CN101616666A - 用于治疗和预防再狭窄的药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明提供了用于治疗和/或预防再狭窄的药物组合物，该药物组合物包括(a)治疗有效量的由式1和式2表示的特定化合物或其药学可接受的盐、前体药物、溶剂合物或异构体，和(b)药学可接受的载体、稀释剂或赋形剂或其任何组合。

Description

用于治疗和预防再狭窄的药物组合物

技术领域

本发明涉及通过抑制血管平滑肌细胞增殖而具有治疗和/或预防再狭窄的疗效的药物组合物，更具体地涉及包括以下的药物组合物(1)治疗有效量的式1化合物和式2化合物或其药学可接受的盐、前体药物、溶剂合物或异构体，和(b)药学可接受的载体、稀释剂或赋形剂或其任何组合。

背景技术

血管平滑肌细胞增殖，其作为对血管壁损伤的应答，是指在动脉硬化中被显著地观察到的一种现象，其在动脉内膜中由于脂质所引起的血管壁损伤而显示继发性变化。因此，血管平滑肌细胞增殖已知是动脉粥样硬化的主要原因。另外，血管平滑肌细胞增殖是在外科手术诸如血管成形术、搭桥术或血管移植中的已知的严重问题，这些方法是目前用于恢复由于动脉硬化而变窄的血管的功能的最好方法。

因此，为了预防和治疗动脉硬化，血管平滑肌细胞增殖被认为是非常重要的因素，并且因此，目前正在积极地对血管平滑肌细胞增殖进行研究。最近，已知在细胞能量代谢中起到关键作用的AMP活化蛋白激酶(AMPK)的效果已被报道为，增加的AMPK活性足以抑制血管平滑肌细胞增殖。

在这一点上，NAD是增加AMPK活性的多种因子中的重要因子，并且NAD(P)H：奎宁氧化还原酶1(NQO1)是提高细胞中NAD的主要因子之一。

NAD(P)H：醌氧化还原酶(EC1.6.99.2)也被称作DT-黄递酶、醌还原酶、甲萘醌还原酶、维生素K还原酶或偶氮染料还原酶，并且这些NQO以两种同工型NQO1和NQO2存在(ROM.J.INTERN.MED.2000-2001，第38-39卷，第33-50页)。NQO是黄素蛋白并且催化醌或醌衍生物的的双电子还原和去毒。NQO的活性防止形成具有极高反应性的醌代谢物，使苯并(d)芘和醌去毒，并削弱铬的毒性。NQO的活性在所有种类的组织中都被发现，但是因组织与组织的不同而具有差别。通常，NQO的高水平表达在癌细胞、肝、胃和肾组织中被证实。NQO基因表达由生物体内异物、抗氧化剂、氧化剂、重金属、紫外线、射线照射等所触发。NQO是由氧化应激所诱导的多种细胞防卫机制的一部分。与这种细胞防卫机制有关的相关基因表达，包括NQO基因表达在内，足以保护细胞免受氧化应激、自由基和瘤形成的损伤。

NQO1主要分布在上皮细胞和内皮细胞中。这暗示了NQO1可以担当对抗被空气、食管或血管吸收的化合物的防卫机制。新近的研究显示了NQO1通过氧化还原机制参与稳定细胞周期调节因子p53。

NQO使用NADH和NADPH二者作为电子施体。NADPH在生物合成过程中被用作还原剂，NADH被用在产生能量反应中。NADPH是牵涉脂肪合成的重要因子，并且棕榈酸酯的合成需要14个NADPH分子。

然而，产生自由基诸如反应性氧自由基(ROS)，在此期间，在脂肪合成和能量产生之后残留的过剩的NAD(P)H，被存在于质膜上的被称作NAD(P)H氧化酶的氧化酶所清除。在肥胖症和糖尿病中的增加的氧化应激的根本原因被认为主要是NAD(P)H氧化酶(Free Radical Biology&Medicine.Vol.37，No 1，115-123，2004)。还已发现由NAD(P)H氧化酶产生的自由基诸如反应性氧自由基(ROS)对于诸如以下的各种疾病的发病机理是主要因素：癌，心血管疾病，高血压，动脉硬化，心脏肥大，缺血性心脏病，败血症，炎性病况和疾病，血栓形成，脑神经疾病(诸如脑中风(卒中)，阿尔茨海默病和帕金森病)，衰老加速(J.Pharm.Pharmacol.2005，57(1)：111-116)。

因此，当体内或体外的NAD⁺/NADH和NADP⁺/NADPH的比降低时，则剩余过剩的NADH和NADPH分子，它们被用于脂肪生物合成过程。另外，因为过剩的NADH和NADPH当它们过量存在时也被用作引起反应性氧物质(ROS)产生的主要底物，因此NADH和NADPH可能是包括由ROS所引起的炎性病况和疾病在内的重大疾病的致病因素。由于这些原因，据信当可以建立体内或体外环境以确保维持NAD⁺/NADH和NADP⁺/NADPH的比以增加的状态稳定时，可活化由NAD⁺和NADP⁺进行的脂肪氧化和各种能量消耗(代谢)。

最近大量的关注集中于NA(D)P⁺。NA(D)P⁺起到在包括脂肪氧化在内的许多代谢中所牵涉的各种酶的底物或辅酶的作用。具体而言，NA(D)P⁺是牵涉许多生物代谢过程的体内物质并且被用作包括以下在内的多种类型的酶的底物或辅酶：NAD⁺-依赖性DNA连接酶，NAD⁺-依赖性氧化还原酶，聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)，CD38，AMPK，CtBP和Sir2p家族成员，以及被用作负责调节能量代谢、DNA修复和转录的各种酶的辅酶。NAD⁺被发现在转录调节、长寿、卡路里限制性介导的疾病中通过上述的体内作用而起到关键的作用。

因此，NAD(P)⁺/NAD(P)H的比，作为调节细胞内氧化还原态的主要因素，通常被认为是反映有机体的代谢状态的指示器。NAD(P)⁺/NAD(P)H的比根据代谢过程的不同而异。尤其是，公知NAD⁺起到代谢调整物的作用。许多的老化相关疾病直接或间接地与NAD⁺的氧化还原态或NAD(P)⁺/NAD(P)H的变化有关。

同时，证实了AMP活化蛋白激酶(AMPK)是感知活生物体内的能量状态、氧化还原态和磷酸化的程度的蛋白质，并且不仅被AMP活化而且也被NAD⁺所活化(J.Biol.Chem.2004，Dec.17；279(51)：52934-9)。通过磷酸化作用被活化的AMPK已据报道表现出各种功能和作用，诸如抑制脂肪合成，促进葡萄糖摄取，促进脂肪降解(脂解)和脂肪氧化，促进糖酵解，增强胰岛素灵敏性，抑制糖原合成，抑制甘油三酯和胆固醇合成，减轻炎症(抗炎作用)，血管扩张活性，心血管系统的功能性改善，线粒体再生和肌肉结构变化，抗氧化功能，抗老化和抗癌效果。另外，由于以上所述的各种活性和功能，AMPK被认为是治疗诸如以下疾病的靶蛋白：肥胖症，糖尿病，代谢综合征，脂肪肝，缺血性心脏病，高血压，退行性脑疾病，高脂血症，糖尿病并发症和勃起功能障碍(Nat.Med.2004Jul；10(7)：727-33；Nature reviews 3，340-351，2004；和Genes&Development 27，1-6，2004)。

Lee等人(Nature medicine，13(June)，2004)已经建议了α-硫辛酸通过抑制下丘脑AMPK活性从而控制食欲可以发挥抗肥胖效果。他们还报道说α-硫辛酸通过活化肌肉组织内的、而非下丘脑内的AMPK而促进脂肪代谢，并且α-硫辛酸对于治疗肥胖症是治疗有效的，因为它通过活化特别是在脂肪细胞中的UCP-1而促进能量消耗。

Roger等人(Cell，117，145-151，2004)已建议了AMPK活化因子或丙二酰基-辅酶A还原因子可以是用于从这种异常疾病和综合征中恢复或预防这些异常疾病和综合征的可能的靶标。

Nandakumar等人(Progress in lipid research 42，238-256，2003)已经推荐了，在缺血性心脏病中，AMPK将是借助于调节脂肪和葡萄糖代谢而治疗缺血再灌注损伤的靶标。

Min等人(Am.J.Physiol.Gastrointest Liver Physiol 287，G 1-6，2004)已经报道说AMPK有效用于调节酒精性脂肪肝。

Genevieve等人(J.Biol.Chem.279，20767-74，2004)已经报道说AMPK抑制在慢性炎性病况或内毒素休克(包括肥胖症相关糖尿病在内)中作为炎症递质的iNOS酶的活性，从而AMPK有效地用于开发具有能够增强胰岛素敏感性的机理的新药物。另外，他们已经报道说iNOS活性的抑制通过AMPK的活化而实现，并且因此，这一发现可在临床上适用于诸如败血症、多发性硬化、心肌梗死、炎性肠病和胰腺β细胞功能障碍的疾病。

Zing-ping等人(FEBS Letters 443，285-289，1999)已经报道说AMPK在鼠科动物肌细胞和心肌细胞中在Ca-钙调蛋白存在的条件下通过磷酸化作用而活化内皮NO合酶。这指出AMPK牵涉包括心绞痛在内的心脏病。

Javier等人(Genes&Develop.2004)已经报道说通过限制能量利用可以延长寿命并且这种被延长的寿命以体内AMP/ATP比被增加并因此AMPK的α2亚单位被AMP活化的方式来实现。因此，他们已经建议了AMPK可起到用于检测寿命延长和能量水平以及胰岛素样信号信息之间的关系的探测器的作用。

同时，具有常规的萘醌基化合物的一些药物组合物是已知的。其中，β-拉杷醌(lapachone)是从南美洲当地的lapacho树(单叶风铃木(Tabebuia avellanedae))中获得的拉帕醇由来的天然存在植物产品。董尼酮和α-董尼酮也得自南美洲当地的登氏好望角苣苔(Streptocarpusdunnii)的叶子。因为在古代的南美洲，这些天然的三环萘醌衍生物已被广泛用作抗癌药物和用于治疗在南美洲中作为典型地方病的恰加斯氏病(Chagas disease)，并且已知发挥优异的治疗效果。特别地，因为它们作为抗癌药物的药理作用通常被西方国家所已知，因此这些三环萘醌衍生物最近引起人们的相当多的注意。事实上，如美国专利No.5,969,163所公开的，这种三环萘醌衍生物化合物目前正被许多科研小组和机构开发作为一类抗癌药物。

然而，尽管进行许多的调查和研究，但是这些萘醌化合物借助于增加NAD和AMPK的活性具有用于治疗或预防与用于动脉硬化的外科手术有关的再狭窄的治疗效力或治疗由血管平滑肌细胞增殖引起的动脉硬化的事实仍然是未知的。

发明概述

通过基于如上所述的事实所进行的许多广泛的和密集的研究和实验，本发明的发明人新证实了借助于具体化合物的采用来活化NQO1通过抑制血管平滑肌细胞增殖而有效用于预防和/或治疗与用于治疗动脉硬化的外科手术有关的再狭窄。基于这些发现完成了本发明。

因此，本发明的目的是提供一种药物组合物，其包括作为活性成分的化合物，该化合物具有用于治疗和预防与用于治疗动脉硬化的外科手术有关的再狭窄的治疗有效性。

根据本发明的一方面，上述目的和其它目的可通过提供用于治疗和/或预防再狭窄的药物组合物来实现，该药物组合物包括：(a)治疗有效量的一种或多种选自下式1和下式2所示的化合物或其药学可接受的盐、前体药物、溶剂合物或异构体：

其中

R₁和R₂各自独立地是氢，卤素，氨基，烷氧基，或C₁-C₆低级烷基或烷氧基，或者R₁和R₂可连在一起形成被取代的或未被取代的环状结构，该环状结构可以是饱和的或部分不饱和的或完全不饱和的；

R₃、R₄、R₅、R₆、R₇和R₈各自独立地是氢，羟基，氨基，C₁-C₂₀烷基，烯或烷氧基，C₄-C₂₀环烷基，杂环烷基，芳基或杂芳基，R₃到R₈的两个取代基可连在一起形成可以是饱和的或部分不饱和或完全不饱和的环状结构；

X选自C(R)(R’)，N(R”)，O和S，优选O或S，更优选O，其中R’是氢或C₁-C₆低级烷基；

Y是C，S或N，条件是当Y是S时则R₇和R₈什么都不是并且当Y是N时则R₇是氢或C₁-C₆低级烷基并且R₈什么都不是；和

n是0或1，条件是当n是0时，与n相邻的碳原子通过直接键形成环状结构；和

(b)药学可接受的载体、稀释剂、或赋形剂或其任何组合。

为了证实式1化合物对再狭窄的治疗效果，本发明的发明人已经进行了实验。并且，结果是，证实了当式1或2的化合物被给予到血管平滑肌细胞时，其提高NQO1表达，并且与NQO1表达相一致的增加的NAD⁺提高AMPK活性从而抑制血管平滑肌细胞增殖。另外，还证实了化合物的给药在进行用于治疗动脉硬化的球囊血管成形术后抑制了内膜增生。

在这方面，式1或2的化合物被认为对于预防和治疗与通常在进行球囊血管成形术后产生的与血管平滑肌细胞增殖有关的再狭窄和与在由脂质导致的血管壁损伤后的与血管平滑肌细胞增殖有关的动脉硬化具有优异效果。

本公开使用的术语“药学可接受的盐”是指化合物的不对其所被给予的有机体产生显著的刺激并且不丧失该化合物的生物活性和性质的形式。药学可接受的盐的实例包括该化合物与包含药学可接受的阴离子并且能够形成无毒的酸加成盐的酸所形成的酸加成盐，所述酸为例如无机酸，诸如盐酸、硫酸、硝酸、磷酸、氢溴酸和氢碘酸；有机含碳酸，诸如酒石酸、甲酸、枸橼酸、乙酸、三氯乙酸、三氟乙酸、葡糖酸、苯甲酸、乳酸、富马酸、马来酸和水杨酸；或磺酸，诸如甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸和对甲苯磺酸。具体而言，药学可接受的羧酸盐的实例包括含有碱金属或碱土金属诸如锂、钠、钾、钙和镁的盐，含有氨基酸诸如精氨酸、赖氨酸和胍的盐，含有有机碱诸如二环己胺、N-甲基-D-葡糖胺、三(羟基甲基)甲胺、二乙醇胺、胆碱和三乙胺的盐。本发明的化合物可通过本领域公知的常规方法被转化为其盐。

本文使用的术语“前体药物”是指在体内可被转化为母体药物的试剂。前体药物经常是有用的，因为，在一些部位，它们可比母体药物更容易地被给予。例如，它们通过口服给药可具有生物利用度，而母体化合物可能并非如此。前体药物与母体药物相比还可具有在药物组合物中的改善的溶解度。前体药物的非限制性实例是作为酯(“前体药物”)被给予的本发明的化合物从而帮助转运通过其中水溶性对移动不利的细胞膜，然后当其位于其中水溶性是有益的细胞内部时其被代谢性水解成羧酸即活性实体。前体药物的另一个实例可能是与酸性基团键合的短肽(聚胺酸)，其中所述肽被代谢掉以暴露出活性部分。

作为这种前体药物的实例，本发明的药物化合物可以包括作为活性物质的由下式1a表示的前体药物：

其中

R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈、X和n具有式1中的定义。

R₉和R₁₀各自独立地是-SO₃ ^-Na⁺或由下式A表示的取代基或其盐，

其中，

R₁₁和R₁₂各自独立地是氢或被取代的或未被取代的C₁-C₂₀直链烷基或C₁-C₂₀支链烷基，

R₁₃选自以下的i)到viii)的基团：

i)氢；

ii)被取代的或未被取代的C₁-C₂₀直链烷基或C₁-C₂₀支链烷基；

iii)被取代的或未被取代的胺；

iv)被取代的或未被取代的C₃-C₁₀环烷基或C₃-C₁₀杂环烷基；

v)被取代的或未被取代的C₄-C₁₀芳基或C₄-C₁₀杂芳基；

vi)-(CRR ’-NR”CO)₁-R₁₄，其中R、R’和R”各自独立地是氢或被取代的或未被取代的C₁-C₂₀直链烷基或C₁-C₂₀支链烷基，R₁₄选自氢，被取代的或未被取代的胺，环烷基，杂环烷基，芳基和杂芳基，1选自1～5；

vii)被取代的或未被取代的羧基；

viii)-OSO₃-Na⁺；

k选自0～20，条件是当k是0时，R₁₁和R₁₂什么都不是并且R₁₃直接结合于羰基。

本文使用的术语“溶剂合物”是指本发明的化合物或其盐进一步包括化学计量的或非化学计量的量的通过非共价分子间作用力与其结合的溶剂。优选的溶剂是挥发性的、无毒的和/或对于人的给药是可接受的。当溶剂是水时，则溶剂合物是指水合物。

本文使用的术语“异构体”是指本发明的化合物或其盐，其具有相同的化学式或分子式，但是在光学上或空间上具有不同的构型。D型旋光异构体和L型旋光异构体可存在于式1中，根据被选择的R₃～R₈类型的取代基的不同而异。

除非另作说明，否则术语“式1或2的化合物”意在包涵化合物自身及其药学可接受的盐、前体药物、溶剂合物和异构体。

本文使用的术语“烷基”是指脂肪族烃基。烷基部分可以是“饱和的烷基”基团，这意味着不包含任何的烯或炔部分。作为替代，烷基部分也可是“不饱和的烷基”部分，这意味着其包含至少一个烯或炔部分。术语“烯”部分是指这样的基团，在该基团中，至少两个碳原子形成至少一个碳-碳双键，并且“炔”部分是指这样的基团，在该基团中，至少两个碳原子形成至少一个碳-碳三键。烷基部分，无论是是被取代或未被取代的，可以是支链的、直链的或环状的。

本文使用的术语“杂环烷基”是指其中一个或多个环碳原子被氧、氮或硫代替的碳环基团，并且其包括例如但不限于：呋喃、噻吩、吡咯、吡咯啉、吡咯烷、噁唑、噻唑、咪唑、咪唑啉、咪唑烷、吡唑、吡唑啉、吡唑烷、异噻唑、三唑、噻二唑、吡喃、吡啶、哌啶、吗啉、硫代吗啉、哒嗪、嘧啶、吡嗪、哌嗪和三嗪。

本文使用的术语“芳基”是指具有至少一个具有共轭π电子系统的环的芳香取代基团并且包括碳环芳基(例如苯基)和杂环芳基(例如吡啶)基团。该术语包括单环的或稠环的多环(即，共享相邻的碳原子对的环)基团。

本文使用的术语“杂芳基”是指包含至少一个杂环的芳基。

芳基或杂芳基的实例包括但不限于苯基、呋喃、吡喃、吡啶基、嘧啶基和三唑基。

本发明的式1或2中的R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇和R₈可任选被取代。当被取代时，取代基团是一个或多个分别地且独立地选自以下的基团：环烷基，芳基，杂芳基，杂脂环基，羟基，烷氧基，芳基氧基，巯基，烷基硫基，芳基硫基，氰基，卤素，羰基，硫代羰基，O-氨甲酰基，N-氨甲酰基，O-硫代氨甲酰基，N-硫代氨甲酰基，C-酰胺基，N-酰胺基，S-磺酰胺基，N-磺酰胺基，C-羧基，O-羧基，异氰基，硫氰基，异硫氰基，硝基，甲硅烷基，三卤代甲磺酰基，以及包括被一取代和二取代的氨基在内的氨基，及其被保护的衍生物。另外，在式1a中的R₁₁、R₁₂和R₁₃也可被上述取代基所取代，并且当被取代时，它们可被上述取代基所取代。

在式1的化合物中，优选下式3和4的化合物。

式3的化合物是其中n是0且相邻碳原子通过它们之间的直接键形成环状结构(呋喃环)的化合物，并且在以下通常被称为“呋喃化合物”或“呋喃并-o-萘醌衍生物”。

式4的化合物是其中n是1的化合物并且在以下通常被称为“吡喃化合物”或“吡喃并-o-萘醌”。

在式1中，每个R₁和R₂特别优选是氢。

在式3的呋喃化合物中，特别优选其中R₁、R₂和R₄是氢的式3a的化合物或者其中R₁、R₂和R₆是氢的式3b的化合物。

另外，在式4的吡喃化合物中，特别优选其中R₁、R₂、R₅、R₆、R₇和R₈是氢的式4a的化合物或者其中R₁和R₂连在一起形成被取代的或未被取代的环状结构的式4b或4c的化合物。

在式2的化合物中，优选但不限于下式2a和2b的化合物。

式2a的化合物是其中n是0且相邻碳原子借助于它们之间的直接键形成环状结构并且Y是C的化合物。

式2b的化合物是其中n是1且Y是C的化合物。

在式2a或2b中，R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈和X如式2中的定义。

本文使用的术语“药物组合物”是指式1或2的化合物与其它化学组分诸如稀释剂或载体的混合物。药物组合物帮助给药该化合物到有机体。给予化合物的各种技术是本领域已知的并且包括但不限于口服、注射、气雾剂、非肠道和局部给药。药物组合物还可通过使感兴趣的化合物与酸诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等反应而获得。对于治疗和预防再狭窄是治疗有效的有效成份包括所有的上式所示的化合物，在后文中被称为“活性成分”。

术语“治疗有效量”是指一定量的活性成分，当给予化合物时，该量有效减轻或减少需要治疗的疾病的一个或多个症状到某些程度，或者推迟需要预防的疾病的临床标志或症状的开始。因此，治疗有效量是指表现出以下效果的活性成分的量：(i)反转疾病的进程的速率；(ii)在某种程度上抑制疾病的进一步发展；和/或，(iii)在某种程度上缓解(或优选消除)与疾病有关的一种或多种症状。治疗有效量可采用在已知的用于需要治疗的疾病的体内和体外模型系统中用该化合物进行实验而凭经验进行确定。

活性成分的制备

在本发明的药物组合物中，作为活性物质的式1或2的化合物，正如下文所示例的，可以通过本领域已知的常规方法和/或各种基于有机化学合成领域中的一般技术和实践的方法制备。如下所述的制备方法仅仅是示例性的并且还可使用其它方法。因此，本发明的范围不受以下方法的限制。

制备方法1：通过酸催化的环化合成活性物质

具有相对简单的化学结构的三环萘醌(吡喃并-o-萘醌和呋喃并-o-萘醌)衍生物通常借助于使用硫酸作为催化剂进行的环化以比较高的收率被合成，基于这一方法，可以合成出许多的式1的化合物。

更具体地说，上述合成方法可以总结如下。

也就是说，当2-羟基-1，4-萘醌与各种烯丙基溴化物或其等价物在碱存在的条件下反应时，同时获得C-烷基化产物和O-烷基化产物。也可能仅仅根据反应条件合成出两个衍生物中的任一种。因为O-烷基化衍生物通过使用溶剂诸如甲苯或二甲苯对O-烷基化衍生物进行回流经过克莱森重排而被转化为另一种类型的C-烷基化衍生物，因此，有可能获得各种类型的3-取代的-2-羟基-1，4-萘醌衍生物。如此获得的各种类型的C-烷基化衍生物可经历采用硫酸作为催化剂进行的环化，从而能够合成属于式1的化合物的吡喃并-o-萘醌或呋喃并-o-萘醌衍生物。

制备方法2：使用3-亚甲基-1，2，4-[3H]萘三酮的狄尔斯-阿尔德反应

根据V.Nair等人在Tetrahedron Lett.42(2001)，4549-4551中的教导，据报导，许多的吡喃并-o-萘醌衍生物可以通过使3-亚甲基-1，2，4-[3H]萘三酮(其当共同加热2-羟基-1，4-萘醌和甲醛时被产生)经历与各种烯烃化合物进行的狄尔斯-阿尔德反应可相对容易地被合成出。这一方法的优点在于，与采用硫酸作为催化剂诱导环化的方式相比，各种形式的吡喃并-o-萘醌衍生物可以采用相对简单化的方式被合成出。

