CN109917130A - 一种犬crp的化学发光免疫检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种犬CRP的化学发光免疫检测试剂盒，包括犬CRP单克隆抗体包被的毛细管、碱性磷酸酶标记的犬CRP单克隆抗体、碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物和清洗液。本发明具有快速检测、灵敏度高、特异性强、线性范围宽、稳定性好、试剂用量小、成本低、操作简便，对使用人员要求低的优点。
Description
技术领域
本发明属于免疫分析技术领域，尤其涉及一种犬CRP的检测试剂盒。
背景技术
机体在受到细菌感染或组织损伤等刺激时，会出现急性期反应，受到刺激的细胞会释放促炎因子，促进肝脏合成一些急性期反应蛋白，并从肝细胞中分泌至血液。C反应蛋白(C-neactveprotein ,简称CRP)是犬最主要的，也是很敏感的急性时相反应蛋白。在钙离子存在时CRP与肺炎球菌C-多糖起沉淀反应形成复合物，在动物遭受细菌感染或者组织伤时，血清中一些急剧上升的蛋白质（如急性蛋白CRP），激活补体和加强吞噬细胞的吞噬而起调理作用，清除入侵机体的病原微生物和损伤，坏死，凋亡的组织细胞。
CRP在机体的免疫反应方面有着积极作用，在很多病症中会出现显著变化。CRP在炎症发生后数小时就开始升高，48小时可以到达顶峰，在疾病恢复期迅速下降。CRP升高的程度反应炎症的大小或活动性，在急性炎症和感染时CRP与疾病活动性有良好的相关性，CRP值可为快速决定提供一种方法。因此，CRP可以作为急性感染和炎症性疾病的一种标志，在疾病早期检测犬CRP值对犬做出正确的诊断及其重要。
常用的CRP检测方法多种多样，主要有乳胶免疫比浊法、放射免疫测定、ELISA法及化学发光法等。乳胶免疫比浊法是利用抗原抗体反应形成免疫复合物，产生的浊度与CRP含量呈正比，用比浊法进行测定，从而求得CRP的含量，此方法灵敏度和线性无法兼顾。ELISA法稳定性好，但操作步骤繁琐、反应时间长且检测灵敏度较低。放射免疫测定灵敏度高，但弊端较大，如会存在放射性同位素损伤、污染及不稳定等，且容易对操作人员造成伤害。
目前测试人CRP含量的试剂盒已相对较为成熟和稳定，但测试犬CRP含量的ELISA试剂盒，操作步骤繁琐、反应时间长、检测灵敏度较低且试剂使用量大，对使用人员要求高。面对日益庞大的宠物市场，简便、迅速、准确检测犬CRP含量的会成为主流方向。
发明内容
为解决上述现有技术的不足，本发明提供了一种犬CRP的化学发光免疫检测试剂盒，该试剂盒具有快速检测、灵敏度高、特异性强、线性范围宽、稳定性好、试剂用量小、成本低、操作简便，对使用人员要求低的优点。
为了达到上述技术目的，本发明所采用的技术方案是：
一种犬CRP的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：包括犬CRP单克隆抗体包被的毛细管、碱性磷酸酶标记的犬CRP单克隆抗体、碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物和清洗液。
所述毛细管为高精度毛细管，其外径为1.2±0.02mm，内径为0.7±0.005m，长度为30±1mm，材质为高硼硅3.3玻璃。
所述犬CRP单克隆抗体包被的毛细管是通过采用犬CRP单克隆抗体EDC一步法包被毛细管或者采用犬CRP单克隆抗体SMCC包被毛细管的方法来制备的。
所述犬CRP单克隆抗体EDC一步法包被毛细管具体步骤如下：
制取包被液：在50M的MES缓冲液中加入EDC和犬CRP单克隆抗体混匀后，得到包被液Ⅰ；包被液Ⅰ中，EDC的浓度为5～400ug/mL，犬CRP单克隆抗体的浓度为2～10ug/mL；
