CN105687036B - 白及护肤产品及其制备方法 - Google Patents

白及护肤产品及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105687036B
CN105687036B CN201610079396.2A CN201610079396A CN105687036B CN 105687036 B CN105687036 B CN 105687036B CN 201610079396 A CN201610079396 A CN 201610079396A CN 105687036 B CN105687036 B CN 105687036B
Authority
CN
China
Prior art keywords
bletilla
water
added
polysaccharide
product
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201610079396.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105687036A (zh
Inventor
李兰岚
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Changsha Aiyang Medical Technology Co Ltd
Original Assignee
Changsha Aiyang Medical Technology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Changsha Aiyang Medical Technology Co Ltd filed Critical Changsha Aiyang Medical Technology Co Ltd
Priority to CN201610079396.2A priority Critical patent/CN105687036B/zh
Publication of CN105687036A publication Critical patent/CN105687036A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN105687036B publication Critical patent/CN105687036B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/88—Liliopsida (monocotyledons)
    • A61K36/898—Orchidaceae (Orchid family)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/33—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing oxygen
    • A61K8/36—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A61K8/365—Hydroxycarboxylic acids; Ketocarboxylic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/72—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic macromolecular compounds
    • A61K8/73—Polysaccharides
    • A61K8/736—Chitin; Chitosan; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q17/00—Barrier preparations; Preparations brought into direct contact with the skin for affording protection against external influences, e.g. sunlight, X-rays or other harmful rays, corrosive materials, bacteria or insect stings
    • A61Q17/005—Antimicrobial preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/10—Preparation or pretreatment of starting material
    • A61K2236/19—Preparation or pretreatment of starting material involving fermentation using yeast, bacteria or both; enzymatic treatment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/35—Extraction with lipophilic solvents, e.g. Hexane or petrol ether
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
    • A61K2236/55—Liquid-liquid separation; Phase separation

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明涉及一种白及护肤产品，干燥过后的白及经用蒸馏水热提取、加入中性蛋白酶水解蛋白、过滤、减压浓缩，然后用柱吸附、将洗脱液浓缩，减压浓缩，制得白及水溶性多糖纯品，其多糖含量在99％以上，并将白及水溶性多糖与壳聚糖和乳酸加入水，混合冷冻至干后应用于保健或药物中。

