CN101627110A - 生产l-氨基酸的微生物和l-氨基酸的生产方法 - Google Patents

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Abstract

通过在培养基中培养具有L－氨基酸生产能力并且经过修饰而增强了kdp系统的属于肠杆菌科的微生物，在该培养基中或菌体内生成和蓄积L－氨基酸，并且从该培养基或菌体回收L－氨基酸，来生产L－氨基酸。

Description

生产L-氨基酸的微生物和L-氨基酸的生产方法
技术领域
本发明涉及使用微生物的L-氨基酸生产方法，特别是L-谷氨酸、L-赖氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸等L-氨基酸的生产方法。L-谷氨酸作为调味品、L-赖氨酸、L-苏氨酸和L-色氨酸作为动物饲料用添加剂、健康食品成分或氨基酸输液等，在产业上是有用的L-氨基酸。
背景技术
L-氨基酸是通过使用各种微生物的发酵方法来进行工业生产的。例如，L-谷氨酸主要是通过使用属于短杆菌属(Brevibacterium)、棒杆菌属(Corynebacterium)、分枝杆菌属(Mycobacterium)的所谓棒杆菌型细菌中的L-谷氨酸生产菌或其突变株的发酵法来进行生产(参照例如非专利文献1)。作为通过使用其它微生物的发酵法进行的L-谷氨酸生产方法，已知有使用芽孢杆菌属(Bacillus)、链霉属(Streptomyces)、青霉属(Penicillium)等的微生物(参照例如专利文献1)，假单胞菌属(Pseudomonas)、节杆菌属(Arthrobacter)、沙雷氏菌属(Serratia)、假丝酵母属(Candida)等的微生物(参照例如专利文献2)，芽孢杆菌属、假单胞菌属、沙雷氏菌属、产气气杆菌(Aerobacter aerogenes)(现称产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes))等的微生物(参照例如专利文献3)，大肠杆菌突变株(参照例如专利文献1)等的方法。此外，还公开了使用属于克雷伯氏菌属(Klebsiella)、欧文氏菌属(Erwinia)或泛菌属(Pantoea)、肠杆菌属的微生物的L-谷氨酸生产方法(参照例如专利文献2～4)。
为了通过诸如上述的使用微生物的发酵法生产L-氨基酸等目的物质，可以采用使用野生型微生物(野生株)的方法、使用从野生株衍生的营养缺陷型株的方法、使用从野生株作为各种药物抗性突变株衍生的代谢调节突变株的方法、使用具有营养缺陷型株和代谢调节突变株这两者的性质的菌株的方法等。
而且，近年来在目的物质的发酵生产中采用了重组DNA技术。例如，通过增强L-氨基酸生物合成体系酶编码基因的表达(专利文献5、专利文献6)、或增强L-氨基酸生物合成体系的碳源供给(专利文献7)来提高微生物的L-氨基酸生产性能。
kdp系统是在钾离子摄入中起作用的P型ATP酶(非专利文献2)。kdp系统由kdp操纵子编码，当培养基中的钾离子为低浓度时、或在高渗透压下进行培养时，能够衍生其表达(非专利文献3)。此外，已知该表达受双成分调控体系之一的KdpD、KdpE调控(非专利文献4)。然而，目前为止，关于kdp系统强化与L-氨基酸生产之间的关系，尚无研究。
专利文献1特开平5-244970号公报
专利文献2美国专利第3,563,857号说明书
专利文献3特公昭32-9393号公报
专利文献4特开2000-189175号公报
专利文献5美国专利第5168056号说明书
专利文献6美国专利第5776736号说明书
专利文献7美国专利第5906925号说明书
非专利文献1明石邦彦等著《アミノ酸発酵》、学会出版センタ一、195～215页、1986年
非专利文献2 Laimonis A.Laimins，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1978 July；75(7)：3216-19
非专利文献3 Laimonis A.Laimins，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1981 Jan.；78(1)：464-68
非专利文献4 Mark O.Walderhaug，J.Bacteriol.，1992 Apr.；174(7)：2152-59
发明内容
发明所要解决的问题
本发明的课题是：提供能够高效地生产L-氨基酸的属于肠杆菌科的微生物，和使用该微生物来高效地生产L-氨基酸的方法。
解决问题的手段
本发明人等为了解决上述课题进行了深入研究，结果发现通过使用增强了kdp系统的微生物能够高效地生产L-氨基酸，从而完成了本发明。
即，本发明如下所述。
(1)属于肠杆菌科的微生物，其具有L-氨基酸生产能力，并且经过修饰而增强了kdp系统。
(2)前文所述的微生物，其中，kdp系统是通过增加kdp操纵子或构成该操纵子的1种或2种以上基因的表达量和/或通过增加kdp操纵子或所述基因的翻译量而增强的。
(3)前述的微生物，其中，kdp系统是通过提高kdp操纵子或构成该操纵子的1种或2种以上基因的拷贝数、修饰该操纵子的表达调节序列，而增强的。
(4)前述的微生物，其中，kdp操纵子至少包含kdpA基因、kdpB基因和kdpC基因。
(5)前述的微生物，其中，kdpA基因是编码具有SEQ ID NO：2或8所示氨基酸序列的蛋白质的基因，或者是编码kdp系统的A亚单位的基因，所述kdp系统的A亚单位具有在SEQ ID NO：2或8中取代、缺失、插入或添加了1个或数个氨基酸的氨基酸序列。
(6)前述的微生物，其中，kdpB基因是编码具有SEQ ID NO：3或9所示氨基酸序列的蛋白质的基因，或者是编码kdp系统的B亚单位的基因，其中，kdp系统的B亚单位具有在SEQ ID NO：3或9中取代、缺失、插入或添加了1个或数个氨基酸的氨基酸序列。
(7)前述的微生物，其中，kdpC基因是编码具有SEQ ID NO：4或10所示氨基酸序列的蛋白质的基因，或者是编码kdp系统的C亚单位的基因，其中，所述kdp系统的C亚单位具有在SEQ ID NO：4或10中取代、缺失、插入或添加了1个或数个氨基酸的氨基酸序列。
(8)前述的微生物，其中，所述kdp操纵子为下述(a)～(d)中任一项所述的DNA：
(a)包含SEQ ID NO：1的碱基编号546～4871所示的碱基序列的DNA；
(b)与SEQ ID NO：1的碱基编号546～4871所示的碱基序列或与可从该碱基序列制备的探针在严格条件下杂交，并且编码kdp系统的DNA；
(c)包含SEQ ID NO：7的碱基编号543～4853所示的碱基序列的DNA；
(b)与SEQ ID NO：7的碱基编号543～4853所示的碱基序列或与可从该碱基序列制备的探针在严格条件下杂交，并且编码kdp系统的DNA。
(9)前述的微生物，其中，所述L-氨基酸是选自L-谷氨酸、L-赖氨酸、L-苏氨酸、L-精氨酸、L-组氨酸、L-异亮氨酸、L-缬氨酸、L-亮氨酸、L-苯丙氨酸、L-酪氨酸、L-色氨酸和L-半胱氨酸中的一种或二种以上的L-氨基酸。
(10)前述的微生物，其中，前述属于肠杆菌科的微生物为埃希氏菌属细菌、肠杆菌属细菌或泛菌属细菌。
(11)L-氨基酸的生产方法，其特征在于，在培养基中培养前述的微生物，从而在该培养基中或菌体内生成和蓄积L-氨基酸，并且从该培养基或菌体回收L-氨基酸。
(12)前述的方法，其中，所述L-氨基酸为选自L-谷氨酸、L-赖氨酸、L-苏氨酸、L-精氨酸、L-组氨酸、L-异亮氨酸、L-缬氨酸、L-亮氨酸、L-苯丙氨酸、L-酪氨酸、L-色氨酸和L-半胱氨酸中的一种或二种以上的L-氨基酸。
附图说明
图1显示辅助质粒RSF-Red-TER的构造的图。
图2显示辅助质粒RSF-Red-TER的构建的图。
图3显示LacZ基因上游的P.ananatis染色体区域的构造的图。
图4显示kdp操纵子启动子取代株在酸性条件下的试管培养中的生长的图。
图5显示kdp操纵子启动子取代株的L-谷氨酸生产性能的图。
图6显示Pantoea ananatis(SEQ ID NO：8)与大肠杆菌(SEQ ID NO：2)的KdpA的氨基酸序列的比对、以及它们的共有序列(SEQ ID NO：57)的图。
图7显示Pantoea ananatis(SEQ ID NO：9)与大肠杆菌(SEQ ID NO：3)的KdpB的氨基酸序列的比对、以及它们的共有序列(SEQ ID NO：58)的图。
图8显示Pantoea ananatis(SEQ ID NO：10)与大肠杆菌(SEQ ID NO：4)的KdpC的氨基酸序列的比对、以及它们的共有序列(SEQ ID NO：59)的图。
实施发明的最佳模式
以下，对本发明进行详细说明。
<1>本发明的微生物
本发明的微生物是具有L-氨基酸生产能力、并且经过修饰而增强了kdp系统的属于肠杆菌科的微生物。这里的L-氨基酸生产能力是指将本发明的微生物在培养基中培养后，在培养基中或菌体内生成L-氨基酸并将其蓄积到可从培养基或菌体回收的程度的能力。而且，本发明的微生物也可以具有多种L-氨基酸的生产能力。作为具有L-氨基酸生产能力的微生物，可以是本身具有L-氨基酸生产能力的微生物，也可以是通过利用突变法或重组DNA技术对如下文所述的微生物进行修饰而具有了L-氨基酸生产能力的微生物。
对于L-氨基酸的种类没有特殊限制，可以列举出L-赖氨酸、L-鸟氨酸、L-精氨酸、L-组氨酸、L-瓜氨酸等碱性氨基酸，L-异亮氨酸、L-丙氨酸、L-缬氨酸、L-亮氨酸、L-甘氨酸等脂肪族氨基酸，L-苏氨酸、L-丝氨酸等羟基单氨基羧酸形式的氨基酸，L-脯氨酸等环式氨基酸，L-苯丙氨酸、L-酪氨酸、L-色氨酸等芳香族氨基酸，L-半胱氨酸、L-胱氨酸、L-甲硫氨酸等含硫氨基酸，L-谷氨酸、L-天冬氨酸、L-谷氨酰胺、L-天冬酰胺等等酸性氨基酸，特别优选L-谷氨酸、L-赖氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸。本发明的微生物可以具有2种以上氨基酸的生产能力。
<1-1>L-氨基酸生产能力的赋予
以下，对赋予微生物以L-氨基酸生产能力的方法，以及可在本发明中使用的被赋予了L-氨基酸生产能力的微生物进行例示。但是，只要具有L-氨基酸生产能力，不限于这些微生物。
作为用于本发明的微生物，只要是埃希氏菌属、肠杆菌属、泛菌属、克雷伯氏菌属、沙雷氏菌属、欧文氏菌属、沙门氏菌属(Salmonella)、摩根氏菌属(Morganella)等属于肠杆菌科的微生物且具有L-氨基酸生产能力即可，没有特殊限制。具体地，可以利用根据NCBI(National Center forBiotechnology Information)数据库所述的分类属于肠杆菌科的微生物(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Taxonomy/Browser/wwwtax.cgi？id＝91347)。作为用于修饰的肠杆菌科的亲本株，其中希望使用埃希氏菌属细菌、肠杆菌属细菌、泛菌属细菌、欧文氏菌属、肠杆菌属或克雷伯氏菌属。
作为用于获得本发明的埃希氏菌属细菌的埃希氏菌属细菌亲本株，没有特殊限制，具体地可以利用Neidhardt等的著作(Backmann，B.J.1996.Derivations and Genotypes of some mutant derivatives of Escherichia coli K-12，p.2460-2488.表1.于F.D.Neidhardt(编)，Escherichia coli and SalmonellaCellular and Molecular Biology/Second Edition，American Society forMicrobiology Press，Washington，D.C.一书中)中列举的那些。这其中，可以列举出例如大肠杆菌(Escherichia coli)。作为大肠杆菌，具体地可以列举原型野生株K 12株来源的大肠杆菌W3110(ATCC 27325)、大肠杆菌MG1655(ATCC 47076)等。
这些菌株可以从例如美国典型培养物保藏中心(地址12301 ParklawnDrive，Rockville，Maryland 20852P.O.Box 1549，Manassas，VA20108，UnitedStates of America)通过分售获得。即，对各菌株给予了对应的注册号，可以利用该注册号通过分售获得(参照http://www.atcc.org/)。对应于各菌株的注册号见美国典型培养物保藏中心的目录。
作为肠杆菌属细菌，可以列举成团肠杆菌(Enterobacter agglomerans)、产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)等，作为泛菌属细菌，可以列举Pantoeaananatis。而且，成团肠杆菌最近基于16S rRNA碱基序列分析等被重新分类为成团泛菌(Pantoea agglomerans)或Pantoea ananatis、斯氏泛菌(Pantoeastewartii)。在本发明中，只要是分类为肠杆菌科即可，可以是属于肠杆菌属或泛菌属中任何一个属的细菌。
特别地，泛菌属细菌、欧文氏菌属细菌和肠杆菌属细菌是分类为γ-变形细菌(γ-Proteobacteria)的细菌，它们在分类学上的亲缘关系非常近(J GenAppl Microbiol 1997 Dec；43(6)355-361、International Journal of SystematicBacteriology，Oct.1997，p1061-1067)。近年来，依据DNA-DNA杂交实验等，属于肠杆菌属的细菌中，有些被重新分类为成团泛菌(Pantoeaagglomerans)或Pantoea dispersa等(International Journal of SystematicBacteriology，July 1989；39(3).p.337-345)。此外，属于欧文氏菌属的细菌中，有些被重新分类为菠萝泛菌(Pantoea ananas)、斯氏泛菌(Pantoeastewartii)(参照International Journal of Systematic Bacteriology，Jan 1993；43(1).p.162-173)。
肠杆菌属细菌的实例包括成团肠杆菌(Enterobacter agglomerans)、产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)等。具体地，可以使用欧洲专利申请公开952221号说明书示例的菌株。
作为肠杆菌属的代表性菌株，可以列举出成团肠杆菌ATCC12287株。
作为泛菌属细菌的代表性菌株，可以列举出Pantoea ananatis、斯氏泛菌、成团泛菌、柠檬泛菌(Pantoea citrea)。具体地，可以列举下述菌株。
Pantoea ananatis AJ13355株(FERM BP-6614)(欧洲专利申请公开0952221号说明书)
Pantoea ananatis AJ13356株(FERM BP-6615)(欧洲专利申请公开0952221号说明书)
Pantoea ananatis AJ13601株(FERM BP-7207)(欧洲专利申请公开0952221号说明书)
这些菌株在分离出来时被鉴定为成团肠杆菌，并作为成团肠杆菌保藏。但是，如上述，通过16S rRNA的碱基序列解析等被重新分类为Pantoeaananatis。
作为欧文氏菌属细菌，可以列举出解淀粉欧文氏菌(Erwiniaamylovora)、胡萝卜软腐欧文氏菌(Erwinia carotovora)；作为克雷伯氏菌属细菌，可以列举出植生克雷伯氏菌(Klebsiella planticola)。具体地，可以列举出下述菌株。
解淀粉欧文氏菌ATCC15580株
胡萝卜软腐欧文氏菌ATCC15713株
植生克雷伯氏菌AJ13399株(FERM BP-6600)(欧洲专利申请公开955368号说明书)
植生克雷伯氏菌AJ13410株(FERM BP-6617)(欧洲专利申请公开955368号说明书)
以下，说明对属于肠杆菌科的微生物赋予L-氨基酸生产能力的方法，或增强如上所述的微生物的L-氨基酸生产能力的方法。
为了赋予L-氨基酸生产能力，可以使用在棒状杆菌型细菌或埃希氏菌属细菌等的选育中沿用至今的方法，如获取营养缺陷突变体、类似物抗性菌株或代谢调节突变菌株，创建L-氨基酸生物合成系统酶表达增强的重组菌株等等(参见《アミノ酸発酵》，(株)学会出版センタ一，1986年5月30日首次出版发行，第77-100页)。这里，在L-氨基酸生产菌的选育中，所赋予的营养缺陷性、类似物抗性或代谢调节突变等性质可以是单独一种，也可以是两种或者三种以上。此外，表达被增强的L-氨基酸生物合成系统酶可以是单独一种，也可以是两种或三种以上。另外，可以将营养缺陷性、类似物抗性或代谢调节突变等性质的赋予与生物合成系统酶的增强组合进行。
具有L-氨基酸生产能力的营养缺陷突变体菌株、L-氨基酸类似物抗性菌株或代谢调节突变菌株可如下获得：对亲本菌株或野生型菌株施以常规突变处理，即X-射线或UV照射或用诱变剂例如N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(NTG)或甲磺酸乙酯(EMS)等处理；其后，从所得的突变菌株中选择显示营养缺陷性、类似物抗性或代谢调节突变并且还具有L-氨基酸生产能力的菌株。
以下，示例出L-氨基酸生产菌或其构建方法。
L-谷氨酸生产菌
首先，作为L-氨基酸生产菌，对L-谷氨酸生产菌进行示例。
用于衍生本发明的L-谷氨酸生产菌的亲本株的例子包括、但不限于大肠杆菌(E.coli)VL334thrC+(EP 1172433)等属于埃希氏菌属的菌株。大肠杆菌VL334(VKPM B-1641)是L-异亮氨酸和L-苏氨酸营养缺陷型菌株，并且在thrC和ilvA基因有突变(美国专利4,278,765)。利用可在野生型大肠杆菌菌株K12(VKPM B-7)细胞中增殖的噬菌体P1，通过常规转化方法来转移thrC基因的野生型等位基因。结果，获得了L-异亮氨酸营养缺陷型的L-谷氨酸生产菌VL334thrC+(VKPM B-8961)。
作为通过修饰来赋予细菌以L-谷氨酸生产能力或者增强细菌的L-谷氨酸生产能力的方法，可以列举例如通过对细菌进行修饰使得编码L-谷氨酸生物合成相关酶的基因的表达增强的方法。
作为L-谷氨酸生物合成相关酶，可以列举出：例如谷氨酸脱氢酶(以下也称“GDH”)(gdhA)、谷氨酰胺合酶(glnA)、谷氨酸合酶(gltAB)、异柠檬酸脱氢酶(icdA)、顺乌头酸水合酶(acnA，acnB)、柠檬酸合酶(以下也称“CS”)(gltA)、甲基柠檬酸合酶(メタレクエン酸シンタ一ゼ)(以下也称“PRPC”)(prpC)、磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(以下也称“PEPC”)(ppc)、丙酮酸羧化酶(pyc)、丙酮酸脱氢酶(aceEF，lpdA)、丙酮酸激酶(pykA，pykF)、磷酸烯醇丙酮酸合酶(ppsA)、烯醇化酶(eno)、磷酸甘油变位酶(pgmA，pgmI)、磷酸甘油酸激酶(pgk)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(gapA)、丙糖磷酸异构酶(tpiA)、果糖二磷酸醛缩酶(fbp)、磷酸果糖激酶(pfkA，pfkB)、葡糖磷酸异构酶(pgi)等。此外，酶名称后的括号内为基因名称(以下同)。这些酶中，优选CS或PRPC、PEPC和GDH中的1种以上，更优选全部这3种。(参照WO2006/051660号小册子)。
以下，针对修饰细菌以增强目的基因表达的方法进行示例。
第一种方法是提高目的基因的拷贝数的方法。例如，通过将目的基因克隆在适当的质粒上，并用所得的质粒转化宿主细菌，可以提高该基因的拷贝数。例如，当使用编码CS的基因(gltA基因)或者编码PRPC的基因(prpC基因)、编码PEPC的基因(ppc基因)和编码GDH的基因(gdhA基因)作为目的基因时，这些基因的碱基序列在埃希氏菌属细菌和棒杆菌属细菌中已经阐明(Biochemistry、第22卷、5243～5249页、1983年；J.Biochem.、第95卷、909～916页、1984年；Gene、第27卷、193～199页、1984年；Microbiology、第140卷、1817～1828页、1994年；Mol.Gen.Genet.、第218卷、330～339页、1989年；Molecular Microbiology、第6卷、317～326页、1992年)，因此可以基于各碱基序列来合成引物，以染色体DNA为模板，通过PCR法从属于肠杆菌科的细菌中取得。
作为用于转化的质粒，可以列举出能够在属于肠杆菌群的细菌中自主复制的质粒，例如pUC19、pUC18、pBR322、RSF1010、pHSG299、pHSG298、pHSG399、pHSG398、pSTV28、pSTV29(pHSG、pSTV可从TAKARABio公司获得)、pMW119、pMW118、pMW219、pMW218(pMW可从NIIPONGENE公司获得)等。而且，还可以以噬菌体DNA代替质粒作为载体使用。作为用于同时增强上述CS或PRPC、PEPC和GDH的活性的质粒，可以列举出整合了gltA基因、ppc基因和gdhA基因的RSFCPG(参照欧洲专利申请公开第0952221号说明书)、和将RSFCPG的gltA基因替换成prpC的RSFPPG(参见实施例)。
作为转化方法，可以使用例如：用氯化钙处理受体菌细胞来增加DNA的透过性的方法(如Mandel，M.和Higa，A.，J.Mol.Biol.，53，159(1970)报道该方法用于大肠杆菌K-12)，或者由处于增殖阶段的细胞制备感受态细胞并导入DNA的方法(如Duncan，C.H.，Wilson，G.A.和Young，F.E.，Gene，1，153(1977)报道该方法用于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis))。或者，还可以应用将DNA受体菌的细胞制备成容易导入重组DNA的原生质体或原生质球的状态，再将重组DNA导入DNA受体菌的方法(如Chang，S.和Choen，S.N.，Molec.Gen.Genet.，168，111(1979)；Bibb，M.J.，Ward，J.M.和Hopwood，O.A.，Nature，274，398(1978)；Hinnen，A.，Hicks，J.B.和Fink，G.R.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，75 1929(1978)报道该方法用于枯草杆菌、放线菌类和酵母)。此外，采用电脉冲法(特开平2-207791号公报)能够进行微生物的转化。
提高基因的拷贝数可以通过向微生物的染色体DNA上导入多个拷贝的目的基因来实现。为了将多个拷贝的目的基因导入到微生物的染色体DNA上，可以利用染色体DNA上以多拷贝存在的序列作为靶标，通过同源重组来进行(Experimentsin Molecular Genetics，Cold Spring Harbor Lab.(1972))。作为染色体DNA上以多拷贝存在的序列，可以利用重复DNA(repetitiveDNA)、存在于转座元件端部的反向重复序列。或者，可以如特开平2-109985号公报所述那样，将目的基因加载在转座子上，使其发生转移，从而将多个基因拷贝导入染色体DNA上。另外，还可以通过使用Mu噬菌体的方法(特开平2-109985号)将目的基因整合到宿主染色体上。
第2种方法是在染色体DNA上或质粒上、将目的基因的启动子等表达调节序列替换为更强力的表达调节序列来增强目的基因的表达的方法。例如，lac启动子、trp启动子、trc启动子、PR启动子、lacUV启动子等是已知的强力启动子。此外，还可以如国际公布WO00/18935所公开的那样，在基因的启动子区域导入数个碱基的碱基取代，将其修饰成更强力的启动子。启动子强度的评价方法和强力启动子的例子记载于Goldstein等的论文(Prokaryotic promoters in biotechnology.Biotechnol.Annu.Rev.，1995，1，105-128)等中。
表达调节序列的替换例如可以按照与使用温度敏感型质粒的基因替换相似的方式进行。作为可以在本发明的属于肠杆菌科的细菌中使用的、具有温度敏感型复制起点的载体，可以列举出例如WO 99/03988号国际公布小册子所述的质粒pMAN997等。
而且，已知核糖体结合位点(RBS)与起始密码子之间的间隔序列、特别是起始密码子紧邻上游的序列中数个核苷酸的取代对mRNA的翻译效率有非常大的影响，可以对它们进行修饰来提高翻译量。
而且，表达调节序列的修饰可以与上述的提高基因拷贝数的方法组合使用。
作为进行如上述的基因取代的方法，有下述方法：例如，称为“Red驱动整合(Red-driven integration)”的方法(Datsenko，K.A，和Wanner，B.L.Proc.Natl.Acad.Sci.USA.97：6640-6645(2000))，组合使用Red驱动整合法与λ噬菌体来源的切出系统(Cho，E.H.，Gumport，R.I.，Gardner，J.F.J.Bacteriol.184：5200-5203(2002))的方法(参照WO2005/010175号)等使用线性DNA的方法，或者使用含温度敏感型复制起点的质粒、可接合转移的质粒的方法，利用在宿主内不含复制起点的自杀载体的方法等(美国专利第6303383号说明书，或特开平05-007491号公报)。
而且，Red驱动整合中，如参考例1所示，适合使用对λRed基因产物有抗性的菌株例如Pantoea ananatis SC17(0)株。该株于2005年9月21保藏于俄罗斯国立工业微生物保藏中心(Russian National Collection of IndustrialMicroorganisms(VKPM)，GNII Genetika)(所在地：Russia，1175451 Moscow，1 Dorozhny proezd.1)，保藏号VKPM B-9246。
作为经采用以上方法进行修饰而增强了柠檬酸合酶基因、甲基柠檬酸合酶基因、磷酸烯醇丙酮酸羧化酶基因和/或谷氨酸脱氢酶基因的表达的微生物，可以例示出特开平2001-333769号公报、特开2000-106869号公报、特开2000-189169号公报、特开2000-333769、特开2006-129840、国际公布2006/051660号小册子等中记载的微生物。
此外，L-谷氨酸生产能力也可以通过增强6-磷酸葡糖酸脱水酶活性、或2-酮-3-脱氧-6-磷酸葡糖酸醛缩酶活性、或者这两者的活性来赋予。作为提高了6-磷酸葡糖酸脱水酶活性、2-酮-3-脱氧-6-磷酸葡糖酸醛缩酶活性的微生物，可以列举出特开2003-274988公开的微生物。
赋予或增强L-谷氨酸生产能力的修饰可以通过减少或缺损催化从L-谷氨酸生物合成途径中分支并合成L-谷氨酸以外的化合物的反应的酶的活性来进行。催化从L-谷氨酸生物合成途径中分支并合成L-谷氨酸以外的化合物的反应的酶的实例包括2-氧化戊二酸脱氢酶(α-酮戊二酸脱氢酶)(sucA)，异柠檬酸裂合酶(aceA)，磷酸乙酰转移酶(pta)，乙酸激酶(ack)，乙酰羟酸合酶(ilvG)，乙酰乳酸合酶(ilvI)，甲酸乙酰转移酶(pfl)，乳酸脱氢酶(ldh)，谷氨酸脱羧酶(gadAB)、1-吡咯啉5-羧酸脱氢酶(putA)等。这其中，特别优选降低或缺损2-氧化戊二酸脱氢酶活性。
为了降低或缺损上述酶的活性，可以采用常规突变处理法、或者基因工程方法在上述酶的基因中导入能够使得细胞中对应酶的活性降低或缺损的突变。作为突变处理法，包括例如照射X射线或紫外线的方法、或用N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍等突变剂进行处理的方法等。基因中导入突变的位点可以是编码酶蛋白的编码区域，也可以是启动子等表达调控区域。此外，在基因工程方法方面，可以采用例如基因重组法、转化法、细胞融合法等方法。
细胞中目的酶活性的降低或缺损及活性降低的程度可以通过测定候选株的菌体提取液或纯化级分的酶活性，并与野生株相比较来确认。例如，2-氧化戊二酸脱氢酶活性可以按照Reed等的方法(L.J.Reed和B.B.Mukherjee，Methods in Enzymology 1969，13，p.55-61)来测定。
作为缺损了2-氧化戊二酸脱氢酶活性或降低了2-氧化戊二酸脱氢酶活性的属于埃希氏菌属的细菌，可以列举出以下的菌株(美国专利第5,378,616号和第5,573,945号)。
大肠杆菌W3110sucA::Kmr
大肠杆菌AJ12624(FERM BP-3853)
大肠杆菌AJ12628(FERM BP-3854)
大肠杆菌AJ12949(FERM BP-4881)
大肠杆菌W3110sucA::Kmr是通过破坏大肠杆菌W3110的2-氧化戊二酸脱氢酶基因(sucA基因)而得到的菌株。该菌株的2-氧化戊二酸脱氢酶完全缺损。
作为缺损或降低了2-氧化戊二酸脱氢酶活性的其它细菌，具体地可以列举出如下菌株。
Pantoea ananatis AJ13601(FERM BP-7207欧洲专利公开说明书1078989)
Pantoea ananatis AJ13356(FERM BP-6615 美国专利6.331,419号)
Pantoea ananatis SC17sucA(FERM BP-8646国际公布小册子WO2005/085419号)
植生克雷伯氏菌AJ13410(FERM BP-6617美国专利6,197,559号)
而且，SC17sucA株是这样得到的菌株：作为低pH下能够在含L-谷氨酸和碳源的培养基中增殖的菌株，从自然界分离出AJ13355株，从而获得了粘液低生产性突变株(SC17)，然后破坏了该菌株的2-氧化戊二酸脱氢酶基因(sucA)。AJ13601株是这样得到的菌株：在SC17sucA株中导入包含大肠杆菌来源的gltA、ppc和gdhA基因的质粒RSFCPG，以及包含乳发酵短杆菌来源的gltA基因的质粒pSTVCB，而得到SC17sucA/RSFCPG+pSTVCB株；再从该SC17sucA/RSFCPG+pSTVCB株中选择低pH下显示出对高浓度L-谷氨酸的抗性的菌株，进一步选择增殖度、L-谷氨酸生产能力高的菌株，而得到AJ13601株(欧洲专利申请公开0952221号说明书)。AJ13356株是AJ13355株的α-KGDH-E1亚单位基因(sucA)缺失后得到的菌株。此外，实施例所述NP106株是从AJ13601株脱去质粒RSFCPG+pSTVCB而得到的菌株。
AJ13355株和AJ13356株已于平成10年(1998年)2月19日保藏于日本通产省工业技术院生命工学工业技术研究所(现名称为产业技术综合研究所专利生物保藏中心，地址：邮政编码305-8566茨城县筑波市东1丁目1番地1中央第6)，保藏号分别为FERM P-16644和FERM P-16645，并于平成11年(1999年)1月11日转为基于布达佩斯条约的国际保藏，并给予保藏号FERM BP-6614和FERM BP-6615。SC17sucA株的内部编号为AJ417株，已于平成16年(2004年)2月26日保藏于产业技术综合研究所专利生物保藏中心(地址：邮政编码305-8566茨城县筑波市东1丁目1番地1中央第6)，保藏号FERM BP-08646。AJ13601株已于1999年8月18日保藏于工业技术院生命工学工业技术研究所(现名称为产业技术综合研究所专利生物保藏中心，地址：邮政编码305-8566茨城县筑波市东1丁目1番地1中央第6)，保藏号为FERM P-17516，并且于2000年7月6日转为基于布达佩斯条约的国际保藏，并给与保藏号FERM BP-7207。
上述Pantoea ananatis AJ13355株、AJ13356株、AJ13601株、和前述的植生克雷伯氏菌AJ13399株具有于酸性条件下培养后在液体培养基中蓄积超过L-谷氨酸饱和浓度的量的L-谷氨酸蓄积能力。
此外，为了提高肠杆菌科的L-谷氨酸生产能力，还可以采用缺损arcA基因的方法(美国专利7,090,998号公报)、扩增谷氨酸分泌基因yhfK基因的方法(WO2005/085419小册子)。
上述的增强或缺损酶活性的方法对于以下所示的其它氨基酸的生产菌也同样适用。
L-苏氨酸生产菌
作为用于衍生本发明的L-苏氨酸生产菌的亲本株的例子，可以列举出：大肠杆菌TDH-6/pVIC40(VKPM B-3996)(美国专利第5,175,107号、美国专利第5,705,371号)、大肠杆菌472T23/pYN7(ATCC 98081)(美国专利第5,631,157号)、大肠杆菌NRRL-21593(美国专利第5,939,307号)、大肠杆菌FERM BP-3756(美国专利第5,474,918号)、大肠杆菌FERM BP-3519和FERM BP-3520(美国专利第5,376,538号)、大肠杆菌MG442(Gusyatiner等，Genetika(俄语)，14，947-956(1978))、大肠杆菌VL643和VL2055(EP1149911 A)等属于埃希氏杆菌属的菌株，但不限于此。
TDH-6菌株缺失thrC基因，是蔗糖同化型，并且ilvA基因有泄漏突变(leaky mutation)。该菌株的rhtA基因也有突变，该突变赋予对高浓度的苏氨酸或高丝氨酸的抗性。B-3996菌株携带pVIC40质粒，pVIC40是通过将含有突变的thrA基因的thrA*BC操纵子插入到由RSF1010获得的载体中而获得。这种突变的thrA基因编码的天冬氨酸激酶高丝氨酸脱氢酶I对苏氨酸的反馈抑制基本上已解除。B-3996菌株在1987年11月19日被保藏于All-Union Scientific Center of Antibiotics(全联盟抗生素科学中心)(Nagatinskaya Street 3-A，117105 Moscow，Russia)，登录号为RIA 1867。该菌株也在1987年4月7日保藏于俄罗斯国立工业微生物保藏中心(Russian National Collection of Industrial Microorganisms(VKPM)，GNIIGenetika)(1 Dorozhny proezd.，1 Moscow 117545，Russia)，登录号为B-3996。
还可以使用大肠杆菌VKPM B-5318(EP 0593792B)作为用于衍生本发明的L-苏氨酸生产菌的亲本株。B-5318菌株是非异亮氨酸营养缺陷型的，并且温度敏感的λ噬菌体C1阻遏物和PR启动子取代了pVIC40质粒中的苏氨酸操纵子的调控区域。VKPM B-5318菌株在1990年5月3日保藏于俄罗斯国立工业微生物保藏中心(VKPM)，登录号为VKPM B-5318。
此外，本发明的细菌优选是经过修饰而增加了下列基因中1种以上的表达的细菌：
-突变thrA基因，其编码对苏氨酸的反馈抑制具有抗性的天冬氨酸激酶高丝氨酸脱氢酶I；
-thrB基因，其编码高丝氨酸激酶；
-thrC基因，其编码苏氨酸合酶；
-rhtA基因，其编码推定的跨膜蛋白；
-asd基因，其编码天冬氨酸-β-半醛脱氢酶；
-aspC基因，其编码天冬氨酸氨基转移酶(天冬氨酸转氨酶)。
