CN109444412A - 一种用于微型化学发光免疫分析系统的宠物d-二聚体检测试剂盒 - Google Patents

一种用于微型化学发光免疫分析系统的宠物d-二聚体检测试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN109444412A
CN109444412A CN201811254379.3A CN201811254379A CN109444412A CN 109444412 A CN109444412 A CN 109444412A CN 201811254379 A CN201811254379 A CN 201811254379A CN 109444412 A CN109444412 A CN 109444412A
Authority
CN
China
Prior art keywords
dimer
solution
capillary
antibody
pet
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201811254379.3A
Other languages
English (en)
Inventor
高礼珍
冉鹏
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Chengdu Pulitai Biological Technology Co Ltd
Original Assignee
Chengdu Pulitai Biological Technology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Chengdu Pulitai Biological Technology Co Ltd filed Critical Chengdu Pulitai Biological Technology Co Ltd
Priority to CN201811254379.3A priority Critical patent/CN109444412A/zh
Publication of CN109444412A publication Critical patent/CN109444412A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/551—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being inorganic
    • G01N33/552—Glass or silica

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)

Abstract

本发明公开了一种用于微型化学发光免疫分析系统的宠物D‑二聚体检测试剂盒，D‑二聚体校准品、酶结合物工作液、已包被D‑二聚体抗体的毛细管、清洗液和化学发光底物。本发明灵敏度高、特异性强、线性范围宽、上样量小，需要的血浆或血清样本量小，操作方法简便，用户只需手动添加微量样本等简单操作，便能达到快捷且高准确率的宠物疾病诊断目的。

Description

一种用于微型化学发光免疫分析系统的宠物D-二聚体检测试 剂盒
技术领域
本发明属于免疫分析技术领域，尤其涉及一种宠物D-二聚体的检测试剂盒。
背景技术
纤维蛋白是血栓的主要成分。它的生成引起纤溶系统的激活，导致纤溶酶的生成和纤维蛋白的溶解。交联纤维蛋白的溶解生成一系列特异的降解产物，其中包括 D-二聚体( D-dimer)。 D-二聚体的出现标志稳定性纤维蛋白的生成，又证实了纤溶系统被激活。使用的 D-二聚体的单克隆抗体可以识别纤维蛋白原及其降解产物不具有的抗原决定簇，使血浆中 D-二聚体含量可以直接测定。
D-二聚体是交联纤维蛋白( Fb) 经纤溶酶作用后的特异降解产物，可作为体内高凝状态和纤溶亢进的分子标志物，是唯一反映凝血和纤溶的理想指标。在血栓及肺栓塞性疾病、DIC、心脑血管疾病及恶性肿瘤等疾病中，均会有凝血及纤溶系统的异常，进而导致体内D-二聚体水平的升高，其升高程度与病情进展程度密切相关。因此，检测样本血浆中D-二聚体的含量可以辅助诊断以上疾病的发生发展，尤其在肺栓塞和深静脉血栓的排除诊断中，D-二聚体具有极其重要的临床排除诊断价值。因此，检测样本血浆中 D －二聚体的含量具有极其重要的临床应用价值。
目前，人D-二聚体的定量检测方法中应用较多的主要为：酶联免疫吸附法(ELISA)、乳胶颗粒凝集法(LATEX)、免疫过滤胶体金染色法、双抗体RBC凝集法和放免法等，随着方法学的不断进步，在人用市场上已出现了化学发光检测法，多数是用于大型仪器的配套试剂。在动物D-二聚体的定量检测上市面上出现的有犬/兔/大鼠等ELISA试剂盒，还有少数胶体金，免疫层析的快速检测卡；对于宠物市场上使用微型化学发光免疫分析仪进行D-二聚体检查的化学发光POCT检测方法几乎未出现，由于化学发光免疫分析具有灵敏度高、特异性强等优点，用这种方法分析简便快速，能实现全自动化，且标记结合物稳定，没有污染，因此方法学以其独特的优势同样有望应用于动物D-二聚体的定量检测中。
D-二聚体测定的半定量胶乳试验简便、快速，但需肉眼观察试验结果，不同观察者主观差异对结果影响较大，结果不够准确，且敏感性不高，不能满足临床需要；传统ELISAD-二聚体定量检测，虽然检测性能尚佳，但操作较复杂，每次需要做标准曲线，繁琐、耗时，不适于紧急情况下单个样本的检测，也不能完全满足临床急诊医疗的需要。
医院检验科室使用的全自动化学发光免疫分析仪器绝大多数都是大型设备，测试通量高，但价格昂贵，操作复杂，对使用人员要求高，体积庞大，占用大量空间。相比，微型化学发光免疫分析仪具有试剂消耗量低，分析快速和操作简便等优势，但目前市面上的微型化学发光免疫分析仪绝大多数都是半自动仪器，需要使用人员手工进行试验，仪器不能自动添加底物并检测，过程繁琐，耗时长。
部分公司推出了微型全自动化学发光免疫分析仪，中国发明专利CN102980996B介绍了一种利用毛细管作为反应容器的化学发光免疫分析系统，实现了微型全自动化学发光免疫分析仪体积小，检测速度快，自动化的优点，其采用了定制的毛细管反应单元，如果重复使用，每次检测后必须清洗后才能进行下次检测，存在清洗不干净，交叉污染的风险；如一次性使用，成本较高，更换繁琐。
爱德士等进口动物诊断试剂品牌在生化、内分泌、血气、血凝、尿检、血常规等检测项目上为小动物诊断行业提供了先进的诊断设备，但高昂的诊断成本也让宠物医院望而却步。因此宠物诊断市场仪器及配套试剂的进口替代化亟待解决。
市面上目前存在的不同POCT法与同类应用于大型仪器上的方法检测结果间存在差异，因此国产POCT试剂有必要进一步改进方法提高其敏感性，应提供一种与实验室内大型分析仪检测结果保持一致的 POCT 检测系统，减少不必要的误诊、漏诊。
发明内容
为解决上述现有技术的不足，本发明提供了一种用于微型化学发光免疫分析系统的宠物D-二聚体检测试剂盒，该试剂盒灵敏度高、特异性强、线性范围宽、上样量小，需要的血浆或血清样本量小，操作方法简便，用户只需手动添加微量样本等简单操作，便能达到快捷且高准确率的宠物疾病诊断目的。
为了达到上述技术目的，本发明所采用的技术方案是：
一种用于微型化学发光免疫分析系统的宠物D-二聚体检测试剂盒，其特征在于：D-二聚体校准品、酶结合物工作液、已包被D-二聚体抗体的毛细管、清洗液和化学发光底物。
所述D-二聚体校准品是由校准品稀释液和D-二聚体配制而成，所述D-二聚体校准品的浓度为分别为：0.01～0.06 、0.08～0.18、0.25～0.56、0.74～1.67、2.22～5.00、6.67～15.00μg/mL 。
所述校准品稀释液包括如下成分：
三羟甲基氨基甲烷 20～50mmol/L
NaCl 150～300mmol/L
牛血清白蛋白（质量百分比） 1％
海藻糖（质量百分比）2%
曲拉通（体积百分比）0.05%
Proclin300 （体积百分比） 0.05～0.2％。
所述校准品稀释液的pH=7.0～7.5。
所述酶结合物工作液的浓度为0.5～2μg/mL。
所述酶结合物工作液是在酶结合物溶液中加入酶结合物稀释液配制而成，其中，所述酶结合物稀释液包括如下成分：
三羟甲基氨基甲烷 20～50mmol/L
NaCl 150～300mmol/L
酪蛋白（质量百分比） 1％
蔗糖（质量百分比） 1％
甘油（体积百分比） 1％
吐温20 （体积百分比）0.1％
ZnCl2 0.05～5mmol/L
MgCl2 0.05～5mmol/L
Proclin300 （体积百分比） 0.05～0.2％。
所述酶结合物稀释液pH为6.0～6.5。
所述酶结合物溶液包括碱性磷酸酶标记的D-二聚体标记抗体。
所述碱性磷酸酶标记的D-二聚体标记抗体是通过将活化的D-二聚体标记抗体与活化的碱性磷酸酶按摩尔比为1：(1～2)混合，于2～8℃环境下在pH为7.3的三乙醇胺缓冲液中反应18～24h得到。
所述活化的D-二聚体标记抗体是通过如下方法制得：
将Traut’s溶液与D-二聚体标记抗体溶液按摩尔比为1：(20～50)混合，于室温条件下在pH为8.5的三乙醇胺缓冲液中反应12～18min得到。
所述活化的D-二聚体标记抗体中还加入有甘氨酸溶液，加入的甘氨酸溶液的物质的量是Traut’s试剂物质的量的10～20倍，充分混匀后于室温下反应5～10min。
所述活化的碱性磷酸酶是通过将4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐溶液与碱性磷酸酶溶液按摩尔比为1：(15～30)混合，于室温条件下在N,N-二甲基甲酰胺溶液中反应20～30min得到。
所述活化的碱性磷酸酶中还加入有甘氨酸溶液，所述甘氨酸溶液的物质的量是4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐物质的量的10～20倍，充分混匀后于室温下反应5～10min。
所述碱性磷酸酶标记的D-二聚体标记抗体中还加入有马来酰亚胺溶液，加入的马来酰亚胺的物质的量是所述碱性磷酸酶标记的D-二聚体标记抗体物质的量的5～20倍，充分混匀后于室温下反应5～15min。
所述碱性磷酸酶标记的D-二聚体标记抗体还要进行纯化处理，处理后还要加入甘油并于-25～-15℃下保存。
所述Traut’s溶液的浓度为2～4mg/mL；所述D-二聚体标记抗体溶液的浓度为2～5mg/mL；所述4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐溶液的浓度为2～4mg/mL；所述碱性磷酸酶溶液的浓度为16～20mg/mL。
所述已包被D-二聚体抗体的毛细管中的毛细管为高精度毛细管，其材质为高硼硅玻璃，内径=0.7mm（±0.005mm）；外径=1.2mm（±0.02mm)；长度=30mm(±0.5mm）。
所述已包被D-二聚体抗体的毛细管是通过如下方法制成：
将氨化处理后的毛细管浸泡在活化后的D-二聚体包被抗体溶液中，于室温条件下在pH为6.5～7.5的20～100mmol/L PBS缓冲液中交联反应1～5h得到已包被D-二聚体抗体的毛细管。
所述活化后的D-二聚体包被抗体溶液是通过将D-二聚体抗体、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，按照摩尔比150:375:1在0.1mol/L 2-（N-吗啉代）乙磺酸缓冲液中室温反应15min制得。
所述毛细管氨化处理的具体步骤为：
步骤1，毛细管清洁：首先毛细管浸泡在盐酸溶液中（HCl:乙醇=1:1），室温浸泡30min，倒去盐酸溶液，用超纯水清洗，干燥空气吹干；然后将毛细管浸泡在稀碱溶液中（0.1MNaOH），室温浸泡30min，倒去碱溶液，用超纯水清洗，干燥空气吹干；
步骤2，毛细管羟基化：将经过步骤1的毛细管浸泡在piranha溶液中（H2O2：H2SO4=1:3），室温超声浸泡30min，倒去piranaha 溶液，依次用稀碱液（0.1M NaOH）、超纯水、乙醇清洗，干燥空气吹干，60℃烘烤2hr；
步骤3，毛细管表面氨基修饰：将经过步骤2的毛细管用10%的3-氨丙基三乙氧基硅烷-乙醇灌注浸泡4h，70℃烘箱，乙醇冲洗，干燥空气吹干；再用10%甲基丙烯酸甲酯-乙醇灌注浸泡24h，40℃烘箱，乙醇清洗，干燥空气吹干；最后用20%乙二胺-乙醇灌注浸泡24h，40℃烘箱，乙醇清洗，干燥空气吹干，4℃存放。
所述已包被D-二聚体抗体的毛细管中还要加入毛细管封闭液，于37℃条件下反应1～4h。
本发明的试剂盒还包括毛细管化学发光检检测装置，该毛细管化学发光检测装置采用授权公告号为CN107091923B，授权公告日为2018年1月30日的中国发明专利公开的毛细管化学发光检测装置。将D-二聚体校准品、酶结合物工作液、清洗液和化学发光底物装在其液体试剂杯里，而将已包被D-二聚体抗体的毛细管替换下该专利中的毛细管本体即可。
本发明还提供了上述D-二聚体检测试剂盒的使用方法，包括：
（1）取三根已包被抗体的毛细管分别加入12μL校准品、12μL质控品、12μL待测样品；于37℃下反应5～15min；
（2）干燥空气吹掉管内液体后加入12μL清洗液清洗后再吹干，重复清洗3次；
（3）同（1）毛细管中再分别加入12μL酶结合物工作液，于37℃下反应5～15min；反应后同（2）进行清洗操作；
（4）每根毛细管中加入12μL化学发光底物，混匀，用化学发光仪检测发光强度。
本发明相对于现有技术具有如下有益效果：
1、本发明提供的D-二聚体检测试剂盒，包括酶结合物，所述酶结合物主要成分是碱性磷酸酶标记的D-二聚体标记抗体，其制备过程中加入甘氨酸溶液以终止活化反应，以及马来酰亚胺溶液封闭多余的巯基以终止标记反应，有效避免了非特异性反应的发生，保证了碱性磷酸酶标记的D-二聚体标记抗体的稳定性；对标记反应中各反应物质的使用量以及温度、pH条件等进行限定，优化了标记反应的条件。
2、本发明提供的D-二聚体检测试剂盒，包括已包被抗体毛细管，已包被抗体毛细管为D-二聚体包被抗体偶联的氨基化毛细管，其制备过程中先让毛细管表面羟基化，双氧水及浓硫酸的混合使用大大提高了羟基化的效率，将枝形聚合物 PAMAM 再通过硅烷化试剂 3-氨丙基三乙氧基硅烷，并主要通过丙烯酸甲酯的双键与 3-氨丙基三乙氧基硅烷的端氨基发生 M icheal加成反应 , 逐步键合到毛细管内壁上得到半代的 PAMAM , 然后端酯基与乙二胺发生酰胺化反应 , 得到整代的枝形大分子聚酰胺-胺 (PAMAM )，对各步反应中各反应物质的使用量以及温度、反应时间进行限定，优化了逐步键合反应的条件。
3、本发明提供的D-二聚体检测试剂盒，包括已毛细管上偶联的D-二聚体包被抗体，D-二聚体包被抗体为抗体预先和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺进行反应得到的N-羟基琥珀酰亚胺活性酯，活性酯只与氨基反应，能够大大提高抗体毛细管上的抗体包被效率，对活化反应中各反应物质的使用量以及时间、pH条件进行限定，优化了活化反应的条件。
4、本发明提供的D-二聚体检测试剂盒，所述试剂盒含有已包被抗体毛细管，毛细管具有毛细现象，可以自动吸取样本，且加液与排液分别位于毛细管的两端，进出不交叉，降低污染。同时避免使用移液枪等操作，对操作人员的要求更低，配合傻瓜式的微型化学发光分析系统，可直接进行检测，大大提高了检测速度，简化了操作步骤；可全自动、一键式操作，15分钟左右即可出检测结果，能很好的满足宠物医院急诊的需求，便于大范围推广应用。
5、本发明提供的D-二聚体检测试剂盒，该试剂盒将化学发光技术与氨基化的毛细管表面相结合，弥补宠物医疗化学发光发光法诊断疾病的空白，且提供了一种非均相的反应体系，避免反应时需要混合等操作，同时在抗体包被及毛细管活化等操作中通过清洗操作便能起到终止反应的效果，避免化学终止剂的添加，能大大简化实验流程，减少试剂污染，并且采用了两步法反应模式，避免HOOK效应的产生，使得检测灵敏度和精密度大大提高，线性范围也得到极大的扩展；采用氨基化毛细管作为固相载体，其足够多的氨基数量能够使靶物质迅速且有效地结合在毛细管上，其多余氨基及空位通过封闭剂的有效封闭能大大减少有关的非特异性结合物，提高了试剂盒产品的特异性。
6、本发明提供的D-二聚体检测试剂盒，包括已包被抗体毛细管，已包被抗体毛细管为D-二聚体包被抗体偶联的连接有树枝状大分子（PAMAM）毛细管，树枝状大分子是具有最高支化度、非常规整及可控制结构的三维大分子 , 并且当树枝状大分子达到一定的分子代数后表面会产生大量功能性端基 , 这样既可提供对内部空间的保护 , 也可对外部物质起到重要的分子识别作用.因此通过此工艺制得了一种高效、稳定且寿命长的毛细管，能大大提高检测范围，保证了试剂盒检测结果的准确性；偶联反应结束后加入封闭液，有效地降低了交叉反应的概率，提高了试剂盒的特异性，进一步保证了检测结果的准确性；
7、本发明提供的D-二聚体检测试剂盒，所述酶结合物置于甘油中保存，有效地保证了酶结合物的活性，采用含有关键蛋白、糖类、氯离子、锌离子的酶结合物稀释液，保证了标记结合物长期保存的稳定性。采用碱性磷酸酶标记D-二聚体标记抗体，避免了污染产生。
8、本发明提供的D-二聚体检测试剂盒，所述检测试剂盒中的各组分均是该反应体系下的最优配方，给该检测试剂盒的检测性能提供了有力的保障。
9、本发明提供的D-二聚体检测试剂盒，可以在微型全自动化学发光免疫分析仪上同时测定多个样本，实现D-二聚体的高通量快速化测定，且准确度和检测效率都得到极大地提高。
附图说明
图1为D-二聚体抗体的标准曲线图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的描述，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，并不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域的普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的其他所用实施例，都属于本发明的保护范围。
实施例1
一种用于微型化学发光免疫分析系统的宠物D-二聚体检测试剂盒，其特征在于：D-二聚体校准品、酶结合物工作液、已包被D-二聚体抗体的毛细管、清洗液和化学发光底物。
D-二聚体校准品的制备：
所述D-二聚体校准品是由校准品稀释液和D-二聚体配制而成，所述D-二聚体校准品有六级，六级的浓度为分别为：0.01、0.08、0.25、0.74、2.22 、6.67μg/mL。
所述校准品稀释液包括如下成分：
三羟甲基氨基甲烷 20mmol/L
NaCl 150mmol/L
牛血清白蛋白（质量百分比） 1％
海藻糖（质量百分比） 2%
曲拉通（体积百分比）0.05%
Proclin300 （体积百分比） 0.05％。
所述校准品稀释液的pH=7.0。
酶工作液的制备：
所述酶结合物工作液的浓度为0.5μg/mL。
所述酶结合物工作液是在酶结合物溶液中加入酶结合物稀释液配制而成，其中，所述酶结合物稀释液包括如下成分：
三羟甲基氨基甲烷 50mmol/L
NaCl 150mmol/L
酪蛋白（质量百分比） 1％
蔗糖（质量百分比） 1％
甘油（体积百分比） 1％
吐温20 （体积百分比） 0.1％
ZnCl2 0.05mmol/L
MgCl2 0.05mmol/L
Proclin300 （体积百分比） 0.05％。
所述酶结合物稀释液pH为6.0。
所述酶结合物包括碱性磷酸酶标记的D-二聚体标记抗体。
所述碱性磷酸酶标记的D-二聚体标记抗体通过如下方法制成：
D-二聚体标记抗体活化：将Traut’s溶液与D-二聚体标记抗体溶液按摩尔比为1：20混合，于室温条件下在pH为8.5的三乙醇胺缓冲液中反应12min；然后加入甘氨酸溶液，加入的甘氨酸溶液的物质的量是Traut’s溶液物质的量的10倍，充分混匀后于室温下终止反应5min；最后进行纯化处理；
碱性磷酸酶活化：将4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐溶液与碱性磷酸酶溶液按摩尔比为1：15混合，于室温条件下在N,N-二甲基甲酰胺溶液中反应20min；然后加入甘氨酸溶液，加入的甘氨酸溶液的物质的量是4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐物质的量的10倍，充分混匀后于室温下终止反应5min；最后进行纯化处理；
标记：将活化的D-二聚体标记抗体与活化的碱性磷酸酶按摩尔比为1：1混合，于2℃环境下在pH为7.3的三乙醇胺缓冲液中反应18h得到碱性磷酸酶标记的D-二聚体标记抗体；
终止：向得到的碱性磷酸酶标记的D-二聚体标记抗体中加入马来酰亚胺溶液，所述马来酰亚胺的物质的量是所述碱性磷酸酶标记的D-二聚体标记抗体物质的量的5倍，充分混匀后于室温下反应5min；
纯化保存：将经过终止步骤的碱性磷酸酶标记的D-二聚体标记抗体进行纯化，纯化后加入甘油并于-25℃下保存。
所述Traut’s溶液的浓度为2mg/mL；所述D-二聚体标记抗体溶液的浓度为2mg/mL；所述4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐溶液的浓度为2mg/mL；所述碱性磷酸酶溶液的浓度为16mg/mL。
已包被D-二聚体抗体的毛细管的制备：
毛细管为高精度毛细管，，其材质为高硼硅玻璃，内径=0.7mm（±0.005mm）；外径=1.2mm（±0.02mm)；长度=30mm(±0.5mm）。
毛细管氨基化处理：
1.毛细管清洁：a、毛细管浸泡在盐酸溶液中（HCl:乙醇=1:1），室温浸泡30min。倒去盐酸溶液，用超纯水清洗，干燥空气吹干。
b、毛细管浸泡在稀碱溶液中（0.1M NaOH），室温浸泡30min。倒去碱溶液，用超纯水清洗，干燥空气吹干。
2.毛细管羟基化：毛细管浸泡在piranha溶液中（H2O2：H2SO4=1:3），室温超声浸泡30min。倒去piranaha 溶液，依次用稀碱液（0.1M NaOH）、超纯水、乙醇清洗，干燥空气吹干，60℃烘烤2hr。
3.毛细管表面氨基修饰：10%的3-氨丙基三乙氧基硅烷-乙醇灌注浸泡4h，70℃烘箱，乙醇冲洗，干燥空气吹干；10%甲基丙烯酸甲酯-乙醇灌注浸泡24h，40℃烘箱，乙醇清洗，干燥空气吹干；20%乙二胺-乙醇灌注浸泡24h，40℃烘箱，乙醇清洗，干燥空气吹干，4℃存放。
抗体活化处理：
称取4mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，用100mmol/L的2-（N-吗啉代）乙磺酸缓冲液(pH＝6.0±0.05)配制成浓度为4mg/mL的溶液，称取6mg N-羟基琥珀酰亚胺，用100mmol/L的2-（N-吗啉代）乙磺酸缓冲液(pH＝6.0±0.05)配制成浓度为6mg/mL的溶液；称取0.2mgD-二聚体抗体，100mmol/L的2-（N-吗啉代）乙磺酸缓冲液(pH＝6.0±0.05)配制成浓度为2mg/mL的溶液,并向其中加入浓度为4mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶液和6mg/mLN-羟基琥珀酰亚胺溶液，D-二聚体抗体与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、 N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为150:375:1，立刻混匀，室温下反应15分钟。脱盐，置换到100mmol/L的磷酸盐缓冲液中(pH＝7.2±0.05)。
将抗体活化产物用紫外分光光度计测吸光度，换算浓度后，用100mmol/L的磷酸盐缓冲液(pH＝7.2±0.05)稀释成3μg/mL的包被量对已氨基化的毛细管进行室温包被2小时，用100mmol/L的磷酸盐缓冲液(pH＝7.2±0.05)洗去多余抗体溶液，干燥空气吹干。
将毛细管用封闭液进行37℃封闭1小时，用50mmol/L的三羟甲基氨基甲烷溶液（pH=7.4±0.5）洗去多余封闭液，干燥空气吹干，于2～8℃保存备用。
清洗液的制备：
依次向容器内加入三羟甲基氨基甲烷6.057g，NaCl 9g，吐温20 0.5g，曲拉通1g，水900mL，混匀至各组分溶解，用氢氧化钠溶液调节溶液pH至7.5±0.5，补加水定容至1000mL，混匀30分钟，0.22μm过滤即得到清洗液。
化学发光底物为APS-5底物，需要再2～8℃条件下避光保存，用时缓慢混匀。
实施例2
本实施例与实施例1基本相同，不同的是：
所述D-二聚体校准品的浓度为分别为：0.02 、0.1、0.3、0.8、3、8μg/mL 。
所述校准品稀释液包括如下成分：
三羟甲基氨基甲烷 50mmol/L
NaCl 300mmol/L
牛血清白蛋白（质量百分比） 1％
海藻糖（质量百分比） 2%
曲拉通（体积百分比） 0.05%
Proclin300 （体积百分比） 0.05％。
所述校准品稀释液的pH=7.2。
所述酶结合物工作液的浓度为0.8μg/mL。
所述酶结合物稀释液包括如下成分：三羟甲基氨基甲烷 50mmol/L、NaCl（质量百分比）150～300mmol/L、酪蛋白（质量百分比）1％、蔗糖（质量百分比）1％、甘油（质量百分比）1％、吐温20（体积百分比）0.1％、ZnCl2（体积百分比）0.05～5mmol/L、MgCl2（体积百分比）0.05～5mmol/L、Proclin300（体积百分比） 0.05～0.2％。
酶结合物稀释液pH为6.2。
所述碱性磷酸酶标记的D-二聚体标记抗体是通过将活化的D-二聚体标记抗体与活化的碱性磷酸酶按摩尔比为1：2混合，于5℃环境下在pH为7.3的三乙醇胺缓冲液中反应20h得到。
将Traut’s溶液与D-二聚体标记抗体溶液按摩尔比为1：30混合，于室温条件下在pH为8.5的三乙醇胺缓冲液中反应15min得到。
所述活化的D-二聚体标记抗体中还加入有甘氨酸溶液，加入的甘氨酸溶液的物质的量是Traut’s试剂物质的量的15倍，充分混匀后于室温下反应8min。
所述活化的碱性磷酸酶是通过将4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐溶液与碱性磷酸酶溶液按摩尔比为1：20混合，于室温条件下在N,N-二甲基甲酰胺溶液中反应25min得到。
所述活化的碱性磷酸酶中还加入有甘氨酸溶液，所述甘氨酸溶液的物质的量是4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐物质的量的15倍，充分混匀后于室温下反应8min。
所述碱性磷酸酶标记的D-二聚体标记抗体中还加入有马来酰亚胺溶液，加入的马来酰亚胺的物质的量是所述碱性磷酸酶标记的D-二聚体标记抗体物质的量的10倍，充分混匀后于室温下反应12min。
所述碱性磷酸酶标记的D-二聚体标记抗体还要进行纯化处理，处理后还要加入甘油并于-20℃下保存。
所述Traut’s溶液的浓度为3mg/mL；所述D-二聚体标记抗体溶液的浓度为3mg/mL；所述4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐溶液的浓度为3mg/mL；所述碱性磷酸酶溶液的浓度为18mg/mL。
将氨化处理后的毛细管浸泡在活化后的D-二聚体包被抗体溶液中，于室温条件下在pH为7的80mmol/L PBS缓冲液中交联反应3h得到已包被D-二聚体抗体的毛细管。
所述活化后的D-二聚体包被抗体溶液是通过将D-二聚体抗体、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，按照摩尔比150:375:1在0.1mol/L 2-（N-吗啉代）乙磺酸缓冲液中室温反应15min制得。
实施例3
本实施例与实施例1基本相同，不同的是：
所述D-二聚体校准品是由校准品稀释液和D-二聚体配制而成，所述D-二聚体校准品的浓度为分别为： 0.06 、0.18、0.56、1.67、5.00、15.00μg/mL 。
所述校准品稀释液包括如下成分：
三羟甲基氨基甲烷 25mmol/L、NaCl 200mmol/L、牛血清白蛋白（质量百分比） 1％、海藻糖（质量百分比） 2%、曲拉通（体积百分比） 0.05%、Proclin300 （体积百分比） 0.05～0.2％。
所述校准品稀释液的pH=7.3。
所述酶结合物工作液的浓度为1.5μg/mL。
所述酶结合物工作液是在酶结合物溶液中加入酶结合物稀释液配制而成，其中，所述酶结合物稀释液包括如下成分：
三羟甲基氨基甲烷 30mmol/L、NaCl （质量百分比） 250mmol/L、酪蛋白（质量百分比）1％、蔗糖（质量百分比）1％、甘油（体积百分比）1％、吐温20（体积百分比）0.1％、ZnCl23mmol/L、MgCl2 4mmol/L、Proclin300 0.1％。
所述酶结合物稀释液pH为6.3。
所述碱性磷酸酶标记的D-二聚体标记抗体是通过将活化的D-二聚体标记抗体与活化的碱性磷酸酶按摩尔比为1：1.8混合，于7℃环境下在pH为7.3的三乙醇胺缓冲液中反应23h得到。
将Traut’s溶液与D-二聚体标记抗体溶液按摩尔比为1：50混合，于室温条件下在pH为8.5的三乙醇胺缓冲液中反应16min得到。
所述活化的D-二聚体标记抗体中还加入有甘氨酸溶液，加入的甘氨酸溶液的物质的量是Traut’s试剂物质的量的18倍，充分混匀后于室温下反应8min。
所述活化的碱性磷酸酶是通过将4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐溶液与碱性磷酸酶溶液按摩尔比为1：20混合，于室温条件下在N,N-二甲基甲酰胺溶液中反应28min得到。
所述活化的碱性磷酸酶中还加入有甘氨酸溶液，所述甘氨酸溶液的物质的量是4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐物质的量的19倍，充分混匀后于室温下反应8min。
所述碱性磷酸酶标记的D-二聚体标记抗体中还加入有马来酰亚胺溶液，加入的马来酰亚胺的物质的量是所述碱性磷酸酶标记的D-二聚体标记抗体物质的量的18倍，充分混匀后于室温下反应14min。
所述碱性磷酸酶标记的D-二聚体标记抗体还要进行纯化处理，处理后还要加入甘油并于-15℃下保存。
所述Traut’s溶液的浓度为4mg/mL；所述D-二聚体标记抗体溶液的浓度为4mg/mL；所述4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐溶液的浓度为3mg/mL；所述碱性磷酸酶溶液的浓度为20mg/mL。
将氨化处理后的毛细管浸泡在活化后的D-二聚体包被抗体溶液中，于室温条件下在pH为7.2的90mmol/L PBS缓冲液中交联反应3h得到已包被D-二聚体抗体的毛细管。
所述活化后的D-二聚体包被抗体溶液是通过将D-二聚体抗体、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，按照摩尔比150:375:1在0.1mol/L 2-（N-吗啉代）乙磺酸缓冲液中室温反应15min制得。
本发明还提供了上述D-二聚体检测试剂盒的使用方法，包括：
（1）取三根已包被抗体的毛细管分别加入12μL校准品、12μL质控品、12μL待测样品；于37℃下反应5～15min；
（2）干燥空气吹掉管内液体后加入12μL清洗液清洗后再吹干，重复清洗3次；
（3）同（1）毛细管中再分别加入12μL酶结合物工作液，于37℃下反应5～15min；反应后同（2）进行清洗操作；
（4）每根毛细管中加入12μL化学发光底物，混匀，用化学发光仪检测发光强度。
线性验证
选一份高浓度样本（接近高限），将其依次稀释出至少7个浓度梯度的样本（低值浓度样本需接近0.01μg/mL），对每一浓度样本均重复测定至少2次，计算其平均值，将结果平均值与稀释比例用最小二乘法进行直线拟合，如图1所示，相关系数r=0.9991＞0.99，说明本发明提供的试剂盒的线性较好。
精密度验证
取具有溯源性的血清高值质控品、低值质控品各一份，对每份质控品进行10次检测，将共10次检测结果计算平均值、标准值。根据变异系数CV＝(标准偏差/平均值)×100％，计算得到：CV1(0.50μg/mL)＝3.54％，CV2(2.50μg/mL)＝4.75％。由此可知，本发明提供的试剂盒具有较高的精密度。
准确度验证
取具有溯源性的血清高值质控品、低值质控品各一份，用本发明的试剂盒分别进
行检测，各检测5次，计算平均值，后与质控品靶值进行对照。结果显示，本发明的试剂盒检测值与靶值接近，说明本发明提供的试剂盒具有较高的准确度。
灵敏度验证
取具有溯源性的质控品稀释至检测范围下限(0.01μg/mL)附近进行测定，重复测定3次，计算平均值，后与质控品靶值进行对照。结果显示，本发明的试剂盒检测值与靶值接近，说明本发明提供的试剂盒具有较高的灵敏度。
检测范围验证
取具有溯源性的标准品，稀释不同的倍数后分别检测是否有发光现象，结果显示，在浓度为0.01～10μg/mL的范围内，均有发光现象，表明本发明的试剂盒检测范围为0.01～10μg/mL。
酶结合物稳定性验证
取工作浓度为1μg/mL的酶结合物工作液于37℃恒温恒湿箱中放置7天进行加速试验，试验后测得信号保留率90%左右，说明此酶结合物具有较高的稳定性。
英文缩写解释：
Proclin300：液体生物防腐剂
Traut’s溶液：2-亚氨基硫烷盐酸盐溶液
PBS：磷酸盐缓冲液。