制备方法3：通过自由基反应进行卤代烷基化和环化

在合成隐丹参醌和15，16-二氢-丹参酮中所用的相同方法也可被方便地用来合成呋喃并-o-萘醌衍生物。也就是说，根据A.C.Baillie等人(J.Chem.Soc.(C)1968，48-52)的教导，得自3-卤代丙酸或4-卤代丁酸衍生物的2-卤代乙基或3-卤代乙基化学物质可与2-羟基-1，4-萘醌反应，从而合成出3-(2-卤代乙基或3-卤代丙基)-2-羟基-1，4-萘醌，其然后在适当的酸性催化剂条件下经历环化，以合成出各种吡喃并-o-萘醌或呋喃并-o-萘醌衍生物。

制备方法4：通过狄尔斯-阿尔德反应进行4，5-苯并呋喃二酮的环化

在合成隐丹参醌和15，16-二氢-丹参酮中所用的另一个方法可以是由J.K.Snyder等人(Tetrahedron Letters 28(1987)，3427-3430)所教导的方法。根据这一方法，呋喃并-o-萘醌衍生物可以通过在4，5-苯并呋喃二酮衍生物和各种二烯衍生物之间经过狄尔斯-阿尔德反应进行环加成被合成出。

另外，基于以上所述的制备方法，采用相应的合成法，根据取代基类型的不同而异，可以合成出各种衍生物。如此合成的衍生物的具体实例和方法在下表1中示出。具体的制备方法将在以下的实施例中描述。

[表1]

本发明的药物组合物可采用自身已知的方法被制备，例如，借助于常规的混合、溶解、造粒、制糖衣丸、磨光、乳化、包封、截留或冻干过程。

本发明的药物组合物可另外包含药学可接受的载体、稀释剂或赋形剂或其任何组合。因此，本发明的药物组合物可以常规方式被制备，采用一种或多种包括帮助将活性化合物加工成药学可使用的制剂的赋形剂和助剂在内的药学可接受的载体进行。该药物组合物帮助将化合物给药至有机体。

术语“载体”是指帮助将化合物并入细胞或组织内的化学物质。例如，二甲亚砜(DMSO)是通常被采用的载体，因为其帮助使许多有机化合物被摄取进入有机体的细胞或组织内。

术语“稀释剂”是指在水中稀释的化学物质，其将感兴趣的化合物溶解以及使得该化合物的生物学活性形式是稳定的。溶解在缓冲溶液中的盐在本领域中用作稀释剂。一种常用的缓冲溶液是磷酸盐缓冲盐水(PBS)，因为其摹拟人体液的离子强度条件。因为缓冲盐可以在低浓度下控制溶液的pH，因此缓冲液稀释剂很少地改变化合物的生物活性。

本文所述的化合物可以自身的形式或以它们与其它活性成分或适当的载体或赋形剂混合的药物组合物的形式(如在联合治疗中的那样)被给药至人患者。化合物的配制和给药技术可见于“Remington’sPharmaceutical Sciences，”Mack Publishing Co.，Easton，PA，第18版，1990。

给予化合物的各种技术是本领域已知的并且包括但不限于口服、注射、气雾剂、非肠道和局部给药。药物组合物还可通过使感兴趣的化合物与酸诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等反应而获得。

化合物可采用本领域已知的许多方法进行配制，优选被配制成药学可接受的口服、外用、透粘膜和可注射的制剂，更优选被配制成口服制剂。

本发明的用于口服给药的药物组合物优选被制备成肠靶向制剂。

通常，口服药物组合物在口服给药时经过胃，大部分被小肠所吸收，然后散布于所有的体组织内，从而发挥对靶组织的治疗效果。

在这一点上，本发明的口服药物组合物借助于活性成分的肠靶向制剂而增强了作为活性成分的式1或2化合物的生物吸收和生物利用度。更具体地说，当本发明的药物组合物中的活性成分主要在胃内和小肠上部被吸收时，被吸收进入体内的活性成分直接经历肝代谢，这伴随着活性成分的大量降解，因此，不可能发挥所需水平的治疗效果。另一方面，预期当活性成分主要地在小肠下部周围和下游被吸收时，被吸收的活性成分经由淋巴管移动到靶组织，从而发挥高的治疗效果。

另外，因为药物以本发明的药物组合物靶向于直到作为消化过程的最终目的地的结肠的方式进行构建，因此有可能增加药物的体内潴留时间并且还有可能使得当药物被给药到体内时由于身体代谢而可能发生的药物分解最小化。结果是，有可能改善药物的药代动力学性质，显著降低治疗疾病所必需的活性成分的必需有效剂量，并且甚至给予痕量的活性成分时也可获得所需的治疗效果。另外，在口服药物组合物中，还有可能通过降低由于胃内pH变化和饮食摄取模式所带来的生物利用度在个体间和个体内的差异而使得药物吸收差异最小化。

因此，本发明的肠靶向制剂被构建为使得活性成分主要地在小肠和大肠内被吸收，更优选在与小肠下部所对应的空肠、回肠和结肠内被吸收，特别优选在回肠或结肠内被吸收。

肠靶向制剂可通过许多方法利用消化道的许多生理参数进行设计。在本发明的一个优选方案中，肠靶向制剂可如下制备：(1)基于pH敏感聚合物的制剂方法，(2)基于可被肠特异性细菌酶分解的生物可降解的聚合物的制剂方法，(3)基于可被肠特异性细菌酶分解的生物可降解的基质的制剂方法，或(4)在给定的滞后时间后允许释放药物的制剂方法，及其任何组合。

具体而言，(1)采用pH敏感聚合物的肠靶向制剂是基于消化道的pH变化的药物递送系统。胃的pH在1-3的范围内，而小肠和大肠的pH值与胃的pH相比为7或更高。基于这一事实，pH敏感聚合物可被使用的目的是为了确保药物组合物到达更靠下的肠部分而不受消化道的pH波动的影响。pH敏感聚合物的实例可包括但不限于选自以下的至少一种：甲基丙烯酸-丙烯酸乙酯共聚物(Eudragit：Rohm PharmaGmbH的注册商标)、羟基丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯(HPMCP)及其混合物。

优选地，pH敏感聚合物可通过包衣法被附加。例如，聚合物的附加可以通过将该聚合物混合在溶剂中以形成水性包衣悬浮液、将所得的包衣悬浮液进行喷雾以形成薄膜包衣、并对该薄膜包衣进行干燥而进行。

(2)使用可被肠特异性细菌酶分解的生物可降解的聚合物的肠靶向制剂基于采用可由肠细菌产生的特异性酶的降解能力。特异性酶的实例可包括偶氮还原酶、细菌水解酶、糖苷酶、酯酶、多糖酶等等。

当希望设计使用偶氮还原酶作为靶标的肠靶向制剂时，生物可降解的聚合物可能是包含偶氮芳香性链接的聚合物，例如苯乙烯和甲基丙烯酸羟乙酯(HEMA)的共聚物。当该聚合物被附加到包含活性成分的制剂中时，通过偶氮还原酶的作用将该聚合物的偶氮基还原，活性成分可被释放进入肠，偶氮还原酶通过肠细菌例如脆弱类杆菌(Bacteroides fragilis)和粘液真杆菌(Eubacterium limosum)特异性分泌。

当希望设计采用糖苷酶、酯酶或多糖酶作为靶标的肠靶向制剂时，生物可降解的聚合物可以是天然存在多糖或其被取代的衍生物。例如，生物可降解的聚合物可以是选自以下的至少一种：葡聚糖酯、果胶、淀粉酶、乙基纤维素及其药学可接受的盐。当聚合物被附加到活性成分时，通过被肠细菌例如双歧杆菌(Bifidobacteria)和畸形菌体(Bacteroides spp.)特异性分泌的每种酶的作用而将聚合物水解，活性成分可被释放进入肠。这些聚合物是天然物质，并且具有低的体内毒性风险的优点。

(3)使用可被肠特异性细菌酶分解的生物可降解的基质的肠靶向制剂可以是其中生物可降解的聚合物彼此交联并且被附加到活性成分或包含活性成分的制剂中的形式。生物可降解的聚合物的实例可包括天然存在的聚合物诸如硫酸软骨素、瓜尔胶、脱乙酰壳多糖、果胶等等。药物释放的程度可根据构成基质的聚合物的交联程度的不同而异。

除了天然存在的聚合物之外，生物可降解的基质还可是基于N-取代的丙烯酰胺的合成水凝胶。例如，可采用通过N-叔丁基丙烯酰胺与丙烯酸的交联或通过甲基丙烯酸-2-羟乙酯与4-甲基丙烯酰基氧基偶氮苯的共聚合成的水凝胶作为基质。交联可以是例如上述的偶氮链接，并且制剂可以是其中交联密度被保持为以提供用于肠药物递送的最佳条件的形式，并且当药物被递送到肠时该链接被降解以与肠粘膜相互作用。

另外，(4)在滞后时间后随着时程释放药物的肠靶向制剂是采用允许在预定时间后与pH变化无关地释放活性成分的机制的药物递送系统。为了实现活性药物的肠释放，该制剂应该耐受胃pH环境，并且应当具有在活性成分释放进入肠之前与药物从身体被递送到肠所采用的时段相当的5-6小时的静止相。时间特异性延迟释放制剂可通过附加从聚环氧乙烷与聚氨酯的共聚而制备的水凝胶制备。

具体而言，延迟释放制剂可具有这样的结构，其中在施加药物到不溶性聚合物之后，当附加具有上述组成的水凝胶时，该制剂在停留在胃内和小肠的上消化道内时吸收水、然后溶胀，并且然后移动到作为下消化道的小肠下部并释放药物，药物的滞后时间根据水凝胶长度的不同而异。

作为聚合物的另一个实例，乙基纤维素(EC)可用于延迟释放剂型中。EC是不溶性聚合物，并且可充当响应由于水渗透或由蠕动带来的肠内压力的改变所导致的溶胀介质的膨胀而用于延迟药物释放时间的因素。滞后时间可通过EC的浓度来控制。作为附加实例，羟基丙基甲基纤维素(HPMC)也可用作阻滞剂，其通过控制聚合物的浓度而允许药物在给定时段后释放，并可具有5到10小时的滞后时间。

在本发明的口服药物组合物中，活性成分可具有高结晶度的晶体结构、或低结晶度的晶体结构。活性成分优选具有低结晶度的晶体结构，这可以解决与式1或2的化合物的微溶有关的问题，并且增加溶出速率和体内吸收速率。

本文使用的术语“结晶度”被定义为是总化合物的结晶部分的重量分数并且可通过本领域已知的常规方法进行测定。例如，结晶度的测量可如下进行：密度法或沉淀法，该方法通过对结晶部分和无定形部分的每个密度加上和/或减去适当的值而获得的事先假设的预置值；牵涉熔融热的测量的方法；其中当进行X射线衍射分析时通过从X射线衍射强度分布中分离出晶体衍射级分和非结晶衍射级分来计算结晶度的X射线法；或从在红外吸收光谱的结晶带之间的宽度的峰值计算结晶度的红外线方法。

在本发明的口服药物组合物中，活性成分的结晶度优选为50％或更低。更优选地，活性成分可具有无定形结构，材料的固有的结晶度从该结构中完全丧失。无定形化合物与结晶化合物相比表现出比较高的溶解度，并且可以显著地改善药物的溶出速率和体内吸收速率。

在本发明的一个优选方案中，无定形结构可在将活性成分制成微粒子或细粒(活性成分的微粉化)期间形成。微粒子可例如如下制备：活性成分的喷雾干燥，牵涉形成活性成分与聚合物的熔融物的熔融法，牵涉在将活性成分溶解在溶剂中、形成包含体、溶剂挥发之后形成活性成分与聚合物的共沉淀物的共沉淀法。优选喷雾干燥。即使当活性成分不是无定形结构时，即，其具有晶体结构或半结晶结构，借助于机械研磨将活性成分进行微粉化处理变成细粒，从而由于粒子具有大的比表面积而改善溶解度，因此，得到活性药物的改善的溶出速率和生物吸收速率。

喷雾干燥是通过将活性成分溶解在某些溶剂中并将所得溶液进行喷雾干燥而制备细粒的一种方法。在喷雾干燥期间，化合物的结晶度的大部分丧失，从而得到无定形态，因此，获得了细粉形式的喷雾干燥的产品。

