WO2023138524A1 - Kras g12d降解剂及其在医药上的应用 - Google Patents

Kras g12d降解剂及其在医药上的应用 Download PDF

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WO2023138524A1
WO2023138524A1 PCT/CN2023/072303 CN2023072303W WO2023138524A1 WO 2023138524 A1 WO2023138524 A1 WO 2023138524A1 CN 2023072303 W CN2023072303 W CN 2023072303W WO 2023138524 A1 WO2023138524 A1 WO 2023138524A1
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吴颢
徐人奇
路渊
张洪波
王冬
郑航
谭耀明
王泽�
陆镜禾
李树森
杜亚军
时召涛
李正清
王国建
陈小平
周全
兰宏
王家炳
丁列明
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贝达药业股份有限公司
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    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/08—Bridged systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00

Definitions

  • the present invention relates to a novel compound having KRAS inhibitory and degradative activity.
  • the invention also relates to processes for the preparation of these compounds and pharmaceutical compositions containing them.
  • the KRAS gene is one of the most commonly mutated oncogenes. Data show that nearly 25% of cancer patients have KRAS gene mutations, especially in patients with lung cancer, rectal cancer and pancreatic cancer. Although many studies have been devoted to directly or indirectly targeting KRAS for a long time, they still face the problems of difficult targeting and limited effects.
  • sotolacil AMG-510
  • Sotoracil inhibits the biological activity of the mutant protein by covalently binding to the cysteine mutated at position 12 of KRAS.
  • KRAS G12D protein is still difficult to target due to the lack of covalently bound cysteine.
  • the G12D mutation is the highest proportion of all KRAS mutations, reaching 26%, and the mutation frequency is higher in malignant tumors such as pancreatic cancer and colorectal cancer that lack treatment. Therefore, if the KRAS G12D mutant protein can be successfully targeted, it will greatly meet the clinical needs.
  • PROTACs proteolysis-targeting chimeras
  • POI protein of interest
  • PROTAC Compared with the research and development of traditional small molecule inhibitors, is that this technology is expected to target “undruggable targets” in the traditional sense. and overcome the "drug resistance” produced by small molecule inhibitors. Moreover, PROTAC can catalyze multiple rounds of degradation of the target protein, and the complete removal of the protein will also produce a more potent drug effect. Therefore, if the PROTAC technology is applied to the KRAS G12D target, it is expected to completely inhibit the MAPK signaling pathway, give full play to the advantages of PROTAC, and greatly meet the clinical needs.
  • the present invention provides a compound with XYZ structure, its stereoisomer, tautomer, deuterated substance or pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein X is a KRAS protein-binding ligand compound represented by general formula (I), Y is a connecting chain connecting X and Z, and Z is an E3 ligase-binding ligand compound;
  • X 1 is selected from N or CR 6 ;
  • R 6 is selected from H, amino, substituted amino, cyano, C 1-6 alkyl, substituted C 1-6 alkyl, halogen, C 2-6 alkenyl, substituted C 2-6 alkenyl, C 3-6 cycloalkyl or substituted C 3-6 cycloalkyl;
  • L is selected from bond, O, S, NR 7 or alkynylene;
  • R 7 is selected from H, C 1-6 alkyl or C 3-6 cycloalkyl;
  • R is selected from H, hydroxyl, cyano, halogen or C 1-3 alkyl, and the C 1-3 alkyl is optionally substituted by one or more substituents selected from halogen, hydroxyl or cyano;
  • R 2 is selected from bond, C 1-6 alkyl, R 2 is optionally further substituted by one or more R 9 ;
  • R 3 is selected from H, halogen, C 1-6 alkyl or -OR 10 , said R 10 is selected from C 1-6 alkyl or C 3-8 cycloalkyl, R 10 is optionally further substituted by one or more substituents selected from hydroxyl, halogen, C 1-3 alkyl, C 1-3 alkoxy or cyclopropyl;
  • R is selected from H, amino, substituted amino, cyano, C 1-6 alkyl, substituted C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy, C 3-14 cycloalkyl-O-, C 1-6 haloalkyl, C 1-6 haloalkoxy, hydroxyl, halogen, C 2-6 alkenyl, substituted C 2-6 alkenyl, C 3-6 cycloalkyl or substituted C 3-6 cycloalkyl; -6 alkoxy, C 3-14 cycloalkyl-O-, C 1-6 haloalkyl , C 1-6 haloalkoxy, C 2-6 alkenyl or C 3-6 cycloalkyl optionally can also be substituted by one or more R a ;
  • R 8 is selected from H, C 1-6 alkyl, C 1-6 haloalkyl, C 1-6 hydroxyalkyl or C 1-6 aminoalkyl;
  • R 9 are each independently selected from H, halogen, hydroxyl, amino, oxo, nitro, cyano, carboxyl, C 1-6 alkyl, C 1-6 hydroxyalkyl, C 1-6 aminoalkyl, C 1-6 haloalkyl, C 1-6 alkoxy, C 1-6 haloalkoxy, C 1-6 heteroalkyl, C 3-8 cycloalkyl, 3-8 membered heterocyclyl, C 6-14 aryl or 5-14 membered heteroaryl;
  • Ring A is selected from C 3-14 cycloalkyl, 3-14 membered heterocyclic group, C 6-14 aryl or 5-14 membered heteroaryl;
  • R is each independently selected from H, halogen, hydroxyl, amino, oxo, nitro, cyano, carboxyl, C 1-6 alkyl, C 1-6 hydroxyalkyl, C 1-6 aminoalkyl, C 1-6 haloalkyl, C 1-6 alkoxy, C 1-6 haloalkoxy, C 1-6 heteroalkyl, C 3-8 cycloalkyl, 3-8 membered heterocyclyl, C 6-14 aryl or 5-14 membered heteroaryl;
  • n is selected from 0, 1, 2, 3 or 4.
  • X is a KRAS protein-binding ligand compound represented by general formula (I)
  • Y is a connecting chain connecting X and Z
  • Z is an E3 ligase-binding ligand compound
  • R is selected from H, amino, substituted amino, cyano, C 1-6 alkyl, substituted C 1-6 alkyl, halogen, C 2-6 alkenyl, substituted C 2-6 alkenyl, C 3-6 cycloalkyl or substituted C 3-6 cycloalkyl;
  • R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , X 1 , L, and m are as shown in formula (I).
  • X in formula (I) is selected from the following structures: Wherein, the definitions of R 3 , R 4 , R 5 , R 6 and R 8 are as shown in formula (I).
  • R in formula (I) is selected from said Optionally further substituted by one or more R 11 , each of which R 11 is independently selected from H, hydroxyl, cyano, amino, halogen, C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy, C 2-6 alkenyl, C 2-6 alkynyl or -C 0-3 alkylene-C 3-14 cycloalkyl.
  • R in formula (I) is selected from The R 11 is selected from H, halogen, C 1-3 alkyl or C 2-3 alkynyl.
  • Y in formula (I) is selected from the following structures: in,
  • Ring G or ring D are each independently selected from C 6-14 aryl, C 3-14 cycloalkyl, 5-14 membered heteroaryl or 3-14 membered heterocyclic group, said C 6-14 aryl, 3-14 membered cycloalkyl, 5-14 membered heteroaryl or 3-14 membered heterocyclic group are optionally further substituted by one or more substituents selected from halogen or C 1-3 alkyl;
  • E is selected from -O-, -NH- or -NCH 3 -;
  • n, n1, n2, and n3 are each independently selected from an integer of 0-10.
  • each of the above-mentioned G or D is independently selected from C 6-14 aryl, 5-14 membered heteroaryl or 3-14 membered heterocyclic group, and the C 6-14 aryl, 5-14 membered heteroaryl or 3-14 membered heterocyclic group is optionally further substituted by one or more substituents selected from halogen or C 1-3 alkyl;
  • the C 6-14 aryl is preferably
  • the C 3-14 cycloalkyl is preferably
  • the 5-14 membered heteroaryl is preferably selected from The 3-14 membered heterocyclic group is preferably selected from
  • Y in formula (I) is selected from the following structures: Wherein, n, n1, n2, and n3 are each independently selected from an integer of 0-10.
  • Y in formula (I) is selected from the following structures: Wherein, n, n1, n2, and n3 are each independently selected from an integer of 0-10.
  • Y in formula (I) is selected from the following structures: Wherein, n is selected from an integer of 0-10.
  • Z in formula (I) is selected from the following structures:
  • the Z in formula (I) is selected from the following structures:
  • XY in formula (I) is selected from the structures shown below: in,
  • R 3 , R 4 , R 5 , and X are the same as those described in formula (I);
  • the G ring is selected from C 3-14 cycloalkyl, 3-14 membered heterocyclic group, C 6-14 aryl or 5-14 membered heteroaryl, and the 3-14 membered heterocyclic group is a monocyclic or spiro ring; the C 3-14 cycloalkyl, C 6-14 aryl, 5-14 membered heteroaryl or 3-14 membered heterocyclic group is optionally further substituted by one or more substituents selected from halogen or C 1-3 alkyl.
  • the C 6-14 aryl is
  • the 5-14 membered heteroaryl is selected from
  • the 3-14 membered heterocyclic group is selected from The C 3-14 cycloalkyl, C 6-14 aryl, 5-14 membered heteroaryl or 3-14 membered heterocyclic group is optionally further substituted by one or more substituents selected from halogen or C 1-3 alkyl.
  • formula (I) is selected from the following compounds:
  • the present invention also provides a pharmaceutical composition, wherein the pharmaceutical composition comprises a therapeutically effective amount of at least one compound represented by formula (I), its stereoisomer, tautomer, deuterated compound or pharmaceutically acceptable salt.
  • the invention provides the application of the compound represented by structural formula (I) or its pharmaceutical composition in the preparation of medicine.
  • the present invention further provides the preferred technical scheme of said application:
  • the application is in the preparation of medicines for treating and/or preventing cancer.
  • the application is the application of preparing medicines for treating diseases mediated by KRAS G12D.
  • said disease is cancer.
  • the cancer is selected from breast cancer, multiple myeloma, bladder cancer, endometrial cancer, gastric cancer, cervical cancer, rhabdomyosarcoma, non-small cell lung cancer, small cell lung cancer, pleomorphic lung cancer, ovarian cancer, esophageal cancer, melanoma, colorectal cancer, hepatoma, head and neck tumors, hepatocholangiocarcinoma, myelodysplastic syndrome, malignant glioma, prostate cancer, thyroid cancer, Schwann cell tumor, lung squamous cell carcinoma, lichenoid keratosis, synovial sarcoma , skin cancer, pancreatic cancer, testicular cancer, or liposarcoma.
  • the present invention also provides a method for treating and/or preventing diseases, comprising administering a therapeutically effective amount of at least one compound represented by structural formula (I), its stereoisomer, tautomer, deuterated substance or pharmaceutically acceptable salt, or a pharmaceutical composition containing it to the subject.
  • the present invention also provides a method for treating cancer, comprising administering a therapeutically effective amount of at least one compound represented by structural formula (I), its stereoisomer, tautomer, deuterated substance or pharmaceutically acceptable salt, or a pharmaceutical composition containing it to the subject.
  • halogen refers to fluorine, chlorine, bromine or iodine, unless otherwise specified.
  • connection order of the groups in the present invention is not particularly limited, and it can be connected from left to right or from right to left.
  • alkyl includes linear or branched monovalent saturated hydrocarbon groups.
  • alkyl includes methyl, ethyl, propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, n-pentyl, 3-(2-methyl)butyl, 2-pentyl, 2-methylbutyl, neopentyl, n-hexyl, 2-hexyl, 2-methylpentyl, and the like.
  • “ 1-8 " in “ 1-8 alkyl” refers to a group comprising 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8 carbon atoms arranged in a linear or branched chain.
  • alkylene refers to a divalent alkyl linking group. Alkylene formally refers to an alkane in which the two CH bonds are replaced by the point of attachment of the alkylene to the rest of the compound. Similarly, “C 1-3 " in C 1-3 alkylene refers to an alkylene group containing 1, 2 or 3 carbon atoms, including but not limited to methylene, 1,2-ethylene, 1,3-propylene or 1,2-isopropylene.
  • Alkoxy refers to the oxygen ether form of the aforementioned linear or branched alkyl, ie -O-alkyl.
  • aryl in the present invention, unless otherwise stated, refers to an unsubstituted or substituted single group of atoms including carbocyclic rings Ring or fused ring aromatic groups.
  • C 6-18 aryl more preferably aryl is C 6-10 monocyclic or bicyclic aromatic ring group.
  • Preferred are phenyl, naphthyl; most preferred is naphthyl.
  • the aryl ring may be fused to a heteroaryl, heterocyclyl, or cycloalkyl, where the ring bonded to the parent structure is an aryl ring, non-limiting examples include, but are not limited to, benzocyclopentyl.
  • aryl in the present invention, unless otherwise stated, refers to an unsubstituted or substituted monocyclic or condensed ring aromatic group including carbocyclic atoms. Preferably C 6-18 aryl, more preferably aryl is C 6-10 monocyclic or bicyclic aromatic ring group. Preferred are phenyl, naphthyl; most preferred is naphthyl.
  • the aryl ring may be fused to a heteroaryl, heterocyclyl, or cycloalkyl, where the ring bonded to the parent structure is an aryl ring, non-limiting examples include, but are not limited to, benzocyclopentyl.
  • heterocyclyl refers to a ring system having at least one cyclized alkyl or cyclized alkenyl group containing a heteroatom selected from N, O and/or S.
  • the heterocyclyl group may include monocyclic or polycyclic rings (eg, having 2, 3 or 4 fused rings, spiro rings, bridged rings, etc.).
  • a heterocyclyl group can be attached to the rest of the compound via a ring-forming carbon atom or a ring-forming heteroatom.
  • a 3-14-membered heterocyclic group is preferred, and "3-14-membered" in a 3-14-membered heterocyclic group refers to a heterocyclic group composed of 3-14 C, N, O or S ring-forming atoms; more preferably a 5-14-membered heterocyclic group and a 3-8-membered heterocyclic group, and even more preferably a 3-6-membered heterocyclic group.
  • nitrogen or sulfur heteroatoms can be selectively oxidized, and nitrogen heteroatoms can be selectively quaternized.
  • heterocyclic groups include, but are not limited to Azetidinyl, pyrrolidinyl, piperidinyl, piperazinyl, oxopiperazinyl, oxopiperidinyl, tetrahydrofuranyl, dioxolanyl, tetrahydroimidazolyl, tetrahydrothiazolyl, tetrahydrooxazolyl, tetrahydropyranyl, morpholinyl, thiomorpholinyl, thiomorpholinyl sulfoxide, thiomorpholinyl sulfone and tetrahydrooxadiazolyl.
  • the heterocyclyl may be fused to an aryl, heteroaryl or cycloalkyl ring, where the ring bonded to the parent structure is the heterocyclyl.
  • heteroaryl in the present invention, unless otherwise stated, refers to a monocyclic or polycyclic (e.g., 2, 3 or 4 fused, spiro, bridged, etc.) aromatic heterocyclic ring having at least one heteroatom selected from N, O and/or S, and wherein the nitrogen or sulfur heteroatom can be optionally oxidized, and the nitrogen heteroatom can be optionally quaternized.
  • a 5-18 membered heteroaryl group wherein "5-18 membered” in the 5-18 membered heteroaryl group refers to a heteroaryl group consisting of 5-18 C, N, O or S ring atoms, more preferably a 5-10 membered heteroaryl group.
  • heteroaryl group may be fused to an aryl, heterocyclyl or cycloalkyl ring where the ring attached to the parent structure is a heteroaryl ring.
  • cycloalkyl refers to a ring system having at least one cycloalkyl group.
  • a C 3-14 cycloalkyl group is preferred, wherein “C 3-14 " means that the cycloalkyl group can have 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 or 14 ring atoms.
  • Cycloalkyl groups can include monocyclic and polycyclic rings (eg, having 2, 3 or 4 fused rings, spiro rings, bridged rings, etc.).
  • the cycloalkyl group includes but not limited to cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, etc.; the cycloalkyl group can also be fused to an aryl, heterocyclyl or heteroaryl ring, wherein the ring connected to the parent structure is a cycloalkyl group.
  • substituted means that one or more hydrogen atoms in the group are respectively replaced by the same or different substituents.
  • substituents are independently selected from groups comprising -F, -Cl, -Br, -I, -OH, trifluoromethoxy, ethoxy, prop
  • linking group When the number of a linking group is 0, such as -(CH 2 ) 0 -, it means that the linking group is a bond.
  • pharmaceutically acceptable salt refers to a salt prepared from a pharmaceutically acceptable non-toxic base or acid.
  • salts derived from inorganic bases include aluminum, ammonium, calcium, copper (superior and subvalent), ferric, ferrous, lithium, magnesium, manganese (superior and subvalent), potassium, sodium, zinc, and the like. Particular preference is given to the ammonium, calcium, magnesium, potassium and sodium salts.
  • Nontoxic organic bases from which pharmaceutically acceptable salts can be derived include primary, secondary and tertiary amines, also cyclic amines and substituted amines, such as naturally occurring and synthetic substituted amines.
  • non-toxic organic bases capable of forming salts, including ion exchange resins and arginine, betaine, caffeine, choline, N',N'-dibenzylethylenediamine, diethylamine, 2-diethylaminoethanol, 2-dimethylaminoethanol, ethanolamine, ethylenediamine, N-ethylmorpholine, N-ethylpiperidine, reduced glucosamine, glucosamine, histidine, isopropylamine, lysine, methylglucamine, morpholine, piperazine, piperidine, polyamine resins, promethazine Caine, chloroprocaine, purine, theobromine, triethylamine, trimethylamine, tripropylamine, tromethamine, etc.
  • ion exchange resins and arginine betaine, caffeine, choline, N',N'-dibenzylethylenediamine, diethylamine, 2-diethylamino
  • the compound provided by the present invention is a base
  • its corresponding salt can be conveniently prepared from pharmaceutically acceptable non-toxic acids, including inorganic acids and organic acids.
  • acids include, for example, acetic acid, benzenesulfonic acid, benzoic acid, camphorsulfonic acid, citric acid, ethanesulfonic acid, formic acid, fumaric acid, gluconic acid, glutamic acid, hydrobromic acid, hydrochloric acid, isethionic acid, lactic acid, maleic acid, malic acid, mandelic acid, methanesulfonic acid, mucic acid, nitric acid, pamoic acid, pantothenic acid, phosphoric acid, succinic acid, sulfuric acid, oxalic acid, propionic acid, glycolic acid, hydroiodic acid, perchloric acid, cyclamate, salicylic acid, 2- Naphthalenesulfonic acid, saccharinic acid, trifluoroacetic acid, tartaric acid
  • prodrugs of the compounds of the present invention are included in the protection scope of the present invention.
  • the prodrugs refer to functional derivatives that are readily converted in vivo into the desired compound.
  • any pharmaceutically acceptable salt, ester, salt of an ester or other derivatives of the compound of the present application which can directly or indirectly provide the compound of the present application or its pharmaceutically active metabolite or residue after administration to the recipient.
  • the compounds of the present invention may contain one or more asymmetric centers and may thereby give rise to diastereoisomers and optical isomers.
  • the present invention includes all possible diastereoisomers and their racemic mixtures, their substantially pure resolved enantiomers, all possible geometric isomers and their pharmaceutically acceptable salts.
  • the present invention includes any possible tautomers and their pharmaceutically acceptable salts, and their mixtures.
  • substitution of compounds of formula (I) with heavier isotopes may afford certain therapeutic advantages due to greater metabolic stability, eg increased in vivo half-life or reduced dosage requirements.
  • pharmaceutical composition refers to a mixture of one or more compounds of the present application or their pharmaceutically acceptable salts and pharmaceutically acceptable auxiliary materials.
  • the purpose of a pharmaceutical composition is to facilitate administration of a compound of the present application to an organism.
  • compositions comprising "a” pharmaceutically acceptable excipient may be interpreted to mean that the pharmaceutical composition includes “one or more” pharmaceutically acceptable excipients.
  • pharmaceutically acceptable excipients refers to those excipients that have no obvious stimulating effect on the organism and will not impair the biological activity and performance of the active compound. Suitable excipients are well known to those skilled in the art, such as carbohydrates, waxes, water-soluble and/or water-swellable polymers, hydrophilic or hydrophobic materials, gelatin, oils, solvents, water and the like.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be prepared by combining the compound of the present application with suitable pharmaceutically acceptable auxiliary materials, For example, it can be formulated into solid, semi-solid, liquid or gaseous preparations, such as tablets, pills, capsules, powders, granules, ointments, emulsions, suspensions, suppositories, injections, inhalants, gels, microspheres and aerosols.
  • suitable pharmaceutically acceptable auxiliary materials such as tablets, pills, capsules, powders, granules, ointments, emulsions, suspensions, suppositories, injections, inhalants, gels, microspheres and aerosols.
  • Typical routes of administration of a compound of the present invention, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a pharmaceutical composition thereof include, but are not limited to, oral, rectal, topical, inhalation, parenteral, sublingual, intravaginal, intranasal, intraocular, intraperitoneal, intramuscular, subcutaneous, intravenous administration.
  • treatment generally refers to obtaining a desired pharmacological and/or physiological effect.
  • the effect may be therapeutic in terms of partial or complete stabilization or cure of the disease and/or side effects due to the disease.
  • treatment encompasses any treatment of a disease in a patient, including: (a) inhibiting the symptoms of the disease, ie arresting its development; or (b) relieving the symptoms of the disease, ie causing regression of the disease or symptoms.
  • an effective amount means an amount of a compound of the present application that (i) treats or prevents a particular disease, condition or disorder, (ii) alleviates, ameliorates or eliminates one or more symptoms of a particular disease, condition or disorder, or (iii) prevents or delays the onset of one or more symptoms of a particular disease, condition or disorder described herein.
  • the amount of a compound of the present application that constitutes a “therapeutically effective amount” will vary depending on the compound, the disease state and its severity, the mode of administration, and the age of the mammal to be treated, but can be routinely determined by those skilled in the art based on their own knowledge and this disclosure.
  • Figure 1 is a graph showing the degradation effect of the compounds of the present invention on KRAS G12D in AGS cells.
  • Fig. 2 is a verification diagram of the mechanism of PROTAC action of the compound of the present invention in AGS cells.
  • DIEA N,N-Diisopropylethylamine
  • Dioxane dioxane
  • HOAc glacial acetic acid
  • POCl 3 phosphorus oxychloride
  • THF Tetrahydrofuran
  • TFA trifluoroacetic acid
  • HATU 2-(7-azobenzotriazole)-N,N,N',N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate
  • TBAF Tetrabutylammonium fluoride
  • Pre-HPLC preparation of high performance liquid phase
  • Pre-TLC preparation of thin-layer plates
  • CataCXium A Pd G3 [n-butylbis(1-adamantyl)phosphine](2-amino-1,1'-biphenyl-2-yl)palladium(II) methanesulfonate.
  • the filter cake was collected, added to a mixture of 700 mL saturated aqueous sodium bicarbonate and 700 mL ethyl acetate, alkalized, extracted, and separated; the aqueous phase was extracted with 350 mL ethyl acetate, and separated; the ethyl acetate phase was combined, and 300 mL of saturated aqueous sodium chloride was added to wash and separate; the organic phase was dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, desiccant removed, and concentrated to obtain the target product M-2 (36.3 g, yield 94.0%).
  • compound M-3 (57.50 g) was dissolved in DMF (22.00 mL), zinc cyanide (32.22 g), tetrakistriphenylphosphine palladium (12.19 g) and powdered Molecular sieves (20.00 mL) were added therein, and heated and kept at 100° C. for about 7 hours in a nitrogen atmosphere. Remove the oil bath, cool down to room temperature naturally, and wait for post-processing. Diatomaceous earth was used to filter, and the reaction mixture was filtered and sucked dry; the filtrate was collected and concentrated at 60-70°C to obtain a crude light yellow solid.
  • reaction solution was cooled to below 10°C in an ice-water bath, then 500mL of saturated ammonium chloride aqueous solution was added, and a light yellow solid precipitated, and 1000mL of water was added; then transferred to a 5L beaker, and 3000mL of water was added; stirred for 1 hour, filtered, and drained; the filter cake was collected, placed in a vacuum oven, and dried at 50-55°C to constant weight to obtain the target product M-6 (18.3g, yield 84.93%).
  • tert-butyl 4-(hydroxymethyl)piperidine-1-carboxylate (5.0 g) was dissolved in DCM (50 mL), followed by Add triethylamine (9.68mL) and p-toluenesulfonyl chloride (5.31g), react at room temperature for 15h, add an appropriate amount of water to the reaction liquid to quench, then add an appropriate amount of ethyl acetate for extraction, collect the organic phase, dry over anhydrous sodium sulfate, filter and concentrate under reduced pressure to obtain 8.02g of product, namely compound M6-1, which is directly used in the next step.
  • M9-2 (88g) was added to a 1L three-neck flask, 500mL DMF was added, and CuCN (31g) was added. After heating up to 125°C for 16 hours, 2L of water was added dropwise, then added to 2L of water, filtered, the filter cake was washed with water, and EA was dissolved. The aqueous phase was extracted twice with EA, the organic phases were collected and combined, and concentrated to obtain the target product M9-3 (55.4 g). ESI-MS m/z: 207.0[M] - .
  • Example 1 Compound (2S, 4R)-1-((S)-2-(7-((1-((4-((1R, 5S)-3,8-diazacyclo[3.2.1]octane-3-yl)-7-(8-ethynyl-7-fluoro-3-hydroxynaphthalene-1-yl)-8-fluoropyridin[4,3-d]pyrimidin-2-yl)oxy)methyl)cyclopropyl(methyl)amino)heptanamide Synthesis of -3,3-dimethylbutyryl)-4-hydroxy-N-(4-(4-methylthiazole-5-benzyl)pyrrolidine
  • intermediate M (20g) was added to a 500mL single-necked flask, DMF (100mL) and THF (100mL) were added to it, and compound 1,1-cyclopropanedimethanol (23.9g), cesium carbonate (45.6g), DABCO (0.52g) were added to it, and reacted at 40°C for 5h under the protection of N2 .
  • the reaction mixture was cooled to room temperature, 200mL of water was poured into it, solids were precipitated, filtered, the filter cake was rinsed with water, and the filter cake was dried to obtain 19.8g of compound 1-1.
  • Example 47 Compound (2S,4R)-1-((S)-2-(7-((1-((4-((1R,5S)-3,8-diazacyclo[3.2.1] Octane-3-yl)-7-(8-ethynyl-7-fluoro-3-hydroxynaphthalen-1-yl)-8-fluoropyridin[4,3-d]pyrimidin-2-yl)oxy)methyl)cyclopropyl(methyl)amino)heptanyl)-3,3-dimethylbutyryl)-4-hydroxy-N-(4-(4-methylthiazole-5-benzyl)pyrrolidine
  • Example 130 (2S,4R)-1-((S)-2-(4-(1R,5S)-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-3-yl)-7-(8-ethynyl-7-fluoro-3-hydroxynaphthalen-1-yl)-8-fluoropyridin[4,3-d]pyrimidin-2-yl)oxy)methyl)cyclopropyl)methyl)-3,9-diazaspiro[5 .5] Synthesis of undecyl-3-yl)benzamide)-3,3-dimethylbutyryl)-4-hydroxy-N-((S)-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethyl)pyrrolidine-2-carboxamide
  • Example 133 (2S,4R)-1-((S)-2-(4-(7-((1-(((4-((1R,5S)-3,8-diazabicyclo [3.2.1] Xin-3-Legal) -7- (8-acetylene-7-fluorine-3-hydroxyl-1-yl) -8-fluorpyrine [4,3-D] pyrimidine-2-base) cyclopropyl) (methyl) amino) -2-nitrogen tack [3.5] -2-yidamin) -3,3-base) -3,3-base) Di metamyrateramine) -4-hydroxyl-N-ethyl) pyrodermid-2-metamide
  • Example 148 Compound (2S, 4R)-1-((2S)-2-(4-((1-((1-)(((7-(2-amino-3-cyanobenzo[b]thiophen-4-yl)-4-((1R,5S)-3,8-diazabicyclo[3.2.1]oct-3-yl)-6-chloro-8-fluoroquinazolin-2-yl)oxy)methyl)cyclopropyl) Synthesis of methyl)piperidin-4-yl)methoxy)benzamido)-3,3-dimethylbutyryl)-4-hydroxy-N-(((S)-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethyl)pyrrolidine-2-carboxamide
  • Example 149 Compound ((3R, 7aR)-7a-(((7-(2-amino-3-cyanobenzo[b]thiophen-4-yl)-4-((1R,5S)-3,8-diazabicyclo[3.2.1]oct-3-yl)-6-chloro-8-fluoroquinazolin-2-yl)oxy)methyl)hexahydro-1H-pyrrolazin-3-yl)methyl 4-(1-( Synthesis of ((S)-1-((2S,4R)-4-hydroxy-2-((((R)-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethyl)carbamoyl)pyrrolidin-1-yl)-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl)-1H-1,2,3-triazol-4-yl)piperidine-1-carboxylate
  • Example 150 Compound ((3R, 7aR)-7a-(((7-(2-amino-3-cyanobenzo[b]thiophen-4-yl)-4-((1R,5S)-3,8-diazabicyclo[3.2.1]oct-3-yl)-6-chloro-8-fluoroquinazolin-2-yl)oxy)methyl)hexahydro-1H-pyrrolazin-3-yl)methyl(4-(1- Synthesis of (((S)-1-((2S,4R)-4-hydroxy-2-(((2S)-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethyl)carbamoyl)pyrrolidin-1-yl)-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl)-1H-1,2,3-triazol-4-yl)phenyl)carbamate
  • Example 151 Compound ((3R, 7aR)-7a-(((7-(2-amino-3-cyanobenzo[b]thiophen-4-yl)-4-((1R,5S)-3,8-diazabicyclo[3.2.1]oct-3-yl)-6-chloro-8-fluoroquinazolin-2-yl)oxy)methyl)hexahydro-1H-pyrrolazin-3-yl)methyl 6-((S Synthesis of )-1-((2S, 4R)-4-hydroxy-2-((((R)-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethyl)carbamoyl)pyrrolidin-1-yl)-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl)carbamoyl)-2-azaspiro[3.3]heptane-2-carboxylate
  • Example 152 ((7-(2-Amino-3-cyanobenzo[b]thiophen-4-yl)-4-((1R,5S)-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-3-yl)-6-chloro-8-fluoroquinazolin-2-yl)oxy)methyl)hexahydro-1H-pyrrolidin-3-yl)methyl(6-((R)-1-((2R)-4-hydroxy- 2-((R)-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethylcarbamoyl)pyrrolidine-1- Synthesis of (yl)-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl)amino)-6-oxohexyl)carbamate
  • tert-butyl 4-(hydroxymethyl)piperidine-1-carboxylate (5.0 g) was dissolved in DCM (50 mL), then triethylamine (9.68 mL) and p-toluenesulfonyl chloride (5.31 g) were added successively, and reacted at room temperature for 15 h, quenched with an appropriate amount of water in the reaction solution, and then added an appropriate amount of ethyl acetate for extraction. used directly in the next step.
  • Dissolve 152-4 (1.3g) in THF (12.00mL), MeOH (12.00mL) mixed solution, add sodium hydroxide (480mg) in water (12.0mL) solution, react at 40°C for 1h, after the reaction solution is cooled to room temperature, add 1M sulfuric acid to adjust to acidity, add an appropriate amount of DCM/MeOH for extraction, collect the organic phase, dry over anhydrous sodium sulfate, filter and distill off the solvent under reduced pressure to obtain 1.24g of the product, namely 152- 5.
  • reaction solution was added dropwise to a mixed solution of ethyl acetate and saturated sodium bicarbonate, the organic phase was collected by extraction, dried over anhydrous sodium sulfate, and sent for sample preparation for liquid phase separation to obtain 146.0 mg of yellow powder, namely compound 152.
  • Example 153 The compound ((7-(2-amino-3-cyanobenzo[b]thiophen-4-yl)-4-((1R,5S)-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-3-yl)-6-chloro-8-fluoroquinazolin-2-yl)oxy)methyl)hexahydro-1H-pyrrolidin-3-yl)methyl(6-((R)-1-((2R)-4-hydroxy Synthesis of 2-((R)-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethylcarbamoyl)pyrrolidin-1-yl)-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl)amino)-6-oxohexyl)carbamate
  • 6-aminocaproic acid methyl ester hydrochloride (1.00g) was dissolved in 5.00mL THF and 5.00mL MeOH mixed solvent, then solid sodium bicarbonate (2.30g) was added, reacted at room temperature for 2h, filtered to remove the insoluble solid, the filter cake was washed several times with THF, the filtrate was collected, and the solvent was distilled off under reduced pressure to obtain 0.658g of an oily product, namely compound 153-1.
  • Example 154 Compound ((7-(2-amino-3-cyanobenzo[b]thiophen-4-yl)-4-((1R,5S)-3,8-diazepine Bicyclo[3.2.1]octane-3-yl)-6-chloro-8-fluoroquinazolin-2-yl)oxy)methyl)hexahydro-1H-pyrrolidin-3-yl)methyl(6-((R)-1-((2R)-4-hydroxyl-2-((R)-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethylcarbamoyl)pyrrolidin-1-yl)-3,3-dimethyl-1- Synthesis of oxobutan-2-yl)amino)-4-oxobutyl)carbamate
  • Example 155 Compound ((7-(2-amino-3-cyanobenzo[b]thiophen-4-yl)-4-((1R,5S)-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-3-yl)-6-chloro-8-fluoroquinazolin-2-yl)oxy)methyl)hexahydro-1H-pyrrolidin-3-yl)methyl(6-((R)-1-((2R)-4-hydroxy Synthesis of 2-((R)-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethylcarbamoyl)pyrrolidin-1-yl)-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl)amino)-8-oxooctyl)carbamate
  • Example 156 Compound ((3R,7aR)-7a-((7-(2-Amino-3-cyanobenzo[b]thiophen-4-yl)-4-((1R,5S)-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-3-yl)-6-chloro-8-fluoroquinazolin-2-yl)oxy)methyl)hexahydro-1H-pyrrolizin-3-yl)methyl 2-(S) Synthesis of -1-((2S,4R)-4-hydroxy-2-((S)-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethyl)carbamoyl)pyrrolidin-1-yl)-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl)carbamoyl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
  • Example 157 Compound ((3S, 7aS)-7a-((7-(2-amino-3-cyanobenzo[b]thiophen-4-yl)-4-((1R, 5S)-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octane-3-yl)-6-chloro-8-fluoroquinazolin-2-yl)oxy)methyl)hexahydro-1H-pyrrolidin-3-yl)methyl 4-(2-((S)-1-((2S)-4-hydroxyl-2-((S)-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethylcarbamoyl)pyrrolidine-1 Synthesis of -yl)-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl)amino)-2-oxoethyl)piperidine-1-carboxylate
  • Example 158 Compound ((3R,7aR)-7a-((7-(2-Amino-3-cyanobenzo[b]thiophen-4-yl)-4-((1R,5S)-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-3-yl)-6-chloro-8-fluoroquinazolin-2-yl)oxy)methyl)hexahydro-1H-pyrrolizin-3-yl)methyl 4-(S) Synthesis of -1-((2S)-4-hydroxy-2-((S)-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethyl)carbamoyl)pyrrolidin-1-yl)-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl)carbamoyl)piperidine-1-carboxylate
  • Example 159 Compound ((3R,7aR)-7a-((7-(2-amino-3-cyanobenzo[b]thiophen-4-yl)-4-((1R,5S)-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-3-yl)-6-chloro-8-fluoroquinazolin-2-yl)oxy)methyl)hexahydro-1H-pyrrolizin-3-yl)methyl 4-(S) Synthesis of 1-((2S)-4-hydroxy-2-((S)-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethyl)carbamoyl)pyrrolidin-1-yl)-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl)carbamoyl)piperidine-1-carboxylate
  • compound 159-2 (180 mg) was dissolved in 3.0 mL of anhydrous methanol, anhydrous potassium carbonate (167 mg), (1-diazo-2-oxopropyl) dimethyl phosphonate (174 mg) were added, and reacted at room temperature for 3 h.
  • the reaction solution was extracted by adding appropriate amount of water and ethyl acetate, the organic phase was collected, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under reduced pressure to obtain compound 159-3 (110 mg), ESI-MS m/z: 194[M+H-56] + .
  • compound 159-3 (110mg), 2S,4R-1-(S)-2-azido-3,3-dimethylbutyryl)-4-hydroxy-N-(S)-1-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethyl)pyrrolidine-2-carboxamide (229mg), anhydrous copper sulfate (63.3mg) and sodium ascorbate (227mg) were dissolved in 4.0mL tert-butyl Alcohol, 4.0mL water and 4.0mL THF mixed solvent, react at room temperature for 2h.
  • 159-6 (54.0mg) was dissolved in 5.00mL DCM, then 2.00mL TFA was added, reacted at room temperature for 0.5h, the reaction solution was directly concentrated, reconstituted in 5.00mL DCM, concentrated again, and separated and purified by Pre-HPLC to obtain compound 159 (12.1mg).
  • Example 160 Compound (2S, 4R)-1-(2S)-2-(4-(7-(3R, 7aR)-7a-((7-(2-amino-3-cyanobenzothiophen-4-yl)-4-((1R,5S)-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octane-3-yl)-6-chloro-8-fluoroquinazolin-2-yl)oxy)methyl)hexahydro Synthesis of -1H-pyrrolazine-3-carbonyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)-1H-1,2,3-triazol-1-yl)-3,3-dimethylbutyryl)-4-hydroxy-N-((S)-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethyl)pyrrolidine-2-carboxamide
  • intermediate 161-1 (100.0 mg) were dissolved in 2.00 mL of DMF, then N,N-diisopropylethylamine (0.08 mL) and N,N,N',N'-tetramethyl-O-(7-azabenzotriazol-1-yl)urea hexafluorophosphate (38.0 mg) were added, and reacted at room temperature for 30 minutes. An appropriate amount of water was added to the reaction liquid to precipitate a solid, and the collected solid was separated and purified by column chromatography to obtain compound 160-3 (45.0 mg). ESI-MS m/z: 746[M+2H] + /2.
  • 160-3 (45.0mg) was dissolved in MeOH (2.00mL) mixed solution, lithium hydroxide (4.0mg) in water (1.0mL) solution was added, and reacted at room temperature for 1h. After the reaction solution was cooled to room temperature, 1M sulfuric acid was added to adjust to neutrality, and an appropriate amount of DCM/MeOH was added for extraction. The organic phase was collected, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under reduced pressure to obtain 160-4 (25.0mg). ESI-MS m/z: 725[M+2H] + /2.
  • Example 161 Compound 7-((3R, 7aR)-7a-((7-(2-amino-3-cyanobenzo[b]thiophen-4-yl)-4-((1R,5S)-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octane-3-yl)-6-chloro-8-fluoroquinazolin-2-yl)oxy)methyl)hexahydro-1H-pyrrolazine-3-carbonyl)-N-( Synthesis of (S)-1-((2S,4R)-4-hydroxy-2-(S)-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethylcarbamoyl)pyrrolidin-1-yl)-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl)-7-azaspiro[3.5]nonane-2-carboxamide
  • Example 162 Compound ((3R, 7aR)-7a-(((4-((1R, 5S)-3,8-diazabicyclo[3.2.1]oct-3-yl)-7-(8-ethynyl-7-fluoro-3-hydroxynaphthalen-1-yl)-8-fluoropyrido[4,3-d]pyrimidin-2-yl)oxy)methyl)hexahydro-1H-pyr Alloxazin-3-yl)methyl 2-(((S)-1-((2S,4R)-4-hydroxy-2-((((S)-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethyl)carbamoyl)pyrrolidin-1-yl)-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl)carbamoyl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
  • Example 163 Compound ((3R, 7aR)-7a-(((4-((1R, 5S)-3,8-diazabicyclo[3.2.1]oct-3-yl)-7-(8-ethyl-7-fluoro-3-hydroxynaphthalen-1-yl)-8-fluoropyrido[4,3-d]pyrimidin-2-yl)oxy)methyl)hexahydro-1H-pyrrolazin-3-yl)methyl 2-( ((S)-1-((2S,4R)-4-Hydroxy-2-((((S)-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethyl)carbamoyl)pyrrolidin-1-yl)-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl)carbamoyl a)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
  • Example 164 Compound (2S,4R)-1-((S)-2-(4-(7-((1-(((4-((1R,5S)-3,8-diazabicyclo[3.2.1]oct-3-yl)-7-(8-ethynyl-7-fluoro-3-hydroxynaphthalen-1-yl)-8-fluoropyrido[4,3-d]pyrimidin-2-yl)oxy)methyl)cyclopropyl )methyl)-2,7-diazaspiro[3.5]non-2-yl)benzamido)-3,3-dimethylbutyryl)-4-hydroxy-N-(((S(1-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethyl)pyrrolidine e-2-carboxamide
  • Example 165 Compound ((3R,7aR)-7a-((7-(2-Amino-3-cyanobenzo[b]thiophen-4-yl)-4-((1R,5S)-3,8-diazabicyclo[3.2.21]oct-3-yl)-6-chloro-8-fluoroquinazolin-2-ylpentazol-2-ylbenzobenzo-pyrazol-5-yl)phenyl)-2-hydroxyethyl Synthesis of (yl)carbamoyl)-4-hydroxypyrrolidin-1-yl)-3-methyl-1-oxobutan-2-yl)-1H-1,2,3-triazol-4-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-carboxylic acid
  • Example 166 Compound ((3R,7aR)-7a-((7-(2-Amino-3-cyanobenzo[b]thiophen-4-yl)-4-((1R,5S)-3,8-diazabicyclo[3.2.1]oct-3-yl)-6-chloro-8-fluoroquinazolin-2-ylpentazol-2-ylbenzobenzothiazol-5-yl)phenyl)ethyl)carbamoyl Synthesis of )pyrrolidin-1-yl)-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl)carbamoyl)-2-azaspiro[3.5]nonan-2-carboxylic acid
  • Example 167 Compound (2S, 4R)-1-((2S)-2-(4-(6-(((3R, 7aR)-7a-((7-(2-amino-3-cyanobenzo[b]thiophen-4-yl)-4-((1R,5S)-3,8-thiophen-4-yl, 4-(1R,5S)-3,3,8-diazabicyclo[3.2.11 ]oct-3-yl)-3-oxo-3-yl)-6-chloro-8-fluoroquinolin-2-ylquinolin-2-yl)oxymethylhexahydro-1H-pyrrolidin-3-ylmethoxyethylene)1,2,3-triazol-1-yl)-3,3-dimethylbutyryl)-4-hydroxy-N-((S)-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethyl)pyrrolidine-2-carboxamide synthesis of
  • Example 168 Compound ((3R,7aR)-7a-((7-(2-Amino-3-cyanobenzo[b]thiophen-4-yl)-4-((1R,5S)-3,8-diazabicyclo[3.2.21]oct-3-yl)-6-chloro-8-fluoroquinazolin-2-yl-quinazolinyl-2-yl)oxymethylthiazol-5-yl)phenyl)ethyl)aminomethyl Synthesis of acyl)pyrrolidin-1-yl)-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl)carbamoyl)phenyl)azetidine-1-carboxylate
  • Compound 168-2 (660mg) was added to a 50mL single-necked bottle, 10mL MeOH and 2mL water were added, sodium hydroxide (410mg) was added at room temperature, and the temperature was raised to 60°C for 2h. After the reaction, water was added to the reaction solution to adjust the pH to 6, extracted twice with EA, washed with brine, dried over anhydrous sodium sulfate, and concentrated to obtain the target compound 168-3 (550 mg).
  • Example 169 Compound ((3R,7aR)-7a-(((7-(2-amino-3-cyanobenzo[b]thiophen-4-yl)-4-((1R,5S)-3,8-diazabicyclo[3.2.1]oct-3-yl)-6-chloro-8-fluoroquinazolin-2-yl)oxy)methyl)hexahydro-1H-pyrrolazin-3-yl)methyl 4-(4-( Synthesis of ((S)-1-((2S,4R)-4-hydroxy-2-(((S)-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethyl)carbamoyl)pyrrolidin-1-yl)-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl)carbamoyl)phenyl)piperidine-1-carboxylate
  • Example 170 Compound (2S, 4R)-1-((2S)-2-(4-(1-((3R, 7aR)-7a-((7-(2-amino-3-cyanobenzo-3-cyanobenzo[b]thiophen-4-yl)-4-((1R,5S)-3,8-thiophen-4-ylcarbonylpiperidine-4-4-dimethylbutyryl)-4-hydroxy-N-( Synthesis of (S)-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethyl)pyrrolidine-2-carboxamide
  • Example 172 (2S,4R)-1-((2S)-2-(4-(2-((1-((4-(3,8-diazabicyclo[3.2.1]oct-3-yl)-7-(8-ethynyl-7-fluoro-3-hydroxynaphthalen-1-yl)-8-fluoropyridin[4,3-d]pyrimidin-2-yl)oxy)methyl)cyclopropyl)methyl)-2,7-diaze Heterospiro[3.5]non-7-yl)benzamido)-3,3-dimethylbutyryl)-4-hydroxy-N-((S)-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethyl)pyrrolidine-2-carboxamide
  • Compound 172-5 (57.8 mg) was added to a 25 mL single-necked bottle, dissolved in DMF (3 mL), CsF (88.6 mg) was added, and reacted at room temperature for 1 h. Add 15mL of water to the reaction solution, solid precipitates out, filter, rinse the filter cake with water, and dry the filter cake to obtain 36.4 mg of the target compound, namely compound 172-6.
  • Example 173 6-(7-((1-(((4-((1R,5S)-3,8-diazabicyclo[3.2.1]oct-3-yl)-7-(8-ethynyl-7-fluoro-3-hydroxynaphthalen-1-yl)-8-fluoropyridin[4,3-d]pyrimidin-2-yl)oxy)methyl)cyclopropyl)methyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2- Base)-N-((S)-1-((2S,4R)-4-hydroxy-2-(((R)-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethyl)carbamoyl)pyrrolidin-1-yl)-3,3-dimethyl 1-oxobutan-2-yl)nicotinamide
  • Example 175 (2S,4R)-1-((S)-2-(4-(7-((1-(((4-((1R,5S)-3,8-diazabicyclo[3.2.1]oct-3-yl)-7-(8-ethynyl-7-fluoro-3-hydroxynaphthalen-1-yl)-8-fluoropyridin[4,3-d]pyrimidin-2-yl)oxy)methyl)cyclopropyl)methyl Synthesis of )-7-azaspiro[3.5]non-2-yl)-1H-1,2,3-triazol-1-yl)-3,3-dimethylbutyryl)-4-hydroxy-N-)pyrrolidine-2-carboxamide
  • Example 176 Compound (2S,4R)-1-((S)-2-(4-(4-(1-((1-(((4-((1R,5S)-3,8-diazabicyclo[3.2.1]oct-3-yl)-7-(8-ethynyl-7-fluoro-3-hydroxynaphthalen-1-yl)-8-fluoropyrido[4,3-d]pyrimidin-2-yl)oxy)methyl) Synthesis of cyclopropyl)methyl)piperidin-4-yl)phenyl)-1H-1,2,3-triazol-1-yl)-3,3-dimethylbutyryl)-4-hydroxy-N-((S)-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethyl)pyrrolidine-2-carboxamide
  • Example 177 Compound (2S,4R)-1-((S)-2-(4-(4-((1-((1-(((4-((1R,5S)-3,8-diazabicyclo[3.2.1]oct-3-yl)-7-(8-ethynyl-7-fluoro-3-hydroxynaphthalen-1-yl)-8-fluoropyridin[4,3-d]pyrimidin-2-yl)oxy)methyl) Synthesis of cyclopropyl)methyl)piperidin-4-yl)methoxy)phenyl)-1H-1,2,3-triazol-1-yl)-3,3-dimethylbutyryl)-4-hydroxy-N-((S)-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethyl)pyrrolidine-2-carboxamide
  • tert-butyl 4-((4-(methoxycarbonyl)phenoxy)methyl)piperidine-1-carboxylate (600.0 mg) and lithium hydroxide monohydrate (720.5 mg) were dissolved in a mixed solvent of MeOH/H 2 O (6/1.5 mL), and reacted at 70°C for 1 hour.
  • 177-1 (300.0 mg) was dissolved in THF (5 mL), and borane ⁇ tetrahydrofuran solution (2.3 mL, 1M) was slowly added dropwise, and reacted at room temperature for 3 hours.
  • 1M dilute hydrochloric acid (2mL) to the reaction solution to quench the reaction, add EA (10mL) for extraction, saturate Wash once with brine, dry the organic phase over anhydrous sodium sulfate, filter, concentrate, and separate and purify by column chromatography to obtain 208.5 mg of the target compound, namely compound 177-2.
  • 177-2 (208.5 mg) and DMP (356.8 mg) were dissolved in DCM (10 mL), and reacted at room temperature for 1 hour.
  • 177-3 (127.8 mg) and potassium carbonate (109.9 mg) were dissolved in MeOH (3 mL), reacted at room temperature for 20 minutes, added (1-diazo-2-oxopropyl) dimethyl phosphonate (0.1 mL), and reacted overnight at 40°C. Suction filtration, concentration, and separation and purification by column chromatography gave 94.1 mg of the target compound, namely compound 177-4.
  • Example 178 Compound ((3R,7aR)-7a-(((4-((1R,5S)-3,8-diazabicyclo[3.2.11]oct-3-yl)-7-(8-ethynyl-7-fluorofluoro-3-hydroxynaphthalen-1-yl)-8-fluoropyridin[4,3-d]pyrimidin-2-pyrimidin-2-yl)(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethyl Synthesis of )carbamoyl)pyrrolidin-1-yl)-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl)-1H-1,2,3-triazol-4-yl)-7---azaspiro[3.5]nonan-7-carboxylate
  • 178-2 (16 mg) was dissolved in 3 mL of DCM, then 1.5 mL of TFA was added, and the reaction was carried out at room temperature for 0.5 h, and the reaction was completed by LCMS monitoring.
  • Example 179 Compound (2S,4R)-1-((2S)-2-(4-(1-((((7-(2-amino-3-cyanobenzo[b]thiophen-4-yl)-thiophen-4-yl)-4-((1R,5S)-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-3-yl)-3,8-diazacyclo[3.2.1] Oct-3-yl)-6-chloro-8-fluoroquinazolin-2-yloxy)methylmethylcyclopropylmethyl)-7-azaspiro[3.5]non-2-yl-2-yl1,2,3-triazol-1-yl)-3-methylmethylmethylcyclopropyl, 3-dimethylbutyryl)-4-hydroxy-N-((S)-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethyl)pyrrolidin-2- Synthesis of formamide
  • 179-4 (330 mg) was dissolved in 6 mL of DCM, then 2 mL of TFA was added, and the reaction was carried out at room temperature for 30 min, and the reaction was completed by LCMS monitoring.
  • 179-6 (20 mg) was dissolved in 3 mL of DCM, then 1.5 mL of TFA was added, and reacted at room temperature for 30 min, and the reaction was completed by LCMS monitoring. After concentrating the liquid, 6.2 mg of the target compound, namely compound 179, was isolated by preparation.
  • Example 180 Compound (2S,4R)-1-((S)-2-(4-(1-(((4-(((1R,5S)-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-3-yl)-7-(8-ethyl-7-fluoro-3-hydroxynaphthalen-1-yl)-8-fluoropyrido[4,3-d]pyrimidin-2-yl)oxy)methyl)cyclopropyl)piperidine Synthesis of -4-yl)methoxy)benzamido)-3,3-dimethylbutyryl)-4-hydroxy-N-((S)-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethyl)pyrrolidine-2-carboxamide
  • Example 181 Compound (2S,4R)-1-((S)-2-(4-((1-(((1-)(((4-(1R,5S)-3,8-diazabicyclo-3.2.1]oct-3-yl)-7-(8-ethyl-7-ethyl-7-fluorofluoro-3-hydroxynaphthalen-1-yl)-8-fluoropyrido[4,3-d]pyrimidin-2-yl) Synthesis of oxy)methylcyclopropylmethyl)piperidin-4-ylmethoxy-methoxybenzamido)-3,3-dimethylbutenyl-butyryl)-N-(((2(R)-1-(1-ethyl-1H-pyrazol-5-yl)phenyl)-2-hydroxyethyl)-4-hydroxypyrrolidine-2-carboxamide
  • Dissolve compound 181-5 (117 mg) in 5 mL of anhydrous methanol, then add DIEA (0.06 ml), react at room temperature for 10 minutes, then add tert-butyl (1R, 5S)-3-(7-(8-ethyl-7-fluoro-3-(methoxy-methoxy)naphthalene-1-yl)-8-fluoro-2-((1-formylcyclopropyl)methoxy)pyrido[4,3-d]pyrimidin-4-yl )-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octane-8-carboxylate (80mg) and ZnCl2 (0.2ml, 1M/Hexane), transferred to 40°C for 1h, then added sodium cyanoborohydride (73mg), reacted at 40°C for 16h, and LCMS monitored the completion of the reaction.
  • DIEA 0.06 ml
  • Step 1 Synthesis of Compound 183-1
  • Example 184 (2S,4R)-1-((2S)-2-(4-((1-((1-)))-(4-(3,8-diazabicyclo[3.2.21]oct-3-yl)-7-(8-ethyl-7-fluorofluoro-3-hydroxynaphthalen-1-yl)-8-fluoro-5-methoxypyridine-4-,3-d]pyrimidin-2-yl)oxy)methyl-cyclopropyl Methyl)cyclopropylmethyl-piperidin-4-ylmethoxy-methoxybenzamido)-3,3-dimethyl-butenyl-4-hydrox4-hydromethoxymethylmethylmethyl((S)-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethyl)pyrrolidine-2-carboxamide
  • Example 185 Compound (2S,4R)-1-((2S)-2-(4-((7-((1-(((7-(2-amino-3-cyano-7-fluorobenzo[b]thiophen-4-yl)-4-((1R,5S)-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-3-yl)-6-chloro-8-fluoroquinazolin-2-yl)oxy)methyl) Synthesis of cyclopropyl)methyl)-7-azaspiro[3.5]non-2-yl)oxy)benzamido)-3,3-dimethylbutyryl)-4-hydroxy-N-((S)-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethyl)pyrrolidine-2-carboxamide
  • Example 186 1-(4-(1-((4-(1R,5S)-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-3-yl)-7-(8-ethynyl-7-fluoro-3-hydroxynaphthalen-1-yl)-8-fluoropyrido[4,3-d]pyrimidin-2-yl)oxy)methyl)cyclopropyl)methyl)(methyl)amino)methyl)phenyl)-N-(((S)- Synthesis of 1-((2S,4R)-4-hydroxy-2-((S)-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethylcarbamoyl)pyrrolidin-1-yl)-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl)piperidine-4-carboxamide
  • Example 188 (2S,4R)-1-((2S)-2-(4-((1-(((4-(3,8-diazabicyclo[3.2.1]oct-3-yl) -7-(7,8-difluoro-3-hydroxynaphthalen-1-yl)-8-fluoropyridin[4,3-d]pyrimidin-2-yl)oxy)methyl)cyclopropyl)methyl)piperidin-4-yl)methoxy)benzamido)-3,3-dimethylbutyryl)-4-hydroxy-N-(((S)-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethyl)pyrrolidine-2-carboxamide
  • Step 1 Synthesis of Compound 189-1
  • Example 190 (2S,4R)-1-((S)-2-(3-((5-(((1-(((4-((1R,5S)-3,8-diazabicyclo[3.2.1]oct-3-yl)-7-(8-ethynyl-7-fluoro-3-hydroxynaphthalen-1-yl)-8-fluoropyridin[4,3-d]pyrimidin-2-yl)oxy)methyl)cyclopropyl )methyl)(methyl)amino)methyl)pyridin-2-yloxy)propionamido)-3,3-dimethylbutyryl)-4-hydroxy-N-(4-(4-methylthiazol-5-yl)benzyl)pyrrolidine-2-carboxamide
  • Step 1 Synthesis of compound 190-1
  • Example 192 (2S,4R)-1-((2S)-2-(4-(((1-)))-(4-(3,8-diazabicyclo[3.2.21]octan-3-yl)-7-(8-ethynyl-7-fluorofluoro-3-hydroxynaphthalen-1-yl)-8-fluoropyridin-4,3-d]pyrimidin-2-yl)oxy)methyl-cyclopropylmethyl-cyclopropenyl Synthesis of methyl)piperidin-4-ylmethyl-methyl-methylmethylmethyl-methylbenzamido)-3,3-dimethylbutylformyl-4-hydroxybenzamide-3,3-dimethylhetera-N-((S)-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethyl)pyrrolidine-2-carboxamide
  • Step 8 Synthesis of Compound 192-8
  • Embodiment 1 Cell Proliferation Assay (AGS)
  • the KRas-G12D mutant tumor cell AGS ( CRL-1739 TM ) were spread in a low-adsorption 96-well plate at a cell density of 1 ⁇ 10 3 /well, and placed in a cell culture incubator for overnight culture. After the cells adhered to the wall, the compounds to be tested were added to the 96-well plate at the final concentrations of 20000, 6666.67, 2222.22, 740.74, 246.91, 82.30, 27.43, 9.14, 3.05, and 0 nM (the final concentration of DMSO was 0.5%). After culturing at 37°C for 96 hours, 50 ⁇ L of Cell-titer GLO working solution was added to each well, shaken and mixed. After homogenization, incubate at room temperature for 10 min, read the Luminescence luminescence value on a multi-functional microplate reader, and convert the luminescence value data into inhibition percentage. And according to the following formula, calculate the percentage of inhibition of cell proliferation:
  • Inhibition percentage (maximum value - measured value) / (maximum value - blank value) ⁇ 100
  • Curve fitting was performed using GraphPad Prism software and IC50 values were obtained.
  • test compounds have different degrees of inhibitory effects on the proliferation of AGS cells, and the IC 50 of the optimal compound is lower than 15nM, which can strongly inhibit the proliferation of AGS cells.
  • the samples were uniformly loaded onto the SDS-PAGE gel at 20 ⁇ g/well, and the electrophoresis program was set to 80V for 0.5h, then 120V for 1h.
  • electrophoresis transfer the PAGE gel to a 0.22 ⁇ m PVDF membrane, block with 5% BSA for 1 hour, cut the PVDF membrane at the 35kD marker, and incubate KRAS (Sigma#SAB1404011-100UG) and ⁇ -actin (CST#5057S) primary antibodies respectively, and incubate overnight at 4°C.
  • KRAS Sigma#SAB1404011-100UG
  • CST#5057S ⁇ -actin
  • the PVDF membrane was removed from the primary antibody solution, washed 4 times with TBST for 5 minutes each time, and then incubated with the corresponding secondary antibody at room temperature for 1.5 hr, washed 4 times with TBST, and then exposed on iBright FL1000.
  • Embodiment 3 KRAS G12D degradation test (AGS)
  • the ability of compounds to degrade KRAS G12D was detected by intracellular immunoblotting.
  • the AGS cells in good growth condition and in the logarithmic growth phase were plated in a 96-well transparent bottom black plate, so that the number of cells in each well was 5 ⁇ 10 4 ; cultured overnight at 37° C., 5% CO 2 .
  • the compound was diluted to the corresponding concentration and administered so that the final concentration of the compound was 20000, 5000, 1250, 312.5, 78.1, 19.5, 4.9, 1.2, OnM (the final concentration of DMSO was 0.5%; the tenth column added DMSO of the corresponding concentration as the background well), and the plate after the addition of the drug was placed at 37 ° C, 5% CO 2 for 24 hours.
  • Compound name AGSDC 50 (nM) Compound name AGSDC 50 (nM) 1 54 173 twenty four 92 55 174 40 129 20 180 52 130 29 187 52 133 twenty one 188 68 152 twenty four 189 70 163 83 190 51 172 72 the the
  • the test compounds have a strong ability to degrade KRAS G12D in cells.
  • the half-degradation concentration (DC 50 ) obtained by the measurement is all within 100nM, and the DC 50 of some compounds can even reach 20-30nM, which proves that the above compounds can achieve efficient degradation of KRAS G12D at the cellular level.
  • AGS cells in good growth condition and in the logarithmic growth phase were plated into 12-well plates at 3 ⁇ 10 5 and cultured overnight at 37°C and 5% CO 2 .
  • the cells were pretreated with DMSO, 10 ⁇ M VH032 (MCE#HY-120217) or 3 ⁇ M MG132 (MCE#HY-13259) for 2 hours. After two hours, 5 ⁇ M compounds were added and incubated at 37°C, 5% CO 2 for 24 hours. After the treatment, discard the culture medium, add PBS to wash once, lyse with 50 ⁇ l/well lysate on ice for 10 min, centrifuge, and collect the total protein.
  • the samples were uniformly loaded onto the SDS-PAGE gel at 20 ⁇ g/well, and the electrophoresis program was set to 80V for 0.5h, then 120V for 1h.
  • the PAGE gel was transferred to a 0.22 ⁇ m PVDF membrane, Block with 5% BSA for 1 hour, cut the PVDF membrane at the 35kD marker, incubate KRAS (Sigma#SAB1404011-100UG) and ⁇ -actin (CST#5057S) primary antibodies respectively, and incubate overnight at 4°C.
  • the PVDF membrane was removed from the primary antibody solution, washed 4 times with TBST for 5 minutes each time, and then incubated with the corresponding secondary antibody at room temperature for 1.5 hr, washed 4 times with TBST, and then exposed on iBright FL1000.

