CN110455785A - 一种化学发光底物检验方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种化学发光底物检验方法，通过外观检查、空白孔观察、发光值批间差和变异、发光值降幅，发光值线性，对化学发光实验用发光底物产品进行系列化检验，检验步骤清晰明了，检验全面，检验结果真实可靠；全面涵盖了低中高三个质控范围，适用范围广，且不用在每种试剂盒上单独检验，节约了成本。本发明的检验方法简单，容易操作，具有通用性，按此方法检验得到的质量合格的化学发光底物，能满足所有化学发光反应的正常进行，适用性很强，市面上面所有种类的发光底物的质量是否合格都可以用本发明所提供的方法进行检验。

Description

一种化学发光底物检验方法

技术领域

本发明涉及体外诊断试剂，尤其是涉及一种化学发光实验中所用到的化学发光底物的检验方法。

背景技术

化学发光底物是体外诊断领域不可或缺的通用试剂，在化学发光反应中，发光底物的作用是在酶的催化作用下激发产生能量，以光子的形式释放出来，我们称这个过程为化学发光，由此可见发光底物在整个化学发光反应中起着至关重要的作用。

为保证整个化学发光反应的正常进行，使用前，通常需要对化学发光底物的质量进行检验。目前对化学发光底物的质量进行检测时，一般是将该化学发光底物和其对应的试剂盒一起进行化学发光反应，通过试剂盒检测相应的具有固定浓度的样本，在通过所测样本浓度值的准确性，来确定该化学发光底物是否符合标准。这种检验方法虽能确保在对应的试剂盒上符合要求，但存在明显的缺点：一是在配套的试剂盒上检验不仅浪费大量的人力物力，且不具有通用性；二是仅用精密性参考品检验会产生质控范围太窄的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能对所有种类发光底物进行检验的方法，且该检验方法操作简单，结果准确，适用范围广，可节省大量人力资源。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的化学发光底物检验方法，包括下述步骤：

第一步，肉眼观察待测样品溶液，为无色透明液体，其中无沉淀物和絮状物；

第二步，取酶免HBsAg酶结合物，用纯化水按4倍的比例稀释六个梯度，获得的梯度酶结合物浓度从低到高分别定义为S1、S2、S3、S4、S5、S6，六个梯度的酶结合物的浓度分别定义为0.25、1、4、16、64、256；

第三步，分别量取5ul的S1-S6的酶结合物加入到空白发光板的第1条到第4条，然后第1、2条加入对照品发光底物A、B各50μl/孔，第3、4条加入待测样品发光底物A、B各50μl/孔，最后这4条同时加入合格批次的发光底物B，混合均匀后，将待测样品和对照品同时检测，测量0分钟、2分钟、5分钟、10分钟、15分钟的发光值；第四步：空白孔发光值检验：取第三步5分钟空白孔的发光值，发光值的均值应≤50.

第五步，发光值批间偏差：取第三步5分钟的发光值，对比待检发光底物和对照发光底物的发光值，批间偏差应符合-20%≤S1≤20%，-15%≤S2≤15%，-10%≤S3-S6≤10%，批间偏差=（待检发光底物发光值-对照发光底物发光值）/对照发光底物发光值。

第六步，取第三步5分钟和15分钟的发光值，比较两者的发光值，发光值降幅应符合-20%≤S1-S6≤20%；

第七步，取第三步5分钟的发光值，以酶浓度的对数为横坐标，发光值对数为纵坐标，即用log-log进行线性回归计算，相关系数R²≥0.9900。

本发明的优点在于检验方法简单，容易操作，具有通用性，按此方法检验得到的质量合格的化学发光底物，能满足所有化学发光反应的正常进行。

本发明通过检验底物的外观、空白发光值、批间偏差、稳定性、线性等各方面，确保了化学发光底物的质量符合标准。而本发明所提供的检验方法，能够全面的反应化学发光底物的特性，适用性很强，市面上面所有种类的发光底物都可以用本发明所提供的方法进行检验其质量是否合格。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明方法做更加详细的说明，以便于本领域技术人员的理解。其中待检验的化学发光底物称之为待测样品，用于对照的化学发光底物称之为对照品。

实施例1 本发明所述的检验化学发光底物的方法包括下述具体步骤：

第一步，肉眼观察待测样品溶液，为无色透明液体，其中无沉淀物和絮状物；

第二步，取酶免HBsAg酶结合物，用纯化水按4倍的比例稀释六个梯度，获得的梯度酶结合物浓度从低到高分别定义为S1、S2、S3、S4、S5、S6，六个梯度的酶结合物的浓度分别定义为0.25、1、4、16、64、256；

第三步，分别量取5ul的S1-S6的酶结合物加入到空白发光板的第1条到第4条，然后第1、2条加入对照品发光底物A、B各50μl/孔，第3、4条加入待测样品发光底物A、B各50μl/孔，最后这4条同时加入合格批次的发光底物B，混合均匀后，将待测样品和对照品同时检测，测量0分钟、2分钟、5分钟、10分钟、15分钟的发光值；

第四步：空白孔发光值检验：取第三步5分钟空白孔的发光值，发光值的均值应≤50.

