CN110618263B - 一种c反应蛋白全程检测的方法以及相应的试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种基于化学发光免疫分析的C反应蛋白全程检测的试剂盒以及C反应蛋白全程检测方法。该试剂盒包含R1试剂、M试剂、R2试剂、预激发液和激发液。该R1试剂即样品处理液为0.5M柠檬酸溶液(pH3.0‑3.5，用十二水磷酸氢二钠调节)。本发明还提供一种C反应蛋白全程检测试剂盒，其包含包被第一抗体的平底板式化学发光板、样品处理液、辣根过氧化酶(HRP)或碱性磷酸酶(AP)标记的第二抗体、显色液。本发明还提供使用所述试剂盒进行C反应蛋白全程检测的方法。所述第一抗体和第二抗体均为能与C反应蛋白特异性反应的单克隆抗体。

Description

一种C反应蛋白全程检测的方法以及相应的试剂盒
技术领域
本发明属于化学发光免疫分析技术领域，具体涉及一种C反应蛋白全程检测的方法以及相应的试剂盒。
背景技术
C反应蛋白(C-Reactive protein，CRP)是1930年由Tillet和Francis发现一种能在Ca2+存在时与肺炎链球菌C多糖体反应形成复合物的急性时相反应蛋白；血清CRP由肝细胞在IL-6、IL-2、TNF刺激下合成，炎症局部巨噬细胞也有少量产生。CRP的分子量约为115KD，由含有五个相同的未糖基化的多肽亚单位组成，每个亚单位含有204个氨基酸，这些亚单位间通过非共价键连结成环状的五聚体，并有一个链间二硫键，这种五聚体蛋白具有显著的耐热及抗蛋白降解的能力。
CRP在体内分布很广，除了血液外，胸水、腹水、心包液、关节液中均可测出。
CRP是重要的急性反应蛋白，在细菌感染发生6-8h开始升高，24-48h达到高峰，感染消除后其含量急剧下降，一周内恢复正常。
CRP的临床应用主要是鉴别细菌或者病毒感染的一个首选指标，以及监控病情变化及术后感染、用于抗生素疗效动态观察、指导和监测治疗等。其次CRP与心血管疾病、冠心病、急性冠状综合征有关，患者的CRP水平往往明显升高，且其升高水平与冠状动脉梗阻程度、冠心病终末事件的发生及预后、充血性心力衰竭的程度均有显著相关性。另外，CRP也是房颤的独立预测因子，且血清中的CRP浓度与高血压之间有一定的相关性，高血压患者的收缩压、舒张压水平随血清CRP浓度增高而升高。
目前，市场上的CRP检测主要分为超敏CRP(hsCRP)检测、常规CRP检测、全程CRP检测。超敏CRP检测主要用于诊断和预测心血管事件的发生、发展，而常规CRP检测主要用于细菌感染、各种炎症过程、组织坏死与组织损伤(如外科手术后)及其恢复期筛检、监测、病情评估与疗效判断。早期的常规CRP检测主要都是基于免疫散射比浊或者免疫透射比浊方法，检测能力5mg/L以上，由于缺乏高的灵敏度难以预测心血管疾病的风险。后续相继研发了免疫增强比浊法，其大大提高了分析灵敏度，检测下限可以达到0.02mg/L。这种超敏感检测低浓度的CRP叫做超敏CRP检测。随着技术的不断创新与改进，现在有些检测方法可以一次覆盖超敏与全程CRP的检测线性，如化学发光检测方法、免疫荧光检测方法等，检测的线宽能够达到0.02-100mg/L。
目前，全程CRP检测大多使用添加竞争游离抗体，例如美国专利申请公开号US2014/0017712A1就提到利用添加一个游离的单抗或者能够与包被或者标记竞争的抗体。但是，这样的方法对于试剂的稳定性等操作增加难度。中国专利公开号CN105988003A公开了用酸破坏后碱中和的方式，达到全程检测的目的，但仍然不够稳定方便。因此本领域仍然需要改进全程CRP检测的方法，以实现稳定、方便的检测模式。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种稳定、方便的C反应蛋白全程检测的方法以及相应的试剂盒。
本发明的技术方案如下：
在一个方面，本发明提供一种C反应蛋白全程检测试剂盒，其包含：
M试剂，含有0.5～1mg/mL的包被了第一抗体的磁性微粒、0.04～0.06％(w/v)表面活性剂(所述表面活性剂任选为吐温20)和8～12％(w/v)蔗糖，溶剂为pH＝7.0～8.0的磷酸盐缓冲液；其中第一抗体的包被量为5～20μg/mg磁性微粒；
R1试剂，即样品处理液，浓度为0.1～1M的柠檬酸溶液，pH＝3.0～4.0；
R2试剂，含有包被了第二抗体的吖啶酯、0.5～1％酪蛋白和0.5～1％牛血清白蛋白，溶剂为pH＝7.0～8.0的磷酸盐缓冲液，其中第二抗体的包被量为0.3-0.9μg/μg吖啶酯；
预激发液和激发液；
所述第一抗体和第二抗体均为能与C反应蛋白特异性反应的单克隆抗体，所述第一抗体和第二抗体针对不同的表位。
在另一方面，本发明提供一种C反应蛋白全程检测试剂盒，其包含：
