CN101939412A - 生产氨基酸的微生物以及氨基酸的生产方法 - Google Patents

生产氨基酸的微生物以及氨基酸的生产方法 Download PDF

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Abstract

在培养基，例如包含乙醇或脂肪酸作为碳源的培养基中培养具有选自L-赖氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-苯丙氨酸、L-缬氨酸、L-亮氨酸、L-异亮氨酸和L-丝氨酸中的L-氨基酸的生产能力、且经过修饰而增加了丙酮酸合酶或丙酮酸：NADP+氧化还原酶的活性的微生物，使该培养基中或菌体内生成并蓄积所述L-氨基酸，并从该培养基或菌体采集L-氨基酸。

Description

生产氨基酸的微生物以及氨基酸的生产方法
技术领域
本发明涉及生产L-氨基酸的微生物以及L-氨基酸的生产方法。L-赖氨酸、L-苏氨酸和L-色氨酸被广泛地作为饲料添加剂等使用。此外，L-苯丙氨酸被作为甜味剂原料使用。L-缬氨酸、L-亮氨酸和L-异亮氨酸可用于氨基酸输液、滋补品。此外，L-丝氨酸可以用作食品添加剂、化妆品的原料等。
背景技术
为了通过使用微生物的发酵法生产L-氨基酸等目的物质，可以采用使用野生型微生物(野生株)的方法、使用从野生株衍生的营养缺陷型株的方法、使用从野生株作为各种药物抗性突变株衍生的代谢调节突变株的方法、使用兼具营养缺陷型株和代谢调节突变株二者的性质的菌株的方法等。
近年来，在目的物质的发酵生产中采用了重组DNA技术。例如，人们通过增强L-氨基酸生物合成体系酶编码基因或涉及L-氨基酸的分泌或抗性的蛋白质的编码基因的表达、或者增强L-氨基酸生物合成体系的碳源流入来提高微生物的L-氨基酸生产性能。
作为如上所述技术，例如，就L-赖氨酸而言，已知可以增强二氢吡啶二羧酸合酶、天冬氨酸激酶、二氢吡啶二羧酸还原酶、二氨基庚二酸脱羧酶、二氨基庚二酸脱氢酶等酶的编码基因的表达(专利文献1)，降低高丝氨酸脱氢酶、赖氨酸脱羧酶(专利文献2)和苹果酸酶(malic enzyme)(专利文献3)的活性等。
就L-苏氨酸而言，作为赋予L-苏氨酸和/或L-高丝氨酸抗性的基因，可以列举下列：rhtA基因(专利文献4)、rhtB基因(专利文献5)、rhtC基因(专利文献6)、yfiK、yeaS基因(专利文献7)。此外，还包括增强编码天冬氨酸激酶、天冬氨酸半醛脱氢酶、高丝氨酸激酶、苏氨酸合酶、以及天冬氨酸氨基转移酶(天冬氨酸转氨酶)的基因的表达(专利文献8)，降低苏氨酸脱氢酶的活性(专利文献9)等。
就L-色氨酸而言，已知有解除磷酸甘油酸脱氢酶、邻氨基苯甲酸合酶的反馈抑制(专利文献10)，缺损色氨酸酶(专利文献11)等。
就L-苯丙氨酸而言，已知有解除分支酸变位酶-预苯酸脱水酶的反馈抑制(专利文献12)，以及缺损分支酸变位酶-预苯酸脱氢酶以及酪氨酸阻遏物(专利文献13)等。
就L-缬氨酸而言，已知有生长需要核酸和/或缺失H+-ATP酶的突变株(专利文献14)等；对于L-亮氨酸，已知有解除异丙基苹果酸合酶的反馈抑制(专利文献15)等；对于L-异亮氨酸，已知有强化编码苏氨酸脱氨酶、乙酰羟酸合酶的基因等的表达(专利文献16)等。
就L-丝氨酸而言，已知有携带降低了由丝氨酸导致的反馈抑制的3-磷酸甘油酸脱氢酶的菌株(专利文献17)，具有L-丝氨酸生产能力且增强了磷酸丝氨酸磷酸酶活性或磷酸丝氨酸转氨酶活性中的至少一种的细菌，缺失L-丝氨酸分解能力的细菌(专利文献18)，以及具有偶氮丝氨酸或β-(2-噻吩基)-DL-丙氨酸抗性且具有L-丝氨酸生产能力的细菌(专利文献19)等。
专利文献1美国专利第6,040,160号
专利文献2美国专利第5,827,698号
专利文献3WO2005/010175
专利文献4美国专利第6,303,348号
专利文献5欧洲专利申请公开第0994190号
专利文献6欧洲专利申请公开第1013765号
专利文献7欧洲专利申请公开第1016710号
【专利文献8】WO2006/123764
【专利文献9】美国专利第7,179,623号
【专利文献10】美国专利第6,180,373号
【专利文献11】美国专利第4,371,614号
【专利文献12】美国专利第5,354,672号
【专利文献13】WO03/044191
【专利文献14】美国专利第5,888,783号
【专利文献15】美国专利第6,403,342号
【专利文献16】美国专利第5,998,178号
【专利文献17】美国专利第5,618,716号
【专利文献18】美国专利第6,037,154号
【专利文献19】美国专利第6,258,573号
发明内容
发明所要解决的问题
本发明的课题是：提供能够高效生产L-氨基酸的菌株，以及提供使用该菌株高效生产L-氨基酸的方法。
解决问题的手段
传统的L-氨基酸生产主要是以糖类作为碳源，利用丙酮酸脱氢酶为TCA循环提供乙酰CoA来实现的。但是，丙酮酸脱氢酶的反应伴有脱碳酸，必然要释放1分子的CO2。因此，本发明人等认为，为了进一步提高生产力，必须要减少这种脱碳酸。于是，本发明人等为解决上述课题进行了深入研究，结果发现：以乙醇、脂肪酸等能提供乙酰CoA的物质为碳源，通过提高催化碳酸固定反应的酶--丙酮酸合酶或丙酮酸:NADP+氧化还原酶的酶活性，进一步通过增强铁氧还蛋白-NADP+还原酶的活性(该酶具有分别从氧化型铁氧还蛋白或氧化型黄素氧还蛋白生成对丙酮酸合酶的酶活性而言必要的还原型铁氧还蛋白或还原型黄素氧还蛋白的活性)、或者通过提高铁氧还蛋白或黄素氧还蛋白产生能力，能够提高L-氨基酸的生产力，从而完成了本发明。
即，本发明如下述。
(1).一种微生物，其具有生产选自L-赖氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-苯丙氨酸、L-缬氨酸、L-亮氨酸、L-异亮氨酸和L-丝氨酸中的L-氨基酸的能力，且经过修饰而增强了丙酮酸合酶或丙酮酸:NADP+氧化还原酶的活性。
(2).上述的微生物，其经过修饰而增强了丙酮酸合酶的活性。
(3).上述的微生物，其经过修饰而增强了丙酮酸:NADP+氧化还原酶的活性。
(4).上述的微生物，其中，丙酮酸合酶或丙酮酸:NADP+氧化还原酶的活性是通过增加编码丙酮酸合酶或丙酮酸:NADP+氧化还原酶的基因的表达量和/或增加所述基因的翻译量而增强的。
(5).上述的微生物，其中，丙酮酸合酶或丙酮酸:NADP+氧化还原酶的活性是通过提高编码丙酮酸合酶或丙酮酸:NADP+氧化还原酶的基因的拷贝数或修饰所述基因的表达调节序列而增强的。
(6).上述的微生物，其中，所述编码丙酮酸合酶的基因编码下述(A)～(D)中任一项所示的多肽，或下述(E)、(F)、(G)和(H)的多肽，或下述(E)、(F)、(G)、(H)、(I)和(J)的多肽：
(A)包含SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的多肽；
(B)包含在SEQ ID NO：2中取代、缺失、插入或添加1个或数个氨基酸而得到的氨基酸序列，并且具有丙酮酸合酶活性的多肽；
(C)包含SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列的多肽；
(D)包含在SEQ ID NO：4中取代、缺失、插入或添加1个或数个氨基酸而得到的氨基酸序列，并且具有丙酮酸合酶活性的多肽；
(E)下述(E1)或(E2)的多肽：
(E1)包含SEQ ID NO：57所示的氨基酸序列的多肽；
(E2)包含在SEQ ID NO：57中取代、缺失、插入或添加1个或数个氨基酸而得到的氨基酸序列，并且能够与至少(F)、(G)和(H)的多肽一起形成具有丙酮酸合酶活性的蛋白质复合体的多肽；
(F)下述(F1)或(F2)的多肽：
(F1)包含SEQ ID NO：57所示的氨基酸序列的多肽；
(F2)包含在SEQ ID NO：57中取代、缺失、插入或添加1个或数个氨基酸而得到的氨基酸序列，并且能够与至少(E)、(G)和(H)的多肽一起形成具有丙酮酸合酶活性的蛋白质复合体的多肽；
(G)下述(G1)或(G2)的多肽：
(G1)包含SEQ ID NO：57所示的氨基酸序列的多肽；
(G2)包含在SEQ ID NO：57中取代、缺失、插入或添加1个或数个氨基酸而得到的氨基酸序列，并且能够与至少(E)、(F)和(H)的多肽一起形成具有丙酮酸合酶活性的蛋白质复合体的多肽；
(H)下述(H1)或(H2)的多肽：
(H1)包含SEQ ID NO：57所示的氨基酸序列的多肽；
(H2)包含在SEQ ID NO：57中取代、缺失、插入或添加1个或数个氨基酸而得到的氨基酸序列，并且能够与至少(E)、(F)和(G)的多肽一起形成具有丙酮酸合酶活性的蛋白质复合体的多肽；
(I)下述(I1)或(I2)的多肽：
(H1)包含SEQ ID NO：65所示的氨基酸序列的多肽；
(H2)包含在SEQ ID NO：65中取代、缺失、插入或添加1个或数个氨基酸而得到的氨基酸序列，并且能够与至少(E)、(F)、(G)和(H)的多肽一起形成具有丙酮酸合酶活性的蛋白质复合体的多肽；
(J)下述(J1)或(J2)的多肽：
(J1)包含SEQ ID NO：67所示的氨基酸序列的多肽；
(J2)包含在SEQ ID NO：67中取代、缺失、插入或添加1个或数个氨基酸而得到的氨基酸序列，并且能够与至少(E)、(F)、(G)和(H)的多肽一起形成具有丙酮酸合酶活性的蛋白质复合体的多肽。
(7).上述的微生物，其中，所述编码丙酮酸合酶的基因包含下述(a)～(d)中任一项的DNA，或下述(e)、(f)、(g)和(h)的DNA，或下述(e)、(f)、(g)、(h)、(i)和(j)的DNA：
(a)具有SEQ ID NO：1所示的碱基序列的DNA；
(b)与SEQ ID NO：1所示的碱基序列的互补序列或与能够由该碱基序列制备的探针在严格条件下杂交，并且编码具有丙酮酸合酶活性的多肽的DNA；
(c)具有SEQ ID NO：3所示的碱基序列的DNA；
(d)与SEQ ID NO：3所示的碱基序列的互补序列或与能够由该碱基序列制备的探针在严格条件下杂交，并且编码具有丙酮酸合酶活性的多肽的DNA；
(e)下述(e1)或(e2)的DNA：
(e1)具有SEQ ID NO：56所示的碱基序列的DNA；
(e2)与SEQ ID NO：56所示的碱基序列的互补序列或与能够由该碱基序列制备的探针在严格条件下杂交，并且能够与至少(f)、(g)、以及(h)所示的DNA一起编码具有丙酮酸合酶活性的蛋白质复合体的DNA；
(f)下述(f1)或(f2)的DNA：
(f1)具有SEQ ID NO：58所示的碱基序列的DNA；
(f2)与SEQ ID NO：58所示的碱基序列的互补序列或与能够由该碱基序列制备的探针在严格条件下杂交，并且能够与至少(e)、(g)、以及(h)所示的DNA一起编码具有丙酮酸合酶活性的蛋白质复合体的DNA；
(g)下述(g1)或(g2)的DNA：
(g1)具有SEQ ID NO：60所示的碱基序列的DNA、
(g2)与SEQ ID NO：60所示的碱基序列的互补序列或与能够由该碱基序列制备的探针在严格条件下杂交，并且能够与至少(e)、(f)、以及(h)所示的DNA一起编码具有丙酮酸合酶活性的蛋白质复合体的DNA；
(h)下述(h1)或(h2)的DNA：
(h1)具有SEQ ID NO：62所示的碱基序列的DNA、
(h2)与SEQ ID NO：62所示的碱基序列的互补序列或与能够由该碱基序列制备的探针在严格条件下杂交，并且能够与至少(e)、(f)、以及(g)所示的DNA一起编码具有丙酮酸合酶活性的蛋白质复合体的DNA；
(i)下述(i1)或(i2)的DNA：
(h1)具有SEQ ID NO：64所示的碱基序列的DNA；
(h2)与SEQ ID NO：64所示的碱基序列的互补序列或与能够由该碱基序列制备的探针在严格条件下杂交，并且能够与至少(e)、(f)、(g)和(h)所示的DNA一起编码具有丙酮酸合酶活性的蛋白质复合体的DNA；
(j)下述(j1)或(j2)的DNA：
(j1)具有SEQ ID NO：66所示的碱基序列的DNA；
(j2)与SEQ ID NO：66所示的碱基序列的互补序列或与能够由该碱基序列制备的探针在严格条件下杂交，并且能够与至少(e)、(f)、(g)和(h)所示的DNA一起编码具有丙酮酸合酶活性的蛋白质复合体的DNA。
(8).上述的微生物，其中，编码丙酮酸:NADP+氧化还原酶的基因编码下述(A)或(B)所示的多肽：
(A)包含SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列的多肽；
(B)包含在SEQ ID NO：6中取代、缺失、插入或添加1个或数个氨基酸而得到的氨基酸序列，并且具有丙酮酸:NADP+氧化还原酶活性的多肽。
(9).上述的微生物，其中，编码丙酮酸:NADP+氧化还原酶的基因包含下述(a)或(b)的DNA：
(a)具有SEQ ID NO：5所示的碱基序列的DNA；
(b)与SEQ ID NO：5所示的碱基序列的互补序列或与能够由该碱基序列制备的探针在严格条件下杂交，并且编码具有丙酮酸:NADP+氧化还原酶活性的多肽的DNA。
(10).上述的微生物，其经过修饰而增强了铁氧还蛋白-NADP+还原酶的活性。
(11).上述的微生物，其经过修饰而提高了产生铁氧还蛋白或黄素氧还蛋白的能力。
(12).上述的微生物，其经过修饰而降低了苹果酸酶的活性。
(13).上述的微生物，其经过修饰而降低了丙酮酸脱氢酶活性。
(14).上述的微生物，其经过修饰从而能够以需氧方式同化乙醇。
(15).上述的微生物，其中，所述微生物是属于选自埃希氏菌属、肠杆菌属、泛菌属、克雷伯氏菌属、沙雷氏菌属中的属的细菌。
(16).上述的微生物，其中，该微生物的NAD型苹果酸酶和NADP型苹果酸酶二者的活性均已降低。
(17).上述的微生物，其中，所述微生物为棒状杆菌型细菌。
(18).一种生产L-氨基酸的方法，其中，在培养基中培养上述的微生物，使该培养基中或菌体内生成并蓄积选自L-赖氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-苯丙氨酸、L-缬氨酸、L-亮氨酸、L-异亮氨酸和L-丝氨酸中的L-氨基酸，并从该培养基或菌体收集L-氨基酸。
(19).上述的方法，其中，所述培养基的特征在于含有乙醇或脂肪酸作为碳源。
附图说明
[图1]显示源自纤细裸藻(Euglena gracilis)的丙酮酸:NADP+氧化还原酶(PNO)基因的表达的Western印迹照片。泳道1：分子量标记，泳道2：WC196ΔcadAΔldcC/pCABD2/pMW-Pthr的粗酶抽提液，泳道3：WC196ΔcadAΔldcC/pCABD2/pMW-Pthr-PNO的粗酶抽提液
发明的具体实施方式
以下，对本发明进行具体说明。
<1>本发明的微生物
本发明的微生物是具有生产选自L-赖氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-苯丙氨酸、L-缬氨酸、L-亮氨酸、L-异亮氨酸、以及L-丝氨酸中的L-氨基酸的能力，且经过了修饰而增强了丙酮酸合酶或丙酮酸：NADP+氧化还原酶的活性的微生物。
在本发明中，如无特殊说明，“L-氨基酸”是指所述的L-赖氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-苯丙氨酸、L-缬氨酸、L-亮氨酸、L-异亮氨酸、和/或L-丝氨酸。
“L-氨基酸生产能力”是指当在培养基中培养本发明的微生物时，以可从细胞或培养基中回收的程度在细胞或培养基中生成、蓄积L-氨基酸的能力。本发明的微生物所生产的L-氨基酸可以是1种氨基酸，也可以是2种或2种以上的L-氨基酸。作为具备L-氨基酸生产能力的微生物，可以是本身具备L-氨基酸生产能力的微生物，也可以是通过利用突变法或重组DNA技术对如下文所述的微生物进行修饰而具备了L-氨基酸生产能力的微生物，或者可以是通过导入本发明的基因而被赋予了L-氨基酸生产能力的微生物。
此外，“增强丙酮酸合酶或丙酮酸:NADP+氧化还原酶的活性”包括如下两方面含义：在本身具有丙酮酸合酶或丙酮酸:NADP+氧化还原酶的微生物中，增强所述两种酶中的至少一种的活性；以及，对于赋予不具有丙酮酸合酶或丙酮酸:NADP+氧化还原酶的微生物，赋予其所述两种酶中的至少一种酶的活性。
<1-1>L-氨基酸生产能力的赋予
本发明的微生物可以通过以具有L-氨基酸生产能力的微生物作为亲本株，对其进行修饰以增强丙酮酸合酶或丙酮酸:NADP+氧化还原酶或这两者的活性来获得。本发明的微生物还可以通过以经过了修饰使得丙酮酸合酶或丙酮酸:NADP+氧化还原酶的活性增强的微生物作为亲本株，并对其赋予或增强L-氨基酸生产能力来获得。
以下，示例说明对微生物赋予L-氨基酸生产能力的方法以及能够在本发明中使用的被赋予了L-氨基酸生产能力的微生物。但是，微生物只要具有L-氨基酸生产能力，并不限于此。
作为用于本发明的微生物，可以列举例如，属于埃希氏菌属(Escherichia)、肠杆菌属(Enterobacter)、泛菌属(Pantoea)、克雷伯氏菌属(Klebsiella)、沙雷氏菌属(Serratia)、欧文氏菌属(Erwinia)、沙门氏菌属(Salmonella)、摩根氏菌属(Morganella)等γ-变形细菌的肠杆菌科细菌，属于短杆菌属(Brevibacterium)、棒杆菌属(Corynebacterium)、微杆菌属(Microbacterium)的所谓棒状杆菌型(coryneform)细菌，属于脂环酸杆菌属(Alicyclobacillus)、芽孢杆菌属(Bacillus)、酵母属(Saccharomyces)等的微生物。γ-变形细菌可以使用依据NCBI(National Center for Biotechnology Information)分类学数据库http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Taxonomy/Browser/wwwtax.cgi·id＝91347)公布的分类法归属的微生物。
作为埃希氏菌属细菌，可以列举大肠杆菌(Escherichia coli)等。在采用基因工程方法选育大肠杆菌时，可以使用大肠杆菌K-12株及其衍生物大肠杆菌MG1655株(ATCC 47076)和W3110株(ATCC 27325)。大肠杆菌K-12株是在1922年由斯坦福大学分离出来的，它是λ噬菌体的溶原菌，具有F因子，是一种能够通过接合等手段来构建遗传重组体的、通用性高的菌株。此外，大肠杆菌K-12株的基因组序列已经测定，其基因信息也可以自由地使用。大肠杆菌K-12株及其衍生株可以从例如美国典型培养物保藏中心(ATCC)零售获得(住所：ATCC，地址：P.O.Box 1549，Manassas，VA 20108，United States of America)。
特别是，泛菌属细菌、欧文氏菌属细菌和肠杆菌属细菌是分类为γ-变形细菌(γ-Proteobacteria)的细菌，它们在分类学上的亲缘关系非常近(J.Gen.Appl.Microbiol.1997，43：355-361；Int.J.Syst.Bacteriol.1997，47：1061-1067)。近年来，依据DNA-DNA杂交实验等，属于肠杆菌属的细菌中，有些被重新分类为成团泛菌(Pantoea agglomerans)或分散泛菌(Pantoeadispersa)等(Int.J.Syst.Bacteriol.1989，39：337-345)。此外，属于欧文氏菌属的细菌中，有些被重新分类为菠萝泛菌(Pantoea ananas)、斯氏泛菌(Pantoea stewartii)(参照Int.J.Syst.Bacteriol.1993，43：162-173)。
肠杆菌属细菌包括例如成团肠杆菌(Enterobacter agglomerans)和产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)等。具体地，可以使用欧洲专利申请公开952221号说明书示例的菌株。作为肠杆菌属的代表性菌株，可以列举成团肠杆菌ATCC12287株。
作为泛菌属细菌的代表性菌株，可以列举Pantoea ananatis、斯氏泛菌、成团泛菌、柠檬泛菌(Pantoea citrea)。具体地，可以列举下述菌株。
Pantoea ananatis AJ13355株(FERM BP-6614)(欧洲专利申请公开0952221号说明书)
Pantoea ananatis AJ13356株(FERM BP-6615)(欧洲专利申请公开0952221号说明书)
而且，所述菌株在欧洲专利申请公开0952221号说明书中记载为成团肠杆菌，但现在，如上文所述，依据16S rRNA碱基序列分析它们已被重新分类为Pantoea ananatis。
作为欧文氏菌属细菌，可以列举解淀粉欧文氏菌(Erwinia amylovora)、胡萝卜软腐欧文氏菌(Erwinia carotovora)；作为克雷伯氏菌属细菌，可以列举植生克雷伯氏菌(Klebsiella planticola)。具体地，可以列举下述菌株。
解淀粉欧文氏菌ATCC15580株
胡萝卜软腐欧文氏菌ATCC15713株
植生克雷伯氏菌AJ13399株(FERM BP-6600)(欧洲专利申请公开955368号说明书)
植生克雷伯氏菌AJ13410株(FERM BP-6617)(欧洲专利申请公开955368号说明书)
本发明所称的棒状杆菌型细菌包括这样的微生物，它们是在《Bergey’sManual of Determinative Bacteriology》第8版599页(1974)中定义的一组微生物，包括为需氧性、革兰氏阳性、非耐酸性、无芽孢形成能力的杆菌，曾经归类于短杆菌属(Brevibacterium)但现在已经统一归类于棒杆菌属(Corynebacterium)的那些细菌(Liebl，W.et al.1991，Int.J.Syst.Bacteriol.41：255-260)，还包括与棒杆菌属极其近缘的短杆菌属细菌和微杆菌属细菌。
作为适于在L-谷氨酸类氨基酸的生产中应用的棒状杆菌型细菌，可以列举例如以下所示的菌株。
嗜乙酰乙酸棒杆菌(Corynebacterium acetoacidophilum)
醋谷棒杆菌(Corynebacterium acetoglutamicum)
烷醇棒杆菌(Corynebacterium alkanolyticum)
美棒杆菌(Corynebacterium callunae)
谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)
百合花棒杆菌(Corynebacterium lilium)
栖糖蜜棒杆菌(Corynebacterium melassecola)
嗜热产氨棒杆菌(Corynebacterium thermoaminogenes)(Corynebacteriumefficiens)
力士棒杆菌(Corynebacterium herculis)
二歧短杆菌(Brevibacterium divaricatum)(谷氨基酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum))
黄色短杆菌(Brevibacterium flavum)(谷氨酸棒杆菌(Corynebacteriumglutamicum))
Brevibacterium immariophilum
乳发酵短杆菌(Brevibacterium lactofermentum)(谷氨基酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum))
玫瑰色短杆菌(Brevibacterium roseum)
解糖短杆菌(Brevibacterium saccharolyticum)
生硫短杆菌(Brevibacterium thiogenitalis)
产氨短杆菌(Brevibacterium ammoniagenes)(产氨棒杆菌(Corynebacterium ammoniagenes))
白色棒杆菌(Brevibacterium album)
蜡状短杆菌(Brevibacterium cerinum)
嗜氨微杆菌(Microbacterium ammoniaphilum)
具体地，可以列举诸如下述的菌株。
嗜热产氨棒杆菌AJ12340(FERM BP-1539)
谷氨酸棒杆菌ATCC13032
黄色短杆菌(谷氨酸棒杆菌)ATCC13826、ATCC14067
乳发酵短杆菌(谷氨酸棒杆菌)ATCC13665、ATCC13869
产氨短杆菌(产氨棒杆菌)ATCC6871
用于本发明的细菌可以是具有乙醇同化性的细菌。作为这样的细菌，可以是本来具有乙醇同化性的细菌，也可以是被赋予了乙醇同化性的重组菌株，还可以是提高了乙醇同化性的突变菌株。在大肠杆菌中，作为在厌氧条件下生成乙醇的酶，已知有可逆地催化以下反应的具有乙醛脱氢酶和醇脱氢酶活性的AdhE的存在。
乙酰-CoA+NADH+H+→乙醛+NAD++CoA
乙醛+NADH+H+→乙醇+NAD+
大肠杆菌在需氧条件下不能同化乙醇，但已知其通过AdhE的突变，可变得能够以需氧方式同化乙醇(Clark D.P.，and Cronan，J.E.Jr.1980.J.Bacteriol.144：179-184；Membrillo-Hernandez，J.et al.2000.J.Biol.Chem.275：33869-33875)。作为这样的具有突变的AdhE突变体，具体地有大肠杆菌AdhE的第568位的谷氨酸残基被谷氨酸和天冬氨酸以外的氨基酸残基、例如赖氨酸取代而得到的突变体(Glu568Lys、E568K)。
而且，所述AdhE突变体还可以包含以下的附加突变。
A)第560位的谷氨酸残基被其它氨基酸残基、例如赖氨酸残基所取代；
B)第566位的苯丙氨酸残基被其它氨基酸残基、例如缬氨酸残基所取代；
C)第22位的谷氨酸残基、第236位的甲硫氨酸残基、第461位的酪氨酸残基、第554位的异亮氨酸残基以及第786位的丙氨酸残基被其它氨基酸残基、例如分别被甘氨酸残基、缬氨酸残基、半胱氨酸残基、丝氨酸残基以及缬氨酸残基所取代；或
D)上述突变的组合。
已知谷氨酸棒杆菌具有多种醇脱氢酶，能够以需氧方式同化乙醇(Pelechova，J.et al.1980.Folia Microbiol(Praha)25：341-346)。
用于本发明的细菌还可以是具有油脂或脂肪酸同化性的细菌。这样的细菌可以是本来就具有油脂或脂肪酸同化性的细菌，也可以是赋予了油脂或脂肪酸同化性的重组菌株，还可以是提高了油脂或脂肪酸同化性的突变菌株。已知在大肠杆菌中能够同化链长12以上的长链脂肪酸(Clark，D.P.and Cronan，J.E.1996.In Escherichia coli and Salmonella：Cellular andMolecular Biology/Second Edition(Neidhardt，F.C.Ed.)pp.343-357)。而且，已知能够利用中链、短链脂肪酸的大肠杆菌突变株(Nunn，W.D.et al.1979.J.Biol.Chem.254：9130-9134；Salanitro，J.P.and Wegener，W.S.1971.J.Bacteriol.108：885-892)。
在本发明中，具有L-氨基酸生产能力的细菌是指具有下述能力细菌：当在培养基中进行培养时，能够生产L-氨基酸、并能够使L-氨基酸在培养基中蓄积到可从培养基回收的程度。优选能够使目的L-氨基酸以优选0.5g/L以上、更优选1.0g/L以上的量在培养基中蓄积的细菌。L-氨基酸包括L-赖氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-苯丙氨酸、L-缬氨酸、L-亮氨酸、L-异亮氨酸和L-丝氨酸。特别是，优选L-赖氨酸、L-苏氨酸、L-缬氨酸、L-色氨酸。
以下，说明对如上所述的细菌赋予L-氨基酸生产能力的方法，或增强如上所述的细菌的L-氨基酸生产能力的方法。
为了赋予L-氨基酸生产能力，可以使用在棒状杆菌型细菌或埃希氏菌属细菌等氨基酸生产菌的选育中沿用至今的方法，如获取营养缺陷突变株、L-氨基酸类似物抗性菌株或代谢调节突变菌株，创建L-氨基酸生物合成系统酶表达增强的重组菌株等等(参见《アミノ酸発酵》，(株)学会出版中心，1986年5月30日第一版发行，第77-100页)。这里，在L-氨基酸生产菌的选育中，被赋予的营养缺陷性、类似物抗性或代谢调节突变等性质可以是单独一种，也可以是两种或者三种以上。此外，表达增强的L-氨基酸生物合成系统酶可以是单独一种，也可以是两种或三种以上。另外，营养缺陷突变、类似物抗性或代谢调节突变等性质的赋予与生物合成系统酶的增强可以组合进行。
具有L-氨基酸生产能力的营养缺陷突变体菌株、类似物抗性菌株或代谢调节突变菌株可如下地获得：对亲本菌株或野生型菌株施以常规突变处理，即X-射线或紫外线照射或用诱变剂例如N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍等处理；其后，从所得的突变菌株中选择显示营养缺陷性、类似物抗性或代谢调节突变并且还具有L-氨基酸生产能力的菌株。
此外，可以通过进行基因重组增强酶活性，来赋予或增强L-氨基酸生产能力。就酶活性的增强而言，包括例如通过修饰细菌以增强编码与L-氨基酸的生物合成相关的基因的表达的方法。增强基因的表达的方法可以通过下述方式实现：导入通过将包含所述基因的DNA片段导入合适的质粒(例如至少包含负责质粒在微生物内的复制增殖功能的基因的质粒载体)而得到的扩增质粒；或者通过接合、基因转移等使所述基因在染色体上多拷贝化；抑或在这些基因的启动子区域导入突变等(参考国际公开小册子WO95/34672号)。
当向上文所述的扩增质粒或者染色体上导入目的基因时，用于表达所述基因的启动子可以是任何能够在属于肠杆菌科的细菌中发挥功能的启动子，可以是所使用的基因自身的启动子，也可以是经过修饰的启动子。也可以通过适当地选择在L-氨基酸生产菌中强力发挥功能的启动子，或者通过使启动子的-35、-10区域与共有序列接近，来进行基因表达量的调节。如上所述的增强酶基因表达的方法，在WO00/18935号小册子、欧洲专利申请公开1010755号说明书等中有记载。
下面，对于给细菌赋予L-氨基酸生产能力的方法、以及被赋予了L-氨基酸生产能力的细菌进行示例。
L-赖氨酸生产菌
属于埃希氏菌属的L-赖氨酸生产菌的实例可以列举出对L-赖氨酸类似物具有抗性的突变株。L-赖氨酸类似物可抑制属于埃希氏菌属的细菌的生长，但是这种抑制在当L-赖氨酸共存于培养基中时会被全部或部分解除。L-赖氨酸类似物的实例可以列举出、但不限于，氧代赖氨酸，赖氨酸氧肟酸(lysine hydroxamate)，S-(2-氨乙基)-L-半胱氨酸(AEC)，γ-甲基赖氨酸，α-氯代己内酰胺等。这些赖氨酸类似物具有抗性的突变株可以通过对属于埃希氏菌属的细菌进行常规的人工诱变处理来得到。可用于L-赖氨酸生产的菌株的具体实例可以列举出大肠杆菌AJ11442(参考FERMBP-1543，NRRL B-12185；参见美国专利第4,346,170号)和大肠杆菌VL611。在这些微生物中，L-赖氨酸对由天冬氨酸激酶的反馈抑制已被解除。
WC196株可以用作大肠杆菌的L-赖氨酸生产菌。该菌株是通过对大肠杆菌K-12来源的W3110株赋予AEC抗性来选育获得的。该菌株被命名为大肠杆菌AJ13069，于1994年12月6日保藏在工业技术院生命工学工业技术研究所(现为独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心，
Figure GPA00001043068400141
305-8566日本国茨城县筑波市东1丁目1番地1中央第6)，保藏号FERMP-14690，并于1995年9月29日转为基于布达佩斯条约的国际保藏，保藏号FERM BP-5252(美国专利第5,827,698号)。
作为L-赖氨酸生产菌或用于衍生L-赖氨酸生产菌的亲本株，可以列举出L-赖氨酸生物合成系统酶的1种或者2种以上的活性被增强的菌株。相关的酶包括，但不限于：二氢吡啶二羧酸合酶(dapA)、天冬氨酸激酶(lysC)、二氢吡啶二羧酸还原酶(dapB)、二氨基庚二酸脱羧酶(lysA)、二氨基庚二酸脱氢酶(ddh)(美国专利第6,040,160号)、磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(ppc)、天冬氨酸氨基转移酶(aspC)、天冬氨酸半醛脱氢酶(asd)、二氨基庚二酸差向异构酶(dapF)、四氢吡啶二羧酸琥珀酰酶(dapD)(tetrahydrodipicolinicacidsuccinylase)、琥珀酰二氨基庚二酸脱酰酶(dapE)(succinyl diamino pimelicacid deacylase)以及天冬氨酸酶基因(aspA)(EP 1253195A)。酶名称后的括号内为基因名称(下同)。在这些酶中，特别优选为二氢吡啶二羧酸还原酶、二氨基庚二酸脱羧酶、二氨基庚二酸脱氢酶、磷酸烯醇丙酮酸羧化酶、天冬氨酸氨基转移酶、二氨基庚二酸差向异构酶、天冬氨酸半醛脱氢酶、四氢吡啶二羧酸琥珀酰酶、以及琥珀酰二氨基庚二酸脱酰酶。此外，可以增强亲本株中下述基因的表达水平：与能量效率相关的基因(cyo)(EP 1170376A)、编码烟酰胺核苷酸转氢酶的基因(pntAB)(美国专利第5,830,716号)、ybjE基因(WO2005/073390)、或所述基因的组合。
作为L-赖氨酸生产菌或用于衍生L-氨基酸生产菌的亲本株的例子，还可以列举催化通过从L-氨基酸生物合成途径分支而生成L-赖氨酸以外的化合物的反应的酶的活性减少或者缺损的菌株。作为催化通过从L-赖氨酸生物合成途径分支而生成L-赖氨酸之外的化合物的反应的酶的例子，可以列举出高丝氨酸脱氢酶、赖氨酸脱羧酶(美国专利第5,827,698号)、和苹果酸酶(WO2005/010175)。
作为优选的L-赖氨酸生产菌，可以列举出大肠杆菌WC196Δmez/pCABD2(WO2005/010175)、WC196ΔcadAΔldcC/pCABD2(WO2006/078039)等。WC196Δmez/pCABD2株是通过在WC196Δmez株中导入美国专利第6040160所述的质粒pCABD2而获得的菌株，所述WC196Δmez株是通过破坏WC196株的编码苹果酸酶的sfcA和b2463基因而制作的。WC196Δmez株的详细情况在WO2005/010175中有记载。sfcA基因和b2463基因的碱基序列、以及各基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO：52～55所示。
WC196ΔcadAΔldcC/pCABD2株是通过在编码赖氨酸脱羧酶的cadA以及ldcC基因被破坏的WC196株中导入美国专利第6040160所述的质粒pCABD2而获得的菌株。pCABD2包含：编码具有解除了由L-赖氨酸导致的反馈抑制的突变的大肠杆菌来源二氢吡啶二羧酸合成酶(DDPS)的突变型dapA基因、编码具有解除了由L-赖氨酸导致的反馈抑制的突变的大肠杆菌来源天冬氨酸激酶III的突变型lysC基因、编码源自大肠杆菌的二氢吡啶二羧酸还原酶的dapB基因、以及编码源自乳发酵短杆菌的二氨基庚二酸脱氢酶的ddh基因。
L-苏氨酸生产菌
作为具有L-苏氨酸生产能力的微生物优选实例可以列举出增强了L-苏氨酸生物合成系统酶的1种或2种以上的活性的细菌。作为L-苏氨酸生物合成系统酶，可以列举出天冬氨酸激酶III(lysC)、天冬氨酸半醛脱氢酶基因(asd)、thr操纵子所编码的天冬氨酸激酶I基因(thrA)、高丝氨酸激酶基因(thrB)、苏氨酸合酶(thrC)、天冬氨酸氨基转移酶(天冬氨酸转氨酶)(aspC)。括号里为该基因的简写符号(下同)。这些酶中特别优选天冬氨酸激酶III、天冬氨酸半醛脱氢酶、天冬氨酸激酶I、高丝氨酸激酶、天冬氨酸氨基转移酶、以及苏氨酸合酶。也可以将L-苏氨酸生物合成系统基因导入苏氨酸分解受到抑制的埃希氏属细菌中。作为苏氨酸分解受到抑制的埃希氏菌属细菌，例如可以列举出苏氨酸脱氢酶活性缺损的TDH-6菌株(特开2001-346578号、美国专利第7,179,623号)。
L-苏氨酸生物合成系统酶的酶活性受最终产物L-苏氨酸的抑制。因此，为了构建L-苏氨酸生产菌，优选对L-苏氨酸生产菌合成系统基因进行修饰以使所述酶不受L-苏氨酸的反馈抑制。此外，上述thrA、thrB和thrC基因组成苏氨酸操纵子，苏氨酸操纵子形成弱化子(attenuator)结构，苏氨酸操纵子的表达受到培养液中异亮氨酸和苏氨酸的抑制，并且表达受到弱化作用的抑制。这种修饰可通过去除弱化区中的前导序列或弱化子来实现(参照Lynn，S.P.et al.，J.F.J.Mol.Biol.194：59-69(1987)；国际公开第02/26993号小册子；国际公开第2005/049808号小册子)。
苏氨酸操纵子的上游存在天然启动子，但可以用非天然启动子将其取代(参考WO98/04715号小册子)，也可以构建苏氨酸操纵子使得苏氨酸生物合成的相关的基因的表达受到λ噬菌体的阻遏物(repressor)和启动子的调控(参考欧洲专利第0593792号说明书)。此外，为了对细菌进行修饰使其不受L-苏氨酸的反馈抑制，可以通过选择对α-氨基-β-羟基戊酸(AHV)有抗性的菌株来实现。
对于如上所述经修饰而不受L-苏氨酸的反馈抑制的苏氨酸操纵子而言，优选的是其在宿主内的拷贝数有所提高、或者是其连接于强启动子而表达量有所增加。除了通过使用质粒的扩增来提高拷贝数之外，还可以通过使用转座子、Mu噬菌体等向基因组中转移苏氨酸操纵子来提高拷贝数。
理想的是，除了L-苏氨酸生物合成系统酶之外，还增强与糖酵解系统、TCA循环或呼吸链相关的基因或调控基因表达的基因，或者糖摄取基因。这些在L-苏氨酸生产中有效的基因的实例可以列举出，转氢酶基因(pntAB)(欧洲专利733712号说明)、磷酸烯醇丙酮酸羧化酶基因(pepC)(国际公开95/06114号小册子)、磷酸烯醇丙酮酸合酶基因(pps)(欧洲专利877090号说明书)、棒状杆菌型细菌或者芽孢杆菌属细菌的丙酮酸羧化酶基因(国际公开99/18228号小册子、欧洲申请公开1092776号说明书)。
此外，强化赋予L-苏氨酸抗性的基因、赋予L-高丝氨酸抗性的基因的表达，或对宿主赋予L-苏氨酸抗性、L-高丝氨酸抗性，也是合适的。作为可以赋予抗性的基因的实例，可以列举出rhtA基因(Res.Microbiol.154：123-135(2003))、rhtB基因(欧洲专利申请公开第0994190号说明书)、rhtC基因(欧洲专利申请公开第1013765号说明书)、yfiK、yeaS基因(欧洲专利申请公开第1016710号说明书)。此外，关于对宿主赋予L-苏氨酸抗性的方法，可以参考欧洲专利申请公开第0994190号说明书、国际公开第90/04636号小册子中所记载的方法。
作为L-苏氨酸生产菌或用于衍生L-苏氨酸生产菌的亲本株的例子，可以列举：大肠杆菌TDH-6/pVIC40(VKPM B-3996)(美国专利第5,175,107号、美国专利第5,705,371号)、大肠杆菌472T23/pYN7(ATCC 98081)(美国专利第5,631,157号)、大肠杆菌NRRL-21593(美国专利第5,939,307号)、大肠杆菌FERM BP-3756(美国专利第5,474,918号)、大肠杆菌FERM BP-3519和FERM BP-3520(美国专利第5,376,538号)、大肠杆菌MG442(Gusyatiner etal.，Genetika(俄语)，14，947-956(1978))、大肠杆菌VL643和VL2055(EP1149911A)等属于埃希氏菌属的菌株，但不限于此。
TDH-6菌株在thrC基因有缺陷，是蔗糖同化型，并且ilvA基因有泄漏突变(leaky mutation)。该菌株的rhtA基因也有赋予对高浓度苏氨酸或高丝氨酸的抗性的突变。B-3996菌株包含pVIC40，pVIC40是通过将含有突变的thrA基因的thrA*BC操纵子插入到由RSF1010获得的载体中而获得的。这种突变的thrA基因编码的天冬氨酸激酶高丝氨酸脱氢酶I对苏氨酸的反馈抑制基本上已解除。B-3996菌株在1987年11月19日被保藏于All-UnionScientific Center of Antibiotics(全联盟抗生素科学中心)(Nagatinskaya Street3-A，117105 Moscow，Russia)，保藏号为RIA 1867。该菌株也在1987年4月7日保藏于俄罗斯国立工业微生物保藏中心(Russian National Collectionof Industrial Microorganisms)(VKPM)(1 Dorozhny proezd.，1 Moscow117545，Russia)，保藏号为B-3996。
还可以使用大肠杆菌VKPM B-5318(EP 0593792B)作为L-苏氨酸生产菌或用于衍生L-苏氨酸生产菌的亲本株。B-5318菌株是异亮氨酸原养型的，并且pVIC40质粒中的苏氨酸操纵子的调控区域被置换为温度敏感的λ噬菌体C1阻遏物和PR启动子。VKPM B-5318菌株在1990年5月3日保藏于俄罗斯国立工业微生物保藏中心(VKPM，1 Dorozhny proezd.，1 Moscow117545，Russia)，保藏号为VKPM B-5318。
编码天冬氨酸激酶高丝氨酸脱氢酶I的大肠杆菌thrA基因已经阐明(核苷酸编号337至2799，GenBank登录号NC_000913.2，gi：49175990)。thrA基因位于大肠杆菌K-12染色体上thrL基因和thrB基因之间。大肠杆菌的编码高丝氨酸激酶的thrB基因已经阐明(核苷酸编号2801至3733，GenBank登录号NC_000913.2，gi：49175990)。thrB基因位于大肠杆菌K-12染色体上的thrA基因和thrC基因之间。大肠杆菌的编码苏氨酸合酶的thrC基因已经阐明(核苷酸编号3734至5020，GenBank登录号NC_000913.2，gi：49175990)。thrC基因位于大肠杆菌K-12染色体上thrB基因和yaaX开放阅读框之间。所述3个基因全部作为一个单独的苏氨酸操纵子发挥功能。为增强苏氨酸操纵子的表达，优选从操纵子中将影响转录的弱化子区域去除(WO2005/049808，WO2003/097839)。
编码对苏氨酸的反馈抑制有抗性的天冬氨酸激酶高丝氨酸脱氢酶I的突变thrA基因，以及thrB和thrC基因可以作为一个操纵子从熟知的pVIC40质粒中获得，该质粒存在于苏氨酸生产株大肠杆菌VKPM B-3996菌株中。pVIC40质粒在美国专利5,705,371中有详述。
大肠杆菌的rhtA基因存在于大肠杆菌染色体上的18min处，靠近编码谷氨酰胺转运系统的成分的glnHPQ操纵子。rhtA基因与ORF1(ybiF基因，核苷酸编号764至1651，GenBank登录号AAA218541，gi：440181)相同，位于pexB与ompX基因之间。表达由ORF1编码的蛋白的单元称为rhtA基因(rht：对高丝氨酸和苏氨酸抗性)。此外，已经证明rhtA23突变是在相对于ATG起始密码子的-1位置用G→A取代(ABSTRACTS of the 17thInternational Congress of Biochemistry and Molecular Biology in conjugationwith Annual Meeting of the American Society for Biochemistry and MolecularBiology(第17界国际生物化学与分子生物学大会暨美国生物化学与分子生物学协会年会摘要)，San Francisco，California，1997年8月24-29日，摘要号457，EP 1013765A)。
大肠杆菌的asd基因已经阐明(核苷酸编号3572511至3571408，GenBank登录号NC_000913.1，gi：16131307)，并且可以根据该基因的碱基序列利用引物通过PCR来获得(参见White，T.J.等，Trends Genet.，5，185(1989))。其它微生物的asd基因可以通过类似方式获得。
此外，大肠杆菌的aspC基因已经阐明(核苷酸编号983742至984932，GenBank登录号NC_000913.1，gi：16128895)，并且可以通过PCR获得。其它微生物的aspC基因可以通过类似方式获得。
L-色氨酸生产菌
L-色氨酸生产菌或用于衍生L-色氨酸生产菌的亲本株的实例包括、但不限于下述属于埃希氏菌属的菌株，如可以使用由突变的trpS基因编码的色氨酰-tRNA合成酶缺陷的大肠杆菌JP4735/pMU3028(DSM10122)和JP6015/pMU91(DSM10123)(美国专利5,756,345)；具有编码不受丝氨酸反馈抑制的磷酸甘油酸脱氢酶的serA等位基因和编码不受色氨酸反馈抑制的邻氨基苯甲酸合酶(anthranilate synthase)的trpE等位基因的大肠杆菌SV164(pGH5)(美国专利6,180,373)；色氨酸酶缺陷的大肠杆菌AGX17(pGX44)(NRRL B-12263)和AGX6(pGX50)aroP(NRRL B-12264)(美国专利4,371,614)；产生磷酸烯醇丙酮酸的能力增强的大肠杆菌AGX17/pGX50，pACKG4-pps(WO9708333，美国专利6,319,696)等等。此外，还可以使用由yedA基因或yddG基因编码的蛋白活性增加的产生L-色氨酸的属于埃希氏菌属的细菌(美国专利申请2003/0148473A1和2003/0157667A1)。
L-色氨酸生产菌和用于衍生L-色氨酸生产菌的亲本株的实例还可以列举出下述菌株，该菌株的选自邻氨基苯甲酸合酶(trpE)、磷酸甘油酸脱氢酶(serA)、3-脱氧-D-阿拉伯庚酮醛酸-7-磷酸合酶(3-デオキシ-D-アラビノヘプツロン酸-7-リン酸シンタ一ゼ)(aroG)、3-脱氢奎宁酸合酶(aroB)、莽草酸脱氢酶(aroE)、莽草酸激酶(aroL)、5-烯醇丙酮酰莽草酸3-磷酸合酶(5-enolpyruvylshikimate 3-phosphate synthase)(aroA)、分支酸合酶(aroC)、预苯酸脱水酶、分支酸变位酶以及色氨酸合酶(trpAB)中的1种或2种以上的酶的活性被增强。预苯酸脱水酶以及分支酸变位酶作为双功能酶(CM-PD)，由pheA基因编码。在这些酶中，特别优选磷酸甘油酸脱氢酶、3-脱氧-D-阿拉伯庚酮醛酸-7-磷酸合酶、3-脱氢奎宁酸合酶、莽草酸激酶、5-烯醇丙酮酰莽草酸3-磷酸合酶、分支酸合酶、预苯酸脱水酶、分支酸变位酶-预苯酸脱氢酶。邻氨基苯甲酸合酶和磷酸甘油酸脱氢酶两者均受L-色氨酸和L-丝氨酸的反馈抑制，因此也可以向这些酶中导入使反馈抑制解除的突变。具有此类突变的菌株的具体实例包括具有脱敏型邻氨基苯甲酸合酶的大肠杆菌SV164和通过将质粒pGH5(WO 94/08031)转入大肠杆菌SV164获得的菌株，所述质粒pGH5包含突变的serA基因，该突变的serA基因编码反馈抑制被解除了的磷酸甘油酸脱氢酶。
L-色氨酸生产菌或者用于衍生L-色氨酸生产菌的亲本株的实例还可以列举出，导入了包含编码抑制解除型邻氨基苯甲酸合酶的基因的色氨酸操纵子的菌株(特开昭57-71397号，特开昭62-244382号，美国专利4,371,614)。此外，可以也通过增强色氨酸操纵子(trpBA)中编码色氨酸合酶的基因的表达来赋予L-色氨酸生产能力。色氨酸合酶由α和β亚基组成，这两种亚基分别由trpA和trpB基因编码。另外，还可以通过增强异柠檬酸裂解酶-苹果酸合酶操纵子的表达来改进L-色氨酸生产能力(WO2005/103275)。
L-苯丙氨酸生产菌
L-苯丙氨酸生产菌或者用于衍生L-苯丙氨酸生产菌的亲本株的实例，可以列举出，但不限于下述属于埃希氏菌属的菌株，分支酸变位酶-预苯酸脱氢酶以及酪氨酸阻遏物缺损的大肠杆菌AJ12739(tyrA::Tn10，tyrR)(VKPM B-8197)(WO03/044191)，携带了编码解除了反馈抑制的分支酸变位酶-预苯酸脱水酶的突变型pheA34基因的大肠杆菌HW1089(ATCC55371)(美国专利第5,354,672号)，大肠杆菌MWEC101-b(KR8903681)、大肠杆菌NRRL B-12141、NRRL B-12145、NRRL B-12146以及NRRLB-12147(美国专利第4,407,952号)等。此外，也可以使用携带有编码解除了反馈抑制的分支酸变位酶-预苯酸脱氢酶基因的大肠杆菌K-12[W3110(tyrA)/pPHAB](FERM BP-3566)、大肠杆菌K-12[W3110(tyrA)/pPHAD](FERM BP-12659)、大肠杆菌K-12[W3110(tyrA)/pPHATerm](FERMBP-12662)以及命名为AJ 12604的大肠杆菌K-12[W3110(tyrA)/pBR-aroG4，pACMAB](FERM BP-3579)作为亲本株(EP 488424B1)。此外，还可使用由yedA基因或yddG基因编码的蛋白质的活性增强的属于埃希氏菌属的L-苯丙氨酸生产菌(美国专利申请公开2003/0148473A1以及2003/0157667A1、WO03/044192)。
L-缬氨酸生产菌
L-缬氨酸生产菌或用于衍生L-缬氨酸生产菌的亲本株实例包括、但不限于经修饰从而过表达ilvGMEDA操纵子的菌株(美国专利5,998,178)。理想的是将ilvGMEDA操纵子中对于衰减作用而言必要的区域移除，以使操纵子的表达不会被产生的L-缬氨酸所削弱。此外，理想的是将操纵子中的ilvA基因破坏从而降低苏氨酸脱氨酶的活性。
L-缬氨酸生产菌或用于衍生L-缬氨酸生产菌的亲本株的实例还包括具有氨酰t-RNA合成酶中的突变的突变株(美国专利5,658,766)。例如，可以使用大肠杆菌VL1970，该菌株在编码异亮氨酸tRNA合成酶的ileS基因中具有突变。已将大肠杆菌VL1970在1988年6月24日保藏在俄罗斯国立工业微生物保藏中心(VKPM)(Russia，113545 Moscow，1 Dorozhny Proezd.)，保藏号为VKPM B-4411。
此外，还可以使用生长需要核酸和/或缺失H+-ATP酶的突变株(WO96/06926、美国专利第5,888,783号)作为亲本株。
此外，作为属于埃希氏菌属的L-缬氨酸生产菌，还可以使用H-81(VKPMB-8066)、NRRL B-12287和NRRL B-12288(美国专利4,391,907)、VKPMB-4411(美国专利5,658,766)、VKPM B-7707(欧洲专利申请1016710A2)等。H-81株于2001年1月30日保藏于俄罗斯国立工业微生物保藏中心(VKPM)(1 Dorozhny proezd.，1 Moscow 117545，Russia)，保藏号VKPM B-8066，并于2002年2月1日转为基于布达佩斯条约的国际保藏。
L-亮氨酸生产菌
L-亮氨酸生产菌或者用于衍生L-亮氨酸生产菌的亲本株的实例可以列举出、但不限于下述属于埃希氏菌属的菌株，如对亮氨酸有抗性的大肠杆菌菌株(例如，菌株57(VKPM B-7386，美国专利第6,124,121号))或对β-2-噻吩基丙氨酸、3-羟基亮氨酸、4-偶氮亮氨酸、5，5，5-三氟亮氨酸等亮氨酸类似物有抗性的大肠杆菌菌株(特公昭62-34397号和特开平8-70879号)、通过WO96/06926中描述的基因工程方法获得的大肠杆菌菌株、大肠杆菌H-9068(特开平8-70879号)等。
可以通过增加涉及L-亮氨酸生物合成的1种以上的基因的表达来改进本发明的细菌。这些基因的实例可优选列举leuABCD操纵子中的基因，所述操纵子中的基因以突变的leuA基因为代表，该基因编码对L-亮氨酸反馈抑制具有抗性的异丙基苹果酸合酶(美国专利6,403,342)。此外，可以通过增强编码从细菌细胞分泌L-氨基酸的蛋白的1种以上的基因的表达来改进本发明的细菌。这类基因的实例包括b2682和b2683基因(ygaZH基因)(EP1239041A2)。
L-异亮氨酸生产菌
L-异亮氨酸生产菌或用于衍生L-异亮氨酸生产菌的亲本株的实例可以列举出、但不限于对6-二甲基氨基嘌呤有抗性的突变株(特开平5-304969号)，对异亮氨酸类似物如硫代异亮氨酸(thiaisoleucine)和异亮氨酸氧肟酸具有抗性的突变株，以及对DL-乙硫氨酸(DL-ethionine)和/或精氨酸氧肟酸具有抗性的突变株(特开平5-130882号)。此外，还可以使用以编码苏氨酸脱氨酶、乙酰羟酸合酶(acetohydroxate synthase)等涉及L-异亮氨酸生物合成的蛋白质的基因转化的重组菌株(特开平2-458号，FR 0356739，和美国专利第5,998,178号)作为亲本株。
L-丝氨酸生产菌
作为L-丝氨酸生产菌或用于衍生L-丝氨酸的亲本株的例子，可以列举出携带丝氨酸反馈抑制减弱的3-磷酸甘油酸脱氢酶的大肠杆菌(专利2584409号、美国专利第5,618,716号)。此外，还可以使用具有L-丝氨酸生产能力且磷酸丝氨酸磷氧化酶活性或磷酸丝氨酸转氨酶活性中的至少一种增强的棒状杆菌型细菌、L-丝氨酸分解能力缺失的棒状杆菌型细菌(特开平11-253187号、美国专利第6,037,154号)、以及偶氮丝氨酸或β-(2-噻吩基)-DL-丙氨酸抗性的具有L-丝氨酸生产能力的棒状杆菌型细菌(特开平11-266881号、美国专利第6,258,573号)。
当通过基因重组来选育上述L-氨基酸生产菌时，所使用的基因不限于具有上述基因信息的基因或具有公知序列的基因，在不损害所编码的蛋白质的功能的前提下，也可以使用这些基因的同源物、人工修饰体等具有保守突变的基因。即，还可以是编码具有在公知蛋白质的氨基酸序列中在1个或数个位置上取代、缺失、插入或添加1个或者数个氨基酸而得到的序列的蛋白质的基因。关于“保守突变”，在后面关于丙酮酸合酶等的内容中有描述，其也适用于上述基因。
<1-2>丙酮酸合酶或丙酮酸:NADP+氧化还原酶活性的增强
本发明的微生物是对诸如上述的具有L-氨基酸生产能力的微生物进行了修饰使得其丙酮酸合酶或丙酮酸:NADP+氧化还原酶的活性增强而得到的微生物。对于增强丙酮酸合酶或丙酮酸:NADP+氧化还原酶活性的修饰而言，优选进行修饰使得与亲本株例如野生株、非修饰株相比，丙酮酸合酶或丙酮酸:NADP+氧化还原酶活性增强。而且，正如所述，当微生物本来不具有丙酮酸合酶活性时，通过修饰而具有了该酶活性的微生物，其丙酮酸合酶或丙酮酸:NADP+氧化还原酶活性与非修饰株变得更强。
可以先对细菌进行修饰使得其丙酮酸合酶或丙酮酸:NADP+氧化还原酶的酶活性提高，然后再赋予L-氨基酸生产能力。而且，丙酮酸合酶或丙酮酸:NADP+氧化还原酶活性的增强可以采用如前文所述的增强基因表达的方法来进行。即，可以通过以启动子修饰为代表的表达调节区域修饰等来增强内源性丙酮酸合酶基因或丙酮酸:NADP+氧化还原酶基因的表达，也可以通过在细菌中导入包含丙酮酸合酶基因或丙酮酸:NADP+氧化还原酶基因的质粒或通过在细菌染色体上导入所述基因等来增强外源性丙酮酸合酶基因的表达。
本发明中的“丙酮酸合酶”是指在电子供体存在下，例如在铁氧还蛋白或者黄素氧还蛋白存在下，可逆地催化由乙酰基-CoA和CO2生成丙酮酸的下述反应的酶(EC 1.2.7.1)。丙酮酸合酶也可简称为PS，或者有些情况下还被命名为丙酮酸氧化还原酶、丙酮酸铁氧还蛋白氧化还原酶、丙酮酸黄素氧还蛋白氧化还原酶或丙酮酸氧化还原酶。作为电子供体，可以使用铁氧还蛋白或黄素氧还蛋白。
还原型铁氧还蛋白+乙酰-CoA+CO2→氧化型铁氧还蛋白+丙酮酸+CoA
丙酮酸合酶的活性增强的确认，可以通过从增强前微生物和增强后的微生物制备粗酶液、并比较它们的丙酮酸合酶活性来实现。丙酮酸合酶的活性可以按照例如Yoon等的方法(Yoon，K.S.et al.1997.Arch.Microbiol.167：275-279)来测定。例如，向包含作为电子受体的氧化型甲基紫精、CoA和粗酶液的反应液中添加丙酮酸，采用光谱学方法测定因丙酮酸的脱碳酸反应而增加的还原型甲基紫精的量，这样就可以测定丙酮酸合酶的活性。1个酶活性单位(U)表示为每1分钟1μmol甲基紫精的还原量。当亲本株具有丙酮酸合酶活性时，理想的是，与亲本株相比较，酶活性上升优选1.5倍以上、更优选2倍以上、更优选3倍以上。此外，当亲本株不具有丙酮酸合酶活性时，只要通过导入丙酮酸合酶基因生成丙酮酸合酶即可，但理想的是，优选酶活性被增强到可测定的程度，优选0.001U/mg(菌体蛋白)以上、更优选0.005U/mg以上、更优选0.01U/mg以上。丙酮酸合酶对氧敏感，通常来说其活性表达和测定也往往较为困难(Buckel，W.and Golding，B.T.2006.Ann.Rev.of Microbiol.60：27-49)。因此，在测定酶活性时，优选如实施例中描述的那样，降低反应容器中的氧浓度来进行酶反应。
作为编码丙酮酸合酶的基因，可以利用绿硫菌(Chlorobium tepidum)、嗜热氢杆菌(Hydrogenobacter thermophilus)等具有还原性TCA循环的细菌的丙酮酸合酶基因。此外，也可以利用以大肠杆菌(Escherichia coli)代表的属于肠杆菌科细菌群(腸内細菌群)的细菌来源的丙酮酸合酶基因。而且，作为编码丙酮酸合酶的基因，还可以利用海藻甲烷球菌(Methanococcusmaripaludis)、詹氏甲烷球菌(Methanocaldococcus jannaschii)、高温弯曲甲烷热杆菌(Methanothermobacter thermautotrophicus)等自养型产甲烷古细菌(autotrophic methanogens)的丙酮酸合酶基因。
具体地，作为绿硫菌(Chlorobium tepidum)的丙酮酸合酶基因，可以列举出具有位于绿硫菌基因组序列(GenBank登录号：NC_002932)的碱基序号1534432～1537989的、SEQ ID NO：1所示的碱基序列的基因。SEQ ID NO：2中示出了该基因编码的氨基酸序列(GenBank登录号：AAC76906)。此外，已知嗜热氢杆菌的丙酮酸合酶由δ亚基(GenBank登录号：BAA95604)、α亚基(GenBank登录号BAA95605)、β亚基(GenBank登录号：BAA95606)、γ亚基(GenBank登录号：BAA95607)这4个亚基的复合体形成(Ikeda，T.etal.2006.Biochem.Biophys.Res.Commun.340：76-82)。而且，还可以示例出由位于幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori)基因组序列(GenBank登录号：NC000915)的碱基序号1170138～1173296的HP1108、HP1109、HP1110、HP1111这4个基因构成的丙酮酸合酶基因，由硫磺矿硫化叶菌(Sulfolobussolfataricus)基因组序列(GenBank登录号：NC 002754)的碱基序号1047593～1044711所示的SSO1208、SSO7412、SSO1207、SSO1206这4个基因编码的丙酮酸合酶基因。而且，丙酮酸合酶基因还可以基于与上述示例的基因的同源性，从绿硫菌属(Chlorobium)、脱硫菌属(Desulfobacter)、产液菌属(Aquifex)、氢杆菌属(Hydrogenobacter)、热变形菌属(Thermoproteus)、热棒菌属(Pyrobaculum)细菌等中克隆。
在大肠杆菌中，ydbK基因(b1378)位于K-12株基因组序列(GenBank登录号：U00096)的碱基序号1435284～1438808，具有SEQ ID NO：3所示的碱基序列；从序列同源性推测，其编码丙酮酸黄素氧还蛋白氧化还原酶、即丙酮酸合酶。SEQ ID NO：4中示出了该基因编码的氨基酸序列(GenBank登录号：AAC76906)。如实施例所示，证实了该基因产物具有丙酮酸合酶活性，通过强化该基因的表达，能够提高L-氨基酸生产能力。而且，丙酮酸合酶基因还可以是与大肠杆菌丙酮酸合酶基因(ydbK)具有高同源性的、属于埃希氏菌属、沙门氏菌属(Salmonella)、沙雷氏菌属(Serratia)、肠杆菌属(Enterobacter)、志贺氏菌属(Shigella)、柠檬酸杆菌属(Citrobacter)等肠杆菌科细菌群的丙酮酸合酶基因。
海沼甲烷球菌(Methanococcus maripaludis)的丙酮酸合酶由位于海沼甲烷球菌基因组序列(GenBank登录号：NC_005791)(Hendrickson，E.L.et al.2004.J.Bacteriol.186：6956-6969)的碱基序号1462535～1466397的porCDABEF操纵子编码(Lin，W.C.et al.2003.Arch.Microbiol.179.444-456)。已知该丙酮酸合酶包含γ、α、β和δ这4个亚基，除了所述亚基之外，PorE和PorF对丙酮酸合酶的活性而言也是重要的(Lin，W.and Whitman，W.B.2004.Arch.Microbiol.181：68-73)。γ亚基由基因组序列的碱基序号1465867～1466397(互补链)的porA基因编码，SEQ ID NO：56中示出了其碱基序列，SEQ ID NO：57中示出了该基因编码的氨基酸序列(GenBank登录号：NP_988626)。δ亚基由基因组序列的碱基序号1465595～1465852(互补链)的porB基因编码，SEQ ID NO：58中示出了其碱基序列，SEQ ID NO：59中示出了该基因编码的氨基酸序列(GenBank登录号：NP_988627)。α亚基由基因组序列的碱基序号1464410～1465573(互补链)的porC基因编码，SEQ ID NO：60中示出了其碱基序列，SEQ ID NO：61中示出了该基因编码的氨基酸序列(GenBank登录号：NP_988625)。β亚基由基因组序列的碱基序号1463497～1464393(互补链)的porD基因编码，SEQ ID NO：62中示出了其碱基序列，SEQ ID NO：63中示出了该基因编码的氨基酸序列(GenBank登录号：NP_988624)。PorE由基因组序列碱基序号1462970～1463473(互补链)的porE基因编码，SEQ ID NO：64中示出了其碱基序列，SEQ ID NO：65中示出了该基因编码的氨基酸序列(GenBank登录号：NP_988623)。PorF由基因组序列碱基序号1462535～1462951(互补链)的porF基因编码，SEQ ID NO：66中示出了其碱基序列，SEQ ID NO：67中示出了该基因编码的氨基酸序列(GenBank登录号：NP_988622)。
已知自养型的甲烷生成古细菌詹氏甲烷球菌(Methanocaldococcusjannaschii)、高温弯曲甲烷热杆菌(Methanothermobacter thermautotrophicus)等也具有相同基因结构的丙酮酸合酶基因，可以加以利用。
本发明中，“丙酮酸:NADP+氧化还原酶”是指：在电子供体存在下，例如在NADPH或者NADH存在下，可逆地催化由乙酰-CoA和CO2生成丙酮酸的下述反应的酶(EC 1.2.1.15)。丙酮酸:NADP+氧化还原酶有时简称为PNO，有些情况下还被命名为丙酮酸脱氢酶。然而，本发明中在提及“丙酮酸脱氢酶活性”时，是指如文后述的催化丙酮酸氧化脱碳酸生成乙酰-CoA的反应的活性，催化该反应的丙酮酸脱氢酶(PDH)与丙酮酸:NADP+氧化还原酶不是同一种酶。丙酮酸:NADP+氧化还原酶可以利用NADPH或者NADH作为电子供体。
NADPH+乙酰-CoA+CO2→NADP++丙酮酸+CoA
丙酮酸:NADP+氧化还原酶的活性增强这一事实的确认，可以通过从增强前的微生物和增强后的微生物制备粗酶液、并比较它们的丙酮酸:NADP+氧化还原酶活性来实现。丙酮酸:NADP+氧化还原酶的活性可以按照例如Inui等的方法(Inui，H.et al.1987.J.Biol.Chem.262：9130-9135)来测定。例如，向包含作为电子受体的氧化型甲基紫精、CoA和粗酶液的反应液中添加丙酮酸，采用光谱学方法测定由于丙酮酸的脱碳酸反应而增加的还原型甲基紫精的量，这样就可以测定丙酮酸:NADP+氧化还原酶的活性。1个酶活性单位(U)表示为每1分钟1μmol甲基紫精的还原量。当亲本株具有丙酮酸:NADP+氧化还原酶活性时，理想的是，与亲本株相比较，酶活性上升优选1.5倍以上、更优选2倍以上、更优选3倍以上。此外，当亲本株不具有丙酮酸:NADP+氧化还原酶活性时，只要通过导入丙酮酸:NADP+氧化还原酶基因可生成丙酮酸:NADP+氧化还原酶即可，但理想的是，优选酶活性被强化到可测定的程度，优选0.001U/mg(菌体蛋白)以上、更优选0.005U/mg以上、更优选0.01U/mg以上。丙酮酸:NADP+氧化还原酶对氧敏感，因而其活性表达和测定通常来说也存在许多困难(Inui，H.et al.1987.J.Biol.Chem.262：9130-9135；Rotte，C.et al.2001.Mol.Biol.Evol.18：710-720)。在由于失活等原因无法测定活性的情况下，可以像实施例所述那样，通过Western印迹等方法来确认蛋白质的表达。
编码丙酮酸:NADP+氧化还原酶的基因除了作为光合成真核微生物(也被分类为原生动物)的纤细裸藻(Euglena gracilis)的丙酮酸:NADP+氧化还原酶基因(Nakazawa，M.et al.2000.FEBS Lett.479：155-156)、原生生物小球隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)的丙酮酸:NADP+氧化还原酶基因(Rotte，C.et al.2001.Mol.Biol.Evol.18：710-720)之外，已知在硅藻假微型海链藻(Tharassiosira pseudonana)中也存在同源基因(Ctrnacta，V.et al.2006.J.Eukaryot.Microbiol.53：225-231)。
具体地，作为纤细裸藻(Euglena gracilis)的丙酮酸:NADP+氧化还原酶基因，可以示例出具有SEQ ID NO：5所示的碱基序列的基因(GenBank登录号：AB021127)。SEQ ID NO：6中示出了该基因编码的氨基酸序列(GenBank登录号：BAB12024)。
本发明的微生物还可以是经过了如下的修饰而使得丙酮酸合酶的活性增强的微生物，所述修饰使得与亲本株例如野生株或非修饰株相比，将电子供体从氧化型再生为还原型的活性(该活性对于丙酮酸合酶的活性而言是必需的)增强。将氧化型电子供体再生为还原型的活性包括例如铁氧还蛋白-NADP+还原酶活性。此外，还可以是经过了如下的修饰而使得丙酮酸合酶的活性增强的微生物，所述修饰除了增强电子供体的再生活性之外还增加丙酮酸合酶基因的表达。而且，上述亲本株可以是天然内在地具有编码电子供体的再生活性的基因的微生物，也可以是并非天然具有电子供体的再生活性，但通过导入编码该活性的基因而被赋予了该活性，从而L-谷氨酸生产能力变得更高的微生物。
“铁氧还蛋白-NADP+还原酶”是指可逆地催化以下反应的酶(EC1.18.1.2)。
还原型铁氧还蛋白+NADP+-→氧化型铁氧还蛋白+NADPH+H+
本反应是可逆反应，能够在NADPH和氧化型铁氧还蛋白的存在下生产还原型铁氧还蛋白。铁氧还蛋白可以替换成黄素氧还蛋白，命名为黄素氧还蛋白-NADP+还原酶的酶也具有同等功能。已经确认铁氧还蛋白-NADP+还原酶在从微生物到高等生物中普遍存在(参照Carrillo，N.和Ceccarelli，E.A.2003.Eur.J.Biochem.270：1900-1915；Ceccarelli，E.A.et al.2004.Biochim.Biophys.Acta.1698：155-165)，其也被命名为铁氧还蛋白-NADP+氧化还原酶、NADPH-铁氧还蛋白氧化还原酶。
铁氧还蛋白-NADP+还原酶的活性已增强这一事实的确认，可以通过从修饰前的微生物和修饰后的微生物制备粗酶液，并比较它们的铁氧还蛋白-NADP+还原酶活性来实现。铁氧还蛋白-NADP+还原酶的活性可以按照例如Blaschkowski等的方法(Blaschkowski，H.P.et al.1982.Eur.J.Biochem.123：563-569)来测定。例如，可以通过以铁氧还蛋白作为底物、采用光谱学方法测定减少的NADPH的量来测定。1个酶活性单位(U)表示为每1分钟1μmolNADPH的氧化量。当亲本株具有铁氧还蛋白-NADP+还原酶活性时，如亲本株的活性充分高，则没有增强的必要，但理想的是，与亲本株相比较，酶活性上升优选1.5倍以上、更优选2倍以上、更优选3倍以上。
已经在许多生物物种中发现了编码铁氧还蛋白-NADP+还原酶的基因，这些基因只要在目的L-氨基酸生产株中有活性即可加以使用。在大肠杆菌中，作为黄素氧还蛋白-NADP+还原酶，已经鉴定出的有fpr基因(Bianchi，V.et al.1993.J.Bacteriol.175：1590-1595)。此外，已知在恶臭假单胞菌(Psuedomonas putida)中NADPH-假单胞氧还蛋白还原酶(Putidaredoxinreductase)基因和假单胞氧还蛋白(Putidaredoxin)基因以操纵子的形式存在(Koga，H.et al.1989.J.Biochem.(Tokyo)106：831-836)。
大肠杆菌的黄素氧还蛋白-NADP+还原酶包括，例如，位于大肠杆菌K-12株基因组序列(Genbank登录号.U00096)的碱基序号4111749～4112495(互补链)的、具有SEQ ID NO：7所示的碱基序列的fpr基因。SEQ ID NO：8中示出了Fpr的氨基酸序列(Genbank登录号.AAC76906)。此外，在谷氨酸棒杆菌基因组序列(Genbank登录号.BA00036)的碱基序号2526234～2527211中发现了铁氧还蛋白-NADP+还原酶基因(Genbank登录号.BAB99777)。
对丙酮酸合酶的活性而言，存在铁氧还蛋白或黄素氧还蛋白作为电子供体是必要的。因此，也可以是经过修饰使得铁氧还蛋白或黄素氧还蛋白的生产能力提高，从而丙酮酸合酶的活性增强的微生物。
此外，除了进行修饰以增强丙酮酸合酶的活性或者增强黄素氧还蛋白-NADP+还原酶和丙酮酸合酶的活性之外，还可以进行修饰来提高铁氧还蛋白或黄素氧还蛋白的生产能力。
本发明中，“铁氧还蛋白”是指：含有非卟啉铁原子(Fe)和硫原子，并结合有称作4Fe-4S、3Fe-4S、或者2Fe-2S簇的铁-硫簇的蛋白质，其作为单电子传递体发挥功能。“黄素氧还蛋白”是指：包含FMN(Flavin-mononucleotide，黄素单核苷酸)作为辅基的、发挥单电子或者双电子传递体功能的蛋白质。关于铁氧还蛋白和黄素氧还蛋白，在McLean等的文献中有记载(McLean，K.J.et al.2005.Biochem.Soc.Trans.33：796-801)。
而且，用于修饰的亲本株可以是天然内在地具有编码铁氧还蛋白或黄素氧还蛋白的基因的菌株，也可以是天然不具有铁氧还蛋白或黄素氧还蛋白基因、但通过导入铁氧还蛋白或黄素氧还蛋白基因而被赋予了活性，从而L-谷氨酸生产能力提高的菌株。
铁氧还蛋白或黄素氧还蛋白的生产能力与亲本株(例如野生株或非修饰株)相比有所提高的事实，可以通过将铁氧还蛋白或黄素氧还蛋白的mRNA的量与野生型或者非修饰株比较来加以确认。作为表达量的确认方法，可以列举Nothern杂交、RT-PCR(Sambrook，J.et al.1989.Molecular Cloning ALaboratory Manual/Second Edition，Cold Spring Harbor Laboratory Press，NewYork)。关于表达量，只要是与野生株或者非修饰株相比较有所上升即可，理想的是，例如与野生株、非修饰株相比，上升1.5倍以上、更优选2倍以上、更优选3倍以上。
此外，铁氧还蛋白或黄素氧还蛋白的生产能力与亲本株(例如野生株或非修饰株)相比有所提高的这一事实的确认，可以通过SDS-PAGE、二维电泳或者使用抗体的Western印迹来检测(Sambrook，J.et al.1989.MolecularCloning A Laboratory Manual/Second Edition，Cold Spring Harbor LaboratoryPress，New York)。关于生产量，只要与野生株或者非修饰株相比较有所提高可以是任何量，理想的是，例如与野生株、非修饰株相比上升1.5倍以上、更优选2倍以上、更优选3倍以上。
铁氧还蛋白以及黄素氧还蛋白的活性可以通过将其添加至适当的氧化还原反应体系中来测定。例如，Boyer等公开了下述方法：通过铁氧还蛋白-NADP+还原酶还原产生的铁氧还蛋白，对由生成的还原型铁氧还蛋白引起的细胞色素C的还原进行定量(Boyer，M.E.et al.2006.Biotechnol.Bioeng.94：128-138)。此外，黄素氧还蛋白的活性可以通过使用黄素氧还蛋白-NADP+还原酶以相同的方法测定。
编码铁氧还蛋白或黄素氧还蛋白的基因分布广泛，任何基因，只要其编码出的铁氧还蛋白或黄素氧还蛋白能够被丙酮酸合酶和电子供体再生系统所利用，都可以加以使用。例如，在大肠杆菌中，作为编码具有2Fe-2S簇的铁氧还蛋白的基因，有fdx基因(Ta，D.T.和Vickery，L.E.1992.J.Biol.Chem.267：11120-11125)，而yfhL基因被预想是编码具有4Fe-4S簇的铁氧还蛋白的基因。此外，作为黄素氧还蛋白基因，已知有fldA基因(Osborne，C.et al.1991.J.Bacteriol.173：1729-1737)和fldB基因(Gaudu，P.和Weiss，B.2000.J.Bacteriol.182：1788-1793)。在谷氨酸棒杆菌的基因组序列(Genbank登录号.BA00036)中，在碱基序号562643～562963位发现了铁氧还蛋白基因fdx(Genbank登录号.BAB97942)，而且在碱基序号1148953～1149270位发现了fer(Genbank登录号.BAB98495)。此外，在绿硫菌中，存在许多铁氧还蛋白基因，其中，铁氧还蛋白I以及铁氧还蛋白II被鉴定为作为丙酮酸合酶的电子受体的4Fe-4S型铁氧还蛋白基因(Yoon，K.S.et al.2001.J.Biol.Chem.276：44027-44036)。还可以使用嗜热氢杆菌的铁氧还蛋白基因等来源于具有还原型TCA循环的细菌的铁氧还蛋白基因或黄素氧还蛋白基因。
具体地，大肠杆菌的铁氧还蛋白基因包括例如位于大肠杆菌K-12株基因组序列(Genbank登录号.U00096)的碱基序号2654770～2655105位(互补链)的SEQ ID NO：9所示的fdx基因、以及位于碱基序号2697685～2697945位的SEQ ID NO：11所示的yfhL基因。SEQ ID NO：10以及SEQ ID NO：12中示出了Fdx以及YfhL的氨基酸序列(分别为Genbank登录号.AAC75578以及AAC75615)。作为大肠杆菌的黄素氧还蛋白基因，包括例如：位于大肠杆菌K-12株基因组序列(Genbank登录号.U00096)的碱基序号710688～710158位(互补链)的SEQ ID NO：13所示的fldA基因、以及位于碱基序号3037877～3038398位的SEQ ID NO：15所示的fldB基因。SEQ IDNO：14以及SEQ ID NO：16中示出了fldA基因以及fldB基因所编码的氨基酸序列(分别为Genbank登录号.AAC73778以及AAC75933)。
作为绿硫菌的铁氧还蛋白基因，包括例如：位于绿硫菌基因组序列(Genbank登录号.NC_002932)的碱基序号1184078～1184266位的SEQ IDNO：17所示的铁氧还蛋白I基因、以及位于碱基序号1184476～1184664位的SEQ ID NO：19所示的铁氧还蛋白II基因。SEQ ID NO：18以及SEQ IDNO：20中示出了铁氧还蛋白I以及铁氧还蛋白II所编码的氨基酸序列(分别为Genbank登录号.AAM72491以及AAM72490)。此外，还可列举：嗜热氢杆菌的铁氧还蛋白基因(Genbank登录号.BAE02673)、硫磺矿硫化叶菌基因组序列中的碱基序号2345414～2345728位所示的硫磺矿硫化叶菌的铁氧还蛋白基因。而且，还可以是基于与上述示例的基因的同源性，从绿菌属、脱硫菌属(Desulfobacter)、产液菌属(Aquifex)、氢杆菌属、热变形菌属(Thermoproteus)、热棒菌属(Pyrobuculum)细菌等克隆的基因，而且还可以是从肠杆菌属、克雷伯氏菌属、沙雷氏菌属、欧文氏菌属、耶尔森菌属等γ-变形细菌，谷氨酸棒杆菌、乳发酵短杆菌等棒状杆菌型细菌；铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)等假单胞菌属细菌；以及结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)等分枝杆菌属(Mycobacterium)细菌等中克隆的基因。
这些编码丙酮酸合酶、铁氧还蛋白-NADP+还原酶、铁氧还蛋白、黄素氧还蛋白的基因(以下统称为本发明的基因)还可以使用具有保守突变的基因，如所述基因的同源物或人工变体等，以不损害编码的蛋白质的活性即功能为限。也就是说，可以是编码具有在公知的蛋白质的氨基酸序列或野生型蛋白质的氨基酸序列中的1个或者数个位置上发生1个或者数个氨基酸的取代、缺失、插入或添加而得到的氨基酸序列的保守变体的基因。这里所说的1个或者数个，因氨基酸残基在蛋白质立体结构中的位置、氨基酸的种类而异，优选是1～20个、更优选1～10个、特别优选1～5个。
上述突变优选是保守取代，其是功能上无变化的中性突变。关于保守取代，当取代位点是芳香族氨基酸时为Phe、Trp和Tyr之间的相互取代的突变；当取代位点是疏水氨基酸时为Leu、Ile和Val之间的相互取代的突变；当取代位点是极性氨基酸时为Gln和Asn之间的相互取代的突变；当取代位点是碱性氨基酸时为Lys、Arg和His之间的相互取代的突变；当取代位点是酸性氨基酸时为Asp和Glu之间的相互取代的突变；当取代位点是具有羟基的氨基酸时为Ser和Thr之间的相互取代的突变。
更具体地，可以列举：用Ser或Thr取代Ala；用Gln、His或Lys取代Arg；用Glu、Gln、Lys、His或Asp取代Asn；用Asn、Glu或Gln取代Asp；用Ser或Ala取代Cys；用Asn、Glu、Lys、His、Asp或Arg取代Gln；用Gly、Asn、Gln、Lys或Asp取代Glu；用Pro取代Gly；用Asn、Lys、Gln、Arg或Tyr取代His；用Leu、Met、Val或Phe取代Ile；用Ile、Met、Val或Phe取代Leu；用Asn、Glu、Gln、His或Arg取代Lys；用Ile、Leu、Val或Phe取代Met；用Trp、Tyr、Met、Ile或Leu取代Phe；用Thr或Ala取代Ser；用Ser或Ala取代Thr；用Phe或Tyr取代Trp；用His、Phe或Trp取代Tyr；和用Met、Ile或Leu取代Val。此外，这样的氨基酸的取代、缺失、插入、添加或倒位等还包括因基于携带本发明的基因的微生物的个体差异、种间差异等情形而天然发生的突变(mutant或variant)而产生的那些取代、缺失、插入、添加或倒位。
此外，还可以替换成在本发明的基因所导入的各个宿主中易于使用的密码子。同样地，本发明的基因只要具有功能即可，所编码的蛋白质的N末端侧和/或C末端侧可以被延长或截短。例如，延长的长度是50个以下、优选20个以下、更优选10个以下、特别优选5个以下的氨基酸残基。
编码如上所述的保守变体的基因，例如可以通过定点突变方法对碱基序列进行修饰，使得被编码的蛋白的特定位点上的氨基酸残基包含取代、缺失、插入或添加，来获得这样的基因。此外，还可以通过传统公知的突变处理来获得。突变处理包括例如：用羟胺等对本发明的基因进行体外处理的方法，以及对携带该基因的微生物(例如埃希氏菌属细菌)采用紫外线照射或使用N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(NTG)或甲磺酸乙酯(EMS)等在常规突变处理中使用的突变剂来进行处理的方法。此外，如上所述的氨基酸的取代、缺失、插入、增加或倒位等还包括因基于携带本发明的基因的微生物的个体差异、种间差异等情形而天然发生的突变(mutant或variant)而产生的那些取代、缺失、插入、添加或倒位。至于这些基因是否编码有功能的丙酮酸合酶、铁氧还蛋白-NADP+还原酶、铁氧还蛋白或黄素氧还蛋白，可以通过例如将这些基因导入具有L-氨基酸生产能力的微生物，并测定各基因产物的活性来予以确认。
本发明的基因可以是能够与具有上述碱基序列的DNA或可由与具有所述碱基序列的DNA制备的探针在严格条件下杂交，并且编码丙酮酸合酶、铁氧还蛋白-NADP+还原酶、铁氧还蛋白、或黄素氧还蛋白的DNA。
这里，“严格条件”是指形成所谓特异性杂交体而不形成非特异性杂交体的条件。将该条件明确地数值化是困难的，举一实例：具有高同源性的DNA(例如具有70％以上，优选80％以上，更优选90％以上，特别优选95％以上同源性的DNA)目互杂交，而同源性较之为低的DNA则不互相杂交的条件；或者：在与常规Southern杂交的洗涤条件即60℃，1×SSC、0.1％SDS，优选0.1×SSC、0.1％SDS，更优选68℃、0.1×SSC、0.1％SDS相当的盐浓度、温度下洗涤1次，优选2～3次的条件。而且，在本说明书中，“同源性”(homology)有时是指“同一性”(identity)。
探针也可以具有本发明的基因的一部分序列。这样的探针可以采用本领域技术人员熟知的方法，以基于各基因的碱基序列制备的寡核苷酸为引物，以包含各基因的DNA片段为模板进行PCR反应来加以制备。而且，当使用300bp左右长度的DNA片段作为探针时，作为在上述条件下杂交后的洗涤条件，例如可以是50℃、2×SSC、0.1％SDS。
上述关于保守变体的描述同样适用于所述的L-氨基酸生产能力的赋予中描述的酶和基因。
如上文所述的用于增强本发明基因之表达的修饰，可以依照赋予L-氨基酸生产能力的相关记载中描述的增强目的基因表达的方法来进行。本发明的基因可以利用携带该基因的微生物的基因组DNA为模板，通过PCR法获得。
例如，绿硫菌的丙酮酸合酶基因可以使用基于SEQ ID NO：1的碱基序列制备的引物，例如SEQ ID NO：35、36所示的引物，以绿硫菌的基因组DNA为模板，通过PCR(polymerase chain reaction)方法获得(参考White，T.J.et al.1989.Trends Genet.5：185-189)。
大肠杆菌的丙酮酸合酶基因可以使用基于SEQ ID NO.3的碱基序列制备的引物，使用例如SEQ ID NO：38、39所示的引物，以大肠杆菌的基因组DNA为模板，通过PCR来获得。
纤细裸藻的丙酮酸:NADP+氧化还原酶基因可以使用基于SEQ ID NO：5制备的引物，例如如SEQ ID NO：40、41所示的引物，以纤细裸藻的基因组DNA为模板，通过PCR法来获得。
大肠杆菌的黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因可以使用基于SEQ IDNO：7的碱基序列制备的引物，例如SEQ ID NO：42、43所示的引物，以大肠杆菌的基因组DNA为模板，通过PCR法获得。
大肠杆菌的铁氧还蛋白基因fdx可以使用基于SEQ ID NO：9的碱基序列制备的引物，例如SEQ ID NO：44、45所示的引物，以大肠杆菌的基因组DNA为模板，通过PCR法获得。
大肠杆菌的黄素氧还蛋白基因fidA和黄素氧还蛋白基因fldB可以分别使用基于SEQ ID NO：13的碱基序列和基于SEQ ID NO：15的碱基序列制备的引物，以大肠杆菌的基因组DNA为模板，通过PCR法获得。
此外，绿硫菌的铁氧还蛋白I基因和铁氧还蛋白II基因可以分别使用基于SEQ ID NO：17和基于SEQ ID NO：19的碱基序列制备的引物，以绿硫菌的基因组DNA为模板，通过PCR法获得。
对来源其它微生物的本发明的基因，也可以以基于上述各基因的序列信息或该微生物的公知基因或蛋白质序列信息制备的寡核苷酸为引物，通过PCR法，或者，以基于所述序列信息制备的寡核苷酸为探针，通过杂交法，从该微生物的基因组DNA或基因组DNA文库获得。而且，基因组DNA可以从作为DNA供体的微生物采用例如Saito和Miura的方法(参照Saito，H.和Miura，K.I.1963.Biochem.Biophys.Acta，72，619-629；生物工学実験書，日本生物工学会編，97～98页，培風館，1992年)等来制备。
本发明基因以及L-氨基酸生物合成系统基因的表达的增强，可以通过采用如上述的方法，利用转化或同源重组来提高本发明基因的拷贝数，或者修饰本发明基因的表达调节序列来实现。此外，本发明基因的表达增强，可以通过扩增能够提高本发明基因的表达的激活子(activator)、和/或缺失或弱化能够降低本发明基因的表达的调节子(regulator)来实现。
以下，对增强基因表达的方法进行说明。
第一种方法是提高目的基因的拷贝数的方法。例如，可以通过将目的基因克隆在适当的载体上，并用所得载体转化宿主细菌，提高该基因的拷贝数。
作为用于转化的载体，可以列举能够在使用的微生物中自主复制的质粒。例如，作为能够在属于肠杆菌科类细菌的微生物中自主复制的质粒，可以列举pUC19、pUC18、pBR322、RSF1010、pHSG299、pHSG298、pHSG399、pHSG398、pSTV28、pSTV29(pHSG、pSTV可从TAKARA Bio公司获得)、pMW119、pMW118、pMW219、pMW218(pMW可从NIPPON GENE公司获得)等。此外，作为棒状杆菌型细菌用的质粒，可以列举pAM330(特开昭58-67699号公报)、pHM1519(特开昭58-77895号公报)、pSFK6(参照特开2000-262288号公报)、pVK7(美国专利申请公开说明书2003-0175912)、pAJ655、pAJ611、pAJ1844(特开昭58-192900号公报)、pCG1(特开昭57-134500号公报)、pCG2(特开昭58-35197号公报)、pCG4、pCG11(特开昭57-183799号公报)、pHK4(特开平5-7491号公报)等。此外，从这些载体中取出具有使质粒得以在棒状杆菌型细菌中自主复制的能力的DNA片段，并将其插入到所述大肠杆菌用载体中，可以作为能够在大肠杆菌以及棒状杆菌型细菌这两者中自主复制的所谓穿梭载体来使用。而且，还可以使用噬菌体DNA代替质粒作为载体。
作为转化方法，可以列举例如：用氯化钙处理受体菌细胞来增加DNA的透过性的方法，如已被报道用于大肠杆菌K-12的方法(Mandel，M.和Higa，A.J.Mol.Biol.1970.53：159-162)，或者从处于增殖阶段的细胞制备感受态细胞并导入DNA的方法，如已被报道用于枯草芽孢杆菌的方法(Duncan，C.H.et al.1997.Gene 1：153-167)。或者，还可以应用将DNA受体菌的细胞制备成容易导入重组DNA的原生质体或原生质球的状态，再将重组DNA导入DNA受体菌的方法，该方法已知用于枯草杆菌、放线菌类和酵母(Chang，S.and Choen，S.N.，1979.Mol.Gen.Genet.168：111-115；Bibb，M.J.et al.1978.Nature 274：398-400；Hinnen，A.et al.1978.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 75：1929-1933)。此外，采用电脉冲法(特开平2-207791号公报)也能够进行微生物的转化。
提高基因的拷贝数还可以通过向微生物的基因组DNA上导入多个拷贝的目的基因来实现。为了将多个拷贝的目的基因导入到微生物的基因组DNA上，可以利用基因组DNA上以多拷贝存在的序列作为靶标，通过同源重组来进行(MillerI，J.H.Experiments in Molecular Genetics，1972，ColdSpring Harbor Laboratory)。作为基因组DNA上以多拷贝存在的序列，可以利用重复DNA(repetitive DNA)、存在于转座元件端部的反向重复序列。或者，还可以如特开平2-109985号公报所公开的那样，将目的基因装载在转座子中，使其发生转移，从而将多个基因拷贝导入基因组DNA中。另外，还可以通过使用Mu噬菌体的方法(特开平2-109985号)将目的基因整合到宿主基因组上。目的基因转移到了基因组上的事实，可以通过以该基因的一部分为探针进行Southren杂交来予以确认。
而且，当提高基因拷贝数时，只要能够增强目的基因的产物的活性即可，对于拷贝数没有特殊限制。在微生物本来就具有目的基因的情况下，优选为2个以上；此外，在微生物本来不具有本发明的基因时，导入的基因的拷贝数可以是1个，也可以是2个以上。
第2种方法是在基因组DNA上或质粒上、将目的基因的启动子等表达调节序列替换为适当强度的表达调节序列来增强目的基因的表达的方法。例如，thr启动子、lac启动子、trp启动子、trc启动子、pL启动子、tac启动子等是已知的常用启动子。作为棒状杆菌型细菌中的高表达型启动子，可以列举延伸因子Tu(EF-Tu)基因tuf的启动子，编码共伴侣蛋白(cochaperonin)GroES-伴侣蛋白(chaperonin)GroEL、硫氧还蛋白还原酶、磷酸甘油酸变位酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶等的基因的启动子(WO2006/028063号公报、EP1697525号公报)。启动子强度的评价方法和强力启动子的例子记载于Goldstein和Doi的论文(Goldstein，M.A.and Doi R.H.1995.Prokaryotic promoters in biotechnology.Biotechnol.Annu.Rev.，1，105-128)等中。
此外，可以如国际公开WO00/18935所描述的那样，通过在基因的启动子区域导入数个碱基的碱基取代将其修饰成强度合适的启动子。表达调节序列的取代例如可以像使用温度敏感型质粒的基因取代那样进行。作为可以在大肠杆菌或Pantoea ananatis中使用的、具有温度敏感型复制起点的载体，可以列举例如WO 99/03988号国际公开小册子所述的温度敏感型质粒pMAN997或其衍生质粒等。此外，表达调节序列的取代还可以通过使用线性DNA的方法来进行，如利用λ噬菌体的Red重组酶(Red recombinase)的称为“Red驱动整合”(Red-driven integration)的方法(Datsenko，K.A.andWanner，B.L.，2000.Proc.Natl.Acad.Sci.USA.97：6640-6645)、以及将Red驱动整合法与λ噬菌体来源的切出系统(Cho，E.H.et al.2002.J.Bacteriol.184：5200-5203)联合使用的方法(参照WO2005/010175号)等。而且，表达调节序列的修饰可以与如上所述的提高基因的拷贝数的方法联合使用。
而且，已知对核糖体结合位点(RBS)与起始密码子之间的间隔序列中，特别是对起始密码子紧邻上游的序列中的数个核苷酸的取代，对mRNA的翻译效率有非常大的影响，可以对所述序列进行修饰来提高翻译量。
当丙酮酸合酶由多个亚基构成时，可以分别增强编码各亚基的基因的表达，也可以以多顺反子的形式同时增强这些基因的表达。此外，当使用载体将基因导入微生物时，编码各亚基的基因可以同时担载在单一载体分子上，也可以分别担载在不同载体分子上。此外，当将基因插入基因组时，编码各亚基的基因可以同时插入到基因组上的同一位点，也可以分别插入到不同位置上。
此外，本发明的微生物优选除了丙酮酸合酶或丙酮酸:NADP+氧化还原酶的活性增强之外，其苹果酸酶活性也已降低。当本发明的微生物是属于埃希氏菌属、肠杆菌属、泛菌属、克雷伯氏菌属或沙雷氏菌属的细菌时，特别优选降低苹果酸酶的活性。
本发明中，苹果酸酶的活性是指：可逆地催化苹果酸氧化脱碳酸生成丙酮酸的反应的活性。上述反应由以NADP为电子受体的NADP型苹果酸酶(也记作苹果酸脱氢酶(malate dehydrogenase)(草酰乙酸脱羧性(oxaloacetate-decarboxylating))(NADP+))(EC：1.1.1.40 b2463基因(也记作maeB基因)SEQ ID NO：54)、或者以NAD为电子受体的NAD型苹果酸酶(也记作苹果酸脱氢酶(草酰乙酸脱羧性)(NAD+))(EC：1.1.1.38 sfcA基因(也记作maeA基因)SEQ ID NO：52)这2种酶来催化。苹果酸酶活性的确认可以按照Bologna等的方法(Bologna，F.P.et al.2007.J.Bacteriol.2007 189：5937-5946)来测定。
NADP依赖型苹果酸酶:NADP+(NADP-依赖性苹果酸酶:NADP+)+苹果酸(malate)→NADPH+CO2+丙酮酸(pyruvate)
NAD依赖型苹果酸酶:NAD+(NAD-依赖性苹果酸酶:NAD+)+苹果酸→NADH+CO2+丙酮酸
酶活性的降低可以像后述的丙酮酸脱氢酶活性的降低那样进行。
在本发明中，更优选使NADP型苹果酸酶与NAD型苹果酸酶这两者的活性均降低，特别是，当本发明的微生物是属于埃希氏菌属、肠杆菌属、泛菌属、克雷伯氏菌属或沙雷氏菌属的细菌时，优选降低这两种类型的苹果酸酶的活性。
此外，本发明的微生物优选除了增强丙酮酸合酶或丙酮酸:NADP+氧化还原酶的活性之外，还降低丙酮酸脱氢酶活性。
在本发明中，丙酮酸脱氢酶(以下也称“PDH”)活性是指催化丙酮酸氧化脱碳酸、生成乙酰-CoA(acetyl-CoA)的反应的活性。上述反应由PDH(Elp：pyruvate dehydrogenase，EC：1.2.4.1 aceE基因SEQ ID NO：46)、二氢硫辛酰基乙酰转移酶(E2p：dihydrolipoyltransacetylase，EC：2.3.1.12 aceF基因SEQ ID NO：48)、二氢硫辛酰胺脱氢酶(E3：dihydrolipoamide dehydrogenase；EC：1.8.1.4 lpdA基因SEQ ID NO：50)这3种酶来催化。即，这3种亚单位分别催化以下反应，而将催化这3个反应合起来的反应的活性称为PDH活性。PDH活性的确认可以采用Visser和Strating的方法(Visser，J.and Strating，M.1982.Methods Enzymol.89：391-399)来测定。
E1p：丙酮酸+[二氢硫辛酰赖氨酸残基琥珀酰转移酶]硫辛酰赖氨酸→[二氢硫辛酰赖氨酸残基乙酰转移酶]S-乙酰二氢硫辛酰赖氨酸+CO2
E2p：CoA+酶N6-(S-乙酰二氢硫辛酰)赖氨酸→乙酰-CoA+酶N6-(二氢硫辛酰)赖氨酸
E3：蛋白N6-(二氢硫辛酰)赖氨酸+NAD+→蛋白N6-(硫辛酰)赖氨酸+NADH+H+
酶活性的降低具体地可以通过下述方法实现：使染色体上的PDH编码基因，具体地说是aceE、aceF和lpdA中的1个或2个以上基因的编码区域的一部分或全部缺损，或者对启动子、shine-dalgarno(SD)序列等表达调节序列进行修饰，等等。此外，对表达调节序列以外的非翻译区的修饰也可以降低基因的表达量。而且，还可以缺失包括染色体上的基因的前后的序列在内的整个基因。此外，所述修饰还可以这样完成：通过基因重组向染色体上的酶编码区域中导入氨基酸取代(错义突变)、或者导入终止密码子(无义突变)、或者导入添加或缺失一～二个核苷酸的移码突变(Wang，J.P.et al.2006.J.Agric.Food Chem.54：9405-9410；Winkler，W.C.2005.Curr.Opin.Chem.Biol.9：594-602；Qiu，Z.and Goodman，M.F.1997.J.Biol.Chem.272：8611-8617；Wente，S.R.and Schachman，H.K.1991.J.Biol.Chem.266：20833-20839)。
在本发明中，优选通过利用同源重组，使染色体上的基因表达调节序列例如启动子区域、或编码区域、或非编码区域的一部分或全部缺损，或者在所述区域中插入其它序列，来降低细胞内的酶活性。然而，只要是降低PDH活性的修饰即可，也可以是通过X射线或紫外线照射、或者N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍等突变剂进行的常规突变处理引起的修饰。
就表达调节序列的修饰而言，优选为1个碱基以上，更优选为2个碱基以上，特别优选为3个碱基以上。此外，在缺失编码区域时，只要产生的酶蛋白质的功能降低或缺失即可，缺失的区域可以是N末端区域、内部区域、C末端区域中的任何区域，也可以是整个编码区域。通常，缺失的区域越长，越能够切实地使基因失活。此外，优选的是被缺失区域的上游或下游的读码框不一致。
在编码区域中插入其他序列时，可以为基因的任何区域，但插入的序列越长越能够切实地使编码酶的基因失活。优选的是插入部位前后的序列的读码框不一致。对于其他序列没有特殊限制，只要是能够降低或缺损酶蛋白质的功能即可，包括例如携带有抗生素抗性基因或对L-氨基酸生产有用的基因的转座子等。
对染色体上的基因如上述地进行修饰，可以通过下述方法实现：例如，制备缺失型基因(其经过了修饰使得基因的部分序列缺失、不产生正常功能的酶蛋白质)，用包含该基因的DNA转化细菌，通过使缺失型基因与染色体上的基因发生同源重组，从而将染色体上的基因替换成缺失型基因。缺失型基因所编码的酶蛋白质即使能够产生，其与野生型酶蛋白质的立体结构也不同，其功能降低或消失。这种基于利用同源重组进行的基因取代的基因破坏，还可以采用下述方法进行：前述的Red驱动整合方法、组合使用Red驱动整合法与λ噬菌体来源的切出系统的方法等使用线性DNA的方法，或者使用含温度敏感型复制起点的质粒、可接合转移的质粒的方法，利用在宿主内不含复制起点的自杀载体的方法(美国专利第6303383号说明书，或特开平05-007491号)等。
上述关于降低PDH活性的描述同样适用于前述的其它酶“活性的降低”、或其它基因的“破坏”。
此外，在厌氧或微需氧的条件下进行培养的场合，本发明的微生物还可以是经过修饰，使得除了丙酮酸合酶或丙酮酸:NADP+氧化还原酶的活性被增强之外，不在厌氧或微需氧的条件下产生有机酸或乙醇的微生物。这里，作为有机酸，可以列举出乳酸、甲酸、乙酸。作为进行修饰使得不生产有机酸或乙醇的方法，包括例如破坏编码乳酸脱氢酶的基因的方法(Verumi，G.N.et al.2002.J.Industrial Microbiol.Biotechnol.28：325-332；特开2005-95169)。
此外，当在包含脂肪酸作为碳源的培养基中进行培养时，还可以提高本发明的微生物的脂肪酸同化能力。提高脂肪酸同化能力的手段包括例如：弱化或缺损fadR基因的表达，增强涉及脂肪酸同化的fadL、fadE、fadD、fadB和/或fadA基因的表达，或增强编码细胞色素bo型氧化酶复合体(cytochrome bo terminal oxidase complex)的各亚基的基因群(Gennis，R.B.and Stewart，V.1996.p.217-261.In F.D.Neidhardt(ed.)，Escherichia coli andSalmonella Cellular and Molecular Biology/Second Edition，American Societyfor Microbiology Press，Washington，D.C；Chepuri et al.1990.J.Biol.Chem.265：11185-11192)即cyoABCDE的表达等。
“fadR基因”是编码FadR的基因，所述FadR是在肠杆菌科细菌群中发现的调节脂肪酸代谢并具有DNA结合能力的转录因子(DiRusso，C.C.et al.1992.J.Biol.Chem.267：8685-8691；DiRusso，C.C.et al.1993.Mol.Microbiol.7：311-322)，大肠杆菌的fadR基因可以示例出具有位于大肠杆菌的基因组序列(Genbank登录号：U00096)碱基序号1234161～1234880的SEQ ID NO：82所示的碱基序列的基因。SEQ ID NO：83中示出了该基因编码的氨基酸序列。
<2>本发明的L-氨基酸生产方法
本发明的方法是以用培养基培养本发明的微生物，在培养基中或菌体内生成并蓄积L-氨基酸，并从该培养基或菌体收集L-氨基酸为特征的L-氨基酸生产方法。
这里，本发明的方法可以采用分批培养(batch culture)、流加培养(Fed-batch culture)、连续培养法(continuous culture)中的任何方法，培养基中的乙醇或脂肪酸可以包含在初始培养基中，也可以包含在流加培养基中，或者包含于这两者中。
这里，在本发明中，上述流加培养是指下述培养方法：将培养基连续地或间歇地添加至培养容器中，并且在培养完成之前不从容器中取出培养基。此外，连续培养指下述培养方法：连续地或间歇地将培养基流加至培养容器中，同时从容器中取出培养基(通常而言，等于所流加的培养基的量)。“初始培养基”的意思是在流加培养或连续培养中，流加流加培养基之前的分批培养中所用的培养基(培养开始时的培养基)；“流加培养基”的意思是在进行流加培养或连续培养时，提供至发酵罐的培养基。此外，分批培养(batchculture)是指：每批制备一次新的培养基，将菌株接种到其中，并且直至收获都不加入培养基。
作为碳源，优选是能够产生乙酰CoA但不伴随发生脱碳酸反应的碳源，具体地可以列举出：乙醇、脂肪酸、或者、通过分解可产生脂肪酸的脂肪酸酯包括油脂等。以下，就使用乙醇或脂肪酸作为所述碳源的情况进行示例说明。
乙醇是以分子式C2H5OH表示的一元醇，可以利用纯乙醇，也可以直接利用含乙醇的混合物，如乙醇发酵等中产生的培养液中的乙醇等。
脂肪酸是以通式CmHnCOOH表示的一元羧酸。只要能够被具有L-氨基酸生产能力的细菌利用即可，可以是任何链长的脂肪酸，也可以以任意比例含有任何链长的脂肪酸。优选的脂肪酸是油酸(C17H33COOH)以及棕榈酸(C15H31COOH)，特别优选油酸。关于油酸，可以通过油脂的水解来获得包含油酸的长链脂肪酸混合物。用于本发明的油酸可以以棕榈油等油脂的水解物的形式获得，可以使用从动物油、植物油、废食用油、其它混合油脂或巧克力等包含脂肪成分的食品中提取的油酸。此外，脂肪酸可以以游离酸的形式利用，也可以以与钠、钾等碱金属的盐或者铵盐的形式加以利用。
本发明的方法中使用的培养基中所含的乙醇或脂肪酸的量可以是任意的，只要本发明的方法中使用的细菌能够作为碳源加以同化即可，当作为单独的碳源添加到培养基中时，优选包含20w/v％以下、优选10w/v％以下、更优选2w/v％以下。此外，培养基中包含的乙醇或脂肪酸可以是任意的，只要在其含量下能够作为碳源被同化即可，当作为单独的碳源添加到培养基中时，希望包含0.001w/v％以上、优选0.05w/v％以上、更优选0.1w/v％以上。
此外，在作为流加培养基使用的情况下，当作为单独的碳源添加乙醇或脂肪酸时，培养基中优选包含10w/v％以下、优选5w/v％以下、更优选1w/v％以下，优选包含0.001w/v％以上、优选0.05w/v％以上、更优选0.1w/v％以上。
而且，乙醇的浓度可以采用各种方法来测定，酶法测定是简便且常规的(Swift，R.2003.Addiction 98：73-80)。脂肪酸的浓度可以采用气相色谱或HPLC等常规方法来测定(Lehotay，S.J.and Hajslova，J.TrAC Trends Anal.Chem.2002.21：686-697；Lin，J.T.et al.1998.J.Chromatogr.A.808：43-49)。
而且，还可以将乙醇和脂肪酸混合后添加到本发明的培养基中。乙醇和脂肪酸的添加浓度可以是任意的，只要本发明的方法中使用的细菌能够作为碳源同化所述脂肪酸即可，当在培养基中仅添加乙醇和脂肪酸的混合物作为碳源时，优选合计包含20w/v％以下、优选10w/v％以下、更优选2w/v％以下。此外，培养基中的乙醇和脂肪酸的混合物的含量可以是任意的，只要在其含量下本发明中使用的细菌能够作为碳源加以同化即可。当培养基中仅添加乙醇和脂肪酸的混合作为碳源时，优选与油酸合在一起包含0.001w/v％以上、优选0.05w/v％以上、更优选0.1w/v％以上。
此外，乙醇与脂肪酸的混合比例可以是任意的，只要为本发明的方法中使用的细菌能够作为碳源同化的浓度即可，可以以相对于乙醇1脂肪酸为2以下、优选1.5以下、特别优选1以下左右的比例来进行混合。作为下限，只要混合了脂肪酸即可，优选相对于乙醇1，混合0.05以上、优选0.1以上的脂肪酸。
而且，本发明的方法中使用的培养基中除了乙醇或脂肪酸或乙醇和脂肪酸这两者之外，还可以添加其它碳源。优选的是葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、半乳糖、废糖蜜、淀粉水解物等糖类，甘油等多元醇类，富马酸、柠檬酸、琥珀酸等有机酸类。特别优选葡萄糖、蔗糖、果糖、甘油。作为甘油，也可以使用在生物柴油燃料生产中产生的粗甘油。碳源可以是1种，也可以是2种以上的混合物。在使用其它碳源的情况下，碳源中的乙醇或脂肪酸、或乙醇和脂肪酸的混合物的比例优选为10重量％以上、优选30重量％以上、更优选50重量％以上。
而且，在本发明中，可以在培养的所有步骤中均包含一定浓度的乙醇或者脂肪酸，也可以仅在流加培养基或初始培养基中添加有乙醇或者脂肪酸，如果其它碳源充足，则也可以存在乙醇或脂肪酸不足的一定时间。所谓“暂时性的”，意思是，例如，在发酵总时间的10％、20％、最大至30％的时间内脂肪酸处于不足的状态。
就培养基中添加的其它成分而言，可以使用除碳源外还含有氮源、无机离子和视需要而定的其它有机成分的常规培养基。本发明的培养基中包含的氮源可以使用氨、硫酸铵、碳酸铵、氯化铵、磷酸铵、醋酸铵、尿素等铵盐或硝酸盐等，pH调整中使用的氨气、氨水也可作为氮源利用。此外，还可以利用蛋白胨、酵母提取物、肉提取物、麦芽提取物、玉米浆、大豆水解物等。培养基中也以只含这些氮源中的1种，也可以含有这些氮源中的2种以上。这些氮源可以用于初始培养基，也可以用于流加培养基。此外，初始培养基、流加培养基中可以使用相同的氮源，也可以将流加培养基的氮源改变为与初始培养基不同。
本发明的培养基中，除了碳源、氮源之外，优选还包含磷酸源、硫源。作为磷酸源，可以利用磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、焦磷酸等磷酸多聚物等。此外，作为硫源，只要包含硫原子即可，优选硫酸盐、硫代硫酸盐、亚硫酸盐等硫酸盐，半胱氨酸、胱氨酸、谷胱甘肽等含硫氨基酸，这其中优选硫酸铵。
此外，培养基除碳源、氮源、硫源之外，还可以包含生长促进因子(具有生长促进效果的营养素)。能够使用的生长促进因子包括微量金属、氨基酸、维生素、核酸以及含有所述物质的蛋白胨、酪蛋白氨基酸、酵母提取物、大豆蛋白降解产物等。作为微量金属，可以列举铁、锰、镁、钙等；作为维生素，可以列举维生素B1、维生素B2、维生素B6、烟酸、烟酰胺、维生素B12等。这些生长促进因子可以包含在初始培养基中，也可以包含在流加培养基中。
此外，在使用其生长需求氨基酸等的营养缺陷型突变株时，优选在培养基中添补所需求的营养素。特别是，可在本发明中使用的L-赖氨酸生产菌中大多如后述地强化了L-赖氨酸生物合成途径，而弱化了L-赖氨酸分解能力，因此，优选添加选自L-苏氨酸、L-高丝氨酸、L-异亮氨酸、L-甲硫氨酸中的1种或2种以上。初始培养基和流加培养基的培养基组成可以相同，也可以不同。此外，初始培养基与流加培养基的培养基组成可以相同，也可以不同。而且，当流加培养基的流加分多个阶段进行时，各流加培养基的组成可以相同，也可以不同。
培养优选在发酵温度20至45℃，特别优选33至42℃的通气条件下进行。这里，将氧浓度调节到5至50％，优选至大约10％来进行发酵。此外，优选将pH控制在5至9进行通气培养。如果在培养期间pH降低，可例如添加碳酸钙或碱例如氨气和氨水以中和培养物。在这些条件下，进行优选大约10至120小时的培养，从而在培养液中蓄积显著量的L-氨基酸。蓄积的L-氨基酸的浓度只要是高于野生型菌株中的浓度并且在该浓度下能够将L-氨基酸从培养基收集和回收即可，可以是50g/L以上，理想的是75g/L以上，更理想的是100g/L以上。
当目的氨基酸为碱性氨基酸时，可以采用通过下述方法进行发酵、并回收目的碱性氨基酸的方法来进行生产(参照特开2002-065287号)：将培养中的pH控制在6.5～9.0、培养结束时的培养基的pH控制在7.2～9.0、发酵中的发酵槽内压力控制为正的方法，或者，向培养基供给二氧化碳或含二氧化碳的混合气体，使得存在培养基中的碳酸氢根离子和/或碳酸根离子为至少2g/L以上的培养期，并以所述碳酸氢根离子和/或碳酸根离子作为以碱性氨基酸为主的阳离子的抗衡离子的方法。
就培养结束后从培养液中收集L-氨基酸的方法而言，可以按照公知的回收方法来进行。例如，在采用离子交换树脂法、沉淀法，或通过离心分离等从培养液中除去菌体后，进行浓缩晶析来进行收集。
在本发明中，为了确保高于一定水平的L-氨基酸蓄积，微生物的培养可以分为种子培养(seed culture)和主培养(main culture)来进行，种子培养可通过使用培养瓶等的摇动培养或通过分批培养来进行，而主培养可以以流加培养或连续培养的形式进行。或者，种子培养和主培养均可以以分批培养的方式进行。
在本发明中，当进行流加培养或连续培养时，可以以间歇的方式流加流加培养基，使乙醇或脂肪酸或其它碳源的流加发生暂时的停止。优选的是，停止流加培养基供给的时间为流加进行时间的至多30％，理想的是至多20％，特别理想的是至多10％。当间歇流加流加培养液时，可添加一定时间的流加培养基，并如下控制第二次及以后的添加：在某个添加期前面的添加停止期中发酵培养基内碳源耗尽时pH的上升和溶氧浓度的上升通过计算机被检测到时，即开始添加；从而培养罐(culture tank)中的基质浓度总是自动保持在低水平(美国专利5,912,113号说明书)。
流加培养中使用的流加培养基，优选采用含乙醇或脂肪酸和其它碳源、以及具有生长促进效果的营养素(生长促进因子)的培养基，并且可以进行控制，使得发酵培养基中的脂肪酸浓度在一定浓度以下。这里，所谓一定浓度以下，是指制备添加10w/v％以下、优选5w/v％以下、更优选1w/v％以下的培养基。
作为其它碳源，优选葡萄糖、蔗糖、果糖、甘油；作为生长促进因子，优选氮源、磷酸、氨基酸等。作为氮源，可以使用氨、硫酸铵、碳酸铵、氯化铵、磷酸铵、醋酸铵、尿素等铵盐或硝酸盐等。此外，作为磷酸源，可以使用磷酸二氢钾、磷酸氢二钾，作为氨基酸，在使用营养缺陷型突变株的场合，优选添补所需求的营养素。此外，流加培养基可以是1种，也可以混合2种以上的培养基。在使用2种以上的流加培养基时，这些培养基可以混合起来通过1个补料罐流加，也可以用多个补料罐流加。
在将连续培养方法用于本发明时，可以同时进行取出和流加；也可以取出一部分后再进行流加。此外，所述方法也可以是将包含L-氨基酸和细胞的培养液取出，然后仅将细胞再循环回发酵罐，对菌体进行再利用的连续培养方法(参照法国专利号2669935说明书)。作为连续或间歇流加营养源的方法，可以使用与流加培养中所用的相同方法。
再利用菌体的连续培养方法是如下所述的方法：在氨基酸浓度达到预定水平时，将发酵培养基间歇或连续地取出，仅取出L-氨基酸，并且将包含菌体的过滤残余物再循环到发酵罐中，这种方法可通过参考例如法国专利号2669935说明书来实施。
其中，将培养液间歇取出时，可以在L-氨基酸浓度达到预定浓度时取出部分L-氨基酸，并且新流加培养基来继续培养。此外，至于添加的培养基的量，优选进行设定使其最终与取出之前的培养液的量为等量。这里，“等量”的意思是取出之前培养液量的大约93～107％的量。
在将培养液连续取出时，优选在流加营养培养基的同时或之后开始取出。例如，开始取出的时间是添加开始之后的5小时之内，优选3小时之内，更优选1小时之内。此外，至于培养液的取出量，优选取出的量和流加的量为等量。
实施例
以下，通过实施例更具体地说明本发明，但本发明不受其限制。
〔实施例1〕<大肠杆菌来源的醇脱氢酶(AdhE)突变株的构建>
为了使大肠杆菌能够以需氧方式同化乙醇，获取了醇脱氢酶AdhE突变体。大肠杆菌来源的野生型AdhE基因(adhe)的碱基序列及其编码的氨基酸序列分别示于SEQ ID NO：21和SEQ ID NO：22。
<1-1>大肠杆菌MG1655::PL-tacadhE株的构建
通过Datsenko和Wanner开发的称为“Red-driven integration”的方法(Datsenko，K.A.and Wanner，B.L.2000.Proc.Natl.Acad.Sci.USA.97：6640-6645)和λ噬菌体来源的切出系统(Cho，E.H.et al.2002.J.Bacteriol.184：5200-5203)将大肠杆菌adhE基因的启动子区域替换成PL-tac。
通过本方法，使用以5′侧设计有目的基因的一部分、3′侧设计有抗生素抗性基因的一部分的合成寡核苷酸作为引物而得到的PCR产物，可以一步式地构建基因重组株。进而，结合使用λ噬菌体来源的切出系统，可以将整合到基因重组株中的抗生素抗性基因除去。
包含PL-tac和编码氯霉素抗性(CmR)基因的cat基因的片段，以国际专利申请WO2006/043730记载的大肠杆菌MG1655PL-tacxylE株的基因组为模板，使用SEQ ID NO：23和SEQ ID NO：24所示的引物，通过PCR法来进行扩增。SEQ ID NO：23的引物包含adhE基因的上游区域的互补序列，SEQID NO：24的引物包含adhE基因的5′区域的互补序列。
PL-tac的序列如SEQ ID NO：25所示。PCR中使用了Gene Amp PCRSystem 2700扩增仪(Applied Biosystems)和Taq DNA聚合酶(Fermentas公司)。所得扩增片段采用琼脂糖凝胶电泳来进行纯化、回收。通过电穿孔将片段导入携带具有温度敏感型的复制能力的质粒pKD46的大肠杆菌MG1655/pKD46株中。质粒pKD46(Datsenko，K.A.and Wanner，B.L.2000.Proc.Natl.Acad.Sci.USA.97：6640-6645)中包含λ噬菌体的总计2154个碱基的DNA片段(GenBank/EMBL登录号J02459，第31088位～33241位)，该片段中包含阿拉伯糖诱导性ParaB启动子控制下的编码λRed同源重组系统的Red重组酶的基因(γ、β、exo基因)。质粒pKD46对于将PCR产物整合至MG1655株的染色体上而言是必要的。
对于扩增得到的PCR产物，采用琼脂糖凝胶电泳进行纯化，通过电穿孔将其导入到包含具有温度敏感型的复制能力的质粒pKD46的大肠杆菌MG1655株中。电穿孔用感受态细胞按下述制备。具体地，将在含100mg/L的氨苄青霉素的LB培养基(胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、NaCl 10g/L)中30℃培养过夜的MG1655/pKD46株用含氨苄青霉素(100mg/L)和L-阿拉伯糖(10mM)的5mL的LB培养基稀释100倍。对于所得稀释物，于30℃在通气条件下使其生长至OD600为约0.6后，100倍浓缩，用10％甘油洗涤3次，从而使其能够用于电穿孔。电穿孔使用70μL的感受态细胞与约100ng的PCR产物来进行。在电穿孔后的杯子中加入1mL的SOC培养基(Sambrook，J.et al.1989.Molecular Cloning A Laboratory Manual/SecondEdition，Cold Spring Harbor Laboratory Press，New York)，于37℃培养1小时后，于37℃在含Cm(氯霉素)(40mg/L)的LB琼脂培养基(胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、NaCl 10g/L、琼脂15g/L)上进行平板培养，选择出Cm抗性重组体。
将Cm抗性株接种到含2％乙醇的M9平板培养基(Sambrook，J.et al.1989.Molecular Cloning A Laboratory Manual/Second Edition，Cold SpringHarbor Laboratory Press，New York)上，从37℃、培养2-3日所生长出的菌株中选取约100个克隆，再于含2％乙醇的M9平板培养基上37℃进行培养，选择36小时以内生长出的菌株。为了考察所述菌株的CmR基因与启动子区域的序列，使用SEQ ID NO：26和SEQ ID NO：27所示的引物通过PCR法进行了扩增。对于经确认adhE基因的启动子区域中包含CmR基因的一个克隆，于37℃进行培养来除去温度敏感型质粒pKD46，从而得到了MG1655::PL-tacadhE株。
<1-2>大肠杆菌MG1655ΔadhE株的构建
对于大肠杆菌MG1655(ATCC 700926)野生型的adhE基因，采用Datsenko和Wanner开发的方法将其替换成非活性型adhE基因。以质粒pACYC177(GenBank/EMBL accession number X06402、Fermentas公司)为模板，使用SEQ ID NO：28和SEQ ID NO：29所示的引物，通过PCR法扩增了包含编码卡那霉素抗性(KanR)基因的kan基因的片段。SEQ ID NO：28的引物包含与adhE基因318bp上游的区域的40个碱基互补的序列，SEQ IDNO：29的引物包含与adhE基因3′侧区域的41个碱基互补的序列。PCR中使用了Gene Amp PCR System 2700扩增仪(Applied Biosystems)和Taq DNA聚合酶(Fermentas公司)。将所得扩增片段用琼脂糖凝胶电泳进行纯化、回收。对于该片段，通过电穿孔将其导入携带质粒pKD46的大肠杆菌MG1655/pKD46株。
为了确认在含20μg/ml卡那霉素的LB平板培养基(Sambrook，J.et al.1989.Molecular Cloning A Laboratory Manual/Second Edition，Cold SpringHarbor Laboratory Press，New York)上生长出的克隆中存在KmR基因，使用SEQ ID NO：30和SEQ ID NO：31所示的引物，采用PCR法进行了扩增。对于一个已确认在adhE基因区域中包含KmR基因的克隆，通过在37℃进行培养，除去温度敏感型质粒pKD46，从而得到了MG1655ΔadhE株。
<1-3>突变型醇脱氢酶(AdhE*)的构建
为了将Glu568Lys(E568K)突变导入AdhE，使用与adhE基因的碱基序列1662-1701和1703-1730互补、且第1702位的碱基引入g→a突变的SEQID NO：32所示的引物、以及与adhE基因碱基序列的3’末端侧区域同源的SEQ ID NO：33所示的引物，以大肠杆菌MG1655株基因组为模板，进行了PCR。PCR中使用了Gene Amp PCR System 2700扩增仪(AppliedBiosystems)和Pyrobest DNA聚合酶(宝酒造)。对于所得的1.05kbp的扩增片段，用琼脂糖凝胶电泳进行了纯化、回收。
以大肠杆菌MG1655::PL-tacadhE株基因组为模板，使用SEQ ID NO：34所示的引物以及导入了突变的1.05kbp片段作为引物，进行了PCR。SEQ IDNO：34的引物是位于adhE基因起始密码子上游402-425bp的引物。PCR中使用了Gene Amp PCR System 2700扩增仪(Applied Biosystems)和TaKaRaLA DNA聚合酶(宝酒造)。对于所得4.7kbp的扩增片段，用琼脂糖凝胶电泳进行了纯化、回收。
为了使野生型adhE基因区域与突变型adhE基因重组，对于包含CmR基因和PL-tac下游的突变型adhE基因的4.7kbp片段(cat-PL-tacadhE*)，采用Datsenko和Wanner的方法，通过电穿孔将其导入MG1655ΔadhE/pKD46株。对于所得克隆，在包含2％乙醇作为唯一碳源的M9平板培养基上进行选择。测定了生长出的克隆的adhE基因的序列，结果鉴定出下述引起氨基酸取代的突变：Glu568Lys(gag-aag)、Ile554Ser(atc-agc)、Glu22Gly(gaa-gga)、Met236Val(atg-gtg)、Tyr461Cys(tac-tgc)以及Ala786Val(gca-gta)，将该克隆命名为MG1655::PL-tacadhE*株。
以大肠杆菌MG1655::PL-tacadhE*株作为供体，使P1vir噬菌体感染MG1655Δtdh rhtA*株的P1转导(Miller，J.H.(1972)Experiments in MolecularGenetics，Cold Spring Harbor Lab.Press，Plainview，NY)，得到了具有乙醇同化性的L-苏氨酸生产株MG1655Δtdh rhtA*PL-tacadhE*株。MG1655ΔtdhrhtA*株是这样得到的L-苏氨酸生产株：从MG1655株出发，采用Datsenko和Wanner的方法破坏编码苏氨酸脱氢酶的tdh基因，并在rhtA基因中通过P1转导导入了来自于在极限培养基中对高浓度苏氨酸具有抗性的菌株VL614rhtA23(Livshits，V.A.et al.2003.Res.Microbiol.154：123-135)的rhtA23突变。
<1-4>大肠杆菌WC196Δmez株来源的醇脱氢酶(AdhE)突变株的构建
为了对L-赖氨酸生产菌赋予乙醇同化性，以MG1655Δtdh rhtA*PL-tacadhE*株作为供体，对国际专利公报WO2005/010175所述的L-赖氨酸生产菌WC196Δmez/pCABD2株进行了P1转导，得到了具有乙醇同化性的L-赖氨酸生产株WC196Δmez PL-tacadhE*/pCABD2株。WC196Δmez株是编码苹果酸酶(malic enzyme)的sfcA以及b2463基因被破坏的WC196株(WO2005/010175)。pCABD2是携带美国专利No.6,040,160所述的对L-赖氨酸反馈抑制呈抗性的dapA*基因、对L-赖氨酸反馈抑制呈抗性的lysC*基因、dapB基因以及ddh基因的质粒。
〔实施例2〕<绿硫菌来源的丙酮酸合酶基因表达质粒的构建与活性测定>
<2-1>绿硫菌来源丙酮酸合酶基因表达质粒的构建
绿硫菌是最适生长温度为48℃的中高温型自养细菌，绿硫菌TLS株的基因组序列已由Eisen等阐明(Eisen，J.A.et al.2002.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 99：9509-9514)。从该菌株中分离出丙酮酸合酶基因，构建了表达质粒。
<2-2>绿硫菌来源丙酮酸合酶基因表达株的丙酮酸合酶活性的测定
以绿硫菌TLS株(ATCC49652)的染色体为模板，使用SEQ ID NO：35、36所示的寡核苷酸进行PCR，扩增了丙酮酸合酶基因片段。将所得基因片段用SacI切割，插入pSTV28(TakaraBio公司制造)的SacI位点，构建了质粒，将其命名为pSTV-PS。在使用BigDye Terminators v1.1 Cycle SequencingKit确认了丙酮酸合酶基因全长中没有PCR错误后，用SacI从pSTV-PS中切出将丙酮酸合酶基因，插入到pMW-Pthr的SacI位点，构建了丙酮酸合酶基因表达用质粒pMW-Pthr-PS。pMW-Pthr是在载体pMW219(NipponGene公司制造)的HindIII位点与XbaI位点之间具有大肠杆菌K-12株的苏氨酸操纵子(thrABC)的启动子区域(Pthr)的质粒，可通过在该启动子的下游克隆基因来进行基因表达。所使用的苏氨酸操纵子的启动子序列如SEQ IDNO：37所示。
通过电穿孔在WC196ΔcadAΔldcC/pCABD2中分别导入pMW-Pthr-PS以及比较对照用载体pMW-Pthr，以卡那霉素抗性为指标获得了转化体，确认了质粒的导入。将绿硫菌来源的丙酮酸合酶基因表达株命名为WC196ΔcadAΔldcC/pCABD2/pMW-Pthr-PS，将对照株命名为WC196ΔcadAΔldcC/pCABD2/pMW-Pthr。
将上述菌株接种于含20mg/L链霉素和40mg/L卡那霉素的LB培养基，37℃振荡培养过夜。通过离心分离回收菌体，悬浮于50mM HEPES缓冲液(pH 8.0)中。将悬浮液用超声波破碎机破碎，15000rpm离心15分钟后，以所得上清作为粗酶液。
使用Protein Assay CBB溶液(Nakalai Tesque公司制造)测定粗酶液中的蛋白质浓度，将相当于250μg总蛋白质的粗酶液用于活性测定。
活性测定如下进行。在下述反应溶液2mL中加入粗酶液进行反应。首先，将包含除底物丙酮酸以外的所有成分的反应溶液加入光谱测定用比色皿中，用橡胶塞和铝盖将比色皿密闭起来。使用注射器向比色池中吹入氩气5分钟，降低比色池内的氧浓度。然后，将比色皿置于分光光度计(日立公司制造U-3210 Spectrophotometer)上，使用注射器添加丙酮酸溶液开始反应。37℃反应30分钟，其中通过经时测定578nm的吸光度来观察还原型甲基紫精(methylviologen)的量的变化。结果如表1所示。表中，比活性的单位为U/mg蛋白。1U定义为每1分钟还原1nmol甲基紫精的活性。
〔反应液〕
MgCl2                   1mM
二硫苏糖醇              1mM
甲基紫精                5mM
CoA                     0.25mM
丙酮酸                  10mM(测定即将开始添加)
HEPES(pH8.0)            50mM
【表1】
表1
  质粒   比活性
  pMW-Pthr   0.0
  pMW-Pthr-PS   1.2
