CN101384611A - 蛋白多糖的制造方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种有效且低廉地从天然资源中回收蛋白多糖的方法。其涉及的蛋白多糖的制造方法包含将含有蛋白多糖的生物学材料在0.0025N～0.1N的碱溶液中进行浸渍的工序以及将浸渍后的溶液进行回收的工序。本发明与以往的提取方法相比，可以简便且在短时间内在其未变性、未降解的状态下回收蛋白多糖，可以大大降低蛋白多糖的制造成本。另外，本发明的方法可以从本来被视作废弃处理的鱼类、鸟类及哺乳类等的废弃部位中回收工业可利用性高的蛋白多糖，也可以对工业废弃物的有效利用及工业废弃物本身的减少做出贡献。

Description

蛋白多糖的制造方法
技术领域
[0001]本发明涉及从含有蛋白多糖的生物学材料，例如鱼类、软体动物、鸟类及哺乳类的软骨组织中提取、制造蛋白多糖的方法，所述的蛋白多糖作为医药品原料、医疗用品材料、化妆品原料、食品材料、工业用材料等有用。
背景技术
[0002]蛋白多糖是在一个核心蛋白上共价结合数个至数十个直链状的糖链而形成的具有极为复杂且多样结构的糖蛋白质的总称，软骨组织中存在的蛋白多糖所含有的具有代表性的糖链是硫酸软骨素。
[0003]由于具有优异的保湿性、生物相容性或润滑性等的高利用性，硫酸软骨素是一种颇受产业界关注的成分，现已开发出多种从天然资源中有效回收及制造的方法。
[0004]在软骨组织中，硫酸软骨素并非自身单独存在，而是以蛋白质复合物即蛋白多糖的形式存在。但是，由于糖蛋白质复合物的这种复杂结构，直接提取蛋白多糖在多数情况下难以进行，因此主要采用将蛋白多糖的核心蛋白部分彻底降解而仅提取硫酸软骨素的方法。该方法的产品是硫酸软骨素等粘多糖。
[0005]另一方面，直接回收、制造并利用蛋白多糖而不是硫酸软骨素的尝试也在进行。特别是，在鱼类、鸟类及哺乳类的软骨组织中，含有以硫酸软骨素为主要糖链的蛋白多糖；另一方面，由于这些软骨组织通常进行废弃处理，因而有人提出了几种兼具废弃物有效利用的、由软骨组织制造蛋白多糖的方法。
[0006]例如，有人公开了使用盐酸胍(专利文献1)或使用醋酸(专利文献2)等方法从鲑鱼鼻软骨中提取蛋白多糖的方法。但遗憾的是，现有的任何一种方法提取和精制成本都高，不能称其达到了实用化的水平。
专利文献1：特开2001—172296号公报
专利文献2：特开2002—69097号公报
发明内容
[0007]本发明的课题在于开发一种从鱼类、软体动物、鸟类或哺乳类、特别是从它们的废弃部位中以低成本制造可以经口摄取的蛋白多糖的方法。
[0008]本发明者们通过在一定条件下使用本来不适用于蛋白质和蛋白质复合物的回收、制造的碱溶液，发现可以有效地从软骨组织及其他含有蛋白多糖的生物学材料中回收作为糖蛋白质复合物的蛋白多糖，从而完成了下列各发明。
[0009](1)一种蛋白多糖的制造方法，包含将含有蛋白多糖的生物学材料在0.0025N～0.1N的碱溶液中进行浸渍的工序以及将浸渍后的溶液进行回收的工序。
[0010](2)上述(1)中所述的制造方法，其中所述的制造方法进一步包含从所述回收的溶液中分离蛋白多糖的工序。
[0011](3)上述(1)或(2)中所述的制造方法，其中所述碱溶液是碱金属盐的溶液。
[0012](4)上述(1)～(3)中任一项所述的制造方法，其中所述的含有蛋白多糖的生物学材料是鱼类、软体动物、鸟类或哺乳类的软骨组织、肌肉纤维或皮。
[0013](5)上述(4)中所述的制造方法，其中所述的含有蛋白多糖的生物学材料是鱼类、鸟类或哺乳类的软骨组织。
