CN113349368A - 猴头菌-人参发酵菌质酵素口服液的制备工艺及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了猴头菌‑人参发酵菌质酵素口服液的制备工艺及应用，该制备工艺包括以下步骤：筛选得到最优猴头菌，并使猴头菌菌丝布满整个培养基表面；取适量猴头菌固体培养物转接于液体培养基中进行培养，得到液体菌种；完成人参药性基质的制备；完成发酵菌质的制备；通过预设的澄清方法对发酵菌质提取物进行澄清，得到口服液；通过在口服液中添加矫味剂，对口服液口感进行调节。有益效果：本发明的口服液兼具有猴头菌及人参的作用，制备方法简单、产量高、成本低，具有长效的保存价值，同时不会产生有害的副产物。
Description
技术领域
本发明涉及猴头菌固体菌种的培养、液体菌种的制备、人参药性基质的制备、发酵菌质的制备、口服液的制备，具体来说，涉及猴头菌-人参发酵菌质酵素口服液的制备工艺及应用。
背景技术
中药提取液中成分较为复杂，既含有多种有效成分，也含有如色素、鞣质、果胶和蛋白质等影响中药提取液澄明度和稳定性的高分子物质。然而，在中药提取液加工的过程中，澄明度作为反应产品外观和稳定性的指标之一，具有十分重要的地位。目前，提高澄清度的方法有，自然沉淀法、膜分离法、水提醇沉法、高速离心法、吸附剂澄清法等。其中，自然沉淀法耗费时间较长且澄清效果不佳，膜分离法在中药制剂生产中易造成膜堵塞，降低膜使用寿命，造成中药中有效成分保留率降低，水提醇沉法和吸附剂澄清法应用较为广泛。在吸附剂澄清法中，壳聚糖、ZTC、明胶等是常用的澄清剂。壳聚糖最为最常用的澄清剂之一，资源丰富，是世界上第二大天然可再生资源，其制备过程简单，毒性低，具有良好的生物可降解和生物相容性等特点。在果汁、中药制剂及功能性饮料等制备过程中得到了广泛的应用。据此，本发明通过单因素考察及正交优化实验对猴头菌-人参固体双向发酵菌质口服液的澄清工艺进行研究。
现有的同类产品的原材料多以猴头菌子实体或人参药材、猴头菌或人参提取物、猴头菌或人参液体培养物为主，而并无以猴头菌-人参固体发酵产物为原材料进行开发的口服液产品。如：珊瑚状猴头菌乳酸菌饮料的研制、猴头菇葡萄汁保健饮料、猴头菇大豆复合饮料、猴头菇酸奶、猴头菇袋泡茶、人参乳饮料、人参荷兰圆形奶酪、人参枸杞酸乳、人参八宝茶、人参可乐等。此类产品的原材料大多以药材为主，并未进行二次加工，产品具有一定的保健价值，但并未开真正挖掘出药材的实际药用价值，对药材本身的珍贵资源是一种极大的浪费。且这些同类产品只具有本产品中原材料中其一的作用，使产品中呈现的效果单一，适用群体受限。
针对相关技术中的问题，目前尚未提出有效的解决方案。
发明内容
针对相关技术中的问题，本发明提出猴头菌-人参发酵菌质酵素口服液的制备工艺及应用，以克服现有相关技术所存在的上述技术问题。
为此，本发明采用的具体技术方案如下：
根据本发明的一个方面，提供了猴头菌-人参发酵菌质酵素口服液的制备工艺，该制备工艺包括以下步骤：
S1、固体菌种培养：对猴头菌菌种进行筛选得到最优猴头菌，并在无菌条件下将最优猴头菌转接至PDA固体培养基中，培养至猴头菌菌丝布满整个培养基表面；
S2、液体菌种培养：取适量猴头菌固体培养物转接于液体培养基中，并在26℃、160rpm/min的黑暗条件下进行培养，且当培养基中含有大量黄色菌球时，终止液体发酵；
S3、药性基质制备：将人参药材粉碎，过药典16目筛，并装入初始含水量为40％的培养瓶中，同时在121℃高压环境下灭菌30分钟。
S4、发酵菌质制备：待药性基质冷却至室温后，以单位为mL的液体菌种与单位为g的固体培养基按照1:5的比例接入人参药性基质中进行避光培养，当猴头菌菌丝布满整个培养瓶且形成明显的菌蕾结构时，即为发酵终点，同时取出发酵菌质，在40℃环境下烘干，密封保存；
S5、发酵菌质澄清：通过预设的澄清方法对发酵菌质提取物进行澄清，得到口服液；
S6、矫味：通过在口服液中添加矫味剂，对口服液口感进行调节。
进一步的，所述S1中培养至猴头菌菌丝布满整个培养基表面时的环境条件为：28℃恒温黑暗条件。
进一步的，所述S2中取适量猴头菌固体培养物转接于液体培养基中，液体培养基包含葡萄糖20g、蛋白胨10g、KH2PO42g、MgSO4·7H2O1g及蒸馏水1L。
进一步的，所述S5中通过预设的澄清方法对发酵菌质提取物进行澄清包括以下步骤：
S51、取1.0g壳聚糖，加入100mL的1％体积分数乙酸溶液，并在80℃水浴中溶胀2小时，且搅拌直至均匀后，冷藏备用；
S52、取猴头菌-人参双向固体发酵菌质提取物25.0mL，在水提液中边加边搅拌1％的壳聚糖溶液，并在室温下通过磁力搅拌保持15min，且室温静置后，取上清即得。
进一步的，所述S51中搅拌直至均匀后，冷藏备用时，搅拌时长为15min。
进一步的，所述S52中室温静置的时长为24h。
进一步的，所述S5中通过预设的澄清方法对发酵菌质提取物进行澄清还包括以下步骤：
S51’、将猴头菌-人参双向固体发酵菌质20g放入烧杯中，加适量蒸馏水浸泡后，进行煎煮；
S52’、取煎煮液静置冷却后用8层纱布滤去残渣，定容至500ml，并使25mL提取液相当于1g生药量；
S53’、取50mL提取液加入乙醇进行醇沉，并调节醇的终浓度达到40％，将搅拌均匀的醇沉液于4℃下静置后，以6000r/min离心10min，弃去下层沉淀残渣，得上清液。
进一步的，所述S51’中将加适量蒸馏水浸泡时，浸泡时间为1h。
进一步的，所述S53’中搅拌均匀的醇沉液于4℃下静置时，静置时长为24h。
根据本发明的另一方面，提供了猴头菌-人参发酵菌质酵素口服液在提高人体免疫力、记忆力、镇静催眠、肿瘤防治、降血糖、保肝护胃的药物及保健品中的应用；
其中，所述矫味剂分为原味、苹果味、山楂味及葡萄味，作为矫味剂的果味浸膏为新鲜水果经热水浸提后所得，其密度为1.18-1.2；
所述原味的配方配比：木糖醇的加入量为2％；
所述苹果味的配方配比：单位为mL的苹果浸膏：单位为mL的提取液＝2:5；
所述山楂味的配方配比：单位为mL的山楂浸膏：单位为mL的提取液＝0.6:5；
所述葡萄味的配方配比：单位为mL的葡萄浸膏：单位为mL的提取液＝1:5；
其中，口服液最佳澄清工艺为，壳聚糖最佳加入量为4％，絮凝温度60℃，搅拌速度640r/min。
本发明的有益效果为：
(1)本发明相比于化学转化法，采用双向发酵的生物转化技术，可以大幅度提高转化效率，同时不会产生有害的副产物。
(2)猴头菌及人参均归属于“药食同源”类资源，猴头菌具有利五脏、助消化、治疗神经衰弱和神经保护等作用，通过双向发酵过程中次生代谢产物对药效成分进行改造，进而得到具有更高活性的成分，大幅度提高原材料的药用价值。以发酵菌质为原材料进行口服液的制备，对口服液的澄清工艺进行优化，使其更加均一稳定，具有长效的保存价值。
(3)本发明口服液相比于常见的药材形式，如饮片及其炮制品等，更便于日常携带及服用，且更利于人体消化吸收、适用人群较广。同时，在口服液的制备过程中，经层层工艺筛选，可极大减轻药材在种植过程中的农药残留，提高产品的安全性。相比于其他同类型产品，本发明的口服液含有的功效更加广泛，兼具有猴头菌及人参的作用，使口服液的营养成分更为丰富。