包被：将表面氨基化的毛细管浸泡在包被液Ⅰ中进行包被，包被温度为室温，包被时间为20～40min；
清洗：将包被后的毛细管用pH=7.4的50mM的Tris～HCl溶液淋洗并吹干。
所述MES缓冲液包括如下成分：
MES 0.05～1.5M
NaCl 0.05～1.5M
MgCl2 1～5mM
ZnCl2 0.01～0.1mM
BSA 0.2～1.5%（质量百分比）
吐温20 0.2～0.6%（体积百分比）。
所述犬CRP单克隆抗体SMCC包被毛细管具体步骤如下：
活化犬CRP单克隆抗体：将犬CRP单克隆抗体浓缩至3mg/mL～5mg/mL，并用2-IT活化犬CRP单克隆抗体；
活化毛细管：将表面氨基化的毛细管浸泡在SMCC中进行活化处理，浸泡时间为1.5h，浸泡温度为室温，活化完成后，用pH=7.4的50mM 的Tris～HCl溶液淋洗并吹干，所述SMCC的浓度为2mg/mL；
包被：将活化后的犬CRP单克隆抗体用pH=7.4的TSE溶液稀释至10ug/mL，制成包被液Ⅱ，将活化后的毛细管浸泡在包被液Ⅱ中进行包被，包被时间为12～24h，包被温度为4℃；
所述TSE溶液包括如下成分：
三乙醇胺 0.05~0.2M
氯化钠 0.05~0.2M
EDTA.2Na.2H2O 0.5~1.5mM
氯化镁 0.5~1.5mM
氯化锌 0.05~0.13mM。
清洗：将包被后的毛细管用pH=7.4的50mM的Tris～HCl溶液淋洗并吹干；
封闭：用50mM 的Tris～HCl溶液浸泡封闭包被后的毛细管，封闭温度为37℃，封闭时间为3h，封闭完成后用清洗液淋洗并吹干，所述Tris～HCl溶液中含有2%（质量百分比）的BSA和0.1M的甘氨酸。
所述碱性磷酸酶标记的犬CRP单克隆抗体通过如下方法制成：
犬CRP单克隆抗体活化：将犬CRP单克隆抗体浓缩至3mg/mL～5mg/mL，并用2-IT进行活化处理；
碱性磷酸酶活化：将碱性磷酸酶浓缩至2mg/mL～4mg/mL，并用SMCC进行活化处理；
混合：将活化后的碱性磷酸酶和犬CRP单克隆抗体的按照摩尔比例为1.2:1混合，并加入1/500犬CRP单克隆抗体体积的1M的MgCl2溶液，在温度为4℃的条件下，反应12～24h后，加入终止剂终止反应，终止反应后，进行纯化处理，得到碱性磷酸酶标记的犬CRP单克隆抗体。
所述碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物为AMPPD或APS-5。
所述清洗液通过如下方法配置：
在pH=7.4的50mM 的Tris～HCl溶液中加入氯化钠、CHAPS和曲拉通，溶解后即可得到清洗液，清洗液中，氯化钠的质量百分浓度为0.9%，CHAPS的质量百分浓度为0.1%，曲拉通的质量百分浓度为0.1%。
本发明还提供了CRP系列校准品，所述犬CRP系列校准品通过如下方法配置：
用pH=7.4的 50mM 的Tris～HCl缓冲液将犬CRP纯品稀释成六个水平的冻干校准品，用纯水复溶后，CRP校准品的浓度分别为6.25 ug/mL、12.5ug/mL、25ug/mL、50ug/mL、100ug/mL和200ug/mL。
本发明的试剂盒还包括毛细管化学发光检检测装置，该毛细管化学发光检测装置采用授权公告号为CN107091923B，授权公告日为2018年1月30日的中国发明专利公开的毛细管化学发光检测装置。将碱性磷酸酶标记的犬CRP单克隆抗体、碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物和清洗液装在其液体试剂杯里，而将犬CRP单克隆抗体包被的毛细管替换下该专利中的毛细管本体即可。
本发明相对于现有技术具有如下有益效果：
本发明研制的CRP检测试剂盒采用的是双抗体夹心两步法反应模式，以毛细管为载体，用化学发光免疫方法检测犬CRP抗原含量。采用毛细管为载体，毛细管容积小，极大地降低了原料用量，节约成本；检测使用样本量只需10～15uL，极大地降低了样本使用量，在一定程度上解决了小型犬样本量少的问题。
本发明犬CRP检测试剂盒采用单克隆抗体，单克隆抗体特异性强、纯度高、无污染性且非特异性结合概率小，可大批量的生产。同时本发明的试剂盒检测范围为0～200ug/mL，样本检测过程快速、操作简便、结果准确度高、灵敏度高，且本发明的试剂保存时间长、无放射性污染、试剂使用量小，使用成本低，更容易推广使用。
本发明的试剂盒能准确定量地检测出犬血液中的CRP抗原，可以根据CRP含量对急性感染的病情进行监测和判断。
附图说明
图1为检测本发明提供的试剂盒的线性相关系数图。
具体实施方式
本发明为犬CRP的化学发光免疫检测试剂盒，包括犬CRP单克隆抗体包被的毛细管、碱性磷酸酶标记的犬CRP单克隆抗体、碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物和清洗液。
所述毛细管为高精度毛细管，其外径为1.2±0.02mm，内径为0.7±0.005m，长度为30±1mm，材质为高硼硅3.3玻璃。
下面结合实施例对本发明作进一步的描述，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，并不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域的普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的其他所用实施例，都属于本发明的保护范围。
实施例1
本发明提供了一种犬CRP的化学发光免疫检测试剂盒，包括犬CRP单克隆抗体包被的毛细管、碱性磷酸酶标记的犬CRP单克隆抗体、碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物和清洗液。
所述犬CRP单克隆抗体包被的毛细管是通过采用犬CRP单克隆抗体EDC一步法包被毛细管来制备的。
所述犬CRP单克隆抗体EDC一步法包被毛细管具体步骤如下：
制取包被液：在50M的MES缓冲液中加入EDC和犬CRP单克隆抗体混匀后，得到包被液Ⅰ；
包被液Ⅰ中，EDC的浓度为5ug/mL，EDC浓度过低或过高，会使犬CRP检测的CV%变大；
犬CRP单克隆抗体的浓度为2ug/mL；犬CRP单克隆抗体浓度不在此范围会使犬CRP检测的灵敏度偏低；
包被：将表面氨基化的毛细管浸泡在包被液Ⅰ中进行包被，包被温度为室温，包被时间为20min；时间过短或过长，会降低犬CRP检测的灵敏度；
清洗：将包被后的毛细管用pH=7.4的50mM的Tris～HCl溶液淋洗并吹干。
所述MES缓冲液包括如下成分：
MES 0.05M
NaCl 0.05M
MgCl2 1mM
ZnCl2 0.01mM
BSA 0.2%（质量百分比）
吐温20 0.2%（体积百分比）；
所述碱性磷酸酶标记的犬CRP单克隆抗体通过如下方法制成：
犬CRP单克隆抗体活化：将犬CRP单克隆抗体浓缩至3mg/mL，并用2-IT进行活化处理；
碱性磷酸酶活化：将碱性磷酸酶浓缩至2mg/mL，并用SMCC进行活化处理；
混合：将活化后的碱性磷酸酶和犬CRP单克隆抗体的按照摩尔比例为1.2:1混合，并加入1/500犬CRP单克隆抗体体积的1M的MgCl2溶液，在温度为4℃的条件下，反应12h后，加入终止剂终止反应，终止反应后，进行纯化处理，得到碱性磷酸酶标记的犬CRP单克隆抗体。
所述碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物为AMPPD。
所述清洗液通过如下方法配置：