Description

白及护肤产品及其制备方法
技术领域
本发明属于天然药物应用的技术领域，涉及一种白及水溶性多糖产品，更具体地涉及到从白及中提取白及水溶性多糖方法及其应用。
背景技术
白及(Bletilla striata)，又名白给、连及草、紫兰根，为兰科白及属多年生草本植物，株高18～60cm。白及主要分布于东亚地区，在我国零星分布于陕西、甘肃、江苏、安徽、浙江、江西、福建、湖北、湖南、广东、广西、四川、重庆、云南和贵州等省(市)。通常生长于海拔100～3200m的常绿阔叶林或针叶林，以路边草丛、岩石缝中较散见。白及地下块茎肥厚、肉质、富粘性，常为3枚(个别种类为5枚或是1枚)，它是白及苗每年新生长的呈扁球形或扁卵圆形的假鳞茎，着生有数量较多的细长根。每枚假鳞茎在发芽季节可长出新芽1个。毗邻假鳞茎相连，串成叉状的地下茎(块根)。白及真正的茎很短，4～6枚狭长形或披针形叶着生基部成鞘并抱茎；叶长8～29cm，宽1.5～4cm。白及花紫红色或粉红色、白色、黄色，供观赏。白及属全球共6种，我国有白及(B.striata)、黄花白及(B.ochracea)、小白及(B.formosana)和华北白及(B.sinensis)分布。
白及假鳞茎是常用中药，止血收敛、消肿生肌功效好。新鲜块茎含水分14.6％、淀粉30.48％、葡萄糖1.5％.尚含挥发油、黏液质.根含白及甘露聚糖。入药内服主治肺结核咯血、支气管扩张咯血、胃溃疡吐血、尿血、便血等症；外用治外伤出血、烧烫伤、手足皲裂等。近年来研究发现，白及假鳞茎中的白及胶是主要药效部位，其主要成分是白及水溶性多糖(其分子构成为葡萄糖与甘聚糖相互连接的聚合物)。白及水溶性多糖的理化性质与阿拉伯胶、西黄蓍胶类似，但黏性特殊。
日本YAMAK最早开展白及化学成分系统研究，发现大量菲类及衍生物。我国学者随后通过研究，分离出其他白及化学成分。近几年来，白及化学成分研究集中在鳞茎中的联苄类、二氢菲类和联菲类化合物，已分离鉴定出一系列具活性的联苄、二氢菲类和联菲类新化合物。研究发现，白及块茎粘液质含丰富的葡甘聚糖，含量占粘液质总量的30％。白及块茎挥发油、淀粉、葡萄糖等其它化学成分也得到研究。
白及止血效果确切可靠，与所含大量白及胶有关。白及胶成膜具有较强粘附力，敷于动物的出血点或面，可立刻与创面融合而难以剥离，而且仅仅是接触伤口的一面溶融，这样就可迅速止血和防止感染。实验证明，白及提取物具有缩短凝血时间、抑制肌体对纤维素溶解的作用，可迅速形成人工血栓，对外伤止血或内脏出血临床治疗均有较好疗效，安全且无任何副作用。
白及胶目前广泛用于胃、食道、十二指肠等消化道溃疡，鼻腔、口腔等呼吸道粘膜溃疡，子宫、阴道等妇科疾病的粘膜溃疡，以及皮肤损伤、疮疡、烧烫伤等临床治疗，总有效率在90％以上，有些病例类型的治愈有效率高达100％，而且治愈效果受到年龄大小、病程长短、个体差异及不同职业等因素的影响较小。
白及胶属于分子量较小的天然聚合物，但无抗原性、无致热原性，与动物机体组织较好地相容，并可被缓慢地降解吸收。医药工作者利用白及胶的优良性能来修补破损组织，使某些外科疾病治疗无须手术也能解决。例如，朱志安等将白及胶与经过特殊处理的脱钙骨制成复合性生物颅骨材料，用于修复颅骨缺损，在相容性、可塑性、自由定型性，以及消毒硬化性方面均取得非常满意效果。对某些溃疡穿孔、吻合术后的痰管病例，运用口服白及胶或白及粉治疗，均有较好的填充修复作用。
局部介入治疗技术(化疗)广泛应用于恶性肿瘤临。从病变部位血管内给予高浓度药物栓塞化疗，可使恶性肿瘤明显坏死，患者生存期延长，生存率提高。但化疗常用栓塞剂如明胶、海绵、自体凝血块、不锈钢圈等，都存在着诸多不足，导致化疗的中长期疗效不甚满意。白及胶粘合力强，遇水可缓慢膨胀，降解吸收缓慢，作为化疗栓塞剂用于脏器出血、止血和恶性肿瘤的临床治疗，在不同管径血管中都可达到完全栓塞效果，而且可与各种抗肿瘤药物混合，又不引起全身性药物不良反应，疗效明显优于明胶、海绵栓塞的，是中长期化疗较理想的天然栓塞材料。
研究证明，动物机体内过量的自由基，可引起细胞损伤和死亡，加速皮肤衰老和皱纹产生。芮海云等研究发现，白及中性多糖有明显清除自由基的能力，其清除活性高于维生素E的。白及胶据此可作为延缓肌肤衰老的营养性化妆品原料。
白及胶黏度特性优异，堪比阿拉伯胶、黄耆胶，可作为食品、化妆品领域的增稠剂、悬浮剂、保湿剂和助乳化剂，还可作为良好的赋形剂、散剂、膜剂、凝胶剂的基质材料。