[0014]本发明与以往的提取方法相比，可以简便地且短时间内在其未变性、未降解的状态下回收蛋白多糖，可以大大降低蛋白多糖的制造成本。另外，本发明的方法可以从本来被视作废弃处理的鱼类、鸟类及哺乳类等的废弃部位中回收工业上可利用性高的蛋白多糖，也可以对工业废弃物的有效利用及工业废弃物本身的减少做出贡献。
[0015]另外，本发明中不一定需要添加用于使组织内包含的蛋白质降解酶失活的蛋白质降解酶阻断剂(抑制剂)。所述阻断剂的效果并非对所有的蛋白质降解酶有效，而且许多阻断剂本身对人体有害，当制造作为食品材料的蛋白多糖时，并不优选使用阻断剂，而本发明并不需要阻断剂，因此可以避免上述问题。
[0016]本发明是基于使用本被视为禁忌的碱溶液的构思，提取、制造含有通常对热或碱不稳定的含有蛋白质的蛋白多糖的方法。
[0017]蛋白多糖是糖与蛋白质的复合物，但核心蛋白与结合该蛋白的糖链的结合力弱、具有容易分离的性质。因此，它的提取或精制一般极为困难，必须注意与仅由蛋白质形成的胶原或仅由糖形成的硫酸软骨素等的提取的区别。因此，现有技术工序变得复杂、或者伴有手工操作的部分多等，不适合大量生产。
[0018]另外，通常蛋白质对热或酸、特别是碱不稳定，具有容易变性、降解的性质。利用该性质，主动采用碱降解蛋白质的方法已被公知，但既防止蛋白质部分的降解，又用碱提取作为糖蛋白质复合物的蛋白多糖的方法还不为人们所知。
[0019]本发明能适用于含有蛋白多糖的生物学材料，例如鱼类、软体动物、鸟类或哺乳类的软骨组织、肌肉纤维或皮，优选适用于软骨组织。本发明中使用的软骨组织可以利用鱼类、鸟类或哺乳类，特别是它们任何一类的废弃部位。本发明中的软骨组织，是指单独的软骨或者软骨的周围部分，例如含有骨、肌肉纤维、皮等的组织的任意一种。
[0020]本发明中，特别优选利用的是通常被称为冰头的、鲑鱼头部所含有的占其平均重量约6％的鼻软骨组织。在北海道沿岸地区捕获的鲑鱼(大部分是秋鲑(シロサケ))在作为各种加工品进行处理时，其头部多数情况下是不需要的，因此，虽然一部分切断的头部被加工成鱼粉而利用，但其大部分作为工业废弃物而被丢弃处理。冰头可以从这种废弃物中简便、低廉且稳定地获得。
[0021]另外，本发明中，除冰头以外，还可以利用鳐鱼的软骨组织、鲨鱼的软骨组织等源于鱼类的软骨组织、鸡的软骨组织等鸟类软骨组织、以及牛的咽喉软骨或支气管软骨、鲸的软骨等源于哺乳动物的软骨组织。进而，人们已知软体动物鱿鱼或章鱼的表皮也存在蛋白多糖，这些软体动物的表皮等也可以在本发明中利用。特别地，有人报道了太平洋褶鱿鱼(スルメイカ)的表皮中存在几乎不含硫酸的软骨素-蛋白质复合物，此外，软骨素占太平洋褶鱿鱼表皮中的粘多糖的70％以上(须山等合著，“鱿鱼的利用”，1980年11月发行，第93页，恒星社)，因而太平洋褶鱿鱼的表皮可用作本发明中含有蛋白多糖的生物学材料的一个实例。上述含有蛋白多糖的生物学材料多数还是工业废弃物，其容易获得。这些原料在浸渍于下文所述的碱溶液之前，为了增加表面积以提高蛋白多糖的提取量，优选尽可能地微细破碎。
[0022]本发明使用的碱溶液，可以适当使用碱金属或其盐的水溶液、碱土类金属或其盐的水溶液等，但从蛋白多糖的提取效率、后处理的简易程度等来看，优选使用碱金属的水溶液如苛性钠(NaOH)、碳酸氢钠、碳酸钙、苛性钾，特别优选使用苛性钠。
[0023]碱溶液的浓度为0.0025N～0.1N，优选为0.01N～0.05N。当使用0.0025N～0.1N的碱溶液时，浸渍时间优选为9小时以上。另外，当使用0.01N～0.05N的碱溶液时，浸渍时间优选为9小时左右。进一步地，当使用0.05N～0.1N的碱溶液时，浸渍时间优选为9小时以下。另外，当使用0.01N～0.1N的碱溶液时，将提取时间设定为2小时左右，也可以抑制蛋白多糖的核心蛋白的降解。通过这些条件，可以回收、制造具有更高分子量的蛋白多糖。
[0024]在0℃～室温下、优选在0℃～10℃下、更优选在0℃～4℃下，将软骨组织在碱溶液中进行浸渍。特别是，通过将浸渍温度设定为0℃～4℃，可以提取几乎不降解的、作为高分子的糖蛋白质复合物的蛋白多糖。
[0025]相对于1重量份的软骨，采用2～15重量份、优选4～12重量份、更优选6～12重量份的碱溶液进行浸渍。优选采用混合器或搅拌器一边搅拌一边浸渍。
[0026]从软骨组织中进行的蛋白多糖的提取，可以通过利用例如Galambos法(John等，ANALYTICAL BIOCHEMISTRY，1967年，第19卷，第119-132页)检测乃至定量糖醛酸的量来进行监测，但也可以通过其他公知方法检测糖醛酸，并进行监测。
[0027]浸渍结束后的碱溶液，由于较多地含有提取蛋白多糖后的残渣，优选利用过滤、离心分离及其他方法将其除去。也可以将含有蛋白多糖的提取液直接作为产品而利用，但优选采用适当方法将蛋白多糖进行分离乃至精制，达到对于蛋白多糖的各种用途所要求的纯度。
[0028]本发明中，作为蛋白多糖的精制方法并不需要特别的方法，作为优选方法可以列举出离心分离法。通过离心分离操作，细小的固体作为沉淀残渣、源于原料的油脂成分作为上层漂浮物、可以分别容易地除去。
[0029]另外，将通过离心分离法回收的含有蛋白多糖的液相，也可以进一步采用滤纸或者具有适当截留分子量的超滤膜分离装置进行过滤。排阻分子量可以大概处于5万～100万的范围。在该操作中，如果使用截留分子量为50万以上的滤器，则还可以从液相中除去胶原，可以提高蛋白多糖的纯度。另外，通过向含有蛋白多糖的液相中加水以降低液相的粘度，可以使膜的透过变得容易，并且重复该操作，还可以除去略微产生的鱼臭。
[0030]进而，通过将所得到的浓缩液加入到用食盐饱和的乙醇中，还可以回收凝胶状的蛋白多糖。该凝胶状的蛋白多糖也可以利用真空冷冻干燥机使其形成固体。或者，也可以利用喷雾干燥机使其干燥，形成粉末状固体。
附图说明
[0031]图1表示使用苛性钠和醋酸时，蛋白多糖的回收量图。
具体实施方式
[0032]下面列举实施例对本发明进行更详细地说明，但本发明并不限定于这些实施例。
实施例
[0033]<实施例1>
从—40℃下冷冻保存的秋鲑头部摘除鼻软骨，将其利用电动绞肉机绞碎成碎末(mince)状，准备200.00g作为初始原料。向5升的提取容器中加入事先冷却到0℃的蒸馏水2397.60g，进而放入固体苛性钠2.40g，制备总量2400.00g(0.025N)的苛性钠水溶液。向该提取容器中放入初始原料200.00g，使用搅拌器一边搅拌一边浸渍9小时。
[0034]浸渍结束后，将内容物转移到另一安装有不锈钢滤器(筛孔大小为1mm见方)的容器中，回收含有蛋白多糖的提取液。
[0035]将提取液利用IWAKI CFS-400型离心分离机在3500rpm下离心分离20分钟，再除去固体成分及油脂成分，回收含有蛋白多糖的液相。
[0036]进而，将该液相利用滤纸(Advantec公司生产)进行过滤，再加入6倍于滤液量的蒸馏水，然后利用日本Millipore生产的制备级(PREP/SCALE)TFF膜(截留分子量10万)同时进行截留和浓缩。
[0037]取得到的一部分浓缩液，测定液体中的固体成分重量。测定是通过干燥炉(YAMATO DX401)在105℃干燥16小时，使水分完全蒸发后，利用数字式称重仪(A&D公司GF—400)精密测定残留固体成分。其结果以换算值计，从200.00g初始原料可以得到相当于其3.32％的6.64g干燥固体成分。
[0038]另外，通过利用氨基酸自动分析装置(日立制作所公司制造，L-8500氨基酸分析仪)测定浓缩液中氨基酸的量来对浓缩液中的胶原量进行定量，并且通过Galambos法测定糖醛酸的量来计算蛋白多糖的量。
[0039]进而，利用高效液相色谱装置(岛津制作所、柱TSK-GELG4000PWXL)测定蛋白多糖的分子量。
[0040]从以上分析结果可知，固体成分中存在蛋白质25.0％、灰分21.5％、碳水化合物52.9％、脂质0.6％。根据专利文献1，其记载了蛋白多糖的核心蛋白的重量比为约7.0％，因此本发明中的蛋白多糖由碳水化合物约52.9％来计算，推定其纯度为约57％。另外，蛋白多糖的分子量为约220万。
[0041]在上述实施例所示的操作中，图1表示的是将苛性钠溶液的浓度变为0.0025N、0.025N、0.05N、以及将苛性钠换成0.666N的醋酸进行24小时的浸渍、提取时，蛋白多糖回收量(糖醛酸的量)随时间变化的考察结果。
[0042]<实施例2>
从—40℃下冷冻保存的秋鲑头部摘除鼻软骨，将其利用电动绞肉机绞碎成碎末状，再将其浸渍于丙酮中，将鼻软骨进行脱脂及脱水。将处理后的鼻软骨经通风或者减压干燥后所得到的24.00g作为初始原料。向5升的提取容器中加入事先冷却到5℃的蒸馏水2997.75g，进而放入固体苛性钠2.25g，制备总量3000.00g(0.02N)的苛性钠水溶液。向该提取容器中放入初始原料24.00g，使用搅拌器一边搅拌一边浸渍9小时。
[0043]浸渍结束后，将内容物转移到另一安装有不锈钢滤器(筛孔大小为1mm见方)的容器中，除去鼻软骨，回收含有蛋白多糖的提取液。
[0044]将提取液利用日立himac CF7D2型离心分离机在3000rpm下离心分离20分钟，再除去固体成分及油脂成分，回收含有蛋白多糖的液相。
[0045]进而，将该液相利用滤纸(Advantec公司生产)进行过滤，再加入6倍于滤液量的蒸馏水，然后利用日本Millipore生产的BIOMAX100K聚醚砜膜(截留分子量10万)同时进行截留和浓缩。
[0046]取得到的一部分浓缩液，测定液体中的固体成分重量。测定是通过干燥炉(YAMATO DX401)在105℃干燥16小时，使水分完全蒸发后，利用数字式称重仪(A&D公司GF—400)精密测定残留固体成分。其结果以换算值计，从24.00g初始原料可以得到相当于其30.29％的7.50g干燥固体成分。
[0047]另外，通过利用氨基酸自动分析装置(日立制作所公司制造，L-8500氨基酸分析仪)测定浓缩液中氨基酸的量来对浓缩液中的胶原量进行定量，并且通过Galambos法测定糖醛酸的量来计算蛋白多糖的量。进而，利用高效液相色谱装置(岛津制作所、柱TSK-GELG4000PWXL)测定蛋白多糖的分子量。
[0048]从以上分析结果可知，固体成分中存在蛋白质11.8％、灰分18.4％、碳水化合物67.8％、脂质0.0％。根据专利文献1，其记载了蛋白多糖的核心蛋白的重量比为约7.0％，因此本发明中的蛋白多糖的推定纯度经计算为(碳水化合物×0.07+脂质)/(碳水化合物+蛋白质+脂质)×100＝91.1％。另外，蛋白多糖的分子量为约120万。
[0049]<实施例3>
从—40℃下冷冻保存的秋鲑头部摘除鼻软骨，将其利用电动绞肉机绞碎成碎末状，再将其浸渍于丙酮中，将鼻软骨进行脱脂及脱水。将处理后的鼻软骨经通风或者减压干燥后所得到的17.90g作为初始原料。向5升的提取容器中加入事先冷却到5℃的蒸馏水2322.67g，进而放入固体苛性钾2.33g，制备总量2325g(0.018N)的苛性钾水溶液。向该提取容器中放入初始原料17.90g，使用搅拌器一边搅拌一边浸渍9小时。
[0050]浸渍结束后，将内容物转移到另一安装有不锈钢滤器(筛孔大小为1mm见方)的容器中，除去鼻软骨，回收含有蛋白多糖的提取液。
[0051]将提取液利用日立himac CF7D2型离心分离机在3000rpm下离心分离20分钟，再除去固体成分及油脂成分，回收含有蛋白多糖的液相。
[0052]进而，将该液相利用滤纸(Advantec公司生产)进行过滤，再加入6倍于滤液量的蒸馏水，然后利用日本Millipore生产的BIOMAX100K聚醚砜膜(截留分子量10万)同时进行截留和浓缩。
[0053]取得到的一部分浓缩液，测定液体中的固体成分重量。测定是通过干燥炉(YAMATO DX401)在105℃干燥16小时，使水分完全蒸发后，利用数字式称重仪(A&D公司GF—400)精密测定残留固体成分。其结果以换算值计，从17.90g初始原料可以得到相当于其29.61％的5.29g干燥固体成分。
[0054]另外，通过利用氨基酸自动分析装置(日立制作所公司制造，L-8500氨基酸分析仪)测定浓缩液中氨基酸的量来对浓缩液中的胶原量进行定量，并且通过Galambos法测定糖醛酸的量来计算蛋白多糖的量。进而，利用高效液相色谱装置(岛津制作所、柱TSK-GELG4000PWXL)测定蛋白多糖的分子量。
[0055]从以上分析结果可知，固体成分中存在蛋白质14.0％、灰分22.4％、碳水化合物63.6％、脂质0.0％。根据专利文献1，其记载了蛋白多糖的核心蛋白的重量比为约7.0％，因此本发明中的蛋白多糖的推定纯度经计算为(碳水化合物×0.07+脂质)/(碳水化合物+蛋白质+脂质)×100＝87.7％。另外，蛋白多糖的分子量为约120万。
[0056]<实施例4>
手工除去国产鸡胸(ヤゲン)软骨上的肉片后，利用电动绞肉机绞碎成碎末状，再将其浸渍于丙酮中，从鸡胸软骨中进行脱脂及脱水。将处理后的软骨经通风或者减压干燥后所得到的44.40g作为初始原料。向5升的提取容器中加入事先冷却到5℃的蒸馏水2997.75g，进而放入固体苛性钠2.25g，制备总量3000.00g(0.02N)的苛性钠水溶液。向该提取容器中放入初始原料44.40g，使用搅拌器一边搅拌一边浸渍9小时。
[0057]浸渍结束后，将内容物转移到另一安装有不锈钢滤器(筛孔大小为1mm见方)的容器中，除去软骨，回收含有蛋白多糖的提取液。
[0058]将提取液利用日立himac CF7D2型离心分离机在3000rpm下离心分离20分钟，再除去固体成分及油脂成分，回收含有蛋白多糖的液相。
[0059]进而，将该液相利用滤纸(Advantec公司生产)进行过滤，再加入6倍于滤液量的蒸馏水，然后利用日本Millipore生产的BIOMAX100K聚醚砜膜(截留分子量10万)同时进行截留和浓缩。
[0060]取得到的一部分浓缩液，测定液体中的固体成分重量。测定是通过干燥炉(YAMATO DX401)在105℃干燥16小时，使水分完全蒸发后，利用数字式称重仪(A&D公司GF—400)精密测定残留固体成分。其结果以换算值计，从44.40g初始原料可以得到相当于其22.23％的9.87g干燥固体成分。
[0061]另外，通过利用氨基酸自动分析装置(日立制作所公司制造，L-8500氨基酸分析仪)测定浓缩液中氨基酸的量来对浓缩液中的胶原量进行定量，并且通过Galambos法测定糖醛酸的量来计算蛋白多糖的量。进而，利用高效液相色谱装置(岛津制作所、柱TSK-GELG4000PWXL)测定蛋白多糖的分子量。
[0062]从以上分析结果可知，固体成分中存在蛋白质31.3％、灰分16.9％、碳水化合物51.8％、脂质0.0％。根据专利文献1，其记载了蛋白多糖的核心蛋白的重量比为约7.0％，因此本发明中的蛋白多糖的推定纯度经计算为(碳水化合物×0.07+脂质)/(碳水化合物+蛋白质+脂质)×100＝66.7％。另外，蛋白多糖的分子量为约92万(16％)和约46万(84％)。
[0063]<实施例5>
从鳐鱼(广东鳐，カスべ)中手工摘除软骨，利用电动绞肉机绞碎成碎末状，再将其浸渍于丙酮中，进行脱脂及脱水。将处理后的软骨经通风或者减压干燥后所得到的12.00g作为初始原料。向5升的提取容器中加入事先冷却到5℃的蒸馏水1678.74g，进而放入固体苛性钠1.26g，制备总量1680.00g(0.02N)的苛性钠水溶液。向该提取容器中放入初始原料12.00g，使用搅拌器一边搅拌一边浸渍9小时。
[0064]浸渍结束后，将内容物转移到另一安装有不锈钢滤器(筛孔大小为1mm见方)的容器中，除去软骨，回收含有蛋白多糖的提取液。
[0065]将提取液利用日立himac CF7D2型离心分离机在3000rpm下离心分离20分钟，再除去固体成分及油脂成分，回收含有蛋白多糖的液相。
[0066]进而，将该液相利用滤纸(Advantec公司生产)进行过滤，再加入6倍于滤液量的蒸馏水，然后利用日本Millipore生产的BIOMAX100K聚醚砜膜(截留分子量10万)同时进行截留和浓缩。
[0067]取得到的一部分浓缩液，测定液体中的固体成分重量。测定是通过干燥炉(YAMATO DX401)在105℃干燥16小时，使水分完全蒸发后，利用数字式称重仪(A&D公司GF—400)精密测定残留固体成分。其结果以换算值计，从12.00g初始原料可以得到相当于其17.92％的2.15g干燥固体成分。
[0068]另外，通过利用氨基酸自动分析装置(日立制作所公司制造，L-8500氨基酸分析仪)测定浓缩液中氨基酸的量来对浓缩液中的胶原量进行定量，并且通过Galambos法测定糖醛酸的量来计算蛋白多糖的量。进而，利用高效液相色谱装置(岛津制作所、柱TSK-GELG4000PWXL)测定蛋白多糖的分子量。
[0069]从以上分析结果可知，固体成分中存在蛋白质43.5％、灰分19.5％、碳水化合物37.0％、脂质0.0％。根据专利文献1，其记载了蛋白多糖的核心蛋白的重量比为约7.0％，因此本发明中的蛋白多糖的推定纯度经计算为(碳水化合物×0.07+脂质)/(碳水化合物+蛋白质+脂质)×100＝49.2％。另外，蛋白多糖的分子量为约170万。
[0070]<实施例6>
从鲨鱼中手工摘除软骨，利用电动绞肉机绞碎成碎末状，再将其浸渍于丙酮中，进行脱脂及脱水。将处理后的软骨经通风或者减压干燥后所得到的12.00g作为初始原料。向5升的提取容器中加入事先冷却到5℃的蒸馏水1678.74g，进而放入固体苛性钠1.26g，制备总量1680.00g(0.02N)的苛性钠水溶液。向该提取容器中放入初始原料12.00g，使用搅拌器一边搅拌一边浸渍9小时。
[0071]浸渍结束后，将内容物转移到另一安装有不锈钢滤器(筛孔大小为1mm见方)的容器中，除去软骨，回收含有蛋白多糖的提取液。
[0072]将提取液利用日立himac CF7D2型离心分离机在3000rpm下离心分离20分钟，再除去固体成分及油脂成分，回收含有蛋白多糖的液相。
[0073]进而，将该液相利用滤纸(Advantec公司生产)进行过滤，再加入6倍于滤液量的蒸馏水，然后利用日本Millipore生产的BIOMAX100K聚醚砜膜(截留分子量10万)同时进行截留和浓缩。
[0074]取得到的一部分浓缩液，测定液体中的固体成分重量。测定是通过干燥炉(YAMATO DX401)在105℃干燥16小时，使水分完全蒸发后，利用数字式称重仪(A&D公司GF—400)精密测定残留固体成分。其结果以换算值计，从12.00g初始原料可以得到相当于其11.36％的1.36g干燥固体成分。
