CN101484151A - 二价smac模拟物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及Smac的二价模拟物，它用作细胞凋亡蛋白抑制剂的抑制剂。本发明还涉及这些模拟物用于诱导细胞凋亡和使细胞对细胞凋亡诱导物敏感的用途。

Description

二价SMAC模拟物及其应用

发明背景

本申请要求2006年5月5日提交的美国临时专利申请序列号60/798,018，和2007年4月13日提交的美国临时专利申请序列号60/923,415的优先权，其中每一篇在此整体引入供参考。

发明领域

[0001]本发明属于药物化学领域。特别地，本发明涉及作为细胞凋亡蛋白抑制剂的抑制剂而起作用的Smac的N-末端序列的二价模拟物。本发明还涉及这些模拟物在引起或使细胞对细胞凋亡的诱导敏感的应用。

相关技术

[0002]侵害性的癌细胞表型是导致胞内信号传导途径失调的多种遗传和渐成式改变的结果(Ponder，Nature 411：336(2001))。然而，对所有癌细胞而言具有普遍性的是它们不能完成细胞凋亡程序，而因正常细胞凋亡机制的缺陷导致的缺乏适当的细胞凋亡为癌症的标志(Lowe et al.，Carcinogenesis 21：485(2000))。目前癌症疗法中的大部分，包括化疗剂、放射和免疫疗法均通过间接诱导癌细胞中的细胞凋亡起作用。因此，癌细胞因正常细胞凋亡机制中的缺陷而缺乏完成细胞凋亡程序的能力通常与对化疗、放射或免疫疗法诱导的细胞凋亡的耐性增加相关。不同来源的人体癌症因细胞凋亡缺陷而对目前治疗方案具有的原发性或获得性抗性为目前癌症疗法中的主要问题(Lowe etal.，Carcinogenesis 21：485(2000)；Nicholson，Nature 407：810(2000))。因此，目前和未来对为改善癌症患者存活期和生活质量而设计并且研发新分子靶-特异性抗癌疗法的努力必须包括特异性地靶向于对细胞凋亡有耐受性的癌细胞的策略。在这方面，在直接抑制癌细胞中的细胞凋亡方面起重要作用的关键负调节物代表了用于新抗癌药设计的非常富有前途的治疗策略。

[0003]已经鉴定了两类细胞凋亡的中心负调节物。第一类调节物为Bcl-2族蛋白，以两种有效的抗细胞凋亡分子Bcl-2和Bcl-XL蛋白为典型(Adams et al.，Science 281：1322(1998)；Reed，Adv.Pharmacol.41：501(1997)；Reed et al.，J.Cell.Biochem.60：23(1996))。已经广泛综述了在癌症中靶向于Bcl-2和Bcl-XL以恢复癌细胞敏感性并且克服癌细胞对细胞凋亡的抗性的治疗策略(Adams et al.，Science281：1322(1998)；Reed，Adv.Pharmacol.41：501(1997)；Reed et al.，J.Cell.Biochem.60：23(1996))。几个实验室致力于设计Bcl-2和Bcl-XL的小分子抑制剂。

[0004]细胞凋亡的第二类中心负调节物为细胞凋亡蛋白抑制剂(IAP)(Deveraux et al.，Genes Dev.13：239(1999)；Salvesen et al.，Nat.Rev.Mol.Cell.Biol.3：401(2002))。这一类别包括蛋白质例如XIAP、cIAP-1、cIAP-2、ML-IAP、HIAP、KIAP、TSIAP、NAIP、生存素、livin、ILP-2、apollon和BRUCE。IAP蛋白有效抑制相当多种细胞凋亡刺激，包括化疗剂、放射和免疫疗法在癌细胞中诱导的细胞凋亡。

[0005]X-连锁的IAP(XIAP)为所有IAP成员中在抑制细胞凋亡方面最有效的抑制剂(Holcik et al.，Apoptosis 6：253(2001)；LaCasseet al.，Oncogene 17：3247(1998)；Takahashi et al.，J.Biol.Chem.273：7787(1998)；Deveraux et al.，Nature 388：300(1997)；Sun et al.，Nature 401：818(1999)；Deveraux et al.，EMBO J.18：5242(1999)；Asselin et al.，Cancer Res.61：1862(2001))。XIAP在死亡受体-介导的和线粒体-介导的两种途径中的细胞凋亡负调节中起关键作用。XIAP作为有效的内源性细胞凋亡抑制剂通过直接结合和有效抑制半胱天冬酶家族酶中的三个成员半胱天冬酶-3、-7和-9起作用(Takahashi et al.，J.Biol.Chem.273：7787(1998)；Deveraux et al.，Nature 388：300(1997)；Sun et al.，Nature 401：818(1999)；Deveraux et al.，EMBO J.18：5242(1999)；Asselin et al.，Cancer Res.61：1862(2001)；Riedl等Cell 104：791(2001)；Chai et al.，Cell 104：769(2001)；Huang et al.，Cell 104：781(2001))。XIAP含有细胞凋亡重复(BIR)结构域的三个杆状病毒抑制剂以及C-末端RING指状结构。第三个BIR结构域(BIR3)选择性靶向半胱天冬酶-9，即线粒体途径中的起始物半胱天冬酶，而BIR1与BIR2之间的连接区抑制半胱天冬酶-3和半胱天冬酶-7二者(Salvesen et al.，Nat.Rev.Mol.Cell.Biol.3：401(2002))。尽管与XIAP的结合可以防止所有三种半胱天冬酶活化，但是显然与半胱天冬酶-9的相互作用对其抑制细胞凋亡而言最为关键(Ekert et al.，J.Cell Biol.152；483(2001)；Srinivasula et al.，Nature 410：112(2001))。因为XIAP在下游效应期，即多个信号传导途径的汇集点阻断细胞凋亡，所以靶向XIAP的策略可以证实对于克服癌细胞对细胞凋亡的抗性是尤其有效的(Fulda et al.，Nature Med.8：808(2002)；Arnt et al.，J.Biol.Chem.277：44236(2002))。

[0006]尽管XIAP在每种类型癌症中的确切作用远未得到完全了解，但是有证据确切地表明XIAP在许多类型的癌症中广泛得到过表达，并且可能在癌细胞对多种目前的治疗剂的抗性中起重要作用(Holcik et al.，Apoptosis 6：253(2001)；LaCasse et al.，Oncogene17：3247(1998))。

[0007]已发现XIAP蛋白在大部分NCI60人癌细胞系中表达(Tamm et al.，Clin.Cancer Res.6：1796(2000))。对在78位预先未治疗的患者的肿瘤样品的分析表明，那些具有低水平XIAP的患者显然具有更长的存活期(Tamm et al.，Clin.Cancer Res.6：1796(2000))。已发现XIAP在人恶性胶质瘤中表达(Wagenknecht et al.，Cell Death Differ.6：370(1999)；Fulda et al.，Nature Med.8：808(2002))。发现XIAP在人前列腺癌细胞中表达，并且阻断与Apo2配体/肿瘤坏死因子-相关的细胞凋亡，这种细胞凋亡在有线粒体活化存在下诱导配体介导的前列腺癌细胞细胞凋亡(McEleny et al.，Prostate 51：133(2002)；Ng et al.，Mol.Cancer Ther：1：1051(2002))。XIAP在患者的非小细胞肺癌(NSCLC)中超表达并且已发现与NSCLC发病机制有关(Hofmann etal.，J.Cancer Res.Clin.Ontcol.128：554(2002))。XIAP的表达和使用顺铂治疗时XIAP减量调节的缺乏与人卵巢癌的顺铂抗性有关(Li etal.，Endocrinology 142：370(2001)；Cheng et al.，Drug Resist.Update5：131(2002))。这些数据共同提示XIAP可能在几种人癌对目前治疗剂的抗性中起重要作用。

[0008]细胞凋亡不是单一过程，而是涉及许多不同，有时相互连接的导致细胞降解的信号路径。细胞凋亡的特定形式中涉及的路径取决于许多因素，例如引发该过程的损害。其它因素包括特定受体的活化或过度活化，例如由肿瘤坏死因子α(TNFα)、肿瘤坏死因子相关的细胞凋亡诱导的配体(TRAIL或Apo2L)或FAS配体引起的“死亡”受体的活化。另一个决定性因素是所涉及的细胞的类型，因为在Fas或TNFα受体活化之后所谓的类型I和类型II细胞显示不同的信号路径。

[0009]TRAIL(Apo2L)在与两个前细胞凋亡TRAIL受体，即TRAIL-R1(或DR⁴)(Pan et al.，Science 276：111(1997))或TRAIL-R2(KILLER，或DR⁵)(Wu et al.，Nat.Genet.17：141-143(1997)；Pan etal.，Science 277：815(1997)；Walczak et al.，EMBO J.16：5386(1997))结合后已经显示为癌细胞(而不是正常细胞)中细胞凋亡的选择性和有效性诱导物。由TRAIL引起的前细胞凋亡性死亡受体的活化引起死亡诱导发信号复合体(DISC)的形成，该复合体由作为接合体的受体FADD(Kischkel et al.，Immunity 12：611(2000)；Kuang et al.，J.Biol.Chem.275：25065(2000))和作为引发剂半胱天冬酶的半胱天冬酶-8构成。一旦DISC形成，半胱天冬酶-8由诱导的亲近自加工和活化(Medema et al.，EMBO J.16：2794(1997)；Muzio et al.，J.Biol.Chem.273：2926(1998))。

[0010]TRAIL作为潜在癌症治疗已经产生重要的利益(Frenchet al.，Nat.Med.5：146(1999))，因为其对癌细胞的选择性寻靶，而大多数正常细胞好象耐TRAIL(Ashkenazi et al.，Science 281：1305(1998)；Walczak et al.，Nat.Med.5：157(1999))。TRAIL的全身施用已经证明安全和有效地杀死乳房或结肠异种移植的肿瘤和延长在小白鼠中的存活期(Walczak et al.，Nat.Med.5：157(1999))。虽然TRAIL特别可以杀死许多类型癌细胞，但是许多其它显示TRAIL耐性(Kimet al.，Clin.Cancer Res.6：335(2000)；Zhang et al.，Cancer Res.59：2747(1999))。此外，癌细胞已经被特别识别TRAIL-R1或TRAIL-R2的抗体(单克隆或多克隆)的施用杀死。

[0011]许多机理已经确定为对TRAIL耐性负责的潜在因素。此种机理以许多水平存在，包括受体水平、线粒体水平、后线粒体水平和DISC水平。例如，半胱天冬酶-8表述的损失(Teitz et al.，Nat.Med.6：529(2000)；Griffith et al.，J.Immunol.161：2833(1998))或细胞FLICE抑制剂蛋白质(cFLIP)的高表述(Kim et al.，Clin.Cancer Res.6：335(2000)；Zhang et al.，Cancer Res.59：27471999；Kataoka et al.，J.Immunol.161：3936(1998))使得癌细胞耐TRAIL。Yeh等已经介绍cFLIP-有缺陷的初期小白鼠成纤维细胞尤其对受体介导的细胞凋亡敏感(Yeh et al.，Immunity 12：533(2000))。cFLIP的若干缝接变体是已知的，包括短缝接变体cFLIP-S和长缝接变体cFLIP-L。已经表明，由于cFLIP-S的逆转录病毒介导的转导，cFLIP-有缺陷的初期小白鼠成纤维细胞变得耐TRAIL诱导的细胞凋亡(Bin et al.，FEBS Lett.510：37(2002))。

[0012]虽然TRAIL代表肿瘤选择性死亡受体活化的可能有希望的候选物(即，它优先在肿瘤细胞而不是常规组织中引起细胞凋亡)，但是许多癌细胞耐上述细胞凋亡诱导药物。结果，用此种药物治疗通常要求用辐射和/或细胞毒素化学品的共同治疗以达到治疗效果。然而，辐射和化疗都具有显著的副作用，并且如有可能一般加以避免。

[0013]因此，仍需要可以选择性地和有效地使肿瘤细胞对选择性细胞凋亡诱导药物例如TRAIL或TRAIL受体抗体敏感，而仍不使周围正常细胞敏感的试剂。此种试剂还将可用于降低或防止通常与使用受体介导的细胞凋亡癌症药物有关的抗药性，从而改进它们的有效性和消除对组合治疗的需要。

[0014]近来，将Smac/DIABLO(第二种线粒体衍生的半胱天冬酶激活物)鉴定为响应于细胞凋亡刺激物而从线粒体释放入胞质溶胶的蛋白质(Budihardjo et al.，Annu.Rev.Cell Dev.Biol.15：269(1999)；Du et al.，Cell 102：33(2000))。使用在成熟为成熟多肽过程中通过蛋白水解除去的N-末端线粒体引导肽合成Smac。已证实Smac直接与XIAP和其它IAP发生相互作用并且破坏其与半胱天冬酶的结合，并促进半胱天冬酶活化。Smac为有效的XIAP内源性抑制剂。

[0015]近来已经确定了XIAP的BIR3结构域与Smac蛋白和肽相复合的高分辨率实验性三维(3D)结构(Sun et al.，J.Biol.Chem.275：36152(2000)；Wu et al.，Nature 408：1008(2000))(附图1)。Smac的N-末端四肽(Ala-Val-Pro-Ile或AVPI(SEQ ID NO：1))通过几种氢键相互作用和范德瓦耳斯相互作用识别XIAP的BIR3结构域上的表面沟。还证实BIR3与半胱天冬酶-9之间的相互作用涉及半胱天冬酶-9小亚单位的氨基末端上的四个残基(Ala-Thr-Pro-Phe或ATPF(SEQID NO：2))到BIR3结构域上的同一表面沟。近来几种研究已经令人信服地证实Smac通过与半胱天冬酶-9竞争BIR3结构域表面上的相同结合沟而促进半胱天冬酶-9的催化活性(Ekert et al.，J.Cell Biol.152：483(2001)；Srinivasula et al.，Nature 410：112(2001))。

[0016]不同于大部分蛋白-蛋白相互作用，Smac-XIAP相互作用仅由Smac蛋白上的四个氨基酸残基和XIAP的BIR3结构域上的明确确定的表面沟介导。Smac肽AVPI(SEQ ID NO：1)与XIAP结合的K_d值(K_d＝0.4μM)基本上与成熟Smac蛋白相同(K_d＝0.42μM)。这种明确确定的相互作用位点对模拟Smac与XIAP之间结合的非肽药物类小分子的设计而言是理想的。

[0017]近来证实，由与载体肽结合以促进胞内递送的Smac N-末端前四个氨基酸残基组成的细胞可渗透性Smac肽(AVPI(SEQ IDNO：1))可以在体外使不同肿瘤细胞和在体内使恶性胶质瘤细胞对死亡受体连接或细胞毒性药物诱导的细胞凋亡敏感(Fulda et al.，NatureMed.8：808(2002))。重要的是，这种Smac肽强烈促进Apo2L/TRAIL在颅内恶性胶质瘤的体内异种移植物模型中的抗肿瘤活性。完全根除已建立的肿瘤和小鼠的存活仅在使用Smac肽类和Apo2L/TRAIL的联合疗法时得以实现。具有重要意义的是Smac肽对正常脑组织没有可检测到的毒性。

[0018]第二种近期的独立研究还证实，由与不同载体肽结合的Smac N-末端前4-8个氨基酸残基组成的肽促进了细胞凋亡的诱导和不同化疗药，包括紫杉醇、依托泊苷、SN-38和多柔比星在MCF-7和其它人乳腺癌细胞系中的长期抗增殖作用(Arnt et al.，J.Biol.Chem.277：44236(2002))。该研究令人信服地证实了XIAP和cIAP-1为这些肽类在细胞中的主要分子靶。

[0019]第三种研究证实与聚精氨酸结合的前7个N-末端残基的Smac肽在非小细胞肺癌H460细胞中可恢复凋亡体活性并且逆转细胞凋亡抗性(Yang et al.，Cancer Res.63：831(2003))。已证实XIAP与H460细胞中凋亡体活性的缺乏和半胱天冬酶活性的抑制有关。当与化疗联用时，细胞可渗透的Smac肽使小鼠体内肿瘤生长退化，而对小鼠几乎没有毒性。这些近期独立的研究共同强烈提示，有效的稳定的细胞可渗透Smac肽模拟物可能对人乳腺癌和其它类型的癌症具有显著的治疗潜能。

[0020]基于肽的抑制剂为阐明IAP的抗细胞凋亡功能和IAP在癌细胞对化疗剂的响应方面的作用的有用工具。但基于肽的抑制剂作为可能有用的治疗剂一般存在内在局限性。这些限制包括其细胞渗透性差和体内稳定性差。实际上，在这三种公布的使用基于Smac的肽抑制剂的研究中，所述的肽类必须与载体肽类融合以使其具有相对的细胞渗透性。

[0021]美国公开申请号2005/0197403公开了以下通式I的二聚Smac模拟化合物：

其中：

R¹和R^1′选自氢，任选取代的甲基和羟基；

R²和R^2′选自任选取代的甲基和任选取代的乙基；

R³和R^3′选自CH₂、NH、O和S；

R⁴和R^4′选自CH和N；

R⁵-R⁸和R^5′-R^8′选自氢，任选杂化、任选取代的烷基，任选杂化、任选取代的烯基，任选杂化、任选取代的炔基，任选杂化、任选取代的芳基；和

L是以共价键方式将R²、R⁵、R⁶或R⁷与R^2′、R^5′、R^6′或R^7′连接的连接基，

或其药学上可接受的盐。

[0022]为了克服基于肽的抑制剂的内在局限性，本发明涉及二价构象约束的Smac模拟物的设计。

发明概述

[0023]已普遍接受的是，癌细胞或其支持细胞不能响应于遗传损害或对细胞凋亡诱导物(例如抗癌剂和辐射)的暴露而经历细胞凋亡是癌症发作和发展的主要因素。认为诱导癌细胞或其支持细胞(例如肿瘤脉管系统中的新血管细胞)中的细胞凋亡是实际上市场上或当今实际应用的所有有效癌症治疗药或放射疗法的普遍作用机制。细胞不能进行细胞凋亡的一个原因在于IAP的表达和蓄积增加。

[0024]本发明认为，患有癌症或与细胞凋亡的失调有关的其它过度增殖性病症或疾病的动物接触治疗有效量的抑制IAP功能的药物(例如小分子)将完全杀死癌细胞或支持细胞(其持续存活依赖于IAP的过度活性或过度表达的那些细胞)和/或使得这类细胞作为群体对癌症治疗药或放疗的细胞死亡诱导活性更敏感。本发明认为，IAP的抑制剂满足了对治疗多种癌症类型的尚未得到满足的需求，无论是作为单一疗法进行施用以在依赖于IAP功能的癌细胞中诱导细胞凋亡，还是以时间关系与诱导细胞死亡的其它癌症治疗药或放疗组合施用，以使得与仅单独使用癌症治疗药或放疗治疗的动物中相应比例的细胞相比，更大比例的癌细胞或支持细胞对进行细胞凋亡程序敏感。

[0025]在本发明的某些实施方案中，使用治疗有效量的本发明化合物和抗癌药或放射疗程对动物进行组合治疗在这类动物中产生了与单独使用所述化合物或抗癌药/放射治疗相比更大的肿瘤响应和临床有益性。另一方面，因为所述的化合物可以降低表达IAP的所有细胞的细胞凋亡阈值，所以响应于抗癌药/放射的凋亡诱导活性而成功进行细胞凋亡程序的细胞比例增加。或者，使用本发明的化合物可以使得施用较低、因此为低毒性和更具耐受性的剂量的抗癌药和/或放射，以产生与单独常规剂量的抗癌药/放射相同的肿瘤响应/临床有益性。因为所有经批准的抗癌药和放疗的剂量都是已知的，所以本发明关注它们与本发明化合物的各种组合。此外，因为本发明的化合物至少部分通过抑制IAP起作用，所以使癌细胞和支持细胞接触治疗有效量的这些化合物可以在时间上使细胞响应于抗癌药或放疗而执行细胞凋亡程序的尝试一致进行。因此，在某些实施方案中，施用本发明的组合物连同某些临时的相关方案尤其提供了有效的治疗实践。

[0026]本发明涉及可用于抑制IAP蛋白活性并且增加细胞对细胞凋亡诱导物的敏感性的Smac模拟物。在一个特定的实施方案中，该Smac模拟物是通式II的化合物或其药学上可接受的盐或前药：

其中：

A₁和A₁′独立地选自氢、任选取代的烷基和Z；

A₂和A₂′独立地选自氢、任选取代的烷基和COR¹，其中当V是O时不存在A₂和当V′是O时不存在A₂′；

V和V′独立地选自N、CH和O；

W和W′独立地选自CH和N；

X和X′独立地是任选取代的C_1-3烷基；

Y和Y′独立地选自CONR¹，C(O)O，(CR¹R²)_1-3，其中一个或多个CH₂基团可以被O、S或NR¹替代，任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；

D和D′独立地选自任选取代的亚烷基(alkylenyl)和(CR¹R²)_n-R^5a-(CR³R⁴)_m；

J和J′独立地选自任选取代的亚烷基和(CR¹R²)_p-R^5b-(CR³R⁴)_q；

T和T′独立地选自C＝O、C＝S、C＝NR¹、S、O、NR¹、CR¹R²、任选取代的碳环、任选取代的杂环、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；

U和U′独立地选自氢、NR¹R²、OR¹、SR¹、任选取代的烷基和任选取代的芳基；

n、m、p和q独立地是0-5；

每个R¹选自氢、任选取代的烷基、任选取代的碳环、任选取代的杂环、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基和Z；

每个R²、R³和R⁴独立地选自氢、任选取代的烷基、任选取代的碳环、任选取代的杂环、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；

R^5a和R^5b独立地选自C＝O、C＝S、C＝NR¹、S、O、NR¹和CR¹R²；和

Z是以共价键方式将A₁、Y、D、J、T和U之一与A₁′、Y′、D′、J′、T′和U′之一连接的连接基。

[0027]本发明涉及通式II表示的化合物，它们为IAP蛋白的抑制剂。本发明还涉及本发明的化合物诱导细胞中细胞凋亡的用途。本发明还涉及本发明的化合物用于使细胞对细胞凋亡诱导物敏感的应用。这些化合物可用于治疗、改善或预防对细胞凋亡的诱导有反应性的疾病，例如以细胞凋亡的失调为特征的疾病，包括过度增殖性疾病，例如癌症。在某些实施方案中，这些化合物可以用于治疗、改善或预防特征在于对癌症疗法产生耐受性的癌症(例如为化学抗性、放射抗性、激素抗性等的那些癌症)。在其它实施方案中，这些化合物可以用于治疗特征在于IAP的过表达的过度增殖性疾病。

[0028]本发明提供了包含通式II的化合物的药物组合物，所述通式II化合物的存在量为诱导细胞中细胞凋亡或使细胞对细胞凋亡诱导物敏感的治疗有效量。

[0029]本发明进一步提供了包含通式II的化合物和用于对动物施用所述化合物的说明书的试剂盒。这些试剂盒可以任选地包含其它治疗剂，例如抗癌剂或细胞凋亡调节剂。

附图简述

[0030]图1示出了Smac模拟物与XIAP BIR3蛋白的竞争性结合。

[0031]图2示出了MDA-MB-231、MAMLE-3M、SK-OV-3和OVCAR-4细胞中由SH-164引起的细胞生长抑制。

[0032]图3示出了MDA-MB-231、MAMLE-3M和OVCAR-4细胞中由SH-164引起的细胞死亡的诱导。

[0033]图4A-4C示出了MDA-MB-231(A)、MDA-MB-453(B)和PC-3(C)细胞中由与TRAIL结合的SH-164引起的细胞生长的抑制。

[0034]图5示出了MDA-MB-231细胞中由与顺铂或米托蒽醌结合的SH-164引起的细胞生长抑制。

[0035]图6示出了MDA-MB-231乳癌细胞系中由SH-164引起的细胞凋亡的诱导。

发明详述

[0036]本发明涉及由通式II表示的二价构象约束的化合物，它们为Smac的模拟物并且作为IAP抑制剂起作用。通过抑制IAP，这些化合物使细胞对细胞凋亡诱导物敏感，并且在某些情况中，其自身诱导细胞凋亡。因此，本发明涉及使细胞对细胞凋亡诱导物敏感的方法和诱导细胞中细胞凋亡的方法，包括使所述的细胞接触单独的通式II的化合物或通式II化合物与细胞凋亡诱导物的组合。本发明进一步涉及治疗、改善或预防动物中对诱导细胞凋亡有反应性的疾病的方法，包括对所述的动物施用通式II的化合物和细胞凋亡诱导物。这类疾病包括那些特征在于细胞凋亡失调的疾病和那些特征在于IAP过度表达的疾病。

[0037]本文所用的术语“IAP蛋白”指的是细胞凋亡蛋白家族抑制剂中的任意已知的成员，包括，但不限于XIAP、cIAP-1、cIAP-2、ML-IAP、HIAP、TSIAP、KIAP、NAIP、生存素、livin、ILP-2、apollon和BRUCE。

[0038]本文所用的术语“IAP过度表达”指的是细胞中与表达编码IAP蛋白的mRNA基础水平或具有IAP蛋白基础水平的相应非病态细胞相比，编码IAP蛋白的mRNA水平升高(例如异常水平)和/或IAP蛋白的水平升高。用于检测细胞中编码IAP蛋白的mRNA水平或IAP蛋白水平的方法包括，但不限于使用IAP蛋白抗体的蛋白质印迹、免疫组织化学法和核酸扩增或直接RNA检测法。与细胞中IAP蛋白的绝对水平同样重要的是测定它们过度表达IAP蛋白，故还有这类细胞中IAP蛋白与其他促细胞凋亡信号传导分子(例如促细胞凋亡Bcl-2族蛋白)相比的相对水平。当这两种分子的平衡处于若不是由于IAP蛋白水平、促细胞凋亡信号传导分子将足以使细胞进行细胞凋亡程序并且死亡这种状态时，所述的细胞将依赖于IAP蛋白才能存活。在这类细胞中，接触抑制有效量的IAP蛋白抑制剂将足以使细胞进行细胞凋亡程序并且死亡。因此，术语“IAP蛋白的过度表达”还指因促细胞凋亡信号和抗-细胞凋亡信号的相对水平而导致细胞响应抑制IAP蛋白功能的抑制有效量的化合物发生细胞凋亡。

[0039]本文所用的术语“抗癌剂(anticancer agent)”和“抗癌药(anticancer drug)”指的是用于治疗过度增殖性疾病，例如癌症(例如哺乳动物中)的任意治疗剂(例如化疗化合物和/或分子治疗化合物)、放疗或外科手术。

[0040]本文所用的术语“前药”指的是需要在靶生理系统中发生生物转化(例如自发或酶促)以将前体药物释放或转化(例如通过酶、生理、机械、电磁方式)成活性药物的母体“药物”分子的药物上无活性的衍生物。设计前体药物是为了克服与稳定性、毒性、缺乏特异性或有限的生物利用度相关的问题。示例性前药包括活性药物分子自身和化学掩蔽基团(例如可逆地抑制所述药物活性的基团)。某些优选的前药为带有在代谢条件下可裂解的基团的化合物的变型或衍生物。示例性前药在它们在生理条件进行进行溶剂解或进行酶降解或其它生物转化(例如磷酸化、氢化、脱氢、糖基化)时在体内或体外变成具有药学活性。前药通常提供在哺乳动物体内溶解度、组织相容性或延缓释放的优点(例如，参见Bundgard，Design of Prodrugs，pp.7-9，21-24，Elsevier，Amsterdam(1985)；和Silverman，The Organic Chemistryof Drug Design and Drug Action，pp.352-401，Academic Press，SanDiego，CA(1992))。常用的前药包括酸性衍生物，例如通过使母体酸与合适的醇(例如低级链烷醇)反应制备的酯类，通过使母体酸与胺反应制备的酰胺类，或反应生成酰化碱性衍生物的碱性基团(例如低级烷基酰胺)。

[0041]本文所用的术语“药物上可接受的盐”指的是在靶动物(例如哺乳动物)体内为生理上耐受的本发明化合物的任意盐(例如通过与酸或碱反应获得)。本发明化合物的盐可以来源于无机酸和碱或者有机酸和碱。酸的实例包括，但不限于盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、高氯酸、富马酸、马来酸、磷酸、乙醇酸、乳酸、水杨酸、琥珀酸、对甲苯磺酸、酒石酸、乙酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、甲酸、苯甲酸、丙二酸、磺酸、萘-2-磺酸、苯磺酸等。其它自身并非药物上可接受的酸，例如草酸，可以用于制备用作获得本发明化合物及其药物上可接受的酸加成盐的中间体。

[0042]碱的实例包括，但不限于碱金属(例如钠)氢氧化物、碱土金属(例如镁)氢氧化物、氨和通式NW₄ ⁺的化合物，其中W为C_1-4烷基，等。

[0043]盐的实例包括，但不限于：乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、氟庚酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐、十一酸盐等。盐的其它实例包括与合适的阳离子诸如Na⁺、NH₄ ⁺和NW₄ ⁺(其中W为C_1-4烷基)化合的本发明化合物的阴离子等。为了治疗应用，关注药物上可接受的本发明化合物的盐。然而，例如，非药物上可接受的酸和碱的盐也可以应用于制备或纯化药物上可接受的化合物。

[0044]本文所用的术语“治疗有效量”指的是足以使得疾病的一种或多种症状改善或者预防疾病进展或者导致疾病退化的治疗剂用量。例如，就治疗癌症而言，治疗有效量优选指的是减小肿瘤生长率、减小肿瘤质量、减少转移瘤的数量、增加肿瘤进展的时间或增加存活时间至少5％，优选至少10％，至少15％，至少20％，至少25％，至少30％，至少35％，至少40％，至少45％，至少50％，至少55％，至少60％，至少65％，至少70％，至少75％，至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少100％的治疗剂用量。

[0045]本文所用的术语“致敏(sensitize)”和“敏化(sensitizing)”指的是通过给予第一种治疗剂(例如通式II的化合物)使动物或动物体内的细胞对第二种活性剂的生物作用(例如促进或阻滞细胞功能的方面，包括，但不限于细胞分裂、细胞生长、增殖、侵害、血管发生或细胞凋亡)更为敏感或更具响应性。可以将第一试剂对靶细胞的致敏效应以在与和不与第一试剂一起施用第二试剂时观察到的指定生物作用(例如促进或阻滞细胞功能的方面，包括，但不限于细胞生长、增殖、侵害、血管发生或细胞凋亡)的差异来度量。致敏细胞的响应可以比在没有第一试剂存在下的响应增加至少10％，至少20％，至少30％，至少40％，至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，至少90％，至少100％，至少150％，至少200％，至少350％，至少300％，至少350％，至少400％，至少450％或至少500％。

[0046]本文所用的术语“细胞凋亡失调”指的是细胞通过细胞凋亡发生细胞死亡(例如倾向性)的能力上的任何异常。细胞凋亡失调与各种状况相关或由它们诱导，包括：例如自身免疫性疾病(例如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、移植物抗宿主病、重症肌无力或斯耶格仑综合症)、慢性炎症状况(例如银屑病、哮喘或克罗恩病)、过度增殖性疾病(例如肿瘤、B细胞淋巴瘤或T细胞淋巴瘤)、病毒感染(例如疱疹、乳头瘤或HIV)和其它状况，例如骨关节炎和动脉粥样硬化。应注意当这种失调由病毒感染诱导或与之相关时，在发生或观察到失调时可能检测到病毒感染，也可能未检测到病毒感染。即病毒-诱导的失调甚至可能在病毒感染症状消失后发生。

[0047]本文所用的术语“过度增殖性疾病”指的是动物体内的增殖细胞的局限化群体不受通常的正常生长限制的控制。过度增殖性疾病的实例包括但不局限于肿瘤、赘生物、淋巴瘤等。如果赘生物未发生侵害或转移，那么认为赘生物为良性的；如果这两种情况中发生一种，那么认为是恶性的。“转移”细胞指的是细胞可以侵入和破坏附近的身体结构。增生是细胞增殖的一种形式，包括组织或器官中的细胞数量增加，而结构或功能没有显著改变。组织变形是受控细胞生长的一种形式，其中一种类型的完全分化细胞取代了另一种类型的分化细胞。

[0048]活化淋巴样细胞的病理性生长通常导致自身免疫性疾病或慢性炎症疾病。本文所用的术语“自身免疫性疾病”指的是生物体产生识别生物体自身分子、细胞或组织的抗体或免疫细胞的任何疾病。自身免疫性疾病的非限制性实例包括自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、贝格尔病或IgA肾病、口炎性腹泻、慢性疲乏综合征、克罗恩病、皮肌炎、纤维肌痛、移植物抗宿主病、格雷夫斯病、桥本甲状腺炎、特发性血小板减少性紫癜、扁平苔癣、多发性硬化、重症肌无力、银屑病、风湿热、风湿性关节炎、硬皮病、斯耶格伦综合症、系统性红斑狼疮、1型糖尿病、溃疡性结肠炎、白癜风等。

[0049]本文所用的术语“肿瘤性疾病”指的是为良性(非癌性)或恶性(癌性)的任何异常细胞生长。

[0050]本文所用的术语“抗肿瘤剂”指的是阻止被靶向的(例如恶性)赘生物增殖、生长或扩散的任意化合物。

[0051]本文所用的术语“预防(prevent、preventing和prevention)”指的是动物体内病态细胞(例如过度增殖性或赘生性细胞)的出现减少。预防可以为完全性的，例如受试者体内的病态细胞总体上不存在。预防还可以为部分的，使得受试者体内出现的病态细胞少于未使用本发明出现的病态细胞。

[0052]本文所使用的术语“细胞凋亡调节剂”是指与细胞凋亡的调节(例如，抑制、减少、增加、促进)有关的试剂。细胞凋亡调节剂的实例包括包含死亡结构域的蛋白，例如但不限于Fas/CD95、TRAMP、TNF RI、DR1、DR2、DR3、DR4、DR5、DR6、FADD和RIP。细胞凋亡调节剂的其它实例包括但不限于，TNFα、Fas配体、Fas/CD95及其它TNF族受体的抗体、TRAIL(亦称Apo2配体或Apo2L/TRAIL)、TRAIL-R1或TRAIL-R2的激动剂(例如，单克隆或多克隆主动抗体)、Bcl-2、p53、BAX、BAD、Akt、CAD、PI3激酶、PP1和半胱天冬酶蛋白。调节剂广泛地包括TNF族受体和TNF族配体的激动剂和拮抗剂。细胞凋亡调节剂可以是可溶性的或膜结合的(例如配体或受体)。优选的细胞凋亡调节剂是细胞凋亡诱导物，例如TNF或TNF相关的配体，尤其是TRAMP配体、Fas/CD95配体、TNFR-1配体或TRAIL。

[0053]本发明的IAP的抑制剂是具有以下通式II的化合物或其药学上可接受的盐或前药：

其中：

A₁和A₁′独立地选自氢、任选取代的烷基和Z；

A₂和A₂′独立地选自氢、任选取代的烷基和COR¹，其中当V是O时不存在A₂和当V′是O时不存在A₂′；

V和V′独立地选自N、CH和O；

W和W′独立地选自CH和N；

X和X′独立地是任选取代的C_1-3烷基；

Y和Y′独立地选自CONR¹，C(O)O，(CR¹R²)_1-3，其中一个或多个CH₂基团可以被O、S或NR¹替代，任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；

D和D′独立地选自任选取代的亚烷基和(CR¹R²)_n-R^5a-(CR³R⁴)_m；

J和J′独立地选自任选取代的亚烷基和(CR¹R²)_p-R^5b-(CR³R⁴)_q；

T和T′独立地选自C＝O、C＝S、C＝NR¹、S、O、NR¹、CR¹R²、任选取代的碳环、任选取代的杂环、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；

U和U′独立地选自氢、NR¹R²、OR¹、SR¹、任选取代的烷基和任选取代的芳基；

n、m、p和q独立地是0-5；

每个R¹选自氢、任选取代的烷基、任选取代的碳环、任选取代的杂环、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基和Z；

每个R²、R³和R⁴独立地选自氢、任选取代的烷基、任选取代的碳环、任选取代的杂环、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；

R^5a和R^5b独立地选自C＝O、C＝S、C＝NR¹、S、O、NR¹和CR¹R²；和

Z是以共价键方式将A₁、Y、D、J、T和U之一与A₁′、Y′、D′、J′、T′和U′之一连接的连接基。

[0054]在另一个实施方案中，Z连接D与U′。在另一个实施方案中，Z连接D与D′。在另一个实施方案中，Z连接U与U′。在另一个实施方案中，n和m独立地选自0-4，满足n+m是3或4。在另一个实施方案中，p和q独立地选自0和1，满足p+q是1。在另一个实施方案中，n和m独立地选自0-4，满足n+m是3或4，并且p和q独立地选自0和1，满足p+q是1。在另一个实施方案中，T是C＝O。在另一个实施方案中，U是NR¹R²。在另一个实施方案中，R^5b是CH₂。在另一个实施方案中，Y是CONH，W是CH，V是N。在另一个实施方案中，A²和A^2′独立地选自氢和任选取代的烷基。

[0055]在另一个特定的实施方案中，本发明的IAP的抑制剂是以下通式III的化合物或其药学上可接受的盐或前药：

其中A₁、A₂、V、W、X、Y、D、J、Z、A₁′、A₂′、V′、W′、X′、Y′、D′、J′和R²具有如上述的意义。

[0056]在另一个特定的实施方案中，本发明的IAP的抑制剂是以下通式IV的化合物或其药学上可接受的盐或前药：

其中A₁、A₂、V、W、X、Y、D、J、Z、T、U、A₁′、A₂′、V′、W′、X′、Y′、D′、J′、T′和U′具有如上述的意义。

[0057]在另一个特定的实施方案中，本发明的IAP的抑制剂是以下通式V的化合物或其药学上可接受的盐或前药：

其中A₁、A₂、V、W、X、Y、D、J、Z、A₁′、A₂′、V′、W′、X′、Y′、D′、J′、T′、U′和R²具有如上述的意义。

[0058]在另一个特定的实施方案中，可用于制备本发明IAP的中间体是以下通式XIII的化合物：

其中：

D＂是(CR¹R²)_n-R^5c-(CR³R⁴)_m；

J选自任选取代的亚烷基和(CR¹R²)_p-R^5b-(CR³R⁴)_q；

T选自C＝O、C＝S、C＝NR¹、S、O、NR¹、CR¹R²、任选取代的碳环、任选取代的杂环、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；

U选自氢、NR¹R²、OR¹、SR¹、任选取代的烷基和任选取代的芳基；

n、m、p和q独立地选自0-5；

每个R¹、R²、R³和R⁴独立地选自氢、任选取代的烷基、任选取代的碳环、任选取代的杂环、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；

R^5c选自C＝O、C＝S、C＝NR¹、S、O、NR¹、CR^1aR^2a、NCOR⁸和NCO₂R⁸；

R^1a和R^2a独立地选自氢、羟基、叠氮基、任选取代的烷基、任选取代的碳环、任选取代的杂环、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；

R^5b选自O、S、NR¹、CR¹R²、C＝O、C＝S和C＝NR¹；

R⁷选自氢、CO₂R^7a和COCH(R^7b)N(R^7c)CO₂R^7a；

R^7a选自任选取代的烷基、任选取代的碳环、任选取代的杂环、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；

R^7b是任选取代的C_1-3烷基；

R^7c选自氢和任选取代的烷基；和

R⁸选自任选取代的烷基、任选取代的碳环、任选取代的杂环、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基。

[0059]在另一个实施方案中，R^7a是叔丁基。在另一个实施方案中，n是1，m是2，R^5c是NCO₂R⁸且R⁸是苄基。在另一个实施方案中，R^5c是CR^1aR^2a，R^1a选自羟基、叠氮基和任选取代的杂芳基，R^2a是氢。

[0060]有用的烷基包括直链或支化C_1-18烷基，尤其是甲基、乙基、丙基、异丙基、叔丁基、仲丁基、3-戊基和3-己基。术语“亚烷基(alkylenyl)”是指含1、2、3或4个连接的亚甲基的二价烷基，由-(CH₂)₄-示例。

[0061]有用的烯基包括直链或支化C_2-18烷基，特别是乙烯基、丙烯基、异丙烯基、丁烯基、异丁烯基和己烯基。

[0062]本文所使用的术语“亚烯基”是指衍生自烯烃的二价基，由-CH₂CH＝CHCH₂-示例。

[0063]有用的炔基是C_2-18炔基，特别是乙炔基、丙炔基、丁炔基和2-丁炔基。

[0064]有用的环烷基是C_3-8环烷基。典型的环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、金刚烷基和降冰片基。

[0065]有用的芳基包括C_6-14芳基，特别是苯基、萘基、菲基、蒽基、茚基、甘菊环基、联苯基、亚联苯基和芴基。

[0066]有用的杂芳基包括噻吩基、苯并[b]噻吩基、萘并[2，3-b]噻吩基、噻蒽基、呋喃基、吡喃基、异苯并呋喃基、色烯基、呫吨基、吩呫吨基(phenoxanthenyl)、2H-吡咯基、吡咯基、咪唑基、三唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、吲嗪基、异吲哚基、3H-吲哚基、吲哚基、吲唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、异喹啉基、喹啉基、酞嗪基(phthalzinyl)、萘啶基、喹喔啉基(quinozalinyl)、噌啉基、蝶啶基、咔唑基、β-咔啉基、菲啶基、吖啶基、咱啶基、菲咯啉基、吩嗪基、异噻唑基、吩噻嗪基、异噁唑基、呋咱基、吩噁嗪基、1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮、7-氨基香豆素、吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮、1，2-苯并异噁唑-3-基、苯并咪唑基、2-羟吲哚基和2-氧代苯并咪唑基。当杂芳基在环上含有氮原子，那么这类氮原子可以为N-氧化物形式，例如吡啶基N-氧化物、吡嗪基N-氧化物、嘧啶基N-氧化物等。

[0067]任选的取代基包括一个或多个烷基；卤素；叠氮基；卤代烷基；羟基；炔基；环烷基；杂烷基；杂炔基；任选被一个或多个低级烷基、卤素、卤代烷基或杂芳基取代的芳基；任选被一个或多个低级烷基、卤代烷基或杂芳基取代的芳氧基；芳烷基；任选被一个或多个低级烷基、卤代烷基和芳基取代的杂芳基；任选被一个或多个低级烷基、卤代烷基和芳基取代的杂芳氧基；烷氧基；烷基硫；芳基硫；酰胺基；氨基；酰氧基；任选被一个或多个低级烷基、卤代烷基和芳基取代的芳酰氧基；任选被一个或多个低级烷基、卤素或卤代烷基取代的二苯基氧膦基氧基；芳烷基；任选被一个或多个低级烷基、卤代烷基和芳基取代的杂芳基；任选被一个或多个低级烷基、卤代烷基和芳基取代的杂芳氧基；烷氧基；烷基硫；芳基硫；酰胺基；氨基；酰氧基；任选被一个或多个低级烷基、卤代烷基和芳基取代的芳酰氧基；任选被一个或多个低级烷基、卤素或卤代烷基取代的二苯基氧膦基氧基；任选被一个或多个低级烷基、卤代烷基和芳基取代的杂环；任选被一个或多个低级烷基、卤代烷基和芳基取代的杂环烷氧基；任选被一个或多个低级烷基、卤代烷基和芳基取代的部分不饱和杂环烷基；任选被一个或多个低级烷基、卤代烷基和芳基取代的部分不饱和杂环烷氧基；和任何共价连接基(见下页)。

[0068]有用的饱和或部分饱和碳环基是如上面所限定的环烷基，以及环烯基，例如环戊烯基、环庚烯基和环辛烯基。碳环基还包括具有稠环的任选取代的芳基的基团例如萘满。

[0069]有用的卤素包括氟、氯、溴和碘。

[0070]有用的烷芳基和烷杂芳基包括被任何上述C_6-14芳基或杂芳基取代的任何上述C_1-18烷基。有用的包括苄基、苯乙基和萘甲基。

[0071]有用的卤代烷基包括被一个或多个氟、氯、溴或碘原子取代的C_1-10烷基，例如氟代甲基、二氟甲基、三氟甲基、五氟乙基、1，1-二氟乙基、氯代甲基、氯代氟代甲基和三氯甲基。

[0072]有用的杂烷基包括含一个或多个氮、氧或硫原子的C_1-10烷基，例如-CH₂CH₂OCH₃、-CH₂OH、-CH₂CH₂NH₂和-CH₂CH₂NHCH₃。

[0073]有用的杂炔基包括含一个或多个氮、氧或硫原子的C_2-18炔基，例如-CH₂OCH₂CCH。

[0074]有用的烷氧基包括被上述C_1-10烷基之一取代的氧。

[0075]有用的烷基硫包括被上述C_1-10烷基之一取代的硫。还包括此类烷基硫的亚砜和砜。

[0076]有用的酰氨基包括羰酰氨基以及与氨基氮连接的任何C_1-6酰基(烷酰基)，例如乙酸氨基、丙酰氨基、丁酰氨基、戊酰氨基、己酰氨基以及芳基-取代的C_2-6取代的酰基。

[0077]有用的酰氧基是与氧基(-O-)连接的任何C_1-6酰基(烷酰基)，例如甲酰氧基、乙酰氧基、丙酰氧基、丁酰氧基、戊酰氧基、己酰氧基等。

[0078]有用的芳酰氧基包括在上述任何酰氧基上取代的任何上述芳基，例如2，6-二氯苯甲酰氧基、2，6-二氟苯甲酰氧基和2，6-二-(三氟甲基)苯甲酰氧基。

[0079]有用的氨基包括-NH₂、-NHR¹¹和-NR¹¹R¹¹，其中R¹¹和R¹²是C_1-10烷基或如上面所限定的环烷基。

[0080]有用的饱和或部分饱和的杂环基包括四氢呋喃基、吡喃基、哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、咪唑烷基、咪唑啉基、二氢吲哚基、异二氢吲哚基、奎宁环基、吗啉基、异苯并二氢吡喃基、苯并二氢吡喃基、吡唑烷基、吡唑啉基、特窗酰基(tetronoyl)和tetramoyl。

[0081]有用的亚芳基包括C_6-14亚芳基，特别是

亚苯基、亚萘基、亚菲基、亚蒽基、亚茚基、亚薁基、亚联苯基、biphenylenylene和亚芴基。

[0082]有用的杂亚芳基包括二取代的杂芳基例如2，5-亚噻吩基、2，4-亚咪唑基和1，3-亚三唑基。

[0083]在整个说明书中，基团、其任选的取代基经选择提供稳定结构部分和化合物。

[0084]可以用于本发明的共价连接基包括任何二价共价连接基。在一些实施方案中，连接基是含5-50个原子的邻接链。使用标准键长和角度，连接基通常具有约5埃-约100埃的长度。更优选，连接基具有约10埃-约50埃的长度。在某些实施方案中，连接基包含至少一个芳基、杂芳基或杂环结构部分。在其它实施方案中，连接基是对称的。在其它实施方案中，连接基是非对称的。连接基可以是许多已知的均双官能化和杂双官能化连接基。参见例如美国专利号7,001,989、6,967,107、6,921,669、6,906,182、6,887,952、6,759,509、6,521,431、6,512,101、5,880,270、5,856,571、5,824,805、5,262,524、5,258,498、5,212,075、5,165,923、5,141,648，所述文献中的每一篇整体引入供参考。

[0085]在另一个实施方案中，连接基可以包含与A₁、Y、D、J、T或U中任一个和A₁′、Y′、D′、J′、T′或U′中任一个键接的-COR^9a-或-R^9aCO-，其中R^7a是O、S或NR^10a，R^10a是氢或低级烷基。在这个实施方案中，连接基还包含与第一基团的R^9a-和第二基团的CO-键接的基团，其可以包括任选取代的亚烷基，其中该亚烷基的碳原子中任一个可以被一个或多个O、S、NR^10a、亚芳基和杂亚芳基取代。此类连接基的实例包括但不限于：

和

[0086]在另一个实施方案中，连接基可以包含与A₁、Y、D、J、T或U中任一个和A₁′、Y′、D′、J′、T′或U′中任一个键接的羰基，并且进一步包含与该羰基键接的亚烷基、聚亚烷基或芳烷基二醇基。此类二醇的实例包括聚氧化乙烯，聚氧丙烯，和聚氧化乙烯和聚氧化丙烯二醇的嵌段共聚物，二乙二醇，三乙二醇，四乙二醇，二丙二醇，硫代乙二醇，和五乙二醇、六乙二醇、七乙二醇、八乙二醇、九乙二醇和十乙二醇。这些二醇的具体实例包括乙二醇；1，2-丙二醇；1，3-丙二醇；2，4-二甲基-2-乙基己烷-1，3-二醇；2，2-二甲基-1，3-丙二醇；2-乙基-2-丁基-1，3-丙二醇；2-乙基-2-异丁基-1，3-丙二醇；1，3-丁二醇；1，4-丁二醇；1，5-戊二醇；1，6-己二醇；2，2-4-三甲基-1，6-己二醇；硫代二乙醇；1，2-环己烷二甲醇；1，3-环己烷二甲醇；1，4-环己烷二甲醇；2，2，4，4-四甲基-1，3-环丁烷二醇；对-苯二甲醇；2，3-萘二醇和2，7-萘二醇。二氨基化合物的实例包括1，3-双-(2，4-二氨基苯氧基)丙烷；2，4-二氨基-5-甲基苯乙醚；2，4-二氨基-5-甲基苯氧基乙醇；2，4-二氨基二苯胺；2，4-二氨基苯酚；2，4-二氨基苯酚；2，4-二氨基苯氧基乙醇；2，6-双(2-羟基乙氧基)-3，5-吡啶二胺；2，6-二氨基吡啶；2，6-二甲氧基-3，5-吡啶二胺；2-氯-5-硝基-正羟乙基对亚苯基二胺；2-氯-对亚苯基二胺；2-氨甲基-对氨基苯酚和4，5-二氨基-1-甲基吡唑。氨基-羟基化合物的实例包括2-氨基-3-羟基吡啶；2-氨基-3-硝基苯酚；2-氨基-4-羟乙基氨基茴香醚；2-氨基-4-羟乙基氨基茴香醚硫酸盐和2-氨基-6-氯-4-硝基苯酚。

[0087]在另一个实施方案中，连接基可以包含与A₁、Y、D、J、T或U中任一个和A₁′、Y′、D′、J′、T′或U′中任一个键接的氧或氨基，并且进一步包含二酸，从而获得二酯、二酰胺或酯酰胺。此类二酸的实例包括琥珀酸、富马酸、肥酸等。

[0088]在另一个实施方案中，连接基包含1，2，3-三唑-4，5-烯基，它通过炔丙基与叠氮基的环加成引入。

[0089]连接基用来将两种Smac模拟物化合物接合到二价结构中。接合在一起的Smac模拟物化合物可以相同或不同，并且可以是已知用来键接IAP和抑制IAP和半胱天冬酶的相互作用的任何Smac模拟物化合物。在一个实施方案中，Smac模拟物是构象约束的。在另一个实施方案中，Smac模拟物不含任何自然发生的氨基酸。在另一个实施方案中，Smac模拟物不含任何肽键。可用作本发明中的起始材料的已知的Smac模拟物化合物的实例包括以下：

[0090]WO 2005/069888公开了以下通式VI的Smac肽模拟物化合物或其药学上可接受的盐或前药：

其中：

R₁是C_1-2烷基或C_1-2卤代烷基；

R₂为支化或未支化烷基或环烷基或取代或未被取代的芳基、烷芳基、杂芳基或烷杂芳基；

R₃为支化或未支化烷基或环烷基或取代或未被取代的芳基、烷芳基、杂芳基或烷杂芳基；

Y为(CH₂)_0-3，其中一个或多个碳可以被一个或多个选自氧、硫和氮的杂原子取代，并且CH₂基团上的一个或多个氢可以被支化或未支化烷基或环烷基或取代或未取代的芳基、烷芳基、杂芳基或烷杂芳基取代；和

Z是CONH、CH₂O、NHCO、(CH₂)_1-4、(CH₂)_1-3CONH(CH₂)_0-3、(CH₂)_1-3S(CH₂)_0-3、(CH₂)_1-3NH(CH₂)_0-3、(CH₂)_1-3NHCO(CH₂)_0-3、(CH₂)_1-3NHSO₂(CH₂)_0-3、(CH₂)_1-3NHC(O)NH(CH₂)_0-3、(CH₂)_1-3NHC(S)NH(CH₂)_0-3或(CH₂)_1-3NR′(CH₂)_0-3，其中R′为支化或未支化烷基或环烷基或取代或未被取代的芳基、烷芳基、杂芳基或烷杂芳基。

[0091]WO 2005/069894公开了以下通式VII的Smac模拟物化合物或其药物上可接受的盐或前药：

其中：

R₁是C_1-2烷基或C_1-2卤代烷基；

R₂为支化或未支化烷基或环烷基或取代或未被取代的芳基、烷芳基、杂芳基或烷杂芳基；

X是CONH、CH₂O、CH₂NH、CH₂S或(CH₂)_1-3；

Y₁为(CH₂)_1-5，其中一个或多个碳可以被一个或多个选自氧、硫和氮的杂原子取代，并且CH₂基团上的一个或多个氢可以被支化或未支化烷基或环烷基或取代或未取代的芳基、烷芳基、杂芳基或烷杂芳基取代；

Y₂为(CH₂)_1-5，其中一个或多个碳可以被一个或多个选自氧、硫和氮的杂原子取代，并且CH₂基团上的一个或多个氢可以被支化或未支化烷基或环烷基或取代或未取代的芳基、烷芳基、杂芳基或烷杂芳基取代；和

Z是CONH、CH₂O、NHCO、(CH₂)_1-4、(CH₂)_1-3CONH(CH₂)_0-3、(CH₂)_1-3S(CH₂)_0-3、(CH₂)_1-3NH(CH₂)_0-3、(CH₂)_1-3NHCO(CH₂)_0-3、(CH₂)_1-3NHSO₂(CH₂)_0-3、(CH₂)_1-3NHC(O)NH(CH₂)_0-3、(CH₂)_1-3NHC(S)NH(CH₂)_0-3或(CH₂)_1-3NR’(CH₂)_0-3，其中R’为支化或未支化烷基或环烷基或取代或未被取代的芳基、烷芳基、杂芳基或烷杂芳基。

[0092]WO 2006/010118公开了以下通式VIII的Smac模拟物化合物或其药学上可接受的盐或前药：

其中：

A是NR₁R₂或N⁺R₁R₂R₃；

R₁、R₂和R₃独立地是氢或任选取代的C_1-8烷基、C_2-8烯基或C_2-8炔基，其中一个或多个碳可以被C＝O、C＝S或选自O、S和N的杂原子替代，CH、CH₂或CH₃基中的一个或多个氢可以被氟、支化或未支化烷基或环烷基、任选取代的芳基、烷芳基、杂芳基或烷杂芳基、或OR₄、SR₄或NR₄R₅替代；

R₄和R₅独立地是氢或任选取代的C_1-4烷基，C_2-5烯基或C_2-5炔基，其中一个或多个碳可以被选自O、S和N的杂原子替代，或任选取代的芳基，烷芳基，杂芳基或烷杂芳基；或

R₁、R₂和R₃中的任两个与和它们连接的氮一起形成杂环基，其中一个或多个碳原子可以被C＝O、C＝S或选自O、S和N的杂原子替代，条件是该杂原子与该氮原子被至少两个碳隔开；

B是任选取代的C_1-4烷基、C_2-4烯基或C_2-4炔基，其中一个或多个氢可以被氟替代；

U是CONH、C(O)O、C(S)O、C(S)NH、C(NH)NH或(CH₂)_1-5，其中一个或多个碳可以被选自O、S和N的杂原子替代；

V和W独立地是(CH₂)_1-5，其中一个或多个碳可以被C＝O、C＝S或选自O、S和N的杂原子替代，并且CH₂基中的一个或多个氢可以被支化或未支化烷基或环烷基、任选取代的芳基、烷芳基、杂芳基或烷杂芳基，或OR₄、SR₄或NR₄R₅替代；

X是任选取代的C_1-18烷基、C_2-18烯基、C_2-18炔基、芳基或杂芳基，其中一个或多个碳可以被C＝O、C＝S或选自O、S和N的杂原子替代，并且CH、CH₂或CH₃基中的一个或多个氢可以被支化或未支化烷基或环烷基、任选取代的芳基、烷芳基、杂芳基或烷杂芳基，或OR₄、SR₄或NR₄R₅替代；

Y是CH或N；

Z是CH₂、C＝O、C＝S、CHSR、CHOR或CHNR；和

R是氢或任选取代的C_1-4烷基、C_2-4烯基或C_2-4炔基。

[0093]美国公开申请号2005/0234042公开了根据以下通式IX的化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

R₁是H；C₁-C₄烷基；C₁-C₄烯基；C₁-C₄炔基或C₃-C₁₀环烷基，它们是未取代或取代的；

R₂是H；C₁-C₄烷基；C₁-C₄烯基；C₁-C₄炔基或C₃-C₁₀环烷基，它们是未取代或取代的；

R₃是H；-CF₃；-C₂F₅；C₁-C₄烷基；C₁-C₄烯基；C₁-C₄炔基；-CH₂-Z或R²和R³与氮一同形成het环；

Z是H；-OH；F；Cl；-CH₃；-CF₃；-CH₂Cl；-CH₂F或-CH₂OH；

R₄是C₁-C₁₆直链或支化烷基；C₁-C₁₆烯基；C₁-C₁₆炔基或-C₃-C₁₀环烷基；-(CH₂)_1-6-Z₁；-(CH₂)_0-6-芳基；和-(CH₂)_0-6-het；其中烷基、环烷基和苯基是未取代或取代的；

Z₁是-N(R₈)-C(O)-C₁-C₁₀烷基；-N(R₈)-C(O)-(CH₂)_1-6-C₃-C₇环烷基；-N(R₈)-C(O)-(CH₂)_0-6-苯基；-N(R₈)-C(O)-(CH₂)_1-6-het；-C(O)-N(R₉)(R₁₀)；-C(O)-O-C₁-C₁₀烷基；-C(O)-O-(CH₂)_1-6-C₃-C₇环烷基；-C(O)-O-(CH₂)_0-6-苯基；-C(O)-O-(CH₂)_1-6-het；-O-C(O)-C₁-C₁₀烷基；-O-C(O)-(CH₂)_1-6-C₃-C₇环烷基；-O-C(O)-(CH₂)_0-6-苯基；-O-C(O)-(CH₂)_1-6-het；其中烷基、环烷基和苯基是未取代或取代的；

het是含1-4个选自N、O和S的杂原子的5-7元杂环，或8-12元稠环体系，该稠环体系包括至少一个含1、2或3个选自N、O和S的杂原子的5-7元杂环，该杂环或稠环体系在碳或氮原子上是未取代或取代的；

R₈是H；-CH₃；-CF₃；-CH₂OH或-CH₂Cl；

R₉和R₁₀各自独立地是H；C₁-C₄烷基；C₃-C₇环烷基；-(CH₂)_1-6-C₃-C₇环烷基；-(CH₂)_0-6-苯基；其中烷基、环烷基和苯基是未取代或取代的，或R₉和R₁₀与氮一同形成het；

R₅是H；C₁-C₁₀-烷基；芳基；苯基；C₃-C₇环烷基；-(CH₂)_1-6-C₃-C₇环烷基；-C₁-C₁₀烷基-芳基；-(CH₂)_0-6-C₃-C₇环烷基-(CH₂)_0-6-苯基；-(CH₂)_0-4CH-((CH₂)_1-4-苯基)₂；-(CH₂)_0-6-CH(苯基)₂；-茚满基；-C(O)-C₁-C₁₀烷基；-C(O)-(CH₂)_1-6-C₃-C₇-环烷基；-C(O)-(CH₂)_0-6-苯基；-(CH₂)_0-6-C(O)-苯基；-(CH₂)_0-6-het；-C(O)-(CH₂)_1-6-het；或R₅是氨基酸的残基，其中烷基、环烷基、苯基和芳基取代基是未取代或取代的；

U如结构X所示：

其中：

n＝0-5；

X是-CH或N；

R_a和R_b独立地是O、S或N原子或C_0-8烷基，其中烷基链中的一个或多个碳原子可以被选自O、S或N的杂原子替代，和其中烷基可以是未取代或取代的；

R_d选自：(a)-R_e-Q-(R_f)_p(R_g)_q或(b)Ar₁-D-Ar₂；

R_c是H或R_c和R_d可以一同形成环烷基或het；其中如果R_d和R_c形成环烷基或het，则R₅在C或N原子处与该形成的环连接；

p和q独立地是0或1；

R_e是C_1-8烷基或烷叉基，并且R_e可以是未取代或取代的；

Q是N、O、S、S(O)或S(O)₂；

Ar₁和Ar₂是取代或未取代的芳基或het；

R_f和R_g各自独立地是H；-C₁-C₁₀烷基；C₁-C₁₀烷芳基；-OH；-O-C₁-C₁₀烷基；-(CH₂)_0-6-C₃-C₇环烷基；-O-(CH₂)_0-6-芳基；苯基；芳基；苯基-苯基；-(CH₂)_1-6-het；-O-(CH₂)_1-6-het；-OR₁₁；-C(O)-R₁₁；-C(O)-N(R₁₁)(R₁₂)；-N(R₁₁)(R₁₂)；-S-R₁₁；-S(O)-R₁₁；-S(O)₂-R₁₁；-S(O)₂-NR₁₁R₁₂；-NR₁₁-S(O)₂-R₁₂；S-C₁-C₁₀烷基；芳基-C₁-C₄烷基；het-C₁-C₄-烷基，其中烷基、环烷基、het和芳基是未取代或取代的；-SO₂-C₁-C₂烷基；-SO₂-C₁-C₂烷基苯基；-O-C₁-C₄烷基；或R_g和R_f形成选自het或芳基的环；

D是-CO-；-C(O)-C_1-7亚烷基或亚芳基；-CF₂-；-O-；-S(O)_r，其中r是0-2；1，3-二氧杂环戊烷(dioaxolane)；或C_1-7烷基-OH；其中烷基、亚烷基或亚芳基可以未取代或被一个或多个卤素、OH、-O-C₁-C₆烷基、-S-C₁-C₆烷基或-CF₃取代的；或D是-N(R_h)，其中R_h是H；C_1-7烷基(未取代或取代的)；芳基；-O(C_1-7环烷基)(未取代或取代的)；C(O)-C₁-C₁₀烷基；C(O)-C₀-C₁₀烷基-芳基；C-O-C₁-C₁₀烷基；C-O-C₀-C₁₀烷基-芳基或SO₂-C₁-C₁₀-烷基；SO₂-(C₀-C₁₀-烷芳基)；

R₆、R₇、R′₆和R′₇各自独立地是H；-C₁-C₁₀烷基；-C₁-C₁₀烷氧基；芳基-C₁-C₁₀烷氧基；-OH；-O-C₁-C₁₀烷基；-(CH₂)_0-6-C₃-C₇环烷基；-O-(CH₂)_0-6-芳基；苯基；-(CH₂)_1-6-het；-O-(CH₂)_1-6-het；-OR₁₁；-C(O)-R₁₁；-C(O)-N(R₁₁)(R₁₂)；-N(R₁₁)(R₁₂)；-S-R₁₁；-S(O)-R₁₁；-S(O)₂-R₁₁；-S(O)₂-NR₁₁R₁₂；-NR₁₁-S(O)₂-R₁₂；其中烷基、环烷基和芳基是未取代或取代的；和R₆、R₇、R′₆和R′₇可以联合形成环系；

R₁₁和R₁₂独立地是H；C₁-C₁₀烷基；-(CH₂)_0-6-C₃-C₇环烷基；-(CH₂)_0-6-(CH)_0-1(芳基)_1-2；-C(O)-C₁-C₁₀烷基；-C(O)-(CH₂)_1-6-C₃-C₇环烷基；-C(O)-O-(CH₂)_0-6-芳基；-C(O)-(CH₂)_0-6-O-芴基；-C(O)-NH-(CH₂)_0-6-芳基；-C(O)-(CH₂)_0-6-芳基；-C(O)-(CH₂)_1-6-het；-C(S)-C₁-C₁₀烷基；-C(S)-(CH₂)_1-6-C₃-C₇环烷基；-C(S)-O-(CH₂)_0-6-芳基；-C(S)-(CH₂)_0-6-O-芴基；-C(S)-NH-(CH₂)_0-6-芳基；-C(S)-(CH₂)_0-6-芳基；-C(S)-(CH₂)_1-6-het；其中烷基、环烷基和芳基是未取代或取代的；或R₁₁和R₁₂是促进分子越过细胞膜传输的取代基；或R₁₁和R₁₂与氮原子一同形成het；

其中R₁₁和R₁₂的烷基取代基可以是未取代或被一个或多个选自C₁-C₁₀烷基、卤素、OH、-O-C₁-C₆烷基、-S-C₁-C₆烷基或-CF₃的取代基取代的；

R₁₁和R₁₂的取代的环烷基取代基被一个或多个选自C₁-C₁₀烯烃；C₁-C₆烷基；卤素；OH；-O-C₁-C₆烷基；-S-C₁-C₆烷基或-CF₃的取代基取代；和

R₁₁和R₁₂的取代的苯基或芳基被一个或多个选自卤素；羟基；C₁-C₄烷基；C₁-C₄烷氧基；硝基；-CN；-O-C(O)-C₁-C₄烷基和-C(O)-O-C₁-C₄-芳基的取代基取代。

[0094]美国公开申请号2005/0261203公开了以下通式XI的化合物和其盐和溶剂合物：

其中：

X₁和X₂独立地是O或S；

L是键、-C(X₃)-、-C(X₃)NR₁₂或-C(X₃)O-，其中X₃是O或S，R₁₂是H或R₁；

R₁是烷基、碳环、碳环取代的烷基、杂环或杂环取代的烷基，其中各自任选取代有卤素、羟基、巯基、羧基、烷基、卤代烷基、烷氧基、烷基磺酰基、氨基、硝基、芳基和杂芳基；

R²是烷基、环烷基、环烷基烷基、芳基、芳烷基、杂环或杂环烷基；

R³是H或烷基；

R⁴和R⁴，独立地是H、烷基、芳基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、杂芳基或杂芳烷基，其中各自任选取代有卤素、羟基、巯基、羧基、烷基、烷氧基、氨基和硝基；

R⁵和R⁵，各自独立地是H或烷基；

R₆是H或烷基。

[0095]美国公开申请号2006/0014700公开了以下通式XII的化合物和其盐和溶剂合物：

其中

X₁、X₂和X₃独立地是O或S；

Y是(CHR₇)_n、O或S；其中n是1或2，R₇是H、卤素、烷基、芳基、芳烷基、氨基、芳氨基、烷氨基、芳烷基氨基、烷氧基、芳氧基或芳烷氧基；

A是含1-4个杂原子任选取代有以下基团的5-元杂环：氨基、羟基、巯基、卤素、羧基、脒基、胍基、烷基、烷氧基、芳基、芳氧基、酰基、酰氧基、酰氨基、烷氧基羰基氨基、环烷基、烷基硫、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、氨基磺酰基、烷基氨基磺酰基、烷基磺酰基氨基或杂环；其中每个烷基、烷氧基、芳基、芳氧基、酰基、酰氧基、酰氨基、环烷基和杂环取代基任选取代有羟基、卤素、巯基、羧基、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、硝基、氰基、环烷基、芳基或杂环；

R¹是H或R¹和R²一同形成5-8元环；

R²是烷基、环烷基、环烷基烷基、芳基、芳烷基、杂环或杂环烷基；各自任选取代有羟基、巯基、卤素、氨基、羧基、烷基、卤代烷基、烷氧基或烷基硫；

R³是H或烷基；

R⁴和R⁴′独立地是H、羟基、氨基、烷基、芳基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、杂芳基或杂芳烷基，其中每个烷基、芳基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、杂芳基和杂芳烷基任选取代有卤素、羟基、巯基、羧基、烷基、烷氧基、氨基和硝基；

R⁵和R⁵′各自独立地是H或烷基；

R₆和R₆′各自独立地是H、烷基、芳基或芳烷基。

[0096]本发明化合物相信可以作为立体异构体(包括旋光异构体)存在。本发明包括所有立体异构体(既作为纯的各立体异构体制剂和每种的富集制剂)，和这类立体异构体的外消旋混合物以及可以按照本领域技术人员众所周知的方法分离的各对映体。

[0097]在本发明的某些实施方案中，通式II的化合物选自：

和

或其游离碱或其另一种药学上可接受的盐。

[0098]可以使用本领域技术人员公知的方法制备本发明的化合物。特别地，可以如实施例中的示例性反应所述制备具有通式II的化合物。

[0099]本发明的一个重要方面在于通式II的化合物可诱导细胞凋亡并且还强化诱导细胞凋亡作为对细胞凋亡诱导信号的反应。因此，关注这些化合物使细胞对细胞凋亡诱导物敏感，包括对这类诱导物产生抗性的细胞。本发明的IAP抑制剂可以用于诱导可以通过诱导细胞凋亡进行治疗、改善或预防的任何疾病中的细胞凋亡。因此，本发明提供了靶向于特征为过度表达IAP蛋白的动物的组合物和方法。在某些实施方案中，所述的细胞(例如癌细胞)与非病理性样品(例如非癌细胞)相比IAP蛋白的表达水平升高。在其它实施方案中，所述的细胞通过响应于抑制有效量的通式I化合物进行细胞凋亡程序和死亡而可操作地表现出IAP蛋白的表达水平升高，所述的反应至少部分因这类细胞中其存活对IAP蛋白功能的依赖性而发生。

[0100]在另一个实施方案中，本发明涉及调节细胞凋亡相关的状态，该状态与一种或多种细胞凋亡调节剂有关。细胞凋亡调节剂的实例包括例如但不限于Fas/CD95、TRAMP、TNF RI、DR1、DR2、DR3、DR4、DR5、DR6、FADD、RIP、TNFα、Fas配体、TRAIL、TRAIL-RI或TRAIL-R2的抗体、Bcl-2、p53、BAX、BAD、Akt、CAD、PI3激酶、PP1和半胱天冬酶蛋白。还包括细胞凋亡的引发、决定和退化阶段中涉及的其它试剂。细胞凋亡调节剂的实例包括其活性、存在或浓度改变可以调节受试者的细胞凋亡的试剂。优选的细胞凋亡调节剂是细胞凋亡诱导物，例如TNF或TNF相关的配体，尤其是TRAMP配体、Fas/CD95配体、TNFR-1配体或TRAIL。

[0101]在某些实施方案中，本发明的组合物和方法用于治疗动物(例如哺乳动物受试者，包括，但不限于人和兽类动物)中患病细胞、组织、器官或病理情况和/或疾病状态。在这方面，各种疾病和病理情况易于使用本发明的方法和组合物进行治疗或预防。这些疾病和情况的非限制性示例性明细包括，但不限于乳腺癌、前列腺癌、淋巴瘤、皮肤癌、胰腺癌、结肠癌、黑素瘤、恶性黑素瘤、卵巢癌、脑癌、原发性脑癌、头-颈癌、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、肝癌、膀胱癌、非-小细胞肺癌、头或颈癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、小细胞肺癌、维尔姆斯肿瘤、宫颈癌、睾丸癌、膀胱癌、胰腺癌、胃癌、结肠癌、前列腺癌、泌尿生殖器癌、甲状腺癌、食道癌、骨髓瘤、多发性骨髓瘤、肾上腺癌、肾细胞癌、子宫内膜癌、肾上腺皮质癌、恶性胰腺胰岛素瘤、恶性类癌瘤、绒毛膜癌、蕈样真菌病、恶性血钙过多、宫颈超常增生、白血病、急性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、急性骨髓性白血病、慢性髓细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、急性粒细胞性白血病、毛细胞性白血病、成神经细胞瘤、横纹肌肉瘤、卡波西肉瘤、真性红细胞增多、原发性血小板增多、何杰金病、非何杰金淋巴瘤、软组织肉瘤、骨肉瘤、原发性巨球蛋白血症和视网膜母细胞瘤等；T和B细胞介导的自身免疫病；炎性疾病；感染；过度增殖性疾病；AIDS；变性疾病、血管疾病等。在某些实施方案中，正治疗的癌细胞为转移性的。在其它实施方案中，正治疗的癌细胞对抗癌剂有抗性。

[0102]在某些实施方案中，适合于用本发明组合物和方法治疗的感染包括，但不限于因病毒、细菌、真菌、支原体、肮病毒等导致的感染。

[0103]本发明的某些实施方案提供了给予有效量的通式I化合物和至少一种额外的治疗剂(包括，但不限于化疗抗肿瘤药、细胞凋亡调节剂、抗菌药、抗病毒药、抗真菌药和消炎剂)和/或治疗技术(例如外科手术和/或放疗)的方法。

[0104]预计许多合适的抗癌药可用于本发明方法。实际上，本发明关注，但不限于大量抗癌剂的施用，诸如：诱导细胞凋亡的试剂；多核苷酸(例如反义，核酶，siRNA)；多肽类(例如酶和抗体)；生物模拟物(例如棉酚或BH3模拟物)；与Bcl-2族蛋白，例如Bax结合(例如寡聚化或复合)的试剂；生物碱类；烷化剂；抗肿瘤抗生素；抗代谢物；激素；铂化合物；单克隆或多克隆抗体(例如与抗癌药、毒素、防御素缀合的抗体)、毒素；放射性核素；生体应答修饰物(例如干扰素(例如IFN-α)和白细胞介素(例如IL-2))；过继免疫治疗剂；造血生长因子；诱导肿瘤细胞分化的试剂(例如全反式视黄酸)；基因疗法试剂(例如反义疗法试剂和核苷酸)；肿瘤疫苗；血管生成抑制剂；蛋白体抑制剂；NF-KB调节剂；抗-CDK化合物；HDAC抑制剂等。适合于与披露的化合物共同施用的化疗化合物和抗癌疗法的大量其它实例为本领域技术人员公知的。

[0105]在优选的实施方案中，抗癌剂包括诱导或刺激细胞凋亡的试剂。诱导细胞凋亡的活性剂包括，但不限于放射(例如X-射线、γ射线、UV)；肿瘤坏死因子(TNF)相关的因子(例如，TNF族受体蛋白、TNF族配体、TRAIL、TRAIL-R1或TRAIL-R2的抗体)；激酶抑制剂(例如表皮生长因子受体(EGFR)激酶抑制剂、血管生长因子受体(VGFR)激酶抑制剂、成纤维细胞生长因子受体(FGFR)激酶抑制剂、血小板衍生生长因子受体(PDGFR)激酶抑制剂和Bcr-Abl激酶抑制剂(诸如GLEEVEC))；反义分子；抗体(例如HERCEPTIN、RITUXAN、ZEVALIN和AVASTIN)；抗雌激素药(例如雷洛昔芬和他莫昔芬)；抗雄激素药(例如氟他胺、比卡鲁胺、非那雄胺、氨鲁米特、酮康唑和皮质类固醇)；环加氧酶2(COX-2)抑制剂(例如塞来考昔、美洛昔康、NS-398和非类固醇抗炎药(NSAID))；消炎药(例如保泰松、DECADRON、DELTASONE、地塞米松、dexamethasone intensol、DEXONE、HEXADROL、羟氯喹、METICORTEN、ORADEXON、ORASONE、羟布宗、PEDIAPRED、保泰松、PLAQUENIL、泼尼松龙、泼尼松、PRELONE和TANDEARIL)；和癌症化疗药(例如伊立替康(CAMPTOSAR)、CPT-11、氟达拉滨(FLUDARA)、达卡巴嗪(DTIC)、地塞米松、米托蒽醌、MYLOTARG、VP-16、顺铂、卡铂、奥沙利铂、5-FU、多柔比星、吉西他滨、硼替佐米、吉非替尼、贝伐珠单抗、TAXOTERE或TAXOL)；细胞信号传导分子；神经酰胺类和细胞因子；星孢素等。

[0106]在其它实施方案中，本发明的组合物和方法提供了通式II的化合物和至少一种选自烷化剂、抗代谢物和天然产物(例如草药和其它植物和/或动物衍生的化合物)的抗-过度增殖药或抗肿瘤剂。

[0107]适用于本发明组合物和方法的烷化剂包括，但不限于：1)氮芥类(例如氮芥、环磷酰胺、异环磷酰胺、美法仑(L-沙可来新)；和苯丁酸氮芥)；2)氮丙啶类和甲基蜜胺类(例如六甲蜜胺和塞替派)；3)磺酸烷基酯类(例如白消安)；4)亚硝基脲类(例如卡莫司汀(BCNU)；洛莫司汀(CCNU)；司莫司汀(赛氮芥)；和链佐星(链唑霉素))；和5)三氮烯类(例如达卡巴嗪(DTIC；二甲基三嗪并咪唑甲酰胺)。

[0108]在某些实施方案中，适用于本发明组合物和方法的抗代谢物包括，但不限于：1)叶酸类似物(例如甲氨蝶呤(氨甲蝶呤))；2)嘧啶类似物(例如氟尿嘧啶(5-氟尿嘧啶；5-FU)、氟尿苷(氟脱氧尿苷；FudR)和阿糖胞苷(阿糖胞苷))；和3)嘌呤类似物(例如巯嘌呤(6-巯嘌呤；6-MP)、硫鸟嘌呤(6-硫鸟嘌呤；TG)和喷司他丁(2′-脱氧柯福霉素))。

[0109]在其它实施方案中，适用于本发明组合物和方法的化疗剂包括，但不限于：1)长春花生物碱(例如长春碱(VLB)、长春新碱)；2)表鬼臼毒素(例如依托泊苷和替尼泊苷)；3)抗生素(例如更生霉素(放线菌素D)、柔红霉素(道诺霉素；柔毛霉素)、多柔比星、博来霉素、普卡霉素(光辉霉素)和丝裂霉素(丝裂霉素C))；4)酶(例如L-天冬酰胺酶)；5)生物响应调节剂(例如干扰素-α)；6)铂配位复合物(例如顺铂(顺式-DDP)和卡铂)；7)蒽二酮类(例如米托蒽醌)；8)取代的脲类(例如羟基脲)；9)甲基肼衍生物(例如丙卡巴肼(N-甲基肼；MIH))；10)肾上腺皮质抑制剂(例如米托坦(o，p′-DDD)和氨鲁米特)；11)肾上腺皮质类固醇类(例如泼尼松)；12)黄体酮(例如己酸羟孕酮、醋酸甲羟孕酮和醋酸甲地孕酮)；13)雌激素(例如己烯雌酚和炔雌醇)；14)抗雌激素药(例如他莫昔芬)；15)雄激素(例如丙酸睾酮和氟甲睾酮)；16)抗雄激素药(例如氟他胺)；和17)促性腺激素释放激素类似物(例如亮丙瑞林)。

[0110]常用于癌症疗法的任何溶瘤剂可应用于本发明的组合物和方法中。例如，美国食品与药品监督管理局维持了批准用于美国的溶瘤剂配方集。U.S.F.D.A.的国际合作机构维持了相似的配方集。表1中提供了批准用于美国的典型抗肿瘤药的实例。本领域技术人员可以理解，对所有美国批准的化疗药所需的“产品标签”描述了所列举的活性剂被批准的适应征、给药信息、毒性数据等。

[0111]抗癌剂还包括已经确定具有抗癌剂活性但是目前没有经美国食品和药物管理局或其它对应机构批准的或正在进行新用途评价的化合物。实例包括但不限于，3-AP、12-O-十四酰佛波醇(tetradecanoylphorbol)-13-乙酸盐、17AAG、852A、ABI-007、ABR-217620、ABT-751、ADI-PEG 20、AE-941、AG-013736、AGRO100、丙氨菌素、AMG 706、抗体G250、坑瘤酮、AP23573、阿帕齐醌、APC8015、阿替莫德、ATN-161、阿曲生坦、阿扎胞苷、BB-10901、BCX-1777、贝伐珠单抗、BG00001、比卡鲁胺、BMS247550、硼替佐米、苔藓抑素-1、布舍瑞林、钙三醇、CCI-779、CDB-2914、头孢克肟、西妥昔单抗、CG0070、西仑吉肽、氯法拉滨、康普瑞汀A4磷酸盐、CP-675，206、CP-724，714、CpG7909、姜黄素、地西他滨、DENSPM、度骨化醇、E7070、E7389、海鞘素743、乙法昔罗、依氟鸟氨酸、EKB-569、恩扎啕林、厄洛替尼、依昔舒林、芬维A胺、黄酮吡多、氟达拉滨、氟他胺、福莫司汀、FR901228、G17DT、加利昔单抗、吉非替尼、高金雀花碱、葡磷酰胺、GTI-2040、组氨瑞林、HKI-272、高粗榧碱、HSPPC-96、hu14.18-干扰白细胞素-2融合蛋白、HuMax-CD4、伊洛前列素、咪喹莫德、英利昔单抗、白介素-12、IPI-504、依罗夫文、依沙匹隆、拉帕替尼、来妥替尼、亮丙立德、LMB-9免疫毒素、氯那法尼、luniliximab、马磷酰胺、MB07133、MDX-010、MLN2704、单克隆抗体3F8、单克隆抗体J591、莫特沙芬、MS-275、MVA-MUC1-IL2、尼鲁米特、硝基喜树碱、诺拉曲塞二盐酸盐、诺瓦得士、NS-9、O6-苄基鸟嘌呤、奥利美生钠、ONYX-015、奥戈伏单抗、OSI-774、帕尼单抗、伯尔定、PD-0325901、培美曲塞、PHY906、吡格列酮、吡非尼酮、匹蒽醌、PS-341，PSC 833，PXD101，吡唑啉吖啶、R115777、RAD001、豹蛙酶、若贝霉素类似物、rhuAngiostatin蛋白、rhuMab 2C4、罗格列酮、卢比替康、S-1、S-8184、沙铂、SB-、15992、SGN-0010、SGN-40、索拉非尼、SR³1747A、ST1571、SU011248、N-(辛二酰基)苯胺羟肟酸、苏拉明、他波司他、他仑帕奈、他立喹达、坦罗莫司、TGFa-PE38免疫毒素、瑟利德米、胸腺法新、替匹法尼、替拉扎明、TLK286、曲贝替定、三甲曲沙葡糖醛酸脂、TroVax、UCN-1、丙戊酸、长春氟宁、VNP40101M、伏洛昔单抗、伏林司他、VX-680、ZD1839、ZD6474、齐留通和佐舒喹达三盐酸盐。

[0112]就抗癌剂和其它治疗剂的更详细描述而言，本领域技术人员可以参考任何数量的说明性手册，包括，但不限于Physician′sDesk Reference以及Goodman和Gilman的＂Pharmaceutical Basis ofTherapeutics＂第10版Eds.Hardman et al.，2002。

[0113]本发明提供了施用通式II的化合物与放疗的方法。本发明并不限于用于将治疗剂量的放射传递给动物的类型、用量或递送和给药系统。例如，动物可以接受光子放疗、粒子束放疗、其它类型的放疗及其组合。在某些实施方案中，使用线性加速器将放射递送给动物。在还有的其它实施方案中，使用γ刀递送放射。

[0114]放射源可以在动物的内部或外部。外部放射治疗最为常用并且包括使用例如线性加速器使高能辐射束通过皮肤定向于肿瘤部位。尽管射束局限于肿瘤部位，但是几乎不可能避免接触正常健康组织。然而，外放射通常为患者充分耐受。内放射疗法包括在体内肿瘤部位处或接近肿瘤部位处植入辐射发射源，诸如珠、金属线、丸粒、胶囊、颗粒等，包括使用特异性靶向癌细胞的递送系统(例如使用与癌细胞结合配体结合的颗粒)。这类植入物可以在治疗后除去或在体内保持失活状态。内放射疗法的类型包括，但不限于近距离放射疗法、间质内放射、腔内放射、放射免疫疗法等。

[0115]动物可以可选地接受放射致敏剂(例如甲硝唑、米索硝唑、动脉内溴甙、静脉内碘苷(IudR)、硝基咪唑、5-取代的-4-硝基咪唑类、2H-异吲哚二酮类、[[(2-溴乙基)-氨基]甲基]-硝基-1H-咪唑-1-乙醇、硝基苯胺衍生物、DNA-亲合性低氧选择性细胞毒素、卤化DNA配体、1，2，4苯并三嗪氧化物、2-硝基咪唑衍生物、含氟的硝基吡咯衍生物、苯甲酰胺、烟酰胺、吖啶-嵌入剂、5-硫代四唑衍生物、3-硝基-1，2，4-三唑、4，5-二硝基咪唑衍生物、羟基化texaphrins、顺铂、丝裂霉素、tiripazamine、亚硝基脲、巯基嘌呤、氨甲蝶呤、氟尿嘧啶、博来霉素、长春新碱、卡铂、表柔比星、多柔比星、环磷酰胺、长春地辛、依托泊苷、紫杉醇、热(过热)等)、辐射防护剂(例如半胱胺、氨基烷基二氢硫代磷酸酯、氨磷汀(WR2721)、IL-1、IL-6等)。放射致敏剂促进杀死肿瘤细胞。辐射防护剂防止健康组织受到放射的有害作用。

[0116]可以对患者施用任意类型的放射，只要患者耐受放射剂量而没有不可接受的负面副作用即可。合适类型的放疗包括：例如，电离(电磁)放疗(例如X-射线或γ射线)或粒子束放疗(例如高线性能量放射)。将电离放射定义为包括具有产生电离，即得到或失去电子的足够能量的粒子或光子的放射(例如，如US 5,770,581中所述，将该文献的全部内容引入本文作为参考)。放射的作用至少部分可以受到临床医师控制。为最大限度地接触靶细胞并且降低毒性，优选将放射剂量分次给予。

[0117]对动物施用的总放射剂量优选约为.01戈瑞(Gy)-约100Gy。更优选，在治疗期过程中施用约10Gy-约65Gy(例如约15Gy，20Gy，25Gy，30Gy，35Gy，40Gy，45Gy，50Gy，55Gy或60Gy)。尽管在某些实施方案中，可以在1天过程中施用完整剂量的放射，但是理想的是将总剂量分次并且在几天内给予。理想的是在至少约3天过程中给予放疗，例如至少5、7、10、14、17、21、25、28、32、35、38、42、46、52或56天(约1-8周)。因此，每日放射剂量包括约1-5Gy(例如约1Gy，1.5Gy，1.8Gy，2Gy，2.5Gy，2.8Gy，3Gy，3.2Gy，3.5Gy，3.8Gy，4Gy，4.2Gy或4.5Gy)，优选1-2Gy(例如1.5-2Gy)。每日放射剂量应足以诱导破坏被靶向的细胞。如果延长超过一定期限，那么并不优选每天给予放射，从而使动物休息并且实现该疗法的作用。例如，对每周治疗而言，理想的是连续5天给予放射，并且有2天不给予，由此每周有2天休息。然而，可以1天/周，2天/周，3天/周，4天/周，5天/周，6天/周或所有7天/周给予放射，这取决于动物的反应性和任何可能的副作用。可以在治疗期中的任意时间时启动放疗。优选在第1周或第2周启动放射并且在该治疗期的剩余期限内给予。例如，在包括6周治疗例如实体瘤的治疗期间，在第1-6周或第2-6周内给予放射。或者，在包括5周治疗期的第1-5周或第2-5周内给予放射。然而，本发明并不限于这些示例性的放疗施用方案。

[0118]抗菌治疗剂也可以用作本发明中的治疗剂。可以使用可以杀伤、抑制或者减弱微生物功能的任意活性剂以及预计具有这类活性的任意试剂。抗菌剂包括，但不限于天然和合成的抗生素、抗体、抑制蛋白(例如防御素)、反义核酸、膜破裂剂等，可以单独使用或以组合方式使用。实际上，可以使用任何类型的抗生素，包括，但不限于抗细菌剂、抗病毒剂、抗真菌剂等。

[0119]在本发明的某些实施方案中，在下列条件中的一种或多种下对动物施用通式II的化合物和一种或多种治疗剂或抗癌剂：以不同的周期性；以不同的期限；以不同的浓度；通过不同的给药途径等。在某些实施方案中，在施用治疗剂或抗癌剂之前施用所述的化合物，例如在施用抗癌药之前0.5、1、2、3、4、5、10、12或18小时，1、2、3、4、5或6天，1、2、3或4周施用该化合物。在某些实施方案中，在施用治疗剂或抗癌剂之后施用所述的化合物，例如在施用抗癌药之后0.5、1、2、3、4、5、10、12或18小时，1、2、3、4、5或6天，1、2、3或4周施用该化合物。在某些实施方案中，同时施用所述的化合物和治疗剂或抗癌剂，但使用不同的日程表，例如每日施用所述的化合物，而每周1次、每2周1次、每3周1次或每4周1次施用所述的治疗剂或抗癌剂。在其它实施方案中，每周1次施用所述的化合物，而每日、每周1次、每2周1次、每3周1次或每4周1次施用所述的治疗剂或抗癌剂。

[0120]本发明范围内的组合物包括以有效实现其指定目的的量包含本发明化合物的所有组合物。尽管个体需要可变，但是确定每种成分的有效量的最佳范围属于本领域技术人员的范围。一般来说，对哺乳动物，例如人而言，口服给药0.0025-50mg/kg/天为对诱导细胞凋亡有反应性的疾病而治疗的哺乳动物体重的剂量的化合物或等量的其药物上可接受的盐。优选口服给药约0.01-约25mg/kg以治疗、改善或预防这类疾病。就肌内注射而言，剂量一般为口服剂量的约一半。例如，合适的肌内剂量为约0.0025-约25mg/kg，最优选约0.01-约5mg/kg。

[0121]单位口服剂量可以包括约0.01-约1000mg，优选约0.1-约100mg的化合物。每天可以将单位剂量作为一片或多片片剂或者一粒或多粒胶囊给予一次或多次，所述的片剂或胶囊各自含有约0.1-约10，适宜地是约0.25-50mg化合物或其溶剂合物。

[0122]在局部用制剂中，化合物的存在浓度约为0.01-100mg/克载体。在优选的实施方案中，化合物的存在浓度约为0.07-1.0mg/ml，更优选约0.1-0.5mg/ml，最优选约0.4mg/ml。

[0123]除将化合物作为原料化学品给药外，还可以将本发明的化合物作为药物制剂的组成部分施用，所述的药物制剂含有合适的药物上可接受的载体，包括有利于将所述化合物加工成可以在药学上使用的制剂的赋形剂和助剂。优选所述的制剂含有约0.01-99％，优选约0.25-75％的活性化合物与赋形剂，特别是那些可以口服或局部给药并且可以用于优选给药类型的制剂，例如片剂、锭剂、缓释锭剂和胶囊、口腔清洗剂和口腔洗剂、凝胶、液体混悬液、洗发剂、发胶、洗发香波；还有可以通过直肠给药的制剂，诸如栓剂；以及通过静脉内注入、注射、局部或口服给药的合适的溶液。

[0124]可以将本发明的药物组合物对可以经历本发明化合物有益作用的任意动物给药。在这类动物中位于最前列的是哺乳动物，例如人，不过，本发明并不限于此。其它动物包括兽类动物(牛、绵羊、猪、马、狗、猫等)。

[0125]可以通过实现指定目的的任意方式施用所述的化合物及其药物组合物。例如，可以通过非肠道、皮下、静脉内、肌内、腹膜内、透皮、口含、鞘内、颅内、鼻内或局部途径给药。或者可以通过口服途径给药，或同时进行口服给药。给药剂量取决于接受者的年龄、健康情况和体重、并行治疗的种类(如果有的话)、治疗频率和所需效果的性质。

[0126]按照自身公知的方式，例如通过常规的混合、制粒、制锭、溶解或冻干方法制备本发明的药物制剂。因此，可以通过下列步骤获得口服使用的药物制剂：将活性化合物与固体赋形剂合并，可选地研磨所得混合物并且如果需要或必要，在添加合适的助剂后加工颗粒混合物，从而得到片芯或锭芯。

[0127]具体来说，合适的赋形剂为：填充剂，例如糖类，例如乳糖或蔗糖、甘露糖醇或山梨醇；纤维素制品和/或磷酸钙，例如磷酸三钙或磷酸氢钙；以及粘结剂，例如淀粉糊，例如使用玉米淀粉、小麦淀粉、稻淀粉、马铃薯淀粉、明胶、西黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮。如果需要，可以加入崩解剂，例如上述淀粉和羧甲基淀粉、交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或藻酸或其盐，例如藻胶钠。助剂尤其是流动调节剂和润滑剂，例如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸或其盐，例如硬脂酸镁或硬脂酸钙，和/或聚乙二醇。如果需要，可以给锭芯包上耐胃液的合适的包衣材料。为了这一目的，可以使用浓糖溶液，它可以可选地含有阿拉伯胶、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。为了生产耐胃液的包衣材料，使用合适的纤维素制品，例如邻苯二酸乙酰纤维素或邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素的溶液。例如，为了鉴别或为了表征活性化合物剂量的组合，可以向片剂或锭剂包衣层中加入染料或色素。

[0128]可以口服使用的其它药物制剂包括由明胶制成的推入-配合式胶囊以及由明胶和增塑剂诸如甘油或山梨醇制成的密封软胶囊。推入-配合式胶囊可以含有颗粒形式的活性化合物，所述的颗粒中可以混合有诸如乳糖这类填充剂、例如淀粉这类粘合剂和/或诸如滑石粉或硬脂酸镁这类润滑剂以及任选地，稳定剂。在软胶囊中，优选将活性化合物溶于或悬浮于合适的液体中，例如脂肪油或液体石蜡。此外，可以加入稳定剂。

[0129]可以通过直肠使用的可能的药物制剂包括：例如由一种或多种活性化合物与栓剂基质的组合组成的栓剂。合适的栓剂基质例如为天然或合成的甘油三酯类或链烷烃类。此外，还能够使用由活性化合物与基质组合组成的直肠用胶囊。可能的基质材料包括：例如液体甘油三酯类、聚乙二醇类或链烷烃类。

[0130]用于非肠道给药的合适的制剂包括水溶性形式的活性化合物，例如水溶性盐和碱性溶液的水溶液。此外，可以将活性化合物的混悬液以合适的油性注射混悬液形式给药。合适的亲脂性溶剂或媒介物包括：脂肪油，例如芝麻油；或合成的脂肪酸酯类，例如油酸乙酯或甘油三酯类或聚乙二醇-400。含水的注射混悬液可以含有增加该混悬液粘度的物质，包括：例如羧甲基纤维素钠、山梨醇和/或葡聚糖。该混悬液中还可以任选地含有稳定剂。

[0131]优选通过选择合适的载体将本发明的局部用组合物配制成油剂、霜剂、洗剂、软膏剂等。合适的载体包括植物油或矿物油、白凡士林(白软石蜡)、支链脂肪或油、动物脂肪和高分子量醇(大于C12)。优选的载体为那些活性组分在其中可溶的载体。还可以包括乳化剂、稳定剂、湿润剂和抗氧化剂，并且如果需要，还可以包括赋予颜色或香味的试剂。另外，透皮促进剂可以用于这些局部用制剂中。这类促进剂的实例可以在美国专利US 3,989,816和US 4,444,762中找到。

[0132]优选由矿物油、自乳化蜂蜡和水的混合物配制霜剂，在该混合物中混合了混合溶于少量油诸如杏仁油的活性组分。这类霜剂的典型实例为一种包括约40份水、约20份蜂蜡、约40份矿物油和约1份杏仁油的霜剂。

[0133]可以通过将活性组分在植物油诸如杏仁油中的溶液与温热的软石蜡混合并且使该混合物冷却而配制软膏剂。这类软膏剂的典型实例为一种包括按重量计约30％杏仁油和约70％白软石蜡的软膏剂。

[0134]可以通过将活性组分溶于合适的高分子量醇例如丙二醇或聚乙二醇而便利地制备洗剂。

[0135]下列实施例用于解释本发明的方法和组合物，而非起限定作用。在临床疗法中通常遇到并且对本领域技术人员显而易见的对条件和参数的其它合适的修改和改变属于本发明的精神和范围内。

实施例1

二价Smac模拟物的合成

[0136]一般方法：在300MHz的质子频率下获得NMR光谱。用Me₄Si(0.00ppm)、CHCl₃(7.26ppm)、CD₂HOD(3.31ppm)或DHO(04.79ppm)作为内标物报道¹H化学位移。用CDCl₃(77.00ppm)、CD₃OD(49.00ppm)或1，4-二氧杂环己烷(67.16ppm)作为内标物报道¹³C化学位移。在室温下测量旋光度。

一般程序A(缩合)：

[0137]在0℃下，在搅拌下向两种底物在CH₂Cl₂(20mg/mL，对于小底物)中的溶液中添加EDC(1.1当量/氨基)、HOBt(1.1当量/氨基)和N，N-二异丙基乙基胺(4当量/氨基)。在室温下搅拌该混合物八小时然后浓缩。通过层析纯化该残余物而获得产物。

一般程序B(点击化学)：

[013]向CuSO₄的溶液(10mg/mL)中添加L-抗坏血酸(+)-钠(2当量)。震荡该混合物直到颜色变成亮黄。向该两种底物在乙腈或2-甲基丙醇(20mg/mL，对于小底物)的溶液中添加CuSO₄-L-抗坏血酸钠(0.1当量CuSO₄/当量该小底物)的预制得的混合物。在室温下搅拌该混合物一整夜然后用二氯甲烷萃取三时间。用盐水洗涤合并的有机层，在Na₂SO₄上干燥并浓缩。通过层析纯化该残余物而获得产物。

一般程序C(Boc的去保护)：

[0139]向底物在甲醇中的溶液(20mg/mL)中添加HCl在1，4-二氧杂环己烷中的溶液(4M，10-20当量/Boc)。在室温下搅拌该溶液一整夜然后浓缩而获得产物。

实施例2

DQ-24、SH-143、SH-155和SH-142的合成

[0140]根据方案I合成化合物DQ-24、SH-143、SH-155和SH-142。

方案I：

试剂和条件：(a)i.三氟乙酸酐，Et₃N，CH₂Cl₂，rt；ii.NaHCO₃，MeOH，95％；(b)NaH，炔丙基溴，DMF，92％；(c)i.MsCl，Et₃N；ii.NaN₃，DMF，100℃，85％经过两步；(d)i.3，CuSO₄，(+)-L-抗坏血酸钠，CH₃CN-H₂O 3:1；ii.2N LiOH，1，4-二氧杂环己烷-H₂O 1:1，74％经过两步；(e)i.NaH，苄基2-溴代乙基醚；ii.10％ Pd-C，H₂，MeOH；iii.MsCl，Et₃N；iv.NaN₃，DMF，65％，经过四步；(f)i.3，CuSO₄，(+)-L-抗坏血酸钠，CH₃CN-H₂O 3:1；ii.2N LiOH，1，4-二氧杂环己烷-H₂O 1:1，72％经过两步；(g)炔丙基醚(5eq)，CuSO₄，(+)-L-抗坏血酸钠，CH₃CN-H₂O3:1，69％；(h)i.8，CuSO₄，(+)-L-抗坏血酸钠，CH₃CN-H₂O 3:1；ii.在1，4-二氧杂环己烷中的4N HCl，MeOH，95％；(i)NaH，炔丙基溴，DMF，82％；(j)i.8(2.2eq)，CuSO₄，(+)-L-抗坏血酸钠，CH₃CN-H₂O 3:1；ii.在1，4-二氧杂环己烷中的4N HCl，MeOH，62％经过两步。

[0141]用三氟乙酸酐选择性保护L-苯甘氨醇1中的氨基获得醇2。用溴丙块烷基化2产生炔烃3。2与甲烷磺酰氯反应接着用NaN₃置换所得的甲磺酸酯提供叠氮化物4。3和4在CuSO₄-(+)-钠-L-抗坏血酸盐下的环加成接着除去三氟乙酰基提供二胺5。

[0142]用苄基2-溴代甲基醚烷基化2接着使苄基保护基水解提供醇。该醇与甲烷磺酰氯反应接着用NaN₃置换所得的甲磺酸酯提供叠氮化物6。6与3在CuSO₄-(+)-钠-L-抗坏血酸盐下的环加成接着除去三氟乙酰基提供二胺7。

[0143]根据我们预先报道的方法(Sun et al.，TetrahedronLetters，46：7015(2005))合成化合物8。化合物8与过量炔丙基醚(5-10当量)的环加成产生炔烃9。9和8在CuSO₄-(+)-钠-L-抗坏血酸盐下的环加成接着除去Boc保护基提供二胺10。

[0144]根据我们预先报道的方法(Sun et al.，TetrahedronLetters，46：7015(2005))合成化合物11。用溴丙块烷基化11产生炔烃12。2.2当量8与1当量12在CuSO₄-(+)-钠-L-抗坏血酸盐的催化下的环加成接着除去Boc保护基提供二胺13。

方案II：

试剂和条件：(a)10％ Pd-C，MeOH，H₂，100％；(b)i.二胺，EDC，HOBt，N，N-二异丙基乙基胺，CH₂Cl₂；ii.在1，4-二氧杂环己烷中的4NHCl，MeOH；iii.L-N-Boc-N-甲基丙氨酸，EDC，HOBt，N，N-二异丙基乙基胺，CH₂Cl₂；iv.在1，4-二氧杂环己烷中的4N HCl。

[0145]根据文献报道的方法(Duggan et al.，Org.Biomol.Chem.，3：2287(2005))(方案II)合成化合物14。化合物14中C-C双键的缩减和苄基酯的水解产生酸15。2.2当量15分别与上述二胺缩合接着除去Boc保护基获得四种铵盐。这些盐分别与L-N-Boc-N-甲基丙氨酸的缩合接着Boc保护基的去保护提供二价Smac模拟物DQ-24、SH-143、SH-142和SH-155。每种化合物的合成方案的效率在表2中示出。

表2

 

名称	产率(％，经过四个步骤)
		DQ-24	61
SH-143	62
		SH-155	59
SH-142	55

[0146]¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ 7.50(s，1H)，7.38-7.20(m，3H)，7.28-7.20(m，2H)，7.26-7.05(m，5H)，4.98-4.75(m，2H)，4.23(s，2H)，4.36(m，2H)，3.50(m，2H)；¹³C NMR(75MHz，CDCl₃)：δ 143.78，133.54，132.53，130.26，129.97，129.70，129.62，127.47，127.10，126.40，69.89，63.23，54.67，54.60，52.40。

[0147]¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ 7.59(s，1H)，7.32-7.22(m，3H)，7.22-7.13(m，5H)，7.12-7.05(m，2H)，4.55-4.29(m，6H)，3.85-3.75(m，1H)，3.75-3.56(m，5H)；¹³C NMR(75MHz，CDCl₃)：δ143.51，133.88，133.63，129.83，129.61，129.52，129.38，127.36，127.32，125.59，70.89，70.20，69.25，63.42，54.62，54.39，50.49。

[0148]¹H NMR(300HMz，CDCl₃)：δ 7.55(s，1H)，7.40-7.08(m，9H)，5.90(brs，1H)，5.24(brs，1H)，4.74(s，2H)，4.34(t，J＝7.1Hz，2H)，4.23(d，J＝2.4Hz，1H)，2.96(t，J＝7.3Hz，2H)，2.49(t，J＝2.4Hz，1H)，2.22(m，2H)，1.43(brs，9H)；¹³C NMR(75HMz，CDCl₃)：δ 154.93，144.26，141.98，140.15，139.04，128.54，128.50，127.36，127.22，127.07，122.56，79.67，79.16，74.89，62.91，58.06，57.37，49.37，31.94，31.44，28.25。

[0149]

[0150]¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ 7.52(s，2H)，7.38-7.12(m，10H)，7.08-6.99(m，4H)，6.92-6.79(m，4H)，5.42(s，2H)，4.40(s，4H)，4.02(m，4H)，2.18(m，4H)，1.78(m，4H)；¹³C NMR(75MHz，CDCl₃)：δ144.10，139.59，137.31，132.04，131.80，131.72，129.70，129.64，127.47，65.29，60.60，52.51，34.08，33.18。

[0151]¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ 7.40-7.18(m，5H)，7.15(brs，4H)，6.45(brs，1H)，4.24(d，J＝2.4Hz，2H)，3.90(d，J＝1.9Hz，2H)，3.55(t，J＝6.3Hz，2H)，2.72(dd，J＝8.9，7.4Hz，2H)，2.77(t，J＝2.4Hz，1H)，2.04(t，J＝1.9Hz，1H)，1.92(m，2H)，1.43(brs，9H)；¹³C NMR(75MHz，CDCl₃)：δ 155.17，140.92，139.85，136.99，128.76，128.53，128.40，128.22，127.22，80.68，80.58，79.86，74.19，70.26，69.16，58.01，34.75，31.79，30.99，28.23。

[0152]¹H NMR(300MHz，D₂O)：δ 7.50(s，1H)，7.33(s，1H)，7.23-7.03(m，17H)，6.99-6.92(m，6H)，6.80-6.68(m，4H)，5.38(s，1H)，5.34(s，1H)，5.10(s，1H)，4.08(s，2H)，4.08(t，J＝6.8Hz，1H)，3.99(s，2H)，3.92(t，J＝6.8Hz，2H)，3.02(t，J＝6.2Hz，2H)，2.30(t，J＝7.3Hz，2H)，2.17(t，J＝7.3Hz，2H)，2.11(t，J＝7.3Hz，2H)，1.89-1.80(m，2H)，1.78-1.62(m，2H)，1.48-1.35(m，2H)；¹³C NMR(75MHz，D₂O)：δ 163.46，162.99，144.04，143.16，141.81，141.56，137.61，137.05，134.70，129.75，129.64，129.57，129.54，129.41，129.28，127.64，127.45，127.28，127.16，126.49，125.00，118.54，114.67，68.74，65.33，62.55，58.06，50.20，49.98，40.52，31.70，31.60，30.98，30.67，30.42，29.96。

[0153]¹H NMR(300MHz，D₂O)：δ 7.77(s，1H)，7.78-7.21(m，10H)，5.32(m，1H)，4.91(m，1H)，4.75-4.56(m，4H)，4.50(s，2H)，4.33(m，1H)，4.17(m，3H)，3.79(m，2H)，3.60(m，2H)，2.55(s，3H)，2.53(s，3H)，2.25-1.80(m，4H)，1.79-1.61(m，7H)，1.60-1.45(m，9H)，1.40-1.38(m，4H)，1.37(d，J＝7.5Hz，3H)，1.33(d，J＝7.2Hz，3H)；¹³C NMR(75MHz，D₂O)：δ 173.82，173.65，172.34，172.29，144.94，138.64，137.46，129.41，129.25，128.87，128.23，126.91，126.88，125.73，72.14，63.14，62.15，61.16，60.96，57.28，54.14，53.64，53.34，51.10，35.94，32.94，32.33，31.31，27.95，25.86，21.99，15.60。

[0154]¹H NMR(300MHz，D₂O)：δ 7.50(s，1H)，7.30-7.08(m，10H)，4.95-4.80(m，3H)，4.75(m，1H)，4.47(s，2H)，4.39(m，2H)，4.32-4.10(m，4H)，4.35-4.08(m，4H)，3.66-3.50(m，4H)，2.55(s，6H)，2.22-1.43(m，24H)，1.39(m，6H)；¹³C NMR(75MHz，D₂O)：δ 173.71，172.30，169.52，143.92，138.73，129.07，128.18，126.96，125.53，72.87，72.32，68.99，63.36，62.21，62.14，61.05，57.20，53.40，53.24，51.14，50.42，35.96，32.99，32.32，31.32，27.89，25.08，21.94，15.63。

[0155]¹H NMR(300MHz，D₂O)：δ 7.29(s，2H)，7.10-6.92(m，10H)，6.85(d，J＝8.0Hz，4H)，6.58(d，J＝8.0Hz，4H)，5.78(s，2H)，4.65(m，2H)，4.38(s，4H)，4.22(m，2H)，4.08(m，2H)，3.95-3.73(m，6H)，2.55(s，6H)，2.21-1.28(m，36H)；¹³C NMR(75MHz，D₂O)：δ 179.33，172.64，172.07，144.32，141.56，140.08，139.74，129.15，127.99，127.69，127.53，124.85，63.13，62.04，61.01，57.48，57.30，51.12，49.98，36.03，33.27，32.47，31.77，31.44，31.22，27.87，25.25，21.99，15.78。

SH-142(游离胺)

[0156]¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ 7.92(brd，J＝8.4Hz，2H)，7.82(brd，J＝8.4Hz，2H)，7.49(s，1H)，7.45-7.06(m，28H)，6.21(s，1H)，6.19(s，1H)，4.90(m，2H)，4.85(s，1H)，4.75(m，2H)，4.62(s，2H)，4.33(t，J＝7.1Hz，4H)，4.20(m，2H)，3.82(s，2H)，3.49(t，J＝7.1Hz，2H)，3.06(m，2H)，2.70-2.55(m，8H)，2.38(s，6H)，2.30-1.35(m，28H)，1.30(d，J＝6.9Hz，6H)；¹³C NMR(75MHz，CDCl₃)：δ 174.16，172.05，169.69，145.37，141.64，140.60，139.70，139.15，139.11，128.60，128.56，128.50，127.59，127.47，127.32，127.29，127.27，127.02，122.22，121.52，69.87，66.39，64.35，60.15，59.75，59.18，56.78，53.41，49.41，49.26，42.65，36.71，35.97，35.12，32.03，31.59，31.55，31.09，24.91，24.06，23.20，19.44。

实施例3

SH-156、SH-158、SH-159、SH-164、SH-165、SH-166和SH-167的合成

[0157]根据方案III合成化合物SH-156、SH-158、SH-159、SH-164、SH-165、SH-166和SH-167。

方案III：

试剂和条件：(a)i.17，EDC，HOBt，N，N-二异丙基乙基胺，CH₂Cl₂；ii.在1，4-二氧杂环己烷中的4N HCl，MeOH；iii.L-N-Boc-N-甲基丙氨酸，EDC，HOBt，CH₂Cl₂，78％经过三步；(b)i.二叠氮化物，CuSO₄，(+)-L-抗坏血酸钠，t-BuOH-H₂O 3:1；ii.在1，4-二氧杂环己烷中的4NHCl，MeOH。

[0158]根据文献报道的方法由化合物16制备手性胺17[Messina et al.，J.Org.Chem.，64：3767(1999)]。酸15与手性胺17的缩合接着用HCl在甲醇中去保护Boc保护基产生铵盐。该盐与L-N-Boc-N-甲基丙氨酸的缩合提供中间体18。18与分别相应的二叠氮化物在CuSO₄-(+)-钠-L-抗坏血酸盐的催化下环加成接着Boc保护基的去保护获得设计的二价Smac模拟物SH-156、SH-158、SH-159、SH-164、SH-165、SH-166和SH-167。每种化合物的合成方案的效率在表3中示出。

表3

 

名称	产率(％，经过两个步骤)
		SH-156	63
SH-158	65
		SH-159	61
SH-164	62
		SH-165	59
SH-166	58
		SH-167	59

[0159]¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ 7.75(brd，J＝8.5Hz，1H)，7.50-7.44(m，2H)，7.38-7.23(m，3H)，6.90(brs，1H)，5.95(dd，J＝8.5，2.4Hz，1H)，4.80(m，1H)，4.64(dd，J＝8.4，6.2Hz，1H)，4.60(brm，1H)，4.15(m，1H)，2.88(s，3H)，2.62(m，1H)，2.53(d，J＝2.4Hz，1H)，2.20-1.70(m，5H)，1.51(brs，9H)，1.56-1.05(m，9H)；¹³C NMR(75MHz，CDCl₃)：δ 171.99，170.95，169.73，138.96，129.03，128.55，127.53，82.13，73.25，60.03，59.47，50.32，45.21，36.94，36.30，32.36，30.48，28.80，25.29，24.42，23.45，14.16。

[0160]¹H NMR(300MHz，D₂O)：δ 7.58(s，2H)，7.29-7.13(m，10H)，6.08(s，2H)，4.70(m，2H)，4.38(m，4H)，4.27(m，2H)，4.22(m，2H)，3.85(m，2H)，3.73(m，4H)，3.32(m，4H)，3.25(m，4H)，2.58(s，6H)，2.25-1.48(m，22H)，1.40(d，J＝7.0Hz，6H)，1.39(m，2H)；¹³C NMR(75MHz，D₂O)：δ 173.36，172.32，169.56，148.12，139.21，129.32，128.54，127.40，124.51，69.98，69.75，68.97，62.07，61.07，57.20，51.13，50.46，50.41，35.94，33.01，32.35，31.31，27.81，25.07，21.92，15.63。

[0161]¹H NMR(300MHz，D₂O)：δ 7.56(s，2H)，7.29-7.13(m，10H)，6.05(s，2H)，4.70(m，2H)，4.38-4.14(m，8H)，3.85(m，2H)，3.63(m，4H)，3.35(s，4H)，2.55(s，6H)，2.22-1.45(m，22H)，1.42(d，J＝7.1Hz，6H)，1.40(m，2H)；¹³C NMR(75MHz，D₂O)：δ 173.31，172.28，169.54，148.15，139.23，129.30，128.53，127.38，124.45，69.85，68.90，62.05，61.05，57.20，51.12，50.39，35.93，33.03，32.34，31.32，27.78，25.07，21.93，15.63。

[0162]¹H NMR(300MHz，D₂O)：δ 7.51(s，2H)，7.28-7.04(m，10H)，6.04(s，2H)，4.70(m，2H)，4.39-4.15(m，8H)，3.82(m，2H)，3.70(m，4H)，2.56(s，6H)，2.20-1.45(m，22H)，1.40(d，J＝6.9Hz，6H)，1.38(m，2H)；¹³C NMR(75MHz，D₂O)：δ 173.28，172.22，169.52，148.14，139.30，129.31，128.48，127.33，124.36，68.99，62.04，61.06，57.21，51.10，50.42，50.35，35.93，33.06，32.35，31.32，27.81，25.09，21.93，15.64。

[0163]¹H NMR(300MHz，D₂O)：δ 7.40(s，2H)，7.15-6.85(m，10H)，6.65(s，4H)，6.08(s，2H)，4.65(m，2H)，4.32(m，2H)，4.08(m，2H)，3.92-3.74(m，6H)，2.84(m，4H)，2.54(s，6H)，2.28-1.04(m，38H)；¹³CNMR(75MHz，D₂O)：δ 172.24，171.83，169.34，148.50，139.56，139.41，129.07，128.53，127.43，122.92，61.70，60.72，57.20，51.23，50.86，50.15，36.08，34.96，34.64，31.34，29.61，28.63，28.57，28.20，27.60，25.20，15.71。

[0164]¹H NMR(300MHz，D₂O)：δ 7.55(s，2H)，7.19-7.05(m，10H)，6.85(s，4H)，5.98(s，2H)，5.15(s，4H)，4.65(m，2H)，4.25(t，J＝7.2Hz，2H)，4.10(m，2H)，3.82(m，2H)，2.54(s，6H)，2.12-1.20(m，30H)；¹³CNMR(75MHz，D₂O)：δ 173.04，172.16，169.49，148.55，139.08，135.38，129.27，128.82，128.51，127.40，123.90，62.92，60.92，57.19，53.62，51.05，50.39，35.88，33.05，32.28，31.32，27.66，25.06，21.91，15.64。

[0165]¹H NMR(300MHz，D₂O)：δ 7.59(s，2H)，7.28-7.10(m，10H)，6.02(s，2H)，4.65(m，2H)，4.29(m，2H)，4.22-4.08(m，6H)，3.82(m，2H)，2.53(s，6H)，2.20-1.42(m，26H)，1.40(d，J＝7.1Hz，6H)，1.35(m，2H)；¹³C NMR(75MHz，D₂O)：δ 173.35，172.29，169.53，148.20，139.07，129.31，128.54，127.36，124.06，62.05，61.03，57.19，51.11，50.32，50.05，35.92，33.02，32.33，31.31，27.76，26.68，25.06，21.93，15.63。

[0166]¹H NMR(300MHz，D₂O)：δ 7.62(s，2H)，7.28-7.12(m，10H)，6.07(s，2H)，4.65(m，2H)，4.30(t，J＝8.8Hz，2H)，4.25-4.10(m，6H)，3.84(m，2H)，2.55(s，6H)，2.23-1.95(m，4H)，1.95-1.45(m，22H)，1.40(d，J＝7.0Hz，6H)，1.35(m，2H)，1.05-0.85(m，8H)；¹³C NMR(75MHz，D₂O)：δ 173.33，172.28，169.55，148.22，139.18，129.30，128.54，127.43，123.96，62.04，61.02，57.18，51.10，50.72，50.44，35.94，33.03，32.34，31.32，29.35，27.86，25.40，25.09，21.90，15.64。

实施例4

SH-153和SH-172的合成

[0167]根据方案IV和V合成化合物SH-153和SH-172。

方案IV：

试剂和条件：(a)9-BBN，THF，然后H₂O₂(在水中35％)，3N NaOH；(b)戴斯-马丁氧化剂(Dess-Martin periodinane)，CH₂Cl₂，对20的产率为33％，对21的产率为62％；(c)戴斯-马丁氧化剂，CH₂Cl₂，96％；(d)NaBH₃CN，MeOH，H₂SO₄(cata.)，94％。

[0168]化合物14中的C-C双键通过用9-BBN处理而硼氢化接着通过碱性H₂O₂氧化所得的硼烷获得四种醇的混合物。可以通过层析将醇19与其它三种异构体分离并通过X射线分析确认它的结构。通过戴斯-马丁氧化剂氧化其它三种异构体的混合物产生两种酮20和21，它们可以通过层析分离。在催化量H₂SO₄存在下通过NaBH₃CN还原酮20提供为单一异构体的醇22。通过戴斯-马丁氧化剂氧化醇19获得酮20，所以也确认醇22的结构。

方案V

试剂和条件：(a)i.10％，Pd-C，H₂，MeOH；ii.(R)-(-)-1，2，3，4-四氢-1-萘胺，EDC，HOBt，N，N-二异丙基乙基胺，CH₂Cl₂；iii.MsCl，N，N-二异丙基乙基胺，CH₂Cl₂；iv.NaN₃，DMF；(b)炔丙基醚(5eq)，CuSO₄，(+)-L-抗坏血酸钠，AcCN:t-BuOH:H₂O，2:2:1，rt；(c)23或24，CuSO₄，(+)-L-抗坏血酸钠，t-BuOH:H₂O，1:1，rt；(d)i.在1，4-二氧杂环己烷中的4N HCl，MeOH；ii.L-N-Boc-N-甲基丙氨酸，EDC，HOBt，N，N-二异丙基乙基胺，CH₂Cl₂；iii.在1，4-二氧杂环己烷中的4N HCl，MeOH。

[0169]19和22中的苄基酯的水解接着所得的酸与(R)-(-)-1，2，3，4-四氢-1-萘胺缩合产生两种酰胺(方案V)。这两种酰胺与甲烷磺酰氯反应接着用NaN₃置换所得的两种甲磺酸酯提供两种叠氮化物23和24。这两种叠氮化物与过量炔丙基醚在CuSO₄-(+)-钠-L-抗坏血酸催化下的环加成获得两种炔烃25和26。23和24分别与这两种炔烃的环加成提供化合物27和28。这两种化合物中的Boc保护基的除去接着与L-N-Boc-N-甲基丙氨酸缩合产生两种酰胺。这两种酰胺中Boc保护基的除去分别获得SH-153和SH-172。

[0170]向化合物14(1.25g，3mmol)在50mL干THF中的溶液中添加9mL 9-BBN溶液(0.5M，在THF中，4.5mmol)。在回流该溶液12h之后，在0℃下逐滴添加1.5mL 3M NaOH溶液和2mL H₂O₂溶液(35％，在水中)。在回暖到室温并搅拌2h之后，用乙酸乙酯萃取该混合物三次。在Na₂SO₄上干燥合并的有机层然后浓缩。通过层析纯化残余物而获得化合物19(330mg，25％)和三种其它异构体的混合物(580mg，45％)。

[0171]化合物19的化学数据：¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ7.40-7.28(m，5H)，5.43(brd，J＝7.8Hz，1H)，5.28，5.18(ABq，J＝Hz，2H)，4.67(t，J＝8.4Hz，1H)，4.65(m，1H)，4.20(m，1H)，3.96(m，1H)，2.45-1.60(m，10H)，1.38(brs，9H)；¹³C NMR(75MHz，CDCl₃)：δ 172.38，170.83，155.13，135.39，128.58，128.40，128.34，79.70，70.63，67.14，60.13，56.16，50.70，45.22，32.67，31.70，28.35，27.34。

[0172]在室温下向上面获得的三种异构体的混合物(570mg，1.3mmol)在15mL CH₂Cl₂中的溶液中添加戴斯-马丁氧化剂(660mmol，1.56mmol)。在相同温下搅拌该混合物2h然后浓缩。通过层析纯化该残余物而获得化合物20(160mg，28％)和21(330mg，58％)。可以按相同方法将化合物19氧化成化合物20。

[0173]化合物20的化学数据：¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ7.40-7.28(m，5H)，5.42(brd，J＝8.2Hz，1H)，5.28，5.18(ABq，J＝12.2Hz，2H)，4.62(t，J＝8.4Hz，1H)，4.37(m，1H)，3.13(m，1H)，3.02(t，1H)，2.50-1.98(m，8H)，1.83(m，1H)，1.60(m，1H)，1.38(brs，9H)；¹³C NMR(75MHz，CDCl₃)：δ 211.37，172.20，170.94，154.92，135.23，128.56，128.41，128.22，79.81，67.17，60.53，56.06，53.39，52.88，36.79，32.36，30.18，28.22，27.00。

[0174]化合物21的化学数据：¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ7.40-7.20(m，5H)，5.49(brd，J＝7.7Hz，1H)，5.17(s，2H)，5.09(m，1H)，4.52(t，J＝8.5Hz，1H)，4.22(m，1H)，3.08(dd，J＝12.7，4.5Hz，1H)，2.92(m，1H)，2.60(m，2H)，2.36-1.72(m，6H)，1.43(brs，9H)；¹³C NMR(75MHz，CDCl₃)：δ 207.72，170.93，170.15，154.74，135.58，128.37，128.30，128.14，80.00，66.67，60.10，59.74，52.13，48.52，39.65，34.18，32.36，28.21，26.90。

[0175]在-15℃下向化合物20(160mg，0.37mmol)在15mL甲醇中的溶液中添加NaBH₃CN(120mg，1.9mmol)和3滴H₂SO₄(98％)。在相同温度下搅拌4h之后，添加10mL水并用乙酸乙酯(30mL×4)萃取该混合物。在Na₂SO₄上干燥合并的有机层然后浓缩。通过层析纯化该残余物而获得化合物22(147mg，92％)。

[0176]¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ 7.30(brs，5H)，5.45(brd，J＝8.4Hz，1H)，5.20，5.10(ABq，J＝14.1Hz，2H)，4.85(m，1H)，4.48(m，2H)，4.13(m，1H)，3.16(brs，1H)，2.42-1.45(m，10H)，1.38(brs，9H)；¹³C NMR(75MHz，CDCl₃)：δ 172.30，171.03，155.06，135.43，128.49，128.27，128.15，79.36，67.70，66.87，59.74，54.00，51.65，43.62，32.12，31.82，29.30，28.29，27.11。

[0177]向化合物19(170mg，0.39mmol)在10mL CH₂Cl₂中的溶液中添加甲烷磺酰氯(0.05mL，0.6mmol)。将该溶液冷却到0℃然后逐滴添加0.2mL N，N-二异丙基乙胺。在室温下搅拌该混合物4h然后浓缩。通过层析纯化该残余物而获得甲磺酸酯。向该甲磺酸酯在10mL甲醇中的溶液中添加50mg 10％Pd-C。在室温下在H₂下搅拌该混合物3h之后，滤出催化剂并将过滤物浓缩而产生酸。将该酸溶于10mLCH₂Cl₂。随后向这一溶液中添加(R)-(-)-1，2，3，4-四氢-1-萘胺(60mg，0.4mmol)、EDC(77mg，0.4mmol)、HOBt(55mg，0.4mmol)和0.3mLN，N-二异丙基乙胺。在室温下搅拌该溶液一整夜然后浓缩。通过层析纯化该残余物而提供酰胺。向该酰胺在5mL DMF中的溶液中添加0.2g NaN₃。在110℃下搅拌该混合物6h然后在60mL乙酸乙酯和15mL盐水之间分配。在Na₂SO₄上干燥合并的有机层然后浓缩。通过层析纯化残余物而获得化合物23(132mg，经过四个步骤68％)。

[0178]¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ 7.30(m，1H)，7.20-7.03(m，3H)，6.81(brd，J＝8.2Hz，1H)，5.50(brd，J＝8.4Hz，1H)，5.18(m，1H)，4.65(m，1H)，4.48(m，1H)，4.35(m，1H)，3.84(m，1H)，2.80(m，2H)，2.45(m，1H)，2.30-1.78(m，13H)，1.45(brs，9H)；¹³C NMR(75MHz，CDCl₃)：δ 171.19，170.26，154.87，137.18，136.41，129.07，128.73，127.28，126.16，79.56，60.47，59.30，54.47，50.79，47.57，40.40，33.19，32.56，29.83，29.02，28.32，27.82，25.43，19.74。

[0179]按与对化合物6相同的程序由化合物22合成化合物24(63％，经过四个步骤)。

[0180]¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ 7.32(m，1H)，7.15(m，2H)，7.06(m，1H)，6.77(brd，J＝8.3Hz，1H)，5.43(brd，J＝8.2Hz，1H)，5.16(m，1H)，4.54(m，1H)，4.48(t，J＝7.5Hz，1H)，4.25(m，1H)，3.52(m，1H)，2.80(m，2H)，2.48-1.50(m，14H)，1.42(brs，9H)；¹³C NMR(75MHz，CDCl₃)：δ 171.02，170.07，154.94，137.11，136.33，128.98，128.76，127.20，126.23，79.76，61.17，60.35，56.99，49.85，47.47，42.20，32.74，29.84，29.14，29.01，28.25，26.08，19.76。

[0181]向20mg CuSO₄在2mL水中的溶液中添加40mg(+)-钠L-抗坏血酸盐。震荡该混合物直到颜色变成亮黄。在室温下将这一混合物逐滴添加到化合物23(120mg，0.24mmol)和0.2mL炔丙基醚在3mL乙腈和3mL t-BuOH中的溶液中。在相同温度下搅拌该混合物一整夜然后在60mL CH₂Cl₂和15mL盐水之间分配。在Na₂SO₄上干燥合并的有机层然后浓缩。通过层析纯化该残余物而获得化合物25(105mg，74％)。

[0182]¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ 7.64(s，1H)，7.39(m，1H)，7.18(m，2H)，7.07(m，1H)，6.50(brd，J＝8.3Hz，1H)，5.83(brd，J＝7.1Hz，1H)，5.19(m，1H)，4.76(m，1H)，4.70(s，2H)，4.55-4.32(m，3H)，4.23(d，J＝2.4Hz，2H)，2.80(m，2H)，2.50(t，J＝2.4Hz，1H)，2.46-1.63(m，14H)，1.48(brs，9H)；¹³C NMR(75MHz，CDCl₃)：δ 170.63，170.48，154.79，143.58，137.35，136.30，129.11，128.59，127.36，126.41，122.65，79.71，79.31，74.87，62.96，60.83，59.13，57.49，54.65，53.29，47.84，41.98，34.53，32.49，31.26，30.15，29.10，28.34，25.81，20.06。

[0183]按对化合物25相同的方法由化合物24合成化合物26(产率73％)。

[0184]¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ 7.59(s，1H)，7.36(m，1H)，7.13(m，2H)，7.04(m，1H)，6.68(brd，J＝8.2Hz，1H)，5.48(brd，J＝8.3Hz，1H)，5.15(m，1H)，4.89(m，1H)，4.72(m，1H)，4.70(s，2H)，4.56-4.35(m，2H)，4.14(d，J＝2.3Hz，1H)，2.80(m，2H)，2.58-1.55(m，15H)，1.43(brs，9H)；¹³C NMR(75MHz，CDCl₃)：δ 170.83，170.60，155.02，144.76，137.22，136.29，129.03，128.79，127.31，126.32，120.18，79.86，79.18，74.97，62.97，61.36，60.02，57.52，57.22，49.65，47.76，43.81，32.84，32.72，30.50，29.92，29.01，28.29，26.56，19.86。

[0185]向化合物23和25在3mL乙腈和3mL t-BuOH中的溶液中添加20mg CuSO₄和40mg(+)-钠L-抗坏血酸盐在2mL水中的混合物。在室温下搅拌该混合物一整夜然后在60mL CH₂Cl₂和15mL盐水之间分配。在Na₂SO₄上干燥合并的有机层然后浓缩。通过层析纯化该残余物而获得化合物27(79％)。

[0186]¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ 7.70(s，2H)，7.40(m，2H)，7.19(m，4H)，7.11(m，2H)，6.54(brd，J＝8.3Hz，2H)，5.79(brd，J＝7.1Hz，2H)，5.19(m，2H)，4.75(m，2H)，4.67(s，4H)，4.47(m，4H)，4.35(t，J＝8.5Hz，2H)，2.79(m，4H)，2.45-1.60(m，28H)，1.43(brs，18H)；¹³CNMR(75MHz，CDCl₃)：δ 170.57，170.48，154.78，143.89，137.31，136.32，129.06，128.62，127.31，126.39，122.60，79.66，63.66，60.80，59.06，54.65，53.27，47.80，41.93，34.49，32.49，30.13，29.21，29.09，28.32，25.78，20.03。

[0187]按对化合物27相同的方法由化合物24和26合成化合物28。

[0188]¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ 7.61(s，2H)，7.38(m，1H)，7.20-6.99(m，6H)，6.60(brd，J＝8.0Hz，2H)，5.48(brd，J＝8.1Hz，2H)，5.16(m，2H)，4.89(m，2H)，4.73(m，2H)，4.70(s，4H)，4.52-4.33(m，4H)，2.78(m，4H)，2.56-1.58(m，28H)，1.43(brs，18H)；¹³C NMR(75MHz，CDCl₃)：δ 170.89，170.51，155.01，137.22，136.25，129.03，128.81，127.33，126.35，120.21，79.87，63.85，61.38，60.03，57.27，49.65，47.75，43.86，32.85，32.73，30.51，29.21，29.03，28.30，26.54，19.84。

[0189]向化合物27在5mL甲醇中的溶液添加1mL HCl溶液(4N，在1，4-二氧杂环己烷中)。在室温下搅拌该溶液一整夜然后浓缩。将该残余物悬浮在5mL CH₂Cl₂中。向该混合物中添加L-N-甲基-N-Boc-丙氨酸、EDC、HOBt和N，N-二异丙基乙胺。在室温下搅拌该混合物一整夜然后浓缩。通过层析纯化该残余物而产生酰胺。向该酰胺在5mL甲醇中的溶液添加1mL HCl溶液(4N，在1，4-二氧杂环己烷中)。在室温下搅拌该溶液一整夜然后浓缩而产生为HCl盐的粗SH-172。通过HPLC纯化该化合物而产生纯产物。在25min内梯度从75％溶剂A(含0.1％TFA的水)和25％溶剂B(含0.1％TFA的乙腈)运行到55％溶剂A和45％溶剂B。分析性HPLC显示纯度超过95％。

[0190]¹H NMR(300MHz，D₂O)：δ 7.85(s，2H)，7.22-7.02(m，8H)，4.98-4.79(m，4H)，4.80-4.60(m，4H)，4.52(s，4H)，4.28(t，J＝8.7Hz，2H)，3.82(m，2H)，2.72-2.50(m，10H)，2.48-1.55(m，28H)，1.45(d，J＝7.0Hz，6H)；¹³C NMR(75MHz，D₂O)：δ 173.57，171.59，169.27，138.30，136.14，129.54，128.56，127.82，126.61，124.46，62.79，61.98，59.66，57.28，55.45，53.24，48.38，41.25，31.93，31.32，31.11，29.86，28.81，27.24，20.27，15.64。

[0191]按与对SH-172相同的程序由化合物28合成SH-153。

[0192]¹H NMR(300MHz，D₂O)：δ 7.95(s，2H)，7.20-6.95(m，8H)，4.92-4.74(m，6H)，4.59(s，4H)，4.55(m，2H)，4.27(m，2H)，3.86(m，2H)，2.78-2.52(m，12H)，2.42-2.08(m，8H)，1.99-1.55(m，18H)，1.45(d，J＝7.0Hz，6H)；¹³C NMR(75MHz，D₂O)：δ 172.99，171.58，169.78，138.23，136.07，129.46，128.57，127.78，126.57，123.39，62.82，62.56，60.59，58.14，57.13，50.49，48.38，42.62，32.49，31.30，29.84，29.53，28.78，27.86，20.20，15.61。

实施例5

SH-146的合成

[0193]根据方案VI合成化合物SH-146。

方案VI：

试剂和条件：(a)i.2N LiOH，1，4-二氧杂环己烷:H₂O 1:1；ii.15，EDC，HOBt，N，N-二异丙基乙基胺，CH₂Cl₂，88％经过两步；(b)i.24，CuSO₄，(+)-L-抗坏血酸钠，t-BuOH--H₂O，1:1；ii.在1，4-二氧杂环己烷中的4N HCl，MeOH；iii.L-N-Boc-N-甲基丙氨酸，EDC，HOBt，N，N-二异丙基乙基胺，CH₂Cl₂；iv.在1，4-二氧杂环己烷中的4N HCl，MeOH，55％经过四步。

[0194]除去化合物3中的三氟乙酰基保护基接着使所得的胺与酸15缩合获得酰胺29。叠氮化物24与炔烃29在CuSO₄-(+)-钠-L-抗坏血酸盐的催化下的环加成接着除去Boc保护基提供铵盐。在该盐与L-N-Boc-N-甲基丙氨酸缩合之后，通过用在甲醇中的HCl处理使该Boc保护基裂解而提供二价Smac模拟物SH-146。

[0195]¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ 7.75(brs，J＝7.4Hz，1H)，7.32-7.15(m，5H)，5.53(brd，J＝7.1Hz，1H)，5.08(m，1H)，4.73(t，J＝6.6Hz，1H)，4.60(m，1H)，4.19(brs，2H)，4.12(m，1H)，3.80(m，2H)，2.62(m，1H)，2.45(t，J＝2.3Hz，1H)，2.23-1.65(m，4H)，1.55-1.10(m，16H)；¹³CNMR(75MHz，CDCl₃)：δ 172.20，169.94，155.03，139.45，128.37，127.46，127.05，79.59，79.23，74.91，72.23，59.76，59.27，58.34，52.96，51.08，36.44，32.00，28.37，24.93，24.12，23.08。

[0196]¹H NMR(300MHz，D₂O)：δ 7.84(s.1H)，7.40-7.25(m，6H)，7.24-7.02(m，3H)，4.98-4.85(m，4H)，4.74(m，2H)，4.53(s，2H)，4.30(m，2H)，4.27(m，1H)，3.97-3.80(m，2H)，3.78-3.65(m，2H)，2.92(m，2H)，2.56(s，3H)，2.55(s，3H)，2.35-1.45(m，26H)，1.43(d，J＝7.0Hz，3H)，1.38(d，J＝7.0Hz，3H)；¹³C NMR(75MHz，D₂O)：δ 173.88，173.59，172.24，171.57，169.52，169.26，143.92，138.65，138.31，136.20，129.51，129.12，128.48，128.17，127.80，126.95，126.60，124.24，72.30，63.35，62.21，61.98，61.05，59.61，57.27，57.19，55.46，53.35，53.20，51.12，48.41，41.21，35.95，33.00，32.34，31.30，29.83，28.80，27.94，25.08，21.91，20.30，15.62。

实施例6

YP-317、YP-381、YP-383和YP-385的合成

[0197]根据方案VII合成化合物YP-317。

试剂和条件：(a)叔丁基二甲基甲硅烷基氯，N，N-二异丙基乙基胺，二氯甲烷；(b)10％ Pd-C，甲醇，H₂，经过两步88％；(c)Boc-Dap(Z)-OH，EDC，HOBt，N，N-二异丙基乙基胺，二氯甲烷；(d)在四氢呋喃中的1M四丁基氟化铵，四氢呋喃，经过两步87％；(e)戴斯-马丁氧化剂，二氯甲烷，96％；(f)10％ Pd-C，甲醇，H₂，64％；(g)氯甲酸苄基酯，碳酸氢钠，1，4-二氧杂环己烷，95％；(h)亚硫酰氯，甲醇；(i)Boc酸酐，碳酸氢钠，1，4-二氧杂环己烷，经过两步71％；(j)在H₂O中的2M氢氧化锂，1，4-二氧杂环己烷-H₂O；(k)氨基二苯甲烷，EDC，HOBt，N，N-二异丙基乙基胺，二氯甲烷，经过两步74％；(l)在1，4-二氧杂环己烷中的4M氯化氢，甲醇；(m)L-N-Boc-N-甲基丙氨酸，EDC，HOBt，N，N-二异丙基乙基胺，二氯甲烷，经过两步78％；(n)10％Pd-C，甲醇，H₂，90％；(o)α，α’-二溴-对二甲苯，碳酸氢钠，1，4-二氧杂环己烷；(p)化合物21，碳酸氢钠，1，4-二氧杂环己烷；(q)在1，4-二氧杂环己烷中的4M氯化氢，甲醇，经过三步34％。

[0198]通过公开的方法(Zhang et al.，Org.Lett.，4：4029-4032(2002)；(b)Polyak et al.，J.Org，Chem.63：5937-5949(1998))按六个步骤由焦谷氨酸(化合物30)制备化合物31。用TBS保护化合物31中的羟基而产生化合物32。通过催化氢化除去该苄基保护基而产生胺33，将它与Boc-Dap(Z)-OH偶合而产生酰胺34。通过四氢呋喃中的1M四丁基氟化铵除去化合物34中的TBS保护基而产生醇35，然后通过戴斯-马丁氧化剂将它氧化成醛36。通过催化氢化除去化合物36中的Cbz保护基，所需胺与醛的分子内缩合随后还原所得的烯胺在一个锅中进行而获得二环化合物37。用Cbz保护基保护胺37而产生化合物38。除去化合物38中的Boc保护基并通过用甲醇中的亚硫酰氯处理将叔丁基酯转变成甲基酯而获得化合物39。用Boc保护基保护胺基而产生化合物40。将甲基酯40转化成羧酸41，使它与氨基二苯甲烷缩合而形成酰胺42。除去化合物42中的Boc保护基而获得游离胺43，将它与L-N-Boc-N-甲基丙氨酸偶合而产生酰胺44。通过催化氢化除去化合物44中的Cbz保护基而获得胺45，用α，α’-二溴-对二甲苯处理该胺45而产生化合物46。用化合物45和碳酸氢钠处理化合物46而获得受保护的二聚物47，除去它的Boc保护基而形成所需二聚物YP-317。

[0199]¹H NMR(D₂O)δ 9.23-9.26(m，1H)，7.18-7.22(m，8H)，7.06-7.08(m，4H)，6.02-6.05(m，1H)，5.30-5.36(m，1H)，4.59(m，1H)，4.52(m，1H)，4.27(s，2H)，3.78-3.86(m，2H)，3.53-3.58(m，2H)，2.99(t，J＝2Hz，1H)，2.56(s，3H)，2.32(m，1H)，1.84-1.92(m，1H)，1.67-1.75(m，4H)，1.35-1.37(d，J＝7Hz，3H)；¹³C NMR(D₂O)δ 173.93，170.13，167.90，163.54，163.07，140.74，140.62，132.39，130.59，129.39，129.26，128.40，128.13，127.85，127.58，118.58，114.72，62.98，61.07，59.03，58.25，57.10，56.42，55.26，54.18，47.98，31.65，31.24，30.98，27.01，15.42；HRMS发现：[M+H]⁺1057.6057(计算1057.6028)。

[0200]按类似的方式经由化合物45的酰化合成YP-381、YP-383和YP-385。

[0201]¹H NMR(300MHz，CD₃OD，TMS)δ 8.94-8.91(d，J＝7.9Hz，1H)，7.37-7.24(m，10H)，6.17-6.14(d，J＝8.2Hz，1H)，4.58-4.55(m，1H)，4.24(br，1H)，3.99-3.90(m，2H)，3.50-3.38(m，1H)，2.70(s，3H)，2.65-2.40(m，2H)，2.31(m，1H)，2.09-1.78(m，6H)，1.61(m，2H)，1.56-1.53(d，J＝7.0Hz，3H)，1.32(s，4H)。¹³CNMR(75MHz，CD₃OD)δ176.5，175.9，173.2，169.6，143.0，129.6，128.8，128.2，62.7，58.2，53.7，34.4，33.4，32.3，31.8，30.3，28.3，26.1，16.2.HRMS：计算m/z[M+Na]⁺1143.6371；发现1143.6387。

[0202]¹H NMR(300MHz，CD₃OD，TMS)δ 7.35-7.27(m，10H)，6.16(s，1H)，4.59-4.52(m，1H)，4.24(br，1H)，4.02-3.99(m，1H)，3.97-3.92(m，1H)，3.90-3.87(m，1H)，3.58-3.48(m，2H)，2.70(s，3H)，2.56-2.34(m，2H)，2.34-2.32(m，1H)，2.06-1.19(m，6H)，1.56-1.53(d，J＝7.0Hz，3H)，1.30(s，6H)。¹³CNMR(75MHz，CD₃OD)δ 176.5，175.9，173.2，169.6，143.0，129.6，128.8，128.2，62.7，58.2，53.7，34.4，33.4，31.7，30.6，30.4，28.3，26.3，16.1.HRMS：计算m/z[M+Na]⁺1171.6684；发现1171.6680。

[0203]¹H NMR(300MHz，CD₃OD，TMS)δ 8.95-8.93(d，J＝8.1Hz，1H)，7.37-7.24(m，10H)，6.17-6.14(d，J＝8.0Hz，1H)，4.58-4.56(m，1H)，4.24(br，1H)，3.99-3.92(m，2H)，3.82-3.70(m，1H)，2.70(s，3H)，2.62-2.40(m，2H)，2.33(m，1H)，2.04-1.75(m，6H)，1.60-1.56(m，2H)，1.55-1.52(d，J＝7.0Hz，3H)，1.34-1.30(m，2H)。¹³CNMR(75MHz，CD₃OD)δ 176.5，175.8，173.3，169.7，143.0，129.6，128.8，128.2，62.7，58.2，53.7，34.5，33.4，31.7，30.2，28.3，26.2，16.1.HRMS：计算m/z[M+Na]⁺1115.6058；发现1115.6055。

实施例7

Smac模拟物中间体的合成

方案VIII

试剂和条件：(a)i.在1，4-二氧杂环己烷中的4N HCl，甲醇；ii.Boc-Dap(Z)-OH，EDC，HOBt，N，N-二异丙基乙基胺，CH₂Cl₂，52％经过两步；(b)O₃，然后PPh₃，CH₂Cl₂，90％；(c)H₂，10％ Pd-C，i-PrOH，41％；(d)9-BBN(2eq)，THF，回流，12h，然后3N NaOH(2eq)，35％，H₂O₂(2.5eq)，0℃-rt，85％；(e)i.戴斯-马丁氧化剂，CH₂Cl₂；ii.H₂，10％ Pd-C，i-PrOH，50％经过两步。

[0204]中间体51和53的合成在方案VIII中示出。可以根据报道的方法(参见：(1)Zhang，J.；Xiong，C.；Wang，W.；Ying，J.；Hruby，V.，J.Org.Lett.，2002，4(23)，4029-4032和(2)Polyak，F.and Lubell，W.D.J.Org，Chem.1998，63，5937-5949)按五个步骤由焦谷氨酸30制备化合物48，为两种非对映异构体的混合物，其中R形式异构体为主要产物(比例为约4:1)。除去48中的Boc基接着与N-α-(叔丁氧基羰基)-N-β-(苯甲氧基羰基)-L-二氨基-丙酸(Boc-Dap(Z)-OH)缩合获得酰胺49。49中的C-C双键的臭氧氧化产生醛50。4中Cbz基的裂解，所得的胺与醛基的分子内缩合和随后还原该烯胺在一个锅中进行而获得化合物51。在这一转换中，仅获得化合物51并且没有检测到其异构体，表明小异构体的氨基醛在这些条件下没有环化。

[0205]用9-BBN将49中的C-C双键硼氢化接着将所得的硼烷碱性氧化提供醇52。用戴斯-马丁氧化剂氧化52提供两种醛的混合物，按与对化合物51相同的程序将该混合物环化而获得化合物53。与51相似，在这一转化期间仅获得一种异构体。

[0206]化合物51的分析数据：[α]²⁰ _D-30.2(c＝1.7，CHCl₃)；¹HNMR(300MHz，CDCl₃，TMS)δ 5.45(brd，J＝8.0Hz，1H)，4.67(m，1H)，4.52(t，J＝9.0Hz，1H)，4.23(m，1H)，3.74(s，3H)，3.20(m，2H)，2.94(m，1H)，2.74(dd，J＝13.6，10.9Hz，1)，2.35(m，1H)，2.14(m，1H)，1.99(m，1H)，1.86-1.74(m，3H)，1.66(m，1H)，1.43(brs，9H)；¹³C NMR(75MHz，CDCl₃，TMS)δ 173.42，170.60，155.16，79.68，59.46，58.39，54.92，52.44，46.72，37.45，32.15，29.64，28.29，26.98。

[0207]化合物53的分析数据：[α]²⁰ _D-23.2(c＝1.0，CHCl₃)；¹HNMR(300MHz，CDCl₃，TMS)δ 5.23(brd，J＝8.0Hz，1H)，4.79(m，1H)，4.65(dd，J＝9.7，8.2Hz)，4.22(m，1H)，3.74(s，3H)，3.02-2.80(m，4H)，2.38-1.70(m，9H)，1.43(brs，9H)；¹³C NMR(75MHz，CDCl₃，TMS)δ173.38，171.59，155.09，79.68，62.03，59.82，53.72，53.15，52.48，50.09，34.66，34.55，29.47，28.31，27.33。

实施例8

SH-188、189和190的合成

方案IX

试剂和条件：(a)EDC，HOBt，N，N-二异丙基乙基胺，CH₂Cl₂；(b)i.在1，4-二氧杂环己烷中的4N HCl，MeOH；ii.(S)-N-Boc-N-甲基丙氨酸，EDC，HOBt，N，N-二异丙基乙基胺，CH₂Cl₂；iii.10％ Pd-C，H₂，MeOH；(c)硫光气或三光气，CH₂Cl₂；ii.在1，4-二氧杂环己烷中的4N HCl，MeOH。

[0208]酸15与胺54或55的缩合分别产生酰胺56和57(方案IX)。56或57中的Boc保护基的除去接着所得的铵与(S)-N-Boc-N-甲基丙氨酸的缩合产生两种酰胺。这两种酰胺中的Cbz保护基的除去提供胺58和59。58或59与0.5当量三光气的缩合提供两种脲。这两种脲中的Boc保护基的除去分别提供SH-188和SH-190。58与0.5当量硫光气的缩合产生硫脲。这种硫脲中的Boc保护基的除去产生SH-189。

实施例9

SH-202的合成

方案X

试剂和条件：(a)i.NaH(2.5eq)，1，12-二溴代十二烷，DMF；ii.3NLiOH，1，4-二氧杂环己烷；(b)酸15(2.2eq)，EDC，HOBt，N，N-二异丙基乙基胺，CH₂Cl₂；(c)i.在1，4-二氧杂环己烷中的4N HCl，MeOH；ii.(S)-N-Boc-N-甲基丙氨酸，EDC，HOBt，N，N-二异丙基乙基胺，CH₂Cl₂；iii.在1，4-二氧杂环己烷中的4N HCl，MeOH。

[0209]用1，12-二溴十二烷置换衍生自化合物60的醇钠接着除去三氟乙酰基获得二胺61。61与2当量酸15的缩合产生酰胺62。62中的Boc保护基的除去接着与(S)-N-Boc-N-甲基丙氨酸缩合提供酰胺。这一酰胺中的Boc保护基的除去提供SH-202。

实施例10

Smac模拟物中间体的合成

方案XI

试剂和条件：(a)i.在1，4-二氧杂环己烷中的4N HCl，甲醇；ii.Boc-Dap(Z)-OH，EDC，HOBt，N，N-二异丙基乙基胺，CH₂Cl₂；(b)O₃，然后PPh₃，CH₂Cl₂；(c)H₂，10％ Pd-C，i-PrOH；(d)i.CbzCl，NaHCO₃，1，4-二氧杂环己烷；ii.3N LiOH，1，4-二氧杂环己烷，然后1N HCl；(e)i.胺，EDC，HOBt，N，N-二异丙基乙基胺，CH₂Cl₂；ii.在1，4-二氧杂环己烷中的4N HCl，甲醇；iii.(S)-N-保护的氨基酸，EDC，HOBt，N，N-二异丙基乙基胺，CH₂Cl₂；(f)i.二酸(0.5eq)，EDC，HOBt，N，N-二异丙基乙基胺，CH₂Cl₂；ii.在1，4-二氧杂环己烷中的4N HCl，MeOH。

[0210]关键中间体41的新型和有效的合成方法在方案XI中提供。可以根据报道的方法(参见：(1)Zhang，J.；Xiong，C.；Wang，W.；Ying，J.and Hruby，V.，J.Org.Lett.，2002，4(23)，4029-4032和(2)Polyak，F.and Lubell，W.D.J.Org，Chem.1998，63，5937-5949)按五个步骤由焦谷氨酸30制备化合物48，为两种非对映异构体的混合物，其中R形式异构体为主要产物(比例为约4:1)。除去48中的Boc基接着与N-α-(叔丁氧基羰基)-N-β-(苯甲氧基羰基)-L-二氨基-丙酸(Boc-Dap(Z)-OH)缩合获得酰胺49。49中C-C双键的臭氧氧化接着用PPh₃还原产生醛50。50中Cbz基的裂解，所得的胺与醛基的分子内缩合和随后还原该烯胺在一个锅中进行而获得所需化合物51。保护氨基接着将51中的甲基酯水解提供酸41。

[0211]41与不同二胺的缩合获得一系列酰胺。这些酰胺中的Boc保护基的除去接着所得的铵盐与(S)-N-保护的氨基酸缩合产生一系列酰胺63。这些酰胺中的保护基的除去提供我们设计的二价Smac模拟物64。

实施例11

二价SMAC模拟物

[0212]SH-173：¹H NMR(300HMz，CDCl₃)：δ 8.70(s，2H)，8.32(d，J＝8.0Hz，2H)，7.60(d，J＝7.4Hz，2H)，7.40-6.80(m，26H)，6.47(d，J＝7.9Hz，2H)，6.25(d，J＝8.0Hz，2H)，4.81(m，2H)，4.70(m，2H)，4.50(m，2H)，4.27(t，J＝7.1Hz，4H)，3.95(m，2H)，3.30-3.08(m，4H)，2.60(t，J＝2.61Hz，4H)，2.45-2.25(m，2H)，2.12-1.20(m，36H)；¹³C NMR(75HMz，CDCl₃)：δ 170.78，170.41，170.14，169.88，148.00，140.45，138.98，136.19，128.53，128.44，127.68，127.56，127.28，123.70，121.67，121.55，119.13，118.57，111.29，110.25，59.98，59.06，54.01，50.40，50.20，50.01，47.76，35.93，34.61，31.74，29.53，29.09，28.08，24.83，23.30，22.95，20.82。

[0213]SH-175：¹H NMR(300HMz，D₂O)：δ 7.87(s，1H)，7.71(s，2H)，7.30-7.11(m，10H)，6.05(s，2H)，4.64(m，2H)，4.35-4.16(m，10H)，3.81(m，2H)，2.60(t，J＝6.2Hz，2H)，2.54(s，6H)，2.10(m，2H)，1.98(m，2H)，1.75-1.42(m，34H)；¹³C NMR(75HMz，D₂O)：δ 175.85，174.79，172.08，150.63，147.37，141.60，131.85，131.09，129.93，128.50，126.79，64.57，63.53，59.73，54.54，53.66，52.90，52.59，38.49，35.57，34.90，33.93，31.29，30.32，28.96，28.65，27.63，27.38，25.24，24.49，18.22。

[0214]SH-176：¹H NMR(300MHz，D₂O)：δ 7.48(s，2H)，7.10-6.67(20H)，5.84(s，2H)，4.65(m，2H)，4.55(m，2H)，4.42-4.16(m，8H)，3.80(m，2H)，2.53(s，6H)，2.25-1.30(m，26H)；¹³C NMR(75MHz，D₂O)：δ 172.72，171.00，169.10，143.67，141.49，141.30，129.07，127.96，127.58，127.39，124.10，62.76，61.24，59.43，57.67，57.27，55.00，53.20，41.26，32.12，31.31，26.98，24.69，15.62。

[0215]SH-177：¹H NMR(300MHz，D₂O)：δ 7.62(s，2H)，7.15-6.90(20H)，5.90(s，2H)，4.75(m，4H)，4.43(s，4H)，4.39(m，4H)，3.83(m，2H)，2.80(s，6H)，2.46(m，2H)，2.22-1.90(m，8H)，1.75-1.43(m，10H)，1.36(d，J＝8.4Hz，6H)；¹³C NMR(75MHz，D₂O)：δ 175.14，173.74，172.25，146.86，144.06，143.66，131.72，131.66，130.55，130.21，129.97，125.60，65.46，64.63，62.98，60.36，59.70，52.87，45.02，34.98，33.87，32.30，30.26，18.17。

[0216]SH-178：¹H NMR(300MHz，D₂O)：δ 7.88(s，2H)，7.46-7.30(m，10H)，6.19(s，2H)，4.78(m，6H)，4.42(m，2H)，4.30(m，2H)，3.90(m，2H)，3.74(m，4H)，3.60(m，4H)，3.52(m，2H)，3.28(m，2H)，2.64(s，6H)，2.40-1.56(m，24H)，1.49(d，J＝7.0Hz，6H)；¹³C NMR(75MHz，D₂O)：δ 176.14，174.90，172.10，151.28，141.51，131.90，131.19，130.01，127.32，64.64，63.61，59.73，58.06，53.68，52.96，52.05，47.49，38.50，35.53，34.90，33.89，30.35，27.61，24.48，18.18。

[0217]SH-179：¹H NMR(300MHz，D₂O)：δ 7.87(s，2H)，7.40-7.22(m，10H)，6.19(s，2H)，4.74(m，6H)，4.42(m，2H)，4.30(m，2H)，4.05(m，2H)，3.79(t，J＝5.1Hz，4H)，3.71(t，J＝5.1Hz，4H)，3.53(brs，8H)，3.10(m，4H)，2.40-1.60(m，24H)，1.50(d，J＝7.0Hz，6H)；¹³C NMR(75MHz，D₂O)：δ 176.15，174.92，172.00，151.25，141.51，131.90，131.19，130.07，127.28，64.64，63.60，59.57，58.60，58.06，53.69，52.95，52.14，50.67，47.56，38.49，35.53，34.89，30.34，27.60，24.47，18.46。

[0218]SH-180：¹H NMR(300MHz，D₂O)：δ 7.60(s，2H)，7.30-7.10(m，10H)，6.68(s，4H)，6.15(s，2H)，4.74(m，2H)，4.52-4.30(m，4H)，4.20(m，2H)，4.19-4.02(m，8H)，3.80(m，2H)，3.13(m，2H)，2.40-1.12(m，42H)；¹³C NMR(75MHz，D₂O)：δ 172.79，170.36，169.39，148.33，139.54，129.24，128.55，127.41，123.46，61.91，60.88，60.28，57.02，56.06，50.99，50.38，49.08，48.13，35.98，34.26，33.10，32.32，29.20，27.85，25.11，21.95，16.84。

[0219]SH-181：¹H NMR(300MHz，D₂O)：δ 7.87(s，2H)，7.31(m，4H)，7.08(m，4H)，6.16(s，2H)，4.82-4.72(m，6H)，4.50(m，2H)，4.26(m，2H)，3，88(m，2H)，3.78(m，4H)，3.68(brs，8H)，2.61(s，6H)，2.36-1.53(m，24H)，1.50(t，J＝7.0Hz，6H)；¹³C NMR(75MHz，D₂O)：δ 176.03，174.85，172.05，163.45，151.16，137.40，131.90，127.33，118.51，64.59，63.58，59.73，58.02，53.64，52.30，51.87，47.26，38.48，35.53，34.86，33.85，30.27，27.60，24.47，18.16。

[0220]SH-182：¹H NMR(300MHz，D₂O)：δ 7.61(s，2H)，7.23(m，4H)，6.78(m，4H)，6.53(m，4H)，6.12(s，2H)，4.70(m，2H)，4.32(m，2H)，4.18(m，2H)，4.10-3.83(m，6H)，2.61(s，6H)，2.22-1.03(m，42H)；¹³CNMR(75MHz，D₂O)：δ 172.53，171.92，169.39，160.60，148.31，139.38，134.84，129.40，128.42，115.60，61.76，60.78，57.20，50.94，50.27，49.59，35.99，34.42，33.22，32.32，31.33，29.41，27.95，25.14，21.99，15.66。

[0221]SH-183：¹H NMR(300HMz，D₂O)：δ 7.87(s，2H)，7.38-7.22(m，4H)，7.12-6.99(m，4H)，6.17(s，2H)，4.85-4.74(m，6H)，4.34(m，2H)，4.27(m，2H)，3.98(m，2H)，3.80-3.65(m，8H)，3.55(s，8H)，3.10(m，2H)，2.37-1.40(m，30H)。

[0222]SH-184：¹H NMR(300MHz，D₂O)：δ 7.62(s，2H)，7.20(m，4H)，6.90-6.70(m，4H)，6.69-6.50(brs，4H)，6.19(s，2H)，4.72(m，2H)，4.50-4.28(m，4H)，4.20-3.80(m，6H)，3.12(m，4H)，2.22-0.98(m，42H)。

[0223]SH-185：¹H NMR(300HMz，D₂O)：δ 7.67(s，2H)，7.26-7.10(m，10H)，6.07(s，2H)，4.73(m，2H)，4.28(m，2H)，4.25-4.10(m，6H)，3.83(m，2H)，2.54(s，6H)，2.20-1.92(m，4H)，1.86-1.30(m，34H)，0.98-0.80(m，12H)；¹³C NMR(75HMz，D₂O)：δ 177.43，173.05，172.22，148.26，139.29，129.28，128.50，127.43，123.81，62.00，60.99，57.20，51.08，50.76，50.40，36.00，33.06，32.36，31.32，29.52，28.62，28.26，27.77，25.76，25.10，21.93，15.65。

[0224]

[0225]SH-186：¹H NMR(300HMz，D₂O)：δ 7.58(s，2H)，7.20-6.90(m，10H)，6.61(s，4H)，6.08(s，2H)，4.72(m，2H)，4.30(m，2H)，4.10(m，2H)，3.95(m，4H)，3.80(m，2H)，2.52(s，6H)，2.25-1.05(m，36H)，1.02-0.75(m，14H)；¹³C NMR(75HMz，D₂O)：δ 174.88，174.40，171.91，151.04，142.52，142.31，131.63，130.92，130.00，125.57，125.09，64.30，63.24，59.74，53.42，52.90，38.63，38.20，35.90，34.85，34.28，33.87，32.69，32.05，31.73，30.20，29.07，27.76，24.49，18.23。

[0226]SH-187：¹H NMR(300HMz，D₂O)：δ 7.56(s，2H)，7.40-7.05(m，16H)，7.02(m，2H)，6.90(m，2H)，6.78(m，4H)，6.11(s，2H)，4.75(m，2H)，4.49(m，2H)，4.25(m，4H)，4.20(m，2H)，3.98(m，2H)，3.84(m，2H)，2.49(s，6H)，2.38(m，4H)，2.24-1.22(m，36H)。

[0227]SH-188：¹H NMR(300HMz，D₂O)：δ 7.10-6.92(m，10H)，6.85(m，4H)，6.70(m，4H)，5.85(s，2H)，4.65(m，2H)，4.32(m，2H)，4.06(m，2H)，3.82(m，2H)，2.74(m，4H)，2.54(s，6H)，2.15(m，4H)，2.02-1.20(m，34H)；¹³C NMR(75HMz，D₂O)：δ 172.36，171.92，169.41，160.17，141.40，141.15，139.27，129.01，127.66，127.46，61.88，60.87，57.18，50.94，39.72，35.99，33.20，32.49，31.60，31.33，27.79，25.19，21.91，15.69。

[0228]SH-189：¹H NMR(300HMz，D₂O)：δ 7.18-6.99(m，10H)，6.95(m，4H)，6.80(m，4H)，5.90(s，2H)，4.72(m，2H)，4.36(m，2H)，4.13(m，2H)，3.89(m，2H)，3.30(brm，4H)，2.63(s，6H)，2.30(m，4H)，2.12-1.18(m，34H)。

[0229]SH-190：¹H NMR(300HMz，D₂O)：δ ¹³C NMR(75HMz，D₂O)：δ 7.15-6.93(m，10H)，6.95(m，4H)，6.79(m，4H)，6.85(s，2H)，4.74(m，2H)，4.36(m，2H)，4.13(m，2H)，3.88(m，2H)，2.80(m，4H)，2.58(s，6H)，2.36-1.08(m，42H)。

[0230]SH-191：¹H NMR(300HMz，D₂O)：δ 7.75(s，2H)，7.40-7.20(m，10H)，6.16(s，2H)，4.74(m，2H)，4.36(m，2H)，4.32-4.20(m，6H)，3.89(m，2H)，2.95(t，J＝6.6Hz，4H)，2.64(s，6H)，2.32-1.20(m，38H)。

[0231]SH-198：¹H NMR(300HMz，D₂O)：δ 7.70(s，2H)，7.30-7.12(m，10H)，6.07(s，2H)，4.65(m，2H)，4.32(m，2H)，4.25-4.10(m，6H)，3.84(m，2H)，3.10(m，4H)，2.55(s，6H)，2.20-1.20(m，38H)，0.98(m，2H)；¹³C NMR(75HMz，D₂O)：δ 173.17，172.22，169.53，148.15，139.16，129.32，128.54，127.40，124.04，70.20，69.63，62.01，60.98，57.19，51.10，50.82，50.63，50.35，35.97，33.06，32.36，31.37，29.29，28.17，27.77，26.48，25.80，25.10，22.58，21.95，15.67。

[0232]SH-199：¹H NMR(300HMz，D₂O)：δ 7.73(s，2H)，7.20-7.02(m，10H)，6.05(s，2H)，4.65(m，2H)，4.30(m，2H)，4.22-4.08(m，6H)，3.84(m，2H)，3.08(m，4H)，2.52(s，6H)，2.25-0.90(m，42H)；¹³CNMR(75HMz，D₂O)：δ 173.02，172.13，169.49，147.91，139.07，129.31，128.55，127.41，124.14，70.25，66.87，61.93，60.90，57.18，50.97，50.22，36.01，33.08，32.37，31.40，29.33，28.23，27.74，25.11，22.62，21.97，15.70。

[0233]SH-200：¹H NMR(300HMz，D₂O)：δ 7.77(s，2H)，7.22-7.08(m，10H)，6.05(s，2H)，4.65(m，2H)，4.37-4.22(m，6H)，4.16(m，2H)，3.82(m，2H)，3.48(m，4H)，3.08(m，4H)，2.52(s，6H)，2.16-1.42(m，30H)，1.01(m，4H)；¹³C NMR(75HMz，D₂O)：δ 173.11，172.16，169.49，148.01，139.10，129.32，128.56，127.38，124.62，70.59，68.39，66.87，61.96，60.95，57.19，50.73，50.24，35.98，33.09，32.36，31.40，27.77，25.43，25.12，21.96，15.69。

[0234]SH-201：¹H NMR(300HMz，D₂O)：δ 7.60(s，2H)，7.40-6.70(m，20)，6.16(s，2H)，4.75(m，2H)，4.49(m，2H)，4.25(m，4H)，4.20(m，2H)，3.98(m，2H)，3.84(m，2H)，2.49(s，6H)，2.40-1.20(m，48H)。

[0235]SH-202：¹H NMR(300HMz，D₂O)：δ 7.35-7.16(m，10H)，5.02(m，2H)，4.74(m，2H)，4.39(m，2H)，4.27(m，2H)，3.92(m，2H)，3.55(m，4H)，3.34(m，4H)，2.64(s，6H)，2.28-1.20(m，54H)；¹³C NMR(75HMz，D₂O)：δ 175.35，174.62，172.04，141.98，131.60，130.66，129.70，75.84，73.59，64.68，63.33，59.74，55.57，53.55，38.93，35.65，35.05，33.93，32.55，32.31，30.64，28.86，27.85，24.68，18.29。

[0236]SH-206：¹H NMR(300HMz，D₂O)：δ 7.44(s，2H)，7.30-6.80(m，10H)，6.49(s，4H)，5.99(s，2H)，4.63(m，2H)，4.28(m，2H)，4.06(m，2H)，3.92(m，2H)，3.80(m，4H)，2.55(s，6H)，2.28-0.95(m，42H)；¹³C NMR(75HMz，D₂O)：δ 175.04，174.33，171.97，150.65，143.08，141.97，131.63，131.00，130.59，129.60，126.25，64.31，63.33，59.74，53.47，52.92，38.47，36.87，35.85，34.86，33.87，31.85，30.42，27.65，24.52，18.26。

[0237]SM-410：¹H NMR(MeOH-d₄，300MHz)δ 8.91(m，2H)，7.37-7.13(m，24H)，6.16(m，2H)，4.73(m，2H)，4.53(m，2H)，4.06-3.73(m，8H)，3.37-3.27(m，6H)，2.92(m，6H)，2.68(m，6H)，2.30(m，2H)，2.05-1.81(m，10H)，1.55(m，6H)；¹³C NMR(MeOH-d₄，300MHz)δ174.4，172.3，169.3，168.6，142.2，142.0，139.3，129.1，128.7，128.5，127.8，127.5，127.3，61.8，57.3，52.6，51.8，46.6，34.9，32.4，31.4，30.9，27.3，15.3。

实施例12

抑制剂与XIAP BIR3的结合

[0238]为了试验二价Smac模拟物与IAP蛋白的结合能力，使用荧光偏振(FP)基方法的敏感和定量体外结合试验被开发和用来测定Smac模拟物与XIAP蛋白的结合亲合性(Nikolovska-Coleska et al.，Anal.Biochem.332：261-73(2004))。对于这一试验，将5-羧基荧光素(5-Fam)与突变的Smac肽AbuRPF-K-(5-Fam)-NH₂(称作SM5F)的赖氨酸侧链耦合。SM5F肽与XIAP BIR3蛋白的结合的K_d值测定为17.92nM，表明该肽与具有高亲合性的XIAP蛋白的表面袋结合。与His-标记物稠环的人XIAP(残基241-356)的重组XIAP BIR3蛋白是稳定和可溶的，并且用于FP基结合试验。

[0239]采用试验化合物在DMSO中的连续稀释进行剂量依赖性结合实验。在Dynex 96孔黑色圆底板(Fisher Scientific)中添加在试验缓冲物(100mM磷酸钾，pH值7.5；100μg/ml牛丙球蛋白；0.02％叠氮化钠，从Invitrogen^TM Life Technology购买)中的试验样品和预培养的XIAP BIR3蛋白质(30nM)和SM5F肽(5nM)的5μl样品以产生125μl的最终体积。对于每一试验，包括含重组XIAP BIR3蛋白和SM5F(相当于0％抑制)的结合肽对照物和仅含游离SM5F(相当于100％抑制)的游离肽对照物。当结合达到平衡时在3小时培养之后使用ULTRAREADER(Tecan U.S.Inc.，Research Triangle Park，NC)测量偏振值。使用非线性最小二乘分析由曲线测定IC₅₀值，即替换50％结合肽时的抑制剂浓度。使用GRAPHPAD PRISM软件(GraphPad Software，Inc.，San Diego，CA)进行曲线拟合。

实施例13

对XIAP蛋白的荧光偏振基结合试验

[0240]用人XIAP蛋白(残基120-356)(10nM)和荧光标记的Smac基二价肽(称作Smac2-F)(0.5nM)作为示踪剂在试验缓冲物(100mM磷酸钾，pH值7.5；100μg/ml牛丙球蛋白；0.02％叠氮化钠)中在Dynex 96孔黑色圆底板(Fisher Scientific)中培养Smac模拟物。确定Smac2-F与XIAP结合，其中K_d值为1.2nM。对于每一试验，对照物包括XIAP和Smac2-F肽(相当于0％抑制)，和仅包括Smac-2F(等于100％抑制)。在2小时培养之后，使用Ultra平台阅读器测量偏振值。使用非线性最小二乘分析由该曲线测定IC₅₀值，即替换50％结合的示踪剂时的抑制剂浓度。使用GraphPad 

软件进行曲线拟合。

[02411]当在结合试验中试验时，二价Smac模拟物SH-164具有1.9±0.5nM的IC₅₀(图1)。这比一价Smac模拟物SH-122的结合亲合性好大于500倍并且比天然Smac肽AVPI(SEQ ID NO：1)有效>5000倍。这些数据表明二价Smac模拟物将充当IAP活性的有效抑制剂。其它二价Smac模拟物的结合亲合性在表4中给出。

表4

 

名称	对XIAP BIR3的结合亲合性(IC50[μM])
		YP-245P3	1-10
YP-246P	0.1-1
		YP-330	<0.1
YP-337	<0.1
		YP-350	<0.1
YP-356	<0.1
		YP-376	<0.1
YP-377	<0.1
		SM-401	<0.1
SM-402	<0.1
		SM-403	<0.1
SM-404	<0.1
		SM-405	<0.1
SM-406	<0.1
		SM-407	<0.1
SM-408	<0.1
		SM-409	<0.1
SH-207	<1

实施例14

通过二价Smac模拟物的细胞生长抑制

[0242]试验SH-164对各种癌细胞系的生长的影响。将细胞与试验化合物以3000细胞/孔的密度一起接种在96-孔平底细胞培养台上并将细胞在37℃下在95％气和5％CO₂的气氛中培养4天。使用WST-8试剂和(2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2，4二磺苯基)-2H-四唑一钠盐；Dojindo Molecular Technologies，Inc.，Gaithersburg，Maryland)测定在用不同浓度化合物处理之后的细胞生长抑制率。在10％的最终浓度下将WST-8添加到每一孔中，然后在37℃下培养该平台2-3小时。使用ULTRA Tecan阅读器(Molecular Device)在450nm下测量样品的吸光率。通过比较未处理的细胞中的和用试验化合物处理过的细胞中的吸光率计算所试验化合物的抑制细胞生长50％(IC₅₀)的浓度。

[0243]当相对MDA-MB-231人乳癌细胞系和MAMEL-3M黑素瘤细胞系试验时，SH-164显示1.4nM的IC₅₀(图2)。此外，SH-164在若干其它癌细胞系中也是强烈的(图2)。

实施例15

二价Smac模拟物诱导细胞死亡

[0244]使用台盼蓝细胞生存性试验测试SH-164诱导各种癌细胞系中细胞死亡的能力。将0.3×10⁶细胞接种在6-孔平台中并在37℃下在95％空气和5％CO₂的气氛中在有或没有试验化合物的情况下培养2天。0.4％台盼蓝(Invitrogen Corporation)的1:1稀释液用来测定细胞生存性。当用MDA-MB-231、MAMLE-3M和OVCAR-4细胞培养时，SH-164显示是有效的细胞死亡诱导物(图3)。在每种情况下，SH-164在100nM的浓度下引起至少70％细胞死亡。

实施例16

二价Smac模拟物及其它试剂的结合物对细胞生长抑制的影响

[0245]为了试验二价Smac模拟物使癌细胞对其它试剂的生长抑制作用敏感的能力，单独地或与增加剂量的二价Smac模拟物结合地采用各种试剂进行细胞生长抑制试验。将MDA-MB-231(2LMP)乳癌细胞仅暴露在TRAIL中得到2.2ng/ml的IC₅₀(图4A)。TRAIL和SH-164的结合显著地降低TRAIL的IC₅₀，其中在100nM SH-164存在下TRAIL具有0.008ng/ml的IC₅₀。采用MDA-MB-453乳癌细胞看到类似的结果，其中单独的TRAIL具有>1000ng/ml的IC₅₀，TRAIL和100nM SH-164的结合具有16ng/ml的IC₅₀(图4B)。当使用PC-3人前列腺癌细胞时，单独的TRAIL具有>300ng/ml的IC₅₀，而在100nMSH-164存在下TRAIL具有2ng/ml的IC₅₀(图4C)。SH-122具有类似但是更低效力的效果，其中TRAIL和1000nM SH-122的结合具有30ng/ml的IC₅₀。相反，500nM SH-149不降低TRAIL的IC₅₀。

[0246]还试验SH-164提高化疗剂顺铂和米托蒽醌的生长抑制效果的能力。当对MDA-MB-231(2LMP)人乳癌细胞试验时，在100nM的浓度下SH-164使该细胞对由两种试剂引起的生长抑制敏感(图5)。这些数据表明二价Smac模拟物能够使细胞对各种癌症治疗剂的生长抑制效果敏感。

实施例17

细胞凋亡试验

[0247]使用细胞凋亡检测试剂盒(BioVision Research Products，Mountain View，CA)根据厂家的规程进行细胞凋亡分析。简要地，用Smac模拟物处理细胞12小时，采集并用冰冷PBS洗涤。在室温下在黑暗中用膜联蛋白V-FITC和碘化丙啶(P.I.)染色细胞15分钟并立即通过FACS calibur流式细胞仪(Becton Dickinson，Erembodegem，Belgium)分析。被染色的细胞膜联蛋白V(+)和P.I.(-)认为是早期细胞凋亡细胞。染色细胞膜联蛋白V(+)和P.I.(+)认为是晚期细胞凋亡细胞并且染色细胞膜联蛋白V(-)和P.I.(+)认为是坏死细胞(图6)。

实施例18

对XIAP的结合亲合性和在细胞生长抑制中的活性

[0248]Smac模拟物对XIAP的结合亲合性和在细胞生长抑制中的活性在表5中给出。

表5

 

化合物	对XIAP的结合IC50值[nM]	在WST试验中的IC50值(nM)(MDA-MB-231)	在WST-试验SK-OV-3中的IC50值(nM)
				SH-142	<50	<100
SH-143	<50
				SH-146	<50
SH-153	<10	<1000
				SH-155	<10	<100	<100

 

SH-156	<10	<1000	<1000
				SH-158	<10	<1000	<1000
SH-159	<10	<1000	<1000
				SH-164	<10	<10	<10
SH-165	<10	<1000	<1000
				SH-166	<10	<1000	<1000
SH-167	<10	<10	<10
				SH-172	<10	<1000
SH-173	>10,000	>10000	>10000
				SH-175	<50	<100	<100
SH-176	<10	<100
				SH-177	<10	<100
SH-178	<100	<10,000
				SH-179	<100	<10000
SH-180	<100	<1000	<1000
				SH-181	<100	<10000
SH-182	<100	<10	<10
				SH-183	<100	<10,000
SH-184	<100	<10	<100
				SH-185	<50	<10	<10
SH-186	<50	<10	<10
				SH-187	>10000	>10000	>10000
SH-188	<100	<100	<100
				SH-189	<100	<100	<100
SH-190	<100	<10	<10
				SH-191	<100	<100	<100
SH-198	<100	<10	<10
				SH-199	<10	<10	<10
SH200	<10	<100	<100

 

SH-201	>10,000	>1000	>1000
				SH-202	<100	<10	<10
SH-206	<1000	<1000	<1000
				YP-317	<100	<100
YP-343	<100	<100
				YP-381	<10	<10	<10
YP-383	<10	<10	<10
				YP-385	<10	<10	<10
SM-410	<100	<500	<500

[0249]上面已经完整地描述了本发明，本领域技术人员将能够理解，可以在广泛和等同条件、配方和其它参数的范围内实施本发明，而不会影响本发明的范围或其任何实施方案。将本文引述的所有专利、专利申请和出版物的全部内容完整地引入本文作为参考。

Claims (63)

1.具有以下通式II的化合物或其药学上可接受的盐或前药：

其中：

A₁和A₁′独立地选自氢、任选取代的烷基和Z；

A₂和A₂′独立地选自氢、任选取代的烷基和COR¹，其中当V是O时不存在A₂和当V′是O时不存在A₂′；

V和V′独立地选自N、CH和O；

W和W′独立地选自CH和N；

X和X′独立地是任选取代的C_1-3烷基；

Y和Y′独立地选自CONR¹，C(O)O，(CR¹R²)_1-3，其中一个或多个CH₂基团可以被O、S或NR¹替代，任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；

D和D′独立地选自任选取代的亚烷基和(CR¹R²)_n-R^5a-(CR³R⁴)_m；

J和J′独立地选自任选取代的亚烷基和(CR¹R²)_p-R^5b-(CR³R⁴)_q；

T和T′独立地选自C＝O、C＝S、C＝NR¹、S、O、NR¹、CR¹R²、任选取代的碳环、任选取代的杂环、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；

U和U′独立地选自氢、NR¹R²、OR¹、SR¹、任选取代的烷基和任选取代的芳基；

n、m、p和q独立地是0-5；

每个R¹选自氢、任选取代的烷基、任选取代的碳环、任选取代的杂环、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基和Z；

每个R²、R³和R⁴独立地选自氢、任选取代的烷基、任选取代的碳环、任选取代的杂环、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；

R^5a和R^5b独立地选自C＝O、C＝S、C＝NR¹、S、O、NR¹和CR¹R²；和

Z是以共价键方式将A₁、Y、D、J、T和U之一与A₁′、Y′、D′、J′、T′和U′之一连接的连接基。

2.权利要求1的化合物，其中z连接D与U′。

3.权利要求1的化合物，其中Z连接D与D′。

4.权利要求1的化合物，其中Z连接U与U′。

5.权利要求1的化合物，其中n和m独立地选自0-4，满足n+m是3或4。

6.权利要求1的化合物，其中p和q独立地选自0和1，满足p+q是1。

7.权利要求1的化合物，其中n和m独立地选自0-4，满足n+m是3或4，并且p和q独立地选自0和1，满足p+q是1。

8.权利要求7的化合物，其中T是C＝O。

9.权利要求8的化合物，其中U是NR¹R²。

10.权利要求9的化合物，其中R^5b是CH₂。

11.权利要求1的化合物，其中Y是CONH，W是CH并且V是N。

12.权利要求1的化合物，选自：

或其游离碱或其另一种药学上可接受的盐。

13.具有以下通式XIII的化合物：

其中：

D′′是(CR¹R²)_n-R^5c-(CR³R⁴)_m；

J选自任选取代的亚烷基和(CR¹R²)_p-R^5b-(CR³R⁴)_q；

T选自C＝O、C＝S、C＝NR¹、S、O、NR¹、CR¹R²、任选取代的碳环、任选取代的杂环、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；

U选自氢、NR¹R²、OR¹、SR¹、任选取代的烷基和任选取代的芳基；

n、m、p和q独立地选自0-5；

每个R¹、R²、R³和R⁴独立地选自氢、任选取代的烷基、任选取代的碳环、任选取代的杂环、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；

R^5c选自C＝O、C＝S、C＝NR¹、S、O、NR¹、CR^1aR^2a、NCOR⁸和NCO₂R⁸；

R^1a和R^2a独立地选自氢、羟基、叠氮基、任选取代的烷基、任选取代的碳环、任选取代的杂环、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；

R^5b选自O、S、NR¹、CR¹R²、C＝O、C＝S和C＝NR¹；

R⁷选自氢、CO₂R^7a和COCH(R^7b)N(R^7c)CO₂R^7a；

R^7a选自任选取代的烷基、任选取代的碳环、任选取代的杂环、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；

R^7b是任选取代的C_1-3烷基；

R^7c选自氢和任选取代的烷基；和

R⁸选自任选取代的烷基、任选取代的碳环、任选取代的杂环、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基。

14.权利要求13的化合物，其中R^7a是叔丁基。

15.权利要求13的化合物，其中n是1，m是2，R^5c是NCO₂R⁸且R⁸是苄基。

16.权利要求13的化合物，其中R^5c是CR^1aR^2a，R^1a选自羟基、叠氮基和任选取代的杂芳基，且R^2a是氢。

17.权利要求13的化合物，选自：

和

18.药物组合物，包含权利要求1的化合物和药学上可接受的载体。

19.诱导细胞中细胞凋亡的方法，包括使所述的细胞接触权利要求1的化合物。

20.使细胞对细胞凋亡诱导物敏感的方法，包括使所述的细胞接触权利要求1的化合物。

21.权利要求20的方法，进一步包括使该细胞与细胞凋亡诱导物接触。

22.权利要求21的方法，其中所述细胞凋亡诱导物是化疗剂。

23.权利要求21的方法，其中所述细胞凋亡诱导物是辐射。

24.权利要求21的方法，其中所述细胞凋亡诱导物是肿瘤坏死因子(TNF)、TNF相关配体或TRAIL-R1或TRAIL-R2的激动剂。

25.权利要求24的方法，其中所述TNF相关配体选自TRAMP配体、Fas/CD95配体、TNFR-1配体和TRAIL。

26.权利要求25的方法，其中所述TNF相关配体是TRAIL。

27.权利要求25的方法，其中所述TRAIL-R1或TRAIL-R2的激动剂是抗体。

28.治疗、改善或预防对动物中细胞凋亡的诱导有反应性的疾病的方法，包括对所述动物施用治疗有效量的权利要求1的化合物。

29.权利要求28的方法，进一步包括施用细胞凋亡诱导物。

30.权利要求28的方法，其中所述细胞凋亡诱导物是化疗剂。

31.权利要求29的方法，其中所述细胞凋亡诱导物是辐射。

32.权利要求29的方法，其中所述细胞凋亡诱导物是TNF、TNF相关配体或TRAIL-R1或TRAIL-R2的激动剂。

33.权利要求32的方法，其中所述TNF相关配体选自TRAMP配体、Fas/CD95配体、TNFR-1配体和TRAIL。

34.权利要求33的方法，其中所述TNF相关配体是TRAIL。

35.权利要求32的方法，其中所述TRAIL-R1或TRAIL-R2的激动剂是抗体。

36.权利要求28的方法，其中所述对细胞凋亡的诱导有反应性的疾病为过度增殖性疾病。

37.权利要求36的方法，其中所述过度增殖性疾病是癌症。

38.权利要求28的方法，其中在所述的细胞凋亡诱导物之前施用权利要求1的所述化合物。

39.权利要求28的方法，其中在所述的细胞凋亡诱导物之后施用权利要求1的所述化合物。

40.权利要求28的方法，其中与所述的细胞凋亡诱导物同时施用权利要求1的所述化合物。

41.治疗、改善或预防动物中过度增殖性疾病的方法，包括对所述动物施用治疗有效量的权利要求1的化合物。

42.权利要求41的方法，进一步包括施用细胞凋亡诱导物。

43.权利要求42的方法，其中所述细胞凋亡诱导物是化疗剂。

44.权利要求42的方法，其中所述细胞凋亡诱导物是辐射。

45.权利要求42的方法，其中所述细胞凋亡诱导物是TNF、TNF相关配体或TRAIL-R1或TRAIL-R2的激动剂。

46.权利要求45的方法，其中所述TNF相关配体选自TRAMP配体、Fas/CD95配体、TNFR-1配体和TRAIL。

47.权利要求46的方法，其中所述TNF相关配体是TRAIL。

48.权利要求45的方法，其中所述TRAIL-R1或TRAIL-R2的激动剂是抗体。

49.权利要求41的方法，其中所述过度增殖性疾病是癌症。

50.权利要求49的方法，其中在所述的细胞凋亡诱导物之前施用权利要求1的所述化合物。

51.权利要求49的方法，其中在所述的细胞凋亡诱导物之后施用权利要求1的所述化合物。

52.权利要求49的方法，其中与所述的细胞凋亡诱导物同时施用权利要求1的所述化合物。

53.包含权利要求1的化合物和对动物施用所述化合物的说明书的试剂盒。

54.权利要求53的试剂盒，还包含细胞凋亡诱导物。

55.权利要求54的试剂盒，其中所述细胞凋亡诱导物是化疗剂。

56.权利要求55的试剂盒，其中所述细胞凋亡诱导物是TNF、TNF相关配体或TRAIL-R1或TRAIL-R2的激动剂。

57.权利要求56的试剂盒，其中所述TNF相关配体选自TRAMP配体、Fas/CD95配体、TNFR-1配体和TRAIL。

58.权利要求57的试剂盒，其中所述TNF相关配体是TRAIL。

59.权利要求56的试剂盒，其中所述TRAIL-R1或TRAIL-R2的激动剂是抗体。

60.权利要求53的试剂盒，其中所述说明书为对患有过度增殖性疾病的动物施用所述化合物的说明书。

61.权利要求60的试剂盒，其中所述过度增殖性疾病是癌症。

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