公开号为CN101195839的中国专利介绍一种白及多糖胶精制工艺，步骤：称取白及粗多糖100g，加入400mL的70％乙醇溶液，设定水浴温度至70℃，加热1h，然后冷却。真空抽滤，用浓度为95％的乙醇洗涤三次。准确称取乙醇洗涤后衡干重白及粗多糖样品，按30ml水/g洗涤后衡干重白及粗多糖的比例加入水，置于50℃水浴中，不断搅拌，使之充分溶解，按洗涤后衡干重白及粗多糖重量的0.5％加入中性蛋白酶，调节pH6.5-7.0，50℃完全水解20h。酶解液70℃灭酶处理10min，用高速冷冻离心机6000r/min，离心15min。倾出上清液，加入4倍上清液体积的95％乙醇，醇沉4h后真空抽滤，真空抽滤后的白及胶用纯度为95％的乙醇洗涤2次，丙酮洗涤3次，乙醚洗涤3次，滤干。60℃烘干2h后贮存。
公开号为CN102477102A的中国专利介绍一种白及多糖用于止血材料的方法，将干品白及块茎粉碎后过筛；过筛固体溶于去离子水，按重量比过筛固体：去离子水比为1:5～6，温度：70±5℃，溶出时间：2～3小时；离心10～15分钟，得澄清粘稠溶液；絮凝，将离心所得溶液加入溶液体积2倍量的95％乙醇，静置，过滤，50～60℃干燥，得到白及多糖粗粉。现有技术中止血材料是直接用白及块茎研磨成粉使用，其缺点是含杂质多，不能控制有效物含量，使用不方便，本发明是从兰科植物白及块茎干品中加水溶解提取，用乙醇沉淀干燥制成粗粉，其优点是提取方法不复杂，成本低，有效物含量高，杂质少，止血效果好，粗粉经处理后可以制成海绵状材料和止血牙塞等制品，广泛用于医学和生物医学工程。
公开号为CN101906169A的中国专利介绍一种白及多糖制备的工艺组合，用预装1.2mm筛网的万能粉碎机将白及饮片5kg粉碎，使全部通过二号筛，得白及粗粉。将白及粗粉与500kg的一级反渗透水共置搅拌混合罐中，搅拌15分钟，使混合均匀成白及混悬液。将白及混悬液输入高压压均质机，调节高压均质机泵体压力45～55MPa。高压均质的匀浆经三足离心机离心，收集离心液。在离心液中加入滑石粉和硅藻土各2kg，混合均匀，经硅藻土过滤器循环过滤至滤液几无色澄清时，收集滤液。将介质滤液经串联500nm和200nm陶瓷膜的微滤过滤器过滤至保留液量45kg，得胶状白及多糖浓缩液。浓缩液中加入乙醇，使含醇量达55％，静置6小时，沉降离心，收集白色的沉淀；沉淀用乙醇洗涤2～3次，沉降离心，收集沉淀。将乙醇洗涤后的沉淀均匀的薄铺在烘盘内，-0.09MPa、65℃以下干燥至水分7％，粉碎，得白色白及多糖1.6kg。收率32％，硫酸-苯酚法测定多糖含量为96％。
公开号为CN102453106A的中国专利介绍一种白及多糖的制备方法，步骤为：(1)白及粗多糖的提取取白及块茎200g，粉碎，过20目筛，加入其2～4倍质量体积为70～90％的乙醇浸泡4h，沥干乙醇后，再加入原料质量的10～20倍去离子水进行提取，温度60～80℃，搅拌浸提3～4h，过滤分离滤渣，滤液8000r/min离心15min，上清液经旋转蒸发仪浓缩至原体积的1/3，按其体积2～4倍加入80～95％乙醇，4～8℃静置沉淀8h，过滤、洗涤得白及粗多糖，真空干燥后保藏备用；(2)酶法精制白及多糖白及粗多糖浓度为2～5％，加入木瓜蛋白酶1～12mg/g进行水解，水解体系的pH为5.5～8.5，水解温度为40～60℃，水解时间为30～240min，酶解完成后在水解液中加入3倍体积的95％乙醇，于4℃冰箱静置沉淀5h，过滤，并用75％乙醇洗涤沉淀。
公开号为CN103044560A的中国专利介绍一种白及多糖的制备方法，其具体步骤为：(1)白及粗多糖的提取取白及块茎200g，粉碎，过20目筛，加入其2～4倍质量体积为70～90％的乙醇浸泡4h，沥干乙醇后，再加入原料质量的10～20倍去离子水进行提取，温度60～80℃，搅拌浸提3～4h，过滤分离滤渣，滤液8000r/min离心15min，上清液经旋转蒸发仪浓缩至原体积的1/3，按其体积2～4倍加入80～95％乙醇，4～8℃静置沉淀8h，过滤、洗涤得白及粗多糖，真空干燥后保藏备用；(2)酶法精制白及多糖白及粗多糖浓度为2～5％，加入木瓜蛋白酶1～12mg/g进行水解，水解体系的pH为5.5～8.5，水解温度为40～60℃，水解时间为30～240min，酶解完成后在水解液中加入3倍体积的95％乙醇，于4℃冰箱静置沉淀5h，过滤，并用75％乙醇洗涤沉淀。
