CN109030818A - 一种酶免疫检测板及其检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种酶免疫检测板及其检测方法，用于酶免疫检测，酶免疫检测板包括微孔板本体，微孔板本体的一端面向内第一次凹陷形成一第一凹槽，第一凹槽具有沿其延伸方向相对设置的第一侧壁和第二侧壁，第一凹槽，的底面包括若干个凹陷区以及非凹陷区，每个凹陷区向内第二次凹陷形成底面平行于端面的微孔，相邻微孔为非凹陷区所隔绝，相邻两个微孔之间的非凹陷区上设置有一锥形结构，每个微孔被其附近的锥形结构所围合，或每个微孔被其附近的锥形结构以及第一凹槽的侧壁所围合，锥形结构的锥顶位于远离非凹陷区的方向上，且锥顶位于第一平面下方，第一平面为端面所在的平面。简化了检测工作的操作步骤，适用于基层医疗单位使用，可以提高工作效率。
Description
技术领域
本发明属于酶免疫分析技术领域，涉及一种酶免疫检测板及其检测方法。
背景技术
酶免疫吸附检测法是一项具有灵敏度高、重复性好的检测技术，现有技术中的酶免疫检测一般需要在聚苯乙烯材质的微孔板上进行，每个微孔作为食物抗原或食物抗体的固相载体，也是小型的免疫生化反应器，酶免疫检测需要专业人员采用微量移液枪向每个微孔内按步骤分别向每个微孔定量加入血样或样品稀释液、洗涤液、酶接物和显色剂等检测试剂，导致耗时和增加了工作量，降低了工作效率，在基层医疗单位，当一个血样需要进行多项检测并同时需要进行多份血样的高灵敏度检测时，这些繁琐的检测工作会大大降低工作效率，因此，市场上需要一种既能简化操作步骤又能满足酶免疫吸附检测法的技术要求的检测装置。
发明内容
本发明的目的在于提供一种酶免疫检测板及其检测方法，以解决现有技术中的酶免疫吸附检测的操作步骤繁琐导致工作效率低的问题的问题。
为解决上述技术问题，本发明提供了一种酶免疫检测板，用于酶免疫检测，包括微孔板本体，所述微孔板本体的一端面向内第一次凹陷形成一第一凹槽，所述第一凹槽具有沿其延伸方向相对设置的第一侧壁和第二侧壁，所述第一凹槽的底面包括若干个凹陷区以及非凹陷区，每个所述凹陷区向内第二次凹陷形成底面平行于所述端面的微孔，相邻所述微孔为所述非凹陷区所隔绝，相邻两个所述微孔之间的非凹陷区上设置有一锥形结构，每个所述微孔被其附近的所述锥形结构所围合，或每个所述微孔被其附近的所述锥形结构以及所述第一凹槽的侧壁所围合；
所述锥形结构的锥顶位于远离所述非凹陷区的方向上，且所述锥顶位于所述第一平面下方，所述第一平面为所述端面所在的平面。
优选地，所述第一侧壁和所述第二侧壁平行，或者所述第一次凹陷沿其凹陷方向形成一扩口形凹槽，所述扩口形凹槽的扩口位于远离所述微孔的底面的方向上。
优选地，所述第一凹槽的非凹陷区所在的平面平行于所述第一平面。
优选地，所述微孔的尺寸一致且其以阵列的形式均匀分布在所述微孔板本体上。
优选地，所述微孔为圆孔，且其数量为2-100个，且其直径为1-10mm，且其凹陷深度为0.1-10mm，相邻两个所述微孔的圆心距为6-12mm。
优选地，所述锥形结构为棱锥。
优选地，所述锥形结构的锥顶到所述微孔的底面的距离相等。
优选地，所述锥形结构沿垂直于其延伸方向的截面的尺寸一致。
优选地，所述锥形结构沿垂直于其延伸方向的截面形状为等腰三角形，且所述等腰三角形的中心线垂直于所述端面。
优选地，所述第一凹槽上靠近所述微孔板本体的一端面的一端沿垂直于所述微孔板本体的一端面的方向向外延伸形成一扩口结构，所述扩口结构的扩口位于远离所述端面的方向上，且所述扩口结构上靠近其扩口的一端沿所述微孔板本体的一端面方向向外延伸形成一外沿，所述外沿和所述扩口结构向内凹陷形成第二凹槽，所述第二凹槽的槽底与所述第一凹槽的非凹陷区连接，且所述第二凹槽的延伸方向与所述第一凹槽的延伸方向之间的夹角为锐角。