包被第一抗体的平底板式化学发光板，含有板式发光板(任选96孔、384孔等板式发光板)，其中第一抗体的包被量为100～500ng/孔(任选500ng/孔)，包被缓冲液为pH＝7.0～8.0的磷酸盐缓冲液，封闭液为5-8％(w/v)封闭血清或封闭蛋白质(所述封闭血清任选为小牛血清)和0.02％(w/v)叠氮化钠、pH值为7.2-7.4的50mM磷酸缓冲液；
样品处理液，浓度为0.1～1M的柠檬酸溶液，pH＝3～4；
标记酶液，含有标记了辣根过氧化物酶或者碱性磷酸酶的第二抗体，标记量为第二抗体1mg/mL，与辣根过氧化酶或者碱性磷酸酶同比例标记；
显色液：当标记酶为辣根过氧化酶时，显色液包括显色A液和显色B液，显色A液为过氧化氢(任选地，显色A液的配方：醋酸钠13.6g，柠檬酸1.6g，30％双氧水0.3ml，蒸馏水配制至500ml)，显色B液为邻苯二胺(任选地，显色B液的配方：乙二胺四乙酸二钠0.2g，柠檬酸0.95g，甘油50ml，9.15g四甲基联苯胺，蒸馏水配制至500ml)；当标记酶为碱性磷酸酶时，显色液为市售试剂；
所述第一抗体和第二抗体均为能与C反应蛋白特异性反应的单克隆抗体，所述第一抗体和第二抗体针对不同的表位。
在一些实施方案中，柠檬酸的pH是通过十二水磷酸氢二钠调节，优选地，柠檬酸的pH为3.0-3.5，更优选地，柠檬酸的pH为3.2、3.3、3.4或3.5。
在另一些实施方案中，柠檬酸的浓度是0.5mol/L。
在一些实施方案中，预激发液为1％(w/v)过氧化氢溶液，激发液为1mol/L氢氧化钠溶液，第一抗体为10C11，第二抗体为14D9-2。
在又一些实施方案中，所述M试剂的制备方法：将所述第一抗体与磁性微粒混合pH＝5.0～6.0的2-吗啉乙磺酸缓冲液中，于25-37℃包被1-3h，加入pH＝8.0～9.0的0.1％～0.5％(w/v)牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液终止1～3h，将其中包被后的磁珠微粒分离后分散于pH＝7.0～8.0的磷酸盐缓冲液中，再加入0.04～0.06％(w/v)表面活性剂(所述表面活性剂任选为吐温20，在一个实施方案中为所述表面活性剂0.05％(w/v)吐温20)和8～12％(w/v)蔗糖(任选地，10％(w/v)蔗糖)，即得M试剂；
所述R2试剂的制备方法：将所述第二抗体与吖啶酯混合于pH＝8.0～9.0的磷酸盐缓冲液中，于25-37℃包被1～3h，再加入pH＝8.0～9.0的含有0.1％～0.5％(w/v)牛血清白蛋白的Tris缓冲液终止1～3h，得到母液，母液用pH＝7.0～8.0的磷酸盐缓冲液稀释至1:100～500，即得R2试剂。
在另一些实施方案中，所述发光板包被原的制备方法为：将包被第一抗体用包被缓冲液为pH＝7.0～8.0的磷酸盐缓冲液稀释至100～500ng/孔(任选500ng/孔)，每孔100μL加入到发光板上，37℃温育2h或者4℃过夜，倾去包被液，用200μL为5-8％(w/v)小牛血清和0.02％(w/v)叠氮化钠的封闭液37℃温育2h，倾去孔内液体，干燥后用铝膜真空密封，4℃干燥处保存；
所述标记酶液的制备方法：将所述第二抗体与辣根过氧化酶或者碱性磷酸酶1:1混合标记透析于pH＝9.6的碳酸盐缓冲液中，4h更换一次透析缓冲液，更换3次，收集酶标第二抗体即为母液，而后将母液用市售酶稀释液1:500稀释，即得标记酶液。
在又一方面，本发明提供一种C反应蛋白全程检测的方法，其使用本发明的试剂盒进行，其包括：
(1)取20μL样品加入100μL的R1试剂，处理样品；
(2)再加入50μL的M试剂，共同孵育15min；
(3)步骤(2)结束后，用含有0.05～0.08％(w/v)的吐温20磷酸盐缓冲液洗涤，再加入50μL的R2试剂，孵育10min；
(4)步骤(3)结束后，用含有0.05～0.08％(w/v)的吐温20磷酸盐缓冲液洗涤，加入100μL预激发液，进行预激发。
(5)去除预激发液，加入100μL激发液，进行激发和检测。
在又一方面，本发明提供柠檬酸溶液作为样品处理液在制备C反应蛋白全程检测试剂盒中的用途。
在一些实施方案中，柠檬酸溶液为浓度为0.1～1M的柠檬酸溶液，
pH＝3～4；优选地，柠檬酸的pH是通过十二水磷酸氢二钠调节，更优选地，柠檬酸的pH为3.0-3.5，更优选地，柠檬酸的pH为3.2、3.3、3.4或3.5。
在一方面，本发明提供一种C反应蛋白全程检测试剂盒(直接化学发光，即磁微粒化学发光方法)，包括如下组分：
M试剂，含有0.5～1mg/mL的包被了第一抗体的磁性微粒、0.04～0.06％(w/v)表面活性剂(所述表面活性剂任选为吐温20)和8～12％(w/v)蔗糖，溶剂为pH＝7.0～8.0的磷酸盐缓冲液；其中第一抗体的包被量为5～20μg/mg磁性微粒；
R1试剂，即样品处理液，浓度为0.1～1M的柠檬酸溶液，pH＝3.0～4.0；
R2试剂，含有包被了第二抗体的吖啶酯、0.5～1％酪蛋白和0.5～1％牛血清白蛋白，溶剂为pH＝7.0～8.0的磷酸盐缓冲液，其中第二抗体的包被量为0.3-0.9μg/μg吖啶酯；
预激发液和激发液；
上述第一抗体和第二抗体均为能与C反应蛋白特异性反应的单克隆抗体，所述第一抗体和第二抗体针对不同的表位。
吖啶类化合物的发光机理为：在碱性过氧化氢溶液中，分子受过氧化氢离子攻击形成不稳定状态的过氧化合物，该过氧化合物分解为CO2和电子激发态的N-甲基吖啶酮，当其回到基态时发出最大发射波长为430nm的光子。曲拉通X-100、吐温20、CTAC(十六烷基三甲基氯化铵，一种阳离子表面活性剂)等表面活性剂可增强发光。
在本发明的一个优选实施方案中，所述R1试剂为0.5M的柠檬酸溶液，pH＝3～3.5。
进一步优选地，所述R1试剂的pH通过十二水磷酸氢二钠来调节。
在一个实施方案中，柠檬酸的pH是通过十二水磷酸氢二钠调节，优选地，柠檬酸的pH为3.0-3.5，更优选地，柠檬酸的pH为3.2、3.3、3.4或3.5。
在又一个实施方案中，柠檬酸的浓度是0.5mol/L。
进一步优选地，所述M试剂含有0.05％吐温20和10％蔗糖。
进一步优选地，所述M试剂的制备方法为：将所述第一抗体与磁性微粒混合pH＝5.0～6.0的2-吗啉乙磺酸缓冲液中，于25～37℃包被1～3h，加入pH＝8.0～9.0的0.1～0.5％牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液1～3h终止包被，将其中包被后的磁珠微粒分离后分散于pH＝7.0～8.0的磷酸盐缓冲液中，再加入吐温20和蔗糖，即得M试剂。
进一步优选地，所述R2试剂的制备方法：将所述第二抗体与吖啶酯混合于pH＝8.0～9.0的磷酸盐缓冲液中，于25～37℃包被1～3h，在加入pH＝8.0～9.0的含有0.1～0.5％牛血清白蛋白的Tris缓冲液1～3h终止包被，得到母液，将该母液用pH＝7.0～8.0的磷酸盐缓冲液以1:100～500进行稀释，即得R2试剂。
进一步优选地，所述预激发液为1％(w/v)过氧化氢溶液。
更进一步的，所述激发液为1mol/L氢氧化钠溶液。
在另一方面，本发明提供一种C反应蛋白全程检测试剂盒(酶促化学发光，即辣根过氧化酶或碱性磷酸酶板式化学发光)，包括如下组分：
包被第一抗体的平底板式化学发光板，含有板式发光板(任选96孔、384孔等板式发光板)，其中第一抗体的包被量为100～500ng/孔(任选500ng/孔)，包被缓冲液为pH＝7.0～8.0的磷酸盐缓冲液，封闭液为5-8％(w/v)封闭血清或封闭蛋白质(所述封闭血清任选为小牛血清)和0.02％(w/v)叠氮化钠、pH值为7.2-7.4的50mM磷酸缓冲液。
样品处理液，浓度为0.1～1M的柠檬酸溶液，pH＝3～4。
标记酶液，含有标记了辣根过氧化物酶或者碱性磷酸酶的第二抗体，标记量为第二抗体1mg/mL，与辣根过氧化酶或者碱性磷酸酶同比例标记。
显色液：当标记酶为辣根过氧化酶时，显色液包括显色A液和显色B液，显色A液为过氧化氢(醋酸钠13.6g，柠檬酸1.6g，30％双氧水0.3ml，蒸馏水配置至500ml)，显色B液为邻苯二胺(显色B液的配方：乙二胺四乙酸二钠0.2g，柠檬酸0.95g，甘油50ml，9.15g四甲基联苯胺，蒸馏水配制至500ml)；当标记酶为碱性磷酸酶时，显色液为市售试剂(货号180309-01，购买自：厦门波生生物技术有限公司)。
检测：利用全自动化学发光分析仪(购买自：烟台爱德康生物科技有限公司)进行读值。
上述第一抗体和第二抗体均为能与C反应蛋白特异性反应的单克隆抗体。
在本发明的一个优选实施方案中，所述样品处理液为0.5M的柠檬酸溶液，pH＝3～3.5。
进一步优选地，所述样品处理液的pH通过十二水磷酸氢二钠来调节。
在一个实施方案中，柠檬酸的pH是通过十二水磷酸氢二钠调节，优选地，柠檬酸的pH为3.0-3.5，更优选地，柠檬酸的pH为3.2、3.3、3.4或3.5。
在又一个实施方案中，柠檬酸的浓度是0.5mol/L。
进一步优选地，所述包被第一抗体的平底板式化学发光板含有5-8％的小牛血清和0.02％叠氮化钠。
进一步优选地，所述包被第一抗体的平底板式化学发光板的制备方法为：将包被第一抗体用包被缓冲液为pH＝7.0～8.0的磷酸盐缓冲液稀释至5μg/mL，即500ng/孔，每孔100μL加入到发光板上，37℃温育2h或者4℃过夜，倾去包被液，用200μL封闭液(5-8％的小牛血清和0.02％叠氮化钠)，37℃温育2h，倾去孔内液体，干燥后用铝膜真空密封，4℃干燥处保存。
进一步优选地，所述的标记酶液的制备方法：将所述第二抗体与辣根过氧化酶或者碱性磷酸酶1:1混合标记透析于pH＝9.6的碳酸盐缓冲液中，4h更换一次透析缓冲液，更换3次，收集酶标第二抗体即为母液，而后将母液用商品化的酶稀释液1:500稀释，即为标记酶液。
