JP2004137183A - グリコサミノグリカン又はその塩を含む経口投与用医薬品、健康食品又は栄養薬品組成物 - Google Patents
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Abstract
【課題】グリコサミノグリカン及び／又はグリコサミノグリカン塩の経口吸収を向上させ、それらが本来有するた薬効を高め、また速効させた医薬品、健康食品及び栄養薬品組成物を提供する。
【解決手段】グリコサミノグリカン及びその塩からなる群より選ばれた１種又は２種以上と、サポニン及びその塩からなる群より選ばれた１種又は２種以上とを含有する経口投与用医薬品、健康食品又は栄養薬品組成物である。グリコサミノグリカン又はその塩は、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸塩、デルマタン硫酸、デルマタン硫酸塩、コンドロイチン、コンドロイチン硫酸、コンドロイチン硫酸塩などである。サポニンは大豆サポニンが好ましい。グリコサミノグリカン及びその塩からなる群より選ばれた１種又は２種以上に対する、サポニン及びその塩からなる群より選ばれた１種又は２種以上の配合割合は質量比で１：０．０００１〜２が好ましい。
【解決手段】グリコサミノグリカン及びその塩からなる群より選ばれた１種又は２種以上と、サポニン及びその塩からなる群より選ばれた１種又は２種以上とを含有する経口投与用医薬品、健康食品又は栄養薬品組成物である。グリコサミノグリカン又はその塩は、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸塩、デルマタン硫酸、デルマタン硫酸塩、コンドロイチン、コンドロイチン硫酸、コンドロイチン硫酸塩などである。サポニンは大豆サポニンが好ましい。グリコサミノグリカン及びその塩からなる群より選ばれた１種又は２種以上に対する、サポニン及びその塩からなる群より選ばれた１種又は２種以上の配合割合は質量比で１：０．０００１〜２が好ましい。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、人間や動物の結合組織（特に関節）の回復・維持、ひいては老化の防止、肌荒れ、小皺の改善や女性のバストの発育の増進、視力の回復・維持などの美容・健康の促進、回復、維持のための経口投与用の医薬品、健康食品又は栄養薬品（ｎｕｔｒａｃｅｕｔｉｃａｌ）組成物に関係するものである。
【０００２】
【従来技術】
グリコサミノグリカン（以下、「ＧＡＧ」ということがある）は、ヒトの皮膚、腱、筋肉、軟骨、血管、脳など広範囲に体内に存在する生体成分であり、分子量５千〜数百万にもおよぶ高分子量のヒアルロン酸、並びにタンパク質に結合してプロテオグリカンとして存在するコンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸などが知られている。これらのＧＡＧは、直鎖の酸性多糖で、Ｎ−アセチルへキソサミンとウロン酸がβ−１，３結合した二糖単位がβ−１，４−ヘキソサミド結合した繰り返し構造を持つ。
【０００３】
ヒアルロン酸は分子量が大きく、互いに反発する陰イオン性カルボキシル基を多く有すため、溶液中では乾燥時に比べ、１０００倍もの容積を占め、高度に水和された分子として存在する。溶液中で大量の水と水和していることはヒアルロン酸が関節における潤滑剤やショック吸収剤として働くのに役立つ性質でありヒアルロン酸の極めて特長的な物理的性質である。臨床面では、眼科領域でヒアルロン酸やそのナトリウム塩が、それらの角膜上皮創傷治癒促進作用及び保水作用により、角結膜上皮障害治療用点眼剤として用いられている。またヒアルロン酸又はその塩は、変形性膝関節症や肩関節周囲炎の治療薬として、また膀胱炎治療薬として、更に血中脂質低下剤として有効である。さらに、最近では、化粧品や洗髪剤にヒアルロン酸が含まれている他、食用にもされ、皮膚の若返り、関節の柔軟性の回復、各種炎症の緩和などの観点から注目されている（非特許文献１、特許文献１〜３参照）
【０００４】
また、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸は、組織の構築及び水分の保持、細胞膜の水分や電解質の調整、免疫系の活性化などに重要な役割を果たしているものと推定されている。デルマタン硫酸は糖尿病性腎炎に対する消炎作用や、経口投与したコンドロイチン硫酸の関節炎に対する効果などが注目を集めている。また、コンドロイチン硫酸又はその誘導体や大豆抽出物などを皮膚外用剤に含有させることが提案されている（非特許文献２〜３、特許文献４参照）。
【０００５】
しかし、ＧＡＧの体内動態、すなわち腸管吸収の可能性及び代謝経路は、未だ不明な点が多く、実際に経口投与したＧＡＧの薬理的効果は定かでない。近年、生体内におけるＧＡＧの生理活性とその機能が注目されており、特に食用ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸などが健康食品として広く普及していることから、経口投与によるＧＡＧの吸収に関する解明が必要とされる。ＧＡＧの体内動態を調べるため、ＧＡＧ分析を目的とした前処理法も検討されてきたが、従来のＣＰＣ沈殿法は煩雑な操作に熟練を要し、信頼性に欠けていた。最近、限外濾過膜を用いた前処理法が発表された（非特許文献４参照）。
【０００６】
【特許文献１】
国際公開第９８／２９１２５号パンフレット
【特許文献２】
特開２０００−１０２３６２号公報
【特許文献３】
特開平５−３２００５８号公報
【特許文献４】
特開２００２−１４５７５２号公報
【非特許文献１】
Ａｔｈａｎａｓｉｏｕ ＫＡ ｅｔ ａｌ．，“Ｂａｓｉｃ ｓｃｉｅｎｃｅ ｏｆ ａｒｔｉｃｕｌａｒ ｃａｒｔｉｌａｇｅ ｒｅｐａｉｒ．”，Ｃｌｉｎ． Ｓｐｏｒｔｓ Ｍｅｄ．， ２００１；２０（２）：２２３−２４７．
【非特許文献２】
Ｏｆｏｓｕ ＦＡ．，“Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｓｕｌｏｄｅｘｉｄｅ．” Ｓｅｍｉｎ． Ｔｈｒｏｍｂ． Ｈｅｍｏｓｔ．， １９９８；２４（２）：１２７−１３８．
【非特許文献３】
Ｅｃｈａｒｄ ＢＷ ｅｔ ａｌ．，“Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｏｒａｌ ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ ａｎｄ ｃｈｏｎｄｒｏｉｔｉｎ ｓｕｌｆａｔｅａｌｏｎｅ ａｎｄ ｉｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｏｆ ＳＨＲ ａｎｄ ＳＤ ｒａｔｓ．” Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ．， ２００１；２２５（１−）：８５−９１．
【非特許文献４】
Ｓａｋａｉ Ｓ． ｅｔ ａｌ．，“Ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｍｉｃｒｏｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆｃｈｏｎｄｒｏｉｔｉｎ ｓｕｌｆａｔｅ ｉｎ ｐｌａｓｍａ ａｎｄ ｕｒｉｎｅ．”，Ａｎａｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．， ２００２；３０２（２）：１６９−１７４．
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、グリコサミノグリカン及び／又はグリコサミノグリカン塩の経口吸収を従来に比べ向上させた組成物を提供することを目的とする。すなわち、従来、経口投与しても元の分子量を維持した形で、有効に吸収させる方法がなかったグリコサミノグリカン及び／又はグリコサミノグリカン塩を経口吸収容易にした医薬品、健康食品又は栄養薬品組成物を提供することを目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、グリコサミノグリカン又はその塩の人体への経口吸収の増大を目的に研究した結果、ＧＡＧとサポニンを同時に経口投与することでＧＡＧの吸収に影響するかどうかを、非特許文献４記載の限外濾過膜を用いた前処理法を利用して経口投与したＧＡＧの体内動態を確認しながら、種々実験を行ったところ、意外にもサポニン添加によりＧＡＧの経口吸収が飛躍的に増大することを知見し、本発明を完成させた。
【０００９】
すなわち本発明は、グリコサミノグリカン及びその塩からなる群より選ばれた１種又は２種以上と、サポニン及びその塩からなる群より選ばれた１種又は２種以上とを含有することを特徴とする経口投与用医薬品、健康食品又は栄養薬品組成物である。グリコサミノグリカン及びその塩からなる群より選ばれた１種又は２種以上に対する、サポニン及びその塩からなる群より選ばれた１種又は２種以上の配合割合は質量比で１：０．０００１〜２が好ましい。
【００１０】
【発明の実施の形態】
本発明で用いるグリコサミノグリカン又はその塩は、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸塩、デルマタン硫酸、デルマタン硫酸塩、コンドロイチン、コンドロイチン硫酸、コンドロイチン硫酸塩などである。本発明では、これらのうちの１種又は２種以上を用いる。本発明で用いるグリコサミノグリカンの分子量は特に限定されないが、通常７千〜１００万、好ましくは７千〜１０万更に好ましくは１万〜３万程度である。本発明で用いるグリコサミノグリカンは、薬理学的に許容できる塩の形態にあってもよい。このような塩としてはナトリウム塩やカリウム塩のようなアルカリ金属塩、カルシウム塩、アルミニウム塩等を挙げることができるがこれらに限定されるものではない。
【００１１】
本発明で用いるグリコサミノグリカン又はその塩としては、動植物を抽出して得られたグリコサミノグリカン又はその塩を含有する抽出物が好ましく用いられる。例えば、鶏冠を抽出して得られたヒアルロン酸含有鶏冠エキス、魚類軟骨を抽出して得られたコンドロイチン硫酸含有抽出物、ブタ小腸粘膜やへその緒などを抽出して得られるヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸の複合ムコ多糖類含有抽出物などが用いられ、更に微生物醗酵抽出物も利用できる。
【００１２】
本発明で用いるサポニン又はその塩としては、大豆から得られるサポニン又はサポニン塩或はこれらの混合物が好ましく用いられる。大豆サポニンは、大豆グループＡサポニン、大豆グループＢサポニン、大豆グループＥサポニン、ＤＤＭＰサポニンなどが知られているが、特に限定されない。大豆を抽出して得られたサポニン又はその塩を含有する抽出物を用いるのが特に好ましい。
【００１３】
本発明において、グリコサミノグリカン又はその塩に対するサポニン又はその塩の配合割合は、質量比で１：０．０００１〜２である。その配合割合が１：０．０００１未満ではサポニン又はその塩の配合割合が少ないため、グリコサミノグリカン及びその塩の経口吸収作用が十分に発揮されなく、また配合比が１：２を超えてサポニン又はその塩を増量してもそれに応じた経口吸収効果の向上は期待できない。また、グリコサミノグリカン及びその塩の１回の服用量は、その種類、使用の目的によって適宜であるが、１ｍｇ〜５０ｇが好ましい。そして、このグリコサミノグリカン又はその塩１ｍｇ〜５０ｇに、サポニン又はその塩１ｍｇ〜５０ｇを配合するのが好ましい。
【００１４】
本発明においては、グリコサミノグリカン又はその塩とサポニン又はその塩とを含有する経口投与用医薬品、健康食品又は栄養薬品組成物に、さらに薬学的に許容し得る添加剤を含有させてもよい。添加剤は賦形剤、結合剤、調味剤、滑沢剤、保存剤、ミネラル補強剤、糖補強剤、ビタミン類、アミノ酸類などである。賦形剤、結合剤としてはメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、クロスポピドン、乳糖、デンプン、ヒドロキシプロピルセルロース、セルロースなどが用いられる。調味剤としてはアスパルテーム、白糖、エリスリトール、キシリトール、メントール、果汁エキスなどが用いられる。滑沢剤としてはステアリン酸マグネシウムなどが用いられる。保存剤としては安息香酸、パラオキシ安息香酸エステル類、ソルビン酸、クエン酸、プロピレングリコールなどが用いられる。ミネラル補強剤としては塩化カリウム、炭酸カリウム、炭酸カルシウム、塩化亜鉛などが用いられる。糖補強剤としてはグルコサミン塩などが用いられる。このグルコサミン塩はカニやエビの殻由来のキチンオリゴ糖など抽出物が好ましく使用できる。これらは２種以上用いてもよい。
【００１５】
本発明の経口投与用組成物は、１回当たりの服用量が、グリコサミノグリカン及びその塩からなる群より選ばれた１種又は２種以上１ｍｇ〜５０ｇと、サポニン及びその塩からなる群より選ばれた１種又は２種以上１ｍｇ〜５０ｇと、薬学的に許容し得る添加剤２０ｍｇ〜１００ｇであるものが好ましい。本発明は、グリコサミノグリカン又はその塩の経口投与の分野において利用できる。本発明によると、経口投与によるグリコサミノグリカン又はそのの塩吸収効率を向上させえるので、その薬効を高め、また速効させることができる。
【００１６】
本発明の医薬品、健康食品又は栄養薬品組成物は錠剤、顆粒剤、細粒剤、液剤、カプセル剤、シロップ剤などの剤型、更には食品に混合した形態にして服用したり、食する。本発明の組成物は、経口投与によって、結合組織（特に関節）の回復・維持、また眼精疲労の回復・維持、美容健康の促進、回復、維持のために投与される。本発明の組成物は、具体的には、関節炎治療剤、変形性膝関節症治療薬、肩関節周囲炎治療薬、膀胱炎治療薬、糖尿病性腎炎治療剤、血中脂質低下剤などとして用いられる。
【００１７】
【試験例】
限外濾過膜を用いた前処理法（非特許文献４参照）を用いて、経口投与したＧＡＧの体内動態を調べた。試験方法、薬品、装置などを以下に示す。なお、下記試験例において用いられている略号の意味するところは次の通りである．
ＧＡＧ：グリコサミノグリカン
ＣｈＳ：コンドロイチン硫酸
ＤＳ：デルマタン硫酸
ＨＡ：ヒアルロン酸
ＧｌｃＡ：グルクロン酸
ＩｄｏＡ：イズロン酸
ＧａｌＮＡｃ：Ｎ−アセチルガラクトサミン
ＧｌｃＮＡｃ：Ｎ−アセチルグルコサミン
【００１８】
ΔＤｉ−０Ｓ：２−アセトアミド−２−デオキシ−３−Ｏ−（ｂ−Ｄ−グルコ−４−エネピルアノシルウロン酸）−Ｄ−ガラクトース
ΔＤｉ−４Ｓ：２−アセトアミド−２−デオキシ−３−Ｏ−（ｂ−Ｄ−グルコ−４−エネピルアノシルウロン酸）−４−Ｏ−スルホ−Ｄ−ガラクトース
ΔＤｉ−６Ｓ：２−アセトアミド−２−デオキシ−３−Ｏ−（ｂ−Ｄ−グルコ−４−エネピルアノシルウロン酸）−６−Ｏ−スルホ−Ｄ−ガラクトース
ΔＤｉ−ｄｉＳＢ：２−アセトアミド−２−デオキシ−３−Ｏ−（２−Ｏ−スルホ−ｂ−Ｄ−グルコ−４−エネピルアノシルウロン酸）−４−Ｏ−スルホ−Ｄ−ガラクトース
【００１９】
ΔＤｉ−ｄｉＳＤ：２−アセトアミド−２−デオキシ−３−Ｏ−（２−Ｏ−スルホ−ｂ−Ｄ−グルコ−４−エネピルアノシルウロン酸）−６−Ｏ−スルホ−Ｄ−ガラクトース
ΔＤｉ−ｄｉＳＥ：２−アセトアミド−２−デオキシ−３−Ｏ−（２−Ｏ−スルホ−ｂ−Ｄ−グルコ−４−エネピルアノシルウロン酸）−４，６−ビス−Ｏ−スルホ−Ｄ−ガラクトース
ΔＤｉ−ｔｒｉＳ：２−アセトアミド−２−デオキシ−３−Ｏ−（２−Ｏ−スルホ−ｂ−Ｄ−グルコ−４−エネピルアノシルウロン酸）−４，６−ビス−Ｏ−スルホ−Ｄ−ガラクトース
【００２０】
１．限外濾過膜を用いた血液サンプルの前処理法
血液中ＧＡＧ抽出のため、血液サンプルを非特許文献４に従って処理した。すなわち、アクチナーゼを加えたトリス−アセテート緩衝液に血液サンプルを懸濁させ、タンパク質を十分に消化、分解した。酢酸を加えて除タンパクし、その上清を分子量５０００カットの遠心フィルターにのせ、水酸化ナトリウムで中和させた。遠心機を用いてフィルターを透過させ、濾過した後、トリス−アセテート緩衝液及びエタノールで洗浄し、粗ＧＡＧを収集した。この粗ＧＡＧを、フィルター上で一定量のＧＡＧ分解酵素を用いて分解し、ＧＡＧを不飽和二糖として得た。
【００２１】
２．限外濾過膜を用いた尿サンプルの前処理法
尿中ＧＡＧ抽出のため、尿サンプルを非特許文献４に従って処理した。すなわち、尿サンプルを分子量５０００カットの遠心フィルターにのせ、遠心機にかけ、一度フィルターを透過させた。続いてエタノールをフィルターにのせ遠心し、洗浄した。この段階で粗ＧＡＧをフィルター上に収集した。この粗ＧＡＧを、フィルター上で一定量のＧＡＧ分解酵素を用いて分解し、ＧＡＧを不飽和二糖として得た。
【００２２】
３．試薬など
（１）ＧＡＧの標準品及び大豆サポニン
ヒアルロン酸（大腸菌由来、分子量２万） は紀文フードケミファ株式会社製を用いた。コンドロイチン硫酸（ウシ気管軟骨由来、分子量１．５万）及びデルマタン硫酸（ブタ皮膚由来、分子量２万）は生化学工業株式会社製を用いた。また、不飽和二糖標準品のΔＤｉ−０Ｓ、ΔＤｉ−４Ｓ、ΔＤｉ−６Ｓ、ΔＤｉ−ＵＡ２Ｓ、ΔＤｉ−ＨＡ、ΔＤｉ−ＳＢ、ΔＤｉ−ＳＤ、ΔＤｉ−ＳＥ、ΔＤｉ−ＳＢ、ΔＤｉ−ｔｒｉＳは生化学工業株式会社製を用いた。大豆サポニンは和光純薬工業株式会社製を用いた。
（２）酵素
Ｃｈｏｎｄｒｏｉｔｉｎａｓｅ Ｂ：ＩｄｏＡ１→３ＧａｌＮＡｃ構造に作用、ＧｌｃＡ１→３ＧａｌＮＡｃ構造に作用せず。
ＡＢＣ：ＩｄｏＡ１→３ＧａｌＮＡｃ構造、ＧｌｃＡ１→３ＧａｌＮＡｃ構造の両構造に作用。
ＡＣＩＩ：ＩｄｏＡ１→３ＧａｌＮＡｃ構造に作用せず、ＧｌｃＡ１→３ＧａｌＮＡｃ構造に作用、ヒアルロン酸にも作用。
いずれも、生化学工業株式会社製を用いた。
【００２３】
（３）限外濾過膜
ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ 社「ＵＬＴＲＡＦＲＥＥ−ＭＣ ５０００ＮＭＷＬ Ｆｉｌｔｅｒ Ｕｎｉｔ ＢＩＯＭＡＸ−５」を使用した。
（４）高速液体クロマトグラフィー用試薬
蛍光試薬の２−シアノアセトアミドは和光純薬工業株式会社製を使用した。蛍光試薬の混合液に使用した水酸化ナトリウム、及び溶離液に用いた重炭酸アンモニウムは和光純薬工業株式会社製を使用した。同じく溶離液に用いたアセトニトリルは Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ 社製を使用した。他の有機溶媒は全て蒸留して用いた。水はミリポア超純粋装置により作製された精製水を用いた。
（５）ラット
ラット（ＳＤ系、雄、体重１２０−１５０ｇ）は購入後１週間自由に飼料、水を与えて予備飼育し、２４時間絶食ののち試験に供した。
【００２４】
４．装置
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）：
溶離液送液ポンプは、日本分光工業株式会社（ＪＡＳＣＯ）製Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｔ ＨＰＬＣ ｐｕｍｐＰＵ−９８０、反応試薬送液ポンプは島村製作所製ダブルプランジャーポンプ ＳＰＵ−２．５ ＮＰ 型、カラム恒温層はタイタック株式会社製ＴＨＥＲＭＯ ＭＩＮＤＥＲ Ｍｉｎｉ−８０、検出器は日本分光工業株式会社製ＪＡＳＣＯ Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｔ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｏｒ ＦＰ−９２０Ｓ、反応層は島村計器製作所製Ｄｒｙ Ｒｅａｃｔｉｏｎ Ｂａｃｈ ＤＢ−５、記録計は日立製作所製Ｃｈｒｏｍａｔｏ Ｉｎｔｅｇｒａｔｏｒ Ｄ−２５００を使用した。
【００２５】
５．添加回収実験
（１）血漿サンプルにおける添加回収実験
血漿サンプルに２．０ｍｇ／ｍＬ、２０．０ｍｇ／ｍＬの添加濃度でコンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、又はヒアルロン酸を添加し、それぞれ非特許文献４記載の前処理法を行い、高感度ポストカラムの高速液体クロマトグラフィー法によって不飽和二糖を分離、定量した。
（２）尿サンプルにおける添加回収実験
尿サンプルに０ｍｇ／ｍＬ、２．０ｍｇ／ｍＬ、２０．０ｍｇ／ｍＬの添加濃度でを添加し、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、あるいはヒアルロン酸を添加し、ろ過法により前処理を行い、高感度ポストカラムの高速液体クロマトグラフィー法を用いて不飽和二糖を分離、定量した。
【００２６】
試験例１ ヒアルロン酸の経口投与
ラットの血漿中にはヒアルロン酸はほとんど含まれていない（Ｍｕｒａｔａ Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ Ｖｅｓｓｅｌｓ， １９８８；２５（１）：１−１１．）。そこで分子量２万のヒアルロン酸を用いて投与試験を行った。すなわち、ラットにヒアルロン酸（５０ｍｇ／ｋｇ）の単独経口投与し、またヒアルロン酸（５０ｍｇ／ｋｇ）とヒアルロン酸に対し１．０質量％の大豆サポニンとを同時に経口投与し、各投与後１２０分にわたって経時的に血液を採取し、前処理を行い、高感度ポストカラムの高速液体クロマトグラフィー法を用いて分離、定量を行った。
【００２７】
その結果を図１に示す。図１はヒアルロン酸投与による血漿中ヒアルロン酸濃度の変化を経時的に示した。ヒアルロン酸単独投与群の場合、投与後６０分までは、投与前と比べて大きな違いは見られなかった。一方、大豆サポニン同時投与群の場合は、ヒアルロン酸の単独投与の場合とは異なり、投与後１５分後にヒアルロン酸の急激な増加が見られた。すなわち、ヒアルロン酸の経口投与において、血漿中のヒアルロン酸量の増加が認められ、ヒアルロン酸が経口投与によって血液中へ吸収されることが明らかになった。また、大豆サポニンの同時投与により吸収速度が速くなり、かつその吸収量も上昇した。このことから、大豆サポニンがヒアルロン酸の吸収速度を速め、吸収を促進していることが明らかになった。
【００２８】
試験例２ コンドロイチン硫酸の経口投与
血漿中にはインターアルファトリプシンインヒビター（ビクニン）に結合した低硫酸化コンドロイチン４硫酸鎖が含まれている（Ｉｍａｎａｒｉ Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｏｂｉｏｄｙｎ．， １９９２；１５（５）：２３１−２３７．）。そのため、ＧａｌＮＡｃ４硫酸残基を含むコンドロイチン硫酸を試験には用いるのは好ましくない。そこで血漿中にはほとんど見いだされないＧａｌＮＡｃ６硫酸を多く含むサメ軟骨由来コンドロイチン硫酸を用いて経口投与試験を行った。すなわち、ラットにコンドロイチン硫酸（５０ｍｇ／ｋｇ）の単独経口投与し、またコンドロイチン硫酸（５０ｍｇ／ｋｇ）とコンドロイチン硫酸に対し１．０質量％の大豆サポニンとを同時に経口投与し、各投与後１２０分にわたって経時的に血液を採取し、前処理を行い、高感度ポストカラムの高速液体クロマトグラフィー法を用いて分離、定量を行った。
【００２９】
その結果を図２に示す。図２は、血漿に見出されたコンドロイチン６硫酸の経時変化を示す。血漿中には通常見出さすことのできないコンドロイチン６硫酸は、正常なヒト、ラットを含む哺乳動物尿中に多量に排泄されていることから、今回投与群においても尿中コンドロイチン６硫酸量には顕著な変化は観察されなかった。コンドロイチン硫酸単独投与群の場合は、投与後徐々にコンドロイチン６硫酸濃度が増加した。大豆サポニン同時投与群の場合は、コンドロイチン硫酸の単独投与とは異なり、投与後３０分後にコンドロイチン硫酸の急激な増加が見られた。大豆サポニン添加では、単独に比べ、明らかに早い時間に増加が見られた。
【００３０】
試験例３ デルマタン硫酸の経口投与
血漿中にデルマタン硫酸はほとんど存在しない（Ｑｉｕ Ｇ．ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｌ． Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．， １９９３；１６（４）：３４０−３４２．）。そこで分子量２万のデルマタン硫酸を用いて経口投与試験を行った。すなわち、ラットにデルマタン硫酸（５０ｍｇ／ｋｇ）の単独経口投与し、またデルマタン硫酸（５０ｍｇ／ｋｇ）とデルマタン硫酸に対し１．０質量％の大豆サポニンとを同時に経口投与し、各投与後１２０分にわたって経時的に血液を採取し、前処理を行い、高感度ポストカラムの高速液体クロマトグラフィー法を用いて分離、定量を行った。
【００３１】
その結果を図３に示した。図３は、血漿中のデルマタン硫酸由来不飽和二糖の経時変化を示した。デルマタン硫酸単独投与群では、投与後徐々にデルマタン硫酸濃度が増加した。大豆サポニン同時投与群ではデルマタン硫酸の単独投与とは異なり、投与後３０分後にデルマタン硫酸の急激な増加が見られた。大豆サポニン添加では、単独に比べ、明らかに早い時間に増加が見られた。
【００３２】
【実施例】
以下に実施例をあげて本発明を具体的に説明するが本発明は何らこれらに限定されるものではない。
実施例１
鶏冠エキス１ｇ（ヒアルロン酸として２００ｍｇ）、大豆サポニン５０ｍｇ混合し、更にアスパルテーム５０ｍｇを混合し、賦形剤及び滑剤として、乳糖及びステアリン酸マグネシウムを少量加え混合したものを常法に従い打錠機にて成形して錠剤にした。この錠剤を、一回１錠づつ１日３回服用する。
【００３３】
実施例２
魚類軟骨抽出物１ｇ（コンドロイチン硫酸として２００ｍｇ）、大豆サポニン５０ｍｇを混合し、さらに複合ビタミン類１ｇ、賦形剤及び滑剤として乳糖、ステアリン酸マグネシウムを少量加え混合したものを常法に従い打錠機にて成形して錠剤にした。
【００３４】
実施例３
複合ムコ多糖類抽出物２ｇ（ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸を含有）、大豆サポニン１００ｍｇを混合し、さらに複合ビタミン剤５００ｍｇ、複合アミノ酸５００ｍｇ、アスパルテーム５０ｍｇ、保存剤適量を加え、常法に従い液剤とした。
【００３５】
実施例４
ヒアルロン酸４００ｍｇ、大豆抽出物２００ｍｇ（大豆サポニンとして１００ｍｇ含有）を混合し、さらにグルコサミン塩酸塩４００ｍｇ、複合ビタミン類５００ｍｇ、複合アミノ酸１００ｍｇ、アスパルテーム５０ｍｇを加え混合したものを常法に従い粉末剤とした。
【００３６】
実施例５
魚類軟骨抽出物１ｇ（コンドロイチン硫酸として２００ｍｇ）、大豆サポニン５０ｍｇを混合し、さらにカニ・エビ殻由来のキチンオリゴ糖１ｇ（グルコサミン塩酸塩として２００ｍｇ）、複合ビタミン類１ｇ、賦形剤及び滑剤として乳糖、ステアリン酸マグネシウムを少量加え混合したものを常法に従い打錠機にて成形して錠剤にした。
【００３７】
実施例６
鶏冠エキス１ｇ（ヒアルロン酸として２００ｍｇ）、大豆サポニン５０ｍｇを混合し、さらにカニ・エビ殻由来のキチンオリゴ糖１ｇ（グルコサミン塩酸塩として２００ｍｇ）、アスパルテーム５０ｍｇ、賦形剤及び滑剤として乳糖、ステアリン酸マグネシウムを少量加え混合したものを常法に従い打錠機にて成形して錠剤にした。
【００３８】
実施例７
複合ムコ多糖類抽出物２ｇ（ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸を含有）、大豆サポニン１００ｍｇを混合し、さらにカニ・エビ殻由来のキチンオリゴ糖１ｇ（グルコサミン塩酸塩として２００ｍｇ）、賦形剤及び滑剤として乳糖、ステアリン酸マグネシウムを少量加え混合したものを常法に従い打錠機にて成形して錠剤にした。
【００３９】
実施例８
複合ムコ多糖類抽出物２ｇ（ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸を含有）、大豆サポニン１００ｍｇを混合し、さらにカニ・エビ殻由来のキチンオリゴ糖１ｇ（グルコサミン塩酸塩として２００ｍｇ）複合ビタミン類１ｇ、複合アミノ酸２ｇ、エリスリトール５０ｍｇ、賦形剤として乳糖を少量加え混合したものを常法に従い打錠機にて成形して錠剤にした。
【００４０】
実施例９
複合ムコ多糖類抽出物２ｇ（ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸を含有）、大豆サポニン１００ｍｇを混合し、さらにカニ・エビ殻由来のキチンオリゴ糖１ｇ（グルコサミン塩酸塩として２００ｍｇ）、複合ビタミン類１ｇ、複合アミノ酸２ｇ、炭酸カルシウム５００ｍｇ、キシリトール６０ｍｇを加え常法に従い液剤を得た。
【００４１】
実施例１０
複合ムコ多糖類抽出物２ｇ（ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸を含有）、大豆抽出物５００ｍｇ（大豆サポニンとして２００ｍｇ含有）を混合し、さらにカニ・エビ殻由来のキチンオリゴ糖１ｇ（グルコサミン塩酸塩として２００ｍｇ）複合ビタミン類１ｇ、複合アミノ酸２ｇ、アスパルテーム８０ｍｇ、賦形剤及び滑剤として乳糖、ステアリン酸マグネシウムを少量加え混合したものを常法に従い打錠機にて成形して錠剤にした。
【００４２】
実施例１１
コンドロイチン硫酸４００ｍｇ、大豆抽出物２００ｍｇ（大豆サポニンとして１００ｍｇ含有）を混合し、さらにグルコサミン塩酸塩として４００ｍｇ、複合ビタミン類５００ｍｇ、複合アミノ酸１００ｍｇ、アスパルテーム１００ｍｇ、結合剤として乳糖を少量加え混合したものを常法に従い成形して顆粒剤を得た。
【００４３】
【発明の効果】
本発明によると、サポニン又はその塩を、グリコサミノグリカン又はその塩と共に投与することにより、グリコサミノグリカン又はその塩の経口吸収を飛躍的に増大させることができる。そのため、従来有効に経口吸収させる方法がなかった生理活性の高いグリコサミノグリカン又はその塩を経口吸収容易な形で利用できる。したがって、本発明によると、経口投与によるグリコサミノグリカン又はその塩の本来有する薬効を高めたり、速効させることができる。本発明は、グリコサミノグリカン又はその塩の経口投与の分野で利用でき、例えば、人間や動物の結合組織（特に関節）の回復・維持、老化の防止、肌荒れ、小皺の改善、血中脂質低下、女性のバストの発育の増進、視力の回復・維持、関節痛治療、膀胱炎治療薬など美容・健康の促進、回復、維持に有用である。
【図面の簡単な説明】
【図１】ヒアルロン酸の血漿中濃度の経時変化を示すグラフ
【図２】コンドロイチン６硫酸の血漿中濃度の経時変化を示すグラフ
【図３】デルマタン硫酸の血漿中濃度の経時変化を示すグラフ
【発明の属する技術分野】
本発明は、人間や動物の結合組織（特に関節）の回復・維持、ひいては老化の防止、肌荒れ、小皺の改善や女性のバストの発育の増進、視力の回復・維持などの美容・健康の促進、回復、維持のための経口投与用の医薬品、健康食品又は栄養薬品（ｎｕｔｒａｃｅｕｔｉｃａｌ）組成物に関係するものである。
【０００２】
【従来技術】
グリコサミノグリカン（以下、「ＧＡＧ」ということがある）は、ヒトの皮膚、腱、筋肉、軟骨、血管、脳など広範囲に体内に存在する生体成分であり、分子量５千〜数百万にもおよぶ高分子量のヒアルロン酸、並びにタンパク質に結合してプロテオグリカンとして存在するコンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸などが知られている。これらのＧＡＧは、直鎖の酸性多糖で、Ｎ−アセチルへキソサミンとウロン酸がβ−１，３結合した二糖単位がβ−１，４−ヘキソサミド結合した繰り返し構造を持つ。
【０００３】
ヒアルロン酸は分子量が大きく、互いに反発する陰イオン性カルボキシル基を多く有すため、溶液中では乾燥時に比べ、１０００倍もの容積を占め、高度に水和された分子として存在する。溶液中で大量の水と水和していることはヒアルロン酸が関節における潤滑剤やショック吸収剤として働くのに役立つ性質でありヒアルロン酸の極めて特長的な物理的性質である。臨床面では、眼科領域でヒアルロン酸やそのナトリウム塩が、それらの角膜上皮創傷治癒促進作用及び保水作用により、角結膜上皮障害治療用点眼剤として用いられている。またヒアルロン酸又はその塩は、変形性膝関節症や肩関節周囲炎の治療薬として、また膀胱炎治療薬として、更に血中脂質低下剤として有効である。さらに、最近では、化粧品や洗髪剤にヒアルロン酸が含まれている他、食用にもされ、皮膚の若返り、関節の柔軟性の回復、各種炎症の緩和などの観点から注目されている（非特許文献１、特許文献１〜３参照）
【０００４】
また、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸は、組織の構築及び水分の保持、細胞膜の水分や電解質の調整、免疫系の活性化などに重要な役割を果たしているものと推定されている。デルマタン硫酸は糖尿病性腎炎に対する消炎作用や、経口投与したコンドロイチン硫酸の関節炎に対する効果などが注目を集めている。また、コンドロイチン硫酸又はその誘導体や大豆抽出物などを皮膚外用剤に含有させることが提案されている（非特許文献２〜３、特許文献４参照）。
【０００５】
しかし、ＧＡＧの体内動態、すなわち腸管吸収の可能性及び代謝経路は、未だ不明な点が多く、実際に経口投与したＧＡＧの薬理的効果は定かでない。近年、生体内におけるＧＡＧの生理活性とその機能が注目されており、特に食用ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸などが健康食品として広く普及していることから、経口投与によるＧＡＧの吸収に関する解明が必要とされる。ＧＡＧの体内動態を調べるため、ＧＡＧ分析を目的とした前処理法も検討されてきたが、従来のＣＰＣ沈殿法は煩雑な操作に熟練を要し、信頼性に欠けていた。最近、限外濾過膜を用いた前処理法が発表された（非特許文献４参照）。
【０００６】
【特許文献１】
国際公開第９８／２９１２５号パンフレット
【特許文献２】
特開２０００−１０２３６２号公報
【特許文献３】
特開平５−３２００５８号公報
【特許文献４】
特開２００２−１４５７５２号公報
【非特許文献１】
Ａｔｈａｎａｓｉｏｕ ＫＡ ｅｔ ａｌ．，“Ｂａｓｉｃ ｓｃｉｅｎｃｅ ｏｆ ａｒｔｉｃｕｌａｒ ｃａｒｔｉｌａｇｅ ｒｅｐａｉｒ．”，Ｃｌｉｎ． Ｓｐｏｒｔｓ Ｍｅｄ．， ２００１；２０（２）：２２３−２４７．
【非特許文献２】
Ｏｆｏｓｕ ＦＡ．，“Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｓｕｌｏｄｅｘｉｄｅ．” Ｓｅｍｉｎ． Ｔｈｒｏｍｂ． Ｈｅｍｏｓｔ．， １９９８；２４（２）：１２７−１３８．
【非特許文献３】
Ｅｃｈａｒｄ ＢＷ ｅｔ ａｌ．，“Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｏｒａｌ ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ ａｎｄ ｃｈｏｎｄｒｏｉｔｉｎ ｓｕｌｆａｔｅａｌｏｎｅ ａｎｄ ｉｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｏｆ ＳＨＲ ａｎｄ ＳＤ ｒａｔｓ．” Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ．， ２００１；２２５（１−）：８５−９１．
【非特許文献４】
Ｓａｋａｉ Ｓ． ｅｔ ａｌ．，“Ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｍｉｃｒｏｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆｃｈｏｎｄｒｏｉｔｉｎ ｓｕｌｆａｔｅ ｉｎ ｐｌａｓｍａ ａｎｄ ｕｒｉｎｅ．”，Ａｎａｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．， ２００２；３０２（２）：１６９−１７４．
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、グリコサミノグリカン及び／又はグリコサミノグリカン塩の経口吸収を従来に比べ向上させた組成物を提供することを目的とする。すなわち、従来、経口投与しても元の分子量を維持した形で、有効に吸収させる方法がなかったグリコサミノグリカン及び／又はグリコサミノグリカン塩を経口吸収容易にした医薬品、健康食品又は栄養薬品組成物を提供することを目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、グリコサミノグリカン又はその塩の人体への経口吸収の増大を目的に研究した結果、ＧＡＧとサポニンを同時に経口投与することでＧＡＧの吸収に影響するかどうかを、非特許文献４記載の限外濾過膜を用いた前処理法を利用して経口投与したＧＡＧの体内動態を確認しながら、種々実験を行ったところ、意外にもサポニン添加によりＧＡＧの経口吸収が飛躍的に増大することを知見し、本発明を完成させた。
【０００９】
すなわち本発明は、グリコサミノグリカン及びその塩からなる群より選ばれた１種又は２種以上と、サポニン及びその塩からなる群より選ばれた１種又は２種以上とを含有することを特徴とする経口投与用医薬品、健康食品又は栄養薬品組成物である。グリコサミノグリカン及びその塩からなる群より選ばれた１種又は２種以上に対する、サポニン及びその塩からなる群より選ばれた１種又は２種以上の配合割合は質量比で１：０．０００１〜２が好ましい。
【００１０】
【発明の実施の形態】
本発明で用いるグリコサミノグリカン又はその塩は、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸塩、デルマタン硫酸、デルマタン硫酸塩、コンドロイチン、コンドロイチン硫酸、コンドロイチン硫酸塩などである。本発明では、これらのうちの１種又は２種以上を用いる。本発明で用いるグリコサミノグリカンの分子量は特に限定されないが、通常７千〜１００万、好ましくは７千〜１０万更に好ましくは１万〜３万程度である。本発明で用いるグリコサミノグリカンは、薬理学的に許容できる塩の形態にあってもよい。このような塩としてはナトリウム塩やカリウム塩のようなアルカリ金属塩、カルシウム塩、アルミニウム塩等を挙げることができるがこれらに限定されるものではない。
【００１１】
本発明で用いるグリコサミノグリカン又はその塩としては、動植物を抽出して得られたグリコサミノグリカン又はその塩を含有する抽出物が好ましく用いられる。例えば、鶏冠を抽出して得られたヒアルロン酸含有鶏冠エキス、魚類軟骨を抽出して得られたコンドロイチン硫酸含有抽出物、ブタ小腸粘膜やへその緒などを抽出して得られるヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸の複合ムコ多糖類含有抽出物などが用いられ、更に微生物醗酵抽出物も利用できる。
【００１２】
本発明で用いるサポニン又はその塩としては、大豆から得られるサポニン又はサポニン塩或はこれらの混合物が好ましく用いられる。大豆サポニンは、大豆グループＡサポニン、大豆グループＢサポニン、大豆グループＥサポニン、ＤＤＭＰサポニンなどが知られているが、特に限定されない。大豆を抽出して得られたサポニン又はその塩を含有する抽出物を用いるのが特に好ましい。
【００１３】
本発明において、グリコサミノグリカン又はその塩に対するサポニン又はその塩の配合割合は、質量比で１：０．０００１〜２である。その配合割合が１：０．０００１未満ではサポニン又はその塩の配合割合が少ないため、グリコサミノグリカン及びその塩の経口吸収作用が十分に発揮されなく、また配合比が１：２を超えてサポニン又はその塩を増量してもそれに応じた経口吸収効果の向上は期待できない。また、グリコサミノグリカン及びその塩の１回の服用量は、その種類、使用の目的によって適宜であるが、１ｍｇ〜５０ｇが好ましい。そして、このグリコサミノグリカン又はその塩１ｍｇ〜５０ｇに、サポニン又はその塩１ｍｇ〜５０ｇを配合するのが好ましい。
【００１４】
本発明においては、グリコサミノグリカン又はその塩とサポニン又はその塩とを含有する経口投与用医薬品、健康食品又は栄養薬品組成物に、さらに薬学的に許容し得る添加剤を含有させてもよい。添加剤は賦形剤、結合剤、調味剤、滑沢剤、保存剤、ミネラル補強剤、糖補強剤、ビタミン類、アミノ酸類などである。賦形剤、結合剤としてはメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、クロスポピドン、乳糖、デンプン、ヒドロキシプロピルセルロース、セルロースなどが用いられる。調味剤としてはアスパルテーム、白糖、エリスリトール、キシリトール、メントール、果汁エキスなどが用いられる。滑沢剤としてはステアリン酸マグネシウムなどが用いられる。保存剤としては安息香酸、パラオキシ安息香酸エステル類、ソルビン酸、クエン酸、プロピレングリコールなどが用いられる。ミネラル補強剤としては塩化カリウム、炭酸カリウム、炭酸カルシウム、塩化亜鉛などが用いられる。糖補強剤としてはグルコサミン塩などが用いられる。このグルコサミン塩はカニやエビの殻由来のキチンオリゴ糖など抽出物が好ましく使用できる。これらは２種以上用いてもよい。
【００１５】
本発明の経口投与用組成物は、１回当たりの服用量が、グリコサミノグリカン及びその塩からなる群より選ばれた１種又は２種以上１ｍｇ〜５０ｇと、サポニン及びその塩からなる群より選ばれた１種又は２種以上１ｍｇ〜５０ｇと、薬学的に許容し得る添加剤２０ｍｇ〜１００ｇであるものが好ましい。本発明は、グリコサミノグリカン又はその塩の経口投与の分野において利用できる。本発明によると、経口投与によるグリコサミノグリカン又はそのの塩吸収効率を向上させえるので、その薬効を高め、また速効させることができる。
【００１６】
本発明の医薬品、健康食品又は栄養薬品組成物は錠剤、顆粒剤、細粒剤、液剤、カプセル剤、シロップ剤などの剤型、更には食品に混合した形態にして服用したり、食する。本発明の組成物は、経口投与によって、結合組織（特に関節）の回復・維持、また眼精疲労の回復・維持、美容健康の促進、回復、維持のために投与される。本発明の組成物は、具体的には、関節炎治療剤、変形性膝関節症治療薬、肩関節周囲炎治療薬、膀胱炎治療薬、糖尿病性腎炎治療剤、血中脂質低下剤などとして用いられる。
【００１７】
【試験例】
限外濾過膜を用いた前処理法（非特許文献４参照）を用いて、経口投与したＧＡＧの体内動態を調べた。試験方法、薬品、装置などを以下に示す。なお、下記試験例において用いられている略号の意味するところは次の通りである．
ＧＡＧ：グリコサミノグリカン
ＣｈＳ：コンドロイチン硫酸
ＤＳ：デルマタン硫酸
ＨＡ：ヒアルロン酸
ＧｌｃＡ：グルクロン酸
ＩｄｏＡ：イズロン酸
ＧａｌＮＡｃ：Ｎ−アセチルガラクトサミン
ＧｌｃＮＡｃ：Ｎ−アセチルグルコサミン
【００１８】
ΔＤｉ−０Ｓ：２−アセトアミド−２−デオキシ−３−Ｏ−（ｂ−Ｄ−グルコ−４−エネピルアノシルウロン酸）−Ｄ−ガラクトース
ΔＤｉ−４Ｓ：２−アセトアミド−２−デオキシ−３−Ｏ−（ｂ−Ｄ−グルコ−４−エネピルアノシルウロン酸）−４−Ｏ−スルホ−Ｄ−ガラクトース
ΔＤｉ−６Ｓ：２−アセトアミド−２−デオキシ−３−Ｏ−（ｂ−Ｄ−グルコ−４−エネピルアノシルウロン酸）−６−Ｏ−スルホ−Ｄ−ガラクトース
ΔＤｉ−ｄｉＳＢ：２−アセトアミド−２−デオキシ−３−Ｏ−（２−Ｏ−スルホ−ｂ−Ｄ−グルコ−４−エネピルアノシルウロン酸）−４−Ｏ−スルホ−Ｄ−ガラクトース
【００１９】
ΔＤｉ−ｄｉＳＤ：２−アセトアミド−２−デオキシ−３−Ｏ−（２−Ｏ−スルホ−ｂ−Ｄ−グルコ−４−エネピルアノシルウロン酸）−６−Ｏ−スルホ−Ｄ−ガラクトース
ΔＤｉ−ｄｉＳＥ：２−アセトアミド−２−デオキシ−３−Ｏ−（２−Ｏ−スルホ−ｂ−Ｄ−グルコ−４−エネピルアノシルウロン酸）−４，６−ビス−Ｏ−スルホ−Ｄ−ガラクトース
ΔＤｉ−ｔｒｉＳ：２−アセトアミド−２−デオキシ−３−Ｏ−（２−Ｏ−スルホ−ｂ−Ｄ−グルコ−４−エネピルアノシルウロン酸）−４，６−ビス−Ｏ−スルホ−Ｄ−ガラクトース
【００２０】
１．限外濾過膜を用いた血液サンプルの前処理法
血液中ＧＡＧ抽出のため、血液サンプルを非特許文献４に従って処理した。すなわち、アクチナーゼを加えたトリス−アセテート緩衝液に血液サンプルを懸濁させ、タンパク質を十分に消化、分解した。酢酸を加えて除タンパクし、その上清を分子量５０００カットの遠心フィルターにのせ、水酸化ナトリウムで中和させた。遠心機を用いてフィルターを透過させ、濾過した後、トリス−アセテート緩衝液及びエタノールで洗浄し、粗ＧＡＧを収集した。この粗ＧＡＧを、フィルター上で一定量のＧＡＧ分解酵素を用いて分解し、ＧＡＧを不飽和二糖として得た。
【００２１】
２．限外濾過膜を用いた尿サンプルの前処理法
尿中ＧＡＧ抽出のため、尿サンプルを非特許文献４に従って処理した。すなわち、尿サンプルを分子量５０００カットの遠心フィルターにのせ、遠心機にかけ、一度フィルターを透過させた。続いてエタノールをフィルターにのせ遠心し、洗浄した。この段階で粗ＧＡＧをフィルター上に収集した。この粗ＧＡＧを、フィルター上で一定量のＧＡＧ分解酵素を用いて分解し、ＧＡＧを不飽和二糖として得た。
【００２２】
３．試薬など
（１）ＧＡＧの標準品及び大豆サポニン
ヒアルロン酸（大腸菌由来、分子量２万） は紀文フードケミファ株式会社製を用いた。コンドロイチン硫酸（ウシ気管軟骨由来、分子量１．５万）及びデルマタン硫酸（ブタ皮膚由来、分子量２万）は生化学工業株式会社製を用いた。また、不飽和二糖標準品のΔＤｉ−０Ｓ、ΔＤｉ−４Ｓ、ΔＤｉ−６Ｓ、ΔＤｉ−ＵＡ２Ｓ、ΔＤｉ−ＨＡ、ΔＤｉ−ＳＢ、ΔＤｉ−ＳＤ、ΔＤｉ−ＳＥ、ΔＤｉ−ＳＢ、ΔＤｉ−ｔｒｉＳは生化学工業株式会社製を用いた。大豆サポニンは和光純薬工業株式会社製を用いた。
（２）酵素
Ｃｈｏｎｄｒｏｉｔｉｎａｓｅ Ｂ：ＩｄｏＡ１→３ＧａｌＮＡｃ構造に作用、ＧｌｃＡ１→３ＧａｌＮＡｃ構造に作用せず。
ＡＢＣ：ＩｄｏＡ１→３ＧａｌＮＡｃ構造、ＧｌｃＡ１→３ＧａｌＮＡｃ構造の両構造に作用。
ＡＣＩＩ：ＩｄｏＡ１→３ＧａｌＮＡｃ構造に作用せず、ＧｌｃＡ１→３ＧａｌＮＡｃ構造に作用、ヒアルロン酸にも作用。
いずれも、生化学工業株式会社製を用いた。
【００２３】
（３）限外濾過膜
ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ 社「ＵＬＴＲＡＦＲＥＥ−ＭＣ ５０００ＮＭＷＬ Ｆｉｌｔｅｒ Ｕｎｉｔ ＢＩＯＭＡＸ−５」を使用した。
（４）高速液体クロマトグラフィー用試薬
蛍光試薬の２−シアノアセトアミドは和光純薬工業株式会社製を使用した。蛍光試薬の混合液に使用した水酸化ナトリウム、及び溶離液に用いた重炭酸アンモニウムは和光純薬工業株式会社製を使用した。同じく溶離液に用いたアセトニトリルは Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ 社製を使用した。他の有機溶媒は全て蒸留して用いた。水はミリポア超純粋装置により作製された精製水を用いた。
（５）ラット
ラット（ＳＤ系、雄、体重１２０−１５０ｇ）は購入後１週間自由に飼料、水を与えて予備飼育し、２４時間絶食ののち試験に供した。
【００２４】
４．装置
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）：
溶離液送液ポンプは、日本分光工業株式会社（ＪＡＳＣＯ）製Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｔ ＨＰＬＣ ｐｕｍｐＰＵ−９８０、反応試薬送液ポンプは島村製作所製ダブルプランジャーポンプ ＳＰＵ−２．５ ＮＰ 型、カラム恒温層はタイタック株式会社製ＴＨＥＲＭＯ ＭＩＮＤＥＲ Ｍｉｎｉ−８０、検出器は日本分光工業株式会社製ＪＡＳＣＯ Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｔ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｏｒ ＦＰ−９２０Ｓ、反応層は島村計器製作所製Ｄｒｙ Ｒｅａｃｔｉｏｎ Ｂａｃｈ ＤＢ−５、記録計は日立製作所製Ｃｈｒｏｍａｔｏ Ｉｎｔｅｇｒａｔｏｒ Ｄ−２５００を使用した。
【００２５】
５．添加回収実験
（１）血漿サンプルにおける添加回収実験
血漿サンプルに２．０ｍｇ／ｍＬ、２０．０ｍｇ／ｍＬの添加濃度でコンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、又はヒアルロン酸を添加し、それぞれ非特許文献４記載の前処理法を行い、高感度ポストカラムの高速液体クロマトグラフィー法によって不飽和二糖を分離、定量した。
（２）尿サンプルにおける添加回収実験
尿サンプルに０ｍｇ／ｍＬ、２．０ｍｇ／ｍＬ、２０．０ｍｇ／ｍＬの添加濃度でを添加し、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、あるいはヒアルロン酸を添加し、ろ過法により前処理を行い、高感度ポストカラムの高速液体クロマトグラフィー法を用いて不飽和二糖を分離、定量した。
【００２６】
試験例１ ヒアルロン酸の経口投与
ラットの血漿中にはヒアルロン酸はほとんど含まれていない（Ｍｕｒａｔａ Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ Ｖｅｓｓｅｌｓ， １９８８；２５（１）：１−１１．）。そこで分子量２万のヒアルロン酸を用いて投与試験を行った。すなわち、ラットにヒアルロン酸（５０ｍｇ／ｋｇ）の単独経口投与し、またヒアルロン酸（５０ｍｇ／ｋｇ）とヒアルロン酸に対し１．０質量％の大豆サポニンとを同時に経口投与し、各投与後１２０分にわたって経時的に血液を採取し、前処理を行い、高感度ポストカラムの高速液体クロマトグラフィー法を用いて分離、定量を行った。
【００２７】
その結果を図１に示す。図１はヒアルロン酸投与による血漿中ヒアルロン酸濃度の変化を経時的に示した。ヒアルロン酸単独投与群の場合、投与後６０分までは、投与前と比べて大きな違いは見られなかった。一方、大豆サポニン同時投与群の場合は、ヒアルロン酸の単独投与の場合とは異なり、投与後１５分後にヒアルロン酸の急激な増加が見られた。すなわち、ヒアルロン酸の経口投与において、血漿中のヒアルロン酸量の増加が認められ、ヒアルロン酸が経口投与によって血液中へ吸収されることが明らかになった。また、大豆サポニンの同時投与により吸収速度が速くなり、かつその吸収量も上昇した。このことから、大豆サポニンがヒアルロン酸の吸収速度を速め、吸収を促進していることが明らかになった。
【００２８】
試験例２ コンドロイチン硫酸の経口投与
血漿中にはインターアルファトリプシンインヒビター（ビクニン）に結合した低硫酸化コンドロイチン４硫酸鎖が含まれている（Ｉｍａｎａｒｉ Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｏｂｉｏｄｙｎ．， １９９２；１５（５）：２３１−２３７．）。そのため、ＧａｌＮＡｃ４硫酸残基を含むコンドロイチン硫酸を試験には用いるのは好ましくない。そこで血漿中にはほとんど見いだされないＧａｌＮＡｃ６硫酸を多く含むサメ軟骨由来コンドロイチン硫酸を用いて経口投与試験を行った。すなわち、ラットにコンドロイチン硫酸（５０ｍｇ／ｋｇ）の単独経口投与し、またコンドロイチン硫酸（５０ｍｇ／ｋｇ）とコンドロイチン硫酸に対し１．０質量％の大豆サポニンとを同時に経口投与し、各投与後１２０分にわたって経時的に血液を採取し、前処理を行い、高感度ポストカラムの高速液体クロマトグラフィー法を用いて分離、定量を行った。
【００２９】
その結果を図２に示す。図２は、血漿に見出されたコンドロイチン６硫酸の経時変化を示す。血漿中には通常見出さすことのできないコンドロイチン６硫酸は、正常なヒト、ラットを含む哺乳動物尿中に多量に排泄されていることから、今回投与群においても尿中コンドロイチン６硫酸量には顕著な変化は観察されなかった。コンドロイチン硫酸単独投与群の場合は、投与後徐々にコンドロイチン６硫酸濃度が増加した。大豆サポニン同時投与群の場合は、コンドロイチン硫酸の単独投与とは異なり、投与後３０分後にコンドロイチン硫酸の急激な増加が見られた。大豆サポニン添加では、単独に比べ、明らかに早い時間に増加が見られた。
【００３０】
試験例３ デルマタン硫酸の経口投与
血漿中にデルマタン硫酸はほとんど存在しない（Ｑｉｕ Ｇ．ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｌ． Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．， １９９３；１６（４）：３４０−３４２．）。そこで分子量２万のデルマタン硫酸を用いて経口投与試験を行った。すなわち、ラットにデルマタン硫酸（５０ｍｇ／ｋｇ）の単独経口投与し、またデルマタン硫酸（５０ｍｇ／ｋｇ）とデルマタン硫酸に対し１．０質量％の大豆サポニンとを同時に経口投与し、各投与後１２０分にわたって経時的に血液を採取し、前処理を行い、高感度ポストカラムの高速液体クロマトグラフィー法を用いて分離、定量を行った。
【００３１】
その結果を図３に示した。図３は、血漿中のデルマタン硫酸由来不飽和二糖の経時変化を示した。デルマタン硫酸単独投与群では、投与後徐々にデルマタン硫酸濃度が増加した。大豆サポニン同時投与群ではデルマタン硫酸の単独投与とは異なり、投与後３０分後にデルマタン硫酸の急激な増加が見られた。大豆サポニン添加では、単独に比べ、明らかに早い時間に増加が見られた。
【００３２】
【実施例】
以下に実施例をあげて本発明を具体的に説明するが本発明は何らこれらに限定されるものではない。
実施例１
鶏冠エキス１ｇ（ヒアルロン酸として２００ｍｇ）、大豆サポニン５０ｍｇ混合し、更にアスパルテーム５０ｍｇを混合し、賦形剤及び滑剤として、乳糖及びステアリン酸マグネシウムを少量加え混合したものを常法に従い打錠機にて成形して錠剤にした。この錠剤を、一回１錠づつ１日３回服用する。
【００３３】
実施例２
魚類軟骨抽出物１ｇ（コンドロイチン硫酸として２００ｍｇ）、大豆サポニン５０ｍｇを混合し、さらに複合ビタミン類１ｇ、賦形剤及び滑剤として乳糖、ステアリン酸マグネシウムを少量加え混合したものを常法に従い打錠機にて成形して錠剤にした。
【００３４】
実施例３
複合ムコ多糖類抽出物２ｇ（ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸を含有）、大豆サポニン１００ｍｇを混合し、さらに複合ビタミン剤５００ｍｇ、複合アミノ酸５００ｍｇ、アスパルテーム５０ｍｇ、保存剤適量を加え、常法に従い液剤とした。
【００３５】
実施例４
ヒアルロン酸４００ｍｇ、大豆抽出物２００ｍｇ（大豆サポニンとして１００ｍｇ含有）を混合し、さらにグルコサミン塩酸塩４００ｍｇ、複合ビタミン類５００ｍｇ、複合アミノ酸１００ｍｇ、アスパルテーム５０ｍｇを加え混合したものを常法に従い粉末剤とした。
【００３６】
実施例５
魚類軟骨抽出物１ｇ（コンドロイチン硫酸として２００ｍｇ）、大豆サポニン５０ｍｇを混合し、さらにカニ・エビ殻由来のキチンオリゴ糖１ｇ（グルコサミン塩酸塩として２００ｍｇ）、複合ビタミン類１ｇ、賦形剤及び滑剤として乳糖、ステアリン酸マグネシウムを少量加え混合したものを常法に従い打錠機にて成形して錠剤にした。
【００３７】
実施例６
鶏冠エキス１ｇ（ヒアルロン酸として２００ｍｇ）、大豆サポニン５０ｍｇを混合し、さらにカニ・エビ殻由来のキチンオリゴ糖１ｇ（グルコサミン塩酸塩として２００ｍｇ）、アスパルテーム５０ｍｇ、賦形剤及び滑剤として乳糖、ステアリン酸マグネシウムを少量加え混合したものを常法に従い打錠機にて成形して錠剤にした。
【００３８】
実施例７
複合ムコ多糖類抽出物２ｇ（ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸を含有）、大豆サポニン１００ｍｇを混合し、さらにカニ・エビ殻由来のキチンオリゴ糖１ｇ（グルコサミン塩酸塩として２００ｍｇ）、賦形剤及び滑剤として乳糖、ステアリン酸マグネシウムを少量加え混合したものを常法に従い打錠機にて成形して錠剤にした。
【００３９】
実施例８
複合ムコ多糖類抽出物２ｇ（ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸を含有）、大豆サポニン１００ｍｇを混合し、さらにカニ・エビ殻由来のキチンオリゴ糖１ｇ（グルコサミン塩酸塩として２００ｍｇ）複合ビタミン類１ｇ、複合アミノ酸２ｇ、エリスリトール５０ｍｇ、賦形剤として乳糖を少量加え混合したものを常法に従い打錠機にて成形して錠剤にした。
【００４０】
実施例９
複合ムコ多糖類抽出物２ｇ（ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸を含有）、大豆サポニン１００ｍｇを混合し、さらにカニ・エビ殻由来のキチンオリゴ糖１ｇ（グルコサミン塩酸塩として２００ｍｇ）、複合ビタミン類１ｇ、複合アミノ酸２ｇ、炭酸カルシウム５００ｍｇ、キシリトール６０ｍｇを加え常法に従い液剤を得た。
【００４１】
実施例１０
複合ムコ多糖類抽出物２ｇ（ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸を含有）、大豆抽出物５００ｍｇ（大豆サポニンとして２００ｍｇ含有）を混合し、さらにカニ・エビ殻由来のキチンオリゴ糖１ｇ（グルコサミン塩酸塩として２００ｍｇ）複合ビタミン類１ｇ、複合アミノ酸２ｇ、アスパルテーム８０ｍｇ、賦形剤及び滑剤として乳糖、ステアリン酸マグネシウムを少量加え混合したものを常法に従い打錠機にて成形して錠剤にした。
【００４２】
実施例１１
コンドロイチン硫酸４００ｍｇ、大豆抽出物２００ｍｇ（大豆サポニンとして１００ｍｇ含有）を混合し、さらにグルコサミン塩酸塩として４００ｍｇ、複合ビタミン類５００ｍｇ、複合アミノ酸１００ｍｇ、アスパルテーム１００ｍｇ、結合剤として乳糖を少量加え混合したものを常法に従い成形して顆粒剤を得た。
【００４３】
【発明の効果】
本発明によると、サポニン又はその塩を、グリコサミノグリカン又はその塩と共に投与することにより、グリコサミノグリカン又はその塩の経口吸収を飛躍的に増大させることができる。そのため、従来有効に経口吸収させる方法がなかった生理活性の高いグリコサミノグリカン又はその塩を経口吸収容易な形で利用できる。したがって、本発明によると、経口投与によるグリコサミノグリカン又はその塩の本来有する薬効を高めたり、速効させることができる。本発明は、グリコサミノグリカン又はその塩の経口投与の分野で利用でき、例えば、人間や動物の結合組織（特に関節）の回復・維持、老化の防止、肌荒れ、小皺の改善、血中脂質低下、女性のバストの発育の増進、視力の回復・維持、関節痛治療、膀胱炎治療薬など美容・健康の促進、回復、維持に有用である。
【図面の簡単な説明】
【図１】ヒアルロン酸の血漿中濃度の経時変化を示すグラフ
【図２】コンドロイチン６硫酸の血漿中濃度の経時変化を示すグラフ
【図３】デルマタン硫酸の血漿中濃度の経時変化を示すグラフ
Claims (11)
- グリコサミノグリカン及びその塩からなる群より選ばれた１種又は２種以上と、サポニン及びその塩からなる群より選ばれた１種又は２種以上とを含有することを特徴とする経口投与用医薬品、健康食品又は栄養薬品組成物。
- グリコサミノグリカン又はその塩からなる群より選ばれた１種又は２種以上が、動植物を抽出して得られたグリコサミノグリカン又はその塩を含有する抽出物である請求項１記載の経口投与用医薬品、健康食品又は栄養薬品組成物。
- グリコサミノグリカン及びその塩からなる群より選ばれた１種又は２種以上が、ヒアルロン酸及び／又はヒアルロン酸塩である請求項１又は２記載の経口投与用医薬品、健康食品又は栄養薬品組成物。
- グリコサミノグリカン及びその塩からなる群より選ばれた１種又は２種以上が、デルマタン硫酸及び／又はデルマタン硫酸塩である請求項１又は２記載の経口投与用医薬品、健康食品又は栄養薬品組成物。
- グリコサミノグリカン及びその塩からなる群より選ばれた１種又は２種以上が、コンドロイチン、コンドロイチン硫酸及びコンドロイチン硫酸塩から選ばれた少なくとも１種である請求項１又は２記載の経口投与用医薬品、健康食品又は栄養薬品組成物。
- サポニン及びその塩からなる群より選ばれた１種又は２種以上が、大豆サポニンである請求項１〜５のいずれかに記載の経口投与用医薬品、健康食品又は栄養薬品組成物。
- 大豆サポニンが、大豆を抽出して得られたサポニン又はその塩を含有する抽出物である請求項６記載の経口投与用医薬品、健康食品又は栄養薬品組成物。
- グリコサミノグリカン及びその塩からなる群より選ばれた１種又は２種以上に対する、サポニン及びその塩からなる群より選ばれた１種又は２種以上の配合割合が質量比で１：０．０００１〜２である請求項１〜７のいずれかに記載の経口投与用医薬品、健康食品又は栄養薬品組成物。
- さらに薬学的に許容し得る添加剤を含有させた請求項１〜８のいずれかに記載の経口投与用医薬品、健康食品又は栄養薬品組成物。
- 薬学的に許容し得る添加剤が、賦形剤、結合剤、調味剤、滑沢剤、保存剤、ミネラル補強剤、糖補強剤、ビタミン類、アミノ酸類から選ばれた１種又は２種以上である請求項９記載の経口投与用医薬品、健康食品又は栄養薬品組成物。
- １回当たりの服用量が、グリコサミノグリカン及びその塩からなる群より選ばれた１種又は２種以上１ｍｇ〜５０ｇと、サポニン及びその塩からなる群より選ばれた１種又は２種以上１ｍｇ〜５０ｇと、薬学的に許容し得る添加剤２０ｍｇ〜１００ｇである経口投与用医薬品、健康食品又は栄養薬品組成物。
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