白及胶、白及生物碱，以及白及其他活性成分，在抑制肿瘤细胞增生、延缓皮肤衰老，以及增稠、悬浮、保湿、助乳化和赋型等方面具有广泛市场前景。尤其是不同分子量的白及葡甘聚糖，在护肤保健品开发方面具有极为广阔的市场前景。市场上粗白及多糖纯度一般低于80％，色泽略黄，且带有药味，作为食品添加剂或医药材料还需要进行精制，大大限制了白及多糖胶在保健品和医药上的应用。造成目前状态的主要原因是白及多糖的生产工艺不成熟，在其提取过程中对淀粉未进行水解处理，淀粉在高温水溶液中进行分解形成糊精，对后期过滤有很大影响，大量酚类物质和糊精在白及多糖中存留。而白及胶是由D-葡萄糖和D-甘露糖组成，用淀粉酶水解白及中淀粉时，淀粉酶无法对白及多糖进行水解。白及多糖在水中极易溶解，不利固定在人体某一部位便于长期吸收等问题。
发明内容
为了提高白及多糖的质量和固定多糖便于充分吸收等问题，本发明通过干燥过后的白及经用蒸馏水热提取、加入中性蛋白酶水解蛋白、过滤、减压浓缩，然后用柱吸附、将洗脱液浓缩，减压浓缩，制得白及水溶性多糖纯品，其多糖含量在99％以上，并将白及水溶性多糖与壳聚糖和乳酸加入水中，混合冷冻至干后应用于保健品或药物中。
本发明第一个目的是提供一种白及护肤产品，具有保水、抑菌、促进伤口愈合作用。
在一个实施方案中，白及护肤产品是由各原料成份以以下重量份组成：白及水溶性多糖4～10份、壳聚糖凝胶0.5～4份、乳酸0.5～1.5份，其余为蒸馏水，混合后冷冻至干。
在一个实施方案中，白及护肤产品是由各原料成份以以下重量份组成：白及水溶性多糖6～8份、壳聚糖1～2份、乳酸0.5～0.8份，其余为蒸馏水，混合后冷冻至干。
在另一个实施方案中，白及护肤产品是由各原料成份以以下重量份组成：白及水溶性多糖7份、壳聚糖1份、乳酸0.6份，其余为蒸馏水，混合后冷冻至干。
上述所使用的壳聚糖规格为脱乙酰度为80～90％，黏度为600～2000mPa·s，黏均分子量达到3×106以上。
本发明另一个目的是提供一种白及水溶性多糖的制备方法，其具体步骤包括：
(1)白及淀粉水解：粉碎干燥白及，加入淀粉酶水溶液，使淀粉酶的终浓度为2U以上，30-50℃下处理3-7小时，得水解混合液；
(2)白及水溶性多糖提取：将水解混合液加热至60-80℃进行回流提取60-180min，加入石油醚搅拌10～30min后，静置1～3小时分层去除含有石油醚的上层溶液，得不含有石油醚的下层溶液，再经5000～8000rpm离心10～30min得上清液和沉淀Ⅰ；
(3)醇沉：将上清液在50～60℃减压浓缩至一定体积，再加入95％乙醇至终浓度达到65％以上，醇沉10～20h，进行过滤，得滤液Ⅱ和滤渣Ⅱ，滤液Ⅱ进行减压浓缩至原有体积的1/10～1/20，对浓缩液进行常规结晶处理得葡萄糖晶体；
(4)白及水溶性多糖柱纯化：向滤渣Ⅱ中加入少量的水进行溶解，将其溶液上SEPHADEX G-15柱分离，用3BV～6BV的水进行洗脱并收集洗脱液，并浓缩洗脱液至原有体积的1/15～/25，再上硅胶柱分离用3BV～6BV的水进行洗脱并收集白及水溶性多糖成分浓缩至干，获得白及水溶性多糖。
在一个实施方案中，步骤(1)中所述淀粉酶水溶液的体积(L)与白及重量(kg)比为8～20:1；淀粉酶由津市市新型发酵有限责任公司提供，也可以从市场上购买，淀粉酶使用终浓度为2U以上(其中U是指国际酶活力单位)。所用淀粉酶只能水解葡萄糖与葡萄糖连接的糖苷键。
在一个实施方案中，步骤(2)中所述石油醚是采用90～120℃沸程规格的石油醚，其体积L与水解混合液的体积L比为2～5：1。
在一个实施方案中，步骤(3)中所述过滤：膜孔径为0.22μm的陶瓷膜过滤一次。
在一个实施方案中，步骤(3)中所述一定体积是指原有体积的1/10～1/40。
在一个实施方案中，步骤(4)中用少量的水溶解滤渣Ⅱ时，所用水的体积L与滤渣Ⅱ重量kg比例为1～2.5：1；BV是指柱体积。
上述白及护肤产品可以直接用于各种患者伤口的止血、皮肤愈合等材料中，也可直接用于化妆品中保水材料等方面的应用，也可以用于抑制各种病原菌等医用材料中。
技术效果
1、白及水溶性多糖与壳聚糖混合使用，充分利用了壳聚糖的广谱抑菌作用和亲水又不溶于水的易成膜特性。
2、该产品利于白及水溶性多糖在同一部位的充分吸收，不易出现流失的现象，加强了多方面的调理作用，副作用小，保水效果好，止血效果快，促进伤口快速愈合作用。
3、由于淀粉酶只能水解葡萄糖之间形成的糖苷键，利用淀粉酶可对白及中淀粉进行水解，防止淀粉在高温水溶液中转变成糊精，不利于白及水溶性多糖快速释放到水相中，能缩短过滤时间，利于彻底去除酚类物质，有效地提高白及多糖的产量。