进一步优选地，所述当标记酶为辣根过氧化酶时，显色A液为过氧化氢，显色B液为邻苯二胺；当标记酶为碱性磷酸酶时，显色液为市售试剂。
更进一步的，直接利用全自动化学发光分析仪测定含量。
本发明的有益效果是：本发明的试剂盒在反应过程中一步加入样品处理液(浓度为0.1～1M的柠檬酸溶液，pH＝3～4)后本发明的试剂盒的检测范围就可以达到0.02mg/L-100mg/L，使试剂盒达到C反应蛋白全程检测的要求。
附图说明
图1是配对的剂量反应曲线，其为配对检测校准品的曲线。左图代表10C11－7D9配对剂量反应曲线，右图代表10C11－14D9-2配对剂量反应曲线。
图2是配对检测结果相关性分析，其评价样品与背景值的相关性。左图代表10C11－7D9配对检测结果相关性分析，右图代表10C11－14D9-2配对检测结果相关性分析。
具体实施方式
以下通过具体实施方式对本发明的技术方案进行进一步的说明和描述。
试剂均为分析纯，如未特别指明，均购自厦门西陇化工有限公司。
在一个实施方式中，本发明的C反应蛋白全程检测试剂盒(直接化学发光，即磁微粒化学发光方法)，包括如下组分：
M试剂，含有0.8mg/mL的包被了第一抗体的磁性微粒、0.05％吐温20和10％蔗糖，溶剂为pH＝7.5的磷酸盐缓冲液。其中第一抗体的包被量为12μg/μg磁性微粒，上述磁性微粒购自Thermo Fisher Scientific，为纳米级的超顺磁颗粒，其核心为Fe3O4。M试剂的制备方法为：将所述第一抗体与磁性微粒混合pH＝5.5的2-吗啉乙磺酸缓冲液中，于32℃包被1～3h，加入pH＝8.5的0.3％牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液2h终止包被，将其中包被后的磁珠微粒分离后分散于pH＝7.5的磷酸盐缓冲液中，再加入吐温20和蔗糖，即得M试剂；
R1试剂，浓度为0.5M的柠檬酸溶液，pH＝3.2，用十二水磷酸氢二钠调节；
R2试剂，含有包被了第二抗体的吖啶酯、0.8％酪蛋白和0.8％牛血清白蛋白，溶剂为pH＝7.5的磷酸盐缓冲液，其中第二抗体的包被量为12μg/μg吖啶酯。R2试剂的制备方法为：将所述第二抗体与吖啶酯混合于pH＝8.5的磷酸盐缓冲液中，于32℃包被1～3h，在加入pH＝8.5的含有0.3％牛血清白蛋白的Tris缓冲液2h终止包被，得到母液；将该母液用pH＝7.5的磷酸盐缓冲液1:300进行稀释，即得R2试剂；
预激发液，1％(w/v)过氧化氢溶液；
激发液，1mol/L氢氧化钠溶液；
上述第一抗体和第二抗体均为能与C反应蛋白特异性反应的单克隆抗体，其中第一抗体为10C11，第二抗体为14D9-2，均购自厦门万泰沧海生物技术有限公司。
使用上述C反应蛋白全程检测试剂盒进行检测的方法，包括如下步骤：
(1)取20μL样品(样品为血清或制备抗原标准曲线的标准C反应蛋白)加入100μL的R1试剂中，对样品进行处理；
(2)再加入50μL的M试剂，共同孵育15min；
(3)步骤(2)结束后，用含有0.05％的吐温20的磷酸盐缓冲液洗涤，再加入50μL的R2试剂，孵育10min；
(4)步骤(3)结束后，用含有0.05％的吐温20的磷酸盐缓冲液洗涤，加入预激发液100μL，进行预激发。
(5)去除预激发液，加入100μL激发液，进行激发和检测。
在另一个实施方式中，本发明的C反应蛋白全程检测试剂盒(酶促化学发光，即辣根过氧化酶板式化学发光)，包括如下组分：
发光板包被原，含有96孔的板式发光板、其中第一抗体的包被量为500ng/孔，包被缓冲液为pH＝7.5的磷酸盐缓冲液，所述的封闭液为6％的小牛血清和0.02％叠氮化钠、pH值为7.3的50mM磷酸缓冲液。发光板包被原的制备方法为：将第一抗体用包被缓冲液为pH＝7.5的磷酸盐缓冲液稀释至5μg/mL(即500ng/孔)，每孔100μL加入到发光板上，37℃温育2h或者4℃过夜，倾去包被液，用200μL封闭液为6％的小牛血清和0.02％叠氮化钠，37℃温育2h，倾去孔内液体，干燥后用铝膜真空密封，4℃干燥处保存；
样品处理液，浓度为0.5M的柠檬酸溶液，pH＝3.2，用十二水磷酸氢二钠调节；
标记酶液，含有标记了辣根过氧化物酶或者碱性磷酸酶的第二抗体，标记量为第二抗体1mg/mL，与辣根过氧化酶和碱性磷酸酶同比例标记。标记酶液的制备方法为：将所述第二抗体与辣根过氧化酶或者碱性磷酸酶1:1混合标记透析于pH＝9.6的碳酸盐缓冲液中，4h更换一次透析缓冲液，更换3次，收集酶标第二抗体即得母液，而后将母液用商品化的酶稀释液(货号ED-11，购自北京万泰生物药业股份有限公司)1:500稀释，即得标记酶液；
显色液：当标记酶为辣根过氧化酶时，显色A液为过氧化氢，显色B液为邻苯二胺；当标记酶为碱性磷酸酶时，显色液为外购试剂(购买自：厦门波生生物技术有限公司)。