编码大肠杆菌天冬氨酸激酶高丝氨酸脱氢酶I的thrA基因已经阐明(核苷酸编号337至2799，GenBank登录号NC_000913.2，gi：49175990)。thrA基因位于大肠杆菌K-12染色体上thrL基因和thrB基因之间。编码大肠杆菌高丝氨酸激酶的thrB基因已经阐明(核苷酸编号2801至3733，GenBank登录号NC_000913.2，gi：49175990)。thrB基因位于大肠杆菌K-12染色体上的thrA基因和thrC基因之间。编码大肠杆菌的苏氨酸合酶的thrC基因已经阐明(核苷酸编号3734至5020，GenBank登录号NC_000913.2，gi：49175990)。thrC基因位于大肠杆菌K-12染色体上thrB基因和yaaX开放阅读框之间。所有这3个基因作为单独的一个苏氨酸操纵子发挥功能。为增加苏氨酸操纵子的表达，优选从操纵子中将影响转录的弱化子区域去除(WO2005/049808，WO2003/097839)。
编码对苏氨酸的反馈抑制有抗性的天冬氨酸激酶高丝氨酸脱氢酶I的突变thrA基因，加上thrB和thrC基因，可以作为一个操纵子从熟知的pVIC40质粒中获得，该质粒存在于苏氨酸生产株大肠杆菌VKPM B-3996菌株中，在美国专利No.5,705,371中有详述。
rhtA基因在大肠杆菌染色体上的18min处，靠近编码谷氨酰胺转运系统的成分的glnHPQ操纵子。rhtA基因与ORF1(ybiF基因，核苷酸编号764至1651，GenBank登录号AAA218541，gi：440181)相同，位于pexB与ompX基因之间。已将表达由ORF1编码的蛋白的单位命名为rhtA基因(rht：对高丝氨酸和苏氨酸抗性)。此外，已经证明rhtA23突变是在相对ATG起始密码子的-1位置上的G→A取代(ABSTRACTS of the 17th InternationalCongress of Biochemistry and Molecular Biology in conjugation with AnnualMeeting of the American Society for Biochemistry and Molecular Biology(第17界国际生物化学与分子生物学大会暨美国生物化学与分子生物学协会年会摘要)，San Francisco，California，1997年8月24-29日，摘要号457，EP 1013765 A)。
大肠杆菌的asd基因已经阐明(核苷酸编号3572511至3571408，GenBank登录号NC_000913.1，gi：16131307)，并且可以利用根据该基因的碱基序列制备的引物通过PCR(参见White，T.J.等，Trends Genet.，5，185(1989))来获得。其它微生物的asd基因也可以通过类似方式获得。
此外，大肠杆菌的aspC基因已经阐明(核苷酸编号983742至984932，GenBank登录号NC_000913.1，gi：16128895)，并且可以通过PCR获得。其它微生物的aspC基因也可以通过类似方式获得。
L-赖氨酸生产菌
属于埃希氏菌属的L-赖氨酸生产菌的实例包括对L-赖氨酸类似物具有抗性的突变株。L-赖氨酸类似物可抑制属于埃希氏菌属的细菌的生长，但是这种抑制当L-赖氨酸共存于培养基中时会被全部或部分解除。L-赖氨酸类似物的实例包括、但不限于，氧代赖氨酸，赖氨酸氧肟酸(lysinehydroxamate)，S-(2-氨乙基)-L-半胱氨酸(AEC)，γ-甲基赖氨酸，α-氯代己内酰胺等。将属于埃希氏菌属的细菌进行常规的人工诱变处理可以得到对这些赖氨酸类似物具有抗性的突变株。可用于L-赖氨酸生产的菌株的具体实例包括大肠杆菌AJ11442(FERM BP-1543，NRRL B-12185；参见美国专利4,346,170号)和大肠杆菌VL611。在这些微生物中，L-赖氨酸对天冬氨酸激酶的反馈抑制已被解除。
可将WC196菌株用作大肠杆菌的L-赖氨酸生产菌。这种菌株是通过赋予源自大肠杆菌K-12的W3110菌株以AEC抗性而培育的。该菌株被命名为大肠杆菌AJ13069菌株，并于1994年12月6日保藏在工业技术院生命工学工业技术研究所(现为独立行政法人产业技术综合研究所特许微生物保藏中心，305-8566，日本国茨城县筑波市东1丁目1番地1中央第6)，取得登录号FERM P-14690。其后根据布达佩斯条约的规定于1995年9月29日转为国际保藏，并取得登录号FERM BP-5252(美国专利第5,827,698号)。
用于衍生本发明的L-赖氨酸生产菌的亲本株的实例还包括下述菌株，在所述菌株中编码L-赖氨酸生物合成酶的1种以上基因的表达增加。这样的基因的实例包括，但不限于，二氢吡啶二羧酸合酶基因(dapA)、天冬氨酸激酶基因(lysC)、二氢吡啶二羧酸还原酶基因(dapB)、二氨基庚二酸脱羧酶基因(lysA)、二氨基庚二酸脱氢酶基因(ddh)(美国专利第6,040,160号)、磷酸烯醇丙酮酸羧化酶基因(ppc)、天冬氨酸半醛脱氢酶基因(asd)和天冬氨酸酶基因(aspA)(EP 1253195 A)。此外，亲本菌株中涉及能量效率(energyefficiency)的基因(cyo)(EP 1170376 A)、编码烟酰胺核苷酸转氢酶的基因(pntAB)(美国专利第5,830,716号)、ybjE基因(WO2005/073390)或它们的组合的表达水平增加也是可以的。
作为用于衍生本发明的L-赖氨酸生产菌的亲本株的例子，可列举催化通过从L-赖氨酸生物合成途径分支而生成L-赖氨酸以外的化合物的反应的酶的活性减少或缺损的菌株。作为催化通过从L-赖氨酸生物合成途径分支而生成L-赖氨酸之外的化合物的反应的酶的例子，可以列举出高丝氨酸脱氢酶、赖氨酸脱羧酶(美国专利第5,827,698号)、和苹果酸酶(WO2005/010175)。
L-半胱氨酸生产菌
用于衍生本发明的L-半胱氨酸生产菌的亲本株的实例包括、但不限于下述属于埃希氏菌属的菌株，如用编码反馈抑制抗性丝氨酸乙酰转移酶的多种cysE等位基因转化的大肠杆菌JM15(美国专利6,218,168，俄罗斯专利申请第2003121601号)，具有编码适于向细胞分泌有毒物质的蛋白的过表达基因的大肠杆菌W3110(美国专利第5,972,663号)，半胱氨酸脱巯基酶(cysteine desulfohydrase)活性减少的大肠杆菌菌株(JP11155571A2)；由cysB基因编码的半胱氨酸调节子的正向转录调控物活性增强的大肠杆菌W3110(WO0127307A1)，等等。
L-亮氨酸生产菌
用于衍生本发明的L-亮氨酸生产菌的亲本株的实例包括、但不限于下述属于埃希氏菌属的菌株，如对亮氨酸有抗性的大肠杆菌菌株(例如，菌株57(VKPM B-7386，美国专利第6,124,121号))或对亮氨酸类似物(包括β-2-噻吩丙氨酸、3-羟基亮氨酸、4-氮亮氨酸、5，5，5-三氟亮氨酸等)有抗性的大肠杆菌菌株(特公昭62-34397号和特开平8-70879号)；通过WO96/06926中描述的遗传工程方法获得的大肠杆菌菌株；大肠杆菌H-9068(特开平8-70879号)，等等。
可以通过增加涉及L-亮氨酸生物合成的一种以上的基因的表达来改进本发明的细菌。这些基因的实例可优选列举以编码对L-亮氨酸反馈抑制具有抗性的异丙基苹果酸合酶的突变leuA基因为代表的leuABCD操纵子中的基因(美国专利第6,403,342号)。此外，可以通过增加编码从细菌细胞分泌L-氨基酸的蛋白的一种以上的基因的表达来改进本发明的细菌。这类基因的实例包括b2682和b2683基因(ygaZH基因)(EP 1239041 A2)。
L-组氨酸生产菌
用于衍生本发明的L-组氨酸生产菌的亲本株的实例包括、但不限于下述属于埃希氏菌属的菌株，如大肠杆菌24菌株(VKPM B-5945，RU2003677)；大肠杆菌80菌株(VKPM B-7270，RU2119536)；大肠杆菌NRRL B-12116-B12121(美国专利4,388,405)；大肠杆菌H-9342(FERM BP-6675)和H-9343(FERM BP-6676)(美国专利6,344,347)；大肠杆菌H-9341(FERM BP-6674)(EP1085087)；大肠杆菌AI80/pFM201(美国专利6,258,554)等等。
用于衍生本发明的L-组氨酸生产菌的亲本株的实例还包括如下菌株，所述菌株中编码L-组氨酸生物合成系统酶的1种以上的基因的表达增加。这些基因的实例包括ATP磷酸核糖基转移酶基因(hisG)、磷酸核糖基AMP环化水解酶基因(hisI)、磷酸核糖基-ATP焦磷酸水解酶基因(hisIE)、磷酸核糖基亚氨甲基-5-氨基咪唑氨甲酰核糖核苷酸异构酶基因(hisA)、酰胺转移酶基因(hisH)、组氨醇磷酸氨基转移酶基因(hisC)、组氨醇磷酸酶基因(hisB)、组氨醇脱氢酶基因(hisD)等。
已知hisG和hisBHAFI编码的L-组氨酸生物合成酶被L-组氨酸所抑制，因此还可以通过向ATP磷酸核糖基转移酶基因(hisG)中引入诱导对反馈抑制有抗性的突变来有效地增加生产L-组氨酸的能力(俄罗斯专利2003677和2119536)。
具有L-组氨酸生产能力的菌株具体实例包括大肠杆菌FERM-P 5038和5048，其已经导入了携带编码L-组氨酸生物合成酶的DNA的载体(特开昭56-005099号)，导入了用于氨基酸输送的rht基因的大肠杆菌菌株(EP1016710A)，赋予了磺胺胍、DL-1，2，4-三唑-3-丙氨酸和链霉素抗性的大肠杆菌80菌株(VKPM B-7270，俄罗斯专利2119536)，等等。
L-苯丙氨酸生产菌
用于衍生本发明的L-苯丙氨酸生产菌的亲本株的例子包括、但不限于下述属于埃希氏菌属的菌株，如大肠杆菌AJ12739(tyrA::Tn10，tyrR)(VKPM B-8197)；具有突变型pheA34基因的大肠杆菌HW1089(ATCC55371)(美国专利5,354,672)；大肠杆菌MWEC101-b(KR8903681)；大肠杆菌NRRL B-12141，NRRL B-12145，NRRL B-12146和NRRL B-12147(美国专利4,407,952)等。此外，也可以使用大肠杆菌K-12[W3110(tyrA)/pPHAB](FERM BP-3566)，大肠杆菌K-12[W3110(tyrA)/pPHAD](FERMBP-12659)，大肠杆菌K-12[W3110(tyrA)/pPHATerm](FERM BP-12662)和命名为AJ 12604的大肠杆菌K-12[W3110(tyrA)/pBR-aroG4，pACMAB](FERM BP-3579)作为亲本菌株(EP 488424 B1)。此外，还可使用由yedA基因或yddG基因编码的蛋白活性增加的属于埃希氏菌属的L-苯丙氨酸生产菌(美国专利申请公开2003/0148473 A1和2003/0157667 A1)。
L-色氨酸生产菌
用于衍生本发明的L-色氨酸生产菌的亲本株的实例包括、但不限于下述属于埃希氏菌属的菌株，如大肠杆菌JP4735/pMU3028(DSM10122)和JP6015/pMU91(DSM10123)，其色氨酰-tRNA合成酶缺陷，该酶由突变的trpS基因编码(美国专利5,756,345)；大肠杆菌SV164(pGH5)，其具有编码对丝氨酸反馈抑制有抗性的磷酸甘油酸脱氢酶的serA等位基因和编码对色氨酸反馈抑制有抗性的邻氨基苯甲酸合酶(anthranilate synthase)的trpE等位基因(美国专利6,180,373)；色氨酸酶缺陷的大肠杆菌AGX17(pGX44)(NRRL B-12263)和AGX6(pGX50)aroP(NRRL B-12264)(美国专利4,371,614)；磷酸烯醇丙酮酸的生产能力增加的大肠杆菌AGX17/pGX50，pACKG4-pps(WO9708333，美国专利6,319,696)等等。此外，还可以使用由yedA基因或yddG基因编码的蛋白活性增强的产生L-色氨酸的埃希氏菌属细菌(美国专利申请公开2003/0148473A1和2003/0157667A1)。
用于衍生本发明的L-色氨酸生产菌的亲本株的实例还包括选自邻氨基苯甲酸合酶(trpE)、磷酸甘油酸脱氢酶(serA)和色氨酸合酶(trpAB)中的1种以上的酶活性增加的菌株。邻氨基苯甲酸合酶和磷酸甘油酸脱氢酶两者受L-色氨酸和L-丝氨酸的反馈抑制，因此可以向这些酶中引入导致反馈抑制解除的突变。具有此类突变的菌株的具体实例包括具有脱敏的邻氨基苯甲酸合酶的大肠杆菌SV164菌株和通过将质粒pGH5(WO 94/08031)转入大肠杆菌SV164获得的菌株，所述质粒pGH5包含突变的serA基因，该突变的serA基因编码对反馈抑制脱敏的磷酸甘油酸脱氢酶。
用于衍生本发明的L-色氨酸生产菌的亲本株的实例还包括导入了色氨酸操纵子的菌株，所述色氨酸操纵子包含编码脱敏的邻氨基苯甲酸合酶的基因(特开昭57-71397号，特开昭62-244382号，美国专利4,371,614)。此外，可以通过增加色氨酸操纵子(trpBA)中编码色氨酸合酶的基因的表达来赋予L-色氨酸生产能力。色氨酸合酶由α和β亚基组成，这两种亚基分别由trpA和trpB编码。另外，可以通过增强异柠檬酸裂合酶-苹果酸合酶操纵子的表达来改进L-色氨酸生产能力(WO2005/103275)。
L-脯氨酸生产菌
用于衍生本发明的L-脯氨酸生产菌的亲本株实例包括、但不限于下述属于埃希氏菌属的菌株，如ilvA基因缺陷并且能够产生L-脯氨酸的大肠杆菌702ilvA(VKPM B-8012)(EP 1172433)等。
可以通过增强涉及L-脯氨酸生物合成的1种以上的基因的表达来改进本发明的细菌。用于L-脯氨酸生产菌的优选基因的实例包括编码解除了L-脯氨酸反馈抑制的谷氨酸激酶的proB基因(德国专利第3127361号)。此外，可以通过增加编码从细菌细胞分泌L-氨基酸的蛋白的1种以上的基因的表达来改进本发明的细菌。这些基因包括b2682和b2683基因(ygaZH基因)(EP1239041 A2)。
具有L-脯氨酸生产能力的属于埃希氏菌属的细菌的实例包括下列大肠杆菌菌株：NRRL B-12403和NRRL B-12404(英国专利第2075056号)，VKPM B-8012(俄罗斯专利申请2000124295)，德国专利第3127361中描述的质粒突变体，Bloom F.R.等描述的质粒突变体(The 15th Miami wintersymposium(第15届迈阿密冬季研讨会)，1983，第34页)等等。
L-精氨酸生产菌
用于衍生本发明的L-精氨酸生产菌的亲本株包括、但不限于下述属于埃希氏菌属的菌株，如大肠杆菌237菌株(VKPM B-7925)(美国专利申请公开2002/058315 A1)及其带有突变的N-乙酰谷氨酸合酶(N-acetylglutamatesynthase)的衍生菌株(俄罗斯专利申请2001112869)，大肠杆菌382菌株(VKPM B-7926)(EP1170358A1)，引入了编码N-乙酰谷氨酸合成酶(N-acetylglutamate synthetase)的argA基因的精氨酸生产株(EP1170361A1)，等等。
用于衍生本发明的L-精氨酸生产菌的亲本菌株的实例还包括编码L-精氨酸生物合成酶的1种以上基因的表达增加的菌株。相关基因的实例包括N-乙酰谷氨酰磷酸还原酶基因(argC)、鸟氨酸乙酰转移酶基因(argJ)、N-乙酰谷氨酸激酶基因(argB)、乙酰鸟氨酸转氨酶基因(argD)、鸟氨酸氨甲酰基转移酶基因(argF)、精氨琥珀酸合成酶基因(argG)、精氨琥珀酸裂合酶基因(argH)和氨甲酰基磷酸合成酶基因(carAB)。
L-缬氨酸生产菌
用于衍生本发明的L-缬氨酸生产菌的亲本株的实例包括但不限于经修饰而过表达ilvGMEDA操纵子的菌株(美国专利5,998,178)。优选将衰减所需的ilvGMEDA操纵子的区域移除以使操纵子的表达不会被产生的L-缬氨酸所削弱。此外，优选将操纵子中的ilvA基因破坏从而降低苏氨酸脱氨酶的活性。
用于衍生本发明的L-缬氨酸生产菌的亲本株的实例还包括具有氨酰t-RNA合成酶突变的突变株(美国专利5,658,766)。例如，可以使用大肠杆菌VL1970，该菌株在编码异亮氨酸tRNA合成酶的ileS基因中具有突变。已将大肠杆菌VL1970在1988年6月24日保藏在俄罗斯国立工业微生物保藏中心(VKPM)(1 Dorozhny Proezd.，1 Moscow 117545，Russia)，登录号为VKPM B-4411。
此外，还可以使用生长需要硫辛酸(lipoic acid)的突变株和/或缺乏H+-ATP酶的突变株(WO96/06926)作为亲本株。
L-异亮氨酸生产菌
用于衍生本发明的L-异亮氨酸生产菌的亲本株的实例包括、但不限于对6-二甲基氨基嘌呤有抗性的突变株(特开平5-304969号)，对异亮氨酸类似物如硫代异亮氨酸(thiaisoleucine)和异亮氨酸氧肟酸具有抗性的突变株，以及对DL-乙硫氨酸(DL-ethionine)和/或精氨酸氧肟酸具有抗性的突变株(特开平5-130882号)。此外，还可以使用以编码涉及L-异亮氨酸生物合成的蛋白(如苏氨酸脱氨酶、乙酰羟酸合酶(acetohydroxate synthase)等)的基因转化的重组菌株(特开平2-458号，FR 0356739，和美国专利第5,998,178号)作为亲本株。
<1-2>kdp系统的增强
本发明的微生物可以通过对诸如上述的具有L-氨基酸生产能力的属于肠杆菌科的微生物进行修饰使得kdp系统增强而得到。但是，也可以在进行修饰使kdp系统增强后，再赋予L-氨基酸生产能力。
而且，kdp系统的增强，可以如下文所述地通过进行修饰使得kdp操纵子或构成该操纵子的1种或2种以上的基因的表达量增加来实现，它们的表达量的增加可以是表达调节区域修饰(如启动子修饰)等所致内因性基因表达增加，也可以是包含操纵子或各基因的质粒的导入等所导致的外因性基因表达增加。而且，这些还可以组合使用。此外，通过增加kdp操纵子或构成该操纵子的各基因的翻译量，也可以增强kdp系统。
在本发明中，“kdp系统”是指在钾离子摄入系统(high-affinity potassiumtransport system)中起作用的P型ATP酶(potassium-transporting P-type ATP酶，钾转运P型ATP酶)(EC 3.6.3.12)。
此外，“经过修饰而增强了kdp系统”意思是基于所述P型ATP酶的钾离子摄入增强，更具体地是指微生物经过修饰而增强了所述P型ATP酶的活性。这相当于，例如，与野生株或非修饰株相比较，平均每个细胞的P型ATP酶分子数增加，或者平均每个P型ATP酶分子的活性上升。优选进行修饰，使得与野生株或非修饰株相比较，P型ATP酶活性提高至每个菌体平均150％以上、优选200％以上，更希望提高至每个菌体平均300％以上。此外，作为比较对象的属于肠杆菌科的野生型微生物，可以列举出例如大肠杆菌MG1655(ATCC 47076)、Pantoea ananatis AJ13355(FERMBP-6615)等。
kdp操纵子的表达量上升与否的确认可以通过将kdp操纵子的mRNA的量与野生型或者非修饰株相比较来确认。作为表达量的确认方法，可以列举出Northern杂交、RT-PCR(Molecular cloning(Cold spring HarborLaboratory Press，Cold spring Harbor(USA)，2001))。只要与野生株或者非修饰株相比较表达量上升即可，优选例如与野生株、非修饰株相比，上升1.5倍以上、更优选2倍以上、更优选3倍以上。
P型ATP酶活性例如可以这样测定：从具有kdp系统的微生物中提取kdp系统并进行纯化(参照Siebers，A.等，Eur.J.Biochem.178，131(1988))，然后测定其ATP酶活性的方法(参照Arnold，A.等，Anal.Biochem.71，209(1976))。
kdp系统由kdp操纵子所编码的3个亚单位构成，在大肠杆菌中，各亚单位基因的注释如下。
kdpA高亲和性钾转运系统的ATP酶，A链
kdpB高亲和性钾转运系统的ATP酶，B链
kdpC高亲和性钾转运系统，P-型ATP酶，C链
本发明中的“kdp操纵子”是指编码所述P型ATP酶的A亚单位、B亚单位、C亚单位的基因群，A亚单位由kdpA基因编码，B亚单位由kdpB基因编码，C亚单位由kdpC基因编码。在本发明中，kdp操纵子还可以包含kdpA、kdpB和kdpC基因以外的基因。
大肠杆菌kdp操纵子的碱基序列如SEQ ID NO：1所示。该操纵子包含下述的6个基因，它们在SEQ ID NO：1的编码区域(含终止密码子)的位置分别如下。kdpA、kdpB、kdpC、kdpD和kdpE所编码的氨基酸序列分别如SEQ ID NO：2～6所示。
kdpF：457～546
kdpA：546～2219
kdpB：2242～4290
kdpC：4299～4871
kdpD：4864～7548
kdpE：7545～8222
Pantoea ananatis的kdp操纵子的碱基序列如SEQ ID NO：7所示。该操纵子包含下述的4个基因，它们在SEQ ID NO：7的编码区域(含终止密码子)的位置分别如下。kdpA、kdpB、kdpC和kdpD所编码的氨基酸序列分别如SEQ ID NO：8～11所示。
kdpA：543～2225
kdpB：2228～4273
kdpC：4284～4853
kdpD：4867～7542
此外，Pantoea ananatis的kdpE基因的碱基序列和该基因编码的氨基酸序列分别如SEQ ID NO：12、13所示。
在本说明书中，有时将kdpA、kdpB、kdpC、kdpD和kdpE编码的蛋白质分别记作KdpA、KdpB、KdpC、KdpD和KdpE。
Pantoea ananatis与大肠杆菌的KdpA、KdpB、KdpC的氨基酸序列的分别比对如图6～8所示。Pantoea ananatis与大肠杆菌中共有的序列显示在比对的下部。此外，KdpA、KdpB、KdpC各自的共有序列如SEQ ID NO：57～59所示。
Pantoea ananatis与大肠杆菌的KdpA、KdpB、KdpC的同源性分别为75.36％、81.35％、59.57％。
埃希氏菌的kdpA基因登录于GenBank NP_415226.1 Reportspotassium-transpo...[gi:16128674]，kdpB基因登录于NP_415225.Reportspotassium-transpo...[gi:16128673]，kdpC基因登录于NP_415224.Reportspotassium-transpo...[gi:16128672]，kdpD基因登录于NP_415223.Reportsfused sensory his...[gi:16128671]，kdpE基因登录于NP_415222.ReportsDNA-binding respo...[gi:16128670]。
而且，kdp操纵子也可以基于与上述示例的基因间的同源性，从埃希氏菌属、泛菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属、沙雷氏菌属、欧文氏菌属、耶尔森氏菌属(Yersinia)等属于肠杆菌科的微生物中克隆。
可用于本发明的kdp操纵子还可以这样取得：基于序列已经阐明的属于肠杆菌科的微生物的碱基序列制作引物，使用该引物通过以属于肠杆菌科的微生物的染色体DNA为模板的PCR法(PCR：聚合酶链式反应；参照White，T.J.等，Trends Genet.5，185(1989))，可以获取kdp操纵子及其相邻区域(包括其上游区域的表达调控区域)。其它微生物的kdp操纵子的同源物也可以同样获得。
kdp操纵子同源物是指：其它微生物来源的、与大肠杆菌或Pantoeaananatis的kdp操纵子显示高相似性、且编码摄入钾离子的P型ATP酶的基因。其它微生物来源的kdpA基因、kdpB基因和kdpC基因是指下述基因，所述基因与SEQ ID NO：2、3、4、8、9和10的氨基酸序列全长具有80％以上、优选90％以上、更优选95％以上、特别优选97％以上的同源性，并且编码构成具有摄入钾的P型ATP酶活性的蛋白质的亚单位。
各亚单位也可以是编码具有在SEQ ID NO：2、3、4、8、9和10的氨基酸序列中1个或数个位置上取代、缺失、插入或添加了1个或数个氨基酸的氨基酸序列的保守变体的基因，只要不损害它们所构成的P型ATP酶的活性即可。这里，“数个”是指：虽然因氨基酸残基的种类或其在蛋白质的立体结构中的位置而异，但优选为2～20个、更优选2～10个、特别优选2～5个。此外，这样的氨基酸的取代、缺失、插入、添加或倒位等还包括因基于携带kdp操纵子的微生物的个体差异、种间差异等情形而天然发生的突变(mutant或variant)而产生的那些取代、缺失、插入、添加或倒位。
上述取代优选为保守取代，所述保守取代是一种功能上无变化的中性突变。关于保守突变，当取代位点是芳香族氨基酸时为Phe、Trp和Tyr之间、当取代位点是疏水氨基酸时为Leu、Ile和Val之间、当是极性氨基酸时为Gln和Asn之间、当是碱性氨基酸时为Lys、Arg和His之间、当是酸性氨基酸时为Asp和Glu之间、当是具有羟基的氨基酸时为Ser和Thr之间的相互取代的突变。作为保守取代可列举：用Ser或Thr取代Ala；用Gln、His或Lys取代Arg；用Glu、Gln、Lys、His或Asp取代Asn；用Asn、Glu或Gln取代Asp；用Ser或Ala取代Cys；用Asn、Glu、Lys、His、Asp或Arg取代Gln；用Gly、Asn、Gln、Lys或Asp取代Glu；用Pro取代Gly；用Asn、Lys、Gln、Arg或Tyr取代His；用Leu、Met、Val或Phe取代Ile；用Ile、Met、Val或Phe取代Leu；用Asn、Glu、Gln、His或Arg取代Lys；用Ile、Leu、Val或Phe取代Met；用Trp、Tyr、Met、Ile或Leu取代Phe；用Thr或Ala取代Ser；用Ser或Ala取代Thr；用Phe或Tyr取代Trp；用His、Phe或Trp取代Tyr；和用Met、Ile或Leu取代Val。
此外，kdp操纵子随宿主微生物的不同而具有不同的基因简并性，因此，可以替换成在kdp操纵子所导入的宿主中容易使用的密码子。相似地，kdp操纵子只要能够通过扩增来提高L-氨基酸生产即可，编码出的各亚单位的N末端侧和/或C末端侧可以延长或削减。例如延长、削减的长度以氨基酸残基计为50个以下、优选20个以下、更优选10个以下、特别优选5个以下。更具体地，可以从SEQ ID NO：2、3、4、8、9和10的氨基酸序列的N末端侧延长或削减50个氨基酸～5个氨基酸、或者从C末端侧延长或削减50个氨基酸～5个氨基酸。
kdp操纵子还可以是这样的DNA，所述DNA与具有与SEQ ID NO：1或7的碱基序列或该碱基序列中的各编码区域的碱基序列互补的序列的DNA、或可从具有这些碱基序列的DNA制备的探针在严格条件下杂交，并且编码具有kdp系统即摄入钾离子的P型ATP酶的活性的蛋白质。
这里，“严格条件”是指形成所谓特异性杂交体而不形成非特异性杂交体的条件。将该条件明确的数值化是困难的，举一实例，有这样的条件：在该条件下，具有高同源性的DNA，例如具有70％以上，优选80％以上，更优选90％以上，甚至更优选95％以上，特别优选具有97％以上同源性的DNA相互杂交，而同源性较之为低的DNA则不互相杂交；或者是这样的条件：在与常规Southern杂交的洗涤条件即60℃，1×SSC、0.1％SDS优选0.1×SSC、0.1％SDS相当的盐浓度下进行杂交。
探针可以具有kdp操纵子的部分序列。这样的探针可以采用本领域技术人员知晓的方法，以基于各基因的碱基序列制备的寡核苷酸为引物，以包含各基因的DNA片段为模板，通过PCR反应来制备。而且，当作为探针使用300bp左右长度的DNA片段时，作为在上述条件下进行杂交后的洗涤条件，可以列举出50℃、2×SSC，0.1％SDS中洗涤1次或2～3次的条件。
这样的与kdp操纵子同源的基因，例如可以通过采用定点突变方法对SEQ ID NO：1或7的碱基序列中的编码区域进行修饰来获得，所述修饰使得编码的蛋白的特定位点的氨基酸残基包含取代、缺失、插入或增加。此外，还可以通过诸如以下的传统公知的突变处理来获得。可以采用下述方法作为突变处理通过基因重组人为地在kdp操纵子中导入突变，来获得编码高活性kdp系统的操纵子，所述方法有：用羟胺等对SEQ ID NO：1或7的碱基序列或该碱基序列中的编码区域的序列进行体外处理的方法，对保持该基因的微生物例如属于肠杆菌科的微生物采用紫外线或使用N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(NTG)或甲磺酸乙酯(EMS)等在常规突变处理中使用的突变剂来进行处理的方法，易错(error-prone)PCR(Cadwell，R.C.PCRMeth.Appl.2，28(1992))、DNA改组(Stemmer，W.P.Nature 370，389(1994))和StEP-PCR(Zhao，H.Nature Biotechnol.16，258(1998))。这些kdp操纵子的同源物是否编码P型ATP酶，例如可以通过下述方法来确定：将这些基因导入具有L-氨基酸生产能力的属于肠杆菌科的微生物，测定L-氨基酸的生产能力是否提高，或者按上述方法测定P型ATP酶活性。
而且，上述关于变体和同源物的描述也适用于后述的kdpD基因和kdpE基因。
对属于肠杆菌科的微生物进行修饰使得kdp操纵子或构成该操纵子的1种或2种以上基因的表达量增加，可以按照前述的、对细菌进行修饰使得目的基因的表达增强的方法来进行。即，可以通过提高kdp操纵子或构成该操纵子的各基因的表达的拷贝数、和/或将该操纵子的启动子等表达调节序列更换成强力的启动子等表达调节序列、或者将构成该操纵子的各基因置于强力表达调节序列的调控下，来增强该操纵子或各基因的表达。构成kdp操纵子的各基因的表达的增强可以以操纵子单元的形式进行，此外还可以各基因分别进行，优选以操纵子单元的形式进行。当各基因分别地增强表达时，增强的基因可以是构成kdp操纵子的任何基因，优选至少为kdpA、kdpB和kdpC基因中的任何1种或2种以上，更优选增强kdpA、kdpB和kdpC基因全部这三个基因的表达。
此外，对各基因的核糖体结合位点(RBS)与起始密码子之间的间隔区的序列进行修饰，使得构成kdp操纵子的各基因的翻译量增加，这样也可以增强kdp系统。
而且，已知kdp操纵子的表达受kdpD基因和kdpE基因编码的双成分调控系统KdpDE的调控(J.Bacteriol.，1992Apr.；174(7)：2152-59.)，通过增加kdpD基因和kdpE基因的表达量也可以增加kdp操纵子的表达量。
<2>本发明的L-氨基酸的生产方法
通过在培养基中培养本发明的微生物，使L-氨基酸生成并蓄积在该培养基中，并且从该培养基中收集L-氨基酸，能够生产L-氨基酸。
用于培养的培养基可以使用含有碳源、氮源、无机盐类以及视需要的氨基酸、维生素等有机微量营养元素的常规培养基。可以使用合成培养基或者天然培养基。培养基中使用的碳源和氮源可以是任意种类的，只要所培养的菌株能够利用即可。
碳源可以使用糖类，如葡萄糖、甘油、果糖、蔗糖、麦芽糖、甘露糖、半乳糖、淀粉水解物和糖蜜，此外也可以单独使用或者与其它碳源组合使用有机酸，如乙酸和柠檬酸，以及醇，如乙醇。作为氮源，可以使用氨、铵盐如硫酸铵、碳酸铵、氯化铵、磷酸铵或乙酸铵，或者使用硝酸盐。作为有机痕量营养物，可以使用氨基酸、维生素、脂肪酸和核酸，以及包含这些营养物的蛋白胨、酪蛋白氨基酸、酵母提取物、大豆蛋白水解物等，并且在使用生长需要氨基酸等营养物的营养缺陷型突变菌株时，优选补充所需要的营养物。
特别是，当使用调整为能够使L-谷氨酸析出的条件的液体培养基时，在培养基中添加泛酸，能够更有效地晶析(WO2004/111258号小册子)。无机盐类可以使用磷酸盐、镁盐、钙盐、铁盐、锰盐等。
培养优选控制在发酵温度20～45℃、pH 3-9的条件下进行通气培养。当培养中pH下降时，可以例如添加碳酸钙，或用氨气等碱来中和。在这样的条件下，优选进行约10～120小时左右的培养，在培养液中蓄积目的氨基酸。
此外，可以使用调整为能够析出L-谷氨酸的条件的液体培养基，在使L-谷氨酸在培养基中析出的同时进行培养。作为L-谷氨酸析出的条件，可以列举出例如pH 5.0～4.0、优选pH 4.5～4.0、更优选pH 4.3～4.0、特别优选pH 4.0。
此外，当使L-谷氨酸在培养基中析出时，预先添加L-谷氨酸、L-赖氨酸晶体作为晶种，能够更有效地进行晶析(欧洲专利1233069号、欧洲专利申请公开1624069号)。
作为从培养结束后的培养液中收集L-氨基酸的方法，可以采用公知的回收方法来进行。例如，可以采用从培养液中除去菌体后进行浓缩晶析的方法，或者通过离子交换色谱等来收集。当在能够使L-谷氨酸析出的条件下进行培养时，析出到培养液中的L-谷氨酸可以采用离心分离或过滤等来收集。这种情况下，可以在使溶解在培养基中的L-谷氨酸晶析后，一并进行分离。
而且，在生产碱性氨基酸时，可以采用通过下述方法进行发酵、并回收目的碱性氨基酸的方法来进行生产：将培养中的pH调控为6.5～9.0、将培养结束时的培养基的pH调控为7.2～9.0，将发酵中发酵罐内压力调控为正，或者向培养基中供给二氧化碳气或含二氧化碳气的混合气体，使得存在培养基中的碳酸氢根离子和/或碳酸根离子至少为2g/L以上的培养期，将所述碳酸氢根离子和/或碳酸根离子作为以碱性氨基酸为主的阳离子的抗衡离子(参照特开2002-065287号、美国专利申请公开第2002025564号)。
实施例
以下，通过实施例对本发明进行更具体的说明。
〔参考例1〕对λRed基因产物具有抗性的Pantoea ananatis菌株的构建
为了在Pantoea ananatis中进行kdp操纵子的扩增，构建了用于高效率地进行称作“Red驱动整合”或“Red介导整合”的方法(Proc.Natl.Acad.Sci.USA.97.6640-6645(2000))的受体菌。
首先，构建了表达λ的gam、bet和exo各基因(以下称“λRed基因”)的新辅助质粒RSF-Red-TER(图1)。详细描述见参考例2。
该质粒可以用于具有不同基因背景的广域宿主。理由是：1)其具有在许多革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌甚至植物中都能够稳定保持的RSF1010广宿主域质粒的复制子(Scholz，等，1989；Buchanan-Wollaston等，1987)，2)λRed基因、gam、bet和exo基因受到能够被许多细菌的RNA聚合酶识别的PlacUV5启动子的调节(例如、Brunschwig，E.和Darzins，A.，Gene，111，1，35-41(1992)；Dehio，M.等，Gene，215，2，223-229(1998))，3)自调节因子PlacUV5-lacI、以及大肠杆菌rrnB操纵子的ρ非依赖性转录终止子(TrrnB)降低λRed基因的本底表达水平(Skorokhodova，A.Yu等，Biotekhnologiya(俄语)，5，3-21(2004))。而且，RSF-Red-TER质粒包含果聚糖蔗糖酶(levansucrase)基因(sacB)，利用该基因，可以在含蔗糖的培养基中从细胞回收质粒。
在大肠杆菌中，PCR反应生成的DNA片段与由RSF-Red-TER质粒提供的短侧翼区域一起发生整合的频率与使用pKD46辅助质粒(Datsenko，K.A.，Wanner，B.L.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，97，6640-6645，(2000))时一样高。然而，λRed基因的表达对Pantoea ananatis显示毒性。用RSF-Red-TER辅助质粒转化的细胞在含IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷，1mM)和适当抗生素(氯霉素25μg/ml或卡那霉素40μg/ml)的LB培养基上显示非常低的生长速度，λRed介导的重组(λRed-mediated recombination)的效率即使能够观察到，也是非常低的(10-8)。
选择了对λRed基因的全部3个基因的表达均具有抗性的Pantoeaananatis突变菌株。为此，通过电穿孔将RSF-Red-TER质粒导入Pantoeaananatis SC17株(美国专利第6,596,517号)。培养18小时后，得到了约106个转化株，有10个克隆的菌落尺寸大，其余的菌落都非常小。培养18小时后，大菌落为约2mm，小菌落为约0.2mm。将培养延长至24小时，小菌落不再继续生长，而大菌落继续生长。将对λRed基因的全部3个基因(gam、bet和exo)的表达均具有抗性的大菌落Pantoea ananatis突变菌株中的一个用于进一步分析。
从1个大菌落克隆和数个小菌落克隆中分离出RSF-Red-TER质粒DNA，用其再次转化大肠杆菌MG1655，考察了质粒合成Red基因的活性产物的能力。由所得转化体中Red依赖性整合的对照实验可知，只有从大菌落克隆分离的质粒可引起Red依赖性整合所必需的λRed基因的表达。为了考察所选的大菌落克隆中是否发生Red介导的整合，使用PCR反应生成的下述线性DNA片段进行了电穿孔，所述DNA片段设计为包含KmR标记和与hisD基因同源的40bp侧翼区域，并且整合到Pantoea ananatis的hisD基因的SmaI识别位点。将2个小菌落的克隆用作对照。Pantoeaananatis的hisD基因的核苷酸序列示于SEQ ID NO：14。PCR中使用SEQ IDNO：15和16的寡核苷酸作为引物，使用pMW118-(λattL-Kmr-λattR)质粒作为模板。使用对λRed基因不具有抗性的2个小菌落的克隆作为对照。pMW118-(λattL-Kmr-λattR)质粒的构建在参考例3中详细描述。
RSF-Red-TER质粒能够通过该质粒上的lacI基因诱导Red基因的表达。对两种诱导条件进行了考察。在第1组中，电穿孔1小时前添加IPTG(1mM)；在第2组中，在用于制备可电穿孔细胞的培养开始时添加IPTG。携带来自大菌落克隆的RSF-Red-TER的细胞的后代的生长速度并不显著地低于不带有SC17质粒的菌株。添加IPTG仅使这些培养物的生长速度有些许降低。另一方面，小菌落克隆的后代在未添加IPTG的条件下生长非常缓慢，而加以诱导后，生长基本上停止。对大菌落克隆的后代的细胞进行电穿孔后，有许多KmR克隆(短诱导时间为18个克隆，延长诱导时间后为约100个克隆)生长。考察的全部100个克隆均具有His-表现型，通过PCR对20个克隆进行了确认，结果确认了这些细胞的染色体结构与预想的相同。另一方面，对小菌落克隆的后代的细胞即使进行电穿孔也未能得到整合的菌株。
使所得大菌落克隆在含7％蔗糖的平板上生长，并使质粒脱落，用RSF-Red-TER再次进行转化。将不携带质粒的菌株命名为SC17(0)。该菌株已于2005年9月21保藏在俄罗斯国立工业微生物保藏中心(RussianNational Collection of Industrial Microorganisms(VKPM)，GNII Genetika)(地址：Russia，117545 Moscow，1 Dorozhny proezd.1)，保藏号VKPM B-9246。
上述再次转化后生长出的全部克隆均与亲本菌株克隆SC17(0)一样具有较大的菌落尺寸。在用RSF-Red-TER质粒再次转化的SC17(0)株中进行了Red介导的整合实验。对于所得的3个独立转化株，使用与前述实验所用的相同的DNA片段进行了考察。采用了短诱导时间(电穿孔1小时前)。在各实验中，生长出超过10个的KmR克隆。测试的全部克隆均具有His-表现型。这样，选择出突变菌株，将其命名为对λRed基因的表达具有抗性的SC17(0)。该菌株可以作为用于对Pantoea ananatis染色体的Red依赖性整合的合适受体菌。
〔参考例2〕辅助质粒RSF-Red-TER的构建
辅助质粒RSF-Red-TER的构建方案如图2所示。
作为构建的最初步骤，设计了RSFsacBPlacMCS载体。为此，分别使用SEQ ID NO：17、18、19、20的寡核苷酸，通过PCR扩增了包含pACYC184质粒的cat基因和枯草芽孢杆菌的sacB基因的结构部分的DNA片段。这些寡核苷酸的5′末端分别包含对进一步克隆而言必需且便利的BglII、SacI、XbaI、和BamHI限制酶位点。将所得1.5kb的sacB片段克隆到此前获得的pMW119-PlaclacI载体的XbaI-BamHI位点。该载体是依照与pMW118-PlaclacI载体的相关描述(Skorokhodova，A.Yu等，Biotekhnologiya(俄语)，5，3-21(2004))相同的方法构建的。只是该载体包含来自pMW219而不是pMW218质粒的多接头位点。
接下来，将上述的1.0kb的cat片段用BglII和SacI处理，并克隆到在先步骤中所得的RSF-PlaclacIsacB质粒的BamHI-SacI位点。所得质粒pMW-PlaclacIsacBcat包含PlacUV5-lacI-sacB-cat片段。为了将该片段亚克隆到RSF1010载体，将pMW-PlaclacIsacBcat用BglII消化，并用DNA聚合酶I克列诺片段处理使末端平滑化，然后用SacI切割。从1％琼脂糖凝胶中洗提出pMWPlaclacIsacBcat质粒的3.8kb的BglII-SacI片段，将其与用PstI和SacI处理的RSF1010载体连接。用连接混合液转化大肠杆菌TG1，将其在含氯霉素(50mg/L)的LB培养基上铺板。对从生长出的克隆中分离的质粒进行限制酶分析，得到了RSFsacB质粒。为了构建RSFsacBPlacMCS载体，以SEQ ID NO：21和22的寡核苷酸为引物，以pMW119-PlaclacI质粒为模板，通过PCR扩增了包含PlacUV5启动子的DNA片段。将所得的146bp片段用SacI和NotI消化，将其与RSFsacB质粒的SacI-NotI大片段连接。然后，以SEQ ID NO：23和24的寡核苷酸为引物，以pKD46质粒(Datsenko，K.A.，Wanner，B.L.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，97，6640-6645，(2000))为模板，通过PCR扩增了包含λRedαβγ基因和转录终止子tL3的2.3kb的DNA片段。将所得片段克隆到RSFsacBPlacMCS载体的PvuI-NotI位点。这样，设计了RSFRed质粒。
为了排除Red基因的通读转录，将大肠杆菌rrnB操纵子的ρ-依赖性转录终止子插入到cat基因与PlacUV5启动子之间。为此，以SEQ ID NO：25和22的寡核苷酸为引物，以大肠杆菌BW3350的染色体为模板，通过PCR扩增了包含PlacUV5启动子与TrrnB终止子的DNA片段。将所得的这些片段用KpnI处理，并进行连接。然后，以SEQ ID NO：22和26的寡核苷酸为引物，通过使用寡核苷酸的PCR扩增了包含PlacUV5和TrrnB这两者的0.5kb片段。将所得DNA片段用EcoRI消化，并用DNA聚合酶I克列诺片段处理使末端平滑化，然后用BamHI切割，将其与RSFsacBPlacMCS载体的Ecl136II-BamHI大片段连接。将所得质粒命名为RSF-Red-TER。
〔参考例3〕pMW118-(λattL-Kmr-λattR)质粒的构建
pMW118-(λattL-Kmr-λattR)质粒是这样构建的：在pMW118-attL-Tc-attR(WO2005/010175)质粒中，用pUC4K质粒的卡那霉素抗性基因取代四环素抗性标记基因。为此，将pMW118-attL-Tc-attR质粒的EcoRI-HindIII大片段与pUC4K质粒的HindIII-PstI(676bp)和EcoRI-HindIII(585bp)这2个片段连接。作为基础的pMW118-attL-Tc-attR是通过连接以下4个片段而得到的。
1)使用引物P1(SEQ ID NO：27)和P2(SEQ ID NO：28)从大肠杆菌W3350(包含λ原噬菌体)染色体的相当于attL的区域通过PCR扩增得到的具有attL(SEQ ID NO：29)的BglII-EcoRI片段(114bp)。这些引物包含BglII和EcoRI的附加识别位点。
2)使用引物P3(SEQ ID NO：30)和P2(SEQ ID NO：31)从大肠杆菌W3350(包含λ原噬菌体)染色体的相当于attR的区域通过PCR扩增得到的具有attR(SEQ ID NO：32)的PstI-HindIII片段(182bp)。这些引物包含PstI和HindIII的附加识别位点。
3)pMW118-ter_rrnB的BglII-HindIII大片段(3916bp)。质粒pMW118-ter_rrnB是通过连接以下3个DNA片段而得到的。
·pMW118的具有AatII-EcoRI片段的大片段(2359bp)。该片段是通过用EcoRI消化pMW118、并用DNA聚合酶I克列诺片段进行处理、再用AatII进行消化而得到的。
·具有氨苄青霉素抗性(ApR)的基因bla的pUC19的AatII-BglII小片段(1194bp)。该片段是使用引物P5和P6(SEQ ID NO：33和34)对pUC19质粒的相应区域进行PCR扩增而得到的。这些引物中包含PstI、AatII和BglII的附加识别位点。
·转录终止子ter_rrnB的BglII-PstI小片段(363bp)。该片段是通过使用引物P7和P8(SEQ ID NO：35和36)对大肠杆菌MG1655染色体的相应区域进行PCR扩增而得到的。这些引物包含PstI、BglII和PstI的附加识别位点。
4)具有四环素抗性基因和ter_thrL转录终止子的pML-Tc-ter_thrL的EcoRI-PstI小片段(1388bp)(SEQ ID NO：37)。pML-Tc-ter_thrL质粒是通过如下的2个步骤获得的。
·将pML-MCS质粒(Mashko，S.V.等，BiotekhnoIogiya(俄语)，2001，no.5，3-20)用XbaI和BamHI消化，然后将大片段(3342bp)与包含ter_thrL终止子的XbaI-BamHI片段(68bp)连接。该包含ter_thrL终止子的片段是使用引物P9和P10(SEQ ID NO：38和39)对大肠杆菌MG1655染色体的相应区域进行PCR而得到的。这样，得到了pML-ter_thrL质粒。这些引物包含PstI、XbaI和BamHI的附加识别位点。
·将pML-ter_thrL质粒用KpnI和XbaI消化，然后用DNA聚合酶I克列诺片段处理，再与具有四环素抗性基因的pBR322的EcoRI-Van91I小片段(1317bp)连接，从而得到了pML-Tc-ter_thrL质粒。而且，将pBR322用EcoRI和Van91I消化，然后再用DNA聚合酶I克列诺片段进行了处理。
〔实施例1〕kdp操纵子的启动子取代株的取得
(1)谷氨酸生产质粒RSFPPG的构建
构建了L-谷氨酸生物合成系统基因，prpC基因(国际公布2006/051660号小册子)、ppc基因、gdh基因(欧洲申请公布0999282号说明书)被扩增的质粒RSFPPG。
设计了引物1(SEQ ID NO：40)和引物2(SEQ ID NO：41)，用于扩增RSFCPG(欧洲申请公开1233068号说明书)的gltA基因的ORF以外的部分。使用该引物，以RSFCPG为模板进行PCR，获得了约14.9kb的片段。另一方面，对于prpC，使用引物3(SEQ ID NO：42)和引物4(SEQ ID NO：43)，以大肠杆菌W3110株的染色体DNA为模板进行PCR，获得了约1.2kb的片段。将两PCR产物分别用BglII和KpnI处理并进行连接，然后转化大肠杆菌JM109株。收集出现的所有菌落，以混合物的形式提取质粒。用该质粒混合物转化柠檬酸合酶(CS)缺损株大肠杆菌ME8330株，将其涂布于含50mg/L尿嘧啶、5mg/L硫胺-HCl的M9极限培养基(1L纯水中含葡萄糖5g、硫酸镁2mM、磷酸二氢钾3g、氯化钠0.5g、氯化铵1g、磷酸氢二钠6g的培养基)。从出现的菌株中提取质粒，命名为RSFPPG。在L-谷氨酸生产菌Pantoea ananatis NP106株中导入上述质粒RSFPPG，构建了L-谷氨酸生产菌NP106/RSFPPG(本菌株称为“NA1株”)。
NP106株是如下述地获得的。将前文例示的Pantoea ananatis AJ13601株在LBGM9液体培养基中于34℃振荡培养一夜，稀释到每个平板为100～200个菌落，将其涂布在含四环素12.5mg/L的LBGM9平板上。对于出现的菌落，将其转印到含四环素12.5mg/L和氯霉素25mg/L的LBGM9平板上，选择氯霉素敏感性的菌株，从而获得了pSTVCB脱落的菌株，将其命名为G106S。而且，将G106S株在LBGM9液体培养基中于34℃振荡培养一夜，稀释到每个平板为100～200个菌落，将其涂布在不含药物的LBGM9平板上。对于出现的菌落，将其转印在含四环素12.5mg/L的LBGM9平板和不含药物的LBGM9平板上，选择四环素敏感性菌株，从而获得了RSFCPG脱落的菌株，将其命名为NP106。这样获得的NP106株不再具有AJ13601株所携带的RSFCPG和pSTVCB这2个质粒。
(2)kdp操纵子的启动子已更换成tac启动子的菌株的取得
i)P.ananatis SC17(0)株的构建(其中，将Ptac启动子连接到λattL-KmR-λattR的下游而得到的序列(λattL-KmR-λattR-Ptac)被整合到lacZ基因的上游)
将Ptac启动子整合到P.ananatis SC17(0)株染色体上的lacZ基因的上游。LacZ基因上游的P.ananatis染色体区域的结构如图3所示。Pantoeaananatis的yghU、scrK、和lacZ基因的碱基序列如SEQ ID NO：44、45和46所示。Ptac启动子的-35区的序列为ttgaca。
使用与Ptac启动子对应的5′侧引物1(SEQ ID NO：47)和3′侧引物2(SEQID NO：48)、以及作为模板的pDR540质粒(法玛西亚公司，瑞典)，通过PCR扩增了Ptac启动子片段。两个引物均在5′末端包含BglII识别序列。此外，引物2包含Ptac的3’末端位点的46个核苷酸、SD序列和lacZ基因的编码区域的最初部分。
而且，以pMW118-(λattL-KmR-λattR)为模板，使用引物3(SEQ ID NO：49)和引物4(SEQ ID NO：50)通过PCR扩增了包含与λ的attL和attR位点相邻的可除去的Km抗性基因的DNA片段。所得片段在一个末端具有用于与tac启动子片段连接的BglII识别位点，在另一个末端具有与Pantoea ananatis染色体同源的、用于整合到细菌基因组的、相当于位于scrK基因的上游的序列的位点(图3)。将2个PCR生成生成片段用BglII进行处理，用T4 DNA连接酶在体外进行连接。
将连接反应液用于针对Pantoea ananatis染色体的λ依赖性整合。将辅助质粒RSF-Red-TER用作λ噬菌体Red基因的载体。为了得到Pantoeaananatis的电转化感受态细胞，用RSF-Red-Ter质粒进行转化，将SC17(0)株在含50μg/ml氯霉素的LB培养基上于34℃培养一夜。接下来，将培养液用含50μg/ml氯霉素的新鲜LB培养基稀释100倍，34℃通气下进行生长使得OD600为0.3。然后，添加1mM的IPTG，继续培养至OD600为0.7。将10mM的样品用等量的去离子水洗涤3次，悬浮在40μl的冷10％甘油中。在即将开始电穿孔之前，将溶解在5μl去离子水中的体外扩增DNA片段100-200ng添加到细胞悬浮液中。操作使用细菌电穿孔装置(“BioRad”美国、商品号165-2089，版本2-89)进行。使用的脉冲的参数为电场强度：20kV/cm，脉冲时间：5毫秒。
电穿孔后，立即在细胞悬浮液中添加补充有葡萄糖(0.5％)的LB培养基1ml。然后，使细胞在34℃通气下生长2小时，在含40μg/ml的氯霉素的LB固体培养基上进行铺板，34℃温育一夜。用选择出的KmR的整合体在添加了IPTG(1mM)和蔗糖(5g/L)的LB培养基平板上划线，34℃进行生长，从而形成单个菌落。为了将RSF-Red-TER辅助质粒从整合体中除去，分离了KmR、CmS变体。
通过碱基序列测定确认了选择出的KmR、CmS菌落的染色体结构。
ii)用tac启动子取代kdp操纵子启动子
采用常规方法合成了如SEQ ID NO：51和52所示的2条合成DNA引物。
SEQ ID NO：51所示的引物的结构是在Pantoea ananatis的kdp操纵子上游的同源序列上连接λattL-KmR-λattR-Ptac的5’端的同源序列。SEQ IDNO：52的引物的结构是：在Pantoea ananatis的kdp操纵子的包含最初的起始密码子的5’端的互补序列上连接λattL-KmR-λattR-Ptac的3’端的互补序列。使用这些引物、并使用i)中选择出的菌株的染色体DNA作为模板，进行PCR，扩增得到了约1.6kbp的片段，其中，λattL-KmR-λattR-Ptac的序列的5’端上连接了kdp操纵子上游的同源序列，并且λattL-KmR-λattR-Ptac的序列的3’端上连接了kdp操纵子的包含最初的起始密码子的5’端的同源序列。
对上述PCR片段进行纯化，按照常规方法通过电穿孔导入SC17(0)/RSF-Red-TER中。
将导入了PCR片段的SC17(0)/RSF-Red-TER株在含40mg/L卡那霉素的L培养基(细菌蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl 5g、琼脂15g溶于纯水1L而成的培养基，pH7.0)进行选择，得到了约20个菌落作为转化体。使用SEQ ID NO：53和SEQ ID NO：54所示的2条合成DNA引物进行PCR，确认了kdp操纵子上游插入了上述片段，将确认了片段插入的菌株命名为SC17(0)::Ptac-kdp。从该菌株抽提基因组DNA，通过电穿孔转化NA1/pSTV-yhfK株。NA1/pSTV-yhfK株是这样得到的：从AJ13601株(参照特开平2001-333769号公报)中除去RSFCPG和pSTVCB这2个质粒，并导入L-谷氨酸生产用的质粒RSFPPG和pSTV-yhfK(参照特开平2005-278643号公报)这2个质粒。
RSFCPG和pSTVCB的这两个质粒见特开平2001-333769号公报中的描述。RSFCPG是包含大肠杆菌来源的gltA、ppc、gdhA各基因的质粒。pSTVCB是在pSTV29(宝酒造(株))中插入乳发酵短杆菌来源的gltA基因而成的质粒。此外，pSTV-yhfk是在pSTV29(宝酒造(株))中插入Pantoea ananatis来源的yhfk基因而成的质粒。
将导入了SC17(0)::Ptac-kdp的基因组DNA的NA1/pSTV-yhfK株在平板上进行选择，得到了约20个菌落作为转化体；其中所述平板是向L培养基(细菌蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl 5g、琼脂15g溶于纯水1L而成的培养基，pH7.0)中添加基础培养基成分(葡萄糖0.5g、硫酸镁2mM、磷酸二氢钾3g、氯化钠0.5g氯化铵1g磷酸氢二钠6g溶于纯水1L中而成的培养基)和40mg/L卡那霉素、12.5mg/L四环素盐酸盐、25mg/L氯霉素而得到的。这些菌株中，在kdp操纵子上游均插入了λattL-KmR-λattR-Ptac片段，选择其中的1个克隆，将其命名为NA1::Ptac-kdp/pSTV-yhfK。
(3)kdp操纵子启动子取代株的试管培养评价
接下来，为了研究kdp操纵子的强化对生长的影响，进行了试管培养。使用NA1::Ptac-kdp/pSTV-yhfK株和作为对照的NA1/pSTV-yhfK株，研究了酸性条件下的生长。
[试管培养用培养基组成]
D-葡萄糖            0.5％
Na2HPO4             6.0g/L
KH2PO4              3.0g/L
NaCl                0.5g/L
NH4Cl               1.0g/L
MgSO4·7H2O         2.0mM
ε-二氨基庚二酸     200mg/L
L-赖氨酸盐酸盐      200mg/L
DL-甲硫氨酸         200mg/L
L-谷氨酸            30g/L
四环素盐酸盐        12.5mg/L
氯霉素              25mg/L
用氨水调整至pH4.5或pH4.9后，用滤器进行过滤。
将NA1::Ptac-kdp/pSTV-yhfK株和NA1/pSTV-yhfK株用在L培养基(细菌蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl 5g、琼脂15g溶于纯水1L而成的培养基，pH7.0)中添加基主培养基成分(葡萄糖0.5g、硫酸镁2mM、磷酸二氢钾3g、氯化钠0.5g、氯化铵1g磷酸氢二钠6g溶于纯水1L而成的培养基)和12.5mg/L四环素盐酸盐、25mg/L氯霉素而得到的培养基进行前培养，刮下1/8平板的菌体用生理食盐水清洗2次，最后悬浮于生理食盐水1ml中，取其中的20μl接种到装有试管培养用培养基5mL的试管中，34℃下振荡培养，同时用自动OD测定器(TN1506 BIO PHOTORECORDER ADVANTEC公司制)，每30分钟测定一次OD(660nm)。结果如图4所示。
与作为对照的NA1/pSTV-yhfK株相比，kdp强化株NA1::Ptac-kdp/pSTV-yhfK株中，观察到了pH4.5和pH4.9的酸性条件下的生长的改善。因此，由这些结果可知：kdp操纵子的强化对生长改善效果和L-谷氨酸生产速度的提高是有效果的。
(4)kdp操纵子启动子取代株的S-jar培养评价
接下来，为了研究kdp操纵子的增强对L-谷氨酸生产的影响，使用NA1::Ptac-kdp/pSTV-yhfK株和NA1/pSTV-yhfK株，进行了L-谷氨酸生产培养。
培养分形成菌体的种子培养和生成L-谷氨酸的主培养这2个阶段进行。
种子培养用以下的培养基组成进行。
〔种子培养培养基组成〕
蔗糖                    50g/L
MgSO4·7H2O             0.4g/L
GD113(消泡剂)           0.1mL/L
(NH4)2SO4               4.0g/L
KH2PO4                  2.0g/L
酵母提取物              4.0g/L
FeSO4·7H2O             0.01g/L
MnSO4·5H2O             0.01g/L
柠檬酸                  0.02g/L
L-赖氨酸盐酸盐          0.4g/L
DL-甲硫氨酸             0.4g/L
ε-二氨基庚二酸         0.4g/L
泛酸钙                  18mg/L
四环素盐酸盐            12.5mg/L
氯霉素                  25mg/L
120℃、蒸汽灭菌20分钟。
将NA1::Ptac-kdp/pSTV-yhfK株和NA1/pSTV-yhfK株用在L培养基(细菌蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl 5g、琼脂15g溶于纯水1L而成的培养基，pH7.0)中添加基主培养基成分(葡萄糖0.5g、硫酸镁2mM、磷酸二氢钾3g、氯化钠0.5g、氯化铵1g磷酸氢二钠6g溶于纯水1L而成的培养基)和12.5mg/L四环素、25mg/L氯霉素而得到的培养基进行前培养，将1张平板的量接种到装有上述组成的培养基300mL的1L容量的微型罐中，34℃、pH6.0进行搅拌调控约12小时，使得通气1/1vvm、氧浓度为3％以上。添加氨气进行调整使得培养中的pH为6.0。培养基中的糖的耗尽为指标，结束种子培养。
主培养培养基组成如以下所示。
〔培养培养基组成〕(接种20％种子培养液后的浓度)
蔗糖                    100g/L
MgSO4·7H2O             0.4g/L
GD113                   0.1mL/L
(NH4)2SO4               5.0g/L
KH2PO4                  6.0g/L
酵母提取物              6.0g/L
FeSO4·7H2O             0.02g/L
MnSO4·5H2O             0.02g/L
柠檬酸                  0.02g/L
甜菜碱*                 2.0g/L
L-赖氨酸盐酸盐          0.8g/L
DL-甲硫氨酸             0.6g/L
ε-二氨基庚二酸         0.6g/L
泛酸钙                  18mg/L
四环素盐酸盐            25mg/L
氯霉素                  25mg/L
*：N-N-N-三甲基甘氨酸
将种子培养所得的菌体60mL注入装有上述组成的培养基240mL的1L容量的微型罐中，pH4.7进行培养。主培养开始16小时后结束培养。随时间测定了培养液中的菌体浓度和L-谷氨酸浓度。菌体浓度通过使用用水稀释至101倍的培养液、用分光光度计(U-2000A日立制作所)测定620nm的浊度来考察。L-谷氨酸浓度通过将培养液上清用水稀释适当倍率后、使用BIOTECHANALYSER(生物技术分析仪)(AS-210SAKURA精机)来测定。
结果如表1和图5所示。可以判明：与比较对照株NA1/pSTV-yhfK相比，kdp操纵子强化株NA1::Ptac-kdp/pSTV-yhfK株的生长提高，L-谷氨酸的蓄积、L-谷氨酸的生产速度也提高。
表1
Figure A20088000279000431
〔实施例2〕蓄积L-苏氨酸的大肠杆菌中kdp操纵子的扩增
(1)kdp操纵子扩增用质粒的构建
为了在埃希氏菌属细菌中导入kdp操纵子，使用公知的质粒pMW218(宝酒造(株))，构建了kdp操纵子扩增用质粒。
首先，将pMW218用限制酶HindIII和BamHI进行消化，加入苯酚-氯仿溶液并混合来停止反应。将反应液离心分离后，回收上层，通过乙醇沉淀回收DNA。另一方面，以从大肠杆菌MG1655中抽提的染色体作为模板，使用SEQ ID NO：55和56所示的DNA引物进行PCR(变性94℃-10秒、退火60℃-30秒、延伸反应72℃-120秒)扩增kdp操纵子。PCR反应中使用Pyrobest DNA聚合酶(宝酒造(株))。将所得kdp操纵子片段用限制酶HindIII和BamHI进行消化，加入苯酚-氯仿溶液并混合来停止反应。
将如上述制备的pMW218消化物和kdpABC基因区域片段用DNALigation Kit Ver.2(宝酒造(株))进行连接。用该连接反应溶液转化大肠杆菌(E.coli JM109感受态细胞、宝酒造(株))，将其涂布于含50mg/L卡那霉素的LB琼脂培养基，37℃保温一夜。将琼脂培养基上出现的菌落接种在含50mg/L卡那霉素的LB液体培养基中，37℃振荡培养8小时。采用碱-SDS法从各培养液提取质粒DNA，通过用限制酶进行消化来确认结构，得到pMW218kdp。
(2)将pMW218kdp导入蓄积苏氨酸的大肠杆菌B-3996以及氨基酸生产
将如上述获得的pMW218kdp通过电穿孔法(Canadian Journal ofMicrobiology，43.197(1997))导入VKPM B-3996。
对于所得转化株(本菌株称为“B-3996/pMW218kdp”)和作为对照的导入了pMW218的菌株(本菌株称为“B-3996/pMW218”)，如下地进行培养，考察培养上清中的L-苏氨酸浓度。
将各转化株接种到含50mg/L卡那霉素和20mg/L链霉素的LB液体培养基3mL中，37℃试管培养一夜，然后将培养液200μL接菌到含50mg/L卡那霉素和20mg/L链霉素的苏氨酸生产培养基(20ml)中，37℃振荡培养24小时。培养结束后，离心分离除去菌体，使用氨基酸分析装置(L-8500日立制作所)测定了培养上清中的L-苏氨酸浓度。与作为对照的B-3996/pMW218株相比较，可知：在kdp操纵子扩增株B-3996/pMW218kdp中，培养基中的L-苏氨酸蓄积量提高。
〔苏氨酸生产培养基〕
D-葡萄糖                40g/L
(NH4)2SO4               16g/L
KH2PO4                  1.0g/L
MgSO4·7H2O             1.0g/L
FeSO4·7H2O             0.01g/L
MnSO4·7H2O             0.01g/L
L-异亮氨酸              50mg/L
DL-甲硫氨酸             500mg/L
碳酸钙                  0.6g/L
链霉素                  20mg/L
卡那霉素                50mg/L
用氢氧化钾调整至pH7.5。
115℃、蒸汽灭菌10分钟。
〔序列表的说明〕
SEQ ID NO：1：大肠杆菌的kdp操纵子的碱基序列(kdpA、kdpB、kdpC的氨基酸序列一并记载)
kdpF：457～546
kdpA：546～2219
kdpB：2242～4290
kdpC：4299～4871
kdpD：4864～7548
kdpE：7545～8222
SEQ ID NO：2：KdpA的氨基酸序列
kdpA：546～2219
kdpB：2242～4290
kdpC：4299～4871
kdpD：4864～7548
kdpE：7545～8222
SEQ ID NO：2：KdpA的氨基酸序列
SEQ ID NO：3：KdpB的氨基酸序列
SEQ ID NO：4：KdpC的氨基酸序列
SEQ ID NO：5：KdpD的氨基酸序列
SEQ ID NO：6：KdpE的氨基酸序列
SEQ ID NO：5：KdpD操纵子的碱基序列(SDHC的氨基酸序列一并记载)
SEQ ID NO：7：Pantoea ananatis kdp操纵子的碱基序列(kdpA、kdpB、kdpC、kdpD的氨基酸序列一并记载)
kdpA：543～2225
kdpB：2228～4273
kdpC：4284～4853
kdpD：4867～7542
SEQ ID NO：8：KdpA的氨基酸序列
SEQ ID NO：9：KdpB的氨基酸序列
SEQ ID NO：10：KdpC的氨基酸序列
SEQ ID NO：11：KdpD的氨基酸序列
SEQ ID NO：12：Pantoea ananatis的kdpE基因的碱基序列
SEQ ID NO：13：KdpE的氨基酸序列
SEQ ID NO：14：Pantoea ananatis的hisD基因的碱基序列
SEQ ID NO：15：用于将KmR基因组合入hisD基因的片段的扩增用引物
SEQ ID NO：16：用于将KmR基因组合入hisD基因的片段的扩增用引物
SEQ ID NO：17：cat基因扩增用引物
SEQ ID NO：18：cat基因扩增用引物
SEQ ID NO：19：sacB基因扩增用引物
SEQ ID NO：20：sacB基因扩增用引物
SEQ ID NO：21：含PlacUV5启动子的DNA片段扩增用引物
SEQ ID NO：28：attL扩增用引物
SEQ ID NO：29：attL的碱基序列
SEQ ID NO：30：attR扩增用引物
SEQ ID NO：31：attR扩增用引物
SEQ ID NO：32：attR的碱基序列
SEQ ID NO：33：含bla基因的DNA片段扩增用引物
SEQ ID NO：34：含bla基因的DNA片段扩增用引物
SEQ ID NO：35：含ter_rrnB的DNA片段扩增用引物
SEQ ID NO：36：含ter_rrnB的DNA片段扩增用引物
SEQ ID NO：37：含ter_thrL终止子的DNA片段的碱基序列
SEQ ID NO：38：含ter_thrL终止子的DNA片段扩增用引物
SEQ ID NO：39：含ter_thrL终止子的DNA片段扩增用引物
SEQ ID NO：40：用于扩增gltA基因的ORF以外的部分的引物
SEQ ID NO：41：用于扩增gltA基因的ORF以外的部分的引物
SEQ ID NO：42：prpC基因扩增用引物
SEQ ID NO：43：prpC基因扩增用引物
SEQ ID NO：44：Pantoea ananatis的yghU基因的碱基序列
SEQ ID NO：45：Pantoea ananatis的scrK基因的碱基序列
SEQ ID NO：46：Pantoea ananatis的lacZ基因的碱基序列
SEQ ID NO：47：含Ptac启动子的DNA片段扩增用引物
SEQ ID NO：48：含Ptac启动子的DNA片段扩增用引物
SEQ ID NO：49：含Km抗性基因的DNA片段扩增用引物
SEQ ID NO：50：含Km抗性基因的DNA片段扩增用引物
SEQ ID NO：51：连接有tac启动子的kdp操纵子上游序列扩增用引物
SEQ ID NO：52：连接有tac启动子的kdp操纵子上游序列扩增用引物
SEQ ID NO：53：kdp操纵子上游结构确认用引物
SEQ ID NO：54：kdp操纵子上游结构确认用引物
SEQ ID NO：55：kdp操纵子扩增用引物
SEQ ID NO：56：kdp操纵子扩增用引物
SEQ ID NO：57：Pantoea ananatis与大肠杆菌的KdpA的氨基酸序列的共有序列
SEQ ID NO：58：Pantoea ananatis与大肠杆菌的KdpB的氨基酸序列的共有序列
SEQ ID NO：59：Pantoea ananatis与大肠杆菌的KdpC的氨基酸序列的共有序列
工业实用性
通过使用本发明的微生物，可以高效率地发酵生产L-谷氨酸、L-赖氨酸、L-苏氨酸、L-精氨酸、L-组氨酸、L-异亮氨酸、L-缬氨酸、L-亮氨酸、L-苏氨酸、L-苯丙氨酸、L-酪氨酸、L-色氨酸、或L-半胱氨酸、L-谷氨酸等L-氨基酸。在优选方式中，本发明的微生物的L-氨基酸生产量和生产速度均良好。
序列表
<110>味之素株式会社(Ajinomoto Co.，Inc.)
