CN112218859A - 蛋白水解调节剂及相关使用方法 - Google Patents

Abstract

本公开涉及双官能化合物，其可用作Kirsten大鼠肉瘤蛋白(靶蛋白)的调节剂。特别地，本公开涉及双官能化合物，其一端含有与各自的E3泛素连接酶结合的Von Hippel‑Lindau、cereblon、凋亡蛋白抑制剂或小鼠双微体2同源物配体，并且另一端含有与靶蛋白结合的部分，使得将靶蛋白置于泛素连接酶附近以实现靶蛋白的降解(和抑制)。本公开表现出与靶蛋白的降解/抑制有关的广泛的药理活性。用本发明的化合物和组合物治疗或预防由靶蛋白的聚集、积聚和/或过度活化引起的疾病或病症。

Description

蛋白水解调节剂及相关使用方法

相关申请的交叉引用

本公开要求于2018年4月4日提交的题为“MODULATORS OF PROTEOLYSIS ANDASSOCIATED METHODS OF USE”的美国临时申请号62/652,676的优先权，并且出于所有目的将其内容通过引用整体并入本文。

通过引用并入

2016年8月5日提交的公开为申请公开号2017/0065719的美国专利申请序列号15/230,354，和2016年7月11日提交的公开为美国专利申请公开号2017/0008904的美国专利申请15/206,497；和2016年7月13日提交的公开为美国专利申请公开号2017/0037004的美国专利申请15/209,648；和2017年10月11日提交的公开为美国专利申请公开号2018/0099940的美国专利申请序列号15/730,728；和2015年4月14日提交的公开为美国专利申请公开号2015/0291562的美国专利申请序列号14/686,640；和2015年7月6日提交的公开为美国专利申请公开号2016/0058872的美国专利申请序列号14/792,414；和2014年7月11日提交的公开为美国专利申请公开号2014/0356322的美国专利申请序列号14/371,956；和2016年3月18日提交的公开为美国专利申请公开号2016/0272639的美国专利申请序列号15/074,820；和2018年1月31日提交的公开为美国专利申请公开号2018/0215731A1的美国临时专利申请序列号15/885,671；和2016年3月18日提交的公开为国际专利申请公开号WO2016/149668的国际专利申请号PCT/US2016/023258通过引用整体并入本文。此外，本文引用的所有参考文献均通过引用整体并入本文。

技术领域

本说明书提供包含靶蛋白结合部分和E3泛素连接酶结合部分的双官能化合物，和相关使用方法。双官能化合物可用作靶向泛素化的调节剂，尤其是对于Kirsten ras肉瘤蛋白(KRas或KRAS)，诸如突变型KRas或功能获得性KRas，所述双官能化合物由根据本公开的双官能化合物降解和/或以其他方式抑制。

背景技术

大多数小分子药物在紧密且明确的口袋中结合酶或受体。另一方面，众所周知，由于大的接触表面和所涉及的浅槽或平坦界面，使用小分子难以靶向蛋白质-蛋白质相互作用。E3泛素连接酶(其中数百种在人类中是已知的)赋予泛素化底物特异性，因此由于它们对某些蛋白质底物的特异性，使它们成为比一般蛋白酶体抑制剂更有吸引力的治疗靶标。已经证明E3连接酶的配体的开发具有挑战性，部分原因在于它们必须破坏蛋白质-蛋白质相互作用。然而，最近的发展提供了与这些连接酶结合的特异性配体。例如，自从发现了Nutlins——首个小分子E3连接酶抑制剂，已经报道了靶向E3连接酶的另外化合物，但是该领域仍未得到充分发展。例如，自从发现了Nutlins——首个小分子E3连接酶小鼠双微体2同源物(MDM2)抑制剂，已经报道了靶向MDM2(即，人双微体2或HDM2)E3连接酶的另外化合物(J.Di,et al.Current Cancer Drug Targets(2011),11(8),987-994)。

一种具有令人兴奋的治疗潜力的E3连接酶是von Hippel-Lindau(VHL)肿瘤抑制物——E3连接酶复合物VCB的底物识别亚基，其也由elongins B和C、Cul2和Rbx1组成。VHL的主要底物是低氧诱导因子1α(HIF-1α)——一种上调基因的转录因子，诸如对低氧水平应答的促血管生成生长因子VEGF和红细胞诱导细胞因子红细胞生成素。产生了Von HippelLindau(VHL)的针对E3连接酶的底物识别亚基的首个小分子配体，且获得了晶体结构，这证实了化合物模拟转录因子HIF-1α(VHL的主要底物)的结合模式。

Cereblon是一种在人体中由CRBN基因编码的蛋白质。CRBN直向同源物从植物到人类是高度保守的，这强调了其生理学重要性。Cereblon与损伤的DNA结合蛋白1(DDB1)、Cullin-4A(CUL4A)和Cullin 1调节物(ROC1)形成E3泛素连接酶复合物。这一复合物泛素化许多其他蛋白质。靶蛋白的cereblon泛素化通过尚未完全阐明的机制导致成纤维细胞生长因子8(FGF8)和成纤维细胞生长因子10(FGF10)的水平增加。FGF8反过来调节许多发育过程，诸如肢体和听泡形成。最终的结果是，这一泛素连接酶复合物对于胚胎中的肢体生长是重要的。在没有cereblon的情况下，DDB1与充当DNA损伤结合蛋白的DDB2形成复合物。

凋亡蛋白(IAP)抑制剂是涉及抑制凋亡即细胞死亡的蛋白家族。人IAP家族包括8个成员，并且许多其他生物体含有IAP同源物。IAP含有识别底物并促进它们泛素化的E3连接酶特异性结构域和杆状病毒IAP重复序列(BIR)结构域。IAP促进泛素化，并能直接结合和抑制半胱天冬酶。半胱天冬酶是实现凋亡的蛋白酶(例如，半胱天冬酶-3、半胱天冬酶-7和半胱天冬酶-9)。因此，IAP通过结合半胱天冬酶抑制细胞死亡。然而，促凋亡刺激物可导致释放线粒体蛋白DIABLO(也称为第二种半胱天冬酶或SMAC的线粒体来源的激活剂)和HTRA2(也称为Omi)。DIABLO和HTRA2的结合似乎阻断IAP活性。

SMAC与基本上所有已知的IAP相互作用，包括XIAP、c-IAP1、c-IAP2、NIL-IAP、Bruce和生存素。成熟SMAC的前四个氨基酸(AVPI)与IAP的一部分结合，这被认为对于阻断IAP的抗凋亡作用是必需的。

双官能化合物，诸如美国专利申请公开2015-0291562和2014-0356322(通过引用并入本文)描述的那些，作用是将内源蛋白募集到E3泛素连接酶以进行降解。特别地，这些公开描述了双官能或蛋白水解靶向嵌合体(PROTAC)化合物，其可用作多种多肽和其他蛋白质的靶向泛素化的调节剂，所述多肽和其他蛋白质之后被双官能化合物降解和/或以其他方式抑制。

Kirsten大鼠肉瘤(KRAS)基因是编码KRas的致癌基因，KRas是一种小GTP酶信号转导蛋白。Ras蛋白与质膜联合，并充当将细胞外信号转导为细胞内反应的开关，从而调节例如细胞分裂。KRas基因的许多激活或功能获得性突变是已知的，并且事实上，KRas是癌症中最频繁突变的基因。功能获得性KRas突变存在于大约30％的人类癌症中，包括例如胰腺癌(＞80％)、结肠癌(大约40-50％)、肺癌(大约30-50％)、非小细胞肺癌、胆道恶性肿瘤、子宫内膜癌、宫颈癌、膀胱癌、肝癌、髓样白血病和乳腺癌。这些活化突变损害KRas在活性和无活性状态之间转换的能力。已经确定突变型KRas在各种癌症的起始、维持、进展和转移中起关键作用，并且突变经常与预后不良和对化疗和生物疗法包括例如靶向表皮生长因子受体的疗法的抗性增加相关。然而，尽管其在癌症中起关键作用且具有高发病率，但是缺乏直接靶向这一致癌基因的有效疗法，使得其被认为“无成药性”。

因此，本领域中持续需要有效治疗与KRas的过度表达、聚集和/或过度活化(例如，活性KRas的聚集)有关的疾病，诸如功能获得性KRas突变体(即，具有功能获得性突变的KRas)。然而，非特异性作用以及无法靶向和调节突变型KRas仍然是开发有效治疗的障碍。因此，靶向KRas并利用或增强VHL、cereblon、MDM2和IAP底物特异性的小分子治疗剂将非常有用。

发明内容

本公开描述了具有将内源蛋白募集到E3泛素连接酶以进行降解的功能的双官能化合物及其使用方法。特别地，本公开提供了双官能或蛋白水解靶向嵌合体(PROTAC)化合物，其可用作多种多肽和其他蛋白质的靶向泛素化的调节剂，所述多肽和其他蛋白质之后由本文所述的双官能化合物降解和/或以其他方式抑制。本文提供的化合物的优点在于，与实际上来自任何蛋白质类别或家族的靶向多肽的降解/抑制一致，广泛的药理活性是可能的。另外，说明书提供了使用有效量的本文所述的化合物来治疗或改善疾病状况的方法，所述疾病状况是诸如癌症，例如胰腺癌、结肠癌、结直肠癌、肺癌、非小细胞肺癌、胆道恶性肿瘤、子宫内膜癌、宫颈癌、膀胱癌、肝癌、髓样白血病和乳腺癌。

因此，一方面，本公开提供了双官能或PROTAC化合物，其包含E3泛素连接酶结合部分(即，E3泛素连接酶的配体或“ULM”基团)和结合靶蛋白的部分(即，蛋白质/多肽靶向配体或“PTM”基团)，使得将靶蛋白/多肽(例如，Kirsten大鼠肉瘤蛋白(KRas或KRAS)和/或突变型KRas，诸如KRas^G12C)放置在泛素连接酶附近，以影响该蛋白质的降解(和抑制)。在一个优选的实施例中，ULM(泛素化连接酶调节剂)可以是Von Hippel-Lindau E3泛素连接酶(VHL)结合部分(VLM)或cereblon E3泛素连接酶结合部分(CLM)或小鼠双微体2同源物(MDM2)E3泛素连接酶结合部分(MLM)或IAP E3泛素连接酶结合部分(即“ILM”)。例如，双官能化合物的结构可描述为：

本文所示的PTM和ULM部分(例如，VLM、CLM、MLM或ILM)的各自位置以及它们的数量仅作为示例提供，并且不意图以任何方式限制化合物。如本领域技术人员将理解的，可以合成本文所述的双官能化合物，使得各个官能部分的数量和位置可以根据需要变化。

在某些实施例中，双官能化合物还包含化学接头(“L”)。在本示例中，双官能化合物的结构可描述为：

其中PTM是蛋白质/多肽靶向部分，L是接头，例如，PTM与ULM偶联的键或化学基团，并且ULM是IAP E3泛素连接酶结合部分(ILM)或Von Hippel-Lindau E3泛素连接酶(VHL)结合部分(VLM)或cereblon E3泛素连接酶结合部分(CLM)或小鼠双微体2同源物(MDM2)E3泛素连接酶结合部分(MLM)。

例如，双官能化合物的结构可描述为：

其中：PTM是蛋白质/多肽靶向部分；“L”是偶联PTM和VLM、CLM、MLM、ILM或其组合中的至少一个的接头(例如，键或化学接头基团)；VLM是结合VHL E3连接酶的Von Hippel-Lindau E3泛素连接酶结合部分；CLM是结合cereblon的cereblon E3泛素连接酶结合部分；MLM是结合MDM2的MDM2 E3泛素连接酶结合部分；并且ILM是结合IAP的IAP结合部分。

在某些优选的实施例中，ILM是AVPI四肽片段。这样，在某些另外的实施例中，双官能化合物的ILM分别包含氨基酸丙氨酸(A)、缬氨酸(V)、脯氨酸(P)和异亮氨酸(I)或其非天然模拟物。在另外的实施例中，AVPI四肽片段的氨基酸通过酰胺键(即，–C(O)NH–或–NHC(O)–)彼此连接。

在某些实施例中，本文所述的化合物包含多个独立选择的ULM、多个PTM、多个化学接头或其组合。

在某些实施例中，ILM包含化学部分，诸如本文所述的那些。

在另外的实施例中，VLM可以是羟脯氨酸或其衍生物。此外，其他预期的VLM包括在美国专利申请公开号2014/03022523中，如上所述，其整体并入本文。

在一个实施例中，CLM包含衍生自酰亚胺、硫代酰亚胺、酰胺或硫代酰胺的化学基团。在一个特定的实施例中，化学基团是邻苯二甲酰亚氨基或其类似物或衍生物。在某些实施例中，CLM为沙利度胺、来那度胺、泊马度胺，其类似物、其电子等排体或其衍生物。其他预期的CLM描述于美国专利申请公开号2015/0291562，其整体并入本文。

在某些实施例中，MLM可以是Nutlin或其衍生物。此外，其他预期的MLM包括在2016年7月11日提交的公开为美国专利申请公开号2017/0008904的美国专利申请15/206,497中，如上所讨论的，其整体并入本文。在某些另外的实施例中，双官能化合物的MLM包含化学部分，诸如取代的咪唑啉、取代的螺吲哚酮、取代的吡咯烷、取代的哌啶酮、取代的吗啉酮、取代的吡咯并嘧啶、取代的咪唑并吡啶、取代的噻唑并咪唑啉、取代的吡咯并吡咯烷酮和取代的异喹啉酮。

在另外的实施例中，MLM包括上面提及的具有位置为顺式或反式构型的相邻双芳基取代的核心结构。

在某些实施例中，“L”是键。在另外的实施例中，接头“L”是线性非氢原子数在1至20范围内的连接体。连接体“L”可以含有但不限于官能团，诸如醚、酰胺、烷烃、烯烃、炔烃、酮、羟基、羧酸、硫醚、亚砜和砜。接头可以含有芳族、杂芳族、环状、双环和三环部分。接头中可以包括卤素取代，如Cl、F、Br和I。在氟取代的情况下，可以包括单个或多个氟。

在某些实施例中，VLM是反式-3-羟基脯氨酸的衍生物，其中反式-3-羟基脯氨酸中的氮和羧酸均官能化为酰胺。

在某些实施例中，CLM为哌啶-2,6-二酮的衍生物，其中哌啶-2,6-二酮可在3-位被取代，且3-取代可为以C-N键或C-C键连接的双环杂芳族化合物。CLM的示例可以是但不限于：泊马度胺、来那度胺和沙利度胺及其衍生物。

在另一方面，本说明书提供了治疗组合物，其包含有效量的本文所述的化合物或其盐形式以及药学上可接受的载体。所述治疗性组合物调节患者或受试者(例如，动物诸如人)中蛋白质的降解和/或抑制，并且可以用于治疗或改善通过降解/抑制的蛋白质调节的疾病状态或病况。在某些实施例中，本文所述的治疗组合物可用于实现目的蛋白的降解，以治疗或改善疾病，例如癌症(诸如胰腺癌、结肠癌、结直肠癌、肺癌或非小细胞肺癌)。在另一方面，本公开提供了一种在细胞中泛素化/降解靶蛋白的方法。在某些实施例中，所述方法包含施用如本文所述的双官能化合物，其包括ILM和PTM、PTM和VLM，或PTM和CLM，或PTM和MLM，优选通过接头部分连接，在其他方面如本文所述，其中VLM/ILM/CLM/MLM通过接头与PTM偶联，以靶向与PTM结合的蛋白质进行降解。类似地，PTM可以通过接头与VLM或CLM或MLM或ILM偶联，以靶向蛋白质或多肽进行降解。当将靶蛋白置于E3泛素连接酶附近时，靶蛋白将发生降解，从而降解/抑制靶蛋白作用并控制蛋白水平。本公开提供的对蛋白质水平的控制提供了疾病状态或病况的治疗，所述疾病状态或病况通过降低患者细胞中靶蛋白的水平来通过该蛋白质进行调节。

在另一方面，本说明书提供了用于在受试者或患者(例如，动物诸如人)中治疗或改善其疾病、病症或症状的方法，其包含向需要其的受试者施用组合物，所述组合物包含有效量例如治疗有效量的本文所述的化合物或其盐形式，以及药学上可接受的载体，其中所述组合物可有效治疗或改善受试者的疾病、病症或症状。

在另一方面，本说明书提供了使用根据本公开的化合物在生物系统中鉴定目标蛋白的降解作用的方法。

前面的通用应用领域仅通过示例的方式给出，并且不旨在限制本公开和所附权利要求的范围。根据本权利要求、说明书和示例，本领域的普通技术人员将认识到与本公开的组合物、方法和过程有关的其他目的和优点。例如，可以以多种组合来利用本公开的各个方面和实施例，本说明书明确地预期了所有这些组合。这些附加方面和实施例明确地包括在本公开的范围内。通过引用并入本文所引用的公开和其他材料以阐明本公开的背景，并且在特定情况下，以提供关于实践的附加细节。

附图说明

并入说明书中并形成说明书一部分的附图示出了本公开的几个实施例，并且与说明书一起用于解释本公开的原理。附图仅出于说明本公开的实施例的目的，并且不应被解释为限制本公开。通过以下详述以及示出本公开的示例性实施例的附图，本公开的其他目的、特征和优点将变得显而易见，其中：

图1A和图1B.PROTAC功能的一般原理图。(图1A)示例性的PROTAC包含蛋白质靶向部分(PTM；深色阴影矩形)、泛素连接酶结合部分(ULM；浅色阴影三角形)以及任选的将PTM偶联或束缚到ULM的接头部分(L；黑色线)。(图1B)示出了如本文所述的PROTAC的功能用途。简而言之，ULM识别并结合特定的E3泛素连接酶，并且PTM结合并募集靶蛋白，使它与E3泛素连接酶非常接近。通常，E3泛素连接酶与E2泛素结合蛋白复合，并且单独或通过E2蛋白催化泛素(黑色圆)通过异肽键与靶蛋白上的赖氨酸结合。然后，将多泛素化蛋白(最右边)通过细胞的蛋白酶体机制靶向降解。

图2A和图2B.图2A是Western印迹，显示了有效的降解物，示例性化合物399。图2B是Western印迹，显示了效力较小的降解物，示例性化合物432。如凝胶迁移所见，两种化合物共价修饰KRas^G12C。

具体实施方式

以下提供了详细描述，以帮助本领域技术人员实施本公开。在不脱离本公开的精神或范围的情况下，本领域普通技术人员可以对本文描述的实施例进行修改和变化。本文提及的所有公开、专利申请、专利、附图和其他参考文献均明确地整体通过引用并入。

当前描述的组合物和方法令人惊讶和出乎意料地发现：一旦将E3泛素连接酶蛋白(例如，凋亡蛋白抑制剂(IAP)、Von Hippel-Lindau E3泛素连接酶(VHL)、cereblon E3泛素连接酶或小鼠双微体2同源物(MDM2)E3泛素连接酶)与靶蛋白通过结合E3泛素连接酶蛋白和靶蛋白的双官能或嵌合构建体邻近放置，就会使靶蛋白泛素化。因此，本公开提供了这样的化合物和组合物，其包含与蛋白质靶结合部分(“PTM”)偶联的E3泛素连接酶结合部分(“ULM”)，导致所选靶蛋白的泛素化，从而导致蛋白酶体降解靶蛋白(见图1A和图1B)。本公开还提供了一种组合物文库及其用途。

在某些方面，本公开提供了包含能够与泛素连接酶诸如IAP、VHL、MDM2或cereblon结合的配体的化合物，所述配体例如是小分子配体(即，分子量低于2,000、1,000、500或200道尔顿)。所述化合物还包含能够结合靶蛋白的部分，方式是将靶蛋白放置在泛素连接酶附近以实现该蛋白的降解(和/或抑制)。除上述以外，小分子可以表示该分子是非肽基的，即通常不认为其是肽，例如包含少于4、3或2个氨基酸。根据本说明书，PTM、ULM或PROTAC分子可以是小分子。

除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。本说明书中使用的术语仅用于描述特定实施例，并且不旨在限制本公开。

在提供值的范围的情况下，应理解，除非上下文另有明确规定，否则本公开包含每个中间值至下限单位的十分之一(诸如在含有多个碳原子的基团的情况下，在这种情况下提供每个落入该范围内的碳原子数)，在该范围的上限和下限与该范围内的任何其他所述或中间值之间。这些较小范围的上限和下限可以独立地包括在也涵盖在本公开中的较小范围内，而且受所述范围内的任何明确排除的限制。在所述范围包括一个或两个限制的情况下，不包括两个限制中的一个的范围也包括在本公开中。

以下术语用于描述本公开。在本文中没有具体定义术语的情况下，本领域普通技术人员将该术语赋予本领域公认的含义，将该术语在上下文中应用于描述本公开。

本文和所附权利要求中使用的冠词“一”和“一个”在本文中用于指代该冠词的语法对象中的一个或多于一个(即，至少一个)，除非上下文另有明确说明。举例来说，“元素”是指一个元素或多于一个元素。

在说明书和权利要求书中使用的短语“和/或”应该理解为是指这样结合的元素中的“一个或两个”，即，在某些情况下共同存在而在其他情况下不连续存在的元素。用“和/或”列出的多个元素应以相同的方式解释，即，这样连接的元素中的“一个或多个”。除了由“和/或”从句明确标识的元素之外，还可以任选地存在其他元素，无论与那些具体标识的元素相关还是无关。因此，作为一个非限制性示例，在一个实施例中，当与开放式语言诸如“包含”结合使用时，对“A和/或B”的引用可以仅指A(任选地包括除B之外的元素)；在另一个实施例中，仅指B(任选地包括除A之外的元素)；在又一个实施例中，指A和B(任选地包括其他元素)；等等。

如在本文的说明书和权利要求中所使用的，“或”应被理解为具有与以上定义的“和/或”相同的含义。例如，当将列表中的项目分开时，“或”或“和/或”应解释为包含性的，即，包含许多元素或元素列表中的至少一个，也包含许多元素或元素列表中的多于一个，以及任选的其他未列出的项目。仅明确指出相反的术语，诸如“仅一个”或“恰好一个”，或当在权利要求书中使用时，“由……组成”将指仅包括许多元素或元素列表中的一个元素。通常，本文中使用的术语“或”在排他性术语(例如“任一”、“一个”、“仅一个”或“恰好一个”)之前时应仅解释为表示专一的替代方案(即“一个或另一个，但不是两个”)。

在权利要求以及以上说明书中，所有过渡性短语，诸如“包含”、“包括”、“携带”、“具有”、“含有”、“涉及”、“持有”、“由……构成”等应理解为开放式的，即，意指包括但不限于。仅过渡性短语“由……组成”和“基本上由……组成”应分别是封闭式或半封闭式过渡性短语，如United States Patent Office Manual of Patent Examining Procedures,Section 2111.03中所列。

如本文在说明书和权利要求中所使用的，关于一个或多个元素的列表的短语“至少一个”应理解为是指选自元素列表中的任何一个或多个元素的至少一个元素，但不必须包括元素列表中具体列出的每一个元素中的至少一个，并且不排除元素列表中元素的任何组合。这一定义还允许除了短语“至少一个”所指代的元素列表中具体标识的元素之外的元素可以任选地存在，无论与那些具体标识的元素有关还是无关。因此，作为非限制性示例，在一个实施例中，“A和B中的至少一个”(或等效地，“A或B中的至少一个”，或等效地“A和/或B中的至少一个”)可以指代至少一个，任选地包括多于一个A，不存在B(并且任选地包括除B以外的元素)；在另一个实施例中，指代至少一个，任选地包括多于一个B，不存在A(并且任选地包括除A以外的元素)；在又一个实施例中，指代至少一个，任选地包括多于一个A，以及至少一个，任选地包括多于一个B(以及任选地包括其他元素)；等等。

还应该理解的是，在本文描述的包括多于一个步骤或动作的某些方法中，所述方法的步骤或动作的顺序不必限于列举方法的步骤或动作的顺序，除非上下文另有说明。

术语“共同施用”和“共同地施用”或“联合疗法”是指同时施用(同时施用两种或更多种治疗剂)和时变施用(在与其他一种或多种治疗剂的施用时间不同的时间施用一种或多种治疗剂)，只要治疗剂在某种程度上同时存在于患者中，优选以有效量同时存在。在某些优选方面，本文所述的一种或多种本发明的化合物与至少一种另外的生物活性剂，尤其包括抗癌剂，诸如靶向表皮生长因子受体的化学疗法或生物疗法(例如，吉非替尼、厄洛替尼、纳拉替尼、拉帕替尼、西妥昔单抗、凡德他尼、耐昔妥珠单抗、奥西替尼或其组合中的至少一个)共同施用。在特别优选的方面，化合物的共同施用导致协同活性和/或疗法，包括抗癌活性。

除非另有说明，否则本文所用的术语“化合物”是指本文所公开的任何具体化合物，并且在上下文中包括互变异构体、区域异构体、几何异构体和(适用情况下)立体异构体，包括其光学异构体(对映异构体)和其他立体异构体(非对映异构体)，以及(适用情况下)药学上可接受的盐和衍生物，包括其前药和/或氘代形式。预期的氘化小分子是其中药物分子中包含的一个或多个氢原子已被氘替代的那些。

在其用途的在上下文中，术语化合物通常是指单一化合物，但也可以包括其他化合物，诸如立体异构体、区域异构体和/或旋光异构体(包括外消旋混合物)以及所公开化合物的特定对映异构体或对映异构体富集的混合物。在上下文中，所述术语还指已被修饰以促进化合物施用和递送至活性部位的化合物的前药形式。注意，在描述本发明的化合物时，描述了许多取代基和与其相关的变量等。本领域普通技术人员应理解，本文描述的分子是如下文一般描述的稳定化合物。当显示键时，在所示化合物和价键相互作用的众所周知的规则的背景下，双键和单键均被表示或理解。

术语“泛素连接酶”是指促进泛素向特定底物蛋白转移的蛋白质家族，靶向底物蛋白进行降解。例如，IAP是单独或与E2泛素结合酶结合的E3泛素连接酶蛋白，其导致泛素与靶蛋白上的赖氨酸结合，并随后靶向特定蛋白底物以被蛋白酶体降解。因此，单独的或与E2泛素结合酶复合的E3泛素连接酶负责将泛素转移至靶蛋白。通常，泛素连接酶参与多聚泛素化，使得第二泛素与第一泛素连接；第三泛素与第二泛素连接，依此类推。多聚泛素化标记蛋白质以被蛋白酶体降解。然而，存在一些限于单泛素化的泛素化事件，其中泛素连接酶仅将单个泛素添加到底物分子上。单泛素化的蛋白质不靶向蛋白酶体进行降解，而是可以改变其细胞位置或功能，例如，通过结合具有能够结合泛素的结构域的其他蛋白质。更为复杂的是，E3可以靶向泛素上的不同赖氨酸来制造链。最普遍的赖氨酸是泛素链上的Lys48。这是用来制造由蛋白酶体识别的多聚泛素的赖氨酸。

在整个说明书中使用术语“患者”或“受试者”来描述动物，优选为人或家养动物，向其提供了用根据本公开的组合物进行的治疗，包括预防性治疗。对于治疗特定动物诸如人类患者特有的那些感染、状况或疾病状态，术语“患者”是指该特定动物，包括家养动物诸如狗或猫或农场动物如马、牛、羊等。通常，在本公开中，术语患者是指人类患者，除非使用该术语的上下文中另外声明或暗示。

术语“有效的”用于描述化合物、组合物或组分的量，当在其预期用途的上下文中使用时，实现预期的结果。术语有效包含所有其他有效量或有效浓度的在本申请中另外描述或使用的术语。

化合物和组合物

一方面，说明书提供了化合物，其包含E3泛素连接酶结合部分(“ULM”)，包括IAP的E3泛素连接酶结合部分(“ILM”)、cereblon E3泛素连接酶结合部分(“CLM”)、Von Hippel-Lindae E3泛素连接酶(VHL)结合部分(VLM)和/或小鼠双微体2同源物(MDM2)E3泛素连接酶结合部分(MLM)。在一个示例性的实施例中，根据以下结构，ULM通过化学接头(L)与靶蛋白结合部分(PTM)偶联：

(A)PTM-L-ULM

其中L是键或化学接头基团，ULM是E3泛素连接酶结合部分，并且PTM是靶蛋白结合部分。本文示出的化合物中部分的数量和/或相对位置仅作为示例提供。如本领域技术人员将理解的，本文描述的化合物可以以各个官能部分的任何期望数量和/或相对位置来合成。

除非上下文另有说明，否则术语ULM、ILM、VLM、MLM和CLM以其包括性含义使用。例如，术语ULM包括所有ULM，包括结合IAP(即ILM)、MDM2(即MLM)、cereblon(即CLM)和VHL(即VLM)的那些。进一步地，术语ILM包括所有可能的IAP E3泛素连接酶结合部分，术语MLM包括所有可能的MDM2 E3泛素连接酶结合部分，术语VLM包括所有可能的VHL结合部分，并且术语CLM包括所有cereblon结合部分。

在另一方面，本公开提供了可用于通过诱导靶蛋白的降解来调节蛋白活性的双官能或多官能化合物(例如，PROTAC)。在某些实施例中，化合物包含偶联的ILM或VLM或CLM或MLM，其例如直接或间接地共价连接至结合靶蛋白的部分(即，蛋白靶向部分或“PTM”)。在某些实施例中，ILM/VLM/CLM/MLM和PTM通过化学接头(L)连接或偶联。ILM结合IAP E3泛素连接酶，VLM结合VHL，CLM结合cereblon E3泛素连接酶，MLM结合MDM2 E3泛素连接酶，并且PTM识别靶蛋白，各个部分与其靶标的相互作用通过将靶蛋白置于泛素连接酶蛋白附近来降解靶蛋白。示例性的双官能化合物可描述为：

(B)PTM—ILM

(C)PTM—CLM

(D)PTM—VLM

(E)PTM—MLM

在某些实施例中，双官能化合物还包含化学接头(“L”)。例如，双官能化合物可描述为：

(F)PTM—L—ILM

(G)PTM—L—CLM

(H)PTM—L—VLM

(I)PTM—L—MLM

其中PTM是蛋白质/多肽靶向部分，L是化学接头，ILM是IAP E3泛素连接酶结合部分，CLM是cereblon E3泛素连接酶结合部分，VLM是VHL结合部分，并且MLM是MDM2 E3泛素连接酶结合部分。

在某些实施例中，ULM(例如，ILM、CLM、VLM或MLM)显示出活性或与E3泛素连接酶(例如，IAP E3泛素连接酶、cereblon E3泛素连接酶、VHL或MDM2 E3泛素连接酶)结合，IC₅₀小于约200μM。可以根据本领域已知的任何方法例如荧光偏振测定来确定IC₅₀。

在某些另外的实施例中，本文所述的双官能化合物表现出的活性为IC₅₀小于约100、50、10、1、0.5、0.1、0.05、0.01、0.005、0.001mM、或小于约100、50、10、1、0.5、0.1、0.05、0.01、0.005、0.001μM，或小于约100、50、10、1、0.5、0.1、0.05、0.01、0.005、0.001nM，或小于约100、50、10、1、0.5、0.1、0.05、0.01、0.005、0.001pM。

在某些实施例中，本文所述的化合物包含多个PTM(靶向相同或不同的蛋白质靶标)、多个ULM、一个或多个ULM(即与多种/不同的E3泛素连接酶例如VHL、IAP、cereblon和/或MDM2特异性结合的部分)或其组合。在本文所述的任何方面或实施例中，PTM和ULM(例如，ILM、VLM、CLM和/或MLM)可以直接偶联或经由一个或多个化学接头或其组合偶联。在另外的实施例中，当化合物具有多个ULM时，ULM可以针对相同的E3泛素连接酶，或者每个相应的ULM可以特异性地与不同的E3泛素连接酶结合。在另外的实施例中，在化合物具有多个PTM的情况下，PTM可以结合相同的靶蛋白，或者每个相应的PTM可以特异性结合不同的靶蛋白。

在某些实施例中，在化合物包含多个ULM的情况下，ULM是相同的。在另外的实施例中，化合物包含多个ULM(例如，ULM、ULM’等)、至少一个直接或通过化学接头(L)或两者偶联至ULM的PTM。在某些另外的实施例中，包含多个ULM的化合物还包含多个PTM。在仍另外的实施例中，PTM相同或任选地不同。在另外的实施例中，其中PTM是不同的，各个PTM可以结合相同的蛋白质靶标或特异性地结合不同的蛋白质靶标。

在某些实施例中，化合物可以包含多个ULM和/或多个ULM’。在进一步的实施例中，包含至少两个不同的ULM、多个ULM和/或多个ULM’的化合物还包含至少一个直接或经由化学接头或两者与ULM或ULM’偶联的PTM。在本文所述的任何实施例中，包含至少两个不同的ULM的化合物可以进一步包含多个PTM。在仍另外的实施例中，PTM相同或任选地不同。在仍另外的实施例中，其中PTM是不同的，各个PTM可以结合相同的蛋白质靶标或特异性结合不同的蛋白质标靶。在仍其他实施例中，PTM本身是ULM(或ULM’)，诸如ILM、VLM、CLM、MLM、ILM’、VLM’、CLM’和/或MLM’。

在另外的实施例中，说明书提供了本文所述的化合物，包括其对映异构体、非对映异构体、溶剂化物和多晶型物，包括其药学上可接受的盐形式，例如酸和碱盐形式。

示例性ILM

AVPI四肽片段

在本文所述的任何化合物中，ILM可包含丙氨酸-缬氨酸-脯氨酸-异亮氨酸(AVPI)四肽片段或其非天然模拟物。在某些实施例中，ILM选自由式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)表示的化学结构组成的群组：

其中：

式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的R¹选自H或烷基；

式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的R²选自H或烷基；

式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的R³选自H、烷基、环烷基和杂环烷基；

式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的R⁵和R⁶独立地选自H、烷基、环烷基、杂环烷基，或更优选地，式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的R⁵和R⁶一起形成吡咯烷或哌啶环，其任选进一步稠合至1-2个环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基环，其各自可接着进一步稠合至另一个环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基环；

式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的R³和R⁵可一起形成5-8元环，其任选进一步稠合至1-2个环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基环；

式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的R⁷选自环烷基、环烷基烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、芳基、芳基-C(O)-R⁴、芳基烷基、杂芳基、杂芳基-C(O)-R⁴、杂芳基-R⁴、杂芳基-萘、杂芳基烷基或-C(O)NH–R⁴，其各自任选进一步被1-3个取代基取代，所述取代基选自卤素、烷基、卤代烷基、羟基、烷氧基、氰基、(杂)环烷基、芳基、(杂)芳基、-C(O)NH–R⁴或C(O)-R⁴；并且

R⁴选自烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、芳基(例如，双环芳基)、芳基烷基、杂芳基(例如，双环杂芳基)、杂芳基烷基，其任选进一步被上述1-3个取代基取代。

如上所示，式(II)的P1、P2、P3和P4分别与AVPI四肽片段或其非天然模拟物的A、V、P和I相关。类似地，式(I)和(III)至(V)种的每个具有与AVPI四肽片段或其非天然模拟物的A、V、P和I相关的部分。

在本文所述的任何化合物中，ILM可具有式(VI)的结构，所述结构是WO公开号2008/014236中描述的IAP拮抗剂的衍生物；或其非天然模拟物：

其中：

式(VI)的R₁独立地选自H、C₁-C₄-烷基、C₁-C₄-烯基、C₁-C₄-炔基或C₃-C_1O-环烷基，其是未被取代或被取代的；

式(VI)的R₂独立地选自H、C₁-C₄-烯基、C₁-C₄-烯基、C₁-C₄-炔基或C₃-C_1O-环烷基，其是未被取代或被取代的；

式(VI)的R₃独立地选自H、-CF₃、-C₂H₅、C₁-C₄-烷基、C₁-C₄-烯基、C₁-C₄-炔基、-CH₂-Z或任一R₂和R₃一起形成杂环；

式(VI)的每个Z独立地选自H、-OH、F、Cl、-CH₃、-CF₃、-CH₂Cl、-CH₂F或-CH₂OH；

式(VI)的R₄独立地选自C₁-C₁₆直链或支链烷基、C₁-C₁₆-烯基、C₁-C₁₆-炔基、C₃-C₁₀-环烷基、-(CH₂)_0-6-Z₁、-(CH₂)_0-6-芳基和-(CH₂)_0-6-het，其中烷基、环烷基和苯基未被取代或被取代；

式(VI)的R₅独立地选自H、C_1-10-烷基、芳基、苯基、C_3-7-环烷基、-(CH₂)_1-6-C_3-7-环烷基、-C_1-10-烷基-芳基、-(CH₂)_0-6-C_3-7-环烷基-(CH₂)_0-6-苯基、-(CH₂)_0-4-CH[(CH₂)_1-4-苯基]₂、茚满基、-C(O)-C_1-10-烷基、-C(O)-(CH₂)_1-6-C_3-7-环烷基、-C(O)-(CH₂)_0-6-苯基、-(CH₂)_0-6-C(O)-苯基、-(CH₂)_0-6-het、-C(O)-(CH₂)_1-6-het或R₅选自氨基酸的残基，其中烷基、环烷基、苯基和芳基取代基未被取代或被取代；

式(VI)的Z₁独立地选自-N(R₁₀)-C(O)-C_1-10-烷基、-N(R_1O)-C(O)-(CH₂)_0-6-C_3-7-环烷基、-N(R₁₀)-C(O)-(CH₂)_0-6-苯基、-N(R₁₀)-C(O)(CH₂)_1-6-het、-C(O)-N(R₁₁)(R₁₂)、-C(O)-O-C_1-10-烷基、-C(O)-O-(CH₂)_1-6-C_3-7-环烷基、-C(O)-O-(CH₂)_0-6-苯基、-C(O)-O-(CH₂)_1-6-het、-O-C(O)-C_1-10-烷基、-O-C(O)-(CH₂)_1-6-C_3-7-环烷基、-O-C(O)-(CH₂)_0-6-苯基、-O-C(O)-(CH₂)_1-6-het，其中烷基、环烷基和苯基未被取代或被取代；

式(VI)的het独立地选自含有1-4个选自N、O和S的杂原子的5-7元杂环或8-12元稠合环系，其包括至少一个含有1、2或3个选自N、O和S的杂原子的5-7元杂环，所述杂环或稠合环系在碳或氮原子上未被取代或被取代；

式(VI)的R₁₀选自H、-CH₃、-CF₃、-CH₂OH或-CH₂Cl；

式(VI)的R₁₁和R₁₂独立地选自H、C_1-4-烷基、C_3-7-环烷基、-(CH₂)_1-6-C_3-7-环烷基、(CH₂)_0-6-苯基，其中烷基、环烷基和苯基未被取代或被取代；或R₁₁和R₁₂与氮一起形成het，并且

式(VI)的U独立地如式(VII)所示：

其中：

式(VII)的每个n独立地选自0-5；

式(VII)的X选自-CH和N；

式(VII)的R_a和R_b独立地选自O、S或N原子或C_0-8-烷基，其中烷基链中的一个或多个碳原子任选被选自O、S或N的杂原子替代，并且其中每个烷基独立地未被取代或被取代；

式(VII)的R_d选自Re-Q-(R_f)_p(R_g)_q和Ar₁-D-Ar₂；

式(VII)的R_c选自H或任一R_c和R_d一起形成环烷基或het；其中如果R_c和R_d形成环烷基或het，则R₅在C或N原子处连接至形成的环；

式(VII)的p和q独立地选自0或1；

式(VII)的R_e选自C_1-8-烷基和亚烷基，并且每个Re未被取代或被取代；

Q选自N、O、S、S(O)和S(O)₂；

式(VII)的Ar₁和Ar₂独立地选自被取代或未被取代的芳基和het；

式(VII)的R_f和R_g独立地选自H、-C1-10-烷基、C_1-10-烷基芳基、-OH、-O-C_1-10-烷基、-(CH₂)_0-6-C_3-7-环烷基、-O-(CH₂)_0-6-芳基、苯基、芳基、苯基-苯基、-(CH₂)_1-6-het、-O-(CH₂)_1-6-het、-OR₁₃、-C(0)-R₁₃、-C(O)-N(R₁₃)(R₁₄)、-N(R₁₃)(R₁₄)、-S-R₁₃、-S(O)-R₁₃、-S(O)₂-R₁₃、-S(O)₂-NR₁₃R₁₄、-NR₁₃-S(O)₂-R₁₄、-S-C_t-10-烷基、芳基-C_1-4-烷基或het-C_1-4-烷基，其中烷基、环烷基、het和芳基未被取代或被取代，-SO₂-C_1-2-烷基、-SO₂-C_1-2-烷基苯基、-O-C_1-4-烷基或任一R_g和R_f一起形成选自het或芳基的环；

式(VII)的D选自-CO-、-C(O)-C_1-7-亚烷基或亚芳基、-CF₂-、-O-、-S(O)_r，其中r是0-2、1,3-二氧杂环戊烷或C_1-7-烷基-OH；其中烷基、亚烷基或亚芳基未被取代或被一个或多个卤素、OH、-O-C_1-6-烷基、-S-C_1-6-烷基或-CF₃取代；或每个D独立地选自N(R_h)；

Rh选自H、未被取代或被取代的C_1-7-烷基、芳基、未被取代或被取代的-O-(C_1-7-环烷基)、-C(O)-C_1-10-烷基、-C(O)-C_0-10-烷基-芳基、-C-O-C_01-10-烷基、-C-O-C_0-10-烷基-芳基、-SO₂-C_1-10-烷基或-SO₂-(C_0-10-烷基芳基)；

式(VII)的R₆、R₇、R₈和R₉独立地选自H、-C_1-10-烷基、-C_1-10-烷氧基、芳基-C_1-10-烷氧基、-OH、-O-C_1-10-烷基、-(CH₂)_0-6-C_3-7-环烷基、-O-(CH₂)_0-6-芳基、苯基、-(CH₂)_1-6-het、-O-(CH₂)_1-6-het、-OR₁₃、-C(O)-R₁₃、-C(O)-N(R₁₃)(R₁₄)、-N(R₁₃)(R₁₄)、-S-R₁₃、-S(O)-R₁₃、-S(O)₂-R₁₃、-S(O)₂-NR₁₃R₁₄或-NR₁₃-S(O)₂-R₁₄；其中每个烷基、环烷基和芳基未被取代或被取代；并且任一R₆、R₇、R₈和R₉任选一起形成环系；

式(VII)的R₁₃和R₁₄独立地选自H、C_1-10-烷基、-(CH₂)_0-6-C_3-7-环烷基、-(CH₂)_0-6-(CH)_0-1-(芳基)_1-2、-C(O)-C_1-10-烷基、-C(O)-(CH₂)_1-6-C_3-7-环烷基、-C(O)-O-(CH₂)_0-6-芳基、-C(O)-(CH₂)_0-6-O-芴基、-C(O)-NH-(CH₂)_0-6-芳基、-C(O)-(CH₂)_0-6-芳基、-C(O)-(CH₂)_0.6-het、-C(S)-C_1-10-烷基、-C(S)-(CH₂)_1-6-C_3-7-环烷基、-C(S)-O-(CH₂)_0-6-芳基、-C(S)-(CH₂)_0-6-O-芴基、-C(S)-NH-(CH₂)_0-6-芳基、-C(S)-(CH₂)_0-6-芳基或-C(S)-(CH₂)_1-6-het，其中每个烷基、环烷基和芳基未被取代或被取代；或任一R₁₃和R₁₄与氮原子一起形成het；

其中式(VII)的R₁₃和R₁₄的烷基取代基未被取代或被取代，并且当被取代时，被一个或多个取代基取代，所述取代基选自C_1-10-烷基、卤素、OH、-O-C_1-6-烷基、-S-C_1-6-烷基和-CF₃；并且R₁₃和R₁₄的取代的苯基或芳基被一个或多个取代基取代，所述取代基选自卤素、羟基、C_1-4-烷基、C_1-4-烷氧基、硝基、-CN、-O-C(O)-C_1-4-烷基和-C(O)-O-C_1-4-芳基；或其药学上可接受的盐或水合物。

在某些实施例中，化合物还包含通过至少一个另外的独立选择的接头基团连接至式(VI)的ILM或其非天然模拟物的独立选择的第二ILM。在一个实施例中，第二ILM是式(VI)的衍生物或其非天然模拟物。在一个实施例中，至少一个另外的独立选择的接头基团包括化学连接ILM和第二ILM的两个另外的独立选择的接头基团。在一个实施例中，式(VI)的ILM或其非天然模拟物的至少一个另外的接头基团，化学地连接选自R₄和R₅的基团。例如，可以如下所示连接式(VI)的ILM和式(VI)的第二ILM或其非天然模拟物：

在某些实施例中，ILM、至少一个另外的独立选择的接头基团L和第二ILM具有选自由以下组成的群组的结构：

它们是在WO公开号2008/014236中描述的IAP拮抗剂的衍生物。

在本文所述的任何化合物中，ILM可以具有式(VIII)的结构，所述结构基于Ndubaku,C.,et al.Antagonism of c-IAP and XIAP proteins is required forefficient induction of cell death by small-molecule IAP antagonists,ACSChem.Biol.,557-566,4(7)(2009)中描述的IAP配体；或其非天然模拟物：

其中式(VIII)的A1和A2各自独立地选自任选取代的单环、稠环、芳基和杂芳基；并且式(VIII)的R选自H或Me。

在一个特定实施例中，接头基团L连接至式(VIII)的A1。在另一个实施例中，接头基团L连接至式(VIII)的A2。

在一个特定实施例中，ILM选自由以下组成的群组：

在本文所述的任何化合物中，ILM可以具有式(IX)的结构，所述结构源自Mannhold,R.,et al.IAP antagonists:promising candidates for cancer therapy,Drug Discov.Today,15(5-6),210-9(2010)中交叉引用的化学型；或其非天然模拟物：

其中R¹选自烷基、环烷基和杂环烷基，并且最优选地选自异丙基、叔丁基、环己基和四氢吡喃基并且式(IX)的R²选自–OPh或H。

在本文所述的任何化合物中，ILM可以具有式(X)的结构，所述结构源自Mannhold,R.,et al.IAP antagonists:promising candidates for cancer therapy,DrugDiscov.Today,15(5-6),210-9(2010)中交叉引用的化学型；或其非天然模拟物：

其中：

式(X)的R¹选自H、–CH₂OH、--CH₂CH₂OH、--CH₂NH₂、--CH₂CH₂NH₂；

式(X)的X选自S或CH₂；

式(X)的R²选自：

式(X)的R³和R⁴独立地选自H或Me

在本文所述的任何化合物中，ILM可以具有式(XI)的结构，所述结构源自Mannhold,R.,et al.IAP antagonists:promising candidates for cancer therapy,Drug Discov.Today,15(5-6),210-9(2010)中交叉引用的化学型；或其非天然模拟物：

其中式(XI)的R¹选自H或Me，并且式(XI)的R²选自H或

在本文所述的任何化合物中，ILM可以具有式(XII)的结构，所述结构源自Mannhold,R.,et al.IAP antagonists:promising candidates for cancer therapy,Drug Discov.Today,15(5-6),210-9(2010)中交叉引用的化学型；或其非天然模拟物：

其中：

式(XII)的R¹选自：

并且

式(XII)的R²选自：

在本文所述的任何化合物中，IAP E3泛素连接酶结合部分选自由以下组成的群组：

在本文所述的任何化合物中，ILM可以具有式(XIII)的结构，所述结构源自Flygare,J.A.,et al.Small-molecule pan-IAP antagonists:a patent review,ExpertOpin.Ther.Pat.,20(2),251-67(2010)中总结的IAP配体；或其非天然模拟物：

其中：

式(XIII)的Z不存在或为O；

式(XIII)的R¹选自：

的R¹⁰选自H、烷基或芳基；

X选自CH2和O；并且

是含氮杂芳基。

在本文所述的任何化合物中，ILM可以具有式(XIV)的结构，所述结构源自Flygare,J.A.,et al.Small-molecule pan-IAP antagonists:a patent review,ExpertOpin.Ther.Pat.,20(2),251-67(2010)中总结的IAP配体；或其非天然模拟物：

其中：

式(XIV)的Z不存在或为O；

式(XIV)的R³和R⁴独立地选自H或Me；

式(XIV)的R¹选自：

的R¹⁰选自H、烷基或芳基；

的X选自CH2和O；并且

的

是含氮杂芳基。

在本文所述的任何化合物中，ILM选自由以下组成的群组：

其是美国专利公开号2008/0269140和美国专利号7,244,851中公开的配体衍生物。

在本文所述的任何化合物中，ILM可以具有式(XV)的结构，其是WO公开号2008/128171中描述的IAP配体的衍生物；或其非天然模拟物：

其中：

式(XV)的Z不存在或为O；

式(XV)的R¹选自：

的R¹⁰选自H、烷基或芳基；

的X选自CH2和O；并且

是含氮杂芳基；并且

式(XV)的R²选自H、烷基或酰基。

在特定的实施例中，ILM具有以下结构：

在本文所述的任何化合物中，ILM可以具有式(XVI)的结构，所述结构基于WO公开号2006/069063中描述的IAP配体；或其非天然模拟物：

其中：

式(XVI)的R²选自烷基、环烷基和杂环烷基；更优选地选自异丙基、叔丁基、环己基和四氢吡喃基，最优选地选自环己基；

式(XVI)的

是5-或6-元含氮杂芳基；更优选5-元含氮杂芳基并且最优选噻唑；并且

式(XVI)的Ar是芳基或杂芳基。

在本文所述的任何化合物中，ILM可以具有式(XVII)的结构，所述结构基于Cohen,F.et al.,Antogonists of inhibitors of apoptosis proteins based on thiazoleamide isosteres,Bioorg.Med.Chem.Lett.,20(7),2229-33(2010)中描述的IAP配体；或其非天然模拟物：

其中：

式(XVII)的R¹选自卤素(例如，氟)、氰基、

式(XVII)的X选自O或CH2。

在本文所述的任何化合物中，ILM可以具有式(XVIII)的结构，所述结构基于Cohen,F.et al.,Antogonists of inhibitors of apoptosis proteins based onthiazole amide isosteres,Bioorg.Med.Chem.Lett.,20(7),2229-33(2010)中描述的IAP配体；或其非天然模拟物：

其中式(XVIII)的R选自烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基或卤素(在可变取代位置中)。

在本文所述的任何化合物中，ILM可以具有式(XIX)的结构，所述结构基于Cohen,F.et al.,Antogonists of inhibitors of apoptosis proteins based on thiazoleamide isosteres,Bioorg.Med.Chem.Lett.,20(7),2229-33(2010)中描述的IAP配体；或其非天然模拟物：

其中

是6-元含氮杂芳基。

在某些实施例中，组合物的ILM选自由以下组成的群组：

在某些实施例中，组合物的ILM选自由以下组成的群组：

在本文所述的任何化合物中，ILM可以具有式(XX)的结构，所述结构基于WO公开号2007/101347中描述的IAP配体；或其非天然模拟物：

其中式(XX)的X选自CH₂、O、NH或S。

在本文所述的任何化合物中，ILM可以具有式(XXI)的结构，所述结构基于美国专公开利7,345,081和美国专利公开7,419,975中描述的IAP配体；或其非天然模拟物：

其中：

式(XXI)的R²选自：

式(XXI)的R⁵选自：

并且

式(XXI)的W选自CH或N；并且

的R⁶独立地是单或二环稠合芳基或杂芳基。

在某些实施例中，化合物的ILM选自由以下组成的群组：

在某些实施例中，化合物的ILM选自由以下组成的群组：

其描述于WO公开号2009/060292、美国专利公开号7,517,906、WO公开号2008/134679、WO公开号2007/130626和WO公开号2008/128121中。

在本文所述的任何化合物中，ILM可以具有式(XXII)或(XXIII)的结构，其源自WO公开号2015/006524 and Perez HL,Discovery of potent heterodimeric antagonistsof inhibitor of apoptosis proteins(IAPs)with sustained antitumoractivity.J.Med.Chem.58(3),1556-62(2015)中描述的IAP配体；或其非天然模拟物：

其中：

式(XXII)或(XXIII)的R¹是任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任选取代的环烷基烷基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基烷基或任选取代的芳基；

式(XXII)或(XXIII)的R²是任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任选取代的环烷基烷基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基烷基或任选取代的芳基；

或者可替代地，式(XXII)或(XXIII)的R¹和R²独立地是任选取代的硫烷基，其中与硫烷基的S原子连接的取代基是任选取代的烷基、任选取代的支链烷基、任选取代的杂环基、-(CH₂)_vCOR²⁰、-CH₂CHR²¹COR²²或-CH₂R²³；

其中：

v是1-3的整数；

–(CH₂)_vCOR²⁰和-CH₂R²³的R²⁰和R²²独立地选自OH、NR²⁴R²⁵或OR²⁶；

-CH₂CHR²¹COR²的R²¹选自基团NR²⁴R²⁵；

-CH₂R²³的R²³选自任选取代的芳基或任选取代的杂环基，其中任选取代基包括烷基和卤素；

NR²⁴R²⁵的R²⁴选自氢或任选取代的烷基；

NR²⁴R²⁵的R²⁵选自氢、任选取代的烷基、任选取代的支链烷基、任选取代的芳基烷基、任选取代的杂环基、-CH₂(OCH₂CH₂O)_mCH₃或多胺链，诸如精胺或亚精胺；

OR²⁶的R²⁶选自任选取代的烷基，其中任选取代基是OH、卤素或NH₂；并且

m是1-8的整数；

式(XXII)或(XXIII)的R³和R⁴独立地选自任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳基烷基、任选取代的芳基烷氧基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环基、任选取代的杂芳基烷基或任选取代的杂环烷基，其中取代基是烷基、卤素或OH；

式(XXII)或(XXIII)的R⁵、R⁶、R⁷和R⁸独立地选自氢、任选取代的烷基或任选取代的环烷基；并且

X选自键或化学接头基团，和/或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。在某些实施例中，X是键或自由以下组成的群组：

其中“*”是PTM、L或ULM如ILM的连接点。

在本文所述的任何化合物中，ILM可以具有式(XXIV)或(XXVI)的结构，其源自WO公开号2015/006524和Perez HL,Discovery of potent heterodimeric antagonists ofinhibitor of apoptosis proteins(IAPs)with sustained antitumoractivity.J.Med.Chem.58(3),1556-62(2015)中描述的IAP配体；或其非天然模拟物；和与接头基团L的化学接头，如所示：

其中：

式(XXIV)、(XXV)或(XXVI)的R¹选自任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任选取代的环烷基烷基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基烷基或任选取代的芳基；

式(XXIV)、(XXV)或(XXVI)的R²选自任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任选取代的环烷基烷基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基烷基或任选取代的芳基；

或者可替代地，

式(XXIV)、(XXV)或(XXVI)的R¹和R²独立地选自任选取代的硫烷基，其中与硫烷基的S原子连接的取代基是任选取代的烷基、任选取代的支链烷基、任选取代的杂环基、

-(CH₂)_vCOR²⁰、-CH₂CHR²¹COR²²或-CH₂R²³，

其中：

v是1-3的整数；

–(CH₂)_vCOR²⁰和-CH₂R²³的R²⁰和R²²独立地选自OH、NR²⁴R²⁵或OR²⁶；

-CH₂CHR²¹COR²的R²¹选自NR²⁴R²⁵；

-CH₂R²³的R²³选自任选取代的芳基或任选取代的杂环基，其中任选取代基包括烷基和卤素；

NR²⁴R²⁵的R²⁴选自氢或任选取代的烷基；

NR²⁴R²⁵的R²⁵选自氢、任选取代的烷基、任选取代的支链烷基、任选取代的芳基烷基、任选取代的杂环基、-CH₂(OCH₂CH₂O)_mCH₃或多胺链，诸如精胺或亚精胺；

OR²⁶的R²⁶选自任选取代的烷基，其中任选取代基是OH、卤素或NH₂；并且

m是1-8的整数；

式(XXIV)、(XXV)或(XXVI)的R³和R⁴独立地是任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳基烷基、任选取代的芳基烷氧基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环基、任选取代的杂芳基烷基或任选取代的杂环烷基，其中取代基是烷基、卤素或OH；

式(XXIV)、(XXV)或(XXVI)的R⁵、R⁶、R⁷和R⁸独立地是氢、任选取代的烷基或任选取代的环烷基；和/或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。

在特定的实施例中，根据式(XXII)至(XXVI)的ILM：

R⁷和R⁸选自H或Me；

R⁵和R⁶选自包含以下的群组：

R³和R⁴选自包含以下的群组：

在本文所述的任何化合物中，ILM可以具有式(XXVII)或(XXVII)的结构，其源自WO公开号2014/055461和Kim,KS,Discovery of tetrahydroisoquinoline-based bivalentheterodimeric IAP antagonists.Bioorg.Med.Chem.Lett.24(21),5022-9(2014)中描述的IAP配体；或其非天然模拟物：

其中：

R³⁵是选自烷基、卤素、烷氧基、氰基和卤代烷氧基的1-2个取代基；

式(XXVII)和(XXVIII)的R¹选自H或任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任选取代的环烷基烷基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基烷基或任选取代的芳基；

式(XXVII)和(XXVIII)的R²选自H或任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任选取代的环烷基烷基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基烷基或任选取代的芳基；

或者可替代地，

式(XXVII)和(XXVIII)的R¹和R²独立地选自任选取代的硫烷基–CR⁶⁰R⁶¹SR⁷⁰，其中R⁶⁰和R⁶¹选自H或甲基，并且R⁷⁰选自任选取代的烷基、任选取代的支链烷基、任选取代的杂环基、-(CH₂)_vCOR²⁰、-CH₂CHR²¹COR²²或-CH₂R²³，

其中：

v是1-3的整数；

–(CH₂)_vCOR²⁰和-CH₂CHR²¹COR²²的R²⁰和R²²独立地选自OH、NR²⁴R²⁵或OR²⁶；

-CH₂CHR²¹COR²²的R²¹选自NR²⁴R²⁵；

-CH₂R²³的R²³选自任选取代的芳基或任选取代的杂环基，其中任选取代基包括烷基和卤素；

NR²⁴R²⁵的R²⁴选自氢或任选取代的烷基；

NR²⁴R²⁵的R²⁵选自氢、任选取代的烷基、任选取代的支链烷基、任选取代的芳基烷基、任选取代的杂环基、-CH₂CH₂(OCH₂CH₂)_mCH₃或多胺链

诸如精胺或亚精胺；

其中δ＝0–2、ψ＝1–3、

OR²⁶的R²⁶是任选取代的烷基，其中任选取代基是OH、卤素或NH₂；并且

m是1-8的整数，

式(XXVII)和(XXVIII)的R³和R⁴独立地选自任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳基烷基、任选取代的芳基烷氧基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环基、任选取代的杂芳基烷基或任选取代的杂环烷基，其中取代基是烷基、卤素或OH；

式(XXVII)和(XXVIII)的R⁵、R⁶、R⁷和R⁸独立地选自氢、任选取代的烷基或任选取代的环烷基；

式(XXVII)和(XXVIII)的R³¹选自任选进一步取代的烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基或杂芳基烷基，其优选地选自由以下组成的群组：

式(XXVII)和(XXVIII)的X选自–(CR⁸¹R⁸²)_m-、任选取代的杂芳基或杂环基、

式(XXVII)的Z选自C＝O、-O-、-NR、-CONH-、-NHCO-或可以不存在；

–(CR⁸¹R⁸²)_m-的R⁸¹和R⁸²独立地选自氢、卤素、烷基或环烷基，或R⁸¹和R⁸²可以一起形成碳环；

的R¹⁰和R¹¹独立地选自氢、卤素或烷基；

的R¹²、R¹³、R¹⁴、R¹⁵和R¹⁶独立地选自氢、卤素或任选取代的烷基或OR¹⁷；

R¹⁷选自氢、任选取代的烷基或任选取代的环烷基；

–(CR²¹R²²)_m-和

的m和n独立地是0、1、2、3或4；

的o和p独立地是0、1、2或3；

的q和t独立地是0、1、2、3或4；

的r是0或1；

和/或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。

在本文所述的任何化合物中，ILM可以具有式(XXIX)、(XXX)、(XXXI)或(XXXII)的结构，其源自WO公开号2014/055461和Kim,KS,Discovery of tetrahydroisoquinoline-based bivalent heterodimeric IAP antagonists.Bioorg.Med.Chem.Lett.24(21),5022-9(2014)中描述的IAP配体；或其非天然模拟物；和与接头基团L的化学接头，如所示：

其中：

式(XXIX)至(XXXII)的R²选自H、任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任选取代的环烷基烷基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基烷基或任选取代的芳基；

或者可替代地；

式(XXVII)和(XXVIII)的R¹和R²独立地选自H、任选取代的硫烷基–CR⁶⁰R⁶¹SR⁷⁰，其中R⁶⁰和R⁶¹选自H或甲基和R⁷⁰是任选取代的烷基、任选取代的支链烷基、任选取代的杂环基、-(CH₂)_vCOR²⁰、-CH₂CHR²¹COR²²或-CH₂R²³；

其中：

v是1-3的整数；

–(CH₂)_vCOR²⁰和-CH₂CHR²¹COR²²的R²⁰和R²²独立地选自OH、NR²⁴R²⁵或OR²⁶；

-CH₂CHR²¹COR²²的R²¹选自NR²⁴R²⁵；

-CH₂R²³的R²³选自任选取代的芳基或任选取代的杂环基，其中任选取代基包括烷基和卤素；

NR²⁴R²⁵的R²⁴选自氢或任选取代的烷基；

NR²⁴R²⁵的R²⁵选自氢、任选取代的烷基、任选取代的支链烷基、任选取代的芳基烷基、任选取代的杂环基、-CH₂CH₂(OCH₂CH₂)_mCH₃或多胺链

诸如精胺或亚精胺，

其中δ＝0–2、ψ＝1–3、

OR²⁶的R²⁶是任选取代的烷基，其中任选取代基是OH、卤素或NH₂；

m是1-8的整数；

式(XXIX)至(XXXII)的R⁶和R⁸独立地选自氢、任选取代的烷基或任选取代的环烷基；并且

式(XXIX)至(XXXII)的R³¹选自任选进一步取代的烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基或杂芳基烷基，其优选地选自由以下组成的群组：

在某些实施例中，化合物的ILM是：

在本文所述的任何化合物中，ILM可以具有式(XXXIII)的结构，其源自WO公开号2014/074658和WO公开号2013/071035中描述的IAP配体；或其非天然模拟物：

其中：

式(XXXIII)的R²选自H、任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任选取代的环烷基烷基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基烷基或任选取代的芳基；

式(XXXIII)的R⁶和R⁸独立地选自氢、任选取代的烷基或任选取代的环烷基；

式(XXXIII)的R³²选自(C1-C4亚烷基)-R³³，其中R³³选自氢、任选进一步取代的芳基、杂芳基或环烷基；

式(XXXIII)的X选自：

式(XXXIII)的Z和Z’独立地选自：

其中每个

表示与化合物的连接点，并且在任何给定化合物中Z和Z’不能都是

式(XXXIII)的Y选自：

其中式(XXXIII)的Z和Z’相同，并且Z是

其中每个

表示与化合物的连接点，X选自：

并且

式(XXXIII)的Y独立地选自：

其中：

表示与化合物的–C＝O部分的连接点；

表示与化合物的–NH部分的连接点；

表示与Z的第一连接点；

表示与Z的第二连接点；

m是0-3的整数；

n是1-3的整数；

p是0-4的整数；并且

A是–C(O)R³；

–C(O)R³的R³选自OH、NHCN、NHSO₂R¹⁰、NHOR¹¹或N(R¹²)(R¹³)；

NHSO₂R¹⁰和NHOR¹¹的R¹⁰和F¹¹独立地选自氢、任选取代的-C₁-C₄烷基、环烷基、芳基、杂芳基、杂环基或杂环烷基；

N(R¹²)(R¹³)的R¹²和R¹³独立地选自氢、-C₁-C₄烷基、-(C₁-C₄)亚烷基)-NH-(C₁-C₄烷基)和–(C₁-C₄亚烷基)-O-(C₁-C₄羟基烷基)，或R¹²和R¹³与它们共同连接的氮原子一起形成饱和杂环基，其任选包含一个另外的选自N、O和S的杂原子，并且其中饱和杂环任选被甲基取代。

在本文所述的任何化合物中，ILM可以具有式(XXXIV)或(XXXV)的结构，其源自WO公开号2014/047024中描述的IAP配体；或其非天然模拟物：

其中：

式(XXXIV)或(XXXV)的X不存在或为选自以下的基团：-(CR¹⁰R¹¹)_m-、任选取代的杂芳基或任选取代的杂环基，

式(XXXIV)或(XXXV)的Y和Z独立地选自C＝0、-0-、-NR⁹-、-CONH-、-NHCO-或可以不存在；

式(XXXIV)或(XXXV)的R¹和R²独立地选自任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任选取代的环烷基烷基、任选取代的芳基烷基、任选取代的芳基，或者

式(XXXIV)或(XXXV)的R¹和R²独立地选自任选取代的硫烷基，其中与硫烷基的S原子连接的取代基是任选取代的烷基、任选取代的支链烷基、任选取代的杂环基、-(CH₂)_vCOR²⁰、-CH₂CHR²¹COR²²或-CH₂R²³；其中

v是1-3的整数；

-(CH₂)_vCOR²⁰和-CH₂CHR²¹COR²²的R²⁰和R²²独立地选自OH、NR²⁴R²⁵或OR²⁶；

-CH₂CHR²¹COR²²的R²¹选自NR²⁴R²⁵；

-CH₂R²³的R²³选自任选取代的芳基或任选取代的杂环基，其中任选取代基包括烷基和卤素；

NR²⁴R²⁵的R²⁴选自氢或任选取代的烷基；

NR²⁴R²⁵的R²⁵选自氢、任选取代的烷基、任选取代的支链烷基、任选取代的芳基烷基、任选取代的杂环基、-CH₂(OCH₂CH²⁰)mCH3或多胺链；

R²⁶是任选取代的烷基，其中任选取代基是OH、卤素或NH₂；

-(CR¹⁰R¹¹)_m-的m是1-8的整数；

式(XXXIV)或(XXXV)的R³和R⁴独立地选自任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳基烷基、任选取代的芳基烷氧基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环基、任选取代的杂芳基烷基或任选取代的杂环烷基，其中取代基是烷基、卤素或OH；

式(XXXIV)或(XXXV)的R⁵、R⁶、R⁷和R⁸独立地选自氢、任选取代的烷基或任选取代的环烷基；

-(CR¹⁰R¹¹)_m-的R¹⁰和R¹¹独立地选自氢、卤素或任选取代的烷基；

的R¹²和R¹³独立地选自氢、卤素或任选取代的烷基，或R¹²和R¹³可以一起形成碳环；

的R¹⁴、R¹⁵、R¹⁶、R¹⁷和R¹⁸独立地选自氢、卤素、任选取代的烷基或OR¹⁹；

OR¹⁹的R¹⁹选自氢、任选取代的烷基或任选取代的环烷基；

-(CR¹⁰R¹¹)_m-的m和n独立地是0、1、2、3或4；

-(CR¹⁰R¹¹)_m-的o和p独立地是0、1、2或3；

-(CR¹⁰R¹¹)_m-的q是0、1、2、3或4；r是0或1；

-(CR¹⁰R¹¹)_m-的t是1、2或3；和/或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。在本文所述的任何化合物中，ILM可以具有式(XXXVI)的结构，其源自WO公开号2014/025759中描述的IAP配体；或其非天然模拟物：

其中：

式(XXXVI)的A选自：

其中虚线表示任选双键；

式(XXXVI)的X选自：-(CR²¹R²²)_m-、

式(XXXVI)的Y和Z独立地选自-0-、-NR⁶-或不存在；

式(XXXVI)的V选自-N-或-CH-；

式(XXXVI)的W选自-CH-或-N-；

式(XXXVI)的R¹选自任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任选取代的环烷基烷基、任选取代的芳基烷基或任选取代的芳基；

式(XXXVI)的R³和R⁴独立地选自任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基烷基、任选取代的杂芳基烷基或任选取代的杂环烷基；

式(XXIV)、(XXV)或(XXVI)的R⁵、R⁶、R⁷和R⁸独立地选自氢、任选取代的烷基或任选取代的环烷基或优选甲基；

的R⁹和R¹⁰独立地选自氢、卤素或任选取代的烷基，或R⁹和R¹⁰可以一起形成环；

的R¹¹、R¹²、R¹³和R¹⁴独立地选自氢、卤素、任选取代的烷基或OR¹⁵；

OR¹⁵的R¹⁵选自氢、任选取代的烷基或任选取代的环烷基；

-(CR²¹R²²)_m-和

的m和n独立地选自0、1、2、3或4；

的o和p独立地选自0、1、2或3；

的q选自0、1、2、3或4；

的r选自0或1，和/或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。

在本文所述的任何化合物中，ILM可以具有式(XXXVII)或(XXXVIII)的结构，其源自WO公开号2014/011712中描述的IAP配体；或其非天然模拟物：

其中：

式(XXXVII)和(XXXVIII)的X是–(CR¹⁶R¹⁷)_m-、

或不存在；

式(XXXVII)和(XXXVIII)的Y和Z独立地选自-0-、C＝0、NR⁶或不存在；

式(XXXVII)和(XXXVIII)的R¹和R²选自任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任选取代的烷基芳基或任选取代的芳基；

式(XXXVII)和(XXXVIII)的R³和R⁴独立地选自任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任选取代的环烷基烷基、任选取代的芳基烷基或任选取代的芳基；

式(XXXVII)和(XXXVIII)的R⁵和R⁶独立地选自任选取代的烷基或任选取代的环烷基；

式(XXXVII)和(XXXVIII)的R⁷和R⁸独立地选自氢、任选取代的烷基或任选取代的环烷基或优选甲基；

的R⁹和R¹⁰独立地选自氢、任选取代的烷基，或R⁹和R¹⁰可以一起形成环；

的R¹¹至R¹⁴独立地选自氢、卤素、任选取代的烷基或OR¹⁵；

OR¹⁵的R¹⁵选自氢、任选取代的烷基或任选取代的环烷基；

–(CR¹⁶R¹⁷)_m-的R¹⁶和R¹⁷独立地选自氢、卤素或任选取代的烷基；

式(XXXVII)和(XXXVIII)的R⁵⁰和R⁵¹独立地选自任选取代的烷基，或R⁵⁰和R⁵¹一起形成环；

–(CR¹⁶R¹⁷)_m-和

的m和n独立地是0-4的整数；

的o和p独立地是0-3的整数；

的q是0-4的整数；并且

的r是0-1的整数；

或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。

在一个实施例中，式(XXXVII)或(XXXVIII)的ILM的R¹和R²是叔丁基，并且式(XXXVII)或(XXXVIII)的ILM的R³和R⁴是四氢萘。

在本文所述的任何化合物中，ILM可以具有式(XXXIX)或(XL)的结构，其源自WO公开号2013/071039中描述的IAP配体；或其非天然模拟物：

其中：

式(XXXIX)和(XL)的R⁴³和R⁴⁴独立地选自氢、任选进一步取代的烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、环烷基、环烷基烷基，并且

式(XXXIX)和(XL)的R⁶和R⁸独立地选自氢、任选取代的烷基或任选取代的环烷基。

式(XXXIX)和(XL)的每个X独立地选自：

式(XXXIX)和(XL)的每个Z选自

其中每个

表示与化合物的连接点；并且

每个Y选自：

其中：

表示与化合物的–C＝O部分的连接点；

表示与化合物的氨基部分的连接点；

表示与Z的第一连接点；

表示与Z的第二连接点；并且

A选自-C(O)R³或

或前述中任一种的互变异构形式，其中：

-C(O)R³的R³选自OH、NHCN、NHS0₂R¹⁰、NHOR¹¹或N(R¹²)(R¹³)；

NHS0₂R¹⁰和NHOR¹¹的R¹⁰和R¹¹独立地选自-C₁-C₄烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环烷基(其任一种是任选取代的)和氢；

N(R¹²)(R¹³)的R¹²和R¹³各自独立地选自氢、-C₁-C₄烷基、-(C₁-C₄亚烷基)-NH-(C₁-C₄烷基)、苄基、-(C₁-C₄亚烷基)-C(O)OH、-(C₁-C₄亚烷基)-C(O)CH₃、-CH(苄基)-COOH、-C₁-C₄烷氧基和-(C₁-C₄亚烷基)-O-(C₁-C₄羟基烷基)；或N(R¹²)(R¹³)的R¹²和R¹³与它们共同连接的氮原子一起形成饱和杂环基，其任选包含选自N、O和S的一个另外的杂原子，并且其中饱和杂环任选被甲基取代。

在本文所述的任何化合物中，ILM可以具有式(XLI)的结构，其源自WO公开号2013/071039中描述的IAP配体；或其非天然模拟物：

其中：

式(XLI)的W¹选自O、S、N-R^A或C(R^8a)(R^8b)；

式(XLI)的W²选自O、S、N-R^A或C(R^8c)(R^8d)；条件是W¹和W²不都是O或不都是S；

式(XLI)的R¹选自H、C₁-C₆烷基、C₃-C₆环烷基、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₃-C₆环烷基)、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的杂芳基、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的芳基)或-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的杂芳基)；

当X¹选自O、N-R^A、S、S(O)或S(O)₂时，X²是C(R^2aR^2b)；

或者：

式(XLI)的X¹选自CR^2cR^2d且X²是CR^2aR^2b，并且R^2c和R^2a一起形成键；

或者：

式(XLI)的X¹和X²独立地选自C和N，并且是稠合的被取代或未被取代的饱和或部分饱和的3-10元环烷基环、稠合的被取代或未被取代的饱和或部分饱和的3-10元杂环烷基环、稠合的被取代或未被取代的5-10元芳基环或稠合的被取代或未被取代的5-10元杂芳基环的成员；

或者：

式(XLI)的X¹选自CH₂并且X²是C＝0、C＝C(R^C)₂或C＝NR^C；其中每个R^c独立地选自H、-CN、-OH、烷氧基、被取代或未被取代的C₁-C₆烷基、被取代或未被取代的C₃-C₆环烷基、被取代或未被取代的C₂-C₅杂环烷基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的杂芳基、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₃-C₆环烷基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₂-C₅杂环烷基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的芳基)或-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的杂芳基)；

N-R^A的R^A选自H、C₁-C₆烷基、-C(＝O)C₁-C₂烷基、被取代或未被取代的芳基或被取代或未被取代的杂芳基；

CR^2cR^2d和CR^2aR^2b的R^2a、R^2b、R^2c、R^2d独立地选自H、被取代或未被取代的C1-C6烷基、被取代或未被取代的C₁-C₆杂烷基、被取代或未被取代的C₃-C₆环烷基、被取代或未被取代的C₂-C₅杂环烷基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的杂芳基、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₃-C₆环烷基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₂-C₅杂环烷基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的芳基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的杂芳基)和-C(＝O)R^B；

-C(＝O)R^B的R^B选自被取代或未被取代的C₁-C₆烷基、被取代或未被取代的C₃-C₆环烷基、被取代或未被取代的C₂-C₅杂环烷基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的杂芳基、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₃-C₆环烷基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₂-C₅杂环烷基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的芳基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的杂芳基)或-NR^DR^E；

NR^DR^E的R^D和R^E独立地选自H、被取代或未被取代的C₁-C₆烷基、被取代或未被取代的C₃-C₆环烷基、被取代或未被取代的C₂-C₅杂环烷基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的杂芳基、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₃-C₆环烷基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₂-C₅杂环烷基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的芳基)或-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的杂芳基)；

式(XLI)的m选自0、1或2；

式(XLI)的-U-选自-NHC(＝O)-、-C(＝O)NH-、-NHS(＝O)₂-、-S(＝O)₂NH-、-NHC(＝O)NH-、-NH(C＝O)O-、-O(C＝O)NH-或-NHS(＝O)₂NH-；

式(XLI)的R³选自C₁-C₃烷基或C₁-C₃氟烷基；

式(XLI)的R⁴选自-NHR⁵、-N(R⁵)2、-N+(R⁵)3或-OR⁵；

-NHR⁵、-N(R⁵)2、-N+(R⁵)3和-OR⁵的每个R⁵独立地选自H、C₁-C₃烷基、C₁-C₃卤代烷基、C₁-C₃杂烷基和-C₁-C₃烷基-(C₃-C₅环烷基)；

或者：

式(XLI)的R³和R⁵与它们连接的原子一起形成被取代或未被取代的5-7元环；

或者：

式(XLI)的R³与U的氮原子键合以形成被取代或未被取代的5-7元环；

式(XLI)的R⁶选自-NHC(＝O)R⁷、-C(＝O)NHR⁷、-NHS(＝O)2R⁷、-S(＝O)₂NHR⁷；-NHC(＝O)NHR⁷、-NHS(＝O)₂NHR⁷、-(C₁-C₃烷基)-NHC(＝O)R⁷、-(C₁-C₃烷基)-C(＝O)NHR⁷、-(C₁-C₃烷基)-NHS(＝O)2R⁷、-(C₁-C₃烷基)-S(＝O)2NHR⁷；-(C₁-C₃烷基)-NHC(＝O)NHR⁷、-(C₁-C₃烷基)-NHS(＝O)2NHR⁷、被取代或未被取代的C₂-C₁₀杂环烷基或被取代或未被取代的杂芳基；

-NHC(＝O)R⁷、-C(＝O)NHR⁷、-NHS(＝O)2R⁷、-S(＝O)₂NHR⁷；-NHC(＝O)NHR⁷、-NHS(＝O)₂NHR⁷、-(C₁-C₃烷基)-NHC(＝O)R⁷、-(C₁-C₃烷基)-C(＝O)NHR⁷、-(C₁-C₃烷基)-NHS(＝O)2R⁷、-(C₁-C₃烷基)-S(＝O)2NHR⁷；-(C₁-C₃烷基)-NHC(＝O)NHR⁷、-(C₁-C₃烷基)-NHS(＝O)2NHR⁷的每个R⁷独立地选自C₁-C₆烷基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆杂烷基、被取代或未被取代的C3-C10环烷基、被取代或未被取代的C₂-C₁₀杂环烷基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的杂芳基、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₃-C₁₀环烷基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C2-C10杂环烷基、-C1-C6烷基-(被取代或未被取代的芳基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的杂芳基)、-(CH2)p-CH(被取代或未被取代的芳基)2、-(CH₂)_p-CH(被取代或未被取代的杂芳基)2、-(CH₂)_P-CH(被取代或未被取代的芳基)(被取代或未被取代的杂芳基)、-(被取代或未被取代的芳基)-(被取代或未被取代的芳基)、-(被取代或未被取代的芳基)-(被取代或未被取代的杂芳基)、-(被取代或未被取代的杂芳基)-(被取代或未被取代的芳基)或-(被取代或未被取代的杂芳基)-(被取代或未被取代的杂芳基)；

R⁷的p选自0、1或2；

C(R^8a)(R^8b)和C(R^8c)(R^8d)的R^8a、R^8b、R^8c和R^8d独立地选自H、C₁-C₆烷基、C₁-C₆氟烷基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆杂烷基和被取代或未被取代的芳基；

或者：

R^8a和R^8d如上所定义，并且R^8b和R^8c一起形成键；

或者：

R^8a和R^8d如上所定义，并且R^8b和R^8c与它们连接的原子一起形成包含1-3个选自S、O和N的杂原子的被取代或未被取代的稠合5-7元饱和或部分饱和碳环或杂环、被取代或未被取代的稠合5-10元芳基环或包含1-3个选自S、O和N的杂原子的被取代或未被取代的稠合5-10元杂芳基环；

或者：

R^8c和R^8d如上所定义，并且R^8a和R^8b与它们连接的原子一起形成包含1-3个选自S、O和N的杂原子的被取代或未被取代的饱和或部分饱和3-7元螺环或杂螺环；

或者：

R^8a和R^8b如上所定义，并且R^8c和R^8d与它们连接的原子一起形成包含1-3个选自S、O和N的杂原子的被取代或未被取代的饱和或部分饱和3-7元螺环或杂螺环；

其中每个取代的烷基、杂烷基、稠合环、螺环、杂螺环、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基被1-3个R⁹取代；并且

R^8a、R^8b、R^8c和R^8d的每个R⁹独立地选自卤素、-OH、-SH、(C＝O)、CN、C₁-C₄烷基、C1-C4氟烷基、C₁-C₄烷氧基、C₁-C₄氟烷氧基、-NH₂、-NH(C₁-C₄烷基)、-NH(C₁-C₄烷基)₂、-C(＝O)OH、-C(＝0)NH₂、-C(＝O)C₁-C₃烷基、-S(＝O)₂CH₃、-NH(C₁-C₄烷基)-OH、-NH(C₁-C₄烷基)-O-(C-C₄烷基)、-O(C₁-C₄烷基)-NH2；-O(C₁-C₄烷基)-NH-(C₁-C₄烷基)和-O(C₁-C₄烷基)-N-(C₁-C₄烷基)₂，或两个R⁹与它们连接的原子一起形成被卤素、-OH或C₁-C₃烷基取代或未被取代的亚甲基二氧基或亚乙基二氧基环。

在本文所述的任何化合物中，ILM可以具有式(XLII)的结构，其源自WO公开号2013/071039中描述的IAP配体；或其非天然模拟物：

其中：

式(XLII)的W¹是O、S、N-R^A或C(R^8a)(R^8b)；

式(XLII)的W²是O、S、N-R^A或C(R^8c)(R^8d)；条件是W¹和W²不都是O或不都是S；

式(XLII)的R¹选自H、C₁-C₆烷基、C₃-C₆环烷基、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₃-C₆环烷基)、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的杂芳基、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的芳基)或-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的杂芳基)；

当式(XLII)的X¹是N-R^A时，X²是C＝O或CR^2cR^2d和X³是CR^2aR^2b；

或者：

当式(XLII)的X¹选自S、S(O)或S(O)₂时，X²是CR^2cR^2d和X³是CR^2aR^2b；

或者：

当式(XLII)的X¹是O时，X²是CR^2cR^2d和N-R^A且X³是CR^2aR^2b；

或者：

当式(XLII)的X¹是CH₃时，X²选自O、N-R^A、S、S(O)或S(O)₂且X³是CR^2aR^2b；

当式(XLII)的X¹是CR^2eR^2f且X2是CR^2cR^2d时，并且R^2e和R^2c一起形成键，且式(VLII)的X³是CR^2aR^2b；

或者：

式(XLII)的X¹和X³都是CH₂且式(XLII)的X²是C＝0、C＝C(R^C)2或C＝NR^C；其中每个R^C独立地选自H、-CN、-OH、烷氧基、被取代或未被取代的C1-C6烷基、被取代或未被取代的C₃-C₆环烷基、被取代或未被取代的C₂-C₅杂环烷基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的杂芳基、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₃-C₆环烷基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₂-C₅杂环烷基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的芳基)或-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的杂芳基)；

或者：

式(XLII)的X¹和X²独立地选自C和N，并且是稠合的被取代或未被取代的饱和或部分饱和的3-10元环烷基环、稠合的被取代或未被取代的饱和或部分饱和的3-10元杂环烷基环、稠合的被取代或未被取代的5-10元芳基环或稠合的被取代或未被取代的5-10元杂芳基环的成员，并且X³是CR^2aR^2b；

或者：

式(XLII)的X²和X³独立地选自C和N，并且是稠合的被取代或未被取代的饱和或部分饱和的3-10元环烷基环、稠合的被取代或未被取代的饱和或部分饱和的3-10元杂环烷基环、稠合的被取代或未被取代的5-10元芳基环或稠合的被取代或未被取代的5-10元杂芳基环的成员，且式(VLII)的X¹是CR^2eR^2f；

N-R^A的R^A选自H、C₁-C₆烷基、-C(＝O)C₁-C₂烷基、被取代或未被取代的芳基或被取代或未被取代的杂芳基；

CR^2cR^2d、CR^2aR^2b和CR^2eR^2f的R^2a、R^2b、R^2c、R^2d、R^2e和R^2f独立地选自H、被取代或未被取代的C1-C6烷基、被取代或未被取代的C₁-C₆杂烷基、被取代或未被取代的C₃-C₆环烷基、被取代或未被取代的C₂-C₅杂环烷基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的杂芳基、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₃-C₆环烷基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₂-C₅杂环烷基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的芳基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的杂芳基)和-C(＝O)R^B；

-C(＝O)R^B的R^B选自被取代或未被取代的C₁-C₆烷基、被取代或未被取代的C₃-C₆环烷基、被取代或未被取代的C₂-C₅杂环烷基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的杂芳基、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₃-C₆环烷基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₂-C₅杂环烷基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的芳基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的杂芳基)或-NR^DR^E；

NR^DR^E的R^D和R^E独立地选自H、被取代或未被取代的C₁-C₆烷基、被取代或未被取代的C₃-C₆环烷基、被取代或未被取代的C₂-C₅杂环烷基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的杂芳基、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₃-C₆环烷基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₂-C₅杂环烷基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的芳基)或-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的杂芳基)；

式(XLII)的m选自0、1或2；

式(XLII)的-U-选自-NHC(＝O)-、-C(＝O)NH-、-NHS(＝O)₂-、-S(＝O)₂NH-、-NHC(＝O)NH-、-NH(C＝O)O-、-O(C＝O)NH-或-NHS(＝O)₂NH-；

式(XLII)的R³选自C₁-C₃烷基或C₁-C₃氟烷基；

式(XLII)的R⁴选自-NHR⁵、-N(R⁵)₂、-N+(R⁵)₃或-OR⁵；

-NHR⁵、-N(R⁵)₂、-N+(R⁵)₃和-OR⁵的每个R⁵独立地选自H、C₁-C₃烷基、C₁-C₃卤代烷基、C₁-C₃杂烷基和-C₁-C₃烷基-(C₃-C₅环烷基)；

或者：

式(XLII)的R³和R⁵与它们连接的原子一起形成被取代或未被取代的5-7元环；

或者：

式(XLII)的R³与U的氮原子键合以形成被取代或未被取代的5-7元环；

式(XLII)的R⁶选自-NHC(＝O)R⁷、-C(＝O)NHR⁷、-NHS(＝O)2R⁷、-S(＝O)₂NHR⁷；-NHC(＝O)NHR⁷、-NHS(＝O)₂NHR⁷、-(C₁-C₃烷基)-NHC(＝O)R⁷、-(C₁-C₃烷基)-C(＝O)NHR⁷、-(C₁-C₃烷基)-NHS(＝O)₂R⁷、-(C₁-C₃烷基)-S(＝O)₂NHR⁷；-(C₁-C₃烷基)-NHC(＝O)NHR⁷、-(C₁-C₃烷基)-NHS(＝O)₂NHR⁷、被取代或未被取代的C₂-C₁₀杂环烷基或被取代或未被取代的杂芳基；

-NHC(＝O)R⁷、-C(＝O)NHR⁷、-NHS(＝O)2R⁷、-S(＝O)₂NHR⁷；-NHC(＝O)NHR⁷、-NHS(＝O)₂NHR⁷、-(C₁-C₃烷基)-NHC(＝O)R⁷、-(C₁-C₃烷基)-C(＝O)NHR⁷、-(C₁-C₃烷基)-NHS(＝O)2R⁷、-(C₁-C₃烷基)-S(＝O)2NHR⁷；-(C₁-C₃烷基)-NHC(＝O)NHR⁷、-(C₁-C₃烷基)-NHS(＝O)2NHR⁷的每个R⁷独立地选自C₁-C₆烷基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆杂烷基、被取代或未被取代的C3-C10环烷基、被取代或未被取代的C₂-C₁₀杂环烷基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的杂芳基、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₃-C₁₀环烷基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C2-C10杂环烷基、-C1-C6烷基-(被取代或未被取代的芳基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的杂芳基)、-(CH2)p-CH(被取代或未被取代的芳基)2、-(CH₂)_p-CH(被取代或未被取代的杂芳基)2、-(CH₂)_P-CH(被取代或未被取代的芳基)(被取代或未被取代的杂芳基)、-(被取代或未被取代的芳基)-(被取代或未被取代的芳基)、-(被取代或未被取代的芳基)-(被取代或未被取代的杂芳基)、-(被取代或未被取代的杂芳基)-(被取代或未被取代的芳基)或-(被取代或未被取代的杂芳基)-(被取代或未被取代的杂芳基)；

R⁷的p选自0、1或2；

C(R^8a)(R^8b)和C(R^8c)(R^8d)的R^8a、R^8b、R^8c和R^8d独立地选自H、C₁-C₆烷基、C₁-C₆氟烷基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆杂烷基和被取代或未被取代的芳基；

或者：

R^8a和R^8d如上所定义，并且R^8b和R^8c一起形成键；

或者：

R^8a和R^8d如上所定义，并且R^8b和R^8c与它们连接的原子一起形成包含1-3个选自S、O和N的杂原子的被取代或未被取代的稠合5-7元饱和或部分饱和碳环或杂环、被取代或未被取代的稠合5-10元芳基环或包含1-3个选自S、O和N的杂原子的被取代或未被取代的稠合5-10元杂芳基环；

或者：

R^8c和R^8d如上所定义，并且R^8a和R^8b与它们连接的原子一起形成包含1-3个选自S、O和N的杂原子的被取代或未被取代的饱和或部分饱和3-7元螺环或杂螺环；

或者：

R^8a和R^8b如上所定义，并且R^8c和R^8d与它们连接的原子一起形成包含1-3个选自S、O和N的杂原子的被取代或未被取代的饱和或部分饱和3-7元螺环或杂螺环；

其中每个取代的烷基、杂烷基、稠合环、螺环、杂螺环、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基被1-3个R⁹取代；并且

R^8a、R^8b、R^8c和R^8d的每个R⁹独立地选自卤素、-OH、-SH、(C＝O)、CN、C₁-C₄烷基、C1-C4氟烷基、C₁-C₄烷氧基、C₁-C₄氟烷氧基、-NH₂、-NH(C₁-C₄烷基)、-NH(C₁-C₄烷基)₂、-C(＝O)OH、-C(＝0)NH₂、-C(＝O)C₁-C₃烷基、-S(＝O)₂CH₃、-NH(C₁-C₄烷基)-OH、-NH(C₁-C₄烷基)-O-(C-C₄烷基)、-O(C₁-C₄烷基)-NH2；-O(C₁-C₄烷基)-NH-(C₁-C₄烷基)和-O(C₁-C₄烷基)-N-(C₁-C₄烷基)₂，或两个R⁹与它们连接的原子一起形成被卤素、-OH或C₁-C₃烷基取代或未被取代的亚甲基二氧基或亚乙基二氧基环。

在本文所述的任何化合物中，ILM可以具有式(XLIII)的结构，其源自WO公开号2013/071039中描述的IAP配体；或其非天然模拟物：

其中：

式(XLIII)的W¹选自O、S、N-R^A或C(R^8a)(R^8b)；

式(XLIII)的W²选自O、S、N-R^A或C(R^8c)(R^8d)；条件是W¹和W²不都是O或不都是S；

式(XLIII)的R¹选自H、C₁-C₆烷基、C₃-C₆环烷基、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₃-C₆环烷基)、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的杂芳基、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的芳基)或-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的杂芳基)；

当式(XLIII)的X¹选自N-R^A、S、S(O)或S(O)₂时，式(XLIII)的X²是CR^2cR^2d，且式(XLIII)的X³是CR^2aR^2b；

或者：

当式(XLIII)的X¹是O时，式(XLIII)的X²选自O、N-R^A、S、S(O)或S(O)₂，且式(XLIII)的X³是CR^2aR^2b；

或者：

当式(XLIII)的X¹是CR^2eR^2f且式(XLIII)的X²是CR^2cR^2d时，并且R^2e和R^2c一起形成键，且式(XLIII)的X³是CR^2aR^2b；

或者：

式(XLIII)的X¹和X²独立地选自C和N，并且是稠合的被取代或未被取代的饱和或部分饱和的3-10元环烷基环、稠合的被取代或未被取代的饱和或部分饱和的3-10元杂环烷基环、稠合的被取代或未被取代的5-10元芳基环或稠合的被取代或未被取代的5-10元杂芳基环的成员，且式(XLIII)的X³是CR^2aR^2b；

或者：

式(XLIII)的X²和X³独立地选自C和N，并且是稠合的被取代或未被取代的饱和或部分饱和的3-10元环烷基环、稠合的被取代或未被取代的饱和或部分饱和的3-10元杂环烷基环、稠合的被取代或未被取代的5-10元芳基环或稠合的被取代或未被取代的5-10元杂芳基环的成员，且式(VLII)的X¹是CR^2eR^2f；

N-R^A的R^A是H、C₁-C₆烷基、-C(＝O)C₁-C₂烷基、被取代或未被取代的芳基或被取代或未被取代的杂芳基；

CR^2cR^2d、CR^2aR^2b和CR^2eR^2f的R^2a、R^2b、R^2c、R^2d、R^2e和R^2f独立地选自H、被取代或未被取代的C₁-C₆烷基、被取代或未被取代的C₁-C₆杂烷基、被取代或未被取代的C₃-C₆环烷基、被取代或未被取代的C₂-C₅杂环烷基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的杂芳基、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₃-C₆环烷基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₂-C₅杂环烷基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的芳基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的杂芳基)和-C(＝O)R^B；

-C(＝O)R^B的R^B是被取代或未被取代的C₁-C₆烷基、被取代或未被取代的C₃-C₆环烷基、被取代或未被取代的C₂-C₅杂环烷基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的杂芳基、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₃-C₆环烷基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₂-C₅杂环烷基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的芳基)、-C₁-C₆烷基-(未被取代或被取代的杂芳基)或-NR^DR^E；

NR^DR^E的R^D和R^E独立地选自H、被取代或未被取代的C₁-C₆烷基、被取代或未被取代的C₃-C₆环烷基、被取代或未被取代的C₂-C₅杂环烷基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的杂芳基、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₃-C₆环烷基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₂-C₅杂环烷基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的芳基)或-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的杂芳基)；

式(XLIII)的m是0、1或2；

式(XLIII)的-U-是-NHC(＝O)-、-C(＝O)NH-、-NHS(＝O)₂-、-S(＝O)₂NH-、-NHC(＝O)NH-、-NH(C＝O)O-、-O(C＝O)NH-或-NHS(＝O)₂NH-；

式(XLIII)的R³是C₁-C₃烷基或C₁-C₃氟烷基；

式(XLIII)的R⁴是-NHR⁵、-N(R⁵)₂、-N+(R⁵)₃或-OR⁵；

-NHR⁵、-N(R⁵)₂、-N+(R⁵)₃和-OR⁵的每个R⁵独立地选自H、C₁-C₃烷基、C₁-C₃卤代烷基、C₁-C₃杂烷基和-C₁-C₃烷基-(C₃-C₅环烷基)；

或者：

式(XLIII)的R³和R⁵与它们连接的原子一起形成被取代或未被取代的5-7元环；

或者：

式(XLIII)的R³与U的氮原子键合以形成被取代或未被取代的5-7元环；

式(XLIII)的R⁶选自-NHC(＝O)R⁷、-C(＝O)NHR⁷、-NHS(＝O)2R⁷、-S(＝O)₂NHR⁷；-NHC(＝O)NHR⁷、-NHS(＝O)₂NHR⁷、-(C₁-C₃烷基)-NHC(＝O)R⁷、-(C₁-C₃烷基)-C(＝O)NHR⁷、-(C₁-C₃烷基)-NHS(＝O)₂R⁷、-(C₁-C₃烷基)-S(＝O)₂NHR⁷；-(C₁-C₃烷基)-NHC(＝O)NHR⁷、-(C₁-C₃烷基)-NHS(＝O)₂NHR⁷、被取代或未被取代的C₂-C₁₀杂环烷基或被取代或未被取代的杂芳基；

-NHC(＝O)R⁷、-C(＝O)NHR⁷、-NHS(＝O)2R⁷、-S(＝O)₂NHR⁷；-NHC(＝O)NHR⁷、-NHS(＝O)₂NHR⁷、-(C₁-C₃烷基)-NHC(＝O)R⁷、-(C₁-C₃烷基)-C(＝O)NHR⁷、-(C₁-C₃烷基)-NHS(＝O)2R⁷、-(C₁-C₃烷基)-S(＝O)2NHR⁷；-(C₁-C₃烷基)-NHC(＝O)NHR⁷、-(C₁-C₃烷基)-NHS(＝O)2NHR⁷的每个R⁷独立地选自C₁-C₆烷基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆杂烷基、被取代或未被取代的C3-C10环烷基、被取代或未被取代的C₂-C₁₀杂环烷基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的杂芳基、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₃-C₁₀环烷基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C2-C10杂环烷基、-C1-C6烷基-(被取代或未被取代的芳基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的杂芳基)、-(CH2)p-CH(被取代或未被取代的芳基)2、-(CH₂)_p-CH(被取代或未被取代的杂芳基)2、-(CH₂)_P-CH(被取代或未被取代的芳基)(被取代或未被取代的杂芳基)、-(被取代或未被取代的芳基)-(被取代或未被取代的芳基)、-(被取代或未被取代的芳基)-(被取代或未被取代的杂芳基)、-(被取代或未被取代的杂芳基)-(被取代或未被取代的芳基)或-(被取代或未被取代的杂芳基)-(被取代或未被取代的杂芳基)；

R⁷的p是0、1或2；

C(R^8a)(R^8b)和C(R^8c)(R^8d)的R^8a、R^8b、R^8c和R^8d独立地选自H、C₁-C₆烷基、C₁-C₆氟烷基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆杂烷基和被取代或未被取代的芳基；

或者：

R^8a和R^8d如上所定义，并且R^8b和R^8c一起形成键；

或者：

R^8a和R^8d如上所定义，并且R^8b和R^8c与它们连接的原子一起形成包含1-3个选自S、O和N的杂原子的被取代或未被取代的稠合5-7元饱和或部分饱和碳环或杂环、被取代或未被取代的稠合5-10元芳基环或包含1-3个选自S、O和N的杂原子的被取代或未被取代的稠合5-10元杂芳基环；

或者：

R^8c和R^8d如上所定义，并且R^8a和R^8b与它们连接的原子一起形成包含1-3个选自S、O和N的杂原子的被取代或未被取代的饱和或部分饱和3-7元螺环或杂螺环；

或者：

R^8a和R^8b如上所定义，并且R^8c和R^8d与它们连接的原子一起形成包含1-3个选自S、O和N的杂原子的被取代或未被取代的饱和或部分饱和3-7元螺环或杂螺环；

其中每个取代的烷基、杂烷基、稠合环、螺环、杂螺环、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基被1-3个R⁹取代；并且

R^8a、R^8b、R^8c和R^8d的每个R⁹独立地选自卤素、-OH、-SH、(C＝O)、CN、C₁-C₄烷基、C1-C4氟烷基、C₁-C₄烷氧基、C₁-C₄氟烷氧基、-NH₂、-NH(C₁-C₄烷基)、-NH(C₁-C₄烷基)₂、-C(＝O)OH、-C(＝0)NH₂、-C(＝O)C₁-C₃烷基、-S(＝O)₂CH₃、-NH(C₁-C₄烷基)-OH、-NH(C₁-C₄烷基)-O-(C-C₄烷基)、-O(C₁-C₄烷基)-NH2；-O(C₁-C₄烷基)-NH-(C₁-C₄烷基)和-O(C₁-C₄烷基)-N-(C₁-C₄烷基)₂，或两个R⁹与它们连接的原子一起形成被卤素、-OH或C₁-C₃烷基取代或未被取代的亚甲基二氧基或亚乙基二氧基环。

在本文所述的任何化合物中，ILM可以具有式(XLIV)的结构，其源自WO公开号2013/071039中描述的IAP配体；或其非天然模拟物：

其中：

式(XLIV)的W¹选自O、S、N-R^A或C(R^8a)(R^8b)；

式(XLIV)的W²选自O、S、N-R^A或C(R^8c)(R^8d)；条件是W¹和W²不都是O或不都是S；

式(XLIV)的W³选自O、S、N-R^A或C(R^8e)(R^8f)，条件是包含W¹、W²和W³的环不包含两个相邻氧原子或硫原子；

式(XLIV)的R¹选自H、C₁-C₆烷基、C₃-C₆环烷基、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₃-C₆环烷基)、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的杂芳基、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的芳基)或-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的杂芳基)；

当式(XLIV)的X¹是O时，式(XLIV)的X²选自CR^2cR^2d和N-R^A，且式(XLIV)的X³是CR^2aR^2b；

或者：

当式(XLIV)的X¹是CH₂时，则式(XLIV)的X²选自O、N-R^A、S、S(O)或S(O)₂，且式(XLIV)的X³是CR^2aR^2b；

或者：

当式(XLIV)的X¹是CR^2eR^2f且式(XLIV)的X²是CR^2cR^2d时，并且R^2e和R^2c一起形成键，且式(XLIV)的X³是CR^2aR^2b；

或者：

式(XLIV)的X¹和X³都是CH₂且式(XLII)的X²是C＝0、C＝C(R^C)2或C＝NR^C；其中每个R^C独立地选自H、-CN、-OH、烷氧基、被取代或未被取代的C₁-C₆烷基、被取代或未被取代的C₃-C₆环烷基、被取代或未被取代的C₂-C₅杂环烷基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的杂芳基、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₃-C₆环烷基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₂-C₅杂环烷基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的芳基)或-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的杂芳基)；

或者：

式(XLIV)的X¹和X²独立地选自C和N，并且是稠合的被取代或未被取代的饱和或部分饱和的3-10元环烷基环、稠合的被取代或未被取代的饱和或部分饱和的3-10元杂环烷基环、稠合的被取代或未被取代的5-10元芳基环或稠合的被取代或未被取代的5-10元杂芳基环的成员，且式(XLIV)的X³是CR^2aR^2b；

或者：

式(XLIV)的X²和X³独立地选自C和N，并且是稠合的被取代或未被取代的饱和或部分饱和的3-10元环烷基环、稠合的被取代或未被取代的饱和或部分饱和的3-10元杂环烷基环、稠合的被取代或未被取代的5-10元芳基环或稠合的被取代或未被取代的5-10元杂芳基环的成员，且式(VLIV)的X¹是CR^2eR^2f；

N-R^A的R^A选自H、C₁-C₆烷基、-C(＝O)C₁-C₂烷基、被取代或未被取代的芳基或被取代或未被取代的杂芳基；

CR^2cR^2d、CR^2aR^2b和CR^2eR^2f的R^2a、R^2b、R^2c、R^2d、R^2e和R^2f独立地选自H、被取代或未被取代的C₁-C₆烷基、被取代或未被取代的C₁-C₆杂烷基、被取代或未被取代的C₃-C₆环烷基、被取代或未被取代的C₂-C₅杂环烷基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的杂芳基、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₃-C₆环烷基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₂-C₅杂环烷基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的芳基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的杂芳基)和-C(＝O)R^B；

-C(＝O)R^B的R^B选自被取代或未被取代的C₁-C₆烷基、被取代或未被取代的C₃-C₆环烷基、被取代或未被取代的C₂-C₅杂环烷基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的杂芳基、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₃-C₆环烷基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₂-C₅杂环烷基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的芳基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的杂芳基)或-NR^DR^E；

NR^DR^E的R^D和R^E独立地选自H、被取代或未被取代的C₁-C₆烷基、被取代或未被取代的C₃-C₆环烷基、被取代或未被取代的C₂-C₅杂环烷基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的杂芳基、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₃-C₆环烷基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₂-C₅杂环烷基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的芳基)或-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的杂芳基)；

式(XLIV)的m选自0、1或2；

式(XLIV)的-U-选自-NHC(＝O)-、-C(＝O)NH-、-NHS(＝O)₂-、-S(＝O)₂NH-、-NHC(＝O)NH-、-NH(C＝O)O-、-O(C＝O)NH-或-NHS(＝O)₂NH-；

式(XLIV)的R³选自C₁-C₃烷基或C₁-C₃氟烷基；

式(XLIV)的R⁴选自-NHR⁵、-N(R⁵)₂、-N+(R⁵)₃或-OR⁵；

-NHR⁵、-N(R⁵)₂、-N+(R⁵)₃和-OR⁵的每个R⁵独立地选自H、C₁-C₃烷基、C₁-C₃卤代烷基、C₁-C₃杂烷基和-C₁-C₃烷基-(C₃-C₅环烷基)；

或者：

式(XLIV)的R³和R⁵与它们连接的原子一起形成被取代或未被取代的5-7元环；

或者：

式(XLIII)的R³与U的氮原子键合以形成被取代或未被取代的5-7元环；

式(XLIII)的R⁶选自-NHC(＝O)R⁷、-C(＝O)NHR⁷、-NHS(＝O)2R⁷、-S(＝O)₂NHR⁷；-NHC(＝O)NHR⁷、-NHS(＝O)₂NHR⁷、-(C₁-C₃烷基)-NHC(＝O)R⁷、-(C₁-C₃烷基)-C(＝O)NHR⁷、-(C₁-C₃烷基)-NHS(＝O)₂R⁷、-(C₁-C₃烷基)-S(＝O)₂NHR⁷；-(C₁-C₃烷基)-NHC(＝O)NHR⁷、-(C₁-C₃烷基)-NHS(＝O)₂NHR⁷、被取代或未被取代的C₂-C₁₀杂环烷基或被取代或未被取代的杂芳基；

-NHC(＝O)R⁷、-C(＝O)NHR⁷、-NHS(＝O)2R⁷、-S(＝O)₂NHR⁷；-NHC(＝O)NHR⁷、-NHS(＝O)₂NHR⁷、-(C₁-C₃烷基)-NHC(＝O)R⁷、-(C₁-C₃烷基)-C(＝O)NHR⁷、-(C₁-C₃烷基)-NHS(＝O)2R⁷、-(C₁-C₃烷基)-S(＝O)2NHR⁷；-(C₁-C₃烷基)-NHC(＝O)NHR⁷、-(C₁-C₃烷基)-NHS(＝O)2NHR⁷的每个R⁷独立地选自C₁-C₆烷基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆杂烷基、被取代或未被取代的C3-C10环烷基、被取代或未被取代的C₂-C₁₀杂环烷基、被取代或未被取代的芳基、被取代或未被取代的杂芳基、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C₃-C₁₀环烷基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的C2-C10杂环烷基、-C1-C6烷基-(被取代或未被取代的芳基)、-C₁-C₆烷基-(被取代或未被取代的杂芳基)、-(CH2)p-CH(被取代或未被取代的芳基)2、-(CH₂)_p-CH(被取代或未被取代的杂芳基)2、-(CH₂)_P-CH(被取代或未被取代的芳基)(被取代或未被取代的杂芳基)、-(被取代或未被取代的芳基)-(被取代或未被取代的芳基)、-(被取代或未被取代的芳基)-(被取代或未被取代的杂芳基)、-(被取代或未被取代的杂芳基)-(被取代或未被取代的芳基)或-(被取代或未被取代的杂芳基)-(被取代或未被取代的杂芳基)；

R⁷的p选自0、1或2；

C(R^8a)(R^8b)、C(R^8c)(R^8d)和C(R^8e)(R^8f)的R^8a、R^8b、R^8c、R^8d、R^8e和R^8f独立地选自H、C₁-C₆烷基、C₁-C₆氟烷基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆杂烷基和被取代或未被取代的芳基；

或者：

C(R^8a)(R^8b)、C(R^8c)(R^8d)和C(R^8e)(R^8f)的R^8a、R^8d、R^8e和R^8f如上所定义，并且R^8b和R^8c一起形成键；

或者：

C(R^8a)(R^8b)、C(R^8c)(R^8d)和C(R^8e)(R^8f)的R^8a、R^8b、R^8d和R^8f如上所定义，并且R^8c和R^8e一起形成键；

或者：

C(R^8a)(R^8b)、C(R^8c)(R^8d)和C(R^8e)(R^8f)的R^8a、R^8d、R^8e和R^8f如上所定义，并且R^8b和R^8c与它们连接的原子一起形成包含1-3个选自S、O和N的杂原子的被取代或未被取代的稠合5-7元饱和或部分饱和碳环杂环、被取代或未被取代的稠合5-10元芳基环或包含1-3个选自S、O和N的杂原子的被取代或未被取代的稠合5-10元杂芳基环；

或者：

C(R^8a)(R^8b)、C(R^8c)(R^8d)和C(R^8e)(R^8f)的R^8a、R^8b、R^8d和R^8f如上所定义，并且R^8c和R^8e与它们连接的原子一起形成包含1-3个选自S、O和N的杂原子的被取代或未被取代的稠合5-7元饱和或部分饱和碳环或杂环、被取代或未被取代的稠合5-10元芳基环或包含1-3个选自S、O和N的杂原子的被取代或未被取代的稠合5-10元杂芳基环；

或者：

C(R^8c)(R^8d)和C(R^8e)(R^8f)的R^8c、R^8d、R^8e和R^8f如上所定义，并且R^8a和R^8b与它们连接的原子一起形成包含1-3个选自S、O和N的杂原子的被取代或未被取代的饱和或部分饱和3-7元螺环或杂螺环；

或者：

C(R^8a)(R^8b)和C(R^8e)(R^8f)的R^8a、R^8b、R^8e和R^8f如上所定义，并且R^8c和R^8d与它们连接的原子一起形成包含1-3个选自S、O和N的杂原子的被取代或未被取代的饱和或部分饱和3-7元螺环或杂螺环；

或者：

C(R^8a)(R^8b)和C(R^8c)(R^8d)的R^8a、R^8b、R^8c和R^8d如上所定义，并且R^8e和R^8f与它们连接的原子一起形成包含1-3个选自S、O和N的杂原子的被取代或未被取代的饱和或部分饱和3-7元螺环或杂螺环；

或者：

其中每个取代的烷基、杂烷基、稠合环、螺环、杂螺环、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基被1-3个R⁹取代；并且

R^8a、R^8b、R^8c、R^8d、R^8e和R^8f的每个R⁹独立地选自卤素、-OH、-SH、(C＝O)、CN、C₁-C₄烷基、C1-C4氟烷基、C₁-C₄烷氧基、C₁-C₄氟烷氧基、-NH₂、-NH(C₁-C₄烷基)、-NH(C₁-C₄烷基)₂、-C(＝O)OH、-C(＝0)NH₂、-C(＝O)C₁-C₃烷基、-S(＝O)₂CH₃、-NH(C₁-C₄烷基)-OH、-NH(C₁-C₄烷基)-O-(C-C₄烷基)、-O(C₁-C₄烷基)-NH2；-O(C₁-C₄烷基)-NH-(C₁-C₄烷基)和-O(C₁-C₄烷基)-N-(C₁-C₄烷基)₂，或两个R⁹与它们连接的原子一起形成被卤素、-OH或C₁-C₃烷基取代或未被取代的亚甲基二氧基或亚乙基二氧基环。

在本文所述的任何化合物中，ILM可以具有式(XLV)、(XLVI)或(XLVII)的结构，其源自Vamos,M.,et al.,Expedient synthesis of highly potent antagonists ofinhibitor of apoptosis proteins(IAPs)with unique selectivity for ML-IAP、ACSChem.Biol.,8(4),725-32(2013)中描述的IAP配体；或其非天然模拟物：

其中：

式(XLV)的R²、R³和R⁴独立地选自H或ME；

式(XLV)的X独立地选自O或S；并且

式(XLV)的R¹选自：

在特定的实施例中，ILM具有根据式(XLVIII)的结构：

其中式(XLVIII)的R³和R⁴独立地选自H或ME；

是选自以下的5元杂环：

在特定的实施例中，式XLVIII)的

是

在特定的实施例中，ILM具有下示结构并且连接至接头基团L：

在特定的实施例中，ILM具有根据式(XLIX)、(L)或(LI)的结构：

其中：

式(XLIX)、(L)或(LI)的R³独立地选自H或ME；

是选自以下的5元杂环：

并且

式(XLIX)、(L)或(LI)的L选自：

在特定的实施例中，(XLIX)、(L)或(LI)的L

在特定的实施例中，ILM具有根据式(LII)的结构：

在特定的实施例中，根据式(LII)的ILM化学连接至用

指示并且如下所示的区域中的接头基团L：

在本文所述的任何化合物中，ILM可以具有式(LIII)或(LIV)的结构，所述结构基于Hennessy,EJ,et al.,Discovery of aminopiperidine-based Smac mimetics as IAPantagonists,Bioorg.Med.Chem.Lett.,22(4),1960-4(2012)中描述的IAP配体；或其非天然模拟物：

其中：

式(LIII)和(LIV)的R¹选自：

式(LIII)和(LIV)的R²选自H或Me；

式(LIII)和(LIV)的R³选自：

X的选自H、卤素、甲基、甲氧基、羟基、硝基或三氟甲基。

在本文所述的任何化合物中，ILM可以具有式(LV)或(LVI)的结构或其非天然模拟物，并且化学连接至它们中所示的接头：

在本文所述的任何化合物中，ILM可以具有式(LVII)的结构，所述结构基于Cohen,F,et al.,Orally bioavailable antagonists of inhibitor of apoptosis proteinsbased on an azabicyclooctane scaffold,J.Med.Chem.,52(6),1723-30(2009)中描述的IAP配体；或其非天然模拟物：

其中：

式(LVII)的R1选自：

的X选自H、氟、甲基或甲氧基。

在特定的实施例中，ILM由以下结构表示：

在特定的实施例中，ILM选自由以下组成的群组并且ILM和接头基团L之间的化学连接如下所示：

在本文所述的任何化合物中，ILM选自由以下结构组成的群组，所述结构基于Asano,M,et al.,Design,sterioselective synthesis and biological evaluation ofnovel tri-cyclic compounds as inhibitor of apoptosis proteins(IAP)antagonists,Bioorg.Med.Chem.,21(18)：5725-37(2013)中描述的IAP配体；或其非天然模拟物：

在特定的实施例中，ILM选自由以下组成的群组并且ILM和接头基团L之间的化学连接如下所示：

在本文所述的任何化合物中，ILM可以具有式(LVIII)的结构，所述结构基于Asano,M,et al.,Design,sterioselective synthesis and biological evaluation ofnovel tri-cyclic compounds as inhibitor of apoptosis proteins(IAP)antagonists,Bioorg.Med.Chem.,21(18):5725-37(2013)中描述的IAP配体；或其非天然模拟物：

其中式(LVIII)的X是一个或两个独立地选自H、卤素或氰基的取代基。

在本文所述的任何化合物中，ILM可以具有式(LIX)或(LX)的结构或其非天然模拟物，并且化学连接至它们中所示的接头基团L：

其中式(LIX)和(LX)的X是一个或两个独立地选自H、卤素或氰基的取代基和；并且式(LIX)和(LX)的L是本文所述的接头基团。

在本文所述的任何化合物中，ILM可以具有式(LXI)的结构，所述结构基于Ardecky,RJ,et al.,Design,sysnthesis and evaluation of inhibitor of apoptosis(IAP)antagonists that are highly selective for the BIR2 domain of XIAP,Bioorg.Med.Chem.,23(14):4253-7(2013)中描述的IAP配体；或其非天然模拟物：

其中：

式(LXI)的

是天然或非天然氨基酸；并且

式(LXI)的R²选自：

在本文所述的任何化合物中，ILM可以具有式(LXII)或(LLXIII)所示的结构或其非天然模拟物，并且化学连接至它们中所示的接头基团L：

式(LXI)的

是天然或非天然氨基酸；并且

式(LXI)的L是本文所述的接头基团。

在本文所述的任何化合物中，ILM可以具有选自由以下组成的群组的结构，所述结构基于Wang,J,et al.,Discovery of novel second mitochondrial-derived activatorof caspase mimetics as selective inhibitor or apoptosis protein inhibitors,J.Pharmacol.Exp.Ther.,349(2):319-29(2014)中描述的IAP配体；或其非天然模拟物：

在本文所述的任何化合物中，ILM具有根据式(LXIX)的结构，所述结构基于Hird,AW,et al.,Structure-based design and synthesis of tricyclic IAP(Inhibitors ofApoptosis Proteins)inhibitors,Bioorg.Med.Chem.Lett.,24(7):1820-4(2014)中描述的IAP配体；或其非天然模拟物：

其中式LIX的R选自由以下组成的群组：

的R1选自H或ME；

的R2选自烷基或环烷基；

的X是1-2个独立地选自卤素、羟基、甲氧基、硝基和三氟甲基的取代基

的Z是O或NH；

的HET是单或稠合双环杂芳基；并且

式(LIX)的---是任选双键。

在特定的实施例中，化合物的ILM具有由以下表示的化学结构：

在特定的实施例中，化合物的ILM具有选自由以下组成的群组的化学结构：

术语“独立地”在本文中用于指示独立应用的变量随应用的不同而独立地变化。

术语“烷基”在其上下文中是指可任选被取代的直链、支链或环状的完全饱和烃基或烷基，优选为C₁-C₁₀，更优选为C₁-C₆，或者为C₁-C₃烷基。烷基的示例是甲基、乙基、正丁基、仲丁基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基、异丙基、2-甲基丙基、环丙基、环丙基甲基、环丁基、环戊基、环戊基乙基、环己基乙基和环己基等。在某些实施例中，烷基被一个卤素基团(At、Br、Cl、F或I)封端。在某些优选的实施例中，根据本公开的化合物可用于与脱卤素酶共价结合。这些化合物通常含有侧链(通常通过聚乙二醇基团连接)，所述侧链以烷基终止，该烷基在其远端具有卤素取代基(通常氯或溴)，这导致含有这种部分的化合物与蛋白质共价结合。

术语“烯基”是指含有至少一个C＝C键的直链、支链或环状的C₂-C₁₀(优选C₂-C₆)烃基。

术语“炔基”是指含有至少一个C≡C键的直链、支链或环状的C₂-C₁₀(优选C₂-C₆)烃基。

术语“亚烷基”在使用时是指可–(CH₂)_n-基团(n通常为0至6的整数)。当被取代时，亚烷基优选在一个或多个亚甲基上被C₁-C₆烷基(包括环丙基或叔丁基)取代，但是也可以被一个或多个卤素基团，优选1-3个卤素基团或一个或两个羟基、O-(C₁-C₆烷基)基团或氨基酸侧链取代，如本文所另外公开的。在某些实施例中，亚烷基可以被氨基甲酸乙酯或烷氧基(或其他基团)取代，所述氨基甲酸乙酯或烷氧基进一步被聚乙二醇链(具有1至10，优选1至6，通常有1至4个乙二醇单元)取代，所述聚乙二醇链被单个卤素基团优选氯基团取代的烷基链(优选但不排他地在聚乙二醇链的远端)取代。在仍其他实施例中，亚烷基(通常是亚甲基)可以被氨基酸侧链基团取代，诸如天然或非天然氨基酸的侧链基团，例如丙氨酸、β-丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、色氨酸或酪氨酸。

术语“未取代的”应指仅被氢原子取代。包括C₀的一系列碳原子是指碳不存在并被H替代，因此，C₀-C₆的一系列碳原子包括1、2、3、4、5和6的碳原子，并且对于C₀，H代替碳。

术语“取代的”或“任选取代的”应独立地指(即，当存在多于一个取代基时，每个取代基独立于另一个取代基)在上下文中分子上的任何位置的碳(或氮)位上的一个或多个取代基(在根据本公开的化合物的部分上的独立地至多五个取代基，优选至多三个取代基，通常为1或2个取代基，并且可包括自身可进一步被取代的取代基)，并且包括作为取代基的羟基；巯基；羧基；氰基(C≡N)；硝基(NO₂)；卤素(优选1、2或3个卤素，尤其是在烷基上，尤其是甲基，诸如三氟甲基)；烷基(优选C₁-C₁₀，更优选C₁-C₆)；芳基(尤其是苯基和取代的苯基，例如苄基或苯甲酰基)；烷氧基(优选C₁-C₆烷基或芳基，包括苯基和取代的苯基)；硫醚(C₁-C₆烷基或芳基)；酰基(优选C₁-C₆酰基)；酯或硫酯(优选C₁-C₆烷基或芳基)，包括亚烷基酯(使得连接在亚烷基上，而不是在酯官能团上，所述酯官能团优选被C₁-C₆烷基或芳基取代)，优选C₁-C₆烷基或芳基，卤素(优选F或Cl)；胺(包括五元或六元环亚烷基胺，进一步包括C₁-C₆烷基胺或C₁-C₆二烷基胺，所述烷基可被一个或两个羟基取代)或任选取代的–N(C₀-C₆烷基)C(O)(O-C₁-C₆烷基)(其可任选被聚乙二醇链取代，所述聚乙二醇链进一步与含有单个卤素、优选氯取代基的烷基键合)；肼；酰氨基，其优选被一个或两个C₁-C₆烷基取代(包括羧酰胺，其任选被一个或两个C₁-C₆烷基取代)；烷醇(优选C₁-C₆烷基或芳基)；或烷酸(优选C₁-C₆烷基或芳基)。根据本公开的取代基可以包括例如-SiR₁R₂R₃基团，其中R₁和R₂各自如本文中另外所述，R₃为H或C₁-C₆烷基，优选在该上下文中的R₁、R₂、R₃为C₁-C₃烷基(包括异丙基或叔丁基)。上述基团中的每一个可以直接连接到取代的部分，或者可替代地，取代基可以通过任选取代的-(CH₂)_m-或者可替代地任选取代的-(OCH₂)_m-、-(OCH₂CH₂)_m-或-(CH₂CH₂O)_m-基团连接到取代的部分(优选在芳基或杂芳基部分的情况下)，所述任选取代的基团可以被上述取代基中的任何一个或多个取代。如上所鉴定的亚烷基-(CH₂)_m-或-(CH₂)_n-基团或其他链诸如乙二醇链可以在链上的任何位置被取代。亚烷基上的优选取代基包括卤素或C₁-C₆(优选C₁-C₃)烷基，其可任选被一个或两个羟基、一个或两个醚基(O-C₁-C₆基团)、最多三个卤素基团(优选F)或本文另外描述的氨基酸侧链和任选取代的酰胺(优选如上所述取代的羧酰胺)或氨基甲酸乙酯基团(所述基团通常可被一个或两个C₀-C₆烷基取代基进一步取代)取代。在某些实施例中，亚烷基(通常是单个亚甲基)被一个或两个任选取代的C₁-C₆烷基，优选C₁-C₄烷基，最通常是甲基或O-甲基或如本文另外所述的氨基酸侧链取代。在本公开中，分子中的部分可任选地被至多五个取代基，优选地至多三个取代基取代。最通常地，在本公开中，被取代的部分被一个或两个取代基取代。

术语“取代的”(每个取代基独立于任何其他取代基)在所使用的上下文中还应指C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、卤素、酰氨基、羧酰氨基、砜包括磺酰胺、酮基、羧基、C₁-C₆酯(氧基酯或羰基酯)、C₁-C₆酮基、氨基甲酸乙酯-O-C(O)-NR₁R₂或-N(R₁)-C(O)-O-R₁、硝基、氰基和胺(尤其包括C₁-C₆亚烷基-NR₁R₂、单-或二-C₁-C₆烷基取代的胺，其可任选被一个或两个羟基取代)。除非另有说明，在上下文中这些基团中的每一个均含有1-6个碳原子。在某些实施例中，优选的取代基包括例如，-NH-、-NHC(O)-、-O-、＝O、-(CH₂)_m-(此处，m和n在上下文中是1、2、3、4、5或6)、-S-、-S(O)-、SO₂-或–NH-C(O)-NH-、-(CH₂)_nOH、-(CH₂)_nSH、-(CH₂)_nCOOH、C₁-C₆烷基、-(CH₂)_nO-(C₁-C₆烷基)、-(CH₂)_nC(O)-(C₁-C₆烷基)、-(CH₂)_nOC(O)-(C₁-C₆烷基)、-(CH₂)_nC(O)O-(C₁-C₆烷基)、-(CH₂)_nNHC(O)-R₁、-(CH₂)_nC(O)-NR₁R₂、-(OCH₂)_nOH、-(CH₂O)_nCOOH、C₁-C₆烷基、-(OCH₂)_nO-(C₁-C₆烷基)、-(CH₂O)_nC(O)-(C₁-C₆烷基)、-(OCH₂)_nNHC(O)-R₁、-(CH₂O)_nC(O)-NR₁R₂、-S(O)₂-R_S、-S(O)-R_S(R_S是C₁-C₆烷基或-(CH₂)_m-NR₁R₂基团)、NO₂、CN或卤素(F、Cl、Br、I、优选F或Cl)，取决于取代基使用的上下文。在上下文中，R₁和R₂各自为H或C₁-C₆烷基(其可以任选地被一个或两个羟基或至多三个卤素基团、优选氟取代)。在所定义的化合物和所用取代基的化学上下文内，术语“取代的”还应意指如本文另外描述的任选取代的芳基或杂芳基或任选取代的杂环基。亚烷基也可以如本文另外公开的被取代，优选被任选取代的C₁-C₆烷基(甲基、乙基或羟甲基或羟乙基是优选的，从而提供手性中心)，如本文另外描述的氨基酸基团的侧链，如上文所述的酰氨基，或氨基甲酸乙酯基团O-C(O)-NR₁R₂基团(其中R₁和R₂如本文另外所述)取代，尽管也可以使用许多其他基团作为取代基。各种任选取代的部分可以被3个或更多个取代基，优选不超过3个取代基并且优选被1或2个取代基取代。应当指出的是，在化合物中，在需要分子取代的特定位置(主要是由于化合价)，但是没有表明取代的情况下，该取代基应解释为或理解为H，除非该取代的上下文另外暗示。

在上下文中，术语“芳基”或“芳族”是指具有单环(例如，苯、苯基、苄基)或稠环(例如，萘基、蒽基、菲基等)的取代的(如本文另外描述的)或未取代的单价芳族基团，并且可以在环上任何可用的稳定位置上或另外如所呈现的化学结构所述与本公开的化合物键合。在上下文中，芳基的其他示例可包括杂环芳族环系，在环(单环)中具有一个或多个氮、氧或硫原子的“杂芳基”基团，诸如咪唑、呋喃基、吡咯、呋喃基、噻吩、噻唑、吡啶、嘧啶、吡嗪、三唑、噁唑、或稠合环系，诸如吲哚、喹啉、吲哚嗪、氮杂吲哚嗪、苯并呋喃等，其可如上所述任选地被取代。在可以提及的杂芳基中包括含氮杂芳基，例如吡咯、吡啶、吡啶酮、哒嗪、嘧啶、吡嗪、吡唑、咪唑、三唑、三嗪、四唑、吲哚、异吲哚、吲哚嗪、氮杂吲哚嗪、嘌呤、吲唑、喹啉、二氢喹啉、四氢喹啉、异喹啉、二氢异喹啉、四氢异喹啉、喹嗪、酞嗪、萘啶、喹喔啉、喹唑啉、噌啉、蝶啶、咪唑并吡啶、咪唑并三嗪、吡嗪并哒嗪、吖啶、菲啶、咔唑、咔唑啉、嘧啶、菲咯啉、并五苯(phenacene)、噁二唑、苯并咪唑、吡咯并吡啶、吡咯并嘧啶和吡啶并嘧啶；含硫芳族杂环，诸如噻吩和苯并噻吩；含氧芳族杂环，诸如呋喃、吡喃、环戊二烯并吡喃、苯并呋喃和异苯并呋喃；以及包含选自氮、硫和氧的2个或更多个杂原子的芳族杂环，诸如噻唑、噻二唑、异噻唑、苯并噁唑、苯并噻唑、苯并噻二唑、吩噻嗪、异噁唑、呋咱、吩噁嗪、吡唑并噁唑、咪唑并噻唑、噻吩并呋喃、呋喃并吡咯、吡啶并噁嗪、呋喃并吡啶、呋喃并嘧啶、噻吩并嘧啶和噁唑，等等，所有这些可以任选地被取代。

术语“取代的芳基”是指由至少一个芳环或多个稠环构成的芳族碳环基，其中至少一个为芳族，其中环被一个或多个取代基取代。例如，芳基可包含选自以下的取代基：-(CH₂)_nOH、-(CH₂)_n-O-(C₁-C₆)烷基、-(CH₂)_n-O-(CH₂)_n-(C₁-C₆)烷基、-(CH₂)_n-C(O)(C₀-C₆)烷基、-(CH₂)_n-C(O)O(C₀-C₆)烷基、-(CH₂)_n-OC(O)(C₀-C₆)烷基、胺、单或二-(C₁-C₆烷基)胺，其中胺上的烷基任选被以下取代：1或2个羟基或至多三个卤素(优选F、Cl)基团；OH、COOH、C₁-C₆烷基，优选CH₃、CF₃、OMe、OCF₃、NO₂或CN基团(其各自可以在苯环的邻位、间位和/或对位，优选对位取代)；任选取代的苯基(苯基本身优选与PTM基团包括ULM基团经由接头基团连接/附接)和/或F、Cl、OH、COOH、CH₃、CF₃、OMe、OCF₃、NO₂或CN基团中的至少一个(在苯环的邻位、间位和/或对位，优选对位)；萘基(其可以被任选取代)；任选取代的杂芳基，优选任选取代的异噁唑(包括甲基取代的异噁唑)、任选取代的噁唑(包括甲基取代的噁唑)、任选取代的噻唑(包括甲基取代的噻唑)、任选取代的异噻唑(包括甲基取代的异噻唑)、任选取代的吡咯(包括甲基取代的吡咯)、任选取代的咪唑(包括甲基取代的咪唑)、任选取代的苯并咪唑或甲氧基苄基咪唑、任选取代的oximidazole或methyloximidazole、任选取代的二唑基(包括甲基二唑基)、任选取代的三唑基(包括甲基取代的三唑基)、任选取代的吡啶基(包括卤素-(优选F)或甲基取代的吡啶基或氧杂吡啶基(其中吡啶基通过氧与苯基连接)、任选取代的呋喃、任选取代的苯并呋喃、任选取代的二氢苯并呋喃、任选取代的吲哚、吲哚嗪或氮杂吲哚嗪(2、3或4-氮杂吲哚嗪)、任选取代的喹啉及其组合。

“羧基”表示基团--C(O)OR，其中R是氢、烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、杂芳基或取代的杂芳基，而这些通用取代基的含义与本文定义的相应基团的定义相同。

术语“杂芳基”或“杂芳基团”可以指但决不限于任选取代的喹啉(其可以连接到药效团上或取代在喹啉环内的任何碳原子上)、任选取代的吲哚(包括二氢吲哚)、任选取代的吲哚嗪、任选取代的氮杂吲哚嗪(2、3或4-氮杂吲哚嗪)任选取代的苯并咪唑、苯并二唑、苯并呋喃、任选取代的咪唑、任选取代的异噁唑、任选取代的噁唑(优选甲基取代)、任选取代的二唑、任选取代的三唑、四唑、任选取代的苯并呋喃、任选取代的噻吩、任选取代的噻唑(优选甲基和/或巯基取代)、任选取代的异噻唑、任选取代的三唑(优选被甲基、三异丙基甲硅烷基、任选取代的-(CH₂)_m-O-C₁-C₆烷基或任选取代的-(CH₂)_m-C(O)-O-C₁-C₆烷基取代的1,2,3-三唑)、任选取代的吡啶(2-、3或4-吡啶)或根据以下化学结构的基团：

其中：

S^c是CHR^SS、NR^URE或O；

R^HET是H、CN、NO₂、卤素(优选Cl或F)、任选取代的C₁-C₆烷基(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代(例如，CF₃))、任选取代的O(C₁-C₆烷基)(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)或任选取代的炔属基团–C≡C-R_a，其中R_a是H或C₁-C₆烷基(优选C₁-C₃烷基)；

R^SS是H、CN、NO₂、卤素(优选F或Cl)、任选取代的C₁-C₆烷基(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)、任选取代的O-(C₁-C₆烷基)(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)或任选取代的-C(O)(C₁-C₆烷基)(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)；

R^URE是H、C₁-C₆烷基(优选H或C₁-C₃烷基)或–C(O)(C₁-C₆烷基)，所述基团各自被一个或两个羟基或最多三个卤素，优选氟基团或任选取代的杂环，例如哌啶、吗啉、吡咯烷、四氢呋喃、四氢噻吩、哌啶、哌嗪(它们各自被任选取代)取代，并且

Y^C是N或C-R^YC，其中R^YC是H、OH、CN、NO₂、卤素(优选Cl或F)、任选取代的C₁-C₆烷基(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团(例如，CF₃)取代)、任选取代的O(C₁-C₆烷基)(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)或任选取代的炔属基团–C≡C-R_a，其中R_a是H或C₁-C₆烷基(优选C₁-C₃烷基)。

术语“芳烷基”和“杂芳基烷基”是指同时包含根据上述定义的芳基，或分别地杂芳基以及烷基和/或杂烷基和/或碳环和/或杂环烷基环系的基团。

如本文所用，术语“芳基烷基”是指附加于以上定义的烷基的以上定义的芳基。芳基烷基通过烷基连接至母体部分，其中烷基为一至六个碳原子。芳基烷基中的芳基可以如上所定义被取代。

术语“杂环”是指含有至少一个杂原子例如N、O或S的环状基团，并且可以是芳族(杂芳基)或非芳族的。因此，取决于其所使用的上下文，杂芳基部分包含在杂环的定义下。上文描述了示例性的杂芳基。

示例性的杂环包括：氮杂环丁烷基、苯并咪唑基、1,4-苯并二噁烷基、1,3-苯并二氧杂环戊烯基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、二氢咪唑基、二氢吡喃基、二氢呋喃基、二噁烷基、二氧杂环戊烷基、亚乙基脲、1,3-二氧杂环戊烷、1,3-二噁烷、1,4-二噁烷、呋喃基、高哌啶基、咪唑基、咪唑啉基、咪唑烷基、二氢吲哚基、吲哚基、异喹啉基、异噻唑烷基、异噻唑基、异噁唑烷基、异噁唑基、吗啉基、萘啶基、噁唑烷基、噁唑基、吡啶酮、2-吡咯烷酮、吡啶、哌嗪基、N-甲基哌嗪基、哌啶基、邻苯二甲酰亚胺、琥珀酰亚胺、吡嗪基、吡唑啉基、吡啶基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、吡咯基、喹啉基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢喹啉、噻唑烷基、噻唑基、噻吩基、四氢噻吩、环氧乙烷、氧杂环丁烷基、氧杂硫杂环戊烷基(oxathiolanyl)、硫杂环己烷等。

杂环基团可以任选地被选自由以下组成的群组的成员取代：烷氧基、取代的烷氧基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、酰基、酰基氨基、酰基氧基、氨基、取代的氨基、氨基酰基、氨基酰基氧基、氧基氨基酰基、叠氮基、氰基、卤素、羟基、酮基、硫代酮基、羧基、羧基烷基、硫基芳氧基、硫基杂芳氧基、硫基杂环氧基、巯基、硫基烷氧基、取代的硫基烷氧基、芳基、芳氧基、杂芳基、杂芳氧基、杂环、杂环氧基、羟基氨基、烷氧基氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-取代的烷基、-SO芳基、-SO-杂芳基、-SO2-烷基、-SO2-取代的烷基、-SO2-芳基、氧代(═O)和-SO2-杂芳基。这样的杂环基可具有单个环或多个稠环。氮杂环和杂芳基的示例包括但不限于吡咯、咪唑、吡唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、哒嗪、吲哚嗪、异吲哚、吲哚、吲唑、嘌呤、喹嗪、异喹啉、喹啉、酞嗪、萘啶、喹喔啉、喹唑啉、噌啉、蝶啶、咔唑、咔啉、菲啶、吖啶、菲咯啉、异噻唑、吩嗪、异噁唑、吩噁嗪、吩噻嗪、咪唑烷、咪唑啉、哌啶、哌嗪、二氢吲哚、吗啉代、哌啶基、四氢呋喃基等以及N-烷氧基-含氮杂环。术语“杂环”还包括其中任何杂环稠合至苯环或环己烷环或另一个杂环的双环基团(例如，吲哚基、喹啉基、异喹啉基、四氢喹啉基等)。

术语“环烷基”可以指但决不限于单价基团，其衍生自如本文所定义的单环或多环烷基或环烷烃，例如，在环中具有三至二十个碳原子的饱和单环烃基，包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基等。术语“取代的环烷基”可以指但决不限于单环或多环烷基，并被一个或多个取代基取代，例如被氨基、卤素、烷基、取代的烷基、碳基氧基、碳基巯基、芳基、硝基、巯基或磺基取代，而这些通用取代基的含义与该说明中定义的相应基团的定义相同。

“杂环烷基”是指单环或多环烷基，其中其环状结构的至少一个环碳原子被选自由N、O、S或P组成的群组的杂原子替代。“取代的杂环烷基”是指单环或多环烷基，其中其环状结构的至少一个环碳原子被选自由N、O、S或P组成的群组的杂原子替代，并且该基团包含一个或多个选自由以下组成的群组的取代基：卤素、烷基、取代的烷基、碳基氧基、碳基巯基、芳基、硝基、巯基或磺基，而这些通用取代基的含义与该说明中定义的相应基团的定义相同。

术语“烃基”是指含有碳和氢并且可以是完全饱和的、部分不饱和的或芳族的化合物并且包括芳基、烷基、烯基和炔基。

术语“独立地”在本文中用于指示独立应用的变量随应用的不同而独立地变化。

术语“低级烷基”是指甲基、乙基或丙基

术语“低级烷氧基”是指甲氧基、乙氧基或丙氧基。

在本文所述的任何实施例中，W、X、Y、Z、G、G’、R、R’、R”、Q1-Q4、A和Rn可独立地共价连接至接头和/或连接有一个或多个PTM、ULM、ILM或ILM’基团的接头。

示例性MLM

在某些另外的实施例中，双官能化合物的MLM包括化学部分，诸如取代的咪唑啉、取代的螺-吲哚酮、取代的吡咯烷、取代的哌啶酮、取代的吗啉酮、取代的吡咯并嘧啶、取代的咪唑并吡啶、取代的噻唑并咪唑啉、取代的吡咯并吡咯烷酮和取代的异喹啉酮。

在另外的实施例中，MLM包括上面提及的具有位置为顺式或反式构型的相邻双芳基取代的核心结构。

在另外的实施例中，MLM包括如RG7112、RG7388、SAR405838、AMG-232、AM-7209、DS-5272、MK-8242和NVP-CGM-097以及类似物或衍生物中的部分结构特征。

在某些优选的实施例中，MLM是由式(A-1)表示的取代的咪唑啉，或由式(A-2)表示的噻唑并咪唑啉，或由式(A-3)表示的螺吲哚啉酮，或由式(A-4)表示的吡咯烷，或由式(A-5)表示的哌啶酮/吗啉酮，或由式(A-6)表示的异喹啉酮，或由式(A-7)表示的吡咯并嘧啶/咪唑并吡啶，或由式(A-8)表示的吡咯并吡咯烷酮/咪唑并吡咯烷酮的衍生物。

其中上述式(A-1)至式(A-8)，

式(A-1)至式(A-8)的X选自由以下组成的群组：碳、氧、硫、亚砜、砜和N-R^a；

R^a独立地是H或具有1-6个碳数的烷基；

式(A-1)至式(A-8)的Y和Z独立地是碳或氮；

式(A-1)至式(A-8)的A、A’和A”独立地选自C、N、O或S，也可以是形成稠合的双环或6,5-和5,5-稠合芳族双环基团的一个或两个原子；

式(A-1)至式(A-8)的R₁、R₂独立地选自由以下组成的群组：芳基或杂芳基、具有一个或两个独立地选自硫或氮的杂原子的杂芳基，其中芳基或杂芳基可以是单环或双环或未被取代或被一至三个取代基取代，所述取代基独立地选自由以下组成的群组：

卤素、-CN、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、-OH、具有1-6个碳的烷氧基、具有1-6个碳的氟取代的烷氧基、具有1-6个碳的亚砜、具有1-6个碳的砜、具有2-6个碳的酮、具有2-6个碳的酰胺和具有2-6个碳的二烷基胺；

式(A-1)至式(A-8)的R₃、R₄独立地选自由以下组成的群组：H、甲基和C1-C6烷基；

式(A-1)至式(A-8)的R₅选自由以下组成的群组：芳基或杂芳基、具有一个或两个独立地选自硫或氮的杂原子的杂芳基，其中芳基或杂芳基可以是单环或双环或未被取代或被一至三个取代基取代，所述取代基独立地选自由以下组成的群组：

卤素、-CN、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、-OH、具有1-6个碳的烷氧基、具有1-6个碳的氟取代的烷氧基、具有1-6个碳的亚砜、具有1-6个碳的砜、具有2-6个碳的酮、具有2-6个碳的酰胺、具有2-6个碳的二烷基胺、烷基醚(C2-C6)、烷基酮(C3-C6)、吗啉基、烷基酯(C3-C6)、烷基氰化物(C3-C6)；

式(A-1)至式(A-8)的R₆是H或–C(＝O)R^b，其中

式(A-1)至式(A-8)的R^b选自由以下组成的群组：烷基；环烷基；单-、二-或三-取代的芳基或杂芳基；4-吗啉基；1-(3-氧代哌嗪基)；1-哌啶基；4-N-R^c-吗啉基；4-R^c-1-哌啶基和3-R^c-1-哌啶基，其中

式(A-1)至式(A-8)的R^c选自由以下组成的群组：烷基；氟取代的烷基；氰基烷基；羟基-取代的烷基；环烷基；烷氧基烷基；酰胺烷基；烷基砜；烷基亚砜；烷基酰胺；芳基；杂芳基；单-、二-或三-取代的芳基或杂芳基；CH2CH2R^d和CH2CH2CH2R^d，其中

式(A-1)至式(A-8)的R^d选自由以下组成的群组：烷氧基、烷基砜、烷基亚砜、N-取代的羧酰胺、-NHC(O)-烷基、-NH-SO₂-烷基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基；

式(A-1)至式(A-8)的R₇选自由以下组成的群组：H、C1-C6烷基、环烷基、氟取代的烷基、氰基取代的烷基、5-或6-元杂芳基或芳基、取代的5-或6-元杂芳基或芳基；

式(A-1)至式(A-8)的R₈选自由以下组成的群组：-R^e-C(O)-R^f、-R^e-烷氧基、-R^e-芳基、-R^e-杂芳基和-R^e-C(O)-R^f-C(O)-R^g，其中：

式(A-1)至式(A-8)的R^e是具有1-6个碳的亚烷基或键；

式(A-1)至式(A-8)的R^f是取代的4-至7-元杂环；

式(A-1)至式(A-8)的R^g选自由以下组成的群组：芳基、杂芳基、取代的芳基或杂芳基和4-至7-元杂环；

式(A-1)至式(A-8)的R₉选自由以下组成的群组：式(A-3)中稠合芳族杂环上的单-、二-或三-取代基，其中所述取代基独立地选自由以下组成的群组：卤素、烯烃、炔烃、烷基，其未被取代或被Cl或F取代；

式(A-1)至式(A-8)的R₁₀选自由以下组成的群组：芳基或杂芳基，其中杂芳基可以含有一个或两个为硫或氮的杂原子，芳基或杂芳基可以是单环或双环的，芳基或杂芳基可以被一至三个取代基取代或未被取代，所述取代基包括卤素、F、Cl、-CN、烯烃、炔烃、C1-C6烷基、C1-C6环烷基、-OH、具有1-6个碳的烷氧基、具有1-6个碳的氟取代的烷氧基、具有1-6个碳的亚砜、具有1-6个碳的砜、具有2-6个碳的酮；

式(A-1)至式(A-8)的R₁₁是-C(O)-N(R^h)(Rⁱ)，其中R^h和Rⁱ选自由以下组成的群组：

H；任选取代的直链或支链C1-C6烷基；烷氧基取代的烷基；单-和二-羟基取代的烷基(例如，C3-C6)、砜取代的烷基；任选取代的芳基；任选取代的杂芳基；单-、二-或三-取代的芳基或杂芳基；苯基-4-羧酸；取代的苯基-4-羧酸、烷基羧酸；任选取代的杂芳基羧酸；烷基羧酸；氟取代的烷基羧酸；任选取代的环烷基、3-羟基环丁烷、4-羟基环己烷、芳基取代的环烷基；杂芳基取代的环烷基；或Rh和Ri一起形成环；

式(A-1)至式(A-8)的R₁₂和R₁₃独立地选自H、低级烷基(C1-C6)、低级烯基(C2-C6)、低级炔基(C2-C6)、环烷基(4、5和6-元环)、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、5-和6-元芳基和杂芳基，R12和R13可以连接以形成在环上有或没有取代的5-和6-元环；

式(A-1)至式(A-8)的R₁₄选自由以下组成的群组：烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环、取代的杂环、环烷基、取代的环烷基、环烯基和取代的环烯基；

式(A-1)至式(A-8)的R₁₅是CN；

式(A-1)至式(A-8)的R₁₆选自由以下组成的群组：C1-6烷基；C1-6环烷基；C2-6烯基；一个或多个氢被氟替代的C1-6烷基或C3-6环烷基；一个CH₂被S(＝O)、-S或-S(＝O)₂替代的烷基或环烷基；末端CH₃被S(＝O)₂N(烷基)(烷基)、-C(＝O)N(烷基)(烷基)、-N(烷基)S(＝O)₂(烷基)、-C(＝O)2(烷基)、-O(烷基)替代的烷基或环烷基；氢被羟基替代的C1-6烷基或烷基-环烷基；任选含有-(C＝0)-基团的3-7元环烷基或杂环烷基，或5-6元芳基或杂芳基，所述杂环烷基或杂芳基可以含有一至三个独立地选自O、N或S的杂原子，并且所述环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基可被一至三个取代基取代或未被取代，所述取代基独立地选自卤素、C1-6烷基、羟基化C1-6烷基、含有硫醚、醚、砜、亚砜、氟取代的醚或氰基的C1-6烷基；

式(A-1)至式(A-8)的R₁₇选自由以下组成的群组：(CH₂)nC(O)NR^kR^l，其中R^k和R^l独立地选自H、C1-6烷基、羟基化C1-6烷基、C1-6烷氧基烷基、一个或多个氢被氟替代的C1-6烷基、一个碳被S(O)、S(O)(O)替代的C1-6烷基、一个或多个氢被氟替代的C1-6烷氧基烷基、氢被氰基替代的C1-6烷基、5和6元芳基或杂芳基、烷基芳基(其中烷基含有1-6个碳)和烷基杂芳基(其中烷基含有1-6个碳)，其中芳基或杂芳基可进一步被取代；

式(A-1)至式(A-8)的R₁₈选自由以下组成的群组：取代的芳基、杂芳基、烷基、环烷基，取代优选是-N(C1-4烷基)(环烷基)、-N(C1-4烷基)烷基-环烷基和-N(C1-4烷基)[(烷基)-(杂环-取代的)-环烷基]；

式(A-1)至式(A-8)的R₁₉选自由以下组成的群组：芳基、杂芳基、双环杂芳基，并且这些芳基或杂芳基可以被卤素、C1-6烷基、C1-6环烷基、CF₃、F、CN、炔烃、烷基砜取代，所述卤素取代可以是单-、二-或三-取代；

式(A-1)至式(A-8)的R₂₀和R₂₁独立地选自C1-6烷基、C1-6环烷基、C1-6烷氧基、羟基化C1-6烷氧基和氟取代的C1-6烷氧基，其中R₂₀和R₂₁可以进一步连接以形成可进一步被取代的5、6和7-元环或杂环；

式(A-1)至式(A-8)的R₂₂选自由以下组成的群组：H、C1-6烷基、C1-6环烷基、羧酸、羧酸酯、酰胺、反向酰胺、磺酰胺、反向磺酰胺、N-酰基脲、含氮5-元杂环，所述5-元杂环可进一步被C1-6烷基、烷氧基、氟-取代的烷基、CN和烷基砜取代；

式(A-1)至式(A-8)的R₂₃选自芳基、杂芳基、-O-芳基、-O-杂芳基、-O-烷基、-O-烷基-环烷基、-NH-烷基、-NH-烷基-环烷基、-N(H)-芳基、-N(H)-杂芳基、-N(烷基)-芳基、-N(烷基)-杂芳基，所述芳基或杂芳基可被卤素、C1-6烷基、羟基化C1-6烷基、环烷基、氟-取代的C1-6烷基、CN、烷氧基、烷基砜、酰胺和磺酰胺取代；

式(A-1)至式(A-8)的R₂₄选自由以下组成的群组：-CH2-(C1-6烷基)、-CH2-环烷基、-CH2-芳基、CH2-杂芳基，其中烷基、环烷基、芳基和杂芳基可被卤素、烷氧基、羟基化烷基、氰基-取代的烷基、环烷基和取代的环烷基取代；

式(A-1)至式(A-8)的R₂₅选自由以下组成的群组：C1-6烷基、C1-6烷基-环烷基、烷氧基-取代的烷基、羟基化烷基、芳基、杂芳基、取代的芳基或杂芳基、5、6和7-元含氮饱和杂环、5,6-稠合和6,6-稠合含氮饱和杂环，并且这些饱和杂环可以被C1-6烷基、氟-取代的C1-6烷基、烷氧基、芳基和杂芳基取代；

式(A-1)至式(A-8)的R₂₆选自由以下组成的群组：C1-6烷基、C3-6环烷基，所述烷基或环烷基可以被-OH、烷氧基、氟-取代的烷氧基、氟-取代的烷基、-NH₂、-NH-烷基、NH-C(O)烷基、-NH-S(O)₂-烷基和-S(O)₂-烷基取代；

式(A-1)至式(A-8)的R₂₇选自由以下组成的群组：芳基、杂芳基、双环杂芳基，其中芳基或杂芳基可以被C1-6烷基、烷氧基、NH2、NH-烷基、卤素或-CN取代，并且所述取代可以独立地是单-、二-和三-取代；

式(A-1)至式(A-8)的R₂₈选自由以下组成的群组：芳基、5和6-元杂芳基、双环杂芳基、环烷基、饱和杂环诸如哌啶、哌啶酮、四氢吡喃、N-酰基-哌啶，其中环烷基、饱和杂环、芳基或杂芳基可以进一步被-OH；烷氧基；单-、二-或三-取代，包括卤素；-CN；烷基砜和氟取代的烷基取代；并且

式(A-1)至式(A-8)的R_1”选自由以下组成的群组：H、烷基、芳基取代的烷基、烷氧基取代的烷基、环烷基、芳基-取代的环烷基和烷氧基取代的环烷基。

在某些实施例中，式(A-1)至式(A-8)的R^f和R^g中杂环的是取代的吡咯烷、取代的哌啶、取代的哌嗪。

更具体地，MLM的非限制性示例包括以下所示的那些以及由以下分子中所示的一种或多种不同特征的组合产生的那些“混合”分子。

使用在A-1至A-8中的MLM，可以制备以下PROTAC以靶向特定的蛋白质进行降解，其中“L”是连接体(即接头基团)，并且“PTM”是结合靶蛋白的配体。

在某些实施例中，说明书提供了一种双官能分子，其包含选自由以下组成的群组的结构：

其中X、R^a、Y、Z、A、A’、A”、R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R^b、R^c、R^d、R₇、R^e、R^f、R^g、R₉、R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄、R₁₅、R₁₆、R₁₇、R^k、R^l、R₁₈、R₁₉、R₂₀、R₂₁、R₂₂、R₂₃，R₂₄、R₂₅、R₂₆、R₂₇、R₂₈和R_1”如本文对于式(A-1)至(A-8)所定义的。

在某些实施例中，说明书提供了具有以下结构的双官能或嵌合分子：PTM-L-MLM，其中PTM是通过L与MLM偶联的蛋白质靶结合部分，其中L是键(即，不存在)或化学接头。在某些实施例中，MLM具有选自由以下组成的群组的结构：A-1-1、A-1-2、A-1-3和A-1-4的结构：

其中：

式A-1-1至A-1-4(即A-1-1、A-1-2、A-1-3和A-1-4)的R1’和R2’独立地选自由以下组成的群组：F、Cl、Br、I、乙炔、CN、CF₃和NO₂；

R3’选自由以下组成的群组：-OCH₃、-OCH₂CH₃、-OCH₂CH₂F、-OCH₂CH₂OCH₃和-OCH(CH₃)₂；

式A-1-1至A-1-4的R4’选自由以下组成的群组：H、卤素、-CH₃、-CF₃、-OCH₃、-C(CH₃)₃、-CH(CH₃)₂、-环丙基、-CN、-C(CH₃)₂OH、-C(CH₃)₂OCH₂CH₃、-C(CH₃)₂CH₂OH、-C(CH₃)₂CH₂OCH₂CH₃、-C(CH₃)₂CH₂OCH₂CH₂OH、-C(CH₃)₂CH₂OCH₂CH₃、-C(CH₃)₂CN、-C(CH₃)₂C(O)CH₃、-C(CH₃)₂C(O)NHCH₃、-C(CH₃)₂C(O)N(CH₃)₂、-SCH₃、-SCH₂CH₃、-S(O)₂CH₃、-S(O₂)CH₂CH₃、-NHC(CH₃)₃、-N(CH₃)₂、吡咯烷基和4-吗啉基；

式A-1-1至A-1-4的R5’选自由以下组成的群组：卤素、-环丙基、-S(O)₂CH₃、-S(O)₂CH₂CH₃、1-吡咯烷基、-NH₂、-N(CH₃)₂和-NHC(CH₃)₃；并且

式A-1-1至A-1-4的R6’选自下示结构，其中接头连接点表示为“*”。

除了R6'作为接头连接点，R4'也可以用作接头连接位置。如果R4'是接头连接位点，则接头将连接到上面显示的R4'基团的末端原子。

在某些实施例中，式A-1-1至A-1-4的接头连接位置是R4’或R6’或二者中的至少一个。

在某些实施例中，式A-1-1至A-1-4的R6’独立地选自由以下组成的群组：H、

其中“*”表示接头的连接点。

在某些实施例中，式A-4-1至A-4-6的接头连接至R1’、R2’、R3’、R4’、R5’、R6’或其组合中的至少一个。

在某些实施例中，说明书提供了具有以下结构的双官能或嵌合分子：PTM-L-MLM，其中PTM是通过L与MLM偶联的蛋白质靶结合部分，其中L是键(即，不存在)或化学接头。在某些实施例中，MLM具有选自由以下组成的群组的结构：A-4-1、A-4-2、A-4-3、A-4-4、A-4-5和A-4-6：

其中：

式A-4-1至A-4-6(即A-4-1、A-4-2、A-4-3、A-4-4、A-4-5和A-4-6)的R7’是一个或多个(例如，1、2、3、4个)卤素；

式A-4-1至A-4-6的R8’是一个或多个选自由以下组成的群组的基团(例如，1、2、3或4个基团)：H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO₂、乙炔基、环丙基、甲基、乙基、异丙基、乙烯基、甲氧基、乙氧基、异丙氧基、-OH、其他C1-6烷基、其他C1-6烯基和C1-6炔基，其是单-、二-或三-取代；

式A-4-1至A-4-6的R9’选自由以下组成的群组：烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、烯基和取代的环烯基；

式A-4-1至A-4-6的Z选自由以下组成的群组：H、-OCH₃、-OCH₂CH₃和卤素；

式A-4-1至A-4-6的R10’和R11’各自独立地选自由以下组成的群组：H、(CH₂)_n-R'、(CH₂)_n-NR'R”、(CH₂)_n-NR'COR”、(CH₂)_n-NR'SO₂R”、(CH₂)_n-COOH、(CH₂)_n-COOR'、(CH)_n-CONR'R”、(CH₂)_n-OR'、(CH₂)_n-SR'、(CH₂)_n-SOR'、(CH₂)_n-CH(OH)-R'、(CH₂)_n-COR'、(CH₂)_n-SO₂R’、(CH₂)_n-SONR'R”、(CH₂)_n-SO₂NR'R”、(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-R'、(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-OH、(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-OR'、(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-NR'R”、(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-NR'COR”、(CH₂CH₂O)_m(CH₂)_n-NR'SO₂R”、(CH₂CH₂O)_m(CH₂)_n-COOH、(CH₂CH₂O)_m(CH₂)_n-COOR'、(CH₂CH₂O)_m-(CH2)_n-CONR'R”、(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-SO₂R'、(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-COR'、(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-SONR'R”、(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-SO₂NR'R”、(CH₂)_p-(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_nR'、(CH₂)p-(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-OH、(CH₂)_p-(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)n-OR'、(CH₂)_p-(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-NR'R”、(CH₂)_p-(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-NR'COR”、(CH₂)_p-(CH₂CH₂O)m-(CH₂)_n-NR'SO₂R”、(CH₂)_p-(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-COOH、(CH₂)_p-(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-COOR'、(CH₂)_p-(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-CONR'R”、(CH₂)p-(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-SO₂R'、(CH2)_p-(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-COR'、(CH₂)_p-(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-SONR'R”、(CH₂)_p-(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-SO₂NR'R”、芳基-(CH₂)_n-COOH和杂芳基-烷基-CO-烷基-NR'R”m，其中烷基可以被OR'和杂芳基-(CH₂)_n-杂环取代，其中杂环可以任选被烷基、羟基、COOR'和COR'取代；其中R'和R”选自H、烷基、被卤素取代的烷基、羟基、NH2、NH(烷基)、N(烷基)₂、氧代、羧基、环烷基和杂芳基；

m、n和p独立地是0-6；

式A-4-1至A-4-6的R12’选自由以下组成的群组：-O-(烷基)、-O-(烷基)-烷氧基、-C(O)-(烷基)、-C(OH)-烷基-烷氧基、-C(O)-NH-(烷基)、-C(O)-N-(烷基)₂、-S(O)-(烷基)、S(O)₂-(烷基)、-C(O)-(环胺)和-O-芳基-(烷基)、-O-芳基-(烷氧基)；

式A-4-1至A-4-6的R1”选自由以下组成的群组：H、烷基、芳基取代的烷基、烷氧基取代的烷基、环烷基、芳基取代的环烷基和烷氧基取代的环烷基。

在本文描述的任何方面或实施例中，烷基、烷氧基等可以是低级烷基或低级烷氧基。

在某些实施例中，式A-4-1至A-4-6的接头连接位置为Z、R8’、R9’、R10’、R11”、R12”或R1”中的至少一个。

用于设计A-1-1至A-1-4、A-4-1至A-4-6中提出的嵌合分子的方法可以应用于具有式A-2、A-3、A-5、A-6、A-7和A-8的MLM，其中MLM中的溶剂暴露区域可以连接至接头“L”，所述接头将与靶蛋白配体“PTM”连接以构建PROTAC。

在本文所述的任何方面或实施例中，MLM选自：

示例性的MDM2结合部分包括但不限于以下：

1.Vassilev,et al.,In vivo activation of the p53 pathway by small-molecule antagonists of MDM2,SCIENCE vol:303,pag:844-848(2004)和Schneekloth,et al.,Targeted intracellular protein degradation induced by a smallmolecule:En route to chemical proteomics,Bioorg.Med.Chem.Lett.18(2008)5904–5908中鉴定的HDM2/MDM2抑制剂，(或另外)包括下述化合物nutlin-3、nutlin-2和nutlin-1(衍生化)及其所有衍生物和类似物：

(衍生的，其中接头基团L或–(L-MLM)基团连接在例如甲氧基或作为羟基)；

(衍生的，其中接头基团L或–(L-MLM)基团连接在例如甲氧基或羟基)；

(衍生的，其中接头基团L或–(L-MLM)基团例如通过甲氧基或作为羟基连接)；和

2.反式-4-碘-4'-硼烷基-查耳酮

(衍生的，其中接头基团L或–(L-MLM)基团例如通过羟基连接)。

示例性CLM

新-酰亚胺化合物

一方面，本说明书提供了可用于结合和/或抑制cereblon的化合物。在某些实施例中，所述化合物选自由以下化学结构组成的群组：

其中：

式(a)至(f)的W独立地选自以下群组：CH₂、CHR、C＝O、SO₂、NH和N-烷基；

式(a)至(f)的X独立地选自以下群组：O、S和H₂；

式(a)至(f)的Y独立地选自以下群组：CH₂、-C＝CR’、NH、N-烷基、N-芳基、N-杂芳基、N-环烷基、N-杂环基、O和S；

式(a)至(f)的Z独立地选自以下群组：O和S或H₂，除了X和Z不能都是H₂；

式(a)至(f)的G和G’独立地选自以下群组：H、任选取代的直链或支链烷基、OH、R’OCOOR、R’OCONRR”、任选被R’取代的CH₂-杂环基和任选被R’取代的苄基；

式(a)至(f)的Q1–Q4表示被独立地选自R’、N或N-氧化物的基团取代的碳C；

式(a)至(f)的A独立地选自以下群组：H、任选取代的直链或支链烷基、环烷基、Cl和F；

式(a)至(f)的R包含但不限于：-CONR’R”、-OR’、-NR’R”、-SR’、-SO₂R’、-SO₂NR’R”、-CR’R”-、-CR’NR’R”-、(-CR’O)_n’R”、-芳基、-杂芳基、-任选取代的直链或支链烷基、-环烷基、-杂环基、-P(O)(OR’)R”、-P(O)R’R”、-OP(O)(OR’)R”、-OP(O)R’R”、-Cl、-F、-Br、-I、-CF₃、-CN、-NR’SO₂NR’R”、-NR’CONR’R”、-CONR’COR”、-NR’C(＝N-CN)NR’R”、-C(＝N-CN)NR’R”、-NR’C(＝N-CN)R”、-NR’C(＝C-NO₂)NR’R”、-SO₂NR’COR”、-NO₂、-CO₂R’、-C(C＝N-OR’)R”、-CR’＝CR’R”、-CCR’、-S(C＝O)(C＝N-R’)R”、-SF₅和-OCF₃

式(a)至(f)的R’和R”独立地选自键、H、烷基、环烷基、芳基、杂芳基、杂环、-C(＝O)R、杂环基，其各自任选被取代；

式(a)至(f)的n'是1-10的整数(例如，1-4、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)；

式(a)至(f)的

表示键，其可以是立体定向的((R)或(S))或非立体定向的；并且

式(a)至(f)的R_n包含1-4个独立选择的官能团或原子，例如O、OH、N、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、-烷基-芳基(例如，–烷基-芳基，包括C1-C6烷基、C4-C7芳基或其组合中的至少一个)、芳基(例如，C5-C7芳基)、胺、酰胺或羧基。

示例性CLM

在本文所述的任何化合物中，CLM包含选自以下群组的化学结构：

其中：

式(a)至(f)的W独立地选自以下群组：CH₂、CHR、C＝O、SO₂、NH和N-烷基；

式(a)至(f)的X独立地选自以下群组：O、S和H2；

式(a)至(f)的Y独立地选自以下群组：CH₂、-C＝CR’、NH、N-烷基、N-芳基、N-杂芳基、N-环烷基、N-杂环基、O和S；

式(a)至(f)的Z独立地选自以下群组：O和S或H2，除了X和Z不能都是H2；

式(a)至(f)的G和G’独立地选自以下群组：H、任选取代的直链或支链烷基、OH、R’OCOOR、R’OCONRR”、任选被R’取代的CH₂-杂环基和任选被R’取代的苄基；

式(a)至(f)的Q1–Q4表示被独立地选自R’、N或N-氧化物的基团取代的碳C；

式(a)至(f)的A独立地选自以下群组：H、烷基(直链、支链、任选取代)、环烷基、Cl和F；

式(a)至(f)的R包括但不限于：-CONR’R”、-OR’、-NR’R”、-SR’、-SO2R’、-SO2NR’R”、-CR’R”-、-CR’NR’R”-、(-CR’O)_n’R”、-芳基、-杂芳基、-烷基、-环烷基、-杂环基、-P(O)(OR’)R”、-P(O)R’R”、-OP(O)(OR’)R”、-OP(O)R’R”、-Cl、-F、-Br、-I、-CF3、-CN、-NR’SO2NR’R”、-NR’CONR’R”、-CONR’COR”、-NR’C(＝N-CN)NR’R”、-C(＝N-CN)NR’R”、-NR’C(＝N-CN)R”、-NR’C(＝C-NO2)NR’R”、-SO2NR’COR”、-NO2、-CO2R’、-C(C＝N-OR’)R”、-CR’＝CR’R”、-CCR’、-S(C＝O)(C＝N-R’)R”、-SF5和-OCF3

式(a)至(f)的R’和R”独立地选自键、H、烷基、环烷基、芳基、杂芳基、杂环、-C(＝O)R、杂环基，其各自任选被取代；

式(a)至(f)的n是1-10的整数(例如，1-4、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)；

式(a)至(f)的

表示键，其可以是立体定向的((R)或(S))或非立体定向的；并且

式(a)至(f)的Rn包含1-4个独立选择的官能团或原子，例如O、OH、N、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、-烷基-芳基(例如，-烷基-芳基，包括C1-C6烷基、C4-C7芳基或其组合中的至少一个)、芳基(例如，C5-C7芳基)、胺、酰胺或羧基，并且任选地，其中之一被修饰以共价连接至PTM、化学接头基团(L)、ULM、CLM(或CLM’)或其组合。

在本文描述的某些实施例中，CLM或ULM包括选自以下群组的化学结构：

其中：

式(g)的W独立地选自以下群组：CH₂、C＝O、NH和N-烷基；

式(g)的R独立地选自H、甲基或任选取代的直链或支链烷基(例如，任选取代的直链或支链C1-C6烷基)；

式(g)的

表示键，其可以是立体定向的((R)或(S))或非立体定向的；并且

式(g)的Rn包含1-4个独立选择的官能团或原子，例如O、OH、N、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、-烷基-芳基(例如，–烷基-芳基，包括C1-C6烷基、C4-C7芳基或其组合中的至少一个)、芳基(例如，C5-C7芳基)、胺、酰胺或羧基，并且任选地，其中之一被修饰以共价连接至PTM、化学接头基团(L)、ULM、CLM(或CLM’)或其组合。

在本文描述的任何实施例中，式(a)至(g)的W、X、Y、Z、G、G’、R、R’、R”、Q1-Q4、A和Rn可以独立地共价偶联至接头和/或连接有一个或多个PTM、ULM、CLM或CLM’基团的接头。

在本文描述的任何方面或实施例中，Rn包括1-4个独立选择的官能团或原子，例如O、OH、N、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、-烷基-芳基(例如，-烷基-芳基，包括C1-C6烷基、C4-C7芳基或其组合中的至少一个)、芳基(例如，C5-C7芳基)、胺、酰胺或羧基并且任选地，其中之一被修饰以共价连接至PTM、化学接头基团(L)、ULM、CLM(或CLM’)或其组合。

在本文描述的任何方面或实施例中，Rn包括1-4个官能团或原子，例如O、OH、N、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、胺、酰胺或羧基，并且任选地，其中之一被修饰以共价连接至PTM、化学接头基团(L)、ULM、CLM(或CLM’)或其组合。

更具体地，CLM的非限制性示例包括以下所示的那些以及由以下分子中所示的1种或多种不同特征的组合产生的那些“混合”分子。

在本文所述的任何化合物中，CLM包括选自以下群组的化学结构：

其中：

W独立地选自CH₂、CHR、C＝O、SO₂、NH和N-烷基；

Q₁、Q₂、Q₃、Q₄、Q₅各自独立地表示被独立地选自R’、N或N-氧化物的基团取代的碳C或N；

R¹选自不存在、H、OH、CN、C1-C3烷基、C＝O；

R²选自以下群组：不存在、H、OH、CN、C1-C3烷基、CHF₂、CF₃、CHO、C(＝O)NH₂；

R³选自H、烷基(例如，C1-C6或C1-C3烷基)、取代的烷基(例如，取代的C1-C6或C1-C3烷基)、烷氧基(例如，C1-C6或C1-C3烷氧基)、取代的烷氧基(例如，取代的C1-C6或C1-C3烷氧基)；

R⁴选自H、烷基、取代的烷基；

R⁵和R⁶各自独立地是H、卤素、C(＝O)R’、CN、OH、CF₃；

X是C、CH、C＝O或N；

X₁是C＝O、N、CH或CH₂；

R’选自H、卤素、胺、烷基(例如，C1-C3烷基)、取代的烷基(例如，取代的C1-C3烷基)、烷氧基(例如，C1-C3烷氧基)、取代的烷氧基(例如，取代的C1-C3烷氧基)、NR²R³、C(＝O)OR²、任选取代的苯基；

n是0-4；

是单键或双键；并且

CLM共价连接至PTM、化学接头基团(L)、ULM、CLM(或CLM’)或其组合。

在本文描述的任何方面或实施例中，CLM或CLM’通过R基团(例如，R、R¹、R²、R³、R⁴或R’)、W、X或Q基团(例如，Q₁、Q₂、Q₃、Q₄或Q₅)共价连接至PTM、化学接头基团(L)、ULM、CLM、CLM’或其组合。

在本文描述的任何实施例中，CLM或CLM’通过W、X、R、R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R’、Q₁、Q₂、Q₃、Q₄和Q₅共价连接至PTM、化学接头基团(L)、ULM、CLM、CLM’或其组合。

在本文描述的任何实施例中，W、X、R¹、R²、R³、R⁴、R’、Q₁、Q₂、Q₃、Q₄和Q₅可以独立地共价偶联至接头和/或连接有一个或多个PTM、ULM、ULM’、CLM或CLM’基团的接头。

更具体地，CLM的非限制性示例包括以下所示的那些以及由以下化合物的1种或多种特征产生的“混合”分子或化合物。

其中：

W独立地选自以下群组：CH₂、CHR、C＝O、SO₂、NH和N-烷基；

R¹选自以下群组：不存在、H、CH、CN、C1-C3烷基；

R²是H或C1-C3烷基；

R³选自H、烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基；

R⁴是甲基或乙基；

R⁵是H或卤素；

R⁶是H或卤素；

CLM的R是H；

R’是H或PTM、PTM’、化学接头基团(L)、ULM、CLM、CLM’的连接点，

Q₁和Q₂各自独立地是被独立地选自H或C1-C3烷基的基团取代的C或N；

是单键或双键；并且

Rn包含官能团或原子。

在本文描述的任何实施例中，W、R¹、R²、Q₁、Q₂、Q₃、Q₄和Rn可以独立地共价偶联至接头和/或连接有一个或多个PTM、ULM、ULM’、CLM或CLM’基团的接头。

在本文描述的任何实施例中，R¹、R²、Q₁、Q₂、Q₃、Q₄和Rn可以独立地共价偶联至接头和/或连接有一个或多个PTM、ULM、ULM’、CLM或CLM’基团的接头。

在本文描述的任何实施例中，Q₁、Q₂、Q₃、Q₄和Rn可以独立地共价偶联至接头和/或连接有一个或多个PTM、ULM、ULM’、CLM或CLM’基团的接头。

在本文描述的任何方面或实施例中，R_n被修饰以共价连接至接头基团(L)、PTM、ULM、具有与CLM相同的化学结构的第二CLM、CLM’、第二接头或其任意多个或组合。

在本文描述的任何方面或实施例中，CLM选自：

其中R’是卤素，并且R¹如本文所述的任何方面或实施例中所述。

在某些情况下，“CLM”可以是与cereblon E3连接酶结合的酰亚胺。这些酰亚胺和接头连接点可以是但不限于以下结构：

示例性VLM

在本文描述的化合物的某些实施例中，ULM是VLM，并且包含选自以下群组的化学结构：ULM-a：

其中：

虚线表示至少一个PTM、另一个ULM或VLM或MLM或ILM或CLM(即ULM’或VLM’或CLM’或ILM’或MLM’)或偶联至少一个PTM、ULM’或VLM’或CLM’或ILM’或MLM’的化学接头部分与接头另一端的连接；

式ULM-a的X¹、X²各自独立地选自以下群组：键、O、NR^Y3、CR^Y3R^Y4、C＝O、C＝S、SO和SO₂；

式ULM-a的R^Y3、R^Y4各自独立地选自以下群组：H、任选被1个或多个卤素取代的直链或支链C_1-6烷基、任选取代的C_1-6烷氧基(例如，任选被0-3个R^P基团取代)；

式ULM-a的R^P是0、1、2或3个各自独立地选自以下群组的基团：H、卤素、-OH、C_1-3烷基、C＝O；

式ULM-a的W³选自任选取代的T、任选取代的-T-N(R^1aR^1b)X³、任选取代的-T-N(R^1aR^1b)、任选取代的-T-芳基、任选取代的-T-杂芳基、任选取代的T-联杂芳基、任选取代的-T-杂环基、任选取代的-T-双杂环基、任选取代的-NR¹-T-芳基、任选取代的-NR¹-T-杂芳基或任选取代的-NR¹-T-杂环；

式ULM-a的X³是C＝O、R¹、R^1a、R^1b；

R¹、R^1a、R^1b各自独立地选自由以下组成的群组：H、任选被1个或多个卤素或-OH基团取代的直链或支链C₁-C₆烷基、R^Y3C＝O、R^Y3C＝S、R^Y3SO、R^Y3SO₂、N(R^Y3R^Y4)C＝O、N(R^Y3R^Y4)C＝S、N(R^Y3R^Y4)SO和N(R^Y3R^Y4)SO₂；

式ULM-a的T选自以下群组：任选取代的烷基、-(CH₂)_n-基团，其中每一个亚甲基任选被一个或两个选自以下群组的取代基取代：卤素、甲基、任选被1个或多个卤素取代的直链或支链C₁-C₆烷基、C(O)NR¹R^1a或NR¹R^1a，或者R¹和R^1a连接形成任选取代的杂环基或-OH基团或任选取代的氨基酸侧链；

式ULM-a的W⁴是任选取代的-NR1-T-芳基，其中芳基可以任选被任选取代的5-6元杂芳基、任选取代的-NR1-T-杂芳基或任选取代的-NR1-T-杂环取代，其中-NR1共价键合至X²且R¹是H或CH₃，优选H；并且

n是0-6，通常是0、1、2或3，优选0或1。

在本文描述的任何实施例中，T选自以下群组：任选取代的烷基、-(CH₂)_n-基团，其中每一个亚甲基任选被一个或两个选自以下群组的取代基取代：卤素、甲基、任选取代的烷氧基、任选被1个或多个卤素取代的直链或支链C₁-C₆烷基、C(O)NR¹R^1a或NR¹R^1a，或者R¹和R^1a连接形成任选取代的杂环或-OH基团或任选取代的氨基酸侧链；并且n是0-6，通常是0、1、2或3，优选0或1。

在某些实施例中，式ULM-a的W⁴是

其中W⁵是任选取代的苯基或任选取代的5-10元杂芳基(例如，任选被一个或多个[诸如1、2、3、4或5]卤素、CN、任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基、任选取代的烷氧基、羟基或任选取代的卤代烷氧基取代)，并且R_14a、R_14b各自独立地选自以下群组：H、卤代烷基或任选取代的烷基。

在任意实施例中，式ULM-a的W⁵选自以下群组：任选取代的苯基或任选取代的5-10元杂芳基(例如，W⁵任选被一个或多个[诸如1、2、3、4或5]卤素、CN、任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基、任选取代的烷氧基、羟基或任选取代的卤代烷氧基取代)，并且

式ULM-a的R₁₅选自以下群组：H、卤素、CN、OH、NO₂、NR_14aR_14b、OR_14a、CONR_14aR_14b、NR_14aCOR_14b、SO₂NR_14aR_14b、NR_14aSO₂R_14b、任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基、任选取代的卤代烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的环烷基或任选取代的环杂烷基；

在另外的实施例中，用于本公开的W⁴取代基还具体包括(并且不限于公开的具体化合物)在本文公开的标识化合物中发现的W⁴取代基。这些W⁴取代基中的每一个可与任何数量的本文还公开的W³取代基组合使用。

在某些另外的实施例中，ULM-a在吡咯烷部分中任选被0-3个R^P基团取代。每个R^P独立地是H、卤素、-OH、C1-3烷基、C＝O。

在本文描述的任何实施例中，式ULM-a的W³、W⁴可以独立地共价偶联至连接有一个或多个PTM基团的接头。

并且其中虚线表示至少一个PTM、另一个ULM(ULM’)或偶联至少一个PTM或ULM’或二者的化学接头部分与ULM的连接位点。

在某些实施例中，ULM是VHL并且由以下结构表示：

其中：

式ULM-b的W³选自以下群组：任选取代的芳基、任选取代的杂芳基或

式ULM-b的R₉和R₁₀独立地是氢、任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任选取代的羟基烷基、任选取代的杂芳基或卤代烷基，或R₉、R₁₀和与它们连接的碳原子形成任选取代的环烷基；

式ULM-b的R₁₁选自以下群组：任选取代的杂环、任选取代的烷氧基、任选取代的杂芳基、任选取代的芳基、

式ULM-b的R₁₂选自以下群组：H或任选取代的烷基；

式ULM-b的R₁₃选自以下群组：H、任选取代的烷基、任选取代的烷基羰基、任选取代的(环烷基)烷基羰基、任选取代的芳烷基羰基、任选取代的芳基羰基、任选取代的(杂环基)羰基或任选取代的芳烷基；

式ULM-b的R_14a、R_14b各自独立地选自以下群组：H、卤代烷基或任选取代的烷基；

式ULM-b的W⁵选自以下群组：任选取代的苯基或任选取代的5-10元杂芳基(例如，W⁵任选被一个或多个[诸如1、2、3、4或5]卤素、CN、任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基、任选取代的烷氧基、羟基或任选取代的卤代烷氧基)取代，

式ULM-b的R₁₅选自H、卤素、CN、OH、NO₂、NR_14aR_14b、OR_14a、CONR_14aR_14b、NR_14aCOR_14b、SO₂NR_14aR_14b、NR_14a SO₂R_14b、任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基、任选取代的卤代烷氧基；芳基、杂芳基、环烷基或环杂烷基(各自任选被取代)；

式ULM-b的每个R₁₆独立地选自以下群组：卤素、CN、任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基、任选取代的烷氧基、羟基或任选取代的卤代烷氧基；

式ULM-b的o是0、1、2、3或4；

式ULM-b的R₁₈独立地选自以下群组：H、卤素、任选取代的烷氧基、氰基、任选取代的烷基、卤代烷基、卤代烷氧基或接头；并且

式ULM-b的p是0、1、2、3或4，且其中虚线表示至少一个PTM、另一个ULM(ULM’)或偶联至少一个PTM或ULM’或二者的化学接头部分与ULM的连接位点。

在某些实施例中，式ULM-b的R₁₅是

其中R₁₇是H、卤素、任选取代的C_3-6环烷基、任选取代的C_1-6烷基、任选取代的C_1-6烯基和C_1-6卤代烷基；并且Xa是S或O。

在某些实施例中，式ULM-b的R₁₇选自以下群组：甲基、乙基、异丙基和环丙基。

在某些另外的实施例中，式ULM-b的R₁₅选自由以下组成的群组：

在某些实施例中，式ULM-b的R₁₁选自由以下组成的群组：

在某些实施例中，ULM具有选自以下群组的化学结构：

其中：

式ULM-c、ULM-d和ULM-e的R₁是H、乙基、异丙基、叔丁基、仲丁基、环丙基、环丁基、环戊基或环己基；任选取代的烷基、任选取代的羟基烷基、任选取代的杂芳基或卤代烷基；

式ULM-c、ULM-d和ULM-e的R_14a是H、卤代烷基、任选取代的烷基、甲基、氟甲基、羟基甲基、乙基、异丙基或环丙基；

式ULM-c、ULM-d和ULM-e的R₁₅选自由以下组成的群组：H、卤素、CN、OH、NO₂、任选取代的杂芳基、任选取代的芳基；任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基、任选取代的卤代烷氧基、任选取代的环烷基或任选取代的环杂烷基；

式ULM-c、ULM-d和ULM-e的X是C、CH₂或C＝O

式ULM-c、ULM-d和ULM-e的R₃不存在或为任选取代的5或6元杂芳基；并且

虚线表示至少一个PTM、另一个ULM(ULM’)或偶联至少一个PTM或ULM’或二者的化学接头部分与ULM的连接位点。

在某些实施例中，ULM包括根据以下化学结构的基团：

其中：

式ULM-f的R_14a是H、卤代烷基、任选取代的烷基、甲基、氟甲基、羟基甲基、乙基、异丙基或环丙基；

式ULM-f的R₉是H；

式ULM-f的R₁₀是H、乙基、异丙基、叔丁基、仲丁基、环丙基、环丁基、环戊基或环己基；

式ULM-f的R₁₁是

或任选取代的杂芳基；

式ULM-f的p是0、1、2、3或4；

式ULM-f的每个R₁₈独立地是卤素、任选取代的烷氧基、氰基、任选取代的烷基、卤代烷基、卤代烷氧基或接头；

式ULM-f的R₁₂是H、C＝O；

式ULM-f的R₁₃是H、任选取代的烷基、任选取代的烷基羰基、任选取代的(环烷基)烷基羰基、任选取代的芳烷基羰基、任选取代的芳基羰基、任选取代的(杂环基)羰基或任选取代的芳烷基，

式ULM-f的R₁₅选自由以下组成的群组：H、卤素、Cl、CN、OH、NO₂、任选取代的卤代烷基、任选取代的杂芳基、任选取代的芳基；

并且

其中式ULM-f的虚线表示至少一个PTM、另一个ULM(ULM’)或偶联至少一个PTM或ULM’或二者的化学接头部分与ULM的连接位点。

在某些实施例中，ULM选自以下结构：

其中n是0或1。

在某些实施例中，ULM选自以下结构：

其中，ULM-a1至ULM-a15、ULM-b1至ULM-b12、ULM-c1至ULM-c15和ULM-d1至ULM-d9中的苯环任选被氟、低级烷基和烷氧基取代，并且其中虚线表示至少一个PTM、另一个ULM(ULM’)或偶联至少一个PTM或ULM’或二者的化学接头部分与ULM-a的连接位点。

在一个实施例中，ULM-a1至ULM-a15、ULM-b1至ULM-b12、ULM-c1至ULM-c15和ULM-d1至ULM-d9中的苯环可以官能化为酯以使其成为前药的一部分。

在某些实施例中，ULM-a1至ULM-a15、ULM-b1至ULM-b12、ULM-c1至ULM-c15和ULM-d1至ULM-d9的吡咯烷环上的羟基分别包括酯连接前药部分。

在本文描述的任何方面或实施例中，ULM和ULM’(在存在时)各自独立地是根据以下化学结构的基团：

或其药学上可接受的盐，其中：

ULM-g的R^1’是任选取代的C₁-C₆烷基、任选取代的-(CH₂)_nOH、任选取代的-(CH₂)_nSH、任选取代的(CH₂)_n-O-(C₁-C₆)烷基、含有环氧化物部分WCOCW的任选取代的(CH₂)_n-WCOCW-(C₀-C₆)烷基，其中每个W独立地是H或C₁-C₃烷基、任选取代的-(CH₂)_nCOOH、任选取代的-(CH₂)_nC(O)-(C₁-C₆烷基)、任选取代的-(CH₂)_nNHC(O)-R₁、任选取代的-(CH₂)_nC(O)-NR₁R₂、任选取代的-(CH₂)_nOC(O)-NR₁R₂、-(CH₂O)_nH、任选取代的-(CH₂)_nOC(O)-(C₁-C₆烷基)、任选取代的-(CH₂)_nC(O)-O-(C₁-C₆烷基)、任选取代的-(CH₂O)_nCOOH、任选取代的-(OCH₂)_nO-(C₁-C₆烷基)、任选取代的-(CH₂O)_nC(O)-(C₁-C₆烷基)、任选取代的-(OCH₂)_nNHC(O)-R₁、任选取代的-(CH₂O)_nC(O)-NR₁R₂、-(CH₂CH₂O)_nH、任选取代的-(CH₂CH₂O)_nCOOH、任选取代的-(OCH₂CH₂)_nO-(C₁-C₆烷基)、任选取代的-(CH₂CH₂O)_nC(O)-(C₁-C₆烷基)、任选取代的-(OCH₂CH₂)_nNHC(O)-R₁、任选取代的-(CH₂CH₂O)_nC(O)-NR₁R₂、任选取代的-SO₂R_S、任选取代的S(O)R_S、NO₂、CN或卤素(F、Cl、Br、I，优选F或Cl)；

ULM-g的R₁和R₂各自独立地是H或可任选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团(优选氟)取代的C₁-C₆烷基；

ULM-g的R_S是C₁-C₆烷基、任选取代的芳基、杂芳基或杂环基或-(CH₂)_mNR₁R₂基团；

ULM-g的X和X’各自独立地是C═O、C═S、-S(O)、S(O)₂(优选X和X’都是C═O)；

ULM-g的R^2’是任选取代的-(CH₂)_n-(C＝O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w烷基、任选取代的-(CH₂)_n-(C＝O)_u(NR₁)_v(SO₂)_wNR_1NR_2N基团、任选取代的-(CH₂)_n-(C＝O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-芳基、任选取代的-(CH₂)_n-(C＝O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-杂芳基、任选取代的-(CH₂)_n-(C＝O)_vNR₁(SO₂)_w-杂环、任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-烷基、任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-NR_1NR_2N、任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-NR₁C(O)R_1N、任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-(C＝O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-芳基、任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-芳基-杂芳基、任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-(C＝O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-杂芳基或任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-(C＝O)_vNR₁(SO₂)_w-杂环、任选取代的-X^R2’-烷基；任选取代的-X^R2’-芳基；任选取代的-X^R2’-杂芳基；任选取代的-X^R2’-杂环基；任选取代的；

ULM-g的R^3’是任选取代的烷基、任选取代的-(CH₂)_n-(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-烷基、任选取代的-(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-NR_1NR_2N、任选取代的-(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-NR₁C(O)R_1N、任选取代的-(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-C(O)NR₁R₂、任选取代的-(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-芳基、任选取代的–(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-杂芳基、任选取代的–(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-杂环、任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-烷基、任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-NR_1NR_2N、任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-NR₁C(O)R_1N、任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-芳基、任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-杂芳基、任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-杂环、任选取代的-O-(CH₂)n-(C＝O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-烷基、任选取代的-O-(CH₂)n-(C＝O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-NR_1NR_2N、任选取代的-O-(CH₂)n-(C＝O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-NR₁C(O)R_1N、任选取代的-O-(CH₂)n-(C＝O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-芳基、任选取代的-O-(CH₂)_n-(C＝O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-杂芳基或任选取代的-O-(CH₂)_n-(C＝O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-杂环；-(CH₂)_n-(V)_n’-(CH₂)_n-(V)_n’-烷基、任选取代的-(CH₂)_n-(V)_n’-(CH₂)_n-(V)_n’-芳基、任选取代的-(CH₂)_n-(V)_n’-(CH₂)_n-(V)_n’-杂芳基、任选取代的–(CH₂)_n-(V)_n’-(CH₂)_n-(V)_n’-杂环’基团、任选取代的-(CH₂)_n-N(R_1’)(C＝O)_m’-(V)_n’-烷基、任选取代的-(CH₂)_n-N(R_1’)(C＝O)_m’-(V)_n’-芳基、任选取代的-(CH₂)_n-N(R_1’)(C＝O)_m’-(V)_n’-杂芳基、任选取代的-(CH₂)_n-N(R_1’)(C＝O)_m’-(V)_n’-杂环基团、任选取代的-X^R3’-烷基；任选取代的-X^R3’-芳基；任选取代的-X^R3’-杂芳基；任选取代的-X^R3’-杂环基团；

ULM-g的R_1N和R_2N各自独立地是H、任选被一个或两个羟基和最多三个卤素基团取代的C₁-C₆烷基，或任选取代的-(CH₂)_n-芳基、-(CH₂)_n-杂芳基或-(CH₂)_n-杂环基团；

ULM-g的V是O、S或NR₁；

ULM-g的R₁与上述相同；

ULM-g的R¹和R_1’各自独立地是H或C₁-C₃烷基；

ULM-g的X^R2’和X^R3’各自独立地是任选取代的-(CH₂)_n-、-(CH₂)_n-CH(X_v)＝CH(X_v)-(顺式或反式)、-(CH₂)_n-CH≡CH-、-(CH₂CH₂O)_n-或C₃-C₆环烷基，其中X_v是H、卤素或任选取代的C₁-C₃烷基；

ULM-g的每个m独立地是0、1、2、3、4、5、6；

ULM-g的每个m’独立地是0或1；

ULM-g的每个n独立地是0、1、2、3、4、5、6；

ULM-g的每个n’独立地是0或1；

ULM-g的每个u独立地是0或1；

ULM-g的每个v独立地是0或1；

ULM-g的每个w独立地是0或1；并且

当PTM不是ULM’时，ULM-g的R^1’、R^2’、R^3’、X和X’中的任何一个或多个被任选修饰以通过接头基团共价键合至PTM基团，或当PTM是ULM’时，ULM和ULM’各自的R^1’、R^2’、R^3’、X和X’中的任何一个或多个被任选修饰以彼此直接共价键合或通过接头基团共价键合，或其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或多晶型物。

在本文描述的任何方面或实施例中，ULM和ULM’(在存在时)各自独立地是根据以下化学结构的基团：

其中：

ULM-h的R^1’、R^2’和R^3’各自与上面相同，并且X是C＝O、C＝S、-S(O)基团或S(O)₂基团，更优选C＝O基团，并且

当PTM不是ULM’时，ULM-h的R^1’、R^2’和R^3’中的任何一个或多个被任选修饰以键合接头基团，所述接头基团进一步共价键合至PTM基团，或当PTM是ULM’时，ULM和ULM’中每一个的任何一个或多个R^1’、R^2’和R^3’被任选修饰以彼此直接共价键合或通过接头基团共价键合，或者

其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、溶剂化物或多晶型物。

在本文描述的任何方面或实施例中，ULM和ULM’(在存在时)各自独立地根据以下化学结构：

其中：

当PTM不是ULM’时，ULM-I的R^1’、R^2’和R^3’中的任何一个或多个被任选修饰以键合接头基团，所述接头基团进一步共价键合至PTM基团，或当PTM是ULM’时，ULM和ULM’中每一个的R^1’、R^2’和R^3’中的任何一个或多个被任选修饰以彼此直接共价键合或通过接头基团共价键合，或者

其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、溶剂化物或多晶型物。

在本公开的进一步优选方面中，ULM-g至ULM-i的R^1’优选是羟基或可以代谢为羟基或羧基的基团，使得化合物表示活性化合物的前药形式。示例性优选R^1’基团包括例如-(CH₂)_nOH、(CH₂)_n-O-(C₁-C₆)烷基、-(CH₂)_nCOOH、-(CH₂O)_nH、任选取代的-(CH₂)_nOC(O)-(C₁-C₆烷基)或任选取代的-(CH₂)_nC(O)-O-(C₁-C₆烷基)，其中n是0或1。其中R^1’是或含有羧酸基团、羟基或氨基，所述羟基、羧酸基团或胺(其各自可任选被取代)可以进一步被化学修饰以提供与键合有PTM基团(包括ULM’基团)的接头基团的共价连接；

当存在时，ULM-g和ULM-h的X和X’优选是C＝O、C＝S、-S(O)基团或S(O)₂基团，更优选C＝O基团；

ULM-g至ULM-i的R^2’优选是任选取代的-NR¹-T-芳基(例如，任选取代的NH-T-芳基或任选取代的N(CH₃)-T-芳基)、任选取代的-NR¹-T-杂芳基(例如，任选取代的NH-T-杂芳基或任选取代的N(CH₃)-T-杂芳基)或任选取代的-NR¹-T-杂环基(例如，任选取代的NH-T-杂环基或任选取代的N(CH₃)-T-杂环基)，其中R¹是H或CH₃，优选地H和T是任选取代的–(CH₂)_n-基团，其中每一个亚甲基可以任选被一个或两个取代基取代，所述取代基优选选自卤素、本文另外描述的氨基酸侧链或C₁-C₃烷基，优选一个或两个甲基，其可被任选取代；并且n是0-6，通常是0、1、2或3，优选0或1。可替代地，T也可以是–(CH₂O)_n-基团、–(OCH₂)_n-基团、–(CH₂CH₂O)_n-基团、–(OCH₂CH₂)_n-基团，所有所述基团任选被取代。

ULM-g至ULM-i的R^2’的优选芳基包括任选取代的苯基或萘基，优选苯基，其中苯基或萘基通过接头基团连接至PTM(包括ULM’基团)，和/或任选被卤素(优选F或Cl)、胺、单烷基或二烷基胺(优选二甲基胺)、F、Cl、OH、COOH、C₁-C₆烷基优选CH₃、CF₃、OMe、OCF₃、NO₂或CN基团(其各自可以在苯环的邻、间和/或对位，优选对位被取代)、任选取代的苯基(所述苯基本身任选通过接头基团连接至PTM基团，包括ULM’)取代，和/或任选被以下取代：F、Cl、OH、COOH、CH₃、CF₃、OMe、OCF₃、NO₂或CN基团中的至少一个(在苯环的邻、间和/或对位，优选对位)；可任选被取代的萘基；任选取代的杂芳基，优选任选取代的异噁唑(包括甲基取代的异噁唑)、任选取代的噁唑(包括甲基取代的噁唑)、任选取代的噻唑(包括甲基取代的噻唑)、任选取代的异噻唑(包括甲基取代的异噻唑)、任选取代的吡咯(包括甲基取代的吡咯)、任选取代的咪唑(包括甲基咪唑)、任选取代的苯并咪唑或甲氧基苄基咪唑、任选取代的oximidazole或methyloximidazole、任选取代的二唑基(包括甲基二唑基)、任选取代的三唑基(包括甲基取代的三唑基)、任选取代的吡啶基(包括卤素-(优选F))或甲基取代的吡啶基或氧杂吡啶基(其中吡啶基通过氧连接至苯基)、任选取代的呋喃、任选取代的苯并呋喃、任选取代的二氢苯并呋喃、任选取代的吲哚、吲哚嗪或氮杂吲哚嗪(2、3或4-氮杂吲哚嗪)、任选取代的喹啉、任选取代的根据以下化学结构的基团：

其中：

ULM-g至ULM-i的S^c是CHR^SS、NR^URE或O；

ULM-g至ULM-i的R^HET是H、CN、NO₂、卤素(优选Cl或F)、任选取代的C₁-C₆烷基(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代(例如，CF₃))、任选取代的O(C₁-C₆烷基)(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)或任选取代的炔属基团–C≡C-R_a，其中R_a是H或C₁-C₆烷基(优选C₁-C₃烷基)；

ULM-g至ULM-i的R^SS是H、CN、NO₂、卤素(优选F或Cl)、任选取代的C₁-C₆烷基(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)、任选取代的O-(C₁-C₆烷基)(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)或任选取代的-C(O)(C₁-C₆烷基)(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)；

ULM-g至ULM-i的R^URE是H、C₁-C₆烷基(优选H或C₁-C₃烷基)或–C(O)(C₁-C₆烷基)，每个所述基团任选被一个或两个羟基或最多三个卤素，优选氟基团或任选取代的苯基、任选取代的杂芳基或任选取代的杂环(优选例如，哌啶、吗啉、吡咯烷、四氢呋喃)取代；

ULM-g至ULM-i的R^PRO是H、任选取代的C₁-C₆烷基或选自由以下组成的群组的任选取代的芳基(苯基或萘基)、杂芳基或杂环基：噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、二唑、oximidazole、吡咯、吡咯烷、呋喃、二氢呋喃、四氢呋喃、噻吩、二氢噻吩、四氢噻吩、吡啶、哌啶、哌嗪、吗啉、喹啉(各自优选被C₁-C₃烷基，优选甲基或卤素基团，优选F或Cl取代)、苯并呋喃、吲哚、吲哚嗪、氮杂吲哚嗪；

ULM-g至ULM-i的R^PRO1和R^PRO2各自独立地是H、任选取代的C₁-C₃烷基或一起形成酮基；并且

ULM-g至ULM-i的每个n独立地是0、1、2、3、4、5或6(优选0或1)或任选取代的杂环，优选四氢呋喃、四氢噻吩、哌啶、哌嗪或吗啉(每个所述基团在被取代时，优选被甲基或卤素(F、Br、Cl)取代，每个所述基团都可以通过连接基团选择性地连接至PTM基团(包括ULM'基团)上)。

在某些优选方面中，ULM-g至ULM-i的

是

基团，

其中ULM-g至ULM-i的R^PRO和n与上面相同。

ULM-g至ULM-i的R^2’的优选杂芳基包括任选取代的喹啉(其可以连接至药效团或在喹啉环内的任何碳原子上被取代)、任选取代的吲哚、任选取代的吲哚嗪、任选取代的氮杂吲哚嗪、任选取代的苯并呋喃(包括任选取代的苯并呋喃)、任选取代的异噁唑、任选取代的噻唑、任选取代的异噻唑、任选取代的噻吩、任选取代的吡啶(2-、3或4-吡啶)、任选取代的咪唑、任选取代的吡咯、任选取代的二唑、任选取代的三唑、四唑、任选取代的oximidazole或根据以下化学结构的基团：

其中：

ULM-g至ULM-i的S^c是CHR^SS、NR^URE或O；

ULM-g至ULM-i的R^HET是H、CN、NO₂、卤素(优选Cl或F)、任选取代的C₁-C₆烷基(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代(例如，CF₃))、任选取代的O(C₁-C₆烷基)(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)或任选取代的炔属基团–C≡C-R_a，其中ULM-g至ULM-i的R_a是H或C₁-C₆烷基(优选C₁-C₃烷基)；

ULM-g至ULM-i的R^SS是H、CN、NO₂、卤素(优选F或Cl)、任选取代的C₁-C₆烷基(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)、任选取代的O-(C₁-C₆烷基)(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)或任选取代的-C(O)(C₁-C₆烷基)(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)；

ULM-g至ULM-i的R^URE是H、C₁-C₆烷基(优选H或C₁-C₃烷基)或–C(O)(C₁-C₆烷基)，所述基团各自任选被以下取代：一个或两个羟基或最多三个卤素，优选氟基团或任选取代的杂环，例如哌啶、吗啉、吡咯烷、四氢呋喃、四氢噻吩、哌啶、哌嗪(它们各自任选被取代)取代，并且

ULM-g至ULM-i的Y^C是N或C-R^YC，其中R^YC是H、OH、CN、NO₂、卤素(优选Cl或F)、任选取代的C₁-C₆烷基(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代(例如，CF₃))、任选取代的O(C₁-C₆烷基)(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)或任选取代的炔属基团–C≡C-R_a，其中R_a是H或C₁-C₆烷基(优选C₁-C₃烷基)，所述基团各自通过接头基团任选连接至PTM基团(包括ULM’基团)。

ULM-g至ULM-i的R^2’的优选杂环基包括四氢呋喃、四氢噻吩、四氢喹啉、哌啶、哌嗪、吡咯烷、吗啉、环氧乙烷或硫杂环己烷(所述基团各自任选被取代)，或根据以下化学结构的基团：

优选

基团，

其中：

ULM-g至ULM-i的R^PRO是H、任选取代的C₁-C₆烷基或任选取代的芳基、杂芳基或杂环基；

ULM-g至ULM-i的R^PRO1和R^PRO2各自独立地是H、任选取代的C₁-C₃烷基或一起形成酮基，并且

ULM-g至ULM-i的每个n独立地是0、1、2、3、4、5或6(通常是0或1)，所述基团各自通过接头基团任选连接至PTM基团(包括ULM’基团)。

ULM-g至ULM-i的优选R^2’取代基还具体包括(并且不限于公开的具体化合物)在本文公开的标识化合物中发现的R^2’取代基(包括在本说明书中公开的特定化合物，以及所附的附图)。这些R^2’取代基中的每一个可以与任何数量的本文还公开的R^3’取代基组合使用。

ULM-g至ULM-i的R^3’优选任选取代的–T-芳基、任选取代的–T-杂芳基、任选取代的–T-杂环基、任选取代的-NR¹-T-芳基(例如，任选取代的NH-T-芳基、任选取代的N(CH₃)-T-芳基或任选取代的N(C₁-C₃烷基)-T-芳基)、任选取代的-NR¹-T-杂芳基(例如，任选取代的NH-T-杂芳基、任选取代的N(CH₃)-T-杂芳基或任选取代的N(C₁-C₃烷基)-T-杂芳基)或任选取代的-NR¹-T-杂环基(例如，任选取代的NH-T-杂环基、任选取代的N(CH₃)-T-杂环基或任选取代的N(C₁-C₃烷基)-T-杂环基)，其中R¹是H或C₁-C₃烷基，优选H或CH₃，T是任选取代的–(CH₂)_n-基团，其中每一个亚甲基可以任选被一个或两个取代基取代，所述取代基优选选自卤素、C₁-C₃烷基或本文另外描述的氨基酸侧链，优选甲基，其可任选被取代；并且n是0-6，通常是0、1、2或3，优选0或1。可替代地，T也可以是–(CH₂O)_n-基团、–(OCH₂)_n-基团、–(CH₂CH₂O)_n-基团、–(OCH₂CH₂)_n-基团，每个所述基团任选被取代。

ULM-g至ULM-i的R^3’的优选芳基包括任选取代的苯基或萘基，优选苯基，其中苯基或萘基任选通过接头基团连接至PTM基团(包括ULM’基团)和/或任选被卤素(优选F或Cl)、胺、单烷基或二烷基胺(优选二甲基胺)、酰氨基(优选–(CH₂)_m-NR₁C(O)R₂基团，其中m、R₁和R₂与上面相同)、卤素(通常是F或Cl)、OH、CH₃、CF₃、OMe、OCF₃、NO₂、CN或S(O)₂R_S基团(R_S是C₁-C₆烷基、任选取代的芳基、杂芳基或杂环基或-(CH₂)_mNR₁R₂基团)(其各自可在苯环的邻、间和/或对位，优选对位被取代)或芳基(优选苯基)、杂芳基或杂环取代。优选地，所述取代基苯基是任选取代的苯基(即取代基苯基本身优选被F、Cl、OH、SH、COOH、CH₃、CF₃、OMe、OCF₃、NO₂、CN或连接有PTM基团(包括ULM’基团)的接头基团中的至少一个取代，其中取代发生在苯环的邻、间和/或对位，优选对位)；萘基，其可以任选被取代，包括上述的那些；任选取代的杂芳基(优选任选取代的异噁唑(包括甲基取代的异噁唑)、任选取代的噁唑(包括甲基取代的噁唑)、任选取代的噻唑(包括甲基取代的噻唑)、任选取代的吡咯(包括甲基取代的吡咯)、任选取代的咪唑(包括甲基咪唑、苄基咪唑或甲氧基苄基咪唑)、oximidazole或methyloximidazole、任选取代的二唑基(包括甲基二唑基)、任选取代的三唑基(包括甲基取代的三唑基)、吡啶基(包括卤素(优选F)或甲基取代的吡啶基或氧杂吡啶基(其中吡啶基通过氧与苯基连接))；或任选取代的杂环(四氢呋喃、四氢噻吩、吡咯烷、哌啶、吗啉、哌嗪、四氢喹啉、环氧乙烷或硫杂环己烷)。芳基、杂芳基或杂环基可通过接头基团任选连接至PTM基团(包括ULM’基团)。

ULM-g至ULM-i的R^3’的优选杂芳基包括任选取代的喹啉(其可以连接至药效团或在喹啉环内的任何碳原子上被取代)、任选取代的吲哚(包括二氢吲哚)、任选取代的吲哚嗪、任选取代的氮杂吲哚嗪(2、3或4-氮杂吲哚嗪)、任选取代的苯并咪唑、苯并二唑、苯并呋喃、任选取代的咪唑、任选取代的异噁唑、任选取代的噁唑(优选甲基取代的)、任选取代的二唑、任选取代的三唑、四唑、任选取代的苯并呋喃、任选取代的噻吩、任选取代的噻唑(优选甲基和/或巯基取代的)、任选取代的异噻唑、任选取代的三唑(优选被甲基取代的1,2,3-三唑、三异丙基甲硅烷基、任选取代的-(CH₂)_m-O-C₁-C₆烷基或任选取代的-(CH₂)_m-C(O)-O-C₁-C₆烷基)、任选取代的吡啶(2-、3或4-吡啶)或根据以下化学结构的基团：

其中：

ULM-g至ULM-i的S^c是CHR^SS、NR^URE或O；

ULM-g至ULM-i的R^HET是H、CN、NO₂、卤素(优选Cl或F)、任选取代的C₁-C₆烷基(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代(例如，CF₃))、任选取代的O(C₁-C₆烷基)(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)或任选取代的炔属基团–C≡C-R_a，其中R_a是H或C₁-C₆烷基(优选C₁-C₃烷基)；

ULM-g至ULM-i的R^SS是H、CN、NO₂、卤素(优选F或Cl)、任选取代的C₁-C₆烷基(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)、任选取代的O-(C₁-C₆烷基)(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)或任选取代的-C(O)(C₁-C₆烷基)(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)；

ULM-g至ULM-i的R^URE是H、C₁-C₆烷基(优选H或C₁-C₃烷基)或–C(O)(C₁-C₆烷基)，所述基团各自任选被以下取代：一个或两个羟基或最多三个卤素，优选氟基团或任选取代的杂环，例如哌啶、吗啉、吡咯烷、四氢呋喃、四氢噻吩、哌啶、哌嗪(它们各自任选被取代)取代，并且

ULM-g至ULM-i的Y^C是N或C-R^YC，其中R^YC是H、OH、CN、NO₂、卤素(优选Cl或F)、任选取代的C₁-C₆烷基(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代(例如，CF₃))、任选取代的O(C₁-C₆烷基)(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)或任选取代的炔属基团–C≡C-R_a，其中R_a是H或C₁-C₆烷基(优选C₁-C₃烷基)。每个所述杂芳基可通过接头基团任选连接/附接至PTM基团(包括ULM’基团)。

ULM-g至ULM-i的R^3’的优选杂环基包括四氢喹啉、哌啶、哌嗪、吡咯烷、吗啉、四氢呋喃、四氢噻吩、环氧乙烷和硫杂环己烷(每个所述基团可任选被取代)，或根据以下化学结构的基团：

优选

基团，

其中：

ULM-g至ULM-i的R^PRO是H、任选取代的C₁-C₆烷基或选自由以下组成的群组的任选取代的芳基(苯基或萘基)、杂芳基或杂环基：噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、二唑、oximidazole、吡咯、吡咯烷、呋喃、二氢呋喃、四氢呋喃、噻吩、二氢噻吩、四氢噻吩、吡啶、哌啶、哌嗪、吗啉、喹啉(各自优选被C₁-C₃烷基，优选甲基或卤素基团，优选F或Cl取代)、苯并呋喃、吲哚、吲哚嗪、氮杂吲哚嗪；

ULM-g至ULM-i的R^PRO1和R^PRO2各自独立地是H、任选取代的C₁-C₃烷基或一起形成酮基，并且

ULM-g至ULM-i的每个n是0、1、2、3、4、5或6(优选0或1)，其中每个所述杂环基可通过接头基团任选连接/附接至PTM基团(包括ULM’基团)。

ULM-g至ULM-i的优选R^3’取代基还具体包括(并且不限于公开的具体化合物)在本文公开的标识化合物中发现的R^3’取代基(包括在本说明书中和所附的附图中公开的特定化合物)。这些R^3’取代基中的每一个可以与任何数量的本文还公开的R^2’取代基组合使用。

在某些替代的优选实施例中，ULM-g至ULM-i的R^2’是任选取代的-NR₁-X^R2’-烷基、-NR₁-X^R2’-芳基；任选取代的-NR₁-X^R2’-HET、任选取代的-NR₁-X^R2’-芳基-HET或任选取代的-NR₁-X^R2’-HET-芳基，其中：

ULM-g至ULM-i的R₁是H或C₁-C₃烷基(优选H)；

ULM-g至ULM-i的X^R2’是任选取代的–CH₂)_n-、–CH₂)_n-CH(X_v)＝CH(X_v)-(顺式或反式)、–(CH₂)_n-CH≡CH-、-(CH₂CH₂O)_n-或C₃-C₆环烷基；并且

ULM-g至ULM-i的X_v是H、卤素或任选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代的C₁-C₃烷基；

ULM-g至ULM-i的烷基是任选取代的C1-C₁₀烷基(优选C₁-C₆烷基)(在某些优选实施例中，烷基被卤素基团，通常是Cl或Br封端)；

ULM-g至ULM-i的芳基是任选取代的苯基或萘基(优选苯基)；并且

ULM-g至ULM-i的HET是任选取代的噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、二唑、oximidazole、吡咯、吡咯烷、呋喃、二氢呋喃、四氢呋喃、噻吩、二氢噻吩、四氢噻吩、吡啶、哌啶、哌嗪、吗啉、苯并呋喃、吲哚、吲哚嗪、氮杂吲哚嗪、喹啉(被取代时，每个优选被C₁-C₃烷基，优选甲基或卤素基团，优选F或Cl取代)或根据以下化学结构的基团：

ULM-g至ULM-i的S^c是CHR^SS、NR^URE或O；

ULM-g至ULM-i的R^HET是H、CN、NO₂、卤素(优选Cl或F)、任选取代的C₁-C₆烷基(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代(例如，CF₃))、任选取代的O(C₁-C₆烷基)(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)或任选取代的炔属基团–C≡C-R_a，其中R_a是H或C₁-C₆烷基(优选C₁-C₃烷基)；

ULM-g至ULM-i的R^SS是H、CN、NO₂、卤素(优选F或Cl)、任选取代的C₁-C₆烷基(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)、任选取代的O-(C₁-C₆烷基)(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)或任选取代的-C(O)(C₁-C₆烷基)(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)；

ULM-g至ULM-i的R^URE是H、C₁-C₆烷基(优选H或C₁-C₃烷基)或–C(O)(C₁-C₆烷基)，所述基团各自被一个或两个羟基或最多三个卤素，优选氟基团或任选取代的杂环，例如哌啶、吗啉、吡咯烷、四氢呋喃、四氢噻吩、哌啶、哌嗪(它们各自任选被取代)取代；

ULM-g至ULM-i的Y^C是N或C-R^YC，其中R^YC是H、OH、CN、NO₂、卤素(优选Cl或F)、任选取代的C₁-C₆烷基(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代(例如，CF₃))、任选取代的O(C₁-C₆烷基)(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)或任选取代的炔属基团–C≡C-R_a，其中R_a是H或C₁-C₆烷基(优选C₁-C₃烷基)；

ULM-g至ULM-i的R^PRO是H、任选取代的C₁-C₆烷基或选自由以下组成的群组的任选取代的芳基(苯基或萘基)、杂芳基或杂环基：噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、二唑、oximidazole、吡咯、吡咯烷、呋喃、二氢呋喃、四氢呋喃、噻吩、二氢噻吩、四氢噻吩、吡啶、哌啶、哌嗪、吗啉、喹啉(各自优选被C₁-C₃烷基，优选甲基或卤素基团，优选F或Cl取代)、苯并呋喃、吲哚、吲哚嗪、氮杂吲哚嗪；

ULM-g至ULM-i的R^PRO1和R^PRO2各自独立地是H、任选取代的C₁-C₃烷基或一起形成酮基，并且

ULM-g至ULM-i的每个n独立地是0、1、2、3、4、5或6(优选0或1)。

每个所述基团可任选通过接头基团连接/附接至PTM基团(包括ULM’基团)。

在本公开的某些替代优选实施例中，ULM-g至ULM-i的R^3’是任选取代的–(CH₂)_n-(V)_n’-(CH₂)_n-(V)_n’-R^S3’基团、任选取代的-(CH₂)_n-N(R_1’)(C＝O)_m’-(V)_n’-R^S3’基团、任选取代的-X^R3’-烷基、任选取代的-X^R3’-芳基；任选取代的-X^R3’-HET基团、任选取代的-X^R3’-芳基-HET基团或任选取代的-X^R3’-HET-芳基，

其中：

R^S3’是任选取代的烷基(C₁-C₁₀，优选C₁-C₆烷基)、芳基或HET基团；

R_1’是H或C₁-C₃烷基(优选H)；

V是O、S或NR_1’；

X^R3’是–(CH₂)_n-、-(CH₂CH₂O)_n-、–CH₂)_n-CH(X_v)＝CH(X_v)-(顺式或反式)、–CH₂)_n-CH≡CH-或C₃-C₆环烷基，其所有均任选被取代；

X_v是H、卤素或任选被一个或两个羟基或最多三个卤素取代的C₁-C₃烷基；

烷基是任选取代的C₁-C₁₀烷基(优选C₁-C₆烷基)(在某些优选实施例中，烷基被卤素基团，通常是Cl或Br封端)；

芳基是任选取代的苯基或萘基(优选苯基)；并且

HET是任选取代的噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、二唑、oximidazole、吡咯、吡咯烷、呋喃、二氢呋喃、四氢呋喃、噻吩、二氢噻吩、四氢噻吩、吡啶、哌啶、哌嗪、吗啉、苯并呋喃、吲哚、吲哚嗪、氮杂吲哚嗪、喹啉(被取代时，各自优选被C₁-C₃烷基，优选甲基或卤素基团，优选F或Cl取代)或根据以下化学结构的基团：

ULM-g至ULM-i的S^c是CHR^SS、NR^URE或O；

ULM-g至ULM-i的R^HET是H、CN、NO₂、卤素(优选Cl或F)、任选取代的C₁-C₆烷基(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代(例如，CF₃))、任选取代的O(C₁-C₆烷基)(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)或任选取代的炔属基团–C≡C-R_a，其中R_a是H或C₁-C₆烷基(优选C₁-C₃烷基)；

ULM-g至ULM-i的R^SS是H、CN、NO₂、卤素(优选F或Cl)、任选取代的C₁-C₆烷基(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)、任选取代的O-(C₁-C₆烷基)(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)或任选取代的-C(O)(C₁-C₆烷基)(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)；

ULM-g至ULM-i的R^URE是H、C₁-C₆烷基(优选H或C₁-C₃烷基)或–C(O)(C₀-C₆烷基)，所述基团各自被一个或两个羟基或最多三个卤素，优选氟基团或任选取代的杂环，例如哌啶、吗啉、吡咯烷、四氢呋喃、四氢噻吩、哌啶、哌嗪(它们各自任选被取代)取代；

ULM-g至ULM-i的Y^C是N或C-R^YC，其中R^YC是H、OH、CN、NO₂、卤素(优选Cl或F)、任选取代的C₁-C₆烷基(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代(例如，CF₃))、任选取代的O(C₁-C₆烷基)(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)或任选取代的炔属基团–C≡C-R_a，其中R_a是H或C₁-C₆烷基(优选C₁-C₃烷基)；

ULM-g至ULM-i的R^PRO是H、任选取代的C₁-C₆烷基或选自由以下组成的群组的任选取代的芳基(苯基或萘基)、杂芳基或杂环基：噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、二唑、oximidazole、吡咯、吡咯烷、呋喃、二氢呋喃、四氢呋喃、噻吩、二氢噻吩、四氢噻吩、吡啶、哌啶、哌嗪、吗啉、喹啉(各自优选被C₁-C₃烷基，优选甲基或卤素基团，优选F或Cl取代)、苯并呋喃、吲哚、吲哚嗪、氮杂吲哚嗪；

ULM-g至ULM-i的R^PRO1和R^PRO2各自独立地是H、任选取代的C₁-C₃烷基或一起形成酮基；

ULM-g至ULM-i的每个n独立地是0、1、2、3、4、5或6(优选0或1)；

ULM-g至ULM-i的每个m’是0或1；并且

ULM-g至ULM-i的每个n’是0或1；

其中每个所述化合物，优选在烷基、芳基或Het基团上，任选通过接头连接/附接至PTM基团(包括ULM’基团)。

在替代的实施例中，ULM-g至ULM-i的R³’是–(CH₂)_n-芳基、–(CH₂CH₂O)_n-芳基、–(CH₂)_n-HET或–(CH₂CH₂O)_n-HET，

其中：

ULM-g至ULM-i的所述芳基是任选被一个或两个取代基取代的苯基，其中所述取代基优选选自-(CH₂)_nOH、C₁-C₆烷基(其本身进一步任选被CN取代)、卤素(最多三个卤素基团)、OH、-(CH₂)_nO(C₁-C₆)烷基、胺、单-或二-(C₁-C₆烷基)胺，其中胺上的烷基任选被1或2个羟基或最多三个卤素(优选F、Cl)基团取代，或者

ULM-g至ULM-i的所述芳基被-(CH₂)_nOH、-(CH₂)_n-O-(C₁-C₆)烷基、-(CH₂)_n-O-(CH₂)_n-(C₁-C₆)烷基、-(CH₂)_n-C(O)(C₀-C₆)烷基、-(CH₂)_n-C(O)O(C₀-C₆)烷基、-(CH₂)_n-OC(O)(C₀-C₆)烷基、胺、单-或二-(C₁-C₆烷基)胺，其中胺上的烷基任选被1或2个羟基或最多三个卤素(优选F、Cl)基团取代、CN、NO₂、-(CH₂)_n-(V)_m’-CH₂)_n-(V)_m’-(C₁-C₆)烷基、–(V)_m’-(CH₂CH₂O)_n-R^PEG基团取代，其中V是O、S或NR_1’，R_1’是H或C₁-C₃烷基(优选H)，并且R^PEG是H或任选被取代(包括任选被羧基取代)的C₁-C₆烷基，或者

ULM-g至ULM-i的所述芳基任选被杂环包括杂芳基取代，其选自由以下组成的群组：噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、二唑、oximidazole、吡咯、吡咯烷、呋喃、二氢呋喃、四氢呋喃、噻吩、二氢噻吩、四氢噻吩、吡啶、哌啶、哌嗪、吗啉、喹啉、苯并呋喃、吲哚、吲哚嗪、氮杂吲哚嗪(被取代时，各自优选被C₁-C₃烷基，优选甲基或卤素基团，优选F或Cl取代)或根据以下化学结构的基团：

ULM-g至ULM-i的S^c是CHR^SS、NR^URE或O；

ULM-g至ULM-i的R^HET是H、CN、NO₂、卤素(优选Cl或F)、任选取代的C₁-C₆烷基(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代(例如，CF₃))、任选取代的O(C₁-C₆烷基)(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)或任选取代的炔属基团–C≡C-R_a，其中R_a是H或C₁-C₆烷基(优选C₁-C₃烷基)；

ULM-g至ULM-i的R^SS是H、CN、NO₂、卤素(优选F或Cl)、任选取代的C₁-C₆烷基(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)、任选取代的O-(C₁-C₆烷基)(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)或任选取代的-C(O)(C₁-C₆烷基)(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)；

ULM-g至ULM-i的R^URE是H、C₁-C₆烷基(优选H或C₁-C₃烷基)或–C(O)(C₀-C₆烷基)，所述基团各自被一个或两个羟基或最多三个卤素，优选氟基团或任选取代的杂环，例如哌啶、吗啉、吡咯烷、四氢呋喃、四氢噻吩、哌啶、哌嗪(它们各自任选被取代)取代；

ULM-g至ULM-i的Y^C是N或C-R^YC，其中R^YC是H、OH、CN、NO₂、卤素(优选Cl或F)、任选取代的C₁-C₆烷基(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代(例如，CF₃))、任选取代的O(C₁-C₆烷基)(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)或任选取代的炔属基团–C≡C-R_a，其中R_a是H或C₁-C₆烷基(优选C₁-C₃烷基)；

ULM-g至ULM-i的R^PRO是H、任选取代的C₁-C₆烷基或选自由以下组成的群组的任选取代的芳基(苯基或萘基)、杂芳基或杂环基：噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、二唑、oximidazole、吡咯、吡咯烷、呋喃、二氢呋喃、四氢呋喃、噻吩、二氢噻吩、四氢噻吩、吡啶、哌啶、哌嗪、吗啉、喹啉(各自优选被C₁-C₃烷基，优选甲基或卤素基团，优选F或Cl取代)、苯并呋喃、吲哚、吲哚嗪、氮杂吲哚嗪；

ULM-g至ULM-i的R^PRO1和R^PRO2各自独立地是H、任选取代的C₁-C₃烷基或一起形成酮基；

ULM-g至ULM-i的HET优选是噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、二唑、oximidazole、吡咯、吡咯烷、呋喃、二氢呋喃、四氢呋喃、噻吩、二氢噻吩、四氢噻吩、吡啶、哌啶、哌嗪、吗啉、喹啉(各自优选被C₁-C₃烷基，优选甲基或卤素基团，优选F或Cl取代)、苯并呋喃、吲哚、吲哚嗪、氮杂吲哚嗪或根据以下化学结构的基团：

ULM-g至ULM-i的S^c是CHR^SS、NR^URE或O；

ULM-g至ULM-i的R^HET是H、CN、NO₂、卤素(优选Cl或F)、任选取代的C₁-C₆烷基(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代(例如，CF₃))、任选取代的O(C₁-C₆烷基)(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)或任选取代的炔属基团–C≡C-R_a，其中R_a是H或C₁-C₆烷基(优选C₁-C₃烷基)；

ULM-g至ULM-i的R^SS是H、CN、NO₂、卤素(优选F或Cl)、任选取代的C₁-C₆烷基(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)、任选取代的O-(C₁-C₆烷基)(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)或任选取代的-C(O)(C₁-C₆烷基)(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)；

ULM-g至ULM-i的R^URE是H、C₁-C₆烷基(优选H或C₁-C₃烷基)或–C(O)(C₀-C₆烷基)，所述基团各自被一个或两个羟基或最多三个卤素，优选氟基团或任选取代的杂环，例如哌啶、吗啉、吡咯烷、四氢呋喃、四氢噻吩、哌啶、哌嗪(它们各自任选被取代)取代；

ULM-g至ULM-i的Y^C是N或C-R^YC，其中R^YC是H、OH、CN、NO₂、卤素(优选Cl或F)、任选取代的C₁-C₆烷基(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代(例如，CF₃))、任选取代的O(C₁-C₆烷基)(优选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团取代)或任选取代的炔属基团–C≡C-R_a，其中R_a是H或C₁-C₆烷基(优选C₁-C₃烷基)；

ULM-g至ULM-i的R^PRO是H、任选取代的C₁-C₆烷基或任选取代的芳基、杂芳基或杂环基；

ULM-g至ULM-i的R^PRO1和R^PRO2各自独立地是H、任选取代的C₁-C₃烷基或一起形成酮基；

ULM-g至ULM-i的每个m’独立地是0或1；并且

ULM-g至ULM-i的每个n独立地是0、1、2、3、4、5或6(优选0或1)，

其中每个所述化合物，优选在所述芳基或HET基团上，任选通过接头基团连接/附接至PTM基团(包括ULM’基团)。

在仍另外的实施例中，优选化合物包括根据以下化学结构的那些：

其中：

ULM-i的R^1’是OH在患者或受试者中代谢为OH的基团；

ULM-i的R^2’是–NH-CH₂-芳基-HET(优选直接连接至甲基取代的噻唑的苯基)；

ULM-i的R^3’是–CHR^CR3’-NH-C(O)-R^3P1基团或–CHR^CR3’-R^3P2基团；

ULM-i的R^CR3’是C₁-C₄烷基，优选甲基、异丙基或叔丁基；

ULM-i的R^3P1是C₁-C₃烷基(优选甲基)、任选取代的氧杂环丁烷基(优选甲基取代的–(CH₂)_nOCH₃基团，其中n是1或2(优选2)或

基团(乙基醚基团优选取代在苯基部分上的间位))、吗啉代基团(连接至2或3位的羰基)；

ULM-i的R^3P2是

基团；

ULM-i的芳基是苯基；

ULM-i的HET是任选取代的噻唑或异噻唑；并且

ULM-i的R^HET是H或卤素基团(优选H)；

或其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或多晶型物，其中每个所述化合物任选通过接头基团连接至PTM基团(包括ULM’基团)。

在某些方面中，包含泛素E3连接酶结合部分的双官能化合物(ULM)，其中ULM是根据以下化学结构的基团：

其中：

ULM-j的R₅和R₆各自独立地是OH、SH或任选取代的烷基，或者R₅、R₆和与它们连接的碳原子一起形成羰基；

ULM-j的R₇是H或任选取代的烷基；

ULM-j的E是键、C＝O或C＝S；

ULM-j的G是键、任选取代的烷基、-COOH或C＝J；

ULM-j的J是O或N-R₈；

ULM-j的R₈是H、CN、任选取代的烷基或任选取代的烷氧基；

ULM-j的M是任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环或

ULM-j的R₉和R₁₀各自独立地是H；任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任选取代的羟基烷基、任选取代的硫烷基、二硫化物连接的ULM、任选取代的杂芳基或卤代烷基；或者R₉、R₁₀和与它们连接的碳原子一起形成任选取代的环烷基；

ULM-j的R₁₁是任选取代的杂环、任选取代的烷氧基、任选取代的杂芳基、任选取代的芳基或

ULM-j的R₁₂是H或任选取代的烷基；

ULM-j的R₁₃是H、任选取代的烷基、任选取代的烷基羰基、任选取代的(环烷基)烷基羰基、任选取代的芳烷基羰基、任选取代的芳基羰基、任选取代的(杂环基)羰基或任选取代的芳烷基；任选取代的(氧代烷基)氨基甲酸酯，

ULM-j的每个R₁₄独立地是H、卤代烷基、任选取代的环烷基、任选取代的烷基或任选取代的杂环烷基；

ULM-j的R₁₅是H、CN、任选取代的杂芳基、卤代烷基、任选取代的芳基、任选取代的烷氧基或任选取代的杂环基；

ULM-j的每个R₁₆独立地是卤素、任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基、CN或任选取代的卤代烷氧基；

ULM-j的每个R₂₅独立地是H或任选取代的烷基；或者两个R₂₅基团可以一起形成氧代或任选取代的环烷基；

ULM-j的R₂₃是H或OH；

ULM-j的Z₁、Z₂、Z₃和Z₄独立地是C或N；并且

ULM-j的o是0、1、2、3或4或其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或多晶型物。

在某些实施例中，其中ULM-j的G是C＝J，J是O，R₇是H，每个R₁₄是H且o是0。

在某些实施例中，其中ULM-j的G是C＝J，J是O，R₇是H，每个R₁₄是H，R₁₅是任选取代的杂芳基且o是0。在其他情况中，E是C＝O和M是

在某些实施例中，其中ULM-j的E是C＝O，R₁₁是任选取代的杂环或

且M是

在某些实施例中，其中ULM-j的E是C＝O，M是

且R₁₁是

每个R₁₈独立地是卤素、任选取代的烷氧基、氰基、任选取代的烷基、卤代烷基或卤代烷氧基；并且p是0、1、2、3或4。

在某些实施例中，ULM和ULM’(在存在时)各自独立地是根据以下化学结构的基团：

其中：

ULM-k的G是C＝J，J是O；

ULM-k的R₇是H；

ULM-k的每个R₁₄是H；

ULM-k的o是0；

ULM-k的R₁₅是

并且

ULM-k的R₁₇是H、卤素、任选取代的环烷基、任选取代的烷基、任选取代的烯基和卤代烷基。

在其他情况中，ULM-k的R₁₇是烷基(例如，甲基)或环烷基(例如，环丙基)。

在其他实施例中，ULM和ULM’(在存在时)各自独立地是根据以下化学结构的基团：

其中：

ULM-k的G是C＝J，J是O；

ULM-k的R₇是H；

ULM-k的每个R₁₄是H；

ULM-k的o是0；并且

ULM-k的R₁₅选自由以下组成的群组：

其中ULM-k的R₃₀是H或任选取代的烷基。

在其他实施例中，ULM和ULM’(在存在时)各自独立地是根据以下化学结构的基团：

其中：

ULM-k的E是C＝O；

ULM-k的M是

并且

ULM-k的R₁₁选自由以下组成的群组：

在仍其他实施例中，以下化学结构的化合物：

其中ULM-k的E是C＝O；

ULM-k的R₁₁是

并且ULM-k的M是

ULM-k的q是1或2；

ULM-k的R₂₀是H、任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任选取代的芳基或

ULM-k的R₂₁是H或任选取代的烷基；并且

ULM-k的R₂₂是H、任选取代的烷基、任选取代的烷氧基或卤代烷基。

在本文所述的任何实施例中，ULM-j或ULM-k的R₁₁选自由以下组成的群组：

在某些实施例中，ULM-j或ULM-k的R₁₁选自由以下组成的群组：

在某些实施例中，ULM(或者存在时的ULM’)是根据以下化学结构的基团：

其中：

ULM-l的X是O或S；

ULM-l的Y是H、甲基或乙基；

ULM-l的R₁₇是H、甲基、乙基、羟甲基或环丙基；

ULM-l的M是任选取代的芳基、任选取代的杂芳基或

ULM-l的R₉是H；

ULM-l的R₁₀是H、任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基、任选取代的杂芳基、任选取代的芳基、任选取代的羟基烷基、任选取代的硫烷基或环烷基；

ULM-l的R11是任选取代的杂芳族、任选取代的杂环、任选取代的芳基或

ULM-l的R₁₂是H或任选取代的烷基；并且

ULM-l的R₁₃是H、任选取代的烷基、任选取代的烷基羰基、任选取代的(环烷基)烷基羰基、任选取代的芳烷基羰基、任选取代的芳基羰基、任选取代的(杂环基)羰基或任选取代的芳烷基；任选取代的(氧代烷基)氨基甲酸酯。

在一些实施例中，ULM和ULM’(在存在时)各自独立地是根据以下化学结构的基团：

其中：

ULM-m的Y是H、甲基或乙基

ULM-m的R₉是H；

R₁₀是异丙基、叔丁基、仲丁基、环戊基或环己基；

ULM-m的R₁₁是任选取代的酰胺、任选取代的异吲哚啉酮、任选取代的异噁唑、任选取代的杂环。

在本公开的其他优选实施例中，ULM和ULM’(在存在时)各自独立地是根据以下化学结构的基团：

其中：

ULM-n的R₁₇是甲基、乙基或环丙基；并且

ULM-n的R₉、R₁₀和R₁₁如上所定义。在其他情况中，R₉是H；并且

ULM-n的R₁₀是H、烷基或环烷基(优选异丙基、叔丁基、仲丁基、环戊基或环己基)。

在本文描述的任何方面或实施例中，本文描述的ULM(或当存在时的ULM’)可以是其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、溶剂化物或多晶型物。另外，在本文所述的任何方面或实施例中，本文所述的ULM(或当存在时的ULM’)可直接通过键或通过化学接头与PTM偶联。

在本公开的某些方面中，ULM部分选自由以下组成的群组：

其中VLM可以通过本文所述的接头任选通过任意合适的官能团如胺、酯、醚、烷基或烷氧基在任意合适的位置包括例如芳基、杂芳基、苯基或吲哚基的苯基连接至PTM。

示例性接头

在某些实施例中，本文所述的化合物包括通过化学接头(L)化学连接或偶联至一个或多个ULM(例如，CLM、VLM、MLM、ILM或其组合中的至少一种)的一个或多个PTM。在某些实施例中，接头基团L是包含一个或多个共价连接的结构单元(例如，-A^L ₁…(A^L)_q-或-(A^L)_q-)的基团，其中A^L ₁是偶联至PTM的基团，并且(A^L)_q是偶联至ULM的基团。

在本文所述的任何方面或实施例中，接头基团L是由式–(A^L)_q-表示的键或化学接头基团，其中A^L是化学部分，且q是1-100的整数，并且其中A^L共价键合至PTM和ULM，并提供PTM与蛋白靶标和ULM与E3泛素连接酶的充分结合，以导致靶蛋白泛素化。

在某些实施例中，接头基团L是–(A^L)_q-，其中：

(A^L)_q是连接至ULM(诸如CLM或VLM)、PTM部分或其组合中的至少一个的基团；接头的q是大于或等于1的整数；

每个A^L独立地选自由以下组成的群组：键、CR^L1R^L2、O、S、SO、SO₂、NR^L3、SO₂NR^L3、SONR^L3、CONR^L3、NR^L3CONR^L4、NR^L3SO₂NR^L4、CO、CR^L1＝CR^L2、C≡C、SiR^L1R^L2、P(O)R^L1、P(O)OR^L1、NR^L3C(＝NCN)NR^L4、NR^L3C(＝NCN)、NR^L3C(＝CNO₂)NR^L4、任选被0-6个R^L1和/或R^L2基团取代的C_3-11环烷基、任选被0-9个R^L1和/或R^L2基团取代的C_5-13螺环烷基、任选被0-6个R^L1和/或R^L2基团取代的C_3-11杂环基、任选被0-8个R^L1和/或R^L2基团取代的C_5-13螺杂环烷基、任选被0-6个R^L1和/或R^L2基团取代的芳基、任选被0-6个R^L1和/或R^L2基团取代的杂芳基，其中R^L1或R^L2各自独立地任选连接至其他基团以形成任选被0-4个R^L5基团取代的环烷基和/或杂环基部分；并且

R^L1、R^L2、R^L3、R^L4和R^L5各自独立地是H、卤素、C_1-8烷基、OC_1-8烷基、SC_1-8烷基、NHC_1-8烷基、N(C_1-8烷基)₂、C_3-11环烷基、芳基、杂芳基、C_3-11杂环基、OC_1-8环烷基、SC_1-8环烷基、NHC_1-8环烷基、N(C_1-8环烷基)₂、N(C_1-8环烷基)(C_1-8烷基)、OH、NH₂、SH、SO₂C_1-8烷基、P(O)(OC_1-8烷基)(C_1-8烷基)、P(O)(OC_1-8烷基)₂、CC-C_1-8烷基、CCH、CH＝CH(C_1-8烷基)、C(C_1-8烷基)＝CH(C_1-8烷基)、C(C_1-8烷基)＝C(C_1-8烷基)₂、Si(OH)₃、Si(C_1-8烷基)₃、Si(OH)(C_1-8烷基)₂、COC_1-8烷基、CO₂H、卤素、CN、CF₃、CHF₂、CH₂F、NO₂、SF₅、SO₂NHC_1-8烷基、SO₂N(C_1-8烷基)₂、SONHC_1-8烷基、SON(C_1-8烷基)₂、CONHC_1-8烷基、CON(C_1-8烷基)₂、N(C_1-8烷基)CONH(C_1-8烷基)、N(C_1-8烷基)CON(C_1-8烷基)₂、NHCONH(C_1-8烷基)、NHCON(C_1-8烷基)₂、NHCONH₂、N(C_1-8烷基)SO₂NH(C_1-8烷基)、N(C_1-8烷基)SO₂N(C_1-8烷基)₂、NHSO₂NH(C_1-8烷基)、NHSO₂N(C_1-8烷基)₂、NHSO₂NH₂。

在某些实施例中，接头的q是大于或等于0的整数。在某些实施例中，q是大于或等于1的整数。

在某些实施例中，例如，其中接头的q大于2，(A^L)_q是连接至ULM的基团，并且A^L ₁和(A^L)_q通过接头(L)的结构单元连接。

在某些实施例中，例如，其中接头的q是2，(A^L)_q是连接至A^L ₁和连接至ULM的基团。

在某些实施例中，例如，其中接头的q是1，接头基团L的结构是–A^L ₁–，并且A^L ₁是连接至ULM部分和PTM部分的基团。

在某些实施例中，接头(L)的单元AL包含一般结构表示的基团，所述基团选自由以下组成的群组：

-NR(CH₂)_n-(低级烷基)-、-NR(CH₂)_n-(低级烷氧基)-、-NR(CH₂)_n-(低级烷氧基)-OCH₂-、-NR(CH₂)_n-(低级烷氧基)-(低级烷基)-OCH₂-、-NR(CH₂)_n-(环烷基)-(低级烷基)-OCH₂-、-NR(CH₂)_n-(杂环烷基)-、-NR(CH₂CH₂O)_n-(低级烷基)-O-CH₂-、-NR(CH₂CH₂O)_n-(杂环烷基)-O-CH₂-、-NR(CH₂CH₂O)_n-芳基-O-CH₂-、-NR(CH₂CH₂O)_n-(杂芳基)-O-CH₂-、-NR(CH₂CH₂O)_n-(环烷基)-O-(杂芳基)-O-CH₂-、-NR(CH₂CH₂O)_n-(环烷基)-O-芳基-O-CH₂-、-NR(CH₂CH₂O)_n-(低级烷基)-NH-芳基-O-CH₂-、-NR(CH₂CH₂O)_n-(低级烷基)-O-芳基-CH₂、-NR(CH₂CH₂O)_n-环烷基-O-芳基-、-NR(CH₂CH₂O)_n-环烷基-O-(杂芳基)l-、-NR(CH₂CH₂)_n-(环烷基)-O-(杂环基)-CH₂、-NR(CH₂CH₂)_n-(杂环基)-(杂环基)-CH₂、-N(R1R2)-(杂环基)-CH₂；其中

接头的n可以是0-10；

接头的R可以是H、低级烷基；

接头的R1和R2可以通过连接N形成环。

在本文所述的任何方面或实施例中，接头(L)的单元A^L包括选自以下的基团：

和C1-C6烷基，

其中：

杂环烷基的*N与PTM共享；并且

m、n、o、p、q、r和s各自独立地选自0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。

在某些实施例中，接头(L)的单元A^L包含一般结构表示的基团，所述基团选自由以下组成的群组：

-N(R)-(CH2)_m-O(CH2)_n-O(CH2)_o-O(CH2)_p-O(CH2)_q-O(CH2)_r-OCH2-、

-O-(CH2)_m-O(CH2)_n-O(CH2)_o-O(CH2)_p-O(CH2)_q-O(CH2)_r-OCH2-、

-O-(CH2)_m-O(CH2)_n-O(CH2)_o-O(CH2)_p-O(CH2)_q-O(CH2)_r-O-；

-N(R)-(CH2)_m-O(CH2)_n-O(CH2)_o-O(CH2)_p-O(CH2)_q-O(CH2)_r-O-；

-(CH2)_m-O(CH2)_n-O(CH2)_o-O(CH2)_p-O(CH2)_q-O(CH2)_r-O-；

-(CH2)_m-O(CH2)_n-O(CH2)_o-O(CH2)_p-O(CH2)_q-O(CH2)_r-OCH2-；

其中

接头的m、n、o、p、q和R独立地是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20；

当数字是零时，不存在N-O或O-O键

接头的R是H、甲基和乙基；

接头的X是H和F

其中接头的m可以是2、3、4、5

其中接头的n和m各自可以独立地是0、1、2、3、4、5、6。

在本文所述的任何方面或实施例中，接头(L)的单元A^L选自由以下组成的群组：

其中m和n各自独立地选自0、1、2、3、4、5或6。

在本文所述的任何方面或实施例中，接头(L)的单元A^L选自由以下组成的群组：

其中m、n、o、p、q、r和s各自独立地是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。

在本文所述的任何方面或实施例中，接头(L)的单元A^L选自由以下组成的群组：

在另外的实施例中，接头(L)包括选自以下的结构，但不限于下示结构，其中虚线表示与PTM或ULM部分的连接点：

其中：

W^L1和W^L2各自独立地是不存在、具有0-4个杂原子的任选被RQ取代的4-8元环，每个R^Q独立地是H、卤素、OH、CN、CF₃、任选取代的直链或支链C₁-C₆烷基、任选取代的直链或支链C₁-C₆烷氧基，或者2个R^Q基团与和它们连接的原子一起形成含有0-4个杂原子的4-8元环系；

Y^L1各自独立地是键、任选取代的直链或支链C₁-C₆烷基，并且任选一个或多个C原子被O替代；或任选取代的直链或支链C₁-C₆烷氧基；

n和m独立地是0-10；并且

表示与PTM或ULM部分的连接点。

在另外的实施例中，接头(L)包括选自以下的结构，但不限于下示结构，其中虚线表示与PTM或ULM部分的连接点：

其中：

W^L1和W^L2各自独立地是不存在、芳基、杂芳基、环基、杂环、C_1-6烷基且任选一个或多个C原子被O或N替代，C_1-6烯烃且任选一个或多个C原子被O替代、C_1-6炔烃且任选一个或多个C原子被O替代、双环基、联芳基、联杂芳基或联杂环，其各自任选被R^Q取代，每个R^Q独立地是H、卤素、OH、CN、CF₃、羟基、硝基、C≡CH、C_2-6烯基、C_2-6炔基、任选取代的直链或支链C₁-C₆烷基、任选取代的直链或支链C₁-C₆烷氧基、任选取代的OC_1-3烷基(例如，任选被1个或多个–F取代)、OH、NH₂、NR^Y1R^Y2、CN，或者2个R^Q基团与和它们连接的原子一起形成含有0-4个杂原子的4-8元环系；

Y^L1各自独立地是键、NR^YL1、O、S、NR^YL2、CR^YL1R^YL2、C＝O、C＝S、SO、SO₂、C₁-C₆烷基(直链、支链、任选取代)且任选一个或多个C原子被O替代；任选取代的直链或支链C₁-C₆烷氧基、含0-4个杂原子的3-6元脂环族或芳族环；

Q^L是含有0-4个杂原子的任选桥化的3-6元脂环族或芳族环，其任选被0-6个R^Q取代，每个R^Q独立地是H、任选取代的直链或支链C_1-6烷基(例如，任选被1个或多个卤素或C_1-6烷氧基取代)，或者2个R^Q基团和与它们连接的原子一起形成含有0-2个杂原子的3-8元环系；

R^YL1、R^YL2各自独立地是H、OH、任选取代的直链或支链C_1-6烷基(例如，任选被1个或多个卤素或C_1-6烷氧基取代)，或者R¹、R²和与它们连接的原子一起形成含有0-2个杂原子的3-8元环系；

n和m独立地是0-10；并且

表示与PTM或ULM部分的连接点。

在另外的实施例中，接头基团是任选取代的(聚)乙二醇，其具有1至约100个乙二醇单元(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50个乙二醇单元等)、约1至约50个乙二醇单元、1至约25个乙二醇单元、约1至10个乙二醇单元、1至约8个乙二醇单元和1至6个乙二醇单元、2至4个乙二醇单元，或分散有任选取代的O、N、S、P或Si原子的任选取代的烷基。在某些实施例中，所述接头被芳基、苯基、苄基、烷基、亚烷基或杂环基取代。在某些实施例中，接头可以是不对称的或对称的。

在本文所述化合物的任何实施例中，接头基团可以是如本文所述的任何合适的部分。在一个实施例中，所述接头是未被取代或被取代的聚乙二醇基团，其大小范围为约1至约12个乙二醇单元、1至约10个乙二醇单元、约2至约6个乙二醇单元、约2至5个乙二醇单元、约2至4个乙二醇单元。

在本文所述的任何方面或实施例中，接头(L)包括任选取代的C₁-C₅₀烷基(例如，C₁、C₂、C₃、C₄、C₅、C₆、C₇、C₈、C₉、C₁₀、C₁₁、C₁₂、C₁₃、C₁₄、C₁₅、C₁₆、C₁₇、C₁₈、C₁₉、C₂₀、C₂₁、C₂₂、C₂₃、C₂₄、C₂₅、C₂₆、C₂₇、C₂₈、C₂₉、C₃₀、C₃₁、C₃₂、C₃₃、C₃₄、C₃₅、C₃₆、C₃₇、C₃₈、C₃₉、C₄₀、C₄₁、C₄₂、C₄₃、C₄₄、C₄₅、C₄₆、C₄₇、C₄₈、C₄₉或C₅₀烷基)，其中每个碳任选地被选自N、S、P或Si原子的杂原子取代，所述杂原子具有适当数量的氢、取代或两者以完成化合价，条件是不存在杂原子-杂原子键合(例如，没有杂原子共价连接或相邻定位)。

在本文所述的任何方面或实施例中，接头(L)包括约1至约50(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50)个任选取代的乙二醇单元，其中碳或氧可任选地被选自N、S、P或Si原子的杂原子取代，所述杂原子具有适当数量的氢以完成化合价。例如，在本文所述的任何方面或实施例中，接头(L)具有选自以下的化学结构：

，其中碳或氧可被选自N、S、P或Si原子的杂原子取代，所述杂原子具有适当数量的氢以完成化合价，并且m、n、o、p、q、r和s独立地选自0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19和20。

在另一个实施例中，本公开涉及包含如上所述的PTM基团的化合物，其结合靶蛋白或多肽(例如，Kirsten大鼠肉瘤蛋白(KRas或KRAS)和/或功能获得性KRAS突变体)，其通过泛素连接酶泛素化并且直接或通过接头部分L化学连接至ULM基团，或者可替代地PTM是也是泛素连接酶结合部分的ULM’基团，其可以与如上所述的ULM基团相同或不同并且直接或通过接头部分直接连接至ULM基团；并且L是如上所述的接头部分，其可以存在或不存在，并且其将ULM化学(共价)连接到PTM，或其药学上可接受的盐、对映异构体、立体异构体、溶剂化物或多晶型物。

在某些实施例中，接头基团L是包括一个或多个独立地选自由以下组成的群组的共价连接结构单元的基团：

X选自由以下组成的群组：O、N、S、S(O)和SO₂；n是1-5的整数；R^L1是氢或烷基，

是任选被1-3个取代基取代的单或双环芳基或杂芳基，所述取代基选自烷基、卤素、卤代烷基、羟基、烷氧基或氰基；

是单或双环烷基或杂环烷基，其任选被1-3个取代基取代，所述取代基选自烷基、卤素、卤代烷基、羟基、烷氧基或氰基；并且苯环片段可以任选被1、2或3个取代基取代，所述取代基选自由烷基、卤素、卤代烷基、羟基、烷氧基和氰基组成的群组。在一个实施例中，接头基团L包括最多10个如上所述的共价连接的结构单元。

尽管ULM基团和PTM基团可以通过对于接头化学适当和稳定的任何基团共价连接至接头基团，但是在本公开的优选方面，接头独立地共价键合到ULM基团和PTM基团，优选通过酰胺、酯、硫酯、酮基、氨基甲酸酯(尿烷)、碳或醚，所述基团各自可以插入到ULM基团和PTM基团上的任何地方以提供泛素连接酶上的ULM基团和待降解的靶蛋白上的PTM基团的最大结合。(注意在PTM基团是ULM基团的某些方面，用于降解的靶蛋白可以是泛素连接酶本身)。在某些优选的方面，接头可与ULM和/或PTM基团上的任选取代的烷基、亚烷基、烯烃或炔烃基团、芳基或杂环基团连接。

示例性PTM

在本公开的优选方面，PTM基团是结合靶蛋白的基团。PTM基团的靶标种类众多，并且选自在细胞中表达的蛋白质，使得至少一部分序列在细胞中发现并且可以结合PTM基团。术语“蛋白质”包括足够长度的寡肽和多肽序列，它们可以结合到根据本公开的PTM基团。如本文另外描述的，真核系统或微生物系统中的任何蛋白质，包括病毒、细菌或真菌，是由根据本公开的化合物介导的泛素化的靶标。优选地，靶蛋白是真核蛋白。

根据本公开的PTM基团包括例如，任何与蛋白质特异性结合(与靶蛋白结合)的部分，并且包括以下小分子靶蛋白部分的非限制性示例：KRas抑制剂、Hsp90抑制剂、激酶抑制剂、HDM2和MDM2抑制剂、靶向含人BET溴结构域蛋白的化合物、HDAC抑制剂、人赖氨酸甲基转移酶抑制剂、血管生成抑制剂、核激素受体化合物、免疫抑制化合物以及靶向芳香烃受体(AHR)的化合物，等等。下述组合物例示了小分子靶蛋白结合部分的一些成员。此类小分子靶蛋白结合部分还包括这些组合物的药学上可接受的盐、对映异构体、溶剂化物和多晶型物，以及可以靶向目标蛋白的其他小分子，诸如KRas和/或突变型KRas，包括功能获得性KRas突变体，诸如KRas^G12C。这些结合部分优选地通过接头与泛素连接酶结合部分连接，以便呈递靶蛋白(与蛋白质靶部分结合)，诸如KRas和/或功能获得性KRas突变体，其在泛素连接酶附近以进行泛素化和降解。

本公开可用于治疗许多疾病状态和/或病况，包括其中蛋白质失调并且患者将从蛋白质的降解和/或抑制中受益的任何疾病状态和/或病况。

在另一方面，本说明书提供了治疗组合物，其包含有效量的本文所述的化合物或其盐形式，以及药学上可接受的载体、添加剂或辅料，以及任选地另外的生物活性剂。所述治疗组合物调节患者或受试者例如动物诸如人中的蛋白质降解，并且可用于治疗或改善通过降解蛋白质调节的疾病状态或病况。在某些实施例中，本文所述的治疗组合物可用于实现目标蛋白的降解，以治疗或改善疾病，例如癌症(包括例如胰腺癌、结肠癌、肺癌、非小细胞肺癌，或其组合)。在某些另外的实施例中，该疾病包括或为胰腺癌、结肠癌、结直肠癌、肺癌、非小细胞肺癌、胆道恶性肿瘤、子宫内膜癌、宫颈癌、膀胱癌、肝癌、髓样白血病、乳腺癌或其组合。

在替代方面，本公开涉及通过降解蛋白质或多肽调节所述疾病状态或病况来治疗有需要的受试者的疾病状态或改善疾病或病况的症状的方法，所述方法包括：向所述患者或受试者施用有效量，例如治疗有效量的至少一种如上文所述的化合物，其任选地与药学上可接受的载体、添加剂或辅料以及任选地另外的生物活性剂组合，其中组合物对治疗或改善受试者的疾病、病症或症状有效。根据本公开的方法可以通过施用有效量的至少一种本文所述的化合物用于治疗多种疾病状态或病况，包括癌症(包括例如，胰腺癌、结肠癌、结直肠癌、肺癌、非小细胞肺癌、胆道恶性肿瘤、子宫内膜癌、子宫颈癌、膀胱癌、肝癌、髓样白血病、乳腺癌或其组合)。所述疾病状态或病况可以是由微生物制剂或其他外源性制剂诸如病毒、细菌、真菌、原生动物或其他微生物引起的疾病，或者可以是由导致疾病状态和/或病况的蛋白质的过表达引起的疾病状态。

在另一方面，本说明书提供了使用根据本公开的化合物在生物系统中鉴定目标蛋白的降解作用的方法。

术语“靶蛋白”用于描述蛋白质或多肽，其是与根据本公开的化合物结合并通过下文的泛素连接酶降解的靶标。例如，在本文描述的任何方面或实施例中，PTM是包含KRas蛋白质靶向部分的小分子。此类小分子靶蛋白结合部分还包括这些组合物的药学上可接受的盐、对映异构体、溶剂化物和多晶型物，以及可以靶向目标蛋白质的其他小分子。这些结合部分通过至少一个接头基团L与至少一个ULM基团(例如，VLM、CLM、ILM和/或MLM)连接。

可以结合至蛋白质靶标部分并被与泛素连接酶结合部分结合的连接酶降解的靶蛋白包括任何蛋白质或肽，包括其片段、其类似物和/或其同源物。靶蛋白包括具有任何生物学功能或活性的蛋白质和肽，包括结构、调节、激素、酶促、遗传、免疫学、收缩、储存、运输和信号转导。例如，在本文描述的任何方面或实施例中，PTM是KRas蛋白结合部分。

这些多种蛋白质靶标诸如KRas蛋白质可用于鉴定与蛋白质结合的化合物部分的筛选中，并且通过将所述部分掺入根据本公开的化合物中，蛋白质的活性水平可以为治疗最终结果而改变。

术语“蛋白质靶部分”或PTM用于描述小分子，所述小分子与靶蛋白或其他目标蛋白或多肽结合并且将所述蛋白或多肽置于/呈现在泛素连接酶附近，使得可能通过泛素连接酶来降解蛋白或多肽。小分子靶蛋白结合部分的非限制性示例包括KRas抑制剂、Hsp90抑制剂、激酶抑制剂、MDM2抑制剂、靶向含人BET溴结构域蛋白的化合物、HDAC抑制剂、人赖氨酸甲基转移酶抑制剂、血管生成抑制剂、免疫抑制化合物和靶向芳香烃受体(AHR)的化合物等。下述组合物例示了小分子靶蛋白的一些成员。根据本公开的示例性蛋白质靶部分包括KRas抑制剂、卤代烷卤化酶抑制剂、Hsp90抑制剂、激酶抑制剂、MDM2抑制剂、靶向含人BET溴结构域蛋白的化合物、HDAC抑制剂、人赖氨酸甲基转移酶抑制剂、血管生成抑制剂、免疫抑制化合物和靶向芳香烃受体(AHR)的化合物。

本文所述的组合物例示了这些类型的小分子靶蛋白结合部分的一些成员。此类小分子靶蛋白结合部分还包括这些组合物的药学上可接受的盐、对映异构体、溶剂化物和多晶型物，以及可以靶向目标蛋白的其他小分子。

在本文描述的任何方面或实施例中，PTM是KRas蛋白结合/靶向部分，例如包含KRas蛋白结合/靶向部分的小分子。在本文所述的任何方面或实施例中，PTM结合突变体KRas，例如功能获得性突变体KRas(诸如KRas^G12C)。在本文所述的任何方面或实施例中，PTM具有由以下表示的化学结构：

其中：

是芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基；

X_PTM是C或N；

W_PTM选自由以下组成的群组：任选取代的C3-C6环烷基和任选取代的C3-C6杂烷基、任选取代的C3-C6杂环烷基任选取代的芳基(例如，任选取代的C5-C7芳基)、任选取代的杂芳基(例如，任选取代的C5-C7杂芳基)；

R_PTM1A是NR_PTM9R_PTM10或_PTM9R_PTM10、H、任选取代的烷基、任选取代的烷氧基、任选取代的C3-C6环烷基、任选取代的O-(C3-C6环烷基)、任选取代的C3-C6杂烷基、任选取代的-O-C_1-4烷基-C_3-6环烷基、任选取代的O-(C3-C6杂烷基)、任选取代的O-C_1-4烷基-C_3-6杂烷基、任选取代的O-C_1-4烷基-C_3-6杂环烷基、任选取代的芳基(例如，任选取代的C5-C7芳基)、任选取代的O-芳基(例如，任选取代的O-(C5-C7芳基))、任选取代的杂芳基(例如，任选取代的C5-C7杂芳基)、任选取代的O-杂芳基(例如，任选取代的O-(C5-C7杂芳基))、任选取代的

(例如，任选被至少一个烷基取代，诸如*碳可以任选被烷基取代)、任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

(例如，任选被至少一个烷基取代，诸如*碳可以任选被烷基取代)、任选取代的

(例如，任选被至少一个烷基取代，诸如*碳可以任选被烷基取代)、任选取代的

(例如，任选被至少一个烷基取代，诸如*碳可以任选被烷基取代)、任选取代的

(例如，任选被至少一个烷基取代，诸如*碳可以任选被烷基取代)、任选取代的

(例如，任选被至少一个烷基取代，诸如*碳可以任选被烷基取代)、任选取代的

(例如，任选被至少一个烷基取代，诸如*碳可以任选被烷基取代)，其中N*是接头(L)的杂环烷基(例如，C4-C8杂环烷基)的N原子；

R_PTM1B是NR_PTM9R_PTM10、OR_PTM9R_PTM10、H、任选取代的烷基、任选取代的O-烷基、任选取代的C3-C6环烷基、任选取代的O-(C3-C6环烷基)、任选取代的-O-C_1-4烷基-C_3-6环烷基、任选取代的C3-C6杂烷基、任选取代的O-(C3-C6杂烷基)、任选取代的O-C_1-4烷基-C_3-6杂烷基、任选取代的芳基(例如，任选取代的C5-C7芳基)、任选取代的O-芳基(例如，任选取代的O-(C5-C7芳基))、任选取代的杂芳基(例如，任选取代的C5-C7杂芳基)、任选取代的O-杂芳基(例如，任选取代的O(C5-C7杂芳基))、任选取代的

(例如，任选被至少一个烷基取代，诸如*碳可以任选被烷基取代)、任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

R_PTM9和R_PTM10各自独立地是H、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的脂族胺、任选取代的脂族酰胺；

R_PTM2是H、(C＝O)R_PTM2'、任选取代的直链或支链烷基；

R_PTM2'是任选取代的直链或支链烷基、任选取代的烯烃、-N(R_PTM8)₂或-C(OH)₂；

R_PTM3是烷基、烷氧基、苯基或萘，各自独立地被OH、H、卤素取代；

R_PTM4A是OH、H、卤素、任选取代的直链或支链C1-C6烷基；

R_PTM4B是OH、H、卤素、任选取代的直链或支链C1-C6烷基；

R_PTM5选自由以下组成的群组：任选取代的芳基、任选取代的联芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的联杂芳基、任选取代的C3-C6环烷基、任选取代的C3-C6环杂烷基、卤素、H、任选取代的直链或支链烷基(例如，任选取代的直链或支链C1-C6烷基)、OH和烷氧基；

R_PTM8是H或烷基(例如，C1烷基、C2烷基、C3烷基或C4烷基)；

t是0、1、2、3、4、5、6(诸如0、1、2、3)；并且

表示接头、ULM、ULM’、CLM、CLM’、VLM、VLM’、ILM、ILM’、MLM、MLM’或其组合中的至少一个的连接位点。

在本文所述的任何方面或实施例中，PTM具有由以下表示的化学结构：

其中：

X_PTM1是NH或O；

R_PTM6是芳基、杂芳基、

其中N*是接头(L)的杂环烷基(例如，C4-C8杂环烷基)的N原子；

R_PTM7是H、芳基、O-芳基、杂芳基、O-杂芳基、

t是0、1、2、3、4、5、6(例如，1、2或3)；

R_PTM9是H、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的脂族胺、任选取代的脂族酰胺任选取代的

(例如，任选被至少一个烷基取代，诸如*碳可以任选被烷基取代)；

可以是单键或双键；并且

表示接头、ULM、ULM’、CLM、CLM’、VLM、VLM’、ILM、ILM’、MLM、MLM’或其组合中的至少一个的连接位点。

在本文所述的任何方面或实施例中，PTM选自：

在本文描述的任何方面或实施例中，PTM是：(i)选自表4、6、8、10和12的化合物的PTM；或(ii)表1的PTM。

治疗组合物

包含有效量的至少一种本文所述的双官能化合物与本文另外描述的一种或多种化合物的组合(全部为有效量)以及药学有效量的载体、添加剂或辅料的药物组合物代表本公开的另一方面。

本公开在适用时包括包含如本文所述的化合物的药学上可接受的盐，特别是酸或碱加成盐的组合物。用于制备可根据该方面使用的前述碱性化合物的药学上可接受的酸加成盐的酸是形成无毒酸加成盐的那些，即含有药理学上可接受的阴离子的盐，诸如盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸性磷酸盐、乙酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、酸性柠檬酸盐、酒石酸盐、酒石酸氢盐、琥珀酸盐、马来酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、蔗糖酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和双羟萘酸盐[即，1,1'-亚甲基-双-(2-羟基-3萘甲酸盐)]，等等。

药学上可接受的碱加成盐也可用于产生根据本公开的化合物或衍生物的药学上可接受的盐形式。可以用作制备本发明化合物的药学上可接受的碱盐(本质上是酸性的)的试剂的化学碱是与此类化合物形成无毒碱盐的那些。此类无毒碱盐包括但不限于衍生自此类药理学上可接受的阳离子的那些，诸如碱金属阳离子(例如，钾和钠)和碱土金属阳离子(例如，钙、锌和镁)；铵或水溶性胺加成盐，诸如N-甲基葡糖胺-(葡甲胺)；以及低级烷醇铵和药学上可接受的有机胺的其他碱盐，等等。

根据本公开，本文所述的化合物可以通过口服、肠胃外或局部途径以单剂量或分剂量施用。活性化合物的施用范围可以从连续(静脉滴注)到每天几次口服施用(例如，Q.I.D.)，并且可以包括口服、局部、肠胃外、肌内、静脉内、皮下、透皮(其可以包括渗透促进剂)、颊、舌下和栓剂施用等其他施用途径。肠溶包衣口服片剂也可用于增强来自口服施用途径的化合物的生物利用度。最有效的剂型将取决于所选择的特定试剂的药代动力学以及患者疾病的严重程度。也可以使用根据本公开的化合物作为喷雾剂、雾剂或气雾剂用于鼻内、气管内或肺内施用的施用。因此，本公开还涉及药物组合物，其包含有效量的本文所述的化合物，任选地与药学上可接受的载体、添加剂或辅料组合。根据本公开的化合物可以立即释放、中间释放或持续或控制释放形式施用。持续或控制释放形式优选口服施用，但也以栓剂、透皮或其他局部形式施用。脂质体形式的肌内注射也可以用于控制或维持化合物在注射部位的释放。

本文所述的组合物可以使用一种或多种药学上可接受的载体以常规方式配制，并且也可以以控制释放制剂施用。可用于这些药物组合物中的药学上可接受的载体包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白诸如人血清白蛋白、缓冲物质诸如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物、水、盐或电解质诸如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素基物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。

本文所述的组合物可以口服、肠胃外、通过吸入喷雾、局部、直肠、鼻、颊、阴道或经植入的储库施用。如本文所用，术语“肠胃外”包括皮下、静脉内、肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内和颅内注射或输注技术。优选地，所述组合物口服、腹膜内或静脉内施用。

本文所述的组合物的无菌可注射形式可以是水性或油性悬浮液。可以根据本领域已知的技术，使用合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂来配制这些悬浮液。无菌可注射制剂也可以是在无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如作为在1,3-丁二醇中的溶液。可以使用的可接受的赋形剂和溶剂是水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。另外，无菌的不挥发性油通常用作溶剂或悬浮介质。为此，可以使用任何温和的不挥发性油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。脂肪酸，诸如油酸及其甘油酯衍生物可用于制备注射剂，如在天然药学上可接受的油中，诸如橄榄油或蓖麻油，尤其以其聚氧乙烯化形式。这些油溶液或悬浮液还可以含有长链醇稀释剂或分散剂，诸如Ph.Helv或类似的醇。

本文所述的药物组合物可以以任何口服可接受的剂型口服施用，包括但不限于胶囊剂、片剂、水性混悬剂或溶液剂。在口服使用的片剂的情况下，常用的载体包括乳糖和玉米淀粉。通常还添加润滑剂，诸如硬脂酸镁。对于胶囊剂形式的口服施用，可用的稀释剂包括乳糖和干燥的玉米淀粉。当需要口服水性混悬剂时，将活性成分与乳化剂和悬浮剂混合。如果需要，也可以添加某些甜味剂、调味剂或着色剂。

可替代地，本文所述的药物组合物可以栓剂的形式施用以用于直肠施用。这些可以通过将试剂与合适的无刺激性辅料混合来制备，所述辅料在室温下为固体但在直肠温度下为液体，并且因此将在直肠中熔化以释放药物。此类材料包括可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。

本文所述的药物组合物也可以局部施用。针对这些区域或器官中的每一个容易制备合适的局部制剂。下肠道的局部应用可以直肠栓剂制剂(见上文)或合适的灌肠剂制剂形式进行。也可以使用局部可接受的透皮贴剂。

对于局部应用，可以将药物组合物配制成合适的软膏剂，其含有悬浮或溶解在一种或多种载体中的活性组分。用于本公开化合物的局部施用的载体包括但不限于矿物油、液体凡士林、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。在本公开的某些优选方面，化合物可以被涂覆在支架上，所述支架将经外科手术植入患者体内，以抑制或减少在患者支架中发生阻塞的可能性。

可替代地，可以将药物组合物配制成合适的洗剂或乳膏，其含有悬浮或溶解在一种或多种药学上可接受的载体中的活性组分。合适的载体包括但不限于矿物油、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、聚山梨酯60、鲸蜡酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。

对于眼科使用，可以将药物组合物配制成在等渗的、pH调节的无菌盐水中的微粉化混悬剂，或者优选地配制成在等渗的、pH调节的无菌盐水中的溶液，其含或不含防腐剂诸如苯扎氯铵。或者，对于眼科使用，可以将药物组合物配制成软膏诸如凡士林。

本文所述的药物组合物还可通过鼻喷雾或吸入施用。此类组合物根据药物制剂领域中众所周知的技术制备，并且可以使用苯甲醇或其他合适的防腐剂、增强生物利用度的吸收促进剂、碳氟化合物和/或其他常规的增溶剂或分散剂制备成在盐水中的溶液。

可以与载体材料组合以产生单一剂型的本文所述的药物组合物中的化合物的量将根据宿主和所治疗的疾病、特定的施用方式而变化。优选地，组合物应被配制为单独或与根据本公开的至少一种其他化合物组合地含有约0.05毫克至约750毫克或更多，更优选约1毫克至约600毫克，并且甚至更优选约10毫克至约500毫克的活性成分。

还应理解，针对任何特定患者的特定剂量和治疗方案将取决于多种因素，包括所用特定化合物的活性、年龄、体重、总体健康、性别、饮食、施用时间、排泄速率、药物组合和治疗医师的判断以及所治疗的特定疾病或病况的严重程度。

可以通过向患者(受试者)施用(单独或与本文另外确定的其他已知治疗剂组合)有效量的根据本公开的化合物来治疗需要使用根据本文所述方法的化合物的疗法的患者或受试者，所述化合物包括其药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶型物，任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中。

这些化合物可以通过任何合适的途径，例如口服、肠胃外、静脉内、皮内、皮下或局部包括透皮，以液体、乳膏、凝胶或固体形式或通过气雾剂形式施用。

活性化合物以足以向患者递送治疗有效量的量包含在药学上可接受的载体或稀释剂中，以用于期望适应症而不会在所治疗的患者中引起严重的毒性作用。对于所有上文病况，活性化合物的优选剂量范围为每天约10ng/kg至300mg/kg，优选每天0.1至100mg/kg，更通常为每天每千克接受者/患者体重0.5至约25mg。在合适的载体中，典型的局部剂量范围为0.01-5％wt/wt。

化合物以任何合适的单位剂型方便地施用，包括但不限于每单位剂型含有少于1mg、1mg至3000mg，优选5至500mg活性成分的单位剂型。约25-250mg的口服剂量通常是方便的。

优选施用活性成分以实现约0.00001-30mM，优选约0.1-30μM的活性化合物的血浆峰值浓度。例如，这可以通过静脉内注射活性成分的溶液或制剂来实现，所述溶液或制剂任选地在盐水或水性介质中或作为活性成分的大丸剂施用。口服施用也适合于产生有效血浆浓度的活性剂。

药物组合物中活性化合物的浓度将取决于药物的吸收、分布、失活和排泄速率以及本领域技术人员已知的其他因素。应当注意，剂量值也将随着要减轻的病况的严重性而变化。还应理解，对于任何特定的受试者，应根据个体需要和施用或监督组合物施用的人的专业判断，随时间调整具体的剂量方案，并且本文列出的浓度范围仅作为示例，并不旨在限制要求保护的组合物的范围或实践。活性成分可以一次施用，也可以分成许多较小的剂量，以不同的时间间隔施用。

口服组合物通常将包含惰性稀释剂或可食用载体。它们可以包封入明胶胶囊中或压成片剂。为了口服治疗施用的目的，可以将活性化合物或其前药衍生物与辅料合并，并以片剂、锭剂或胶囊剂的形式使用。药学上相容的粘合剂和/或佐剂材料可以作为组合物的一部分包括。

片剂、丸剂、胶囊剂、锭剂等可以含有以下任何成分或相似性质的化合物：粘合剂，诸如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；辅料，诸如淀粉或乳糖，分散剂诸如藻酸、Primogel或玉米淀粉；润滑剂，诸如硬脂酸镁或Sterotes；助流剂，诸如胶体二氧化硅；甜味剂，诸如蔗糖或糖精；或调味剂，诸如薄荷、水杨酸甲酯或橙色调味剂。当剂量单位形式是胶囊剂时，除上述类型的材料外，它还可以含有液体载体，诸如脂肪油。另外，剂量单位形式可以含有改变剂量单位的物理形式的各种其他材料，例如糖、紫胶或肠溶制剂包衣。

活性化合物或其药学上可接受的盐可以作为酏剂、混悬剂、糖浆剂、薄片剂、口香糖等的组分施用。除了活性化合物之外，糖浆剂还可含有蔗糖作为甜味剂和某些防腐剂、染料、着色剂和调味剂。

活性化合物或其药学上可接受的盐也可以与不损害期望作用的其他活性材料或与补充期望作用的材料混合，诸如抗癌剂，包括表皮生长因子受体抑制剂、EPO和阿法达贝泊汀，等等。在本公开的某些优选方面，将根据本公开的一种或多种化合物与如本文另外描述的另一种生物活性剂诸如抗癌剂或伤口愈合剂包括抗生素共同施用。

用于肠胃外、皮内、皮下或局部应用的溶液剂或混悬剂可包括以下组分：无菌稀释剂诸如注射用水、盐溶液、不挥发性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶剂；抗菌剂诸如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂诸如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂诸如乙二胺四乙酸；缓冲剂诸如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐，以及用于调节张度的试剂诸如氯化钠或右旋糖。可以将肠胃外制剂包封入玻璃或塑料制成的安瓿瓶、一次性注射器或多剂量小瓶中。

如果静脉内施用，优选的载体是生理盐水或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。

在一个实施例中，活性化合物与载体一起制备，所述载体将保护化合物免于从体内快速消除，诸如控制释放制剂，包括植入物和微囊递送系统。可以使用可生物降解的生物相容性聚合物，诸如乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原蛋白、聚原酸酯和聚乳酸。此类制剂的制备方法对本领域技术人员而言是显而易见的。

脂质体混悬剂也可以是药学上可接受的载体。这些可以根据本领域技术人员已知的方法来制备，例如，如美国专利号4,522,811(其通过引用整体并入本文)中所述。例如，脂质体制剂可通过以下制备：将合适的脂质(诸如硬脂酰磷脂酰乙醇胺、硬脂酰磷脂酰胆碱、花生四烯酰磷脂酰胆碱和胆固醇)溶解在无机溶剂中，然后蒸发，留下干脂质在容器表面上的薄膜。然后将活性化合物的水溶液引入容器中。接着，用手旋转容器，以从容器的侧面释放脂质物质并分散脂质聚集体，从而形成脂质体混悬剂。

治疗方法

在另一方面，本说明书提供了治疗组合物，其包含有效量的本文所述的化合物或其盐形式以及药学上可接受的载体。所述治疗组合物调节患者或受试者例如动物诸如人中的蛋白质降解，并且可用于治疗或改善通过降解蛋白质调节的疾病状态或病况。

如本文所用，术语“治疗(treat、treating和treatment)”等是指向可施用本发明化合物的患者提供益处的任何作用，包括治疗通过结合本发明化合物的蛋白质调节的任何疾病状态或病况。上文列出了可以使用根据本公开的化合物治疗的疾病状态或病况，包括癌症(例如，胰腺癌、结肠癌、结直肠癌、肺癌、非小细胞肺癌、胆道恶性肿瘤、子宫内膜癌、宫颈癌、膀胱癌、肝癌、髓样白血病和乳腺癌或其组合中的至少一种)。

说明书提供了如本文所述的用于实现目标蛋白降解以用于治疗或改善疾病的治疗组合物，所述疾病例如癌症(诸如胰腺癌、结肠癌、结直肠癌、肺癌、非小细胞肺癌、胆道恶性肿瘤、子宫内膜癌、宫颈癌、膀胱癌、肝癌、髓样白血病和乳腺癌)。在某些另外的实施例中，所述疾病是多发性骨髓瘤。这样，在另一方面，本说明书提供了在细胞中泛素化/降解靶蛋白的方法。在某些实施例中，所述方法包括施用如本文所述的包含例如ULM和PTM的双官能化合物，其优选通过如本文另外描述的接头部分连接，其中ULM与PTM偶联并且其中ULM识别泛素途径蛋白(例如，泛素连接酶，诸如E3泛素连接酶，包括cereblon、VHL、IAP和/或MDM2)，并且PTM识别靶蛋白，使得当将靶蛋白放置在泛素连接酶附近时将发生靶蛋白降解，因此导致靶蛋白作用的降解/抑制和蛋白质水平的控制。本公开提供的蛋白质水平的控制提供了疾病状态或病况的治疗，所述疾病状态或病况通过靶蛋白经由降低细胞(例如患者细胞)中蛋白质的水平来调节。在某些实施例中，所述方法包括施用有效量的本文所述的化合物，其任选地包括药学上可接受的辅料、载体、佐剂、另一种生物活性剂或其组合。

在另外的实施例中，本说明书提供了用于在受试者或患者例如动物诸如人中治疗或改善疾病、病症或其症状的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用包含有效量如治疗有效量的本文所述的化合物或其盐形式，以及药学上可接受的辅料、载体、佐剂、另一生物活性剂或其组合的组合物，其中所述组合物有效治疗或改善受试者中的疾病或病症或其症状。

在另一方面，本说明书提供了使用根据本公开的化合物在生物系统中鉴定目标蛋白的降解作用的方法。

在另一个实施例中，本公开涉及治疗需要通过蛋白质调节的疾病状态或病况的人类患者的方法，其中该蛋白质的降解将在患者中产生治疗效果，所述方法包括向需要的患者施用有效量的根据本公开的化合物，其任选地与另一种生物活性剂组合。疾病状态或病况可以是由微生物制剂或其他外源性试剂诸如病毒、细菌、真菌、原生动物或其他微生物引起的疾病，或者可以是由导致疾病状态和/或病况的蛋白的过表达引起的疾病状态。

术语“疾病状态或病况”用于描述其中发生蛋白质失调(即，患者中表达的蛋白质的量升高)并且其中患者中一种或多种蛋白质的降解可为有需要的患者提供有益疗法或症状缓解的任何疾病状态或病况。在某些情况下，疾病状态或病况可以被治愈。

可以使用根据本公开的化合物治疗的疾病状态或病况包括例如，哮喘、自身免疫性疾病诸如多发性硬化、各种癌症、纤毛病、腭裂、糖尿病、心脏病、高血压、炎性肠病、智力迟钝、情绪障碍、肥胖、屈光不正、不育、安格尔曼综合征、卡纳万病、乳糜泄、腓骨肌萎缩症、囊性纤维化、杜氏肌营养不良、血色素沉着病、血友病、克氏综合征、神经纤维瘤病、苯丙酮尿症、多囊性肾病、(PKD1)或4(PKD2)普瑞德-威利氏症候群、镰状细胞疾病、黑蒙性家族痴呆症、特纳综合征。

术语“瘤形成”或“癌症”在整个说明书中用于指导致癌性或恶性赘生物，即通过细胞增殖生长，通常比正常更快并且在引发新生长的刺激停止后继续生长的异常组织的形成和生长的病理过程。在本文所述的任何方面或实施例中，所述疾病或病症是选自胰腺癌、结肠癌、结直肠癌、肺癌、非小细胞肺癌、胆道恶性肿瘤、子宫内膜癌、宫颈癌、膀胱癌、肝癌、髓样白血病或乳腺癌的癌症或瘤形成(例如，选自胰腺癌、结肠癌、肺癌或非小细胞肺癌的癌症或瘤形成)。恶性肿瘤显示出部分或完全缺乏结构组织和与正常组织的功能协调，且大多数侵入周围组织，转移到几个部位，并且可能在尝试去除后复发，除非充分治疗否则会导致患者死亡。如本文所用，术语瘤形成用于描述所有癌性疾病状态，并且包括或涵盖与恶性血源性肿瘤、腹水肿瘤和实体瘤相关的病理过程。可单独使用或与至少一种其他抗癌剂组合使用本发明化合物治疗的示例性癌症包括鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、肝细胞癌和肾细胞癌、膀胱癌、肠癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、食道癌、头癌、肾癌、肝癌、肺癌、颈癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌和胃癌；白血病；良性和恶性淋巴瘤，特别是伯基特淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤；良性和恶性黑素瘤；骨髓增生性疾病；肉瘤，包括尤文氏肉瘤、血管肉瘤、卡波西肉瘤、脂肪肉瘤、肌肉瘤、外周神经上皮瘤、滑膜肉瘤、神经胶质瘤、星形细胞瘤、少突神经胶质瘤、室管膜瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、神经节瘤、神经节神经胶质瘤、成神经管细胞瘤、松果体细胞瘤、脑膜瘤、脑膜肉瘤、神经纤维瘤和神经鞘瘤；肠癌、乳腺癌、前列腺癌、非小细胞肺癌、胆道恶性肿瘤、子宫内膜癌、髓样白血病、宫颈癌、子宫癌、肺癌、卵巢癌、睾丸癌、甲状腺癌、星形细胞瘤、食管癌、胰腺癌、胃癌、肝癌、结肠癌、黑素瘤；癌肉瘤、霍奇金病、维尔姆斯瘤和畸胎瘤。可以使用根据本公开的化合物治疗的另外的癌症包括例如，T-系急性淋巴母细胞性白血病(T-ALL)、T-系淋巴母细胞性淋巴瘤(T-LL)、外周T-细胞淋巴瘤、成人T-细胞白血病、Pre-B ALL、Pre-B淋巴瘤、大B-细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、B-细胞ALL、费城染色体阳性ALL和费城染色体阳性CML。

术语“生物活性剂”用于描述除根据本公开的化合物以外的试剂，其与本发明的化合物组合用作具有生物活性的试剂以帮助实现本发明的化合物所用于的预期疗法、抑制和/或防止/预防。优选用于本文的生物活性剂包括具有与使用或施用本发明化合物的药理活性相似的药理活性的那些试剂，并且包括例如抗癌剂、抗病毒剂，尤其包括抗HIV剂和抗HCV剂、抗微生物剂、抗真菌剂等。

术语“另外的抗癌剂”用于描述抗癌剂，其可以与根据本公开的化合物组合以治疗癌症。这些试剂包括，例如依维莫司、曲贝替丁、Abraxane、TLK 286、AV-299、DN-101、帕唑帕尼、GSK690693、RTA 744、ON 0910.Na、AZD 6244(ARRY-142886)、AMN-107、TKI-258、GSK461364、AZD 1152、恩扎妥林(enzastaurin)、凡德他尼、ARQ-197、MK-0457、MLN8054、PHA-739358、R-763、AT-9263、FLT-3抑制剂、VEGFR抑制剂、EGFR TK抑制剂、极光激酶抑制剂、PIK-1调节剂、Bcl-2抑制剂、HDAC抑制剂、c-MET抑制剂、PARP抑制剂、Cdk抑制剂、EGFRTK抑制剂、IGFR-TK抑制剂、抗HGF抗体、PI3激酶抑制剂、AKT抑制剂、mTORC1/2抑制剂、JAK/STAT抑制剂、检查点-1或2抑制剂、粘着斑激酶抑制剂、Map激酶激酶(mek)抑制剂、VEGF捕获抗体、培美曲塞、厄洛替尼、达沙替尼、尼洛替尼、德卡他尼、帕尼单抗、氨柔比星、奥戈伏单抗、Lep-etu、洛拉曲塞、azd2171、巴他布林、奥法木单抗、扎木单抗(zanolimumab)、艾特咔林(edotecarin)、粉防己碱、鲁比替康、替米利芬、奥利默森、替西木单抗、易普利姆玛、棉酚、Bio 111、131-I-TM-601、ALT-110、BIO 140、CC 8490、西仑吉肽、吉马替康、IL13-PE38QQR、INO 1001、IPdR1KRX-0402、甲硫恩酮、LY317615、努阿迪布(neuradiab)、vitespan、Rta 744、Sdx 102、他仑帕奈、阿曲生坦、Xr 311、罗米地辛、ADS-100380、舒尼替尼、5-氟尿嘧啶、伏立诺他、依托泊苷、吉西他滨、阿霉素、脂质体阿霉素、5'-脱氧-5-氟尿苷、长春新碱、替莫唑胺、ZK-304709、seliciclib；PD0325901、AZD-6244、卡培他滨、L-谷氨酸、N-[4-[2-(2-氨基-4,7-二氢-4-氧代-1H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙基]苯甲酰基]-二钠盐七水合物、喜树碱、PEG标记的伊立替康、他莫昔芬、柠檬酸托瑞米芬、阿那曲唑、依西美坦、来曲唑、DES(己烯雌酚)、雌二醇、雌激素、共轭雌激素、贝伐单抗、IMC-1C11、CHIR-258)；3-[5-(甲基磺酰基哌啶甲基)-吲哚基-喹诺酮、瓦他拉尼碱、AG-013736、AVE-0005、醋酸戈舍瑞林、醋酸亮丙瑞林、双羟萘酸曲普瑞林、醋酸甲羟孕酮、己酸羟孕酮、醋酸甲地孕酮、雷洛昔芬、比卡鲁胺、氟他米特、尼鲁米特、醋酸甲地孕酮、CP-724714；TAK-165、HKI-272、厄洛替尼、拉帕替尼、卡尼替尼、ABX-EGF抗体、爱必妥、EKB-569、PKI-166、GW-572016、洛那法尼(Ionafarnib)、BMS-214662、替比法尼；氨磷汀、NVP-LAQ824、辛二酰苯胺异羟肟酸、丙戊酸、曲古抑菌素A、FK-228、SU11248、索拉非尼、KRN951、氨鲁米特、arnsacrine、阿那格雷、L-天冬酰胺酶、卡介苗(BCG)疫苗、阿霉素、博来霉素、布舍瑞林、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、克拉屈滨、氯膦酸盐、环丙孕酮、阿糖胞苷、达卡巴嗪、放线菌素、柔红霉素、己烯雌酚、表柔比星、氟达拉滨、氟氢可的松、氟甲睾酮、氟他米特、格列卫、吉西他滨、羟基脲、伊达比星、异环磷酰胺、伊马替尼、亮丙瑞林、左旋咪唑、洛莫司汀、氮芥、美法仑、6-巯基嘌呤、美司钠、甲氨蝶呤、丝裂霉素、米托坦、米托蒽醌、尼鲁米特、奥曲肽、奥沙利铂、帕米膦酸钠、喷司他丁、普卡霉素、卟菲尔钠、丙卡巴肼、雷替曲塞、利妥昔单抗、链佐星、替尼泊苷、睾酮、沙利度胺、硫鸟嘌呤、噻替哌、维甲酸、长春地辛、13-顺式-视黄酸、苯丙氨酸氮芥、尿嘧啶氮芥、雌莫司汀、六甲蜜胺、氟尿苷、5-脱氧尿苷、阿糖胞苷、6-巯基嘌呤、脱氧助间型霉素、骨化三醇、戊柔比星、光神霉素、长春碱、长春瑞滨、拓扑替康、雷佐生、马立马司他、COL-3、新伐司他、BMS-275291、角鲨胺、内皮抑素、SU5416、SU6668、EMD121974、白介素12、IM862、血管抑素、vitaxin、屈洛昔芬、吲哚昔酚、螺内酯、非那雄胺、西咪替丁、曲妥珠单抗、地尼白介素、吉非替尼、硼替佐米、紫杉醇、无克列莫佛的紫杉醇、多西紫杉醇、埃坡西龙B(epithilone B)、BMS-247550、BMS-310705、屈洛昔芬、4-羟基他莫昔芬、哌喷昔芬、ERA-923、阿佐昔芬、氟维司群、阿可比芬、拉索昔芬、艾多昔芬、TSE-424、HMR-3339、ZK186619、拓扑替康、PTK787/ZK 222584、VX-745、PD 184352、雷帕霉素、40-O-(2-羟乙基)-雷帕霉素、替西罗莫司、AP-23573、RAD001、ABT-578、BC-210、LY294002、LY292223、LY292696、LY293684、LY293646、渥曼青霉素、ZM336372、L-779,450、乙二醇化非格司亭、达贝泊汀、促红细胞生成素、粒细胞集落刺激因子、唑来膦酸盐、泼尼松、西妥昔单抗、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、组氨瑞林、聚乙二醇化干扰素α-2a、干扰素α-2a、聚乙二醇化干扰素α-2a、干扰素-2b、阿扎胞苷、PEG-L-天冬酰胺酶、来那度胺、吉妥珠单抗、氢化可的松、白介素-11、右雷佐生、阿仑单抗、全反式维甲酸、酮康唑、白介素-2、甲地孕酮、免疫球蛋白、氮芥、甲基泼尼松龙、替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)、雄激素、地西他滨、六甲蜜胺、贝沙罗汀、托西莫单抗、三氧化二砷、可的松、依替膦酸钠(etitronate)、米托坦、环孢菌素、脂质体柔红霉素、Edwina-天冬酰胺酶、锶89、卡索匹坦、奈妥吡坦、NK-1受体拮抗剂、帕洛诺司琼、阿瑞吡坦、苯海拉明、羟嗪、甲氧氯普胺、劳拉西泮、阿普唑仑、氟哌啶醇、氟哌利多、屈大麻酚、地塞米松、甲基泼尼松龙、普鲁氯嗪、格拉司琼、恩丹西酮、多拉司琼、托烷司琼、乙二醇化非格司亭、促红细胞生成素、阿法依泊汀、阿法达贝泊汀及其混合物。

在本文描述的任何方面或实施例中，生物活性剂或另外的抗癌剂是靶向表皮生长因子受体的化学疗法或生物疗法(例如，表皮生长因子受体抑制剂，诸如吉非替尼、厄洛替尼、来那替尼、拉帕替尼、西妥昔单抗、凡德他尼、耐昔妥珠单抗、奥希替尼或其组合中的至少一种)。

术语“抗HIV剂”或“其他抗HIV剂”包括例如，核苷逆转录酶抑制剂(NRTI)、其他非核苷逆转录酶抑制剂(即，不代表本公开的那些)、蛋白酶抑制剂、融合抑制剂，等等，其示例性化合物可包括例如，3TC(拉米夫定)、AZT(齐多夫定)、(-)-FTC、ddI(地达诺新)、ddC(扎西他滨)、阿巴卡韦(ABC)、替诺福韦(PMPA)、D-D4FC(Reverset)、D4T(司他夫定)、Racivir、L-FddC、L-FD4C、NVP(奈韦拉平)、DLV(地拉夫定)、EFV(依法韦仑)、SQVM(甲磺酸沙奎那韦)、RTV(利托那韦)、IDV(茚地那韦)、SQV(沙奎那韦)、NFV(奈非那韦)、APV(安普那韦)、LPV(洛匹那韦)、融合抑制剂诸如T20，等等及其融合物和混合物，包括目前在临床试验或开发中的抗HIV化合物。

可以与根据本公开的化合物共同施用的其他抗HIV剂包括例如，其他NNRTI(即，除了根据本公开的NNRTI之外)可以选自由以下组成的群组：奈韦拉平(BI-R6-587)、地拉夫定(U-90152S/T)、依非韦伦(DMP-266)、UC-781(N-[4-氯-3-(3-甲基-2-丁烯基氧基)苯基]-2甲基3-呋喃硫代甲酰胺)、依曲韦林(TMC125)、曲韦定(Ly300046.HCl)、MKC-442(依米韦林，coactinon)、HI-236、HI-240、HI-280、HI-281、利匹韦林(TMC-278)、MSC-127、HBY 097、DMP266、黄芩苷(TJN-151)ADAM-II(3’,3’-二氯-4’,4”-二甲氧基-5’,5”-双(甲氧基羰基)-6,6-二苯基己烯酸甲酯)、3-溴-5-(1-5-溴-4-甲氧基-3-(甲氧基羰基)苯基)庚-1-烯基)-2-甲氧基苯甲酸酯(烯基二芳基甲烷类似物，Adam类似物)、(5-氯-3-(苯基亚磺酰基)-2’-吲哚羧酰胺)、AAP-BHAP(U-104489或PNU-104489)、卡普韦林(AG-1549、S-1153)、阿替韦啶(U-87201E)、铝试剂(SD-095345)、1-[(6-氰基-2-吲哚基)羰基]-4-[3-(异丙基氨基)-2-吡啶基]哌嗪、1-[5-[[N-(甲基)甲基磺酰基氨基]-2-吲哚基羰基-4-[3-(异丙基氨基)-2-吡啶基]哌嗪、1-[3-(乙基氨基)-2-[吡啶基]-4-[(5-羟基-2-吲哚基)羰基]哌嗪、1-[(6-甲酰基-2-吲哚基)羰基]-4-[3-(异丙基氨基)-2-吡啶基]哌嗪、1-[[5-(甲基磺酰基氧基)-2-吲哚基)羰基]-4-[3-(异丙基氨基)-2-吡啶基]哌嗪、U88204E、双(2-硝基苯基)砜(NSC633001)、胡桐内酯A(NSC675451)、胡桐内酯B、6-苄基-5-甲基-2-(环己基氧基)嘧啶-4-酮(DABO-546)、DPC961、E-EBU、E-EBU-dm、E-EPSeU、E-EPU、膦甲酸(膦甲酸钠)、HEPT(1-[(2-羟基乙氧基)甲基]-6-(苯硫基)胸腺嘧啶)、HEPT-M(1-[(2-羟基乙氧基)甲基]-6-(3-甲基苯基)硫基)胸腺嘧啶)、HEPT-S(1-[(2-羟基乙氧基)甲基]-6-(苯硫基)-2-硫基胸腺嘧啶)、海棠果素P、L-737,126、米歇尔胺A(NSC650898)、米歇尔胺B(NSC649324)、米歇尔胺F、6-(3,5-二甲基苄基)-1-[(2-羟基乙氧基)甲基]-5-异丙基尿嘧啶、6-(3,5-二甲基苄基)-1-(乙氧基甲基)-5-异丙基尿嘧啶、NPPS、E-BPTU(NSC 648400)、奥替普拉(4-甲基-5-(吡嗪基)-3H-1,2-二硫杂环戊二烯-3-硫酮)、N-{2-(2-氯-6-氟苯乙基]-N’-(2-噻唑基)硫脲(PETT Cl、F衍生物)、N-{2-(2,6-二氟苯乙基]-N’-[2-(5-溴吡啶基)]硫脲(PETT衍生物)、N-{2-(2,6-二氟苯乙基]-N’-[2-(5-甲基吡啶基)]硫脲(PETT吡啶基衍生物)、N-[2-(3-氟呋喃基)乙基]-N’-[2-(5-氯吡啶基)]硫脲、N-[2-(2-氟-6-乙氧基苯乙基)]-N’-[2-(5-溴吡啶基)]硫脲、N-(2-苯乙基)-N'-(2-噻唑基)硫脲(LY-73497)、L-697,639、L-697,593、L-697,661、3-[2-(4,7-二氟苯并噁唑-2-基)乙基}-5-乙基-6-甲基(吡啶-2(1H)-硫酮(2-吡啶酮衍生物)、3-[[(2-甲氧基-5,6-二甲基-3-吡啶基)甲基]胺]-5-乙基-6-甲基(吡啶-2(1H)-硫酮)、R82150、R82913、R87232、R88703、R89439(洛韦胺)、R90385、S-2720、苏拉明钠、TBZ(噻唑并苯并咪唑、NSC625487)、噻唑并异吲哚-5-酮、(+)(R)-9b-(3,5-二甲基苯基-2,3-二氢噻唑并[2,3-a]异吲哚-5(9bH)-酮、替韦拉平(R86183)、UC-38和UC-84等等。

在适用的情况下，术语“药学上可接受的盐”在整个说明书中用于描述本文所述的一种或多种化合物的盐形式，其被提供以增加化合物在患者胃肠道的胃液中的溶解性，以促进化合物的溶解和生物利用度。在适用的情况下，药学上可接受的盐包括衍生自药学上可接受的无机或有机碱和酸的那些。合适的盐包括衍生自碱金属诸如钾和钠，碱土金属诸如钙、镁和铵盐，以及制药领域众所周知的许多其他酸和碱的那些。钠盐和钾盐特别优选作为根据本公开的磷酸盐的中和盐。

术语“药学上可接受的衍生物”在整个说明书中用于描述任何药学上可接受的前药形式(诸如酯、酰胺、其他前药基团)，其在施用于患者后直接或间接提供本发明化合物或本发明化合物的活性代谢物。

一般合成方法

如本文所述的双官能分子的合成实现和优化可以逐步或模块化进行。例如，如果没有立即可用的合适配体，则鉴定与靶分子结合的化合物可能涉及高通量或中等通量的筛选活动。需要迭代设计和优化周期来改善次优方面，这对于初始配体是不常见的，如通过来自适当的体外、药理和/或ADMET测定的数据所鉴定的。优化/SAR活动的一部分将是探查耐受取代的配体位置，并且该位置可能是连接本文前面提到的接头化学的合适位置，其中可获得晶体学或NMR结构数据，这些数据可用于聚焦此类合成工作。

以非常相似的方式，可以鉴定和优化E3连接酶的配体，即ULM/ILM/VLM/CLM/ILM。

借助PTM和ULM(例如，ILM、VLM、CLM和/或ILM)，本领域技术人员可以使用已知的合成方法使它们结合或不结合接头部分。可以用一系列组合物、长度和柔韧性合成接头部分并进行官能化，使得PTM和ULM基团可以顺序地连接到接头的末端。因此，可以在体外和体内药理学和ADMET/PK研究中实现并描绘双官能分子的文库。与PTM和ULM基团一样，可以对最终的双官能分子进行迭代设计和优化循环，以鉴定具有期望特性的分子。

在某些情况下，可能需要保护基团策略和/或官能团互换(FGI)以促进期望材料的制备。此类化学过程是合成有机化学家众所周知的，并且这项过程中的许多都可以在文本如“Greene's Protective Groups in Organic Synthesis”Peter G.M.Wuts andTheodora W.Greene(Wiley)和“Organic Synthesis:The Disconnection Approach”Stuart Warren and Paul Wyatt(Wiley)中发现。

缩写：

DIEA或DIPEA：二异丙基乙胺

DMF：N,N-二甲基甲酰胺

DMSO：二甲基亚砜

EDCI：1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺

HOBt：羟基苯并三唑

中间体的示例性合成

方案A至I中描述了可用于合成本发明化合物的中间体的示例性合成。

方案A.

可在适合于亲核芳族取代反应的条件下，例如在合适的溶剂诸如N,N-二甲基吡咯烷酮中使用合适的碱如二异丙基乙胺，使可商业获得的式I的化合物或使用本领域技术人员已知的标准反应技术容易地制备的式I的化合物与式II的化合物反应。在此处，Y是伯胺或仲胺，其可以任选地被取代或环化成4至8元杂环，或者为羧酸酯；PG是H或合适的任选保护基，包括但不限于，当Y是伯胺或仲胺时为叔丁氧羰基，或当Y是羧酸酯时为叔丁基；L是任选的接头；Nu是合适的亲核基团诸如O或伯胺或仲胺，其可以任选地被取代或环化成4至8元杂环；X是合适的离去基团诸如氟或氯；并且Z是CH₂或C＝O。在III含有任选的保护基PG的情况下，可以在合适的条件下，例如在当PG-Y是叔丁氧羰基氨基时的于1,4-二噁烷中的盐酸，或当PG-Y是叔丁基羧酸酯时的于二氯甲烷中的三氟乙酸，除去PG以得到式IV的化合物。在PG是H的情况下，可以理解III和IV是相同的结构。

方案B.

可替代地，可使可商业获得的式V的化合物或使用本领域技术人员已知的标准反应技术容易地制备的式V的化合物与式VI的化合物反应以制备式VII的化合物。在此处，PG、Y和L如方案A中所定义；Z是CH₂，并且Nu是O。LG可以是合适的离去基团，诸如甲苯磺酸酯、溴化物或碘化物，在这种情况下，反应条件是用于亲核取代的那些，例如使用合适的碱诸如碳酸钾和合适的溶剂如N,N-二甲基甲酰胺。可替代地，LG可以是H，在这种情况下，反应条件是用于Mitsunobu反应的那些，例如三苯基膦和偶氮二甲酸二异丙酯。然后，可以使用适合于酰亚胺闭环和在必要时伴随除去PG的条件，例如于80℃下于乙腈中的对甲苯磺酸或苯磺酸，将式VII的化合物转化为式IV的化合物。

方案C.

可替代地，可以使式V的化合物与式VIII的化合物反应以制备式III的化合物。在此处，Z是C＝O，并且所有其他基团如方案B中所定义。LG可以是合适的离去基团，诸如甲苯磺酸酯，在这种情况下，反应条件是用于亲核取代的那些，例如使用合适的碱诸如碳酸钾和合适的溶剂诸如N,N-二甲基甲酰胺。然后，可以使用方案A中所述的条件将式III的化合物转化为式IV的化合物。可以例如使用本领域技术人员已知的技术，通过接头L中的官能团操纵，将式IV的化合物进一步转化为另外的式IV的化合物。例如，如果L含有烯烃，则可以在氢化条件下，例如H₂，于甲醇中的钯/炭，还原此类烯烃以得到相应的烷烃。

方案D.

可在酰胺形成条件下，例如于N,N-二甲基甲酰胺中的羟基苯并三唑、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺和二异丙基乙胺，或于二氯甲烷中的1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐和二异丙基乙胺或三乙胺，式VIII的化合物可以与式IX的化合物反应以产生式X的化合物。在此处，Z是任选的取代基，例如H、甲基或羟甲基，Y是伯胺或仲胺，其可以任选地被取代或环化成4至8元杂环，或是羧酸酯；PG是合适的任选的保护基，包括但不限于当Y是伯胺或仲胺时为叔丁氧羰基或当Y是羧酸酯时为甲基；并且L是任选的接头。然后，可以通过在合适的条件下，例如当PG-Y是叔丁氧羰基氨基时的于1,4-二噁烷或二氯甲烷中的盐酸，或当PG-Y是甲基羧酸酯时的于混有四氢呋喃的水中的氢氧化钠或氢氧化锂和/或于1,4-二噁烷中的甲醇或盐酸，除去PG，将式X的化合物转化为式XI的化合物。

方案E.

可使式XII的化合物与式V的化合物反应以制备式XIII的化合物。在此处，LG可以是合适的离去基团诸如甲苯磺酸酯、溴化物或碘化物；L是任选的接头；Y是伯胺或仲胺，其可以任选地被取代或环化成4至8元杂环，或是羧酸酯；PG是H或合适的任选保护基，包括但不限于当Y是伯胺或仲胺时为叔丁氧羰基，或当Y是羧酸酯时为叔丁基；或可替代地，PG-Y一起是LG’——一个合适的离去基团，可以与LG相同或不同。制备式式XIII的化合物的反应条件是亲核取代反应的那些，例如在诸如80℃的温度下使用合适的碱诸如碳酸钾和合适的溶剂诸如N,N-二甲基甲酰胺。可以在合适的条件下，例如当PG-Y是叔丁氧羰基氨基时的于1,4-二噁烷中的盐酸，或者当PG-Y是叔丁基羧酸酯时的于二氯甲烷中的三氟乙酸，除去PG；或者可替代地，当PG-Y一起是LG’时，可以用亲核试剂例如乙醇中的伯胺处理它们(在这种情况下，XIV中的Y变为仲胺)，以得到式XIV的化合物。在PG是H的情况下，应理解，XIII和XIV是相同的结构。根据需要，可以使用本领域技术人员已知的技术将任何化合物XIII或XIV的对映异构体或非对映异构体的混合物拆分为其组成对映异构体或非对映异构体，包括但不限于制备型高效液相色谱法或制备型超临界流体色谱法。

方案F.

可使式XV的化合物与化合物V(使用本领域技术人员已知的标准反应技术容易地制备)反应，以在亲核取代条件下，例如使用在合适的溶剂诸如N,N-二甲基甲酰胺中的合适的碱诸如碳酸钾，制备式XVI的化合物。在此处，化合物V中的PG、Y、L和LG如方案B所定义；并且PG’代表合适的酯保护基，例如甲基、乙基或叔丁基。可以通过用适合于除去PG’的试剂，例如当PG’是甲基或乙基或三氟乙酸和PG’是叔丁基时的在甲醇和水中的氢氧化钠或氢氧化锂，进行处理，将式XVI的化合物转化为式XVIII的化合物。可使化合物XVII与式XVIII的化合物反应，其中Z是任选的取代基，例如H、甲基或羟甲基，并且R是任选的取代基，以在例如以下酰胺形成条件下产生式XIX的化合物：1-羟基苯并三唑、N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺、二异丙基乙胺、N,N-二甲基甲酰胺。通过在合适的条件下，例如当PG-Y是叔丁氧羰基氨基时的于1,4-二噁烷中的盐酸，或者当PG-Y是叔丁基羧酸酯时的于二氯甲烷中的三氟乙酸，除去PG；或者可替代地，当PG-Y一起是与LG相同或不同的合适的离去基团时，可以用亲核试剂例如乙醇中的伯胺处理它们(在这种情况下，XX中的Y变为仲胺)，可以将式XIX的化合物转化为式XX的化合物。在PG是H的情况下，应理解，XIX和XX是相同的结构。根据需要，可以使用本领域技术人员已知的技术将任何化合物XVI、XVII、XIX或XX的对映异构体或非对映异构体的混合物拆分为其组成对映异构体或非对映异构体，包括但不限于制备型高效液相色谱法或制备型超临界流体色谱法。

方案G.

可以在合适的酰胺偶联条件下，例如在N,N-二甲基甲酰胺中的1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐和二异丙基乙胺，使式XXI的化合物与式I的化合物反应，以得到式XXII的化合物。在此处，Y是伯胺或仲胺，其可以任选地被取代或环化成4至8元杂环；PG是H或合适的任选保护基，包括但不限于叔丁氧羰基；L是任选的接头；并且Nu是伯胺或仲胺，其可以任选地被取代或环化成4至8元杂环。在XXII含有任选的保护基PG的情况下，可以在合适的条件下，例如当PG-Y是叔丁氧羰基氨基时的于1,4-二噁烷中的盐酸，除去PG，以得到式XXIII的化合物。在PG是H的情况下，应理解，XXII和XXIII是相同的结构。

方案H.

可使式XXIV的化合物与式V的化合物反应以制备式XXV的化合物。在此处，LG可以是合适的离去基团诸如甲苯磺酸酯、溴化物或碘化物；L是任选的接头；Y是伯胺或仲胺，其可以任选地被取代或环化成4至8元杂环，并且PG是H或合适的任选保护基，包括但不限于苄氧基羰基或2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基；或者可替代地，PG-Y一起是LG’——一个合适的离去基团，可以与LG相同或不同；并且IAP是：

反应条件是用于亲核取代的那些，例如在诸如70-80℃的温度下使用合适的碱诸如碳酸钾和合适的溶剂诸如N,N-二甲基甲酰胺或乙腈。可以在合适的条件下，例如当PG-Y是苄氧基羰基氨基时的氢、钯/炭或当PG-Y是2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基氨基时的于四氢呋喃中的氟化四正丁基铵，除去PG；或者可替代地，当PG-Y一起是LG’时，可以用亲核试剂处理它们，例如于60℃下在乙醇中的伯胺(在这种情况下，XXVI中的Y成为仲胺)，以得到式XXVI的化合物。在PG是H的情况下，应理解，XXV和XXVI是相同的结构。

方案I.

可替代地，可以在亲核取代的条件下，例如在70℃下于N,N-二甲基甲酰胺中的碳酸钾和碘化钾，使方案H中定义的式XXIV的化合物与不同的式V的化合物反应，以得到式XXVII的化合物，其中PG是合适的保护基，诸如四氢吡喃基，Y是O，L是任选的接头，并且LG是合适的离去基团，诸如甲苯磺酸酯、溴化物或碘化物。可以例如用甲醇中的吡啶鎓对甲苯磺酸盐将式XXVII的化合物脱保护，以得到化合物XXVIII。可以通过用例如二氯甲烷中的对甲苯磺酰氯、三乙胺、N,N-二甲基氨基吡啶处理，将式XXVIII的化合物转化为式XXIX的化合物。最后，如方案H中所述，可以用亲核试剂例如在60℃下于乙醇中的伯胺处理式XXIX的化合物，将其转化为式XXVI的化合物。

一般合成方案：

可以如方案1至19中所示，利用方案A至I中所述的中间体结构来合成本发明的化合物。

方案1.

可以在酰胺偶联条件下，例如于N,N-二甲基甲酰胺中的1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐和二异丙基乙胺或于N,N-二甲基甲酰胺中的1-羟基苯并三唑和N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺、二异丙基乙胺，使式XXX的化合物与式IV的化合物反应，以得到式XXXI的化合物。

在此处，

是芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基；每个X独立地是CH或N；R₁是一个或多个独立的烷基、烷氧基、苯基或萘，它们各自可以独立地被OH、H和/或卤素取代；R₂是任选取代的烷基酰胺、烯基酰胺、脲或合适的保护基，诸如叔丁氧羰基；R₃是任选的取代基；L’是任选的接头；W是羧酸；Y是伯胺或仲胺，其可以任选地被取代或环化成4至8元杂环；并且L、Nu和Z如方案A、B或C之一中所定义。

在R₂是保护基的情况下，可以用合适的条件，例如当R₂是叔丁氧羰基时的于二氯甲烷中的三氟乙酸，除去保护基。然后，可以在酰胺偶联的条件下，将其中R₂是H的这一化合物转化为不同的式XXXI的化合物。此类酰胺形成的代表性条件包括但不限于：丙烯酰氯，2,6-二甲基吡啶，二氯甲烷，-78℃；或羧酸，诸如2,2-二羟基乙酸和1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐和二异丙基乙胺。

方案2.

也可以在酰胺偶联条件下，例如于N,N-二甲基甲酰胺中的1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐和三乙胺，使式XXX的化合物与式IV的化合物反应以形成式XXXII的化合物。

在此处，R₂是H；L’-W一起是H或形成任选取代；

X、R₁、R₃如方案1中所定义；Y是羧酸；并且L、Nu和Z如方案A、B或C之一中所定义。

方案3.

也可以在酰胺偶联条件下，例如于N,N-二甲基甲酰胺中的1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐和二异丙基乙胺，使式XXX的化合物与式XI的化合物反应，以得到式XXXIII的化合物。

在此处，

X、R₁、R₂、R₃、L’和W如方案1中所定义；Y是伯胺或仲胺，其可以任选地被取代或环化成4至8元杂环；并且L和Z如方案D中所定义。

在R₂是保护基的情况下，可以用合适的条件，例如当R₂是叔丁氧羰基时的于二氯甲烷中的三氟乙酸，除去保护基。然后，可以在酰胺偶联条件下，将其中R₂是H的这一化合物转化为不同的式XXXIII的化合物。此类酰胺形成的代表性条件包括但不限于：丙烯酰氯，2,6-二甲基吡啶，二氯甲烷，-78℃；或羧酸，诸如于N,N-二甲基甲酰胺中的2,2-二羟基乙酸和1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐和二异丙基乙胺，在室温下。

方案4.

也可以在酰胺偶联条件下，例如于N,N-二甲基甲酰胺中的1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐和三乙胺，使式XXX的化合物与式XI的化合物反应，以形成式XXXIV的化合物。

在此处，R₂是H；L’-W一起是H或形成任选取代；

X、R₁、R₃如方案1中所定义；Y是羧酸；并且L和Z如方案D中所定义。

方案5.

也可以在酰胺偶联条件下，例如于N,N-二甲基甲酰胺中的1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐和二异丙基乙胺，使式XXX的化合物与式XXVI的化合物反应，以得到式XXXV的化合物。

在此处，

X、R₁、R₂、R₃、L’和W如方案1中所定义；Y是伯胺或仲胺，其可以任选地被取代或环化成4至8元杂环；并且L和IAP如方案H或I之一所定义。

然后，可以在合适的条件下，例如于1,4-二噁烷中的盐酸或于二氯甲烷中的三氟乙酸，除去IAP结构中包含的叔丁氧羰基，以得到不同的式XXXV的化合物，其中IAP的结构是：

方案6.

还可以在酰胺偶联条件下，例如于N,N-二甲基甲酰胺中的1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐和二异丙基乙胺，使式XXX的化合物与式XXIII的化合物反应，以得到式XXXVI的化合物。

在此处，

X、R₁、R₂、R₃、L’和W如方案1中所定义；Y是伯胺或仲胺，其可以任选地被取代或环化成4至8元杂环；并且L和Nu如方案G中所定义。

在R₂是保护基的情况下，可以用合适的条件，诸如当R₂是叔丁氧羰基时的于二氯甲烷中的三氟乙酸，除去保护基。然后，可以在酰胺偶联条件下，将其中R₂是H的这一化合物转化为不同的式XXXVI的化合物。此类酰胺形成的代表性条件包括但不限于：丙烯酰氯，2,6-二甲基吡啶，二氯甲烷，-78℃；或羧酸，诸如于N,N-二甲基甲酰胺中的2,2-二羟基乙酸和1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐和二异丙基乙胺，在室温下。

方案7.

也可以在酰胺偶联条件下，例如于N,N-二甲基甲酰胺中的羟基苯并三唑、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺和二异丙基乙胺，使式XXX的化合物与式XIV的化合物反应，以得到式XXXVII的化合物。

在此处，

X、R₁、R₂、R₃、L’和W如方案1中所定义；Y是伯胺或仲胺，其可以任选地被取代或环化成4至8元杂环；并且L如方案E中所定义。

在R₂是保护基的情况下，可以用合适的条件，例如当R₂是叔丁氧羰基时的于二氯甲烷中的三氟乙酸，除去保护基。然后，可以在酰胺偶联条件下，将其中R₂是H的这一化合物转化为不同的式XXXVII的化合物。此类酰胺形成的代表性条件包括但不限于：丙烯酰氯，2,6-二甲基吡啶，二氯甲烷，-78℃；或羧酸，诸如于N,N-二甲基甲酰胺中的2,2-二羟基乙酸和1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐和二异丙基乙胺，在室温下。根据需要，可以使用本领域技术人员已知的技术将任何化合物XXXVII的对映异构体或非对映异构体的混合物拆分为其组成对映异构体或非对映异构体，包括但不限于制备型高效液相色谱法或制备型超临界流体色谱法。

方案8.

也可以在酰胺偶联条件下，例如于N,N-二甲基甲酰胺中的1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐和三乙胺，使式XXX的化合物与式I的化合物反应，以形成式XXXIV的化合物。

在此处，R₂是H；L’-W一起是H或形成任选取代基；

X、R₁、R₃如方案1所定义；Nu-H是伯胺或仲胺；L是任选接头；Y是羧酸酯，并且PG是合适的羧酸保护基，包括但不限于甲基或乙基。然后，可以在适合于除去PG的条件下，例如当PG是甲基或乙基时的于水和甲醇和/或四氢呋喃的混合物中的氢氧化锂，将式XXXVIII的化合物转化为式XXXIX的化合物。最后，可以在适合于酰胺形成的条件下，例如于N,N-二甲基甲酰胺中的羟基苯并三唑、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺和二异丙基乙胺，使式XXXIX的化合物与式VIII的化合物反应，以得到式XXXIV的化合物。在此处，Z如方案D中所定义。

方案9.

也可以在酰胺偶联条件下，例如于N,N-二甲基甲酰胺中的1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐和二异丙基乙胺，使式XXX的化合物与式XX的化合物反应，以得到式XXXVIII的化合物。

在此处，

X、R₁、R₂、R₃、L’和W如方案1中所定义；Y是伯胺或仲胺，其可以任选地被取代或环化成4至8元杂环；并且L、Z和R如方案F中所定义。

在R₂是保护基的情况下，可以用合适的条件，例如当R₂是叔丁氧羰基时的于二氯甲烷中的三氟乙酸，除去保护基。然后，可以在酰胺偶联条件下，将其中R₂是H的这一化合物转化为不同的式XXXVIII的化合物。此类酰胺形成的代表性条件包括但不限于：丙烯酰氯，2,6-二甲基吡啶，二氯甲烷，-78℃；或羧酸，诸如于N,N-二甲基甲酰胺中的2,2-二羟基乙酸和1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐和二异丙基乙胺，在室温下。根据需要，可以使用本领域技术人员已知的技术将任何化合物XXXVIII的对映异构体或非对映异构体的混合物拆分为其组成对映异构体或非对映异构体，包括但不限于制备型高效液相色谱法或制备型超临界流体色谱法。

方案10.

也可以在亲核芳族取代反应的条件下，例如在115℃下于微波加热中在异丙醇中的二异丙基乙胺，使式XXX的化合物与式XI的化合物反应，以得到式XXXIX的化合物。

在此处，

X、R₁、R₂和R₃如方案1中所定义；L’不存在；W是合适的离去基团，诸如氟或氯；Y是伯胺或仲胺，其可以任选地被取代或环化成4至8元杂环；并且L和Z如方案D所定义。在R₁是芳基或杂芳基氯化物、溴化物或碘化物的情况下，式XXXIX的化合物可以进一步转化为不同的式XXXIX的化合物，例如通过在Suzuki偶联条件下与芳基硼酸或酯反应，利用催化的(2-二环己基膦基-2′,4′,6′-三异丙基-1,1′-联苯)[2-(2′-氨基-1,1′-联苯)]钯(II)甲磺酸盐，在60℃下于水和四氢呋喃中的磷酸钾。在R₂是保护基的情况下，可以用合适的条件，例如当R₂是叔丁氧羰基时的于二氯甲烷中的三氟乙酸，除去保护基。然后，可以在酰胺偶联条件下，将其中R₂是H的这一化合物转化为不同的式XXXIX的化合物。此类酰胺形成的代表性条件包括但不限于：丙烯酰氯，2,6-二甲基吡啶，二氯甲烷，-78℃；或羧酸，诸如于N,N-二甲基甲酰胺中的2,2-二羟基乙酸和1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐和二异丙基乙胺，在室温下。

方案11.

也可以在亲核芳族取代反应的条件下，例如在室温下在N,N-二甲基甲酰胺中的氢化钠，使式XXX的化合物与式XL的化合物反应，以得到式XLI的化合物。

在此处，

X、R₁、R₂和R₃如方案1中所定义；L’不存在；W是合适的离去基团，诸如氟或氯；L”是接头；并且Y’是CH₂OH或末端适当保护(例如，叔丁氧羰基)的伯胺或仲胺，其可以任选地被取代或环化成4至8元杂环。

在XLI的情况下，其中Y’是CH₂OH，可以在氧化条件下例如Swern或Dess-Martin氧化将其转化成其相应的醛，以提供其中Y”是CHO的化合物XLII。在XLI的情况下，其中Y’是末端适当保护的伯胺或仲胺，可以使用合适的条件，例如当保护基为叔丁氧羰基时的在室温下于二氯甲烷中的三氟乙酸，将其转化为相应的脱保护胺，以得到化合物XLII，其中Y”是没有保护基的Y’的胺。然后，可以在还原胺化条件下，例如于二氯甲烷中的三乙酰氧基硼氢化钠和三乙胺或于二氯甲烷和甲醇中的氰基硼氢化钠、乙酸钠和乙酸，用式XI的化合物处理式XLII的化合物，以得到式XLIII的化合物。在此处，L和Z如方案D中所定义。在XLII中的Y”是CHO的情况下，XI中的Y是伯胺或仲胺，其可以任选地被取代或环化成4至8元杂环；并且XLIII中的Y”变为CH₂。在XLII中的Y”是可以任选地被取代或环化成4至8元杂环的伯胺或仲胺的情况下，XI中的Y是CHO；并且XLIII中的Y变为CH₂。

在R₂是保护基的情况下，可以用合适的条件，诸如当R₂是叔丁氧羰基时的于二氯甲烷中的三氟乙酸，除去保护基。然后，可以在酰胺偶联条件下，将其中R₂是H的这一化合物转化为不同的式XLIII的化合物。此类酰胺形成的代表性条件包括但不限于：丙烯酰氯，2,6-二甲基吡啶，二氯甲烷，-78℃；或羧酸，诸如于N,N-二甲基甲酰胺中的2,2-二羟基乙酸和1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐和二异丙基乙胺，在室温下。

方案12.

可以在还原胺化条件下，例如于二氯甲烷中的三乙酰氧基硼氢化钠和三乙胺，或者于二氯甲烷和甲醇中的氰基硼氢化钠、乙酸钠和乙酸，使式XXX的化合物与式IV的化合物反应，以得到式XXXI的化合物。

在此处，

R₁、R₂、R₃和L’如方案1中所定义；W是CHO；Y是伯胺或仲胺，其可以任选地被取代或环化成4至8元杂环；并且Nu、L和Z如方案A、B或C之一所定义。

在R₂是保护基的情况下，可以用合适的条件，诸如当R₂是叔丁氧羰基时的于二氯甲烷中的三氟乙酸，除去保护基。然后，可以在酰胺偶联条件下，将其中R₂是H的这一化合物转化为不同的式XLIV的化合物。此类酰胺形成的代表性条件包括但不限于：丙烯酰氯，2,6-二甲基吡啶，二氯甲烷，-78℃；或羧酸，诸如2,2-二羟基乙酸和1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐和二异丙基乙胺。

方案13.

还可以在还原胺化条件下，诸如于二氯甲烷中的三乙酰氧基硼氢化钠和三乙胺，或者于二氯甲烷和甲醇中的氰基硼氢化钠、乙酸钠和乙酸，使式XXX的化合物与式XIV的化合物反应，以得到式XLV的化合物。

在此处，

X、R₁、R₂、R₃和L’如方案1中所定义；W是CHO；Y是伯胺或仲胺，其可以任选地被取代或环化成4至8元杂环；并且L如方案E所定义。

在R₂是保护基的情况下，可以用合适的条件，诸如当R₂是叔丁氧羰基时的于二氯甲烷中的三氟乙酸，除去保护基。然后，可以在酰胺偶联条件下，将其中R₂是H的这一化合物转化为不同的式XLV的化合物。此类酰胺形成的代表性条件包括但不限于：丙烯酰氯，2,6-二甲基吡啶，二氯甲烷，-78℃；或羧酸，诸如于N,N-二甲基甲酰胺中的2,2-二羟基乙酸和1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐和二异丙基乙胺，在室温下。根据需要，可以使用本领域技术人员已知的技术将任何化合物XLV的对映异构体或非对映异构体的混合物拆分为其组成对映异构体或非对映异构体，包括但不限于制备型高效液相色谱法或制备型超临界流体色谱法。

方案14.

还可以在还原胺化条件下，例如于二氯甲烷中的三乙酰氧基硼氢化钠和三乙胺，或者于二氯甲烷和甲醇中的氰基硼氢化钠、乙酸钠和乙酸，使式XXX的化合物与式XXVI的化合物反应，以得到式XLVI的化合物。

在此处，

X、R₁、R₂、R₃和L’如方案1中所定义；W是CHO；Y是伯胺或仲胺，其可以任选地被取代或环化成4至8元杂环；并且L和IAP如方案H或I之一所定义。

然后，可以在合适的条件下，例如于1,4-二噁烷中的盐酸或于二氯甲烷中的三氟乙酸，除去IAP结构中所含的叔丁氧羰基，以得到不同的式XLVI的化合物，其中IAP的结构是：

方案15.

还可以在还原胺化条件下，例如于二氯甲烷中的三乙酰氧基硼氢化钠和三乙胺，或者于二氯甲烷和甲醇中的氰基硼氢化钠、乙酸钠和乙酸，使式XXX的化合物与式XXIII的化合物反应，以得到式XLVII的化合物。

在此处，

X、R₁、R₂、R₃和L’如方案1中所定义；W是CHO；Y是伯胺或仲胺，其可以任选地被取代或环化成4至8元杂环；并且L和Nu如方案G所定义。

在R₂是保护基的情况下，可以用合适的条件，诸如当R₂是叔丁氧羰基时的于二氯甲烷中的三氟乙酸，除去保护基。然后，可以在酰胺偶联条件下，将其中R₂是H的这一化合物转化为不同的式XXXVII的化合物。此类酰胺形成的代表性条件包括但不限于：丙烯酰氯，2,6-二甲基吡啶，二氯甲烷，-78℃；或羧酸，诸如于N,N-二甲基甲酰胺中的2,2-二羟基乙酸和1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐和二异丙基乙胺，在室温下。

方案16.

可使式XLVIII的化合物与式V的化合物反应以制备式XLIX的化合物。在此处，LG可以是合适的离去基团，诸如甲苯磺酸酯、溴化物或碘化物；L是任选的接头；Y是伯胺或仲胺，其可以任选地被取代或环化成4-8元杂环；PG是合适的保护基，包括但不限于叔丁氧羰基；并且PG’是合适的保护基，包括但不限于2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基。然后，可以使用合适的条件，诸如于1,4-二噁烷中的盐酸，同时除去PG和PG’，以得到式L的化合物。然后，可以在还原胺化条件下，诸如于二氯甲烷中的三乙酰氧基硼氢化钠和三乙胺，或者于二氯甲烷和甲醇中的氰基硼氢化钠、乙酸钠和乙酸，使式L的化合物与式XXX的化合物反应以得到式LI的化合物。

在此处，

X、R₁、R₂、R₃和L’如方案1中所定义；并且W是CHO。在R₂是保护基的情况下，可以用合适的条件，诸如当R₂是叔丁氧羰基时的于二氯甲烷中的三氟乙酸，除去保护基。然后，可以在酰胺偶联条件下，将其中R₂是H的这一化合物转化为不同的式LI的化合物。此类酰胺形成的代表性条件包括但不限于：丙烯酰氯，2,6-二甲基吡啶，二氯甲烷，-78℃；或羧酸，诸如于N,N-二甲基甲酰胺中的2,2-二羟基乙酸和1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐和二异丙基乙胺，在室温下。

方案17.

还可以在亲核芳族取代反应条件下，例如于20-50℃下在四氢呋喃中的氢化钠，使式XXX的化合物与式LII的化合物反应，以得到式LIII的化合物。在此处，X和R₃如方案1中所定义；

是任选取代的脂族环胺；R₁是在

的氨基上的合适的保护基，例如叔丁氧羰基；R₂是合适的保护基，例如苄氧羰基；L’不存在；W是合适的离去基团，例如氟或氯；L”是接头；并且PG是合适的醇保护基，例如四氢吡喃基。可以在适于除去某些保护基的条件下，例如当R₁是叔丁氧羰基且PG是四氢吡喃基时的于二氯甲烷中的三氟乙酸，将式LIII化合物的转化为式LIV的化合物；在这种情况下，LIV的R₁变成H。可以使用本领域技术人员已知的条件，将此类式LIV的化合物转化为不同的通式LIV的化合物。例如，通过取其中R₁是H的化合物LIV并在适于Hartwig-Buchwald胺化的条件下，例如在90℃下于1,4-二噁烷中的(2-二环己基膦基-2′,6′-二异丙氧基-1,1′-联苯)[2-(2′-氨基-1,1′-联苯)]钯(II)甲磺酸盐和碳酸铯，用芳基卤化物处理它，获得式LIV的化合物，其中R₁是例如苯基、萘或杂芳基，其可独立地被OH、CN、烷基和/或卤素多取代。化合物LIV向不同化合物LIV的进一步转化可以通过例如改变基团R₂的身份来衍生。例如，在R₂是苄氧羰基的情况下，它可以用例如H₂，于甲醇中的钯/炭处理，以得到其中R₂是H的化合物LIV。其中R₂是H的式LIV的化合物可以例如通过用二氯甲烷中的二碳酸二叔丁酯和三乙胺处理，转化为其中R₂是叔丁氧羰基的另一种式LIV的化合物；或例如通过用四氢呋喃中的三甲基硅基异氰酸酯和三乙胺处理，以得到其中R₂是C(O)NH₂的另一种式LIV的化合物。可以通过用试剂诸如于二氯甲烷中的重氮乙酸乙酯和催化剂诸如乙酸铑(II)处理，将适当取代的式LIV的化合物转化为式LV的化合物，其中PG是合适的保护基诸如乙基。可以使用适于酯水解的条件，诸如于水和四氢呋喃中的氢氧化锂，将式LV的化合物转化为式LVI的化合物。最后，可以在适合胺偶联的条件下，例如于N,N-二甲基甲酰胺中的N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐、1-羟基苯并三唑和二异丙基乙胺，使式LVI的化合物与式VIII的化合物反应以得到式LVII的化合物。在此处，Z是任选的取代基，例如H、甲基或羟甲基。

在R₂是保护基的情况下，可以用合适的条件，诸如当R₂是叔丁氧羰基时的于二氯甲烷中的三氟乙酸，除去保护基。然后，可以在酰胺偶联条件下，将其中R₂是H的这一化合物转化为不同的式LVII的化合物。此类酰胺形成的代表性条件包括但不限于：丙烯酰氯，2,6-二甲基吡啶，二氯甲烷，-78℃；或羧酸，诸如于N,N-二甲基甲酰胺中的2,2-二羟基乙酸和1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐和二异丙基乙胺，在室温下。可替代地，然后可以在脲形成条件下将R₂是H的这一化合物转化为不同的式LVII的化合物。此类酰胺形成的代表性条件包括但不限于在室温下于N,N-二甲基甲酰胺中的三甲基硅基异氰酸酯和三乙胺。

方案18.

可替代地，可以通过用合适的试剂诸如于二氯甲烷中的对甲苯磺酰氯、三乙胺和N,N-二甲基氨基吡啶处理，将式LIV的化合物转化为式LVIII的化合物。

在此处，

R₁、R₂、R₃和L”如方案17中对LIV所定义；并且LG是例如对甲苯磺酸酯。然后，可以在适于亲核取代的条件下，例如在50℃下于N,N-二甲基甲酰胺中的碳酸钾，使式LVIII的化合物与式VIII的化合物反应，以得到式LIX的化合物。在此处，Z是C＝O。

在R₂是保护基的情况下，可以用合适的条件，诸如当R₂是叔丁氧羰基时的于二氯甲烷中的三氟乙酸，除去保护基。然后，可以在酰胺偶联条件下，将其中R₂是H的这一化合物转化为不同的式LIX的化合物。此类酰胺形成的代表性条件包括但不限于：丙烯酰氯，2,6-二甲基吡啶，二氯甲烷，-78℃；或羧酸，诸如于N,N-二甲基甲酰胺中的2,2-二羟基乙酸和1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐和二异丙基乙胺，在室温下。可替代地，然后可以在脲形成条件下将R₂是H的这一化合物转化为不同的式LIX的化合物。此类酰胺形成的代表性条件包括但不限于在室温下于N,N-二甲基甲酰胺中的三甲基硅基异氰酸酯和三乙胺。

方案19.

可替代地，可以在适于烷基化反应的条件下，例如在80℃下于N,N-二甲基甲酰胺中的碳酸钾，通过用式XII的化合物处理，将式LVIII的化合物转化为式LX的化合物。

在此处，

R₁、R₂、R₃和L”如方案17中对LIV所定义。

在R₂是保护基的情况下，可以用合适的条件，诸如当R₂是叔丁氧羰基时的于二氯甲烷中的三氟乙酸，除去保护基。然后，可以在酰胺偶联条件下，将其中R₂是H的这一化合物转化为不同的式LX的化合物。此类酰胺形成的代表性条件包括但不限于：丙烯酰氯，2,6-二甲基吡啶，二氯甲烷，-78℃；或羧酸，诸如于N,N-二甲基甲酰胺中的2,2-二羟基乙酸和1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐和二异丙基乙胺，在室温下。可替代地，然后可以在脲形成条件下将R₂是H的这一化合物转化为不同的式LX的化合物。此类酰胺形成的代表性条件包括但不限于在室温下于N,N-二甲基甲酰胺中的三甲基硅基异氰酸酯和三乙胺。

方案20.

可替代地，可以通过在80℃下用氨等效物诸如邻苯二甲酰亚胺钾盐在N,N-二甲基甲酰胺中处理，然后，例如在70℃下用乙醇中的水合肼处理，将式LVIII的化合物转化为式LXI的化合物。

在此处，

R₁、R₂、R₃和L”如方案17中对LIV所定义。

然后，可以在适于亲核芳族取代的条件下，例如在90℃下于二甲基亚砜中的二异丙基乙胺，使式LXI的化合物与式II的化合物反应，以得到式LXII的化合物。在此处，Z是C＝O。

在R₂是保护基的情况下，可以用合适的条件，诸如当R₂是叔丁氧羰基时的于二氯甲烷中的三氟乙酸，除去保护基。然后，可以在酰胺偶联条件下，将其中R₂是H的这一化合物转化为不同的式LXII的化合物。此类酰胺形成的代表性条件包括但不限于：丙烯酰氯，2,6-二甲基吡啶，二氯甲烷，-78℃；或羧酸，诸如于N,N-二甲基甲酰胺中的2,2-二羟基乙酸和1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐和二异丙基乙胺，在室温下。可替代地，然后可以在脲形成条件下将R₂是H的这一化合物转化为不同的式LXII的化合物。此类酰胺形成的代表性条件包括但不限于在室温下于N,N-二甲基甲酰胺中的三甲基硅基异氰酸酯和三乙胺。

方案21.

可替代地，可以在适于亲核取代的条件下，例如在80℃下于N,N-二甲基甲酰胺中的碳酸钾，使式LVIII的化合物与式VI的化合物反应，以制备式LXIII的化合物。

在此处，

R₁、R₂、R₃和L”如方案17中对LIV所定义；并且Z是CH₂。

然后，在R₂是叔丁氧羰基的情况下，可以用试剂处理式LXIII的化合物以实现酰亚胺闭环并同时去除R₂，例如在回流下于乙腈中的苯磺酸。在LVIII中的R₂是叔丁氧羰基的情况下，在LXIV中的R₂由此变为H。然后，可以在酰胺偶联条件下，将其中R₂是H的这一化合物LXIV转化为不同的式LXIV的化合物。此类酰胺形成的代表性条件包括但不限于：丙烯酰氯，2,6-二甲基吡啶，二氯甲烷，-78℃；或羧酸，诸如于N,N-二甲基甲酰胺中的2,2-二羟基乙酸和1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐和二异丙基乙胺，在室温下。可替代地，然后可以在脲形成条件下将R₂是H的这一化合物转化为不同的式LXIV的化合物。此类酰胺形成的代表性条件包括但不限于在室温下于N,N-二甲基甲酰胺中的三甲基硅基异氰酸酯和三乙胺。

方案22.

可替代地，可以在适于烷基化反应的条件下，例如在80℃下于乙腈中的碳酸钾，通过用式XXIV的化合物处理，将式LVIII的化合物转化为式LXV的化合物。

在此处，

R₁、R₂、R₃和L”如方案17中对LIV所定义；并且IAP是：

在R₂是保护基的情况下，可以用合适的条件，诸如当R₂是苄氧羰基时的H₂、于甲醇中的钯/炭，除去保护基。然后，可以在酰胺偶联条件下，将其中R₂是H的这一化合物转化为不同的式LXVI的化合物。此类酰胺形成的代表性条件包括但不限于：丙烯酰氯，2,6-二甲基吡啶，二氯甲烷，-78℃；或羧酸，例如于N,N-二甲基甲酰胺中的2,2-二羟基乙酸和1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐和二异丙基乙胺，在室温下。

随后，可以通过用适于除去叔丁氧羰基保护基的试剂，例如于二氯甲烷中的三氟乙酸处理，将式LXV的化合物转化为式LXVI的化合物。在此处，IAP’是：

方案23.

可替代地，可以在酰胺偶联条件下，例如于N,N-二甲基甲酰胺中的N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐、1-羟基苯并三唑和二异丙基乙胺，使式LXI的化合物与式XXI的化合物反应，以得到式LXVII的化合物。

在此处，

R₁、R₂、R₃和L”如方案17中对LIV所定义。

在R₂是保护基的情况下，可以用合适的条件，诸如当R₂是苄氧羰基时的H₂，于甲醇中的钯/炭，除去保护基。然后可以在酰胺偶联条件下，将其中R₂是H的这一化合物转化为不同的式LXVII的化合物。此类酰胺形成的代表性条件包括但不限于：丙烯酰氯，2,6-二甲基吡啶，二氯甲烷，-78℃；或羧酸，诸如于N,N-二甲基甲酰胺中的2,2-二羟基乙酸和1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐和二异丙基乙胺，在室温下。

方案24.

可替代地，可以在适于烷基化反应的条件下，例如在80℃下于乙腈中的碳酸钾，通过用式XLVIII的化合物处理，将式LVIII的化合物转化为式LXVIII的化合物。

在此处，

R₁、R₂、R₃和L”如方案17中对LIV所定义；并且PG’如方案16所定义。在R₂是保护基的情况下，可以用合适的条件，诸如于1,4-二噁烷中的氯化氢，除去保护基；在PG’是2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基的情况下，PG’在这些条件下变为H。然后，可以在酰胺偶联条件下，将其中PG’和R₂是H的这一化合物转化为不同的式LXVII的化合物。此类酰胺形成的代表性条件包括但不限于：丙烯酰氯，2,6-二甲基吡啶，二氯甲烷，-78℃；或羧酸，诸如于N,N-二甲基甲酰胺中的2,2-二羟基乙酸和1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐和二异丙基乙胺，在室温下。

一般合成方案1.

可以在酰胺形成条件下，例如HOBt，EDCI，用合适的碱诸如DIEA和合适的溶剂诸如DMF，使式I的化合物(可商业获得或使用本领域技术人员已知的标准反应技术容易制备)与化合物II反应，以产生式III的化合物。PG是合适的保护基，例如叔丁氧羰基，R是H或任选的取代基，例如甲基，并且Z是任选的取代基，例如H、甲基或羟甲基。可以使用适于除去保护基的条件，例如当PG是叔丁氧羰基时的于二氯甲烷中的1,4-二噁烷的氯化氢，将式III的化合物转化为式IV的化合物。然后，可以在酰胺偶联条件下，例如类似于用于将I和II转化为III的那些，使式IV的化合物与式V的化合物反应，以产生式VI的化合物。然后，可以在合适的保护基去除条件下，例如于二氯甲烷中的三氟乙酸，将化合物VI转化为化合物VII。可以在酰胺形成条件下，例如丙烯酰氯，2,6-二甲基吡啶，二氯甲烷，将化合物VII转化为式VIII的化合物。

一般合成方案2.

可以使式IX的化合物与式X的化合物反应，以提供式XI的化合物，其中X是合适的离去基团，诸如氟或氯，PG是合适的保护基，例如叔丁氧羰基，R是H或任选的取代基，例如甲基，并且反应条件是用于亲核芳族取代的那些，例如DIEA，DMSO，80℃。可以使用适于除去保护基的条件，例如当PG是叔丁氧羰基时的于二氯甲烷中的1,4-二噁烷中的氯化氢，将式XI的化合物转化为式XII的化合物。然后，可以在酰胺偶合条件下，例如HOBt，EDCI，用合适的碱诸如DIEA和合适的溶剂诸如DMF，使式XI的化合物与式V的化合物反应，以产生式XIII的化合物。然后，可以在合适的保护基去除条件下，例如于二氯甲烷中的三氟乙酸，将化合物XIII转化为化合物XIV。可以在酰胺形成条件下，例如丙烯酰氯，2,6-二甲基吡啶，二氯甲烷，将化合物XIV转化为式XV的化合物。

2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-羟基异吲哚啉-1,3-二酮的示例性合成

步骤1：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-羟基异吲哚啉-1,3-二酮的制备

向3-氨基哌啶-2,6-二酮(4.1g，24.7mmol，1.50eq，HCl盐)在乙酸(45mL)中的溶液中，装入乙酸钠(4.1g，49.4mmol，3.00eq)，然后将混合物在25℃搅拌1小时。然后将4-羟基邻苯二甲酸(3.0g，16.5mmol，1.00eq)加入混合物中并加热至120℃，搅拌另外11小时。浓缩混合物，然后倒入水(20mL)中，然后过滤。通过柱色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇＝50:1至10:1)粗产物，以得到为无色固体的2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-羟基-异吲哚啉-1,3-二酮(3.9g，14.3mmol，86％产率)。LC/MS(ESI)m/z:275[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ11.19-10.94(m,2H),7.75(d,J＝8.0Hz,1H),7.20-7.08(m,2H),5.08(dd,J＝5.2,12.8Hz,1H),3.34(br s,1H),2.95-2.81(m,1H),2.64-2.55(m,1H),2.08-1.98(m,1H).

(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺盐酸盐的示例性合成

步骤1：(S)-(1-(4-溴苯基)乙基)氨基甲酸叔丁酯的制备

向250mL圆底烧瓶中放入于二氯甲烷(100mL)中的(1S)-1-(4-溴苯基)乙-1-胺(10.0g，49.98mmol，1.00equiv)、三乙胺(10.0g，99.01mmol，2.00equiv)、二碳酸二叔丁酯(13.0g，59.63mmol，1.20equiv)。将所得溶液在室温搅拌2小时。将得到的混合物真空浓缩。将残余物用乙酸乙酯/石油醚(1:10)施加到硅胶柱上。得到15.0g为白色固体的N-[(1S)-1-(4-溴苯基)乙基]氨基甲酸叔丁酯。

步骤2：(S)-(1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酸叔丁酯的制备

向以氮气惰性气氛吹扫并维持的250mL圆底烧瓶中放入N-[(1S)-1-(4-溴苯基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(15.0g，49.97mmol，1.00equiv)在N,N-二甲基乙酰胺(100mL)中的溶液、4-甲基-1,3-噻唑(9.9g，99.84mmol，2.00equiv)、乙酸钾(9.8g，99.86mmol，2.00equiv)、乙酸钯(II)(112.5mg，0.50mmol，0.01equiv)。将所得溶液在120℃下搅拌2小时。通过添加水(500mL)淬灭反应混合物。所得溶液用乙酸乙酯(200mL x 3)萃取，合并有机层并真空浓缩。将残余物用乙酸乙酯/石油醚(1:5)施加到硅胶柱上。得到7.5g(47％)为白色固体的N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯。LC/MS(ESI)m/z:319.13[M+Na]⁺.

步骤3：(S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙-1-胺盐酸盐的制备

向100-mL圆底烧瓶中放入N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(7.5g，23.55mmol，1.00equiv)在甲醇(20mL)中的溶液，在室温下鼓入氯化氢(气体)。将所得溶液在室温下搅拌2小时。将得到的混合物真空浓缩。得到4.4g(86％)为白色固体的(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙-1-胺。

步骤4：(2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的制备

向100-mL圆底烧瓶中放入于N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中的(2S,4R)-1-[(叔丁氧基)羰基]-4-羟基吡咯烷-2-羧酸(4.7g，20.32mmol，1.00equiv)、N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(7.8g，60.35mmol，3.00equiv)、o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(11.5g，30.26mmol，1.50equiv)、(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙-1-胺(4.4g，20.15mmol，1.00equiv)。将所得溶液在室温搅拌12小时。通过添加水(20mL)淬灭反应混合物。所得溶液用乙酸乙酯(100mL x 3)萃取，合并有机层，并在烘箱中减压干燥，真空浓缩。将残余物用乙酸乙酯/石油醚(1:1)施加到硅胶柱上。得到5.0g(57％)为黄色固体的(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯。LC/MS(ESI)m/z:432.15[M+1]⁺.

步骤5：(2S,4R)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺盐酸盐的制备

向500-mL圆底烧瓶中放入(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(5.0g，11.59mmol，1.00equiv)在甲醇(200mL)中的溶液，然后在室温下将氯化氢(气体)鼓入反应混合物中2小时。将得到的混合物真空浓缩。得到3.2g(83％)为红色固体的(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺。

步骤6：

((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯的制备

向25-mL圆底烧瓶中放入于N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中的(2S)-2-[(叔丁氧基)羰基]氨基-3,3-二甲基丁酸(2.0g，8.65mmol，0.99equiv)、N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(3.4g，3.00equiv)、o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(5.0g，1.50equiv)、(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺盐酸盐(3.2g，8.70mmol，1.00equiv)。将所得溶液在室温搅拌12小时。将所得溶液用乙酸乙酯(60mL x 3)萃取，并用水(100mL x 2)洗涤。合并有机层并干燥，真空浓缩。将残余物用己烷/石油醚(1:3)施加到硅胶柱上。得到4.0g(84％)为黄色固体的N-[(2S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]氨基甲酸叔丁酯。LC/MS(ESI)m/z:545.30[M+1]⁺.

步骤7：(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺盐酸盐的制备

向100-mL圆底烧瓶中放入N-[(2S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]氨基甲酸叔丁酯(4.0g，7.34mmol，1.00equiv)在甲醇(30mL)中的溶液，然后在室温下将氯化氢(气体)鼓入反应混合物中2小时。将得到的混合物真空浓缩。得到3.5g为黄色固体的(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺盐酸盐。LC/MS(ESI)m/z:445.05[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.99(s,1H),8.57-8.55(d,J＝7.8Hz,1H),8.01(b,3H),7.46-7.43(d,J＝8.4Hz,2H),7.39-7.37(d,J＝8.4Hz,2H),4.98-4.90(m,1H),4.57-4.51(m,1H),4.34(b,1H),3.94-3.92(m,1H),3.69-3.66(m,1H),3.53-3.49(m,1H),2.52(s,3H),2.10-2.07(m,1H),1.83-1.81(m,1H),1.40-1.30(m,3H),1.03(s,9H).

3-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸的示例性合成

步骤1：2-氨基-4-溴-5-氯-3-氟苯甲酸的制备

向2-氨基-4-溴-3-氟苯甲酸(9.0g，38.5mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(180mL)中的溶液中，加入N-氯代琥珀酰亚胺(6.2g，46.2mmol)并在70℃下搅拌过夜。冷却至室温后，将反应混合物倒入水(100mL)中。通过过滤收集沉淀，并将滤饼用水洗涤并真空干燥以得到为黄色固体的2-氨基-4-溴-5-氯-3-氟苯甲酸(9.0g，87％)。LC/MS(ESI)m/z:268.0[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ6.90(br,2H),7.69(d,J＝2.0Hz,1H).

步骤2：7-溴-6-氯-8-氟喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮的制备

将2-氨基-4-溴-5-氯-3-氟苯甲酸(2.0g，7.5mmol)和脲(2.2g，37.3mmol)的混合物在室温下均匀混合，并在240℃下搅拌2小时。冷却至100℃后，向其中加入水(30mL)，并将所得混合物在100℃下搅拌30分钟。通过过滤收集沉淀，滤饼用沸水洗涤三次并真空干燥以得到为黄色固体的7-溴-6-氯-8-氟喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(2.1g，95％)。LC/MS(ESI)m/z:293.6[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.82(d,J＝1.6Hz,1H),11.65(br,2H).

步骤3：7-溴-2,4,6-三氯-8-氟喹唑啉的制备

向7-溴-6-氯-8-氟喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(500mg，1.7mmol)在三氯氧磷(7.5mL)中的悬浮液中，加入N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(550mg，4.3mmol)并回流过夜。减压蒸发挥发物，以得到残余物，将所述残余物通过硅胶快速色谱法纯化(己烷中的2％乙酸乙酯)以得到为黄色固体的7-溴-2,4,6-三氯-8-氟喹唑啉(400mg，71％)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.21(d,J＝2.0Hz,1H).

步骤4：4-(7-溴-2,6-二氯-8-氟喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

在室温下向7-溴-2,4,6-三氯-8-氟喹唑啉(400mg，1.2mmol)和三乙胺(364mg，3.6mmol)在1,4-二噁烷(6mL)中的溶液中，加入哌嗪-1-羧酸叔丁酯(236mg，1.27mmol)并在50℃下搅拌30分钟。用水(15mL)淬灭反应混合物，并用二氯甲烷(10mL x2)萃取。将合并的有机层用盐水(10ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩，以得到残余物，将所述残余物通过硅胶快速色谱法纯化(用在己烷的3％-30％乙酸乙酯洗脱)以得到为黄色固体的4-(7-溴-2,6-二氯-8-氟喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(520mg，90％)。LC/MS(ESI)m/z:479.0/481.0[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ1.50(s,9H),3.69-3.62(m,4H),3.94-3.85(m,4H),7.77(d,J＝2.0Hz,1H).

步骤5：4-(7-溴-6-氯-2-((3-乙氧基-3-氧代丙基)氨基)-8-氟喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向4-(7-溴-2,6-二氯-8-氟喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(100mg，0.2mmol)在异丙醇(3mL)中的溶液中，加入3-氨基丙酸乙酯盐酸盐(91.8mg，0.6mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(78mg，0.6mmol)并回流20小时。将反应混合物在乙酸乙酯(20ml)和水(10ml)之间分配。收集有机层，并用乙酸乙酯(15ml x 2)萃取水层。将合并的有机层用盐水(10ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩，以得到残余物，将所述残余物通过硅胶快速色谱法纯化(用在己烷中的10％-50％乙酸乙酯洗脱)，以得到为无色油的4-(7-溴-6-氯-2-((3-乙氧基-3-氧代丙基)氨基)-8-氟喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(95mg，81％)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ1.27(t,J＝7.2Hz,3H),1.49(s,9H),2.60-2.70(m,2H),3.55-3.70(m,8H),3.84-3.75(m,2H),4.16(q,J＝7.2Hz,2H),5.67(br,1H),7.57(d,J＝2.0Hz,1H).

步骤6：4-(6-氯-2-((3-乙氧基-3-氧代丙基)氨基)-8-氟-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

在室温下，在氮气气氛下向4-(7-溴-6-氯-2-((3-乙氧基-3-氧代丙基)氨基)-8-氟喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(820mg，1.46mmol)在1,4-二噁烷(16.5mL)和水(4mL)中的溶液中，加入2-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(550mg，1.75mmol)、碳酸钠(387mg，3.65mmol)和1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(110mg，0.15mmol)；将混合物用氮气脱气三次。所得混合物回流2小时。将反应混合物在乙酸乙酯(30ml)和水(20ml)之间分配；收集有机层，并用乙酸乙酯(20ml x 2)萃取水层。将合并的有机层用盐水(40ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩，以得到粗残余物，将所述残余物通过硅胶快速色谱法纯化(用在己烷中的10-33％乙酸乙酯洗脱)以得到为白色泡沫的4-(6-氯-2-((3-乙氧基-3-氧代丙基)氨基)-8-氟-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(940mg，78％)。LC/MS(ESI)m/z:668.4[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ1.26(t,J＝7.2Hz,3H),1.51(s,9H),2.67(t,J＝6.0Hz,2H),3.55(s,3H),3.62-3.75(m,8H),3.79-3.83(m,2H),4.16(q,J＝7.2Hz,2H),5.38-5.29(m,2H),5.57-5.65(m,1H),7.19(d,J＝2.4Hz,1H),7.30-7.26(m,1H),7.37(d,J＝8.4Hz,1H),7.49-7.42(m,1H),7.52(d,J＝2.4Hz,1H),7.66(d,J＝1.4Hz,1H),7.82(d,J＝8.2Hz,1H).

步骤7：3-((6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸乙酯盐酸盐的制备

在室温下向4-(6-氯-2-((3-乙氧基-3-氧代丙基)氨基)-8-氟-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(940mg，1.4mmol)在乙醇(10mL)中的溶液中，加入在二噁烷中的氯化氢(10mL，4M)并搅拌过夜。减压蒸发挥发物以得到3-((6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸乙酯盐酸盐(1.4mmol)。LC/MS(ESI)m/z:524.4[M+1]⁺.

步骤8：3-((7-(3-乙酰氧基萘-1-基)-4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟喹唑啉-2-基)氨基)丙酸乙酯的制备

在室温下向3-((6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸乙酯盐酸盐(1.4mmol)在二氯甲烷(30mL)中的悬浮液中，加入三乙胺(850mg，8.4mmol)和乙酰氯(328mg，4.2mmol)并搅拌1小时。真空浓缩反应混合物以得到残余物，将所述残余物通过硅胶柱纯化(用在二氯甲烷中的2％甲醇洗脱)以得到为浅黄色油的3-((7-(3-乙酰氧基萘-1-基)-4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟喹唑啉-2-基)氨基)丙酸乙酯(735mg，两步产率86％)。LC/MS(ESI)m/z:608.7[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ1.26(t,J＝7.2Hz,3H),2.18(s,3H),2.36(s,3H),2.67(t,J＝6.0Hz,2H),3.66-3.88(m,10H),4.17(q,J＝7.2Hz,2H),5.64(t,J＝5.2Hz,1H),7.23(d,J＝2.4Hz,1H),7.43-7.36(m,1H),7.45(d,J＝8.2Hz,1H),7.49-7.53(m,1H),7.66(d,J＝1.6Hz,1H),7.73(d,J＝2.2Hz,1H),7.89(d,J＝8.2Hz,1H).

步骤9：3-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸的制备

在室温下向3-((7-(3-乙酰氧基萘-1-基)-4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟喹唑啉-2-基)氨基)丙酸乙酯(735mg，1.2mmol)在四氢呋喃(6ml)-水(2ml)中的溶液中，加入氢氧化锂一水合物(241mg，6.0mmol)并搅拌2小时。将混合物溶液冷却至室温，用稀盐酸(3N)酸化至pH3-4，并用二氯甲烷(10ml x 2)萃取。将有机层合并，用盐水(10ml)洗涤，经硫酸钠干燥并减压浓缩以得到为白色固体的3-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸(470mg，78％)。LC/MS(ESI)m/z:538.3[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ2.07(s,3H),2.55-2.65(m,2H),3.45-3.85(m,8H),4.19-3.88(m,2H),7.07(s,1H),7.17-7.35(m,3H),7.53-7.38(m,1H),7.70-8.10(m,2H),10.22-9.94(m,1H),12.33(br,1H).

3-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸的示例性合成

步骤1：3-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸乙酯的制备

在0℃下向3-((6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸乙酯盐酸盐(630mg，1.12mmol)和三乙胺(341mg，3.36mmol)在二氯甲烷(5ml)中的溶液中，加入丙烯酰氯(166mg，1.68mmol)，在室温下搅拌1小时。将混合物在0℃下用水(20ml)淬灭，并用二氯甲烷(20ml)萃取。收集有机层，用盐水(20ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩，以得到粗残余物，将其通过硅胶快速色谱法纯化(用在二氯甲烷中的2-5％甲醇洗脱)以得到为灰白色固体的3-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸乙酯(425mg，66％)。

步骤2：3-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸的制备

在室温下搅拌3-((4-(4-氨基甲酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸乙酯3-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸乙酯(425mg，0.75mmol)和氢氧化锂一水合物(63mg，1.5mmol)在四氢呋喃(4ml)-水(1ml)-甲醇(1ml)中的混合物1小时。反应混合物用稀盐酸(1N)酸化至pH 6-7，并用二氯甲烷(10ml x 3)萃取。合并的有机层经硫酸钠干燥并减压浓缩以得到为浅黄色固体的3-((4-(4-氨基甲酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸(400mg，99％)。LC/MS(ESI)m/z:550.1[M+1]⁺.

2,2,5-三甲基-4-氧代-3,8,11-三氧杂-5-氮杂十三烷-13-基4-甲基苯磺酸酯的示例性合成

步骤1：2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯的制备

在25℃下，在氮气下向2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙醇(5.00g，33.29mmol，1.00eq)和4-甲基苯磺酰氯(1.59g，8.32mmol，0.25eq)在二氯甲烷(50mL)中的混合物中，一次性加入三乙胺(1.68g，16.65mmol，2.3mL，0.5eq)。将混合物在25℃下搅拌12小时。将混合物用盐水(30mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1至0:1)残余物，以得到为无色油的2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙基4-甲基苯磺酸酯(1.72g，5.65mmol，17％产率)。LC/MS(ESI)m/z:327.0[M+23]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.81(d,J＝8.3Hz,2H),7.35(d,J＝8.0Hz,2H),4.22-4.15(m,2H),3.79-3.67(m,4H),3.67-3.56(m,6H),2.46(s,3H).

步骤2：2-(2-(2-(甲基氨基)乙氧基)乙氧基)乙-1-醇的制备

将甲胺(41.27g，398.65mmol，50mL，30％，于乙醇中，24.27eq)加至2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙基4-甲基苯磺酸酯(5g，16.43mmol，1eq)中。将混合物在80℃下搅拌12小时。将混合物冷却至20℃并真空浓缩。得到为无色油的2-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]乙醇(2.68g，16.43mmol)。

步骤3：(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备

向2-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]乙醇(2.68g，16.43mmol，1eq)和二碳酸二叔丁酯(4.30g，19.70mmol，4.5mL，1.2eq)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中，加入三乙胺(3.32g，32.84mmol，4.5mL，2eq)。将混合物在20℃下搅拌12小时。通过添加水(20mL)淬灭混合物，并用乙酸乙酯(20mL x 3)萃取水相。合并的有机相用盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3/1至1/3)残余物，以得到为无色油的N-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(3.2g，12.15mmol，74％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ3.70-3.80(m,2H),3.54-3.70(m,8H),3.41(br s,2H),2.92(s,3H),1.46(s,9H).

步骤4：2,2,5-三甲基-4-氧代-3,8,11-三氧杂-5-氮杂十三烷-13-基4-甲基苯磺酸酯的制备

向N-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(600mg，2.28mmol，1eq)和三乙胺(461mg，4.56mmol，0.6mL，2eq)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中，加入对甲苯磺酰氯(651mg，3.42mmol，1.5eq)。将混合物在20℃下搅拌12小时。将混合物用水(20mL)稀释。用乙酸乙酯(20mL x 3)萃取水相。合并的有机相用盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10/1至3/1)残余物，以得到为无色油的2-[2-[2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙氧基]乙氧基]乙基4-甲基苯磺酸酯(750mg，1.80mmol，79％产率)。LC/MS(ESI)m/z:440.1[M+23]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.81(d,J＝8.0Hz,2H),7.35(d,J＝8.0Hz,2H),4.19-4.15(m,2H),3.70(t,J＝4.8Hz,2H),3.61-3.51(m,6H),3.38(br s,2H),2.90(s,3H),2.46(s,3H),1.45(s,9H).

2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮的示例性合成

步骤1：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮的制备

在100℃下，在氮气下向3-氨基哌啶-2,6-二酮(10.90g，66.22mmol，1.1eq，盐酸盐)和4-氟异苯并呋喃-1,3-二酮(10g，60.20mmol，1eq)在乙酸(150mL)中的混合物中，一次性加入乙酸钾(18.32g，186.63mmol，3.1eq)。将混合物在100℃下搅拌16小时。将混合物冷却至20℃，并在55℃减压浓缩。将残余物用乙酸乙酯(100mL)和水(30mL)研磨，减压收集滤饼并在高真空下干燥。得到为黑色固体的化合物2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(8.9g，32.22mmol，53％产率)。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.15(br s,1H),7.95(dt,J＝4.6,7.9Hz,1H),7.82-7.70(m,2H),5.17(dd,J＝5.3,12.9Hz,1H),2.99-2.81(m,1H),2.66-2.52(m,2H),2.13-2.02(m,1H).

(S)-3-((4-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸的示例性合成

步骤1：3-氟-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯酚的制备

在0℃下，向(2-氟-6-甲氧基-苯基)硼酸(10g，58.84mmol，1.0eq)在二氯甲烷(100mL)中的溶液中，加入三溴化硼(44g，176.52mmol，3.0eq)。然后将混合物在0℃下搅拌0.5小时。将混合物在0℃下用冰水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(200mL x 3)萃取，用盐水(200mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，然后浓缩。向四氢呋喃(100mL)中的残余物中，加入2,3-二甲基丁-2,3-二醇(13.91g，117.68mmol，2eq)。然后，将混合物在20℃下搅拌12小时。然后，将混合物浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚)残余物。获得为白色固体的3-氟-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯酚(6g，25.20mmol，42％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.37(s,1H),7.36-7.28(m,1H),6.69(d,J＝8.4Hz,1H),6.57(t,J＝8.8Hz,1H),1.40(s,12H).

步骤2：4-(7-溴-6-氯-8-氟-2-((3-甲氧基-3-氧代丙基)氨基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

在20℃下，在氮气下向3-氨基丙酸甲酯(16.57g，118.71mmol，3eq，盐酸盐)和4-(7-溴-2,6-二氯-8-氟-喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(19g，39.57mmol，1eq)在异丙醇(600mL)中的混合物中一次性加入N,N-二异丙基乙胺(25.57g，197.85mmol，34.46mL，5eq)。将混合物在95℃下搅拌12小时。将混合物冷却至20℃，并在45℃减压浓缩。通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10/1，3/1)残余物，以得到为黄色固体的4-[7-溴-6-氯-8-氟-2-[(3-甲氧基-3-氧代-丙基)氨基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(10.6g，19.38mmol，49％产率)。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.75(s,1H),7.65-7.32(m,1H),3.64-3.52(m,10H),3.34(s,3H),2.66(br d,J＝9.2Hz,2H),1.43(s,9H).

步骤3：4-(6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-2-((3-甲氧基-3-氧代丙基)氨基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向4-[7-溴-6-氯-8-氟-2-[(3-甲氧基-3-氧代-丙基)氨基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(6.8g，12.44mmol，1eq)和3-氟-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯酚(7.43g，31.21mmol，2.51eq)在甲苯(140mL)中的溶液中，加入[2-(2-氨基苯基)苯基]-氯化钯；二环己基-[2-(2,6-二甲氧基苯基)苯基]磷烷(448mg，0.62mmol，0.05eq)和磷酸钾(1.5M，24.87mL，3eq)。将反应混合物脱气并充入氮气三次，然后在75℃下搅拌30小时。加入乙酸乙酯(80mL)和水(100mL)并分离混合物。有机层经硫酸钠干燥，然后真空浓缩，以得到残余物。通过硅胶快速色谱法纯化(在石油醚中的0-100％乙酸乙酯)残余物，以得到为黄色固体的4-[6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)-2-[(3-甲氧基-3-氧代-丙基)氨基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4.2g，6.90mmol，55％产率，95％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:578.2[M+1]⁺.

步骤4：(S)-4-(6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-2-((3-甲氧基-3-氧代丙基)氨基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯和(R)-4-(6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-2-((3-甲氧基-3-氧代丙基)氨基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

通过SFC分离4-[6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)-2-[(3-甲氧基-3-氧代-丙基)氨基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(5g，8.65mmol，1eq)。得到为黄色固体的(S)-4-(6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-2-((3-甲氧基-3-氧代丙基)氨基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2.38g，3.85mmol，89％产率，93％纯度)。得到为黄色固体的(R)-4-(6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-2-((3-甲氧基-3-氧代丙基)氨基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2.5g，4.15mmol，96％产率，96％纯度)。

步骤5：叔丁基(S)-3-((4-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸的制备

向4-[6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)-2-[(3-甲氧基-3-氧代-丙基)氨基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2.38g，3.83mmol，1eq)在四氢呋喃(12mL)和甲醇(12mL)的混合物中的溶液中，加入水(12mL)和氢氧化锂一水合物(450mg，10.73mmol，2.80eq)。将反应混合物在20℃下搅拌16小时。通过添加1N盐酸将水层的pH调节至6。将所得混合物用乙酸乙酯(70mL x 2)萃取。有机层经硫酸钠干燥，然后真空浓缩，以得到为黄色固体的(S)-3-((4-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸(2.02g，3.58mmol，93％产率)。

(R)-3-((4-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸的示例性合成

步骤1：(R)-3-((4-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸的制备

向4-[6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)-2-[(3-甲氧基-3-氧代-丙基)氨基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2.5g，4.15mmol，1eq)在四氢呋喃(12mL)和甲醇(12mL)的混合物中的溶液中，加入水(12mL)和氢氧化锂一水合物(488mg，11.63mmol，2.80eq)。将反应混合物在20℃下搅拌16小时。通过添加1N盐酸将混合物的pH调节至6。将所得混合物用乙酸乙酯(80mL x 2)萃取。有机层经硫酸钠干燥，然后真空浓缩，以得到为黄色固体的(R)-3-((4-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸(2.24g，3.97mmol，95％产率)。

(S)-3-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸的示例性合成

步骤1：(S)-3-((6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸的制备

向(S)-3-((4-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸(1.0g，1.77mmol，1eq)在二噁烷(10mL)中的溶液中，加入氯化氢/二噁烷(4M，30.00mL，67.68eq)。将混合物在25℃下搅拌1小时。减压浓缩反应混合物，以得到为白色固体的产物(S)-3-((6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸(0.88g，1.76mmol，99％产率，盐酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:464.0[M+1]⁺.

步骤2：(S)-3-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸的制备

向(S)-3-((6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸(0.88g，1.76mmol，1eq，盐酸盐)和饱和碳酸氢钠溶液(20mL)在四氢呋喃(20mL)中的溶液中，加入丙烯酰氯(159mg，1.76mmol，143.24uL，9.98e-1eq)。将混合物在0℃下搅拌0.5小时。减压浓缩反应混合物以除去溶剂，得到残余物。残余物通过制备型HPLC纯化。得到为白色固体的化合物(S)-3-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸(0.52g，1.00mmol，57％产率)。¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.77(s,1H),7.33-7.25(m,1H),6.86-6.66(m,3H),6.26(dd,J＝2.0,16.8Hz,1H),5.80(dd,J＝2.0,10.8Hz,1H),3.88(br s,8H),3.74(br t,J＝6.4Hz,2H),2.63(t,J＝6.4Hz,2H).

(S)-3-((4-(4-氨基甲酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸的示例性合成

步骤1：(S)-3-((6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸甲酯盐酸盐的制备

向3-[[4-(4-叔丁氧基羰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酸(1.5g，2.66mmol，1eq)在甲醇(5mL)中的溶液中，加入盐酸/甲醇(4M，10mL).将混合物在50℃下搅拌2小时。减压浓缩反应混合物以得到为黄色固体的化合物3-[[6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氨基]丙酸甲酯(1.35g，盐酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:478.2[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.63(brs,1H),9.92(brs,2H),8.77-8.43(m,1H),8.08(s,1H),7.38(q,J＝8.0Hz,1H),6.94(d,J＝8.4Hz,1H),6.87-6.72(m,1H),4.42-4.15(m,4H),3.86-3.51(m,5H),3.36-3.26(m,4H),2.71-2.55(m,2H).

步骤2：(S)-3-((4-(4-氨基甲酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸甲酯的制备

向3-[[6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氨基]丙酸甲酯(1.35g，2.62mmol，1eq，盐酸盐)和三乙胺(266mg，2.62mmol，1eq)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)和四氢呋喃(5mL)中的溶液中，加入三甲基硅基异氰酸酯(302mg，2.62mmol，1eq)。将混合物在20℃下搅拌0.5小时。减压浓缩反应混合物以得到为黄色油的化合物3-[[4-(4-氨基甲酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酸甲酯(1.37g)。LC/MS(ESI)m/z:521.2[M+1]⁺.

步骤3：(S)-3-((4-(4-氨基甲酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸的制备

向3-[[4-(4-氨基甲酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酸甲酯(1.37g，2.63mmol，1eq)在四氢呋喃(10mL)和水(3mL)中的溶液中，加入氢氧化锂一水合物(276mg，6.57mmol，2.5eq)。将混合物在20℃下搅拌0.5小时。减压浓缩反应混合物，以得到残余物。将残余物用水(10mL)稀释，用盐酸(1M)酸化至pH＝3，在加入盐酸的同时形成一些沉淀。将得到的混合物过滤并将滤饼减压蒸发至干以得到为黄色固体的化合物3-[[4-(4-氨基甲酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酸(1.2g，2.37mmol，90％产率)。LC/MS(ESI)m/z:507.2[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.41(brs,1H),10.57-10.08(m,1H),8.19-7.94(m,1H),7.93-7.64(m,1H),7.44-7.26(m,1H),6.98-6.73(m,2H),6.11(brs,2H),4.19-3.91(m,2H),3.77-3.46(m,4H),3.43-3.36(m,4H),2.58(t,J＝6.4Hz,2H).

4-(6-氯-8-氟-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-7-基)萘-2-醇盐酸盐的示例性合成

步骤1：7-溴-6-氯-8-氟喹唑啉-4(3H)-酮的制备

在回流下搅拌2-氨基-4-溴-5-氯-3-氟苯甲酸(1.5g，5.58mmol)和醋酸甲脒(2.3g，22.35mmol)在乙醇(30ml)中的混合物24小时。浓缩混合物，并将残余物在水(20ml)和乙酸乙酯(20ml)之间分配。有机层用盐水(10ml)洗涤，经硫酸钠干燥并减压浓缩以得到为浅黄色固体的7-溴-6-氯-8-氟喹唑啉-4(3H)-酮(1.2g，77％)。

步骤2：7-溴-4,6-二氯-8-氟喹唑啉的制备

在室温下向7-溴-6-氯-8-氟喹唑啉-4(3H)-酮(1.2g，4.3mmol)在二氯化硫(16ml)中的溶液中加，入N,N-二甲基甲酰胺(1ml)。将混合物在回流下搅拌16小时。浓缩混合物，并将残余物溶解于二氯甲烷(20ml)中。将有机层倒入冰水(20ml)中，用碳酸氢钠水溶液(1N，10ml)和盐水(10ml)洗涤，经硫酸钠干燥，并减压浓缩，以得到粗残余物，将所述残余物通过硅胶快速色谱法纯化(用在己烷中的5％乙酸乙酯洗脱)，以得到为黄色固体的7-溴-4,6-二氯-8-氟喹唑啉(1.07g，83％)。

步骤3：4-(7-溴-6-氯-8-氟喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

在50℃搅拌7-溴-4,6-二氯-8-氟喹唑啉(1.07g，3.61mmol)、哌嗪-1-羧酸叔丁酯(674mg，3.61mmol)和三乙胺(1.1g，10.85mmol)在1,4-二噁烷(11ml)中的混合物30分钟。浓缩反应混合物，并将残余物在乙酸乙酯(15ml)和水(20ml)之间分配。收集有机层，用盐水(10ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩，以得到粗残余物，将所述残余物通过硅胶快速色谱法纯化(用在己烷中的20-25％乙酸乙酯洗脱)，以得到为白色固体的4-(7-溴-6-氯-8-氟喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1g，62％)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ1.50(s,9H),3.65,3.80(two singles,8H),7.79(s,1H),8.77(s,1H).

步骤4：4-(6-氯-8-氟-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

在室温下，在氮气气氛下向4-(7-溴-6-氯-8-氟喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1g，2.24mmol)，2-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(705mg，2.24mmol)和碳酸钾(624mg，4.48mmol)在二噁烷(8ml)-水(2ml)中的悬浮液中，加入四(三苯基膦)钯(0)(520mg，0.45mmol)；将混合物脱气并再充氮气三次。将所得混合物回流12小时。浓缩混合物，并将残余物在水(10ml)和乙酸乙酯(10ml)之间分配。收集有机层，用盐水(10ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩，以得到粗残余物，将所述残余物通过硅胶快速色谱法纯化(用在己烷中的18-33％乙酸乙酯洗脱)，以得到为浅黄色固体的4-(6-氯-8-氟-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(420mg，34％)。LC/MS(ESI)m/z:553.20[M+1]⁺.

步骤5：4-(6-氯-8-氟-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-7-基)萘-2-醇盐酸盐的制备

在室温下向4-(6-氯-8-氟-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(200mg，0.36mmol)在甲醇(2ml)中的溶液中，加入二噁烷盐酸溶液(2ml)。将混合物在室温搅拌1小时。浓缩混合物，固体用乙酸乙酯(5ml)洗涤。收集固体并干燥，以得到4-(6-氯-8-氟-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-7-基)萘-2-醇盐酸盐(190mg)。LC/MS(ESI)m/z:409.10[M+1]⁺.

(2S,4R)-1-((S)-15-(叔丁基)-13-氧代-5,8,11-三氧杂-2,14-二氮杂十六烷-16-酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的示例性合成

步骤1：2,2,5-三甲基-4-氧代-3,8,11,14-四氧杂-5-氮杂十六烷-16-酸叔丁酯的制备

在室温下搅拌(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(600mg，2.28mmol)，四丁基氯化铵(635mg，2.38mmol)、2-溴乙酸叔丁酯(445mg，2.28mmol)和氢氧化钠(12ml，35％，于水中)在二氯甲烷(12ml)中的溶液4小时。收集有机相，并且水层用二氯甲烷(10ml x 2)萃取。合并的有机层用盐水(20ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩以得到残余物，将所述残余物经硅胶快速色谱法纯化(用在环己烷中的10-20％乙酸乙酯洗脱)，以得到为无色油的2,2,5-三甲基-4-氧代-3,8,11,14-四氧杂-5-氮杂十六烷-16-酸叔丁酯(300mg，35％)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ1.45,1.47(two singles,18H),2.91(s,3H),3.32-3.46(m,2H),3.58-3.73(m,10H),4.02(s,2H).

步骤2：2,2,5-三甲基-4-氧代-3,8,11,14-四氧杂-5-氮杂十六烷-16-酸的制备

在室温下搅拌2,2,5-三甲基-4-氧代-3,8,11,14-四氧杂-5-氮杂十六烷-16-酸叔丁酯(100mg，0.26mmol)和氢氧化锂一水合物(23mg，0.53mmol)在四氢呋喃(1ml)-水(0.5ml)-甲醇(0.5ml)中的混合物1小时。浓缩混合物，残余物用盐酸水溶液(1N)酸化直至pH4-5，并用二氯甲烷(10ml)萃取。有机层用盐水(5ml)洗涤，经硫酸钠干燥并减压浓缩，以得到为无色油的2,2,5-三甲基-4-氧代-3,8,11,14-四氧杂-5-氮杂十六烷-16-酸(77mg，90％)。

步骤3：((S)-13-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-14,14-二甲基-11-氧代-3,6,9-三氧杂-12-氮杂十五烷基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备

在0℃下向2,2,5-三甲基-4-氧代-3,8,11,14-四氧杂-5-氮杂十六烷-16-酸(77mg，0.24mmol)、(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺盐酸盐(115mg，0.24mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(124mg，0.96mmol)在干燥N,N-二甲基甲酰胺(2ml)中的溶液中，加入HATU(2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐)(182mg，0.48mmol)，使所得混合物温热至室温，并在室温搅拌10分钟。将混合物在乙酸乙酯(20ml)和水(20ml)之间分配。收集有机层，用盐水(20ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩，以得到粗残余物，将所述残余物通过硅胶快速柱色谱法纯化(用在二氯甲烷中的5％甲醇洗脱)，以得到为浅黄色油的((S)-13-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-14,14-二甲基-11-氧代-3,6,9-三氧杂-12-氮杂十五烷基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(140mg，78％)。LC/MS(ESI)m/z:748.40[M+1]⁺.

步骤4：(2S,4R)-1-((S)-15-(叔丁基)-13-氧代-5,8,11-三氧杂-2,14-二氮杂十六烷-16-酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

在室温下向((S)-13-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-14,14-二甲基-11-氧代-3,6,9-三氧杂-12-氮杂十五烷基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(70mg，0.093mmol)在二氯甲烷(1ml)中的溶液中，加入2,2,2-三氟乙酸(0.5ml)。将混合物在室温搅拌1小时。减压浓缩混合物以得到为浅黄色油的(2S,4R)-1-((S)-15-(叔丁基)-13-氧代-5,8,11-三氧杂-2,14-二氮杂十六烷-16-酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(70mg)。

(2S,4R)-1-((S)-18-(叔丁基)-16-氧代-5,8,11,14-四氧杂-2,17-二氮杂十九烷-19-酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的示例性合成

步骤1：2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯的制备

在25℃下，在氮气下向2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙醇(5g，25.74mmol，4.4mL，1eq)和4-甲基苯磺酰氯(1.23g，6.44mmol，0.25eq)在二氯甲烷(50mL)中的混合物中，一次性加入三乙胺(1.30g，12.87mmol，1.8mL，0.5eq)。将混合物在25℃下搅拌12小时。将混合物用盐水(30mL x 2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1至0/1)残余物以得到为无色油的2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙基4-甲基苯磺酸酯(1.98g，5.68mmol，22％产率)。LC/MS(ESI)m/z:371.0[M+23]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.82(d,J＝8.3Hz,2H),7.36(d,J＝8.2Hz,2H),4.21-4.11(m,2H),3.75-3.61(m,14H),2.47(s,3H).

步骤2：5,8,11-三氧杂-2-氮杂十三烷-13-醇的制备

在80℃搅拌2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙基4-甲基苯磺酸酯(6g，17.22mmol，1eq)在甲胺(16.21g，172.21mmol，33％纯度，10eq)中的溶液16小时。将反应混合物在真空中浓缩以得到残余物。得到为浅黄色油的2-[2-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙醇(4.6g)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.77(d,J＝8.2Hz,2H),7.17(d,J＝7.9Hz,2H),3.84-3.71(m,4H),3.69-3.60(m,10H),3.21-3.09(m,2H),2.82-2.63(m,3H).

步骤3：(2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备

在0℃下向2-[2-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙醇(3.86g，18.62mmol，1eq)在二氯甲烷(30mL)中的溶液中，加入二碳酸二叔丁酯(4.88g，22.35mmol，5.13mL，1.2eq)，然后在15℃下搅拌16小时。加入三乙胺(3.77g，37.25mmol，5.18mL，2eq)，然后在15℃下搅拌12小时。将反应混合物在真空中浓缩以得到残余物。通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5/1至1/3)残余物，以得到为浅黄色油的N-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(5.74g)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ3.75-3.47(m,14H),3.38(br s,2H),2.90(s,3H),1.44(s,9H).

步骤4：2,2,5-三甲基-4-氧代-3,8,11,14,17-五氧杂-5-氮杂十九烷-19-酸乙酯的制备

在-5至0℃下向N-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(1g，3.25mmol，1eq)和二乙酰氧基铑(143mg，0.32mmol，0.1eq)在二氯甲烷(20mL)中的混合物中分三份滴加2-重氮乙酸乙酯(2.47g，19.50mmol，2.27mL，90％纯度，6eq)。然后将反应混合物在10℃下搅拌16小时。将乙酸(0.4mL)加入到反应混合物中。然后将反应混合物用二氯甲烷(30mL x 3)萃取，并真空浓缩，以得到残余物。通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝20/1至1/3)残余物。得到为绿色油的2-[2-[2-[2-[2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酸乙酯(600mg，1.52mmol，46％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.21(q,J＝7.2Hz,2H),4.15(s,2H),3.75-3.67(m,4H),3.66(s,4H),3.64-3.51(m,6H),3.39(br s,2H),2.91(s,3H),1.50-1.39(m,9H),1.31-1.26(m,3H).

步骤5：2,2,5-三甲基-4-氧代-3,8,11,14,17-五氧杂-5-氮杂十九烷-19-酸的制备

向2-[2-[2-[2-[2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酸乙酯(600mg，1.52mmol，1eq)在四氢呋喃(5mL)、水(5mL)和甲醇(5mL)的溶液中，加入氢氧化锂一水合物(365mg，15.25mmol，10eq)，然后将混合物在15℃下搅拌4小时。向混合物中加入1M氯化氢水溶液至pH 3.0-4.0，然后用二氯甲烷(30mL x 3)萃取，然后将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。得到为无色油的2-[2-[2-[2-[2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酸(473mg，1.29mmol，84％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.16(s,2H),3.80-3.74(m,2H),3.73-3.57(m,12H),3.41(br s,2H),2.92(s,3H),1.46(s,9H).

步骤6：((S)-16-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-17,17-二甲基-14-氧代-3,6,9,12-四氧杂-15-氮杂十八烷基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备

在0℃下向2-[2-[2-[2-[2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酸(250mg，0.68mmol，1eq)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(304mg，0.68mmol，1eq)和N,N-二异丙基乙胺(265mg，2.05mmol，0.36mL，3eq)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液中相继加入羟基苯并三唑(111mg，0.82umol，1.2eq)和3-(乙基亚氨基亚甲基氨基)-N,N-二甲基-丙-1-胺；盐酸盐(157mg，0.82mmol，1.2eq)，然后在15℃下搅拌12小时。将反应混合物倒入水(30mL)中，然后用乙酸乙酯(20mL x 3)萃取。合并的有机相用盐水(10mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过制备型TLC纯化(二氯甲烷/甲醇＝10/1)残余物。获得为无色油的N-[2-[2-[2-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(405mg，0.51mmol，74％产率)。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.98(s,1H),8.43(d,J＝7.7Hz,1H),7.46-7.41(m,2H),7.37(d,J＝8.2Hz,3H),5.12(d,J＝3.5Hz,1H),4.91(q,J＝6.9Hz,1H),4.54(d,J＝9.7Hz,1H),4.44(t,J＝8.2Hz,1H),4.28(br s,1H),3.63-3.47(m,15H),3.30-3.26(m,2H),3.17(s,3H),2.80(br d,J＝4.4Hz,3H),2.45(s,3H),1.77(ddd,J＝4.5,8.5,12.9Hz,1H),1.43-1.35(m,12H),0.94(s,9H).

步骤7：叔丁基(2S,4R)-1-((S)-18-(叔丁基)-16-氧代-5,8,11,14-四氧杂-2,17-二氮杂十九烷-19-酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向N-[2-[2-[2-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(120mg，0.15mmol，1eq)在二氯甲烷(4mL)中的溶液中，加入氯化氢/二噁烷(4M，4mL，105.60eq)，然后在15℃下搅拌2小时。真空浓缩反应混合物以得到为无色油的(2S,4R)-1-[(2S)-3,3-二甲基-2-[[2-[2-[2-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(120mg，盐酸盐)。

(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-羧酰胺盐酸盐的示例性合成

步骤1：4-(4-甲基噻唑-5-基)苯甲腈的制备

向以氮气惰性气氛吹扫并维持的1-L圆底烧瓶中放入4-溴苯甲腈(20g，109.88mmol，1.00equiv)在DMA(250mL)中的溶液、4-甲基-1,3-噻唑(21.88g，220.67mmol，2.00equiv)、Pd(OAc)₂(743mg，3.31mmol，0.03equiv)和KOAc(21.66g，220.71mmol，2.00equiv)。将所得溶液在150℃下搅拌5小时。将反应混合物用水/冰浴冷却，并用1L水稀释。将所得溶液用3x 300mL的乙酸乙酯萃取。合并的有机层用3x 300mL水和1x 300mL盐水洗涤，然后经无水硫酸钠干燥并真空浓缩。用乙酸乙酯/石油醚(1:100-1:5)在comb-flash上纯化残余物。得到20g(91％)为米色固体的4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯甲腈。

步骤2：(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)甲胺的制备

向以氮气惰性气氛吹扫并维持的3-L 3-颈圆底烧瓶中放入于四氢呋喃(1000mL)中的4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯甲腈(35g，174.77mmol，1.00equiv)。随后，在10分钟内于0℃分批添加LiAlH₄(20g，526.32mmol，3.00equiv)。将所得溶液在油浴中于60℃搅拌3小时。用水/冰浴将反应冷却至0℃，然后通过添加20mL水，20mL NaOH(15％)和60mL水淬灭。将所得溶液用200mL乙酸乙酯稀释。滤出固体。滤液经无水硫酸钠干燥并真空浓缩。用二氯甲烷/甲醇(10:1)将残余物施加到硅胶柱上。得到20g(56％)为黄色油的[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲胺。

步骤3：(2S,4R)-4-羟基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的制备

向50-mL圆底烧瓶中放入于N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中的(2S,4R)-1-[(叔丁氧基)羰基]-4-羟基吡咯烷-2-羧酸(2.7g，11.68mmol，1.20equiv)、DIEA(2.52g，19.50mmol，1.20equiv)、HATU(4.47g，11.76mmol，1.20equiv)、[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲胺(2g，9.79mmol，1.00equiv)。将所得溶液在25℃下搅拌过夜。然后通过添加20mL水淬灭反应，并用3x 20mL乙酸乙酯萃取。合并有机层，经无水硫酸钠干燥并真空浓缩。用二氯甲烷/甲醇(20:1)将残余物施加到硅胶柱上。得到1g(24％)为黄色固体的(2S,4R)-4-羟基-2-([[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]氨基甲酰基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯。

步骤4：(2S,4R)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-羧酰胺盐酸盐的制备

向1000-mL圆底烧瓶中放入(2S,4R)-4-羟基-2-([[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]氨基甲酰基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(45g，107.78mmol，1.00equiv)、氯化氢(13.44L)在二噁烷(300mL)中的溶液。将所得溶液在20℃下搅拌2小时。通过过滤收集固体。得到37.3g(98％)为黄色固体的(2S,4R)-4-羟基-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-羧酰胺盐酸盐。

步骤5：((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯的制备

向1000-mL圆底烧瓶中放入于N,N-二甲基甲酰胺(500mL)中的(2S)-2-[[(叔丁氧基)羰基]氨基]-3,3-二甲基丁酸(15.73g，68.01mmol，1.20equiv)、DIEA(29.2g，225.94mmol，4.00equiv)、HATU(25.9g，68.12mmol，1.20equiv)和(2S,4R)-2-氨基-5-氯-4-羟基-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]戊酰胺(20g，56.52mmol，1.00equiv)。将所得溶液在20℃下搅拌16小时。然后通过添加200mL水淬灭反应，并用3x 100mL乙酸乙酯萃取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物用乙酸乙酯/石油醚(2:1)施加到硅胶柱上。得到15.2g(51％)为黄色固体的N-[(2S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-([[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]氨基甲酰基)吡咯烷-1-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]氨基甲酸叔丁酯。

步骤6：(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-羧酰胺盐酸盐的制备

向500-mL圆底烧瓶中放入于二噁烷(20mL)中的N-[(2S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-([[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]氨基甲酰基)吡咯烷-1-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]氨基甲酸叔丁酯(12g，22.61mmol，1.00equiv)和氯化氢(3.584L)在二噁烷(80mL)中的溶液。将所得溶液在25℃下搅拌2小时。通过过滤收集固体。得到5.1g(48％)为黄色固体的(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-羧酰胺盐酸盐。LC/MS(ESI)m/z:431[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)δ9.84-9.82(s,1H),7.58-7.54(m,4H),4.71-4.41(m,4H),4.13-4.08(m,1H),3.86-3.71(m,2H),3.36(s,1H),2.60-2.58(s,3H),2.35-2.07(m,2H),1.19-1.12(m,9H).

1-(4-(氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)-2-((4-氯-2-羟基-5-(1-甲基环丙基)苯基)氨基)乙-1-酮盐酸盐的示例性合成

步骤1：N-(4-氯-2-甲氧基-5-(1-甲基环丙基)苯基)乙酰胺的制备

按照通过引用整体并入本文的美国专利申请公开号2014/288045A1中概述的程序制备N-(4-氯-2-甲氧基-5-(1-甲基环丙基)苯基)乙酰胺。

步骤2：N-(4-氯-2-羟基-5-(1-甲基环丙基)苯基)乙酰胺的制备

在20℃下向N-(4-氯-2-甲氧基-5-(1-甲基环丙基)苯基)乙酰胺(2.0g，7.88mmol，1.0equiv)在EtSH(20mL)中的溶液中，加入AlCl₃(10.5g，78.8mmol，1.0eq)。搅拌20小时后，将混合物用冰水淬灭。用NaHCO₃水溶液将pH调节至约9，并用EtOAc萃取混合物。合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并真空浓缩。通过硅胶柱色谱法用PE:EtOAc(1:1)纯化残余物，以得到为黄色固体的期望产物N-(4-氯-2-羟基-5-(1-甲基环丙基)苯基)乙酰胺(1.2g，产率63.6％)。LC/MS(ESI)m/z:241.1[M+1]⁺.

步骤3：2-氨基-5-氯-4-(1-甲基环丙基)苯酚的制备

在100℃下搅拌N-(4-氯-2-羟基-5-(1-甲基环丙基)苯基)乙酰胺(0.4g，2.51mmol，1.0equiv)在EtOH/con.HCl(27.5mL，10/1，v/v)中的溶液5小时。冷却至室温后，真空除去混合物以得到为褐色固体的期望产物2-氨基-5-氯-4-(1-甲基环丙基)苯酚(0.4g，产率100％)。LC/MS(ESI)m/z:198.1[M+1]⁺.

步骤4：(4-氯-2-羟基-5-(1-甲基环丙基)苯基)甘氨酸乙酯的制备

在20℃下向2-氨基-5-氯-4-(1-甲基环丙基)苯酚(0.4g，2.0mmol，1.0equiv)在MeOH(20mL)中的溶液中，加入AcOH(3滴)和乙醛酸乙酯(306mg，3.0mmol，50％，于甲苯中)。搅拌2小时后，加入NaBH₃CN(378mg，6.0mmol)。将所得溶液在50℃下搅拌20小时。然后将反应倒入乙酸乙酯和水溶液中。有机相经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱法用PE:EtOAc(10:1)纯化残余物，以得到为黄色油的(4-氯-2-羟基-5-(1-甲基环丙基)苯基)甘氨酸乙酯(0.4g，产率70.5％)。LC/MS(ESI)m/z:284.1[M+1]⁺.

步骤5：(4-氯-2-羟基-5-(1-甲基环丙基)苯基)甘氨酸的制备

在25℃下向(4-氯-2-羟基-5-(1-甲基环丙基)苯基)甘氨酸乙酯(0.4g，1.48mmol，1.0equiv)在THF/H₂O(16Ml，3/1，v/v)中的溶液中，加入LiOH(620mg，14.8mmol)。搅拌1小时后，用1M HCl将pH调节至约2。将混合物用EtOAc溶解。有机相经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩，以得到为褐色油的(4-氯-2-羟基-5-(1-甲基环丙基)苯基)甘氨酸(0.18g)。¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)δ6.66(s,1H),6.25(s,1H),5.38(q,J＝6.4Hz,1H),3.86(s,2H),1.90(s,3H),1.72(dd,J＝6.8Hz,3H).

步骤6：4-(1-(叔丁氧基羰基)氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-羧酸苄酯的制备

向哌嗪-1-羧酸苄酯(10g，45.4mmol)和3-氧代氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(8.5g，49.6mmol)在MeOH(200mL)中的溶液中，加入AcOH(3mL)。在25℃下搅拌1小时后，向混合物中加入NaBH₃CN(8.5g，136.2mmol)，并将所得混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用NaHCO₃水溶液淬灭并用EtOAc萃取。有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并浓缩。通过硅胶柱色谱法用PE:EtOAc(5:1)纯化残余物，以得到为白色固体的4-(1-(叔丁氧基羰基)氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(12.6g，产率75％)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.38-7.30(m,5H),5.13(s,2H),4.17-4.09(m,2H),3.94-3.90(m,2H),3.59-3.52(m,4H),3.09-3.04(m,1H),2.30(s,4H),1.43(s,9H).

步骤7：3-(哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯的制备

向4-(1-(叔丁氧基羰基)氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(1.7g，4.53mmol)在甲醇(50mL)中的溶液中，加入Pd/C(0.5g，10％)。将所得混合物在H₂、25℃下搅拌20小时。过滤混合物，减压蒸发以得到为无色油的3-(哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(950mg,产率87％)。

步骤8：3-(4-((4-氯-2-羟基-5-(1-甲基环丙基)苯基)甘氨酰基)哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯的制备

向3-(哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(250mg，1.03mmol)溶液中，加入DIEA(530mg，4.1mmol)、(4-氯-2-羟基-5-(1-甲基环丙基)苯基)甘氨酸(290mg，1.13mmol)和PyBOP(1.07g，2.06mmol)。将混合物在20℃下搅拌1小时。将混合物用水淬灭并用EtOAc萃取。有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并浓缩。通过硅胶柱色谱法用DCM:MeOH(50:1～20:1)纯化残余物，以得到为褐色油的3-(4-((4-氯-2-羟基-5-(1-甲基环丙基)苯基)甘氨酰基)哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(210mg，产率43％)。LC/MS(ESI)m/z:479.2[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ6.84-6.79(m,1H),6.43(s,1H),3.96-3.88(m,4H),3.82-3.79(m,2H),3.71(s,2H),3.48(d,J＝4.0Hz,2H),3.11-3.08(m,1H),2.36(d,J＝4.0Hz,4H),1.93(s,2H),1.82-1.73(m,3H),1.41(s,9H),1.26-1.23(m.2H).

步骤9：1-(4-(氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)-2-((4-氯-2-羟基-5-(1-甲基环丙基)苯基)氨基)乙-1-酮盐酸盐的制备

3-(4-((4-氯-2-羟基-5-(1-甲基环丙基)苯基)甘氨酰基)哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(210mg，0.44mmol)在二噁烷(2mL)和HCl(6M，于二噁烷中，1mL)中的溶液。将所得混合物在20℃下搅拌0.5h。浓缩混合物，以得到为白色固体的1-(4-(氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)-2-((4-氯-2-羟基-5-(1-甲基环丙基)苯基)氨基)乙-1-酮盐酸盐(120mg,产率66％)。LC/MS(ESI)m/z:379.2[M+1]⁺.

((S)-1-(((S)-1-环己基-2-((S)-2-(4-(3-羟基苯甲酰基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的示例性合成

步骤1：(S)-2-氨基甲酰基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的制备

在-10℃下向(叔丁氧基羰基)-L-脯氨酸(20.3g，94.20mmol)和三乙胺(16ml)在四氢呋喃(80ml)中的混合物中，加入2-氯乙酸甲酯(30.0g，245.9mmol)在四氢呋喃(40ml)中的溶液。搅拌30分钟后，在-10℃向反应混合物中加入氢氧化铵(30ml)。将所得混合物在室温搅拌过夜。减压蒸发挥发物至残余物，将所述残余物用乙酸乙酯(100ml)溶解，用碳酸氢钠水溶液(饱和40ml)洗涤，然后用盐水(40ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩以得到为无色油的(S)-2-氨基甲酰基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(22.0g)。

步骤2：(S)-2-硫代氨基甲酰基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的制备

在70℃搅拌(S)-2-氨基甲酰基吡咯烷-1-羧酸酯(22.0g)在四氢呋喃(80ml)和Lawesson试剂(41.8g，103.40mmol)中的混合物2小时。将所述混合物在乙酸乙酯(400ml)和水(400ml)之间分配。收集有机层，用盐水(300ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩，以得到粗残余物，将所述残余物通过硅胶快速色谱法纯化(用在己烷中的20％乙酸乙酯洗脱)，以得到为白色固体的(S)-2-硫代氨基甲酰基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(8.3g，38％产率)。LC/MS(ESI)m/z:231.0[M+1]⁺.

步骤3：(S)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)噻唑-4-羧酸乙酯的制备

在60℃搅拌(S)-2-硫代氨基甲酰基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(8.3g，40.4mmol)和3-溴-2-氧代丙酸乙酯(13.8g，56.6mmol)在乙醇(80ml)中的混合物2小时。减压蒸发挥发物以得到粗残余物，将所述残余物溶于碳酸氢钠饱和水溶液(10.6g，100mmol，于80ml水中)-四氢呋喃(80mL)中。向所得混合物中加入二碳酸二叔丁酯(8.81g，40.4mmol)，并在室温下搅拌2小时。减压蒸发挥发物，并将所得水溶液用乙酸乙酯(300ml)萃取。收集有机层，用盐水(150ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩，以得到粗残余物，将所述残余物通过硅胶快速色谱法纯化(用在己烷中的20％乙酸乙酯洗脱)，以得到为无色油的(S)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)噻唑-4-羧酸乙酯(6.8g，52％产率)。LC/MS(ESI)m/z:327.0[M+1]⁺.

步骤4：(S)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)噻唑-4-羧酸的制备

在室温下搅拌(S)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)噻唑-4-羧酸乙酯(6.8g，20.90mmol)和氢氧化钠(1.67g，41.8mmol)在甲醇(30ml)-水(30ml)中的混合物1小时。减压蒸发挥发物。用盐酸水溶液(1N)酸化所得水溶液至pH至3-4，并用乙酸乙酯(60ml)萃取。收集有机层，用盐水(20ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩以得到为白色固体的(S)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)噻唑-4-羧酸(4.5g，72％产率)。LC/MS(ESI)m/z:299.0[M+1]⁺.

步骤5：(S)-2-(4-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的制备

在0℃下向(S)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)噻唑-4-羧酸(3.88g，15.10mmol)，N,O-二甲基羟基胺盐酸盐(1.53g，15.60mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(5.03g，39.0mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(20ml)中的混合物中，加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(3.25g，16.90mmol)和1-羟基苯并三唑(2.11g，15.60mmol)，使所得混合物温热至室温，并在室温搅拌12小时。将混合物在乙酸乙酯(200ml)和水(100ml)之间分配。收集有机层，用水(100ml x 2)洗涤，然后用盐水(100ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩以得到粗残余物，将所述残余物通过硅胶快速色谱法纯化(用在己烷中的20％乙酸乙酯洗脱)，以得到为无色油的(S)-2-(4-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(3.46g，78％产率)。LC/MS(ESI)m/z:342.0[M+1]⁺.

步骤6：(S)-2-(4-(3-甲氧基苯甲酰基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的制备

在-40℃下向(S)-2-(4-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(3.3g，9.46mmol)在无水四氢呋喃(30ml)中的混合物中，滴加(3-甲氧基苯基)溴化镁(28.4ml，28.40mmol)，将混合物在-40℃下搅拌1小时。在-0℃下用氯化铵溶液(100ml)淬灭混合物。将所得混合物用乙酸乙酯(30ml x 3)萃取。收集有机层，用盐水(80ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩以得到粗残余物，将所述残余物通过硅胶快速色谱法纯化(用在己烷中的20％乙酸乙酯洗脱)，以得到为无色油的(S)-2-(4-(3-甲氧基苯甲酰基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(3.49g，95％产率)。LC/MS(ESI)m/z:389.1[M+1]⁺.

步骤7：(S)-(3-羟基苯基)(2-(吡咯烷-2-基)噻唑-4-基)甲酮的制备

在-45℃下向(S)-2-(4-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(3.49g，8.99mmol)在二氯甲烷(20ml)中的混合物中，加入三溴硼烷(4.2ml)在二氯甲烷(10ml)中的溶液，将混合物在-45℃下搅拌1小时。在-78℃下用甲醇(1ml)淬灭混合物。温热至室温后，将所得混合物在二氯甲烷(30ml)和水(30ml)之间分配。收集有机层，用盐水(15ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩，以得到粗残余物，将其通过硅胶快速色谱法纯化(用5％甲醇/二氯甲烷洗脱)以得到为无色油的(S)-2-(4-(3-甲氧基苯甲酰基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(1.25g，51％产率)。LC/MS(ESI)m/z:275.1[M+1]⁺.

步骤8：((S)-1-环己基-2-((S)-2-(4-(3-羟基苯甲酰基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯的制备

在0℃下向(S)-2-(4-(3-甲氧基苯甲酰基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(1.20g，4.38mmol)、(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-环己基乙酸(2.81g，10.95mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(5.65g，43.80mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10ml)中的混合物中，加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(2.52g，13.14mmol)，1-羟基苯并三唑(1.77g，13.14mmol)，使所得混合物温热至室温，并在室温下搅拌1小时。将混合物在乙酸乙酯(30ml)和水(30ml)之间分配。收集有机层，用盐水(15ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩以得到粗残余物，将所述残余物溶于甲醇，加入碳酸钾(1.51g，10.95mmol)，将混合物在室温搅拌2小时。将混合物过滤并减压浓缩以得到粗残余物，将所述残余物通过硅胶快速色谱法纯化(用在己烷中的20％乙酸乙酯洗脱)，以得到为无色油的((S)-1-环己基-2-((S)-2-(4-(3-羟基苯甲酰基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.35g，60％产率)。LC/MS(ESI)m/z:514.2[M+1]⁺.

步骤9：(S)-2-氨基-2-环己基-1-((S)-2-(4-(3-羟基苯甲酰基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)乙-1-酮的制备

向((S)-1-环己基-2-((S)-2-(4-(3-羟基苯甲酰基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.34g，2.61mmol)在二氯甲烷(5ml)中的混合物中，加入1M盐酸盐/二噁烷(1.0ml)，在室温下搅拌混合物1.5小时。减压蒸发挥发物以得到残余物，将所述残余物用碳酸氢钠饱和水溶液碱化，用二氯甲烷(20ml x 2)萃取。收集有机层，用盐水(15ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩以得到为浅黄色油的(S)-2-氨基-2-环己基-1-((S)-2-(4-(3-羟基苯甲酰基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)乙酮(980mg)。LC/MS(ESI)m/z:414.1[M+1]⁺.

步骤10：((S)-1-(((S)-1-环己基-2-((S)-2-(4-(3-羟基苯甲酰基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备

在室温下向(S)-2-氨基-2-环己基-1-((S)-2-(4-(3-羟基苯甲酰基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)乙酮(980mg，2.37mmol)在二氯甲烷(10ml)中的混合物，N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(5.03g，39.0mmol)中，加入(S)-(1-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(673mg，2.37mmol)在二氯甲烷(10ml)中的溶液。将所得混合物搅拌1小时。混合物用二氯甲烷(30ml)稀释并用水(30ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩以得到粗残余物，将所述残余物通过硅胶快速色谱法纯化(用在己烷中的20％乙酸乙酯洗脱)，以得到为白色固体的((S)-1-(((S)-1-环己基-2-((S)-2-(4-(3-羟基苯甲酰基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(895mg，62％产率)。LC/MS(ESI)m/z:599.1[M+1]⁺.

((S)-1-(((S)-1-环己基-2-((S)-2-(4-(4-羟基萘-1-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的示例性合成

步骤1：(S)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)丙酰氨基)-2-环己基乙酸甲酯的制备

向(2S)-2-氨基-2-环己基-乙酸甲酯(1.60g，7.70mmol，1.00eq，氯化氢)和(2S)-2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]丙酸(1.57g，7.70mmol，1.00eq)在二氯甲烷(20mL)中的混合物中一次性加入O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(4.39g，11.56mmol，1.50eq)和三乙胺(2.34g，23.11mmol，3.22mL，3.00eq)。将混合物在30℃下搅拌12小时。将反应混合物用水(50mL x 2)洗涤，并将有机相真空浓缩。通过柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)残余物以得到为白色固体的化合物(2S)-2-[[(2S)-2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]丙酰基]氨基]-2-环己基-乙酸甲酯(2.40g，6.73mmol，87％产率)。LC/MS(ESI)m/z:357.2[M+1]⁺.

步骤2：(S)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)丙酰氨基)-2-环己基乙酸的制备

在0℃下，在氮气下向(2S)-2-[[(2S)-2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]丙酰基]氨基]-2-环己基-乙酸甲酯(2.40g，6.73mmol，1.00eq)在四氢呋喃(15mL)中的混合物中分批加入氢氧化锂(0.42g，10.10mmol，1.50eq)在水(5mL)中的混合物。将混合物在20℃下搅拌1小时。将混合物用水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL x 2)萃取。用氯化氢溶液(1M)将水相的pH调节至约5。然后将其用乙酸乙酯(40mL x 3)萃取。合并的有机层用水(80mL x 2)和盐水(80mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到产物。得到为白色固体的化合物(2S)-2-[[(2S)-2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]丙酰基]氨基]-2-环己基-乙酸(2.20g，6.42mmol，95％产率)。LC/MS(ESI)m/z:287.1[M-55]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.01-6.55(m,1H),4.74(br s,1H),4.52(br dd,J＝5.0,8.3Hz,1H),2.81(d,J＝3.3Hz,3H),1.95-1.81(m,1H),1.79-1.59(m,4H),1.49(s,8H),1.40-1.18(m,5H),1.16-0.96(m,3H).

步骤3：1-(4-氟萘-1-基)乙-1-酮的制备

在0℃下向1-氟萘(5.00g，34.21mmol，4.42mL，1.00eq)和氯化铝(6.84g，51.31mmol，2.80mL，1.50eq)在二氯甲烷(50mL)中的混合物中，加入于二氯甲烷(10mL)中的乙酰氯(3.22g，41.05mmol，2.93mL，1.20eq)。将混合物在0℃下搅拌0.5小时。然后将混合物在20℃下搅拌4小时。将混合物倒入水(60mL)中，将其用二氯甲烷(50mL x2)萃取。合并的有机层用水(80mL x 2)和盐水(80mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/0至20/1)残余物，以得到为无色油的化合物1-(4-氟-1-萘基)乙酮(5.40g，28.69mmol，84％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.94-8.86(m,1H),8.17(d,J＝8.3Hz,1H),7.98(dd,J＝5.4,8.1Hz,1H),7.71-7.65(m,1H),7.64-7.58(m,1H),7.16(dd,J＝8.1,9.7Hz,1H),2.84-2.67(m,3H).

步骤4：1-(4-(苄氧基)萘-1-基)乙-1-酮的制备

向苯基甲醇(4.48g，41.45mmol，4.31mL，1.50eq)在二甲基甲酰胺(60mL)中的混合物中，加入叔丁醇钾(4.65g，41.45mmol，1.50eq)。将混合物在20℃下搅拌0.5小时。然后将1-(4-氟-1-萘基)乙酮(5.20g，27.63mmol，1.00eq)加入到混合物中。将混合物在20℃下搅拌2小时。将混合物用水(200mL)稀释，用乙酸乙酯(100mL x 2)萃取。合并的有机层用水(100mL x 2)和盐水(100mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝30/1至10/1)残余物，以得到为白色固体的化合物1-(4-苄氧基-1-萘基)乙酮(7.64g，22.80mmol，83％产率)。

步骤5：1-(4-(苄氧基)萘-1-基)-2-溴乙-1-酮的制备

在20℃下，在N₂下向1-(4-苄氧基-1-萘基)乙酮(5.00g，18.09mmol，1.00eq)在二氯甲烷(300mL)中的混合物中，分批加入液体溴(2.89g，18.09mmol，932.78uL，1.00eq)。将混合物搅拌2小时。通过添加饱和硫代硫酸钠(50mL)来淬灭反应混合物，并且真空浓缩有机相。通过柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝30/1)残余物，以得到为白色固体的化合物1-(4-苄氧基-1-萘基)-2-溴-乙酮(4.50g，12.67mmol，70％产率)。LC/MS(ESI)m/z:354.9[M+1]⁺.

步骤6：(S)-2-(4-(4-(苄氧基)萘-1-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的制备

在氮气下向1-(4-苄氧基-1-萘基)-2-溴-乙酮(3.90g，10.98mmol，1.00eq)和(2S)-2-硫代氨基甲酰基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(3.79g，16.47mmol，1.50eq)在乙醇(80mL)中的混合物中，加入吡啶(0.87g，10.98mmol，886.16uL，1.00eq)。将混合物加热至80℃并搅拌1小时。将反应混合物真空浓缩。通过柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)残余物，以得到为白色固体的化合物(2S)-2-[4-(4-苄氧基-1-萘基)噻唑-2-基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(5.30g，10.89mmol，99％产率)。LC/MS(ESI)m/z:487.3[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.49-8.37(m,1H),8.35-8.31(m,1H),8.23(br s,1H),7.61-7.48(m,5H),7.47-7.33(m,3H),7.27(s,1H),7.26(br s,1H),6.93(d,J＝7.9Hz,1H),5.32(s,2H),3.77-3.42(m,2H),2.48-2.25(m,2H),2.14-1.94(m,3H),1.57-1.34(m,9H).

步骤7：(S)-4-(4-(苄氧基)萘-1-基)-2-(吡咯烷-2-基)噻唑的制备

在N₂下向(2S)-2-[4-(4-苄氧基-1-萘基)噻唑-2-基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(2.00g，4.11mmol，1.00eq)在二氯甲烷(36mL)中的混合物中一次性加入三氟乙酸(18.12g，158.89mmol，11.76mL，38.66eq)。将混合物在30℃下搅拌1小时。将反应混合物真空浓缩。得到为白色固体的化合物4-(4-苄氧基-1-萘基)-2-[(2S)-吡咯烷-2-基]噻唑(2.06g，三氟乙酸)。LC/MS(ESI)m/z:387.2[M+1]⁺.

步骤8：((S)-1-(((S)-2-((S)-2-(4-(4-(苄氧基)萘-1-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)-1-环己基-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备

向(2S)-2-[[(2S)-2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]丙酰基]氨基]-2-环己基-乙酸(1.15g，3.36mmol，1eq)、4-(4-苄氧基-1-萘基)-2-[(2S)-吡咯烷-2-基]噻唑(2.02g，4.03mmol，1.2eq，三氟乙酸)和4-甲基吗啉(1.36g，13.43mmol，1.48mL，4eq)在四氢呋喃(40mL)和二甲基甲酰胺(4mL)中的混合物中，加入4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基-吗啉-4-鎓；氯化物；水合物(1.98g，6.72mmol，2eq)。将混合物在20℃下搅拌12小时。通过添加水(30mL)淬灭反应混合物，并用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取，然后真空浓缩有机相。通过柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)残余物，以得到为白色固体的化合物N-[(1S)-2-[[(1S)-2-[(2S)-2-[4-(4-苄氧基-1-萘基)噻唑-2-基]吡咯烷-1-基]-1-环己基-2-氧代-乙基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(0.80g，1.09mmol，33％产率，97％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:711.3[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.46-8.39(m,1H),8.25-8.18(m,1H),8.03(s,1H),7.59-7.49(m,5H),7.47-7.34(m,3H),7.25(s,1H),6.92(d,J＝8.1Hz,1H),5.70-5.61(m,1H),4.79-4.59(m,2H),3.96-3.78(m,2H),2.97(s,2H),2.89(s,2H),2.82(s,3H),2.47(br s,1H),2.37-2.16(m,2H),2.05(s,2H),1.88-1.54(m,17H),1.50(s,9H),1.53-1.45(m,1H),1.35(d,J＝7.1Hz,3H),1.30-0.93(m,9H).

步骤9：((S)-1-(((S)-1-环己基-2-((S)-2-(4-(4-羟基萘-1-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备

在氮气下向N-[(1S)-2-[[(1S)-2-[(2S)-2-[4-(4-苄氧基-1-萘基)噻唑-2-基]吡咯烷-1-基]-1-环己基-2-氧代-乙基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(0.50g，0.70mmol，1.00eq)在甲醇(10mL)中的混合物中，一次性加入氢氧化钯(0.36g，2.53mmol，3.60eq)和氢气(0.01g，0.70mmol，1.00eq)。将混合物在20℃下搅拌16小时。过滤反应混合物，并将滤液真空浓缩。得到为白色固体的化合物N-[(1S)-2-[[(1S)-1-环己基-2-[(2S)-2-[4-(4-羟基-1-萘基)噻唑-2-基]吡咯烷-1-基]-2-氧代-乙基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(0.3g，0.48mmol，69％产率)。LC/MS(ESI)m/z:621.3[M+1]⁺.

((S)-1-(((S)-1-环己基-2-((S)-2-(4-(4-(2-(2-(2-(甲基氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)萘-1-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的示例性合成

步骤1：((S)-1-(((S)-2-((S)-2-(4-(4-(2-(2-(2-溴乙氧基)乙氧基)乙氧基)萘-1-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)-1-环己基-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备

在氮气下向N-[(1S)-2-[[(1S)-1-环己基-2-[(2S)-2-[4-(4-羟基-1-萘基)噻唑-2-基]吡咯烷-1-基]-2-氧代-乙基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(0.30g，0.48mmol，1.00eq)和1,2-双(2-溴乙氧基)乙烷(0.27g，0.97mmol，2.00eq)在乙腈(12mL)中的混合物中，加入碳酸钾(0.23g，1.69mmol，3.50eq)。将混合物加热至80℃并搅拌12小时。将反应混合物用水(10mL)洗涤，并用乙酸乙酯(20mL)萃取，然后将有机相真空浓缩。通过柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)残余物，以得到为白色固体的化合物N-[(1S)-2-[[(1S)-2-[(2S)-2-[4-[4-[2-[2-(2-溴乙氧基)乙氧基]乙氧基]-1-萘基]噻唑-2-基]吡咯烷-1-基]-1-环己基-2-氧代-乙基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(0.15g，0.18mmol，38％产率)。LC/MS(ESI)m/z:817.3[M+1]⁺.

步骤2：((S)-1-(((S)-1-环己基-2-((S)-2-(4-(4-(2-(2-(2-(甲基氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)萘-1-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备

将N-[(1S)-2-[[(1S)-2-[(2S)-2-[4-[4-[2-[2-(2-溴乙氧基)乙氧基]乙氧基]-1-萘基]噻唑-2-基]吡咯烷-1-基]-1-环己基-2-氧代-乙基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(0.14g，0.17mmol，1.00eq)和甲胺/乙醇(10mL)的混合物加热至60℃并搅拌12小时。将反应混合物真空浓缩。得到为白色固体的化合物N-[(1S)-2-[[(1S)-1-环己基-2-[(2S)-2-[4-[4-[2-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-萘基]噻唑-2-基]吡咯烷-1-基]-2-氧代-乙基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(0.13g)。LC/MS(ESI)m/z:766.4[M+1]⁺.

(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的示例性合成

步骤1：(2-(2-(2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙氧基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备

向2-[2-[2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙氧基]乙氧基]乙基4-甲基苯磺酸酯(400mg，0.96mmol，1eq)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液中，加入(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)钾(213mg，1.15mmol，1.2eq)。将混合物在50℃下搅拌12小时。混合物用水(20mL)稀释，水相用乙酸乙酯(20mL x 3)萃取。合并的有机相用盐水(20mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过制备型TLC纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)残余物，以得到为无色油的N-[2-[2-[2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙氧基]乙氧基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(300mg，0.76mmol，79％产率)。LC/MS(ESI)m/z:415.1[M+23]⁺.

步骤2：(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备

向N-[2-[2-[2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙氧基]乙氧基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(300mg，0.76mmol，1eq)在乙醇(5mL)中的溶液中，加入水合肼(382mg，7.64mmol，0.4mL，10eq)。将混合物在80℃下搅拌12小时。将混合物用水(20mL)稀释，并将水相用二氯甲烷(20mL x 3)萃取。合并的有机相用盐水(20mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过制备型TLC纯化(二氯甲烷/甲醇＝5/2)残余物，以得到为无色油的N-[2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(120mg，0.46mmol，59％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ3.66-3.56(m,6H),3.55-3.49(m,2H),3.40(br s,2H),2.99-2.79(m,5H),1.74(br s,3H),1.46(s,9H).

(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟苯基)-4-(4-氯-2-氟苯基)-4-氰基-N-(2-甲氧基-4-((2-(2-(2-(甲基氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酰基)苯基)-5-新戊基吡咯烷-2-羧酰胺的示例性合成

步骤1：(Z)-3-(3-氯-2-氟苯基)-2-(4-氯-2-氟苯基)丙烯腈的制备

在氮气气氛下，在0℃下向3-氯-2-氟-苯甲醛(13.7g，86.68mmol，1.05eq)和2-(4-氯-2-氟-苯基)乙腈(14g，82.56mmol，1eq)在甲醇(200mL)中的混合物中，滴加甲醇钠(13.4g，247.67mmol，3eq)在甲醇(40mL)中的溶液。添加期间产物开始沉淀。将悬浮液在45℃下搅拌5小时。过滤固体，并用水(200mL)和甲醇(50mL)洗涤，然后真空干燥以得到为白色固体的(Z)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-2-(4-氯-2-氟-苯基)丙-2-烯腈(24g，77.39mmol，93％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.20-8.10(m,1H),7.81(s,1H),7.64-7.49(m,2H),7.33-7.20(m,3H).

步骤2：4-(2-(((苄氧基)羰基)氨基)乙酰氨基)-3-甲氧基苯甲酸乙酯的制备

在氮气气氛下，在0℃下向2-(苄氧基羰基氨基)乙酸(5.9g，28.17mmol，1.1eq)和4-氨基-3-甲氧基-苯甲酸乙酯(5g，25.61mmol，1eq)在四氢呋喃(50mL)中的混合物中，加入O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(11.7g，30.74mmol，1.2eq)和N,N-二异丙基乙胺(6.6g，51.23mmol，8.9mL，2eq)。将混合物温热至20℃并搅拌12小时。用水(100mL)稀释混合物，并用乙酸乙酯(100mL x 3)萃取。合并的有机相用盐水(200mL x 2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10/1，3/1至1/1)残余物，以得到为黄色油的4-[[2-(苄氧基羰基氨基)乙酰基]氨基]-3-甲氧基-苯甲酸乙酯(9g，23.29mmol，91％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.41(br d,J＝8.4Hz,2H),7.68(br d,J＝8.4Hz,1H),7.53(s,1H),7.42-7.28(m,5H),5.61(br s,1H),5.18(s,2H),4.42-4.32(m,2H),4.11-4.01(m,2H),3.88(s,3H),1.40(t,J＝7.2Hz,3H).

步骤3：4-(2-氨基乙酰氨基)-3-甲氧基苯甲酸乙酯的制备

在氮气气氛下向4-[[2-(苄氧基羰基氨基)乙酰基]氨基]-3-甲氧基-苯甲酸乙酯(8.8g，22.77mmol，1eq)在乙醇(100mL)中的溶液中，加入钯炭活性催化剂(1g，10％纯度)。将悬浮液在真空下脱气并用氢气吹扫几次。将混合物在氢气(15psi)下在50℃下搅拌24小时。然后将混合物在氢气(50psi)下在50℃下搅拌5小时。将反应混合物过滤并浓缩滤液。通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10/1，3/1至1/1)粗产物，以得到为黄色油的4-[(2-氨基乙酰基)氨基]-3-甲氧基-苯甲酸乙酯(3.2g，12.69mmol，56％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ10.00(br s,1H),8.53(d,J＝8.4Hz,1H),7.71(dd,J＝1.6,8.4Hz,1H),7.57(d,J＝1.6Hz,1H),4.38(q,J＝7.2Hz,2H),3.97(s,3H),3.53(s,2H),1.40(t,J＝7.2Hz,3H).

步骤4：(E)-4-(2-((3,3-二甲基亚丁基)氨基)乙酰氨基)-3-甲氧基苯甲酸乙酯的制备

在20℃下向4-[(2-氨基乙酰基)氨基]-3-甲氧基-苯甲酸乙酯(3.2g，12.69mmol，1eq)和3,3-二甲基丁醛(1.3g，12.94mmol，1.6mL，1.02eq)在二氯甲烷(50mL)中的混合物中，加入硫酸镁(3.0g，25.37mmol，2eq)。将混合物搅拌20小时。将混合物过滤并将滤液在真空中浓缩以得到为黄色油的4-[[2-[(E)-3,3-二甲基亚丁基氨基]乙酰基]氨基]-3-甲氧基-苯甲酸乙酯(4.24g，12.68mmol，100％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.45(br s,1H),8.53(d,J＝8.4Hz,1H),7.89-7.82(m,1H),7.72-7.68(m,1H),7.58-7.53(m,1H),4.39-4.34(m,2H),4.25-4.20(m,2H),3.94(s,3H),2.30-2.27(m,2H),1.42-1.38(m,3H),1.04(s,9H).

步骤5：4-((2R,3S,4R,5R)-3-(3-氯-2-氟苯基)-4-(4-氯-2-氟苯基)-4-氰基-5-新戊基吡咯烷-2-羧酰氨基)-3-甲氧基苯甲酸乙酯的制备

向[1-(2-二苯基磷烷基-1-萘基)-2-萘基]-二苯基-磷烷(530mg，0.85mmol，0.12eq)在2-甲基四氢呋喃(10mL)中的溶液中，加入乙酰氧基铜(95mg，0.78mmol，0.11eq)。将混合物在20℃下搅拌30分钟。在氮气氛下于20℃下加入在2-甲基四氢呋喃(100mL)中的4-[[2-[(E)-3,3-二甲基亚丁基氨基]乙酰基]氨基]-3-甲氧基-苯甲酸乙酯(2.6g，7.80mmol，1.1eq)和(Z)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-2-(4-氯-2-氟-苯基)丙-2-烯腈(2.2g，7.09mmol，1eq)。然后加入三乙胺(717mg，7.09mmol，1.0mL，1eq)。将混合物在20℃下搅拌36小时。用水(100mL)稀释合混物，并用乙酸乙酯(100mL x 3)萃取。合并的有机相用盐水(100mL x 2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10/1至5/1)残余物，以得到为黄色固体的4-[[(2R,3S,4R,5R)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基丙基)吡咯烷-2-羰基]氨基]-3-甲氧基-苯甲酸乙酯(3g，4.65mmol，65％产率)。

步骤6：4-((2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟苯基)-4-(4-氯-2-氟苯基)-4-氰基-5-新戊基吡咯烷-2-羧酰氨基)-3-甲氧基苯甲酸的制备

在20℃下向4-[[(2R,3S,4R,5R)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基丙基)吡咯烷-2-羰基]氨基]-3-甲氧基-苯甲酸乙酯(3.0g，4.65mmol，1eq)在水(5mL)，四氢呋喃(5mL)和甲醇(5mL)中的混合物中，加入氢氧化钠(937mg，23.44mmol，5.04eq)。将混合物在20℃下搅拌12小时。然后将混合物加热至50℃并搅拌另外12小时。将混合物用水(20mL)稀释，并用1N盐酸酸化至pH＝5。添加期间产物开始沉淀。过滤固体并真空干燥以得到粗产物。将固体与乙腈(100mL)研磨，以得到为白色固体的4-[[(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基丙基)吡咯烷-2-羰基]氨基]-3-甲氧基-苯甲酸(1.2g，1.91mmol，41％产率，98％ee，95％de，98％纯度)。¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.38(d,J＝8.4Hz,1H),7.76-7.70(m,1H),7.69-7.62(m,2H),7.44-7.30(m,3H),7.28-7.19(m,2H),4.79-4.76(m,1H),4.64(d,J＝8.0Hz,1H),4.16-4.04(m,2H),3.98(s,3H),1.76-1.66(m,1H),1.36(br d,J＝14.0Hz,1H),1.04(s,9H).

步骤7：(2-(2-(2-(4-((2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟苯基)-4-(4-氯-2-氟苯基)-4-氰基-5-新戊基吡咯烷-2-羧酰氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备

向4-[[(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基丙基)吡咯烷-2-羰基]氨基]-3-甲氧基-苯甲酸(200mg，0.32mmol，1eq)和N-[2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(85mg，0.32mmol，1eq)在N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中的混合物中，加入1-羟基苯并三唑(65mg，0.48mmol，1.5eq)，N-(3-二甲基氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺盐酸盐(93mg，0.48mmol，1.5eq)和N,N-二异丙基乙胺(125mg，0.97mmol，0.17mL，3eq)。将混合物在20℃下搅拌12小时。将混合物用水(25mL)淬灭。然后将其用乙酸乙酯(25mL x 3)萃取。合并的有机层用水(35mL x 2)和盐水(35mL x2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过制备型TLC纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)残余物。得到为浅黄色固体的N-[2-[2-[2-[[4-[[(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基丙基)吡咯烷-2-羰基]氨基]-3-甲氧基-苯甲酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(230mg，0.26mmol，82％产率)。LC/MS(ESI)m/z:860.4[M+1]⁺.

步骤8：(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟苯基)-4-(4-氯-2-氟苯基)-4-氰基-N-(2-甲氧基-4-((2-(2-(2-(甲基氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酰基)苯基)-5-新戊基吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向N-[2-[2-[2-[[4-[[(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基丙基)吡咯烷-2-羰基]氨基]-3-甲氧基-苯甲酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(230mg，0.26mmol，1eq)在二氯甲烷(8mL)中的混合物中，加入三氟乙酸(2.00mL)。将混合物在20℃下搅拌0.5小时。减压浓缩混合物以得到产物。得到为浅黄色油的(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基丙基)-N-[2-甲氧基-4-[2-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]乙基氨基甲酰基]苯基]吡咯烷-2-羧酰胺(230mg，三氟乙酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:760.3[M+1]⁺.

(2S,4R)-4-羟基-N-(2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-(3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰胺的示例性合成

步骤1：2-(3-甲基异噁唑-5-基)乙酸的制备

在氮气下，在-78℃下向3,5-二甲基异噁唑(15g，154.46mmol，15mL，1eq)在四氢呋喃(150mL)中的溶液中，滴加正丁基锂(2.5M，77mL，1.25eq)，将混合物在-55℃下搅拌30分钟，然后将二氧化碳鼓入混合物中30分钟，将混合物在25℃下搅拌1小时。通过饱和氯化铵溶液(50mL)淬灭混合物，用乙酸乙酯(50mL)萃取混合物。用盐酸水溶液(2M)调节水相至pH＝2，用乙酸乙酯(50mL，三次)萃取混合物，将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，并浓缩滤液以得到为褐色固体的2-(3-甲基异噁唑-5-基)乙酸(10g，70.86mmol，46％产率)。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.74(br s,1H),6.24(s,1H),3.83(s,2H),2.20(s,3H).

步骤2：2-(3-甲基异噁唑-5-基)乙酸甲酯的制备

在0℃下，向2-(3-甲基异噁唑-5-基)乙酸(10g，70.86mmol，1eq)在甲醇(100mL)中的溶液中，加入亚硫酰氯(12.65g，106.29mmol，7.71mL，1.5eq)，并将混合物在50℃搅拌4小时。将混合物浓缩以得到粗产物。将粗产物用乙酸乙酯(200mL)稀释，并用水(200mL)洗涤，然后用饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)和盐水(50mL)洗涤，有机相经无水干燥，过滤并浓缩滤液以得到为褐色油的2-(3-甲基异噁唑-5-基)乙酸甲酯(10g，64.45mmol，91％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ6.11(s,1H),3.80(s,2H),3.76(s,3H),2.30(s,3H).

步骤3：3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酸甲酯的制备

在0℃下向2-(3-甲基异噁唑-5-基)乙酸甲酯(10g，64.45mmol，1eq)在四氢呋喃(100mL)中的溶液中，加入氢化钠(3.87g，96.68mmol，60％纯度，1.5eq)，然后在0℃下加入2-碘丙烷(13.15g，77.34mmol，7.74mL，1.2eq)，将混合物在25℃下搅拌2小时。加入另外的2-碘丙烷(2.55g，15.00mmol，1.5mL)，并将混合物在25℃下搅拌10小时。将混合物用盐酸水溶液(1M，300mL)淬灭，并将混合物用乙酸乙酯(200mL，三次)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，并浓缩滤液，以得到为褐色油的3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酸甲酯(13g)。

步骤4：3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酸的制备

向3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酸甲酯(12.7g，64.39mmol，1eq)在甲醇(90mL)和水(60mL)中的溶液中，加入氢氧化钠(12.88g，321.96mmol，5eq)，将混合物在25℃搅拌2小时。浓缩混合物以除去甲醇，然后将残余物用水(200mL)稀释并用乙酸乙酯(200mL)萃取，水相用盐酸水溶液(2M)调节至pH＝3，然后将混合物用二氯甲烷(200mL，三次)萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，并浓缩滤液，以得到为褐色油的粗产物，将这一粗产物通过快速制备型HPLC纯化，除去乙腈的级分，残余物用二氯甲烷(300mL x 5)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，并浓缩滤液，以得到为白色固体的产物3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酸(7.5g，40.94mmol，63％产率)。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ6.26(s,1H),3.58(d,J＝8.7Hz,1H),2.33-2.23(m,1H),2.21(s,3H),0.95(d,J＝6.7Hz,3H),0.82(d,J＝6.8Hz,3H).

步骤5：2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯甲腈的制备

向4-溴-2-羟基-苯甲腈(15g，75.75mmol，1eq)和4-甲基噻唑(20.28g，204.53mmol，19mL，2.7eq)在N-甲基吡咯烷酮(150mL)中的溶液中，加入乙酸钾(22.30g，227.25mmol，3eq)和乙酸钯(1.70g，7.58mmol，0.1eq)，将混合物在110℃在氮气下搅拌6小时。混合物用水(500mL)淬灭，水相用乙酸乙酯(300mL x 3)萃取。合并的有机相用盐水(200mL，两次)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，然后将甲基叔丁基醚(500mL)加入到混合物中，并用水(100mL)和盐水(100mL，两次)洗涤有机相。通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3/1至1/1)残余物。得到为黄色固体的化合物2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯甲腈(11g，50.87mmol，67％产率)。

步骤6：2-(氨基甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯酚的制备

在0℃下向2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯甲腈(11g，50.87mmol，1eq)在四氢呋喃(150mL)中的溶液中，加入氢化铝锂(7.72g，203.46mmol，4eq)，将混合物在50℃下搅拌3小时。在0℃下用水(8mL)淬灭混合物，然后加入15％氢氧化钠水溶液(8mL)，然后加入水(8mL)、无水硫酸钠(30g)，在25℃下搅拌混合物30分钟，过滤且固体加入二氯甲烷/甲醇(4/1，50mL)，将混合物在25℃下搅拌1小时，过滤并将合并的滤液浓缩，以得到为褐色固体的2-(氨基甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯酚(7g，31.78mmol，62％产率)。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.82(s,1H),6.90(d,J＝7.5Hz,1H),6.52(d,J＝1.6Hz,1H),6.25(dd,J＝1.7,7.5Hz,1H),3.59(s,2H),2.41(s,3H).

步骤7：(2S,4R)-4-羟基-2-((2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的制备

向2-(氨基甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯酚(7g，31.78mmol，1eq)和(2S,4R)-1-叔丁氧基羰基-4-羟基-吡咯烷-2-羧酸(7.35g，31.78mmol，1eq)在二甲基甲酰胺(70mL)中的溶液中，加入二异丙基乙胺(12.32g，95.33mmol，16.60mL，3eq)，然后加入HATU(13.29g，34.95mmol，1.1eq)，将混合物在25℃下搅拌2小时。加入另外的(2S,4R)-1-叔丁氧基羰基-4-羟基-吡咯烷-2-羧酸(7.35g，31.78mmol，1eq)和HATU(12.08g，31.78mmol，1eq)，将混合物在25℃下搅拌5小时。将混合物用水(300mL)稀释，并用乙酸乙酯(300mL，两次)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，并浓缩滤液，以得到为褐色油的粗产物，将这一粗产物溶于四氢呋喃/水(2/1，150mL)中，并加入氢氧化锂(3g)，将混合物在25℃下搅拌1小时。将混合物用水(300mL)稀释，并用盐酸水溶液(0.5M)调节至pH＝7，混合物用乙酸乙酯(300mL，两次)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，并浓缩滤液以得到粗产物，将这一粗产物通过硅胶色谱法纯化(在二氯甲烷中的2-10％甲醇)，以得到为黄色油的(2S,4R)-4-羟基-2-[[2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基氨基甲酰基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(6.9g，15.92mmol，50％产率)。LC/MS(ESI)m/z:434.1[M+1]⁺.

步骤8：(2S,4R)-4-羟基-N-(2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向(2S,4R)-4-羟基-2-[[2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基氨基甲酰基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(6.9g，15.92mmol，1eq)在甲醇(30mL)中的溶液中，加入氯化氢/二噁烷(4M，30mL，7.54eq)，将混合物在25℃下搅拌20分钟。将混合物浓缩以得到为黄色固体的产物，将这一粗产物用乙酸乙酯和石油醚(1:1，20mL)研磨，过滤混合物，并通过旋转蒸发仪干燥固体，以得到为黄色固体的产物(2S,4R)-4-羟基-N-[[2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-羧酰胺(4.83g，13.06mmol，82％产率，盐酸)。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.03(br s,1H),9.11-8.95(m,2H),8.66(br s,1H),7.20(d,J＝7.9Hz,1H),7.04(d,J＝1.3Hz,1H),6.90(dd,J＝1.7,7.8Hz,1H),4.44(br s,1H),4.40-4.26(m,3H),3.41-3.27(m,1H),3.13-3.02(m,1H),2.46(s,3H),2.33(br dd,J＝7.5,12.7Hz,1H),1.96-1.85(m,1H),1.33-1.24(m,1H).

步骤9：(2S,4R)-4-羟基-N-(2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-(3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向(2S,4R)-4-羟基-N-[[2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-羧酰胺(4.83g，13.06mmol，1eq，盐酸盐)在二甲基甲酰胺(60mL)中的溶液中，加入二异丙基乙胺(5.06g，39.18mmol，6.82mL，3eq)，然后加入3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酸(2.39g，13.06mmol，1eq)和HATU(5.46g，14.36mmol，1.1eq)，将混合物在25℃搅拌2小时。将混合物用水(200mL)稀释，并用乙酸乙酯(300mL，两次)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，并浓缩滤液以得到粗产物。将这一粗产物通过制备型HPLC纯化，除去乙腈级分，并将残余物用二氯甲烷(300mL x 5)萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，并浓缩滤液，以得到为白色固体的产物(2S,4R)-4-羟基-N-[[2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-1-[3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羧酰胺(4.0g，8.02mmol，61％产率)。¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.85(s,1H),7.39-7.23(m,1H),6.98-6.86(m,2H),6.31-6.06(m,1H),4.65-4.28(m,4H),3.94-3.48(m,3H),2.52-2.45(m,3H),2.42-2.31(m,1H),2.26-2.15(m,4H),2.13-2.03(m,1H),1.08-1.01(m,3H),0.92-0.81(m,3H).

2-(2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯的示例性合成

步骤1：2-(2-羟基乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯的制备

在0℃下向2-(2-羟基乙氧基)乙醇(55.66g，524.53mmol，49.70mL，2eq)在四氢呋喃(500mL)中的溶液中，加入氢化钠(6.29g，157.27mmol，60％纯度，0.6eq)，并在氮气下搅拌0.5小时。然后，向混合物中加入对甲苯磺酰氯(50g，262.26mmol，1eq)，温热至25℃并搅拌6小时。将混合物倒入饱和氯化铵溶液(200mL)中并搅拌15分钟。用乙酸乙酯(200mL x 2)萃取水相。合并的有机相用盐水(200mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10/1至1/1)残余物，以得到为黄色油的2-(2-羟基乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯(35g，134.46mmol，51％产率)。LC/MS(ESI)m/z:261.0[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.76-7.72(m,2H),7.28(d,J＝8.0Hz,2H),4.15-4.02(m,2H),3.66-3.55(m,4H),3.49-3.44(m,2H),2.38(s,3H).

步骤2：2-(2-(甲基氨基)乙氧基)乙-1-醇的制备

将2-(2-羟基乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯(3g，11.52mmol，1eq)在甲胺(11.93g，115.25mmol，10eq)中的混合物脱气并用氮气吹扫3次，然后将混合物在氮气下于85℃搅拌16小时。将反应混合物减压浓缩以得到残余物。得到为黄色油的化合物2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙醇(1.37g，11.50mmol，99％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ3.72-3.47(m,8H),2.67-2.63(m,3H).

步骤3：(2-(2-羟基乙氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备

将2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙醇(1.37g，11.50mmol，1eq)和二碳酸二叔丁酯(3.01g，13.80mmol，3.17mL，1.2eq)在二氯甲烷(20mL)中的混合物脱气并用氮气吹扫3次，然后将混合物在氮气下于25℃搅拌16小时。通过添加200mL水淬灭反应混合物，并用乙酸乙酯(300mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水(100mL x 3)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝50/1至5/1)残余物。得到为黄色油的化合物N-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(1.7g，7.75mmol，67％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ3.77-3.68(m,2H),3.66-3.55(m,4H),3.42(br s,2H),2.92(s,3H),1.48-1.25(m,9H).

步骤4：2-(2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯的制备

将N-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(1.1g，5.02mmol，1eq)，p-甲苯磺酰氯(1.91g，10.03mmol，2eq)和三乙胺(1.52g，15.05mmol，2.09mL，3eq)在二氯甲烷(20mL)中的混合物脱气并用氮气吹扫3次，然后将混合物在氮气下于25℃搅拌12小时。通过添加200mL水淬灭反应混合物，并用乙酸乙酯(300mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水(100mL x 3)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝30/1至10/1)残余物。得到为无色油的化合物2-[2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙氧基]乙基4-甲基苯磺酸酯(1.6g，4.28mmol，85％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.73(d,J＝8.4Hz,2H),7.28(d,J＝8.0Hz,2H),4.12-4.01(m,2H),3.60-3.52(m,2H),3.45(br s,2H),3.25(br s,2H),2.78(s,3H),2.38(s,3H),1.37(s,9H).

(2-(2-(2-(((2S,4R)-4-羟基-1-((R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰氨基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯和(2-(2-(2-(((2S,4R)-4-羟基-1-((S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰氨基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的示例性合成

步骤1：(2-(2-(2-(((2S,4R)-4-羟基-1-(3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰氨基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备

将2-[2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙氧基]乙基4-甲基苯磺酸酯(70mg，0.18mmol，1eq)、(2S,4R)-4-羟基-N-[[2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-1-[3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羧酰胺(93mg，0.18mmol，1eq)和碳酸钾(51mg，0.37mmol，2eq)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的混合物脱气并用氮气吹扫3次，然后将混合物在氮气下于80℃搅拌4小时。通过添加水(10mL)淬灭反应混合物，并用乙酸乙酯(20mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水(10mL x 3)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过制备型TLC纯化(9％甲醇/二氯甲烷)残余物，以得到为黄色油的化合物N-[2-[2-[2-[[[(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]甲基]-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基]乙氧基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.14mmol，76％产率)。LC/MS(ESI)m/z:722.4[M+23]⁺.

步骤2：(2-(2-(2-(((2S,4R)-4-羟基-1-((R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰氨基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯和(2-(2-(2-(((2S,4R)-4-羟基-1-((S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰氨基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备

通过制备型SFC纯化N-[2-[2-[2-[[[(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]甲基]-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基]乙氧基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(250mg，0.35mmol，1eq)。得到为无色油的化合物(2-(2-(2-(((2S,4R)-4-羟基-1-((R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰氨基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(90mg，0.12mmol，33％产率，94％纯度)和(2-(2-(2-(((2S,4R)-4-羟基-1-((S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰氨基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(90mg，0.12mmol，35％产率，99％纯度)。

2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯的示例性合成

步骤1：3-(苄氧基)异噁唑-5-羧酸甲酯的制备

向3-羟基异噁唑-5-羧酸甲酯(7.20g，50.31mmol，1.00eq)在丙酮(150mL)中的溶液中加入碳酸钾(13.91g，100.62mmol，2.00eq)。将混合物加热至80℃持续1小时，然后加入(溴甲基)苯(10.33g，60.37mmol，1.20eq)。将所得混合物在80℃下搅拌另外3小时。滤出固体，并将滤液真空浓缩。通过硅胶柱色谱法进一步纯化(石油醚:乙酸＝15:1至10:1)残余物，以得到为无色油的3-苄氧基异噁唑-5-羧酸甲酯(9.50g，40.73mmol，81％产率)。油在15℃静置15小时后固化。LC/MS(ESI)m/z:256.0[M+23]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.49-7.41(m,5H),6.60(s,1H),5.34(s,2H),3.97(s,3H).

步骤2：(3-(苄氧基)异噁唑-5-基)甲醇的制备

向3-苄氧基异噁唑-5-羧酸甲酯(2.33g，9.99mmol，1.00eq)在甲醇(50mL)中的溶液中，分批加入硼氢化钠(756mg，19.98mmol，2.00eq)。将所得混合物在15℃下搅拌3小时。将混合物倒入盐酸(0.2M，200mL)中，然后用乙酸乙酯(150mL x 2)萃取。合并的有机层用饱和盐水(200mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，以得到为无色油的(3-苄氧基异噁唑-5-基)甲醇(1.85g，9.02mmol，90％产率)。LC/MS(ESI)m/z:206.0[M+1]⁺.

步骤3：2-(3-(苄氧基)异噁唑-5-基)乙腈的制备

向溴化氰(334mg，3.15mmol，1.05eq)和三苯基膦(787mg，3.00mmol，1.00eq)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中，加入(3-苄氧基异噁唑-5-基)甲醇(616mg，3.00mmol，1.00eq)在二氯甲烷(10mL)中的溶液。将混合物在15℃下搅拌1小时，然后在0℃下加入2,3,4,6,7,8,9,10-八氢嘧啶并[1,2-a]氮杂环庚三烯(480mg，3.15mmol，1.05eq)。将所得混合物在0-15℃下搅拌另外14小时。真空浓缩溶剂。通过硅胶柱色谱法进一步纯化(石油醚:乙酸＝5:1至4:1)残余物，以得到为无色油的2-(3-苄氧基异噁唑-5-基)乙腈(320mg，1.49mmol，50％产率)。LC/MS(ESI)m/z:215.0[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.48-7.41(m,5H),6.06(s,1H),5.30(s,2H),3.82(s,2H).

步骤4：2-(3-(苄氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁腈的制备

向2-(3-苄氧基异噁唑-5-基)乙腈(214mg，1.00mmol，1.00eq)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的溶液中，加入碳酸钾(138mg，1.00mmol，1.00eq)。将混合物在15℃搅拌半小时，然后加入2-碘丙烷(170mg，1.00mmol，1.00eq)。将所得混合物在15℃下搅拌另外2.5小时。然后将2-甲基丙-2-醇钾(90mg，0.8mmol，0.80eq)加入到混合物中，将混合物在15℃下搅拌另外12小时。将混合物倒入盐酸(0.2M，30mL)中，然后用乙酸乙酯(30mL x 2)萃取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝10:1至8:1)残余物，以得到为无色油的2-(3-苄氧基异噁唑-5-基)-3-甲基-丁腈(150mg，0.56mmol，59％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.48-7.41(m,5H),6.04(s,1H),5.28(s,2H),3.85(d,J＝5.6Hz,1H),2.42-2.37(m,1H),1.18(d,J＝6.8Hz,3H),1.10(d,J＝6.8Hz,3H).

步骤5：2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸的制备

向2-(3-苄氧基异噁唑-5-基)-3-甲基-丁腈(3.40g，13.27mmol，1.00eq)在二噁烷(30mL)中的溶液中，加入盐酸(11.8M，120mL)。将混合物加热至100℃，并在100℃下搅拌15小时。将混合物冷却至15℃，然后用乙酸乙酯(150mL x 3)萃取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过制备型HPLC进一步纯化粗产物，以得到为黄色固体的2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基-丁酸(230mg，1.19mmol，9％产率)。LC/MS(ESI)m/z:186.1[M+1]⁺.

步骤6：2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯的制备

在0℃下向2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基-丁酸(1g，5.40mmol，1eq)在甲醇(10mL)中的溶液中，加入亚硫酰氯(2.57g，21mmol，1.57mL，4eq)。将反应混合物在70℃下搅拌3小时。将反应混合物减压浓缩。将残余物用水(50ml)稀释，并用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水(80mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。得到为黄色油的2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基-丁酸甲酯(1g，5.02mmol，92％产率)。LC/MS(ESI)m/z:200.1[M+1]⁺.

(2S,4R)-4-羟基-N-((S)-1-(2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺盐酸盐的示例性合成

步骤1：1-(4-溴-2-甲氧基苯基)乙-1-酮的制备

向1-(4-溴-2-羟基-苯基)乙酮(10g，46.50mmol，1.0eq)在二甲基甲酰胺(50mL)中的溶液中，加入碳酸钾(9.64g，69.75mmol，1.5eq)。然后在0℃将碘甲烷(13.20g，93.00mmol，2.0eq)加入到混合物中。然后将混合物在20℃下搅拌12小时。将混合物用水(200mL)稀释，用乙酸乙酯(100ml x 3)萃取，用盐水(50mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，然后浓缩。得到为黄色固体的1-(4-溴-2-甲氧基-苯基)乙酮(10.5g，45.84mmol，98％产率)。LC/MS(ESI)m/z:230.9[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.63(d,J＝8.4Hz,1H),7.18-7.11(m,2H),3.93(s,3H),2.60(s,3H).

步骤2：(R,E)-N-(1-(4-溴-2-甲氧基苯基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的制备

向1-(4-溴-2-甲氧基-苯基)乙酮(10g，43.65mmol，1.18eq)在四氢呋喃(50mL)中的溶液中，加入钛酸四乙酯(16.94g，74.26mmol，2.0eq)。然后将2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(4.5g，37.13mmol，1.0eq)加入混合物中并用N₂吹扫(3次)。然后将混合物在70℃下搅拌12小时。将混合物用水(100mL)淬灭，用水(200mL)稀释，过滤，然后用乙酸乙酯(200ml x 3)萃取，用盐水(200mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤然后浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝0:1至3:1)残余物。得到为黄色油的(NE)-N-[1-(4-溴-2-甲氧基-苯基)亚乙基]-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰胺(9g，27.09mmol，73％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.35(d,J＝8.0Hz,1H),7.13(dd,J＝1.2,8.0Hz,1H),7.09(s,1H),3.88(s,3H),2.70(s,3H),1.35-1.28(m,9H).

步骤3：(R)-N-((S)-1-(4-溴-2-甲氧基苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的制备

在0℃下向(NE)-N-[1-(4-溴-2-甲氧基-苯基)亚乙基]-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰胺(9g，27.09mmol，1.0eq)在四氢呋喃(90mL)中的溶液中，加入三仲丁基硼氢化锂(1M，81.26mL，3.0eq)。然后将混合物在20℃下搅拌2小时。将混合物用水(100mL)淬灭，用水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(300mL x 3)萃取，用盐水(200mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，然后浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝20:1至1:1)残余物。得到为黄色油的N-[(1S)-1-(4-溴-2-甲氧基-苯基)乙基]-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰胺(5.5g，16.45mmol，60％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.20-7.16(m,1H),7.12-7.07(m,1H),7.02(d,J＝2.0Hz,1H),4.90-4.82(m,1H),3.86(s,3H),3.50(d,J＝5.2Hz,1H),1.52(d,J＝6.8Hz,3H),1.21(s,9H).

步骤4：(R)-N-((S)-1-(2-甲氧基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的制备

向N-[(1S)-1-(4-溴-2-甲氧基-苯基)乙基]-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰胺(4.7g，14.06mmol，1.0eq)和4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(5.36g，21.09mmol，1.5eq)在二噁烷(12mL)中的溶液中，加入[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)(1.03g，1.41mmol，0.1eq)和乙酸钾(2.76g，28.12mmol，2.0eq)。然后将混合物用N₂吹扫(3次)。然后将混合物在90℃下搅拌5小时。将混合物用水(20mL)稀释，过滤，然后用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，用盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，然后浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝10:1至1:1)残余物。得到为黄色油的N-[(1S)-1-[2-甲氧基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]乙基]-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰胺(4.5g，11.80mmol，84％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.42(d,J＝8.0Hz,1H),7.32-7.28(m,2H),4.90(m,J＝6.4Hz,1H),3.91(s,3H),3.73-3.67(m,1H),1.55(d,J＝6.8Hz,3H),1.36(s,12H),1.19(s,9H).

步骤5：(R)-N-((S)-1-(2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的制备

向N-[(1S)-1-[2-甲氧基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]乙基]-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰胺(4.71g，12.36mmol，1.0eq)和5-溴-4-甲基-噻唑(2.2g，12.36mmol，1.0eq)在二噁烷(8mL)和水(2mL)中的溶液中加入碳酸氢钠(2.08g，24.72mmol，2.0eq)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)(904mg，1.24mmol，0.1eq)。然后将混合物用N₂吹扫(3次)。然后将混合物在90℃下搅拌5小时。将混合物用水(20mL)稀释，过滤，用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取，用盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，然后浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇＝100:1至10:1)残余物。得到为浅黄色油的N-[(1S)-1-[2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰胺(3.9g，11.06mmol，89％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.69(s,1H),7.34(d,J＝8.0Hz,1H),7.03(d,J＝8.0Hz,1H),6.92(s,1H),4.92(m,J＝6.4Hz,1H),3.89(s,3H),3.58(d,J＝5.6Hz,1H),2.56(s,3H),1.57(d,J＝6.8Hz,3H),1.22(s,9H).

步骤6：(S)-1-(2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙-1-胺盐酸盐的制备

向N-[(1S)-1-[2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰胺(3.6g，10.21mmol，1.0eq)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中，加入氯化氢/二噁烷(4M，18.46mL，7.23eq)。然后将混合物在20℃下搅拌1小时。将混合物浓缩。得到为黄色固体的(1S)-1-[2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙胺(3.8g，HCl)。

步骤7：(2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的制备

向(1S)-1-[2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙胺(800mg，2.25mmol，1.0eq，HCl)在二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液中，加入二异丙基乙胺(871mg，6.74mmol，1.17mL，3.0eq)。然后将混合物在20℃下搅拌10分钟。将(2S,4R)-1-叔丁氧基羰基-4-羟基-吡咯烷-2-羧酸(519mg，2.25mmol，1.0eq)和1-羟基苯并三唑(364mg，2.70mmol，1.2eq)加入到混合物中，并在20℃下搅拌10分钟。然后将1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(517mg，2.70mmol，1.2eq)加入混合物中，并在20℃下搅拌40分钟。将混合物用水(30mL)稀释，用乙酸乙酯(30ml x 3)萃取，用盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，然后浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇＝100:1至20:1)残余物。得到为黄色固体的(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(850mg，1.84mmol，82％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.69(s,1H),7.28(s,1H),7.00(dd,J＝1.6,7.6Hz,1H),6.93(s,1H),5.34-5.21(m,1H),4.59-4.26(m,2H),3.91(s,3H),3.81-3.53(m,2H),2.54(s,3H),2.51-2.38(m,1H),2.22-1.94(m,1H),1.57-1.18(m,13H).

步骤8：(2S,4R)-4-羟基-N-((S)-1-(2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺盐酸盐的制备

向(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(850mg，1.84mmol，1.0eq)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中，加入盐酸(气体)/二噁烷(4M，10mL)。然后将混合物在20℃下搅拌1小时。将混合物浓缩。得到为黄色固体的(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(700mg，1.76mmol，95％产率，HCl)。

(2-(2-(2-((5-((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)异噁唑-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯和(2-(2-(2-((5-((R)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)异噁唑-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的示例性合成

步骤1：3-甲基-2-(3-((2,2,5-三甲基-4-氧代-3,8,11-三氧杂-5-氮杂十三烷-13-基)氧基)异噁唑-5-基)丁酸甲酯的制备

向2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基-丁酸甲酯(500mg，2.51mmol，1.0eq)和2-[2-[2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙氧基]乙氧基]乙基4-甲基苯磺酸酯(1.05g，2.51mmol，1.0eq)在二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液中，加入碳酸钾(1.04g，7.53mmol，3.0eq)。然后将混合物在70℃下搅拌48小时。将混合物用水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，用盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，然后浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝10:1至1:1)残余物。得到为黄色油的2-[3-[2-[2-[2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸甲酯(650mg，1.46mmol，58％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ5.93(s,1H),4.44-4.37(m,2H),3.88-3.83(m,2H),3.74(s,3H),3.72-3.60(m,6H),3.50(d,J＝8.8Hz,1H),3.41(br s,2H),2.92(s,3H),2.37(m,J＝6.8,8.8Hz,1H),1.47(s,9H),1.01(d,J＝6.8Hz,3H),0.93(d,J＝6.8Hz,3H).

步骤2：3-甲基-2-(3-((2,2,5-三甲基-4-氧代-3,8,11-三氧杂-5-氮杂十三烷-13-基)氧基)异噁唑-5-基)丁酸的制备

向2-[3-[2-[2-[2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸甲酯(630mg，1.42mmol，1.0eq)在甲醇(4mL)和水(2mL)中的溶液中，加入氢氧化锂一水合物(594mg，14.17mmol，10.0eq)。然后将混合物在20℃下搅拌2小时。将混合物用盐酸水溶液(4M，3mL)淬灭，用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取，用盐水(20mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，然后浓缩。得到为黄色油的2-[3-[2-[2-[2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸(600mg，1.39mmol，98％产率)。

步骤3：(2-(2-(2-((5-(1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)异噁唑-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备

向(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(369mg，0.93mmol，1.0eq，HCl)在二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液中，加入二异丙基乙胺(360mg，2.79mmol，3.0eq)。然后将混合物在20℃下搅拌10分钟。将2-[3-[2-[2-[2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸(400mg，0.93mmol，1.0eq)和1-羟基苯并三唑(251mg，1.86mmol，2.0eq)加入混合物中，并在20℃下搅拌10分钟。然后将1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(356mg，1.86mmol，2.0eq)加入混合物中，并在20℃下搅拌40分钟。将混合物用水(30mL)稀释，用乙酸乙酯(30mL x 2)萃取，用盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，然后浓缩。通过制备型薄层色谱法(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化残余物。得到为白色固体的N-[2-[2-[2-[5-[1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(490mg，0.63mmol，67％产率，99％纯度)。

步骤4：(2-(2-(2-((5-((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)异噁唑-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯和(2-(2-(2-((5-((R)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)异噁唑-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备

通过SFC分离N-[2-[2-[2-[5-[1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(490mg，0.63mmol，1.0eq)。浓缩有机层。得到为白色固体的(2-(2-(2-((5-((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)异噁唑-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(190mg，0.24mmol，95％产率，98％纯度)。得到为白色固体的(2-(2-(2-((5-((R)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)异噁唑-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(250mg，0.32mmol，84％产率，99％纯度)。

4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)萘-2-醇的示例性合成

步骤1：4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)萘-2-醇的制备

向4-溴萘-2-醇(220mg，0.99mmol，1eq)和4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(326mg，1.28mmol，1.3eq)在二甲基甲酰胺(20mL)中的溶液中，加入[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)，二氯甲烷(80mg，0.1mmol，0.1eq)和乙酸钾(242mg，2.47mmol，2.5eq)，然后将混合物在90℃在氮气下搅拌5小时。将混合物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL)萃取，有机相经无水干燥，过滤，并浓缩滤液以得到粗产物。通过硅胶柱色谱法纯化(在石油醚中的10-33.3％乙酸乙酯/石油醚)这一粗产物，以得到为白色固体的400mg产物，将这一产物通过制备型TLC进一步纯化(在石油醚中的50％乙酸乙酯)，以得到为白色固体的4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)萘-2-醇(180mg，0.67mmol，67％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.67(d,J＝8.2Hz,1H),7.72-7.66(m,2H),7.46-7.35(m,2H),7.28-7.27(m,1H),4.95(s,1H),1.43(s,12H).

4-(6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)-2-(((R)-1-氧代丙-2-基)氧基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的示例性合成

步骤1：(R)-2-(苄氧基)丙酸甲酯的制备

将(2R)-2-苄氧基丙酸(20.00g，110.99mmol，1.00eq)在甲醇(150mL)中的溶液冷却至0℃，然后滴加二氯化硫(39.61g，332.96mmol，24.2mL，3.00eq)。然后将混合物在50℃下搅拌4小时。减压浓缩反应混合物以得到残余物。残余物用饱和碳酸氢钠溶液(200mL)稀释，然后用乙酸乙酯(200mL x 2)萃取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到为黄色油的产物(2R)-2-苄氧基丙酸甲酯(21.96g)。LC/MS(ESI)m/z:217.1[M+23]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.40-7.27(m,5H),4.70(d,J＝11.6Hz,1H),4.46(d,J＝11.6Hz,1H),4.08(q,J＝6.8Hz,1H),3.77(s,3H),1.45(d,J＝6.8Hz,3H).

步骤2：(R)-2-(苄氧基)丙醛的制备

将(2R)-2-苄氧基丙酸甲酯(20.96g，107.92mmol，1.00eq)在二氯甲烷(200mL)中的溶液冷却至-78℃，然后滴加二异丁基氢化铝(1M，110mL，1.00eq)。然后将混合物在-78℃下搅拌1小时。将反应混合物用盐酸(1M，10mL)淬灭，通过硅藻土过滤。将滤液用水(100mL)稀释，然后用二氯甲烷(100mL x 2)萃取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。得到为无色油的化合物(2R)-2-苄氧基丙醛(15.70g)。LC/MS(ESI)m/z:181.1[M+17]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.68(d,J＝1.6Hz,1H),7.42-7.33(m,5H),4.68-4.60(m,2H),3.95-3.86(m,1H),1.34(d,J＝6.8Hz,3H).

步骤3：(R)-(((1,1-二甲氧基丙-2-基)氧基)甲基)苯的制备

向(2R)-2-苄氧基丙醛(14.70g，89.52mmol，1eq)在三甲氧基甲烷(71.15g，670.46mmol，73.5mL，7.49eq)中的溶液中，加入4-甲基苯磺酸；吡啶(450mg，1.79mmol，0.02eq)。将混合物在25℃下搅拌2小时。将反应混合物用水(100mL)稀释，然后用乙酸乙酯(100mL x 2)萃取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝25/1至20/1)残余物，以得到期望产物。得到为无色油的化合物[(1R)-2,2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]甲基苯(16.70g，79.42mmol，89％产率，100％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:233.1[M+23]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.39-7.27(m,5H),4.68-4.61(m,2H),4.22(d,J＝5.2Hz,1H),3.62-3.53(m,1H),3.44(d,J＝4.0Hz,6H),1.20(d,J＝6.4Hz,3H).

步骤4：(R)-1,1-二甲氧基丙-2-醇的制备

在氮气下向[(1R)-2,2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]甲基苯(9.00g，42.80mmol，1.00eq)在甲醇(80mL)中的溶液中，加入钯活性炭(500mg，5％纯度)和氢氧化钯(500mg，5％纯度)。将悬浮液在真空下脱气并用氢气净化几次。将混合物在60℃在氢气(15psi)下搅拌8小时。将反应混合物通过硅藻土过滤，并减压浓缩以得到残余物。得到为无色油的化合物(2R)-1,1-二甲氧基丙-2-醇(4.1g)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.08(d,J＝6.4Hz,1H),3.81-3.73(m,1H),3.45(d,J＝4.0Hz,6H),1.20(d,J＝6.4Hz,3H).

步骤5：(R)-4-(7-溴-6-氯-2-((1,1-二甲氧基丙-2-基)氧基)-8-氟喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

4-(7-溴-2,6-二氯-8-氟-喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(300mg，0.62mmol，1eq)，(2R)-1,1-二甲氧基丙-2-醇(150.13mg，1.25mmol，2eq)，碳酸钾(259mg，1.87mmol，3eq)和1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(7mg，62.48umol，0.1eq)溶于微波管中的乙腈(10mL)中。将密封的管在微波下于100℃加热2小时。将反应混合物过滤并将滤液真空浓缩以得到残余物。通过硅胶柱色谱法纯化(在石油醚中的0-15％乙酸乙酯)残余物，以得到为黄色固体的4-[7-溴-6-氯-2-[(1R)-2,2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]-8-氟-喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(706mg，1.10mmol，22％产率，87％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:565.1[M+1]⁺.

步骤6：4-(6-氯-2-(((R)-1,1-二甲氧基丙-2-基)氧基)-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向4-[7-溴-6-氯-2-[(1R)-2,2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]-8-氟-喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(608mg，1.08mmol，1eq)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)萘-2-醇(379mg，1.40mmol，1.3eq)在四氢呋喃(15mL)中的溶液中，加入磷酸钾(1.5M，2.16mL，3eq)和(2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]钯(II)甲磺酸盐(91mg，0.11mmol，0.1eq)。将反应混合物脱气并充入氮气3次，然后加热至65℃保持16小时。加入乙酸乙酯(30mL)，并用水(30mL)洗涤混合物。有机层经硫酸钠干燥，然后真空浓缩，以得到残余物。通过快速硅胶色谱法纯化(在石油醚中的0-60％乙酸乙酯)残余物，以得到粗产物(600mg)。这一粗产物通过半制备型反相HPLC纯化。将收集的级分真空浓缩以除去大部分乙腈。用饱和碳酸氢钠水溶液将混合物的pH调节至8，然后用乙酸乙酯(50mL x 2)萃取。合并的有机层经硫酸钠干燥，然后真空浓缩，以得到为浅黄色固体的4-[6-氯-2-[(1R)-2,2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(400mg)。LC/MS(ESI)m/z:627.2[M+1]⁺.

步骤7：(2R)-2-((6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)丙醛的制备

向4-[6-氯-2-[(1R)-2,2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(400mg，0.64mmol，1eq)在二噁烷(20mL)中的溶液中，加入盐酸(12M，2.00mL，37.63eq)。将反应混合物在25℃下搅拌1小时。将反应混合物真空浓缩以得到为浅黄色胶的(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙醛(330mg，盐酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:481.1[M+1]⁺.

步骤8：4-(6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)-2-(((R)-1-氧代丙-2-基)氧基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

将(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙醛(330mg，0.64mmol，1eq，盐酸盐)和二碳酸二叔丁酯(278.41mg，1.28mmol，2eq)在四氢呋喃(20mL)中的混合物冷却至0℃。然后加入饱和硫酸钠水溶液(322mg，3.83mmol，6mL，6eq)。将反应混合物在25℃下搅拌2小时。加入乙酸乙酯(30mL)和水(20mL)并分离混合物。有机层经硫酸钠干燥，然后真空浓缩，以得到残余物。残余物通过硅胶柱色谱法，用二氯甲烷(50mL)，然后用乙酸乙酯(40mL)纯化，以得到为浅黄色固体的4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-[(1R)-1-甲基-2-氧代-乙氧基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(380mg)。LC/MS(ESI)m/z:581.2[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.71(dd,J＝1.8,3.4Hz,1H),7.80(d,J＝1.1Hz,1H),7.76(d,J＝8.3Hz,1H),7.44(dt,J＝1.5,7.3Hz,1H),7.33-7.27(m,2H),7.27-7.22(m,1H),7.10(d,J＝2.4Hz,1H),6.32-5.88(m,1H),5.30-5.22(m,1H),3.99-3.77(m,4H),3.74-3.61(m,4H),1.59-1.54(m,3H),1.52(s,9H).

4-(2-(甲苯磺酰基氧基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的示例性合成

步骤1：2-(苄氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯的制备

向2-苄氧基乙醇(50g，328.54mmol，46.73mL，1eq)和氢氧化钾(22.12g，394.24mmol，1.2eq)在四氢呋喃(200mL)中的溶液中，加入甲苯磺酰氯(56.37g，295.68mmol，0.9eq)。将混合物在25℃下搅拌1小时。加入乙酸乙酯(1000mL)，然后过滤反应，然后将滤液用盐水(200mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过快速硅胶色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝5:1至3:1)残余物。得到为黄色油的化合物2-苄氧基乙基4-甲基苯磺酸酯(75g，243.82mmol，74％产率，99％纯度)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.85-7.79(m,2H),7.38-7.31(m,4H),7.30-7.26(m,2H),7.31(s,1H),4.51(s,2H),4.26-4.19(m,2H),3.73-3.65(m,2H),2.50-2.40(m,3H).

步骤2：4-(2-(苄氧基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备

向4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(10.35g，51.41mmol，1.05eq)在N,N-二甲基甲酰胺(150mL)中的溶液中，加入氰化钠(2.15g，53.86mmol，60％纯度，1.1eq)，在0℃下搅拌0.5小时，加入2-苄氧基乙基4-甲基苯磺酸酯(15g，48.96mmol，1eq)。将混合物在25℃下搅拌1小时。加入氯化铵溶液(200mL)，然后用乙酸乙酯(200mL*3)萃取水相。合并的有机相用盐水(100mL*2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过快速硅胶色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝10:1至4:1)残余物。得到为无色油的化合物4-(2-苄氧基乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(14.5g)。LC/MS(ESI)m/z:236.1[M-100]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.41-7.30(m,5H),4.60(s,2H),3.80(br d,J＝9.9Hz,2H),3.71-3.62(m,4H),3.55-3.46(m,1H),3.08(ddd,J＝3.5,9.5,13.3Hz,2H),1.86(br d,J＝7.9Hz,2H),1.60-1.50(m,2H),1.47(s,9H).

步骤3：4-(2-羟基乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备

在氮气下向4-(2-苄氧基乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(5g，14.91mmol，1eq)在甲醇(40mL)中的溶液中，加入钯活性炭(0.5g，10％纯度)。将悬浮液在真空下脱气并用H₂吹扫几次。将混合物在25℃在氢气(15psi)下搅拌12小时。将反应混合物过滤并真空浓缩。得到为无色油的化合物4-(2-羟基乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(3g，12.23mmol，82％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ3.86-3.72(m,4H),3.66-3.58(m,2H),3.56-3.45(m,1H),3.16-3.07(m,2H),2.15-2.05(m,1H),1.96-1.78(m,2H),1.59-1.49(m,2H),1.47(s,9H).

步骤4：4-(2-(甲苯磺酰基氧基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备

在0℃下向4-(2-羟基乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(7.4g，30.17mmol，1eq)和三乙胺(9.16g，90.50mmol，12.60mL，3eq)在二氯甲烷(70mL)中的混合物中，加入甲苯磺酰氯(8.63g，45.25mmol，1.5eq)。将混合物在25℃下搅拌12小时。将反应混合物真空浓缩。通过快速硅胶色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝4:1至1:1)残余物。得到为黄色油的化合物4-[2-(对甲苯磺酰基氧基)乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(8.7g，21.78mmol，72％产率)。.¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.80(d,J＝8.3Hz,2H),7.34(d,J＝8.1Hz,2H),4.18-4.13(m,2H),3.76-3.70(m,2H),3.67-3.60(m,4H),3.47-3.39(m,1H),3.14-3.01(m,2H),2.46-2.43(m,3H),1.90-1.78(m,2H),1.45(s,9H).

4-(2-(2-(2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的示例性合成

步骤1：2-(2-(2-(苄氧基)乙氧基)乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯的制备

在25℃下搅拌2-[2-(2-苄氧基乙氧基)乙氧基]乙醇(18.2g，75.74mmol，1eq)和氢氧化钾(12.75g，227.22mmol，3eq)在四氢呋喃(100mL)中的溶液0.5小时，然后加入对甲苯磺酰氯(28.88g，151.48mmol，2eq)，并在25℃下搅拌1小时。在25℃下将反应混合物用水(100mL)淬灭，并用乙酸乙酯(200mL*3)萃取。合并的有机层用盐水(150mL*2)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过快速硅胶色谱法纯化(在石油醚中的0-10％乙酸乙酯)残余物。得到为无色油的化合物2-[2-(2-苄氧基乙氧基)乙氧基]乙基4-甲基苯磺酸酯(20g，50.70mmol，66.9％产率)。

步骤2：4-(2-(2-(2-(苄氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备

在0℃下向4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(8.42g，41.83mmol，1.1eq)在N,N-二甲基甲酰胺(150mL)中的混合物中，加入氢化钠(1.75g，43.73mmol，60％于矿物油中，1.15eq)。然后在25℃下搅拌0.5小时。然后将2-[2-(2-苄氧基乙氧基)乙氧基]乙基4-甲基苯磺酸酯(15g，38.02mmol，1eq)加入到混合物中。将混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物用饱和氯化铵溶液(350mL)淬灭。然后用乙酸乙酯(150mL x 3)萃取。合并的有机层用水(200mL x 2)和盐水(200mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过硅胶色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝10:1至3:1)纯化残余物。得到为无色油的化合物4-[2-[2-(2-苄氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(11.8g，27.86mmol，73.27％产率)。LC/MS(ESI)m/z:324.1[M-99]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.35-7.28(m,5H),4.57-4.56(m,2H),3.84-3.75(m,2H),3.69-3.63(m,12H),3.50-3.45(m,1H),3.07-3.02(m,2H),1.83-1.81(m,2H),1.53-1.45(m,11H).

步骤3：4-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备

向4-[2-[2-(2-苄氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(11.8g，27.86mmol，1eq)在甲醇(100mL)中的混合物中，加入钯炭活性催化剂(800mg，10％纯度)。将混合物脱气并用氢气再填充3次。然后将其在25℃在氢气气氛(50psi)下搅拌12小时。将反应混合物温热至60℃。将混合物在60℃在氢气气氛(50psi)下搅拌另外12小时。将混合物过滤。减压浓缩滤液以得到为无色油的产物4-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(9g)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ3.82-3.60(m,14H),3.50-3.47(m,1H),3.06-3.02(m,2H),1.85-1.82(m,2H),1.53-1.44(m,11H).

步骤4：4-(2-(2-(2-(甲苯磺酰基氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备

向4-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(7g，20.99mmol，1eq)和氢氧化钾(1.53g，27.29mmol，1.3eq)在四氢呋喃(70mL)中的混合物中，加入p-甲苯磺酰氯(4.80g，25.19mmol，1.2eq)。将混合物在25℃下搅拌1小时。将混合物用冰水(100mL)稀释。然后用乙酸乙酯(100mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水(150mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过硅胶色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝10:1至1:2)残余物。得到为无色油的化合物4-[2-[2-[2-(对甲苯磺酰基氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(7.5g，15.38mmol，73.26％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.78(d,J＝8.4Hz,2H),7.33(d,J＝8.4Hz,2H),4.14(t,J＝4.8Hz,2H),3.82-3.75(m,2H),3.69-3.66(m,2H),3.59-3.57(m,8H),3.45-3.35(m,1H),3.05-3.00(m,2H),2.43(s,3H),1.81-1.80(m,2H),1.50-1.44(m,11H).

步骤5：4-(2-(2-(2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备

向4-[2-[2-[2-(对甲苯磺酰基氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(3.5g，7.18mmol，1eq)在N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中的混合物中，加入(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)钾(1.60g，8.61mmol，1.2eq)。将混合物在80℃下搅拌2小时。将混合物用水(100mL)稀释。然后用乙酸乙酯(50mL x3)萃取。合并的有机层用水(80mL x 2)和盐水(80mLx 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过硅胶色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝3:1至1:1)残余物。得到为无色油的化合物4-[2-[2-[2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.31g，4.99mmol，69％产率)。LC/MS(ESI)m/z:363.1[M-100]⁺.

4-(2-(2-(甲苯磺酰基氧基)乙氧基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的示例性合成

步骤1：2-(2-(苄氧基)乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯的制备

向2-(2-苄氧基乙氧基)乙醇(50g，254.79mmol，1eq)和氢氧化钾(17.15g，305.74mmol，1.2eq)在四氢呋喃(200mL)中的溶液中，加入对甲苯磺酰氯(48.57g，254.79mmol，1eq)。将混合物在25℃下搅拌1小时。加入冰水(500mL)和乙酸乙酯(500mL)，水相用乙酸乙酯(300mL*3)萃取。合并的有机相用盐水(200mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过快速硅胶色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝5:1至3:1)残余物。得到为黄色油的化合物2-(2-苄氧基乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯(70g，199.76mmol，78％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.85-7.75(m,2H),7.38-7.28(m,7H),4.54(s,2H),4.23-4.13(m,2H),3.72-3.69(m,2H),3.64-3.60(m,2H),3.59-3.55(m,2H),2.44(s,3H).

步骤2：4-(2-(2-(苄氧基)乙氧基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备

向4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(12.27g，60.97mmol，1.07eq)在N,N-二甲基甲酰胺(200mL)中的混合物中，加入氢化钠(2.55g，63.75mmol，60％纯度，1.12eq)，在0℃下搅拌0.5小时。然后加入2-(2-苄氧基乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯(20g，57.07mmol，1eq)，将混合物在25℃下搅拌1小时。加入氯化铵溶液(200mL)，然后用乙酸乙酯(200mL*3)萃取水相。合并的有机相用盐水(100mL*2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过快速硅胶色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝5:1至3:1)残余物。得到为黄色油的化合物4-[2-(2-苄氧基乙氧基)乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(16.2g)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.38-7.33(m,4H),7.32-7.28(m,1H),4.58(s,2H),4.15-4.08(m,1H),3.77(d,J＝13.0Hz,2H),3.72-3.66(m,2H),3.66-3.63(m,5H),3.61-3.42(m,1H),3.05(ddd,J＝3.4,9.5,13.3Hz,2H),1.83(d,J＝7.1Hz,2H),1.52(tdd,J＝4.5,8.7,13.0Hz,2H),1.46(s,9H).

步骤3：4-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备

在氮气下向4-[2-(2-苄氧基乙氧基)乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(16.2g，42.69mmol，1eq)在甲醇(100mL)中的溶液中，加入钯/炭(1.5g，42.69mmol，4.27mL，10％纯度，1eq)。将悬浮液在真空下脱气并用氢气吹扫几次。将混合物在25℃在氢气(50psi)下搅拌60小时。过滤反应混合物并减压浓缩以得到残余物。得到为黄色油的化合物4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(6.7g，23.15mmol，54％产率)。¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)δ3.79-3.71(m,2H),3.70-3.61(m,7H),3.59-3.55(m,3H),3.21-3.06(m,2H),1.91-1.81(m,2H),1.51-1.42(m,12H).

步骤4：4-(2-(2-(甲苯磺酰基氧基)乙氧基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备

向4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(6.5g，22.46mmol，1eq)在二氯甲烷(65mL)中的溶液中，加入三乙胺(6.82g，67.39mmol，9.38mL，3eq)，然后将对甲苯磺酰氯(6.42g，33.69mmol，1.5eq)加入混合物中，将混合物在25℃下搅拌16小时。减压浓缩反应以得到残余物。通过快速硅胶色谱法纯化(在石油醚中的0-25％乙酸乙酯)残余物。得到为无色油的4-[2-[2-(对甲苯磺酰基氧基)乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(7.4g，16.68mmol，74％产率)。¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.81-7.76(m,2H),7.46-7.41(m,2H),4.81(s,3H),3.74-3.64(m,4H),3.58-3.49(m,6H),3.11(t,J＝9.6Hz,2H),2.47-2.45(m,1H),1.86-1.76(m,2H),1.46(s,9H),1.48-1.37(m,2H).

N-(1,3-二甲基-2-氧代-6-(3-丙氧基苯氧基)-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-4-羟基-N-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)苯磺酰胺的示例性合成

步骤1：4-(苄氧基)苯磺酸钠的制备

向4-羟基苯磺酸(17.50g，100.47mmol，1eq)在丙-2-醇(280mL)中的溶液中，加入(溴甲基)苯(36.86g，215.54mmol，25.6mL，2.15eq)，氢氧化钠(2M，100mL，1.99eq)并滴加(溴甲基)苯(36.86g，215.54mmol，25.6mL，2.15eq)。将混合物在70℃下搅拌20小时。将混合物浓缩以得到固体，将固体用水(50mL)洗涤，过滤并减压浓缩以得到为白色固体的产物(4-苄氧基苯基)磺酰基氧基钠(19.00g，66.37mmol，66％产率)。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.52(d,J＝8.8Hz,2H),7.46-7.32(m,5H),6.94(d,J＝8.8Hz,2H),5.12(s,2H).

步骤2：4-(苄氧基)苯磺酰氯的制备

向(4-苄氧基苯基)磺酰基氧基钠(19.00g，66.37mmol，1.00eq)在二氯化硫(80mL)中的溶液中，加入N,N-二甲基甲酰胺(475mg，6.50mmol，0.5mL，0.98eq)。将混合物在70℃下搅拌4小时。将混合物浓缩以得到粗产物，并将这一物质用乙酸乙酯(50mL)溶解，并用水(150mL)洗涤，然后用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤三次，过滤并浓缩滤液以得到白色固体。得到为白色固体的化合物4-苄氧基苯磺酰氯(16.50g，58.36mmol，88％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.00(dd,J＝2.0,6.8Hz,2H),7.46-7.40(m,5H),7.15(dd,J＝2.0,6.8Hz,2H),5.21(s,2H).

步骤3：4-(苄氧基)-N-(1,3-二甲基-2-氧代-6-(3-丙氧基苯氧基)-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)苯磺酰胺的制备

在0℃下向5-氨基-1,3-二甲基-6-(3-丙氧基苯氧基)苯并咪唑-2-酮(3.00g，9.16mmol，1.00eq)和三乙胺(1.39g，13.75mmol，2.0mL，1.50eq)在二氯甲烷(30mL)中的溶液中，滴加4-苄氧基苯磺酰氯(2.60g，9.16mmol，1.00eq)在二氯甲烷(10mL)中的溶液。将混合物在20℃下搅拌12小时。向混合物中加入水(20mL)，然后用二氯甲烷(50mL x 3)萃取，有机层用盐水洗涤，然后用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，以得到残余物。残余物通过制备型HPLC纯化。得到为黄色固体的化合物4-苄氧基-N-[1,3-二甲基-2-氧代-6-(3-丙氧基苯氧基)苯并咪唑-5-基]苯磺酰胺(2.30g，4.01mmol，44％产率)。LC/MS(ESI)m/z:574.2[M+1]⁺.

步骤4：4-(苄氧基)-N-(1,3-二甲基-2-氧代-6-(3-丙氧基苯氧基)-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-N-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)苯磺酰胺的制备

在0℃下向4-苄氧基-N-[1,3-二甲基-2-氧代-6-(3-丙氧基苯氧基)苯并咪唑-5-基]苯磺酰胺(2.30g，4.01mmol，1.00eq)在四氢呋喃(30mL)中的溶液中，加入氢化钠(208mg，5.21mmol，60％纯度，1.30eq)，持续30分钟，然后滴加三甲基甲硅烷基乙氧基甲基氯(870mg，5.21mmol，1.30eq)。将反应在25℃下搅拌12小时。向混合物中加入水(50mL)，然后用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，有机层用水洗涤，然后经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，以得到残余物。通过硅胶纯化(石油醚/乙酸乙酯，10/1～1/1)残余物。得到为黄色固体的化合物4-苄氧基-N-[1,3-二甲基-2-氧代-6-(3-丙氧基苯氧基)苯并咪唑-5-基]-N-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)苯磺酰胺(2.70g，3.84mmol，96％产率)。LC/MS(ESI)m/z:704.2[M+1]⁺.

步骤5：N-(1,3-二甲基-2-氧代-6-(3-丙氧基苯氧基)-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-4-羟基-N-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)苯磺酰胺的制备

将4-苄氧基-N-[1,3-二甲基-2-氧代-6-(3-丙氧基苯氧基)苯并咪唑-5-基]-N-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)苯磺酰胺(2.70g，3.84mmol，1.00eq)，钯活性炭(3.84mmol，10％纯度，1.00eq)在甲醇(30mL)中的混合物脱气并用氮气吹扫3次，然后将混合物在氢气气氛下于25℃搅拌3小时。将混合物通过硅藻土垫过滤，并浓缩滤液以得到产物。得到为白色固体的化合物N-[1,3-二甲基-2-氧代-6-(3-丙氧基苯氧基)苯并咪唑-5-基]-4-羟基-N-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)苯磺酰胺(2.30g，3.75mmol，98％产率)。LC/MS(ESI)m/z:636.3[M+23]⁺.

(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((2S,4R)-4-(2-(2-(2-(((2S,4R)-4-羟基-1-((R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰氨基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯和(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((2S,4R)-4-(2-(2-(2-(((2S,4R)-4-羟基-1-((S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰氨基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的示例性合成

步骤1：(2S,4R)-2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的制备

向(2S,4R)-4-羟基-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(25g，115.07mmol，1eq)在二氯甲烷(400mL)中的溶液中，加入三乙胺(23.29g，230.14mmol，32.03mL，2eq)和N,N-二甲基吡啶-4-胺(1.41g，11.51mmol，0.1eq)，然后在0℃下加入叔丁基二甲基甲硅烷基氯(18.21g，120.82mmol，1.05eq)，将混合物在25℃下搅拌48小时。使用旋转蒸发仪在水浴上减压蒸发溶液。通过硅胶柱色谱法(EA:PE＝0:1至1:5)纯化这一粗产物以得到为无色油的化合物(2S,4R)-2-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-4-羟基-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(40g)。¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)δ4.45(s,1H),4.00-3.91(m,1H),3.56-3.53(m,2H),3.40(s,2H),2.23-2.15(m,2H),2.00-1.90(m,1H),1.45(s,9H),0.89(s,9H),0.01(s,6H).

步骤2：(2S,4R)-2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-(2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的制备

在0℃下向(2S,4R)-2-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-4-羟基-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(40g，120.66mmol，1eq)在四氢呋喃(500mL)中的溶液中，加入氢化钠(7.24g，180.98mmol，60％于矿物油中，1.5eq)。将反应混合物在25℃下搅拌1小时。然后加入2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯(45.71g，132.72mmol，1.1eq)，并将反应混合物在25℃搅拌另外12小时。将反应混合物通过饱和氯化铵水溶液(200mL)淬灭，然后通过乙酸乙酯(100mL x 3)萃取。合并有机层并在真空下蒸发以得到残余物。通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/0至2/1)残余物，以得到产物。得到为浅黄色油的(2S,4R)-2-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲-基]-4-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(40.8g，83.79mmol，68％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.65-4.64(m,1H),3.90-3.85(m,4H),3.70-3.39(m,12H),2.23-2.13(m,1H),2.10-1.92(m,1H),1.91-1.49(m,6H),1.45(s,9H),0.88(s,9H),0.03(s,6H).

步骤3：(2S,4R)-2-(羟基甲基)-4-(2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的制备

在25℃下向(2S,4R)-2-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-4-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(10.8g，21.44mmol，1eq)在四氢呋喃(125mL)中的溶液中，加入四丁基氟化铵(1M，23.6mL，1.1eq)。将混合物在25℃下搅拌12小时。真空除去溶剂，以得到残余物。通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10/1至1/1)残余物。得到为浅黄色油的产物(2S,4R)-2-(羟基甲基)-4-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(6.35g，16.30mmol，76％产率)。

步骤4：((2S,4R)-1-甲基-4-(2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)吡咯烷-2-基)甲醇的制备

在25℃下向(2S,4R)-2-(羟基甲基)-4-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(20g，51.35mmol，1eq)在四氢呋喃(350mL)中的溶液中加入氢化锂铝(4.87g，128.38mmol，2.5eq)。将混合物在60℃下搅拌16小时。在加入硅藻土(20g)之前，将反应混合物通过水(10mL)淬灭。过滤混合物并收集滤液，然后真空蒸发以得到为浅黄色油的[(2S,4R)-1-甲基-4-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]吡咯烷-2-基]甲醇(14g)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.64-4.63(m,1H),4.01-3.97(m,1H),3.87-3.85(m,2H),3.70-3.46(m,9H),3.40-3.38(m,2H),2.63-2.61(m,1H),2.40-2.36(m,1H),2.33(s,3H),2.13-2.02(m,1H),1.88-1.43(m,8H).

步骤5：4-((S)-4-((苄氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((2S,4R)-1-甲基-4-(2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,8-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-羧酸叔丁酯的制备

在氮气下向[(2S,4R)-1-甲基-4-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]吡咯烷-2-基]甲醇(6.22g，20.49mmol，1.2eq)和4-[(3S)-4-苄氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-氯-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-羧酸叔丁酯(9g，17.08mmol，1eq)在二噁烷(180mL)中的溶液中，加入甲磺酸(2-二环己基-膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(1.43g，1.71mmol，0.1eq)和碳酸铯(16.69g，51.23mmol，3eq)。将反应混合物在氮气下于90℃搅拌6小时。真空除去溶剂，以得到粗产物。通过硅胶柱色谱法纯化(乙酸乙酯)粗产物以得到产物。得到为褐色固体的产物4-[(3S)-4-苄氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S,4R)-1-甲基-4-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]吡咯烷-2-基]甲氧基]-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-羧酸叔丁酯(7.4g，6.63mmol，39％产率，71％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:794.5[M+1]⁺.

步骤6：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((2S,4R)-4-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯的制备

向4-[(3S)-4-苄氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S,4R)-1-甲基-4-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]吡咯烷-2-基]甲氧基]-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-羧酸叔丁酯(7g，8.82mmol，1eq)在二氯甲烷(100mL)中的溶液中，加入三氟乙酸(25.13g，220.42mmol，16.3mL，25eq)。将混合物在25℃下搅拌2小时。反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)淬灭，然后用二氯甲烷(30mL x 3)萃取。真空蒸发合并的有机层以除去溶剂，得到粗产物。粗产物通过制备型HPLC纯化。得到为浅黄色固体的产物苄基(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸酯(2.76g，4.13mmol，47％产率，91％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:610.4[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.40-7.37(m,5H),5.19(s,2H),4.65(s,1H),4.37(dd,J＝11.2Hz,J＝4.4Hz,1H),4.18-2.58(m,26H),2.46(s,3H),2.38(dd,J＝9.6Hz,J＝6.0Hz,1H),2.01-1.95(m,3H).

步骤7：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((2S,4R)-4-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯的制备

在氮气下向(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸苄酯(2.2g，3.61mmol，1eq)和1-溴萘(1.34g，6.49mmol，0.9mL，1.8eq)在二噁烷(50mL)中的溶液中，加入甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(301.8mg，0.36mmol，0.1eq)和碳酸铯(3.53g，10.82mmol，3eq)。将混合物在氮气中于90℃搅拌12小时。将反应混合物通过水(50mL)淬灭，并通过乙酸乙酯(40mL x3)萃取。合并有机层并在真空下蒸发以得到残余物。通过硅胶柱色谱法纯化(二氯甲烷/甲醇＝10/1)残余物，以得到产物。得到为黄色油的产物(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸苄酯(1.15g，1.39mmol，38％产率，89％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:736.3[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.22-8.20(m,1H),7.87-7.85(m,1H),7.62(d,J＝8.0Hz,1H),7.51-7.36(m,8H),7.15(d,J＝6.8Hz,1H),5.21(s,2H),4.70(s,1H),4.38-4.10(m,8H),3.76-3.31(m,14H),3.10-2.72(m,6H),2.47(s,3H),2.39-2.35(m,1H),2.14-2.08(m,1H),2.03-1.96(m,1H).

步骤8：2-((S)-4-(2-(((2S,4R)-4-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的制备

向(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸苄酯(1.38g，1.88mmol，1eq)和氢氧化铵(1.82g，12.98mmol，2mL，25％纯度，6.92eq)在甲醇(60mL)和四氢呋喃(3mL)中的溶液中，加入钯炭活性催化剂(200mg，10％纯度)。将混合物脱气并充入氢气，然后在25℃下用氢气(15psi)搅拌12小时。向反应混合物中加入四氢呋喃(40mL)并过滤。真空除去有机溶剂以得到为浅黄色固体的2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(1.1g)。LC/MS(ESI)m/z:602.3[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.23-8.21(m,1H),7.87-7.85(m,1H),7.62(d,J＝8.4Hz,1H),7.51-7.49(m,2H),7.43(t,J＝8.4Hz,1H),7.15-7.13(m,1H),4.41-4.39(m,1H),4.26(s,2H),4.22(dd,J＝11.2Hz,J＝6.4Hz,1H),4.03(d,J＝12.0Hz,1H),3.88(d,J＝12.0Hz,1H),3.76-3.72(m,3H),3.67-3.54(m,6H),3.45-2.85(m,12H),2.57-2.55(m,2H),2.47(s,3H),2.39(dd,J＝9.6Hz,J＝6.0Hz,1H),2.11-1.84(m,2H).

步骤9：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((2S,4R)-4-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(800mg，1.33mmol，1eq)在四氢呋喃(30mL)和水(30mL)中的溶液中，加入碳酸氢钠(223.4mg，2.66mmol，0.1mL，2eq)和二碳酸二叔丁酯(1.45g，6.65mmol，1.5mL，5eq)。将混合物在25℃下搅拌6小时。通过加入水(20mL)淬灭反应混合物，然后用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取。有机相用盐水(30mL x 2)洗涤，真空蒸发，以得到粗产物。通过硅胶柱色谱法纯化(二氯甲烷/甲醇＝10/1)粗产物。得到为浅黄色固体的产物(2S)-2-(氰基-甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(670mg，0.95mmol，72％产率)。LC/MS(ESI)m/z:702.4[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.23-8.20(m,1H),7.87-7.85(m,1H),7.62(d,J＝8.4Hz,1H),7.51-7.49(m,2H),7.43(t,J＝8.4Hz,1H),7.15-7.14(m,1H),4.63(s,1H),4.41-4.39(m,1H),4.26-4.22(m,3H),4.12(d,J＝12.0Hz,1H),3.75-3.31(m,14H),3.10-2.76(m,6H),2.48(s,3H),2.40(dd,J＝9.6Hz,J＝6.0Hz,1H),2.37-2.05(m,2H),1.52(s,9H).

步骤10：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((2S,4R)-1-甲基-4-(2-(2-(甲苯磺酰基氧基)乙氧基)乙氧基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(300mg，0.43mmol，1eq)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中，加入三乙胺(129.8mg，1.28mmol，0.2mL，3eq)，对甲苯磺酰氯(163mg，0.85mmol，2eq)和二甲基氨基吡啶(10.4mg，0.09mmol，0.2eq)。将混合物在25℃下搅拌12小时。真空除去溶剂，以得到残余物。通过制备型TLC纯化(二氧化硅，二氯甲烷/甲醇＝10/1)残余物。得到为浅黄色固体的产物(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-1-甲基-4-[2-[2-(对甲苯磺酰基氧基)乙氧基]乙氧基]吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(233mg，0.27mmol，64％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.22-8.20(m,1H),7.87-7.85(m,1H),7.81-7.75(m,2H),7.62(d,J＝8.0Hz,1H),7.51-7.49(m,2H),7.43(t,J＝8.0Hz,1H),7.35(d,J＝8.0Hz,2H),7.15-7.12(m,1H),4.63(s,1H),4.43-4.39(m,1H),4.27-3.93(m,8H),3.72-3.27(m,12H),3.07-2.75(m,6H),2.49(s,3H),2.45(s,3H),2.41-2.36(m,1H),2.09-1.98(m,2H),1.52(s,9H).

步骤11：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((2S,4R)-4-(2-(2-(2-(((2S,4R)-4-羟基-1-((R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰氨基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯和(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((2S,4R)-4-(2-(2-(2-(((2S,4R)-4-羟基-1-((S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰氨基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-1-甲基-4-[2-[2-(对甲苯磺酰基氧基)乙氧基]乙氧基]吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(250mg，0.29mmol，1eq)和(2S,4R)-4-羟基-N-[[2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-1-[3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羧酰胺(152.9mg，0.31mmol，1.05eq)在乙腈(8mL)中的溶液中，加入碳酸铯(190.3mg，0.58mmol，2eq)。将混合物在80℃下搅拌14小时。加入水(30mL)后，用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取混合物。真空蒸发合并的有机相，以得到残余物。通过制备型TLC(二氧化硅，二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化残余物。得到为黄色固体的含有两种异构体的产物(255mg)。然后通过SFC进一步纯化产物。得到为黄色油的产物(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-[[[(2S,4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]甲基]-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(80mg，0.06mmol，21％产率，92％纯度)。得到为浅黄色固体的产物(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-[[[(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]甲基]-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(120mg，0.096mmol，33％产率，95％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:1182.7[M+1]⁺.

(S)-4-(4-((苄氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-羧酸叔丁酯的示例性合成

步骤1：1-苄基4-(叔丁基)(R)-2-(羟基甲基)哌嗪-1,4-二羧酸酯的制备

向(3R)-3-(羟基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(5.00g，23.12mmol，1.00eq)在乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)中的溶液中，一次性加入碳酸氢钠(5.83g，69.00mmol，3.00eq)，然后将氯羧酸苄酯(5.94g，35.00mmol，1.51eq)在0℃下缓慢加至溶液中，同时搅拌30分钟。将所得溶液在10℃下搅拌5小时。从反应溶液中分离出有机层，并用水(10mL)洗涤。用乙酸乙酯(100mL)萃取水相。收集有机层并合并，用水(30mL x 3)盐水(30mL)洗涤，经硫酸钠干燥，减压浓缩，以得到黄色液体。通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3/1至1/1)黄色液体，以得到为无色液体的化合物O1-苄基-O4-叔丁基(2R)-2-(羟基甲基)哌嗪-1,4-二羧酸酯(8.00g，22.83mmol，99％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.33-7.24(m,5H),5.08(s,2H),4.18(br s,1H),3.87(br s,2H),3.57(br s,2H),3.12-2.78(m,2H),1.97(s,2H),1.60-1.57(m,1H),1.40(s,9H).

步骤2：1-苄基4-(叔丁基)(R)-2-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)哌嗪-1,4-二羧酸酯的制备

向O1-苄基-O4-叔丁基(2R)-2-(羟基甲基)哌嗪-1,4-二羧酸酯(6.31g，18.01mmol，1.00eq)在二氯甲烷(100mL)中的溶液中，一次性加入三乙胺(5.47g，54.00mmol，3.00eq)。然后向溶液中加入甲磺酰氯(3.09g，27.00mmol，1.50eq)。将得到的溶液在25℃下搅拌2小时。将溶液减压浓缩以得到为黄色液体的化合物O1-苄基O4-叔丁基(2R)-2-(甲基磺酰基氧基甲基)哌嗪-1,4-二羧酸酯(6.66g)。

步骤3：1-苄基4-(叔丁基)(S)-2-(氰基甲基)哌嗪-1,4-二羧酸酯的制备

向O1-苄基-O4-叔丁基(2R)-2-(甲基磺酰基氧基甲基)哌嗪-1,4-二羧酸酯(2.45g，5.72mmol，1.00eq)在N,N-二甲基乙酰胺(10mL)中的溶液中，一次性加入氰基钠(560mg，11.00mmol，2.00eq)。将溶液在55℃下搅拌24小时。将溶液倒入乙酸乙酯(200mL)中，将溶液用水(50mL x 2)洗涤。分离并收集有机层，用盐水(50mL)洗涤，减压浓缩，以得到黄色液体。通过柱色谱法纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝10/1至4/1)黄色液体以得到为无色液体的化合物O1-苄基-O4-叔丁基(2S)-2-(氰基甲基)哌嗪-1,4-二羧酸酯(1.00g，2.00mmol，40％产率)。LC/MS(ESI)m/z:304.1[M-55]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.39(s,5H),5.19(s,2H),4.58(br s,1H),4.15-3.86(m,3H),3.24-2.48(m,5H),1.51(s,9H).

步骤4：(S)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸苄酯的制备

向O1-苄基-O4-叔丁基(2S)-2-(氰基甲基)哌嗪-1,4-二羧酸酯(900mg，2.50mmol，1.00eq)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中，缓慢加入三氟乙酸(3.08g，27.00mmol，10.79eq)。将溶液在10℃下搅拌2小时。减压浓缩溶液以得到为黄色液体的(2S)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸苄酯(911mg，2.44mmol，97％产率，三氟乙酸盐)。

步骤5：(S)-4-(4-((苄氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-羧酸叔丁酯的制备

向(2S)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸苄酯(646mg，2.49mmol，1.00eq，三氟乙酸盐)和二异丙基乙胺(1.29g，9.96mmol，4.00eq)在二甲基亚砜(20mL)中的溶液中，一次性加入2,4-二氯-5,6-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(8H)-羧酸叔丁酯(758mg，2.49mmol，1.00eq)。将得到的溶液在50℃下搅拌9小时。反应溶液用乙酸乙酯(200mL)和水(100mL)稀释。分离并收集有机层，用水(50mL x 2)和盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，以得到黄色液体。通过柱色谱法纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝10/1至1/1)黄色液体，以得到为黄色液体的4-[(3S)-4-苄氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-氯-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-羧酸叔丁酯(1.10g，2.09mmol，84％产率)。LC/MS(ESI)m/z:527.1[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.46-7.32(m,5H),5.26-5.14(m,2H),4.67(d,J＝17.6Hz,2H),4.51-4.42(m,1H),4.21-4.05(m,2H),3.93-3.75(m,2H),3.40(d,J＝10.8Hz,2H),3.12(dt,J＝3.2,12.4Hz,1H),2.97-2.51(m,3H),1.61(s,2H),1.50(s,9H).

(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((2S,4R)-1-甲基-4-(2-(2-(2-(甲苯磺酰基氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的示例性合成

步骤1：(2S,4R)-2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-(2-(2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的制备

在25℃下向(2S,4R)-2-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-4-羟基-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(15g，45.25mmol，1.1eq)在四氢呋喃(30mL)中的混合物中，加入氢化钠(3.29g，82.37mmol，60％纯度，2eq)，搅拌1小时，然后加入2-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]乙基4-甲基苯磺酸酯(15.98g，41.13mmol，1eq)，将混合物在25℃下搅拌12小时。将残余物倒入冰水(100mL)中并搅拌0.5分钟。用乙酸乙酯(70mL x 3)萃取水相。合并的有机相用盐水(50mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝5:1至2:1)残余物。得到为无色油的化合物(2S,4R)-2-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-4-[2-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(18.2g，33.22mmol，81％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.63(t,J＝3.4Hz,1H),4.51-4.14(m,1H),4.03-3.78(m,4H),3.69-3.66(m,6H),3.65-3.55(m,6H),3.54-3.47(m,2H),3.44-3.38(m,1H),2.27-2.13(m,1H),2.00-1.78(m,2H),1.77-1.65(m,2H),1.60(brd,J＝8.2Hz,2H),1.45(br s,9H),1.22-1.17(m,1H),0.87(s,9H),0.02(br s,6H).

步骤2：(2S,4R)-2-(羟基甲基)-4-(2-(2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的制备

在20℃下向(2S,4R)-2-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-4-[2-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(18.2g，33.22mmol，1eq)在四氢呋喃(80mL)中的混合物中，加入四丁基铵(1M，33.22mL，1eq)。将反应混合物在20℃下搅拌2小时。将反应混合物真空浓缩以得到残余物。通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝5:1至1:1)残余物，以得到为黄色油的(2S,4R)-2-(羟基甲基)-4-[2-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(9g，20.76mmol，62％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.66-4.62(m,1H),4.39(br s,1H),4.03(br s,1H),3.92-3.82(m,2H),3.75-3.70(m,1H),3.70-3.68(m,2H),3.67(d,J＝2.0Hz,4H),3.64-3.61(m,2H),3.60-3.54(m,4H),3.54-3.44(m,2H),3.44-3.37(m,1H),2.20-2.10(m,1H),1.89-1.79(m,1H),1.78-1.66(m,2H),1.64-1.57(m,2H),1.53(br d,J＝6.6Hz,2H),1.47(s,1H).

步骤3：((2S,4R)-1-甲基-4-(2-(2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)吡咯烷-2-基)甲醇的制备

向(2S,4R)-2-(羟基甲基)-4-[2-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(9g，20.76mmol，1eq)在四氢呋喃(150mL)中的混合物中，加入氢化铝锂(3.94g，103.80mmol，5eq)，然后在70℃下搅拌反应混合物12小时。将混合物冷却至25℃。加入四氢呋喃(200mL)，缓慢加入水(5mL)，然后过滤混合物并真空浓缩。通过硅胶色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝3:1至0:1)，然后用(四氢呋喃:甲醇＝10:1，含0.1％氢氧化铵)纯化粗产物，以得到为无色油的[(2S,4R)-1-甲基-4-[2-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]吡咯烷-2-基]甲醇(5.2g，14.97mmol，72％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.67-4.60(m,1H),4.42-4.34(m,1H),4.04-3.96(m,1H),3.91-3.74(m,2H),3.72-3.64(m,7H),3.64-3.54(m,4H),3.54-3.47(m,1H),3.43-3.36(m,2H),2.77-2.61(m,1H),2.42-2.36(m,2H),2.35-2.32(m,3H),2.29-2.05(m,2H),1.94-1.67(m,4H),1.65-1.55(m,2H).

步骤4：4-((S)-4-((苄氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((2S,4R)-1-甲基-4-(2-(2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,8-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-羧酸叔丁酯的制备

向4-[(3S)-4-苄氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-氯-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-羧酸叔丁酯(1.7g，3.23mmol，1eq)和[(2S,4R)-1-甲基-4-[2-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]吡咯烷-2-基]甲醇(1.40g，4.03mmol，1.25eq)在二噁烷(20mL)中的溶液中，加入甲磺酸(2-二环己基膦基-2,6-二异丙氧基-1,1-联苯)(2-氨基-1,1-联苯-2-基)钯(ii)(270mg，0.32mmol，0.1eq)和碳酸铯(3.15g，9.68mmol，3eq)，将混合物在90℃在氮气下搅拌2小时。加入水(100mL)。用乙酸乙酯(150mL x 3)萃取水相。合并的有机相用盐水(50mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝4:1至0:1)，然后通过硅胶色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)，以得到产物。得到为褐色油的化合物4-[(3S)-4-苄氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S,4R)-1-甲基-4-[2-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]吡咯烷-2-基]甲氧基]-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-羧酸叔丁酯(2.3g)。LC/MS(ESI)m/z:838.6[M+1]⁺.

步骤5：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((2S,4R)-4-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯的制备

向4-[(3S)-4-苄氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S,4R)-1-甲基-4-[2-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]吡咯烷-2-基]甲氧基]-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-羧酸叔丁酯(2.5g，2.98mmol，1eq)在二氯甲烷(20mL)中的混合物中，加入三氟乙酸(3.08g，27.01mmol，2mL，9.05eq)，然后将反应混合物在20℃下搅拌5小时。将残余物倒入饱和碳酸钾溶液中并搅拌0.5分钟。然后加入水合锂以将pH调节至12，搅拌20分钟，然后将水相用二氯甲烷和甲醇(10:1，50mL x 3)萃取，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。残余物通过半制备型反相HPLC纯化，以得到为褐色油的化合物(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸苄酯(1.3g，1.99mmol，67％产率)。LC/MS(ESI)m/z:676.3[M+23]⁺.

步骤6：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((2S,4R)-4-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯的制备

向(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸苄酯(1g，1.53mmol，1eq)和1-溴萘(633mg，3.06mmol，0.4mL，2eq)在二噁烷(10mL)中的溶液中，加入甲磺酸(2-二环己基膦基-2,6-二异丙氧基-1,1-联苯)(2-氨基-1,1-联苯-2-基)钯(ii)(128mg，0.15mmol，0.1eq)和碳酸铯(1.50g，4.59mmol，3eq)，将混合物在氮气下于90℃搅拌8小时。加入水(10mL)。用乙酸乙酯(15mL x 3)萃取水相。合并的有机相用盐水(10mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过快速硅胶色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇＝50:1至10:1)残余物，以得到为褐色固体的(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸苄酯(310mg，0.40mmol，26％产率)。LC/MS(ESI)m/z:780.5[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.24-8.15(m,1H),7.90-7.82(m,1H),7.61(d,J＝8.1Hz,1H),7.54-7.46(m,2H),7.46-7.33(m,6H),7.14(d,J＝7.4Hz,1H),5.21(s,2H),4.70(br s,1H),4.39(br s,1H),4.34-4.24(m,2H),4.23-4.15(m,2H),4.06(br s,1H),3.95(br d,J＝11.5Hz,1H),3.76-3.72(m,2H),3.70-3.54(m,10H),3.51-3.41(m,2H),3.32(br d,J＝11.9Hz,3H),3.10-3.01(m,1H),3.00-2.79(m,4H),2.79-2.72(m,1H),2.48(brs,3H),2.39(br s,1H),2.09(br dd,J＝4.3,7.5Hz,1H),2.02-1.97(m,1H),1.86(td,J＝3.3,6.6Hz,2H),0.92-0.75(m,1H).

步骤7：2-((S)-4-(2-(((2S,4R)-4-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的制备

在氮气下向(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸苄酯(310mg，0.40mmol，1eq)在甲醇(10mL)中的溶液中，加入钯/炭(30mg，10％纯度)和氢氧化铵(273mg，2.34mmol，0.3mL，30％纯度，5.88eq)。将悬浮液在真空下脱气并用氢气吹扫几次。将混合物在氢气(15psi)下在20℃下搅拌5小时。将混合物真空浓缩。得到为黄色固体的化合物2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(180mg，0.26mmol，67％产率，95％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:646.4[M+1]⁺.

步骤8：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((2S,4R)-4-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(150mg，0.23mmol，1eq)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中，加入二碳酸二叔丁酯(507mg，2.32mmol，0.5mL，10eq)和三乙胺(71mg，0.70mmol，0.1mL，3eq)，将反应混合物在25℃下搅拌12小时。将混合物过滤，并真空浓缩。将反应混合物通过制备型TLC纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)。得到为黄色油的化合物(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(130mg，0.16mmol，71％产率，95％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:746.3[M+1]⁺.

步骤9：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((2S,4R)-1-甲基-4-(2-(2-(2-(甲苯磺酰基氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(130mg，0.17mmol，1eq)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中，加入三乙胺(53mg，0.52mmol，3eq)和对甲苯磺酰氯(66mg，0.35mmol，2eq)和二甲基氨基吡啶(4mg，0.034mmol，0.2eq)，将反应混合物在25℃下搅拌12小时。将混合物过滤，并真空浓缩。将反应混合物通过制备型TLC纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)。得到为黄色油的化合物(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-1-甲基-4-[2-[2-[2-(对甲苯磺酰基氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(100mg，0.11mmol，61％产率，95％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:900.4[M+1]⁺.

(2S,4R)-1-((S)-18-(叔丁基)-16-氧代-5,8,11,14-四氧杂-2,17-二氮杂十九烷-19-酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的示例性合成

步骤1：((S)-16-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-17,17-二甲基-14-氧代-3,6,9,12-四氧杂-15-氮杂十八烷基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备

将2-[2-[2-[2-[2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酸(450mg，1.23mmol，1.00eq)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(592mg，1.23mmol，1.00eq,盐酸盐)，羟基苯并三唑(199mg，1.48mmol，1.20eq)，1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(283mg，1.48mmol，1.20eq)在二氯甲烷(10mL)和二异丙基乙胺(318mg，2.46mmol，430uL，2.00eq)中的混合物脱气并用氮气吹扫3次，然后将混合物在氮气气氛下于20℃搅拌12小时。将反应混合物用水(30mL)稀释，用盐酸(1M)调节至pH＝2，然后用乙酸乙酯(30mL x 2)萃取。合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液(50mL x 1)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过硅胶柱色谱法纯化(在甲醇中的100-90％乙酸乙酯)残余物以得到为无色油的化合物N-[2-[2-[2-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(650mg，0.82mmol，67％产率)。LC/MS(ESI)m/z:792.5[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.68(s,1H),7.53-7.29(m,6H),5.17-4.99(m,1H),4.77(t,J＝8.0Hz,1H),4.58-4.47(m,2H),4.25-3.96(m,3H),3.79-3.50(m,16H),3.44-3.32(m,2H),2.91(s,3H),2.65-2.50(m,4H),2.14-2.01(m,1H),1.52-1.42(m,12H),1.08(s,9H).

步骤2：(2S,4R)-1-((S)-18-(叔丁基)-16-氧代-5,8,11,14-四氧杂-2,17-二氮杂十九烷-19-酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向N-[2-[2-[2-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(650mg，0.82mmol，1eq)在二氯甲烷(4mL)中的溶液中，加入氯化氢/二噁烷(4M，3mL)。将混合物在20℃下搅拌0.5小时。减压浓缩反应混合物以得到为绿色油的化合物(2S,4R)-1-[(2S)-3,3-二甲基-2-[[2-[2-[2-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(600mg，盐酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:692.2[M+1]⁺.

(R)-(2-(2-羟基乙氧基)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酸叔丁酯的示例性合成

步骤1：(R)-(1-(4-溴苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯的制备

向(2R)-2-氨基-2-(4-溴苯基)乙醇(5g，19.80mmol，1eq，盐酸盐)和三乙胺(6.01g，59.40mmol，8.27mL，3eq)在二氯甲烷(80mL)中的溶液中，加入二碳酸二叔丁酯(4.66g，21.35mmol，4.91mL，1.08eq)。将反应混合物在20℃下搅拌16小时。将反应溶液用水(100mL)洗涤，经硫酸钠干燥，然后真空浓缩以得到为白色固体的N-[(1R)-1-(4-溴苯基)-2-羟基-乙基]氨基甲酸叔丁酯(6.07g，18.85mmol，95％产率，98％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:338.1[M+23]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.50(d,J＝8.4Hz,2H),7.24(d,J＝8.8Hz,2H),4.79(t,J＝5.6Hz,1H),4.48(br s,1H),3.47(br dd,J＝6.0,10.4Hz,2H),1.36(s,9H).

步骤2：(R)-2-(2-(4-溴苯基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙氧基)乙酸乙酯的制备

在0℃下向N-[(1R)-1-(4-溴苯基)-2-羟基-乙基]氨基甲酸叔丁酯(4g，12.65mmol，1eq)和二乙酰氧基铑(279mg，1.27mmol，0.1eq)在二氯甲烷(150mL)中的溶液中，滴加2-重氮乙酸乙酯(5.41g，37.95mmol，4.97mL，3eq)。将反应混合物在20℃下搅拌16小时。将反应混合物真空浓缩以得到残余物。通过硅胶柱色谱法纯化(在石油醚中的0-10％乙酸乙酯)残余物，以得到为白色固体的2-[(2R)-2-(4-溴苯基)-2-(叔丁氧基羰基氨基)乙氧基]乙酸乙酯(5.1g)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.48-7.43(m,2H),7.24(d,J＝8.4Hz,2H),5.79(br s,1H),4.87-4.62(m,1H),4.25-4.24(m,2H),4.06(d,J＝1.2Hz,2H),3.80-3.73(m,1H),3.69(br d,J＝4.8Hz,1H),1.50-1.36(m,9H),1.30-1.26(m,3H).

步骤3：(R)-2-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)乙氧基)乙酸乙酯的制备

向2-[(2R)-2-(4-溴苯基)-2-(叔丁氧基羰基氨基)乙氧基]乙酸乙酯(3g，7.46mmol，1eq)和4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2’-联(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(2.27g，8.95mmol，1.2eq)在二噁烷(45mL)中的溶液中，加入二噁烷(45mL)[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)(436mg，0.60mmol，0.08eq)和乙酸钾(1.46g，14.92mmol，2eq)。将反应混合物脱气并用氮气吹扫3次，然后将混合物在90℃下搅拌16小时。将反应混合物真空浓缩以得到残余物。通过硅胶柱色谱法纯化(在石油醚中的0-30％乙酸乙酯/石油醚)残余物，以得到为黄色油的2-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]乙氧基]乙酸乙酯(3.35g)。

步骤4：(R)-2-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙氧基)乙酸乙酯的制备

向2-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]乙氧基]乙酸乙酯(3.35g，7.46mmol，1eq)和5-溴-4-甲基-噻唑(2.65g，14.91mmol，2eq)在二噁烷(60mL)中的溶液中，加入[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)(545mg，0.75mmol，0.1eq)，碳酸钾(2.06g，14.91mmol，2eq)和水(12mL)。将反应混合物脱气并用氮气吹扫3次，然后将混合物在85℃下搅拌6小时。将反应混合物真空浓缩以除去大部分溶剂。然后加入水(40mL)，并用乙酸乙酯(40mL x 2)萃取混合物。有机层经硫酸钠干燥，然后真空浓缩，以得到残余物。通过硅胶快速色谱法纯化(在石油醚中的0-100％乙酸乙酯)这一残余物，以得到为浅黄色胶的2-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙氧基]乙酸乙酯(1.6g，3.80mmol，51％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.70(s,1H),7.42(s,4H),5.86(br s,1H),4.86(br s,1H),4.25(q,J＝7.2Hz,2H),4.10(s,2H),3.88-3.71(m,2H),2.55(s,3H),1.45(br s,9H),1.31(t,J＝7.2Hz,3H).

步骤5：(R)-(2-(2-羟基乙氧基)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酸叔丁酯的制备

在-5℃下向氢化铝锂(131mg，3.45mmol，1eq)在四氢呋喃(20mL)中的悬浮液中，加入2-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙氧基]乙酸乙酯(1.45g，3.45mmol，1eq)在四氢呋喃(20mL)中的溶液。将反应混合物在0℃下搅拌1小时。然后加入氢化铝锂(131mg，3.45mmol，1eq)，并将反应混合物在0℃下搅拌另外1小时。加入水(20mL)，并用乙酸乙酯(30mL)萃取混合物。有机层经硫酸钠干燥，然后真空浓缩，以得到残余物。通过硅胶快速色谱法纯化(在石油醚中的0-200％乙酸乙酯)残余物，以得到为无色油的N-[(1R)-2-(2-羟基乙氧基)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(780mg，2.06mmol，59％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.68(s,1H),7.48-7.35(m,4H),5.33(br d,J＝7.6Hz,1H),4.90(br s,1H),3.81-3.76(m,1H),3.76-3.68(m,3H),3.67-3.61(m,1H),3.60-3.53(m,1H),2.54(s,3H),2.16-1.93(m,1H),1.44(br s,9H).

(2S,4R)-4-羟基-1-(3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酸的示例性合成

步骤1：2-(3-甲基异噁唑-5-基)乙酸的制备

在氮气下于-78℃向3,5-二甲基异噁唑(15g，154.46mmol，15mL，1eq)在四氢呋喃(150mL)中的溶液中，滴加正丁基锂(2.5M，77mL，1.25eq)，将混合物在-55℃下搅拌30分钟，然后将二氧化碳鼓入混合物中30分钟，将混合物在25℃下搅拌1小时。通过饱和氯化铵溶液(50mL)淬灭混合物，用乙酸乙酯(50mL)萃取混合物。用盐酸水溶液(2M)调节水相至pH＝2，用乙酸乙酯(50mL，3次)萃取混合物，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩滤液，以得到为褐色固体的2-(3-甲基异噁唑-5-基)乙酸(10g，70.86mmol，46％产率)。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.74(br s,1H),6.24(s,1H),3.83(s,2H),2.20(s,3H).

步骤2：2-(3-甲基异噁唑-5-基)乙酸甲酯的制备

在0℃下向2-(3-甲基异噁唑-5-基)乙酸(10g，70.86mmol，1eq)在甲醇(100mL)中的溶液中，加入亚硫酰氯(12.65g，106.29mmol，7.71mL，1.5eq)，并将混合物在50℃搅拌4小时。将混合物浓缩以得到粗产物。将这一粗产物用乙酸乙酯(200mL)稀释，并用水(200mL)洗涤，然后用饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)，接着用盐水(50mL)洗涤，将有机相用无水干燥，过滤并浓缩滤液，以得到为褐色油的2-(3-甲基异噁唑-5-基)乙酸甲酯(10g，64.45mmol，91％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ6.11(s,1H),3.80(s,2H),3.76(s,3H),2.30(s,3H).

步骤3：3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酸甲酯的制备

在0℃下向2-(3-甲基异噁唑-5-基)乙酸甲酯(10g，64.45mmol，1eq)在四氢呋喃(100mL)中的溶液中，加入氢化钠(3.87g，96.68mmol，60％纯度，1.5eq)，然后在0℃下加入2-碘丙烷(13.15g，77.34mmol，7.74mL，1.2eq)，将混合物在25℃下搅拌2小时。加入另外的2-碘丙烷(2.55g，15.00mmol，1.5mL)，将混合物在25℃下搅拌10小时。将混合物用盐酸水溶液(1M，300mL)淬灭，并将混合物用乙酸乙酯(200mL，三次)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩滤液，以得到为褐色油的3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酸甲酯(13g)。

步骤4：3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酸的制备

向3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酸甲酯(12.7g，64.39mmol，1eq)在甲醇(90mL)和水(60mL)中的溶液中，加入氢氧化钠(12.88g，321.96mmol，5eq)，将混合物在25℃下搅拌2小时。浓缩混合物以除去甲醇，然后将残余物用水(200mL)稀释，并用乙酸乙酯(200mL)萃取，用盐酸水溶液(2M)调节水相直至pH＝3，然后将混合物用二氯甲烷(200mL，三次)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，并浓缩滤液，以得到为褐色油的粗产物，通过快速制备型HPLC纯化这一物质，除去乙腈级分，并用二氯甲烷(300mL x 5)萃取残余物，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，并浓缩滤液，以得到为白色固体的产物3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酸(7.5g，40.94mmol，63％产率)。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ6.26(s,1H),3.58(d,J＝8.7Hz,1H),2.33-2.23(m,1H),2.21(s,3H),0.95(d,J＝6.7Hz,3H),0.82(d,J＝6.8Hz,3H).

步骤5：(2S,4R)-4-羟基-1-(3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酸甲酯的制备

向(2S,4R)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸甲酯(1.19g，6.55mmol，1eq，盐酸盐)，3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酸(1.2g，6.55mmol，1eq)和三乙胺(1.99g，19.65mmol，2.74mL，3eq)在N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中的溶液中，加入o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-n,n,n',n'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(2.74g，7.21mmol，1.1eq)。将反应混合物在25℃下搅拌40分钟。将反应混合物溶解于乙酸乙酯(50mL)中，然后用盐水(50mL)洗涤。有机层经硫酸钠干燥，然后真空浓缩，以得到残余物(3g)。通过制备型HPLC纯化残余物，以得到为浅褐色胶的(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羧酸甲酯(1.64g，5.28mmol，80％产率)。LC/MS(ESI)m/z:311.1[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ6.20-6.04(m,1H),4.68-4.50(m,2H),3.89(dd,J＝4.3,10.8Hz,1H),3.78-3.69(m,3H),3.69-3.57(m,2H),2.47-2.34(m,1H),2.28(d,J＝9.1Hz,4H),2.12-2.09(m,1H),1.12-0.95(m,3H),0.89(d,J＝6.8Hz,3H).

步骤6：(2S,4R)-4-羟基-1-(3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酸的制备

向(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羧酸甲酯(1.2g，3.87mmol，1eq)在四氢呋喃(12mL)中的溶液中，加入水(12mL)和氢氧化锂一水合物(487mg，11.60mmol，3eq)。将反应混合物在25℃下搅拌2小时。用1N盐酸将混合物的pH调节至2。用乙酸乙酯(40mL x 2)萃取混合物。有机层经硫酸钠干燥，然后真空浓缩，以得到为无色胶的(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羧酸(1.02g，3.44mmol，89.02％产率)。LC/MS(ESI)m/z:297.1[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)δ6.23-6.14(m,1H),4.57-4.39(m,2H),3.90-3.67(m,2H),3.66-3.57(m,1H),2.50-2.32(m,1H),2.31-2.21(m,4H),2.13-2.02(m,1H),1.12-0.96(m,3H),0.91-0.78(m,3H).

((R)-1-((2S,4R)-4-羟基-1-((R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-基)-3-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-1-氧代-5,8,11-三氧杂-2-氮杂十三烷-13-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯和((3R)-1-((2S,4R)-4-羟基-1-(3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-基)-3-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-1-氧代-5,8,11-三氧杂-2-氮杂十三烷-13-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的示例性合成

步骤1：2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯的制备

向2-(2-羟基乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯(1g，3.84mmol，1eq)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中，加入3,4-二氢-2H-吡喃(496mg，5.76mmol，1.5eq)和对甲苯磺酸(33mg，0.19mmol，0.05eq)。将反应溶液在20℃下搅拌2小时。加入三乙胺(0.1mL)，并将反应混合物真空浓缩以得到残余物。通过硅胶快速色谱法纯化(在石油醚中的0-25％乙酸乙酯)残余物，以得到产物。得到为无色油的2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯(1.15g，3.34mmol，86.91％产率)。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.81(d,J＝8.3Hz,2H),7.35(d,J＝8.1Hz,2H),4.62-4.58(m,1H),4.20-4.16(m,2H),3.90-3.77(m,2H),3.74-3.69(m,2H),3.64-3.59(m,2H),3.57-3.46(m,2H),2.46(s,3H),1.88-1.77(m,1H),1.75-1.67(m,1H),1.57-1.48(m,4H).

步骤2：((1R)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-2-(2-(2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯的制备

在0℃下向N-[(1R)-2-(2-羟基乙氧基)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(430mg，1.14mmol，1eq)在四氢呋喃(4mL)中的溶液中，加入氢化钠(91mg，2.28mmol，60％纯度，2eq)。将反应混合物在20℃下搅拌0.5小时。然后，加入2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯(393mg，1.14mmol，1eq)在四氢呋喃(6mL)中的溶液，并将反应混合物在55℃下搅拌12小时。将混合物用水(30mL)淬灭，并用乙酸乙酯(30mL，三次)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，并浓缩滤液以得到粗产物。通过制备型TLC纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)这一粗产物，以得到为褐色油的产物N-[(1R)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]-2-[2-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(85mg，0.12mmol，10.8％产率，79.4％纯度)。

步骤3：(R)-2-(2-(2-(2-氨基-2-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙-1-醇的制备

在20℃下向N-[(1R)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]-2-[2-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(84mg，0.15mmol，1eq)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中，加入盐酸/甲醇(4M，0.5mL，13.11eq)。将反应混合物在20℃下搅拌3小时。将反应混合物真空浓缩。得到为黄色油的化合物2-[2-[2-[(2R)-2-氨基-2-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙醇(61mg，0.15mmol，99.3％产率，盐酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:367.2[M+1]⁺.

步骤4：(2S,4R)-4-羟基-N-((R)-2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)-1-(3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向2-[2-[2-[(2R)-2-氨基-2-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙醇(98mg，0.24mmol，1eq，盐酸盐)，(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羧酸(76mg，0.26mmol，1.05eq)，1-羟基苯并三唑(43mg，0.32mmol，1.3eq)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺盐酸盐(61mg，0.32mmol，1.3eq)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液中，加入二异丙基乙胺(94mg，0.73mmol，3eq)。将反应混合物在20℃下搅拌15小时。将混合物用水(30mL)稀释，并用二氯甲烷(30mL，两次)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，并浓缩滤液，以得到粗产物。通过制备型TLC纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)这一粗产物以得到产物。得到为淡黄色油的总计180mg的(2S,4R)-4-羟基-N-[(1R)-2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]-1-[3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羧酰胺。LC/MS(ESI)m/z:645.1[M+1]⁺.

步骤5：(3R)-1-((2S,4R)-4-羟基-1-(3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-基)-3-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-1-氧代-5,8,11-三氧杂-2-氮杂十三烷-13-基4-甲基苯磺酸酯的制备

向(2S,4R)-4-羟基-N-[(1R)-2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]-1-[3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羧酰胺(100mg，0.11mmol，1eq)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中，加入三乙胺(22mg，0.21mmol，2eq)，二甲基氨基吡啶(1.31mg，10.70umol，0.1eq)，然后加入4-甲基苯-1-磺酰氯(41mg，0.21mmol，2eq)，将混合物在20℃下搅拌10小时。浓缩混合物以得到粗产物。通过制备型TLC纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)这一粗产物以得到产物。得到为褐色油的化合物2-[2-[2-[(2R)-2-[[(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]-2-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙基4-甲基苯磺酸酯(40mg，0.04mmol，40.2％产率，85.9％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:799.0[M+1]⁺.

步骤6：(2S,4R)-4-羟基-1-(3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)-N-((R)-13-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-5,8,11-三氧杂-2-氮杂十三烷-13-基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向2-[2-[2-[(2R)-2-[[(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]-2-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙基4-甲基苯磺酸酯(100mg，0.13mmol，1eq)在甲基胺/乙醇(4mL，30％纯度)中的溶液，将混合物在50℃下搅拌3小时。浓缩混合物以得到为淡黄色油的产物(2S,4R)-4-羟基-N-[(1R)-2-[2-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]-1-[3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羧酰胺(90mg)。LC/MS(ESI)m/z:658.2[M+1]⁺.

步骤7：((3R)-1-((2S,4R)-4-羟基-1-(3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-基)-3-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-1-氧代-5,8,11-三氧杂-2-氮杂十三烷-13-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备

向(2S,4R)-4-羟基-N-[(1R)-2-[2-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]-1-[3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羧酰胺(82mg，0.12mmol，1eq)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中，加入三乙胺(38mg，0.37mmol，3eq)和二碳酸二叔丁酯(54mg，0.25mmol，57uL，2eq)，将混合物在20℃下搅拌5小时。浓缩混合物以得到粗产物。通过制备型TLC纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)这一粗产物以得到为淡黄色油的N-[2-[2-[2-[(2R)-2-[[(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]-2-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(75mg，98.95umol，79.4％产率)。LC/MS(ESI)m/z:780.1[M+23]⁺.

步骤8：((R)-1-((2S,4R)-4-羟基-1-((R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-基)-3-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-1-氧代-5,8,11-三氧杂-2-氮杂十三烷-13-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯和((3R)-1-((2S,4R)-4-羟基-1-(3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-基)-3-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-1-氧代-5,8,11-三氧杂-2-氮杂十三烷-13-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备

通过SFC纯化N-[2-[2-[2-[(2R)-2-[[(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]-2-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(75mg，0.10mmol，1eq)。得到为无色油的化合物N-[2-[2-[2-[(2R)-2-[[(2S,4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]-2-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(30mg，35.50umol，35.9％产率，89.7％纯度)和N-[2-[2-[2-[(2R)-2-[[(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]-2-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(28mg，34.36umol，34.7％产率，93％纯度)。

3-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-N-甲基丙酰胺(示例性化合物13)的示例性合成

步骤1：(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备

向2,2,5-三甲基-4-氧代-3,8,11-三氧杂-5-氮杂十三烷-13-基4-甲基苯磺酸酯(370mg，0.73mmol)、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-羟基异吲哚啉-1,3-二酮(200mg，0.73mmol)和碳酸钾(200mg，1.5mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的搅拌溶液。将得到的混合物在60℃下搅拌过夜。将反应混合物在水(20mL)和乙酸乙酯(15mL)之间分配。收集有机层，用水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩，以得到粗残余物，将其通过制备型TLC纯化(用在氯甲烷中的8％甲醇洗脱)，以得到(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(180mg，47％)。LC/MS(ESI)m/z:520.5[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ1.45(s,9H),2.13-2.17(m,1H),2.73-2.93(m,6H),3.40(s,2H),3.60-3.65(m,4H),3.71-3.73(m,2H),3.91(t,J＝4.4Hz,2H),4.25(t,J＝3.6Hz,3H),4.96(dd,J＝5.2Hz,J＝12.0Hz,1H),7.23(dd,J＝2.0Hz,J＝8.0Hz,1H),7.36(d,J＝2.0Hz,1H),7.78(d,J＝8.4Hz,1H),8.09(s,1H).

步骤2：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(2-(2-(2-(甲基氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)异吲哚啉-1,3-二酮盐酸盐的制备

在室温下搅拌(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(90mg，0.17mmol)在二噁烷中的4M氯化氢(3mL)中的溶液1小时。减压除去挥发物，以得到为HCl盐的2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(2-(2-(2-(甲基氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)异吲哚啉-1,3-二酮盐酸盐。

步骤3：3-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-N-甲基丙酰胺的制备

在0℃下向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(2-(2-(2-(甲基氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)异吲哚啉-1,3-二酮盐酸盐(0.17mmol)、3-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸(50mg，0.09mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的搅拌溶液中，加入N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(36mg，0.28mmol)和(2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐)(71mg，0.19mmol)。将所得混合物在室温搅拌24小时。将反应混合物在乙酸乙酯(20ml)和水(20ml)之间分配。收集有机层，用水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩，以得到粗残余物，将所述残余物通过制备型TLC纯化，以得到为白色固体的3-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-N-甲基丙酰胺(50mg，57％)。LC/MS(ESI)m/z:941.0[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ2.01-2.07(m,4H),2.54-2.75(m,4H),2.87-2.99(m,4H),3.47-3.77(m,16H),4.18-4.28(m,6H),5.09-5.14(m,1H),7.07-7.08(m,1H),7.22-7.27(m,2H),7.32-7.36(m,2H),7.43-7.48(m,2H),7.80-7.84(m,2H),8.04-8.09(m,2H),11.12(s,1H).

3-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-N-甲基丙酰胺(示例性化合物111)的示例性合成

步骤1：(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备

向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(151mg，0.55mmol，1.2eq)和N-[2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(120mg，0.46mmol，1eq)在二甲基亚砜(5mL)中的溶液中，加入N,N-二异丙基乙胺(77mg，0.60mmol，0.1mL，1.3eq)。将混合物在80℃下搅拌12小时。混合物用水(20mL)稀释，水相用乙酸乙酯(20mL x 3)萃取。合并的有机相用盐水(20mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过制备型TLC纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)残余物，以得到为黄色固体的N-[2-[2-[2-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.19mmol，40％产率，96％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:541.1[M+23]⁺.

步骤2：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((2-(2-(2-(甲基氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮的制备

将氯化氢的二噁烷溶液(4M，10mL，207.42eq)加入到N-[2-[2-[2-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.19mmol，1eq)中，并将混合物在20℃下搅拌12小时。将混合物真空浓缩，以得到为无色油的2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[2-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]乙基氨基]异吲哚啉-1,3-二酮(110mg，盐酸盐)。

步骤3：4-((7S)-6-氯-2-((3-((2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基)-3-氧代丙基)氨基)-8-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[2-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]乙基氨基]异吲哚啉-1,3-二酮(120mg，0.22mmol，1eq，三氟乙酸盐)和3-[[4-(4-叔丁氧基羰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酸(127mg，0.22mmol，1eq)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的混合物中，加入1-羟基苯并三唑(60mg，0.45mmol，2eq)，N-(3-二甲基氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺盐酸盐(86mg，0.45mmol，2eq)和N,N-二异丙基乙胺(145mg，1.13mmol，0.20mL，5eq)。将混合物在25℃下搅拌12小时。将混合物用水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL x 3)萃取。合并的有机层用水(30mL x 2)和盐水(30mL x2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。残余物通过制备型薄层色谱纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)，以得到为浅黄色固体的4-[6-氯-2-[[3-[2-[2-[2-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]氨基]-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(150mg，0.15mmol，69％产率)。LC/MS(ESI)m/z:964.4[M+1]⁺.

步骤4：3-(((S)-6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)-N-甲基丙酰胺的制备

向4-[6-氯-2-[[3-[2-[2-[2-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]氨基]-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(150mg，0.15mmol，1eq)在二氯甲烷(4mL)中的混合物中，加入三氟乙酸(1mL)。将混合物在25℃下搅拌1小时。减压浓缩混合物以得到为绿色油的3-[[6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氨基]-N-[2-[2-[2-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙基]-N-甲基-丙酰胺(150mg，三氟乙酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:864.3[M+1]⁺.

步骤5：3-(((S)-4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)-N-甲基丙酰胺的制备

在-78℃下向3-[[6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氨基]-N-[2-[2-[2-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙基]-N-甲基-丙酰胺(75mg，0.08mmol，1eq，三氟乙酸盐)和2,6-二甲基吡啶(82mg，0.77mmol，0.09mL，10eq)在二氯甲烷(20mL)中的混合物中，加入于二氯甲烷(5mL)中的丙-2-烯酰氯(7mg，0.08mmol，0.006mL，1eq)。将混合物在氮气气氛下于-78℃搅拌30分钟。将混合物用水(20mL)淬灭。然后将其用二氯甲烷(20mL x 2)萃取。合并的有机层用水(20mL x 2)和盐水(20mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。残余物通过半制备型反相HPLC纯化。得到为黄色固体的3-[[6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氨基]-N-[2-[2-[2-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙基]-N-甲基-丙酰胺(36.9mg，0.04mmol，51％产率，99％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:918.3[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.09(s,1H),10.47(s,1H),8.10-8.00(m,1H),7.94-7.77(m,1H),7.55-7.51(m,1H),7.39-7.37(m,1H),7.11-7.00(m,2H),6.87-6.74(m,3H),6.59-6.56(m,1H),6.18(d,J＝16.8Hz,1H),5.75(d,J＝9.6Hz,1H),5.04(dd,J＝4.8,13.2Hz,1H),4.25-4.13(m,3H),3.85-3.68(m,17H),2.95-2.84(m,4H),2.70-2.59(m,6H),2.02-1.99(m,1H).

3-(((R)-4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)-N-甲基丙酰胺(示例性化合物112)的示例性合成

步骤1：4-((7R)-6-氯-2-((3-((2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基)-3-氧代丙基)氨基)-8-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[2-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]乙基氨基]异吲哚啉-1,3-二酮(120mg，0.22mmol，1eq，三氟乙酸盐)和3-[[4-(4-叔丁氧基羰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酸(127mg，0.22mmol，1eq)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的混合物中，加入1-羟基苯并三唑(60mg，0.45mmol，2eq)，N-(3-二甲基氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺盐酸盐(86mg，0.45mmol，2eq)和N,N-二异丙基乙胺(145mg，1.13mmol，0.2mL，5eq)。将混合物在25℃下搅拌4小时。将混合物用水(20mL)稀释。然后将其用乙酸乙酯(20mL x 3)萃取。合并的有机层用水(30mL x 2)和盐水(30mL x2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过制备型薄层色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)残余物。得到为浅黄色油的4-[6-氯-2-[[3-[2-[2-[2-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]氨基]-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(160mg，0.16mmol，73％产率)。LC/MS(ESI)m/z:964.4[M+1]⁺.

步骤2：3-(((R)-6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)-N-甲基丙酰胺的制备

向4-[6-氯-2-[[3-[2-[2-[2-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]氨基]-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(160mg，0.16mmol，1eq)在二氯甲烷(4mL)中的混合物中，加入三氟乙酸(1mL)。将混合物在25℃下搅拌1小时。减压浓缩混合物以得到为绿色油的3-[[6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氨基]-N-[2-[2-[2-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙基]-N-甲基-丙酰胺(160mg，三氟乙酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:864.3[M+1]⁺.

步骤3：3-(((R)-4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)-N-甲基丙酰胺的制备

在-78℃下向3-[[6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氨基]-N-[2-[2-[2-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙基]-N-甲基-丙酰胺(80mg，0.08mmol，1eq，三氟乙酸盐)和2,6-二甲基吡啶(87mg，0.81mmol，0.09mL，10eq)在二氯甲烷(20mL)中的混合物中，加入于二氯甲烷(5mL)中的丙-2-烯酰氯(7mg，0.08mmol，0.006mL，1eq)。将混合物在氮气气氛下于-78℃搅拌30分钟。将混合物用水(20mL)淬灭。然后将其用二氯甲烷(20mL x 2)萃取。合并的有机层用水(20mL x 2)和盐水(20mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。残余物通过半制备型反相HPLC纯化。得到为黄色固体的3-[[6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氨基]-N-[2-[2-[2-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙基]-N-甲基-丙酰胺(45.3mg，0.04mmol，59％产率，99％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:918.3[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.09(s,1H),10.49(s,1H),8.02-8.00(m,1H),7.95-7.80(m,1H),7.55-7.51(m,1H),7.40-7.38(m,1H),7.12-7.01(m,2H),6.88-6.74(m,3H),6.55-6.50(m,1H),6.18(d,J＝16.8Hz,1H),5.75(d,J＝9.6Hz,1H),5.04(dd,J＝4.8,13.6Hz,1H),4.20-4.11(m,3H),3.86-3.68(m,17H),2.95-2.84(m,4H),2.71-2.55(m,6H),2.02-2.00(m,1H).

(E)-5-(2-(2-((5-(4-(6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊-3-烯-1-基)氧基)乙氧基)乙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(示例性化合物169)的示例性合成

步骤1：2-(2-(3-(苄氧基)丙氧基)乙氧基)乙-1-醇的制备

在0℃下向2,2'-氧基二乙醇(8g，74.9mmol)在干燥的N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中的溶液中，加入氢化钠(60％于矿物油中)(1.5g，37.4mmol)。将混合物在50℃下搅拌1小时。然后在50℃下加入3-(苄氧基)丙基4-甲基苯磺酸酯(4g，12.5mmol)，并将混合物在70℃下搅拌12小时。将混合物冷却至室温，并用乙酸乙酯(100ml)和水(200ml)分配。收集有机层，用盐水(50ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩，以得到粗残余物，将所述残余物通过硅胶快速色谱法纯化(用在己烷中的33-50％乙酸乙酯至在二氯甲烷中的2％甲醇洗脱)，以得到为黄色油的2-(2-(3-(苄氧基)丙氧基)乙氧基)乙醇(1.94g，61％)。

步骤2：2-(2-(2-(3-(苄氧基)丙氧基)乙氧基)乙氧基)四氢-2H-吡喃的制备

在回流下搅拌2-(2-(3-(苄氧基)丙氧基)乙氧基)乙醇(1.94g，7.63mmol)，3,4-二氢-2H-吡喃(1.28g，15.25mmol)、吡啶-1-鎓4-甲基苯磺酸酯(960mg，3.81mmol)和N,N-二甲基吡啶-4-胺(93mg，0.76mmol)在二氯甲烷(20mL)中的混合物5小时。浓缩混合物，并且在水(30ml)和乙酸乙酯(20mL)之间分配残余物。收集有机层，用盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩以得到粗残余物，将所述残余物通过硅胶快速色谱法纯化(用在己烷中的18-25％乙酸乙酯洗脱)，以得到为无色油的2-(2-(2-(3-(苄氧基)丙氧基)乙氧基)乙氧基)四氢-2H-吡喃(2.4g，88％)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ1.48-1.64(m,4H),1.68-1.75(m,1H),1.79-1.85(m,1H),1.87-1.93(m,2H),3.47-3.53(m,1H),3.55-3.69(m,11H),3.84-3.90(m,2H),4.50(s,2H),4.63(t,J＝3.6Hz,1H),7.27-7.36(m,5H).

步骤3：3-(2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)丙-1-醇的制备

在室温下，在氢气气氛(氢气球)下搅拌2-(2-(2-(3-(苄氧基)丙氧基)乙氧基)乙氧基)四氢-2H-吡喃(2.4g，7.09mmol)和钯/炭(10％，240mg)在甲醇(30ml)中的混合物1小时。通过过滤除去钯/炭，并用甲醇(10mL)洗涤。减压浓缩合并的滤液以提供为灰色油的3-(2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)丙-1-醇(1.53g，92％)。

步骤4：3-(2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)丙醛的制备

在室温下搅拌3-(2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)丙-1-醇(1.53g，6.16mmol)和Dess-Martin高碘烷(5.2g，12.32mmol)在二氯甲烷(15ml)中的混合物1小时。浓缩混合物，并用己烷(10mL)洗涤残余物。将混合物过滤并将滤液减压浓缩，以得到为无色油的3-(2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)丙醛(1.3g，85％)。

步骤5：(E)-5-(2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)戊-2-烯酸叔丁酯的制备

在室温下搅拌3-(2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)丙醛(600mg，2.44mmol)和2-(三苯基亚正膦基)乙酸叔丁酯(918mg，2.44mmol)在二氯甲烷(6ml)中的混合物2小时。浓缩混合物，通过硅胶快速色谱法纯化(用在己烷中的13-20％乙酸乙酯洗脱)残余物，以得到为无色油的(E)-5-(2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)戊-2-烯酸叔丁酯(420mg，50％)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ1.48(s,9H),1.50-1.62(m,4H),1.69-1.76(m,1H),1.79-1.87(m,1H),2.44-2.49(m,2H),3.48-3.53(m,1H),3.57-3.70(m,9H),3.84-3.90(m,2H),4.63(t,J＝3.6Hz,1H),5.78-5.82(m,1H),6.81-6.88(m,1H).

步骤6：(E)-5-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)戊-2-烯酸叔丁酯的制备

在50℃下搅拌(E)-5-(2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)戊-2-烯酸叔丁酯(420mg，1.22mmol)和吡啶-1-鎓4-甲基苯磺酸酯(154mg，0.61mmol)在甲醇(5mL)中的混合物6小时。浓缩混合物，并在水(20mL)和乙酸乙酯(10mL)之间分配残余物。收集有机层，用盐水(10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩以得到为无色油的(E)-5-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)戊-2-烯酸叔丁酯(275mg，86％)。

步骤7：(E)-5-(2-(2-(甲苯磺酰基氧基)乙氧基)乙氧基)戊-2-烯酸叔丁酯的制备

在0℃下向(E)-5-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)戊-2-烯酸叔丁酯(275mg，1.05mmol)，三乙胺(215mg，2.1mmol)和N,N-二甲基吡啶-4-胺(13mg，0.1mmol)在二氯甲烷(3ml)中的溶液中，加入4-甲苯磺酰氯(212mg，1.1mmol)。将混合物在室温搅拌3小时。将混合物用二氯甲烷(20mL)稀释，用水(10ml)，盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，以得到粗残余物，将所述残余物通过硅胶快速色谱法纯化(用在己烷中的18-25％乙酸乙酯洗脱)，以得到为无色油的(E)-5-(2-(2-(甲苯磺酰基氧基)乙氧基)乙氧基)戊-2-烯酸叔丁酯(240mg，55％)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ1.47(s,9H),2.41-2.47(m,5H),3.52-3.59(m,6H),3.68-3.70(m,2H),4.15-4.18(m,2H),5.77-5.81(m,1H),6.81-6.84(m,1H),7.34(d,J＝8.0Hz,2H),7.80(d,J＝8.4Hz,2H).

步骤8：(E)-5-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)乙氧基)乙氧基)戊-2-烯酸叔丁酯的制备

在50℃下搅拌(E)-5-(2-(2-(甲苯磺酰基氧基)乙氧基)乙氧基)戊-2-烯酸叔丁酯(240mg，0.58mmol)、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-羟基异吲哚啉-1,3-二酮(159mg，0.58mmol)和碳酸钾(160mg，1.16mmol)在干燥N,N-二甲基甲酰胺(3ml)中的混合物16小时。将混合物在乙酸乙酯(20ml)和水(30ml)之间分配。收集有机层，用盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩，以得到粗残余物，将其通过硅胶快速色谱法纯化(用在二氯甲烷中的1-2％甲醇洗脱)，以得到为无色油的(E)-5-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)乙氧基)乙氧基)戊-2-烯酸叔丁酯(200mg，67％)。LC/MS(ESI)m/z:517.40[M+1]⁺.

步骤9：(E)-5-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)乙氧基)乙氧基)戊-2-烯酸的制备

在室温下向(E)-5-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)乙氧基)乙氧基)戊-2-烯酸叔丁酯(100mg，0.19mmol)在二氯甲烷(2ml)中的溶液中，加入2,2,2-三氟乙酸(0.5ml)。将混合物在室温搅拌30分钟。将混合物浓缩并将残余物通过制备型TLC纯化(在二氯甲烷中的10％甲醇/)，以得到为无色油的(E)-5-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)乙氧基)乙氧基)戊-2-烯酸(64mg，72％)。LC/MS(ESI)m/z:461.10[M+1]⁺.

步骤10：(E)-5-(2-(2-((5-(4-(6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊-3-烯-1-基)氧基)乙氧基)乙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮的制备

在0℃下向(E)-5-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)乙氧基)乙氧基)戊-2-烯酸(42mg，0.09mmol)、4-(6-氯-8-氟-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-7-基)萘-2-醇(40mg，0.1mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(47mg，0.36mmol)在干燥N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中的溶液中，加入HATU(2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐)(69mg，0.18mmol)，使所得混合物温热至室温，并在室温搅拌15分钟。将混合物在乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)之间分配。收集有机层，用盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩，以得到粗残余物，将所述残余物通过HPLC纯化，以得到为白色固体的(E)-5-(2-(2-((5-(4-(6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊-3-烯-1-基)氧基)乙氧基)乙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(22mg，28％)。LC/MS(ESI)m/z:851.20[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ2.37-2.48(m,3H),2.54-2.65(m,2H),2.83-2.93(m,1H),3.54-3.94(m,16H),4.25-4.40(m,2H),5.09-5.13(m,1H),6.53-6.58(m,1H),6.70-6.77(m,1H),7.11-7.46(m,7H),7.82(d,J＝8.0Hz,2H),8.08(s,1H),8.71(s,1H),10.06(s,1H),11.10(s,1H).

4-(6-氯-8-氟-2-(((S)-17-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-4,18,18-三甲基-3,15-二氧代-7,10,13-三氧杂-4,16-二氮杂十九烷基)氨基)-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酰胺(示例性化合物183)的示例性合成

步骤1：4-(6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)-2-((3-甲氧基-3-氧代丙基)氨基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

将4-[7-溴-6-氯-8-氟-2-[(3-甲氧基-3-氧代-丙基)氨基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.00g，1.83mmol，1eq)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)萘-2-醇(593mg，2.19mmol，1.2eq)、磷酸钾(1.5M，3.7mL，3eq)和[2-(2-氨基苯基)苯基]钯(1+)；二环己基-[2-(2,4,6-三异丙基苯基)苯基]磷烷；甲磺酸盐(155mg，0.18mmol，0.1eq)在四氢呋喃(10mL)中的混合物脱气并用氮气吹扫3次，然后将混合物在氮气气氛下在65℃下搅拌12小时。将反应混合物用水(50mL)稀释，然后用乙酸乙酯(50mL x 2)萃取。合并的有机层用盐水(100mL x 1)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过硅胶柱色谱法(石油醚/乙酸乙酯＝5/1至1/1)纯化残余物，以得到为褐色固体的化合物4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-[(3-甲氧基-3-氧代-丙基)氨基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(780mg，1.28mmol，70％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.73(d,J＝8.4Hz,1H),7.64(d,J＝1.6Hz,1H),7.40(t,J＝7.6Hz,1H),7.34-7.28(m,2H),7.24-7.17(m,1H),7.12(d,J＝2.0Hz,1H),5.86(brs,1H),3.90-3.72(m,6H),3.71-3.60(m,7H),2.69(t,J＝6.4Hz,2H),1.52(s,9H).

步骤2：3-((6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸甲酯的制备

向4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-[(3-甲氧基-3-氧代-丙基)氨基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(780mg，1.28mmol，1eq)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中，加入在二噁烷中的盐酸(4M，5mL)。将混合物在25℃下搅拌15分钟。减压浓缩反应混合物，以得到为黄色固体的化合物3-[[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氨基]丙酸甲酯(700mg,盐酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:510.2[M+1]⁺.

步骤3：3-((4-(4-氨基甲酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸甲酯的制备

向3-[[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氨基]丙酸甲酯(650mg，1.19mmol，1eq,盐酸盐)和三乙胺(361mg，3.57mmol，0.5mL，3eq)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中，加入三甲基硅基异氰酸酯(178mg，1.55mmol，1.3eq)在二氯甲烷(1.5mL)中的溶液。将混合物在20℃下搅拌0.5小时。减压浓缩反应混合物，以得到为黄色固体的化合物3-[[4-(4-氨基甲酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酸甲酯(700mg)。LC/MS(ESI)m/z:553.2[M+1]⁺.

步骤4：3-((4-(4-氨基甲酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸的制备

向3-[[4-(4-氨基甲酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酸甲酯(700mg，1.27mmol，1eq)在四氢呋喃(10mL)和水(1mL)中的溶液中，加入氢氧化锂一水合物(133mg，3.16mmol，2.5eq)。将混合物在20℃下搅拌0.5小时。将反应混合物减压浓缩以除去四氢呋喃。将残余物用盐酸(1M)酸化至pH＝3，在加入盐酸的同时形成一些沉淀。过滤所得混合物，并将滤饼蒸发至干，以得到为褐色固体的化合物3-[[4-(4-氨基甲酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酸(640mg，1.19mmol，94％产率)。LC/MS(ESI)m/z:539.1[M+1]⁺.

步骤5：4-(6-氯-8-氟-2-(((S)-17-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-4,18,18-三甲基-3,15-二氧代-7,10,13-三氧杂-4,16-二氮杂十九烷基)氨基)-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酰胺的制备

在0℃下向(2S,4R)-1-((S)-15-(叔丁基)-13-氧代-5,8,11-三氧杂-2,14-二氮杂十六烷-16-酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(70mg，0.93mmol)、3-((4-(4-氨基甲酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸(40mg，0.074mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(48mg，0.37mmol)在干燥N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中的溶液中，加入HATU(2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐)(72mg，0.18mmol)，使所得混合物温热至室温，并在室温搅拌10分钟。将混合物在乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)之间分配。收集有机层，用盐水(10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩，以得到粗残余物，将所述残余物通过制备型TLC纯化(在二氯甲烷中的10％甲醇)，以得到为浅黄色固体的4-(6-氯-8-氟-2-(((S)-17-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-4,18,18-三甲基-3,15-二氧代-7,10,13-三氧杂-4,16-二氮杂十九烷基)氨基)-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酰胺(40mg，36％两步)。LC/MS(ESI)m/z:1190.40[M+23]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ0.92(s,9H),1.17-1.26(m,3H),1.31-1.39(m,3H),1.74-1.81(m,1H),1.99-2.07(m,1H),2.45(s,3H),2.57-2.70(m,2H),2.74-2.92(m,2H),3.01(s,1H),3.39-3.62(m,20H),3.86-3.98(m,2H),4.22-4.34(m,1H),4.42-4.58(m,2H),4.84-4.94(m,2H),5.12(s,1H),6.08(s,2H),7.04-7.43(m,11H),7.73-7.86(m,2H),8.42(d,J＝7.6Hz,1H),8.97(s,1H),9.97(s,1H).

(2S,4R)-1-((2S)-21-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-2-(叔丁基)-18-甲基-4,19-二氧代-6,9,12,15-四氧杂-3,18-二氮杂二十一烷酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(示例性化合物194)的示例性合成

步骤1：3-((4-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸的制备

向4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-[(3-甲氧基-3-氧代-丙基)氨基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(7.02g，11.51mmol，1eq)在四氢呋喃(25mL)、甲醇(25mL)和水(50mL)中的溶液中，加入氢氧化锂一水合物(4.83g，115.07mmol，10eq)，将混合物在15℃下搅拌2小时。将混合物倒入水(10mL)中，用1M盐酸将pH调节至3。用乙酸乙酯(150mL x 3)萃取水相。合并的有机相用盐水(20mL x 2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。得到为黄色固体的化合物3-[[4-(4-叔丁氧基羰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酸(6.96g)。LC/MS(ESI)m/z:596.3[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.19(br s,1H),10.06(s,1H),7.85-7.75(m,2H),7.62-7.35(m,2H),7.28(d,J＝2.2Hz,1H),7.23(d,J＝3.7Hz,2H),7.07(d,J＝2.2Hz,1H),3.80-3.47(m,10H),2.56(br s,2H),1.45(s,9H).

步骤2：4-(6-氯-8-氟-2-(((S)-20-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-4,21,21-三甲基-3,18-二氧代-7,10,13,16-四氧杂-4,19-二氮杂二十二烷酰基)氨基)-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

在0℃下向(2S,4R)-1-[(2S)-3,3-二甲基-2-[[2-[2-[2-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(130mg，0.18mmol，1eq，盐酸盐)、3-[[4-(4-叔丁氧基羰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酸(106mg，0.18mmol，1eq)和N,N-二异丙基乙胺(69mg，0.54mmol，0.09mL，3eq)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的溶液中，相继加入1-羟基苯并三唑(29mg，0.21mmol，1.2eq)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(41mg，0.21mmol，1.2eq)，然后在20℃下搅拌2小时。将反应混合物用30mL水淬灭，然后用乙酸乙酯(20mL x 3)萃取。合并的有机相用盐水(10mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩以得到残余物。通过制备型TLC纯化(二氯甲烷/甲醇＝10/1)残余物。得到为灰白色固体的4-[6-氯-8-氟-2-[[3-[2-[2-[2-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]氨基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(123mg，0.09mmol，50％产率，92％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:635.6[M/2+1]⁺.

步骤3：(2S,4R)-1-((2S)-2-(叔丁基)-21-((6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-18-甲基-4,19-二氧代-6,9,12,15-四氧杂-3,18-二氮杂二十一烷酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向4-[6-氯-8-氟-2-[[3-[2-[2-[2-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]氨基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(170mg，0.13mmol，1eq)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中，加入三氟乙酸(770mg，6.75mmol，0.5mL，50.45eq)，然后在20℃下搅拌2小时。浓缩反应混合物以得到残余物。得到为黄色固体的(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氨基]丙酰基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(170mg，0.13mmol，98％产率，三氟乙酸)。

步骤4：(2S,4R)-1-((2S)-21-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-2-(叔丁基)-18-甲基-4,19-二氧代-6,9,12,15-四氧杂-3,18-二氮杂二十一烷酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

在-65℃下向(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氨基]丙酰基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(170mg，0.13mmol，1eq，三氟乙酸)和2,6-二甲基吡啶(142mg，1.32mmol，0.15mL，10eq)在二氯甲烷(15mL)中的溶液中，加入丙-2-烯酰氯(12mg，0.13mmol，0.01mL，1eq)在二氯甲烷(10mL)中的溶液，然后在这一温度下搅拌10分钟。将反应混合物用水10mL淬灭，然后用二氯甲烷(10mL x 3)萃取。合并的有机相用盐水(10mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩以得到残余物。通过半制备型反相HPLC纯化残余物，以得到为灰白色固体的(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酰基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(38mg，0.03mmol，22％产率，98％纯度，甲酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:612.3[M/2+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.02(br s,1H),8.98(s,1H),8.45(br d,J＝7.7Hz,1H),8.17(s,1H),7.84-7.76(m,2H),7.49-7.33(m,6H),7.28-7.10(m,4H),7.03(d,J＝2.2Hz,1H),6.85(dd,J＝10.5,16.7Hz,1H),6.26-6.11(m,1H),5.81-5.67(m,1H),5.14(br s,1H),4.89(br t,J＝7.2Hz,1H),4.53(d,J＝9.5Hz,1H),4.43(t,J＝8.0Hz,1H),4.27(br s,1H),3.99-3.88(m,2H),3.86-3.65(m,7H),3.62-3.60(m,1H),3.61-3.40(m,21H),3.03-2.77(m,1H),3.03-2.77(m,1H),3.03-2.77(m,1H),2.61(br s,1H),2.44(s,3H),2.10-1.98(m,1H),1.81-1.70(m,1H),1.48-1.31(m,3H),0.96-0.88(m,1H),0.92(s,8H).

(2S,4R)-1-((S)-18-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-((R)-2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-2-基)氨基)-2-(叔丁基)-15-甲基-4,16-二氧代-6,9,12-三氧杂-3,15-二氮杂十八烷酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(示例性化合物210)的示例性合成

步骤1：4-(6-氯-8-氟-7-((R)-2-氟-6-羟基苯基)-2-(((S)-17-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-4,18,18-三甲基-3,15-二氧代-7,10,13-三氧杂-4,16-二氮杂十九烷基)氨基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向(2S,4R)-1-[(2S)-3,3-二甲基-2-[[2-[2-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(146mg，0.21mmol，1.2eq，盐酸盐)和3-[[4-(4-叔丁氧基羰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酸(100mg，0.18mmol，1eq)在N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中的混合物中，加入1-羟基苯并三唑(36mg，0.27mmol，1.5eq)，1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(51mg，0.27mmol，1.5eq)和N,N-二异丙基乙胺(69mg，0.53mmol，0.1mL，3eq)。将混合物在15℃下搅拌16小时。将反应混合物用水(20mL)淬灭，然后用二氯甲烷(50mL)稀释，并用二氯甲烷(50mL x 2)萃取。合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过制备型TLC纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)残余物，以得到为黄色油的4-[6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)-2-[[3-[2-[2-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]氨基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(150mg，0.13mmol，71％产率)。LC/MS(ESI)m/z:1193.2[M+1]⁺.

步骤2：(2S,4R)-1-((S)-2-(叔丁基)-18-((6-氯-8-氟-7-((R)-2-氟-6-羟基苯基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-15-甲基-4,16-二氧代-6,9,12-三氧杂-3,15-二氮杂十八烷酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向4-[6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)-2-[[3-[2-[2-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]氨基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(150mg，0.13mmol，1eq)在二氯甲烷(8mL)中的溶液中，加入三氟乙酸(3.08g，26.97mmol，2.00mL，215eq)。将混合物在15℃下搅拌20分钟。浓缩混合物以得到为黄色油的(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[2-[3-[[6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氨基]丙酰基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(150mg，0.12mmol，99％产率，三氟乙酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:1093.1[M+1]⁺.

步骤3：(2S,4R)-1-((S)-18-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-((R)-2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-2-基)氨基)-2-(叔丁基)-15-甲基-4,16-二氧代-6,9,12-三氧杂-3,15-二氮杂十八烷酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

在-70℃下向(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[2-[3-[[6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氨基]丙酰基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(76mg，0.06mmol，1eq，三氟乙酸盐)和2,6-二甲基吡啶(67mg，0.63mmol，10eq)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中，滴加丙-2-烯酰氯(5mg，0.06mmol，0.9eq)，持续10分钟。将反应混合物用水(20mL)淬灭，然后用二氯甲烷(50mL)稀释，并用二氯甲烷(50mL x 2)萃取。合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过半制备型反相HPLC纯化残余物以得到为白色固体的(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[2-[3-[[6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酰基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(30mg，0.03mmol，42％产率，100％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:1147.3[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.22(brs,1H),8.98(s,1H),8.45(br d,J＝7.8Hz,1H),7.72(s,1H),7.55-6.99(m,7H),6.92-6.68(m,3H),6.17(dd,J＝2.4,16.7Hz,1H),5.79-5.63(m,1H),5.14(br s,1H),4.89(br t,J＝6.4Hz,1H),4.54(d,J＝9.4Hz,1H),4.44(t,J＝8.0Hz,1H),4.28(br s,1H),3.99-3.90(m,2H),3.80-3.49(m,24H),3.06-2.82(m,3H),2.75-2.58(m,2H),2.45(s,3H),2.04(br d,J＝8.0Hz,1H),1.81-1.72(m,1H),1.48-1.32(m,3H),0.93(br d,J＝2.4Hz,9H).

(2S,4R)-1-((S)-21-(((S)-4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-2-基)氨基)-2-(叔丁基)-18-甲基-4,19-二氧代-6,9,12,15-四氧杂-3,18-二氮杂二十一烷酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(示例性化合物211)的示例性合成

步骤1：4-((S)-6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-2-(((S)-20-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-4,21,21-三甲基-3,18-二氧代-7,10,13,16-四氧杂-4,19-二氮杂二十二烷酰基)氨基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向(2S,4R)-1-[(2S)-3,3-二甲基-2-[[2-[2-[2-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(150mg，0.20mmol，1eq，盐酸盐)和3-[[4-(4-叔丁氧基羰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酸(129mg，0.20mmol，1eq)在N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中的混合物中，加入1-羟基苯并三唑(41mg，0.30mmol，1.5eq)，N-(3-二甲基氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺盐酸盐(59mg，0.30mmol，1.5eq)和N,N-二异丙基乙胺(79mg，0.61mmol，0.10mL，3eq)。将混合物在20℃下搅拌12小时。将混合物用水(25mL)稀释。然后将其用乙酸乙酯(20mL x 3)萃取。合并的有机层用水(30mL x 2)和盐水(30mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过制备型TLC纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)残余物。得到为浅黄色油的化合物4-[6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)-2-[[3-[2-[2-[2-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]氨基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(150mg，0.12mmol，58％产率)。LC/MS(ESI)m/z:1237.6[M+1]⁺.

步骤2：(2S,4R)-1-((S)-2-(叔丁基)-21-(((S)-6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-18-甲基-4,19-二氧代-6,9,12,15-四氧杂-3,18-二氮杂二十一烷酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向4-[6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)-2-[[3-[2-[2-[2-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]氨基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(150mg，0.12mmol，1eq)在二氯甲烷(4mL)中的混合物中，加入三氟乙酸(1mL)。将混合物在20℃下搅拌1小时。减压浓缩混合物以得到为浅黄色油的(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氨基]丙酰基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(150mg，三氟乙酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:1237.6[M+1]⁺.

步骤3：(2S,4R)-1-((S)-21-(((S)-4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-2-基)氨基)-2-(叔丁基)-18-甲基-4,19-二氧代-6,9,12,15-四氧杂-3,18-二氮杂二十一烷酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

在氮气气氛下，于-75℃向(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氨基]丙酰基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(75mg，0.06mmol，1eq，三氟乙酸盐)和2,6-二甲基吡啶(64mg，0.60mmol，0.07mL，10eq)在二氯甲烷(20mL)中的混合物中，滴加于二氯甲烷(5mL)中的丙-2-烯酰氯(5mg，0.06mmol，1eq)。然后将其在-75℃下搅拌20分钟。将混合物用水(20mL)淬灭。然后将其用二氯甲烷(20mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水(30mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过半制备型反相HPLC纯化残余物。得到为白色固体的(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酰基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(29.8mg，0.02mmol，39％产率，98％纯度，甲酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:1213.3[M+23]⁺；¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.87(s,1H),8.27(s,1H),7.77(s,1H),7.43-7.35(m,4H),7.32-7.27(m,1H),6.84-6.68(m,3H),6.29-6.24(m,1H),5.81-5.78(m,1H),5.01-4.98(m,1H),4.69-4.66(m,1H),4.60-4.55(m,1H),4.11-3.98(m,2H),3.90-3.82(m,7H),3.75-3.72(m,4H),3.66-3.51(m,17H),3.15(s,1H),2.96-2.94(m,2H),2.86-2.83(m,1H),2.78-2.74(m,1H),2.47(s,3H),2.23-2.17(m,1H),2.01-1.92(m,1H),1.56-1.48(m,3H),1.03-1.02(m,9H).

(2S,4R)-1-((2S)-2-(叔丁基)-14-((1-((2R)-2-((6-氯-4-(4-(2,2-二羟基乙酰基)哌嗪-1-基)-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)氧基)-4-氧代-6,9,12-三氧杂-3-氮杂十四烷酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(示例性化合物246)的示例性合成

步骤1：4-((11-氧代-3,6,9,12-四氧杂十四烷酰基)氧基)哌-啶1-羧酸叔丁酯的制备

将4-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.38g，4.14mmol，1.00eq)和四乙酸二铑(II)(183mg，0.41mmol，0.10eq)在二氯甲烷(15mL)中的溶液冷却至0℃，然后滴加2-重氮乙酸乙酯(2.83g，24.84mmol，6.00eq)。然后将混合物在20℃下搅拌8小时。反应混合物用水(20mL)稀释，然后用乙酸乙酯(20mL x 2)萃取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5/1至1/1)残余物，以得到期望产物。得到为黄色油的化合物4-((11-氧代-3,6,9,12-四氧杂十四烷酰基)氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.36g，3.24mmol，78％产率)。LC/MS(ESI)m/z:320.0[M-99]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.21(q,J＝7.2Hz,2H),4.15(s,2H),3.74-3.62(m,14H),3.49-3.46(m,1H),3.08-3.05(m,2H),1.83(d,J＝8.8Hz,2H),1.53–1.49(m,2H),1.45(s,9H),1.29(t,J＝7.2Hz,3H).

步骤2：2-(2-(2-(2-((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙酸的制备

向4-((11-氧代-3,6,9,12-四氧杂十四烷酰基)氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(600mg，1.43mmol，1.00eq)在四氢呋喃(5mL)和水(2mL)的混合物中的溶液中，加入氢氧化锂水合物(150mg，3.58mmol，2.50eq)。将混合物在20℃下搅拌0.5小时。将反应混合物减压浓缩以得到残余物。将残余物用盐酸(1M)酸化至pH＝3，然后用乙酸乙酯(20mL x 2)萃取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。得到为无色油的化合物2-(2-(2-(2-((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙酸(550mg)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.15(s,2H),3.82-3.63(m,14H),3.56-3.44(m,1H),3.11-2.95(m,2H),1.91-1.80(m,2H),1.58-1.48(m,2H),1.45(s,9H).

步骤3：4-(((S)-13-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-14,14-二甲基-11-氧代-3,6,9-三氧杂-12-氮杂十五烷基)氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备

向2-(2-(2-(2-((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙酸(250mg，0.64mmol，1.00eq)和(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(369mg，0.77mmol，1.20eq,盐酸盐)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中，加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(184mg，0.96mmol，1.50eq)和羟基苯并三唑(129mg，0.96mmol，1.50eq)和二异丙基乙胺(248mg，1.92mmol，3.00eq)。将反应混合物在25℃下搅拌10小时。将反应混合物用水(20mL)稀释，用盐酸(1M)酸化至pH＝3，然后用二氯甲烷(20mL x 2)萃取。合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液(20mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化(乙酸乙酯/甲醇＝1/0至10/1)残余物以得到期望产物。得到为无色油的化合物4-(((S)-13-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-14,14-二甲基-11-氧代-3,6,9-三氧杂-12-氮杂十五烷基)氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(427mg，0.52mmol，82％产率)。LC/MS(ESI)m/z:818.4[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.68(s,1H),7.52-7.31(m,6H),5.30(s,1H),5.16-5.02(m,1H),4.75(t,J＝7.6Hz,1H),4.59-4.46(m,2H),4.15-4.09(m,1H),3.87-3.55(m,15H),3.52-3.43(m,1H),3.28(s,1H),3.12-2.98(m,2H),2.61-2.49(m,4H),2.11-2.05(m,1H),1.89-1.78(m,5H),1.51-1.42(m,12H),1.07(s,9H).

步骤4：(2S,4R)-1-((S)-2-(叔丁基)-4-氧代-14-(哌啶-4-基氧基)-6,9,12-三氧杂-3-氮杂十四烷酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向4-(((S)-13-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-14,14-二甲基-11-氧代-3,6,9-三氧杂-12-氮杂十五烷基)氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(427mg，0.52mmol，1.00eq)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中，加入氯化氢/二噁烷(4.0M，3.0mL，22.99eq)。将混合物在25℃下搅拌0.5小时。减压浓缩反应混合物以得到残余物。得到为白色固体的化合物(2S,4R)-1-((S)-2-(叔丁基)-4-氧代-14-(哌啶-4-基氧基)-6,9,12-三氧杂-3-氮杂十四烷-1-酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(400mg，盐酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:718.4[M+1]⁺.

步骤5：4-(6-氯-8-氟-2-(((R)-1-(4-(((S)-13-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-14,14-二甲基-11-氧代-3,6,9-三氧杂-12-氮杂十五烷基)氧基)哌啶-1-基)丙-2-基)氧基)-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向(2S,4R)-1-[(2S)-3,3-二甲基-2-[[2-[2-[2-[2-(4-哌啶基氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(78mg，0.1mmol，1.2eq，盐酸盐)在甲醇(2mL)中的混合物中，加入硫酸钠(28mg，0.34mmol，4eq)。将反应混合物在25℃下搅拌20分钟。加入4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-[(1R)-1-甲基-2-氧代-乙氧基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(50mg，0.09mmol，1eq)在二氯甲烷(2mL)中的溶液，然后加入乙酸(10mg，0.17mmol，2eq)。将反应混合物冷却至0℃，并加入氰基硼氢化钠(16mg，0.26mmol，3eq)。将反应混合物在25℃下搅拌4小时。加入甲醇(2mL)，以得到为澄清溶液的反应混合物。通过制备型TLC纯化(在二氯甲烷中的10％甲醇)溶液，以得到为无色胶的4-[6-氯-8-氟-2-[(1R)-2-[4-[2-[2-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-哌啶基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(45mg，0.03mmol，38％产率，94％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:1281.6[M+1]⁺.

步骤6：(2S,4R)-1-((2S)-2-(叔丁基)-14-((1-((2R)-2-((6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)氧基)-4-氧代-6,9,12-三氧杂-3-氮杂十四烷酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向4-[6-氯-8-氟-2-[(1R)-2-[4-[2-[2-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-哌啶基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(45mg，0.03mmol，1eq)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中，加入三氟乙酸(308mg，2.70mmol，0.2mL，77.01eq)。将反应混合物在25℃下搅拌1小时。将反应溶液真空浓缩以得到为无色胶的(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(45mg，0.03mmol，98％产率，三氟乙酸盐)。

步骤7：(2S,4R)-1-((2S)-2-(叔丁基)-14-((1-((2R)-2-((6-氯-4-(4-(2,2-二羟基乙酰基)哌嗪-1-基)-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)氧基)-4-氧代-6,9,12-三氧杂-3-氮杂十四烷酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(85mg，0.07mmol，1eq，盐酸盐)和2,2-二羟基乙酸(65mg，0.7mmol，10eq)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的混合物中，加入O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(80mg，0.21mmol，3eq)和N,N-二异丙基乙胺(90mg，0.7mmol，0.1mL，10eq)。将混合物在25℃下搅拌12小时。将混合物过滤。通过制备型HPLC纯化滤液。得到为白色固体的化合物(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-4-[4-(2,2-二羟基乙酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁基酰]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(17.5mg，0.01mmol，19％产率，97.8％纯度，甲酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:1256.4[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.04(s,1H),8.97(s,1H),8.43-8.41(d,J＝8.0Hz,1H),8.18(s,1H),8.00(s,1H),7.81-7.79(d,J＝8.0Hz,1H),7.58-7.26(m,7H),7.24-7.14(m,2H),7.09-7.01(m,1H),6.43-6.30(m,1H),5.52-5.03(m,2H),4.95-4.80(m,1H),4.71-4.34(m,2H),4.27(s,1H),4.00-3.78(m,8H),3.75-3.66(m,2H),3.63-3.49(m,12H),3.23-3.18(m,3H),2.90-2.74(m,2H),2.44(s,4H),2.18-1.98(m,5H),1.81-1.66(m,3H),1.40-1.18(m,8H),0.92(s,9H).

(2S,4R)-1-((S)-2-((E)-19-(3-(4-((4-氯-2-羟基-5-(1-甲基环丙基)苯基)甘氨酰基)哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-19-氧代-3,6,9,12,15-五氧杂十九-17-烯酰胺)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-羧酰胺(示例性化合物251)的示例性合成

步骤1：17-羟基-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷酸叔丁酯的制备

在氮气气氛下，在0℃下向3,6,9,12-四氧杂十四烷-1,14-二醇(3eq)在无水N,N-二甲基甲酰胺中的冷和搅拌的溶液中，分批加入氢化钠(60％，1.2eq)。使反应混合物温热至室温，并在室温下搅拌1小时，然后再冷却至0℃，分批加入2-溴乙酸叔丁酯(1eq)，使所得混合物温热至室温并在室温下搅拌2小时。在冰水冷却下，用水小心地淬灭反应，并用二氯甲烷萃取。合并的有机相用盐水洗涤，经无水硫酸镁干燥并减压蒸发至干。通过硅胶色谱法纯化(洗脱剂为在二氯甲烷中的1-6％甲醇)粗产物，以得到为浅黄色油的期望产物17-羟基-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷-1-酸叔丁酯，产率29％。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ1.48(s,9H),3.60-3.73(m,20H),4.02(s,2H).

步骤2：17-氧代-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷酸叔丁酯的制备

向17-羟基-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷酸叔丁酯(1g，3.52mmol)在CH₃CN(30mL)中的溶液中，加入IBX(1.4g，4.87mmol)。将溶液搅拌并在氮气下加热至回流5小时。将反应混合物冷却至室温，然后通过硅藻土过滤。减压浓缩滤液。通过硅胶柱色谱法纯化(PE/EA＝5/1至EA)残余物，以得到标题化合物(875mg，2.5mmol，71％产率)。

步骤2：1-(叔丁基)19-甲基(E)-3,6,9,12,15-五氧杂十九-17-烯二酸酯的制备

向17-氧代-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷酸叔丁酯(875mg，2.5mmol)和2-(二甲氧基磷酰基)乙酸甲酯(844mg，4.64mmol)在THF(10mL)中的溶液中，加入DBU(1.1g，6.96mmol)。将溶液在N₂下在室温搅拌5小时。反应混合物用水(20mL)淬灭。有机相用盐水洗涤。有机层经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化(PE/EA，从30/1至1/1)残余物，以得到标题化合物(224mg，0.55mmol，22％产率)。

步骤3：(E)-3-氧代-2,7,10,13,16,19-六氧杂二十一-4-烯-21-酸的制备

向1-(叔丁基)19-甲基(E)-3,6,9,12,15-五氧杂十九-17-烯二酸酯(224mg，0.55mmol)在DCM(5mL)中的溶液中，加入TFA(1mL)。将混合物在室温搅拌1小时。减压浓缩溶液以得到产物(E)-3-氧代-2,7,10,13,16,19-六氧杂二十一-4-烯-21-酸(240mg)。

步骤4：(S,E)-3-((2S,4R)-4-羟基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-2,2-二甲基-5-氧代-7,10,13,16,19-五氧杂-4-氮杂二十三-21-烯-23-酸甲酯的制备

向(E)-3-氧代-2,7,10,13,16,19-六氧杂二十一-4-烯-21-酸(240mg)在DCM(10mL)中的溶液中，加入(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-羧酰胺盐酸盐(257mg，0.55mmol)、TEA(154mg，1.52mmol)和HATU(289mg，0.76mmol)。将混合物在室温搅拌1小时。然后将其用H₂O(10mL)淬灭。将混合物用DCM萃取。合并的有机层用盐水洗涤。有机相经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化(DCM/MeOH＝从50/1至20/1)残余物。以得到甲基(S,E)-3-((2S,4R)-4-羟基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-2,2-二甲基-5-氧代-7,10,13,16,19-五氧杂-4-氮杂二十三-21-烯-23-酸(206mg，0.27mmol)。

步骤5：甲基(S,E)-3-((2S,4R)-4-羟基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-2,2-二甲基-5-氧代-7,10,13,16,19-五氧杂-4-氮杂二十三-21-烯-23-酸的制备

向(S,E)-3-((2S,4R)-4-羟基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-2,2-二甲基-5-氧代-7,10,13,16,19-五氧杂-4-氮杂二十三-21-烯-23-酸甲酯(206mg，0.27mmol)在THF/水(5mL/5mL)中的溶液中，加入NaOH(33mg，0.81mmol)。将混合物在室温搅拌1小时。用HCl水溶液(1M)将混合物的pH调节至9。减压浓缩混合物以得到甲基(S,E)-3-((2S,4R)-4-羟基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-2,2-二甲基-5-氧代-7,10,13,16,19-五氧杂-4-氮杂二十三-21-烯-23-酸(220mg)。

步骤6：(2S,4R)-1-((S)-2-((E)-19-(3-(4-((4-氯-2-羟基-5-(1-甲基环丙基)苯基)甘氨酰基)哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-19-氧代-3,6,9,12,15-五氧杂十九-17-烯酰胺)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向甲基(S,E)-3-((2S,4R)-4-羟基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-2,2-二甲基-5-氧代-7,10,13,16,19-五氧杂-4-氮杂二十三-21-烯-23-酸(220mg)在DMF(5mL)中的溶液中，相继加入1-(4-(氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)-2-((4-氯-2-羟基-5-(1-甲基环丙基)苯基)氨基)乙-1-酮盐酸盐(116mg，0.28mmol)、TEA(84mg，0.84mmol)和HATU(160mg，0.42mmol)。将得到的混合物在室温搅拌30分钟。将其用H₂O(10mL)淬灭并用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用盐水洗涤。有机相经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物，以得到(2S,4R)-1-((S)-2-((E)-19-(3-(4-((4-氯-2-羟基-5-(1-甲基环丙基)苯基)甘氨酰基)哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-19-氧代-3,6,9,12,15-五氧杂十九-17-烯酰胺)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-羧酰胺(15.5mg，0.014mmol)。¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.87(s,1H),8.25–8.26(m,1H),7.41–7.47(m,4H),6.78–6.84(m,1H),6.65(s,1H),6.36(s,1H),6.23–6.29(m,1H),5.36–5.41(m,1H),4.69–4.71(m,1H),4.50–4.59(m,3H),4.29–4.38(m,2H),4.18–4.20(m,2H),4.05–4.14(m,4H),3.96(s,2H),3.78–3.91(m,3H),3.60–3.70(m,20H),3.24(br,1H),2.48(s,3H),2.37–2.45(m,4H),2.20–2.25(m,1H),2.05–2.12(m,1H),1.90(s,3H),1.71–1.72(m,3H),1.04(s,9H).

(2S,4R)-1-((2S)-2-(2-((5-(4-(6-氯-2-((3-(二甲基氨基)-3-氧代丙基)氨基)-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊基)氧基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(示例性化合物254)的示例性合成

步骤1：17-羟基-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷酸叔丁酯的制备

将氢氧化钠(10.67g，266.67mmol，11.08eq)溶解在水(16mL)中，然后添加到3-苄氧基丙-1-醇(4g，24.07mmol，3.81mL，1eq)，四正丁基氯化铵(7.02g，25.27mmol，7.06mL，1.05eq)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中。然后加入2-溴乙酸叔丁酯(18.78g，96.26mmol，14.22mL，4eq)。将得到的混合物在20℃下搅拌16小时。加入水(80mL)，并分离有机相。用二氯甲烷(200mL x 2)进一步萃取水相。合并的有机相用盐水(80mL x 2)洗涤，干燥并浓缩。通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/0至5/1)残余物，以得到为无色油的2-(3-苄氧基丙氧基)乙酸叔丁酯(1.0g，3.21mmol，13％产率，90％纯度)和为黄色油的2-(3-苄氧基丙氧基)乙酸叔丁酯(6g，14.98mmol，62％产率，70％纯度)。

步骤2：2-(3-羟基丙氧基)乙酸叔丁酯的制备

向2-(3-苄氧基丙氧基)乙酸叔丁酯(6g，14.98mmol，1eq)在乙醇(10mL)中的溶液中，加入钯炭活性催化剂(0.5g 10％纯度)，并将混合物用氢气脱气。将混合物在15℃下在15PSI下搅拌16小时。然后将混合物在40℃下在50PSI下搅拌2小时。过滤混合物。通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5/1至1/1)残余物，以得到为无色液体的2-(3-羟基丙氧基)乙酸叔丁酯(1.1g，5.78mmol，39％产率)。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ4.36(t,J＝5.2Hz,1H),3.92(s,2H),3.53-3.38(m,4H),1.73-1.54(m,2H),1.50-1.38(s,9H).

步骤3：2-(3-氧代丙氧基)乙酸叔丁酯的制备

在-70℃下向草酰氯(1.20g，9.45mmol，0.83mL，3eq)在二氯甲烷(8mL)中的混合物中，滴加于二氯甲烷(4mL)中的二甲基亚砜(984mg，12.60mmol，0.98mL，4eq)，并在-70℃下搅拌0.5小时。滴加于二氯甲烷(4mL)中的2-(3-羟基丙氧基)乙酸叔丁酯(600mg，3.15mmol，1eq)，并在-70℃下搅拌0.5小时。将三乙胺(2.55g，25.20mmol，3.51mL，8eq)滴加到反应混合物中。然后将反应混合物在-70℃下搅拌1小时并在20℃下搅拌1小时。用饱和氯化铵(20mL)淬灭反应混合物，然后用二氯甲烷(50mL)稀释并用二氯甲烷(50mL x 2)萃取。合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，干燥，过滤并减压浓缩以得到为黄色油的2-(3-氧代丙氧基)乙酸叔丁酯(500mg，2.66mmol，84.33％产率)。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.67(t,J＝2.0Hz,1H),8.75(s,1H),4.05-3.91(m,2H),3.78(t,J＝6.0Hz,2H),2.62(dt,J＝2.0,6.0Hz,2H),1.45-1.42(s,9H).

步骤4：(E)-5-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙氧基)戊-2-烯酸甲酯的制备

向2-(3-氧代丙氧基)乙酸叔丁酯(500mg，2.66mmol，1eq)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中，加入2-(三苯基-正膦亚基)乙酸甲酯(889mg，2.66mmol，1eq)。将混合物在15℃下搅拌16小时。将混合物浓缩为残余物。通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10/1至3/1)残余物，以得到为黄色油的(E)-5-(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)戊-2-烯酸甲酯(350mg，1.43mmol，54％产率)。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ6.91(td,J＝6.8,15.6Hz,1H),5.97(td,J＝1.6,15.6Hz,1H),4.06-3.89(m,2H),3.65(s,3H),3.60-3.50(m,2H),2.45(dq,J＝1.6,6.4Hz,2H),1.43(s,9H).

步骤5：(E)-2-((5-甲氧基-5-氧代戊-3-烯-1-基)氧基)乙酸的制备

向(E)-5-(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)戊-2-烯酸甲酯(300mg，1.23mmol，1eq)在二氯甲烷(8mL)中的溶液中，加入三氟乙酸(3.08g，27.01mmol，2mL，22eq)。将混合物在15℃下搅拌1小时。浓缩混合物以得到为黄色油的2-[(E)-5-甲氧基-5-氧代-戊-3-烯氧基]乙酸(370mg，1.22mmol，99％产率，三氟乙酸盐)。

步骤6：2-((5-甲氧基-5-氧代戊基)氧基)乙酸的制备

向2-[(E)-5-甲氧基-5-氧代-戊-3-烯氧基]乙酸(100mg，0.53mmol，1eq)在甲醇(5mL)中的溶液中，加入钯炭活性催化剂(0.05g 10％纯度)，并将混合物用氢气脱气。将整个混合物在15℃在15psi下搅拌16小时。将混合物过滤以获得滤液。浓缩滤液以得到为黄色油的2-(5-甲氧基-5-氧代-戊氧基)乙酸(140mg)。

步骤7：5-(2-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-2-氧代乙氧基)戊酸甲酯的制备

向2-(5-甲氧基-5-氧代-戊氧基)乙酸(140mg，0.74mmol，1eq)和(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(327mg，0.74mmol，1eq)在N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中的混合物中，N,N-二异丙基乙胺(285mg，2.21mmol，0.38mL，3eq)、1-羟基苯并三唑(119mg，0.88mmol，1.2eq)和3-(乙基亚氨基亚甲基氨基)-N,N-二甲基-丙-1-胺；盐酸盐(169mg，0.88mmol，1.2eq)。将混合物在15℃下搅拌2小时。将混合物用水(20mL)淬灭，水相用乙酸乙酯(50mL x2)萃取。合并的有机相用盐水(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过半制备型反相HPLC纯化残余物，以得到为无色油的5-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]戊酸甲酯(120mg，0.19mmol，26％产率)。LC/MS(ESI)m/z:617.5[M+1]⁺.

步骤8：5-(2-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-2-氧代乙氧基)戊酸的制备

向5-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]戊酸甲酯(120mg，0.19mmol，1eq)在四氢呋喃(3mL)、甲醇(3mL)和水(3mL)中的溶液中，加入氢氧化锂一水合物(251mg，5.98mmol，30.74eq)。将混合物在0℃下搅拌3小时。用盐酸(1M)将混合物的pH调至5，并用乙酸乙酯(150mL)萃取水相。合并的有机相用盐水(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩以得到为黄色油的5-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]戊酸(100mg，0.16mmol，85％产率)。

步骤9：(3-(二甲基氨基)-3-氧代丙基)氨基甲酸叔丁酯的制备

向2-氰基-N,N-二甲基-乙酰胺(500mg，4.46mmol，1eq)在乙醇(10mL)中的溶液中，加入雷尼镍(100mg，1.17mmol)，然后加入氢氧化铵(1.82g，17.14mmol，2mL，33％纯度，3.84eq)、二碳酸二叔丁酯(1.46g，6.69mmol，1.54mL，1.5eq)，将混合物在25℃下在氢气(15psi)下搅拌10小时。将混合物过滤并浓缩滤液以得到粗产物。通过硅胶柱色谱法纯化(在石油醚中的20-100％乙酸乙酯)粗产物，以得到为无色油的产物N-[3-(二甲基氨基)-3-氧代-丙基]氨基甲酸叔丁酯(850mg，3.93mmol，88％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ5.43-5.27(m,1H),3.41(q,J＝5.6Hz,2H),2.98(s,3H),2.95(s,3H),2.50(t,J＝5.6Hz,2H),1.42(s,9H).

步骤10：3-氨基-N,N-二甲基丙酰胺盐酸盐的制备

向N-[3-(二甲基氨基)-3-氧代-丙基]氨基甲酸叔丁酯(850mg，3.93mmol，1eq)在二氯甲烷(8mL)中的溶液中加入盐酸/甲醇(4M，8mL，8.14eq)，将混合物在25℃下搅拌2小时。浓缩混合物以得到为无色油的3-氨基-N,N-二甲基-丙酰胺(580mg，3.80mmol，96.7％产率，盐酸)。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.02(br s,3H),2.98-2.90(m,5H),2.83(s,3H),2.68(t,J＝6.7Hz,2H).

步骤11：4-(7-溴-6-氯-2-((3-(二甲基氨基)-3-氧代丙基)氨基)-8-氟喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向3-氨基-N,N-二甲基-丙酰胺(650mg，4.26mmol，2.38eq，盐酸盐)在异丙醇(10mL)中的溶液中，加入二异丙基乙胺(810mg，6.27mmol，1.1mL，3.5eq)，然后加入4-(7-溴-2,6-二氯-8-氟-喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(860mg，1.79mmol，1eq)，将混合物在95℃下搅拌12小时。将混合物浓缩以得到残余物，将这一残余物溶解于乙酸乙酯(100mL)中，并用水(100mL)洗涤，将有机相用无水干燥，过滤，并将滤液浓缩以得到粗产物。通过硅胶柱色谱法纯化(乙酸乙酯/石油醚/二氯甲烷＝5/1/1、3/1/1、2/1/1、1/1/1)这一粗产物，以得到为褐色固体的4-[7-溴-6-氯-2-[[3-(二甲基氨基)-3-氧代-丙基]氨基]-8-氟-喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(750mg，1.34mmol，74％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.56(d,J＝1.9Hz,1H),5.92(br t,J＝6.2Hz,1H),3.84(q,J＝6.2Hz,2H),3.61(br s,8H),3.03(s,3H),2.97(s,3H),2.67(br s,2H),1.50(s,9H).

步骤12：4-(6-氯-2-((3-(二甲基氨基)-3-氧代丙基)氨基)-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向4-[7-溴-6-氯-2-[[3-(二甲基氨基)-3-氧代-丙基]氨基]-8-氟-喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(332mg，0.59mmol，1eq)和4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)萘-2-醇(160mg，0.59mmol，1eq)在二噁烷(8mL)和水(2mL)中的溶液中，加入碳酸钠(188mg，1.78mmol，3eq)、四[三苯基膦]钯(0)(68mg，0.06mmol，0.1eq)，将混合物在90℃在氮气下搅拌5小时。向反应混合物中装入四[三苯基膦]钯(0)(34.22mg，0.029mmol，0.05eq)，并在90℃在氮气下搅拌3小时。将混合物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL，两次)萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，并将滤液浓缩以得到粗产物。通过制备型TLC纯化(二氯甲烷/乙酸乙酯＝1/1)这一粗产物，以得到为褐色固体的4-[6-氯-2-[[3-(二甲基氨基)-3-氧代-丙基]氨基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(100mg，0.16mmol，26.6％产率，98.2％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:623.1[M+1]⁺.

步骤13：3-((6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-N,N-二甲基丙酰胺的制备

向4-[6-氯-2-[[3-(二甲基氨基)-3-氧代-丙基]氨基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(100mg，0.16mmol，1eq)在二氯甲烷(8mL)中的溶液中，加入三氟乙酸(3.08g，27.01mmol，2mL，168.32eq)，将混合物在25℃下搅拌1小时。浓缩混合物以得到粗产物。将这一粗产物用饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(20mL，三次)萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，并将滤液浓缩，以得到为褐色固体的3-[[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氨基]-N,N-二甲基-丙酰胺(95mg)。LC/MS(ESI)m/z:523.1[M+1]⁺.

步骤14：(2S,4R)-1-((2S)-2-(2-((5-(4-(6-氯-2-((3-(二甲基氨基)-3-氧代丙基)氨基)-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊基)氧基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向5-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]戊酸(100mg，0.17mmol，1eq)和3-[[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氨基]-N,N-二甲基-丙酰胺(106mg，0.17mmol，1eq，三氟乙酸盐)在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的混合物中，加入N,N-二异丙基乙胺(64mg，0.50mmol，3eq)、3-(乙基亚氨基亚甲基氨基)-N,N-二甲基-丙-1-胺；盐酸盐(38mg，0.20mmol，1.2eq)和1-羟基苯并三唑(27mg，0.20mmol，1.2eq)。将混合物在15℃下搅拌3小时。将反应混合物用水(20mL)淬灭，然后用二氯甲烷(50mL)稀释，并用二氯甲烷(50mL x 2)萃取。合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过半制备型反相HPLC纯化残余物，以得到为白色固体的(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[5-[4-[6-氯-2-[[3-(二甲基氨基)-3-氧代-丙基]氨基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-基]-5-氧代-戊氧基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(9mg，0.01mmol，4.6％产率，95％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:554.4[M/2+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.78-9.66(s,1H),9.09-8.87(s,1H),8.45(d,J＝7.6Hz,1H),8.38(s,1H),7.80(br d,J＝6.0Hz,2H),7.43(br d,J＝8.0Hz,3H),7.38-7.31(m,3H),7.27(d,J＝2.0Hz,1H),7.25-7.10(m,3H),7.05(d,J＝2.4Hz,1H),5.15(br s,1H),4.89(br t,J＝7.2Hz,1H),4.55(d,J＝9.4Hz,1H),4.46(t,J＝8.0Hz,1H),4.29(br s,1H),3.97-3.89(m,2H),3.71(br s,5H),3.59(br s,3H),3.52(br s,5H),2.98(s,3H),2.80(br s,3H),2.61(br t,J＝6.8Hz,2H),2.47-2.40(m,6H),2.12-2.01(m,1H),1.81-1.72(m,1H),1.62(br s,4H),1.49-1.35(m,3H),0.94(s,9H).

3-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-(2-(2-(2-(3-(2-((S)-1-((S)-2-环己基-2-((S)-2-(甲基氨基)丙酰氨基)乙酰基)吡咯烷-2-基)噻唑-4-羰基)苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-N-甲基丙酰胺(示例性化合物257)的示例性合成

步骤1：(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯的制备

在0℃下向2-(2-(2-(甲基氨基)乙氧基)乙氧基)乙-1-醇(1.8g，0.005mol)和三乙胺(1.01g，0.01mol)在二氯甲烷(30mL)中的搅拌溶液中，加入(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)碳酸4-硝基苯酯(3.1g，0.02mol)。将所得混合物在室温搅拌过夜。反应混合物用二氯甲烷(20mL)稀释，用水和盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩，以得到粗残余物，将所述残余物通过硅胶快速色谱法纯化(用在己烷中的20-30％乙酸乙酯洗脱)，以得到为无色油的(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(560mg，42％)。

步骤2：2,2,7-三甲基-6-氧代-5,10,13-三氧杂-7-氮杂-2-硅杂十五烷-15-基4-甲基苯磺酸酯的制备

在0℃下向(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(560mg，1.43mmol)、三乙胺(436mg，4.3mmol)和N,N-二甲基吡啶-4-胺(17mg，0.14mmol)在二氯甲烷(10mL)中的搅拌溶液中，加入4-甲苯磺酰氯(820mg，4.3mmol)。将得到的混合物在室温搅拌2小时。减压浓缩反应混合物以得到粗残余物，将所述残余物通过硅胶快速色谱法纯化(用在己烷中的20-40％乙酸乙酯洗脱)，以得到为白色固体的2,2,7-三甲基-6-氧代-5,10,13-三氧杂-7-氮杂-2-硅杂十五烷-15-基4-甲基苯磺酸酯(300mg，45％)。

步骤3：((S)-1-(((S)-1-环己基-2-氧代-2-((S)-2-(4-(3-((2,2,7-三甲基-6-氧代-5,10,13-三氧杂-7-氮杂-2-硅杂十五烷-15-基)氧基)苯甲酰基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备

向2,2,7-三甲基-6-氧代-5,10,13-三氧杂-7-氮杂-2-硅杂十五烷-15-基4-甲基苯磺酸酯(115mg，0.24mmol)和碳酸钾(103mg，0.74mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的搅拌溶液中，加入((S)-1-(((S)-1-环己基-2-((S)-2-(4-(3-羟基苯甲酰基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.16mmol)。将得到的混合物在50℃下搅拌过夜。将反应混合物在乙酸乙酯(20mL)和水(10mL)之间分配。收集有机层，并用乙酸乙酯(15ml x 2)萃取水层。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩，以得到残余物，将所述残余物通过硅胶快速色谱法纯化(用在二氯甲烷中的3-5％甲醇洗脱)，以得到为白色固体的((S)-1-(((S)-1-环己基-2-氧代-2-((S)-2-(4-(3-((2,2,7-三甲基-6-氧代-5,10,13-三氧杂-7-氮杂-2-硅杂十五烷-15-基)氧基)苯甲酰基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(120mg，49％)。

步骤4：((S)-1-(((S)-1-环己基-2-((S)-2-(4-(3-(2-(2-(2-(甲基氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯甲酰基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备

向((S)-1-(((S)-1-环己基-2-氧代-2-((S)-2-(4-(3-((2,2,7-三甲基-6-氧代-5,10,13-三氧杂-7-氮杂-2-硅杂十五烷-15-基)氧基)苯甲酰基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(120mg，0.13mmol)在四氢呋喃(5mL)中的搅拌溶液中，加入四丁基氟化铵(80mg，0.30mmol)。将得到的混合物在室温搅拌4小时。将反应混合物在乙酸乙酯(20mL)和水(10mL)之间分配。收集有机层，并用乙酸乙酯(15ml x2)萃取水层。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，以得到残余物，将所述残余物通过硅胶快速色谱法纯化(用在二氯甲烷中的3-5％甲醇洗脱)，以得到为白色固体的((S)-1-(((S)-1-环己基-2-((S)-2-(4-(3-(2-(2-(2-(甲基氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯甲酰基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(130mg，80％)。

步骤5：((2S)-1-(((1S)-2-((2S)-2-(4-(3-(2-(2-(2-(3-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-甲基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯甲酰基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)-1-环己基-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备

向((S)-1-(((S)-1-环己基-2-((S)-2-(4-(3-(2-(2-(2-(甲基氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯甲酰基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(130mg，0.14mmol)、(2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐)(96mg，0.23mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(49mg，0.37mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的搅拌溶液中，加入3-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸(70mg，0.12mmol)。将得到的混合物在室温搅拌1小时。将反应混合物在乙酸乙酯(20mL)和水(10mL)之间分配。收集有机层，并用乙酸乙酯(15ml x 2)萃取水层。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩以得到残余物，将所述残余物通过制备型TLC纯化(用在二氯甲烷中的10％甲醇洗脱)，以得到为白色固体的((S)-1-(((S)-2-((S)-2-(4-(3-(2-(2-(2-(3-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-((E)-3-羟基-1-(o-甲苯基)丙-1-烯-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-甲基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯甲酰基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)-1-环己基-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(80mg，49％)。

步骤6：3-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-(2-(2-(2-(3-(2-((S)-1-((S)-2-环己基-2-((S)-2-(甲基氨基)丙酰氨基)乙酰基)吡咯烷-2-基)噻唑-4-羰基)苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-N-甲基丙酰胺的制备

在室温下搅拌((S)-1-(((S)-2-((S)-2-(4-(3-(2-(2-(2-(3-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-((E)-3-羟基-1-(o-甲苯基)丙-1-烯-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-甲基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯甲酰基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)-1-环己基-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(80mg，0.062mmol)在4M氯化氢/二噁烷(2mL)中的溶液20分钟。减压蒸发挥发物以得到残余物，将所述残余物溶于碳酸氢钠水溶液(1N，10mL)中，并用二氯甲烷(20mL)萃取。收集合并的有机层，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩，以得到粗残余物，将所述残余物通过制备型TLC纯化(用在二氯甲烷中的10％甲醇洗脱)，以得到为白色固体的3-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-(2-(2-(2-(3-(2-((S)-1-((S)-2-环己基-2-((S)-2-(甲基氨基)丙酰氨基)乙酰基)吡咯烷-2-基)噻唑-4-羰基)苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-N-甲基丙酰胺(60mg，82％)。LC/MS(ESI)m/z:1175.5[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ0.86(s,1H),1.06(s,6H),1.16-1.28(m,5H),1.62(d,J＝1.2Hz,6H),2.01(s,2H),2.19(s,1H),2.32(s,3H),2.63(d,J＝25.4Hz,2H),2.80(s,1H),2.99(s,1H),3.38-3.60(m,11H),3.61-3.91(m,12H),4.12(dd,J＝1.4,0.8Hz,2H),4.47(s,1H),5.32-5.43(m,1H),5.73(d,J＝10.4Hz,1H),6.16(d,J＝16.8Hz,1H),6.76-6.89(m,1H),7.05(d,J＝1.9Hz,1H),7.18-7.29(m,4H),7.42(s,2H),7.58-7.66(m,2H),7.78(s,2H),8.38–8.26(m,1H),8.47(s,1H),10.01(s,1H).

3-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-((S)-2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-(2-(2-(2-((4-(2-((S)-1-((S)-2-环己基-2-((S)-2-(甲基氨基)丙酰氨基)乙酰基)吡咯烷-2-基)噻唑-4-基)萘-1-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-N-甲基丙酰胺(示例性化合物277)的示例性合成

步骤1：((S)-1-(((S)-2-((S)-2-(4-(4-(2-(2-(2-(3-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-((S)-2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-甲基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)萘-1-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)-1-环己基-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备

向3-[[6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酸(50mg，96.54umol，1eq)和N-[(1S)-2-[[(1S)-1-环己基-2-[(2S)-2-[4-[4-[2-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-萘基]噻唑-2-基]吡咯烷-1-基]-2-氧代-乙基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(78.39mg，102.34umol，1.06eq)在二甲基甲酰胺(5mL)中的混合物中，一次性加入二异丙基乙胺(49.91mg，386.17umol，67.26uL，4eq)、羟基苯并三唑(26.09mg，193.08umol，2eq)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺(37.01mg，193.08umol，2eq)。将混合物在20℃下搅拌12小时。将反应混合物用水(50mL)洗涤，并用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取，然后将有机相真空浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物，以得到为白色固体的化合物N-[(1S)-2-[[(1S)-2-[(2S)-2-[4-[4-[2-[2-[2-[3-[[6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酰基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-萘基]噻唑-2-基]吡咯烷-1-基]-1-环己基-2-氧代-乙基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(60mg，47.40umol，49％产率)。LC/MS(ESI)m/z:633.3[M/2+1]⁺.

步骤2：3-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-((S)-2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-(2-(2-(2-((4-(2-((S)-1-((S)-2-环己基-2-((S)-2-(甲基氨基)丙酰氨基)乙酰基)吡咯烷-2-基)噻唑-4-基)萘-1-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-N-甲基丙酰胺的制备

向N-[(1S)-2-[[(1S)-2-[(2S)-2-[4-[4-[2-[2-[2-[3-[[6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酰基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-萘基]噻唑-2-基]吡咯烷-1-基]-1-环己基-2-氧代-乙基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(60mg，47.40umol，1eq)在二氯甲烷(5mL)中的混合物中，一次性加入三氟乙酸(770.00mg，6.75mmol，0.5mL，142.48eq)。将混合物在20℃下搅拌1小时。减压浓缩反应混合物以除去溶剂，得到残余物。通过制备型HPLC纯化残余物以得到为白色固体的化合物(2S)-N-[(1S)-2-[(2S)-2-[4-[4-[2-[2-[2-[3-[[6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酰基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-萘基]噻唑-2-基]吡咯烷-1-基]-1-环己基-2-氧代-乙基]-2-(甲基氨基)丙酰胺(23.4mg，18.10umol，38％产率，99％纯度，三氟乙酸)。LC/MS(ESI)m/z:583.3[M/2+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.25(br d,J＝7.3Hz,1H),8.14-8.01(m,1H),7.85-7.63(m,1H),7.52-7.32(m,5H),6.91-6.66(m,4H),6.30(br d,J＝16.4Hz,1H),5.83(br d,J＝10.3Hz,1H),5.51(br d,J＝7.2Hz,1H),4.67-4.58(m,1H),4.28(br s,2H),4.16-3.51(m,26H),3.16-3.03(m,1H),2.97(s,2H),2.86(br s,1H),2.75-2.65(m,3H),2.46-2.07(m,4H),1.95-1.61(m,6H),1.51(d,J＝7.0Hz,3H),1.31-1.06(m,5H).

4-(6-氯-2-((3-((2-(2-(2-((4-(2-((S)-1-((S)-2-环己基-2-((S)-2-(甲基氨基)丙酰氨基)乙酰基)吡咯烷-2-基)噻唑-4-基)萘-1-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基)-3-氧代丙基)氨基)-8-氟-7-((S)-2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酰胺(示例性化合物287)的示例性合成

步骤1：((S)-1-(((S)-2-((S)-2-(4-(4-(2-(2-(2-(3-((4-(4-氨基甲酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-((S)-2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-甲基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)萘-1-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)-1-环己基-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备

向((S)-1-(((S)-1-环己基-2-((S)-2-(4-(4-(2-(2-(2-(甲基氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)萘-1-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(60.45mg，78.91umol，1eq)、(S)-3-((4-(4-氨基甲酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-2-基)氨基)丙酸(40mg，78.91umol，1eq)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(40.80mg，315.65umol，54.98uL，4eq)在二甲基甲酰胺(5mL)中的混合物中，一次性加入羟基苯并三唑(21.33mg，157.83umol，2.0eq)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(30.26mg，157.83umol，2eq)。将混合物在20℃下搅拌12小时。将反应混合物用水(50mL)洗涤，并用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取，然后将有机相真空浓缩。通过制备型薄层色谱法纯化(二氧化硅，乙酸乙酯:甲醇＝40:1)残余物。得到为白色固体的化合物((S)-1-(((S)-2-((S)-2-(4-(4-(2-(2-(2-(3-((4-(4-氨基甲酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-((S)-2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-甲基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)萘-1-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)-1-环己基-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(60mg，40.16umol，51％产率，84％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:1254.8[M+1]⁺.

步骤2：4-(6-氯-2-((3-((2-(2-(2-((4-(2-((S)-1-((S)-2-环己基-2-((S)-2-(甲基氨基)丙酰氨基)乙酰基)吡咯烷-2-基)噻唑-4-基)萘-1-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基)-3-氧代丙基)氨基)-8-氟-7-((S)-2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酰胺的制备

向((S)-1-(((S)-2-((S)-2-(4-(4-(2-(2-(2-(3-((4-(4-氨基甲酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-((S)-2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-甲基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)萘-1-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)-1-环己基-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(50mg，39.84umol，1eq)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中，加入三氟乙酸(1.54g，13.51mmol，1000uL，338.97eq)。将混合物在25℃下搅拌2小时。减压浓缩反应混合物以得到残余物。通过制备型HPLC纯化残余物。得到为黄色固体的化合物4-(6-氯-2-((3-((2-(2-(2-((4-(2-((S)-1-((S)-2-环己基-2-((S)-2-(甲基氨基)丙酰氨基)乙酰基)吡咯烷-2-基)噻唑-4-基)萘-1-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基)-3-氧代丙基)氨基)-8-氟-7-((S)-2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酰胺(8.7mg，6.58umol，16％产率，96％纯度，三氟乙酸)。LC/MS(ESI)m/z:1176.5[M+23]⁺；¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.27(br d,J＝8.0Hz,1H),8.09(d,J＝8.4Hz,1H),7.81-7.67(m,1H),7.50-7.37(m,5H),6.88-6.76(m,3H),5.55(br d,J＝8.0Hz,1H),4.65(d,J＝6.8Hz,1H),4.31(br s,2H),4.06-3.58(m,25H),2.99(s,2H),2.89(br s,1H),2.70(s,3H),2.47(br s,1H),2.29(br d,J＝6.4Hz,2H),2.17(br s,1H),1.96-1.62(m,7H),1.53(d,J＝6.8Hz,3H),1.37-1.10(m,6H).

(2R,3S,4R,5S)-N-(4-((2-(2-(2-(3-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-甲基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酰基)-2-甲氧基苯基)-3-(3-氯-2-氟苯基)-4-(4-氯-2-氟苯基)-4-氰基-5-新戊基吡咯烷-2-羧酰胺(示例性化合物302)的示例性合成

步骤1：4-(6-氯-2-((1-(4-((2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟苯基)-4-(4-氯-2-氟苯基)-4-氰基-5-新戊基吡咯烷-2-羧酰氨基)-3-甲氧基苯基)-11-甲基-1,12-二氧代-5,8-二氧杂-2,11-二氮杂十四烷-14-基)氨基)-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基丙基)-N-[2-甲氧基-4-[2-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]乙基氨基甲酰基]苯基]吡咯烷-2-羧酰胺(140mg，0.16mmol，1eq，三氟乙酸盐)和3-[[4-(4-叔丁氧基羰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酸(95mg，0.16mmol，1eq)在N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中的混合物中，加入1-羟基苯并三唑(32mg，0.24mmol，1.5eq)，N-(3-二甲基氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺盐酸盐(46mg，0.24mmol，1.5eq)和N,N-二异丙基乙胺(103mg，0.80mmol，0.14mL，5eq)。将混合物在20℃下搅拌15小时。将混合物用水(25mL)稀释，用乙酸乙酯(25mL x 3)萃取。合并的有机层用水(30mL x 2)和盐水(30mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过制备型薄层色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)残余物。得到为浅黄色固体的4-[6-氯-2-[[3-[2-[2-[2-[[4-[[(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基丙基)吡咯烷-2-羰基]氨基]-3-甲氧基-苯甲酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]氨基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(150mg，0.11mmol，70％产率)。LC/MS(ESI)m/z:1339.4[M+1]⁺.

步骤2：(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟苯基)-4-(4-氯-2-氟苯基)-N-(4-((2-(2-(2-(3-((6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-甲基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酰基)-2-甲氧基苯基)-4-氰基-5-新戊基吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向4-[6-氯-2-[[3-[2-[2-[2-[[4-[[(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基丙基)吡咯烷-2-羰基]氨基]-3-甲氧基-苯甲酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]氨基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(150mg，0.11mmol，1eq)在二氯甲烷(5mL)中的混合物中，加入三氟乙酸(1mL)。将混合物在20℃下搅拌0.5小时。减压浓缩混合物以得到产物。得到为浅黄色油的(2R,3S,4R,5S)-N-[4-[2-[2-[2-[3-[[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氨基]丙酰基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]乙基氨基甲酰基]-2-甲氧基-苯基]-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基丙基)吡咯烷-2-羧酰胺(150mg，三氟乙酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:1239.4[M+1]⁺.

步骤3：(2R,3S,4R,5S)-N-(4-((2-(2-(2-(3-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-甲基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酰基)-2-甲氧基苯基)-3-(3-氯-2-氟苯基)-4-(4-氯-2-氟苯基)-4-氰基-5-新戊基吡咯烷-2-羧酰胺的制备

在氮气气氛下，在-78℃下向(2R,3S,4R,5S)-N-[4-[2-[2-[2-[3-[[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氨基]丙酰基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]乙基氨基甲酰基]-2-甲氧基-苯基]-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基丙基)吡咯烷-2-羧酰胺(150mg，0.11mmol，1eq，三氟乙酸盐)和2,6-二甲基吡啶(118mg，1.11mmol，0.13mL，10eq)在二氯甲烷(20mL)中的混合物中，加入于二氯甲烷(2mL)中的丙-2-烯酰氯(10mg，0.11mmol，0.009mL，1eq)。将混合物在-78℃下搅拌0.5小时。将混合物用水(20mL)淬灭。将其用二氯甲烷(20mL x 2)萃取。合并的有机层用盐水(20mL x2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过制备型HPLC纯化残余物。得到为灰白色固体的(2R,3S,4R,5S)-N-[4-[2-[2-[2-[3-[[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酰基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]乙基氨基甲酰基]-2-甲氧基-苯基]-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基丙基)吡咯烷-2-羧酰胺(40.1mg，0.03mmol，27％产率，97％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:1293.3[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.39(s,1H),9.99(s,1H),8.45-8.42(m,1H),8.30-8.29(m,2H),7.79-7.77(m,2H),7.74-7.71(m,1H),7.58-7.48(m,5H),7.41-7.34(m,4H),7.26(s,1H),7.25-7.21(m,2H),7.04(s,1H),6.86-6.80(m,1H),6.18-6.14(m,1H),5.73-5.71(m,1H),4.59(s,2H),4.27-4.41(m,1H),3.97-3.90(m,4H),3.80-3.71(m,10H),3.52-3.45(m,12H),2.98-2.79(m,3H),2.62-2.60(m,1H),1.66-1.60(m,1H),1.28-1.24(m,1H),0.96(s,9H).

(2R,3S,4R,5S)-N-(4-((2-(2-(2-(3-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-((S)-2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-甲基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酰基)-2-甲氧基苯基)-3-(3-氯-2-氟苯基)-4-(4-氯-2-氟苯基)-4-氰基-5-新戊基吡咯烷-2-羧酰胺(示例性化合物319)的示例性合成

步骤1：4-(6-氯-2-((1-(4-((2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟苯基)-4-(4-氯-2-氟苯基)-4-氰基-5-新戊基吡咯烷-2-羧酰氨基)-3-甲氧基苯基)-11-甲基-1,12-二氧代-5,8-二氧杂-2,11-二氮杂十四烷-14-基)氨基)-8-氟-7-((S)-2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基丙基)-N-[2-甲氧基-4-[2-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]乙基氨基甲酰基]苯基]吡咯烷-2-羧酰胺(175mg，0.2mmol，1eq，三氟乙酸盐)和4-[4-(4-叔丁氧基羰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)喹唑啉-2-基]丁酸(112mg，0.2mmol，1eq)在N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中的混合物中，加入1-羟基苯并三唑(54mg，0.40mmol，2eq)、N-(3-二甲基氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺盐酸盐(76mg，0.40mmol，2eq)和N,N-二异丙基乙胺(129mg，1.00mmol，0.17mL，5eq)。将混合物在25℃下搅拌12小时。将混合物用水(25mL)稀释。然后将其用乙酸乙酯(25mL x 3)萃取。合并的有机层用水(30mL x 2)和盐水(30mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过制备型薄层色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)残余物。得到为浅黄色固体的化合物4-[6-氯-2-[[3-[2-[2-[2-[[4-[[(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基丙基)吡咯烷-2-羰基]氨基]-3-甲氧基-苯甲酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]氨基]-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(180mg，0.14mmol，68％产率)。LC/MS(ESI)m/z:1307.4[M+1]⁺.

步骤2：(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟苯基)-4-(4-氯-2-氟苯基)-N-(4-((2-(2-(2-(3-((6-氯-8-氟-7-((S)-2-氟-6-羟基苯基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-甲基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酰基)-2-甲氧基苯基)-4-氰基-5-新戊基吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向4-[6-氯-2-[[3-[2-[2-[2-[[4-[[(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基丙基)吡咯烷-2-羰基]氨基]-3-甲氧基-苯甲酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]氨基]-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(180mg，0.14mmol，1eq)在二氯甲烷(5mL)中的混合物中，加入三氟乙酸(1mL)。将混合物在25℃下搅拌0.5小时。减压浓缩混合物以得到产物。得到为浅黄色油的(2R,3S,4R,5S)-N-[4-[2-[2-[2-[3-[[6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氨基]丙酰基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]乙基氨基甲酰基]-2-甲氧基-苯基]-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基丙基)吡咯烷-2-羧酰胺(180mg，三氟乙酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:1207.3[M+1]⁺.

步骤3：(2R,3S,4R,5S)-N-(4-((2-(2-(2-(3-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-((S)-2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-甲基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酰基)-2-甲氧基苯基)-3-(3-氯-2-氟苯基)-4-(4-氯-2-氟苯基)-4-氰基-5-新戊基吡咯烷-2-羧酰胺的制备

在氮气气氛下，在-78℃下向(2R,3S,4R,5S)-N-[4-[2-[2-[2-[3-[[6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氨基]丙酰基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]乙基氨基甲酰基]-2-甲氧基-苯基]-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基丙基)吡咯烷-2-羧酰胺(90mg，0.07mmol，1eq，三氟乙酸盐)和2,6-二甲基吡啶(73mg，0.68mmol，0.08mL，10eq)在二氯甲烷(20mL)中的混合物中，加入于二氯甲烷(5mL)中的乙酰氯(5mg，0.07mmol，0.004mL，1eq)。将混合物在-78℃下搅拌20分钟。将混合物用水(20mL)淬灭。然后将其用二氯甲烷(20mL x 2)萃取。合并的有机层用盐水(30mL x2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过制备型HPLC纯化残余物。得到为白色固体的化合物(2R,3S,4R,5S)-N-[4-[2-[2-[2-[3-[[4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酰基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]乙基氨基甲酰基]-2-甲氧基-苯基]-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基丙基)吡咯烷-2-羧酰胺(51.1mg，0.04mmol，59％产率，99％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:1249.3[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.49-10.39(m,2H),8.48-8.44(m,1H),8.31(dd,J＝2.0,8.4Hz,1H),8.02-8.01(m,2H),7.74-7.71(m,1H),7.58-7.45(m,4H),7.38-7.33(m,4H),6.88-6.79(m,2H),4.58(s,2H),4.16-4.12(m,3H),3.96-3.90(m,7H),3.55-3.37(m,17H),2.96-2.84(m,3H),2.71-2.65(m,2H),2.04-2.03(m,3H),1.67-1.61(m,1H),1.28-1.24(m,1H),0.96(s,9H).

(2R,3S,4R,5S)-N-(4-((2-(2-(2-(3-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-((R)-2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-甲基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酰基)-2-甲氧基苯基)-3-(3-氯-2-氟苯基)-4-(4-氯-2-氟苯基)-4-氰基-5-新戊基吡咯烷-2-羧酰胺(示例性化合物320)的示例性合成

步骤1：4-(6-氯-2-((1-(4-((2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟苯基)-4-(4-氯-2-氟苯基)-4-氰基-5-新戊基吡咯烷-2-羧酰氨基)-3-甲氧基苯基)-11-甲基-1,12-二氧代-5,8-二氧杂-2,11-二氮杂十四烷-14-基)氨基)-8-氟-7-((R)-2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基丙基)-N-[2-甲氧基-4-[2-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]乙基氨基甲酰基]苯基]吡咯烷-2-羧酰胺(175mg，0.20mmol，1eq，三氟乙酸盐)和4-[4-(4-叔丁氧基羰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)喹唑啉-2-基]丁酸(112mg，0.20mmol，1eq)在N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中的混合物中，加入1-羟基苯并三唑(54mg，0.40umol，2eq)、N-(3-二甲基氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺盐酸盐(76mg，0.40mmol，2eq)和N,N-二异丙基乙胺(129mg，1.00mmol，0.17mL，5eq)。将混合物在25℃下搅拌12小时。将混合物用水(20mL)稀释。然后将其用乙酸乙酯(20mL x 3)萃取。合并的有机层用水(30mL x 2)和盐水(30mL x2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过制备型薄层色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)残余物。得到为浅黄色固体的化合物4-[6-氯-2-[[3-[2-[2-[2-[[4-[[(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基丙基)吡咯烷-2-羰基]氨基]-3-甲氧基-苯甲酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]氨基]-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(140mg，0.11mmol，53％产率)。LC/MS(ESI)m/z:1307.4[M+1]⁺.

步骤2：(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟苯基)-4-(4-氯-2-氟苯基)-N-(4-((2-(2-(2-(3-((6-氯-8-氟-7-((R)-2-氟-6-羟基苯基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-甲基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酰基)-2-甲氧基苯基)-4-氰基-5-新戊基吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向4-[6-氯-2-[[3-[2-[2-[2-[[4-[[(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基丙基)吡咯烷-2-羰基]氨基]-3-甲氧基-苯甲酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]氨基]-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(140mg，0.11mmol，1eq)在二氯甲烷(5mL)中的混合物中，加入三氟乙酸(1mL)。将混合物在25℃下搅拌0.5小时。减压浓缩混合物以得到产物。得到为浅黄色油的(2R,3S,4R,5S)-N-[4-[2-[2-[2-[3-[[6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氨基]丙酰基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]乙基氨基甲酰基]-2-甲氧基-苯基]-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基丙基)吡咯烷-2-羧酰胺(140mg，三氟乙酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:1207.4[M+1]⁺.

步骤3：(2R,3S,4R,5S)-N-(4-((2-(2-(2-(3-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-((R)-2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-甲基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酰基)-2-甲氧基苯基)-3-(3-氯-2-氟苯基)-4-(4-氯-2-氟苯基)-4-氰基-5-新戊基吡咯烷-2-羧酰胺的制备

在氮气气氛下，在-78℃下向(2R,3S,4R,5S)-N-[4-[2-[2-[2-[3-[[6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氨基]丙酰基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]乙基氨基甲酰基]-2-甲氧基-苯基]-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基丙基)吡咯烷-2-羧酰胺(70mg，0.05mmol，1eq，三氟乙酸盐)和2,6-二甲基吡啶(56mg，0.53mmol，0.06mL，10eq)在二氯甲烷(20mL)中的混合物中，加入于二氯甲烷(5mL)中的乙酰氯(4mg，0.05mmol，0.004mL，1eq)。将混合物在-78℃下搅拌20分钟。将混合物用水(20mL)淬灭。然后将其用二氯甲烷(20mL x 2)萃取。合并的有机层用盐水(30mL x2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过制备型HPLC纯化残余物。得到为白色固体的化合物(2R,3S,4R,5S)-N-[4-[2-[2-[2-[3-[[4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酰基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]乙基氨基甲酰基]-2-甲氧基-苯基]-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基丙基)吡咯烷-2-羧酰胺(30.1mg，0.02mmol，45％产率，99％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:1249.4[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.50-10.39(m,2H),8.47-8.45(m,1H),8.31(dd,J＝2.0,8.4Hz,1H),8.02-8.00(m,2H),7.74-7.71(m,1H),7.58-7.46(m,4H),7.40-7.32(m,4H),6.88-6.79(m,2H),4.58(s,2H),4.16-4.12(m,3H),3.93-3.90(m,7H),3.54-3.37(m,17H),2.96-2.84(m,3H),2.71-2.65(m,2H),2.04-2.03(m,3H),1.67-1.61(m,1H),1.28-1.24(m,1H),0.96(s,9H).

(2S,4R)-N-(2-(2-(2-(3-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-甲基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-4-羟基-1-((R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰胺(示例性化合物339)的示例性合成

步骤1：(2S,4R)-4-羟基-1-((R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)-N-(2-(2-(2-(甲基氨基)乙氧基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

将N-[2-[2-[2-[[[(2S,4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]甲基]-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基]乙氧基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(90mg，0.12mmol，1eq)在盐酸/二噁烷(4M，10mL，311eq)中的混合物脱气并用氮气吹扫3次，然后将混合物在25℃在氮气下搅拌0.5小时。将反应混合物减压浓缩以得到残余物。得到为无色油的化合物(2S,4R)-4-羟基-N-[[2-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羧酰胺(75mg，0.11mmol，91％产率,盐酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:600.4[M+1]⁺.

步骤2：4-(6-氯-8-氟-2-((3-((2-(2-(2-(((2S,4R)-4-羟基-1-((R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰氨基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基)-3-氧代丙基)氨基)-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

将(2S,4R)-4-羟基-N-[[2-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羧酰胺(75mg，0.11mmol，1eq,盐酸盐)，3-[[4-(4-叔丁氧基羰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酸(70mg，0.11mmol，1eq)、1-羟基苯并三唑(23mg，0.17mmol，1.5eq)，1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(33mg，0.17mmol，1.5eq)和N,N-二异丙基乙胺(61mg，0.47mmol，4eq)在N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中的混合物脱气并用氮气吹扫3次，然后将混合物在25℃在氮气下搅拌12小时。通过添加10mL水淬灭反应混合物，并用乙酸乙酯(20mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水(10mL x 3)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过制备型TLC纯化(在二氯甲烷中的9％甲醇)残余物。得到为黄色油的4-[6-氯-8-氟-2-[[3-[2-[2-[2-[[[(2S,4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]甲基]-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基]乙氧基]乙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]氨基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(75mg，0.06mmol，50％产率，93％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:590.1[M/2+1]⁺.

步骤3：(2S,4R)-N-(2-(2-(2-(3-((6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-甲基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-4-羟基-1-((R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

将4-[6-氯-8-氟-2-[[3-[2-[2-[2-[[[(2S,4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]甲基]-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基]乙氧基]乙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]氨基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(80mg，0.06mmol，1eq)和三氟乙酸(821mg，7.20mmol，106.05eq)在二氯甲烷(5mL)中的混合物脱气并用氮气吹扫3次，然后将混合物在25℃在氮气下搅拌1小时。减压浓缩反应混合物以得到为黄色油的(2S,4R)-N-[[2-[2-[2-[3-[[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氨基]丙酰基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羧酰胺(75mg，0.06mmol，92％产率，三氟乙酸盐)。

步骤4：(2S,4R)-N-(2-(2-(2-(3-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-甲基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-4-羟基-1-((R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

在氮气下，在-78℃下向(2S,4R)-N-[[2-[2-[2-[3-[[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氨基]丙酰基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羧酰胺(75mg，0.06mmol，1eq，三氟乙酸盐)和2,6-二甲基吡啶(67mg，0.62mmol，0.073mL，10eq)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中，滴加丙-2-烯酰氯(6mg，0.06mmol，0.05mL，1eq)在二氯甲烷(1mL)中的溶液。将反应溶液在-78℃下搅拌0.5小时。通过添加10mL水淬灭反应混合物，并用乙酸乙酯(20mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水(10mL x 3)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过半制备型反相HPLC纯化残余物。得到为白色固体的化合物2S,4R)-N-[[2-[2-[2-[3-[[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酰基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羧酰胺(45mg，0.04mol，62％产率，99％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:566.5[M/2+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.98(br s,1H),8.97(s,1H),8.30-8.21(m,1H),7.79(br d,J＝7.9Hz,2H),7.52-7.34(m,1H),7.32-6.94(m,8H),6.89-6.79(m,1H),6.24-6.14(m,2H),5.74(br d,J＝10.6Hz,1H),5.11(br s,1H),4.55-4.15(m,6H),3.93-3.76(m,11H),3.66-3.49(m,6H),3.03-2.70(m,4H),2.65-2.55(m,4H),2.47-2.39(m,3H),2.30-2.03(m,1H),2.15-2.12(m,2H),2.07-2.00(m,1H),1.91(br dd,J＝5.1,7.6Hz,1H),0.97(d,J＝6.6Hz,2H),0.80(d,J＝6.7Hz,2H),0.68(br d,J＝6.5Hz,1H),0.56(br d,J＝6.4Hz,1H).

(2S,4R)-N-(2-(2-(2-(3-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-甲基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-4-羟基-1-((S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰胺(示例性化合物340)的示例性合成

步骤1：(2S,4R)-4-羟基-1-((S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)-N-(2-(2-(2-(甲基氨基)乙氧基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

将N-[2-[2-[2-[[[(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]甲基]-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基]乙氧基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(90mg，0.12mmol，1eq)在盐酸/二噁烷(4M，10mL，311eq)中的混合物脱气并用氮气吹扫3次，然后将混合物在25℃在氮气下搅拌0.5小时。减压浓缩反应混合物以得到残余物。得到为无色油的化合物(2S,4R)-4-羟基-N-[[2-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-1-[(2S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羧酰胺(75mg，0.11mmol，91％产率,盐酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:600.4[M+1]⁺.

步骤2：4-(6-氯-8-氟-2-((3-((2-(2-(2-(((2S,4R)-4-羟基-1-((S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰氨基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基)-3-氧代丙基)氨基)-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

将(2S,4R)-4-羟基-N-[[2-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-1-[(2S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羧酰胺(75mg，0.11mmol，1eq,盐酸盐)，3-[[4-(4-叔丁氧基羰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酸(70mg，0.11mmol，1eq)、1-羟基苯并三唑(23mg，0.17mmol，1.5eq)，1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(33mg，0.17mmol，1.5eq)和N,N-二异丙基乙胺(61mg，0.47mmol，4eq)在N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中的混合物脱气并用氮气吹扫3次，然后将混合物在25℃在氮气下搅拌12小时。通过添加10mL水淬灭反应混合物，并用乙酸乙酯(20mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水(10mL x 3)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过制备型TLC纯化(在二氯甲烷中的9％甲醇)残余物。得到为黄色油的4-[6-氯-8-氟-2-[[3-[2-[2-[2-[[[(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]甲基]-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基]乙氧基]乙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]氨基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(75mg，0.06mmol，50％产率，93％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:590.4[M/2+1]⁺.

步骤3：(2S,4R)-N-(2-(2-(2-(3-((6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-甲基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-4-羟基-1-((S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

将4-[6-氯-8-氟-2-[[3-[2-[2-[2-[[[(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]甲基]-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基]乙氧基]乙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙基]氨基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(80mg，0.06mmol，1eq)和三氟乙酸(821mg，7.20mmol，106.05eq)在二氯甲烷(5mL)中的混合物脱气并用氮气吹扫3次，然后将混合物在25℃在氮气下搅拌1小时。减压浓缩反应混合物以得到残余物。得到为黄色油的化合物(2S,4R)-N-[[2-[2-[2-[3-[[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氨基]丙酰基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羧酰胺(75mg，0.06mmol，92％产率，三氟乙酸盐)。

步骤4：(2S,4R)-N-(2-(2-(2-(3-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-甲基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-4-羟基-1-((S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

在氮气下，在-78℃下向(2S,4R)-N-[[2-[2-[2-[3-[[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氨基]丙酰基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羧酰胺(75mg，0.06mmol，1eq，三氟乙酸盐)和2,6-二甲基吡啶(67mg，0.62mmol，73uL，10eq)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中，滴加丙-2-烯酰氯(6mg，0.06mmol，5.13uL，1eq)在二氯甲烷(1mL)中的溶液。将反应溶液在-78℃下搅拌0.5小时。通过添加10mL水淬灭反应混合物，并用乙酸乙酯(20mL x3)萃取。合并的有机层用盐水(10mL x 3)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过半制备型反相HPLC纯化残余物。得到为白色固体的2S,4R)-N-[[2-[2-[2-[3-[[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酰基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羧酰胺(33.7mg，0.03mmol，47％产率，99％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:566.3[M/2+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.01(br s,1H),8.97(s,1H),8.33(br s,1H),7.79(br d,J＝6.0Hz,2H),7.46-7.38(m,1H),7.34(br d,J＝7.8Hz,1H),7.29-7.17(m,4H),7.11-6.95(m,3H),6.84(br dd,J＝10.5,16.7Hz,1H),6.24-6.14(m,2H),5.74(br d,J＝10.6Hz,1H),5.08(br s,1H),4.48-4.12(m,6H),3.88-3.72(m,12H),3.60-3.50(m,5H),3.22-2.83(m,4H),2.71-2.57(m,3H),2.47-2.41(m,3H),2.30-2.27(m,1H),2.25-2.19(m,2H),2.15-2.09(m,1H),2.07-1.99(m,1H),1.97-1.84(m,1H),0.99-0.88(m,3H),0.81-0.72(m,3H).

(2S,4R)-1-((2S,E)-2-(叔丁基)-17-(4-(6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-基)-4,17-二氧代-6,9,12-三氧杂-3-氮杂十七-15-烯酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(示例性化合物374)的示例性合成

步骤1：2-(2-(3-(苄氧基)丙氧基)乙氧基)乙-1-醇的制备

向2-[2-[2-(3-苄氧基丙氧基)乙氧基]乙氧基]四氢吡喃(6.3g，18.61mmol，1eq)在甲醇(70mL)中的混合物中，加入对甲苯磺酸(641mg，3.72mmol，0.2eq)。将混合物在20℃下搅拌12小时。减压浓缩混合物以得到残余物。通过硅胶色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝4:1至1:1)残余物。得到为无色油的化合物2-[2-(3-苄氧基丙氧基)乙氧基]乙醇(3.9g，15.33mmol，82％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.35-7.28(m,5H),4.51(s,2H),3.72-3.71(m,2H),3.62-3.60(m,2H),3.59-3.56,(m,6H),1.94-1.86(m,2H).

步骤2：1-苯基-2,6,9,12-四氧杂十四烷-14-酸乙酯的制备

在氮气气氛下，在0℃下向2-[2-(3-苄氧基丙氧基)乙氧基]乙醇(4.5g，17.69mmol，1eq)和乙酸铑(391mg，0.88mmol，0.05eq)在二氯甲烷(50mL)中的混合物中，滴加在在二氯甲烷(10mL)中的2-重氮乙酸乙酯(12.11g，106.16mmol，6eq)。将混合物在氮气气氛下在20℃下搅拌12小时。将混合物用乙酸(1mL)淬灭。然后将其用盐水(40mL x 3)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过硅胶色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝5:1至3:1)残余物。得到为浅黄色油的化合物2-[2-[2-(3-苄氧基丙氧基)乙氧基]乙氧基]乙酸乙酯(3.6g，10.58mmol，59％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.34-7.27(m,5H),4.51(s,2H),4.22-4.20(m,2H),4.14(s,2H),3.78-3.70(m,4H),3.59-3.58(m,2H),3.57-3.56(m,6H),1.93-1.85(m,2H),1.30-1.28(m,3H).

步骤3：2-(2-(2-(3-羟基丙氧基)乙氧基)乙氧基)乙酸乙酯的制备

在氮气气氛下向2-[2-[2-(3-苄氧基丙氧基)乙氧基]乙氧基]乙酸乙酯(3.6g，10.58mmol，1eq)在乙醇(40mL)中的混合物中，加入钯炭活性催化剂(0.4g，10％纯度)。将混合物脱气并用氢气再填充3次。将混合物在氢气气氛(50psi)下于50℃搅拌12小时。将混合物过滤并减压浓缩以得到产物。得到为褐色油的2-[2-[2-(3-羟基丙氧基)乙氧基]乙氧基]乙酸乙酯(2.7g)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.19-4.11(m,2H),3.74(s,2H),3.72-3.69(m,4H),3.65-3.60(m,8H),1.82-1.86(m,2H),1.25(t,J＝7.2Hz,3H).

步骤4：2-(2-(2-(3-氧代丙氧基)乙氧基)乙氧基)乙酸乙酯的制备

在0℃下向2-[2-[2-(3-羟基丙氧基)乙氧基]乙氧基]乙酸乙酯(2.7g，10.79mmol，1eq)在二氯甲烷(30mL)中的混合物中，加入Dess-Martin高碘烷(6.86g，16.18mmol，5.01mL，1.5eq)。将混合物在20℃下搅拌0.5小时。将混合物过滤。将滤液用饱和碳酸氢钠溶液(30mL x 2)和盐水(30mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并减压浓缩以得到残余物。通过硅胶色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝3:1至1:1)残余物。得到为无色油的化合物2-[2-[2-(3-氧代丙氧基)乙氧基]乙氧基]乙酸乙酯(2.5g，10.07mmol，93％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.77(s,1H),4.20-4.18(m,2H),4.12(s,2H),3.82-3.79(m,2H),3.71-3.69(m,4H),3.67-3.61(m,4H),2.66(t,J＝6.0Hz,2H),1.25(t,J＝3.6Hz,3H).

步骤5：(E)-5-(2-(2-(2-乙氧基-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙氧基)戊-2-烯酸叔丁酯的制备

在20℃下搅拌2-[2-[2-(3-氧代丙氧基)乙氧基]乙氧基]乙酸乙酯(2.5g，10.07mmol，1eq)和2-(三苯基-正膦亚基)乙酸叔丁酯(3.79g，10.07mmol，1eq)在二氯甲烷(25mL)中的混合物12小时。减压浓缩混合物以得到残余物。通过硅胶色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝6:1至4:1)残余物。得到为无色油的化合物(E)-5-[2-[2-(2-乙氧基-2-氧代-乙氧基)乙氧基]乙氧基]戊-2-烯酸叔丁酯(2.48g，7.16mmol，71％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ6.88-6.80(m,1H),5.82-5.78(m,1H),4.26-4.23(m,2H),4.21(s,2H),3.73-3.71(m,4H),3.64-3.60(m,2H),3.59-3.56(m,4H),2.49-2.44(m,2H),1.47(s,9H),1.30-1.26(m,3H).

步骤6：(E)-4-氧代-3,6,9,12-四氧杂十七-15-烯-17-酸的制备

向(E)-5-[2-[2-(2-乙氧基-2-氧代-乙氧基)乙氧基]乙氧基]戊-2-烯酸叔丁酯(1.0g，2.89mmol，1eq)在二氯甲烷(15mL)中的混合物中，加入三氟乙酸(3.00mL)。将混合物在20℃下搅拌1小时。减压浓缩混合物以得到产物。得到为无色油的(E)-5-[2-[2-(2-乙氧基-2-氧代-乙氧基)乙氧基]乙氧基]戊-2-烯酸(1.4g)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.18-7.11(m,1H),5.96-5.92(m,1H),4.25-4.23(m,2H),4.16(s,2H),3.74-3.69(m,6H),3.67-3.64(m,4H),2.58-2.53(m,2H),1.29(t,J＝7.2Hz,3H).

步骤7：(E)-2-(2-(2-((5-(4-(6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊-3-烯-1-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙酸乙酯的制备

向(E)-5-[2-[2-(2-乙氧基-2-氧代-乙氧基)乙氧基]乙氧基]戊-2-烯酸(150mg，0.38mmol，1eq)和4-(6-氯-8-氟-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-7-基)萘-2-醇(202mg，0.45mmol，1.17eq,盐酸盐)在N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中的混合物中，加入1-羟基苯并三唑(78mg，0.58mmol，1.5eq)、N-(3-二甲基氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺盐酸盐(111mg，0.58mmol，1.5eq)和N,N-二异丙基乙胺(250mg，1.94mmol，0.33mL，5eq)。将混合物在20℃下搅拌12小时。将混合物用水(30mL)稀释，用乙酸乙酯(25mL x 3)萃取。合并的有机层用水(30mL x 2)和盐水(30mLx 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过制备型TLC纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)残余物。得到为黄色油的2-[2-[2-[(E)-5-[4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-基]-5-氧代-戊-3-烯氧基]乙氧基]乙氧基]乙酸乙酯(120mg，0.17mmol，45％产率)。LC/MS(ESI)m/z:681.3[M+1]⁺.

步骤8：(E)-2-(2-(2-((5-(4-(6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊-3-烯-1-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙酸的制备

向2-[2-[2-[(E)-5-[4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-基]-5-氧代-戊-3-烯氧基]乙氧基]乙氧基]乙酸乙酯(120mg，0.17mmol，1eq)在四氢呋喃(5mL)中的混合物中，加入于水(1mL)中的氢氧化锂一水合物(22mg，0.52mmol，3eq)。将混合物在0℃下搅拌20分钟。将混合物用水(10mL)稀释，用乙酸乙酯(15mL x 2)萃取。然后用氯化氢溶液(1M)将水相的pH调节至约5。将混合物用乙酸乙酯(10mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水(20mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到产物。得到为浅黄色油的化合物2-[2-[2-[(E)-5-[4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-基]-5-氧代-戊-3-烯氧基]乙氧基]乙氧基]乙酸(110mg)。LC/MS(ESI)m/z:653.3[M+1]⁺.

步骤9：(2S,4R)-1-((2S,E)-2-(叔丁基)-17-(4-(6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-基)-4,17-二氧代-6,9,12-三氧杂-3-氮杂十七-15-烯酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向2-[2-[2-[(E)-5-[4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-基]-5-氧代-戊-3-烯氧基]乙氧基]乙氧基]乙酸(110mg，0.17mmol，1eq)和(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(81mg，0.17mmol，1eq，盐酸盐)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的混合物中，加入1-羟基苯并三唑(34mg，0.25mmol，1.5eq)、N-(3-二甲基氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺盐酸盐(48mg，0.25mmol，1.5eq)和N,N-二异丙基乙胺(65mg，0.50mmol，0.09mL，3eq)。将混合物在20℃下搅拌12小时。将混合物用水(15mL)稀释，用乙酸乙酯(15mL x 3)萃取。将合并的有机层用水(20mL x 2)和盐水(20mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并减压浓缩以得到残余物。通过制备型TLC纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)残余物，以得到残余物。通过半制备型反相HPLC纯化残余物。得到为白色固体的(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[(E)-5-[4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-基]-5-氧代-戊-3-烯氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(50.8mg，0.04mmol，27％产率，99％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:1195.4[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.84(s,1H),8.66(s,1H),8.08(d,J＝1.2Hz,1H),7.75(d,J＝8.4Hz,1H),7.42-7.38(m,5H),7.27(d,J＝2.4Hz,1H),7.25-7.20(m,2H),7.06(s,1H),6.90-6.86(m,1H),6.58-6.54(m,1H),5.02-4.98(m,1H),4.56-4.54(m,1H),4.42(s,1H),4.05-4.03(m,6H),3.89-3.71(m,5H),3.69-3.64(m,12H),2.56-2.51(m,2H),2.45(s,3H),2.18-2.16(m,1H),1.99-1.95(m,1H),1.50-1.46(m,3H),1.04(s,9H).

(2S,4R)-1-((2S)-2-(3-(2-(2-(2-(3-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-甲基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(示例性化合物386)的示例性合成

步骤1：(2S,4R)-4-羟基-N-((S)-1-(2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)-1-((S)-3-甲基-2-(3-(2-(2-(2-(甲基氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰胺盐酸盐的制备

向N-[2-[2-[2-[5-[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.13mmol，1.0eq)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中，加入氯化氢/二噁烷(4M，2mL，61.91eq)。将反应混合物在20℃下搅拌1小时。减压浓缩反应混合物以得到残余物。得到为无色油的期望化合物(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]-1-[(2S)-3-甲基-2-[3-[2-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]异噁唑-5-基]丁酰基]吡咯烷-2-羧酰胺(90mg，HCl)。

步骤2：(2S,4R)-1-((2S)-2-(3-(2-(2-(2-(3-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-甲基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]-1-[(2S)-3-甲基-2-[3-[2-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]异噁唑-5-基]丁酰基]吡咯烷-2-羧酰胺(90mg，0.13mmol，1.0eq，HCl)在二甲基甲酰胺(3mL)中的溶液中，加入二异丙基乙胺(50mg，0.4mmol，3.0eq)。将混合物在20℃下搅拌10分钟。然后将3-[[4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酸(68mg，0.13mmol，1.0eq)和1-羟基苯并三唑(34mg，0.25mmol，2.0eq)加至混合物中，并在20℃下搅拌10分钟。将1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(48mg，0.25mmol，2.0eq)加至混合物中，并在20℃下搅拌40分钟。将混合物用水(2mL)稀释，用二氯甲烷(20mL)萃取，然后浓缩。通过半制备型反相纯化残余物。得到为灰白色固体的(2S,4R)-1-[(2S)-2-[3-[2-[2-[2-[3-[[4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酰基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(26mg，0.021mmol，17％产率，100％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:1193.3[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.01-8.96(m,1H),8.29(d,J＝7.2Hz,1H),7.81-7.73(m,2H),7.41(br s,1H),7.28-6.96(m,9H),6.08(d,J＝5.2Hz,1H),5.12(t,J＝7.2Hz,1H),4.46-4.09(m,4H),3.90-3.80(m,4H),3.78-3.61(m,12H),3.50(d,J＝18.8Hz,10H),3.04-2.96(m,2H),2.80(br s,2H),2.25(d,J＝6.4Hz,2H),2.10-1.96(m,5H),1.78(d,J＝6.8Hz,1H),1.38(d,J＝6.8Hz,1H),1.26(d,J＝6.8Hz,3H),1.00-0.72(m,8H).

(2S,4R)-1-((2R)-2-(3-(2-(2-(2-(3-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-甲基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(示例性化合物387)的示例性合成

步骤1：(2S,4R)-4-羟基-N-((S)-1-(2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)-1-((R)-3-甲基-2-(3-(2-(2-(2-(甲基氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰胺盐酸盐的制备

向N-[2-[2-[2-[5-[(1R)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.13mmol，1.0eq)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中，加入氯化氢/二噁烷(4M，2mL，61.91eq)。将反应混合物在20℃下搅拌1小时。减压浓缩反应混合物以得到残余物。得到为无色油的期望化合物(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]-1-[(2R)-3-甲基-2-[3-[2-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]异噁唑-5-基]丁酰基]吡咯烷-2-羧酰胺(90mg，HCl)。

步骤2：(2S,4R)-1-((2R)-2-(3-(2-(2-(2-(3-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-甲基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]-1-[(2R)-3-甲基-2-[3-[2-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]异噁唑-5-基]丁酰基]吡咯烷-2-羧酰胺(90mg，0.13mmol，1.0eq，HCl)在二甲基甲酰胺(3mL)中的溶液中，加入二异丙基乙胺(50mg，0.4mmol，3.0eq)。将混合物在20℃下搅拌10分钟。然后将3-[[4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酸(71mg，0.13mmol，1.0eq)和1-羟基苯并三唑(36.10mg，0.26mmol，2.0eq)加至混合物中，并在20℃下搅拌10分钟。将1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(51mg，0.26mmol，2.0eq)加至混合物中，并在20℃下搅拌40分钟。将混合物用水(2mL)稀释，用二氯甲烷(20mL)萃取，然后浓缩。通过半制备型反相纯化残余物。得到为灰白色固体的(2S,4R)-1-[(2R)-2-[3-[2-[2-[2-[3-[[4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酰基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(45mg，0.035mmol，26％产率，95％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:1193.3[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.01-8.96(m,1H),8.29(d,J＝7.2Hz,1H),7.81-7.73(m,2H),7.41(br s,1H),7.28-6.96(m,9H),6.08(d,J＝5.2Hz,1H),5.12(t,J＝7.2Hz,1H),4.46-4.09(m,4H),3.90-3.80(m,4H),3.78-3.61(m,12H),3.50(d,J＝18.8Hz,10H),3.04-2.96(m,2H),2.80(br s,2H),2.25(d,J＝6.4Hz,2H),2.10-1.96(m,5H),1.78(d,J＝6.8Hz,1H),1.38(d,J＝6.8Hz,1H),1.26(d,J＝6.8Hz,3H),1.00-0.72(m,8H).

(2S,4R)-1-((2S)-21-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-2-(叔丁基)-18-甲基-4-氧代-6,9,12,15-四氧杂-3,18-二氮杂二十一烷酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(示例性化合物396)的示例性合成

步骤1：((S)-20-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-4,21,21-三甲基-18-氧代-7,10,13,16-四氧杂-4,19-二氮杂二十二烷酰基)氨基甲酸叔丁酯的制备

将(2S,4R)-1-[(2S)-3,3-二甲基-2-[[2-[2-[2-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(260mg，0.36mmol，1.00eq，盐酸盐)、N-(3-溴丙基)氨基甲酸叔丁酯(170mg，0.71mmol，2.00eq)和二异丙基乙胺(93mg，0.71mmol，2.00eq)溶于微波管中的异丙醇(3mL)中。将密封的管在微波下于110℃加热2小时。减压浓缩反应混合物以得到残余物。通过制备型TLC纯化(硅胶板，在甲醇中的13％二氯甲烷)残余物，以得到为无色油的化合物N-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙基-甲基-氨基]丙基]氨基甲酸叔丁酯(140mg，0.16mmol，46％产率)。LC/MS(ESI)m/z:849.5[M+1]⁺.

步骤2：(2S,4R)-1-((S)-21-氨基-2-(叔丁基)-18-甲基-4-氧代-6,9,12,15-四氧杂-3,18-二氮杂二十一烷酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向N-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙基-甲基-氨基]丙基]氨基甲酸叔丁酯(140mg，0.16mmol，1.00eq)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中，加入在二噁烷中的盐酸(4M，4mL)。将混合物在15℃下搅拌0.5小时。减压浓缩反应混合物以得到为无色油的化合物(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[2-[2-[3-氨基丙基(甲基)氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(130mg，盐酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:749.4[M+1]⁺.

步骤3：4-(7-溴-6-氯-8-氟-2-(((S)-20-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-4,21,21-三甲基-18-氧代-7,10,13,16-四氧杂-4,19-二氮杂二十二烷酰基)氨基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

将(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[2-[2-[3-氨基丙基(甲基)氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(130mg，0.16mmol，1.00eq，盐酸盐)、4-(7-溴-2,6-二氯-8-氟-喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(88mg，0.18mmol，1.15eq)和二异丙基乙胺(71mg，0.55mmol，0.10mL，3.46eq)溶于微波管中的异丙醇(5mL)中。将密封的管在微波下于115℃加热3小时。减压浓缩反应混合物以得到残余物。通过制备型薄层色谱法纯化(硅胶板，在甲醇中的13％二氯甲烷)残余物，以得到为无色油的化合物4-[7-溴-6-氯-8-氟-2-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙基-甲基-氨基]丙基氨基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(120mg，0.1mmol，64％产率，100％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:597.5[M/2+1]⁺.

步骤4：4-(6-氯-8-氟-2-(((S)-20-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-4,21,21-三甲基-18-氧代-7,10,13,16-四氧杂-4,19-二氮杂二十二烷酰基)氨基)-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

将4-[7-溴-6-氯-8-氟-2-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙基-甲基-氨基]丙基氨基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(120mg，0.10mmol，1.00eq)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)萘-2-醇(54mg，0.20mmol，2.00eq)、[2-(2-氨基苯基)苯基]钯(1+)；二环己基-[2-(2,4,6-三异丙基苯基)苯基]磷烷；甲磺酸盐(9mg，0.01mmol，0.10eq)和磷酸钾(1.5M，于H₂O中，0.20mL，3.00eq)在四氢呋喃(5mL)中的混合物脱气并用氮气吹扫3次，然后将混合物在氮气气氛下于60℃搅拌12小时。减压浓缩反应混合物以得到残余物。通过制备型薄层色谱法纯化(硅胶板，在甲醇中的13％二氯甲烷)残余物，以得到为黄色固体的化合物4-[6-氯-8-氟-2-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙基-甲基-氨基]丙基氨基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(100mg，0.08mmol，79％产率)。LC/MS(ESI)m/z:1255.8[M+1]⁺.

步骤5：(2S,4R)-1-((2S)-2-(叔丁基)-21-((6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-18-甲基-4-氧代-6,9,12,15-四氧杂-3,18-二氮杂二十一烷酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向4-[6-氯-8-氟-2-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙基-甲基-氨基]丙基氨基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(100mg，0.08mmol，1.00eq)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中，加入氯化氢/二噁烷(4M，3mL)。将得到的混合物在20℃下搅拌0.5小时。减压浓缩反应混合物以得到为黄色固体的化合物(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氨基]丙基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(95mg,盐酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:1155.7[M+1]⁺.

步骤6：(2S,4R)-1-((2S)-21-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-2-(叔丁基)-18-甲基-4-氧代-6,9,12,15-四氧杂-3,18-二氮杂二十一烷酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

将(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氨基]丙基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(95mg，0.08mmol，1.00eq,盐酸盐)和2,6-二甲基吡啶(124mg，1.16mmol，0.14mL，15.00eq)在二氯甲烷(5mL)中的溶液冷却至-78℃。然后加入在二氯甲烷(1mL)中的丙-2-烯酰氯(7.00mg，0.08mmol，1.00eq)。将所得混合物在-78℃下搅拌0.5小时。用饱和碳酸氢钠溶液(20mL)淬灭反应混合物，然后用二氯甲烷(20mL x 2)萃取。合并的有机层用盐水(20mL x 1)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过半制备型反相HPLC纯化残余物，以得到为黄色固体的化合物(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氨基]丙基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(31mg，0.02mmol，30％产率，98％纯度，三氟乙酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:1209.4[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.58(brs,1H),8.98(s,1H),8.82-8.56(m,1H),8.41(d,J＝8.0Hz,1H),8.08(brs,1H),7.82(d,J＝8.8Hz,1H),7.59-7.18(m,9H),7.07(s,1H),6.82(dd,J＝11.2,16.4Hz,1H),6.20(d,J＝16.4Hz,1H),5.77(d,J＝11.2Hz,1H),4.96-4.85(m,2H),4.54(d,J＝9.6Hz,1H),4.43(t,J＝8.0Hz,1H),4.28(s,1H),4.24-4.07(m,3H),3.97-3.66(m,9H),3.63-3.09(m,20H),2.81(s,3H),2.45(s,3H),2.21-1.91(m,3H),1.90-1.70(m,1H),1.50-1.31(m,3H),0.93(s,9H).

(2S,4R)-1-((2S)-2-(2-(2-((1-((2R)-2-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)氧基)乙氧基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(示例性化合物398)的示例性合成

步骤1：4-(2-(2-乙氧基-2-氧代乙氧基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备

向4-(2-羟基乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2g，8.15mmol，1eq)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中，加入二乙酰氧基铑(90mg，0.41mmol，0.05eq)。在0℃下加入2-重氮乙酸乙酯(2.79g，24.46mmol，3eq)，将混合物在25℃下搅拌12小时。真空浓缩反应混合物。通过快速硅胶色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝9:1至3:1)粗产物。得到为无色油的化合物4-[2-(2-乙氧基-2-氧代-乙氧基)乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.7g，5.13mmol，63％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.22(q,J＝7.1Hz,2H),4.16(s,2H),3.83-3.71(m,4H),3.70-3.63(m,2H),3.50(tt,J＝3.9,8.2Hz,1H),3.07(ddd,J＝3.4,9.5,13.3Hz,2H),1.89-1.79(m,2H),1.58-1.48(m,2H),1.46(s,9H),1.32-1.27(m,3H).

步骤2：2-(2-((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)氧基)乙氧基)乙酸的制备

向4-[2-(2-乙氧基-2-氧代-乙氧基)乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.6g，4.83mmol，1eq)在甲醇(3mL)和四氢呋喃(3mL)和水(3mL)中的溶液中，加入氢氧化锂一水合物(405mg，9.66mmol，2eq)。将混合物在25℃下搅拌1小时。加入10mL水。用1M盐酸将混合物的pH调节至3-4，然后用二氯甲烷和甲醇(10:1，30mL x 3)萃取水相。合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。得到为黄色固体的化合物2-[2-[(1-叔丁氧基羰基-4-哌啶基)氧基]乙氧基]乙酸(1.2g，3.96mmol，82％产率)。

步骤3：4-(2-(2-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备

向2-[2-[(1-叔丁氧基羰基-4-哌啶基)氧基]乙氧基]乙酸(410mg，1.35mmol，1eq)和(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(600mg，1.35mmol，1eq)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液中，加入羟基苯并三唑(274mg，2.03mmol，1.50eq)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(389mg，2.03mmol，1.50eq)和N,N-二异丙基乙胺(593mg，4.59mmol，0.8mL，3.40eq)。将混合物在25℃下搅拌12小时。加入水(50mL)，用乙酸乙酯(40mL x 3)萃取水相。合并的有机相用盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇＝1:0至20:1)残余物。得到为黄色油的化合物4-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(690mg，0.95mmol，70％产率)。LC/MS(ESI)m/z:730.4[M+1]⁺.

步骤4：(2S,4R)-1-((S)-3,3-二甲基-2-(2-(2-(哌啶-4-基氧基)乙氧基)乙酰氨基)丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

在20℃下搅拌4-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(690mg，0.95mmol，1.00eq)在盐酸/二噁烷(4.0M，15mL，63.47eq)中的混合物1.0小时。减压除去溶剂。将残余物用甲醇(10mL)和乙腈(30mL)稀释，再次除去溶剂并真空干燥。在25℃下搅拌(2S,4R)-1-[(2S)-3,3-二甲基-2-[[2-[2-(4-哌啶基氧基)乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(470mg，705.42umol，1eq，盐酸盐)和碳酸钾(975mg，7.05mmol，10.00eq)在二氯甲烷(8mL)和乙腈(16mL)的混合物中的悬浮液1.5小时。通过硅藻土垫过滤悬浮液，并用二氯甲烷(15mL)洗涤，将滤液真空浓缩并干燥。得到为淡黄色固体的化合物(2S,4R)-1-[(2S)-3,3-二甲基-2-[[2-[2-(4-哌啶基氧基)乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(295mg，0.47mmol，66％产率)。

步骤5：4-(6-氯-8-氟-2-(((R)-1-(4-(2-(2-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙氧基)哌啶-1-基)丙-2-基)氧基)-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-[(1R)-1-甲基-2-氧代-乙氧基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(60mg，0.10mmol，1eq)和(2S,4R)-1-[(2S)-3,3-二甲基-2-[[2-[2-(4-哌啶基氧基)乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(78mg，0.12mmol，1.2eq)在甲醇(1mL)和二氯甲烷(2mL)中的溶液中，加入乙酸(12mg，0.20mmol，2eq)，然后在0℃下加入氰基硼氢化钠(19mg，0.31mmol，3eq)。将混合物在25℃下搅拌3小时。真空浓缩混合物。通过制备型TLC纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)混合物以得到产物。得到为黄色固体的化合物4-[6-氯-8-氟-2-[(1R)-2-[4-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]-1-哌啶基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(63mg)。LC/MS(ESI)m/z:1194.2[M+1]⁺.

步骤6：(2S,4R)-1-((2S)-2-(2-(2-((1-((2R)-2-((6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)氧基)乙氧基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向4-[6-氯-8-氟-2-[(1R)-2-[4-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]-1-哌啶基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(61mg，0.05mmol，1eq)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中，加入三氟乙酸(770mg，6.75mmol，0.5mL，132.28eq)。将混合物在25℃下搅拌0.5小时。真空浓缩混合物。得到为黄色油的化合物(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(61mg，0.05mmol，99％产率，三氟乙酸盐)。

步骤7：(2S,4R)-1-((2S)-2-(2-(2-((1-((2R)-2-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)氧基)乙氧基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(61mg，0.05mmol，1eq，三氟乙酸盐)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中，加入2,6-二甲基吡啶(54mg，0.50mmol，10eq)，然后在-65℃下加入在二氯甲烷(4mL)中的丙-2-烯酰氯(4mg，0.045mmol，0.9eq)。将混合物在-65℃下搅拌10分钟。加入水(10mL)。用二氯甲烷(15mL*3)萃取水相。真空浓缩合并的有机相。通过半制备型反相HPLC纯化残余物。然后将收集的级分浓缩以除去大部分乙腈。冻干溶液。得到为白色固体的化合物(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(19mg，0.02mmol，31％产率，99％纯度，甲酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:574.8[M/2+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.13-9.89(m,1H),8.98(s,1H),8.41(br d,J＝7.1Hz,1H),8.26(s,1H),8.00(s,1H),7.80(d,J＝9.2Hz,1H),7.42(br d,J＝7.0Hz,3H),7.39-7.26(m,4H),7.21(br d,J＝8.3Hz,2H),7.06(br d,J＝5.4Hz,1H),6.83(dd,J＝10.6,16.9Hz,1H),6.18(br d,J＝16.9Hz,1H),5.74(brd,J＝10.6Hz,1H),5.38(br s,1H),5.12(br s,1H),4.88(br d,J＝6.1Hz,1H),4.52(d,J＝9.9Hz,1H),4.43(t,J＝8.5Hz,1H),4.27(br s,1H),3.92(br d,J＝8.4Hz,6H),3.85(br s,2H),3.78(br s,2H),3.54(br d,J＝14.1Hz,6H),3.46-3.40(m,3H),2.77(br s,2H),2.61(br s,1H),2.45(s,3H),2.39(br s,1H),2.15(br s,2H),2.02(br d,J＝8.6Hz,1H),1.77(br s,3H),1.35(br d,J＝6.5Hz,3H),1.30(br d,J＝6.1Hz,3H),0.90(br s,9H).

(2S,4R)-1-((2S)-2-(2-(2-((1-((2R)-2-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)氧基)乙氧基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(示例性化合物399)的示例性合成

步骤1：4-(2-(2-(2-乙氧基-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备

在氮气下，在0℃下向4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1g，3.46mmol，1eq)在二氯甲烷(30mL)中的溶液中，一次性加入二乙酰氧基铑(38mg，0.17mmol，0.05eq)，然后加入2-重氮乙酸乙酯(2.37g，20.73mmol，6eq)并在25℃下搅拌16小时。将混合物用乙酸(4mL)缓慢淬灭，并加入水(20mL)。用二氯甲烷(15mL x 3)萃取水相。合并的有机相用盐水(20mL x 3)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过柱色谱法纯化(SiO₂，石油醚/乙酸乙酯＝30/1至10:1)残余物。得到为无色油的化合物4-[2-[2-(2-乙氧基-2-氧代-乙氧基)乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(700mg，1.86mmol，54％产率)。¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)δ4.22-4.16(m,4H),3.71-3.67(m,10H),3.60-3.56(m,1H),3.31-3.13(m,2H),1.81-1.61(m,2H),1.50-1.47(m,2H),1.47(s,9H),1.27(t,J＝7.2Hz,3H).

步骤2：2-(2-(2-((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙酸的制备

向4-[2-[2-(2-乙氧基-2-氧代-乙氧基)乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(700mg，1.86mmol，1eq)在四氢呋喃(2mL)、甲醇(2mL)和水(2mL)中的溶液中，加入氢氧化锂一水合物(235mg，5.59mmol，3eq)，将混合物在25℃下搅拌1小时。向混合物中加入盐酸溶液(1M)以调节pH至约3至4。将反应混合物用水(30mL)淬灭，并用乙酸乙酯(20mL x 2)萃取，将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。得到为无色油的化合物2-[2-[2-[(1-叔丁氧基羰基-4-哌啶基)氧基]乙氧基]乙氧基]乙酸(460mg，1.32mmol，71％产率)。

步骤3：4-(2-(2-(2-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备

向(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(600mg，1.35mmol，1eq)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液中，加入2-[2-[2-[(1-叔丁氧基羰基-4-哌啶基)氧基]乙氧基]乙氧基]乙酸(469mg，1.35mmol，1eq)、1-羟基苯并三唑(274mg，2.02mmol，1.5eq)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(388mg，2.02mmol，1.5eq)和N,N-二异丙基乙胺(593mg，4.59mmol，3.4eq)，将混合物在25℃下搅拌16小时。将反应混合物用水(50mL)淬灭，并用乙酸乙酯(30mL x 2)萃取，将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过柱色谱法纯化(SiO₂，二氯甲烷:甲醇＝50:1至5:1)残余物。通过半制备型反相HPLC进一步纯化残余物。得到为无色油的化合物4-[2-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(777mg，1.00mmol，74％产率)。LC/MS(ESI)m/z:774.4[M+1]⁺.

步骤4：(2S,4R)-1-((S)-3,3-二甲基-2-(2-(2-(2-(哌啶-4-基氧基)乙氧基)乙氧基)乙酰氨基)丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向4-[2-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(80mg，0.10mmol，1eq)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中，加入盐酸/二噁烷(4M，0.8mL，30.96eq)。将反应混合物在25℃下搅拌1小时。真空浓缩反应混合物，以得到为浅黄色固体的(2S,4R)-1-[(2S)-3,3-二甲基-2-[[2-[2-[2-(4-哌啶基氧基)乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(73mg，0.10mmol，99％产率，盐酸盐)。

步骤5：4-(6-氯-8-氟-2-(((R)-1-(4-(2-(2-(2-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙氧基)哌啶-1-基)丙-2-基)氧基)-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向(2S,4R)-1-[(2S)-3,3-二甲基-2-[[2-[2-[2-(4-哌啶基氧基)乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(73mg，0.10mmol，1eq，盐酸盐)在甲醇(1mL)中的混合物中，加入乙酸钠(25mg，0.31mmol，3eq)。将反应混合物在25℃下搅拌20分钟。加入4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-[(1R)-1-甲基-2-氧代-乙氧基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(60mg，0.10mmol，1eq)在二氯甲烷(2mL)中的溶液，然后加入乙酸(12mg，0.21mmol，2eq)。将反应混合物冷却至0℃，并加入氰基硼氢化钠(6mg，0.41mmol，4eq)。将反应混合物在25℃下搅拌14小时。加入二氯甲烷(20mL)和水(20mL)并分离混合物。有机层经硫酸钠干燥，然后真空浓缩以得到残余物。通过制备型TLC纯化(在二氯甲烷中的10％甲醇)残余物，以得到为无色胶的4-[6-氯-8-氟-2-[(1R)-2-[4-[2-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-哌啶基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(63mg，0.05mmol，46％产率，94％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:1238.6[M+1]⁺.

步骤6：(2S,4R)-1-((2S)-2-(2-(2-(2-((1-((2R)-2-((6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向4-[6-氯-8-氟-2-[(1R)-2-[4-[2-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-哌啶基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(63mg，0.05mmol，1eq)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中，加入三氟乙酸(7.70g，67.53mmol，5mL，1327.98eq)。将反应混合物在25℃下搅拌1小时。真空浓缩反应混合物以得到为浅黄色胶的(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(63.7mg，0.05mmol，100％产率，三氟乙酸盐)。

步骤7：(2S,4R)-1-((2S)-2-(2-(2-(2-((1-((2R)-2-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(63mg，0.05mmol，1eq，三氟乙酸盐)在N,N-二甲基甲酰胺(1mL)和二氯甲烷(5mL)中的溶液中，加入2,6-二甲基吡啶(184mg，1.72mmol，0.2mL，34.15eq)。将反应混合物冷却至-65℃，然后加入丙-2-烯酰氯(4mg，0.05mmol，0.9eq)在二氯甲烷(0.36mL)中的溶液。将反应混合物在-65℃下搅拌10分钟。加入二氯甲烷(30mL)和水(15mL)并分离混合物。有机层经硫酸钠干燥，然后真空浓缩以得到残余物。通过半制备型反相HPLC纯化这一残余物。将收集的级分真空浓缩以除去大部分乙腈，然后冻干。得到为白色固体的(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(14.5mg，0.01mmol，21％产率，98％纯度，三氟乙酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:1192.5[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.06(br d,J＝11.9Hz,1H),9.26(br s,1H),8.98(s,1H),8.40(d,J＝7.7Hz,1H),8.07(s,1H),7.82(d,J＝8.2Hz,1H),7.48-7.33(m,6H),7.30(d,J＝2.2Hz,1H),7.27-7.15(m,2H),7.06(dd,J＝2.3,9.0Hz,1H),6.83(dd,J＝10.6,16.6Hz,1H),6.19(dd,J＝2.2,16.6Hz,1H),5.80-5.72(m,1H),5.64(br s,1H),4.89(br s,1H),4.54(br d,J＝9.8Hz,1H),4.42(br t,J＝8.0Hz,1H),4.28(br s,1H),3.96(br d,J＝7.3Hz,6H),3.93-3.90(m,4H),3.86(br s,5H),3.81(br s,6H),3.62-3.51(m,10H),3.43-3.29(m,1H),3.17(br s,2H),2.45(s,3H),2.12-1.86(m,3H),1.77(br s,1H),1.47-1.33(m,6H),0.92(s,9H).

(2S,4R)-1-((2S)-2-(2-(4-((1-((2R)-2-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(示例性化合物403)的示例性合成

步骤1：4-((4-(2-乙氧基-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备

向2-哌嗪-1-基乙酸乙酯(1g，4.79mmol，1eq,盐酸盐)在甲醇(20mL)和二氯甲烷(20mL)中的混合物中加入乙酸钠(1.18g，14.38mmol，3eq)。将混合物在25℃下搅拌10分钟。然后在25℃搅拌下加入4-甲酰基哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.02g，4.79mmol，1eq)和乙酸(576mg，9.58mmol，0.6mL，2eq)10分钟。然后在0℃下加入氰基硼氢化钠(603mg，9.58mmol，2eq)。然后将反应混合物在25℃下搅拌12小时。然后将混合物用水(30mL)稀释。然后将混合物用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取。合并的有机层用水(50mL x 2)和盐水(50mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩以得到残余物。通过硅胶色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝7:3至0:1)残余物。得到为无色油的产物4-[[4-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)哌嗪-1-基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.7g，4.60mmol，96％产率)。LC/MS(ESI)m/z:370.3[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.24-4.18(m,2H),3.31(s,2H),3.18-2.97(m,4H),2.97-2.90(m,4H),2.77-2.67(m,4H),2.09(s,2H),1.94-1.85(m,1H),1.84-1.74(m,2H),1.46(s,9H),1.31-1.28(m,3H),1.23-1.14(m,2H).

步骤2：2-(4-((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)乙酸的制备

向4-[[4-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)哌嗪-1-基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(200mg，0.54mmol，1eq)在四氢呋喃(2mL)、甲醇(1mL)和水(2mL)中的混合物中加入氢氧化锂一水合物(68mg，1.62mmol，3eq)。将混合物在25℃下搅拌1小时。将混合物用稀盐酸(1M)酸化至PH＝6-7。然后将混合物真空浓缩以得到残余物。得到为粉色固体的产物2-[4-[(1-叔丁氧基羰基-4-哌啶基)甲基]哌嗪-1-基]乙酸(180mg)。

步骤3：4-((4-(2-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备

向2-[4-[(1-叔丁氧基羰基-4-哌啶基)甲基]哌嗪-1-基]乙酸(115mg，0.34mmol，1eq)和(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(150mg，0.34mmol，1eq，盐酸盐)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的混合物中，加入1-羟基苯并三唑(91mg，0.68mmol，2eq)，N-(3-二甲基氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺盐酸盐(130mg，0.68mmol，2eq)和N,N-二异丙基乙胺(218mg，1.69mmol，0.3mL，5eq)。将混合物在25℃下搅拌12小时。将混合物用水(30mL)稀释。然后将混合物用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取。将合并的有机层用水(50mL x 2)和盐水(50mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩以得到残余物。通过制备型TLC纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)残余物。得到为无色油的化合物4-[[4-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙基]哌嗪-1-基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(70mg)。LC/MS(ESI)m/z:768.5[M+1]⁺.

步骤4：(2S,4R)-1-((S)-3,3-二甲基-2-(2-(4-(哌啶-4-基甲基)哌嗪-1-基)乙酰氨基)丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向4-[[4-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙基]哌嗪-1-基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(70mg，0.09mmol，1eq)在二氯甲烷(5mL)中的混合物中，加入氯化氢/二噁烷(4M，5mL)。将混合物在25℃下搅拌30分钟。然后真空浓缩混合物以得到残余物。得到为白色固体的产物(2S,4R)-1-[(2S)-3,3-二甲基-2-[[2-[4-(4-哌啶基甲基)哌嗪-1-基]乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(64mg，盐酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:668.5[M+1]⁺.

步骤5：4-(6-氯-8-氟-2-(((R)-1-(4-((4-(2-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)丙-2-基)氧基)-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向(2S,4R)-1-[(2S)-3,3-二甲基-2-[[2-[4-(4-哌啶基甲基)哌嗪-1-基]乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(64mg，0.09mmol，1eq,盐酸盐)在二氯甲烷(3mL)和甲醇(3mL)中的混合物中，加入乙酸钠(23mg，0.27mmol，3eq)。将混合物在25℃下搅拌10分钟。然后在25℃下在搅拌下加入4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-[(1R)-1-甲基-2-氧代-乙氧基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(53mg，0.09mmol，1eq)和乙酸(11mg，0.18mmol，2eq)10分钟。然后在0℃下加入氰基硼氢化钠(18mg，0.27mmol，3eq)。然后将反应混合物在25℃下搅拌12小时。真空浓缩混合物以得到残余物。通过制备型TLC纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)残余物。得到为白色固体的产物4-[6-氯-8-氟-2-[(1R)-2-[4-[[4-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙基]哌嗪-1-基]甲基]-1-哌啶基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(40mg，0.03mmol，36％产率)。LC/MS(ESI)m/z:617.4[M/2+1]⁺.

步骤6：(2S,4R)-1-((2S)-2-(2-(4-((1-((2R)-2-((6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向4-[6-氯-8-氟-2-[(1R)-2-[4-[[4-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙基]哌嗪-1-基]甲基]-1-哌啶基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(40mg，0.03mmol，1eq)在二氯甲烷(5mL)中的混合物中，加入三氟乙酸(3.08g，2mL)。将混合物在25℃下搅拌30分钟。真空浓缩混合物以得到残余物。得到为白色固体的(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[4-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]甲基]哌嗪-1-基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(40mg，三氟乙酸盐)。

步骤7：(2S,4R)-1-((2S)-2-(2-(4-((1-((2R)-2-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[4-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]甲基]哌嗪-1-基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(40mg，0.03mmol，1eq，三氟乙酸盐)在二氯甲烷(20mL)中的混合物中，加入2,6-二甲基吡啶(35mg，0.32mmol，0.04mL，10eq)。然后在氮气气氛下在-78℃下加入在二氯甲烷(5mL)中的丙-2-烯酰氯(3mg，0.03mL，0.9eq)。然后将混合物在氮气气氛下于-78℃搅拌15分钟。将混合物用水(25mL)稀释。然后将其用二氯甲烷(20mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水(30mL x2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩以得到残余物。通过制备型HPLC纯化残余物。得到为白色固体的化合物(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[4-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]甲基]哌嗪-1-基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(5.8mg，0.005mmol，14.7％产率，100％纯度，甲酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:593.8[M/2+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.96(s,1H),8.44-8.42(d,J＝8.0Hz,1H),8.28(s,2H),8.00(s,1H),7.80-7.78(d,J＝8.0Hz,1H),7.70-7.66(d,J＝16.0Hz,1H),7.46-7.39(m,3H),7.38-7.31(m,2H),7.28-7.27(d,J＝4.0Hz,1H),7.26-7.15(m,2H),7.10-7.03(m,1H),6.88-6.77(m,1H),6.22-6.13(m,1H),5.78-5.71(m,1H),5.45-5.36(m,1H),4.92-4.81(m,1H),4.50-4.32(m,3H),4.26(s,1H),3.99-3.69(m,14H),3.11-2.79(m,5H),2.44(s,7H),2.11-1.85(m,6H),1.79-1.69(m,1H),1.59-1.49(m,2H),1.41-1.26(m,7H),0.90(s,12H).

(2S,4R)-1-((2S)-2-(2-(4-((4-((2R)-2-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)丙基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(示例性化合物404)的示例性合成

步骤1：4-((1-((苄氧基)羰基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

在4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1g，3.46mmol，1eq)在盐酸盐/甲醇(4M，3mL，3.47eq)中的溶液，将混合物在25℃下搅拌1小时。将混合物过滤并减压浓缩以得到残余物。得到为白色固体的化合物2-[2-(4-哌啶基氧基)乙氧基]乙醇(600mg，盐酸盐)。

步骤2：4-(哌啶-4-基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向4-[(1-苄氧基羰基-4-哌啶基)甲基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(910mg，2.18mmol，1eq)在甲醇(15mL)中的溶液中，加入钯炭活性催化剂(500mg，10％纯度)，将悬浮液在真空下脱气并用氢气吹扫几次。将在甲醇(15mL)中的钯炭活性催化剂(100mg，0.07mmol，10％纯度，3.27e-2eq)加入混合物中并在氢气(4mg，2.18mmol，1eq)(50psi)下在25℃下搅拌16小时。将反应混合物过滤并将滤液浓缩。得到为无色胶的化合物4-(4-哌啶基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.8g)。LC/MS(ESI)m/z:284.1[M+1]⁺.

步骤3：4-((1-(2-乙氧基-2-氧代乙基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向4-(4-哌啶基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(650mg，2.29mmol，1eq)和2-溴乙酸乙酯(460mg，2.75mmol，0.3mL，1.2eq)在乙腈(10mL)中的溶液中加入碳酸钾(951mg，6.88mmol，3eq)，将混合物在80℃下搅拌16小时。将反应混合物用水(30mL)淬灭，并用乙酸乙酯(20mLx 2)萃取，将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过硅胶色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝10:1至0:1)残余物。得到为黄色油的化合物4-[[1-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-4-哌啶基]甲基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(537mg，1.45mmol，63％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.16(q,J＝7.2Hz,2H),3.38(d,J＝4.8Hz,2H),3.20(s,2H),2.94(d,J＝11.6Hz,2H),2.36-2.27(m,4H),2.21-2.11(m,4H),1.73(d,J＝12.8Hz,2H),1.43(s,9H),1.26-1.22(m,8H).

步骤4：2-(4-((4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)乙酸的制备

向4-[[1-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-4-哌啶基]甲基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(567mg，1.53mmol，1eq)在水(5mL)、甲醇(5mL)和四氢呋喃(5mL)中的溶液中加入氢氧化锂一水合物(322mg，7.67mmol，5eq)，将混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物倒入盐酸溶液(1M)中以将pH调节至约6至7。反应混合物用(氯仿:异丙醇＝5:1)(200mL x 2)萃取，合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。得到为黄色固体的化合物2-[4-[(4-叔丁氧基羰基哌嗪-1-基)甲基]-1-哌啶基]乙酸(332mg，0.97mmol，63％产率)。¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)δ3.57(s,2H),3.42(s,4H),2.38(t,J＝5.2Hz,4H),2.26(d,J＝7.2Hz,2H),2.02(d,J＝14.4Hz,2H),1.56-1.42(m,11H),1.15(d,J＝6.0Hz,5H).

步骤5：4-((1-(2-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向2-[4-[(4-叔丁氧基羰基哌嗪-1-基)甲基]-1-哌啶基]乙酸(115mg，0.3mmol，1.08eq)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液中，加入(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(150mg，0.3mmol，1eq,盐酸盐)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(90mg，0.47mmol，1.5eq)，1-羟基苯并三唑(63mg，0.47mmol，1.5eq)、N,N-二异丙基乙胺(161mg，1.25mmol，0.2mL，4eq)，将混合物在25℃下搅拌2小时。将反应混合物用水(30mL)淬灭，并用乙酸乙酯(50mL x2)萃取，将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过制备型TLC纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)残余物。得到为无色固体的化合物4-[[1-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙基]-4-哌啶基]甲基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(140mg，0.18mmol，57％产率，98％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:768.05[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.88(s,1H),7.47-7.38(m,4H),5.01(q,J＝7.2Hz,1H),4.65-4.44(m,4H),3.90-3.83(m,1H),3.80-3.69(m,1H),3.42(s,3H),3.35(s,4H),3.03(d,J＝4.4Hz,2H),2.93-2.84(m,2H),2.48(s,3H),2.37(t,J＝4.8Hz,4H),2.25-2.20(m,4H),2.02-1.91(m,1H),1.80(t,J＝13.6Hz,2H),1.60-1.50(m,4H),1.45(s,9H),1.33-1.22(m,2H),1.06-1.02(m,9H).

步骤6：(2S,4R)-1-((S)-3,3-二甲基-2-(2-(4-(哌嗪-1-基甲基)哌啶-1-基)乙酰氨基)丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

在4-[[1-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙基]-4-哌啶基]甲基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(140mg，0.18mmol，1eq)在盐酸/甲醇(4M，5mL，109.72eq)中的溶液中，将混合物在25℃下搅拌1小时。减压浓缩混合物以得到残余物。得到为无色油的化合物(2S,4R)-1-[(2S)-3,3-二甲基-2-[[2-[4-(哌嗪-1-基甲基)-1-哌啶基]乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(120mg，0.17mmol，93％产率,盐酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:668.5[M+1]⁺.

步骤7：4-(6-氯-8-氟-2-(((R)-1-(4-((1-(2-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)丙-2-基)氧基)-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向(2S,4R)-1-[(2S)-3,3-二甲基-2-[[2-[4-(哌嗪-1-基甲基)-1-哌啶基]乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(73mg，0.1mmol，1eq,盐酸盐)在甲醇(3mL)中的溶液中，加入乙酸钠(25mg，0.3mmol，3eq)，将混合物在25℃下搅拌0.5小时。然后加入在二氯甲烷(3mL)中的4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-[(1R)-1-甲基-2-氧代-乙氧基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(60mg，0.1mmol，1eq)。在0℃下向反应中加入乙酸(6mg，0.1mmol，0.006mL，1eq)，然后加入氰基硼氢化钠(19mg，0.3mmol，3eq)，持续0.5小时。将混合物在25℃下搅拌11小时。减压浓缩混合物以得到残余物。通过制备型TLC纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)残余物。得到为无色油的化合物4-[6-氯-8-氟-2-[(1R)-2-[4-[[1-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙基]-4-哌啶基]甲基]哌嗪-1-基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(72mg，0.06mmol，55％产率，97％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:617.4[M/2+1]⁺.

步骤8：(2S,4R)-1-((2S)-2-(2-(4-((4-((2R)-2-((6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)丙基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向4-[6-氯-8-氟-2-[(1R)-2-[4-[[1-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙基]-4-哌啶基]甲基]哌嗪-1-基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(72mg，0.06mmol，1eq)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中，加入三氟乙酸(1.54g，13.51mmol，1mL，231.28eq)，将混合物在25℃下搅拌1小时。减压浓缩混合物以得到残余物。得到为黄色油的化合物(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[4-[[4-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]哌嗪-1-基]甲基]-1-哌啶基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(72mg，0.06mmol，99％产率，三氟乙酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:567.4[M/2+1]⁺.

步骤9：(2S,4R)-1-((2S)-2-(2-(4-((4-((2R)-2-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)丙基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[4-[[4-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]哌嗪-1-基]甲基]-1-哌啶基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(72mg，0.06mmol，1eq，三氟乙酸盐)在N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中的溶液中，加入2,6-二甲基吡啶(248mg，2.31mmol，0.3mL，40eq)，将混合物冷却至-78℃，然后滴加在二氯甲烷(5mL)中的丙-2-烯酰氯(4.70mg，0.05mmol，0.004mL，0.9eq)，将混合物在-78℃下搅拌30分钟。减压浓缩混合物以得到残余物。通过半制备型反相HPLC纯化残余物。得到为白色固体的化合物(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[4-[[4-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]哌嗪-1-基]甲基]-1-哌啶基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(9.9mg，0.008mmol，14％产率，96％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:594.8[M/2+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.98(s,1H),8.45(d,J＝7.7Hz,1H),8.25(s,2H),8.01(s,1H),7.81(d,J＝8.2Hz,1H),7.73(d,J＝9.7Hz,1H),7.43(d,J＝8.2Hz,3H),7.36(d,J＝8.4Hz,2H),7.29(d,J＝2.2Hz,1H),7.24-7.18(m,2H),7.06(dd,J＝2.3,8.5Hz,1H),6.84(dd,J＝10.5,16.7Hz,1H),6.18(dd,J＝2.1,16.6Hz,1H),5.79-5.72(m,1H),5.45-5.38(m,1H),4.88(t,J＝7.2Hz,1H),4.51-4.39(m,2H),4.27(s,1H),3.95-3.73(m,8H),2.99(d,J＝14.9Hz,1H),2.87-2.71(m,4H),2.69-2.58(m,3H),2.45(s,3H),2.40(s,2H),2.21(s,4H),2.08-2.02(m,6H),1.79-1.58(m,4H),1.45-1.29(m,8H),1.07(s,2H),0.92(s,9H).

(2S,4R)-1-((S)-20-((1-((R)-2-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-7-(3-羟基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)氧基)-2-(叔丁基)-4-氧代-6,9,12,15,18-五氧杂-3-氮杂二十烷酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(示例性化合物410)的示例性合成

步骤1：2,4-二溴萘-1-胺的制备

在5℃下向二溴(25.67g，160.63mmol，8.3mL，2.30eq)在乙酸(75mL)中的溶液中，滴加萘-1-胺(10.00g，69.84mmol，9.8mL，1.00eq)在乙酸(50mL)中的溶液，持续30分钟。添加完成后，将乙酸(50mL)稀释。将反应混合物加热至70℃持续30分钟。将悬浮液过滤并用乙酸(100mL)洗涤，将滤饼悬浮在20％的氢氧化钠水溶液(120mL)中，将混合物搅拌20分钟并用乙酸乙酯(100mL x 2)萃取。合并的有机相用饱和盐水(150mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝30/1至1/1)残余物。浓缩洗脱液，并用乙酸乙酯和石油醚的混合物(50mL，V/V＝1/10)处理，将悬浮液过滤并用石油醚(50mL)洗涤，将滤饼在真空下干燥。得到为灰色固体的化合物2,4-二溴萘-1-胺(10.20g，33.89mmol，49％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.18(d,J＝8.4Hz,1H),7.81-7.90(m,2H),7.62-7.53(m,2H),4.63(brs,2H).

步骤2：4-溴-2-羟基萘-1-重氮鎓的制备

在5至8℃下，在15分钟时段内向2,4-二溴萘-1-胺(10.20g，33.89mmol，1.00eq)在乙酸(100mL)和丙酸(17mL)的混合物中的溶液中，分批加入亚硝酸钠(2.69g，38.97mmol，1.15eq)。将反应混合物在5至8℃下搅拌45分钟。将混合物在搅拌下倒入冰水(660mL)中，将浆液过滤并用水(100mL)洗涤，将滤饼风干。得到为淡黄色固体的化合物4-溴-2-羟基萘-1-重氮鎓(8.20g，32.79mmol，97％产率)。

步骤3：4-溴萘-2-醇的制备

在10℃下，在10分钟时段内向4-溴-2-羟基-萘-1-重氮鎓(8.20g，32.79mmol，1.00eq)在乙醇(170mL)中的溶液中，分批加入四氢硼酸钠(2.84g，75.07mmol，2.29eq)。将混合物在20℃下搅拌80分钟。用盐酸溶液(1.0M，80mL)将溶液的pH调节至约6，减压除去有机相，并用水(150mL)稀释，用乙酸乙酯(150mL x 2)萃取混合物，合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝50/1至5/1)残余物。得到为紫色固体的化合物4-溴萘-2-醇(2.70g，12.10mmol，37％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.15(d,J＝8.0Hz,1H),7.66(d,J＝7.6Hz,1H),7.49-7.41(m,3H),7.15(d,J＝2.0Hz,1H),5.42(s,1H).

步骤4：1-溴-3-(甲氧基甲氧基)萘的制备

在0℃下向4-溴萘-2-醇(2.70g，12.10mmol，1.00eq)和碳酸钾(5.02g，36.31mmol，3.00eq)在N,N-二甲基甲酰胺(20.0mL)中的溶液中滴加氯(甲氧基)甲烷(1.49g，18.51mmol，1.4mL，1.53eq)。将混合物在20℃下搅拌12小时。将混合物用水(100mL)稀释，并用乙酸乙酯(50mL x 2)萃取，合并的有机相用饱和盐水(40mL x 2)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过半制备型反相HPLC纯化粗产物，减压除去洗脱液并真空干燥。得到为淡红色油的化合物1-溴-3-(甲氧基甲氧基)萘(1.40g，5.24mmol，43％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.18-8.15(m,1H),7.78-7.13(m,1H),7.59(d,J＝2.4Hz,1H),7.53-7.45(m,2H),7.41(d,J＝2.0Hz,1H),5.30(s,2H),3.54(s,3H).

步骤5：7-苄基-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,4-二醇的制备

在0℃下，在30分钟时段内将钠(11.64g，506.31mmol，4.43eq)分批添加到乙醇(500mL)中，并在20℃下搅拌另外30分钟。然后向上述溶液中加入1-苄基-3-氧代哌啶-4-羧酸乙酯(34.00g，114.18mmol，1.00eq,盐酸盐)和脲(20.57g，342.54mmol，3.00eq)，将反应混合物在90℃下搅拌12小时。用盐酸溶液(1.0M)将混合物的pH调节至约7，并减压除去大部分有机相。将悬浮液过滤并用水(40mL)洗涤，将滤饼真空干燥。得到为白色固体的化合物7-苄基-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,4-二醇(18.10g，70.35mmol，62％产率)。LC/MS(ESI)m/z:258.1[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.93(s,1H),10.61(s,1H),7.37-7.27(m,5H),3.62(s,2H),3.13(s,2H),2.61(t,J＝5.6Hz,2H),2.23(t,J＝5.2Hz,2H).

步骤6：7-苄基-2,4-二氯-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶的制备

向7-苄基-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,4-二醇(18.10g，70.35mmol，1.00eq)在三氯氧磷(165.00g，1.08mol，100mL，15.30eq)中的溶液中，缓慢加入二异丙基乙胺(27.28g，211.05mmol，36.8mL，3.00eq)。将混合物在110℃下搅拌12小时。减压蒸发溶剂，并用二氯甲烷(150mL)稀释，将悬浮液缓慢倒入冰浴中，并用饱和碳酸氢钠溶液(100mL)调节至pH约7，分离有机相。并用二氯甲烷(150mL x 3)萃取水相，合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。(在搅拌下将三氯氧磷缓慢倒入水中，并用饱和碳酸氢钠溶液调节至pH约7)。通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10/1至5/1)残余物。得到为淡红色固体的化合物7-苄基-2,4-二氯-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶(6.70g，22.78mmol，32％产率)。得到为白色固体的嘧啶-2,4-二醇(18.10g，70.35mmol，62％产率)。LC/MS(ESI)m/z:294.0[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.36-7.28(m,5H),3.74(s,2H),3.67(s,2H),2.85(s,4H).

步骤7：4-(7-苄基-2-氯-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向7-苄基-2,4-二氯-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶(28.50g，96.88mmol，1.00eq)和哌嗪-1-羧酸叔丁酯(18.95g，101.72mmol，1.05eq)在(甲基亚磺酰基)甲烷(200mL)中的溶液中，加入二异丙基乙胺(25.04g，193.76mmol，33.8mL，2.00eq)。将混合物在55℃下搅拌3小时。用水(500mL)和乙酸乙酯(60mL)稀释混合物，将悬浮液搅拌10分钟，并分离水相，过滤有机层，用乙酸乙酯(40mL)、石油醚(60mL)洗涤滤饼，并真空干燥，得到约38g为白色固体的产物，用乙酸乙酯(150mL x 2)萃取水相。合并的有机相和上层滤液用水(300mL)、饱和盐水(300mL x 2)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10/1至3/1)粗产物，以得到约3.2g为白色固体的产物。得到为白色固体的化合物4-(7-苄基-2-氯-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(41.20g，92.80mmol，96％产率)。LC/MS(ESI)m/z:444.1[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.36-7.29(m,5H),3.70(s,2H),3.62(s,2H),3.54-3.49(m,8H),2.68(s,4H),1.50(s,9H).

步骤8：(R)-4-(7-苄基-2-((1,1-二甲氧基丙-2-基)氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向4-(7-苄基-2-氯-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(10.00g，22.52mmol，1.00eq)和(R)-1,1-二甲氧基丙-2-醇(4.06g，33.79mmol，1.50eq)在甲苯(120mL)中的溶液中，加入三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(1.24g，1.35mmol，0.06eq)，(R)-(+)-2,2'-双(二苯基膦基)-1,1'-联萘(1.40g，2.25mmol，0.10eq)和2-甲基丙-2-醇钠(5.41g，56.31mmol，2.50eq)。将反应混合物用氮气脱气并在100℃下搅拌4小时。减压除去溶剂。通过硅胶柱色谱法纯化(在石油醚中的17-50％乙酸乙酯)残余物。得到为绿色固体的化合物4-[7-苄基-2-[(1R)-2,2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4.90g，9.29mmol，41％产率)。LC/MS(ESI)m/z:528.4[M+1]⁺.

步骤9：(R)-4-(2-((1,1-二甲氧基丙-2-基)氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

在氮气下向4-[7-苄基-2-[(1R)-2,2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4.90g，9.29mmol，1.00eq)在甲醇(90mL)和四氢呋喃(15mL)的混合物中的溶液中，加入氨溶液(9.04mmol，92.86mmol，9.9mL，36％纯度，10.00eq)和钯活性炭(10％，1.00g)。将悬浮液在真空下脱气并用氢气净化几次。将混合物在氢气(50psi)下在50℃下搅拌64小时。通过硅藻土垫过滤悬浮液，并用甲醇(30mL)洗涤，将滤液浓缩并真空干燥。得到为黄色胶的化合物4-[2-[(1R)-2,2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3.54g，8.09mmol，87％产率)。LC/MS(ESI)m/z:438.2[M+1]⁺.

步骤10：(R)-4-(2-((1,1-二甲氧基丙-2-基)氧基)-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向4-[2-[(1R)-2,2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3.54g，8.09mmol，1.00eq)和1-溴-3-(甲氧基甲氧基)萘(2.27g，8.50mmol，1.05eq)在二噁烷(45mL)中的混合物中，加入RuPhos-Pd-G3(338mg，0.40mmol，0.05eq)、二环己基-(2′,6′-二异丙氧基-[1,1′-联苯]-2-基)膦(388mg，0.81mmol，0.10eq)和碳酸铯(6.59g，20.23mmol，2.50eq)。将反应混合物用氮气脱气并在100℃下搅拌5小时。减压除去溶剂。通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5/1至3/1)残余物。得到为淡红色固体的化合物4-[2-[(1R)-2,2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]-7-[3-(甲氧基甲氧基)-1-萘基]-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3.90g，6.25mmol，77％产率)。LC/MS(ESI)m/z:624.4[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.11(d,J＝8.4Hz,1H),7.76(d,J＝8.0Hz,1H),7.46(t,J＝7.2Hz,1H),7.38(t,J＝8.4Hz,1H),7.17(d,J＝1.6Hz,1H),6.89(d,J＝2.0Hz,1H),5.31(s,2H),5.28-5.21(m,1H),4.48(d,J＝6.0Hz,1H),4.25(s,2H),3.59-3.43(m,17H),3.37(s,2H),2.88(s,2H),1.51(s,9H),1.37(d,J＝6.4Hz,3H).

步骤11：(R)-2-((7-(3-羟基萘-1-基)-4-(哌嗪-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)丙醛的制备

向4-[2-[(1R)-2,2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]-7-[3-(甲氧基甲氧基)-1-萘基]-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.90g，3.05mmol，1.00eq)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中，加入氯化氢/二噁烷(4.0M，20mL，26.26eq)。将反应混合物在20℃下搅拌4.0小时。将悬浮液过滤并用乙酸乙酯(15mL)和石油醚(15mL)洗涤，将滤饼真空干燥。得到为淡黄色固体的化合物(2R)-2-[[7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙醛(800mg，1.70mmol，56％产率，盐酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:434.1[M+1]⁺.

步骤12：(R)-2-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-7-(3-羟基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)丙醛的制备

向(2R)-2-[[7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙醛(400mg，0.85mmol，1.00eq,盐酸盐)在二氯甲烷(155mL)和N,N-二甲基甲酰胺(4mL)的混合物中的溶液中，加入丙-2-烯酰氯(85mg，0.94mmol，1.10eq)在二氯甲烷(5mL)中的溶液。然后在-78℃下滴加2,6-二甲基吡啶(2.74g，25.53mmol，30.00eq)，持续30分钟。将反应混合物在-78℃下搅拌1.0小时。减压除去溶剂，然后真空蒸发高沸点溶剂。通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3/1至1/1，乙酸乙酯/甲醇＝20/1至10/1)残余物。得到为淡红色固体的产物(2R)-2-[[7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙醛(700mg)。LC/MS(ESI)m/z:488.1[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.94(s,1H),8.01(d,J＝8.8Hz,2H),7.49-7.24(m,3H),6.87-6.77(m,1H),6.18(d,J＝16.8Hz,2H),5.76(d,J＝6.4Hz,1H),5.21-5.05(m,1H),4.60-4.46(m,2H),4.05-3.95(m,4H),3.83-3.74(m,8H),1.50(t,J＝6.4Hz,3H).

步骤13：14-羟基-3,6,9,12-四氧杂十四烷酰基4-甲基苯磺酸酯的制备

在0℃下向2-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙醇(15g，62.95mmol，13.27mL，2eq)在四氢呋喃(150mL)中的溶液中，加入氢化钠(1.26g，31.48mmol，60％纯度，1eq)。将混合物在0℃下搅拌0.5小时。然后加入对甲苯磺酰氯(6.00g，31.48mmol，1eq)，将混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物倒入饱和氯化铵水溶液(100mL)中，用乙酸乙酯(80mL x 2)萃取水层。然后将有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，并将滤液浓缩以得到残余物。通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3/1至二氯甲烷/甲醇＝10/1)残余物，以得到为浅黄色油的2-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙基4-甲基苯磺酸酯(8.62g，21.96mmol，69％产率)。

步骤14：14-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-3,6,9,12-四氧杂十四烷酰基4-甲基苯磺酸酯的制备

在0℃下向2-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙基4-甲基苯磺酸酯(13g，33.12mmol，1eq)在二氯甲烷(100mL)中的溶液中，加入4-甲基苯磺酸吡啶(416mg，1.66mmol，0.05eq)和3,4-二氢-2H-吡喃(3.34g，39.75mmol，3.63mL，1.2eq)。然后将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物过滤以得到滤液。滤液用水(300mL)淬灭，然后用二氯甲烷(500mL)稀释，并用二氯甲烷(500mL x 2)萃取。合并的有机层用盐水(300mL)洗涤，干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3:1)残余物，以得到为黄色油的2-[2-[2-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙基4-甲基苯磺酸酯(12.5g，26.23mmol)。

步骤15：4-((14-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-3,6,9,12-四氧杂十四烷酰基)氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备

在0℃下向4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(6.33g，31.47mmol，1.2eq)在四氢呋喃(500mL)中的混合物中分批加入氢化钠(1.26g，31.47mmol，60％纯度，1.2eq)。将混合物在0℃下搅拌1小时。然后向混合物中滴加2-[2-[2-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙基4-甲基苯磺酸酯(12.5g，26.23mmol，1eq)在四氢呋喃(50mL)中的溶液。将混合物在25℃下搅拌12小时。将残余物倒入饱和碳酸氢钠(300mL)中。用乙酸乙酯(100mL x 3)萃取混合物。合并有机层，经无水硫酸钠干燥并过滤。浓缩滤液。通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3:1)残余物。得到为黄色油的4-[2-[2-[2-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(13.3g)。

步骤16：4-((14-羟基-3,6,9,12-四氧杂十四烷酰基)氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备

向4-[2-[2-[2-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(13.3g，26.30mmol，1eq)在乙醇(50mL)中的溶液中，加入4-甲基苯磺酸吡啶(661mg，2.63mmol，0.1eq)。将混合物在60℃下搅拌12小时。过滤反应混合物，并减压浓缩以得到残余物。通过柱色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝5:1至0:1)残余物。得到为无色油的4-[2-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(7.2g，17.08mmol，65％产率)。

步骤17：4-((17-氧代-3,6,9,12,15,18-六氧杂二十烷基)氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备

在氮气下，在0℃下向4-[2-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(400mg，0.95mmol，1eq)在四氢呋喃(20mL)中的溶液中，一次性加入氢化钠(46mg，1.14mmol，60％纯度，1.2eq)。将混合物在0℃下搅拌0.5小时。然后在0℃下加入2-溴乙酸乙酯(190mg，1.14mmol，1.2eq)。将混合物在25℃下搅拌11.5小时。向反应混合物中加入水(30mL)，并用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取混合物。合并的有机相用盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过柱色谱法纯化(SiO₂，石油醚/乙酸乙酯＝5/1至1/1)残余物。得到为白色油的化合物4-[2-[2-[2-[2-[2-(2-乙氧基-2-氧代-乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(250mg，0.49mmol，51％产率)。

步骤18：17-((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)氧基)-3,6,9,12,15-五氧杂十七酸的制备

向4-[2-[2-[2-[2-[2-(2-乙氧基-2-氧代-乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(250mg，492.50umol，1eq)在四氢呋喃(5mL)和水(5mL)中的溶液中，加入锂水合物(59mg，2.46mmol，5eq)。将混合物在25℃下搅拌12小时。向反应混合物中装入1M盐酸以调节pH＝5，并用乙酸乙酯20mL(20mL*3)萃取。合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到为黄色油的化合物2-[2-[2-[2-[2-[2-[(1-叔丁氧基羰基-4-哌啶基)氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酸(200mg)。

步骤19：4-(((S)-19-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-20,20-二甲基-17-氧代-3,6,9,12,15-五氧杂-18-氮杂二十一烷基)氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备

将2-[2-[2-[2-[2-[2-[(1-叔丁氧基羰基-4-哌啶基)氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酸(500mg，1.04mmol，1eq)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(464mg，1.04mmol，1eq)、1-羟基苯并三唑(211mg，1.56mmol，1.5eq)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(300mg，1.56mmol，1.5eq)和N,N-二异丙基乙胺(539mg，4.17mmol，4eq)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的混合物脱气并用氮气吹扫3次，然后将混合物在N₂气氛下在25℃搅拌12小时。向反应混合物中加入水(50mL)，并用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取混合物。合并的有机相用盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过半制备型反相HPLC纯化粗产物以得到为无色油的化合物4-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(700mg，0.77mmol，74％产率)。

步骤20：(2S,4R)-1-((S)-2-(叔丁基)-4-氧代-20-(哌啶-4-基氧基)-6,9,12,15,18-五氧杂-3-氮杂二十烷酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向4-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(100mg，0.11mmol，1eq)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中，加入盐酸/二噁烷(4M，1mL，36.25eq)。将反应混合物在25℃下搅拌1小时。真空浓缩混合物以得到为无色胶的(2S,4R)-1-[(2S)-3,3-二甲基-2-[[2-[2-[2-[2-[2-[2-(4-哌啶基氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(93mg，盐酸盐)。

步骤21：(2S,4R)-1-((S)-20-((1-((R)-2-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-7-(3-羟基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)氧基)-2-(叔丁基)-4-氧代-6,9,12,15,18-五氧杂-3-氮杂二十烷酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向(R)-2-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-7-(3-羟基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)丙醛(40mg，0.08mmol，1.00eq)和(2S,4R)-1-((S)-2-(叔丁基)-4-氧代-20-(哌啶-4-基氧基)-6,9,12,15,18-五氧杂-3-氮杂二十烷-1-酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(71mg，0.08mmol，1.00eq，盐酸盐)在1,2-二氯乙烷(1.0mL)和甲醇(1.0mL)的混合物中的混合物中，加入乙酸钠(135mg，1.64mmol，20.00eq)，持续约30分钟。然后在0℃下加入氰基硼氢化钠(16mg，0.25mmol，3.00eq)。使混合物温热至20℃，持续1.5小时。将悬浮液过滤并用二氯甲烷(7mL)洗涤，将滤液浓缩并真空干燥。通过制备型TLC纯化(二氯甲烷:甲醇＝15:1)残余物。通过半制备型反相HPLC进一步纯化产物。将洗脱液在真空中冻干。通过半制备型反相HPLC进一步纯化产物。将洗脱液在真空中冻干。得到为粉色固体的化合物(2S,4R)-1-((S)-20-((1-((R)-2-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-7-(3-羟基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)氧基)-2-(叔丁基)-4-氧代-6,9,12,15,18-五氧杂-3-氮杂二十烷-1-酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(7.1mg，0.005mmol，7％产率，97％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:1299.7[M+23]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.60(s,1H),7.94(d,J＝8.4Hz,1H),7.55(d,J＝7.6Hz,1H),7.48(d,J＝8.0Hz,1H),7.34-7.21(m,7H),6.82(s,1H),6.71(s,1H),6.51(dd,J＝10.8,16.8Hz,1H),6.26(d,J＝16.8Hz,1H),5.68(d,J＝10.8Hz,1H),5.35-5.22(m,1H),5.04-4.98(m,1H),4.68(t,J＝8.0Hz,1H),4.53(d,J＝8.8Hz,1H),4.44(s,1H),4.10(s,2H),4.01-3.89(m,3H),3.75-3.35(m,30H),3.30-3.15(m,2H),2.88-2.78(m,2H),2.75-2.65(m,2H),2.44(s,3H),2.41-2.33(m,2H),2.27-2.15(m,2H),2.08-2.00(m,1H),1.96-1.86(m,3H),1.56-1.44(m,3H),1.40(d,J＝6.8Hz,3H),1.26(d,J＝6.0Hz,3H),0.99(s,9H).

