CN103941017A - C反应蛋白检测试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种C反应蛋白检测试剂盒，其含有包被有本发明C反应蛋白单克隆抗体的多孔板、酶工作液、样本稀释液、酶反应底物、C反应蛋白校准品、和C反应蛋白质控品。通过本发明的试剂盒定量检测存在于血清或血浆中的CRP含量，实现对炎症的早期诊断，检测速度快、灵敏度高、特异性好。

Description

C反应蛋白检测试剂盒
技术领域
本发明属于分子免疫学领域，具体涉及一种C反应蛋白检测试剂盒、以及C反应蛋白单克隆抗体及其用途。 
背景技术
C反应蛋白（CRP）是1930年由Tillett和Francis发现的肺炎患者血清中一种与肺炎球菌（现称肺炎链球菌）非特异型的菌体多糖成分C多糖（C-polysacch aride，CPS）发生沉淀反应的物质。1941年Macleod和Avery先后证实这是一种急性感染时出现的蛋白质，与C多糖体的絮状沉淀反应依赖于Ca2+的存在。 
CRP是由5个完全相同的非糖基化的亚单位非共价联结，每个亚单位相对分子质量23017，由206个氨基酸残基组成。CRP这种盘状五聚体特征结构使其归于五聚素（pentraxins）家族。 
CRP是在组织受损、发炎或感染时，经细胞因子如白细胞介素6（IL-6）等诱导，主要在肝脏中合成，为急性期时相反应蛋白。CRP在健康人血清中浓度很低，但对炎症反应非常敏感，炎症开始4h～7h其浓度就显著升高，是非特异性的炎症指示剂。CRP水平可以反映机体潜在的炎症活跃程度，广泛应用于临床。 
健康人的CRP值非常低，一般小于0.8mg/L，90％的健康人CRP<0.3mg/L。而在炎性反应或急性损伤后，CRP的合成则在4～6h内迅速增加，36～50h达高峰，峰值可为正常值的l00～1000倍。其半衰期较短（4～6h），经积极合理治疗后，3～7天迅速降至正常。 
发明内容
根据本发明的一些具体实施方式，提供了一种C反应蛋白单克隆抗体，其由保藏号为CGMCC No.8702的杂交瘤细胞所产生。该杂交瘤细胞于2013年12月31日以CGMCC No.8702的编号保藏于中国普 通微生物菌种保藏管理中心。 
根据本发明的一些具体实施方式，提供了另一种C反应蛋白单克隆抗体，其由保藏号为CGMCC No.8703的杂交瘤细胞所产生。该杂交瘤细胞于2013年12月31日以CGMCC No.8703的编号保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心。 
根据本发明的一些具体实施方式，提供了一种杂交瘤细胞，其保藏号为CGMCC No.8702。根据本发明的一些具体实施方式，提供了另一种杂交瘤细胞，其保藏号为CGMCC No.8703。 
根据本发明的一些具体实施方式，提供了本发明的C反应蛋白单克隆抗体在制备诊断试剂中的用途。根据本发明的一些具体实施方式，提供了本发明的杂交瘤细胞在制备诊断试剂中的用途。本发明的两种C反应蛋白单克隆抗体可以单独用于制备诊断试剂，然而优选组合用于制备诊断试剂。在一些具体实施方式中，所述诊断试剂是C反应蛋白检测试剂。C反应蛋白检测试剂是指用于定量或定性检测人类样本中C反应蛋白的试剂。C反应蛋白检测试剂可检测人类样本中C反应蛋白的存在和/或含量。所述诊断试剂可以是现有技术中任何适当的形式，包括但不限于ELISA检测试剂、免疫比浊检测试剂、磁颗粒检测试剂、化学发光检测试剂、放射免疫检测试剂、免疫荧光检测试剂。实际上，本发明的C反应蛋白单克隆抗体或杂交瘤细胞可以用于制备任何基于抗原-抗体相互作用的检测试剂。在一些具体实施方式中，所述诊断试剂可以体现为液体形式、干粉、冻干粉形式、颗粒形式、多孔板形式或其它本领域公知的形式。 
根据本发明的一些具体实施方式，提供了一种C反应蛋白检测试剂，其包含一种本发明的C反应蛋白单克隆抗体或两种C反应蛋白单克隆抗体的组合。 
根据本发明的一些具体实施方式，提供了一种C反应蛋白检测试剂盒，其包含本发明两种C反应蛋白单克隆抗体的组合。 
根据本发明的一些具体实施方式，提供了一种C反应蛋白检测试剂盒，其包含：包被有本发明一种C反应蛋白单克隆抗体的多孔板、和酶工作液。其中所述酶工作液包含带标记的另一种C反应蛋白单克隆抗体以及酶缓冲液。所述标记选自辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、 放射性标记、免疫荧光标记；酶缓冲液包含磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠、小牛血清和Proclin-300。当多孔板上的单克隆抗体由保藏号为CGMCC No.8702的杂交瘤细胞所产生时，则酶工作液中的单克隆抗体由本发明的另一株杂交瘤细胞产生；反之亦然，当多孔板上的单克隆抗体由保藏号为CGMCC No.8703的杂交瘤细胞所产生时，则酶工作液中的单克隆抗体由保藏号为CGMCC No.8702的杂交瘤细胞产生。 
在一些具体实施方式，本发明的C反应蛋白检测试剂盒还可以根据需要包含样本稀释液、酶反应底物、CRP校准品和质控品。样本稀释液包含盐、表面活性剂、缓冲成分，pH在5-8之间，优选6-7。在一些具体实施方式，样本稀释液包含NaCl、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、山羊血清、吐温20、Proclin-300，pH值6.2-6.6。在一些具体实施方式，样本稀释液可以配制成浓缩型。所述酶反应底物根据所标记的酶而改变，例如当使用辣根过氧化物酶时，适合的底物包括但不限于邻苯二胺（OPD）、ABTS、四甲基联苯胺（TMB）或4氨基安替比林等。当使用碱性磷酸酶时，适合的底物包括但不限于BCIP/NBT。 
在一些具体实施方式，本发明的C反应蛋白检测试剂盒包含：包被有本发明的一种C反应蛋白单克隆抗体的多孔板、酶工作液、样本稀释液、酶反应底物、C反应蛋白校准品和C反应蛋白质控品。其中酶工作液包含辣根过氧化物酶标记的另一种C反应蛋白单克隆抗体。 
在一个具体实施方式，本发明的C反应蛋白检测试剂盒包含： 
包被有第一C反应蛋白单克隆抗体的多孔板， 
酶工作液， 
样本稀释液， 
酶反应底物， 
C反应蛋白校准品、和 
C反应蛋白质控品； 
其中所述酶工作液包含标记有辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶的第二C反应蛋白单克隆抗体和酶缓冲液，所述酶缓冲液包含5.8g/L磷酸氢二钠、0.59g/L磷酸二氢钠、8.0g/L氯化钠、200ml/L小牛血清和适量Proclin-300，Proclin-300为常用生物防腐剂，根据供应商推荐确定 其用量，例如0.5‰-2‰范围内； 
所述样本稀释液包含180g/L氯化钠、58g/L十二水合磷酸氢二钠、5.94g/L二水合磷酸二氢钠、250ml/L山羊血清、10ml/L吐温20，适量Proclin-300，pH值6.2-6.6，Proclin-300为常用生物防腐剂，根据供应商推荐确定其用量，例如0.5‰-2‰范围内； 
所述酶反应底物为辣根过氧化物酶的底物， 
所述C反应蛋白校准品为已知C反应蛋白浓度的血清，浓度分别为2、4、8、16、64ng/ml， 
所述C反应蛋白质控品为浓度在10-60ng/ml之间的血清， 
所述第一C反应蛋白单克隆抗体由保藏号为CGMCC No.8702的杂交瘤细胞所产生时，第二C反应蛋白单克隆抗体由保藏号为CGMCCNo.8703的杂交瘤细胞所产生。 
附图说明
图1.本发明所制备的CRP试剂盒中校准品的线性标准曲线。 
具体实施方式
为了使本发明易于理解，下面结合具体实施例进一步阐述本发明。以下提供了本发明实施方式中所使用的具体材料及其来源。但是，应当理解的是，这些仅仅是示例性的，并不意图限制本发明，与如下试剂和仪器的类型、型号、品质、性质或功能相同或相似的材料均可以用于实施本发明。 
实施例1：单克隆抗体的获得 
1.动物免疫 
为了产生CRP单克隆抗体，选取6周龄、体重约20g的雌性Balb/c小鼠。初次免疫，取CRP重组抗原（购自Prospec）20-50μg加完全福氏佐剂皮下多点注射，第14和28天分别进行第二次和第三次免疫剂量同上，加福氏不完全佐剂腹腔内注射，融合前3天加强免疫，剂量20-50μg为宜，3天后，取脾融合。通常，制备鼠科来源的单克隆抗体，可参考《抗体》手册中描述的方法（Harlow和Lane,Antibodies:A  Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor NY,pp.726,1988）或Kohler和Milstein描述的制备杂交瘤的技术（Nature,256:495-497,1975）。 
2.细胞融合 
制备饲养细胞层：取一只未免疫的Balb/c小鼠，6周，拉颈处死，浸泡在75%酒精内，5min，用无菌剪刀剪开皮肤，暴露腹膜，用无菌注射器注入6ml预冷的培养液（严禁刺破肠管），反复冲洗，吸出冲洗液，冲洗液放入10ml离心管，1200rpm/分离6min，用20%胎牛血清（FCS）的培养液混悬，调整细胞数至1×105/ml，加入96孔板，100μl/孔，放入37℃CO2孵箱培养。 
制备免疫脾细胞：取免疫好的Balb/c小鼠，拉颈处死，无菌取脾脏，用10ml不完全培养液洗一次，脾脏研碎，过200目细胞筛，将脾细胞转移至10ml离心管中，800rpm离心10min，细胞用10ml培养液洗2次，细胞计数，取1×108脾淋巴细胞悬液备用。 
制备骨髓瘤细胞SP2/0：取对数生长骨髓瘤细胞离心，用无血清培养液洗2次，计数，取得5×107细胞备用。 
细胞融合：将骨髓瘤细胞与脾细胞按1：10的比例混合在一起，在50ml离心管中用无血清不完全培养液洗1次，离心，1200rpm，8min；弃上清，用吸管吸净残留液体，以免影响聚乙二醇（PEG）浓度。轻轻弹击离心管底，使细胞沉淀略松动。 
加入37℃预温的1ml45%PEG（分子量4000）溶液，边加边轻微摇动。37℃水浴作用90s。加37℃预温的不完全培养液以终止PEG作用，每隔2min分别加入1ml、2ml、3ml、4ml、5ml和6ml。离心，800rpm,6min。充上清，用含20%小牛血清HAT选择培养液重悬。将上述细胞，加到已有饲养细胞层的96孔板内，每孔加100μl。将培养板置37℃、5%CO2培养箱中培养。 
3.杂交瘤细胞的筛选 
脾细胞和骨髓瘤细胞融合后5天，形成多种细胞的混合体，补加HAT培养基100ul，第10天换HT培养基培养。杂交瘤细胞布满孔底1/5面积时，即可采用间接ELISA法检测培养上清，筛选阳性克隆。以CRP重组抗原包被酶标板（5μg/ml）100μl/孔，4℃过夜，将酶标板孔 中的液体倒尽，加入PBST，重复洗涤三次；加入封闭液200μl/孔进行封闭，置于37℃，1小时。洗涤封闭液，加入100μl细胞培养上清，阳性对照选小鼠的免疫血清，阴性对照选SP2/0培养上清，空白为洗涤液，于37℃静置2h。加入HRP标记羊抗鼠二抗（1:5000）100μl/孔，于37℃静置60min。加入PBST，重复洗涤三次；加入底物反应液100μl/孔，37℃置暗处反应10分钟。加入H2SO4(2mol/L)50μl/孔，终止反应。酶标仪检测450nm吸光度值。结果以CRP重组抗原免疫小鼠，成功得到分泌CRP单克隆抗体的杂交瘤细胞株。 
4.杂交瘤的克隆化 
筛选得到的阳性克隆，采用有限稀释法对杂交瘤克隆化，克隆前1天制备饲养细胞层，将要克隆的杂交瘤细胞用不完全培养基从培养孔内轻轻吹干，计数。调整细胞为5个细胞/ml。取准备的饲养细胞层的细胞培养板，每孔加入稀释细胞100μl。孵育于37℃、5%CO2孵箱中。在第7天换液，以后每3天换液1次。9天可见细胞克隆形成，ELISA法检测检测抗体效价。并将最强的两株阳性克隆再次克隆化，直至细胞阳性率达100%，即可定株；定株的细胞扩大培养。 
5.杂交瘤细胞的保藏 
将能够分泌这两种单克隆抗体的CRP杂交瘤细胞株于2013年12月31日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号分别为CGMCC No.8702和CGMCC No.8703。 
实施例2.单克隆抗体的制备： 
将已保藏的二株杂交瘤细胞分别1×107的细胞浓度注射于BALB/c小鼠腹腔，10天后分别收集腹水。通过以下步骤分别纯化两株单克隆抗体： 
1.收集所得的腹水以2500rpm离心，取上清。加等体积的PBS（pH7.4）与1/2体积的饱和硫酸铵，4℃、静置30min； 
2.以3000rpm，4℃，离心20min； 
3.去沉淀，上清加等体积的饱和硫酸铵，静置30min； 
4.以3000rpm，4℃，离心20min； 
5.取沉淀，加5ml生理盐水与5ml饱和硫酸铵静置30min； 
6.以3000rpm，4℃，离心20min； 
7.沉淀加5ml生理盐水与5ml0.02M的PBS(PH7.4)； 
8.加8倍柱体积的PB缓冲液平衡Protein G凝胶柱（购自GE）； 
9.将第7步中的混合液加到凝胶柱中； 
10.使用10倍柱体积的PB缓冲液洗脱杂蛋白； 
11.用0.2M pH2.8甘氨酸缓冲液洗脱抗体并收集； 
12.使用再生液清洗柱子； 
13.加平衡液（按GE推荐的）平衡柱子。 
实施例3.检测试剂的制备 
1.制备包被有CRP单抗的多孔板： 
a）包被：采用0.05M、pH值为9.6-9.8的碳酸盐缓冲液与适当浓度的实施例2收集的一株CRP抗体（CGMCC No.8702）混合制成包被混合液，并将其加载于微孔板上，4℃包被12h； 
碳酸盐缓冲液标准配方： 
无水碳酸钠          1.600g 
碳酸氢钠            2.940g 
纯化水              定容至1000ml。 
b)洗板：稀释20倍浓缩洗液（pH值6.2-6.6）至1倍浓度后，洗板2次； 
20倍浓缩洗液标准配方： 
c)封闭：将封闭液（磷酸氢二钠5.8g、磷酸二氢钠0.59g、氯化钠8.0g、山羊血清100ml、0.5ml Proclin-300，纯化水定容至1000ml）加载于微孔板上，室温封闭2小时，甩干，干燥过夜。 
2.酶工作液的制备： 
2.1标记步骤: 
(1)称取1mg辣根过氧化物酶（HRP，购自Sigma）溶解于300μl 蒸馏水中。 
(2)于上液中加入0.6μl新配的0.1M NaIO4溶液，室温下避光搅拌20分钟。 
(3)将上述溶液装入透析袋中，使用1mM pH4.4的醋酸钠缓冲液透析，4℃过夜。 
(4)加20μl1M pH9.5碳酸盐缓冲液，使HRP的pH升高到9.0～9.5，然后立即加入5mg本发明的另一株抗体（CGMCC No.8703）(在1ml0.01M碳酸盐缓冲液中)，室温避光轻轻搅拌2小时。 
(5)加0.05ml新配的4mg/ml NaBH4液，混匀，再置4℃2小时。 
(6)将上述液装入透析袋中，使用0.15M pH7.4PBS透析，4℃过夜。 
(7)加入等体积的甘油，-20℃保存，最终辣根过氧化物酶标抗体浓度为1mg/ml。 
2.2酶标记抗体浓度确定： 
采用方针法选择酶标抗体的工作浓度，取2ul酶标抗体(1mg/ml)加入到5ml酶稀释液中，即1：2500的比例。 
2.3酶工作液的配制： 
将2.1步骤中制备的辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体，以1：2500的比例将酶标抗体溶于酶缓冲液中。酶缓冲液配方为：5.8g/L磷酸氢二钠、0.59g/L磷酸二氢钠、8.0g/L氯化钠、200ml/L小牛血清、0.5‰-2‰Proclin-300。 
实施例4.本发明CRP的ELISA试剂盒的制备 
1）制备包被有CRP单抗的多孔板：如实施例3所述； 
2）制备酶工作液：如实施例3所述； 
3）样本稀释液（10×）：1000ml中包括氯化钠180.000g、十二水合磷酸氢二钠58.000g、二水合磷酸二氢钠5.940g、250ml山羊血清、吐温-2010.000ml、0.5‰-2‰Proclin-300，pH值6.20-6.60； 
4）辣根过氧化物酶底物：底物液A为含有0.6‰过氧化脲的10mmol/L柠檬酸缓冲液，避光储存；底物液B为含有0.4‰TMB的5mmol/L柠檬酸缓冲液，避光储存； 
5）CRP校准品的配制：用阴性对照血清稀释已知CRP浓度的阳 性血清，制备成浓度为2、4、8、16、64ng/ml的C反应蛋白校准品； 
6）CRP质控品的配制：用阴性对照血清稀释已知CRP浓度的阳性血清，制备成浓度范围50ng/ml的高值CRP质控品和10ng/ml的低值CRP质控品。 
7）在合适的容器中分装上述各组分，并组装为成品试剂盒，还可以并入产品使用说明书、包装、辅助配件（如封板膜、滴管）等，2-8℃保存备用。 
测试例1.本发明CRP ELISA试剂盒的使用方法 
1.样本准备： 
样本无需特殊处理，采用常规医用技术收集全血样本，离心分离后吸取血清或血浆用于检测。待测血清或血浆如在24小时之内使用，可于2℃～8℃保存，若需长期存放应保存在-20℃以下，并避免反复冻融。请不要使用严重溶血、脂血或黄疸样本。 
2.检测步骤： 
2.1准备： 
a)试剂盒平衡至室温后方可使用。 
b)CRP包被的多孔板：可直接使用。在多孔板平衡至室温后打开外包装铝箔袋，以防止多孔板的板条吸收空气中水蒸气。请将剩余板条立即放回含干燥剂的铝箔袋或自封袋中密封。 
c)样本稀释液（10×）：取需要量，用纯化水1:10稀释成为样本稀释液（1×）待用。如果10×样本稀释液出现结晶，稀释前应至37°C加热、充分溶解混匀。 
d)样本稀释：待测血清或血浆样本用样本稀释液（1×）按1：500的比例稀释，建议取2μl待测血清或血浆加入1ml样本稀释液（1×）。 
2.2检测程序 
上样：取足够数量的多孔板板条固定于框架上，分别设置CRP校准品孔、CRP质控品孔和待测样本孔，记录各孔位置；向多孔板的孔中加50μl CRP校准品（或质控品、或稀释后的待测样本）和50μl CRP酶工作液，37℃温育15min。CRP校准品和CRP质控品无需稀释，可直接使用。 
洗板：每孔加入350μl洗液（1×PBST，用户自行配制，其它公知洗液也可用），静置5-10秒后弃尽，重复冲洗5次后、拍干。 
显色：每孔加入50μl底物液A和50μl底物液B，充分混匀，37℃温育15min。 
终止：显色完毕后，每孔加入50μl终止液（用户根据本领域常规终止液配方自行配制，例如硫酸溶液），充分混匀。 
测定：终止反应后，立即置酶标仪（Bio-Rad iMark）450nm波长（以空白孔调零）或双波长450nm/630nm下测定OD值。 
计算：根据CRP校准品的浓度及对应的OD值，使用log(X)-log(Y)线性拟合方式计算结果，并绘制标准曲线，线性系数0.996（见图1）。 
样本测量：将样本的OD值代入拟合方程式，结果乘以稀释倍数，即为样本最终浓度。 
测试例2.本发明CRP的ELISA试剂盒的方法学指标 
1.准确性：采用回收法评价准确性，回收率在90%～110%之间； 
2.最低检测限：不高于1.0ng/ml； 
3.线性：在1.0ng/ml～64ng/ml范围内线性相关系数r≥0.9900。 
4.重复性：批内变异系数不超于5%； 
5.批间差：批间变异系数不超于10%。 
表1.准确性、最低检出限、系统线性、重复性检测结果 
6.特异性： 
分别检测CRP阴性样本N1、阳性样本P1血液样本。降钙素原浓度、白介素-6、降钙素作为干扰物添加三个浓度梯度，分别为：400 pg/ml、200pg/ml、100pg/ml；2ng/ml、1ng/ml、0.5ng/ml；0.2ng/ml、0.1ng/ml、0.05ng/ml。干扰物对CRP抗体检测的交叉反应情况。实验结果见表2。 
表2.交叉反应实验结果 
结果分析：降钙素原不大于400pg/ml、白介素-6不大于2ng/ml、降钙素浓度梯度不大于0.2ng/ml对CRP抗体检测结果没有明显影响。 
7.稳定性：按照试剂盒说明书操作，用质控品检验了在37℃保存1.5天、3天、6天和2～8℃保存三个月的试验资料。用样本检测一个月内试剂的开瓶稳定性，每批产品每一个月测定一次，共检测了三批试剂盒的稳定性。用第一批试剂盒做样本存储条件稳定性试验。 
表3.4℃保存条件下稳定性实验结果 
R-H、R-M、R-L分别代表：高值准确度参考品、中值准确度参考品、低值准确度参考品。 
表4.37℃稳定性实验结果 
表5.开瓶稳定性 
样本号 0周OD值 2周OD值 偏差(%) 4周OD值 偏差(%)
1 0.108 0.099 8.33% 0.087 6%
2 0.123 0.117 4.88% 0.102 4%
3 0.272 0.258 5.15% 0.236 7%
4 1.870 1.856 0.75% 1.824 2%
5 1.829 1.817 0.66% 1.799 2%
6 1.605 1.609 -0.25% 1.786 -9%
7 1.236 1.214 1.78% 1.189 4%
8 1.509 1.499 0.66% 1.476 2%
9 1.478 1.476 0.14% 1.432 3%
10 1.213 1.245 -2.64% 1.198 1%
表6.样本储存稳定性 
小结：试剂盒于37℃可放置6天，2℃～8℃可放置3个月。 
8.干扰物质分析： 
8.1血红蛋白：在不同浓度血红蛋白存在时，分别检测CRP阴性样本N1、阳性样本P1血液样本。实验结果见表7。当轻度溶血样本血红蛋白≤200mg/ml时，用本试剂盒检测对结果基本无影响。 
表7：血红蛋白干扰物质的分析结果 
8.2甘油三酯，实验结果见表8。当甘油三酯浓度在1000mg/dl内，对CRP抗体检测结果没有显著性影响。 
表8：甘油三酯干扰物质的分析结果 
8.3胆红素：实验结果见表9。 
表9：胆红素干扰物质的分析结果 
结果分析：当胆红素浓度不大于20mg/dl时对CRP抗体检测结果无明显影响。 
8.4肝素钠，实验结果见表10，当肝素钠浓度不大于40U/ml时对CRP抗体检测结果无明显影响。 
表10：肝素钠干扰物质的分析结果 
8.5EDTA.K2：当EDTA.K2浓度不大于600μg/ml时对CRP抗体检测结果没有明显影响。 
表11：EDTA.K2干扰物质的分析结果 
测试例3.本发明CRP的ELISA试剂盒在临床测定方面的性能 
本发明的C反应蛋白定量测定试剂盒（酶联免疫吸附法）（实验组）与对比试剂美国BIOCHECK公司的C反应蛋白定量测定试剂盒 （酶联免疫吸附法）（对比组）进行临床性能及等效性对比研究，其详细的检测结果见表12： 
表12.试剂盒相关性结果 
本发明的C反应蛋白定量测定试剂盒（酶联免疫吸附法）与对比试剂分别对相同115份血清样本进行检测的临床试验数据可知：γ=0.999，回归方程为：y=1.129x-0.110；且分别对b、γ作t检验结果显示，P值＜0.05，相关系数γ和回归系数b均有统计学意义。 
取C反应蛋白浓度范围内的数据进行偏倚估计分析结果为：相对偏差=Bx/x=0.2%<10%；Bx95%区间=-2.834～2.207完全符合用于临床分析的要求。本发明的C反应蛋白检测试剂盒（酶联免疫吸附法）与对比试剂相比，相关性好。 

Claims (10)

1.一种C反应蛋白检测试剂盒，其包含：
包被有第一C反应蛋白单克隆抗体的多孔板，
酶工作液，
样本稀释液，
酶反应底物，
C反应蛋白校准品、和
C反应蛋白质控品；
其中
所述酶工作液包含标记有辣根过氧化物酶的第二C反应蛋白单克隆抗体和酶缓冲液，其中酶缓冲液包含磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠、小牛血清和Proclin-300，
所述样本稀释液包含氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、山羊血清、吐温20、Proclin-300，且pH值为6-7，
所述酶反应底物为辣根过氧化物酶的底物，
所述C反应蛋白校准品为已知C反应蛋白浓度的血清，C反应蛋白浓度分别为2、4、8、16、64ng/ml，
所述C反应蛋白质控品为C反应蛋白浓度在10-60ng/ml之间的血清，
当所述第一C反应蛋白单克隆抗体由保藏号为CGMCC No.8702的杂交瘤细胞所产生时，第二C反应蛋白单克隆抗体由保藏号为CGMCC No.8703的杂交瘤细胞所产生，或者当所述第一C反应蛋白单克隆抗体由保藏号为CGMCC No.8703的杂交瘤细胞所产生时，第二C反应蛋白单克隆抗体由保藏号为CGMCC No.8702的杂交瘤细胞所产生。
2.一种C反应蛋白单克隆抗体，其由保藏号为CGMCC No.8702的杂交瘤细胞所产生。
3.一种C反应蛋白单克隆抗体，其由保藏号为CGMCC No.8703的杂交瘤细胞所产生。
4.一种杂交瘤细胞，其保藏号为CGMCC No.8702。
5.一种杂交瘤细胞，其保藏号为CGMCC No.8703。
6.根据权利要求2或3所述的C反应蛋白单克隆抗体、或根据权利要求4或5所述的杂交瘤细胞在制备诊断试剂中的用途。
7.根据权利要求6所述的用途，所述诊断试剂是C反应蛋白检测试剂。
8.根据权利要求6所述的用途，所述诊断试剂选自：ELISA检测试剂、免疫比浊检测试剂、磁颗粒检测试剂、化学发光检测试剂、免疫荧光检测试剂和放射免疫检测试剂。
9.一种C反应蛋白检测试剂，其包含：
根据权利要求2所述的C反应蛋白单克隆抗体、以及
根据权利要求3所述的C反应蛋白单克隆抗体。
10.一种C反应蛋白检测试剂盒，其包含：
根据权利要求2所述的C反应蛋白单克隆抗体、以及
根据权利要求3所述的C反应蛋白单克隆抗体。
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