<120>生产L-氨基酸的微生物和L-氨基酸的生产方法
<130>C874-C7269
<150>JP2007-011392
<151>2007-01-22
<150>JP2007-131763
<151>2007-05-17
<160>59
<170>PatentIn version 3.3
<210>1
<211>8501
<212>DNA
<213>大肠杆菌(Escherichia coli)
<220>
<221>CDS
<222>(546)..(2219)
<220>
<221>CDS
<222>(2242)..(4290)
<220>
<221>CDS
<222>(4299)..(4871)
<400>1
cgaccagacg cgatgcaggt agctgtaaaa gcgggcgcgg tctttccaga aaagcatgaa     60
aggcagcgcc agaacgcccg ctgcaaccgc ataagtacgg cgtaaaaaga taagccatgc    120
aggatattct ctgtagagtt ccatactttt ctcccccttt tgtatctacc cggtgaatgg    180
caccggaaaa atgaatttgt ttatctgatg aaaatagtac cgccttttgt gtaattttac    240
tactcatccg accacttatt tttgcttatt gatggtttat ttacattcat cctgtaatta    300
agttacacaa aagttaaatt aatactaaac attagttaaa tcatggcttt tgccattttt    360
atactttttt tacaccccgc ccgcagattt ttgcgaaatc tttgcagcca gaattctacc    420
cttccggtat cacttttagg ccactggagg tgcactgtga gtgcaggcgt gataaccggc    480
gtattgctgg tgtttttatt actgggttat ctggtttatg ccctgatcaa tgcggaggcg    540
ttctg atg gct gcg caa ggg ttc tta ctg atc gcc acg ttt tta ctg gtg    590
      Met Ala Ala Gln Gly Phe Leu Leu Ile Ala Thr Phe Leu Leu Val
      1               5                   10                  15
tta atg gtg ctg gcg cgt cct tta ggc agc ggg ctg gcg cgg ctg att      638
Leu Met Val Leu Ala Arg Pro Leu Gly Ser Gly Leu Ala Arg Leu Ile
                20                  25                  30
aat gac att cct ctt ccc ggt aca acg ggc gtt gag cgc gta ctt ttt      686
Asn Asp Ile Pro Leu Pro Gly Thr Thr Gly Val Glu Arg Val Leu Phe
            35                  40                  45
cgc gca ctt ggc gtc tct gac cgt gag atg aac tgg aag caa tat ctt      734
Arg Ala Leu Gly Val Ser Asp Arg Glu Met Asn Trp Lys Gln Tyr Leu
        50                  55                  60
tgt gcc att ctc ggc ctg aac atg ctg ggg ctg gcg gtg ctg ttt ttt      782
Cys Ala Ile Leu Gly Leu Asn Met Leu Gly Leu Ala Val Leu Phe Phe
    65                  70                  75
atg ttg ctc ggt cag cac tat ctg ccg ctt aat cca cag cag ttg cca      830
Met Leu Leu Gly Gln His Tyr Leu Pro Leu Asn Pro Gln Gln Leu Pro
80                  85                  90                  95
ggg ctg tcg tgg gat ctg gcg ctg aat acc gcc gtc agc ttt gtc acc      878
Gly Leu Ser Trp Asp Leu Ala Leu Asn Thr Ala Val Ser Phe Val Thr
                100                 105                 110
aat acc aac tgg caa tct tat agc ggt gaa acc acg ttg agc tat ttc      926
Asn Thr Asn Trp Gln Ser Tyr Ser Gly Glu Thr Thr Leu Ser Tyr Phe
            115                 120                 125
agc cag atg gcg ggc tta acg gtg caa aac ttt ctt tct gcc gcc agc      974
Ser Gln Met Ala Gly Leu Thr Val Gln Asn Phe Leu Ser Ala Ala Ser
        130                 135                 140
ggg att gcg gtg att ttt gcc ctc atc cgt gcg ttt acc cgc cag agc    1022
Gly Ile Ala Val Ile Phe Ala Leu Ile Arg Ala Phe Thr Arg Gln Ser
    145                 150                 155
atg agc acg ctc ggg aat gcc tgg gtc gat ctg cta cgc atc acg tta    1070
Met Ser Thr Leu Gly Asn Ala Trp Val Asp Leu Leu Arg Ile Thr Leu
160                 165                 170                 175
tgg gtg cta gtc cct gtg gcg ttg ttg att gca ctg ttt ttt att caa    1118
Trp Val Leu Val Pro Val Ala Leu Leu Ile Ala Leu Phe Phe Ile Gln
                180                 185                 190
caa ggt gcg ctg caa aac ttt ctg cct tat cag gct gtg aat acc gtt    1166
Gln Gly Ala Leu Gln Asn Phe Leu Pro Tyr Gln Ala Val Asn Thr Val
            195                 200                 205
gaa gga gcg caa cag ctg tta ccc atg ggg cct gta gct tct cag gaa    1214
Glu Gly Ala Gln Gln Leu Leu Pro Met Gly Pro Val Ala Ser Gln Glu
        210                 215                 220
gcg atc aag atg ctc ggt act aac ggc ggt ggc ttc ttt aat gcc aac    1262
Ala Ile Lys Met Leu Gly Thr Asn Gly Gly Gly Phe Phe Asn Ala Asn
    225                 230                 235
tcg tcg cat ccg ttt gaa aac cca acc gca ctg acc aac ttc gtg cag    1310
Ser Ser His Pro Phe Glu Asn Pro Thr Ala Leu Thr Asn Phe Val Gln
240                 245                 250                 255
atg ctg gcg atc ttc ttg atc cca acg gcg ctg tgc ttt gcc ttt ggt    1358
Met Leu Ala Ile Phe Leu Ile Pro Thr Ala Leu Cys Phe Ala Phe Gly
                260                 265                 270
gaa gtg atg ggc gat cgc cgc cag ggg cgc atg ttg ctg tgg gcg atg    1406
Glu Val Met Gly Asp Arg Arg Gln Gly Arg Met Leu Leu Trp Ala Met
            275                 280                 285
tca gtg att ttt gtc atc tgc gta ggc gtg gtg atg tgg gca gaa gtt    1454
Ser Val Ile Phe Val Ile Cys Val Gly Val Val Met Trp Ala Glu Val
        290                 295                 300
cag ggt aat cct cat ctg ctg gca ctg ggc acg gac agc agc atc aat    1502
Gln Gly Asn Pro His Leu Leu Ala Leu Gly Thr Asp Ser Ser Ile Asn
    305                 310                 315
atg gaa ggt aaa gag agc cgt ttc ggc gtg ctg gtc agt agc ctg ttt    1550
Met Glu Gly Lys Glu Ser Arg Phe Gly Val Leu Val Ser Ser Leu Phe
320                 325                 330                 335
gcg gtc gtg acg acg gcg gct tcc tgt ggc gcg gtg att gcg atg cat    1598
Ala Val Val Thr Thr Ala Ala Ser Cys Gly Ala Val Ile Ala Met His
                340                 345                 350
gat  tcg ttt acc gct ctc ggt ggc atggtg ccg atg tgg ctg atg caa    1646
Asp Ser Phe Thr Ala Leu Gly Gly Met Val Pro Met Trp Leu Met Gln
            355                 360                 365
att ggt gaa gtg gtg ttc ggc ggt gtc ggt tct ggt ctt tac ggc atg    1694
Ile Gly Glu Val Val Phe Gly Gly Val Gly Ser Gly Leu Tyr Gly Met
        370                 375                 380
atg ctg ttt gtc ctg ctg gcg gtg ttt att gcc ggg ctg atg att ggt    1742
Met Leu Phe Val Leu Leu Ala Val Phe Ile Ala Gly Leu Met Ile Gly
    385                 390                 395
cgt aca ccg gaa tat ctg ggt aaa aaa atc gac gta cgc gag atg aaa    1790
Arg Thr Pro Glu Tyr Leu Gly Lys Lys Ile Asp Val Arg Glu Met Lys
400                 405                 410                 415
ctg act gca ctg gca att ctg gtt acc ccg acg ctg gtg ctg atg ggc    1838
Leu Thr Ala Leu Ala Ile Leu Val Thr Pro Thr Leu Val Leu Met Gly
                420                 425                 430
gcg gcg ttg gcg atg atg acc gac gcc gga cgt agc gcc atg ctc aac    1886
Ala Ala Leu Ala Met Met Thr Asp Ala Gly Arg Ser Ala Met Leu Asn
            435                 440                 445
cct ggc ccg cat ggt ttt agc gaa gtg ctg tac gcc gtg tca tcc gcc    1934
Pro Gly Pro His Gly Phe Ser Glu Val Leu Tyr Ala Val Ser Ser Ala
        450                 455                 460
gct aac aac aac ggc agc gcc ttt gcc gga tta agc gcc aac tct ccg    1982
Ala Asn Asn Asn Gly Ser Ala Phe Ala Gly Leu Ser Ala Asn Ser Pro
    465                 470                 475
ttc tgg aac tgt tta ctg gcg ttc tgc atg ttt gtc ggt cgc ttc ggg    2030
Phe Trp Asn Cys Leu Leu Ala Phe Cys Met Phe Val Gly Arg Phe Gly
480                 485                 490                 495
gtg att atc ccg gtg atg gca att gcc ggt tcg ctg gtg agt aaa aag    2078
Val Ile Ile Pro Val Met Ala Ile Ala Gly Ser Leu Val Ser Lys Lys
                500                 505                 510
agc caa gcc gcc agc tcc ggc acg ctg cca acg cac ggc ccg ctg ttt    2126
Ser Gln Ala Ala Ser Ser Gly Thr Leu Pro Thr His Gly Pro Leu Phe
            515                 520                 525
gtt ggc ctg tta atc ggc acc gtg ttg ctg gtt ggc gca ctg acc ttt    2174
Val Gly Leu Leu Ile Gly Thr Val Leu Leu Val Gly Ala Leu Thr Phe
        530                 535                 540
atc cct gcc ctg gcg ctt ggt ccg gtg gcg gaa tat ctc tcc tga        2219
Ile Pro Ala Leu Ala Leu Gly Pro Val Ala Glu Tyr Leu Ser
    545                 550                 555
tgatattgag tgagcactga at atg agt cgt aaa caa ctg gcg cta ttc gaa   2271
                         Met Ser Arg Lys Gln Leu Ala Leu Phe Glu
                                 560                 565
cca aca ctt gtc gtt cag gcg ctg aaa gaa gcg gtg aaa aaa tta aac    2319
Pro Thr Leu Val Val Gln Ala Leu Lys Glu Ala Val Lys Lys Leu Asn
        570                 575                 580
ccg cag gcg caa tgg cgc aat ccg gtg atg ttt atc gtc tgg atc ggc    2367
Pro Gln Ala Gln Trp Arg Asn Pro Val Met Phe Ile Val Trp Ile Gly
    585                 590                 595
agt ctg ctg acc acc tgt att agc atc gcg atg gca agc ggt gcg atg    2415
Ser Leu Leu Thr Thr Cys Ile Ser Ile Ala Met Ala Ser Gly Ala Met
600                 605                 610                 615
ccc ggc aat gcg ctg ttt agc gcg gcc att agc ggt tgg ctg tgg atc    2463
Pro Gly Asn Ala Leu Phe Ser Ala Ala Ile Ser Gly Trp Leu Trp Ile
                620                 625                 630
acc gta ctg ttc gct aat ttc gcc gag gcg ctg gca gaa ggc cgc agt    2511
Thr Val Leu Phe Ala Asn Phe Ala Glu Ala Leu Ala Glu Gly Arg Ser
            635                 640                 645
aaa gcg cag gcc aac agt ctg aaa ggg gtg aaa aaa act gcc ttt gcc    2559
Lys Ala Gln Ala Asn Ser Leu Lys Gly Val Lys Lys Thr Ala Phe Ala
        650                 655                 660
cgc aag ctg cgt gag ccg aaa tat ggc gct gcg gcg gac aaa gtt cct    2607
Arg Lys Leu Arg Glu Pro Lys Tyr Gly Ala Ala Ala Asp Lys Val Pro
    665                 670                 675
gcc gac caa ctt cgt aaa ggc gat atc gta ctg gta gaa gct ggc gat    2655
Ala Asp Gln Leu Arg Lys Gly Asp Ile Val Leu Val Glu Ala Gly Asp
680                 685                 690                 695
att atc ccc tgc gat ggt gaa gtt att gaa ggg ggt gca tcg gtc gat    2703
Ile Ile Pro Cys Asp Gly Glu Val Ile Glu Gly Gly Ala Ser Val Asp
                700                 705                 710
gaa agc gcc atc acc ggg gaa tcg gca ccg gtg atc cgt gaa tcc ggc    2751
Glu Ser Ala Ile Thr Gly Glu Ser Ala Pro Val Ile Arg Glu Ser Gly
            715                 720                 725
ggc gat ttt gcc tcc gtc acc ggc ggc acg cgt att ctt tct gac tgg    2799
Gly Asp Phe Ala Ser Val Thr Gly Gly Thr Arg Ile Leu Ser Asp Trp
        730                 735                 740
ctg gtg att gag tgt agc gtt aac ccc ggc gag aca ttt ctg gat cgg    2847
Leu Val Ile Glu Cys Ser Val Asn Pro Gly Glu Thr Phe Leu Asp Arg
    745                 750                 755
atg atc gcg atg gtg gaa ggc gca cag cga cgc aaa acg ccg aac gaa    2895
Met Ile Ala Met Val Glu Gly Ala Gln Arg Arg Lys Thr Pro Asn Glu
760                 765                 770                 775
att gcc ctg acc att ctg ctg att gcc ctg act atc gtc ttt tta ctg    2943
Ile Ala Leu Thr Ile Leu Leu Ile Ala Leu Thr Ile Val Phe Leu Leu
                780                 785                 790
gca acc gcc acg ctg tgg ccg ttt tcc gcg tgg ggc ggt aat gca gtc    2991
Ala Thr Ala Thr Leu Trp Pro Phe Ser Ala Trp Gly Gly Asn Ala Val
            795                 800                 805
agc gta acg gta ctg gtg gcg ctg ctg gtc tgt ctg atc cca acc act    3039
Ser Val Thr Val Leu Val Ala Leu Leu Val Cys Leu Ile Pro Thr Thr
        810                 815                 820
att ggc ggc ctg ttg tca gcg atc ggc gtc gcc ggg atg agc cgg atg    3087
Ile Gly Gly Leu Leu Ser Ala Ile Gly Val Ala Gly Met Ser Arg Met
    825                 830                 835
cta ggc gcg aat gtg att gcc acc agc gga cgt gca gtt gaa gcg gca    3135
Leu Gly Ala Asn Val Ile Ala Thr Ser Gly Arg Ala Val Glu Ala Ala
840                 845                 850                 855
ggt gac gtt gac gtt ctg cta ctg gat aaa acc ggc acc atc aca ctc    3183
Gly Asp Val Asp Val Leu Leu Leu Asp Lys Thr Gly Thr Ile Thr Leu
                860                 865                 870
ggt aac cgt cag gcg tcg gag ttt atc ccc gcg cag ggc gtg gat gaa    3231
Gly Asn Arg Gln Ala Ser Glu Phe Ile Pro Ala Gln Gly Val Asp Glu
            875                 880                 885
aaa acg ctg gct gac gcc gca caa ctg gct tcg ctg gct gat gaa acg    3279
Lys Thr Leu Ala Asp Ala Ala Gln Leu Ala Ser Leu Ala Asp Glu Thr
        890                 895                 900
ccg gaa ggc cgc agt att gtg atc ctc gcc aag cag cgt ttt aac ctg    3327
Pro Glu Gly Arg Ser Ile Val Ile Leu Ala Lys Gln Arg Phe Asn Leu
    905                 910                 915
cgc gag cgc gat gtg cag tcg ctc cat gcc acc ttt gta ccg ttt act    3375
Arg Glu Arg Asp Val Gln Ser Leu His Ala Thr Phe Val Pro Phe Thr
920                 925                 930                 935
gcg caa agc cgg atg agc ggg atc aac atc gac aac cgc atg atc cgt    3423
Ala Gln Ser Arg Met Ser Gly Ile Asn Ile Asp Asn Arg Met Ile Arg
                940                 945                 950
aaa ggt tct gtc gat gcc att cgt cgc cat gtt gag gct aac ggt ggt    3471
Lys Gly Ser Val Asp Ala Ile Arg Arg His Val Glu Ala Asn Gly Gly
            955                 960                 965
cac ttc cct acc gat gtt gat caa aaa gtc gat cag gtt gcg cgt cag    3519
His Phe Pro Thr Asp Val Asp Gln Lys Val Asp Gln Val Ala Arg Gln
        970                 975                 980
gga gcc acg ccg ctg gtg gtg gtg gaa ggt tct cgt gtg ctg ggc gtt    3567
Gly Ala Thr Pro Leu Val Val Val Glu Gly Ser Arg Val Leu Gly Val
    985                 990                 995
att  gcg ctg aaa gat atc  gtc aaa ggc ggt att  aaa gag cgc ttc    3612
Ile  Ala Leu Lys Asp Ile  Val Lys Gly Gly Ile  Lys Glu Arg Phe
1000                 1005                 1010
gcc  cag ctg cgc aaa atg  ggc att aaa acg gtg  atg att acc ggc    3657
Ala  Gln Leu Arg Lys Met  Gly Ile Lys Thr Val  Met Ile Thr Gly
1015                 1020                 1025
gat  aac cgt ctg act gcc  gcc gcg att gct gcg  gaa gcg ggt gtc    3702
Asp  Asn Arg Leu Thr Ala  Ala Ala Ile Ala Ala  Glu Ala Gly Val
1030                 1035                 1040
gat  gat ttt ctc gcc gaa  gcg aca ccg gag gcc  aag ctg gca ttg    3747
Asp  Asp Phe Leu Ala Glu  Ala Thr Pro Glu Ala  Lys Leu Ala Leu
1045                 1050                 1055
atc  cgt cag tat cag gcg  gaa ggt cgt ttg gta  gcg atg acc ggc    3792
Ile  Arg Gln Tyr Gln Ala  Glu Gly Arg Leu Val  Ala Met Thr Gly
1060                 1065                 1070
gac  ggc acc aac gat gct  ccg gcg ctg gcg cag  gca gat gtc gcg    3837
Asp  Gly Thr Asn Asp Ala  Pro Ala Leu Ala Gln  Ala Asp Val Ala
1075                 1080                 1085
gtg  gcg atg aac tcc ggc  acc cag gcg gcg aaa  gag gcg ggc aat    3882
Val  Ala Met Asn Ser Gly  Thr Gln Ala Ala Lys  Glu Ala Gly Asn
1090                 1095                 1100
atg  gtc gat ctc gac tct  aac ccg acc aag ttg  atc gag gtg gtg    3927
Met  Val Asp Leu Asp Ser  Asn Pro Thr Lys Leu  Ile Glu Val Val
1105                 1110                 1115
cac  att ggc aaa cag atg  ctg atg acc cgt ggc  tcg ctg acc acc    3972
His  Ile Gly Lys Gln Met  Leu Met Thr Arg Gly  Ser Leu Thr Thr
1120                 1125                 1130
ttc  agc att gcc aac gat  gtg gcg aaa tac ttc  gcc att att ccg    4017
Phe  Ser Ile Ala Asn Asp  Val Ala Lys Tyr Phe  Ala Ile Ile Pro
1135                 1140                 1145
gcg  gca ttc gcg gca acg  tat ccg cag tta aat  gcg ctg aac atc    4062
Ala  Ala Phe Ala Ala Thr  Tyr Pro Gln Leu Asn  Ala Leu Asn Ile
1150                 1155                 1160
atg  tgc ctg cat tcg ccc  gac tcc gca atc ctc  agt gcg gtg att    4107
Met  Cys Leu His Ser Pro  Asp Ser Ala Ile Leu  Ser Ala Val Ile
1165                 1170                 1175
ttc  aac gcc ttg att atc  gtc ttt ttg att ccc  ctg gcg tta aaa    4152
Phe  Asn Ala Leu Ile Ile  Val Phe Leu Ile Pro  Leu Ala Leu Lys
1180                 1185                 1190
ggc  gtg agt tat aaa ccg  ctt acc gct tct gcc  atg ttg cgc cgt    4197
Gly  Val Ser Tyr Lys Pro  Leu Thr Ala Ser Ala  Met Leu Arg Arg
1195                 1200                 1205
aac  tta tgg att tac ggt  ctg ggt ggg ctg ctg  gtg ccg ttt atc    4242
Asn  Leu Trp Ile Tyr Gly  Leu Gly Gly Leu Leu  Val Pro Phe Ile
1210                 1215                 1220
ggt  atc aaa gtc att gat  tta ctg ctg acc gtt  tgc ggt ctg gtg    4287
Gly  Ile Lys Val Ile Asp  Leu Leu Leu Thr Val  Cys Gly Leu Val
1225                 1230                 1235
tga ggtttacc atg  agt gga tta cgt ccg  gca tta tca aca ttt  atc   4334
             Met  Ser Gly Leu Arg Pro  Ala Leu Ser Thr Phe  Ile
             1240                 1245                 1250
ttt ctg tta ttg  att act ggc ggc gtt  tac ccg ctg ctg acc  acc    4379
Phe Leu Leu Leu  Ile Thr Gly Gly Val  Tyr Pro Leu Leu Thr  Thr
            1255                 1260                 1265
gta ctg ggg caa  tgg tgg ttt ccc tgg  cag gcc aat ggt tcg  ttg       4424
Val Leu Gly Gln  Trp Trp Phe Pro Trp  Gln Ala Asn Gly Ser  Leu
            1270                 1275                 1280
att cgt gaa ggt  gat acg gtg cgc ggt  tcg gca tta atc ggg  cag       4469
Ile Arg Glu Gly  Asp Thr Val Arg Gly  Ser Ala Leu Ile Gly  Gln
            1285                 1290                 1295
aat ttt acc ggc  aac ggc tat ttt cat  ggt cgc ccg tcg gca  acg       4514
Asn Phe Thr Gly  Asn Gly Tyr Phe His  Gly Arg Pro Ser Ala  Thr
            1300                 1305                 1310
gca gaa atg ccc  tat aat cca cag gct  tct ggc ggg agc aat  ctg       4559
Ala Glu Met Pro  Tyr Asn Pro Gln Ala  Ser Gly Gly Ser Asn  Leu
            1315                 1320                 1325
gcg gtc agt aac  cct gag ctg gat aaa  cta ata gcc gca cgc  gtt       4604
Ala Val Ser Asn  Pro Glu Leu Asp Lys  Leu Ile Ala Ala Arg  Val
            1330                 1335                 1340
gct gca tta cgg  gcc gct aac ccg gat  gcc agc gcg agc gtt  ccg       4649
Ala Ala Leu Arg  Ala Ala Asn Pro Asp  Ala Ser Ala Ser Val  Pro
            1345                 1350                 1355
gtt gaa ctg gtg  acg gca tcg gca agc  ggg ctg gac aat aat  atc       4694
Val Glu Leu Val  Thr Ala Ser Ala Ser  Gly Leu Asp Asn Asn  Ile
            1360                 1365                 1370
acc ccg caa gcg  gcg gcc tgg caa atc  cca cgc gtg gcg aaa  gcg       4739
Thr Pro Gln Ala  Ala Ala Trp Gln Ile  Pro Arg Val Ala Lys  Ala
            1375                 1380                 1385
cgt aat ctc agc  gtt gaa cag ctc acg  caa ctg atc gca aaa  tac       4784
Arg Asn Leu Ser  Val Glu Gln Leu Thr  Gln Leu Ile Ala Lys  Tyr
            1390                 1395                 1400
agc caa caa ccg  ctg gtg aaa tat atc  ggc cag ccg gtt gtc  aac       4829
Ser Gln Gln Pro  Leu Val Lys Tyr Ile  Gly Gln Pro Val Val  Asn
            1405                 1410                 1415
att gtt gaa ctc  aat ctg gcg ctg gat  aaa ctt gat gaa taa            4871
Ile Val Glu Leu  Asn Leu Ala Leu Asp  Lys Leu Asp Glu
            1420                 1425
cgaaccctta cgtcccgacc ccgatcgtct gctggaacaa actgccgcgc cgcatcgggg    4931
gaagctgaaa gttttcttcg gtgcctgtgc aggcgtcggg aagacctggg cgatgctggc    4991
agaagcccag cgactgcggg cgcaagggct ggatattgtg gttggcgtgg tagaaaccca    5051
cgggcgaaaa gataccgccg ccatgctgga agggctggct gttctgccgt taaaacgcca    5111
ggcgtaccgt gggcggcata tcagcgagtt tgatctcgat gccgccctcg cccgccgccc    5171
ggcgctgatc ttaatggacg aactggcgca cagtaatgcg ccaggttccc gtcatcccaa    5231
acgctggcag gatatcgaag aactgctgga agctggcatt gatgttttca ctaccgtcaa    5291
cgttcagcat ctggaaagtc tgaatgatgt ggtcagcggc gtcaccggaa ttcaggtacg    5351
ggaaaccgtg cccgatcctt ttttcgatgc cgccgacgac gtggtgctgg tggacttgcc    5411
cccggacgat ctgcgccagc ggctgaaaga aggcaaagtc tatattgccg ggcaggcgga    5471
gcgcgccatt gaacattttt tccgcaaagg taatctgatc gccctgcgcg aactggcact    5531
gcgccgtact gccgatcgcg ttgatgagca aatgcgcgcc tggcgggggc atcctggcga    5591
agagaaagtg tggcacacgc gcgacgcgat ccttttatgc atcggccata acaccggcag    5651
cgaaaaactg gtccgcgcag cggcgcggct ggcgtcacgg ctgggtagcg tctggcacgc    5711
ggtgtatgtt gaaacccctg ccctgcaccg cttaccggaa aaaaaacgtc gggcaattct    5771
cagcgcctta cgtctggcgc aggaactggg cgcggagacg gcaacacttt ctgatccagc    5831
ggaagagaaa gcggtagtgc gttatgcccg tgaacataat ctcggcaaga ttattctcgg    5891
tcgcccggcc tcgcgccgct ggtggcgtcg ggaaacgttt gctgaccgac tggcgcgcat    5951
cgcccccgat ctcgatcagg tgctggtcgc gcttgatgaa ccacccgccc gcacgattaa    6011
caacgcgccg gataaccgct cttttaaaga caagtggcgt gtacaaattc agggatgcgt    6071
ggttgccgcc gcgttatgcg ccgttatcac cttaattgcc atgcagtggc tgatggcgtt    6131
tgatgccgcc aacctggtga tgctgtatct gcttggcgtg gtggtggtgg cgctatttta    6191
tggacgctgg ccttcagtgg ttgccaccgt cattaatgta gtgagtttcg atctcttttt    6251
tatcgcccca cgcggcacgc tcgccgtctc tgatgtgcaa tatctgctga ccttcgcggt    6311
gatgttaacc gtcgggctgg tgatcgggaa ccttactgct ggcgtgcgtt atcaggcgcg    6371
ggtagcccgt taccgcgagc aacgcacacg gcacttatat gaaatgtcga aagctctggc    6431
ggtgggccgc agtccgcagg atatcgctgc caccagcgaa caatttattg cctccacgtt    6491
tcatgcccgc agtcaggtgt tgttgcccga tgacaacggt aaattgcagc cgttaacaca    6551
tccgcaagga atgacgccgt gggacgatgc catcgcgcag tggagttttg ataaaggcct    6611
gcctgcgggc gcgggcaccg acacgttacc cggtgtaccg taccagattt tgccgctaaa    6671
aagcggcgag aaaacctacg ggctggtggt ggtggagccg gggaatctgc gccagttgat    6731
gatcccggaa cagcagcgcc tgctggagac gtttacgctg ttagtcgcca atgcccttga    6791
gcggctgacg ctaaccgcca gcgaagaaca ggcgcggatg gcaagcgaac gtgaacagat    6851
ccgcaacgcc ctgctggcgg cgctttcgca tgatttacgc acgccgctta cggtgctgtt    6911
tggtcaggca gaaatcttaa cgctcgatct ggcaagcgaa ggatcacccc acgcccgcca    6971
ggccagcgag atccgtcagc atgtgctgaa cactacccga ctggtgaata atctactgga    7031
tatggcgcga attcagtccg gcggctttaa tttgaagaaa gagtggttaa cgctggaaga    7091
agtagtcggc agcgcgctgc aaatgctgga accgggttta tcgtcgccca tcaatctttc    7151
tctgccagaa ccgctgacct taatccacgt tgacgggcca ctctttgaac gggtgctgat    7211
taatctgctg gagaacgcgg tgaaatatgc gggtgcgcag gccgaaattg gtatcgatgc  7271
ccacgttgag ggcgaaaatc tacaactgga tgtctgggat aacggccccg gtcttccgcc  7331
aggccaggag cagacgatat ttgataagtt tgctcgcggg aataaagagt cggcagtacc  7391
gggggtaggg cttggactgg caatttgtcg ggcgatagtg gatgtacacg ggggcactat  7451
taccgcgttc aaccgaccgg aaggtggtgc ctgttttcgt gttacacttc cccagcaaac  7511
tgcccctgaa cttgaagaat ttcatgagga tatgtgacaa acgttctgat tgttgaagat  7571
gaacaggcta ttcgtcgctt tctgcgcacg gcgctggagg gcgacgggat gcgcgtcttt  7631
gaggccgaaa cgctgcaacg cggcttgctg gaagcggcaa cccgtaagcc agatttgatt  7691
attctcgatc tcggcctgcc cgatggtgat gggattgagt ttatccgcga cctgcgccag  7751
tggagcgcgg tgccggtgat tgtgctttcc gcacgcagcg aagagagcga caaaatcgcc  7811
gcgctggatg ccggagcgga tgattatctg agtaagccgt ttggcattgg cgaattgcag  7871
gcccgtctgc gcgtcgcatt acgccgccac tctgccacca ccgcgcccga tccgctggta  7931
aaattttccg atgttaccgt cgatttagcc gcccgcgtga ttcaccgggg tgaggaagag  7991
gtgcatctca caccaattga gttccgcctg ctggcggtgc tgctcaacaa tgccggaaaa  8051
gtactcaccc agcgccagct ccttaaccag gtgtgggggc caaacgcggt cgaacacagt  8111
cactatttgc gtatttatat gggacatctg cgacaaaaac tggaacagga tcccgcccgc  8171
ccacgccatt tcattactga aaccggtatt ggctatcggt ttatgctttg aatattaatt  8231
ttaatacagc ctgcctttta ttaattaaag ccgtaataat aaatacggct ttttatctta  8291
aacaacacac aaaaataaca attcaatatt ttatattact gagtaaaaag ctcatcatta  8351
aataaattaa gattgatcat tttttattga tcacctteac agttcaaccg tatttcctgg  8411
atagaatatc ttcaccttca ttcacatcag gaaaggtaaa ttaaatggaa aataacagcc  8471
gcactatgcc ccatataagg cggacaactc                                   8501
<210>2
<211>557
<212>PRT
<213>大肠杆菌
<400>2
Met Ala Ala Gln Gly Phe Leu Leu Ile Ala Thr Phe Leu Leu Val Leu
1               5                   10                  15
Met Val Leu Ala Arg Pro Leu Gly Ser Gly Leu Ala Arg Leu Ile Asn
            20                  25                  30
Asp Ile Pro Leu Pro Gly Thr Thr Gly Val Glu Arg Val Leu Phe Arg
        35                  40                  45
Ala Leu Gly Val Ser Asp Arg Glu Met Asn Trp Lys Gln Tyr Leu Cys
    50                  55                  60
Ala Ile Leu Gly Leu Asn Met Leu Gly Leu Ala Val Leu Phe Phe Met
65                  70                  75                  80
Leu Leu Gly Gln His Tyr Leu Pro Leu Asn Pro Gln Gln Leu Pro Gly
                85                  90                  95
Leu Ser Trp Asp Leu Ala Leu Asn Thr Ala Val Ser Phe Val Thr Asn
            100                 105                 110
Thr Asn Trp Gln Ser Tyr Ser Gly Glu Thr Thr Leu Ser Tyr Phe Ser
        115                 120                 125
Gln Met Ala Gly Leu Thr Val Gln Asn Phe Leu Ser Ala Ala Ser Gly
    130                 135                 140
Ile Ala Val Ile Phe Ala Leu Ile Arg Ala Phe Thr Arg Gln Ser Met
145                 150                 155                 160
Ser Thr Leu Gly Asn Ala Trp Val Asp Leu Leu Arg Ile Thr Leu Trp
                165                 170                 175
Val Leu Val Pro Val Ala Leu Leu Ile Ala Leu Phe Phe Ile Gln Gln
            180                 185                 190
Gly Ala Leu Gln Asn Phe Leu Pro Tyr Gln Ala Val Asn Thr Val Glu
        195                 200                 205
Gly Ala Gln Gln Leu Leu Pro Met Gly Pro Val Ala Ser Gln Glu Ala
    210                 215                 220
Ile Lys Met Leu Gly Thr Asn Gly Gly Gly Phe Phe Asn Ala Asn Ser
225                 230                 235                 240
Ser His Pro Phe Glu Asn Pro Thr Ala Leu Thr Asn Phe Val Gln Met
                245                 250                 255
Leu Ala Ile Phe Leu Ile Pro Thr Ala Leu Cys Phe Ala Phe Gly Glu
            260                 265                 270
Val Met Gly Asp Arg Arg Gln Gly Arg Met Leu Leu Trp Ala Met Ser
        275                 280                 285
Val Ile Phe Val Ile Cys Val Gly Val Val Met Trp Ala Glu Val Gln
    290                 295                 300
Gly Asn Pro His Leu Leu Ala Leu Gly Thr Asp Ser Ser Ile Asn Met
305                 310                 315                 320
Glu Gly Lys Glu Ser Arg Phe Gly Val Leu Val Ser Ser Leu Phe Ala
                325                 330                 335
Val Val Thr Thr Ala Ala Ser Cys Gly Ala Val Ile Ala Met His Asp
            340                 345                 350
Ser Phe Thr Ala Leu Gly Gly Met Val Pro Met Trp Leu Met Gln Ile
        355                 360                 365
Gly Glu Val Val Phe Gly Gly Val Gly Ser Gly Leu Tyr Gly Met Met
    370                 375                 380
Leu Phe Val Leu Leu Ala Val Phe Ile Ala Gly Leu Met Ile Gly Arg
385                 390                 395                 400
Thr Pro Glu Tyr Leu Gly Lys Lys Ile Asp Val Arg Glu Met Lys Leu
                405                 410                 415
Thr Ala Leu Ala Ile Leu Val Thr Pro Thr Leu Val Leu Met Gly Ala
            420                 425                 430
Ala Leu Ala Met Met Thr Asp Ala Gly Arg Ser Ala Met Leu Asn Pro
        435                 440                 445
Gly Pro His Gly Phe Ser Glu Val Leu Tyr Ala Val Ser Ser Ala Ala
    450                 455                 460
Asn Asn Asn Gly Ser Ala Phe Ala Gly Leu Ser Ala Asn Ser Pro Phe
465                 470                 475                 480
Trp Asn Cys Leu Leu Ala Phe Cys Met Phe Val Gly Arg Phe Gly Val
                485                 490                 495
Ile Ile Pro Val Met Ala Ile Ala Gly Ser Leu Val Ser Lys Lys Ser
            500                 505                 510
Gln Ala Ala Ser Ser Gly Thr Leu Pro Thr His Gly Pro Leu Phe Val
        515                 520                 525
Gly Leu Leu Ile Gly Thr Val Leu Leu Val Gly Ala Leu Thr Phe Ile
    530                 535                 540
Pro Ala Leu Ala Leu Gly Pro Val Ala Glu Tyr Leu Ser
545                 550                 555
<210>3
<211>682
<212>PRT
<213>大肠杆菌
<400>3
Met Ser Arg Lys Gln Leu Ala Leu Phe Glu Pro Thr Leu Val Val Gln
1               5                   10                  15
Ala Leu Lys Glu Ala Val Lys Lys Leu Asn Pro Gln Ala Gln Trp Arg
            20                  25                  30
Asn Pro Val Met Phe Ile Val Trp Ile Gly Ser Leu Leu Thr Thr Cys
        35                  40                  45
Ile Ser Ile Ala Met Ala Ser Gly Ala Met Pro Gly Asn Ala Leu Phe
    50                  55                  60
Ser Ala Ala Ile Ser Gly Trp Leu Trp Ile Thr Val Leu Phe Ala Asn
65                  70                  75                  80
Phe Ala Glu Ala Leu Ala Glu Gly Arg Ser Lys Ala Gln Ala Asn Ser
                85                  90                  95
Leu Lys Gly Val Lys Lys Thr Ala Phe Ala Arg Lys Leu Arg Glu Pro
            100                 105                 110
Lys Tyr Gly Ala Ala Ala Asp Lys Val Pro Ala Asp Gln Leu Arg Lys
        115                 120                 125
Gly Asp Ile Val Leu Val Glu Ala Gly Asp Ile Ile Pro Cys Asp Gly
    130                 135                 140
Glu Val Ile Glu Gly Gly Ala Ser Val Asp Glu Ser Ala Ile Thr Gly
145                 150                 155                 160
Glu Ser Ala Pro Val Ile Arg Glu Ser Gly Gly Asp Phe Ala Ser Val
                165                 170                 175
Thr Gly Gly Thr Arg Ile Leu Ser Asp Trp Leu Val Ile Glu Cys Ser
            180                 185                 190
Val Asn Pro Gly Glu Thr Phe Leu Asp Arg Met Ile Ala Met Val Glu
        195                 200                 205
Gly Ala Gln Arg Arg Lys Thr Pro Asn Glu Ile Ala Leu Thr Ile Leu
    210                 215                 220
Leu Ile Ala Leu Thr Ile Val Phe Leu Leu Ala Thr Ala Thr Leu Trp
225                 230                 235                 240
Pro Phe Ser Ala Trp Gly Gly Asn Ala Val Ser Val Thr Val Leu yal
                245                 250                 255
Ala Leu Leu Val Cys Leu Ile Pro Thr Thr Ile Gly Gly Leu Leu Ser
            260                 265                 270
Ala Ile Gly Val Ala Gly Met Ser Arg Met Leu Gly Ala Asn Val Ile
        275                 280                 285
Ala Thr Ser Gly Arg Ala Val Glu Ala Ala Gly Asp Val Asp Val Leu
    290                 295                 300
Leu Leu Asp Lys Thr Gly Thr Ile Thr Leu Gly Asn Arg Gln Ala Ser
305                 310                 315                 320
Glu Phe Ile Pro Ala Gln Gly Val Asp Glu Lys Thr Leu Ala Asp Ala
                325                 330                 335
Ala Gln Leu Ala Ser Leu Ala Asp Glu Thr Pro Glu Gly Arg Ser Ile
            340                 345                 350
Val Ile Leu Ala Lys Gln Arg Phe Asn Leu Arg Glu Arg Asp Val Gln
        355                 360                 365
Ser Leu His Ala Thr Phe Val Pro Phe Thr Ala Gln Ser Arg Met Ser
    370                 375                 380
Gly Ile Asn Ile Asp Asn Arg Met Ile Arg Lys Gly Ser Val Asp Ala
385                 390                 395                 400
Ile Arg Arg His Val Glu Ala Asn Gly Gly His Phe Pro Thr Asp Val
                405                 410                 415
Asp Gln Lys Val Asp Gln Val Ala Arg Gln Gly Ala Thr Pro Leu Val
            420                 425                 430
Val Val Glu Gly Ser Arg Val Leu Gly Val Ile Ala Leu Lys Asp Ile
        435                 440                 445
Val Lys Gly Gly Ile Lys Glu Arg Phe Ala Gln Leu Arg Lys Met Gly
    450                 455                 460
Ile Lys Thr Val Met Ile Thr Gly Asp Asn Arg Leu Thr Ala Ala Ala
465                 470                 475                 480
Ile Ala Ala Glu Ala Gly Val Asp Asp Phe Leu Ala Glu Ala Thr Pro
                485                 490                 495
Glu Ala Lys Leu Ala Leu Ile Arg Gln Tyr Gln Ala Glu Gly Arg Leu
            500                 505                 510
Val Ala Met Thr Gly Asp Gly Thr Asn Asp Ala Pro Ala Leu Ala Gln
        515                 520                 525
Ala Asp Val Ala Val Ala Met Asn Ser Gly Thr Gln Ala Ala Lys Glu
    530                 535                 540
Ala Gly Asn Met Val Asp Leu Asp Ser Asn Pro Thr Lys Leu Ile Glu
545                 550                 555                 560
Val Val His Ile Gly Lys Gln Met Leu Met Thr Arg Gly Ser Leu Thr
                565                 570                 575
Thr Phe Ser Ile Ala Asn Asp Val Ala Lys Tyr Phe Ala Ile Ile Pro
            580                 585                 590
Ala Ala Phe Ala Ala Thr Tyr Pro Gln Leu Asn Ala Leu Asn Ile Met
        595                 600                 605
Cys Leu His Ser Pro Asp Ser Ala Ile Leu Ser Ala Val Ile Phe Asn
    610                 615                 620
Ala Leu Ile Ile Val Phe Leu Ile Pro Leu Ala Leu Lys Gly Val Ser
625                 630                 635                 640
Tyr Lys Pro Leu Thr Ala Ser Ala Met Leu Arg Arg Asn Leu Trp Ile
                645                 650                 655
Tyr Gly Leu Gly Gly Leu Leu Val Pro Phe Ile Gly Ile Lys Val Ile
            660                 665                 670
Asp Leu Leu Leu Thr Val Cys Gly Leu Val
        675                 680
<210>4
<211>190
<212>PRT
<213>大肠杆菌
<400>4
Met Ser Gly Leu Arg Pro Ala Leu Ser Thr Phe Ile Phe Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
Ile Thr Gly Gly Val Tyr Pro Leu Leu Thr Thr Val Leu Gly Gln Trp
            20                  25                  30
Trp Phe Pro Trp Gln Ala Asn Gly Ser Leu Ile Arg Glu Gly Asp Thr
        35                  40                  45
Val Arg Gly Ser Ala Leu Ile Gly Gln Asn Phe Thr Gly Asn Gly Tyr
    50                  55                  60
Phe His Gly Arg Pro Ser Ala Thr Ala Glu Met Pro Tyr Asn Pro Gln
65                  70                  75                  80
Ala Ser Gly Gly Ser Asn Leu Ala Val Ser Asn Pro Glu Leu Asp Lys
                85                  90                  95
Leu Ile Ala Ala Arg Val Ala Ala Leu Arg Ala Ala Asn Pro Asp Ala
            100                 105                 110
Ser Ala Ser Val Pro Val Glu Leu Val Thr Ala Ser Ala Ser Gly Leu
        115                 120                 125
Asp Asn Asn Ile Thr Pro Gln Ala Ala Ala Trp Gln Ile Pro Arg Val
    130                 135                 140
Ala Lys Ala Arg Asn Leu Ser Val Glu Gln Leu Thr Gln Leu Ile Ala
145                 150                 155                 160
Lys Tyr Ser Gln Gln Pro Leu Val Lys Tyr Ile Gly Gln Pro Val Val
                165                 170                 175
Asn Ile Val Glu Leu Asn Leu Ala Leu Asp Lys Leu Asp Glu
            180                 185                 190
<210>5
<211>894
<212>PRT
<213>大肠杆菌
<400>5
Met Asn Asn Glu Pro Leu Arg Pro Asp Pro Asp Arg Leu Leu Glu Gln
1               5                   10                  15
Thr Ala Ala Pro His Arg Gly Lys Leu Lys Val Phe Phe Gly Ala Cys
            20                  25                  30
Ala Gly Val Gly Lys Thr Trp Ala Met Leu Ala Glu Ala Gln Arg Leu
        35                  40                  45
Arg Ala Gln Gly Leu Asp Ile Val Val Gly Val Val Glu Thr His Gly
    50                  55                  60
Arg Lys Asp Thr Ala Ala Met Leu Glu Gly Leu Ala Val Leu Pro Leu
65                  70                  75                  80
Lys Arg Gln Ala Tyr Arg Gly Arg His Ile Ser Glu Phe Asp Leu Asp
                85                  90                  95
Ala Ala Leu Ala Arg Arg Pro Ala Leu Ile Leu Met Asp Glu Leu Ala
            100                 105                 110
His Ser Asn Ala Pro Gly Ser Arg His Pro Lys Arg Trp Gln Asp Ile
        115                 120                 125
Glu Glu Leu Leu Glu Ala Gly Ile Asp Val Phe Thr Thr Val Asn Val
    130                 135                 140
Gln His Leu Glu Ser Leu Asn Asp Val Val Ser Gly Val Thr Gly Ile
145                 150                 155                 160
Gln Val Arg Glu Thr Val Pro Asp Pro Phe Phe Asp Ala Ala Asp Asp
                165                 170                 175
Val Val Leu Val Asp Leu Pro Pro Asp Asp Leu Arg Gln Arg Leu Lys
            180                 185                 190
Glu Gly Lys Val Tyr Ile Ala Gly Gln Ala Glu Arg Ala Ile Glu His
        195                 200                 205
Phe Phe Arg Lys Gly Asn Leu Ile Ala Leu Arg Glu Leu Ala Leu Arg
    210                 215                 220
Arg Thr Ala Asp Arg Val Asp Glu Gln Met Arg Ala Trp Arg Gly His
225                 230                 235                 240
Pro Gly Glu Glu Lys Val Trp His Thr Arg Asp Ala Ile Leu Leu Cys
                245                 250                 255
Ile Gly His Asn Thr Gly Ser Glu Lys Leu Val Arg Ala Ala Ala Arg
            260                 265                 270
Leu Ala Ser Arg Leu Gly Ser Val Trp His Ala Val Tyr Val Glu Thr
        275                 280                 285
Pro Ala Leu His Arg Leu Pro Glu Lys Lys Arg Arg Ala Ile Leu Ser
    290                 295                 300
Ala Leu Arg Leu Ala Gln Glu Leu Gly Ala Glu Thr Ala Thr Leu Ser
305                 310                 315                 320
Asp Pro Ala Glu Glu Lys Ala Val Val Arg Tyr Ala Arg Glu His Asn
                325                 330                 335
Leu Gly Lys Ile Ile Leu Gly Arg Pro Ala Ser Arg Arg Trp Trp Arg
            340                 345                 350
Arg Glu Thr Phe Ala Asp Arg Leu Ala Arg Ile Ala Pro Asp Leu Asp
        355                 360                 365
Gln Val Leu Val Ala Leu Asp Glu Pro Pro Ala Arg Thr Ile Asn Asn
    370                 375                 380
Ala Pro Asp Asn Arg Ser Phe Lys Asp Lys Trp Arg Val Gln Ile Gln
385                 390                 395                 400
Gly Cys Val Val Ala Ala Ala Leu Cys Ala Val Ile Thr Leu Ile Ala
                405                 410                 415
Met Gln Trp Leu Met Ala Phe Asp Ala Ala Asn Leu Val Met Leu Tyr
            420                 425                 430
Leu Leu Gly Val Val Val Val Ala Leu Phe Tyr Gly Arg Trp Pro Ser
        435                 440                 445
Val Val Ala Thr Val Ile Asn Val Val Ser Phe Asp Leu Phe Phe Ile
    450                 455                 460
Ala Pro Arg Gly Thr Leu Ala Val Ser Asp Val Gln Tyr Leu Leu Thr
465                 470                 475                 480
Phe Ala Val Met Leu Thr Val Gly Leu Val Ile Gly Asn Leu Thr Ala
                485                 490                 495
Gly Val Arg Tyr Gln Ala Arg Val Ala Arg Tyr Arg Glu Gln Arg Thr
            500                 505                 510
Arg His Leu Tyr Glu Met Ser Lys Ala Leu Ala Val Gly Arg Ser Pro
        515                 520                 525
Gln Asp Ile Ala Ala Thr Ser Glu Gln Phe Ile Ala Ser Thr Phe His
    530                 535                 540
Ala Arg Ser Gln Val Leu Leu Pro Asp Asp Asn Gly Lys Leu Gln Pro
545                 550                 555                 560
Leu Thr His Pro Gln Gly Met Thr Pro Trp Asp Asp Ala Ile Ala Gln
                565                 570                 575
Trp Ser Phe Asp Lys Gly Leu Pro Ala Gly Ala Gly Thr Asp Thr Leu
            580                 585                 590
Pro Gly Val Pro Tyr Gln Ile Leu Pro Leu Lys Ser Gly Glu Lys Thr
        595                 600                 605
Tyr Gly Leu Val Val Val Glu Pro Gly Asn Leu Arg Gln Leu Met Ile
    610                 615                 620
Pro Glu Gln Gln Arg Leu Leu Glu Thr Phe Thr Leu Leu Val Ala Asn
625                 630                 635                 640
Ala Leu Glu Arg Leu Thr Leu Thr Ala Ser Glu Glu Gln Ala Arg Met
                645                 650                 655
Ala Ser Glu Arg Glu Gln Ile Arg Asn Ala Leu Leu Ala Ala Leu Ser
            660                 665                 670
His Asp Leu Arg Thr Pro Leu Thr Val Leu Phe Gly Gln Ala Glu Ile
        675                 680                 685
Leu Thr Leu Asp Leu Ala Ser Glu Gly Ser Pro His Ala Arg Gln Ala
    690                 695                 700
Ser Glu Ile Arg Gln His Val Leu Asn Thr Thr Arg Leu Val Asn Asn
705                 710                 715                 720
Leu Leu Asp Met Ala Arg Ile Gln Ser Gly Gly Phe Asn Leu Lys Lys
                725                 730                 735
Glu Trp Leu Thr Leu Glu Glu Val Val Gly Ser Ala Leu Gln Met Leu
            740                 745                 750
Glu Pro Gly Leu Ser Ser Pro Ile Asn Leu Ser Leu Pro Glu Pro Leu
        755                 760                 765
Thr Leu Ile His Val Asp Gly Pro Leu Phe Glu Arg Val Leu Ile Asn
    770                 775                 780
Leu Leu Glu Asn Ala Val Lys Tyr Ala Gly Ala Gln Ala Glu Ile Gly
785                 790                 795                 800
Ile Asp Ala His Val Glu Gly Glu Asn Leu Gln Leu Asp Val Trp Asp
                805                 810                 815
Asn Gly Pro Gly Leu Pro Pro Gly Gln Glu Gln Thr Ile Phe Asp Lys
            820                 825                 830
Phe Ala Arg Gly Asn Lys Glu Ser Ala Val Pro Gly Val Gly Leu Gly
        835                 840                 845
Leu Ala Ile Cys Arg Ala Ile Val Asp Val His Gly Gly Thr Ile Thr
    850                 855                 860
Ala Phe Asn Arg Pro Glu Gly Gly Ala Cys Phe Arg Val Thr Leu Pro
865                 870                 875                 880
Gln Gln Thr Ala Pro Glu Leu Glu Glu Phe His Glu Asp Met
                885                 890
<210>6
<211>225
<212>PRT
<213>大肠杆菌
<400>6
Val Thr Asn Val Leu Ile Val Glu Asp Glu Gln Ala Ile Arg Arg Phe
1               5                   10                  15
Leu Arg Thr Ala Leu Glu Gly Asp Gly Met Arg Val Phe Glu Ala Glu
            20                  25                  30
Thr Leu Gln Arg Gly Leu Leu Glu Ala Ala Thr Arg Lys Pro Asp Leu
        35                  40                  45
Ile Ile Leu Asp Leu Gly Leu Pro Asp Gly Asp Gly Ile Glu Phe Ile
    50                  55                  60
Arg Asp Leu Arg Gln Trp Ser Ala Val Pro Val Ile Val Leu Ser Ala
65                  70                  75                  80
Arg Ser Glu Glu Ser Asp Lys Ile Ala Ala Leu Asp Ala Gly Ala Asp
                85                  90                  95
Asp Tyr Leu Ser Lys Pro Phe Gly Ile Gly Glu Leu Gln Ala Arg Leu
            100                 105                 110
Arg Val Ala Leu Arg Arg His Ser Ala Thr Thr Ala Pro Asp Pro Leu
        115                 120                 125
Val Lys Phe Ser Asp Val Thr Val Asp Leu Ala Ala Arg Val Ile His
    130                 135                 140
Arg Gly Glu Glu Glu Val His Leu Thr Pro Ile Glu Phe Arg Leu Leu
145                 150                 155                 160
Ala Val Leu Leu Asn Asn Ala Gly Lys Val Leu Thr Gln Arg Gln Leu
                165                 170                 175
Leu Asn Gln Val Trp Gly Pro Asn Ala Val Glu His Ser His Tyr Leu
            180                 185                 190
Arg Ile Tyr Met Gly His Leu Arg Gln Lys Leu Glu Gln Asp Pro Ala
        195                 200                 205
Arg Pro Arg His Phe Ile Thr Glu Thr Gly Ile Gly Tyr Arg Phe Met
    210                 215                 220
Leu
225
<210>7
<211>7620
<212>DNA
<213>Pantoea ananatis
<220>
<221>CDS
<222>(543)..(2225)
<220>
<221>CDS
<222>(2228)..(4273)
<220>
<221>CDS
<222>(4284)..(4853)
<220>
<221>CDS
<222>(4867)..(7542)
<400>7
aggctggacc ccagccaaaa ccctgcaaat gatgttgagc tggccggggc atttcgacag     60
taccttactg cacgctttcg tcagtacgat agggatgtat cccgtcggtt ccctggttcg    120
cctggcgtct ggacgcattg cgctggtggt gaagggcggc gataagtcat tacagcgacc    180
tacggtgcat gtcttctggt cactgcacgc gcagcgggaa atcaaacccg aggtgctgga    240
tctgggcgac agtttttgta ctgacagcat tgtgtgtgcc gaagataacg gccgttggga    300
caacgtcgat ctgcgccgaa tctggttgct ggacgccgcc tgatattgcg ggtcgttttt    360
atacattttt tacatccccg acccgcattt taaccctttc tttatgtgcg ccagcgcaag    420
ctactcagca aatccaatcc tctggaggtt gctgtgagtg caggcgtaat aaccggcatt    480
gtgctggtag tgttgttgct gggctatctg atctatgccc tgttaaatgc ggaggccttc    540
tg atg gcg gcc aat gcg ttt tta ctg atc gcg gtt tat ctg ctg ttg       587
   Met Ala Ala Asn Ala Phe Leu Leu Ile Ala Val Tyr Leu Leu Leu
   1               5                   10                  15
ctg atg gtg atg gcg caa ccg ctg ggg cgt ggg ctg gcc gcg ctg gtt      635
Leu Met Val Met Ala Gln Pro Leu Gly Arg Gly Leu Ala Ala Leu Val
                20                  25                  30
gcc gat aaa ccc ctc ttt gca cgt gct gaa gcc ctg ctg tgg cgt ttt      683
Ala Asp Lys Pro Leu Phe Ala Arg Ala Glu Ala Leu Leu Trp Arg Phe
            35                  40                  45
tcg ggt gta caa gaa ggc ggt atg cgc tgg cag cac tac ctg ctg gca      731
Ser Gly Val Gln Glu Gly Gly Met Arg Trp Gln His Tyr Leu Leu Ala
        50                  55                  60
att ttg gtg ttc aac ctg ctt ggc ttc gtg gtg ctg ctc gcc atc cta      779
Ile Leu Val Phe Asn Leu Leu Gly Phe Val Val Leu Leu Ala Ile Leu
    65                  70                  75
atg ttt cag gga gcg ttg ccg ctc aat ccg caa cat ctt ccc gga ctg    827
Met Phe Gln Gly Ala Leu Pro Leu Asn Pro Gln His Leu Pro Gly Leu
80                  85                  90                  95
agc tgg gat ttg gcg ctg aat acc gct atc agt ttt gtc acc aac acc    875
Ser Trp Asp Leu Ala Leu Asn Thr Ala Ile Ser Phe Val ThT Asn Thr
                100                 105                 110
aac tgg cag tct tat gcc ggt gaa agc acc ctg agt tac ttc agc cag    923
Asn Trp Gln Ser Tyr Ala Gly Glu Ser Thr Leu Ser Tyr Phe Ser Gln
            115                 120                 125
atg gtc ggg ctg acg gtg cag aac ttc gtt tcc gcc gcc acc ggc atc    971
Met Val Gly Leu Thr Val Gln Asn Phe Val Ser Ala Ala Thr Gly Ile
        130                 135                 140
gcc gtg gcg ttt gcg ctg att cgc ggt ttt gct aat cgt tcg gtg gca   1019
Ala Val Ala Phe Ala Leu Ile Arg Gly Phe Ala Asn Arg Ser Val Ala
    145                 150                 155
acc ctg ggc aac gcc tgg cgc gat tta acg cgc att aca ctc tat gtc   1067
Thr Leu Gly Asn Ala Trp Arg Asp Leu Thr Arg Ile Thr Leu Tyr Val
160                 165                 170                 175
ctg ttg ccg atc agc ctg ctg atg gcg ctg ttt ttt gtc agc cag ggc   1115
Leu Leu Pro Ile Ser Leu Leu Met Ala Leu Phe Phe Val Ser Gln Gly
                180                 185                 190
agc atc cag aac ttc ctg ccg tat cac aac gtc acc agc ctg gaa ggt   1163
Ser Ile Gln Asn Phe Leu Pro Tyr His Asn Val Thr Ser Leu Glu Gly
            195                 200                 205
gcg cag caa acg ctg gca atg ggg ccg gtt gcc tct cag gaa gcc atc   1211
Ala Gln Gln Thr Leu Ala Met Gly Pro Val Ala Ser Gln Glu Ala Ile
        210                 215                 220
aaa atg ctg ggc acc aac ggc ggc ggc ttt ttc aac gtt aac tct gcg   1259
Lys Met Leu Gly Thr Asn Gly Gly Gly Phe Phe Asn Val Asn Ser Ala
    225                 230                 235
cat ccg ttt gag aac cct acc gcg ctg agc aat ttc gta cag atg ctt   1307
His Pro Phe Glu Asn Pro Thr Ala Leu Ser Asn Phe Val Gln Met Leu
240                 245                 250                 255
agt atc ttc ctg att cct gca gca ctc tgc ttt gcc ttt ggc gaa agc   1355
Ser Ile Phe Leu Ile Pro Ala Ala Leu Cys Phe Ala Phe Gly Glu Ser
                260                 265                 270
gtt aaa gat cgg cgc cag ggc tca atg ttg ctc tgg tcc atg acg ttg   1403
Val Lys Asp Arg Arg Gln Gly Ser Met Leu Leu Trp Ser Met Thr Leu
            275                 280                 285
atg ttt gtc gtg gct gct gcg ctg gtg atg tgg gct gaa cta cgt ggc   1451
Met Phe Val Val Ala Ala Ala Leu Val Met Trp Ala Glu Leu Arg Gly
        290                 295                 300
aac ccg cac ttt ctg acg cta ggg gct gac agc gcc atc aat atg gaa   1499
Asn Pro His Phe Leu Thr Leu Gly Ala Asp Ser Ala Ile Asn Met Glu
    305                 310                 315
ggc aaa gaa acg cgc ttc ggc att ctc aac tcc agc ctg ttt gcg gtg   1547
Gly Lys Glu Thr Arg Phe Gly Ile Leu Asn Ser Ser Leu Phe Ala Val
320                 325                 330                 335
att acg acg gcg gcg tcc tgc ggt gcg gta aac gcg atg cat gac tcg   1595
Ile Thr Thr Ala Ala Ser Cys Gly Ala Val Asn Ala Met His Asp Ser
                340                 345                 350
ttt acg gcg ctg ggc ggt atg gtg ccg atg ctg ctg atg caa ctg ggc   1643
Phe Thr Ala Leu Gly Gly Met Val Pro Met Leu Leu Met Gln Leu Gly
            355                 360                 365
gag gtg gtg ttt ggc ggc gtg ggt gcc ggt ctg tac ggg atg ctg ctg   1691
Glu Val Val Phe Gly Gly Val Gly Ala Gly Leu Tyr Gly Met Leu Leu
        370                 375                 380
ttt gtc tta ctg gcg gtg ttt att gcc ggg ttg atg att ggc cgc aca   1739
Phe Val Leu Leu Ala Val Phe Ile Ala Gly Leu Met Ile Gly Arg Thr
    385                 390                 395
ccg gaa ttc ctc ggc aag aaa atc gac gta tgg gaa atg aaa atg acg   1787
Pro Glu Phe Leu Gly Lys Lys Ile Asp Val Trp Glu Met Lys Met Thr
400                 405                 410                 415
gcc ctg gcg att ctg gtc acg ccc gcg ctg gtg ttg atc ggt acg gcg   1835
Ala Leu Ala Ile Leu Val Thr Pro Ala Leu Val Leu Ile Gly Thr Ala
                420                 425                 430
att gcg atg atg acc gac gcc gga cgc gca ggt atg gca aac ccc gga   1883
Ile Ala Met Met Thr Asp Ala Gly Arg Ala Gly Met Ala Asn Pro Gly
            435                 440                 445
acg cat ggc ttt agt gaa gtc ctg tat gcc gtt tcg tcg gcc gcc aat   1931
Thr His Gly Phe Ser Glu yal Leu Tyr Ala Val Ser Ser Ala Ala Asn
        450                 455                 460
aac aat ggc agc gcc ttt gcg ggc ctg aac gcc aat acg ccg ttc tgg    1979
Asn Asn Gly Ser Ala Phe Ala Gly Leu Asn Ala Asn Thr Pro Phe Trp
    465                 470                 475
aac ctg ctg ctg gcg gtg tgt atg ttc gta ggt cgc ttc ggc atc att    2027
Asn Leu Leu Leu Ala Val Cys Met Phe Val Gly Arg Phe Gly Ile Ile
480                 485                 490                 495
att ccg gtc atg gcg att gcg ggg gca atg gcg gtg aaa aaa gtg cag    2075
Ile Pro Val Met Ala Ile Ala Gly Ala Met Ala Val Lys Lys Val Gln
                500                 505                 510
ccg gta ggt aac ggc acg ctc cct acg cac ggt ccg ctg ttt atc gca    2123
Pro Val Gly Asn Gly Thr Leu Pro Thr His Gly Pro Leu Phe Ile Ala
            515                 520                 525
ctg ctg gtc ggt acc gtc ttg ttg gtc ggc gcg ctg acc ttt att cct    2171
Leu Leu Val Gly Thr Val Leu Leu Val Gly Ala Leu Thr Phe Ile Pro
        530                 535                 540
gct ctg gcg ctg ggt ccg gtc gcc gag cac ctg caa ctt att cag gga    2219
Ala Leu Ala Leu Gly Pro Val Ala Glu His Leu Gln Leu Ile Gln Gly
    545                 550                 555
caa taa tc atg agt cgt caa caa cag gtg ttt gac gca gcg ctg tta     2266
Gln        Met Ser Arg Gln Gln Gln Val Phe Asp Ala Ala Leu Leu
560                        565                 570
cgt acc tca gcg atc gat gcg gta aaa aaa ctc gat cct cgc gtg cag    2314
Arg Thr Ser Ala Ile Asp Ala Val Lys Lys Leu Asp Pro Arg Val Gln
    575                 580                 585
ttt cgc aat ccg gtc atg ttt gtg gtt tac ctg ggc agt atc ctg acc    2362
Phe Arg Asn Pro Val Met Phe Val Val Tyr Leu Gly Ser Ile Leu Thr
590                 595                 600                 605
tcg att ctg gcc ata atg atg ttt acc gga cac cag agc ggc agc gcc    2410
Ser Ile Leu Ala Ile Met Met Phe Thr Gly His Gln Ser Gly Ser Ala
                610                 615                 620
agc ttt acc ggc gcg att gcc ctg tgg tta tgg ttc acc gtg ctg ttt    2458
Ser Phe Thr Gly Ala Ile Ala Leu Trp Leu Trp Phe Thr Val Leu Phe
            625                 630                 635
gcc aac atg gca gaa gcc ctg gcg gaa ggg cgc agt aaa gcc cag gca    2506
Ala Asn Met Ala Glu Ala Leu Ala Glu Gly Arg Ser Lys Ala Gln Ala
        640                 645                 650
aac agc ctg aaa ggc gtt aaa aag acc agc ttc gcc aaa aaa ctg tcg    2554
Asn Ser Leu Lys Gly Val Lys Lys Thr Ser Phe Ala Lys Lys Leu Ser
    655                 660                 665
gcg gcg cac tac ggt gca gcg tgg cag cag gtg gcg gcc gat gcg ctg    2602
Ala Ala His Tyr Gly Ala Ala Trp Gln Gln Val Ala Ala Asp Ala Leu
670                 675                 680                 685
cgt aaa ggg gat gcc gtg ctg gta gag gcc ggt gat gtg atc ccc tgc    2650
Arg Lys Gly Asp Ala Val Leu Val Glu Ala Gly Asp Val Ile Pro Cys
                690                 695                 700
gac ggt gaa gtc gtg gaa ggg ggc gca tcg gta gac gag agc gcg atc    2698
Asp Gly Glu Val Val Glu Gly Gly Ala Ser Val Asp Glu Ser Ala Ile
            705                 710                 715
acc ggt gaa tcg gca ccg gtg atc cgt gaa tcg ggc ggg gat ttc gcc    2746
Thr Gly Glu Ser Ala Pro Val Ile Arg Glu Ser Gly Gly Asp Phe Ala
        720                 725                 730
tcg gtg acc ggc ggg aca cgc att ctg tct gac tgg ctg gtc att acc    2794
Ser Val Thr Gly Gly Thr Arg Ile Leu Ser Asp Trp Leu Val Ile Thr
    735                 740                 745
tgc agc gcc aac cca ggc gaa acc ttc ctg gac cgg atg atc gcc atg    2842
Cys Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Phe Leu Asp Arg Met Ile Ala Met
750                 755                 760                 765
gtc gaa ggc gca cag cgt cgt aaa acc ccg aat gag att gcc ctg acc    2890
Val Glu Gly Ala Gln Arg Arg Lys Thr Pro Asn Glu Ile Ala Leu Thr
                770                 775                 780
att ctg ctg gtg tcg ctc acc att gtg ttt ctg tta gcc acc gtc acg    2938
Ile Leu Leu Val Ser Leu Thr Ile Val Phe Leu Leu Ala Thr Val Thr
            785                 790                 795
ctg tgg cct ttt tca gcc tgg ggc ggc acg ccg gtc acc atc acc gta    2986
Leu Trp Pro Phe Ser Ala Trp Gly Gly Thr Pro Val Thr Ile Thr Val
        800                 805                 810
ctg gtg gcg ctg ctg gta tgc ctg atc ccg acc acc att ggc ggt ctg    3034
Leu Val Ala Leu Leu Val Cys Leu Ile Pro Thr Thr Ile Gly Gly Leu
    815                 820                 825
ctg tcc gct atc ggc gtg gcc ggg atg agc cgg atg ctg ggc gct aac    3082
Leu Ser Ala Ile Gly Val Ala Gly Met Ser Arg Met Leu Gly Ala Asn
830                 835                 840                 845
gtc att gcc acc agt ggc cgc gct gtt gaa gcc gct ggc gac gtg gat    3130
Val Ile Ala Thr Ser Gly Arg Ala Val Glu Ala Ala Gly Asp Val Asp
                850                 855                 860
gtg ctg atg ctg gat aaa acc ggc acc atc acg ctg ggt aac cgt cag    3178
Val Leu Met Leu Asp Lys Thr Gly Thr Ile Thr Leu Gly Asn Arg Gln
            865                 870                 875
gca acg cag ttt tta ccg gct ccc ggc gtc acg gaa gaa cag ctg gcg    3226
Ala Thr Gln Phe LcuPro A la Pro Gly Val Thr Glu Glu Gln Leu Ala
        880                 885                 890
gat gcg gcg cag ctg gcg tcc ctg gcg gat gaa acg ccg gaa ggg cgc    3274
Asp Ala Ala Gln Leu Ala Ser Leu Ala Asp Glu Thr Pro Glu Gly Arg
    895                 900                 905
agc atc gtg gtg ctg gcg aag caa aag ttt aac ctg cgt gaa cgt gac    3322
Ser Ile Val Val Leu Ala Lys Gln Lys Phe Asn Leu Arg Glu Arg Asp
910                 915                 920                 925
ctg agc agc atg ggc gcc agc ttt att ccc ttc tcg gct caa acc cgt    3370
Leu Ser Ser Met Gly Ala Ser Phe Ile Pro Phe Ser Ala Gln Thr Arg
                930                 935                 940
atg agc ggc gtc aac gta cag gac cgc ctg atc cgt aaa ggt gcg gtc    3418
Met Ser Gly Val Asn Val Gln Asp Arg Leu Ile Arg Lys Gly Ala Val
            945                 950                 955
gat gcg gtg cgc cgt cat att gaa gcc agc cac ggt gcc ttt ccg gct    3466
Asp Ala Val Arg Arg His Ile Glu Ala Ser His Gly Ala Phe Pro Ala
        960                 965                 970
gag gtg aac gcc cgg gtt gaa gag gtg gcg cgg gcc ggt ggc aca ccg    3514
Glu Val Asn Ala Arg Val Glu Glu Val Ala Arg Ala Gly Gly Thr Pro
    975                 980                 985
ctg gtg gtg gcg gaa ggc gca aag gtg ctg ggc  gtg gtg gcg cta aaa   3562
Leu Val Val Ala Glu Gly Ala Lys Val Leu Gly  Val Val Ala Leu Lys
990                 995                 1000                 1005
gat atc gtt aaa ggt  ggc atc aaa gaa cgt  ttt gcg gaa ctg cgc      3607
Asp Ile Val Lys Gly  Gly Ile Lys Glu Arg  Phe Ala Glu Leu Arg
                1010                 1015                 1020
aag atg ggc att aaa  acc gtg atg atc acc  ggt gat aac ccg ctc      3652
Lys Met Gly Ile Lys  Thr Val Met Ile Thr  Gly Asp Asn Pro Leu
                1025                 1030                 1035
acc gcc gcc gcc atc  gcg gca gag gca ggg  gtg gat gac ttt ctg      3697
Thr Ala Ala Ala Ile  Ala Ala Glu Ala Gly  Val Asp Asp Phe Leu