机械研磨是通过施加强力到活性成分粒子上而将活性成分研磨形成细粒的一种方法。机械研磨可采用许多粉碎方法诸如喷射研磨、球磨研磨、振动研磨、锤磨等进行。特别优选的是喷射研磨，其可采用空气压力和在低于40℃的温度下进行。

同时，与晶体结构无关，粒状活性成分的粒径降低导致比表面积增加，从而增加了溶出速率和溶解度。然而，过小的粒径使得很难制备具有如此大小的细粒并还产生导致溶解度降低的粒子的结块或聚结问题。因此，在一个优选方案中，活性成分的粒径范围为5纳米到500微米。在这一范围内，可最大限度地抑制粒子结块或聚结，并且由于粒子的高的比表面积而使得溶出速率和溶解度最大化。

优选地，表面活性剂可另外地被加入以防止粒子结块或聚结，这一现象可发生在细粒形成期间，和/或抗静电剂可另外地被加入以防止静电发生。

如有必要，在研磨期间可另外加入吸湿材料。式1或2的化合物倾向于由于水而发生结晶，因此，吸湿材料的引入抑制了式1或2的化合物随时间而发生的重结晶并且能保持化合物粒子由于微粉化而具有的增加的溶解度。另外，吸湿材料用于抑制药物组合物的凝结和聚结而不会不利地影响活性成分的治疗效果。

表面活性剂的实例可包括但不限于：阴离子型表面活性剂诸如多库酯钠和十二烷基硫酸钠；阳离子型表面活性剂诸如苯扎氯铵、苄索氯铵和西曲溴铵；非离子型表面活性剂诸如甘油单油酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯和山梨糖醇酐酯；两性聚合物诸如聚乙烯-聚丙烯聚合物和聚氧乙烯-聚氧丙烯聚合物(泊洛沙姆)，和Gelucire^TM系列(Gattefosse Corporation，USA)；丙二醇单辛酸酯，油酰基聚乙二醇-6-甘油酯，亚油酰基聚乙二醇-6-甘油酯，辛酰己酰基聚乙二醇-8-甘油酯，丙二醇单月桂酸酯，和聚甘油基-6-二油酸酯。这些物质可单独或以其任何组合的方式使用。

吸湿材料的实例可包括但不限于：胶态氧化硅，轻质无水硅酸，重质无水硅酸，氯化钠，硅酸钙，铝硅酸钾，铝硅酸钙等等。这些材料可单独或以其任何组合的方式使用。

上述的一些吸湿剂还可用作抗静电剂。

表面活性剂、抗静电剂和吸湿剂可以能够实现上述效果的量被加入，并且这些量可根据微粉化条件而异进行适当调整。优选地，以基于活性成分的总重量的0.05到20％使用添加剂。

在一个优选方案中，在将本发明的药物组合物配制成用于口服给药的制剂期间，可另外加入水溶性聚合物、增溶剂和崩解促进剂。优选地，可通过将添加剂和粒状活性成分混合在溶剂中并将所述混合物喷雾干燥将组合物配制成所需剂型。

水溶性聚合物通过使得式1或2的化合物分子或粒子的环境是亲水性的从而增强水溶性并优选保持活性成分式1或2的化合物的无定形态而用来帮助防止粒状活性成分聚结。

优选地，水溶性聚合物是pH非依赖性的聚合物，并且可带来活性成分的结晶度损失和亲水性增强，即使在胃肠pH的个体间和个体内差异的条件下也是如此。

水溶性聚合物的优选实例可包括选自以下的至少一种：纤维素衍生物诸如甲基纤维素、羟基甲基纤维素、羟基乙基纤维素、乙基纤维素、羟基乙基甲基纤维素、羧基甲基纤维素、羟基丙基甲基纤维素、羟基丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、羧基甲基纤维素钠和羧基甲基乙基纤维素；聚乙烯醇；聚乙酸乙烯酯；聚乙酸乙烯邻苯二甲酸酯；聚乙烯吡咯烷酮(PVP)；和包含其的聚合物；聚氧化烯或聚亚烷基二醇，和包含其的聚合物。优选羟基丙基甲基纤维素。

在本发明的药物组合物中，高于给定水平的过高含量的水溶性聚合物不再提供溶解度的进一步增加，而是不利地带来各种问题，诸如制剂硬度的总体增加，由于水溶性聚合物当暴露于洗脱液下时的过度溶胀而在制剂周围形成膜而使得洗脱液不渗透进入制剂。因此，增溶剂优选被加入以通过修饰式1或2的化合物的物理性质而使得制剂的溶解度达最大化。

在这方面，增溶剂用于增强微溶的式1或2的化合物的增溶性和湿润性，可以显著地降低式1或2的化合物的由于饮食和在摄取饮食后给药的时间差异所带来的生物利用度的差异。增溶剂可选自常规地被广泛使用的表面活性剂或两性分子，增溶剂的具体实例可以是上面阐述的表面活性剂。

崩解促进剂用于改善药物释放速度，能够使得药物在目标部位快速释放从而增加药物的生物利用度。

崩解促进剂的优选实例可包括但不限于选自以下的至少一种：交联羧甲纤维素钠、交聚维酮、羧基甲基纤维素钙、淀粉羟乙酸钠和被低级取代的羟基丙基纤维素。优选是交联羧甲纤维素钠。

当考虑如上所述的各种因素在内时，基于100重量份的活性成分，优选加入10到1000重量份的水溶性聚合物，1到30重量份的崩解促进剂和0.1到20重量份的增溶剂。

除了以上所述的成分之外，如有必要，可任选加入本领域已知的与制剂有关的其它材料。

用于喷雾干燥的溶剂是表现出高溶解度而不改变其物理性质并在喷雾干燥期间容易挥发的物质。这种溶剂的优选实例包括但不限于二氯甲烷、氯仿、甲醇和乙醇。这些物质可单独或以其任何组合的方式使用。优选地，在喷雾溶液中的固体的含量范围基于喷雾溶液的总重量为5到50％。

以上所述的肠靶向制剂方法可优选地用于如上制备的制剂粒子。

在一个优选方案中，本发明的口服药物组合物可通过包括以下步骤的方法被配制：

(a)加入单独的或与表面活性剂和吸湿材料组合的式1或2的化合物，并用喷射磨研磨式1或2的化合物以制备活性成分微粒子；

(b)将活性成分微粒子连同水溶性聚合物、增溶剂和崩解促进剂溶解在溶剂中并对所得溶液进行喷雾干燥以制备制剂粒子；和

(c)将制剂粒子连同pH敏感聚合物和增塑剂溶解在溶剂中并对所得溶液进行喷雾干燥以在制剂粒子上施加肠靶向包衣。

表面活性剂、稀释材料、水溶性聚合物、增溶剂和崩解促进剂如上所阐述。增塑剂是被加入以防止包衣变硬的添加剂，并且可包括例如聚合物，诸如聚乙二醇。

或者，活性成分的配制可通过步骤(b)的媒介物和步骤(c)的肠靶向包衣材料被顺序地或同时地喷雾到作为籽粒的步骤(a)的经过喷射研磨的活性成分粒子上来进行。

对于注射，本发明的药剂可被配制在含水溶液中，优选被配制在生理学相容的缓冲液诸如Hanks′s溶液、林格氏液或生理盐水中。对于透粘膜给药，在制剂中使用适于待渗透的屏障的渗透剂。这种渗透剂是本领域通常已知的。

化合物可被配制成通过注射进行的非肠道给药，例如通过快速浓注或连续输注。用于注射的制剂可以单位剂型存在，例如存在于安瓿或多剂量容器中，并加有防腐剂。该组合物可采取诸如以下的形式：在油性或水性媒介物中的悬浮剂、溶液剂或乳剂，并且可包括配制用试剂诸如助悬剂、稳定剂和/或分散剂。

作为替代，活性成分可以是用于在使用前与适当的媒介物例如无菌、无热原的水构建的粉末。

本发明的药物组合物可被制成或被加入到常用片剂、以及能够递送活性成分到患病区域的各种形式中。例如，该组合物的附加可通过被包衣在或被包埋在要被插入到血管内的网状支架中。该支架通常通过手术被插入以调节血管、胃肠道、胆道等内的血液或体液流。其是由不锈钢、形状记忆合金、镍钛金属互化物(Ti-Ni)等制成的网状材料。因此，本发明的药物组合物可通过以下方式被施用于患病区域：直接被包覆到支架的外表面或借助于预定粘合剂被附着到支架的外表面上、或以能够向外释放的形式被包埋在支架中。尽管上面仅仅举例说明了支架作为介质用于附加活性成分，但是本领域技术人员可能进行各种修改、附加和置换而不脱离由权利要求书所限定的本发明的范围和精神。

适用于本发明的药物组合物包括其中活性成分以有效实现预定目的的量被包含在内的组合物。更具体地说，治疗有效量是指化合物的有效预防、缓和或改善被治疗受试者的病症或延长被治疗受试者的存活的量。治疗有效量的确定完全处在本领域技术人员的能力下，特别是根据本文提供的详细公开后。

当本发明的药物组合物被配制成单位剂型时，式1或2的化合物作为活性成分优选以约0.1至1,000mg的单位剂量被包含在内。式1或2的化合物的给药量由主治医师根据被治疗患者的体重和年龄、疾病的特征性质和严重程度的不同来进行确定。

本发明还提供了式1或2的化合物在制备用于预防和治疗再狭窄的药物中的应用。本文使用的术语“治疗”是指当药物在表现出病症发病的受试者中被使用时停止或延迟疾病的发展。术语“预防”是指当药物在未表现出病症发病但是具有高的疾病发病风险的受试者中被使用时停止或延迟病症发病。

附图说明

本发明的上述的和其它目的、特征以及其它优点可从以下的详细说明并结合附图得以更清楚的理解，其中：

图1是表示用改变浓度的本发明的化合物1进行预处理后对活细胞数的计数结果的柱状图表；

图2是证实用本发明的化合物1处理的血管平滑肌细胞中的NQO1的表达的-PCR的结果；

图3是证实用本发明的化合物1处理的血管平滑肌细胞中的AMPK和ACC的磷酸化程度的结果；

图4是证实用本发明的化合物1处理的血管平滑肌细胞中的p53、p21、视网膜母细胞瘤和CDK的表达的结果；

图5是证实用本发明的化合物1处理的血管平滑肌细胞中的细胞增殖的抑制的结果；

图6是在给予本发明的化合物1的大鼠中的血管内膜增生的观察结果；和

图7是通过杀死给予了本发明的化合物1的大鼠并用油红O染色后在内部血管壁和主动脉瓣上的脂质积聚程度的比较/观察结果。

优选方案的详细说明

现在，将参见以下实施例更详细地描述本发明。这些实施例的提供仅用于说明本发明的目的，且决不被认为是对本发明的范围和精神构成限制。

实施例1：β-拉杷醌(化合物1)的合成

17.4g(0.10M)的2-羟基-1，4-萘醌被溶解在120ml的DMSO中，向其中逐渐加入0.88g(0.11M)的LiH。这里，应当小心进行因为产生氢。搅拌该反应溶液，在证实不进一步产色氢后另外搅拌30分钟。然后，向其中逐渐地加入15.9g(0.10M)的异戊二烯基溴(1-溴-3-甲基-2-丁烯)和3.35g(0.025M)的LiI，将反应溶液加热到45℃然后在该温度下剧烈搅拌12小时。将反应溶液冷却到低于10℃，先加入76g的冰、然后加入250ml的水，之后，逐渐加入25ml的浓盐酸以保持所得溶液处于大于1的酸性pH下。向反应混合物中加入200ml的EtOAc，然后剧烈搅拌，从而得到白色固相，其不溶于EtOAc中。过滤这些固体并分离EtOAc层，水层再一次用100ml的EtOAc提取并与之前提取的有机层合并，将该有机层用150ml的5％NaHCO₃洗涤并浓缩，所得的浓缩物被溶解在200ml的CH₂Cl₂中，加入70ml的2N NaOH水溶液并剧烈摇动以分离出两个层，通过用2N的NaOH水溶液处理两次(70ml×2)进一步分离CH₂Cl₂层，将如此分离的水性溶液合并在一起并调节到大于2的酸性pH，从而形成固体，所得固体经过滤和分离，得到拉帕醇。将如此获得的拉帕醇从75％的EtOH中重结晶，所得拉帕醇与80ml的硫酸混合，在室温下剧烈搅拌该混合物达10分钟并向其中加入200g的冰以完成反应，向反应物质中加入60ml的CH₂Cl₂，然后剧烈摇动。之后，分离出CH₂Cl₂层并用5％的NaHCO₃洗涤，水层再一次用30ml的CH₂Cl₂提取，用5％NaHCO₃洗涤并与之前提取的有机层合并。有机层用MgSO₄干燥并浓缩，得到不纯的β-拉杷醌。如此获得的β-拉杷醌从异丙醇重结晶，从而获得8.37g的纯的β-拉杷醌。

