WO2001074753A1 - Synthetische derivate von lunularsäure, arzneimittel enthaltend diese verbindungen, verfahren zur herstellung der lunularsäurederivate sowie deren verwendung - Google Patents

Synthetische derivate von lunularsäure, arzneimittel enthaltend diese verbindungen, verfahren zur herstellung der lunularsäurederivate sowie deren verwendung Download PDF

Info

Publication number
WO2001074753A1
WO2001074753A1 PCT/DE2001/001264 DE0101264W WO0174753A1 WO 2001074753 A1 WO2001074753 A1 WO 2001074753A1 DE 0101264 W DE0101264 W DE 0101264W WO 0174753 A1 WO0174753 A1 WO 0174753A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
radical
compounds
carbon atoms
formula
activity
Prior art date
Application number
PCT/DE2001/001264
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Clarissa GERHÄUSER
Theophil Eicher
Rigobert Pick
Original Assignee
Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts filed Critical Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts
Priority to AU2001258200A priority Critical patent/AU2001258200A1/en
Publication of WO2001074753A1 publication Critical patent/WO2001074753A1/de

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/30—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/32—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C65/00—Compounds having carboxyl groups bound to carbon atoms of six—membered aromatic rings and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
    • C07C65/01—Compounds having carboxyl groups bound to carbon atoms of six—membered aromatic rings and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups containing hydroxy or O-metal groups
    • C07C65/105—Compounds having carboxyl groups bound to carbon atoms of six—membered aromatic rings and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups containing hydroxy or O-metal groups polycyclic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
    • C07C69/76—Esters of carboxylic acids having a carboxyl group bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring
    • C07C69/94—Esters of carboxylic acids having a carboxyl group bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring of polycyclic hydroxy carboxylic acids, the hydroxy groups and the carboxyl groups of which are bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/06—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom containing only hydrogen and carbon atoms in addition to the ring nitrogen atom
    • C07D213/16—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom containing only hydrogen and carbon atoms in addition to the ring nitrogen atom containing only one pyridine ring
    • C07D213/20—Quaternary compounds thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/24—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D213/28—Radicals substituted by singly-bound oxygen or sulphur atoms
    • C07D213/30—Oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/24—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D213/54—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D213/55—Acids; Esters
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/62—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D213/63—One oxygen atom
    • C07D213/64—One oxygen atom attached in position 2 or 6
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/72—Nitrogen atoms
    • C07D213/74—Amino or imino radicals substituted by hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D215/00—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems
    • C07D215/02—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D215/04—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms, directly attached to the ring carbon atoms
    • C07D215/10—Quaternary compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D215/00—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems
    • C07D215/02—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D215/12—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D215/14—Radicals substituted by oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D217/00—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems
    • C07D217/22—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to carbon atoms of the nitrogen-containing ring
    • C07D217/24—Oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D231/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings
    • C07D231/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings
    • C07D231/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D231/14—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D231/16—Halogen atoms or nitro radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D233/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings
    • C07D233/54—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D233/64—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms, e.g. histidine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/26—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/46—Two or more oxygen, sulphur or nitrogen atoms
    • C07D239/52—Two oxygen atoms
    • C07D239/54—Two oxygen atoms as doubly bound oxygen atoms or as unsubstituted hydroxy radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D249/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D249/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms not condensed with other rings
    • C07D249/08—1,2,4-Triazoles; Hydrogenated 1,2,4-triazoles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D261/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings
    • C07D261/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings not condensed with other rings
    • C07D261/06—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings not condensed with other rings having two or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D261/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings not condensed with other rings having two or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D265/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one nitrogen atom and one oxygen atom as the only ring hetero atoms
    • C07D265/04—1,3-Oxazines; Hydrogenated 1,3-oxazines
    • C07D265/06—1,3-Oxazines; Hydrogenated 1,3-oxazines not condensed with other rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D277/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings
    • C07D277/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings
    • C07D277/20—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D277/32—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D277/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings
    • C07D277/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings
    • C07D277/20—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D277/32—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D277/38—Nitrogen atoms
    • C07D277/42—Amino or imino radicals substituted by hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D307/34—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D307/38—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D307/54—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/77—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D307/78—Benzo [b] furans; Hydrogenated benzo [b] furans
    • C07D307/79—Benzo [b] furans; Hydrogenated benzo [b] furans with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C07D307/80—Radicals substituted by oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
    • C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
    • C07D311/06—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 2
    • C07D311/08—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 2 not hydrogenated in the hetero ring
    • C07D311/16—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 2 not hydrogenated in the hetero ring substituted in position 7
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
    • C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
    • C07D311/22—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
    • C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D311/78—Ring systems having three or more relevant rings
    • C07D311/92—Naphthopyrans; Hydrogenated naphthopyrans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D317/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D317/08—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3
    • C07D317/44—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3 ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D317/46—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3 ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with one six-membered ring
    • C07D317/48—Methylenedioxybenzenes or hydrogenated methylenedioxybenzenes, unsubstituted on the hetero ring
    • C07D317/50—Methylenedioxybenzenes or hydrogenated methylenedioxybenzenes, unsubstituted on the hetero ring with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to atoms of the carbocyclic ring
    • C07D317/60—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D333/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom
    • C07D333/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D333/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings not substituted on the ring sulphur atom
    • C07D333/06—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings not substituted on the ring sulphur atom with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to the ring carbon atoms
    • C07D333/24—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D333/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom
    • C07D333/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D333/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings not substituted on the ring sulphur atom
    • C07D333/26—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings not substituted on the ring sulphur atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D333/28—Halogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D333/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom
    • C07D333/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D333/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings not substituted on the ring sulphur atom
    • C07D333/26—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings not substituted on the ring sulphur atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D333/30—Hetero atoms other than halogen
    • C07D333/34—Sulfur atoms

