CN104569314B - 一种商品化定量检测试剂盒评价方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种商品化定量检测试剂盒评价方法，所述方法为采用评价指标对样品进行评价，所评价指标包括准确度评价、精密度评价、重复性评价、检出限评价、定量限评价、线性或范围评价、特异性评价、基质效应与互通性评价。本发明建立了一种准确可靠、可被广大生产企业及科研工作者接受的商品化定量检测试剂盒评价方法。

Description

一种商品化定量检测试剂盒评价方法

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种基于标准物质和不确定度计算的商品化定量检测试剂盒评价方法。

背景技术

试剂盒是指能完成一个特定实验的必需的试剂/器材的集合。试剂盒具有简单、快速、方便，适于现场操作等特点，对基体分析操作技能要求降低，更易实现流水化、标准化管理，有效排除了实验人员主观因素的影响，降低实验过程中的偶然误差，被广泛应用于检测领域。

近年，试剂盒在全球市场上的研发与销售呈快速上升趋势，2005年全球市场销售额超过200亿美元，且以15％左右的速度逐年增长。一方面是试剂盒的迅猛发展，而另一方面试剂盒市场良莠不齐的现象愈加明显，试剂盒的生产、销售及认证认可体制尚不完善，没有相应的标准或质量评价政策。且其灵敏度、稳定性及假阴/阳性控制尚不能满足检测需要，采用试剂盒进行检测的公信度受到质疑。

为解决试剂盒性能评价问题，许多厂家和科研机构进行了尝试，包括采用标准溶液、标准品进行准确度验证、加标回收率验证、重复性验证等；也有单位提出采用多家实验室比对的方法对试剂盒性能进行验证。然而，目前提出的评价方法中由于未采用国家有证标准物质，因此其标准品、标准溶液本身的标准值的准确度无法保证，也无法判断该标准品或标准溶液与试剂盒的互通性、无法判断该标准品是否与样本之间是否具有基质效应，测定结果无法向上溯源，容易造成不同实验室对相同试剂盒评价结果的不一致；同时，在数据处理方法上目前多数统计方法在计算时仅反映出数据的离散性，实验环节中许多器具及实验条件的系统误差未进行计算，造成评价结果可能不准确。

因此，迫切需要建立一种准确可靠、可被广大生产商和科研工作者接受的试剂盒检测结果准确度、重复性、灵敏度、交叉反应性等性能指标及其与特定标准物质互通性的评价方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是建立一种准确可靠、可被广大生产企业及科研工作者接受的商品化定量检测试剂盒评价方法。

一种商品化定量检测试剂盒评价方法，为采用国家有证标准物质对试剂盒性能指标，包括准确度、精密度、检出限、定量限、线性、特异性、基质效应与互通性，进行评价计算；在计算过程中对准确度、检出限、定量限、特异性、基质效应的评价结果进行不确定度评定；根据不确定度的大小对指标测定结果与声称结果的符合性进行判定；

所述准确度评价方法包括如下步骤：

(1)与标准物质或参考方法比对

与标准物质比对：

采用试剂盒对同一份样本进行至少6次测试，按照《ISO/IECGuide98-3:2008》国际标准的要求对试剂盒测定结果的扩展不确定度进行评定，该扩展不确定度应为95％置信水平下的扩展不确定度U；当商品化定量检测试剂盒检测结果的扩展不确定度能够满足检测方法预期的准确度和精密度要求，且按照公式(1)计算的E_n值不大于1时，视为准确度满足要求；

$E_n=\frac{|\stackrel{\‾}{x}-x_0|}{\sqrt{U^2+U_0^2}}---\left(1\right)$

其中:

商品化定量检测试剂盒检测结果的算术平均值；

x₀：标准物质标准值，由使用的标准物质证书提供；

U：商品化定量检测试剂盒检测结果平均值的扩展不确定度，该不确定度应为95％置信水平下的扩展不确定度；

U₀：标准物质定值结果的扩展不确定度，由使用的标准物质证书提供；

与参考方法比对：

采用试剂盒与参考方法分别对同一份样本进行至少6次测试，按照《ISO/IECGuide98-3:2008》国际标准的要求对试剂盒测定结果及参考方法测定结果的扩展不确定度U和U₀进行评定，该扩展不确定度应为95％置信水平下的扩展不确定度，参考方法应当为国际标准、国家标准、行业标准或其它经过验证的方法，参考方法的扩展不确定度应当小于商品化定量检测试剂盒检测结果的扩展不确定度，商品化定量检测试剂盒检测结果的扩展不确定度应当满足检测方法预期的准确度和精密度要求，且按照公式(2)计算得到的检测方法结果与参考方法结果之间的E_n值不大于1时，视为准确度满足要求；

$E_n=\frac{|x-x_0|}{\sqrt{U^2+U_0^2}}---\left(2\right)$

其中:

x：商品化定量检测试剂盒检测结果的平均值；

x₀：参考方法的检测结果平均值；

U：商品化定量检测试剂盒检测结果平均值的扩展不确定度；

U₀：参考方法的检测结果的扩展不确定度；

(2)与厂家声称的最大允许误差对比

在预期检测范围的高、中、低水平分别采用有证标准物质对试剂盒检测结果准确度进行评价；高水平为预期检测范围3/4处、中水平为预期检测范围1/2处、低水平为预期检测范围1/4处，每个水平标准物质采用商品化定量检测试剂盒至少分析三次，并计算检测范围高、中、低三个水平的误差和扩展不确定度；

误差计算公式为：

E＝M-M_S

其中：

E:误差；

M:三次分析测定结果的算术平均值；

M_S:标准物质的标准值；

按照《ISO/IECGuide98-3:2008》国际标准的要求评定试剂盒测定结果的扩展不确定度U_M，标准物质的扩展不确定度U_Ms由证书给出，误差的标准合成不确定度通过下式计算：

$U_{c,E}=\sqrt{U_M^2+U_{M_S}^2}$

其中,

U_c,E——误差的扩展不确定度；

U_M——试剂盒测定结果的扩展不确定度；

U_Ms——标准物质的扩展不确定度；

与厂家声称指标或法规、标准要求的符合性判定：

厂家声称的最大允许误差或法规、标准要求的最大允许误差为MPEV；

当试剂盒检测结果的扩展不确定度U≤1/3MPEV时，忽略检测结果本身扩展不确定度对合格性判定的要求，如果检测结果绝对误差E在其最大允许误差限内时,即|E|≤MPEV时，判为满足技术要求，为符合，否则为不符合；

当试剂盒检测结果的扩展不确定度U>1/3MPEV时，考虑测量不确定度因素的影响，如果检测结果的最大绝对误差E的绝对值小于或等于其最大允许误差的绝对值MPEV与绝对误差的扩展不确定度U之差时判为符合，即：

|E|≤MPEV-U₉₅，则为符合；

如果检测结果的最大绝对误差E的绝对值大于或等于其最大允许误差的绝对值MPEV与绝对误差的扩展不确定度U₉₅之和时，判为不符合，即：

|E|≥MPEV+U₉₅，则为不符合；

当检测结果的最大绝对误差既不符合“符合判定”又不符合“不符合判定”时，为处于待定区，这时不能下符合或不符合的结论，即为待定区；

MPEV-U<|E|<MPEV+U,待定区；

此时，通过改善环境条件与增加测量次数措施，以降低测量不确定度U，使满足与最大允许误差绝对值MPEV之比小于或等于1∶3的要求，然后对检测结果的最大绝对误差重新进行评定。

本发明所述的商品化定量检测试剂盒评价方法，其中所述精密度评价包括如下步骤：

采用试剂盒对同一有证标准物质进行至少6次测试，在进行精密度评价时，标准物质不经过样品前处理过程，

根据公式(3)计算精密度：

$R=\sqrt{\frac{\underset{i=1}{\overset{6}{\mathrm{\&Sigma;}}}{(x_i-\stackrel{\&OverBar;}{x})}^2}{n-1}}\&times;\frac{1}{\stackrel{\&OverBar;}{x}}\&times;100\%---\left(3\right)$

式中：

R—相对标准偏差，以百分数表示；

x_i—第i次商品化定量检测试剂盒分析样品的结果；

—n次测定结果的平均值。

本发明所述的商品化定量检测试剂盒评价方法，其中所述重复性评价包括如下步骤：

采用试剂盒对同一有证标准物质进行至少6次测试，在进行重复性评价时，标准物质应当经过规定的样品前处理过程，按照公式(3)计算相对比标准偏差作为重复性评价的表征。

本发明所述的商品化定量检测试剂盒评价方法，其中，

所述检出限评价包括如下步骤：选择至少3份空白样品，用待评价的试剂盒的检测方法对空白样品和经梯度稀释的国家有证标准物质进行测定，将3倍空白响应值代入通过国家有证标准物质绘制的标准曲线计算出的浓度作为检测限，当试剂盒实际测定的对象与试剂盒声称的分析物不一致时，应当将实际测定对象的浓度换算为分析物的浓度，并以分析物的浓度单位进行表征；

所述定量限评价包括如下步骤：选择至少3份空白样品，用待评价的试剂盒的检测方法对空白样品和经梯度稀释的国家有证标准物质进行测定，同时计算3份空白样品测定响应值的标准偏差，将3份空白样品浓度测定结果的响应平均值加上10倍响应值的标准偏差，将响应值计算结果代入通过国家有证标准物质绘制的标准曲线中计算出对应的浓度值，作为试剂盒定量限的评价结果；当试剂盒实际测定的对象与试剂盒声称的分析物不一致时，应当将实际测定对象的浓度换算为分析物的浓度，并以分析物的浓度单位进行表征。

本发明所述的商品化定量检测试剂盒评价方法，其中，

所述线性或范围的评价方法包括如下步骤：

以多水平的有证标准物质考察线性或范围，当采用单水平标准物质通过稀释获得多水平标准溶液时，基质效应应当相同；标准溶液包括一定的梯度，至少包括5个浓度水平；将响应值和溶液标准值进行线性拟合，计算线性相关系数进行线性评价，有必要时，对线性拟合系数的不确定度进行评定；

在进行范围评价时，在检测范围内标准曲线不存在拐点，具有范围意义的数据点在统计学上能够与相邻数据点区分。

本发明所述的商品化定量检测试剂盒评价方法，其中，

所述特异性评价方法包括如下步骤：采用试剂盒对样本中可能存在的交叉反应物的有证标准物质进行测定，交叉反应物的浓度应涵盖实际测定中可能的浓度水平，每个水平至少进行3次测试，特异性评价结果以交叉反应系数、交叉反应函数或要求的方式给出。

本发明所述的商品化定量检测试剂盒评价方法，其中，

所述互通性评价方法包括如下步骤：

互换性包括两个方面：试剂盒自带标准品与其它标准品的互换性；另一个是两个或两个以上不同试剂盒测定结果的互换性；

试剂盒自带标准品与其它标准品的互换性评价：

方法一：使用试剂盒自带标准品和浓度接近的其它标准品同时绘制标准曲线后，测量实际带有基质的样本，样本应当能够覆盖整个检测范围，至少10个样品；每个程序每一样本至少测量3次，为避免由于样本不稳定性带来的影响，在试验时使用两个程序同时完成一个样本的测量后再进行下一个样本的测量，记录测量结果；

方法二：使用试剂盒自带标准品作为标准，直接测定需要评价的标准品，每个水平标准品重复测定至少3次；

两个或两个以上不同试剂盒的互换性：采用各个试剂盒自带的标准品，测定带有基质的实际样本，样本应当能够覆盖整个检测范围，至少10个样品；每个试剂盒对每一个水平的样本至少测定3次，为避免分析间精密度带来的影响，在测定时一个样本连续测定3次后再进行下一样本的测定，记录测量结果；

试剂盒自带标准品与其它标准品的互换性评价数据的处理：

对应于方法一：使用试剂盒自带标准品测定样本的结果作为x轴，使用待评价标准品测定样本的结果作为y轴，进行Deming回归，并确定95％置信水平下直线斜率和截距的置信范围；如果直线斜率的置信范围包括1，截距的置信范围包括0，证明待评价标准品与试剂盒标准品之间具有互换性，否则说明待评价标准品与试剂盒标准品之间不能互换；

对应于方法二：使用试剂盒自带标准品测定待评价标准品的结果作为x轴，待评价标准品的标准值作为y轴，进行Deming回归，并确定95％置信水平下直线斜率和截距的置信范围；如果直线斜率的置信范围包括1，截距的置信范围包括0，证明待评价标准品与试剂盒标准品之间具有互换性，否则说明待评价标准品与试剂盒标准品之间不能互换；

两个或两个以上不同试剂盒的互换性评价结果的数据处理：分别以两个试剂盒检测结果作为x轴和y轴，进行Deming回归，并确定95％置信水平下直线斜率和截距的置信范围；如果直线斜率的置信范围包括1，截距的置信范围包括0，证明两个试剂盒之间具有互换性；否则，说明两个试剂盒之间没有互换性。

本发明所述的商品化定量检测试剂盒评价方法，其中，

所述试剂盒包括但不限于胰岛素化学发光免疫检测试剂盒，

采用所述胰岛素化学发光免疫检测试剂盒进行评价的方法包括如下步骤：

(11)采用不含胰岛素的空白血清，或使用经基质效应验证在BeckmanDxI800免疫分析系统上具有互通性的BSA溶液将胰岛素标准物质稀释至如下浓度水平：143.4pmol/L、15.1pmol/L、44.7pmol/L、75.2pmol/L、105.0pmol/L、134.5pmol/L，按照公式(1)进行准确度验证；

(12)打开BeckmanDxI800反应管仓门，装载反应试管；换上新的洗涤缓冲液；更换新的基质溶液；倒空废液和固体废物袋，将有效期内的胰岛素检测试剂盒装载到系统中，用1mL纯水将BeckmanDxI800试剂盒配套的定标品溶解，静止30分钟后转移300μL至样品管中，在系统主菜单选择定标，按F1增加定标液，扫描定标液的条形码录入定标液信息并确认，在主菜单上选择样品管理，并选择需要使用的定标液及放置定标液的定标架，上机定标直至通过；

(13)将143.4pmol/L的胰岛素标准物质溶液分装到6个样品杯中，在BeckmanDxI800主菜单样品管理界面添加样品进行分析，6个样品重复分析测定结果平均值为150.1pmol/L；根据《ISO/IECGuide98-3:2008》国际标准的要求评定试剂盒测定结果的扩展不确定度U＝7.5pmol/L，使用的标准物质的扩展不确定度为4.3pmol/L，根据公式(1)计算E_n值为0.77，该值小于1，说明在143.4pmol/L量值点试剂盒准确度通过验证；

$E_n=\frac{\left|{x-x}_0\right|}{\sqrt{U^2+U_0^2}}---\left(1\right)$

其中:

商品化定量检测试剂盒检测结果的算术平均值；

x₀：标准物质标准值，由使用的标准物质证书提供；

U：商品化定量检测试剂盒检测结果平均值的扩展不确定度，该不确定度应为95％置信水平下的扩展不确定度；

U₀：标准物质定值结果的扩展不确定度，由使用的标准物质证书提供；

(14)选取血清样本，采用同位素稀释质谱方法作为参考方法对血清中的胰岛素含量进行测定测定，以氘标记的缬氨酸合成胰岛素B链FVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPKT形成同位素标记的胰岛素B链；取2mL血清于固相萃取柱中，待流过固相萃取柱后用500μL水进行淋洗一次，最后以500μL90％乙腈-水进行洗脱，用5％体积比的1M二硫苏糖醇溶液作为还原剂，涡旋混匀后在60℃水浴锅中加热15min，取1mL胰岛素标准溶液或者样品，加入1mL同位素标记的胰岛素B链肽段溶液并称重，涡旋混匀并按上述条件进行固相萃取和还原，还原后的溶液用MALDI-TOF基质混匀后点在靶板上，自然晾干，进行质谱分析，监测还原后的胰岛素B链(m/z＝3431)以及同位素标记的B链(m/z＝3447)的信号强度，根据下面公式计算血清中胰岛素含量为74.6pmol/L；

$w_s=\frac{R_{h-s}}{R_{h-\mathrm{std}}}\&times;\frac{m_{s-l}}{m}\&times;R_{m-\mathrm{std}}$

式中，R_m-std表示标准溶液中胰岛素与标记的B链的质量比；

R_h-std表示标准溶液中非标记的胰岛素B链还原肽段与标记的B链的峰高比或峰面积比；

R_h-s表示样品溶液中非标记的胰岛素B链还原肽段与标记的B链的峰高比或峰面积比；

m_s-l表示样品溶液中标记的B链的质量(g)；

m为样品溶液的质量(g)；

w_s为样品溶液中胰岛素的含量(g/g)；

使用BeckmanDxI800胰岛素化学发光免疫分析试剂盒中的标准品校准BeckmanDxI800免疫分析系统，然后用该系统对同一个血清样品进行测定，测定结果为72.1pmol/L；根据《ISO/IECGuide98-3:2008》国际标准的要求评定参考方法和试剂盒方法测定结果的扩展不确定度分别为3.0pmol/L和3.7pmol/L，根据公式(1)计算E_n值为0.52，该值小于1，说明在74.6pmol/L量值点试剂盒准确度通过验证；

$E_n=\frac{\left|{x-x}_0\right|}{\sqrt{U^2+U_0^2}}---\left(1\right)$

其中:

：商品化定量检测试剂盒检测结果的算术平均值；

x₀：标准物质标准值，由使用的标准物质证书提供；

U：商品化定量检测试剂盒检测结果平均值的扩展不确定度，该不确定度应为95％置信水平下的扩展不确定度；

U₀：标准物质定值结果的扩展不确定度，由使用的标准物质证书提供；

(15)假定试剂盒的最大允许误差为15％，即在74.6pmol/L量值点的最大允许误差MPEV＝11.19pmol/L，由于试剂盒检测结果的扩展不确定度U＝3.7pmol/L，所以(U＝3.7pmol/L)<(1/3MPEV＝3.73pmol/L)，而误差|E|＝2.5pmol/L，满足|E|≤MPEV，因此该试剂盒在74.6pmol/L量值点的测量误差小于假定的最大允许误差；

(16)使用BeckmanDxI800胰岛素化学发光免疫分析试剂盒中的标准品校准BeckmanDxI800免疫分析系统，然后用该系统对同一个血清样品连续测定6次，根据公式(3)计算试剂盒测定结果的精密度：

$R=\sqrt{\frac{\underset{i=1}{\overset{6}{\mathrm{\&Sigma;}}}{(x_i-\stackrel{\&OverBar;}{x})}^2}{n-1}}\&times;\frac{1}{\stackrel{\&OverBar;}{x}}\&times;100\%---\left(3\right)$

式中：

R—相对标准偏差，以百分数表示；

x_i—第i次商品化定量检测试剂盒分析样品的结果；

—n次测定结果的平均值；

计算结果为2.1％；

(17)按照步骤(2)中的操作步骤，使用BeckmanDxI800胰岛素化学发光免疫分析试剂盒中的标准品校准BeckmanDxI800免疫分析系统，然后用该系统对3份除去胰岛素的血清样品进行测定；并以经梯度稀释的胰岛素国家有证标准物质143.4pmol/L、15.1pmol/L、44.7pmol/L、75.2pmol/L、105.0pmol/L、134.5pmol/L绘制标准曲线，将3倍空白样品响应值代入标准曲线计算出的浓度作为检测限，计算结果为1.3pmol/L；

(18)按照步骤(2)中的操作步骤，使用BeckmanDxI800胰岛素化学发光免疫分析试剂盒中的标准品校准BeckmanDxI800免疫分析系统，然后用该系统对3份除去胰岛素的血清样品进行测定，每份样品重复测定3次；并以经梯度稀释的胰岛素国家有证标准物质143.4pmol/L、15.1pmol/L、44.7pmol/L、75.2pmol/L、105.0pmol/L、134.5pmol/L绘制标准曲线，将3倍空白样品响应值代入标准曲线计算出的浓度；同时将3份空白样品测定结果标准偏差的10倍代入标准曲线计算出浓度，将以上两个浓度相加作为定量限，计算结果为4.3pmol/L；

(19)按照步骤(2)中的操作步骤，使用BeckmanDxI800胰岛素化学发光免疫分析试剂盒中的标准品校准BeckmanDxI800免疫分析系统，然后用该系统测定标称浓度分别为143.4pmol/L、15.1pmol/L、44.7pmol/L、75.2pmol/L、105.0pmol/L、134.5pmol/L胰岛素国家有证标准物质，将测定结果平均值和标准物质标准值进行线性拟合，计算线性相关系数为0.992；

(20)按照步骤(2)中的操作步骤，使用BeckmanDxI800胰岛素化学发光免疫分析试剂盒中的标准品校准BeckmanDxI800免疫分析系统，然后用该系统测定标称浓度分别为143.4pmol/L、15.1pmol/L、44.7pmol/L、75.2pmol/L、105.0pmol/L、134.5pmol/L胰岛素国家有证标准物质，将测定结果平均值和标准物质标准值进行Deming回归，回归直线的斜率在95％置信水平下的置信区间为[0.4858,1.4612],截距在95％置信水平下的置信区间为[-36.6198,27.3289]，因此证明试剂盒校准品和标准物质之间具有互换性。

(21)本发明所述的商品化定量检测试剂盒评价方法，其中，

所述方法还包括标准物质的选取：

进行商品化定量检测试剂盒评价时，应选用国家计量行政部门批准的与检测项目、基质效应一致的的有证标准物质；

根据检测结果准确度、精密度或不确定度的预期要求，选择合适的有证标准物质进行试剂盒评价，所选标准物质的不确定度应当确保在最终检测结果不确定度分量中，由标准物质不确定度引入的分量占检测结果合成标准不确定度的1/3至1/10；

当满足要求的有证标准物质不可获得时，选用其它来源的标准物质、参考物质、标准品，并在检验报告中进行说明。

为达上述目的，本发明充分采用计量学的思路开展检测试剂盒的评价工作，选用相应检测项目的国家有证标准物质进行试剂盒性能评价；同时，在数据处理和评价上，引入不确定度的概念，实现评价数据的合理解释，保证评价结果的客观准确。

国家有证标准物质和不确定度都是计量学的概念，计量是指实现单位统一、量值可靠的活动，它采用国家有证标准物质或计量标准作为量值的载体，将SI单位复现的量值经过逐级的传递链，最终传递到最终的检测结果中，因此采用国家有证标准物质的量值具有准确性、可比性和可溯源性的特点，使用国家有证标准物质进行试剂盒性能指标的评价，能够保证评价结果的准确和可比。

不确定度是表征合理地赋予被测量之值的分散性，与测量结果相联系的参数，测量重复性仅是不确定度分量之一，除测量重复性外，还可以通过不确定度B类评价方法将测量仪器、测量环境、测量条件等各种影响因素可能的不确定度分量综合计算，从而得出在指定置信水平下的可能的结果区间，采用不确定度进行测量结果评价的结论更为客观可靠，在计量学国际比对结果评价、能力验证结果评价等场合都得到了广泛的应用，因此本发明中将不确定度引入到定量试剂盒性能指标和互通性的评价中，从而得到更为客观、准确、可靠的结论。

本发明规定了采用国家有证标准物质进行商品化定量检测试剂盒评价方法评价结果符合性判定的通用要求。

本发明适用于商品化定量检测试剂盒生产企业、用户及第三方机构在生产或使用时对商品化定量检测试剂盒相关技术指标进行评价。

本发明适用于商品化定量检测试剂盒检测项目存在适用的国家有证标准物质的场合。

本发明不适用于商品化标称特性检查用(定性)检测试剂盒的评价。

本发明中所指的商品化定量检测试剂盒(commercialtestkitsforquantitationpurpose)是对一种分析方法的主要或关键组成进行了商品化包装并可供销售的检测体系，用以确定一种或多种目标分析物的含量。

(1)本发明中使用到的名词术语及定义

测量方法measurementmethod

对测量过程中使用的操作所给出的逻辑性安排的一般性描述。

被测量measurand

拟测量的量。

影响量influencequantity

在直接测量中不影响实际被测的量、但会影响示值与测量结果之间关系的量。

测量误差measurementerror，errorofmeasurement

测得的量值减去参考量值。

测量准确度measurementaccuracy，accuracyofmeasurement

被测量的测得值与其真值间的一致程度。

测量正确度measurementtrueness.truenessofmeasurement

无穷多次重复测量所得量值的平均值与一个参考量值间的一致程度。

测量不确定度measurementuncertainty，uncertaintyofmeasurement

根据所用到的信息，表征赋予被测量量值分散性的非负参数。

参考物质[标准物质]referencematerial，RM

具有足够均匀和稳定的特定特性的物质，其特性被证实适用于测量中或标称特性检查中的预期用途。

有证标准物质certifiedreferencematerial，CRM

附有由权威机构发布的文件，提供使用有效程序获得的具有不确定度和溯源性的一个或多个特性量值的标准物质。

基质效应matrixeffect

样本中除分析物以外的其他成分对分析物测定值的影响以及基质对分析方法准确测定分析物的能力的干扰。

特异性specificity

能准确、特异测定目标物的能力。

检测限limitofdetection

在给定的置信水平上，样品中的目标物能被可靠地与噪音背景区分的最低浓度或含量。

定量限limitofquantitation

样品中目标物在一个可接受的精密度与正确度水平上能被定量检测的最低浓度或含量。

精密度precision

在规定条件下，独立测试结果间的一致程度。

重复性repeatability

在同一实验室，由同一操作者使用相同的设备，按相同的测试方法，在短时间内对同一被测对象相互独立进行的测试条件为重复性条件。在重复性条件下获得的精密度称为重复性。

再现性reproducibility

在不同的实验室，由不同的操作者使用不同的设备，按相同的测试方法，从同一被测对象取得测试结果的条件为再现性条件。在再现性条件下获得的精密度称为再现性。

(2)对被评价的商品化定量检测试剂盒、评价实验室及评价仪器的要求

对商品化定量检测试剂盒的要求

检测试剂盒应包装完整；标签、标识清晰、规范；带有使用说明书或等同指导性文件。

若检测试剂盒带有标准品，应当说明其标准品的计量学溯源性，并尽可能提供标准品的不确定度。

对评价实验室的要求

检测实验室应具备完善的质量管理体系，通过ISO17025或ISO15189实验室认可。参与评价的实验室至少需要8家，每个结果至少重复测定2次。

对评价仪器的要求

用于商品化定量检测试剂盒评价、对测量结果有重要影响的仪器设备均应通过计量部门的检定或校准。仪器计量特性检定或校准给出的误差或修正值应当在结果处理时用以修正测量数据，并将相应的不确定度合成到最终检测结果的不确定度中，最终报告中应当附有仪器检定或校准证书，或仪器的计量特性，以便用户对评价结果进行分析。

(3)评价方法

标准物质的选取

进行商品化定量检测试剂盒评价时，应选用国家计量行政部门批准的与检测项目、基质效应一致的的有证标准物质。

根据检测结果准确度、精密度或不确定度的预期要求，选择合适的有证标准物质进行试剂盒评价，所选标准物质的不确定度应当确保在最终检测结果不确定度分量中，由标准物质不确定度引入的分量占检测结果合成标准不确定度的1/3至1/10。

当满足要求的有证标准物质不可获得时，可选用其它来源的标准物质、参考物质、标准品，并在检验报告中进行说明。

评价指标的选取

商品化定量检测试剂盒通常评价的性能指标包括但不限于

准确度

精密度

重复性

线性

定量限

检测限

特异性

商品化定量检测试剂盒进行的评价指标由客户指定。

根据客户要求，可进行特定标准物质或商品化定量检测试剂盒在指定的特定商品化定量检测试剂盒中基质效应与互通性的评价。

本发明商品化定量检测试剂盒评价方法与现有技术不同之处在于：

本发明商品化定量检测试剂盒评价方法建立了一种准确可靠、可被广大生产企业及科研工作者接受的商品化定量检测试剂盒评价方法。本发明充分采用计量学的思路开展检测试剂盒的评价工作，选用相应检测项目的国家有证标准物质进行试剂盒性能评价；同时，在数据处理和评价上，引入不确定度的概念，实现评价数据的合理解释，保证评价结果的客观准确。

国家有证标准物质和不确定度都是计量学的概念，计量是指实现单位统一、量值可靠的活动，它采用国家有证标准物质或计量标准作为量值的载体，将SI单位复现的量值经过逐级的传递链，最终传递到最终的检测结果中，因此采用国家有证标准物质的量值具有准确性、可比性和可溯源性的特点，使用国家有证标准物质进行试剂盒性能指标的评价，能够保证评价结果的准确和可比。

不确定度是表征合理地赋予被测量之值的分散性，与测量结果相联系的参数，测量重复性仅是不确定度分量之一，除测量重复性外，还可以通过不确定度B类评价方法将测量仪器、测量环境、测量条件等各种影响因素可能的不确定度分量综合计算，从而得出在指定置信水平下的可能的结果区间，采用不确定度进行测量结果评价的结论更为客观可靠，在计量学国际比对结果评价、能力验证结果评价等场合都得到了广泛的应用，因此本发明中将不确定度引入到定量试剂盒性能指标和互通性的评价中，从而得到更为客观、准确、可靠的结论。

本发明规定了采用国家有证标准物质进行商品化定量检测试剂盒评价方法评价结果符合性判定的通用要求。

下面结合具体实施例对本发明的商品化定量检测试剂盒评价方法作进一步说明。

具体实施方式

实施例1

一种商品化定量检测试剂盒评价方法，为采用国家有证标准物质对试剂盒性能指标，包括准确度、精密度、检出限、定量限、线性、特异性、基质效应与互通性，进行评价计算；在计算过程中对准确度、检出限、定量限、特异性、基质效应的评价结果进行不确定度评定；根据不确定度的大小对指标测定结果与声称结果的符合性进行判定；

所述准确度评价方法包括如下步骤：

(1)与标准物质或参考方法比对

与标准物质比对：

采用试剂盒对同一份样本进行至少6次测试，按照《ISO/IECGuide98-3:2008》国际标准的要求对试剂盒测定结果的扩展不确定度进行评定，该扩展不确定度应为95％置信水平下的扩展不确定度U；当商品化定量检测试剂盒检测结果的扩展不确定度能够满足检测方法预期的准确度和精密度要求，且按照公式(1)计算的E_n值不大于1时，视为准确度满足要求；

$E_n=\frac{\left|{\stackrel{\&OverBar;}{x}-x}_0\right|}{\sqrt{U^2+U_0^2}}---\left(1\right)$

其中:

商品化定量检测试剂盒检测结果的算术平均值；

x₀：标准物质标准值，由使用的标准物质证书提供；

U：商品化定量检测试剂盒检测结果平均值的扩展不确定度，该不确定度应为95％置信水平下的扩展不确定度；

U₀：标准物质定值结果的扩展不确定度，由使用的标准物质证书提供；

与参考方法比对：

采用试剂盒与参考方法分别对同一份样本进行至少6次测试，按照《ISO/IECGuide98-3:2008》国际标准的要求对试剂盒测定结果及参考方法测定结果的扩展不确定度U和U₀进行评定，该扩展不确定度应为95％置信水平下的扩展不确定度，参考方法应当为国际标准、国家标准、行业标准或其它经过验证的方法，参考方法的扩展不确定度应当小于商品化定量检测试剂盒检测结果的扩展不确定度，商品化定量检测试剂盒检测结果的扩展不确定度应当满足检测方法预期的准确度和精密度要求，且按照公式(2)计算得到的检测方法结果与参考方法结果之间的E_n值不大于1时，视为准确度满足要求；

$E_n=\frac{\left|{x-x}_0\right|}{\sqrt{U^2+U_0^2}}---\left(2\right)$

其中:

x：商品化定量检测试剂盒检测结果的平均值；

x₀：参考方法的检测结果平均值；

U：商品化定量检测试剂盒检测结果平均值的扩展不确定度；

U₀：参考方法的检测结果的扩展不确定度；

(2)与厂家声称的最大允许误差对比

在预期检测范围的高、中、低水平分别采用有证标准物质对试剂盒检测结果准确度进行评价；高水平为预期检测范围3/4处、中水平为预期检测范围1/2处、低水平为预期检测范围1/4处，每个水平标准物质采用商品化定量检测试剂盒至少分析三次，并计算检测范围高、中、低三个水平的误差和扩展不确定度；

误差计算公式为：

E＝M-M_S

其中：

E:误差；

M:三次分析测定结果的算术平均值；

M_S:标准物质的标准值；

按照《ISO/IECGuide98-3:2008》国际标准的要求评定试剂盒测定结果的扩展不确定度U_M，标准物质的扩展不确定度U_Ms由证书给出，误差的标准合成不确定度通过下式计算：

$U_{c,E}=\sqrt{U_M^2+U_{M_S}^2}$

其中,

U_c,E——误差的扩展不确定度；

U_M——试剂盒测定结果的扩展不确定度；

U_Ms——标准物质的扩展不确定度；

与厂家声称指标或法规、标准要求的符合性判定：

厂家声称的最大允许误差或法规、标准要求的最大允许误差为MPEV；

当试剂盒检测结果的扩展不确定度U≤1/3MPEV时，忽略检测结果本身扩展不确定度对合格性判定的要求，如果检测结果绝对误差E在其最大允许误差限内时,即|E|≤MPEV时，判为满足技术要求，为符合，否则为不符合；

当试剂盒检测结果的扩展不确定度U>1/3MPEV时，考虑测量不确定度因素的影响，如果检测结果的最大绝对误差E的绝对值小于或等于其最大允许误差的绝对值MPEV与绝对误差的扩展不确定度U之差时判为符合，即：

|E|≤MPEV-U₉₅，则为符合；

如果检测结果的最大绝对误差E的绝对值大于或等于其最大允许误差的绝对值MPEV与绝对误差的扩展不确定度U₉₅之和时，判为不符合，即：

|E|≥MPEV+U₉₅，则为不符合；

当检测结果的最大绝对误差既不符合“符合判定”又不符合“不符合判定”时，为处于待定区，这时不能下符合或不符合的结论，即为待定区；

MPEV-U<|E|<MPEV+U,待定区；

此时，通过改善环境条件与增加测量次数措施，以降低测量不确定度U，使满足与最大允许误差绝对值MPEV之比小于或等于1∶3的要求，然后对检测结果的最大绝对误差重新进行评定。

所述精密度评价包括如下步骤：

采用试剂盒对同一有证标准物质进行至少6次测试，在进行精密度评价时，标准物质不经过样品前处理过程，

根据公式(3)计算精密度：

$R=\sqrt{\frac{\underset{i=1}{\overset{6}{\mathrm{\&Sigma;}}}{(x_i-\stackrel{\&OverBar;}{x})}^2}{n-1}}\&times;\frac{1}{\stackrel{\&OverBar;}{x}}\&times;100\%---\left(3\right)$

式中：

R—相对标准偏差，以百分数表示；

x_i—第i次商品化定量检测试剂盒分析样品的结果；

—n次测定结果的平均值。

所述重复性评价包括如下步骤：

采用试剂盒对同一有证标准物质进行至少6次测试，在进行重复性评价时，标准物质应当经过规定的样品前处理过程，按照公式(3)计算相对比标准偏差作为重复性评价的表征。

所述检出限评价包括如下步骤：选择至少3份空白样品，用待评价的试剂盒的检测方法对空白样品和经梯度稀释的国家有证标准物质进行测定，将3倍空白响应值代入通过国家有证标准物质绘制的标准曲线计算出的浓度作为检测限，当试剂盒实际测定的对象与试剂盒声称的分析物不一致时，应当将实际测定对象的浓度换算为分析物的浓度，并以分析物的浓度单位进行表征；

所述定量限评价包括如下步骤：选择至少3份空白样品，用待评价的试剂盒的检测方法对空白样品和经梯度稀释的国家有证标准物质进行测定，同时计算3份空白样品测定响应值的标准偏差，将3份空白样品浓度测定结果的响应平均值加上10倍响应值的标准偏差，将响应值计算结果代入通过国家有证标准物质绘制的标准曲线中计算出对应的浓度值，作为试剂盒定量限的评价结果；当试剂盒实际测定的对象与试剂盒声称的分析物不一致时，应当将实际测定对象的浓度换算为分析物的浓度，并以分析物的浓度单位进行表征。

所述线性或范围的评价方法包括如下步骤：

以多水平的有证标准物质考察线性或范围，当采用单水平标准物质通过稀释获得多水平标准溶液时，基质效应应当相同；标准溶液包括一定的梯度，至少包括5个浓度水平；将响应值和溶液标准值进行线性拟合，计算线性相关系数进行线性评价，有必要时，对线性拟合系数的不确定度进行评定；

在进行范围评价时，在检测范围内标准曲线不存在拐点，具有范围意义的数据点在统计学上能够与相邻数据点区分。

所述特异性评价方法包括如下步骤：采用试剂盒对样本中可能存在的交叉反应物的有证标准物质进行测定，交叉反应物的浓度应涵盖实际测定中可能的浓度水平，每个水平至少进行3次测试，特异性评价结果以交叉反应系数、交叉反应函数或要求的方式给出。

所述互通性评价方法包括如下步骤：

互换性包括两个方面：试剂盒自带标准品与其它标准品的互换性；另一个是两个或两个以上不同试剂盒测定结果的互换性；

试剂盒自带标准品与其它标准品的互换性评价：

方法一：使用试剂盒自带标准品和浓度接近的其它标准品同时绘制标准曲线后，测量实际带有基质的样本，样本应当能够覆盖整个检测范围，至少10个样品；每个程序每一样本至少测量3次，为避免由于样本不稳定性带来的影响，在试验时使用两个程序同时完成一个样本的测量后再进行下一个样本的测量，记录测量结果；

方法二：使用试剂盒自带标准品作为标准，直接测定需要评价的标准品，每个水平标准品重复测定至少3次；

两个或两个以上不同试剂盒的互换性：采用各个试剂盒自带的标准品，测定带有基质的实际样本，样本应当能够覆盖整个检测范围，至少10个样品；每个试剂盒对每一个水平的样本至少测定3次，为避免分析间精密度带来的影响，在测定时一个样本连续测定3次后再进行下一样本的测定，记录测量结果；

试剂盒自带标准品与其它标准品的互换性评价数据的处理：

对应于方法一：使用试剂盒自带标准品测定样本的结果作为x轴，使用待评价标准品测定样本的结果作为y轴，进行Deming回归，并确定95％置信水平下直线斜率和截距的置信范围；如果直线斜率的置信范围包括1，截距的置信范围包括0，证明待评价标准品与试剂盒标准品之间具有互换性，否则说明待评价标准品与试剂盒标准品之间不能互换；

对应于方法二：使用试剂盒自带标准品测定待评价标准品的结果作为x轴，待评价标准品的标准值作为y轴，进行Deming回归，并确定95％置信水平下直线斜率和截距的置信范围；如果直线斜率的置信范围包括1，截距的置信范围包括0，证明待评价标准品与试剂盒标准品之间具有互换性，否则说明待评价标准品与试剂盒标准品之间不能互换；

两个或两个以上不同试剂盒的互换性评价结果的数据处理：分别以两个试剂盒检测结果作为x轴和y轴，进行Deming回归，并确定95％置信水平下直线斜率和截距的置信范围；如果直线斜率的置信范围包括1，截距的置信范围包括0，证明两个试剂盒之间具有互换性；否则，说明两个试剂盒之间没有互换性。

所述方法还包括标准物质的选取：

进行商品化定量检测试剂盒评价时，应选用国家计量行政部门批准的与检测项目、基质效应一致的的有证标准物质；

根据检测结果准确度、精密度或不确定度的预期要求，选择合适的有证标准物质进行试剂盒评价，所选标准物质的不确定度应当确保在最终检测结果不确定度分量中，由标准物质不确定度引入的分量占检测结果合成标准不确定度的1/3至1/10；

当满足要求的有证标准物质不可获得时，选用其它来源的标准物质、参考物质、标准品，并在检验报告中进行说明。

实施例2

本发明商品化定量检测试剂盒评价方法，所述试剂盒包括但不限于胰岛素化学发光免疫检测试剂盒，

采用所述胰岛素化学发光免疫检测试剂盒进行评价的方法包括如下步骤：

(1)采用不含胰岛素的空白血清，或使用经基质效应验证在BeckmanDxI800免疫分析系统上具有互通性的BSA溶液将胰岛素标准物质稀释至如下浓度水平：143.4pmol/、15.1pmol/、44.7pmol/、75.2pmol/、105.0pmol/、134.5pmol/L，按照公式(1)进行准确度验证。使用BeckmanDxI800胰岛素化学发光免疫分析试剂盒中的标准品校准BeckmanDxI800免疫分析系统，然后用该系统对143.4pmol/L的胰岛素标准物质溶液重复测定6次，测定结果平均值为150.1pmol/L，根据《ISO/IECGuide98-3:2008》国际标准的要求评定试剂盒测定结果的扩展不确定度U_M＝7.5pmol/L，使用的标准物质的扩展不确定度为4.3pmol/L，根据下面公式计算E_n值为0.77，该值小于1，说明在143.4pmol/L量值点试剂盒准确度通过验证；

$E_n=\frac{\left|{x-x}_0\right|}{\sqrt{U^2+U_0^2}}$

(2)选取血清样本，采用同位素稀释质谱方法作为参考方法对血清中的胰岛素含量进行测定，测定结果为74.6pmol/L；使用BeckmanDxI800胰岛素化学发光免疫分析试剂盒中的标准品校准BeckmanDxI800免疫分析系统，然后用该系统对同一个血清样品进行测定，测定结果为72.1pmol/L。根据《ISO/IECGuide98-3:2008》国际标准的要求评定参考方法和试剂盒方法测定结果的扩展不确定度分别为3.0pmol/L和3.7pmol/L，根据下面公式计算E_n值为0.52，该值小于1，说明在74.6pmol/L量值点试剂盒准确度通过验证；

$E_n=\frac{\left|{x-x}_0\right|}{\sqrt{U^2+U_0^2}}$

(3)假定试剂盒的最大允许误差为15％，即在74.6pmol/L量值点的最大允许误差MPEV＝11.19pmol/L，由于试剂盒检测结果的扩展不确定度U＝3.7pmol/L，所以(U＝3.7pmol/L)<(1/3MPEV＝3.73pmol/L)，而误差|E|＝2.5pmol/L，满足|E|≤MPEV，因此该试剂盒在74.6pmol/L量值点的测量误差小于假定的最大允许误差。

(4)使用BeckmanDxI800胰岛素化学发光免疫分析试剂盒中的标准品校准BeckmanDxI800免疫分析系统，然后用该系统对同一个血清样品连续测定6次，根据下面的公式计算试剂盒测定结果的精密度：

$R=\sqrt{\frac{\underset{i=1}{\overset{6}{\mathrm{\&Sigma;}}}{(x_i-\stackrel{\&OverBar;}{x})}^2}{n-1}}\&times;\frac{1}{\stackrel{\&OverBar;}{x}}\&times;100\%$

式中：

R—相对标准偏差，以百分数表示；

x_i—第i次商品化定量检测试剂盒分析样品的结果；

—n次测定结果的平均值。

计算结果为2.1％。

(5)使用BeckmanDxI800胰岛素化学发光免疫分析试剂盒中的标准品校准BeckmanDxI800免疫分析系统，然后用该系统对3份除去胰岛素的血清样品进行测定。并以经梯度稀释的胰岛素国家有证标准物质143.4pmol/、15.1pmol/、44.7pmol/、75.2pmol/、105.0pmol/、134.5pmol/L绘制标准曲线，将3倍空白样品响应值代入标准曲线计算出的浓度作为检测限，计算结果为1.3pmol/L；

(6)使用BeckmanDxI800胰岛素化学发光免疫分析试剂盒中的标准品校准BeckmanDxI800免疫分析系统，然后用该系统对3份除去胰岛素的血清样品进行测定，每份样品重复测定3次。并以经梯度稀释的胰岛素国家有证标准物质143.4pmol/、15.1pmol/、44.7pmol/、75.2pmol/、105.0pmol/、134.5pmol/L绘制标准曲线，将3倍空白样品响应值代入标准曲线计算出的浓度；同时将3份空白样品测定结果标准偏差的10倍代入标准曲线计算出浓度，将以上两个浓度相加作为定量限，计算结果为4.3pmol/L；

(7)使用BeckmanDxI800胰岛素化学发光免疫分析试剂盒中的标准品校准BeckmanDxI800免疫分析系统，然后用该系统测定标称浓度分别为143.4pmol/、15.1pmol/、44.7pmol/、75.2pmol/、105.0pmol/、134.5pmol/L胰岛素国家有证标准物质，将测定结果平均值和标准物质标准值进行线性拟合，计算线性相关系数为0.992；

(8)使用BeckmanDxI800胰岛素化学发光免疫分析试剂盒中的标准品校准BeckmanDxI800免疫分析系统，然后用该系统测定标称浓度分别为143.4pmol/、15.1pmol/、44.7pmol/、75.2pmol/、105.0pmol/、134.5pmol/L胰岛素国家有证标准物质，将测定结果平均值和标准物质标准值进行Deming回归，回归直线的斜率在95％置信水平下的置信区间为[0.4858,1.4612],截距在95％置信水平下的置信区间为[-36.6198,27.3289]，因此证明试剂盒校准品和标准物质之间具有互换性。

以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (9)

1.一种商品化定量检测试剂盒评价方法，其特征在于：所述方法为采用国家有证标准物质对试剂盒性能指标，包括准确度、精密度、重复性、检出限、定量限、线性、特异性、基质效应与互换性，进行评价计算；在计算过程中对准确度、检出限、定量限、特异性、基质效应的评价结果进行不确定度评定；根据不确定度的大小对指标测定结果与声称结果的符合性进行判定；

所述准确度评价方法包括如下步骤：

(1)与标准物质或参考方法比对

与标准物质比对：

采用试剂盒对同一份样本进行至少6次测试，按照《ISO/IECGuide98-3:2008》国际标准的要求对试剂盒测定结果的扩展不确定度进行评定，该扩展不确定度应为95％置信水平下的扩展不确定度U；当商品化定量检测试剂盒检测结果的扩展不确定度能够满足检测方法预期的准确度和精密度要求，且按照公式(1)计算的E_n值不大于1时，视为准确度满足要求；

$E_n=\frac{\left|\stackrel{\&OverBar;}{x}-x_0\right|}{\sqrt{U^2+U_0^2}}---\left(1\right)$

其中:

商品化定量检测试剂盒检测结果的算术平均值；

x₀：标准物质标准值，由使用的标准物质证书提供；

U：商品化定量检测试剂盒检测结果平均值的扩展不确定度，该不确定度应为95％置信水平下的扩展不确定度；

U₀：标准物质定值结果的扩展不确定度，由使用的标准物质证书提供；

与参考方法比对：

采用试剂盒与参考方法分别对同一份样本进行至少6次测试，按照《ISO/IECGuide98-3:2008》国际标准的要求对试剂盒测定结果及参考方法测定结果的扩展不确定度U和U₀进行评定，该扩展不确定度应为95％置信水平下的扩展不确定度，参考方法应当为国际标准、国家标准、行业标准或其它经过验证的方法，参考方法的扩展不确定度应当小于商品化定量检测试剂盒检测结果的扩展不确定度，商品化定量检测试剂盒检测结果的扩展不确定度应当满足检测方法预期的准确度和精密度要求，且按照公式(2)计算得到的检测方法结果与参考方法结果之间的E_n值不大于1时，视为准确度满足要求；

$E_n=\frac{\left|x-x_0\right|}{\sqrt{U^2+U_1^2}}---\left(2\right)$

其中:

x：商品化定量检测试剂盒检测结果的平均值；

x₀：参考方法的检测结果平均值；

U：商品化定量检测试剂盒检测结果平均值的扩展不确定度；

U₁：参考方法的检测结果的扩展不确定度；

(2)与厂家声称的最大允许误差对比

在预期检测范围的高、中、低水平分别采用有证标准物质对试剂盒检测结果准确度进行评价；高水平为预期检测范围3/4处、中水平为预期检测范围1/2处、低水平为预期检测范围1/4处，每个水平标准物质采用商品化定量检测试剂盒至少分析三次，并计算检测范围高、中、低三个水平的误差和扩展不确定度；

误差计算公式为：

E＝M-M_S

其中：

E:误差；

M:三次分析测定结果的算术平均值；

M_S:标准物质的标准值；

按照《ISO/IECGuide98-3:2008》国际标准的要求评定试剂盒测定结果的扩展不确定度U_M，标准物质的扩展不确定度U_Ms由证书给出，误差的标准合成不确定度通过下式计算：

$U_{c,E}=\sqrt{U_M^2+U_{M_S}^2}$

其中,

U_c,E——误差的扩展不确定度；

U_M——试剂盒测定结果的扩展不确定度；

U_Ms——标准物质的扩展不确定度；

与厂家声称指标或法规、标准要求的符合性判定：

厂家声称的最大允许误差或法规、标准要求的最大允许误差的绝对值为MPEV；

当试剂盒测定结果的扩展不确定度U_M≤1/3MPEV时，忽略检测结果本身扩展不确定度对合格性判定的要求，如果检测结果的最大绝对误差E在其最大允许误差限内时,即|E|≤MPEV时，判为满足技术要求，为符合，否则为不符合；

当试剂盒测定结果的扩展不确定度U_M>1/3MPEV时，考虑测量不确定度因素的影响，如果检测结果的最大绝对误差E的绝对值小于或等于其最大允许误差的绝对值MPEV与绝对误差的扩展不确定度U₉₅之差时判为符合，即：

|E|≤MPEV-U_95，则为符合；

如果检测结果的最大绝对误差E的绝对值大于或等于其最大允许误差的绝对值MPEV与绝对误差的扩展不确定度U₉₅之和时，判为不符合，即：

|E|≥MPEV+U_95，则为不符合；

当检测结果的最大绝对误差既不符合“符合判定”又不符合“不符合判定”时，为处于待定区，这时不能下符合或不符合的结论，即为待定区；

MPEV-U₉₅<|E|<MPEV+U₉₅,待定区；

此时，通过改善环境条件与增加测量次数措施，以降低试剂盒测定结果的扩展不确定度U_M，使其满足与最大允许误差绝对值MPEV之比小于或等于1∶3的要求，然后对检测结果的最大绝对误差重新进行评定。

2.根据权利要求1所述的商品化定量检测试剂盒评价方法，其特征在于：所述精密度评价包括如下步骤：

采用试剂盒对同一有证标准物质进行至少6次测试，在进行精密度评价时，标准物质不经过样品前处理过程，

根据公式(3)计算精密度：

$R=\sqrt{\frac{\underset{i=1}{\overset{6}{\&Sigma;}}{(x_i-\stackrel{\&OverBar;}{x})}^2}{n-1}}\&times;\frac{1}{\stackrel{\&OverBar;}{x}}\&times;100\%---\left(3\right)$

式中：

R—相对标准偏差，以百分数表示；

x_i—第i次商品化定量检测试剂盒分析样品的结果；

—n次测定结果的平均值。

3.根据权利要求2所述的商品化定量检测试剂盒评价方法，其特征在于：所述重复性评价包括如下步骤：

采用试剂盒对同一有证标准物质进行至少6次测试，在进行重复性评价时，标准物质应当经过规定的样品前处理过程，按照公式(3)计算相对比标准偏差作为重复性评价的表征。

4.根据权利要求3所述的商品化定量检测试剂盒评价方法，其特征在于：

所述检出限评价包括如下步骤：选择至少3份空白样品，用待评价的试剂盒的检测方法对空白样品和经梯度稀释的国家有证标准物质进行测定，将3倍空白响应值代入通过国家有证标准物质绘制的标准曲线计算出的浓度作为检测限，当试剂盒实际测定的对象与试剂盒声称的分析物不一致时，应当将实际测定对象的浓度换算为分析物的浓度，并以分析物的浓度单位进行表征；

所述定量限评价包括如下步骤：选择至少3份空白样品，用待评价的试剂盒的检测方法对空白样品和经梯度稀释的国家有证标准物质进行测定，同时计算3份空白样品测定响应值的标准偏差，将3份空白样品浓度测定结果的响应平均值加上10倍响应值的标准偏差，将响应值计算结果代入通过国家有证标准物质绘制的标准曲线中计算出对应的浓度值，作为试剂盒定量限的评价结果；当试剂盒实际测定的对象与试剂盒声称的分析物不一致时，应当将实际测定对象的浓度换算为分析物的浓度，并以分析物的浓度单位进行表征。

5.根据权利要求4所述的商品化定量检测试剂盒评价方法，其特征在于：所述线性或范围的评价方法包括如下步骤：

以多水平的有证标准物质考察线性或范围，当采用单水平标准物质通过稀释获得多水平标准溶液时，基质效应应当相同；标准溶液包括一定的梯度，至少包括5个浓度水平；将响应值和溶液标准值进行线性拟合，计算线性相关系数进行线性评价，有必要时，对线性拟合系数的不确定度进行评定；

在进行范围评价时，在检测范围内标准曲线不存在拐点，具有范围意义的数据点在统计学上能够与相邻数据点区分。

6.根据权利要求5所述的商品化定量检测试剂盒评价方法，其特征在于：所述特异性评价方法包括如下步骤：采用试剂盒对样本中可能存在的交叉反应物的有证标准物质进行测定，交叉反应物的浓度应涵盖实际测定中可能的浓度水平，每个水平至少进行3次测试，特异性评价结果以交叉反应系数、交叉反应函数或要求的方式给出。

7.根据权利要求6所述的商品化定量检测试剂盒评价方法，其特征在于：所述互换性评价方法包括如下步骤：

互换性包括两个方面：试剂盒自带标准品与其它标准品的互换性；另一个是两个或两个以上不同试剂盒测定结果的互换性；

试剂盒自带标准品与其它标准品的互换性评价：

方法一：使用试剂盒自带标准品和浓度接近的其它标准品同时绘制标准曲线后，测量实际带有基质的样本，样本应当能够覆盖整个检测范围，至少10个样品；每个程序每一样本至少测量3次，为避免由于样本不稳定性带来的影响，在试验时使用两个程序同时完成一个样本的测量后再进行下一个样本的测量，记录测量结果；

方法二：使用试剂盒自带标准品作为标准，直接测定需要评价的标准品，每个水平标准品重复测定至少3次；

两个或两个以上不同试剂盒的互换性：采用各个试剂盒自带的标准品，测定带有基质的实际样本，样本应当能够覆盖整个检测范围，至少10个样品；每个试剂盒对每一个水平的样本至少测定3次，为避免分析间精密度带来的影响，在测定时一个样本连续测定3次后再进行下一样本的测定，记录测量结果；

试剂盒自带标准品与其它标准品的互换性评价数据的处理：

对应于方法一：使用试剂盒自带标准品测定样本的结果作为x轴，使用待评价标准品测定样本的结果作为y轴，进行Deming回归，并确定95％置信水平下直线斜率和截距的置信范围；如果直线斜率的置信范围包括1，截距的置信范围包括0，证明待评价标准品与试剂盒标准品之间具有互换性，否则说明待评价标准品与试剂盒标准品之间不能互换；

对应于方法二：使用试剂盒自带标准品测定待评价标准品的结果作为x轴，待评价标准品的标准值作为y轴，进行Deming回归，并确定95％置信水平下直线斜率和截距的置信范围；如果直线斜率的置信范围包括1，截距的置信范围包括0，证明待评价标准品与试剂盒标准品之间具有互换性，否则说明待评价标准品与试剂盒标准品之间不能互换；

两个或两个以上不同试剂盒的互换性评价结果的数据处理：分别以两个试剂盒检测结果作为x轴和y轴，进行Deming回归，并确定95％置信水平下直线斜率和截距的置信范围；如果直线斜率的置信范围包括1，截距的置信范围包括0，证明两个试剂盒之间具有互换性；否则，说明两个试剂盒之间没有互换性。

8.根据权利要求1所述的商品化定量检测试剂盒评价方法，其特征在于：所述方法还包括标准物质的选取：

进行商品化定量检测试剂盒评价时，应选用国家计量行政部门批准的与检测项目、基质效应一致的的有证标准物质；

根据检测结果准确度、精密度或不确定度的预期要求，选择合适的有证标准物质进行试剂盒评价，所选标准物质的不确定度应当确保在最终检测结果不确定度分量中，由标准物质不确定度引入的分量占检测结果合成标准不确定度的1/3至1/10；

当满足要求的有证标准物质不可获得时，选用其它来源的标准物质、参考物质、标准品，并在检验报告中进行说明。

9.一种商品化定量检测试剂盒评价方法，其特征在于：所述试剂盒为胰岛素化学发光免疫检测试剂盒，

采用所述胰岛素化学发光免疫检测试剂盒进行评价的方法包括如下步骤：

(1)采用不含胰岛素的空白血清，或使用经基质效应验证在BeckmanDxI800免疫分析系统上具有互通性的BSA溶液将胰岛素标准物质稀释至如下浓度水平：143.4pmol/L、15.1pmol/L、44.7pmol/L、75.2pmol/L、105.0pmol/L、134.5pmol/L，按照公式(1)进行准确度验证；

(2)打开BeckmanDxI800反应管仓门，装载反应试管；换上新的洗涤缓冲液；更换新的基质溶液；倒空废液和固体废物袋，将有效期内的胰岛素检测试剂盒装载到系统中，用1mL纯水将BeckmanDxI800试剂盒配套的定标品溶解，静止30分钟后转移300μL至样品管中，在系统主菜单选择定标，按F1增加定标液，扫描定标液的条形码录入定标液信息并确认，在主菜单上选择样品管理，并选择需要使用的定标液及放置定标液的定标架，上机定标直至通过；

(3)将143.4pmol/L的胰岛素标准物质溶液分装到6个样品杯中，在BeckmanDxI800主菜单样品管理界面添加样品进行分析，6个样品重复分析测定结果平均值为150.1pmol/L；根据《ISO/IECGuide98-3:2008》国际标准的要求评定试剂盒测定结果的扩展不确定度U＝7.5pmol/L，使用的标准物质的扩展不确定度为4.3pmol/L，根据公式(1)计算E_n值为0.77，该值小于1，说明在143.4pmol/L量值点试剂盒准确度通过验证；

$E_n=\frac{\left|x-x_0\right|}{\sqrt{U^2+U_0^2}}---\left(1\right)$

其中:

商品化定量检测试剂盒检测结果的算术平均值；

x₀：标准物质标准值，由使用的标准物质证书提供；

U：商品化定量检测试剂盒检测结果平均值的扩展不确定度，该不确定度应为95％置信水平下的扩展不确定度；

U₀：标准物质定值结果的扩展不确定度，由使用的标准物质证书提供；

(4)选取血清样本，采用同位素稀释质谱方法作为参考方法对血清中的胰岛素含量进行测定，以氘标记的缬氨酸合成胰岛素B链FVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPKT形成同位素标记的胰岛素B链；取2mL血清于固相萃取柱中，待流过固相萃取柱后用500μL水进行淋洗一次，最后以500μL90％乙腈-水进行洗脱，用5％体积比的1M二硫苏糖醇溶液作为还原剂，涡旋混匀后在60℃水浴锅中加热15min，取1mL胰岛素标准溶液或者样品，加入1mL同位素标记的胰岛素B链肽段溶液并称重，涡旋混匀并按上述条件进行固相萃取和还原，还原后的溶液用MALDI-TOF基质混匀后点在靶板上，自然晾干，进行质谱分析，监测还原后的胰岛素B链m/z＝3431以及同位素标记的B链m/z＝3447的信号强度，根据下面公式计算血清中胰岛素含量为74.6pmol/L；

$w_s=\frac{R_{h-s}}{R_{h-std}}\&times;\frac{m_{s-l}}{m}\&times;R_{m-std}$

式中，R_m-std表示标准溶液中胰岛素与标记的B链的质量比；

R_h-std表示标准溶液中非标记的胰岛素B链还原肽段与标记的B链的峰高比或峰面积比；

R_h-s表示样品溶液中非标记的胰岛素B链还原肽段与标记的B链的峰高比或峰面积比；

m_s-l表示样品溶液中标记的B链的质量，单位为g；

m为样品溶液的质量，单位为g；

w_s为样品溶液中胰岛素的含量，单位为g/g；

使用BeckmanDxI800胰岛素化学发光免疫分析试剂盒中的标准品校准BeckmanDxI800免疫分析系统，然后用该系统对同一个血清样品进行测定，测定结果为72.1pmol/L；根据《ISO/IECGuide98-3:2008》国际标准的要求评定参考方法和试剂盒方法测定结果的扩展不确定度分别为3.0pmol/L和3.7pmol/L，根据公式(1)计算E_n值为0.52，该值小于1，说明在74.6pmol/L量值点试剂盒准确度通过验证；

(5)假定试剂盒的最大允许误差为15％，即在74.6pmol/L量值点的最大允许误差的绝对值MPEV＝11.19pmol/L，由于试剂盒测定结果的扩展不确定度U＝3.7pmol/L，所以(U＝3.7pmol/L)<(1/3MPEV＝3.73pmol/L)，而误差|E|＝2.5pmol/L，满足|E|≤MPEV，因此该试剂盒在74.6pmol/L量值点的测量误差小于假定的最大允许误差；

(6)使用BeckmanDxI800胰岛素化学发光免疫分析试剂盒中的标准品校准BeckmanDxI800免疫分析系统，然后用该系统对同一个血清样品连续测定6次，根据公式(3)计算试剂盒测定结果的精密度：

$R=\sqrt{\frac{\underset{i=1}{\overset{6}{\&Sigma;}}{(x_i-\stackrel{\&OverBar;}{x})}^2}{n-1}}\&times;\frac{1}{\stackrel{\&OverBar;}{x}}\&times;100\%---\left(3\right)$

式中：

R—相对标准偏差，以百分数表示；

x_i—第i次商品化定量检测试剂盒分析样品的结果；

—n次测定结果的平均值；

计算结果为2.1％；

(7)按照步骤(2)中的操作步骤，使用BeckmanDxI800胰岛素化学发光免疫分析试剂盒中的标准品校准BeckmanDxI800免疫分析系统，然后用该系统对3份除去胰岛素的血清样品进行测定；并以经梯度稀释的胰岛素国家有证标准物质143.4pmol/L、15.1pmol/L、44.7pmol/L、75.2pmol/L、105.0pmol/L、134.5pmol/L绘制标准曲线，将3倍空白样品响应值代入标准曲线计算出的浓度作为检测限，计算结果为1.3pmol/L；

(8)按照步骤(2)中的操作步骤，使用BeckmanDxI800胰岛素化学发光免疫分析试剂盒中的标准品校准BeckmanDxI800免疫分析系统，然后用该系统对3份除去胰岛素的血清样品进行测定，每份样品重复测定3次；并以经梯度稀释的胰岛素国家有证标准物质143.4pmol/L、15.1pmol/L、44.7pmol/L、75.2pmol/L、105.0pmol/L、134.5pmol/L绘制标准曲线，将3份空白样品响应值代入标准曲线计算出浓度；同时将3份空白样品测定结果标准偏差的10倍代入标准曲线计算出浓度，将以上两个浓度相加作为定量限，计算结果为4.3pmol/L；

(9)按照步骤(2)中的操作步骤，使用BeckmanDxI800胰岛素化学发光免疫分析试剂盒中的标准品校准BeckmanDxI800免疫分析系统，然后用该系统测定标称浓度分别为143.4pmol/L、15.1pmol/L、44.7pmol/L、75.2pmol/L、105.0pmol/L、134.5pmol/L胰岛素国家有证标准物质，将测定结果平均值和标准物质标准值进行线性拟合，计算线性相关系数为0.992；

(10)按照步骤(2)中的操作步骤，使用BeckmanDxI800胰岛素化学发光免疫分析试剂盒中的标准品校准BeckmanDxI800免疫分析系统，然后用该系统测定标称浓度分别为143.4pmol/L、15.1pmol/L、44.7pmol/L、75.2pmol/L、105.0pmol/L、134.5pmol/L胰岛素国家有证标准物质，将测定结果平均值和标准物质标准值进行Deming回归，回归直线的斜率在95％置信水平下的置信区间为[0.4858,1.4612],截距在95％置信水平下的置信区间为[-36.6198,27.3289]，因此证明试剂盒校准品和标准物质之间具有互换性。