4、利用SEPHADEX G-10柱和硅胶柱分离白及多糖，利用小分子物质与多糖分子分离，获得更高含量的白及护肤产品，与采用DE-52或DEAE-纤维素柱离子交换柱分离纯化相比，白及多糖是一种中性杂多糖，采用葡聚糖凝胶分离效果更好。
5、采用石油醚等有机溶剂将酚类物质、有机酸和色素萃取出，并使酶和蛋白质变性，在后期多糖纯化过程中减少蛋白质乳化作用的干扰。
6、采用乳酸进行溶解壳聚糖，既能防止水溶性多糖的水解，又能促进壳聚糖溶解性，还能增加白及护肤产品的粘性，更利于其产品的应用如面膜等护肤性产品。
具体实施方式
下面，本发明将用实施例进行进一步的说明，但是它并不限于这些实施例的任一个或类似实例。
实施例1：白及水溶性多糖的制备方法
粉碎干燥白及100kg，加入1000L的淀粉酶水溶液，使淀粉酶的终浓度为2U以上，40℃保温处理4小时，得水解混合液；将水解混合液加热至60-80℃进行回流提取140min，向提取液中直接加入2倍石油醚搅拌20min后，静置1～3小时分层去除含有石油醚的上层溶液，得不含有石油醚的下层溶液，再经5000～8000rpm离心10～30min得上清液和沉淀Ⅰ；将上清液在50-60℃减压浓缩至原有体积的1/15，再加入95％乙醇至终浓度达到65％以上，醇沉15h，进行0.22μm的陶瓷膜过滤一次，得滤液Ⅱ和滤渣Ⅱ43.8kg，滤液Ⅱ进行减压浓缩至原有体积的1/15，对浓缩液进行常规结晶处理得葡萄糖晶体；向滤渣Ⅱ中加入50kg的水进行溶解，将其溶液上SEPHADEX G-15柱分离，用3BV～6BV的水进行洗脱并收集洗脱液，并浓缩洗脱液至原有体积的1/20，再上硅胶柱分离用3BV～6BV的水进行洗脱并收集白及水溶性多糖成分浓缩至干，获得白及水溶性多糖12.45kg。经蒽酮—浓硫酸法测定，其中白及水溶性多糖含量为99.57％。
对照实施例1
按公开号为CN101906169A所介绍的白及多糖制备工艺方法：用预装1.2mm筛网的万能粉碎机将白及饮片10kg粉碎，使全部通过二号筛，得白及粗粉。将白及粗粉与500kg的一级反渗透水共置搅拌混合罐中，搅拌15分钟，使混合均匀成白及混悬液。将白及混悬液输入高压压均质机，调节高压均质机泵体压力45～55MPa。高压均质的匀浆经三足离心机离心，收集离心液。在离心液中加入滑石粉和硅藻土各2kg，混合均匀，经硅藻土过滤器循环过滤至滤液几无色澄清时，收集滤液。将介质滤液经串联500nm和200nm陶瓷膜的微滤过滤器过滤至保留液量45kg，得胶状白及多糖浓缩液。浓缩液中加入乙醇，使含醇量达55％，静置6小时，沉降离心，收集白色的沉淀；沉淀用乙醇洗涤2～3次，沉降离心，收集沉淀。将乙醇洗涤后的沉淀均匀的薄铺在烘盘内，-0.09MPa、65℃以下干燥至水分7％，粉碎，得白色白及多糖3.34kg。收率33.4％，经蒽酮—浓硫酸法测定多糖含量为96.2％。取所获得的白及多糖1kg加入500mL水溶液，加入100克的淀粉酶，使淀粉酶的终浓度为2U以上，40℃保温处理3小时，80℃以上灭酶处理10min，离心去除沉淀，加入95％乙醇至终浓度达到65％以上，醇沉10-20h，5000～8000rpm离心10～30min得沉淀，干燥沉淀得450g，经蒽酮—浓硫酸法测定多糖含量为98.24％。
对照实施例2
按公开号为CN103044560A所介绍白及多糖的制备方法：取白及块茎10kg，粉碎，过20目筛，加入其2～4倍质量体积为70～90％的乙醇浸泡4h，沥干乙醇后，再加入原料质量的10～20倍去离子水进行提取，温度60～80℃，搅拌浸提3～4h，过滤分离滤渣，滤液8000r/min离心15min，上清液经旋转蒸发仪浓缩至原体积的1/3，按其体积2～4倍加入80～95％乙醇，4～8℃静置沉淀8h，过滤、洗涤得白及粗多糖，真空干燥后得白及粗多糖，其浓度为2～5％，加入木瓜蛋白酶1～12mg/g进行水解，水解体系的pH为5.5～8.5，水解温度为40～60℃，水解时间为30～240min，酶解完成后在水解液中加入3倍体积的95％乙醇，于4℃冰箱静置沉淀5h，过滤，并用75％乙醇洗涤沉淀，沉淀干燥得白色白及多糖3.78kg。收率37.8％，经蒽酮—浓硫酸法测定多糖含量为96.5％。取1kg白及多糖加入500mL水溶液，加入100克的淀粉酶，使淀粉酶的终浓度为2U以上，40℃保温处理3小时，80℃以上灭酶处理10min，离心去除沉淀，加入95％乙醇至终浓度达到65％以上，醇沉10-20h，5000～8000rpm离心10～30min得沉淀，干燥沉淀得530kg，经蒽酮—浓硫酸法测定多糖含量为98.21％。
实施例2：白及护肤产品的制备方法
取60克乳酸溶于水，再加入壳聚糖100克(所购买壳聚糖的脱乙酰度为80～90％，黏度为600～2000mPa·s，黏均分子量达到3×106以上)，再向其所得溶液中加入实施例1所获得的白及水溶性多糖700克、加入400克的蒸馏水，混合后冷冻至干，获得白及护肤产品。
实施例3：白及护肤产品的保水实验
名称取10g白及护肤产品、淀粉、牛血清蛋白干样品置于一表面皿上，加入30mL的去离子水(对比自来水)，在室温下搅拌均匀后静置，在室温下测定不同时间各表面皿上物质重量的变化见表1。
表1不同材料的保水效果
实施例4：白及护肤产品的抑菌实验
将上述白及护肤产品加水配制而成得药液。选用金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、变形杆菌、乙型链球菌共六种菌进行抑菌实验，上述菌种均由湖南省卫生防疫站提供。采用琼脂扩散法(平皿打孔法)进行抑菌实验：取固体培养基(蛋白胨10g，牛肉膏5g，氯化钠5g，琼脂3g，加蒸馏水1000ml，调pH至7.6，再过滤，分装，高压灭菌，冷却至55℃，倾注灭菌平皿中凝固)，加热熔化，冷却至50℃，再加入脱纤维兔血，轻轻摇匀(不要产生气泡)，然后倾注灭菌平皿中凝固即为血琼脂培养基。用灭菌棉试纸分别蘸取金黄色葡萄球菌、乙型链球菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、变形杆菌六种菌液，菌液浓度为1.0×105cfu.ml-1，涂布于整个培养基表面，反复几次，使其均匀。用直径5mm的无菌金属打孔器，均匀地在每一平板打6个孔，然后用移液器在每孔中加药液100μl；置37℃电热恒温培养箱内培养24h后，观察并记录抑菌圈的有无及其大小见表2。
采用试管稀释法进行最低抑菌浓度实验：取蛋白胨10g，牛肉膏5g，氯化钠5g，加蒸馏水100ml,调pH至7.6，再过滤，分装，高压灭菌后冷却，制成肉汤培养基。乙型链球菌营养要求高，将灭菌后的肉汤培养基冷却，然后加入10％的胎牛血清备用。然后将上述药物及菌种，用无菌小试管11支排于试管架，第1支不加肉汤培养基，第2－11管各加1ml；于第1支试管中加入配制好的药液2ml，取1ml加入第2管，混匀后取1ml加入第3管，依次倍比稀释，自第10管吸出1ml弃去，第11管系对照管，将各管中加入已校正浓度的菌液(105cfu.ml-1)0.1ml，混匀后放置37℃培养24h，观察结果，找出抑制细菌生长的最低药物浓度，3次实验结果的平均值即为药物的最低抑菌浓度(MIC)。结果见表2(注：“-”表示没有作用)。将MIC以上浓度的培养物各浓度取0.1ml倾注琼脂培养基(每浓度做三皿)，37℃，24h后，观察细菌生长情况，用活菌计数法检查平皿上菌落，平均数小于5个的最小稀释度的药物浓度即为最低杀菌浓度(MBC)见表2(注：“-”表示没有作用)。
表2白及多糖对各种有害菌的作用
实施例5：白及护肤产品对金葡菌感染小鼠的影响
NIH小鼠，雌雄兼用，体重18～22g，由湖南中医学院动物实验中心提供，合格证号为湘医动字第20－001号。实验动物环境：清洁级环境。实验室温度22-25℃，湿度55-65％。NIH小鼠随机分成6组每组10只。4组样品组分别以40g.kg-1的剂量灌胃给药，空白对照组给予等体积生理盐水，每日2次。第3天给药后60min，按0.1mL.10g-1腹腔注射金黄色葡萄球菌培养液(12亿个/mL)，观察5天内动物死亡情况，统计死亡数见表3。
表3白及多糖对金葡菌感染小鼠的保护作用
项目 动物数 剂量(g.kg-1) 死亡数 死亡率(p)
生理盐水 20 40 20 1
99％白及多糖 20 40 5 0.25
白及护肤产品 20 40 0 0
实施例6：白及护肤产品对小鼠伤口愈合的影响
NIH小鼠，雌雄兼用，体重18～22g，由湖南中医学院动物实验中心提供，合格证号为湘医动字第20－001号。实验动物环境：清洁级环境。实验室温度22-25℃，湿度55-65％。NIH小鼠随机分成8组，每组10只。将壳聚糖用1％乙酸溶解，冻干后得壳聚糖薄膜片。4组样品组用碘液消毒伤口处后，分别将冻干产品贴敷伤口处，再用医用胶布包扎固定好，空白对照组采用医院常规伤口处理办法进行包扎(碘液消毒，用消毒纱布包扎处理)，每日2次。小鼠伤口深度1cm、长度2cm，观察5天内小鼠伤口愈合情况见表4。
表4白及多糖对小鼠伤口愈合的保护作用

Claims (8)

1.一种白及护肤产品，其特征在于是由各原料成份以以下重量份组成：白及水溶性多糖4～10份、壳聚糖0.5～4份、乳酸0.5～1.5份，其余为蒸馏水，混合后冷冻至干，其中所述白及水溶性多糖的具体制备步骤包括：
（1）白及淀粉水解：粉碎干燥白及，加入淀粉酶水溶液，使淀粉酶的终浓度为2U以上，30-50℃下处理3-7小时，得水解混合液；
（2）白及水溶性多糖提取：将水解混合液加热至60-80℃进行回流提取60-180min，加入石油醚搅拌10～30min后，静置1～3小时分层去除含有石油醚的上层溶液，得不含有石油醚的下层溶液，再经5000～8000rpm离心10～30min得上清液和沉淀Ⅰ；
（3）醇沉：将上清液在50-60℃减压浓缩至一定体积，再加入95%乙醇至终浓度达到65%以上，醇沉10-20 h，进行过滤，得滤液Ⅱ和滤渣Ⅱ，滤液Ⅱ进行减压浓缩至原有体积的1/10-1/20，对浓缩液进行常规结晶处理得葡萄糖晶体；
（4）白及水溶性多糖柱纯化：向滤渣Ⅱ中加入少量的水进行溶解，将其溶液上SEPHADEXG-15柱分离，用3BV～6BV的水进行洗脱并收集洗脱液，并浓缩洗脱液至原有体积的1/15～/25，再上硅胶柱分离用3BV～6BV的水进行洗脱并收集白及水溶性多糖成分浓缩至干，获得白及水溶性多糖。
2.如权利要求1所述的产品，其特征在于是由各原料成份以以下重量份组成：白及水溶性多糖6～8份、壳聚糖1～2份、乳酸0.5～0.8份，其余为蒸馏水，混合后冷冻至干。
3.如权利要求1所述的产品，其特征在于是由各原料成份以以下重量份组成：白及水溶性多糖7份、壳聚糖1份、乳酸0.6份，其余为蒸馏水，混合后冷冻至干。
4.如权利要求1所述的产品，其特征在于步骤(1)中所述淀粉酶水溶液的体积L与白及重量kg比为8-20:1。
5.如权利要求1所述的产品，其特征在于步骤(2)中所述石油醚是采用90～120℃沸程规格的石油醚，其体积L与水解混合液的体积L比为2～5：1。
6.如权利要求1所述的产品，其特征在于步骤(3)中所述一定体积是指原有体积的1/10-1/40。
7.如权利要求1所述的产品，其特征在于步骤(4)中用少量的水溶解滤渣Ⅱ时，所用水的体积L与滤渣Ⅱ重量kg比例为1～2.5：1。
8.如权利要求1～3所述的产品在用于制备各种患者伤口的止血、皮肤愈合和抑制各种病原菌医用材料的用途，或在用于制备化妆品中保水材料的用途。
CN201610079396.2A 2016-02-04 2016-02-04 白及护肤产品及其制备方法 Active CN105687036B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610079396.2A CN105687036B (zh) 2016-02-04 2016-02-04 白及护肤产品及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610079396.2A CN105687036B (zh) 2016-02-04 2016-02-04 白及护肤产品及其制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105687036A CN105687036A (zh) 2016-06-22
CN105687036B true CN105687036B (zh) 2018-10-02

Family

ID=56222150

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610079396.2A Active CN105687036B (zh) 2016-02-04 2016-02-04 白及护肤产品及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105687036B (zh)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109142347A (zh) * 2018-11-08 2019-01-04 湖南食品药品职业学院 一种白及粉快速鉴别方法
CN110420151A (zh) * 2019-06-14 2019-11-08 杭州一纯生物科技有限公司 一种白及提取物免洗面膜组合物及其制备方法
CN110672466A (zh) * 2019-11-03 2020-01-10 湖南食品药品职业学院 一种便携式鉴别白及粉的方法
CN112480280B (zh) * 2020-12-08 2022-06-24 中国科学院新疆理化技术研究所 一种中亚白及多糖衍生物的制备方法和用途

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101195839A (zh) * 2007-12-28 2008-06-11 中华全国供销合作总社南京野生植物综合利用研究院 白芨多糖胶精制工艺
CN104287997A (zh) * 2013-07-17 2015-01-21 杜建安 一种本草抗菌清洗液的配制及工艺

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101195839A (zh) * 2007-12-28 2008-06-11 中华全国供销合作总社南京野生植物综合利用研究院 白芨多糖胶精制工艺
CN104287997A (zh) * 2013-07-17 2015-01-21 杜建安 一种本草抗菌清洗液的配制及工艺

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
《白芨多糖的分子量测定及其吸湿保湿性评价》;孔令姗等;《日用化学工业》;20150222;第45卷(第2期);第97页左栏第4-7行、最后两行，第95页左栏最后一段-右栏第6段 *
《白芨多糖胶研究进展》;张卫明等;《2014年中华中医药学会药膳分会年论文集》;20140419;第70-76页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN105687036A (zh) 2016-06-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105687036B (zh) 白及护肤产品及其制备方法
CN102114044B (zh) 一种人工加工熊胆粉及其制备方法
CN104368031A (zh) 一种医用抗菌敷料及其制备方法
CN104163847B (zh) 蝇蛆活性蛋白肽的制备方法与所制备的蝇蛆活性蛋白肽及其用途
CN105123816A (zh) 一种检验科用杀菌消毒液及制备方法
CN110742908A (zh) 一种美洲大蠊提取物的制备工艺
CN110639007A (zh) 一种口服型重组人乳铁蛋白丝蛋白水凝胶及其在制备增强免疫力的药物中的应用
CN104367987B (zh) 兽用黄芪制剂及其制备方法
CN105617316A (zh) 一种检验科用抑菌消毒液及制备方法
CN109512851B (zh) 一种医用抑菌助产凝胶的制备方法
CN107319222A (zh) 一种安神补脑绞股蓝中草药保健饮料及其制备方法
CN106668331A (zh) 一种具有消炎抑菌及促进创面愈合的组合物及制配方法
CN108066228B (zh) 一种保湿抗菌沐浴露及其制备方法
CN105288703A (zh) 杀菌消炎无纺布敷料及制备方法
JPH08143462A (ja) 免疫賦活剤及び抗腫瘍剤
CN111110832A (zh) 一种蜗牛提取液和枸骨提取液治愈创伤及疤痕的制剂及其制备方法
JP7391204B2 (ja) ワモンゴキブリの抽出物、製剤、調製方法およびその使用
CN101755863A (zh) 金银花面条及其生产方法
CN104857116B (zh) 中药地榆在制备抗真菌药物增效剂中的应用
CN102068479B (zh) 治疗慢性尿路感染的中药组合物及其制备方法
CN105582316A (zh) 一种止血抑菌合成材料及其制备方法
CN105535512A (zh) 一种止血生肌药物及其制备方法
CN110721297A (zh) 治疗慢性前列腺炎及前列腺增生复方植物药及制备方法
CN105012201B (zh) 含山楂核醇提物的具有抗幽门螺杆菌功效的口腔护理产品
CN107913332A (zh) 一种检验科用中西医结合消毒剂及制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
TA01 Transfer of patent application right
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20180817

Address after: 410205 Room 601, 6 / F, Changsha CLP software park headquarters building, Changsha high tech Development Zone, Changsha, Hunan, 39

Applicant after: Changsha Aiyang Medical Technology Co Ltd

Address before: 410128 Furong district, Hunan, Changsha

Applicant before: Li Lanlan

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant