JP2011168591A - 低分子量多硫酸化ヒアルロン酸誘導体及びこれを含有する医薬 - Google Patents

Abstract

【課題】アレルギー性疾患の予防及び／又は治療に有用な低分子量の多硫酸化ヒアルロン酸誘導体の提供。
【解決手段】下記一般式（ＩＢ）で表される低分子量多硫酸化ヒアルロン酸誘導体又はその製薬学的に許容される塩を有効成分とする花粉症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎及び喘息から選ばれるアレルギー性疾患の予防及び／又は治療剤。

〔式中、ｎは０〜１５の数、Ｒはそれぞれ独立して水素原子又はＳＯ₃Ｈ基、等〕
【選択図】なし

Description

本発明は、アレルギー性疾患の予防及び／又は治療に有用な低分子量多硫酸化ヒアルロン酸誘導体（ＨＡＰＳ）に関する。

β−Ｄ−Ｎ−アセチルグルコサミンとβ−Ｄ−グルクロン酸が交互に結合してできた直鎖状の高分子多糖であるヒアルロン酸は、ムコ多糖類の中でも比較的容易に入手でき、特異な物理化学的性質及び生理的性質を示すことから、それ自体又はその各種誘導体が医薬品や化粧品として使用されている。

例えば、ヒアルロン酸の誘導体である多硫酸化ヒアルロン酸は、カリクレイン−キニン系の阻害活性（特許文献１）及びホスホリパーゼＡ２の阻害活性（特許文献２）があり、アレルギー性疾患の治療薬として使用できること（特許文献３）、接着因子の一つであるセレクチン介在性の炎症に対する強い抗炎症作用を示すこと（特許文献４）等が知られている。

また、粘度平均分子量が１００００以下のような、低分子量のオリゴ多硫酸化ヒアルロン酸が皮膚透過性に優れた化粧料の有効成分として使用できること（特許文献５）、及び４〜２０糖の多硫酸化ヒアルロン酸オリゴ糖が、抗血液凝固活性及び抗ヒアルロニダーゼ活性を有し、抗癌剤となり得る可能性があることが報告されている（非特許文献１）。

特開平１１−１４７９０１号公報 特開平１１−２６９０７７号公報 特開平１１−３３５２８８号公報 特開平８−２７７２２４号公報 特開平１０−１９５１０７号公報

Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ, ｖｏｌ.１１, Ｎｏ.１, ｐｐ.５７-６４, ２００１

しかしながら、上記のような多硫酸化ヒアルロン酸及び多硫酸化ヒアルロン酸オリゴマーには、それ自体が血管透過性亢進能等の刺激作用を有することから臨床応用に不適切なものもあり、薬理活性・安全性等の全てを満足するものは少ないのが実情である。
本発明は、このような問題点のないアレルギー性疾患の予防及び／又は治療に有用な低分子量のヒアルロン酸誘導体を提供することに関する。

本発明者らは、アレルギー性疾患の予防及び／又は治療に有用な化合物を開発すべく鋭意研究を重ねた結果、下記一般式（ＩＡ）及び（ＩＢ）で示される低分子量多硫酸化ヒアルロン酸誘導体が、抗アレルギー作用及び抗炎症作用を持ち、かつ血管透過性亢進能を有さず、医薬品として有用であることを見出した。

すなわち、本発明は、以下の１）〜１５）に係るものである。
１）下記一般式（ＩＡ）：

〔式中、ｎは０〜１５の数を示し、Ｘは次式（ａ）又は（ｂ）：

Ｙは次式（ｃ）、（ｄ）又は（ｅ）：

を示し、Ｒはそれぞれ独立して水素原子又はＳＯ₃Ｈ基を示し（但し、Ｒの総数当たり８０〜１００％をＳＯ₃Ｈ基が占める）、Ｒ¹は−ＯＨ、−ＯＳＯ₃Ｈ又は−ＮＺ₁Ｚ₂（ここで、Ｚ₁及びＺ₂は、独立して水素原子、−ＳＯ₃Ｈ、置換されていてもよい低級アルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基又は置換されていてもよいヘテロアリール基を示すか、或いは−ＮＺ₁Ｚ₂全体でアミノ酸残基もしくはペプチド残基を示す。）を示し、＊は酸素原子との結合部位を示す。〕、
又は、下記一般式（ＩＢ）：

〔式中、ｎは０〜１５の数を示し、Ｗは次式（ｆ）又は（ｇ）：

を示し、Ｒはそれぞれ独立して水素原子又はＳＯ₃Ｈ基を示し（但し、Ｒの総数当たり８０〜１００％をＳＯ₃Ｈ基が占める）、Ｒ¹は−ＯＨ、−ＯＳＯ₃Ｈ又は−ＮＺ₁Ｚ₂（ここで、Ｚ₁及びＺ₂は、独立して水素原子、−ＳＯ₃Ｈ、置換されていてもよい低級アルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基又は置換されていてもよいヘテロアリール基を示すか、或いは−ＮＺ₁Ｚ₂全体でアミノ酸残基もしくはペプチド残基を示す。）を示し、＊は酸素原子との結合部位を示す。〕
で表される低分子量多硫酸化ヒアルロン酸誘導体又はその製薬学的に許容される塩を有効成分とする花粉症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎及び喘息から選ばれるアレルギー性疾患の予防及び／又は治療剤。
２）一般式（ＩＡ）において、Ｙが式（ｄ）又は（ｅ）である、上記１）の予防及び／又は治療剤。
３）Ｘが式（ａ）である、上記２）の予防及び／又は治療剤。
４）ｎが３、４又は５である、上記３）の予防及び／又は治療剤。
５）ｎが４又は５である、上記３）の予防及び／又は治療剤。
６）低分子量多硫酸化ヒアルロン酸誘導体が一般式（ＩＢ）である、上記１）の予防及び／又は治療剤。
７）ｎが３、４又は５である、上記６）の予防及び／又は治療剤。
８）ｎが４又は５である、上記６）の予防及び／又は治療剤。
９）花粉症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎及び喘息から選ばれるアレルギー性疾患の予防及び／又は治療剤の製造のための上記１）〜８）のいずれかの低分子量多硫酸化ヒアルロン酸誘導体又はその製薬学的に許容される塩の使用。
１０）上記１）〜８）のいずれかの低分子量多硫酸化ヒアルロン酸誘導体又はその製薬学的に許容される塩の有効量をヒト又は動物に投与することを特徴とする、花粉症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎及び喘息から選ばれるアレルギー性疾患の予防及び／又は治療方法。
１１）下記一般式（ＩＡ’）：

〔式中、ｎは０〜１５の数を示し、Ｘは次式（ａ）又は（ｂ）：

Ｙ'は次式（ｄ）又は（ｅ）：

を示し、Ｒはそれぞれ独立して水素原子又はＳＯ₃Ｈ基を示し（但し、Ｒの総数当たり８０〜１００％をＳＯ₃Ｈ基が占める）、Ｒ¹は−ＯＨ、−ＯＳＯ₃Ｈ又は−ＮＺ₁Ｚ₂（ここで、Ｚ₁及びＺ₂は、独立して水素原子、−ＳＯ₃Ｈ、置換されていてもよい低級アルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基又は置換されていてもよいヘテロアリール基を示すか、或いは−ＮＺ₁Ｚ₂全体でアミノ酸残基もしくはペプチド残基を示す。）を示し、＊は酸素原子との結合部位を示す。〕、
又は、下記一般式（ＩＢ）：

〔式中、ｎは０〜１５の数を示し、Ｗは次式（ｆ）又は（ｇ）：

を示し、Ｒはそれぞれ独立して水素原子又はＳＯ₃Ｈ基を示し（但し、Ｒの総数当たり８０〜１００％をＳＯ₃Ｈ基が占める）、Ｒ¹は−ＯＨ、−ＯＳＯ₃Ｈ又は−ＮＺ₁Ｚ₂（ここで、Ｚ₁及びＺ₂は、独立して水素原子、−ＳＯ₃Ｈ、置換されていてもよい低級アルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基又は置換されていてもよいヘテロアリール基を示すか、或いは−ＮＺ₁Ｚ₂全体でアミノ酸残基もしくはペプチド残基を示す。）を示し、＊は酸素原子との結合部位を示す。〕
で表される低分子量多硫酸化ヒアルロン酸誘導体又はその製薬学的に許容される塩。
１２）一般式（ＩＡ’）において、Ｘが式（ａ）である、上記１１）の低分子量多硫酸化ヒアルロン酸誘導体又はその製薬学的に許容される塩。
１３）一般式（ＩＢ）である、上記１１）記載の低分子量多硫酸化ヒアルロン酸誘導体又はその製薬学的に許容される塩。
１４）ｎが３、４又は５である、上記１２）又は１３）の低分子量多硫酸化ヒアルロン酸誘導体又はその製薬学的に許容される塩。
１５）上記１１）、１２）、１３）又は１４）の低分子量多硫酸化ヒアルロン酸誘導体又はその製薬学的に許容される塩、及び製薬学的に許容される賦形剤を含有する医薬組成物。

本発明の低分子量多硫酸化ヒアルロン酸誘導体又はその製薬学的に許容される塩は、優れた抗アレルギー作用及び抗炎症作用を有すると共に、血管透過性亢進能を有さないことから、副作用が少なく安全性に優れる、花粉症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎及び喘息等の、アレルギー性疾患の予防及び／又は治療剤として使用できる。また、本発明の低分子量多硫酸化ヒアルロン酸誘導体又はその製薬学的に許容される塩の中でも、特に一般式（ＩＡ）のＹが（ｄ）又は（ｅ）である化合物群及び一般式（ＩＢ）である化合物群は、水溶液中での安定性が高く、製剤化が容易であるという利点を有する。

製造例１で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例２で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例３で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例４で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例５で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例６で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例７で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例８で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例９で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例１０で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例１１で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例１４で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例１５で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例１６で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例１７で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例１８で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例１９で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例２０で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例２１で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例２２で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例２３で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例２４で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例２５で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例２６で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例２７で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例２８で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例２９で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例３０で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例３１で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例３２で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例３３で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例３４で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例３５で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例３６で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例３７で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例３８で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例３９で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例４０で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例４１で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例４２で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例４３で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例４４で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例４５で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例４６で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例４７で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例４８で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例４９で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例５０で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例５１で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例５２で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例５３で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 製造例５４で得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物１の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物２の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物３の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物４の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物５の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物６の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物７の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物８の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物９の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物１０の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物１１の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物１４の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物１５の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物１６の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物１７の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物１８の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物１９の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物２０の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物２１の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物２２の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物２３の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物２４の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物２５の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物２６の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物２７の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物２８の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物２９の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物３０の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物３１の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物３２の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物３３の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物３４の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物３５の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物３６の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物３７の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物３８の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物３９の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物４０の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物４１の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物４２の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物４３の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物４４の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物４５の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物４６の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物４７の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 化合物４８の¹Ｈ−ＮＭＲチャート図。 即時型アレルギー反応抑制効果を示すグラフ。###： p<0.01， ## ： p<0.01, †： p<0.05, * ：p<0.05, **： P<0.01，N = 8, mean +/- SE 遅発型アレルギー反応抑制効果を示すグラフ。###： p<0.01， ## ： p<0.01, †： p<0.05, * ：p<0.05, **： P<0.01，N = 8, mean +/- SE 血管透過亢進能を示すグラフ。dex: デキストラン投与のスポット，Control：硫酸化ヒアルロン酸 投与のスポット 血管透過亢進能を示すグラフ。dex: デキストラン投与のスポット，Control：硫酸化ヒアルロン酸 投与のスポット 血管透過亢進能を示すグラフ。dex: デキストラン投与のスポット，Control：硫酸化ヒアルロン酸 投与のスポット

本発明の低分子量多硫酸化ヒアルロン酸誘導体は、ヒアルロン酸オリゴマーの総水酸基が過剰に硫酸化されたものであるが、硫酸化の程度は、式（ＩＡ）及び（ＩＢ）のＲの総数（オリゴマー全体）当たり、ＳＯ₃Ｈ基の占める割合（又は置換度）が、８０〜１００％であるものが挙げられ、９０〜１００％であるものが好ましい。尚、オリゴマーにおけるＳＯ₃Ｈ基は偏在していてもよいが、通常、分子全体に均一に存在するものが、調製及び使用の観点からは好ましい。

本発明の式（ＩＡ）で表される化合物のうち、Ｙが式（ｄ）又は（ｅ）である化合物（式（ＩＡ’））及び式（ＩＢ）で表される化合物は、文献未記載の新規化合物である。
上記式（ＩＡ）及び（ＩＢ）において、Ｚ₁及びＺ₂で示される、置換されていてもよい低級アルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基、置換されていてもよいヘテロアリール基における、「低級アルキル」としては、直鎖又は分枝状の炭素数１〜６（以下、「Ｃ_1-6」のように略す）のアルキル、例えばメチル、エチル、ｎ-プロピル、イソプロピル、ｎ-ブチル、イソブチル、ｓｅｃ-ブチル、ｔｅｒｔ-ブチル、ｎ-ペンチル、ｎ-ヘキシル等が挙げられる。このうち、好ましくは、Ｃ_1-4アルキルであり、より好ましくは、メチル、エチル、ｎ-プロピル、イソプロピル、ｎ-ブチル、イソブチル、ｓｅｃ-ブチル、ｔｅｒｔ-ブチルであり、更に好ましくは、メチル、エチルである。

「アリール基」としては、Ｃ_6-14の単環乃至三環式芳香族炭化水素環基が挙げられ、例えばフェニル、ナフチル、アントラセニルが挙げられ、好ましくはフェニルである。

「ヘテロアリール基」としては、窒素原子、硫黄原子及び酸素原子から選択されるヘテロ原子を少なくとも１つ有する、飽和又は不飽和の単環又は多環複素環式基が挙げられる。
具体的には、１〜４の窒素原子を有する３〜６員の不飽和複素単環式基、例えばピロリル、ピロリニル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、トリアゾリル、テトラゾリル、テトラヒドロピリジル等；
１〜４の窒素原子を有する３〜７員の飽和複素単環式基、例えばピロリジニル、イミダゾリジニル、ピペリジル、ピペラジニル、ホモピペリジル等；
１〜５の窒素原子を有する不飽和縮合複素環式基、例えばインドリル、イソインドリル、イソインドリニル、ベンズイミダゾリル、キノリル、イソキノリル、イミダソピリジル、インダゾリル、ベンゾトリアゾリル、テトラゾロピリジニル、キノキサリニル、ピリジノテトラヒドロピリジル、テトラヒドロイソキノリル、インドリニル、ジヒドロピロロピリジル等；
１〜５の窒素原子を有する飽和縮合複素環式基、例えばピロリジノピペラジニル、キヌクリジニル、ピロリジノピペリジル等；
酸素原子を有する３〜６員の不飽和複素単環式基、例えばピラニル、フリル等；
酸素原子を有する３〜６員の飽和複素単環式基、例えば１Ｈ−テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル等；
１又は２の硫黄原子を有する３〜６員の不飽和複素単環式基、例えばチエニル等；
１又は２の酸素原子及び１〜３の窒素原子を有する３〜６員の不飽和複素単環式基、例えばオキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、オキサジリニル等；
１又は２の酸素原子及び１〜３の窒素原子を有する３〜６員の飽和複素単環式基、例えばモルホリニル等；
１又は２の酸素原子及び１〜３の窒素原子を有する飽和縮合複素環式基、例えばベンゾフラザニル、ベンズオキサゾリル、ベンズオキサジアゾリル等；
１又は２の硫黄原子及び１〜３の窒素原子を有する３〜６員の不飽和複素単環式基、例えばチアゾリル、チアジアゾリル等；
１又は２の硫黄原子及び１〜３の窒素原子を有する３〜６員の飽和複素単環式基、例えばチアゾリジニル等；
１又は２の硫黄原子及び１〜３の窒素原子を有する不飽和縮合複素環式基、例えばベンゾチアゾリル、チアゾロテトラヒドロピリジル等；
１又は２の酸素原子を有する不飽和縮合複素環式基、例えばベンゾフラニル、ベンゾジオキソリル、クロマニル等；
が挙げられる。

上記「低級アルキル基」に置換し得る基としては、例えば、ハロゲン原子、カルボキシ基、アリール基、低級アルコキシル基、アシル基等が挙げられ、「アリール基」及び「ヘテロアリール基」に置換し得る基としては、例えば、ハロゲン原子、カルボキシ基、低級アルキル基、低級アルコキシル基、アシル基等が挙げられる。

ここで、アリール基としてはフェニル、ナフチル等が挙げられ、低級アルキル基としては、上述したＣ_1-6アルキルが挙げられる。

また、ハロゲン原子としては、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素等が挙げられる。

また、低級アルコキシ基としては、直鎖又は分枝状のＣ_1-6アルコキシ、例えばメトキシ、エトキシ、ｎ-プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ-ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ-ブトキシ、ｔｅｒｔ-ブトキシ、ｎ-ペントキシ、ｎ-ヘキソキシ等が挙げられる。このうち、好ましくは、Ｃ_1-4アルコキシルであり、より好ましくは、メトキシ、エトキシ、ｎ-プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ-ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ-ブトキシ、ｔｅｒｔ-ブトキシであり、更に好ましくは、メトキシ、エトキシである。

アシル基としては、ＣＨＯ、Ｃ_1-6アルキル−カルボニル、Ｃ_1-6アルコキシ−カルボニル、アリールカルボニル、アリール-Ｃ_1-6アルキレン−カルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ヘテロアリール-Ｃ_1-6アルキレン−カルボニル基等が挙げられる。
ここで、Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_1-6アルコキシ、アリール、ヘテロアリールは前記したものと同様の基が挙げられる。また、Ｃ_1-6アルキレンとしては、直鎖又は分枝状のＣ_1-6アルキレン、例えば、メチレン、エチレン、トリメチレン、テトラメチレン、ペンタメチレン、ヘキサメチレン、プロピレン、メチルメチレン、エチルエチレン、１,２-ジメチルエチレン、１,１,２,２-テトラメチルエチレン等が挙げられ、好ましくは、メチレン、エチレン、トリメチレンである。

また、「アラルキル基」としては、例えばアリール−Ｃ_1-6アルキルが挙げられる。ここで、アリール、Ｃ_1-6アルキルとしては前記と同様の基が例示できるが、好適なアラルキル基としては、ベンジル、フェネチル等が挙げられる。
当該アラルキル基に置換し得る基としては、上記のアリール基、低級アルキル基に置換し得る基として例示したものが挙げられる。

Ｚ₁及びＺ₂で示される、「置換されていてもよい低級アルキル基」としては、トリフルオロメチル、ベンジル、２−、３−あるいは４−メチルベンジル、２−、３−あるいは４−メトキシベンジル、メトキシメチル、メトキシカルボニルメチル基等が好ましく、
「置換されていてもよいアリール基」としては、２−、３−あるいは４−メチルフェニル、２−、３−あるいは４−メトキシフェニル、２−、３−あるいは４−フルオロフェニル、２−、３−あるいは４−トリフルオロメチル、２−、３−あるいは４−カルボキシフェニル基等が好ましく、
「置換されていてもよいアラルキル基」としては、ベンジル、２−、３−あるいは４−メチルベンジル、２−、３−あるいは４−メトキシベンジル等が好ましく、
「置換されていてもよいヘテロアリール基」としては、２−、３−あるいは４−メチルピリジル、２−、３−あるいは４−メトキシピリジル、２−、３−あるいは４−フルオロピリジル、２−、３−あるいは４−トリフルオロピリジル、２−、３−あるいは４−カルボキシピリジル基等が好ましい。
−ＮＺ₁Ｚ₂が全体としてアミノ酸残基もしくはペプチド残基を示す場合における、「アミノ酸残基もしくはペプチド残基」としては、例えば、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン、β-アラニン、サルコシン、フェニルグリシン、Ｎ−エチルグリシン、Ｎ−ｎ−プロピルグリシン、Ｎ−イソプロピルグリシン、Ｎ−ｎ−ブチルグリシン、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルグリシン、Ｎ−ｎ−ペンチルグリシン、Ｎ−ｎ−ヘキシルグリシン等のアミノ酸残基；サルコシルグリシン、グリシルグリシン、グリシルサルコシン、サルコシルサルコシン、アラニルグリシン、β-アラニルフェニルアラニン、グリシルフェニルアラニン、フェニルアラニルグリシン、フェニルアラニルフェニルアラニン、グリシルグリシルグリシン、Ｎ−エチルグリシルグリシン、Ｎ−ｎ−プロピルグリシルグリシン、サルコシルグリシルグリシン、Ｎ−エチルグリシルグリシルグリシン、フェニルアラニルグリシルグリシン等のペプチド残基が挙げらる。尚、当該アミノ酸残基もしくはペプチド残基は、末端のカルボキシル基がアミド化されていてもよい。

式（ＩＡ）及び（ＩＢ）で表される化合物において、ｎは０〜１５の数を示すが、３〜９であるのが好ましく、３、４又は５であるのがより好ましく、４又は５であるのがさらに好ましい。

尚、上記一般式（ＩＡ）及び（ＩＢ）で表される化合物には、各種立体異性体、光学異性体、水和物等の溶媒和物が包含される。

また、本発明の低分子量多硫酸化ヒアルロン酸誘導体の好適な塩は、製薬学的に許容される塩であって、例えば、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等）、アルカリ土類金属塩（例えば、マグネシウム塩、カルシウム塩等）等の金属塩、アンモニウム塩、アルカリ金属（ナトリウムやカリウム等）及びアルカリ土類金属（マグネシウムやカルシウム等）の水酸化物、炭酸塩又は炭酸水素塩等の無機塩基との塩、もしくは、有機アミン（例えば、トリメチルアミン、トリエチルアミン等）、ピリジン、キノリン、ピペリジン、イミダゾール、ピコリン、ジメチルアミノピリジン、ジメチルアニリン、Ｎ−メチルモルホリン等の有機塩基との塩等を挙げることができる。

本発明の低分子量多硫酸化ヒアルロン酸誘導体又はその製薬学的に許容される塩の分子量は、塩の種類によっても異なるが、その平均分子量は、１５００〜１３５００であるのが好ましい。

本発明の一般式（ＩＡ）あるいは（ＩＢ）で示される化合物は、例えば、下記の反応式−１に示すように、一般式（ＩＩＡ）あるいは（ＩＩＢ）で示される低分子量ヒアルロン酸誘導体を硫酸化することにより製造することができる。尚、原料化合物及び目的化合物は、前記した適切な塩であっても良い。
また、下記式中、Ｚ₃及びＺ₄で示される各置換基は、Ｚ₁及びＺ₂に対応し、各置換基の意味は前述したとおりである。

［式中、Ｘ¹は次の（ａ¹）又は（ｂ¹）

Ｙ¹は次の（ｃ¹）又は（ｄ¹）又は（ｅ¹）

Ｗ¹は次の（ｆ¹）又は（ｇ¹）

を示し、Ｒ¹'は−ＯＨ又は−ＮＺ₃Ｚ₄（ここで、Ｚ₃及びＺ₄は、独立して水素原子、置換されていてもよい低級アルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基又は置換されていてもよいヘテロアリール基を示すか、或いは−ＮＺ₃Ｚ₄全体でアミノ酸残基もしくはペプチド残基を示し、ｎ、Ｘ、Ｙ、Ｗ、Ｒ及び＊は前記と同じものを示す。〕

本反応は、既知の硫酸化反応、例えば化合物（ＩＩＡ）あるいは（ＩＩＢ）と硫酸化剤を適当な溶媒に溶解させ、加熱下に反応させることにより行うことができる。

ここで使用される溶媒としては、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、Ｎ−メチルピロリドン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、１，１，３，３−テトラメチル尿素、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリルアミド、あるいは、１−エチル−３−メチルイミダゾリウム ヘキサフルオロホスフェート、１−ブチル−１−メチルピロリジニウム テトラフルオロボレート、１−ブチルピリジニウム クロリド等のイオン性液体等、又はこれらの混合溶媒等を例示できる。

硫酸化剤としては、特に限定されるものではないが、無水硫酸とピリジン、ピコリン、２，６−ルチジン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジオキサン等の錯体、若しくは、硫酸−ジシクロヘキシルカルボジイミド、クロロスルホン等を使用するのが好ましい。一般に硫酸化剤は化合物（ＩＩＡ）あるいは（ＩＩＢ）に対して１〜１００等量使用するのが好ましい。また、本反応の系内には、トリフルオロ酢酸やトリフルオロメタンスルホン酸等の酸触媒を添加しても良い。

反応温度及び反応時間は、特に限定されるものではないが、例えば、０〜１２０℃で、３０分〜２０日が挙げられる。

式（ＩＩＡ）中、Ｙ¹が式（ｄ¹）又は（ｅ¹）であり、Ｒ¹'が−ＯＨである化合物、あるいは式（ＩＩＢ）中、Ｒ¹'が−ＯＨである化合物は、反応−２で示される還元反応により製造することができる。尚、原料化合物及び目的化合物は、前記した適切な塩であっても良い。

［式中、Ａ¹は次の（ｈ）又は（ｉ）

Ａ²は次の（ｊ）又は（ｋ）

を示し、ｎ、Ｘ¹及び＊は前記と同じものを示す。］

すなわち、化合物（ＩＩＩ-１）あるいは（ＩＩＩ-２）を、例えば適当な溶媒中還元剤の存在下に還元反応に付すことにより化合物（ＩＩ−１）あるいは（ＩＩ-２）を製造することができる。
本反応に使用される溶媒としては、例えば、水、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、エチレングリコール等の低級アルコール類、アセトニトリル、蟻酸、酢酸等の脂肪酸、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、モノグライム、ジグライム等のエーテル類、ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素類、ジクロロメタン、ジクロロエタン、クロロホルム、四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素類、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド又はこれらの混合溶媒等を例示できる。

還元剤としては、例えば、水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素リチウム、水素化ホウ素カリウム、水素化ホウ素テトラブチルアンモニウム、水素化ホウ素亜鉛、トリ第二ブチル水素化ホウ素リチウム、ボラン類縁体、水素化ジイソブチルアルミニウム、水素化リチウムアルミニウム等を例示できる。
還元剤は、化合物（ＩＩＩ-１）あるいは（ＩＩＩ-２）に対して、通常０．１倍モル〜６０倍モル程度用いられる。

本反応の系内には、ピリジン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、Ｎ−エチルジイソプロピルアミン等のアミン類、水酸化ナトリウム等の無機塩基又は／及びジメチルグリオキシム、２，２’−ビピリジル、１，１０−フェナンスロリン等のリガンドの存在下、塩化亜鉛、塩化コバルト（ＩＩ）、塩化サマリウム（ＩＩＩ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）、塩化チタン（ＩＩＩ）、塩化鉄（ＩＩ）、塩化鉄（ＩＩＩ）、塩化ニッケル（ＩＩ）等を添加しても良い。
なお、本還元反応は、パラジウム、白金などの遷移金属触媒存在下での接触水素化によって行なうこともできる。

本反応は、通常−８０〜１００℃程度、好ましくは−８０〜７０℃程度にて行なうことができるが、一般に、３０分〜６０時間程度で終了する。

式（ＩＩＡ）中、Ｙ¹が式（ｄ¹）又は（ｅ¹）であり、Ｒ¹'が−ＮＺ₃Ｚ₄である化合物、あるいは式（ＩＩＢ）中、Ｒ¹'が−ＮＺ₃Ｚ₄である化合物は、次反応式−３で示される還元的アミノ化反応により製造することができる。尚、原料化合物及び目的化合物は、前記した適切な塩であっても良い。

〔式中、Ａ¹、Ａ²、Ｚ₃及びＺ₄は、前記と同じものを示す。〕

本反応は、例えば、適当な溶媒中、還元剤の存在下、化合物（ＩＩＩ-１）又は（ＩＩＩ-２）にアミン（ＩＶ）を反応させてシッフ塩基を形成させ、次いで還元する、いわゆる還元的アミノ化反応である。

アミン（ＩＶ）は、化合物（ＩＩＩ-１）又は（ＩＩＩ-２）に対して、通常１倍モル〜５倍モル程度用いられる。

ここで使用される溶媒としては、例えば、水、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、エチレングリコール等の低級アルコール類、アセトニトリル、蟻酸、酢酸等の脂肪酸、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、モノグライム、ジグライム等のエーテル類、ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素類、ジクロロメタン、ジクロロエタン、クロロホルム、四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素類、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド又はこれらの混合溶媒等を例示できる。

ここで使用される還元剤としては、例えば、水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素リチウム、水素化ホウ素カリウム、水素化ホウ素テトラブチルアンモニウム、シアノトリヒドロホウ酸ナトリウム、トリアセトキシヒドロホウ酸ナトリウム等を例示できる。還元剤は、化合物（ＩＩＩ）に対して、通常０．１倍モル〜６０倍モル程度用いられる。

本反応は、通常−８０〜１００℃程度、好ましくは−８０〜７０℃程度にて行うことができるが、一般的に、３０分〜６０時間程度で終了する。

必要に応じて、１倍モル〜５０倍モルの有機酸類もしくはその塩の存在下で反応を行なってもよい。有機酸類もしくはその塩としては、例えば、酢酸、トリフルオロ酢酸やこれらのアルカリ金属塩（例えば酢酸ナトリウム等）等が挙げられる。

本反応の系内には、ピリジン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、Ｎ−エチルジイソプロピルアミン等のアミン類、水酸化ナトリウム等の無機塩基又は／及びジメチルグリオキシム、２，２’−ビピリジル、１，１０−フェナンスロリン等のリガンドの存在下、塩化亜鉛、塩化コバルト（ＩＩ）、塩化サマリウム（ＩＩＩ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）、塩化チタン（ＩＩＩ）、塩化鉄（ＩＩ）、塩化鉄（ＩＩＩ）、塩化ニッケル（ＩＩ）等を添加しても良い。
また、該反応の反応系内に、適当量のホウ酸を添加しても良い。

偶数の糖で構成される化合物群と奇数糖で構成される化合物群の変換は、次反応式−４又は５により、原料化合物より構成糖の一つ少ない化合物を製造できる。

［式中、Ａ²は前記と同じものを示す。]

本反応は、弱アルカリ加熱処理によるＮ-アセチルグルコサミンの脱離反応である。
化合物（Ｖ）をReissigらの方法（Reissig, J. L., et al., J. Biol. Chem., 217, 959 (1955)）に準じて、ＰＨ９．１８のホウ酸塩緩衝液中で加熱攪拌することで、化合物（ＶＩ）を製造できる。
本反応は、通常５０〜１２０℃程度、好ましくは７０〜９０℃程度にて行うことができるが、一般的に、３０分〜６０時間程度で終了する。

［式中、Ｄ¹は次の（ｒ）又は（ｓ）

を示し、ｎ及び＊は前記と同じものを示す。］

本反応は、β−グルクロニダーゼを用いたグルクロン酸の脱離反応である。
化合物（ＶＩＩ）を、β-グルクロニダーゼ存在下、適当なバッファー中で攪拌することで、化合物（ＶＩＩＩ）を製造できる。
本反応は、通常室温〜６０℃程度、好ましくは３０〜４０℃程度にて行うことができるが、一般的に、３０分〜６０時間程度で終了する。

上記の各反応式で得られる各々の目的化合物は、各種修飾多糖類で常用されている精製操作により精製することができる。具体的な精製操作には、ゲルろ過、中和、透析による脱塩、有機溶媒添加の沈殿操作による回収操作、もしくは凍結乾燥による回収操作等が挙げられる。

本発明の化合物は、後記実施例に示すように、抗アレルギー作用及び抗炎症作用を持ち、かつ血管透過性亢進能を示さないことから、花粉症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎及び喘息等のアレルギー性疾患の予防及び／又は治療するための医薬として有用である。
斯かる医薬は、本発明の化合物を通常の医療製剤の形態に製剤したものであって、通常使用される充填剤、増量剤、結合剤、付湿剤、崩壊剤、表面活性剤、滑沢剤等の希釈剤あるいは賦形剤を用いて調製される。

このような医薬としては、治療目的に応じて種々の形態の中から選択でき、その代表的なものとして、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤、坐剤、注射剤（液剤、懸濁剤等）、点眼剤、軟膏剤、吸入剤等が挙げられる。

錠剤の形態に成形する際に用いられる担体としては、公知のものを広く使用でき、例えば、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース等の賦形剤、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドン等の結合剤、乾燥デンプン、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、デンプン、乳糖等の崩壊剤、白糖、ステアリン、カカオバター、水素添加油等の崩壊抑制剤、第４級アンモニウム塩基、ラウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤、グリセリン、デンプン等の保湿剤、デンプン、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸等の吸着剤、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ酸末、ポリエチレングリコール等の滑沢剤等が挙げられる。

更に錠剤は、必要に応じて通常の錠皮を施した錠剤、例えば、糖衣剤、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルムコーティング錠あるいは二重錠、多層錠とすることができる。

丸剤の形態に成形する際に用いられる担体としては、公知のものを広く使用でき、例えば、ブドウ糖、乳糖、デンプン、カカオ脂、硬化植物油、カオリン、タルク等の賦形剤、アラビアゴム末、トラガント末、ゼラチン、エタノール等の結合剤、ラミナラン、寒天等の崩壊剤等が挙げられる。

坐剤の形態に成形する際に用いられる担体としては、公知のものを広く使用でき、例えば、ポリエチレングリコール、カカオ脂、高級アルコール、高級アルコールのエステル、ゼラチン、半合成グリセライド等が挙げられる。

注射剤として調整される場合は、液剤、乳剤、及び懸濁剤は殺菌され、かつ血液と等張であるのが好ましい。これらの液剤、乳剤及び懸濁剤の形態に成形する際に用いられる希釈剤としては、公知の広く用いられているものを使用することができ、例えば、水、エタノール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル等が挙げられる。なお、この場合、等張性の溶液を調整するのに十分な量の食塩、ブドウ糖或いはグリセリンを医療製剤中に含有させてもよく、また通常の溶解補助剤、緩衝剤、無痛化剤等を、更に必要に応じて、着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤等や他の医薬品を含有させても良い。

斯かる医薬中に含有される本発明化合物の量は、特に限定されず広い範囲内から適宜選択することができるが、通常、医薬中に本発明化合物を１〜７０重量％含有させるのが好ましい。
本発明に係る医薬の投与方法としては、特に制限はなく、各種製剤形態、患者の年齢、性別、疾患の状態、その他の条件に応じた方法で投与される。例えば、錠剤、丸剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤及びカプセル剤の場合には経口投与される。また、注射剤の場合には、単独であるいはブドウ糖、アミノ酸等の通常の補液と混合して静脈内に投与したり、更には必要に応じて、単独で筋肉内、皮内、皮下もしくは腹腔内に投与したりすることができる。坐剤の場合には、直腸内に投与される。

上記医薬の投与量は、用法、患者の年齢、性別、疾患の程度、その他の条件に応じて適宜選択すればよく、通常、１日あたり体重１ｋｇに対して、０．００１〜１００ｍｇ、好ましくは０．００１〜５０ｍｇを１回〜数回に分けて投与される。尚、上記投与量は、種々の条件で変動するので、上記範囲より少ない投与量で十分な場合もあるし、また上記範囲を超えた投与量が必要な場合もある。

以下、実施例を掲げて、本発明をより詳細に説明する。
なお、¹Ｈ−ＮＭＲは、溶媒として重水（Ｄ₂Ｏ）を用い、ＡＶＡＮＣＥIII ４００（ＢＵＲＫＥＲ社製）あるいはＡＶＡＮＣＥ ５００（ＢＵＲＫＥＲ社製）により測定した。
製造例１〜５４ 原料化合物の製造
以下の製造例１〜５４に記載の方法により、表１〜７で示される原料化合物を製造した。
なお、質量分析は、Ｖｏｙａｇｅｒ ＤＥ−ＰＲＯ（アプライドシステムズジャパン株式会社）による。
製造例１
ヒアルロン酸ナトリウム（資生堂製、ＢＩＯ Ｓｏｄｉｕｍ Ｈｙａｌｕｒｏｎａｔｅ ＨＡ９）とウシ精巣由来ヒアルロニダーゼ(ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製、Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｄａｓｅ Ｂｏｖｉｎｅ Ｔ １００ＫＵ)から、文献Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ, ｖｏｌ.１２, Ｎｏ.７, ｐｐ.４２１-４２６, ２００２に従って分離したヒアルロン酸オリゴ糖４-ｍｅｒ（２０ｍｇ）を、メタノール（１ｍｌ）と水（０．５ｍｌ）に溶解し、氷冷下、水素化ホウ素ナトリウム（１０ｍｇ）を加えて撹拌した。室温に戻して一晩撹拌した。質量分析にて反応の終了を確認した。
氷冷下で１０％酢酸メタノール溶液（０．５ｍｌ）と水（１ｍｌ）を加えた後、減圧下で濃縮した。１０％酢酸メタノール溶液（０．５ｍｌ）を加えて共沸した後、メタノール（２ｍｌ）を加えて共沸を２回行なった。
残渣を水（２ｍｌ）に溶解し、ディスクフィルター（日本ポール社製、０．４５μｍ）にてろ過した。ショートカラム（Ａｌｄｒｉｃｈ社製、Ｄｏｗｅｘ（登録商標）５０Ｗ x ８ ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｆｏｒｍ）に通してプロトン化体とした後、減圧濃縮した。ＡＫＴＡシステム（GEヘルスケア バイオサイエンス株式会社製）を用いてゲルろ過クロマトグラフィー（Ｇ−１０、１６ｍｍ x ６００ｍｍ、水）を行い脱塩し、目的の画分を凍結乾燥して、目的物を得た。（１２ｍｇ、白色粉末）
ＭＳ[Ｍ＋Ｎａ]⁺：８４６.２１
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図１に示す。

製造例２
原料をヒアルロン酸オリゴ糖６-ｍｅｒ（６０ｍｇ）に変えたこと以外、製造例１と同様に反応して、目的物を得た。（５０ｍｇ、白色粉末）
ＭＳ[Ｍ-Ｈ]^-：１１５７．８１
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図２に示す。

製造例３
ヒアルロン酸オリゴ糖８-ｍｅｒ（６０ｍｇ）を製造例１と同様に反応して、目的物を得た。（５１ｍｇ、白色粉末）
ＭＳ[Ｍ-Ｈ]^-：１５３５．５７
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図３に示す。

製造例４
ヒアルロン酸オリゴ糖１０-ｍｅｒ（６０ｍｇ）を製造例１と同様に反応して、目的物を得た。（４８ｍｇ、白色粉末）
ＭＳ[Ｍ-Ｈ]^-：１９１５．７２
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図４に示す。

製造例５
ヒアルロン酸オリゴ糖１２-ｍｅｒ（６０ｍｇ）を製造例１と同様に反応して、目的物を得た。（６０ｍｇ、白色粉末）
ＭＳ[Ｍ-Ｈ]^-：２２９４．９８
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図５に示す。

製造例６
原料をヒアルロン酸オリゴ糖１４-ｍｅｒ（２０ｍｇ）に変えたこと以外、製造例１と同様にして、目的物を得た。（２０ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図６に示す。

製造例７
ヒアルロン酸オリゴ糖１６-ｍｅｒ（１０ｍｇ）を、メタノール（０．６ｍｌ）と水（０．３ｍｌ）に溶解し、氷冷下、水素化ホウ素ナトリウム（５ｍｇ）を加えて撹拌した。室温に戻して一晩撹拌した。質量分析にて反応の終了を確認した。
氷冷下で１０％酢酸メタノール溶液（０．１ｍｌ）と水（０．２ｍｌ）を加えた後、減圧下で濃縮した。
残渣を水（１ｍｌ）に溶解し、ディスクフィルター（日本ポール社製、０．４５μｍ）にてろ過した。ＡＫＴＡシステム（GEヘルスケア バイオサイエンス株式会社製）を用いてゲルろ過クロマトグラフィー（Ｇ−１０、１６ｍｍ x ６００ｍｍ、水）を行い脱塩し、目的の画分を凍結乾燥して、目的物を得た。（１０ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図７に示す。

製造例８
原料をヒアルロン酸オリゴ糖１８-ｍｅｒ（２０ｍｇ）に変えたこと以外、製造例1と同様にして、目的物を得た。（２０ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図８に示す。

製造例９
原料をヒアルロン酸オリゴ糖２０-ｍｅｒ（４２ｍｇ）に変えたこと以外、製造例１と同様にして、目的物を得た。（４０ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図９に示す。

製造例１０
ヒアルロン酸オリゴ糖１０-ｍｅｒ（２０ｍｇ）を、水（０．８ｍｌ）に溶解し、氷冷した。アントラニル酸（３０ｍｇ）、ボロン酸（４０ｍｇ）、酢酸ナトリウム（８０ｍｇ）及びシアノトリヒドロホウ酸ナトリウム（５ｍｇ）をメタノール（１ｍｌ）と水（０．２ｍｌ）に溶解し、この溶液を加えて８０℃で５時間撹拌した。質量分析にて反応の終了を確認した。
減圧下で濃縮した後、残渣をメタノール（１ｍｌ）と水（１ｍｌ）に溶解し、ディスクフィルター（日本ポール社製、０．４５μｍ）にてろ過した。ゲルろ過クロマトグラフィー（ＬＨ−２０、１８ｍｍ x ５００ｍｍ、水：メタノール＝１：１）を行い精製し、目的の画分を凍結乾燥して、目的物を得た。（２４ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図１０に示す。

製造例１１
ヒアルロン酸オリゴ糖１０-ｍｅｒ（２０ｍｇ）を、水（０．８ｍｌ）に溶解し、氷冷した。アニリン（３０ｍｇ）、ボロン酸（４０ｍｇ）、酢酸ナトリウム（８０ｍｇ）及びシアノトリヒドロホウ酸ナトリウム（５ｍｇ）をメタノール（１ｍｌ）と水（０．２ｍｌ）に溶解し、加えて８０℃で５時間撹拌した。質量分析にて反応の終了を確認した。
減圧下で濃縮した後、残渣をメタノール（１ｍｌ）と水（１ｍｌ）に溶解し、ディスクフィルター（日本ポール社製、０．４５μｍ）にてろ過した。ゲルろ過クロマトグラフィー（ＬＨ−２０、１８ｍｍ x ５００ｍｍ、水：メタノール＝１：１）を行い精製し、目的の画分を凍結乾燥して、目的物を得た。（１７ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図１１に示す。

製造例１２
原料をヒアルロン酸オリゴ糖２４〜３２-ｍｅｒ（１０ｍｇ）に変えたこと以外、製造例１と同様にして、目的物を得た。（１０ｍｇ、白色粉末）

製造例１３
原料をヒアルロン酸オリゴ糖３４〜４６-ｍｅｒ（１０ｍｇ）に変えたこと以外、製造例１と同様にして、目的物を得た。（１０ｍｇ、白色粉末）

製造例１〜１３の目的物の構造を下記表１に記す。

製造例１４
ヒアルロン酸ナトリウム（資生堂製、ＢＩＯ Ｓｏｄｉｕｍ Ｈｙａｌｕｒｏｎａｔｅ ＨＡ９）とウシ精巣由来ヒアルロニダーゼ(ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製、Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｄａｓｅ Ｂｏｖｉｎｅ Ｔ １００ＫＵ)から、文献Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ, ｖｏｌ.１２, Ｎｏ.７, ｐｐ.４２１-４２６, ２００２に従って分離したヒアルロン酸オリゴ糖４-ｍｅｒ（４０ｍｇ）を、ホウ酸塩緩衝液（ｐＨ９．１８）（３ｍｌ）に溶解し、８０℃にて１時間攪拌した。室温に戻し、メタノール（３ｍｌ）を加えた後、減圧濃縮した。残渣を水（２ｍｌ）に溶解し、ディスクフィルター（日本ポール社製、０．４５μｍ）にてろ過した後、ＡＫＴＡシステム（GEヘルスケア バイオサイエンス株式会社製）を用いてゲルろ過クロマトグラフィー（Ｇ−１０、１６ｍｍ x ６００ｍｍ、水）を行い脱塩し、目的の画分を濃縮することで白色粉末を得た。
続いて、得られた白色粉末（２５ｍｇ）をメタノール（１ｍｌ）と水（０．５ｍｌ）に溶解し、氷冷下、水素化ホウ素ナトリウム（１０ｍｇ）を加えて撹拌した。室温に戻して一晩撹拌した。質量分析にて反応の終了を確認した。氷冷下で１０％酢酸メタノール溶液（０．２ｍｌ）を加えた後、減圧下で濃縮した。残渣を水（２ｍｌ）に溶解し、ディスクフィルター（日本ポール社製、０．４５μｍ）にてろ過した後、ＡＫＴＡシステム（GEヘルスケア バイオサイエンス株式会社製）を用いてゲルろ過クロマトグラフィー（Ｇ−１０、１６ｍｍ x ６００ｍｍ、水）を行い脱塩し、目的の画分を凍結乾燥して、目的物を得た。（１８ｍｇ、白色粉末）
ＭＳ[Ｍ-Ｈ]^-：５７３．４５
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図１２に示す。

製造例１５
原料をヒアルロン酸オリゴ糖６-ｍｅｒ（６０ｍｇ）に変えたこと以外、製造例１４と同様にして、目的物を得た。（３４ｍｇ、白色粉末）
ＭＳ[Ｍ-Ｈ]^-：９５３．０２
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図１３に示す。

製造例１６
原料をヒアルロン酸オリゴ糖８-ｍｅｒ（１０ｍｇ）に変えたこと以外、製造例１４と同様にして、目的物を得た。（８ｍｇ、白色粉末）
ＭＳ[Ｍ-Ｈ]^-：１３３１．５４
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図１４に示す。

製造例１７
原料をヒアルロン酸オリゴ糖１０-ｍｅｒ（１０ｍｇ）に変えたこと以外、製造例１４と同様にして、目的物を得た。（８ｍｇ、白色粉末）
ＭＳ[Ｍ-Ｈ]^-：１７１０．２８
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図１５に示す。

製造例１８
原料をヒアルロン酸オリゴ糖１２-ｍｅｒ（２０ｍｇ）に変えたこと以外、製造例１４と同様にして、目的物を得た。（１６ｍｇ、白色粉末）
ＭＳ[Ｍ-Ｈ]^-：２０９０．０１
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図１６に示す。

製造例１９
原料をヒアルロン酸オリゴ糖１４-ｍｅｒ（１８ｍｇ）に変えたこと以外、製造例１４と同様にして、目的物を得た。（１１ｍｇ、白色粉末）
ＭＳ[Ｍ-Ｈ]^-：２４６９．５２
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図１７に示す。

製造例２０
原料をヒアルロン酸オリゴ糖１６-ｍｅｒ（７ｍｇ）に変えたこと以外、製造例１４と同様にして、目的物を得た。（５ｍｇ、白色粉末）
ＭＳ[Ｍ-Ｈ]^-：２８４８．５９
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図１８に示す。

製造例２１
原料をヒアルロン酸オリゴ糖１８-ｍｅｒ（１０ｍｇ）に変えたこと以外、製造例１４と同様にして、目的物を得た。（９ｍｇ、白色粉末）
ＭＳ[Ｍ-Ｈ]^-：３２２５．７０
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図１９に示す。

製造例２２
原料をヒアルロン酸オリゴ糖２０-ｍｅｒ（１５ｍｇ）に変えたこと以外、製造例１４と同様にして、目的物を得た。（１３ｍｇ、白色粉末）
ＭＳ[Ｍ-Ｈ]^-：３６０４．１６
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図２０に示す。

製造例１４〜２２の目的物の構造を下記表２に記す。

製造例２３
製造例１で得られた化合物（１７ｍｇ）を、バッファー（塩化ナトリウム水溶液（３００ｍＭ、１ｍｌ）及び酢酸ナトリウム水溶液（２００ｍＭ、１ｍｌ）を混合して、氷酢酸にてｐＨを５．２に調整したもの）（２ｍｌ）に溶解し、bovine liver β-glucuronidase Type B-1（Sigma-Aldrich社製）（８ｍｇ）を加えて、３７℃にて８時間インキュベートした。反応液を限外ろ過（ミリポア社製、Amicon Ultra 4ml 10K Nominal Molecular Weight Limit）して精製した後、ＡＫＴＡシステム（GEヘルスケア バイオサイエンス株式会社製）を用いてゲルろ過クロマトグラフィー（Ｇ−１０、１６ｍｍ x ６００ｍｍ、水）を行い脱塩し、目的の画分を凍結乾燥して、目的物を得た。（８ｍｇ、白色粉末）
ＭＳ[Ｍ-Ｈ]^-：６０１．１８
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図２１に示す。

製造例２４
原料を製造例２で得られた化合物（１１ｍｇ）に変えたこと以外、製造例２３と同様にして、目的物を得た。（４ｍｇ、白色粉末）
ＭＳ[Ｍ-Ｈ]^-：９８０．２９
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図２２に示す。

製造例２５
原料を製造例３で得られた化合物（１０ｍｇ）に変えたこと以外、製造例２３と同様にして、目的物を得た。（８ｍｇ、白色粉末）
ＭＳ[Ｍ-Ｈ]^-：１３５９．３７
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図２３に示す。

製造例２６
原料を製造例４で得られた化合物（３０ｍｇ）に変えたこと以外、製造例２３と同様にして、目的物を得た。（１５ｍｇ、白色粉末）
ＭＳ[Ｍ-Ｈ]^-：１７３８．１５
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図２４に示す。

製造例２７
原料を製造例５で得られた化合物（１４ｍｇ）に変えたこと以外、製造例２３と同様にして、目的物を得た。（７ｍｇ、白色粉末）
ＭＳ[Ｍ-Ｈ]^-：２１１７．５０
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図２５に示す。

製造例２８
原料を製造例９で得られた化合物（１０ｍｇ）に変えたこと以外、製造例２３と同様にして、目的物を得た。（５ｍｇ、白色粉末）
ＭＳ[Ｍ-Ｈ]^-：３６３３．８４
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図２６に示す。

製造例２３〜２８の目的物の構造を下記表３に記す。

製造例２９
原料を製造例１５で得られた化合物（１５ｍｇ）に変えたこと以外、製造例２３と同様にして、目的物を得た。（９ｍｇ、白色粉末）
ＭＳ[Ｍ-Ｈ]^-：７７７．２８
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図２７に示す。

製造例３０
原料を製造例１６で得られた化合物（１１ｍｇ）に変えたこと以外、製造例２３と同様にして、目的物を得た。（７ｍｇ、白色粉末）
ＭＳ[Ｍ-Ｈ]^-：１１５６．４１
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図２８に示す。

製造例３１
原料を製造例１７で得られた化合物（２３ｍｇ）に変えたこと以外、製造例２３と同様にして、目的物を得た。（１５ｍｇ、白色粉末）
ＭＳ[Ｍ-Ｈ]^-：１５３５．０７
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図２９に示す。

製造例３２
原料を製造例１８で得られた化合物（１４ｍｇ）に変えたこと以外、製造例２３と同様にして、目的物を得た。（８ｍｇ、白色粉末）
ＭＳ[Ｍ-Ｈ]^-：１９１４．６０
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図３０に示す。

製造例３３
原料を製造例２２で得られた化合物（８ｍｇ）に変えたこと以外、製造例２３と同様にして、目的物を得た。（５ｍｇ、白色粉末）
ＭＳ[Ｍ-Ｈ]^-：３４３０．６７
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図３１に示す。

製造例２９〜３３の目的物の構造を下記表４に記す。

製造例３４
ヒアルロン酸ナトリウム（フードケミファ製、ヒアルロン酸 ＦＣＨ-ＳＵ）とStreptomyces hyalurolyticus由来のヒアルロニダーゼ（アマノエンザイム製、ヒアルノニダーゼ“アマノ”１）から、文献Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ, ｖｏｌ.１１, Ｎｏ.１, ｐｐ.５７-６４, ２００１に従って分離した不飽和ヒアルロン酸オリゴ糖４-ｍｅｒ（８ｍｇ）を、メタノール（２ｍｌ）と水（１ｍｌ）に溶解し、氷冷下、水素化ホウ素ナトリウム（４ｍｇ）を加えて撹拌した。室温に戻して一晩撹拌した。質量分析にて反応の終了を確認した。氷冷下で１０％酢酸メタノール溶液（０．２ｍｌ）を加えた後、減圧下で濃縮した後、ＡＫＴＡシステム（GEヘルスケア バイオサイエンス株式会社製）を用いてゲルろ過クロマトグラフィー（Ｇ−１０、１６ｍｍ x ６００ｍｍ、水）を行い脱塩し、目的の画分を凍結乾燥して、目的物を得た。（３ｍｇ、白色粉末）
ＭＳ[Ｍ-Ｈ]^-：７５９．６１
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図３２に示す。

製造例３５
原料を不飽和ヒアルロン酸オリゴ糖６-ｍｅｒ（１０ｍｇ）に変えたこと以外、製造例３４と同様にして、目的物を得た。（９ｍｇ、白色粉末）
ＭＳ[Ｍ-Ｈ]^-：１１３９．１５
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図３３に示す。

製造例３６
原料を不飽和ヒアルロン酸オリゴ糖８-ｍｅｒ（１０ｍｇ）に変えたこと以外、製造例３４と同様にして、目的物を得た。（１０ｍｇ、白色粉末）
ＭＳ[Ｍ-Ｈ]^-：１５１８．４９
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図３４に示す。

製造例３７
原料を不飽和ヒアルロン酸オリゴ糖１０-ｍｅｒ（１０ｍｇ）に変えたこと以外、製造例３４と同様にして、目的物を得た。（１０ｍｇ、白色粉末）
ＭＳ[Ｍ-Ｈ]^-：１８９７．５７
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図３５に示す。

製造例３８
原料を不飽和ヒアルロン酸オリゴ糖１２-ｍｅｒ（１０ｍｇ）に変えたこと以外、製造例３４と同様にして、目的物を得た。（８ｍｇ、白色粉末）
ＭＳ[Ｍ-Ｈ]^-：２２７６．９９
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図３６に示す。

製造例３９
原料を不飽和ヒアルロン酸オリゴ糖２０-ｍｅｒ（１２ｍｇ）に変えたこと以外、製造例３４と同様にして、目的物を得た。（１０ｍｇ、白色粉末）
ＭＳ[Ｍ-Ｈ]^-：３７９２．０３
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図３７に示す。

製造例３４〜３９の目的物の構造を下記表５に記す。

製造例４０
ヒアルロン酸ナトリウム（フードケミファ製、ヒアルロン酸 ＦＣＨ-ＳＵ）とStreptomyces hyalurolyticus由来のヒアルロニダーゼ（アマノエンザイム製、ヒアルノニダーゼ“アマノ”１）から、文献Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ, ｖｏｌ.１１, Ｎｏ.１, ｐｐ.５７-６４, ２００１に従って分離した不飽和ヒアルロン酸オリゴ糖４-ｍｅｒ（１０ｍｇ）を、ホウ酸塩緩衝液（ｐＨ９．１８）（１ｍｌ）に溶解し、８０℃にて１時間攪拌した。室温に戻し、メタノール（３ｍｌ）を加えた後、減圧濃縮した。残渣を水（２ｍｌ）に溶解し、ディスクフィルター（日本ポール社製、０．４５μｍ）にてろ過した後、ＡＫＴＡシステム（GEヘルスケア バイオサイエンス株式会社製）を用いてゲルろ過クロマトグラフィー（Ｇ−１０、１６ｍｍ x ６００ｍｍ、水）を行い脱塩し、目的の画分を濃縮することで白色粉末を得た。
続いて、得られた白色粉末（６ｍｇ）をメタノール（１ｍｌ）と水（０．５ｍｌ）に溶解し、氷冷下、水素化ホウ素ナトリウム（１０ｍｇ）を加えて撹拌した。室温に戻して一晩撹拌した。質量分析にて反応の終了を確認した。氷冷下で１０％酢酸メタノール溶液（０．２ｍｌ）を加えた後、減圧下で濃縮した。残渣を水（２ｍｌ）に溶解し、ディスクフィルター（日本ポール社製、０．４５μｍ）にてろ過した後、ＡＫＴＡシステム（GEヘルスケア バイオサイエンス株式会社製）を用いてゲルろ過クロマトグラフィー（Ｇ−１０、１６ｍｍ x ６００ｍｍ、水）を行い脱塩し、目的の画分を凍結乾燥して、目的物を得た。（４ｍｇ、白色粉末）
ＭＳ[Ｍ-Ｈ]^-：５５６．７７
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図３８に示す。

製造例４１
原料を不飽和ヒアルロン酸オリゴ糖６-ｍｅｒ（１０ｍｇ）に変えたこと以外、製造例４０と同様にして、目的物を得た。（７ｍｇ、白色粉末）
ＭＳ[Ｍ-Ｈ]^-：９３５．４９
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図３９に示す。

製造例４２
原料を不飽和ヒアルロン酸オリゴ糖８-ｍｅｒ（１０ｍｇ）に変えたこと以外、製造例４０と同様にして、目的物を得た。（６ｍｇ、白色粉末）
ＭＳ[Ｍ-Ｈ]^-：１３１４．２１
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図４０に示す。

製造例４３
原料を不飽和ヒアルロン酸オリゴ糖１０-ｍｅｒ（１０ｍｇ）に変えたこと以外、製造例４０と同様にして、目的物を得た。（７ｍｇ、白色粉末）
ＭＳ[Ｍ-Ｈ]^-：１６９３．５８
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図４１に示す。

製造例４４
原料を不飽和ヒアルロン酸オリゴ糖１２-ｍｅｒ（１０ｍｇ）に変えたこと以外、製造例４０と同様にして、目的物を得た。（６ｍｇ、白色粉末）
ＭＳ[Ｍ-Ｈ]^-：２０７３．４１
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図４２に示す。

製造例４０〜４４の目的物の構造を下記表６に記す。

製造例４５
ヒアルロン酸オリゴ糖４-ｍｅｒ（１０ｍｇ）に、ベンジルアミン（２４ｍｇ）、ボロン酸（２０ｍｇ）、酢酸ナトリウム（４０ｍｇ）及びシアノトリヒドロホウ酸ナトリウム（１５ｍｇ）をメタノール（０．５ｍｌ）と水（０．５ｍｌ）に溶解した溶液を加えて５０℃で６時間撹拌した。質量分析にて反応の終了を確認した。
減圧下で濃縮した後、水（２ｍｌ）に溶解し、ディスクフィルター（日本ポール社製、０．４５μｍ）にてろ過した。ゲルろ過クロマトグラフィー（Ｇ−１０、１６ｍｍ x ６００ｍｍ、水）を行い精製し、目的の画分を凍結乾燥して、目的物を得た。（８ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図４３に示す。

製造例４６
ヒアルロン酸オリゴ糖４-ｍｅｒ（１０ｍｇ）に、フェニルアラニン（５ｍｇ）、酢酸（１０μｌ）、酢酸ナトリウム（１０ｍｇ）及びシアノトリヒドロホウ酸ナトリウム（１０ｍｇ）を、メタノール（０．２ｍｌ）と水（０．２ｍｌ）に溶解した溶液を加えて６０℃で６時間撹拌した。質量分析にて反応の終了を確認した。
減圧下で濃縮した後、残渣にジクロロメタン（５ｍｌ）と水（５ｍｌ）を加えて抽出した。水相を減圧下で濃縮した後、水（２ｍｌ）に溶解し、ディスクフィルター（日本ポール社製、０．４５μｍ）にてろ過した。ゲルろ過クロマトグラフィー（Ｇ−１０、１６ｍｍ x ６００ｍｍ、水）を行い精製し、目的の画分を凍結乾燥して、目的物を得た。（１１ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図４４に示す。

製造例４７
フェニルアラニンをプロリンに変えたこと以外、製造例４６と同様にして、目的物を得た。（８ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図４５に示す。

製造例４８
フェニルアラニンをトリプトファンに変えたこと以外、製造例４６と同様にして、目的物を得た。（７ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図４６に示す。

製造例４９
フェニルアラニンをグリシルフェニルアラニンアミドに変えたこと以外、製造例４６と同様にして、目的物を得た。（４ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図４７に示す。

製造例５０
フェニルアラニンをフェニルアラニルグリシンに変えたこと以外、製造例４６と同様にして、目的物を得た。（１４ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図４８に示す。

製造例５１
出発物質をヒアルロン酸オリゴ糖４-ｍｅｒ（１０ｍｇ）からヒアルロン酸オリゴ糖１０-ｍｅｒ（２０ｍｇ）に、またベンジルアミンを４−クロロアニリンに変えたこと以外、製造例４５と同様にして、目的物を得た。（１０ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図４９に示す。

製造例５２
ヒアルロン酸オリゴ糖４-ｍｅｒをヒアルロン酸オリゴ糖１０-ｍｅｒに、ベンジルアミンを２−アミノピリジンに変えたこと以外、製造例４５と同様にして、目的物を得た。（１２ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図５０に示す。

製造例５３
ヒアルロン酸オリゴ糖４-ｍｅｒをヒアルロン酸オリゴ糖１０-ｍｅｒに、フェニルアラニンをフェニルアラニルグリシルグリシンに変えたこと以外、製造例４６と同様にして、目的物を得た。（５ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図５１に示す。

製造例５４
ヒアルロン酸オリゴ糖４-ｍｅｒをヒアルロン酸オリゴ糖１０-ｍｅｒに変えたこと以外、製造例４６と同様にして、目的物を得た。（５ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図５２に示す。

製造例４５〜５４の目的物の構造を下記表７に記す。

実施例１〜４８ 本発明化合物の製造
以下の実施例１〜４８に記載の方法により、表８〜１４で示される本発明化合物を製造した。なお、質量分析は、ＱＳＴＡＲ ｐｕｌｓａｒ ｉ（アプライドシステムズジャパン株式会社）による。

実施例１
製造例１で合成した化合物（１２ｍｇ）を水（１ｍｌ）に溶解し、トリブチルアミン（１００μｌ）を加えて撹拌した後、減圧下で濃縮した。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍｌ）を加えて共沸を２回行なった。残渣をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍｌ）に溶解し、ピリジン・三酸化硫黄（１５０ｍｇ）を加えて、窒素雰囲気下４２℃で３時間撹拌した。
４℃下、水（１ｍｌ）を加えた後、飽和酢酸ナトリウムエタノール溶液（３０ｍｌ）を加えて沈殿化させ、Ｖｏｌｔｅｘ ｍｉｘｅｒで撹拌した後、冷却遠心分離（４℃、３０００ｒｐｍ、１５分）して、沈殿物を捕集した。上清を捨て、残渣に水（１ｍｌ）を加えて溶解し、飽和酢酸ナトリウムエタノール溶液（２０ｍｌ）を加えて沈殿化させ、Ｖｏｌｔｅｘ ｍｉｘｅｒで撹拌した後、冷却遠心分離（４℃、３０００ｒｐｍ、１５分）して、沈殿物を捕集した。再度、上清を捨て、残渣に水（１ｍｌ）を加えて溶解し、飽和酢酸ナトリウムエタノール溶液（２０ｍｌ）を加えて沈殿化させ、Ｖｏｌｔｅｘ ｍｉｘｅｒで撹拌した後、冷却遠心分離（４℃、３０００ｒｐｍ、１５分）して、沈殿物を捕集した。上清を捨て、残渣を水（２ｍｌ）に溶解した後、減圧濃縮した。
残渣を水（２ｍｌ）に溶解し、ディスクフィルター（日本ポール社製、０．４５μｍ）にてろ過した。ＡＫＴＡシステム（GEヘルスケア バイオサイエンス株式会社製）を用いてゲルろ過クロマトグラフィー（Ｇ−１０、１６ｍｍ x ６００ｍｍ、水）を行い脱塩し、目的の画分を凍結乾燥して、化合物１を得た。（２４ｍｇ、白色粉末）
[Ｍ+２Ｎａ]²⁺：９９４．７５
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図５３に示す。

実施例２
原料を製造例２で得られた化合物（４７ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１と同様にして、化合物２を得た。（７６ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図５４に示す。

実施例３
原料を製造例３で得られた化合物（５１ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１と同様にして、化合物３を得た。（１０８ｍｇ、白色粉末）
[Ｍ+３Ｎａ]³⁺：１２１０．１０
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図５５に示す。

実施例４
原料を製造例４で合成した化合物（４８ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１と同様にして、化合物４を得た。（９２ｍｇ、白色粉末）
[Ｍ+３Ｎａ]³⁺：１４７９．７３
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図５６に示す。
実施例５
原料を製造例５で得られた化合物（６０ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１と同様にして、化合物５を得た。（１１２ｍｇ、白色粉末）
[Ｍ+４Ｎａ]⁴⁺：１３１７．７４
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図５７に示す。

実施例６
原料を製造例６で得られた化合物（２０ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１と同様にして、化合物６を得た。（２２ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図５８に示す。

実施例７
製造例７で得られた化合物（１０ｍｇ）にをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍｌ）に溶解し、ピリジン・三酸化硫黄（１５０ｍｇ）を加えて、窒素雰囲気下４２℃で３時間撹拌した。
４℃下、水（１ｍｌ）を加えた後、飽和酢酸ナトリウムエタノール溶液（２５ｍｌ）を加えて沈殿化させ、Ｖｏｌｔｅｘ ｍｉｘｅｒで撹拌した後、冷却遠心分離（４℃、３０００ｒｐｍ、１５分）して、沈殿物を捕集した。上清を捨て、残渣に水（１ｍｌ）を加えて溶解し、飽和酢酸ナトリウムエタノール溶液（２０ｍｌ）を加えて沈殿化させ、Ｖｏｌｔｅｘ ｍｉｘｅｒで撹拌した後、冷却遠心分離（４℃、３０００ｒｐｍ、１５分）して、沈殿物を捕集した。再度、上清を捨て、残渣に水（１ｍｌ）を加えて溶解し、飽和酢酸ナトリウムエタノール溶液（２０ｍｌ）を加えて沈殿化させ、Ｖｏｌｔｅｘ ｍｉｘｅｒで撹拌した後、冷却遠心分離（４℃、３０００ｒｐｍ、１５分）して、沈殿物を捕集した。上清を捨て、残渣を水（２ｍｌ）に溶解した後、減圧濃縮した。
残渣を水（２ｍｌ）に溶解し、ディスクフィルター（日本ポール社製、０．４５μｍ）にてろ過した。ＡＫＴＡシステム（GEヘルスケア バイオサイエンス株式会社製）を用いてゲルろ過クロマトグラフィー（Ｇ−１０、１６ｍｍ x ６００ｍｍ、水）を行い脱塩し、目的の画分を凍結乾燥して、化合物７を得た。（１６ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図５９に示す。

実施例８
原料を製造例８で得られた化合物（２０ｍｇ）に変えたこと以外、実施例７と同様にして、化合物８を得た。（３３ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図６０に示す。

実施例９
原料を製造例９で得られた化合物（３９ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１と同様にして、化合物９を得た。（９０ｍｇ、白色粉末）
[Ｍ+５Ｎａ]⁵⁺：１７０７．０７
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図６１に示す。

実施例１０
原料を製造例１０で得られた化合物（２４ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１と同様にして、化合物１０を得た。（４８ｍｇ、白色粉末）
[Ｍ+３Ｎａ]³⁺：１４９３．４２
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図６２に示す。

実施例１１
原料を製造例１１で得られた化合物（１７ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１と同様にして、化合物１１を得た。（３４ｍｇ、白色粉末）
[Ｍ+３Ｎａ]³⁺：１５０５．１１
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図６３に示す。

実施例１２
原料を製造例１２で得られた化合物（１０ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１と同様にして、化合物１２を得た。（１０ｍｇ、白色粉末）
実施例１３
原料を製造例１３で得られた化合物（１０ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１と同様にして、化合物１３を得た。（２１ｍｇ、白色粉末）

化合物１〜１３の構造を下記表８に記す。

実施例１４
製造例１４で得られた化合物（１８ｍｇ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍｌ）に溶解し、ピリジン・三酸化硫黄（３００ｍｇ）を加えて、窒素雰囲気下４２℃で３時間撹拌した。
４℃下、水（１ｍｌ）を加えた後、飽和酢酸ナトリウムエタノール溶液（２５ｍｌ）を加えて沈殿化させ、Ｖｏｌｔｅｘ ｍｉｘｅｒで撹拌した後、冷却遠心分離（４℃、３０００ｒｐｍ、１５分）して、沈殿物を捕集した。上清を捨て、残渣に水（１ｍｌ）を加えて溶解し、飽和酢酸ナトリウムエタノール溶液（２０ｍｌ）を加えて沈殿化させ、Ｖｏｌｔｅｘ ｍｉｘｅｒで撹拌した後、冷却遠心分離（４℃、３０００ｒｐｍ、１５分）して、沈殿物を捕集した。再度、上清を捨て、残渣に水（１ｍｌ）を加えて溶解し、飽和酢酸ナトリウムエタノール溶液（２５ｍｌ）を加えて沈殿化させ、Ｖｏｌｔｅｘ ｍｉｘｅｒで撹拌した後、冷却遠心分離（４℃、３０００ｒｐｍ、１５分）して、沈殿物を捕集した。上清を捨て、残渣を水（２ｍｌ）に溶解した後、ディスクフィルター（日本ポール社製、０．４５μｍ）にてろ過した。ＡＫＴＡシステム（GEヘルスケア バイオサイエンス株式会社製）を用いてゲルろ過クロマトグラフィー（Ｇ−１０、１６ｍｍ x ６００ｍｍ、水）を行い脱塩し、目的の画分を凍結乾燥して、化合物１４を得た。（３０ｍｇ、白色粉末）
[Ｍ+２Ｎａ]²⁺：７９１．３０
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図６４に示す。

実施例１５
原料を製造例１５で得られた化合物（３４ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１４と同様にして、化合物１５を得た。（７２ｍｇ、白色粉末）
[Ｍ+３Ｎａ]³⁺：８０４．８３
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図６５に示す。

実施例１６
原料を製造例１６で得られた化合物（８ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１４と同様にして、化合物１６を得た。（１１ｍｇ、白色粉末）
[Ｍ+３Ｎａ]³⁺：１０７４．４２
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図６６に示す。

実施例１７
原料を製造例１７で得られた化合物（８ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１４と同様にして、化合物１７を得た。（１４ｍｇ、白色粉末）
[Ｍ+３Ｎａ]³⁺：１３４４．０６
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図６７に示す。

実施例１８
原料を製造例１８で得られた化合物（１６ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１４と同様にして、化合物１８を得た。（２３ｍｇ、白色粉末）
[Ｍ+４Ｎａ]⁴⁺：１２１７．００
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図６８に示す。

実施例１９
原料を製造例１９で得られた化合物（１１ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１４と同様にして、化合物１９を得た。（９ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図６９に示す。

実施例２０
原料を製造例２０で得られた化合物（５ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１４と同様にして、化合物２０を得た。（８ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図７０に示す。

実施例２１
原料を製造例２１で得られた化合物（８ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１４と同様にして、化合物２１を得た。（１１ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図７１に示す。

実施例２２
原料を製造例２２で得られた化合物（１３ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１４と同様にして、化合物２２を得た。（１４ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図７２に示す。

化合物１４〜２２の構造を下記表９に記す。

実施例２３
原料を製造例２３で得られた化合物（８ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１４と同様にして、化合物２３を得た。（１４ｍｇ、白色粉末）
[Ｍ+２Ｎａ]²⁺：７９３．８１
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図７３に示す。

実施例２４
原料を製造例２４で得られた化合物（４ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１４と同様にして、化合物２４を得た。（７ｍｇ、白色粉末）
[Ｍ+２Ｈ]²⁺：１１７６．２５
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図７４に示す。

実施例２５
原料を製造例２５で得られた化合物（８ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１４と同様にして、化合物２５を得た。（１１ｍｇ、白色粉末）
[Ｍ+３Ｎａ]³⁺：１０７６．１０
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図７５に示す。

実施例２６
原料を製造例２６で得られた化合物（１５ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１４と同様にして、化合物２６を得た。（２６ｍｇ、白色粉末）
[Ｍ+３Ｎａ]³⁺：１３４５．７２
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図７６に示す。

実施例２７
原料を製造例２７で得られた化合物（７ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１４と同様にして、化合物２７を得た。（１１ｍｇ、白色粉末）
[Ｍ+４Ｎａ]⁴⁺：１６１６．６７
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図７７に示す。

実施例２８
原料を製造例２８で得られた化合物（５ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１４と同様にして、化合物２８を得た。（７ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図７８に示す。

化合物２３〜２８の構造を下記表１０に記す。

実施例２９
原料を製造例２９で得られた化合物（９ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１４と同様にして、化合物２９を得た。（１６ｍｇ、白色粉末）
[Ｍ+２Ｈ]²⁺：９７２．７７
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図７９に示す。

実施例３０
原料を製造例３０で得られた化合物（７ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１４と同様にして、化合物３０を得た。（８ｍｇ、白色粉末）
[Ｍ+２Ｈ]²⁺：１３７７．２０
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図８０に示す。

実施例３１
原料を製造例３１で得られた化合物（１５ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１４と同様にして、化合物３１を得た。（２１ｍｇ、白色粉末）
[Ｍ+３Ｎａ]³⁺：１２１０．０７
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図８１に示す。

実施例３２
原料を製造例３２で得られた化合物（８ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１４と同様にして、化合物３２を得た。（９ｍｇ、白色粉末）
[Ｍ+３Ｈ]³⁺：１４５８．３４
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図８２に示す。

実施例３３
原料を製造例３３で得られた化合物（５ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１４と同様にして、化合物３３を得た。（７ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図８３に示す。

化合物２９〜３３の構造を下記表１１に記す。

実施例３４
製造例３６で合成した化合物（７ｍｇ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．７ｍｌ）に溶解し、トリエチルアミン・三酸化硫黄（７５ｍｇ）、トリフルオロメタンスルホン酸（１２μｌ）を加えて、窒素雰囲気下０℃で４８時間撹拌した。
０℃下、水（１ｍｌ）を加えた後、飽和酢酸ナトリウムエタノール溶液（２５ｍｌ）を加えて沈殿化させ、Ｖｏｌｔｅｘ ｍｉｘｅｒで撹拌した後、冷却遠心分離（４℃、３０００ｒｐｍ、１５分）して、沈殿物を捕集した。上清を捨て、残渣に水（１ｍｌ）を加えて溶解し、飽和酢酸ナトリウムエタノール溶液（２５ｍｌ）を加えて沈殿化させ、Ｖｏｌｔｅｘ ｍｉｘｅｒで撹拌した後、冷却遠心分離（４℃、３０００ｒｐｍ、１５分）して、沈殿物を捕集した。再度、上清を捨て、残渣に水（１ｍｌ）を加えて溶解し、飽和酢酸ナトリウムエタノール溶液（２５ｍｌ）を加えて沈殿化させ、Ｖｏｌｔｅｘ ｍｉｘｅｒで撹拌した後、冷却遠心分離（４℃、３０００ｒｐｍ、１５分）して、沈殿物を捕集した。上清を捨て、残渣を水（２ｍｌ）に溶解した後、ディスクフィルター（日本ポール社製、０．４５μｍ）にてろ過した。ＡＫＴＡシステム（GEヘルスケア バイオサイエンス株式会社製）を用いてゲルろ過クロマトグラフィー（Ｇ−１０、１６ｍｍ x ６００ｍｍ、水）を行い脱塩し、目的の画分を凍結乾燥して、化合物３４を得た。（９ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図８４に示す。

実施例３５
原料を製造例３７で得られた化合物（１０ｍｇ）に変えたこと以外、実施例３４と同様にして、化合物３５を得た。（１４ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図８５に示す。

実施例３６
原料を製造例３８で得られた化合物（１０ｍｇ）に変えたこと以外、実施例３４と同様にして、化合物３６を得た。（１５ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図８６に示す。

化合物３４〜３６の構造を下記表１２に記す。

実施例３７
原料を製造例４１で得られた化合物（９ｍｇ）に変えたこと以外、実施例３４と同様にして、化合物３７を得た。（１１ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図８７に示す。

実施例３８
原料を製造例４４で得られた化合物（１２ｍｇ）に変えたこと以外、実施例３４と同様にして、化合物３８を得た。（２０ｍｇ、黄色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図８８に示す。

化合物３７〜３８の構造を下記表１３に記す。

実施例３９
原料を製造例４５で得られた化合物（８ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１４と同様にして、化合物３９を得た。（１２ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図８９に示す。

実施例４０
原料を製造例４６で得られた化合物（１０ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１４と同様にして、化合物４０を得た。（１６ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図９０に示す。

実施例４１
原料を製造例４７で得られた化合物（８ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１４と同様にして、化合物４１を得た。（１４ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図９１に示す。

実施例４２
原料を製造例４８で得られた化合物（７ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１４と同様にして、化合物４２を得た。（１２ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図９２に示す。

実施例４３
原料を製造例４９で得られた化合物（４ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１４と同様にして、化合物４３を得た。（９ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図９３に示す。

実施例４４
原料を製造例５０で得られた化合物（１０ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１４と同様にして、化合物４４を得た。（２４ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図９４に示す。

実施例４５
原料を製造例５１で得られた化合物（１０ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１４と同様にして、化合物４５を得た。（２１ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図９５に示す。

実施例４６
原料を製造例５２で得られた化合物（１２ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１４と同様にして、化合物４６を得た。（１５ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図９６に示す。

実施例４７
原料を製造例５３で得られた化合物（５ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１４と同様にして、化合物４７を得た。（９ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図９７に示す。

実施例４８
原料を製造例５４で得られた化合物（５ｍｇ）に変えたこと以外、実施例１４と同様にして、化合物４８を得た。（９ｍｇ、白色粉末）
¹Ｈ−ＮＭＲ：チャートを図９８に示す。

化合物３９〜４８の構造を下記表１４に記す。

参考例１〜７
表１５で示される本発明化合物（既知化合物）を、文献Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ, ｖｏｌ.１１, Ｎｏ.１, ｐｐ.５７-６４, ２００１に記載の方法に従って製造した。

参考例１
購入入手したヒアルロン酸ナトリウム（資生堂製、ＢＩＯ Ｓｏｄｉｕｍ Ｈｙａｌｕｒｏｎａｔｅ ＨＡ９）とウシ精巣由来ヒアルロニダーゼ(ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製、Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｄａｓｅ Ｂｏｖｉｎｅ Ｔ １００ＫＵ)から、文献Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ, ｖｏｌ.１２, Ｎｏ.７, ｐｐ.４２１-４２６, ２００２に従って分離したヒアルロン酸オリゴ糖４-ｍｅｒ（２０ｍｇ）を原料にし、上記文献Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ, ｖｏｌ.１１, Ｎｏ.１, ｐｐ.５７-６４, ２００１に従って、化合物４９を得た。（２１ｍｇ、白色粉末）

参考例２
原料をヒアルロン酸オリゴ糖１０-ｍｅｒ（４３ｍｇ）に変えたこと以外、参考例１と同様にして、化合物５０を得た。（８６ｍｇ、白色粉末）

参考例３
原料をヒアルロン酸オリゴ糖１６-ｍｅｒ（７５ｍｇ）に変えたこと以外、参考例１と同様にして、化合物５１を得た。（８０ｍｇ、白色粉末）

参考例４
原料をヒアルロン酸オリゴ糖２０-ｍｅｒ（２３ｍｇ）に変えたこと以外、参考例１と同様にして、化合物５２を得た。（４２ｍｇ、白色粉末）

参考例５
原料をヒアルロン酸オリゴ糖２２-ｍｅｒ（１７ｍｇ）に変えたこと以外、参考例１と同様にして、化合物５３を得た。（２５ｍｇ、白色粉末）

参考例６
原料をヒアルロン酸オリゴ糖２４〜３２-ｍｅｒ（２０ｍｇ）に変えたこと以外、参考例１と同様にして、化合物５４を得た。（１８ｍｇ、白色粉末）

参考例７
原料をヒアルロン酸オリゴ糖３４〜４６-ｍｅｒ（２４ｍｇ）に変えたこと以外、参考例１と同様にして、化合物５５を得た。（３９ｍｇ、白色粉末）
化合物４９〜５５の構造を下記表１５に記す。

試験例１：抗アレルギー作用；モルモットアレルギー性鼻炎モデル（鼻閉モデル）
実験には、Ｈａｒｔｌｅｙ系モルモット（雄、初回感作時６〜７週齢）を用いた。
入荷した動物は、検疫及び順化のため、７日間以上の予備飼育後、実験に使用した。
初回感作として、１ｍｌ中に卵白アルブミン（ＯＶＡ）１ｍｇ及び水酸化アルミニウムゲル（Ａｌｕｍ）１０ｍｇを含有する生理食塩水溶液を、動物あたり１ｍｌ背部皮下に投与した。初回感作1週間後の１回、又は１週間後と２週間後の２回、１０ｍｇ／ｍｌのＯＶＡ生理食塩水溶液を２０μｌずつ、マイクロピペットを用いて両側の鼻腔内に投与することで局所感作を行った。
群分けは、感作終了日の体重及び感作開始日から感作終了日までの体重変動を指標とし、二次元層別無作為抽出法により行なった。
最終感作１週間後、２０ｍｇ／ｍｌのＯＶＡ生理食塩水溶液を１０μｌずつ、両側の鼻腔内に投与し、抗原抗体反応を誘発した。Control群（非誘発群）には同様に生理食塩水を投与した。
被験物質は、誘発３０分前に、１０μｌずつ、両側の鼻腔内に投与した。被験物質は、生理食塩水に溶解し、５００μｇ／ｍｌの濃度の溶液を投与に使用した。Ｃｏｎｔｒｏｌ群（非誘発群）及びＳａｌｉｎｅ群（溶媒対照群）には、同様に生理食塩水を投与した。尚、対照薬（化合物０）として「Flunase」（グラクソ・スミスクライン株式会社製）を使用した。
鼻腔抵抗の測定は、誘発当日の誘発前、誘発１０分後、２、３、４、５、６及び７時間後に行った。各測定時間に１回、それぞれ１００呼吸分の鼻腔抵抗（ｎａｓａｌ ａｉｒｗａｙ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ, ｎＲａｗ）を測定し、その平均値を各測定時間におけるｎＲａｗとし、ｎＲａｗの増加率を算出して鼻腔抵抗の指標とした。
鼻腔抵抗（ｎＲａｗ）の増加率（％）は次式で求めた。

評価は、誘発１０分後におけるｎＲａｗの増加率（即時型鼻腔抵抗）及び誘発後３〜７時間におけるｎＲａｗの増加率の曲線下面積(ＡＵＣ_3-7hr，遅発型鼻腔抵抗)で行った。

結果を図９９及び図１００に示す。
図９９及び図１００から、本発明化合物は、即時型アレルギー反応抑制効果を示すとともに、遅発型アレルギー反応抑制効果を示す。

試験例２：ＰＣＡ（Ｐａｓｓｉｖｅ Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ Ａｎａｐｈｙｌａｘｉｓ：受動皮膚アナフィラキシー反応）抑制効果
実験には、Ｈａｒｔｌｅｙ系モルモット（雄、５週齢以上）を用いた。
モルモットにＯＶＡを免疫して得た抗ＯＶＡ血清を生理食塩水で５００倍に希釈した（Ａ液）。
下記表１６に示す被験物質を生理食塩水で２００μｇ／ｍｌに希釈した（Ｂ液）。
Ｂ液を２５０倍に希釈したモルモット抗ＯＶＡ血清と等量ずつ混合し、最終濃度を被験物質１００μｇ／ｍｌ、抗ＯＶＡ血清５００倍にした（Ｃ液）。
エーテル麻酔後に背部剪毛したモルモットの背部に、１スポットあたり１００μｌの生理食塩水、Ａ液、あるいはＣ液を皮内注射した。
約３時間後に、０．２〜０．４％のＯＶＡを含む０．５％エバンスブルー生理食塩水溶液を０．８〜１ｍｌ／ｂｏｄｙで静脈内投与した。
３０分以内に放血して皮を剥ぎ、各スポットの色素量を画像処理により定量した。画像処理において、抗ＯＶＡ血清のみ投与のスポットの色素量を１００％とした時の被験物質による抑制度を調べた。結果を表１６に示す。（N = 3 or 6）

上記表１６から本発明化合物はＰＣＡ抑制効果を示す。

試験例３：血管透過性亢進能試験
実験には、Ｈａｒｔｌｅｙ系モルモット（雄、５週齢以上）を用いた。
被験物質を生理食塩水にて１００μｇ／ｍｌに希釈した。
また、コントロールとして硫酸化ヒアルロン酸（４糖〜約７０糖の混合物；特開平１１−１４７９０１号公報の実施例（製造例１）などに従って合成。）を用いた。
エーテル麻酔後に背部剪毛したモルモットの背部に、１スポットあたり１００μｌの生理食塩水、あるいは被験物質の生理食塩水溶液を皮内注射した。
０．５％エバンスブルー生理食塩水溶液を１ｍｌ／ｂｏｄｙで静脈内投与した。
３０分以内に放血して皮を剥ぎ、各スポットの色素量を画像処理により定量した。
結果を、デキストラン（ｄｅｘｔｒａｎ ｓｕｌｆａｔｅ １００００）投与のスポットの色素量を１００％とした時の被験物質の血管透過率として図１０１〜図１０３に示す。

図１０１〜図１０３から、本発明化合物は、公知の高分子の多硫酸化ヒアルロン酸と異なり、血管透過亢進能がなく、それ自体副作用となる刺激作用を示さないことがわかる。

試験例４：長期安定性（水溶液中）
化合物４及び化合物５０について、１ｍｇ／ｍｌ水溶液を調整し、ＨＰＬＣ分析を行なった。
これらの溶液を冷所（２〜８℃）及び室温でそれぞれ保存し、経時的に４ヶ月までＨＰＬＣ分析を行い、それぞれのピークのパターン変化を調べた。

ＨＰＬＣ条件：
カラム：Ｍｉｇｈｔｙｓｉｌ ＲＰ−１８ ＧＰ（３μｍ、４．６ｘ５０ｍｍ）
カラム温度：４０℃
移動相Ａ：２ｍＭのＴＢＡＰを含む２０ｍＭ ＫＨ₂ＰＯ₄／ＭｅＣＮ（７０：３０）
移動相Ｂ：ＭｅＣＮ／２ｍＭのＴＢＡＰを含む２０ｍＭ ＫＨ₂ＰＯ₄（８０：２０）
グラジエント条件：Ｉｎｉｔｉａｌ；Ａ １００％、Ｂ０％
０分〜２０分で、Ａ １００→９５％、Ｂ ０→５％，直線
流量：１ｍｌ／ｍｉｎ
検出：ＵＶ（２１０ｎｍ）
注入量：約５μｇ／５μｌ
（ＴＢＡＰ：ｔｅｔｒａｂｕｔｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）
結果を下記表１７に示す。

上記表１７から、化合物５０は、冷所保存においても３本認められる主ピークのうちの２本目の経時的増加と３本目の経時的減少が認められ、水溶液中で不安定であるのに対し、化合物４は室温保存においても４ヶ月間ピークパターンに変化は認められず、水溶液中で安定であることがわかった。
一般式（ＩＡ）のＹが（ｄ）又は（ｅ）である化合物群及び一般式（ＩＢ）である化合物群は、低分子量多硫酸化ヒアルロン酸誘導体の中でも、水溶液中での安定性の高い化合物として、特に有用である。

本発明の低分子量多硫酸化ヒアルロン酸誘導体又はその製薬学的に許容される塩は、血管透過性亢進能が少なく、従って炎症性の副作用が少なく安全性に優れた、アレルギー性疾患の予防及び／又は治療剤として使用しうる。

Claims (7)

1. 下記一般式（ＩＢ）：
   

   

   〔式中、ｎは０〜１５の数を示し、Ｗは次式（ｆ）又は（ｇ）：
   

   

   を示し、Ｒはそれぞれ独立して水素原子又はＳＯ₃Ｈ基を示し（但し、Ｒの総数当たり８０〜１００％をＳＯ₃Ｈ基が占める）、Ｒ¹は−ＯＨ、−ＯＳＯ₃Ｈ又は−ＮＺ₁Ｚ₂（ここで、Ｚ₁及びＺ₂は、独立して水素原子、−ＳＯ₃Ｈ、置換されていてもよい低級アルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基又は置換されていてもよいヘテロアリール基を示すか、或いは−ＮＺ₁Ｚ₂全体でアミノ酸残基もしくはペプチド残基を示す。〕
   で表される低分子量多硫酸化ヒアルロン酸誘導体又はその製薬学的に許容される塩を有効成分とする花粉症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎及び喘息から選ばれるアレルギー性疾患の予防及び／又は治療剤。
2. ｎが３、４又は５である、請求項１記載の予防及び／又は治療剤。
3. ｎが４又は５である、請求項２記載の予防及び／又は治療剤。
4. 花粉症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎及び喘息から選ばれるアレルギー性疾患の予防及び／又は治療剤の製造のための請求項１〜３のいずれかに記載の低分子量多硫酸化ヒアルロン酸誘導体又はその製薬学的に許容される塩の使用。
5. 下記一般式（ＩＢ）：
   

   

   〔式中、ｎは０〜１５の数を示し、Ｗは次式（ｆ）又は（ｇ）：
   

   

   を示し、Ｒはそれぞれ独立して水素原子又はＳＯ₃Ｈ基を示し（但し、Ｒの総数当たり８０〜１００％をＳＯ₃Ｈ基が占める）、Ｒ¹は−ＯＨ、−ＯＳＯ₃Ｈ又は−ＮＺ₁Ｚ₂（ここで、Ｚ₁及びＺ₂は、独立して水素原子、−ＳＯ₃Ｈ、置換されていてもよい低級アルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基又は置換されていてもよいヘテロアリール基を示すか、或いは−ＮＺ₁Ｚ₂全体でアミノ酸残基もしくはペプチド残基を示す。〕
   で表される低分子量多硫酸化ヒアルロン酸誘導体又はその製薬学的に許容される塩。
6. ｎが３、４又は５である、請求項５記載の低分子量多硫酸化ヒアルロン酸誘導体又はその製薬学的に許容される塩。
7. 請求項５又は６記載の低分子量多硫酸化ヒアルロン酸誘導体又はその製薬学的に許容される塩、及び製薬学的に許容される賦形剤を含有する医薬組成物。

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