Definitions

  • the invention relates to synthetic derivatives of lunular acid, medicaments containing these compounds, processes for the preparation of lunular acid derivatives and their use as chemopreventive agents against cancer.
  • cancer is a disease that affects a third of the population of industrialized countries today for a variety of reasons (e.g. aging of the population, negative environmental influences, etc.) and a further increase in diseases can be expected, efforts are being made to find substances that can be identified early used to protect against the development of cancer (cancer prophylaxis). There is therefore an extensive line of research dealing with the identification of new chemopreventive agents to meet the urgent need for cancer prevention.
  • the object of the present invention is to identify new chemopreventive agents which are simple to use and free of side effects.
  • lunular acid (2-hydroxy-6- [2- (4-hydroxyphenyl)] ethylbenzoic acid) and lunularin, which can be isolated from liverwort, which belongs to the moss category, is a chemopreventive Have an effect.
  • X is any mono- or polycyclic (hetero) aryl radical which is optionally substituted.
  • Examples include a carbocyclic, monocyclic radical, for example the phenyl group, a heterocyclic, monocyclic radical, for example the groups thienyl, thiophenyl, furyl, furanyl, pyranyl, pyrrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridyl, pyridinyl, pyrrolidinyl, pyrazinyl, pyrimidinyl, pyrazolonyl, pyridazinyl, purinyl, thiazolol, indiazolyl, thiazolyl, thiazolol, indiazyl , Furazannyl, pyrrolinyl, imidazolinyl, pyrazolinyl, thiazolinyl, triazolyl, tetrazolyl, and the positional isomers of
  • R x and R 2 can each independently be hydrogen, a straight or branched alkyl radical having 1 to 30 carbon atoms, a straight or branched alkenyl radical having 2 to 30 carbon atoms, a mono- or polycyclic alkyl radical having 3 to 30 carbon atoms, a mono- or polycyclic alkenyl radical with 4 to 30 carbon atoms, or a mono- or polycyclic mean aromatic radical, where these radicals can optionally be substituted by one or more substituents.
  • R and R 2 may be the same or different.
  • any straight or branched C 1 . 30 alkyl radical can be used. Examples include methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl and tert.
  • R x and R 2 are preferably C 1 -C 14 -alkyl radicals or C 3 14 -cycloalkyl radicals.
  • R ⁇ and R 2 are particularly preferably H, CH 3 or CH 3 CH 2 .
  • any straight or branched C 2 _ 30 alkenyl group may be used.
  • examples of these are vinyl, propenyl, isopropenyl, allyl, 2-methylallyl, butenyl or isobutenyl, hexenyl or isohexenyl, heptenyl or isoheptenyl, octenyl or isooctenyl groups.
  • Vinyl, propenyl and isopropenyl are preferred.
  • R 1 and / or R 2 can be any cycloalkyl radical. Examples include a cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl or cyclohexyl, cycloheptyl, cycloctyl, cyclononyl or cyclodonecyl groups. Cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl and cyclohexyl are preferred.
  • the cycloalkenyl radical with 4 to 30 carbon atoms that can be used for R ⁇ and / or R 2 can be any cycloalkenyl radical. Examples of these are a Cyc lobut eny 1, cyclopentenyl or Cyc lohexeny 1, Cyc lohept enyl, Cxclooctenyl, Cyclononenyl or Cyclodecenyl groups. Cyclobutenyl, cyclopentenyl or cyclohexenyl are preferred. Examples of polycyclic alkyl or alkenyl radicals include norbornane, adamantane or benzvalene. Preferred substituents of the various radicals X, R 1 and / or R 2 indicated above and of the basic structure as substituent R 3 can be selected from the following group:
  • Halogen fluorine, chlorine, bromine, iodine
  • dialkylamino such as dimethylamino, diethylamino, methylethylamino, each of these dialkylamino residues optionally being in oxide form, aminoalkyl, such as aminomethyl or aminoethyl, dialkylaminoalkyl, such as dimethylaminomethyl or ethyl,
  • Dialkylaminoalkyloxy such as dimethylaminoethyloxy, hydroxyl, free, esterified carboxyl group, such as alkoxycarbonyl, for example methoxycarbonyl or ethoxycarbonyl, or converted into a salt, for example by a sodium or potassium atom,
  • Alkyl with 1 to 8 carbon atoms such as methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, tert.
  • Butyl optionally substituted by one or more halogen atoms, for example by fluorine, such as trifluoromethyl, oxo, cyano, nitro, formyl,
  • Alkoxy such as methoxy, ethoxy, propyloxy, isopropyloxy, butyloxy,
  • Alkylthio such as methylthio, ethylthio, propylthio, isopropylthio, butylthio, carbamoyl,
  • Alkenyl such as vinyl, propenyl, alkynyl, such as ethynyl, propynyl and aryl, such as phenyl, furyl, thienyl.
  • substituted radicals are an alkyl group substituted by one or more halogen atoms rest, such as the trifluoromethyl, trifluorobutyl, pentafluoropropyl, pentafluorobutyl, pentafluoropentyl, heptafluorobutyl or nonafluorobutyl or 2-chloroethyl group.
  • Tables 3 and 4 list a number of further preferred compounds.
  • the compounds of formulas (I) and (II) above are prepared according to the synthetic scheme shown in FIG. 1.
  • Compounds of the above formulas (III) and (IV) are analogous to the instructions in Cullmann et al. , Z. Naturforsch. 54c, pp. 147-150 (1999) and Cullmann et al. , Phytochemistry, Vol. 45, No. 6, pp. 1235-1247 (1997).
  • the above-mentioned compounds according to the invention are suitable for the prevention of all types of cancer by, on the one hand, inhibiting certain metabolic processes in which substances are produced which promote the development of cancer, and on the other hand promoting certain metabolic processes which, for example, intercept carcinogenic substances.
  • Modulation of enzymes involved in the metabolic activation and release of carcinogens is one of the best studied mechanisms for chemoprotective agents.
  • Phase 1 enzymes (Cytochrome P450) activate xenobiotics by inserting functional groups that link these compounds make it more water soluble. Although this functionalization via phase 1 enzymes is necessary for the complete detoxification of substances, the induction of phase 1 enzymes can increase the risk of producing carcinogens that can react with DNA and initiate carcinogenesis.
  • Phase 2 enzymes conjugate the activated compounds to endogenous ligands such as glutathione or glucuronic, acetic or sulfuric acid, thereby increasing the release of the compounds in the form of these conjugates.
  • endogenous ligands such as glutathione or glucuronic, acetic or sulfuric acid
  • the inhibition of phase 1 enzymes simultaneously with the induction of phase 2 enzymes is a logical strategy in chemoprevention, which is particularly advantageous in the early stages of carcinogenesis.
  • the inhibitory effects on phase 1 CyplA activity and on the induction of phase 2 NAD (P) H: quinone reductase (QR) activity are determined.
  • ß-naphthoflavone-induced rat hepatoma cells are used as the source of CyplA.
  • the time-dependent dealkylation of 3-cyano-7-ethoxycoumarin (CEC) to 3-cyano-7-hydroxycoumarin can be monitored fluorometrically in 96-hole plates (Crespi et al., Anal. Biochem. (1997), 248 (1) : 188-190).
  • the induction of QR activity as a model phase 2 enzyme is measured, for example, colorimetrically in cultured Hepa lclc7 cells.
  • Substances with chemopreventive properties are characterized by manifold mechanisms of action: (1) desired foreign substance metabolism (e.g. measured as induction of NAD (P) H-quinone reductase and inhibition of CyplA), (2) anti-inflammatory mechanisms (e.g. measured as inhibition of induction of iNOS and inhibition of COX-1), (3) antioxidative mechanisms associated with radical scavenger properties (eg measured by reaction with diphenylpikryl radicals) and (4) anti-tumor promoting and anti-proliferative properties (e.g. measured as inhibition of phorbol ester-mediated induction of ornithine decarboxylase or measured using the mouse mammary gland model)
  • desired foreign substance metabolism e.g. measured as induction of NAD (P) H-quinone reductase and inhibition of CyplA
  • anti-inflammatory mechanisms e.g. measured as inhibition of induction of iNOS and inhibition of COX-1
  • the medicament according to the invention can be administered in various ways, e.g. oral, parenteral, cutaneous, subcutaneous, intravenous, intramuscular or rectal.
  • the non-invasive, i.e. oral, cutaneous or rectal, administration is administered to a patient over a period to be determined by the doctor or is administered continuously over long periods.
  • the medicine can be administered to both humans and mammals.
  • the drug is also suitable as support medication before, during or after tumor therapy (surgery, radiation and / or chemotherapy).
  • the dosage of the compound according to the invention is determined by the doctor on the basis of the patient-specific parameters such as e.g. Age, weight, gender, disease severity, etc. determined.
  • the drug is appropriately formulated according to the route of administration, e.g. in the form of simple or coated tablets, hard or soft gelatin capsules, powder for reconstitution before use, granules, suppositories, ovules, injectables, infusion solutions, pomades, creams, gels, microspheres, implants, which are manufactured according to the usual galenic processes.
  • the compounds according to the invention can optionally be formulated together with further active ingredients and with excipients customary in pharmaceutical compositions, for example talc, gum arabic, lactose, starch, magnesium stearate, cocoa butter, aqueous and, depending on the preparation to be prepared
  • excipients customary in pharmaceutical compositions, for example talc, gum arabic, lactose, starch, magnesium stearate, cocoa butter, aqueous and, depending on the preparation to be prepared
  • Non-water carriers fatty bodies with animal or vegetable origin, paraffin derivatives, glycols (especially polyethylene glycol), various plasticizers, dispersants or emulsifiers, preservatives.
  • Additives such as sodium chloride solution, ethanol, sorbitol, glycerin, olive oil, almond oil, propylene glycol or ethylene glycol can be used to produce liquid preparations.
  • Infusion or injection solutions can also be prepared. These are preferably aqueous solutions or suspensions, it being possible to prepare them before use, for example from lyophilized preparations which contain the active ingredient in all or together with a carrier such as mannitol, lactose, glucose, albumin and the like.
  • the ready-to-use solutions are sterilized and, if necessary, mixed with auxiliaries, for example with preservatives, stabilizers, emulsifiers, solubilizers, buffers and / or salts for regulating the osmotic pressure. Sterilization can be achieved by sterile filtration through filters with a small pore size, after which the Composition can optionally be lyophilized. Small amounts of antibiotics can also be added to help maintain sterility.
  • the invention also relates to pharmaceuticals or pharmaceutical compositions which contain a therapeutically effective amount of the active ingredient (compound according to the invention of the above formulas) together with organic or inorganic inert solid or liquid pharmaceutically acceptable carriers or diluents which are suitable for the intended administration, and that do not interact adversely with the active ingredients.
  • the invention also relates to a method for producing a pharmaceutical composition, which is characterized in that the compound according to the invention is mixed with a pharmaceutically acceptable carrier.
  • medicaments according to the invention in particular the compounds described in the experimental part and very particularly the compounds in which in the above formula (I) or (II) R1 and / or R2, which may be the same or different, contain a methyl, ethyl , Propyl or isoproyl group.
  • compositions according to the invention comprise as active ingredient at least one active ingredient as defined above. If necessary, further pharmaceutical active ingredients can be included in the composition, such as e.g.
  • Acetylcysteine natural polyphenols such as green tea
  • Red wine ingredients resveratrol
  • anthocyanidins resveratrol
  • Vitamins e.g. high-dose vitamin C, vitamin E,
  • Vitamin A vitamin D
  • Anti-inflammatories e.g. Cyclooxygenase 1 or 2 inhibitors
  • Nonsteroidal anti-inflammatory NSAIDs such as ASA, etc.
  • lipoxygenase inhibitors or inhibitors of inducible nitric oxide synthesis are examples of nonsteroidal anti-inflammatory NSAIDs, such as ASA, etc.
  • lipoxygenase inhibitors or inhibitors of inducible nitric oxide synthesis are examples of nonsteroidal anti-inflammatory NSAIDs, such as ASA, etc.
  • Hormone modulators e.g. Anti-estrogens (e.g. tamoxifen,
  • Angiogenesis inhibitors [e.g. Genistein]
  • Signal transmission modulators e.g. Protein kinase inhibitors (e.g. curcumin or Ras farnesylation inhibitors, such as perillyl alcohol or limonene)
  • Protein kinase inhibitors e.g. curcumin or Ras farnesylation inhibitors, such as perillyl alcohol or limonene
  • Ornithine decarboxylase inhibitors [eg DFMO] Apoptosis inducers
  • Fig. 2 Dose-dependent inhibition of preneoplastic lesion formation in an MMOC model by EC-252
  • the product which has crystallized out is filtered off with suction and dissolved in 50 ml of chloroform.
  • the solution is filtered through 50 g of silica gel (post-elution with a little CHC1 3 ).
  • the solvent is distilled off in vacuo and the residue [2.90 g (79%) E / Z mixture] recrystallized twice from ethanol. 1.84 g (50%) of the product are obtained, yellowish needles, mp. 93-94 ° C.
  • Hepalclc7 cells (ATCC American Type Culture Collection, Rockville, Maryland, USA) are sown in a 96-well plate at a density of 2 ⁇ 10 4 cells / ml (200 ⁇ l per well) in ⁇ -MEM containing 100 units / ml penicillin G-Na, 100 units / ml streptomycin sulfate and 250 ng / ml amphotericin B (Gibco BRL, Grand Island, NY) supplemented with 10% fetal calf serum and cultivated at 37 ° C in a 5% C0 2 atmosphere.
  • QR activity was measured by measuring the NADPH-dependent menadiol-mediated reduction of MTT (3- (4, 5-dimethylthiazo-2-yl) -2, 5-diphenyltetrazolium bromide) to blue formazan (Prochaska et al., Anal. Biochem. 1988, 169 (2): 328-336). Proteins were determined by crystal violet staining on an identical set of plates. The induction of QR activity was calculated from the ratio of the specific enzyme activities of the cells treated with the compounds to a solvent control.
  • the CD values (concentration in ⁇ M required to double the specific enzyme activity) were generated.
  • the CD values were compared with the IC50 values (half-maximal inhibitory concentration of cell viability in ⁇ M) in order to obtain the chemopreventive index Cl. Additional tests were performed in a mutant cell line (BP r cl) derived from Hepa Iclc7 cells, which is unable to translocate the Ah receptor-ligand complex into the nucleus.
  • CD / CQ concentration to double / quadruple the specific activity of QR
  • the dose-dependent induction of CyplA activity in cultured hepalclc7 was subsequently determined.
  • the Hepalclc7 cells were treated analogously as described above for 24 hours with 0.5 ⁇ M ⁇ -naphthoflavone, a classic bifunctional inducer of drug-metabolizing enzymes. To compare the inducing potential, the concentrations required for the 10-fold increase in CyplA activity were determined. Since the induction of CyplA can lead to the activation of procarcinogens, the potential to inhibit CyplA activity was further tested. These investigations were carried out on lysates of ⁇ -naphthoflavone-induced H4IIE rat hepatoma cells and CEC made as a substrate.
  • H4IIE cells (ATCC American Type Culture Collection, Rockville, Maryland, USA) are for this purpose in 10 cm cell culture plates with a density of lxlO 6 cells in 10 ml of MEME medium with the same additives as indicated above for the ⁇ -MEM medium , sown and cultivated for 24 hours at 37 ° C, 5% C0 2 atmosphere. The medium is then renewed and the cells are induced for 38 hours with 10 ⁇ M ⁇ -naphthoflavone to induce CyplA.
  • the cells are then washed three times with phosphate-buffered saline (PBS), harvested by scraping in 1 ml of 200 mM potassium phosphate buffer, pH 7.4 with 10 mM MgCl 2 (buffer 1) and immediately frozen in liquid nitrogen.
  • PBS phosphate-buffered saline
  • the cell homogenate is thawed at room temperature, pressed through a No. 20 cannula for lysis and diluted to 10 ml with buffer 1. 90 ⁇ l of this solution (approx.
  • CyplA activity is to be assessed as negative, since this activity can lead to the activation of carcinogens.
  • a slight induction of CyplA is desirable (ideally no CyplA induction at all) and an inhibition of CyplA at low concentrations.
  • Table 2 Modulation of Cyp 1 A activity by selected bibenzyls (all data in ⁇ M)
  • Cio- fold concentration resulting in a 10-fold
  • Mouse macrophages in DMEM medium containing 100 units / ml penicillin G-Na, 100 units / ml streptomycin sulfate and 250 ng / ml amphotericin B were supplemented with 10 % fetal calf serum at 37 ° C in a 5% C0 2 atmosphere.
  • the cells were cultivated at a density of 1 ⁇ 10 5 cells / well in DMEM in 96-well plates. After a preincubation time of 24 hours, the medium was replaced by 170 ⁇ l serum-free DMEM.
  • the test compounds (10 ⁇ l in 10% DMSO, 8 serial 2-fold dilutions, final concentration range 0.8 to 50 ⁇ M) were added.
  • iNOS was induced by adding 20 ⁇ l LPS solution (500 ng / ml in serum-free DMEM). After 24 hours, the iNOS activity was determined by quantifying the nitrite levels in 100 ⁇ l cell culture supernatants according to the Griess reaction and compared with a standard nitrite curve. In order to determine the cytotoxic effects of the test compounds, the remaining cell culture medium was removed and the cells were fixed at 4 ° C. for 30 minutes with 50 ⁇ l ice-cold 10% aqueous trichloroacetic acid solution, washed five times with water and briefly dried. The cell numbers were determined by sulforhodamine B staining (Skehan et al., J. Natl. Cancer Inst. (1990), 82 (13), pp. 1107-1112). In general, the compounds were tested in non-toxic concentrations (cell staining> 50% of the LPS-treated control cells).
  • the compounds of Table 3 were tested for their antioxidative properties.
  • the supposed potential of the compounds according to the invention for trapping diphenyl-picryl-hydrazyl radicals (DPPH) was selected. This was done by photometrically monitoring the reaction with 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) free radicals in a microplate format at 515 nm (van Amsterdam et al., Free Radical Biol. Med. (1992), 12, p 183-187).
  • DPPH 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl
  • the radical scavenger potential was checked with a solvent control (0% radical scavenger properties) and A scorbic acid (250 ⁇ M final concentration, 100% radical scavenger properties) compared.
  • the half-maximum free radical scavenger concentration SC 50 was generated, which was obtained in a final concentration range of 2-250 ⁇ M. Inhibition of DPPH at low concentrations of the test compounds is desirable here. The results of the tests are shown in Table 4.
  • Another parameter for determining the antioxidative properties of the compounds according to the invention is the determination of the inhibition of the phorbol-mediated superoxide burst in differentiated HL-60 cells.
  • TPA tetradecanoylphorbol acetate
  • S uer ox id - Radi ka 1 bi 1 fertil in human HL-60 promyelocytic leukemia cells that were differentiated into granulocytes was determined by photometric determination of the cytochrome c reduction (Takeuchi et al., Cancer Res. (1994), 54 (22), pp. 5837-5840, Pick and Mizel, J. Immuno1. Meth. (1981), 46 (2), pp. 211-226).
  • HL-60 cells with a density of 2 x 10 5 cells / ml with 1.3% DMSO in RPMI 1640 medium containing 100 units / ml penicillin G-Na and 100 units / ml streptomycin sulfate were supplemented with 10% fetal calf serum in 37 ° C treated in a 5% C0 2 atmosphere for four days to induce the terminal differentiation to granulocytes.
  • the cells were harvested by centrifugation, washed twice with "Hanks balanced salt solution" containing 30 mM HEPES, pH 7.8 and adjusted to a density of 2 ⁇ 10 6 / ml.
  • the reaction was carried out by cooling the plates on ice for Stopped for 15 minutes. The plates were then centrifuged and the cytochrome c reduction in the supernatant was determined at 550 nm using a microplate reader (Spectramax 340, Molecular Devices). The cell pellet was washed twice with PBS and the cell growth ability was measured fluorometrically by enzymatic hydrolysis of the fluorogenic esterase substrate Calcein AM (250 nM in PBS, 100 ⁇ l / well) at 37 ° C. in a cytofluor 4000 microplate fluorescence reader (PE Applied Biosystems, excitation 485 nm , Emission 620 nm).
  • the compounds of Table 3 were examined for the TPA-induced ODC (ornit in decarboxylase) activity in cultured mouse 308 cells.
  • the cultivation of the mouse 308 cells, the treatment of the cells with the test compounds added in serial dilutions in DMSO (0.5% final DMSO concentration) and the determination of the ODC activity were carried out as described in Gerhauser et al. , Nat. Med. (1995), 1 (3), pp. 260-266.
  • the protein content of the cell lysates using bovine serum albumin as standard was measured according to Bradford (Analyt. Biochem. (1976), 72 (1-2), pp. 248-254) and used to determine the ODC-specific activity (pmol 14 CO 2 / mg protein / hour).
  • IC 50 values half-maximal inhibitory concentration of TPA-induced ODC activity in ⁇ g / ml were calculated. Inhibition of the induction of ODC at small concentrations of the test compounds is desirable here. The results of the tests are shown in Table 4.
  • COX activity was measured at 37 ° C under recording of the oxygen consumption during the conversion of arachidonic acid into prostaglandins in a 1.0 ml incubation cell of an oxygen electrode assembly (Hansatec DW based on a 0 2 - electrode of the Clark type ) measured.
  • the reaction mixture containing 0.1 M sodium / potassium phosphate buffer, pH 7.4, 1 mM hydroquinone, 0.01 mM hemin and approximately 0.2 U COX-1 in 100 ⁇ l microsome fraction obtained from mutton seed bubbles as the starting source for COX-1 (specific activity 0.2-1 U / mg protein) was incubated with 10 ⁇ l DMSO (negative control) or test substance solution (10 mM in DMSO) for 90 seconds.
  • the reaction was started by adding 2 ⁇ l of 50 mM arachidonic acid in ethanol (100 ⁇ M final concentration) and the oxygen consumption was recorded for 20 seconds. For the calculation, the rate of 0 2 consumption was compared with the DMSO control (100% activity). The results of the tests are shown in Table 4.
  • MMOC mouse mammary gland model
  • test compounds can be tested to determine whether they inhibit carcinogen-induced preneoplastic lesions in mouse mammary gland organ culture. This is an important indicator of a chemopreventive effect in the animal model.
  • mice 3 to 4 week old virgin female BALB / c mice were prepared by daily subcutaneous injections with 1 ⁇ g estradiol 17ß and 1 mg progesterone for 9 days. On day 10, the animals are sacrificed by cervical dislocation and the thoracic pair of mammary glands is removed, which is placed on a silk tissue. These tissue preparations were incubated in serum-free Waymouth MB752 / I medium (5 glands / 5 ml medium / plate) for 10 days.
  • serum-free Waymouth MB752 / I medium 5 glands / 5 ml medium / plate
  • the medium is supplemented with 2 mM glutamine, antibiotics (penicillin and streptomycin, each 100 units / ml solution) and growth-promoting hormones, 5 ⁇ g insulin, 5 ⁇ g prolactin, 1 ⁇ g aldosterone and 1 ⁇ g hydrocortisone per ml medium.
  • the carcinogen DMBA (2 ⁇ g / ml) is added to the medium for 24 hours between days 3 and 4. This time interval represents the period of DNA synthesis.
  • Control plates were treated with DMSO (DMBA solvent). After 10 days of incubation, the glands were kept in a medium containing only insulin (5 ⁇ g / ml) for a further 14. During the entire culture period, the glands were kept at 37 ° C in a 5% CO 2 atmosphere.
  • the Ishikawa cells were routinely in ⁇ -MEM medium containing 100 units / ml penicillin G-Na, 100 units / ml streptomycin sulfate and 250 ng / ml amphotericin B supplemented with 10% activated carbon-cleaned fetal calf serum at 37 ° C in a 5% C0 2 - atmosphere kept.
  • test compounds according to Table 3 (10 ⁇ l in 10% DMSO, final concentration range 0.8-50 ⁇ M), 10 ⁇ l 10% DMSO (as negative control, final concentration 0.5%) or 10 ⁇ l tamoxifen (in 10% DMSO, final concentration 0, 5 ⁇ M, as a positive anti-estrogen) and either 20 ⁇ l EFM (for estrogenic activity) or 20 ⁇ l 50 nM ß-estradiol in EFM (for anti-estrogen activity) were added to the plates to a final volume of 200 ⁇ l.
  • the plates were incubated at 37 ° C in a humid 5% CO 2 atmosphere for 72 hours.
  • the cell growth ability was determined fluorometrically by Calcein AM hydrolysis.
  • the plates were washed three times with PBS (preheated to 37 ° C.) and 100 ⁇ l of 250 nM Calcein AM in preheated PBS was added to each hole.
  • the fluorescence was measured for 10 minutes at 37 ° C. in a Cytofluor 4000 microplate fluorescence reader (PE Applied Biosystems, excitation 485 nm, emission 620 nm).
  • the calcein solution was immediately removed and 50 ul / well 0.5% Triton X in PBS was added.
  • AP activity and cell growth were determined from the rates of product formation (in fluorescence units / min). The ratio of the two rates was calculated as a measure of the relative specific AP activity. The relative increase in AP activity, indicative of estrogenic activity, was calculated by comparison with a DMSO solvent control. For the calculation of the anti-estrogenic effects, the results were expressed as percentages in comparison to a Kontro 1 lpr obe treated with DMSO and ß-estradiol. Tamoxifen was used as a positive control substance and produced> 50% inhibition at a test concentration of 0.5 ⁇ M.
  • Test compounds with values that qualify them as a good chemoprevent are summarized in Table 4.
  • QR stands for induction of NAD (P) H quinone reductase in Hepelclc7 mouse hepatoma cells
  • IC 5 o half-maximal inhibitory concentration of the cell vivacy
  • CyplA Ind. Induction of CyplA enzyme activity in Hepelclc7 mouse hepatoma cells
  • IC 50 half-maximum inhibitory concentration of cell viability
  • NXO trapping of superoxide radical anions in the xanthine / xanthine oxidase system
  • IC 50 half-maximum inhibitory concentration
  • Antiox Inhibition of phorbolester-mediated superoxide burst in differentiated HL-60 cells
  • ODC Inhibition of phorbol ester-mediated induction of ornithine decarboxylase in mice
  • IC 5 o half-maximum inhibitory concentration ⁇ -poly: inhibition of human DNA polymerase ⁇
  • Phosphatase causes (measure of estrogenic activity) tox IC 5 o: half-maximal inhibition of cell growth nI no induction: no induction
  • Resveratrol served as an internal positive control in all experiments. At a concentration of 5 ⁇ M, resveratrol inhibited 52.4 + 7.4% of the DMBA-induced preneoplastic lesions

Landscapes

  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

Die Erfindung betrifft Lunularsäurederivate, die sich als chemopräventive Agentien eignen.

Description

Synthetische Derivate von Lunularsäure, Arzneimittel enthaltend diese Verbindungen, Verfahren zur Herstellung der Lunularsäurederivate sowie deren Verwendung
Die Erfindung betrifft synthetische Derivate von Lunularsäure, Arzneimittel enthaltend diese Verbindungen, Verfahren zur Herstellung der Lunularsäurederivate sowie deren Verwendung als chemopräventive Agentien gegen Krebserkrankungen.
Da Krebs eine Erkrankung ist, die heute aus verschiedensten Gründen (z.B. Älterwerden der Bevölkerung, negative Umwelteinflüsse usw.) schon ein Drittel der Bevölkerung von Industriestaaten betrifft und noch mit einer weiteren Zunahme der Erkrankungen zu rechnen ist, gibt es Bemühungen Stoffe herauszufinden, welche frühzeitig angewendet, einen Schutz vor dem Entstehen von Krebs geben (Krebsprophylaxe) . Es gibt deshalb eine ausgedehnte Forschungsrichtung, die sich mit der Identifikation neuer chemopräventiver Agentien beschäftigt, um den dringenden Bedarf der Krebsverhütung zu decken.
Die Aufgabe der vorliegenden Erfindung besteht in der Identifikation neuer chemopräventiver Agentien, die einfach und nebenwirkungsfrei anzuwenden sind.
Gelöst wird diese Aufgabe durch die Gegenstände der Patentansprüche .
Von den Erfindern wurde bereits früher gefunden, daß Lunularsäure (2-Hydroxy-6- [2- (4-hydroxy- phenyl) ] ethylbenzoesäure) und Lunularin, die aus Leberblümchen, welche zur Kategorie der Moose gehören, isoliert werden können, eine chemopräventive Wirkung haben.
Figure imgf000003_0001
Lunularsäure: R = COOH Lunularin: R = H
Jetzt wurde weiter herausgefunden, daß bestimmte Derivate der Lunularsäure eine noch weit über Lunularsäure und Lunularin hinausgehende positive Wirkung haben und selbst in geringen Dosen noch gegen Stoffwechselprozesse schützen, die für eine Krebsentstehung verantwortlich gemacht werden können. Gegenstand der Erfindung sind daher Verbindungen der allgemeinen Formel (I), (II), (III) oder (IV)
Figure imgf000003_0002
Figure imgf000003_0003
worin X ein beliebiger mono- oder polycyclischer (Hetero) Arylrest, der ggf. substituiert ist, ist. Beispiele hierfür sind ein carbocyclischer, monocyclischer Rest, beispielsweise die Phenylgruppe, ein heterocyclischer , monocyclischer Rest, beispielsweise die Gruppen Thienyl, Thiophenyl, Furyl , Furanyl , Pyranyl , Pyrrolyl, Imidazolyl, Pyrazolyl, Pyridyl, Pyridinyl, Pyrrolidinyl , Pyrazinyl, Pyrimidinyl , Pyrazolonyl, Pyridazinyl, Purinyl, Thiazolyl, Oxazolyl, Indolyl, Furazannyl, Pyrrolinyl, Imidazolinyl , Pyrazolinyl, Thiazolinyl, Triazolyl, Tetrazolyl, sowie die Positionsisomeren des oder der Heteroatome, die diese Gruppen umfassen können, ein Rest bestehend aus carbocyclischen kondensierten Ringen, beispielsweise die Naphthylgruppe oder die Phenanthrenylgruppe, ein Rest bestehend aus kondensierten heterocyclischen Ringen, beispielsweise Benzofuranyl , Benzothienyl , Benzimidazolyl, Benzothiazolyl , Naphtho[2,3- b] thienyl, Thianthrenyl , Isobenzofuranyl , Chromenyl , Xanthenyl , Phenoxathiinyl , Indolizinyl, Isoindolyl, 3H- Indolyl, Indolyl, Indazolyl, Purinyl, Chinolizinyl , Isochinolyl, Chinolyl, Phthalzinyl, Naphthyridinyl , Chinoxalinyl, Chinazolinyl , Chinolinyl, Pteridinyl, Carbazolyl, ß-Carbolinyl, Cinnolinyl, Acridinyl, Phenazinyl, Phenothiazinyl , Phenoxazinyl , Indolinyl, Isoindolinyl , Imidazopyridyl , Imidazopyridmidinyl oder auch die kondensierten polycyclischen Systeme bestehend aus heterocyclischen Monozyklen, wie beispielsweise vorstehend definiert, wie beispielsweise Thionaphthenyl , Furo[2,3- b]pyrrol oder Thieno [2 , 3-b] furan, und insbesondere die Phenyl-, Furylgruppen, wie 2-Furyl, Imidazolyl, wie 2- Imidazolyl, Pyridyl, wie 2-Pyridyl, 3-Pyridyl, 4-Pyridyl, Pyrimidinyl, wie Pyridmid-2-yl , Thiazolyl, wie Thiazol-2-yl , Thiazolinyl, wie Thiazolin-2-yl, Triazolyl, wie Triazolyl-2- yl, Tetrazolyl, wie Tetrazol-2-yl , Benzimidazolyl, wie Benzimidazol-2-yl, Benzothiazolyl", Benzothiazol-2-yl , Purinyl, wie Purin-7-yl, oder Chinolyl, wie 4-Chinolyl.
In den obigen Formeln können Rx und R2 jeweils unabhängig voneinander Wasserstoff, einen geraden oder verzweigten Alkylrest mit 1 bis 30 Kohlenstoffatomen, einen geraden oder verzweigten Alkenylrest mit 2 bis 30 Kohlensto fatomen, einen mono- oder polyzyklischen Alkylrest mit 3 bis 30 Kohlenstoffatomen, einen mono- oder polyzyklischen Alkenylrest mit 4 bis 30 Kohlenstoffatomen, oder einen mono- oder polyzyklischen aromatischen Rest bedeuten, wobei diese Reste gegebenenfalls durch einen oder mehrere Substituenten substituiert sein können. R und R2 können gleich oder verschieden sein.
Es kann für R± und/oder R2 jeder beliebige gerade oder verzweigte C1.30-Alkylrest verwendet werden. Beispiele hierfür sind Methyl-, Ethyl-, Propyl-, Isopropyl-, Butyl-, Isobutyl-, tert . -Butyl- , n-Butyl-, n-Hexyl-, 2-Methylpentyl- , 2,3- Dimethylbutyl- , n-Heptyl-, 2-Methylhexyl- , 2 , 2-Dimethylpentyl- 3 , 3-Dιmethylpentyl- , 3 -Ethylpentyl- , n-Octyl-, 2,2- D ime t hy 1 hexy 1 - , 3 , 3 - D ime t hy 1 hexy 1 - , 3-Methyl-3- ethylpentylgruppen. Bevorzugt sind wegen der besseren Loslichkeit kurze Alkylketten, wie Methyl-, Ethyl-, Propyl- und Isopropyl- . Bevorzugt sind Rx und R2 gerade C1_14-Alkylreste oder C3 l4-Cycloalkylreste . Besonders bevorzugt stehen Rλ und R2 für H, CH3 oder CH3CH2.
Es kann für Rλ und/oder R2 jeder beliebige gerade oder verzweigte C2_30-Alkenylrest verwendet werden. Beispiele hierfür sind Vinyl-, Propenyl-, Isopropenyl-, Allyl-, 2-Methylallyl- , Butenyl- oder Isobutenyl-, Hexenyl- oder Isohexenyl-, heptenyl- oder Isoheptenyl- , Octenyl- oder Isooctenylgruppen. Bevorzugt sind Vinyl-, Propenyl- und Isopropenyl-.
So kann R1 und/oder R2 jeder beliebige Cycloalkylrest sein. Beispiele hierfür sind eine Cyclopropyl- , Cyclobutyl-, Cyclopentyl- oder Cyclohexyl-, Cycloheptyl- , Cxclooctyl-, Cyclononyl- oder Cyc lodecylgruppen . Bevorzugt sind Cyclopropyl-, Cyclobutyl-, Cyclopentyl- und Cyclohexyl-.
Der für Rλ und/oder R2 verwendbare Cycloalkenylrest mit 4 bis 30 Kohlenstof fatomen kann jeder beliebige Cycloalkenylrest sein. Beispiele hierfür sind eine Cyc lobut eny 1 - , Cyclopentenyl - oder Cyc lohexeny 1 - , Cyc lohept enyl - , Cxclooctenyl-, Cyclononenyl- oder Cyclodecenylgruppen. Bevorzugt sind Cyclobutenyl-, Cyclopentenyl- oder Cyclohexenyl . Beispiele für polyzyklische Alkyl- bzw. Alkenylreste umfassen Norbornan, Adamantan oder Benzvalen. Vorzugsweise vorhandene Substituenten der verschiedenen vorstehend angegebenen Reste X, R1 und/oder R2 sowie des Grundgerüsts als Substituent R3 können aus der folgenden Gruppe ausgewählt werden:
Halogen: Fluor, Chlor, Brom, Iod,
Amino, Alkylamino, Dimethylamino oder Ethylamino, Dialkylamino , wie Dimethylamino, Diethylamino , Methylethylamino, wobei jeder dieser Dialkylaminoreste gegebenenfalls in Oxidform vorliegt, Aminoalkyl, wie Aminomethyl oder A inoethyl, Dialkylaminoalkyl , wie Dimethylaminomethyl oder ethyl ,
Dialkylaminoalkyloxy, wie Dimethylaminoethyloxy, Hydroxyl , freie, veresterte Carboxylgruppe, wie Alkoxycarbonyl , beispielsweise Methoxycarbonyl oder Ethoxycarbonyl , oder in ein Salz, beispielsweise durch ein Natriumoder Kaliumatom überführt,
Alkyl mit 1 bis 8 Kohlenstoffatomen, wie Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl, Butyl, Isobutyl, tert . - Butyl, gegebenenfalls durch ein oder mehrere Halogen- atom(e) substituiert, beispielsweise durch Fluor, wie Trifluormethyl , Oxo, Cyano, Nitro, Formyl ,
Acyl, wie Acetyl, Propionyl, Butyryl , Benzoyl, Acyloxy, wie Acetoxy oder ein Rest der Formel: -0-CO- (CH2)nC02H, worin n = 1 bis 5,
Alkoxy, wie Methoxy, Ethoxy, Propyloxy, Isopropyloxy, Butyloxy,
Alkylthio, wie Methylthio, Ethylthio, Propylthio, Isopropylthio, Butylthio, Carbamoyl ,
Alkenyl, wie Vinyl, Propenyl, Alkinyl , wie Ethinyl , Propinyl und Aryl , wie Phenyl , Furyl , Thienyl.
Als Beispiele für derartige substituierte Reste können ein durch ein oder mehrere Halogenatom (e) substituierter Alkyl- rest, wie die Trifluormethyl-, Trifluorbutyl- , Pentafluorpro- pyl-, Pentaf luorbutyl-, Pentafluorpentyl- , Heptafluorbutyl - oder Nonafluorbutylgruppe oder 2-Chlorethyl- genannt werden.
Verbindungen der obigen Formeln (I), (II) , (III) und (IV) werden im weiteren mit dem Begriff "Lunularsäurederivate" beschrieben.
Bevorzugte Verbindungen sind:
Cl, AcO
Cl, AcÖ
Figure imgf000007_0001
In den Tabellen 3 und 4 sind eine Reihe weiterer bevorzugter Verbindungen aufgelistet.
Erfindungsgemäß ganz bevorzugte Verbindungen sind:
Figure imgf000007_0002
Figure imgf000008_0001
Figure imgf000008_0002
Vorzugsweise werden die Verbindungen der obigen Formeln (I) und (II) gemäß dem in Fig. 1 gezeigten Syntheseschema hergestellt. Verbindungen der obigen Formeln (III) und (IV) sind analog den Vorschriften in Cullmann et al . , Z. Naturforsch. 54c, S. 147-150 (1999) und Cullmann et al . , Phytochemistry, Vol. 45, Nr. 6, S. 1235-1247 (1997) herstellbar.
Die vorstehend genannten erfindungsgemäßen Verbindungen eignen sich zur Prävention von Krebserkrankungen aller Art, indem sie einerseits bestimmte Stoffwechselprozesse hemmen, bei denen Stoffe entstehen, die die Krebsentstehung fördern, und andererseits bestimmte Stoffwechselprozesse fördern, die beispielsweise karzinogene Substanzen abfangen. Die Modulation von Enzymen, die bei der metabolischen Aktivierung und Freisetzung von Carcinogenen beteiligt sind, ist einer der am besten untersuchten Mechanismen für chemoprotektive Agentien. Phase 1-Enzyme (Cytochrome P450) aktivieren Xenobiotika durch das Einfügen von funktionellen Gruppen, die diese Verbindungen besser wasserlöslich machen. Obwohl diese Funktionalisierung über Phase 1-Enzyme für die komplette Detoxifizierung von Substanzen notwendig ist, kann die Induktion von Phase 1- Enzymen das Risiko erhöhen, Carcinogene zu produzieren, die mit DNA reagieren können und Carcinogenese initiieren. Phase 2-Enzyme konjugieren die aktivierten Verbindungen an endogene Liganden, wie Glutathion oder Glucuron-, Essig- oder Schwefelsäure, wodurch die Freisetzung der Verbindungen in Form dieser Konjugate vermehrt wird. Allgemein stellt die Inhibierung von Phase 1-Enzymen gleichzeitig mit der Induktion von Phase 2 Enzymen eine logische Strategie bei der Chemoprävention dar, was besonders vorteilhaft in frühen Stadien der Carcinogenese ist. Um Modulatoren des Arzneimittel-Metabolismus zu identifizieren und damit eine Aussage über chemopräventive Agentien zu erhalten, werden beispielsweise die inhibitorischen Effekte auf die Phase 1 CyplA Aktivität und auf die Induktion der Phase 2 NAD(P)H:Chinonreduktase (QR) Aktivität bestimmt. Dazu werden beispielsweise ß-Naphthoflavon-induzierte Rattenhepatomzellen als Quelle von CyplA verwendet. Die zeitabhängige Dealkylierung von 3-Cyano-7-ethoxycumarin (CEC) zu 3-Cyano-7- hydroxycumarin kann fluorometrisch in 96-Loch-Platten verfolgt werden (Crespi et al . , Anal. Biochem. (1997), 248 (1): 188- 190) . Die Induktion von QR-Aktivität als Modell-Phase 2-Enzym wird beispielsweise colorimetrisch in kultivierten Hepa lclc7- Zellen gemessen. Dazu wird die NADPH-abhängige Menadiol- vermittelte Reduktion von MTT (3- (4, 5-dimethylthiazo-2-yl) - 2 , 5-diphenyltetrazoliumbromid) in blaues Formazan untersucht (Prochaska et al . , Anal. Biochem.- 1988, 169(2): 328-336).
Stoffe mit chemopräventiven Eigenschaften zeichnen sich somit durch manigfaltige Wirkungsmechanismen aus: (1) gewünschter Fremdstoff-Metabolismus (z.B. gemessen als Induktion von NAD (P) H-Chinonreduktase und Hemmung von CyplA), (2) entzündungshemmende Mechanismen (z.B. gemessen als Hemmung der Induktion von iNOS und Hemmung von COX-1), (3) antioxidative Mechanismen verbunden mit Radikalfängereigenschaften (z.B. gemessen mittels Reaktion mit Diphenylpikrylradikalen) und (4) anti-Tumor promovierende und anti-proliferative Eigenschaften (z.B. gemessen als Hemmung der Phorbolester-vermittelten Induktion der Ornithin-Decarboxylase oder gemessen anhand des Maus-Brustdrüsenmodells )
Die Verbindungen der obigen Formeln sind gut verträglich und können im Rahmen eines Arzneimittels zur Prävention von Krebserkrankungen verabreicht werden.
Das erfindungsgemäße Arzneimittel kann auf verschiedenen Wegen verabreicht werden, z.B. oral, parenteral, kutan, subkutan, intravenös, intramuskulär oder rektal. Bevorzugt ist die ni cht - invas ive , d.h. orale, kutane oder rektale, Verabreichung. Das Arzneimittel wird einem Patienten über einen vom Arzt zu bestimmenden Zeitraum oder wird stetig über lange Zeiträume verabreicht. Das Arzneimittel kann sowohl Menschen als auch Säugern verabreicht werden. Das Arzneimittel bietet sich auch an als Unterstützungsmedikation vor, während oder nach einer Tumortherapie (Operation, Bestrahlung und/oder Chemotherapie) an.
Die Dosierung der erfindungsgemäßen Verbindung wird vom Arzt anhand der patientenspezifischen Parameter wie z.B. Alter, Gewicht, Geschlecht, Schwere der Erkrankung, etc. bestimmt.
Entsprechend der Art der Verabreichung wird das Arzneimittel in geeigneter Weise formuliert, z.B. in Form von einfachen oder dragierten Tabletten, Hart- oder Weichgelatinekapseln, Pulver zur Rekons ti tution vor Gebrauch, Granulaten, Suppositorien, Ovula, Injektionspräparaten, Infusionslösungen, Pomaden, Cremes, Gels, Mikrosphären, Implantaten, die nach üblichen galenischen Verfahren hergestellt werden.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können gegebenenfalls zusammen mit weiteren Wirkstoffen und mit in pharmazeutischen Zusammensetzungen üblichen Exzipientien formuliert werden, z.B. je nach herzustellendem Präparat Talk, Gummi arabicum, Lactose, Stärke, Magnesiumstearat , Kakaobutter, wäßrige und nichtwaßπge Trager, Fettkorper mit tierischem oder pflanzlichem Ursprung, Paraffinderivate, Glykole (insbesondere Polyet ylenglykol) , verschiedene Weichmacher, Dispergiermittel oder Emulgatoren, Konservierungsstoffe.
Zur Herstellung flussiger Präparate können Additive wie Natri- umchloridlosung, Ethanol, Sorbit, Glycerin, Olivenöl, Mandelöl, Propylenglycol oder Ethylenglycol verwendet werden.
Es können auch Infusions- oder Injektionslosungen hergestellt werden. Diese sind bevorzugt wäßrige Losungen oder Suspensionen, wobei es möglich ist, diese vor Gebrauch herzustellen, beispielsweise aus lyophilisierten Präparaten, die den Wirkstoff alleme oder zusammen mit einem Trager, wie Mannit, Lactose, Glucose, Albumin und dergleichen, enthalten. Die gebrauchsfertigen Losungen werden sterilisiert und gegebenenfalls mit Hilfsmitteln vermischt, beispielsweise mit Konservierungsstoffen, Stabilisatoren, Emulgatoren, Lösungsvermitt- lern, Puffern und/oder Salzen zur Regulierung des osmotischen Drucks. Die Sterilisierung kann durch Sterilfiltration durch Filter mit einer kleinen Porengröße erzielt werden, wonach die Zusammensetzung gegebenenfalls lyophilisiert werden kann. Geringe Mengen an Antibiotika können auch zugesetzt werden, um die Beibehaltung der Sterilität zu unterstutzen.
Vorteilhaft ist die Bereitstellung des erfindungsgemäßen Arzneimittels in einer Dosis-Einheits-Form zur Verabreichung an einen Sauger.
Die Erfindung betrifft auch Arzneimittel bzw. pharmazeutische Zusammensetzungen, die eine therapeutisch wirksame Menge des aktiven Inhaltsstoffs (erfindungsgemäße Verbindung der obigen Formeln) zusammen mit organischen oder anorganischen inerten festen oder flüssigen pharmazeutisch vertraglichen Tragern bzw. Verdünnungsmitteln, die für die beabsichtigte Verabreichung geeignet sind, und die mit den aktiven Inhaltsstoffen nicht nachteilig wechselwirken, enthalten. Die Erfindung betrifft auch ein Verfahren zur Produktion einer pharmazeutischen Zusammensetzung, die dadurch gekennzeichnet ist, daß die erfindungsgemäße Verbindung mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger vermischt wird.
Unter den erfindungsgemäßen Medikamenten können insbesondere die im experimentellen Teil beschriebenen Verbindungen und ganz besonders die Verbindungen, bei denen in der obigen Formel (I) oder (II) Rl und/oder R2 , die gleich oder verschieden sein können, eine Methyl-, Ethyl-, Propyl- oder Isoproylgruppe ist, genannt werden.
Die erfindungsgemäßen Arzneimittel bzw. pharmazeutischen Zusammensetzungen umfassen als Wirkstoff mindestens einen wie vorstehend definierten Wirkstoff. Gegebenenfalls können noch weitere pharmazeutische Wirkstoffe in die Zusammensetzung aufgenommen werden, wie z.B.
An t i ox i dan t i en [z.B. red. Gluthathion, N-
Acetylcystein, natürliche Polyphenole wie Grüntee-
(Epigallcate-chingallat und andere Catechine) oder
Rotweinbestandteile (Resveratrol ) , Anthocyanidine,
Flavonoide, Procyanidine] ,
Vitamine [z.B. hochdosiertes Vitamin C, Vitamin E,
Vitamin A, Vitamin D] ,
Mineralstoffe [z.B. Magnesium, Zink, Calcium] ,
Spurenelemente [z.B. Selen],
Entzündungshemmer [z.B. Cyclooxygenase 1 oder 2 Hemmer
(Nichtsteroidale Entzündungshemmer NSAIDs , wie ASS etc . ) , Lipoxygenasehemmer oder Hemmstoffe der induzierbaren Stickstoffoxidsynthese] ,
Hormonmodulatoren [z.B. Antiöstrogene (z.B. Tamoxifen,
Genistein) oder Aromatasehemmer] ,
Angiogenesehemmer [z.B. Genistein],
Modulatoren der Signalübertragung [z.B. Proteinkinase- hemmer (z.B. Curcumin oder Ras-Farnesylierungshemmer , wie Perillylalkohol oder Limonen) ] ,
Proliferationshemmer ,
Ornithin-Decarboxylase-Hemmer [z.B. DFMO] Apoptose-Induktoren
Ballaststoffe (auch als Vorstufen von kurzkettigen
Fettsäuren)
Induktoren von Zellproliferationsprozessen [z.B.
Natriumbutyrat]
Die Erfindung wird weiter anhand der Figur erläutert:
Fig. 1: Syntheseschema
Fig. 2: Dosis-abhängige Inhibierung der präneoplastischen Läsionsbildung in einem MMOC-Modell durch EC-252
Die Erfindung wird anhand der nachstehenden Beispiele näher erläutert .
Beispiel 1
V e r f a h r e n z u r H e r s t e l l u n g v o n E - 6 - ( ω - Styryl ) salicylsäuremethylester (EC-9 )
Zu einer Lösung von Natriummethanolat in Methanol (bereitet durch Auflösen von 9,20 g (400 mMol) Natrium in 300 ml wasserfreiem Methanol) gibt man 56,3 g (100 mMol) (3-Acetoxy- 2-methoxycarbonyl)benzyl-triphenyl-phosphoniumbromid (Eicher et al., Synthesis 1988, S. 525) und rührt 30 Min. bei +20°C. Danach fügt man 10,6 g (100 mMol) Benzaldehyd (käufliches Produkt frisch destilliert) zu und erhitzt das Reaktionsgemisch 4 Std. unter Rückfluß. Danach kühlt man auf Raumtemperatur ab, neutralsiert durch Zugabe von Eisessig und entfernt das Solvens im Vakuum. Man nimmt den Rückstand in 300 ml Chloroform auf, wäscht zweimal mit je 100 ml Wasser, trocknet die organische Phase über MgS04 , filtriert sie über 200 g Kieselgel (Nachelution mit wenig CHC13) und entfernt das Solvens im Vakuum. Man erhält ein farbloses Öl, das in ca. 150 ml Petrolether (40-60°C) aufgenommen und bei -30°C (15 h) zur Kristallisation gebracht wird. Man erhält 23,6 g (93%) farblose Nadeln, E/Z-Gemisch, Smp. 51-52°C. Aus dem E/Z-Gemisch kann durch Erhitzen in Toluol (30 Std. unter Rückfluß) in Gegenwart von Iod (einige mg) das reine E-konfigurierte Produkt quantitativ erhalten werden (Smp. : 56-57°C) .
Figure imgf000014_0001
Beispiel 2
V e r f a h r e n z u r H e r s t e l l u n g v o n 6 ( 2 - Phenylethyl) salicylsäuremethyleεter (EC-1)
22,0 g (86,3 mMol) des Produkts aus Beispiel 1 werden in 300 ml Essigester gelöst. Man fügt 2,0 g Palladium auf Aktivkohle (5%) als Katalysator zu und hydriert in einer konventionellen Hydrierapparatur (Fa. Parr) bei 5 bar Wasserstoff-Überdruck. Nach ca. 4 Std. ist die Wasserstoff-Aufnähme beendet. Man filtriert vom Katalysator ab, entfernt das Solvens im Vakuum, nimmt den Rückstand in Chloroform auf und filtriert die CHC13 -Lösung über 300 g Kieselgel (Nachelution mit wenig CHC13 ) . Das Filtrat wird im Vakuum vom Solvens befreit und der Rückstand aus Petrolether (40-60°C) umkristallisiert. Man erhält 19,9 g (90%) des Produkts, farblose Prismen, Smp. 55- 56°C.
Figure imgf000014_0002
Beispiel 3
Verfahren zur Herstellung von E-l- (5-Bromthienyl) -2- [ (2- ethoxycarbonyl-3-methoxy)phenyl]ethen (EC-252)
Zu einer Lösung von Natriummethanolat in Methanol (bereitet durch Auflösen von 0,30 g (13,0 mMol) Natrium in 50 ml wasserfreiem Methanol) gibt man 5,63 g (10,0 mMol) (2- Ethoxycarbonyl-3-methoxy) benzyl-triphenyl-phosphoniumbromid (Eicher et al . , Synthesis 1988, S. 525) und rührt 30 Min. bei +20°C. Danach fügt man 1,91g (10,0 mMol) 5-Bromthiophen-2- carbaldehyd (Fa. Acros Organics, Geel, Belgien) zu und rührt das Reaktionsgemisch 24 Std. bei +20°C. Das auskristallisierte Produkt wird abgesaugt und in 50 ml Chloroform gelöst. Die Lösung wird über 50 g Kieselgel filtriert (Nachelution mit wenig CHC13) . Das Solvens wird im Vakuum abdestilliert und der Rückstand [2,90 g (79%) E/Z-Gemisch] zweimal aus Ethanol umkristallsiert . Man erhält 1,84 g (50%) des Produkts, gelbliche Nadeln, Smp. 93-94°C.
Figure imgf000015_0001
Beispiel 4
Bestimmung der chemopräventiven Aktivität ausgewählter Lunularsäurederivate
Hepalclc7-Zellen (ATCC American Type Culture Collection, Rockville, Maryland, USA) sät man in einer 96-Lochplatte in einer Dichte von 2 x 104 Zellen/ml (200 μl pro Loch) in α-MEM enthaltend 100 Einheiten/ml Penicillin G-Na, 100 Einheiten/ml Streptomycinsulfat und 250 ng/ml Amphotericin B (Gibco BRL, Grand Island, NY) ergänzt mit 10% fötalem Kälberserum aus und kultiviert bei 37°C in einer 5%igen C02 -Atmosphäre. Nach einer Präinkubationszeit von 24 Stunden wurde das Medium erneuert, die Testverbindungen gelöst in 10% DMSO (10 μ l , Endkonzentration 0,5%) zugegeben und die Platten für weitere 48 Stunden inkubiert. Die QR-Aktivität wurde durch Messen der NADPH-abhängigen Menadiol-vermittelten Reduktion von MTT (3- ( 4 , 5-dimethylthiazo-2-yl ) -2 , 5-diphenyltetrazoliumbromid) zu blauem Formazan gemessen (Prochaska et al . , Anal. Biochem. 1988, 169(2) : 328-336) . Die Proteine wurden durch Kristallviolett-Färbung eines identischen Satzes von Platten bestimmt. Die Induktion der QR-Aktivität wurde aus dem Verhältnis der spezifischen Enzymaktiviäten der mit den Verbindungen behandelten Zellen zu einer Lösungsmittelkontrolle berechnet. Die CD-Werte (benötigte Konzentration in μM, um die spezifische Enzymaktivität zu verdoppeln) wurden erzeugt. Die CD-Werte wurden mit den IC50- Werten (halbmaximale inhibitorische Konzentration der Zeil- Lebensfähigkeit in μM) ins Verhältnis gesetzt, um den chemopräventiven Index Cl zu erhalten. Zusätzliche Tests wurden in einer von Hepa Iclc7-Zellen abgeleiteten Mutanten- Zelllinie (BPrcl) unternommen, welche unfähig ist, den Ah Rezeptor-Ligandenkomplex in den Kern zu translocieren.
Für chemopräventiv wirkende Verbindungen ist eine Induktion von QR bei kleinen Konzentrationen wünschenswert. Tabelle 1: Induktion von NAD(P)H : Chinonoxidoreduktase (QR) durch ausgewählte Bibenzyle (alle Daten in μM)
Hepalclc7 BPrcl
CD/CQ IC50 Cl CD
A 51,4/n.d > 93,5 > 1, n.I
B 20,4/n.d. > 50 2,5 n.I
EC-1 0,22/6,8 31,3 171 n.I
EC-252 0,06/0,24 7,8 129 n.I
EC-9 0,03/0,16 7,2 223 n.I
CD/CQ = Konzentration, um die spezifische Aktiviät von QR zu verdoppeln/zu vervierfachen
IC50 = halbmaximale inhibitorische Konzentration
Cl = Chemopräventiver Index ; Verhältnis von IC50 und CD n.d. = nicht bestimmt n.I. keine Induktion
A = Lunularin (Kontrolle)
B = Lunularsäure (Kontrolle)
Nachfolgend wurde die Dosis-abhängige Induktion von CyplA- Aktivität in kultivierten Hepalclc7 bestimmt. Die Hepalclc7- Zellen wurden analog wie oben beschrieben für 24 Stunden mit 0,5 μM ß-Naphthoflavon, einem klassischen bifunktionellen Induktor von Arzneimi ttel-metabolisierenden Enzymen, behandelt. Zum Vergleich des induzierenden Potentials wurden die für die 10-fache Anhebung der CyplA-Aktivi tat erforderlichen Konzentrationen ermittelt. Da die Induktion von CyplA zu der Aktivierung von Procarcinogenen führen kann, wurde weiter das Potential, um CyplA-Aktivität zu inhibieren, getestet. Diese Untersuchungen wurden an Lysaten von ß- Naphthoflavon-induzierten H4IIE Rattenhepatoma-Zellen und CEC als Substrat gemacht. H4IIE-Zellen (ATCC American Type Culture Collection, Rockville, Maryland, USA) werden dazu in 10 cm Zellkulturplatten mit einer Dichte von lxlO6 Zellen in 10 ml MEME-Medium mit den gleichen Zusätzen, wie vorstehend für das α-MEM-Medium angegeben, ausgesät und für 24 Stunden bei 37°C, 5% C02 Atmosphäre kultiviert. Danach wird das Medium erneuert und die Zellen für 38 Std. mit 10 μM ß-Naphthoflavon zur Induktion von CyplA induziert. Anschließend werden die Zellen dreimal mit phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) gewaschen, durch Abschaben in 1 ml 200 mM Kaliumphosphatpuffer, pH 7,4 mit 10 mM MgCl2 (Puffer 1) geerntet und sofort in flüssigem Stickstoff eingefroren. Zur Aktivitätsbestimmung wird das Zellhomogenat bei Raumtemperatur aufgetaut, zur Lyse durch eine Kanüle Nr. 20 gedrückt und mit Puffer 1 auf 10 ml verdünnt. 90 μl dieser Lösung (ca. 5-25 μg Protein) werden in 96-Lochplatten zu einer Mischung aus lOμl der Testsubstanz in DMSO und 100 μl Reaktionsgemisch (2-fach konzentriert) enthaltend 2,6 mM NADP, 6,6 mM Glucose-6- Phospaht, 10 μM 3-Cyano-7-Ethoxycumarin (CEC) und 0,5 Einheiten Glucose-6-phosphatdehydrogenase gegeben. Der Ansatz wird kurz gemischt. Die Kinetik der zeitabhängigen Dealkylierung von CEC wird 45 Min. lang bei 37°C im Mikrotiterplattenfluorimeter mit einer Anregungswellenlänge von 409 nm und einer Emissionswellenlänge von 460 nm aufgenommen (vgl. Crespi et al . , Anal. Biochem. (1997), 248 (1) , S. 188-190) .
Die Induktion der CyplA-Aktivität ist als negativ zu bewerten, da diese Aktivität zu einer Aktivierung von Karzinogenen führen kann. Für chemopräventiv wirkende Verbindungen ist deshalb eine geringe Induktion von CyplA wünschenswert (am besten gar keine CyplA-Induktion) sowie eine Hemmung von CyplA bei kleinen Konzentrationen. Tabelle 2 : Modulation von Cyp 1 A- Ak t i vi t ä t durch ausgewählte Bibenzyle (alle Daten in μM)
CyplA- Induktion CyplA- Inhibierunα
lO-fach IC50
A > 93,5 3,7
B 8, 0 8,3
EC-1 2,1 0,99
EC-252 0,225 0,11
EC-9 < 0,13 0,08
Cio-fach : Konzentration resultierend in einer 10-fachen
Induktion der CyplA-Aktivität IC50: Halbmaximale inhibitorische Konzentration A : Lunularin (Kontrolle) B : Lunularsäure (Kontrolle)
Desweiteren wurden alle Verbindungen der Tabelle 3 analog wie vorstehend beschrieben hinsichtlich der QR- und CyplA- Aktivität getestet. Die Auswertung ergab, daß einige der getesteten Verbindungen bessere Eigenschaften haben als andere. Verbindungen mit Werten, die diese als gute Chemopr ävent iva qualifizieren, sind in Tabelle 4 zusammengestellt .
Desweiteren wurden die Verbindungen der Tabelle 3 hinsichtlich der Hemmung der Lipopolysaccharid-induzierten Expression der iNOS in Maus-Makrophagen getestet (N02) . Die Inhibition der Lipopolysaccharid (LPS) -vermittelten iNOS-Induktion in Maus Raw 246.7-Makrophagen wurde mittels der Griess-Reaktion (Ding et al., J. Im unol. (1988), 141(7), S. 2407-2412) bestimmt. Dazu wurden Maus-Makrophagen in DMEM-Medium enthaltend 100 Einheiten/ml Penicillin G-Na, 100 Einheiten/ml Streptomycinsulfat und 250 ng/ml Amphotericin B ergänzt mit 10 % fötalem Kälberserum bei 37°C in einer 5% C02 -Atmosphäre kultiviert. Die Zellen wurden mit einer Dichte von lx 105 Zellen/Loch in DMEM in 96-Lochplatten kultiviert. Nach einer Präinkubationszeit von 24 Stunden wurde das Medium durch 170 μl serumfreies DMEM ersetzt. Die Testverbindungen (10 μl in 10% DMSO, 8 serielle 2-fach Verdünnungen, Endkonzentrations- bereich 0,8 bis 50 μM) wurden hinzugefügt. iNOS wurde durch Zusatz von 20 μl LPS-Lösung (500 ng/ml in serumfreiem DMEM) induziert. Nach 24 Stunden wurde die iNOS-Aktivität über die Quantitierung der Nitritlevel in 100 μl Zellkulturüberständen gemäß der Griess-Reaktion bestimmt und mit einer Nitrit- Standardkurve verglichen. Um die zytotoxischen Effekte der Testverbindungen zu bestimmen, wurde das restliche Zellkulturmedium entfernt und die Zellen wurden bei 4°C für 30 Minuten mit 50 μl eiskalter 10%-iger wässriger Trichloressigsäure-Lösung fixiert, fünfmal mit Wasser gewaschen und kurz getrocknet. Die Zellzahlen wurden durch Sulforhodamin B-Färbung bestimmt (Skehan et al . , J. Natl . Cancer Inst. (1990), 82(13), S. 1107-1112). Im allgemeinen wurden die Verbindungen in nicht-toxischen Konzentrationen getestet ( Zel lanf ärbung > 50% der LPS-behandel ten Kontrollzellen) .
Für chemopräventiv wirkende Verbindungen ist eine Hemmung der Induktion der iNOS bei kleinen Konzentrationen wünschenswert. Die Ergebnisse der Tests sind in Tabelle 4 zusammengef ßt.
Desweiteren wurden die Verbindungen der Tabelle 3 auf ihre antioxidativen Eigenschaften hin getestet. Dafür wurde das vermeintliche Potential der erfindungsgemäßen Verbindungen zum Abfangen von Diphenyl-picryl-hydrazyl-Radikalen (DPPH) ausgewählt. Dies erfolgte durch photometrisches Verfolgen der Reaktion mit 1 , l-Diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) freien Radikalen in einem Mikroplatten-Format bei 515 nm (van Amsterdam et al . , Free Radical Biol . Med. (1992), 12, S. 183- 187). Dazu wurden die in DMSO gelösten Testverbindungen mit einer Lösung von 100 μM DPPH in Ethanol für 30 Minuten bei 37°C behandelt. Das Radikalfänger-Potential wurde mit einer Lösungsmittel-Kontrolle (0% Radikalfängereigenschaften) und A s c o r b i n s äu r e (250 μM E n d k o n z e n t r a t i o n , 100% Radikalfängereigenschaften) verglichen. Die halbmaximale Radikalfängerkonzentration SC50 wurde generiert, die in einem Endkonzentrationsbereich von 2-250 μM gewonnen wurden. Hier ist eine Hemmung von DPPH bei kleinen Konzentrationen der Testverbindungen erwünscht. Die Ergebnisse der Tests sind in Tabelle 4 gezeigt.
Ein weiterer Parameter, um die antioxidativen Eigenschaften der erfindungsgemäßen Verbindungen zu ermitteln, ist die Ermittlung der Hemmung des Phorboles ter-vermittel ten Superoxidbursts in differenzierten HL-60 Zellen. Die Inhibierung der Tetradecanoylphorbolacetat (TPA) -induzierten S u e r ox i d - Radi ka 1 b i 1 düng in menschlichen HL-60 promyelocytischen Leukämiezellen, die zu Granulocyten differenziert waren, wurde durch photometrische Bestimmung der Cytochrom c-Reduktion bestimmt (Takeuchi et al . , Cancer Res . (1994), 54(22), S. 5837-5840, Pick und Mizel, J. Immuno1. Meth. (1981), 46(2), S. 211-226). Dazu wurden HL-60 Zellen bei einer Dichte von 2 x 105 Zellen/ml mit 1,3% DMSO in RPMI 1640 Medium enthaltend 100 Einheiten/ml Penicillin G-Na und 100 Einheiten/ml Streptomycinsulfat ergänzt mit 10% fötalem Kälberserum bei 37°C in einer 5% C02 Atmosphäre für vier Tage behandelt, um die terminale Differenzierung zu Granulocyten zu induzieren. Die Zellen wurden durch Zentrifugation geerntet, zweimal mit "Hanks balanced salt solution" enthaltend 30 mM HEPES, pH 7,8 gewaschen und auf eine Dichte von 2 x 106 / ml eingestellt. 2 x 105 Zellen/Loch (100 μl) werden mit den Testverbindungen (25 μl, in 10% DMSO) für 5 Minuten vor der Zugabe von 75 μl Cytochrom c-Lösung in HHBSS (5 mg/ml, 1,25 mg/ml Endkonzentration) präinkubiert . 25 μl Superoxid- Dismutase (600 U/ml in HHBS, 12 U/Loch Endkonzentration) wurden als Positivkontrolle verwendet, alle anderen Löcher erhielten 25 μl HHBSS. Die Superoxidanion-Radikal-Bildung wurde durch Zugabe von 25 μl TPA (0,55 mg/ml in HHBSS, 55 ng/ml Endkonzentration) gestartet. Die Platten wurden leicht geschüttelt. Nach einer Inkubationszeit von 30 Minuten bei 37°C wurde die Reaktion durch Kaltstellen der Platten auf Eis für 15 Minuten gestoppt. Danach wurden die Platten zentrifugiert und die Cytochrom c Reduktion im Überstand wurde bei 550 nm unter Verwendung eines Mikroplattenlesegerätes (Spectramax 340, Molecular Devices) bestimmt. Das Zellpellet wurde zweimal mit PBS gewaschen und die Zellwachstumsfähigkeit wurde fluorometrisch durch enzymatische Hydrolyse des fluorogenen Esterase-Substrats Calcein AM (250 nM in PBS, 100 μl/Loch) bei 37°C in einem Cytofluor 4000 Mikroplattenfluoreszenzlesegeräts (PE Applied Biosystems, Anregung 485 nm, Emission 620 nm) bestimmt. Unter Verwendung dieser Methode konnten unspezifische Effekte von reduzierenden Testverbindungen vermieden werden. Die Reaktion war linear für mindestens 30 Minuten. IC50 - Werte (halbmaximale inhibi torische Konzentration von TPA-induzierter Superoxid-Entstehung) wurden generiert. Hier ist eine Inhibierung der Entstehung von Superoxid-Radikalen bei kleinen Konzentrationen der Testverbindungen erwünscht. Die Ergebnisse der Tests sind in Tabelle 4 gezeigt.
Desweiteren wurden die Verbindungen der Tabelle 3 auf die TPA- induzierte ODC (Ornit in-Decarboxylase) -Aktivität in kultivierten Maus 308-Zellen untersucht. Die Kultivierung der Maus 308-Zellen, die Behandlung der Zellen mit den in seriellen Verdünnungen in DMSO (0,5% DMSO-Endkonzentration) zugefügten Testverbindungen und die Bestimmung der ODC- Aktivität wurde durchgeführt wie in Gerhäuser et al . , Nat . Med. (1995), 1(3), S. 260-266 beschrieben. Der Proteingehalt der Zellysate unter Verwendung von Rinderserumalbumin as Standard wurde gemäß Bradford (Analyt. Biochem. (1976), 72(1- 2), S. 248-254) gemessen und verwendet, um die ODC-spezifische Aktivität (pmol 14C02/mg Protein/Std. ) zu berechnen. IC50 - Werte (halbmaximale inhibitorische Konzentration von TPA- induzierter ODC-Aktivität in μg/ml) wurden berechnet. Hier ist eine Inhibierung der Induktion von ODC bei kleinen Konzentrationen der Testverbindungen erwünscht. Die Ergebnisse der Tests sind in Tabelle 4 gezeigt.
Die Verbindungen der Tabelle 3 wurden auch auf eine inhibitorische Wirkung auf die Cyclooxygenase (COX) -Aktivität getestet (Jang et al . , Science (1997), 275, S. 218-220; Van der Ouderaa et al . , Meth. Enzymol . (1982), 86, S. 60-68). Die COX-Aktivität wurde bei 37°C unter Aufzeichnen des Sauerstoff- Verbrauchs während der Umwandlung von Arachidonsäure in Prostaglandine in einer 1,0 ml Inkubationszelle einer Sauerstoff-Elektroden-Einheit (Hansatec DW, basierend auf einer 02 - Elektrode vom Clark-Typ) gemessen. Das R e a k t i o n s g e m i s c h e n t h a l t e n d 0 , 1 M Natrium/Kaliumphosphatpuffer, pH 7,4, 1 mM Hydrochinon, 0,01 mM Hemin und ungefähr 0,2 U COX-1 in 100 μl Mikrosomen- Fraktion erhalten aus Hammelsamenblasen als Ausgangsquelle für COX-1 (spezifische Aktivität 0,2 - 1 U/mg Protein) wurde mit 10 μl DMSO (Negativkontrolle) oder Testsubstanzlösung (10 mM in DMSO) für 90 Sek. inkubiert. Die Reaktion wurde durch Zugabe von 2 μl 50 mM Arachidonsäure in Ethanol (100 μM Endkonzentration) gestartet und der Sauerstoffverbrauch wurde für 20 Sek. aufgezeichnet. Für die Berechnung wurde die Rate des 02 - Verbrauchs mit der DMSO-Kontrolle (100 % Aktivität) verglichen. Die Ergebnisse der Tests sind in Tabelle 4 gezeigt .
Beispiel 5:
Nachweis der chemopräventiven Aktivität erfindungsgemäßer Verbindungen im Maus-Brustdrüsenmodell (MMOC)
Mit diesem Modell können Testverbindungen daraufhin getestet werden, ob sie die Entstehung Carcinogen-induzierter präneoplastischer Läsionen in Maus-Brustdrüsen-Organkultur hemmen. Dies ist ein wichtiger Hinweis auf eine chemopräventive Wirkung im Tiermodell.
Ein Nachteil von in-vitro Untersuchungen ist, daß die glatte Übertragbarkeit auf die in-vivo Situation oft nicht gegeben ist. Es wurde jedoch jetzt ein Organkulturmodell entwickelt, das als Klammer zwischen Kurzzeit-in vitro-Versuchen und Langzeit-in vivo-Carcinogenesemodellen dienen kann. Dies ist das Maus-Brustdrüsenmodell (mouse mammary glands, MMOC; Mehta et al . , Carcinogenesis 1995, 16(2), S. 399-404). Dieses System kombiniert die Vorteile eines in-vitro-Modells (Einfachheit, Handhabbarkeit, Dauer) mit den komplexen zellulären, metabolischen und Entwicklungsbedingungen in einem Organismus.
3 bis 4 Wochen alte jungfräuliche weibliche BALB/c Mäuse wurden durch tägliche subkutane Injektionen mit 1 μg Östradiol 17ß und 1 mg Progesteron für 9 Tage vorbereitet. Am Tag 10 werden die Tiere durch zervikale Dislokation getötet und das thorikale Brustdrüsenpaar entnommen, das auf ein Seidengewebe gelegt wird. Diese Gewebepräparationen wurden 10 Tage in serumfreiem Waymouth MB752 / I-Medium (5 Drüsen/5 ml Medium/Platte) inkubiert. Das Medium ist ergänzt mit 2 mM Glutamin, Antibiotika (Penicillin und Streptomycin, jeweils 100 Einheiten/ml Lösung) und Wachstumsfördernden Hormonen, 5 μg Insulin, 5 μg Prolaktin, 1 μg Aldosteron und 1 μg Hydrocortison pro ml Medium. Das Carcinogen DMBA (2 μg/ml) wird dem Medium für 24 Stunden zwischen den Tagen 3 und 4 zugesetzt. Dieses Zeitinterval stellt den Zeitraum der DNA- Synthese dar. Kontrollplatten wurden mit DMSO (DMBA- Lösungsmittel) behandelt. Nach 10 Tagen Inkubation wurden die Drüsen für weitere 14 in einem Medium gehalten, das nur Insulin (5 μg/ml) enthielt. Während der gesamten Kulturdauer wurden die Drüsen bei 37°C in einer 5% C02 Atmosphäre gehalten.
Die erfindungsgemäße Verbindungen EC-252 (Testagenz) wurde in verschiedenen Konzentration zu dem Medium für die Tage 0-10 gegeben (10-15 Drüsen pro Konzentration). Carcinogen- behandelte Drüsen ohne Testagenz dienten als Positivkontrolle. Am Ende des Experiments nach 24 Tagen wurden die Drüsen in 10% Formalin fixiert, mit Alauncarmin gefärbt und morphokologisch das Vorhandensein von Drüsenläsionen untersucht. Das Auftreten (Inzidenz) von gebildeten Läsionen (Prozentsatz der Drüsen mit Läsionen bezüglich der Gesamtanzahl der Drüsen pro Gruppe) in der mit EC-252 behandelten Gruppe wird mit den Läsionen in der nur mit DMBA-behandelten Gruppe (unbehandelte Gruppe = DMBA- Kontrolle) verglichen und daraus der Prozentsatz der Inhibierung berechnet. Das Ergebnis ist in Fig. 2 gezeigt.
Desweiteren wurden ausgewählte Verbindungen der Tabelle 3 analog wie vorstehend beschrieben im Maus-Brustdrüsenmodell getestet. Die Auswertung ergab, daß einige der getesteten Verbindungen bessere Eigenschaften haben als andere. Verbindungen mit Werten, die diese als gute Chemopräventiva qualifizieren, sind in Tabelle 4 zusammengestellt.
Weitere Ergebnisse der getesteten Verbindungen sind Tabelle 5 zu entnehmen.
Beispiel 6:
Nachweis der östrogenen bzw. antiöstrogenen Effekte der erfindungsgemäßen Verbindungen in der Ishikawa humanen Endometriumkrebs-Zelllinie
Die Messung der Förderung von alkalischer Phosphatase (AP)- Aktivität in der Ishikawa humanen Endometrium-Adenocarcinoma- Zellinie (Department of Biochemistry, University of Montreal) erlaubt die Abschätzung der instrinsischen östrogenen Aktivität der Testverbindungen gemäß Tabelle 3. Anti-östrogene Effekte wurden durch Co-Behandlung mit ß-Östradiol und Inhibitoren bestimmt. Die Zellkulturbedingungen waren gemäß Littlefield et al . , Endocrinology (1990), 127(6), S. 2757- 2762.
Die Ishikawa-Zellen wurden routinemäßig in α-MEM Medium enthaltend 100 Einheiten/ml Penicillin G-Na, 100 Einheiten/ml Streptomycinsulfat und 250 ng/ml Amphotericin B ergänzt mit 10% Aktivkohle-gereinigtem fötalem Kälberserum bei 37°C in einer 5% C02 - Atmosphäre gehalten. Einen Tag vor Start des Experiments wurde das Medium in ein Östrogen- und Phenolrotfreies D-MEM/F-12-Gemisch (1:1) enthaltend L-Glutamat und Pyridoxin-HCl (Fa. Gibco BRL) ergänzt mit 100 Einheiten/ml Penicillin G-Na, 100 Einheiten/ml Streptomycinsulfat und 250 ng/ml Amphotericin B und 5% Aktivkohle-gereinigtem fötalem Kälberserum gewechselt. Für die Bestimmung der östrogenen/anti-östrogenen Aktivität wurden die Zellen mit 0,25% Phenolrot-freiem Trypsin/EDTA trypsiniert und durch eine Injektionsnadel Nr. 18 gepreßt, um eine Einzelzellsuspension zu erhalten. Diese wurde in einer 96-Loch Mikroplatte in einer Dichte von 2 x 104/Loch in 200 μl EFM plattiert. Nach einer Vorinkubationsphase von 24 Stunden wurde das Medium durch 170 μl frisches EFM ersetzt. Die Testverbindungen gemäß Tabelle 3 (10 μl in 10% DMSO, Endkonzentrationsbereich 0,8-50 μM) , 10 μl 10% DMSO (als Negativkontrolle, Endkonzentration 0,5%) oder 10 μl Tamoxifen (in 10% DMSO, Endkonzentration 0,5 μM, als positives Antiöstrogen) und entweder 20 μl EFM (für östrogene Aktivität) oder 20 μl 50 nM ß-Östradiol in EFM (für anti- östrogene Aktivität) wurden auf ein Endvolumen von 200 μl zu den Platten hinzugefügt. Die Platten wurden bei 37°C in einer feuchten 5% C02-Atmosphäre für 72 Stunden inkubiert. Um die Wirkungen der Testverbindungen auf die Zeilproliferation zu bestimmen, wurde die Zellwachstumsfähigkeit durch Calcein AM Hydrolyse fluorometrisch bestimmt. Dazu wurden die Platten dreimal mit PBS (vorgewärmt auf 37°C) gewaschen und 100 μl 250 nM Calcein AM in vorgewärmtem PBS wurde zu jedem Loch hinzugefügt. Die Fluoreszenz wurde für 10 Minuten bei 37°C in einem Cytofluor 4000 Mikroplatten-Fluoreszenzlesegerät (PE Applied Biosystems, Anregung 485 nm, Emission 620 nm) gemessen. Die Calceinlösung wurde sofort entfernt und 50 μl/Loch 0,5% Triton X in PBS wurde hinzugefügt. Die Platten wurden über Nacht bei -80°C aufbewahrt. Um die AP-Aktivität zu bestimmen, wurden die Platten bei 37°C innerhalb von 2 Minuten aufgetaut und 100 μl/Loch 15 μM 4-Methyl-Umbelliferylphosphat (MUP) in 1 M Diethanolaminpuffer , pH 9,8 enthaltend 0,24 mM MgCl2 wurden hinzugefügt . Die Platten wurden 5 Minuten auf einem M i k r o p 1 a t t e n s c hü t t 1 e r geschüttelt. Die Dephosphorylierung von MUP zu dem fluorescenten 4-Methyl-7- Zb
hydroxy-coumarin ( 4-Methylumbellif eron) wurden für 45 Minuten bei 37°C (Anregung 360 nm, Emission 460 nm) beobachtet. Die AP- Aktivität und das Zellwachstum wurden aus den Raten der Produktbildung (in Fluoreszenzeinheiten/min) bestimmt. Das Verhältnis beider Raten wurde als ein Maß der relativen spezifischen AP-Aktivität berechnet. Die relative Vergrößerung der AP-Aktivität, die indikativ für eine östrogene Aktivität is t , wurde durch Vergleich mit einer DMSO- Lösungsmittelkontrolle berechnet. Für die Kalkulation der anti-östrogenen Wirkung wurden die Ergebnisse als Prozentsätze im Vergleich zu einer mit DMSO und ß-Östradiol behandelten Kon t r o 1 lpr obe ausgedrückt. Tamoxifen wurden als Positivkontrollsubstanz verwendet und produzierte eine Inhibition von > 50% bei einer Testkonzentration von 0,5 μM.
Tes t Verbindungen mit Werten, die diese als gute Chemoprävent i va qualifizieren, sind in Tabelle 4 zusammengestellt .
Tabelle 3
Figure imgf000028_0001
27a
Tabelle 3 (Forts.)
Figure imgf000029_0001
Figure imgf000030_0001
29
Figure imgf000031_0001
Figure imgf000032_0001
Figure imgf000033_0001
32
Figure imgf000034_0001
33
Figure imgf000035_0001
34
Figure imgf000036_0001
Figure imgf000037_0001
36
Figure imgf000038_0001
Figure imgf000039_0001
Figure imgf000040_0001
39
Figure imgf000041_0001
40
Tabelle 4
Figure imgf000042_0001
40a
Tabelle 4 (Forts, quer)
Figure imgf000043_0001
41
Tabelle 4 (Forts, quer)
Figure imgf000044_0001
Tabelle 4 (Forts . quer)
Figure imgf000045_0001
42 Zur Tabelle 4 (Alle Angaben in μM bzw. %):
FREMDSTOFF-METABOLISMUS
Gewünscht:
Induktion von QR bei kleinen Konzentrationen, Hemmung von CyplA bei kleinen Konzentrationen, keine Induktion von CyplA.
QR steht für Induktion der NAD(P)H Chinon Reduktase in Hepelclc7 Maus Hepatomzellen
CD = Konzentration die eine Verdopplung der spezifischen Aktivität der QR bewirkt
IC5o = halbmaximale Hemmkonzentration der Zellviabihtat
Cl = chemopräventiver Index (IC50/CD) n I no Induction Keine Induktion n d not determined nicht bestimmt st Hinweis auf Cytostatische Wirkung
CyplA = Hemmung der CyplA Enzvmaktivitat unter Verwendung von 3-Cyano-7-ethoxycoumaπn Als Enzymquelle wurden ß-Naphthoflavon induzierte H4IIE Ratten Hepatomzellen verwendet IC5o= halbmaximale Hemmkonzentration
CyplA Ind. = Induktion der CyplA Enzvmaktivitat in Hepelclc7 Maus Hepatomzellen
Dieser Effekt ist negativ zu bewerten, kann zu einer Aktivierung von Karzinogenen fuhren' Wird aus mechanistischen Gründen mitbestimmt
Fünffache Induktion = Konzentration die eine Verfunffachung der spezifischen Aktivität von CyplA bewirkt
IC50= halbmaximale Hemmkonzentration der Zellviabihtat
ENTZÜNDUNGSHEMMENDE MECHANISMEN
Gewünscht:
Hemmung der Induktion der iNOS bei kleinen Konzentrationen,
Hemmung von Cox-1 bei kleinen Konzentrationen
N02 Hemmung der LPS-induzierten Expression der iNOS in Maus Makrophagen
IC50 Hern = halbmaximale Hemmung der Nitrit (NO) Produktion
IC50 Tox = Halbmaximale Hemmung des Zellwachstums
CI s o n d not determined nicht bestimmt
Cox-1 Hemmung der Cyclooxygenase 1 Aktivität
% Hemm Prozentuale Hemmung bei einer Testkonzentration von lOOμM
IC50 = halbmaximale Hemmkonzentration
ANTI-OXIDATIVE MECHANISMEN UND RADIKALFÄNGEREIGENSCHAFTEN
Gewünscht:
Hemmung bei kleinen Konzentrationen
DPPH: Reaktion mit Dιphen>lpιkrylradιkalen halbmaximale Hemmkonzentration 43
NXO: Abfangen von Superoxidradikal Anionen im Xanthin/Xanthinoxidase System IC50 = halbmaximale Hemmkonzentration
Antiox: Hemmung des Phorbolester-vermittelten Superoxidbursts in differenzierten HL-60 Zellen
Nachweis über Reduktion von Cytochrom c
% Hemm.: Prozentuale Hemmung bei einer Testkonzentration von lOOμM
IC5o = halbmaximale Hemmkonzentration
ANTI-TUMOR PROMOVIERENDE UND ANTI-PROLIFERATIΛΕ EIGENSCHAFTEN:
Gewünscht:
Hemmung der Induktion von ODC bei kleinen Konzentrationen,
Hemmung der DNA Polymerase α bei kleinen Konzentrationen, anti-östrogene Eigenschaften bei kleinen Konzentrationen, keine östrogenen Eigenschaften,
Hemmung der Entstehung von Läsionen im MMOC bei kleinen Konzentrationen
ODC: Hemmung der Phorbolester-vermittelten Induktion der Ornithin Decarboxylase in Maus
Keratinozyten (Zellinie Nr 308)
IC5o= halbmaximale Hemmkonzentration α-Poly: Hemmung der humanen DNA Polymerase α
% Hemm.: Prozentuale Hemmung bei einer Testkonzentration von 500 bzw l OOμM
IC50 = halbmaximale Hemmkonzentration
Ishikawa: östrogene (-E) bzw. antiostrogene (+E) Effekte in der Ishikawa humanen
Endometriumkrebs Zellinie
(+E) IC50 = halbmaximale Hemmkonzentration für ant-i östrogene Effekte
(-E) C5 = Konzentration die eine Verfunffachung der spezifischen Aktivität der alkalischen
Phosphatase bewirkt (Maß für östrogene Aktivität) tox IC5o: Halbmaximale Hemmung des Zellwachstums n.I. no Induction: keine Induktion
Nur für eine Auswahl bestimmt (siehe Tabelle Auswahl)
MMOC: Maus mammary organ culture
Hemmung der Entstehung Carcinogen-induzierter pra-neoplastischer Lasionen in Maus Brustdrusen
Organkultur
Wichtiger Hinweis auf chemopräventive Wirkung im Tiermodell
Konz.: Testkonzentration in μM
% Inh.: Prozentuale Hemmung im Vergleich zur DMBA-Kontrolle
44 TABELLE 5
Inhibierung von DMBA-induzierten präneoplastischen Läsionen in Maus-Brustdrüsen-
Organkultur
Figure imgf000048_0001
n d nicht bestimmt
Resveratrol diente als interne Positivkontrolle in allen Experimenten Bei einer Konzentration von 5μM inhibierte Resveratrol 52,4 + 7,4 % der DMBA-indzierten präneoplastischen Lasionen

Claims

45
PATENTANSPRÜCHE
unularsäurederivat gekennzeichnet durch Formel (I) (II) , (III) oder (IV) :
Figure imgf000049_0001
Figure imgf000049_0002
worin X einen mono- oder polycyclischen (Hetero) Arylrest bedeutet, -
Rl und/oder R2 jeweils unabhängig voneinander einen geraden oder verzweigten Alkylrest mit 1 bis 30 Kohlenstoffatomen, einen geraden oder verzweigten Alkenylrest mit 2 bis 30 Kohlenstoffatomen, einen mono- oder polyzyklischen Alkylrest mit 3 bis 30 Kohlenstoffatomen, einen mono- oder polyzyklischen Alkenylrest mit 4 bis 30 Kohlenstoffatomen, oder einen mono- oder polyzyklischen aromatischen Rest mit 6 bis 30 Kohlenstof atomen bedeuten, wobei die Reste X, Rl , R2 gegebenenfalls durch einen oder mehrere Substituenten substituiert sein können, wobei diese Substituenten und/oder R3 ausgewählt sind aus
Halogen: Fluor, Chlor, Brom, Iod,
Amino, Alkylamino, Dimethylamino oder Ethylamino,
Dialkylamino, wie Dimethylamino, Diethylamino,
Methylethylamino, wobei jeder dieser
Dialkylaminoreste gegebenenf lls in Oxidform vorliegt,
Aminoalkyl, wie Aminomethyl oder Aminoethyl,
Dialkylaminoalkyl , wie Dimethylaminomethyl oder - ethyl,
Dialkylaminoalkyloxy, wie Dimethylaminoethyloxy,
Hydroxyl , freie, veresterte Carboxylgruppe, wie
Alkoxycarbonyl, beispielsweise Methoxycarbonyl oder
Ethoxycarbonyl , oder in ein Salz, beispielsweise durch ein Natrium- oder Kaliumatom überführt,
Alkyl mit 1 bis 8 Kohlenstoffatomen, wie Methyl,
Ethyl, Propyl, Isopropyl, Butyl, Isobutyl, tert.-
Butyl, gegebenenfalls durch ein oder mehrere
Halogenato (e) substituiert, beispielsweise durch
Fluor, wie Trifluormethyl ,
Oxo, Cyano, Nitro, Formyl ,
Acyl, wie Acetyl, Propionyl, Butyryl , Benzoyl,
Acyloxy, wie Acetoxy oder ein Rest der Formel:
-0-C0- (CH2)nC02H, worin n = 1 bis 5, Alkoxy, wie Methoxy, Ethoxy, Propyloxy, Isopropyloxy, Butyloxy,
Alkyl hio, wie Methylthio, Ethylthio, Propylthio, Isopropylthio , Butylthio, Carbamoyl ,
Alkenyl , wie Vinyl, Propenyl, Alkinyl, wie Ethinyl, Propinyl und Aryl, wie Phenyl , Furyl , Thienyl. 47
Lunularsäurederivat nach Anspruch 1 gekennzeichnet durch Formel (V) oder (VI) :
Cl, AcO
Cl, AcÖ
Figure imgf000051_0001
Lunularsäurederivat nach Anspruch 1 oder 2 mit der Formel (VII), (VIII), (IX), (X) oder (XI):
Figure imgf000051_0002
48
4) Arzneimittel gekennzeichnet durch einen Gehalt an - mindestens einer Verbindung der allgemeinen Formel
(I), (II), (III), (IV), (V), (VI) , (VII) , (VIII) , (IX) , (X) oder (XI) .
5) Arzneimittel nach einem der Ansprüche 1-4, umfassend zusätzlich Vitamine, Mineralstoffe, Antioxidantien, Spurenelemente, Entzundungshemmer , Hormonmodulatoren, Angiogenesehemmer, Modulatoren der Signalubertragung, Proliferationshemmer , Ornithindecarboxylasehemmer , Apoptose-Induktoren, Ballaststoffe und/oder Induktoren von Zellproliferationsprozessen.
6) Arzneimittel nach einem der Ansprüche 1-5 bereitgestellt in einer Dosis-Einheits-Form zur Verabreichung an einen Säuger.
7) Arzneimittel nach einem der Ansprüche 1-6 umfassend weiter einen pharmazeutisch vertraglichen inerten Trager oder ein Verdünnungsmittel.
8) Verwendung eines Arzneimittels gemäß einem der Ansprüche 1-8 zur Prävention einer Krebserkrankung.
9) Verfahren zur Herstellung eines Arzneimittels nach einem der Anspr che 1-7, dadurch gekennzeichnet, daß die Verbindung gemäß Formel (I) , (II) , (III) oder (IV) mit einem pharmazeutisch vertraglichen Trager oder Verdünnungsmittel vermischt wird.
PCT/DE2001/001264 2000-03-30 2001-03-30 Synthetische derivate von lunularsäure, arzneimittel enthaltend diese verbindungen, verfahren zur herstellung der lunularsäurederivate sowie deren verwendung WO2001074753A1 (de)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AU2001258200A AU2001258200A1 (en) 2000-03-30 2001-03-30 Synthetic derivatives of lunularic acid, medicaments containing said compounds, method for producing the lunularic acid derivatives and the use thereof

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE10015525A DE10015525A1 (de) 2000-03-30 2000-03-30 Synthetische Derivate von Lunularsäure, Arzneimittel enthaltend diese Verbindung, Verfahren zur Herstellung der Lunularsäurederivate sowie deren Verwendung
DE10015525.1 2000-03-30

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2001074753A1 true WO2001074753A1 (de) 2001-10-11

Family

ID=7636788

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/DE2001/001264 WO2001074753A1 (de) 2000-03-30 2001-03-30 Synthetische derivate von lunularsäure, arzneimittel enthaltend diese verbindungen, verfahren zur herstellung der lunularsäurederivate sowie deren verwendung

Country Status (3)

Country Link
AU (1) AU2001258200A1 (de)
DE (1) DE10015525A1 (de)
WO (1) WO2001074753A1 (de)

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002013809A2 (en) * 2000-08-16 2002-02-21 Insmed Incorporated Compositions containing hypotriglyceridemically active stilbenoids
WO2002013806A2 (en) * 2000-08-16 2002-02-21 Insmed Incorporated Compositions containing hypotriglyceridemically active stilbenoids
WO2003079986A2 (en) * 2002-03-18 2003-10-02 Bristol-Myers Squibb Company Uracil derivatives as inhibitors of tnf-alpha converting enzyme (tace) and matrix metalloproteinases
JP2009533417A (ja) * 2006-04-14 2009-09-17 ミュタビリス エス アー 新規ヒドロキシフェニル誘導体およびその生物学的適用
EP2801347A1 (de) * 2013-05-10 2014-11-12 Rahn Ag Carboxylierte Stilbene zur Aktivierung von AMPK und Sirtuinen
US9272985B2 (en) 2009-09-01 2016-03-01 Fab Pharma S.A.S. Antibacterial hydroxyphenyl compound
WO2018112545A1 (en) * 2016-12-23 2018-06-28 The University Of Queensland Inhibitors of sox18 protein activity for treating angiogenesis- and/or lymphangiogenesis-related diseases

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005069998A2 (en) 2004-01-20 2005-08-04 Brigham Young University Technology Transfer Office Novel sirtuin activating compounds and methods for making the same

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0539326A2 (de) * 1991-10-16 1993-04-28 Sandoz Ltd. Derivate von Bis(Phenyl)Äthan
US5371062A (en) * 1992-04-07 1994-12-06 Bayer Aktiengesellschaft Substituted azines

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DD126866A1 (de) * 1976-08-13 1977-08-17

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0539326A2 (de) * 1991-10-16 1993-04-28 Sandoz Ltd. Derivate von Bis(Phenyl)Äthan
US5371062A (en) * 1992-04-07 1994-12-06 Bayer Aktiengesellschaft Substituted azines

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BIOSCI.,BIOTECHNOL.,BIOCHEM., vol. 60, no. 5, 1996, pages 862 - 865 *
CHEMICAL ABSTRACTS, vol. 125, no. 5, 29 July 1996, Columbus, Ohio, US; abstract no. 51414v, NAKAYAMA TAKATO ET AL.: "Inhibiting effects of lunularic acid analogs on the growth of liverwort,watercress, and timothy grass" page 403; column r; XP002174714 *
NAOKI TAKEUCHI ET AL.: "Annelation Reactions of Enaminones with Ethyl Acetoacetate.Studies on the beta-Carbonyl Compounds Connected with the beta-Polyketides.XI.", CHEMICAL AND PHARMACEUTICAL BULLETIN., vol. 39, no. 7, July 1991 (1991-07-01), PHARMACEUTICAL SOCIETY OF JAPAN. TOKYO., JP, pages 1655 - 1658, XP002174712, ISSN: 0009-2363 *
NAOKI TAKEUCHI ET AL.: "Biogenetic-type Synthesis of 3,4-Dihydro-8-hydroxy-3-phenylisocoumarin (Studies on the beta-Carbonyl Compounds connected with the beta-Polyketides. V )", CHEMICAL AND PHARMACEUTICAL BULLETIN., vol. 28, no. 10, October 1980 (1980-10-01), PHARMACEUTICAL SOCIETY OF JAPAN. TOKYO., JP, pages 3007 - 3012, XP002174713, ISSN: 0009-2363 *
UGO AZZENA ET AL.: "Regioselectivity in the Reductive Cleavage of Pyrogallol Derivatives: Reductive Electrophilic Substitution of Acetals of 2,3-Dimethoxyphenol", JOURNAL OF THE CHEMICAL SOCIETY, PERKIN TRANSACTIONS 1., 1995, CHEMICAL SOCIETY. LETCHWORTH., GB, pages 261 - 266, XP002174711, ISSN: 1472-7781 *

Cited By (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002013806A2 (en) * 2000-08-16 2002-02-21 Insmed Incorporated Compositions containing hypotriglyceridemically active stilbenoids
WO2002013809A3 (en) * 2000-08-16 2002-10-10 Insmed Inc Compositions containing hypotriglyceridemically active stilbenoids
WO2002013806A3 (en) * 2000-08-16 2002-10-31 Insmed Inc Compositions containing hypotriglyceridemically active stilbenoids
US6541522B2 (en) 2000-08-16 2003-04-01 Insmed Incorporated Methods of using compositions containing hypotriglyceridemically active stilbenoids
WO2002013809A2 (en) * 2000-08-16 2002-02-21 Insmed Incorporated Compositions containing hypotriglyceridemically active stilbenoids
WO2003079986A2 (en) * 2002-03-18 2003-10-02 Bristol-Myers Squibb Company Uracil derivatives as inhibitors of tnf-alpha converting enzyme (tace) and matrix metalloproteinases
WO2003079986A3 (en) * 2002-03-18 2004-05-13 Bristol Myers Squibb Co Uracil derivatives as inhibitors of tnf-alpha converting enzyme (tace) and matrix metalloproteinases
US7101883B2 (en) 2002-03-18 2006-09-05 Bristol-Myers Squibb Company Uracil derivatives as inhibitors of TNF-α converting enzyme (TACE) and matrix metalloproteinases
US9309179B2 (en) 2006-04-14 2016-04-12 Fab Pharma Hydroxyphenyl derivatives and biological applications thereof
JP2009533417A (ja) * 2006-04-14 2009-09-17 ミュタビリス エス アー 新規ヒドロキシフェニル誘導体およびその生物学的適用
US8722746B2 (en) 2006-04-14 2014-05-13 Fab Pharma S.A.S. Hydroxyphenyl derivatives and biological applications thereof
US9272985B2 (en) 2009-09-01 2016-03-01 Fab Pharma S.A.S. Antibacterial hydroxyphenyl compound
EP2801347A1 (de) * 2013-05-10 2014-11-12 Rahn Ag Carboxylierte Stilbene zur Aktivierung von AMPK und Sirtuinen
WO2018112545A1 (en) * 2016-12-23 2018-06-28 The University Of Queensland Inhibitors of sox18 protein activity for treating angiogenesis- and/or lymphangiogenesis-related diseases
KR20190105018A (ko) * 2016-12-23 2019-09-11 더 유니버서티 어브 퀸슬랜드 혈관신생- 및/또는 림프관신생-관련 질환을 치료하기 위한 sox18 단백질 활성의 억제제
CN110536685A (zh) * 2016-12-23 2019-12-03 昆士兰大学 Sox18蛋白活性的抑制剂用于治疗血管生成相关疾病和/或淋巴管生成相关疾病
JP2020506884A (ja) * 2016-12-23 2020-03-05 ザ ユニバーシティー オブ クイーンズランド 血管新生および／またはリンパ脈管新生関連の疾病の処置のためのｓｏｘ１８タンパク質活性の阻害剤
EP3558293A4 (de) * 2016-12-23 2020-10-28 The University of Queensland Inhibitor der sox-18-aktivität zur behandlung von angiogenese- und/oder lymphangiogenesebezogenen erkrankungen
US11434190B2 (en) 2016-12-23 2022-09-06 The University Of Queensland Inhibitors of SOX18 protein activity for treating angiogenesis-and/or lymphangiogenesis-related diseases
AU2017383102B2 (en) * 2016-12-23 2023-05-11 The University Of Queensland Inhibitors of SOX18 protein activity for treating angiogenesis- and/or lymphangiogenesis-related diseases
KR102572077B1 (ko) * 2016-12-23 2023-08-29 더 유니버서티 어브 퀸슬랜드 혈관신생- 및/또는 림프관신생-관련 질환을 치료하기 위한 sox18 단백질 활성의 억제제

Also Published As

Publication number Publication date
AU2001258200A1 (en) 2001-10-15
DE10015525A1 (de) 2001-10-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2018202407B2 (en) Enhancing autophagy or increasing longevity by administration of urolithins or precursors thereof
DE69927805T2 (de) Neue fettanaloge zur behandlung von sekundärer restenose
DE60314633T2 (de) Substituierte 1,3-diphenylprop-2-en-1-on derivate, deren herstellung und anwendungen
AU667864B2 (en) Pharmaceutical compositions
DE60032795T2 (de) Nordihydroguaiaretinsäurederivate zur behandlung von tumoren
EP0708640B1 (de) Pharmazeutische zubereitungen mit einem wirkstoff, der modifizierte amidingruppen enthält
KR101932668B1 (ko) 쉬나무 추출물을 유효성분으로 하는 창상 치유용 약학 조성물
DE2711493A1 (de) Substanzen zur behandlung von arthritis
DE102008015432A1 (de) Verwendung von Pirinixinsäure-Derivaten zur Hemmung der Prostaglandin E2 Synthese
JP2004506657A (ja) 天然および合成ｈｃａのバイオアベイラブルな組成物
DE69723688T2 (de) Verbindungen mit zytoprotektiver wirkung
US4861783A (en) 4-quinoline carboxylic acid derivatives useful for treating skin and muco-epithelial diseases
Tatipamula et al. Anti-inflammatory properties of Dirinaria consimilis extracts in albino rats
WO2001074753A1 (de) Synthetische derivate von lunularsäure, arzneimittel enthaltend diese verbindungen, verfahren zur herstellung der lunularsäurederivate sowie deren verwendung
EP1154766A2 (de) Verwendung von r-arylpropionsäuren zur herstellung von arzneimitteln, zur behandlung von erkrankungen bei mensch und tier, welche durch die hemmung der aktivierung von nf-kappa b therapeutisch beeinflusst werden können
DE69630073T2 (de) (-)Hydroxycitrat enthaltende Verbindungen mit neuen therapeutischen Wirkungen
EP0501206A2 (de) Phenonverbindungen, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese enthaltende pharmazeutische Zubereitungen
KR20190018108A (ko) 티몰을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 또는 아토피성 피부염의 예방 또는 치료용 조성물
CN108904481B (zh) 邻羟基查尔酮类似物在制备抗氧化药物中的应用
CA2487165C (en) Cinnamic acid dimers, their preparation and the use thereof for treating neurodegenerative disease
DE2318784A1 (de) N-(2,4-dihydroxybenzoyl)-4-aminosalizylsaeure
ITMI20012573A1 (it) Gli acilsalicilati:una nuova classe di induttori di risposta heat shock
EP0212137B1 (de) Verwendung eines Retinoids zur Herstellung eines zytostatischen Arzneimittels.
DE1795327C3 (de) Verwendung von N-Acetyl-1-Hydroxyprolin
DE2535799B2 (de) N&#39;- [1 -(p-Chlorbenzoyl)-5-methoxy-2-methyl-3indolyl-acetoxy- alkyl] -N-(N-benzoyl- N&#39;,N&#39;-di-npropyl-DL-isoglutaminyloxy- alkyl)-piperazine und diese enthaltene Entzündungen und Gelenksaffektionen hemmende Präparate

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AE AG AL AM AT AU AZ BA BB BG BR BY BZ CA CH CN CR CU CZ DK DM DZ EE ES FI GB GD GE GH GM HR HU ID IL IN IS JP KE KG KP KR KZ LC LK LR LS LT LU LV MA MD MG MK MN MW MX MZ NO NZ PL PT RO RU SD SE SG SI SK SL TJ TM TR TT TZ UA UG US UZ VN YU ZA ZW

AL Designated countries for regional patents

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): GH GM KE LS MW MZ SD SL SZ TZ UG ZW AM AZ BY KG KZ MD RU TJ TM AT BE CH CY DE DK ES FI FR GB GR IE IT LU MC NL PT SE TR BF BJ CF CG CI CM GA GN GW ML MR NE SN TD TG

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
DFPE Request for preliminary examination filed prior to expiration of 19th month from priority date (pct application filed before 20040101)
122 Ep: pct application non-entry in european phase
NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: JP