Claims (10)

1.一种用于微型化学发光免疫分析系统的宠物D-二聚体检测试剂盒，其特征在于：D-二聚体校准品、酶结合物工作液、已包被D-二聚体抗体的毛细管、清洗液和化学发光底物。
2.根据权利要求1所述的一种用于微型化学发光免疫分析系统的宠物D-二聚体检测试剂盒，其特征在于：所述D-二聚体校准品是由校准品稀释液和D-二聚体配制而成，所述校准品稀释液包括如下成分：
三羟甲基氨基甲烷 20～50mmol/L
NaCl 150～300mmol/L
牛血清白蛋白 1％
海藻糖 2%
曲拉通 0.05%
Proclin300 0.05～0.2％。
3.根据权利要求1所述的一种用于微型化学发光免疫分析系统的宠物D-二聚体检测试剂盒，其特征在于：所述酶结合物工作液是在酶结合物溶液中加入酶结合物稀释液配制而成，其中，所述酶结合物稀释液包括如下成分：
三羟甲基氨基甲烷 20～50mmol/L
NaCl 150～300mmol/L
酪蛋白 1％
蔗糖 1％
甘油 1％
吐温20 0.1％
ZnCl2 0.05～5mmol/L
MgCl2 0.05～5mmol/L
Proclin300 0.05～0.2％。
4.根据权利要求1所述的一种用于微型化学发光免疫分析系统的宠物D-二聚体检测试剂盒，其特征在于：所述酶结合物溶液包括碱性磷酸酶标记的D-二聚体标记抗体，
所述碱性磷酸酶标记的D-二聚体标记抗体是通过将活化的D-二聚体标记抗体与活化的碱性磷酸酶按摩尔比为1：(1～2)混合，于2～8℃环境下在pH为7.3的三乙醇胺缓冲液中反应18～24h得到。
5.根据权利要求4所述的一种用于微型化学发光免疫分析系统的宠物D-二聚体检测试剂盒，其特征在于：所述活化的D-二聚体标记抗体是通过如下方法制得：
将Traut’s溶液与D-二聚体标记抗体溶液按摩尔比为1：(20～50)混合，于室温条件下在pH为8.5的三乙醇胺缓冲液中反应12～18min得到；所述活化的碱性磷酸酶是通过将4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐溶液与碱性磷酸酶溶液按摩尔比为1：(15～30)混合，于室温条件下在N,N-二甲基甲酰胺溶液中反应20～30min得到。
6.根据权利要求5所述的一种用于微型化学发光免疫分析系统的宠物D-二聚体检测试剂盒，其特征在于：所述活化的D-二聚体标记抗体中还加入有甘氨酸溶液，加入的甘氨酸溶液的物质的量是Traut’s试剂物质的量的10～20倍，充分混匀后于室温下反应5～10min；所述活化的碱性磷酸酶中还加入有甘氨酸溶液，所述甘氨酸溶液的物质的量是4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐物质的量的10～20倍，充分混匀后于室温下反应5～10min。
7.根据权利要求4所述的一种用于微型化学发光免疫分析系统的宠物D-二聚体检测试剂盒，其特征在于：所述碱性磷酸酶标记的D-二聚体标记抗体中还加入有马来酰亚胺溶液，加入的马来酰亚胺的物质的量是所述碱性磷酸酶标记的D-二聚体标记抗体物质的量的5～20倍，充分混匀后于室温下反应5～15min；所述碱性磷酸酶标记的D-二聚体标记抗体还要进行纯化处理，处理后还要加入甘油并于-25～-15℃下保存。
8.根据权利要求5所述的一种用于微型化学发光免疫分析系统的宠物D-二聚体检测试剂盒，其特征在于：所述Traut’s溶液的浓度为2～4mg/mL；所述D-二聚体标记抗体溶液的浓度为2～5mg/mL；所述4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐溶液的浓度为2～4mg/mL；所述碱性磷酸酶溶液的浓度为16～20mg/mL。
9.根据权利要求1所述的一种用于微型化学发光免疫分析系统的宠物D-二聚体检测试剂盒，其特征在于：所述已包被D-二聚体抗体的毛细管是通过如下方法制成：
将氨化处理后的毛细管浸泡在活化后的D-二聚体包被抗体溶液中，于室温条件下在pH为6.5～7.5的20～100mmol/L PBS缓冲液中交联反应1～5h得到已包被D-二聚体抗体的毛细管。
10.根据权利要求9所述的一种用于微型化学发光免疫分析系统的宠物D-二聚体检测试剂盒，其特征在于：所述活化后的D-二聚体包被抗体溶液是通过将D-二聚体抗体、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，按照摩尔比150:375:1在0.1mol/L 2-（N-吗啉代）乙磺酸缓冲液中室温反应15min制得；所述氨化处理后的毛细管是通过如下方法制成的：
步骤1，毛细管清洁：首先毛细管浸泡在盐酸和乙醇溶液中，按照体积比计，HCl:乙醇=1:1，室温浸泡30min，倒去盐酸溶液，用超纯水清洗，干燥空气吹干；然后将毛细管浸泡在碱溶液中，室温浸泡30min，倒去碱溶液，用超纯水清洗，干燥空气吹干；
步骤2，毛细管羟基化：将经过步骤1的毛细管浸泡在piranha溶液中，室温超声浸泡30min，倒去piranaha 溶液，依次用稀碱液、超纯水、乙醇清洗，干燥空气吹干，60℃烘烤2hr；所述piranaha 溶液是由H2O2和H2SO4混合而成，按照体积比，H2O2：H2SO4=1:3；
步骤3，毛细管表面氨基修饰：将经过步骤2的毛细管用10%的3-氨丙基三乙氧基硅烷-乙醇灌注浸泡4h，70℃烘箱，乙醇冲洗，干燥空气吹干；再用10%甲基丙烯酸甲酯-乙醇灌注浸泡24h，40℃烘箱，乙醇清洗，干燥空气吹干；最后用20%乙二胺-乙醇灌注浸泡24h，40℃烘箱，乙醇清洗，干燥空气吹干，4℃存放。
CN201811254379.3A 2018-10-26 2018-10-26 一种用于微型化学发光免疫分析系统的宠物d-二聚体检测试剂盒 Pending CN109444412A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811254379.3A CN109444412A (zh) 2018-10-26 2018-10-26 一种用于微型化学发光免疫分析系统的宠物d-二聚体检测试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811254379.3A CN109444412A (zh) 2018-10-26 2018-10-26 一种用于微型化学发光免疫分析系统的宠物d-二聚体检测试剂盒

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN109444412A true CN109444412A (zh) 2019-03-08

Family

ID=65548377

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811254379.3A Pending CN109444412A (zh) 2018-10-26 2018-10-26 一种用于微型化学发光免疫分析系统的宠物d-二聚体检测试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109444412A (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110028582A (zh) * 2019-04-29 2019-07-19 江苏众红生物工程创药研究院有限公司 抗人d-二聚体抗体及其应用
CN110947372A (zh) * 2019-12-16 2020-04-03 成都普利泰生物科技有限公司 一种毛细管表面氨基化方法
CN111812330A (zh) * 2020-06-23 2020-10-23 江苏奥雅生物科技有限公司 一种用于d-二聚体检测的试剂盒
CN115097130A (zh) * 2022-05-17 2022-09-23 中国石油大学(华东) 一种快速定性-定量检测冠状病毒的毛细玻璃管检测方法

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1989000290A1 (en) * 1987-07-02 1989-01-12 In Vitro Technologies, Inc. Capillary device for immunoassay of multiple analytes
US5976896A (en) * 1994-06-06 1999-11-02 Idexx Laboratories, Inc. Immunoassays in capillary tubes
US5981196A (en) * 1996-08-12 1999-11-09 Rohm And Haas Company Immunossay method
US20110262940A1 (en) * 2008-12-19 2011-10-27 Hideaki Hisamoto Capillary for immunoassay, and capillary immunoassay method using same
CN105181680A (zh) * 2015-09-28 2015-12-23 成都博奥新景医学科技有限公司 一种三聚氰胺的磁珠分离化学发光免疫检测方法
CN106290822A (zh) * 2016-07-28 2017-01-04 武汉景川诊断技术股份有限公司 D‑二聚体免疫胶乳微球制备方法及应用
CN107091923A (zh) * 2017-06-02 2017-08-25 成都普利泰生物科技有限公司 一种毛细管化学发光检测装置及其检测方法
CN107942051A (zh) * 2017-11-15 2018-04-20 南通伊仕生物技术股份有限公司 一种d‑二聚体检测试剂盒及其使用方法

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1989000290A1 (en) * 1987-07-02 1989-01-12 In Vitro Technologies, Inc. Capillary device for immunoassay of multiple analytes
US5976896A (en) * 1994-06-06 1999-11-02 Idexx Laboratories, Inc. Immunoassays in capillary tubes
US5981196A (en) * 1996-08-12 1999-11-09 Rohm And Haas Company Immunossay method
US20110262940A1 (en) * 2008-12-19 2011-10-27 Hideaki Hisamoto Capillary for immunoassay, and capillary immunoassay method using same
CN105181680A (zh) * 2015-09-28 2015-12-23 成都博奥新景医学科技有限公司 一种三聚氰胺的磁珠分离化学发光免疫检测方法
CN106290822A (zh) * 2016-07-28 2017-01-04 武汉景川诊断技术股份有限公司 D‑二聚体免疫胶乳微球制备方法及应用
CN107091923A (zh) * 2017-06-02 2017-08-25 成都普利泰生物科技有限公司 一种毛细管化学发光检测装置及其检测方法
CN107942051A (zh) * 2017-11-15 2018-04-20 南通伊仕生物技术股份有限公司 一种d‑二聚体检测试剂盒及其使用方法

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110028582A (zh) * 2019-04-29 2019-07-19 江苏众红生物工程创药研究院有限公司 抗人d-二聚体抗体及其应用
CN110028582B (zh) * 2019-04-29 2022-03-25 江苏众红生物工程创药研究院有限公司 抗人d-二聚体抗体及其应用
CN110947372A (zh) * 2019-12-16 2020-04-03 成都普利泰生物科技有限公司 一种毛细管表面氨基化方法
CN111812330A (zh) * 2020-06-23 2020-10-23 江苏奥雅生物科技有限公司 一种用于d-二聚体检测的试剂盒
CN115097130A (zh) * 2022-05-17 2022-09-23 中国石油大学(华东) 一种快速定性-定量检测冠状病毒的毛细玻璃管检测方法
CN115097130B (zh) * 2022-05-17 2024-03-19 中国石油大学(华东) 一种快速定性-定量检测冠状病毒的毛细玻璃管检测方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109444412A (zh) 一种用于微型化学发光免疫分析系统的宠物d-二聚体检测试剂盒
CN108333357A (zh) 一种磁珠时间分辨荧光免疫定量检测ck-mb试剂盒
CN103364568A (zh) 一种层粘连蛋白纳米磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法
CN101201354A (zh) 甲状腺素化学发光免疫分析定量测定试剂盒及制备方法
CN105954267A (zh) 一种抗组蛋白抗体IgG的磁微粒化学发光定量测定试剂盒及制备和检测方法
CN102998465B (zh) 血管紧张素ⅰ磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法
CN103837674A (zh) 特异性IgE抗体的检测方法、该方法所使用的试剂盒以及该试剂盒的制备和使用方法
CN106324251B (zh) 小片段BMG抗体的制备方法及β2-微球蛋白检测试剂盒
CN107942051A (zh) 一种d‑二聚体检测试剂盒及其使用方法
CN107044977A (zh) 一种酪氨酸磷酸酶抗体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法
CN105929166A (zh) 一种抗LKM-1抗体IgG的磁微粒化学发光定量测定试剂盒及制备和检测方法
CN109459570A (zh) 一种快速检测人体血液中铅离子的胶体金免疫试纸条制备方法
CN109164257A (zh) 一种基于磁微粒的时间分辨荧光免疫检测方法
CN105954509A (zh) 肾素化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法
WO2012092708A1 (zh) 一种测定抗ra33抗体igg的方法及试剂装置
CN105929172A (zh) 一种抗PM-Scl抗体IgG的磁微粒化学发光定量测定试剂盒及制备和检测方法
CN109444419A (zh) 一种检测犬促甲状腺激素的化学发光免疫分析试剂盒
CN109187972A (zh) 一种定量检测血浆肾素含量的磁微粒化学发光试剂盒及其制备方法
CN109975538A (zh) 一种检测牛结核病IFN-γ和牛副结核病抗体的试纸条及其制备方法
CN107475076A (zh) 自动核酸提取仪用猪蓝耳病抗体免疫磁珠法检测试剂盒
CN107884569A (zh) 一种快速检测氯霉素残留的方法
CN105891193A (zh) 呼吸道合胞病毒化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法
CN103185777B (zh) 一种检测抗Jo-1抗体的试剂装置及其方法
CN109444410A (zh) 一种兽用狂犬病毒中和抗体化学发光检测试剂盒
CN109444418A (zh) 一种动物孕酮化学发光检测试剂盒

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination