JPH0968532A - マイクロプレート - Google Patents

マイクロプレート

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JPH0968532A
JPH0968532A JP22388595A JP22388595A JPH0968532A JP H0968532 A JPH0968532 A JP H0968532A JP 22388595 A JP22388595 A JP 22388595A JP 22388595 A JP22388595 A JP 22388595A JP H0968532 A JPH0968532 A JP H0968532A
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JP
Japan
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well
microplate
antibody
antigen
side wall
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JP22388595A
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English (en)
Inventor
Kiichiro Hirose
喜一郎 広瀬
Toshio Mitsuma
敏夫 三津間
Takatoshi Touno
高利 東野
Naoki Takanashi
直樹 高梨
Taeko Morimoto
妙子 森本
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S R L KK
Toppan Inc
Original Assignee
S R L KK
Toppan Printing Co Ltd
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Publication date
Application filed by S R L KK, Toppan Printing Co Ltd filed Critical S R L KK
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Abstract

(57)【要約】 【目的】 抗原もしくは抗体の吸着特性に優れ,感度の
高い免疫学的分析結果が得られるマイクロプレートの開
示 【構成】 反応用凹部となるウェル3の底部5の平面形
状を四角形としたことを特徴とするマイクロプレート

Description

【発明の詳細な説明】
【0001】
【産業上の利用分野】本発明は,酵素免疫反応による病
理診断のための固相免疫測定検査用治具に関するもの
で,前記反応と検出とを兼用するマイクロプレートと呼
ばれる成形品に関する。
【0002】
【従来の技術】近年,医学の幅広い分野で免疫反応を利
用した分析手法が取り入れられている。この分析手法は
ガン性蛋白質の検出や血中薬物の定量等に用いられてお
り,有用な臨床データが得られている。
【0003】この免疫反応を利用する方法には,抗原抗
体反応を利用して微量の抗原物質を精度良く分析測定す
る免疫分析法,特に固相抗体を用いる免疫分析法が注目
されている。
【0004】固相抗体を用いる免疫分析法は,固相上に
抗原もしくは抗体を固定し,ラジオアイソトープ,蛍光
性物質もしくは酵素などの標識物を結合させた抗体もし
くは抗原と,抗原抗体反応を行わせる。反応と未反応物
の分離は洗浄によって容易に行うことができ,固相表面
上に抗原抗体反応によって固定された抗原もしくは抗体
は,標識物質の定量によって定量できる。
【0005】ところで,この方法では抗原もしくは抗体
を固相に多量に且つ安定性良く,反応性部位が上向きに
なるように吸着(特異吸着)させることが重要である。
【0006】これまでは,固相としてポリスチレンを軸
とする各種プラスチック素材に,ガンマ線等の物理処理
を行うこと,あるいは化学的に官能基を導入するなど
で,特異吸着を多量に固定して反応性向上を図ってき
た。(特開昭62−242857,特開昭59−804
42号,特開昭48−7303号公報。)
【0007】
【発明が解決しようとする課題】しかし,上述のマイク
ロプレートは射出成形で成形されており,ウェルの平面
形状は円筒状であり,底部ほど円の直径は小さくなって
いるため,また,多くのプレートのサイズは検査装置と
の関係により内径6.5mmφ程度の円形であるため,
反応部位の面積が小さくなる問題があった。
【0008】本発明の目的は,従来の固相免疫測定用成
形品の固相特異吸着性改善において,反応性を従来より
高める方法及びプレート形状を提案することにある。
【0009】
【課題を解決するための手段】本発明は,抗原または抗
体が,ウェルの側面より底面により多く吸着すると予想
されるため,底面の面積拡大を試みた。マイクロプレー
トには96穴のウェルが形成され,このウェルは8×1
2の格子状に9mmピッチで配列されている。このピッ
チにおいてウェルの底面の面積を最大にするため,ウェ
ルを四角柱状に改善した。ここで角部にRの面取りを設
けると,洗浄などの効率が向上する。
【0010】また,抗原・抗体の吸着に関し,ウェルの
側壁部表面が平滑であると,抗原・抗体等の試薬あるい
は試料等が滑り落ちてしまうが,側壁部表面に凹凸があ
れば物理的にこれらが保持されると予想されるため,ウ
ェルの側壁部表面をマット状に処理により粗面化し,改
善した。
【0011】更に,抗原や抗体を特異吸着させる素材に
は,ポリスチレンやポリカーボネート,ポリエチレン,
ポリプロピレン,トリメチルペンテン樹脂,ポリメタク
リレート樹脂がある。このうち,本発明のマイクロプレ
ートの場合は,比色測定を行うセルを兼ねているため,
特に透明性が必要である。そこで,ポリスチレン,ポリ
カーボネート,ポリアクリロニトリルスチレン共重合体
が適している。
【0012】更に,このような基材物質からなるマイク
ロプレートのウェルの底部あるいは側面に,「低温プラ
ズマ処理(250W〜1KW,真空度1.0torr以
内)」,あるいは「紫外線処理(200〜300nm)
で数秒以上」,あるいは「ガンマ線処理(1kGy以
上)」等の処理によって−C−O−基を官能基として5
%以内導入することによって,マイクロプレートにおけ
る抗原抗体反応の検査感度を向上できる。
【0013】
【作用】本発明の請求項1乃至3のマイクロプレートで
は,ウェルの底面の面積を広げることや側壁部のマット
処理により,抗体や抗原が底部や側壁部に特異吸着しや
すくなり,更に請求項4のマイクロプレートでは−C−
O−結合の官能基導入により吸着性をアップすることが
できた。
【0014】これにより,検査感度の向上と精度アップ
ができた。また,抗原や抗体の濃度が低くても十分な感
度が得られることが判明した。併用効果も十分期待でき
る。
【0015】
【実施例】以下,本発明の実施例にかかるマイクロプレ
ートを図面に基づいて説明する。
【0016】<実施例1>図1は本実施例のマイクロプ
レートであり,このマイクロプレートの射出成形用金型
を作成するに当たり,四角柱型の金型を製作した。この
金型に透明なポリスチレン樹脂を用いて射出成形を行っ
た。マイクロプレート1の平面部2には,図1に示した
ように,深さ11mmで底6.15mm角(37.82
mm2)の正方形筒状のウェル3が多数(例えば8×1
2=96箇所)形成されている。前後左右の隣合うウェ
ル3,3同士の間隔は9mmピッチである。マイクロプ
レート1においては,図2に示すように,ウェル3の側
壁部4或いは底部5の肉厚と平面部2の肉厚とがほぼ等
しく,且つ平面部2並びにウェル3の側壁部4,底部5
は無着色のガラスのように透明であり,着色されていな
い。ウェル3の開口縁部3aは平面部2の上方に少し膨
らんでいる。
【0017】このマイクロプレート1により次のような
試験を行う。
【0018】洗浄乾燥したマイクロプレート1のウェ
ル2に,hCG捕捉抗体を濃度調製した燐酸バッファ調
製液を塗布して,4°Cにて1昼夜放置した。 塗布し
た燐酸バッファ調製液は,hCG捕捉抗体(Mouse
IgG)が,複数種類の濃度(1μg/ml,5μg
/ml,10μg/ml,25μg/ml)となるよう
に調製されており,1ウェルあたり200μlの割合で
塗布されている。なお,hCGは,ヒト絨毛性ゴナドト
ロピンであり,Mouse IgGは,マウスのモノク
ロナール抗体を示す。
【0019】1昼夜放置後,上澄み液を捨ててマイク
ロプレートウォッシャでtween20(関東化学
(株)製の界面活性剤=ポリオキシエチレンソルビタレ
モノラウレート(しょ糖脂肪酸エステル))を0.01
%含有の純水にて3回洗浄する。
【0020】純水による洗浄後,固定用粘着液として
のブロッキング液(大日本製薬株式会社製商品名「ブロ
ックエース」)を1ウェルあたり250μl分注して2
時間以上室温にて放置する。2時間放置後,ブロッキン
グ液を捨ててマイクロプレート1を3回洗浄する。
【0021】マイクロプレート1の洗浄後,抗原(h
CG)の添加を行う。4.0ng/mlのassay用
バッファー(評価分析用バッファー)で調製したものを
1ウェルあたり200μl分注して4°Cで2時間以上
反応させる。
【0022】上澄み除去後,同様tween20を
0.01%含有した純水による洗浄を4回繰り返し,抗
hCG抗体HRP(ペルオキシダーゼ)の0.1M リ
ン酸バッファー(PB) 0.2% Tween20を
含む標識溶液を1ウェルあたり200μl分注して1.
5時間反応させる。
【0023】再度上澄みを除去し,洗浄を3回繰り返
す。
【0024】発色基質のテトラメチルベンジレン(T
MB)溶液20ml+過酸化水素5μl調製したものを
1ウェルあたり200μl分注して発色させ,1時間室
温放置する。
【0025】2Nの硫酸50μlを添加して反応を停
止させ,波長450nmの可視光によるOD値(光学濃
度)を吸光光度計で測定した。表1に結果を示す。な
お,OD値は,半透明物質の不透明の程度を示す値であ
り,入射光I0と透過光Iとの比率I0/Iの対数Log
(I0/I)で示される。
【0026】<実施例2>実施例2では,マイクロプレ
ート1を作成するに当たり,ウェル2の形状を実施例1
同様の四角形状とし,ウェル2内の側壁部3表面をマッ
ト処理により,スリガラス状に粗面化し,微少な凹凸を
形成した。マイクロプレート1の素材はポリスチレン樹
脂である。ウェル2の配列は実施例1と同様である。
【0027】実施例2のマイクロプレート1により,実
施例1の工程ないし工程と同様の処理を行った。結
果を表1に示す。
【0028】<実施例3>実施例3では,ポリスチレン
樹脂でプレート成形を行った。実施例3のマイクロプレ
ート1は,ウェル2の形状を実施例1同様の四角形状と
し,ウェル2内の側壁部3表面をマット処理により,ス
リガラス状に粗面化し,微少な凹凸を形成した。ウェル
2の配列は実施例1と同様である。実施例3のマイクロ
プレート1を窒素雰囲気下で低温プラズマ処理を行っ
た。この低温プラズマ処理においては,真空度1Tor
rでマイクロ波出力300Wを2基発振させて10秒処
理した。次に,実施例3のマイクロプレート1につき,
実施例1の工程ないし工程と同様の処理を行った。
結果は表1の通りである。これによりプレート表面をE
SCA(X線光電子分光法)により観察したところカル
ボニル基−C−O−結合の官能基が2.8%であった。
【0029】<比較例1>次に,比較例を示す。比較例
1のマイクロプレート6は,図3に示すように,ポリス
チレン樹脂でプレート成形され,円筒状のウェル7を有
する。この比較例1のマイクロプレートにつき,実施例
1の工程ないし工程と同様の処理を行った。結果を
表1に示す。
【0030】
【表1】 表1に示すように,実施例1,2のマイクロプレート
は,抗体コート濃度が1μg/mlでは入射光L0と透過光
Lとの比率log(L0/L)が1以下であるが,実施例3で
は抗体コート濃度が1μg/mlでも比率が1.3であり,
抗体がマイクロプレートに吸着されていることがわか
る。比較例では,抗体コート濃度が1μg/mlのとき0.
3であるので吸着がなされていない。比較例では抗体コ
ート濃度が5μg/mlのときにlog(L0/L)が1である
が,この抗体コート濃度の下で実施例1,2,3のいず
れも,1.5,2.0,2.3という数値を示してお
り,比較例より顕著に吸着率が向上していることがわか
る。従って,実施例1〜3のマイクロプレートによれ
ば,抗原もしくは抗体の吸着特性に優れ,感度が高くな
り,精度の高い免疫学的分析結果が得られることから,
医療検査においてガンなどの早期発見を促進できると共
に,高価な試料や試薬等の使用量を減量化できるので,
極めて有益な効果を奏する。
【0031】比較例2では実施例と同様にプレートに低
温プラズマ処理を施した。このプラズマ処理の条件は真
空度1torr,出力500W2基,発振時間1分以上
とした。この比較例によれば,−C−O−官能基は12
%であった。
【0032】
【発明の効果】本発明のマイクロプレートは,抗原もし
くは抗体の吸着特性に優れ,感度の高い免疫学的分析結
果が得られることから,医療検査においてガンなどの早
期発見が可能で,治療の確率が高くなる。
【図面の簡単な説明】
【図1】本発明の実施例のマイクロプレートの平面図
【図2】図1のマイクロプレートの断面図
【図3】比較例のマイクロプレートの平面図
【符号の説明】
1 マイクロプレート 2 平面部 3 ウェル 4 側壁部 5 底部
フロントページの続き (72)発明者 東野 高利 東京都台東区台東1丁目5番1号凸版印刷 株式会社内 (72)発明者 高梨 直樹 東京都立川市曙町二丁目41番19号株式会社 エスアールエル内 (72)発明者 森本 妙子 東京都立川市曙町二丁目41番19号株式会社 エスアールエル内

Claims (4)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】検査試料を収納する反応用凹部となるウェ
    ルが多数配列形成され,各ウェルの底部の平面形状が四
    角形であることを特徴とするマイクロプレート。
  2. 【請求項2】検査試料を収納する反応用凹部となるウェ
    ルが多数配列形成され,各ウェルの底部の面積が29m
    2乃至43mm2であることを特徴とするマイクロプレ
    ート。
  3. 【請求項3】透明材料により形成され,前記ウェルの側
    壁部が粗面化されていることを特徴とするマイクロプレ
    ート
  4. 【請求項4】請求項1乃至3のマイクロプレートにおい
    て,−C−O−結合を5%以内有することを特徴とする
    マイクロプレート。
JP22388595A 1995-08-31 1995-08-31 マイクロプレート Pending JPH0968532A (ja)

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JP22388595A JPH0968532A (ja) 1995-08-31 1995-08-31 マイクロプレート

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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2004501359A (ja) * 2000-05-05 2004-01-15 エラン ファーマシューティカルズ,インコーポレイテッド カルボニル基でコーティングした固相反応体を使用するガングリオシドに対する抗体の検出
JP2004505261A (ja) * 2000-07-27 2004-02-19 アテナ ダイアグナスティクス,インコーポレイテッド カルボニル基でコーティングされた固相反応材を使用するスフィンゴ糖脂質に対する抗体の検出
WO2022202378A1 (ja) * 2021-03-26 2022-09-29 富士フイルム株式会社 検査用カートリッジ

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JP2004505261A (ja) * 2000-07-27 2004-02-19 アテナ ダイアグナスティクス,インコーポレイテッド カルボニル基でコーティングされた固相反応材を使用するスフィンゴ糖脂質に対する抗体の検出
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Effective date: 20040608