RU2508405C1 - Способ получения инкорпорированных контрольных образцов для иммуноферментных тест-систем путем сушки в лунках планшета - Google Patents
Способ получения инкорпорированных контрольных образцов для иммуноферментных тест-систем путем сушки в лунках планшета Download PDFInfo
- Publication number
- RU2508405C1 RU2508405C1 RU2012156306/10A RU2012156306A RU2508405C1 RU 2508405 C1 RU2508405 C1 RU 2508405C1 RU 2012156306/10 A RU2012156306/10 A RU 2012156306/10A RU 2012156306 A RU2012156306 A RU 2012156306A RU 2508405 C1 RU2508405 C1 RU 2508405C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- serum
- control
- dilution
- solution
- antibodies
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к иммуноферментным анализам, и представляет собой способ получения инкорпорированных контрольных образцов для иммуноферментных тест-систем для определения инфекций группы TORCH. Способ включает приготовление раствора для разведения сыворотки, подготовку сыворотки доноров для отрицательного контроля с последующим разведением раствором для разведения, причем сыворотка не содержит антитела к токсоплазме, цитомегаловирусу, вирусам простого герпеса и краснухи, HBsAg, антитела к ВИЧ-1,2, вирусу гепатита С, подготовку сыворотки доноров для положительного контроля с последующим ее разведением раствором для разведения, причем сыворотка содержит антитела к токсоплазме, цитомегаловирусу, вирусам простого герпеса и краснухи, внесение жидких контрольных образцов в лунки планшета, лиофильную сушку положительного и отрицательного контроля, маркировку положительного контроля красным цветом, а отрицательного контроля - зеленым. Заявленное изобретение позволяет получить универсальные контрольные образцы для всех тест-систем для определения инфекции группы TORCH, инкорпорированные в лунках рабочего планшета, удобные в использовании и безопасные. 1 ил., 2 табл., 1 пр.
Description
Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в технологии производства тест-систем для иммуноферментного анализа.
Иммуноферментный анализ является одним из высокочувствительных методов лабораторной диагностики. Он широко используется в медицинских лабораториях для определения в сыворотке крови различных макромолекул (антигенов, гормонов), вирусов и т.д. Предприятия-производители тест-систем для иммуноферментного анализа выпускают готовые наборы для постановки ИФА, в состав которых входят все необходимые компоненты. Примерами таких тест-систем являются, например, тест-системы, описанные в приложениях 1 и 2 к Приказу №214 Министерства здравоохранения РФ О разрешении медицинского применения медицинских иммунологических препаратов от 14 июня 2000 г. или в Приложениях 1 и 2 к Приказу №118 Министерства здравоохранения РФ О разрешении медицинского применения медицинских иммунологических препаратов от 15 апреля 1998 г. В качественных системах используются позитивные и негативные контроли, которые заведомо содержат и не содержат аналиты (антитела либо антигены). В количественных системах используются калибраторы - образцы с известной концентрацией искомых макромолекул, которые позволяют определить концентрацию тех или иных антигенов или антител в анализируемой сыворотке. Контрольные образцы представляют собой жидкие окрашенные реагенты, которые используются в постановке анализа согласно процедурам, описанным в инструкциях по использованию наборов. Как правило, положительный и отрицательный контроли вносятся в определенном объеме в несколько лунок планшета, после чего инкубируются так же, как исследуемые образцы. В количественных системах используются жидкие калибраторы, которые по инструкции так же вносятся в лунки планшета в определенном объеме и затем инкубируются так же, как исследуемые образцы. По оптической плотности в лунках планшета с контролями по окончании анализа судят о правильности прохождения реакции. В количественном анализе по оптической плотности калибраторов строится калибровочная кривая, посредством которой определяются концентрации аналитов в образцах сыворотки.
Постановка контролей либо калибраторов очень важна. Любой анализ должен сопровождаться постановкой контроля. В противном случае анализ является невалидным, а полученные результаты недостоверными. При постановке большого количества образцов ставится от 3 до 8 положительных и отрицательных контролей. Для этого используются лунки планшета с иммуносорбентом. Таким образом, количество образцов крови, которое можно поставить с помощью одного набора, уменьшается. При дробном использовании набора это количество снижается еще больше, так как при постановке даже одной сыворотки необходим контроль. Если разбить один набор на 3 постановки, то количество лунок, занимаемых контролем, увеличивается втрое. Постановка с калибраторами снижает количество свободных лунок для одного анализа образцов на 10 - 12. Таким образом, недостатком известных из уровня техники способов является небольшое количество образцов, которое можно поставить с использованием одного набора.
Из уровня техники известны способы изготовления контрольных панелей для тест-систем (см. например, патент РФ 2265028 С2, опубликованный 27.11.2005, или патент РФ 2346282 С2, опубликованный 10.02.2009). Согласно данным документам изготавливают контрольные панели сывороток для контроля качества диагностики гепатита В. При этом референс-панели лиофильно высушивают.
Кроме того, из уровня техники известен патент РФ 2181893 С1, опубликованный 27.04.2002, в котором раскрыт способ получения референс-панели для контроля качества тест-систем и вакцин против гепатита В. Данный способ взят авторами настоящего изобретения за прототип.
При производстве иммуноферментных диагностических систем для определения специфических антител, например антител к возбудителям инфекционных заболеваний, аутоантител, антител к специфическим маркерам, в качестве позитивного контрольного образца традиционно используются образцы сыворотки крови человека, содержащие определяемые антитела (аналиты) от пациентов с перенесенным или текущим патологическим процессом (инфекционным заболеванием, аллергией или злокачественными новообразованиями). Образование специфических антител является ответной реакцией организма на циркулирование биологических агентов, вызвавших данное инфекционное заболевание или патологический процесс. Таким образом, еще одной проблемой известных тест-систем является проблема инфекционной опасности.
Решением проблемы инфекционной опасности использования контрольных образцов в иммуноферментных тест-системах, а также проблемы расходования иммуносорбента для постановки контрольных образцов в анализе может быть добавление в набор дополнительных лунок иммуносорбента, которые будут использоваться для постановки контролей либо калибраторов. Для удобства эти дополнительные лунки изначально содержат, либо не содержат, контрольные образцы в высушенном виде. Во время постановки требуется лишь внести в эти лунки раствор для разведения сывороток или блокирующий раствор, который используется в данном тесте.
Еще одним недостатком известных тест-систем является их неуниверсальность. Для определения различных инфекций необходимы различные тест-системы.
В основу настоящего изобретения поставлена следующая задача: создание универсальных положительных и отрицательных контрольных образцов, инкорпорированных именно в лунках рабочего планшета, используемых в иммуноферментном анализе, чувствительность, специфичность и стабильность которых не отличается от жидких аналогов.
Задача решается разработанным способом получения универсальных инкорпорированных контрольных образцов для использования при постановках всех иммуноферментных тест-систем для определения инфекций группы TORCH, в которую входят токсоплазмоз, краснуха, цитомегаловирус и герпес.
Заявлен способ получения инкорпорированных контрольных образцов для иммуноферментных тест-систем для определения инфекций группы TORCH, включающий:
A) приготовление раствора для разведения сыворотки, представляющего собой фосфатно-солевой буфер с 2%-ным содержанием бычьего сывороточного альбумина с добавлением проклина 300 и 10%-ного раствора азида,
Б) подготовку сыворотки доноров для отрицательного контроля, причем сыворотка не содержит антитела к токсоплазме, цитомегаловирусу, вирусам простого герпеса и краснухи, HBsAg, антитела к ВИЧ-1,2, вирусу гепатита С, где отобранные сыворотки крови осветляют центрифугированием при температуре 4-8 градусов С,
B) разведение сыворотки, полученной на этапе Б), в растворе для разведения для получения жидкого отрицательного контроля,
Г) подготовку сыворотки доноров для положительного контроля, причем сыворотка содержит антитела к токсоплазме, цитомегаловирусу, вирусам простого герпеса и краснухи, где отобранные сыворотки крови осветляют центрифугированием при температуре 4-8 градусов С,
Д) разведение сыворотки, полученной на этапе Г), в растворе для разведения для получения жидкого положительного контроля,
Е) внесение жидких контрольных образцов в лунки планшета,
Ж) лиофильную сушку положительного и отрицательного контроля,
3) маркировку положительного контроля красным цветом, а отрицательного контроля - зеленым.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1.
Получение инкорпорированного в лунке рабочего планшета отрицательного контрольного образца тест-системы для определения в сыворотке антител к TORCH-инфекциям.
Получение жидкого контрольного отрицательного образца.
Приготовление раствора для разведения отрицательной сыворотки
Готовится 100 мл фосфатно-солевого буфера с 2%-ным содержанием БСА (бычий сывороточный альбумин) (Sigma Cat # A3059). К полученному раствору добавляется 0,1 мл проклина300, 1 мл 10% раствора азида. В приготовленную среду добавляется негативная сыворотка или плазма.
В качестве отрицательного контрольного образца (К-) используют сыворотки доноров, не содержащих антитела к токсоплазме, цитомегаловирусу, вирусам простого герпеса и краснухи, не содержащие HBsAg, антитела к ВИЧ-1,2 и вирусу гепатита С, инактивированные прогреванием в течение 45 мин при 56°С. Отобранные для приготовления К- сыворотки крови осветляют 50-минутным центрифугированием при 18000 об/мин на рефрижераторной центрифуге при температуре от 4 до 8°С, после чего разводят на среде, состоящей из ФСР (консерванты - проклин и азид).
Сыворотка разводится в растворе в соотношении 1 к 100. Жидкий контроль вносится в нужные лунки планшета в объеме 100 мл, после чего лиофильно высушивается.
Лиофильная сушка проводится согласно стандартной процедуре, описанной, например, в патенте №RU 2179726 от 20.02.2002.
Приготовление инкорпорированных положительных образцов или калибраторов производится аналогично. В качестве позитивного контрольного образца используют сыворотки доноров, содержащих антитела к токсоплазме, цитомегаловирусу, вирусам простого герпеса и краснухи, и вносят в раствор для разведения в нужном объеме. Жидкие К+ или калибраторы вносятся в лунки планшета по 100 мл и лиофильно высушиваются (см. выше).
Для идентификации положительного и отрицательного контролей лунки, в которые были внесены и высушены образцы, маркируются красным и зеленым цветом.
В дальнейшем такие контроли и калибраторы можно использовать в необходимом количестве для конкретной постановки. Необходимо отделить нужное количество лунок от стрипа и поместить в рамку. Далее процедура проходит согласно инструкции. В лунки с контрольными образцами вносится раствор для разведения сывороток или блокирующий раствор, после чего проводятся все те же манипуляции, что с анализируемыми образцами крови.
Схематично процесс производства инкорпорированного образца представлен на рисунке 1.
Благодаря наличию консервантов в буфере для разведения контрольных образцов инкорпорированные контроли стабильны в течение всего срока годности тест-систем. Исследования показали, что стабильность и специфичность инкорпорированных контрольных образцов аналогичны этим показателям жидких контрольных образцов. Результаты приведены в таблицах 1 и 2.
Таблица 1 | |||||
Длительное хранение отрицательных контролей тест-системы | |||||
Контроль | Дата изготовления | Дата контроля | Срок хранения | Контрольные показатели | |
Внешний вид | ОП | ||||
Жидкий контроль | 26.10.09 | 27.10.09 | - | Прозрачная зеленого цвета жидкость | 0.067 |
30.04.10 | 6 месяцев | -- « -- | 0.070 | ||
26.10.10 | 12 месяцев | -- « -- | 0.078 | ||
27.04.11 | 18 месяцев | -- « -- | 0.071 | ||
30.07.11 | 21 месяц | -- « -- | 0.089 | ||
Инкорпориро-ванный контроль | 26.10.09 | 27.10.09 | - | Стрипы полистиролового разборного планшета с прозрачными бесцветными или зеленого цвета лунками | 0.077 |
30.04.10 | 6 месяцев | -- « -- | 0.074 | ||
26.10.10 | 12 месяцев | -- « -- | 0.074 | ||
27.04.11 | 18 месяцев | -- « -- | 0.079 | ||
30.07.11 | 21 месяц | -- « -- | 0.072 |
Таблица 2 | |||||
Длительное хранение положительных контролей тест-системы | |||||
Контроль | Дата изготовл ения | Дата контроля | Срок хранения | Контрольные показатели | |
Внешний вид | ОП | ||||
Жидкий контроль | 26.10.09 | 27.10.09 | - | Слегка опалесцирующая малиново-красного цвета жидкость | 3.115 |
30.04.10 | 6 месяцев | -- « -- | 3.110 | ||
26.10.10 | 12 месяцев | -- « -- | 3.107 | ||
27.04.11 | 18 месяцев | -- « -- | 3.014 | ||
30.07.11 | 21 месяц | -- « -- | 3.003 | ||
Инкорпориро-ванный контроль | 26.10.09 | 27.10.09 | - | Стрипы полистиролового разборного планшета с прозрачными бесцветными или малиново-красного цвета лунками | 2.754 |
30.04.10 | 6 месяцев | -- « -- | 2.700 | ||
26.10.10 | 12 месяцев | -- « -- | 2.513 | ||
27.04.11 | 18 месяцев | -- « -- | 2.218 | ||
30.07.11 | 21 месяц | -- « -- | 2.156 |
На основании вышеизложенного можно сделать вывод, что преимущества заявленного способа получения контрольных образцов заключаются в следующем.
1. Удобство использования потребителем лунок с сухим контролем. Исчезает необходимость переноса контрольных образцов, содержащих и не содержащих инфицированную сыворотку из специальных флаконов в лунки рабочего планшета. В случае с инкорпорированными контролями требуется просто добавить в лунку блокирующий раствор, в котором разводятся все остальные анализируемые сыворотки.
2. Безопасность постановок тест-системы. Необходимость переноса жидких положительных образцов в лунки планшета несет потенциальную возможность контактирования с инфицированным материалом, поскольку в качестве позитивного контрольного образца традиционно используются образцы сыворотки крови человека, содержащие определяемые антитела (аналиты) от пациентов с перенесенным или текущим патологическим процессом.
3. Экономия основных лунок планшета при постановке ИФА. Наборы иммуноферментных тест-систем комплектуются дополнительными стрипами с инкорпорированными контрольными образцами, что дает возможность не использовать в наборе жидкие контрольные образцы и использовать дробную постановку без ущерба для количества анализируемых сывороток.
4. Удобство при производстве иммуноферментных тест-систем. Универсальные положительные и отрицательные контрольные инкорпорированные образцы могут быть одинаковыми и использоваться при постановках всех иммуноферментных тест-систем для определения инфекций группы ToRCH.
Claims (1)
- Способ получения инкорпорированных контрольных образцов для иммуноферментных тест-систем для определения инфекций группы TORCH, включающий:
A) приготовление раствора для разведения сыворотки, представляющего собой фосфатно-солевой буфер с 2%-ным содержанием бычьего сывороточного альбумина с добавлением проклина 300 и 10%-ного раствора азида,
Б) подготовку сыворотки доноров для отрицательного контроля, причем сыворотка не содержит антитела к токсоплазме, цитомегаловирусу, вирусам простого герпеса и краснухи, HBsAg, антитела к ВИЧ-1,2, вирусу гепатита С, где отобранные сыворотки крови осветляют центрифугированием при температуре 4-8 градусов С,
B) разведение сыворотки, полученной на этапе Б) в растворе для разведения для получения жидкого отрицательного контроля,
Г) подготовку сыворотки доноров для положительного контроля, причем сыворотка содержит антитела к токсоплазме, цитомегаловирусу, вирусам простого герпеса и краснухи, где отобранные сыворотки крови осветляют центрифугированием при температуре 4-8 градусов С,
Д) разведение сыворотки, полученной на этапе Г) в растворе для разведения для получения жидкого положительного контроля,
Е) внесение жидких контрольных образцов в лунки планшета,
Ж) лиофильную сушку положительного и отрицательного контроля,
З) маркировку положительного контроля красным цветом, а отрицательного контроля - зеленым.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2012156306/10A RU2508405C1 (ru) | 2012-12-25 | 2012-12-25 | Способ получения инкорпорированных контрольных образцов для иммуноферментных тест-систем путем сушки в лунках планшета |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2012156306/10A RU2508405C1 (ru) | 2012-12-25 | 2012-12-25 | Способ получения инкорпорированных контрольных образцов для иммуноферментных тест-систем путем сушки в лунках планшета |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2508405C1 true RU2508405C1 (ru) | 2014-02-27 |
Family
ID=50152209
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2012156306/10A RU2508405C1 (ru) | 2012-12-25 | 2012-12-25 | Способ получения инкорпорированных контрольных образцов для иммуноферментных тест-систем путем сушки в лунках планшета |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2508405C1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109030818A (zh) * | 2018-07-26 | 2018-12-18 | 上海微银生物技术有限公司 | 一种酶免疫检测板及其检测方法 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2179726C2 (ru) * | 1999-11-17 | 2002-02-20 | Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" | Способ изготовления контрольных панелей сывороток для контроля качества диагностики гепатита в |
RU2181893C2 (ru) * | 1999-05-25 | 2002-04-27 | Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" | Способ получения референс-панели для контроля качества тест-систем и вакцин против гепатита в |
RU2265028C2 (ru) * | 2003-11-06 | 2005-11-27 | Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" | СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ КОНТРОЛЬНОЙ ПАНЕЛИ СЫВОРОТОК AY ЭНД AD СУБТИПОВ HBsAg ДЛЯ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА ДИАГНОСТИКИ ГЕПАТИТА B |
RU2325655C1 (ru) * | 2006-08-10 | 2008-05-27 | Общество с ограниченной ответственностью Научно-производственное объединение "Диагностические системы" | Иммуноферментная тест-система для определения поверхностного антигена вируса гепатита в и способ определения поверхностного антитела вирусного гепатита в |
-
2012
- 2012-12-25 RU RU2012156306/10A patent/RU2508405C1/ru active IP Right Revival
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2181893C2 (ru) * | 1999-05-25 | 2002-04-27 | Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" | Способ получения референс-панели для контроля качества тест-систем и вакцин против гепатита в |
RU2179726C2 (ru) * | 1999-11-17 | 2002-02-20 | Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" | Способ изготовления контрольных панелей сывороток для контроля качества диагностики гепатита в |
RU2265028C2 (ru) * | 2003-11-06 | 2005-11-27 | Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" | СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ КОНТРОЛЬНОЙ ПАНЕЛИ СЫВОРОТОК AY ЭНД AD СУБТИПОВ HBsAg ДЛЯ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА ДИАГНОСТИКИ ГЕПАТИТА B |
RU2325655C1 (ru) * | 2006-08-10 | 2008-05-27 | Общество с ограниченной ответственностью Научно-производственное объединение "Диагностические системы" | Иммуноферментная тест-система для определения поверхностного антигена вируса гепатита в и способ определения поверхностного антитела вирусного гепатита в |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109030818A (zh) * | 2018-07-26 | 2018-12-18 | 上海微银生物技术有限公司 | 一种酶免疫检测板及其检测方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Corstjens et al. | Circulating Anodic Antigen (CAA): a highly sensitive diagnostic biomarker to detect active Schistosoma infections—improvement and use during SCORE | |
Zava et al. | Validation of dried blood spot sample modifications to two commercially available COVID-19 IgG antibody immunoassays | |
Nath et al. | Diagnosis of herpes simplex virus: laboratory and point-of-care techniques | |
JP2015522825A (ja) | 凝集の検出および測定のための方法 | |
CN112858675B (zh) | 一种新型冠状病毒抗原、抗体联合智能化检测装置 | |
CN107727869A (zh) | 一种测定血清中抗核抗体的试剂盒及其制备方法 | |
CN102841206B (zh) | 肌钙蛋白T(Troponin-T,TNT)测定试剂盒 | |
RU2325655C1 (ru) | Иммуноферментная тест-система для определения поверхностного антигена вируса гепатита в и способ определения поверхностного антитела вирусного гепатита в | |
CN105911291A (zh) | 一种尿液微量蛋白检测试剂盒及其检测方法 | |
CN105527430A (zh) | 一种直接检测肠道病毒71型和柯萨奇病毒a16型的试剂盒及其应用 | |
CN111273017A (zh) | 一种快速检测新型冠状病毒的荧光免疫层析试剂盒 | |
Victer et al. | Deceased tissue donor serology and molecular testing for HIV, hepatitis B and hepatitis C viruses: a lack of cadaveric validated tests | |
CN110596396B (zh) | 一种检测蛋白的方法以及试纸条和试剂盒 | |
CN101644709A (zh) | 快速检测病毒中和抗体的方法和试剂盒 | |
RU2508405C1 (ru) | Способ получения инкорпорированных контрольных образцов для иммуноферментных тест-систем путем сушки в лунках планшета | |
CN105911274A (zh) | 一种同步定量检测不同分子形式人中性粒细胞脂质运载蛋白免疫层析装置及其制备方法 | |
Shao | Accurate interpretation of SARS-CoV-2 antigen detection by immunochromatography | |
CN106546729B (zh) | 一种去除干式免疫荧光定量法检测中血清基质效应的新工艺方法 | |
Link et al. | Capillary flow-driven immunoassay platform for COVID-19 antigen diagnostics | |
Huang et al. | Proteomic patterns as biomarkers for the early detection of schistosomiasis japonica in a rabbit model | |
CN105807070A (zh) | 一种检测乙肝病毒的试剂盒 | |
WO2012128658A1 (ru) | Способ изготовления панели сывороток с hbsag ad и ay субтипов для контроля качества диагностики гепатита в | |
JPWO2011129220A1 (ja) | 試料中の分析対象物質を測定するための検査器具及びそれを用いた分析対象物質の測定方法 | |
CN106248959B (zh) | 一种检测血清岩藻糖蛋白的免疫渗滤方法及免疫渗滤装置 | |
Lima et al. | Lab on a Paper‐Based Device for Coronavirus Biosensing |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20141226 |
|
NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20151127 |
|
PD4A | Correction of name of patent owner |