〔实施例3〕<绿硫菌来源的丙酮酸合酶基因表达、大肠杆菌来源的黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因、大肠杆菌来源的铁氧还蛋白基因扩增质粒的构建>
作为丙酮酸合酶活性必需的辅酶再生系统，使用大肠杆菌来源的黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因和大肠杆菌来源的黄素氧还蛋白基因，构建了同时表达上述的两个基因以及丙酮酸合酶基因共三个基因的质粒。作为大肠杆菌的铁氧还蛋白-NADP+还原酶基因使用了fpr基因；作为大肠杆菌的铁氧还蛋白基因使用了fdx基因。
<3-1>大肠杆菌来源的黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因扩增质粒的构建
以大肠杆菌MG1655株的染色体为模板，使用SEQ ID NO：42、43所示的寡核苷酸进行PCR，扩增了黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因片段。将该基因片段用SmaI切割，插入到pMW-Pthr的SmaI位点，构建了黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因扩增用质粒，命名为pMW-Pthr-fpr。
<3-2>大肠杆菌来源铁氧还蛋白fdx基因扩增质粒的构建
以大肠杆菌MG1655株的染色体为模板，使用SEQ ID NO：44、45所示的寡核苷酸进行PCR，扩增了铁氧还蛋白fdx基因片段。将该基因片段用EcoRI切割，插入到pMW-Pthr的EcoRI位点，构建了铁氧还蛋白fdx基因扩增用质粒pMW-Pthr-fdx。
<3-3>绿硫菌来源的丙酮酸合酶基因、大肠杆菌来源的黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因、铁氧还蛋白fdx基因扩增用质粒的构建
将pMW-Pthr-fpr用SmaI消化，将所得fpr基因片段与用SmaI处理pMW-Pthr-fdx所得的片段连接，得到了pMW-Pthr-fpr-fdx。然后，将pMW-Pthr-PS用SacI切割，将所得PS基因片段与用SacI处理pMW-Pthr-fpr-fdx所得的片段连接，构建了绿硫菌来源的丙酮酸合酶基因、大肠杆菌来源的黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因、铁氧还蛋白fdx基因表达增强质粒pMW-Pthr-fpr-PS-fdx。
在上述各质粒中，绿硫菌来源的丙酮酸合酶基因通过Pthr转录，其它基因通过来自Pthr的通读而转录。
〔实施例4〕<绿硫菌来源丙酮酸合酶基因、大肠杆菌来源黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因、大肠杆菌来源铁氧还蛋白基因表达增强对以油酸作为碳源进行培养时的L-赖氨酸生产能力的效果>
<4-1>将绿硫菌来源的丙酮酸合酶基因、大肠杆菌来源的黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因、大肠杆菌来源的铁氧还蛋白基因扩增质粒导入WC196Δmez株
在WC196Δmez/pCABD2中通过电穿孔分别导入pMW-Pthr-fpr-PS-fdx、比较对照用载体pMW-Pthr，以卡那霉素抗性为指标获得了转化体，确认了质粒的导入。绿硫菌来源的丙酮酸合酶基因、大肠杆菌来源的黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因、大肠杆菌来源的铁氧还蛋白基因表达株命名为WC196Δmez/pCABD2/pMW-Pthr-fpr-PS-fdx，对照株命名为WC196Δmez/pCABD2/pMW-Pthr。
<4-2>绿硫菌来源的丙酮酸合酶基因、大肠杆菌来源的黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因及大肠杆菌来源的铁氧还蛋白基因的表达增强对以油酸作为碳源进行培养时的L-赖氨酸生产能力的效果
将WC196Δmez/pCABD2/pMW Pthr、WC196Δmez/pCABD2/pMW-Pthr-fpr-PS-fdx这两个菌株接种于LB平板培养基，于37℃预培养过夜。将1/8平板的菌体接种于500mL容量坂口烧瓶中的20mL下述组成的油酸培养基，37℃、搅拌速度120rpm、需氧条件下培养72小时。使用生物传感器BF-5(王子计测机器)测定了培养基中蓄积的L-赖氨酸。此外，对培养液中的活菌数也进行了测定。两次培养的平均值如表2所示。与对照相比，绿硫菌来源的丙酮酸合酶基因、大肠杆菌来源的黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因及大肠杆菌来源的铁氧还蛋白基因表达增强株中可以观察到L-赖氨酸蓄积的提高。
〔油酸培养基组成〕
油酸钠                        20g/L
Tween80                       5g/L
MgSO4·7H2O                   1g/L·
(NH4)2SO4                     12g/L
KH2PO4                        0.5g/L
酵母提取物                    1g/L
FeSO4·7H2O                   0.01g/L
MnSO4·5H2O                   0.01g/L
卡那霉素                      40mg/L
链霉素                        20mg/L
碳酸钙                        30g/L
pH7.0(用KOH进行调整)灭菌条件：115℃、10分钟，碳酸钙于180℃干热灭菌2小时以上。油酸钠与Tween80混合，灭菌后添加。MgSO4·7H2O与碳酸钙分别单独灭菌，然后再添加。卡那霉素、链霉素也单独添加。
【表2】
表2
  菌株   L-赖氨酸(g/L)   活菌数(108/mL)
  WC196Δmez/pCABD2/pMW-Pthr   1.77   22.3
  WC196Δmez/pCABD2/pMW-Pthr-fpr-PS-fdx   2.35   13.6
〔实施例5〕<大肠杆菌来源的丙酮酸合酶基因表达质粒的构建与活性测定>
构建了在大肠杆菌MG1655株基因组中发现的与丙酮酸合酶基因具有同源性的ydbK基因的表达质粒，测定了活性。
<5-1>大肠杆菌来源的丙酮酸合酶基因表达质粒的构建
以大肠杆菌MG1655株的染色体为模板，使用SEQ ID NO：38、39所示的寡核苷酸进行PCR，扩增了丙酮酸合酶基因片段。将所得基因片段用KpnI切割，插入pSTV28(TakaraBio公司制造)的KpnI位点，构建了质粒，命名为pSTV-ydbK。在使用BigDye Terminators v1.1 Cycle Sequencing Kit确认了丙酮酸合酶基因的全长中没有PCR错误后，用KpnI从pSTV-ydbK中切出丙酮酸合酶基因，将其插入pMW-Pthr的KpnI位点，构建了丙酮酸合酶基因表达用质粒pMW-Pthr-ydbK。
<5-2>大肠杆菌来源丙酮酸合酶基因表达株的丙酮酸合酶活性的测定
在WC196ΔcadAΔldcC/pCABD2中通过电穿孔分别导入pMW-Pthr-ydbK、比较对照用载体pMW-Pthr，以卡那霉素抗性为指标获得了转化体，确认了质粒的导入。大肠杆菌来源丙酮酸合酶基因表达株命名为WC196ΔcadAΔldcC/pCABD2/pMW-Pthr-ydbK，对照株命名为WC196ΔcadAΔldcC/pCABD2/pMW-Pthr。
将上述菌株接种于含20mg/L链霉素和40mg/L卡那霉素的LB培养基中，37℃振荡培养过夜。通过离心分离回收菌体，像实施例2所述的绿硫菌来源丙酮酸合酶基因表达株的活性测定方法那样测定了活性。结果如表3所示。对照株WC196ΔcadAΔldcC/pCABD2/pMW-Pthr中未确认存在丙酮酸合酶的活性，而在大肠杆菌来源的丙酮酸合酶基因表达株WC196ΔcadAΔldcC/pCABD2/pMW-Pthr-ydbK中确认到8.0U/mg的活性。结果如表3所示。比活性的单位与表1相同。
【表3】
表3
  质粒   比活性
  pMW-Pthr   0.0
  pMW-Pthr-ydbK   8.0
〔实施例6〕<大肠杆菌来源的丙酮酸合酶基因、大肠杆菌来源的黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因、大肠杆菌来源的铁氧还蛋白基因表达质粒的构建>
将实施例3所述的包含大肠杆菌来源的黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因的质粒pMW-Pthr-fpr用SmaI消化，将所得fpr基因片段与用SmaI处理包含大肠杆菌来源铁氧还蛋白基因的质粒pMW-Pthr-fdx而得到的片段相连接，得到了pMW-Pthr-fpr-fdx。然后，将pMW-Pthr-ydbK用KpnI消化，将所得ydbK基因片段与用KpnI处理pMW-Pthr-fpr-fdx而得到的片段相连接，构建了大肠杆菌来源丙酮酸合酶基因、大肠杆菌来源黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因、铁氧还蛋白fdx基因表达增强质粒pMW-Pthr-fpr-ydbK-fdx。
〔实施例7〕<大肠杆菌来源的丙酮酸合酶基因、大肠杆菌来源的黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因、大肠杆菌来源的铁氧还蛋白基因表达增强对以乙醇作为碳源进行培养时的L-赖氨酸生产能力的效果>
<7-1>将大肠杆菌来源的丙酮酸合酶基因、大肠杆菌来源的黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因、大肠杆菌来源的铁氧还蛋白基因扩增质粒导入WC196Δmez adhE*株
在WC196Δmez adhE*/pCABD2中通过电穿孔分别导入pMW-Pthr-fpr-ydbK-fdx、比较对照用载体pMW-Pthr，以卡那霉素抗性为指标获得了转化体，确认了质粒的导入。将大肠杆菌来源的黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因、丙酮酸合酶基因、以及铁氧还蛋白基因的表达株命名为WC196Δmez PL-tacadhE*/pCABD2/pMW-Pthr-fpr-ydbK-fdx、对照株命名为WC196Δmez PL-tacadhE*/pCABD2/pMW-Pthr。
<7-2>大肠杆菌来源的丙酮酸合酶基因、大肠杆菌来源的黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因、大肠杆菌来源的铁氧还蛋白基因的表达增强对以乙醇作为碳源进行培养时的L-赖氨酸生产能力的效果
将WC196Δmez PL-tacadhE*/pCABD2/pMW-Pthr、WC196ΔmezPL-tacadhE*/pCABD2/pMW-Pthr-fpr-ydbK-fdx这两个菌株接种于LB平板培养基，37℃培养过夜。将相当于1/8平板的菌体接种于500mL容量坂口烧瓶中的20mL下述组成的乙醇培养基，37℃、搅拌速度120rpm、需氧条件下培养96小时。使用生物传感器BF-5(王子计测机器)测定了培养基中蓄积的L-赖氨酸和残留乙醇。此外，还测定了培养液的浊度。
两次培养的平均值如表4所示。大肠杆菌来源的丙酮酸合酶基因、大肠杆菌来源的黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因、大肠杆菌来源的铁氧还蛋白基因的表达增强的菌株中，与对照相比，观察到了L-赖氨酸蓄积的提高。
〔乙醇培养基组成〕
乙醇                    20ml/L
MgSO4·7H2O             1g/L
(NH4)2SO4               12g/L
KH2PO4                  0.5g/L
酵母提取物              1g/L
FeSO4·7H2O             0.01g/L
MnSO4·5H2O             0.01g/L
卡那霉素                40mg/L
链霉素                  20mg/L
碳酸钙                  30g/L
pH7.0(用KOH进行调整)灭菌条件：115℃、10分钟
MgSO4·7H2O与碳酸钙分别单独灭菌，再添加。乙醇、卡那霉素、链霉素单独添加。
【表4】
表4
  菌株   Lys(g/L)  EtOH(V/V％)   OD620
  WC196Δmez PL-tacadhE*/pCABD2/pMW-Pthr   2.47  0.00   14.7
  WC196Δmez PL-tacadhE*/pCABD2/pMW-Pthr-fpr-ydbK-fdx   2.89  0.00   9.3
〔实施例8〕<纤细裸藻来源的丙酮酸:NADP+氧化还原酶基因表达质粒的构建与表达的确认>
纤细裸藻Z株是最适生长温度为27℃的光合性原生生物。从该生物中分离出丙酮酸:NADP+氧化还原酶基因，构建了表达该基因的质粒。
<8-1>纤细裸藻来源丙酮酸:NADP+氧化还原酶基因表达质粒的构建
按Rotte等的方法从纤细裸藻Z株(ATCC12894)制作cDNA文库(Rotte，C.et al.2001.Mol.Biol.Evol.18：710-720)。以该cDNA为模板，使用SEQ IDNO：40、41所示的寡核苷酸进行PCR，扩增了丙酮酸:NADP+氧化还原酶基因片段。用KpnI消化所得基因片段，然后插入pUC19(TakaraBio公司制造)的KpnI位点从而构建了质粒，命名为pUC-PNO。在使用BigDyeTerminators v1.1 Cycle Sequencing Kit确认丙酮酸:NADP+氧化还原酶基因的全长中没有PCR错误后，用KpnI将丙酮酸:NADP+氧化还原酶从pUC-PNO中切出，插入pMW-Pthr的KpnI位点，构建了丙酮酸:NADP+氧化还原酶基因表达用质粒pMW-Pthr-PNO。
<8-2>纤细裸藻来源的丙酮酸:NADP+氧化还原酶基因表达株的丙酮酸:NADP+氧化还原酶表达的确认
在WC196ΔcadAΔldcC/pCABD2中通过电穿孔分别导入pMW-Pthr-PNO、比较对照用载体pMW-Pthr，以卡那霉素抗性为指标获得了转化体，确认了质粒的导入。将纤细裸藻来源的丙酮酸:NADP+氧化还原酶基因表达株命名为WC196ΔcadAΔldcC/pCABD2/pMW-Pthr-PNO，对照株命名为WC196ΔcadAΔldcC/pCABD2/pMW Pthr。
将上述菌株接种于含20mg/L链霉素和40mg/L卡那霉素的LB培养基，37℃振荡培养过夜。将1mL培养液接种于20mL含20mg/L链霉素和40mg/L卡那霉素的LB培养基中，37℃振荡培养5小时。通过离心分离回收菌体，悬浮于1mL的PBS中。将悬浮液用超声波破碎机破碎，15000rpm、离心15分钟后，以所得上清作为粗抽提液。使用蛋白测定CBB溶液(Nakalai Tesque公司制造)测定粗抽提液中的蛋白质浓度，将包含10μg蛋白质的粗抽提液用于样品制备。样品制备如下进行：在粗抽提液中加入NuPAGE LDS样品缓冲液(Invitrogen公司制造)使其浓度为1.1倍，再加入NuPAGE样品还原剂(Invitrogen公司制造)使其终浓度为10％，70℃加热处理10分钟。对于制备好的样品，使用NuPAGE Tris-乙酸凝胶3-8％(Invitrogen公司制造)进行电泳。使用MagicMark XP Western Protein Standard(Invitrogen公司制造)作为分子量标准。
对于电泳后的凝胶，使用iBlot Gel Transfer Device(Invitrogen公司制造)将其转印到膜上。从转印后的封闭直至检测的操作使用WesternBreezeChemiluminescent Western Blot Immunodetection Kit(Invitrogen公司制造)进行。首先，对膜进行30分钟封闭处理后，用纯水洗涤2次，在1000倍稀释的抗PNO血清溶液中温育1小时。将膜用洗涤液洗涤3次，在第二抗体溶液中温育30分钟。将膜用洗涤液洗涤3次、再用纯水洗涤2次后，加入检测试剂，使用Lumino-image Analyzer LAS-1000(Fuii Photo Film公司制造)进行检测。结果如图1所示。对于WC196ΔcadAΔldcC/pCABD2/pMW-Pthr-PNO株，检测到了200kD左右的推定为PNO的条带。另一方面，对于对照株WC196ΔcadAΔldcC/pCABD2/pMW-Pthr株，没有检测出这样的条带。
〔实施例9〕<纤细裸藻来源的丙酮酸:NADP+氧化还原酶基因的表达增强对以油酸作为碳源进行培养时的L-赖氨酸生产能力的效果>
<9-1>将纤细裸藻来源的丙酮酸:NADP+氧化还原酶基因扩增质粒导入WC196Δmez株
向WC196Δmez/pCABD2中通过电穿孔分别导入pMW-Pthr-PNO和比较对照用载体pMW-Pthr，以卡那霉素抗性为指标获得了转化体，确认了质粒的导入。纤细裸藻来源的丙酮酸:NADP+氧化还原酶基因表达株命名为WC196Δmez/pCABD2/pMW-Pthr-PNO，对照株命名为WC196Δmez/pCABD2/pMW-Pthr。
<9-2>纤细裸藻来源的丙酮酸:NADP+氧化还原酶基因的表达增强对以油酸作为碳源进行培养时的L-赖氨酸生产能力的效果
将WC196Δmez/pCABD2/pMW-Pthr和WC196Δmez/pCABD2/pMW-Pthr-PNO这两个菌株接种于LB平板培养基，37℃培养过夜。将相当于1/8平板的菌体接种于500mL容量的坂口烧瓶中的20mL下述组成的油酸培养基中，37℃、搅拌速度120rpm、需氧条件下培养72小时。使用生物传感器BF-5(王子计测机器)测定了培养基中蓄积的L-赖氨酸。此外，对培养液中的活菌数也进行了测定。两次培养的平均值如表5所示。
在纤细裸藻来源的丙酮酸:NADP+氧化还原酶基因表达增强株中，与对照相比，可以观察到L-赖氨酸蓄积的提高。
〔油酸培养基组成〕
油酸钠                    20g/L
Tween80                   5g/L
MgSO4·7H2O               1g/L
(NH4)2SO4                 12g/L
KH2PO4                    0.5g/L
酵母提取物            1g/L
FeSO4·7H2O           0.01g/L
MnSO4·5H2O           0.01g/L
卡那霉素              40mg/L
链霉素                20mg/L
碳酸钙                30g/L
pH7.0(用KOH进行调整)灭菌条件：115℃、10分钟
油酸钠与Tween80混合后灭菌，然后再添加。MgSO4·7H2O和碳酸钙分别单独灭菌，再添加。卡那霉素、链霉素单独添加。
【表5】
表5
  菌株   Lys(g/L)   活菌数(108/mL)
  WC196Δmez/pCABD2/pMW-Pthr   1.77   22.3
  WC196Δmez/pCABD2/pMW-Pthr-PNO   2.41   15.9
〔实施例10〕<纤细裸藻来源的丙酮酸:NADP+氧化还原酶基因表达增强对以乙醇作为碳源进行培养时的L-赖氨酸生产能力的效果>
<10-1>将纤细裸藻来源丙酮酸:NADP+氧化还原酶基因扩增用质粒导入WC196Δmez adhE*株
在WC196Δmez adhE*/pCABD2中通过电穿孔分别导入pMW-Pthr-PNO、比较对照用载体pMW-Pthr，以卡那霉素抗性为指标获得了转化体，确认了质粒的导入。纤细裸藻来源丙酮酸:NADP+氧化还原酶基因表达株命名为WC196Δmez adhE*/pCABD2/pMW-Pthr-PNO，对照株命名为WC196Δmez adhE*/pCABD2/pMW-Pthr。
<10-2>纤细裸藻来源丙酮酸:NADP+氧化还原酶基因表达增强对以乙醇作为碳源进行培养时的L-赖氨酸生产能力的效果
将WC196Δmez PL-tacadhE*/pCABD2/pMW-Pthr、WC196Δmez PL-tacadhE*/pCABD2/pMW-Pthr-PNO这两个菌株接种于LB平板培养基，于37℃预培养过夜。将相当于1/8平板的菌体接种于500mL容量坂口烧瓶中的20mL下述组成的乙醇培养基，37℃、搅拌速度120rpm、需氧条件下培养96小时。培养的第96小时取样1mL，使用生物传感器BF-5(王子计测机器)测定了培养基中蓄积的L-赖氨酸。此外，还测定了培养液的浊度。两次培养的平均值如表6所示。纤细裸藻来源的丙酮酸:NADP+氧化还原酶基因表达增强的菌株中，与对照相比，可以观察到L-赖氨酸蓄积的提高。
〔乙醇培养基组成〕
乙醇                    20ml/L
MgSO4·7H2O             1g/L
(NH4)2SO4               12g/L
KH2PO4                  0.5g/L
酵母提取物              1g/L
FeSO4·7H2O             0.01g/L
MnSO4·5H2O             0.01g/L
卡那霉素                40mg/L
链霉素                  20mg/L
碳酸钙                  30g/L
pH7.0(用KOH进行调整)灭菌条件：115℃、10分钟
MgSO4·7H2O和碳酸钙分别单独灭菌后添加。乙醇、卡那霉素、链霉素也单独添加。
【表6】
表6
  菌株   Lys(g/L)   EtOH(V/V％)   OD620
  WC196Δmez adhE*/pCABD2/pMW-Pthr   2.47   0.00   14.7
  WC196Δmez adhE*/pCABD2/pMW-Pthr-PNO   2.63   0.00   12.9
〔实施例11〕<大肠杆菌L-赖氨酸生产株WC196ΔcadAΔldcCΔmezΔfadR/pCABD2的构建>
<11-1>大肠杆菌L-赖氨酸生产株WC196ΔcadAΔldcCΔfadR的构建
调节大肠杆菌脂肪酸代谢的转录因子FadR由fadR基因(SEQ ID NO：82)编码(DiRusso，C.C.et al.1992.J.Biol.Chem.267：8685-8691)。作为大肠杆菌的L-赖氨酸生产株，从国际专利公报WO2006/078039所述的WC196ΔcadAΔldcC/pCABD2株构建了fadR基因的缺损株。
编码调节脂肪酸代谢的转录因子的fadR基因的缺失利用Datsenko和Wanner的方法(Datsenko，K.A.and Wanner，B.L.2000.Proc.Natl.Acad.Sci.USA.97：6640-6645)与λ噬菌体来源的切出系统(Cho，E.H.et al.2002.J.Bacteriol.184：5200-5203)来进行。使用质粒pMW118-(λattL-Kmr-aλttR)(WO2006/093322)作为模板，SEQ ID NO：68和69所示合成寡核苷酸作为引物，进行了PCR，其中所述引物的3′末端具有对应于attL和attR的两端的序列，引物的5′末端具有对应于目的基因fadR基因的一部分的序列。
对于扩增的PCR产物，用琼脂糖凝胶电泳进行纯化，通过电穿孔将其导入包含具有温度敏感型复制能力的质粒pKD46的大肠杆菌WC196ΔcadAΔldcC株中。然后，为了除去pKD46质粒，在含Km(卡那霉素)的LB琼脂培养基上42℃传代2次，测试所得菌落的氨苄青霉素抗性，获得了pKD46脱落的氨苄青霉素敏感型株。在氨苄青霉素敏感型株中通过PCR确认了能够基于卡那霉素抗性基因(kan)识别的fadR基因的缺失。将所得fadR缺损株命名为WC196ΔcadAΔldcCΔfadR::att-kan株。
然后，为了除去导入fadR基因内的att-kan基因，使用上述的pMW-intxis-ts(美国专利申请公开20060141586)作为辅助质粒。pMW-intxis-ts是一种具有温度敏感型复制能力的质粒，携带编码λ噬菌体的整合酶(Int)的基因、编码切除酶(excisionase、Xis)的基因。
采用常规方法制作上述所得WC196ΔcadAΔldcCΔfadR::att-kan株的感受态细胞，用辅助质粒pMW-intxis-ts进行转化，于30℃在含100mg/L氨苄青霉素的LB琼脂培养基上进行平板培养，选择氨苄青霉素抗性株。为了除去pMW-intxis-ts质粒，在LB琼脂培养基上42℃传代2次，测试所得菌落的氨苄青霉素抗性和卡那霉素抗性，获得了卡那霉素和氨苄青霉素敏感型株，它是att-kan和pMW-intxis-ts脱落的fadR破坏株。将该株命名为WC196ΔcadAΔldcCΔfadR株。
<11-2>大肠杆菌L-赖氨酸生产株WC196ΔcadAΔldcCΔfadRΔsfcA的构建
按照上述<11-1>的方法，使用SEQ ID NO：70、71的引物作为sfcA破坏用引物，使WC196ΔcadAΔldcCΔfadR株中sfcA基因缺失。这样，获得了WC196ΔcadAΔldcCΔfadRΔsfcA株。
<11-3>大肠杆菌L-赖氨酸生产株WC196ΔcadAΔldcCΔmezΔfadR/pCABD2的构建
按照上述<11-1>的方法，使用SEQ ID NO：72、73的引物作为b2463破坏用引物来进行WC196ΔcadAΔldcCΔfadRΔsfcA株中b2463基因的缺失。这样，得到了WC196ΔcadAΔldcCΔfadRΔsfcAΔb2463株。将该菌株命名为WC196ΔcadAΔldcCΔmezΔfadR株。在该菌株中通过电穿孔导入质粒pCABD2，以链霉素抗性为指标获得转化体，确认了质粒的导入。将该菌株命名为WC196ΔcadAΔldcCΔmezΔfadR/pCABD2株。
〔实施例12〕<大肠杆菌来源的丙酮酸合酶基因、大肠杆菌来源的黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因表达质粒的构建>
<12-1>大肠杆菌来源的黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因扩增用质粒的构建
以大肠杆菌MG1655株的染色体为模板，使用SEQ ID NO：42、43所示的寡核苷酸进行PCR，扩增了大肠杆菌来源的黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因片段。将基因片段用SmaI消化后，插入pMW-PL-tac的SmaI位点，构建了大肠杆菌来源的黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因扩增用质粒，命名为pMW-PL-tac-fpr。pMW-PL-tac是这样构建的质粒：以WO2006/043730记载的大肠杆菌MG1655PL-tacxylE株的基因组为模板，使用SEQ ID NO：84和SEQ ID NO：85所示的引物，通过PCR方法扩增包含PL-tac的片段，然后，将所得基因片段用HindIII以及SalI切割后，插入到同样用HindIII以及SalI切割的pMW119(Nippon Gene制造)中。该质粒中，可以在所述PL-tac下游克隆基因并加以表达。
<12-2>将大肠杆菌来源的丙酮酸合酶基因插入大肠杆菌来源的黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因表达质粒
用KpnI从实施例5记载的pSTV-ydbK中将丙酮酸合酶基因ydbK切出，插入pMW-PL-tac-fpr的KpnI位点，构建了大肠杆菌来源丙酮酸合酶基因、大肠杆菌来源黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因表达质粒pMW-PL-tac-fpr-ydbK。
〔实施例13〕<大肠杆菌来源的丙酮酸合酶基因、大肠杆菌来源的黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因的表达增强对以油酸作为碳源进行培养时的L-赖氨酸生产能力的效果>
<13-1>将大肠杆菌来源丙酮酸合酶基因、大肠杆菌来源的黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因表达质粒导入WC196ΔcadAΔldcCΔmezΔfadR/pCABD2株
在WC196ΔcadAΔldcCΔmezΔfadR/pCABD2株中通过电穿孔分别导入pMW-PL-tac-fpr-ydbK和比较对照用载体pMW-PL-tac，以氨苄青霉素抗性为指标获得转化体，确认了质粒的导入。将大肠杆菌来源丙酮酸合酶基因、大肠杆菌来源黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因表达增强株命名为WC196ΔcadAΔldcCΔmezΔfadR/pCABD2/pMW-PL-tac-fpr-ydbK，对照株命名为WC196ΔcadAΔldcCΔmezΔfadR/pCABD2/pMW-PL-tac。
<13-2>大肠杆菌来源的丙酮酸合酶基因、大肠杆菌来源的黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因表达增强对以油酸作为碳源进行培养时的L-赖氨酸生产能力的效果
将WC196ΔcadAΔldcCΔmezΔfadR/pCABD2/pMW-PL-tac、WC196ΔcadAΔldcCΔmezΔfadR/pCABD2/pMW-PL-tac-fpr-ydbK这两个菌株接种于LB平板培养基，于37℃预培养过夜。将相当于1/8平板的菌体接种于500mL容量的坂口烧瓶中的20mL下述组成的油酸培养基，37℃、搅拌速度120rpm、需氧条件下培养72小时。使用生物传感器BF-5(王子计测机器)测定了培养基中蓄积的L-赖氨酸。此外，对培养液中的活菌数也进行了测定。两次培养的平均值如表7所示。在大肠杆菌来源的丙酮酸合酶基因、大肠杆菌来源的黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因的表达增强株中，与对照相比，可以观察到L-赖氨酸蓄积的提高。
〔油酸培养基组成〕
油酸钠                10g/L
Tween80               5g/L
MgSO4·7H2O           1g/L
(NH4)2SO4             12g/L
KH2PO4                0.5g/L
酵母提取物            1g/L
FeSO4·7H2O           0.01g/L
MnSO4·5H2O           0.01g/L
氨苄青霉素            100mg/L
链霉素                20mg/L
碳酸钙                30g/L
pH7.0(用KOH进行调整)灭菌条件：115℃、10分钟
油酸钠与Tween80混合后灭菌，然后再添加。MgSO4·7H2O和碳酸钙分别单独灭菌，再添加。卡那霉素、链霉素也是单独添加。
【表7】
表7
菌株   Lys(g/L)   活菌数(108/mL)
  WC196ΔcadAΔldcCΔmezΔfadR/pCABD2/pMW-PL-tacWC196ΔcadAΔldcCΔmezΔfadR/pCABD2/pMW-PL-tac-fpr-ydbK   3.174.11   6.000.23
〔实施例14〕<大肠杆菌来源的丙酮酸合酶基因、大肠杆菌来源的黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因表达增强对以乙醇作为碳源进行培养时的L-赖氨酸生产能力的效果>
<14-1>大肠杆菌WC196ΔcadAΔldcC株来源的醇脱氢酶(AdhE)突变株的构建
为了赋予L-赖氨酸生产菌以乙醇同化性，以MG1655Δtdh rhtA*PL-tacadhE*为供体，对L-赖氨酸生产菌WC196ΔcadAΔldcC株进行了P1转导，获得了WC196ΔcadAΔldcC PL-tacadhE*株。
<14-2>大肠杆菌L-赖氨酸生产株WC196ΔcadAΔldcCΔsfcA PL-tacadhE*的构建
按照上述<11-1>的方法，使用SEQ ID NO：70、71的引物作为sfcA破坏用引物，使WC196ΔcadAΔldcC adhE*株中sfcA基因缺失。由此获得了WC196ΔcadAΔldcCΔsfcA PL-tacadhE*株。
<14-3>大肠杆菌L-赖氨酸生产株WC196ΔcadAΔldcCΔmezPL-tacadhE*/pCABD2的构建
按照上述<11-1>的方法，使用SEQ ID NO：72、73的引物作为b2463破坏用引物，使WC196ΔcadAΔldcCΔsfcA adhE*株中b2463基因缺失。由此得到了WC196ΔcadAΔldcCΔsfcAΔb2463 PL-tacadhE*株。将该菌株命名为WC196ΔcadAΔldcCΔmez PL-tacadhE*株。在该菌株中通过电穿孔导入质粒pCABD2，以链霉素抗性为指标获得了转化体，确认了质粒的导入。将该株命名为WC196ΔcadAΔldcCΔmez PL-tacadhE*/pCABD2株。
<14-4>将大肠杆菌来源的丙酮酸合酶基因、大肠杆菌来源的黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因表达质粒导入WC196ΔcadAΔldcCΔmezPL-tacadhE*/pCABD2株
在WC196ΔcadAΔldcCΔmez PL-tacadhE*/pCABD2株中通过电穿孔分别导pMW-PL-tac-fpr-ydbK、比较对照用载体pMW-PL-tac，以氨苄青霉素抗性为指标获得了转化体，确认了质粒的导入。将大肠杆菌来源丙酮酸合酶基因、大肠杆菌来源黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因表达增强的菌株命名为WC196ΔcadAΔldcCΔmez PL-tacadhE*/pCABD2/pMW-PL-tac-fpr-ydbK，对照株命名为WC196ΔcadAΔldcCΔmez PL-tacadhE*/pCABD2/pMW-PL-tac。
<14-5>大肠杆菌来源的丙酮酸合酶基因、大肠杆菌来源的黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因的表达增强对以乙醇作为碳源进行培养时的L-赖氨酸生产能力的效果
将WC196ΔcadAΔldcCΔmez PL-tacadhE*/pCABD2/pMW-PL-tac、WC196ΔcadAΔldcCΔmez PL-tacadhE*/pCABD2/pMW-PL-tac-fpr-ydbK这两个菌株接种于LB平板培养基，于37℃预培养过夜。将相当于1/8平板的菌体接种于500mL容量的坂口烧瓶中的20mL下述组成的乙醇培养基，37℃、搅拌速度120rpm、需氧条件下培养120小时。培养第120小时，取样1mL，使用生物传感器BF-5(王子计测机器)测定了培养基中蓄积的L-赖氨酸。此外，还测定了培养液的浊度。两次培养的平均值如表8所示。大肠杆菌来源的丙酮酸合酶基因、大肠杆菌来源的黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因表达增强株中，与对照相比，可以观察到L-赖氨酸蓄积的提高。
〔乙醇培养基组成〕
乙醇                         20mL/L
MgSO4·7H2O                  1g/L
(NH4)2SO4                    12g/L
KH2PO4                       0.5g/L
酵母提取物                   1g/L
FeSO4·7H2O                  0.01g/L
MnSO4·5H2O                  0.01g/L
氨苄青霉素                   100mg/L
链霉素                       20mg/L
碳酸钙                       30g/L
pH7.0(用KOH进行调整)灭菌条件：115℃、10分钟
MgSO4·7H2O和碳酸钙分别单独灭菌后再添加。乙醇、卡那霉素、链霉素也单独添加。
【表8】
表8
菌株   Lys(g/L)   EtOH(％V/V) OD600
  WC196ΔcadAΔldcCΔmez PL-tacadhE*/pCABD2/pMW-PL-tacWC196ΔcadAΔldcCΔmez PL-tacadhE*/pCABD2/pMW-PL-tac-fpr-ydbK   2.152.52   0.000.00   12.010.0
〔实施例15〕<大肠杆菌来源的丙酮酸合酶基因表达质粒的构建及该基因增强对以油酸作为碳源进行培养时的L-赖氨酸生产能力的效果>
<15-1>大肠杆菌来源的丙酮酸合酶基因表达质粒的构建
以大肠杆菌MG1655株的染色体为模板，使用SEQ ID NO：74、75所示的寡核苷酸进行PCR，扩增了丙酮酸合酶基因片段。将所得基因片段用KpnI消化，插入到pMW-PL-tac的KpnI位点，构建了大肠杆菌来源丙酮酸合酶基因表达质粒pMW-PL-tac-ydbK。
<15-2>将大肠杆菌来源的丙酮酸合酶基因表达质粒导入WC196ΔcadAΔldcCΔmezΔfadR/pCABD2株
向WC196ΔcadAΔldcCΔmezΔfadR/pCABD2株中通过电穿孔分别导入pMW-PL-tac-ydbK、比较对照用载体pMW-PL-tac，以氨苄青霉素抗性为指标获得了转化体，确认了质粒的导入。将大肠杆菌来源的丙酮酸合酶基因表达增强株命名为WC196ΔcadAΔldcCΔmezΔfadR/pCABD2/pMW-PL-tac-ydbK，对照株命名为WC196ΔcadAΔldcCΔmezΔfadR/pCABD2/pMW-PL-tac。
<15-3>大肠杆菌来源的丙酮酸合酶基因表达增强对以油酸作为碳源进行培养时的L-赖氨酸生产能力的效果
将WC196ΔcadAΔldcCΔmezΔfadR/pCABD2/pMW-PL-tac、WC196ΔcadAΔldcCΔmezΔfadR/pCABD2/pMW-PL-tac-ydbK这两个菌株接种于LB平板培养基，于37℃预培养过夜。将相当于1/8平板的菌体接种于500mL容量的坂口烧瓶中的20mL下述组成的油酸培养基，37℃、搅拌速度120rpm、需氧条件下培养72小时培养。使用生物传感器BF-5(王子计测机器)测定了培养基中蓄积的L-赖氨酸。三次培养的平均值如表9所示。在大肠杆菌来源丙酮酸合酶基因表达增强的菌株中，与对照相比，可以观察到L-赖氨酸蓄积的提高。
〔油酸培养基组成〕
油酸钠                    10g/L
Tween80                   5g/L
MgSO4·7H2O               1g/L
(NH4)2SO4                 12g/L
KH2PO4                    0.5g/L
酵母提取物                1g/L
FeSO4·7H2O               0.01g/L
MnSO4·5H2O               0.01g/L
氨苄青霉素                100mg/L
链霉素                    20mg/L
碳酸钙                    30g/L
pH7.0(用KOH进行调整)灭菌条件：115℃、10分钟
油酸钠与Tween80混合后灭菌，然后再添加。MgSO4·7H2O和碳酸钙分别单独灭菌，再添加。氨苄青霉素、链霉素也单独添加。
表9
  菌株   Lys(g/L)
  WC196ΔcadAΔldcCΔmezΔfadR/pCABD2/pMW-PL-tacWC196ΔcadAΔldcCΔmezΔfadR/pCABD2/pMW-PL-tac-ydbK   2.954.05
〔实施例16〕<海藻甲烷球菌来源的丙酮酸合酶表达质粒的构建与活性测定>
<16-1>海藻甲烷球菌来源的丙酮酸合酶基因表达质粒的构建
以海藻甲烷球菌ATCC43000株的染色体为模板，使用SEQ ID NO：76、77所示的寡核苷酸进行PCR，扩增了丙酮酸合酶基因片段。将所得基因片段用SacI消化，插入到pMW-PL-tac的SacI位点，构建了海藻甲烷球菌来源丙酮酸合酶基因表达质粒pMW-PL-tac-MmPS。
<16-2>海藻甲烷球菌来源的丙酮酸合酶的活性测定
在大肠杆菌JM109株(TakaraBio)中通过电穿孔分别导入pMW-PL-tac-MmPS、比较对照用载体pMW-PL-tac，以氨苄青霉素抗性为指标获得了转化体，确认了质粒的导入。海藻甲烷球菌来源丙酮酸合酶基因表达株命名为JM109/pMW-PL-tac-MmPS，对照株命名为JM109/pMW-PL-tac。
将上述菌株接种于含100mg/L氨苄青霉素的LB培养基，37℃振荡培养过夜。通过离心分离回收菌体、按照实施例2所述的绿硫菌来源的丙酮酸合酶基因表达株的活性测定方法测定了活性。结果如表10所示。对照株JM109/pMW-PL-tac中，未确认到丙酮酸合酶的活性，而海藻甲烷球菌来源丙酮酸合酶基因表达株JM109/pMW-PL-tac-MmPS中，确认到了7.1U/mg的活性。比活性的单位与表1相同。
【表10】
表10
  质粒   比活性
  pMW-PL-tac   0.0
  pMW-PL-tac-MmPS   7.1
〔实施例17〕<海藻甲烷球菌来源的丙酮酸合酶基因的基因表达增强对以油酸作为碳源进行培养时的L-赖氨酸生产能力的效果>
<17-1>将海藻甲烷球菌来源丙酮酸合酶基因表达质粒导入WC196ΔcadAΔldcCΔmezΔfadR/pCABD2株
在WC196ΔcadAΔldcCΔmezΔfadR/pCABD2株中通过电穿孔分别导入pMW-PL-tac-MmPS和比较对照用载体pMW-PL-tac，以氨苄青霉素抗性为指标获得了转化体，确认了质粒的导入。将海藻甲烷球菌来源丙酮酸合酶基因表达增强株命名为WC196ΔcadAΔldcCΔmezΔfadR/pCABD2/pMW-PL-tac-MmPS，对照株命名为WC196ΔcadAΔldcCΔmezΔfadR/pCABD2/pMW-PL-tac。
<17-2>海藻甲烷球菌来源的丙酮酸合酶基因的表达增强对以油酸作为碳源进行培养时的L-赖氨酸生产能力的效果
将WC196ΔcadAΔldcCΔmezΔfadR/pCABD2/pMW-PL-tac、WC196ΔcadAΔldcCΔmezΔfadR/pCABD2/pMW-PL-tac-MmPS这两个菌株接种于LB平板培养基，于37℃预培养过夜。将相当于1/8平板的菌体接种于500mL容量的坂口烧瓶中的20mL下述组成的油酸培养基，37℃、搅拌速度120rpm、需氧条件下培养72小时培养。使用生物传感器BF-5(王子计测机器)测定了培养基中蓄积的L-赖氨酸。此外，对培养液中的活菌数也进行了测定。三次培养的平均值如表11所示。海藻甲烷球菌来源丙酮酸合酶基因表达增强株中，与对照相比，可以观察到L-赖氨酸蓄积的提高。
〔油酸培养基组成〕
油酸钠                  10g/L
Tween80                 5g/L
MgSO4·7H2O             1g/L
(NH4)2SO4               12g/L
KH2PO4                  0.5g/L
酵母提取物              1g/L
FeSO4·7H2O             0.01g/L
MnSO4·5H2O             0.01g/L
氨苄青霉素              100mg/L
链霉素                  20mg/L
碳酸钙                  30g/L
pH7.0(用KOH进行调整)灭菌条件：115℃、10分钟
油酸钠与Tween80混合后灭菌，然后再添加。MgSO4·7H2O和碳酸钙分别单独灭菌，再添加。氨苄青霉素、链霉素也单独添加。
【表11】
表11
  菌株   Lys(g/L)
  WC196ΔcadAΔldcCΔmezΔfadR/pCABD2/pMW-PL-tacWC196ΔcadAΔIdcCΔmezΔfadR/pCABD2/pMW-PL-tac-MmPS   2.904.22
〔实施例18〕<海藻甲烷球菌来源的丙酮酸合酶基因的基因表达增强对以乙醇作为碳源进行培养时的L-赖氨酸生产能力的效果>
<18-1>将海藻甲烷球菌来源的丙酮酸合酶基因基因表达质粒导入WC196ΔcadAΔldcCΔmez adhE*/pCABD2株
在WC196ΔcadAΔldcCΔmez adhE*/pCABD2株中，通过电穿孔分别导入pMW-PL-tac-MmPS、比较对照用载体pMW-PL-tac，以氨苄青霉素抗性为指标获得了转化体，确认了质粒的导入。将海藻甲烷球菌来源的丙酮酸合酶基因表达增强株命名为WC196ΔcadAΔldcCΔmez PL-tacadhE*/pCABD2/pMW-PL-tac-MmPS，对照株命名为WC196ΔcadAΔldcCΔmez PL-tacadhE*/pCABD2/pMW-PL-tac。
<18-2>海藻甲烷球菌来源丙酮酸合酶基因表达增强对以乙醇作为碳源进行培养时的L-赖氨酸生产能力的效果
将WC196ΔcadAΔldcCΔmez PL-tacadhE*/pCABD2/pMW-PL-tac、WC196ΔcadAΔldcCΔmez PL-tacadhE*/pCABD2/pMW-PL-tac-MmPS这两个菌株接种于LB平板培养基，于37℃预培养过夜。将相当于1/8平板的菌体接种于500mL容量坂口烧瓶中的20mL下述组成的乙醇培养基，37℃、搅拌速度120rpm、需氧条件下培养96小时培养。培养第96小时，取样1mL，使用生物传感器BF-5(王子计测机器)测定了培养基中蓄积的L-赖氨酸。此外，还测定了培养液的浊度。两次培养的平均值如表12所示。海藻甲烷球菌来源的丙酮酸合酶基因表达增强株中，与对照相比，可以观察到L-赖氨酸蓄积的提高。
〔乙醇培养基组成〕
乙醇                    20mL/L
MgSO4·7H2O             1g/L
(NH4)2SO4               12g/L
KH2PO4                  0.5g/L
酵母提取物              1g/L
FeSO4·7H2O             0.01g/L
MnSO4·5H2O             0.01g/L
氨苄青霉素              100mg/L
链霉素                  20mg/L
碳酸钙                  30g/L
pH70(用KOH进行调整)灭菌条件：115℃、10分钟
MgSO4·7H2O与碳酸钙分别单独灭菌，然后再添加。乙醇、氨苄青霉素、链霉素也单独添加。
【表12】
表12
菌株   Lys(g/L)   EtOH(％V/V) OD620
  WC196ΔcadAΔldcCΔmez PL-tacadhE*/pCABD2/pMW-PL-tacWC196ΔcadAΔldcCΔmezPL-tacadhE*/pCABD2/pMW-PL-tac-MmPS   2.192.67   0.100.14   13.912.0
〔实施例19〕<大肠杆菌来源的丙酮酸合酶基因高表达质粒pPL-ydbK3的构建>
<19-1>大肠杆菌MG1655 cat-PL-ydbK株的构建
为了制作大肠杆菌来源的丙酮酸合酶基因的高表达质粒，将基因组上的ydbK基因的启动子更换为PL启动子。启动子取代利用Datsenko和Wanner的方法(Datsenko，K.A.and Wanner，B.L.2000.Proc.Natl.Acad.Sci.USA.97：6640-6645)以及λ噬菌体来源的切出系统(Cho，E.H.et al.2002.J.Bacteriol.184：5200-5203)来进行。制备了ydbK-attR(SEQ ID NO：78)和PL-ydbK(SEQ ID NO：79)作为引物，所述ydbK-attR具有attR、ydbK基因的上游序列、以及BW25113 cat-PL-yddG株基因组上的Cmr基因的相邻区域的序列，所述PL-ydbK具有ydbK基因的上游区域和存在于BW25113cat-PL-yddG株基因组中的PL启动子的下游区域的序列。关于BW25113cat-PL-yddG株，在欧洲专利申请公开EP1449918A1或者俄罗斯专利申请公开RU2222596中有具体记载。以BW25113 cat-PL-yddG株基因组为模板，使用SEQ ID NO：78以及79所示的合成寡核苷酸作为引物进行了PCR。将所得PCR产物通过电穿孔导入大肠杆菌MG1655/pKD46株，选择Cm抗性重组体。为了除去pKD46，将其涂布在含Cm的LB平板培养基上，42℃进行两轮培养后，选择出氨苄青霉素敏感型株。将这样得到的菌株命名为MG1655 cat-PL-ydbK株。
<19-2>质粒pPL-ydbK3的构建
使用GenElute Bacterial Genomic DNA Kit(Sigma-Aldrich公司)制备了MG1655 cat-PL-ydbK株的基因组。将基因组DNA和质粒pMW119用SalI切割后，进行混合并连接。用反应液转化MG1655株，选择Cm抗性株。对于cat-PL-ydbK的构建，通过以质粒DNA为模板，以ydbKC1(SEQ ID NO：80)和ydbK CH2(SEQ ID NO：81)为引物，通过PCR进行了确认。得到了包含长度11.2kb的插入的质粒pMW119 cat-PL-ydbK big-1。将质粒pMW119cat-PL-ydbK big-1用限制酶SmlI(New England Biolabs公司)消化后，用克列诺片段进行标准处理(Sambrook，J.et al.1989.Molecular CloningA LaboratoryManual/Second Edition，Cold Spring Harbor Laboratory Press，New York)。将pMW119用SmaI消化后，将两质粒的切割产物混合并进行连接。用反应液转化MG1655株，选择Cmr株。从Cm抗性株抽提出质粒，通过BamHI消化确认了其长度。这样得到了具有所得6.7kb的cat-PL-ydbK片段的质粒pPLydbK3。
〔实施例20〕<大肠杆菌来源的丙酮酸合酶基因的表达增强对以乙醇作为碳源进行培养时的L-苏氨酸生产能力的效果>
为了研究大肠杆菌来源的丙酮酸合酶基因的扩增对L-苏氨酸生产能力的效果，将实施例1中制作的MG1655Δtdh rhtA*PL-tac adhE*用质粒pVIC40转化。质粒pVIC40是美国专利第5,705,371号所述的L-苏氨酸生产质粒。将MG1655Δtdh rhtA*PL-tacadhE*/pVIC40进一步用pPLydbK3转化，得到了MG1655Δtdh rhtA*PL-tacadhE*/pVIC40/pPLydbK3株。将所述菌株用营养培养液(nutrient broth)于37℃培养18小时后，将0.1ml的培养液添加到20×200mm的试管中的2mlL-苏氨酸生产用乙醇培养基中，32℃回旋培养72小时。对于第48小时和第72小时的培养基中的L-苏氨酸量，通过纸层析进行了考察，所述纸层析的流动相由丁醇∶乙酸∶水＝4∶1∶1(v/v)。使用含2％茚三酮的丙酮溶液作为显现试剂。切取包含L-苏氨酸的点，在0.5％的CdCl2水溶液中洗脱后，依据540nm处的吸收进行了定量。10根试管的培养结果如表13所示。与非增强株MG1655Δtdh rhtA*PL-tacadhE*/pVIC40相比，大肠杆菌来源的丙酮酸合酶基因表达增强的MG1655Δtdh rhtA*PL-tacadhE*/pVIC40/pPLydbK3显示了更高的L-苏氨酸蓄积。
〔L-苏氨酸生产用乙醇培养基组成〕
乙醇                    20g/L
(NH4)2SO4               22g/L
K2HPO4                  2g/L
MgSO4·7H2O             0.8g/L
MnSO4·5H2O           0.02g/L
FeSO4·7H2O           0.02g/L
维生素B1              0.002g/L
酵母提取物            1.0g/L
CaCO3                 30g/L
pH7.0、K2HPO4和CaCO3分别单独灭菌后再添加。乙醇也单独添加。
【表13】
表13
Figure GPA00001043068400721
〔实施例21〕<大肠杆菌来源的丙酮酸合酶基因的表达增强对以乙醇作为碳源进行培养时的L-缬氨酸生产能力的效果>
为了考察大肠杆菌来源的丙酮酸合酶基因表达增强对L-缬氨酸生产能力的效果，从MG1655::PL-tacadhE*株对L-缬氨酸生产菌H-81株进行P1转导，得到了H-81 PL-tacadhE*株。进一步，将H-81 PL-tacadhE*株用pPLydbK3转化，得到了H-81 PL-tacadhE*/pPLydbK3株。将这些菌株用营养培养液(nutrient broth)于37℃培养18小时后，将0.1ml的培养液添加到20×200mm的试管中的2ml L-缬氨酸生产用乙醇培养基中，32℃转动培养72小时。第48小时和第72小时，通过TLC对培养基中的L-缬氨酸量进行了定量。使用包被有0.11mm Sorbfil硅胶的不含荧光试剂的10×15cmTLC平板(StockCompany Sorbpolymer，Krasnodar，Russia)，利用由异丙醇∶乙酸乙酯∶25％氨水∶水＝40∶40∶7∶16(v/v)构成的流动相进行展开后，以2％茚三酮丙酮溶液作为显现试剂来进行定量。10根试管的培养结果如表14所示。与非增强株H-81 PL-tacadhE*株相比，大肠杆菌来源丙酮酸合酶基因表达增强的H-81 PL-tacadhE*/pPLydbK3株显示了更高的L-缬氨酸蓄积。
L-缬氨酸生产用乙醇培养基
乙醇                        20g/L
(NH4)2SO4                    15g/L
KH2PO4                       1.5g/L
MgSO4·7H2O                  1g/L
豆浓(mameno)(以总氮计)       0.4g/L
CaCO3                        25g/L
pH7.0、CaCO3单独灭菌。乙醇也单独添加。
【表14】
表14
Figure GPA00001043068400731
〔序列表的说明〕
SEQ ID NO：1：绿硫菌的丙酮酸合酶基因的碱基序列
SEQ ID NO：2：绿硫菌的丙酮酸合酶的氨基酸序列
SEQ ID NO：3：大肠杆菌的丙酮酸合酶基因(ydbK)的碱基序列
SEQ ID NO：4：大肠杆菌的丙酮酸合酶(YdbK)的氨基酸序列
SEQ ID NO：5：纤细裸藻的丙酮酸:NADP+氧化还原酶基因的碱基序列
SEQ ID NO：6：纤细裸藻的丙酮酸:NADP+氧化还原酶的氨基酸序列
SEQ ID NO：7：大肠杆菌的黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因(fpr)的碱基序列
SEQ ID NO：8：大肠杆菌的黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因(fpr)编码的氨基酸序列
SEQ ID NO：9：大肠杆菌的铁氧还蛋白基因(fdx)的碱基序列
SEQ ID NO：10：大肠杆菌的铁氧还蛋白基因(fdx)编码的氨基酸序列
SEQ ID NO：11：大肠杆菌的铁氧还蛋白基因(yfhL)的碱基序列
SEQ ID NO：12：大肠杆菌的铁氧还蛋白基因(yhfL)编码的氨基酸序列
SEQ ID NO：13：大肠杆菌的黄素氧还蛋白基因(fldA)的碱基序列
SEQ ID NO：14：大肠杆菌的黄素氧还蛋白基因(fldA)编码的氨基酸序列
SEQ ID NO：15：大肠杆菌的黄素氧还蛋白基因(fldB)的碱基序列
SEQ ID NO：16：大肠杆菌的黄素氧还蛋白基因(fldB)编码的氨基酸序列
SEQ ID NO：17：绿硫菌的铁氧还蛋白I基因的碱基序列
SEQ ID NO：18：绿硫菌的铁氧还蛋白I基因编码的氨基酸序列
SEQ ID NO：19：绿硫菌的铁氧还蛋白II基因的碱基序列
SEQ ID NO：20：绿硫菌的铁氧还蛋白II基因编码的氨基酸序列
SEQ ID NO：21：大肠杆菌的醇脱氢酶基因(adhE)的碱基序列
SEQ ID NO：22：大肠杆菌的醇脱氢酶(AdhE)的氨基酸序列
SEQ ID NO：23：PL-tac和氯霉素抗性(CmR)基因扩增引物1
SEQ ID NO：24：PL-tac和氯霉素抗性(CmR)基因扩增引物2
SEQ ID NO：25：PL-tac的碱基序列
SEQ ID NO：26：PL-tac和氯霉素抗性(CmR)基因扩增引物3
SEQ ID NO：27：PL-tac和氯霉素抗性(CmR)基因扩增引物4
SEQ ID NO：28：卡那霉素抗性(KmR)基因扩增引物1
SEQ ID NO：29：卡那霉素抗性(KmR)基因扩增引物2
SEQ ID NO：30：卡那霉素抗性(KmR)基因扩增引物3
SEQ ID NO：31：卡那霉素抗性(KmR)基因扩增引物4
SEQ ID NO：32：大肠杆菌的突变型醇脱氢酶基因扩增引物1
SEQ ID NO：33：大肠杆菌的突变型醇脱氢酶基因扩增引物2
SEQ ID NO：34：大肠杆菌的突变型醇脱氢酶基因扩增引物3
SEQ ID NO：35：绿硫菌的丙酮酸合酶基因扩增引物1
SEQ ID NO：36：绿硫菌的丙酮酸合酶基因扩增引物2
SEQ ID NO：37：大肠杆菌的苏氨酸操纵子启动子序列
SEQ ID NO：38：大肠杆菌的丙酮酸合酶基因扩增引物1
SEQ ID NO：39：大肠杆菌的丙酮酸合酶基因扩增引物2
SEQ ID NO：40：纤细裸藻的丙酮酸:NADP+氧化还原酶基因扩增引物1
SEQ ID NO：41：纤细裸藻的丙酮酸:NADP+氧化还原酶基因扩增引物2
SEQ ID NO：42：大肠杆菌的黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因扩增用引物1
SEQ ID NO：43：大肠杆菌的黄素氧还蛋白-NADP+还原酶基因扩增用引物2
SEQ ID NO：44：大肠杆菌的fdx基因扩增用引物1
SEQ ID NO：45：大肠杆菌的fdx基因扩增用引物2
SEQ ID NO：46：大肠杆菌的丙酮酸脱氢酶Ep1亚基基因(aceE)的碱基序列
SEQ ID NO：47：大肠杆菌的丙酮酸脱氢酶Ep1亚基的氨基酸序列
SEQ ID NO：48：大肠杆菌的丙酮酸脱氢酶E2亚基基因(aceF)的碱基序列
SEQ ID NO：49：大肠杆菌的丙酮酸脱氢酶E2亚基的氨基酸序列
SEQ ID NO：50：大肠杆菌的丙酮酸脱氢酶E3亚基基因(1pdA)的碱基序列
SEQ ID NO：51：大肠杆菌的丙酮酸脱氢酶E3亚基的氨基酸序列
SEQ ID NO：52：编码大肠杆菌的NAD型苹果酸酶的基因(sfcA)的碱基序列
SEQ ID NO：53：大肠杆菌的sfcA基因编码的苹果酸酶的氨基酸序列
SEQ ID NO：54：编码大肠杆菌的NADP型苹果酸酶的基因(b2463)的碱基序列
SEQ ID NO：55：大肠杆菌的b2463基因编码的苹果酸酶的氨基酸序列
SEQ ID NO：56：海藻甲烷球菌的丙酮酸合酶γ亚基基因(porA)的碱基序列
SEQ ID NO：57：海藻甲烷球菌的丙酮酸合酶γ亚基的氨基酸序列
SEQ ID NO：58：海藻甲烷球菌的丙酮酸合酶δ亚基基因(porB)的碱基序列
SEQ ID NO：59：海藻甲烷球菌的丙酮酸合酶δ亚基的氨基酸序列
SEQ ID NO：60：海藻甲烷球菌的丙酮酸合酶α亚基基因(porC)的碱基序列
SEQ ID NO：61：海藻甲烷球菌的丙酮酸合酶α亚基的氨基酸序列
SEQ ID NO：62：海藻甲烷球菌的丙酮酸合酶β亚基基因(porD)的碱基序列
SEQ ID NO：63：海藻甲烷球菌的丙酮酸合酶β亚基的氨基酸序列
SEQ ID NO：64：海藻甲烷球菌的丙酮酸合酶porE基因的碱基序列
SEQ ID NO：65：海藻甲烷球菌的丙酮酸合酶PorE的氨基酸序列
SEQ ID NO：66：海藻甲烷球菌的丙酮酸合酶porF基因的碱基序列
SEQ ID NO：67：海藻甲烷球菌的丙酮酸合酶PorF的氨基酸序列
SEQ ID NO：68：fadR基因破坏用PCR引物1
SEQ ID NO：69：fadR基因破坏用PCR引物2
SEQ ID NO：70：sfcA基因破坏用PCR引物1
SEQ ID NO：71：sfcA基因破坏用PCR引物2
SEQ ID NO：72：b2463基因破坏用PCR引物1
SEQ ID NO：73：b2463基因破坏用PCR引物2
SEQ ID NO：74：大肠杆菌的丙酮酸合酶基因扩增引物1
SEQ ID NO：75：大肠杆菌的丙酮酸合酶基因扩增引物2
SEQ ID NO：76：海藻甲烷球菌的丙酮酸合酶基因扩增引物1
SEQ ID NO：77：海藻甲烷球菌的丙酮酸合酶基因扩增引物2
SEQ ID NO：78：大肠杆菌的丙酮酸合酶基因启动子取代用扩增引物1
SEQ ID NO：79：大肠杆菌的丙酮酸合酶基因启动子取代用扩增引物2
SEQ ID NO：80：cat-PL-ydbK结构确认用引物1
SEQ ID NO：81：cat-PL-ydbK结构确认用引物2
SEQ ID NO：82：大肠杆菌的fadR基因的碱基序列
SEQ ID NO：83：大肠杆菌的FadR的氨基酸序列
SEQ ID NO：84：PL-tac扩增引物1
SEQ ID NO：85：PL-tac扩增引物2
工业实用性
通过使用本发明的微生物，能够高效地发酵生产L-氨基酸。此外，在本发明的方法的优选实施方式中，通过抑制脱碳酸、利用碳酸固定反应，能够降低二氧化碳排放，是环境友好的方法。
序列表
<110>味之素株式会社(Ajinomoto Co.，Inc.)0
 
<120>生产氨基酸的微生物以及氨基酸的生产方法
 
<130>C985-C8187
 
<150>JP2007-228733
<151>2007-09-04
 
<150>RU2007147434
<151>2007-12-21
 
<160>85
 
<170>PatentIn version 3.5
 
<210>1
<211>3558
<212>DNA
<213>绿硫菌(Chlorobium tepidum)
 
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(3558)
 
<400>1
atg acc cgg aca ttc aag aca atg gag ggg aat gaa gct ctt gct cat    48
Met Thr Arg Thr Phe Lys Thr Met Glu Gly Asn Glu Ala Leu Ala His
1               5                   10                  15
gtc gcc tat cgc act aat gaa gtc atc tcg ata tac ccg att acc ccg    96
Val Ala Tyr Arg Thr Asn Glu Val Ile Ser Ile Tyr Pro Ile Thr Pro
              20                  25                  30
gca tct ccg atg gga gag tac tcc gac gca tgg gcc gct gtc gat gta    144
Ala Ser Pro Met Gly Glu Tyr Ser Asp Ala Trp Ala Ala Val Asp Val
        35                  40                  45
aaa aat atc tgg ggt acc gtg cca ctc gtc aat gag atg cag agc gaa    192
Lys Asn Ile Trp Gly Thr Val Pro Leu Val Asn Glu Met Gln Ser Glu
    50                  55                  60
gcc ggt gcc gcc gcc gcc gtt cac ggc gcg ttg cag acc ggc gcg ctg    240
Ala Gly Ala Ala Ala Ala Val His Gly Ala Leu Gln Thr Gly Ala Leu
65                  70                  75                  80
acg acc acc ttc acg gcc tct cag ggt ctc tta ctg atg atc ccg aac    288
Thr Thr Thr Phe Thr Ala Ser Gln Gly Leu Leu Leu Met Ile Pro Asn
                85                  90                  95
atg tac aag atc gcc ggt gaa ctg acc ccc tgc gtg att cac gtg tca    336
Met Tyr Lys Ile Ala Gly Glu Leu Thr Pro Cys Val Ile His Val Ser
            100                 105                 110
gcc cgt tcg ctg gcc gcg cag gcg ctc tcg ata ttc tgc gac cac ggt    384
Ala Arg Ser Leu Ala Ala Gln Ala Leu Ser Ile Phe Cys Asp His Gly
        115                 120                 125
gac gtg atg tcg gtc agg ggc acc ggc ttc gcg ctg ctc gct tcc tgt    432
Asp Val Met Ser Val Arg Gly Thr Gly Phe Ala Leu Leu Ala Ser Cys
    130                 135                 140
tcg gta cag gag gta atg gac atg gcg ctg att tcg cag gcc gca acg    480
Ser Val Gln Glu Val Met Asp Met Ala Leu Ile Ser Gln Ala Ala Thr
145                 150                 155                 160
ctc gaa tcg cgc gtg cca ttc ctg cac ttc ttc gac ggc ttc cgc acg    528
Leu Glu Ser Arg Val Pro Phe Leu His Phe Phe Asp Gly Phe Arg Thr
                165                 170                 175
tcg cac gaa atc tcg aaa atc gag gtg ctc tcg gac gaa cag att cgc    576
Ser His Glu Ile Ser Lys Ile Glu Val Leu Ser Asp Glu Gln Ile Arg
            180                 185                 190
tcg atg atc aac gac gag ctg gtc ttc gca cac cgc atg cgc cgc atg    624
Ser Met Ile Asn Asp Glu Leu Val Phe Ala His Arg Met Arg Arg Met
        195                 200                 205
tcg cct gat gca ccg atc atc cgc ggt acc tcg cag aat ccg gac gtc    672
Ser Pro Asp Ala Pro Ile Ile Arg Gly Thr Ser Gln Asn Pro Asp Val
     210                 215                 220
tat ttc cag gca cgc gag agc gtc aac aaa tat tat gag gcc tgc ccg    720
Tyr Phe Gln Ala Arg Glu Ser Val Asn Lys Tyr Tyr Glu Ala Cys Pro
225                 230                 235                 240
tca atc acc cag aag gcg atg gac cag ttc gcc aaa ctg act ggg cgc    768
Ser Ile Thr Gln Lys Ala Met Asp Gln Phe Ala Lys Leu Thr Gly Arg
                245                 250                 255
agc tat aaa ctt tac cag tac tac ggc gct ccg gat gcc gac cgt atc    816
Ser Tyr Lys Leu Tyr Gln Tyr Tyr Gly Ala Pro Asp Ala Asp Arg Ile
            260                 265                 270
atc atc atg atg ggg tca ggt gcc gag acc gct ctc gaa act gtc gaa    864
Ile Ile Met Met Gly Ser Gly Ala Glu Thr Ala Leu Glu Thr Val Glu
        275                 280                 285
tac ctc aac aac cac ggc gaa aag gtc ggt ctg gtc aag gta cgc ctt    912
Tyr Leu Asn Asn His Gly Glu Lys Val Gly Leu Val Lys Val Arg Leu
    290                 295                 300
ttc agg cca ttc gac gtt gca acc ttc atc gca tcg cta cca tcg agc    960
Phe Arg Pro Phe Asp Val Ala Thr Phe Ile Ala Ser Leu Pro Ser Ser
305                 310                 315                 320
gtg aag agt atc gcg gtg ctc gac cgt gtc aag gaa cca ggc agc gct    1008
Val Lys Ser Ile Ala Val Leu Asp Arg Val Lys Glu Pro Gly Ser Ala
                325                 330                 335
ggc gaa ccg ctc tat ctc gat gta gtc aac gcc gta gcc gaa tcg tac    1056
Gly Glu Pro Leu Tyr Leu Asp Val Val Asn Ala Val Ala Glu Ser Tyr
            340                 345                 350
cag gaa ggc aaa tgc gct tcg atg cca agc gtt ttg ggt ggg cgc tat    1104
Gln Glu Gly Lys Cys Ala Ser Met Pro Ser Val Leu Gly Gly Arg Tyr
        355                 360                 365
ggc ctg tcg tcg aag gag ttc act ccg gcg atg gtc aag gcg atc ttc    1152
Gly Leu Ser Ser Lys Glu Phe Thr Pro Ala Met Val Lys Ala Ile Phe
    370                 375                 380
gac aat atg aac gcg gaa tct cca aag aat cac ttc acc gtt ggc atc    1200
Asp Asn Met Asn Ala Glu Ser Pro Lys Asn Hi s Phe Thr Val Gly Ile
385                 390                 395                 400
gac gat gac gta acc aag aag agc ctc gcc tac gac gag acc ttc tcg    1248
Asp Asp Asp Val Thr Lys Lys Ser Leu Ala Tyr Asp Glu Thr Phe Ser
                405                 410                 415
att gag ccg gac tcg gtc ttc cgc gcc ctc ttc tac ggc ctc ggt tca    1296
Ile Glu Pro Asp Ser Val Phe Arg Ala Leu Phe Tyr Gly Leu Gly Ser
            420                 425                 430
gac ggc acg gtc ggt gca aac aag aac tcg atc aag atc att ggc gaa    1344
Asp Gly Thr Val Gly Ala Asn Lys Asn Ser Ile Lys Ile Ile Gly Glu
        435                 440                 445
aac acc gac aac tac gcg cag ggc ttc ttc gtc tac gac tcc aag aaa    1392
Asn Thr Asp Asn Tyr Ala Gln Gly Phe Phe Val Tyr Asp Ser Lys Lys
    450                 455                 460
gcc ggt tcg atc acg acc tcg cac ctg cgg ttc ggc ccg gag cag atc    1440
Ala Gly Ser Ile Thr Thr Ser His Leu Arg Phe Gly Pro Glu Gln Ile
465                 470                 475                 480
cgc tcg acc tac ctc atc acc gag gcg cag ttc gtc ggc tgc cac cac    1488
Arg Ser Thr Tyr Leu Ile Thr Glu Ala Gln Phe Val Gly Cys His His
                485                 490                 495
tgg gtc ttt ctc gaa atg atc gac gtt gcc aag aac ctc aag cag ggt    1536
Trp Val Phe Leu Glu Met Ile Asp Val Ala Lys Asn Leu Lys Gln Gly
            500                 505                 510
ggt acg ctg ctc atc aac tcg gcc tat gcg ccg gat gtg gtg tgg agc    1584
Gly Thr Leu Leu Ile Asn Ser Ala Tyr Ala Pro Asp Val Val Trp Ser
        515                 520                 525
aag ctc ccg cgt ccg gtg cag cag cac ttg atc gac aag cag gcg aag    1632
Lys Leu Pro Arg Pro Val Gln Gln His Leu Ile Asp Lys Gln Ala Lys
    530                 535                 540
ctc tac acc atc gat gcc tac aag gtc gcc cac gaa agc ggc atg ggt    1680
Leu Tyr Thr Ile Asp Ala Tyr Lys Val Ala His Glu Ser Gly Met Gly
545                 550                 555                 560
cag cgc atc aac act atc atg cag gcc tgt ttc ttc gcc att tcg ggc    1728
Gln Arg Ile Asn Thr Ile Met Gln Ala Cys Phe Phe Ala Ile Ser Gly
                565                 570                 575
gtg ctg ccg cgt gaa gag gca atc gaa aag atc aag gac gcg atc cgc    1776
Val Leu Pro Arg Glu Glu Ala Ile Glu Lys Ile Lys Asp Ala Ile Arg
            580                 585                 590
cac acc tac ggc aaa aag ggc gat gag gtc gtt cag cag aac atc aag    1824
His Thr Tyr Gly Lys Lys Gly Asp Glu Val Val Gln Gln Asn Ile Lys
        595                 600                 605
gca gtt gac aac acg ctt gcc aac ctg cat gaa gtg aaa atc ggc gct    1872
Ala Val Asp Asn Thr Leu Ala Asn Leu His Glu Val Lys Ile Gly Ala
    610                 615                 620
gtg gca gac agc acc aag gag ctg cgc tcg ccc atc gtt ggc gac gcg     1920
Val Ala Asp Ser Thr Lys Glu Leu Arg Ser Pro Ile Val Gly Asp Ala
625                 630                 635                 640
cca gag ttc gtc tgt aac gtg ctg gca aag att att gcc ggc gag ggc     1968
Pro Glu Phe Val Cys Asn Val Leu Ala Lys Ile Ile Ala Gly Glu Gly
                645                 650                 655
gac tcg att ccg gtc agc aag ctg cct gcc gat gga acc tat ccg ctc     2016
Asp Ser Ile Pro Val Ser Lys Leu Pro Ala Asp Gly Thr Tyr Pro Leu
            660                 665                 670
ggc acc acg aag ttc gag aaa cgc aac ctc gcg cag gag att ccg gtc     2064
Gly Thr Thr Lys Phe Glu Lys Arg Asn Leu Ala Gln Glu Ile Pro Val
        675                 680                 685
tgg gct ccg gag ctg tgc atc gag tgt ggc aag tgc tcg atg gtc tgc     2112
Trp Ala Pro Glu Leu Cys Ile Glu Cys Gly Lys Cys Ser Met Val Cys
    690                 695                 700
ccg cac gct gcc atc cgc atc aag gtt tac gag ccg aag cac ctc gaa     2160
Pro His Ala Ala Ile Arg Ile Lys Val Tyr Glu Pro Lys His Leu Glu
705                 710                 715                 720
aac gcc ccg gca acc ttc aag agc ctc gat gcg aaa gca aaa aac tgg     2208
Asn Ala Pro Ala Thr Phe Lys Ser Leu Asp Ala Lys Ala Lys Asn Trp
                725                 730                 735
gag ggc atg cgc tat acg gtt cag att gca ccg gaa gat tgt acc ggc     2256
Glu Gly Met Arg Tyr Thr Val Gln Ile Ala Pro Glu Asp Cys Thr Gly
            740                 745                 750
tgc caa ctc tgc gtc aac gcc tgc ccc gca aga gac aag cag gtt gaa     2304
Cys Gln Leu Cys Val Asn Ala Cys Pro Ala Arg Asp Lys Gln Val Glu
        755                 760                 765
ggc cgc aaa gcg ctc aac atg cac gag cag gct ccg ctg cgc gaa acc     2352
Gly Arg Lys Ala Leu Asn Met His Glu Gln Ala Pro Leu Arg Glu Thr
    770                 775                 780
gaa tct gcc tgc tgg agc ttc ttc atc aat ctc ccg gaa ttc gac cgc     2400
Glu Ser Ala Cys Trp Ser Phe Phe Ile Asn Leu Pro Glu Phe Asp Arg
785                 790                 795                 800
aac aag atc aac cag cgc ctc atc aaa gag cag cag ctt cag cag cca     2448
Asn Lys Ile Asn Gln Arg Leu Ile Lys Glu Gln Gln Leu Gln Gln Pro
                805                 810                 815
ctc ttc gag ttc tcg ggc gca tgc tcg ggc tgc ggc gaa acg cca tac     2496
Leu Phe Glu Phe Ser Gly Ala Cys Ser Gly Cys Gly Glu Thr Pro Tyr
            820                 825                 830
gtc aag ctg atg act cag ctc ttc ggt gat cgc ctc gtt atc ggc aac     2544
Val Lys Leu Met Thr Gln Leu Phe Gly Asp Arg Leu Val Ile Gly Asn
        835                 840                 845
gcc acc ggc tgc tcg tcg atc tac ggc ggc aac ctg ccg acc acg ccg     2592
Ala Thr Gly Cys Ser Ser Ile Tyr Gly Gly Asn Leu Pro Thr Thr Pro
    850                 855                 860
tat gca gcc aac ccg cag ggc ctt ggg cca acg tgg tcg aac tcg ctt     2640
Tyr Ala Ala Asn Pro Gln Gly Leu Gly Pro Thr Trp Ser Asn Ser Leu
865                 870                 875                 880
ttc gag gac acg gca gag ttc gcg ctt ggt ttc cgg ata tcg atc gac     2688
Phe Glu Asp Thr Ala Glu Phe Ala Leu Gly Phe Arg Ile Ser Ile Asp
                885                 890                 895
aag cag cag caa ttt gcc aaa gag ctg gtc aaa aag ctc gct ggt gac     2736
Lys Gln Gln Gln Phe Ala Lys Glu Leu Val Lys Lys Leu Ala Gly Asp
            900                 905                 910
atc ggt gaa aac ctt gcc acc gcc att ctc aac gcc acg cag aac agt     2784
Ile Gly Glu Asn Leu Ala Thr Ala Ile Leu Asn Ala Thr Gln Asn Ser
        915                 920                 925
gaa ccg gag att ttc gag cag cgt gag cgc gtg gcc gtg ctg aag gat     2832
Glu Pro Glu Ile Phe Glu Gln Arg Glu Arg Val Ala Val Leu Lys Asp
    930                 935                 940
aag ctc cag cag atg aaa tcc gac gat gcc aag aac ctg ctt gct gtg     2880
Lys Leu Gln Gln Met Lys Ser Asp Asp Ala Lys Asn Leu Leu Ala Val
945                 950                 955                 960
gct gac atg ctg gtc aag aag agc gtg tgg gct gtc ggc ggc gac ggc     2928
Ala Asp Met Leu Val Lys Lys Ser Val Trp Ala Val Gly Gly Asp Gly
                965                 970                 975
tgg gcc tac gat atc ggt tac ggg ggt ctc gac cac gtc acc gca tcg     2976
Trp Ala Tyr Asp Ile Gly Tyr Gly Gly Leu Asp His Val Thr Ala Ser
            980                 985                 990
ggc aag aac gtc aac atg ctc gtg ctc gac acc gag gtc tat tcc aat     3024
Gly Lys Asn Val Asn Met Leu Val  Leu Asp Thr Glu Val  Tyr Ser Asn
        995                 1000                 1005
acc ggc  ggt cag gcc tcc aag  gct acg ccg aaa gcc  gcg atc gcc      3069
Thr Gly  Gly Gln Ala Ser Lys  Ala Thr Pro Lys Ala  Ala Ile Ala
    1010                 1015                 1020
aag ttt  gcc gct gcg ggg cgc  atc gct acc aag aaa  gac ctt ggt      3114
Lys Phe  Ala Ala Ala Gly Arg  Ile Ala Thr Lys Lys  Asp Leu Gly
    1025                 1030                 1035
ctg atc  tcg atg agc tac ggc  aat gcc tat gtg gcc  agt gtt gca      3159
Leu Ile  Ser Met Ser Tyr Gly  Asn Ala Tyr Val Ala  Ser Val Ala
    1040                 1045                 1050
ctt ggc  gca cgt gac gag cag  aca ctc aga gct ttc  atc gaa gcc      3204
Leu Gly  Ala Arg Asp Glu Gln  Thr Leu Arg Ala Phe  Ile Glu Ala
    1055                 1060                 1065
gag gcg  tac gat ggc ccg tcg  att atc atc gcc tac  tcg cac tgc      3249
Glu Ala  Tyr Asp Gly Pro Ser  Ile Ile Ile Ala Tyr  Ser His Cys
    1070                 1075                 1080
att gca  cac ggc ttt gac ttg  tct atg ggt ctg gag  cac cag aaa      3294
Ile Ala  His Gly Phe Asp Leu  Ser Met Gly Leu Glu  His Gln Lys
    1085                 1090                 1095
gca gcg  gtc gat tcc ggc cac  tgg ctg ctg tat cgc  tac aat ccc      3339
Ala Ala  Val Asp Ser Gly His  Trp Leu Leu Tyr Arg  Tyr Asn Pro
    1100                 1105                 1110
gac aga  ctc aag gag gga ctg  aat ccg ctg cag ctc  gac tcc aaa      3384
Asp Arg  Leu Lys Glu Gly Leu  Asn Pro Leu Gln Leu  Asp Ser Lys
    1115                 1120                 1125
aag ccg  aaa atg ccg gtc gcg  gag ttc ctg aac atg  gag aac cgc      3429
Lys Pro  Lys Met Pro Val Ala  Glu Phe Leu Asn Met  Glu Asn Arg
    1130                 1135                 1140
ttc aga  ata ctg aag aag acc  cac ccc gat ctg gcc  aag aag tac      3474
Phe Arg  Ile Leu Lys Lys Thr  His Pro Asp Leu Ala  Lys Lys Tyr
    1145                 1150                 1155
ttc gag  gca atc cag cac gag  gtc aat gcc cgc tgg  gca cac tac      3519
Phe Glu  Ala Ile Gln His Glu  Val Asn Ala Arg Trp  Ala His Tyr
    1160                 1165                 1170
gaa cac  ctc gcc aac cgt tcg  att gaa ggc gaa gca  taa              3558
Glu His  Leu Ala Asn Arg Ser  Ile Glu Gly Glu Ala
    1175                 1180                 1185
 
<210>2
<211>1185
<212>PRT
<213>绿硫菌
 
<400>2
Met Thr Arg Thr Phe Lys Thr Met Glu Gly Asn Glu Ala Leu Ala His
1               5                   10                  15
Val Ala Tyr Arg Thr Asn Glu Val Ile Ser Ile Tyr Pro Ile Thr Pro
            20                  25                  30
Ala Ser Pro Met Gly Glu Tyr Ser Asp Ala Trp Ala Ala Val Asp Val
        35                  40                  45
Lys Asn Ile Trp Gly Thr Val Pro Leu Val Asn Glu Met Gln Ser Glu
    50                  55                  60
Ala Gly Ala Ala Ala Ala Val His Gly Ala Leu Gln Thr Gly Ala Leu
65                  70                  75                  80
Thr Thr Thr Phe Thr Ala Ser Gln Gly Leu Leu Leu Met Ile Pro Asn
                85                  90                  95
Met Tyr Lys Ile Ala Gly Glu Leu Thr Pro Cys Val Ile His Val Ser
            100                 105                 110
Ala Arg Ser Leu Ala Ala Gln Ala Leu Ser Ile Phe Cys Asp His Gly
        115                 120                 125
Asp Val Met Ser Val Arg Gly Thr Gly Phe Ala Leu Leu Ala Ser Cys
    130                 135                 140
Ser Val Gln Glu Val Met Asp Met Ala Leu Ile Ser Gln Ala Ala Thr
145                 150                 155                 160
Leu Glu Ser Arg Val Pro Phe Leu His Phe Phe Asp Gly Phe Arg Thr
                165                 170                 175
Ser His Glu Ile Ser Lys Ile Glu Val Leu Ser Asp Glu Gln Ile Arg
            180                 185                 190
Ser Met Ile Asn Asp Glu Leu Val Phe Ala His Arg Met Arg Arg Met
        195                 200                 205
Ser Pro Asp Ala Pro Ile Ile Arg Gly Thr Ser Gln Asn Pro Asp Val
    210                 215                 220
Tyr Phe Gln Ala Arg Glu Ser Val Asn Lys Tyr Tyr Glu Ala Cys Pro
225                 23                 0235                 240
Ser Ile Thr Gln Lys Ala Met Asp Gln Phe Ala Lys Leu Thr Gly Arg
245                 250                 255
Ser Tyr Lys Leu Tyr Gln Tyr Tyr Gly Ala Pro Asp Ala Asp Arg Ile
                260                 265                 270
Ile Ile Met Met Gly Ser Gly Ala Glu Thr Ala Leu Glu Thr Val Glu
            275                 280                 285
Tyr Leu Asn Asn His Gly Glu Lys Val Gly Leu Val Lys Val Arg Leu
        290                 295                 300
Phe Arg Pro Phe Asp Val Ala Thr Phe Ile Ala Ser Leu Pro Ser Ser
305                 310                 315                 320
Val Lys Ser Ile Ala Val Leu Asp Arg Val Lys Glu Pro Gly Ser Ala
                325                 330                 335
Gly Glu Pro Leu Tyr Leu Asp Val Val Asn Ala Val Ala Glu Ser Tyr
            340                 345                 350
Gln Glu Gly Lys Cys Ala Ser Met Pro Ser Val Leu Gly Gly Arg Tyr
        355                 360                 365
Gly Leu Ser Ser Lys Glu Phe Thr Pro Ala Met Val Lys Ala Ile Phe
    370                 375                 380
Asp Asn Met Asn Ala Glu Ser Pro Lys Asn His Phe Thr Val Gly Ile
385                 390                 395                 400
Asp Asp Asp Val Thr Lys Lys Ser Leu Ala Tyr Asp Glu Thr Phe Ser
                405                 410                 415
Ile Glu Pro Asp Ser Val Phe Arg Ala Leu Phe Tyr Gly Leu Gly Ser
            420                 425                 430
Asp Gly Thr Val Gly Ala Asn Lys Asn Ser Ile Lys Ile Ile Gly Glu
        435                 440                 445
Asn Thr Asp Asn Tyr Ala Gln Gly Phe Phe Val Tyr Asp Ser Lys Lys
    450                 455                 460
Ala Gly Ser Ile Thr Thr Ser His Leu Arg Phe Gly Pro Glu Gln Ile
465                 470                 475                 480
Arg Ser Thr Tyr Leu Ile Thr Glu Ala Gln Phe Val Gly Cys His His
                485                 490                 495
Trp Val Phe Leu Glu Met Ile Asp Val Ala Lys Asn Leu Lys Gln Gly
            500                 505                 510
Gly Thr Leu Leu Ile Asn Ser Ala Tyr Ala Pro Asp Val Val Trp Ser
        515                 520                 525
Lys Leu Pro Arg Pro Val Gln Gln His Leu Ile Asp Lys Gln Ala Lys
    530                 535                 540
Leu Tyr Thr Ile Asp Ala Tyr Lys Val Ala His Glu Ser Gly Met Gly
545                 550                 555                 560
Gln Arg Ile Asn Thr Ile Met Gln Ala Cys Phe Phe Ala Ile Ser Gly
                565                 570                 575
Val Leu Pro Arg Glu Glu Ala Ile Glu Lys Ile Lys Asp Ala Ile Arg
            580                 585                 590
His Thr Tyr Gly Lys Lys Gly Asp Glu Val Val Gln Gln Asn Ile Lys
        595                 600                 605
Ala Val Asp Asn Thr Leu Ala Asn Leu His Glu Val Lys Ile Gly Ala
    610                 615                 620
Val Ala Asp Ser Thr Lys Glu Leu Arg Ser Pro Ile Val Gly Asp Ala
625                 630                 635                 640
Pro Glu Phe Val Cys Asn Val Leu Ala Lys Ile Ile Ala Gly Glu Gly
                645                 650                 655
Asp Ser Ile Pro Val Ser Lys Leu Pro Ala Asp Gly Thr Tyr Pro Leu
            660                 665                 670
Gly Thr Thr Lys Phe Glu Lys Arg Asn Leu Ala Gln Glu Ile Pro Val
        675                 680                 685
Trp Ala Pro Glu Leu Cys Ile Glu Cys Gly Lys Cys Ser Met Val Cys
    690                 695                 700
Pro His Ala Ala Ile Arg Ile Lys Val Tyr Glu Pro Lys His Leu Glu
705                 710                 715                 720
Asn Ala Pro Ala Thr Phe Lys Ser Leu Asp Ala Lys Ala Lys Asn Trp
                725                 730                 735
Glu Gly Met Arg Tyr Thr Val Gln Ile Ala Pro Glu Asp Cys Thr Gly
            740                 745                 750
Cys Gln Leu Cys Val Asn Ala Cys Pro Ala Arg Asp Lys Gln Val Glu
        755                 760                 765
Gly Arg Lys Ala Leu Asn Met His Glu Gln Ala Pro Leu Arg Glu Thr
    770                 775                 780
Glu Ser Ala Cys Trp Ser Phe Phe Ile Asn Leu Pro Glu Phe Asp Arg
785                 790                 795                 800
Asn Lys Ile Asn Gln Arg Leu Ile Lys Glu Gln Gln Leu Gln Gln Pro
                805                 810                 815
Leu Phe Glu Phe Ser Gly Ala Cys Ser Gly Cys Gly Glu Thr Pro Tyr
            820                 825                 830
Val Lys Leu Met Thr Gln Leu Phe Gly Asp Arg Leu Val Ile Gly Asn
        835                 840                 845
Ala Thr Gly Cys Ser Ser Ile Tyr Gly Gly Asn Leu Pro Thr Thr Pro
    850                 855                 860
Tyr Ala Ala Asn Pro Gln Gly Leu Gly Pro Thr Trp Ser Asn Ser Leu
865                 870                 875                 880
Phe Glu Asp Thr Ala Glu Phe Ala Leu Gly Phe Arg Ile Ser Ile Asp
                885                 890                 895
Lys Gln Gln Gln Phe Ala Lys Glu Leu Val Lys Lys Leu Ala Gly Asp
            900                 905                 910
Ile Gly Glu Asn Leu Ala Thr Ala Ile Leu Asn Ala Thr Gln Asn Ser
        915                 920                 925
Glu Pro Glu Ile Phe Glu Gln Arg Glu Arg Val Ala Val Leu Lys Asp
    930                 935                 940
Lys Leu Gln Gln Met Lys Ser Asp Asp Ala Lys Asn Leu Leu Ala Val
945                 950                 955                 960
Ala Asp Met Leu Val Lys Lys Ser Val Trp Ala Val Gly Gly Asp Gly
                965                 970                 975
Trp Ala Tyr Asp Ile Gly Tyr Gly Gly Leu Asp His Val Thr Ala Ser
            980                 985                 990
Gly Lys Asn Val Asn Met Leu Val  Leu Asp Thr Glu Val  Tyr Ser Asn
        995                 1000                 1005
Thr Gly  Gly Gln Ala Ser Lys  Ala Thr Pro Lys Ala  Ala Ile Ala
    1010                 1015                 1020
Lys Phe  Ala Ala Ala Gly Arg  Ile Ala Thr Lys Lys  Asp Leu Gly
    1025                 1030                 1035
Leu Ile  Ser Met Ser Tyr Gly  Asn Ala Tyr Val Ala  Ser Val Ala
    1040                 1045                 1050
Leu Gly  Ala Arg Asp Glu Gln  Thr Leu Arg Ala Phe  Ile Glu Ala
    1055                 1060                 1065
Glu Ala  Tyr Asp Gly Pro Ser  Ile Ile Ile Ala Tyr  Ser His Cys
    1070                 1075                 1080
Ile Ala  His Gly Phe Asp Leu  Ser Met Gly Leu Glu  His Gln Lys
    1085                 1090                 1095
Ala Ala  Val Asp Ser Gly His  Trp Leu Leu Tyr Arg  Tyr Asn Pro
    1100                 1105                 1110
Asp Arg  Leu Lys Glu Gly Leu Asn Pro Leu Gln Leu  Asp Ser Lys
    1115                 1120                 1125
Lys Pro  Lys Met Pro Val Ala  Glu Phe Leu Asn Met  Glu Asn Arg
    1130                 1135                 1140
Phe Arg  Ile Leu Lys Lys Thr  His Pro Asp Leu Ala  Lys Lys Tyr
    1145                 1150                 1155
Phe Glu  Ala Ile Gln His Glu  Val Asn Ala Arg Trp  Ala His Tyr
    1160                 1165                 1170
Glu His  Leu Ala Asn Arg Ser  Ile Glu Gly Glu Ala
    1175                 1180                 1185
 
<210>3
<211>3525
<212>DNA
<213>大肠杆菌(Escherichia coli)
 
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(3525)
 
<400>3
atg att act att gac ggt aat ggc gcg gtt gct tcg gtc gca ttt cgc          48
Met Ile Thr Ile Asp Gly Asn Gly Ala Val Ala Ser Val Ala Phe Arg
  1               5                  10                  15
acc agt gaa gtt atc gcc atc tac cct att acc ccc agt tcc acg atg          96
Thr Ser Glu Val Ile Ala Ile Tyr Pro Ile Thr Pro Ser Ser Thr Met
             20                  25                  30
gca gaa cag gct gat gcc tgg gcc gga aac ggc tta aag aac gtt tgg          144
Ala Glu Gln Ala Asp Ala Trp Ala Gly Asn Gly Leu Lys Asn Val Trp
         35                  40                  45
gga gac aca cca cgc gtg gtt gaa atg cag tcg gaa gcg ggt gct atc         192
Gly Asp Thr Pro Arg Val Val Glu Met Gln Ser Glu Ala Gly Ala Ile
     50                  55                  60
gct acc gtg cat ggc gct ttg cag acg ggt gcc ctt tca aca tcg ttt         240
Ala Thr Val His Gly Ala Leu Gln Thr Gly Ala Leu Ser Thr Ser Phe
 65                  70                  75                  80
acg tca tcg cag ggt ttg ctg ctg atg atc ccg acg ctg tac aaa ctg         288
Thr Ser Ser Gln Gly Leu Leu Leu Met Ile Pro Thr Leu Tyr Lys Leu
                 85                  90                  95
gca ggc gaa cta aca ccg ttt gtc ctg cat gta gcg gca cgt acc gtt         336
Ala Gly Glu Leu Thr Pro Phe Val Leu His Val Ala Ala Arg Thr Val
            100                 105                 110
gcc aca cat gca ctc tct att ttt ggc gat cat tcc gac gtt atg gcg         384
Ala Thr His Ala Leu Ser Ile Phe Gly Asp His Ser Asp Val Met Ala
        115                 120                 125
gtg cgc cag acg ggt tgc gcg atg ttg tgt gca gca aac gtc cag gaa         432
Val Arg Gln Thr Gly Cys Ala Met Leu Cys Ala Ala Asn Val Gln Glu
    130                 135                 140
gcg caa gac ttt gct ctc att tcg caa atc gcg acg ctg aaa agc cgc         480
Ala Gln Asp Phe Ala Leu Ile Ser Gln Ile Ala Thr Leu Lys Ser Arg
145                 150                 155                 160
gtg cca ttt att cat ttc ttt gat ggt ttc cgc acg tcc cac gaa atc         528
Val Pro Phe Ile His Phe Phe Asp Gly Phe Arg Thr Ser His Glu Ile
                165                 170                 175
aat aaa att gtc ccg ctg gcc gat gac acg att ctt gat ctc atg ccg         576
Asn Lys Ile Val Pro Leu Ala Asp Asp Thr Ile Leu Asp Leu Met Pro
            180                 185                 190
cag gtc gaa att gat gct cat cgc gcc cgg gca ctc aac ccg gaa cat         624
Gln Val Glu Ile Asp Ala His Arg Ala Arg Ala Leu Asn Pro Glu His
        195                 200                 205
ccg gtg atc cgc ggt acg tcc gcc aat cct gac act tat ttc cag tct         672
Pro Val Ile Arg Gly Thr Ser Ala Asn Pro Asp Thr Tyr Phe Gln Ser
    210                 215                 220
cgc gaa gcc acc aac cca tgg tac aac gcg gtc tat gac cat gtt gaa         720
Arg Glu Ala Thr Asn Pro Trp Tyr Asn Ala Val Tyr Asp His Val Glu
225                 230                 235                 240
cag gcg atg aat gat ttc tct gcc gcg aca ggt cgt cag tat cag ccg         768
Gln Ala Met Asn Asp Phe Ser Ala Ala Thr Gly Arg Gln Tyr Gln Pro
                245                 250                 255
ttt gaa tat tac ggg cat ccg caa gcg gaa cgg gtg att atc ctg atg         816
Phe Glu Tyr Tyr Gly His Pro Gln Ala Glu Arg Val Ile Ile Leu Met
            260                 265                 270
ggc tct gcc att ggc acc tgt gaa gaa gtg gtt gat gaa ttg cta acc         864
Gly Ser Ala Ile Gly Thr Cys Glu Glu Val Val Asp Glu Leu Leu Thr
        275                 280                 285
cgt ggc gaa aaa gtt ggc gtg ctg aaa gtt cgc ctg tac cgc ccc ttc         912
Arg Gly Glu Lys Val Gly Val Leu Lys Val Arg Leu Tyr Arg Pro Phe
    290                 295                 300
tcc gct aaa cat tta ctg caa gct ctg ccg gga tcc gta cgc agc gtg         960
Ser Ala Lys His Leu Leu Gln Ala Leu Pro Gly Ser Val Arg Ser Val
305                 310                 315                 320
gcg gta ctg gac aga acc aaa gaa ccc ggt gcc cag gca gaa ccg ctc        1008
Ala Val Leu Asp Arg Thr Lys Glu Pro Gly Ala Gln Ala Glu Pro Leu
                325                 330                 335
tat ctg gat gta atg acc gca ctg gca gaa gcc ttt aat aat ggc gag        1056
Tyr Leu Asp Val Met Thr Ala Leu Ala Glu Ala Phe Asn Asn Gly Glu
            340                 345                 350
cgc gaa act ctg ccc cgt gtc att ggt ggg cgc tat ggt ctt tca tcc        1104
Arg Glu Thr Leu Pro Arg Val Ile Gly Gly Arg Tyr Gly Leu Ser Ser
        355                 360                 365
aaa gaa ttt ggc cca gac tgt gta ctg gcg gta ttt gcc gag ctc aac        1152
Lys Glu Phe Gly Pro Asp Cys Val Leu Ala Val Phe Ala Glu Leu Asn
    370                 375                 380
gcg gct aaa ccg aaa gcg cgc ttt acg gtt ggt att tac gat gat gtg        1200
Ala Ala Lys Pro Lys Ala Arg Phe Thr Val Gly Ile Tyr Asp Asp Val
385                 390                 395                 400
acc aat ctg tca ctg ccg ttg ccg gaa aac acc ctg cca aac tcg gcg        1248
Thr Asn Leu Ser Leu Pro Leu Pro Glu Asn Thr Leu Pro Asn Ser Ala
                405                 410                 415
aaa ctg gaa gcc ttg ttt tat ggc ctt ggt agt gat ggc agc gtt tcc        1296
Lys Leu Glu Ala Leu Phe Tyr Gly Leu Gly Ser Asp Gly Ser Val Ser
            420                 425                 430
gcg acc aaa aac aat atc aag att atc ggt aat tcc acg ccg tgg tac        1344
Ala Thr Lys Asn Asn Ile Lys Ile Ile Gly Asn Ser Thr Pro Trp Tyr
        435                 440                 445
gca cag ggc tat ttt gtt tac gac tcc aaa aag gcg ggc ggc ctg acg        1392
Ala Gln Gly Tyr Phe Val Tyr Asp Ser Lys Lys Ala Gly Gly Leu Thr
    450                 455                 460
gtt tct cac ctt cga gtg agc gaa cag ccg att cgt tcc gct tat ctc        1440
Val Ser His Leu Arg Val Ser Glu Gln Pro Ile Arg Ser Ala Tyr Leu
465                 470                 475                 480
att tcc cag gct gat ttt gtt ggc tgc cac cag ttg cag ttt atc gat        1488
Ile Ser Gln Ala Asp Phe Val Gly Cys His Gln Leu Gln Phe Ile Asp
                485                 490                 495
aaa tat cag atg gct gag cgt tta aaa cct ggc ggc att ttc ctg ctc        1536
Lys Tyr Gln Met Ala Glu Arg Leu Lys Pro Gly Gly Ile Phe Leu Leu
            500                 505                 510
aac acg ccg tac agc gca gat gaa gtg tgg tcg cgc ttg ccg caa gaa        1584
Asn Thr Pro Tyr Ser Ala Asp Glu Val Trp Ser Arg Leu Pro Gln Glu
        515                 520                 525
gtt cag gcc gtg tta aac cag aaa aaa gcg cgc ttc tat gtg att aac        1632
Val Gln Ala Val Leu Asn Gln Lys Lys Ala Arg Phe Tyr Val Ile Asn
    530                 535                 540
gcg gcg aaa atc gcc cgc gaa tgt ggc ctg gcg gcc cgt att aat acc        1680
Ala Ala Lys Ile Ala Arg Glu Cys Gly Leu Ala Ala Arg Ile Asn Thr
545                 550                 555                 560
gtc atg cag atg gct ttt ttc cat ctg acg caa att ctg cct ggc gat        1728
Val Met Gln Met Ala Phe Phe His Leu Thr Gln Ile Leu Pro Gly Asp
                565                 570                 575
agc gcc ctc gca gaa ttg cag ggt gcg att gcc aaa agt tac agt agc        1776
Ser Ala Leu Ala Glu Leu Gln Gly Ala Ile Ala Lys Ser Tyr Ser Ser
            580                 585                 590
aaa ggc cag gat ctg gtg gaa cgc aac tgg cag gct ctg gcg ctg gcg        1824
Lys Gly Gln Asp Leu Val Glu Arg Asn Trp Gln Ala Leu Ala Leu Ala
        595                 600                 605
cgt gaa tcc gta gaa gaa gtt ccg ttg caa ccg gta aat ccg cac agc        1872
Arg Glu Ser Val Glu Glu Val Pro Leu Gln Pro Val Asn Pro His Ser
    610                 615                 620
gcc aat cga ccg cca gtg gtt tcc gat gcc gcc cct gat ttc gtg aaa        1920
Ala Asn Arg Pro Pro Val Val Ser Asp Ala Ala Pro Asp Phe Val Lys
625                 630                 635                 640
acc gta acc gct gcg atg ctc gcc ggg ctt ggt gac gcc ctc ccc gtt        1968
Thr Val Thr Ala Ala Met Leu Ala Gly Leu Gly Asp Ala Leu Pro Val
                645                 650                 655
tcg gcg ctg ccg cca gac ggc acc tgg ccg atg ggc act acg cgc tgg        2016
Ser Ala Leu Pro Pro Asp Gly Thr Trp Pro Met Gly Thr Thr Arg Trp
            660                 665                 670
gaa aaa cgc aat atc gcc gaa gag atc ccc atc tgg aaa gag gaa ctc        2064
Glu Lys Arg Asn Ile Ala Glu Glu Ile Pro Ile Trp Lys Glu Glu Leu
        675                 680                 685
tgt acc caa tgt aac cac tgc gtt gcc gct tgc cca cac tca gct att        2112
Cys Thr Gln Cys Asn His Cys Val Ala Ala Cys Pro His Ser Ala Ile
     690                 695                 700
cgc gca aaa gtg gtg ccg cct gaa gcg atg gaa aac gcc cct gcc agc        2160
Arg Ala Lys Val Val Pro Pro Glu Ala Met Glu Asn Ala Pro Ala Ser
705                 710                 715                 720
ctg cat tcg ctg gat gtg aaa tcg cgt gat atg cgc ggg cag aaa tat        2208
Leu His Ser Leu Asp Val Lys Ser Arg Asp Met Arg Gly Gln Lys Tyr
                725                 730                 735
gtc ttg cag gtg gca ccg gaa gat tgc acc ggt tgt aac ctg tgc gtc        2256
Val Leu Gln Val Ala Pro Glu Asp Cys Thr Gly Cys Asn Leu Cys Val
            740                 745                 750
gaa gtt tgc ccg gcg aaa gac cgt cag aat cca gag att aaa gcc atc        2304
Glu Val Cys Pro Ala Lys Asp Arg Gln Asn Pro Glu Ile Lys Ala Ile
        755                 760                 765
aat atg atg tct cgc ctg gaa cat gtc gaa gaa gag aaa atc aat tac        2352
Asn Met Met Ser Arg Leu Glu His Val Glu Glu Glu Lys Ile Asn Tyr
    770                 775                 780
gat ttc ttc ctc aac ctg cca gaa atc gac cgt agc aaa ctg gaa cgt        2400
Asp Phe Phe Leu Asn Leu Pro Glu Ile Asp Arg Ser Lys Leu Glu Arg
785                 790                 795                 800
att gat att cgt aca tcg cag ctg att aca ccg ctg ttt gaa tat tca        2448
Ile Asp Ile Arg Thr Ser Gln Leu Ile Thr Pro Leu Phe Glu Tyr Ser
                805                 810                 815
ggt gct tgc tcc ggt tgt ggc gag acg ccg tat att aaa tta ctg act        2496
Gly Ala Cys Ser Gly Cys Gly Glu Thr Pro Tyr Ile Lys Leu Leu Thr
            820                 825                 830
cag ctc tat ggc gac cgg atg ttg atc gct aac gcc act ggc tgt tct        2544
Gln Leu Tyr Gly Asp Arg Met Leu Ile Ala Asn Ala Thr Gly Cys Ser
        835                 840                 845
tca att tat ggc ggt aac ctg ccc tct aca ccg tat acc acc gat gcc        2592
Ser Ile Tyr Gly Gly Asn Leu Pro Ser Thr Pro Tyr Thr Thr Asp Ala
    850                 855                 860
aac ggt cgt ggg ccg gca tgg gcg aac tct cta ttt gaa gat aat gcc        2640
Asn Gly Arg Gly Pro Ala Trp Ala Asn Ser Leu Phe Glu Asp Asn Ala
865                 870                 875                 880
gaa ttt ggc ctt ggt ttc cgc ctg acg gtc gat caa cac cgt gtc cgc        2688
Glu Phe Gly Leu Gly Phe Arg Leu Thr Val Asp Gln His Arg Val Arg
                885                 890                 895
gtg ctg cgt ctg ctg gat caa ttt gcc gat aaa atc ccg gcg gaa tta        2736
Val Leu Arg Leu Leu Asp Gln Phe Ala Asp Lys Ile Pro Ala Glu Leu
            900                 905                 910
ctg acg gcg ttg aaa tca gac gcc acg cca gag gtt cgt cgt gaa cag        2784
Leu Thr Ala Leu Lys Ser Asp Ala Thr Pro Glu Val Arg Arg Glu Gln
        915                 920                 925
gtt gca gct tta cgc cag caa ctc aac gat gtt gcc gaa gca cat gaa        2832
Val Ala Ala Leu Arg Gln Gln Leu Asn Asp Val Ala Glu Ala His Glu
    930                 935                 940
ctg cta cgt gat gca gat gca ctg gtg gaa aaa tca atc tgg ctg att        2880
Leu Leu Arg Asp Ala Asp Ala Leu Val Glu Lys Ser Ile Trp Leu Ile
945                 950                 955                 960
ggt ggt gat ggc tgg gct tac gat atc ggc ttt ggc ggt ctg gat cat        2928
Gly Gly Asp Gly Trp Ala Tyr Asp Ile Gly Phe Gly Gly Leu Asp His
                965                 970                 975
gta ttg agt ttg acg gaa aac gtc aac att ctg gtg ctg gat acg caa        2976
Val Leu Ser Leu Thr Glu Asn Val Asn Ile Leu Val Leu Asp Thr Gln
            980                 985                 990
tgc tat tcc aac acc ggt ggt cag gcg tcg aaa gcg aca ccg ctg ggt        3024
Cys Tyr Ser Asn Thr Gly Gly Gln Ala Ser Lys Ala Thr Pro Leu Gly
        995                1000                1005
gca gta act aaa ttt ggc gag cac ggc aaa cgt aaa gcg cgt aaa gat        3072
Ala Val Thr Lys Phe Gly Glu His Gly Lys Arg Lys Ala Arg Lys Asp
   1010                1015                1020
ctt ggc gtc agt atg atg atg tac ggt cat gtt tat gtg gcg cag att        3120
Leu Gly Val Ser Met Met Met Tyr Gly His Val Tyr Val Ala Gln Ile
1025                1030                1035                1040
tct ctc ggc gcg cag ctg aac cag acg gtg aaa gcg att cag gaa gcg        3168
Ser Leu Gly Ala Gln Leu Asn Gln Thr Val Lys Ala Ile Gln Glu Ala
               1045                1050                1055
gaa gcg tat ccg ggg cca tcg ctg atc att gct tat agc ccg tgt gaa        3216
Glu Ala Tyr Pro Gly Pro Ser Leu Ile Ile Ala Tyr Ser Pro Cys Glu
           1060                1065                1070
gag cat ggt tac gat ctg gca ctc agc cac gac cag atg cgc caa ctc        3264
Glu His Gly Tyr Asp Leu Ala Leu Ser His Asp Gln Met Arg Gln Leu
       1075                1080                1085
aca gct acc ggc ttc tgg ccg cta tat cgc ttt gat ccg cgt cgt gcc        3312
Thr Ala Thr Gly Phe Trp Pro Leu Tyr Arg Phe Asp Pro Arg Arg Ala
   1090                1095                1100
gat gaa ggc aaa ctg ccg ctg gcc ttg gat tca cgc ccg ccg tca gaa        3360
Asp Glu Gly Lys Leu Pro Leu Ala Leu Asp Ser Arg Pro Pro Ser Glu
1105                1110                1115                1120
gca ccg gaa gaa acg tta ctt cac gag caa cgt ttc cgt cgg ctg aat        3408
Ala Pro Glu Glu Thr Leu Leu His Glu Gln Arg Phe Arg Arg Leu Asn
               1125                1130                1135
tcg cag cag cca gaa gtg gca gaa cag tta tgg aaa gat gct gca gct        3456
Ser Gln Gln Pro Glu Val Ala Glu Gln Leu Trp Lys Asp Ala Ala Ala
           1140                1145                1150
gat ttg caa aaa cgc tat gac ttc ctg gca caa atg gcc gga aaa gcg        3504
Asp Leu Gln Lys Arg Tyr Asp Phe Leu Ala Gln Met Ala Gly Lys Ala
       1155                1160                1165
gaa aaa agc aac acc gat taa                                           3525
Glu Lys Ser Asn Thr Asp
   1170
<210>4
<211>1174
<212>PRT
<213>大肠杆菌
 
<400>4
Met Ile Thr Ile Asp Gly Asn Gly Ala Val Ala Ser Val Ala Phe Arg
1               5                   10                  15
Thr Ser Glu Val Ile Ala Ile Tyr Pro Ile Thr Pro Ser Ser Thr Met
            20                  25                  30
Ala Glu Gln Ala Asp Ala Trp Ala Gly Asn Gly Leu Lys Asn Val Trp
        35                  40                  45
Gly Asp Thr Pro Arg Val Val Glu Met Gln Ser Glu Ala Gly Ala Ile
    50                  55                  60
Ala Thr Val His Gly Ala Leu Gln Thr Gly Ala Leu Ser Thr Ser Phe
65                  70                  75                  80
Thr Ser Ser Gln Gly Leu Leu Leu Met Ile Pro Thr Leu Tyr Lys Leu
                85                  90                  95
Ala Gly Glu Leu Thr Pro Phe Val Leu His Val Ala Ala Arg Thr Val
            100                 105                 110
Ala Thr His Ala Leu Ser Ile Phe Gly Asp His Ser Asp Val Met Ala
        115                 120                 125
Val Arg Gln Thr Gly Cys Ala Met Leu Cys Ala Ala Asn Val Gln Glu
    130                 135                 140
Ala Gln Asp Phe Ala Leu Ile Ser Gln Ile Ala Thr Leu Lys Ser Arg
145                 150                 155                 160
Val Pro Phe Ile His Phe Phe Asp Gly Phe Arg Thr Ser His Glu Ile
                165                 170                 175
Asn Lys Ile Val Pro Leu Ala Asp Asp Thr Ile Leu Asp Leu Met Pro
            180                 185                 190
Gln Val Glu Ile Asp Ala His Arg Ala Arg Ala Leu Asn Pro Glu His
        195                 200                 205
Pro Val Ile Arg Gly Thr Ser Ala Asn Pro Asp Thr Tyr Phe Gln Ser
    210                 215                 220
Arg Glu Ala Thr Asn Pro Trp Tyr Asn Ala Val Tyr Asp His Val Glu
225                 230                 235                 240
Gln Ala Met Asn Asp Phe Ser Ala Ala Thr Gly Arg Gln Tyr Gln Pro
                245                 250                 255
Phe Glu Tyr Tyr Gly His Pro Gln Ala Glu Arg Val Ile Ile Leu Met
            260                 265                 270
Gly Ser Ala Ile Gly Thr Cys Glu Glu Val Val Asp Glu Leu Leu Thr
        275                 280                 285
Arg Gly Glu Lys Val Gly Val Leu Lys Val Arg Leu Tyr Arg Pro Phe
    290                 295                 300
Ser Ala Lys His Leu Leu Gln Ala Leu Pro Gly Ser Val Arg Ser Val
305                 310                 315                 320
Ala Val Leu Asp Arg Thr Lys Glu Pro Gly Ala Gln Ala Glu Pro Leu
                325                 330                 335
Tyr Leu Asp Val Met Thr Ala Leu Ala Glu Ala Phe Asn Asn Gly Glu
            340                 345                 350
Arg Glu Thr Leu Pro Arg Val Ile Gly Gly Arg Tyr Gly Leu Ser Ser
        355                 360                 365
Lys Glu Phe Gly Pro Asp Cys Val Leu Ala Val Phe Ala Glu Leu Asn
    370                 375                 380
Ala Ala Lys Pro Lys Ala Arg Phe Thr Val Gly Ile Tyr Asp Asp Val
385                 390                 395                 400
Thr Asn Leu Ser Leu Pro Leu Pro Glu Asn Thr Leu Pro Asn Ser Ala
                405                 410                 415
Lys Leu Glu Ala Leu Phe Tyr Gly Leu Gly Ser Asp Gly Ser Val Ser
            420                 425                 430
Ala Thr Lys Asn Asn Ile Lys Ile Ile Gly Asn Ser Thr Pro Trp Tyr
        435                 440                 445
Ala Gln Gly Tyr Phe Val Tyr Asp Ser Lys Lys Ala Gly Gly Leu Thr
    450                 455                 460
Val Ser His Leu Arg Val Ser Glu Gln Pro Ile Arg Ser Ala Tyr Leu
4654                 70                 475                 480
Ile Ser Gln Ala Asp Phe Val Gly Cys His Gln Leu Gln Phe Ile Asp
                485                 490                 495
Lys Tyr Gln Met Ala Glu Arg Leu Lys Pro Gly Gly Ile Phe Leu Leu
            500                 505                 510
Asn Thr Pro Tyr Ser Ala Asp Glu Val Trp Ser Arg Leu Pro Gln Glu
        515                 520                 525
Val Gln Ala Val Leu Asn Gln Lys Lys Ala Arg Phe Tyr Val Ile Asn
    530                 535                 540
Ala Ala Lys Ile Ala Arg Glu Cys Gly Leu Ala Ala Arg Ile Asn Thr
545                 550                 555                 560
Val Met Gln Met Ala Phe Phe His Leu Thr Gln Ile Leu Pro Gly Asp
                565                 570                 575
Ser Ala Leu Ala Glu Leu Gln Gly Ala Ile Ala Lys Ser Tyr Ser Ser
             580                 585                 590
Lys Gly Gln Asp Leu Val Glu Arg Asn Trp Gln Ala Leu Ala Leu Ala
        595                 600                 605
Arg Glu Ser Val Glu Glu Val Pro Leu Gln Pro Val Asn Pro His Ser
    610                 615                 620
Ala Asn Arg Pro Pro Val Val Ser Asp Ala Ala Pro Asp Phe Val Lys
625                 630                 635                 640
Thr Val Thr Ala Ala Met Leu Ala Gly Leu Gly Asp Ala Leu Pro Val
                645                 650                 655
Ser Ala Leu Pro Pro Asp Gly Thr Trp Pro Met Gly Thr Thr Arg Trp
            660                 665                 670
Glu Lys Arg Asn Ile Ala Glu Glu Ile Pro Ile Trp Lys Glu Glu Leu
        675                 680                 685
Cys Thr Gln Cys Asn His Cys Val Ala Ala Cys Pro His Ser Ala Ile
    690                 695                 700
Arg Ala Lys Val Val Pro Pro Glu Ala Met Glu Asn Ala Pro Ala Ser
705                 710                 715                 720
Leu His Ser Leu Asp Val Lys Ser Arg Asp Met Arg Gly Gln Lys Tyr
                725                 730                 735
Val Leu Gln Val Ala Pro Glu Asp Cys Thr Gly Cys Asn Leu Cys Val
            740                 745                 750
Glu Val Cys Pro Ala Lys Asp Arg Gln Asn Pro Glu Ile Lys Ala Ile
        755                 760                 765
Asn Met Met Ser Arg Leu Glu His Val Glu Glu Glu Lys Ile Asn Tyr
    770                 775                 780
Asp Phe Phe Leu Asn Leu Pro Glu Ile Asp Arg Ser Lys Leu Glu Arg
785                 790                 795                 800
Ile Asp Ile Arg Thr Ser Gln Leu Ile Thr Pro Leu Phe Glu Tyr Ser
                805                 810                 815
Gly Ala Cys Ser Gly Cys Gly Glu Thr Pro Tyr Ile Lys Leu Leu Thr
            820                 825                 830
Gln Leu Tyr Gly Asp Arg Met Leu Ile Ala Asn Ala Thr Gly Cys Ser
        835                 840                 845
Ser Ile Tyr Gly Gly Asn Leu Pro Ser Thr Pro Tyr Thr Thr Asp Ala
    850                 855                 860
Asn Gly Arg Gly Pro Ala Trp Ala Asn Ser Leu Phe Glu Asp Asn Ala
865                 870                 875                 880
Glu Phe Gly Leu Gly Phe Arg Leu Thr Val Asp Gln His Arg Val Arg
                885                 890                 895
Val Leu Arg Leu Leu Asp Gln Phe Ala Asp Lys Ile Pro Ala Glu Leu
            900                 905                 910
Leu Thr Ala Leu Lys Ser Asp Ala Thr Pro Glu Val Arg Arg Glu Gln
        915                 920                 925
Val Ala Ala Leu Arg Gln Gln Leu Asn Asp Val Ala Glu Ala His Glu
    930                 935                 940
Leu Leu Arg Asp Ala Asp Ala Leu Val Glu Lys Ser Ile Trp Leu Ile
945                 950                 955                 960
Gly Gly Asp Gly Trp Ala Tyr Asp Ile Gly Phe Gly Gly Leu Asp His
                965                 970                 975
Val Leu Ser Leu Thr Glu Asn Val Asn Ile Leu Val Leu Asp Thr Gln
            980                 985                 990
Cys Tyr Ser Asn Thr Gly Gly Gln  Ala Ser Lys Ala Thr  Pro Leu Gly
        995                 1000                 1005
Ala Val  Thr Lys Phe Gly Glu  His Gly Lys Arg Lys  Ala Arg Lys
    1010                 1015                 1020
Asp Leu  Gly Val Ser Met Met  Met Tyr Gly His Val  Tyr Val Ala
    1025                 1030                 1035
Gln Ile  Ser Leu Gly Ala Gln  Leu Asn Gln Thr Val  Lys Ala Ile
    1040                 1045                 1050
Gln Glu  Ala Glu Ala Tyr Pro  Gly Pro Ser Leu Ile  Ile Ala Tyr
    1055                 1060                 1065
Ser Pro  Cys Glu Glu His Gly  Tyr Asp Leu Ala Leu  Ser His Asp
    1070                 1075                 1080
Gln Met  Arg Gln Leu Thr Ala  Thr Gly Phe Trp Pro  Leu Tyr Arg
    1085                 1090                 1095
Phe Asp  Pro Arg Arg Ala Asp  Glu Gly Lys Leu Pro  Leu Ala Leu
    1100                 1105                 1110
Asp Ser  Arg Pro Pro Ser Glu  Ala Pro Glu Glu Thr  Leu Leu His
    1115                 1120                 1125
Glu Gln  Arg Phe Arg Arg Leu  Asn Ser Gln Gln Pro  Glu Val Ala
    1130                 1135                 1140
Glu Gln  Leu Trp Lys Asp Ala  Ala Ala Asp Leu Gln  Lys Arg Tyr
    1145                 1150                 1155
Asp Phe  Leu Ala Gln Met Ala  Gly Lys Ala Glu Lys  Ser Asn Thr
    1160                 1165                 1170
Asp
 
<210>5
<211>5412
<212>DNA
<213>纤细裸藻
 
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(5412)
 
<400>5
atg aag cag tct gtc cgc cca att att tcc aat gta ctg cgc aag gag         48
Met Lys Gln Ser Val Arg Pro Ile Ile Ser Asn Val Leu Arg Lys Glu
  1               5                  10                  15
gtt gct ctg tac tca aca atc att gga caa gac aag ggg aag gaa cca         96
Val Ala Leu Tyr Ser Thr Ile Ile Gly Gln Asp Lys Gly Lys Glu Pro
             20                  25                  30
act ggt cga aca tac acc agt ggc cca aaa ccg gca tct cac att gaa         144
Thr Gly Arg Thr Tyr Thr Ser Gly Pro Lys Pro Ala Ser His Ile Glu
         35                  40                  45
gtt ccc cat cat gtg act gtg cct gcc act gac cgc acc ccg aat ccc         192
Val Pro His His Val Thr Val Pro Ala Thr Asp Arg Thr Pro Asn Pro
     50                  55                  60
gat gct caa ttc ttt cag tct gta gat ggg tca caa gcc acc agt cac         240
Asp Ala Gln Phe Phe Gln Ser Val Asp Gly Ser Gln Ala Thr Ser His
 65                  70                  75                  80
gtt gcg tac gct ctg tct gac aca gcg ttc att tac cca att aca ccc         288
Val Ala Tyr Ala Leu Ser Asp Thr Ala Phe Ile Tyr Pro Ile Thr Pro
                 85                  90                  95
agt tct gtg atg ggc gag ctg gct gat gtt tgg atg gct caa ggg agg         336
Ser Ser Val Met Gly Glu Leu Ala Asp Val Trp Met Ala Gln Gly Arg
            100                 105                 110
aag aac gcc ttt ggt cag gtt gtg gat gtc cgt gag atg caa tct gag         384
Lys Asn Ala Phe Gly Gln Val Val Asp Val Arg Glu Met Gln Ser Glu
        115                 120                 125
gct gga gcc gca ggc gcc ctg cat ggg gca ctg gct gct gga gct att         432
Ala Gly Ala Ala Gly Ala Leu His Gly Ala Leu Ala Ala Gly Ala Ile
    130                 135                 140
gct aca acc ttc act gcc tct caa ggg ttg ttg ttg atg att ccc aac         480
Ala Thr Thr Phe Thr Ala Ser Gln Gly Leu Leu Leu Met Ile Pro Asn
145                 150                 155                 160
atg tat aag att gca ggt gag ctg atg ccc tct gtc atc cac gtt gca         528
Met Tyr Lys Ile Ala Gly Glu Leu Met Pro Ser Val Ile His Val Ala
                165                 170                 175
gcc cga gag ctt gca ggc cac gct ctg tcc att ttt gga gga cac gct         576
Ala Arg Glu Leu Ala Gly His Ala Leu Ser Ile Phe Gly Gly His Ala
            180                 185                 190
gat gtc atg gct gtc cgc caa aca gga tgg gct atg ctg tgc tcc cac         624
Asp Val Met Ala Val Arg Gln Thr Gly Trp Ala Met Leu Cys Ser His
        195                 200                 205
aca gtg cag cag tct cac gac atg gct ctc atc tcc cac gtg gcc acc         672
Thr Val Gln Gln Ser His Asp Met Ala Leu Ile Ser His Val Ala Thr
    210                 215                 220
ctc aag tcc agc atc ccc ttc gtt cac ttc ttt gat ggt ttc cgc aca         720
Leu Lys Ser Ser Ile Pro Phe Val His Phe Phe Asp Gly Phe Arg Thr
225                 230                 235                 240
agc cac gaa gtg aac aaa atc aaa atg ctg cct tat gca gaa ctg aag         768
Ser His Glu Val Asn Lys Ile Lys Met Leu Pro Tyr Ala Glu Leu Lys
                245                 250                 255
aaa ctg gtg cct cct ggc acc atg gaa cag cac tgg gct cgt tcg ctg         816
Lys Leu Val Pro Pro Gly Thr Met Glu Gln His Trp Ala Arg Ser Leu
            260                 265                 270
aac ccc atg cac ccc acc atc cga gga aca aac cag tct gca gac atc         864
Asn Pro Met His Pro Thr Ile Arg Gly Thr Asn Gln Ser Ala Asp Ile
        275                 280                 285
tac ttc cag aat atg gaa agt gca aac cag tac tac act gat ctg gcc         912
Tyr Phe Gln Asn Met Glu Ser Ala Asn Gln Tyr Tyr Thr Asp Leu Ala
    290                 295                 300
gag gtc gtt cag gag aca atg gac gaa gtt gca cca tac atc ggt cgc         960
Glu Val Val Gln Glu Thr Met Asp Glu Val Ala Pro Tyr Ile Gly Arg
305                 310                 315                 320
cac tac aag atc ttt gag tat gtt ggt gca cca gat gca gaa gaa gtg        1008
His Tyr Lys Ile Phe Glu Tyr Val Gly Ala Pro Asp Ala Glu Glu Val
                325                 330                 335
aca gtg ctc atg ggt tct ggt gca acc aca gtc aac gag gca gtg gac        1056
Thr Val Leu Met Gly Ser Gly Ala Thr Thr Val Asn Glu Ala Val Asp
            340                 345                 350
ctt ctt gtg aag cgt gga aag aag gtt ggt gca gtc ttg gtg cac ctc        1104
Leu Leu Val Lys Arg Gly Lys Lys Val Gly Ala Val Leu Val His Leu
        355                 360                 365
tac cga cca tgg tca aca aag gca ttt gaa aag gtc ctg ccc aag aca        1152
Tyr Arg Pro Trp Ser Thr Lys Ala Phe Glu Lys Val Leu Pro Lys Thr
    370                 375                 380
gtg aag cgc att gct gct ctg gat cgc tgc aag gag gtg act gca ctg        1200
Val Lys Arg Ile Ala Ala Leu Asp Arg Cys Lys Glu Val Thr Ala Leu
385                 390                 395                 400
ggt gag cct ctg tat ctg gat gtg tcg gca act ctg aat ttg ttc ccg        1248
Gly Glu Pro Leu Tyr Leu Asp Val Ser Ala Thr Leu Asn Leu Phe Pro
                405                 410                 415
gaa cgc cag aat gtg aaa gtc att gga gga cgt tac gga ttg ggc tca        1296
Glu Arg Gln Asn Val Lys Val Ile Gly Gly Arg Tyr Gly Leu Gly Ser
            420                 425                 430
aag gat ttc atc ccg gag cat gcc ctg gca att tac gcc aac ttg gcc        1344
Lys Asp Phe Ile Pro Glu His Ala Leu Ala Ile Tyr Ala Asn Leu Ala
        435                 440                 445
agc gag aac ccc att caa agattc act gtg ggt atc aca gat gat gtc         1392
Ser Glu Asn Pro Ile Gln Arg Phe Thr Val Gly Ile Thr Asp Asp Val
    450                 455                 460
act ggc aca tcc gtt cct ttc gtc aac gag cgt gtt gac acg ttg ccc        1440
Thr Gly Thr Ser Val Pro Phe Val Asn Glu Arg Val Asp Thr Leu Pro
465                 470                 475                 480
gag ggc acc cgc cag tgt gtc ttc tgg gga att ggt tca gat gga aca        1488
Glu Gly Thr Arg Gln Cys Val Phe Trp Gly Ile Gly Ser Asp Gly Thr
                485                 490                 495
gtg gga gcc aat cgc tct gcc gtg aga atc att gga gac aac agc gat        1536
Val Gly Ala Asn Arg Ser Ala Val Arg Ile Ile Gly Asp Asn Ser Asp
            500                 505                 510
ttg atg gtt cag gcc tac ttc caa ttt gat gct ttc aag tca ggt ggt        1584
Leu Met Val Gln Ala Tyr Phe Gln Phe Asp Ala Phe Lys Ser Gly Gly
        515                 520                 525
gtc act tcc tcg cat ctc cgt ttt gga cca aag ccc atc aca gcg caa        1632
Val Thr Ser Ser His Leu Arg Phe Gly Pro Lys Pro Ile Thr Ala Gln
    530                 535                 540
tac ctt gtt acc aat gct gac tac atc gcg tgc cac ttc cag gag tat        1680
Tyr Leu Val Thr Asn Ala Asp Tyr Ile Ala Cys His Phe Gln Glu Tyr
545                 550                 555                 560
gtc aag cgc ttt gac atg ctt gat gcc atc cgt gag ggg ggc acc ttt        1728
Val Lys Arg Phe Asp Met Leu Asp Ala Ile Arg Glu Gly Gly Thr Phe
                565                 570                 575
gtt ctc aat tct cgg tgg acc acg gag gac atg gag aag gag att ccg        1776
Val Leu Asn Ser Arg Trp Thr Thr Glu Asp Met Glu Lys Glu Ile Pro
            580                 585                 590
gct gac ttc cgg cgc aag ctg gca cag aag aag gtc cgc ttc tac aat        1824
Ala Asp Phe Arg Arg Lys Leu Ala Gln Lys Lys Val Arg Phe Tyr Asn
        595                 600                 605
gtg gat gct cga aag atc tgt gac agt ttt ggt ctt ggg aag cgc atc        1872
Val Asp Ala Arg Lys Ile Cys Asp Ser Phe Gly Leu Gly Lys Arg Ile
    610                 615                 620
aat atg ctg atg cag gct tgt ttc ttc aag ctg tct ggg gtg ctc cca        1920
Asn Met Leu Met Gln Ala Cys Phe Phe Lys Leu Ser Gly Val Leu Pro
625                 630                 635                 640
ctg gcc gaa gct cag cgg ctg ctg aac gag tcc att gtg cat gag tat        1968
Leu Ala Glu Ala Gln Arg Leu Leu Asn Glu Ser Ile Val His Glu Tyr
                645                 650                 655
gga aag aag ggt ggc aag gtg gtg gagatg aac caa gca gtg gtg aat        2016
Gly Lys Lys Gly Gly Lys Val Val Glu Met Asn Gln Ala Val Val Asn
            660                 665                 670
gct gtc ttt gct ggt gac ctg ccc cag gaa gtt caa gtc cct gcc gcc        2064
Ala Val Phe Ala Gly Asp Leu Pro Gln Glu Val Gln Val Pro Ala Ala
        675                 680                 685
tgg gca aac gca gtt gat aca tcc acc cgt acc ccc acc ggg att gag        2112
Trp Ala Asn Ala Val Asp Thr Ser Thr Arg Thr Pro Thr Gly Ile Glu
    690                 695                 700
ttt gtt gac aag atc atg cgc ccg ctg atg gat ttc aag ggt gac cag        2160
Phe Val Asp Lys Ile Met Arg Pro Leu Met Asp Phe Lys Gly Asp Gln
705                 710                 715                 720
ctc cca gtc agt gtg atg act cct ggt gga acc ttc cct gtc ggg aca        2208
Leu Pro Val Ser Val Met Thr Pro Gly Gly Thr Phe Pro Val Gly Thr
                725                 730                 735
aca cag tat gcc aag cgt gca att gct gct ttc att ccc cag tgg att        2256
Thr Gln Tyr Ala Lys Arg Ala Ile Ala Ala Phe Ile Pro Gln Trp Ile
            740                 745                 750
cct gcc aac tgc aca cag tgc aac tat tgt tcg tat gtt tgc ccc cac        2304
Pro Ala Asn Cys Thr Gln Cys Asn Tyr Cys Ser Tyr Val Cys Pro His
        755                 760                 765
gcc acc atc cga cct ttc gtg ctg aca gac cag gag gtg cag ctg gcc        2352
Ala Thr Ile Arg Pro Phe Val Leu Thr Asp Gln Glu Val Gln Leu Ala
    770                 775                 780
ccg gag agc ttt gtg aca cgc aag gcg aag ggt gat tac cag ggg atg        2400
Pro Glu Ser Phe Val Thr Arg Lys Ala Lys Gly Asp Tyr Gln Gly Met
785                 790                 795                 800
aat ttc cgc atc caa gtt gct cct gag gat tgc act ggc tgc cag gtg        2448
Asn Phe Arg Ile Gln Val Ala Pro Glu Asp Cys Thr Gly Cys Gln Val
                805                 810                 815
tgc gtg gag acg tgc ccc gat gat gcc ctg gag atg acc gac gct ttc        2496
Cys Val Glu Thr Cys Pro Asp Asp Ala Leu Glu Met Thr Asp Ala Phe
            820                 825                 830
acc gcc acc cct gtg caa cgc acc aac tgg gag ttc gcc atc aag gtg        2544
Thr Ala Thr Pro Val Gln Arg Thr Asn Trp Glu Phe Ala Ile Lys Val
        835                 840                 845
ccc aac cgc ggc acc atg acg gac cgc tac tcc ctg aag ggc agc cag        2592
Pro Asn Arg Gly Thr Met Thr Asp Arg Tyr Ser Leu Lys Gly Ser Gln
    850                 855                 860
ttc cag cag ccc ctc ctg gag ttc tcc ggg gcc tgc gag ggc tgc ggc        2640
Phe Gln Gln Pro Leu Leu Glu Phe Ser Gly Ala Cys Glu Gly Cys Gly
865                 870                 875                 880
gag acc cca tat gtc aag ctg ctc acc cag ctc ttc ggc gag cgg acg        2688
Glu Thr Pro Tyr Val Lys Leu Leu Thr Gln Leu Phe Gly Glu Arg Thr
                885                 890                 895
gtc atc gcc aac gcc acc ggc tgc agt tcc atc tgg ggt ggc act gcc        2736
Val Ile Ala Asn Ala Thr Gly Cys Ser Ser Ile Trp Gly Gly Thr Ala
            900                 905                 910
ggc ctg gcg ccg tac acc acc aac gcc aag ggc cag ggc ccg gcc tgg        2784
Gly Leu Ala Pro Tyr Thr Thr Asn Ala Lys Gly Gln Gly Pro Ala Trp
        915                 920                 925
ggc aac agc ctg ttc gag gac aac gcc gag ttc ggc ttt ggc att gca        2832
Gly Asn Ser Leu Phe Glu Asp Asn Ala Glu Phe Gly Phe Gly Ile Ala
    930                 935                 940
gtg gcc aac gcc cag aag agg tcc cgc gtg agg gac tgc atc ctg cag        2880
Val Ala Asn Ala Gln Lys Arg Ser Arg Val Arg Asp Cys Ile Leu Gln
945                 950                 955                 960
gca gtg gag aag aag gtc gcc gat gag ggt ttg acc aca ttg ttg gcg        2928
Ala Val Glu Lys Lys Val Ala Asp Glu Gly Leu Thr Thr Leu Leu Ala
                965                 970                 975
caa tgg ctg cag gat tgg aac aca gga gac aag acc ttg aag tac caa        2976
Gln Trp Leu Gln Asp Trp Asn Thr Gly Asp Lys Thr Leu Lys Tyr Gln
            980                 985                 990
gac cag atc att gca ggg ctg gca cag cag cgc agc aag gat ccc ctt        3024
Asp Gln Ile Ile Ala Gly Leu Ala Gln Gln Arg Ser Lys Asp Pro Leu
        995                1000                1005
ctg gag cag atc tat ggc atg aag gac atg ctg cct aac atc agc cag        3072
Leu Glu Gln Ile Tyr Gly Met Lys Asp Met Leu Pro Asn Ile Ser Gln
   1010                1015                1020
tgg atc att ggt ggt gat ggc tgg gcc aac gac att ggt ttc ggt ggg        3120
Trp Ile Ile Gly Gly Asp Gly Trp Ala Asn Asp Ile Gly Phe Gly Gly
1025                1030                1035                1040
ctg gac cac gtg ctg gcc tct ggg cag aac ctc aac gtc ctg gtg ctg        3168
Leu Asp His Val Leu Ala Ser Gly Gln Asn Leu Asn Val Leu Val Leu
               1045                1050                1055
gac acc gag atg tac agc aac acc ggt ggg cag gcc tcc aag tcc acc        3216
Asp Thr Glu Met Tyr Ser Asn Thr Gly Gly Gln Ala Ser Lys Ser Thr
           1060                1065                1070
cac atg gcc tct gtg gcc aag ttt gcc ctg gga ggg aag cgc acc aac        3264
His Met Ala Ser Val Ala Lys Phe Ala Leu Gly Gly Lys Arg Thr Asn
       1075                1080                1085
aag aag aac ttg acg gag atg gca atg agc tat ggc aac gtc tat gtg        3312
Lys Lys Asn Leu Thr Glu Met Ala Met Ser Tyr Gly Asn Val Tyr Val
   1090                1095                1100
gcc acc gtc tcc cat ggc aac atg gcc cag tgc gtc aag gcg ttt gtg        3360
Ala Thr Val Ser His Gly Asn Met Ala Gln Cys Val Lys Ala Phe Val
1105                1110                1115                1120
gag gct gag tct tat gat gga cct tcg ctc att gtt ggc tat gcg cca        3408
Glu Ala Glu Ser Tyr Asp Gly Pro Ser Leu Ile Val Gly Tyr Ala Pro
               1125                1130                1135
tgc atc gag cat ggt ctg cgt gct ggt atg gca agg atg gtt caa gag        3456
Cys Ile Glu His Gly Leu Arg Ala Gly Met Ala Arg Met Val Gln Glu
           1140                1145                1150
tct gag gct gcc atc gcc acg gga tac tgg ccc ctg tac cgc ttt gac        3504
Ser Glu Ala Ala Ile Ala Thr Gly Tyr Trp Pro Leu Tyr Arg Phe Asp
       1155                1160                1165
ccc cgc ctg gcg acc gag ggc aag aac ccc ttc cag ctg gac tcc aag        3552
Pro Arg Leu Ala Thr Glu Gly Lys Asn Pro Phe Gln Leu Asp Ser Lys
   1170                1175                1180
cgc atc aag ggc aac ctg cag gag tac ctg gac cgc cag aac cgg tat        3600
Arg Ile Lys Gly Asn Leu Gln Glu Tyr Leu Asp Arg Gln Asn Arg Tyr
1185                1190                1195                1200
gtc aac ctg aag aag aac aac ccg aag ggt gcg gat ctg ctg aag tct        3648
Val Asn Leu Lys Lys Asn Asn Pro Lys Gly Ala Asp Leu Leu Lys Ser
               1205                1210                1215
cag atg gcc gac aac atc acc gcc cgg ttc aac cgc tac cga cgc atg        3696
Gln Met Ala Asp Asn Ile Thr Ala Arg Phe Asn Arg Tyr Arg Arg Met
           1220                1225                1230
ttg gag ggc ccc aat aca aaa gcc gcc gcc ccc agc ggc aac cat gtg        3744
Leu Glu Gly Pro Asn Thr Lys Ala Ala Ala Pro Ser GlyAsn His Val
       1235                1240                1245
acc atc ctg tac ggc tcc gaa act ggc aac agt gag ggt ctg gca aag        3792
Thr Ile Leu Tyr Gly Ser Glu Thr Gly Asn Ser Glu Gly Leu Ala Lys
   1250                1255                1260
gag ctg gcc acc gac ttc gag cgc cgg gag tac tcc gtc gca gtg cag        3840
Glu Leu Ala Thr Asp Phe Glu Arg Arg Glu Tyr Ser Val Ala Val Gln
1265                1270                1275                1280
gct ttg gat gac atc gac gtt gct gac ttg gag aac atg ggc ttc gtg        3888
Ala Leu Asp Asp Ile Asp Val Ala Asp Leu Glu Asn Met Gly Phe Val
               1285                1290                1295
gtc att gcg gtg tcc acc tgt ggg cag gga cag ttc ccc cgc aac agc        3936
Val Ile Ala Val Ser Thr Cys Gly Gln Gly Gln Phe Pro Arg Asn Ser
           1300                1305                1310
cag ctg ttc tgg cgg gag ctg cag cgg gac aag cct gag ggc tgg ctg        3984
Gln Leu Phe Trp Arg Glu Leu Gln Arg Asp Lys Pro Glu Gly Trp Leu
       1315                1320                1325
aag aac ttg aag tac act gtc ttc ggg ctg ggc gac agc aca tac tac        4032
Lys Asn Leu Lys Tyr Thr Val Phe Gly Leu Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr
   1330                1335                1340
ttc tac tgc cac acc gcc aag cag atc gac gct cgc ctg gcc gcc ttg        4080
Phe Tyr Cys His Thr Ala Lys Gln Ile Asp Ala Arg Leu Ala Ala Leu
1345                1350                1355                1360
ggc gct cag cgg gtg gtg ccc att ggc ttc ggc gac gat ggg gat gag        4128
Gly Ala Gln Arg Val Val Pro Ile Gly Phe Gly Asp Asp Gly Asp Glu
               1365                1370                1375
gac atg ttc cac acc ggc ttc aac aac tgg atc ccc agt gtg tgg aat        4176
Asp Met Phe His Thr Gly Phe Asn Asn Trp Ile Pro Ser Val Trp Asn
           1380                1385                1390
gag ctc aag acc aag act ccg gag gaa gcg ctg ttc acc ccg agc atc        4224
Glu Leu Lys Thr Lys Thr Pro Glu Glu Ala Leu Phe Thr Pro Ser Ile
       1395                1400                1405
gcc gtg cag ctc acc ccc aac gcc acc ccg cag gat ttc cat ttc gcc        4272
Ala Val Gln Leu Thr Pro Asn Ala Thr Pro Gln Asp Phe His Phe Ala
   1410                1415                1420
aag tcc acc cca gtg ctg tcc atc acc ggt gcc gaa cgc atc acg ccg        4320
Lys Ser Thr Pro Val Leu Ser Ile Thr Gly Ala Glu Arg Ile Thr Pro
1425                1430                1435                1440
gca gac cac acc cgc aac ttc gtc act atc cga tgg aag acc gat ttg        4368
Ala Asp His Thr Arg Asn Phe Val Thr Ile Arg Trp Lys Thr Asp Leu
               1445                1450                1455
tcg tac cag gtg ggt gac tct ctt ggt gtc ttc cct gag aac acc cgg        4416
Ser Tyr Gln Val Gly Asp Ser Leu Gly Val Phe Pro Glu Asn Thr Arg
           1460                1465                1470
tca gtg gtg gag gag ttc ctg cag tat tac ggc ttg aac ccc aag gac        4464
Ser Val Val Glu Glu Phe Leu Gln Tyr Tyr Gly Leu Asn Pro Lys Asp
       1475                1480                1485
gtc atc acc atc gaa aac aag ggc agc cgg gag ttg ccc cac tgc atg        4512
Val Ile Thr Ile Glu Asn Lys Gly Ser Arg Glu Leu Pro His Cys Met
   1490                1495                1500
gct gtt ggg gat ctc ttc acg aag gtg ttg gac atc ttg ggc aaa ccc        4560
Ala Val Gly Asp Leu Phe Thr Lys Val Leu Asp Ile Leu Gly Lys Pro
1505                1510                1515                1520
aac aac cgg ttc tac aag acc ctt tct tac ttt gca gtg gac aag gcc        4608
Asn Asn Arg Phe Tyr Lys Thr Leu Ser Tyr Phe Ala Val Asp Lys Ala
               1525                1530                1535
gag aag gag cgc ttg ttg aag atc gcc gag atg ggg ccg gag tac agc        4656
Glu Lys Glu Arg Leu Leu Lys Ile Ala Glu Met Gly Pro Glu Tyr Ser
          1540                1545                1550
aac atc ctg tct gag acg tac cac tac gcg gac atc ttc cac atg ttc        4704
Asn Ile Leu Ser Glu Thr Tyr His Tyr Ala Asp Ile Phe His Met Phe
       1555                1560                1565
ccg tcc gcc cgg ccc acg ctg cag tac ctc atc gag atg atc ccc aac        4752
Pro Ser Ala Arg Pro Thr Leu Gln Tyr Leu Ile Glu Met Ile Pro Asn
   1570                1575                1580
atc aag ccc cgg tac tac tcc atc tcc tcc gcc ccc atc cac acc cct        4800
Ile Lys Pro Arg Tyr Tyr Ser Ile Ser Ser Ala Pro Ile His Thr Pro
1585                1590                1595                1600
ggc gag gtc cac agc ctg gtg ctc atc gac acc tgg atc acg ctg tcc        4848
Gly Glu Val His Ser Leu Val Leu Ile Asp Thr Trp Ile Thr Leu Ser
               1605                1610                1615
ggc aag cac cgc acg ggg ctg acc tgc acc atg ctg gag cac ctg cag        4896
Gly Lys His Arg Thr Gly Leu Thr Cys Thr Met Leu Glu His Leu Gln
           1620                1625                1630
gcg ggc cag gtg gtg gat ggc tgc atc cac ccc acg gcg atg gag ttc        4944
Ala Gly Gln Val Val Asp Gly Cys Ile His Pro Thr Ala Met Glu Phe
       1635                1640                1645
ccc gac cac gag aag ccg gtg gtg atg tgc gcc atg ggc agt ggc ctg        4992
Pro Asp His Glu Lys Pro Val Val Met Cys Ala Met Gly Ser Gly Leu
   1650                1655                1660
gca ccg ttc gtt gct ttc ctg cgc gac ggc tcc acg ctg cgg aag cag        5040
Ala Pro Phe Val Ala Phe Leu Arg Asp Gly Ser Thr Leu Arg Lys Gln
1665                1670                1675                1680
ggc aag aag acc ggg aac atg gca ttg tac ttc ggc aac agg tat gag        5088
Gly Lys Lys Thr Gly Asn Met Ala Leu Tyr Phe Gly Asn Arg Tyr Glu
               1685                1690                1695
aag acg gag ttc ctg atg aag gag gag ctg aag ggt cac atc aac gat        5136
Lys Thr Glu Phe Leu Met Lys Glu Glu Leu Lys Gly His Ile Asn Asp
           1700                1705                1710
ggt ttg ctg aca ctt cga tgc gct ttc agc cga gat gac ccc aag aag        5184
Gly Leu Leu Thr Leu Arg Cys Ala Phe Ser Arg Asp Asp Pro Lys Lys
       1715                1720                1725
aag gtg tat gtg cag gac ctt atc aag atg gac gaa aag atg atg tac        5232
Lys Val Tyr Val Gln Asp Leu Ile Lys Met Asp Glu Lys Met Met Tyr
   1730                1735                1740
gat tac ctc gtg gtg cag aag ggt tct atg tat tgc tgt gga tcc cgc        5280
Asp Tyr Leu Val Val Gln Lys Gly Ser Met Tyr Cys Cys Gly Ser Arg
1745                1750                1755                1760
agt ttc atc aag cct gtc cag gag tca ttg aaa cat tgc ttc atg aaa        5328
Ser Phe Ile Lys Pro Val Gln Glu Ser Leu Lys His Cys Phe Met Lys
               1765                1770                1775
gct ggt ggg ctg act gca gag caa gct gag aac gag gtc atc gat atg        5376
Ala Gly Gly Leu Thr Ala Glu Gln Ala Glu Asn Glu Val Ile Asp Met
           1780                1785                1790
ttc acg acc ggg cgg tac aat atc gag gca tgg taa                        5412
Phe Thr Thr Gly Arg Tyr Asn Ile Glu Ala Trp
       1795                1800
 
<210>6
<211>1803
<212>PRT
<213>纤细裸藻(Euglena gracilis)
 
<400>6
Met Lys Gln Ser Val Arg Pro Ile Ile Ser Asn Val Leu Arg Lys Glu
  1               5                  10                  15
Val Ala Leu Tyr Ser Thr Ile Ile Gly Gln Asp Lys Gly Lys Glu Pro
             20                  25                  30
Thr Gly Arg Thr Tyr Thr Ser Gly Pro Lys Pro Ala Ser His Ile Glu
         35                  40                  45
Val Pro His His Val Thr Val Pro Ala Thr Asp Arg Thr Pro Asn Pro
     50                  55                  60
Asp Ala Gln Phe Phe Gln Ser Val Asp Gly Ser Gln Ala Thr Ser His
 65                  70                  75                  80
Val Ala Tyr Ala Leu Ser Asp Thr Ala Phe Ile Tyr Pro Ile Thr Pro
                 85                  90                  95
Ser Ser Val Met Gly Glu Leu Ala Asp Val Trp Met Ala Gln Gly Arg
            100                 105                 110
Lys Asn Ala Phe Gly Gln Val Val Asp Val Arg Glu Met Gln Ser Glu
        115                 120                 125
Ala Gly Ala Ala Gly Ala Leu His Gly Ala Leu Ala Ala Gly Ala Ile
    130                 135                 140
Ala Thr Thr Phe Thr Ala Ser Gln Gly Leu Leu Leu Met Ile Pro Asn
145                 150                 155                 160
Met Tyr Lys Ile Ala Gly Glu Leu Met Pro Ser Val Ile His Val Ala
                165                 170                 175
Ala Arg Glu Leu Ala Gly His Ala Leu Ser Ile Phe Gly Gly His Ala
            180                 185                 190
Asp Val Met Ala Val Arg Gln Thr Gly Trp Ala Met Leu Cys Ser His
        195                 200                 205
Thr Val Gln Gln Ser His Asp Met Ala Leu Ile Ser His Val Ala Thr
    210                 215                 220
Leu Lys Ser Ser Ile Pro Phe Val His Phe Phe Asp Gly Phe Arg Thr
225                 230                 235                 240
Ser His Glu Val Asn Lys Ile Lys Met Leu Pro Tyr Ala Glu Leu Lys
                245                 250                 255
Lys Leu Val Pro Pro Gly Thr Met Glu Gln His Trp Ala Arg Ser Leu
            260                 265                 270
Asn Pro Met His Pro Thr Ile Arg Gly Thr Asn Gln Ser Ala Asp Ile
        275                 280                 285
Tyr Phe Gln Asn Met Glu Ser Ala Asn Gln Tyr Tyr Thr Asp Leu Ala
    290                 295                 300
Glu Val Val Gln Glu Thr Met Asp Glu Val Ala Pro Tyr Ile Gly Arg
305                 310                 315                 320
His Tyr Lys Ile Phe Glu Tyr Val Gly Ala Pro Asp Ala Glu Glu Val
                325                 330                 335
Thr Val Leu Met Gly Ser Gly Ala Thr Thr Val Asn Glu Ala Val Asp
            340                 345                 350
Leu Leu Val Lys Arg Gly Lys Lys Val Gly Ala Val Leu Val His Leu
        355                 360                 365
Tyr Arg Pro Trp Ser Thr Lys Ala Phe Glu Lys Val Leu Pro Lys Thr
    370                 375                 380
Val Lys Arg Ile Ala Ala Leu Asp Arg Cys Lys Glu Val Thr Ala Leu
385                 390                 395                 400
Gly Glu Pro Leu Tyr Leu Asp Val Ser Ala Thr Leu Asn Leu Phe Pro
                405                 410                 415
Glu Arg Gln Asn Val Lys Val Ile Gly Gly Arg Tyr Gly Leu Gly Ser
            420                 425                 430
Lys Asp Phe Ile Pro Glu His Ala Leu Ala Ile Tyr Ala Asn Leu Ala
        435                 440                 445
Ser Glu Asn Pro Ile Gln Arg Phe Thr Val Gly Ile Thr Asp Asp Val
    450                 455                 460
Thr Gly Thr Ser Val Pro Phe Val Asn Glu Arg Val Asp Thr Leu Pro
465                 470                 475                 480
Glu Gly Thr Arg Gln Cys Val Phe Trp Gly Ile Gly Ser Asp Gly Thr
                485                 490                 495
Val Gly Ala Asn Arg Ser Ala Val Arg Ile Ile Gly Asp Asn Ser Asp
            500                 505                 510
Leu Met Val Gln Ala Tyr Phe Gln Phe Asp Ala Phe Lys Ser Gly Gly
        515                 520                 525
Val Thr Ser Ser His Leu Arg Phe Gly Pro Lys Pro Ile Thr Ala Gln
    530                 535                 540
Tyr Leu Val Thr Asn Ala Asp Tyr Ile Ala Cys His Phe Gln Glu Tyr
545                 550                 555                 560
Val Lys Arg Phe Asp Met Leu Asp Ala Ile Arg Glu Gly Gly Thr Phe
                565                 570                 575
Val Leu Asn Ser Arg Trp Thr Thr Glu Asp Met Glu Lys Glu Ile Pro
            580                 585                 590
Ala Asp Phe Arg Arg Lys Leu Ala Gln Lys Lys Val Arg Phe Tyr Asn
        595                 600                 605
Val Asp Ala Arg Lys Ile Cys Asp Ser Phe Gly Leu Gly Lys Arg Ile
    610                 615                 620
Asn Met Leu Met Gln Ala Cys Phe Phe Lys Leu Ser Gly Val Leu Pro
625                 630                 635                 640
Leu Ala Glu Ala Gln Arg Leu Leu Asn Glu Ser Ile Val His Glu Tyr
                645                 650                 655
Gly Lys Lys Gly Gly Lys Val Val Glu Met Asn Gln Ala Val Val Asn
            660                 665                 670
Ala Val Phe Ala Gly Asp Leu Pro Gln Glu Val Gln Val Pro Ala Ala
        675                 680                 685
Trp Ala Asn Ala Val Asp Thr Ser Thr Arg Thr Pro Thr Gly Ile Glu
    690                 695                 700
Phe Val Asp Lys Ile Met Arg Pro Leu Met Asp Phe Lys Gly Asp Gln
705                 710                 715                 720
Leu Pro Val Ser Val Met Thr Pro Gly Gly Thr Phe Pro Val Gly Thr
                 725                 730                 735
Thr Gln Tyr Ala Lys Arg Ala Ile Ala Ala Phe Ile Pro Gln Trp Ile
            740                 745                 750
Pro Ala Asn Cys Thr Gln Cys Asn Tyr Cys Ser Tyr Val Cys Pro His
        755                 760                 765
Ala Thr Ile Arg Pro Phe Val Leu Thr Asp Gln Glu Val Gln Leu Ala
    770                 775                 780
Pro Glu Ser Phe Val Thr Arg Lys Ala Lys Gly Asp Tyr Gln Gly Met
785                 790                 795                 800
Asn Phe Arg Ile Gln Val Ala Pro Glu Asp Cys Thr Gly Cys Gln Val
                805                 810                 815
Cys Val Glu Thr Cys Pro Asp Asp Ala Leu Glu Met Thr Asp Ala Phe
            820                 825                 830
Thr Ala Thr Pro Val Gln Arg Thr Asn Trp Glu Phe Ala Ile Lys Val
        835                 840                 845
Pro Asn Arg Gly Thr Met Thr Asp Arg Tyr Ser Leu Lys Gly Ser Gln
    850                 855                 860
Phe Gln Gln Pro Leu Leu Glu Phe Ser Gly Ala Cys Glu Gly Cys Gly
865                 870                 875                 880
Glu Thr Pro Tyr Val Lys Leu Leu Thr Gln Leu Phe Gly Glu Arg Thr
                885                 890                 895
Val Ile Ala Asn Ala Thr Gly Cys Ser Ser Ile Trp Gly Gly Thr Ala
            900                 905                 910
Gly Leu Ala Pro Tyr Thr Thr Asn Ala Lys Gly Gln Gly Pro Ala Trp
        915                 920                 925
Gly Asn Ser Leu Phe Glu Asp Asn Ala Glu Phe Gly Phe Gly Ile Ala
    930                 935                 940
Val Ala Asn Ala Gln Lys Arg Ser Arg Val Arg Asp Cys Ile Leu Gln
945                 950                 955                 960
Ala Val Glu Lys Lys Val Ala Asp Glu Gly Leu Thr Thr Leu Leu Ala
                965                 970                 975
Gln Trp Leu Gln Asp Trp Asn Thr Gly Asp Lys Thr Leu Lys Tyr Gln
            980                 985                 990
Asp Gln Ile Ile Ala Gly Leu Ala Gln Gln Arg Ser Lys Asp Pro Leu
        995                1000                1005
Leu Glu Gln Ile Tyr Gly Met Lys Asp Met Leu Pro Asn Ile Ser Gln
   1010                1015                1020
Trp Ile Ile Gly Gly Asp Gly Trp Ala Asn Asp Ile Gly Phe Gly Gly
1025                1030                1035                1040
Leu Asp His Val Leu Ala Ser Gly Gln Asn Leu Asn Val Leu Val Leu
               1045                1050                1055
Asp Thr Glu Met Tyr Ser Asn Thr Gly Gly Gln Ala Ser Lys Ser Thr
           1060                1065                1070
His Met Ala Ser Val Ala Lys Phe Ala Leu Gly Gly Lys Arg Thr Asn
       1075                1080                1085
Lys Lys Asn Leu Thr Glu Met Ala Met Ser Tyr Gly Asn Val Tyr Val
   1090                1095                1100
Ala Thr Val Ser His Gly Asn Met Ala Gln Cys Val Lys Ala Phe Val
1105                1110                1115                1120
Glu Ala Glu Ser Tyr Asp Gly Pro Ser Leu Ile Val Gly Tyr Ala Pro
               1125                1130                1135
Cys Ile Glu His Gly Leu Arg Ala Gly Met Ala Arg Met Val Gln Glu
           1140                1145                1150
Ser Glu Ala Ala Ile Ala Thr Gly Tyr Trp Pro Leu Tyr Arg Phe Asp
       1155                1160                1165
Pro Arg Leu Ala Thr Glu Gly Lys Asn Pro Phe Gln Leu Asp Ser Lys
   1170                1175                1180
Arg Ile Lys Gly Asn Leu Gln Glu Tyr Leu Asp Arg Gln Asn Arg Tyr
1185                1190                1195                1200
Val Asn Leu Lys Lys Asn Asn Pro Lys Gly Ala Asp Leu Leu Lys Ser
               1205                1210                1215
Gln Met Ala Asp Asn Ile Thr Ala Arg Phe Asn Arg Tyr Arg Arg Met
           1220                1225                1230
Leu Glu Gly Pro Asn Thr Lys Ala Ala Ala Pro Ser Gly Asn His Val
       1235                1240                1245
Thr Ile Leu Tyr Gly Ser Glu Thr Gly Asn Ser Glu Gly Leu Ala Lys
   1250                1255                1260
Glu Leu Ala Thr Asp Phe Glu Arg Arg Glu Tyr Ser Val Ala Val Gln
1265                1270                1275                1280
Ala Leu Asp Asp Ile Asp Val Ala Asp Leu Glu Asn Met Gly Phe Val
               1285                1290                1295
Val Ile Ala Val Ser Thr Cys Gly Gln Gly Gln Phe Pro Arg Asn Ser
           1300                1305                1310
Gln Leu Phe Trp Arg Glu Leu Gln Arg Asp Lys Pro Glu Gly Trp Leu
       1315                1320                1325
Lys Asn Leu Lys Tyr Thr Val Phe Gly Leu Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr
   1330                1335                1340
Phe Tyr Cys His Thr Ala Lys Gln Ile Asp Ala Arg Leu Ala Ala Leu
1345                1350                1355                1360
Gly Ala Gln Arg Val Val Pro Ile Gly Phe Gly Asp Asp Gly Asp Glu
                1365                1370                1375
Asp Met Phe His Thr Gly Phe Asn Asn Trp Ile Pro Ser Val Trp Asn
           1380                1385                1390
Glu Leu Lys Thr Lys Thr Pro Glu Glu Ala Leu Phe Thr Pro Ser Ile
       1395                1400                1405
Ala Val Gln Leu Thr Pro Asn Ala Thr Pro Gln Asp Phe His Phe Ala
   1410                1415                1420
Lys Ser Thr Pro Val Leu Ser Ile Thr Gly Ala Glu Arg Ile Thr Pro
1425                1430                1435                1440
Ala Asp His Thr Arg Asn Phe Val Thr Ile Arg Trp Lys Thr Asp Leu
               1445                1450                1455
Ser Tyr Gln Val Gly Asp Ser Leu Gly Val Phe Pro Glu Asn Thr Arg
           1460                1465                1470
Ser Val Val Glu Glu Phe Leu Gln Tyr Tyr Gly Leu Asn Pro Lys Asp
       1475                1480                1485
Val Ile Thr Ile Glu Asn Lys Gly Ser Arg Glu Leu Pro His Cys Met
   1490                1495                1500
Ala Val Gly Asp Leu Phe Thr Lys Val Leu Asp Ile Leu Gly Lys Pro
1505                1510                1515                1520
Asn Asn Arg Phe Tyr Lys Thr Leu Ser Tyr Phe Ala Val Asp Lys Ala
               1525                1530                1535
Glu Lys Glu Arg Leu Leu Lys Ile Ala Glu Met Gly Pro Glu Tyr Ser
           1540                1545                1550
Asn Ile Leu Ser Glu Thr Tyr His Tyr Ala Asp Ile Phe His Met Phe
       1555                1560                1565
Pro Ser Ala Arg Pro Thr Leu Gln Tyr Leu Ile Glu Met Ile Pro Asn
   1570                1575                1580
Ile Lys Pro Arg Tyr Tyr Ser Ile Ser Ser Ala Pro Ile His Thr Pro
1585                1590                1595                1600
Gly Glu Val His Ser Leu Val Leu Ile Asp Thr Trp Ile Thr Leu Ser
               1605                1610                1615
Gly Lys His Arg Thr Gly Leu Thr Cys Thr Met Leu Glu His Leu Gln
           1620                1625                1630
Ala Gly Gln Val Val Asp Gly Cys Ile His Pro Thr Ala Met Glu Phe
        1635                1640                1645
Pro Asp His Glu Lys Pro Val Val Met Cys Ala Met Gly Ser Gly Leu
   1650                1655                1660
Ala Pro Phe Val Ala Phe Leu Arg Asp Gly Ser Thr Leu Arg Lys Gln
1665                1670                1675                1680
Gly Lys Lys Thr Gly Asn Met Ala Leu Tyr Phe Gly Asn Arg Tyr Glu
               1685                1690                1695
Lys Thr Glu Phe Leu Met Lys Glu Glu Leu Lys Gly His Ile Asn Asp
           1700                1705                1710
Gly Leu Leu Thr Leu Arg Cys Ala Phe Ser Arg Asp Asp Pro Lys Lys
       1715                1720                1725
Lys Val Tyr Val Gln Asp Leu Ile Lys Met Asp Glu Lys Met Met Tyr
   1730                1735                1740
Asp Tyr Leu Val Val Gln Lys Gly Ser Met Tyr Cys Cys Gly Ser Arg
1745                1750                1755                1760
Ser Phe Ile Lys Pro Val Gln Glu Ser Leu Lys His Cys Phe Met Lys
               1765                1770                1775
Ala Gly Gly Leu Thr Ala Glu Gln Ala Glu Asn Glu Val Ile Asp Met
           1780                1785                1790
Phe Thr Thr Gly Arg Tyr Asn Ile Glu Ala Trp
       1795                1800
 
<210>7
<211>747
<212>DNA
<213>大肠杆菌
 
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(747)
 
<400>7
atg gct gat tgg gta aca ggc aaa gtc act aaa gtg cag aac tgg acc      48
Met Ala Asp Trp Val Thr Gly Lys Val Thr Lys Val Gln Asn Trp Thr
1               5                   10                  15
gac gcc ctg ttt agt ctc acc gtt cac gcc ccc gtg ctt ccg ttt acc      96
Asp Ala Leu Phe Ser Leu Thr Val His Ala Pro Val Leu Pro Phe Thr
            20                  25                  30
gcc ggg caa ttt acc aag ctt ggc ctt gaa atc gac ggc gaa cgc gtc      144
Ala Gly Gln Phe Thr Lys Leu Gly Leu Glu Ile Asp Gly Glu Arg Val
        35                  40                  45
cag cgc gcc tac tcc tat gta aac tcg ccc gat aat ccc gat ctg gag      192
Gln Arg Ala Tyr Ser Tyr Val Asn Ser Pro Asp Asn Pro Asp Leu Glu
    50                  55                  60
ttt tac ctg gtc acc gtc ccc gat ggc aaa tta agc cca cga ctg gcg      240
Phe Tyr Leu Val Thr Val Pro Asp Gly Lys Leu Ser Pro Arg Leu Ala
65                  70                  75                  80
gca ctg aaa cca ggc gat gaa gtg cag gtg gtt agc gaa gcg gca gga      288
Ala Leu Lys Pro Gly Asp Glu Val Gln Val Val Ser Glu Ala Ala Gly
                85                  90                  95
ttc ttt gtg ctc gat gaa gtg ccg cac tgc gaa acg cta tgg atg ctg      336
Phe Phe Val Leu Asp Glu Val Pro His Cys Glu Thr Leu Trp Met Leu
            100                 105                 110
gca acc ggt aca gcg att ggc cct tat tta tcg att ctg caa cta ggt      384
Ala Thr Gly Thr Ala Ile Gly Pro Tyr Leu Ser Ile Leu Gln Leu Gly
        115                 120                 125
aaa gat tta gat cgc ttc aaa aat ctg gtc ctg gtg cac gcc gca cgt      432
Lys Asp Leu Asp Arg Phe Lys Asn Leu Val Leu Val His Ala Ala Arg
    130                 135                 140
tat gcc gcc gac tta agc tat ttg cca ctg atg cag gaa ctg gaa aaa      480
Tyr Ala Ala Asp Leu Ser Tyr Leu Pro Leu Met Gln Glu Leu Glu Lys
145                 150                 155                 160
cgc tac gaa gga aaa ctg cgc att cag acg gtg gtc agt cgg gaa acg      528
Arg Tyr Glu Gly Lys Leu Arg Ile Gln Thr Val Val Ser Arg Glu Thr
                165                 170                 175
gca gcg ggg tcg ctc acc gga cgg ata ccg gca tta att gaa agt ggg      576
Ala Ala Gly Ser Leu Thr Gly Arg Ile Pro Ala Leu Ile Glu Ser Gly
            180                 185                 190
gaa ctg gaa agc acg att ggc ctg ccg atg aat aaa gaa acc agc cat      624
Glu Leu Glu Ser Thr Ile Gly Leu Pro Met Asn Lys Glu Thr Ser His
        195                 200                 205
gtg atg ctg tgc ggc aat cca cag atg gtg cgc gat aca caa cag ttg      672
Val Met Leu Cys Gly Asn Pro Gln Met Val Arg Asp Thr Gln Gln Leu
    210                 215                 220
ctg aaa gag acc cgg cag atg acg aaa cat tta cgt cgc cga ccg ggc        720
Leu Lys Glu Thr Arg Gln Met Thr Lys His Leu Arg Arg Arg Pro Gly
225                 230                 235                 240
cat atg aca gcg gag cat tac tgg taa                                    747
His Met Thr Ala Glu His Tyr Trp
                245
 
<210>8
<211>248
<212>PRT
<213>大肠杆菌
 
<400>8
Met Ala Asp Trp Val Thr Gly Lys Val Thr Lys Val Gln Asn Trp Thr
1               5                   10                  15
Asp Ala Leu Phe Ser Leu Thr Val His Ala Pro Val Leu Pro Phe Thr
            20                  25                  30
Ala Gly Gln Phe Thr Lys Leu Gly Leu Glu Ile Asp Gly Glu Arg Val
        35                  40                  45
Gln Arg Ala Tyr Ser Tyr Val Asn Ser Pro Asp Asn Pro Asp Leu Glu
    50                  55                  60
Phe Tyr Leu Val Thr Val Pro Asp Gly Lys Leu Ser Pro Arg Leu Ala
65                  70                  75                  80
Ala Leu Lys Pro Gly Asp Glu Val Gln Val Val Ser Glu Ala Ala Gly
                85                  90                  95
Phe Phe Val Leu Asp Glu Val Pro His Cys Glu Thr Leu Trp Met Leu
            100                 105                 110
Ala Thr Gly Thr Ala Ile Gly Pro Tyr Leu Ser Ile Leu Gln Leu Gly
        115                 120                 125
Lys Asp Leu Asp Arg Phe Lys Asn Leu Val Leu Val His Ala Ala Arg
    130                 135                 140
Tyr Ala Ala Asp Leu Ser Tyr Leu Pro Leu Met Gln Glu Leu Glu Lys
145                 150                 155                 160
Arg Tyr Glu Gly Lys Leu Arg Ile Gln Thr Val Val Ser Arg Glu Thr
                165                 170                 175
Ala Ala Gly Ser Leu Thr Gly Arg Ile Pro Ala Leu Ile Glu Ser Gly
            180                 185                 190
Glu Leu Glu Ser Thr Ile Gly Leu Pro Met Asn Lys Glu Thr Ser His
        195                 200                 205
Val Met Leu Cys Gly Asn Pro Gln Met Val Arg Asp Thr Gln Gln Leu
    210                 215                 220
Leu Lys Glu Thr Arg Gln Met Thr Lys His Leu Arg Arg Arg Pro Gly
225                 230                 235                 240
His Met Thr Ala Glu His Tyr Trp
                245
 
<210>9
<211>336
<212>DNA
<213>大肠杆菌
 
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(336)
 
<400>9
atg cca aag att gtt att ttg cct cat cag gat ctc tgc cct gat ggc      48
Met Pro Lys Ile Val Ile Leu Pro His Gln Asp Leu Cys Pro Asp Gly
1               5                   10                  15
gct gtt ctg gaa gct aat agc ggt gaa acc att ctc gac gca gct ctg      96
Ala Val Leu Glu Ala Asn Ser Gly Glu Thr Ile Leu Asp Ala Ala Leu
            20                  25                  30
cgt aac ggt atc gag att gaa cac gcc tgt gaa aaa tcc tgt gct tgc      144
Arg Asn Gly Ile Glu Ile Glu His Ala Cys Glu Lys Ser Cys Ala Cys
        35                  40                  45
acc acc tgc cac tgc atc gtt cgt gaa ggt ttt gac tca ctg ccg gaa      192
Thr Thr Cys His Cys Ile Val Arg Glu Gly Phe Asp Ser Leu Pro Glu
    50                  55                  60
agc tca gag cag gaa gac gac atg ctg gac aaa gcc tgg gga ctg gag      240
Ser Ser Glu Gln Glu Asp Asp Met Leu Asp Lys Ala Trp Gly Leu Glu
65                  70                  75                  80
ccg gaa agc cgt tta agc tgc cag gcg cgc gtt acc gac gaa gat tta      288
Pro Glu Ser Arg Leu Ser Cys Gln Ala Arg Val Thr Asp Glu Asp Leu
                85                  90                  95
gta gtc gaa atc ccg cgt tac act atc aac cat gcg cgt gag cat taa      336
Val Val Glu Ile Pro Arg Tyr Thr Ile Asn His Ala Arg Glu His
            100                 105                 110
 
<210>10
<211>111
<212>PRT
<213>大肠杆菌
 
<400>10
Met Pro Lys Ile Val Ile Leu Pro His Gln Asp Leu Cys Pro Asp Gly
1               5                   10                  15
Ala Val Leu Glu Ala Asn Ser Gly Glu Thr Ile Leu Asp Ala Ala Leu
            20                  25                  30
Arg Asn Gly Ile Glu Ile Glu His Ala Cys Glu Lys Ser Cys Ala Cys
        35                  40                  45
Thr Thr Cys His Cys Ile Val Arg Glu Gly Phe Asp Ser Leu Pro Glu
    50                  55                  60
Ser Ser Glu Gln Glu Asp Asp Met Leu Asp Lys Ala Trp Gly Leu Glu
65                  70                  75                  80
Pro Glu Ser Arg Leu Ser Cys Gln Ala Arg Val Thr Asp Glu Asp Leu
                85                  90                  95
Val Val Glu Ile Pro Arg Tyr Thr Ile Asn His Ala Arg Glu His
            100                 105                 110
 
<210>11
<211>261
<212>DNA
<213>大肠杆菌
 
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(261)
 
<400>11
atg gcg ttg tta atc act aaa aaa tgc atc aat tgt gat atg tgt gaa      48
Met Ala Leu Leu Ile Thr Lys Lys Cys Ile Asn Cys Asp Met Cys Glu
1               5                   10                  15
ccc gaa tgc ccg aat gag gcg att tca atg gga gat cat atc tac gag      96
Pro Glu Cys Pro Asn Glu Ala Ile Ser Met Gly Asp His Ile Tyr Glu
            20                  25                  30
att aac agc gat aag tgt acc gaa tgc gta ggg cac tac gag aca cca      144
Ile Asn Ser Asp Lys Cys Thr Glu Cys Val Gly His Tyr Glu Thr Pro
        35                  40                  45
acc tgc cag aag gtg tgc ccg atc ccc aat act att gtg aaa gat ccg      192
Thr Cys Gln Lys Val Cys Pro Ile Pro Asn Thr Ile Val Lys Asp Pro
    50                  55                  60
gcg cat gtc gag aca gaa gaa cag ttg tgg gat aaa ttt gtg ctg atg      240
Ala His Val Glu Thr Glu Glu Gln Leu Trp Asp Lys Phe Val Leu Met
65                  70                  75                  80
cac cac gcg gat aaa att taa                                          261
His His Ala Asp Lys Ile
                85
 
<210>12
<211>86
<212>PRT
<213>大肠杆菌
 
<400>12
Met Ala Leu Leu Ile Thr Lys Lys Cys Ile Asn Cys Asp Met Cys Glu
1               5                   10                  15
Pro Glu Cys Pro Asn Glu Ala Ile Ser Met Gly Asp His Ile Tyr Glu
            20                  25                  30
Ile Asn Ser Asp Lys Cys Thr Glu Cys Val Gly His Tyr Glu Thr Pro
        35                  40                  45
Thr Cys Gln Lys Val Cys Pro Ile Pro Asn Thr Ile Val Lys Asp Pro
    50                  55                  60
Ala His Val Glu Thr Glu Glu Gln Leu Trp Asp Lys Phe Val Leu Met
65                  70                  75                  80
His His Ala Asp Lys Ile
                85
 
<210>13
<211>531
<212>DNA
<213>大肠杆菌
 
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(531)
 
<400>13
atg gct atc act ggc atc ttt ttc ggc agc gac acc ggt aat acc gaa      48
Met Ala Ile Thr Gly Ile Phe Phe Gly Ser Asp Thr Gly Asn Thr Glu
1               5                   10                  15
aat atc gca aaa atg att caa aaa cag ctt ggt aaa gac gtt gcc gat      96
Asn Ile Ala Lys Met Ile Gln Lys Gln Leu Gly Lys Asp Val Ala Asp
            20                  25                  30
gtc cat gac att gca aaa agc agc aaa gaa gat ctg gaa gct tat gac      144
Val His Asp Ile Ala Lys Ser Ser Lys Glu Asp Leu Glu Ala Tyr Asp
        35                  40                  45
att ctg ctg ctg ggc atc cca acc tgg tat tac ggc gaa gcg cag tgt      192
Ile Leu Leu Leu Gly Ile Pro Thr Trp Tyr Tyr Gly Glu Ala Gln Cys
    50                  55                  60
gac tgg gat gac ttc ttc ccg act ctc gaa gag att gat ttc aac ggc      240
Asp Trp Asp Asp Phe Phe Pro Thr Leu Glu Glu Ile Asp Phe Asn Gly
65                  70                  75                  80
aaa ctg gtt gcg ctg ttt ggt tgt ggt gac cag gaa gat tac gcc gaa      288
Lys Leu Val Ala Leu Phe Gly Cys Gly Asp Gln Glu Asp Tyr Ala Glu
                85                  90                  95
tat ttc tgc gac gca ttg ggc acc atc cgc gac atc att gaa ccg cgc      336
Tyr Phe Cys Asp Ala Leu Gly Thr Ile Arg Asp Ile Ile Glu Pro Arg
            100                 105                 110
ggt gca acc atc gtt ggt cac tgg cca act gcg ggc tat cat ttc gaa      384
Gly Ala Thr Ile Val Gly His Trp Pro Thr Ala Gly Tyr His Phe Glu
        115                 120                 125
gca tca aaa ggt ctg gca gat gac gac cac ttt gtc ggt ctg gct atc      432
Ala Ser Lys Gly Leu Ala Asp Asp Asp His Phe Val Gly Leu Ala Ile
    130                 135                 140
gac gaa gac cgt cag ccg gaa ctg acc gct gaa cgt gta gaa aaa tgg      480
Asp Glu Asp Arg Gln Pro Glu Leu Thr Ala Glu Arg Val Glu Lys Trp
145                 150                 155                 160
gtt aaa cag att tct gaa gag ttg cat ctc gac gaa att ctc aat gcc      528
Val Lys Gln Ile Ser Glu Glu Leu His Leu Asp Glu Ile Leu Asn Ala
                165                 170                 175
tga                                                                  531
 
<210>14
<211>176
<212>PRT
<213>大肠杆菌
 
<400>14
Met Ala Ile Thr Gly Ile Phe Phe Gly Ser Asp Thr Gly Asn Thr Glu
1               5                   10                  15
Asn Ile Ala Lys Met Ile Gln Lys Gln Leu Gly Lys Asp Val Ala Asp
            20                  25                  30
Val His Asp Ile Ala Lys Ser Ser Lys Glu Asp Leu Glu Ala Tyr Asp
        35                  40                  45
Ile Leu Leu Leu Gly Ile Pro Thr Trp Tyr Tyr Gly Glu Ala Gln Cys
    50                  55                  60
Asp Trp Asp Asp Phe Phe Pro Thr Leu Glu Glu Ile Asp Phe Asn Gly
65                  70                  75                  80
Lys Leu Val Ala Leu Phe Gly Cys Gly Asp Gln Glu Asp Tyr Ala Glu
                85                  90                  95
Tyr Phe Cys Asp Ala Leu Gly Thr Ile Arg Asp Ile Ile Glu Pro Arg
            100                 105                 110
Gly Ala Thr Ile Val Gly His Trp Pro Thr Ala Gly Tyr His Phe Glu
        115                 120                 125
Ala Ser Lys Gly Leu Ala Asp Asp Asp His Phe Val Gly Leu Ala Ile
    130                 135                 140
Asp Glu Asp Arg Gln Pro Glu Leu Thr Ala Glu Arg Val Glu Lys Trp
145                 150                 155                 160
Val Lys Gln Ile Ser Glu Glu Leu His Leu Asp Glu Ile Leu Asn Ala
                165                 170                 175
 
<210>15
<211>522
<212>DNA
<213>大肠杆菌
 
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(522)
 
<400>15
atg aat atg ggt ctt ttt tac ggt tcc agc acc tgt tac acc gaa atg       48
Met Asn Met Gly Leu Phe Tyr Gly Ser Ser Thr Cys Tyr Thr Glu Met
1               5                   10                  15
gcg gca gaa aaa atc cgc gat att atc ggc cca gaa ctg gtg acc tta       96
Ala Ala Glu Lys Ile Arg Asp Ile Ile Gly Pro Glu Leu Val Thr Leu
            20                  25                  30
cat aac ctc aag gac gac tcc ccg aaa tta atg gag cag tac gat gtg      144
His Asn Leu Lys Asp Asp Ser Pro Lys Leu Met Glu Gln Tyr Asp Val
        35                  40                  45
ctc att ctg ggt atc ccg acc tgg gat ttt ggt gaa atc cag gaa gac      192
Leu Ile Leu Gly Ile Pro Thr Trp Asp Phe Gly Glu Ile Gln Glu Asp
    50                  55                  60
tgg gaa gcc gtc tgg gat cag ctc gac gac ctg aac ctt gaa ggt aaa      240
Trp Glu Ala Val Trp Asp Gln Leu Asp Asp Leu Asn Leu Glu Gly Lys
65                  70                  75                  80
att gtt gcg ctg tat ggg ctt ggc gat caa ctg gga tac ggc gag tgg      288
Ile Val Ala Leu Tyr Gly Leu Gly Asp Gln Leu Gly Tyr Gly Glu Trp
                85                  90                  95
ttc ctc gat gcg ctc ggt atg ctg cat gac aaa ctc tcg acc aaa ggc      336
Phe Leu Asp Ala Leu Gly Met Leu His Asp Lys Leu Ser Thr Lys Gly
            100                 105                 110
gtg aag ttc gtc ggc tac tgg cca acg gaa gga tat gaa ttt acc agc      384
Val Lys Phe Val Gly Tyr Trp Pro Thr Glu Gly Tyr Glu Phe Thr Ser
        115                 120                 125
ccg aaa ccg gtg att gct gac ggg caa ctg ttc gtg ggt ctg gcg ctg      432
Pro Lys Pro Val Ile Ala Asp Gly Gln Leu Phe Val Gly Leu Ala Leu
    130                 135                 140
gat gaa act aac cag tat gac ctt agc gac gag cgt att cag agc tgg      480
Asp Glu Thr Asn Gln Tyr Asp Leu Ser Asp Glu Arg Ile Gln Ser Trp
145                 150                 155                 160
tgc gag caa atc ctc aac gaa atg gca gag cat tac gcc tga              522
Cys Glu Gln Ile Leu Asn Glu Met Ala Glu His Tyr Ala
                165                 170
 
<210>16
<211>173
<212>PRT
<213>大肠杆菌
 
<400>16
Met Asn Met Gly Leu Phe Tyr Gly Ser Ser Thr Cys Tyr Thr Glu Met
1               5                   10                  15
Ala Ala Glu Lys Ile Arg Asp Ile Ile Gly Pro Glu Leu Val Thr Leu
            20                  25                  30
His Asn Leu Lys Asp Asp Ser Pro Lys Leu Met Glu Gln Tyr Asp Val
        35                  40                  45
Leu Ile Leu Gly Ile Pro Thr Trp Asp Phe Gly Glu Ile Gln Glu Asp
    50                  55                  60
Trp Glu Ala Val Trp Asp Gln Leu Asp Asp Leu Asn Leu Glu Gly Lys
65                  70                  75                  80
Ile Val Ala Leu Tyr Gly Leu Gly Asp Gln Leu Gly Tyr Gly Glu Trp
                85                  90                  95
Phe Leu Asp Ala Leu Gly Met Leu His Asp Lys Leu Ser Thr Lys Gly
            100                 105                 110
Val Lys Phe Val Gly Tyr Trp Pro Thr Glu Gly Tyr Glu Phe Thr Ser
        115                 120                 125
Pro Lys Pro Val Ile Ala Asp Gly Gln Leu Phe Val Gly Leu Ala Leu
    130                 135                 140
Asp Glu Thr Asn Gln Tyr Asp Leu Ser Asp Glu Arg Ile Gln Ser Trp
145                 150                 155                 160
Cys Glu Gln Ile Leu Asn Glu Met Ala Glu His Tyr Ala
                165                 170
 
<210>17
<211>522
<212>DNA
<213>绿硫菌
 
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(522)
 
<400>17
atg aat atg ggt ctt ttt tac ggt tcc agc acc tgt tac acc gaa atg      48
Met Asn Met Gly Leu Phe Tyr Gly Ser Ser Thr Cys Tyr Thr Glu Met
1               5                   10                  15
gcg gca gaa aaa atc cgc gat att atc ggc cca gaa ctg gtg acc tta      96
Ala Ala Glu Lys Ile Arg Asp Ile Ile Gly Pro Glu Leu Val Thr Leu
            20                  25                  30
cat aac ctc aag gac gac tcc ccg aaa tta atg gag cag tac gat gtg      144
His Asn Leu Lys Asp Asp Ser Pro Lys Leu Met Glu Gln Tyr Asp Val
        35                  40                  45
ctc att ctg ggt atc ccg acc tgg gat ttt ggt gaa atc cag gaa gac      192
Leu Ile Leu Gly Ile Pro Thr Trp Asp Phe Gly Glu Ile Gln Glu Asp
    50                  55                  60
tgg gaa gcc gtc tgg gat cag ctc gac gac ctg aac ctt gaa ggt aaa      240
Trp Glu Ala Val Trp Asp Gln Leu Asp Asp Leu Asn Leu Glu Gly Lys
65                  70                  75                  80
att gtt gcg ctg tat ggg ctt ggc gat caa ctg gga tac ggc gag tgg      288
Ile Val Ala Leu Tyr Gly Leu Gly Asp Gln Leu Gly Tyr Gly Glu Trp
                85                  90                  95
ttc ctc gat gcg ctc ggt atg ctg cat gac aaa ctc tcg acc aaa ggc      336
Phe Leu Asp Ala Leu Gly Met Leu His Asp Lys Leu Ser Thr Lys Gly
            100                 105                 110
gtg aag ttc gtc ggc tac tgg cca acg gaa gga tat gaa ttt acc agc      384
Val Lys Phe Val Gly Tyr Trp Pro Thr Glu Gly Tyr Glu Phe Thr Ser
        115                 120                 125
ccg aaa ccg gtg att gct gac ggg caa ctg ttc gtg ggt ctg gcg ctg      432
Pro Lys Pro Val Ile Ala Asp Gly Gln Leu Phe Val Gly Leu Ala Leu
    130                 135                 140
gat gaa act aac cag tat gac ctt agc gac gag cgt att cag agc tgg      480
Asp Glu Thr Asn Gln Tyr Asp Leu Ser Asp Glu Arg Ile Gln Ser Trp
145                 150                 155                 160
tgc gag caa atc ctc aac gaa atg gca gag cat tac gcc tga              522
Cys Glu Gln Ile Leu Asn Glu Met Ala Glu His Tyr Ala
                165                 170
 
<210>18
<211>173
<212>PRT
<213>绿硫菌
 
<400>18
Met Asn Met Gly Leu Phe Tyr Gly Ser Ser Thr Cys Tyr Thr Glu Met
1               5                   10                  15
Ala Ala Glu Lys Ile Arg Asp Ile Ile Gly Pro Glu Leu Val Thr Leu
            20                  25                  30
His Asn Leu Lys Asp Asp Ser Pro Lys Leu Met Glu Gln Tyr Asp Val
        35                  40                  45
Leu Ile Leu Gly Ile Pro Thr Trp Asp Phe Gly Glu Ile Gln Glu Asp
    50                  55                  60
Trp Glu Ala Val Trp Asp Gln Leu Asp Asp Leu Asn Leu Glu Gly Lys
65                  70                  75                  80
Ile Val Ala Leu Tyr Gly Leu Gly Asp Gln Leu Gly Tyr Gly Glu Trp
                85                  90                  95
Phe Leu Asp Ala Leu Gly Met Leu His Asp Lys Leu Ser Thr Lys Gly
            100                 105                 110
Val Lys Phe Val Gly Tyr Trp Pro Thr Glu Gly Tyr Glu Phe Thr Ser
        115                 120                 125
Pro Lys Pro Val Ile Ala Asp Gly Gln Leu Phe Val Gly Leu Ala Leu
    130                 135                 140
Asp Glu Thr Asn Gln Tyr Asp Leu Ser Asp Glu Arg Ile Gln Ser Trp
145                 150                 155                 160
Cys Glu Gln Ile Leu Asn Glu Met Ala Glu His Tyr Ala
                165                 170
 
<210>19
<211>189
<212>DNA
<213>绿硫菌
 
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(189)
 
<400>19
atg gca ctg tat atc acc gaa gaa tgc acc tac tgc ggt gct tgc gaa      48
Met Ala Leu Tyr Ile Thr Glu Glu Cys Thr Tyr Cys Gly Ala Cys Glu
1               5                   10                  15
ccc gaa tgc ccg acc aac gct atc tcc gct ggc agc gag atc tac gtt      96
Pro Glu Cys Pro Thr Asn Ala Ile Ser Ala Gly Ser Glu Ile Tyr Val
            20                  25                  30
atc gat gcc gca tcc tgc aac gag tgc gcc ggt ttt gct gac tct cct      144
Ile Asp Ala Ala Ser Cys Asn Glu Cys Ala Gly Phe Ala Asp Ser Pro
        35                  40                  45
gct tgc gtt gct gtc tgc ccg gca gag tgc atc gtt cag ggc tga          189
Ala Cys Val Ala Val Cys Pro Ala Glu Cys Ile Val Gln Gly
    50                  55                  60
 
<210>20
<211>62
<212>PRT
<213>绿硫菌
 
<400>20
Met Ala Leu Tyr Ile Thr Glu Glu Cys Thr Tyr Cys Gly Ala Cys Glu
1               5                   10                  15
Pro Glu Cys Pro Thr Asn Ala Ile Ser Ala Gly Ser Glu Ile Tyr Val
            20                  25                  30
Ile Asp Ala Ala Ser Cys Asn Glu Cys Ala Gly Phe Ala Asp Ser Pro
        35                  40                  45
Ala Cys Val Ala Val Cys Pro Ala Glu Cys Ile Val Gln Gly
    50                  55                  60
 
<210>21
<211>2676
<212>DNA
<213>大肠杆菌
 
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(2676)
 
<400>21
atg gct gtt act aat gtc gct gaa ctt aac gca ctc gta gag cgt gta    48
Met Ala Val Thr Asn Val Ala Glu Leu Asn Ala Leu Val Glu Arg Val
  1               5                     10                  15
aaa aaa gcc cag cgt gaa tat gcc agt ttc act caa gag caa gta gac         96
Lys Lys Ala Gln Arg Glu Tyr Ala Ser Phe Thr Gln Glu Gln Val Asp
             20                  25                  30
aaa atc ttc cgc gcc gcc gct ctg gct gct gca gat gct cga atc cca         144
Lys Ile Phe Arg Ala Ala Ala Leu Ala Ala Ala Asp Ala Arg Ile Pro
         35                  40                  45
ctc gcg aaa atg gcc gtt gcc gaa tcc ggc atg ggt atc gtc gaa gat         192
Leu Ala Lys Met Ala Val Ala Glu Ser Gly Met Gly Ile Val Glu Asp
     50                  55                  60
aaa gtg atc aaa aac cac ttt gct tct gaa tat atc tac aac gcc tat         240
Lys Val Ile Lys Asn His Phe Ala Ser Glu Tyr Ile Tyr Asn Ala Tyr
 65                  70                  75                  80
aaa gat gaa aaa acc tgt ggt gtt ctg tct gaa gac gac act ttt ggt         288
Lys Asp Glu Lys Thr Cys Gly Val Leu Ser Glu Asp Asp Thr Phe Gly
                 85                  90                  95
acc atc act atc gct gaa cca atc ggt att att tgc ggt atc gtt ccg         336
Thr Ile Thr Ile Ala Glu Pro Ile Gly Ile Ile Cys Gly Ile Val Pro
            100                 105                 110
acc act aac ccg act tca act gct atc ttc aaa tcg ctg atc agt ctg         384
Thr Thr Asn Pro Thr Ser Thr Ala Ile Phe Lys Ser Leu Ile Ser Leu
            115                 120                 125
aag acc cgt aac gcc att atc ttc tcc ccg cac ccg cgt gca aaa gat         432
Lys Thr Arg Asn Ala Ile Ile Phe Ser Pro His Pro Arg Ala Lys Asp
        130                 135                 140
gcc acc aac aaa gcg gct gat atc gtt ctg cag gct gct atc gct gcc         480
Ala Thr Asn Lys Ala Ala Asp Ile Val Leu Gln Ala Ala Ile Ala Ala
145                 150                 155                 160
ggt gct ccg aaa gat ctg atc ggc tgg atc gat caa cct tct gtt gaa         528
Gly Ala Pro Lys Asp Leu Ile Gly Trp Ile Asp Gln Pro Ser Val Glu
                165                 170                 175
ctg tct aac gca ctg atg cac cac cca gac atc aac ctg atc ctc gcg         576
Leu Ser Asn Ala Leu Met His His Pro Asp Ile Asn Leu Ile Leu Ala
            180                 185                 190
act ggt ggt ccg ggc atg gtt aaa gcc gca tac agc tcc ggt aaa cca         624
Thr Gly Gly Pro Gly Met Val Lys Ala Ala Tyr Ser Ser Gly Lys Pro
        195                 200                 205
gct atc ggt gta ggc gcg ggc aac act cca gtt gtt atc gat gaa act         672
Ala Ile Gly Val Gly Ala Gly Asn Thr Pro Val Val Ile Asp Glu Thr
    210                 215                 220
gct gat atc aaa cgt gca gtt gca tct gta ctg atg tcc aaa acc ttc         720
Ala Asp Ile Lys Arg Ala Val Ala Ser Val Leu Met Ser Lys Thr Phe
225                 230                 235                 240
gac aac ggc gta atc tgt gct tct gaa cag tct gtt gtt gtt gtt gac         768
Asp Asn Gly Val Ile Cys Ala Ser Glu Gln Ser Val Val Val Val Asp
                245                 250                 255
tct gtt tat gac gct gta cgt gaa cgt ttt gca acc cac ggc ggc tat         816
Ser Val Tyr Asp Ala Val Arg Glu Arg Phe Ala Thr His Gly Gly Tyr
            260                 265                 270
ctg ttg cag ggt aaa gag ctg aaa gct gtt cag gat gtt atc ctg aaa         864
Leu Leu Gln Gly Lys Glu Leu Lys Ala Val Gln Asp Val Ile Leu Lys
        275                 280                 285
aac ggt gcg ctg aac gcg gct atc gtt ggt cag cca gcc tat aaa att         912
Asn Gly Ala Leu Asn Ala Ala Ile Val Gly Gln Pro Ala Tyr Lys Ile
    290                 295                 300
gct gaa ctg gca ggc ttc tct gta cca gaa aac acc aag att ctg atc         960
Ala Glu Leu Ala Gly Phe Ser Val Pro Glu Asn Thr Lys Ile Leu Ile
305                 310                 315                 320
ggt gaa gtg acc gtt gtt gat gaa agc gaa ccg ttc gca cat gaa aaa         1008
Gly Glu Val Thr Val Val Asp Glu Ser Glu Pro Phe Ala His Glu Lys
                325                 330                 335
ctg tcc ccg act ctg gca atg tac cgc gct aaa gat ttc gaa gac gcg         1056
Leu Ser Pro Thr Leu Ala Met Tyr Arg Ala Lys Asp Phe Glu Asp Ala
            340                 345                 350
gta gaa aaa gca gag aaa ctg gtt gct atg ggc ggt atc ggt cat acc         1104
Val Glu Lys Ala Glu Lys Leu Val Ala Met Gly Gly Ile Gly His Thr
        355                 360                 365
tct tgc ctg tac act gac cag gat aac caa ccg gct cgc gtt tct tac         1152
Ser Cys Leu Tyr Thr Asp Gln Asp Asn Gln Pro Ala Arg Val Ser Tyr
    370                 375                 380
ttc ggt cag aaa atg aaa acg gcg cgt atc ctg att aac acc cca gcg         1200
Phe Gly Gln Lys Met Lys Thr Ala Arg Ile Leu Ile Asn Thr Pro Ala
385                 390                 395                 400
tct cag ggt ggt atc ggt gac ctg tat aac ttc aaa ctc gca cct tcc        1248
Ser Gln Gly Gly Ile Gly Asp Leu Tyr Asn Phe Lys Leu Ala Pro Ser
                405                 410                 415
ctg act ctg ggt tgt ggt tct tgg ggt ggt aac tcc atc tct gaa aac        1296
Leu Thr Leu Gly Cys Gly Ser Trp Gly Gly Asn Ser Ile Ser Glu Asn
            420                 425                 430
gtt ggt ccg aaa cac ctg atc aac aag aaa acc gtt gct aag cga gct        1344
Val Gly Pro Lys His Leu Ile Asn Lys Lys Thr Val Ala Lys Arg Ala
        435                 440                 445
gaa aac atg ttg tgg cac aaa ctt ccg aaa tct atc tac ttc cgc cgt        1392
Glu Asn Met Leu Trp His Lys Leu Pro Lys Ser Ile Tyr Phe Arg Arg
    450                 455                 460
ggc tcc ctg cca atc gcg ctg gat gaa gtg att act gat ggc cac aaa        1440
Gly Ser Leu Pro Ile Ala Leu Asp Glu Val Ile Thr Asp Gly His Lys
465                 470                 475                 480
cgt gcg ctc atc gtg act gac cgc ttc ctg ttc aac aat ggt tat gct        1488
Arg Ala Leu Ile Val Thr Asp Arg Phe Leu Phe Asn Asn Gly Tyr Ala
                485                 490                 495
gat cag atc act tcc gta ctg aaa gca gca ggc gtt gaa act gaa gtc        1536
Asp Gln Ile Thr Ser Val Leu Lys Ala Ala Gly Val Glu Thr Glu Val
            500                 505                 510
ttc ttc gaa gta gaa gcg gac ccg acc ctg agc atc gtt cgt aaa ggt        1584
Phe Phe Glu Val Glu Ala Asp Pro Thr Leu Ser Ile Val Arg Lys Gly
        515                 520                 525
gca gaa ctg gca aac tcc ttc aaa cca gac gtg att atc gcg ctg ggt        1632
Ala Glu Leu Ala Asn Ser Phe Lys Pro Asp Val Ile Ile Ala Leu Gly
    530                 535                 540
ggt ggt tcc ccg atg gac gcc gcg aag atc atg tgg gtt atg tac gaa        1680
Gly Gly Ser Pro Met Asp Ala Ala Lys Ile Met Trp Val Met Tyr Glu
545                 550                 555                 560
cat ccg gaa act cac ttc gaa gag ctg gcg ctg cgc ttt atg gat atc        1728
His Pro Glu Thr His Phe Glu Glu Leu Ala Leu Arg Phe Met Asp Ile
                565                 570                 575
cgt aaa cgt atc tac aag ttc ccg aaa atg ggc gtg aaa gcg aaa atg        1776
Arg Lys Arg Ile Tyr Lys Phe Pro Lys Met Gly Val Lys Ala Lys Met
            580                 585                 590
atc gct gtc acc acc act tct ggt aca ggt tct gaa gtc act ccg ttt        1824
Ile Ala Val Thr Thr Thr Ser Gly Thr Gly Ser Glu Val Thr Pro Phe
        595                 600                 605
gcg gtt gta act gac gac gct act ggt cag aaa tat ccg ctg gca gac        1872
Ala Val Val Thr Asp Asp Ala Thr Gly Gln Lys Tyr Pro Leu Ala Asp
    610                 615                 620
tat gcg ctg act ccg gat atg gcg att gtc gac gcc aac ctg gtt atg        1920
Tyr Ala Leu Thr Pro Asp Met Ala Ile Val Asp Ala Asn Leu Val Met
625                 630                 635                 640
gac atg ccg aag tcc ctg tgt gct ttc ggt ggt ctg gac gca gta act        1968
Asp Met Pro Lys Ser Leu Cys Ala Phe Gly Gly Leu Asp Ala Val Thr
                645                 650                 655
cac gcc atg gaa gct tat gtt tct gta ctg gca tct gag ttc tct gat        2016
His Ala Met Glu Ala Tyr Val Ser Val Leu Ala Ser Glu Phe Ser Asp
            660                 665                 670
ggt cag gct ctg cag gca ctg aaa ctg ctg aaa gaa tat ctg cca gcg        2064
Gly Gln Ala Leu Gln Ala Leu Lys Leu Leu Lys Glu Tyr Leu Pro Ala
        675                 680                 685
tcc tac cac gaa ggg tct aaa aat ccg gta gcg cgt gaa cgt gtt cac        2112
Ser Tyr His Glu Gly Ser Lys Asn Pro Val Ala Arg Glu Arg Val His
    690                 695                 700
agt gca gcg act atc gcg ggt atc gcg ttt gcg aac gcc ttc ctg ggt        2160
Ser Ala Ala Thr Ile Ala Gly Ile Ala Phe Ala Asn Ala Phe Leu Gly
705                 710                 715                 720
gta tgt cac tca atg gcg cac aaa ctg ggt tcc cag ttc cat att ccg        2208
Val Cys His Ser Met Ala His Lys Leu Gly Ser Gln Phe His Ile Pro
                725                 730                 735
cac ggt ctg gca aac gcc ctg ctg att tgt aac gtt att cgc tac aat        2256
His Gly Leu Ala Asn Ala Leu Leu Ile Cys Asn Val Ile Arg Tyr Asn
            740                 745                 750
gcg aac gac aac ccg acc aag cag act gca ttc agc cag tat gac cgt        2304
Ala Asn Asp Asn Pro Thr Lys Gln Thr Ala Phe Ser Gln Tyr Asp Arg
        755                 760                 765
ccg cag gct cgc cgt cgt tat gct gaa att gcc gac cac ttg ggt ctg        2352
Pro Gln Ala Arg Arg Arg Tyr Ala Glu Ile Ala Asp His Leu Gly Leu
    770                 775                 780
agc gca ccg ggc gac cgt act gct gct aag atc gag aaa ctg ctg gca        2400
Ser Ala Pro Gly Asp Arg Thr Ala Ala Lys Ile Glu Lys Leu Leu Ala
785                 790                 795                 800
tgg ctg gaa acg ctg aaa gct gaa ctg ggt att ccg aaa tct atc cgt        2448
Trp Leu Glu Thr Leu Lys Ala Glu Leu Gly Ile Pro Lys Ser Ile Arg
                805                 810                 815
gaa gct ggc gtt cag gaa gca gac ttc ctg gcg aac gtg gat aaa ctg        2496
Glu Ala Gly Val Gln Glu Ala Asp Phe Leu Ala Asn Val Asp Lys Leu
            820                 825                 830
tct gaa gat gca ttc gat gac cag tgc acc ggc gct aac ccg cgt tac        2544
Ser Glu Asp Ala Phe Asp Asp Gln Cys Thr Gly Ala Asn Pro Arg Tyr
        835                 840                 845
ccg ctg atc tcc gag ctg aaa cag att ctg ctg gat acc tac tac ggt        2592
Pro Leu Ile Ser Glu Leu Lys Gln Ile Leu Leu Asp Thr Tyr Tyr Gly
    850                 855                 860
cgt gat tat gta gaa ggt gaa act gca gcg aag aaa gaa gct gct ccg        2640
Arg Asp Tyr Val Glu Gly Glu Thr Ala Ala Lys Lys Glu Ala Ala Pro
865                 870                 875                 880
gct aaa gct gag aaa aaa gcg aaa aaa tcc gct taa                        2676
Ala Lys Ala Glu Lys Lys Ala Lys Lys Ser Ala
                885                 890
 
<210>22
<211>891
<212>PRT
<213>大肠杆菌
 
<400>22
Met Ala Val Thr Asn Val Ala Glu Leu Asn Ala Leu Val Glu Arg Val
  1               5                  10                  15
Lys Lys Ala Gln Arg Glu Tyr Ala Ser Phe Thr Gln Glu Gln Val Asp
             20                  25                  30
Lys Ile Phe Arg Ala Ala Ala Leu Ala Ala Ala Asp Ala Arg Ile Pro
         35                  40                  45
Leu Ala Lys Met Ala Val Ala Glu Ser Gly Met Gly Ile Val Glu Asp
     50                  55                  60
Lys Val Ile Lys Asn His Phe Ala Ser Glu Tyr Ile Tyr Asn Ala Tyr
 65                  70                  75                  80
Lys Asp Glu Lys Thr Cys Gly Val Leu Ser Glu Asp Asp Thr Phe Gly
                 85                  90                  95
Thr Ile Thr Ile Ala Glu Pro Ile Gly Ile Ile Cys Gly Ile Val Pro
            100                 105                 110
Thr Thr Asn Pro Thr Ser Thr Ala Ile Phe Lys Ser Leu Ile Ser Leu 
        115                 120                 125
Lys Thr Arg Asn Ala Ile Ile Phe Ser Pro His Pro Arg Ala Lys Asp
    130                 135                 140
Ala Thr Asn Lys Ala Ala Asp Ile Val Leu Gln Ala Ala Ile Ala Ala
145                 150                 155                 160
Gly Ala Pro Lys Asp Leu Ile Gly Trp Ile Asp Gln Pro Ser Val Glu
                165                 170                 175
Leu Ser Asn Ala Leu Met His His Pro Asp Ile Asn Leu Ile Leu Ala
            180                 185                 190
Thr Gly Gly Pro Gly Met Val Lys Ala Ala Tyr Ser Ser Gly Lys Pro
        195                 200                 205
Ala Ile Gly Val Gly Ala Gly Asn Thr Pro Val Val Ile Asp Glu Thr
    210                 215                 220
Ala Asp Ile Lys Arg Ala Val Ala Ser Val Leu Met Ser Lys Thr Phe
225                 230                 235                 240
Asp Asn Gly Val Ile Cys Ala Ser Glu Gln Ser Val Val Val Val Asp
                245                 250                 255
Ser Val Tyr Asp Ala Val Arg Glu Arg Phe Ala Thr His Gly Gly Tyr
            260                 265                 270
Leu Leu Gln Gly Lys Glu Leu Lys Ala Val Gln Asp Val Ile Leu Lys
        275                 280                 285
Asn Gly Ala Leu Asn Ala Ala Ile Val Gly Gln Pro Ala Tyr Lys Ile
    290                 295                 300
Ala Glu Leu Ala Gly Phe Ser Val Pro Glu Asn Thr Lys Ile Leu Ile
305                 310                 315                 320
Gly Glu Val Thr Val Val Asp Glu Ser Glu Pro Phe Ala His Glu Lys
                325                 330                 335
Leu Ser Pro Thr Leu Ala Met Tyr Arg Ala Lys Asp Phe Glu Asp Ala
            340                 345                 350
Val Glu Lys Ala Glu Lys Leu Val Ala Met Gly Gly Ile Gly His Thr
        355                 360                 365
Ser Cys Leu Tyr Thr Asp Gln Asp Asn Gln Pro Ala Arg Val Ser Tyr
    370                 375                 380
Phe Gly Gln Lys Met Lys Thr Ala Arg Ile Leu Ile Asn Thr Pro Ala
385                 390                 395                 400
Ser Gln Gly Gly Ile Gly Asp Leu Tyr Asn Phe Lys Leu Ala Pro Ser
                405                 410                 415
Leu Thr Leu Gly Cys Gly Ser Trp Gly Gly Asn Ser Ile Ser Glu Asn
            420                 425                 430
Val Gly Pro Lys His Leu Ile Asn Lys Lys Thr Val Ala Lys Arg Ala
        435                 440                 445
Glu Asn Met Leu Trp His Lys Leu Pro Lys Ser Ile Tyr Phe Arg Arg
    450                 455                 460
Gly Ser Leu Pro Ile Ala Leu Asp Glu Val Ile Thr Asp Gly His Lys
465                 470                 475                 480
Arg Ala Leu Ile Val Thr Asp Arg Phe Leu Phe Asn Asn Gly Tyr Ala
                485                 490                 495
Asp Gln Ile Thr Ser Val Leu Lys Ala Ala Gly Val Glu Thr Glu Val
            500                 505                 510
Phe Phe Glu Val Glu Ala Asp Pro Thr Leu Ser Ile Val Arg Lys Gly
        515                 520                 525
Ala Glu Leu Ala Asn Ser Phe Lys Pro Asp Val Ile Ile Ala Leu Gly
    530                 535                 540
Gly Gly Ser Pro Met Asp Ala Ala Lys Ile Met Trp Val Met Tyr Glu
545                 550                 555                 560
His Pro Glu Thr His Phe Glu Glu Leu Ala Leu Arg Phe Met Asp Ile
                565                 570                 575
Arg Lys Arg Ile Tyr Lys Phe Pro Lys Met Gly Val Lys Ala Lys Met
            580                 585                 590
Ile Ala Val Thr Thr Thr Ser Gly Thr Gly Ser Glu Val Thr Pro Phe
        595                 600                 605
Ala Val Val Thr Asp Asp Ala Thr Gly Gln Lys Tyr Pro Leu Ala Asp
    610                 615                 620
Tyr Ala Leu Thr Pro Asp Met Ala Ile Val Asp Ala Asn Leu Val Met
625                 630                 635                 640
Asp Met Pro Lys Ser Leu Cys Ala Phe Gly Gly Leu Asp Ala Val Thr
                645                 650                 655
His Ala Met Glu Ala Tyr Val Ser Val Leu Ala Ser Glu Phe Ser Asp
            660                 665                 670
Gly Gln Ala Leu Gln Ala Leu Lys Leu Leu Lys Glu Tyr Leu Pro Ala
        675                 680                 685
Ser Tyr His Glu Gly Ser Lys Asn Pro Val Ala Arg Glu Arg Val His
    690                 695                 700
Ser Ala Ala Thr Ile Ala Gly Ile Ala Phe Ala Asn Ala Phe Leu Gly
705                 710                 715                 720
Val Cys His Ser Met Ala His Lys Leu Gly Ser Gln Phe His Ile Pro
                725                 730                 735
His Gly Leu Ala Asn Ala Leu Leu Ile Cys Asn Val Ile Arg Tyr Asn
            740                 745                 750
Ala Asn Asp Asn Pro Thr Lys Gln Thr Ala Phe Ser Gln Tyr Asp Arg
        755                 760                 765
Pro Gln Ala Arg Arg Arg Tyr Ala Glu Ile Ala Asp His Leu Gly Leu
    770                 775                 780
Ser Ala Pro Gly Asp Arg Thr Ala Ala Lys Ile Glu Lys Leu Leu Ala
785                 790                 795                 800
Trp Leu Glu Thr Leu Lys Ala Glu Leu Gly Ile Pro Lys Ser Ile Arg
                805                 810                 815
Glu Ala Gly Val Gln Glu Ala Asp Phe Leu Ala Asn Val Asp Lys Leu
            820                 825                 830
Ser Glu Asp Ala Phe Asp Asp Gln Cys Thr Gly Ala Asn Pro Arg Tyr
        835                 840                 845
Pro Leu Ile Ser Glu Leu Lys Gln Ile Leu Leu Asp Thr Tyr Tyr Gly
    850                 855                 860
Arg Asp Tyr Val Glu Gly Glu Thr Ala Ala Lys Lys Glu Ala Ala Pro
865                 870                 875                 880
Ala Lys Ala Glu Lys Lys Ala Lys Lys Ser Ala
                885                 890
<210>23
<211>69
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物
 
<400>23
cgttattgtt atctagttgt gcaaaacatg ctaatgtagc attacgcccc gccctgccac    60
tca tcgcag                                                           69
 
<210>24
<211>58
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物
 
<400>24
attagtaaca gccataatgc tctcctgata atgttaaacc gctcacaatt ccacacat     58
 
<210>25
<211>183
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>杂合启动子
 
<400>25
ctagatctct cacctaccaa acaatgcccc cctgcaaaaa ataaattcat aaaaaacata  60
cagataacca tctgcggtga taaattatct ctggcggtgt tgacaattaa tcatcggctc  120
gtataatgtg tggaattgtg agcggtttaa cattatcagg agagcattat ggctgttact  180
aat                                                                183
 
<210>26
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物
 
<400>26
acttgttctt gagtgaaact ggca                                        24
 
<210>27
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物
 
<400>27
aagacgcgct gacaatacgc ct                                          22
 
<210>28
<211>69
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物
<400>28
cgttattgtt atctagttgt gcaaaacatg ctaatgtagc atcagaaaaa ctcatcgagc    60
atcaaatga                                                            69
 
<210>29
<211>65
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物
 
<400>29
agccggagca gcttctttct tcgctgcagt ttcaccttct acgttgtgtc tcaaaatctc    60
tgatg                                                                65
 
<210>30
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物
 
<400>30
aagacgcgct gacaatacgc cttt                                           24
 
<210>31
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物
 
<400>31
aaggggccgt ttatgttgcc agac                                           24
 
<210>32
<211>69
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物
 
<400>32
catgtgggtt atgtacgaac atccggaaac tcacttcgaa aagctggcgc tgcgctttat    60
ggatatccg                                                            69
 
<210>33
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物
 
<400>33
aaggggccgt ttatgttgcc agac                                           24
 
<210>34
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
 
<400>34
aagacgcgct gacaatacgc cttt                                           24
 
<210>35
<211>51
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物
 
<400>35
ttttctagat aaggaggaat gacgtatgac ccggacattc aagacaatgg a             51
 
<210>36
<211>39
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物
 
<400>36
aaatctagat tcagcttatg cttcgccttc aatcgaacg                           39
 
<210>37
<211>344
<212>DNA
<213>大肠杆菌
 
<400>37
aagctttacg cgaacgagcc atgacattgc tgacgactct ggcagtggca gatgacataa    60
aactggtcga ctggttacaa caacgcctgg ggcttttaga gcaacgagac acggcaatgt    120
tgcaccgttt gctgcatgat attgaaaaaa atatcaccaa ataaaaaacg ccttagtaag    180
tatttttcag cttttcattc tgactgcaac gggcaatatg tctctgtgtg gattaaaaaa    240
agagtgtctg atagcagctt ctgaactggt tacctgccgt gagtaaatta aaattttatt    300
gacttaggtc actaaatact ttaaccaata taggcgactc taga                     344
 
<210>38
<211>53
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物
 
<400>38
ttttctggta cctaaggagg aatgacgtat gattactatt gacggtaatg gcg          53
 
<210>39
<211>40
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物
 
<400>39
gagagaccgg gtaccttaat cggtgttgct tttttccgct                         40
 
<210>40
<211>49
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物
 
<400>40
aattggtacc taaggaggaa tgacgtatga ccagtggccc aaaaccggc    49
 
<210>41
<211>42
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物
 
<400>41
gcgacgccta gcttagggta ccttaccatg cctcgatatt gt           42
 
<210>42
<211>35
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物
 
<400>42
ctctctggcc ccgggctgat tgatttgatc gattg                  35
 
<210>43
<211>33
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物
 
<400>43
gagagacccc gggttaccag taatgctccg ctg                    33
 
<210>44
<211>30
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物
 
<400>44
gcgcgaattc gggcgatgat gttgacgcca                        30
 
<210>45
<211>30
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物
 
<400>45
gcgcgaattc gtcccatact aacctctgtt                        30
 
<210>46
<211>2664
<212>DNA
<213>大肠杆菌
 
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(2664)
 
<400>46
atg tca gaa cgt ttc cca aat gac gtg gat ccg atc gaa act cgc gac    48
Met Ser Glu Arg Phe Pro Asn Asp Val Asp Pro Ile Glu Thr Arg Asp
1               5                   10                  15
tgg ctc cag gcg atc gaa tcg gtc atc cgt gaa gaa ggt gtt gag cgt    96
Trp Leu Gln Ala Ile Glu Ser Val Ile Arg Glu Glu Gly Val Glu Arg
            20                  25                  30
gct cag tat ctg atc gac caa ctg ctt gct gaa gcc cgc aaa ggc ggt    144
Ala Gln Tyr Leu Ile Asp Gln Leu Leu Ala Glu Ala Arg Lys Gly Gly
        35                  40                  45
gta aac gta gcc gca ggc aca ggt atc agc aac tac atc aac acc atc    192
Val Asn Val Ala Ala Gly Thr Gly Ile Ser Asn Tyr Ile Asn Thr Ile
    50                  55                  60
ccc gtt gaa gaa caa ccg gag tat ccg ggt aat ctg gaa ctg gaa cgc    240
Pro Val Glu Glu Gln Pro Glu Tyr Pro Gly Asn Leu Glu Leu Glu Arg
65                  70                  75                  80
cgt att cgt tca gct atc cgc tgg aac gcc atc atg acg gtg ctg cgt    288
Arg Ile Arg Ser Ala Ile Arg Trp Asn Ala Ile Met Thr Val Leu Arg
                85                  90                  95
gcg tcg aaa aaa gac ctc gaa ctg ggc ggc cat atg gcg tcc ttc cag    336
Ala Ser Lys Lys Asp Leu Glu Leu Gly Gly Hi s Met Ala Ser Phe Gln
            100                 105                 110
tct tcc gca acc att tat gat gtg tgc ttt aac cac ttc ttc cgt gca    384
Ser Ser Ala Thr Ile Tyr Asp Val Cys Phe Asn His Phe Phe Arg Ala
        115                 120                 125
cgc aac gag cag gat ggc ggc gac ctg gtt tac ttc cag ggc cac atc    432
Arg Asn Glu Gln Asp Gly Gly Asp Leu Val Tyr Phe Gln Gly Hi s Ile
    130                 135                 140
tcc ccg ggc gtg tac gct cgt gct ttc ctg gaa ggt cgt ctg act cag    480
Ser Pro Gly Val Tyr Ala Arg Ala Phe Leu Glu Gly Arg Leu Thr Gln
145                 150                 155                 160
gag cag ctg gat aac ttc cgt cag gaa gtt cac ggc aat ggc ctc tct    528
Glu Gln Leu Asp Asn Phe Arg Gln Glu Val Hi s Gly Asn Gly Leu Ser
                165                 170                 175
tcc tat ccg cac ccg aaa ctg atg ccg gaa ttc tgg cag ttc ccg acc    576
Ser Tyr Pro His Pro Lys Leu Met Pro Glu Phe Trp Gln Phe Pro Thr
            180                 185                 190
gta tct atg ggt ctg ggt ccg att ggt gct att tac cag gct aaa ttc    624
Val Ser Met Gly Leu Gly Pro Ile Gly Ala Ile Tyr Gln Ala Lys Phe
        195                 200                 205
ctg aaa tat ctg gaa cac cgt ggc ctg aaa gat acc tct aaa caa acc    672
Leu Lys Tyr Leu Glu His Arg Gly Leu Lys Asp Thr Ser Lys Gln Thr
    210                 215                 220
gtt tac gcg ttc ctc ggt gac ggt gaa atg gac gaa ccg gaa tcc aaa    720
Val Tyr Ala Phe Leu Gly Asp Gly Glu Met Asp Glu Pro Glu Ser Lys
225                 230                 235                 240
ggt gcg atc acc atc gct acc cgt gaa aaa ctg gat aac ctg gtc ttc    768
Gly Ala Ile Thr Ile Ala Thr Arg Glu Lys Leu Asp Asn Leu Val Phe
                245                 250                 255
gtt atc aac tgt aac ctg cag cgt ctt gac ggc ccg gtc acc ggt aac    816
Val Ile Asn Cys Asn Leu Gln Arg Leu Asp Gly Pro Val Thr Gly Asn
            260                 265                 270
ggc aag atc atc aac gaa ctg gaa ggc atc ttc gaa ggt gct ggc tgg    864
Gly Lys Ile Ile Asn Glu Leu Glu Gly Ile Phe Glu Gly Ala Gly Trp
        275                 280                 285
aac gtg atc aaa gtg atg tgg ggt agc cgt tgg gat gaa ctg ctg cgt    912
Asn Val Ile Lys Val Met Trp Gly Ser Arg Trp Asp Glu Leu Leu Arg
    290                 295                 300
aag gat acc agc ggt aaa ctg atc cag ctg atg aac gaa acc gtt gac    960
Lys Asp Thr Ser Gly Lys Leu Ile Gln Leu Met Asn Glu Thr Val Asp
305                 310                 315                 320
ggc gac tac cag acc ttc aaa tcg aaa gat ggt gcg tac gtt cgt gaa    1008
Gly Asp Tyr Gln Thr Phe Lys Ser Lys Asp Gly Ala Tyr Val Arg Glu
                325                 330                 335
cac ttc ttc ggt aaa tat cct gaa acc gca gca ctg gtt gca gac tgg    1056
His Phe Phe Gly Lys Tyr Pro Glu Thr Ala Ala Leu Val Ala Asp Trp
            340                 345                 350
act gac gag cag atc tgg gca ctg aac cgt ggt ggt cac gat ccg aag     1104
Thr Asp Glu Gln Ile Trp Ala Leu Asn Arg Gly Gly His Asp Pro Lys
        355                 360                 365
aaa atc tac gct gca ttc aag aaa gcg cag gaa acc aaa ggc aaa gcg     1152
Lys Ile Tyr Ala Ala Phe Lys Lys Ala Gln Glu Thr Lys Gly Lys Ala
    370                 375                 380
aca gta atc ctt gct cat acc att aaa ggt tac ggc atg ggc gac gcg     1200
Thr Val Ile Leu Ala His Thr Ile Lys Gly Tyr Gly Met Gly Asp Ala
385                 390                 395                 400
gct gaa ggt aaa aac atc gcg cac cag gtt aag aaa atg aac atg gac     1248
Ala Glu Gly Lys Asn Ile Ala His Gln Val Lys Lys Met Asn Met Asp
                405                 410                 415
ggt gtg cgt cat atc cgc gac cgt ttc aat gtg ccg gtg tct gat gca     1296
Gly Val Arg His Ile Arg Asp Arg Phe Asn Val Pro Val Ser Asp Ala
            420                 425                 430
gat atc gaa aaa ctg ccg tac atc acc ttc ccg gaa ggt tct gaa gag     1344
Asp Ile Glu Lys Leu Pro Tyr Ile Thr Phe Pro Glu Gly Ser Glu Glu
        435                 440                 445
cat acc tat ctg cac gct cag cgt cag aaa ctg cac ggt tat ctg cca     1392
His Thr Tyr Leu His Ala Gln Arg Gln Lys Leu His Gly Tyr Leu Pro
    450                 455                 460
agc cgt cag ccg aac ttc acc gag aag ctt gag ctg ccg agc ctg caa     1440
Ser Arg Gln Pro Asn Phe Thr Glu Lys Leu Glu Leu Pro Ser Leu Gln
465                 470                 475                 480
gac ttc ggc gcg ctg ttg gaa gag cag agc aaa gag atc tct acc act     1488
Asp Phe Gly Ala Leu Leu Glu Glu Gln Ser Lys Glu Ile Ser Thr Thr
                485                 490                 495
atc gct ttc gtt cgt gct ctg aac gtg atg ctg aag aac aag tcg atc     1536
Ile Ala Phe Val Arg Ala Leu Asn Val Met Leu Lys Asn Lys Ser Ile
            500                 505                 510
aaa gat cgt ctg gta ccg atc atc gcc gac gaa gcg cgt act ttc ggt     1584
Lys Asp Arg Leu Val Pro Ile Ile Ala Asp Glu Ala Arg Thr Phe Gly
        515                 520                 525
atg gaa ggt ctg ttc cgt cag att ggt att tac agc ccg aac ggt cag     1632
Met Glu Gly Leu Phe Arg Gln Ile Gly Ile Tyr Ser Pro Asn Gly Gln
    530                 535                 540
cag tac acc ccg cag gac cgc gag cag gtt gct tac tat aaa gaa gac     1680
Gln Tyr Thr Pro Gln Asp Arg Glu Gln Val Ala Tyr Tyr Lys Glu Asp
545                 550                 555                 560
gag aaa ggt cag att ctg cag gaa ggg atc aac gag ctg ggc gca ggt     1728
Glu Lys Gly Gln Ile Leu Gln Glu Gly Ile Asn Glu Leu Gly Ala Gly
                565                 570                 575
tgt tcc tgg ctg gca gcg gcg acc tct tac agc acc aac aat ctg ccg     1776
Cys Ser Trp Leu Ala Ala Ala Thr Ser Tyr Ser Thr Asn Asn Leu Pro
            580                 585                 590
atg atc ccg ttc tac atc tat tac tcg atg ttc ggc ttc cag cgt att     1824
Met Ile Pro Phe Tyr Ile Tyr Tyr Ser Met Phe Gly Phe Gln Arg Ile
        595                 600                 605
ggc gat ctg tgc tgg gcg gct ggc gac cag caa gcg cgt ggc ttc ctg     1872
Gly Asp Leu Cys Trp Ala Ala Gly Asp Gln Gln Ala Arg Gly Phe Leu
    610                 615                 620
atc ggc ggt act tcc ggt cgt acc acc ctg aac ggc gaa ggt ctg cag     1920
Ile Gly Gly Thr Ser Gly Arg Thr Thr Leu Asn Gly Glu Gly Leu Gln
625                 630                 635                 640
cac gaa gat ggt cac agc cac att cag tcg ctg act atc ccg aac tgt     1968
His Glu Asp Gly His Ser His Ile Gln Ser Leu Thr Ile Pro Asn Cys
                645                 650                 655
atc tct tac gac ccg gct tac gct tac gaa gtt gct gtc atc atg cat     2016
Ile Ser Tyr Asp Pro Ala Tyr Ala Tyr Glu Val Ala Val Ile Met His
            660                 665                 670
gac ggt ctg gag cgt atg tac ggt gaa aaa caa gag aac gtt tac tac     2064
Asp Gly Leu Glu Arg Met Tyr Gly Glu Lys Gln Glu Asn Val Tyr Tyr
        675                 680                 685
tac atc act acg ctg aac gaa aac tac cac atg ccg gca atg ccg gaa     2112
Tyr Ile Thr Thr Leu Asn Glu Asn Tyr His Met Pro Ala Met Pro Glu
    690                 695                 700
ggt gct gag gaa ggt atc cgt aaa ggt atc tac aaa ctc gaa act att     2160
Gly Ala Glu Glu Gly Ile Arg Lys Gly Ile Tyr Lys Leu Glu Thr Ile
705                 710                 715                 720
gaa ggt agc aaa ggt aaa gtt cag ctg ctc ggc tcc ggt tct atc ctg     2208
Glu Gly Ser Lys Gly Lys Val Gln Leu Leu Gly Ser Gly Ser Ile Leu
                725                 730                 735
cgt cac gtc cgt gaa gca gct gag atc ctg gcg aaa gat tac ggc gta     2256
Arg His Val Arg Glu Ala Ala Glu Ile Leu Ala Lys Asp Tyr Gly Val
            740                 745                 750
ggt tct gac gtt tat agc gtg acc tcc ttc acc gag ctg gcg cgt gat     2304
Gly Ser Asp Val Tyr Ser Val Thr Ser Phe Thr Glu Leu Ala Arg Asp
        755                 760                 765
ggt cag gat tgt gaa cgc tgg aac atg ctg cac ccg ctg gaa act ccg     2352
Gly Gln Asp Cys Glu Arg Trp Asn Met Leu His Pro Leu Glu Thr Pro
    770                 775                 780
cgc gtt ccg tat atc gct cag gtg atg aac gac gct ccg gca gtg gca     2400
Arg Val Pro Tyr Ile Ala Gln Val Met Asn Asp Ala Pro Ala Val Ala
785                 790                 795                 800
tct acc gac tat atg aaa ctg ttc gct gag cag gtc cgt act tac gta     2448
Ser Thr Asp Tyr Met Lys Leu Phe Ala Glu Gln Val Arg Thr Tyr Val
                805                 810                 815
ccg gct gac gac tac cgc gta ctg ggt act gat ggc ttc ggt cgt tcc     2496
Pro Ala Asp Asp Tyr Arg Val Leu Gly Thr Asp Gly Phe Gly Arg Ser
            820                 825                 830
gac agc cgt gag aac ctg cgt cac cac ttc gaa gtt gat gct tct tat     2544
Asp Ser Arg Glu Asn Leu Arg His His Phe Glu Val Asp Ala Ser Tyr
        835                 840                 845
gtc gtg gtt gcg gcg ctg ggc gaa ctg gct aaa cgt ggc gaa atc gat     2592
Val Val Val Ala Ala Leu Gly Glu Leu Ala Lys Arg Gly Glu Ile Asp
    850                 855                 860
aag aaa gtg gtt gct gac gca atc gcc aaa ttc aac atc gat gca gat     2640
Lys Lys Val Val Ala Asp Ala Ile Ala Lys Phe Asn Ile Asp Ala Asp
865                 870                 875                 880
aaa gtt aac ccg cgt ctg gcg taa                                     2664
Lys Val Asn Pro Arg Leu Ala
                885
 
<210>47
<211>887
<212>PRT
<213>大肠杆菌
 
<400>47
Met Ser Glu Arg Phe Pro Asn Asp Val Asp Pro Ile Glu Thr Arg Asp
1               5                   10                  15
Trp Leu Gln Ala Ile Glu Ser Val Ile Arg Glu Glu Gly Val Glu Arg
            20                  25                  30
Ala Gln Tyr Leu Ile Asp Gln Leu Leu Ala Glu Ala Arg Lys Gly Gly
        35                  40                  45
Val Asn Val Ala Ala Gly Thr Gly Ile Ser Asn Tyr Ile Asn Thr Ile
    50                  55                  60
Pro Val Glu Glu Gln Pro Glu Tyr Pro Gly Asn Leu Glu Leu Glu Arg
65                  70                  75                  80
Arg Ile Arg Ser Ala Ile Arg Trp Asn Ala Ile Met Thr Val Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Ser Lys Lys Asp Leu Glu Leu Gly Gly His Met Ala Ser Phe Gln
            100                 105                 110
Ser Ser Ala Thr Ile Tyr Asp Val Cys Phe Asn His Phe Phe Arg Ala
        115                 120                 125
Arg Asn Glu Gln Asp Gly Gly Asp Leu Val Tyr Phe Gln Gly His Ile
    130                 135                 140
Ser Pro Gly Val Tyr Ala Arg Ala Phe Leu Glu Gly Arg Leu Thr Gln
145                 150                 155                 160
Glu Gln Leu Asp Asn Phe Arg Gln Glu Val His Gly Asn Gly Leu Ser
                165                 170                 175
Ser Tyr Pro His Pro Lys Leu Met Pro Glu Phe Trp Gln Phe Pro Thr
            180                 185                 190
Val Ser Met Gly Leu Gly Pro Ile Gly Ala Ile Tyr Gln Ala Lys Phe
        195                 200                 205
Leu Lys Tyr Leu Glu His Arg Gly Leu Lys Asp Thr Ser Lys Gln Thr
    210                 215                 220
Val Tyr Ala Phe Leu Gly Asp Gly Glu Met Asp Glu Pro Glu Ser Lys
225                 230                 235                 240
Gly Ala Ile Thr Ile Ala Thr Arg Glu Lys Leu Asp Asn Leu Val Phe
                245                 250                 255
Val Ile Asn Cys Asn Leu Gln Arg Leu Asp Gly Pro Val Thr Gly Asn
            260                 265                 270
Gly Lys Ile Ile Asn Glu Leu Glu Gly Ile Phe Glu Gly Ala Gly Trp
        275                 280                 285
Asn Val Ile Lys Val Met Trp Gly Ser Arg Trp Asp Glu Leu Leu Arg
    290                 295                 300
Lys Asp Thr Ser Gly Lys Leu Ile Gln Leu Met Asn Glu Thr Val Asp
305                 310                 315                 320
Gly Asp Tyr Gln Thr Phe Lys Ser Lys Asp Gly Ala Tyr Val Arg Glu
                325                 330                 335
His Phe Phe Gly Lys Tyr Pro Glu Thr Ala Ala Leu Val Ala Asp Trp
            340                 345                 350
Thr Asp Glu Gln Ile Trp Ala Leu Asn Arg Gly Gly His Asp Pro Lys
        355                 360                 365
Lys Ile Tyr Ala Ala Phe Lys Lys Ala Gln Glu Thr Lys Gly Lys Ala
    370                 375                 380
Thr Val Ile Leu Ala His Thr Ile Lys Gly Tyr Gly Met Gly Asp Ala
385                 390                 395                 400
Ala Glu Gly Lys Asn Ile Ala His Gln Val Lys Lys Met Asn Met Asp
                405                 410                 415
Gly Val Arg His Ile Arg Asp Arg Phe Asn Val Pro Val Ser Asp Ala
            420                 425                 430
Asp Ile Glu Lys Leu Pro Tyr Ile Thr Phe Pro Glu Gly Ser Glu Glu
        435                 440                 445
His Thr Tyr Leu His Ala Gln Arg Gln Lys Leu His Gly Tyr Leu Pro
    450                 455                 460
Ser Arg Gln Pro Asn Phe Thr Glu Lys Leu Glu Leu Pro Ser Leu Gln
46                 5470                 475                 480
Asp Phe Gly Ala Leu Leu Glu Glu Gln Ser Lys Glu Ile Ser Thr Thr
                485                 490                 495
Ile Ala Phe Val Arg Ala Leu Asn Val Met Leu Lys Asn Lys Ser Ile
            500                 505                 510
Lys Asp Arg Leu Val Pro Ile Ile Ala Asp Glu Ala Arg Thr Phe Gly
        515                 520                 525
Met Glu Gly Leu Phe Arg Gln Ile Gly Ile Tyr Ser Pro Asn Gly Gln
    530                 535                 540
Gln Tyr Thr Pro Gln Asp Arg Glu Gln Val Ala Tyr Tyr Lys Glu Asp
545                 550                 555                 560
Glu Lys Gly Gln Ile Leu Gln Glu Gly Ile Asn Glu Leu Gly Ala Gly
                565                 570                 575
Cys Ser Trp Leu Ala Ala Ala Thr Ser Tyr Ser Thr Asn Asn Leu Pro
            580                 585                 590
Met Ile Pro Phe Tyr Ile Tyr Tyr Ser Met Phe Gly Phe Gln Arg Ile
        595                 600                 605
Gly Asp Leu Cys Trp Ala Ala Gly Asp Gln Gln Ala Arg Gly Phe Leu
    610                 615                 620
Ile Gly Gly Thr Ser Gly Arg Thr Thr Leu Asn Gly Glu Gly Leu Gln
625                 630                 635                 640
His Glu Asp Gly His Ser His Ile Gln Ser Leu Thr Ile Pro Asn Cys
                645                 650                 655
Ile Ser Tyr Asp Pro Ala Tyr Ala Tyr Glu Val Ala Val Ile Met His
            660                 665                 670
Asp Gly Leu Glu Arg Met Tyr Gly Glu Lys Gln Glu Asn Val Tyr Tyr
        675                 680                 685
Tyr Ile Thr Thr Leu Asn Glu Asn Tyr His Met Pro Ala Met Pro Glu
    690                 695                 700
Gly Ala Glu Glu Gly Ile Arg Lys Gly Ile Tyr Lys Leu Glu Thr Ile
705                 710                 715                 720
Glu Gly Ser Lys Gly Lys Val Gln Leu Leu Gly Ser Gly Ser Ile Leu
                725                 730                 735
Arg His Val Arg Glu Ala Ala Glu Ile Leu Ala Lys Asp Tyr Gly Val
            740                 745                 750
Gly Ser Asp Val Tyr Ser Val Thr Ser Phe Thr Glu Leu Ala Arg Asp
        755                 760                 765
Gly Gln Asp Cys Glu Arg Trp Asn Met Leu His Pro Leu Glu Thr Pro
    770                 775                 780
Arg Val Pro Tyr Ile Ala Gln Val Met Asn Asp Ala Pro Ala Val Ala
785                 790                 795                 800
Ser Thr Asp Tyr Met Lys Leu Phe Ala Glu Gln Val Arg Thr Tyr Val
                805                 810                 815
Pro Ala Asp Asp Tyr Arg Val Leu Gly Thr Asp Gly Phe Gly Arg Ser
            820                 825                 830
Asp Ser Arg Glu Asn Leu Arg His His Phe Glu Val Asp Ala Ser Tyr
        835                 840                 845
Val Val Val Ala Ala Leu Gly Glu Leu Ala Lys Arg Gly Glu Ile Asp
    850                 855                 860
Lys Lys Val Val Ala Asp Ala Ile Ala Lys Phe Asn Ile Asp Ala Asp
865                 870                 875                 880
Lys Val Asn Pro Arg Leu Ala
                885
 
<210>48
<211>1893
<212>DNA
<213>大肠杆菌
 
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1893)
 
<400>48
atg gct atc gaa atc aaa gta ccg gac atc ggg gct gat gaa gtt gaa      48
Met Ala Ile Glu Ile Lys Val Pro Asp Ile Gly Ala Asp Glu Val Glu
1               5                   10                   15
atc acc gag atc ctg gtc aaa gtg ggc gac aaa gtt gaa gcc gaa cag      96
Ile Thr Glu Ile Leu Val Lys Val Gly Asp Lys Val Glu Ala Glu Gln
            20                  25                  30
tcg ctg atc acc gta gaa ggc gac aaa gcc tct atg gaa gtt ccg tct      144
Ser Leu Ile Thr Val Glu Gly Asp Lys Ala Ser Met Glu Val Pro Ser
        35                  40                  45
ccg cag gcg ggt atc gtt aaa gag atc aaa gtc tct gtt ggc gat aaa      192
Pro Gln Ala Gly Ile Val Lys Glu Ile Lys Val Ser Val Gly Asp Lys
    50                  55                  60
acc cag acc ggc gca ctg att atg att ttc gat tcc gcc gac ggt gca      240
Thr Gln Thr Gly Ala Leu Ile Met Ile Phe Asp Ser Ala Asp Gly Ala
65                  70                  75                  80
gca gac gct gca cct gct cag gca gaa gag aag aaa gaa gca gct ccg      288
Ala Asp Ala Ala Pro Ala Gln Ala Glu Glu Lys Lys Glu Ala Ala Pro
                85                  90                  95
gca gca gca cca gcg gct gcg gcg gca aaa gac gtt aac gtt ccg gat      336
Ala Ala Ala Pro Ala Ala Ala Ala Ala Lys Asp Val Asn Val Pro Asp
            100                 105                 110
atc ggc agc gac gaa gtt gaa gtg acc gaa atc ctg gtg aaa gtt ggc      384
Ile Gly Ser Asp Glu Val Glu Val Thr Glu Ile Leu Val Lys Val Gly
        115                 120                 125
gat aaa gtt gaa gct gaa cag tcg ctg atc acc gta gaa ggc gac aag      432
Asp Lys Val Glu Ala Glu Gln Ser Leu Ile Thr Val Glu Gly Asp Lys
    130                 135                 140
gct tct atg gaa gtt ccg gct ccg ttt gct ggc acc gtg aaa gag atc      480
Ala Ser Met Glu Val Pro Ala Pro Phe Ala Gly Thr Val Lys Glu Ile
145                 150                 155                 160
aaa gtg aac gtg ggt gac aaa gtg tct acc ggc tcg ctg att atg gtc      528
Lys Val Asn Val Gly Asp Lys Val Ser Thr Gly Ser Leu Ile Met Val
                165                 170                 175
ttc gaa gtc gcg ggt gaa gca ggc gcg gca gct ccg gcc gct aaa cag      576
Phe Glu Val Ala Gly Glu Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ala Lys Gln
            180                 185                 190
gaa gca gct ccg gca gcg gcc cct gca cca gcg gct ggc gtg aaa gaa      624
Glu Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Gly Val Lys Glu
        195                 200                 205
gtt aac gtt ccg gat atc ggc ggt gac gaa gtt gaa gtg act gaa gtg      672
Val Asn Val Pro Asp Ile Gly Gly Asp Glu Val Glu Val Thr Glu Val
    210                 215                 220
atg gtg aaa gtg ggc gac aaa gtt gcc gct gaa cag tca ctg atc acc      720
Met Val Lys Val Gly Asp Lys Val Ala Ala Glu Gln Ser Leu Ile Thr
225                 230                 235                 240
gta gaa ggc gac aaa gct tct atg gaa gtt ccg gcg ccg ttt gca ggc      768
Val Glu Gly Asp Lys Ala Ser Met Glu Val Pro Ala Pro Phe Ala Gly
                245                 250                 255
gtc gtg aag gaa ctg aaa gtc aac gtt ggc gat aaa gtg aaa act ggc      816
Val Val Lys Glu Leu Lys Val Asn Val Gly Asp Lys Val Lys Thr Gly
            260                 265                 270
tcg ctg att atg atc ttc gaa gtt gaa ggc gca gcg cct gcg gca gct      864
Ser Leu Ile Met Ile Phe Glu Val Glu Gly Ala Ala Pro Ala Ala Ala
        275                 280                 285
cct gcg aaa cag gaa gcg gca gcg ccg gca ccg gca gca aaa gct gaa     912
Pro Ala Lys Gln Glu Ala Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Lys Ala Glu
    290                 295                 300
gcc ccg gca gca gca cca gct gcg aaa gcg gaa ggc aaa tct gaa ttt     960
Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala Ala Lys Ala Glu Gly Lys Ser Glu Phe
305                 310                 315                 320
gct gaa aac gac gct tat gtt cac gcg act ccg ctg atc cgc cgt ctg     1008
Ala Glu Asn Asp Ala Tyr Val His Ala Thr Pro Leu Ile Arg Arg Leu
                325                 330                 335
gca cgc gag ttt ggt gtt aac ctt gcg aaa gtg aag ggc act ggc cgt     1056
Ala Arg Glu Phe Gly Val Asn Leu Ala Lys Val Lys Gly Thr Gly Arg
            340                 345                 350
aaa ggt cgt atc ctg cgc gaa gac gtt cag gct tac gtg aaa gaa gct     1104
Lys Gly Arg Ile Leu Arg Glu Asp Val Gln Ala Tyr Val Lys Glu Ala
        355                 360                 365
atc aaa cgt gca gaa gca gct ccg gca gcg act ggc ggt ggt atc cct     1152
Ile Lys Arg Ala Glu Ala Ala Pro Ala Ala Thr Gly Gly Gly Ile Pro
    370                 375                 380
ggc atg ctg ccg tgg ccg aag gtg gac ttc agc aag ttt ggt gaa atc     1200
Gly Met Leu Pro Trp Pro Lys Val Asp Phe Ser Lys Phe Gly Glu Ile
385                 390                 395                 400
gaa gaa gtg gaa ctg ggc cgc atc cag aaa atc tct ggt gcg aac ctg     1248
Glu Glu Val Glu Leu Gly Arg Ile Gln Lys Ile Ser Gly Ala Asn Leu
                405                 410                 415
agc cgt aac tgg gta atg atc ccg cat gtt act cac ttc gac aaa acc     1296
Ser Arg Asn Trp Val Met Ile Pro His Val Thr His Phe Asp Lys Thr
            420                 425                 430
gat atc acc gag ttg gaa gcg ttc cgt aaa cag cag aac gaa gaa gcg     1344
Asp Ile Thr Glu Leu Glu Ala Phe Arg Lys Gln Gln Asn Glu Glu Ala
        435                 440                 445
gcg aaa cgt aag ctg gat gtg aag atc acc ccg gtt gtc ttc atc atg     1392
Ala Lys Arg Lys Leu Asp Val Lys Ile Thr Pro Val Val Phe Ile Met
    450                 455                 460
aaa gcc gtt gct gca gct ctt gag cag atg cct cgc ttc aat agt tcg     1440
Lys Ala Val Ala Ala Ala Leu Glu Gln Met Pro Arg Phe Asn Ser Ser
465                 470                 475                 480
ctg tcg gaa gac ggt cag cgt ctg acc ctg aag aaa tac atc aac atc     1488
Leu Ser Glu Asp Gly Gln Arg Leu Thr Leu Lys Lys Tyr Ile Asn Ile
                485                 490                 495
ggt gtg gcg gtg gat acc ccg aac ggt ctg gtt gtt ccg gta ttc aaa     1536
Gly Val Ala Val Asp Thr Pro Asn Gly Leu Val Val Pro Val Phe Lys
            500                 505                 510
gac gtc aac aag aaa ggc atc atc gag ctg tct cgc gag ctg atg act     1584
Asp Val Asn Lys Lys Gly Ile Ile Glu Leu Ser Arg Glu Leu Met Thr
        515                 520                 525
att tct aag aaa gcg cgt gac ggt aag ctg act gcg ggc gaa atg cag     1632
Ile Ser Lys Lys Ala Arg Asp Gly Lys Leu Thr Ala Gly Glu Met Gln
    530                 535                 540
ggc ggt tgc ttc acc atc tcc agc atc ggc ggc ctg ggt act acc cac     1680
Gly Gly Cys Phe Thr Ile Ser Ser Ile Gly Gly Leu Gly Thr Thr His
545                 550                 555                 560
ttc gcg ccg att gtg aac gcg ccg gaa gtg gct atc ctc ggc gtt tcc     1728
Phe Ala Pro Ile Val Asn Ala Pro Glu Val Ala Ile Leu Gly Val Ser
                565                 570                 575
aag tcc gcg atg gag ccg gtg tgg aat ggt aaa gag ttc gtg ccg cgt     1776
Lys Ser Ala Met Glu Pro Val Trp Asn Gly Lys Glu Phe Val Pro Arg
            580                 585                 590
ctg atg ctg ccg att tct ctc tcc ttc gac cac cgc gtg atc gac ggt     1824
Leu Met Leu Pro Ile Ser Leu Ser Phe Asp His Arg Val Ile Asp Gly
        595                 600                 605
gct gat ggt gcc cgt ttc att acc atc att aac aac acg ctg tct gac     1872
Ala Asp Gly Ala Arg Phe Ile Thr Ile Ile Asn Asn Thr Leu Ser Asp
    610                 615                 620
att cgc cgt ctg gtg atg taa                                         1893
Ile Arg Arg Leu Val Met
625                 630
 
<210>49
<211>630
<212>PRT
<213>大肠杆菌
 
<400>49
Met Ala Ile Glu Ile Lys Val Pro Asp Ile Gly Ala Asp Glu Val Glu
1               5                   10                  15
Ile Thr Glu Ile Leu Val Lys Val Gly Asp Lys Val Glu Ala Glu Gln
            20                  25                  30
Ser Leu Ile Thr Val Glu Gly Asp Lys Ala Ser Met Glu Val Pro Ser
        35                  40                  45
Pro Gln Ala Gly Ile Val Lys Glu Ile Lys Val Ser Val Gly Asp Lys
    50                  55                  60
Thr Gln Thr Gly Ala Leu Ile Met Ile Phe Asp Ser Ala Asp Gly Ala
65                  70                  75                  80
Ala Asp Ala Ala Pro Ala Gln Ala Glu Glu Lys Lys Glu Ala Ala Pro
                85                  90                  95
Ala Ala Ala Pro Ala Ala Ala Ala Ala Lys Asp Val Asn Val Pro Asp
            100                 105                 110
Ile Gly Ser Asp Glu Val Glu Val Thr Glu Ile Leu Val Lys Val Gly
        115                 120                 125
Asp Lys Val Glu Ala Glu Gln Ser Leu Ile Thr Val Glu Gly Asp Lys
    130                 135                 140
Ala Ser Met Glu Val Pro Ala Pro Phe Ala Gly Thr Val Lys Glu Ile
145                 150                 155                 160
Lys Val Asn Val Gly Asp Lys Val Ser Thr Gly Ser Leu Ile Met Val
                165                 170                 175
Phe Glu Val Ala Gly Glu Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ala Lys Gln
            180                 185                 190
Glu Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Gly Val Lys Glu
        195                 200                 205
Val Asn Val Pro Asp Ile Gly Gly Asp Glu Val Glu Val Thr Glu Val
    210                 215                 220
Met Val Lys Val Gly Asp Lys Val Ala Ala Glu Gln Ser Leu Ile Thr
225                 230                 235                 240
Val Glu Gly Asp Lys Ala Ser Met Glu Val Pro Ala Pro Phe Ala Gly
                245                 250                 255
Val Val Lys Glu Leu Lys Val Asn Val Gly Asp Lys Val Lys Thr Gly
            260                 265                 270
Ser Leu Ile Met Ile Phe Glu Val Glu Gly Ala Ala Pro Ala Ala Ala
        275                 280                 285
Pro Ala Lys Gln Glu Ala Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ala Lys Ala Glu
    290                 295                 300
Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala Ala Lys Ala Glu Gly Lys Ser Glu Phe
305                 310                 315                 320
Ala Glu Asn Asp Ala Tyr Val His Ala Thr Pro Leu Ile Arg Arg Leu
                325                 330                 335
Ala Arg Glu Phe Gly Val Asn Leu Ala Lys Val Lys Gly Thr Gly Arg
            340                 345                 350
Lys Gly Arg Ile Leu Arg Glu Asp Val Gln Ala Tyr Val Lys Glu Ala
        355                 360                 365
Ile Lys Arg Ala Glu Ala Ala Pro Ala Ala Thr Gly Gly Gly Ile Pro
    370                 375                 380
Gly Met Leu Pro Trp Pro Lys Val Asp Phe Ser Lys Phe Gly Glu Ile
385                 390                 395                 400
Glu Glu Val Glu Leu Gly Arg Ile Gln Lys Ile Ser Gly Ala Asn Leu
                405                 410                 415
Ser Arg Asn Trp Val Met Ile Pro His Val Thr His Phe Asp Lys Thr
            420                 425                 430
Asp Ile Thr Glu Leu Glu Ala Phe Arg Lys Gln Gln Asn Glu Glu Ala
        435                 440                 445
Ala Lys Arg Lys Leu Asp Val Lys Ile Thr Pro Val Val Phe Ile Met
    450                 455                 460
Lys Ala Val Ala Ala Ala Leu Glu Gln Met Pro Arg Phe Asn Ser Ser
465                 470                 475                 480
Leu Ser Glu Asp Gly Gln Arg Leu Thr Leu Lys Lys Tyr Ile Asn Ile
                485                 490                 495
Gly Val Ala Val Asp Thr Pro Asn Gly Leu Val Val Pro Val Phe Lys
            500                 505                 510
Asp Val Asn Lys Lys Gly Ile Ile Glu Leu Ser Arg Glu Leu Met Thr
        515                 520                 525
Ile Ser Lys Lys Ala Arg Asp Gly Lys Leu Thr Ala Gly Glu Met Gln
    530                 535                 540
Gly Gly Cys Phe Thr Ile Ser Ser Ile Gly Gly Leu Gly Thr Thr His
545                 550                 555                 560
Phe Ala Pro Ile Val Asn Ala Pro Glu Val Ala Ile Leu Gly Val Ser
                565                 570                 575
Lys Ser Ala Met Glu Pro Val Trp Asn Gly Lys Glu Phe Val Pro Arg
            580                 585                 590
Leu Met Leu Pro Ile Ser Leu Ser Phe Asp His Arg Val Ile Asp Gly
        595                 600                 605
Ala Asp Gly Ala Arg Phe Ile Thr Ile Ile Asn Asn Thr Leu Ser Asp
     610                 615                 620
Ile Arg Arg Leu Val Met
625                 630
 
<210>50
<211>1425
<212>DNA
<213>大肠杆菌
 
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1425)
 
<400>50
atg agt act gaa atc aaa act cag gtc gtg gta ctt ggg gca ggc ccc       48
Met Ser Thr Glu Ile Lys Thr Gln Val Val Val Leu Gly Ala Gly Pro
1               5                   10                  15
gca ggt tac tcc gct gcc ttc cgt tgc gct gat tta ggt ctg gaa acc       96
Ala Gly Tyr Ser Ala Ala Phe Arg Cys Ala Asp Leu Gly Leu Glu Thr
            20                  25                  30
gta atc gta gaa cgt tac aac acc ctt ggc ggt gtt tgc ctg aac gtc      144
Val Ile Val Glu Arg Tyr Asn Thr Leu Gly Gly Val Cys Leu Asn Val
        35                  40                  45
ggc tgt atc cct tct aaa gca ctg ctg cac gta gca aaa gtt atc gaa      192
Gly Cys Ile Pro Ser Lys Ala Leu Leu His Val Ala Lys Val Ile Glu
    50                  55                  60
gaa gcc aaa gcg ctg gct gaa cac ggt atc gtc ttc ggc gaa ccg aaa      240
Glu Ala Lys Ala Leu Ala Glu His Gly Ile Val Phe Gly Glu Pro Lys
65                  70                  75                  80
acc gat atc gac aag att cgt acc tgg aaa gag aaa gtg atc aat cag      288
Thr Asp Ile Asp Lys Ile Arg Thr Trp Lys Glu Lys Val Ile Asn Gln
                85                  90                  95
ctg acc ggt ggt ctg gct ggt atg gcg aaa ggc cgc aaa gtc aaa gtg      336
Leu Thr Gly Gly Leu Ala Gly Met Ala Lys Gly Arg Lys Val Lys Val
            100                 105                 110
gtc aac ggt ctg ggt aaa ttc acc ggg gct aac acc ctg gaa gtt gaa      384
Val Asn Gly Leu Gly Lys Phe Thr Gly Ala Asn Thr Leu Glu Val Glu
        115                 120                 125
ggt gag aac ggc aaa acc gtg atc aac ttc gac aac gcg atc att gca      432
Gly Glu Asn Gly Lys Thr Val Ile Asn Phe Asp Asn Ala Ile Ile Ala
    130                 135                 140
gcg ggt tct cgc ccg atc caa ctg ccg ttt att ccg cat gaa gat ccg      480
Ala Gly Ser Arg Pro Ile Gln Leu Pro Phe Ile Pro His Glu Asp Pro
145                 150                 155                 160
cgt atc tgg gac tcc act gac gcg ctg gaa ctg aaa gaa gta cca gaa      528
Arg Ile Trp Asp Ser Thr Asp Ala Leu Glu Leu Lys Glu Val Pro Glu
                165                 170                 175
cgc ctg ctg gta atg ggt ggc ggt atc atc ggt ctg gaa atg ggc acc      576
Arg Leu Leu Val Met Gly Gly Gly Ile Ile Gly Leu Glu Met Gly Thr
            180                 185                 190
gtt tac cac gcg ctg ggt tca cag att gac gtg gtt gaa atg ttc gac      624
Val Tyr His Ala Leu Gly Ser Gln Ile Asp Val Val Glu Met Phe Asp
        195                 200                 205
cag gtt atc ccg gca gct gac aaa gac atc gtt aaa gtc ttc acc aag      672
Gln Val Ile Pro Ala Ala Asp Lys Asp Ile Val Lys Val Phe Thr Lys
    210                 215                 220
cgt atc agc aag aaa ttc aac ctg atg ctg gaa acc aaa gtt acc gcc      720
Arg Ile Ser Lys Lys Phe Asn Leu Met Leu Glu Thr Lys Val Thr Ala
225                 230                 235                 240
gtt gaa gcg aaa gaa gac ggc att tat gtg acg atg gaa ggc aaa aaa      768
Val Glu Ala Lys Glu Asp Gly Ile Tyr Val Thr Met Glu Gly Lys Lys
                245                 250                 255
gca ccc gct gaa ccg cag cgt tac gac gcc gtg ctg gta gcg att ggt      816
Ala Pro Ala Glu Pro Gln Arg Tyr Asp Ala Val Leu Val Ala Ile Gly
            260                 265                 270
cgt gtg ccg aac ggt aaa aac ctc gac gca ggc aaa gca ggc gtg gaa      864
Arg Val Pro Asn Gly Lys Asn Leu Asp Ala Gly Lys Ala Gly Val Glu
        275                 280                 285
gtt gac gac cgt ggt ttc atc cgc gtt gac aaa cag ctg cgt acc aac      912
Val Asp Asp Arg Gly Phe Ile Arg Val Asp Lys Gln Leu Arg Thr Asn
290                 295                 300
gta ccg cac atc ttt gct atc ggc gat atc gtc ggt caa ccg atg ctg      960
Val Pro His Ile Phe Ala Ile Gly Asp Ile Val Gly Gln Pro Met Leu
305                 310                 315                 320
gca cac aaa ggt gtt cac gaa ggt cac gtt gcc gct gaa gtt atc gcc      1008
Ala His Lys Gly Val His Glu Gly His Val Ala Ala Glu Val Ile Ala
                325                 330                 335
ggt aag aaa cac tac ttc gat ccg aaa gtt atc ccg tcc atc gcc tat      1056
Gly Lys Lys His Tyr Phe Asp Pro Lys Val Ile Pro Ser Ile Ala Tyr
            340                 345                 350
acc gaa cca gaa gtt gca tgg gtg ggt ctg act gag aaa gaa gcg aaa      1104
Thr Glu Pro Glu Val Ala Trp Val Gly Leu Thr Glu Lys Glu Ala Lys
        355                 360                 365
gag aaa ggc atc agc tat gaa acc gcc acc ttc ccg tgg gct gct tct      1152
Glu Lys Gly Ile Ser Tyr Glu ThrAla Thr Phe Pro Trp AlaAla Ser
    370                 375                 380
ggt cgt gct atc gct tcc gac tgc gca gac ggt atg acc aag ctg att      1200
Gly Arg Ala Ile Ala Ser Asp Cys Ala Asp Gly Met Thr Lys Leu Ile
385                 390                 395                 400
ttc gac aaa gaa tct cac cgt gtg atc ggt ggt gcg att gtc ggt act      1248
Phe Asp Lys Glu Ser His Arg Val Ile Gly Gly Ala Ile Val Gly Thr
                405                 410                 415
aac ggc ggc gag ctg ctg ggt gaa atc ggc ctg gca atc gaa atg ggt      1296
Asn Gly Gly Glu Leu Leu Gly Glu Ile Gly Leu Ala Ile Glu Met Gly
            420                 425                 430
tgt gat gct gaa gac atc gca ctg acc atc cac gcg cac ccg act ctg      1344
Cys Asp Ala Glu Asp Ile Ala Leu Thr Ile His Ala His Pro Thr Leu
        435                 440                 445
cac gag tct gtg ggc ctg gcg gca gaa gtg ttc gaa ggt agc att acc      1392
His Glu Ser Val Gly Leu Ala Ala Glu Val Phe Glu Gly Ser Ile Thr
    450                 455                 460
gac ctg ccg aac ccg aaa gcg aag aag aag taa                          1425
Asp Leu Pro Asn Pro Lys Ala Lys Lys Lys
465                 470
 
<210>51
<211>474
<212>PRT
<213>大肠杆菌
 
<400>51
Met Ser Thr Glu Ile Lys Thr Gln Val Val Val Leu Gly Ala Gly Pro
1               5                   10                  15
Ala Gly Tyr Ser Ala Ala Phe Arg Cys Ala Asp Leu Gly Leu Glu Thr
            20                  25                  30
Val Ile Val Glu Arg Tyr Asn Thr Leu Gly Gly Val Cys Leu Asn Val
        35                  40                  45
Gly Cys Ile Pro Ser Lys Ala Leu Leu His Val Ala Lys Val Ile Glu
    50                  55                  60
Glu Ala Lys Ala Leu Ala Glu His Gly Ile Val Phe Gly Glu Pro Lys
65                  70                  75                  80
Thr Asp Ile Asp Lys Ile Arg Thr Trp Lys Glu Lys Val Ile Asn Gln
                85                  90                  95
Leu Thr Gly Gly Leu Ala Gly Met Ala Lys Gly Arg Lys Val Lys Val
            100                 105                 110
Val Asn Gly Leu Gly Lys Phe Thr Gly Ala Asn Thr Leu Glu Val Glu
        115                 120                 125
Gly Glu Asn Gly Lys Thr Val Ile Asn Phe Asp Asn Ala Ile Ile Ala
    130                 135                 140
Ala Gly Ser Arg Pro Ile Gln Leu Pro Phe Ile Pro His Glu Asp Pro
1451                 50                 155                 160
Arg Ile Trp Asp Ser Thr Asp Ala Leu Glu Leu Lys Glu Val Pro Glu
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Met Gly Gly Gly Ile Ile Gly Leu Glu Met Gly Thr
            180                 185                 190
ValTyr His Ala Leu Gly Ser Gln Ile Asp Val Val Glu Met Phe Asp
       195                 200                 205
Gln Val Ile Pro Ala Ala Asp Lys Asp Ile Val Lys Val Phe Thr Lys
    210                 215                 220
Arg Ile Ser Lys Lys Phe Asn Leu Met Leu Glu Thr Lys Val Thr Ala
225                 230                 235                 240
ValGlu Ala Lys Glu Asp Gly Ile Tyr Val Thr Met Glu Gly Lys Lys
               245                 250                 255
Ala Pro Ala Glu Pro Gln Arg Tyr Asp Ala Val Leu Val Ala Ile Gly
            260                 265                 270
Arg Val Pro Asn Gly Lys Asn Leu Asp Ala Gly Lys Ala Gly Val Glu
        275                 280                 285
Val Asp Asp Arg Gly Phe Ile Arg Val Asp Lys Gln Leu Arg Thr Asn
    290                 295                 300
Val Pro His Ile Phe Ala Ile Gly Asp Ile Val Gly Gln Pro Met Leu
305                 310                 315                 320
Ala His Lys Gly Val His Glu Gly His Val Ala Ala Glu Val Ile Ala
                325                 330                 335
Gly Lys Lys His Tyr Phe Asp Pro Lys Val Ile Pro Ser Ile Ala Tyr
            340                 345                 350
Thr Glu Pro Glu Val Ala Trp Val Gly Leu Thr Glu Lys Glu Ala Lys
        355                 360                 365
Glu Lys Gly Ile Ser Tyr Glu Thr Ala Thr Phe Pro Trp Ala Ala Ser
    370                 375                 380
Gly Arg Ala Ile Ala Ser Asp Cys Ala Asp Gly Met Thr Lys Leu Ile
385                 390                 395                 400
Phe Asp Lys Glu Ser His Arg Val Ile Gly Gly Ala Ile Val Gly Thr
                405                 410                 415
Asn Gly Gly Glu Leu Leu Gly Glu Ile Gly Leu Ala Ile Glu Met Gly
            420                 425                 430
Cys Asp Ala Glu Asp Ile Ala Leu Thr Ile His Ala His Pro Thr Leu
        435                 440                 445
His Glu Ser Val Gly Leu Ala Ala Glu Val Phe Glu Gly Ser Ile Thr
    450                 455                 460
Asp Leu Pro Asn Pro Lys Ala Lys Lys Lys
465                 470
 
<210>52
<211>1698
<212>DNA
<213>大肠杆菌
 
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1698)
 
<400>52
atg gaa cca aaa aca aaa aaa cag cgt tcg ctt tat atc cct tac gct      48
Met Glu Pro Lys Thr Lys Lys Gln Arg Ser Leu Tyr Ile Pro Tyr Ala
1               5                   10                  15
ggc cct gta ctg ctg gaa ttt ccg ttg ttg aat aaa ggc agt gcc ttc      96
Gly Pro Val Leu Leu Glu Phe Pro Leu Leu Asn Lys Gly Ser Ala Phe
            20                  25                  30
agc atg gaa gaa cgc cgt aac ttc aac ctg ctg ggg tta ctg ccg gaa      144
Ser Met Glu Glu Arg Arg Asn Phe Asn Leu Leu Gly Leu Leu Pro Glu
        35                  40                  45
gtg gtc gaa acc atc gaa gaa caa gcg gaa cga gca tgg atc cag tat      192
Val Val Glu Thr Ile Glu Glu Gln Ala Glu Arg Ala Trp Ile Gln Tyr
    50                  55                  60
cag gga ttc aaa acc gaa atc gac aaa cac atc tac ctg cgt aac atc      240
Gln Gly Phe Lys Thr Glu Ile Asp Lys His Ile Tyr Leu Arg Asn Ile
65                  70                  75                  80
cag gac act aac gaa acc ctc ttc tac cgt ctg gta aac aat cat ctt      288
Gln Asp Thr Asn Glu Thr Leu Phe Tyr Arg Leu Val Asn Asn His Leu
                85                  90                  95
gat gag atg atg cct gtt att tat acc cca acc gtc ggc gca gcc tgt      336
Asp Glu Met Met Pro Val Ile Tyr Thr Pro Thr Val Gly Ala Ala Cys
            100                 105                 110
gag cgt ttt tct gag atc tac cgc cgt tca cgc ggc gtg ttt atc tct      384
Glu Arg Phe Ser Glu Ile Tyr Arg Arg Ser Arg Gly Val Phe Ile Ser
        115                 120                 125
tac cag aac cgg cac aat atg gac gat att ctg caa aac gtg ccg aac     432
Tyr Gln Asn Arg His Asn Met Asp Asp Ile Leu Gln Asn Val Pro Asn
    130                 135                 140
cat aat att aaa gtg att gtg gtg act gac ggt gaa cgc att ctg ggg     480
His Asn Ile Lys Val Ile Val Val Thr Asp Gly Glu Arg Ile Leu Gly
145                 150                 155                 160
ctt ggt gac cag ggc atc ggc ggg atg ggc att ccg atc ggt aaa ctg     528
Leu Gly Asp Gln Gly Ile Gly Gly Met Gly Ile Pro Ile Gly Lys Leu
                165                 170                 175
tcg ctc tat acc gcc tgt ggc ggc atc agc ccg gcg tat acc ctt ccg     576
Ser Leu Tyr Thr Ala Cys Gly Gly Ile Ser Pro Ala Tyr Thr Leu Pro
            180                 185                 190
gtg gtg ctg gat gtc gga acg aac aac caa cag ctg ctt aac gat ccg     624
Val Val Leu Asp Val Gly Thr Asn Asn Gln Gln Leu Leu Asn Asp Pro
        195                 200                 205
ctg tat atg ggc tgg cgt aat ccg cgt atc act gac gac gaa tac tat     672
Leu Tyr Met Gly Trp Arg Asn Pro Arg Ile Thr Asp Asp Glu Tyr Tyr
    210                 215                 220
gaa ttc gtt gat gaa ttt atc cag gct gtg aaa caa cgc tgg cca gac     720
Glu Phe Val Asp Glu Phe Ile Gln Ala Val Lys Gln Arg Trp Pro Asp
225                 230                 235                 240
gtg ctg ttg cag ttt gaa gac ttt gct caa aaa aat gcg atg ccg tta     768
Val Leu Leu Gln Phe Glu Asp Phe Ala Gln Lys Asn Ala Met Pro Leu
                245                 250                 255
ctt aac cgc tat cgc aat gaa att tgt tct ttt aac gat gac att cag     816
Leu Asn Arg Tyr Arg Asn Glu Ile Cys Ser Phe Asn Asp Asp Ile Gln
            260                 265                 270
ggc act gcg gcg gta aca gtc ggc aca ctg atc gca gca agc cgc gcg     864
Gly Thr Ala Ala Val Thr Val Gly Thr Leu Ile Ala Ala Ser Arg Ala
        275                 280                 285
gca ggt ggt cag tta agc gag aaa aaa atc gtc ttc ctt ggc gca ggt     912
Ala Gly Gly Gln Leu Ser Glu Lys Lys Ile Val Phe Leu Gly Ala Gly
    290                 295                 300
tca gcg gga tgc ggc att gcc gaa atg atc atc tcc cag acc cag cgc     960
Ser Ala Gly Cys Gly Ile Ala Glu Met Ile Ile Ser Gln Thr Gln Arg
305                 310                 315                 320
gaa gga tta agc gag gaa gcg gcg cgg cag aaa gtc ttt atg gtc gat     1008
Glu Gly Leu Ser Glu Glu Ala Ala Arg Gln Lys Val Phe Met Val Asp
                325                 330                 335
cgc ttt ggc ttg ctg act gac aag atg ccg aac ctg ctg cct ttc cag     1056
Arg Phe Gly Leu Leu Thr Asp Lys Met Pro Asn Leu Leu Pro Phe Gln
            340                 345                 350
acc aaa ctg gtg cag aag cgc gaa aac ctc agt gac tgg gat acc gac     1104
Thr Lys Leu Val Gln Lys Arg Glu Asn Leu Ser Asp Trp Asp Thr Asp
        355                 360                 365
agc gat gtg ctg tca ctg ctg gat gtg gtg cgc aat gta aaa cca gat     1152
Ser Asp Val Leu Ser Leu Leu Asp Val Val Arg Asn Val Lys Pro Asp
    370                 375                 380
att ctg att ggc gtc tca gga cag acc ggg ctg ttt acg gaa gag atc     1200
Ile Leu Ile Gly Val Ser Gly Gln Thr Gly Leu Phe Thr Glu Glu Ile
385                 390                 395                 400
atc cgt gag atg cat aaa cac tgt ccg cgt ccg atc gtg atg ccg ctg     1248
Ile Arg Glu Met His Lys His Cys Pro Arg Pro Ile Val Met Pro Leu
                405                 410                 415
tct aac ccg acg tca cgc gtg gaa gcc aca ccg cag gac att atc gcc     1296
Ser Asn Pro Thr Ser Arg Val Glu Ala Thr Pro Gln Asp Ile Ile Ala
            420                 425                 430
tgg acc gaa ggt aac gcg ctg gtc gcc acg ggc agc ccg ttt aat cca     1344
Trp Thr Glu Gly Asn Ala Leu Val Ala Thr Gly Ser Pro Phe Asn Pro
        435                 440                 445
gtg gta tgg aaa gat aaa atc tac cct atc gcc cag tgt aac aac gcc     1392
Val Val Trp Lys Asp Lys Ile Tyr Pro Ile Ala Gln Cys Asn Asn Ala
    450                 455                 460
ttt att ttc ccg ggc atc ggc ctg ggt gtt att gct tcc ggc gcg tca     1440
Phe Ile Phe Pro Gly Ile Gly Leu Gly Val Ile Ala Ser Gly Ala Ser
465                 470                 475                 480
cgt atc acc gat gag atg ctg atg tcg gca agt gaa acg ctg gcg cag     1488
Arg Ile Thr Asp Glu Met Leu Met Ser Ala Ser Glu Thr Leu Ala Gln
                485                 490                 495
tat tca cca ttg gtg ctg aac ggc gaa ggt atg gta ctg ccg gaa ctg     1536
Tyr Ser Pro Leu Val Leu Asn Gly Glu Gly Met Val Leu Pro Glu Leu
                 500                 505                 510
aaa gat att cag aaa gtc tcc cgc gca att gcg ttt gcg gtt ggc aaa     1584
Lys Asp Ile Gln Lys Val Ser Arg Ala Ile Ala Phe Ala Val Gly Lys
            515                 520                 525
atg gcg cag cag caa ggc gtg gcg gtg aaa acc tct gcc gaa gcc ctg     1632
Met Ala Gln Gln Gln Gly Val Ala Val Lys Thr Ser Ala Glu Ala Leu
        530                 535                 540
caa cag gcc att gac gat aat ttc tgg caa gcc gaa tac cgc gac tac     1680
Gln Gln Ala Ile Asp Asp Asn Phe Trp Gln Ala Glu Tyr Arg Asp Tyr
545                 550                 555                 560
cgc cgt acc tcc atc taa                                             1698
Arg Arg Thr Ser Ile
                565
 
<210>53
<211>565
<212>PRT
<213>大肠杆菌
 
<400>53
Met Glu Pro Lys Thr Lys Lys Gln Arg Ser Leu Tyr Ile Pro Tyr Ala
1               5                   10                  15
Gly Pro Val Leu Leu Glu Phe Pro Leu Leu Asn Lys Gly Ser Ala Phe
            20                  25                  30
Ser Met Glu Glu Arg Arg Asn Phe Asn Leu Leu Gly Leu Leu Pro Glu
        35                  40                  45
Val Val Glu Thr Ile Glu Glu Gln Ala Glu Arg Ala Trp Ile Gln Tyr
    50                  55                  60
Gln Gly Phe Lys Thr Glu Ile Asp Lys His Ile Tyr Leu Arg Asn Ile
65                  70                  75                  80
Gln Asp Thr Asn Glu Thr Leu Phe Tyr Arg Leu Val Asn Asn His Leu
                85                  90                  95
Asp Glu Met Met Pro Val Ile Tyr Thr Pro Thr Val Gly Ala Ala Cys
            100                 105                 110
Glu Arg Phe Ser Glu Ile Tyr Arg Arg Ser Arg Gly Val Phe Ile Ser
        115                 120                 125
Tyr Gln Asn Arg His Asn Met Asp Asp Ile Leu Gln Asn Val Pro Asn
    130                 135                 140
His Asn Ile Lys Val Ile Val Val Thr Asp Gly Glu Arg Ile Leu Gly
145                 150                 155                 160
Leu Gly Asp Gln Gly Ile Gly Gly Met Gly Ile Pro Ile Gly Lys Leu
                165                 170                 175
Ser Leu Tyr Thr Ala Cys Gly Gly Ile Ser Pro Ala Tyr Thr Leu Pro
            180                 185                 190
Val Val Leu Asp Val Gly Thr Asn Asn Gln Gln Leu Leu Asn Asp Pro
        195                 200                 205
Leu Tyr Met Gly Trp Arg Asn Pro Arg Ile Thr Asp Asp Glu Tyr Tyr
    210                 215                 220
Glu Phe Val Asp Glu Phe Ile Gln Ala Val Lys Gln Arg Trp Pro Asp
225                 230                 235                 240
Val Leu Leu Gln Phe Glu Asp Phe Ala Gln Lys Asn Ala Met Pro Leu
                245                 250                 255
Leu Asn Arg Tyr Arg Asn Glu Ile Cys Ser Phe Asn Asp Asp Ile Gln
            260                 265                 270
Gly Thr Ala Ala Val Thr Val Gly Thr Leu Ile Ala Ala Ser Arg Ala
        275                 280                 285
Ala Gly Gly Gln Leu Ser Glu Lys Lys Ile Val Phe Leu Gly Ala Gly
    290                 295                 300
Ser Ala Gly Cys Gly Ile Ala Glu Met Ile Ile Ser Gln Thr Gln Arg
305                 310                 315                 320
Glu Gly Leu Ser Glu Glu Ala Ala Arg Gln Lys Val Phe Met Val Asp
                325                 330                 335
Arg Phe Gly Leu Leu Thr Asp Lys Met Pro Asn Leu Leu Pro Phe Gln
            340                 345                 350
Thr Lys Leu Val Gln Lys Arg Glu Asn Leu Ser Asp Trp Asp Thr Asp
        355                 360                 365
Ser Asp Val Leu Ser Leu Leu Asp Val Val Arg Asn Val Lys Pro Asp
    370                 375                 380
Ile Leu Ile Gly Val Ser Gly Gln Thr Gly Leu Phe Thr Glu Glu Ile
385                 390                 395                 400
Ile Arg Glu Met His Lys His Cys Pro Arg Pro Ile Val Met Pro Leu
                405                 410                 415
Ser Asn Pro Thr Ser Arg Val Glu Ala Thr Pro Gln Asp Ile Ile Ala
            420                 425                 430
Trp Thr Glu Gly Asn Ala Leu Val Ala Thr Gly Ser Pro Phe Asn Pro
        435                 440                 445
Val Val Trp Lys Asp Lys Ile Tyr Pro Ile Ala Gln Cys Asn Asn Ala
    450                 455                 460
Phe Ile Phe Pro Gly Ile Gly Leu Gly Val Ile Ala Ser Gly Ala Ser
465                 470                 475                 480
Arg Ile Thr Asp Glu Met Leu Met Ser Ala Ser Glu Thr Leu Ala Gln
                485                 490                 495
Tyr Ser Pro Leu Val Leu Asn Gly Glu Gly Met Val Leu Pro Glu Leu
            500                 505                 510
Lys Asp Ile Gln Lys Val Ser Arg Ala Ile Ala Phe Ala Val Gly Lys
        515                 520                 525
Met Ala Gln Gln Gln Gly Val Ala Val Lys Thr Ser Ala Glu Ala Leu
    530                 535                 540
Gln Gln Ala Ile Asp Asp Asn Phe Trp Gln Ala Glu Tyr Arg Asp Tyr
545                 550                 555                 560
Arg Arg Thr Ser Ile
                565
 
<210>54
<211>2280
<212>DNA
<213>大肠杆菌
 
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(2280)
 
<400>54
atg gat gac cag tta aaa caa agt gca ctt gat ttc cat gaa ttt cca      48
Met Asp Asp Gln Leu Lys Gln Ser Ala Leu Asp Phe His Glu Phe Pro
1               5                   10                  15
gtt cca ggg aaa atc cag gtt tct cca acc aag cct ctg gca aca cag      96
Val Pro Gly Lys Ile Gln Val Ser Pro Thr Lys Pro Leu Ala Thr Gln
            20                  25                  30
cgc gat ctg gcg ctg gcc tac tca cca ggc gtt gcc gca cct tgt ctt      144
Arg Asp Leu Ala Leu Ala Tyr Ser Pro Gly Val Ala Ala Pro Cys Leu
        35                  40                  45
gaa atc gaa aaa gac ccg tta aaa gcc tac aaa tat acc gcc cga ggt      192
Glu Ile Glu Lys Asp Pro Leu Lys Ala Tyr Lys Tyr Thr Ala Arg Gly
    50                  55                  60
aac ctg gtg gcg gtg atc tct aac ggt acg gcg gtg ctg ggg tta ggc      240
Asn Leu Val Ala Val Ile Ser Asn Gly Thr Ala Val Leu Gly Leu Gly
65                  70                  75                  80
aac att ggc gcg ctg gca ggc aaa ccg gtg atg gaa ggc aag ggc gtt      288
Asn Ile Gly Ala Leu Ala Gly Lys Pro Val Met Glu Gly Lys Gly Val
                85                  90                  95
ctg ttt aag aaa ttc gcc ggg att gat gta ttt gac att gaa gtt gac      336
Leu Phe Lys Lys Phe Ala Gly Ile Asp Val Phe Asp Ile Glu Val Asp
            100                 105                 110
gaa ctc gac ccg gac aaa ttt att gaa gtt gtc gcc gcg ctc gaa cca      384
Glu Leu Asp Pro Asp Lys Phe Ile Glu Val Val Ala Ala Leu Glu Pro
        115                 120                 125
acc ttc ggc ggc atc aac ctc gaa gac att aaa gcg cca gaa tgt ttc      432
Thr Phe Gly Gly Ile Asn Leu Glu Asp Ile Lys Ala Pro Glu Cys Phe
    130                 135                 140
tat att gaa cag aaa ctg cgc gag cgg atg aat att ccg gta ttc cac      480
Tyr Ile Glu Gln Lys Leu Arg Glu Arg Met Asn Ile Pro Val Phe His
145                 150                 155                 160
gac gat cag cac ggc acg gca att atc agc act gcc gcc atc ctc aac      528
Asp Asp Gln His Gly Thr Ala Ile Ile Ser Thr Ala Ala Ile Leu Asn
                165                 170                 175
ggc ttg cgc gtg gtg gag aaa aac atc tcc gac gtg cgg atg gtg gtt      576
Gly Leu Arg Val Val Glu Lys Asn Ile Ser Asp Val Arg Met Val Val
            180                 185                 190
tcc ggc gcg ggt gcc gca gca atc gcc tgt atg aac ctg ctg gta gcg      624
Ser Gly Ala Gly Ala Ala Ala Ile Ala Cys Met Asn Leu Leu Val Ala
        195                 200                 205
ctg ggt ctg caa aaa cat aac atc gtg gtt tgc gat tca aaa ggc gtt     672
Leu Gly Leu Gln Lys His Asn Ile Val Val Cys Asp Ser Lys Gly Val
    210                 215                 220
atc tat cag ggc cgt gag cca aac atg gcg gaa acc aaa gcc gca tat     720
Ile Tyr Gln Gly Arg Glu Pro Asn Met Ala Glu Thr Lys Ala Ala Tyr
225                 230                 235                 240
gcg gtg gtg gat gac ggc aaa cgt acc ctc gat gat gtg att gaa ggc     768
Ala Val Val Asp Asp Gly Lys Arg Thr Leu Asp Asp Val Ile Glu Gly
                245                 250                 255
gcg gat att ttc ctg ggc tgt tcc ggc ccg aaa gtg ctg acc cag gaa     816
Ala Asp Ile Phe Leu Gly Cys Ser Gly Pro Lys Val Leu Thr Gln Glu
            260                 265                 270
atg gtg aag aaa atg gct cgt gcg cca atg atc ctg gcg ctg gcg aac     864
Met Val Lys Lys Met Ala Arg Ala Pro Met Ile Leu Ala Leu Ala Asn
        275                 280                 285
ccg gaa ccg gaa att ctg ccg ccg ctg gcg aaa gaa gtg cgt ccg gat     912
Pro Glu Pro Glu Ile Leu Pro Pro Leu Ala Lys Glu Val Arg Pro Asp
    290                 295                 300
gcc atc att tgc acc ggt cgt tct gac tat ccg aac cag gtg aac aac     960
Ala Ile Ile Cys Thr Gly Arg Ser Asp Tyr Pro Asn Gln Val Asn Asn
305                 310                 315                 320
gtc ctg tgc ttc ccg ttc atc ttc cgt ggc gcg ctg gac gtt ggc gca     1008
Val Leu Cys Phe Pro Phe Ile Phe Arg Gly Ala Leu Asp Val Gly Ala
                325                 330                 335
acc gcc atc aac gaa gag atg aaa ctg gcg gcg gta cgt gcg att gca     1056
Thr Ala Ile Asn Glu Glu Met Lys Leu Ala Ala Val Arg Ala Ile Ala
            340                 345                 350
gaa ctc gcc cat gcg gaa cag agc gaa gtg gtg gct tca gcg tat ggc     1104
Glu Leu Ala His Ala Glu Gln Ser Glu Val Val Ala Ser Ala Tyr Gly
        355                 360                 365
gat cag gat ctg agc ttt ggt ccg gaa tac atc att cca aaa ccg ttt     1152
Asp Gln Asp Leu Ser Phe Gly Pro Glu Tyr Ile Ile Pro Lys Pro Phe
    370                 375                 380
gat ccg cgc ttg atc gtt aag atc gct cct gcg gtc gct aaa gcc gcg     1200
Asp Pro Arg Leu Ile Val Lys Ile Ala Pro Ala Val Ala Lys Ala Ala
385                 390                 395                 400
atg gag tcg ggc gtg gcg act cgt ccg att gct gat ttc gac gtc tac     1248
Met Glu Ser Gly Val Ala Thr Arg Pro Ile Ala Asp Phe Asp Val Tyr
                405                 410                 415
atc gac aag ctg act gag ttc gtt tac aaa acc aac ctg ttt atg aag     1296
Ile Asp Lys Leu Thr Glu Phe Val Tyr Lys Thr Asn Leu Phe Met Lys
            420                 425                 430
ccg att ttc tcc cag gct cgc aaa gcg ccg aag cgc gtt gtt ctg ccg     1344
Pro Ile Phe Ser Gln Ala Arg Lys Ala Pro Lys Arg Val Val Leu Pro
        435                 440                 445
gaa ggg gaa gag gcg cgc gtt ctg cat gcc act cag gaa ctg gta acg     1392
Glu Gly Glu Glu Ala Arg Val Leu His Ala Thr Gln Glu Leu Val Thr
    450                 455                 460
ctg gga ctg gcg aaa ccg atc ctt atc ggt cgt ccg aac gtg atc gaa     1440
Leu Gly Leu Ala Lys Pro Ile Leu Ile Gly Arg Pro Asn Val Ile Glu
465                 470                 475                 480
atg cgc att cag aaa ctg ggc ttg cag atc aaa gcg ggc gtt gat ttt     1488
Met Arg Ile Gln Lys Leu Gly Leu Gln Ile Lys Ala Gly Val Asp Phe
                485                 490                 495
gag atc gtc aat aac gaa tcc gat ccg cgc ttt aaa gag tac tgg acc     1536
Glu Ile Val Asn Asn Glu Ser Asp Pro Arg Phe Lys Glu Tyr Trp Thr
            500                 505                 510
gaa tac ttc cag atc atg aag cgt cgc ggc gtc act cag gaa cag gcg     1584
Glu Tyr Phe Gln Ile Met Lys Arg Arg Gly Val Thr Gln Glu Gln Ala
        515                 520                 525
cag cgg gcg ctg atc agt aac ccg aca gtg atc ggc gcg atc atg gtt     1632
Gln Arg Ala Leu Ile Ser Asn Pro Thr Val Ile Gly Ala Ile Met Val
    530                 535                 540
cag cgt ggg gaa gcc gat gca atg att tgc ggt acg gtg ggt gat tat     1680
Gln Arg Gly Glu Ala Asp Ala Met Ile Cys Gly Thr Val Gly Asp Tyr
545                 550                 555                 560
cat gaa cat ttt agc gtg gtg aaa aat gtc ttt ggt tat cgc gat ggc     1728
His Glu His Phe Ser Val Val Lys Asn Val Phe Gly Tyr Arg Asp Gly
                565                 570                 575
gtt cac acc gca ggt gcc atg aac gcg ctg ctg ctg ccg agt ggt aac     1776
Val His Thr Ala Gly Ala Met Asn Ala Leu Leu Leu Pro Ser Gly Asn
            580                 585                 590
acc ttt att gcc gat aca tat gtt aat gat gaa ccg gat gca gaa gag     1824
Thr Phe Ile Ala Asp Thr Tyr Val Asn Asp Glu Pro Asp Ala Glu Glu
        595                 600                 605
ctg gcg gag atc acc ttg atg gcg gca gaa act gtc cgt cgt ttt ggt     1872
Leu Ala Glu Ile Thr Leu Met Ala Ala Glu Thr Val Arg Arg Phe Gly
    610                 615                 620
att gag ccg cgc gtt gct ttg ttg tcg cac tcc aac ttt ggt tct tct     1920
Ile Glu Pro Arg Val Ala Leu Leu Ser His Ser Asn Phe Gly Ser Ser
625                 630                 635                 640
gac tgc ccg tcg tcg agc aaa atg cgt cag gcg ctg gaa ctg gtc agg     1968
Asp Cys Pro Ser Ser Ser Lys Met Arg Gln Ala Leu Glu Leu Val Arg
                645                 650                 655
gaa cgt gca cca gaa ctg atg att gat ggt gaa atg cac ggc gat gca     2016
Glu Arg Ala Pro Glu Leu Met Ile Asp Gly Glu Met His Gly Asp Ala
            660                 665                 670
gcg ctg gtg gaa gcg att cgc aac gac cgt atg ccg gac agc tct ttg     2064
Ala Leu Val Glu Ala Ile Arg Asn Asp Arg Met Pro Asp Ser Ser Leu
        675                 680                 685
aaa ggt tcc gcc aat att ctg gtg atg ccg aac atg gaa gct gcc cgc     2112
Lys Gly Ser Ala Asn Ile Leu Val Met Pro Asn Met Glu Ala Ala Arg
    690                 695                 700
att agt tac aac tta ctg cgt gtt tcc agc tcg gaa ggt gtg act gtc     2160
Ile Ser Tyr Asn Leu Leu Arg Val Ser Ser Ser Glu Gly Val Thr Val
705                 710                 715                 720
ggc ccg gtg ctg atg ggt gtg gcg aaa ccg gtt cac gtg tta acg ccg     2208
Gly Pro Val Leu Met Gly Val Ala Lys Pro Val His Val Leu Thr Pro
                725                 730                 735
atc gca tcg gtg cgt cgt atc gtc aac atg gtg gcg ctg gcc gtg gta     2256
Ile Ala Ser Val Arg Arg Ile Val Asn Met Val Ala Leu Ala Val Val
            740                 745                 750
gaa gcg caa acc caa ccg ctg taa                                     2280
Glu Ala Gln Thr Gln Pro Leu
        755
 
<210>55
<211>759
<212>PRT
<213>大肠杆菌
 
<400>55
Met Asp Asp Gln Leu Lys Gln Ser Ala Leu Asp Phe His Glu Phe Pro
1               5                   10                  15
Val Pro Gly Lys Ile Gln Val Ser Pro Thr Lys Pro Leu Ala Thr Gln
            20                  25                  30
Arg Asp Leu Ala Leu Ala Tyr Ser Pro Gly Val Ala Ala Pro Cys Leu
        35                  40                  45
Glu Ile Glu Lys Asp Pro Leu Lys Ala Tyr Lys Tyr Thr Ala Arg Gly
    50                  55                  60
Asn Leu Val Ala Val Ile Ser Asn Gly Thr Ala Val Leu Gly Leu Gly
65                  70                  75                  80
Asn Ile Gly Ala Leu Ala Gly Lys Pro Val Met Glu Gly Lys Gly Val
                85                  90                  95
Leu Phe Lys Lys Phe Ala Gly Ile Asp Val Phe Asp Ile Glu Val Asp
            100                 105                 110
Glu Leu Asp Pro Asp Lys Phe Ile Glu Val Val Ala Ala Leu Glu Pro
        115                 120                 125
Thr Phe Gly Gly Ile Asn Leu Glu Asp Ile Lys Ala Pro Glu Cys Phe
    130                 135                 140
Tyr Ile Glu Gln Lys Leu Arg Glu Arg Met Asn Ile Pro Val Phe His
145                 150                 155                 160
Asp Asp Gln His Gly Thr Ala Ile Ile Ser Thr Ala Ala Ile Leu Asn
                165                 170                 175
Gly Leu Arg Val Val Glu Lys Asn Ile Ser Asp Val Arg Met Val Val
            180                 185                 190
Ser Gly Ala Gly Ala Ala Ala Ile Ala Cys Met Asn Leu Leu Val Ala
        195                 200                 205
Leu Gly Leu Gln Lys His Asn Ile Val Val Cys Asp Ser Lys Gly Val
    210                 215                 220
Ile Tyr Gln Gly Arg Glu Pro Asn Met Ala Glu Thr Lys Ala Ala Tyr
225                 230                 235                 240
Ala Val Val Asp Asp Gly Lys Arg Thr Leu Asp Asp Val Ile Glu Gly
                245                 250                 255
Ala Asp Ile Phe Leu Gly Cys Ser Gly Pro Lys Val Leu Thr Gln Glu
            260                 265                 270
Met Val Lys Lys Met Ala Arg Ala Pro Met Ile Leu Ala Leu Ala Asn
        275                 280                 285
Pro Glu Pro Glu Ile Leu Pro Pro Leu Ala Lys Glu Val Arg Pro Asp
    290                 295                 300
Ala Ile Ile Cys Thr Gly Arg Ser Asp Tyr Pro Asn Gln Val Asn Asn
305                 310                 315                 320
Val Leu Cys Phe Pro Phe Ile Phe Arg Gly Ala Leu Asp Val Gly Ala
                325                 330                 335
Thr Ala Ile Asn Glu Glu Met Lys Leu Ala Ala Val Arg Ala Ile Ala
            340                 345                 350
Glu Leu Ala His Ala Glu Gln Ser Glu Val Val Ala Ser Ala Tyr Gly
        355                 360                 365
Asp Gln Asp Leu Ser Phe Gly Pro Glu Tyr Ile Ile Pro Lys Pro Phe
    370                 375                 380
Asp Pro Arg Leu Ile Val Lys Ile Ala Pro Ala Val Ala Lys Ala Ala
385                 390                 395                 400
Met Glu Ser Gly Val Ala Thr Arg Pro Ile Ala Asp Phe Asp Val Tyr
                405                 410                 415
Ile Asp Lys Leu Thr Glu Phe Val Tyr Lys Thr Asn Leu Phe Met Lys
            420                 425                 430
Pro Ile Phe Ser Gln Ala Arg Lys Ala Pro Lys Arg Val Val Leu Pro
        435                 440                 445
Glu Gly Glu Glu Ala Arg Val Leu His Ala Thr Gln Glu Leu Val Thr
    450                 455                 460
Leu Gly Leu Ala Lys Pro Ile Leu Ile Gly Arg Pro Asn Val Ile Glu
465                 470                 475                 480
Met Arg Ile Gln Lys Leu Gly Leu Gln Ile Lys Ala Gly Val Asp Phe
                485                 490                 495
Glu Ile Val Asn Asn Glu Ser Asp Pro Arg Phe Lys Glu Tyr Trp Thr
            500                 505                 510
Glu Tyr Phe Gln Ile Met Lys Arg Arg Gly Val Thr Gln Glu Gln Ala
        515                 520                 525
Gln Arg Ala Leu Ile Ser Asn Pro Thr Val Ile Gly Ala Ile Met Val
    530                 535                 540
Gln Arg Gly Glu Ala Asp Ala Met Ile Cys Gly Thr Val Gly Asp Tyr
545                 550                 555                 560
His Glu His Phe Ser Val Val Lys Asn Val Phe Gly Tyr Arg Asp Gly
                565                 570                 575
Val His Thr Ala Gly Ala Met Asn Ala Leu Leu Leu Pro Ser Gly Asn
            580                 585                 590
Thr Phe Ile Ala Asp Thr Tyr Val Asn Asp Glu Pro Asp Ala Glu Glu
        595                 600                 605
Leu Ala Glu Ile Thr Leu Met Ala Ala Glu Thr Val Arg Arg Phe Gly
    610                 615                 620
Ile Glu Pro Arg Val Ala Leu Leu Ser His Ser Asn Phe Gly Ser Ser
625                 630                 635                 640
Asp Cys Pro Ser Ser Ser Lys Met Arg Gln Ala Leu Glu Leu Val Arg
                645                 650                 655
Glu Arg Ala Pro Glu Leu Met Ile Asp Gly Glu Met His Gly Asp Ala
            660                 665                 670
Ala Leu Val Glu Ala Ile Arg Asn Asp Arg Met Pro Asp Ser Ser Leu
        675                 680                 685
Lys Gly Ser Ala Asn Ile Leu Val Met Pro Asn Met Glu Ala Ala Arg
    690                 695                 700
Ile Ser Tyr Asn Leu Leu Arg Val Ser Ser Ser Glu Gly Val Thr Val
705                 710                 715                 720
Gly Pro Val Leu Met Gly Val Ala Lys Pro Val His Val Leu Thr Pro
                725                 730                 735
Ile Ala Ser Val Arg Arg Ile Val Asn Met Val Ala Leu Ala Val Val
            740                 745                 750
Glu Ala Gln Thr Gln Pro Leu
        755
 
<210>56
<211>531
<212>DNA
<213>海藻甲烷球菌(Methanococcus maripaludis)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(531)
 
<400>56
atg aaa gaa gtt aga ttc cac gga aga ggg gga cag ggc gca gta aca      48
Met Lys Glu Val Arg Phe His Gly Arg Gly Gly Gln Gly Ala Val Thr
  1               5                  10                  15
gca gct caa att ctt gct aag gct gca ttc tac gat ggt aag ttc tgc      96
Ala Ala Gln Ile Leu Ala Lys Ala Ala Phe Tyr Asp Gly Lys Phe Cys
             20                  25                  30
caa gct ttt cca ttc ttt ggt gtg gaa aga aga ggg gct ccc gta atg      144
Gln Ala Phe Pro Phe Phe Gly Val Glu Arg Arg Gly Ala Pro Val Met
         35                  40                  45
gca ttt aca aga att gac gat gaa aaa ata aga tta aga agc cag att      192
Ala Phe Thr Arg Ile Asp Asp Glu Lys Ile Arg Leu Arg Ser Gln Ile
     50                  55                  60
tac gaa cca aat tac gta att gtg cag gat cca aca ttg atg gat tca      240
Tyr Glu Pro Asn Tyr Val Ile Val Gln Asp Pro Thr Leu Met Asp Ser
 65                  70                  75                  80
gta gat gtt aca agc ggg atc aaa gac ggc gga ata att ttg ata aac      288
Val Asp Val Thr Ser Gly Ile Lys Asp Gly Gly Ile Ile Leu Ile Asn
                 85                  90                  95
acg tta aaa gac ata aaa ctc aat ggc tac gac gtt aaa aca ata gac      336
Thr Leu Lys Asp Ile Lys Leu Asn Gly Tyr Asp Val Lys Thr Ile Asp
            100                 105                 110
gct aca gga ata gca ttg gaa gtt ctt gga gtt ccg att gta aat acg      384
Ala Thr Gly Ile Ala Leu Glu Val Leu Gly Val Pro Ile Val Asn Thr
        115                 120                 125
aca ctt tgt gga gct ttt gct ggg ctt act gga gaa gtt act atc gaa      432
Thr Leu Cys Gly Ala Phe Ala Gly Leu Thr Gly Glu Val Thr Ile Glu
    130                 135                 140
tca ctt aaa aaa tcg att ttg gaa aca ttt cct ggt aaa tta ggc cct      480
Ser Leu Lys Lys Ser Ile Leu Glu Thr Phe Pro Gly Lys Leu Gly Pro
145                 150                 155                 160
aaa aat gca gat gca gct gaa aaa gcg tat aac cta aca aaa ggt ctg      528
Lys Asn Ala Asp Ala Ala Glu Lys Ala Tyr Asn Leu Thr Lys Gly Leu
                165                 170                 175
taa                                                                  531
 
<210>57
<211>176
<212>PRT
<213>海藻甲烷球菌
 
<400>57
Met Lys Glu Val Arg Phe His Gly Arg Gly Gly Gln Gly Ala Val Thr
  1               5                  10                  15
Ala Ala Gln Ile Leu Ala Lys Ala Ala Phe Tyr Asp Gly Lys Phe Cys
             20                  25                  30
Gln Ala Phe Pro Phe Phe Gly Val Glu Arg Arg Gly Ala Pro Val Met
         35                  40                  45
Ala Phe Thr Arg Ile Asp Asp Glu Lys Ile Arg Leu Arg Ser Gln Ile
     50                  55                  60
Tyr Glu Pro Asn Tyr Val Ile Val Gln Asp Pro Thr Leu Met Asp Ser
 65                  70                  75                  80
Val Asp Val Thr Ser Gly Ile Lys Asp Gly Gly Ile Ile Leu Ile Asn
                 85                  90                  95
Thr Leu Lys Asp Ile Lys Leu Asn Gly Tyr Asp Val Lys Thr Ile Asp
            100                 105                 110
Ala Thr Gly Ile Ala Leu Glu Val Leu Gly Val Pro Ile Val Asn Thr
        115                 120                 125
Thr Leu Cys Gly Ala Phe Ala Gly Leu Thr Gly Glu Val Thr Ile Glu
    130                 135                 140
Ser Leu Lys Lys Ser Ile Leu Glu Thr Phe Pro Gly Lys Leu Gly Pro
145                 150                 155                 160
Lys Asn Ala Asp Ala Ala Glu Lys Ala Tyr Asn Leu Thr Lys Gly Leu
                165                 170                 175
<210>58
<211>258
<212>DNA
<213>海藻甲烷球菌
 
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(258)
 
<400>58
atg gta aac aca gga aca att att tat gaa cct gga agt tca gca aac      48
Met Val Asn Thr Gly Thr Ile Ile Tyr Glu Pro Gly Ser Ser Ala Asn
  1               5                  10                  15
aat aaa act gga agc tgg aga gta ttc aaa cca gtt tta gat caa gac      96
Asn Lys Thr Gly Ser Trp Arg Val Phe Lys Pro Val Leu Asp Gln Asp
             20                  25                  30
aaa tgc gta aaa tgc gaa aat tgt tac atc ttc tgt cct gaa ggc tgt      144
Lys Cys Val Lys Cys Glu Asn Cys Tyr Ile Phe Cys Pro Glu Gly Cys
         35                  40                  45
atc caa gaa aaa gat gga aaa ttt gaa att gac tac gac tac tgt aaa      192
Ile Gln Glu Lys Asp Gly Lys Phe Glu Ile Asp Tyr Asp Tyr Cys Lys
     50                  55                  60
gga tgc cta att tgc gag aaa gaa tgt cct gta aaa gcg ata aaa gca      240
Gly Cys Leu Ile Cys Glu Lys Glu Cys Pro Val Lys Ala Ile Lys Ala
 65                  70                  75                  80
gaa agg gaa gaa aaa taa                                              258
Glu Arg Glu Glu Lys
                 85
 
<210>59
<211>85
<212>PRT
<213>海藻甲烷球菌
 
<400>59
Met Val Asn Thr Gly Thr Ile Ile Tyr Glu Pro Gly Ser Ser Ala Asn
  1               5                  10                  15
Asn Lys Thr Gly Ser Trp Arg Val Phe Lys Pro Val Leu Asp Gln Asp
             20                  25                  30
Lys Cys Val Lys Cys Glu Asn Cys Tyr Ile Phe Cys Pro Glu Gly Cys
         35                  40                  45
Ile Gln Glu Lys Asp Gly Lys Phe Glu Ile Asp Tyr Asp Tyr Cys Lys
     50                  55                  60
Gly Cys Leu Ile Cys Glu Lys Glu Cys Pro Val Lys Ala Ile Lys Ala
 65                  70                  75                  80
Glu Arg Glu Glu Lys
                 85
 
<210>60
<211>1164
<212>DNA
<213>海藻甲烷球菌
 
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1164)
 
<400>60
atg tgt gaa gtt aag gtt atc aca gga act tct gca gcc gct gaa gct      48
Met Cys Glu Val Lys Val Ile Thr Gly Thr Ser Ala Ala Ala Glu Ala
  1               5                  10                  15
gca aag ctt gca gat gta gat gtt att gca gca tat cca att acc ccc      96
Ala Lys Leu Ala Asp Val Asp Val Ile Ala Ala Tyr Pro Ile Thr Pro
             20                  25                  30
caa acg aca tgt gta gaa aag ctt gca gat ttt gtg gct aat ggt gaa      144
Gln Thr Thr Cys Val Glu Lys Leu Ala Asp Phe Val Ala Asn Gly Glu
         35                  40                  45
tta aac gca gaa tac att aaa gta gaa agt gaa cat tct gca atg agt      192
Leu Asn Ala Glu Tyr Ile Lys Val Glu Ser Glu His Ser Ala Met Ser
     50                  55                  60
gca agt att gga gca agt gcg gca ggt gca aga gca ttt act gca aca      240
Ala Ser Ile Gly Ala Ser Ala Ala Gly Ala Arg Ala Phe Thr Ala Thr
 65                  70                  75                  80
tca tca caa ggt tta gca ttg atg cac gaa gtt tta ttt tca gca gca      288
Ser Ser Gln Gly Leu Ala Leu Met His Glu Val Leu Phe Ser Ala Ala
                 85                  90                  95
gga atg aga gtt cca gtt gta atg atg aat gca aac agg gca tta tct      336
Gly Met Arg Val Pro Val Val Met Met Asn Ala Asn Arg Ala Leu Ser
            100                 105                 110
gca cca att aac att tgg aat gac cag caa gac agt tta tct caa aga      384
Ala Pro Ile Asn Ile Trp Asn Asp Gln Gln Asp Ser Leu Ser Gln Arg
        115                 120                 125
gat aca gga tgg att caa cta tat gct gaa gac aac cag gaa gtt tta      432
Asp Thr Gly Trp Ile Gln Leu Tyr Ala Glu Asp Asn Gln Glu Val Leu
    130                 135                 140
gat tta gtt att caa gca ttt aaa att gca gaa gac gaa aaa gtt ctt      480
Asp Leu Val Ile Gln Ala Phe Lys Ile Ala Glu Asp Glu Lys Val Leu
145                 150                 155                 160
ctt cca gtt atg gta aac tta gat ggt ttt att tta aca cat act gta      528
Leu Pro Val Met Val Asn Leu Asp Gly Phe Ile Leu Thr His Thr Val
                165                 170                 175
gaa cca gtt aca gtt cca aaa caa gaa aat gta ctc gat ttt atc gga      576
Glu Pro Val Thr Val Pro Lys Gln Glu Asn Val Leu Asp Phe Ile Gly
            180                 185                 190
act tat gaa cca aaa cat gcg tac ttg gac cct aaa aaa cca atg aca      624
Thr Tyr Glu Pro Lys His Ala Tyr Leu Asp Pro Lys Lys Pro Met Thr
        195                 200                 205
caa ggt gct ctt ggt gat cca aat tac tac atg gaa aca aga tat gca      672
Gln Gly Ala Leu Gly Asp Pro Asn Tyr Tyr Met Glu Thr Arg Tyr Ala
    210                 215                 220
att gaa acc gca atg aga aac gct gaa aaa gtt att gca gac gtt cac      720
Ile Glu Thr Ala Met Arg Asn Ala Glu Lys Val Ile Ala Asp Val His
225                 230                 235                 240
gat gct ttt gca gaa aaa ttc aac aga gct tac gga aac ggg ctt att      768
Asp Ala Phe Ala Glu Lys Phe Asn Arg Ala Tyr Gly Asn Gly Leu Ile
                245                 250                 255
gaa agt tac aat tta gaa aaa gca gaa aac gta att att gca atg ggt      816
Glu Ser Tyr Asn Leu Glu Lys Ala Glu Asn Val Ile Ile Ala Met Gly
            260                 265                 270
tca att tgt gga aca att aaa gat att att gat ctc aag aaa aaa gaa      864
Ser Ile Cys Gly Thr Ile Lys Asp Ile Ile Asp Leu Lys Lys Lys Glu
       275                 280                 285
ggc gta gaa atc ggt tta tta aaa ata aga tgc tac aga cca ctt cct      912
Gly Val Glu Ile Gly Leu Leu Lys Ile Arg Cys Tyr Arg Pro Leu Pro
    290                 295                 300
gtt gaa atg atc aaa gat gca ctc aaa aat gct aaa aat gtt gca att      960
Val Glu Met Ile Lys Asp Ala Leu Lys Asn Ala Lys Asn Val Ala Ile
305                 310                 315                 320
ctt gat aag agc ata agc ctt ggc atg aac aaa ggt gca att tat gca      1008
Leu Asp Lys Ser Ile Ser Leu Gly Met Asn Lys Gly Ala Ile Tyr Ala
                325                 330                 335
gat gtt gca tca cat ttg aaa gat aaa aag act gta aat tac atc gta      1056
Asp Val Ala Ser His Leu Lys Asp Lys Lys Thr Val Asn Tyr Ile Val
            340                 345                 350
ggt ctt ggt gga cga gat att act cca gaa gac att ttg gga att tac      1104
Gly Leu Gly Gly Arg Asp Ile Thr Pro Glu Asp Ile Leu Gly Ile Tyr
        355                 360                 365
gac gat gta gaa att tct gaa gat gga aaa aca aac tgg atc gga ttg      1152
Asp Asp Val Glu Ile Ser Glu Asp Gly Lys Thr Asn Trp Ile Gly Leu
    370                 375                 380
aag gaa gaa taa                                                      1164
Lys Glu Glu
385
 
<210>61
<211>387
<212>PRT
<213>海藻甲烷球菌
 
<400>61
Met Cys Glu Val Lys Val Ile Thr Gly Thr Ser Ala Ala Ala Glu Ala
  1              5                   10                  15
Ala Lys Leu Ala Asp Val Asp Val Ile Ala Ala Tyr Pro Ile Thr Pro
             20                  25                  30
Gln Thr Thr Cys Val Glu Lys Leu Ala Asp Phe Val Ala Asn Gly Glu
         35                  40                  45
Leu Asn Ala Glu Tyr Ile Lys Val Glu Ser Glu His Ser Ala Met Ser
     50                  55                  60
Ala Ser Ile Gly Ala Ser Ala Ala Gly Ala Arg Ala Phe Thr Ala Thr
 65                  70                  75                  80
Ser Ser Gln Gly Leu Ala Leu Met His Glu Val Leu Phe Ser Ala Ala
                 85                  90                  95
Gly Met Arg Val Pro Val Val Met Met Asn Ala Asn Arg Ala Leu Ser
            100                 105                 110
Ala Pro Ile Asn Ile Trp Asn Asp Gln Gln Asp Ser Leu Ser Gln Arg
        115                 120                 125
Asp Thr Gly Trp Ile Gln Leu Tyr Ala Glu Asp Asn Gln Glu Val Leu
    130                 135                 140
Asp Leu Val Ile Gln Ala Phe Lys Ile Ala Glu Asp Glu Lys Val Leu
145                 150                 155                 160
Leu Pro Val Met Val Asn Leu Asp Gly Phe Ile Leu Thr His Thr Val
                165                 170                 175
Glu Pro Val Thr Val Pro Lys Gln Glu Asn Val Leu Asp Phe Ile Gly
            180                 185                 190
Thr Tyr Glu Pro Lys His Ala Tyr Leu Asp Pro Lys Lys Pro Met Thr
        195                 200                 205
Gln Gly Ala Leu Gly Asp Pro Asn Tyr Tyr Met Glu Thr Arg Tyr Ala
    210                 215                 220
Ile Glu Thr Ala Met Arg Asn Ala Glu Lys Val Ile Ala Asp Val His
225                 230                 235                 240
Asp Ala Phe Ala Glu Lys Phe Asn Arg Ala Tyr Gly Asn Gly Leu Ile
                245                 250                 255
Glu Ser Tyr Asn Leu Glu Lys Ala Glu Asn Val Ile Ile Ala Met Gly
            260                 265                 270
Ser Ile Cys Gly Thr Ile Lys Asp Ile Ile Asp Leu Lys Lys Lys Glu
        275                 280                 285
Gly Val Glu Ile Gly Leu Leu Lys Ile Arg Cys Tyr Arg Pro Leu Pro
    290                 295                 300
Val Glu Met Ile Lys Asp Ala Leu Lys Asn Ala Lys Asn Val Ala Ile
305                 310                 315                 320
Leu Asp Lys Ser Ile Ser Leu Gly Met Asn Lys Gly Ala Ile Tyr Ala
                325                 330                 335
Asp Val Ala Ser His Leu Lys Asp Lys Lys Thr Val Asn Tyr Ile Val
            340                 345                 350
Gly Leu Gly Gly Arg Asp Ile Thr Pro Glu Asp Ile Leu Gly Ile Tyr
        355                 360                 365
Asp Asp Val Glu Ile Ser Glu Asp Gly Lys Thr Asn Trp Ile Gly Leu
    370                 375                 380
Lys Glu Glu
385
 
<210>62
<211>897
<212>DNA
<213>海藻甲烷球菌
 
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(897)
 
<400>62
atg act gga agc caa ttt cca aga gaa gaa tta ttt gct cca gga cac      48
Met Thr Gly Ser Gln Phe Pro Arg Glu Glu Leu Phe Ala Pro Gly His
  1               5                  10                  15
agg ggc tgt gca ggt tgt ggt gca gca att gtt gca aga ctc gct tta      96
Arg Gly Cys Ala Gly Cys Gly Ala Ala Ile Val Ala Arg Leu Ala Leu
             20                  25                  30
aaa gct gct gga aaa aac acg atc gtt gca aat gct aca gga tgt ctt      144
Lys Ala Ala Gly Lys Asn Thr Ile Val Ala Asn Ala Thr Gly Cys Leu
         35                  40                  45
gaa gtt atg aca acg ccg tat cct gaa act gca tgg aaa gtt cct tgg      192
Glu Val Met Thr Thr Pro Tyr Pro Glu Thr Ala Trp Lys Val Pro Trp
     50                  55                  60
att cac gtt gca ttc gaa aac gct gca gca gta gca agt ggt gtt gag      240
Ile His Val Ala Phe Glu Asn Ala Ala Ala Val Ala Ser Gly Val Glu
 65                  70                  75                  80
gga gct gta gct gcc tta aag aga aaa cgc gga aaa tac ggt gaa gaa      288
Gly Ala Val Ala Ala Leu Lys Arg Lys Arg Gly Lys Tyr Gly Glu Glu
                 85                  90                  95
aaa gta aac gtt att gca ttt ggt ggt gac ggc ggt acc gca gat atc      336
Lys Val Asn Val Ile Ala Phe Gly Gly Asp Gly Gly Thr Ala Asp Ile
            100                 105                 110
gga ttc caa gca cta agt ggt gca atg gaa agg ggc cac gat atg gtt      384
Gly Phe Gln Ala Leu Ser Gly Ala Met Glu Arg Gly His Asp Met Val
        115                 120                 125
tat atc atg tac gat aac gaa gct tac atg aac acc gga gtt caa aga      432
Tyr Ile Met Tyr Asp Asn Glu Ala Tyr Met Asn Thr Gly Val Gln Arg
    130                 135                 140
agt ggt tca aca cct tta ttg gcc tca aca acg act tca cct gcc gga      480
Ser Gly Ser Thr Pro Leu Leu Ala Ser Thr Thr Thr Ser Pro Ala Gly
145                 150                 155                 160
agc ctt atc cgt ggg gaa act atg cct aaa aag aac atg cca atg atc      528
Ser Leu Ile Arg Gly Glu Thr Met Pro Lys Lys Asn Met Pro Met Ile
                165                 170                 175
atg gcg gct cat gga ata cct tat gtt gca aca gca tca ata agc tat      576
Met Ala Ala His Gly Ile Pro Tyr Val Ala Thr Ala Ser Ile Ser Tyr
            180                 185                 190
cca gaa gac ttc atg aaa aaa gtt aaa aaa gca tgt gaa ata aac ggt      624
Pro Glu Asp Phe Met Lys Lys Val Lys Lys Ala Cys Glu Ile Asn Gly
        195                 200                 205
cct gca ttt att caa gta atg caa cca tgt act acc ggc tgg gga tat      672
Pro Ala Phe Ile Gln Val Met Gln Pro Cys Thr Thr Gly Trp Gly Tyr
    210                 215                 220
cct gct gat aaa aca att gaa ttg ggc aga ctt gca gta gaa act ggt      720
Pro Ala Asp Lys Thr Ile Glu Leu Gly Arg Leu Ala Val Glu Thr Gly
225                 230                 235                 240
gtt tgg cca ctt ttc gaa att gaa aat ggt gaa ttt aag tta aac tac      768
Val Trp Pro Leu Phe Glu Ile Glu Asn Gly Glu Phe Lys Leu Asn Tyr
                245                 250                 255
aag cca ctt aaa aga aaa cca att gaa gaa tac tta aaa gtg cag aaa      816
Lys Pro Leu Lys Arg Lys Pro Ile Glu Glu Tyr Leu Lys Val Gln Lys
            260                 265                 270
aga tac aga cac tta aat ccc gaa gag att tca gta att caa aag acc      864
Arg Tyr Arg His Leu Asn Pro Glu Glu Ile Ser Val Ile Gln Lys Thr
        275                 280                 285
atc gac atg aaa tgc gac gaa tac ggt ctt taa                          897
Ile Asp Met Lys Cys Asp Glu Tyr Gly Leu
    290                 295
 
<210>63
<211>298
<212>PRT
<213>海藻甲烷球菌
 
<400>63
Met Thr Gly Ser Gln Phe Pro Arg Glu Glu Leu Phe Ala Pro Gly His
  1               5                  10                  15
Arg Gly Cys Ala Gly Cys Gly Ala Ala Ile Val Ala Arg Leu Ala Leu
             20                  25                  30
Lys Ala Ala Gly Lys Asn Thr Ile Val Ala Asn Ala Thr Gly Cys Leu
         35                  40                  45
Glu Val Met Thr Thr Pro Tyr Pro Glu Thr Ala Trp Lys Val Pro Trp
     50                  55                  60
Ile His Val Ala Phe Glu Asn Ala Ala Ala Val Ala Ser Gly Val Glu
 65                  70                  75                  80
Gly Ala Val Ala Ala Leu Lys Arg Lys Arg Gly Lys Tyr Gly Glu Glu
                 85                  90                  95
Lys Val Asn Val Ile Ala Phe Gly Gly Asp Gly Gly Thr Ala Asp Ile
            100                 105                 110
Gly Phe Gln Ala Leu Ser Gly Ala Met Glu Arg Gly His Asp Met Val
        115                 120                 125
Tyr Ile Met Tyr Asp Asn Glu Ala Tyr Met Asn Thr Gly Val Gln Arg
    130                 135                 140
Ser Gly Ser Thr Pro Leu Leu Ala Ser Thr Thr Thr Ser Pro Ala Gly
145                 150                 155                 160
Ser Leu Ile Arg Gly Glu Thr Met Pro Lys Lys Asn Met Pro Met Ile
                165                 170                 175
Met Ala Ala His Gly Ile Pro Tyr Val Ala Thr Ala Ser Ile Ser Tyr
            180                 185                 190
Pro Glu Asp Phe Met Lys Lys Val Lys Lys Ala Cys Glu Ile Asn Gly
        195                 200                 205
Pro Ala Phe Ile Gln Val Met Gln Pro Cys Thr Thr Gly Trp Gly Tyr
    210                 215                 220
Pro Ala Asp Lys Thr Ile Glu Leu Gly Arg Leu Ala Val Glu Thr Gly
225                 230                 235                 240
Val Trp Pro Leu Phe Glu Ile Glu Asn Gly Glu Phe Lys Leu Asn Tyr
                245                 250                 255
Lys Pro Leu Lys Arg Lys Pro Ile Glu Glu Tyr Leu Lys Val Gln Lys
            260                 265                 270
Arg Tyr Arg His Leu Asn Pro Glu Glu Ile Ser Val Ile Gln Lys Thr
        275                 280                 285
Ile Asp Met Lys Cys Asp Glu Tyr Gly Leu
    290                 295
 
<210>64
<211>504
<212>DNA
<213>海藻甲烷球菌
 
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(504)
 
<400>64
atg aaa aaa gta atg atg gtt aac gaa gct tgt gat aac tgc ggg gat      48
Met Lys Lys Val Met Met Val Asn Glu Ala Cys Asp Asn Cys Gly Asp
  1               5                  10                  15
tgt gtt aaa tca tgt tct gaa gtt cac gaa gtt agt gga atc agc att      96
Cys Val Lys Ser Cys Ser Glu Val His Glu Val Ser Gly Ile Ser Ile
             20                  25                  30
tgg gag cac gaa gga agg tat cta cca gta gta tgc cag cac tgt act      144
Trp Glu His Glu Gly Arg Tyr Leu Pro Val Val Cys Gln His Cys Thr
         35                  40                  45
tca tca ccc tgt atg gaa gta tgt cct gtt tcg gct atc gaa tca aag      192
Ser Ser Pro Cys Met Glu Val Cys Pro Val Ser Ala Ile Glu Ser Lys
     50                  55                  60
gat ggt gta att tat ctt gac aaa gaa tcc tgc att gga tgt gga ctc      240
Asp Gly Val Ile Tyr Leu Asp Lys Glu Ser Cys Ile Gly Cys Gly Leu
 65                  70                  75                  80
tgt gca atg gca tgc ccc ttt ggt gca ata tac ata agc gga aag act      288
Cys Ala Met Ala Cys Pro Phe Gly Ala Ile Tyr Ile Ser Gly Lys Thr
                 85                  90                  95
gca cac aag tgt gat ttg tgt ttt gga aga gac gaa caa gca tgt gtt      336
Ala His Lys Cys Asp Leu Cys Phe Gly Arg Asp Glu Gln Ala Cys Val
            100                 105                 110
aaa gca tgc agt aaa aga tgt ctc gaa gtt gta aac gtt gat gaa tta      384
Lys Ala Cys Ser Lys Arg Cys Leu Glu Val Val Asn Val Asp Glu Leu
        115                 120                 125
gta atg gat aaa aag ttg aat aat att gaa aat tta aca gtt ttg ggt      432
Val Met Asp Lys Lys Leu Asn Asn Ile Glu Asn Leu Thr Val Leu Gly
    130                 135                 140
tct aaa gga aaa tcc aaa aag aaa aaa gga ctc ctt tct tta gtt act      480
Ser Lys Gly Lys Ser Lys Lys Lys Lys Gly Leu Leu Ser Leu Val Thr
145                 150                 155                 160
gca tcg tca aga tgt aat cct taa                                      504
Ala Ser Ser Arg Cys Asn Pro
                165
 
<210>65
<211>167
<212>PRT
<213>海藻甲烷球菌
<400>65
Met Lys Lys Val Met Met Val Asn Glu Ala Cys Asp Asn Cys Gly Asp
  1               5                  10                  15
Cys Val Lys Ser Cys Ser Glu Val His Glu Val Ser Gly Ile Ser Ile
             20                  25                  30
Trp Glu His Glu Gly Arg Tyr Leu Pro Val Val Cys Gln His Cys Thr
         35                  40                  45
Ser Ser Pro Cys Met Glu Val Cys Pro Val Ser Ala Ile Glu Ser Lys
     50                  55                  60
Asp Gly Val Ile Tyr Leu Asp Lys Glu Ser Cys Ile Gly Cys Gly Leu
 65                  70                  75                  80
Cys Ala Met Ala Cys Pro Phe Gly Ala Ile Tyr Ile Ser Gly Lys Thr
                 85                  90                  95
Ala His Lys Cys Asp Leu Cys Phe Gly Arg Asp Glu Gln Ala Cys Val
            100                 105                 110
Lys Ala Cys Ser Lys Arg Cys Leu Glu Val Val Asn Val Asp Glu Leu
        115                 120                 125
Val Met Asp Lys Lys Leu Asn Asn Ile Glu Asn Leu Thr Val Leu Gly
    130                 135                 140
Ser Lys Gly Lys Ser Lys Lys Lys Lys Gly Leu Leu Ser Leu Val Thr
145                 150                 155                 160
Ala Ser Ser Arg Cys Asn Pro
                165
 
<210>66
<211>417
<212>DNA
<213>海藻甲烷球菌
 
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(417)
 
<400>66
atg aag gta atg cca aat att gac ttg tgc gta gat tgc aaa aag tgt      48
Met Lys Val Met Pro Asn Ile Asp Leu Cys Val Asp Cys Lys Lys Cys
  1               5                  10                  15
gaa cgg gca tgt cct ata aac gca att cac gtt ttt gat ggg att ccc      96
Glu Arg Ala Cys Pro Ile Asn Ala Ile His Val Phe Asp Gly Ile Pro
             20                  25                  30
att agg tgt atg cac tgt gaa gat gca ccc tgt ctt aat gta tgt ccc      144
Ile Arg Cys Met His Cys Glu Asp Ala Pro Cys Leu Asn Val Cys Pro
         35                  40                  45
gaa gat gca att gag aaa ata gct gat aaa gta gta gta cac cct gaa      192
Glu Asp Ala Ile Glu Lys Ile Ala Asp Lys Val Val Val His Pro Glu
     50                  55                  60
aag tgt gtt gga tgt gca tta tgt gct gaa gtt tgc cct gtt ggg gcc      240
Lys Cys Val Gly Cys Ala Leu Cys Ala Glu Val Cys Pro Val Gly Ala
  65                  70                  75                  80
ata cag att gat aga ggt aca aaa gtc gca gta aaa tgt gat gga tgt      288
Ile Gln Ile Asp Arg Gly Thr Lys Val Ala Val Lys Cys Asp Gly Cys
                 85                  90                  95
atc gaa aga ggc agt gaa gta tgt ctt gaa gtg tgt cct aca aag gca      336
Ile Glu Arg Gly Ser Glu Val Cys Leu Glu Val Cys Pro Thr Lys Ala
            100                 105                 110
ctc gac tac tac gaa aat aca att gaa aac aaa aga gcg gaa ctt gtt      384
Leu Asp Tyr Tyr Glu Asn Thr Ile Glu Asn Lys Arg Ala Glu Leu Val
        115                 120                 125
tca aaa ctt aag aaa tta act tca aga aaa taa                          417
Ser Lys Leu Lys Lys Leu Thr Ser Arg Lys
    130                 135
 
<210>67
<211>138
<212>PRT
<213>海藻甲烷球菌
 
<400>67
Met Lys Val Met Pro Asn Ile Asp Leu Cys Val Asp Cys Lys Lys Cys
  1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Cys Pro Ile Asn Ala Ile His Val Phe Asp Gly Ile Pro
             20                  25                  30
Ile Arg Cys Met His Cys Glu Asp Ala Pro Cys Leu Asn Val Cys Pro
         35                  40                  45
Glu Asp Ala Ile Glu Lys Ile Ala Asp Lys Val Val Val His Pro Glu
     50                  55                  60
Lys Cys Val Gly Cys Ala Leu Cys Ala Glu Val Cys Pro Val Gly Ala
 65                  70                  75                  80
Ile Gln Ile Asp Arg Gly Thr Lys Val Ala Val Lys Cys Asp Gly Cys
                 85                  90                  95
Ile Glu Arg Gly Ser Glu Val Cys Leu Glu Val Cys Pro Thr Lys Ala
            100                 105                 110
Leu Asp Tyr Tyr Glu Asn Thr Ile Glu Asn Lys Arg Ala Glu Leu Val
        115                 120                 125
Ser Lys Leu Lys Lys Leu Thr Ser Arg Lys
    130                 135
 
<210>68
<211>63
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物
 
<400>68
tatgatgagt ccaactttgt tttgctgtgt tatggaaatc tcacttgaag cctgcttttt    60
tat                                                                  63
 
<210>69
<211>63
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物
 
<400>69
caaaaaaccc ctcgtttgag gggtttgctc tttaaacgga agggacgctc aagttagtat    60
aaa                                                                  63
 
<210>70
<211>63
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物
 
<400>70
ccgacgccct ggcggtaaag caaagacgat aaaagccccc cagggtgaag cctgcttttt    60
tat                                                                  63
 
<210>71
<211>63
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物
 
<400>71
agggagaggg aaatagcccg gtagccttca ctaccgggcg caggccgctc aagttagtat   60
aaa                                                                 63
 
<210>72
<211>63
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物
 
<400>72
gcccacacac tttatttgtg aacgttacgt gaaaggaaca accaatgaag cctgcttttt    60
tat                                                                  63
 
<210>73
<211>63
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物
 
<400>73
ctgcttaccc tgaatattca gggtaagcgt gagagttaaa aaaaacgctc aagttagtat    60
aaa                                                                  63
 
<210>74
<211>60
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物
 
<400>74
ttggtaccaa taattttgtt taactttaag aaggagatat aatgattact attgacggta    60
 
<210>75
<211>52
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物
 
<400>75
gcgacgccta gcttagggta ccttaatcgg tgttgctttt ttccgctttt cc           52
 
<210>76
<211>46
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物
 
<400>76
catagagctc taaggaggaa tgacgtatga aagaagttag attcca                 46
 
<210>77
<211>43
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物
 
<400>77
ggtgtctgcg ataggccgag ctcttatttt cttgaagtta att                    43
<210>78
<211>64
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物
 
<400>78
caaaagcgaa aatgcagaag aaagccattt gctaaacgct caagttagta taaaaaagct    60
gaac                                                                 64
 
<210>79
<211>64
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物
 
<400>79
aagcaaccgc gccattaccg tcaatagtaa tcatatagct gtttccttct agacggccaa    60
tgct                                                                 64
 
<210>80
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物
 
<400>80
cttcctctga tcttcaagcc a                                              21
 
<210>81
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物
 
<400>81
ttctgccatc gtggaactgg                                                20
 
<210>82
<211>720
<212>DNA
<213>大肠杆菌
 
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(720)
 
<400>82
atg gtc att aag gcg caa agc ccg gcg ggt ttc gcg gaa gag tac att      48
Met Val Ile Lys Ala Gln Ser Pro Ala Gly Phe Ala Glu Glu Tyr Ile
1               5                   10                  15
att gaa agt atc tgg aat aac cgc ttc cct ccc ggg act att ttg ccc      96
Ile Glu Ser Ile Trp Asn Asn Arg Phe Pro Pro Gly Thr Ile Leu Pro
            20                  25                  30
gca gaa cgt gaa ctt tca gaa tta att ggc gta acg cgt act acg tta      144
Ala Glu Arg Glu Leu Ser Glu Leu Ile Gly Val Thr Arg Thr Thr Leu
        35                  40                  45
cgt gaa gtg tta cag cgt ctg gca cga gat ggc tgg ttg acc att caa      192
Arg Glu Val Leu Gln Arg Leu Ala Arg Asp Gly Trp Leu Thr Ile Gln
    50                  55                  60
cat ggc aag ccg acg aag gtg aat aat ttc tgg gaa act tcc ggt tta      240
His Gly Lys Pro Thr Lys Val Asn Asn Phe Trp Glu Thr Ser Gly Leu
65                  70                  75                  80
aat atc ctt gaa aca ctg gcg cga ctg gat cac gaa agt gtg ccg cag      288
Asn Ile Leu Glu Thr Leu Ala Arg Leu Asp His Glu Ser Val Pro Gln
                85                  90                  95
ctt att gat aat ttg ctg tcg gtg cgt acc aat att tcc act att ttt      336
Leu Ile Asp Asn Leu Leu Ser Val Arg Thr Asn Ile Ser Thr Ile Phe
            100                 105                 110
att cgc acc gcg ttt cgt cag cat ccc gat aaa gcg cag gaa gtg ctg      384
Ile Arg Thr Ala Phe Arg Gln His Pro Asp Lys Ala Gln Glu Val Leu
        115                 120                 125
gct acc gct aat gaa gtg gcc gat cac gcc gat gcc ttt gcc gag ctg      432
Ala Thr Ala Asn Glu Val Ala Asp His Ala Asp Ala Phe Ala Glu Leu
    130                 135                 140
gat tac aac ata ttc cgc ggc ctg gcg ttt gct tcc ggc aac ccg att      480
Asp Tyr Asn Ile Phe Arg Gly Leu Ala Phe Ala Ser Gly Asn Pro Ile
145                 150                 155                 160
tac ggt ctg att ctt aac ggg atg aaa ggg ctg tat acg cgt att ggt      528
Tyr Gly Leu Ile Leu Asn Gly Met Lys Gly Leu Tyr Thr Arg Ile Gly
                165                 170                 175
cgt cac tat ttc gcc aat ccg gaa gcg cgc agt ctg gcg ctg ggc ttc      576
Arg His Tyr Phe Ala Asn Pro Glu Ala Arg Ser Leu Ala Leu Gly Phe
            180                 185                 190
tac cac aaa ctg tcg gcg ttg tgc agt gaa ggc gcg cac gat cag gtg      624
Tyr His Lys Leu Ser Ala Leu Cys Ser Glu Gly Ala His Asp Gln Val
        195                 200                 205
tac gaa aca gtg cgt cgc tat ggg cat gag agt ggc gag att tgg cac      672
Tyr Glu Thr Val Arg Arg Tyr Gly His Glu Ser Gly Glu Ile Trp His
    210                 215                 220
cgg atg cag aaa aat ctg ccg ggt gat tta gcc att cag ggg cga taa      720
Arg Met Gln Lys Asn Leu Pro Gly Asp Leu Ala Ile Gln Gly Arg
225                 230                 235
 
<210>83
<211>239
<212>PRT
<213>大肠杆菌
 
<400>83
Met Val Ile Lys Ala Gln Ser Pro Ala Gly Phe Ala Glu Glu Tyr Ile
1               5                   10                  15
Ile Glu Ser Ile Trp Asn Asn Arg Phe Pro Pro Gly Thr Ile Leu Pro
            20                  25                  30
Ala Glu Arg Glu Leu Ser Glu Leu Ile Gly Val Thr Arg Thr Thr Leu
        35                  40                  45
Arg Glu Val Leu Gln Arg Leu Ala Arg Asp Gly Trp Leu Thr Ile Gln
    50                  55                  60
His Gly Lys Pro Thr Lys Val Asn Asn Phe Trp Glu Thr Ser Gly Leu
65                  70                  75                  80
Asn Ile Leu Glu Thr Leu Ala Arg Leu Asp His Glu Ser Val Pro Gln
                85                  90                  95
Leu Ile Asp Asn Leu Leu Ser Val Arg Thr Asn Ile Ser Thr Ile Phe
            100                 105                 110
Ile Arg Thr Ala Phe Arg Gln His Pro Asp Lys Ala Gln Glu Val Leu
        115                 120                 125
Ala Thr Ala Asn Glu Val Ala Asp His Ala Asp Ala Phe Ala Glu Leu
    130                 135                 140
Asp Tyr Asn Ile Phe Arg Gly Leu Ala Phe Ala Ser Gly Asn Pro Ile
145                 150                 155                 160
Tyr Gly Leu Ile Leu Asn Gly Met Lys Gly Leu Tyr Thr Arg Ile Gly
                165                 170                 175
Arg His Tyr Phe Ala Asn Pro Glu Ala Arg Ser Leu Ala Leu Gly Phe
            180                 185                 190
Tyr His Lys Leu Ser Ala Leu Cys Ser Glu Gly Ala His Asp Gln Val
        195                 200                 205
Tyr Glu Thr Val Arg Arg Tyr Gly His Glu Ser Gly Glu Ile Trp His
    210                 215                 220
Arg Met Gln Lys Asn Leu Pro Gly Asp Leu Ala Ile Gln Gly Arg
225                 230                 235
 
<210>84
<211>53
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物
 
<400>84
tgattacgcc aagcttagga ggtctagacg ctcaagttag tataaaaaag ctg          53
 
<210>85
<211>68
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物
 
<400>85
atcctctaga gtcgacgcgg ccgctcctgt gtgaaattgt tatccgctca caattccaca    60
cattatac                                                             68

Claims (19)

1.一种微生物，其具有生产选自L-赖氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-苯丙氨酸、L-缬氨酸、L-亮氨酸、L-异亮氨酸和L-丝氨酸中的L-氨基酸的能力，且经过修饰而增强了丙酮酸合酶或丙酮酸:NADP+氧化还原酶的活性。
2.权利要求1所述的微生物，其经过修饰而增强了丙酮酸合酶的活性。
3.权利要求1所述的微生物，其经过修饰而增强了丙酮酸:NADP+氧化还原酶的活性。
4.权利要求1～3中任一项所述的微生物，其中，丙酮酸合酶或丙酮酸:NADP+氧化还原酶的活性是通过增加编码丙酮酸合酶或丙酮酸:NADP+氧化还原酶的基因的表达量和/或增加所述基因的翻译量而增强的。
5.权利要求4所述的微生物，其中，丙酮酸合酶或丙酮酸:NADP+氧化还原酶的活性是通过提高编码丙酮酸合酶或丙酮酸:NADP+氧化还原酶的基因的拷贝数或修饰所述基因的表达调节序列而增强的。
6.权利要求4或5所述的微生物，其中，所述编码丙酮酸合酶的基因编码下述(A)～(D)中任一项所示的多肽，或下述(E)、(F)、(G)和(H)的多肽，或下述(E)、(F)、(G)、(H)、(I)和(J)的多肽：
(A)包含SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的多肽；
(B)包含在SEQ ID NO：2中取代、缺失、插入或添加1个或数个氨基酸而得到的氨基酸序列，并且具有丙酮酸合酶活性的多肽；
(C)包含SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列的多肽；
(D)包含在SEQ ID NO：4中取代、缺失、插入或添加1个或数个氨基酸而得到的氨基酸序列，并且具有丙酮酸合酶活性的多肽；
(E)下述(E1)或(E2)的多肽：
(E1)包含SEQ ID NO：57所示的氨基酸序列的多肽；
(E2)包含在SEQ ID NO：57中取代、缺失、插入或添加1个或数个氨基酸而得到的氨基酸序列，并且能够与至少(F)、(G)和(H)的多肽一起形成具有丙酮酸合酶活性的蛋白质复合体的多肽；
(F)下述(F1)或(F2)的多肽：
(F1)包含SEQ ID NO：57所示的氨基酸序列的多肽；
(F2)包含在SEQ ID NO：57中取代、缺失、插入或添加1个或数个氨基酸而得到的氨基酸序列，并且能够与至少(E)、(G)和(H)的多肽一起形成具有丙酮酸合酶活性的蛋白质复合体的多肽；
(G)下述(G1)或(G2)的多肽：
(G1)包含SEQ ID NO：57所示的氨基酸序列的多肽；
(G2)包含在SEQ ID NO：57中取代、缺失、插入或添加1个或数个氨基酸而得到的氨基酸序列，并且能够与至少(E)、(F)和(H)的多肽一起形成具有丙酮酸合酶活性的蛋白质复合体的多肽；
(H)下述(H1)或(H2)的多肽：
(H1)包含SEQ ID NO：57所示的氨基酸序列的多肽；
(H2)包含在SEQ ID NO：57中取代、缺失、插入或添加1个或数个氨基酸而得到的氨基酸序列，并且能够与至少(E)、(F)和(G)的多肽一起形成具有丙酮酸合酶活性的蛋白质复合体的多肽；
(I)下述(I1)或(I2)的多肽：
(H1)包含SEQ ID NO：65所示的氨基酸序列的多肽；
(H2)包含在SEQ ID NO：65中取代、缺失、插入或添加1个或数个氨基酸而得到的氨基酸序列，并且能够与至少(E)、(F)、(G)和(H)的多肽一起形成具有丙酮酸合酶活性的蛋白质复合体的多肽；
(J)下述(J1)或(J2)的多肽：
(J1)包含SEQ ID NO：67所示的氨基酸序列的多肽；
(J2)包含在SEQ ID NO：67中取代、缺失、插入或添加1个或数个氨基酸而得到的氨基酸序列，并且能够与至少(E)、(F)、(G)和(H)的多肽一起形成具有丙酮酸合酶活性的蛋白质复合体的多肽。
7.权利要求4或5所述的微生物，其中，所述编码丙酮酸合酶的基因包含下述(a)～(d)中任一项的DNA，或下述(e)、(f)、(g)和(h)的DNA，或下述(e)、(f)、(g)、(h)、(i)和(j)的DNA：
(a)具有SEQ ID NO：1所示的碱基序列的DNA；
(b)与SEQ ID NO：1所示的碱基序列的互补序列或与能够由该碱基序列制备的探针在严格条件下杂交，并且编码具有丙酮酸合酶活性的多肽的DNA；
(c)具有SEQ ID NO：3所示的碱基序列的DNA；
(d)与SEQ ID NO：3所示的碱基序列的互补序列或与能够由该碱基序列制备的探针在严格条件下杂交，并且编码具有丙酮酸合酶活性的多肽的DNA；
(e)下述(e1)或(e2)的DNA：
(e1)具有SEQ ID NO：56所示的碱基序列的DNA；
(e2)与SEQ ID NO：56所示的碱基序列的互补序列或与能够由该碱基序列制备的探针在严格条件下杂交，并且能够与至少(f)、(g)、以及(h)所示的DNA一起编码具有丙酮酸合酶活性的蛋白质复合体的DNA；
(f)下述(f1)或(f2)的DNA：
(f1)具有SEQ ID NO：58所示的碱基序列的DNA；
(f2)与SEQ ID NO：58所示的碱基序列的互补序列或与能够由该碱基序列制备的探针在严格条件下杂交，并且能够与至少(e)、(g)、以及(h)所示的DNA一起编码具有丙酮酸合酶活性的蛋白质复合体的DNA；
(g)下述(g1)或(g2)的DNA：
(g1)具有SEQ ID NO：60所示的碱基序列的DNA、
(g2)与SEQ ID NO：60所示的碱基序列的互补序列或与能够由该碱基序列制备的探针在严格条件下杂交，并且能够与至少(e)、(f)、以及(h)所示的DNA一起编码具有丙酮酸合酶活性的蛋白质复合体的DNA；
(h)下述(h1)或(h2)的DNA：
(h1)具有SEQ ID NO：62所示的碱基序列的DNA、
(h2)与SEQ ID NO：62所示的碱基序列的互补序列或与能够由该碱基序列制备的探针在严格条件下杂交，并且能够与至少(e)、(f)、以及(g)所示的DNA一起编码具有丙酮酸合酶活性的蛋白质复合体的DNA；
(i)下述(i1)或(i2)的DNA：
(h1)具有SEQ ID NO：64所示的碱基序列的DNA；
(h2)与SEQ ID NO：64所示的碱基序列的互补序列或与能够由该碱基序列制备的探针在严格条件下杂交，并且能够与至少(e)、(f)、(g)和(h)所示的DNA一起编码具有丙酮酸合酶活性的蛋白质复合体的DNA；
(j)下述(j1)或(j2)的DNA：
(j1)具有SEQ ID NO：66所示的碱基序列的DNA；
(j2)与SEQ ID NO：66所示的碱基序列的互补序列或与能够由该碱基序列制备的探针在严格条件下杂交，并且能够与至少(e)、(f)、(g)和(h)所示的DNA一起编码具有丙酮酸合酶活性的蛋白质复合体的DNA。
8.权利要求4或5所述的微生物，其中，编码丙酮酸:NADP+氧化还原酶的基因编码下述(A)或(B)所示的多肽：
(A)包含SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列的多肽；
(B)包含在SEQ ID NO：6中取代、缺失、插入或添加1个或数个氨基酸而得到的氨基酸序列，并且具有丙酮酸:NADP+氧化还原酶活性的多肽。
9.权利要求4或5所述的微生物，其中，编码丙酮酸:NADP+氧化还原酶的基因包含下述(a)或(b)的DNA：
(a)具有SEQ ID NO：5所示的碱基序列的DNA；
(b)与SEQ ID NO：5所示的碱基序列的互补序列或与能够由该碱基序列制备的探针在严格条件下杂交，并且编码具有丙酮酸:NADP+氧化还原酶活性的多肽的DNA。
10.权利要求1或权利要求2～7中任一项所述的微生物，其经过修饰而增强了铁氧还蛋白-NADP+还原酶的活性。
11.权利要求1、权利要求2～7或权利要求10中任一项所述的微生物，其经过修饰而提高了产生铁氧还蛋白或黄素氧还蛋白的能力。
12.权利要求1～11中任一项所述的微生物，其经过修饰而降低了苹果酸酶的活性。
13.权利要求1～12中任一项所述的微生物，其经过修饰而降低了丙酮酸脱氢酶活性。
14.权利要求1～13中任一项所述的微生物，其经过修饰从而能够以需氧方式同化乙醇。
15.权利要求1～14中任一项所述的微生物，其中，所述微生物是属于选自埃希氏菌属、肠杆菌属、泛菌属、克雷伯氏菌属、沙雷氏菌属中的属的细菌。
16.权利要求15所述的微生物，其中，该微生物的NAD型苹果酸酶和NADP型苹果酸酶二者的活性均已降低。
17.权利要求1～14中任一项所述的微生物，其中，所述微生物为棒状杆菌型细菌。
18.一种生产L-氨基酸的方法，其中，在培养基中培养权利要求1～17中任一项所述的微生物，使该培养基中或菌体内生成并蓄积选自L-赖氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-苯丙氨酸、L-缬氨酸、L-亮氨酸、L-异亮氨酸和L-丝氨酸中的L-氨基酸，并从该培养基或菌体收集L-氨基酸。
19.权利要求18所述的方法，其中，所述培养基的特征在于含有乙醇或脂肪酸作为碳源。
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