JP2017502653A - マイクロチャンバープレート - Google Patents
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Abstract
Description
前記リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応法は、前記ポリメラーゼ連鎖反応後に電気泳動過程を必要とせず、ポリメラーゼ連鎖反応を行うと同時に反応した産物を定量的に測定して試料内部の各々の特定塩基配列を持つ遺伝子の濃度を109以上の範囲で決定できる利点がある(“A−Z of Quantitative PCR” edited by Stephen A.Bustin 2004−2006 International University,“Realtime PCR” edited by M.Tevfik Dorak 2006 Taylor & Francis Group)。
本発明に係るマイクロチャンバープレートの製造方法は
(a)マイクロチャンバー本体の上側面303に流動性フィルム200を付着させる段階と、
(b)ブロー成形を介して各マイクロチャンバーホールの側面302と流動性フィルム200を付着させると同時にマイクロチャンバーホールの下側面305に流動性フィルム200を形成して、マイクロチャンバーホール301を形成する段階と、
(c)マイクロチャンバー本体の上側面303の流動性フィルム200とマイクロチャンバー本体密閉部500を融着させる段階と、を含むことを特徴とする。
前記マイクロチャンバープレートの製造方法において、マイクロチャンバー本体300、流動性フィルム200、マイクロチャンバー本体密閉部500等は、先述したような技術的特徴を持つ。
1.1 マイクロチャンバー本体300の準備
マイクロチャンバー本体内部に一定空間、すなわちマイクロチャンバーホール301が形成されるように一定の厚さのSUS(Stainless Steel)をエッチングしてマイクロチャンバー本体300を準備した。マイクロチャンバー本体300を形成するSUS(Stainless Steel)の厚さは1mmで、チャンバーホール301は径1.2mm〜1.9mmであり、各々のチャンバーホール301は、2.25mm間隔で個別プレート当たり最大768個まで形成される。チャンバーホール301の径及び各々のチャンバーホール301の間の間隔は容易に調節が可能である。
前記流動性フィルム200は、ポリエチレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリプロピレン、ポリメチルメタクリレート及びポリカーボネートで選択された一つまたは二以上が組み合わされて使用可能で、成形が可能な透明なフィルムはいずれも使用可能である。以下、キャスト流動性フィルム200としてポリプロピレン(Cast Polypropylene)フィルム(韓国、栗村(ユルチョン)化学GCP、60μm)を使用した実施例を挙げて説明する。
マイクロチャンバー本体に前記実施例1.2のように流動性フィルム200を付着させた後、170〜270℃の温度で加熱しながら、真空(−20kPa〜−100kPa)または加圧(1〜2kgf/cm2)するブロー成形を介してマイクロチャンバーホールの側面302とマイクロチャンバーの下側面304に流動性フィルム200を形成した。この時、真空及び加圧印可時にはリーク(leak)が発生しないように密閉した。ブロー成形が完了後1時間が経過した時、冷水を利用して成形機構物を冷却させて、成形機構物から流動性フィルムが成形されたマイクロチャンバー本体を分離した。マイクロチャンバー本体に成形された流動性フィルムの余分をマイクロチャンバー本体に合うようにカットした。
前記マイクロチャンバー本体に形成された各マイクロチャンバーホール301の内部に核酸分析のための特異成分400を各々分注した。前記特異成分400は、各々のプライマーまたはプローブを含む。特異成分400の分注は、専用の試料分注機を利用して行われ、反応のために計算された濃度の試料が各マイクロチャンバーホール301当たり1〜2μLずつ同時に分注された。分注された特異成分400は、マイクロチャンバーホール301からの離脱を防止するために、80〜90℃のオーブンで5分間乾燥させた。
前記各々異なる特異成分が内蔵されたマイクロチャンバーホール301を含むマイクロチャンバー本体300に試料注入部800が形成されたマイクロチャンバー本体密閉部500を付着した。前記マイクロチャンバー本体密閉部500は、厚さ10〜200μmのアルミニウム、ステンレススチール、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリカーボネート、PMMA、ポリスチレン、ナイロン、ポリウレタンなどのフィルム形態であるか、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリカーボネート、PMMA、ナイロン、PTFE、PVDFなどの多孔性膜または金属であってもよい。
マイクロチャンバー本体密閉部500に形成された試料注入部800を介して試料を各マイクロチャンバーホール301に真空注入する過程を詳細に説明する。この時用いられる試料は、各マイクロチャンバーホール301毎に異なってもよく、一部または全部のマイクロチャンバーホールに同じ試料が注入されてもよい。
前記実施例2で製造されたマイクロチャンバープレートを利用して、ポリメラーゼ連鎖反応を行って、その結果から本発明のマイクロチャンバープレートで遺伝子増幅が可能であることを確認した。
図4及び図5を参照して本発明にマイクロチャンバープレートの使用方法を説明する。本発明に係るマイクロチャンバープレートは、マイクロチャンバープレート収容部5000に受容できる。マイクロチャンバープレート収容部5000は、平らな板状に形成されることができる。マイクロチャンバープレート収容部5000は、試料注入用マイクロチャンバープレート4000を安置させるためのものである。図面符号‘5100’は、マイクロチャンバープレート収容部5000が多数個一体で形成されたマイクロチャンバープレート収容部モジュールを示す。一方、マイクロチャンバープレート収容部モジュール5100の側面には収容部締結突起5200が突出形成される。図4の図面符号‘3100’は、マイクロチャンバープレート収容部蓋3000が互いに連結されて多数個形成されたマイクロチャンバープレート収容部蓋モジュールを示す。
200 流動性フィルム
300 マイクロチャンバー本体
301 マイクロチャンバーホール
302 マイクロチャンバーホールの側面
303 マイクロチャンバー本体の上側面
304 マイクロチャンバー本体の下側面
305 マイクロチャンバーホールの下側面
400 生物学的物質分析のための特異成分
500 マイクロチャンバー本体密閉部
600 接着性コーティング層
700 試料
701 気泡
800 試料注入部
1000 ケース蓋
1100 ケース蓋モジュール
1200 ケース蓋貫通孔
2000 締結ケース
2100 締結ケースモジュール
2200 締結ケース貫通孔
2300 締結ケース締結溝
3000 マイクロチャンバープレート収容部蓋
3100 マイクロチャンバープレート収容部蓋モジュール
3200 切開線
4000 マイクロチャンバープレート
4100 マイクロチャンバープレートモジュール
5000 マイクロチャンバープレート収容部
5100 マイクロチャンバープレート収容部モジュール
5200 マイクロチャンバープレート収容部締結突起
Claims (28)
- マイクロチャンバー本体300と、前記マイクロチャンバー本体300の上側面303に提供されたマイクロチャンバー本体密閉部500と、を含み、生物学的物質分析のための特異成分が内蔵できるマイクロチャンバーホール301が形成されているマイクロチャンバープレートにおいて、マイクロチャンバー本体の下側面304の一部または全部が、流動性フィルム200で構成されていることを特徴とする前記マイクロチャンバープレート。
- 前記流動性フィルム200は、マイクロチャンバー本体の上側面303でマイクロチャンバーホールの側面302を経て、マイクロチャンバーホール301の下側面305にまで延びて形成されていることを特徴とする請求項1に記載のマイクロチャンバープレート。
- マイクロチャンバー本体の上側面303に流動性フィルム200を付着させて、ブロー成形した後、マイクロチャンバー本体密閉部500をマイクロチャンバー本体の上側面303に密着させて製造されたことを特徴とする請求項1に記載のマイクロチャンバープレート。
- 前記流動性フィルム200は、加熱、真空もしくは加圧、または加熱、真空及び加圧によってマイクロチャンバー本体300に付着していることを特徴とする請求項1に記載のマイクロチャンバープレート。
- 前記流動性フィルム200は、真空もしくは加圧、または真空及び加圧によって試料を供給する場合、垂れる現象が発生して、試料注入部800から試料が供給されることが可能となり、そして、真空及び加圧を解除する場合に、垂れる現象が緩和されて余分の試料またはマイクロチャンバーホール301内に含まれている残存気泡701が、試料注入部800を介してマイクロチャンバーホールの外部に流出することを特徴とする請求項1に記載のマイクロチャンバープレート。
- 流動性フィルム200とマイクロチャンバー本体300との間にまたは流動性フィルム200とマイクロチャンバー本体密閉部500との間に、密着のための接着フィルム100が追加的に含まれることを特徴とする請求項1に記載のマイクロチャンバープレート。
- 前記流動性フィルム200は、光学測定のための透明性を持つことを特徴とする請求項1に記載のマイクロチャンバープレート。
- 前記流動性フィルム200は、ポリエチレン、ポリエチレンテレフタレート、延伸または非延伸されたポリプロピレン、ポリカーボネート、PMMA及びこれらのコポリマー中から選択された材質からなることを特徴とする請求項7に記載のマイクロチャンバープレート。
- 前記マイクロチャンバー本体密閉部500には、各マイクロチャンバーホール301当たり一つ以上の試料注入部800が形成されていることを特徴とする請求項1に記載のマイクロチャンバープレート。
- 前記マイクロチャンバー本体300は、金属または高分子フィルムからなることを特徴とする請求項1に記載のマイクロチャンバープレート。
- 前記マイクロチャンバー本体密閉部500は、気孔の大きさ0.2〜5.0μmの多孔性膜材質からなることを特徴とする請求項1に記載のマイクロチャンバープレート。
- 前記各試料注入部800は、各マイクロチャンバーホール全体面積対比0.05%〜60%の面積を持つことを特徴とする請求項9に記載のマイクロチャンバープレート。
- 前記マイクロチャンバー本体密閉部500は、流動性フィルム200に熱融着、レーザ融着及び接合剤コーティングから選択された一つ以上の方法を介して付着していることを特徴とする請求項2に記載のマイクロチャンバープレート。
- 前記マイクロチャンバー本体300の表面は、ポリエステル系高分子樹脂及びポリエチレン系ホットメルト接着剤の中から選択された一つ以上の物質によってコーティングされていることを特徴とする請求項1に記載のマイクロチャンバープレート。
- (a)マイクロチャンバー本体の上側面303に流動性フィルム200を付着させる段階と、
(b)ブロー成形を介して各マイクロチャンバーホールの側面302と流動性フィルム200を付着させると同時にマイクロチャンバーホールの下側面305に流動性フィルム200を形成して、マイクロチャンバーホール301を形成する段階と、
(c)マイクロチャンバー本体の上側面303の流動性フィルム200とマイクロチャンバー本体密閉部500を融着させる段階と、を含むことを特徴とするマイクロチャンバープレートの製造方法。 - 前記(b)段階と(c)段階との間に、(b’)各マイクロチャンバーホール301に生物学的物質分析のための特異成分400を注入する段階をさらに含むことを特徴とする請求項15に記載のマイクロチャンバープレートの製造方法。
- 前記(b)段階のブロー成形は、100〜300℃の温度で行われることを特徴とする請求項15に記載のマイクロチャンバープレートの製造方法。
- 前記(a)段階での流動性フィルム200とマイクロチャンバー本体300との間にまたは流動性フィルム200とマイクロチャンバー本体密閉部500との間に、密着のための接着フィルム100が追加的に含まれることを特徴とする請求項15に記載のマイクロチャンバープレートの製造方法。
- 前記流動性フィルム200は、光学測定のための透明性を持つことを特徴とする請求項15に記載のマイクロチャンバープレートの製造方法。
- 前記流動性フィルム200は、ポリエチレン、ポリエチレンテレフタレート、延伸または非延伸されたポリプロピレン、ポリカーボネート、PMMA及びこれらのコポリマー中から選択された材質からなることを特徴とする請求項19に記載のマイクロチャンバープレートの製造方法。
- 前記マイクロチャンバー本体密閉部500には、各マイクロチャンバーホール301当たり一つ以上の試料注入部800が形成されていることを特徴とする請求項15に記載のマイクロチャンバープレートの製造方法。
- 前記マイクロチャンバー本体密閉部500は、金属または高分子フィルムからなることを特徴とする請求項15に記載のマイクロチャンバープレートの製造方法。
- 前記マイクロチャンバー本体密閉部500は、気孔の大きさ0.2〜5.0μmの多孔性膜材質からなることを特徴とする請求項15に記載のマイクロチャンバープレートの製造方法。
- 前記各試料注入部800は、各マイクロチャンバーホール全体面積対比0.05%〜60%の面積を持つことを特徴とする請求項15に記載のマイクロチャンバープレートの製造方法。
- 前記(c)段階での前記マイクロチャンバー本体密閉部500は、流動性フィルム200に熱融着、超音波融着及び接合剤コーティングから選択された一つ以上の方法を介して付着していることを特徴とする請求項15に記載のマイクロチャンバープレートの製造方法。
- 前記マイクロチャンバー本体300の表面は、ポリエステル系高分子樹脂及びポリエチレン系ホットメルト接着剤の中から選択された一つ以上の物質によってコーティングされていることを特徴とする請求項15に記載のマイクロチャンバープレートの製造方法。
- 前記(c)段階後に、(d)試料700注入段階及び(e)試料注入部800密封段階をさらに含むことを特徴とする請求項15に記載のマイクロチャンバープレートの製造方法。
- 試料注入部800の密封は、高分子フィルム、オイル、シリコン、パラフィン及び接着剤からなる群で選択される一つ以上の物質を利用して行われることを特徴とする請求項27に記載のマイクロチャンバープレートの製造方法。
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