                1040                 1045                 1050
tca gaa gcg acg ccg  gaa gcc aag ctg gca  ctg att cgt cag tat      3742
Ser Glu Ala Thr Pro  Glu Ala Lys Leu Ala  Leu Ile Arg Gln Tyr
                1055                 1060                 1065
cag gcg gag ggg cgc  tta gtc gcg atg acc  ggt gac ggc acc aat      3787
Gln Ala Glu Gly Arg  Leu Val Ala Met Thr  Gly Asp Gly Thr Asn
                1070                 1075                 1080
gac gcg cca gcg ttg  gcc cag gcg gac gtg  gcg gtc gcc atg aac      3832
Asp Ala Pro Ala Leu  Ala Gln Ala Asp Val  Ala Val Ala Met Asn
                1085                 1090                 1095
tcg ggt act cag gcg  gcg aaa gaa gcg ggc  aac atg gtc gat ctg      3877
Ser Gly Thr Gln Ala  Ala Lys Glu Ala Gly  Asn Met Val Asp Leu
                1100                 1105                 1110
gac tcg aac ccc acc  aaa ctg ctg gaa gtg  gtg cac att ggt aag      3922
Asp Ser Asn Pro Thr  Lys Leu Leu Glu Val  Val His Ile Gly Lys
                1115                 1120                 1125
cag atg ctg atg acg  cgc ggt tcc ttg acc  acc ttc agt atc gcc      3967
Gln Met Leu Met Thr  Arg Gly Ser Leu Thr  Thr Phe Ser Ile Ala
                1130                 1135                 1140
aat gac gtt gcc aag  tat ttc gcc atc atc  ccg gcc gcc ttt gct      4012
Asn Asp Val Ala Lys  Tyr Phe Ala Ile Ile  Pro Ala Ala Phe Ala
                1145                 1150                 1155
gca acc tat cca cag  tta aat atg ctc aac  gtg atg cag ctg cac      4057
Ala Thr Tyr Pro Gln  Leu Asn Met Leu Asn  Val Met Gln Leu His
                1160                 1165                 1170
tcg ccc gca tcg gcc  atc ctg tcg gcc gtg  att ttt aac gcc cta      4102
Ser Pro Ala Ser Ala  Ile Leu Ser Ala Val  Ile Phe Asn Ala Leu
                1175                 1180                 1185
gtg att gta ttc ctg  atc cct ctg gcg ctt  aaa ggt gtc agc tat      4147
Val Ile Val Phe Leu  Ile Pro Leu Ala Leu  Lys Gly Val Ser Tyr
                1190                 1195                 1200
cgc ccc ttg agt gcc  gca tcg ctg ttg cgc  cgt aat tta ctg att      4192
Arg Pro Leu Ser Ala  Ala Ser Leu Leu Arg  Arg Asn Leu Leu Ile
                1205                 1210                 1215
tat ggg tta ggt ggg  ctg ctg gtg ccc ttt  gtc ggc atc aaa gcg     4237
Tyr Gly Leu Gly Gly  Leu Leu Val Pro Phe  Val Gly Ile Lys Ala
                1220                 1225                 1230
att gat atg ttg ctc  gtg ctg tct ggt atg  gcc tga ggagattaaa atg  4286
Ile Asp Met Leu Leu  Val Leu Ser Gly Met  Ala                Met
                1235                 1240
agt cag tta  cgt ccg gcg att ttc  ctg ctt ttg ctg cta  acg gtt    4331
Ser Gln Leu  Arg Pro Ala Ile Phe  Leu Leu Leu Leu Leu  Thr Val
        1245                 1250                 1255
gtg tgc ggc  gtc gtt tat cct ttg  ctt acc acg gga ctg  tcg caa    4376
Val Cys Gly  Val Val Tyr Pro Leu  Leu Thr Thr Gly Leu  Ser Gln
        1260                 1265                 1270
ctg ctg ttt  ccc tgg cag gct aac  ggg tca gta ttg aat  gtc gat    4421
Leu Leu Phe  Pro Trp Gln Ala Asn  Gly Ser Val Leu Asn  Val Asp
        1275                 1280                 1285
ggc gaa gaa  cgg gga tca gcg ctg  att ggt cag aat ttt  agc cag    4466
Gly Glu Glu  Arg Gly Ser Ala Leu  Ile Gly Gln Asn Phe  Ser Gln
        1290                 1295                 1300
ccc ggt tat  ttc tgg ggg cgt cct  tct gca acc ggt gat  aag cct    4511
Pro Gly Tyr  Phe Trp Gly Arg Pro  Ser Ala Thr Gly Asp  Lys Pro
        1305                 1310                 1315
tat aat cct  ctg gcc tcc agc ggc  agc aac ctg gcg gcc  agc aac    4556
Tyr Asn Pro  Leu Ala Ser Ser Gly  Ser Asn Leu Ala Ala  Ser Asn
        1320                 1325                 1330
ccg gcg ctg  gat aag gct gta gcc  gag cgc gtg gcg gct  ttg cgc    4601
Pro Ala Leu  Asp Lys Ala Val Ala  Glu Arg Val Ala Ala  Leu Arg
        1335                 1340                 1345
acg gcg aat  ccg cag gct aac ggg  gcg gta ccg gtc gag  ctg gta    4646
Thr Ala Asn  Pro Gln Ala Asn Gly  Ala Val Pro Val Glu  Leu Val
        1350                 1355                 1360
acc acc tcg  gcc agt gga ctg gac  ccg gag att tcg cct  gag gct    4691
Thr Thr Ser  Ala Ser Gly Leu Asp  Pro Glu Ile Ser Pro  Glu Ala
        1365                 1370                 1375
gcg ctg tgg  cag gca ccg cgt atc  gcg gcg gca cgt cag  ctg ccg    4736
Ala Leu Trp  Gln Ala Pro Arg Ile  Ala Ala Ala Arg Gln  Leu Pro
        1380                 1385                 1390
ctg gcg aaa  gtg gat gcc ctg gta  gac agc atg acg cag  cgc ccg    4781
Leu Ala Lys  Val Asp Ala Leu Val  Asp Ser Met Thr Gln  Arg Pro
        1395                 1400                 1405
ctg ctg ccc  ttt atc ggc gaa ccg  act gtc aat gtg ctg  cag ctt    4826
Leu Leu Pro  Phe Ile Gly Glu Pro  Thr Val Asn Val Leu  Gln Leu
        1410                 1415                 1420
aat ctg gcg  ctg aac gac ctc aaa  taa ctgtaaggat gct atg aac cac  4875
Asn Leu Ala  Leu Asn Asp Leu Lys                     Met Asn His
        1425                 1430
gaa ccg  ctg cgc ccc gat ccg  gat gcg ctg ctg cag  acc agc agc    4920
Glu Pro  Leu Arg Pro Asp Pro  Asp Ala Leu Leu Gln  Thr Ser Ser
    1435                 1440                 1445
gac agc  cat cgc ggc aaa ctg  aaa atc tat ttt ggc  gcc tgt gcg    4965
Asp Ser  His Arg Gly Lys Leu  Lys Ile Tyr Phe Gly  Ala Cys Ala
    1450                 1455                 1460
ggc gta  gga aaa acc tat gcc  atg ttg cag gag gcg  cag cgg ctg    5010
Gly Val  Gly Lys Thr Tyr Ala  Met Leu Gln Glu Ala  Gln Arg Leu
    1465                 1470                 1475
cgt gcc  cag ggg ctg gat gtg  ctg gtg ggc gta gtg  gaa acg cac    5055
Arg Ala  Gln Gly Leu Asp Val  Leu Val Gly Val Val  Glu Thr His
    1480                 1485                 1490
gaa cgt  ccg gaa aca gcg cag  ctt ctt aac gga ctg  gtg ctg ttg    5100
Glu Arg  Pro Glu Thr Ala Gln  Leu Leu Asn Gly Leu  Val Leu Leu
    1495                 1500                 1505
ccg cgc  cgg gcg acg ggc cgt  tcg cgg cat gcg gag  ttc gac ctt    5145
Pro Arg  Arg Ala Thr Gly Arg  Ser Arg His Ala Glu  Phe Asp Leu
    1510                 1515                 1520
gat gcc  gcg ctg gcg cgc cat  ccg gca gta att ttg  atg gat gag    5190
Asp Ala  Ala Leu Ala Arg His  Pro Ala Val Ile Leu  Met Asp Glu
    1525                 1530                 1535
ctg gcg  cac acg aac gtg aag  ggc tca cgt cat ccc  aaa cgc tgg    5235
Leu Ala  His Thr Asn Val Lys  Gly Ser Arg His Pro  Lys Arg Trp
    1540                 1545                 1550
cag gat  att gag gaa ctg ctg  gag gcg ggc att gat  gtc ctg acg    5280
Gln Asp  Ile Glu Glu Leu Leu  Glu Ala Gly Ile Asp  Val Leu Thr
    1555                 1560                 1565
aca gtg  aat gtt cag cat ctg  gaa agt ctg aat gat  gtg gtc ggt    5325
Thr Val  Asn Val Gln His Leu  Glu Ser Leu Asn Asp  Val Val Gly
    1570                 1575                 1580
ggc gtc  acc ggc att cag gtg  cgt gaa acc gtt ccc  gat ccc ttt    5370
Gly Val  Thr Gly Ile Gln Val  Arg Glu Thr Val Pro  Asp Pro Phe
    1585                 1590                 1595
ttc gac  gct gcc gat gaa gtg  gta ctg gtt gat ctc  ccg cct gac    5415
Phe Asp  Ala Ala Asp Glu Val  Val Leu Val Asp Leu  pro Pro Asp
    1600                 1605                 1610
gat ctc  cgc cag cgc ctg aaa  gag ggc aag gtc tac  att ggc gat    5460
Asp Leu  Arg Gln Arg Leu Lys  Glu Gly Lys Val Tyr  Ile Gly Asp
    1615                 1620                 1625
cgt gcc  gaa cgc gcc atc gaa  aat ttc ttt cgt aag  ggc aac ctg    5505
Arg Ala  Glu Arg Ala Ile Glu  Asn Phe Phe Arg Lys  Gly Asn Leu
    1630                 1635                 1640
tat gcc  ctg cgt gag ctg gcg  ctg cgc cgc act gcc  gac cgg gtc    5550
Tyr Ala  Leu Arg Glu Leu Ala  Leu Arg Arg Thr Ala  Asp Arg Val
    1645                 1650                 1655
gat gac  cag atg cgc gcc tgg  cgc gac agt caa ggc  cgc gat cgg    5595
Asp Asp  Gln Met Arg Ala Trp  Arg Asp Ser Gln Gly  Arg Asp Arg
    1660                 1665                 1670
gtc tgg  cac acg cgt gat gcc  att tta ttg tgt att  ggg gac gat    5640
Val Trp  His Thr Arg Asp Ala  Ile Leu Leu Cys Ile  Gly Asp Asp
    1675                 1680                 1685
acc ggc  agt gaa aaa ctg gtg  cgg acg gcg gcg cgg  ctg gcc gcc    5685
Thr Gly  Ser Glu Lys Leu Val  Arg Thr Ala Ala Arg  Leu Ala Ala
    1690                 1695                 1700
agg ctg  ggc agc gaa tgg cat  gcc gtt tac gtg gaa  acg ccc cgg    5730
Arg Leu  Gly Ser Glu Trp His  Ala Val Tyr Val Glu  Thr Pro Arg
    1705                 1710                 1715
ctt aac  cgg cta ccg gaa gcg  cgg cgt cgg gcc att  tta cgc acg    5775
Leu Asn  Arg Leu Pro Glu Ala  Arg Arg Arg Ala Ile  Leu Arg Thr
    1720                 1725                 1730
ctg aag  ctg gcg cag gat atg  ggg gcg gag acg gcg  acg ctg tcc    5820
Leu Lys  Leu Ala Gln Asp Met  Gly Ala Glu Thr Ala  Thr Leu Ser
    1735                 1740                 1745
gac cct  gat gag gcg cag gcg  gtc ctg cgt tac gcg  cgg gaa cat    5865
Asp Pro  Asp Glu Ala Gln Ala  Val Leu Arg Tyr Ala  Arg Glu His
    1750                 1755                 1760
aat ctg  ggt aag att gtg aca  ggc cga cgc ccg gcg  cgc cgc tgg    5910
Asn Leu  Gly Lys Ile Val Thr  Gly Arg Arg Pro Ala  Arg Arg Trp
    1765                 1770                 1775
cgg cgt  gac agc ttt gcc gag  cgg ctg ggg cag ttg  ggt ccc gat    5955
Arg Arg  Asp Ser Phe Ala Glu  Arg Leu Gly Gln Leu  Gly Pro Asp
    1780                 1785                 1790
ctg gat  ctg ttg gtc gtg gcg  ctc aat gag cct atc  cag gat gcg    6000
Leu Asp  Leu Leu Val Val Ala  Leu Asn Glu Pro Ile  Gln Asp Ala
    1795                 1800                 1805
ccc cat  ccg tta gcc gag gat  cgg gtt aac agc gac  aaa tgg cgg    6045
Pro His  Pro Leu Ala Glu Asp  Arg Val Asn Ser Asp  Lys Trp Arg
    1810                 1815                 1820
ctg cag  ctg cgc ggc gtc ctg  atg gcg ctg gtg ctg  tgt att gtg    6090
Leu Gln  Leu Arg Gly Val Leu  Met Ala Leu Val Leu  Cys Ile Val
    1825                 1830                 1835
gtc acc  gcc gca ggg cag tcg  gtg ctg atc agc ttc  gat ccg gcc    6135
Val Thr  Ala Ala Gly Gln Ser  Val Leu Ile Ser Phe  Asp Pro Ala
    1840                 1845                 1850
aac tgt  gtg atg atc tat tta  ctg gcg gtg gtg atc  gtc gcg ttg    6180
Asn Cys  Val Met Ile Tyr Leu  Leu Ala Val Val Ile  Val Ala Leu
    1855                 1860                 1865
cgc tat  gga cga tgg ccc tcc  gtt atc gcc acc gtc  atg aac atc    6225
Arg Tyr  Gly Arg Trp Pro Ser  Val Ile Ala Thr Val  Met Asn Ile
    1870                 1875                 1880
att gcc  ttt gac ctg ttt ttc  gtc gca cct acc ggc  acg gtc gcg    6270
Ile Ala  Phe Asp Leu Phe Phe  Val Ala Pro Thr Gly  Thr Val Ala
    1885                 1890                 1895
gtc tcg  gat ttg caa tac ctg  gtg acc ttt ggg gtg  atg ctg gcg    6315
Val Ser  Asp Leu Gln Tyr Leu  Val Thr Phe Gly Val  Met Leu Ala
    1900                 1905                 1910
gtc ggg  gtc att gtt ggc aac  ctg acg gcc ggc gtt  cgc tac cag    6360
Val Gly  Val Ile Val Gly Asn  Leu Thr Ala Gly Val  Arg Tyr Gln
    1915                 1920                 1925
gcg cgg  gtt gcc cgc tac cgg  gag cag cgc acg cgg  cag ctt tac    6405
Ala Arg  Val Ala Arg Tyr Arg  Glu Gln Arg Thr Arg  Gln Leu Tyr
    1930                 1935                 1940
gaa atg  gcc aag tcg ctg gga  agc ggc ctg acg cct  gaa gat atc    6450
Glu Met  Ala Lys Ser Leu Gly  Ser Gly Leu Thr Pro  Glu Asp Ile
    1945                 1950                 1955
gcc gcg  acc agc cag cgg gtg  ttg gag gcg acc tta  cag gcg cga    6495
Ala Ala  Thr Ser Gln Arg Val  Leu Glu Ala Thr Leu  Gln Ala Arg
    1960                 1965                 1970
tgc ctg  ctg ctg cta ccc gat  gag cag ggc gaa ctg  cac acg ctg    6540
Cys Leu  Leu Leu Leu Pro Asp  Glu Gln Gly Glu Leu  His Thr Leu
    1975                 1980                 1985
ggc aac  gcg ctg ccg ggc aac  gaa ccg gat tgg gct  atc gcg aaa    6585
Gly Asn  Ala Leu Pro Gly Asn  Glu Pro Asp Trp Ala  Ile Ala Lys
    1990                 1995                 2000
tgg agc  ttc agc aag ggc cag  cca gca ggc gca ggc  acg gac acc    6630
Trp Ser  Phe Ser Lys Gly Gln  Pro Ala Gly Ala Gly  Thr Asp Thr
    2005                 2010                 2015
tta ccg  gcg gtg ccc tat cag  att ctg ccg ctg aaa  gtg ggc gat    6675
Leu Pro  Ala Val Pro Tyr Gln  Ile Leu Pro Leu Lys  Val Gly Asp
    2020                 2025                 2030
ctg tgt  cgc gga ttg ctg gtg  gtt gaa ccg cag aat  gtg cgt cag    6720
Leu Cys  Arg Gly Leu Leu Val  Val Glu Pro Gln Asn  Val Arg Gln
    2035                 2040                 2045
ctg atg  gtg ccg gaa cag caa  cgg ctg ctg gaa acc  ttc acc gtg    6765
Leu Met  Val Pro Glu Gln Gln  Arg Leu Leu Glu Thr  Phe Thr Val
    2050                 2055                 2060
ctg att  gcc aat gcc ctg gag  cgg atg gcg ctg tcc  cag agt gag    6810
Leu Ile  Ala Asn Ala Leu Glu  Arg Met Ala Leu Ser  Gln Ser Glu
    2065                 2070                 2075
gcg gct  tcc cgg ctg tca gct  gaa cgt gag cag ctg  cgt aat gct    6855
Ala Ala  Ser Arg Leu Ser Ala  Glu Arg Glu Gln Leu  Arg Asn Ala
    2080                 2085                 2090
ttg ctg  tcg gcg Gtc tcc cat  gat tta cgt acc ccg  ctg acg gtg    6900
Leu Leu  Ser Ala Leu Ser His  Asp Leu Arg Thr Pro  Leu Thr Val
    2095                 2100                 2105
ctg ttt  ggt cag gca gaa atg  ctg atg ctg gac ctg  gcc agc gat    6945
Leu Phe  Gly Gln Ala Glu Met  Leu Met Leu Asp Leu  Ala Ser Asp
    2110                 2115                 2120
aac tca  aag tat gtg ccc cag  gcc agc cag att cgt  gaa caa acc    6990
Asn Ser  Lys Tyr Val Pro Gln  Ala Ser Gln Ile Arg  Glu Gln Thr
    2125                 2130                 2135
ctg agt  acc att cgt ctg gtc  agc aac atg ctg gat  atg gcg cgt    7035
Leu Ser  Thr Ile Arg Leu Val  Ser Asn Met Leu Asp  Met Ala Arg
    2140                 2145                 2150
att cag  tca ggc ggc ctg aat  tta cgc gaa gag tgg  ctg gcg ctg    7080
Ile Gln  Ser Gly Gly Leu Asn  Leu Arg Glu Glu Trp  Leu Ala Leu
    2155                 2160                 2165
gaa gag  gtg att ggt ggc gcg  ctc agt agc atg gcg  ccg tcg ctc    7125
Glu Glu  Val Ile Gly Gly Ala  Leu Ser Ser Met Ala  Pro Ser Leu
    2170                 2175                 2180
aag gga  aga gag gtc gaa ctc  gat ctg cct gaa gat  att gtc ctg    7170
Lys Gly  Arg Glu Val Glu Leu  Asp Leu Pro Glu Asp  Ile Val Leu
    2185                 2190                 2195
atc aaa  ggc gac agt acg ttg  ctg gag cgg gta ttt  acc aac ctg    7215
Ile Lys  Gly Asp Ser Thr Leu  Leu Glu Arg Val Phe  Thr Asn Leu
    2200                 2205                 2210
att gaa  aac agc ctg aag tac  gct ggc aac tgt gcg  ccc cgc ggc    7260
Ile Glu  Asn Ser Leu Lys Tyr  Ala Gly Asn Cys Ala  Pro Arg Gly
    2215                 2220                 2225
ata cgt  gcc tgg tgt gaa aat  acc cgg ctg gaa atc  gcc atc tgg    7305
Ile Arg  Ala Trp Cys Glu Asn  Thr Arg Leu Glu Ile  Ala Ile Trp
    2230                 2235                 2240
gac ggc  ggg ccg ggc atc gcc  caa aac gac ctg acg  cgg att ttc    7350
Asp Gly  Gly Pro Gly Ile Ala  Gln Asn Asp Leu Thr  Arg Ile Phe
    2245                 2250                 2255
gac aaa  ttt tca cgc ggt gat  aaa gaa tcg gcc gta  ccg ggc gtt    7395
Asp Lys  Phe Ser Arg Gly Asp  Lys Glu Ser Ala Val  Pro Gly Val
    2260                 2265                 2270
ggg ctg  gga ctg gcg att tgt  aaa acg att atc gaa  agc cac ggc    7440
Gly Leu  Gly Leu Ala Ile Cys  Lys Thr Ile Ile Glu  Ser His Gly
    2275                 2280                 2285
ggt cag atc tgg gcg gaa aat cgt gct gaa ggc ggt gcc tgc ttt    7485
Gly Gln Ile Trp Ala Glu Asn Arg Ala Glu Gly Gly Ala Cys Phe
    2290                2295                2300
cgt ctc tct tta cca ctt cca ccc gtt cct gaa att tct cct gaa    7530
Arg Leu Ser Leu Pro Leu Pro Pro Val Pro Glu Ile Ser Pro Glu
    2305                2310                2315
ggc ttg aaa taa cttcacagat gatcggttat aatgcgcgac cttactgatt    7582
Gly Leu  Lys
    2320
atgattggga aattatggaa cgttttaccg aaaacctg                      7620
<210>8
<211>560
<212>PRT
<213>Pantoeaananatis
<400>8
Met Ala Ala Asn Ala Phe Leu Leu Ile Ala Val Tyr Leu Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
Met Val Met Ala Gln Pro Leu Gly Arg Gly Leu Ala Ala Leu Val Ala
            20                  25                  30
Asp Lys Pro Leu Phe Ala Arg Ala Glu Ala Leu Leu Trp Arg Phe Ser
        35                  40                  45
Gly Val Gln Glu Gly Gly Met Arg Trp Gln His Tyr Leu Leu Ala Ile
    50                  55                  60
Leu Val Phe Asn Leu Leu Gly Phe Val Val Leu Leu Ala Ile Leu Met
65                  70                  75                  80
Phe Gln Gly Ala Leu Pro Leu Asn Pro Gln His Leu Pro Gly Leu Ser
                85                  90                  95
Trp Asp Leu Ala Leu Asn Thr Ala Ile Ser Phe Val Thr Asn Thr Asn
            100                 105                 110
Trp Gln Ser Tyr Ala Gly Glu Ser Thr Leu Ser Tyr Phe Ser Gln Met
        115                 120                 125
Val Gly Leu Thr Val Gln Asn Phe Val Ser Ala Ala Thr Gly Ile Ala
    130                 135                 140
Val Ala Phe Ala Leu Ile Arg Gly Phe Ala Asn Arg Ser Val Ala Thr
145                 150                 155                 160
Leu Gly Asn Ala Trp Arg Asp Leu Thr Arg Ile Thr Leu Tyr Val Leu
                165                 170                 175
Leu Pro Ile Ser Leu Leu Met Ala Leu Phe Phe Val Ser Gln Gly Ser
            180                 185                 190
Ile Gln Asn Phe Leu Pro Tyr His Asn Val Thr Ser Leu Glu Gly Ala
        195                 200                 205
Gln Gln Thr Leu Ala Met Gly Pro Val Ala Ser Gln Glu Ala Ile Lys
    210                 215                 220
Met Leu Gly Thr Asn Gly Gly Gly Phe Phe Asn Val Asn Ser Ala His
225                 230                 235                 240
Pro Phe Glu Asn Pro Thr Ala Leu Ser Asn Phe Val Gln Met Leu Ser
                245                 250                 255
Ile Phe Leu Ile Pro Ala Ala Leu Cys Phe Ala Phe Gly Glu Ser Val
            260                 265                 270
Lys Asp Arg Arg Gln Gly Ser Met Leu Leu Trp Ser Met Thr Leu Met
        275                 280                 285
Phe Val Val Ala Ala Ala Leu Val Met Trp Ala Glu Leu Arg Gly Asn
    290                 295                 300
Pro His Phe Leu Thr Leu Gly Ala Asp Ser Ala Ile Asn Met Glu Gly
305                 310                 315                 320
Lys Glu Thr Arg Phe Gly Ile Leu Asn Ser Ser Leu Phe Ala Val Ile
                325                 330                 335
Thr Thr Ala Ala Ser Cys Gly Ala Val Asn Ala Met His Asp Ser Phe
            340                 345                 350
Thr Ala Leu Gly Gly Met Val Pro Met Leu Leu Met Gln Leu Gly Glu
        355                 360                 365
Val Val Phe Gly Gly Val Gly Ala Gly Leu Tyr Gly Met Leu Leu Phe
    370                 375                 380
Val Leu Leu Ala Val Phe Ile Ala Gly Leu Met Ile Gly Arg Thr Pro
385                 390                 395                 400
Glu Phe Leu Gly Lys Lys Ile Asp Val Trp Glu Met Lys Met Thr Ala
                405                 410                 415
Leu Ala Ile Leu Val Thr Pro Ala Leu Val Leu Ile Gly Thr Ala Ile
            420                 425                 430
Ala Met Met Thr Asp Ala Gly Arg Ala Gly Met Ala Asn Pro Gly Thr
        435                 440                 445
His Gly Phe Ser Glu Val Leu Tyr Ala Val Ser Ser Ala Ala Asn Asn
    450                 455                 460
Asn Gly Ser Ala Phe Ala Gly Leu Asn Ala Asn Thr Pro Phe Trp Asn
465                 470                 475                 480
Leu Leu Leu Ala Val Cys Met Phe Val Gly Arg Phe Gly Ile Ile Ile
                485                 490                 495
Pro Val Met Ala Ile Ala Gly Ala Met Ala Val Lys Lys Val Gln Pro
            500                 505                 510
Val Gly Asn Gly Thr Leu Pro Thr His Gly Pro Leu Phe Ile Ala Leu
        515                 520                 525
Leu Val Gly Thr Val Leu Leu Val Gly Ala Leu Thr Phe Ile Pro Ala
    530                 535                 540
Leu Ala Leu Gly Pro Val Ala Glu His Leu Gln Leu Ile Gln Gly Gln
545                 550                 555                 560
<210>9
<211>681
<212>PRT
<213>Pantoea ananatis
<400>9
Met Ser Arg Gln Gln Gln Val Phe Asp Ala Ala Leu Leu Arg Thr Ser
1               5                   10                  15
Ala Ile Asp Ala Val Lys Lys Leu Asp Pro Arg Val Gln Phe Arg Asn
            20                  25                  30
Pro Val Met Phe Val Val Tyr Leu Gly Ser Ile Leu Thr Ser Ile Leu
        35                  40                  45
Ala Ile Met Met Phe Thr Gly His Gln Ser Gly Ser Ala Ser Phe Thr
    50                  55                  60
Gly Ala Ile Ala Leu Trp Leu Trp Phe Thr Val Leu Phe Ala Asn Met
65                  70                  75                  80
Ala Glu Ala Leu Ala Glu Gly Arg Ser Lys Ala Gln Ala Asn Ser Leu
                85                  90                  95
Lys Gly Val Lys Lys Thr Ser Phe Ala Lys Lys Leu Ser Ala Ala His
            100                 105                 110
Tyr Gly Ala Ala Trp Gln Gln Val Ala Ala Asp Ala Leu Arg Lys Gly
        115                 120                 125
Asp Ala Val Leu Val Glu Ala Gly Asp Val Ile Pro Cys Asp Gly Glu
    130                 135                 140
Val Val Glu Gly Gly Ala Ser Val Asp Glu Ser Ala Ile Thr Gly Glu
145                 150                 155                 160
Ser Ala Pro Val Ile Arg Glu Ser Gly Gly Asp Phe Ala Ser Val Thr
                165                 170                 175
Gly Gly Thr Arg Ile Leu Ser Asp Trp Leu Val Ile Thr Cys Ser Ala
            180                 185                 190
Asn Pro Gly Glu Thr Phe Leu Asp Arg Met Ile Ala Met Val Glu Gly
        195                 200                 205
Ala Gln Arg Arg Lys Thr Pro Asn Glu Ile Ala Leu Thr Ile Leu Leu
    210                 215                 220
Val Ser Leu Thr Ile Val Phe Leu Leu Ala Thr Val Thr Leu Trp Pro
225                 230                 235                 240
Phe Ser Ala Trp Gly Gly Thr Pro Val Thr Ile Thr Val Leu Val Ala
                245                 250                 255
Leu Leu Val Cys Leu Ile Pro Thr Thr Ile Gly Gly Leu Leu Ser Ala
            260                 265                 270
Ile Gly Val Ala Gly Met Ser Arg Met Leu Gly Ala Asn Val Ile Ala
        275                 280                 285
Thr Ser Gly Arg Ala Val Glu Ala Ala Gly Asp Val Asp Val Leu Met
    290                 295                 300
Leu Asp Lys Thr Gly Thr Ile Thr Leu Gly Asn Arg Gln Ala Thr Gln
305                 310                 315                 320
Phe Leu Pro Ala Pro Gly Val Thr Glu Glu Gln Leu Ala Asp Ala Ala
                325                 330                 335
Gln Leu Ala Ser Leu Ala Asp Glu Thr Pro Glu Gly Arg Ser Ile Val
            340                 345                 350
Val Leu Ala Lys Gln Lys Phe Asn Leu Arg Glu Arg Asp Leu Ser Ser
        355                 360                 365
Met Gly Ala Ser Phe Ile Pro Phe Ser Ala Gln Thr Arg Met Ser Gly
    370                 375                 380
Val Asn Val Gln Asp Arg Leu Ile Arg Lys Gly Ala Val Asp Ala Val
385                 390                 395                 400
Arg Arg His Ile Glu Ala Ser His Gly Ala Phe Pro Ala Glu Val Asn
                405                 410                 415
Ala Arg Val Glu Glu Val Ala Arg Ala Gly Gly Thr Pro Leu Val Val
            420                 425                 430
Ala Glu Gly Ala Lys Val Leu Gly Val Val Ala Leu Lys Asp Ile Val
        435                 440                 445
Lys Gly Gly Ile Lys Glu Arg Phe Ala Glu Leu Arg Lys Met Gly Ile
    450                 455                 460
Lys Thr Val Met Ile Thr Gly Asp Asn Pro Leu Thr Ala Ala Ala Ile
465                 470                 475                 480
Ala Ala Glu Ala Gly Val Asp Asp Phe Leu Ser Glu Ala Thr Pro Glu
                485                 490                 495
Ala Lys Leu Ala Leu Ile Arg Gln Tyr Gln Ala Glu Gly Arg Leu Val
            500                 505                 510
Ala Met Thr Gly Asp Gly Thr Asn Asp Ala Pro Ala Leu Ala Gln Ala
        515                 520                 525
Asp Val Ala Val Ala Met Asn Ser Gly Thr Gln Ala Ala Lys Glu Ala
    530                 535                 540
Gly Asn Met Val Asp Leu Asp Ser Asn Pro Thr Lys Leu Leu Glu Val
545                 550                 555                 560
Val His Ile Gly Lys Gln Met Leu Met Thr Arg Gly Ser Leu Thr Thr
                565                 570                 575
Phe Ser Ile Ala Asn Asp Val Ala Lys Tyr Phe Ala Ile Ile Pro Ala
            580                 585                 590
Ala Phe Ala Ala Thr Tyr Pro Gln Leu Asn Met Leu Asn Val Met Gln
        595                 600                 605
Leu His Ser Pro Ala Ser Ala Ile Leu Ser Ala Val Ile Phe Asn Ala
    610                 615                 620
Leu Val Ile Val Phe Leu Ile Pro Leu Ala Leu Lys Gly Val Ser Tyr
625                 630                 635                 640
Arg Pro Leu Ser Ala Ala Ser Leu Leu Arg Arg Asn Leu Leu Ile Tyr
                645                 650                 655
Gly Leu Gly Gly Leu Leu Val Pro Phe Val Gly Ile Lys Ala Ile Asp
            660                 665                 670
Met Leu Leu Val Leu Ser Gly Met Ala
        675                 680
<210>10
<211>189
<212>PRT
<213>Pantoea ananatis
<400>10
Met Ser Gln Leu Arg Pro Ala Ile Phe Leu Leu Leu Leu Leu Thr Val
1               5                   10                  15
Val Cys Gly Val Val Tyr Pro Leu Leu Thr Thr Gly Leu Ser Gln Leu
            20                  25                  30
Leu Phe Pro Trp Gln Ala Asn Gly Ser Val Leu Asn Val Asp Gly Glu
        35                  40                  45
Glu Arg Gly Ser Ala Leu Ile Gly Gln Asn Phe Ser Gln Pro Gly Tyr
    50                  55                  60
Phe Trp Gly Arg Pro Ser Ala Thr Gly Asp Lys Pro Tyr Asn Pro Leu
65                  70                  75                  80
Ala Ser Ser Gly Ser Asn Leu Ala Ala Ser Asn Pro Ala Leu Asp Lys
                85                  90                  95
Ala Val Ala Glu Arg Val Ala Ala Leu Arg Thr Ala Asn Pro Gln Ala
            100                 105                 110
Asn Gly Ala Val Pro Val Glu Leu Val Thr Thr Ser Ala Ser Gly Leu
        115                 120                 125
Asp Pro Glu Ile Ser Pro Glu Ala Ala Leu Trp Gln Ala Pro Arg Ile
    130                 135                 140
Ala Ala Ala Arg Gln Leu Pro Leu Ala Lys Val Asp Ala Leu Val Asp
145                 150                 155                 160
Ser Met Thr Gln Arg Pro Leu Leu Pro Phe Ile Gly Glu Pro Thr Val
                165                 170                 175
Asn Val Leu Gln Leu Asn Leu Ala Leu Asn Asp Leu Lys
            180                 185
<210>11
<211>891
<212>PRT
<213>Pantoea ananatis
<400>11
Met Asn His Glu Pro Leu Arg Pro Asp Pro Asp Ala Leu Leu Gln Thr
1               5                   10                  15
Ser Ser Asp Ser His Arg Gly Lys Leu Lys Ile Tyr Phe Gly Ala Cys
            20                  25                  30
Ala Gly Val Gly Lys Thr Tyr Ala Met Leu Gln Glu Ala Gln Arg Leu
        35                  40                  45
Arg Ala Gln Gly Leu Asp Val Leu Val Gly Val Val Glu Thr His Glu
    50                  55                  60
Arg Pro Glu Thr Ala Gln Leu Leu Asn Gly Leu Val Leu Leu Pro Arg
65                  70                  75                  80
Arg Ala Thr Gly Arg Ser Arg His Ala Glu Phe Asp Leu Asp Ala Ala
                85                  90                  95
Leu Ala Arg His Pro Ala Val Ile Leu Met Asp Glu Leu Ala His Thr
            100                 105                 110
Asn Val Lys Gly Ser Arg His Pro Lys Arg Trp Gln Asp Ile Glu Glu
        115                 120                 125
Leu Leu Glu Ala Gly Ile Asp Val Leu Thr Thr Val Asn Val Gln His
    130                 135                 140
Leu Glu Ser Leu Asn Asp Val Val Gly Gly Val Thr Gly Ile Gln Val
145                 150                 155                 160
Arg Glu Thr Val Pro Asp Pro Phe Phe Asp Ala Ala Asp Glu Val Val
                165                 170                 175
Leu Val Asp Leu Pro Pro Asp Asp Leu Arg Gln Arg Leu Lys Glu Gly
            180                 185                 190
Lys Val Tyr Ile Gly Asp Arg Ala Glu Arg Ala Ile Glu Asn Phe Phe
        195                 200                 205
Arg Lys Gly Asn Leu Tyr Ala Leu Arg Glu Leu Ala Leu Arg Arg Thr
    210                 215                 220
Ala Asp Arg Val Asp Asp Gln Met Arg Ala Trp Arg Asp Ser Gln Gly
225                 230                 235                 240
Arg Asp Arg Val Trp His Thr Arg Asp Ala Ile Leu Leu Cys Ile Gly
                245                 250                 255
Asp Asp Thr Gly Ser Glu Lys Leu Val Arg Thr Ala Ala Arg Leu Ala
            260                 265                 270
Ala Arg Leu Gly Ser Glu Trp His Ala Val Tyr Val Glu Thr Pro Arg
        275                 280                 285
Leu Asn Arg Leu Pro Glu Ala Arg Arg Arg Ala Ile Leu Arg Thr Leu
    290                 295                 300
Lys Leu Ala Gln Asp Met Gly Ala Glu Thr Ala Thr Leu Ser Asp Pro
305                 310                 315                 320
Asp Glu Ala Gln Ala Val Leu Arg Tyr Ala Arg Glu His Asn Leu Gly
                325                 330                 335
Lys Ile Val Thr Gly Arg Arg Pro Ala Arg Arg Trp Arg Arg Asp Ser
            340                 345                 350
Phe Ala Glu Arg Leu Gly Gln Leu Gly Pro Asp Leu Asp Leu Leu Val
        355                 360                 365
Val Ala Leu Asn Glu Pro Ile Gln Asp Ala Pro His Pro Leu Ala Glu
    370                 375                 380
Asp Arg Val Asn Ser Asp Lys Trp Arg Leu Gln Leu Arg Gly Val Leu
385                 390                 395                 400
Met Ala Leu Val Leu Cys Ile Val Val Thr Ala Ala Gly Gln Ser Val
                405                 410                 415
Leu Ile Ser Phe Asp Pro Ala Asn Cys Val Met Ile Tyr Leu Leu Ala
            420                 425                 430
Val Val Ile Val Ala Leu Arg Tyr Gly Arg Trp Pro Ser Val Ile Ala
        435                 440                 445
Thr Val Met Asn Ile Ile Ala Phe Asp Leu Phe Phe Val Ala Pro Thr
    450                 455                 460
Gly Thr Val Ala Val Ser Asp Leu Gln Tyr Leu Val Thr Phe Gly Val
465                 470                 475                 480
Met Leu Ala Val Gly Val Ile Val Gly Asn Leu Thr Ala Gly Val Arg
                485                 490                 495
Tyr Gln Ala Arg yal Ala Arg Tyr Arg Glu Gln Arg Thr Arg Gln Leu
            500                 505                 510
Tyr Glu Met Ala Lys Ser Leu Gly Ser Gly Leu Thr Pro Glu Asp Ile
        515                 520                 525
Ala Ala Thr Ser Gln Arg Val Leu Glu Ala Thr Leu Gln Ala Arg Cys
    530                 535                 540
Leu Leu Leu Leu Pro Asp Glu Gln Gly Glu Leu His Thr Leu Gly Asn
545                 550                 555                 560
Ala Leu Pro Gly Asn Glu Pro Asp Trp Ala Ile Ala Lys Trp Ser Phe
                565                 570                 575
Ser Lys Gly Gln Pro Ala Gly Ala Gly Thr Asp Thr Leu Pro Ala Val
            580                 585                 590
Pro Tyr Gln Ile Leu Pro Leu Lys Val Gly Asp Leu Cys Arg Gly Leu
        595                 600                 605
Leu Val Val Glu Pro Gln Asn Val Arg Gln Leu Met Val Pro Glu Gln
    610                 615                 620
Gln Arg Leu Leu Glu Thr Phe Thr Val Leu Ile Ala Asn Ala Leu Glu
625                 630                 635                 640
Arg Met Ala Leu Ser Gln Ser Glu Ala Ala Ser Arg Leu Ser Ala Glu
                645                 650                 655
Arg Glu Gln Leu Arg Asn Ala Leu Leu Ser Ala Leu Ser His Asp Leu
            660                 665                 670
Arg Thr Pro Leu Thr Val Leu Phe Gly Gln Ala Glu Met Leu Met Leu
        675                 680                 685
Asp Leu Ala Ser Asp Asn Ser Lys Tyr Val Pro Gln Ala Ser Gln Ile
    690                 695                 700
Arg Glu Gln Thr Leu Ser Thr Ile Arg Leu Val Ser Asn Met Leu Asp
705                 710                 715                 720
Met Ala Arg Ile Gln Ser Gly Gly Leu Asn Leu Arg Glu Glu Trp Leu
                725                 730                 735
Ala Leu Glu Glu Val Ile Gly Gly Ala Leu Ser Ser Met Ala Pro Ser
            740                 745                 750
Leu Lys Gly Arg Glu Val Glu Leu Asp Leu Pro Glu Asp Ile Val Leu
        755                 760                 765
Ile Lys Gly Asp Ser Thr Leu Leu Glu Arg Val Phe Thr Asn Leu Ile
    770                 775                 780
Glu Asn Ser Leu Lys Tyr Ala Gly Asn Cys Ala Pro Arg Gly Ile Arg
785                 790                 795                 800
Ala Trp Cys Glu Asn Thr Arg Leu Glu Ile Ala Ile Trp Asp Gly Gly
                805                 810                 815
Pro Gly Ile Ala Gln Asn Asp Leu Thr Arg Ile Phe Asp Lys Phe Ser
            820                 825                 830
Arg Gly Asp Lys Glu Ser Ala Val Pro Gly Val Gly Leu Gly Leu Ala
        835                 840                 845
Ile Cys Lys Thr Ile Ile Glu Ser His Gly Gly Gln Ile Trp Ala Glu
    850                 855                 860
Asn Arg Ala Glu Gly Gly Ala Cys Phe Arg Leu Ser Leu Pro Leu Pro
865                 870                 875                 880
Pro Val Pro Glu Ile Ser Pro Glu Gly Leu Lys
                885                 890
<210>12
<211>1215
<212>DNA
<213>Pantoea ananatis
<220>
<221>CDS
<222>(301)..(975)
<400>12
gcgtacggcg caaaatgatt ttatgacgag aataagtccg gtacatggat tcctcctgac     60
gaaaagtcgg ttaaatgtga tctgcatcca atattacgcc tgattgtgta attttactac    120
tcatctgacc actaaatttg acgctttttt gtactgttaa tgacaatctg aaaattagtt    180
acattttggt taaataatgg ttttgacgat gatctttagc gcgattcgat ggcaacacgg    240
acgaaaggct gaaaagttga tacagtgtat tttccctttt caggcaatgg caggattggc    300
gtg acc acg gtt tta atc att gaa gat gag aaa gaa att cgc cgc ttc      348
Val Thr Thr Val Leu Ile Ile Glu Asp Glu Lys Glu Ile Arg Arg Phe
1               5                   10                  15
gtg cgc atc gcg ttg gaa agc gaa ggc ctg aag gtt ttc gat gcc gaa      396
Val Arg Ile Ala Leu Glu Ser Glu Gly Leu Lys Val Phe Asp Ala Glu
            20                  25                  30
acg cta caa cgt ggg ttg att gag gcg gcg acg cga aaa ccc gat ctg      444
Thr Leu Gln Arg Gly Leu Ile Glu Ala Ala ThT Arg Lys Pro Asp Leu
        35                  40                  45
gtc att ctc gat ctc ggc ctg ccc gat ggc gat ggc aaa acc ttt att      492
Val Ile Leu Asp Leu Gly Leu Pro Asp Gly Asp Gly Lys Thr Phe Ile
    50                  55                  60
ggc gag ctg cgt cag tgg agc acg ctg ccc gtg att gtg ctg tcg gcc    540
Gly Glu Leu Arg Gln Trp Ser Thr Leu Pro Val Ile Val Leu Ser Ala
65                  70                  75                  80
cga atc gac gaa cag gat aaa att gac gcg ctg gat gca ggg gcc gac    588
Arg Ile Asp Glu Gln Asp Lys Ile Asp Ala Leu Asp Ala Gly Ala Asp
                85                  90                  95
gat tac ctg acg aaa ccc ttc ggt att ggt gaa ctg ctg gca cgc gtt    636
Asp Tyr Leu Thr Lys Pro Phe Gly Ile Gly Glu Leu Leu Ala Arg Val
            100                 105                 110
cgc gtc gcc ttg cgc cgt cat gcc gga caa cat acc gat ccc aag gtc    684
Arg Val Ala Leu Arg Arg His Ala Gly Gln His Thr Asp Pro Lys Val
        115                 120                 125
agc ttc gcc gac gtt acc gtg gat att gcg gcc cgc aga gtg ctg cgc    732
Ser Phe Ala Asp Val Thr Val Asp Ile Ala Ala Arg Arg Val Leu Arg
    130                 135                 140
gct ggc gag gaa gtg cac ctt acg ccg ata gag ttt cgt ttg ctg acg    780
Ala Gly Glu Glu Val His Leu Thr Pro Ile Glu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
acg ctg ctg aac aac gcg ggc aaa gtg ctg acc cag cgg cag ctg ttg    828
Thr Leu Leu Asn Asn Ala Gly Lys Val Leu Thr Gln Arg Gln Leu Leu
                165                 170                 175
agc cag gtg tgg gga cca aac gcc gtt gaa cac agc cac tat ctg cgg    876
Ser Gln Val Trp Gly Pro Asn Ala Val Glu His Ser His Tyr Leu Arg
            180                 185                 190
atc tat atg ggg cac ctg cgg caa aag ctg gag gcg aat cct acc cag    924
Ile Tyr Met Gly His Leu Arg Gln Lys Leu Glu Ala Asn Pro Thr Gln
        195                 200                 205
ccg gta cat ctg ctc acg gaa acc ggc atc ggc tac cgg ttt atg cca    972
Pro Val His Leu Leu Thr Glu Thr Gly Ile Gly Tyr Arg Phe Met Pro
    210                 215                 220
taa aaaaagcgcc acttaggcgc ttttttcatt taacaggcaa atcaggcgtt           1025
tttcagcact tcgctgacaa tctctaccgc ttctttttct atctgcgcgc ggtgttctgc    1085
gcccaggaaa ctttcacaat agattttgta tgcatcttcg gtgcctgaag gacgggccgc    1145
aaaccagccg ttttccgtca tcactttcag gccgccgata gacgcgccat tgcccggcgc    1205
agcggtcaga                                                           1215
<210>13
<211>224
<212>PRT
<213>Pantoea ananatis
<400>13
Val Thr Thr Val Leu Ile Ile Glu Asp Glu Lys Glu Ile Arg Arg Phe
1               5                   10                  15
Val Arg Ile Ala Leu Glu Ser Glu Gly Leu Lys Val Phe Asp Ala Glu
            20                  25                  30
Thr Leu Gln Arg Gly Leu Ile Glu Ala Ala Thr Arg Lys Pro Asp Leu
        35                  40                  45
Val Ile Leu Asp Leu Gly Leu Pro Asp Gly Asp Gly Lys Thr Phe Ile
    50                  55                  60
Gly Glu Leu Arg Gln Trp Ser Thr Leu Pro Val Ile Val Leu Ser Ala
65                  70                  75                  80
Arg Ile Asp Glu Gln Asp Lys Ile Asp Ala Leu Asp Ala Gly Ala Asp
                85                  90                  95
Asp Tyr Leu Thr Lys Pro Phe Gly Ile Gly Glu Leu Leu Ala Arg Val
            100                 105                 110
Arg Val Ala Leu Arg Arg His Ala Gly Gln His Thr Asp Pro Lys Val
        115                 120                 125
Ser Phe Ala Asp Val Thr Val Asp Ile Ala Ala Arg Arg Val Leu Arg
    130                 135                 140
Ala Gly Glu Glu Val His Leu Thr Pro Ile Glu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
Thr Leu Leu Asn Asn Ala Gly Lys Val Leu Thr Gln Arg Gln Leu Leu
                165                 170                 175
Ser Gln Val Trp Gly Pro Asn Ala Val Glu His Ser His Tyr Leu Arg
            180                 185                 190
Ile Tyr Met Gly His Leu Arg Gln Lys Leu Glu Ala Asn Pro Thr Gln
        195                 200                 205
Pro Val His Leu Leu Thr Glu Thr Gly Ile Gly Tyr Arg Phe Met Pro
    210                   215                   220
<210>14
<211>1308
<212>DNA
<213>Pantoea ananatis
<400>14
atgagcagaa tcatgacgcc cgtgaactgg gaagcctgca gcagcgaggc gcagcaggcg    60
ctgttggcac gccctgcgct cgcctcgtct gacagcatca gccagatcgt gcgcgatgtg   120
ttggtcagag tgaaagagga aggcgatgcg gctttacgag aattcagcgc gcgctttgac   180
aaggttgaaa cagacgacct gcgcgttacg ccacagcaga tgcaggcggc cagcgatcgc   240
cttggtgacg agctgaaaca ggcgatggcc gtggccattg gcaatattga aacctttcac   300
cgtgcgcaga tcctgccgcc ggtggatgtg gaaacgcagc ccggcgtgcg ctgtcagcaa   360
attacgcgcc cgatgaaatc ggtgggcttg tatattccgg gcggttctgc cccgctgttt   420
tctaccgttc tgatgctggc taccccggcg cggattgcgg gctgtggtcg cgtggtgctg   480
tgctcgcccc cgccgattgc tgatgaaatt ctctacgcgg ccaaactttg cggtgtggaa   540
gaagtgttcc aggtgggtgg atcacaggcg attgccgccc tggcttttgg caccgaaagc   600
atccctaagg tagataaaat ttttggtccg ggcaacgcgt gggttaccga agccaaacgt   660
caggtcagcc agcgccttga tggcgcggcg attgatatgc ccgctggccc gtcggaagtg   720
ctggtgattg ccgatgaagg tgccacaccg gccttcgttg cctctgatct gctgtcgcag   780
gcggaacacg gccctgactc gcaggtgatt ttactgacgc cttcgctggc gctggccgag   840
cgcgtcgccg aggcggtgga ggatcagctg gcccagttgc cacgtgcggc gacagcccgc   900
caggcactgg aaagcagccg cctgatcgtc gcccgggata tgcagcaatg cattgcgatc   960
tccaaccgct atggtccgga gcacctgatt ctgcaaaccc gcacgccacg ggatctggtg  1020
gaacagatta ccagcgccgg ttcggttttc ctgggcgact ggtcaccgga atccgcagga  1080
gattatgctt cgggcaccaa ccacgtgctg ccgacctacg gctataccgc gacatgctcc  1140
agcctgggcc tggccgactt tcagaaacgc atgacggtac aggagctgac gccgcagggc  1200
ttcctgaacc tggcggcgac catcgaaacc ctggcggccg ctgaacagct gcacgcccac  1260
aaaaatgccg tcacgttgcg cgttgccgca ctcaaggagc aagcatga               1308
<210>15
<211>68
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物
<400>15
ccatagcggt tggagatcgc aatgcattgc tgcat atccc tgaagcctgc ttttttatac    60
taagttgg                                                              68
<210>16
<211>68
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物
<400>16
gcccgccagg cactggaaag cagccgcctg atcgtcgccc cgctcaagtt agtataaaaa     60
agctgaac                                                              68
<210>17
<211>33
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物
<400>17
tagcgagatc tctgatgtcc ggcggtgctt ttg                                  33
<210>18
<211>32
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物
<400>18
aaaaagagct cttacgcccc gccctgccac tc                          32
<210>19
<211>34
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物
<400>19
caggatctag aaggagacat gaacgatgaa catc                        34
<210>20
<211>36
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物
<400>20
gataaggatc cgaaat aaaa gaaaatgcca atagga                     36
<210>21
<211>31
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物
<400>21
cctttgagct cgcgggcagt gagcgcaacg c                           31
<210>22
<211>48
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物
<400>22
ctagagcggc cgccgatcgg gatcctcctg tgtgaaattg ttatccgc         48
<210>23
<211>42
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物
<400>23
ctctacgatc gaggaggtta taaaaaatgg atattaatac tg               42
<210>24
<211>36
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物
<400>24
tcaaagcggc cgcttcttcg tctgtttcta ctggta          36
<210>25
<211>31
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物
<400>25
cctttggtac cgcgggcagt gagcgcaacg c               31
<210>26
<211>34
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物
<400>26
aacaggaatt ctttgcctgg cggcagtagc gcgg            34
<210>27
<211>40
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物P1
<400>27
ctagtaagat cttgaagcct gcttttttat actaagttgg      40
<210>28
<211>41
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物P2
<400>28
atgatcgaat tcgaaatcaa ataatgattt tattttgact g    41
<210>29
<211>120
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>含有attL的DNA片段
<400>29
agatcttgaa gcctgctttt ttatactaag ttggcattat aaaaaagcat tgcttatcaa    60
tttgttgcaa cgaacaggtc actatcagtc aaaataaaat cattatttga tttcgaattc   120
<210>30
<211>41
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物P3
<400>30
atgccactgc agtctgttac aggtcactaa taccatctaa g                  41
<210>31
<211>46
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物P4
<400>31
accgttaagc tttctagacg ctcaagttag tataaaaaag ctgaac             46
<210>32
<211>184
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>含有attR的DNA片段
<400>32
ctgcagtctg ttacaggtca ctaataccat ctaagtagtt gattcatagt gactgcatat     60
gttgtgtttt acagtattat gtagtctgtt ttttatgcaa aatctaattt aatatattga    120
tatttatatc attttacgtt tctcgttcag cttttttata ctaacttgag cgtctagaaa    180
gctt                                                                 184
<210>33
<211>38
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物P5
<400>33
ttcttagacg tcaggtggca cttttcgggg aaatgtgc                     38
<210>34
<211>37
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物P6
<400>34
taacagagat ctcgcgcaga aaaaaaggat ctcaaga                      37
<210>35
<211>46
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物P7
<400>35
aacagagatc taagcttaga  tcctttgcct ggcggcagta gcgcgg           46
<210>36
<211>35
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物P8
<400>36
ataaactgca gcaaaaagag tttgtagaaa cgcaa                     35
<210>37
<211>1388
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>含有Tc基因和ter_thrL的DNA片段
<400>37
gaattctcat gtttgacagc ttatcatcga taagctttaa tgcggtagtt tatcacagtt    60
aaattgctaa cgcagtcagg caccgtgtat gaaatctaac aatgcgctca tcgtcatcct   120
cggcaccgtc accctggatg ctgtaggcat aggcttggtt atgccggtac tgccgggcct   180
cttgcgggat atcgtccatt ccgacagcat cgccagtcac tatggcgtgc tgctagcgct   240
atatgcgttg atgcaatttc tatgcgcacc cgttctcgga gcactgtccg accgctttgg   300
ccgccgccca gtcctgctcg cttcgctact tggagccact atcgactacg cgatcatggc   360
gaccacaccc gtcctgtgga tcctctacgc cggacgcatc gtggccggca tcaccggcgc   420
cacaggtgcg gttgctggcg cctatatcgc cgacatcacc gatggggaag atcgggctcg   480
ccacttcggg ctcatgagcg cttgtttcgg cgtgggtatg gtggcaggcc ccgtggccgg   540
gggactgttg ggcgccatct ccttgcatgc accattcctt gcggcggcgg tgctcaacgg   600
cctcaaccta ctactgggct gcttcctaat gcaggagtcg cataagggag agcgtcgacc   660
gatgcccttg agagccttca acccagtcag ctccttccgg tgggcgcggg gcatgactat   720
cgtcgccgca cttatgactg tcttctttat catgcaactc gtaggacagg tgccggcagc   780
gctctgggtc attttcggcg aggaccgctt tcgctggagc gcgacgatga tcggcctgtc   840
gcttgcggta ttcggaatct tgcacgccct cgctcaagcc ttcgtcactg gtcccgccac   900
caaacgtttc ggcgagaagc aggccattat cgccggcatg gcggccgacg cgctgggcta   960
cgtcttgctg gcgttcgcga cgcgaggctg gatggccttc cccattatga ttcttctcgc  1020
ttccggcggc atcgggatgc ccgcgttgca ggccatgctg tccaggcagg tagatgacga  1080
ccatcaggga cagcttcaag gatcgctcgc ggctcttacc agcctaactt cgatcactgg  1140
accgctgatc gtcacggcga tttatgccgc ctcggcgagc acatggaacg ggttggcatg  1200
gattgtaggc gccgccctat accttgtctg cctccccgcg ttgcgtcgcg gtgcatggag  1260
ccgggccacc tcgacctgaa tggaagccgg cggcacctcg ctaacggatt caccactcca  1320
actagaaagc ttaacacaga aaaaagcccg cacctgacag tgcgggcttt ttttttcgac  1380
cactgcag                                                           1388
<210>38
<211>36
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物P9
<400>38
agtaattcta gaaagcttaa cacagaaaaa agcccg                     36
<210>39
<211>43
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物P10
<400>39
ctagtaggat ccctgcagtg gtcgaaaaaa aaagcccgca ctg             43
<210>40
<211>33
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物1
<400>40
ggaagatcta tttgccttcg cacatcaacc tgg                             33
<210>41
<211>30
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物2
<400>41
cggggtacct tgtaaatatt ttaacccgcc                                 30
<210>42
<211>56
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物3
<400>42
ggaagatcta aggagacctt aaatgagcga cacaacgatc ctgcaaaaca gtaccc    56
<210>43
<211>39
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物4
<400>43
cggggtacct cgtagaggtt tactggcgct tatccagcg                       39
<210>44
<211>864
<212>DNA
<213>Pantoea ananatis
<400>44
atgtctgaac aacactatca gcccgctaaa gtctggaagt gggacccgga agcgaaaggt   60
aatggtgcca aaactaaccg ccctaccgct ggcccaaccc atgaaaaagc cctgccggtt  120
ggtaagcatc cgctgcagct ctactctctg ggcacgccta acggccagaa agtcactatt  180
ctgctggaag agttgctggc gctgaacgtg aacgatgcag agtacgatgc ctggttaatc  240
aatattggtg aaggcgacca gttcagcagc ggttttgttg agatcaaccc caactccaaa  300
atcccggcac tgtgcgatca ttcagccaca ccaccgattc gcgtatttga atccggtaac  360
atcctgctct atctggcgga aaaatacggt tatttcctgc cgaaagatcc ggccaaacgc  420
accgaaacgc tgaactggct gttctggctg caaggctcag ccccttacct tggcggcggc  480
tttggtcact tctatcatta cgcgccagaa aagattgaat acgccatcaa ccgcttctca  540
ctggaagcca aacgtcagtt tgacgtgctg gaccgtcagc ttgccgataa ccgttatctg  600
gcgggtgacg attacaccat cgccgatatc gccacctggc cgtggtacgg cagcatggtg  660
ctgtataacc agtacaatgc ggcagaattc ctcgaccttc agtcctacaa aaatgtggtg  720
cgctgggccg aagagatcgc tctgcgtccg gccgttatgc gcggccgcaa ggtgaaccgt  780
gtgatgggcg aacccgccga tcagctgcgc gagcgccatg acgcatcgga ctttgatacg  840
caaacccaag acaagcaagc ctga                                         864
<210>45
<211>918
<212>DNA
<213>Pantoea ananatis
<400>45
atgtcagcac gagtctggtg tctgggtgat gccgtggtgg acctgcttcc ggacgggccg     60
gggcatttaa tacagtgtgc aggcggggcg cccgccaatg tggcggtggg cattgcccgc    120
ttacagggcc gcagcgggtt tattggccgg gttggggacg atccttttgg tcactttatg    180
cagcacacgc tggcgactga acaggttgat acccgctata tgacgctgga cagcgcccag    240
cgcacctcaa cggtggtggt ggcgctggat caggaaggtg agcggacttt tacctttatg    300
gtgcgcccca gtgcagatct gtttctggaa caaggcgatc tccccaggtt tgagcaaggt    360
gaatggcttc actgctgctc aattgccctg gcggcagaac cttcgcgctc caccaccttt    420
tctgccatgc agcagatcag cgatgccggt ggctttgtga gctttgatcc caatattcgt    480
cacgatctgt ggcacgacga tgcccaactg cgggactgtg tgaaccgggc gttacagctg    540
gccgatgtgg tcaagctgtc tgaggaagag ctggcttttc tgactccggg ggcgcaacac    600
gctgacagca tgcaggcgct ggcggaacgc tttgcgatta gcctgctgat ggtcacccag    660
ggcaaggcag gagtgaaagt ctggcatcag ggtaaacatt atcactatcc cacgctgcct    720
gtggtgagcg tggacaccac cggcgcaggg gatgcgtttg tcgccgggct gctatggggg    780
ctggcggaaa aggggatgcc cgctaatgag gccgagctgg cggcacgact cagcagcgca    840
cagcagtgtg gggcgctggc gacgacggca aaaggggcca tgaccgcgtt gcct tatcgt   900
caccaaattg aaggatga                                                  918
<210>46
<211>3095
<212>DNA
<213>Pantoea ananatis
<400>46
agactgccat gaccctggac agagattcat tagcggccgt actcgcccgg cgcgactggg      60
aaaaccccgg cgtcagcgaa cataaccggc tggaagccca tccgccgttt tacagctggc     120
gcagcgctga ggcggcccat aacaacgcgc catcggcgca gcgaaaaagc ctgagcggcg     180
aatggacgtt tgcctttttc cctgcgcccg aggcggtgcc ggatagctgg cgcacccagg     240
atttgcaggc ggcagcgacg attaccgtgc cgtcagtctg gcaaatgcag ggctatgatg     300
ttccgattta caccaatgtt acctatccca ttccggttga tcccccgcgc gttccggctg     360
aaaatcctac gggatgttat tcgctcacat ttaatgtgga tgcagactgg ctgcaacatg     420
gacaaacccg aattattttt gacggcgtga attcagcctt ctatctctgg tgcaacggac     480
gctgggtggg ctacgggcag gacagccgct tgccgtctga atttgatctg agcgaatttc     540
tgcgcgaagg tgaaaatcgc ctggcggtga tggtgttgcg ctggagcgat ggcagctatc     600
tggaagatca ggatatgtgg cgcatgagtg gtattttccg cgatgtttcc ctgctgcata     660
agcctgccag ccatcttcgc gatctgcgca ttcgtacgca tttcaatgac gatttcagtc     720
gtgcgcggct ggaagctgag gtgcgggttg ccggagcact ggatgacgat ttacgggtca     780
gcgtgcagct cttcgcgggt gacacgctaa ccggagaagc gacgtcgccc ttgggcagcg     840
cgattattga cgagcgcggc gcgtggagcg atcggacaac gctgtgcatc aacgttgcta     900
accctgcgct gtggagtgcg gaaacgccgc atctctaccg ggcggttgtg cagttacacc     960
ggacggacgg tacgctgatt gaggcggagg cctgcgacgt gggattccgg cacgtcagca    1020
tcgaaaatgg cctgctgctg ctcaacggtc agccactgct catccgcggc accaaccgcc    1080
acgagcatca tcctgaacgc ggtcaggtga tggatcgtga cactatggtg caggatattt    1140
tgctgatgaa gcagaataac ttcaacgcgg tgcgctgctc ccattaccct aacgatcccc    1200
tgtggtatag cctgtgtgac cactacggct tgtacgtcgt ggatgaagcc aacatcgaaa    1260
cgcatggcat ggtgccgatg aatcgcctga gcgacgatcc cgtctggctt cccgccatga    1320
gccagcgcgt cacgcgcatg gtgcagcgcg atcgtaatca cccctgcatt attatctggt    1380
cactgggtaa cgaatcgggc cacggtgcta accatgatgc gctctaccgc tggctgaaaa    1440
gtgaagatcc ttcccgcccg gtccagtacg aaggtggcgg ggccaatacc gcagcgaccg    1500
atattatctg tccgatgtat gcgcgggtcg atgaggatca acctttcccg gccgtgccga    1560
aatggtccat taaaaaatgg ctgtctatgc caggcgagca gcgtccgctt attctctgtg    1620
aatatgctca tgccatggga aacagccttg gtggctacgc aaaatactgg caggcatttc    1680
gtcagtatcc tcgcctgcag ggcggttttg tctgggactg ggtcgatcag tcgctcataa    1740
aatatgacga taacggcgaa ccctgggctg cctacggtgg cgactttggt gatacgccta    1800
atgatcgcca gttctgcatg aacgggctgg tctttgccga ccggacgccc catccctcgc    1860
tctacgaagc ccgccatgcg cagcagttct tccagttcag gctgctaccg ggcagcgagc    1920
gcacgctgga agtgaccagc gaatacctgt tccgccacag tgataatgaa atcctgcact    1980
ggtcggtggc tcaggatggc aacctgctgg ccgccggtga agtcacgctg gatatcgcgc    2040
cacagggccg ccagcagatc gcactcccgg aggtgccgct gcctcaatct gcgggccagc    2100
tctggctgac ggtgcgggtg gaacagcctc agccgacggc ctggtcagaa gccggtcata    2160
tcagcgcctg gcagcagtgg ccactggagg cgatcctgaa tgtggccctg ccgcctcagg    2220
cggcgagtgc gccacagctc agccgcggcg aagacacctt cagcgtggcg gtgaacaacc    2280
agcgctgggc attcagccgt cagcagggcg tgctcacgca gtactggatc gacgatcagc    2340
cgcagctcct gtcgccgctg cgcgatcagt ttacccgtgc gccgctggat aacgatatcg    2400
gcgtcagcga agtcacgcgc atcgacccta atgcctgggt cgagcgctgg aaagcggcgg    2460
ggcactatca gtctgaggtc accaccctgc agtgcaccgc cgaagcgctc tccgacgccg    2520
tcgtgatcaa caccgttcat gcctggcagt tccagggcaa aacgctgttt attagccgta    2580
aagtgtaccg tattgatgga tttggcgaga tggcggtgac ggtgaacgta gagatcgcga    2640
gcggcacgcc ttatccggca cgcatcggta tgagctgtca gctcacccag atcgtcgagc  2700
gagtgaactg gctaggcctg gggccgcatg aaaattaccc ggatcgcctg acctcggcct  2760
gctttgaccg ctgggattta ccgctgagtg aaatgtacac cccgtatgtt ttccccaccg  2820
aaaacggcct gcgctgcggc acgcgtgaac tcaactatgg tgcgcaccag tggcgtggcg  2880
atttccagtt caacatcagt cgctacagcc agacacagct gatggaaacc tgccatcgcc  2940
acctgttacg gcctgaggcg ggcacgtggc tcaatattga tggcttccac atgggcgtcg  3000
gcggtgacga ttcctggagc ccgtcggtat caccggaatt cctgctcagt gcaggacgtt  3060
acagctacca gtttatctgg gggcaacaaa aataa                             3095
<210>47
<211>34
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物
<400>47
gcttaagatc tccctgttga caattaatca tcgg                                34
<210>48
<211>70
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物
<400>48
agtacggccg ctaatgaatc tctgtccagg gtcatggcag tctccttgtg tgaaattgtt    60
atccgctcac                                                           70
<210>49
<211>39
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物
<400>49
ccgttagatc tcgctcaagt tagtataaaa aagctgaac                           39
<210>50
<211>70
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物
<400>50
tagcgggctg atagtgttgt tcagacatga tgaggttcgc cttgaagcct gcttttttat    60
actaagttgg                                                           70
<210>51
<211>78
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物
<400>51
cgttgggaca acgtcgatct gcgccgaatc tggttgctgg acgccgcctg tgaagcctgc    60
ttttttatac taagttgg                                                  78
<210>52
<211>80
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物
<400>52
caacagcaga taaaccgcga tcagtaaaaa cgcattggcc gccatggcag tctccttgtg    60
tgaaattgtt atccgctcac                                                80
<210>53
<211>17
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物
<400>53
catgtcttct ggtcact                                                   17
<210>54
<211>16
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物
<400>54
caagcaggtt gaacac                                                    16
<210>55
<211>32
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物
<400>55
cccaagcttc cctgatcaat gaggaggcgt tc                                  32
<210>56
<211>33
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>引物
<400>56
cgggatccga cgatcggggt cgggacgtaa ggg                                 33
<210>57
<211>557
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>P.anantis和大肠杆菌的KdpA的共有序列
<220>
<221>变异
<222>4，5，11，12，15，19，21，25.29，31，32，34，37，38，39，40，41，42，44，45，47，49，
50，53，54，55，56，58，60，61，64，6，69，71，74，75，78，79，80，82，83，85，86，93，107，119，
122，131，139，143，148，154，156，157，158，1690，161，168，171，176，179，182，185，190，191，
194，195，202，203，205，207，213，215，238，241，251，258，264，273，274，275，281，286，288，
289，290，293，294，295，296，297，303，304，309，311，314，317，325，329，331，338，348，364，
368，378，384，404，412，416，426，430，432，434，443，446，450，475，478，483，487，496，506，
512，514，528，532，555，557
<223>Xaa可以是任何天然出现的氨基酸
<400>57
Met Ala Ala Xaa Xaa Phe Leu Leu Ile Ala Xaa Xaa Leu Leu Xaa Leu
1               5                   10                  15
Met Val Xaa Ala Xaa Pro Leu Gly Xaa Gly Leu Ala Xaa Leu Xaa Xaa
            20                  25                  30
Asp Xaa Pro Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Glu Xaa Xaa Leu Xaa Arg
        35                  40                  45
Xaa Xaa Gly Val Xaa Xaa Xaa Xaa Met Xaa Trp Xaa Xaa Tyr Leu Xaa
    50                  55                  60
Ala Ile Leu Xaa Xaa Asn Xaa Leu Gly Xaa Xaa Val Leu Xaa Xaa Xaa
65                  70                  75                  80
Leu Xaa Xaa Gln Xaa Xaa Leu Pro Leu Asn Pro Gln Xaa Leu Pro Gly
                85                  90                  95
Leu Ser Trp Asp Leu Ala Leu Asn Thr Ala Xaa Ser Phe Val Thr Asn
            100                 105                 110
Thr Asn Trp Gln Ser Tyr Xaa Gly Glu Xaa Thr Leu Ser Tyr Phe Ser
        115                 120                 125
Gln Met Xaa Gly Leu Thr Val Gln Asn Phe Xaa Ser Ala Ala Xaa Gly
    130                 135                 140
Ile Ala Val Xaa Phe Ala Leu Ile Arg Xaa Phe Xaa Xaa Xaa Ser Xaa
145                 150                 155                 160
Xaa Thr Leu Gly Asn Ala Trp Xaa Asp Leu Xaa Arg Ile Thr Leu Xaa
                165                 170                 175
Val Leu Xaa Pro Xaa Xaa Leu Leu Xaa Ala Leu Phe Phe Xaa Xaa Gln
            180                 185                 190
Gly Xaa Xaa Gln Asn Phe Leu Pro Tyr Xaa Xaa Val Xaa Xaa Xaa Glu
        195                 200                 205
Gly Ala Gln Gln Xaa Leu Xaa Met Gly Pro Val Ala Ser Gln Glu Ala
    210                 215                 220
Ile Lys Met Leu Gly Thr Asn Gly Gly Gly Phe Phe Asn Xaa Asn Ser
225                 230                 235                 240
Xaa His Pro Phe Glu Asn Pro Thr Ala Leu Xaa Asn Phe Val Gln Met
                245                 250                 255
Leu Xaa Ile Phe Leu Ile Pro Xaa Ala Leu Cys Phe Ala Phe Gly Glu
            260                 265                 270
Xaa Xaa Xaa Asp Arg Arg Gln Gly Xaa Met Leu Leu Trp Xaa Met Xaa
        275                 280                 285
Xaa Xaa Phe Val Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Val Met Trp Ala Glu Xaa Xaa
    290                 295                 300
Gly Asn Pro His Xaa Leu Xaa Leu Gly Xaa Asp Ser Xaa Ile Asn Met
305                 310                 315                 320
Glu Gly Lys Glu Xaa Arg Phe Gly Xaa Leu Xaa Ser Ser Leu Phe Ala
                325                 330                 335
Val Xaa Thr Thr Ala Ala Ser Cys Gly Ala Val Xaa Ala Met His Asp
            340                 345                 350
Ser Phe Thr Ala Leu Gly Gly Met Val Pro Met Xaa Leu Met Gln Xaa
        355                 360                 365
Gly Glu Val Val Phe Gly Gly Val Gly Xaa Gly Leu Tyr Gly Met Xaa
    370                 375                 380
Leu Phe Val Leu Leu Ala Val Phe Ile Ala Gly Leu Met Ile Gly Arg
385                 390                 395                 400
Thr Pro Glu Xaa Leu Gly Lys Lys Ile Asp Val Xaa Glu Met Lys Xaa
                405                 410                 415
Thr Ala Leu Ala Ile Leu Val Thr Pro Xaa Leu Val Leu Xaa Gly Xaa
            420                 425                 430
Ala Xaa Ala Met Met Thr Asp Ala Gly Arg Xaa Xaa Met Xaa Asn Pro
        435                 440                 445
Gly Xaa His Gly Phe Ser Glu Val Leu Tyr Ala Val Ser Ser Ala Ala
    450                 455                 460
Asn Asn Asn Gly Ser Ala Phe Ala Gly Leu Xaa Ala Asn Xaa Pro Phe
465                 470                 475                 480
Trp Asn Xaa Leu Leu Ala Xaa Cys Met Phe Val Gly Arg Phe Gly Xaa
                485                 490                 495
Ile Ile Pro Val Met Ala Ile Ala Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Lys Lys Xaa
            500                 505                 510
Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Thr Leu Pro Thr His Gly Pro Leu Phe Xaa
        515                 520                 525
Xaa Leu Leu Xaa Gly Thr Val Leu Leu Val Gly Ala Leu Thr Phe Ile
    530                 535                 540
Pro Ala Leu Ala Leu Gly Pro Val Ala Glu Xaa Leu Xaa
545                 550                 555
<210>58
<211>681
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>P.anantis和大肠杆菌的KdpB的共有序列
<220>
<221>变异
<222>4，6，7，8，10，11，12，14，15，16，17，18，19，20，26，28，29，31，38，40，41，44，47，
48，49，50，52，54，55，57，58，59，61，63，65，66，69，70，74，81，104，107，110，111，112，
113，118，119，120，122，125，131，139，147，190，193，226，227，237，248，249，251，252，305，
320，321，323，326，331，332，354，359，367，368，370，371，373，375，378，381，386，388，390，
392，397，401，405，408，411，414，415，417，418，419，421，422，426，426，428，434，437，438，
443，459，475，492，559，604，607，609，614，627，642，645，647，648，649，655，667，671，674，
677，678，679，681
<223>Xaa可以是任何天然出现的氨基酸
<400>58
Met Ser Arg Xaa Gln Xaa Xaa Xaa Phe Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Xaa
1               5                   10                  15
Xaa Xaa Xaa Xaa Ala Val Lys Lys Leu Xaa Pro Xaa Xaa Gln Xaa Arg
            20                  25                  30
Asn Pro Val Met Phe Xaa Val Xaa Xaa Gly Ser Xaa Leu Thr Xaa Xaa
        35                  40                  45
Xaa Xaa Ile Xaa Met Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Ala Xaa Phe
    50                  55                  60
Xaa Xaa Ala Ile Xaa Xaa Trp Leu Trp Xaa Thr Val Leu Phe Ala Asn
65                  70                  75                  80
Xaa Ala Glu Ala Leu Ala Glu Gly Arg Ser Lys Ala Gln Ala Asn Ser
                85                  90                  95
Leu Lys Gly Val Lys Lys Thr Xaa Phe Ala Xaa Lys Leu Xaa Xaa Xaa
            100                 105                 110
Xaa Tyr Gly Ala Ala Xaa Xaa Xaa Val Xaa Ala Asp Xaa Leu Arg Lys
        115                 120                 125
Gly Asp Xaa Val Leu Val Glu Ala Gly Asp Xaa Ile Pro Cys A sp Gly
    130                 135                 140
Glu Val Xaa Glu Gly Gly Ala Ser Val Asp Glu Ser Ala Ile Thr Gly
145                 150                 155                 160
Glu Ser Ala Pro Val Ile Arg Glu Ser Gly Gly Asp Phe Ala Ser Val
                165                 170                 175
Thr Gly Gly Thr Arg Ile Leu Ser Asp Trp Leu Val Ile Xaa Cys Ser
            180                 185                 190
Xaa Asn Pro Gly Glu Thr Phe Leu Asp Arg Met Ile Ala Met Val Glu
        195                 200                 205
Gly Ala Gln Arg Arg Lys Thr Pro Asn Glu Ile Ala Leu Thr Ile Leu
    210                 215                 220
Leu Xaa Xaa Leu Thr Ile Val Phe Leu Leu Ala Thr Xaa Thr Leu Trp
225                 230                 235                 240
Pro Phe Ser Ala Trp Gly Gly Xaa Xaa Val Xaa Xaa Thr Val Leu Val
                245                 250                 255
Ala Leu Leu Val Cys Leu Ile Pro Thr Thr Ile Gly Gly Leu Leu Ser
            260                 265                 270
Ala Ile Gly Val Ala Gly Met Ser Arg Met Leu Gly Ala Asn Val Ile
        275                 280                 285
Ala Thr Ser Gly Arg Ala Val Glu Ala Ala Gly Asp Val Asp Val Leu
    290                 295                 300
Xaa Leu Asp Lys Thr Gly Thr Ile Thr Leu Gly Asn Arg Gln Ala Xaa
305                 310                 315                 320
Xaa Phe Xaa Pro Ala Xaa Gly Val Xaa Glu Xaa Xaa Leu Ala Asp Ala
                325                 330                 335
Ala Gln Leu Ala Ser Leu Ala Asp Glu Thr Pro Glu Gly Arg Ser Ile
            340                 345                 350
Val Xaa Leu Ala Lys Gln Xaa Phe Asn Leu Arg Glu Arg Asp Xaa Xaa
        355                 360                 365
Ser Xaa Xaa Ala Xaa Phe Xaa Pro Phe Xaa Ala Gln Xaa Arg Met Ser
    370                 375                 380
Gly Xaa Asn Xaa Xaa Xaa Arg Xaa Ile Arg Lys Gly Xaa Val Asp Ala
385                 390                 395                 400
Xaa Arg Arg His Xaa Glu Ala Xaa Xaa Gly Xaa Phe Pro Xaa Xaa Val
                405                 410                 415
Xaa Xaa Xaa Val Xaa Xaa Val Ala Arg Xaa Gly Xaa Thr Pro Leu Val
            420                 425                 430
Val Xaa Gly Gly Xaa Xaa Val Leu Gly Val Xaa Ala Leu Lys Asp Ile
        435                 440                 445
Val Lys Gly Gly Ile Lys Glu Arg Phe Ala Xaa Leu Arg Lys Met Gly
    450                 455                 460
Ile Lys Thr Val Met Ile Thr Gly Asp Asn Xaa Leu Thr Ala Ala Ala
465                 470                 475                 480
Ile Ala Ala Glu Ala Gly Val Asp Asp Phe Leu Xaa Glu Ala Thr Pro
                485                 490                 495
Glu Ala Lys Leu Ala Leu Ile Arg Gln Tyr Gln Ala Glu Gly Arg Leu
            500                 505                 510
Val Ala Met Thr Gly Asp Gly Thr Asn Asp Ala Pro Ala Leu Ala Gln
        515                 520                 525
Ala Asp Val Ala Val Ala Met Asn Ser Gly Thr Gln Ala Ala Lys Glu
    530                 535                 540
Ala Gly Asn Met Val Asp Leu Asp Ser Asn Pro Thr Lys Leu Xaa Glu
545                 550                 555                 560
Val Val His Ile Gly Lys Gln Met Leu Met Thr Arg Gly Ser Leu Thr
                565                 570                 575
Thr Phe Ser Ile Ala Asn Asp Val Ala Lys Tyr Phe Ala Ile Ile Pro
            580                 585                 590
Ala Ala Phe Ala Ala Thr Tyr Pro Gln Leu Asn Xaa Leu Asn Xaa Met
        595                 600                 605
Xaa Leu His Ser Pro Xaa Ser Ala Ile Leu Ser Ala Val Ile Phe Asn
    610                 615                 620
Ala Leu Xaa Ile Val Phe Leu Ile Pro Leu Ala Leu Lys Gly Val Ser
625                 630                 635                 640
Tyr Xaa Pro Leu Xaa Ala Xaa Xaa Xaa Leu Arg Arg Asn Leu Xaa Ile
                645                 650                 655
Tyr Gly Leu Gly Gly Leu Leu Val Pro Phe Xaa Gly Ile Lys Xaa Ile
            660                 665                 670
Asp Xaa Leu Leu Xaa Xaa Xaa Gly Xaa
        675                 680
<210>59
<211>189
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>P.anantis和大肠杆菌的KdpC的共有序列
<220>
<221>变异
<222>3，8，9，10，11，12，13，15，16，17，18，20，28，30，32，33，42，43，44，45，46，47，48，
49，60，61，62，66，73，74，75，80，83，89，93，97，98，100，107，111，113，114，115，123，130，
131，133，135，138，141，144，146，149，151，152，153，154，155，156，157，159，160，161，162，
163，165，168，169，170，173，175，178，178，179，180，186，187，188，189
<223>Xaa可以是任何天然出现的氨基酸
<400>59
Met Ser Xaa Leu Arg Pro Ala Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Xaa
1               5                   10                  15
Xaa Xaa Gly Xaa Val Tyr Pro Leu Leu Thr Thr Xaa Leu Xaa Gln Xaa
            20                  25                  30
Xaa Phe Pro Trp Gln Ala Asn Gly Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
        35                  40                  45
Xaa Arg Gly Ser Ala Leu Ile Gly Gln Asn Phe Xaa Xaa Xaa Gly Tyr
    50                  55                  60
Phe Xaa Gly Arg Pro Ser Ala Thr Xaa Xaa Xaa Pro Tyr Asn Pro Xaa
65                  70                  75                  80
Ala Ser Xaa Gly Ser Asn Leu Ala Xaa Ser Asn Pro Xaa Leu Asp Lys
                85                  90                  95
Xaa Xaa Ala Xaa Arg Val Ala Ala Leu Arg Xaa Ala Asn Pro Xaa Ala
            100                 105                 110
Xaa Xaa Xaa Val Pro Val Glu Leu Val Thr Xaa Ser Ala Ser Gly Leu
        111                 120                 125
Asp Xaa Xaa Ile Xaa Pro Xaa Ala Ala Xaa Trp Gln Xaa Pro Arg Xaa
    130                 135                 140
Ala Xaa Ala Arg Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Xaa
145                 150                 155                 160
Xaa Xaa Xaa Gln Xaa Pro Leu Xaa Xaa Xaa Ile Gly Xaa Pro Xaa Val
                165                 170                 175
Asn Xaa Xaa Xaa Leu Asn Leu Ala Leu Xaa Xaa Leu Xaa
            180                 185

Claims (12)

1.一种属于肠杆菌科的微生物，其具有L-氨基酸生产能力，并且经过修饰而增强了kdp系统。
2.权利要求1所述的微生物，其中，kdp系统是通过增加kdp操纵子或构成该操纵子的1种或2种以上基因的表达量和/或通过增加kdp操纵子或所述基因的翻译量而增强的。
3.权利要求2所述的微生物，其中，kdp系统是通过提高kdp操纵子或构成该操纵子的1种或2种以上基因的拷贝数、修饰该操纵子的表达调节序列而增强的。
4.权利要求2或3所述的微生物，其中，kdp操纵子至少包含kdpA基因、kdpB基因和kdpC基因。
5.权利要求4所述的微生物，其中，kdpA基因是编码具有SEQ ID NO：2或8所示氨基酸序列的蛋白质的基因，或者是编码kdp系统的A亚单位的基因，所述kdp系统的A亚单位具有在SEQ ID NO：2或8中取代、缺失、插入或添加了1个或数个氨基酸的氨基酸序列。
6.权利要求4或5所述的微生物，其中，kdpB基因是编码具有SEQ IDNO：3或9所示氨基酸序列的蛋白质的基因，或者是编码kdp系统的B亚单位的基因，所述kdp系统的B亚单位具有在SEQ ID NO：3或9中取代、缺失、插入或添加了1个或数个氨基酸的氨基酸序列。
7.权利要求4～6中任一项所述的微生物，其中，kdpC基因是编码具有SEQ ID NO：4或10所示氨基酸序列的蛋白质的基因，或者是编码kdp系统的C亚单位的基因，所述kdp系统的C亚单位具有在SEQ ID NO：4或10中取代、缺失、插入或添加了1个或数个氨基酸的氨基酸序列。
8.权利要求4～7中任一项所述的微生物，其中，所述kdp操纵子为下述(a)～(d)中任一项所述的DNA：
(a)包含SEQ ID NO：1的碱基编号546～4871所示的碱基序列的DNA；
(b)与SEQ ID NO：1的碱基编号546～4871所示的碱基序列或与可从该碱基序列制备的探针在严格条件下杂交，并且编码kdp系统的DNA；
(c)包含SEQ ID NO：7的碱基编号543～4853所示的碱基序列的DNA；
(b)与SEQ ID NO：7的碱基编号543～4853所示的碱基序列或与可从该碱基序列制备的探针在严格条件下杂交，并且编码kdp系统的DNA。
9.权利要求1～8中任一项所述的微生物，其中，所述L-氨基酸为选自由L-谷氨酸、L-赖氨酸、L-苏氨酸、L-精氨酸、L-组氨酸、L-异亮氨酸、L-缬氨酸、L-亮氨酸、L-苯丙氨酸、L-酪氨酸、L-色氨酸和L-半胱氨酸组成的群组中的一种或二种以上的L-氨基酸。
10.权利要求1～9中任一项所述的微生物，其中，属于肠杆菌科的微生物为埃希氏菌属细菌、肠杆菌属细菌或泛菌属细菌。
11.一种生产L-氨基酸的方法，其特征在于，在培养基中培养权利要求1～10中任一项所述的微生物，从而在该培养基中或菌体内生成并蓄积L-氨基酸，并且从该培养基或菌体回收L-氨基酸。
12.权利要求11所述的方法，其中，所述L-氨基酸为选自由L-谷氨酸、L-赖氨酸、L-苏氨酸、L-精氨酸、L-组氨酸、L-异亮氨酸、L-缬氨酸、L-亮氨酸、L-苯丙氨酸、L-酪氨酸、L-色氨酸和L-半胱氨酸组成的群组中的一种或二种以上的L-氨基酸。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105189734A (zh) * 2013-03-19 2015-12-23 国立大学法人奈良先端科学技术大学院大学 提高l-半胱氨酸生产能力的属于肠杆菌科的细菌

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2004124226A (ru) 2004-08-10 2006-01-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) Использование фосфокетолазы для продукции полезных метаболитов
US7915018B2 (en) * 2004-10-22 2011-03-29 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing L-amino acids using bacteria of the Enterobacteriaceae family
JP5218400B2 (ja) 2007-04-17 2013-06-26 味の素株式会社 カルボキシル基を有する酸性物質の製造法
JP5488467B2 (ja) 2008-09-05 2014-05-14 味の素株式会社 Ｌ−アミノ酸生産菌及びｌ−アミノ酸の製造法
WO2010027045A1 (ja) * 2008-09-08 2010-03-11 味の素株式会社 Ｌ－アミノ酸を生産する微生物及びｌ－アミノ酸の製造法
RU2010101135A (ru) 2010-01-15 2011-07-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) Бактерия семейства enterobacteriaceae - продуцент l-аспартата или метаболитов, производных l-аспартата, и способ получения l-аспартата или метаболитов, производных l-аспартата
JP2016165225A (ja) 2013-07-09 2016-09-15 味の素株式会社 有用物質の製造方法
RU2013146377A (ru) 2013-10-17 2015-04-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИЗОПРЕНА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ РОДА Bacillus
JPWO2015080273A1 (ja) 2013-11-28 2017-03-16 味の素株式会社 イソプレンモノマーの製造方法
RU2014112066A (ru) 2014-03-28 2015-10-10 Адзиномото Ко., Инк. Способ получения мономерного изопрена
JP2017216881A (ja) 2014-12-26 2017-12-14 味の素株式会社 ジカルボン酸の製造方法
EP3368695A2 (en) 2015-10-27 2018-09-05 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing aldehyde
JP2019165635A (ja) * 2016-08-10 2019-10-03 味の素株式会社 Ｌ−アミノ酸の製造法
EP3778910A4 (en) 2018-04-06 2022-01-19 Ajinomoto Co., Inc. PROCESS FOR THE PREPARATION OF 13-HYDROXY-9(Z)-OCTADECEONIC ACID
WO2021060438A1 (en) 2019-09-25 2021-04-01 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing l-amino acids by bacterial fermentation
US20240117393A1 (en) 2022-09-30 2024-04-11 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing l-amino acid

Family Cites Families (99)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR356739A (fr) 1904-09-20 1905-12-07 Charles Glauser Perrin Mécanisme de remontoir et de mise à l'heure
JPS329393B1 (zh) 1954-12-25 1957-11-07
US3563857A (en) 1967-03-20 1971-02-16 Sanraku Ocean Co Process for producing l-glutamic acid by fermentation
SU875663A1 (ru) 1978-06-30 1982-09-15 Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Штаммы е.coLI ВНИИГенетика VL 334 @ N6 и ВНИИГенетика VL 334 @ N7-продуценты L-треонина и способ их получени
JPS561890A (en) 1979-06-15 1981-01-10 Ajinomoto Co Inc Preparation of l-phenylalanine by fermentation
JPS565099A (en) 1979-06-25 1981-01-20 Ajinomoto Co Inc Production of l-histidine through fermentation process and microorganism used therefor
JPS5618596A (en) 1979-07-23 1981-02-21 Ajinomoto Co Inc Production of l-lysine through fermentation process
JPS56144093A (en) 1980-04-14 1981-11-10 Ajinomoto Co Inc Preparation of l-proline by fermentation
US4371614A (en) 1980-08-22 1983-02-01 Ajinomoto Co., Inc. E.Coli bacteria carrying recombinant plasmids and their use in the fermentative production of L-tryptophan
DE3127361A1 (de) 1981-07-08 1983-02-03 Schering Ag, 1000 Berlin Und 4619 Bergkamen Herstellung und anwendung von plasmiden mit genen fuer die biosynthese von l-prolin
JPS6234397A (ja) 1985-08-08 1987-02-14 Mitsubishi Electric Corp ダイナミツクメモリ装置
JPH06102024B2 (ja) 1986-04-16 1994-12-14 味の素株式会社 新規プロモーター及び該プロモーターを用いた遺伝子発現方法
KR890003681B1 (ko) 1987-03-26 1989-09-30 주식회사 미원 미생물에 의한 l-페닐 알라닌의 제조방법
JP2536570B2 (ja) 1987-10-12 1996-09-18 味の素株式会社 発酵法によるｌ―イソロイシンの製造法
FR2627508B1 (fr) 1988-02-22 1990-10-05 Eurolysine Procede pour l'integration d'un gene choisi sur le chromosome d'une bacterie et bacterie obtenue par ledit procede
US5705371A (en) 1990-06-12 1998-01-06 Ajinomoto Co., Inc. Bacterial strain of escherichia coli BKIIM B-3996 as the producer of L-threonine
DE3891417T1 (de) 1988-10-25 1991-01-10 Vnii Genetiki Selektsii Promy Stamm der bakterien escherichia coli bkiim b-3996, produziert von l-threonin
JPH02207791A (ja) 1989-02-07 1990-08-17 Ajinomoto Co Inc 微生物の形質転換法
JPH07108228B2 (ja) 1990-10-15 1995-11-22 味の素株式会社 温度感受性プラスミド
DE69133342T2 (de) 1990-11-30 2004-07-22 Ajinomoto Co., Inc. Rekombinante DNS-Sequenzen kodierend für Enzyme frei von Feedback-Inhibition, Plasmide, die diese Sequenzen enthalten, transformierte Mikroorganismen, nützlich für Produktion aromatischer Aminosäuren, und deren Verfahren zur Herstellung durch Fermentation
US5168056A (en) 1991-02-08 1992-12-01 Purdue Research Foundation Enhanced production of common aromatic pathway compounds
US5534421A (en) 1991-05-30 1996-07-09 Ajinomoto Co., Inc. Production of isoleucine by escherichia coli having isoleucine auxotrophy and no negative feedback inhibition of isoleucine production
BR9203053A (pt) * 1991-08-07 1993-03-30 Ajinomoto Kk Processo para produzir acido l-glutamico pro fermentacao
JP3006926B2 (ja) 1991-09-04 2000-02-07 協和醗酵工業株式会社 発酵法によるｌ−スレオニンの製造法
JP3036930B2 (ja) 1991-11-11 2000-04-24 協和醗酵工業株式会社 発酵法によるｌ−イソロイシンの製造法
JP3151073B2 (ja) 1992-02-25 2001-04-03 協和醗酵工業株式会社 発酵法によるアミノ酸の製造法
RU2003677C1 (ru) 1992-03-30 1993-11-30 Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Штамм бактерий ESCHERICHIA COLI - продуцент L-гистидина
DE4232468A1 (de) 1992-09-28 1994-03-31 Consortium Elektrochem Ind Mikroorganismen für die Produktion von Tryptophan und Verfahren zu ihrer Herstellung
DE69219775T3 (de) 1992-10-14 2004-08-05 Ajinomoto Co., Inc. Neuartiges L-threoninproduzierendes Mikrobakterium und eine Herstellungsmethode für L-Threonin
US5354672A (en) 1992-11-24 1994-10-11 Ian Fotheringham Materials and methods for hypersecretion of amino acids
US5776736A (en) 1992-12-21 1998-07-07 Purdue Research Foundation Deblocking the common pathway of aromatic amino acid synthesis
ATE210728T1 (de) 1993-10-28 2001-12-15 Ajinomoto Kk Herstellungsverfahren einer substanz
JPH07155184A (ja) 1993-12-08 1995-06-20 Ajinomoto Co Inc 発酵法によるｌ−リジンの製造法
JP3880636B2 (ja) 1994-01-10 2007-02-14 味の素株式会社 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法
US5998178A (en) 1994-05-30 1999-12-07 Ajinomoto Co., Ltd. L-isoleucine-producing bacterium and method for preparing L-isoleucine through fermentation
JP3698758B2 (ja) 1994-06-30 2005-09-21 協和醗酵工業株式会社 発酵法によるｌ−ロイシンの製造法
DE69535674T2 (de) 1994-08-30 2009-01-02 Ajinomoto Co., Inc. Verfahren zur herstellung von l-valin und l-leucin
ATE319834T1 (de) 1994-09-16 2006-03-15 Texas A & M Univ Sys Mikroorganismen und verfahren zur überproduktion von dahp mittels klonierten ppsgens
DE69534801T3 (de) 1994-12-09 2013-05-08 Ajinomoto Co., Inc. Neues lysin decarboxylase gen und verfahren zur herstellung von l-lysin
JP4032441B2 (ja) 1995-08-30 2008-01-16 味の素株式会社 Ｌ−アミノ酸の製造方法
GB2304718B (en) 1995-09-05 2000-01-19 Degussa The production of tryptophan by the bacterium escherichia coli
DE19539952A1 (de) 1995-10-26 1997-04-30 Consortium Elektrochem Ind Verfahren zur Herstellung von O-Acetylserin, L-Cystein und L-Cystein-verwandten Produkten
US5939307A (en) 1996-07-30 1999-08-17 The Archer-Daniels-Midland Company Strains of Escherichia coli, methods of preparing the same and use thereof in fermentation processes for l-threonine production
RU2119536C1 (ru) 1997-01-21 1998-09-27 Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Штамм escherichia coli - продуцент l-гистидина
DE19726083A1 (de) 1997-06-19 1998-12-24 Consortium Elektrochem Ind Mikroorganismen und Verfahren zur fermentativen Herstellung von L-Cystein, L-Cystin, N-Acetyl-Serin oder Thiazolidinderivaten
DE69837041T2 (de) 1997-07-18 2007-11-08 Ajinomoto Co., Inc. Verfahren und Mikroorganismus zur Herstellung von Purin-Nukleosiden durch Fermentation
RU2140450C1 (ru) 1997-10-29 1999-10-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") Штамм бактерий escherichia coli продуцент l-лейцина (варианты)
JP4151094B2 (ja) 1997-11-25 2008-09-17 味の素株式会社 Ｌ−システインの製造法
AU756507B2 (en) 1998-03-18 2003-01-16 Ajinomoto Co., Inc. L-glutamic acid-producing bacterium and method for producing L-glutamic acid
JP4144098B2 (ja) 1998-03-18 2008-09-03 味の素株式会社 Ｌ−グルタミン酸生産菌及びｌ−グルタミン酸の製造法
JP3921866B2 (ja) 1998-03-18 2007-05-30 味の素株式会社 Ｌ−グルタミン酸生産菌及びｌ−グルタミン酸の製造法
AU746542B2 (en) 1998-03-18 2002-05-02 Ajinomoto Co., Inc. L-glutamic acid-producing bacterium and method for producing L-glutamic acid
JP4294123B2 (ja) 1998-07-03 2009-07-08 協和発酵バイオ株式会社 ホスホリボシルピロリン酸を経由して生合成される代謝産物の製造法
CN1170938C (zh) 1998-09-25 2004-10-13 味之素株式会社 构建产生氨基酸的细菌的方法及通过发酵该经构建的产生氨基酸的细菌以制备氨基酸的方法
JP4144131B2 (ja) 1998-10-19 2008-09-03 味の素株式会社 Ｌ−グルタミン酸生産菌及びｌ−グルタミン酸の製造法
US7247459B1 (en) * 1998-10-19 2007-07-24 Ajinomoto Co., Inc. L-glutamic acid producing bacterium and process for producing L-glutamic acid
RU2148642C1 (ru) 1998-12-23 2000-05-10 ЗАО "Научно-исследовательский институт АДЖИНОМОТО-Генетика" (ЗАО "АГРИ") Фрагмент днк rhtc, кодирующий синтез белка rhtc, придающего повышенную устойчивость к l-треонину бактериям escherichia coli, и способ получения l-аминокислоты
RU2175351C2 (ru) 1998-12-30 2001-10-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") Фрагмент днк из escherichia coli, определяющий повышенную продукцию l-аминокислот (варианты), и способ получения l-аминокислот
JP2000262288A (ja) 1999-03-16 2000-09-26 Ajinomoto Co Inc コリネ型細菌の温度感受性プラスミド
JP4061769B2 (ja) 1999-03-25 2008-03-19 味の素株式会社 Ｌ−グルタミン酸の製造法
JP2000333769A (ja) 1999-05-31 2000-12-05 Ikeda Bussan Co Ltd シートバックフレーム
RU2201454C2 (ru) 1999-07-09 2003-03-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" Мутантная альфа-изопропилмалат синтаза (ipms), днк, кодирующая мутантную ipms, способ получения штамма escherichia coli, способ получения l-лейцина
JP4427878B2 (ja) 1999-08-20 2010-03-10 味の素株式会社 析出を伴う発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法
CA2319283A1 (en) 1999-09-20 2001-03-20 Kuniki Kino Method for producing l-amino acids by fermentation
JP4245746B2 (ja) 1999-09-20 2009-04-02 協和発酵バイオ株式会社 発酵法によるアミノ酸の製造法
DE19949579C1 (de) 1999-10-14 2000-11-16 Consortium Elektrochem Ind Verfahren zur fermentativen Herstellung von L-Cystein oder L-Cystein-Derivaten
ATE411378T1 (de) 2000-01-21 2008-10-15 Ajinomoto Kk Verfahren zur herstellung von l-lysin
RU2212447C2 (ru) 2000-04-26 2003-09-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" Штамм escherichia coli - продуцент аминокислоты (варианты) и способ получения аминокислот (варианты)
RU2215783C2 (ru) 2001-05-15 2003-11-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото - Генетика" МУТАНТНАЯ N-АЦЕТИЛГЛУТАМАТ СИНТАЗА (ВАРИАНТЫ), ФРАГМЕНТ ДНК, ШТАММ БАКТЕРИИ Escherichia coli - ПРОДУЦЕНТ АРГИНИНА (ВАРИАНТЫ) И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АРГИНИНА
JP4682454B2 (ja) 2000-06-28 2011-05-11 味の素株式会社 新規変異型ｎ−アセチルグルタミン酸合成酵素及びｌ−アルギニンの製造法
JP4380029B2 (ja) 2000-07-05 2009-12-09 味の素株式会社 微生物を利用した物質の製造法
DE60120570T2 (de) 2000-07-06 2007-01-25 Ajinomoto Co., Inc. Bakterium, das befähigt ist L-Glutaminsäure, L-Prolin und L-Arginin herzustellen, und Verfahren zur Herstellung von L-Glutaminsäure, L-Prolin und L-Arginin
RU2208640C2 (ru) 2000-07-06 2003-07-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АРГИНИНА, ШТАММ Escherichia coli - ПРОДУЦЕНТ L-АРГИНИНА
RU2207371C2 (ru) 2000-09-26 2003-06-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" Способ получения l-аминокислот семейства l-глутаминовой кислоты, штамм бактерии escherichia coli - продуцент l-аминокислоты (варианты)
JP4362959B2 (ja) 2000-08-24 2009-11-11 味の素株式会社 塩基性アミノ酸の製造方法
DE60219969T2 (de) 2001-02-13 2008-01-17 Ajinomoto Co., Inc. Methode zur Production von L-Aminosäuren mittels Bakterien der Gattung Escherichia
JP4599726B2 (ja) 2001-02-20 2010-12-15 味の素株式会社 Ｌ−グルタミン酸の製造法
JP2002238592A (ja) 2001-02-20 2002-08-27 Ajinomoto Co Inc Ｌ−グルタミン酸の製造法
RU2229513C2 (ru) 2001-11-23 2004-05-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" Способ получения l-аминокислот, штамм escherichia coli - продуцент l-аминокислоты (варианты)
CA2468179C (en) 2001-11-23 2013-05-21 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing l-amino acids using bacteria belonging to the genus escherichia
JP3932945B2 (ja) 2002-03-27 2007-06-20 味の素株式会社 Ｌ−アミノ酸の製造法
KR100459758B1 (ko) 2002-05-15 2004-12-03 씨제이 주식회사 이소루이신 조절이 해제된 트레오닌 오페론 염기서열 및그를 포함하는 형질전환 세포를 이용한 ｌ-트레오닌의생산방법
AU2003205041A1 (en) 2002-07-12 2004-01-29 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing target substance by fermentation
BR0304860A (pt) * 2002-11-11 2004-08-31 Ajinomoto Kk Método para produzir uma substância alvo pela utilização de uma-bactéria pertencente ao gênero escherichia
KR20060015582A (ko) 2003-05-07 2006-02-17 아지노모토 가부시키가이샤 Ｌ-글루탐산의 제조법
EP1655374B1 (en) 2003-06-10 2014-10-15 Ajinomoto Co., Inc. Process for producing l-glutamic acid
RU2003121601A (ru) 2003-07-16 2005-02-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") (RU) Мутантная серинацетилтрансфераза
JP4665451B2 (ja) 2003-07-29 2011-04-06 味の素株式会社 Ｌ−リジンまたはｌ−スレオニンの製造法
JP4380305B2 (ja) 2003-11-21 2009-12-09 味の素株式会社 発酵法によるｌ−アミノ酸の製造法
DE602005016763D1 (de) * 2004-01-30 2009-11-05 Ajinomoto Kk L-aminosäure produzierender mikroorganismus und verfahren zur l-aminosäureproduktion
JP4665537B2 (ja) * 2004-01-30 2011-04-06 味の素株式会社 Ｌ−アミノ酸生産菌及びｌ−アミノ酸の製造法
US7344874B2 (en) 2004-03-04 2008-03-18 Ajinomoto Co., Inc. L-glutamic acid-producing microorganism and a method for producing L-glutamic acid
JP4665558B2 (ja) * 2004-03-04 2011-04-06 味の素株式会社 Ｌ−グルタミン酸生産微生物及びｌ−グルタミン酸の製造法
WO2005103275A1 (ja) 2004-04-26 2005-11-03 Ajinomoto Co., Ltd. 発酵法によるｌ－トリプトファンの製造法
RU2004124226A (ru) * 2004-08-10 2006-01-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) Использование фосфокетолазы для продукции полезных метаболитов
US7915018B2 (en) * 2004-10-22 2011-03-29 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing L-amino acids using bacteria of the Enterobacteriaceae family
JP2008029202A (ja) 2004-11-09 2008-02-14 Ajinomoto Co Inc Ｌ−グルタミン酸の製造法
JP2006129840A (ja) 2004-11-09 2006-05-25 Ajinomoto Co Inc Ｌ−グルタミン酸の製造法
US7501282B2 (en) * 2005-02-25 2009-03-10 Ajinomoto Co., Inc. Plasmid autonomously replicable in Enterobacteriaceae family

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105189734A (zh) * 2013-03-19 2015-12-23 国立大学法人奈良先端科学技术大学院大学 提高l-半胱氨酸生产能力的属于肠杆菌科的细菌
CN105189734B (zh) * 2013-03-19 2018-11-09 国立大学法人奈良先端科学技术大学院大学 提高l-半胱氨酸生产能力的属于肠杆菌科的细菌

Also Published As

Publication number Publication date
CN101627110B (zh) 2014-08-13
EP2116595B1 (en) 2017-04-05
KR20090112719A (ko) 2009-10-28
KR101730837B1 (ko) 2017-04-27
US7919284B2 (en) 2011-04-05
ES2631360T3 (es) 2017-08-30
EP2116595A4 (en) 2010-04-28
EP2116595A1 (en) 2009-11-11
BRPI0806790A2 (pt) 2011-09-13
US20100062496A1 (en) 2010-03-11
BRPI0806790B1 (pt) 2017-02-14
WO2008090770A1 (ja) 2008-07-31
JPWO2008090770A1 (ja) 2010-05-20
JP5540504B2 (ja) 2014-07-02

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