[0075]另外，通过利用氨基酸自动分析装置(日立制作所公司制造，L-8500氨基酸分析仪)测定浓缩液中氨基酸的量来对浓缩液中的胶原量进行定量，并且通过Galambos法测定糖醛酸的量来计算蛋白多糖的量。进而，利用高效液相色谱装置(岛津制作所、柱TSK-GELG4000PWXL)测定蛋白多糖的分子量。
[0076]从以上分析结果可知，固体成分中存在蛋白质37.8％、灰分27.4％、碳水化合物37.8％、脂质0.0％。根据专利文献1，其记载了蛋白多糖的核心蛋白的重量比为约7.0％，因此本发明中的蛋白多糖的推定纯度经计算为(碳水化合物×0.07+脂质)/(碳水化合物+蛋白质+脂质)×100＝55.7％。另外，蛋白多糖的分子量为约150万。
[0077]<实施例7>
将太平洋褶鱿鱼(真鱿)的表皮经手工剥离后，浸渍于丙酮中，进行脱脂及脱水。将处理后的表皮经通风或者减压干燥后，用剪刀剪细，再用研钵绞碎至粉末状调制成干燥表皮。向10升的提取容器中加入事先冷却到5℃的蒸馏水5036.20g，进而放入固体苛性钠3.80g，制备总量5040g(0.02N)的苛性钠水溶液。向该提取容器中放入初始原料33.70g，使用搅拌器一边搅拌一边浸渍9小时。
[0078]浸渍结束后，将内容物转移到另一安装有不锈钢滤器(筛孔大小为1mm见方)的容器中，除去表皮，回收含有蛋白多糖的提取液。
[0079]将提取液利用日立himac CF7D2型离心分离机在3000rpm下离心分离20分钟，再除去固体成分及油脂成分，回收含有蛋白多糖的液相。
[0080]进而，将该液相利用滤纸(Advantec公司生产)进行过滤，再加入6倍于滤液量的蒸馏水，然后利用日本Millipore生产的BIOMAX100K聚醚砜膜(截留分子量10万)同时进行截留和浓缩。
[0081]取得到的一部分浓缩液，测定液体中的固体成分重量。测定是通过干燥炉(YAMATO DX401)在105℃干燥16小时，使水分完全蒸发后，利用数字式称重仪(A&D公司GF—400)精密测定残留固体成分。其结果是，从33.70g的干燥表皮可以得到相当于其47.7％的16.10g干燥固体成分。
[0082]另外，通过利用氨基酸自动分析装置(日立制作所公司制造，L-8500氨基酸分析仪)测定浓缩液中氨基酸的量来对浓缩液中的胶原量进行定量，并且通过Galambos法测定糖醛酸的量来计算蛋白多糖的量。进而，利用高效液相色谱装置(岛津制作所、柱TSK-GELG4000PWXL)测定蛋白多糖的分子量。
[0083]从以上分析结果可知，固体成分中存在蛋白质91.7％、灰分1.9％、碳水化合物6.4％、脂质0.0％。根据专利文献1，其记载了蛋白多糖的核心蛋白的重量比为约7.0％，因此本发明中的蛋白多糖的推定纯度经计算为(碳水化合物×0.07+脂质)/(碳水化合物+蛋白质+脂质)×100＝7.0％。另外，蛋白多糖的分子量为约170万。

Claims (5)

1.一种蛋白多糖的制造方法，包含将含有蛋白多糖的生物学材料在0.0025N～0.1N的碱溶液中进行浸渍的工序以及将浸渍后的溶液进行回收的工序。
2.根据权利要求1所述的制造方法，其中所述的制造方法进一步包含从所述回收的溶液中分离蛋白多糖的工序。
3.根据权利要求1或2所述的制造方法，其中所述的碱溶液是碱金属盐的溶液。
4.根据权利要求1～3任一项所述的制造方法，其中所述的含有蛋白多糖的生物学材料是鱼类、软体动物、鸟类或哺乳类的软骨组织、肌肉纤维或皮。
5.根据权利要求4所述的制造方法，其中所述的含有蛋白多糖的生物学材料是鱼类、鸟类或哺乳类的软骨组织。
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