CN117180247A - 2-氨基-6-甲基苯酚衍生物作为铁死亡抑制剂在制备防治骨关节炎的药物中的应用 - Google Patents

2-氨基-6-甲基苯酚衍生物作为铁死亡抑制剂在制备防治骨关节炎的药物中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN117180247A
CN117180247A CN202311181050.XA CN202311181050A CN117180247A CN 117180247 A CN117180247 A CN 117180247A CN 202311181050 A CN202311181050 A CN 202311181050A CN 117180247 A CN117180247 A CN 117180247A
Authority
CN
China
Prior art keywords
benzyl
amino
methylphenol
derivative
iron death
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202311181050.XA
Other languages
English (en)
Inventor
张磊
王婷
宫傲
韩立聪
朱昊
于豆
盛卸晃
马建平
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
First Affiliated Hospital of Shandong First Medical University
Original Assignee
First Affiliated Hospital of Shandong First Medical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by First Affiliated Hospital of Shandong First Medical University filed Critical First Affiliated Hospital of Shandong First Medical University
Priority to CN202311181050.XA priority Critical patent/CN117180247A/zh
Publication of CN117180247A publication Critical patent/CN117180247A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Landscapes

  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

本申请涉及生物医药技术领域，具体涉及一种铁死亡抑制剂在制备防治骨关节炎的药物中的应用。本发明将2‑氨基‑6‑甲基苯酚(式(Ⅰ)所示)衍生物施用于人体C28人软骨细胞和活体小鼠，发现上述化合物可作为铁死亡抑制剂，能够显著抑制Erastin和RSL3诱导的细胞铁死亡，且具有长期稳定的抑制效果。因此2‑氨基‑6‑甲基苯酚衍生物可以作为一种靶向细胞铁死亡的抑制剂，并提供上述化合物在防治骨关节炎中的用途。

Description

2-氨基-6-甲基苯酚衍生物作为铁死亡抑制剂在制备防治骨 关节炎的药物中的应用
技术领域
本申请涉及生物医药技术领域，具体涉及2-氨基-6-甲基苯酚衍生作为铁死亡抑制剂在制备防治骨关节炎的药物中的应用。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
细胞铁死亡(Ferroptosis)是最近发现的一种在形态学，生物化学和遗传学等方面均不同于凋亡、坏死和自噬的新的程序性细胞死亡方式。因该过程依赖于铁离子的存在，故称铁死亡。其发生机制为：细胞内膜脂质活性氧生成与降解的平衡失调，细胞发生依赖于铁离子的、氧化性的、非凋亡的程序性细胞死亡。典型特征为：线粒体变小，双层膜密度增加，同时表现为细胞膜脂质活性氧自由基增多。
骨关节炎(osteoarthritis，OA)是一种以关节软骨损害为主，并累趿整个关节组织的最常见的关节疾病，最终发生关节软骨退变、纤维化、断裂、缺损及整个关节面的损害。骨关节炎表现为关节疼痛、僵硬、肥大及活动受限，好发于膝、髋、颈椎和腰椎等负重关节及远端指间关节、近端指间关节、第一腕掌关节和第一跖趾关节。骨关节炎好发于中老年人，老年人致残的主要原因。
目前，关于诱发骨关节炎的因素及其潜在机制仍不清楚，但是现有研究中表明，铁死亡通过参与软骨细胞丢失、细胞外基质溶解和滑膜炎因此促进骨关节炎的进展。
Ferrostatin-1和Liproxstatin-1是第一代小分子铁死亡抑制剂，功能为清除细胞膜脂质自由基损伤，阻断细胞铁死亡的发生。该类抑制剂具有明确的作用机理和构效关系。然而，这两种化合物分别存在半衰期短和毒性较大的不足。
发明内容
为了克服上述问题，本发明提供了2-氨基-6-甲基苯酚衍生物作为铁死亡抑制剂在制备防治骨关节炎的药物中的应用。本发明在对细胞铁死亡作用机制研究基础上，通过虚拟筛选和细胞活性测试，发现了一种2-氨基-6-甲基苯酚衍生物可以作为一种靶向细胞铁死亡的抑制剂，并提供上述化合物在防治骨关节炎中的用途。
为实现上述技术目的，本发明采用如下技术方案：
本发明的第一个方面，提供2-氨基-6-甲基苯酚衍生物作为铁死亡抑制剂的应用，所述2-氨基-6-甲基苯酚衍生物结构式如式(Ⅰ)所示：
其中，R选自氢、乙基、正丁基、苯甲基、3-氰基-苯甲基、3-硝基-苯甲基、4-氯-苯甲基、4-甲基-苯甲基、4-甲氧基-苯甲基或4-苯甲酸甲酯基。进一步优选为4-甲基-苯甲基。
2-氨基6-甲基苯酚衍生物能够阻断脂质自由基的链式反应，减少自由基对细胞膜的损伤作用，防止细胞铁死亡的发生，保护细胞，从而实现对铁死亡机制相关疾病的治疗作用。
应当说明的是，本发明所述2-氨基6-甲基苯酚衍生物，除具有上述结构的小分子实体，所述化合物的水合物、溶剂化物、药用盐及药用酯也属于本发明第一方面相同构思下的技术方案，属于本发明申请保护的技术内容。
优选的，上述2-氨基-6-甲基苯酚衍生物作为铁死亡抑制剂的应用，其应用方式包括但不限于以下任意一种：
(1)应用于预防、改善或治疗与铁死亡途径相关的疾病；
(2)应用于制备预防、改善或治疗铁死亡途径相关疾病的药物；
(3)应用于铁死亡途径抑制模型的制备。
上述(1)、(2)方面的应用中，所述铁死亡相关的疾病包括但不限于癌症、脑出血、肿瘤、缺血-再灌注损伤、创伤性脑损伤、帕金森氏病、植物热应激、肝肾损伤、胆道疾病、骨关节炎等有关；本发明验证的一种实施方式中，上述2-氨基6-甲基苯酚衍生物应用于预防、改善或治疗骨关节炎。
上述(3)方面的应用中，上述化合物作为一种模型药物应用于基础研究模型的制备，如体外C28人软骨细胞中铁死亡途径抑制模型，或用于抑制抑制Erastin和RSL3诱导的细胞铁死亡。
本发明的第三个方面，提供一种药物组合物，所述组合物包括活性剂量的上述2-氨基-6-甲基苯酚衍生物。
上述药物组合物中，所述化合物的剂量可依据药物的施用目的、受试者状态等因素进行常规调整。所述药物组合物中，上述化合物的剂量应当是有效剂量的，并且所述药物组合物采用易于精准给药的剂型。
所述药物组合物应用于制备体内施用的药物制剂时，所述药物制剂应当是无菌的，实现药物制剂无菌的方法对于本领域技术人员来说应该是已知的，例如，可以通过无菌滤膜过滤等方法来实现。本领域技术人员还可以根据药物组合物所需的剂型选择合适的药学上可接受的载体，以将其制备成不同的剂型，如，胃肠道给药剂型、或非经胃肠道给药剂型。
进一步地，上述经胃肠道给药剂型包括散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、缓释剂、溶液剂、干混悬剂、泡腾片、乳剂、混悬剂等。
进一步地，非经胃肠道给药剂型包括注射给药剂型(例如注射剂，包括静脉注射剂、肌内注射剂、皮下注射剂、皮内注射剂及腔内注射剂等多种注射剂)；呼吸道给药剂型(如喷雾剂、气雾剂、粉雾剂等)；皮肤给药剂型(如外用溶液剂、洗剂、搽剂、软膏剂、硬膏剂、糊剂、贴剂等；粘膜给药剂型(如滴眼剂、滴鼻剂、眼用软膏剂、含漱剂、舌下片剂、粘贴片剂、贴膜剂等)；腔道给药剂型(如栓剂、气雾剂、泡腾片、滴剂、滴丸剂等，用于在直肠、阴道、尿道、鼻腔、耳道等)。
进一步地，上述药物为注射剂。
本发明的第四个方面，提供上述2-氨基6-甲基苯酚衍生物和/或第三方面所述的药物组合物在制备应用于预防、改善或治疗骨关节炎或相关药物中的应用。
综上所述，本发明提供了2-氨基-6-甲基苯酚衍生物在治疗骨关节炎的应用，具体的，所述铁死亡抑制剂2-氨基-6-甲基苯酚衍生物可用于制备治疗/缓解骨关节炎的药物，或者与铁死亡抑制剂联合用药预防骨关节炎的补充剂。
本发明的有益效果主要体现在：本发明提供了2-氨基6-甲基苯酚衍生物在抑制软骨细胞铁死亡过程的证据，为以铁死亡为靶点的骨关节炎的治疗提供了理论依据，特别是对临床过程中对其与铁死亡抑制剂联合用药提供了基础。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
图1为2-氨基-6-甲基苯酚衍生物对Erastin诱导的细胞铁死亡有显著的抑制效果；
图2为2-氨基-6-甲基苯酚衍生物增加了Erastin诱导的细胞中的GPX4含量；
图3为2-氨基-6-甲基苯酚衍生物对Erastin诱导的细胞脂质过氧化有显著的抑制效果；
图4为2-氨基-6-甲基苯酚衍生物对RSL3诱导的细胞铁死亡有持续的抑制效果(A：细胞存活率；B：脂质过氧化)；
图5为2-氨基6-甲基苯酚衍生物治疗给药小鼠关节损伤情况(HE染色10/20X)。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本发明使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本发明的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本发明的技术方案。
化合物2-氨基6-甲基苯酚购自Specs公司，Ferrostatin-1，Erastin和RSL3购自sigma公司，均溶于无菌二甲基亚砜DMSO中，配置成所需浓度。2-氨基6-甲基苯酚的衍生物的制备方法如本发明实施例1～9所示。
C28人软骨细胞系培养条件：含10％ FBS(GIBCO)的DMEM高糖型培养基(GIBCO)，37℃，5％ CO2饱和湿度培养箱。
本发明中所用统计采用R软件分析，实验数据以Mean±SEM表示。细胞和动物实验的组间比较采用Tukey’s检验(ANOVA)，两组间比较以Student'st-test检验，以P<0.05认为有统计学意义，字母不同表示P<0.05。
实施例1：合成化合物2：2-(乙基氨基)-6-甲基苯酚
在N2下向烧瓶中加入2-氨基-6-甲基苯酚(1mmol，123mg)，乙醛(1mmol，44mg，1eq.)和二氯乙烷(5mL)。在室温下搅拌2小时后，冰浴反应溶液使之冷却至0℃。在30分钟内分4批向反应液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(1mmol，212mg，1eq.)。将反应物在室温下搅拌12小时。当通过TLC监测反应完全时，加水淬灭反应，用乙酸乙酯萃取，分三次萃取，每次加入乙酸乙酯的量为10mL，萃取后的有机相进行合并。将合并的有机相用水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩，得到粗产物。粗产物通过硅胶柱色谱法纯化。合成了2-(乙基氨基)-6-甲基苯酚(化合物2)(95mg)，产率62.9％，黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.94(s,1H),6.59(t,J＝7.7Hz,1H),6.38–6.30(m,2H),4.52(s,1H),3.04(q,J＝7.1Hz,2H),2.11(s,3H),1.17(t,J＝7.1Hz,3H)。
实施例2：合成化合物3：2-(丁基氨基)-6-甲基苯酚
在N2下向烧瓶中加入2-氨基-6-甲基苯酚(1mmol，123mg)，正丁醛(1mmol，72mg，1eq.)和二氯乙烷(5mL)。在室温下搅拌2小时后，冰浴反应溶液使之冷却至0℃。在30分钟内分4批向反应液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(1mmol，212mg，1eq.)。将反应物在室温下搅拌12小时。当通过TLC监测反应完全时，加水淬灭反应，用乙酸乙酯萃取，分三次萃取，每次加入乙酸乙酯的量为10mL，萃取后的有机相进行合并。将合并的有机相用水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩，得到粗产物。粗产物通过硅胶柱色谱法纯化。合成了2-(丁基氨基)-6-甲基苯酚(化合物3)(107mg)，产率59.8％，黄色液体。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.97(s,1H),6.59(t,J＝7.7Hz,1H),6.34(dd,J＝13.0,7.7Hz,2H),4.56(s,1H),3.02(t,J＝6.9Hz,2H),2.12(s,3H),1.55(dt,J＝14.7,7.2Hz,2H),1.38(dq,J＝14.4,7.3Hz,2H),0.92(t,J＝7.3Hz,3H)。
实施例3：合成化合物4：2-(苄氨基)-6-甲基苯酚
在N2下向烧瓶中加入2-氨基-6-甲基苯酚(1mmol，123mg)，苯甲醛(1mmol，106mg，1eq.)和二氯乙烷(5mL)。在室温下搅拌2小时后，冰浴反应溶液使之冷却至0℃。在30分钟内分4批向反应液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(1mmol，212mg，1eq.)。将反应物在室温下搅拌12小时。当通过TLC监测反应完全时，加水淬灭反应，用乙酸乙酯萃取，分三次萃取，每次加入乙酸乙酯的量为10mL，萃取后的有机相进行合并。将合并的有机相用水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩，得到粗产物。粗产物通过硅胶柱色谱法纯化。合成了2-(苄氨基)-6-甲基苯酚(化合物4)(121mg)，产率56.8％，黄褐色固体。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.10(d,J＝15.8Hz,1H),7.37–7.33(m,2H),7.33–7.28(m,2H),7.24–7.18(m,1H),6.51(t,J＝7.7Hz,1H),6.33–6.29(m,1H),6.27(d,J＝7.9Hz,1H),5.35(t,J＝5.6Hz,1H),4.29(d,J＝5.6Hz,2H),2.13(s,3H)。
实施例4：合成化合物5：2-甲基-6-((3-氰基苄基)氨基)苯酚
在N2下向烧瓶中加入2-氨基-6-甲基苯酚(1mmol，123mg)，3-氰基苯甲醛(1mmol，131mg，1eq.)和二氯乙烷(5mL)。在室温下搅拌2小时后，冰浴反应溶液使之冷却至0℃。在30分钟内分4批向反应液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(1mmol，212mg，1eq.)。将反应物在室温下搅拌12小时。当通过TLC监测反应完全时，加水淬灭反应，用乙酸乙酯萃取，分三次萃取，每次加入乙酸乙酯的量为10mL，萃取后的有机相进行合并。将合并的有机相用水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩，得到粗产物。粗产物通过硅胶柱色谱法纯化。合成了2-甲基-6-((3-氰基苄基)氨基)苯酚(化合物5)(154mg)，产率64.7％，黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.12(s,1H),7.76(d,,J＝11.6Hz,1H),7.73–7.63(m,2H),7.52(t,J＝7.7Hz,1H),6.50(t,J＝7.7Hz,1H),6.32(d,J＝7.4Hz,1H),6.21(d,J＝7.7Hz,1H),5.63(t,J＝6.2Hz,1H),4.36(d,J＝6.2Hz,2H),2.13(s,3H)。
实施例5：合成化合物6：2-甲基-6-((3-硝基苄基)氨基)苯酚
在N2下向烧瓶中加入2-氨基-6-甲基苯酚(1mmol，123mg)，3-硝基苯甲醛(1mmol，151mg，1eq.)和二氯乙烷(5mL)。在室温下搅拌2小时后，冰浴反应溶液使之冷却至0℃。在30分钟内分4批向反应液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(1mmol，212mg，1eq.)。将反应物在室温下搅拌12小时。当通过TLC监测反应完全时，加水淬灭反应，用乙酸乙酯萃取，分三次萃取，每次加入乙酸乙酯的量为10mL，萃取后的有机相进行合并。将合并的有机相用水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩，得到粗产物。粗产物通过硅胶柱色谱法纯化。合成了2-甲基-6-((3-硝基苄基)氨基)苯酚(化合物6)(157mg)，产率60.9％，褐色固体。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.17(s,1H),8.05(dd,J＝8.1,1.0Hz,1H),7.71–7.63(m,1H),7.58(d,J＝7.0Hz,1H),7.55–7.45(m,1H),6.48(t,J＝7.7Hz,1H),6.33(d,J＝7.1Hz,1H),6.14(d,J＝7.1Hz,1H),5.58(t,J＝6.3Hz,1H),4.62(d,J＝6.3Hz,2H),2.14(s,3H)。
实施例6：合成化合物7：2-((4-氯苄基)氨基)-6-甲基苯酚
在N2下向烧瓶中加入2-氨基-6-甲基苯酚(1mmol，123mg)，4-氯苯甲醛(1mmol，140mg，1eq.)和二氯乙烷(5mL)。在室温下搅拌2小时后，冰浴反应溶液使之冷却至0℃。在30分钟内分4批向反应液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(1mmol，212mg，1eq.)。将反应物在室温下搅拌12小时。当通过TLC监测反应完全时，加水淬灭反应，用乙酸乙酯萃取，分三次萃取，每次加入乙酸乙酯的量为10mL，萃取后的有机相进行合并。将合并的有机相用水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩，得到粗产物。粗产物通过硅胶柱色谱法纯化。合成了2-((4-氯苄基)氨基)-6-甲基苯酚(化合物7)(142mg)，产率57.2％，黄褐色固体。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.08(s,1H),7.36(s,4H),6.49(t,J＝7.7Hz,1H),6.30(d,J＝7.1Hz,1H),6.21(d,J＝7.7Hz,1H),5.48(s,1H),4.29(d,J＝6.0Hz,2H),2.12(s,3H)。
实施例7：合成化合物8：2-甲基-6-((4-甲基苄基)氨基)苯酚
在N2下向烧瓶中加入2-氨基-6-甲基苯酚(1mmol，123mg)，对甲基苯甲醛(1mmol，120mg，1eq.)和二氯乙烷(5mL)。在室温下搅拌2小时后，冰浴反应溶液使之冷却至0℃。在30分钟内分4批向反应液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(1mmol，212mg，1eq.)。将反应物在室温下搅拌12小时。当通过TLC监测反应完全时，加水淬灭反应，用乙酸乙酯萃取，分三次萃取，每次加入乙酸乙酯的量为10mL，萃取后的有机相进行合并。将合并的有机相用水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩，得到粗产物。粗产物通过硅胶柱色谱法纯化。合成了2-甲基-6-((4-甲基苄基)氨基)苯酚(化合物8)(161mg)，产率70.9％，黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.05(s,1H),7.22(d,J＝7.9Hz,2H),7.11(d,J＝7.9Hz,2H),6.50(t,J＝7.7Hz,1H),6.30(d,J＝7.2Hz,1H),6.26(d,J＝7.8Hz,1H),5.29(s,1H),4.23(d,J＝4.6Hz,2H),2.26(s,3H),2.11(s,3H)。
实施例8：合成化合物9：2-((4-甲氧基苄基)氨基)-6-甲基苯酚
在N2下向烧瓶中加入2-氨基-6-甲基苯酚(1mmol，123mg)，4-甲氧基苯甲醛(1mmol，136mg，1eq.)和二氯乙烷(5mL)。在室温下搅拌2小时后，冰浴反应溶液使之冷却至0℃。在30分钟内分4批向反应液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(1mmol，212mg，1eq.)。将反应物在室温下搅拌12小时。当通过TLC监测反应完全时，加水淬灭反应，用乙酸乙酯萃取，分三次萃取，每次加入乙酸乙酯的量为10mL，萃取后的有机相进行合并。将合并的有机相用水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩，得到粗产物。粗产物通过硅胶柱色谱法纯化。合成了2-((4-甲氧基苄基)氨基)-6-甲基苯酚(化合物9)(137mg)，产率56.4％，褐色固体。1HNMR(400MHz,DMSO)δ8.03(s,1H),7.26(d,J＝8.0Hz,2H),6.87(d,J＝8.0Hz,2H),6.51(t,J＝7.6Hz,1H),6.29(s,,2H),5.23(s,1H),4.20(d,J＝4.9Hz,2H),3.72(s,3H),2.11(s,3H)。
实施例9：合成化合物10：4-(((2-羟基-3-甲基苯基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯
在N2下向烧瓶中加入2-氨基-6-甲基苯酚(1mmol，123mg)，4-甲酰基苯甲酸甲酯(1mmol，164mg，1eq.)和二氯乙烷(5mL)。在室温下搅拌2小时后，冰浴反应溶液使之冷却至0℃。在30分钟内分4批向反应液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(1mmol，212mg，1eq.)。将反应物在室温下搅拌12小时。当通过TLC监测反应完全时，加水淬灭反应，用乙酸乙酯萃取，分三次萃取，每次加入乙酸乙酯的量为10mL，萃取后的有机相进行合并。将合并的有机相用水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩，得到粗产物。粗产物通过硅胶柱色谱法纯化。合成了4-(((2-羟基-3-甲基苯基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(化合物10)(193mg)，产率71.2％，橙色固体。1H NMR(400MHz,,DMSO)δ8.10(s,1H),7.90(d,J＝8.3Hz,2H),7.47(d,J＝8.3Hz,2H),6.47(t,J＝7.7Hz,1H),6.30(d,J＝6.8Hz,1H),6.17(d,J＝7.8Hz,1H),5.57(t,J＝6.3Hz,1H),4.39(d,J＝6.2Hz,2H),3.83(s,3H),2.12(s,3H)。
实验例1 2-氨基6-甲基苯酚衍生物抑制Erastin诱导的铁死亡
当培养的C28人软骨细胞待细胞贴壁后，在培养基中分别加入DMSO，Erastin(10μM，终浓度)，Erastin(10μM)+2-氨基6-甲基苯酚衍生物(1μM)，Erastin(10μM)+Ferrostatin-1(0.1μM)。处理24小时后通过MTT检测细胞活力，结果如表1所示(实验重复3次后获得数据)，最终细胞的存活率结果图1所示(实验重复3次后获得数据)。同时对于细胞处理前后GPX4和细胞膜脂质过氧化水平进行检测，最终的结果如图2和图3所示。
细胞活力测定(MTT)：加药处理24小时的C28细胞通过MTT比色法检测细胞活力，MTT试剂盒购自北京索莱宝科技有限公司。细胞膜脂质过氧化水平测定的方法：加药处理12小时后的C28细胞用胰酶消化成单细胞悬液。C11-BODIPY(10μM)室温避光孵育60分钟，PBS洗3次，流式细胞仪检测。
表1 2-氨基6-甲基苯酚衍生物细胞活力结果
实验结果发现：如图1所示，与对照组相比，铁死亡诱导剂Erastin刺激能显著杀死细胞；而2-氨基6-甲基苯酚衍生物能显著抑制Erastin诱导的细胞死亡(p<0.01)，且活性与阳性对照Ferrostatin-1相当，说明2-氨基6-甲基苯酚衍生物具有显著抑制Erastin诱导的细胞铁死亡。
如图2所示，与Erastin相比，2-氨基6-甲基苯酚衍生物处理组细胞中GPX4的含量有明显的升高；如图3所示，与Erastin相比，2-氨基6-甲基苯酚衍生物处理组细胞中脂质过氧化程度大幅减轻，因此2-氨基6-甲基苯酚衍生物对软骨细胞铁死亡的治疗缓解作用。
实验例2 2-氨基6-甲基苯酚衍生物在C28细胞中抑制RSL3导致的铁死亡当培养的C28人软骨细胞待细胞贴壁后，在培养基中分别加入DMSO，RSL3(3μM，终浓度)，RSL3(3μM)+Ferrostatin-1(0.1μM)，RSL3(3μM)+2-氨基6-甲基苯酚衍生物(1μM)。处理24小时后通过MTT检测细胞活力，结果如图4A所示，同时检测了细胞膜脂质过氧化水平，最终的抑制效果图4B所示(实验重复3次后获得数据)。细胞活力测定(MTT)：加药处理24小时的C28细胞通过MTT比色法检测细胞活力，MTT试剂盒购自北京索莱宝科技有限公司。细胞膜脂质过氧化水平测定：加药处理12小时后的C28细胞用胰酶消化成单细胞悬液。C11-BODIPY(10μM)室温避光孵育60分钟，PBS洗3次，流式细胞仪检测。
实验结果发现：如图4所示，与对照组相比，铁死亡诱导剂RSL3刺激能显著杀死细胞；而2-氨基6-甲基苯酚衍生物能显著抑制RSL3诱导的细胞死亡(p<0.01)，且活性与阳性对照Ferrostatin-1相当。同时，2-氨基6-甲基苯酚衍生物能显著清除RSL3诱导的脂质自由基(p<0.01)。说明2-氨基6-甲基苯酚衍生物具有显著抑制RSL-3诱导的细胞铁死亡。
实验例3 2-氨基6-甲基苯酚衍生物对小鼠骨关节炎的缓解作用
动物分组：选取30只8-□10周龄的C57BL/6小鼠，将30只小鼠随机分为3组，雌雄各半，10只C57为对照组；10只C57为DMM模型组；10只C57为DMM模型+2-氨基6-甲基苯酚衍生物(20mg/kg)组。
动物的处理：将2-氨基6-甲基苯酚衍生物溶解在DMSO中，肌肉注射或静脉注射。在注射药物1周后，解剖小鼠，并立即取出膝关节，用于随后的组织切片染色，最终的结果如图5所示。
软骨细胞成骨功能检测：加药处理12小时后的C28细胞用胰酶消化成单细胞悬液，直接低速离心分离出细胞，加入细胞裂解液，裂解后离心取蛋白上清，进行WB检测，分别检测谷胱甘肽过氧化物酶(GPX4)、碱性磷酸酶(ALP)、Ⅰ型胶原(Collenge-1)、成骨转录因子(Runx2)等指标。
实验结果发现：如图5所示，与普通DMM模型组相比，2-氨基6-甲基苯酚衍生物处理组小鼠的膝关节损伤程度明显减轻，表明2-氨基6-甲基苯酚衍生物对关节炎的治疗缓解作用。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.2-氨基-6-甲基苯酚衍生物作为铁死亡抑制剂的应用，其特征在于，所述2-氨基-6-甲基苯酚衍生物结构式如式(Ⅰ)所示：
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，R选自氢、乙基、正丁基、苯甲基、3-氰基-苯甲基、3-硝基-苯甲基、4-氯-苯甲基、4-甲基-苯甲基、4-甲氧基-苯甲基或4-苯甲酸甲酯基，优选为4-甲基-苯甲基。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，还包括所述2-氨基-6-甲基苯酚衍生物的水合物、溶剂化物、药用盐及药用酯。
4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述2-氨基-6-甲基苯酚衍生物，其应用方式包括但不限于以下任意一种：
(1)应用于预防、改善或治疗与铁死亡途径相关的疾病；
(2)应用于制备预防、改善或治疗铁死亡途径相关疾病的药物；
(3)应用于铁死亡途径抑制模型的制备。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述(1)、(2)方面的应用中，所述铁死亡相关的疾病包括但不限于癌症、脑出血、肿瘤、缺血-再灌注损伤、创伤性脑损伤、帕金森氏病、植物热应激、肝肾损伤、胆道疾病、骨关节炎；优选的所述2-氨基-6-甲基苯酚衍生物应用于预防、改善或治疗骨关节炎；
或，所述(3)方面的应用中，上述化合物作为一种模型药物应用于基础研究模型的制备，如体外C28人软骨细胞中铁死亡途径抑制模型，或用于抑制抑制Erastin和RSL3诱导的细胞铁死亡。
6.一种药物组合物，其特征在于，所述组合物包括活性剂量的2-氨基-6-甲基苯酚衍生物；所述2-氨基-6-甲基苯酚衍生物结构式如式(Ⅰ)所示：
7.如权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，R选自氢、乙基、正丁基、苯甲基、3-氰基-苯甲基、3-硝基-苯甲基、4-氯-苯甲基、4-甲基-苯甲基、4-甲氧基-苯甲基或4-苯甲酸甲酯基，优选为4-甲基-苯甲基。
8.如权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述化合物的剂量应当是有效剂量的，并且所述药物组合物采用易于精准给药的剂型；
或，所述药物组合物应用于制备体内施用的药物制剂时，所述药物制剂应当是无菌的；所述药物组合物中还包括药学上可接受的载体。
9.如权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述剂型包括胃肠道给药剂型、或非经胃肠道给药剂型；
所述经胃肠道给药剂型包括散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、缓释剂、溶液剂、干混悬剂、泡腾片、乳剂、混悬剂；
所述非经胃肠道给药剂型包括注射给药剂型、呼吸道给药剂型、皮肤给药剂型、；粘膜给药剂型、腔道给药剂型。
优选地，上述药物为注射给药剂型。
10.2-氨基-6-甲基苯酚衍生物和/或权利要求6所述的药物组合物在制备应用于预防、改善或治疗骨关节炎或相关药物中的应用，其特征在于，所述2-氨基-6-甲基苯酚衍生物结构式如式(Ⅰ)所示，
其中，R选自氢、乙基、正丁基、苯甲基、3-氰基-苯甲基、3-硝基-苯甲基、4-氯-苯甲基、4-甲基-苯甲基、4-甲氧基-苯甲基或4-苯甲酸甲酯基，优选为4-甲基-苯甲基。
CN202311181050.XA 2023-09-13 2023-09-13 2-氨基-6-甲基苯酚衍生物作为铁死亡抑制剂在制备防治骨关节炎的药物中的应用 Pending CN117180247A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202311181050.XA CN117180247A (zh) 2023-09-13 2023-09-13 2-氨基-6-甲基苯酚衍生物作为铁死亡抑制剂在制备防治骨关节炎的药物中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202311181050.XA CN117180247A (zh) 2023-09-13 2023-09-13 2-氨基-6-甲基苯酚衍生物作为铁死亡抑制剂在制备防治骨关节炎的药物中的应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN117180247A true CN117180247A (zh) 2023-12-08

Family

ID=89004868

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202311181050.XA Pending CN117180247A (zh) 2023-09-13 2023-09-13 2-氨基-6-甲基苯酚衍生物作为铁死亡抑制剂在制备防治骨关节炎的药物中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN117180247A (zh)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5346339B2 (ja) しわ改善及び保湿剤組成物、および化粧品
CN101360421B (zh) 烟酰核苷组合物及其使用方法
EP2186792B1 (en) 2-(a-hydroxypentyl) benzoate and its preparation and use
AU2016210070A1 (en) Methods of purifying cannabinoids, compositions and kits thereof
KR102283996B1 (ko) 연골형성의 유도를 위한 화합물 및 방법
CN105592888A (zh) 用于治疗疾病的kdm1a抑制剂
CN103119047A (zh) 三环类蛋白酶体活性增强化合物
Hu et al. Novel paeonol derivatives: Design, synthesis and anti-inflammatory activity in vitro and in vivo
WO2007149782A2 (en) Selective inhibitors for transferases
KR20020035855A (ko) 약용인삼을 포함하는 뇌세포 또는 신경세포 보호제
CN104788440B (zh) 烟酸衍生物及其应用
US20100048668A1 (en) Compositions and methods to control abnormal cell growth
KR101090850B1 (ko) Ｈｓｃ７０ 저해제로서의 이미다졸 유도체와 그 약학적 조성물
JPH02270855A (ja) 抗炎症性アリール化合物
JPWO2006064975A1 (ja) フィビュリン−５の産生を促進及び／又は活性を亢進させるための組成物及び方法
JP3577183B2 (ja) 動脈硬化症予防・治療剤
CN113768921A (zh) 甲氧基黄酮类化合物在制备抗白癜风药物上的用途
Jia et al. Design, synthesis, and evaluation of n-butylphthalide and ligustrazine hybrids as potent neuroprotective agents for the treatment of ischemic stroke in vitro and in vivo
CN117180247A (zh) 2-氨基-6-甲基苯酚衍生物作为铁死亡抑制剂在制备防治骨关节炎的药物中的应用
JP2013539779A (ja) 化合物
Sabi et al. Anti-inflammatory and Anti-hyperuricemic Effect of Ficus benghalensis Bark Extract in Raw 246.7 Cell Line
CN109640974A (zh) 多咖啡酰基奎尼酸的酰胺衍生物、其制备方法和用途
JPH08231396A (ja) 抗ヘリコバクター・ピロリ薬
CN113214275B (zh) 吡喃并咔唑生物碱类衍生物及其治疗神经系统疾病的用途
WO2001074753A1 (de) Synthetische derivate von lunularsäure, arzneimittel enthaltend diese verbindungen, verfahren zur herstellung der lunularsäurederivate sowie deren verwendung

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination