WO2012092708A1 - 一种测定抗ra33抗体igg的方法及试剂装置 - Google Patents

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胡德明
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深圳市亚辉龙生物科技有限公司
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    • B01L3/508—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes rigid containers not provided for above

Definitions

  • the present invention relates to a method and a reagent device for measuring an anti-M33 antibody IgG, and belongs to the field of biological detection technology.
  • Rheumatoid arthritis A is the most common systemic autoimmune disease. It is mainly characterized by chronic, symmetrical, and joint-erosive synovitis. Most of the conditions are progressive. If not treated in time, about three-thirds. One patient will be disabled. Therefore, early diagnosis and early treatment are the key to treating rheumatoid arthritis.
  • the American College of Rheumatology (ACR) revised the diagnostic criteria in 1987 with clinical manifestations, and rheumatoid factor F) as the only diagnostic criterion with poor specificity. Therefore, rheumatologists are committed to finding the biological markers of early diagnosis of RA, and have achieved certain results.
  • Hassfeld et al first slammed the RA33 antibody, which was named as an anti-RA33 antibody because it is a specific antibody for the diagnosis of RA (rheumatoid arthritis) and reacts with a nucleic acid protein with a molecular weight of 33 kD.
  • the target antigen is a 33KD nucleic acid binding protein, which is consistent with the A2 protein in hnRNP, and the antigen is derived from He cells or Ehrilich cells.
  • the detection method is immunoblotting (IBT).
  • anti-RA33 antibodies were found in some patients with RA, and in about 20% of patients with systemic erythematosus (SLE) and 40% to 60% of patients with mixed connective tissue disease (MCTD). But there is literature Description
  • anti-M33 antibodies in SLE patients and MCTD patients often appear simultaneously with the other two autoantibodies U1-RNP and Sm antibodies, so SLE and MCTD can be excluded by simultaneously examining U 1 - NP and Sm antibodies.
  • IBT immunosorbent assay
  • Has sfeld et al first reported the use of the IBT method to detect anti-RA33 antibodies in the serum of RA patients.
  • This method is a hybrid technique that combines high-resolution gel electrophoresis with immunochemical analysis techniques.
  • Western blotting has the advantages of large analytical capacity, high sensitivity, and high specificity. It is the most commonly used method for detecting protein properties, expression and distribution, such as qualitative and quantitative detection of tissue antigens, mass determination of peptide molecules, and virus. Antibody or antigen detection, etc.
  • the disadvantages are:
  • reagents Up to 11 reagents can be used for quantitative determination.
  • Each test reagent should be filled with a reagent bottle, and each time a reagent is used, the liquid suction nozzle needs to be replaced to be separately added to the microplate.
  • the hole not only the variety of reagent bottles, but also the operation of adding reagents is extremely cumbersome. If the automatic enzyme-free analyzer is not used, all operations must be performed manually, and the automatic analyzer is expensive. , the investment is large;
  • the detection reagent is open in the detection process, which easily causes cross-contamination between various reagents and affects the detection result;
  • the number of items in the test item kit configuration and use are all X 96 people. If 10 items need to be tested, the reagent configuration and usage number must be 10 X 96, if only one copy The sample needs to be tested for 10 different items, and 10 X 96 parts of reagents are also required.
  • the present invention proposes a new detection method and reagent device and supporting reagents.
  • the method is based on alcohol-linked immunoassay technology and seeks a more compact, accurate and effective set of methods and reagents for quantitative testing to meet clinical diagnostic needs.
  • the method is based on the principle of enzyme-linked immunosorbent assay to realize the immunoassay of anti-RA33 antibody I gG, and is an independent, single-person, one-time analysis method for detecting anti-RA33 antibody I gG by enzyme-linked immunosorbent assay.
  • a reagent device and a matching reagent which can store various reagents required for anti-RA33 antibody I gG drunk immunoassay on an analysis device, and the related immunology can be more conveniently performed according to the use requirements of the test item. Detection provides a better basis for clinical applications.
  • the invention provides a method for determining an anti-RA33 antibody IgG, which is realized by a kit consisting of an analytical reagent device and a matching reagent for collateral immunoassay, the analytical reagent device comprising a substrate having 8 holes and A handle at one end of the substrate, which is filled and aspirated by various specific reagent solutions between the pores of the reagent device by a special specific analytical instrument, so that the sample reacts with the reagent, and then the value of the solution color after the reaction is measured, and finally The detection result is obtained by processing the measured values.
  • the method for determining an anti-RA33 antibody IgG is to react a test anti-M33 antibody I gG in a sample to be reacted with a recombinant M 33 antigen to form a first immune complex, the first immune complex and the first immune complex
  • the enzyme-labeled second antibody is reacted to form a second immune complex, and the second complex formed by the reaction is subjected to color development comparison analysis with the chromogenic substrate to obtain the content of the anti-RA33 antibody I gG to be tested.
  • the method for determining an anti-RA33 antibody I gG wherein the second antibody is a horseradish peroxidase-labeled anti-human I gG antibody.
  • the present application also provides a reagent device for determining anti-RA33 antibody IgG, comprising a substrate with 8 holes, a handle at one end of the substrate, and an analytical reagent device for detecting anti-RA33 antibody I gG by enzyme-linked immunosorbent assay and corresponding The number of matching reagent calibrators, controls, and buffer wash components.
  • the reagent device for measuring an anti-RA33 antibody I gG wherein a handle of a detection reagent barcode is pasted on a handle of one end of the substrate, and the value of the barcode includes a detection item code corresponding to each detection, and a detection reagent production Batch number, reagent expiration date, qualitative correction value/quantitative determination standard curve parameter, type of enzyme-linked immunoreaction, reagent and serial number of the analytical device.
  • the pore site comprises a reaction well
  • reaction well is flat and has high light source/light path permeability.
  • the absorbance value of visible light/ultraviolet light/fluorescence approaches zero, and the pore is coated with anti-RA33 antibody.
  • Recombinant M33 antigen required for I gG which is used to contain test samples and detection reagents, and to carry out enzyme-linked immunoreactivity with these samples and reagents, and is a container for detecting immune reaction and color display and detection;
  • Each reagent well contains a reagent required for the detection of anti-M33 antibody IgG by enzyme-linked immunosorbent assay. After the reagent is added, the open lip of the micropore is sealed with a sealing film.
  • the reagent device for determining an anti-RA33 antibody I g G wherein the reagent for clotting immunoassay contained in the reagent well comprises an immunosuppressive inhibitor/neutralization required for detecting an alcohol-linked immunoreaction of anti-RA33 antibody IgG Agent/blocker/adsorbent, enzyme conjugate solution, chromogenic substrate solution, color development stop solution, reaction enhancer/accelerator, sample dilution solution.
  • the reagent device for measuring the anti-RA33 antibody I gG wherein the sample hole, the reaction well, the dilution hole and the reagent hole have a cross-sectional shape including a flat type, a V type or a U type, or a flat type, a V type and a U type Any combination.
  • the method for determining an anti-RA33 antibody I gG comprising the steps of:
  • the instrument can be connected to the host through the RS232 serial port, so that the results of the normal operation of the instrument can be handled by the centralized system;
  • the detection further includes the following steps:
  • the instrument can automatically identify the analysis device barcode and quality.
  • Control bar code and calibrator bar code the selection line can be positioned in the "sample” column or the "detection" column;
  • the instrument automatically runs according to the bar code information. According to the bar code, the instrument will select the corresponding set standard curve. The program first detects the calibration product to calibrate the preset curve in the instrument. Secondly, the quality control object is controlled. Detection, if the detection result is within the marked range, it means that the built-in curve is qualified, it can be used for sample detection, and finally the sample detection procedure is started; vi i i. Dilution: The filling needle will automatically take samples from the sample hole and puncture The hole sealing film automatically draws the dilution solution to dilute the sample in the dilution hole. After the action is completed, the diluted sample is filled. Description
  • the needle is moved to the reagent well for a set period of time, after which the liquid is removed;
  • the filling needle will draw a certain amount of washing liquid from the corresponding tank to remove the liquid after three to five washings of the reagent hole;
  • Xi i i Fill the needle piercing reagent hole sealing film and take a certain amount of stop solution to the reagent hole. Read the 0D value on the 450 ship within 10 minutes. If the ⁇ is selected by the dual wavelength method, the reference wavelength is 620nm ⁇ 690nm;
  • Test result When the test program runs, click the data transmission with the host, the instrument will automatically send the results of the normal work to the host for analysis by the external data processing software, and finally generate a report for easy reference;
  • the assay reagent device is an independent, single-part, single-use, alcohol-linked immunoassay reagent device dedicated to a specific analytical instrument for the determination of anti-RA33 antibody IgG.
  • This detection method which uses the principle of enzyme-linked immunosorbent assay, uses a specific analytical instrument, and uses a dedicated detection kit and analytical reagent device to automatically achieve qualitative/quantitative determination of anti-RA33 antibody IgG, which is a brand new , applicable, practical, efficient, and rapid detection of anti-M33 antibody IgG;
  • the barcode value includes the test item code corresponding to the test, the test reagent production batch number, the reagent expiration date, the quantitative standard curve parameter, the specific enzyme-linked immunoreaction type, and the reagent. And the information such as the serial number of the analysis device cannot be changed at will, and it is strictly controlled during use. Especially when the detection reagent is used beyond the expiration date, it will be identified and prevented from being sent out, so that the accuracy of the detection can be ensured;
  • the liquid applicator is filled with test reagents or samples, the operation is automated, the amount is accurate, and the accuracy and precision of the test results are high;
  • Figure 1 is a schematic cross-sectional view showing an embodiment of a reagent device for measuring an anti-M33 antibody IgG according to the present application;
  • Figure 2 is a plan elevational view of one embodiment of a reagent device for determining anti-M33 antibody IgG according to the present application;
  • Figure 3 is a schematic cross-sectional view showing another embodiment of the reagent device for measuring anti-M33 antibody IgG according to the present application;
  • Figure 4 is a top plan view showing another embodiment of the reagent device for measuring anti-M33 antibody IgG according to the present application;
  • 5 and 6 are schematic cross-sectional views showing other embodiments of the reagent device for measuring an anti-RA33 antibody I gG according to the present application;
  • 1 is a sample well
  • 2, 3, 4, 5, 6 are reagent wells
  • 7 is a reaction well
  • 8 is a dilution well
  • 9 is a handle
  • 10 is a sealing film
  • 11 is a matrix
  • 90 is a label.
  • Example 1 Indirect enzyme-linked immunosorbent assay, kit and reagent device for detecting anti-RA33 antibody IgG
  • the invention is based on a more compact, accurate and effective method for detecting immunoassay, and the basic principle is indirect enzyme-linked immunosorbent assay.
  • the recombinant RA33 antigen is adsorbed on the solid phase, and the specific antibody in the diluted human serum is bound to the antigen by incubation, and the antibody not bound to the solid phase is washed and removed, and anti-human immunity labeled with horseradish peroxidase is added. Globulin conjugates, incubated. The unbound alcohol complex was removed and the original enzyme substrate was added. The color produced is proportional to the specific antibody concentration in the test sample.
  • This method mainly achieves the immunodetection of the anti-RA33 antibody I gG by an analytical reagent device for enzyme-linked immunosorbent assay and a supporting reagent.
  • an analytical reagent device for enzyme-linked immunosorbent assay and a supporting reagent.
  • both analytical reagent devices and reagents from specific analytical instruments can be used to quickly and accurately determine the need for clinical diagnosis.
  • the specific structure of the analysis device is as follows:
  • FIG. 1-6 it is a reagent device for measuring anti-M33 antibody I gG conjugate immunoassay according to the application of the present invention, comprising a substrate 11 having 1 to 8 holes on the substrate 11 (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8), where the hole 1 is the sample hole for the sample to be tested, and the bottom surface is the bottom of the "V" groove, and the remaining holes are the reaction a hole 7, a dilution hole 8, and a reagent hole (2, 3, 4, 5, 6), the reaction hole 7 is a reaction hole for receiving a detection sample and a detection reagent and serving as a container for enzyme-linked immunoreactivity and colorimetry.
  • the reaction well is a light source/optical passage through hole, and a handle 9 is provided at one end of the base body, and a label 90 for detecting an anti-RA33 antibody I gG reagent information barcode is attached to the handle.
  • the reference numerals 2, 3, 4, 5, and 6 are reagent holes, and in use, the labels 2, 3, 4, 5, and 6 are filled with reagents required for detection, and The open mouth can be square or round, and the bottom surface is a "V" groove bottom. After filling the reagent or vacant, the sealing film 10 is sealed.
  • the label 8 is a dilution hole for the dilution of the sample. Cover the sealing film.
  • kits outside the analytical reagent device include: Calibrators, Controls, Buffer Wash, Wash, Disinfectant, and Distilled or Deionized Water.
  • Example 2 Preparation of Reagent Device or Kit An indirect method for detecting anti-RA33 antibody IgG. Hole 1 is used as a container for sample to be tested, and a liquid sample is added during use for use in the detection; hole 2 is used as a hole. Sealed with a sealing film for testing and standby;
  • hole position 3 as the reagent container, add the sample dilution reagent, and seal it with a sealing film for use in the test;
  • the pore position 6 is used as a reagent container, and the ruthenium reaction substrate reagent is added, and then sealed with a sealing film for use in detecting;
  • the recombinant RA 33 antigen has been coated, and the liquid sample, the detection reagent and the washing liquid to be tested are added as a reaction container, and finally the sleeping reaction bottom is added. Absorbance measurement after incubation;
  • Use hole 8 as the sample dilution container for dilution of the sample
  • a barcode 90 for anti-RA33 antibody IgG detection reagent and analysis device information is attached to the handle 9, and the barcode includes a detection item code, a detection reagent production batch number, a reagent expiration date, a qualitative correction coefficient/quantitative detection correction coefficient, an enzyme-linked immunoreaction type, and a reagent. And the serial number of the analysis device.
  • a plurality of analytical devices are prepared according to the above method, and corresponding reagents are prepared, including calibrators, controls, buffered washings, washing solutions, disinfecting solutions, and distilled or deionized water. This constitutes the complete anti-RA33 antibody IgG assay kit component.
  • the reagent device for detecting the anti-RA33 antibody IgG and the supporting component are loaded into the outer packaging box of the kit to prepare an anti-M33 antibody IgG kit.
  • the fully automatic analyzer includes an analysis device tray that is matched to the shape of the analysis device. A total of 30 positions are available for the analysis device to be used for inspection and analysis. It also includes a modular integrated mechanical electronics structure for automated sample loading, dilution, incubation, washing and reading. Each position is independently quantified and more than 200 electronic sensors are monitored to ensure the accuracy of the results. Once the instrument is running, the analyzer tray will rotate to a different location for loading, dilution, incubation, washing, and reading steps.
  • the instrument switch When the instrument switch is turned on, the instrument automatically performs a series of checks to prepare the instrument for proper operation.
  • the instrument After powering up, the instrument will start a heating program to adjust the temperature to the temperature to be tested.
  • the instrument can be connected to the host through the RS232 serial port, so that the results obtained by the normal operation of the instrument are handled by the centralized system.
  • the instrument can automatically identify the analysis device barcode and quality.
  • Control bar code and calibrator bar code the selection line can be positioned in the "sample” column or the "detection" column;
  • the instrument automatically runs according to the bar code information. According to the bar code, the instrument will select the corresponding set standard curve. The program first detects the calibration product to calibrate the preset curve in the instrument. Secondly, the quality control object is detected. If the test result is within the marked range, it means that the built-in curve is qualified and can be used for sample detection; finally, the sample test procedure is started;
  • Dilution The filling needle will automatically take the sample from the sample hole 1 and puncture the hole sealing film 10, and automatically draw the diluent in the dilution hole 8 for sample dilution. After the action is completed, the diluted sample will be filled with the needle. Reacting to reagent well 3 for a set period of time, after which the liquid is removed;
  • washing The filling needle will take a certain amount of washing liquid from the corresponding liquid tank, and remove the liquid after three to five washings of the reagent hole 3;
  • the sealing film absorbs a certain amount of horseradish peroxidase-labeled anti-human I gG antibody to the reagent well 3 to carry out a reaction, and removes the liquid after a set period of time;
  • the washing cycle must be started before the instrument is turned off. This will prevent the residual salt from the solution from crystallizing in the liquid path, avoiding damage to the instrument or causing the detection of crusting to be invalid. After the washing is completed, the instrument power is automatically turned off.
  • Example 4 Detection and application of patient samples, analysis of results and quality control of detection
  • Example 3 Using the procedure and procedure of Example 3, the method of use can be used to quantify the level of anti-M33 antibody IgG in human serum using the kit described in Example 2.
  • the anti-RA33 antibody alone is considered a marker for rheumatoid arthritis (UA), but its diagnostic sensitivity depends on the population tested.
  • Anti-RA 33 antibodies do not depend on rheumatoid factor (RF), and their occurrence in RF-negative rheumatoid arthritis is about 45%, which is significant for the early diagnosis of RA.
  • Anti-RA 33 antibodies are present in 70% of SLE patients with erosive arthritis (EA), so anti-RA 33 antibodies can be used as predictors of EA development in SLE. Therefore, we can conduct clinical diagnosis based on the results of the test, and initially determine the patient's condition. The final diagnosis should be considered in combination with clinical manifestations or other diagnostic methods/indicators.
  • Normal reference value 0 ⁇ 25AU/mL; A certain number (statistically significant) of negative samples were detected, and the mean value of the results plus 3 standard deviations (ie +3SD) was the upper limit of the normal reference value. It is recommended that each laboratory establish its own range of normal reference values based on actual conditions.
  • sample value > 30 AU/mL it indicates that the antibody concentration is significantly increased. It should be diagnosed with rheumatoid arthritis and erosive arthritis in combination with clinical manifestations or other diagnostic methods/indicators; sample value ⁇ 20 AU/ In mL, it indicates that the body anti-RA33 antibody IgG level did not increase significantly; 20 AU / mL sample value ⁇ 30 AU / mL, should be re-tested, if still suspicious, re-collected samples after 2 - 3 weeks.
  • the detection of the anti-RA33 antibody I gG of a plurality of samples can be simultaneously and fully automated through the same analysis process, which makes the detection more tubular, lower in cost, shorter in detection time, less prone to cross-contamination, and easy to perform detection. And the detection has strong specificity, high sensitivity and good accuracy.

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Description

说 明 书
一种测定抗 RA33抗体 IgG的方法及试剂装置
技术领域
本发明申请涉及一种测定抗 M33抗体 IgG的方法及试剂装置， 属于生物检 测技术领域。
背景技术
类风湿关节炎 A)是最常见的一种全身性自身免疫性疾病， 以慢性、 对 称性、 关节侵蚀性滑膜炎为主要表现， 大多病情呈进行性， 若未及时治疗， 约 三分之一的病人将致残。 因此， 早期诊断、 早期治疗是治疗类风湿关节炎的关 键。 美国风湿病学会（ACR) 1987年修订的诊断标准以临床表现为主， 类风湿因 子 F)作为惟一的诊断标准， 其特异性较差。 故风湿病学家都致力于寻找 RA 早期诊断的生物学标志， 并已取得一定成果。
1989年 Hassfeld等首次艮道 RA33抗体， 因该抗体是诊断 RA (类风湿关节 炎）较为特异的抗体， 而且与分子量 33KD的核酸蛋白发生反应， 因此定名为抗 RA33抗体。 其靶抗原为 33KD的核酸结合蛋白， 与 hnRNP中的 A2蛋白一致， 抗 原来源于 He 细胞或 Ehrilich细胞。 检测方法为免疫印迹法 （ IBT )。 1992年 Hassfeld在检测抗 M33抗体的同时，发现部分 RA患者同时存在针对 36KD核酸 蛋白的抗体， 且后者与抗原分子量同为 36KD的抗增殖细胞核抗原抗体（抗 PCNA 抗体） 无关。 抗 RA33抗体与抗 RA36抗体常同时出现， 在免疫印迹检测时如同 时存在 33KD、 36KD处形成两条特征性条带， 对诊断 RA具有特异性。 在各项 RA 早期诊断指标中， 抗 M33抗体特异性最高， 在 RA中的阳性率为 35.8%， 尤其在 RA早期出现。 抗 RA 33抗体的消长与病情及用药无关。
此外抗 RA33抗体除见于部分 RA患者外， 约 20 %的系统性红斑良疮 ( SLE ) 患者和 40% -60%的混合性结締组织病（MCTD)患者中也存在该抗体。 但有文献 说 明 书
艮道， SLE患者和 MCTD患者中 抗 M33抗体常常与另外两种自身抗体 U1-RNP和 Sm抗体同时出现， 所以只要同时检查 U 1 - NP和 Sm抗体即可排除 SLE和 MCTD。
抗 RA33抗体的检测最早和最常用的方法是 IBT, 此外， 尚可用酶联免疫吸附 试验（ELISA ) 法进行检测， 但这些方法都存在着不足之处。
一、 免疫印迹法：
1989年， Has sfeld等首先报道用 IBT法检测 RA患者血清中的抗 RA33抗 体。 此法是一种将高分辨率凝胶电泳和免疫化学分析技术相结合的杂交技术。 免疫印迹法具有分析容量大、 敏感度高、 特异性强等优点， 是检测蛋白质特性、 表达与分布的一种最常用的方法， 如组织抗原的定性定量检测、 多肽分子的质 量测定及病毒的抗体或抗原检测等。 其不足之处在于：
( 1 ) 只能进行定性和半定量分析， 无法得出被检物质具体的量；
( 2 )操作步骤繁瑣， 试验用时较长， 在基层开展此项检测比较困难； ( 3 )检测的灵敏度和特异性还有待提高；
( 4 ) 同时， 由于提取抗原整个过程复杂， 耗时长， 仪器设备要求高， 且抗 原难以长期保存， 也不利于临床推广应用。 二、 酶联免疫吸附试验：
与其他生物检测或免疫检测比较， 这种 ELISA检测方法、 技术、 工具或产 品仍有较多的不足而使其应用受限， 这些不足主要包括以下几个方面：
( 1 )使用 12 X 8型、 8 X 12型或整板型 96孔专用微孔板作为抗原抑或抗体 包被用品和反应容器， 在使用时只能分成 12批次、 8批次或整板一次使用； 说 明 书
( 2 )定量测定所用的试剂可多达 11种， 每一种检测试剂都要用试剂瓶来盛 装， 并且每使用一种试剂时都需要更换吸液嘴来分别加注到微孔板的微孔中， 不但试剂瓶种类多， 加注试剂的操作也极为繁瑣， 如果不使用全自动酶免分析 仪的话， 则全部操作都要用手工来进行， 而全自动晦免分析仪的价格十分昂贵， 投入较大；
( 3 )每一检测或每次检测无试剂信息的条形码， 只能通过查看试剂盒外包 装盒的标识才能了解或知悉检测试剂的生产批号及有效期信息， 而且所知悉的 信息在检测过程中不受控， 具有 4艮大的随意性；
( 4 )检测试剂在检测过程中为开放方式， 容易引起各种试剂之间的交叉污 染而影响检测结果；
( 5 )在未采用全自动酶免分析仪进行检测时的检测过程为手工操作， 试剂 或样品的加量不很精确， 操作过程极为繁瑣和复杂， 容易发生操作差错， 检测 结果的准确度和精密度差；
( 6 )在检测项目成套试剂的数量配置及使用上均为项目数 X 96人份， 如杲 需要检测 10个项目， 则试剂的配置及使用数须为 10 X 96人份， 如果只有一份 样品需要检测 10个不同的项目， 也需要配置 10 X 96人份的试剂。
发明内容
为了解决抗 RA 33抗体 I gG分析检测现有方法中存在的不足之处 , 本发明申 请提供一种新的检测方法和试剂装置及配套试剂。 该方法基于醇联免疫检测技 术， 寻求一种更加筒单、 准确、 有效的一套方法及试剂来进行定量检测以满足 临床诊断的需要。
本方法基于酶联免疫检测的原理来实现抗 RA33抗体 I gG的免疫检测， 是一 种独立的、单人份的、一次性的用于酶联免疫检测抗 RA33抗体 I gG的分析方法、 说 明 书
试剂装置以及配套试剂， 它可以将抗 RA33抗体 I gG醉联免疫检测所需要的多种 试剂盛装在一个分析装置上， 通过这种方法可以更方便地根据检测项目的使用 需要进行相关的免疫学检测， 为临床应用提供了更好的依据。
本发明申请提供一种测定抗 RA33抗体 IgG的方法， 是通过晦联免疫检测的 分析试剂装置和配套试剂组成的试剂盒来实现的，这种分析试剂装置包括设有 8 个孔位的基体和位于基体一端的手柄， 它通过专用特定分析仪器对试剂装置各 孔之间的各种特定试剂溶液进行加注和吸弃， 使样品与试剂发生反应， 然后测 量发生反应后溶液色泽的数值， 最终通过对测量的数值进行处理而获得检测结 果。
所述的测定抗 RA33抗体 IgG的方法， 是将待测样品中的待测抗 M33抗体 I gG与重组的 M 33抗原进行反应而形成第一免疫络合物， 该第一免疫络合物与 酶标记的第二抗体进行反应形成第二免疫络合物， 将反应形成的第二络合物与 显色底物进行显色对比分析， 从而获得待测抗 RA33抗体 I gG的含量。
所述的测定抗 RA33抗体 I gG的方法， 其中， 所述的第二抗体为辣根过氧化 物酶标记的抗人 I gG抗体。
本发明申请还提供一种测定抗 RA33抗体 IgG的试剂装置， 设有 8个孔位的 基体、 位于基体一端的手柄， 以及用于酶联免疫法检测抗 RA33抗体 I gG的分析 试剂装置以及相应数量的配套试剂校准品、 质控物和緩沖洗涤液的组份。
所述的测定抗 RA33抗体 I gG的试剂装置， 其中， 所述基体一端的手柄上粘 贴有检测试剂条形码的标帖， 所述条形码的数值包含每项检测所对应的检测项 目代码、检测试剂生产批号、 试剂有效期、 定性校正值 /定量测定标准曲线参数、 酶联免疫反应类型、 试剂及分析装置的序列号的信息。
所述的测定抗 RA33抗体 I gG的试剂装置中， 所述孔位包括一个反应孔、 一 说 明 书
个样品孔、 一个稀释孔和五个试剂孔， 其中，
1) 样品孔盛容待测溶液；
2) 稀释孔用于样品的稀释；
3) 反应孔为平底并具有很高的光源 /光路通透性， 当盛装无色 /空白试剂溶 液时对可见光 /紫外光 /荧光的吸光度值趋近于零， 孔内包被有检测抗 RA33抗体 I gG所需的重组的 M33抗原 ,该孔用于盛容检测样品和检测试 剂， 并与这些样品和试剂发生酶联免疫反应， 是晦联免疫反应和色泽显 示及检测的容器；
4) 每一个试剂孔盛装有酶联免疫法检测抗 M33抗体 IgG所需的一种试剂， 加注试剂后用密封薄膜将微孔的开放口缘进行封闭。
所述的测定抗 RA33抗体 I gG的试剂装置， 所述试剂孔内所盛装晦联免疫检 测所需的试剂包括检测抗 RA33抗体 IgG之醇联免疫反应所需的免疫反应抑制剂 /中和剂 /阻断剂 /吸附剂、 酶结合物溶液、 显色底物溶液、 显色终止液、 反应增 强剂 /促进剂、 样品稀释溶液。
所述的测定抗 RA33抗体 I gG的试剂装置， 所述样品孔、 反应孔、 稀释孔和 试剂孔剖面形状包括平型、 V型或 U型， 抑或是平型、 V型和 U型之间的任意组 合。
所述的测定抗 RA33抗体 I gG的方法， 所述的方法包括如下的步骤：
1 )开机： 打开仪器开关后， 仪器会自动地进行一系列检查， 从而为仪器的正 常运行做准备；
2 )检查程序的准备： 按要求配置好相应的溶液， 包括： 緩冲洗涤液、 清洗液、 消毒液和蒸馏水或去离子水， 配制完毕装入相应的液体罐中；
3 ) 冲洗检查： 说 明 书
4 )预热： 在开机后， 仪器会启动加热程序， 将温度调至待检温度；
5 ) 与主机连机： 仪器通过 RS232 串口可以和主机相连， 从而将仪器正常工 作所得结果交由集中式系统处理；
6 )抗 RA33抗体 I gG的检测： 所述的检测又包括如下的步骤：
i. 从有密封口的一边打开包装袋， 取用所需数量的分析装置， 排除空气 后将袋口封紧；
ϋ. 检查分析装置试剂孔中的底物， 应为无色泽改变， 否则应弃掉； i i i. 分别在每个分析装置的样品孔中加 50 ~ 100 未稀释的样品， 每更 换一个批号的试剂， 应取其中一个分析装置及校准品进行仪器校准； iv. 放置分析装置到仪器中相应的分析装置托盘中， 按照使用说明书进行 校准和检测；
v. 按照所需检测的数量在分析装置托盘中放入相对应数量的分析装置， 并在检测位置之前放入含有校准品和质控物的分析装置， 仪器可自动 地识别分析装置条码、质控物条码和校准品条码，选择行可定位于 "样 品" 栏或 "检测" 栏；
vi. 点击开始， 运行项目表， 扫描各个分析装置条码， 对质控物， 校准品 以及检测样品进行编号；
v i i. 运行检测表， 仪器根据条码信息自动运行， 根据条码， 仪器会选择相 应设置好的标准曲线， 程序首先检测校准品， 以此来校准仪器内预设 的曲线； 其次对质控物进行检测 , 如果其检测结果在标示的范围内， 则表示内置曲线合格，可用于样品的检测，最后开始样品的检测程序； vi i i. 稀释： 加注针会从样品孔自动吸取样品， 刺破孔位密封薄膜自动吸取 稀释液在稀释孔进行样品稀释， 动作完成后， 被稀释的样品会被加注 说 明 书
针移至试剂孔反应一段程序设定的时间， 之后移除液体；
ix. 洗涤： 加注针会从相应的液罐中吸取一定量的洗涤液对试剂孔进行三 到五洗涤后移除液体；
X. 加注针刺破试剂孔密封薄膜吸取一定量的辣根过氧化物酶标记的抗 人 lgG抗体至试剂孔进行反应，反应一段程序设定的时间后移除液体； xi. 重复步骤 ix洗涤；
xi i. 加注针刺破试剂孔密封薄膜吸取一定量的酵反应底物至试剂孔进行 一段程序设定的时间反应；
xi i i. 加注针刺破试剂孔密封薄膜吸取一定量的终止液加注至试剂孔，在 10 分钟内于 450舰读取 0D 值， 如杲选择双波长法测定， 参考波长为 620nm~690nm;
7 )检测结果： 当检测程序运行完毕， 点击与主机的数据传输， 仪器会自动 将正常工作所得结果发送到主机交由外接数据处理软件分析， 最后生成报告单 以便查阅；
8 ) 关机 ： 检测结束后， 在仪器关机前， 必须启动洗涤循环， 这样可以避免 来自溶液中的残留盐份在液路中结晶， 避免损坏仪器或导致检测结果无效， 洗 涤完成后， 仪器电源自动关闭。
所述的分析试剂装置是一种测定抗 RA33抗体 IgG的独立的、 单人份的、 一 次性使用的专用于特定分析仪器的醇联免疫分析试剂装置。
本发明申请所述的用于抗 RA33抗体 IgG晦联免疫的检测方法和配套试剂， 其中实现抗 RA33抗体 IgG免疫检测的分析试剂装置，是一种独立的、单人份的、 一次性使用的专用于特定分析仪器的醇联免疫检测试剂装置。
本发明申请所述测定抗 M33抗体 IgG的方法及装置， 继承了其他检测方法 说 明 书
所具有的特异性强、 灵敏度高， 准确性好、 成本较低、 使用要求不高、 操作较 为简便、 获得检测结果时间短、 应用广泛等特点， 解决了其他检测方法的诸多 不足， 具体体现在以下几个方面：
1. 这种检测方法， 它运用酶联免疫分析原理， 利用特定的分析仪器， 采用配套 专用的检测试剂盒及分析试剂装置， 自动实现抗 RA33抗体 IgG的定性 /定量 测定， 是一种全新的、 适用的、 实用的、 高效的、 快速的检测抗 M33抗体 IgG的方案；
2. 它是一种独立的、 单人份的检测试剂及分析装置， 无需像通用 ELISA法那样 使用 12 X 8型、 8 X 12型或整板型 96孔专用酵联免疫微孔板作为抗原抑或抗 体包被用品和反应容器， 在使用时只要有一份样品即可进行对应项目的检测 而无试剂的浪费。 如果样品的数量超过一份， 按实际样品数使用该试剂及分 析装置即可；
3. 无论是定性检测还是定量检测， 它将每一检测必须的试剂盛装在一个分析试 剂装置的试剂孔位内， 而无须将检测试剂分别用不同的试剂瓶来盛装， 不但 操作极为简便， 而且不容易造成操作差错， 从而保证检测结果的正确性；
4. 它对每一个分析试剂装置都有一个专用条形码， 条形码的数值包含检测所对 应的检测项目代码、 检测试剂生产批号、 试剂有效期、 定量测定标准曲线参 数、 具体的酶联免疫反应类型、 试剂及分析装置的序列号等信息， 不能随意 被改变， 使用时严格受控， 尤其是在使用超过有效期检测试剂时， 将被识别 并阻止发出检测 ^艮告， 从而可以确保检测的准确性；
5. 它将每一检测试剂进行有效分隔和密封， 不会引起各种试剂之间的交叉污染 而影响检测结果；
6. 它是一种专用于特定分析仪器的分析试剂装置， 在检测过程中用全自动的精 说 明 书
密加液器来加注检测试剂或样品， 操作自动化， 加量精确， 检测结果的准确 度和精密度高；
7. 在检测项目成套试剂的数量配置及使用上， 一切按实际使用需要来进行配备 即可， 尤其是在对多项目检测上， 配备更为适量， 不会出现超配置及使用情 况；
附图说明
图 1是本发明申请所述测定抗 M33抗体 IgG的试剂装置的一个实施例的剖面结 构示意图；
图 2是本发明申请所述测定抗 M33抗体 IgG的试剂装置的一个实施例的平面俯 视图；
图 3是本发明申请所述测定抗 M33抗体 IgG的试剂装置的另一个实施例的剖面 结构示意图；
图 4是本发明申请所述测定抗 M33抗体 IgG的试剂装置的另一个实施例的平面 俯视图；
图 5和图 6是本发明申请所述测定抗 RA33抗体 I gG的试剂装置的其它实施例的 剖面结构示意图；
其中， 1为样品孔、 2、 3、 4、 5、 6为试剂孔、 7为反应孔、 8为稀释孔、 9为手 柄、 10为密封薄膜、 11为基体、 90为标贴。
具体实施方式
以下结合具体的检测装置与实施步骤对本发明申请所述的检测方法和试剂 装置进行进一步的描述， 目的是为了公众更好的理解本发明申请所述的技术方 案， 而不是对所述技术方案的限制。 事实上， 在本发明精神实质内， 对所述方 法步骤的改进， 以及对相应试剂装置结构的增减、 替换和改进都在本发明申请 说 明 书
所要求保护的技术方案之内。
实施例 1 检测抗 RA33抗体 IgG的间接酶联免疫检测方法和试剂盒及试剂 装置
本发明是基于晦联免疫检测技术上的一种更加筒单、 准确、 有效的一套方 法， 其采用的基本原理为间接酶联免疫法。 将由重组的 RA33 抗原吸附于固相 上， 通过孵育使稀释的人血清中的特异性抗体与抗原结合， 洗涤去除未与固相 结合的抗体， 加入用辣根过氧化物酶标记的抗人免疫球蛋白晦联物， 孵育。 去 除未结合的醇联物， 加入酶色原底物。 产生的颜色与检测样本中的特异性抗体 浓度成正比。 这种方法主要是通过用于酶联免疫检测的分析试剂装置和配套试 剂来实现抗 RA33抗体 I gG的免疫检测。 通过这种醇联免疫方法， 同时运用特定 分析仪器的分析试剂装置和试剂， 可快速， 准确的做出判断用于临床诊断的需 要。 其分析装置具体结构如下：
如图 1-6所示，是本发明申请所述的一种测定抗 M33抗体 I gG晦联免疫检 测分析的试剂装置， 包括基体 11 , 在所述基体 11上设有 1 ~ 8个孔位（ 1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8 ), 其中孔位 1是用于盛装待测样品的样品孔， 且其底面为 "V" 型凹槽底， 其余孔位是反应孔 7、 稀释孔 8、 试剂孔（2、 3、 4、 5、 6 ), 所述反 应孔 7是用于接收检测样品和检测试剂并作为酶联免疫反应和比色的容器的反 应孔， 该反应孔是光源 /光路的通透孔， 在所述基体一端设有手柄 9 , 在所述手 柄上粘贴有检测抗 RA33抗体 I gG试剂信息条形码的标贴 90。 本实施例中， 所述 标号为 2、 3、 4、 5、 6是试剂孔， 使用时， 这些标号为 2、 3、 4、 5、 6试剂孔 中已盛装有检测所需的试剂， 且其开放口缘可为方形或圓形， 其底面为 "V" 型 凹槽底， 盛装试剂或空置后用密封薄膜 10封口， 所述标号为 8是稀释孔， 用于 样品的稀释， 上面没有覆盖密封薄膜。 说 明 书
分析试剂装置外的试剂盒中的其他试剂包括： 校准品、 质控物、 緩冲洗涤 液、 清洗液、 消毒液和蒸馏水或去离子水。
实施例 2 试剂装置或试剂盒的制作一间接法检测抗 RA33抗体 IgG 以孔位 1作为待测样品盛装容器， 在使用时加入液体样品， 供检测时取用； 以孔位 2作为空孔， 用密封薄膜封口， 供检测备用；
以孔位 3作为试剂容器， 加入样本稀释试剂后用密封薄膜封口， 供检测时 取用；
以孔位 4作为试剂容器， 加入终止试剂后用密封薄膜封口， 供检测时用； 以孔位 5作为试剂容器， 加入辣根过氧化物酶标记的抗人 IgG抗体试剂后 用密封薄膜封口， 供检测时用；
以孔位 6作为试剂容器， 加入晦反应底物试剂后用密封薄膜封口， 供检测 时用；
以孔位 7作为包被物孔 /反应容器 /比色孔， 已包被有重组的 RA 33抗原， 并 作为反应容器加注待测的液体样品和检测试剂及洗涤液， 最后加入睡反应底物 孵育后进行吸光度测定；
以孔位 8作为样品稀释容器， 供稀释样品时用；
在手柄 9粘贴有抗 RA33抗体 IgG检测试剂及分析装置信息的条形码 90 ,该 条形码包括检测项目代码、 检测试剂生产批号、 试剂有效期、 定性校正系数 /定 量检测校正系数、 酶联免疫反应类型、 试剂及分析装置的序列号。
按照上述方法制备若干分析装置， 另外制备相应的试剂， 包括校准品、 质 控物、 緩冲洗涤液、 清洗液、 消毒液和蒸馏水或去离子水等。 这样即构成了完 整的抗 RA33抗体 IgG测定试剂盒组分。 将检测抗 RA33抗体 IgG的试剂装置及 配套使用组份装入试剂盒的外包装盒， 即制成检测抗 M33抗体 IgG试剂盒。 说 明 书
实施例 3 通过全自动分析仪实现对样本抗 RA33抗体 IgG检测的分析操作 流程
全自动分析仪包括一个分析装置托盘， 它是与分析装置的形状相配套的， 一共有 30个位置可供分析装置放置， 用于检测分析。 此外还包括模块式集成机 械电子结构， 可实现自动化的加样， 稀释， 孵育， 洗涤以及读数过程。 每个位 置独立定量分析， 且有 200余个电子传感器监控仪器运行， 保证结果的准确性。 仪器运行后， 分析装置托盘会自行转动到不同的位置进行加样， 稀释， 孵育， 洗涤以及读数的步骤。
( 1 ) 开机
打开仪器开关后， 仪器会自动地进行一系列检查， 从而为仪器的正常运行做 准备。
( 2 )检查程序的准备
按要求配置好相应的溶液， 包括： 緩沖洗涤液、 清洗液、 消毒液和蒸馏水或 去离子水， 配制完毕装入相应的液体罐中。
( 3 ) 冲洗检查
( 4 )预热
在开机后， 仪器会启动加热程序， 将温度调至待检温度。
( 5 ) 与主机连机
仪器通过 RS232串口可以和主机相连， 从而将仪器正常工作所得结果交由集 中式系统处理。
( 6 )抗 RA33抗体 I gG的检测
1 )从有密封口的一边打开包装袋， 取用所需数量的分析装置， 排除空气后 将袋口封紧； 说 明 书
2 )检查分析装置试剂孔 6中的底物， 应为无色泽改变， 否则应弃掉； 3 ) 分别在每个分析装置的样品孔 1中加 50 ~ 100 μ L未稀释的样品， 每更 换一个批号的试剂， 应取其中一个分析装置及校准品进行仪器校准；
4 )放置分析装置到仪器中相应的分析装置托盘中， 按照使用说明书进行校 准 （若有必要）和检测；
5 )按照所需检测的数量在分析装置托盘中放入相对应数量的分析装置， 并 在检测位置之前放入含有校准品和质控物的分析装置， 仪器可自动地识别分析 装置条码、 质控物条码和校准品条码， 选择行可定位于 "样品" 栏或 "检测" 栏；
6 ) 点击开始， 运行项目表， 扫描各个分析装置条码， 对质控物， 校准品以 及检测样品进行编号；
7 )运行检测表， 仪器根据条码信息自动运行， 根据条码， 仪器会选择相应 设置好的标准曲线， 程序首先检测校准品， 以此来校准仪器内预设的曲线； 其 次对质控物进行检测， 如杲其检测结果在标示的范围内， 则表示内置曲线合格， 可用于样品的检测； 最后开始样品的检测程序；
8 )稀释： 加注针会从样品孔 1 自动吸取样品， 刺破孔位密封薄膜 10 , 自动 吸取稀释液在稀释孔 8进行样品稀释， 动作完成后， 被稀释的样品会被加注针 移至试剂孔 3反应一段程序设定的时间， 之后移除液体；
9 )洗涤： 加注针会从相应的液罐中吸取一定量的洗涤液对试剂孔 3进行三 到五洗涤后移除液体；
10 )加注针刺破试剂孔 5密封薄膜吸取一定量的辣根过氧化物酶标记的抗 人 I gG抗体至试剂孔 3进行反应， 反应一段程序设定的时间后移除液体；
11 ) 重复步骤 9 ) 洗涤； 说 明 书
12 )加注针刺破试剂孔 6密封薄膜吸取一定量的酶反应底物至试剂孔 3进 行一段程序设定的时间反应；
13 )加注针刺破试剂孔 4密封薄膜吸取一定量的终止液加注至试剂孔 3, 在 10分钟内于 45 Onm读取 0D值，如果选择双波长法测定，参考波长为 620nm~69 Onm;
( 7 )检测结果
当检测程序运行完毕， 点击与主机的数据传输， 仪器会自动将正常工作所 得结果发送到主机交由外接数据处理软件分析， 最后生成报告单以便查阅； ( 8 ) 关机
检测结束后， 在仪器关机前， 必须启动洗涤循环， 这样可以避免来自溶液中 的残留盐份在液路中结晶， 避免损坏仪器或导致检测结杲无效， 洗涤完成之后， 仪器电源自动关闭。
实施例 4 患者样品的检测应用、 结果分析以及检测的质控
采用实施例 3的操作方法与程序， 使用方法使用实施例 2所述的试剂盒， 可 用于定量测定人血清中的抗 M33抗体 IgG水平。
单独出现抗 RA33抗体被视为类风湿性关节炎 UA ) 的标记物， 但它的诊断 敏感性依赖于被测人群。 抗 RA 33抗体不依赖于类风湿性因子 （ RF )独立出现， 其在 RF阴性类风湿性关节炎中的出现率约 45%, 对 RA的早期诊断意义重大。 在 70%伴有糜烂性关节炎（ EA ) 的 SLE患者中可出现抗 RA 33抗体， 因此抗 RA 33抗 体可作为 SLE中 EA发展的预测指标。 因此我们可根据检测的结果来进行临床诊 断， 初步判断患者患病的情况， 最终确诊应结合临床表现或其他诊断方法 /指标 进行综合考虑。
以下为检测结果的分析：
( 1 ) 参考值 （参考范围） 说 明 书
正常参考值： 0~25AU/mL; 检测一定数量 （具有统计学意义） 的阴性样 本， 结果的平均值加 3倍标准偏差（即 +3SD )为正常参考值的上限。 建议各实 验室根据实际情况， 建立自己的正常参考值范围。
为了方便临床应用， 我们推荐：
样本值 <20 AU/mL 阴性
20 AU/mL < 样本值 < 30 AU/mL 可疑
样本值 > 30 AU/mL 阳性
( 2 )检测结果的解释
结果解释： 样本值 > 30 AU/mL时， 表明抗体浓度明显升高， 应结合临床表现 或其他诊断方法 /指标确诊是否患有类风湿性关节炎和糜烂性关节炎； 样本值 < 20 AU/mL时，表明机体抗 RA33抗体 IgG水平无明显上升； 20 AU/mL 样本值 < 30 AU/mL时， 应重新检测， 若仍为可疑， 2- 3周后重新采集样本检测。
以下是将实施例 3的检测过程重复检测阳性和阴性质控血清， 检查结果的再 现性， 获得如下的结果：
Figure imgf000016_0001
说 明 书
Figure imgf000017_0001
按照本发明， 可通过相同的分析过程同时全自动进行多种样品的抗 RA33抗 体 I gG 的检测， 这就使检测更筒化、 成本降低、 检测时间缩短、 不易发生交叉 污染、 检测操作容易进行； 且检测的特异性强、 灵敏度高、 准确性好。

Claims

权 利 要 求 书
1、 一种测定抗 M33抗体 IgG的方法， 其特征在于： 所述方法是通过酶联 免疫检测的分析试剂装置和配套试剂组成的试剂盒来实现的， 这种分析试剂装 置包括设有 8 个孔位的基体和位于基体一端的手柄， 它通过专用特定分析仪器 对试剂装置各孔之间的各种特定试剂溶液进行加注和吸弃， 使样品与试剂发生 反应， 然后测量发生反应后溶液色泽的数值， 最终通过对测量的数值进行处理 而获得检测结果。
2、 根据权利要求 1所述的测定抗 RA33抗体 IgG的方法， 其特征在于： 所 述的方法是将待测样品中的待测抗 RA33抗体 IgG与重组的 RA33抗原进行反应 而形成第一免疫络合物， 该第一免疫络合物与酶标记的第二抗体进行反应形成 第二免疫络合物， 将反应形成的第二络合物与显色底物进行显色对比分析， 从 而获得待测抗 RA33抗体 I gG的含量。
3、 根据权利要求 2所述的测定抗 RA33抗体 IgG的方法， 其特征在于： 所述 的第二抗体为辣根过氧化物酶标记的抗人 IgG抗体。
4、 一种用于测定抗 RA33抗体 I gG的试剂装置， 其特征在于： 所述的试剂 装置设有 8 个孔位的基体、 位于基体一端的手柄， 以及用于酶联免疫法检测抗 RA33抗体 I gG的分析试剂装置以及相应数量的配套试剂校准品、 质控物和緩冲 洗涤液的组份。
5、 根据权利要求 4所述的用于测定抗 RA33抗体 IgG的试剂装置， 其特征 在于： 所述基体一端的手柄上粘贴有检测试剂条形码的标帖， 所述条形码的数 值包含每项检测所对应的检测项目代码、 检测试剂生产批号、 试剂有效期、 定 性校正值 /定量测定标准曲线参数、 酶联免疫反应类型、 试剂及分析装置的序列 号的信息。
6、 根据权利要求 4所述的用于测定抗 RA33抗体 IgG的试剂装置， 其特征 权 利 要 求 书
在于： 所述孔位包括一个反应孔、 一个样品孔、 一个稀释孔和五个试剂孔， 其 中，
1) 样品孔盛容待测溶液；
2) 稀释孔用于样品的稀释；
3) 反应孔为平底并具有很高的光源 /光路通透性， 当盛装无色 /空白试剂溶 液时对可见光 /紫外光 /荧光的吸光度值趋近于零， 孔内包被有检测抗 RA33抗体 I gG所需的重组的 M33抗原 ,该孔用于盛容检测样品和检测试 剂， 并与这些样品和试剂发生酶联免疫反应， 是酶联免疫反应和色泽显 示及检测的容器；
4) 每一个试剂孔盛装有酶联免疫法检测抗 RA33抗体 IgG所需的一种试剂， 加注试剂后用薄膜将微孔的开放口缘进行封闭。
7、 根据权利要求 6所述的用于测定抗 RA33抗体 I gG的试剂装置， 其特征在 于： 所述试剂孔内所盛装晦联免疫检测所需的试剂包括检测抗 RA33抗体 I gG之 酶联免疫反应所需的免疫反应抑制剂 I中和剂 I阻断剂 /吸附剂、 酶结合物溶液、 显色底物溶液、 显色终止液、 反应增强剂 /促进剂、 样品稀释溶液。
8、 根据权利要求 6所述的用于测定抗 RA33抗体 I gG的试剂装置， 其特征在 于： 所述样品孔、 反应孔、 稀释孔和试剂孔剖面形状包括平型、 V型或 U型， 抑 或是平型、 V型和 U型之间的任意组合。
9、 根据权利要求 1所述的测定抗 RA33抗体 IgG的方法， 其特征在于： 所 述的方法包括如下的步骤：
1 )开机： 打开仪器开关后， 仪器会自动地进行一系列检查， 从而为仪器的正 常运行做准备；
2 )检查程序的准备： 按要求配置好相应的溶液， 包括： 緩冲洗涤液、 清洗液、 权 利 要 求 书
消毒液和蒸馏水或去离子水， 配制完毕装入相应的液体罐中；
3) 冲洗检查：
4 )预热： 在开机后， 仪器会启动加热程序， 将温度调至待检温度；
5 ) 与主机连机： 仪器通过 RS232 串口可以和主机相连， 从而将仪器正常工 作所得结果交由集中式系统处理；
6 )抗 RA33抗体 IgG的检测： 所述的检测又包括如下的步骤：
i. 从有密封口的一边打开包装袋， 取用所需数量的分析装置， 排除空气 后将袋口封紧；
ϋ. 检查分析装置试剂孔中的底物， 应为无色泽改变， 否则应弃掉； iii. 分别在每个分析装置的样品孔中加 50 ~ 100 未稀释的样品， 每更 换一个批号的试剂， 应取其中一个分析装置及校准品进行仪器校准； iv. 放置分析装置到仪器中相应的分析装置托盘中， 按照使用说明书进行 校准和检测；
v. 按照所需检测的数量在分析装置托盘中放入相对应数量的分析装置， 并在检测位置之前放入含有校准品和质控物的分析装置， 仪器可自动 地识別分析装置条码、质控物条码和校准品条码，选择行可定位于 "样 品" 栏或 "检测" 栏；
vi. 点击开始， 运行项目表， 扫描各个分析装置条码， 对质控物， 校准品 以及检测样品进行编号；
vii. 运行检测表， 仪器根据条码信息自动运行， 根据条码， 仪器会选择相 应设置好的标准曲线， 程序首先检测校准品， 以此来校准仪器内预设 的曲线； 其次对质控物进行检测 , 如果其检测结果在标示的范围内， 则表示内置曲线合格，可用于样品的检测，最后开始样品的检测程序； 权 利 要 求 书
vi i i. 稀释： 加注针会从样品孔自动吸取样品， 刺破孔位密封薄膜自动吸取 稀释液在稀释孔进行样品稀释， 动作完成后， 被稀释的样品会被加注 针移至试剂孔反应一段程序设定的时间， 之后移除液体；
ix. 洗涤： 加注针会从相应的液罐中吸取一定量的洗涤液对试剂孔进行三 到五次洗涤后移除液体；
X. 加注针刺破试剂孔密封薄膜吸取一定量的辣根过氧化物酶标记的抗 人 IgG抗体至试剂孔进行反应，反应一段程序设定的时间后移除液体； xi. 重复步骤 ix洗涤；
x i i. 加注针刺破试剂孔密封薄膜吸取一定量的酵反应底物至试剂孔进行 一段程序设定的时间反应；
xi i i. 加注针刺破试剂孔密封薄膜吸取一定量的终止液加注至试剂孔，在 10 分钟内于 450舰读取 0D 值， 如杲选择双波长法测定， 参考波长为 620nm~690nm;
7 )检测结果： 当检测程序运行完毕， 点击与主机的数据传输， 仪器会自动 将正常工作所得结果发送到主机交由外接数据处理软件分析， 最后生成报告单 以便查阅；
8 ) 关机 ： 检测结束后， 在仪器关机前， 必须启动洗涤循环， 这样可以避免 来自溶液中的残留盐份在液路中结晶， 避免损坏仪器或导致检测结果无效， 洗 涤完成后， 仪器电源自动关闭。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106404757A (zh) * 2016-06-30 2017-02-15 深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司 一种抗RA33抗体IgG化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法
CN109669041A (zh) * 2019-02-02 2019-04-23 上海微银生物技术有限公司 一种酶免疫检测板条、酶免疫检测板及其检测方法
CN112730859A (zh) * 2019-10-28 2021-04-30 东方伊诺(苏州)医疗科技有限公司 一种自动酶联免疫分析仪

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110514648A (zh) * 2018-05-21 2019-11-29 博阳生物科技（上海）有限公司 一种化学发光分析poct检测装置及其应用
CN109030818A (zh) * 2018-07-26 2018-12-18 上海微银生物技术有限公司 一种酶免疫检测板及其检测方法
CN111289759B (zh) * 2020-03-10 2023-10-27 苏州翊讯生物科技有限公司 Saa检测试剂盒及saa定量检测的方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5053715A (en) 1986-04-04 1991-10-01 Mitutoyo Corporation Capacitance-type measuring device for absolute measurement of positions
CN201611346U (zh) * 2009-09-17 2010-10-20 深圳市亚辉龙生物科技有限公司 一种用于酶联免疫检测的分析装置
CN201689095U (zh) * 2010-01-04 2010-12-29 深圳市亚辉龙生物科技有限公司 一种全自动自身抗体分析仪

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE140538T1 (de) * 1992-03-05 1996-08-15 Univ Dublin Vorrichtung zum antigennachweis
EP1291654B1 (en) * 2000-04-28 2006-11-22 Mitsubishi Kagaku Iatron, Inc. Automatic measuring cartridge and measuring method using it
CN2554176Y (zh) * 2002-07-01 2003-06-04 西安联尔生物技术有限公司 一种对风湿性疾病指标进行检测的生物芯片

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5053715A (en) 1986-04-04 1991-10-01 Mitutoyo Corporation Capacitance-type measuring device for absolute measurement of positions
CN201611346U (zh) * 2009-09-17 2010-10-20 深圳市亚辉龙生物科技有限公司 一种用于酶联免疫检测的分析装置
CN201689095U (zh) * 2010-01-04 2010-12-29 深圳市亚辉龙生物科技有限公司 一种全自动自身抗体分析仪

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JI CHUNMEI: "USE OF ANTI - CYCLIC CITRULLINATED PEPTIDE AND ANTI - RA33 ANTIBODIES IN DIAGNOSING RHEUMATOID ARTHRITIS", MEDICAL LABORATORY SCIENCE AND CLINICS, vol. 19, no. 3, 2008, pages 84 - 85, XP008163206 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106404757A (zh) * 2016-06-30 2017-02-15 深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司 一种抗RA33抗体IgG化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法
CN109669041A (zh) * 2019-02-02 2019-04-23 上海微银生物技术有限公司 一种酶免疫检测板条、酶免疫检测板及其检测方法
CN112730859A (zh) * 2019-10-28 2021-04-30 东方伊诺(苏州)医疗科技有限公司 一种自动酶联免疫分析仪

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