JPH02154679A - 医療用検査容器 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〈産業上の利用分野〉 本発明は、医療用検査を簡便に実施するための容器に関
する。

〈従来の技術〉 生体内微量物質の測定は、各種疾患の診断および治療効
果の判定など多くの目的で頻繁に実施されており、使用
する目的に応じて、手軽に行なうことができる簡易測定
法や、高感度で測定精度が高い測定方法が次々と開発さ
れている。　なかでも、簡易測定法は、測定機器や反応
装置などを用いずに手軽に実施できることから、定性的
もしくは半定量的測定のみによっても十分診断を下すこ
とができる場合には非常に便利な方法であり、妊娠診断
、感染症診断、尿の生化学検査および微生物検査などに
広く用いられている。

現在、免疫反応を測定原理として利用している簡易測定
法としては、担体として赤血球またはラテックスを用い
た凝集反応もしくは凝集阻止反応（以下、両者を合わせ
て凝集反応という）および標識剤として酵素を用いた酵
素免疫測定法（ＥＩＡ）などがある。

凝集反応のう・ち、担体として赤血球を用いた測定法は
、操作が簡便であり、測定感度は比較的高いが、結果が
得られるまでに長時間を要する。　一方、ラテックスを
用いた測定法は測定感度はやや低いが、操作は筒便で、
短時間で測定結果が得られる。　そのため、この測定法
は妊娠診断など比較的高感度を必要としない診断に、現
在、最も広く利用されている。　しかし、反面、その測
定法は結果の判定に熟練が必要であり、実施できるのは
病院などの医療機関に限られている。

また、凝集反応による簡易測定法は物質の存在の有無を
検知することは可能であっても、物質の存在量の測定、
すなわち、定量的測定には不適当である。

これに対し、ＥＩＡは測定の結果を反応液の色の変化、
すなわち、発色の有無により定性的に、また発色の程度
により定量的に判定する測定方法であるので、定性的測
定はもとより、定量的測定が可能であり、しかも、結果
の判定を誰でもが簡単に、かつ、正確に行なうことがで
きるという利点を有している。

しかし、ＥＩＡは測定感度は極めて高いが、その高感度
を得るには長時間の反応が必要であり、短時間の反応で
は所望する感度は得られない。　更にＢ／Ｆ分！！！操
作（抗原抗体反応において抗原と抗体が結合して生じた
結合型（Ｂｏｕｎｄ：Ｂ　）と結合していない遊離型（
Ｆｒｅｅ：Ｆ）とを物理的に分離すること）が煩雑であ
り、Ｂ／Ｆ分離が正確になされていないと次の工程であ
る酵素反応において非特異的反応が生じるなどの欠点を
有している。

また、測定開始にあたりピペット等で一定量の検体を量
り取ることが必要であり、酵素標識抗体（または抗原）
は反応容器とは別の容器に保持されているのでこれを反
応させるためにピペット等で一定量加える操作も行なわ
なければならない。

そこで、ＥＩＡについて、反応時間を短縮したり、Ｂ／
Ｆ分離操作等を簡便化するための研究が数多くなされて
きたが、満足すべき測定法は未だ実用に供されていない
。

一方、ＤＮＡハイブリッド複合複合酸形成いはＲＮＡハ
イブリッド複、金物形成の機構を利用する特定のＤＮＡ
またはＲＮＡ　（以下ＤＮＡ等と略することがある）検
出のための検査は、ＤＮＡ等が、特定のＤＮＡ等と選択
的に結合する性質を利用する点で抗原・抗体を用いる免
疫学的測定方法とりわけＥＩＡに反応様式が類似してい
る。

したがってＥＩＡと同様な工程が必要となり、従来の測
定法では、反応時間が長すぎる、Ｂ／Ｆ分Ｓ操作が煩雑
である、とベット等の器具を用いなければならない等の
ＥＩＡと同様の解決すべき問題がある。

また、大腸菌等の微生物の検出検査や、尿中糖等の生化
学的検出検査には簡易試験法として、尿試験紙等が開発
されているが、種々の試験項目に対して充分利用できる
とはいえず、試験項目ごとの専用の機器および器具を必
要とすることが多く、このため検査が病院等の医療機関
に限られるという問題がある。　このため簡便で迅速な
測定法の開発が望まれている。

〈発明が解決しようとする課題〉 本発明の目的は、上記の測定法の問題点を解決するため
に、検出反応を短時間で行なうことができ、Ｂ／Ｆ分１
１ｉ１ｆ操作が正確にしかも簡易に行え、ピペット等を
使用することなく一定量の試料や試薬を量り取ることが
でき、測定操作が簡便な医療用検査容器を提供しようと
する。

また、本発明は、様々な医療用検査、例えばＥＩＡ、Ｄ
ＮＡハイブリッド複合複合酸形成ＮＡハイブリッド複合
複合酸形成構を利用した検出方法、微生物検査および生
化学的検査にも、広く適用可能な検査容器を提供するこ
とを目的とする。

く課題を解決するための手段〉 本発明は、実質的に平面に近い内底部を、有する皿状の
容器であって、該内底部の任意の位置に１個または複数
個の小突起の集合体を設けてなることを特徴とする医療
用検査容器を提供する。

また、本発明は、実質的に平面に近い内底部を有する２
以上の皿状の容器を連続して配置してなる検査容器であ
って、前記内底部の任意の位置に１個または複数個の小
突起の集合体を設けてなることを特徴とする医療用検査
容器を提イ共　す　る　。

ここで、前記小突起の集合体に特定物質と選択的に結合
または反応可能な物質を固定させてなることが好ましい
。

また、前記特定物質が測定操作の指標物質であるのが良
い。

さらに、前記特定物質と選択的に結合または反応可能な
物質が、抗体または抗原であるのが好ましい。

また、前記特定物質と選択的に結合または反応可能な物
質が、ＤＮＡまたはＲＮＡであるのが好ましい。

前記特定物質と選択的に結合または反応可能な物質が、
選択培地であるのが好ましい。

前記特定物質と選択的に結合または反応可能な物質が、
生化学的反応に関与する物質であるのが好ましい。

以下に図面を参照して、本発明の詳細な説明する。

本発明の第１の態様の医療用容器は、第１ａ図（平面図
）および第１ｂ図（断面図）に１実施例を示すように、
皿状の容器１の内底部２に小突起の集合体３を設けたも
のである。

この小突起の集合体は、後述する構成を持ち、１定量の
検体や試料あるいは試薬を量り取ることができ、また保
持することができる。

また、小突起の集合体は、特定物質と選択的に結合また
は反応可能な物質（以下選択的結合物質ということがあ
る）を固定させることもできる。　さらにこの小突起の
集合体は、特定物質と選択的結合物質との反応の場とな
り、両者の結合型（Ｂｏｕｎｄ：　Ｂ　）と結合してい
ない遊離型（Ｆｒｅｅ：　Ｆ　）とを物理的に分離する
、いわゆるＢ／Ｆ分離操作の場となることもできる。

本発明の皿状の容器１の内底部２は実質的に平面であっ
て、この内底部２は、その平面と９０°〜１８０°の角
度で接する平面をもつ周縁部２０によって囲まれている
。

皿状の容器の大きざおよび形状は、小突起の集合体を任
意の数、適当な間隔で設けることができるものであれば
よく、あまり大きいと検体や試薬の使用量が大となり、
実質上不利となることから好ましくない。　容器の形状
が円形、楕円形、正方形の場合は、径または辺が２０ｍ
ｍないし３５ｍｍ程度、長方形の場合は１０１０ｍｍＸ
５０程度が適当であるが、これらに限定されるものでは
ない。

本発明の皿状の容器の材質としては、ガラス、プラスチ
ック、紙等が用いられるが、プラスチックが好ましく、
より具体的にはポリスチレン、ポリプロピレン、ポリア
クリル、ポリエステルが用いられる。　発色の程度の判
定が行ない易いように白色の材料を用いることも好まし
い。

本発明の皿状の容器は通常の可塑性材料の加工手段、例
えば射出成型、押出成型、プレス成型等によって製造す
ることができる。

皿状の容器１の内底部２の任意の位置には１個または複
数個の小突起の集合体３が設けられる。

この小突起の集合体は、各々の小突起から成り立ってい
る。

小突起の形状は円柱あるいは角柱が適当であるが、その
径あるいは辺の大きさは０．５ｍｍないし１ｍｍ程度で
あるのが好ましい。

また、小突起の高さは０．５ｍｍないし２ｍｍ程度であ
るのが好ましい。

小突起の間隔の大きさはこの小突起の間隔に液体を入れ
て傾斜させたり、逆さまにしたりあるいは軽く振って水
切りをした場合に、なお、小突起の間隔には液体が保持
されている程度の大きさが好ましい。

このような液体の保持は表面張力や毛細管現象により生
じるものと考えられるから、表面は張力や毛細管現象が
働く程度の大きさが好ましい。

しかし、あまり小さいと検体や試薬の小突起間隔への侵
入がスムーズに行なわれなかったり、Ｂ／Ｆ分離の際の
洗浄が十分に行われなかったりする不都合が生ずるので
そのような不都合の生じない程度の大きざが必要である
。

そのような大きさとしては、小突起間の距離が０．３ｍ
ｍないしｆｍｍ程度であるのが好ましい。

小突起の集合体の大きさは、あまり大きな集合体では少
量の検体で測定を行なうのに不都合なため、集合体の一
辺の大きさは２ｍｍないし５ｍｍ程度が好ましい。

また、小突起の集合体の形状も四角形の他に円形、六角
形等適宜の形状とすることができる。

隣接する小突起の集合体間の距離は、互いに隣接してい
る小突起の集合体に含まれている液体同士が混合しない
程度であればよい。

本発明の第２の態様の医療用検査容器１６は、第８ａ図
（平面図）および第８ｂ図（断面図）に１実施例を示す
ように、上記の皿状の容器！を２以上連続して配置して
なる構成を持つ、　このような構成とすれば、多数、多
種類の検査項目を混乱することなく検査するのに好適で
ある。

本発明の医療用検査容器は、前述の小突起の集合体の特
徴を利用して種々の特定物質の検出検査に用いることが
できる。

第１に、小突起の集合体が、１定量の検体や試料あるい
は試薬を量り取り、保持し、反応やＢ／Ｆ分離の場とな
ることができる性質を利用して、この検査容器外で検体
中の特定物質に対する抗原抗体反応等を行わせ、これを
この検査容器の小突起の集合体と接触させて１定量、量
り取り、次に酵素標識を有する抗体試薬と接触させて１
定量の標識試薬を量り取り、水洗等によりＢ／Ｆ分離を
行ったのち、酵素標識を有する抗抗体試薬をその小突起
の集合体と接触させて一定量の標識試薬を量り取り反応
を行わせ、再度水洗等によりＢ／Ｆ分離を行った後に酵
素の発色反応により検体中の特定物質の定量または判定
量測定を行うことができる。

このような検出検査は、本発明の容器を用いることによ
り、小さな容器でも小突起の集合体により反応の場の接
触面積が大きいので、少量の試料または試薬で短い反応
時間で検出反応を行うことができ、Ｂ／Ｆ分離操作が容
易であり、また試料または試薬を量り取る際にとベット
等の特定の器具を必要とせず、このような器具を用いる
ことにより試料、試薬のロスも少ない。

好ましくは、本発明の医療用容器は、小突起の集合体に
特定物資と選択的に結合または反応可能な物質を固定さ
せて用いるのが良い。

特定物質は、検体中に存在する検出すべき被測定物質で
あり、ＥＩＡに用いる抗体または抗原、特定のＤＮＡま
たはＲＮＡ断片、Ｅ。

Ｃｏｆｔ１等の微生物、グルコース等の生化学的物質が
ある。

特定物質と選択的に結合または反応可能な物質としては
、ＥＩＡに用いる抗原または抗体、特定のＤＮＡあるい
はＤＮＡ断片とハイブリット複合物を形成する相補的な
りＮＡあるいはＲＮＡ、Ｅ、ＣｏｆＬｉ等の特定の微生
物が繁殖する選択培地、グルコース等と反応する糖検出
試薬等があげられる。

特定物質と選択的に結合または反応可能な物質（選択的
結合物質）を小突起の集合体へ固定化させる手段は、従
来から用いられている化学的結合や物理的吸着法等が適
宜選択される。

また、特定物質と選択的結合物質との結合型（Ｂ）から
結合していない遊離型（Ｆ）を分離するＢ／Ｆ分敲分段
手段ては、通常生理食塩水での洗浄や水洗等の分離方法
が用いられる。

特定物質と選択的結合物質との結合型（Ｂ）の検出標識
としては、酵素、酵素に対する基質、発色剤、ラジオア
イソトープ、ビオチン等の後の測定系により発色をうな
がすことのできる発色前駆体、化学的呈色反応等が、特
定物質の種類や形態に応じて適切に選択される。

次に、本発明を図面を参照して具体的に説明する。

以下の説明では、抗原・抗体反応を利用するＥＩＡを例
として説明するが、本発明の医療用容器は、前述のよう
な検出反応に広く利用できるものであり以下の例に限定
されない。

第１図は、本発明の一実施例を示したもので、第１ａ図
は平面図、第１ｂ図は断面図である（以下、ａ図は平面
図、ｂ図および０図は断面図を示す。）。　本実施例は
、皿状の容器１の内底部２に９個の小突起の集合体３−
１ないし３−９を設けてなるものの例である。

内底部に設ける小突起の重合体の配置および数は、この
実施例ではマトリックス状に９個設けであるが、測定の
目的あるいは操作の便宜性を考慮して、任意に設定すれ
ばよい。　例　えば、検体、陽性対照および陰性対照の
三者について同時に反応を実施する場合は、３つの小突
起の集合体を有するものが有利である。

あるいは、階段的に希釈した標準標識としての標準品の
希釈系列と検体とについて同時に反応を実施し、測定す
べき検体の反応と標準品の反応とを比較して半定量を行
う場合には、容器１の中央付近に検体用の小突起の集合
体を設け、それを囲むように標準品希釈系列用の小突起
の集合体を設けるのが有利である。　例　えば、標準品
希釈系列用の小突起の集合体を正六角形の多角の位置に
配置し、その中心の位置に検体用の小突起の集合体を配
置するとか、扇形の弧の位置に標準品希釈系列用の小突
起の集合体を配置し、要の位置に検体用の小突起の集合
体を配置する。　この様に配置すると、検体と標準品希
釈系列との発色の程度の比較を正確に行えるので、半定
量の精度を向上させることができる。

第２ａ図および第２ｂ図は、容器１に検体用の小突起の
集合体４と標準品希釈系列用の小突起の集合体５−１な
いし５−５を扇形に配置したものの例である。　この容
器ｌを使用することにより、検体と標準品希釈系列とを
同時に測定し、発色の程度を比較できるので、より正確
な半定量を実施することができる。

第３ａ図および第３ｂ図は、検体用の小突起の集合体４
の他に陽性対照用小突起の集合体６と陰性対照用小突起
の集合体７を設けたものの例である。　陽性対照として
は、被測定物質と同一の物質、陰性対照としては被測定
物質とは免疫学的に交叉反応しない物質を使用する。

なお、図中に示すように皿状の容器１の一端に棒状の取
フ手８を固着してもよい。　こ　のような構成とすれば
洗浄操作等の際に便利である。

この取っ手８は、皿状の容器１に対して脱着可能の構成
とすることもできる。

第４ａ図および第４ｂ図は、小突起の集合体を「十ノ形
に配置した例である。　この実施例において、小突起の
集合体４−１、小突起の集合体４−２には被測定物質と
選択的に結合または反応する抗体または抗原を固定し、
小突起の集合体９−１ないし９−３には検体中に常に存
在する物質であって被測定物質とは免疫学的に交叉反応
しない物質の抗体または抗原を不溶化させておけば、被
測定物質が検体中に存在する場合は、小突起の集合体４
−１．４−２．９−１．９−２および９−３が発色し、
発色した小突起の集合体を連ねて見ると「＋」状に読め
、液体中に被測定物質が存在しない場合には小突起の集
合体９−１．９−２および９−３だけが発色して「−」
状に読めるように発色するので、測定の結果を表示する
ことになり、便利である。

また、皿状の容器１の内底部２には、溝１゜を設け、小
突起の集合体を洗浄した時の水切れを良くすることもで
きる。

このような溝１０は、好ましくは、小突起の集合体を囲
む外縁に設けるとよい。

第５ａ図、第５ｂ図および第５ｃ図は小突起の集合体を
「米」字形に配置した例である。

小突起の集合体４−１．４−２および９−１ないし９−
３は第４ａ図および第４ｂ図の例と同様に、それぞれ検
体用、対照用として使用する。　そして、これらよりや
や小さな４個の小突起の集合体１１−１ないし１１−４
は非特異的反応の確認用として、測定物質とは免疫学的
に交叉反応しない物質の抗体または抗原を結合させる。

もし、これらの非特異的反応の確認用の小突起の集合体
１１−１ない・し１１−４に発色があれば、洗浄操作が
不十分であるという非特異的反応が確認できる。

第６ａ図および第６ｂ図は、小突起の集合体３を１個有
する皿状の容器１からなる本発明の１実施例を示す。

第７ａ図および第７ｂ図は、容器１の形状を長方形とし
、複数個の小突起の集合体を一列に配置した例である。

　　１２−１ないし１２−５の各小突起の集合体に、一
つの検体中に存在する複数の被測定物質とそれぞれ結合
または反応する抗体または抗原をそれぞれ不溶化してお
けは、それらの複数の物質の存在を１回の測定操作で同
時に検出することができる。

第８ａ図および第８ｂ図は、本発明の第１の態様の１実
施例を示す医療用容器１５の皿状の容器１の形状を長方
形とし、これを５個連結して本発明の第２の態様の１実
施例を示す医療用容器１６とした例を示す。

容器１５を容器１６に対して取りはずし可能な構成とす
れば、容器１５の取りはずしが自由なため、多数の試料
を番号順や陽性陰性対照といった一定の順序で並べたり
、また途中で切り離して、容器１５または１６を運搬す
ることも可能である。

本発明の測定容器の使用法をヒト絨毛性ゴナドトロピン
（以下、ｈＣＧという）の定性的および半定量的測定法
を例に説明する。

ｈＣＧは、絨毛細胞で産生きれるホルモンであり、妊娠
や絨毛性疾患等の場合に血中および尿中に検出される。

　妊娠の場合には充分量のｈＣＧが産生分泌されるので
、尿中または血中のｈＣＧの有無を車に定性的に検知す
ればよい。　この場合、ｈＣＧが存在しない場合は反応
液は発色しないわけであるが、これが、ｈＣＧが存在し
ないためか、あるいは測定操作に誤りがあるためかを明
瞭にするため、すべてのヒトの血中および尿中に存在す
るβ２−ミクログロブリンをも同時に反応させれば、例
えｈＣＧが存在せずに発色しなくてもβ２−ミクログロ
ブリンの部位が発色（陰性対照用）し、測定の工程が確
実に行われたことを確認できる。　このような目的のた
めには第３ａ図および第３ｂ図に示した測定容器が適当
である。

一方、絨毛性疾患の術後の経過観察の場合には、尿中ま
たは血中に出現するｈＣＧの量を追跡する必要があり、
従来は複雑な工程を必要とする定量的測定法により行わ
れていた。　このような場合、第２ａ図および第２ｂ図
に示す容器を用い、ｈｃＧｏ、１０．２０．５０．１０
０ｍ１Ｕ／ｍｆＬの欅！！、　標識である各濃度の標準
品の希釈系列と検体とを同時に測定して発色の程度を比
較すれば、正確な半定量を簡単に実施することができる
。

〈実施例〉 以下に本発明を実施例によって具体的に説明する。

（実施例１）アレルゲン検査用酵素免疫測定用容器 第１ａ図および第１ｂ図に示した９個の小突起の集合体
を有する本発明の測定容器を用いた。　アレルギー疾患
患者の血清を、被測定物質を含む試料とし、被測定物質
と選択的に結合する物質として、ハウスダスト、ヤケヒ
ョウダニ、コナヒョウダニ、アスペルギルス、カンジダ
、すぎ花粉、ぶたくさ花粉、卵白およびミルクの抽出抗
原を選んだ。　これらの抽出抗原をそれぞれを０．０５
Ｍリン酸緩衝生理食塩液ｐＨ６，４（以下、ＰＢＳと略
す）に１００μｇ　／　ｍ　Ｉｔの濃度に溶解した溶液
を３−１な５ｓし３−９の各小突起の集合体に添加して
３７℃、１時間放置後、ＰＢＳで洗浄して、それぞれの
小突起の集合体に各抗原を不溶化したアレルゲン検査用
酵素免疫測定用容器を作製した。

アレルギー疾患患者の血清１０μｍを、各抗原を不溶化
した９個の小突起の集合体にそれぞれづつ添加し、さら
に、西洋ワサビペルオキシダーゼ（以下、酵素と略す）
で標識した抗ＩｇＥ抗体希釈液をそれぞれ５μｆｌ添加
して１０分間反応させた後、ＰＢＳで測定容器を洗浄し
た。　次に、過酸化水素水とテトラメチルベンジジン溶
液をそれぞれ５μ℃づつ添加し、５分後に青色の発色の
認められたものを陽性と判定した。　　１０例の患者に
ついて実施したところ、１例はハウスダストと、１例は
ハウスダストおよびヤケヒョウダニと、２例はヤケヒョ
ウダニと、４例はすぎ花粉と陽性反応を示した。　他の
２例はこの９種の抗原とは反応しなかった。

従来のアレルゲン検査は患者の皮膚に抗原を注射して行
うパッチテストや放射性同位元素を使用するＲＡＳＴな
ど緊雑な検査であったが、本発明の測定容器を使用する
ことによりアレルゲンの検査が簡単に実施できるように
なった。

（実施例２）妊娠検査用酵素免疫測定用容器第５ａ図、
第５ｂ図および第５Ｃ図に示した小突起の集合体を「米
」字形に配置した測定容器を用いた。　被測定物質を尿
中のｈＣＧとし、このものと選択的に結合する物質とし
て抗ｈＣＧ抗体を用いた。　４−１．４−２の２個の小
突起の集合体にＰＢＳで希釈した抗ｈＣＧ抗体を、９−
１ないし９−３の３個の小突起の集合体にＰＢＳで希釈
した抗β２−ミクログロブリン抗体を、１１−１ないし
１１−４の４個の小突起の集合体にＰＢＳで希釈したＩ
ｇＧをそれぞれ１００μｓ／ｍλの濃度で添加し、３７
℃、１時間放置後、ＰＢＳで洗浄した。　この測定容器
に、それぞれＰＢＳで希釈した酵素標識抗ｈＣＧ抗体と
酵素標識抗β２−ミクログロブリン抗体との混合物を皿
状の容器１内にｉｎｎ添加して凍結乾燥し、妊娠検査用
酵素免疫測定用容器を作製した。

妊婦１０例、非妊婦１０例のそれぞれについて、尿１ｍ
ｆＬを前記により製造した測定容器に検体として添加し
て２分間反応させた後水道水で１０秒間洗浄し、次いで
、過酸化水素水とテトラメチルベンジジン溶？夜をそれ
ぞれ５μ℃づつ添加し、１分後に青色の発色を観察した
。

妊婦１０例についてはいずれも４−１．４−２および９
−１ないし９−３の小突起の集合体が強く青色に発色し
、「妊婦」と判定されるとともに、発色した小突起の集
合体を連ねると「＋」と読めた。　非妊婦１０例につい
てはいずれも９−１ないし９−３の小突起の集合体のみ
が強く青色に発色して、「非妊婦」と判定されるととも
に、発色した小突起の集合体を連ねると「−」と読めた
。　このように、妊婦（＋）、非妊婦（−）の結果が、
発色した小突起の集合体を連ねて見ることにより「＋」
あるいは「−」と読むことができるので便利であった。

　　１１−１ないし１１−４の小突起の集合体は発色し
なかった。

前記と同様な操作によって、水道水による洗浄を５秒間
として行ったところ、非特異的反応の確認用である１１
−１ないし１１−４の小突起の集合体も弱く青色に発色
し、洗浄が不十分であることが確認された。

このように、妊娠により出現するｈＣＧと常に尿中に存
在するβ２−ミクログロブリンとを組み合わせることに
より、陽性、陰性の判定がより正確に行えた。　また、
非特異反応の確認を行えるので、熟練者でなくとも容易
に検査を実施できる。

（実施例３）腫瘍マーカー検査用酵素免疫測定用容器 被測定物質をＣＥＡ　（癌胎児抗原） ＡＦＰ　（α−フェトプロティン）、ｈＣＧ。

Ｓ　ＣＣ（５ｑｕａ［ｌ１ｏｕｓ　Ｃｅ１ｌ　Ｃａｒｃ
ｉｎｏｍａ　ｒｅｌａｔｅｄａｎｔｉｇｅｎ　）抗原お
よびフェリチンとし、これらと選択的に結合する物質と
して、これらの物質に対する抗体を用いた。

第７ａ図および第７ｂ図に示した５個の小突起の集合体
を有する測定容器を使用した。

ＣＥＡ、ＡＦＰ％　ｈＣＧ％ＳＣＣ抗原およびフェリチ
ンに対する抗体をそれぞれＰＢＳで１０μｇ　／　ｍ　
ｉの濃度に希釈し、この溶液を１２−１ないし１２−５
の小突起の集合体にそれぞれ添加して３７℃、１時間放
置後、ＰＢＳで洗浄した。

陰性、陽性のカットオフ値をＣＥＡ： ５　ｎ　ｇ　／　ｍ　ＪＺ、ＡＦＰ　：　２０ｎｇ／ｍ
ｕ。

ｈＣＧ　：　５ｍｌ　Ｕ／ｍｆｌ、ｓｃｃ抗原２　ｎ　
ｇ　／　ｍ　１２、フェリチン：１１００ｎ／ｍＪ２と
それぞれ定め、これに適した濃度に希釈した各々の酵素
標識抗体溶液を対応する１２−１ないし１２−５の小突
起の集合体に添加し小突起の間隙に保持させた。　この
状態で凍結乾燥を行い腫瘍マーカー検査用酵素免疫測定
用容器を作成した。

大腸癌、肝癌、肺癌、絨毛癌患者血清および健常人血清
の各１０例づつについてＬｉ［マーカーの存在を前述の
酵素免疫測定用容器を用いて検査した。　同−例の血清
を１２−１ないし１２−５の小突起の集合体に添加する
と毛細管現象により一定量の血清が量り取られた。

１０分間反応させた後、ＰＢＳで洗浄した。

次に過酸化水素水と０−フェニレンジアミン溶液をそれ
ぞれ５μ℃づつ添加し、２分後に黄褐色の発色の認めら
れたものを陽性と判定した。

大腸癌ではＣＥＡについて６／１０、フェリチンについ
て２／１０．肝癌ではＡＦＰについて８／１０、フェリ
チンについて５／１０、肺癌ではＣＥＡについて３／１
０、ＳＣＣ抗原について３／１０．絨毛癌患者ではｈＣ
Ｇについて１０／１０の陽性を示した。

従来は各々の抗原について定量値を求めていたが、本発
明の測定容器を使用することにより一度に複数の腫瘍マ
ーカーの存在を検査することができるようになり、スク
リーニング検査に有用である。

（実施例４）Ｂ型肝炎つィルス検査用容器第８ａ図およ
び第８ｂ図に示した２個の小突起の集合体を有する測定
容器が５ケ連結された検査容器を使用した。　Ｂ型肝炎
ウィルスＤＮＡに対応するＤＮＡ片の溶液を熱変性させ
５μｇ　／　ｍ　ｆｌの濃度に希釈し、この溶液を１３
−１ないし１３−１０の小突起の集合体にそれぞれ添加
して２５℃２４時間放薗した。

２４時間後ＤＮＡ溶液を吸引除去しＵＶランプを用いて
紫外線を３０分間照射した。　５ＳＣ（１０倍希釈）で
洗浄したのち使用まで保存した。

Ｂ型肝炎患者の血清よりＤＮＡを抽出し検体とした。　
Ｂ型肝炎マーカーがすべて陰性の健常人の血清よりＤＮ
Ａを抽出して陰性コントロールとした。　患者より抽出
したＤＮＡ５例を１３−１．３，５，７．９の小突起の
集合体に添加し、陰性コントロールを１３−２．４゜６
．８．１０に添加しハイブリダイゼーションを２４時間
行った。　ＳＳＣ（２倍希釈）で２回洗浄を行ったのち
、ビオチン標識したＢ型肝炎ウィルスのＤＮＡプルーブ
の溶液を０．０２ｕ　ｇ／ｍｆｌの濃度で１３−１ない
し１３−１０の小突起の集合体に添加した。　　６時間
静置したのち５ＳＣ（２倍希釈）で２回洗浄を行った。

　あらかじめ調製したアビジン・ビオヂン化ペルオキシ
ダーゼ結合体溶液を１００μｇ／　ｍ　Ｊ２の濃度で１
３−１ないし１３−１０の小突起の集合体に添加し１時
間静置した。

１時間後ＰＢＳで３回洗浄を行った。　洗浄終了後、過
酸化水素と０−フェニレンジアミン溶液をそれぞれ５μ
にづつ１３−１ないし１３−１０の小突起の集合体に添
加した。　　５分後に観察し陰性コントロール、より強
く発色している検体を陽性とした。

Ｂ型肝炎患者５例中１例が陽性と判定されたが、これは
ＨＢｅ抗原陽性と一致した。　ウィルスを直接的に証明
する事により強い感染性が証明できた。

（実施例５）尿中ブドウ糖検出容器 第７ａ図および第７ｂ図に示した５個の小突起の集合体
を有する容器を使用した。　ブドウ糖酸化酵素、ペルオ
キシダーゼ、ヨウ化カリウムの混合物を１２−１ないし
１２−５の小突起の集合体に添加した。　糖尿病患者尿
２例を１２−１．２の小突起の集合体に、健常人尿３例
を１２−３．４．５の小突起の集合体に添加した。　　
１２−１．２の小突起の集合体は空色から茶褐色へ変化
し陽性と判定した。　　１２−３．４．５の小突起の集
合体には顕著な色調の変化は認められず陰性と判定され
た。

（実施例６）尿中微生物検査容器 本発明を微生物検査に使用した場合を説明する。　微生
物検査は検体中の菌量の判定及び菌種の同定が主な目的
である。　菌量は菌の増殖を比色あるいは比濁で判定す
る事が多く、菌種の同定は選択培地を用いて行う事が普
通である。　これを目的にする培地はすでに開発されて
いる物を用いれば良い。

第１ａ図および第１ｂ図に示した９個の小突起の集合体
を有する容器を使用した。

３−１の小突起の集合体にＥ、ｃｏｌｉの選択培地を、
３−２の小突起の集合体にＣ、ｆｒｅｎｄｌｉの選択培
地を、３−３の小突起の集合体にに１ｅｂｓｉｅｌｌａ
／　Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒの選択培地を、３−４の
小突起の集合体に５ｅｒｒａｔｉａ　ｓｐの選択培地を
、３−５の小突起の集合体にＰｒｏｔｅｕｓ　ｓｐの選
択培地を、３−６の小突起の集合体にＰ。

ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの選択培地を、３−７の小突起の
集合体にＳ　、　ａｕｒｅｕｓの選択培地を、３−８の
小突起の集合体にＧｒｏｕｐ　Ｄ、Ｅｎｔｅｒｏｃｃｕ
ｓの選択培地を、３−９の小突起の集合体にＹｅａｓｔ
の選択培地を添加した。　この容器に尿路感染症患者の
尿を０．５ｍｉ加え３−１ないし３−９の小突起の集合
体に接触させた。　接触後すみやかに尿を吸引除去し１
２時間培養を行った。　　３−１の小突起の集合体に細
菌の増殖が観察されＥ、ｃｏｌｉによる感染症であると
判定された。

（実施例７） 第２ａ図および第２ｂ図に示す本発明の測定容器を製造
した。

容器の材質としてポリスチレンを使用した。

また、本容器は射出成形によって、下記の大きさおよび
形状となるように製造した。

３ｃｍの楕円形 小突起の集合体の個数　　　　　６ 小突起の集合体の大きさ　２．５　ｍｍｘ　２．５　ｍ
ｍ小突起の形状　　　　　　　円　　柱 小突起の径　　　　　　　　０．５　ｎ＋ｎ＋小突起の
高さ　　　　　　　１　ｍｍ 小突起の間隙の大きさ　　　０．５　ｍｍこの容器を使
用して、実際にｈＣＧの測定用として妊娠検査及び絨毛
癌検査用酵素免疫測定容器を作製した。

以下に、測定容器の作製法を記載する。

被測定物質は、試料中のｈＣＧであり、このｈＣＧと選
択的に結合する物質として抗ｈＣＧ抗体を用いた。

抗ｈＣＧ抗体をＰＢＳで１００μｇ／ｍｊ２の濃度とな
るように希釈し、こめ溶液を５μｌ小突起の集合体上に
添加した。３７℃、１時間放誼後、ＰＢＳで洗浄を行っ
た。　この小突起の集合体上にＰＢＳで希釈した酵素標
識（ペルオキシダーゼ）抗ｈＣＧ抗体を各５μｆｔ添加
し、凍結乾燥を行うことにより測定用容器を得た。

ｈＣＧの測定は、次のように行った。　まず、尿５μ℃
を被測定物質検出用の小突起の集合体に、また残された
５つの小突起の集合体には、あらかじめ用意しておいた
ＯｍＩＵ／ｍｕ〜２００　ｍ　Ｉ　Ｕ　／　ｍ　１１の
５段階のｈ　ＣＧ　濃度の標準品を、低濃度から高儂度
なるように順番に添加した。　　２５℃、３分反応させ
、次に、過酸化水素水とテトラメチルベンジジン溶液を
それぞれ３μβづつ添加し、２分後の青色の発色を観察
した。　被測定物質の濃度は、５段階の標準品と比較し
て最も発色強度の近いものから、半定量的にきめた。　
結果を表１に示した。

（比較例１） 持田製薬株式会社製造のＥＩＡ法によるキットを用い、
実用例７で使用したと同様の尿について測定を行い、結
果を表１に示した。

（比較例２） 持田製薬株式会社製造の血球凝集反応法のキットを用い
、実施例７で使用したと同様に尿について測定を行い結
果を表１に示した。

第１表 比較項目 測定感度 測定数 所要時間 測定値 測定機器 実施例７　　比較例１　　比較例２ ５ｍ１Ｕ／＋＋ｌ　　　　５ｍ１Ｕ／ｍｕ　　　　５ｍ
ＩＵ／ｍＪ２１点　　　１点　　　５点 ５分　　　　３０分　　　　２時間 半定量値 不　　要 定量値 必　　要 半定量値 不　　要 表から明らかなように、同一の感度で比較した場合、定
量値と半定量値との違いはあるものの、本発明の容器を
使用した場合は測定所要時間の大幅な短縮、所要検体量
が少量で済むなど簡易迅速性に富み、測定機器も不要で
あるなどの利点を有している。

また、さらに、本発明の容器のみで抗原抗体反応、Ｂ／
Ｆ＋離操作、酵素反応、結果の判定等の一連の操作を実
施できるので、未熟練者でも簡単に酵素免疫測定法を実
施することができる。　小突起の集合体の数や配置を工
夫することにより、単なる定性的測定のみならず、標準
品の希釈系列を用いた比較測定の実施も可能であり、酵
素免疫測定法の利点を生かした測定法を簡便、かつ、正
確に実施することができる。

〈発明の効果〉 本発明の医療用検査容器は実質的に平面に近い内底部を
有する皿状の容器であって、この容器の内底面に被測定
物質あるいは対照物質等と選択的に結合または反応の可
能な物質を不溶化するための任意の数の小突起の集合体
を設けたものである。　このような構成とすることによ
リ、本発明の測定容器は、実質的に平面に近い底部と、
その底部に設けた小突起の集合体よりなっているので、
被測定物質を含んでいる試料や被測定物質を測定するた
めの試薬を各々の小突起の集合体にピペット等で１つ１
つ加えたり、Ｂ／Ｆ分離の際の洗浄を１つ１つ行う必要
はなく、検体や洗浄液を測定容器全体に加えれば、全て
の小突起の集合体に一挙に添加され、あるいは洗浄され
るので、操作が素早く、簡便にできる。　勿論、必要に
応じて各々の小突起の集合体に１つ１つ検体や試薬を添
加することもできる。

また、測定容器全体の大きさも小さく、反応の場である
小突起の集合体は更に小さいので、検体や試薬あるいは
不溶化する被測定物質と選択的に結合または反応の可能
な物質の使用量が少なくて済み、実用上有利である。

さらに、結合または反応の場である小突起の集合体が小
さいので、その容量に対する表面積の比が比較的大とな
り、そのため、小突起の集合体の表面に不溶化さてれい
る上述の選択的結合物質と試料中の被測定物質との結合
または反応の速度あるいは引きつづいておこる測定反応
が促進される結果、測定時間が大幅に短縮される。

本発明の医療用検査容器は、ＥＩＡだけでなく　ＤＮＡ
ハイブリッド複合複合酸形成ＮＡハイブリッド複合複合
酸形成用した試薬や、微生物検査および生化学的検査の
できる物質を保持することができ、広範囲な医療用検査
に適用できる。

【図面の簡単な説明】

第１ａ図、第２ａ図、第３ａ図、第４ａ図、第５ａ図、
第６ａ図、第７ａ図および第８ａ図は、それぞれ本発明
の医療検査容器の好適な実施例を示す平面図である。 第１ｂ図、第２ｂ図、第３ｂ図、第４ｂ図、第６ｂ図、
第７ｂ図および第８ｂ図は、それぞれ第１ａ図、第２ａ
図、第３ａ図、第４ａ図、第６ａ図、第７ａ図および第
８ａ図のＢ−Ｂ線断面図である。 第５ｂ図、第５ｃ図は、それぞれ第５ａ図のＸ−Ｘ線、
Ｙ−Ｙ線断面図である。 １５．１６・・・医療用検査容器、 ２０・・・周縁部 符号の説明 １・・・皿状の容器、　　　２・・・内底部、３・・・
小突起の集合体、 ４・・・測定物質用の小突起の集合体、５・・・標準標
識である標準品の希釈系列用の小突起の集合体、 ６・・・陽性対照用の小突起の集合体、７・・・陰性対
照用の小突起の集合体、８・・・取っ手、 ９・・・検体中に常に存在する物質用の小突起の集合体
、 １０・・・溝、 １１・・・非特異的反応確認用の小突起の集合体、１２
・・・小突起の集合体、 １３・・・小突起の集合体、 同

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. （１）実質的に平面に近い内底部を有する皿状の容器で
   あって、該内底部の任意の位置に１個または複数個の小
   突起の集合体を設けてなることを特徴とする医療用検査
   容器。
2. （２）実質的に平面に近い内底部を有する２以上の皿状
   の容器を連続して配置してなる検査容器であって、前記
   内底部の任意の位置に１個または複数個の小突起の集合
   体を設けてなることを特徴とする医療用検査容器。
3. （３）前記小突起の集合体に特定物質と選択的に結合ま
   たは反応可能な物質を固定させてなる請求項１または２
   に記載の医療用検査容器。
4. （４）前記特定物質が測定操作の指標物質である請求項
   ３記載の医療用検査容器。
5. （５）前記特定物質と選択的に結合または反応可能な物
   質が、抗体または抗原である請求項３または４に記載の
   医療用検査容器。
6. （６）前記特定物質と選択的に結合または反応可能な物
   質が、ＤＮＡまたはＲＮＡである請求項３または４に記
   載の医療用検査容器。
7. （７）前記特定物質と選択的に結合または反応可能な物
   質が、選択培地である請求項３または４に記載の医療用
   検査容器。
8. （８）前記特定物質と選択的に結合または反応可能な物
   質が、生化学的反応に関与する物質である請求項３また
   は４に記載の医療用検査容器。