JPH09159673A - マイクロプレート - Google Patents
マイクロプレートInfo
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- JPH09159673A JPH09159673A JP32331695A JP32331695A JPH09159673A JP H09159673 A JPH09159673 A JP H09159673A JP 32331695 A JP32331695 A JP 32331695A JP 32331695 A JP32331695 A JP 32331695A JP H09159673 A JPH09159673 A JP H09159673A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 免疫反応反応物が吸着しやすいマイクロプレ
ートの開示 【解決手段】固相法による抗原抗体反応を行う反応ウェ
ル３が多数形成されたマイクロプレート１において，反
応ウェル３の各々は，その底面部と側面部との少なくと
もいずれかにレリーフ模様６を有することを特徴とする
マイクロプレート。
ートの開示 【解決手段】固相法による抗原抗体反応を行う反応ウェ
ル３が多数形成されたマイクロプレート１において，反
応ウェル３の各々は，その底面部と側面部との少なくと
もいずれかにレリーフ模様６を有することを特徴とする
マイクロプレート。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は，固相法と呼ばれる
酵素免疫反応検査において，固相担体に抗原抗体反応の
反応物を固定するためのマイクロプレートに関する。
酵素免疫反応検査において，固相担体に抗原抗体反応の
反応物を固定するためのマイクロプレートに関する。
【０００２】
【従来の技術】従来から，生化学或いは医療等の分野で
は免疫反応を利用した分析手法が用いられている。特
に，ガン性蛋白質の検出や血中薬物の定量等ではこの免
疫反応を利用した分析手法により，非常に有用な臨床デ
ータが得られている。
は免疫反応を利用した分析手法が用いられている。特
に，ガン性蛋白質の検出や血中薬物の定量等ではこの免
疫反応を利用した分析手法により，非常に有用な臨床デ
ータが得られている。
【０００３】近時，この免疫反応を利用する分析方法の
うち，抗原抗体反応における結合物を固相表面に吸着さ
せて微量の抗原物質や抗体物質を精度良く分析測定する
免疫分析法（固相法）が注目されている。
うち，抗原抗体反応における結合物を固相表面に吸着さ
せて微量の抗原物質や抗体物質を精度良く分析測定する
免疫分析法（固相法）が注目されている。
【０００４】この固相法では，放射性同位体，蛍光物質
若しくは酵素などにより標識をつけた免疫反応用の試料
及び試薬を，透明なプラスチック容器のウェルといわれ
る反応凹部に分注して免疫反応を行わせ，免疫反応によ
り抗原抗体の結合したものを固相上に吸着固定させる。
反応と未反応物の分離は洗浄によって容易に行うことが
でき，固相表面上に固定された免疫反応物に含まれる抗
原若しくは抗体は，標識物質の化学修飾させたものを発
色させることにより定量出来る。
若しくは酵素などにより標識をつけた免疫反応用の試料
及び試薬を，透明なプラスチック容器のウェルといわれ
る反応凹部に分注して免疫反応を行わせ，免疫反応によ
り抗原抗体の結合したものを固相上に吸着固定させる。
反応と未反応物の分離は洗浄によって容易に行うことが
でき，固相表面上に固定された免疫反応物に含まれる抗
原若しくは抗体は，標識物質の化学修飾させたものを発
色させることにより定量出来る。
【０００５】これまでは，反応容器を形成する素材とし
ては，ポリスチレンを軸に各種プラスチック素材にガン
マ線照射の物理処理を行うことや，化学的に官能基を導
入することで特異吸着を多量に固定して反応性向上を行
ってきた（特開昭６２−２４２６５７号，特開昭５９−
８０４４２号，特開昭４８−７３０３号等の特許公開公
報参照）。
ては，ポリスチレンを軸に各種プラスチック素材にガン
マ線照射の物理処理を行うことや，化学的に官能基を導
入することで特異吸着を多量に固定して反応性向上を行
ってきた（特開昭６２−２４２６５７号，特開昭５９−
８０４４２号，特開昭４８−７３０３号等の特許公開公
報参照）。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】ところで，この固相法
においては，反応用容器の固相表面に多量の抗原又は抗
体が安定性良く吸着させることが重要である。
においては，反応用容器の固相表面に多量の抗原又は抗
体が安定性良く吸着させることが重要である。
【０００７】しかし，このようなマイクロプレートのウ
ェルは，吸光度測定のために，底面部は透明かつ平滑で
あることが重要であるが，検査装置の関係からマイクロ
プレートのウェルの平面形状は円形に画一化されてかつ
底面が平滑であるため，表面積が十分とはいえない。
ェルは，吸光度測定のために，底面部は透明かつ平滑で
あることが重要であるが，検査装置の関係からマイクロ
プレートのウェルの平面形状は円形に画一化されてかつ
底面が平滑であるため，表面積が十分とはいえない。
【０００８】本発明は，抗原抗体反応の反応物が固相表
面に特異吸着し易い傾向に鑑みてなされたものであり，
従来の固相法による免疫測定用容器の固相特異吸着性を
改善して反応性を向上させるために，表面積を拡大する
形状及び構造のマイクロプレートを開示することを目的
とする。
面に特異吸着し易い傾向に鑑みてなされたものであり，
従来の固相法による免疫測定用容器の固相特異吸着性を
改善して反応性を向上させるために，表面積を拡大する
形状及び構造のマイクロプレートを開示することを目的
とする。
【０００９】
【課題を解決するための手段】上記課題を解決するため
に，本発明の請求項１にかかるマイクロプレートは，試
料・試薬などを分注して固相法による抗原抗体反応を行
う反応ウェルが多数形成されたマイクロプレートにおい
て，各反応ウェルの少なくとも底面部にレリーフ加工が
施されていることを特徴とする。
に，本発明の請求項１にかかるマイクロプレートは，試
料・試薬などを分注して固相法による抗原抗体反応を行
う反応ウェルが多数形成されたマイクロプレートにおい
て，各反応ウェルの少なくとも底面部にレリーフ加工が
施されていることを特徴とする。
【００１０】抗原又は抗体の結合したものはウェルの光
透過性よりも底面に多く吸着するため，吸光度測定に支
障のない底面部の面積を確保するとともに，現状の検査
装置で使用できる範囲において，微細な凹凸を設けるこ
とによって底面部の表面積を拡大した構造とする。
透過性よりも底面に多く吸着するため，吸光度測定に支
障のない底面部の面積を確保するとともに，現状の検査
装置で使用できる範囲において，微細な凹凸を設けるこ
とによって底面部の表面積を拡大した構造とする。
【００１１】また，免疫反応物を特異吸着させる素材に
は，ポリスチレンやポリカーボネート，ポリエチレン，
ポリプロピレン，トリメチルペンテン樹脂，ポリメタク
リレート樹脂等があるが，本発明のマイクロプレート
は，比色測定を行うセルを兼ねているため，特に透明性
が必要である。そこで，ポリスチレン，ポリカーボネー
ト，ポリアクリルニトリルスチレン共重合体等が適して
いる。
は，ポリスチレンやポリカーボネート，ポリエチレン，
ポリプロピレン，トリメチルペンテン樹脂，ポリメタク
リレート樹脂等があるが，本発明のマイクロプレート
は，比色測定を行うセルを兼ねているため，特に透明性
が必要である。そこで，ポリスチレン，ポリカーボネー
ト，ポリアクリルニトリルスチレン共重合体等が適して
いる。
【００１２】上述の素材を用いたマイクロプレートの反
応ウェルは８×１２の配列に形成され，各反応ウェルの
形状は円筒状である。マイクロプレートは，射出成形で
製造する際の成型品の抜き勾配のため，反応ウェルは開
口部の直径よりも底部の直径が小さい。通常反応ウェル
の内径は開口部６．５ｍｍ，底面部６．１５ｍｍで深さ
１１．４ｍｍとされている。
応ウェルは８×１２の配列に形成され，各反応ウェルの
形状は円筒状である。マイクロプレートは，射出成形で
製造する際の成型品の抜き勾配のため，反応ウェルは開
口部の直径よりも底部の直径が小さい。通常反応ウェル
の内径は開口部６．５ｍｍ，底面部６．１５ｍｍで深さ
１１．４ｍｍとされている。
【００１３】ここで，ウェルの底面積を吸光度測定に支
障なく最大にするために，底面部のないプレートを射出
成形で行い，底面部は０．５ｍｍ程度のポリスチレンシ
ートを好ましくは深さ１μｍ以下、幅２μｍ以下のロー
ルエンボス加工して底面部のないプレートの底部にヒー
トプレスで接着する。更に，このプレートに低温プラズ
マ処理（２５０ｗ〜１Ｋｗ，真空度１ｔｏｒｒ以内）や
紫外線処理（２００ｎｍ〜３００ｎｍ），ガンマ線処理
（１ｋＧｙ以上）等により，＞Ｃ＝Ｏ官能基を５％以内
導入する手段を併用することでマイクロプレートの感度
向上が更に期待できる。
障なく最大にするために，底面部のないプレートを射出
成形で行い，底面部は０．５ｍｍ程度のポリスチレンシ
ートを好ましくは深さ１μｍ以下、幅２μｍ以下のロー
ルエンボス加工して底面部のないプレートの底部にヒー
トプレスで接着する。更に，このプレートに低温プラズ
マ処理（２５０ｗ〜１Ｋｗ，真空度１ｔｏｒｒ以内）や
紫外線処理（２００ｎｍ〜３００ｎｍ），ガンマ線処理
（１ｋＧｙ以上）等により，＞Ｃ＝Ｏ官能基を５％以内
導入する手段を併用することでマイクロプレートの感度
向上が更に期待できる。
【００１４】本発明の請求項１〜請求項３のマイクロプ
レートによれば，底面部にレリーフ加工をすることによ
り，底面部の面積を吸光度測定に支障なく広げることを
可能とした。また，カルボニル基＞Ｃ＝Ｏの官能基導入
により，吸着性をアップすることが出来た。これによ
り，検査感度の向上と精度アップがはかれた。また，場
合により抗原や抗体の濃度が低くても十分な感度が得ら
れることが判明した。また，側面部にレリーフ模様６に
形成しても良い。
レートによれば，底面部にレリーフ加工をすることによ
り，底面部の面積を吸光度測定に支障なく広げることを
可能とした。また，カルボニル基＞Ｃ＝Ｏの官能基導入
により，吸着性をアップすることが出来た。これによ
り，検査感度の向上と精度アップがはかれた。また，場
合により抗原や抗体の濃度が低くても十分な感度が得ら
れることが判明した。また，側面部にレリーフ模様６に
形成しても良い。
【００１５】
【実施例１】 (1)図１は，本実施例のマイクロプレートの構造を示
す。このマイクロプレート１は，マイクロプレートの板
状部分２（ウェル同士をつなぐ部分）を形成する射出成
形金型において，ウェル３の底面部が底を抜いた円錐台
形状となるように，ウェル３の周壁部分４を形成する。
す。このマイクロプレート１は，マイクロプレートの板
状部分２（ウェル同士をつなぐ部分）を形成する射出成
形金型において，ウェル３の底面部が底を抜いた円錐台
形状となるように，ウェル３の周壁部分４を形成する。
【００１６】(2)その射出成形金型にポリスチレン樹脂
を用いて射出成形を行うと，図１に示すように，板状部
分２に開口部の口径が底面部側の口径より大きな円錐台
形状部のウェル３の周壁部４が９×１２個の配列で形成
される。
を用いて射出成形を行うと，図１に示すように，板状部
分２に開口部の口径が底面部側の口径より大きな円錐台
形状部のウェル３の周壁部４が９×１２個の配列で形成
される。
【００１７】(3)厚さ０．５ｍｍのポリスチレン（Ｐ
Ｓ）シートを展開し，深さ０．５μｍ、幅１μｍのロー
ルエンボス加工によりシート表面にレリーフ模様６を形
成する（図２）。このレリーフ模様６の平面形状として
は同心円形状のほかに波状や縞状のものなどがある。
Ｓ）シートを展開し，深さ０．５μｍ、幅１μｍのロー
ルエンボス加工によりシート表面にレリーフ模様６を形
成する（図２）。このレリーフ模様６の平面形状として
は同心円形状のほかに波状や縞状のものなどがある。
【００１８】(4)図３に示すように先に射出したマイク
ロプレート１のウェル３の底部開口部１５に，レリーフ
処理したポリスチレンシート５を加熱溶着する（図
３）。図４はその完成品を示す。ここで，マイクロプレ
ートのストリップも同様の方法で成形される。
ロプレート１のウェル３の底部開口部１５に，レリーフ
処理したポリスチレンシート５を加熱溶着する（図
３）。図４はその完成品を示す。ここで，マイクロプレ
ートのストリップも同様の方法で成形される。
【００１９】(5)次に，このマイクロプレート１にて，
免疫反応試験を行った。この試験において，マイクロプ
レート１のウェル３には，ｈＣＧ捕捉抗体（Ｍｏｕｓｅ
ＩｇＧ）の濃度が１μｇ／ｍＬ，５μｇ／ｍＬ，１０μ
ｇ／ｍＬ，２５μｇ／ｍＬに区別されるように，リン酸
バッファー調製液を調製した。各濃度のリン酸バッファ
ー調整液をそれぞれ１つのウェルあたり，２００μＬ／
ウェル塗布した。塗布したマイクロプレートは４°Ｃで
１昼夜放置した。
免疫反応試験を行った。この試験において，マイクロプ
レート１のウェル３には，ｈＣＧ捕捉抗体（Ｍｏｕｓｅ
ＩｇＧ）の濃度が１μｇ／ｍＬ，５μｇ／ｍＬ，１０μ
ｇ／ｍＬ，２５μｇ／ｍＬに区別されるように，リン酸
バッファー調製液を調製した。各濃度のリン酸バッファ
ー調整液をそれぞれ１つのウェルあたり，２００μＬ／
ウェル塗布した。塗布したマイクロプレートは４°Ｃで
１昼夜放置した。
【００２０】(6)マイクロプレートの放置により，ｈＣ
Ｇ捕捉抗体がウェル底部に吸着しているので，上澄み液
を捨てる。上澄み液を廃棄したマイクロプレートを洗浄
する。この洗浄にはｔｗｅｅｎ２０（関東化学（株）製
の界面活性剤＝ポリオキシエチレンソルビタレモノラウ
レート（しょ糖脂肪酸エステル））を０．０１％含有さ
せた純水液を用いた。洗浄回数は３回であった。
Ｇ捕捉抗体がウェル底部に吸着しているので，上澄み液
を捨てる。上澄み液を廃棄したマイクロプレートを洗浄
する。この洗浄にはｔｗｅｅｎ２０（関東化学（株）製
の界面活性剤＝ポリオキシエチレンソルビタレモノラウ
レート（しょ糖脂肪酸エステル））を０．０１％含有さ
せた純水液を用いた。洗浄回数は３回であった。
【００２１】(7)洗浄後，ｈＣＧ捕捉抗体が吸着したウ
ェル内にブロッキング液（カゼイン２５％）を２５０μ
Ｌ／ウェル分注して２時間以上室温放置する。
ェル内にブロッキング液（カゼイン２５％）を２５０μ
Ｌ／ウェル分注して２時間以上室温放置する。
【００２２】(8)ブロッキング液を捨てて再度３回洗浄
する。
する。
【００２３】(9)抗原（ＨＣＧ）の添加を行って免疫反
応を行う。４．０ｎｇ／ｍＬの試験用バッファーで調製
したものを２００μＬ／ウェル分注して４°Ｃで２時間
以上反応させる。
応を行う。４．０ｎｇ／ｍＬの試験用バッファーで調製
したものを２００μＬ／ウェル分注して４°Ｃで２時間
以上反応させる。
【００２４】(10)上澄み除去後(4)行程と同様の洗浄を
４回繰り返し，抗ｈＣＧ抗体ＨＲＰ（ペルオキシダー
ゼ）の標識溶液を２００μＬ／ウェル分注して１．５時
間反応させる。この抗ｈＣＧ抗体ＨＲＰの標識溶液に
は，リン酸バッファ０．２％を含むＴｗｅｅｎ２０を
０．１モル濃度含まれる。
４回繰り返し，抗ｈＣＧ抗体ＨＲＰ（ペルオキシダー
ゼ）の標識溶液を２００μＬ／ウェル分注して１．５時
間反応させる。この抗ｈＣＧ抗体ＨＲＰの標識溶液に
は，リン酸バッファ０．２％を含むＴｗｅｅｎ２０を
０．１モル濃度含まれる。
【００２５】(11)再度上澄みを除去した後，洗浄を３回
繰り返す。
繰り返す。
【００２６】(12)発色基質テトラメチルベンジレン（Ｔ
ＭＢ）溶液２０ｍｌに過酸化水素５μＬ調製したものを
２０μＬ／ウェル分注して発色１時間室温放置する。
ＭＢ）溶液２０ｍｌに過酸化水素５μＬ調製したものを
２０μＬ／ウェル分注して発色１時間室温放置する。
【００２７】(13)２規定の硫酸５０μＬを添加して反応
を停止し，４５０ｎｍの光学濃度ＯＤ値を吸光光度計で
測定し，表−１に示す結果を得た。なお，ＯＤ値は，半
透明物質の不透明の程度を示す値であり，入射光Ｉ0と
透過光Ｉとの比率Ｉ0／Ｉの対数Ｌｏｇ（Ｉ0／Ｉ）で示
される。
を停止し，４５０ｎｍの光学濃度ＯＤ値を吸光光度計で
測定し，表−１に示す結果を得た。なお，ＯＤ値は，半
透明物質の不透明の程度を示す値であり，入射光Ｉ0と
透過光Ｉとの比率Ｉ0／Ｉの対数Ｌｏｇ（Ｉ0／Ｉ）で示
される。
【００２８】
【実施例２】 (1)実施例１においては図５に示すようにウェル８を四
角形にし，底面部９にレリーフ１０を加工したマイクロ
プレートを作成した。
角形にし，底面部９にレリーフ１０を加工したマイクロ
プレートを作成した。
【００２９】(2)実施例１の(5)行程乃至(13)行程と同様
に免疫反応処理を行い，結果を表１に示す。
に免疫反応処理を行い，結果を表１に示す。
【００３０】
【実施例３】 (1)実施例３では，図６に示すように，実施例２のウェ
ル６の側面部１１にもマット処理したマイクロプレート
を形成した。
ル６の側面部１１にもマット処理したマイクロプレート
を形成した。
【００３１】(2)実施例１の(5)行程乃至(13)行程と同様
に免疫反応処理を行い，結果を表１に示す。
に免疫反応処理を行い，結果を表１に示す。
【００３２】
【実施例４】 (1)実施例４では，実施例３のマイクロプレートを窒素
雰囲気下で低温プラズマ処理を行った。真空度１Ｔｏｒ
ｒ，マイクロ波出力５００Ｗを２基発振させて約１０秒
間処理した。
雰囲気下で低温プラズマ処理を行った。真空度１Ｔｏｒ
ｒ，マイクロ波出力５００Ｗを２基発振させて約１０秒
間処理した。
【００３３】(2)実施例１の(5)行程乃至(13)行程と同様
に免疫反応処理を行い結果を表１に示した。
に免疫反応処理を行い結果を表１に示した。
【００３４】
(1)比較例として，図７に示すような円筒状のウェル１
２を有し，ウェル１２の側面部１３及び底面部１４が平
滑なポリスチレン樹脂製のマイクロプレートを成形し
た。
２を有し，ウェル１２の側面部１３及び底面部１４が平
滑なポリスチレン樹脂製のマイクロプレートを成形し
た。
【００３５】(2)実施例１の(5)行程乃至(13)行程と同様
に処理を行った。表１に結果を示す。
に処理を行った。表１に結果を示す。
【００３６】
【表１】
【００３７】
【発明の効果】本発明の固相免疫反応測定用のマイクロ
プレートは，底面部の表面積が顕著に拡大化されて抗原
若しくは抗体反応物の固相吸着性に優れるため，感度の
高い免疫学的分析結果が得られることから，特に，医療
検査において抗原等の早期発見が可能となり，免疫反応
に起因する症状の治療の確率が高くなる。底部の周辺部
や側壁部などにレリーフ加工を行いつつ，底部の透明性
を維持することにより，反応物の光学濃度測定も十分に
行うことができる。
プレートは，底面部の表面積が顕著に拡大化されて抗原
若しくは抗体反応物の固相吸着性に優れるため，感度の
高い免疫学的分析結果が得られることから，特に，医療
検査において抗原等の早期発見が可能となり，免疫反応
に起因する症状の治療の確率が高くなる。底部の周辺部
や側壁部などにレリーフ加工を行いつつ，底部の透明性
を維持することにより，反応物の光学濃度測定も十分に
行うことができる。
【図１】本発明の実施例１の一体型マイクロプレートの
完成品の斜視図
完成品の斜視図
【図２】本発明の実施例１のマイクロプレートの底面部
のレリーフ加工面の拡大図
のレリーフ加工面の拡大図
【図３】本発明の実施例１のマイクロプレートのウェル
の製造工程を示す説明図
の製造工程を示す説明図
【図４】本発明の実施例１のマイクロプレートのウェル
の形状を示す図
の形状を示す図
【図５】本発明の実施例２のマイクロプレートのウェル
の形状を示す図
の形状を示す図
【図６】本発明の実施例３のマイクロプレートのウェル
の形状を示す図
の形状を示す図
【図７】比較例のマイクロプレートのウェルの形状を示
す図
す図
１ マイクロプレート ２ 板状部分 ３ ウェル ４ 側壁部 ５ 底部 ６ 模様
Claims (3)
- 【請求項１】固相法による抗原抗体反応を行う反応ウェ
ルが多数形成されたマイクロプレートにおいて，前記反
応ウェルの各々は，少なくともその底面部にレリーフ加
工が施されていることを特徴とするマイクロプレート。 - 【請求項２】請求項１のマイクロプレートにおいて，前
記ウェルの底面部はロールエンボスレリーフ加工したシ
ートにより成形され，前記ウェルの底面部以外は射出成
形により成形され，この射出成形部分と前記シートとが
固着されて前記底面部にレリーフ加工が行われているこ
とを特徴とするマイクロプレート。 - 【請求項３】請求項１乃至請求項２のいずれかのマイク
ロプレートにおいて，カルボニル基（＞Ｃ＝Ｏ）が５％
以内導入されていることを特徴とするマイクロプレー
ト。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP32331695A JPH09159673A (ja) | 1995-12-12 | 1995-12-12 | マイクロプレート |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP32331695A JPH09159673A (ja) | 1995-12-12 | 1995-12-12 | マイクロプレート |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09159673A true JPH09159673A (ja) | 1997-06-20 |
Family
ID=18153436
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP32331695A Pending JPH09159673A (ja) | 1995-12-12 | 1995-12-12 | マイクロプレート |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH09159673A (ja) |
Cited By (15)
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|---|---|---|---|---|
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| JP2006345807A (ja) * | 2005-06-17 | 2006-12-28 | Toppan Printing Co Ltd | 反応チップ |
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-
1995
- 1995-12-12 JP JP32331695A patent/JPH09159673A/ja active Pending
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