(4)本发明制备方法简单、产量高、成本低，适用于工厂批量化生产，大幅度提高产品的储备能力及满足市场的供货需求，在深入挖掘商业价值的同时使其具有更广泛的实际应用价值。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是根据本发明实施例的猴头菌-人参发酵菌质酵素口服液的制备工艺的流程图。
具体实施方式
为进一步说明各实施例，本发明提供有附图，这些附图为本发明揭露内容的一部分，其主要用以说明实施例，并可配合说明书的相关描述来解释实施例的运作原理，配合参考这些内容，本领域普通技术人员应能理解其他可能的实施方式以及本发明的优点，图中的组件并未按比例绘制，而类似的组件符号通常用来表示类似的组件。
根据本发明的实施例，提供了猴头菌-人参发酵菌质酵素口服液的制备工艺及应用，以人参、猴头菌为主要材料进行双向固体发酵，双向固体发酵技术，即以中药材或中药材残渣为药性基质，利用药用真菌的生物活性分解代谢药性基质中的纤维、蛋白质、糖类等成分为自身提供生长所需的营养及能量，使药用真菌在药性基质的基础上通过次生代谢产物发酵对中药材的活性成分进行修饰改造，得到新的药效活性成分。发酵产物兼具有药性基质和药用真菌中药效价值，且降低了原有药材的毒性和副作用，有效提高中药材的药效活性成分含量。
本发明以上述发酵菌质为原材料进行固体饮料的开发，并利用单因素实验结合正交试验筛选的最佳澄清工艺条件。
人参作为传统的名贵中草药之一，被认为是适合使用的新型功能食品的发展对各种疾病有潜力自然调节免疫力。已经证明了具有多种生物活性，如免疫调节，抗癌，神经保护，抗氧化和抗菌等特性，有希望发展成为治疗各种疾病和代谢性疾病的保健品。猴头菌是食用菌中珍贵的药食兼用菌，富含多肽、萜类、甾醇等多种活性物质具有保肝护胃、降血糖、保护神经、抗癌等功效。猴头菌经发酵后，通过对上述猴头菌-人参固体双向发酵菌质的发酵工艺及药效物质的活性含量等方面结果进行分析，用猴头菌对人参药材饮片进行固体双向发酵制得发酵菌质，其含有的稀有皂苷种类及含量得到大幅度的提升。从中医药性角度分析，发酵后得到的菌质与未发酵的人参相比，可大幅度降低人参的燥性，使人参的药效更加温和耐用。
本发明采用猴头菌-人参固体发酵菌质为原材料，进行口服液的制备及澄清工艺的考察。在此过程中包括猴头菌固体菌种的培养、液体菌种的制备、人参药性基质的制备、发酵菌质的制备、口服液的制备。且以猴头菇-人参双向固体发酵菌质为原材料，可制成包括但不限于嚼片剂、泡腾片剂、缓释胶囊、注射剂、口服液。
现结合附图和具体实施方式对本发明进一步说明，如图1所示，根据本发明的一个方面，提供了猴头菌-人参发酵菌质酵素口服液的制备工艺，该制备工艺包括以下步骤：
S1、固体菌种培养：对猴头菌菌种进行筛选得到最优猴头菌，并在无菌条件下将最优猴头菌转接至PDA固体培养基中，培养至猴头菌菌丝布满整个培养基表面；
S2、液体菌种培养：取适量猴头菌固体培养物转接于液体培养基中，并在26℃、160rpm/min的黑暗条件下进行培养，且当培养基中含有大量黄色菌球时，终止液体发酵；
S3、药性基质制备：将人参药材粉碎，过药典16目筛，并装入初始含水量为40％的培养瓶中，同时在121℃高压环境下灭菌30分钟；
S4、发酵菌质制备：待药性基质冷却至室温后，以单位为mL的液体菌种与单位为g的固体培养基按照1:5的比例接入人参药性基质中进行避光培养，当猴头菌菌丝布满整个培养瓶且形成明显的菌蕾结构时，即为发酵终点，同时取出发酵菌质，在40℃环境下烘干，密封保存；
S5、发酵菌质澄清：通过预设的澄清方法对发酵菌质提取物进行澄清，得到口服液；(在提高口服液的澄清方法中，澄清剂澄清法以及水提醇沉法较为常用。壳聚糖最为最常用的澄清剂之一，资源丰富，是世界上第二大天然可再生资源，其制备过程简单，毒性低，具有良好的生物可降解和生物相容性等特点)
S6、矫味：通过在口服液中添加矫味剂，对口服液口感进行调节。
在一个实施例中，所述S1中培养至猴头菌菌丝布满整个培养基表面时的环境条件为：28℃恒温黑暗条件。
在一个实施例中，所述S2中取适量猴头菌固体培养物转接于液体培养基中，液体培养基包含葡萄糖20g、蛋白胨10g、KH2PO42g、MgSO4·7H2O1g及蒸馏水1L。
在一个实施例中，所述S5中通过预设的澄清方法对发酵菌质提取物进行澄清包括以下步骤：
S51、取1.0g壳聚糖，加入100mL的1％体积分数乙酸溶液，并在80℃水浴中溶胀2小时，且搅拌直至均匀后，冷藏备用；
S52、取猴头菌-人参双向固体发酵菌质提取物25.0mL，在水提液中边加边搅拌1％的壳聚糖溶液，并在室温下通过磁力搅拌保持15min，且室温静置后，取上清即得。
在一个实施例中，所述S51中搅拌直至均匀后，冷藏备用时，搅拌时长为15min。
在一个实施例中，所述S52中室温静置的时长为24h。
在一个实施例中，所述S5中通过预设的澄清方法对发酵菌质提取物进行澄清还包括以下步骤：
S51’、将猴头菌-人参双向固体发酵菌质20g放入烧杯中，加适量蒸馏水浸泡后，进行煎煮；
S52’、取煎煮液静置冷却后用8层纱布滤去残渣，定容至500ml，并使25mL提取液相当于1g生药量；
S53’、取50mL提取液加入乙醇进行醇沉，并调节醇的终浓度达到40％，将搅拌均匀的醇沉液于4℃下静置后，以6000r/min离心10min，弃去下层沉淀残渣，得上清液。
在一个实施例中，所述S51’中将加适量蒸馏水浸泡时，浸泡时间为1h。
在一个实施例中，所述S53’中搅拌均匀的醇沉液于4℃下静置时，静置时长为24h。
通过对发酵菌质提取液进行测试，对絮凝剂壳聚糖的加入量、絮凝温度、搅拌速度进行单因素考察，并根据考察结果进行三因素三水平的正交试验进一步筛选澄清工艺的最优条件。同时，采用传统的醇沉法对口服液进行澄清工艺摸索，并对醇浓度进行单一考察。其筛选结果如下所示：
1聚糖对澄清度的考察
1.1壳聚糖用量的考察
由表1-1可知，当壳聚糖用量逐渐增加时，菌质提取液的澄明度逐渐增加，当壳聚糖加入量为6％时，溶液达到几乎澄明，综合评分也达到了最高。随着壳聚糖用量的增加，溶液的澄清度有所增加，但有效成的含量呈下降趋势。综合工业生产成本及操作性，本实验以壳聚糖加入量为6％时为最佳条件。
表1-1壳聚糖加入量的结果考察
1.2温度的考察
由表1-2可知，温度对菌质提取液的有效成分含量有较大的影响，当温度为40℃时，多糖含量可总皂苷含量的综合评分值最高，在此条件下，溶液的澄清度达到了无沉淀的要求，溶液的颜色也开始向浅颜色转变。当温度过低时，溶液中澄清度没有达到很好清除效果，温度过高时会损失有效物质含量，所以综合影响因素，本实验以壳聚糖加入温度为40℃为最佳条件。
表1-2壳聚糖加入时温度的结果考察
1.3搅拌速度的考察
壳聚糖加入的速度会直接影响絮凝作用，搅拌速度直接影响壳聚糖与溶液中杂质的结合程度，故本实验选取搅拌速度为澄清工艺的筛选条件之一。从表1-3可知，随着搅拌速度增加，菌质提取液溶液颜色由深变浅，澄清度逐渐增加，壳聚糖对溶液中的杂质清除能力越强。当搅拌速度为640r/min时，提取液的澄清度达到要求且有效物质含量损失较小，结合实际生产效率及条件，本实验选取搅拌速度为640r/min时为最优条件。
表1-3壳聚糖加入时搅拌速度的结果考察
1.4澄清工艺正交考察
为优化发酵菌质口服液的澄清工艺，以人参药材中有效成分人参皂苷和多糖为评价指标进行综合评分法进行三因素三水平的L9(34)正交试验，正交试验结果及方差分析结果见表1-4。
表1-4澄清工艺正交试验与结果L9(34)
在单因素试验基础上，以壳聚糖用量(％)、絮凝温度(℃)、搅拌速度(r/min)为探讨因素，以多糖含量和总皂苷含量的加权值为评价指标，进行正交试验。由上表数据可知，3个因素对猴头菌-人参双向固体发酵菌质提取液品质的影响作用大小为A＞B＞C，即壳聚糖用量对澄清度影响最大，其次是絮凝温度，搅拌速度的影响最小。猴头菌-人参双向固体发酵菌质口服液澄清工艺最优组合为A1B3C3，即壳聚糖用量4％、絮凝温度60℃、搅拌速度640r/min，在此条件下效成分的含量最高。
1.5澄清考察优化工艺验证
对上述澄清考察优化得到的猴头菌-人参双向固体发酵菌质口服液最佳澄清工艺参数进行验证，结果如表1-5所示，正交试验所得的猴头菌-人参双向固体发酵菌质口服液最佳澄清工艺条件，平行三组实验具有较好的重复性，工艺稳定，可操作性强，可作为最佳的澄清工艺条件。
表1-5验证试验结果
2醇浓度考察
由表1-6的数据可知，当对醇浓度为40％、50％、60％、70％、80％进行考察时发现，当醇浓度为40％时，提取液中有效成分损失较少，多糖的含量最高，且加权值最大，在本实验条件下以40％醇浓度为醇沉工艺中的最佳条件。
表1-6醇浓度考察结果
3防腐剂筛选
如表1-7所示，对山梨酸钾加入量为0.1g/kg、0.25g/kg、0.4g/kg三种浓度进行考察。山梨酸钾作为防腐剂，结构性质稳定，为无色的结晶状粉末，对溶液产生的副作用小，在防腐效果相似的情况下，选取用量少的防腐剂，即在本实验中，选取0.1％的山梨酸钾作为猴头菌-人参双向固体发酵菌质口服液的合理剂量，此添加剂量也符合国家食品药品监督管理局中的相关山梨酸钾的用量规定。
表1-7防腐剂的筛选
4矫味剂筛选
由于人参和猴头菌自身具有独特的气味，需要添加适当辅料调节口服液的口感。人工甜味剂虽甜度较大，但长时间服用会对人体产生危害。木糖醇作为天然健康的甜味剂，正常糖类代谢的中间体，可适用于糖尿病患者。本实验以木糖醇添加量分别为1％，2％，4％对口服液进行口味的调节和改进，同时邀请实验室同学及老师进行品尝，并综合大家的口感对矫味剂进行改进。最终确定，各口味辅料加入量如下：(1)原味：木糖醇的加入量为2％；(2)苹果味：单位为mL的苹果浸膏：单位为mL的提取液＝2:5；(3)山楂味：单位为mL的山楂浸膏：单位为mL的提取液＝0.6:5；(4)葡萄味：单位为mL的葡萄浸膏：单位为mL的提取液＝1:5。在此比例基础上，既能消减人参和猴头菌的独特味道，又能在一定程度上增加口服液的甜度，使其口感更佳，符合多数人的口感要求。
表1-8矫味剂筛选
根据本发明的另一方面，提供了猴头菌-人参发酵菌质酵素口服液在提高人体免疫力、记忆力、镇静催眠、肿瘤防治、降血糖、保肝护胃的药物及保健品中的应用；
其中，所述矫味剂分为原味、苹果味、山楂味及葡萄味，作为矫味剂的果味浸膏为新鲜水果经热水浸提后所得，其密度为1.18-1.2；
所述原味的配方配比：木糖醇的加入量为2％；
所述苹果味的配方配比：单位为mL的苹果浸膏：单位为mL的提取液＝2:5；
所述山楂味的配方配比：单位为mL的山楂浸膏：单位为mL的提取液＝0.6:5；
所述葡萄味的配方配比：单位为mL的葡萄浸膏：单位为mL的提取液＝1:5；
为调节菌质口服液的口感，扩大菌质口服液的适用范围，本发明在添加传统矫味剂木糖醇的基础上，分别选用苹果、葡萄、山楂三种天然水果浸膏对口服液口感进行调节。相比于同类产品的矫味剂，水果中富含维生素及纤维素等类物质，这也使得添加天然水果浸膏后的口服液在一定程度上提高了口服液的营养价值。
其中，口服液最佳澄清工艺为，壳聚糖最佳加入量为4％，絮凝温度60℃，搅拌速度640r/min。
综上所述，本发明相比于化学转化法，采用双向发酵的生物转化技术，可以大幅度提高转化效率，同时不会产生有害的副产物。猴头菌及人参均归属于“药食同源”类资源，猴头菌具有利五脏、助消化、治疗神经衰弱和神经保护等作用，通过双向发酵过程中次生代谢产物对药效成分进行改造，进而得到具有更高活性的成分，大幅度提高原材料的药用价值。以发酵菌质为原材料进行口服液的制备，对口服液的澄清工艺进行优化，使其更加均一稳定，具有长效的保存价值。本发明口服液相比于常见的药材形式，如饮片及其炮制品等，更便于日常携带及服用，且更利于人体消化吸收、适用人群较广。同时，在口服液的制备过程中，经层层工艺筛选，可极大减轻药材在种植过程中的农药残留，提高产品的安全性。相比于其他同类型产品，本发明的口服液含有的功效更加广泛，兼具有猴头菌及人参的作用，使口服液的营养成分更为丰富。本发明制备方法简单、产量高、成本低，适用于工厂批量化生产，大幅度提高产品的储备能力及满足市场的供货需求，在深入挖掘商业价值的同时使其具有更广泛的实际应用价值。
人参为多年生宿根阴性草本双子叶植物，是我国传统的名贵中药材，主产于我国东北地区，被人们誉为“百草之王”。据《中国药典》中记载，人参具有大补元气、复脉固脱、安神等多重药用功效。研究表明，人参的药理活性主要是依赖于人参苷元及稀有人参皂苷Rd、Rg1、Rg3、Rh1、Rh2等。但此类天然皂苷含量极少，提取分离复杂而且收率极低，无法进行工业化生产。如，原型人参皂苷转化得到的稀有人参皂苷Rg2、Rg3具有更高效的抗焦虑、抗炎、抗癌活性作用，稀有皂苷CK、F12在抗肿瘤、抗突变、抗炎保肝、哮喘等诸多方面都表现出良好的药效活性，相比于原型人参皂苷具有更高的药理活性作用。
人参经双向固体发酵后，其发酵产物更利于人体消化吸收，在降低药材原有毒性的同时大幅度提高了其药用价值。如前人在研究人参固体双向发酵过程中的化学成分变化时发现，在人参药性菌质中检测到大量稀有人参皂苷，人参皂苷Rg1、Re、Rb可能转化为人参稀有皂苷Rg3、Rh等。其中，相比于化学转化法，这种双向发酵的生物转化技术可以大幅度提高转化效率，同时不会产生有害的副产物。如人参皂苷Rd经脱糖基化转化为大量的稀有人参皂苷。猴头菌在生长过程中会经代谢产生甾体类化合物、生物碱类化合物、芳香类化合物、萜类化合物、脂肪酸及其脂类等次级产物，这些产物具有一定的抗氧化、抗菌、抗衰老、抗肿瘤和神经保护、抗炎等作用，这些次生代谢产物的潜在药用价值也受到了高度的关注。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.猴头菌-人参发酵菌质酵素口服液的制备工艺，其特征在于，该制备工艺包括以下步骤：
S1、固体菌种培养：对猴头菌菌种进行筛选得到最优猴头菌，并在无菌条件下将最优猴头菌转接至PDA固体培养基中，培养至猴头菌菌丝布满整个培养基表面；
S2、液体菌种培养：取适量猴头菌固体培养物转接于液体培养基中，并在26℃、160rpm/min的黑暗条件下进行培养，且当培养基中含有大量黄色菌球时，终止液体发酵；
S3、药性基质制备：将人参药材粉碎，过药典16目筛，并装入初始含水量为40％的培养瓶中，同时在121℃高压环境下灭菌30分钟；
S4、发酵菌质制备：待药性基质冷却至室温后，以单位为mL的液体菌种与单位为g的固体培养基按照1:5的比例接入人参药性基质中进行避光培养，当猴头菌菌丝布满整个培养瓶且形成明显的菌蕾结构时，即为发酵终点，同时取出发酵菌质，在40℃环境下烘干，密封保存；
S5、发酵菌质澄清：通过预设的澄清方法对发酵菌质提取物进行澄清，得到口服液；
S6、矫味：通过在口服液中添加矫味剂，对口服液口感进行调节。
2.根据权利要求1所述的猴头菌-人参发酵菌质酵素口服液的制备工艺，其特征在于，所述S1中培养至猴头菌菌丝布满整个培养基表面时的环境条件为：28℃恒温黑暗条件。
3.根据权利要求2所述的猴头菌-人参发酵菌质酵素口服液的制备工艺，其特征在于，所述S2中取适量猴头菌固体培养物转接于液体培养基中，液体培养基包含葡萄糖20g、蛋白胨10g、KH2PO42g、MgSO4·7H2O1g及蒸馏水1L。
4.根据权利要求3所述的猴头菌-人参发酵菌质酵素口服液的制备工艺，其特征在于，所述S5中通过预设的澄清方法对发酵菌质提取物进行澄清包括以下步骤：
S51、取1.0g壳聚糖，加入100mL的1％体积分数乙酸溶液，并在80℃水浴中溶胀2小时，且搅拌直至均匀后，冷藏备用；
S52、取猴头菌-人参双向固体发酵菌质提取物25.0mL，在水提液中边加边搅拌1％的壳聚糖溶液，并在室温下通过磁力搅拌保持15min，且室温静置后，取上清即得。
5.根据权利要求4所述的猴头菌-人参发酵菌质酵素口服液的制备工艺，其特征在于，所述S51中搅拌直至均匀后，冷藏备用时，搅拌时长为15min。
6.根据权利要求5所述的猴头菌-人参发酵菌质酵素口服液的制备工艺，其特征在于，所述S52中室温静置的时长为24h。
7.根据权利要求6所述的猴头菌-人参发酵菌质酵素口服液的制备工艺，其特征在于，所述S5中通过预设的澄清方法对发酵菌质提取物进行澄清还包括以下步骤：
S51’、将猴头菌-人参双向固体发酵菌质20g放入烧杯中，加适量蒸馏水浸泡后，进行煎煮；
S52’、取煎煮液静置冷却后用8层纱布滤去残渣，定容至500ml，并使25mL提取液相当于1g生药量；
S53’、取50mL提取液加入乙醇进行醇沉，并调节醇的终浓度达到40％，将搅拌均匀的醇沉液于4℃下静置后，以6000r/min离心10min，弃去下层沉淀残渣，得上清液。
8.根据权利要求7所述的猴头菌-人参发酵菌质酵素口服液的制备工艺，其特征在于，所述S51’中将加适量蒸馏水浸泡时，浸泡时间为1h。
9.根据权利要求8所述的猴头菌-人参发酵菌质酵素口服液的制备工艺，其特征在于，所述S53’中搅拌均匀的醇沉液于4℃下静置时，静置时长为24h。
10.猴头菌-人参发酵菌质酵素口服液在提高人体免疫力、记忆力、镇静催眠、肿瘤防治、降血糖、保肝护胃的药物及保健品中的应用，其特征在于，所述猴头菌-人参发酵菌质酵素口服液为权利要求1-9中的猴头菌-人参发酵菌质酵素口服液；
其中，所述矫味剂分为原味、苹果味、山楂味及葡萄味；
所述原味的配方配比：木糖醇的加入量为2％；
所述苹果味的配方配比：单位为mL的苹果浸膏：单位为mL的提取液＝2:5；
所述山楂味的配方配比：单位为mL的山楂浸膏：单位为mL的提取液＝0.6:5；
所述葡萄味的配方配比：单位为mL的葡萄浸膏：单位为mL的提取液＝1:5；
其中，口服液最佳澄清工艺为，壳聚糖最佳加入量为4％，絮凝温度60℃，搅拌速度640r/min。
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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