在pH=7.4的50mM 的Tris～HCl溶液中加入氯化钠、CHAPS和曲拉通，溶解后即可得到清洗液，清洗液中，氯化钠的质量百分浓度为0.9%，CHAPS的质量百分浓度为0.1%，曲拉通的质量百分浓度为0.1%。
本发明还提供了CRP系列校准品，所述犬CRP系列校准品通过如下方法配置：
用pH=7.4的 50mM 的Tris～HCl缓冲液将犬CRP纯品稀释成六个水平的冻干校准品，用纯水复溶后，CRP校准品的浓度分别为6.25 ug/mL、12.5ug/mL、25ug/mL、50ug/mL、100ug/mL和200ug/mL。
实施例2
本实施例与实施例1基本相同，不同的是，本实施例中，犬CRP单克隆抗体包被的毛细管是通过采用犬CRP单克隆抗体SMCC包被毛细管的方法来制备的。
所述犬CRP单克隆抗体SMCC包被毛细管具体步骤如下：
活化犬CRP单克隆抗体：将犬CRP单克隆抗体浓缩至5mg/mL，并用2-IT活化犬CRP单克隆抗体；
活化毛细管：将表面氨基化的毛细管浸泡在SMCC中进行活化处理，浸泡时间为1.5h，浸泡温度为室温，活化完成后，用pH=7.4的50mM 的Tris～HCl溶液淋洗并吹干，所述SMCC的浓度为2mg/mL；
包被：将活化后的犬CRP单克隆抗体用pH=7.4的TSE溶液稀释至10ug/mL，制成包被液Ⅱ，将活化后的毛细管浸泡在包被液Ⅱ中进行包被，包被时间为24h，包被温度为4℃；
所述TSE溶液包括如下成分：
三乙醇胺 0.2M
氯化钠 0.2M
EDTA.2Na.2H2O 1.5mM
氯化镁 1.5mM
氯化锌 0.13mM。
清洗：将包被后的毛细管用pH=7.4的50mM的Tris～HCl溶液淋洗并吹干；
封闭：用50mM 的Tris～HCl溶液浸泡封闭包被后的毛细管，封闭温度为37℃，封闭时间为3h，封闭完成后用清洗液淋洗并吹干，所述Tris～HCl溶液中含有2%（质量百分比）的BSA和0.1M的甘氨酸。
实施例3
本实施例提供了一种犬CRP的化学发光免疫检测试剂盒，其包括犬CRP单克隆抗体包被的毛细管、碱性磷酸酶标记的犬CRP单克隆抗体、碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物和清洗液。
所述犬CRP单克隆抗体包被的毛细管是通过采用犬CRP单克隆抗体EDC一步法包被毛细管或者采用犬CRP单克隆抗体SMCC包被毛细管的方法来制备的。
所述犬CRP单克隆抗体EDC一步法包被毛细管具体步骤如下：
制取包被液：在50M的MES缓冲液中加入EDC和犬CRP单克隆抗体混匀后，得到包被液Ⅰ；包被液Ⅰ中，EDC的浓度为200ug/mL，犬CRP单克隆抗体的浓度为5ug/mL；
包被：将表面氨基化的毛细管浸泡在包被液Ⅰ中进行包被，包被温度为室温，包被时间为30min；
清洗：将包被后的毛细管用pH=7.4的50mM的Tris～HCl溶液淋洗并吹干。
所述MES缓冲液包括如下成分：
MES 1M
NaCl 1M
MgCl2 3mM
ZnCl2 0.06mM
BSA 1%（质量百分比）
吐温20 0.4%（体积百分比）。
所述碱性磷酸酶标记的犬CRP单克隆抗体通过如下方法制成：
犬CRP单克隆抗体活化：将犬CRP单克隆抗体浓缩至4mg/mL，并用2-IT进行活化处理；
碱性磷酸酶活化：将碱性磷酸酶浓缩至3mg/mL，并用SMCC进行活化处理；
混合：将活化后的碱性磷酸酶和犬CRP单克隆抗体的按照摩尔比例为1.2:1混合，并加入1/500犬CRP单克隆抗体体积的1M的MgCl2溶液，在温度为4℃的条件下，反应20h后，加入终止剂终止反应，终止反应后，进行纯化处理，得到碱性磷酸酶标记的犬CRP单克隆抗体。
所述碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物为APS-5。
所述清洗液通过如下方法配置：
在pH=7.4的50mM 的Tris～HCl溶液中加入氯化钠、CHAPS和曲拉通，溶解后即可得到清洗液，清洗液中，氯化钠的质量百分浓度为0.9%，CHAPS的质量百分浓度为0.1%，曲拉通的质量百分浓度为0.1%。
本实施例还提供了CRP系列校准品，所述犬CRP系列校准品通过如下方法配置：
用pH=7.4的 50mM 的Tris～HCl缓冲液将犬CRP纯品稀释成六个水平的冻干校准品，用纯水复溶后，CRP校准品的浓度分别为6.25 ug/mL、12.5ug/mL、25ug/mL、50ug/mL、100ug/mL和200ug/mL。
实施例4
一种犬CRP的化学发光免疫检测试剂盒，其包括犬CRP单克隆抗体包被的毛细管、碱性磷酸酶标记的犬CRP单克隆抗体、碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物和清洗液。
采用犬CRP单克隆抗体SMCC包被毛细管的方法来制备的。
所述犬CRP单克隆抗体SMCC包被毛细管具体步骤如下：
活化犬CRP单克隆抗体：将犬CRP单克隆抗体浓缩至3mg/mL，并用2-IT活化犬CRP单克隆抗体；
活化毛细管：将表面氨基化的毛细管浸泡在SMCC中进行活化处理，浸泡时间为1.5h，浸泡温度为室温，活化完成后，用pH=7.4的50mM 的Tris～HCl溶液淋洗并吹干，所述SMCC的浓度为2mg/mL；
包被：将活化后的犬CRP单克隆抗体用pH=7.4的TSE溶液稀释至10ug/mL，制成包被液Ⅱ，将活化后的毛细管浸泡在包被液Ⅱ中进行包被，包被时间为12h，包被温度为4℃；
所述TSE溶液包括如下成分：
三乙醇胺 0.05M
氯化钠 0.05M
EDTA.2Na.2H2O 0.5mM
氯化镁 0.5mM
氯化锌 0.05mM。
清洗：将包被后的毛细管用pH=7.4的50mM的Tris～HCl溶液淋洗并吹干；
封闭：用50mM 的Tris～HCl溶液浸泡封闭包被后的毛细管，封闭温度为37℃，封闭时间为3h，封闭完成后用清洗液淋洗并吹干，所述Tris～HCl溶液中含有2%（质量百分比）的BSA和0.1M的甘氨酸。
所述碱性磷酸酶标记的犬CRP单克隆抗体通过如下方法制成：
犬CRP单克隆抗体活化：将犬CRP单克隆抗体浓缩至3mg/mL，并用2-IT进行活化处理；
碱性磷酸酶活化：将碱性磷酸酶浓缩至2mg/mL，并用SMCC进行活化处理；
混合：将活化后的碱性磷酸酶和犬CRP单克隆抗体的按照摩尔比例为1.2:1混合，并加入1/500犬CRP单克隆抗体体积的1M的MgCl2溶液，在温度为4℃的条件下，反应12h后，加入终止剂终止反应，终止反应后，进行纯化处理，得到碱性磷酸酶标记的犬CRP单克隆抗体。
所述碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物为AMPPD。
所述清洗液通过如下方法配置：
在pH=7.4的50mM 的Tris～HCl溶液中加入氯化钠、CHAPS和曲拉通，溶解后即可得到清洗液，清洗液中，氯化钠的质量百分浓度为0.9%，CHAPS的质量百分浓度为0.1%，曲拉通的质量百分浓度为0.1%。
实施例5
本实施例与实施例1基本相同，不同的是：
MES 1.5M
NaCl 1.5M
MgCl2 5mM
ZnCl2 0.1mM
BSA 1.5%（质量百分比）
吐温20 0.6%（体积百分比）。
实施例6
本实施例与实施例2基本相同，不同的是：
所述TSE溶液包括如下成分：
三乙醇胺 0.15M
氯化钠 0.12M
EDTA.2Na.2H2O 1.2mM
氯化镁 1mM
氯化锌 0.1mM。
本发明制备的试剂盒的检测：