¹H-NMR(CDCl₃，δ)：8.05(1H，dd，J＝1，8Hz)，7.82(1H，dd，J＝1，8Hz)，7.64(1H，dt，J＝1，8Hz)，7.50(1H，dt，J＝1，8Hz)，2.57(2H，t，J＝6.5Hz)，1.86(2H，t，J＝6.5Hz)1.47(6H，s)。

实施例：董尼酮(化合物2)的合成

在实施例1的获得拉帕醇的过程中，不溶于EtOAc中的被分离出的固体是2-异戊二烯基氧基-1，4-萘醌，一种O-烷基化产物，其与作为C-烷基化产物的拉帕醇不同。被分离出的2-异戊二烯基氧基-1，4-萘醌首先再一次从EtOAc中重结晶，将3.65g(0.015M)的经过如此纯化的固体溶解在甲苯中并将甲苯回流5小时以诱导克莱森重排，通过减压蒸馏将甲苯浓缩，然后与15ml的硫酸混合，而无需另外纯化，在室温下剧烈搅拌所得混合物10分钟，向其中加入100g的冰以完成反应，向反应物质中加入50ml的CH₂Cl₂并剧烈摇动。之后，分离出CH₂Cl₂层并用5％的NaHCO₃洗涤，水层再一次用20ml的CH₂Cl₂提取，用5％的NaHCO₃洗涤并与之前提取的有机层合并，有机层用MgSO₄干燥、浓缩并进行硅胶色谱纯化，得到2.32g的纯的董尼酮。

¹H-NMR(CDCl₃，δ)：8.05(1H，d，J＝8Hz)，7.64(2H，d，J＝8Hz)，7.56(1H，m)，4.67(1H，q，J＝7Hz)，1.47(3H，d，J＝7Hz)，1.45(3H，s)1.27(3H，s)。

实施例3：α-董尼酮(化合物3)的合成

将在实施例2中经过纯化的4.8g(0.020M)的2-异戊二烯基氧基-1，4-萘醌溶解在二甲苯中，将二甲苯回流15小时，从而在与实施例2相比是显著更高的温度和更长的反应条件下诱导克莱森重排，根据这一反应过程，获得了已成环的α-董尼酮以及已经历克莱森重排并且其中两个甲基之一移位的拉帕醇衍生物。通过减压蒸馏浓缩二甲苯并通过硅胶色谱纯化，得到1.65g的纯的α-董尼酮。

¹H-NMR(CDCl₃，δ)：8.06(1H，d，J＝8Hz)，7.64(2H，m)，7.57(1H，m)，3.21(1H，q，J＝7Hz)，1.53(3H，s)，1.51(3H，s)1.28(3H，d，J＝7Hz)。

实验例4：化合物4的合成

将17.4g(0.10M)的2-羟基-1，4-萘醌溶解在120ml的DMSO中，向其中加入0.88g(0.11M)的LiH，此时，应当小心进行因为放出氢。搅拌该反应溶液，并且在证实不进一步产生氢后，另外搅拌30分钟，然后，向其中逐渐加入14.8g(0.11M)的甲代烯丙基溴(1-溴-2-甲基丙烯)和3.35g(0.025M)的LiI，将反应溶液加热到45℃，然后在该温度下剧烈搅拌12小时，将反应溶液冷却到低于10℃，先加入80g的冰、然后加入250ml的水，之后，逐渐加入25ml的浓盐酸以保持所得溶液处于大于1的酸性pH下，向反应混合物中加入200ml的CH₂Cl₂，然后剧烈搅拌以分离出两层，水层通过加入70ml的CH₂Cl₂再一次被提取并与之前提取的有机层合并在一起，通过TLC证实了新形成了两种物质，并且随后被使用而无需进行任何特定的分离过程，通过减压蒸馏将有机层浓缩，再一次溶解在二甲苯中，然后回流8小时，在该过程中，TLC上的两种物质合为一种物质，从而获得了相对纯的拉帕醇衍生物，将如此获得的拉帕醇衍生物与80ml的硫酸混合并在室温下剧烈搅拌10分钟，向其中加入200g的冰以完成反应，向反应物质中加入80ml的CH₂Cl₂，然后剧烈摇动。之后，分离出CH₂Cl₂层并用5％的NaHCO₃洗涤，水层再一次用50ml的CH₂Cl₂提取，用5％的NaHCO₃洗涤并与之前提取的有机层合并在一起，有机层用MgSO₄干燥并浓缩，得到不纯的β-拉杷醌衍生物(化合物4)，如此获得的β-拉杷醌衍生物从异丙醇中重结晶，从而获得12.21g的纯化合物4。

¹H-NMR(CDCl₃，δ)：8.08(1H，d，J＝8Hz)，7.64(2H，m)，7.57(1H，m)，2.95(2H，s)，1.61(6H，s)。

实验例5：化合物5的合成

与实施例4的相同方式获得化合物5，不同之处在于使用烯丙基溴代替甲代烯丙基溴。

¹H-NMR(CDCl₃，δ)：8.07(1H，d，J＝7Hz)，7.65(2H，m)，7.58(1H，m)，5.27(1H，m)，3.29(1H，dd，J＝10，15Hz)，2.75(1H，dd，J＝7，15Hz)，1.59(3H，d，J＝6Hz)。

实验例6：化合物6的合成

5.08g(40mM)的3-氯丙酰氯被溶解在20ml的醚中并被冷却到-78℃，向所得溶液中逐渐加入1.95g(25mM)的过氧化钠(Na₂O₂)，并同时在该温度下剧烈搅拌，然后另外剧烈搅拌30分钟，将反应溶液加热到0℃并向其中加入7g的冰，然后另外搅拌10分钟，分离有机层，再一次用10ml的0℃的冷水洗涤，然后用0℃NaHCO₃水溶液洗涤，分离出有机层，用MgSO₄干燥，在低于0℃的温度减压蒸馏进行浓缩，从而获得3-氯过氧丙酸。

1.74g(10mM)的2-羟基-1，4-萘醌被溶解在20ml的乙酸中，在室温下向其中逐渐加入之前已制备的3-氯过氧丙酸，将反应混合物搅拌回流2小时，然后减压蒸馏以除去乙酸，所得浓缩物被溶解在20ml的CH₂Cl₂中，用20ml的5％的NaHCO₃洗涤，水层再一次用20ml的CH₂Cl₂提取并与之前提取的有机层合并在一起，有机层用MgSO₄干燥并浓缩，得到化合物6，其与2-(2-氯乙基)-3-羟基-1，4-萘醌混合在一起，通过硅胶色谱纯化所得的化合物，得到0.172g的纯的拉杷醌衍生物(化合物6)。

¹H-NMR(CDCl₃，δ)：8.07(1H，d，J＝7.6Hz)，7.56-7.68(3H，m)，4.89(2H，t，J＝9.2Hz)，3.17(2H，t，J＝9.2Hz)。

实施例7：化合物7的合成

17.4g(0.10M)的2-羟基-1，4-萘醌被溶解在120ml的DMS中，向其中逐渐加入0.88g(0.11M)的LiH，应当小心进行因为放出氢，搅拌该反应溶液，在证实不进一步放出氢后，另外搅拌30分钟，然后向其中逐渐加入19.7g(0.10M)的肉桂基溴(3-苯基烯丙基溴)和3.35g(0.025M)的LiI，将反应溶液加热到45℃，然后在该温度下剧烈搅拌12小时，将反应溶液冷却到低于10℃，先加入80g的冰，然后加入250ml的水，之后，逐渐加入25ml的浓盐酸以维持所得溶液处于大于1的酸性pH，加入200ml的CH₂Cl₂以溶解反应混合物，然后剧烈振摇以分离出两层，水层被丢弃，CH₂Cl₂层用2N NaOH水溶液(100ml×2)处理，分离出水层两次，此时，在用2N NaOH水溶液提取后在实施例8中再次使用剩余的CH₂Cl₂层，如此分离的水性溶液经合并，并使用浓盐酸调整到大于2的酸性pH，从而形成固体，所得固体经过滤和分离，得到拉帕醇衍生物，如此获得的拉帕醇衍生物从75％EtOH中重结晶，所得拉帕醇衍生物与50ml的硫酸混合，该混合物在室温下剧烈搅拌10分钟，并向其中加入150g的冰以完成反应，向反应物质中加入60ml的CH₂Cl₂，然后剧烈摇动，之后，分离出CH₂Cl₂层并用5％NaHCO₃洗涤，水层再一次用30ml的CH₂Cl₂提取，用5％的NaHCO₃洗涤并与之前提取的有机层合并，有机层经浓缩和硅胶色谱纯化，得到2.31g的纯化合物7。

¹H-NMR(CDCl₃，δ)：8.09(1H，dd，J＝1.2，7.6Hz)，7.83(1H，d，J＝7.6Hz)，7.64(1H，dt，J＝1.2，7.6Hz)，7.52(1H，dt，J＝1.2，7.6Hz)，7.41(5H，m)，5.27(1H，dd，J＝2.5，6.0Hz)，2.77(1H，m)2.61(1H，m)，2.34(1H，m)，2.08(1H，m)，0.87(1H，m)。

实施例8：化合物8的合成

将在实施例7中的用2N的NaOH水溶液提取后剩余的CH₂Cl₂层通过减压蒸馏浓缩，所得浓缩物被溶解在30ml的二甲苯中，然后回流10时以诱导克莱森重排，通过减压蒸馏将二甲苯浓缩，然后与15ml的硫酸混合，而无需另外纯化，在室温下剧烈搅拌所得混合物10分钟，向其中加入100g的冰以完成反应，向反应物质中加入50ml的CH₂Cl₂并剧烈摇动。之后，分离出CH₂Cl₂层并用5％的NaHCO₃洗涤，水层再一次用20ml的CH₂Cl₂提取，用5％的NaHCO₃洗涤并与之前提取的有机层合并，有机层用MgSO₄干燥、浓缩并进行硅胶色谱纯化，得到1.26g的纯化合物8。

¹H-NMR(CDCl₃，δ)：8.12(1H，dd，J＝0.8，8.0Hz)，7.74(1H，dd，J＝1.2，7.6Hz)，7.70(1H，dt，J＝1.2，7.6Hz)，7.62(1H，dt，J＝1.6，7.6Hz)，7.27(3H，m)，7.10(2H，td，J＝1.2，6.4Hz)，5.38(1H，qd，J＝6.4，9.2Hz)，4.61(1H，d，J＝9.2Hz)，1.17(3H，d，J＝6.4Hz)。

实施例9：化合物9的合成

3.4g(22mM)的1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯和1.26g(15mM)的2-甲基-3-丁炔-2-醇被溶解在10ml的乙腈中，将所得溶液冷却到0℃，在搅拌下向反应溶液中逐渐加入3.2g(15mM)的三氟醋酐，然后在0℃继续搅拌。在另一个烧瓶中，1.74g(10mM)的2-羟基-1，4-萘醌和135mg(1.0mM)的氯化铜(CuCl₂)被溶解在10ml的乙腈中并搅拌，将之前已纯化的溶液逐渐加入到反应溶液中，然后回流20分钟，通过减压蒸馏将反应溶液浓缩，然后进行硅胶色谱纯化，得到0.22g的纯化合物9。