检测：利用全自动化学发光分析仪(购买自：烟台爱德康生物科技有限公司)进行读值。
上述第一抗体和第二抗体均为能与C反应蛋白特异性反应的单克隆抗体，其中第一抗体为10C11，第二抗体为14D9-2，均购自厦门万泰沧海生物技术有限公司。
使用上述C反应蛋白全程检测试剂盒进行检测的方法，包括如下步骤：
(1)取20μL样品加入到100μL样品处理液中，对样品进行处理；
(2)再加入到发光板包被原，37℃共同孵育40min；
(3)步骤(2)结束后，用含有0.05％的吐温20的磷酸盐缓冲液洗涤5次，扣干发光板，再加入100μL标记酶液，37℃孵育40min；
(4)步骤(3)结束后，用含有0.05％的吐温20的磷酸盐缓冲液洗涤5次，扣干发光板，如果标记酶为辣根过氧化酶时，加入显色A液50μL，显色B液50μL，室温反应5min；如果标记酶为碱性磷酸酶时，加入100μL显色液(购买自：厦门波生生物技术有限公司)室温反应5min；最后都使用全自动化学发光分析仪进行检测，读取发光值。
实施例
实施例1
分别选用不同pH的0.1M柠檬酸、0.1M甘氨酸作为处理液加入酶免检测体系(pH的选择范围为2-6)，以评价经梯度稀释的C反应蛋白抗原。相对OD分别如下表1和2所示。
表1不同pH的0.1M柠檬酸处理液对C反应蛋白检测的影响
浓度(mg/L) pH＝2 pH＝3 pH＝4 pH＝5 pH＝6
100.00 0.4090 1.4410 3.7590 0.7350 1.0130
25.00 0.5760 1.3740 3.7620 1.0160 1.2900
6.25 0.1510 0.8930 3.7590 1.3460 1.5250
1.56 0.0430 0.3720 3.7760 2.4110 2.8010
0.39 0.0120 0.0960 3.0050 1.5960 3.2060
0.10 0.0060 0.0240 0.9480 0.8620 2.2130
0.02 0.0100 0.0110 0.2560 0.0640 0.2760
表2不同pH的0.1M甘氨酸处理液对C反应蛋白检测的影响
浓度(mg/L) pH＝2 pH＝3 pH＝4 pH＝5 pH＝6
100 3.7910 3.7500 2.6820 3.2820 1.7660
25 2.6980 3.5760 2.3680 2.9670 2.1690
6.25 0.5270 3.0060 2.5510 3.2550 2.3350
1.56 0.1100 0.6840 2.6910 3.3620 2.8260
0.39 0.0330 0.1780 1.1610 1.7100 1.8980
0.1 0.0190 0.0440 0.5440 0.7650 0.6870
0.02 0.0140 0.0150 0.1090 0.1850 0.0880
表1和表2显示当处理液为不同的pH的0.1M柠檬酸(用十二水磷酸氢二钠调节成不同的pH值)以及处理液为不同pH的0.1摩尔甘氨酸时，在酶免体系检测中的全程C反应蛋白已溯源抗原的检测情况。结果显示在pH 3-4的之间检测有明显趋势，而其他pH范围检测都不甚理想。由表1和2可知，选用pH 3-4范围作为处理液的处理pH时样品检测有高到低趋势，优于其他pH范围。但是酶免体系线宽还做不到全程检测，故认为最优的pH范围3-4进行化学发光平台摸索，以及选用柠檬酸进行后续实验。
实施例2
由实施例1中改进调整柠檬酸浓度(柠檬酸浓度为0.1M、0.5M、1M)，和pH范围(pH3和pH3.5、pH4)，酶免体系相对线性宽度较窄，优选方案在化学发光平台调整。分别选用pH3-4的不同摩尔浓度的柠檬酸作为处理液加入化学发光检测体系(即磁微粒化学发光平台)，以评价经梯度稀释的C反应蛋白抗原。使用不同pH、不同浓度柠檬酸对经梯度稀释的C反应蛋白抗原进行处理，使用磁微粒化学发光平台或酶促辣根过氧化酶化学发光平台进行检测，获得检测结果，将所获得的结果制成标准曲线。然后检测收集的18例临床样品(来自厦门中山附属医院和西京医院)，相对发光强度分别如下表3和表4所示。
表3不同pH、不同浓度柠檬酸处理液对C反应蛋白检测影响的相关性(磁微粒化学发光体系)
Figure BDA0001700955660000131
Figure BDA0001700955660000141
表4不同pH、不同浓度柠檬酸处理液对C反应蛋白检测影响的相关性(酶促辣根过氧化酶化学发光体系)
Figure BDA0001700955660000142
Figure BDA0001700955660000151