第五步，发光值批间偏差：取第三步5分钟的发光值，对比待检发光底物和对照发光底物的发光值，批间偏差应符合-20%≤S1≤20%，-15%≤S2≤15%，-10%≤S3-S6≤10%，批间偏差=（待检发光底物发光值-对照发光底物发光值）/对照发光底物发光值。

第六步，取第三步5分钟和15分钟的发光值，比较两者的发光值，发光值降幅应符合-20%≤S1-S6≤20%；

第七步，取第三步5分钟的发光值，以酶浓度的对数为横坐标，发光值对数为纵坐标，即用log-log进行线性回归计算，相关系数R²≥0.9900。

实施例2：对比实验

为了验证本发明方法和常用检验方法之间的区别，申请人设计了以下的对比实验：

选取郑州安图生物工程股份有限公司生产的1批发光底物，分别使用本发明检验方法和常规采用的在癌胚抗原检测试剂盒（化学发光法）上进行检验。

具体检验方法如下：

加样布局如下表2所示：

表2

按照表2的加样布局，前两条使用癌胚抗原检测试剂盒（化学发光法）试剂盒检验发光底物，在发光CEA包被板依次加入20μl的校准品，100μl发光CEA酶结合物，在温箱中温育60min，固体洗液洗板5遍，加入待检发光底物A、B各50μl/孔，避光5min用发光仪读数；

后两条在空白发光板中依次加入梯度酶结合物S1-S6，加入待检发光底物A、B各50μl/孔，测量0分钟、2分钟、5分钟、10分钟、15分钟的发光值。

具体数据见表3所示：

表3

通过表3中的检测数据比对可以看出：

当前采用的常规检验方法存在缺陷，最低点为4000左右发光值，最高点为150000左右发光值，梯度不够完善，在200左右发光值的低点和300000左右的高点缺少质控点。

比较两种方法，常规检验方法用时长，需要至少60-80min，检验不全面，有局限性，用某一项目检验，不具有代表性；本检验方法用时短，操作简单，具有通用性，准确度高。

本发明检验方法通过外观检查、空白孔观察、发光值批间差和变异、发光值降幅，发光值线性，对化学发光实验用发光底物产品进行系列化检验，检验步骤清晰明了，操作简单，检验全面，检验结果真实可靠；全面涵盖了低中高三个质控范围，适用范围广，且不用在每种试剂盒上单独检验，节约了成本。

Claims (1)

1.一种化学发光底物检验方法，其特征在于：包括下述步骤：

第一步，肉眼观察待测样品溶液，为无色透明液体，其中无沉淀物和絮状物；

第二步，取酶免HBsAg酶结合物，用纯化水按4倍的比例稀释六个梯度，获得的梯度酶结合物浓度从低到高分别定义为S1、S2、S3、S4、S5、S6，六个梯度的酶结合物的浓度分别定义为0.25、1、4、16、64、256；

第三步，分别量取5ul的S1-S6的酶结合物加入到空白发光板的第1条到第4条，然后第1、2条加入对照品发光底物A、B各50μl/孔，第3、4条加入待测样品发光底物A、B各50μl/孔，最后这4条同时加入合格批次的发光底物B，混合均匀后，将待测样品和对照品同时检测，测量0分钟、2分钟、5分钟、10分钟、15分钟的发光值；

第四步：空白孔发光值检验：取第三步5分钟空白孔的发光值，发光值的均值应≤50；

第五步，发光值批间偏差：取第三步5分钟的发光值，对比待检发光底物和对照发光底物的发光值，批间偏差应符合-20%≤S1≤20%，-15%≤S2≤15%，-10%≤S3-S6≤10%，批间偏差=（待检发光底物发光值-对照发光底物发光值）/对照发光底物发光值；

第六步，取第三步5分钟和15分钟的发光值，比较两者的发光值，发光值降幅应符合-20%≤S1-S6≤20%；

第七步，取第三步5分钟的发光值，以酶浓度的对数为横坐标，发光值对数为纵坐标，即用log-log进行线性回归计算，相关系数R²≥0.9900。