本发明还提供了一种酶免疫的检测方法，采用上述的酶免疫检测板，至少包括以下步骤：
S1：在所述酶免疫检测板的所述微孔内包被抗原或抗体；
S2：将样品加入到所述酶免疫检测板内，且所述样品的液面没过所述锥形结构的锥顶，并位于所述端面以下，孵育设定时间；
S3：倾去经过所述S2处理后的所述微孔内的液体，清洗后，将酶接物加入到所述酶免疫检测板内，且所述酶接物的液面没过所述锥形结构的锥顶，并位于所述端面以下，孵育设定时间后倾去；
S4：清洗后，将显色剂加入到所述酶免疫检测板内，抖动后，且所述显色剂的液面位于所述锥形结构的锥顶以下，孵育设定时间。
优选地，所述第一凹槽上靠近所述微孔板本体的一端面的一端沿垂直于所述微孔板本体的一端面的方向向外延伸形成一扩口结构，所述扩口结构的扩口位于远离所述端面的方向上，且所述扩口结构上靠近其扩口的一端沿所述微孔板本体的一端面方向向外延伸形成一外沿，所述外沿和所述扩口结构向内凹陷形成第二凹槽，所述第二凹槽的槽底与所述第一凹槽的非凹陷区连接，且所述第二凹槽的延伸方向与所述第一凹槽的延伸方向之间的夹角为锐角；
所述S2具体包括：将样品加入到所述第二凹槽内，并使所述样品铺满每个所述微孔的底面；
所述S3具体包括：将酶接物加入到所述酶免疫检测板内，并使所述酶接物铺满每个所述微孔的底面。
优选地，所述样品为人体标本和样品稀释液的混合液，所述清洗操作采用洗涤液，且所述人体标本和所述样品稀释液的混合液、所述洗涤液、所述酶接物及所述显色剂通过所述第二凹槽加入，且所述洗涤液的液面没过所述锥形结构的锥顶，并位于所述端面以下。
优选地，所述人体标本为全血、血清、唾液、尿液、泪液或汗液，所述显色剂为TMB显色试剂或化学发光试剂，所述TMB显色试剂为TMB显色剂或盐酸型TMB显色剂。
与现有技术相比，本发明提供了一种酶免疫检测板及其检测方法，用于酶免疫检测，所述酶免疫检测板包括微孔板本体，所述微孔板本体的一端面向内第一次凹陷形成一第一凹槽，所述第一凹槽具有沿其延伸方向相对设置的第一侧壁和第二侧壁，所述第一凹槽的底面包括若干个凹陷区以及非凹陷区，每个所述凹陷区向内第二次凹陷形成底面平行于所述端面的微孔，相邻所述微孔为所述非凹陷区所隔绝，相邻两个所述微孔之间的非凹陷区上设置有一锥形结构，每个所述微孔被其附近的所述锥形结构所围合，或每个所述微孔被其附近的所述锥形结构以及所述第一凹槽的侧壁所围合，所述锥形结构的锥顶位于远离所述非凹陷区的方向上，且所述锥顶位于所述第一平面下方，所述第一平面为所述端面所在的平面，所述第一侧壁和第二侧壁用于提供样品及检测试剂的进入所述酶免疫检测板的入口，所述锥形结构用于防止相邻所述微孔中的所述显色剂相互流动，从而无需每孔定量加入，大大简化了检测工作的操作步骤，适用于基层医疗单位使用，可以提高工作效率，此外，还提高了显色结果的准确性。
所述酶免疫的检测方法包括按步骤向本发明提供的一种酶免疫检测板内加入所述样品、所述酶接物及所述显色剂，通过控制所述样品、所述酶接物的液面使其没过所述锥形结构的锥顶，并位于所述端面以下，控制所述显色剂的液面位于所述锥形结构的锥顶以下，并在加入所述显色剂后抖动以使所述显色剂能铺满在所述微孔的底面内，由于所述锥形结构的存在，覆盖有所述显色剂的相邻微孔之间不会发生所述显色剂的流动，从而保证了显色结果的准确性。
附图说明
图1是本发明实施例一提供的一种酶免疫检测板的结构示意图；
图2是图1的剖视图；
图3是本发明实施例一提供的另一种酶免疫检测板的剖视图；
图4是本发明实施例一提供的另一种酶免疫检测板的剖视图；
图5是本发明实施例一提供的另一种酶免疫检测板的结构图；
图6是图5的剖视图；
其中，10-微孔板本体；11-第一侧壁；12-微孔；13-网格结构；14-锥形结构；15-扩口结构；16-外沿；17-第二凹槽；18-第二侧壁。
具体实施方式
以下结合附图和具体实施例对本发明提出的一种酶免疫检测板及其检测方法作进一步详细说明。根据权利要求书和下面说明，本发明的优点和特征将更清楚。需说明的是，附图均采用非常简化的形式且均使用非精准的比例，仅用以方便、明晰地辅助说明本发明实施例的目的。附图中相同或相似的附图标记代表相同或相似的部件。
实施例一
图1，是本发明实施例一提供的一种酶免疫检测板的结构示意图，图2，是图1的剖视图。请参考图1和图2，一种酶免疫检测板，用于酶免疫检测，包括由聚苯乙烯制成的微孔12板本体10，所述微孔12板本体10的一端面向内第一次凹陷形成一第一凹槽，所述第一凹槽具有沿其延伸方向相对设置的第一侧壁11和第二侧壁18，所述第一侧壁11和第二侧壁18用于提供样品及检测试剂的进入所述酶免疫检测板的入口，所述第一凹槽的底面包括若干个凹陷区以及非凹陷区，每个所述凹陷区向内第二次凹陷形成底面平行于所述端面的微孔12，所述微孔12用于提供抗原或抗体的固相载体，相邻所述微孔12为所述非凹陷区所隔绝，相邻两个所述微孔12之间的非凹陷区上设置有一锥形结构14，每个所述微孔12被其附近的所述锥形结构14所围合，或每个所述微孔12被其附近的所述锥形结构14以及所述第一凹槽的侧壁所围合；
所述锥形结构14的锥顶位于远离所述非凹陷区的方向上，且所述锥顶位于所述第一平面下方，所述第一平面为所述端面所在的平面。
所述锥形结构14用于防止相邻所述微孔12中的所述显色剂相互流动，从而无需每孔定量加入，大大简化了检测工作的操作步骤，适用于基层医疗单位使用，可以提高工作效率，此外，还提高了显色结果的准确性。
进一步，所述第一凹槽还包括相对设置的第三侧壁和第四侧壁，所述第一侧壁11、第三侧壁、第二侧壁18及第四侧壁依次相连构成所述第一凹槽的侧壁，所述第三侧壁和所述第四侧壁分别位于所述第一侧壁11和所述第二侧壁18之间，应该意识到，这样的范围仅用于说明的目的，所述第一凹槽可以包括多个侧壁，每个侧壁均可以用于提供样品及检测试剂的进入所述酶免疫检测板的入口。
进一步，所述第一侧壁11和所述第二侧壁18平行，相应的所述第三侧壁和所述第四侧壁也可以平行设置，以便于加工，图3，是本发明实施例一提供的另一种酶免疫检测板的剖视图，请参考图3，所述第一次凹陷沿其凹陷方向形成一扩口形凹槽，所述扩口形凹槽由所述第一侧壁11、第三侧壁、第二侧壁18、第四侧壁及槽底组成，所述扩口形凹槽有利于液体流入与其靠近的微孔12中，所述扩口形凹槽的扩口位于远离所述微孔12的底面的方向上。
进一步，所述第一凹槽的非凹陷区所在的平面平行于所述第一平面，保证在无外界干扰的情况下，检测试剂在所述非凹陷区所在的平面上沿其平面的各个方向上的运动趋势相同。
图4，是本发明实施例一提供的另一种酶免疫检测板的剖视图，请参考图4，进一步，所述微孔12与所述第一凹槽的非凹陷区的连接处设置有圆倒角，并且所述微孔12与所述锥形结构14的连接处设置有圆倒角，可以减少所述微孔12与所述第一凹槽的连接处的显色剂的残留，可以减少所述微孔12与所述锥形结构14的连接处的显色剂的残留，进而提高所述酶免疫检测板的测试准确性。
进一步，所述微孔12的尺寸一致且其以阵列的形式均匀分布在所述微孔12板本体10上，应该意识到，这样的范围仅用于说明的目的，在实践中，所述微孔12的尺寸及分布方式并不限定于此，所述微孔12的尺寸也可以不同，其分布方式也可采用非均匀分布的方式。
进一步，所述微孔12沿第一方向和第二方向呈线性阵列布置，且所述微孔12板本体10上相邻所述锥形结构14相互连接形成一连续的网格结构13，所述网格结构13将各个所述微孔12分隔开，所述第一方向为垂直于所述第一侧壁11的方向，所述第二方向垂直于所述第一方向，应该意识到，这样的范围仅用于说明的目的，所述微孔12的阵列的形式也可以设置为圆周阵列布置。
进一步，所述微孔12为圆孔，且其数量为2-100个，且其直径为1-10mm，且其凹陷深度为0.1-10mm，相邻两个所述微孔12的圆心距为6-12mm，应该意识到，这样的范围仅用于说明的目的，所述微孔12的形状、数量、尺寸、及其之间的圆心距并不限定于此。
进一步，所述锥形结构14为棱锥，棱锥是最常见的一种锥形结构14，便于加工，应该意识到，这样的范围仅用于说明的目的，所述锥形结构14的结构并不限定于此，所述锥形结构14也可以是棱锥和棱柱的组合结构。
进一步，所述锥形结构14的锥顶到所述微孔12的底面的距离相等，所述锥形结构14的作用是防止相邻所述微孔12中的所述显色剂相互流动，其锥顶到所述第一凹槽的底面的距离相等有利于增强其作用。
进一步，所述锥形结构14沿垂直于其延伸方向的截面的尺寸一致，以便于加工。
进一步，所述锥形结构14沿垂直于其延伸方向的截面形状为等腰三角形，且所述等腰三角形的中心线垂直于所述端面，应该意识到，这样的范围仅用于说明的目的，所述锥形结构14沿垂直于其延伸方向的截面形状并不限定于此，也可以是三角形和矩形的组合图形。
图5，是本发明实施例一提供的另一种酶免疫检测板的结构图，图6，是图5的剖视图，请参考图5和图6，进一步，所述第一凹槽上靠近所述微孔12板本体10的一端面的一端沿垂直于所述微孔12板本体10的一端面的方向向外延伸形成一扩口结构15，所述扩口结构15的扩口位于远离所述端面的方向上，且所述扩口结构15上靠近其扩口的一端沿所述微孔12板本体10的一端面方向向外延伸形成一外沿16，所述外沿16和所述扩口结构15向内凹陷形成第二凹槽17，所述第二凹槽17的槽底与所述第一凹槽的非凹陷区连接，且所述第二凹槽17的延伸方向与所述第一凹槽的延伸方向之间的夹角为锐角，所述扩口结构15用于防止所述酶免疫检测板内的液体溢出，所述外沿16方便了所述酶免疫检测板的拿取，所述第二凹槽17用于提高加入检测试剂的便利性。
实施例二
本发明还提供了一种酶免疫的检测方法，采用本发明实施例一所述的一种酶免疫检测板，至少包括以下步骤：
步骤1：在所述酶免疫检测板的所述微孔12内包被抗原或抗体；
步骤2：将样品加入到所述酶免疫检测板内，且所述样品的液面没过所述锥形结构14的锥顶，并位于所述端面以下，以保证所述样品与步骤1中的抗原或抗体充分反应，孵育设定时间；
步骤3：倾去经过所述步骤2处理后的所述微孔12内的液体，清洗后，将酶接物加入到所述酶免疫检测板内，且所述酶接物的液面没过所述锥形结构的锥顶，并位于所述端面以下，以保证所述酶接物与步骤2中微孔内生成的物质充分反应，孵育设定时间后倾去；
步骤4：清洗后，将显色剂加入到所述酶免疫检测板内，抖动后，且所述显色剂的液面位于所述锥形结构的锥顶以下，孵育设定时间，因为所述显色剂的液面位于所述锥形结构的锥顶以下所以需要抖动以使所述显色剂能够铺满在所述微孔12中，由于所述锥形结构14的存在，覆盖有所述显色剂的相邻微孔12之间不会发生所述显色剂的流动，从而保证了显色结果的准确性，可抬起并抖动所述酶免疫检测板，以加速所述显色剂向所述酶联检测板内未被显色剂覆盖的微孔中流动，可以适当地小幅度来回抖动，进一步加速所述显色剂的扩散速度。
进一步，所述第一凹槽上靠近所述微孔12板本体10的一端面的一端沿垂直于所述微孔12板本体10的一端面的方向向外延伸形成一扩口结构15，所述扩口结构15的扩口位于远离所述端面的方向上，且所述扩口结构15上靠近其扩口的一端沿所述微孔12板本体10的一端面方向向外延伸形成一外沿16，所述外沿16和所述扩口结构15向内凹陷形成第二凹槽17，所述第二凹槽17的槽底与所述第一凹槽的非凹陷区连接，且所述第二凹槽17的延伸方向与所述第一凹槽的延伸方向之间的夹角为锐角；
所述步骤2具体包括：将样品加入到所述第二凹槽内，并使所述样品铺满每个所述微孔的底面；
所述步骤3具体包括：将酶接物加入到所述酶免疫检测板内，并使所述酶接物铺满每个所述微孔的底面。
进一步，所述样品为人体标本和样品稀释液的混合液，所述清洗操作采用洗涤液，且所述人体标本和所述样品稀释液的混合液、所述洗涤液、所述酶接物及所述显色剂通过所述第二凹槽17加入，所述人体标本和所述样品稀释液的混合液、且所述洗涤液的液面没过所述锥形结构14的锥顶，并位于所述端面以下。
进一步，所述人体标本为全血、血清、唾液、尿液、泪液或汗液，所述显色剂为TMB显色试剂或化学发光试剂，所述TMB显色试剂为TMB显色剂或盐酸型TMB显色剂。
所述酶免疫检测板的显色结果的判读采用目测、酶标仪在450-700nm波段内进行波长比色测量或化学发光仪进行测量。
实施例三
本发明还提供了一种用于检测食物不耐受的食物IgG十四项酶免疫检测单人份试剂盒，采用本发明实施例二所述的一种酶免疫的检测方法进行食物不耐受的食物IgG十四项的酶免疫检测。
所述试剂盒包括：
(1)本发明实施例一图5和图6所述的一种酶免疫检测板。
(2)末梢全血标本，1瓶，50μl。
(3)样品稀释液，1瓶，5ml。
(4)洗涤液，2瓶，5ml。
(5)羊抗人IgG酶接物，1瓶，5ml。
(6)TMB显色剂，1瓶，2.2ml。
所述酶免疫检测板的微孔12的数量为16个，所述微孔12为直径为6mm的圆孔，且其凹陷深度为3mm，且相邻两个所述微孔12的圆心距为10mm。每个所述微孔12内的包被抗原分别为西红柿、大豆、花生、鸡蛋、牛奶、蘑菇、鱼、虾、螃蟹、猪肉、鸡肉、牛肉、大米、小麦、阴性对照及阳性对照。
将50μl末梢全血标本和1瓶装有5ml的样品稀释液混合后将瓶口置于所述第二凹槽17中，然后抬高瓶底使所述末梢全血标本和所述样品稀释液的混合液通过所述第一侧壁11和第二侧壁18流入所述酶免疫检测板中，由于5.05ml的液体完全能够没过所述锥形结构14的锥顶，并位于所述端面以下，同时所述末梢全血标本和所述样品稀释液的混合液也能够充分流动，使得所述末梢全血标本中的食物抗体能够和相应的微孔12内的食物抗原结合，孵育10分钟后倾去所述末梢全血标本和所述样品稀释液的混合液，然后加入1瓶装有5ml的洗涤液清洗一次，弃去，再加入1瓶装有5ml的羊抗人IgG酶接物，形成食物抗原-人IgG-羊抗人IgG酶接物复合物，孵育5分钟后倾去羊抗人IgG酶接物，重复清洗一次，最后加入1瓶装有2.2ml的TMB显色剂，其中，所述洗涤液、所述羊抗人IgG酶接物及所述TMB显色剂通过所述酶免疫检测板的所述第二凹槽17加入，所述洗涤液和所述羊抗人IgG酶接物的液面没过所述锥形结构14的锥顶，并位于所述端面以下，所述TMB显色剂的液面位于所述锥形结构14的锥顶，可抬起并抖动所述酶免疫检测板，以加速所述TMB显色剂向所述酶联检测板内未被所述TMB显色剂覆盖的微孔中流动，可以适当地小幅度来回抖动，进一步加速所述TMB显色剂的扩散速度，由于所述锥形结构14的存在，覆盖有所述TMB显色剂的相邻微孔12之间不会发生所述TMB显色剂的流动，从而保证了显色结果的准确性，孵育5分钟后采用目测的方式即可判读显色结果。
若所述微孔12内出现蓝色颗粒状沉淀则为阳性，说明该末梢全血标本对所述微孔12内的食物抗原产生食物不耐受，若所述微孔12内TMB显色剂呈透明状液体则为阴性，说明该末梢全血标本对所述微孔12内的食物抗原未产生食物不耐受，所述阴性对照和所述阳性对照为检测试剂质控，所述阴性对照孔内的TMB显色剂呈透明状液体，所述阳性对照孔内出现蓝色颗粒状沉淀。
实施例四
本发明还提供了一种用于检测特异性人IgE吸入七项酶免疫检测单人份试剂盒，采用本发明实施例二所述的一种酶免疫的检测方法进行特异性人IgE吸入七项的酶免疫检测。
所述试剂盒包括：
(1)本发明实施例一图5和图6所述的一种酶免疫检测板。
(2)血清，1瓶，300μl。
(3)样品稀释液，1瓶，3ml。
(4)洗涤液，2瓶，3ml。
(5)马抗人IgE酶接物，1瓶，3ml。
(6)盐酸型TMB显色剂，1瓶，1.8ml。
所述酶免疫检测板的微孔12的数量为9个，所述微孔12为直径为7mm的圆孔，且其凹陷深度为5mm，且相邻两个所述微孔12的圆心距为9mm。每个所述微孔12内的包被抗原分别为螨虫、霉菌、屋尘、夏季花粉、兽毛、春季花粉、葎草、阴性对照及阳性对照。
将300μl血清和1瓶装有3ml的样品稀释液混合后将瓶口置于所述第二凹槽17中，然后抬高瓶底使所述血清和所述样品稀释液的混合液通过所述第一侧壁11和第二侧壁18流入所述酶免疫检测板中，由于3.3ml的液体完全能够没过所述锥形结构14的锥顶，并位于所述端面以下，同时所述血清和所述样品稀释液的混合液也能够充分流动，使得所述血清中的食物抗体能够和相应的微孔12内的食物抗原结合，孵育20分钟后倾去所述血清和所述样品稀释液的混合液，然后加入1瓶装有3ml的洗涤液清洗一次，弃去，再加入1瓶装有3ml的马抗人IgE酶接物，形成吸入抗原-人特异性IgE-马抗人IgE酶接物复合物，孵育10分钟后倾去马抗人IgE酶接物，重复清洗一次，最后加入1瓶装有1.8ml的盐酸型TMB显色剂，其中，所述洗涤液、所述马抗人IgE酶接物及所述盐酸型TMB显色剂通过所述酶免疫检测板的所述第二凹槽17加入，所述洗涤液和所述马抗人IgE酶接物的液面没过所述锥形结构14的锥顶，并位于所述端面以下，所述盐酸型TMB显色剂的液面位于所述锥形结构14的锥顶，可抬起并抖动所述酶免疫检测板，以加速所述盐酸型TMB显色剂向所述酶联检测板内未被所述盐酸型TMB显色剂覆盖的微孔中流动，可以适当地小幅度来回抖动，进一步加速所述盐酸型TMB显色剂的扩散速度，由于所述锥形结构14的存在，覆盖有所述盐酸型TMB显色剂的相邻微孔12之间不会发生所述盐酸型TMB显色剂的流动，从而保证了显色结果的准确性，孵育5分钟后使用酶标仪在450nm波长测量光密度值，即可判读显色结果。
若被检测微孔12的光密度值是所述阴性对照孔的光密度值的二倍则为阳性，说明所述血清对所述微孔12内的吸入抗原过敏，若被检测微孔12的光密度值小于所述阴性对照孔的光密度值的二倍则为阴性，说明所述血清对所述微孔12内的吸入抗原不过敏。
实施例五
本发明还提供了一种用于检测特异性人IgE果蔬七项酶免疫检测单人份试剂盒，采用本发明实施例二所述的一种酶免疫的检测方法进行特异性人IgE果蔬七项的酶免疫检测。
所述试剂盒包括：
(1)本发明实施例一图5和图6所述的一种酶免疫检测板。
(2)血清，1瓶，200μl。
(3)样品稀释液，1瓶，3ml。
(4)洗涤液，2瓶，3ml。
(5)马抗人IgE酶接物，1瓶，3ml。
(6)鲁米诺试剂，1瓶，1.8ml。
所述酶免疫检测板的微孔12的数量为9个，所述微孔12为直径为7mm的圆孔，且其凹陷深度为5mm，且相邻两个所述微孔12的圆心距为9mm。每个所述微孔12内的包被抗原分别为香蕉、菠萝、苹果、芒果、蘑菇、茄子、蒜葱、阴性对照及阳性对照。
将200μl血清和1瓶装有3ml的样品稀释液混合后将瓶口置于所述第二凹槽17中，然后抬高瓶底使所述血清和所述样品稀释液的混合液通过所述第一侧壁11和第二侧壁18流入所述酶免疫检测板中，由于3.2ml的液体完全能够没过所述锥形结构14的锥顶，并位于所述端面以下，同时所述血清和所述样品稀释液的混合液也能够充分流动，使得所述血清中的食物抗体能够和相应的微孔12内的食物抗原结合，孵育20分钟后倾去所述血清和所述样品稀释液的混合液，然后加入1瓶装有3ml的洗涤液清洗一次，弃去，再加入1瓶装有3ml的马抗人IgG酶接物，形成食物抗原-人IgG-马抗人IgG酶接物复合物，孵育10分钟后倾去马抗人IgG酶接物，重复清洗一次，最后加入1瓶装有1.8ml的鲁米诺试剂，其中，所述洗涤液、所述马抗人IgG酶接物及所述鲁米诺试剂通过所述酶免疫检测板的所述第二凹槽17加入，所述洗涤液和所述马抗人IgG酶接物的液面没过所述锥形结构14的锥顶，并位于所述端面以下，所述鲁米诺试剂的液面位于所述锥形结构14的锥顶，可抬起并抖动所述酶免疫检测板，以加速所述鲁米诺试剂向所述酶联检测板内未被所述鲁米诺试剂覆盖的微孔中流动，可以适当地小幅度来回抖动，进一步加速所述鲁米诺试剂的扩散速度，由于所述锥形结构14的存在，覆盖有所述鲁米诺试剂的相邻微孔12之间不会发生所述鲁米诺试剂的流动，从而保证了显色结果的准确性，孵育1分钟后使用化学发光仪在425nm波长下测量数值，即可判读显色结果。
若所述微孔12的数值是阴性对照孔的数值的二倍则为阳性，说明所述血清对所述微孔12内的果蔬抗原过敏，若所述微孔12的数值小于阴性对照孔的数值的二倍则为阴性，说明所述血清对所述微孔12内的果蔬抗原不过敏。
综上所述，本发明提供了一种酶免疫检测板及其检测方法，用于酶免疫检测，所述酶免疫检测板包括微孔板本体，所述微孔板本体的一端面向内第一次凹陷形成一第一凹槽，所述第一凹槽具有沿其延伸方向相对设置的第一侧壁和第二侧壁，所述第一凹槽的底面包括若干个凹陷区以及非凹陷区，每个所述凹陷区向内第二次凹陷形成底面平行于所述端面的微孔，相邻所述微孔为所述非凹陷区所隔绝，相邻两个所述微孔之间的非凹陷区上设置有一锥形结构，每个所述微孔被其附近的所述锥形结构所围合，或每个所述微孔被其附近的所述锥形结构以及所述第一凹槽的侧壁所围合，所述锥形结构的锥顶位于远离所述非凹陷区的方向上，且所述锥顶位于所述第一平面下方，所述第一平面为所述端面所在的平面，所述第一侧壁和第二侧壁用于提供样品及检测试剂的进入所述酶免疫检测板的入口，所述锥形结构用于防止相邻所述微孔中的所述显色剂相互流动，从而无需每孔定量加入，大大简化了检测工作的操作步骤，适用于基层医疗单位使用，可以提高工作效率，此外，还提高了显色结果的准确性。
所述酶免疫的检测方法包括按步骤向本发明提供的一种酶免疫检测板内加入所述样品、所述酶接物及所述显色剂，通过控制所述样品、所述酶接物的液面使其没过所述锥形结构的锥顶，并位于所述端面以下，控制所述显色剂的液面位于所述锥形结构的锥顶以下，并在加入所述显色剂后抖动以使所述显色剂能铺满在所述微孔的底面内，由于所述锥形结构的存在，覆盖有所述显色剂的相邻微孔之间不会发生所述显色剂的流动，从而保证了显色结果的准确性。
需要说明的是，本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。对于实施例公开的测试方法而言，由于其采用的测试装置与实施例公开的装置部分相对应，所以对其中涉及的测试装置描述的比较简单，相关之处参见装置部分说明即可。
上述描述仅是对本发明较佳实施例的描述，并非对本发明范围的任何限定，本发明领域的普通技术人员根据上述揭示内容做的任何变更、修饰，均属于权利要求书的保护范围。
Claims (14)
1.一种酶免疫检测板，用于酶免疫检测，其特征在于，包括微孔板本体，所述微孔板本体的一端面向内第一次凹陷形成一第一凹槽，所述第一凹槽具有沿其延伸方向相对设置的第一侧壁和第二侧壁，所述第一凹槽的底面包括若干个凹陷区以及非凹陷区，每个所述凹陷区向内第二次凹陷形成底面平行于所述端面的微孔，相邻所述微孔为所述非凹陷区所隔绝，相邻两个所述微孔之间的非凹陷区上设置有一锥形结构，每个所述微孔被其附近的所述锥形结构所围合，或每个所述微孔被其附近的所述锥形结构以及所述第一凹槽的侧壁所围合；
所述锥形结构的锥顶位于远离所述非凹陷区的方向上，且所述锥顶位于所述第一平面下方，所述第一平面为所述端面所在的平面。
2.如权利要求1所述的一种酶免疫检测板，其特征在于，所述第一侧壁和所述第二侧壁平行，或者所述第一次凹陷沿其凹陷方向形成一扩口形凹槽，所述扩口形凹槽的扩口位于远离所述微孔的底面的方向上。
3.如权利要求1所述的一种酶免疫检测板，其特征在于，所述第一凹槽的非凹陷区所在的平面平行于所述第一平面。
4.如权利要求1所述的一种酶免疫检测板，其特征在于，所述微孔的尺寸一致且其以阵列的形式均匀分布在所述微孔板本体上。
5.如权利要求4所述的一种酶免疫检测板，其特征在于，所述微孔为圆孔，且其数量为2-100个，且其直径为1-10mm，且其凹陷深度为0.1-10mm，相邻两个所述微孔的圆心距为6-12mm。
6.如权利要求1所述的一种酶免疫检测板，其特征在于，所述锥形结构为棱锥。
7.如权利要求1所述的一种酶免疫检测板，其特征在于，所述锥形结构的锥顶到所述微孔的底面的距离相等。
8.如权利要求1所述的一种酶免疫检测板，其特征在于，所述锥形结构沿垂直于其延伸方向的截面的尺寸一致。
9.如权利要求1所述的一种酶免疫检测板，其特征在于，所述锥形结构沿垂直于其延伸方向的截面形状为等腰三角形，且所述等腰三角形的中心线垂直于所述端面。
10.如权利要求1所述的一种酶免疫检测板，其特征在于，所述第一凹槽上靠近所述微孔板本体的一端面的一端沿垂直于所述微孔板本体的一端面的方向向外延伸形成一扩口结构，所述扩口结构的扩口位于远离所述端面的方向上，且所述扩口结构上靠近其扩口的一端沿所述微孔板本体的一端面方向向外延伸形成一外沿，所述外沿和所述扩口结构向内凹陷形成第二凹槽，所述第二凹槽的槽底与所述第一凹槽的非凹陷区连接，且所述第二凹槽的延伸方向与所述第一凹槽的延伸方向之间的夹角为锐角。
11.一种酶免疫的检测方法，采用如权利要求1-10任一项所述的一种酶免疫检测板，其特征在于，至少包括以下步骤：
S1：在所述酶免疫检测板的所述微孔内包被抗原或抗体；
S2：将样品加入到所述酶免疫检测板内，且所述样品的液面没过所述锥形结构的锥顶，并位于所述端面以下，孵育设定时间；
S3：倾去经过所述S2处理后的所述微孔内的液体，清洗后，将酶接物加入到所述酶免疫检测板内，且所述酶接物的液面没过所述锥形结构的锥顶，并位于所述端面以下，孵育设定时间后倾去；
S4：清洗后，将显色剂加入到所述酶免疫检测板内，抖动后，所述显色剂的液面位于所述锥形结构的锥顶以下，孵育设定时间。
12.如权利要求11所述的一种酶免疫的检测方法，其特征在于，所述第一凹槽上靠近所述微孔板本体的一端面的一端沿垂直于所述微孔板本体的一端面的方向向外延伸形成一扩口结构，所述扩口结构的扩口位于远离所述端面的方向上，且所述扩口结构上靠近其扩口的一端沿所述微孔板本体的一端面方向向外延伸形成一外沿，所述外沿和所述扩口结构向内凹陷形成第二凹槽，所述第二凹槽的槽底与所述第一凹槽的非凹陷区连接，且所述第二凹槽的延伸方向与所述第一凹槽的延伸方向之间的夹角为锐角；
所述S2具体包括：将样品加入到所述第二凹槽内，并使所述样品铺满每个所述微孔的底面；
所述S3具体包括：将酶接物加入到所述酶免疫检测板内，并使所述酶接物铺满每个所述微孔的底面。
13.如权利要求12所述的一种酶免疫的检测方法，其特征在于，所述样品为人体标本和样品稀释液的混合液，所述清洗操作采用洗涤液，且所述人体标本和所述样品稀释液的混合液、所述洗涤液、所述酶接物及所述显色剂通过所述第二凹槽加入，且所述洗涤液的液面没过所述锥形结构的锥顶，并位于所述端面以下。
14.如权利要求13所述的一种酶免疫的检测方法，其特征在于，所述人体标本为全血、血清、唾液、尿液、泪液或汗液，所述显色剂为TMB显色试剂或化学发光试剂，所述TMB显色试剂为TMB显色剂或盐酸型TMB显色剂。
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