表3、4显示固定三个pH范围3、3.5与4，改变不同的柠檬酸的浓度(0.1M、0.5M和1M，利用发光平台检测全程的C反应蛋白已溯源抗原，评价18份样品，发现0.5M的柠檬酸浓度pH3－3.5较佳。由表3可知，在上述浓度和pH中，在pH为3到3.5之间做血清之间相关性较好，优选0.5M的柠檬酸，0.5M柠檬酸pH为3到3.5之间的波动较小，视为较稳定。
实施例3
选用0.5M柠檬酸，进一步优化精细摸索pH浓度(pH 2.8-4)。使用不同pH的0.5M柠檬酸作为处理液对经梯度稀释的C反应蛋白抗原进行处理，使用磁微粒化学发光平台或酶促辣根过氧化酶化学发光平台进行检测，获得检测结果，将所获得的结果制成标准曲线。然后检测收集的18例临床样品，检测结果如表5和表6所示。
表5不同pH、0.5M柠檬酸处理液对C反应蛋白检测影响的相关性(磁微粒化学发光体系)
Figure BDA0001700955660000161
Figure BDA0001700955660000171
表6不同pH、0.5M柠檬酸处理液对C反应蛋白检测影响相关性(酶促辣根过氧化酶化学发光体系)
Figure BDA0001700955660000172
Figure BDA0001700955660000181
表5、6显示之前摸索的最优的柠檬酸浓度，而后精细摸索pH的浓度，选用十二水磷酸氢二钠调节不同的pH值(包括pH 2.8-4)，利用发光平台检测全程的C反应蛋白已溯源抗原，发现pH(3.0-3.5)的检测样品的相关性较佳，其中磁微粒化学发光平台是pH3.4最优，线性检测结果最好。
在上述pH中以及结合表5的结果，pH在3.0到3.5范围，C反应蛋白单份血清线性相关性r2 0.96以上，最后优选的条件是0.5M柠檬酸pH(3.4)，检测18份血清的相关性达到0.97以上。而从表6的结果来看，酶促辣根过氧化酶发光平台是pH3.2最优，线性检测结果最好。检测15份血清相关性达到0.959以上。
实施例4
使用优化后的检测体系检测梯度稀释的C反应蛋白抗原作为标准曲线，然后检测收集的47例临床样品，通过标准曲线换算浓度值后与临床背景值进行相关性评价，结果如下表7所示(磁微粒化学发光平台)：
表7
Figure BDA0001700955660000191
Figure BDA0001700955660000201
通过相关性评价，两者相关性方程为y＝0.8151x+0.2179，相关系数r2＝0.9692，说明两者有较好的相关性。
使用优化后的检测体系检测梯度稀释的C反应蛋白抗原作为标准曲线，然后检测收集的73例临床样品，通过标准曲线换算浓度值后与临床背景值进行相关性评价，结果如下表8所示(酶促辣根过氧化酶化学发光平台)：
表8
Figure BDA0001700955660000211
Figure BDA0001700955660000221
Figure BDA0001700955660000231
通过相关性评价，两者相关性方程为y＝1.056x+0.0619，相关系数r2＝0.9506，说明两者有较好的相关性。
实施例5
使用优化后的检测体系和公开号为CN105988003A的专利申请中提到的酸处理碱中和的试剂检测梯度稀释的C反应蛋白抗原作为标准曲线，然后检测收集的48例临床样品，通过标准曲线换算浓度值后与临床背景值进行相关性评价，评价二者的性能差异，结果如图1、2所示(磁微粒化学发光平台)。
通过溯源后的抗原线宽比较，2种试剂均能达到市场需求(0.02-100mg/L)，评价样品相关性，两者试剂性能相当。
由此可见，本发明的试剂盒在反应过程中一步加入样品处理液(浓度为0.1～1M的柠檬酸溶液，pH＝3～4)后本发明的试剂盒的检测范围就可以达到0.02mg/L-100mg/L，使试剂盒达到C反应蛋白全程检测的要求。
以上所述，仅为本发明的较佳实施例而已，故不能依此限定本发明实施的范围，即依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖的范围内。

Claims (16)

1.一种C反应蛋白全程检测试剂盒，其包含：
M试剂，含有0.5～1mg/mL的包被了第一抗体的磁性微粒、0.04～0.06％(w/v)表面活性剂和8～12％(w/v)蔗糖，溶剂为pH＝7.0～8.0的磷酸盐缓冲液；其中第一抗体的包被量为5～20μg/mg磁性微粒，所述表面活性剂为吐温20；
R1试剂，即样品处理液，浓度为0.5M的柠檬酸溶液，pH＝3.0～4.0；
R2试剂，含有包被了第二抗体的吖啶酯、0.5～1％酪蛋白和0.5～1％牛血清白蛋白，溶剂为pH＝7.0～8.0的磷酸盐缓冲液，其中第二抗体的包被量为0.3-0.9μg/μg吖啶酯；
预激发液和激发液；
所述第一抗体和第二抗体均为能与C反应蛋白特异性反应的单克隆抗体，所述第一抗体和第二抗体针对不同的表位。
2.一种C反应蛋白全程检测试剂盒，其包含：
