EA032076B1 - Производные, полученные из гиалуроновой кислоты и карнозина - Google Patents

Производные, полученные из гиалуроновой кислоты и карнозина Download PDF

Info

Publication number
EA032076B1
EA032076B1 EA201692368A EA201692368A EA032076B1 EA 032076 B1 EA032076 B1 EA 032076B1 EA 201692368 A EA201692368 A EA 201692368A EA 201692368 A EA201692368 A EA 201692368A EA 032076 B1 EA032076 B1 EA 032076B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
carnosine
hyaluronic acid
formula
group
kda
Prior art date
Application number
EA201692368A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201692368A1 (ru
Inventor
Себастьяно Шюто
Валентина Греко
Энрико Риццарелли
Франческо Беллия
Валерия Ланца
Сузанна ВАККАРО
Лучиано Мессина
Original Assignee
Себастьяно Шюто
Консиглио Националь Делль Ричерче
Фидия Фармачеутичи С.П.А.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Себастьяно Шюто, Консиглио Националь Делль Ричерче, Фидия Фармачеутичи С.П.А. filed Critical Себастьяно Шюто
Publication of EA201692368A1 publication Critical patent/EA201692368A1/ru
Publication of EA032076B1 publication Critical patent/EA032076B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/61—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule the organic macromolecular compound being a polysaccharide or a derivative thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06026—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atom, i.e. Gly or Ala
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D233/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings
    • C07D233/54—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D233/64—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms, e.g. histidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/05—Dipeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/542—Carboxylic acids, e.g. a fatty acid or an amino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • C08B37/0072—Hyaluronic acid, i.e. HA or hyaluronan; Derivatives thereof, e.g. crosslinked hyaluronic acid (hylan) or hyaluronates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2250/00—Food ingredients
    • A23V2250/54—Proteins
    • A23V2250/55—Peptide, protein hydrolysate

Abstract

Настоящее изобретение относится к производному карнозина (β-аланил-L-гистидина), характеризующемуся формулой (1), полученному посредством функционализации гиалуроновой кислоты с помощью карнозина.

Description

Настоящее изобретение относится к производному карнозина (β-аланил-Ь-гистидина), характеризующемуся формулой (1), полученному посредством функционализации гиалуроновой кислоты с помощью карнозина.
032076 Β1
Настоящее изобретение относится к производному карнозина (β-аланил-Ь-гистидина), характеризующемуся формулой (1), полученному посредством функционализации гиалуроновой кислоты с помощью карнозина.
Более конкретно, настоящее изобретение относится к соединению, характеризующемуся формулой (1)
т.е. конъюгированному 3-Ы-гиалуронилу с 2-(3-аминопропанамид)-3-(1Н-имидазол-4-ил)пропановой кислотой или гиалуронилкарнозину, или 3-(1Н-имидазол-4-ил)-2-(3-гиалуронамидопропанамид) пропановой кислоте.
Соединение, характеризующееся формулой (1), указанное выше, представляет собой конъюгат дипептида карнозина, характеризующегося формулой (2)
и гиалуроновой кислоты, где конъюгация получена посредством образования амидной связи между ΝΗ2группой карнозина, предпочтительно защищенного по карбоксильной группе, и одной или более карбоксильными группами гиалуроновой кислоты, предпочтительно активного производного гиалуроновой кислоты, еще более предпочтительно сложного эфира СОХ, характеризующегося формулой (3)
Настоящее изобретение также относится к способу получения 3-№гиалуронила, конъюгированного с 2-(3-аминопропанамид)-3-(1Н-имидазол-4-ил)пропановой кислотой (НуСаг) и составов, содержащих вышеуказанное для применения в фармацевтическом производстве, косметологии и пищевых добавках, с антиоксидантной, заживляющей, хелатирующей, гастропротекторной (в качестве комплекса с Ζη2+), модулирующей уровень глюкозы, иммуномодулирующей, противоопухолевой, антигенотоксической, нейропротекторной, антигликирующей, антифибриллогенной активностью, активностью в отношении старения центральной нервной системы, защитной активностью в отношении повреждения вследствие ишемии/реперфузии, нефропротекторной, гепатопротекторной активностью.
В процессе дыхания клеток вырабатывается важный и потенциально опасный побочный продукт: супероксидный радикал О2*-, который может реагировать, разрушая их, с биологическими макромолеку
- 1 032076 лами, такими как белки, ДНК и липиды, и могут вырабатываться другие высокореактивные формы (КО8), такие как 'ОН, КО2', КООН, КО', Н2О2 и ΟΝΟΟ', которые являются потенциально агрессивными по отношению к клеточной системе. Все аэробные организмы имеют защитные механизмы в отношении радикала О2'- , среди которых главными являются ферменты супероксиддисмутазы (8ΟΌ), которые катализируют дисмутацию О2'- до О2 и Н2О2. Перекись водорода, полученная таким образом, в свою очередь, превращается в Н2О посредством каталазы и посредством глутатионпероксидазы, таким образом предотвращая образование радикала 'ОН, который будет вырабатываться в результате реакции Фентона (Ре(11)+)+Н2О2^Ре(111)+'ОН+-ОН). При определенных патологических состояниях (воспалительных процессах, реперфузионном повреждении, сердечных приступах, болезни Альцгеймера, АЬ8 и т.д.) ферментов 8ОЭ может быть недостаточно для устранения полученного избытка О2'- и биологические ткани в данных случаях могут подвергаться дальнейшему повреждению. В некоторых тканях позвоночных, таких как ткани мышц или головного мозга, характеризующихся более высоким уровнем окислительного метаболизма, был обнаружен высокий уровень малых молекул с антиоксидантной активностью, таких как глутатион и другие пептиды (карнозин, гомокарнозин, ансерин и т.д.), которые обладают функцией усиленной защиты от процессов окислительного стресса. Защитная активность этих пептидов по отношению к КО8 была подробно описана и показана в литературе ((ВюсЫт. ВюрЬук. Ас1а 1570, 89, 2002; Мо1. Се11к 13, 498, 2002; ВюсЬет. 1. 967, 241, 1988).
Для карнозина, в частности, в отношении его свойств против образования свободных радикалов и против окисления в пероксиды, доклинические исследования продемонстрировали его способность предупреждения и, в некоторых случаях, лечения катаракты (ВюсЬеш. ΙηΙ. 15, 1105, 1987; ВюсЫш. ВюрЬук. Ас1а 1004, 363, 1989). Была продемонстрирована противовоспалительная активность в тканях пищеварительной системы, глаз и кожи ((патентные документы И8 4508728 А, ΌΕ 4316293, \УО 01/52808 А). Дополнительно карнозин показал ингибирующее действие по отношению к окислению ЬПЬ человека, индуцируемое Си(11) (Еиг. 1. Меб. СЬет. 43, 373, 2008), и была конкретно продемонстрирована его активность как акцептора радикалов по отношению к гидроксильному радикалу (Не1у. Опт. Ас1а 85, 1633, 2002). По отношению к механизму, который обеспечивает противодействие карнозина патологическим влияниям нитрозативного стресса, было продемонстрировано, что прямое взаимодействие с оксидом азота является одним из возможных путей (1. №игоксг Кек. 85, 2239, 2007), с учетом того, что только встречающийся в природе дипептид существенно снижает количество оксида азота, высвобождающегося посредством NΟ-донора. Позднее была продемонстрирована эффективность карнозина в снижении активации РАКР-1, а также РАКР-2 после индукции окислительного стресса (№игосЬет. Кек. 35, 2144, 2010; Мо1. Акрес1к Меб. 32, 258, 2011). Ь-карнозин, с другой стороны, аналогично Ν-монометиларгинину (известному ингибитору ^NΟ8) препятствует экспрессии РКАР-1 (№игосЬет. Кек. 38, 50, 2013).
Также интересно наблюдать то, что комплексы карнозина с Си(11) показывают синергическую активность в отношении двух токсичных форм радикалов, О2 -' и НО' (ЛаНопТгапк. 4406, 2003). Параллельно наблюдалось, что присутствие карнозина, ансерина, гомокарнозина и других подобных пептидов улучшает всасывание цинка в кишечнике, на практике улучшая биодоступность. Данный факт является особенно примечательным при синдроме дефицита цинка и при воспалительных заболеваниях кишечника (Вютеб. Кек. Тгасе Е1ет. 12, 159, 2001).
Пептидное происхождение карнозина обуславливает различные ограничения в его применении, связанные с его способностью к разложению со стороны конкретных пептидаз. Для преодоления этого ограничения было предложено применение Ν-ацетилкарнозина (патентный документ \УО 95/10294 А), который разлагается намного медленнее, чем свободный карнозин (С1ш. Опт. Ас1а 254, 1-21, 1996). Для той же цели также применяли получение производных карнозина с циклодекстринами, а именно с соединениями, широко применяемыми в качестве носителей для лекарственных средств, за счет образования вторичного амина (патентный документ ЕР 1176154 А). В этом случае циклодекстрин стабилизирует дипептид, защищая его от гидролитической активности карнозиназы, как продемонстрировано для подобных систем (1. Ат. СЬет. 8ос. 120, 7030, 1998), в результате обеспечивая проявление карнозином его биологической активности, которой способствует присутствие олигосахарида, устраняющего 'ОН радикалы (Не1у. СЫт. Ас1а 85, 1633, 2002). На основе той же теории конъюгированное соединение карнозина с трегалозой (патентный документ ЕР 1860116 А1) было впоследствии запатентовано в качестве системы с антиоксидантной, антигликирующей и антитромбоцитарной активностями. Также в данном случае карнозин конъюгируется посредством связей с функциональными группами -ОН трегалозы, образуя вторичные амины. Связи, образованные таким образом, в определенной степени более стабильные, чем таковые, полученные посредством ионной связи, не только, по меньшей мере частично, защищают карнозин от разложения под действием ферментов, но они обеспечивают преимущество в отношении известной способности трегалозы защищать белки от конформационных изменений под действием денатурирующих агентов.
С другой стороны, объект настоящего изобретения, соединение, характеризующееся формулой (1), получают посредством ковалентной конъюгации карнозина с гиалуроновой кислотой за счет образования амидной связи между карбоксильной группой НА и аминогруппой карнозина.
- 2 032076
Гиалуроновая кислота представляет собой полимер, состоящий из повторяющихся дисахаридных звеньев, состоящих из глюкуроновой кислоты (β-Ό-глюкопирануроновой кислоты) и ацетилглюкозамина (2-ацетиламино-2-дезокси-в-О-глюкопираноза), связанных друг с другом с помощью гликозидной связи между аномерным атомом углерода первого и С-3 ацетилглюкозамином. Дисахаридные звенья, в свою очередь, связаны друг с другом с помощью гликозидных связей между аномерным углеродом ацетилглюкозамина дисахаридного звена и С-3 остатка глюкуроновой кислоты, принадлежащего следующему дисахаридному звену, образуя линейные цепи переменной длины. Средняя молекулярная масса (МА) НА зависит от этой длины, при этом указанная МА является чрезвычайно переменной, также в зависимости от источников, из которых получена НА. В частности, НА, применяемая в настоящем изобретении, может быть получена посредством экстракции (например, из гребней петуха), посредством ферментации или посредством биосинтеза, при этом характеризуется средней МА от 90 до 230 кДа, предпочтительно от 180 до 210 кДа. Следующий диапазон средней МА, применяемый для целей настоящего изобретения, составляет от 500 до 730 кДа. В настоящем описании средняя МА означает средневесовую МА, рассчитанную в соответствии со способом характеристической вязкости (ТсгЬо)су1с11 с1 а1., СагЬойубт Вез, 1986, 363-377). Гиалуроновая кислота (НА) представляет собой встречающийся в природе биологически разлагаемый полимер, имеющий различные применения в медицине, включая молекулярные каркасы для тканевой инженерии и терапию с восстановлением вязкости синовиальной жидкости для лечения остеоартроза. Гиалуроновая кислота применяется в настоящее время в области косметологии ввиду ее защитных и увлажняющих свойств. Она представляет собой одну из главных структурных составляющих внеклеточного матрикса (ЕСМ) тканей позвоночных и она может быть обнаружена практически во всех жидкостях и тканях тела, таких как синовиальная жидкость, жидкость стекловидного тела и гиалиновый хрящ (Вютебюа1 аррйсабопз о£ Йуа1итоп1с ааб. АС8 РиЬйсабопз, р. 155-74, 2006; Βίота!епа1з 25, 1339, 2004; Са1с1йеб Т1ззие Ιηΐ. 7, 175, 1971; ОитИли 8., Ро1утег1с Ьюта1епа18. №\ν Уогк: Магсе1 Эеккег, 2002. Ι8ΒΝ:0-8247-8969-5). Этот биополимер выполняет функцию молекулярного каркаса и связан с другими молекулам матрикса, наряду с аггреканом (Оатд Н.О., На1ез С.А., Сйет1з1ту апб Ыо1оду о£ йуа1итопап. Ох&тб: Е1зеу1ет 8с1епсе, 2004. Ι8ΒΝ:978-0-08-044382-9).
НА также играет определенную роль в различных биологических функциях, таких как регулирование адгезии и сократительной способности клеток, управление дифференцировкой и пролиферацией клеток, и она обеспечивает механические свойства тканей (Вюша1епа18 25, 1339, 2004). Было продемонстрировано, что некоторые рецепторы поверхности клетки (такие как СЭ44, ВНАММ и 1САМ-1) действуют вместе с НА, влияя на некоторые клеточные процессы, среди которых морфогенез, заживление, воспалительный процесс и метастазирование (Вюта1епа18 26, 359-71, 2005; №11. Веу. Сапсег 4, 528, 2004; 1. 8игд. Кез. 147, 247, 2008; 1. Се11. 8с1. 103, 293, 1992). НА также отвечает за вязкоупругие свойства некоторых биологических жидкостей (синовиальной жидкости, жидкости стекловидного тела глаза) и она контролирует гидратацию ткани и транспорт воды (Уе1. Меб. 53, 397, 2008). Дополнительно НА была обнаружена в процессе развития эмбриона в пупочном канатике, что указывает на то, что составные материалы НА могут создавать благоприятные условия для образования и роста тканей (Ас!а Вюта!ет. 6, 2407, 2010; Вюта!ела1з 28, 1830, 2007; 1. Соп1то1. Ве1еазе 69,1 69, 2000; Сйет. Веу. 101, 1869, 2001; Вюта!епа18 24, 4337, 2003).
Характеристики НА, включая ее консистенцию, биосовместимость и гидрофильность, делают ее идеальным увлажнителем, применяемым в косметической дерматологии и продуктах для ухода за кожей (Уе1. Меб. 53, 397, 2008).
В заявке на патент АО 2012/076961 А2 заявляется соединение, содержащее гиалуроновую кислоту, образующее соль или, по меньшей мере частично, образующее соль с карнозином; целью изобретателя в данной заявке на патент было получение препаратов, в которых представлены биофармакологические свойства обоих соединений. В этом случае, однако, вследствие ионного происхождения связи, которая удерживает два активных компонента вместе, при достижении заявленным соединением биологических жидкостей, оно сразу же будет высвобождать свободный карнозин, который будет быстро разрушен под воздействием карнозиназы сыворотки. Конъюгат, характеризующийся формулой (1), объект настоящего изобретения, напротив, и как ранее рассматривалось, характеризуется наличием между карнозином и гиалуроновой кислотой ковалентной связи амидного типа, которая не является непосредственно гидролизуемой, таким образом карнозин в его конъюгированной форме является более устойчивым к действию карнозиназы сыворотки и соединение, характеризующееся формулой (1), поддерживает карнозин в связанном и неизменном состоянии на протяжении периода времени, достаточного для обеспечения достижения вышеуказанным карнозином участка, где он будет оказывать свое воздействие, обеспечивая технический эффект медленного высвобождения.
Однако заявителем было обнаружено и продемонстрировано, что эта связь не только, как ожидалось, замедляет высвобождение карнозина, будучи гидролизуемой в меньшей степени, чем ранее описанные связи, но она, главным образом, придает соединению формулы (1) антиоксидантную активность, которая является чрезвычайно высокой. При помощи конъюгации НА и карнозина посредством амидной связи, как заявлено в настоящем документе, увеличивается биологическое воздействие карнозина в оп
- 3 032076 ределенно более высокой степени, чем действие вследствие простой защиты от ферментативного гидролиза, и это оказалось полностью неожиданным ввиду того, что НА как таковая не проявляет антиоксидантную активность.
Ввиду вышеуказанного присутствие гиалуроновой кислоты в конъюгате, который является объектом настоящего изобретения, синергетически усиливает действие в отношении окислительных процессов, которые ранее присутствовали в карнозине, обеспечивая в дальнейшем значительную стабильность по отношению к карнозиназе сыворотки и, в результате, придавая более высокую активность по отношению к карнозину как таковому или ацетильному производному.
Процентное содержание карбоксильных групп гиалуроновой кислоты, конъюгированной с помощью амидной связи с карнозином, находится в диапазоне от 2 до 25%, предпочтительно от 5 до 20% и еще более предпочтительно равняется 7% общего содержания карбоксильных групп НА.
Объект настоящей заявки на патент также относится к Си(11)-комплексу конъюгата, характеризующегося формулой (1).
δΘΌ-подобная антиоксидантная активность Си(11)-комплекса конъюгата, характеризующегося формулой (1), была фактически оценена, проверена ίη νίίτο посредством сравнения с Си(11)-комплексом свободного карнозина и с Си(11)-комплексом неконъюгированной гиалуроновой кислоты. Результаты показали, что активность Си(11)-комплекса, характеризующегося формулой (1), является чрезвычайно высокой по отношению к активности соответствующих комплексов карнозина или гиалуроновой кислоты.
Объект настоящего изобретения также относится к способу получения соединения, характеризующегося формулой (1), где производное гиалуроновой кислоты ковалентно конъюгировано с карнозином, защищенным по карбоксильной группе. Соединение, характеризующееся формулой (1), в соответствии с настоящим изобретением было фактически синтезировано исходя из гиалуроновой кислоты, активированной соответствующим образом, и карнозина, защищенного по карбоксильной группе. Активное производное гиалуроновой кислоты представляет собой предпочтительно сложный эфир и еще более предпочтительно сложный эфир 3-гидрокси-1,2,3-бензотриазин-4(Н)-она (НООВТ), в котором дипептид карнозина предпочтительно применяют в форме метилового сложного эфира.
Для этой цели можно применять другие сложные эфиры карнозина или другие активные производные гиалуроновой кислоты, эквивалентные сложному эфиру НООВТ.
Соединение, характеризующееся формулой (1), показало более сильную устойчивость к действию карнозиназы сыворотки человека по отношению к неконъюгированному карнозину.
Объект настоящего изобретения также относится к фармацевтическим, косметическим или нутрицевтическим композициям, содержащим соединение, характеризующееся формулой (1), в качестве активного компонента. Принимая во внимание антиоксидантные, антигликирующие, антитромбоцитарные и хелатирующие свойства по отношению к переходным металлам, композиции, содержащие соединение, характеризующееся формулой (1), можно применять для лечения или предупреждения состояний, в которых образование свободных радикалов или нарушение конформации белков вследствие как гликирования, так и других причин, имеет патогенное значение. Примеры этих состояний включают катаракту, сухость глаз, старение кожи, раны, повреждения желудка, диабет, ослабленный иммуномодулирующий ответ, заболевания почек, заболевания печени, опухолевые и неврологические патологии (старение центральной нервной системы, болезнь Альцгеймера), повреждение вследствие ишемии/реперфузии.
Объект настоящего изобретения, таким образом, относится к фармацевтическим, косметическим или нутрицевтическим композициям, содержащим соединение, характеризующееся формулой (1), в качестве активного компонента, для применения в лечении и/или предупреждении нарушений и состояний, связанных с конформацией белка, таких как катаракта, сухость глаз, старение кожи, раны, повреждения желудка, диабет, ослабленный иммуномодулирующий ответ, заболевания почек, заболевания печени, опухолевые и неврологические заболевания, повреждение вследствие ишемии/реперфузии. Эти композиции фактически характеризуются заживляющей, гастропротекторной, предпочтительно в качестве комплекса с Ζη , модулирующей уровень глюкозы, иммуномодулирующей, противоопухолевой, антигенотоксической, нейропротекторной активностью, активностью в отношении старения центральной нервной системы, защитной активностью от повреждения вследствие ишемии/реперфузии, нефропротекторной и гепатопротекторной активностью.
Дозы и пути введения зависят от условий, которые главным образом определяются клиническими экспертами, однако при этом обычно находятся в диапазоне от 100 до 5000 мг/сутки рег ок и от 0,1 до 10 вес.% для составов для местного или системного применения (т.е. в виде инъекций).
Возможные примеры составов включают капсулы, таблетки, гранулы, порошки, растворы, мази, гели, глазные капли и любой другой состав, известный эксперту в области составов.
Возможные пути введения очевидно связаны с заболеванием, подлежащим лечению, и для иллюстративных целей могут включать пероральное, местное, осуществляемое на определенном участке, внутримышечное, интрадермальное, внутриглазное, внутри- или периартикулярное, инфузионное и т.д.
Пример, который иллюстрирует настоящее изобретение, представлен далее.
Если не указано иное, применяли коммерчески доступные реагенты, обработанные следующим об
- 4 032076 разом, при необходимости безводный метанол (81СМЛ, МеОН), применяемый для синтеза метилового сложного эфира карнозина, перед применением выдерживали в течение 24 ч на молекулярных ситах с размером пор 4 А.
Метиловый сложный эфир карнозина (Саг-ОМе) синтезировали, обрабатывая карнозин (81дта) соляной кислотой в метаноле при 0°С. Ацетилхлорид применяли в качестве источника НС1.
'Н-ЯМР спектр регистрировали на контрольно-измерительном приборе Уапаи при 500 МГц (1иоуа 500), с применением НОЭ частоты в качестве образца.
Целью экспериментов было определение молекулярно-массового распределения (М^Э) и определение характеристической вязкости конъюгированного НуСаг осуществляли на хроматографической системе СР6/8ЕС, оснащенной тройным детектором Ма1уети (У15С01ескТЭтах).
Измерения флуоресценции осуществляли на спектрофотометре 8Н1МАО2И РЕ-5301 РС, в свою очередь измерения абсорбции в УФ-видимой части спектра осуществляли на спектрофотометре 8Н1МАЭ/Е υν-1800 или Весктап ЭЕ 650.
δΟΌ-подобную активность Си(11)-комплекса конъюгированного НуСаг и, в том числе, Си(11)комплекса карнозина или НА, определяли с помощью теста Фридовича (Апа1. Вюсйет. АА, 276, 1971).
Для приготовления указанных Си(11)-комплексов применяли нитрат меди в водном растворе в следующих концентрациях: [Ь] = [Си(11)] = 10-6-10-7; фактически известно специалисту в данной области, что карнозин легко образует хелаты с переходными металлами (Егее Реб Рек. Соттип.; 1991, 12-13 ρΐ. 1, 179-185). Все применяемые химические продукты были приобретены у 8щта.
НРЬС анализ олигосахаридов, полученных следующим ферментативным перевариванием НуСаг или свободной гиалуроновой кислоты с тестикулярной гиалуронидазой быка, проводили на хроматографической системе АдПеп! 1200 с УФ-детектором, с применением колонки 8ире1сокП ЬС-8АХ1 (25x4,6 см; 8ире1со) и при считывании хроматографического профиля при длине волны 214 нм. Элюирование: скорость потока 1,2 мл/мин; изократический 50 мМ ЫаС1 (рН 4) на протяжении 5 мин, затем программировали для 1,2 М ЫаС1 (рН 4) за 60 мин.
Пример.
Синтез 3-Ы-гиалуронила, конъюгированного с 2-(3-аминопропанамид)-3-(1Н-имидазол-4-ил)пропановой кислотой (НуСаг).
В типичной процедуре синтеза 1 г гиалуроната натрия (195 кДа) добавляли при перемешивании к 20 мл холодного тетрагидрофурана (ТНЕ) при 5°С. Следующие продукты добавляли последовательно к образующейся в результате суспензии: 20 мл раствора Н2О/ТНЕ (1:1 об./об.), содержащего 0,5 ммоль НООВТ, 10 мл раствора Н2О/ТНЕ (1:1 об./об.), содержащего 0,2 ммоль трис[2-(2-метоксиэтокси)этил] амина, и 5 мл раствора метанола, содержащего 0,125 ммоль метилового сложного эфира Ь-карнозина. Через 30 мин при 5°С 10 мл раствора гидрохлорида И-(3-диметиламинопропил)-Н'-этилкарбодиимида (ЕЭС НС1; 0,25 ммоль) добавляли к смеси и всю реакционную массу оставляли в условиях непрерывного перемешивания при 5°С на протяжении 20 ч. Спустя данный промежуток времени реакционную смесь обрабатывали 100 мл раствора 0,1н. ЫаОН и оставляли в покое при 5°С на протяжении следующих 3,5 ч. На этой стадии рН смеси доводили до 7,0 с помощью 2н. НС1 и конъюгат осаждали посредством добавления 800 мл ацетона. Продукт, представляющий интерес, удаляли из супернатанта посредством центрифугирования и впоследствии подвергали диализу против воды на протяжении 60 ч. Конъюгат затем извлекали и лиофилизировали (выход 70%).
1Н ЯМР (Э2О, 500 МГц) (ррт): 8,66 (синглет; Н-2 имидазольного кольца), 7,34 (синглет; Н-5 имидазольного кольца), 4,61-4,52 (широкий мультиплет; Н-6 остатков глюкуроновой кислоты, Н-1 остатков Νацетилглюкозамина и Н-2 цепи пропановой кислоты), 3,90-3,23 (широкий мультиплет; Н-2, Н-3, Н-4 и Н5 остатков глюкуроновой кислоты, Н-2, Н-3, Н-4, Н-5, 2Н-6 остатков Ν-ацетилглюкозамина и С-3 метилена пропанамидной группы), 3,17 (мультиплет; 2Н-3 цепи пропановой кислоты, 2,44 (мультиплет; метилен С-2 пропанамидной группы), 2,06 (широкий синглет СН3 остатков Ν-ацетилглюкозамина). 1Н ЯМР спектр конъюгированного НуСаг с главными распределениями показан на фиг. 1, которая показывает резонансы, применяемые для вычисления процентного содержания карбоксильных групп, связанных амидным мостиком с карнозиновыми звеньями (% загрузки).
Количество карнозина, присутствующего в конъюгате, определяли из соотношения между значением интегрирования сигнала при 2,06 ррт (по отношению к ацетильным группам НА) и значением интегрирования сигнала при 2,44 ррт (по отношению к С-3 пропанамидной группы) или одного из Н-2 или Н5 сигналов имидазольного кольца (при 8,66 и 7,34 ррт соответственно).
Следуя процедуре синтеза, описанной выше, было доказано, что процентное содержание карбоксильных групп, присутствующих в полисахаридном звене конъюгата, которые образуют амидную связь с карнозином, равняется 7%. Модифицируя надлежащим образом стехиометрические отношения между НА и другими реагентами, были получены значения конъюгации не более 25%.
Характеристическая вязкость и молекулярно-массовое распределение конъюгата НуСаг.
Параметры, указанные выше, определяли с помощью эксклюзионной хроматографии, которую проводили на хроматографической системе СРСтах νΕ 2001 (Ма1уетп), оснащенной двумя колонками Т8К
- 5 032076
СЕЬ СМР^ХЬ (7,8 мм ГОх30 см; Уксо1ек-ТО8ОН В1О§С1ЕЫСЕ), установленными последовательно. Систему объединяли с системой трех детекторов, размещенных последовательно, и содержащей рефрактометрический детектор, детектор рассеянного света и дифференциальный вискозиметр с четырьмя капиллярами. Образец элюировали с применением водного раствора 0,1М нитрата натрия, содержащего 0,5 г/л азида натрия со скоростью потока 0,6 мл/мин, при 40°С. Применяли программное обеспечение Отищес 4.1 для сбора и анализа данных.
На фиг. 2 показана типичная хроматограмма, полученная для НуСаг (загрузка 7%), которая указывает хроматографическое поведение образца НуСаг (7% загрузка) на колонке Т8К-СЕЬ СМР^ХЬ. Определение с помощью тройного детектора осуществляли на У15со1ек ΤΌΑ 302 (Макет).
Физические параметры, относящиеся к характеристической вязкости и молекулярной массе (М^), определенные при разных концентрациях конъюгата гиалуроновой кислоты-карнозина, сравненные с соответствующими данными для гиалуроновой кислоты, определенные с помощью эксклюзионной хроматографии, объединенной с тройным детектором, указаны в табл. 1 ниже.
Таблица 1
Образец Теоретическая конц (мг/мл) Обнаруженная конц. (мг/мл) Молекулярная масса (М1У) Характеристическая вязкость (дл/г)
НА 190 кДа (О) 0,5 мг/мл 0,513 190713 5,2
НА 190 кДа (Е) 0,25 мг/мл 0,261 192830 5,2
НА 190 кДа (Г) 0,1 мг/мл 0,109 194713 5,3
НуСаг (7%) 190 кДа 0,5 мг/мл 0,420 196758 4,8
НуСаг (7%) 190 кДа 0,25 мг/мл 0,205 200258 4,8
НуСаг (7%) 190 кДа 0,1 мг/мл 0,081 204370 4,9
На фиг. 3 показан в качестве примера график Марка-Хаувинка (1од вязкости по отношению к 1од молекулярной массы, М\У) для конъюгата гиалуроновой кислоты-карнозина (загрузка 7%) по сравнению с таковым для неконъюгированной гиалуроновой кислоты: более конкретно, график был получен для раствора (0,5 мг/мл) НуСаг (7% загрузка) по сравнению с раствором при той же концентрации, соответствующей неконъюгированной гиалуроновой кислоты.
Результаты показали, что характеристическая вязкость конъюгата НуСаг только незначительно ниже, чем таковая для неконъюгированной гиалуроновой кислоты, характеризующейся такой же М\У. с учетом того, что средневесовая молекулярная масса конъюгата является когерентно более высокой, чем таковая для исходного полисахарида. Это означает, что конъюгация не изменяет физико-химические характеристики НА, от которых зависит ее реологическое поведение. Это является очень важным, особенно на стадии составления продукта, когда необходимо предварительно установить реологические параметры конечного продукта (вязкость, однородность и т.д.).
ЗОЭ-подобная антиоксидантная активность.
8ОЭ-подобную активность Си(11)-комплекса конъюгата НуСаг определяли с применением непрямого метода Фридовича (Апа1. Вюсйет. АА, 276, 1971). Супероксидный анион вырабатывали ферментативно с использованием системы ксантин-ксантиноксидаза с последующим спектрофотометрическим наблюдением восстановления нитросинего тетразолия (ΝΒΤ) при 560 нм. Реакционная смесь содержала цитохром с (30 мкМ) или ΝΒΤ (250 мкМ), ксантин (50 мкМ), в фосфатном буфере (10 мМ) при рН 7,4. Достаточное количество ксантиноксидазы добавляли к 2 мл этой смеси для того, чтобы получить 0,024 ΔΑ мин-1. Это соответствует скорости образования О2*-, равной 1,1 мкМ мин-1. Скорость восстановления хромогенной молекулы измеряли в присутствии и в отсутствие рассматриваемого комплекса на протяжении 600 с. Все измерения осуществляли при 25±0,2°С с применением кювет, характеризующихся оптической длиной пути 1 см, с термостатической регуляцией и магнитным перемешиванием. Для того чтобы исключить возможное ингибирование активности ксантиноксидазы, получение мочевой кислоты со стороны ксантиноксидазы спектрофотометрически сопровождали при 295 нм в отдельных экспериментах.
- 6 032076
Значения Ι50 (т.е. концентрация, которая приводит к 50% ингибированию восстановления ΝΒΤ) для рассматриваемых комплексов с металлами, определенные при рН 7,4, указаны на фиг. 4 и в табл. 2 ниже.
Таблица 2
Таким образом, в табл. 2 показаны δΟΌ-подобные активности Си(11)-комплексов НуСаг, Саг и НА, выраженные как концентрации, способные к ингибированию 50% восстановления ΝΒΤ (Ι50).
Более конкретно, на фиг. 4 показаны δΟΌ-подобные активности Си(11)-комплексов (Си-НуСаг) и неконъюгированной НА (Си-НА), определенные с помощью непрямого метода, предложенного Фридовичем, в соответствии с функциональными инструкциями, описанными выше. Очевидно, что чем меньше количество продукта, который применяют для получения значения Ι50, тем выше его антиоксидантная активность. Исходя из анализа данных, становится очевидным, что конъюгат Си/НуСаг характеризуется антиоксидантной активностью приблизительно в 4 раза выше, чем таковая для Си/Саг. Исходя из того, что комплекс Си/НА, как ожидалось, характеризуется очень низкой антиоксидантной активностью, результат, полученный с Си/НуСаг, является удивительным и неожиданным и он демонстрирует синергизм вследствие конкретного типа конъюгации НА/карнозина с помощью амидной связи, как описано в настоящем документе.
Ферментативный гидролиз со стороны карнозиназы сыворотки человека.
Зависимую от времени стабильность НуСаг по отношению к карнозиназе сыворотки человека, сравниваемую со стабильностью смеси карнозина + НА или карнозина отдельно, определяли посредством инкубирования каждого из этих веществ (900 мкМ) при 37°С в 50 мМ трис/НС1 (рН 8,0) с вышеуказанным ферментом (ί.'Ν1). очищенным с помощью культуральной среды клеток НеЬа, стабильно трансфицированных, как указывалось ранее (Αηΐίοχίά. Кебох 81диа1., 11, 2759, 2009). Параллельный эксперимент осуществляли в качестве отрицательного контроля, в котором гиалуроновую кислоту отдельно подвергали действию ферментов. Ход реакции сопровождался сбором при разных временных интервалах 50 мкл аликвот смеси в общем на протяжении 5 ч, и, после освобождения от белков с помощью трихлоруксусной кислоты (ТСА) производили флуорометрическое определение количества гистидина в конечном растворе после осуществления реакции с ортофталевым альдегидом (ОРА; Р1ика) в соответствии с ранее описанной процедурой (Сйи. СЫш. Ас1а, 1982, 123, 221). Результаты показаны на фиг. 5.
Более конкретно, на фиг. 5 показана стабильность со временем НуСаг (·), которую подвергали действию карнозиназы сыворотки человека, в сравнении со стабильностью карнозина карнозина + НА и НА отдельно (*) (последнюю использовали как отрицательный контроль для эксперимента). Высвобожденный гистидин определяли спектрофотометрически в качестве ОРА-производного.
Ферментативный гидролиз со стороны тестикулярной гиалуронидазы быка.
Стабильность НуСаг конъюгата по отношению к гиалуронидазе (тестикулярная гиалуронидаза быка, 81дша) оценивали посредством инкубирования вышеуказанного (250 мкл, 20 мг/мл) на протяжении 2 ч при 37°С в буфере (100 мМ ацетат натрия, 150 мМ №С1, рН 5,2) с 1500 звеньями фермента. Спустя данный промежуток времени гидролизат анализировали посредством НРЬС на анионнообменной колонке при условиях эксперимента, описанных в пункте [0024] и ранее приведенного в литературе (Аиа1. Сйеш., 2007, 6390-6397). В качестве параллельного эксперимента, свободную гиалуроновую кислоту использовали в качестве субстрата для подобного фермента при таких же условиях эксперимента. В обоих случаях получали одинаковый хроматографический профиль, характеризующийся присутствием продуктов разложения, главным образом состоящих из тетрамерных и гексамерных глицидных звеньев.
Библиографические ссылки, упоминаемые в описании.
В следующем списке указаны библиографические ссылки, упомянутые заявителем, приведенные только для удобства читателя. Указанное не должно рассматриваться как часть настоящего патентного документа. Еще в случае составления с наивысшей степенью осторожности не исключены возможные ошибки или упущения. Следовательно, в этом отношении не предполагается никакой ответственности.
Патенты, упоминаемые в описании.
И8 4508728 А; ΌΕ 4316293; \\'О 0152808 А; \\'О 9510294 А; ЕР 1176154 А; ЕР 1860116 А1; \\'О 2012/076961 А2.
Непатентная литература, указанная в описании.
ВюсЫш. Вюрйуз. Ас1а, 2002, νοί. 1570, 89;
Мо1еси1е8 апб Се11з, 2002, νο1. 13, 498;
Вюсйеш. 1., 1988, νο1. 967, 241;
Вюсйеш. Ιηΐ., 1987, νο1. 15, 1105;
- 7 032076
ВюсЫт. В1орйу8. Ас1а, 1989, νοί. 1004, 363;
Еиг. 1. Мей. СНет., 2008, νοί. 43, 373;
Нек. СЫт. Лс1а, 2002, νοί. 85, 1633;
1. №игокст Век. 2007, νοί. 85, 2239;
Ыеигосйет. Век., 2010, νοί. 35, 2144;
Μοί. Лкрес1к Мей., 2011, νοί. 32, 258;
ИеигосНет. Век., 2013, νοί. 38, 50;
Όαίΐοη Тгапк., 2003, 4406;
Вютей. Век. Тгасе Еίет., 2001, νοί. 12, 159;
С11Ыса1 СЫт. Лс1а, 1996, νοί. 254, 1;
1. Ат. СНет. 8ο^ 1998, νοί. 120, 7030;
Вютейка1 аррНса^пк ο£ НуаЫгоЫс ас1й. АС8 РиЫ1са1юпк, 2006, р. 155-74; В^οтаΐе^^а1к, 2004, νοί. 25, 1339;
СакЖей Т1ккие Ιηΐ., 1971, νοί. 7, 175;
ЭитЦпи 8., Рοίуте^^с Ьюта1епак. Мете ΥογΚ: Магсе1 Иеккег, 2002. 18ВИ: 0-8247-8969-5;
Сагд Н.С., Накк С.А., СНеиикЦу апй Ьюкду ο£ ЬуШигопап Ох&гй: Εί^νκΓ 8скпсе, 2004. 18ВИ: 9780-08-044382-9;
ВктакпаМ, 2005, νοί. 26, 359;
Иа1. Веν. Сапсег, 2004, νοί. 4, 528;
1. 8игд. Век., 2008, νοί. 147, 247;
1. Се11 8ст, 1992, νοί. 103, 293;
Уе1. Мей., 2008, νοί. 53, 397;
Ас1а Вюта1ег., 2010, νοί. 6, 2407;
ВктакпаМ, 2007, νοί. 28, 1830;
1. ί,’οηΙΐΌί. Векаке, 2000, νοί. 69, 169;
СНет. Веу., 2001, νοί. 101, 1869;
ВктакпаМ, 2003, νοί. 24, 4337;
Ιηΐ. 1. Т1ккие Веас1., 2002, νοί. 24, 65;
Ас1а Вюта1ег., 2013, νοί. 9, 7081;
Апя1. ВюсНет., 1971, νοί. 44, 276;
С1т. СЫт. Ас1а, 1982, νοί. 123, 221;
Апя1. СНет., 2007, 6390-6397;
Егее Вей Век. ί,’οιηιηιιη. 1991, 12-13 р1.1, 179-185.

Claims (5)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Соединение формулы (1) представляющее собой конъюгат карнозина формулы (2) с гиалуроновой кислотой, где конъюгация обеспечена посредством образования амидной связи между ИН2-группой карнозина и карбоксильной группой гиалуроновой кислоты, где гиалуроновая кислота
    - 8 032076 имеет средневесовую молекулярную массу, находящуюся в диапазоне от 90 до 230 кДа или от 500 до 730 кДа.
  2. 2. Соединение по п.1, где процентное содержание карбоксильных групп гиалуроновой кислоты, конъюгированных посредством образования амидной связи с карнозином, находится в диапазоне от 2 до 25%, предпочтительно от 5 до 20% и предпочтительно равняется 7% от общего содержания карбоксильных групп гиалуроновой кислоты.
  3. 3. Соединение по любому из предыдущих пунктов, где гиалуроновая кислота характеризуется средневесовой молекулярной массой, находящейся в диапазоне от 180 до 210 кДа.
  4. 4. Способ получения соединения по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что карнозин ковалентно конъюгируют с гиалуроновой кислотой посредством образования амидной связи между МИ^-группой карнозина и карбоксильной группой активного производного гиалуроновой кислоты, представляющего собой сложный эфир 3-гидрокси-1,2,3-бензотриазин-4(Н)-она, при этом карнозин заптищен по карбоксильной группе посредством образования метилового сложного эфира, при этом с карбоксильной группы снимают защиту в конце реакции конъюгации.
  5. 5. Фармацевтическая композиция, содержащая в качестве активного компонента соединение, характеризующееся формулой (1), по любому из пп.1-3 для применения в лечении и/или предупреждении нарушений и состояний, связанных с конформацией белка, выбранных из группы, состоящей из катаракты, сухости глаз, старения кожи, ран, повреждений желудка, диабета, ослабленного иммуномодулирующего ответа, заболеваний почек, заболеваний печени, опухолевых и неврологических заболеваний, повреждений вследствие ишемии/реперфузии.
    - 9 032076
EA201692368A 2014-07-31 2015-07-30 Производные, полученные из гиалуроновой кислоты и карнозина EA032076B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ITMI20141395 2014-07-31
PCT/IB2015/055782 WO2016016847A1 (en) 2014-07-31 2015-07-30 Derivatives obtained from hyaluronic acid and carnosine

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201692368A1 EA201692368A1 (ru) 2017-04-28
EA032076B1 true EA032076B1 (ru) 2019-04-30

Family

ID=51628371

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201692368A EA032076B1 (ru) 2014-07-31 2015-07-30 Производные, полученные из гиалуроновой кислоты и карнозина

Country Status (10)

Country Link
US (1) US10364299B2 (ru)
EP (1) EP3174555B1 (ru)
KR (1) KR102394087B1 (ru)
CN (1) CN106573957B (ru)
CA (1) CA2951808C (ru)
EA (1) EA032076B1 (ru)
ES (1) ES2725874T3 (ru)
PL (1) PL3174555T3 (ru)
PT (1) PT3174555T (ru)
WO (1) WO2016016847A1 (ru)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT201600083975A1 (it) * 2016-08-09 2018-02-09 Consorzio Interuniversitario Naz Per La Scienza E Tecnologia Dei Materiali Acido ialuronico funzionalizzato
IT201700110784A1 (it) * 2017-10-03 2019-04-03 Fidia Farm Spa Composizioni farmaceutiche contenenti Acido Ialuronico e Carnosina e relativo uso
IT202000014017A1 (it) 2020-06-11 2021-12-11 Fidia Farm Spa Nuovi derivati ottenuti da acido ialuronico e carnosina
WO2023220754A1 (en) * 2022-05-13 2023-11-16 University Of Vermont And State Agricultural College Antioxidant derivative of hyaluronic acid
CN115215948B (zh) * 2022-06-02 2023-07-11 润辉生物技术（威海）有限公司 一种低分子的乙酰透明质酸脱羧肌肽衍生物、制备方法及应用
CN117050145B (zh) * 2023-10-11 2024-05-03 杭州湃肽生化科技有限公司 美容肽的透明质酸修饰物及其应用
CN117700583A (zh) * 2023-12-22 2024-03-15 珠海瑞玞生物工程有限公司 一种透明质酸基生物材料的制备方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1176154A1 (en) * 2000-07-25 2002-01-30 Universita' Degli Studi Di Catania Carnosine derivatives, a process for the preparation thereof and pharmaceutical compositions containing them
EP1860116A1 (en) * 2006-04-07 2007-11-28 Universita' Degli Studi Di Catania Trehalose conjugate with carnosine having antioxidant activity, stable to enzymatic hydrolysis, procedure for its preparation, and pharmaceutical, cosmetic and nutraceutical compositions that contain it
WO2012076961A2 (en) * 2010-12-06 2012-06-14 Gianfranco De Paoli Ambrosi New carnosine compound

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4508728A (en) 1984-05-24 1985-04-02 Kineshiro Nagai Method of treating inflammatory diseases
DE4316293C2 (de) 1993-05-14 1996-05-09 Jobst Krauskopf Verwendung einer Kombination von Anserin/Carnosin und Hypotaurin/Taurin zur Bekämpfung entzündlicher Erkrankungen
IT1270905B (it) 1993-10-15 1997-05-13 Bruschettini Srl Composizioni farmaceutiche contenenti n-acetilcarnosina per il trattamento della cataratta
AUPQ515000A0 (en) 2000-01-19 2000-02-10 Grigg, Geoffrey Walter Treatment of uv induced immunosuppression
ITPD20020271A1 (it) * 2002-10-18 2004-04-19 Fidia Farmaceutici Composti chimico-farmaceutici costituiti da derivati dei taxani legati covalentemente all'acido ialuronico o ai suoi derivati.

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1176154A1 (en) * 2000-07-25 2002-01-30 Universita' Degli Studi Di Catania Carnosine derivatives, a process for the preparation thereof and pharmaceutical compositions containing them
EP1860116A1 (en) * 2006-04-07 2007-11-28 Universita' Degli Studi Di Catania Trehalose conjugate with carnosine having antioxidant activity, stable to enzymatic hydrolysis, procedure for its preparation, and pharmaceutical, cosmetic and nutraceutical compositions that contain it
WO2012076961A2 (en) * 2010-12-06 2012-06-14 Gianfranco De Paoli Ambrosi New carnosine compound

Also Published As

Publication number Publication date
ES2725874T3 (es) 2019-09-30
CA2951808A1 (en) 2016-02-04
EP3174555A1 (en) 2017-06-07
EP3174555B1 (en) 2019-02-27
CN106573957B (zh) 2021-10-26
CN106573957A (zh) 2017-04-19
US20170246306A1 (en) 2017-08-31
EA201692368A1 (ru) 2017-04-28
PT3174555T (pt) 2019-05-28
US10364299B2 (en) 2019-07-30
KR20170035924A (ko) 2017-03-31
KR102394087B1 (ko) 2022-05-03
WO2016016847A1 (en) 2016-02-04
CA2951808C (en) 2022-06-21
PL3174555T3 (pl) 2019-08-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA032076B1 (ru) Производные, полученные из гиалуроновой кислоты и карнозина
Bohaumilitzky et al. A trickster in disguise: Hyaluronan’s ambivalent roles in the matrix
CN102300870B (zh) 低分子量多硫酸化透明质酸衍生物和含有它的医药
Volpi et al. Role, metabolism, chemical modifications and applications of hyaluronan
RU2598552C2 (ru) Сложные эфиры гиалуроновой кислоты, их получение и применение в дерматологии
Dong et al. Pharmacokinetics and biodegradation mechanisms of a versatile carboxymethyl derivative of chitosan in rats: in vivo and in vitro evaluation
US20150175991A1 (en) Bacillus, hyaluronidase, and uses thereof
EP2636748A1 (en) Amino sugar-containing glucan, method for producing same and use of same
HU230385B1 (hu) Részlegesen deszulfatált glükóz-amino-glükánok származékai mint a heparanáz enzim inhibitorai, előállításuk és alkalmazásuk, valamint ilyen származékokat tartalmazó gyógyszerkészítmények
US20060172967A1 (en) Method for producing alkyl-esterified glycosaminoglycan
JP2017043638A (ja) ヘパラン硫酸の精製方法並びに美容用及び皮膚用調製物中におけるその使用
Saturnino et al. Acetylated hyaluronic acid: enhanced bioavailability and biological studies
EP1860116A1 (en) Trehalose conjugate with carnosine having antioxidant activity, stable to enzymatic hydrolysis, procedure for its preparation, and pharmaceutical, cosmetic and nutraceutical compositions that contain it
CN111228139A (zh) 一种美白保湿护肤品
KR20140044826A (ko) 상어­유사 콘드로이틴 설페이트 및 이의 제조방법
Bognanni et al. Cyclodextrin polymers functionalized with histidine and carcinine as chelating therapeutics for copper dyshomeostasis
USUI et al. Preparation and antitumor activities of mitomycin C β-(1→ 6)-branched (1→ 3)-β-D-glucan conjugate
RU2505301C2 (ru) Средство для стимуляции роста волос
EP3922268B1 (en) New derivatives obtained from hyaluronic acid and carnosine
Banasová et al. RADICAL SCAVENGING CAPACITY OF N-(2-MERCAPTO-2-METHYLPROPIONYL)-L-CYSTEINE: DESIGN AND SYNTHESIS OF ITS DERIVATIVES WITH ENHANCED POTENTIAL OF SCAVENGE HYPOCHLORITE
Yuan et al. Recent progress in marine chondroitin sulfate, dermatan sulfate, and chondroitin sulfate/dermatan sulfate hybrid chains as potential functional foods and therapeutic agents
JPWO2007069621A1 (ja) 新規組成物及びその製造法
Saturnino et al. Research Article Acetylated Hyaluronic Acid: Enhanced Bioavailability and Biological Studies