CN102300870B - 低分子量多硫酸化透明质酸衍生物和含有它的医药 - Google Patents

Abstract

本发明提供对过敏性疾病的预防和/或治疗有用的低分子量的多硫酸化透明质酸衍生物。一种过敏性疾病的预防和/或治疗剂，将下述通式(IA)或(IB)表示的低分子量多硫酸化透明质酸衍生物或其制药学上容许的盐作为有效成分，该过敏性疾病选自花粉症、过敏性鼻炎、过敏性结膜炎、异位性皮炎和哮喘。[式中，n是0～15的数，R各自独立是氢原子或SO₃H基，等]。

Description

低分子量多硫酸化透明质酸衍生物和含有它的医药

技术领域

本发明涉及对过敏性疾病的预防和/或治疗有用的低分子量多硫酸化透明质酸衍生物(HAPS)。

背景技术

作为β-D-N-乙酰葡萄糖胺与β-D-葡萄糖醛酸交替键合而成的直链状高分子多糖的透明质酸，在粘多糖类中能够比较容易地获得，显示特异的物理化学性质和生理性质，因而其本身或者其各种衍生物被用作药品、化妆品。

例如，作为透明质酸衍生物的多硫酸化透明质酸，已知具有激肽释放酶-激肽系统的抑制活性(专利文献1)和磷脂酶A2的抑制活性(专利文献2)，可以用作过敏性疾病的治疗药(专利文献3)、对作为粘附因子之一的选择素介导性的炎症显示强抗炎作用(专利文献4)等。

另外，报道了粘均分子量为10000以下的低分子量寡聚多硫酸化透明质酸可以用作透皮性优异的化妆品的有效成分(专利文献5)，以及4～20个糖的多硫酸化透明质酸寡糖具有抗血液凝固活性和抗透明质酸酶活性、有成为抗癌剂的可能性(非专利文献1)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开平11-147901号公报

专利文献2：日本特开平11-269077号公报

专利文献3：日本特开平11-335288号公报

专利文献4：日本特开平8-277224号公报

专利文献5：日本特开平10-195107号公报

非专利文献

非专利文献1：Glycobiology，vol.11，No.1，pp.57-64，2001

发明内容

但是，在上述多硫酸化透明质酸和多硫酸化透明质酸低聚物中，也存在因其本身具有血管通透性亢进作用等刺激作用而不适合临床应用的物质，实际情况是完全满足药理活性·安全性等的物质少。

本发明提供没有此类问题的对过敏性疾病的预防和/或治疗有用的低分子量透明质酸衍生物。

本发明人等为了开发出对过敏性疾病的预防和/或治疗有用的化合物进行了认真研究，结果发现下述通式(IA)和(IB)表示的低分子量多硫酸化透明质酸衍生物具有抗过敏作用和抗炎作用，并且没有血管通透性亢进作用，可用作药品。

即，本发明涉及以下的1)～15)。

1)一种过敏性疾病的预防和/或治疗剂，将下述通式(IA)或下述通式(IB)表示的低分子量多硫酸化透明质酸衍生物或其制药学上容许的盐作为有效成分，该过敏性疾病选自花粉症、过敏性鼻炎、过敏性结膜炎、异位性皮炎和哮喘，

[式中，n表示0～15的数；X表示下式(a)或(b)：

Y表示下式(c)、(d)或(e)：

R各自独立地表示氢原子或SO₃H基(其中，SO₃H基占R总数的80～100％)；R¹表示-OH、-OSO₃H或-NZ₁Z₂(其中，Z₁和Z₂独立地表示氢原子、-SO₃H、可被取代的低级烷基、可被取代的芳基、可被取代的芳烷基或可被取代的杂芳基，或者-NZ₁Z₂整体表示氨基酸残基或肽残基)；*表示与氧原子的键合部位]，

[式中，n表示0～15的数；W表示下式(f)或(g)：

R各自独立地表示氢原子或SO₃H基(其中，SO₃H基占R总数的80～100％)；R¹表示-OH、-OSO₃H或-NZ₁Z₂(其中，Z₁和Z₂独立地表示氢原子、-SO₃H、可被取代的低级烷基、可被取代的芳基、可被取代的芳烷基或可被取代的杂芳基，或者-NZ₁Z₂整体表示氨基酸残基或肽残基)；*表示与氧原子的键合部位]。

2)如上述1)所述的预防和/或治疗剂，其中，在通式(IA)中，Y是式(d)或(e)。

3)如上述2)所述的预防和/或治疗剂，其中，X是式(a)。

4)如上述3)所述的预防和/或治疗剂，其中，n是3、4或5。

5)如上述3)所述的预防和/或治疗剂，其中，n是4或5。

6)如上述1)所述的预防和/或治疗剂，其中，低分子量多硫酸化透明质酸衍生物是通式(IB)。

7)如上述6)所述的预防和/或治疗剂，其中，n是3、4或5。

8)如上述6)所述的预防和/或治疗剂，其中，n是4或5。

9)上述1)～8)中任一项所述的低分子量多硫酸化透明质酸衍生物或其制药学上容许的盐在选自花粉症、过敏性鼻炎、过敏性结膜炎、异位性皮炎和哮喘的过敏性疾病的预防和/或治疗剂的制造中的使用。

10)一种过敏性疾病的预防和/或治疗方法，该过敏性疾病选自花粉症、过敏性鼻炎、过敏性结膜炎、异位性皮炎和哮喘，其特征在于，给予人或动物有效量的上述1)～8)中任一项所述的低分子量多硫酸化透明质酸衍生物或其制药学上容许的盐。

11)一种低分子量多硫酸化透明质酸衍生物或其制药学上容许的盐，其用下述通式(IA’)或下述通式(IB)表示，

[式中，n表示0～15的数；X表示下式(a)或(b)：

Y’表示下式(d)或(e)：

R各自独立地表示氢原子或SO₃H基(其中，SO₃H基占R总数的80～100％)；R¹表示-OH、-OSO₃H或-NZ₁Z₂(其中，Z₁和Z₂独立地表示氢原子、-SO₃H、可被取代的低级烷基、可被取代的芳基、可被取代的芳烷基或可被取代的杂芳基，或者-NZ₁Z₂整体表示氨基酸残基或肽残基)；*表示与氧原子的键合部位]，

[式中，n表示0～15的数，W表示下式(f)或(g)：

R各自独立地表示氢原子或SO₃H基(其中，SO₃H基占R总数的80～100％)；R¹表示-OH、-OSO₃H或-NZ₁Z₂(其中，Z₁和Z₂独立地表示氢原子、-SO₃H、可被取代的低级烷基、可被取代的芳基、可被取代的芳烷基或可被取代的杂芳基，或者-NZ₁Z₂整体表示氨基酸残基或肽残基)；*表示与氧原子的键合部位]。

12)如上述11)所述的低分子量多硫酸化透明质酸衍生物或其制药学上容许的盐，其中，在通式(IA’)中，X是式(a)。

13)如上述11)所述的低分子量多硫酸化透明质酸衍生物或其制药学上容许的盐，其是通式(IB)。

14)如上述12)或13)所述的低分子量多硫酸化透明质酸衍生物或其制药学上容许的盐，其中，n是3、4或5。

15)一种医药组合物，其含有上述11)、12)、13)或14)的低分子量多硫酸化透明质酸衍生物或其制药学上容许的盐、以及制药学上容许的赋形剂。

本发明的低分子量多硫酸化透明质酸衍生物或其制药学上容许的盐，具有优异的抗过敏作用和抗炎作用，而且没有血管通透性亢进作用，因而可以用作副作用少、安全性优异的、花粉症、过敏性鼻炎、过敏性结膜炎、异位性皮炎和哮喘等过敏性疾病的预防和/或治疗剂。另外，在本发明的低分子量多硫酸化透明质酸衍生物或其制药学上容许的盐中，尤其是通式(IA)的Y为(d)或(e)的化合物群以及通式(IB)的化合物群，具有在水溶液中的稳定性高、容易制剂化的优点。

附图说明

[图1]制造例1中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图2]制造例2中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图3]制造例3中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图4]制造例4中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图5]制造例5中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图6]制造例6中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图7]制造例7中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图8]制造例8中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图9]制造例9中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图10]制造例10中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图11]制造例11中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图12]制造例14中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图13]制造例15中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图14]制造例16中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图15]制造例17中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图16]制造例18中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图17]制造例19中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图18]制造例20中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图19]制造例21中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图20]制造例22中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图21]制造例23中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图22]制造例24中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图23]制造例25中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图24]制造例26中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图25]制造例27中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图26]制造例28中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图27]制造例29中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图28]制造例30中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图29]制造例31中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图30]制造例32中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图31]制造例33中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图32]制造例34中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图33]制造例35中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图34]制造例36中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图35]制造例37中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图36]制造例38中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图37]制造例39中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图38]制造例40中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图39]制造例41中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图40]制造例42中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图41]制造例43中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图42]制造例44中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图43]制造例45中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图44]制造例46中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图45]制造例47中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图46]制造例48中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图47]制造例49中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图48]制造例50中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图49]制造例51中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图50]制造例52中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图51]制造例53中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图52]制造例54中得到的化合物的¹H-NMR图表。

[图53]化合物1的¹H-NMR图表。

[图54]化合物2的¹H-NMR图表。

[图55]化合物3的¹H-NMR图表。

[图56]化合物4的¹H-NMR图表。

[图57]化合物5的¹H-NMR图表。

[图58]化合物6的¹H-NMR图表。

[图59]化合物7的¹H-NMR图表。

[图60]化合物8的¹H-NMR图表。

[图61]化合物9的¹H-NMR图表。

[图62]化合物10的¹H-NMR图表。

[图63]化合物11的¹H-NMR图表。

[图64]化合物14的¹H-NMR图表。

[图65]化合物15的¹H-NMR图表。

[图66]化合物16的¹H-NMR图表。

[图67]化合物17的¹H-NMR图表。

[图68]化合物18的¹H-NMR图表。

[图69]化合物19的¹H-NMR图表。

[图70]化合物20的¹H-NMR图表。

[图71]化合物21的¹H-NMR图表。

[图72]化合物22的¹H-NMR图表。

[图73]化合物23的¹H-NMR图表。

[图74]化合物24的¹H-NMR图表。

[图75]化合物25的¹H-NMR图表。

[图76]化合物26的¹H-NMR图表。

[图77]化合物27的¹H-NMR图表。

[图78]化合物28的¹H-NMR图表。

[图79]化合物29的¹H-NMR图表。

[图80]化合物30的¹H-NMR图表。

[图81]化合物31的¹H-NMR图表。

[图82]化合物32的¹H-NMR图表。

[图83]化合物33的¹H-NMR图表。

[图84]化合物34的¹H-NMR图表。

[图85]化合物35的¹H-NMR图表。

[图86]化合物36的¹H-NMR图表。

[图87]化合物37的¹H-NMR图表。

[图88]化合物38的¹H-NMR图表。

[图89]化合物39的¹H-NMR图表。

[图90]化合物40的¹H-NMR图表。

[图91]化合物41的¹H-NMR图表。

[图92]化合物42的¹H-NMR图表。

[图93]化合物43的¹H-NMR图表。

[图94]化合物44的¹H-NMR图表。

[图95]化合物45的¹H-NMR图表。

[图96]化合物46的¹H-NMR图表。

[图97]化合物47的¹H-NMR图表。

[图98]化合物48的¹H-NMR图表。

[图99]表示即时型过敏反应抑制效果的图。###：p＜0.01，##：p＜0.01，p＜0.05，^*：p＜0.05，^**：P＜0.01，N＝8，mean+/-SE

[图100]表示迟发型过敏反应抑制效果的图。###：p＜0.01，##：p＜0.01，p＜0.05，^*：p＜0.05，^**：P＜0.01，N＝8，mean+/-SE

[图101]表示血管通透亢进作用的图。dex：葡聚糖给药的点，Control：硫酸化透明质酸给药的点

[图102]表示血管通透亢进作用的图。dex：葡聚糖给药的点，Control：硫酸化透明质酸给药的点

[图103]表示血管通透亢进作用的图。dex：葡聚糖给药的点，Control：硫酸化透明质酸给药的点

具体实施方式

本发明的低分子量多硫酸化透明质酸衍生物是透明质酸低聚物的总羟基被过量地硫酸化而形成的物质，对于硫酸化的程度，例如SO₃H基占式(IA)和(IB)的R的总数(低聚物全体)的比例(或取代度)为80～100％，优选为90～100％。应予说明，低聚物中的SO₃H基可以不均匀分布，但通常从制备和使用的观点出发优选均匀地存在于全部分子中。

本发明的式(IA)表示的化合物中Y是式(d)或(e)的化合物(式(IA’))和式(IB)表示的化合物是文献未记载的新化合物。

在上述式(IA)和(IB)中，作为Z₁和Z₂表示的、可以被取代的低级烷基、可以被取代的芳基、可以被取代的芳烷基、可以被取代的杂芳基中的“低级烷基”，可举出直链或支链的碳原子数1～6(以下，简记为“C_1-6”)的烷基，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正己基等。其中，优选是C_1-4烷基，更优选是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基，进一步优选是甲基、乙基。

作为“芳基”，可举出C_6-14的单环乃至三环式芳香烃环基，例如可举出苯基、萘基、蒽基，优选是苯基。

作为“杂芳基”，可举出具有至少1个选自氮原子、硫原子和氧原子中的杂原子的饱和或不饱和的单环或多环杂环基。

具体而言，可举出具有1～4个氮原子的3～6元不饱和单杂环基，例如吡咯基、吡咯啉基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、三唑基、四唑基、四氢吡啶基等；

具有1～4个氮原子的3～7元饱和单杂环基，例如吡咯烷基、咪唑烷基、哌啶基、哌嗪基、高哌啶基等；

具有1～5个氮原子的不饱和稠杂环基，例如吲哚基、异吲哚基、二氢异吲哚基、苯并咪唑基、喹啉基、异喹啉基、咪唑并吡啶基、吲唑基、苯并三唑基、四唑并吡啶基、喹喔啉基、吡啶并四氢吡啶基、四氢异喹啉基、二氢吲哚基、二氢吡咯并吡啶基等；

具有1～5个氮原子的饱和稠杂环基，例如吡咯烷并哌嗪基、奎宁环基、吡咯烷并哌啶基等；

具有氧原子的3～6元不饱和单杂环基，例如吡喃基、呋喃基等；

具有氧原子的3～6元饱和单杂环基，例如1H-四氢吡喃基、四氢呋喃基等；

具有1或2个硫原子的3～6元不饱和单杂环基，例如噻吩基等；

具有1或2个氧原子和1～3个氮原子的3～6元不饱和单杂环基，例如唑基、异唑基、二唑基、氮氧丙啶基等；

具有1或2个氧原子和1～3个氮原子的3～6元饱和单杂环基，例如吗啉基等；

具有1或2个氧原子和1～3个氮原子的饱和稠杂环基，例如苯并呋咱基、苯并唑基、苯并二唑基等；

具有1或2个硫原子和1～3个氮原子的3～6元不饱和单杂环基，例如噻唑基、噻二唑基等；

具有1或2个硫原子和1～3个氮原子的3～6元饱和单杂环基，例如噻唑烷基等；

具有1或2个硫原子和1～3个氮原子的不饱和稠杂环基，例如苯并噻唑基、噻唑并四氢吡啶基等；

具有1或2个氧原子的不饱和稠杂环基，例如苯并呋喃基、苯并间二氧杂环戊烯基、苯并二氢吡喃基等。

作为能够取代到上述“低级烷基”上的基团，例如可举出卤原子、羧基、芳基、低级烷氧基、酰基等，作为能够取代到“芳基”和“杂芳基”上的基团，例如可举出卤原子、羧基、低级烷基、低级烷氧基、酰基等。

其中，作为芳基，可举出苯基、萘基等，作为低级烷基，可举出上述的C_1-6烷基。

另外，作为卤原子，可举出氟、氯、溴、碘等。

另外，作为低级烷氧基，可举出直链或支链的C_1-6烷氧基，例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、正己氧基等。其中，优选是C_1-4烷氧基，更优选是甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基，进一步优选是甲氧基、乙氧基。

作为酰基，可举出CHO、C_1-6烷基-羰基、C_1-6烷氧基-羰基、芳基羰基、芳基-C_1-6烷撑-羰基、杂芳基羰基、杂芳基-C_1-6烷撑-羰基等。

其中，C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、芳基、杂芳基可举出与前述同样的基团。另外，作为C_1-6烷撑，可举出直链或支链的C_1-6烷撑，例如甲撑、乙撑、三甲撑、四甲撑、五甲撑、六甲撑、丙撑、甲基甲撑、乙基乙撑、1，2-二甲基乙撑、1，1，2，2-四甲基乙撑等，优选是甲撑、乙撑、三甲撑。

另外，作为“芳烷基”，例如可举出芳基-C_1-6烷基。其中，作为芳基、C_1-6烷基，可例示与前述同样的基团，但作为优选的芳烷基，可举出苄基、苯乙基等。

作为能取代到该芳烷基上的基团，可举出作为能取代到上述芳基、低级烷基上的基团而例示的基团。

作为Z₁和Z₂表示的、“可以被取代的低级烷基”，优选三氟甲基，苄基，2-、3-或4-甲基苄基，2-、3-或4-甲氧基苄基，甲氧基甲基，甲氧基羰基甲基等，

作为“可以被取代的芳基”，优选2-、3-或4-甲基苯基，2-、3-或4-甲氧基苯基，2-、3-或4-氟苯基，2-、3-或4-三氟甲基，2-、3-或4-羧基苯基等，

作为“可以被取代的芳烷基”，优选苄基，2-、3-或4-甲基苄基，2-、3-或4-甲氧基苄基等，

作为“可以被取代的杂芳基”，优选2-、3-或4-甲基吡啶基，2-、3-或4-甲氧基吡啶基，2-、3-或4-氟吡啶基，2-、3-或4-三氟吡啶基，2-、3-或4-羧基吡啶基等。

作为-NZ₁Z₂整体表示氨基酸残基或肽残基时的“氨基酸残基或肽残基”，例如可举出丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、β-丙氨酸、肌氨酸、苯基甘氨酸、N-乙基甘氨酸、N-正丙基甘氨酸、N-异丙基甘氨酸、N-正丁基甘氨酸、N-叔丁基甘氨酸、N-正戊基甘氨酸、N-正己基甘氨酸等氨基酸残基；肌氨酰甘氨酸、甘氨酰甘氨酸、甘氨酰肌氨酸、肌氨酰肌氨酸、丙氨酰甘氨酸、β-丙氨酰苯丙氨酸、甘氨酰苯丙氨酸、苯丙氨酰甘氨酸、苯丙氨酰苯丙氨酸、甘氨酰甘氨酰甘氨酸、N-乙基甘氨酰甘氨酸、N-正丙基甘氨酰甘氨酸、肌氨酰甘氨酰甘氨酸、N-乙基甘氨酰甘氨酰甘氨酸、苯丙氨酰甘氨酰甘氨酸等肽残基。应予说明，该氨基酸残基或肽残基的末端羧基可以被酰胺化。

在式(IA)和(IB)表示的化合物中，n表示0～15的数，优选是3～9，更优选是3、4或5，进一步优选是4或5。

应予说明，上述通式(IA)和(IB)表示的化合物包含各种立体异构体、光学异构体、水合物等溶剂合物。

另外，本发明的低分子量多硫酸化透明质酸衍生物的优选的盐是制药学上容许的盐，例如可举出碱金属盐(例如，钠盐、钾盐等)、碱土金属盐(例如，镁盐、钙盐等)等金属盐；与铵盐、碱金属(钠、钾等)和碱土金属(镁、钙等)的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐等无机碱成的盐；或者，与有机胺(例如、三甲胺、三乙胺等)、吡啶、喹啉、哌啶、咪唑、甲基吡啶、二甲基氨基吡啶、二甲基苯胺、N-甲基吗啉等有机碱成的盐等。

本发明的低分子量多硫酸化透明质酸衍生物或其制药学上容许的盐的分子量根据盐的种类而不同，但其平均分子量优选是1500～13500。

本发明的通式(IA)或(IB)表示的化合物例如可如下述反应式-1所示，通过将通式(IIA)或(IIB)表示的低分子量透明质酸衍生物硫酸化来进行制造。应予说明，原料化合物和目标化合物也可以是前述的适当的盐。

另外，下述式中、Z₃和Z₄表示的各取代基对应于Z₁和Z₂，各取代基的含义如上所述。

[式中，X¹表示下述(a¹)或(b¹)

Y¹表示下述(c¹)、(d¹)或(e¹)

W¹表示下述(f¹)或(g¹)

R¹′表示-OH或-NZ₃Z₄(其中，Z₃和Z₄独立地表示氢原子、可以被取代的低级烷基、可以被取代的芳基、可以被取代的芳烷基或可以被取代的杂芳基，或者-NZ₃Z₄整体表示氨基酸残基或肽残基)，n、X、Y、W、R和*与前述相同。]

本反应可以通过已知的硫酸化反应、例如使化合物(IIA)或(IIB)和硫酸化剂溶解到适当的溶剂中、在加热下使其反应来进行。

作为此处使用的溶剂，可例示N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、N-甲基吡咯烷酮、N，N-二甲基乙酰胺、1，1，3，3-四甲基脲、吡啶、N，N-二甲基丙烯酰胺，或1-乙基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐、1-丁基-1-甲基吡咯烷四氟硼酸盐、氯化1-丁基吡啶等离子性液体等，或它们的混合溶剂等。

作为硫酸化剂，没有特别限定，优选使用三氧化硫与吡啶、甲基吡啶、2，6-二甲基吡啶、三甲胺、三乙胺、N，N-二甲基甲酰胺、二烷等的络合物，或者硫酸-二环己基碳二亚胺、氯化砜等。通常，硫酸化剂的使用量优选相对于化合物(IIA)或(IIB)为1～100当量。另外，可以在本反应的体系内添加三氟乙酸、三氟甲磺酸等酸催化剂。

反应温度和反应时间没有特别限定，例如可举出0～120℃下30分钟～20天。

式(IIA)中Y¹是式(d¹)或(e¹)、R¹′是-OH的化合物或者式(IIB)中R¹′是-OH的化合物可以通过反应-2表示的还原反应来进行制造。应予说明，原料化合物和目标化合物也可以是前述的适当的盐。

[式中，A¹表示下述(h)或(i)

A²表示下述(j)或(k)

n、X¹和*与前述相同。]

即，例如可以通过在适当的溶剂中在还原剂的存在下使化合物(III-1)或(III-2)发生还原反应来制造化合物(II-1)或(II-2)。

作为本反应所使用的溶剂，例如可例示水、甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇、叔丁醇、乙二醇等低级醇类，乙腈，甲酸、乙酸等脂肪酸，二乙醚、四氢呋喃、二烷、乙二醇二甲醚、二乙二醇二甲醚等醚类，苯、甲苯、二甲苯等芳香烃类，二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿、四氯化碳等卤代烃类，N，N-二甲基甲酰胺或它们的混合溶剂等。

作为还原剂，例如可例示硼氢化钠、硼氢化锂、硼氢化钾、硼氢化四丁基铵、硼氢化锌、三仲丁基硼氢化锂、硼烷类似物、氢化二异丁基铝、氢化锂铝等。

通常，还原剂的使用量相对于化合物(III-1)或(III-2)为0.1倍摩尔～60倍摩尔左右。

在本反应的体系内，也可以在吡啶、三甲胺、三乙胺、N-乙基二异丙基胺等胺类、氢氧化钠等无机碱或/和丁二酮肟、2，2’-联吡啶、1，10-菲咯啉等配位体的存在下，添加氯化锌、氯化钴(II)、氯化钐(III)、氯化铈(III)、氯化钛(III)、氯化铁(II)、氯化铁(III)、氯化镍(II)等。

应予说明，本还原反应也可以通过在钯、铂等过渡金属催化剂存在下的催化氢化来进行。

本反应通常可以在-80～100℃左右、优选在-80～70℃左右进行，但通常在30分钟～60小时左右结束。

式(IIA)中Y¹是式(d¹)或(e¹)、R¹′是-NZ₃Z₄的化合物或者式(IIB)中R¹′是-NZ₃Z₄的化合物可以通过以下反应式-3表示的还原性氨基化反应来进行制造。应予说明，原料化合物和目标化合物也可以是前述的适当的盐。

[式中，A¹、A²、Z₃和Z₄与上述相同。]

本反应是例如在适当的溶剂中、在还原剂存在下、使胺(IV)与化合物(III-1)或(III-2)发生反应而形成席夫碱、然后进行还原的所谓还原性氨基化反应。

胺(IV)的使用量通常相对于化合物(III-1)或(III-2)为1倍摩尔～5倍摩尔左右。

作为此处所使用的溶剂，例如可例示水、甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇、叔丁醇、乙二醇等低级醇类，乙腈，甲酸、乙酸等脂肪酸，二乙醚、四氢呋喃、二烷、乙二醇二甲醚、二乙二醇二甲醚等醚类，苯、甲苯、二甲苯等芳香烃类，二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿、四氯化碳等卤代烃类，N，N-二甲基甲酰胺或它们的混合溶剂等。

作为此处使用的还原剂，例如可例示硼氢化钠、硼氢化锂、硼氢化钾、硼氢化四丁基铵、氰基硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化钠等。还原剂的使用量通常相对于化合物(III)为0.1倍摩尔～60倍摩尔左右。

本反应通常可以在-80～100℃左右、优选-80～70℃左右进行，但通常在30分钟～60小时左右结束。

根据需要，可以在1倍摩尔～50倍摩尔的有机酸类或其盐的存在下进行反应。作为有机酸类或其盐，例如可举出乙酸、三氟乙酸、它们的碱金属盐(例如乙酸钠等)等。

在本反应的体系内，也可以在吡啶、三甲胺、三乙胺、N-乙基二异丙基胺等胺类、氢氧化钠等无机碱或/和丁二酮肟、2，2’-联吡啶、1，10-菲咯啉等配位体的存在下，添加氯化锌、氯化钴(II)、氯化钐(III)、氯化铈(III)、氯化钛(III)、氯化铁(II)、氯化铁(III)、氯化镍(II)等。

另外，也可以在该反应的反应体系内添加适量的硼酸。

由偶数个糖构成的化合物群与由奇数个糖构成的化合物群的转换可以通过以下反应式-4或5来进行，从而制造比原料化合物少一个构成糖的化合物。

[式中，A²与上述相同。]

本反应是利用弱碱加热处理的N-乙酰葡萄糖胺的脱离反应。

通过根据Reissig等的方法(Reissig，J.L.，et al.，J.Biol.Chem.，217，959(1955))，在PH9.18的硼酸盐缓冲液中加热搅拌化合物(V)，可以制造化合物(VI)。

本反应通常可以在50～120℃左右、优选70～90℃左右进行，但通常在30分钟～60小时左右结束。

[式中，D¹表示下述(r)或(s)

n和*与上述相同。]

本反应是使用了β-葡萄糖苷酸酶的葡萄糖醛酸的脱离反应。

通过在β-葡萄糖苷酸酶存在下、在适当的缓冲液中搅拌化合物(VII)，可以制造化合物(VIII)。

本反应通常可以在室温～60℃左右、优选30～40℃左右进行，但通常在30分钟～60小时左右结束。

上述各反应式所得到的各种目标化合物可以通过各种修饰多糖类中常用的精制操作来进行精制。在具体的精制操作中，可举出利用凝胶过滤、中和、透析的脱盐、利用添加有机溶剂进行沉淀操作的回收操作，或利用冷冻干燥的回收操作等。

本发明的化合物如后述实施例所示具有抗过敏作用和抗炎作用，且不显示血管通透性亢进作用，因而可用作预防和/或治疗花粉症、过敏性鼻炎、过敏性结膜炎、异位性皮炎和哮喘等过敏性疾病的医药品。

该医药品是将本发明的化合物制剂成通常的医疗制剂形式而得到的，使用通常使用的填充剂、增量剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、表面活性剂、润滑剂等稀释剂或赋形剂来制备。

作为这种医药品，可以根据治疗目的而从各种形式中进行选择，作为其代表，可举出片剂、丸剂、散剂、液剂、悬浮剂、乳剂、颗粒剂、胶囊剂、栓剂、注射剂(液剂、悬浮剂等)、滴眼剂、软膏剂、吸入剂等。

作为成形为片剂形式时使用的载体，可广泛使用公知的材料，例如可举出乳糖、白糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、淀粉、碳酸钙、高岭土、结晶纤维素等赋形剂；水、乙醇、丙醇、单糖浆、葡萄糖液、淀粉液、明胶溶液、羧甲基纤维素、虫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯基吡咯烷酮等粘合剂；干燥淀粉、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯、月桂基硫酸钠、甘油单硬脂酸酯、淀粉、乳糖等崩解剂；白糖、硬脂精、可可脂、氢化油等崩解抑制剂；季铵碱、月桂基硫酸钠等吸收促进剂；甘油、淀粉等保湿剂；淀粉、乳糖、高岭土、膨润土、胶态硅酸等吸附剂；精制滑石粉、硬脂酸盐、硼酸粉、聚乙二醇等润滑剂等。

另外，片剂可以根据需要制成通常的实施了包衣的片剂，例如糖衣片、明胶包衣片、肠溶包衣片、薄膜包衣片或双层片、多层片。

作为成形为丸剂形式时使用的载体，可广泛使用公知的材料，例如可举出葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、硬化植物油、高岭土、滑石等赋形剂；阿拉伯胶粉、西黄蓍胶粉、明胶、乙醇等粘合剂；昆布多糖、琼脂等崩解剂等。

作为成形为栓剂形式时使用的载体，可广泛使用公知的材料，例如可举出聚乙二醇、可可脂、高级醇、高级醇的酯、明胶、半合成甘油酯等。

在调制成注射剂时，优选将液剂、乳剂和悬浮剂灭菌且与血液等渗。作为成形为上述液剂、乳剂和悬浮剂形式时使用的稀释剂，可使用公知的广泛使用的材料，例如可举出水、乙醇、丙二醇、乙氧基化异硬脂醇、多氧基化异硬脂醇(polyoxylated isostearyl alcohol)、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯等。应予说明，此时，可以使医疗制剂中含有足以制备等渗性溶液的量的食盐、葡萄糖或甘油，另外可以含有通常的助溶剂、缓冲剂、无痛化剂等，进一步根据需要可以含有着色剂、保存剂、香料、调味剂、甜味剂等或其它医药品。

该医药品中含有的本发明化合物的量没有特别限定，可以在大范围内适当选择，但通常优选在医药品中含有1～70重量％的本发明化合物。

作为本发明的医药品的给药方法，没有特别限制，以适应于各种制剂形式、患者的年龄、性别、疾病的状态、其它条件的方法来给药。例如当是片剂、丸剂、液剂、悬浮剂、乳剂、颗粒剂和胶囊剂时口服给药。另外，当是注射剂时，单独或与葡萄糖、氨基酸等通常的辅液混合对静脉内给药，另外根据需要单独对肌肉内、皮内、皮下或腹腔内给药。当是栓剂时，对直肠内给药。

上述医药品的给药量只要按照用法、患者的年龄、性别、疾病的程度、其它条件来适当选择即可，通常按每天每1kg体重为0.001～100mg、优选0.001～50mg一次或分数次进行给药。应予说明，上述给药量因各种条件而变动，所以有时比上述范围少的给药量已足够，还有时需要大于上述范围的给药量。

实施例

以下，例示实施例，更详细地说明本发明。

应予说明，使用重水(D₂O)作为溶剂，用AVANCEIII 400(BURKER公司制)或AVANCE 500(BURKER公司制)测定¹H-NMR。

制造例1～54 原料化合物的制造

采用以下的制造例1～54记载的方法，制造表1～7所示的原料化合物。

应予说明，质谱分析使用Voyager DE-PRO(Applied Systems Japan株式会社)。

制造例1

使用透明质酸钠(资生堂制，BIO Sodium Hyaluronate HA9)和取自牛睾丸的透明质酸酶(calbiochem公司制，Hyaluronidase Bovine T100KU)，按照文献Glycobiology，vol.12，No.7，pp.421-426，2002分离出透明质酸寡糖4-mer(20mg)，将其溶解于甲醇(1ml)和水(0.5ml)中，冰冷却下加入硼氢化钠(10mg)并搅拌。恢复到室温，搅拌一晚。通过质谱分析法确认了反应的结束。

冰冷却下加入10％乙酸甲醇溶液(0.5ml)和水(1ml)后，减压下浓缩。加入10％乙酸甲醇溶液(0.5ml)共沸后，加入甲醇(2ml)进行两次共沸。

将残渣溶解在水(2ml)中，用圆盘过滤器(日本Pall公司制，0.45μm)过滤。通过短柱(Aldrich公司制，Dowex(注册商标)50W×8hydrogenform)，形成质子化体后，进行减压浓缩。使用AKTA系统(GE HealthcareBioscience株式会社制)进行凝胶过滤色谱(G-10、16mm×600mm、水)，实施脱盐，将目标部分冷冻干燥，得到目标物。(12mg，白色粉末)

MS[M+Na]⁺：846.21

¹H-NMR：将图表示于图1。

制造例2

除将原料变为透明质酸寡糖6-mer(60mg)以外，与制造例1同样地进行反应，得到目标物。(50mg，白色粉末)

MS[M-H]^-：1157.81

¹H-NMR：将图表示于图2。

制造例3

将透明质酸寡糖8-mer(60mg)与制造例1同样地进行反应，得到目标物。(51mg，白色粉末)

MS[M-H]^-：1535.57

¹H-NMR：将图表示于图3。

制造例4

将透明质酸寡糖10-mer(60mg)与制造例1同样地进行反应，得到目标物。(48mg，白色粉末)

MS[M-H]^-：1915.72

¹H-NMR：将图表示于图4。

制造例5

将透明质酸寡糖12-mer(60mg)与制造例1同样地进行反应，得到目标物。(60mg，白色粉末)

MS[M-H]^-：2294.98

¹H-NMR：将图表示于图5。

制造例6

除将原料变为透明质酸寡糖14-mer(20mg)以外，与制造例1同样地得到目标物。(20mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图6。

制造例7

将透明质酸寡糖16-mer(10mg)溶解在甲醇(0.6ml)和水(0.3ml)中，冰冷却下加入硼氢化钠(5mg)并搅拌。恢复至室温，搅拌一晚。通过质谱分析法确认了反应的结束。

冰冷却下加入10％乙酸甲醇溶液(0.1ml)和水(0.2ml)后，减压下浓缩。

将残渣溶解于水(1ml)中，用圆盘过滤器(日本Pall公司制，0.45μm)过滤。使用AKTA系统(GE Healthcare Bioscience株式会社制)进行凝胶过滤色谱(G-10、16mm×600mm、水)实施脱盐，将目标部分冷冻干燥，得到目标物。(10mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图7。

制造例8

除将原料变为透明质酸寡糖18-mer(20mg)以外，与制造例1同样地得到目标物。(20mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图8。

制造例9

除将原料变为透明质酸寡糖20-mer(42mg)以外，与制造例1同样地得到目标物。(40mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图9。

制造例10

将透明质酸寡糖10-mer(20mg)溶解于水(0.8ml)中，进行冰冷却。将邻氨基苯甲酸(30mg)、硼酸(40mg)、乙酸钠(80mg)和氰基硼氢化钠(5mg)溶解于甲醇(1ml)和水(0.2ml)中，加入该溶液，在80℃下搅拌5小时。通过质谱分析法确认了反应的结束。

减压下浓缩后，将残渣溶解于甲醇(1ml)和水(1ml)中，用圆盘过滤器(日本Pall公司制，0.45μm)过滤。进行凝胶过滤色谱(LH-20，18mm×500mm，水∶甲醇＝1∶1)实施精制，将目标部分冷冻干燥，得到目标物。(24mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图10。

制造例11

将透明质酸寡糖10-mer(20mg)溶解于水(0.8ml)中，进行冰冷却。将苯胺(30mg)、硼酸(40mg)、乙酸钠(80mg)和氰基硼氢化钠(5mg)溶解于甲醇(1ml)和水(0.2ml)中，加入该溶液，在80℃下搅拌5小时。通过质谱分析法确认了反应的结束。

减压下浓缩后，将残渣溶解于甲醇(1ml)和水(1ml)中，用圆盘过滤器(日本Pall公司制，0.45μm)过滤。进行凝胶过滤色谱(LH-20、18mm×500mm、水∶甲醇＝1∶1)实施精制，将目标部分冷冻干燥，得到目标物。(17mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图11。

制造例12

除将原料变为透明质酸寡糖24～32-mer(10mg)以外，与制造例1同样地得到目标物。(10mg，白色粉末)

制造例13

除将原料变为透明质酸寡糖34～46-mer(10mg)以外，与制造例1同样地得到目标物。(10mg，白色粉末)

将制造例1～13的目标物的结构记于下述表1中。

[表1]

制造例14

使用透明质酸钠(资生堂制，BIO Sodium Hyaluronate HA9)和取自牛睾丸的透明质酸酶(calbiochem公司制，Hyaluronidase Bovine T100KU)，按照文献Glycobiology，vol.12，No.7，pp.421-426，2002分离透明质酸寡糖4-mer(40mg)，将其溶解于硼酸盐缓冲液(pH9.18)(3ml)中，在80℃下搅拌1小时。恢复至室温，加入甲醇(3ml)后，减压浓缩。将残渣溶解于水(2ml)中，用圆盘过滤器(日本Pall公司制、0.45μm)过滤后，使用AKTA系统(GE Healthcare Bioscience株式会社制)进行凝胶过滤色谱(G-10，16mm×600mm，水)实施脱盐，浓缩目标部分，从而得到白色粉末。

接着，将得到的白色粉末(25mg)溶解于甲醇(1ml)和水(0.5ml)中，冰冷却下加入硼氢化钠(10mg)并搅拌。恢复至室温，搅拌一晚。通过质谱分析法确认了反应的结束。冰冷却下加入10％乙酸甲醇溶液(0.2ml)后，减压下浓缩。将残渣溶解于水(2ml)中，用圆盘过滤器(日本Pall公司制、0.45μm)过滤后，使用AKTA系统(GE Healthcare Bioscience株式会社制)进行凝胶过滤色谱(G-10，16mm×600mm，水)实施脱盐，将目标部分冷冻干燥，得到目标物。(18mg，白色粉末)

MS[M-H]^-：573.45

¹H-NMR：将图表示于图12。

制造例15

除将原料变为透明质酸寡糖6-mer(60mg)以外，与制造例14同样地得到目标物。(34mg，白色粉末)

MS[M-H]^-：953.02

¹H-NMR：将图表示于图13。

制造例16

除将原料变为透明质酸寡糖8-mer(10mg)以外，与制造例14同样地得到目标物。(8mg，白色粉末)

MS[M-H]^-：1331.54

¹H-NMR：将图表示于图14。

制造例17

除将原料变为透明质酸寡糖10-mer(10mg)以外，与制造例14同样地得到目标物。(8mg，白色粉末)

MS[M-H]^-：1710.28

¹H-NMR：将图表示于图15。

制造例18

除将原料变为透明质酸寡糖12-mer(20mg)以外，与制造例14同样地得到目标物。(16mg，白色粉末)

MS[M-H]^-：2090.01

¹H-NMR：将图表示于图16。

制造例19

除将原料变为透明质酸寡糖14-mer(18mg)以外，与制造例14同样地得到目标物。(11mg，白色粉末)

MS[M-H]^-：2469.52

¹H-NMR：将图表示于图17。

制造例20

除将原料变为透明质酸寡糖16-mer(7mg)以外，与制造例14同样地得到目标物。(5mg，白色粉末)

MS[M-H]^-：2848.59

¹H-NMR：将图表示于图18。

制造例21

除将原料变为透明质酸寡糖18-mer(10mg)以外，与制造例14同样地得到目标物。(9mg，白色粉末)

MS[M-H]^-：3225.70

¹H-NMR：将图表示于图19。

制造例22

除将原料变为透明质酸寡糖20-mer(15mg)以外，与制造例14同样地得到目标物。(13mg，白色粉末)

MS[M-H]^-：3604.16

¹H-NMR：将图表示于图20。

将制造例14～22的目标物的结构记于下述表2。

[表2]

制造例23

将制造例1中得到的化合物(17mg)溶解于缓冲液(混合氯化钠水溶液(300mM，1ml)和乙酸钠水溶液(200mM，1ml)，用冰醋酸调整pH为5.2而得到的溶液)(2ml)中，加入bovine liver β-glucuronidase TypeB-1(Sigma-Aldrich公司制)(8mg)，在37℃下培养8小时。将反应液超滤(Millipore公司制、Amicon Ultra 4ml 10K Nominal Molecular WeightLimit)进行精制后，使用AKTA系统(GE Healthcare Bioscience株式会社制)进行凝胶过滤色谱(G-10，16mm×600mm，水)实施脱盐，将目标部分冷冻干燥，得到目标物。(8mg，白色粉末)

MS[M-H]^-：601.18

¹H-NMR：将图表示于图21。

制造例24

除将原料变为制造例2中得到的化合物(11mg)以外，与制造例23同样地得到目标物。(4mg，白色粉末)

MS[M-H]^-：980.29

¹H-NMR：将图表示于图22。

制造例25

除将原料变为制造例3中得到的化合物(10mg)以外，与制造例23同样地得到目标物。(8mg，白色粉末)

MS[M-H]^-：1359.37

¹H-NMR：将图表示于图23。

制造例26

除将原料变为制造例4中得到的化合物(30mg)以外，与制造例23同样地得到目标物。(15mg，白色粉末)

MS[M-H]^-：1738.15

¹H-NMR：将图表示于图24。

制造例27

除将原料变为制造例5中得到的化合物(14mg)以外，与制造例23同样地得到目标物。(7mg，白色粉末)

MS[M-H]^-：2117.50

¹H-NMR：将图表示于图25。

制造例28

除将原料变为制造例9中得到的化合物(10mg)以外，与制造例23同样地得到目标物。(5mg，白色粉末)

MS[M-H]^-：3633.84

¹H-NMR：将图表示于图26。

将制造例23～28的目标物的结构记于下述表3。

[表3]

制造例29

除将原料变为制造例15中得到的化合物(15mg)以外，与制造例23同样地得到目标物。(9mg，白色粉末)

MS[M-H]^-：777.28

¹H-NMR：将图表示于图27。

制造例30

除将原料变为制造例16中得到的化合物(11mg)以外，与制造例23同样地得到目标物。(7mg，白色粉末)

MS[M-H]^-：1156.41

¹H-NMR：将图表示于图28。

制造例31

除将原料变为制造例17中得到的化合物(23mg)以外，与制造例23同样地得到目标物。(15mg，白色粉末)

MS[M-H]^-：1535.07

¹H-NMR：将图表示于图29。

制造例32

除将原料变为制造例18中得到的化合物(14mg)以外，与制造例23同样地得到目标物。(8mg，白色粉末)

MS[M-H]^-：1914.60

¹H-NMR：将图表示于图30。

制造例33

除将原料变为制造例22中得到的化合物(8mg)以外，与制造例23同样地得到目标物。(5mg，白色粉末)

MS[M-H]^-：3430.67

¹H-NMR：将图表示于图31。

将制造例29～33的目标物的结构记于下述表4。

[表4]

制造例34

使用透明质酸钠(Food Chemifa制，透明质酸FCH-SU)和来自链霉菌属(Streptomyces hyalurolyticus)的透明质酸酶(Amano Enzyme制、透明质酸酶“Amano”1)，按照文献Glycobiology，vol.11，No.1，pp.57-64，2001分离不饱和透明质酸寡糖4-mer(8mg)，将其溶解于甲醇(2ml)和水(1ml)中，冰冷却下加入硼氢化钠(4mg)并搅拌。恢复至室温，搅拌一晚。通过质谱分析法确认了反应的结束。冰冷却下加入10％乙酸甲醇溶液(0.2ml)后，减压下浓缩后，使用AKTA系统(GE HealthcareBioscience株式会社制)进行凝胶过滤色谱(G-10、16mm×600mm、水)实施脱盐，将目标部分冷冻干燥，得到目标物。(3mg，白色粉末)

MS[M-H]^-：759.61

¹H-NMR：将图表示于图32。

制造例35

除将原料变为不饱和透明质酸寡糖6-mer(10mg)以外，与制造例34同样地得到目标物。(9mg，白色粉末)

MS[M-H]^-：1139.15

¹H-NMR：将图表示于图33。

制造例36

除将原料变为不饱和透明质酸寡糖8-mer(10mg)以外，与制造例34同样地得到目标物。(10mg，白色粉末)

MS[M-H]^-：1518.49

¹H-NMR：将图表示于图34。

制造例37

除将原料变为不饱和透明质酸寡糖10-mer(10mg)以外，与制造例34同样地得到目标物。(10mg，白色粉末)

MS[M-H]^-：1897.57

¹H-NMR：将图表示于图35。

制造例38

除将原料变为不饱和透明质酸寡糖12-mer(10mg)以外，与制造例34同样地得到目标物。(8mg、白色粉末)

MS[M-H]^-：2276.99

¹H-NMR：将图表示于图36。

制造例39

除将原料变为不饱和透明质酸寡糖20-mer(12mg)以外，与制造例34同样地得到目标物。(10mg，白色粉末)

MS[M-H]^-：3792.03

¹H-NMR：将图表示于图37。

将制造例34～39的目标物的结构记于下述表5。

[表5]

制造例40

使用透明质酸钠(Food Chemifa制，透明质酸FCH-SU)和来自链霉菌属(Streptomyces hyalurolyticus)的透明质酸酶(Amano Enzyme制，透明质酸酶“Amano”1)，按照文献Glycobiology，vol.11，No.1，pp.57-64，2001分离不饱和透明质酸寡糖4-mer(10mg)，将其溶解于硼酸盐缓冲液(pH9.18)(1ml)中，在80℃下搅拌1小时。恢复至室温，加入甲醇(3ml)后，减压浓缩。将残渣溶解于水(2ml)中，用圆盘过滤器(日本Pall公司制，0.45μm)过滤后，使用AKTA系统(GE Healthcare Bioscience株式会社制)进行凝胶过滤色谱(G-10，16mm×600mm，水)实施脱盐，浓缩目标部分，从而得到白色粉末。

接着，将得到的白色粉末(6mg)溶解于甲醇(1ml)和水(0.5ml)中，冰冷却下加入硼氢化钠(10mg)并搅拌。恢复至室温，搅拌一晚。通过质谱分析法确认了反应的结束。冰冷却下加入10％乙酸甲醇溶液(0.2ml)后，减压下浓缩。将残渣溶解于水(2ml)中，用圆盘过滤器(日本Pall公司制，0.45μm)过滤后，使用AKTA系统(GE Healthcare Bioscience株式会社制)进行凝胶过滤色谱(G-10，16mm×600mm，水)实施脱盐，将目标部分冷冻干燥，得到目标物。(4mg，白色粉末)

MS[M-H]^-：556.77

¹H-NMR：将图表示于图38。

制造例41

除将原料变为不饱和透明质酸寡糖6-mer(10mg)以外，与制造例40同样地得到目标物。(7mg，白色粉末)

MS[M-H]^-：935.49

¹H-NMR：将图表示于图39。

制造例42

除将原料变为不饱和透明质酸寡糖8-mer(10mg)以外，与制造例40同样地得到目标物。(6mg，白色粉末)

MS[M-H]^-：1314.21

¹H-NMR：将图表示于图40。

制造例43

除将原料变为不饱和透明质酸寡糖10-mer(10mg)以外，与制造例40同样地得到目标物。(7mg，白色粉末)

MS[M-H]^-：1693.58

¹H-NMR：将图表示于图41。

制造例44

除将原料变为不饱和透明质酸寡糖12-mer(10mg)以外，与制造例40同样地得到目标物。(6mg，白色粉末)

MS[M-H]^-：2073.41

¹H-NMR：将图表示于图42。

将制造例40～44的目标物的结构记于下述表6。

[表6]

制造例45

在透明质酸寡糖4-mer(10mg)中，加入将苄基胺(24mg)、硼酸(20mg)、乙酸钠(40mg)和氰基硼氢化钠(15mg)溶解于甲醇(0.5ml)和水(0.5ml)中而形成的溶液，在50℃下搅拌6小时。通过质谱分析法确认了反应的结束。

减压下浓缩后，溶解在水(2ml)中，用圆盘过滤器(日本Pall公司制，0.45μm)过滤。进行凝胶过滤色谱(G-10，16mm×600mm，水)实施精制，将目标部分冷冻干燥，得到目标物。(8mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图43。

制造例46

在透明质酸寡糖4-mer(10mg)中，加入将苯丙氨酸(5mg)、乙酸(10μl)、乙酸钠(10mg)和氰基硼氢化钠(10mg)溶解于甲醇(0.2ml)和水(0.2ml)中而形成的溶液，在60℃下搅拌6小时。通过质谱分析法确认了反应的结束。

减压下浓缩后，在残渣中加入二氯甲烷(5ml)和水(5ml)，进行萃取。减压下浓缩水相后，溶解于水(2ml)中，用圆盘过滤器(日本Pall公司制，0.45μm)过滤。进行凝胶过滤色谱(G-10，16mm×600mm，水)实施精制，将目标部分冷冻干燥，得到目标物。(11mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图44。

制造例47

除将苯丙氨酸变为脯氨酸以外，与制造例46同样地得到目标物。(8mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图45。

制造例48

除将苯丙氨酸变为色氨酸以外，与制造例46同样地得到目标物。(7mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图46。

制造例49

除将苯丙氨酸变为甘氨酰苯丙氨酰胺以外，与制造例46同样地得到目标物。(4mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图47。

制造例50

除将苯丙氨酸变为苯丙氨酰甘氨酸以外，与制造例46同样地得到目标物。(14mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图48。

制造例51

将起始物质从透明质酸寡糖4-mer(10mg)变为透明质酸寡糖10-mer(20mg)，另外将苄基胺变为4-氯苯胺，除此以外，与制造例45同样地得到目标物。(10mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图49。

制造例52

将透明质酸寡糖4-mer变为透明质酸寡糖10-mer，将苄基胺变为2-氨基吡啶，除此以外，与制造例45同样地得到目标物。(12mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图50。

制造例53

将透明质酸寡糖4-mer变为透明质酸寡糖10-mer，将苯丙氨酸变为苯丙氨酰甘氨酰甘氨酸，除此以外，与制造例46同样地得到目标物。(5mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图51。

制造例54

除将透明质酸寡糖4-mer变为透明质酸寡糖10-mer以外，与制造例46同样地得到目标物。(5mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图52。

将制造例45～54的目标物的结构记于下述表7。

[表7]

实施例1～48 本发明化合物的制造

按照以下的实施例1～48记载的方法，制造表8～14表示的本发明化合物。应予说明，质谱分析使用QSTAR pulsar i(Applied Systems Japan株式会社)。

实施例1

将制造例1中合成的化合物(12mg)溶解于水(1ml)中，加入三丁胺(100μl)并搅拌后，减压下浓缩。加入N，N-二甲基甲酰胺(2ml)，进行两次共沸。将残渣溶解于N，N-二甲基甲酰胺(1ml)，加入吡啶·三氧化硫(150mg)，在氮气氛中于42℃搅拌3小时。

4℃下加入水(1ml)后，加入饱和乙酸钠乙醇溶液(30ml)，使其沉淀，用Voltex mixer搅拌后，进行冷却离心分离(4℃，3000rpm，15分钟)，收集沉淀物。弃去上清液，在残渣中加入水(1ml)使其溶解，加入饱和乙酸钠乙醇溶液(20ml)，使其沉淀，用Voltex mixer搅拌后，进行冷却离心分离(4℃，3000rpm，15分钟)，收集沉淀物。再次弃去上清液，在残渣中加入水(1ml)使其溶解，加入饱和乙酸钠乙醇溶液(20ml)，使其沉淀，用Voltex mixer搅拌后，进行冷却离心分离(4℃，3000rpm，15分钟)，收集沉淀物。弃去上清液，将残渣溶解于水(2ml)中后，进行减压浓缩。

将残渣溶解于水(2ml)中，用圆盘过滤器(日本Pall公司制，0.45μm)过滤。使用AKTA系统(GE Healthcare Bioscience株式会社制)进行凝胶过滤色谱(G-10，16mm×600mm，水)实施脱盐，将目标部分冷冻干燥，得到化合物1。(24mg，白色粉末)

[M+2Na]²⁺：994.75

¹H-NMR：将图表示于图53。

实施例2

除将原料变为制造例2中得到的化合物(47mg)以外，与实施例1同样地得到化合物2。(76mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图54。

实施例3

除将原料变为制造例3中得到的化合物(51mg)以外，与实施例1同样地得到化合物3。(108mg，白色粉末)

[M+3Na]³⁺：1210.10

¹H-NMR：将图表示于图55。

实施例4

除将原料变为制造例4中合成的化合物(48mg)以外，与实施例1同样地得到化合物4。(92mg，白色粉末)

[M+3Na]³⁺：1479.73

¹H-NMR：将图表示于图56。

实施例5

除将原料变为制造例5中得到的化合物(60mg)以外，与实施例1同样地得到化合物5。(112mg，白色粉末)

[M+4Na]⁴⁺：1317.74

¹H-NMR：将图表示于图57。

实施例6

除将原料变为制造例6中得到的化合物(20mg)以外，与实施例1同样地得到化合物6。(22mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图58。

实施例7

将制造例7中得到的化合物(10mg)溶解于N，N-二甲基甲酰胺(1ml)中，加入吡啶·三氧化硫(150mg)，氮气氛中于42℃搅拌3小时。

4℃下加入水(1ml)后，加入饱和乙酸钠乙醇溶液(25ml)，使其沉淀，用Voltex mixer搅拌后，进行冷却离心分离(4℃，3000rpm，15分钟)，收集沉淀物。弃去上清液，在残渣中加入水(1ml)使其溶解，加入饱和乙酸钠乙醇溶液(20ml)使其沉淀，用Voltex mixer搅拌后，进行冷却离心分离(4℃，3000rpm，15分钟)，收集沉淀物。再次弃去上清液，在残渣中加入水(1ml)使其溶解，加入饱和乙酸钠乙醇溶液(20ml)使其沉淀，用Voltex mixer搅拌后，进行冷却离心分离(4℃，3000rpm，15分钟)，收集沉淀物。弃去上清液，将残渣溶解于水(2ml)中后，减压浓缩。

将残渣溶解于水(2ml)中，用圆盘过滤器(日本Pall公司制，0.45μm)过滤。使用AKTA系统(GE Healthcare Bioscience株式会社制)进行凝胶过滤色谱(G-10，16mm×600mm，水)实施脱盐，将目标部分冷冻干燥，得到化合物7。(16mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图59。

实施例8

除将原料变为制造例8中得到的化合物(20mg)以外，与实施例7同样地得到化合物8。(33mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图60。

实施例9

除将原料变为制造例9中得到的化合物(39mg)以外，与实施例1同样地得到化合物9。(90mg，白色粉末)

[M+5Na]⁵⁺：1707.07

¹H-NMR：将图表示于图61。

实施例10

除将原料变为制造例10中得到的化合物(24mg)以外，与实施例1同样地得到化合物10。(48mg，白色粉末)

[M+3Na]³⁺：1493.42

¹H-NMR：将图表示于图62。

实施例11

除将原料变为制造例11中得到的化合物(17mg)以外，与实施例1同样地得到化合物11。(34mg，白色粉末)

[M+3Na]³⁺：1505.11

¹H-NMR：将图表示于图63。

实施例12

除将原料变为制造例12中得到的化合物(10mg)以外，与实施例1同样地得到化合物12。(10mg，白色粉末)

实施例13

除将原料变为制造例13中得到的化合物(10mg)以外，与实施例1同样地得到化合物13。(21mg，白色粉末)

将化合物1～13的结构记于下述表8。

[表8]

实施例14

将制造例14中得到的化合物(18mg)溶解于N，N-二甲基甲酰胺(2ml)中，加入吡啶·三氧化硫(300mg)，在氮气氛中于42℃搅拌3小时。

4℃下加入水(1ml)后，加入饱和乙酸钠乙醇溶液(25ml)使其沉淀，用Voltex mixer搅拌后，进行冷却离心分离(4℃，3000rpm，15分钟)，收集沉淀物。弃去上清液，在残渣中加入水(1ml)使其溶解，加入饱和乙酸钠乙醇溶液(20ml)使其沉淀，用Voltex mixer搅拌后，进行冷却离心分离(4℃，3000rpm，15分钟)，收集沉淀物。再次弃去上清液，在残渣中加入水(1ml)使其溶解，加入饱和乙酸钠乙醇溶液(25ml)使其沉淀化，用Voltex mixer搅拌后，进行冷却离心分离(4℃，3000rpm，15分钟)，收集沉淀物。去掉上清液，将残渣溶解于水(2ml)中后，用圆盘过滤器(日本Pall公司制，0.45μm)过滤。使用AKTA系统(GE HealthcareBioscience株式会社制)进行凝胶过滤色谱(G-10，16mm×600mm，水)实施脱盐，将目标部分冷冻干燥，得到化合物14。(30mg，白色粉末)

[M+2Na]²⁺：791.30

¹H-NMR：将图表示于图64。

实施例15

除将原料变为制造例15中得到的化合物(34mg)以外，与实施例14同样地得到化合物15。(72mg，白色粉末)

[M+3Na]³⁺：804.83

¹H-NMR：将图表示于图65。

实施例16

除将原料变为制造例16中得到的化合物(8mg)以外，与实施例14同样地得到化合物16。(11mg，白色粉末)

[M+3Na]³⁺：1074.42

¹H-NMR：将图表示于图66。

实施例17

除将原料变为制造例17中得到的化合物(8mg)以外，与实施例14同样地得到化合物17。(14mg，白色粉末)

[M+3Na]³⁺：1344.06

¹H-NMR：将图表示于图67。

实施例18

除将原料变为制造例18中得到的化合物(16mg)以外，与实施例14同样地得到化合物18。(23mg，白色粉末)

[M+4Na]⁴⁺：1217.00

¹H-NMR：将图表示于图68。

实施例19

除将原料变为制造例19中得到的化合物(11mg)以外，与实施例14同样地得到化合物19。(9mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图69。

实施例20

除将原料变为制造例20中得到的化合物(5mg)以外，与实施例14同样地得到化合物20。(8mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图70。

实施例21

除将原料变为制造例21中得到的化合物(8mg)以外，与实施例14同样地得到化合物21。(11mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图71。

实施例22

除将原料变为制造例22中得到的化合物(13mg)以外，与实施例14同样地得到化合物22。(14mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图72。

将化合物14～22的结构记于下述表9。

[表9]

实施例23

除将原料变为制造例23中得到的化合物(8mg)以外，与实施例14同样地得到化合物23。(14mg，白色粉末)

[M+2Na]²⁺：793.81

¹H-NMR：将图表示于图73。

实施例24

除将原料变为制造例24中得到的化合物(4mg)以外，与实施例14同样地得到化合物24。(7mg，白色粉末)

[M+2H]²⁺：1176.25

¹H-NMR：将图表示于图74。

实施例25

除将原料变为制造例25中得到的化合物(8mg)以外，与实施例14同样地得到化合物25。(11mg，白色粉末)

[M+3Na]³⁺：1076.10

¹H-NMR：将图表示于图75。

实施例26

除将原料变为制造例26中得到的化合物(15mg)以外，与实施例14同样地得到化合物26。(26mg，白色粉末)

[M+3Na]³⁺：1345.72

¹H-NMR：将图表示于图76。

实施例27

除将原料变为制造例27中得到的化合物(7mg)以外，与实施例14同样地得到化合物27。(11mg，白色粉末)

[M+4Na]⁴⁺：1616.67

¹H-NMR：将图表示于图77。

实施例28

除将原料变为制造例28中得到的化合物(5mg)以外，与实施例14同样地得到化合物28。(7mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图78。

将化合物23～28的结构记于下述表10。

[表10]

实施例29

除将原料变为制造例29中得到的化合物(9mg)以外，与实施例14同样地得到化合物29。(16mg，白色粉末)

[M+2H]²⁺：972.77

¹H-NMR：将图表示于图79。

实施例30

除将原料变为制造例30中得到的化合物(7mg)以外，与实施例14同样地得到化合物30。(8mg，白色粉末)

[M+2H]²⁺：1377.20

¹H-NMR：将图表示于图80。

实施例31

除将原料变为制造例31中得到的化合物(15mg)以外，与实施例14同样地得到化合物31。(21mg，白色粉末)

[M+3Na]³⁺：1210.07

¹H-NMR：将图表示于图81。

实施例32

除将原料变为制造例32中得到的化合物(8mg)以外，与实施例14同样地得到化合物32。(9mg，白色粉末)

[M+3H]³⁺：1458.34

¹H-NMR：将图表示于图82。

实施例33

除将原料变为制造例33中得到的化合物(5mg)以外，与实施例14同样地得到化合物33。(7mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图83。

将化合物29～33的结构记于下述表11。

[表11]

实施例34

将制造例36中合成的化合物(7mg)溶解于N，N-二甲基甲酰胺(0.7ml)中，加入三乙胺·三氧化硫(75mg)、三氟甲磺酸(12μl)，在氮气氛中于0℃搅拌48小时。

0℃下加入水(1ml)后，加入饱和乙酸钠乙醇溶液(25ml)使其沉淀，用Voltex mixer搅拌后，进行冷却离心分离(4℃，3000rpm，15分钟)，收集沉淀物。弃去上清液，在残渣中加入水(1ml)使其溶解，加入饱和乙酸钠乙醇溶液(25ml)使其沉淀，用Voltex mixer搅拌后，进行冷却离心分离(4℃，3000rpm，15分钟)，收集沉淀物。再次弃去上清液，在残渣中加入水(1ml)使其溶解，加入饱和乙酸钠乙醇溶液(25ml)使其沉淀，用Voltex mixer搅拌后，进行冷却离心分离(4℃，3000rpm，15分钟)，收集沉淀物。弃去上清液，将残渣溶解于水(2ml)中后，用圆盘过滤器(日本Pall公司制，0.45μm)过滤。使用AKTA系统(GE HealthcareBioscience株式会社制)进行凝胶过滤色谱(G-10，16mm×600mm，水)实施脱盐，将目标部分冷冻干燥，得到化合物34。(9mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图84。

实施例35

除将原料变为制造例37中得到的化合物(10mg)以外，与实施例34同样地得到化合物35。(14mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图85。

实施例36

除将原料变为制造例38中得到的化合物(10mg)以外，与实施例34同样地得到化合物36。(15mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图86。

将化合物34～36的结构记于下述表12。

[表12]

实施例37

除将原料变为制造例41中得到的化合物(9mg)以外，与实施例34同样地得到化合物37。(11mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图87。

实施例38

除将原料变为制造例44中得到的化合物(12mg)以外，与实施例34同样地得到化合物38。(20mg，黄色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图88。

将化合物37～38的结构记于下述表13中。

[表13]

化合物编号	n
		37	1
38	4

实施例39

除将原料变为制造例45中得到的化合物(8mg)以外，与实施例14同样地得到化合物39。(12mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图89。

实施例40

除将原料变为制造例46中得到的化合物(10mg)以外，与实施例14同样地得到化合物40。(16mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图90。

实施例41

除将原料变为制造例47中得到的化合物(8mg)以外，与实施例14同样地得到化合物41。(14mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图91。

实施例42

除将原料变为制造例48中得到的化合物(7mg)以外，与实施例14同样地得到化合物42。(12mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图92。

实施例43

除将原料变为制造例49中得到的化合物(4mg)以外，与实施例14同样地得到化合物43。(9mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图93。

实施例44

除将原料变为制造例50中得到的化合物(10mg)以外，与实施例14同样地得到化合物44。(24mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图94。

实施例45

除将原料变为制造例51中得到的化合物(10mg)以外，与实施例14同样地得到化合物45。(21mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图95。

实施例46

除将原料变为制造例52中得到的化合物(12mg)以外，与实施例14同样地得到化合物46。(15mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图96。

实施例47

除将原料变为制造例53中得到的化合物(5mg)以外，与实施例14同样地得到化合物47。(9mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图97。

实施例48

除将原料变为制造例54中得到的化合物(5mg)以外，与实施例14同样地得到化合物48。(9mg，白色粉末)

¹H-NMR：将图表示于图98。

将化合物39～48的结构记于下述表14。

[表14]

参考例1～7

按照文献Glycobiology，vol.11，No.1，pp.57-64，2001记载的方法制造表15所示的本发明化合物(已知化合物)。

参考例1

使用购买获得的透明质酸钠(资生堂制，BIO Sodium HyaluronateHA9)和取自牛睾丸的透明质酸酶(calbiochem公司制，HyaluronidaseBovine T 100KU)，按照文献Glycobiology，vol.12，No.7，pp.421-426，2002分离出透明质酸寡糖4-mer(20mg)，将其作为原料，按照上述文献Glycobiology，vol.11，No.1，pp.57-64，2001，得到化合物49。(21mg，白色粉末)

参考例2

除将原料变为透明质酸寡糖10-mer(43mg)以外，与参考例1同样地得到化合物50。(86mg，白色粉末)

参考例3

除将原料变为透明质酸寡糖16-mer(75mg)以外，与参考例1同样地得到化合物51。(80mg，白色粉末)

参考例4

除将原料变为透明质酸寡糖20-mer(23mg)以外，与参考例1同样地得到化合物52。(42mg，白色粉末)

参考例5

除将原料变为透明质酸寡糖22-mer(17mg)以外，与参考例1同样地得到化合物53。(25mg，白色粉末)

参考例6

除将原料变为透明质酸寡糖24～32-mer(20mg)以外，与参考例1同样地得到化合物54。(18mg，白色粉末)

参考例7

除将原料变为透明质酸寡糖34～46-mer(24mg)以外，与参考例1同样地得到化合物55。(39mg，白色粉末)

将化合物49～55的结构记于下述表15。

[表15]

试验例1：抗过敏作用；豚鼠过敏性鼻炎模型(鼻塞模型)

实验使用Hartley系豚鼠(雄，首次致敏期6～7周龄)。

到货的动物为了检疫和适应进行7天以上的预饲养，然后用于实验。

作为首次致敏，将1ml中含有卵清蛋白(OVA)1mg和氢氧化铝凝胶(Alum)10mg的生理盐水溶液按每只动物1ml对背部皮下给药。通过用微量移液管将10mg/ml的OVA生理盐水溶液每次20μl在首次致敏1周后1次、或者1周后和2周后2次给予到两侧鼻腔内来进行局部致敏。

将致敏结束日的体重和从致敏开始日到致敏结束日的体重变动作为指标，按照二维分层随机抽样来进行分组。

最终致敏1周后，按照每只10μl将20mg/ml的OVA生理盐水溶液给予到两侧鼻腔内，诱发抗原抗体反应。对对照组(非诱发组)同样地给予生理盐水。

在诱发30分钟前，将被试物按每个10μl给予到两侧的鼻腔内。被试物溶解于生理盐水制成500μg/ml浓度的溶液用于给药。对对照组(非诱发组)和Saline组(溶剂对照组)同样地给予生理盐水。应予说明，作为对照药(化合物0)，使用“Flunase”(GlaxoSmithKline株式会社制)。

在诱发当日的诱发前、诱发10分钟后、2、3、4、5、6和7小时后，进行鼻腔阻力的测定。在各测定时间分别测定一次100次呼吸的鼻腔阻力(nasal airway resistance，nRaw)，将其平均值作为各测定时间的nRaw，算出nRaw的增加率，作为鼻腔阻力的指标。

鼻腔阻力(nRaw)的增加率(％)按下式求出。

[数1]

R0：诱发前的nRaw

Rx：各测定时间(x小时后)的nRaw

用诱发10分钟后的nRaw的增加率(即时型鼻腔阻力)和诱发后3～7小时的nRaw的增加率的曲线下方面积(AUC_3-7hr，迟发型鼻腔阻力)进行评价。

[数2]

${\mathrm{AUC}}_{3-7\mathrm{hr}}=\frac{(I_{3\mathrm{hr}}+2x{I}_{4\mathrm{hr}}+2x{I}_{5\mathrm{hr}}+2x{I}_{6\mathrm{hr}}+I_{7\mathrm{hr}})}{2}$

I_3-7hr：诱发后3～7小时的nRaw的增加率

将结果示于图99和图100。

由图99和图100可知，本发明化合物显示即时型过敏反应抑制效果，而且显示迟发型过敏反应抑制效果。

试验例2：PCA(Passive Cutaneous Anaphylaxis：被动皮肤过敏反应)抑制效果

实验使用Hartley系豚鼠(雄，5周龄以上)。

用生理盐水将使豚鼠对OVA免疫而得到的抗OVA血清稀释500倍(A液)。

用生理盐水将下述表16所示的被试物稀释为200μg/ml(B液)。

将B液与稀释250倍的豚鼠抗OVA血清等量混合，得到最终浓度是100μg/ml的被试物、稀释500倍的抗OVA血清(C液)。

在醚麻醉后，背部剪毛后的豚鼠的背部，每1点皮内注射100μl的生理盐水、A液、或C液。

约3小时后，将含0.2～0.4％的OVA的0.5％伊凡斯蓝生理盐水溶液按照0.8～1ml/body进行静脉给药。

在30分钟以内进行放血、剥皮，利用图像处理对各点的色素量进行定量。在图像处理中，检查将仅给予抗OVA血清的点的色素量设为100％时由被试物产生的抑制度。将结果示于表16。(N＝3或6)

[表16]

被试物	PCA反应抑制	被试物	PCA反应抑制
				仅抗OVA血清	×	化合物13	◎
化合物3	○	化合物50	◎
				化合物4	◎	化合物51	◎
化合物5	○	化合物53	◎
				化合物7	◎	化合物54	◎
化合物12	△	化合物55	◎

色素漏出量为80％以上时没有PCA反应抑制的标记为“×”，80～60％(抑制率：20～40％)时标记为“△”，60～30％(抑制率：40～70％)时标记为“○”，小于30％时标记为“◎”

由上述表16可知，本发明化合物显示PCA抑制效果。

试验例3：血管通透性亢进作用试验

实验使用Hartley系豚鼠(雄，5周龄以上)。

用生理盐水将被试物稀释为100μg/ml。

另外，作为对照，使用硫酸化透明质酸(4糖～约70糖的混合物；按照特开平11-147901号公报的实施例(制造例1)等合成)。

醚麻醉后，在背部剪毛后的豚鼠的背部，每点皮内注射100μl的生理盐水、或被试物的生理盐水溶液。

将0.5％伊凡斯蓝生理盐水溶液按照1ml/body进行静脉给药。

在30分钟以内进行放血、剥皮，利用图像处理对各点的色素量进行定量。

将结果作为将给予葡聚糖(dextran sulfate 10000)的点的色素量设为100％时被试物的血管透过率示于图101～图103。

由图101～图103可知，本发明化合物与公知的高分子多硫酸化透明质酸不同，没有血管透过亢进作用，不显示作为其自身副作用的刺激作用。

试验例4：长期稳定性(水溶液中)

针对化合物4和化合物50，调制1mg/ml水溶液，进行HPLC分析。

将这些溶液分别保存在冷处(2～8℃)和室温，随着时间经过进行HPLC分析直到4个月，检查各自的峰形变化。

HPLC条件：

色谱柱：Mightysil RP-18 GP(3μm，4.6×50mm)

柱温：40℃

流动相A：含2mM的TBAP的20mM KH₂PO₄/MeCN(70∶30)

流动相B：MeCN/含2mM的TBAP的20mM KH₂PO₄(80∶20)

梯度条件：起始A 100％、B 0％

          在0分钟～20分钟，A 100→95％、B 0→5％，直线

流速：1ml/min

检测：UV(210nm)

进样量：约5μg/5μl

(TBAP：tetrabutylammonium phosphate)

将结果示于下述表17。

[表17]

-：未实施试验

^*：室温，保存7天，与试验开始时相比没有变化

^**：室温，保存10天，明显不稳定，因而此时结束了试验

由上述表17可知，化合物50即使保存在冷处也确认了看到的3个主峰中的第2个随着时间经过而增加、第3个随着时间经过而减小，在水溶液中不稳定，与此相对，化合物4即使室温保存4个月也未看到峰形的变化，在水溶液中稳定。

在低分子量多硫酸化透明质酸衍生物中，通式(IA)的Y是(d)或(e)的化合物群和通式(IB)的化合物群作为在水溶液中的稳定性高的化合物而特别有用。

产业上的可利用性

本发明的低分子量多硫酸化透明质酸衍生物或其制药学上容许的盐，血管通透性亢进作用少，因而可用作炎症性的副作用少、安全性优异的过敏性疾病的预防和/或治疗剂。

Claims (14)

1.一种过敏性疾病的预防和/或治疗剂，将下述通式(IA)或下述通式(IB)表示的低分子量多硫酸化透明质酸衍生物或其制药学上容许的盐作为有效成分，该过敏性疾病选自花粉症、过敏性鼻炎、过敏性结膜炎、异位性皮炎和哮喘，

式中，n表示0～15的数；X表示下式(a)或(b)；Y表示下式(c)、(d)或(e)；R各自独立地表示氢原子或SO₃H基，其中，SO₃H基占R总数的80～100％；R¹表示-OH、-OSO₃H或-NZ₁Z₂，其中，Z₁和Z₂独立地表示氢原子、-SO₃H、取代或未取代的低级烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的芳烷基或者取代或未取代的杂芳基，或者-NZ₁Z₂整体表示氨基酸残基或肽残基，所述低级烷基是直链或支链的碳原子数1～6的烷基，所述芳基是C_6-14的单环乃至三环式芳香烃环基，所述芳烷基是芳基-C_1-6烷基，所述杂芳基是具有至少1个选自氮原子、硫原子和氧原子中的杂原子的饱和或不饱和的单环或多环杂环基；所述-NZ₁Z₂整体表示氨基酸残基或肽残基时，所述-NZ₁Z₂整体表示选自丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、β-丙氨酸、肌氨酸、苯基甘氨酸、N-乙基甘氨酸、N-正丙基甘氨酸、N-异丙基甘氨酸、N-正丁基甘氨酸、N-叔丁基甘氨酸、N-正戊基甘氨酸、N-正己基甘氨酸的氨基酸残基或该氨基酸残基的末端羧基被酰胺化的氨基酸残基；或者选自肌氨酰甘氨酸、甘氨酰甘氨酸、甘氨酰肌氨酸、肌氨酰肌氨酸、丙氨酰甘氨酸、β-丙氨酰苯丙氨酸、甘氨酰苯丙氨酸、苯丙氨酰甘氨酸、苯丙氨酰苯丙氨酸、甘氨酰甘氨酰甘氨酸、N-乙基甘氨酰甘氨酸、N-正丙基甘氨酰甘氨酸、肌氨酰甘氨酰甘氨酸、N-乙基甘氨酰甘氨酰甘氨酸、苯丙氨酰甘氨酰甘氨酸的肽残基或该肽残基的末端羧基被酰胺化的肽残基；*表示与氧原子的键合部位，

式中，n表示0～15的数；W表示下式(f)或(g)；R各自独立地表示氢原子或SO₃H基，其中，SO₃H基占R总数的80～100％；R¹表示-OH、-OSO₃H或-NZ₁Z₂，其中，Z₁和Z₂独立地表示氢原子、-SO₃H、取代或未取代的低级烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的芳烷基或者取代或未取代的杂芳基，或者-NZ₁Z₂整体表示氨基酸残基或肽残基，所述低级烷基是直链或支链的碳原子数1～6的烷基，所述芳基是C_6-14的单环乃至三环式芳香烃环基，所述芳烷基是芳基-C_1-6烷基，所述杂芳基是具有至少1个选自氮原子、硫原子和氧原子中的杂原子的饱和或不饱和的单环或多环杂环基，所述-NZ₁Z₂整体表示氨基酸残基或肽残基时，所述-NZ₁Z₂整体表示选自丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、β-丙氨酸、肌氨酸、苯基甘氨酸、N-乙基甘氨酸、N-正丙基甘氨酸、N_-异丙基甘氨酸、N-正丁基甘氨酸、N-叔丁基甘氨酸、N-正戊基甘氨酸、N_-正己基甘氨酸的氨基酸残基或该氨基酸残基的末端羧基被酰胺化的氨基酸残基；或者选自肌氨酰甘氨酸、甘氨酰甘氨酸、甘氨酰肌氨酸、肌氨酰肌氨酸、丙氨酰甘氨酸、β-丙氨酰苯丙氨酸、甘氨酰苯丙氨酸、苯丙氨酰甘氨酸、苯丙氨酰苯丙氨酸、甘氨酰甘氨酰甘氨酸、N-乙基甘氨酰甘氨酸、N-正丙基甘氨酰甘氨酸、肌氨酰甘氨酰甘氨酸、N-乙基甘氨酰甘氨酰甘氨酸、苯丙氨酰甘氨酰甘氨酸的肽残基或该肽残基的末端羧基被酰胺化的肽残基；

2.如权利要求1所述的预防和/或治疗剂，其中，在通式(IA)中，Y是式(d)或(e)。

3.如权利要求2所述的预防和/或治疗剂，其中，X是式(a)。

4.如权利要求3所述的预防和/或治疗剂，其中，n是3、4或5。

5.如权利要求3所述的预防和/或治疗剂，其中，n是4或5。

6.如权利要求1所述的预防和/或治疗剂，其中，低分子量多硫酸化透明质酸衍生物是通式(IB)。

7.如权利要求6所述的预防和/或治疗剂，其中，n是3、4或5。

8.如权利要求6所述的预防和/或治疗剂，其中，n是4或5。

9.权利要求1～8中任一项所述的低分子量多硫酸化透明质酸衍生物或其制药学上容许的盐在选自花粉症、过敏性鼻炎、过敏性结膜炎、异位性皮炎和哮喘的过敏性疾病的预防和/或治疗剂的制造中的使用。

10.一种低分子量多硫酸化透明质酸衍生物或其制药学上容许的盐，其用下述通式(IA’)或下述通式(IB)表示，

式中，n表示0～15的数；X表示下式(a)或(b)；Y’表示下式(d)或(e)；R各自独立地表示氢原子或SO₃H基，其中，SO₃H基占R总数的80～100％；R¹表示-OH、-OSO₃H或-NZ₁Z₂，其中，Z₁和Z₂独立地表示氢原子、-SO₃H、取代或未取代的低级烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的芳烷基或者取代或未取代的杂芳基，或者-NZ₁Z₂整体表示氨基酸残基或肽残基，所述低级烷基是直链或支链的碳原子数1～6的烷基，所述芳基是C_6-14的单环乃至三环式芳香烃环基，所述芳烷基是芳基-C_1-6烷基，所述杂芳基是具有至少1个选自氮原子、硫原子和氧原子中的杂原子的饱和或不饱和的单环或多环杂环基；所述-NZ₁Z₂整体表示氨基酸残基或肽残基时，所述-NZ₁Z₂整体表示选自丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、β-丙氨酸、肌氨酸、苯基甘氨酸、N-乙基甘氨酸、N-正丙基甘氨酸、N-异丙基甘氨酸、N-正丁基甘氨酸、N-叔丁基甘氨酸、N-正戊基甘氨酸、N-正己基甘氨酸的氨基酸残基或该氨基酸残基的末端羧基被酰胺化的氨基酸残基；或者选自肌氨酰甘氨酸、甘氨酰甘氨酸、甘氨酰肌氨酸、肌氨酰肌氨酸、丙氨酰甘氨酸、β-丙氨酰苯丙氨酸、甘氨酰苯丙氨酸、苯丙氨酰甘氨酸、苯丙氨酰苯丙氨酸、甘氨酰甘氨酰甘氨酸、N-乙基甘氨酰甘氨酸、N-正丙基甘氨酰甘氨酸、肌氨酰甘氨酰甘氨酸、N-乙基甘氨酰甘氨酰甘氨酸、苯丙氨酰甘氨酰甘氨酸的肽残基或该肽残基的末端羧基被酰胺化的肽残基；*表示与氧原子的键合部位，

式中，n表示0～15的数；W表示下式(f)或(g)；R各自独立地表示氢原子或SO₃H基，其中，SO₃H基占R总数的80～100％；R¹表示-OH、-OSO₃H或-NZ₁Z₂，其中，Z₁和Z₂独立地表示氢原子、-SO₃H、取代或未取代的低级烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的芳烷基或者取代或未取代的杂芳基，或者-NZ₁Z₂整体表示氨基酸残基或肽残基，所述低级烷基是直链或支链的碳原子数1～6的烷基，所述芳基是C_6-14的单环乃至三环式芳香烃环基，所述芳烷基是芳基-C_1-6烷基，所述杂芳基是具有至少1个选自氮原子、硫原子和氧原子中的杂原子的饱和或不饱和的单环或多环杂环基，所述-NZ₁Z₂整体表示氨基酸残基或肽残基时，所述-NZ₁Z₂整体表示选自丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、β-丙氨酸、肌氨酸、苯基甘氨酸、N-乙基甘氨酸、N-正丙基甘氨酸、N-异丙基甘氨酸、N-正丁基甘氨酸、N-叔丁基甘氨酸、N-正戊基甘氨酸、N-正己基甘氨酸的氨基酸残基或该氨基酸残基的末端羧基被酰胺化的氨基酸残基；或者选自肌氨酰甘氨酸、甘氨酰甘氨酸、甘氨酰肌氨酸、肌氨酰肌氨酸、丙氨酰甘氨酸、β-丙氨酰苯丙氨酸、甘氨酰苯丙氨酸、苯丙氨酰甘氨酸、苯丙氨酰苯丙氨酸、甘氨酰甘氨酰甘氨酸、N-乙基甘氨酰甘氨酸、N-正丙基甘氨酰甘氨酸、肌氨酰甘氨酰甘氨酸、N-乙基甘氨酰甘氨酰甘氨酸、苯丙氨酰甘氨酰甘氨酸的肽残基或该肽残基的末端羧基被酰胺化的肽残基；

11.如权利要求10所述的低分子量多硫酸化透明质酸衍生物或其制药学上容许的盐，其中，在通式(IA')中，X是式(a)。

12.如权利要求10所述的低分子量多硫酸化透明质酸衍生物或其制药学上容许的盐，其是通式(IB)。

13.如权利要求11或12所述的低分子量多硫酸化透明质酸衍生物或其制药学上容许的盐，其中，n是3、4或5。

14.一种医药组合物，含有权利要求10、11、12或13所述的低分子量多硫酸化透明质酸衍生物或其制药学上容许的盐、以及制药学上容许的赋形剂。