¹H-NMR(CDCl₃，δ)：8.11(1H，dd，J＝1.2，7.6Hz)，7.73(1H，dd，J＝1.2，7.6Hz)，7.69(1H，dt，J＝1.2，7.6Hz)，7.60(1H，dt，J＝1.6，7.6Hz)，4.95(1H，d，J＝3.2Hz)，4.52(1H，d，J＝3.2Hz)，1.56(6H，s)。

实施例10：化合物10的合成

0.12g的化合物9被溶解在5ml的MeOH中，向其中加入10mg的5％的Pd/C，然后在室温下强烈搅拌3小时，将反应溶液过滤通过硅胶以除去5％的Pd/C，并进行减压蒸馏浓缩，得到化合物10。

¹H-NMR(CDCl₃，δ)：8.05(1H，td，J＝1.2，7.6Hz)，7.64(2H，m)，7.54(1H，m)，3.48(3H，s)，1.64(3H，s)，1.42(3H，s)，1.29(3H，s)。

实施例11：化合物11的合成

1.21g(50mM)的β-拉杷醌(化合物1)和1.14g(50mM)的DDQ(2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌)被溶解在50ml的四氯化碳中并回流72小时，通过减压蒸馏浓缩反应溶液，然后进行硅胶色谱纯化，得到1.18g的纯化合物11。

¹H-NMR(CDCl₃，δ)：8.08(1H，dd，J＝1.2，7.6Hz)，7.85(1H，dd，J＝0.8，7.6Hz)，7.68(1H，dt，J＝1.2，7.6Hz)，7.55(1H，dt，J＝1.2，7.6Hz)，6.63(1H，d，J＝10.0Hz)，5.56(1H，d，J＝10.0Hz)，1.57(6H，s)。

实施例12：化合物12的合成

1.74g(10mM)的2-羟基-1，4-萘醌、3.4g(50mM)的2-甲基-1，3-丁二烯(异戊二烯)、3.0g(100mM)的多聚甲醛和20ml的1，4-二氧杂环己烷被置于压力容器中，然后在100℃加热并搅拌48小时，将反应容器冷却至室温，将其内容物过滤，减压蒸馏浓缩滤液，然后进行硅胶色谱纯化，得到238mg的化合物12，为β-拉杷醌的2-乙烯基衍生物。

¹H-NMR(CDCl₃，δ)：8.07(1H，dd，J＝1.2，7.6Hz)，7.88(1H，dd，J＝0.8，7.6Hz)，7.66(1H，dt，J＝1.2，7.6Hz)，7.52(1H，dt，J＝0.8，7.6Hz)，5.87(1H，dd，J＝10.8，17.2Hz)，5.18(1H，d，J＝10.8Hz)，5.17(1H，17.2Hz)，2.62(1H，m)，2.38(1H，m)，2.17(3H，s)，2.00(1H，m)，1.84(1H，m)。

实施例13：化合物13的合成

1.74g(10mM)的2-羟基-1，4-萘醌、4.8g(50mM)的2，4-二甲基-1，3-戊二烯和3.0g(100mM)的多聚甲醛被溶解在20ml的1，4-二氧杂环己烷中，将所得混合物在强烈搅拌下回流10小时，将反应容器冷却至室温，将其内容物过滤以从固体中除去多聚甲醛，减压蒸馏浓缩滤液，然后进行硅胶色谱纯化，得到428mg的化合物13，为β-拉杷醌衍生物。

¹H-NMR(CDCl₃，δ)：8.06(1H，dd，J＝1.2，7.6Hz)，7.83(1H，dd，J＝0.8，7.6Hz)，7.65(1H，dt，J＝1.2，7.6Hz)，7.50(1H，dt，J＝0.8，7.6Hz)，5.22(1H，bs)，2.61(1H，m)，2.48(1H，m)，2.04(1H，m)，1.80(3H，d，J＝1.0Hz)，1.75(1H，m)，1.72(1H，d，J＝1.0Hz)，1.64(3H，s)。

实施例14：化合物14的合成

5.3g(30mM)的2-羟基-1，4-萘醌、20.4g(150mM)的2，6-二甲基-2，4，6-辛三烯和9.0g(300mM)的多聚甲醛被溶解在50ml的1，4-二氧杂环己烷中，将所得混合物在强烈搅拌下回流10小时，将反应容器冷却至室温，将其内容物过滤以从固体除去多聚甲醛，减压蒸馏浓缩滤液，然后进行硅胶色谱纯化，得到1.18g的化合物14，为β-拉杷醌衍生物。

¹H-NMR(CDCl₃，δ)：8.07(1H，dd，J＝1.2，7.6Hz)，7.87(1H，dd，J＝0.8，7.6Hz)，7.66(1H，dt，J＝1.2，7.6Hz)，7.51(1H，dt，J＝0.8，7.6Hz)，6.37(1H，dd，J＝11.2，15.2Hz)，5.80(1H，宽的d，J＝11.2Hz)，5.59(1H，d，J＝15.2Hz)，2.67(1H，dd，J＝4.8，17.2Hz)，2.10(1H，dd，J＝6.0，17.2Hz)，1.97(1H，m)，1.75(3H，bs)，1.64(3H，bs)，1.63(3H，s)，1.08(3H，d，J＝6.8Hz)。

实施例15：化合物15的合成

5.3g(30mM)的2-羟基-1，4-萘醌、20.4g(50mM)的萜品烯和9.0g(300mM)的多聚甲醛被溶解在50ml的1，4-二氧杂环己烷中，将所得混合物在强烈搅拌下回流10小时，将反应容器冷却至室温，将其内容物过滤以从固体除去多聚甲醛，减压蒸馏浓缩滤液，然后进行硅胶色谱纯化，得到1.12g的化合物15，为四环的o-醌衍生物。

¹H-NMR(CDCl₃，δ)：8.06(1H，d，J＝7.6Hz)，7.85(1H，d，J＝7.6Hz)，7.65(1H，t，J＝7.6Hz)，7.51(1H，t，J＝7.6Hz)，5.48(1H，宽的s)，4.60(1H，宽的s)，2.45(1H，d，J＝16.8Hz)，2.21(1H，m)，2.20(1H，d，J＝16.8Hz)，2.09(1H，m)，1.77(1H，m)，1.57(1H，m)，1.07(3H，s)，1.03(3H，d，J＝0.8Hz)，1.01(3H，d，J＝0.8Hz)，0.96(1H，m)。

实施例16：化合物16和17的合成

17.4g(0.10M)的2-羟基-1，4-萘醌被溶解在120ml的DMS中，向其中逐渐加入0.88g(0.11M)的LiH，应当小心进行因为放出氢，搅拌该反应溶液，在证实不进一步放出氢后，另外搅拌30分钟，然后向其中逐渐加入16.3g(0.12M)的巴己酰溴和3.35g(0.025M)的LiI，将反应溶液加热到45℃，然后在该温度下剧烈搅拌12小时，将反应溶液冷却到低于10℃，先加入80g的冰，然后加入250ml的水，之后，逐渐加入25ml的浓盐酸以维持所得溶液处于大于1的酸性pH，加入200ml的CH₂Cl₂以溶解反应混合物，然后剧烈振摇以分离出两层，水层被丢弃，CH₂Cl₂层用2N NaOH水溶液(100ml×2)处理，分离出水层两次，此时，在用2N NaOH水溶液提取后的剩余的CH₂Cl₂层在实施例17中被再次使用，如此分离的水性溶液经合并，并用浓盐酸调节到大于2的酸性pH，从而形成固体，所得固体经过滤和分离，得到拉帕醇衍生物，如此获得的拉帕醇衍生物从75％EtOH中重结晶，所得拉帕醇衍生物与50ml的硫酸混合，该混合物在室温下剧烈搅拌10分钟，之后向其中加入150g的冰以完成反应，向反应物质中加入60ml的CH₂Cl₂，然后剧烈摇动，之后，分离出CH₂Cl₂层并用5％NaHCO₃洗涤，水层再一次用30ml的CH₂Cl₂提取，用5％的NaHCO₃洗涤并与之前提取的有机层合并，有机层经浓缩和硅胶色谱纯化，分别得到1.78和0.43g的纯化合物16和17。

化合物16的¹H-NMR(CDCl₃，δ)：δ8.07(1H，dd，J＝0.8，6.8Hz)，7.64(2H，宽的d，J＝3.6Hz)，7.57(1H，m)，5.17(1H，qd，J＝6.0，8.8Hz)，3.53(1H，qd，J＝6.8，8.8Hz)，1.54(3H，d，6.8Hz)，1.23(3H，d，6.8Hz)。

化合物17的¹H-NMR(CDCl₃，δ)：δ8.06(1H，d，J＝0.8，7.2Hz)，7.65(2H，宽的d，J＝3.6Hz)，7.57(1H，m)，4.71(1H，五重峰，J＝6.4Hz)，3.16(1H，五重峰，J＝6.4Hz)，1.54(3H，d，6.4Hz)，1.38(3H，d，6.4Hz)。

实施例17：化合物18和19的合成

将在实施例16中的用2N的NaOH水溶液提取后剩余的CH₂Cl₂层通过减压蒸馏浓缩，所得浓缩物被溶解在30ml的二甲苯中，然后回流10时以诱导克莱森重排，通过减压蒸馏将二甲苯浓缩，然后与15ml的硫酸混合，而无需另外纯化，在室温下剧烈搅拌所得混合物10分钟，向其中加入100g的冰以完成反应，向反应物质中加入50ml的CH₂Cl₂并剧烈摇动。之后，分离出CH₂Cl₂层并用5％的NaHCO₃洗涤，水层再一次用20ml的CH₂Cl₂提取，用5％的NaHCO₃洗涤并与之前提取的有机层合并，有机层用MgSO₄干燥、浓缩并进行硅胶色谱纯化，分别得到0.62和0.43g的纯化合物18和19。

化合物18的¹H-NMR(CDCl₃，δ)：8.06(1H，dd，J＝0.8，7.2Hz)，7.81(1H，dd，J＝0.8，7.6Hz)，7.65(1H，dt，J＝0.8，7.6Hz)，7.51(1H，dt，J＝0.8，7.2Hz)，4.40(1H，m)，2.71(1H，m)，2.46(1H，m)，2.11(1H，m)，1.71(1H，m)，1.54(3H，d，6.4Hz)，1.52(1H，m)。

化合物19的¹H-NMR(CDCl₃，δ)：8.08(1H，d，J＝0.8，7.2Hz)，7.66(2H，宽的d，J＝4.0Hz)，7.58(1H，m)，5.08(1H，m)，3.23(1H，dd，J＝9.6，15.2Hz)，2.80(1H，dd，J＝7.2，15.2Hz)，1.92(1H，m)，1.82(1H，m)，1.09(3H，t，7.6Hz)。

实施例18：化合物20的合成

17.4g(0.10M)的2-羟基-1，4-萘醌被溶解在120ml的DMS中，向其中逐渐加入0.88g(0.11M)的LiH，应当小心进行因为放出氢，搅拌该反应溶液，在证实不进一步放出氢后，另外搅拌30分钟，然后向其中逐渐加入21.8g(0.10M)的溴化香叶酯和3.35g(0.025M)的LiI，将反应溶液加热到45℃，然后在该温度下剧烈搅拌12小时，将反应溶液冷却到低于10℃，先加入80g的冰，然后加入250ml的水，之后，逐渐加入25ml的浓盐酸以维持所得溶液处于大于1的酸性pH，加入200ml的CH₂Cl₂以溶解反应混合物，然后剧烈振摇以分离出两层，水层被丢弃，CH₂Cl₂层用2N NaOH水溶液(100ml×2)处理，分离出水层两次，如此分离的水性溶液经合并，并用浓盐酸调节到大于2的酸性pH，从而形成固体，所得固体经过滤和分离，得到2-香叶基-3-羟基-1，4-萘醌，如此获得的产物与50ml的硫酸混合，无需另外纯化，该混合物在室温下剧烈搅拌10分钟，之后向其中加入150g的冰以完成反应，向反应物质中加入60ml的CH₂Cl₂，然后剧烈摇动，之后，分离出CH₂Cl₂层并用5％的NaHCO₃洗涤，水层再一次用30ml的CH₂Cl₂提取，用5％的NaHCO₃洗涤并与之前提取的有机层合并，有机层经浓缩和硅胶色谱纯化，得到3.62g的纯化合物20。

¹H-NMR(CDCl₃，δ)：8.05(1H，d，J＝7.6Hz)，7.77(1H，d，J＝7.6Hz)，7.63(1H，t，J＝7.6Hz)，7.49(1H，t，J＝7.6Hz)，2.71(1H，dd，J＝6.0，17.2Hz)，2.19(1H，dd，J＝12.8，17.2Hz)，2.13(1H，m)，1.73(2H，m)，1.63(1H，dd，J＝6.0，12.8Hz)，1.59(1H，m)，1.57(1H，m)，1.52(1H，m)，1.33(3H，s)，1.04(3H，s)，0.93(3H，s)。

实施例19：化合物21的合成

以与实施例1相同的方式获得化合物21，不同之处在于使用6-氯-2-羟基-1，4-萘醌代替2-羟基-1，4-萘醌。

¹H-NMR(CDCl₃，δ)：8.02(1H，d，J＝8Hz)，7.77(1H，d，J＝2Hz)，7.50(1H，dd，J＝2，8Hz)，2.60(2H，t，J＝7Hz)，1.87(2H，t，J＝7Hz)1.53(6H，s)。

实施例20：化合物22的合成

以与实施例1相同的方式获得化合物22，不同之处在于使用2-羟基-6-甲基-1，4-萘醌代替2-羟基-1，4-萘醌。

¹H-NMR(CDCl₃，δ)：7.98(1H，d，J＝8Hz)，7.61(1H，d，J＝2Hz)，7.31(1H，dd，J＝2，8Hz)，2.58(2H，t，J＝7Hz)，1.84(2H，t，J＝7Hz)1.48(6H，s)。

实施例21：化合物23的合成

以与实施例1相同的方式获得化合物23，不同之处在于使用6，7-二甲氧基-2-羟基-1，4-萘醌代替2-羟基-1，4-萘醌。

¹H-NMR(CDCl₃，δ)：7.56(1H，s)，7.25(1H，s)，3.98(6H，s)，2.53(2H，t，J＝7Hz)，1.83(2H，t，J＝7Hz)1.48(6H，s)。

实施例22：化合物24的合成

以与实施例1相同的方式获得化合物24，不同之处在于使用1-溴-3-甲基-2-戊烯代替1-溴-3-甲基-2-丁烯。

¹H-NMR(CDCl₃，δ)：7.30-8.15(4H，m)，2.55(2H，t，J＝7Hz)，1.83(2H，t，J＝7Hz)，1.80(2H，q，7Hz)1.40(3H，s)，1.03(3H，t，J＝7Hz)。

实施例23：化合物25的合成

以与实施例1相同的方式获得化合物25，不同之处在于使用1-溴-3-乙基-2-戊烯代替1-溴-3-甲基-2-丁烯。

¹H-NMR(CDCl₃，δ)：7.30-8.15(4H，m)，2.53(2H，t，J＝7Hz)，1.83(2H，t，J＝7Hz)，1.80(4H，q，7Hz)0.97(6H，t，J＝7Hz)。

实施例24：化合物26的合成

以与实施例1相同的方式获得化合物26，不同之处在于使用1-溴-3-苯基-2-丁烯代替1-溴-3-甲基-2-丁烯。

¹H-NMR(CDCl₃，δ)：7.15-8.15(9H，m)，1.90-2.75(4H，m)，1.77(3H，s)。

实施例25：化合物27的合成

以与实施例1相同的方式获得化合物27，不同之处在于使用2-溴-亚乙基环己烷代替1-溴-3-甲基-2-丁烯。

¹H-NMR(CDCl₃，δ)：7.30-8.25(4H，m)，2.59(2H，t，J＝7Hz)，1.35-2.15(12H，m)。

实施例26：化合物28的合成

以与实施例1相同的方式获得化合物28，不同之处在于使用2-溴-亚乙基环戊烷代替1-溴-3-甲基-2-丁烯。

¹H-NMR(CDCl₃，δ)：7.28-8.20(4H，m)，2.59(2H，t，J＝7Hz)，1.40-2.20(10H，m)。

实施例27：化合物29的合成

将在实施例5中合成的8.58g(20mM)的化合物5溶解在1000ml的四氯化碳中，然后加入11.4g(50mM)的2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌，所得混合物回流96小时，减压蒸馏浓缩反应溶液，所得的红色固体然后从异丙醇中重结晶，从而获得7.18g的纯化合物29。

¹H-NMR(CDCl₃，δ)：8.05(1H，dd，J＝1.2，7.6Hz)，7.66(1H，dd，J＝1.2，7.6Hz)，7.62(1H，dt，J＝1.2，7.6Hz)，7.42(1H，dt，J＝1.2，7.6Hz)，6.45(1H，q，J＝1.2Hz)，2.43(3H，d，J＝1.2Hz)。

实施例28：化合物30的合成

与J.Org.Chem.，55(1990)4995-5008中所教导的方法类似，使用对苯醌和1-(N-吗啉)丙烯合成4，5-二氢-3-甲基苯并[1，2-b]呋喃-4，5-二酮{苯并呋喃-4，5-二酮}，将1.5g(9.3mM)的如此制备的苯并呋喃-4，5-二酮和3.15g(28.2mM)的1-乙酰氧基-1，3-丁二烯溶解在200ml的苯中，所得混合物回流12小时，将反应溶液冷却至室温并减压蒸馏浓缩，之后进行硅胶色谱分离，得到1.13g的纯化合物30。

¹H-NMR(CDCl₃，δ)：8.05(1H，dd，J＝1.2，7.6Hz)，7.68(1H，dd，J＝1.2，7.6Hz)，7.64(1H，td，J＝1.2，7.6Hz)，7.43(1H，td，J＝1.2，7.6Hz)，7.26(1H，q，J＝1.2Hz)，2.28(3H，d，J＝1.2Hz)。

实施例29：化合物31和32的合成

1.5g(9.3mM)的4，5-二氢-3-甲基苯并[1，2-b]呋喃-4，5-二酮{苯并呋喃-4，5-二酮}和45g(0.6M)的2-甲基-1，3-丁二烯被溶解在200ml的苯中，所得混合物回流5小时，将反应溶液冷却至室温并减压蒸馏进行完全浓缩，将如此获得的浓缩物再一次溶解在150ml的四氯化碳中，之后加入2.3g(10mM)的2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌，所得混合物另外回流15小时，将反应溶液冷却和减压蒸馏浓缩，所得浓缩物进行硅胶色谱纯化，分别得到0.13g和0.11g的纯化合物31和32。

化合物31的¹H-NMR(CDCl₃，δ)：7.86(1H，s)，7.57(1H，d，J＝8.1Hz)，7.42(1H，d，J＝8.1Hz)，7.21(1H，q，J＝1.2Hz)，2.40(3H，s)，2.28(1H，d，J＝1.2Hz)。

化合物32的¹H-NMR(CDCl₃，δ)：δ7.96(1H，d，J＝8.0Hz)，7.48(1H，s)，7.23(2H，m)，2.46(3H，s)，2.28(1H，d，J＝1.2Hz)。

下文中，将给出本发明使用的物质和方法。

1.细胞培养

对于血管平滑肌细胞培养，从大鼠主动脉分离血管平滑肌细胞并对其进行最初培养。血管平滑肌细胞在包含20％胎牛血清(FBS)的培养液中在37℃和5％CO₂中培养和生长，在该过程中获得的细胞被转移到新的实验用培养板中。在实验中使用的细胞是传代培养4至7次的原始细胞，为了活化NQO1，当细胞汇合达80至90％时，将血管平滑肌细胞在包含0.5％胎牛血清的培养基中培养24小时，以维持细胞处于静止期，该细胞用实施例1的化合物(以下被称为化合物1)处理。

2.考察血管平滑肌细胞的增殖速率

将血管平滑肌细胞的原代培养物接种到96孔板上，培养到70％的细胞汇合，并转移和再次在包含0.5％胎牛血清的培养基中培养24小时。然后，维持细胞处于静止期，之后，将细胞用血小板衍生生长因子(PDGF)和化合物1处理，并在37℃下反应48小时，到此为止，处理了用于证实细胞增殖的试剂。在另外反应4小时后，采用酶联吸附测定读数器在450nm测量吸光度以考察细胞增殖速率。

3.RT-PCR

将血管平滑肌细胞的原代培养物用化合物1在37℃下处理并反应预定时段，采用trizol提取RNA然后逆转录到cDNA中。使用NQO1引物对所构造的cDNA进行扩增，然后进行电泳以证实NQO1的表达。

4.蛋白质印迹

在与化合物1反应后被收集的血管平滑肌细胞在RIPA缓冲液(50mM Tris-HCl，150mM NaCl，5mM EDTA，1％NP-40，1mM PMSF，1mM DTT和1mg/ml蛋白酶抑制剂)中进行溶解以分离出全部蛋白质。每个样品中的被分离的蛋白质经过定量化。将25μg的蛋白质与样品缓冲液混合并沸腾5分钟。沸腾蛋白质被冷却并在十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳，从而按其大小分离出蛋白质。这些蛋白质再一次被转移到PVDF膜上并与抗pAMPK、pACC、p53、p21、CDK和pRb的抗体进行免疫反应，以证实蛋白质表达。另外，为了检验是否使用等量的蛋白质，将蛋白质与抗β-肌动蛋白反应。

5.细胞周期分析

使用FACS用于细胞周期分析。将在包含0.5％胎牛血清的培养基中培养24小时的血管平滑肌细胞用化合物1预先处理2小时。将细胞用PDGF和胰岛素处理以诱导细胞增殖并反应48小时，之后，收集细胞并使其通过固定过程，然后用碘化丙啶(PI)进行核染色，然后，采用FACS分析细胞周期。

6.动物试验

使用SD大鼠用于实施球囊血管成形术。将动物圈养在饲养室中，饲养室保持在22±2℃的恒定温度和12小时光明/黑暗(L/D)循环的条件下。将动物分成两组，即，给予一般饮食的对照组和给予100mg/kg的化合物1的实验组，每组4只动物。每组中的4只动物在每只动物位于分开的笼中被饲养4周，期间进行实验。在进行球囊血管成形术之前将动物饲养2周，并且在实施球囊血管成形术之后2周进行给予一般饮食和化合物1饮食的摄取。之后，分离出它们的主动脉通过H&E(苏木精和曙红)染色以证实增生。

7.脂肪形成的测量

将动物处死以分离出它们的心脏和腹主动脉，将其分别固定在4％的福尔马林中。将固定的心脏组织浸没在等渗蔗糖溶液中，然后通过包埋在OCT化合物中保存在冷冻机中。同时，将固定的腹主动脉进行纵向切割并进行制备从而使得内部血管暴露出，将冷冻的心脏组织切割成20微米厚的切片并附着于覆层载玻片上，而将腹主动脉浸没在油红O溶液中以进行油红O染色，并对其进行观察。

实验例1：化合物1对血管平滑肌细胞增殖的效果

为了确定化合物1对血管平滑肌细胞增殖的效果，在96孔板中培养的细胞被保持为静止期，之后用不同浓度的化合物1对其进行预先处理，并且使其与PDGF反应48小时，采用WST细胞计数试剂盒对活细胞数进行计数。在3次以上的独立实验中进行计数以计算平均值。

对活细胞的测量结果参见图1。在图1中，用PDGF和化合物1处理的血管平滑肌细胞数显著低于仅用PDGF处理的血管平滑肌细胞数。这一细胞数类似于未用PDGF和化合物1处理的对照组中的细胞数(PDGF：-，化合物1：-)。另外，已知血管平滑肌细胞数的下降程度随着化合物1的给药剂量增加而增加。结果，相信血管平滑肌细胞数的下降呈现化合物1给药浓度依赖性。

因此，化合物1显示了降低血管平滑肌细胞数的效力。因此，化合物1被认为对于与血管平滑肌细胞数急剧增加有关的再狭窄或动脉硬化的治疗具有优异的效果。

实验例2：化合物1对NQO1表达的效果

如下进行研究旨在考察化合物1对NQO1表达的效果。将血管平滑肌细胞的原代培养物保持为静止期，然后用0.5μM的化合物1处理，在它们反应预定时段后，采用trizol从细胞提取RNA。之后，采用NQO1引物对DNA进行扩增，然后进行电泳以证实NQO1的表达水平。结果参见图2。在图2中，证实了血管平滑肌细胞中NQO1的表达水平显著高于对照组。结果是，化合物1被认为具有NQO1活化剂的作用。

实验例3：化合物1对AMPK和ACC的磷酸化的效果

本实施例意在考察化合物1作为再狭窄的治疗剂的机理，并且如下进行了本实验。

血管平滑肌细胞的原代培养物被保持为静止期，然后用0.5μM的化合物1处理。在它们反应预定时段后，收集细胞以进行蛋白质印迹法。采用对于磷酸化的AMPK和乙酰辅酶A羧化酶(ACC)和对于β-肌动蛋白是特异性的抗体进行定量分析。结果通过三次以上的重复实验被证实。结果参见图3。

在图3中，当与对照组相比时，用化合物1处理的AMPK和ACC的磷酸化程度表现出增加的AMPK磷酸化，而表现出降低的ACC磷酸化。磷酸化的AMPK在用化合物1处理后的1小时被观察到，并持续6小时，这是因为，化合物1降低血管平滑肌细胞数，通过活化NQO1而升高细胞内的NAD⁺，其还活化AMPK。另外，证实了已知作为AMPK的靶蛋白的ACC的磷酸化程度降低的原因，是因为化合物1活化AMPK，从而抑制ACC的活性(ACC是用于脂肪形成的重要的调节酶)，并增加脂类代谢。

因此，能够看出化合物1作为再狭窄和动脉硬化的治疗剂的机理是：化合物1增加NQO1和AMPK的活性导致血管平滑肌细胞增殖被抑制，以及降低ACC活性导致脂肪生成活性被抑制。

实验例4：化合物1对p53和p21的表达变化、和对RB和CDK 的表达变化的效果。

血管平滑肌细胞的原代培养物用0.5μM的化合物1处理。在它们反应预定时段后，收集细胞以进行蛋白质印迹。采用25mg的细胞碎片也证实了p53和p21的表达(图4A)和磷酸化的视网膜母细胞瘤(RB)和细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)的表达(图4B)。通过三次以上的重复实验证实了结果。结果参见图4。

通过测量细胞周期调节蛋白诸如CDK、成视网膜细胞瘤蛋白、p53以及受到p53表达水平控制的下游p21的表达水平，可以证实细胞增殖是否进展。这与抑制血管平滑肌细胞增殖密切相关。

在图4A中，当用化合物1处理蛋白质时，p53的表达水平不大量增加，但是证实了p21的大量增加与p53的表达有关。这指明了细胞周期可以通过诱导p21的表达受到抑制，p21是p53的下游蛋白质。

在图4B中，当用化合物1处理蛋白质时，CDK通过磷酸化作用被活化。因此，能够看出细胞周期蛋白D、细胞周期蛋白E和细胞周期蛋白B的表达水平全都显著低于对照组。这里，细胞周期蛋白D已知在启动细胞周期中发挥重要作用，细胞周期蛋白E已知通过在G1期的最后期被表达从而与CDK2结合而作为G1-S转换的必要因素，和细胞周期蛋白B加速细胞周期向M期的进展。

因此，当用化合物1处理血管平滑肌细胞时，能够看出细胞增殖通过调节细胞周期的进展受到抑制。这指明化合物1被认为对血管平滑肌细胞增殖的抑制具有效果。因此，可以证实化合物1可被有效用于治疗与血管平滑肌细胞增殖有关的再狭窄。

实验例5：化合物1对细胞周期的效果

血管平滑肌的原代培养物用0.5μM的化合物1处理，然后与PDGF和胰岛素反应48小时。在反应预定时段后，将细胞固定并用碘化丙啶(PI)染色，对每个样品进行10,000个细胞的计数，并且每个细胞周期中的各期用百分数表示，参见图5。

在图5中，用化合物1、PDGF和胰岛素处理的图5C的G1期是62％，而仅用PDGF和胰岛素处理的图5B的G1期是57％。由此可见图5C的G1期与图5B的G1期相比进一步增加。

G1期是用于确定细胞增殖是否受到抑制的时期。因此，G1期的增加暗示了血管平滑肌细胞增殖因使用化合物1进行处理而受到抑制，因为G1期不进展到S期。因此，证实了化合物1有效用于抑制血管平滑肌细胞增殖。结果是，化合物1可用作用于治疗与血管平滑肌细胞增殖有关的动脉硬化和再狭窄的组合物。

实验例6：化合物1对内膜增生的效果

在实施球囊血管成形术后的14天，从大鼠中取出颈动脉。用H&E对颈动脉染色后，观察血管内膜增生。结果参见图6。a是对照组，b是在实施球囊血管成形术后在一般饮食组中的血管内膜，c是在实施球囊血管成形术后在100mg/kg的化合物1给药组中的血管内膜，和d是未实施球囊血管成形术但是在100mg/kg的化合物1给药组中的对照组。

从图6的b和c可以看出，一般饮食组b表现为由于在实施球囊血管成形术后在血管内的内膜增生所致的再狭窄。另一方面，化合物1给药组c显示出由于低的内膜增生率所致的足够有保证的血流通路。另外，当考察内膜/中膜比时，能够看出一般饮食组b的内膜/中膜比是2.5，而化合物1给药组c的内膜/中膜比是1，其与组b相比少得多，这暗示出组c具有显著低的内膜增生率。因此，相信化合物1可以是用于解决由在对动脉硬化等实施外科手术后发生的内膜增生所诱导的再狭窄问题的有效治疗剂。

实验例7：化合物1对血管内脂肪形成的效果

将分别给予25mg/kg和50mg/kg的化合物1达4周的大鼠处死，取出其心脏和腹主动脉并制备成冷冻切片。将制备的切片用油红O染色，并比较/观察在内部血管壁和主动脉瓣上的脂质积聚程度。

A(图7的上部分)是主动脉瓣和B(图7的下部分)是腹主动脉。实验重复三次以证实结果，结果参见图7。

在图7中，观察到当用化合物1处理时，在A和B二者中脂肪形成都受到抑制并且血流开始增加。还观察到在给予约50mg/kg化合物1的大鼠的心脏和腹主动脉中的血流水平与正常大鼠中的血流水平大约相同。因此，化合物1被认为对血管内的脂肪形成具有抑制效果并且可被有效用于与由于脂质所致的血管壁损伤而引起的血管平滑肌细胞的快速增殖有关的动脉硬化的实质治疗。

从以上的说明明显可知，本发明的药物组合物可有效地发挥抑制血管平滑肌细胞快速增殖的作用。因此，该组合物对于实质上治疗和/或预防在外科手术后与血管平滑肌细胞增殖有关而产生的再狭窄具有优异的效果。

工业实用性

从以上的说明书明显可知，本发明的药物组合物有效抑制血管平滑肌细胞增殖。因此，本发明的药物组合物在外科手术后与血管平滑肌细胞增殖有关而产生的再狭窄的基础预防和治疗中是有效的。

尽管已经公开了本发明的优选方案用于示例性目的，但是本领域技术人员可能进行各种修改、附加和置换而不脱离由权利要求书所限定的本发明的范围和精神。

Claims (22)

1.用于治疗和/或预防再狭窄的药物组合物，其包括：

(a)治疗有效量的一种或多种选自下式1和下式2所示的化合物或其药学可接受的盐、前体药物、溶剂合物或异构体：

其中

R₁和R₂各自独立地是氢，卤素，氨基，烷氧基，或C₁-C₆低级烷基或烷氧基，或者R₁和R₂可连在一起形成被取代的或未被取代的环状结构，该环状结构可以是饱和的或部分不饱和的或完全不饱和的；

R₃、R₄、R₅、R₆、R₇和R₈各自独立地是氢，羟基，氨基，C₁-C₂₀烷基，烯或烷氧基，C₄-C₂₀环烷基，杂环烷基，芳基或杂芳基，R₃到R₈的两个取代基可连在一起形成可以是饱和的或部分不饱和或完全不饱和的环状结构；

X选自C(R)(R’)，N(R”)，O和S，优选O或S，更优选O，其中R’是氢或C₁-C₆低级烷基；

Y是C，S或N，条件是当Y是S时则R₇和R₈什么都不是并且当Y是N时则R₇是氢或C₁-C₆低级烷基并且R₈什么都不是；和

n是0或1，条件是当n是0时，与n相邻的碳原子通过直接键形成环状结构；和

(b)药学可接受的载体、稀释剂或赋形剂，或其任何组合。

2.权利要求1的组合物，其中X是O。

3.权利要求1的组合物，其中前体药物是下式1a所示的化合物：

其中，

R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈、X和n具有式1中的定义；

R₉和R₁₀各自独立地是-SO₃ ^-Na⁺或由下式A表示的取代基或其盐，

其中，

R₁₁和R₁₂各自独立地是氢或被取代的或未被取代的C₁-C₂₀直链烷基或C₁-C₂₀支链烷基，

R₁₃选自以下的i)到viii)的基团：

i)氢；

ii)被取代的或未被取代的C₁-C₂₀直链烷基或C₁-C₂₀支链烷基；

iii)被取代的或未被取代的胺；

iv)被取代的或未被取代的C₃-C₁₀环烷基或C₃-C₁₀杂环烷基；

v)被取代的或未被取代的C₄-C₁₀芳基或C₄-C₁₀杂芳基；

vi)-(CRR’-NR”CO)₁-R₁₄，其中R、R’和R”各自独立地是氢或被取代的或未被取代的C₁-C₂₀直链烷基或C₁-C₂₀支链烷基，R₁₄选自氢，被取代的或未被取代的胺，环烷基，杂环烷基，芳基和杂芳基，1选自1～5；

vii)被取代的或未被取代的羧基；

viii)-OSO₃-Na⁺；

k选自0～20，条件是当k是0时，R₁₁和R₁₂什么都不是并且R₁₃直接结合于羰基。

4.权利要求1的组合物，其中式1的化合物选自下式3和下式4所示的化合物：

其中，R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇和R₈具有式1中的定义。

5.权利要求1的组合物，其中每个R₁和R₂是氢。

6.权利要求4的组合物，其中式3所示的化合物是其中R₁、R₂和R₄分别是氢的式3a的化合物或者是其中R₁、R₂和R₆分别是氢的式3b的化合物：

7.权利要求4的组合物，其中式4所示的化合物是选自下式4a、4b和4c的化合物：

8.权利要求1的组合物，其中式2所示的化合物是其中n是0且相邻碳原子借助于它们之间的直接键形成环状结构并且Y是C的式2a的化合物或者是其中n是1且Y是C的式2b的化合物，

其中，R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈和X具有式1中的定义。

9.权利要求1的组合物，其中式1或式2所示的化合物具有晶体结构。

10.权利要求1的组合物，其中式1或式2所示的化合物具有无定形结构。

11.权利要求1的组合物，其中式1或式2所示的化合物被配制成细粒形式。

12.权利要求11的组合物，其中细粒形式的制剂通过选自以下的粒子微粉化方法进行：机械研磨、喷雾干燥、沉淀法、高压匀浆法和超临界微粉化。

13.权利要求12的组合物，其中制剂通过作为机械研磨的喷射研磨和/或喷雾干燥制备。

14.权利要求11的组合物，其中细粒的粒径为5纳米至500微米。

15.权利要求1的组合物，其中组合物被配制成肠靶向制剂。

16.权利要求15的组合物，其中肠靶向制剂通过附加pH敏感聚合物制备。

17.权利要求15的组合物，其中肠靶向制剂通过加入可被肠特异性细菌酶分解的生物可降解的聚合物制备。

18.权利要求15的组合物，其中肠靶向制剂通过加入可被肠特异性细菌酶分解的生物可降解的基质制备。

19.权利要求15的组合物，其中肠靶向制剂通过配置为在滞后时间后经时释放药物(″时间特异性延迟释放制剂″)进行。

20.权利要求1的组合物，其中式1或式2所示的化合物通过被包覆在或包埋在待插入血管内的网状支架内而被附加。

21.权利要求1的式1或式2所示的化合物在制备用于预防和治疗与血管平滑肌细胞的快速增殖有关的疾病的药物中的应用。

22.权利要求21的应用，其中疾病是再狭窄。

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