CN107475076A - 自动核酸提取仪用猪蓝耳病抗体免疫磁珠法检测试剂盒 - Google Patents

自动核酸提取仪用猪蓝耳病抗体免疫磁珠法检测试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种用于自动核酸提取仪的猪蓝耳病抗体免疫磁珠法检测系统。本发明保护一种与自动核酸提取仪联用的免疫磁珠法检测系统，基于含有序列表中序列1所示多肽的试剂盒；所述系统的功能为如下(a1)‑(a4)中的至少一种：(a1)检测待测猪是否感染了猪蓝耳病毒；(a2)检测待测猪血清中是否具有猪蓝耳病毒抗体；(a3)检测待测猪唾液中是否具有猪蓝耳病毒抗体；(a4)检测待测猪是否患有猪蓝耳病。本发明提供的系统的检测方法可以实现猪血液、体液中蓝耳病抗体的定性和定量检测，有效降低了猪蓝耳病检测成本，提高了自动化程度和检测精度。

Description

自动核酸提取仪用猪蓝耳病抗体免疫磁珠法检测试剂盒
技术领域
本发明涉及一种自动核酸提取仪用猪蓝耳病抗体免疫磁珠法检测试剂盒。
背景技术
免疫检测是体外诊断领域的一个重要部分，广泛用于分析人类和动物疾病诊断、食品安全、环境监测等各个方面。免疫检测基于抗原抗体免疫反应原理，通常分为异相免疫反应和均相免疫反应，使用异相免疫反应的分析方法包括已经得到广泛使用的酶联免疫吸附检测(ELISA)、胶体金渗滤试纸条、免疫荧光染色等；使用均相免疫反应的分析方法包括荧光偏振免疫分析、血凝血抑、免疫沉淀等。由于其原理简单、试剂种类多、稳定性好、成本较低，免疫检测已经成为目前体外诊断领域使用最多和最重要的分析方法。
磁珠法免疫检测是目前常用的检测方法，由于其与自动化仪器兼容的优点，实现了很多项目的自动化检测，包括环境毒素检测和医用诊断。但是在动物检验检疫领域，尤其是猪蓝耳病，由于研究较少，还未有基于磁珠法的免疫检测试剂盒，以及配套的自动检测仪器和整体检测方案。自动化的免疫检测结果稳定性好、重复性好、人为干扰少，并且可以实现高通量、多项目同时检测，是免疫检测的发展趋势。
猪蓝耳病毒是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的一种以感染猪发热、厌食，妊娠母猪晚期流产、早产、产死胎、弱胎和木乃伊胎，各种年龄猪(特别是仔猪)呼吸障碍为特征的高度传染性疾病。
目前针对猪蓝耳病的免疫检测方法包括基于96孔板的酶联免疫吸附试剂盒，胶体金试纸条，免疫过氧化物酶单层细胞试验等，这些方法均存在自动化水平低的问题。现有的核酸检测的方法虽然灵敏度有所提高，但是，容易产生非特异性的扩增。目前可以实现自动化的猪蓝耳病免疫学检测方法为使用液体工作站操作的96孔板的酶联免疫吸附试剂盒，其存在的问题包括：(1)价格昂贵；目前专门用于免疫检测的液体工作站价格较昂贵，大多数区县一级的动物防疫单位和养殖场户并无能力购买。(2)仪器和操作复杂、故障率高；目前的免疫检测液体工作站一般体积较大，机械构造复杂，对使用人员操作水平要求较高，复杂的机械构造也容易带来较高的故障率。(3)完成检测分析所需时间较长；目前自动化分析仪的原理是机械臂替代人手完成每步操作，统筹能力较差，进行高通量分析时分析时间长。(4)开放程度较差；耗材和试剂为封闭式，不兼容其他种类的耗材和试剂，因此其检验项目有限。针对现有技术中的上述技术问题，亟需提供一种适用于自动核酸提取仪的磁珠法猪蓝耳病抗体免疫检测试剂盒，以降低猪蓝耳病检测成本、提高其检测精度。
发明内容
本发明的目的是提供一种自动核酸提取仪用猪蓝耳病抗体免疫磁珠法检测试剂盒。
本发明首先提供一种系统，包括自动核酸提取仪和含有序列表中序列1所示多肽的试剂盒；
所述系统的功能为如下(a1)-(a4)中的至少一种：
(a1)检测待测猪是否感染了猪蓝耳病毒；
(a2)检测待测猪血清中是否具有猪蓝耳病毒抗体；
(a3)检测待测猪唾液中是否具有猪蓝耳病毒抗体；
(a4)检测待测猪是否患有猪蓝耳病。
所述自动核酸提取仪为磁珠法自动核酸提取仪。
所述自动核酸提取仪包括各种类型的磁珠法自动核酸提取仪，需要满足如下要求：
(1)可实现磁珠在每一个反应孔中吸取和释放；
(2)可控制磁珠在每一个孔的停留时间。
所述自动核酸提取仪具体可为KingFisher 24孔核酸提取仪、KingFisher 96孔核酸提取仪或西安天龙NP968 32孔核酸提取仪。
所述试剂盒包括连接有序列表中序列1所示多肽的磁珠。
所述试剂盒中，所述多肽和磁珠通过亲和素-生物素相互作用连接。
所述试剂盒中，所述多肽和磁珠通过化学反应共价连接。
所述试剂盒中，所述多肽和磁珠通过非特异性连接。
所述试剂盒包括序列表中序列1所示多肽和磁珠。
所述试剂盒中，包括具有生物素标记的序列表中序列1所示多肽和具有亲和素包被的磁珠。
所述试剂盒中，包括具有羟基标记的序列表中序列1所示多肽和具有羧基包被的磁珠。
本发明还保护一种试剂盒，包括序列表中序列1所示多肽；所述试剂盒的功能为如下(b1)-(b4)中的至少一种：
(b1)检测待测猪是否感染了猪蓝耳病毒；
(b2)检测待测猪血清中是否具有猪蓝耳病毒抗体；
(b3)检测待测猪唾液中是否具有猪蓝耳病毒抗体；
(b4)检测待测猪是否患有猪蓝耳病。
本发明还保护一种试剂盒，包括连接有序列表中序列1所示多肽的磁珠；所述试剂盒的功能为如下(b1)-(b4)中的至少一种：
(b1)检测待测猪是否感染了猪蓝耳病毒；
(b2)检测待测猪血清中是否具有猪蓝耳病毒抗体；
(b3)检测待测猪唾液中是否具有猪蓝耳病毒抗体；
(b4)检测待测猪是否患有猪蓝耳病。
所述试剂盒中，所述多肽和磁珠通过亲和素-生物素相互作用连接。
所述试剂盒中，所述多肽和磁珠通过化学反应共价连接。
所述试剂盒中，所述多肽和磁珠通过非特异性连接。
本发明还保护一种试剂盒，包括序列表的序列表中序列1所示多肽和磁珠；所述试剂盒的功能为如下(b1)-(b4)中的至少一种：
(b1)检测待测猪是否感染了猪蓝耳病毒；
(b2)检测待测猪血清中是否具有猪蓝耳病毒抗体；
(b3)检测待测猪唾液中是否具有猪蓝耳病毒抗体；
(b4)检测待测猪是否患有猪蓝耳病。
所述试剂盒中，包括具有生物素标记的序列表中序列1所示多肽和具有亲和素包被的磁珠。
所述试剂盒中，包括具有羟基标记的序列表中序列1所示多肽和具有羧基包被的磁珠。
以上任一所述试剂盒还包括二抗、洗液和显色底物。
所述二抗为带有辣根过氧化物酶标记的兔抗猪IgG。所述二抗具体可为购自sigma公司，货号为：A5670的抗体。
所述洗液为含有0.5％(体积百分比)Tween 20的PBS溶液。
所述显色底物为TMB显色液。
以上任一所述试剂盒还包括阳性对照和阴性对照。
所述阳性对照具体可为经商用试剂盒(HerdChek PRRS X3抗体检测试剂盒，IDEXX公司，货号：99-40959)检测猪蓝耳病抗体为阳性的猪血清。
所述阴性对照具体可为健康猪血清。
本发明还保护序列表的序列1所示的多肽的应用，为如下(c1)-(c8)中的至少一种：
(c1)制备用于检测待测猪是否感染了猪蓝耳病毒的试剂盒；
(c2)制备用于检测待测猪血清中是否具有猪蓝耳病毒抗体的试剂盒；
(c3)制备用于检测待测猪唾液中是否具有猪蓝耳病毒抗体的试剂盒；
(c4)制备用于检测待测猪是否患有猪蓝耳病的试剂盒；
(c5)检测待测猪是否感染了猪蓝耳病毒；
(c6)检测待测猪血清中是否具有猪蓝耳病毒抗体；
(c7)检测待测猪唾液中是否具有猪蓝耳病毒抗体；
(c8)检测待测猪是否患有猪蓝耳病。
本发明还保护一种检测待测样本中是否具有猪蓝耳病抗体的方法，包括如下步骤：取待测样本，采用以上任一所述系统进行检测。
所述方法具体可包括如下步骤：(1)依次在自动核酸提取仪的各孔中加入猪蓝耳病抗体捕获免疫磁珠分散液(反应孔1)、洗液(清洗孔1)、二抗工作液(反应孔2)、洗液(清洗孔2)和显色底物(反应孔3)；(2)将待测样本加入反应孔1中；(3)进行反应，反应结束后在650nm波长下，读取底物的光密度值。
所述反应孔1加入5-300微升猪蓝耳病抗体捕获免疫磁珠分散液。
所述反应孔1加入50微升猪蓝耳病抗体捕获免疫磁珠分散液。
所述清洗孔1加入50-300微升洗液。
所述清洗孔1加入200微升洗液。
所述反应孔2加入5-300微升二抗工作液。
所述反应孔2加入100微升二抗工作液。
所述清洗孔2加入50-300微升洗液。
所述清洗孔2加入200微升洗液。
所述反应孔3加入5-300微升显色底物。
所述反应孔3加入100微升显色底物。
所述猪蓝耳病抗体捕获免疫磁珠分散液由溶剂、序列表中序列1所示多肽和磁珠组成。所述分散液中磁珠的直径为500nm-100μm，磁珠的浓度为10μg/ml-10mg/ml；所述多肽的浓度为1pM-1mM；所述溶剂为PBS溶液。所述分散液中磁珠的直径为1μm，磁珠的浓度为1mg/ml；所述多肽的浓度为1μM；所述溶剂为PBS溶液。
所述二抗工作液为将二抗采用PBS溶液稀释至浓度为1ng/ml-1μg/ml得到的。
所述二抗工作液为将二抗采用PBS溶液稀释至浓度为1μg/ml得到的。
所述反应程序程序和参数依次为：(1)磁珠与待测样品在反应孔1中的反应时间(范围为5分钟-10小时)；(2)在清洗孔1中的清洗时间(范围为1-10分钟)；(3)磁珠与二抗在反应孔2中的反应时间(范围为5分钟-10小时)；(4)在清洗孔2中的清洗时间(范围为1-10分钟)；(5)磁珠与底物在反应孔3中的反应时间(范围为1分钟-1小时)。
所述反应程序程序和参数依次具体为：(1)磁珠与待测样品在反应孔1中的反应时间为10min；(2)在清洗孔1中的清洗时间为2min；(3)磁珠与二抗在反应孔2中的反应时间为10min；(4)在清洗孔2中的清洗时间为2min；(5)磁珠与底物在反应孔3中的反应时间为5min。
本发明还保护一种检测待测样本中是否具有猪蓝耳病抗体的方法，包括如下步骤：取待测样本，采用以上任一所述试剂盒进行检测。
以上任一所述待测样本具体可为猪血清或猪体液或猪唾液。
本发明提供了一种磁珠法免疫检测试剂盒，可用于结合自动核酸提取仪，实现猪血液、体液中蓝耳病抗体的定性和定量检测。目前，市面上还没有针对猪蓝耳病的磁珠法免疫检测试剂盒，使用此试剂盒，结合自动核酸提取仪，可以提高猪蓝耳病抗体检测效率，具体有益效果如下：(1)缩短检测时间；在最少30分钟内自动完成96份样品的检测。(2)作为试剂盒，可兼容多种仪器和耗材。(3)试剂液体保存，与固相免疫反应相比，提高了蛋白质等易失活生物分子的保存质量。(4)不需要人工操作。不需要人工操作和其他辅助仪器，减少了人工操作带来的误差。(5)封闭操作，大大减少了开放操作可能导致的生物污染，也减少了样品中病原感染操作人员的可能性。本发明提供的试剂盒和检测方法有效降低了猪蓝耳病检测成本、提高了自动化程度和检测精度。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
实施例1、猪蓝耳病抗体捕获免疫磁珠分散液的制备
一、猪蓝耳病特异性多肽的筛选和制备
对猪蓝耳病及其免疫检测方法进行研究，通过功能分析、特异性分析和灵敏度分析，得到一个猪蓝耳病特异性多肽，如序列表的序列1所示。
二、猪蓝耳病抗体捕获免疫磁珠分散液的制备
将猪蓝耳病特异性多肽与磁珠连接(可以在多肽的C端进行生物素标记，采用生物时标记时，将磁珠采用亲和素包被，多肽通过亲和素-生物素相互作用连接到磁珠表面；可以在多肽的C端采用羟基标记，当采用羟基标记时，将磁珠表面连接羧基，多肽通过化学反应共价连接到磁珠表面；多肽表面也可以不进行标记，不进行标记时，多肽可通过非特异性吸附连接到磁珠表面)，得到猪蓝耳病抗体捕获免疫磁珠分散液(溶剂为PBS溶液)。
实施例2、猪蓝耳病抗体免疫检测系统和检测方法的建立
一、猪蓝耳病抗体免疫检测系统
猪蓝耳病抗体免疫检测系统由自动核酸提取仪和猪蓝耳病抗体免疫检测试剂盒组成。
自动核酸提取仪包括各种类型的磁珠法自动核酸提取仪，需要满足如下要求：
(1)可实现磁珠在每一个反应孔中吸取和释放；
(2)可控制磁珠在每一个孔的停留时间。
猪蓝耳病抗体免疫检测试剂盒包括实施例1制备的猪蓝耳病抗体捕获免疫磁珠分散液(分散液中磁珠浓度为10μg/ml-10mg/ml，猪蓝耳病特异性多肽浓度为1pM-1mM，溶剂为PBS溶液)、稀释液(含有0.5％Tween 20的PBS溶液)、洗液(含有0.5％Tween20的PBS溶液)、二抗(带有辣根过氧化物酶标记的兔抗猪IgG，sigma公司，货号：A5670)、显色底物(TMB显色液)、阳性对照和阴性对照。
阳性对照：经商用试剂盒(HerdChek PRRS X3抗体检测试剂盒，IDEXX公司，货号：99-40959)检测猪蓝耳病抗体阳性的猪血清。
阴性对照：健康猪采血取血清。
二、检测方法的建立
1、将该试剂盒中的猪蓝耳病抗体捕获免疫磁珠分散液、洗液、二抗和显色底物依次加入到微孔反应板的五个不同孔中(根据预计加入的试剂，依次命名为反应孔1、清洗孔1、反应孔2、清洗孔2、反应孔3)。反应孔1加入5-300微升猪蓝耳病抗体捕获免疫磁珠分散液，清洗孔1加入50-300微升洗液，反应孔2加入5-300微升二抗工作液(将带有辣根过氧化物酶标记的兔抗猪IgG采用PBS溶液稀释)、清洗孔2加入50-300微升洗液，反应孔3加入5-300微升显色底物。
2、将待测样本(猪血清、猪唾液等)加入反应孔1中。
3、将步骤2的微孔反应板置于自动核酸提取仪中，设置程序(待测样本先在反应孔1中进行反应、待测样本中的猪蓝耳病抗体通过猪蓝耳病特异性多肽连接磁珠，然后在清洗孔1中进行清洗，然后在反应孔2中进行反应、磁珠上的猪蓝耳病抗体与二抗结合，然后在清洗孔2中进行清洗，然后在反应孔3中进行反应、发生光反应变化)，启动反应，等待反应完成后，将微孔反应板取出，使用微孔板酶标仪，在650nm波长下，读取底物的光密度值。
按照不同的仪器的要求设置程序。程序和参数依次为：(1)磁珠与待测样品在反应孔1中的反应时间(范围为5分钟-10小时)；(2)在清洗孔1中的清洗时间(范围为1-10分钟)；(3)磁珠与二抗在反应孔2中的反应时间(范围为5分钟-10小时)；(4)在清洗孔2中的清洗时间(范围为1-10分钟)；(5)磁珠与底物在反应孔3中的反应时间(范围为1分钟-1小时)。
4、质控：在加入待测样品时，在平行的磁珠孔中加入阳性对照和阴性对照，结果中阳性对照应显色较深，阴性对照显色较浅(阳性对照和阴性对照的光密度值需要根据反应条件和体系实现校正)，否则认为检测结果无效。
实施例3、检测条件优化和实际检测
待测样品：三头感染蓝耳病的猪，采血取血清，经商用试剂盒检测猪蓝耳病抗体为阳性(样品1、样品2和样品3)。
对实施例2的检测方法进行条件优化，优化的参数包括：磁珠直径(500nm-100μm)、磁珠浓度(10μg/ml-10mg/ml)、猪蓝耳病特异性多肽浓度(1pM-1mM)、二抗浓度(1ng/ml-1μg/ml)、磁珠与特异性多肽的连接方式(亲和素-生物素相互作用、化学反应共价作用或非特异性吸附作用)和反应时间，得到最优的检测方法，具体如下：
核酸提取仪采用KingFisher 24孔核酸提取仪。
1、将猪蓝耳病抗体捕获免疫磁珠分散液、洗液、二抗和显色底物依次加入到微孔反应板的五个不同孔中(根据预计加入的试剂，依次命名为反应孔1、清洗孔1、反应孔2、清洗孔2、反应孔3)。
猪蓝耳病抗体捕获免疫磁珠分散液中，猪蓝耳病特异性多肽的C端进行生物素标记，将磁珠采用亲和素包被。分散液中，磁珠的直径为1微米，浓度为1mg/ml，猪蓝耳病特异性多肽浓度为1μM，溶剂为PBS溶液。
反应孔1加入50微升猪蓝耳病抗体捕获免疫磁珠分散液，清洗孔1加入200微升洗液，反应孔2加入100微升二抗工作液(将带有辣根过氧化物酶标记的兔抗猪IgG采用PBS溶液稀释至浓度为1μg/ml)、清洗孔2加入200微升洗液，反应孔3加入100微升显色底物。
2、将待测样本(猪血清、猪唾液等)加入反应孔1中。
3、将步骤2的微孔反应板置于自动核酸提取仪中，设置程序(待测样本先在反应孔1中进行反应、待测样本中的猪蓝耳病抗体通过猪蓝耳病特异性多肽连接磁珠，然后在清洗孔1中进行清洗，然后在反应孔2中进行反应、磁珠上的猪蓝耳病抗体与二抗结合，然后在清洗孔2中进行清洗，然后在反应孔3中进行反应、发生光反应变化)，启动反应，等待反应完成后，将微孔反应板取出，使用微孔板酶标仪，在650nm波长下，读取底物的光密度值。
按照不同的仪器的要求设置程序。程序和参数依次为：(1)磁珠与待测样品在反应孔1中的反应时间为10min；(2)在清洗孔1中的清洗时间为2min；(3)磁珠与二抗在反应孔2中的反应时间为10min；(4)在清洗孔2中的清洗时间为2min；(5)磁珠与底物在反应孔3中的反应时间为5min。
4、质控：在加入待测样品时，在平行的磁珠孔中加入阳性对照和阴性对照，结果中阳性对照OD值的绝对值应大于等于0.2，阴性对照OD值的绝对值应小于0.2，否则认为检测结果无效。
在进行结果判断时，判定标准是OD值的绝对值，OD值的绝对值大于等于0.2时，判定为阳性，OD值的绝对值小于0.2时，判定为阴性。
结果如表1所示。
表1 检测结果
样本名称 OD值 判断结果
阳性对照 1.5 阳性
阴性对照 0.1 阴性
样品1 0.8 阳性
样品2 0.6 阳性
样品3 0.2 阳性
实施例4、灵敏度实验
待测样本：采用稀释液对阳性对照血清进行梯度稀释，稀释比例分别为1:2、1:4、1:6、1:8和1:16。
采用实施例3中的方法进行检测。
结果如表2所示。结果表明，血清稀释比例为1:8时，还可以得到准确结果。
表2 灵敏度检测结果
样本名称 OD值 判断结果
阳性对照 1.5 阳性
阴性对照 0.15 阴性
阳性对照(1:2稀释) 1.0 阳性
阳性对照(1:4稀释) 0.6 阳性
阳性对照(1:8稀释) 0.21 阳性
阳性对照(1:16稀释) 0.15 阴性
实施例5、特异性实验
待测样本：经商用试剂盒(猪瘟抗体检测试剂盒，IDEXX公司，货号：99-43220)检测猪瘟阳性的猪血清、经商用试剂盒(伪狂犬gB抗体检测试剂盒，IDEXX公司，货号：99-09732)检测伪狂犬阳性的猪血清、经商用试剂盒(口蹄疫O型液相阻断ELISA抗体检测试剂盒，兰州兽医研究所，货号：01.0002)检测口蹄疫阳性的猪血清。
采用实施例3中的方法进行检测。
结果如表3所示。结果表明，本方法具有很好的特异性。
表3 特异性检测结果
样本名称 OD值 判断结果
阳性对照 1.5 阳性
阴性对照 0.18 阴性
猪瘟阳性血清 0.15 阴性
伪狂犬阳性血清 0.15 阴性
口蹄疫阳性血清 0.15 阴性
对比例1、其它多肽的实际应用
人工合成如下多肽：
1、AVKQGVVNLVKYAK；
2、LKSLVLGGRKAVKQG；
3、LSDIKTNTTA；
4、KFWDKNSGDV；
5、ANPENRRAQWE；
6、KKNPEKPHFPLATEDD；
7、FNQGAGTCAL；
8、RESDESMIAPPADTG。
分别采用上述8个多肽替代序列表的序列1所示的猪蓝耳病特异性多肽，按照实施例3中的方法进行实验。
结果显示，编号1-4所示的多肽无法捕获猪蓝耳病抗体，对阳性对照不产生阳性信号。编号5-8所述的多肽非特异性信号过高，对阴性对照液产生阳性信号。
<110> 中国动物疫病预防控制中心
<120> 自动核酸提取仪用猪蓝耳病抗体免疫磁珠法检测试剂盒
<160> 1
<210> 1
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223>
<400> 1
Gln Pro Val Lys Asp Ser Trp Met Ser Ser Arg Gly Phe Asp Glu
1 5 10 15

Claims (10)

1.一种系统，包括自动核酸提取仪和含有序列表中序列1所示多肽的试剂盒；
所述系统的功能为如下(a1)-(a4)中的至少一种：
(a1)检测待测猪是否感染了猪蓝耳病毒；
(a2)检测待测猪血清中是否具有猪蓝耳病毒抗体；
(a3)检测待测猪唾液中是否具有猪蓝耳病毒抗体；
(a4)检测待测猪是否患有猪蓝耳病。
2.如权利要求1所述的系统，其特征在于：所述试剂盒包括连接有序列表中序列1所示多肽的磁珠。
3.如权利要求1所述的系统，其特征在于：所述试剂盒包括序列表中序列1所示多肽和磁珠。
4.如权利要求1至3任一所述的系统，其特征在于：所述自动核酸提取仪为磁珠法自动核酸提取仪。
5.一种试剂盒，包括序列表中序列1所示多肽；所述试剂盒的功能为如下(b1)-(b4)中的至少一种：
(b1)检测待测猪是否感染了猪蓝耳病毒；
(b2)检测待测猪血清中是否具有猪蓝耳病毒抗体；
(b3)检测待测猪唾液中是否具有猪蓝耳病毒抗体；
(b4)检测待测猪是否患有猪蓝耳病。
6.一种试剂盒，包括连接有序列表的序列1所示的多肽的磁珠；所述试剂盒的功能为如下(b1)-(b4)中的至少一种：
(b1)检测待测猪是否感染了猪蓝耳病毒；
(b2)检测待测猪血清中是否具有猪蓝耳病毒抗体；
(b3)检测待测猪唾液中是否具有猪蓝耳病毒抗体；
(b4)检测待测猪是否患有猪蓝耳病。
7.一种试剂盒，包括序列表的序列1所示的多肽和磁珠；所述试剂盒的功能为如下(b1)-(b4)中的至少一种：
(b1)检测待测猪是否感染了猪蓝耳病毒；
(b2)检测待测猪血清中是否具有猪蓝耳病毒抗体；
(b3)检测待测猪唾液中是否具有猪蓝耳病毒抗体；
(b4)检测待测猪是否患有猪蓝耳病。
8.序列表的序列1所示的多肽的应用，为如下(c1)-(c8)中的至少一种：
(c1)制备用于检测待测猪是否感染了猪蓝耳病毒的试剂盒；
(c2)制备用于检测待测猪血清中是否具有猪蓝耳病毒抗体的试剂盒；
(c3)制备用于检测待测猪唾液中是否具有猪蓝耳病毒抗体的试剂盒；
(c4)制备用于检测待测猪是否患有猪蓝耳病的试剂盒；
(c5)检测待测猪是否感染了猪蓝耳病毒；
(c6)检测待测猪血清中是否具有猪蓝耳病毒抗体；
(c7)检测待测猪唾液中是否具有猪蓝耳病毒抗体；
(c8)检测待测猪是否患有猪蓝耳病。
9.一种检测待测样本中是否具有猪蓝耳病抗体的方法，包括如下步骤：取待测样本，采用权利要求1至4任一所述的系统进行检测。
10.一种检测待测样本中是否具有猪蓝耳病抗体的方法，包括如下步骤：取待测样本，采用5至7任一所述的试剂盒进行检测。
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