试剂盒平衡至室温再用于检测，在犬CRP单克隆抗体包被的毛细管中加入10～15uL的样本，在37℃条件下反应5～15分钟；用清洗液清洗并吹干后，在毛细管中加入10～15uL的碱性磷酸酶标记的犬CRP单克隆抗体，在37℃条件下反应5～15分钟；用清洗液清洗并吹干后，加入10～15uL的碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物液，检测发光值，利用四参数拟合得到的校准品浓度～反应曲线的回归方程计算得到样本犬CRP含量。
项目标准：
表一项目标准
线性范围：
测定理论浓度为6.25、12.5、25、50、100、200ug/mL的CRP抗原校准品，每个浓度测试3次，线性相关系数为R2=0.999，结果如表二和图1所示。
表二线性范围
精密度
选择高、中、低三个浓度的校准品，分别用本发明犬CRP试剂盒和对比ELISA试剂盒进行监测，每个浓度分别测试10次，计算10次测试的均值和变异系数，高、中、低三个浓度的犬CRP检测的变异系数均小于10%，具有较好的精密度。对本组数据做配对样本T检验，得P>0.05，得出两组结果的差别无统计学意义，说明两种检测试剂盒在高、中、低三个浓度的犬CRP检测中，均具有较好的一致性。结果如表三所示：
表三精密度
准确度：
将五种不同浓度水平的犬CRP校准品加入1个低水平犬CRP的血清样本中，得到如下数据，回收率为97.8%～102.2%之间。结果如表四所示：
表四准确度
添加干扰物质影响：
在高、中、低三个不同浓度的犬样本中分别添加高浓度的干扰物质，测试值与未添加干扰物质的样本测试值相比，测试值偏差在±10%以内。说明本发明的犬CRP检测试剂盒检测结果不受上述高浓度干扰物质的影响。结果如下表五所示：
表五干扰物质影响结果
批间差：
取3批次试剂盒，测试同一试剂盒中的低值质控品和高值质控品，每个质控品重复测试10次，计算3批次试剂，共计30个数据的均值和变异系数，3批次的试剂盒测试高、中、低三个浓度的犬CRP质控品的批间变异系数均小于10%，结果如表六所示：
表六批间差
稳定性：
试剂盒保存条件为2～8℃，保存12个月后，测试犬CRP试剂盒的各项指标，发现均在正常范围内。考虑在运输和使用过程中，会有非正常保存条件，将试剂盒在37℃条件下保存7天，进行加速老化实验，与2～8℃条件下保存的试剂盒对比测试高、中、低三个浓度的犬CRP质控品。高、中、低三个浓度的犬CRP质控品各重复测试10次，计算均值和变异系数，2～8℃和37℃条件测试高、中、低三个浓度的犬CRP质控品的变异系数均小于10%，可以得出试剂盒在2～8℃至少可以保存12个月以上，结果如表七所示。
表七稳定性
以上数据可以看出，本发明的犬CRP检测试剂盒的检测精密度、准确度、特异性、线性范围等性能均在一个比较高的水平，能准确进行临床筛查并且客户能便捷地使用。
请确认英语缩写解释：
EDC ：1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐
MES：2-(N-吗啉代)乙烷磺酸一水
Tris：三羟甲基氨基甲烷
BSA：牛血清白蛋白
2-IT：2-亚氨基硫烷盐酸盐
SMCC：4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯
CHAPS：3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐
Tris-HCl：三羟甲基氨基甲烷-盐酸Tris-HCl缓冲液中仅含有Tris，用盐酸调节pH
APS-5：（4-氯苯巯基）（10-甲基-9,10-二氢化吖啶亚甲基）磷酸二钠盐
AMPPD ：1，2～二氧环已烷衍生物。
Claims (8)
1.一种犬CRP的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：包括犬CRP单克隆抗体包被的毛细管、碱性磷酸酶标记的犬CRP单克隆抗体、碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物和清洗液。
2.根据权利要求1所述的一种犬CRP的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述犬CRP单克隆抗体包被的毛细管是通过采用犬CRP单克隆抗体EDC一步法包被毛细管或者采用犬CRP单克隆抗体SMCC包被毛细管的方法来制备的。
3.根据权利要求2所述的一种犬CRP的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述犬CRP单克隆抗体EDC一步法包被毛细管具体步骤如下：
制取包被液：在MES缓冲液中加入EDC和犬CRP单克隆抗体混匀后，得到包被液Ⅰ；包被液Ⅰ中，EDC的浓度为5～400ug/mL，犬CRP单克隆抗体的浓度为2～10ug/mL；
包被：将表面氨基化的毛细管浸泡在包被液Ⅰ中进行包被，包被温度为室温，包被时间为20～40min。
4.根据权利要求2所述的一种犬CRP的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述犬CRP单克隆抗体SMCC包被毛细管具体步骤如下：
活化犬CRP单克隆抗体：将犬CRP单克隆抗体浓缩至3mg/mL～5mg/mL，并用2-IT活化犬CRP单克隆抗体；
活化毛细管：将表面氨基化的毛细管浸泡在SMCC中进行活化处理，浸泡时间为1.5h，浸泡温度为室温；
包被：将活化后的犬CRP单克隆抗体用pH=7.4的TSE溶液稀释至10ug/mL，制成包被液Ⅱ，将活化后的毛细管浸泡在包被液Ⅱ中进行包被，包被时间为12～24h，包被温度为4℃；
封闭：用Tris～HCl溶液浸泡封闭包被后的毛细管，封闭温度为37℃，封闭时间为3h，封闭完成后用清洗液淋洗并吹干，所述Tris～HCl溶液中含有2%的BSA和0.1M的甘氨酸。
5.根据权利要求1所述的一种犬CRP的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述碱性磷酸酶标记的犬CRP单克隆抗体通过如下方法制成：
犬CRP单克隆抗体活化：将犬CRP单克隆抗体浓缩至3mg/mL～5mg/mL，并用2-IT进行活化处理；
碱性磷酸酶活化：将碱性磷酸酶浓缩至2mg/mL～4mg/mL，并用SMCC进行活化处理；
混合：将活化后的碱性磷酸酶和犬CRP单克隆抗体的按照摩尔比例为1.2:1混合，并加入1/500犬CRP单克隆抗体体积的1M的MgCl2溶液，在温度为4℃的条件下，反应12～24h后，加入终止剂终止反应，终止反应后，进行纯化处理，得到碱性磷酸酶标记的犬CRP单克隆抗体。
6.根据权利要求1所述的一种犬CRP的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物为AMPPD或APS-5。
7.根据权利要求1所述的一种犬CRP的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述清洗液通过如下方法配置：
在pH=7.4的50mM 的Tris～HCl溶液中加入氯化钠、CHAPS和曲拉通，溶解后即可得到清洗液，清洗液中，氯化钠的质量百分浓度为0.9%，CHAPS的质量百分浓度为0.1%，曲拉通的质量百分浓度为0.1%。
8.根据权利要求1所述的一种犬CRP的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：还包括CRP系列校准品，所述犬CRP系列校准品通过如下方法配置：
CRP校准品的浓度分别为6.25 ug/mL、12.5ug/mL、25ug/mL、50ug/mL、100ug/mL和200ug/mL。
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