包被第一抗体的平底板式化学发光板，其中第一抗体的包被量为100～500ng/孔，包被缓冲液为pH＝7.0～8.0的磷酸盐缓冲液，封闭液为5-8％(w/v)封闭血清或封闭蛋白质和0.02％(w/v)叠氮化钠、pH值为7.2-7.4的50mM磷酸缓冲液；
样品处理液，浓度为0.5M的柠檬酸溶液，pH＝3～4；
标记酶液，含有标记了辣根过氧化物酶或者碱性磷酸酶的第二抗体，标记量为第二抗体1mg/mL，与辣根过氧化酶或者碱性磷酸酶同比例标记；
显色液：当标记酶为辣根过氧化酶时，显色液包括显色A液和显色B液，显色A液为过氧化氢，其中显色A液的配方：醋酸钠13.6g，柠檬酸1.6g，30％双氧水0.3ml，蒸馏水配制至500ml，显色B液为邻苯二胺，其中显色B液的配方：乙二胺四乙酸二钠0.2g，柠檬酸0.95g，甘油50ml，9.15g四甲基联苯胺，蒸馏水配制至500ml；当标记酶为碱性磷酸酶时，显色液为市售试剂；
所述第一抗体和第二抗体均为能与C反应蛋白特异性反应的单克隆抗体，所述第一抗体和第二抗体针对不同的表位。
3.权利要求2所述的试剂盒，其中发光板为96孔或384孔的发光板，第一抗体的包被量为500ng/孔，封闭血清为小牛血清。
4.权利要求1至3中任一项所述的试剂盒，其中柠檬酸的pH是通过十二水磷酸氢二钠调节。
5.权利要求1至3中任一项所述的试剂盒，其中柠檬酸的pH为3.0-3.5。
6.权利要求5所述的试剂盒，其中柠檬酸的pH为3.2、3.3、3.4或3.5。
7.权利要求1至3中任一项所述的试剂盒，其中预激发液为1％(w/v)过氧化氢溶液，激发液为1mol/L氢氧化钠溶液。
8.权利要求1至3中任一项所述的试剂盒，其中第一抗体为10C11，第二抗体为14D9-2。
9.权利要求1所述的试剂盒，其中：
所述M试剂的制备方法：将所述第一抗体与磁性微粒混合于pH＝5.0～6.0的2-吗啉乙磺酸缓冲液中，于25-37℃包被1-3h，加入pH＝8.0～9.0的0.1％～0.5％(w/v)牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液终止1～3h，将其中包被后的磁珠微粒分离后分散于pH＝7.0～8.0的磷酸盐缓冲液中，再加入0.04～0.06％(w/v)表面活性剂和8～12％(w/v)蔗糖，所述表面活性剂为吐温20，即得M试剂；
所述R2试剂的制备方法：将所述第二抗体与吖啶酯混合于pH＝8.0～9.0的磷酸盐缓冲液中，于25-37℃包被1～3h，再加入pH＝8.0～9.0的含有0.1％～0.5％(w/v)牛血清白蛋白的Tris缓冲液终止1～3h，得到母液，母液用pH＝7.0～8.0的磷酸盐缓冲液稀释至1:100～500，即得R2试剂。
10.权利要求9所述的试剂盒，其中表面活性剂为0.05％(w/v)吐温20，蔗糖为10％(w/v)蔗糖。
11.权利要求3所述的试剂盒，其中：
所述发光板的制备方法为：将第一抗体用包被缓冲液为pH＝7.0～8.0的磷酸盐缓冲液稀释至100～500ng/孔，以每孔100μL加入到发光板上，37℃温育2h或者4℃过夜，倾去包被液，用200μL为5-8％(w/v)小牛血清和0.02％(w/v)叠氮化钠的封闭液37℃温育2h，倾去孔内液体，干燥后用铝膜真空密封，4℃干燥处保存；
所述标记酶液的制备方法：将所述第二抗体与辣根过氧化酶或者碱性磷酸酶1:1混合标记透析于pH＝9.6的碳酸盐缓冲液中，4h更换一次透析缓冲液，更换3次，收集酶标第二抗体即为母液，而后将母液用市售酶稀释液1:500稀释，即得标记酶液。
12.权利要求11所述的试剂盒，其中将第一抗体用包被缓冲液为pH＝7.0～8.0的磷酸盐缓冲液稀释至500ng/孔。
13.柠檬酸溶液作为样品处理液在制备C反应蛋白全程检测试剂盒中的用途，其中柠檬酸溶液为浓度为0.5M的柠檬酸溶液，pH＝3～4。
14.权利要求13所述的用途，其中柠檬酸的pH是通过十二水磷酸氢二钠调节。
15.权利要求13或14所述的用途，其中柠檬酸的pH为3.0-3.5。
16.权利要求15所述的用途，其中柠檬酸的pH为3.2、3.3、3.4或3.5。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112051403A (zh) * 2020-08-27 2020-12-08 武汉生之源生物科技股份有限公司 C反应蛋白化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法和应用
CN114152755A (zh) * 2021-12-06 2022-03-08 石家庄斯巴克生物科技有限公司 一种c反应蛋白检测试剂处理液、试剂盒及检测方法
CN114216897A (zh) * 2021-12-22 2022-03-22 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种sST2化学发光检测试剂盒及其检测方法
CN114544978A (zh) * 2022-03-04 2022-05-27 美康生物科技股份有限公司 一种igf-1检测试剂盒及其制备方法和检测方法
CN116203243A (zh) * 2022-09-13 2023-06-02 美康生物科技股份有限公司 一种pinp单克隆抗体、含有其的试剂盒及其应用
CN115975025B (zh) * 2022-11-01 2023-06-23 北京中楷健康科技有限公司 C反应蛋白（crp）检测试剂盒

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1463364A (zh) * 2001-06-14 2003-12-24 松下电器产业株式会社 免疫反应测定方法及其所使用的免疫反应测定试剂
CN1860365A (zh) * 2003-09-26 2006-11-08 松下电器产业株式会社 免疫反应测定方法及该方法所用的试剂、试剂盒以及光学单元
CN103941017A (zh) * 2014-03-18 2014-07-23 北京普恩光德生物科技开发有限公司 C反应蛋白检测试剂盒
CN105988003A (zh) * 2015-01-28 2016-10-05 厦门万泰凯瑞生物技术有限公司 一种全程c反应蛋白测定试剂盒及其应用
CN107402308A (zh) * 2017-06-21 2017-11-28 北京科跃中楷生物技术有限公司 Il‑6定量检测试剂盒及其制备方法
CN107632163A (zh) * 2017-10-16 2018-01-26 苏州长光华医生物医学工程有限公司 一种超敏c反应蛋白的检测方法
CN107656043A (zh) * 2017-09-21 2018-02-02 苏州新波生物技术有限公司 一种c反应蛋白磁微粒检测试剂盒及其使用方法

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5358852A (en) * 1992-12-21 1994-10-25 Eastman Kodak Company Use of calcium in immunoassay for measurement of C-reactive protein
US7101683B2 (en) * 2001-06-26 2006-09-05 Abbott Laboratories Methods for the simultaneous detection of HCV antigens and HCV antibodies
WO2012133452A1 (ja) * 2011-03-28 2012-10-04 三菱化学メディエンス株式会社 全血検体の免疫測定方法および測定キット
CN103940992B (zh) * 2014-05-08 2016-02-24 北京玖佳宜科技有限公司 C-反应蛋白检测试剂盒及其制备

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1463364A (zh) * 2001-06-14 2003-12-24 松下电器产业株式会社 免疫反应测定方法及其所使用的免疫反应测定试剂
CN1860365A (zh) * 2003-09-26 2006-11-08 松下电器产业株式会社 免疫反应测定方法及该方法所用的试剂、试剂盒以及光学单元
CN103941017A (zh) * 2014-03-18 2014-07-23 北京普恩光德生物科技开发有限公司 C反应蛋白检测试剂盒
CN105988003A (zh) * 2015-01-28 2016-10-05 厦门万泰凯瑞生物技术有限公司 一种全程c反应蛋白测定试剂盒及其应用
CN107402308A (zh) * 2017-06-21 2017-11-28 北京科跃中楷生物技术有限公司 Il‑6定量检测试剂盒及其制备方法
CN107656043A (zh) * 2017-09-21 2018-02-02 苏州新波生物技术有限公司 一种c反应蛋白磁微粒检测试剂盒及其使用方法
CN107632163A (zh) * 2017-10-16 2018-01-26 苏州长光华医生物医学工程有限公司 一种超敏c反应蛋白的检测方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
一种定量检测人血清高敏 C 反应蛋白的化学发光免疫;刘平果 等;《生物工程学报》;20101231;第26卷(第8期);1150-1156 *

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