5-(2-(2-(2-((1-((2R)-2-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(示例性化合物428)的示例性合成

步骤1：4-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备

向4-[2-[2-[2-(对甲苯磺酰基氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(800mg，1.64mmol，1eq)和2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-羟基-异吲哚啉-1,3-二酮(449mg，1.64mmol，1eq)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的混合物中，加入碳酸钾(566mg，4.10mmol，2.5eq)和碘化钾(27mg，0.16mmol，0.1eq)。将混合物在50℃下搅拌12小时。将混合物倒入盐酸溶液(30mL，1M)中。然后将其用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取。合并的有机层用水(50mL x 2)和盐水(50mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并减压浓缩以得到残余物。通过硅胶色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝3:1至1:2)残余物，以得到产物。通过制备型HPLC进一步纯化产物。得到为白色固体的化合物4-[2-[2-[2-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(330mg，0.56mmol，34％产率)。LC/MS(ESI)m/z:490.1[M-100]⁺；¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.81(d,J＝8.4Hz,1H),7.44(d,J＝2.0Hz,1H),7.36-7.33(m,1H),5.13-5.11(m,1H),4.58(s,1H),4.32-4.30(m,1H),3.72-3.70(m,3H),3.68-3.65(m,2H),3.62-3.58(s,4H),3.56-3.52(m,1H),3.14-3.02(m,2H),2.78-2.77(m,1H),2.74-2.73(m,2H),2.06-2.12(m,1H),1.84-1.80(m,2H),1.47-1.46(m,2H),1.44(s,9H).

步骤2：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(2-(2-(2-(哌啶-4-基氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)异吲哚啉-1,3-二酮的制备

向4-[2-[2-[2-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(330mg，0.55mmol，1eq)在二氯甲烷(5mL)中的混合物中，加入盐酸/二噁烷(4M，5mL)。将混合物在25℃下搅拌1小时。真空浓缩混合物以得到为黄色油的产物2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-[2-[2-[2-(4-哌啶基氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]异吲哚啉-1,3-二酮(290mg，0.55mmol，98％产率,盐酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:490.3[M+1]⁺.

步骤3：4-(6-氯-2-(((2R)-1-(4-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)哌啶-1-基)丙-2-基)氧基)-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-[2-[2-[2-(4-哌啶基氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]异吲哚啉-1,3-二酮(54mg，0.10mmol，1eq，盐酸盐)在二氯甲烷(3mL)和甲醇(3mL)中的混合物中，加入乙酸钠(25mg，0.30mmol，3eq)。将混合物在25℃下搅拌10分钟。然后在搅拌下在25℃下加入4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-[(1R)-1-甲基-2-氧代-乙氧基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(60mg，0.10mmol，1eq)和乙酸(12mg，0.20mmol，0.01mL，2eq)，持续10分钟。然后在0℃下加入氰基硼氢化钠(19mg，0.30mmol，3eq)。然后将反应混合物在25℃下搅拌12小时。真空浓缩混合物以得到残余物。通过制备型TLC纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)残余物。得到为无色油的化合物4-[6-氯-2-[(1R)-2-[4-[2-[2-[2-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-哌啶基]-1-甲基-乙氧基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(60mg，0.056mmol，55.10％产率)。LC/MS(ESI)m/z:1054.6[M+1]⁺.

步骤4：5-(2-(2-(2-((1-((2R)-2-((6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮的制备

向4-[6-氯-2-[(1R)-2-[4-[2-[2-[2-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-哌啶基]-1-甲基-乙氧基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(60mg，0.056mmol，1eq)在二氯甲烷(5mL)中的混合物中，加入三氟乙酸(3.08g，27.01mmol，2mL，474eq)。将混合物在25℃下搅拌30分钟。然后浓缩混合物以得到为无色油的产物5-[2-[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(60mg，三氟乙酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:954.4[M+1]⁺.

步骤5：5-(2-(2-(2-((1-((2R)-2-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮的制备

向5-[2-[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(60mg，0.056mmol，1eq，三氟乙酸盐)在二氯甲烷(20mL)中的混合物中，加入2,6-二甲基吡啶(0.06mL，10eq)。然后在氮气气氛下在-78℃下向混合物中加入在二氯甲烷(5mL)中的丙-2-烯酰氯(4mg，0.050mmol，0.004mL，0.9eq)。将混合物在氮气氛下于-78℃搅拌30分钟。然后将混合物用水(20mL)淬灭。将其用二氯甲烷((20mL x 3)萃取，用盐水((20mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩以得到残余物。通过制备型HPLC纯化残余物。得到为白色固体的化合物5-[2-[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(5.6mg，0.0052mmol，9.27％产率，98％纯度，甲酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:504.8[M/2+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.10(s,1H),8.31(s,2H),7.99(s,1H),7.80-7.78(d,J＝8.0Hz,2H),7.47-7.40(m,2H),7.36-7.30(m,1H),7.28(s,1H),7.23-7.20(m,1H),7.08-7.04(m,1H),6.88-6.77(m,1H),6.25-6.13(m,1H),5.83-5.67(m,2H),5.43-5.31(m,1H),5.13-5.06(m,1H),4.29-4.24(m,2H),3.94-3.72(m,12H),3.58-3.52(m,7H),3.24-3.13(m,2H),2.94-2.71(m,3H),2.64-2.55(m,2H),2.41-2.34(m,1H),2.21-1.91(m,4H),1.78-1.62(m,2H),1.30-1.27(m,3H),1.24-1.17(m,1H).

5-(2-(2-((1-((2R)-2-((6-氯-4-(4-(2,2-二羟基乙酰基)哌嗪-1-基)-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)氧基)乙氧基)乙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(示例性化合物434)的示例性合成

步骤1：4-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)乙氧基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备

向4-[2-[2-(对甲苯磺酰基氧基)乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(500mg，1.13mmol，1eq)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液中加入2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-羟基-异吲哚啉-1,3-二酮(309mg，1.13mmol，1eq)、碘化钾(19mg，0.11mmol，0.1eq)和碘化钾(390mg，2.82mmol，2.5eq)，将混合物在50℃下搅拌16小时。将混合物倒入盐酸溶液(1M)中以将pH调节至约3至4，并用乙酸乙酯(50mL)萃取反应混合物。将合并的有机层用盐水(30mL x 2)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并减压浓缩以得到残余物。通过制备型TLC纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)残余物。通过半制备型反相HPLC纯化残余物。得到为白色固体的4-[2-[2-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]氧基乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(234mg，0.42mmol，38％产率)。LC/MS(ESI)m/z:568.3[M+23]⁺.

步骤2：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(2-(2-(哌啶-4-基氧基)乙氧基)乙氧基)异吲哚啉-1,3-二酮的制备

向4-[2-[2-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]氧基乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(330mg，0.60mmol，1eq)在二氯甲烷(4mL)中的溶液中，加入盐酸/二噁烷(4M，4mL，26.45eq)，将混合物在25℃下搅拌2小时。减压浓缩混合物以得到残余物。得到为无色油的化合物2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-[2-[2-(4-哌啶基氧基)乙氧基]乙氧基]异吲哚啉-1,3-二酮(260mg，0.54mmol，89％产率，盐酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:446.1[M+1]⁺.

步骤3：4-(6-氯-2-(((2R)-1-(4-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)乙氧基)乙氧基)哌啶-1-基)丙-2-基)氧基)-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-[2-[2-(4-哌啶基氧基)乙氧基]乙氧基]异吲哚啉-1,3-二酮(86mg，0.19mmol，1.4eq，盐酸盐)在甲醇(3mL)中的溶液中，加入乙酸钠(34mg，0.41mmol，3eq)，将混合物在25℃下搅拌0.5小时。然后加入在二氯甲烷(3mL)中的4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-[(1R)-1-甲基-2-氧代-乙氧基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(80mg，0.14mmol，1eq)。在0℃下向反应中加入乙酸(8mg，0.14mmol，1eq)和氰基硼氢化钠(26mg，0.41mmol，3eq)，持续0.5小时，将混合物在25℃下搅拌11小时。减压浓缩反应以得到残余物。通过制备型TLC纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)残余物。得到为无色油的化合物4-[6-氯-2-[(1R)-2-[4-[2-[2-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]氧基乙氧基]乙氧基]-1-哌啶基]-1-甲基-乙氧基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(43mg，0.04mmol，28％产率，90％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:1011.9[M+1]⁺.

步骤4：5-(2-(2-((1-((2R)-2-((6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)氧基)乙氧基)乙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮的制备

向4-[6-氯-2-[(1R)-2-[4-[2-[2-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]氧基乙氧基]乙氧基]-1-哌啶基]-1-甲基-乙氧基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(43mg，0.04mmol，1eq)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中，加入盐酸/二噁烷(4M，3mL，282eq)，将混合物在25℃下搅拌1小时。减压浓缩混合物以得到残余物。得到为无色油的化合物5-[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙氧基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(38mg，0.04mol，98％产率)。

步骤5：5-(2-(2-((1-((2R)-2-((6-氯-4-(4-(2,2-二羟基乙酰基)哌嗪-1-基)-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)氧基)乙氧基)乙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮的制备

向2,2-二羟基乙酸(37mg，0.4mmol，10eq)，5-[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙氧基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(38mg，0.04mmol，1eq，盐酸盐)和o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-n,n,n',n'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(61mg，0.16mmol，4eq)的溶液中，加入在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的二异丙基乙胺(16mg，0.12mmol，0.02mL，3eq)，将混合物在25℃下搅拌16小时。将反应混合物通过水(30mL)淬灭，并用乙酸乙酯(20mL x 2)萃取，将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过半制备型反相HPLC纯化残余物。得到为白色固体的化合物5-[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-4-[4-(2,2-二羟基乙酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙氧基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(7.4mg，0.007mmol，18％产率，96％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:984.3[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.08(s,1H),10.01(s,1H),8.13(s,1H),8.00(s,1H),7.79(d,J＝8.3Hz,1H),7.46-7.38(m,2H),7.34-7.30(m,1H),7.27(s,1H),7.23-7.14(m,2H),7.05(dd,J＝2.4,5.8Hz,1H),6.36(d,J＝7.3Hz,1H),5.42-5.34(m,1H),5.09(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.27(s,2H),3.92-3.80(m,5H),3.78-3.69(m,4H),3.54(d,J＝2.6Hz,3H),3.48(dd,J＝5.1,10.9Hz,4H),2.93-2.81(m,3H),2.63-2.51(m,5H),2.23(s,2H),2.08-1.99(m,1H),1.73(s,2H),1.37-1.24(m,5H).

(2S,4R)-N-(2-(2-((1-((R)-2-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-7-(3-羟基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)氧基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-4-羟基-1-((R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰胺(示例性化合物436)的示例性合成

步骤1：4-(2-(2-(((2S,4R)-4-羟基-1-(3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰氨基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备

向4-[2-(对甲苯磺酰基氧基)乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(361mg，0.90mmol，1.5eq)和(2S,4R)-4-羟基-N-[[2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-1-[3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羧酰胺(300mg，0.60mmol，1eq)在乙腈(6mL)中的溶液中，加入碳酸钾(166.mg，1.20mmol，2eq)。将混合物在80℃下搅拌12小时。加入水(30mL)。用乙酸乙酯(30mL x 2)萃取水相。合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩以得到粗产物。通过半制备型反相HPLC纯化粗产物。得到为白色固体的化合物4-[2-[2-[[[(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]甲基]-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(320mg，0.44mmol，73％产率)。LC/MS(ESI)m/z:626.2[M-100]⁺.

步骤2：4-(2-(2-(((2S,4R)-4-羟基-1-((R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰氨基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备

通过手性SFC分离4-[2-[2-[[[(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]甲基]-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(320mg，0.44mmol，1eq)。减压浓缩混合物以得到产物。得到为无色油的化合物4-[2-[2-[[[(2S,4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]甲基]-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(140mg，0.19mmol，85％产率，97％纯度)。

步骤3：(2S,4R)-4-羟基-1-((R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)-2-(2-(哌啶-4-基氧基)乙氧基)苄基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向4-[2-[2-[[[(2S,4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]甲基]-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(140mg，0.19mmol，1eq)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中，加入盐酸/二噁烷(4M，3mL，62.22eq)，将混合物在25℃下搅拌2小时。减压浓缩混合物以得到残余物。得到为无色油的化合物(2S,4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]-N-[[4-(4-甲基噻唑-5-基)-2-[2-(4-哌啶基氧基)乙氧基]苯基]甲基]吡咯烷-2-羧酰胺(120mg，0.18mmol，94％产率,盐酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:626.2[M+1]⁺.

步骤4：(2S,4R)-N-(2-(2-((1-((R)-2-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-7-(3-羟基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)氧基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-4-羟基-1-((R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向(2R)-2-[[7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙醛(50mg，0.10mmol，1eq)在二氯甲烷(3mL)和甲醇(1mL)中的混合物中，加入乙酸钠(8mg，0.1mmol，1eq)，在25℃下搅拌15分钟，然后加入乙酸(6mg，0.1mmol，1eq)和(2S,4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]-N-[[4-(4-甲基噻唑-5-基)-2-[2-(4-哌啶基氧基)乙氧基]苯基]甲基]吡咯烷-2-羧酰胺(64mg，0.1mmol，1eq，盐酸盐)，在0℃下搅拌15分钟，然后在0℃下加入硼烷；2-甲基吡啶(44mg，0.41mmol，4eq)，然后将反应混合物在25℃下搅拌12小时。减压浓缩混合物以得到残余物。通过半制备型反相HPLC纯化残余物。得到为粉色固体的化合物(2S,4R)-4-羟基-N-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[[7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羧酰胺(12.4mg，0.01mmol，10％产率，95％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:1097.5[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.66(s,1H),8.97(s,1H),8.28(s,1H),8.00(d,J＝7.7Hz,1H),7.66(d,J＝8.8Hz,1H),7.37(d,J＝6.6Hz,1H),7.26(s,1H),7.04-6.95(m,2H),6.87-6.76(m,3H),6.21-6.12(m,2H),5.72(d,J＝12.3Hz,1H),5.20(s,1H),4.35-4.04(m,8H),3.85-3.63(m,8H),3.51(s,14H),2.90-2.73(m,2H),2.27-2.09(m,9H),2.04-1.77(m,5H),1.40(s,2H),1.25(d,J＝6.1Hz,3H),0.96(d,J＝6.6Hz,2H),0.79(d,J＝6.6Hz,2H),0.69(d,J＝6.2Hz,1H),0.57(d,J＝6.7Hz,1H).

(S)-N-((S)-2-((S)-2-(4-(4-(2-(2-(2-((1-((R)-2-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-7-(3-羟基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)萘-1-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)-1-环己基-2-氧代乙基)-2-(甲基氨基)丙酰胺(示例性化合物447)的示例性合成

步骤1：2-(2-(2-(哌啶-4-基氧基)乙氧基)乙氧基)乙-1-醇的制备

向4-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(950mg，2.85mmol，1eq)在二氯甲烷(15mL)中的混合物中，加入氯化氢/甲醇(4M，0.7mL，1eq)。将混合物在25℃下搅拌1小时。真空浓缩混合物以得到为黄色油的产物2-[2-[2-(4-哌啶基氧基)乙氧基]乙氧基]乙醇(760mg，2.82mmol，99％产率，盐酸盐)。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.43-8.89(m,2H),3.60-3.51(m,2H),3.49-3.32(m,7H),3.14(s,3H),3.12-2.99(m,2H),2.95-2.80(m,2H),2.43-2.21(m,1H),2.00-1.82(m,2H),1.74-1.54(m,2H).

步骤2：4-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)哌啶-1-羧酸苄酯的制备

向2-[2-[2-(4-哌啶基氧基)乙氧基]乙氧基]乙醇(760mg，2.82mmol，1eq，盐酸盐)在水(5mL)和四氢呋喃(10mL)中的混合物中，加入碳酸氢钠(710mg，8.45mmol，3eq)。将混合物在25℃下搅拌30分钟。然后在混合物中加入氯甲酸苄酯(720mg，4.23mmol，0.6mL，1.5eq)。将混合物在25℃下搅拌12小时。然后将混合物用水(30mL)稀释。然后将混合物用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取。合并的有机层用水(50mL x 2)和盐水(50mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩以得到为无色油的产物4-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸苄酯(770mg，2.10mmol)。LC/MS(ESI)m/z:390.2[M+23]⁺.

步骤3：4-(2-(2-(2-(甲苯磺酰基氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)哌啶-1-羧酸苄酯的制备

向4-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸苄酯(770mg，2.10mmol，1eq)在二氯甲烷(15mL)中的混合物中，加入对甲苯磺酰氯(479mg，2.51mmol，1.2eq)和三乙胺(424mg，4.19mmol，0.5mL，2eq)。将混合物在25℃下搅拌12小时。然后真空浓缩混合物以得到残余物。通过硅胶色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝10:1至1:1)残余物。得到为无色油的4-[2-[2-[2-(对甲苯磺酰基氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸苄酯(100mg，0.19mmol，10％产率)。LC/MS(ESI)m/z:544.3[M+23]⁺.

步骤4：4-(2-(2-(2-((4-(2-((S)-1-((S)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)丙酰氨基)-2-环己基乙酰基)吡咯烷-2-基)噻唑-4-基)萘-1-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)哌啶-1-羧酸苄酯的制备

向4-[2-[2-[2-(对甲苯磺酰基氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸苄酯(100mg，0.19mmol，1eq)和N-[(1S)-2-[[(1S)-1-环己基-2-[(2S)-2-[4-(4-羟基-1-萘基)噻唑-2-基]吡咯烷-1-基]-2-氧代-乙基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(119mg，0.19mmol，1eq)在乙腈(5mL)中的混合物中，加入碳酸钾(52mg，0.38mmol，2eq)。将混合物在90℃下搅拌12小时。将混合物用水(30mL)稀释。然后用乙酸乙酯(30mL x3)萃取混合物。合并的有机层用水(50mL x 2)和盐水(50mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩以得到残余物。通过制备型TLC纯化(乙酸乙酯)残余物。得到为绿色油的化合物4-[2-[2-[2-[[4-[2-[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]丙酰基]氨基]-2-环己基-乙酰基]吡咯烷-2-基]噻唑-4-基]-1-萘基]氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸苄酯(120mg)。LC/MS(ESI)m/z:970.6[M+1]⁺.

步骤5：((S)-1-(((S)-1-环己基-2-氧代-2-((S)-2-(4-(4-(2-(2-(2-(哌啶-4-基氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)萘-1-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备

在氮气气氛下向4-[2-[2-[2-[[4-[2-[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]丙酰基]氨基]-2-环己基-乙酰基]吡咯烷-2-基]噻唑-4-基]-1-萘基]氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸苄酯(120mg，0.12mmol，1eq)在三氟乙醇(10mL)中的混合物中，加入钯炭活性催化剂(30mg，10％纯度)。将混合物脱气并用氢气再填充3次。然后将其在25℃下搅拌2小时。将混合物过滤并减压浓缩以得到残余物。通过制备型HPLC纯化残余物。得到为白色固体的化合物N-[(1S)-2-[[(1S)-1-环己基-2-氧代-2-[(2S)-2-[4-[4-[2-[2-[2-(4-哌啶基氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-萘基]噻唑-2-基]吡咯烷-1-基]乙基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(35mg，0.04mmol，32％产率，甲酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:836.6[M+1]⁺.

步骤6：((S)-1-(((S)-2-((S)-2-(4-(4-(2-(2-(2-((1-((R)-2-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-7-(3-羟基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)萘-1-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)-1-环己基-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备

向N-[(1S)-2-[[(1S)-1-环己基-2-氧代-2-[(2S)-2-[4-[4-[2-[2-[2-(4-哌啶基氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-萘基]噻唑-2-基]吡咯烷-1-基]乙基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(45mg，0.05mmol，1eq，甲酸盐)在甲醇(2mL)和二氯甲烷(2mL)中的混合物中，加入乙酸钠(12mg，0.15mmol，3eq)。然后在搅拌下将硼烷；2-甲基吡啶络合物(27mg，0.25mmol，5eq)加入到混合物中。然后将混合物在25℃下搅拌20分钟。然后在0℃下加入乙酸(6mg，0.10mmol，2eq)和(2R)-2-[[7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙醛(24mg，0.05mmol，1eq)。然后将反应混合物在25℃下搅拌12小时。然后真空浓缩混合物以得到残余物。通过制备型TLC纯化(二氯甲烷:甲醇＝9:1)残余物。得到为粉色油的N-[(1S)-2-[[(1S)-1-环己基-2-[(2S)-2-[4-[4-[2-[2-[2-[[1-[(2R)-2-[[7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-萘基]噻唑-2-基]吡咯烷-1-基]-2-氧代-乙基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(26mg，0.02mmol，39％产率)。LC/MS(ESI)m/z:1307.5[M+1]⁺.

步骤7：(S)-N-((S)-2-((S)-2-(4-(4-(2-(2-(2-((1-((R)-2-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-7-(3-羟基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)萘-1-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)-1-环己基-2-氧代乙基)-2-(甲基氨基)丙酰胺的制备

向N-[(1S)-2-[[(1S)-1-环己基-2-[(2S)-2-[4-[4-[2-[2-[2-[[1-[(2R)-2-[[7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-萘基]噻唑-2-基]吡咯烷-1-基]-2-氧代-乙基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(26mg，0.02mmol，1eq)在二氯甲烷(2.5mL)中的混合物中，加入三氟乙酸(3.38mmol，0.25mL)。将混合物在25℃下搅拌30分钟。然后将混合物用碳酸氢钠溶液调节至PH＝7-8，然后将混合物过滤。通过制备型HPLC纯化滤液。得到为粉色固体的化合物(2S)-N-[(1S)-1-环己基-2-[(2S)-2-[4-[4-[2-[2-[2-[[1-[(2R)-2-[[7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-萘基]噻唑-2-基]吡咯烷-1-基]-2-氧代-乙基]-2-(甲基氨基)丙酰胺(12.4mg，0.01mmol，48％产率，95％纯度，甲酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:604.4[M/2+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.29-8.20(m,4H),8.07-7.96(m,2H),7.71-7.62(m,2H),7.59-7.57(d,J＝8.0Hz,1H),7.56-7.49(m,2H),7.42-7.35(m,1H),7.30-7.20(m,1H),7.03-7.01(d,J＝8.0Hz,1H),6.88-6.74(m,3H),6.19-6.10(m,1H),5.75-5.68(m,1H),5.48-5.39(m,1H),5.23-5.11(m,1H),4.55-4.47(m,1H),4.34-4.27(m,2H),4.05(s,2H),3.93-3.88(m,2H),3.82-3.77(m,2H),3.73-3.62(m,8H),3.58-3.55(m,3H),3.26-3.17(m,6H),3.14-3.05(m,2H),2.92-2.83(m,2H),2.79-2.68(m,2H),2.31-2.24(m,2H),2.23-2.17(m,4H),2.14-1.99(m,5H),1.88-1.47(m,10H),1.39-1.28(m,2H),1.23-1.21(d,J＝8.0Hz,3H),1.16-0.94(m,9H).

(S)-N-((S)-2-((S)-2-(4-(4-(2-(2-((1-((R)-2-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-7-(3-羟基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)氧基)乙氧基)乙氧基)萘-1-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)-1-环己基-2-氧代乙基)-2-(甲基氨基)丙酰胺(示例性化合物446)的示例性合成

步骤1：2-(2-(哌啶-4-基氧基)乙氧基)乙-1-醇的制备

4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1g，3.46mmol，1eq)在盐酸盐/甲醇(4M，3mL，3.47eq)中的溶液，将混合物在25℃下搅拌1小时。将混合物过滤并减压浓缩以得到为白色固体的产物2-[2-(4-哌啶基氧基)乙氧基]乙醇(600mg，盐酸盐)。

步骤2：4-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)哌啶-1-羧酸苄酯的制备

向2-[2-(4-哌啶基氧基)乙氧基]乙醇(600mg，3.17mmol，1eq)在二氯甲烷(6mL)中的溶液中，加入氯甲酸苄酯(568mg，3.33mmol，0.5mL，1.05eq)和三乙胺(481mg，4.76mmol，0.7mL，1.5eq)，将混合物在25℃下搅拌2小时。将反应混合物用二氯甲烷(20mL x 2)和盐酸溶液(1M)(30mL)萃取。合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，减压浓缩以得到为无色油的产物4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]哌啶-1-羧酸苄酯(625mg)。LC/MS(ESI)m/z:324.2[M+1]⁺.

步骤3：4-(2-(2-(甲苯磺酰基氧基)乙氧基)乙氧基)哌啶-1-羧酸苄酯的制备

向4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]哌啶-1-羧酸苄酯(625mg，1.93mmol，1eq)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入三乙胺(587mg，5.80mmol，0.8mL，3eq)，然后向混合物中加入对甲苯磺酰氯(553mg，2.90mmol，1.5eq)，将混合物在25℃下搅拌16小时。将反应混合物用水(30mL)淬灭，并用二氯甲烷(50mL x 2)萃取，将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过柱色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝30:1至1:1)残余物。得到为无色油的化合物4-[2-[2-(对甲苯磺酰基氧基)乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸苄酯(650mg，1.36mmol，70％产率)。¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.82-7.76(m,2H),7.42(d,J＝8.0Hz,2H),7.38-7.28(m,5H),5.11(s,2H),4.17-4.13(m,2H),3.79-3.69(m,2H),3.68-3.61(m,2H),3.58-3.49(m,5H),3.22(s,2H),2.47-2.40(m,3H),1.87-1.77(m,2H),1.47(tdd,J＝4.4,8.4,12.8Hz,2H).

步骤4：4-(2-(2-((4-(2-((S)-1-((S)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)丙酰氨基)-2-环己基乙酰基)吡咯烷-2-基)噻唑-4-基)萘-1-基)氧基)乙氧基)乙氧基)哌啶-1-羧酸苄酯的制备

向4-[2-[2-(对甲苯磺酰基氧基)乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸苄酯(231mg，0.48mmol，1eq)，N-[(1S)-2-[[(1S)-1-环己基-2-[(2S)-2-[4-(4-羟基-1-萘基)噻唑-2-基]吡咯烷-1-基]-2-氧代-乙基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(300mg，0.48mmol，1eq)在乙腈(5mL)中的溶液中，加入碳酸钾(167mg，1.21mmol，2.5eq)，将混合物在80℃下搅拌6小时。将混合物过滤并减压浓缩以得到残余物。通过制备型TLC纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)残余物。得到为黄色油的化合物4-[2-[2-[[4-[2-[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]丙酰基]氨基]-2-环己基-乙酰基]吡咯烷-2-基]噻唑-4-基]-1-萘基]氧基]乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸苄酯(400mg，0.36mmol，74％产率，83％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:926.5[M+1]⁺.

步骤5：((S)-1-(((S)-1-环己基-2-氧代-2-((S)-2-(4-(4-(2-(2-(哌啶-4-基氧基)乙氧基)乙氧基)萘-1-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备

在氮气下向4-[2-[2-[[4-[2-[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]丙酰基]氨基]-2-环己基-乙酰基]吡咯烷-2-基]噻唑-4-基]-1-萘基]氧基]乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸苄酯(350mg，0.38mmol，1eq)在三氟乙醇(20mL)中的溶液中，加入钯炭活性催化剂(100mg，0.38mmol，10％纯度，1eq)。将悬浮液在真空下脱气并用氢气吹扫几次。将混合物在氢气(15psi)下于25℃搅拌2小时。将混合物过滤并减压浓缩以得到残余物。通过半制备型反相HPLC纯化残余物。得到为无色油的化合物N-[(1S)-2-[[(1S)-1-环己基-2-氧代-2-[(2S)-2-[4-[4-[2-[2-(4-哌啶基氧基)乙氧基]乙氧基]-1-萘基]噻唑-2-基]吡咯烷-1-基]乙基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(111mg，0.14mmol，37％产率)。

步骤6：((S)-1-(((S)-2-((S)-2-(4-(4-(2-(2-((1-((R)-2-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-7-(3-羟基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)氧基)乙氧基)乙氧基)萘-1-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)-1-环己基-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备

向N-[(1S)-2-[[(1S)-1-环己基-2-氧代-2-[(2S)-2-[4-[4-[2-[2-(4-哌啶基氧基)乙氧基]乙氧基]-1-萘基]噻唑-2-基]吡咯烷-1-基]乙基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(81mg，0.1mmol，1eq)在甲醇(3mL)中的溶液中，加入乙酸钠(17mg，0.21mmol，2eq)，然后在0℃下加入在二氯甲烷(1mL)中的硼烷；2-甲基吡啶(44mg，0.41mmol，4eq)，持续0.5小时。加入(2R)-2-[[7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙醛(50mg，0.1mmol，1eq)和乙酸(0.62mg，0.01mmol，0.1eq)，将混合物在25℃下搅拌11.5小时。减压浓缩混合物以得到残余物。通过制备型TLC纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)残余物。得到为无色油的化合物N-[(1S)-2-[[(1S)-1-环己基-2-[(2S)-2-[4-[4-[2-[2-[[1-[(2R)-2-[[7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙氧基]-1-萘基]噻唑-2-基]吡咯烷-1-基]-2-氧代-乙基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(60mg，0.05mmol，46％产率)。

步骤7：(S)-N-((S)-2-((S)-2-(4-(4-(2-(2-((1-((R)-2-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-7-(3-羟基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)氧基)乙氧基)乙氧基)萘-1-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)-1-环己基-2-氧代乙基)-2-(甲基氨基)丙酰胺的制备

向N-[(1S)-2-[[(1S)-1-环己基-2-[(2S)-2-[4-[4-[2-[2-[[1-[(2R)-2-[[7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙氧基]-1-萘基]噻唑-2-基]吡咯烷-1-基]-2-氧代-乙基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(60mg，0.05mol，1eq)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中，加入三氟乙酸(308mg，2.70mmol，0.2mL，56.89eq)，将混合物在25℃下搅拌10分钟。将反应倒入碳酸氢钠水溶液中，并将pH调节至约7至8。将反应混合物用水(30mL)淬灭，并用乙酸乙酯(20mL×2)萃取，将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过半制备型反相HPLC纯化残余物。得到为粉色固体的化合物(2S)-N-[(1S)-1-环己基-2-[(2S)-2-[4-[4-[2-[2-[[1-[(2R)-2-[[7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙氧基]-1-萘基]噻唑-2-基]吡咯烷-1-基]-2-氧代-乙基]-2-(甲基氨基)丙酰胺(6.6mg，0.01mmol，11％产率，95％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:1185.6[M+23]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.33(s,1H),8.28-8.21(m,2H),8.04-7.90(m,2H),7.71-7.63(m,2H),7.60-7.48(m,3H),7.38(t,J＝7.4Hz,1H),7.26(t,J＝7.2Hz,1H),7.02(d,J＝8.1Hz,1H),6.86-6.75(m,3H),6.14(dd,J＝2.4,16.7Hz,1H),5.71(d,J＝12.7Hz,1H),5.42(d,J＝5.6Hz,1H),5.24-5.14(m,1H),4.57-4.48(m,1H),4.31(s,2H),4.05(s,2H),3.91(s,2H),3.80(t,J＝7.1Hz,2H),3.71-3.63(m,6H),3.56(d,J＝5.4Hz,3H),2.99(q,J＝7.1Hz,3H),2.88(s,2H),2.75-2.65(m,3H),2.35-2.14(m,10H),2.12-2.02(m,4H),1.81-1.53(m,10H),1.36(s,2H),1.23(d,J＝6.1Hz,3H),1.13-1.02(m,7H).

(2S,4R)-1-((S)-2-(2-(2-(2-(((3R,5S)-5-(((4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-1-甲基吡咯烷-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(示例性化合物500)的示例性合成

步骤1：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((2S,4R)-4-(2-(2-(2-乙氧基-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(300mg，0.43mmol，1eq)在二氯甲烷(10mL)中的混合物中加入乙酸铑(ii)二聚体(9mg，0.042mmol，0.1eq)，然后在0℃下加入2-重氮乙酸乙酯(146mg，1.28mmol，3eq)，然后将反应混合物在25℃下搅拌12小时。真空浓缩反应混合物。通过制备型TLC纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)残余物，以得到为黄色油的化合物(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-(2-乙氧基-2-氧代-乙氧基)乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(111mg，0.14mmol，33％产率)。LC/MS(ESI)m/z:788.3[M+1]⁺.

步骤2：2-(2-(2-(((3R,5S)-5-(((4-((S)-4-(叔丁氧基羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-1-甲基吡咯烷-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙酸的制备

向(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-(2-乙氧基-2-氧代-乙氧基)乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(110mg，0.14mmol，1eq)在水(1mL)和四氢呋喃(1mL)和甲醇(1mL)中的混合物中，加入氢氧化锂一水合物(126mg，3mmol，21.49eq)，然后将反应混合物在25℃下搅拌2小时。加入四氢呋喃(5mL)和废液(5mL)，然后将反应混合物的pH调节至2-3，用二氯甲烷和甲醇(10:1)(20mL x 4)萃取水相，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，以得到为黄色油的化合物2-[2-[2-[(3R,5S)-5-[[4-[(3S)-4-叔丁氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙酸(131mg)。

步骤3：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((2S,4R)-4-(2-(2-(2-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(134mg，0.28mmol，2eq,盐酸盐)和2-[2-[2-[(3R,5S)-5-[[4-[(3S)-4-叔丁氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙酸(106mg，0.14mmol，1eq)在N-甲基-2-吡咯烷酮(4mL)中的混合物中，加入1-羟基苯并三唑(28mg，0.21mmol，1.5eq)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(40mg，0.21mmol，1.5eq)、N,N-二异丙基乙胺(108mg，0.84mmol，0.1mL，6eq)，然后将反应混合物在20℃下搅拌12小时。将残余物倒入冰水(20mL)中。用乙酸乙酯(20mL*3)萃取水相。合并的有机相用盐水(20mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过制备型TLC纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)残余物，以得到为黄色油的化合物(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(90mg)。LC/MS(ESI)m/z:594.0[M/2+1]⁺.

步骤4：(2S,4R)-1-((S)-2-(2-(2-(2-(((3R,5S)-5-(((4-((S)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-1-甲基吡咯烷-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(35mg，0.030mmol，1eq)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中，加入三氟乙酸(462mg，4.05mmol，0.3mL，137.35eq)。将混合物在15℃下搅拌20分钟。真空浓缩反应混合物，以得到为黄色油的化合物(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[(3R,5S)-5-[[4-[(3S)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(35mg，0.030mmol，99％产率，三氟乙酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:1086.7[M+1]⁺.

步骤5：(2S,4R)-1-((S)-2-(2-(2-(2-(((3R,5S)-5-(((4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-1-甲基吡咯烷-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[(3R,5S)-5-[[4-[(3S)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(30mg，0.025mmol，1eq，三氟乙酸盐)在二氯甲烷(5mL)中的混合物中，加入2,6-二甲基吡啶(27mg，0.25mmol，10eq)，然后在-65℃下加入在二氯甲烷(1.8mL)中的丙-2-烯酰氯(2mg，0.022mmol，0.9eq)，然后将反应混合物在-65℃下搅拌10分钟。加入水(10mL)并搅拌0.5分钟。用二氯甲烷(20mL x 2)萃取水相，并真空浓缩。通过半制备型反相HPLC纯化残余物，然后浓缩收集的级分以除去大部分乙腈。将溶液冻干，以得到为白色固体的化合物(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[(3R,5S)-5-[[4-[(3S)-3-(氰基甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(9.1mg，0.007mmol，30％产率，97％纯度，甲酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:570.8[M/2+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.98(s,1H),8.44(br d,J＝7.6Hz,1H),8.30(s,1H),8.22-8.14(m,1H),7.97-7.88(m,1H),7.64(d,J＝8.2Hz,1H),7.59-7.49(m,2H),7.48-7.39(m,3H),7.38-7.33(m,2H),7.22(d,J＝7.2Hz,1H),6.88(br s,1H),6.20(br d,J＝17.4Hz,1H),5.78(brd,J＝11.6Hz,1H),5.06-4.63(m,2H),4.55(br d,J＝9.5Hz,1H),4.45(br t,J＝8.1Hz,1H),4.34-4.22(m,2H),4.17-4.09(m,3H),4.08-3.98(m,3H),3.98-3.91(m,2H),3.61(brd,J＝3.1Hz,2H),3.58(br d,J＝3.9Hz,4H),3.56-3.53(m,1H),3.54(br s,2H),3.53-3.48(m,4H),3.29(br dd,J＝6.2,9.5Hz,2H),3.24-3.17(m,2H),3.07-2.90(m,4H),2.78-2.63(m,2H),2.45(s,3H),2.34(s,3H),2.19(br dd,J＝6.0,9.4Hz,1H),2.10-2.00(m,1H),1.92-1.72(m,3H),1.37(br d,J＝7.0Hz,3H),0.94(s,9H).

2-((2S)-1-丙烯酰基-4-(2-(((2S,4R)-4-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(示例性化合物504)的示例性合成

步骤1：(2S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((2S,4R)-4-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-1-甲基-4-[2-[2-[2-(对甲苯磺酰基氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(100mg，0.11mmol，1eq)和2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-羟基-异吲哚啉-1,3-二酮(152mg，0.56mmol，5eq)在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的混合物中，加入碳酸钾(46mg，0.33mmol，3eq)，然后将反应混合物在50℃下搅拌12小时。将残余物倒入0.1M盐酸(30mL)中。用乙酸乙酯(50mL x 4)萃取水相，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过制备型TLC纯化(石油醚:乙酸乙酯＝0:1)残余物。得到为黄色油的化合物(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(70mg，0.07mmol，63％产率)。LC/MS(ESI)m/z:1002.6[M+1]⁺.

步骤2：2-((2S)-4-(2-(((2S,4R)-4-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的制备

向(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(35mg，0.035mmol，1eq)在二氯甲烷(5mL)中的混合物中，加入三氟乙酸(1.54g，13.51mmol，1mL，386.70eq)，然后将反应混合物在20℃下搅拌1小时。真空浓缩反应混合物。得到为黄色油的化合物2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(35mg，0.034mmol，99％产率，三氟乙酸盐)。

步骤3：2-((2S)-1-丙烯酰基-4-(2-(((2S,4R)-4-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的制备

向2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(35mg，0.034mmol，1eq，三氟乙酸盐)在二氯甲烷(4mL)中的混合物中，加入2,6-二甲基吡啶(37mg，0.34mmol，10eq)，然后在-65℃下加入在二氯甲烷(2mL)中的丙-2-烯酰氯(3mg，0.03mmol，0.85eq)，持续10分钟。加入水(10mL)并搅拌0.5分钟。用二氯甲烷(20mL x 2)萃取水相，然后真空浓缩。通过半制备型反相HPLC纯化残余物。得到为灰白色固体的化合物2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯酰基-哌嗪-2-基]乙腈(6.2mg，0.006mmol，18％产率，95％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:956.5[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.10(br s,1H),8.37-8.06(m,2H),7.96-7.77(m,2H),7.63(br s,1H),7.58-7.42(m,4H),7.36(br s,1H),7.22(br s,1H),6.86(br s,1H),6.19(br d,J＝17.0Hz,1H),5.78(br d,J＝8.8Hz,1H),5.11(br d,J＝7.9Hz,1H),5.03-4.71(m,1H),4.41(br s,1H),4.34-4.23(m,3H),4.13(br s,4H),4.02(brd,J＝12.3Hz,4H),3.78(br s,4H),3.59(br s,2H),3.54(br s,2H),3.49(br s,4H),3.30-3.16(m,1H),3.06-2.86(m,6H),2.67(br s,1H),2.32(br s,3H),2.16(br s,1H),2.04(brs,1H),1.85(br s,3H).

(2S,4R)-N-(2-(2-(2-(((3R,5S)-5-(((4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-1-甲基吡咯烷-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-4-羟基-1-((R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰胺(示例性化合物506)的示例性合成

步骤1：(2S,4R)-N-(2-(2-(2-(((3R,5S)-5-(((4-((S)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-1-甲基吡咯烷-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-4-羟基-1-((R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-[[[(2S,4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]甲基]-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(80mg，0.067mmol，1eq)在二氯甲烷(8mL)中的溶液中，加入三氟乙酸(3.08g，27.0mmol，2.0mL，400eq)。将混合物在20℃下搅拌2小时。真空蒸发反应混合物，以得到为黄色油的产物(2S,4R)-N-[[2-[2-[2-[(3R,5S)-5-[[4-[(3S)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羧酰胺(73mg)。

步骤2：(2S,4R)-N-(2-(2-(2-(((3R,5S)-5-(((4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-1-甲基吡咯烷-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-4-羟基-1-((R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

在氮气下向(2S,4R)-N-[[2-[2-[2-[(3R,5S)-5-[[4-[(3S)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羧酰胺(73mg，0.067mmol，1eq)和2,6-二甲基吡啶(230mg，2.15mmol，32eq)在二氯甲烷(8mL)和N,N-二甲基甲酰胺(1mL)的混合溶剂中的溶液中，加入在二氯甲烷(0.2mL)中的丙-2-烯酰氯(6.1mg，0.067mmol，1eq)。将混合物在-65℃下搅拌10分钟。将反应混合物用水(10mL)淬灭，然后温热至25℃，然后用二氯甲烷(20mLx 3)萃取。将合并的有机层合并，并在真空下蒸发以得到残余物。通过制备型HPLC纯化残余物。得到为浅黄色固体的产物(2S,4R)-N-[[2-[2-[2-[(3R,5S)-5-[[4-[(3S)-3-(氰基甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羧酰胺(44.1mg，0.034mmol，50％产率，96％纯度，三氟乙酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:1136.3[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.98(s,1H),8.33-8.30(m,1H),8.19-8.17(m,1H),7.95-7.92(m,1H),7.65(d,J＝8.0Hz,1H),7.55-7.53(m,2H),7.47(t,J＝7.6Hz,1H),7.32-7.21(m,2H),7.08-6.97(m,2H),6.87(s,1H),6.22-6.18(m,2H),5.81-5.78(m,1H),5.00-4.76(m,1H),4.62-4.59(m,1H),4.48-4.41(m,3H),4.33-4.08(m,12H),3.98-3.88(m,1H),3.85(d,J＝8.4Hz,1H),3.83-3.71(m,3H),3.65-3.59(m,6H),3.55-3.44(m,1H),3.41-3.33(m,1H),3.31-3.14(m,4H),3.08-3.29(m,7H),2.46-2.44(m,3H),2.37-2.23(m,2H),2.21-2.13(m,3H),2.08-1.86(m,2H),1.00-0.55(m,6H).

(2S,4R)-N-(2-(2-(2-(((3R,5S)-5-(((4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-1-甲基吡咯烷-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-4-羟基-1-((S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰胺(示例性化合物507)的示例性合成

步骤1：(2S,4R)-N-(2-(2-(2-(((3R,5S)-5-(((4-((S)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-1-甲基吡咯烷-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-4-羟基-1-((S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-[[[(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]甲基]-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(60mg，0.051mmol，1eq)在二氯甲烷(6mL)中的溶液中，加入三氟乙酸(2.31g，20.26mmol，1.5mL，400eq)。将混合物在20℃下搅拌2小时。真空蒸发混合物，以得到为浅黄色油的产物(2S,4R)-N-[[2-[2-[2-[(3R,5S)-5-[[4-[(3S)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羧酰胺(50mg)。

步骤2：(2S,4R)-N-(2-(2-(2-(((3R,5S)-5-(((4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-1-甲基吡咯烷-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-4-羟基-1-((S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

在氮气下向(2S,4R)-N-[[2-[2-[2-[(3R,5S)-5-[[4-[(3S)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羧酰胺(50mg，0.046mmol，1eq)和2,6-二甲基吡啶(184mg，1.72mmol，0.2mL，37eq)在二氯甲烷(4mL)和N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)的混合溶剂中的溶液中，加入在二氯甲烷(0.2mL)中的丙-2-烯酰氯(3.7mg，0.042mmol，0.9eq)。将混合物在-65℃下搅拌10分钟。将混合物用水(10mL)淬灭，并用二氯甲烷(20mL x 3)萃取。合并有机层，并在真空下蒸发，以得到残余物(50mg)。通过制备型HPLC纯化残余物。得到为灰白色固体的产物(2S,4R)-N-[[2-[2-[2-[(3R,5S)-5-[[4-[(3S)-3-(氰基甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羧酰胺(28.5mg，0.024mmol，52％产率，96％纯度，三氟乙酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:1136.3[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.99(s,1H),8.65-8.37(m,1H),8.20-8.17(m,1H),7.95-7.93(m,1H),7.67(d,J＝8.0Hz,1H),7.56-7.54(m,2H),7.47(t,J＝7.6Hz,1H),7.36(d,J＝7.6Hz,1H),7.24-7.22(m,1H),7.06-7.00(m,2H),6.88(s,1H),6.23-6.18(m,2H),5.81-5.78(m,1H),4.99-4.78(m,1H),4.63-4.59(m,1H),4.48-4.17(m,12H),4.10-4.07(m,3H),3.96-3.92(m,1H),3.82-3.73(m,5H),3.67-3.55(m,5H),3.46-3.37(m,2H),3.30-3.17(m,4H),3.00-2.97(m,7H),2.48-2.44(m,3H),2.39-2.22(m,2H),2.21-2.13(m,3H),2.09-1.88(m,2H),0.97-0.93(m,3H),0.79-0.76(m,3H).

2-((2S)-1-丙烯酰基-4-(2-(((2S,4R)-4-(2-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(示例性化合物518)的示例性合成

步骤1：(2S,4R)-2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-(2-(2-(2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的制备

在20℃下向(2S,4R)-2-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-4-羟基-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(6g，18.10mmol，1eq)在干燥四氢呋喃(80mL)(由钠干燥并再蒸馏)中的溶液中，加入氢化钠(1.45g，36.20mmol，60％纯度，2eq)。将反应混合物在20℃下搅拌30分钟。然后加入2-[2-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙基4-甲基苯磺酸酯(8.3g，19.19mmol，1.06eq)在四氢呋喃(40mL)中的溶液并将反应混合物在50℃下搅拌另外14小时。加入乙酸乙酯(40mL)，并将混合物用饱和氯化铵水溶液(40mL)洗涤。有机层经硫酸钠干燥，然后真空浓缩以得到残余物。通过快速色谱法纯化(硅胶，在石油醚中的0-100％乙酸乙酯)残余物，以得到为浅黄色油的(2S,4R)-2-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-4-[2-[2-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(3.7g，6.25mmol，34％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.67-4.62(m,1H),4.26-4.08(m,1H),3.98(br s,1H),3.90-3.84(m,2H),3.71-3.65(m,11H),3.65-3.61(m,3H),3.61-3.48(m,5H),3.45-3.37(m,1H),2.19(td,J＝5.4,12.9Hz,1H),2.09-1.94(m,1H),1.89-1.69(m,2H),1.62(br d,J＝4.0Hz,1H),1.66-1.60(m,1H),1.58-1.49(m,3H),1.46(s,9H),1.30-1.24(m,1H),0.88(s,9H),0.07--0.03(m,6H).

步骤2：(2S,4R)-2-(羟基甲基)-4-(2-(2-(2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的制备

在20℃下向(2S,4R)-2-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-4-[2-[2-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(3.7g，6.25mmol，1eq)在四氢呋喃(40mL)中的溶液中，加入四丁基氟化铵(1M，6.25mL，1eq)。将反应混合物在20℃下搅拌6小时。真空浓缩反应混合物以得到残余物。通过硅胶柱色谱法纯化(在石油醚中的30％乙酸乙酯至100％乙酸乙酯)残余物，以得到为无色油的(2S,4R)-2-(羟基甲基)-4-[2-[2-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(2.9g，6.07mmol，97％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.91(br d,J＝8.4Hz,1H),4.67-4.61(m,1H),4.13-3.97(m,2H),3.92-3.84(m,2H),3.71-3.62(m,13H),3.61-3.54(m,4H),3.54-3.48(m,1H),3.41(br dd,J＝4.5,11.9Hz,1H),2.20-2.11(m,1H),1.89-1.79(m,1H),1.77-1.69(m,1H),1.56(br s,1H),1.64-1.51(m,4H),1.47(s,9H).

步骤3：((2S,4R)-1-甲基-4-(2-(2-(2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)吡咯烷-2-基)甲醇的制备

在20℃下向(2S,4R)-2-(羟基甲基)-4-[2-[2-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(9.8g，20.52mmol，1eq)在四氢呋喃(70mL)中的溶液中，加入氢化铝锂(2.34g，61.56mmol，3eq)。将反应混合物在60℃下搅拌14小时。将反应混合物冷却至10℃，并加入四氢呋喃(300mL)。在搅拌下缓慢加入冰水(2mL)以猝灭反应。将硅藻土(30g)加入到悬浮液中，并在20℃下搅拌10分钟。将混合物过滤并将滤饼用四氢呋喃(50mL x 3)洗涤。将滤液真空浓缩至为无色油的[(2S,4R)-1-甲基-4-[2-[2-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]吡咯烷-2-基]甲醇(6.5g，16.60mmol，80％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.68-4.60(m,1H),4.06-3.96(m,1H),3.92-3.83(m,2H),3.71-3.61(m,14H),3.61-3.54(m,2H),3.54-3.47(m,1H),3.44-3.36(m,2H),2.69-2.59(m,1H),2.39(dd,J＝6.2,9.7Hz,1H),2.34(s,3H),2.09(td,J＝8.0,13.4Hz,1H),1.94-1.80(m,2H),1.77-1.68(m,1H),1.66-1.57(m,3H),1.51(br d,J＝3.3Hz,1H).

步骤4：4-((S)-4-((苄氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((2S,4R)-1-甲基-4-(2-(2-(2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,8-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-羧酸叔丁酯的制备

向[(2S,4R)-1-甲基-4-[2-[2-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]吡咯烷-2-基]甲醇(1.37g，3.50mmol，1.32eq)，4-[(3S)-4-苄氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-氯-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-羧酸叔丁酯(1.4g，2.66mmol，1eq)在二噁烷(35mL)中的溶液中，加入碳酸铯(2.60g，7.97mmol，3eq)和甲磺酸(2-二环己基膦基-2,6-二异丙氧基-1,1-联苯)(2-氨基-1,1-联苯-2-基)钯(ii)(222mg，0.26mmol，0.1eq)。将反应混合物脱气并充入氮气3次，然后在90℃下搅拌2小时。加入乙酸乙酯(50mL)和饱和氯化铵水溶液(30mL)，并分离混合物。用乙酸乙酯(40mL)萃取水层。合并的有机层经硫酸钠干燥，然后真空浓缩以得到残余物。通过硅胶柱色谱法纯化(在石油醚中的50％乙酸乙酯至100％乙酸乙酯，然后四氢呋喃中的5％甲醇)残余物，以得到为浅褐色胶的4-[(3S)-4-苄氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S,4R)-1-甲基-4-[2-[2-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]吡咯烷-2-基]甲氧基]-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-羧酸叔丁酯(1.6g，1.81mmol，68％产率)。

步骤5：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((2S,4R)-4-(2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯的制备

向4-[(3S)-4-苄氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S,4R)-1-甲基-4-[2-[2-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]吡咯烷-2-基]甲氧基]-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-羧酸叔丁酯(1.2g，1.36mmol，1eq)在二氯甲烷(15mL)中的溶液中，加入三氟乙酸(4.62g，40.52mmol，3.00mL，29.78eq)。将反应混合物在20℃下搅拌2小时。将反应溶液倒入饱和碳酸氢钠溶液(30mL)中，并用三乙胺将混合物的pH调节至7，然后真空浓缩以得到残余物。将这一产物溶于四氢呋喃(8mL)中，然后与1N氢氧化钠(5mL)一起搅拌10分钟。然后加入水(30mL)并用二氯甲烷(25mL x 2)萃取混合物。有机层经硫酸钠干燥，然后真空浓缩以得到粗产物。通过制备型HPLC纯化粗产物，以得到为无色胶的(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸苄酯(660mg，0.95mmol，69％产率)。LC/MS(ESI)m/z:698.4[M+1]⁺.

步骤6：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((2S,4R)-4-(2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯的制备

向(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸苄酯(1.6g，2.29mmol，1eq)、1-溴萘(950mg，4.59mmol，0.64mL，2eq)、甲磺酸(2-二环己基膦基-2,6-二异丙氧基-1,1-联苯)(2-氨基-1,1-联苯-2-基)钯(ii)(192mg，0.23mmol，0.1eq)和碳酸铯(2.24g，6.88mmol，3eq)的混合物中，加入二噁烷(30mL)。将反应混合物脱气并充入氮气三次，然后在90℃下搅拌14小时。真空浓缩反应混合物以得到残余物。加入饱和氯化铵水溶液(40mL)和水(20mL)，并用乙酸乙酯(40mL x 2)萃取混合物。有机层经硫酸钠干燥，然后真空浓缩以得到残余物。通过硅胶柱色谱法纯化(在石油醚中的30-100％乙酸乙酯，然后在四氢呋喃中的5％甲醇)产物，以得到为浅褐色胶的(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸苄酯(1.05g，1.03mmol，45％产率，81％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:824.3[M+1]⁺.

步骤7：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((2S,4R)-4-(2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸苄酯(1.17g，1.42mmol，1eq)、氢氧化铵(1.82g，17.14mmol，2mL，33％纯度，12.07eq)在甲醇(30mL)中的溶液中，加入钯炭(150mg，5％纯度)。将反应混合物脱气并充入氢气三次，然后在20℃下(15psi)搅拌4小时。然后将反应混合物在20℃下(15psi)搅拌另外2小时。将反应混合物过滤并将滤液真空浓缩，以得到为无色胶的2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(980mg)。向2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(980mg，1.42mmol，1eq)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中，加入三乙胺(431mg，4.26mmol，3eq)和二碳酸二叔丁酯(1.55g，7.10mmol，1.63mL，5eq)。将反应混合物在15℃下搅拌14小时。过滤反应混合物，并真空浓缩滤液以得到残余物。用硅胶(在二氯甲烷中的0-5％甲醇)纯化残余物，以得到为无色胶的(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1g)。LC/MS(ESI)m/z:690.3[M+1]⁺.

步骤8：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((2S,4R)-1-甲基-4-(2-(2-(2-(2-(甲苯磺酰基氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(500mg，0.63mmol，1eq)在二氯甲烷(8mL)中的溶液中，加入4-甲基苯-1-磺酰氯(241mg，1.27mmol，2eq)、三乙胺(192mg，1.90mmol，3eq)和N,N-二甲基吡啶-4-胺(15mg，0.13mmol，0.2eq)。将反应混合物在25℃下搅拌14小时。过滤反应混合物，并真空浓缩滤液以得到残余物。通过制备型TLC纯化(在二氯甲烷中的10％甲醇)残余物，以得到为无色胶的(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-1-甲基-4-[2-[2-[2-[2-(对甲苯磺酰基氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(400mg，0.42mmol，66％产率)。LC/MS(ESI)m/z:944.3[M+1]⁺.

步骤9：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((2S,4R)-4-(2-(2-(2-(2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

在80℃搅拌(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-1-甲基-4-[2-[2-[2-[2-(对甲苯磺酰基氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(200mg，0.21mmol，1eq)和(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)钾(78mg，0.42mmol，2eq)在N.N-二甲基甲酰胺(4mL)中的混合物2小时。加入乙酸乙酯(40mL)，并用水(30mL)洗涤混合物。有机层经硫酸钠干燥，然后真空浓缩以得到残余物。通过制备型TLC纯化(在二氯甲烷中的10％甲醇)残余物，以得到为无色胶的(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-[2-(1,3-二氧代-3a,7a-二氢异吲哚-2-基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(140mg，0.15mmol，72％产率)。LC/MS(ESI)m/z:919.4[M+1]⁺.

步骤10：(S)-4-(2-(((2S,4R)-4-(2-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-[2-(1,3-二氧代-3a,7a-二氢异吲哚-2-基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(140mg，0.15mmol，1eq)在乙醇(2mL)中的混合物中，加入水合肼(155mg，3.04mmol，0.2mL，98％纯度，20eq)。将反应混合物在70℃下搅拌5小时。过滤反应混合物，并用乙醇(30mL)洗涤固体。真空浓缩滤液，以得到为无色胶的(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(140mg)。

步骤11：(2S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((2S,4R)-4-(2-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

在90℃下加热(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(70mg，0.088mmol，1eq)、2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(49mg，0.18mmol，2eq)和N,N-二异丙基乙胺(46mg，0.35mmol，4eq)在二甲基亚砜(2mL)中的混合物3小时。将反应混合物倒入水(25mL)中，然后用乙酸乙酯(20mL)萃取。有机层用盐水(20mL)洗涤，经硫酸钠干燥，然后真空浓缩以得到残余物。通过制备型TLC纯化(在二氯甲烷中的10％甲醇)残余物，以得到为黄色固体的(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(25mg，0.021mmol，24％产率，88％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:1045.6[M+1]⁺.

步骤12：2-((2S)-4-(2-(((2S,4R)-4-(2-(2-(2-(2-((2-(2,4-二氧代环己基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的制备

向(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(30mg，0.028mmol，1eq)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中，加入三氟乙酸(1.54g，13.51mmol，1mL，470.55eq)。将混合物在20℃下搅拌1小时。真空浓缩反应混合物以得到为黄色油的化合物2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(30mg，0.028mmol，99％产率，三氟乙酸盐)。

步骤13：2-((2S)-1-丙烯酰基-4-(2-(((2S,4R)-4-(2-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的制备

向2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(30mg，0.028mmol，1eq，三氟乙酸盐)在二氯甲烷(5mL)中的混合物中，加入2,6-二甲基吡啶(30mg，0.28mmol，10eq)，然后在-65℃下加入在二氯甲烷(2mL)中的丙-2-烯酰氯(2mg，0.025mmol，0.9eq)，然后将反应混合物在-65℃下搅拌10分钟。加入水(10mL)并搅拌0.5分钟。用二氯甲烷(20mL x 2)萃取水相，并真空浓缩。通过半制备型反相HPLC纯化残余物。得到为黄色固体的化合物2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯酰基-哌嗪-2-基]乙腈(15.8mg，0.015mmol，54％产率，97％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:999.5[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.09(s,1H),8.22-8.16(m,1H),7.97-7.90(m,1H),7.65(d,J＝8.3Hz,1H),7.61-7.51(m,3H),7.47(t,J＝7.8Hz,1H),7.23(d,J＝7.3Hz,1H),7.14(d,J＝8.7Hz,1H),7.04(d,J＝7.0Hz,1H),6.88(br s,1H),6.60(br t,J＝5.7Hz,1H),6.20(dd,J＝2.0,16.6Hz,1H),5.85-5.75(m,1H),5.05(dd,J＝5.4,12.9Hz,1H),5.02-4.73(m,1H),4.26(brdd,J＝4.6,10.9Hz,1H),4.14(s,2H),4.12-4.07(m,1H),4.06-3.94(m,3H),3.62(br t,J＝5.4Hz,2H),3.57-3.53(m,4H),3.52-3.49(m,4H),3.49-3.47(m,2H),3.46(br s,2H),3.43(br d,J＝6.1Hz,2H),3.27(br dd,J＝6.2,9.5Hz,3H),3.21-3.17(m,2H),3.10-2.83(m,4H),2.75-2.66(m,2H),2.60(br d,J＝2.7Hz,4H),2.35-2.31(m,3H),2.17(br dd,J＝6.0,9.5Hz,1H),2.07-1.98(m,1H),1.91-1.78(m,2H).

2-((2S)-1-丙烯酰基-4-(2-(((2S,4R)-4-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(示例性化合物521)的示例性合成

步骤1：4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-2-甲基苯甲酸甲酯的制备

向4-羟基-2-甲基-苯甲酸甲酯(5.00g，30.09mmol，1.00eq)在二甲基甲酰胺(100mL)中的溶液中，加入咪唑(6.15g，90.27mmol，3.00eq)。将混合物在15℃下搅拌0.5小时，然后加入氯三甲基甲硅烷(6.80g，45.14mmol，5.5mL，1.50eq)。将所得混合物在15℃下搅拌另外14.5小时。将混合物倒入饱和盐水(300mL)中，然后用乙酸乙酯(300mL*2)萃取。合并的有机层用1M盐酸(300mL*2)、盐水(300mL*3)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩以得到为无色油的4-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-2-甲基-苯甲酸甲酯(8.00g，28.53mmol，95％产率)。LC/MS(ESI)m/z:281.2[M+1]⁺.

步骤2：2-(溴甲基)-4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)苯甲酸甲酯的制备

向4-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-2-甲基-苯甲酸甲酯(3.00g，10.70mmol，1.00eq)在四氯化碳(40mL)中的溶液中加入N-溴代琥珀酰亚胺(2.29g，12.84mmol，1.20eq)和2,2-偶氮二异丁腈(88mg，0.54mmol，0.05eq)。将混合物在15℃下搅拌0.5小时，然后加热至80℃并在80℃下搅拌另外2.5小时。将混合物倒入水(300mL)中，分离有机层。用二氯甲烷(200mL*2)萃取水层。合并的有机层用饱和盐水(300mL*3)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，以得到为浅黄色油的2-(溴甲基)-4-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-苯甲酸甲酯(4.00g，8.39mmol，78％产率，75％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:359.0/361.0[M+1]⁺.

步骤3：5-氨基-4-(5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)-5-氧代戊酸叔丁酯的制备

在氮气气氛下，在0℃下向2-(溴甲基)-4-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-苯甲酸甲酯(9.12g，25.38mmol，1.00eq)和二异丙基乙胺(13.12g，101.52mmol，18mL，4.00eq)在乙腈(70mL)中的混合物中，一次性加入4,5-二氨基-5-氧代-戊酸叔丁酯(5.13g，25.38mmol，1.00eq)。将混合物在60至80℃下搅拌16小时。将混合物真空浓缩。然后加入水(50mL)。用乙酸乙酯(100mL*3)萃取水相。合并的有机相用盐水(100mL*2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3/1至1/1，然后二氯甲烷/甲醇＝10/1)残余物。得到为无色油的产物5-氨基-4-[5-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-5-氧代-戊酸叔丁酯(3.12g，6.68mmol，26％产率，96％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:449.1[M+1]⁺.

步骤4：5-氨基-4-(5-羟基-1-氧代异吲哚啉-2-基)-5-氧代戊酸叔丁酯的制备

向5-氨基-4-[5-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-5-氧代-戊酸叔丁酯(3.12g，6.95mmol，1.00eq)在甲醇(30mL)中的溶液中，加入在四氢呋喃(18mL)中的四丁基氟化铵(1M，于四氢呋喃中，7mL，1.00eq)。将反应混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物真空浓缩。加入水(100mL)，水相用二氯甲烷(100mL*2)萃取。合并的有机相用盐水(100mL*3)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过快速柱色谱法纯化(在石油醚中的0-70％乙酸乙酯)残余物。得到为浅黄色固体的产物5-氨基-4-(5-羟基-1-氧代-异吲哚啉-2-基)-5-氧代-戊酸叔丁酯(2.50g，6.78mmol，97％产率，90％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:357.0[M+23]⁺.

步骤5：(2S)-4-(2-(((2S,4R)-4-(2-(2-(2-((2-(1-氨基-5-(叔丁氧基)-1,5-二氧代戊-2-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-1-甲基-4-[2-[2-[2-(对甲苯磺酰基氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(140mg，0.16mmol，1eq)和5-氨基-4-(5-羟基-1-氧代-异吲哚啉-2-基)-5-氧代-戊酸叔丁酯(78mg，0.23mmol，1.5eq)在乙腈(3mL)中的溶液中，加入碳酸钾(64mg，0.47mmol，3eq)，将混合物在90℃下搅拌12小时。将混合物过滤并将滤液浓缩以得到粗产物，将其通过制备型TLC纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)，以得到为褐色油的(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-[2-(4-叔丁氧基-1-氨基甲酰基-4-氧代-丁基)-1-氧代-异吲哚啉-5-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(110mg，103.55umol，66.6％产率)。

步骤6：2-((2S)-4-(2-(((2S,4R)-4-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的制备

在氮气下，在25℃下向(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-[2-(4-叔丁氧基-1-氨基甲酰基-4-氧代-丁基)-1-氧代-异吲哚啉-5-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(110mg，0.1mmol，1eq)在乙腈(6mL)中的混合物中一次性加入苯磺酸(66mg，0.4mmol，4eq)，将混合物在80℃下搅拌10小时。将混合物真空浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物，以得到为黄色油的2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-氧代-异吲哚啉-5-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(45mg，0.05mmol，48％产率)。

步骤7：2-((2S)-1-丙烯酰基-4-(2-(((2S,4R)-4-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的制备

在氮气下，在-78℃下向2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-氧代-异吲哚啉-5-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(45mg，0.05mmol，1eq)在二氯甲烷(10mL)中的混合物中，一次性加入2,6-二甲基吡啶(54mg，0.51mmol，10eq)，然后加入在二氯甲烷(1mL)中的丙-2-烯酰氯(4.1mg，0.05mmol，0.03mL，0.9eq)。将混合物在-78℃下搅拌15分钟。用水(20mL)淬灭混合物。用乙酸乙酯(15mL x 3)萃取水相。合并的有机相用盐水(15mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到为白色固体的2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-氧代-异吲哚啉-5-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯酰基-哌嗪-2-基]乙腈(13mg，0.012mmol，25％产率，98％纯度，甲酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:471.8[M/2+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.96(s,1H),8.24(s,1H),8.20-8.14(m,1H),7.95-7.89(m,1H),7.66-7.58(m,2H),7.56-7.51(m,2H),7.45-7.3(m,1H),7.25-7.2(m,1H),7.18-7.1(m,1H),7.06-6.9(m,1H),6.88-6.5(m,1H),6.23-6.14(m,1H),5.8-5.5(m,1H),5.06-5.0(m,1H),4.98-4.6(m,1H),4.49-4.32(m,2H),4.27-4.21(m,2H),4.19-4.15(m,2H),4.15-3.93(m,8H),3.79-3.74(m,2H),3.61-3.57(m,3H),3.55-3.53(m,3H),3.51-3.49(m,4H),3.30-3.14(m,2H),3.04-2.84(m,4H),2.75-2.65(m,2H),2.39-2.33(m,5H),2.16-2.1(m,1H),2.00-1.92(m,1H),1.88-1.79(m,2H).

(S)-N-((S)-2-((S)-2-(4-(4-(2-(2-(2-(((3R,5S)-5-(((4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-1-甲基吡咯烷-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)萘-1-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)-1-环己基-2-氧代乙基)-2-(甲基氨基)丙酰胺(示例性化合物548)的示例性合成

步骤1：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((2S,4R)-1-甲基-4-(2-(2-(2-(甲苯磺酰基氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯的制备

向(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸苄酯(160mg，0.20mmol，1eq)在二氯甲烷(2mL)中的混合物中，加入三乙胺(0.1mL，3eq)，对甲苯磺酰氯(78mg，0.41mmol，2eq)和二甲基氨基吡啶(25mg，0.20mmol，1eq)。然后将反应混合物在15℃下搅拌12小时。将反应混合物过滤。通过制备型TLC纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)滤液以得到产物。得到为黄色固体的化合物(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-1-甲基-4-[2-[2-[2-(对甲苯磺酰基氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸苄酯(160mg，0.17mmol，83.5％产率)。LC/MS(ESI)m/z:934.5[M+1]⁺.

步骤2：(S)-4-(2-(((2S,4R)-4-(2-(2-(2-((4-(2-((S)-1-((S)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)丙酰氨基)-2-环己基乙酰基)吡咯烷-2-基)噻唑-4-基)萘-1-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸苄酯的制备

向N-[(1S)-2-[[(1S)-1-环己基-2-[(2S)-2-[4-(4-羟基-1-萘基)噻唑-2-基]吡咯烷-1-基]-2-氧代-乙基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(106mg，0.17mmol，1eq)和(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-1-甲基-4-[2-[2-[2-(对甲苯磺酰基氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸苄酯(160mg，0.17mmol，1eq)在乙腈(5mL)中的混合物中，加入碳酸钾(47mg，0.34mmol，2eq)。将混合物在85℃下搅拌12小时。将混合物用水(20mL)淬灭。然后将混合物用二氯甲烷(30mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩以得到残余物。通过制备型TLC纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)残余物。得到为黄色固体的(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-[[4-[2-[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]丙酰基]氨基]-2-环己基-乙酰基]吡咯烷-2-基]噻唑-4-基]-1-萘基]氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸苄酯(105mg，0.07mmol，44.3％产率)。LC/MS(ESI)m/z:1383.6[M+1]⁺.

步骤3：((S)-1-(((S)-2-((S)-2-(4-(4-(2-(2-(2-(((3R,5S)-5-(((4-((S)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-1-甲基吡咯烷-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)萘-1-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)-1-环己基-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备

向(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-[[4-[2-[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]丙酰基]氨基]-2-环己基-乙酰基]吡咯烷-2-基]噻唑-4-基]-1-萘基]氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸苄酯(105mg，0.07mmol，1eq)和氢氧化铵(0.2mL)在四氢呋喃(0.5mL)和甲醇(5mL)中的混合物中，加入钯炭活性催化剂(30mg，10％纯度)。将混合物脱气并充入氢气三次。然后将混合物在25℃下搅拌12小时。将混合物过滤。通过制备型HPLC纯化滤液。得到为白色固体的化合物N-[(1S)-2-[[(1S)-2-[(2S)-2-[4-[4-[2-[2-[2-[(3R,5S)-5-[[4-[(3S)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-萘基]噻唑-2-基]吡咯烷-1-基]-1-环己基-2-氧代-乙基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(35mg，0.03mmol，36.9％产率)。LC/MS(ESI)m/z:1248.8[M+1]⁺.

步骤4：((S)-1-(((S)-2-((S)-2-(4-(4-(2-(2-(2-(((3R,5S)-5-(((4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-1-甲基吡咯烷-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)萘-1-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)-1-环己基-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备

在-78℃下向N-[(1S)-2-[[(1S)-2-[(2S)-2-[4-[4-[2-[2-[2-[(3R,5S)-5-[[4-[(3S)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-萘基]噻唑-2-基]吡咯烷-1-基]-1-环己基-2-氧代-乙基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(35mg，0.03mmol，1eq)在二氯甲烷(5mL)中的混合物中，加入2,6-二甲基吡啶(30mg，0.28mmol，10eq)和丙-2-烯酰氯(2mg，0.9eq)。然后将混合物在-78℃下搅拌30分钟。将混合物用水(3mL)稀释。然后将混合物用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取。合并的有机层用水(30mL x2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩以得到残余物。得到为粉色油的N-[(1S)-2-[[(1S)-2-[(2S)-2-[4-[4-[2-[2-[2-[(3R,5S)-5-[[4-[(3S)-3-(氰基甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-萘基]噻唑-2-基]吡咯烷-1-基]-1-环己基-2-氧代-乙基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(35mg)。LC/MS(ESI)m/z:1302.9[M+1]⁺.

步骤5：(S)-N-((S)-2-((S)-2-(4-(4-(2-(2-(2-(((3R,5S)-5-(((4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-1-甲基吡咯烷-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)萘-1-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)-1-环己基-2-氧代乙基)-2-(甲基氨基)丙酰胺的制备

向N-[(1S)-2-[[(1S)-2-[(2S)-2-[4-[4-[2-[2-[2-[(3R,5S)-5-[[4-[(3S)-3-(氰基甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-萘基]噻唑-2-基]吡咯烷-1-基]-1-环己基-2-氧代-乙基]氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(35mg，0.03mmol，1eq)在二氯甲烷(2mL)中的混合物中，加入三氟乙酸(0.2mL)。将混合物在25℃下搅拌30分钟。将混合物滴入到饱和碳酸氢钠溶液中。然后将混合物用溶液萃取(二氯甲烷:甲醇＝10:1，30mL x 2)。将合并的有机层真空浓缩以得到残余物。通过制备型HPLC纯化残余物。得到为白色固体的化合物(2S)-N-[(1S)-2-[(2S)-2-[4-[4-[2-[2-[2-[(3R,5S)-5-[[4-[(3S)-3-(氰基甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-萘基]噻唑-2-基]吡咯烷-1-基]-1-环己基-2-氧代-乙基]-2-(甲基氨基)丙酰胺(9.4mg，0.007mmol，26.3％产率，98.7％纯度，三氟乙酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:1203.6[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.13-9.85(m,1H),8.83-8.70(m,2H),8.28-8.22(m,1H),8.20-8.13(m,1H),7.97-7.90(m,1H),7.73-7.63(m,2H),7.61-7.50(m,5H),7.49-7.43(m,1H),7.21-7.19(d,J＝7.46Hz,1H),7.03-7.01(d,J＝8.0Hz,1H),6.94-6.73(m,1H),6.25-6.12(m,1H),5.82-5.72(m,1H),5.47-5.39(m,1H),5.06-4.91(m,1H),4.81-4.70(m,1H),4.65-4.38(m,5H),4.34-4.29(m,2H),4.27-4.22(m,1H),4.14(s,2H),4.10-4.00(m,3H),3.94-3.67(m,12H),3.63-3.54(m,9H),3.24-3.15(m,2H),3.01-2.93(m,5H),2.89(s,1H),2.73(s,1H),2.28-2.17(m,2H),2.08-1.96(m,3H),1.79-1.64(m,4H),1.62-1.53(m,2H),1.35-1.33(d,J＝6.85Hz,3H),1.24-1.00(m,6H).

(2R,3S,4R,5S)-N-(4-((2-(2-(2-(((3R,5S)-5-(((4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-1-甲基吡咯烷-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酰基)-2-甲氧基苯基)-3-(3-氯-2-氟苯基)-4-(4-氯-2-氟苯基)-4-氰基-5-新戊基吡咯烷-2-羧酰胺(示例性化合物552)的示例性合成

步骤1：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((2S,4R)-4-(2-(2-(2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-1-甲基-4-[2-[2-[2-(对甲苯磺酰基氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(300mg，0.33mmol，1eq)在N.N-二甲基甲酰胺(4mL)中的混合物中，加入(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)钾(123mg，0.67mmol，2eq)，然后将反应混合物在80℃下搅拌2小时。加入水(25mL)，用乙酸乙酯(25mL x 3)萃取水相。合并的有机相用盐水(25mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇＝1:0至30:1)残余物，以得到为黄色固体的化合物(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(220mg，0.25mmol，75％产率)。LC/MS(ESI)m/z:875.5[M+1]⁺.

步骤2：(S)-4-(2-(((2S,4R)-4-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(150mg，0.17mmol，1eq)在乙醇(5mL)中的溶液中，加入水合肼(86mg，1.71mmol，10eq)。将混合物在80℃下搅拌2小时。将反应混合物冷却至20℃，然后加入乙酸乙酯(20mL)，将混合物过滤并真空浓缩。得到为黄色胶的化合物(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(141mg)。LC/MS(ESI)m/z:745.5[M+1]⁺.

步骤3：(S)-4-(2-(((2S,4R)-4-(2-(2-(2-(4-((2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟苯基)-4-(4-氯-2-氟苯基)-4-氰基-5-新戊基吡咯烷-2-羧酰氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(40mg，0.054mmol，1.1eq)和4-[[(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基丙基)吡咯烷-2-羰基]氨基]-3-甲氧基-苯甲酸(30mg，0.049mmol，1eq)在N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中的混合物中，加入1-羟基苯并三唑(10mg，0.073mmol，1.5eq)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(14mg，0.073mmol，1.5eq)和N,N-二异丙基乙胺(19mg，0.15mmol，3eq)，将反应混合物在25℃下搅拌12小时。加入水(0.1mL)，然后真空浓缩混合物。通过制备型TLC纯化(二氯甲烷:甲醇＝15:1)反应混合物。得到为黄色油的化合物(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-[[4-[[(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基丙基)吡咯烷-2-羰基]氨基]-3-甲氧基-苯甲酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(30mg，0.022mmol，46％产率)。LC/MS(ESI)m/z:1343.6[M+1]⁺.

步骤4：(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟苯基)-4-(4-氯-2-氟苯基)-4-氰基-N-(4-((2-(2-(2-(((3R,5S)-5-(((4-((S)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-1-甲基吡咯烷-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酰基)-2-甲氧基苯基)-5-新戊基吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[2-[2-[2-[[4-[[(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基丙基)吡咯烷-2-羰基]氨基]-3-甲氧基-苯甲酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(30mg，0.022mmol，1eq)在二氯甲烷(5mL)中的混合物中，加入三氟乙酸(1.54g，13.51mmol，1mL，604.79eq)，然后将反应混合物在25℃下搅拌30分钟。真空浓缩反应混合物。得到为黄色油的化合物(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-N-[4-[2-[2-[2-[(3R,5S)-5-[[4-[(3S)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙基氨基甲酰基]-2-甲氧基-苯基]-5-(2,2-二甲基丙基)吡咯烷-2-羧酰胺(30mg，0.022mmol，99％产率，三氟乙酸盐)。

步骤5：(2R,3S,4R,5S)-N-(4-((2-(2-(2-(((3R,5S)-5-(((4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-1-甲基吡咯烷-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酰基)-2-甲氧基苯基)-3-(3-氯-2-氟苯基)-4-(4-氯-2-氟苯基)-4-氰基-5-新戊基吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-N-[4-[2-[2-[2-[(3R,5S)-5-[[4-[(3S)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙基氨基甲酰基]-2-甲氧基-苯基]-5-(2,2-二甲基丙基)吡咯烷-2-羧酰胺(30mg，0.022mmol，1eq，三氟乙酸盐)在二氯甲烷(5mL)中的混合物中，加入2,6-二甲基吡啶(24mg，0.22mmol，10eq)，然后在-65℃下加入丙-2-烯酰氯(2mg，0.020mmol，0.9eq)，持续10分钟。加入水(10mL)并搅拌0.5分钟。用二氯甲烷(20mL x 2)萃取水相，并真空浓缩。通过半制备型反相HPLC纯化残余物。得到为白色固体的化合物(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-N-[4-[2-[2-[2-[(3R,5S)-5-[[4-[(3S)-3-(氰基甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙基氨基甲酰基]-2-甲氧基-苯基]-5-(2,2-二甲基丙基)吡咯烷-2-羧酰胺(6.0mg，0.004mmol，20％产率，99％纯度，甲酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:640.0[M/2+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.41(s,1H),8.49(br t,J＝5.5Hz,1H),8.31(d,J＝8.4Hz,1H),8.22(s,1H),8.20-8.14(m,1H),7.96-7.89(m,1H),7.72(br t,J＝6.8Hz,1H),7.64(d,J＝8.3Hz,1H),7.60-7.50(m,5H),7.50-7.43(m,2H),7.41-7.32(m,3H),7.21(d,J＝7.3Hz,1H),6.98-6.74(m,1H),6.25-6.11(m,1H),5.78(br d,J＝12.5Hz,1H),5.06-4.72(m,1H),4.62-4.51(m,2H),4.51-4.28(m,2H),4.24(br dd,J＝4.7,10.8Hz,1H),4.15-3.93(m,8H),3.91(s,3H),3.55-3.51(m,6H),3.50-3.47(m,4H),3.45-3.43(m,4H),3.25(br d,J＝3.4Hz,1H),3.16(br s,1H),3.06-2.92(m,4H),2.74-2.68(m,1H),2.31(s,3H),2.14(dd,J＝6.1,9.4Hz,1H),1.91-1.74(m,2H),1.63(br dd,J＝9.9,14.1Hz,1H),1.31-1.10(m,2H),0.96(s,9H).

(2S,4R)-1-(4-(2-(2-(3-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-甲基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(示例性化合物462)的示例性合成

步骤1：1,2-双(2-溴乙氧基)乙烷的制备

在0℃下，在30分钟内向2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙醇(20g，102.97mmol，17.70mL，1eq)和四溴化碳(75.13g，226.54mmol，2.2eq)在四氢呋喃(200mL)中的溶液中，滴加三苯基膦(58.07g，221.39mmol，2.15eq)。添加后，将混合物在20℃下搅拌12小时。减压浓缩反应混合物以除去溶剂得到残余物。通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝50/1至20:1)残余物。得到为无色油的化合物1-(2-溴乙氧基)-2-[2-(2-溴乙氧基)乙氧基]乙烷(30g，89.06mmol，86％产率，95％纯度)。

步骤2：4-(2-(2-溴乙氧基)乙氧基)-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酸的制备

在-78℃下向2-(3-甲基异噁唑-5-基)乙酸(4.09g，28.99mmol，1eq)在四氢呋喃(60mL)中的混合物中，滴加正丁基锂(2.5M，28.99mL，2.5eq)。添加后，将混合物在0℃下搅拌0.5小时。然后在-78℃下滴加1,2-双(2-溴乙氧基)乙烷(16g，57.98mmol，2eq)。将混合物在-78℃下搅拌1小时。然后使混合物温热至室温(25℃)并在25℃下搅拌10.5小时。将混合物倒入冰水(100mL)中，然后加入饱和碳酸氢钠溶液以碱化溶液(pH>8)。用乙酸乙酯(100mL)萃取溶液，并除去有机层。加入饱和柠檬酸溶液以酸化水相(pH＝4)，并用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取溶液。将合并的有机层干燥，过滤并浓缩以得到残余物。通过半制备型反相HPLC纯化残余物。得到为褐色胶的化合物4-[2-(2-溴乙氧基)乙氧基]-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酸(150mg，240.94umol，0.8％产率，54％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:336.0[M+1]⁺.

步骤3：(2S,4R)-1-(4-(2-(2-溴乙氧基)乙氧基)-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向4-[2-(2-溴乙氧基)乙氧基]-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酸(150mg，446.19umol，1eq)和HATU(508.97mg，1.34mmol，3eq)在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的溶液中，加入(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(147.88mg，446.19umol，1eq)和N,N-二异丙基乙胺(230.67mg，1.78mmol，310.87uL，4eq)。将反应混合物在25℃下搅拌12小时。将反应混合物在0℃下用水(10mL)淬灭，然后用乙酸乙酯(10mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水(10mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩以得到残余物。通过硅胶柱色谱法纯化(二氯甲烷/甲醇＝10/1)残余物。得到为褐色胶的化合物(2S,4R)-1-[4-[2-(2-溴乙氧基)乙氧基]-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(0.13g，200.12umol，44％产率)。LC/MS(ESI)m/z:651.1[M+1]⁺.

步骤4：(2S,4R)-4-羟基-1-(4-(2-(2-(甲基氨基)乙氧基)乙氧基)-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

在60℃下搅拌(2S,4R)-1-[4-[2-(2-溴乙氧基)乙氧基]-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(0.1g，153.94umol，1eq)和甲基胺/乙醇(100.00mmol，10mL，30％纯度)的混合物12小时。浓缩混合物以得到为黄色固体的产物(2S,4R)-4-羟基-1-[4-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(90mg，150.07umol，97％产率)。LC/MS(ESI)m/z:600.2[M+1]⁺.

步骤5：(2S,4R)-1-(4-(2-(2-(3-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-N-甲基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向(2S,4R)-4-羟基-1-[4-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(90mg，150.07umol，1eq)和3-[[4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酸(88.80mg，165.07umol，1.1eq)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的溶液中，加入1-羟基苯并三唑(40.55mg，300.13umol，2eq)和N,N-二异丙基乙胺(77.58mg，600.26umol，104.55uL，4eq)。将混合物在25℃下搅拌0.15小时。向混合物中加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(57.54mg，300.13umol，2eq)。将所得混合物在25℃下搅拌2小时。在0℃下用水(15mL)淬灭反应混合物，然后用乙酸乙酯(10mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水(15mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩以得到残余物。通过半制备型反相HPLC纯化残余物。得到为黄色固体的化合物(2S,4R)-1-[4-[2-[2-[3-[[4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酰基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(74.7mg，66.05umol，44％产率，99％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:1119.4[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.90-8.75(m,1H),7.82-7.65(m,2H),7.45-7.29(m,5H),7.23(br s,2H),7.18-7.09(m,1H),7.03(br s,1H),6.27-6.04(m,1H),5.03-4.93(m,1H),4.61-4.52(m,1H),4.48-4.16(m,2H),3.84-3.41(m,21H),3.31(br d,J＝1.5Hz,2H),3.07(br d,J＝9.5Hz,1H),2.99-2.65(m,4H),2.43(s,3H),2.25-1.91(m,10H),1.46(br d,J＝6.5Hz,3H),1.38-1.19(m,2H),0.88(br d,J＝9.2Hz,1H.

(2S,4R)-1-(1-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-4-甲基-16-(3-甲基异噁唑-5-基)-3-氧代-7,10,13-三氧杂-4-氮杂十七烷-17-酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(示例性化合物463)的示例性合成

步骤1：1-溴-2-(2-(2-(2-溴乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙烷的制备

向2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙醇(30g，199.77mmol，26.79mL，1eq)在四氢呋喃(300mL)中的溶液中加入三苯基膦(112.66g，429.51mmol，2.15eq)和四溴化碳(145.75g，439.49mmol，2.2eq)。将混合物在20℃下搅拌12小时。减压浓缩反应混合物以除去溶剂。通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝100/1至40/1)残余物。得到为黄色油的化合物1,2-双(2-溴乙氧基)乙烷(50g，173.93mmol，87％产率)。

步骤2：4-(2-(2-(2-溴乙氧基)乙氧基)乙氧基)-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酸的制备

在-78℃下向2-(3-甲基异噁唑-5-基)乙酸(1.8g，12.75mmol，1eq)在四氢呋喃(20mL)中的混合物中，滴加正丁基锂(2.5M，12.75mL，2.5eq)。添加后，将混合物在0℃下搅拌0.5小时。然后在-78℃下滴加1-(2-溴乙氧基)-2-[2-(2-溴乙氧基)乙氧基]乙烷(8.16g，25.51mmol，2eq)。将混合物在-78℃下搅拌1小时。然后使混合物温热至室温(25℃)并在25℃下搅拌10.5小时。将混合物倒入冰水(50mL)中，然后添加饱和碳酸氢钠溶液以碱化溶液(pH>8)。用乙酸乙酯(30mL)萃取溶液，并弃去有机层。加入饱和柠檬酸溶液以酸化水相(pH＝4)，并用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取溶液。将合并的有机层干燥，过滤并浓缩以得到残余物。通过HPLC纯化残余物。得到为褐色胶的化合物4-[2-[2-(2-溴乙氧基)乙氧基]乙氧基]-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酸(0.15g，394.50umol，3％产率)。LC/MS(ESI)m/z:380.1[M+1]⁺.

步骤3：(2S,4R)-1-(4-(2-(2-(2-溴乙氧基)乙氧基)乙氧基)-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向4-[2-[2-(2-溴乙氧基)乙氧基]乙氧基]-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酸(0.12g，315.60umol，1eq)和HATU(360.00mg，946.79umol，3eq)在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的溶液中，加入(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(104.60mg，315.60umol，1eq)和N,N-二异丙基乙胺(163.16mg，1.26mmol，219.89uL，4eq)。将反应混合物在25℃下搅拌12小时。将反应混合物在0℃下用水(10mL)淬灭，然后用乙酸乙酯(10mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩以得到残余物。通过硅胶柱色谱法纯化(二氯甲烷/甲醇＝10/1)残余物。得到为褐色胶的化合物(2S,4R)-1-[4-[2-[2-(2-溴乙氧基)乙氧基]乙氧基]-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(0.13g，187.42umol，59％产率)。LC/MS(ESI)m/z:695.2[M+1]⁺.

步骤4：(2S,4R)-4-羟基-1-(14-(3-甲基异噁唑-5-基)-5,8,11-三氧杂-2-氮杂十五烷-15-酰基)-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

在60℃下搅拌(2S,4R)-1-[4-[2-[2-(2-溴乙氧基)乙氧基]乙氧基]-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(0.1g，144.17umol，1eq)和甲基胺/乙醇(144.17umol，10mL，30％纯度，1eq)的混合物12小时。浓缩反应以得到为黄色固体的产物(2S,4R)-4-羟基-1-[4-[2-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(80mg，124.26umol，86％产率)。LC/MS(ESI)m/z:644.3[M+1]⁺.

步骤5：(2S,4R)-1-(1-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-4-甲基-16-(3-甲基异噁唑-5-基)-3-氧代-7,10,13-三氧杂-4-氮杂十七烷-17-酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向(2S,4R)-4-羟基-1-[4-[2-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(80mg，124.26umol，1eq)和3-[[4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酸(73.54mg，136.69umol，1.1eq)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的溶液中，加入1-羟基苯并三唑(33.58mg，248.53umol，2eq)和N,N-二异丙基乙胺(64.24mg，497.05umol，86.58uL，4eq)。将混合物在25℃下搅拌0.15小时。向混合物中加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(47.64mg，248.53umol，2eq)。将所得混合物在25℃下搅拌2小时。将反应混合物在0℃下用水(15mL)淬灭，然后用乙酸乙酯(10mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水(15mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩以得到残余物。通过半制备型反相HPLC纯化残余物。得到为黄色固体的化合物(2S,4R)-1-[4-[2-[2-[2-[3-[[4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酰基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(62.4mg，53.08umol，42％产率，99％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:1163.3[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.90-8.83(m,1H),7.78-7.70(m,2H),7.41-7.35(m,5H),7.23(br s,2H),7.20-7.11(m,1H),7.03(br s,1H),6.23-6.13(m,1H),5.00(td,J＝7.0,18.7Hz,1H),4.61-4.54(m,1H),4.48-4.27(m,2H),3.75(br d,J＝16.5Hz,8H),3.58-3.51(m,8H),3.10(br d,J＝7.6Hz,1H),2.91(br d,J＝7.0Hz,2H),2.83-2.70(m,2H),2.65(s,1H),2.45(d,J＝2.4Hz,3H),2.24-2.10(m,10H),1.47(br dd,J＝3.1,6.5Hz,3H),1.28(s,1H),0.88(br d,J＝8.9Hz,1H).

(2S,4R)-1-((2S)-20-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)-2-(叔丁基)-18-甲基-4-氧代-6,9,12,15-四氧杂-3,18-二氮杂二十烷酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(示例性化合物473)的示例性合成

步骤1：4-(7-溴-6-氯-8-氟-2-(2-羟基乙氧基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

在0℃下向乙二醇(1.29g，20.83mmol，1.2mL，5eq)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液中加入氢化钠(200mg，5.00mmol，60％于矿物油中，1.2eq)，将混合物在0℃下搅拌30分钟，然后在0℃下加入在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)的4-(7-溴-2,6-二氯-8-氟-喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2g，4.17mmol，1eq)，将混合物在20℃下搅拌1小时。将混合物用水(100mL)淬灭，并用乙酸乙酯(100mL，两次)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，并将滤液浓缩以得到粗产物。通过快速纯化(乙酸乙酯:石油醚＝0:1至1:1)这一粗产物，以得到为淡黄色固体的化合物4-[7-溴-6-氯-8-氟-2-(2-羟基乙氧基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.15g，2.09mmol，50％产率，92％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:506.9[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.72(d,J＝2.0Hz,1H),4.66-4.54(m,2H),4.04-3.97(m,2H),3.86-3.76(m,4H),3.69-3.60(m,4H),1.50(s,9H).

步骤2：4-(7-溴-6-氯-8-氟-2-(((S)-19-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-3,20,20-三甲基-17-氧代-6,9,12,15-四氧杂-3,18-二氮杂二十一烷基)氧基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向4-[7-溴-6-氯-8-氟-2-(2-羟基乙氧基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(200mg，0.40mmol，1eq)在二氯甲烷(3mL)和二甲基亚砜(1.00g，12.80mmol，1mL，32.37eq)中的溶液中，加入三乙胺(200mg，1.98mmol，5eq)，然后加入吡啶三氧化硫(189mg，1.19mmol，3eq)，将混合物在20℃下搅拌10小时。在氮气下在20℃下向混合物中装入(2S,4R)-1-[(2S)-3,3-二甲基-2-[[2-[2-[2-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(371mg，0.54mmol，0.9eq)、三乙胺(121mg，1.19mmol，2eq)、二氯甲烷(4mL)和二甲基亚砜(5mL)。将混合物在20℃下搅拌30分钟。然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(631mg，2.98mmol，5eq)。将混合物在20℃下搅拌1小时。真空浓缩混合物。通过半制备型反相HPLC纯化反应混合物，以得到为白色固体的化合物4-[7-溴-6-氯-8-氟-2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙基-甲基-氨基]乙氧基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(250mg，0.20mmol，34％产率，甲酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:590.5[M/2+1]⁺.

步骤3：4-(6-氯-8-氟-2-(((S)-19-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-3,20,20-三甲基-17-氧代-6,9,12,15-四氧杂-3,18-二氮杂二十一烷基)氧基)-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

将4-[7-溴-6-氯-8-氟-2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙基-甲基-氨基]乙氧基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(50mg，0.04mmol，1eq)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)萘-2-醇(17mg，0.06mmol，1.5eq)、[2-(2-氨基苯基)苯基]钯(1+)；二环己基-[2-(2,4,6-三异丙基苯基)苯基]磷烷；甲磺酸盐(4mg，0.004mmol，0.1eq)和磷酸钾(1.5M，于H₂O中，0.08mL，3.0eq)在四氢呋喃(3mL)中的混合物脱气并用氮气吹扫(3次)，然后将混合物在氮气气氛下于65℃搅拌12小时。减压浓缩反应混合物以得到残余物。通过制备型薄层色谱法纯化(硅胶板，二氯甲烷/甲醇＝7/1)残余物，以得到为黄色固体的化合物4-[6-氯-8-氟-2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙基-甲基-氨基]乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(40mg，0.03mmol，76％产率)。LC/MS(ESI)m/z:1244.0[M+1]⁺.

步骤4：(2S,4R)-1-((2S)-2-(叔丁基)-20-((6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)-18-甲基-4-氧代-6,9,12,15-四氧杂-3,18-二氮杂二十烷酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向4-[6-氯-8-氟-2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙基-甲基-氨基]乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(40mg，0.03mmol，1eq)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中，加入HCl/二噁烷(4M，3mL)。将混合物在20℃下搅拌0.5小时。减压浓缩反应混合物，以得到为黄色固体的化合物(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[2-[2-[2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基乙基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(40mg，盐酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:1143.6[M+1]⁺.

步骤5：(2S,4R)-1-((2S)-20-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)-2-(叔丁基)-18-甲基-4-氧代-6,9,12,15-四氧杂-3,18-二氮杂二十烷酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

将(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[2-[2-[2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基乙基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(40mg，0.033mmol，1eq，盐酸盐)和2,6-二甲基吡啶(106mg，0.99mmol，30eq)在二氯甲烷(5mL)中的混合物冷却至-78℃，然后加入在二氯甲烷(1mL)中的丙-2-烯酰氯(3mg，0.033mmol，1eq)。将混合物在-78℃下搅拌0.5小时。用饱和碳酸氢钠溶液(20mL)淬灭反应混合物，然后用二氯甲烷(20mL x 2)萃取。合并的有机层用盐水(20mL x 1)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并减压浓缩以得到残余物。通过半制备型反相HPLC纯化残余物，以得到为黄色固体的化合物(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[2-[2-[2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基乙基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(25.6mg，0.019mmol，56％产率，95％纯度，三氟乙酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:589.9[M/2+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)δ9.01-8.89(m,1H),8.17-8.05(m,1H),7.76(d,J＝8.4Hz,1H),7.58-7.38(m,5H),7.28(d,J＝2.4Hz,1H),7.25-7.16(m,2H),7.05(d,J＝2.4Hz,1H),6.89-6.73(m,1H),6.36-6.23(m,1H),5.86-5.75(m,1H),5.04-4.94(m,1H),4.82-4.75(m,1H),4.69-4.63(m,1H),4.58-4.51(m,1H),4.46-4.31(m,1H),4.16-4.06(m,4H),4.05-3.99(m,2H),3.98-3.89(m,4H),3.88-3.80(m,3H),3.80-3.39(m,18H),3.11-2.99(m,3H),2.51-2.42(m,3H),2.40-2.13(m,1H),2.03-1.90(m,1H),1.60-1.43(m,3H),1.07-0.96(m,9H).

(2S,4R)-1-((2S)-2-(2-(4-(2-(2-(4-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)哌啶-1-基)乙氧基)乙基)哌嗪-1-基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(示例性化合物475)的示例性合成

步骤1：2-(2,2-二乙氧基乙氧基)乙-1-醇的制备

在具有100mL内含物体积，配有温度计、搅拌装置和回流冷凝器的三颈烧瓶中装入乙二醇(9.45g，152.23mmol，8.5mL，2eq)。将烧瓶在冰浴上冷却。在0-50℃缓慢加入氢氧化钾(6.41g，114.17mmol，1.5eq)。然后加入2-溴-1,1-二乙氧基-乙烷(15g，76.12mmol，11.45mL，1eq)，并将反应混合物加热至110℃，持续20小时。将反应混合物冷却至20℃，然后加入水(30mL)。通过加入1N盐酸将混合物的pH调节至8。然后用乙酸乙酯(50mL x 5)萃取混合物。有机层经硫酸钠干燥，然后真空浓缩以得到残余物。通过硅胶柱色谱法纯化(在石油醚中的5-80％乙酸乙酯)残余物，以得到为浅黄色油的2-(2,2-二乙氧基乙氧基)乙醇(3.71g，20.82mmol，27％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.65(t,J＝5.2Hz,1H),3.78-3.68(m,4H),3.67-3.62(m,2H),3.62-3.54(m,4H),2.43(br s,1H),1.24(t,J＝7.1Hz,6H).

步骤2：2-(2,2-二乙氧基乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯的制备

向2-(2,2-二乙氧基乙氧基)乙醇(300mg，1.68mmol，1eq)在二氯甲烷(6mL)中的溶液中加入三乙胺(511mg，5.05mmol，0.7mL，3eq)和4-甲基苯-1-磺酰氯(481mg，2.52mmol，1.5eq)。将反应混合物在25℃下搅拌20小时。真空浓缩反应混合物，以得到残余物。通过硅胶柱色谱法纯化(在石油醚中的5-15％乙酸乙酯)残余物，以得到为无色油的2-(2,2-二乙氧基乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯(404mg，1.22mmol，72％产率)。

步骤3：2-(4-(2-(2,2-二乙氧基乙氧基)乙基)哌嗪-1-基)乙酸乙酯的制备

向2-哌嗪-1-基乙酸乙酯(1.06g，5.08mmol，1.3eq，盐酸盐)和2-(2,2-二乙氧基乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯(1.3g，3.91mmol，1eq)在乙腈(10mL)中的溶液中，加入碳酸钾(1.62g，11.76mmol，3.01eq)。将混合物在80℃下搅拌12小时。加入水(10mL)，然后用乙酸乙酯(20mL x 3)萃取混合物，混合物用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物。得到为黄色油的化合物2-[4-[2-(2,2-二乙氧基乙氧基)乙基]哌嗪-1-基]乙酸乙酯(500mg，1.50mmol，38％产率)。LC/MS(ESI)m/z:333.6[M+1]⁺.

步骤4：2-(4-(2-(2,2-二乙氧基乙氧基)乙基)哌嗪-1-基)乙酸的制备

向2-[4-[2-(2,2-二乙氧基乙氧基)乙基]哌嗪-1-基]乙酸乙酯(400mg，1.20mmol，1eq)在四氢呋喃(4mL)和甲醇(2mL)的混合物中的溶液中，加入水(2.5mL)和氢氧化锂一水合物(101mg，2.41mmol，2eq)。将反应混合物在20℃下搅拌2小时。加入2M硫酸以将混合物的pH调节至7。然后真空浓缩混合物以除去大部分有机溶剂，然后冻干。加入甲醇(2mL)和二氯甲烷(20mL)。将混合物过滤并将滤液真空浓缩以得到为浅黄色油的2-[4-[2-(2,2-二乙氧基乙氧基)乙基]哌嗪-1-基]乙酸(320mg，1.05mmol，87％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.62(t,J＝5.1Hz,1H),3.74-3.62(m,4H),3.56(qd,J＝7.1,9.4Hz,2H),3.49(br s,3H),3.33(br s,2H),3.05(br s,4H),2.78(br s,4H),2.67(br s,2H),1.22(t,J＝7.0Hz,6H).

步骤5：(2S,4R)-1-((S)-2-(2-(4-(2-(2,2-二乙氧基乙氧基)乙基)哌嗪-1-基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向2-[4-[2-(2,2-二乙氧基乙氧基)乙基]哌嗪-1-基]乙酸(152mg，0.50mmol，1.2eq)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(200mg，0.42mmol，1eq，盐酸盐)、羟基苯并三唑(73mg，0.54mmol，1.3eq)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(104mg，0.54mmol，1.3eq)在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的溶液中，加入N,N-二异丙基乙胺(161mg，1.25mmol，0.22mL，3eq)。将反应混合物在20℃下搅拌4小时。然后将反应混合物在20℃下搅拌另外14小时。加入水(20mL)，并用乙酸乙酯(20mL x 2)萃取混合物。有机层经硫酸钠干燥，然后真空浓缩以得到残余物。通过制备型TLC纯化(在二氯甲烷中的10％甲醇)残余物，以得到为无色胶的(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[4-[2-(2,2-二乙氧基乙氧基)乙基]哌嗪-1-基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(192mg，0.24mmol，58％产率，92％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:731.5[M+1]⁺.

步骤6：(2S,4R)-1-((S)-3,3-二甲基-2-(2-(4-(2-(2-氧代乙氧基)乙基)哌嗪-1-基)乙酰氨基)丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[4-[2-(2,2-二乙氧基乙氧基)乙基]哌嗪-1-基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(100mg，0.14mmol，1eq)在四氢呋喃(3mL)中的溶液中，加入硫酸(2M，0.5mL，7.31eq)。将反应混合物在60℃下搅拌1小时。将固体硫酸钠加入混合物中以将pH调节至7。然后加入四氢呋喃(30mL)和甲醇(2mL)，并将混合物经硫酸钠干燥。真空浓缩溶液，以得到为无色胶的(2S,4R)-1-[(2S)-3,3-二甲基-2-[[2-[4-[2-(2-氧代乙氧基)乙基]哌嗪-1-基]乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(73mg)。LC/MS(ESI)m/z:679.4[M+23]⁺.

步骤7：4-羟基哌啶-1-羧酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯的制备

向哌啶-4-醇(1.17g，11.57mmol，3eq)在四氢呋喃(10mL)中的溶液中，加入三乙胺(1.17g，11.57mmol，1.61mL，3eq)，向混合物中加入1-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基碳氧基]吡咯烷-2,5-二酮(1g，3.86mmol，1eq)，将反应在25℃下搅拌2小时。将反应混合物用水(30mL)淬灭，并用乙酸乙酯(20mL x 2)萃取。合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过柱色谱法纯化(SiO₂，石油醚/乙酸乙酯＝5:1至0:1)残余物，以得到为无色油的化合物2-(三甲基甲硅烷基)乙基4-氧代哌啶-1-羧酸酯(985mg)。¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)δ4.22-4.16(m,4H),3.71-3.67(m,10H),3.60-3.56(m,1H),3.31-3.13(m,1H),1.81-1.61(m,2H),1.50-1.47(m,2H),1.47(s,9H),1.27(t,J＝7.2Hz,3H).

步骤8：4-(7-溴-6-氯-8-氟-2-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)羰基)哌啶-4-基)氧基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

在85℃下加热4-(7-溴-2,6-二氯-8-氟-喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(500mg，1.04mmol，1eq)、2-(三甲基甲硅烷基)乙基4-氧代哌啶-1-羧酸酯(511mg，2.08mmol，2eq)，钾(432mg，3.12mmol，3eq)和1,4-二氮杂二环[2.2.2]辛烷(12mg，0.10mmol，0.1eq)在乙腈(25mL)中的混合物14小时。过滤反应混合物，并真空浓缩滤液以得到残余物。通过硅胶柱色谱法纯化(在石油醚中的0-15％乙酸乙酯)残余物，以得到为黄色固体的4-[7-溴-6-氯-8-氟-2-[[1-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基羰基)-4-哌啶基]氧基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(240mg，0.35mmol，33％产率)。

步骤9：4-(6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)-2-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)羰基)哌啶-4-基)氧基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向4-[7-溴-6-氯-8-氟-2-[[1-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基羰基)-4-哌啶基]氧基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(230mg，333.77umol，1eq)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)萘-2-醇(117mg，0.43mmol，1.3eq)在四氢呋喃(8mL)中的溶液中加入磷酸钾(1.5M，0.67mL，3eq)和甲磺酸(2-二环己基膦基-2,4,6-三异丙基-1,1-联苯)(2-氨基-1,1-联苯-2-基)钯(ii)(28mg，0.33mol，0.1eq)。将反应混合物脱气并充入氮气3次，然后加热至65℃持续16小时。加入乙酸乙酯(30mL)，并用水(30mL)洗涤混合物。有机层经硫酸钠干燥，然后真空浓缩以得到残余物。通过制备型TLC纯化(在石油醚中的60％乙酸乙酯)残余物，以得到为浅黄色固体的4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-[[1-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基羰基)-4-哌啶基]氧基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(200mg)。LC/MS(ESI)m/z:752.1[M+1]⁺.

步骤10：4-(6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)-2-(哌啶-4-基氧基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-[[1-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基羰基)-4-哌啶基]氧基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(180mg，0.24mmol，1eq)在四氢呋喃(4mL)中的溶液中，加入四丁基氟化铵(1M，0.26mL，1.1eq)。将反应混合物加热至50℃持续14小时。真空浓缩反应溶液以得到残余物。通过制备型HPLC纯化残余物，以得到为浅黄色固体的4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-(4-哌啶基氧基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(130mg，0.18mmol，75％产率，三氟乙酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:608.3[M+1]⁺.

步骤11：4-(6-氯-8-氟-2-((1-(2-(2-(4-(2-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)氧基)-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

在20℃下向4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-(4-哌啶基氧基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(70mg，0.1mmol，1eq，三氟乙酸盐)在甲醇(1mL)中的溶液中，加入乙酸钠(24mg，0.29mmol，3eq)。将反应混合物在20℃下搅拌20分钟。然后加入乙酸(12mg，0.2mmol，2eq)和(2S,4R)-1-[(2S)-3,3-二甲基-2-[[2-[4-[2-(2-氧代乙氧基)乙基]哌嗪-1-基]乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(73mg，0.11mmol，1.15eq)在二氯甲烷(3mL)中的溶液并将混合物冷却至0℃。加入氰基硼氢化钠(9mg，0.15mmol，1.5eq)，并将混合物在20℃下搅拌14小时。通过制备型TLC纯化(在二氯甲烷中的8％甲醇)溶液，以得到为无色油的4-[6-氯-8-氟-2-[[1-[2-[2-[4-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙基]哌嗪-1-基]乙氧基]乙基]-4-哌啶基]氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(53mg，0.04mmol，38％产率，87％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:1238.6[M+1]⁺.

步骤12：(2S,4R)-1-((2S)-2-(2-(4-(2-(2-(4-((6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)哌啶-1-基)乙氧基)乙基)哌嗪-1-基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向4-[6-氯-8-氟-2-[[1-[2-[2-[4-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙基]哌嗪-1-基]乙氧基]乙基]-4-哌啶基]氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(52mg，0.04mmol，1eq)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中，加入三氟乙酸(0.5M，0.08mL，1eq)。将混合物在15℃下搅拌1小时。真空浓缩反应混合物，以得到为无色油的(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[4-[2-[2-[4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基-1-哌啶基]乙氧基]乙基]哌嗪-1-基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(52mg，三氟乙酸盐)。

步骤13：(2S,4R)-1-((2S)-2-(2-(4-(2-(2-(4-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)哌啶-1-基)乙氧基)乙基)哌嗪-1-基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[4-[2-[2-[4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基-1-哌啶基]乙氧基]乙基]哌嗪-1-基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(52mg，41.18umol，1eq，三氟乙酸盐)在N,N-二甲基甲酰胺(1mL)和二氯甲烷(5mL)中的溶液中，加入2,6-二甲基吡啶(176mg，1.65mmol，40eq)。将反应混合物冷却至-70℃。然后加入丙-2-烯酰氯(2.61mg，0.03mmol，0.7eq)在二氯甲烷(0.23mL)中的溶液，并将混合物在-70℃下搅拌10分钟。加入二氯甲烷(20mL)和水(15mL)并分离混合物。有机层经硫酸钠干燥，然后浓缩以得到残余物。通过制备型HPLC纯化残余物，以得到为白色固体的(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[4-[2-[2-[4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基-1-哌啶基]乙氧基]乙基]哌嗪-1-基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(10.2mg，0.008mmol，20％产率，98％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:1202.6[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.98(s,1H),8.74-8.38(m,1H),8.27(s,2H),8.00(s,1H),7.80(d,J＝8.3Hz,1H),7.74-7.49(m,1H),7.46-7.39(m,3H),7.38-7.32(m,2H),7.28(d,J＝2.3Hz,1H),7.25-7.16(m,2H),7.06(d,J＝2.3Hz,1H),6.83(dd,J＝10.5,16.6Hz,1H),6.18(dd,J＝2.3,16.7Hz,1H),5.78-5.70(m,1H),5.03(td,J＝4.4,8.3Hz,1H),4.88(quin,J＝7.0Hz,1H),4.53-4.33(m,2H),4.30-4.20(m,1H),3.92(br d,J＝2.5Hz,4H),3.85(br s,2H),3.77(br s,2H),3.60-3.55(m,4H),3.49(br s,10H),3.02(br d,J＝16.1Hz,1H),2.91-2.83(m,2H),2.78(br s,2H),2.47(br s,4H),2.45(s,3H),2.30-2.22(m,2H),2.10-1.95(m,3H),1.80-1.62(m,1H),1.80-1.62(m,2H),1.48-1.33(m,3H),0.90(s,8H).

(2S,4R)-1-((2S)-14-(4-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)苯氧基)-2-(叔丁基)-4-氧代-6,9,12-三氧杂-3-氮杂十四烷酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(示例性化合物483)的示例性合成

步骤1：2-(2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯的制备

向2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯(32.70g，107.44mmol，1.00eq)在二氯甲烷(300mL)中的溶液中，加入4-甲基苯磺酸；吡啶(2.97g，11.82mmol，0.11eq)，然后在15℃下滴加3,4-二氢-2H-吡喃(14.28g，169.75mmol，15.5mL，1.58eq)。将混合物在15℃下搅拌3小时。减压浓缩反应混合物以除去溶剂，然后用水(300mL)稀释并用乙酸乙酯(300mL x 2)萃取。合并的有机层用水(300mL x 2)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到产物。得到为白色液体的化合物2-(2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯(37.40g，89.92mmol，84％产率，93％纯度)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.82(d,J＝8.0Hz,2H),7.36(d,J＝8.4Hz,2H),4.64(t,J＝3.2Hz,1H),4.18(t,J＝4.8Hz,2H),3.73-3.53(m,12H),2.47(s,3H),1.84-1.73(m,2H),1.61-1.52(m,4H).

步骤2：2-((1-苯基-2,6,9,12-四氧杂十四烷-14-基)氧基)四氢-2H-吡喃的制备

向2-(2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯(37.00g，95.24mmol，1.00eq)在二甲苯(370mL)中的溶液中，加入氢氧化钾(6.41g，114.29mmol，1.20eq)和3-(苄氧基)丙-1-醇(15.83g，95.24mmol，15.1mL，1.00eq)。将混合物在130℃下搅拌3小时。减压浓缩反应混合物以除去溶剂。用乙酸乙酯(800mL)稀释残余物。合并的有机层用水(300mL x 2)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过快速硅胶色谱法纯化残余物。得到为白色固体的化合物2-((1-苯基-2,6,9,12-四氧杂十四烷-14-基)氧基)四氢-2H-吡喃(19.00g，41.23mmol，43％产率，83％纯度)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.35-7.28(m,5H),4.64(t,J＝3.6Hz,1H),4.51(s,2H),3.88-3.49(m,18H),2.05-1.26(m,8H).

步骤3：2-(2-(2-(2-(4-硝基苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙酸乙酯的制备

向2-[2-[2-[2-(对甲苯磺酰基氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酸乙酯(3g，7.68mmol，1eq)和4-硝基苯酚(1.28g，9.22mmol，1.2eq)在二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液中，加入碳酸钾(2.12g，15.37mmol，2eq)。将反应混合物在50℃下搅拌12小时。通过加入水(20mL)淬灭反应混合物，然后用水(30mL)稀释，过滤并用乙酸乙酯(40mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水(80mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过制备型HPLC纯化残余物。得到为浅黄色油的期望化合物2-[2-[2-[2-(4-硝基苯氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酸乙酯(1.3g，3.64mmol，47％产率)。LC/MS(ESI)m/z:835.4[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.27-8.15(m,2H),7.04-6.94(m,2H),4.28-4.17(m,4H),4.14(s,2H),3.95-3.87(m,2H),3.79-3.66(m,8H),1.28(t,J＝7.2Hz,3H).

步骤4：2-(2-(2-(2-(4-氨基苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙酸乙酯的制备

向2-[2-[2-[2-(4-硝基苯氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酸乙酯(1.3g，3.64mmol，1eq)在乙醇(10mL)中的溶液中，加入钯/炭(500mg，10％纯度)。将反应混合物与氢气(15Psi)在40℃下搅拌12小时。将反应混合物过滤并减压浓缩，以得到产物为浅黄色油的化合物2-[2-[2-[2-(4-氨基苯氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酸乙酯(1.1g，3.36mmol，92％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ6.82-6.73(m,2H),6.69-6.60(m,2H),4.22(q,J＝7.2Hz,2H),4.15(s,2H),4.09-4.03(m,2H),3.86-3.79(m,2H),3.78-3.66(m,9H),1.34-1.21(m,4H).

步骤5：4-(7-溴-6-氯-8-氟-2-((4-((11-氧代-3,6,9,12-四氧杂十四烷酰基)氧基)苯基)氨基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向2-[2-[2-[2-(4-氨基苯氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酸乙酯(545mg，1.67mmol，2eq)和4-(7-溴-2,6-二氯-8-氟-喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(400mg，0.83mmol，1eq)在异丙醇(10mL)中的溶液中，加入N,N-二异丙基乙胺(431mg，3.33mmol，4eq)。将反应混合物在95℃下搅拌12小时。通过加入水(20mL)淬灭反应混合物，然后用水(30mL)稀释，过滤并用乙酸乙酯(40mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水(80mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过硅胶色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝20:1至3:1)残余物。得到为黄色固体的期望化合物4-[7-溴-6-氯-2-[4-[2-[2-[2-(2-乙氧基-2-氧代-乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]苯氨基]-8-氟-喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(500mg，0.65mmol，77％产率)。LC/MS(ESI)m/z:772.1[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.66-7.51(m,3H),7.08(s,1H),6.92-6.88(m,2H),6.80-6.71(m,1H),6.69-6.59(m,1H),4.27-4.18(m,3H),4.18-4.11(m,5H),4.08-4.04(m,1H),3.89-3.85(m,1H),3.83-3.79(m,1H),3.78-3.60(m,13H),1.54-1.48(m,9H),1.28(t,J＝7.2Hz,3H).

步骤6：4-(6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)-2-((4-((11-氧代-3,6,9,12-四氧杂十四烷酰基)氧基)苯基)氨基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向4-[7-溴-6-氯-2-[4-[2-[2-[2-(2-乙氧基-2-氧代-乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]苯氨基]-8-氟-喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(340mg，0.44mmol，1eq)和4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)萘-2-醇(143mg，0.53mmol，1.2eq)在四氢呋喃(10mL)中的溶液中，加入磷酸钾(1.5M，0.9mL，3eq)和[2-(2-氨基苯基)苯基]钯(1+)；二环己基-[2-(2,4,6-三异丙基苯基)苯基]磷烷；甲磺酸盐(37mg，0.04mmol，0.1eq)。将反应混合物在60℃下搅拌12小时。通过加入水(10mL)淬灭反应混合物，然后用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水(30mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过制备型TLC纯化(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)残余物。得到为白色固体的期望化合物4-[6-氯-2-[4-[2-[2-[2-(2-乙氧基-2-氧代-乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]苯氨基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(122mg，0.15mmol，33％产率)。LC/MS(ESI)m/z:834.4[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.76(d,J＝8.0Hz,1H),7.70(s,1H),7.54(d,J＝7.8Hz,2H),7.43(t,J＝7.6Hz,1H),7.38-7.31(m,2H),7.26-7.20(m,2H),7.15(s,1H),6.90(d,J＝8.8Hz,2H),4.17-4.09(m,5H),3.86(t,J＝4.4Hz,2H),3.80-3.60(m,16H),1.52(s,9H),1.33-1.22(m,3H).

步骤7：2-(2-(2-(2-(4-((4-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙酸的制备

向4-[6-氯-2-[4-[2-[2-[2-(2-乙氧基-2-氧代-乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]苯氨基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(180mg，0.21mmol，1eq)在四氢呋喃(5mL)和水(2mL)中的溶液中，加入氢氧化锂一水合物(18mg，0.43mmol，2eq)。将反应混合物在15℃下搅拌12小时。用1M盐酸调节残余物的pH＝4至5，然后用乙酸乙酯(30mL x 2)萃取。合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，以得到产物为黄色固体的化合物2-[2-[2-[2-[4-[[4-(4-叔丁氧基羰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氨基]苯氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酸(170mg，0.2mmol，92％产率，94％纯度)。.LC/MS(ESI)m/z:806.4[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.74(d,J＝7.2Hz,1H),7.66(s,1H),7.60-7.29(m,5H),7.10-6.96(m,1H),6.83(s,2H),4.07(d,J＝6.4Hz,2H),3.88-3.57(m,14H),2.33-2.24(m,2H),1.58-1.40(m,9H),1.01-0.78(m,4H).

步骤8：4-(6-氯-8-氟-2-((4-(((S)-13-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-14,14-二甲基-11-氧代-3,6,9-三氧杂-12-氮杂十五烷基)氧基)苯基)氨基)-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

向(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(94mg，0.21mmol，1eq)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的溶液中，加入N,N-二异丙基乙胺(82mg，0.63mmol，3eq)和2-[2-[2-[2-[4-[[4-(4-叔丁氧基羰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氨基]苯氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酸(170mg，0.21umol，1eq)、1-羟基苯并三唑(34mg，0.25mmol，1.2eq)，将反应混合物在15℃下搅拌0.15小时，然后向混合物中加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(49mg，0.25mmol，1.2eq)。将反应混合物在15℃下搅拌0.15小时。然后加热至30℃持续2小时。通过加入水(10mL)淬灭反应混合物，然后用水(30mL)稀释，过滤并用乙酸乙酯(40mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水(80mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过制备型TLC纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)残余物。得到为黄色固体的期望化合物4-[6-氯-8-氟-2-[4-[2-[2-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]苯氨基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(180mg，0.14mmol，65％产率，94％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:617.2[M/2+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.67(d,J＝4.4Hz,1H),7.74(dd,J＝3.2,8.4Hz,1H),7.69-7.60(m,3H),7.46-7.29(m,6H),7.25-7.09(m,2H),6.92(d,J＝9.2Hz,2H),5.06(dd,J＝6.8,11.6Hz,1H),4.88-4.75(m,1H),4.59-4.41(m,2H),4.21-4.11(m,2H),4.09-3.98(m,2H),3.96-3.86(m,1H),3.84-3.80(m,2H),3.77-3.55(m,16H),2.49(d,J＝8.8Hz,3H),2.10-1.97(m,1H),1.52(s,9H),1.44(d,J＝6.8Hz,3H),1.30-1.22(m,1H),1.04(d,J＝4.4Hz,9H),0.93-0.79(m,1H).

步骤9：(2S,4R)-1-((2S)-2-(叔丁基)-14-(4-((6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)苯氧基)-4-氧代-6,9,12-三氧杂-3-氮杂十四烷酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向4-[6-氯-8-氟-2-[4-[2-[2-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]苯氨基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(180mg，0.15mmol，1eq)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中加入氯化氢/二噁烷(4M，2mL，55eq)。将反应混合物在15℃下搅拌0.15小时。减压浓缩反应混合物以得到残余物。将乙腈添加到产物中，然后减压浓缩以得到产物。得到为黄色固体的期望化合物(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[2-[4-[[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氨基]苯氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(170mg，HCl)。LC/MS(ESI)m/z:567.3[M/2+1]⁺.

步骤10：(2S,4R)-1-((2S)-14-(4-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)苯氧基)-2-(叔丁基)-4-氧代-6,9,12-三氧杂-3-氮杂十四烷酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[2-[4-[[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氨基]苯氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(70mg，0.06mmol，1eq，HCl)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中，加入2,6-二甲基吡啶(64mg，0.6mmol，10eq)。将混合物在15℃下搅拌0.15小时，然后在-78℃下向混合物中加入丙-2-烯酰氯(5mg，0.06mmol，1eq)。将反应混合物在-78℃下搅拌0.15小时。通过加入水(10mL)淬灭反应混合物，然后用水(20mL)稀释，并用二氯甲烷(20mL x 3)萃取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到残余物。通过制备型HPLC纯化残余物。得到为黄色固体的期望化合物(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[2-[4-[[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氨基]苯氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-羧酰胺(20.3mg，0.016mmol，26％产率，94％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:593.9[M/2+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.53(s,1H),8.97(s,1H),8.41(d,J＝7.6Hz,1H),8.32-8.25(m,1H),7.92-7.68(m,4H),7.49-7.31(m,6H),7.30-7.19(m,3H),7.08(d,J＝2.1Hz,1H),6.92-6.78(m,3H),6.24-6.10(m,1H),5.80-5.70(m,1H),4.95-4.81(m,1H),4.54(d,J＝9.6Hz,1H),4.44(t,J＝8.0Hz,1H),4.28(s,1H),4.04(t,J＝3.6Hz,2H),3.95(s,2H),3.88-3.69(m,9H),3.66-3.51(m,11H),2.44(s,3H),2.10-1.98(m,1H),1.82-1.71(m,1H),1.44-1.27(m,3H),0.93(s,9H).

(2S,4R)-N-((1R)-15-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-12-甲基-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-13-氧代-3,6,9-三氧杂-12-氮杂十五烷基)-4-羟基-1-((R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰胺(示例性化合物487)的示例性合成

步骤1：(2S,4R)-4-羟基-1-((R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)-N-((R)-13-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-5,8,11-三氧杂-2-氮杂十三烷-13-基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向N-[2-[2-[2-[(2R)-2-[[(2S,4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]-2-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(28mg，0.04mmol，1eq)在二氯甲烷(1mL)中的溶液中，加入盐酸/二噁烷(4M，1mL，108.28eq)，将混合物在20℃下搅拌0.5小时。浓缩混合物以得到产物。得到为淡黄色油的化合物(2S,4R)-4-羟基-N-[(1R)-2-[2-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羧酰胺。LC/MS(ESI)m/z:658.2[M+1]⁺.

步骤2：(2S,4R)-N-((1R)-15-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-12-甲基-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-13-氧代-3,6,9-三氧杂-12-氮杂十五烷基)-4-羟基-1-((R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向(2S,4R)-4-羟基-N-[(1R)-2-[2-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羧酰胺(26mg，0.04mmol，1eq，盐酸盐)、3-[[4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酸(24mg，0.04mmol，1.2eq)、1-羟基苯并三唑(7mg，0.055mmol，1.5eq)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺盐酸盐(11mg，0.055mmol，1.5eq)在N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中的溶液中，加入二异丙基乙胺(14mg，0.11mmol，3eq)。将反应溶液在20℃下搅拌15小时。通过制备型HPLC纯化残余物，除去乙腈级分，并将残余物冻干以得到产物。得到为白色固体的(2S,4R)-N-[(1R)-2-[2-[2-[2-[3-[[4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酰基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羧酰胺(6.5mg，0.005mmol，14.7％产率，97.9％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:1177.4[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.90-8.79(m,1H),7.79(s,1H),7.72(d,J＝8.3Hz,1H),7.41-7.29(m,5H),7.25-7.11(m,3H),7.03-6.98(m,1H),6.22-6.16(m,1H),5.06-4.97(m,1H),4.71-4.55(m,3H),4.45-4.29(m,1H),3.81(br dd,J＝8.7,19.6Hz,12H),3.62-3.48(m,12H),3.14-3.07(m,2H),2.91(br s,4H),2.48-2.33(m,4H),2.24-2.14(m,7H),1.99-1.86(m,1H),1.06-0.91(m,3H),0.87-0.74(m,3H).

(2S,4R)-N-((1R)-15-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-12-甲基-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-13-氧代-3,6,9-三氧杂-12-氮杂十五烷基)-4-羟基-1-((S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰胺(示例性化合物488)的示例性合成

步骤1：(2S,4R)-4-羟基-1-((S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)-N-((R)-13-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-5,8,11-三氧杂-2-氮杂十三烷-13-基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向N-[2-[2-[2-[(2R)-2-[[(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]-2-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(30mg，0.04mmol，1eq)在二氯甲烷(1mL)中的溶液中，加入盐酸/二噁烷(4M，1mL，101.06eq)，将混合物在20℃下搅拌0.5小时。浓缩混合物以得到产物。得到为淡黄色油的(2S,4R)-4-羟基-N-[(1R)-2-[2-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]-1-[(2S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羧酰胺。LC/MS(ESI)m/z:658.2[M+1]⁺.

步骤2：(2S,4R)-N-((1R)-15-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氨基)-12-甲基-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-13-氧代-3,6,9-三氧杂-12-氮杂十五烷基)-4-羟基-1-((S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向(2S,4R)-4-羟基-N-[(1R)-2-[2-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]-1-[(2S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羧酰胺(27mg，0.04mmol，1eq，盐酸盐)、3-[[4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酸(25mg，0.046mmol，1.2eq)、1-羟基苯并三唑(8mg，0.058mmol，1.5eq)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺盐酸盐(11mg，58.33umol，1.5eq)在N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中的溶液中，加入二异丙基乙胺(15mg，0.12mmol，3eq)。将反应溶液在20℃下搅拌15小时。通过制备型HPLC纯化残余物，除去乙腈级分，并将残余物冻干以得到产物。得到为白色固体的(2S,4R)-N-[(1R)-2-[2-[2-[2-[3-[[4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氨基]丙酰基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]-4-羟基-1-[(2S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羧酰胺(7.9mg，0.006mmol，17％产率，98.7％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:1177.4[M+1]⁺；¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.84(d,J＝1.2Hz,1H),7.80(br s,1H),7.73(br d,J＝8.6Hz,1H),7.42-7.33(m,5H),7.25-7.13(m,3H),7.03-6.98(m,1H),6.21-6.18(m,1H),5.06(br s,1H),4.69-4.52(m,3H),4.44-4.33(m,1H),3.84-3.71(m,12H),3.62-3.49(m,12H),3.16-3.07(m,2H),2.94-2.70(m,4H),2.45-2.37(m,4H),2.23-2.14(m,7H),2.01-1.88(m,1H),1.04(d,J＝6.5Hz,3H),0.84(brd,J＝6.8Hz,3H).

(2S,4R)-1-((2S)-2-(3-(4-(2-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)(3-(二甲基氨基)-3-氧代丙基)氨基)乙氧基)丁氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-羧酰胺(示例性化合物495)的示例性合成

步骤1：((2-(4-溴丁氧基)乙氧基)甲基)苯的制备

向2-苄氧基乙醇(20g，131.41mmol，18.69mL，1eq)在甲苯(150mL)和水(150mL)中的溶液中，加入氢氧化钠(42.05g，1.05mol，8eq)和四丁基硫酸氢铵(44.62g，131.41mmol，1eq)和1,4-二溴丁烷(42.56g，197.11mmol，23.78mL，1.5eq)。将混合物在20℃下搅拌16小时。加入盐酸(1N)以酸化水相(PH＝4)，并用乙酸乙酯(100mL x4)萃取溶液。将合并的有机层干燥，过滤并浓缩以得到残余物。通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝50/1至20/1)残余物。得到为无色油的化合物2-(4-溴丁氧基)乙氧基甲基苯(20g，69.64mmol，52％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ1.70-1.80(m,2H),1.92-2.01(m,2H),3.45(t,J＝6.8Hz,2H),3.52(t,J＝6.4Hz,2H),3.61-3.65(m,4H),4.59(s,2H),7.26-7.32(m,1H),7.36(d,J＝4.8Hz,4H).

步骤2：2-(3-(4-(2-(苄氧基)乙氧基)丁氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯的制备

将2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基-丁酸甲酯(3g，15.06mmol，1eq)、2-(4-溴丁氧基)乙氧基甲基苯(4.33g，15.06mmol，1eq)、碳酸钾(4.16g，30.12mmol，2eq)在N,N-二甲基甲酰胺(40mL)中的混合物脱气并用氮气吹扫(3次)，然后将混合物在氮气气氛下于80℃搅拌2小时。将残余物用水(200mL)稀释，并用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，并经无水硫酸钠干燥，过滤，并减压浓缩以得到残余物。通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10/1至1/1)残余物。得到为无色油的化合物2-[3-[4-(2-苄氧基乙氧基)丁氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸甲酯(4.2g，10.36mmol，68％产率)。¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)δ0.91(d,J＝6.4Hz,3H),0.99(d,J＝6.4Hz,3H),1.67-1.77(m,2H),1.81-1.90(m,2H),2.35(dquin,J＝8.4,6.4,6.4,6.4,6.4Hz,1H),3.50-3.59(m,3H),3.60-3.65(m,4H),3.71(s,3H),4.21(t,J＝6.4Hz,2H),4.55(s,2H),6.00(s,1H),7.24-7.31(m,1H),7.32-7.37(m,3H).

步骤3：2-(3-(4-(2-羟基乙氧基)丁氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯的制备

向2-[3-[4-(2-苄氧基乙氧基)丁氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸甲酯(4.2g，10.36mmol，1eq)在1,2-二氯乙烷(80mL)、水(8mL)中的溶液中，加入二氯二氰基苯醌(11.76g，51.79mmol，5eq)。将混合物在20℃下搅拌1小时。通过在25℃下添加饱和碳酸氢钠溶液(150mL)淬灭反应混合物，然后用水(50mL)稀释。分离有机相，并用乙酸乙酯(50mL x4)萃取。合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并减压浓缩以得到残余物。通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10/1至1/1)残余物。得到为紫色液体的化合物2-[3-[4-(2-羟基乙氧基)丁氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸甲酯(2.7g，8.56mmol，82％产率)。¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)δ0.85-0.95(m,3H),0.95-1.04(m,3H),1.66-1.78(m,2H),1.79-1.92(m,2H),2.25-2.43(m,1H),3.46-3.60(m,5H),3.65(br d,J＝3.6Hz,2H),3.72(br d,J＝1.2Hz,3H),4.12-4.28(m,2H),6.00(s,1H).

步骤4：2-(3-(4-(2-溴乙氧基)丁氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯的制备

向2-[3-[4-(2-羟基乙氧基)丁氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸甲酯(2.7g，8.56mmol，1eq)在四氢呋喃(60mL)中的溶液中，加入四溴化碳(8.52g，25.68mmol，3eq)，然后在0℃下滴加于四氢呋喃(20mL)中的三苯基磷(6.74g，25.68mmol，3eq)。将所得混合物在25℃下搅拌10小时。减压浓缩反应混合物以除去溶剂。通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝20/1至5/1)残余物。得到为黄色油的化合物2-[3-[4-(2-溴乙氧基)丁氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸甲酯(3.1g，8.20mmol，95％产率)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ0.93(d,J＝6.8Hz,3H),1.00(d,J＝6.4Hz,3H),1.70-1.78(m,2H),1.83-1.91(m,2H),2.30-2.40(m,1H),3.44-3.50(m,3H),3.55(t,J＝6.4Hz,2H),3.73(s,3H),3.73-3.78(m,2H),4.24(t,J＝6.4Hz,2H),5.87(s,1H).

步骤5：2-(3-(4-(2-((叔丁氧基羰基)(3-(二甲基氨基)-3-氧代丙基)氨基)乙氧基)丁氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯的制备

向2-[3-[4-(2-溴乙氧基)丁氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸甲酯(1.5g，3.97mmol，1eq)和3-氨基-N,N-二甲基-丙酰胺(750mg，4.91mmol，1.24eq，盐酸盐)在乙醇(40mL)中的溶液中，加入N,N-二异丙基乙胺(2.60g，20.12mmol，3.50mL，5.07eq)。将所得混合物在80℃下搅拌12小时。浓缩混合物以得到残余物。得到为黄色油的化合物2-[3-[4-[2-[[3-(二甲基氨基)-3-氧代-丙基]氨基]乙氧基]丁氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸甲酯(1g)。LC/MS(ESI)m/z:414.3[M+1]⁺.在0℃下向2-[3-[4-[2-[[3-(二甲基氨基)-3-氧代-丙基]氨基]乙氧基]丁氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸甲酯(1g，2.42mmol，1eq)和N,N-二异丙基乙胺(1.25g，9.67mmol，1.68mL，4eq)在二氯甲烷(40mL)中的溶液中，加入二碳酸二叔丁酯(1.06g，4.84mmol，1.11mL，2eq)。将反应混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物倒入冰水(60mL)中并搅拌5分钟。用二氯甲烷(40mL x 3)萃取水相。合并的有机相用盐水(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物。得到为无色油的化合物2-[3-[4-[2-[叔丁氧基羰基-[3-(二甲基氨基)-3-氧代-丙基]氨基]乙氧基]丁氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸甲酯(0.51g，992.95umol，41％产率)。LC/MS(ESI)m/z:514.2[M+1]⁺.

步骤6：2-(3-(4-(2-((叔丁氧基羰基)(3-(二甲基氨基)-3-氧代丙基)氨基)乙氧基)丁氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸的制备

向2-[3-[4-[2-[叔丁氧基羰基-[3-(二甲基氨基)-3-氧代-丙基]氨基]乙氧基]丁氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸甲酯(450mg，876.13umol，1eq)在四氢呋喃(8mL)和甲醇(8mL)和水(8mL)中的溶液中，加入氢氧化锂一水合物(110.30mg，2.63mmol，3eq)。将所得混合物在25℃下搅拌12小时。在0℃下用稀盐酸溶液(1N)将反应混合物的pH调节至5，并用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水(10mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩以得到产物。得到为无色油的化合物2-[3-[4-[2-[叔丁氧基羰基-[3-(二甲基氨基)-3-氧代-丙基]氨基]乙氧基]丁氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸(450mg)。LC/MS(ESI)m/z:500.3[M+1]⁺.

步骤7：(3-(二甲基氨基)-3-氧代丙基)(2-(4-((5-((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)异噁唑-3-基)氧基)丁氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯的制备

向2-[3-[4-[2-[叔丁氧基羰基-[3-(二甲基氨基)-3-氧代-丙基]氨基]乙氧基]丁氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸(400mg，800.65umol，1eq)和[二甲基氨基(三唑并[4,5-b]吡啶-3-基氧基)亚甲基]-二甲基-铵鎓；六氟磷酸盐(921mg，2.42mmol，3.03eq)在N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中的溶液中，加入(2S,4R)-4-羟基-N-[[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-羧酰胺(255mg，803.39umol，1eq)和N,N-二异丙基乙胺(420mg，3.25mmol，566.04uL，4.06eq)。将所得混合物在25℃下搅拌12小时。将混合物倒入冰水(40mL)中并搅拌5分钟。用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取水相。合并的有机相用盐水(15mL x 2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过柱色谱法纯化(二氯甲烷/甲醇＝20/1至10/1)残余物。得到为灰白色固体的化合物N-[3-(二甲基氨基)-3-氧代-丙基]-N-[2-[4-[5-[1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基丁氧基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(650mg，748.45umol，93％产率，92％纯度)。LC/MS(ESI)m/z:799.4[M+1]⁺.

步骤8：(3-(二甲基氨基)-3-氧代丙基)(2-(4-((5-((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)异噁唑-3-基)氧基)丁氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯的制备

通过SFC分离N-[3-(二甲基氨基)-3-氧代-丙基]-N-[2-[4-[5-[1-[(2S)-4-羟基-2-[[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基丁氧基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(630.00mg，788.50umol，1eq)。减压浓缩反应混合物以得到残余物。得到为浅黄色固体的化合物N-[3-(二甲基氨基)-3-氧代-丙基]-N-[2-[4-[5-[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基丁氧基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(0.3g，364.21umol，46％产率，97％纯度)。

步骤9：(2S,4R)-1-((S)-2-(3-(4-(2-((3-(二甲基氨基)-3-氧代丙基)氨基)乙氧基)丁氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

在25℃下搅拌N-[3-(二甲基氨基)-3-氧代-丙基]-N-[2-[4-[5-[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基丁氧基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(150mg，187.74umol，1eq)和氯化氢/二噁烷(4M，10mL)的混合物3小时。浓缩混合物以得到产物。得到为浅黄色固体的化合物(2S,4R)-1-[(2S)-2-[3-[4-[2-[[3-(二甲基氨基)-3-氧代-丙基]氨基]乙氧基]丁氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-羧酰胺(130mg，176.79umol，94％产率，盐酸盐)。LC/MS(ESI)m/z:699.3[M+1]⁺.

步骤10：(2S,4R)-1-((2S)-2-(3-(4-(2-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)(3-(二甲基氨基)-3-氧代丙基)氨基)乙氧基)丁氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-羧酰胺的制备

向1-[4-[2,6-二氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-基]乙酮(40mg，82.42umol，1eq)和(2S,4R)-1-[(2S)-2-[3-[4-[2-[[3-(二甲基氨基)-3-氧代-丙基]氨基]乙氧基]丁氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-羧酰胺(130mg，176.79umol，2.15eq,盐酸盐)在二噁烷(1mL)中的溶液中，加入N,N-二异丙基乙胺(159.78mg，1.24mmol，215.33uL，15eq)。将混合物在100℃下搅拌10小时。浓缩混合物以得到残余物。通过半制备型反相HPLC纯化残余物。得到为黄色固体的化合物(2S,4R)-1-[(2S)-2-[3-[4-[2-[[4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]-[3-(二甲基氨基)-3-氧代-丙基]氨基]乙氧基]丁氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-羧酰胺(29.1mg，24.09umol，29％产率，95％纯度)。.LC/MS(ESI)m/z:1169.5[M+23]⁺；¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)δ0.57-0.65(m,1H),0.76(d,J＝6.4Hz,1H),0.85-0.92(m,2H),1.03(d,J＝6.4Hz,2H),1.54-1.79(m,4H),2.01-2.10(m,1H),2.14(s,3H),2.19-2.27(m,1H),2.27-2.38(m,1H),2.40-2.47(m,3H),2.76-2.93(m,5H),2.99-3.16(m,3H),3.42-3.49(m,2H),3.63-3.81(m,12H,)3.84-4.15(m,6H),4.34-4.42(m,2H),4.47(br s,1H),4.54-4.69(m,2H),5.84-5.98(m,1H),6.97-7.05(m,1H),7.10-7.19(m,1H),7.23(br d,J＝2.4Hz,2H),7.30-7.40(m,4H),7.41-7.50(m,1H),7.72(d,J＝8.4Hz,1H),7.75-7.80(m,1H),8.79-8.89(m,1H).

蛋白质水平控制

本说明书还提供了用于控制细胞的蛋白质水平的方法。这是基于使用本文所述的化合物，已知其与特定靶蛋白相互作用，使得靶蛋白的体内降解将导致控制生物系统中的蛋白质量，优选特定的治疗益处。

以下实例用于帮助描述本公开，但不应被视为以任何方式限制本公开。

本发明的具体实施例

本公开包括以下具体实施例。这些下面的实施例可以包括在指定的前述实施例中所记载的所有特征，在适当时，以下实施例还可包括(包含性或替代性地)在任何前述实施例中记载的特征，包括在内或替代地(例如，第八实施例可包括在记载的第一实施例中记载的特征，和/或第二至第七实施例中的任一个的特征)。

在某些实施例中，本说明书提供了以下示例性KRas双官能分子(表4和5的示例性化合物1-10以及表6、8、10和12的示例性化合物11-249、254-454和458-573)，包括其盐、前药、多晶型物、类似物、衍生物和氘化形式。

在本文所述的任何方面或实施例中，本公开的双官能化合物包括来自表1的PTM(例如，PTM-1、PTM-2、PTM-3、PTM-4、PTM-5或PTM-6)、来自表2的接头(例如，L-1、L-2、L-3、L-4、L-5或L-6)和来自表3的ULM(例如，ULM-1、ULM-2、ULM-3、ULM-4或ULM-5)，包括其盐、前药、多晶型物、类似物、衍生物和氘化形式：

表1.本公开的示例性PROTAC的示例性PTM

表2.本公开的示例性PROTAC的示例性接头

表3.本公开的示例性PROTAC的示例性ULM

在本文所述的某些示例性实施例中，提供了具有选自表2的接头的化合物(例如，L-1、L-2、L-3、L-4、L-5或L-6)，所述接头偶联至来自表1的PTM(例如，PTM-1、PTM-2、PTM-3、PTM-4、PTM-5或PTM-6)和来自表3的ULM(例如，ULM-1、ULM-2、ULM-3、ULM-4或ULM-5)。例如，表1的PTM、表2的接头和表3的ULM可以任何期望组合合并，例如，PTM-1/L-1/ULM-1或PTM-2/L-1/ULM-1等，从而形成本公开的示例性化合物。

本公开的一个方面提供了具有以下化学结构的双官能化合物：

ULM―L―PTM，

或其药学上可接受的盐、对映异构体、立体异构体、溶剂化物、多晶型物或前药，其中：ULM是结合E3泛素连接酶的小分子E3泛素连接酶结合部分；PTM是包含Kirsten大鼠肉瘤蛋白(KRas)靶向部分的小分子；并且L是连接ULM和PTM的键或化学连接部分。

在本文所述的任何方面或实施例中，靶向E3泛素连接酶的E3泛素连接酶结合部分选自由以下组成的群组：Von Hippel-Lindau(VLM)、cereblon(CLM)、小鼠双微体2同源物(MLM)和IAP(ILM)。

在本文所述的任何方面或实施例中，PTM由以下表示：

其中：

是芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基；

X_PTM是C或N；

W_PTM选自由以下组成的群组：任选取代的C3-C6环烷基和任选取代的C3-C6杂烷基、任选取代的C3-C6杂环烷基、任选取代的芳基(例如，任选取代的C5-C7芳基)、任选取代的杂芳基(例如，任选取代的C5-C7杂芳基)；

R_PTM1A是NR_PTM9R_PTM10、OR_PTM9R_PTM10、H、任选取代的烷基、任选取代的烷氧基、任选取代的C3-C6环烷基、任选取代的O-(C3-C6环烷基)、任选取代的-O-C_1-4烷基-C_3-6环烷基、任选取代的C3-C6杂烷基、任选取代的O-(C3-C6杂烷基)、任选取代的O-C_1-4烷基-C_3-6杂烷基、任选取代的O-C_1-4烷基-C_3-6杂环烷基、任选取代的芳基(例如，任选取代的C5-C7芳基)、任选取代的O-芳基(例如，任选取代的O-(C5-C7芳基))、任选取代的杂芳基(例如，任选取代的C5-C7杂芳基)、任选取代的O-杂芳基(例如，任选取代的O-(C5-C7杂芳基))、任选取代的

(例如，任选被至少一个烷基取代，诸如*碳可以任选被烷基取代)、任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

(例如，任选被至少一个烷基取代，诸如*碳可以任选被烷基取代)、任选取代的

(例如，任选被至少一个烷基取代，诸如*碳可以任选被烷基取代)、任选取代的

(例如，任选被至少一个烷基取代，诸如*碳可以任选被烷基取代)、任选取代的

(例如，任选被至少一个烷基取代，诸如*碳可以任选被烷基取代)、任选取代的

(例如，任选被至少一个烷基取代，诸如*碳可以任选被烷基取代)、任选取代的

(例如，任选被至少一个烷基取代，诸如*碳可以任选被烷基取代)，其中N*是接头(L)的杂环烷基的N原子；

R_PTM1B是NR_PTM9R_PTM10、OR_PTM9R_PTM10、H、任选取代的烷基、任选取代的O-烷基、任选取代的C3-C6环烷基、任选取代的O-(C3-C6环烷基)、任选取代的-O-C_1-4烷基-C_3-6环烷基、任选取代的C3-C6杂烷基、任选取代的O-(C3-C6杂烷基)、任选取代的O-C_1-4烷基-C_3-6杂烷基、任选取代的芳基(例如，任选取代的C5-C7芳基)、任选取代的O-芳基(例如，任选取代的O-(C5-C7芳基))、任选取代的杂芳基(例如，任选取代的C5-C7杂芳基)、任选取代的O-杂芳基(例如，任选取代的O(C5-C7杂芳基))、任选取代的

(例如，任选被至少一个烷基取代，例如*碳可以任选被烷基取代)、任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

R_PTM9和R_PTM10各自独立地是H、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的脂族胺、任选取代的脂族酰胺；

R_PTM2是H、(C＝O)R_PTM2'、任选取代的直链或支链烷基；

R_PTM2'是任选取代的直链或支链烷基、任选取代的烯烃、-N(R_PTM8)₂或-C(OH)₂；

R_PTM3是烷基、烷氧基、苯基或萘，各自独立地被OH、H、卤素取代；

R_PTM4A是OH、H、卤素、任选取代的直链或支链C1-C6烷基；

R_PTM4B是OH、H、卤素、任选取代的直链或支链C1-C6烷基；

R_PTM5选自由以下组成的群组：任选取代的芳基、任选取代的联芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的联杂芳基、任选取代的C3-C6环烷基、任选取代的C3-C6环杂烷基、卤素、H、任选取代的直链或支链烷基(例如，任选取代的直链或支链C1-C6烷基)、OH和烷氧基；

R_PTM8是H或烷基(例如，C1烷基、C2烷基、C3烷基或C4烷基)；

t是0、1、2、3、4、5、6；并且

表示接头、ULM、ULM’、CLM、CLM’、VLM、VLM’、ILM、ILM’、MLM、MLM’或其组合中的至少一个的连接位点。

在本文所述的任何方面或实施例中，PTM由以下表示：

其中：

X_PTM1是NH或O；

R_PTM6是芳基、杂芳基、

其中N*是接头(L)的杂环烷基(例如，C4-C8杂环烷基)的N原子；

R_PTM7是H、芳基、O-芳基、杂芳基、O-杂芳基、

R_PTM9是H、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的脂族胺、任选取代的脂族酰胺任选取代的

(例如，任选被至少一个烷基取代，诸如*碳可以任选被烷基取代)；

可以是单键或双键；并且

表示接头、ULM、ULM’、CLM、CLM’、VLM、VLM’、ILM、ILM’、MLM、MLM’或其组合中的至少一个的连接位点。

在本文所述的任何方面或实施例中，PTM由以下化学结构表示：

在本文所述的任何方面或实施例中，ULM是具有由以下表示的化学结构的VonHippel-Lindau(VHL)连接酶结合部分(VLM)：

其中：

X¹、X²各自独立地选自以下群组：键、O、NR^Y3、CR^Y3R^Y4、C＝O、C＝S、SO和SO₂；

R^Y3、R^Y4各自独立地选自以下群组：H、任选被1个或多个卤素取代的直链或支链C_1-6烷基、任选被0-3个R^P基团取代的C_1-6烷氧基；

R^P是0、1、2或3个基团，各自独立地选自以下群组：H、卤素、-OH、C_1-3烷基、C＝O；

W³选自任选取代的T、任选取代的–T-N(R^1aR^1b)X³、任选取代的–T-N(R^1aR^1b)、任选取代的–T-芳基、任选取代的-T-杂芳基、任选取代的-T-杂环基、任选取代的-T-双杂环基、任选取代的-NR¹-T-芳基、任选取代的-NR¹-T-杂芳基或任选取代的-NR¹-T-杂环基；

X³是C＝O、R¹、R^1a、R^1b；

R¹、R^1a、R^1b各自独立地选自由以下组成的群组：H、任选被1个或多个卤素或-OH基团取代的直链或支链C₁-C₆烷基、R^Y3C＝O、R^Y3C＝S、R^Y3SO、R^Y3SO₂、N(R^Y3R^Y4)C＝O、N(R^Y3R^Y4)C＝S、N(R^Y3R^Y4)SO和N(R^Y3R^Y4)SO₂；

T选自以下群组：任选取代的烷基、–(CH₂)_n-基团，其中亚甲基中的每一个任选被选自以下群组的一个或两个取代基取代：卤素、甲基、任选取代的烷氧基、任选被1个或多个卤素取代的直链或支链C₁-C₆烷基、C(O)NR¹R^1a或NR¹R^1a，或者R¹和R^1a连接形成任选取代的杂环或-OH基团或任选取代的氨基酸侧链；并且

n是0-6，

W⁴是

R_14a、R_14b各自独立地选自以下群组：H、卤代烷基或任选取代的烷基；

W⁵选自以下群组：任选取代的苯基或任选取代的5-10元杂芳基(例如，任选被一个或多个[诸如1、2、3、4或5个]卤素、CN、任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基、任选取代的烷氧基、羟基或任选取代的卤代烷氧基取代)，

R₁₅选自以下群组：H、卤素、CN、OH、NO₂、NR_14aR_14b、OR_14a、CONR_14aR_14b、NR_14aCOR_14b、SO₂NR_14aR_14b、NR_14aSO₂R_14b、任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基、任选取代的卤代烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的环烷基或任选取代的环杂烷基；

并且其中虚线表示至少一个PTM、另一个ULM(ULM’)或偶联至少一个PTM或ULM’或二者的化学接头部分与ULM的连接位点。

在本文所述的任何方面或实施例中，ULM是具有由以下表示的化学结构的VonHippel-Lindau(VHL)连接酶结合部分(VLM)：

其中：

W³选自以下群组：任选取代的芳基、任选取代的杂芳基或

R₉和R₁₀独立地是氢、任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任选取代的羟基烷基、任选取代的杂芳基或卤代烷基，或者R₉、R₁₀和与它们连接的碳原子形成任选取代的环烷基；

R₁₁选自以下群组：任选取代的杂环基、任选取代的烷氧基、任选取代的杂芳基、任选取代的芳基、

R₁₂选自以下群组：H或任选取代的烷基；

R₁₃选自以下群组：H、任选取代的烷基、任选取代的烷基羰基、任选取代的(环烷基)烷基羰基、任选取代的芳烷基羰基、任选取代的芳基羰基、任选取代的(杂环基)羰基或任选取代的芳烷基；

R_14a、R_14b各自独立地选自以下群组：H、卤代烷基或任选取代的烷基；

W⁵选自以下群组：任选取代的苯基或任选取代的5-10元杂芳基(例如，任选被一个或多个[例如1、2、3、4或5个]卤素、CN、任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基、任选取代的烷氧基、羟基或任选取代的卤代烷氧基取代)；

R₁₅选自以下群组：H、卤素、CN、OH、NO₂、NR_14aR_14b、OR_14a、CONR_14aR_14b、NR_14aCOR_14b、SO₂NR_14aR_14b、NR_14aSO₂R_14b、任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基、任选取代的卤代烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的环烷基或任选取代的环杂烷基；

每个R₁₆独立地选自以下群组：卤素、CN、任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基、任选取代的烷氧基、羟基或任选取代的卤代烷氧基；

o是0、1、2、3或4；

R₁₈独立地选自以下群组：卤素、任选取代的烷氧基、氰基、任选取代的烷基、卤代烷基、卤代烷氧基或接头；并且

p是0、1、2、3或4，并且其中虚线表示至少一个PTM、另一个ULM(ULM’)或偶联至少一个PTM或ULM’或二者的化学接头部分与ULM的连接位点。

在本文所述的任何方面或实施例中，ULM具有选自以下群组的化学结构：

其中：

R₁是H、乙基、异丙基、叔丁基、仲丁基、环丙基、环丁基、环戊基或环己基；任选取代的烷基、任选取代的羟基烷基、任选取代的杂芳基或卤代烷基；

R_14a是H、卤代烷基、任选取代的烷基、甲基、氟甲基、羟基甲基、乙基、异丙基或环丙基；

R₁₅选自由以下组成的群组：H、卤素、CN、OH、NO₂、任选取代的杂芳基、任选取代的芳基、任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基、任选取代的卤代烷氧基、任选取代的环烷基或任选取代的环杂烷基；

X是C、CH₂或C＝O

R₃不存在或为任选取代的5或6元杂芳基；并且

其中虚线表示至少一个PTM、另一个ULM(ULM’)或偶联至少一个PTM或ULM’或二者的化学接头部分与ULM的连接位点。

在本文所述的任何方面或实施例中，ULM包括根据以下化学结构的基团：

其中：

ULM-g的R^1’是任选取代的C₁-C₆烷基、任选取代的-(CH₂)_nOH、任选取代的-(CH₂)_nSH、任选取代的(CH₂)_n-O-(C₁-C₆)烷基、含有环氧化物部分WCOCW的任选取代的(CH₂)_n-WCOCW-(C₀-C₆)烷基，其中每个W独立地是H或C₁-C₃烷基、任选取代的-(CH₂)_nCOOH、任选取代的-(CH₂)_nC(O)-(C₁-C₆烷基)、任选取代的-(CH₂)_nNHC(O)-R₁、任选取代的-(CH₂)_nC(O)-NR₁R₂、任选取代的-(CH₂)_nOC(O)-NR₁R₂、-(CH₂O)_nH、任选取代的-(CH₂)_nOC(O)-(C₁-C₆烷基)、任选取代的-(CH₂)_nC(O)-O-(C₁-C₆烷基)、任选取代的-(CH₂O)_nCOOH、任选取代的-(OCH₂)_nO-(C₁-C₆烷基)、任选取代的-(CH₂O)_nC(O)-(C₁-C₆烷基)、任选取代的-(OCH₂)_nNHC(O)-R₁、任选取代的-(CH₂O)_nC(O)-NR₁R₂、-(CH₂CH₂O)_nH、任选取代的-(CH₂CH₂O)_nCOOH、任选取代的-(OCH₂CH₂)_nO-(C₁-C₆烷基)、任选取代的-(CH₂CH₂O)_nC(O)-(C₁-C₆烷基)、任选取代的-(OCH₂CH₂)_nNHC(O)-R₁、任选取代的-(CH₂CH₂O)_nC(O)-NR₁R₂、任选取代的-SO₂R_S、任选取代的S(O)R_S、NO₂、CN或卤素(F、Cl、Br、I，优选F或Cl)；

ULM-g的R₁和R₂各自独立地是H或可任选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团(优选氟)取代的C1-C6烷基；

ULM-g的R_S是C₁-C₆烷基、任选取代的芳基、杂芳基或杂环基或-(CH₂)_mNR₁R₂基团；

ULM-g的X和X’各自独立地是C═O、C═S、-S(O)、S(O)₂(优选X和X’都是C═O)；

ULM-g的R^2’是任选取代的-(CH₂)_n-(C＝O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w烷基、任选取代的-(CH₂)_n-(C＝O)_u(NR₁)_v(SO₂)_wNR_1NR_2N基团、任选取代的-(CH₂)_n-(C＝O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-芳基、任选取代的-(CH₂)_n-(C＝O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-杂芳基、任选取代的-(CH₂)_n-(C＝O)_vNR₁(SO₂)_w-杂环、任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-烷基、任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-NR_1NR_2N、任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-NR₁C(O)R_1N、任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-(C＝O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-芳基、任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-芳基-杂芳基、任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-(C＝O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-杂芳基或任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-(C＝O)_vNR₁(SO₂)_w-杂环、任选取代的-X^R2’-烷基；任选取代的-X^R2’-芳基；任选取代的-X^R2’-杂芳基；任选取代的-X^R2’-杂环基；任选取代的；

ULM-g的R^3’是任选取代的烷基、任选取代的–(CH₂)_n-(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-烷基、任选取代的–(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-NR_1NR_2N、任选取代的–(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-NR₁C(O)R_1N、任选取代的–(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-C(O)NR₁R₂、任选取代的–(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-芳基、任选取代的–(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-杂芳基、任选取代的–(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-杂环、任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-烷基、任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-NR_1NR_2N、任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-NR₁C(O)R_1N、任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-芳基、任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-杂芳基、任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-杂环、任选取代的-O-(CH₂)n-(C＝O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-烷基、任选取代的-O-(CH₂)n-(C＝O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-NR_1NR_2N、任选取代的-O-(CH₂)n-(C＝O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-NR₁C(O)R_1N、任选取代的-O-(CH₂)n-(C＝O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-芳基、任选取代的-O-(CH₂)_n-(C＝O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-杂芳基或任选取代的-O-(CH₂)_n-(C＝O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-杂环；-(CH₂)_n-(V)_n’-(CH₂)_n-(V)_n’-烷基、任选取代的-(CH₂)_n-(V)_n’-(CH₂)_n-(V)_n’-芳基、任选取代的–(CH₂)_n-(V)_n’-(CH₂)_n-(V)_n’-杂芳基、任选取代的–(CH₂)_n-(V)_n’-(CH₂)_n-(V)_n’-杂环’基、任选取代的-(CH₂)_n-N(R_1’)(C＝O)_m’-(V)_n’-烷基、任选取代的-(CH₂)_n-N(R_1’)(C＝O)_m’-(V)_n’-芳基、任选取代的-(CH₂)_n-N(R_1’)(C＝O)_m’-(V)_n’-杂芳基、任选取代的-(CH₂)_n-N(R_1’)(C＝O)_m’-(V)_n’-杂环基、任选取代的-X^R3’-烷基；任选取代的-X^R3’-芳基；任选取代的-X^R3’-杂芳基；任选取代的-X^R3’-杂环基；任选取代的；

ULM-g的R_1N和R_2N各自独立地是H、任选被一个或两个羟基和最多三个卤素基团取代的C₁-C₆烷基或任选取代的-(CH₂)_n-芳基、-(CH₂)_n-杂芳基或-(CH₂)_n-杂环基；

ULM-g的V是O、S或NR₁；

ULM-g的R₁与上述相同；

ULM-g的R¹和R_1’各自独立地是H或C₁-C₃烷基；

ULM-g的X^R2’和X^R3’各自独立地是任选取代的-(CH₂)_n-、-(CH₂)_n-CH(X_v)＝CH(X_v)-(顺式或反式)、-(CH₂)_n-CH≡CH-、-(CH₂CH₂O)_n-或C₃-C₆环烷基，其中X_v是H、卤素或任选取代的C₁-C₃烷基；

ULM-g的每个m独立地是0、1、2、3、4、5、6；

ULM-g的每个m’独立地是0或1；

ULM-g的每个n独立地是0、1、2、3、4、5、6；

ULM-g的每个n’独立地是0或1；

ULM-g的每个u独立地是0或1；

ULM-g的每个v独立地是0或1；

ULM-g的每个w独立地是0或1；并且

当PTM不是ULM’时，ULM-g的R^1’、R^2’、R^3’、X和X’中的任何一个或多个任选被修饰以通过接头基团共价键合至PTM基团，或当PTM是ULM’时，ULM和ULM’各自的R^1’、R^2’、R^3’、X和X’中的任何一个或多个任选被修饰以直接或通过接头基团彼此共价键合，或其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或多晶型物。

在本文所述的任何方面或实施例中，ULM是cereblon E3连接酶结合部分(CLM)，其选自由以下组成的群组：沙利度胺、来那度胺、泊马度胺、其类似物、其电子等排体或其衍生物。

在本文所述的任何方面或实施例中，CLM具有由以下表示的化学结构：

其中：

W选自由以下组成的群组：CH₂、CHR、C＝O、SO₂、NH和N-烷基；

每个X独立地选自由以下组成的群组：O、S和H₂；

Y选自由以下组成的群组：CH₂、-C＝CR’、NH、N-烷基、N-芳基、N-杂芳基、N-环烷基、N-杂环基、O和S；

Z选自由以下组成的群组：O、S和H₂；

G和G’独立地选自由以下组成的群组：H、任选取代的直链或支链烷基、OH、R’OCOOR、R’OCONRR”、任选被R’取代的CH₂-杂环基和任选被R’取代的苄基；

Q₁、Q₂、Q₃和Q₄表示被独立地选自R’、N或N-氧化物的基团取代的碳C；

A独立地选自以下群组：H、任选取代的直链或支链烷基、环烷基、Cl和F；

R包含-CONR’R”、-OR’、-NR’R”、-SR’、-SO₂R’、-SO₂NR’R”、-CR’R”-、-CR’NR’R”-、(-CR’O)_n’R”、-芳基、-杂芳基、任选取代的直链或支链烷基、-环烷基、-杂环基、-P(O)(OR’)R”、-P(O)R’R”、-OP(O)(OR’)R”、-OP(O)R’R”、-Cl、-F、-Br、-I、-CF₃、-CN、-NR’SO₂NR’R”、-NR’CONR’R”、-CONR’COR”、-NR’C(＝N-CN)NR’R”、-C(＝N-CN)NR’R”、-NR’C(＝N-CN)R”、-NR’C(＝C-NO₂)NR’R”、-SO₂NR’COR”、-NO₂、-CO₂R’、-C(C＝N-OR’)R”、-CR’＝CR’R”、-CCR’、-S(C＝O)(C＝N-R’)R”、-SF₅和-OCF₃；

R’和R”独立地选自由以下组成的群组：键、H、烷基、环烷基、芳基、杂芳基、杂环、-C(＝O)R、杂环基，其各自任选被取代；

表示键，其可以是立体定向的((R)或(S))或非立体定向的；并且

Rn包含1-4个官能团或原子，例如O、OH、N、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、-烷基-芳基(例如，包含C1-C6烷基、C4-C7芳基或其组合中的至少一个的–烷基-芳基)、芳基(例如，C5-C7芳基)、胺、酰胺或羧基；并且

n是1-10的整数，

其中

当n是1时，R_n被修饰以共价连接至接头基团(L)，并且

当n是2、3或4时，一个R_n被修饰以共价连接至接头基团(L)，并且任何其他R_n被任选修饰以共价连接至PTM、CLM、具有与CLM相同的化学结构的第二个CLM、CLM’、第二个接头或其任何多个或组合。

在本文所述的任何方面或实施例中，CLM具有由以下表示的化学结构：

其中：

W独立地选自CH₂、CHR、C＝O、SO₂、NH和N-烷基；

Q₁、Q₂、Q₃、Q₄、Q₅各自独立地是被独立地选自R’、N或N-氧化物的基团取代的碳C或N；

R¹选自不存在、H、OH、CN、C1-C3烷基、C＝O；

R²选自以下群组：不存在、H、OH、CN、C1-C3烷基、CHF₂、CF₃、CHO、C(＝O)NH₂；

R³选自H、烷基(例如，C1-C6或C1-C3烷基)、取代的烷基(例如，取代的C1-C6或C1-C3烷基)、烷氧基(例如，C1-C6或C1-C3烷氧基)、取代的烷氧基(例如，取代的C1-C6或C1-C3烷氧基)；

R⁴选自H、烷基、取代的烷基；

R⁵和R⁶各自独立地是H、卤素、C(＝O)R’、CN、OH、CF₃；

X是C、CH、C＝O或N；

X₁是C＝O、N、CH或CH₂；

R’选自H、卤素、胺、烷基(例如，C1-C3烷基)、取代的烷基(例如，取代的C1-C3烷基)、烷氧基(例如，C1-C3烷氧基)、取代的烷氧基(例如，取代的C1-C3烷氧基)、NR²R³、C(＝O)OR²、任选取代的苯基；

n是0-4；

是单键或双键；并且

CLM共价连接至PTM、化学接头基团(L)、ULM、CLM、CLM’或其组合。

在本文所述的任何方面或实施例中，ULM是具有选自由以下组成的群组的化学部分的(MDM2)结合部分(MLM)：取代的咪唑啉、取代的螺吲哚啉酮、取代的吡咯烷、取代的哌啶酮、取代的吗啉酮、取代的吡咯并嘧啶、取代的咪唑并吡啶、取代的噻唑并咪唑啉、取代的吡咯并吡咯烷酮和取代的异喹啉酮。

在本文所述的任何方面或实施例中，MLM选自：

其中：

式A-1-1至A-1-4(即A-1-1、A-1-2、A-1-3和A-1-4)的R1’和R2’独立地选自由以下组成的群组：F、Cl、Br、I、乙炔、CN、CF₃和NO₂；

R3’选自由以下组成的群组：-OCH₃、-OCH₂CH₃、-OCH₂CH₂F、-OCH₂CH₂OCH₃和-OCH(CH₃)₂；

式A-1-1至A-1-4的R4’选自由以下组成的群组：H、卤素、-CH₃、-CF₃、-OCH₃、-C(CH₃)₃、-CH(CH₃)₂、-环丙基、-CN、-C(CH₃)₂OH、-C(CH₃)₂OCH₂CH₃、-C(CH₃)₂CH₂OH、-C(CH₃)₂CH₂OCH₂CH₃、-C(CH₃)₂CH₂OCH₂CH₂OH、-C(CH₃)₂CH₂OCH₂CH₃、-C(CH₃)₂CN、-C(CH₃)₂C(O)CH₃、-C(CH₃)₂C(O)NHCH₃、-C(CH₃)₂C(O)N(CH₃)₂、-SCH₃、-SCH₂CH₃、-S(O)₂CH₃、-S(O₂)CH₂CH₃、-NHC(CH₃)₃、-N(CH₃)₂、吡咯烷基和4-吗啉基；

式A-1-1至A-1-4的R5’选自由以下组成的群组：卤素、-环丙基、-S(O)₂CH₃、-S(O)₂CH₂CH₃、1-吡咯烷基、-NH₂、-N(CH₃)₂和-NHC(CH₃)₃；并且

式A-1-1至A-1-4的R6’选自H、

其中接头与R^6’的“*”或R^4’的末端原子连接；

式A-4-1至A-4-6的R7’是一个或多个(例如，1、2、3、4个)卤素；

式A-4-1至A-4-6的R8’是一个或多个选自由以下组成的群组的基团(例如，1、2、3或4个基团)：H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO₂、乙炔基、环丙基、甲基、乙基、异丙基、乙烯基、甲氧基、乙氧基、异丙氧基、-OH、其他C1-6烷基、其他C1-6烯基和C1-6炔基，其是单、二或三取代的；

式A-4-1至A-4-6的R9’选自由以下组成的群组：烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、烯基和取代的环烯基；

式A-4-1至A-4-6的Z选自由以下组成的群组：H、-OCH₃、-OCH₂CH₃和卤素；

式A-4-1至A-4-6的R10’和R11’各自独立地选自由以下组成的群组：H、(CH₂)_n-R'、(CH₂)_n-NR'R”、(CH₂)_n-NR'COR”、(CH₂)_n-NR'SO₂R”、(CH₂)_n-COOH、(CH₂)_n-COOR'、(CH)_n-CONR'R”、(CH₂)_n-OR'、(CH₂)_n-SR'、(CH₂)_n-SOR'、(CH₂)_n-CH(OH)-R'、(CH₂)_n-COR'、(CH₂)_n-SO₂R’、(CH₂)_n-SONR'R”、(CH₂)_n-SO₂NR'R”、(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-R'、(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-OH、(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-OR'、(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-NR'R”、(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-NR'COR”、(CH₂CH₂O)_m(CH₂)_n-NR'SO₂R”、(CH₂CH₂O)_m(CH₂)_n-COOH、(CH₂CH₂O)_m(CH₂)_n-COOR'、(CH₂CH₂O)_m-(CH2)_n-CONR'R”、(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-SO₂R'、(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-COR'、(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-SONR'R”、(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-SO₂NR'R”、(CH₂)_p-(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_nR'、(CH₂)p-(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-OH、(CH₂)_p-(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)n-OR'、(CH₂)_p-(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-NR'R”、(CH₂)_p-(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-NR'COR”、(CH₂)_p-(CH₂CH₂O)m-(CH₂)_n-NR'SO₂R”、(CH₂)_p-(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-COOH、(CH₂)_p-(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-COOR'、(CH₂)_p-(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-CONR'R”、(CH₂)p-(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-SO₂R'、(CH2)_p-(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-COR'、(CH₂)_p-(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-SONR'R”、(CH₂)_p-(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-SO₂NR'R”、芳基-(CH₂)_n-COOH和杂芳基-烷基-CO-烷基-NR'R”m，其中烷基可以被OR'和杂芳基-(CH₂)_n-杂环取代，其中杂环可以任选被烷基、羟基、COOR'和COR'取代；其中R'和R”选自H、烷基、被卤素取代的烷基、羟基、NH2、NH(烷基)、N(烷基)₂、氧代、羧基、环烷基和杂芳基；

m、n和p独立地是0-6；

式A-4-1至A-4-6的R12’选自由以下组成的群组：-O-(烷基)、-O-(烷基)烷氧基、-C(O)-(烷基)、-C(OH)-烷基-烷氧基、-C(O)-NH-(烷基)、-C(O)-N-(烷基)₂、-S(O)-(烷基)、S(O)₂-(烷基)、-C(O)-(环胺)和-O-芳基-(烷基)、-O-芳基-(烷氧基)；

式A-4-1至A-4-6的R1”选自由以下组成的群组：H、烷基、芳基取代的烷基、烷氧基取代的烷基、环烷基、芳基取代的环烷基和烷氧基取代的环烷基；并且

表示与L的连接。

在本文所述的任何方面或实施例中，MLM选自：

在本文所述的任何方面或实施例中，ULM是IAP E3泛素连接酶结合部分(ILM)，其包含以下氨基酸：丙氨酸(A)、缬氨酸(V)、脯氨酸(P)和异亮氨酸(I)或它们的非天然模拟物。

在本文所述的任何方面或实施例中，ULM是包含AVPI四肽片段或其衍生物的IAPE3泛素连接酶结合部分(ILM)。

在本文所述的任何方面或实施例中，ILM选自由以下组成的群组：由式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)表示的化学结构：

其中：

式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的R¹选自H或烷基；

式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的R²选自H或烷基；

式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的R³选自H、烷基、环烷基和杂环烷基；

式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的R⁵和R⁶独立地选自H、烷基、环烷基、杂环烷基，或更优选地，式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的R⁵和R⁶一起形成吡咯烷或哌啶环，其任选进一步稠合至1-2个环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基环，其各自可接着进一步稠合至另一个环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基环；

式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的R³和R⁵可一起形成5-8元环，其任选进一步稠合至1-2个环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基环；

式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的R⁷选自环烷基、环烷基烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、芳基、芳基-C(O)-R⁴、芳基烷基、杂芳基、杂芳基-C(O)-R⁴、杂芳基-R⁴、杂芳基-萘、杂芳基烷基或-C(O)NH–R⁴，其每一个任选被1–3个选自卤素、烷基、卤代烷基、羟基、烷氧基、氰基、(杂)环烷基、芳基、(杂)芳基、-C(O)NH–R⁴或-C(O)–R⁴的取代基取代；并且

R⁴选自烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、芳基或双环芳基、芳基烷基、杂芳基(例如，双环杂芳基)、杂芳基烷基，其进一步任选被1–3个上述取代基取代。

在本文所述的任何方面或实施例中，ILM选自由以下组成的群组：

在本文所述的任何方面或实施例中，接头(L)包含由下式表示的化学结构单元：

-(A^L)_q-，

其中：

-(A^L)_q-是与ULM、PTM或两者中的至少一个连接的基团；

q是大于或等于1的整数；

每个A^L独立地选自由以下组成的群组：键、CR^L1R^L2、O、S、SO、SO₂、NR^L3、SO₂NR^L3、SONR^L3、CONR^L3、NR^L3CONR^L4、NR^L3SO₂NR^L4、CO、CR^L1＝CR^L2、C≡C、SiR^L1R^L2、P(O)R^L1、P(O)OR^L1、NR^L3C(＝NCN)NR^L4、NR^L3C(＝NCN)、NR^L3C(＝CNO₂)NR^L4、任选被0-6个R^L1和/或R^L2基团取代的C_3-11环烷基、任选被0-6个R^L1和/或R^L2基团取代的C_3-11杂环基、任选被0-6个R^L1和/或R^L2基团取代的芳基、任选被0-6个R^L1和/或R^L2基团取代的杂芳基，其中R^L1或R^L2各自独立地任选与其他基团连接以形成任选被0-4个R^L5基团取代的环烷基和/或杂环基部分；并且

R^L1、R^L2、R^L3、R^L4和R^L5各自独立地是H、卤素、C_1-8烷基、OC_1-8烷基、SC_1-8烷基、NHC_1-8烷基、N(C_1-8烷基)₂、C_3-11环烷基、芳基、杂芳基、C_3-11杂环基、OC_1-8环烷基、SC_1-8环烷基、NHC_1-8环烷基、N(C_1-8环烷基)₂、N(C_1-8环烷基)(C_1-8烷基)、OH、NH₂、SH、SO₂C_1-8烷基、P(O)(OC_1-8烷基)(C_1-8烷基)、P(O)(OC_1-8烷基)₂、CC-C_1-8烷基、CCH、CH＝CH(C_1-8烷基)、C(C_1-8烷基)＝CH(C_1-8烷基)、C(C_1-8烷基)＝C(C_1-8烷基)₂、Si(OH)₃、Si(C_1-8烷基)₃、Si(OH)(C_1-8烷基)₂、COC_1-8烷基、CO₂H、卤素、CN、CF₃、CHF₂、CH₂F、NO₂、SF₅、SO₂NHC_1-8烷基、SO₂N(C_1-8烷基)₂、SONHC_1-8烷基、SON(C_1-8烷基)₂、CONHC_1-8烷基、CON(C_1-8烷基)₂、N(C_1-8烷基)CONH(C_1-8烷基)、N(C_1-8烷基)CON(C_1-8烷基)₂、NHCONH(C_1-8烷基)、NHCON(C_1-8烷基)₂、NHCONH₂、N(C_1-8烷基)SO₂NH(C_1-8烷基)、N(C_1-8烷基)SO₂N(C_1-8烷基)₂、NHSO₂NH(C_1-8烷基)、NHSO₂N(C_1-8烷基)₂、NHSO₂NH₂。

在本文所述的任何方面或实施例中，接头(L)包括任选取代的C₁-C₅₀烷基(例如，C₁、C₂、C₃、C₄、C₅、C₆、C₇、C₈、C₉、C₁₀、C₁₁、C₁₂、C₁₃、C₁₄、C₁₅、C₁₆、C₁₇、C₁₈、C₁₉、C₂₀、C₂₁、C₂₂、C₂₃、C₂₄、C₂₅、C₂₆、C₂₇、C₂₈、C₂₉、C₃₀、C₃₁、C₃₂、C₃₃、C₃₄、C₃₅、C₃₆、C₃₇、C₃₈、C₃₉、C₄₀、C₄₁、C₄₂、C₄₃、C₄₄、C₄₅、C₄₆、C₄₇、C₄₈、C₄₉或C₅₀烷基)，其中每个碳任选地被以下基团取代：(1)选自N、S、P或Si原子的杂原子，其具有适当数量的氢、取代或两者以完成化合价，(2)任选取代的环烷基或双环环烷基，(3)任选取代的杂环烷基或双环杂环烷基，(4)任选取代的芳基双环芳基，或(5)任选取代的杂芳基或双环杂芳基，条件是没有杂原子-杂原子键合(例如，没有杂原子共价连接或相邻定位)。

在本文所述的任何方面或实施例中，接头(L)的单元A^L包括由选自由以下组成的群组的一般结构表示的基团：

-N(R)-(CH2)_m-O(CH2)_n-O(CH2)_o-O(CH2)_p-O(CH2)_q-O(CH2)_r-OCH2-、-O-(CH2)_m-O(CH2)_n-O(CH2)_o-O(CH2)_p-O(CH2)_q-O(CH2)_r-OCH2-、-O-(CH2)_m-O(CH2)_n-O(CH2)_o-O(CH2)_p-O(CH2)_q-O(CH2)_r-O-；-N(R)-(CH2)_m-O(CH2)_n-O(CH2)_o-O(CH2)_p-O(CH2)_q-O(CH2)_r-O-；-(CH2)_m-O(CH2)_n-O(CH2)_o-O(CH2)_p-O(CH2)_q-O(CH2)_r-O-；-(CH2)_m-O(CH2)_n-O(CH2)_o-O(CH2)_p-O(CH2)_q-O(CH2)_r-OCH2-；

其中m、n、o、p、q、和r各自独立地是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20，条件是当数字是零时，没有N-O或O-O键，R选自H、甲基和乙基且X选自H和F；

在本文所述的任何方面或实施例中，接头(L)的单元A^L选自由以下组成的群组：

其中m和n各自独立地选自0、1、2、3、4、5或6。

在本文所述的任何方面或实施例中，接头(L)的单元A^L选自由以下组成的群组：

其中m、n、o、p、q、r和s各自独立地是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。

在本文所述的任何方面或实施例中，接头(L)的单元A^L选自：

在本文所述的任何方面或实施例中，接头(L)是包含1-10个乙二醇单元的任选被芳基或苯基取代的聚乙烯氧基。

在本文所述的任何方面或实施例中，接头(L)包括以下化学结构：

其中：

W^L1和W^L2各自独立地是不存在、具有0-4个杂原子的任选被RQ取代的4-8元环，每个RQ独立地是H、卤素、OH、CN、CF3、任选取代的直链或支链C1-C6烷基、任选取代的直链或支链C1-C6烷氧基，或者2个RQ和与它们连接的原子一起形成含有0-4个杂原子的4-8元环系；

Y^L1各自独立地是键、任选取代的直链或支链C1-C6烷基且任选一个或多个C原子被O替代；或任选取代的直链或支链C1-C6烷氧基；

n是0-10；并且

表示与PTM或ULM部分的连接点。

在本文所述的任何方面或实施例中，接头(L)包括以下化学结构：

其中：

W^L1和W^L2各自独立地是不存在、芳基、杂芳基、环、杂环、C_1-6烷基且任选一个或多个C原子被O或N替代、C_1-6烯烃且任选一个或多个C原子被O替代、C_1-6炔烃且任选一个或多个C原子被O替代、双环、联芳基、联杂芳基或双杂环，其各自任选被R^Q取代，每个R^Q独立地是H、卤素、OH、CN、CF₃、羟基、硝基、C≡CH、C_2-6烯基、C_2-6炔基、任选取代的直链或支链C₁-C₆烷基、任选取代的直链或支链C₁-C₆烷氧基、任选取代的OC_1-3烷基(例如，任选被1个或多个-F取代)、OH、NH₂、NR^Y1R^Y2、CN，或者2个R^Q基团和与它们连接的原子一起形成含有0-4个杂原子的4-8元环系；

Y^L1各自独立地是键、NR^YL1、O、S、NR^YL2、CR^YL1R^YL2、C＝O、C＝S、SO、SO₂、C₁-C₆烷基(直链、支链、任选取代的)且任选一个或多个C原子被O替代；任选取代的直链或支链C₁-C₆烷氧基、具有0-4个杂原子的3-6元脂环族或芳族环；

QL是具有0-4个杂原子的任选桥化的3-6元脂环族或芳族环，任选被0-6个R^Q取代，每个R^Q独立地是H、任选取代的直链或支链C_1-6烷基(例如，任选被1个或多个卤素或C_1-6烷氧基取代)，或者2个R^Q基团和与它们连接的原子一起形成含有0-2个杂原子的3-8元环系；

R^YL1、R^YL2各自独立地是H、OH、任选取代的直链或支链C_1-6烷基(例如，任选被1个或多个卤素或C_1-6烷氧基取代)，或R¹、R²和与它们连接的原子一起形成含有0-2个杂原子的3-8元环系；

n是0-10；并且

表示与PTM或ULM部分的连接点。

在本文所述的任何方面或实施例中，接头(L)的单元A^L选自由以下组成的群组：

在本文所述的任何方面或实施例中，以下的至少一个：

(a)PTM选自表4、6、8、10和12的化合物或表1的PTM；

(b)ULM选自表4、6、8、10和12的化合物或表3的ULM；

(c)接头(L)的单元A^L选自：

和C1-C6烷基；或

(d)其组合

其中：

杂环烷基的*N与PTM共享；并且

m、n、o、p、q、r和s各自独立地选自0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在本文所述的任何方面或实施例中，接头(L)的单元A^L或L选自由以下组成的群组：

，其中杂环烷基的N*与PTM共享。

在本文所述的任何方面或实施例中，以下中的至少一种：

PTM选自PTM-1、PTM-2、PTM-3、PTM-4、PTM-5或PTM-6；

接头选自L-1、L-2、L-3、L-4、L-5或L-6；

ULM选自ULM-1、ULM-2、ULM-3、ULM-4或ULM-5；或

其组合。

在本文所述的任何方面或实施例中，化合物选自由以下组成的群组：示例性化合物1-10。

本公开的另一方面提供了包含有效量的本公开的双官能化合物和药学上可接受的载体的组合物。

在本文所述的任何方面或实施例中，组合物还包含本公开的另外的生物活性剂或另一种双官能化合物中的至少一种。

在本文所述的任何方面或实施例中，另外的生物活性剂是抗癌剂(例如，表皮生长因子受体抑制剂)。

本公开的另一方面提供了用于治疗受试者的疾病或病症的包含药学上可接受的载体和有效量的本公开的至少一种化合物的组合物，所述方法包括向有需要的受试者施用组合物，其中所述化合物有效治疗或改善疾病或病症的至少一种症状。

在本文所述的任何方面或实施例中，所述疾病或病症与KRas的积聚、聚集、过度活化或其组合中的至少一种相关。

在本文所述的任何方面或实施例中，所述疾病或病症是与KRas的积聚、聚集和/或过度活化相关的癌症。

在本文所述的任何方面或实施例中，所述疾病或病症是胰腺癌、结肠癌、结直肠癌、肺癌、非小细胞肺癌、胆道恶性肿瘤、子宫内膜癌、宫颈癌、膀胱癌、肝癌、髓样白血病和乳腺癌。

在本文所述的任何方面或实施例中，所述疾病或病症是胰腺癌、结肠癌、肺癌、非小细胞肺癌。

实例

测定和降解数据

细胞系、抗体和试剂。NCI-H2030(CRL-5914)和SW1573(CRL-2170)细胞购自ATCC。两个细胞系对于KRas中的G12C突变是纯合的。在含有1％青霉素-链霉素和10％胎牛血清(FBS)的RPMI-1640培养基中培养NCI-H2030细胞。在含有1％青霉素-链霉素和10％FBS的DMEM中培养SW1573细胞。KRas检测抗体(目录号LS-C175665)购自LifeSpan Biosciences，并以1:2000的稀释度使用。使用购自Cell Signaling Technology的抗体(目录号5174)检测GAPDH，并以1:3000稀释。第二抗-小鼠和抗-兔检测抗体购自Cell SignalingTechnology(分别为目录号7076和7074)。

化合物处理和表5数据的Western印迹。将12孔板中的H2030细胞血清饥饿24小时，然后用0.3uM、1uM和3uM的所示双官能化合物处理24小时。在补充有蛋白酶抑制剂的CellSignaling Technology细胞裂解缓冲液(目录号#9803)中裂解细胞，并通过SDS-PAGE分离蛋白质。使用LSBio抗体(目录号LS-C175665)通过免疫印迹检测KRas。

化合物处理和表14数据的Western印迹。将NCI-H2030或SW1573细胞铺板在12孔板中，并允许在37℃下在含有5％CO₂的培养箱中粘附过夜。第二天，用缺乏FBS的适当培养基代替培养基以诱导饥饿。更换培养基后，将细胞放回培养箱另外24小时。然后将化合物在0.1％DMSO中加至适当终浓度(0.3μM、1μM和3μM)。用基于VHL的化合物处理细胞24小时，并用所有其他化合物处理72小时。处理后，将细胞在含有磷酸酶(Thermo Fisher目录号1861277)和蛋白酶(Thermo Fisher目录号78429)抑制剂混合物的RIPA缓冲液(ThermoFisher目录号89900)中裂解。以13,000rpm清除裂解液15分钟，并使用Pierce BCA测定系统(Thermo Fisher目录号23225)测定上清液的总蛋白浓度。对于每个样品，将10μg总蛋白溶解在12％Bis-Tris凝胶上，然后转移到硝酸纤维素膜上。在室温下在TBST(含0.1％Tween-20的Tris缓冲盐水)中的3％BSA封闭1小时后，用一抗(LS Bio目录号LS-C175665)在4℃探测膜过夜。与二抗一起孵育后，第二天使用SuperSignal^TM West Femto底物(Thermo Fisher目录号34095)观察膜。将每个泳道中的KRas信号归一化为GAPDH，目视检查估计降解百分比小于25％(表13中的C)，或使用BIO-RAD Image Lab 5.2.1相对于DMSO对照泳道进行定量，并使用GraphPad PRISM 6.07绘制所有数据。

DC₅₀是半数最大降解浓度(half-maximal degradation concentration)，即观察到50％降解的浓度。D_Max是达到的最大降解功效(即观察到的最大降解)降解数据。

图2A和图2B显示了用单独的双官能化合物或双官能化合物和E3泛素连接酶抑制剂处理细胞，然后在凝胶上检测KRas蛋白的结果。凝胶上KRas检测的迁移率变化说明双官能化合物共价修饰KRas。上带是KRas和双官能化合物，而下带是单独的KRas。图2A是有效降解剂示例性化合物399的代表性蛋白质印迹。图2B是活性较低的降解剂示例性化合物432的代表性蛋白质印迹。如胶凝位移所示，两种化合物共价修饰KRas^G12C。

当在上述条件下测试时，表4、6、8、10和12的双官能化合物证明了靶蛋白降解。例如，表4的每种双官能化合物的DC50在500nM至1uM的范围内，并且Dmax如表5所示。作为进一步的示例，表6、8、10和12的双官能化合物降解KRas，如表14中所示。在表中，“nd”表示未针对特定化合物确定特定参数、特性等。

表4.本公开的示例性双官能化合物

表5.通过表4的示例性双官能化合物进行的靶蛋白降解

*降解百分比：C＜25；25≤B＜50；A≥50

表6.通过方案1和2制备的化合物

表7.表6化合物的数据

表8.通过方案3-6制备的化合物

表9.表8化合物的数据

表10.通过方案7-16制备的化合物

表11.表10化合物的数据

表12.通过方案17-24制备的化合物

表13.表12化合物的数据

表14.通过表6、8、10和12中的示例性双官能化合物进行的靶蛋白降解

^*DC50(nM)C≥1000；100≤B<1000；A<100

^**D_Max(％):C≤35；35<B<70；A≥70

^***降解百分比：C≤35；35＜B<70；A≥70。

nd:未测定

描述了通过PROTAC技术含有KRas募集部分和E3连接酶募集部分(例如，CLM、VLM、ILM或MLM)的新型双官能分子。本公开的双官能分子主动降解KRas，导致强烈的细胞增殖抑制和细胞凋亡诱导。PROTAC介导的蛋白质降解提供了一种有前途的策略，可以通过传统方法靶向“无成药性”病理蛋白，诸如KRas。

整个本申请引用的所有参考文献、专利、未决专利申请和公开的专利的内容特此明确地通过引用并入。

仅使用常规实验，本领域技术人员将认识到或能够确定本文描述的本公开的具体实施例的许多等同方案。此类等同方案旨在由所附权利要求涵盖。应当理解，本文中所描述的详细示例和实施例通过示例的方式给出，仅用于说明性目的，并且绝不认为是对本公开的限制。本领域技术人员将在教导下提出基于其的各种修改或改变，这些修改或改变被包括在本申请的精神和范围之内，并且被认为在所附权利要求的范围之内。例如，可以改变成分的相对量以优化期望效果，可以添加其他成分，和/或可以用相似的成分代替一种或多种所述成分。根据所附权利要求，与本公开的系统、方法和过程相关联的其他有利特征和功能将是显而易见的。此外，本领域技术人员将认识到或仅使用常规实验就能够确定本文所述公开的特定实施例的许多等同方案。此类等同方案旨在由以下权利要求涵盖。

参考文献：

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Claims (37)

1.一种具有以下化学结构的双官能化合物：

ULM―L―PTM，

或其药学上可接受的盐、对映异构体、立体异构体、溶剂化物、多晶型物或前药，

其中：

ULM是与E3泛素连接酶结合的小分子E3泛素连接酶结合部分；

PTM是包含Kirsten大鼠肉瘤蛋白(KRas)靶向部分的小分子；并且

L是连接ULM和PTM的键或化学连接部分。

2.根据权利要求1所述的双官能化合物，其中靶向E3泛素连接酶的所述E3泛素连接酶结合部分选自由以下组成的群组：Von Hippel-Lindau(VLM)、cereblon(CLM)、小鼠双微体2同源物(MLM)和IAP(ILM)。

3.根据权利要求1或2所述的双官能化合物，其中所述PTM由以下表示：

其中：

是芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基；

X_PTM是C或N；

W_PTM选自由以下组成的群组：任选取代的C3-C6环烷基和任选取代的C3-C6杂烷基、任选取代的C3-C6杂环烷基、任选取代的芳基(例如，任选取代的C5-C7芳基)、任选取代的杂芳基(例如，任选取代的C5-C7杂芳基)；

R_PTM1A是NR_PTM9R_PTM10、OR_PTM9R_PTM10、H、任选取代的烷基、任选取代的烷氧基、任选取代的C3-C6环烷基、任选取代的O-(C3-C6环烷基)、任选取代的-O-C_1-4烷基-C_3-6环烷基、任选取代的C3-C6杂烷基、任选取代的O-(C3-C6杂烷基)、任选取代的O-C_1-4烷基-C_3-6杂烷基、任选取代的O-C_1-4烷基-C_3-6杂环烷基、任选取代的芳基(例如，任选取代的C5-C7芳基)、任选取代的O-芳基(例如，任选取代的O-(C5-C7芳基))、任选取代的杂芳基(例如，任选取代的C5-C7杂芳基)、任选取代的O-杂芳基(例如，任选取代的O-(C5-C7杂芳基))、任选取代的

(例如，任选被至少一个烷基取代，诸如*碳可以任选被烷基取代)、任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

(例如，任选被至少一个烷基取代，诸如*碳可以任选被烷基取代)、任选取代的

(例如，任选被至少一个烷基取代，诸如*碳可以任选被烷基取代)、任选取代的

(例如，任选被至少一个烷基取代，诸如*碳可以任选被烷基取代)、任选取代的

(例如，任选被至少一个烷基取代，诸如*碳可以任选被烷基取代)、任选取代的

(例如，任选被至少一个烷基取代，诸如*碳可以任选被烷基取代)、任选取代的

(例如，任选被至少一个烷基取代，诸如*碳可以任选被烷基取代)，其中N*是接头(L)的杂环烷基的N原子；

R_PTM1B是NR_PTM9R_PTM10、OR_PTM9R_PTM10、H、任选取代的烷基、任选取代的O-烷基、任选取代的C3-C6环烷基、任选取代的O-(C3-C6环烷基)、任选取代的-O-C_1-4烷基-C_3-6环烷基、任选取代的C3-C6杂烷基、任选取代的O-(C3-C6杂烷基)、任选取代的O-C_1-4烷基-C_3-6杂烷基、任选取代的芳基(例如，任选取代的C5-C7芳基)、任选取代的O-芳基(例如，任选取代的O-(C5-C7芳基))、任选取代的杂芳基(例如，任选取代的C5-C7杂芳基)、任选取代的O-杂芳基(例如，任选取代的O(C5-C7杂芳基))、任选取代的

(例如，任选被至少一个烷基取代，诸如*碳可以任选被烷基取代)、任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

任选取代的

R_PTM9和R_PTM10各自独立地是H、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的脂族胺、任选取代的脂族酰胺；

R_PTM2是H、(C＝O)R_PTM2'、任选取代的直链或支链烷基；

R_PTM2'是任选取代的直链或支链烷基、任选取代的烯烃、-N(R_PTM8)₂或-C(OH)₂；

R_PTM3是烷基、烷氧基、苯基或萘，各自独立地被OH、H、卤素取代；

R_PTM4A是OH、H或卤素、任选取代的直链或支链C1-C6烷基；

R_PTM4B是OH、H、-CH₂CN、卤素、任选取代的直链或支链C1-C6烷基；

R_PTM5选自由以下组成的群组：任选取代的芳基、任选取代的联芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的联杂芳基、任选取代的C3-C6环烷基、任选取代的C3-C6环杂烷基、卤素、H、任选取代的直链或支链烷基(例如，任选取代的直链或支链C1-C6烷基)、OH和烷氧基；

R_PTM8是H或烷基(例如，C1烷基、C2烷基、C3烷基或C4烷基)；

t是0、1、2、3、4、5、6；并且

表示接头、ULM、ULM’、CLM、CLM’、VLM、VLM’、ILM、ILM’、MLM、MLM’或其组合中的至少一个的连接位点。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的双官能化合物，其中所述PTM由以下表示：

其中：

X_PTM1是NH或O；

R_PTM6是芳基、杂芳基、

其中N*是接头(L)的杂环烷基(例如，C4-C8杂环烷基)的N原子；

R_PTM7是H、芳基、O-芳基、杂芳基、O-杂芳基、

R_PTM9是H、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的脂族胺、任选取代的脂族酰胺任选取代的

(例如，任选被至少一个烷基取代，诸如*碳可以任选被烷基取代)；

可以是单键或双键；并且

表示接头、ULM、ULM’、CLM、CLM’、VLM、VLM’、ILM、ILM’、MLM、MLM’或其组合中的至少一个的连接位点。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的双官能化合物，其中所述PTM由以下化学结构表示：

6.根据权利要求1至5中任一项所述的双官能化合物，其中所述ULM是具有由以下表示的化学结构的Von Hippel-Lindau(VHL)连接酶结合部分(VLM)：

其中：

X¹、X²各自独立地选自以下群组：键、O、NR^Y3、CR^Y3R^Y4、C＝O、C＝S、SO和SO₂；

R^Y3、R^Y4各自独立地选自以下群组：H、任选被1个或多个卤素取代的直链或支链C_1-6烷基、任选被0-3个R^P基团取代的C_1-6烷氧基；

R^P是独立地选自以下群组的0、1、2或3个基团：H、卤素、-OH、C_1-3烷基、C＝O；

W³选自任选取代的T、任选取代的-T-N(R^1aR^1b)X³、任选取代的-T-N(R^1aR^1b)、任选取代的-T-芳基、任选取代的-T-杂芳基、任选取代的-T-联杂芳基、任选取代的-T-杂环基、任选取代的-T-双杂环基、任选取代的-NR¹-T-芳基、任选取代的-NR¹-T-杂芳基或任选取代的-NR¹-T-杂环基；

X³是C＝O、R¹、R^1a、R^1b；

R¹、R^1a、R^1b各自独立地选自由以下组成的群组：H、任选被1个或多个卤素或-OH基团取代的直链或支链C₁-C₆烷基、R^Y3C＝O、R^Y3C＝S、R^Y3SO、R^Y3SO₂、N(R^Y3R^Y4)C＝O、N(R^Y3R^Y4)C＝S、N(R^Y3R^Y4)SO和N(R^Y3R^Y4)SO₂；

T选自任选取代的烷基、-(CH₂)_n-基团，其中亚甲基中的每一个任选被选自以下群组的一个或两个取代基取代：卤素、甲基、任选取代的烷氧基、任选被1个或多个卤素取代的直链或支链C₁-C₆烷基、C(O)NR¹R^1a或NR¹R^1a，或者R¹和R^1a连接形成任选取代的杂环基或-OH基团或任选取代的氨基酸侧链；并且

n是0-6，

W⁴是

R_14a、R_14b各自独立地选自以下群组：H、卤代烷基或任选取代的烷基；

W⁵选自以下群组：任选取代的苯基或任选取代的5-10元杂芳基；

R₁₅选自以下群组：H、卤素、CN、OH、NO₂、NR_14aR_14b、OR_14a、CONR_14aR_14b、NR_14aCOR_14b、SO₂NR_14aR_14b、NR_14aSO₂R_14b、任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基、任选取代的卤代烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的环烷基或任选取代的环杂烷基；

并且其中虚线表示至少一个PTM、另一个ULM(ULM’)或偶联至少一个PTM或ULM’或二者的化学接头部分与ULM的连接位点。

7.根据权利要求1至5中任一项所述的双官能化合物，其中所述ULM是具有由以下表示的化学结构的Von Hippel-Lindau(VHL)连接酶结合部分(VLM)：

其中：

W³选自以下群组：任选取代的芳基、任选取代的杂芳基或

R₉和R₁₀独立地是氢、任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任选取代的羟基烷基、任选取代的杂芳基或卤代烷基，或者R₉、R₁₀和与它们连接的碳原子形成任选取代的环烷基；

R₁₁选自以下群组：任选取代的杂环基、任选取代的烷氧基、任选取代的杂芳基、任选取代的芳基、

R₁₂选自以下群组：H或任选取代的烷基；

R₁₃选自以下群组：H、任选取代的烷基、任选取代的烷基羰基、任选取代的(环烷基)烷基羰基、任选取代的芳烷基羰基、任选取代的芳基羰基、任选取代的(杂环基)羰基或任选取代的芳烷基；

R_14a、R_14b各自独立地选自以下群组：H、卤代烷基或任选取代的烷基；

W⁵选自以下群组：任选取代的苯基或任选取代的5-10元杂芳基；

R₁₅选自以下群组：H、卤素、CN、OH、NO₂、NR_14aR_14b、OR_14a、CONR_14aR_14b、NR_14aCOR_14b、SO₂NR_14aR_14b、NR_14aSO₂R_14b、任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基、任选取代的卤代烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的环烷基或任选取代的环杂烷基；

每个R₁₆独立地选自以下群组：卤素、CN、任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基、任选取代的烷氧基、羟基或任选取代的卤代烷氧基；

o是0、1、2、3或4；

R₁₈独立地选自以下群组：卤素、任选取代的烷氧基、氰基、任选取代的烷基、卤代烷基、卤代烷氧基或接头；并且

p是0、1、2、3或4，并且其中虚线表示至少一个PTM、另一个ULM(ULM’)或偶联至少一个PTM或ULM’或二者的化学接头部分与ULM的连接位点。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的双官能化合物，其中所述ULM具有选自以下群组的化学结构：

其中：

R₁是H、乙基、异丙基、叔丁基、仲丁基、环丙基、环丁基、环戊基或环己基；任选取代的烷基、任选取代的羟基烷基、任选取代的杂芳基或卤代烷基；

R_14a是H、卤代烷基、任选取代的烷基、甲基、氟甲基、羟基甲基、乙基、异丙基或环丙基；

R₁₅选自由以下组成的群组：H、卤素、CN、OH、NO₂、任选取代的杂芳基、任选取代的芳基、任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基、任选取代的卤代烷氧基、任选取代的环烷基或任选取代的环杂烷基；

X是C、CH₂或C＝O

R₃不存在或为任选取代的5或6元杂芳基；并且

其中虚线表示至少一个PTM、另一个ULM(ULM’)或偶联至少一个PTM或ULM’或二者的化学接头部分与ULM的连接位点。

9.根据权利要求1至5中任一项所述的双官能化合物，其中所述ULM包含根据以下化学结构的基团：

其中：

ULM-g的R^1’是任选取代的C₁-C₆烷基、任选取代的-(CH₂)_nOH、任选取代的-(CH₂)_nSH、任选取代的(CH₂)_n-O-(C₁-C₆)烷基、含有环氧化物部分WCOCW的任选取代的(CH₂)_n-WCOCW-(C₀-C₆)烷基，其中每个W独立地是H或C₁-C₃烷基、任选取代的-(CH₂)_nCOOH、任选取代的-(CH₂)_nC(O)-(C₁-C₆烷基)、任选取代的-(CH₂)_nNHC(O)-R₁、任选取代的-(CH₂)_nC(O)-NR₁R₂、任选取代的-(CH₂)_nOC(O)-NR₁R₂、-(CH₂O)_nH、任选取代的-(CH₂)_nOC(O)-(C₁-C₆烷基)、任选取代的-(CH₂)_nC(O)-O-(C₁-C₆烷基)、任选取代的-(CH₂O)_nCOOH、任选取代的-(OCH₂)_nO-(C₁-C₆烷基)、任选取代的-(CH₂O)_nC(O)-(C₁-C₆烷基)、任选取代的-(OCH₂)_nNHC(O)-R₁、任选取代的-(CH₂O)_nC(O)-NR₁R₂、-(CH₂CH₂O)_nH、任选取代的-(CH₂CH₂O)_nCOOH、任选取代的-(OCH₂CH₂)_nO-(C₁-C₆烷基)、任选取代的-(CH₂CH₂O)_nC(O)-(C₁-C₆烷基)、任选取代的-(OCH₂CH₂)_nNHC(O)-R₁、任选取代的-(CH₂CH₂O)_nC(O)-NR₁R₂、任选取代的-SO₂R_S、任选取代的S(O)R_S、NO₂、CN或卤素(F、Cl、Br、I，优选F或Cl)；

ULM-g的R₁和R₂各自独立地是H或或可任选被一个或两个羟基或最多三个卤素基团(优选氟)取代的C1-C6烷基；

ULM-g的R_S是C₁-C₆烷基、任选取代的芳基、杂芳基或杂环基或-(CH₂)_mNR₁R₂基团；

ULM-g的X和X’各自独立地是C═O、C═S、-S(O)、S(O)₂(优选X和X’都是C═O)；

ULM-g的R^2’是任选取代的-(CH₂)_n-(C＝O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w烷基、任选取代的-(CH₂)_n-(C＝O)_u(NR₁)_v(SO₂)_wNR_1NR_2N基团、任选取代的-(CH₂)_n-(C＝O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-芳基、任选取代的-(CH₂)_n-(C＝O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-杂芳基、任选取代的-(CH₂)_n-(C＝O)_vNR₁(SO₂)_w-杂环、任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-烷基、任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-NR_1NR_2N、任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-NR₁C(O)R_1N、任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-(C＝O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-芳基、任选取代的-NR¹-(CH₂)_n–芳基-杂芳基、任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-(C＝O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-杂芳基或任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-(C＝O)_vNR₁(SO₂)_w-杂环、任选取代的-X^R2’-烷基；任选取代的-X^R2’-芳基；任选取代的-X^R2’-杂芳基；任选取代的-X^R2’-杂环基；任选取代的；

ULM-g的R^3’是任选取代的烷基、任选取代的-(CH₂)_n-(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-烷基、任选取代的-(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-NR_1NR_2N、任选取代的-(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-NR₁C(O)R_1N、任选取代的-(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-C(O)NR₁R₂、任选取代的-(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-芳基、任选取代的-(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-杂芳基、任选取代的–(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-杂环、任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-烷基、任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-NR_1NR_2N、任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-NR₁C(O)R_1N、任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-芳基、任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-杂芳基、任选取代的-NR¹-(CH₂)_n-C(O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-杂环、任选取代的-O-(CH₂)n-(C＝O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-烷基、任选取代的-O-(CH₂)n-(C＝O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-NR_1NR_2N、任选取代的-O-(CH₂)n-(C＝O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-NR₁C(O)R_1N、任选取代的-O-(CH₂)n-(C＝O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-芳基、任选取代的-O-(CH₂)_n-(C＝O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-杂芳基或任选取代的-O-(CH₂)_n-(C＝O)_u(NR₁)_v(SO₂)_w-杂环；-(CH₂)_n-(V)_n’-(CH₂)_n-(V)_n’-烷基、任选取代的–(CH₂)_n-(V)_n’-(CH₂)_n-(V)_n’-芳基、任选取代的–(CH₂)_n-(V)_n’-(CH₂)_n-(V)_n’-杂芳基、任选取代的–(CH₂)_n-(V)_n’-(CH₂)_n-(V)_n’-杂环基、任选取代的-(CH₂)_n-N(R_1’)(C＝O)_m’-(V)_n’-烷基、任选取代的-(CH₂)_n-N(R_1’)(C＝O)_m’-(V)_n’-芳基、任选取代的-(CH₂)_n-N(R_1’)(C＝O)_m’-(V)_n’-杂芳基、任选取代的-(CH₂)_n-N(R_1’)(C＝O)_m’-(V)_n’-杂环基、任选取代的-X^R3’-烷基；任选取代的-X^R3’-芳基；任选取代的-X^R3’-杂芳基；任选取代的-X^R3’-杂环基；任选取代的；

ULM-g的R_1N和R_2N各自独立地是H、任选被一个或两个羟基和最多三个卤素基团取代的C₁-C₆烷基或任选取代的-(CH₂)_n-芳基、-(CH₂)_n-杂芳基或-(CH₂)_n-杂环基；

ULM-g的V是O、S或NR₁；

ULM-g的R₁与上述相同；

ULM-g的R¹和R_1’各自独立地是H或C₁-C₃烷基；

ULM-g的X^R2’和X^R3’各自独立地是任选取代的-CH₂)_n-、-CH₂)_n-CH(X_v)＝CH(X_v)-(顺式或反式)、-CH₂)_n-CH≡CH-、-(CH₂CH₂O)_n-或C₃-C₆环烷基，其中X_v是H、卤素或任选取代的C₁-C₃烷基；

ULM-g的每个m独立地是0、1、2、3、4、5、6；

ULM-g的每个m’独立地是0或1；

ULM-g的每个n独立地是0、1、2、3、4、5、6；

ULM-g的每个n’独立地是0或1；

ULM-g的每个u独立地是0或1；

ULM-g的每个v独立地是0或1；

ULM-g的每个w独立地是0或1；并且

当PTM不是ULM’时，ULM-g的R^1’、R^2’、R^3’、X和X’中的任何一个或多个任选被修饰以通过接头基团共价键合至PTM基团，或当PTM是ULM’时，ULM和ULM’各自的R^1’、R^2’、R^3’、X和X’中的任何一个或多个任选被修饰以直接或通过接头基团彼此共价键合，或其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或多晶型物。

10.根据权利要求1至5中任一项所述的双官能化合物，其中所述ULM是选自由以下组成的群组的cereblon E3连接酶结合部分(CLM)：沙利度胺、来那度胺、泊马度胺、其类似物、其电子等排体或其衍生物。

11.根据权利要求1至5和10中任一项所述的双官能化合物，其中CLM具有由以下表示的化学结构：

其中：

W选自由以下组成的群组：CH₂、CHR、C＝O、SO₂、NH和N-烷基；

每个X独立地选自由以下组成的群组：O、S和H₂；

Y选自由以下组成的群组：CH₂、-C＝CR’、NH、N-烷基、N-芳基、N-杂芳基、N-环烷基、N-杂环基、O和S；

Z选自由以下组成的群组：O、S和H₂；

G和G’独立地选自由以下组成的群组：H、任选取代的直链或支链烷基、OH、R’OCOOR、R’OCONRR”、任选被R’取代的CH₂-杂环基和任选被R’取代的苄基；

Q₁、Q₂、Q₃和Q₄表示被独立地选自R’、N或N-氧化物的基团取代的碳C；

A独立地选自以下群组：H、任选取代的直链或支链烷基、环烷基、Cl和F；

R包含-CONR’R”、-OR’、-NR’R”、-SR’、-SO₂R’、-SO₂NR’R”、-CR’R”-、-CR’NR’R”-、(-CR’O)_n’R”、-芳基、-杂芳基、任选取代的直链或支链烷基、-环烷基、-杂环基、-P(O)(OR’)R”、-P(O)R’R”、-OP(O)(OR’)R”、-OP(O)R’R”、-Cl、-F、-Br、-I、-CF₃、-CN、-NR’SO₂NR’R”、-NR’CONR’R”、-CONR’COR”、-NR’C(＝N-CN)NR’R”、-C(＝N-CN)NR’R”、-NR’C(＝N-CN)R”、-NR’C(＝C-NO₂)NR’R”、-SO₂NR’COR”、-NO₂、-CO₂R’、-C(C＝N-OR’)R”、-CR’＝CR’R”、-CCR’、-S(C＝O)(C＝N-R’)R”、-SF₅和-OCF₃；

R’和R”独立地选自由以下组成的群组：键、H、烷基、环烷基、芳基、杂芳基、杂环、-C(＝O)R、杂环基，其各自任选被取代；

n'是1-10的整数，

表示键，其可以是立体定向的((R)或(S))或非立体定向的；并且

Rn包括1-4个独立选择的官能团或原子，例如O、OH、N、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、-烷基-芳基(例如，包括C1-C6烷基、C4-C7芳基或其组合中的至少一个的–烷基-芳基)、芳基(例如，C5-C7芳基)、胺、酰胺或羧基，

其中：

当n是1时，R_n被修饰以共价连接至接头基团(L)，并且

当n是2、3或4时，一个R_n被修饰以共价连接至接头基团(L)，并且任何其他R_n被任选修饰以共价连接至PTM、CLM、具有与CLM相同的化学结构的第二个CLM、CLM’、第二个接头或其任何多个或组合。

12.根据权利要求1至5或10中任一项所述的双官能化合物，其中CLM具有由以下表示的化学结构：

其中：

W独立地选自CH₂、CHR、C＝O、SO₂、NH和N-烷基；

Q₁、Q₂、Q₃、Q₄、Q₅各自独立地是被独立地选自R’、N或N-氧化物的基团取代的碳C或N；

R¹选自不存在、H、OH、CN、C1-C3烷基、C＝O；

R²选自以下群组：不存在、H、OH、CN、C1-C3烷基、CHF₂、CF₃、CHO、C(＝O)NH₂；

R³选自H、烷基(例如，C1-C6或C1-C3烷基)、取代的烷基(例如，取代的C1-C6或C1-C3烷基)、烷氧基(例如，C1-C6或C1-C3烷氧基)、取代的烷氧基(例如，取代的C1-C6或C1-C3烷氧基)；

R⁴选自H、烷基、取代的烷基；

R⁵和R⁶各自独立地是H、卤素、C(＝O)R’、CN、OH、CF₃；

X是C、CH、C＝O或N；

X₁是C＝O、N、CH或CH₂；

R’选自H、卤素、胺、烷基(例如，C1-C3烷基)、取代的烷基(例如，取代的C1-C3烷基)、烷氧基(例如，C1-C3烷氧基)、取代的烷氧基(例如，取代的C1-C3烷氧基)、NR²R³、C(＝O)OR²、任选取代的苯基；

n是0-4；

是单键或双键；并且

CLM共价连接至PTM、化学接头基团(L)、ULM、CLM、CLM’或其组合。

13.根据权利要求1至5中任一项所述的双官能化合物，其中所述ULM是具有选自由以下组成的群组的化学部分的(MDM2)结合部分(MLM)：取代的咪唑啉、取代的螺吲哚啉酮、取代的吡咯烷、取代的哌啶酮、取代的吗啉酮、取代的吡咯并嘧啶、取代的咪唑并吡啶、取代的噻唑并咪唑啉、取代的吡咯并吡咯烷酮和取代的异喹啉酮。

14.根据权利要求13所述的双官能化合物，其中所述MLM选自：

其中：

式A-1-1至A-1-4(即A-1-1、A-1-2、A-1-3和A-1-4)的R1’和R2’独立地选自由以下组成的群组：F、Cl、Br、I、乙炔、CN、CF₃和NO₂；

R3’选自由以下组成的群组：-OCH₃、-OCH₂CH₃、-OCH₂CH₂F、-OCH₂CH₂OCH₃和-OCH(CH₃)₂；

式A-1-1至A-1-4的R4’选自由以下组成的群组：H、卤素、-CH₃、-CF₃、-OCH₃、-C(CH₃)₃、-CH(CH₃)₂、-环丙基、-CN、-C(CH₃)₂OH、-C(CH₃)₂OCH₂CH₃、-C(CH₃)₂CH₂OH、-C(CH₃)₂CH₂OCH₂CH₃、-C(CH₃)₂CH₂OCH₂CH₂OH、-C(CH₃)₂CH₂OCH₂CH₃、-C(CH₃)₂CN、-C(CH₃)₂C(O)CH₃、-C(CH₃)₂C(O)NHCH₃、-C(CH₃)₂C(O)N(CH₃)₂、-SCH₃、-SCH₂CH₃、-S(O)₂CH₃、-S(O₂)CH₂CH₃、-NHC(CH₃)₃、-N(CH₃)₂、吡咯烷基和4-吗啉基；

式A-1-1至A-1-4的R5’选自由以下组成的群组：卤素、-环丙基、-S(O)₂CH₃、-S(O)₂CH₂CH₃、1-吡咯烷基、-NH₂、-N(CH₃)₂和-NHC(CH₃)₃；并且

式A-1-1至A-1-4的R6’选自H、

其中接头与R^6’的“*”或R^4’的末端原子连接；

式A-4-1至A-4-6的R7’是一个或多个(例如，1、2、3、4个)卤素；

式A-4-1至A-4-6的R8’是一个或多个选自由以下组成的群组的基团(例如，1、2、3或4个基团)：H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO₂、乙炔基、环丙基、甲基、乙基、异丙基、乙烯基、甲氧基、乙氧基、异丙氧基、-OH、其他C1-6烷基、其他C1-6烯基和C1-6炔基，其是单、二或三取代的；

式A-4-1至A-4-6的R9’选自由以下组成的群组：烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、烯基和取代的环烯基；

式A-4-1至A-4-6的Z选自由以下组成的群组：H、-OCH₃、-OCH₂CH₃和卤素；

式A-4-1至A-4-6的R10’和R11’各自独立地选自由以下组成的群组：H、(CH₂)_n-R'、(CH₂)_n-NR'R”、(CH₂)_n-NR'COR”、(CH₂)_n-NR'SO₂R”、(CH₂)_n-COOH、(CH₂)_n-COOR'、(CH)_n-CONR'R”、(CH₂)_n-OR'、(CH₂)_n-SR'、(CH₂)_n-SOR'、(CH₂)_n-CH(OH)-R'、(CH₂)_n-COR'、(CH₂)_n-SO₂R’、(CH₂)_n-SONR'R”、(CH₂)_n-SO₂NR'R”、(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-R'、(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-OH、(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-OR'、(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-NR'R”、(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-NR'COR”、(CH₂CH₂O)_m(CH₂)_n-NR'SO₂R”、(CH₂CH₂O)_m(CH₂)_n-COOH、(CH₂CH₂O)_m(CH₂)_n-COOR'、(CH₂CH₂O)_m-(CH2)_n-CONR'R”、(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-SO₂R'、(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-COR'、(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-SONR'R”、(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-SO₂NR'R”、(CH₂)_p-(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_nR'、(CH₂)p-(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-OH、(CH₂)_p-(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)n-OR'、(CH₂)_p-(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-NR'R”、(CH₂)_p-(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-NR'COR”、(CH₂)_p-(CH₂CH₂O)m-(CH₂)_n-NR'SO₂R”、(CH₂)_p-(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-COOH、(CH₂)_p-(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-COOR'、(CH₂)_p-(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-CONR'R”、(CH₂)p-(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-SO₂R'、(CH2)_p-(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-COR'、(CH₂)_p-(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-SONR'R”、(CH₂)_p-(CH₂CH₂O)_m-(CH₂)_n-SO₂NR'R”、芳基-(CH₂)_n-COOH和杂芳基-烷基-CO-烷基-NR'R”m，其中烷基可以被OR'和杂芳基-(CH₂)_n-杂环取代，其中杂环可以任选被烷基、羟基、COOR'和COR'取代；其中R'和R”选自H、烷基、被卤素取代的烷基、羟基、NH2、NH(烷基)、N(烷基)₂、氧代、羧基、环烷基和杂芳基；

m、n和p独立地是0-6；

式A-4-1至A-4-6的R12’选自由以下组成的群组：-O-(烷基)、-O-(烷基)烷氧基、-C(O)-(烷基)、-C(OH)-烷基-烷氧基、-C(O)-NH-(烷基)、-C(O)-N-(烷基)₂、-S(O)-(烷基)、S(O)₂-(烷基)、-C(O)-(环胺)和-O-芳基-(烷基)、-O-芳基-(烷氧基)；

式A-4-1至A-4-6的R1”选自由以下组成的群组：H、烷基、芳基取代的烷基、烷氧基取代的烷基、环烷基、芳基取代的环烷基和烷氧基取代的环烷基；并且

表示与L的连接。

15.根据权利要求13或14所述的双官能化合物，其中所述MLM选自

16.根据权利要求1至5中任一项所述的双官能化合物，其中所述ULM是包含以下氨基酸的IAP E3泛素连接酶结合部分(ILM)：丙氨酸(A)、缬氨酸(V)、脯氨酸(P)和异亮氨酸(I)或其非天然模拟物。

17.根据权利要求1至5或16中任一项所述的双官能化合物，其中所述ULM是包含AVPI四肽片段或其衍生物的IAP E3泛素连接酶结合部分(ILM)。

18.根据权利要求16或17所述的双官能化合物，所述ILM选自由由式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)表示的化学结构组成的群组：

其中：

式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的R¹选自H或烷基；

式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的R²选自H或烷基；

式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的R³选自H、烷基、环烷基和杂环烷基；

式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的R⁵和R⁶独立地选自H、烷基、环烷基、杂环烷基，或更优选地，式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的R⁵和R⁶一起形成吡咯烷或哌啶环，其任选进一步稠合至1-2个环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基环，其各自可接着进一步稠合至另一个环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基环；

式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的R³和R⁵可一起形成5-8元环，其任选进一步稠合至1-2个环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基环；

式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的R⁷选自环烷基、环烷基烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、芳基、芳基-C(O)-R⁴、芳基烷基、杂芳基、杂芳基-C(O)-R⁴、杂芳基-R⁴、杂芳基-萘、杂芳基烷基或-C(O)NH-R⁴，其每一个任选被1-3个选自卤素、烷基、卤代烷基、羟基、烷氧基、氰基、(杂)环烷基、芳基、(杂)芳基、-C(O)NH-R⁴或-C(O)-R⁴的取代基取代；并且

R⁴选自烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、芳基或双环芳基、芳基烷基、杂芳基或双环杂芳基、杂芳基烷基，其进一步任选被1-3个上述取代基取代。

19.根据权利要求16至18中任一项所述的双官能化合物，其中所述ILM选自由以下组成的群组：

20.根据权利要求1至19中任一项所述的双官能化合物，其中接头(L)包含由下式表示的化学结构单元：

-(A^L)_q-，

其中：

-(A^L)_q-是与ULM、PTM或两者中的至少一个连接的基团；

q是大于或等于1的整数；

每个A^L独立地选自由以下组成的群组：键、CR^L1R^L2、O、S、SO、SO₂、NR^L3、SO₂NR^L3、SONR^L3、CONR^L3、NR^L3CONR^L4、NR^L3SO₂NR^L4、CO、CR^L1＝CR^L2、C≡C、SiR^L1R^L2、P(O)R^L1、P(O)OR^L1、NR^L3C(＝NCN)NR^L4、NR^L3C(＝NCN)、NR^L3C(＝CNO₂)NR^L4、任选被0-6个R^L1和/或R^L2基团取代的C_3-11环烷基、任选被0-6个R^L1和/或R^L2基团取代的C_3-11杂环基、任选被0-6个R^L1和/或R^L2基团取代的芳基、任选被0-6个R^L1和/或R^L2基团取代的杂芳基，其中R^L1或R^L2各自独立地任选与其他基团连接以形成任选被0-4个R^L5基团取代的环烷基和/或杂环基部分；并且

R^L1、R^L2、R^L3、R^L4和R^L5各自独立地是H、卤素、C_1-8烷基、OC_1-8烷基、SC_1-8烷基、NHC_1-8烷基、N(C_1-8烷基)₂、C_3-11环烷基、芳基、杂芳基、C_3-11杂环基、OC_1-8环烷基、SC_1-8环烷基、NHC_1-8环烷基、N(C_1-8环烷基)₂、N(C_1-8环烷基)(C_1-8烷基)、OH、NH₂、SH、SO₂C_1-8烷基、P(O)(OC_1-8烷基)(C_1-8烷基)、P(O)(OC_1-8烷基)₂、CC-C_1-8烷基、CCH、CH＝CH(C_1-8烷基)、C(C_1-8烷基)＝CH(C_1-8烷基)、C(C_1-8烷基)＝C(C_1-8烷基)₂、Si(OH)₃、Si(C_1-8烷基)₃、Si(OH)(C_1-8烷基)₂、COC_1-8烷基、CO₂H、卤素、CN、CF₃、CHF₂、CH₂F、NO₂、SF₅、SO₂NHC_1-8烷基、SO₂N(C_1-8烷基)₂、SONHC_1-8烷基、SON(C_1-8烷基)₂、CONHC_1-8烷基、CON(C_1-8烷基)₂、N(C_1-8烷基)CONH(C_1-8烷基)、N(C_1-8烷基)CON(C_1-8烷基)₂、NHCONH(C_1-8烷基)、NHCON(C_1-8烷基)₂、NHCONH₂、N(C_1-8烷基)SO₂NH(C_1-8烷基)、N(C_1-8烷基)SO₂N(C_1-8烷基)₂、NHSO₂NH(C_1-8烷基)、NHSO₂N(C_1-8烷基)₂、NHSO₂NH₂。

21.根据权利要求1至20中任一项所述的双官能化合物，其中L是用于将PTM共价偶联至ULM的工具。

22.根据权利要求1至20中任一项所述的双官能化合物，其中接头(L)的单元A^L选自由以下组成的群组：

和C1-C6烷基；或者

其中：

杂环烷基的*N与PTM共享；并且

m、n、o、p、q、r和s各自独立地选自0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19和20。

23.根据权利要求1至20中任一项所述的双官能化合物，其中接头(L)的单元A^L选自由以下组成的群组：

其中杂环烷基的N*与PTM共享。

24.根据权利要求1至20中任一项所述的双官能化合物，其中接头(L)是包含1-10个乙二醇单元的任选被芳基或苯基取代的聚乙烯氧基。

25.根据权利要求1至20中任一项所述的双官能化合物，其中接头是任选取代的C₁-C₅₀烷基，其中每个碳任选地被以下取代：(1)选自N、S、P或Si原子的杂原子，其具有适当数量的氢、取代或两者以完成化合价，(2)任选取代的环烷基或双环环烷基，(3)任选取代的杂环烷基或双环杂环烷基，(4)任选取代的芳基双环芳基，或(5)任选取代的杂芳基或双环杂芳基，条件是没有杂原子-杂原子键合(例如，没有杂原子共价连接或相邻定位)。

26.根据权利要求1至19中任一项所述的双官能化合物，其中接头(L)包括以下化学结构：

其中：

W^L1和W^L2各自独立地是不存在、具有0-4个杂原子的任选被RQ取代的4-8元环，每个RQ独立地是H、卤素、OH、CN、CF3、任选取代的直链或支链C1-C6烷基、任选取代的直链或支链C1-C6烷氧基，或者2个RQ和与它们连接的原子一起形成含有0-4个杂原子的4-8元环系；

Y^L1各自独立地是键、任选取代的直链或支链C1-C6烷基且任选一个或多个C原子被O替代；或任选取代的直链或支链C1-C6烷氧基；

n是0-10；并且

表示与PTM或ULM部分的连接点。

27.根据权利要求1至19中任一项所述的双官能化合物，其中接头(L)包括以下化学结构：

其中：

W^L1和W^L2各自独立地是不存在、芳基、杂芳基、环、杂环、C_1-6烷基且任选一个或多个C原子被O或N替代、C_1-6烯烃且任选一个或多个C原子被O替代、C_1-6炔烃且任选一个或多个C原子被O替代、双环、联芳基、联杂芳基或双杂环，其各自任选被R^Q取代，每个R^Q独立地是H、卤素、OH、CN、CF₃、羟基、硝基、C≡CH、C_2-6烯基、C_2-6炔基、任选取代的直链或支链C₁-C₆烷基、任选取代的直链或支链C₁-C₆烷氧基、任选取代的OC_1-3烷基(例如，任选被1个或多个-F取代)、OH、NH₂、NR^Y1R^Y2、CN，或者2个R^Q基团和与它们连接的原子一起形成含有0-4个杂原子的4-8元环系；

Y^L1各自独立地是键、NR^YL1、O、S、NR^YL2、CR^YL1R^YL2、C＝O、C＝S、SO、SO₂、任选取代的直链或支链C₁-C₆烷基且任选一个或多个C原子被O替代；任选取代的直链或支链C₁-C₆烷氧基(直链、支链、任选取代的)、具有0-4个杂原子的3-6元脂环族或芳族环；

Q^L是具有0-4个杂原子的任选桥化的3-6元脂环族或芳族环，任选被0-6个R^Q取代，每个R^Q独立地是H、C_1-6烷基(直链、支链、任选被1个或多个卤素、C_1-6烷氧基取代)，或者2个R^Q基团和与它们连接的原子一起形成含有0-2个杂原子的3-8元环系；

R^YL1、R^YL2各自独立地是H、OH、任选被1个或多个卤素或C_1-6烷氧基取代的直链或支链C_1-6烷基，或者R¹、R²和与它们连接的原子一起形成含有0-2个杂原子的3-8元环系；

n是0-10；并且

表示与PTM或ULM部分的连接点。

28.根据权利要求1至20中任一项所述的双官能化合物，其中以下的至少一种：

(a)PTM选自表4、6、8、10或12的化合物或表1的PTM；

(b)ULM选自表4、6、8、10和12的化合物或表3的ULM；

(c)接头(L)的单元A^L选自表4、6、8、10的化合物和或来自表2的L；或

(d)其组合。

29.根据权利要求1所述的双官能化合物，其中所述化合物选自由以下组成的群组：示例性化合物1-249、254-454和458-573。

30.一种组合物，其包含有效量的根据权利要求1-29中任一项所述的双官能化合物和药学上可接受的载体。

31.根据权利要求30所述的组合物，其中所述组合物还包含另外的生物活性剂或根据权利要求1-29中任一项所述的另一种双官能化合物中的至少一种。

32.根据权利要求31所述的组合物，其中所述另外的生物活性剂是抗癌剂(例如，表皮生长因子受体抑制剂)。

33.一种用于治疗受试者的疾病或病症的组合物，其包含药学上可接受的载体和有效量的至少一种根据权利要求1-29中任一项所述的化合物，所述方法包括向有需要的受试者施用所述组合物，其中所述化合物有效治疗或改善所述疾病或病症的至少一种症状。

34.根据权利要求33所述的组合物，其中所述疾病或病症与KRas的积聚、聚集、过度活化或其组合中的至少一种相关。

35.根据权利要求33或34所述的组合物，其中所述疾病或病症是与KRas的积聚、聚集和/或过度活化相关的癌症。

36.根据权利要求34或35所述的组合物，其中所述疾病或病症是胰腺癌、结肠癌、结直肠癌、肺癌、非小细胞肺癌、胆道恶性肿瘤、子宫内膜癌、宫颈癌、膀胱癌、肝癌、髓样白血病和乳腺癌。

37.根据权利要求34-36中任一项所述的组合物，其中所述疾病或病症是胰腺癌、结肠癌、肺癌、非小细胞肺癌。

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