CN114563578A - 人膜性肾病诊断试剂盒 - Google Patents

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CN114563578A CN202210102477.5A CN202210102477A CN114563578A CN 114563578 A CN114563578 A CN 114563578A CN 202210102477 A CN202210102477 A CN 202210102477A CN 114563578 A CN114563578 A CN 114563578A
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高静
刘丽丹
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Abstract

本发明涉及免疫检测领域，更具体地，本发明涉及一种用于人膜性肾病诊断的试剂盒。本发明的试剂盒可以通过单个样本同时定量检测抗PLA2R抗体和抗THSD7A抗体，并可以配合全自动仪器实现自动检测，因此可以通过单次样本检测获得稳定性好、准确性高的定量检测结果，并通过所述检测结果进行人膜性肾病的临床诊断。

Description

人膜性肾病诊断试剂盒
技术领域
本发明涉及免疫检测领域，更具体地，本发明涉及一种用于人膜性肾病诊断的试剂盒。
背景技术
自1948年，Hargraves最初描述狼疮细胞(lupus erythematosus cell，LE cell)现象后，人们开始认识到自身抗体的存在。自身抗体被定义为针对自身组织、器官、细胞及其成分的抗体。
膜性肾病(membranous nephropathy，MN)是肾病综合征中常见的病理类型之一，病理表现为免疫复合物在肾脏组织中大量沉积以及补体增高引起的蛋白尿。原发性MN被看作为主要发生在足细胞中的一类单独一个器官的自身免疫性疾病，发病率占MN的80％左右。在70％的原发性MN患者血清中可检测抗PLA2R(抗磷脂酶A2受体)抗体，在8％-14％的原发性MN患者血清中抗THSD7A(含Ⅰ型血小板域蛋白7A)抗体呈阳性，而抗PLA2R抗体呈阴性。PLA2R联合THSD7A抗体检测有助于提高原发性MN患者临床诊断阳性率。
经过近70年的发展，到目前为止，已经发现了数百种自身抗体，也建立了多种自身抗体的检测方法，主要包括间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence，IIF)、乳胶凝集试验(latex agglutination test)、双向扩散试验(double diffusion test)、对流免疫电泳(counter immunoelectrophoresis，CIEP)、放射免疫法(radioimmunoassay，RIA)，线性免疫印迹法(line immunoassay，LIA)、酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbentassay，ELISA)等。随着近些年来商业化试剂的普及，传统实验室自配试剂的方法，如双向扩散试验、对流免疫电泳等逐渐被淘汰。2015年，中国风湿病数据中心组织的自身抗体实验室室间比对显示，间接免疫荧光法、线性免疫印迹法和酶联免疫吸附法为目前我国自身抗体检测最常用的方法学。近些年来，一些医院也开始采用化学发光法(chemiluminiscenceassay，CLIA)新技术进行自身抗体的检测。
磁性微球因其易于快速捕捉、清洗、表面积较大，且与生物分子易于分离和结合的优点，现被广泛应用于各种检测方法中。近年来，高灵敏、快速、操作简单、成本低廉的检测方法是各领域研究者寻求的热点。将磁性微球与流动注射相结合，实现免疫分析的自动化，磁性微球和免疫诊断试剂可以自由地悬浮分散在溶液中，通过外加磁场捕获与释放磁性微球，同时利用流动注射仪自动进样，从而实现快速、简便的检测。
目前市场上的人膜性肾病相关抗体的检测方法存在结果不够准、检测成本高、实验时间长以及需要多个样本等问题。因此，本领域亟需一种新的人膜性肾病诊断试剂盒，可以配合全自动仪器，通过单次检测的单次样本反应获得稳定性好、准确性高的诊断结果。
发明内容
如上所述，现有的人膜性肾病相关抗体的检测方法仍存在不足。因此，本领域亟需一种新的人膜性肾病诊断试剂盒，通过单个样本的单次样本反应同时定量检测抗PLA2R(抗磷脂酶A2受体)抗体和抗THSD7A(Thrombospondin type-1domain-containing 7A，含Ⅰ型血小板域蛋白7A)抗体，并且通过所述检测结果进行临床诊断。
因此，在第一方面，本发明提供了一种用于人膜性肾病诊断的试剂盒，所述试剂盒包括：
分别包被有PLA2R抗原和THSD7A抗原的磁性荧光编码微球；
报告分子标记的检测抗体；
其中，所述磁性荧光编码微球为羧基、氨基和/或环氧基修饰的磁性荧光编码微球。
本发明的有益效果包括以下一个或多个：
1)通过单个检测样本的单次样本反应可以同时获得抗PLA2R抗体和抗THSD7A抗体的定量检测结果，从而获得更准确的膜性肾病诊断结果；
2)可配合全自动仪器使用，无需手工操作，更为高效。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的实施方案。
图1是通过磁性荧光编码微球定量检测抗体的原理示意图。
图2是包被有PLA2R抗原和THSD7A抗原的磁性荧光编码微球分布图。
具体实施方式
下面将结合本发明的实施方案和附图，对本发明进行清楚、完整的描述。显然，所描述的实施方案仅仅是本发明的一部分实施方案，而不是全部的实施方案。基于本发明中的实施方案，本领域普通技术人员可以获得的所有其他实施方案，都属于本发明保护的范围。
如上所述，目前市场上的人膜性肾病相关抗体的检测方法或产品存在检测结果不够准确、检测成本高、实验时间长等问题，并且都需要多个样本在不同抗体的检测体系中分别进行检测，因此需要进行多次样本反应。本发明旨在提供一种用于人膜性肾病诊断的试剂盒，该试剂盒可使用单个样本通过单次样本反应来同时定量检测样本中的抗PLA2R抗体和抗THSD7A抗体，并且通过所述检测结果进行临床诊断。
因此，在第一方面，本发明提供了一种用于人膜性肾病诊断的试剂盒，所述试剂盒包括：
分别包被有PLA2R抗原和THSD7A抗原的磁性荧光编码微球；
报告分子标记的检测抗体；
其中，所述磁性荧光编码微球为羧基、氨基和/或环氧基修饰的磁性荧光编码微球。
本发明采用了表面积较大的磁性荧光编码微球作为抗原的载体微球，以包被较多的抗原，保证载体微球能够最大程度地与样本中的抗体相结合，从而提高检测灵敏度。此外，现有技术中所用的微球通常为聚丙乙烯微球，在清洗微球的过程中，需要通过离心将荧光编码微球与液体分离。通过离心将荧光编码微球沉淀在容器底部，由于荧光编码微球没有被固定，通过移液枪吸走上清液的过程中，容易同时将荧光编码微球吸走，从而造成微球粒子的丢失，进而影响最终的对样本的检测结果。而本发明中的磁性荧光编码微球在清洗微球的过程中，可以通过磁力架将荧光编码微球与液体分离，即利用磁力架对磁性荧光微球的吸附作用将磁性荧光编码微球吸附、固定在容器底部，从而方便上清液的去除。因此，本发明所用的磁性荧光编码微球，不仅可以方便上清液的去除，而且能够提高样本检测结果的准确性。
在一个实施方案中，所述磁性荧光编码微球可以为羧基、氨基和/或环氧基修饰的磁性荧光编码微球。在一个优选实施方案中，所述包被有PLA2R抗原的磁性荧光编码微球为羧基修饰的磁性荧光编码微球，所述包被有THSD7A抗原的磁性荧光编码微球为环氧基修饰的磁性荧光编码微球。
在一个实施方案中，所述PLA2R抗原和THSD7A抗原与所述磁性荧光编码微球的包被比例为5μg至50μg抗原包被1×107个磁性荧光编码微球。发明人经试验分析发现：当将PLA2R抗原和THSD7A抗原分别与磁性荧光编码微球以上述包被比例进行包被时，相同的抗原相对浓度下检测获得的荧光信号强度基本一致。当PLA2R抗原和THSD7A抗原与磁性荧光编码微球的包被比例小于或大于上述范围时，相同抗原相对浓度下检测获得的荧光信号强度均小于两者包被比例在上述范围内时的荧光信号强度。由此可知，将PLA2R抗原和THSD7A抗原分别与磁性荧光编码微球在上述比例范围内进行包被时，能够获得较为稳定的荧光信号强度，从而最终获得样本中较准确的抗PLA2R抗体和抗THSD7A抗体的相对浓度。
在一个实施方案中，所述报告分子标记的检测抗体的使用浓度为10μg/mL至50μg/mL。在试验中发明人发现：将报告分子标记的检测抗体的使用浓度控制在上述范围内时，相同的抗体相对浓度下检测获得的荧光信号强度的变化梯度基本一致。当报告分子标记的检测抗体浓度小于10μg/mL例如为5μg/mL时，抗体相对浓度在高点值时检测获得的荧光信号强度较低，而当报告分子标记的抗人IgG抗体浓度大于50μg/mL例如为60μg/mL时，抗体相对浓度在0点值时检测获得的荧光信号强度过高。由此可知，将报告分子标记的抗人IgG抗体的使用浓度控制在上述范围内时，能够获得较为稳定的荧光信号强度，从而最终获得样本中较准确的抗PLA2R抗体和抗THSD7A抗体相对浓度。另外，在本发明中，所述检测抗体可以为抗IgG抗体，例如抗人IgG抗体。
在一个实施方案中，所述报告分子可以为藻红蛋白(PE)、别藻蓝蛋白、异硫氧酸荧光素(FITC)、多甲藻黄素-叶绿素-蛋白复合物(PerCP)、罗丹明、四甲基罗丹明、香豆素、氟硼二吡咯、吲哚菁绿、CY3、CY3.5、CY5、CY5.5、CY7、CY7.5、Alexa Fluor 594、Alexa Fluor488、Alexa Fluor 532、PE-Cy5、PE-Cy5.5或PE-Cy7。
藻红蛋白是从红藻中分离纯化的一种荧光蛋白，是一种新型荧光标记染料，因为其具有强烈的荧光，很好的吸光性能和很高的量子产量，在可见光谱区有很宽的激发及发射范围，故在免疫荧光、免疫组化、流式细胞仪检测等抗体的荧光标记和活体成像中有着广泛的应用。PE-Cy7是一种基于藻红蛋白的偶联荧光染料。在一个优选实施方案中，所述报告分子为藻红蛋白(PE)。
在一个实施方案中，所述试剂盒还包括抗PLA2R抗体和抗THSD7A抗体冻干粉或者标准浓度溶液作为校准品。通过利用本发明的试剂盒检测不同浓度的标准溶液的荧光信号强度，可以获得抗PLA2R抗体和抗THSD7A抗体与荧光信号强度的标准曲线。
另外，可以理解，上述分别包被有抗原的磁性荧光编码微球和报告分子标记的检测抗体可以冻干粉的形式存在于试剂盒中。此时，试剂盒可以额外地包含用于溶解这些成分的缓冲液。作为示例，所述缓冲剂可以为磷酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、Tris-盐酸缓冲液，优选为磷酸盐缓冲液。
在一个实施方案中，所述样本为血液样本，例如血清样本或血浆样本。在第二方面，本发明提供了本发明第一方面的试剂盒的使用方法，所述方法包括：使样本(任选地，经稀释后)与包被有PLA2R抗原和THSD7A抗原的磁性荧光编码微球溶液进行反应，固液分离并弃去液体，获得抗原-抗体复合物；随后向所述抗原-抗体复合物中加入报告分子标记的检测抗体溶液进行孵育，固液分离并弃去液体，获得抗原-抗体-抗体复合物；然后利用PBS将所述抗原-双抗体复合物定容、混匀，以获得检测液；最后利用流式细胞仪对检测液进行检测，获得样本中的待测抗PLA2R抗体和抗THSD7A抗体各自对应的荧光信号强度，再根据利用检测校准品获得的抗体相对浓度与荧光信号强度关系的标准曲线，以检测获得的样本中的待测抗PLA2R抗体和抗THSD7A抗体各自对应的荧光信号强度为基础，找到与之对应的抗体相对浓度，从而获得样本中抗PLA2R抗体和抗THSD7A抗体的相对浓度。
在试验过程中，发明人发现样本与包被有PLA2R抗原和THSD7A抗原的磁性荧光编码微球溶液的反应时间控制在10分钟至30分钟时，检测获得的抗PLA2R抗体和抗THSD7A抗体的荧光信号强度呈现持续增长的趋势；当反应时间小于上述范围时，检测获得的抗PLA2R抗体和抗THSD7A抗体的荧光信号强度小于反应时间处于上述范围内时检测获得的荧光信号强度；当反应时间大于上述范围时，检测获得的抗PLA2R抗体和抗THSD7A抗体的荧光信号强度增长趋势已减缓，且基本不变。因此，为了能够获得更加准确的样本中抗PLA2R抗体和抗THSD7A抗体的浓度，样本与包被有PLA2R抗原和THSD7A抗原的磁性荧光编码微球溶液的反应时间优选控制在10分钟至30分钟。
发明人还发现抗原-抗体复合物与报告分子标记的检测抗体溶液的反应时间控制在10分钟至30分钟时，检测获得的抗PLA2R抗体和抗THSD7A抗体的荧光信号强度呈现持续增长的趋势；当反应时间小于上述范围时，检测获得的抗PLA2R抗体和抗THSD7A抗体的荧光信号强度小于反应时间处于上述范围内时检测获得的抗PLA2R抗体和抗THSD7A抗体的荧光信号强度；当反应时间大于上述范围时，检测获得的抗PLA2R抗体和抗THSD7A抗体的荧光信号强度增长趋势已减缓，且基本不变。因此，为了能够获得更加准确的样本中抗PLA2R抗体和抗THSD7A抗体的信息，抗原-抗体复合物与报告分子标记的检测抗体溶液的反应时间优选控制在10分钟至30分钟。
在一个实施方案中，孵育温度为37±1℃。经过试验分析，孵育温度为37℃时，检测获得的抗PLA2R抗体和抗THSD7A抗体的荧光信号强度均大于孵育温度为室温(18℃-25℃)时检测获得的荧光信号强度。因此，为了能够获得更加准确的样本中抗PLA2R抗体和抗THSD7A抗体的信息，将孵育温度选择控制在37±1℃。
所述样本与分别包被有PLA2R抗原和THSD7A抗原的磁性荧光编码微球的添加比例为：每1μL样本对应加入50至500个抗原包被的磁性荧光编码微球。发明人经过试验发现，将样本与包被有抗原的磁性荧光编码微球溶液的添加比例控制在上述范围内，能够保证最终检测获得较为准确的荧光信号强度，从而获得较为准确的抗体相对浓度。当添加比例小于或大于在上述范围内，最终检测获得的荧光信号强度均小于当混合比例在上述范围内时的荧光信号强度，从而会导致最终获得的抗体相对浓度不准确，影响最终的检测结果。
实施例
下面结合实施例对本发明进行更为具体和详细的描述。下述实施例中的试验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规化试剂商店购买所得。应注意，上文的发明内容部分以及下文的详细描述仅为具体阐释本发明之目的，无意于以任何方式对本发明进行限制。
实验材料
1)样本：患者血清
2)分别包被有PLA2R抗原和THSD7A抗原的混合磁性荧光编码微球
3)藻红蛋白(PE)标记的抗人IgG抗体(二抗)；
4)样本稀释液(1×PBS，0.1％BSA)
5)微球清洗液(1×PBS，1％吐温20)
实施例1.氨基修饰的磁性荧光微球的制备
1.在反应管中加入2mL 0.05M 2-(N-吗啉代)乙磺酸(MES)缓冲液(pH＝5)、1mgPLA2R抗原或THSD7A抗原、2mL氨基修饰的磁性荧光微球、20mg碳二亚胺(EDC)。
2.将上述混合物放置在恒温混匀仪上于37℃反应2小时。
3.用磁铁分离微球。
4.用4mL磷酸盐缓冲液重悬微球。
5.重复步骤3和步骤4三次，最后用PBS缓冲液重悬。
实施例2.羧基修饰的磁性荧光微球的制备
1.在反应管中加入2mL 0.01M醋酸钠溶液(pH＝5)、1mg PLA2R抗原或THSD7A抗原、2mL羧基修饰的磁性荧光微球、20mg EDC。
2.将上述混合物放置在恒温混匀仪上于37℃反应2小时。
3.用磁铁分离微球。
4.用4mL磷酸盐缓冲液重悬微球。
5.重复步骤3和步骤4三次，最后用PBS缓冲液重悬。
实施例3.环氧基修饰的磁性荧光微球的制备
1.在反应管中加入5mL 0.1M碳酸盐缓冲液(pH＝9)和2mL环氧基修饰的磁性荧光微球。
2.将1mg PLA2R抗原或THSD7A抗原溶于1mL碳酸盐缓冲液中，并加入到上述反应管中。
3.将上述混合物放置在恒温混匀仪上45℃反应20小时。
4.用磁铁分离微球。
5.用4mL磷酸盐缓冲液重悬微球。
6.重复步骤4和5三次，最后用PBS缓冲液重悬。
实施例4.羟基修饰的磁性荧光微球
1.在反应管中加入2mL羟基修饰的磁性荧光微球，并用NaOH将pH调节到10.5。
2.加入10mg溴化氰(CNBr)，重新将pH调节到10.5，并孵育15分钟。
3.加入2mL冰浴的碳酸钠溶液(0.1N，pH 8.5)，随后冰浴至4℃。
4.加入1mL浓度为1mg/mL的PLA2R抗原或THSD7A抗原，于4℃孵育至少4小时。
5.加入5mL甘氨酸溶液(0.1N，pH 8.5)，于2000×g离心30分钟。
6.用磁铁分离微球。
7.用4mL磷酸盐缓冲液重悬微球。
8.重复步骤6和7三次，最后用PBS缓冲液重悬。
实施例5.羟基修饰的磁性荧光微球
1.在反应管中加入2mL羟基修饰的磁性荧光微球，并用NaOH将pH调节到10.5。
2.加入10mg氰基硼氢化钠(NaCNBH3)，重新将pH调节到9.5，并孵育30分钟。
3.加入2mL冰浴的碳酸钠溶液(0.1N，pH 8.5)，随后冰浴至4℃。
4.加入1mL浓度为1mg/mL的PLA2R抗原或THSD7A抗原，于37℃孵育2小时。
5.用磁铁分离微球。
6.用4mL磷酸盐缓冲液重悬微球。
7.重复步骤5和6三次，最后用PBS缓冲液重悬。
实施例6.PLA2R微球的检测结果
采用实施例1-5制备的微球，均按照以下方法对样本进行检测：
1.将样本按照1：100进行稀释；
2.取50μL稀释样本，加入50μL标记好的PLA2R微球，于37℃摇床上孵育15分钟；
3.借助磁力架或磁力板，用PBS缓冲液，清洗孵育后的微球2次；
4.弃上清，加入PE标记的抗人IgG抗体，于37℃摇床上孵育15分钟；
5.借助磁力架或磁力板，用PBS缓冲液，清洗孵育后的微球2次；
6.弃上清，用100μL PBS重悬微球，并采用流式细胞仪检测，检测结果如表1所示。
作为对照的现有方法为免疫印迹检测法(试剂盒购自南京诺唯赞生物科技有限公司)。
表1
样本编号 现有方法 实施例1 实施例2 实施例3 实施例4 实施例5
1 +++ 37694 101381 83579 1123 789
2 +++ 27517 74008 61013 1085 684
3 ++ 12062 32442 26745 1658 287
4 ++ 11298 18249 15044 987 648
5 + 3807 10240 8441 1046 723
6 + 1998 5373 4430 1856 754
7 - 849 1156 953 1457 721
8 - 434 750 618 1238 854
样本稀释液 / 700 953 786 1546 685
从表1中可以看出，通过实施例1-3的方法制备的PLA2R微球的检测结果的阴阳性符合率之间无明显差异，其中实施例2的PLA2R微球的检测结果的阴阳性比最佳(对于弱阳样本也可以达到1:4.65)，实施例3的PLA2R微球的检测结果的阴阳性比次佳。另外，通过实施例4和5的方法制备的PLA2R微球无反应。从以上实验结果可以明显看出，使用本发明PLA2R微球在进行检测时，对于现有方法中显示的弱阳、中阳和强阳样本，检测结果存在更精确的浓度差异。
实施例7.THSD7A微球的检测结果
THSD7A微球采用与PLA2R微球相同的检测方法进行检测，检测结果如表2所示。
表2
样本编号 现有方法 实施例1 实施例2 实施例3 实施例4 实施例5
1 +++ 52198 110415 135415 2150 3254
2 +++ 38105 80603 98853 1984 2847
3 ++ 16703 35333 43333 2045 3168
4 ++ 17729 19875 24375 1894 3087
5 + 5272 11152 13677 1974 2901
6 + 2767 5852 7177 1962 2834
7 - 1176 1259 1544 2154 2863
8 - 600 817 1002 2087 2987
样本稀释液 / 969 1038 1273 1563 2536
从表2可以看出，通过实施例1-3的方法制备的THSD7A微球的检测结果的阴阳性符合率之间无明显差异，其中实施例3的THSD7A微球的检测结果的阴阳性比最佳(对于弱阳样本也可以达到1:4.6)，实施例2的THSD7A微球的检测结果的阴阳性比次佳。另外，通过实施例4和5的方法制备的THSD7A微球无反应。从以上实验结果可以明显看出，使用本发明THSD7A微球在进行检测时，对于现有方法中显示的弱阳、中阳和强阳样本，检测结果存在更精确的浓度差异。
实施例8.混合PLA2R微球和THSD7A微球对样本的检测结果
根据实施例6和7的结果可以看出，在检测PLA2R时，采用实施例2的PLA2R微球可以获得更好的实验结果；在检测THSD7A时，采用实施例3的THSD7A微球可以获得更好的结果。因此，发明人将这两种微球混合起来(PLA2R微球和THSD7A微球的混合比例可以为1:1至1:10)，用于检测样本的PLA2R和THSD7A抗体，从而实现对人膜性肾病的检测。在本实施例中，两种微球的混合比例为1:1。检测结果如表3所示。
表3
样本性质 PLA2R THSD7A
PLA2R阳性 75129 1111
PLA2R阳性 67333 2060
PLA2R阳性 36678 1224
THSD7A阳性 2489 86354
THSD7A阳性 2223 109269
THSD7A阳性 2398 127109
阴性 1070 2343
阴性 1234 2410
阴性 2100 2277
样本稀释液 564 1340
从实验结果可以明显看出，混合后的微球对于样本的临床符合率达到100％，阴阳性样本的检测结果有明显的差异，并且不对另外一种抗原的检测不具明显的干扰作用。

Claims (8)

1.一种用于人膜性肾病诊断的试剂盒，所述试剂盒包括：
分别包被有PLA2R抗原和THSD7A抗原的磁性荧光编码微球；
报告分子标记的检测抗体，如抗人IgG抗体；
其中，所述磁性荧光编码微球为羧基、氨基和/或环氧基修饰的磁性荧光编码微球。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，所述包被有PLA2R抗原的磁性荧光编码微球为羧基修饰的磁性荧光编码微球，所述包被有THSD7A抗原的磁性荧光编码微球为环氧基修饰的磁性荧光编码微球。
3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其中，所述试剂盒还包括抗PLA2R抗体和抗THSD7A抗体的冻干粉或标准浓度溶液作为校准品、和/或缓冲液。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的试剂盒，其中，所述PLA2R抗原和THSD7A抗原与所述磁性荧光编码微球的包被比例为5μg至50μg抗原包被1×107个磁性荧光编码微球。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的试剂盒，其中，所述报告分子标记的检测抗体的使用浓度为10μg/mL至50μg/mL。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的试剂盒，其中，所述报告分子为藻红蛋白、别藻蓝蛋白、异硫氧酸荧光素、多甲藻黄素-叶绿素-蛋白复合物、罗丹明、四甲基罗丹明、香豆素、氟硼二吡咯、吲哚菁绿、CY3、CY3.5、CY5、CY5.5、CY7、CY7.5、Alexa Fluor 594、Alexa Fluor488、Alexa Fluor 532、PE-Cy5、PE-Cy5.5或PE-Cy7，优选为藻红蛋白。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的试剂盒，其中，50至500个包被有抗原的磁性荧光编码微球用于检测1μL样本。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其中，所述样本为血液样本，例如血清样本或血浆样本。
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