Abstract

一种具有X-Y-Z结构的化合物、其互变异构体、氘代物或药用盐。其中，X为KRAS蛋白结合配体化合物，Z为E3连接酶结合配体化合物；Y为连接X和Z的连接链。该化合物具有KRAS G12D调节活性。此外，还涉及所述化合物的制备方法以及包含其的药物组合物。

Description

KRAS G12D降解剂及其在医药上的应用 技术领域
本发明涉及一种新型化合物，其具有KRAS抑制和降解活性。本发明还涉及这些化合物的制备方法以及包含其的药物组合物。
背景技术
KRAS基因是最常见的突变致癌基因之一，数据显示，有近25％的癌症患者存在KRAS基因突变，特别是肺癌、直肠癌和胰腺癌患者。尽管长期以来诸多研究致力于直接或间接靶向KRAS，但仍面临难以靶向、效果受限的问题。2021年5月，FDA批准首个靶向KRAS G12C突变蛋白的药物索托拉西(AMG-510)，是该领域的重要里程碑事件。索托拉西通过与KRAS12号位突变的半胱氨酸共价结合，从而抑制了突变蛋白的生物活性。然而对于KRAS其他突变例如KRAS G12D蛋白，因为缺少了可以共价结合的半胱氨酸，因此仍然处于难以靶向的境况。与此同时，G12D突变是KRAS所有突变中比例最高的，达26％，并且在胰腺癌，结直肠癌等缺乏治疗手段的恶行肿瘤中，突变频率更高，因此如能成功靶向KRAS G12D突变蛋白将极大满足临床需求。
近年来，人们利用泛素蛋白酶体通路具有特异性降解蛋白底物的功能特点，构建出靶向泛素化蛋白降解嵌合型分子(proteolysis-targeting chimeras,PROTAC)，PROTAC是具有两个异功能的配体通过linker连接的化合物：一个配体靶向于目的蛋白(POI)，而另一个配体特异性地募集E3连接酶。当PROTAC结合E3连接酶和目的蛋白时形成了三元复合物，通过劫持E3连接酶，PROTAC使POI呈现出有利的空间位置以促进其泛素化，随后泛素化的靶标蛋白被蛋白酶体识别后降解，从而选择性地降低靶蛋白在细胞内的水平。PROTAC技术，相对于传统小分子抑制剂的研发手段，其优势在于该技术有望靶向传统意义上“不可成药的靶 点”，并克服小分子抑制剂产生的“耐药性”。并且PROTAC可以催化样的多轮降解靶蛋白，彻底的移除蛋白也将产生更加强效的药效。因此，如果将PROTAC技术应用于KRAS G12D靶点，有望对MAPK信号通路进行彻底抑制，发挥出PROTAC的优势，极大的满足临床需求。
目前，还没有靶向KRAS G12D的PROTAC药物上市，有必要对其进行研究。
发明内容
本发明提供一种具有X-Y-Z结构的化合物、其立体异构体、互变异构体、氘代物或药用盐，其中，X为通式(I)所示的KRAS蛋白结合配体化合物，Y为连接X和Z的连接链，Z为E3连接酶结合配体化合物；
X1选自N或CR6；R6选自H、氨基、取代的氨基、氰基、C1-6烷基、取代的C1-6烷基、卤素、C2-6烯基、取代的C2-6烯基、C3-6环烷基或取代的C3-6环烷基；
L选自键、O、S、NR7或亚炔基；R7选自H、C1-6烷基或C3-6环烷基；
R1选自H、羟基、氰基、卤素或C1-3烷基，所述C1-3烷基任选地被一个或多个选自卤素、羟基或氰基的取代基所取代；
R2选自键、C1-6烷基、 R2任选地进一步被一个或多个R9所取代；
R3选自H、卤素、C1-6烷基或-OR10，所述R10选自C1-6烷基或C3-8环烷基，R10任选地进一步被一个或多个选自羟基、卤素、C1-3烷基、C1-3烷氧基或环丙基的取代基所取代；
R4选自C6-14芳基或5-14元杂芳基，所述芳基或杂芳基任选地进一步被一个或多个R11取代；R11选自H、氰基、卤素、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、-C0-6亚烷基-ORa、-C0-6亚烷基-OC(O)N(Ra)2、-C0-6亚烷基-N(Ra)2、-C0-6亚烷基-NRaC(O)Ra、-C0-6亚烷基-NRaC(O)N(Ra)2、-C0-6亚烷基-NRaS(O)Ra、-C0-6亚烷基-NRaS(O)2Ra、-C0-6亚烷基-S(＝O)Ra、-C0-6亚烷基-S(＝O)2Ra、-C0-6亚烷基-SRa、-C0-6亚烷基-S(Ra)5、-C0-6亚烷基-C(＝O)Ra、-C0-6亚烷基-C(＝O)ORa、-C0-6亚烷基-C(＝O)N(Ra)2、C2-6烯基、C2-6炔基、-C0-6亚烷基-C3-14环烷基、-C0-6亚烷基-(3-14元杂环基)、-C0-6亚烷基-C6-14芳基或-C0-6亚烷基-(5-14元杂芳基)，所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-C0-6亚烷基-C3-14环烷基、-C0-6亚烷基-(3-14元杂环基)、-C0-6亚烷基-C6-14芳基或-C0-6亚烷基-(5-14元杂芳基)任选地还可被1个或多个Ra所取代；
R5选自H、氨基、取代的氨基、氰基、C1-6烷基、取代的C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-14环烷基-O-、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、羟基、卤素、C2-6烯基、取代的C2-6烯基、C3-6环烷基或取代的C3-6环烷基；所述C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-14环烷基-O-、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C2-6烯基或C3-6环烷基任选地还可被1个或多个Ra所取代；
R8选自H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基或C1-6氨基烷基；
R9各自独立地选自H、卤素、羟基、氨基、氧代基、硝基、氰基、羧基、C1-6烷基、C1-6羟基烷基、C1-6氨基烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、C1-6杂烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C6-14芳基或5-14元杂芳基；
环A选自C3-14环烷基、3-14元杂环基、C6-14芳基或5-14元杂芳基；
Ra各自独立地选自H、卤素、羟基、氨基、氧代基、硝基、氰基、羧基、C1-6烷基、C1-6羟基烷基、C1-6氨基烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、C1-6杂烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C6-14芳基或5-14元杂芳基；
m选自0、1、2、3或4。
一些实施方式中，X为通式(I)所示的KRAS蛋白结合配体化合物，Y为连接X和Z的连接链，Z为E3连接酶结合配体化合物；

其中，
R5选自H、氨基、取代的氨基、氰基、C1-6烷基、取代的C1-6烷基、卤素、C2-6烯基、取代的C2-6烯基、C3-6环烷基或取代的C3-6环烷基；
R1、R2、R3、R4、X1、L、m的定义如式(I)所示。
一些实施方式中，式(I)中的X选自如下所示结构：


其中，R3、R4、R5、R6、R8的定义如式(I)所示。
一些实施方式中，式(I)中的R4选自 所述 任选地进一步被一个或多个R11取代，所述R11各自独立地选自H、羟基、氰基、氨基、卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基或-C0-3亚烷基-C3-14环烷基。
一些实施方式中，式(I)中的R4选自所述R11选自H、卤素、C1-3烷基或C2-3炔基。
一些实施方式中，式(I)中的Y选自如下结构：

其中，
G环或D环各自独立选自C6-14芳基、C3-14环烷基、5-14元杂芳基或3-14元杂环基，所述C6-14芳基、3-14元环烷基、5-14元杂芳基或3-14元杂环基任选地进一步被一个或多个选自卤素或C1-3烷基的取代基所取代；
E选自-O-、-NH-或-NCH3-；
n、n1、n2、n3各自独立地选自0-10的整数。
一些实施方式中，上述G或D各自独立选自C6-14芳基、5-14元杂芳基或3-14元杂环基，所述C6-14芳基、5-14元杂芳基或3-14元杂环基任选地进一步被一个或多个选自卤素或C1-3烷基的取代基所取代；
所述C6-14芳基优选为
所述C3-14环烷基优选为
所述5-14元杂芳基优选自 所述3-14元杂环基优选自
一些实施方式中，式(I)中的Y选自如下所示结构：

其中，n、n1、n2、n3各自独立地选自0-10的整数。
一些实施方式中，式(I)中的Y选自如下所示结构：


其中，n、n1、n2、n3各自独立地选自0-10的整数。
一些实施方式中，式(I)中的Y选自如下所示结构：
其中，n选自0-10的整数。
一些实施方式中，式(I)中的Z选自如下所示结构：
一些实施方式中，式(I)中的所述Z选自如下所示结构：
一些实施方式中，式(I)中的X-Y选自如下所示结构：

其中，
所述R3、R4、R5、X的定义同式(I)所述；
所述G环选自C3-14环烷基、3-14元杂环基、C6-14芳基或5-14元杂芳基，所述3-14元杂环基为单环或螺环；所述C3-14环烷基、C6-14芳基、5-14元杂芳基或3-14元杂环基任选地进一步被一个或多个选自卤素或C1-3烷基的取代基所取代。
所述C6-14芳基为
所述5-14元杂芳基选自
所述3-14元杂环基选自 所述C3-14环烷基、C6-14芳基、5-14元杂芳基或3-14元杂环基任选地进一步被一个或多个选自卤素或C1-3烷基的取代基所取代。
一些实施方式中，式(I)选自下式化合物：








本发明还提供了一种药物组合物，其中，所述药物组合物包含治疗有效量的至少一种式(I)所示的化合物、其立体异构体、互变异构体、氘代物或药用盐。
本发明提供了结构式(I)所示化合物或其药物组合物在制备药物中的应用。
本发明进一步提供了所述应用的优选技术方案：
作为优选，所述应用为制备治疗和/或预防癌症药物中的应用。
作为优选，所述应用为制备用于治疗由KRAS G12D介导的疾病的药物的应用。作为优选，所述疾病是癌症。
作为优选，所述癌症选自乳腺癌、多发性骨髓瘤、膀胱癌、子宫内膜癌、胃癌、宫颈癌、横纹肌肉瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、多形性肺癌、卵巢癌、食管癌、黑色素瘤、结肠直肠癌、肝细胞瘤、头颈部肿瘤、肝胆管细胞癌、骨髓增生异常综合征、恶性胶质瘤、前列腺癌、甲状腺癌、徐旺氏细胞瘤、肺鳞状细胞癌、苔藓样角化病、滑膜肉瘤、皮肤癌、胰腺癌、睾丸癌或脂肪肉瘤。
本发明还提供了一种治疗和/或预防疾病的方法，包括向治疗对象施用治疗有效量的至少任意一种结构式(I)所示化合物、其立体异构体、互变异构体、氘代物或药用盐或含其的药物组合物。
本发明还提供了一种治疗癌症的方法，包括向治疗对象施用治疗有效量的至少任意一种结构式(I)所示化合物、其立体异构体、互变异构体、氘代物或药用盐或含其的药物组合物。
除非另有说明，所述结构通式中使用的一般化学术语具有通常的含义。
例如，除非另有说明，本发明所用的术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。
本发明中基团的连接顺序没有特别的限制下，可以自左到右的连接，也可以自右到左的连接。
在本发明中，除非另有说明，“烷基”包括直链或支链的一价饱和烃基。例如，烷基包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、3-(2-甲基)丁基、2-戊基、2-甲基丁基、新戊基、正己基、2-己基、2-甲基戊基等。类似的，“基1-8烷基”中的“1-8”是指包含有1、2、3、4、5、6、7或8个碳原子的直链或支链形式排列的基团。
术语“亚烷基”是指二价烷基连接基团。亚烷基在形式上是指两个C-H键替换为亚烷基与化合物其余部分的连接点的烷烃。类似的，C1-3亚烷基中的“C1-3”是指含有1、2或3个碳原子的亚烷基，包括但不限于亚甲基、1,2-亚乙基、1,3-亚丙基或1,2-亚异丙基。
“烷氧基”是指前述的直链或支链烷基的氧醚形式，即-O-烷基。
术语“芳基”，在本发明中，除非另有说明，是指未取代或取代的包括碳环的原子的单 环或稠环芳香基团。优选C6-18芳基，更优选芳基为C6-10的单环或双环的芳香环基团。优选为苯基、萘基；最优选为萘基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，非限制性实例包括但不限于苯并环戊基。
术语“芳基”，在本发明中，除非另有说明，是指未取代或取代的包括碳环的原子的单环或稠环芳香基团。优选C6-18芳基，更优选芳基为C6-10的单环或双环的芳香环基团。优选为苯基、萘基；最优选为萘基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，非限制性实例包括但不限于苯并环戊基。
术语“杂环基”是指具有至少一个含有杂环子的环化烷基或环化烯基的环系统，所述杂原子选自N、O和/或S。所述杂环基可以包括单环或多环(例如具有2、3或4个稠合环、螺环、桥环等)。杂环基可以经由成环碳原子或成环杂原子与化合物其他部分相连接。优选3-14元杂环基，3-14元杂环基中的“3-14元”是指含有3-14个C、N、O或S的成环原子组成的杂环基；更优选5-14元杂环基和3-8元杂环基，更更优选3-6元杂环基。其中氮或硫杂原子可以选择性地被氧化，并且氮杂原子可以选择性地被季铵化。这些杂环基的实例包括但不限于 氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、氧代哌嗪基、氧代哌啶基、四氢呋喃基、二氧戊环基、四氢咪唑基、四氢噻唑基、四氢恶唑基、四氢吡喃基、吗啉基、硫代吗啉基、硫代吗啉基亚砜、硫代吗啉基砜基和四氢恶二唑基。所述杂环基可以稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基。
术语“杂芳基”，在本发明中，除非另有说明，是指具有至少一个杂原子的单环或多环(例如具有2、3或4个稠合环、螺环、桥环等)芳香族杂环，所述杂原子选自N、O和/或S，并且其中所述氮或硫杂原子可以选择性地被氧化，所述氮杂原子可以选择性地被季铵化。优选5-18元杂芳基，其中5-18元杂芳基中的“5-18元”是指含有5-18个C、N、O或S的成环原子组成的杂芳基，更优选的是5-10元杂芳基，杂芳基的实例包括但不限于噻吩基、呋喃基、咪唑基、异恶唑基、恶唑基、吡唑基、吡咯基、噻唑基、噻二唑基、三唑基、吡啶基、哒嗪基、 吲哚基、氮杂吲哚基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并异恶唑基、苯并噻唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并三唑基腺嘌呤、喹啉基或异喹啉基。所述杂芳基可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环。
术语“环烷基”是指具有至少一个环化烷基的环系统。优选C3-14环烷基，其中的“C3-14”是指环烷基可以具有3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14个成环原子。环烷基可以包括单环和多环(例如具有2、3或4个稠合环、螺环、桥环等)。一些实施例中环烷基包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基等；所述环烷基还可以稠合于芳基、杂环基或杂芳基环上，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基。
术语“取代的”是指基团中的一个或多个氢原子分别被相同的或者不同的取代基所取代。典型的取代基包括但不限于卤素(F、Cl、Br或I)、C1-8烷基、C3-12环烷基、-OR1、-SR1、＝O、＝S、-C(O)R1、-C(S)R1、＝NR1、-C(O)OR1、-C(S)OR1、-NR1R2、-C(O)NR1R2、氰基、硝基、-S(O)2R1、-O-S(O2)OR1、-O-S(O)2R1、-OP(O)(OR1)(OR2)；其中R1和R2独立地选自-H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基或C3-6环烷基。在一些实施例中，取代基独立地选自包含-F、-Cl、-Br、-I、-OH、三氟甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、-SCH3、-SC2H5、甲醛基、-C(OCH3)、氰基、硝基、-CF3、-OCF3、氨基、二甲基氨基、甲硫基、磺酰基和乙酰基的基团。
当一个连接基团的数量为0时，比如-(CH2)0-表示该连接基团为键。
术语“药用盐”是指从药学上可接受的无毒的碱或酸制备的盐。
当本发明提供的化合物是酸时，可以从药学上可接受的无毒的碱，包括无机碱和有机碱，方便地制得其相应的盐。从无机碱衍生的盐包括铝、铵、钙、铜(高价和低价)、三价铁、亚铁、锂、镁、锰(高价和低价)、钾、钠、锌之类的盐。特别优选铵、钙、镁、钾和钠的盐。能够衍生成药学上可接受的盐的无毒有机碱包括伯胺、仲胺和叔胺，也包括环胺及含有取代基的胺，如天然存在的和合成的含取代基的胺。能够成盐的其他药学上可接受的无毒有机碱，包括离子交换树脂以及精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N',N'-二苄乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲胺基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、还原葡萄糖胺、氨基葡萄糖、组氨酸、异丙胺、赖氨酸，甲基葡萄糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、多胺树脂、普鲁卡因、氯普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等。
当本发明提供的化合物是碱时，可以从药学上可接受的无毒的酸，包括无机酸和有机酸，方便制得其相应的盐。这样的酸包括，如，醋酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、甲酸、富马酸、葡萄糖酸、谷氨酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、黏酸、硝酸、扑酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、草酸、丙酸、乙醇酸、氢碘酸、高氯酸、环己氨磺酸、水杨酸、2-萘磺酸、糖精酸、三氟乙酸、酒石酸和对甲苯磺酸等。较优地，柠檬酸、氢溴酸、甲酸、盐酸、马来酸、磷酸、硫酸和酒石酸。更优地，甲酸和盐酸。
本发明化合物的药物前体包含在本发明的保护范围内。通常，所述药物前体是指很容易在体内转化成所需化合物的功能性衍生物。例如，本申请化合物的任何药学上可接受的盐、酯、酯的盐或其它衍生物，其在向受体施用后能够直接或间接地提供本申请的化合物或其具有药学活性的代谢物或残基。
本发明所述化合物可能含有一个或多个不对称中心，并可能由此产生非对映异构体和光学异构体。本发明包括所有可能的非对映异构体及其外消旋混合物、其基本上纯的拆分对映异构体、所有可能的几何异构体及其药用盐。
当式(I)所示化合物存在互变异构体时，除非特别声明，本发明包括任何可能的互变异构体和其药用盐，及它们的混合物。
当式(I)所示化合物用较重的同位素(例如氘)替代可能提供某些治疗优势，这是由于更大的代谢稳定性，例如增加体内半衰期或减少剂量要求。
术语“药物组合物”是指一种或多种本申请的化合物或其药用盐与药学上可接受的辅料组成的混合物。药物组合物的目的是有利于对有机体给予本申请的化合物。
在本发明中，“一”、“一个”、“该”、“至少一个”和“一个或多个”可互换使用。因此，例如，包含“一种”药学上可接受的辅料组成的混合物可以被解释为表示该药物组合物包括“一种或多种”药学上可接受的辅料。
术语“药学上可接受的辅料”是指对有机体无明显刺激作用，而且不会损害该活性化合物的生物活性及性能的那些辅料。合适的辅料是本领域技术人员熟知的，例如碳水化合物、蜡、水溶性和/或水可膨胀的聚合物、亲水性或疏水性材料、明胶、油、溶剂、水等。
本发明的药物组合物可通过将本申请的化合物与适宜的药学上可接受的辅料组合而制备， 例如可配制成固态、半固态、液态或气态制剂，如片剂、丸剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、膏剂、乳剂、悬浮剂、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶剂、微球及气溶胶等。
给予本发明化合物或其药用盐或其药物组合物的典型途径包括但不限于口服、直肠、局部、吸入、肠胃外、舌下、阴道内、鼻内、眼内、腹膜内、肌内、皮下、静脉内给药。
术语“治疗”一般是指获得需要的药理和/或生理效应。该效应根据部分或完全稳定或治愈疾病和/或由于疾病产生的副作用，可以是治疗性的。本文使用的“治疗”涵盖了对患者疾病的任何治疗，包括：(a)抑制疾病的症状，即阻止其发展；或(b)缓解疾病的症状，即，导致疾病或症状退化。
术语“有效量”意指(i)治疗或预防特定疾病、病况或障碍，(ii)减轻、改善或消除特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状，或(iii)预防或延迟本文中所述的特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状发作的本申请化合物的用量。构成“治疗有效量”的本申请化合物的量取决于该化合物、疾病状态及其严重性、给药方式以及待被治疗的哺乳动物的年龄而改变，但可例行性地由本领域技术人员根据其自身的知识及本公开内容而确定。
附图说明
图1为本发明化合物对在AGS细胞中对KRAS G12D的降解效果图。
图2为本发明化合物在AGS细胞中PROTAC作用机制验证图。
具体实施方式
为使上述内容更清楚、明确，本发明将用以下实施例来进一步阐述本发明的技术方案。以下实施例仅用于说明本发明的具体实施方式，以使本领域的技术人员能够理解本发明，但不用于限制本发明的保护范围。本发明的具体实施方式中，未作特别说明的技术手段或方法等为本领域的常规技术手段或方法等。
除非另有说明，本发明所有温度均指摄氏度。
实施例中使用了下列缩略语：
DIEA：N，N-二异丙基乙胺；
DCM:二氯甲烷；
Dioxane：二氧六环；
ESI-MS：电喷雾电离质谱；
EtOH：乙醇；
HOAc：冰醋酸；
MeOH：甲醇；
POCl3：三氯氧磷；
THF：四氢呋喃；
TFA：三氟乙酸；
STAB：三乙酰氧基硼氢化钠；
NaBH3CN：氰基硼氢化钠；
HATU：2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯；
TBAF：四丁基氟化铵；
Pre-HPLC：制备高效液相；
Pre-TLC：制备薄层板；
Johnphos：2-(二叔丁基膦)联苯；
CataCXium A Pd G3：甲磺酸[正丁基二(1-金刚烷基)膦](2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)。
中间体M的合成
步骤1：化合物M-1的合成
在室温下，依次加入2-氯-3-氟-吡啶-4-羧酸(54.00g)，甲苯(390.00mL)，叔丁醇(390.00mL)，三乙胺(128.27mL)，粉末状分子筛(90.00mL)(预活化)，氮气保护下，保温回流半小时(内温87℃)。再自然冷却至室温，然后加入DPPA(99.44mL)，升温至回流，保温反应5小时。将反应混合物冷却至40℃以下，然后加入EA 500mL稀释；继续冷却至室温，硅藻土助滤，将加入的分子筛过滤除去；并用EA 1500mL多次漂洗滤渣、抽干；收集滤液，依次用水700mL，饱和食盐水700mL洗涤、分液；无水硫酸钠干燥有机相；过滤，除干燥剂，浓缩，浓缩物经柱层析分离纯化(PE/EA＝30:1～20:1)，浓缩洗脱液，最终得到目标产物M-1(68.2g，产率89.88％)。ESI-MS m/z:247.1[M+H]+。
步骤2：化合物M-2的合成
在室温下，将化合物M-1(65.00g)溶于CH3CN(82.00mL)中，水浴冷却，慢慢加入盐酸(4M in dioxane)(38.43g)，室温搅拌反应约16小时，白色固体析出，呈悬浮态。将反应混合物过滤，并用乙腈少量漂洗滤饼，抽干，丢弃滤液。收集滤饼，加入到700mL饱和碳酸氢钠水溶液和700mL乙酸乙酯的混合物中，碱化，萃取、分液；水相再用乙酸乙酯350mL萃取，分液；合并乙酸乙酯相，加入饱和氯化钠水溶液300mL洗涤、分液；无水硫酸钠干燥有机相，过滤，除干燥剂，浓缩得到目标产物M-2(36.3g，产率94.0％)。ESI-MS m/z:147.1[M+H]+。
步骤3：化合物M-3的合成
在室温下，将化合物M-2(36.00g)溶于乙腈(180.00mL)中，NIS(66.32g)和对甲苯磺酸(2.12g)加入其中，氮气保护下，加热保温70℃反应。反应液冷却至50℃，加入水900mL，有粉白色固体粉末析出，打浆半小时；过滤，并用水漂洗滤饼，抽干。收集滤饼，加入乙酸乙酯1200mL溶解完全，然后依次用饱和亚硫酸钠水溶液350mL，洗涤两次，再用饱和食盐水350mL洗涤、分液，无水硫酸钠干燥有机相，过滤，浓缩，得到目标产物M-3(63.2g，产率94.43％)。ESI-MS m/z:272.9[M+H]+。
步骤4：化合物M-4的合成
在室温下，将化合物M-3(57.50g)溶于DMF(22.00mL)中，氰化锌(32.22g)、四三苯基膦钯(12.19g)和粉末状分子筛(20.00mL)加入其中，在氮气氛围中，加热保温100℃反应约7小时。撤去油浴，自然冷却至室温，等待后处理。硅藻土助滤，将反应混合物过滤，抽干；收集滤液，60～70℃浓缩，得到淡黄色固体粗品。滤渣用乙酸乙酯500mL漂洗抽干；收集漂洗液，合并到粗品中，再次浓缩至无液体被蒸馏出；加入乙酸乙酯700mL溶解浓缩所得到固体粗品，然后用每次用饱和氯化钠250mL，洗涤3次，分液。无水硫酸钠干燥有机相，过滤，浓缩得到淡黄色固体，加入PE/EA＝3/1混合物160mL，打浆半小时，过滤、抽干。收集滤饼，45℃水浴，浓缩，再高真空油泵抽拉至恒重；最终得到目标产物M-4(36.1g，产率99.7％)。ESI-MS m/z:172.0[M+H]+。
步骤5：化合物M-5的合成
在室温下，500mL的单口烧瓶中，加入浓硫酸(61.37mL)，冰水浴冷却至10℃以下，分批加入化合物M2-4(39.30g)，加毕，搅拌10分钟，在氮气氛围中，用油浴保温60℃，反应约1小时。反应液冷却至室温，然后小心地加入到1100mL的冰水混合物中，稀释淬灭，有少量黄色固体析出。搅拌10分钟后，过滤；收集滤饼，用50mL饱和碳酸氢钠水溶液，打浆 20分钟，再次过滤，收集两次滤液，合并；然后慢慢加入碳酸钠固体，调pH约等于7，有类白色固体粉末析出。搅拌半小时，过滤、抽干；每次用水100mL漂洗滤饼、抽干，共漂洗2次。收集滤饼，放入真空烘箱中，55℃烘干至恒重得到目标产物M-5(33.6g，产率77.37％)。ESI-MS m/z:190.0[M+H]+。
步骤6：化合物M-6的合成
在室温下，加入四氢呋喃(470.00mL)，氮气置换后，微氮气流保护下，加入氢化钠(10.00g)，用油浴加热，保温40～45℃，搅拌15分钟；然后分批加入化合物M-5(18.95g)，加毕，保温机械搅拌20分钟后，然后小心地分批加入CDI(24.31g)，加毕，搅拌15分钟后，油浴加热升温，保温回流反应。反应液用冰水浴，冷却至10℃以下，然后加入饱和氯化铵水溶液500mL，有浅黄色固体析出，加入水1000mL；然后转移至5L烧杯中，补加水3000mL；搅拌1小时，过滤，抽干；收集滤饼，放入真空烘箱中，50～55℃干燥至恒重得到目标产物M-6(18.3g，产率84.93％)。ESI-MS m/z:216.0[M+H]+。
步骤7：化合物M-7的合成
在室温下，将化合物M-6(18.00g)和DIEA(36.00mL)溶于POCl3(180.00mL)中，氮气氛围下，加热保温100℃反应约2.5小时。减压浓缩除去三氯氧磷，并用DCM 100mL带2次；用400mL二氯甲烷溶解浓缩残留物，然后滴加入到500mL的饱和碳酸氢钠水溶液中，用冰水冷却；搅拌15分钟后，分液；水相，再用二氯甲烷300mL萃取、分液；合并二氯甲烷相，用饱和氯化钠水溶液300mL洗涤、分液；无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩，浓缩物经硅胶柱纯化(PE/EA＝90/10～75/25)得到目标产物M-7(10.95g，产率51.94％)。ESI-MS m/z:251.9[M+H]+。
步骤8：化合物M的合成
在室温下，将化合物M-7(10.50g)和DIEA(17.18mL)溶于DCM(120.00mL)中，水浴冷却，分批加入叔丁基3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-羧酸盐(9.27g)，然后室温搅拌反应约10 分钟。补加二氯甲烷120mL，依次用100mL水，100mL饱和氯化钠水溶液洗涤、分液，无水硫酸钠干燥有机相，过滤，浓缩，浓缩物经硅胶柱(PE/EA＝90/10～75/25)及打浆纯化(40mL EA+160mL PE)得到目标化合物M(15.9g，产率89.26％)。ESI-MS m/z:428[M+H]+。
中间体M1的合成：
将(2S，4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(1g)溶于THF(10ml)和乙腈(10ml)中，加入TEA(1.88ml)，冰浴下滴加2-叠氮基-1,3-二甲基咪唑六氟磷酸盐(0.64g)的乙腈(2ml)溶液，冰浴搅拌2h。向反应液中加入20.0mL水，用EA(20ml)萃取3次，合并有机相，硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得目标中间体M1(0.8g)。ESI-MS m/z:471[M+H]+。
中间体M2的合成：
步骤1：化合物M2-1的合成
在室温下，将2-氨基-4-溴-5-氯-3-氟苯甲酰胺(19.00g)加入四氢呋喃(200.00mL)中，室温下分批加入氢化钠(7.10g)。N2保护下，升至40℃搅拌0.5小时。在分批加入二(1H-咪唑-1-基)甲硫磷(18.99g)。在升至70℃搅拌0.5小时。LCMS监测反应完成。加入饱和NH4Cl(20mL)淬灭反应，再用1N HCl调节至PH＝5-6，再用EA(80mL)萃取2次，有机层经饱和食盐水洗涤再用无水硫酸钠干燥，浓缩，得黄色粉末17.4g粗品M2-1，粗品直接用于下一步。
步骤2：化合物M2-2的合成
在室温下，将M2-1(16.40g)加入甲醇(300.00mL)，再加入甲醇钠(4.29g)，最后滴加入碘甲烷(4.95mL)，室温搅拌0.5小时。加入H2O(20mL)稀释，再用2N HCl调至PH＝5-6，减压浓缩，粗品加入H2O(20mL)搅拌5分钟，过滤，滤饼用水冲洗再用PE/EA＝3/1(20mL)冲洗3次，干燥后得黄色粉末状产物M2-2(14.6g)。ESI-MS m/z:323[M+H]+。
步骤3：化合物M2-3的合成
在室温下，将M2-2(14.19g)，叔丁基(1R，5S)-3,8-二氮杂环[3.2.1]辛烷-8-羧酸酯(12.10g)加入乙腈(220.00mL)，再加入DBU(32.76mL)和BOP(58.19g)。室温搅拌2小时。加入EA(100mL)和H2O(100mL)萃取2次，有机层用饱和食盐水洗涤再用无水硫酸钠干燥。经柱层析纯化(PE/EA,10％EA)得黄色粉末状化合物M2-3(16g)。ESI-MS m/z:517[M+H]+。
步骤4：化合物M2-4的合成
在室温下，将M2-3(12.00g)，中间体M4(13.91g)加入CPME(165.00mL)中，再加入Pd(DPEPhos)Cl2(3.32g)，K3PO4(14.76g)。N2置换三次，N2保护下，升至100℃搅拌过夜。加入EA(100mL)和H2O(100mL)萃取2次，有机层用饱和食盐水洗涤再用无水硫酸钠干燥，浓缩，浓缩物经柱层析纯化(PE/EA,25％EA)得到化合物M2-4(4.1g)，ESI-MS m/z:711.20[M+H]+。
步骤5：化合物M2的合成
在室温下，将化合物M2-4(4.10g)加入DCM(50.00mL)中，再加入m-CPBA(3.07g)。室温搅拌0.5小时。LCMS监测反应完成。加入饱和NaHCO3调至PH＝8,再用亚硫酸钠溶液淬灭过量的m-CPBA，减压浓缩除去DCM。再用EA(70ML)萃取2次，有机层用饱和NaHCO3洗涤最后用食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩。浓缩物经柱层析纯化(PE/EA,50％EA)得到目标中间体M2(3.72g)。ESI-MS m/z:743.19[M+H]+。
中间体M3的合成：
步骤1：中间体M3-1的合成
冰浴下，将(3R，7aR)-3-(叔丁基二甲基硅氧基)甲基)四氢-1H-吡咯里嗪-7a(5H)基)甲醇(1.0g)溶于无水THF(10.0mL)中，加入NaH(220mg)，反应0.5h后加入中间体M2(1.34g)，室温反应1h。向反应液中适量饱和氯化铵水溶液淬灭，然后加入适量乙酸乙酯萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩。浓缩物经柱层析纯化得到化合物M3-1(1.34g)。ESI-MS m/z:948[M+H]+。
步骤2：中间体M3的合成
冰浴下，将M3-1(1.28g)溶于无水THF(10.0mL)中，加入TBAF(5mL，1mol/L)室温反应4h。减压浓缩后柱层析纯化得到化合物M3(0.85g)。ESI-MS m/z:834[M+H]+。
中间体M4的合成：
步骤1：化合物M4-1的合成
在0℃下，将2,6-二溴苯甲醛(25.0g)溶于乙醇(300mL)，分批次加入硼氢化钠(3.58g)，加完后恢复至室温，搅拌30min。反应结束后，加水(500mL)稀释，用DCM(200mL)萃取两次，合并有机相，用饱和食盐水(100mL)洗一遍，无水硫酸钠干燥，旋干，得到化合物M4-1(25.0g，产率99％)。ESI-MS m/z＝267[M+H]+。
步骤2：化合物M4-2的合成
在室温下将化合物M4-1(25g)、三苯基膦(32.1g)溶于DCM(300mL)，降温至0℃，分批次加入NBS(18.4g)，加完后保温并搅拌30min。反应完成后，将反应液浓缩。浓缩物经柱色谱纯化(EA:PE＝0-50％)得到产物M4-2(20g，产率64％)。
步骤3：化合物M4-3的合成
在室温下，将化合物M4-2(20g)、氰化钾(11.9g)溶于乙醇(100mL)和水(30mL)的混合溶液中，加热回流3-5h。反应完成后，将反应液浓缩，加EA(100mL)稀释，用水(30mL)洗一遍，饱和碳酸氢钠溶液(30mL)洗一遍，饱和食盐水(30mL)洗一遍。有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩。浓缩物经柱色谱纯化(EA:PE＝10％)得到产物M4-3(13g，产率77％)。
步骤4：化合物M4-4的合成
在冰浴下，向DMF(130mL)中加入NaH(3.0g，60％纯度)，加入化合物M4-3(20.0g)，加完后搅拌10min。再向反应液中滴加异硫氰酰甲酸乙酯(10.5g)，加完后搅拌10min， 再恢复至室温，搅拌20min。向反应液中加入CuI(1.39g)和L-脯氨酸(1.68g)，加完后升温至65℃搅拌2-5h。反应完成后，向反应液中加入0.2M的EDTA水溶液(500mL)和EA(100mL)，搅拌过夜。过滤，滤饼用水(200mL)洗两遍，烘干，得到化合物M4-4(23g，产率97％)。ESI-MS m/z＝323[M-H]-。
步骤5：化合物M4-5的合成
在室温下，将化合物M4-4(23g)溶于DMSO(100mL)，加入氢氧化钠(6M，90mL)，升温至110℃搅拌6h。反应完成后，将反应液降至室温，缓缓倒入水(300mL)中。过滤，滤饼烘干，得到化合物M4-5(15.0g，产率84％)。ESI-MS m/z＝251[M-H]-。
步骤6：化合物M4-6的合成
在冰浴下将M4-5(15.0g)、DIEA(14.7mL)、DMAP(0.58g)、二碳酸二叔丁醇酯(14.2g)加入到THF(200mL)和DMF(30mL)中，室温搅拌1h。反应结束后，将反应液用500mL EA稀释，用300mL水洗一遍，300mL饱和食盐水洗一遍，无水硫酸钠干燥，旋干。柱色谱纯化(EA:PE＝0-20％)得到产物M4-6(16.0g，产率76.4％)。ESI-MS m/z＝351[M-H]-。
步骤7：化合物M4的合成
在室温下，将化合物M4-6(16.0g)溶于THF(250mL)，分批次加入NaH(3.6g，60％纯度)，加完后室温搅拌30min。降温至-78℃，滴加正丁基锂(36mL，2.5M)，加完后保温30min。滴加甲氧基频哪醇硼酸酯(35.8g)，加完后缓慢恢复至室温。将反应液滴加到800mL饱和氯化铵溶液中，分液，水相加EA(200mL)萃取，合并有机相。有机相用100mL饱和食盐水洗一遍，用无水硫酸钠干燥，旋干。柱色谱纯化(EA:PE＝1-20％)得到中间体M4(11g，产率60％)。ESI-MS m/z＝399.2[M-H]-。
中间体M5的合成：
步骤1：化合物M5-1的合成
将7-叔丁氧羰基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸(200.0mg)，2S，4R-1-(S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(S)-1-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(300.0mg)溶于5.00mL DMF中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(0.35mL)和N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(310.0mg)，室温反应30分钟。向反应液中加入100.0mL水，过滤得到体系中析出的固体，固体经柱层析分离纯化得400.0mg化合物M5-1。ESI-MS m/z:696[M+H]+。
步骤2：化合物M5的合成
将化合物M5-1(400.0mg)溶于5.00mL DCM中，然后加入2.00mL TFA，室温反应0.5h，将反应液滴加至饱和碳酸氢钠溶液中，加入适量DCM/MeOH＝10/1溶液萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤减压浓缩即可得到258.0mg化合物M5。ESI-MS m/z:596[M+H]+。
中间体M6的合成：
步骤1：中间体M6-1的合成
室温下，将4-(羟甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(5.0g)溶于DCM(50mL)中，然后依次 加入三乙胺(9.68mL)，对甲苯磺酰氯(5.31g)，室温反应15h，向反应液中适量水淬灭，然后加入适量乙酸乙酯萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩得到8.02g产物，即化合物M6-1，直接用于下一步。
步骤2：中间体M6-2的合成
将中间体M6-1(7.0g)与4-羟基苯甲酸甲酯(2.6g)溶于DMF(30.0mL)中，加入碳酸钾(4.72g)，60℃反应10h。向反应液中适量水淬灭，然后加入适量乙酸乙酯萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，浓缩物经柱层析纯化得到4.02g产物，即化合物M6-2，ESI-MS m/z:350[M+H]+。
步骤3：中间体M6-3的合成
将化合物M6-2(4.0g)溶于THF(40.00mL)，MeOH(40.00mL)混合溶液中，加入氢氧化钠(2.29g)的水(20.0mL)溶液，40℃反应1h，反应液冷却至室温后，加入1M硫酸调节至酸性，加入适量DCM/MeOH萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩得到3.50g产物，即中间体M6-3。ESI-MS m/z:336[M+H]+。
步骤4：中间体M6-4的合成
将中间体M6-3(1.00g)，2S，4R-1-(S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(S)-1-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(1.59g)溶于15.00mL DMF中，然后依次加入N,N-二异丙基乙胺(1.56mL)和N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(1.36g)，室温反应30分钟，LCMS监测反应完成。向反应液中加入100.0mL水，过滤得到体系中析出的固体，经柱层析分离纯化得到1.95g，即中间体M6-4。ESI-MS m/z:762[M+H]+。
步骤5：中间体M6的合成
将中间体M6-4(1.50g)溶于20.00mL DCM中，然后加入5.00mL TFA，室温反应0.5h，将反应液滴加至饱和碳酸氢钠溶液中，加入适量DCM/MeOH＝10/1溶液萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤减压蒸出溶剂得到1.20g中间体M6。ESI-MS m/z:662[M+H]+。
中间体M7的合成：
步骤1：化合物M7-1的合成
将叔丁基(1R，5S)-3-(2,7-二氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸酯(1g),环丙烷-1,1-二基二甲醇(0.48g)，碳酸铯(1.52g)，DABCO(0.05g)溶于10mL DMF中，抽换N2三次，25℃下反应12h。向反应液中加入50.0mL水，用EA(50ml)萃取3次，合并有机相，硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得目标化合物1g，即化合物M7-1。ESI-MS m/z:494[M+H]+。
步骤2：化合物M7-2的合成
将M7-1(500mg)，2-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(354mg),磷酸钾(645mg)，CataCXium A Pd G3(74mg)溶于6mL二氧六环和1.5ml水中，90℃反应3h。向反应液中加入20.0mL水，用EA(30ml)萃取3次，合并有机相，饱和食盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得目标化合物327mg，即化合物M7-2。ESI-MS m/z:692[M+H]+。
步骤3：化合物M7的合成
将化合物M7-2(327mg)溶于5mL DCM中，然后加入戴斯-马丁氧化剂(240mg)，室温反应1h。硅藻土过滤反应液，滤饼用10mL DCM洗脱3次，收集滤液，减压蒸出溶剂后，经柱层析分离纯化得到259mg目标化合物，即化合物M7。ESI-MS m/z:690[M+H]+。
中间体M8的合成：
将化合物((2-氟-6-(甲氧基甲氧基)-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼-2-基)萘-1-基)乙炔基)三异丙基硅烷(10g)加入到100mL单口瓶中，加入30mL盐酸(4M/Dioxane)。 室温下反应半小时后，冰浴下加入饱和碳酸氢钠溶液中和反应液，过滤，滤饼用水洗两次，EA溶解后，无水硫酸钠干燥，浓缩，浓缩物经柱层析纯化(PE:EA＝82:18)得目标中间体M8(9.1g)。
中间体M9的合成：
步骤1：化合物M9-1的合成
4-氨基-2,6-二氯吡啶(63g)加入到1L三口瓶中，加入440mL ACN和180mL水。升温至45℃下加入selectfluor(164g)，反应放热，使其在空气中自然冷却。反应10min后，冰浴下加入饱和亚硫酸钠溶液淬灭反应，EA萃取3次，收集并合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，浓缩物经柱层析纯化(PE:EA＝10:1)得目标化合物M9-1(42.6g)。ESI-MS m/z:163.9[M+H]+。
步骤2：化合物M9-2的合成
M9-1(54g)加入到1L三口瓶中，加入500mL ACN，加入NIS(80g)和TsOH(5.1g)。升温至70℃反应1h后，滴加2.5L水，过滤，滤饼用EA溶解。分液后，浓缩有机相得目标化合物M9-2(94g)。ESI-MS m/z:307.2[M+H]+。
步骤3：化合物M9-3的合成
M9-2(88g)加入到1L三口瓶中，加入500mL DMF，加入CuCN(31g)。升温至125℃反应16h后，滴加2L水后，加入到2L水中，过滤，滤饼用水洗，EA溶解。水相用EA萃2次，收集并合并有机相，浓缩得到目标产物M9-3(55.4g)。ESI-MS m/z:207.0[M]-。
步骤4：化合物M9-4的合成
M9-3(88g)加入到250mL三口瓶中，加入83mL浓硫酸和9mL水。60℃反应16h后，补充70mL浓硫酸和5mL水，继续反应24h。降温至0℃，将反应液缓慢倾倒至2L冰水中，过滤，滤饼水洗后，EA溶解。滤液用EA萃取两次，收集并合并有机相，浓缩后，PE：EA＝1：1打浆。过滤，得到目标产物M9-4(59g)。ESI-MS m/z:224.1[M+H]+。
步骤5：化合物M9-5的合成
M9-4(58g)加入到1L三口瓶中，加入650mL THF，升温至40℃后，缓慢分批次加入NaH(16g)。搅拌10min后，升温至60℃，缓慢加入N,N'-硫羰基二咪唑(69g)。反应1h后，加入饱和氯化铵溶液淬灭反应，滴加稀盐酸调整pH＝4-5，旋去THF。过滤，滤饼用水洗，甲醇溶解后，浓缩有机相，得到粗品M9-5(85g)。ESI-MS m/z:267.0[M+H]+。
步骤6：化合物M9-6的合成
M9-5(74g)加入到1L三口瓶中，加入750mL ACN，加入碘甲烷(22mL)，加入甲醇钠(23g)的水溶液(100mL)。室温下反应15min后，将反应液加入到3.5L的水中，加入稀盐酸调整pH＝4-5,过滤，滤饼用PE：EA＝2：1的混合溶剂打浆。过滤，滤饼即为目标产物M9-7(42.2g)。ESI-MS m/z:281.2[M+H]+。
步骤7：化合物M9-7的合成
反应瓶中分别加入MeOH(1.80mL)和无水THF后，于冰水浴降温5min，缓慢分批加入NaH(2.86g),搅拌5min后，分批加入粉末固体M9-6(4.00g)，自然升至室温22℃搅 拌反应10min；反应于冰水浴降温5min，滴入饱和NH4Cl 100mL淬灭，加入200mL乙酸乙酯，萃取，水相用乙酸乙酯洗2遍，合并有机相减压蒸干，得目标化合物M9-7(4.23g)。ESI-MS m/z:276.0[M+H]+。
步骤8：化合物M9-8的合成
在室温下，向反应瓶中依次加入M9-7(4.23g),(1R，5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(3.91g),DBU(11.47mL)和无水DMF(10.0mL)后，室温搅拌溶清，最后加入PyBOP(12.00g)，室温搅拌反应0.5h。向反应中加入200mL饱和NaCl自来水，200mL EA洗两遍，萃取分液，有机相于减压蒸干，浓缩物经柱层析纯化(PE/EA＝3:1)得目标化合物M9-8(2.57g)。ESI-MS m/z:470.3[M+H]+。
步骤9：化合物M9的合成
微波管中分别加入M9-8(0.70g)，M8(1.40g)，K2CO3(0.63g)，Pd(dppf)Cl2(0.20g)和7mL Dioxane/1mL H2O后，N2置换2min后，微波140℃反应0.5h。向反应液中加入DCM和H2O各20mL，萃取，水相用DCM洗两遍，有机相减压浓缩，浓缩物经柱层析纯化(PE/EA＝4:1)得目标化合物M9(1.23g)。ESI-MS m/z:776.4[M+H]+。
实施例1：化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(7-((1-((4-((1R，5S)-3,8-二氮杂环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟吡啶[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基(甲基)氨基)庚酰胺基)-3,3-二甲基丁酰)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-苄基)吡咯烷的合成
步骤1：化合物1-1的合成
在室温下，500mL单口瓶中加入中间体M(20g)，将DMF(100mL)和THF(100mL)加入其中，再将化合物1,1-环丙烷二甲醇(23.9g)，碳酸铯(45.6g)，DABCO(0.52g)加入其中，N2保护下，40℃反应5h。将反应混合物冷却至室温，向其中倒入200mL水,有固体析出，过滤，滤饼用水淋洗，滤饼烘干，得19.8g化合物1-1。ESI-MS m/z:494[M+H]+。
步骤2：化合物1-2的合成
在室温下，500mL单口瓶中加入化合物1-1(17.8g)，将THF(200mL)和水(40mL)加入其中，再将化合物((2-氟-6-(甲氧基甲氧基)-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼硼烷-2-基)萘-1-基)乙炔基)三异丙基硅烷(18.5g)，K3PO4(22.9g)，CataCXium A Pd G3(5.3g)， N2保护60℃反应5h。反应液直接浓缩，浓缩物经柱层析分离纯化(PE:EA＝1:1)得26.1g目标化合物1-2。ESI-MS m/z:844[M+H]+。
步骤3：化合物1-3的合成
在室温下，将化合物1-2(5.5g)溶于DCM(60mL)中，向其中加入DMP(8.29g)，室温反应4h。向反应液中加硫代硫酸钠溶液淬灭，DCM萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，浓缩，浓缩物经柱层析分离产物(PE:EA＝1:1)，得4.8g目标化合物1-3。ESI-MS m/z:842[M+H]+。
步骤4：化合物1-4的合成
在室温下，将化合物7-氨基庚酸甲酯盐酸盐(190.0mg)溶于DCM(5mL)中，向其中加入TEA(0.33mL)，室温反应30min后，加入化合物1-3(100.0mg)和催化量醋酸，室温反应30min后，加入STAB(126.0mg)，室温反应5h。向反应液中加入饱和食盐水(5mL)，DCM萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，浓缩物经柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝15:1)得116.0mg目标化合物1-4。ESI-MS m/z:985[M+H]+。
步骤5：化合物1-5的合成
在室温下，将上述化合物1-4(116.0mg)溶于MeOH(5mL)中，向其中加入37％w/t甲醛水溶液(0.1mL)和催化量醋酸，室温反应30min后，加入NaBH3CN(37.3mg)，室温反应1h。向反应液中加入饱和食盐水(5mL)，EA萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，浓缩物经柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝15:1)得到110.0mg目标化合物1-5。ESI-MS m/z:999[M+H/]+。
步骤6：化合物1-6的合成
在室温下，将化合物1-5(110.0mg)溶于THF(3mL)中，向其中加入水(1mL)，MeOH(1mL)和氢氧化锂(23.1mg)，室温反应过夜。用稀硫酸调节溶液pH至2-3，向反 应液中加入饱和食盐水(5mL)，EA萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，浓缩得100.3mg目标化合物1-6。ESI-MS m/z:985[M+H/]+。
步骤7：化合物1-7的合成
在室温下，将化合物1-6(100.0mg)溶于DMF(3mL)中，向其中加入(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(50.0mg)，DIEA(0.04mL)和HATU(57.91mg)，室温反应2h。向反应液中加入饱和食盐水(5mL)，EA萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，浓缩，浓缩物经柱层析分离产物(DCM:MeOH＝10:1)得94.0mg目标化合物1-7。ESI-MS m/z:1398[M+H]+。
步骤8：化合物1-8的合成
在室温下，50mL单口瓶中加入化合物1-7(94.0mg)溶于THF(3mL)中，向其中加入1mol/L TBAF的THF溶液(0.2mL)，室温反应1h。向反应液中加入饱和食盐水(5mL)，EA萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，浓缩，浓缩物经柱层析分离产物(DCM:MeOH＝10:1)得67.0mg目标化合物1-8。ESI-MS m/z:1242[M+H]+。
步骤9：化合物1的合成
在室温下，50mL单口瓶中加入化合物1-8(67.0mg)溶于DCM(3mL)，加入TFA(1mL)，室温反应1h。将反应液直接浓缩，浓缩物经反相色谱柱层析分离产物(CH3CN/H2O＝30％-55％)得目标化合物1(12.6mg，纯度95.12％)。ESI-MS m/z:1097[M+H]+。1HNMR(500MHz,DMSO)δ10.22(s,1H),9.33(s,1H),9.14(s,1H),8.99(s,1H),8.57-8.55(m,1H),7.99(dd,J＝9.3,6.0Hz,1H),7.85(d,J＝9.4Hz,1H),7.47(t,J＝9.0Hz,1H),7.43-7.37(m,6H),7.17(s,1H),4.55-4.35(m,7H),4.24-4.19(m,4H),3.90-3.81(m,3H),3.66-3.61(m,2H),3.12-3.10(m,1H),2.97-2.96(m,1H),2.85-2.83(m,4H),2.25-2.23(m,1H),2.21-1.91(m,9H),1.65-1.63(m,2H),1.47-1.46(m,3H),1.27-1.25(m,5H),0.92-0.88(m,13H)。
实施例47：化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(7-((1-((4-((1R，5S)-3,8-二氮杂环[3.2.1] 辛烷-3-基)-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟吡啶[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基(甲基)氨基)庚酰胺基)-3,3-二甲基丁酰)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-苄基)吡咯烷
步骤1：化合物47-1的合成
25mL单口瓶中加入化合物1-1(200mg)，溶于THF(5mL)和水(1mL)，加入2-(7,8-二氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(170.1mg)，K3PO4(257.84mg)，CataCXium A Pd G3(59.0mg)，N2保护60℃反应3h。反应液直接浓缩。浓缩物经柱层析分离纯化(PE:EA＝1:1)，得到220.0mg化合物47-1。
步骤2：化合物47-2的合成
25mL单口瓶中加入化合物47-1(0.22g)，溶于DCM(3mL),加入DMP(0.41g)，室 温反应4h。向反应液中加硫代硫酸钠溶液淬灭，DCM萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，有机相浓缩，浓缩物经柱层析分离产物(PE:EA＝1:1)，得0.21g化合物47-2。
步骤3：化合物47-3的合成
25mL单口瓶中加入7-氨基庚酸甲酯盐酸盐(56.2mg)，溶于DCM(3mL)，加入TEA(0.33mL)，室温反应30min后，加入化合物47-2(80.0mg)和催化量醋酸，室温反应30min后，加入STAB(124.7mg)，室温反应5h。向反应液中加入饱和食盐水(5mL),DCM萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，柱层析分离产物(DCM:MeOH＝15:1)得91.2mg化合物47-3。
步骤4：化合物47-4的合成
25mL单口瓶中加入化合物47-3(91.2mg)，溶于MeOH(3mL)，加入37％w/t甲醛水溶液(0.1mL)和催化量醋酸，室温反应30min后，加入NaBH3CN(37.3mg)，室温反应1h。向反应液中加入饱和食盐水(5mL),EA萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，柱层析分离产物(DCM:MeOH＝15:1)得83.1mg化合物47-4。
步骤5：化合物47-5的合成
25mL单口瓶中加入化合物47-4(83.1mg)，溶于THF(1mL)，加入水(1mL)，MeOH(1mL)和氢氧化锂(19.6mg)，室温反应过夜。用稀硫酸调节溶液pH至2-3，向反应液中加入饱和食盐水(5mL),EA萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，得79.0mg化合物47-5。
步骤6：化合物47-6的合成
50mL单口瓶中加入化合物47-5(79mg)，溶于DMF(3mL)，加入(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(45.47mg)，DIEA(0.04mL)和HATU(54.75mg)，室温反应2h。向反应液中加入饱和食盐水(5mL),EA萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，浓缩。浓缩物经柱层析分离产物(DCM:MeOH＝10:1),得84.0mg化合物47-6。
步骤7：化合物47的合成
50mL单口瓶中加入化合物47-6(84.0mg)，溶于DCM(3mL)，加入TFA(1mL)，室温反应1h。蒸干反应液，反相色谱柱层析分离产物(CH3CN/H2O＝30％-55％),得47.0mg化合物47(纯度97.63％)。LCMS：[M+2H]+/2＝546.47。1H NMR(500MHz,MeOD)δ9.14(d,J＝5.3Hz,1H),8.88(d,J＝7.4Hz,1H),7.63(dd,J＝8.9,4.7Hz,1H),7.46–7.32(m,6H),7.25 (s,1H),4.67–4.33(m,7H),4.27(s,2H),4.05–3.86(m,3H),3.79(dd,J＝10.9,3.7Hz,1H),3.67–3.38(m,2H),3.18-3.06(m,2H),2.96(s,3H),2.45(s,3H),2.32–2.01(m,8H),1.85-1.70(m,2H),1.65-1.52(m,2H),1.42-1.28(m,4H),1.12–0.81(m,14H).
实施例118：(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(1-((4-((1R，5S)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟吡啶[4，3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-基)苯甲酰胺)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物118-1的合成
取25mL单口瓶，将4-羟甲基哌啶(1.00g)溶于DMF(12.0mL),加入KI(0.72g)，对氟苯甲酸甲酯(1.2g)，K2CO3(6.08g)，加热至120℃反应14h。向反应液中加入适量水,EA萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干柱层析分离产物(PE:EA＝5:1)，得1.2g目标化合物，即化合物118-1。
步骤2：化合物118-2的合成
25mL单口瓶中加入化合物118-1(500mg)，溶于THF(5.0mL)，加入邻苯二甲酰亚胺(400mg)，三苯基磷(593mg)，DIAD(458mg)，室温反应过夜。向反应液中加入适 量水,EA萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干柱层析分离产物(PE:EA＝5:1)，得438mg目标化合物，即化合物118-2。
步骤3：化合物118-3的合成
25mL单口瓶中加入化合物118-2(438mg)，溶于EtOH(3mL)，加入水合肼(2.0mL)，室温反应过夜。向反应液中加入适量水,DCM萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干柱层析分离产物(MeOH:DCM＝1:10)，得232mg目标化合物，即化合物118-3。
步骤4：化合物118-4的合成
25mL单口瓶中加入化合物1-3(100mg)，溶于DCM(3mL)，加化合物118-3(41mg)和醋酸(0.1mL)，加热至40℃反应2h后，加入STAB(126mg)，反应过夜。向反应液中加入甲醛水溶液(0.1mL),加热至40℃反应0.5h后,加入STAB(126mg)，反应1h。降温至室温，加入适量饱和碳酸氢钠溶液，DCM萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干柱层析分离产物(MeOH:DCM＝1:10)，得93.0mg目标化合物，即化合物118-4。
步骤5：化合物118-5的合成
25mL单口瓶中加入化合物118-4(93.0mg)，溶于THF(2.00mL)，加MeOH(2.00mL)、3M NaOH(2.00mL),加热至40℃反应过夜。将温至室温后，向反应液中加入适量水，用稀盐酸调节溶液pH至2-3，DCM萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干柱层析分离产物(MeOH:DCM＝1:10)，得45.0mg目标化合物，即化合物118-5。
步骤6：化合物118-6的合成
25mL单口瓶中加入化合物118-5(45.0mg)，溶于DMF(3mL)，加入(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(20.0mg)，DIEA(0.02mL)和HATU(21.7mg)，室温反应2h。向反应液中加入饱和食盐水(5mL),EA萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，柱层析分离产物(DCM:MeOH＝10:1),得45.9mg目标化合物，即化合物118-6。
步骤7：化合物118-7的合成
25mL单口瓶中加入化合物118-6(45.9mg)，溶于DMF(3mL),加入CsF(65.3mg)，室温反应1h。向反应液中加入15mL水,有固体析出，过滤，滤饼用水淋洗，滤饼烘干，得43.0mg目标化合物，即化合物118-7。
步骤8：化合物118的合成
25mL单口瓶中加入化合物118-7(43.0mg)，溶于DCM(2mL)，加入TFA(2mL),室温反应1h。反应液直接蒸干，反相色谱柱层析分离产物(CH3CN/H2O＝30％-55％)，得目标化合物10.1mg，即化合物118。LCMS：[M+2H]+/2＝594.14。1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.11–9.06(m,1H),8.89(d,J＝5.1Hz,1H),8.81–8.73(m,1H),7.97–7.89(m,1H),7.85(dd,J＝9.1,5.7Hz,1H),7.66(d,J＝8.5Hz,1H),7.54–7.46(m,3H),7.45–7.37(m,3H),7.34–7.28(m,1H),7.23–7.20(m,1H),4.81–4.74(m,2H),4.70–4.58(m,3H),4.56–4.40(m,3H),4.35–4.30(m,1H),4.27–4.09(m,4H),4.02–3.83(m,6H),3.63–3.53(m,2H),3.47–3.41(m,1H),3.40–3.34(m,1H),2.98(d,3H),2.48–2.40(m,3H),2.29–2.24(m,1H),2.19–2.05(m,6H),1.92–1.82(m,2H),1.55–1.41(m,2H),1.12(s,9H),1.00–0.84(m,4H).
实施例130：(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(1R，5S)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟吡啶[4，3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)-3，9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)苯甲酰胺)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物130-1的合成
25mL单口瓶中加入3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸叔丁酯(0.500g)，溶于DMSO(5.00mL),加入DIEA(0.170mL)，6-氟烟酸甲酯(0.425g)，加热至120℃反应8h。向反应液中加入适量水和EA萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干柱层析分离产物(PE:EA＝10:1)，得0.645g目标化合物，即化合物130-1。
步骤2：化合物130-2的合成
25mL单口瓶中加入化合物130-1(0.64g)，溶于THF(2.00mL)和MeOH(2.00mL)混合溶液中，加入3M NaOH(2.00mL),加热至40℃反应过夜。将温至室温后，向反应液中加入适量水，用稀盐酸调节溶液pH至2-3，DCM萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干柱层析分离产物(MeOH:DCM＝1:10)，得0.54g目标化合物，即化合物130-2。
步骤3：化合物130-3的合成
25mL单口瓶中加入化合物130-2(100.0mg)，溶于DMF(3.00mL)，加入(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(165.8mg)，DIEA(0.02mL)和HATU(228mg)，室温反应2h。向反应液中加入饱和食盐水(5mL)和EA萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，柱层析分离产物(DCM:MeOH＝10:1),得156mg目标化合物，即化合物130-3。
步骤4：化合物130-4的合成
25mL单口瓶中加入化合物130-3(156mg)，溶于DCM(2.00mL)，加入TFA(2.00mL),室温反应1h。反应液直接蒸干,得158mg目标化合物，即化合物130-4。
步骤5：化合物130-5的合成
25mL单口瓶中加入化合物1-3(100mg)，溶于MeOH(3mL)，加化合物130-4(158mg)，加热至40℃反应2h后，加入氰基硼氢化钠(126mg)，反应过夜。降温至室温，加入适量饱和碳酸氢钠溶液，DCM萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干柱层析分离产物(MeOH:DCM＝1:10)，得88.0mg目标化合物，即化合物130-5。
步骤6：化合物130-6的合成
25mL单口瓶中加入化合物130-5(88.0mg)，溶于DMF(3.00mL),加入CsF(185mg)，室温反应1h。向反应液中加入15mL水,有固体析出，过滤，滤饼用水淋洗，滤饼烘干，得67.2mg目标化合物，即化合物130-6。
步骤7：化合物130的合成
25mL单口瓶中加入化合物130-6(67.2mg)，溶于DCM(2.00mL)，加入TFA(2.00mL),室温反应1h。反应液直接蒸干，反相色谱柱层析分离产物(CH3CN/H2O＝30％-55％),得目标化合物18.1mg，即化合物130。LCMS：[M+2H]+/2＝616.30。1H NMR(500MHz,MeOD-d4)δ9.10(s,1H),8.89(s,1H),7.89(dd,J＝9.4,5.6Hz,1H),7.73(d,J＝8.8Hz,2H),7.44(q,J＝8.4Hz,4H),7.38(d,J＝6.3Hz,2H),7.32(t,J＝9.0Hz,1H),7.22(d,J＝2.3Hz,1H),6.94(d,J＝8.7Hz,2H),4.68(d,J＝11.8Hz,2H),4.62–4.56(m,2H),4.49–4.37(m,3H),4.28(d,J＝10.1Hz,3H),3.95(dd,J＝25.6,14.3Hz,4H),3.81(d,J＝7.6Hz,1H),3.71(s,3H),3.41(dt,J＝32.7,7.7Hz,3H),3.18–3.14(m,3H),2.48(s,3H),2.24–2.10(m,6H),2.04–1.92(m,4H),1.77(s,5H),1.52(d,J＝7.0Hz,5H),1.18–1.08(m,9H),1.00–0.84(m,4H).
实施例133：(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(7-((1-(((4-((1R，5S)-3,8-二氮杂双环 [3.2.1]辛-3-基)-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟吡啶[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)(甲基)氨基)-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)苯甲酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-乙基)吡咯烷-2-甲酰胺
步骤1：化合物133-1的合成
25mL单口瓶中加入化合物7-羟基-2-氮杂螺[3.5]壬-2-羧酸叔丁酯(350mg)，溶于DCM(5mL)，加入TFA(1mL),室温反应2h。反应液直接蒸干，得220.0mg目标化合物，即化合物133-1。
步骤2：化合物133-2的合成
25mL单口瓶中加入化合物133-1(0.22g)，溶于DMF(6mL),加入KI(0.12g)，对氟苯甲酸甲酯(0.2g)，K2CO3(0.98g)，加热至120℃反应14h。向反应液中加入适量水, EA萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干柱层析分离产物(PE:EA＝5:1)，得0.30g目标化合物，即化合物133-2。
步骤3：化合物133-3的合成
25mL单口瓶中加入化合物133-2(300mg)，溶于THF(3mL)，加入邻苯二甲酰亚胺(240mg)，三苯基磷(371mg)，DIAD(286mg)，室温反应过夜。向反应液中加入适量水,EA萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干柱层析分离产物(PE:EA＝5:1)，得347mg目标化合物，即化合物133-3。
步骤4：化合物133-4的合成
25mL单口瓶中加入化合物133-3(347mg)，溶于EtOH(3mL)，加入水合肼(1mL)，室温反应过夜。向反应液中加入适量水,DCM萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干柱层析分离产物(MeOH:DCM＝1:10)，得158mg目标化合物，即化合物133-4。
步骤5：化合物133-5的合成
25mL单口瓶中加入中间体1-3(100mg)，溶于DCM(3mL)，加化合物133-4(41mg)和醋酸(0.1mL)，加热至40℃反应2h后，加入STAB(126mg)，反应过夜。向反应液中加入甲醛水溶液(0.1mL),加热至40℃反应0.5h后,加入STAB(126mg)，反应1h。降温至室温，加入适量饱和碳酸氢钠溶液，DCM萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干柱层析分离产物(MeOH:DCM＝1:10)，得93mg目标化合物，即化合物133-5。
步骤6：化合物133-6的合成
25mL单口瓶中加入化合物133-5(93mg)，溶于THF(1mL)，加MeOH(1mL),3M NaOH(1mL),加热至40℃反应过夜。将温至室温后，向反应液中加入适量水，用稀盐酸调节溶液pH至2-3，DCM萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干柱层析分离产物(MeOH:DCM＝1:10)，得42mg目标化合物，即化合物133-6。
步骤7：化合物133-7的合成
25mL单口瓶中加入化合物133-6(42.0mg)，溶于DMF(3mL)，加入(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(20.3mg)，DIEA(0.02mL)和HATU(21.7mg)，室温反应2h。向反应液中加入饱和食盐水 (5mL),EA萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，柱层析分离产物(DCM:MeOH＝10:1),得46.1mg目标化合物，即化合物133-7。
步骤8：化合物133-8的合成
25mL单口瓶中加入化合物133-7(46.1mg)，溶于DMF(3mL)，加入CsF(66.4mg)，室温反应1h。向反应液中加入15mL水,有固体析出，过滤，滤饼用水淋洗，滤饼烘干，得40.3mg目标化合物，即化合物133-8。
步骤9：化合物133的合成
25mL单口瓶中加入化合物133-8(40.3mg)，溶于DCM(2mL)，加入TFA(2mL),室温反应1h。反应液直接蒸干，反相色谱柱层析分离产物(CH3CN/H2O＝30％-55％)，得目标化合物9.5mg，即化合物133。(纯度96.22％)。LCMS：[M+2H]+/2＝614.75。1H NMR(500MHz,MeOD)δ9.11(s,1H),9.01(s,1H),7.87(dd,J＝15.0,6.5Hz,1H),7.69(d,J＝8.4Hz,2H),7.47–7.29(m,6H),7.23(d,J＝1.9Hz,1H),6.5-6.39(m,2H),5.08-5.01(m,1H),4.85–4.77(m,2H),4.70-4.57(m,2H),4.48–4.22(m,4H),4.06–3.92(m,3H),3.82-3.51(m,9H),2.91(s,3H),2.48(s,3H),2.27–2.07(m,9H),2.05–1.91(m,2H),1.82–1.57(m,5H),1.52(d,J＝7.0Hz,3H),1.17–0.83(m,13H)。
实施例148：化合物(2S，4R)-1-((2S)-2-(4-((1-((1-)(((7-(2-氨基-3-氰基苯并[b]噻吩-4-基)-4-((1R，5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-6-氯-8-氟喹唑啉-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)甲氧基)苯甲酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物148-1的合成
将环丙烷-1,1-二基二甲醇(55mg)溶于2ml THF中，加入NaH(32mg)，室温搅拌1h，然后加入中间体M2(200mg)，室温反应0.5h。向反应液缓慢加入3mL饱和氯化铵溶液淬灭，EA萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。浓缩物经柱层析分离纯化得化合物148-1(200mg)。ESI-MS m/z:765[M+H]+；
步骤2：化合物148-2的合成
化合物148-1(190mg)溶于5mL DCM中，然后加入戴斯-马丁氧化剂(126mg)，室温反应1h。过滤反应液，滤饼用3mL EA洗脱3次，收集滤液，减压浓缩后经柱层析分离纯化得到化合物148-2(170mg)。ESI-MS m/z:763[M+H]+；
步骤3：化合物148-3的合成
将化合物M6(78mg)溶于5mL无水甲醇中，然后加入DIEA(0.04ml)，室温反应10分钟，然后加入148-2(60mg)和ZnCl2(0.6ml,1M/Hexane)，转到40℃反应1h，然后加入氰基硼氢化钠(49mg)，40℃反应16h,LCMS监测反应完成。向反应液缓慢加入5mL水 淬灭，DCM萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后经柱层析分离纯化得化合物148-3(16mg)。ESI-MS m/z:705[M+2H]+/2；
步骤4：化合物148的合成
将148-3(16mg)溶于3mL DCM中，然后加入1.00mL TFA，室温反应0.5h。将反应液直接浓缩，浓缩物经Pre-HPLC分离纯化得到化合物148(6.2mg)。ESI-MS m/z:605[M+2H]+/2。1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ8.87(s,1H),7.89(s,1H),7.78(d,J＝8.4Hz,2H),7.67(s,1H),7.44(d,J＝3.6Hz,4H),7.24(s,1H),7.16(s,1H),6.92(s,2H),3.95(s,3H),3.88(s,5H),3.82(s,3H),3.64(s,6H),3.16-3.14(m,2H),2.69(s,3H),2.48(s,3H),2.21–2.16(m,5H),2.03(s,8H),1.87(s,5H),1.60(s,5H),1.52(d,J＝6.7Hz,4H),0.89(d,J＝7.3Hz,6H)。
实施例149：化合物((3R，7aR)-7a-(((7-(2-氨基-3-氰基苯并[b]噻吩-4-基)-4-((1R，5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-6-氯-8-氟喹唑啉-2-基)氧基)甲基)六氢-1H-吡咯嗪-3-基)甲基4-(1-(((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-((((R)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)哌啶-1-甲酸酯的合成
步骤1：化合物149-1的合成
将4-乙炔基哌啶-1-羧酸叔丁酯(147mg)，4-(1-(((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-((((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(330mg)溶于6mL THF，6mL  H2O，6mL叔丁醇中，然后依次加入抗坏血酸钠(360mg)和无水硫酸铜(100mg)，室温反应3小时。向反应液中加入20.0mL水，用EA(3*20ml)萃取，合并有机相，硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得化合物149-1(420mg)。ESI-MS m/z:680[M+H]+。
步骤2：化合物149-2的合成
将149-1(420mg)溶于10mL DCM中，然后加入3mL TFA，室温反应30min。向反应液中加入1M NaOH水溶液游离酸。再用DCM(3*10ml)萃取，合并有机相并无水硫酸钠干燥，减压蒸出溶剂得到化合物149-2(365mg)。ESI-MS m/z:580[M+H]+。
步骤3：化合物149-3的合成
将中间体M3(40mg)溶于5mL THF中，然后加入13mg CDI，25℃反应1h，然后加入149-2(95mg)，40℃搅拌12h。加入5.00mL甲醇淬灭，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得到化合物149-3(11mg)。ESI-MS m/z:720[M+2H]+/2。
步骤4：化合物149的合成
将149-3(11mg)溶于3mL DCM中，然后加入1mL TFA，室温反应30min。将反应液直接浓缩，浓缩物经Pre-HPLC制备分离得到化合物149(8mg)。ESI-MS m/z:620[M+2H]+/2。1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.88(s,1H),8.05(d,J＝10.1Hz,1H),7.94(s,1H),7.71(d,J＝8.0Hz,1H),7.43(q,J＝8.4Hz,4H),7.36(s,1H),7.28(t,J＝7.7Hz,1H),7.18(d,J＝7.1Hz,1H),5.51(s,1H),5.34-5.31(m,2H),4.61–4.50(m,4H),4.45(s,1H),4.24(s,3H),4.16(s,3H),3.91–3.82(m,3H),3.76(d,J＝10.3Hz,1H),3.59(s,2H),3.44(s,2H),3.16(s,1H),2.93(s,4H),2.24(s,3H),2.22–2.17(m,4H),2.13(s,8H),2.03-2.01(m,5H),1.97(d,J＝13.5Hz,2H),1.93(s,1H),1.61(d,J＝8.4Hz,6H),0.90(t,J＝6.8Hz,5H).
实施例150：化合物((3R，7aR)-7a-(((7-(2-氨基-3-氰基苯并[b]噻吩-4-基)-4-((1R，5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-6-氯-8-氟喹唑啉-2-基)氧基)甲基)六氢-1H-吡咯嗪-3-基)甲基(4-(1-(((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-(((2S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)苯基)氨基甲酸酯的合成
步骤1：化合物150-1的合成
将4-乙炔苯胺(1g)溶于10mL THF中，然后加入(Boc)2O(2.24g)，55℃反应24小时。向反应液中加入20.0mL水，用EA(3*20ml)萃取，合并有机相，硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得到化合物150-1(1.78g)。ESI-MS m/z:218[M+H]+。
步骤2：化合物150-2的合成
将150-1(152mg)，4-(1-(((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-((((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(330mg)溶于6mL THF，6mL H2O，6mL叔丁醇中，然后依次加入抗坏血酸钠(360mg)和无水硫酸铜(100mg)，室温反应3小时。向反应液中加入20.0mL水，用EA(3*20ml)萃取，合并有机相，硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得到化合物150-2(450mg)。ESI-MS m/z:688[M+H]+。
步骤3：化合物150-3的合成
将150-2(450mg)溶于10mL DCM中，然后加入3mL TFA，室温反应30min。向反应液中加入1M NaOH水溶液游离酸。再用DCM(3*10ml)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得化合物150-3(320mg)。ESI-MS m/z:588[M+H]+。
步骤4：化合物150-4的合成
将中间体M3(40mg)溶于5mL THF中，然后加入13mg CDI，25℃反应1h，然后加入150-3(96mg)，40℃搅拌12h。加入5.00mL甲醇淬灭，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得到化合物150-4(8mg)。ESI-MS m/z:725[M+2H]+/2。
步骤5：化合物150的合成
将150-4(8mg)溶于3mL DCM中，然后加入1mL TFA，室温反应30min。将反应液直接浓缩，浓缩物经Pre-HPLC制备分离得到化合物150(2.4mg)。ESI-MS m/z:625[M+2H]+/2。1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ8.89–8.84(m,1H),8.53-8.51(m,1H),7.89(d,J＝20.6Hz,1H),7.76(t,J＝7.7Hz,2H),7.69(d,J＝7.8Hz,1H),7.53(d,J＝8.4Hz,1H),7.46–7.41(m,4H),7.41–7.32(m,1H),7.25(t,J＝7.8Hz,1H),7.16(d,J＝6.9Hz,1H),5.59(s,1H),5.34(s,1H),5.18(s,2H),4.17(s,2H),3.86-3.84(m,4H),3.68(s,2H),3.51-3.49(m,4H),3.16(s,1H),3.04(d,J＝7.5Hz,1H),2.43-2.41(m,3H),2.27(s,3H),2.18-2.15(m,3H),2.04(d,J＝31.7Hz,8H),1.99(s,1H),1.66(s,1H),1.60(s,2H),1.55(d,J＝7.0Hz,3H),1.32–1.26(m,10H),0.90(t,J＝6.9Hz,2H).
实施例151：化合物((3R，7aR)-7a-(((7-(2-氨基-3-氰基苯并[b]噻吩-4-基)-4-((1R，5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-6-氯-8-氟喹唑啉-2-基)氧基)甲基)六氢-1H-吡咯嗪-3-基)甲基6-(((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-((((R)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酰酰基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸盐的合成
步骤1：化合物151-1的合成
将(2S，4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(304mg)，2-(叔丁氧基羰基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-羧酸(150mg)，HATU(284mg)溶于5mL DMF中，然后加入DIEA(0.31ml)，室温反应30分钟。向反应液中加入20.0mL水，用EA(3*20ml)萃取，合并有机相，硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得到化合物151-1(400mg)。ESI-MS m/z:668[M+H]+。
步骤2：化合物151-2的合成
将151-1(135mg)溶于3mL DCM中，然后加入1mL TFA，室温反应30min。向反应液中加入1M NaOH水溶液游离酸。再用氯仿：异丙醇＝3：1(3*5ml)萃取，合并有机相并无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到151-2(110mg)。ESI-MS m/z:568[M+H]+。
步骤3：化合物151-3的合成
将中间体M3(40mg)溶于3mL THF中，然后加入10mg CDI，40℃反应1h，LC-MS监测中间体，然后加入151-2(49mg)，80℃搅拌12h，LC-MS监测反应完成。加入5.00mL甲醇淬灭，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得到化合物151-3(18mg)。ESI-MS m/z:715[M+2H]+/2。
步骤4：化合物151的合成
将151-3(18mg)溶于3mL DCM中，然后加入1mL TFA，室温反应30min。将反应液直接浓缩，浓缩物经Pre-HPLC制备分离得到化合物151(5.3mg)。ESI-MS m/z:615[M+2H]+/2。1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ8.87(d,J＝9.5Hz,1H),8.56–8.49(m,1H),7.94(d,J＝3.8Hz,1H),7.71(d,J＝8.0Hz,1H),7.42(q,J＝8.4Hz,4H),7.27-7.25(m,1H),7.18(d,J＝7.4Hz,1H),5.34-5.31(m,1H),4.77–4.49(m,11H),4.45-4.41(m,3H),4.31-4.30(m,1H),4.24(s,3H),3.99(s,2H),3.88-3.85(m,4H),3.74-3.71(m,1H),3.57(s,1H),3.19-3.17(m,2H),3.07(s,1H),2.95(s,1H),2.45–2.30(m,6H),2.20-2.18(m,4H),2.15–1.99(m,8H),1.96-1.95(m,1H),1.57-1.54(m,1H),1.51-1.48(m,3H),1.36–1.24(m,8H),0.89-0.86(m,1H).
实施例152：((7-(2-氨基-3-氰基苯并[b]噻吩-4-基)-4-((1R，5S)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-6-氯-8-氟喹唑啉-2-基)氧基)甲基)六氢-1H-吡咯烷-3-基)甲基(6-((R)-1-((2R)-4-羟基-2-((R)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基氨基甲酰基)吡咯烷-1- 基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-6-氧代己基)氨基甲酸酯的合成
步骤1：化合物152-1的合成
室温下，将4-(羟甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(5.0g)溶于DCM(50mL)中，然后依次加入三乙胺(9.68mL)，对甲苯磺酰氯(5.31g)，室温反应15h，向反应液中适量水淬灭，然后加入适量乙酸乙酯萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤后减压蒸出溶剂得到8.02g产物，即化合物152-1，直接用于下一步。
步骤2：化合物152-2的合成
将化合物152-1(7.0g)与4-羟基苯甲酸甲酯(2.6g)溶于DMF(30.0mL)中，加入碳酸钾(4.72g)，60℃反应10h。向反应液中适量水淬灭，然后加入适量乙酸乙酯萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤后减压蒸出溶剂，柱层析纯化得到4.02g产物，即化合物152-2，ESI-MS m/z:350[M+H]+。
步骤3：化合物152-3的合成
将152-2(3.5g)溶于DCM(30.0mL)中，加入三氟乙酸(10.0mL)，室温反应0.5h，LC-MS监控反应完毕，将反应液直接浓缩，30.0mL DCM复溶后再次浓缩，得到2.5g产物 三氟乙酸盐，即化合物152-3，直接用于下一步，ESI-MS m/z:250[M+H]+
步骤4：化合物152-4的合成
将152-3(2.4g)溶于DCM(30.0mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(1.42mL)，室温反应30min后加入冰醋酸(2.04mL)，中间体1-3(1.42g)，加热至40℃反应1h后加入三乙酰基硼氢化钠(3.02g)，40℃反应6h。反应液冷却至室温后，向反应液中加入适量水淬灭，然后加入适量DCM萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤后减压蒸出溶剂，柱层析纯化得到1.30g产物，即化合物152-4，ESI-MS m/z:538[M+2H]+/2。
步骤5：化合物152-5的合成
将152-4(1.3g)溶于THF(12.00mL)，MeOH(12.00mL)混合溶液中，加入氢氧化钠(480mg)的水(12.0mL)溶液，40℃反应1h，反应液冷却至室温后，加入1M硫酸调节至酸性，加入适量DCM/MeOH萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤后减压蒸除溶剂后得到1.24g产物，即152-5。ESI-MS m/z:531[M+2H]+/2。
步骤6：化合物152-6的合成
将152-5(1.24g)，2S，4R-1-(S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(S)-1-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(0.58g)溶于15.00mL DMF中，然后依次加入N,N-二异丙基乙胺(0.55mL)和N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(0.60g)，室温反应30分钟，LCMS监测反应完成。向反应液中加入100.0mL水，过滤得到体系中析出的固体，经柱层析分离纯化，得淡黄色固体1.1g，即化合物152-6。ESI-MS m/z:744[M+2H]+/2。
步骤7：化合物152的合成
将152-6(1.10g)溶于15.00mL DMF中，加入氟化铯(1.0g)，室温反应1h，向反应液中加入100mL水，过滤收集析出的固体，柱层析纯化得到0.68g产物。将产物溶于7.0mL DCM中，加入7.0mL三氟乙酸，室温反应1.0h。反应结束后将反应液滴加至乙酸乙酯与饱和碳酸氢钠的混合溶液中，萃取收集有机相，无水硫酸钠干燥，送样制备液相分离，得黄色粉末146.0mg，即化合物152。ESI-MS m/z:594[M+2H]+/2，1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.09(s,1H),8.93(d,J＝4.8Hz,1H),8.62(t,J＝6.7Hz,1H),7.87–7.79(m,1H),7.76(d,J＝ 8.4Hz,2H),7.65(dd,J＝9.2,4.0Hz,1H),7.49–7.42(m,3H),7.41–7.34(m,2H),7.28(td,J＝8.8,1.9Hz,1H),7.22(d,J＝2.4Hz,1H),6.90(dt,J＝8.2,3.9Hz,2H),5.09–4.99(m,1H),4.90(s,1H),4.81(d,J＝13.9Hz,4H),4.62(td,J＝8.3,5.1Hz,2H),4.48(s,2H),4.23(s,2H),4.05–3.78(m,8H),3.50–3.36(m,3H),3.20(dd,J＝13.6,8.0Hz,2H),3.12–2.98(m,2H),2.49(s,3H),2.23(t,J＝10.5Hz,1H),2.13(s,7H),2.02–1.95(m,1H),1.90–1.78(m,2H),1.52(dd,J＝7.0,1.7Hz,3H),1.19–1.05(m,9H),1.00(s,2H),0.89(d,J＝16.7Hz,2H).
实施例153：化合物((7-(2-氨基-3-氰基苯并[b]噻吩-4-基)-4-((1R，5S)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-6-氯-8-氟喹唑啉-2-基)氧基)甲基)六氢-1H-吡咯烷-3-基)甲基(6-((R)-1-((2R)-4-羟基-2-((R)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-6-氧代己基)氨基甲酸酯的合成
步骤1：化合物153-1的合成
室温下，将6-氨基己酸甲酯盐酸盐(1.00g)溶于5.00mL THF和5.00mL MeOH混合溶剂中，然后加入碳酸氢钠固体(2.30g)，室温反应2h，过滤除去不溶性固体，滤饼用THF洗涤数次后，收集滤液，减压蒸出溶剂得到0.658g油状产物，即化合物153-1。ESI-MS m/z:146[M+H]+。
步骤2：化合物153-2的合成
将中间体M3(75.0mg)溶于5.00mL THF中，加入N,N'-羰基二咪唑(16.0mg)，室 温反应1h，送样LC-MS检测醇原料完全转化为活性脂，向反应液中加入153-1(141.0mg)，室温反应15h，向反应液中加进入适量水淬灭反应，加入DCM/MeOH萃取，收集有机相，浓缩，浓缩物经柱层析纯化得到80.0mg产物，即153-2。ESI-MS m/z:503[M+2H]+/2。
步骤3：化合物153-3的合成
将153-2(80.0mg)溶于THF(2.00mL)，MeOH(2.00mL)混合溶液中，加入氢氧化钠(110.0mg)的水(2.0mL)溶液，40℃反应5h，反应液冷却至室温后，加入1M硫酸调节至酸性，加入适量DCM/MeOH萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩得到70.0mg产物，即153-3。ESI-MS m/z:496[M+2H]+/2。
步骤4：化合物153-4的合成
将153-3(70.0mg)，2S，4R-1-(S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(S)-1-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(40.0mg)溶于5.00mL DMF中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(0.04mL)和N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(35mg)，室温反应30分钟。向反应液中加入20.0mL水，过滤得到体系中析出的固体，经柱层析分离纯化，得到化合物153-4(70.0mg)。ESI-MS m/z:709[M+2H]+/2。
步骤5：化合物153的合成
将153-4(70.0mg)溶于5.00mL DCM中，然后加入1.00mL TFA，室温反应0.5h，将反应液直接浓缩，5.00mL DCM复溶后再次浓缩，经Pre-HPLC分离纯化得到化合物153(20.5mg)。ESI-MS m/z:609[M+2H]+/2。1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ8.89(s,1H),7.94(d,J＝2.6Hz,1H),7.73–7.66(m,1H),7.47–7.35(m,4H),7.27(t,J＝7.7Hz,1H),7.20–7.13(m,1H),4.99(t,J＝6.1Hz,1H),4.72(d,J＝13.1Hz,2H),4.65(d,J＝5.7Hz,1H),4.60(d,J＝5.5Hz,1H),4.56(d,J＝8.3Hz,1H),4.48–4.40(m,2H),4.36(t,J＝10.8Hz,1H),4.24(s,2H),3.88(t,J＝13.9Hz,3H),3.74(dd,J＝10.9,4.0Hz,1H),3.61–3.50(m,2H),3.41(d,J＝5.8Hz,1H),3.06(dt,J＝11.8,7.3Hz,3H),2.46(d,J＝9.7Hz,3H),2.44–2.31(m,3H),2.31–2.16(m,6H),2.16–2.00(m,8H),1.96(dd,J＝8.5,3.9Hz,1H),1.60(ddd,J＝21.8,15.2,7.8Hz,3H),1.52–1.42(m,5H),1.31(dq,J＝14.4,7.5Hz,3H),1.03(s,9H).
实施例154：化合物((7-(2-氨基-3-氰基苯并[b]噻吩-4-基)-4-((1R，5S)-3，8-二氮杂 双环[3.2.1]辛烷-3-基)-6-氯-8-氟喹唑啉-2-基)氧基)甲基)六氢-1H-吡咯烷-3-基)甲基(6-((R)-1-((2R)-4-羟基-2-((R)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-4-氧代丁基)氨基甲酸酯的合成
具体合成步骤参考实施例153的合成。ESI-MS m/z:595[M+2H]+/2.1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ8.86(s,1H),7.93(s,1H),7.70(d,J＝8.0Hz,1H),7.47–7.37(m,4H),7.27(t,J＝8.0Hz,1H),7.19–7.16(m,1H),5.01–4.97(m,2H),4.48–4.32(m,4H),4.19–4.09(m,4H),3.87–3.71(m,4H),3.62–3.50(m,2H),3.39–3.35(m,2H),2.47–2.21(m,5H),2.19–2.17(m,4H),2.15–2.09(m,2H),1.77–1.74(m,2H),1.49(d,J＝7.0Hz,3H),1.35–1.25(m,8H),1.01(s,9H)。
实施例155：化合物((7-(2-氨基-3-氰基苯并[b]噻吩-4-基)-4-((1R，5S)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-6-氯-8-氟喹唑啉-2-基)氧基)甲基)六氢-1H-吡咯烷-3-基)甲基(6-((R)-1-((2R)-4-羟基-2-((R)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-8-氧代辛基)氨基甲酸酯的合成
具体合成步骤参考实施例153的合成。ESI-MS m/z:623[M+2H]+/2。1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ8.87(s,1H),7.93(s,1H),7.71(d,J＝8.0Hz,1H),7.46–7.38(m,4H),7.36 7.27(t,J＝8.0Hz,1H),7.18(dd,J＝7.0,3.0Hz,1H),5.02-4.97(m,2H),4.66–4.53(m,6H),4.46-4.43(m,2H),4.36(t,J＝10.5Hz,1H),4.24(s,2H),3.91–3.82(m,3H),3.75(dd,J＝11.0,4.0Hz,1H),3.57–3.55(m,2H),3.07–3.03(m,3H),2.43–2.18(m,8H),2.13-1.94(m,9H),1.59–1.56(m,2H),1.53–1.41(m,5H),1.36–1.26(m,8H),1.02(s,9H)。
实施例156：化合物((3R，7aR)-7a-((7-(2-氨基-3-氰基苯并[b]噻吩-4-基)-4-((1R，5S)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-6-氯-8-氟喹唑啉-2-基)氧基)甲基)六氢-1H-吡咯里嗪-3-基)甲基2-(S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酰基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸酯的合成
步骤1：化合物156-1的合成
将7-叔丁氧羰基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸(200.0mg)，2S，4R-1-(S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(S)-1-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(300.0mg)溶于5.00mL DMF中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(0.35mL)和N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(310.0mg)，室温反应30分钟，LCMS监测反应完成。向反应液中加入100.0mL水，过滤得到体系中析出的固体，经柱层析分离纯化，得淡黄色固体400.0mg，即化合物156-1。ESI-MS m/z:696[M+H]+。
步骤2：化合物156-2的合成
将156-1(400.0mg)溶于5.00mL DCM中，然后加入2.00mL TFA，室温反应0.5h，将反应液滴加至饱和碳酸氢钠溶液中，加入适量DCM/MeOH＝10/1溶液萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤减压浓缩得到化合物156-2。ESI-MS m/z:596[M+H]+。
步骤3：化合物156-3的合成
将中间体M3(60.0mg)溶于5.00mL THF中，加入N,N'-羰基二咪唑(16.0mg)，室温反应1h，向反应液中加入156-2(141.0mg)，室温反应15h，向反应液中加进入适量水淬灭反应，加入DCM/MeOH＝10/1溶液萃取，收集有机相，浓缩，浓缩物经柱层析纯化得到60.0mg产物，即156-3。ESI-MS m/z:728[M+2H]+/2。
步骤4：化合物156的合成
将156-3(60.0mg)溶于5.00mL DCM中，然后加入1.00mL TFA，室温反应0.5h，将反应液直接浓缩，5.00mL DCM复溶后再次浓缩，经Pre-HPLC分离纯化得到化合物156(14.0mg)。ESI-MS m/z:628[M+2H]+/2。1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ8.88(s,1H),7.94(dd,J＝3.7,1.5Hz,1H),7.71(dd,J＝7.9,1.1Hz,1H),7.49–7.36(m,4H),7.32–7.26(m,1H),7.18(dd,J＝7.5,1.1Hz,1H),5.00(q,J＝7.0Hz,1H),4.71(dd,J＝28.8,12.7Hz,4H),4.64–4.52(m,3H),4.44(s,1H),4.38–4.33(m,1H),4.24(s,3H),3.88(q,J＝10.6,7.7Hz,3H),3.75(s,1H),3.58(d,J＝10.9Hz,2H),3.40(d,J＝5.8Hz,4H),3.18(s,2H),2.47(s,6H),2.23(d,J＝8.2Hz,3H),2.18–2.04(m,9H),2.03–1.92(m,4H),1.60(s,3H),1.50(d,J＝7.0Hz,4H),1.01(s,9H)。
实施例157：化合物((3S，7aS)-7a-((7-(2-氨基-3-氰基苯并[b]噻吩-4-基)-4-((1R， 5S)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-6-氯-8-氟喹唑啉-2-基)氧基)甲基)六氢-1H-吡咯烷-3-基)甲基4-(2-((S)-1-((2S)-4-羟基-2-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-氧代乙基)哌啶-1-羧酸酯的合成
具体合成步骤参考实施例156的合成。ESI-MS m/z:615[M+2H]+/2。1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ8.89(d,J＝2.2Hz,1H),7.93(d,J＝1.6Hz,1H),7.71(d,J＝7.9Hz,1H),7.47–7.37(m,4H),7.27(tt,J＝7.8,2.3Hz,1H),7.21–7.15(m,1H),4.99(q,J＝7.0Hz,1H),4.78–4.64(m,4H),4.62–4.51(m,3H),4.43(s,2H),4.24(s,4H),4.07(d,J＝14.1Hz,2H),3.88(q,J＝14.0Hz,3H),3.75(dd,J＝11.1,3.9Hz,1H),3.57(s,2H),3.41(s,1H),2.74(t,J＝12.8Hz,2H),2.47(s,6H),2.26–2.17(m,5H),2.13(d,J＝5.5Hz,7H),1.99–1.90(m,2H),1.56(d,J＝7.0Hz,4H),1.50(d,J＝7.0Hz,2H),1.15(s,2H),1.02(s,9H)。
实施例158：化合物((3R，7aR)-7a-((7-(2-氨基-3-氰基苯并[b]噻吩-4-基)-4-((1R，5S)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-6-氯-8-氟喹唑啉-2-基)氧基)甲基)六氢-1H-吡咯里嗪-3-基)甲基4-(S)-1-((2S)-4-羟基-2-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸酯的合成
具体合成步骤参考实施例156的合成。ESI-MS m/z:608[M+2H]+/2.1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ8.89(d,J＝2.2Hz,1H),7.93(d,J＝1.6Hz,1H),7.71(d,J＝7.9Hz,1H),7.47–7.37(m,4H),7.27(tt,J＝7.8,2.3Hz,1H),7.21–7.15(m,1H),4.99(q,J＝7.0Hz,1H),4.78–4.64(m,4H),4.62–4.51(m,3H),4.43(s,2H),4.24(s,4H),4.07(d,J＝14.1Hz,2H),3.88(q,J＝14.0Hz,3H),3.75(dd,J＝11.1,3.9Hz,1H),3.57(s,2H),3.41(s,1H),2.74(t,J＝12.8Hz,2H),2.47(s,6H),2.26–2.17(m,5H),2.13(d,J＝5.5Hz,5H),1.99–1.90(m,2H),1.56(d,J＝7.0Hz,4H),1.50(d,J＝7.0Hz,2H),1.15(s,2H),1.02(s,9H)。
实施例159：化合物((3R，7aR)-7a-((7-(2-氨基-3-氰基苯并[b]噻吩-4-基)-4-((1R，5S)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-6-氯-8-氟喹唑啉-2-基)氧基)甲基)六氢-1H-吡咯里嗪-3-基)甲基4-(S)-1-((2S)-4-羟基-2-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸酯的合成
步骤1：化合物159-1的合成
将7-叔丁氧羰基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸(500.0mg)溶于5.0mL THF中，加入硼烷四氢呋喃溶液(4.64mL，1mol/L)，室温反应1h。向反应液中缓慢加入5mL HCl/MeOH溶液，搅拌至无气泡产生后，加入1mol/L NaOH溶液调节PH至碱性，然后加入适量乙酸乙酯萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤减压浓缩得到化合物159-1(450.0mg)。ESI-MS m/z:200[M+H-56]+。
步骤2：化合物159-2的合成
将159-1(250.0mg)溶于5.0mL DCM中，加入戴斯马丁试剂(387.0mg)，室温反应1h。向反应液中加入适量乙酸乙酯，析出固体过滤除去，滤液加入1mol/L NaOH溶液调节Ph至碱性，萃取分离收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤减压浓缩得到化合物159-2(180.0mg)。ESI-MS m/z:198[M+H-56]+。
步骤3：化合物159-3的合成
N2保护下，化合物159-2(180mg)溶于3.0mL无水甲醇中，加入无水碳酸钾(167mg)，(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(174mg)，室温反应3h。反应液加入适量水和乙酸乙酯萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤减压浓缩得到化合物159-3(110mg)，ESI-MS m/z:194[M+H-56]+。
步骤4：化合物159-4的合成
N2保护下，化合物159-3(110mg)，2S，4R-1-(S)-2-叠氮基-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(S)-1-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(229mg)，无水硫酸铜(63.3mg)以及抗坏血酸钠(227mg)溶于4.0mL叔丁醇，4.0mL水和4.0mLTHF混合溶剂中，室温反应2h。反应液加入适量水和DCM/MeOH＝10/1溶液萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤减压浓缩，浓缩物经柱层析纯化得到化合物159-4(250mg)，ESI-MS m/z:664[M+H-56]+。
步骤5：化合物159-5的合成
N2保护下，化合物159-4(250mg)溶于5.00mL DCM中，然后加入2.00mL TFA，室温反应0.5h，将反应液滴加至饱和碳酸氢钠溶液中，加入适量DCM/MeOH＝10/1溶液萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤减压浓缩得到化合物159-5(150.0mg)。ESI-MS m/z:620[M+H]+。
步骤6：化合物159-6的合成
将中间体M3(60.0mg)溶于5.00mL THF中，加入N,N'-羰基二咪唑(16.0mg)，室温反应1h，送样LC-MS检测醇原料完全转化为活性脂，向反应液中加入159-5(150.0mg)，室温反应15h，向反应液中加进入适量水淬灭反应，加入DCM/MeOH＝10/1溶液萃取，收集有机相，浓缩。浓缩物经柱层析纯化得到化合物159-6(54.0mg)。ESI-MS m/z:740[M+2H]+/2。
步骤7：化合物159的合成
将159-6(54.0mg)溶于5.00mL DCM中，然后加入2.00mL TFA，室温反应0.5h，将反应液直接浓缩，5.00mL DCM复溶后再次浓缩，经Pre-HPLC分离纯化得到化合物159(12.1mg)。ESI-MS m/z:640[M+2H]+/2。1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ8.98(s,1H),7.96(dd,J＝3.7,1.5Hz,1H),7.81(dd,J＝7.9,1.1Hz,1H),7.59(s,1H),7.52–7.46(m,4H),7.42–7.36(m, 1H),7.28(dd,J＝7.5,1.1Hz,1H),5.00(q,J＝7.0Hz,1H),4.95-4.71(m,4H),4.65–4.55(m,3H),4.47(s,1H),4.43–4.36(m,1H),4.29(s,3H),3.88(q,J＝10.6,7.7Hz,3H),3.75(s,1H),3.58(d,J＝10.9Hz,2H),3.40(d,J＝5.8Hz,4H),3.28(s,2H),2.46(s,6H),2.28(d,J＝8.2Hz,3H),2.19–2.06(m,9H),2.04–1.91(m,4H),1.62(s,3H),1.55(d,J＝7.0Hz,4H),1.05(s,9H).
实施例160：化合物(2S，4R)-1-(2S)-2-(4-(7-(3R，7aR)-7a-((7-(2-氨基-3-氰基苯并噻吩-4-基)-4-((1R，5S)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-6-氯-8-氟喹唑啉-2-基)氧基)甲基)六氢-1H-吡咯嗪-3-羰基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物160-1的合成
冰浴下，将159-4(100.0mg)溶于DCM(2.0mL)中，依次加入三乙胺(0.046mL)，4-二甲氨基吡啶(1.7mg)，乙酰氯(0.019mL)，冰浴下反应1h。向反应液中加入适量水和DCM萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂后柱层析纯化得到产物80mg，即化合物160-1，ESI-MS m/z:762[M+H]+。
步骤2：化合物160-2的合成
冰浴下，将160-1(80.0mg)溶于DCM(2.0mL)中，加入1.00mL TFA，室温反应0.5h，将反应液直接浓缩，5.00mL DCM复溶后再次浓缩得到产物三氟乙酸盐80mg，即化合物160-2，直接用于下一步，ESI-MS m/z:662[M+H]+。
步骤3：化合物160-3的合成
将160-2(80.0mg)，中间体161-1(100.0mg)溶于2.00mL DMF中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(0.08mL)和N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(38.0mg)，室温反应30分钟。向反应液中加入适量水析出固体，收集固体经柱层析分离纯化得到化合物160-3(45.0mg)。ESI-MS m/z:746[M+2H]+/2。
步骤4：化合物160-4的合成
将160-3(45.0mg)溶于MeOH(2.00mL)混合溶液中，加入氢氧化锂(4.0mg)的水(1.0mL)溶液，室温反应1h，反应液冷却至室温后，加入1M硫酸调节至中性，加入适量DCM/MeOH萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩得到160-4(25.0mg)。ESI-MS m/z:725[M+2H]+/2。
步骤5：化合物160的合成
将160-4(25.0mg)溶于3.00mL DCM中，加入1.00mL TFA，室温反应0.5h，将反应液直接浓缩，5.00mL DCM复溶后再次浓缩，经Pre-HPLC分离纯化得到化合物160(4.7mg)。ESI-MS m/z:625[M+2H]+/2。1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ8.90(s,1H),8.68–8.59(m,1H),8.01(d,J＝8.6Hz,1H),7.91(dd,J＝7.9,4.0Hz,1H),7.65–7.41(m,4H),7.29(t,J＝7.7Hz,1H),7.24–7.17(m,1H),5-38-5.34(m,1H),5.05–4.98(m,2H),5.02-4.71(m,3H),4.68–4.57(m,4H),4.53–4.25(m,4H),4.01-3.88(m,4H),4.02-3.77(m,2H),3.54(s,3H),2.55–2.36(m,8H),2.28–2.10(m,7H),2.07–1.75(m,9H),1.66–1.43(m,6H),1.39–1.21(m,9H).
实施例161：化合物7-((3R，7aR)-7a-((7-(2-氨基-3-氰基苯并[b]噻吩-4-基)-4-((1R，5S)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-6-氯-8-氟喹唑啉-2-基)氧基)甲基)六氢-1H-吡咯嗪-3-羰基)-N-((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-(S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物161-1的合成
冰浴下，将中间体M3(50.0mg)与高碘酸钠(53.0mg)溶于1.0mL乙腈，1.0mL四氯化碳，1.0mL水的混合液中，搅拌10min，然后加入三氯化钌(0.25mg)，冰浴下，反应1h。向反应液中加入适量水淬灭反应，加入DCM/MeOH＝10/1溶液萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤减压浓缩得到化合物161-1(110.0mg)，粗品直接用于下一步。ESI-MS m/z:848[M+H]+。
步骤2：化合物161-2的合成
将161-1(110.0mg)，化合物M5(38.0mg)溶于1.00mL DMF中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(0.03mL)和N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(23.0mg)，室温反应30分钟。将反应液浓缩，浓缩物经柱层析分离纯化得到化合物161-2(40.0mg)。ESI-MS m/z:713[M+2H]+/2。
步骤3：化合物161的合成
将161-2(40.0mg)溶于3.00mL DCM中，加入1.00mL TFA，室温反应0.5h，将反应液直接浓缩，5.00mL DCM复溶后再次浓缩，经Pre-HPLC分离纯化得到化合物161(5.9mg)。ESI-MS m/z:613[M+2H]+/2。1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ8.88(s,1H),8.58–8.49(m,1H),7.97(d,J＝8.6Hz,1H),7.73(dd,J＝7.9,4.0Hz,1H),7.51–7.36(m,4H),7.29(t,J＝7.7Hz,1H),5.34(dd,J＝5.4,4.3Hz,1H),5.05–4.98(m,2H),4.71(d,J＝13.8Hz,3H),4.68–4.53(m,4H),4.53–4.43(m,2H),4.25(s,2H),3.88(q,J＝15.4,14.0Hz,4H),3.77(d,J＝10.8Hz,1H),3.54(s,3H),2.52–2.39(m,5H),2.26–2.07(m,9H),2.07–1.83(m,8H),1.67–1.45(m,7H),1.42–1.23(m,9H).
实施例162：化合物((3R，7aR)-7a-(((4-((1R，5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)六氢-1H-吡 咯嗪-3-基)甲基2-(((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-((((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸酰基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸盐
步骤1：化合物162-1的合成
25mL单口瓶中加入化合物((3S,7AS)-3-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)四氢-1H-吡咯啉-7A(5H)-基)甲醇(240.0mg)，溶于THF(4mL),加入NaH(50.4mg)，室温反应0.5h后，加入中间体M(300.0mg)，室温反应1h。向反应液中加饱和氯化铵溶液淬灭,EA萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，有机相浓缩经柱层析分离产物(DCM:EA＝1:1)，得388.0mg化合物162-1。
步骤2：化合物162-2的合成
25mL单口瓶中加入化合物162-1(388.0mg)，溶于THF(5mL)，加入TBAF(1.2mL),室温反应4h。将反应液直接浓缩。浓缩物经柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝12:1)得305.0mg化合物162-2。
步骤3：化合物162-3的合成
25mL单口瓶中加入化合物162-2(305.0mg)，溶于THF(5mL)和水(1mL)，加入((2-氟-6-(甲氧基甲氧基)-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼硼烷-2-基)萘-1-基)乙炔基)三异丙基硅 烷(416.5mg)，K3PO4(345.0mg)，CataCXium A Pd G3(39.5mg)，N2保护60℃反应3h。将反应液直接浓缩。浓缩物经柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝12:1)，得412.0mg化合物162-3。
步骤4：化合物162-4的合成
25mL单口瓶中加入化合物162-3(70.0mg)，溶于THF(3mL),加入CDI(17.1mg)，加热至40℃ 2h后，加入中间体M5(68.6mg)，加热至80℃，反应过夜。将反应液直接浓缩，浓缩物经柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝10:1)，得88.0mg化合物162-4。
步骤5：化合物162-5的合成
25mL单口瓶中加入化合物162-4(88.0mg)，溶于DMF(3mL)，加入CsF(87.0mg)，室温反应1h。向反应液中加入15mL水,有固体析出，过滤，滤饼用水淋洗，滤饼烘干，得72.0mg化合物162-5。
步骤6：化合物162的合成
25mL单口瓶中加入化合物162-5(60.0mg)，溶于DCM(2mL)，加入TFA(2mL)，室温反应1h。反应液直接蒸干,反相色谱柱层析分离产物(CH3CN/H2O＝30％-55％),得到19.0mg化合物162。(纯度99.19％)。LCMS：[M+3H]+/3＝412.50。1HNMR(500MHz,MeOD)δ9.11(s,1H),8.87(d,J＝11.5Hz,1H),7.92–7.84(m,1H),7.59(d,J＝34.9Hz,1H),7.46-7.32(m,6H),7.23-7.20(m,1H),4.70-4.61(m,4H),4.58-4.42(m,5H),4.35-4.23(m,5H),4.05-3.84(m,5H),3.78–3.73(m,1H),3.61-3.49(m,3H),3.45-3.36(m,4H),2.47(s,3H),2.39-2.30(m,2H),2.19-2.08(m,8H),2.05-1.97(m,4H),1.64-1.56(m,3H),1.52-1.46(m,5H),1.01(d,J＝11.7Hz,9H).
实施例163：化合物((3R，7aR)-7a-(((4-((1R，5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)六氢-1H-吡咯嗪-3-基)甲基2-(((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-((((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酰a)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸盐
步骤1：化合物163-1的合成
25mL单口瓶中加入化合物162-5(12.0mg)，溶于MeOH(3mL),加入Pd/C(2.0mg)，通入氢气，室温反应6h。反应液垫硅藻土过滤，滤饼用甲醇淋洗，滤液浓缩得到12.0mg化合物163-1。
步骤2：化合物163的合成
25mL单口瓶中加入化合物163-1(12.0mg)，溶于DCM(1mL)，加入TFA(1mL)，室温反应1h。将反应液直接浓缩，反相色谱柱层析分离产物(CH3CN/H2O＝30％-55％)得4.5mg化合物163。(纯度98-49％)。LCMS：[M+3H]+/3＝413.81。1HNMR(500MHz,MeOD)δ9.11(s,1H),8.87(d,J＝11.5Hz,1H),7.92–7.84(m,1H),7.59(d,J＝34.9Hz,1H),7.46-7.32(m,6H),7.23-7.20(m,1H),4.70-4.61(m,4H),4.58-4.42(m,5H),4.35-4.23(m,5H),4.05-3.84(m,5H),3.61-3.49(m,3H),3.45-3.36(m,4H),2.47(s,3H),2.39-2.24(m,4H),2.19-2.08(m,8H),2.05-1.97(m,4H),1.64-1.56(m,3H),1.52-1.46(m,5H),1.01(d,J＝11.7Hz,9H),0.82-0.71(m,3H)。
实施例164：化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(7-((1-(((4-((1R，5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)-2,7-二氮螺并[3.5]壬-2-基)苯甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(((S(1-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷e-2-甲酰胺
步骤1：化合物164-1的合成
25mL单口瓶中加入化合物M1(0.15g)，溶于DMSO中(3mL)，加入2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯，DIEA(0.48mL),加热至100℃，反应过夜。冷却至室温，向反应液中加入10mL水,有固体析出，过滤，滤饼用水淋洗，滤饼烘干得0.2g化合物164-1。
步骤2：化合物164-2的合成
25mL单口瓶中加入化合物164-1(0.2g)，溶于THF(1mL)，加入4M NaOH溶液(1mL)，MeOH(1mL),加热至40℃，反应3h。冷却至室温，反应液直接浓缩，向反应液中加入5mL水,并用1M HCI溶液调节溶液pH至3-4，有固体析出，过滤，滤饼用水淋洗，滤饼烘干，得0.17g化合物164-2。
步骤3：化合物164-3的合成
25mL单口瓶中加入化合物164-2(140.0mg)，溶于DMF(3mL)，加入(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(180.0mg)，DIEA(0.13mL)和HATU(231.0mg)，室温反应2h。向反应液中加入饱和食盐水(5mL),EA萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，柱层析分离产物(DCM:MeOH＝12:1),得276.0mg化合物164-3。
步骤4：化合物164-4的合成
25mL单口瓶中加入化合物164-3(276.0mg)，溶于DCM(2mL)，加入TFA(2mL),室温反应1h。反应液直接蒸干，向反应液中加入5mL DCM,并用1M NaOH溶液调节溶液pH至8-9,DCM萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干得214.0mg化合物164-4。
步骤5：化合物164-5的合成
25mL单口瓶中加入化合物164-4(100mg)，溶于MeOH(3mL),加入中间体1-3(137.7mg)和1M ZnCI2/THF溶液(0.1mL),加热至40℃，反应2h后，加入NaBH3CN(37.5mg)，反应过夜。反应液直接蒸干。柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝12:1)，得135.8mg化合物164-5。
步骤6：化合物164-6的合成
25mL单口瓶中加入化合物164-5(135.8mg)，溶于DMF(5mL),加入CsF(137.7mg)，室温反应1h。向反应液中加入15mL水,有固体析出，过滤，滤饼用水淋洗，滤饼烘干，得108.6mg化合物164-6。
步骤7：化合物164的合成
25mL单口瓶中加入化合物164-6(108.6mg)，溶于DCM(2mL)，加入TFA(2mL),室温反应1h。反应液直接蒸干,反相色谱柱层析分离产物(CH3CN/H2O＝30％-55％),得35.9mg化合物164。(纯度99.82％)。LCMS：[M+2H]+/2＝600.21。1HNMR(500MHz,MeOD)δ9.09(s,1H),8.91(s,1H),7.89(dd,J＝9.1,5.7Hz,1H),7.70(t,J＝8.4Hz,2H),7.44(q,J＝8.5Hz,4H),7.40–7.36(m,2H),7.32(dd,J＝11.0,6.8Hz,1H),7.23(d,J＝2.4Hz,1H),6.43(dd,J＝8.7,1.6Hz,2H),5.08-4.98(m,2H),4.64–4.55(m,2H),4.50–4.44(m,2H),4.28(d,J＝12.7Hz,2H),4.07–3.58(m,13H),3.47–3.38(m,2H),3.18–3.03(m,2H),2.47(s,3H),2.29–2.07(m,10H),2.02-1.93(m,1H),1.52(d,J＝7.0Hz,3H),1.15-0.82(m,13H).
实施例165：化合物((3R，7aR)-7a-((7-(2-氨基-3-氰基苯并[b]噻吩-4-基)-4-((1R，5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.21]辛-3-基)-6-氯-8-氟喹唑啉-2-基五氮唑-2-基苯并苯并-吡唑-5-基)苯基)-2-羟乙基)氨基甲酰基)-4-羟基吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-羧酸的合成
步骤1：化合物165-1的合成
化合物(2S，4R)-1-((S)-2-叠氮基-3-甲基丁酰基)-N-((R)-1--(4-(1-乙基-1H-吡唑-5-基)苯基)-2-羟乙基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(0.08g)，2-乙炔基-7-氮螺[3.5]壬-7-羧酸叔丁酯(0.044g)的叔丁醇(1ml)和THF(1ml)中，加入硫酸铜(28mg)，抗坏血酸钠(105mg)的水溶液(1ml)，20℃反应1h。反应液加入15ml水中，加入15ml EA，分出有机相，干燥，过滤，滤液减压浓缩，浓缩物经prep-TLC纯化(MeOH：DCM＝1：20)，得到0.078g化合物165-1。ESI-MS m/z:719.40[M+H]+。
步骤2：化合物165-2的合成
化合物165-1(78mg)的DCM(2.0ml)中，加入三氟乙酸(0.4ml),20℃反应0.5h。反应液加入20ml饱和碳酸氢钠中，氯仿/异丙醇＝3：1萃取，分出有机相，水相无产品弃，有机相干燥，过滤，浓缩，得到65mg化合物165-2。直接投下步。ESI-MS m/z:619.40[M+H]+。
步骤3：化合物165-3的合成
中间体M3(45mg)的THF(3.0ml)中，加入CDI(10.5mg),40℃反应1.0h，加入化合物165-2(48mg)，80℃反应5h。反应液加入15ml水中，加入15ml EA，分出有机相，水相无产品弃，有机相干燥，过滤，浓缩，残留物prep-TLC纯化(MeOH：DCM＝1：10)，得到30mg化合物165-3。ESI-MS m/z:740.40[M+2H]+/2。
步骤4：化合物165的合成
化合物165-3(30mg)的DCM(1.0mL)中，加入TFA(0.3ml)，20℃反应0.5h。反应液减压浓缩，残留物Prep-HPLC分离得13.9mg化合物165的三氟乙酸盐。ESI-MS m/z:640.10[M+2H]+/2。1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ8.66(s,1H),7.95-7.92(m,2H),7.69(s,1H),7.52-7.41(m,4H),7.27(s,1H),7.19(s,1H),6.30(s,1H),5.09–4.99(m,1H),4.90(s,1H),4.81(d,J＝13.9Hz,4H),4.62(td,J＝8.3,5.1Hz,2H),4.48(s,2H),4.23(s,2H),4.05–3.78(m,8H),3.50–3.36(m,3H),3.20(dd,J＝13.6,8.0Hz,2H),3.12–2.98(m,2H),2.49(s,3H),2.23(t,J＝10.5Hz,1H),2.13(s,7H),2.02–1.95(m,1H),1.90–1.78(m,2H),1.52(dd,J＝7.0,1.7Hz,3H),1.33–1.25(m,2H),1.19–1.05(m,9H),1.00(s,2H),0.89(d,J＝16.7Hz,2H).
实施例166：化合物((3R，7aR)-7a-((7-(2-氨基-3-氰基苯并[b]噻吩-4-基)-4-((1R，5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-6-氯-8-氟喹唑啉-2-基五氮唑-2-基苯并苯并噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酰)-2-氮杂螺[3.5]壬-2-羧酸的合成
步骤1：化合物166-1的合成
化合物2-(叔丁氧基羰基)-2-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸(0.1g)，(2S，4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(0.178g)的DMF(5ml)中，加入HATU(169mg)，DIPEA(145mg)，20℃反应1h。反应液加入20ml水中，加入15ml EA+1ml甲醇，分出有机相，干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到0.22g化合物166-1。直接投下步。ESI-MS m/z:696.40[M+H]+。
步骤2：化合物166-2的合成
化合物166-1(240mg)的DCM(6.0ml)中，加入三氟乙酸(1.2ml),20℃反应0.5h。反应液加入20ml饱和碳酸氢钠中，氯仿/异丙醇＝3：1萃取，分出有机相，有机相干燥，过滤，浓缩，得到200mg化合物166-2。直接投下步。ESI-MS m/z:596.40[M+H]+。
步骤3：化合物166-3的合成
中间体M3(60mg)的THF(3.0ml)中，加入CDI(13.8mg),40℃反应1.0h，加入化合物166-2(66mg)，60℃反应1h。反应液加入15ml水中，加入15ml EA，分出有机相，有机相干燥，过滤，浓缩，浓缩物经prep-TLC纯化(MeOH：DCM＝1：10)，得到70mg化合物166-3。ESI-MS m/z:728.40[M+2H]+/2。
步骤4：化合物166的合成
化合物166-3(70mg)的DCM(2.0mL)中，加入TFA(0.4ml)，20℃反应0.5h。反应液减压浓缩，浓缩物经Prep-HPLC分离得35.40mg化合物166的三氟乙酸盐。ESI-MS m/z:628.40[M+2H]+/2。1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ8.53(s,1H),7.94-7.93(m,2H),7.71-7.68(m,2H),7.43-7.41(m,2H),7.27(s,1H),7.19(s,1H),5.02–4.96(m,1H),4.90(s,1H),4.81(d,J＝13.9Hz,4H),4.62(td,J＝8.3,5.1Hz,2H),4.48(s,2H),4.23(s,2H),4.05–3.78(m,8H),3.50–3.36(m,3H),3.20(dd,J＝13.6,8.0Hz,2H),3.12–2.98(m,2H),2.49(s,3H),2.23(t,J＝10.5Hz,1H),2.16(s,8H),2.02–1.95(m,1H),1.90–1.78(m,2H),1.52(dd,J＝7.0,1.7Hz,3H),1.33–1.25(m,2H),1.19–1.05(m,9H),1.00(s,2H),0.89(d,J＝16.7Hz,2H).
实施例167：化合物(2S，4R)-1-((2S)-2-(4-(6-(((3R，7aR)-7a-((7-(2-氨基-3-氰基苯并[b]噻吩-4-基)-4-((1R，5S)-3,8-噻吩-4-基，4-(1R、5S)-3,3,8-二氮杂双环[3.2.11]辛-3-基)-3-氧代-3-基)-6-氯-8-氟喹啉-2-基喹啉-2-基)氧甲基六氢-1H-吡咯嗪-3-基甲氧基乙烯)1，2，3-三氮唑-1-基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物167-1的合成
2-氯-5-碘吡啶(1g)加入50mL三口瓶，N2保护下加入10mL TEA，加入三甲基硅基乙炔(1.03g)，碘化亚铜(80mg)，PdCl2(PPh3)2(146mg)，升温至50℃反应3h。反应液过滤后收集滤液直接浓缩。浓缩物经柱层析分离纯化(PE:EA＝10:1)得到0.85g化合物167-1。ESI-MS m/z:210[M+H]+。
步骤2：化合物167-2的合成
化合物167-1(500mg)加入50mL单口瓶，加入5mL MeOH溶解，加入无水碳酸钾(658mg)，室温搅拌2h。反应液过滤后收集滤液直接浓缩。浓缩物经柱层析分离纯化(PE:EA＝20:1)，得到240mg化合物167-2。ESI-MS m/z:138[M+H]+。
步骤3：化合物167-3的合成
将中间体M3(50mg)加入50mL三口瓶，N2保护下加入3mL THF，冷却至0℃，加入NaH(8mg),搅拌10分钟，然后加入化合物167-2(15mg)，缓慢升温至40℃反应2h。向反应液缓慢加入10mL饱和氯化铵溶液猝灭，EA萃取三次，取有机相无水硫酸钠干燥，浓缩。浓缩物经柱层析分离产物(DCM:MeOH＝10:1),得到28mg化合物167-3。ESI-MS m/z:935[M+H]+。
步骤4：化合物167-4的合成
化合物167-3(28mg)加入25mL单口瓶，加入3mL THF/t-BuOH/H2O(1:1:1)混合溶剂， 加入抗坏血酸钠(16mg)，无水硫酸铜(4mg)，室温搅拌3h，反应液加入10mL水猝灭，EA萃取三次，取有机相无水硫酸钠干燥，柱层析分离产物(DCM:MeOH＝10:1),得到15mg化合物167-4。ESI-MS m/z:703[M+2H]+/2。
步骤5：化合物167的合成
化合物167-4(15mg)加入25mL单口瓶，加入DCM 2mL,滴入TFA 0.5mL，室温搅拌2h，反应液直接浓缩，浓缩物经HPLC分离得到1.7mg化合物167。ESI-MS m/z:603[M+2H]+/2。1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ8.60(d,J＝10.6Hz,1H),8.54(s,1H),7.95(d,J＝7.6Hz,1H),7.90(s,1H),7.85(s,1H),7.72(d,J＝8.3Hz,1H),7.48–7.40(m,2H),7.34–7.20(m,2H),6.68(d,J＝8.4Hz,1H),5.63(s,1H),5.41–5.31(m,2H),4.60–4.53(m,2H),4.47(d,J＝20.4Hz,2H),4.22(s,2H),4.10(q,J＝7.3Hz,2H),3.92–3.81(m,2H),3.76–3.69(m,3H),3.49(s,2H),3.25–3.14(m,3H),2.47(d,J＝7.1Hz,3H),2.19(t,J＝7.7Hz,3H),2.12(s,2H),2.10–1.99(m,3H),1.92–1.82(m,3H),1.70(d,J＝7.0Hz,1H),1.60(s,1H),1.55(d,J＝7.0Hz,2H),1.36–1.27(m,9H),1.15(d,J＝6.5Hz,3H),0.90(t,J＝6.8Hz,2H).
实施例168：化合物((3R，7aR)-7a-((7-(2-氨基-3-氰基苯并[b]噻吩-4-基)-4-((1R，5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.21]辛-3-基)-6-氯-8-氟喹唑啉-2-基-喹唑啉基-2-基)氧基甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酰)苯基)氮杂环丁烷-1-羧酸盐的合成
步骤1：化合物168-1的合成
将锌粉(880mg)，80ml无水四氢呋喃加入到250mL三口瓶中，氮气保护，室温下加入二溴甲烷(200mg),升温至65℃反应1h,降至室温加入TMSCl(115mg),室温反应1h,加入3-碘氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(3.0g),40℃反应1h,得到168-1密封备用。
步骤2：化合物168-2的合成
向上述168-1溶液中加入，依次加入4-溴苯甲酸甲酯(1.1g),Pd2(dba)3(235mg),Johnphos(153mg)，氮气保护，40℃反应2h。反应结束后，氯化铵淬灭反应，EA萃取，食盐水洗涤，硫酸钠干燥，浓缩，浓缩物经柱层析纯化(PE:EA＝10:1)得到化合物168-2(660mg)。
步骤3：化合物168-3的合成
化合物168-2(660mg)加入到50mL单口瓶中，加入10mL MeOH和2mL水，室温下加入氢氧化钠(410mg)，升温至60℃反应2h。反应结束后，向反应液中加入水，调节PH＝6,EA萃取二次，食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到目标化合物168-3(550mg)。
步骤4：化合物168-4的合成
化合物168-3(150mg)加入到50mL单口瓶中，加入3mL DMF和HATU(250mg)，氮气保护，0℃加入DIEA(350mg),反应0.5h,加入M03(290mg),升至室温反应1h。反应结束后，氯化铵淬灭反应，EA萃取二次，食盐水洗涤，硫酸钠干燥，浓缩，浓缩物经柱层析纯化(DCM:甲醇＝10:1)得目标化合物168-4(340mg)。ESI-MS m/z:704.3[M+H]+。
步骤5：化合物168-5的合成
化合物168-4(340mg)加入到50mL单口瓶中，加入5mL DCM，1mL TFA,室温反应1h。反应结束后，浓缩，DCM稀释，倒入碳酸氢钠溶液中，DCM：MeOH(10:1)萃取三次，食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到目标化合物168-5(250mg)。ESI-MS m/z:604.3[M+H]+。
步骤6：化合物168-6的合成
将中间体M3(70mg),3ml无水四氢呋喃加入到50mL单口瓶中，氮气保护，室温下加入CDI(20.4mg),室温反应0.5h,加入化合物168-5(76mg)，70℃反应16h。反应结束后，浓缩，浓缩物经柱层析纯化(DCM:甲醇＝10:1)得目标化合物168-6(70mg)。ESI-MS m/z:633.1[M+2H]+/2。
步骤7：化合物168的合成
化合物168-6(70mg)加入到25mL单口瓶中，加入3mL DCM，0.5ml TFA,室温下反应1h。反应结束后，浓缩，DCM稀释，倒入碳酸氢钠溶液中，DCM/MeOH萃取三次，食盐水洗涤，硫酸钠干燥，旋干得粗产物，制备液相进一步纯化得到目标化合物168(20.5mg，33.7％产率)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.99(s,1H),8.42(d,J＝7.8Hz,1H),7.91–7.77(m,7H),7.44(d,J＝8.3Hz,4H),7.38(d,J＝8.3Hz,2H),7.24(t,J＝7.7Hz,1H),7.16(d,J＝7.5Hz,1H),5.14(s,1H),4.94–4.91(m,1H),4.75(d,J＝9.1Hz,1H),4.45(t,J＝8.1Hz,2H),4.35-4.08(m,7H),3.96-3.90(m,4H),3.78-3.62(m,5H),2.46(s,3H),2.10–2.01(m,2H),1.85–1.74(m,10H),1.38(d,J＝7.0Hz,3H),1.25-1.21(m,2H),1.02(s,9H).ESI-MS m/z:633.1[M+2H]+/2。
实施例169：化合物((3R,7aR)-7a-(((7-(2-氨基-3-氰基苯并[b]噻吩-4-基)-4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-6-氯-8-氟喹唑啉-2-基)氧基)甲基)六氢-1H-吡咯嗪-3-基)甲基4-(4-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酰)苯基)哌啶-1-甲酸酯的合成
步骤1：化合物169-1的合成
将4-(1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)苯甲酸(100.0mg)，4-(1-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(174.0mg)和HATU(149.4mg)溶解于DMF(2mL)中，添加DIEA(0.27mL)，室温反应10分钟，LCMS监测反应完成。向反应液中加入DCM(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，经柱层析分离纯化，得到231.0mg化合物169-1。ESI-MS m/z:732[M+H]+。
步骤2：化合物169-2的合成
将169-1(231.0mg)加入DCM(5mL)和TFA(2mL)中，室温反应10分钟，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，加入1M NaOH(2mL)，室温搅拌5分钟，抽滤，得淡黄色固体181.0mg，即化合物169-2。ESI-MS m/z:632[M+H]+。
步骤3：化合物169-3的合成
将169-2(68.2mg)溶于THF(5mL)中，加入CDI(17.5mg)，40℃反应1小时，然后加入中间体M3(60.0mg)，60℃反应4小时。加入甲醇(5.0mL)淬灭反应，将反应液直接浓缩， 柱层析分离纯化，得到41.2mg化合物169-3。ESI-MS m/z:1492[M+H]+。
步骤4：化合物169的合成
将169-3(41.2mg)加入DCM(5mL)和TFA(2mL)中，室温反应10分钟，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，浓缩物经Pre-HPLC制备纯化得到22.1mg化合物169。ESI-MS m/z:1292[M+H]+。1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.89(d,J＝2.5Hz,1H),8.58(d,J＝7.5Hz,1H),7.94(s,1H),7.76(d,J＝8.5Hz,2H),7.70(d,J＝8.0Hz,1H),7.46-7.41(m,3H),7.34(d,J＝8.5Hz,2H),7.29-7.25(m,1H),7.19-7.15(m,1H),5.04-5.00(m,1H),4.60(s,1H),4.58(s,1H),4.47(s,1H),4.23(s,2H),3.96-3.94(m,2H),3.89-3.86(m,2H),3.81(dd,J1＝3.5Hz,J2＝11.0Hz,2H),3.65-3.57(m,2H),3.45-3.44(m,1H),3.17-3.16(m,1H),2.91-2.84(m,2H),2.81-2.75(m,2H),2.48(s,3H),2.46-2.38(m,2H),2.26-2.20(m,2H),2.16-2.07(m,6H),2.01-1.97(m,2H),1.61(d,J＝8.0Hz,2H),1.52(d,J＝7.0Hz,3H),1.11(s,9H)。
实施例170：化合物(2S，4R)-1-((2S)-2-(4-(1-((3R，7aR)-7a-((7-(2-氨基-3-氰基苯并-3-氰基苯并[b]噻吩-4-基)-4-((1R，5S)-3,8-噻吩-4-基羰基哌啶-4-4-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物170-1的合成
将中间体M3(60.0mg)和高碘酸钠(63.6mg)溶解于四氯化碳/乙腈/水(1/1/1mL)的混合溶剂中，0℃反应10分钟。添加三氯化钌(0.5mg)，保温反应2小时。向反应液中加入DCM(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得到51.2mg化合物170-1。ESI-MS m/z:848[M+H]+。
步骤2：化合物170-2的合成
将170-1(30.0mg)，169-2(26.9mg)和HATU(16.2mg)溶解于DMF(0.5mL)中，添加DIEA(0.05mL)，室温反应10分钟。向反应液中加入DCM(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得到24.5mg化合物170-2。ESI-MS m/z:1462[M+H]+。
步骤3：化合物170的合成
将170-2(24.5mg)加入DCM(5mL)和TFA(2mL)中，室温反应10分钟，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，浓缩物经Pre-HPLC制备纯化得到9.4mg化合物170。ESI-MS m/z:1292[M+H]+。1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.89(s,1H),8.61(d,J＝7.5Hz,1H),7.96(s,1H),7.79-7.72(m,3H),7.46-7.41(m,3H),7.37-7.33(m,2H),7.30-7.26(m,1H),7.22-7.13(m,1H),5.06-5.01(m,1H),4.64(s,1H),4.61(s,1H),4.48(s,1H),4.22(s,2H),3.98-3.92(m,2H),3.86-3.81(m,2H),3.59-3.57(m,2H),3.45-3.44(m,1H),3.17-3.16(m,1H),2.88-2.80(m,2H),2.76-2.68(m,2H),2.48(s,3H),2.46-2.43(m,2H),2.25-2.19(m,2H),2.16-2.01(m,6H),1.93-1.84(m,2H),1.63(t,J＝5.0Hz,2H),1.52(d,J＝7.0Hz,3H),1.12(s,9H)。
实施例172：(2S，4R)-1-((2S)-2-(4-(2-((1-((4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟吡啶[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)苯甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺
步骤1：化合物172-1的合成
25mL单口瓶中加入化合物2,7-二氮螺[3.5]壬-2-羧酸叔丁酯(0.2g)，溶于DMSO(3mL),加入DIEA(0.1mL)，对氟苯甲酸甲酯(0.2g)，加热至120℃反应过夜。降温至室温，向反应液中加入适量水,EA萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干柱层析分离产物(PE:EA＝10:1)，得0.21g目标化合物，即化合物172-1。
步骤2：化合物172-2的合成
25mL单口瓶中加入化合物172-1(0.21g)，溶于THF(1mL)，加MeOH(1mL),3M NaOH(1mL),加热至40℃反应过夜。将温至室温后，向反应液中加入适量水，用稀盐酸调节溶液pH至2-3，DCM萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干柱层析分离产物(MeOH:DCM＝1:10)，得0.2g目标化合物，即化合物172-2。
步骤3：化合物172-3的合成
25mL单口瓶中加入化合物172-2(100.0mg)，溶于DMF(3mL)，加入(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(159.8mg)，DIEA(0.02mL)和HATU(216.2mg)，室温反应2h。向反应液中加入饱和食盐水(5mL),EA萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，柱层析分离产物(DCM:MeOH＝10:1),得128.8mg目标化合物，即化合物172-3。
步骤4：化合物172-4的合成
25mL单口瓶中加入化合物172-3(128.8mg)，溶于DCM(2mL)，加入TFA(2mL),室温反应1h。反应液直接蒸干,得101.9mg目标化合物，即化合物172-4。
步骤5：化合物172-5的合成
25mL单口瓶中加入化合物1-3(100mg)，溶于MeOH(3mL)，加化合物172-4(101.9mg)，加热至40℃反应2h后，加入NaBH3CN(36.8mg)，反应过夜。降温至室温，加入适量饱和碳酸氢钠溶液，DCM萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干柱层析分离产物(MeOH:DCM＝1:10)，得57.8mg目标化合物，即化合物172-5。
步骤6：化合物172-6的合成
25mL单口瓶中加入化合物172-5(57.8mg)，溶于DMF(3mL)，加入CsF(88.6mg)，室温反应1h。向反应液中加入15mL水,有固体析出，过滤，滤饼用水淋洗，滤饼烘干，得36.4mg目标化合物，即化合物172-6。
步骤7：化合物172的合成
25mL单口瓶中加入化合物172-6(36.4mg)，溶于DCM(2mL)，加入TFA(2mL),室温反应1h。反应液直接蒸干，反相色谱柱层析分离产物(CH3CN/H2O＝30％-55％)，得目标化合物12.8mg，即化合物172。(纯度98.44％)。LCMS：[M+2H]+/2＝600.38。1H NMR(500MHz,MeOD)δ9.09(s,1H),8.91(s,1H),7.90–7.81(m,1H),7.69(d,J＝8.1Hz,2H),7.49–7.35(m,5H),7.31–7.18(m,2H),6.92(d,J＝7.2Hz,2H),5.11–4.99(m,2H),4.63–4.22(m,8H),4.10–3.76(m,6H),3.57–3.38(m,3H),3.29–3.13(m,4H),2.47(s,3H),2.29–1.88(m,10H),1.70–1.48(m,2H),1.31(d,J＝21.5Hz,3H),1.10(d,J＝10.7Hz,9H),0.97–0.83(m,4H).
实施例173：6-(7-((1-(((4-((1R，5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟吡啶[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)-2,7-二氮螺[3.5]壬-2-基)-N-((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-(((R)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基1-氧代丁烷-2-基)烟酰胺
步骤1：化合物173-1的合成
25mL单口瓶中加入化合物2,7-二氮螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(0.3g)，溶于DMSO(3mL)，加入DIEA(0.1mL)，6-氟烟酸甲酯(0.25g)，加热至120℃反应8h。降温至室温后，向反应液中加入适量水,EA萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干柱层析分离产物(PE:EA＝10:1)，得0.38g目标化合物，即化合物173-1。
步骤2：化合物173-2的合成
25mL单口瓶中加入化合物173-1(0.38g)，溶于THF(1mL)，加MeOH(1mL),3M NaOH(1mL),加热至40℃反应过夜。降温至室温后，向反应液中加入适量水，用稀盐酸调节溶液pH至2-3，DCM萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干柱层析分离产物(MeOH:DCM＝1:10)，得0.36g目标化合物，即化合物173-2。
步骤3：化合物173-3的合成
25mL单口瓶中加入化合物173-2(100.0mg)，溶于DMF(3mL)，加入(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(159.8mg)，DIEA(0.02mL)和HATU(216.2mg)，室温反应2h。向反应液中加入饱和食盐水(5mL),EA萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，柱层析分离产物(DCM:MeOH＝10:1),得166.6mg目标化合物，即化合物173-3。
步骤4：化合物173-4的合成
25mL单口瓶中加入化合物173-3(166.6mg)，溶于DCM(2mL)，加入TFA(2mL),室温反应1h。反应液直接蒸干,得138.3mg目标化合物，即化合物173-4。
步骤5：化合物173-5的合成
25mL单口瓶中加入化合物1-3(100mg)，溶于MeOH(3mL)，加化合物173-4(138.3mg)，加热至40℃反应2h后，加入NaBH3CN(36.8mg)，反应过夜。降温至室温，加入适量饱和碳酸氢钠溶液，DCM萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干柱层析分离产物(MeOH:DCM＝1:10)，得76.6mg目标化合物，即化合物173-5。
步骤6：化合物173-6的合成
25mL单口瓶中加入化合物173-5(76.6mg)，溶于DMF(3mL),加入CsF(128.4mg)，室温反应1h。向反应液中加入15mL水,有固体析出，过滤，滤饼用水淋洗，滤饼烘干，得51.7mg目标化合物，即化合物173-6。
步骤7：化合物173的合成
25mL单口瓶中加入化合物173-6(51.7mg)，溶于DCM(2mL)，加入TFA(2mL),室温反应1h。反应液直接蒸干，反相色谱柱层析分离产物(CH3CN/H2O＝30％-55％),得目标化合物16.2mg，即化合物173。(纯度99.46％)。LCMS：[M+2H/2]+＝600.80。1H NMR(500MHz,MeOD)δ9.04(s,1H),8.87(s,1H),8.54(s,1H),7.95(d,J＝8.6Hz,1H),7.87(dd,J＝9.1,5.7Hz,1H),7.46–7.28(m,6H),7.21(s,1H),6.39(d,J＝8.8Hz,1H).5.08-4.98(m,2H),4.64–4.55(m,2H),4.50–4.44(m,2H),4.28(d,J＝12.7Hz,2H),4.07–3.58(m,13H),3.47–3.38(m,2H),3.18–3.03(m,2H),2.47(s,3H),2.29–2.07(m,10H),2.02-1.93(m,1H),1.52(d,J＝7.0Hz,3H),1.15-0.82(m,13H).
实施例174：(2S，4R)-1-((S)-2-(4-((7-((1-(((4-(1R，5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-7-(8-乙炔基-7-氟氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟吡啶[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基环丙基甲基-4-环丙基甲基)-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基-2-基苯甲酰氨基)-3,3-二甲基二二甲基二甲基苯甲基4-4-4-氢-氧-氧-氢-苯并-苯并苯并苯甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物174-1的合成
化合物2-羟基-7-氮螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(50mg)的THF(1ml)中，加入三苯基膦(57.1mg)，DIAD(44.1mg)，20℃下反应0.5h。再加入4-羟基苯甲酸甲酯(37.8mg)，升温至55℃下反应6h。反应液减压浓缩，残留物prep-TLC纯化(EA:PE＝3:1)，得到53mg目标化合物，即化合物174-1。ESI-MS m/z:376.10[M+H]+。
步骤2：化合物174-2的合成
化合物174-1(53mg)的DCM(1.0ml)中，加入三氟乙酸(0.1ml),20℃反应0.5h。反应液减压浓缩，得到38mg目标化合物，即化合物174-2。直接投下步。ESI-MS m/z:276.21[M+H]+。
步骤3：化合物174-3的合成
化合物174-2(45mg)的DCM(1.5ml)中，加入DIPEA(53.18mg),PH呈中性，加入化合物1-3(105mg)，NaBH(OAc)3(52.86mg)，1滴醋酸，35℃反应10h。反应液加入15ml饱和碳酸氢钠水中，加入15mlDCM，分出有机相，水相无产品弃，有机相干燥，过 滤，浓缩，残留物prep-TLC纯化(MeOH：DCM＝1：20)，得到70mg目标化合物，即化合物174-3。ESI-MS m/z:551.20[M+2H]+/2。
步骤4：化合物174-4的合成
化合物174-3(70mg)的甲醇(0.5ml)和THF(0.5ml)中，加入4M氢氧化钠水溶液(0.60ml),45℃反应1.5h。反应液加入5ml水中，加入15mlEA，分出有机相，水相无产品弃，有机相干燥，过滤，浓缩，得到65mg目标化合物，即化合物174-4。ESI-MS m/z:544.20[M+2H]+/2。
步骤5：化合物174-5的合成
化合物174-4(65mg)，(2S，4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(34mg)的DMF(1ml)中，加入HATU(36.7mg),DIPEA(25.1mg),20℃反应2h。反应液加入15ml水中，加入15mlEA，分出有机相，水相无产品弃，有机相干燥，过滤，浓缩，残留物prep-TLC纯化(M eOH：DCM＝7.5％)，得到60mg目标化合物，即化合物174-5。ESI-MS m/z:757.20[M+2H]+/2。
步骤6：化合物174-6的合成
化合物174-5(60mg)的DMF(1ml)中，加入氟化铯(62.3mg),20℃反应1h。反应液加入15ml水中，加入15mlEA，分出有机相，水相无产品弃，有机相干燥，过滤，浓缩，得到52mg目标化合物，即化合物174-6，直接投下步。ESI-MS m/z:679.20[M+2H]+/2。
步骤7：化合物174的合成
化合物174-6(52mg)的DCM(1.0mL)中，加入TFA(0.28ml)，20℃反应1h。反应液加入15ml饱和碳酸氢钠中，氯仿/异丙醇萃取3次，合并有机相，水相无产品弃，有机相干燥，过滤，减压浓缩，残留物Prep-HPLC分离得10.7mg目标化合物，即化合物174的三氟乙酸盐。ESI-MS m/z:607.10[M+2H]+/2。1H NMR(500MHz,DMSO-d4)δ8.99(s,1H), 8.42-8.40(m,1H),8.01-7.98(m,1H),7.86-7.84(m,2H),7.75-7.73(m,1H),7.45-7.38(m,5H),7.18-7.17(m,1H),6.90-6.88(m,2H),4.94–4.91(m,1H),4.84–4.82(m,1H),4.75-4.73(m,1H),4.70-4.68(d,J＝10.0Hz,1H),4.58-4.53(d,J＝10.0,1H),4.45-4.42(m,2H),4.34-4.30(m,2H),4.22(s,2H),3.89(s,2H),3.66-3.64(m,3H),3.17(s,4H),2.46(s,4H),2.02-1.94(m,8H),1.39-1.37(m，3H),1.24(m,6H),1.02(s,9H),0.87–0.84(m,3H).
实施例175：(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(7-((1-(((4-((1R，5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟吡啶[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物175-1的合成
向化合物1-3(62mg)和159-5(46mg)的甲醇(2mL)溶液中加入ZnCl2(1M/THF,0.1mL)，接着将反应体系置于40℃油浴中搅拌。1小时后向反应体系加入NaBH3CN(23mg)，然后让反应体系在40℃油浴中继续搅拌过夜。反应结束后，向反应体系加入饱和碳酸氢钠溶液和DCM，水相用DCM再萃取三次，合并有机相。有机相经无水硫酸钠干燥后浓缩，浓缩物经PTLC纯化(DCM:NH3/MeOH(7M)＝100:7)得到化合物175-1(40mg,37％产率)。ESI-MS m/z:724.0[M+2H]+/2。
步骤2：化合物175-2的合成
向175-1(40mg)的DMF(2mL)溶液中加入TBAF(84mg)，然后将反应体系置于35℃油浴中搅拌2小时。反应结束后向反应体系中加入EA(30mL)和饱和食盐水(30mL)，萃取分液后继续用饱和食盐水洗涤有机相(30mL*3)，有机相经无水硫酸钠干燥后浓缩，浓缩物经PTLC纯化(DCM:NH3/MeOH(7M)＝100:7)得到化合物175-2(34mg,95％产率)。ESI-MS m/z:645.8[M+2H]+/2。
步骤3：化合物175的合成
向175-2(34mg)的DCM(1mL)溶液中加入三氟化硼乙醚(0.33mL)，然后让反应体系在室温下搅拌2小时。反应结束后将反应体系滴加到冷却的饱和碳酸钠溶液中，然后加入加入混合溶剂DCM/MeOH(10:1)萃取，水相用相同混合溶剂继续萃取三次。有机相合并后经无水硫酸钠干燥，浓缩，浓缩物经制备型薄层色谱纯化(DCM/NH3/MeOH(7M)＝100:13)得目标化合物175(7mg,23％产率)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ9.00(s,1H),8.86(s,1H),8.03(s,1H),7.85(dd,J＝9.1,5.7Hz,1H),7.47–7.29(m,6H),7.20(d,J＝2.5Hz,1H),5.03(q,J＝7.0Hz,1H),4.63(d,J＝12.0Hz,1H),4.59–4.51(m,2H),4.48–4.33(m,3H),3.84(dd,J＝11.0,3.7Hz,1H),3.78–3.64(m,5H),3.56(m,1H),3.35(s,1H),2.47(s,3H),2.29–2.16(m,4H),2.05–1.92(m,4H),1.89–1.77(m,5H),1.71–1.57(m,4H),1.53(d,J＝7.0Hz,3H),1.30–1.26(m,8H),1.06(s,9H),0.75(s,2H),0.56(s,2H).ESI-MS m/z:573.6[M+2H]+/2。
实施例176：化合物(2S,4R)-1-((S)-2-(4-(4-(1-((1-(((4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物176-1的合成
将4-(4-溴苯基)哌啶-甲酸叔丁酯(524.0mg)，双三苯基膦二氯化钯(54.1mg)和碘化亚铜(29.3mg)溶解于TEA(15mL)中，氮气保护，添加三甲基硅基乙炔(0.33mL)，50℃反应过夜。将反应液直接浓缩，向反应液中加入EA(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得目标化合物517.3mg，即化合物176-1。ESI-MS m/z:302[M+H]+。
步骤2：化合物176-2的合成
将176-1(517.3mg)和碳酸钾(499.6mg)溶解于MeOH(10mL)中，室温反应1小时。抽滤，将反应液直接浓缩，柱层析分离纯化，得目标化合物364.5mg，即化合物176-2。ESI-MS m/z:265[M+H]+。
步骤3：化合物176-3的合成
将176-2(60.0mg)，中间体M1(98.9mg)，硫酸铜(30.2mg)和抗坏血酸钠(108.3mg)溶解于混合溶剂THF(1mL)/tBuOH(1mL)/H2O(1mL)中，氮气保护，室温反应3小时。向反应液中加入DCM(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得目标化合物100.2mg，即化合物176-3。ESI-MS m/z:757[M+H]+。
步骤4：化合物176-4的合成
将176-3(100.2mg)加入DCM(3mL)和TFA(1mL)中，室温反应20分钟。将反应液直接浓缩，加入1M NaOH溶液至pH＝10，加入DCM(10mL)和MeOH(1mL)萃取，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得目标化合物76.1mg，即化合物176-4。ESI-MS m/z:657[M+H]+。
步骤5：化合物176-5的合成
将176-4(76.1mg)和中间体1-3(97.5mg)溶解于MeOH(5mL)中，添加氯化锌(0.17mL,1M)，40℃反应1.5小时。向反应液中加入氰基硼氢化钠(36.4mg)，40℃继续反应过夜。向反应液中加入饱和氯化铵溶液(5mL)，有机相浓缩，加入DCM(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得目标化合物42.1mg，即化合物176-5。ESI-MS m/z:1482[M+H]+。
步骤6：化合物176-6的合成
将176-5(42.1mg)和氟化铯(20.0mg)溶解于DMF(0.5mL)中，室温反应30分钟。向反应液中滴加H2O(1mL)，抽滤，得目标化合物36.9mg，即化合物176-6。ESI-MS m/z:1327[M+H]+。
步骤7：化合物176的合成
将176-6(36.9mg)加入DCM(5mL)和TFA(2mL)中，室温反应20分钟。将反应液直接浓缩，制备液相分离，得目标化合物22.5mg，即化合物176。ESI-MS m/z:1182[M+H]+。1H  NMR(500MHz,MeOD)δ9.12(s,1H),9.06(s,1H),8.59-8.54(m,1H),7.92-7.86(m,1H),7.65-7.61(m,2H),7.48-7.37(m,5H),7.33-7.28(m,1H),7.26-7.20(m,3H),5.63(s,1H),5.10-5.05(m,1H),4.87-4.81(m,2H),4.70-4.43(m,2H),4.51-4.32(m,2H),4.23(s,2H),4.11-3.77(m,6H),3.62-3.57(m,1H),3.52-3.43(m,2H),3.25-3.14(m,3H),2.92(s,1H),2.49(s,3H),2.27-2.23(m,1H),2.13(s,6H),2.05-1.97(m,1H),1.69(dd,J1＝2.0Hz,J2＝7.0Hz,1H),1.56(dd,J1＝1.5Hz,J2＝7.0Hz,3H),1.33-1.29(m,1H),1.16-1.54(m,9H),1.04-0.87(m,4H)。
实施例177：化合物(2S,4R)-1-((S)-2-(4-(4-((1-((1-(((4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟吡啶[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)甲氧基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺合成
步骤1：化合物177-1的合成
将4-((4-(甲氧羰基)苯氧基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(600.0mg)和一水合氢氧化锂(720.5mg)溶解于MeOH/H2O(6/1.5mL)的混合溶剂中，70℃反应1小时。向反应液中加入1M稀盐酸至pH＝4，加入DCM(10mL)和MeOH(1mL)萃取，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得目标化合物606.1mg，即化合物177-1。ESI-MS m/z:236[M+H]+。
步骤2：化合物177-2的合成
将177-1(300.0mg)溶解于THF(5mL)中，缓慢滴加硼烷·四氢呋喃溶液(2.3mL,1M)，室温反应3小时。向反应液中加入1M稀盐酸(2mL)淬灭反应，加入EA(10mL)萃取，饱和 食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得目标化合物208.5mg，即化合物177-2。ESI-MS m/z:222[M+H]+。
步骤3：化合物177-3的合成
将177-2(208.5mg)和DMP(356.8mg)溶解于DCM(10mL)中，室温反应1小时。向反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液(10mL)，室温搅拌15分钟，抽滤，加入DCM(10mL)萃取，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得目标化合物127.8mg，即化合物177-3。ESI-MS m/z:220[M+H]+。
步骤4：化合物177-4的合成
将177-3(127.8mg)和碳酸钾(109.9mg)溶解于MeOH(3mL)中，室温反应20分钟，添加(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(0.1mL)，40℃反应过夜。抽滤，浓缩，柱层析分离纯化，得目标化合物94.1mg，即化合物177-4。ESI-MS m/z:216[M+H]+。
步骤5：化合物177-5的合成
将177-4(94.1mg)，中间体M1(70.1mg)，硫酸铜(21.4mg)和抗坏血酸钠(76.8mg)溶解于混合溶剂THF(1mL)/tBuOH(1mL)/H2O(1mL)中，氮气保护，室温反应3小时。向反应液中加入DCM(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得目标化合物105.3mg，即化合物177-5。ESI-MS m/z:787[M+H]+。
步骤6：化合物177-6的合成
将177-5(105.3mg)加入DCM(3mL)和TFA(1mL)中，室温反应20分钟。将反应液直接浓缩，加入1M NaOH溶液至pH＝10，加入DCM(10mL)和MeOH(1mL)萃取，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得目标化合物82.0mg，即化合物177-6。ESI-MS m/z:687[M+H]+。
步骤7：化合物177-7的合成
将177-6(82.0mg)和中间体1-3(120.7mg)溶解于MeOH(5mL)中，添加氯化锌(0.18mL,1M)，40℃反应1.5小时。向反应液中加入氰基硼氢化钠(37.6mg)，40℃继续反应过夜。向反应液中加入饱和氯化铵溶液(5mL)，有机相浓缩，加入DCM(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得目标化合物35.5mg，即化合物177-7。ESI-MS m/z:1512[M+H]+。
步骤8：化合物177-8的合成
将177-7(35.5mg)和氟化铯(17.5mg)溶解于DMF(0.5mL)中，室温反应30分钟。向反应液中滴加H2O(1mL)，抽滤，得目标化合物28.1mg，即化合物177-8。ESI-MS m/z:1357[M+H]+。
步骤9：化合物177的合成
将177-8(28.1mg)加入DCM(5mL)和TFA(2mL)中，室温反应20分钟。将反应液直接浓缩，制备液相分离，得目标化合物16.1mg，即化合物177。ESI-MS m/z:1212[M+H]+。1H NMR(500MHz,MeOD)δ9.15(s,1H),9.08(s,1H),8.61-8.58(m,1H),7.90-7.83(m,1H),7.65-7.62(m,2H),7.47-7.36(m,5H),7.34-7.29(m,1H),7.25-7.20(m,3H),5.61(s,1H),5.11-5.09(m,1H),4.87-4.83(m,2H),4.71-4.49(m,2H),4.50-4.33(m,2H),4.25(s,2H),4.14-3.70(m,6H),3.86-3.84(m,2H),3.61-3.54(m,1H),3.50-3.40(m,2H),3.24-3.15(m,3H),2.94(s,1H),2.45(s,3H),2.28-2.25(m,1H),2.14(s,6H),2.06-1.99(m,1H),1.68(dd,J1＝2.0Hz,J2＝7.0Hz,1H),1.58(dd,J1＝1.5Hz,J2＝7.0Hz,3H),1.31-1.26(m,1H),1.15-1.55(m,9H),1.00-0.81(m,4H)。
实施例178：化合物((3R，7aR)-7a-(((4-((1R，5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.11]辛-3-基)-7-(8-乙炔基-7-氟氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟吡啶[4,3-d]嘧啶-2-嘧啶-2-基)(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-7--氮杂螺[3.5]壬-7-羧酸盐的合成
步骤1：化合物178-1的合成
将化合物162-3(50mg)溶于3mL THF中，然后加入11.5mg CDI，40℃反应1h，LC-MS监测中间体，然后加入159-5(51mg)，80℃搅拌12h，LC-MS监测反应完成。加入5.00mL甲醇淬灭，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得目标化合物20mg，即化合物178-1。ESI-MS m/z:779[M+H/2]+。
步骤2：化合物178-2的合成
化合物178-1(20mg)溶于2mL DMF中，然后加入CsF(20mg)，室温反应1h，LCMS监测反应完成。水和乙酸乙酯萃取，合并有机相，硫酸钠干燥，过滤，减压蒸出溶剂后得到18m g目标化合物，即化合物178-2。ESI-MS m/z:701[M+2H]+/2；
步骤3：化合物178的合成
将178-2(16mg)溶于3mL DCM中，然后加入1.5mL TFA，室温反应0.5h，LCMS监测反应完成。将反应液倒入冰的饱和碳酸钠水溶液中，然后用DCM:MeOH＝10:1萃取，合并有机相，硫酸钠干燥，旋干，制备液相分离，得目标化合物5.5mg，即化合物178。ESI-MS m/z:629[M+2H]+/2。
实施例179：化合物(2S，4R)-1-((2S)-2-(4-(1-((((7-(2-氨基-3-氰基苯并[b]噻吩-4-基)-噻吩-4基)-4-((1R，5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-3,8-二氮杂环[3.2.1] 辛-3-基)-6-氯-8-氟喹唑啉-2-基氧基)甲基甲基环丙基甲基)-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基-2-基1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基甲基甲基甲基环丙基，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物179-1的合成
将7-(叔丁氧基羰基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸(500mg)溶于2mL THF，然后加入硼烷-四氢呋喃溶液(4.64ml,1M)，室温反应0.5小时，LC-MS监测反应完成。向反应液加入5ml 1M HCl淬灭，然后用饱和碳酸氢钠水溶液中和Ph＝7-8，用EA(3*20ml)萃取，合并有机相，硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相得目标化合物474mg，即化合物179-1。ESI-MS m/z:255[M+H]+。
步骤2：化合物179-2的合成
化合物179-1(474mg)溶于5mL DCM中，然后加入戴斯-马丁氧化剂(945mg)，室温反应1h，LC-MS监测反应完成。硅藻土过滤反应液，滤饼用10mL DCM洗脱3次，收集滤液，减压蒸出溶剂后经柱层析分离纯化得到395m g目标化合物，即化合物179-2。ESI-MS m/z:253[M+H]+；
步骤3：化合物179-3的合成
将179-2(395mg)溶于5mL MeOH中，然后加入431mg K2CO3，最后加入0.35ml(1-二苯基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯，25℃反应3h，LC-MS监测反应完成。向反应液加入10ml H2O，用EA(20ml)萃取3次，合并有机相，硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相得目标化合物350mg，即化合物179-3。ESI-MS m/z:249[M+H]+。
步骤4：化合物179-4的合成
将179-3(300mg)，中间体M1(566mg)溶于5mL THF，5mL H2O，5mL叔丁醇中，然后依次加入抗坏血酸钠(620mg)和无水硫酸铜(173mg)，室温反应3小时，LCMS监测反应完成。向反应液中加入20.0mL水，用EA(20ml)萃取3次，合并有机相，硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得目标化合物560mg，即化合物179-4。ESI-MS m/z:719[M+H]+。
步骤5：化合物179-5的合成
将179-4(330mg)溶于6mL DCM中，然后加入2mL TFA，室温反应30min，LCMS监测反应完成。将反应液倒入冰的饱和碳酸钠水溶液中，然后用DCM:MeOH＝10:1萃取，合并有机相，硫酸钠干燥，浓缩液体得目标化合物175mg，即化合物179-5。ESI-MS m/z:619[M+H]+
步骤6：化合物179-6的合成
将化合物179-5(41mg)溶于5mL无水甲醇中，然后加入DIEA(0.03ml)，室温反应10分钟，然后加入化合物148-2(50mg)和ZnCl2(0.2ml,1M/Hexane)，转到40℃反应1h，然后加入氰基硼氢化钠(41mg)，40℃反应16h，LCMS监测反应完成。向反应液缓慢加入5mL水淬灭，DCM萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂后经柱层析分离纯化得20mg目标化合物，即化合物179-6。ESI-MS m/z:684[M+2H]+/2；
步骤7：化合物179的合成
将179-6(20mg)溶于3mL DCM中，然后加入1.5mL TFA，室温反应30min，LCMS监测反应完成。浓缩液体后经制备分离得目标化合物6.2mg，即化合物179。ESI-MS m/z:584[M+2H]+/2。1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.93–8.87(m,1H),8.09-8.05(m,1H),7.93(s,1H), 7.71–7.65(m,1H),7.44(q,J＝10.0Hz,4H),7.29-7.25(m,1H),7.19-7.17(m,1H),5.05-4.95(m,1H),4.78–4.66(m,3H),4.59-4.53(m,1H),4.46-4.41(m,1H),4.31–4.19(m,3H),3.88–3.53(m,9H),3.22–3.15(m,2H),3.13–2.93(m,3H),2.52–2.38(m,5H),2.27–2.11(m,8H),2.10–1.88(m,9H),1.66-1.64(m,1H),1.53(dd,J＝7.0,1.9Hz,3H),1.33-1.28(m,5H),1.01-0.98(m,2H),0.92–0.85(m,3H).
实施例180：化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(1-(((4-(((1R，5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)哌啶-4-基)甲氧基)苯甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物180-1的合成
将中间体M6(165mg)溶于5mL无水甲醇中，然后加入DIEA(0.08ml)，室温反应10分钟，然后加入化合物1-3(139mg)和ZnCl2(0.2ml,1M/Hexane)，转到40℃反应1h，然后加入氰基硼氢化钠(104mg)，40℃反应16h,LCMS监测反应完成。向反应液缓慢加入5mL水淬灭，DCM萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂后经柱层析分离纯化得52mg目标化合物，即化合物180-1。ESI-MS m/z:744[M+2H]+/2；
步骤2：化合物180-2的合成
化合物180-1(52mg)溶于3mL DMF中，然后加入CsF(53mg)，室温反应1h，LCMS 监测反应完成。水和乙酸乙酯萃取，合并有机相，硫酸钠干燥，过滤，减压蒸出溶剂后得到29mg目标化合物，即化合物180-2。ESI-MS m/z:666[M+2H]+/2；
步骤3：化合物180-3的合成
将180-2(29mg)溶于5mL MeOH中，然后加入29mg Pd/C(10％)，2滴HOAc，抽换H2三次，40℃反应12h，LC-MS监测反应完成。硅藻土过滤，用甲醇淋洗三次，浓缩有机相得目标化合物26mg，即化合物180-3。ESI-MS m/z:668[[M+2H]+/2。
步骤4：化合物180的合成
将180-3(26mg)溶于3mL DCM中，然后加入1mL TFA，室温反应30min，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，制备液相分离，得目标化合物5.8mg，即化合物180。ESI-MS m/z:596[M+2H]+/2。
实施例181：化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-((1-(((1-)(((4-(1R，5S)-3,8-二氮杂双环-3.2.1]辛-3-基)-7-(8-乙基-7-乙基-7-氟氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基环丙基甲基)哌啶-4-基甲氧基-甲氧基苯甲酰氨基)-3,3-二甲基丁丁烯基-丁酰基)-N-((((2(R)-1-(1-乙基-1H-吡唑-5-基)苯基)-2-羟乙基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物181-1的合成
将叔丁基(2S，4R)-2-(((R)-1-(4-(1-乙基-1H-吡唑-5-基)苯基)-2-羟乙基)氨基甲酰基)-4-羟基吡咯烷-1-甲酸酯(675mg)溶于2.5mL DCM和2.5mL MeOH中，然后加入3.23mL HCl-Dioxane(4M)，0℃下反应5h，LCMS监测反应完成。减压蒸出溶剂得目标化合物520mg，即化合物181-1。ESI-MS m/z:344[M+H]+。
步骤2：化合物181-2的合成
将181-1(520mg)，(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酸(384mg),HATu(631mg)溶于5mLDMF中，然后加入DIEA(1.0ml)，室温反应4h，LCMS监测反应完成。向反应液中加入20.0mL水，用EA(20ml)萃取3次，合并有机相，硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得目标化合物830mg，即化合物181-2。ESI-MS m/z:558[M+H]+。
步骤3：化合物181-3的合成
将181-2(200mg)溶于2.0mL DCM和2.0mL MeOH中，然后加入0.9mL HCl-Dioxane(4M)，0℃下反应5h，LCMS监测反应完成。减压蒸出溶剂得目标化合物164mg， 即化合物181-3。ESI-MS m/z:458[M+H]+。
步骤4：化合物181-4的合成
将181-3(165mg)，M6-3(110mg),HATu(137mg)溶于5mLDMF中，然后加入DIEA(0.22ml)，室温反应3h，LCMS监测反应完成。向反应液中加入20.0mL水，用EA(3*20ml)萃取，合并有机相，硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，经柱层析分离纯化得目标化合物125mg，即化合物181-4。ESI-MS m/z:775[M+H]+。
步骤5：化合物181-5的合成
将181-4(125mg)溶于3mL DCM中，然后加入1mL TFA，室温反应30min，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩得目标化合物117mg，即化合物181-5。ESI-MS m/z:675[M+H]+。
步骤6：化合物181-6的合成
将化合物181-5(117mg)溶于5mL无水甲醇中，然后加入DIEA(0.06ml)，室温反应10分钟，然后加入叔丁基(1R，5S)-3-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基-甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-((1-甲酰基环丙基)甲氧基基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸酯(80mg)和ZnCl2(0.2ml,1M/Hexane)，转到40℃反应1h，然后加入氰基硼氢化钠(73mg)，40℃反应16h,LCMS监测反应完成。向反应液缓慢加入5mL水淬灭，DCM萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂后经柱层析分离纯化得56mg目标化合物，即化合物181-6。ESI-MS m/z:675[M+2H]+/2；
步骤7：化合物181的合成
将181-6(56mg)溶于3mL DCM中，然后加入1mL TFA，室温反应30min，LCMS监测反应完成。将反应液倒入冰的饱和碳酸钠水溶液中，然后用DCM:NH3-MeOH＝10:1萃取，合并有机相，硫酸钠干燥，旋干，制备液相分离，得目标化合物22.5mg，即化合物181。ESI-MS m/z:602[M+2H]+/2。1H NMR(500MHz,MeOD)δ9.12(s,1H),7.80-7.77(m,2H),7.69(dd,J＝8.9,5.9Hz,1H),7.55–7.47(m,3H),7.45-7.29(m,2H),7.32(t,J＝2.5Hz,1H),7.25(t,J＝8.7Hz,1H),7.04(d,J＝2.2Hz,1H),6.96(dd,J＝8.8,1.9Hz,2H),6.31-6.28(m,1H),5.09-5.02(m,2H),4.69–4.60(m,1H),4.55-4.49(m,3H),4.25–4.07(m,5H),4.03–3.78(m,11H),3.05(t,J＝12.0Hz,2H),2.49-2.45(m,1H),2.28–2.07(m,10H),2.05–1.96(m,2H),1.87(s,2H),1.35-1.28 (m,8H),1.15–1.07(m,10H),1.01(s,2H),0.92–0.86(m,3H),0.79(t,J＝7.4Hz,3H).
实施例182：(2S，4R)-1-((S)-2-(4-((1-((1-)(((4-(1R，5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟吡啶[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)氧)甲基)双环[2.2.2]辛-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S(1-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺
步骤1：化合物182-1的合成
25mL单口瓶中加入化合物4-(甲氧羰基)双环[2.2.2]辛烷-1-羧酸(1.5g)，溶于THF(15mL)，0℃滴加硼烷四氢呋喃溶液(4.24mL,2M)，室温反应18h。向反应液体中加入氯化氢的甲醇溶液(5mL,4M)，回流3小时，蒸干柱层析分离产物，得1.20g目标化合物， 即化合物182-1。
步骤2：化合物182-2的合成
50mL单口瓶中加入化合物182-1(1.0g)，三乙胺(0.7mL)溶于THF(20mL),0℃滴加三甲基氯硅烷(0.64mL)，0℃反应2小时，加入三乙胺(0.7mL)，滴加三甲基氯硅烷(0.64mL)，自然升温反应18h。向反应液中加入正己烷(40mL)，过滤得到滤液蒸干得1.40g目标化合物，即化合物182-2。
步骤3：化合物182-3的合成
50mL单口瓶中加入化合物182-2(1.4g)，三乙基硅烷(0.82mL)和1-苄氧羰基-4-哌啶酮(1.21g)溶于DCM(20mL)，-60℃滴加三氟甲磺酸三甲基硅酯，保持温度反应5分钟后升温到0℃反应1小时。向反应液中加入适量饱和碳酸氢钠溶液,DCM萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干柱层析分离产物，得1.4g目标化合物，即化合物182-3。
步骤4：化合物182-4的合成
10mL单口瓶中加入化合物182-3(1.3g)，溶于MeOH(5mL)和水(1mL)，加入氢氧化锂(1.31g)，50℃反应5小时。向反应液中加入稀盐酸调节PH＝7,EA萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干柱层析分离产物，得1.1g目标化合物，即化合物182-4。
步骤5：化合物182-5的合成
10mL单口瓶中加入化合物182-4(100mg),化合物(2S，4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(130mg)，HATU(140mg)和DIEA(60mg)溶于DMF(2mL)，室温反应10分钟后，反应液体直接蒸干柱层析分离产物，得200mg目标化合物，即化合物182-5。
步骤6：化合物182-6的合成
25mL单口瓶中加入化合物182-5(180mg)，溶于甲醇(5mL)，加湿钯碳(20mg),氢气球作用下室温反应1小时。过滤反应液体得到滤液，蒸干得120mg目标化合物，即化合物182-6。
步骤7：化合物182-7的合成
5mL单口瓶中加入化合物182-6(100mg)，化合物1-3(110mg)溶于甲醇(2mL)， 加入氯化锌乙醚溶液(0.1mL,1M)，40℃反应1h。0℃向反应液中氰基硼氢化钠(50mg),40℃反应18h,旋干反应液体，加入氯化胺溶液，DCM萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，柱层析分离产物,得20mg目标化合物，即化合物182-7。
步骤8：化合物182-8的合成
5mL单口瓶中加入化合物182-7(19mg)，溶于DMF(1mL),加入CsF(19mg)，室温反应1h。向反应液中加入5mL水,EA萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，柱层析分离产物,得15mg目标化合物，即化合物182-8。
步骤9：化合物182的合成
5mL单口瓶中加入化合物182-8(19mg)，溶于DCM(0.5mL)，加入三氟化硼乙醚溶液(0.1mL，1M),室温反应4h。向反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液,DCM萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，柱层析分离产物,得5mg目标化合物，即化合物182。LCMS：[M+2H]+/2＝610.71。
实施例183：(2S，4R)-1-((2S)-2-(4-((1-((1-))))-(4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙炔基-7-氟氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-5-甲氧基吡啶并嘧啶-2-基)氧氧基)甲基环丙基甲基环丙基)甲基-4-甲氧基甲基-4-甲基甲基甲氧基甲氧基苯并甲酰氨基-3,3-二甲基丁丁烯基4-甲基-4-氢-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺
步骤1：化合物183-1的合成
50mL单口瓶中加入中间体M9(2.0g)，溶于DCM(20mL)，加三乙胺(0.72mL),滴加MOMCl(0.23mL),室温反应3小时，TLC显示原料消失。反应液体蒸干柱层析分离产物，得1.6g目标化合物，即化合物183-1。
步骤2：化合物183-2的合成
25mL单口瓶中加入化合物183-1(1.4g)，溶于DCM(20mL)，加入mcpba(1.0g)，室温反应1h。应液体蒸干柱层析分离产物，得0.73g目标化合物，即化合物183-2。
步骤3：化合物183-3的合成
25mL单口瓶中加入化合物1,1-环丙烷二甲醇(140mg)，溶于THF(6mL)，加入氢化钠(70mg),搅拌10分钟后加入化合物183-2(600mg)，室温反应1h。加入适量饱和碳酸氢钠溶液，DCM萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干柱层析分离产物，得800mg目标化合物，即化合物183-3。
步骤4：化合物183-4的合成
25mL单口瓶中加入化合物183-3(800mg)，溶于DCM(10mL)，加入DMP(466mg)，室温反应1h。加入适量饱和碳酸氢钠溶液，DCM萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干柱层析分离产物，得800mg目标化合物，即化合物183-4。
步骤5：化合物183-5的合成
5mL单口瓶中加入化合物183-4(100mg)，中间体M6(76mg)溶于甲醇(5mL)，加入氯化锌乙醚溶液(0.2mL,1M)，40℃反应1h。0℃向反应液中氰基硼氢化钠(72mg),40℃反应18h,旋干反应液体，加入氯化胺溶液，DCM萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，柱层析分离产物,得95mg目标化合物，即化合物183-5。
步骤6：化合物183-6的合成
25mL单口瓶中加入化合物183-5(95mg)，溶于DMF(2mL),加入CsF(95mg)，室温反应1h。向反应液中加入15mL水,有固体析出，过滤，滤饼用水淋洗，滤饼烘干，得85mg目标化合物，即化合物183-6。
步骤7：化合物183的合成
5mL单口瓶中加入化合物183-6(40mg)，溶于DCM(1.4mL)，加入三氟化硼乙醚溶液(0.4mL，1M),室温反应4h。向反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液,DCM萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，柱层析分离产物,得8mg目标化合物，即化合物183。LCMS：[M+2H]+/2＝610.56。
实施例184：(2S，4R)-1-((2S)-2-(4-((1-((1-)))-(4-(3,8-二氮杂双环[3.2.21]辛-3-基)-7-(8-乙基-7-氟氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟-5-甲氧基吡啶-4-，3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基-环丙基甲基)环丙基甲基-哌啶-4-基甲氧基-甲氧基苯甲酰氨基)-3,3-二甲基-丁丁烯基-4-氢x4-氢甲氧基甲基甲基甲基甲基((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺
步骤1：化合物184-1的合成
5mL单口瓶中加入化合物183-6(35mg)，溶于甲醇(3mL)，加湿钯碳(109mg),氢气球作用下室温反应1小时。过滤反应液体得到滤液，蒸干得15mg目标化合物，即化合物184-1。
步骤2：化合物1的合成
5mL单口瓶中加入化合物184-1(15mg)，溶于DCM(1.4mL)，加入三氟化硼乙醚溶液(0.4mL，1M),室温反应4h。向反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液,DCM萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，柱层析分离产物,得3mg目标化合物，即化合物184。LCMS：[[M+2H]+/2＝612.73。
实施例185：化合物(2S,4R)-1-((2S)-2-(4-((7-((1-(((7-(2-氨基-3-氰基-7-氟苯并[b]噻吩-4-基)-4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-6-氯-8-氟喹唑啉-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)氧基)苯甲酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物185-1的合成
将2-(4-(甲氧羰基)苯氧基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(250.0mg)和氢氧化钠(530.0mg)溶解于THF/H2O/MeOH(2/2/2mL)的混合溶剂中，40℃反应1小时。向反应液中加入1M稀盐酸至pH＝6，加入EA(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得目标化合物231.0mg，即化合物185-1。ESI-MS m/z:376[M+H]+。
步骤2：化合物185-2的合成
将185-1(231.0mg)，中间体M1(283.0mg)和HATU(254.0mg)溶解于DMF(5mL)中，添加DIEA(0.67mL)，室温反应20分钟。向反应液中加入DCM(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得目标化合物466.0mg，即化合物185-2。ESI-MS m/z:789[M+H]+。
步骤3：化合物185-3的合成
将185-2(466.0mg)加入DCM(5mL)和TFA(2mL)中，室温反应10分钟。将反应液直接浓缩，加入1M NaOH(2mL)，室温搅拌5分钟，抽滤，得目标化合物380.0mg，即化合物 185-3。ESI-MS m/z:689[M+H]+。
步骤4：化合物185-4的合成
将185-3(190.0mg)和中间体148-2(227.0mg)溶解于MeOH(5mL)中，添加氯化锌(0.41mL,1M)，40℃反应1.5小时。向反应液中加入氰基硼氢化钠(87.0mg)，40℃继续反应过夜。向反应液中加入饱和氯化铵溶液(5mL)，有机相浓缩，加入DCM(10mL)，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化，得目标化合物300.0mg，即化合物185-4。ESI-MS m/z:1454[M+H]+。
步骤5：化合物185的合成
将185-4(100.0mg)加入DCM(5mL)和TFA(2mL)中，室温反应20分钟，LCMS监测反应完成。将反应液直接浓缩，制备液相分离，得目标化合物19.7mg，即化合物185。ESI-MS m/z:1254[M+H]+。1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.91(s,1H),8.63(d,J＝7.5Hz,1H),7.93(s,1H),7.80-7.79(m,2H),7.67(d,J＝9.0Hz,1H),7.46-7.38(m,3H),7.21(s,1H),7.05(t,J＝7.5Hz,1H),6.89(d,J＝8.5Hz,1H),5.02(t,J＝6.5Hz,2H),4.83-4.79(m,2H),4.68-4.58(m,4H),4.47(s,1H),4.33(d,J＝7.0Hz,1H),4.24(s,2H),3.96-3.69(m,6H),3.23(t,J＝6.5Hz,1H),3.10-3.00(m,2H),2.64(s,1H),2.48-2.40(m,4H),2.24-1.93(m,10H),1.52(d,J＝7.5Hz,3H),1.33-1.29(m,1H),1.11-0.98(m,9H),0.90-0.84(m,2H)。
实施例186：1-(4-(1-((4-(1R，5S)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)(甲基)氨基)甲基)苯基)-N-(((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)哌啶-4-甲酰胺的合成
步骤1：化合物186-1的合成
25mL单口瓶中加入4-哌啶甲酸甲酯(0.500g)、对氟苯腈(0.640g)溶于DMSO(5.00mL),加入DIEA(0.170mL)，加热至120℃反应8h。向反应液中加入适量水和EA萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干柱层析分离产物(PE:EA＝10:1)，得0.558g目标化合物，即化合物186-1。
步骤2：化合物186-2的合成
25mL单口瓶中加入化合物186-1(0.558g)，溶于MeOH(2.00mL)中，加入Raney Ni(116mg),室温反应4h。反应完毕后，硅藻土过滤除去催化剂，并用MeOH洗脱滤饼数次，合并有机相后蒸除溶剂得0.54g目标化合物，即化合物186-2。
步骤3：化合物186-3的合成
25mL单口瓶中加入化合物1-3(100mg)，溶于DCM(3mL)，加化合物186-2(52.0mg)和醋酸(0.1mL)，加热至40℃反应2h后，加入STAB(126mg)，反应过夜。向反应液中加入甲醛水溶液(0.1mL),加热至40℃反应0.5h后,加入STAB(126mg)，反应1h。降温至室温，加入适量饱和碳酸氢钠溶液，DCM萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干柱层析分离产物(MeOH:DCM＝1:10)，得88.0mg目标化合物，即化合物186-3。
步骤4：化合物186-4的合成
25mL单口瓶中加入化合物186-3(88.0mg)，溶于THF(1.00mL)，加MeOH(1.00mL)、 3M NaOH(1.00mL),加热至40℃反应过夜。将温至室温后，向反应液中加入适量水，用稀盐酸调节溶液pH至2-3，DCM萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干柱层析分离产物(MeOH:DCM＝1:10)，得65.0mg目标化合物，即化合物186-4。
步骤5：化合物186-5的合成
25mL单口瓶中加入化合物186-4(65.0mg)，溶于DMF(3mL)，加入(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(30.0mg)，DIEA(0.03mL)和HATU(32.6mg)，室温反应2h。向反应液中加入饱和食盐水(5mL),EA萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，柱层析分离产物(DCM:MeOH＝10:1),得66.9mg目标化合物，即化合物186-5。
步骤6：化合物186-6的合成
25mL单口瓶中加入化合物186-5(66.9mg)，溶于DMF(3mL),加入CsF(85.3mg)，室温反应1h。向反应液中加入15mL水,有固体析出，过滤，滤饼用水淋洗，滤饼烘干，得66.0mg目标化合物，即化合物186-6。
步骤7：化合物186的合成
25mL单口瓶中加入化合物186-6(66.0mg)，溶于DCM(2.00mL)，加入TFA(2.00mL),室温反应1h。反应液直接蒸干,反相色谱柱层析分离产物(CH3CN/H2O＝30％-55％),得目标化合物12.1mg，即化合物186。LCMS：[M+2H]+/2＝601.27。1H NMR(500MHz,MeOD-d4)δ9.10(s,1H),8.96(s,1H),7.94–7.82(m,1H),7.66(dd,J＝27.9,7.9Hz,2H),7.49–7.30(m,6H),7.20(dd,J＝43.4,4.8Hz,3H),5.09–4.98(m,2H),4.84–4.74(m,2H),4.64–4.55(m,2H),4.50–4.44(m,2H),4.28(d,J＝14.0Hz,2H),4.14–3.83(m,4H),3.82–3.67(m,3H),3.62-3.51(m,2H),3.45-3.38(m,2H),3.06–2.75(m,5H),2.47(s,3H),2.28–1.76(m,11H),1.52(d,J＝7.0Hz,3H),1.15-0.82(m,13H).
实施例187：(2S，4R)-1-((2S)-2-(4-(6-))-(1-((((4-(3,8-二氮杂双环[3.2.21]辛-3-基)-7-(8-乙炔基-7-氟氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟吡啶-4，3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基-环丙基甲基-甲基甲基-2-氨基-甲基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基苯甲酰氨基)-3,3-二甲基-3-二甲基二甲基二二甲基二甲二甲基二苯并噻唑(S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物187-1的合成
化合物2-(叔丁氧基羰基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-羧酸(1g)的THF(20ml)中，降温至0℃，滴加10M硼烷二甲硫醚(2.09ml)，20℃反应1h，然后升温至65℃反应2h。反应液冷却至室温，加入20ml预冷的EtOH溶液中，搅拌30min，减压浓缩，残留物加入15mlDCM，清水洗2次，干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到800mg目标化合物，即化合物187-1。直接投下步。ESI-MS m/z:172.10[M+H-56]+。
步骤2：化合物187-2的合成
化合物187-1(800mg)的DCM(16.0ml)中，加入三氟乙酸(2.62ml),20℃反应0.5h。反应液减压浓缩，得到440mg目标化合物，即化合物187-2。直接投下步。ESI-MS m/z:128.10[M+H]+。
步骤3：化合物187-3的合成
化合物187-2(216mg)，4-氟苯甲酸甲酯(261.8mg)的DMF(8.0ml)中，加入K2CO3(1.17g),120℃反应48h。反应液冷却至室温，加入20ml清水中，加入15mlEA，分出有机相，水相无产品弃，有机相干燥，过滤，减压浓缩，残留物过柱纯化(EA：PE＝1％to 40％)，得到100mg目标化合物，即化合物187-3。ESI-MS m/z:262.20[M+H]+。
步骤4：化合物187-4的合成
化合物187-3(100mg)的DCM(4ml)中，加入DMP(210mg)，20℃反应0.5h。反应液加入10ml饱和Na2SO3溶液中，补加10mlDCM，分出有机相，干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到95mg目标化合物，即化合物187-4。直接投下步。ESI-MS m/z:260.30[M+H]+。
步骤5：化合物187-5的合成
化合物187-4(95mg)，0.94ml甲胺(2M THF)的DCM(3.0ml)中，加入NaBH(OA c)3(120mg)，1滴醋酸，20℃反应2h。反应液加入15ml饱和碳酸氢钠中，补加15mlD CM萃取，分出有机相，水相无产品弃，有机相干燥，过滤，减压浓缩，得到74mg目标化合物，即化合物187-5。直接投下步。ESI-MS m/z:275.10[M+H]+。
步骤6：化合物187-6的合成
化合物187-5(74mg)，1-3(227mg)的DCM(3.0ml)中，加入NaBH(OAc)3(114.32mg)，1滴醋酸，20℃反应16h。反应液加入15ml饱和碳酸氢钠水中，加入15ml DCM，分出有机相，水相无产品弃，有机相干燥，过滤，浓缩，残留物prep-TLC纯化(Me OH：DCM＝1：20)，得到82mg目标化合物，即化合物187-6。ESI-MS m/z:551.20[M+2H]+/2。
步骤7：化合物187-7的合成
化合物187-6(80mg)的甲醇(0.8ml)和THF(0.8ml)中，加入4M氢氧化钠水溶液(0.92ml),40℃反应16h。反应液加入10ml水中，4M盐酸调PH至6-7，加入15mlEA，分 出有机相，水相无产品弃，有机相干燥，过滤，浓缩，残留物prep-TLC纯化(MeOH：DC M＝7％)，得到30mg目标化合物，即化合物187-7。ESI-MS m/z:544.20[M+2H]+/2。
步骤8：化合物187-8的合成
化合物187-7(30mg)，(2S，4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(15.89mg)的DMF(1ml)中，加入HATU(15.74mg),DIPEA(10.71mg),20℃反应3h。反应液加入15ml水中，加入15mlEA，分出有机相，水相无产品弃，有机相饱和食盐水洗，干燥，过滤，浓缩，残留物prep-TLC纯化(MeOH：DCM＝7％)，得到26mg目标化合物，即化合物187-8。ESI-MS m/z:757.10[M+2H]+/2。
步骤9：化合物187-9的合成
化合物187-8(26mg)的DMF(1ml)中，加入氟化铯(26.13mg),20℃反应1h。反应液加入15ml水中，加入15mlEA，分出有机相，水相无产品弃，有机相饱和食盐水洗，干燥，过滤，浓缩，得到22mg目标化合物，即化合物187-9，直接投下步。ESI-MS m/z:679.20[M+2H]+/2。
步骤10：化合物187的合成
化合物187-9(22mg)的DCM(0.6mL)中，加入TFA(0.12ml)，20℃反应0.5h。反应液低温减压浓缩，残留物Prep-HPLC分离得8.1mg目标化合物，即化合物187的三氟乙酸盐。ESI-MS m/z:606.20[M+2H]+/2。1HNMR(500MHz,MeOD-d4)δ8.89(s,1H),8.61-8.58(m,1H),7.88-7.87(m,1H),7.67-7.62(m,2H),7.46-7.42(m,4H),7.40-7.37(m,1H),7.32-7.29(m,1H),7.22(s,1H),6.34-6.28(m,2H),5.35–5.33(m,1H),4.94–4.91(m,1H),4.84–4.82(m,1H),4.75-4.73(m,2H),4.70-4.68(d,J＝10.0Hz,1H),4.58-4.53(d,J＝10.0,1H),4.45-4.42(m,2H),4.34-4.30(m,2H),4.22(s,2H),3.89(s,2H),3.66-3.64(m,3H),3.17(s,4H),2.46(s,4H),2.02-1.94(m,8H),1.39-1.37(m，3H),1.24(m,9H),1.02(s,9H).
实施例188：(2S，4R)-1-((2S)-2-(4-((1-(((4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基) -7-(7,8-二氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟吡啶[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)甲氧基)苯甲酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺
步骤1：化合物188-1的合成
25mL单口瓶中加入化合物47-2(50mg)，溶于MeOH(3mL)，加入中间体M6(73mg)，加热至40℃反应2h后，加入NaBH3CN(18.5mg)，反应过夜。降温至室温，加入适量饱和碳酸氢钠溶液，DCM萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干柱层析分离产物(MeOH:DCM＝1:10)，得56.2mg目标化合物，即化合物188-1。
步骤2：化合物188的合成
25mL单口瓶中加入化合物188-1(56.2mg)，溶于DCM(2mL)，加入TFA(2mL),室温反应1h。反应液直接蒸干,反相色谱柱层析分离产物(CH3CN/H2O＝30％-55％),得目标化合物22.5mg，即化合物188。(纯度97.02％)。LCMS：[M+2H]+/2＝591.61。1H NMR(500MHz,MeOD)δ9.14(d,J＝2.7Hz,1H),8.89(dd,J＝14.3,3.0Hz,1H),7.77(d,J＝5.9Hz,2H),7.66–7.57(m,1H),7.48–7.32(m,6H),7.25(s,1H),6.93(d,J＝4.0Hz,2H),4.60(d,J＝9.8Hz,2H),4.50–4.36(m,2H),4.21(s,2H),3.93(d,J＝17.7Hz,7H),3.83(d,J＝10.8Hz,1H),3.06(t,J＝11.8Hz,2H),2.47(t,J＝9.3Hz,3H),2.26–2.08(m,9H),2.06–1.96(m,2H),1.95–1.82(m,2H),1.64(d,J＝7.0Hz,1H),1.56–1.48(m,3H),1.31(d,J＝20.2Hz,4H),1.19–1.06(m,9H),1.01–0.90(m,4H).
实施例189：(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(7-((1-(((4-((1R，5S)-3,8-二氮杂双环 [3.2.1]辛-3-基)-7-(7,8-二氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟吡啶[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)-2,7-二氮螺[3.5]壬-2-基)苯甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-甲酰胺
步骤1：化合物189-1的合成
25mL单口瓶中加入化合物47-2(50mg)，溶于MeOH(3mL)，加化合物164-4(74.2mg)，加热至40℃反应2h后，加入NaBH3CN(18.5mg)，反应过夜。降温至室温，加入适量饱和碳酸氢钠溶液，DCM萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干柱层析分离产物(MeOH:DCM＝1:10)，得67.1mg目标化合物，即化合物189-1。
步骤2：化合物189的合成
25mL单口瓶中加入化合物189-1(67.1mg)，溶于DCM(2mL)，加入TFA(2mL),室温反应1h。反应液直接蒸干,反相色谱柱层析分离产物(CH3CN/H2O＝30％-55％),得目标化合物13.1mg，即化合物189。(纯度99.03％)。LCMS：[M+2H]+/2＝597.04。1HNMR(500MHz,MeOD)δ9.14(s,1H),8.87(d,J＝7.2Hz,1H),7.71(t,J＝8.3Hz,2H),7.64(dd,J＝9.2,4.6Hz,1H),7.50–7.40(m,6H),7.37(d,J＝5.0Hz,2H),7.26(d,J＝2.1Hz,1H),6.47(d,J＝8.6Hz,2H),5.05–5.00(m,5H),4.63–4.55(m,3H),4.47(d,J＝11.1Hz,2H),4.28(s,3H),4.00–3.90(m,4H),3.82(dd,J＝21.3,11.8Hz,6H),3.72(s,3H),3.13(dd,J＝24.1,12.6Hz,3H),2.48(s,3H),2.20–2.06(m,11H),1.98–1.82(m,1H),1.63–1.44(m,3H),1.19–1.06(m,9H),1.02–0.90(m,4H).
实施例190：(2S，4R)-1-((S)-2-(3-((5-(((1-(((4-((1R，5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟吡啶[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基)(甲基)氨基)甲基)吡啶-2-基氧基)丙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺
步骤1：化合物190-1的合成
25mL单口瓶中加入6-氟烟腈(4.0g)，溶于DMF(50mL)，加入NaH(3.9g)，1,3-丙二醇(4.9g)，加热至45℃反应3h。反应液直接蒸干。柱层析分离纯化(PE:EA＝3:1)，得3.1g淡黄色固体，即化合物190-1。
步骤2：化合物190-2的合成
25mL单口瓶中加入化合物190-1(2.0g)，溶于ACN(30mL),加入TEMPO(0.35g)，H2O(3mL),次氯酸钠溶液(2mL),室温反应4h。向反应液中加硫代硫酸钠溶液淬灭,DCM萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干柱层析分离产物(PE:EA＝1:1)，得0.8g淡黄色固体，即化合物190-2。
步骤3：化合物190-3的合成
50mL单口瓶中加入化合物190-2(200.0mg)，溶于DMF(3mL)，加入(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(516mg)，DIEA(0.6mL)和HATU(592.5mg)，室温反应2h。向反应液中加入饱和食盐水(5mL),EA萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，柱层析分离产物(DCM:MeOH＝10:1),得368.2mg黄色固体，即化合物190-3。
步骤4：化合物190-4的合成
25mL单口瓶中加入化合物190-3(100.0mg)，溶于MeOH(3mL)，加入Pd/C(50.0mg)和催化量甲酸，通入氢气后，室温反应2h。反应垫硅藻土过滤，滤液蒸干，得101.2mg 浅灰色固体，即化合物190-4。
步骤5：化合物190-5的合成
25mL单口瓶中加入化合物1-3(80.0mg)，溶于MeOH(3mL)，加化合物190-4(101.2mg)，加热至40℃反应2h后，加入NaBH3CN(29.4mg)，反应过夜。冷至室温，加入甲醛水溶液(0.1mL)，搅拌反应液30min后加入NaBH3CN(11.8mg)，反应30min后加入适量饱和碳酸氢钠溶液，DCM萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干柱层析分离产物(MeOH:DCM＝1:10)，得54.5mg淡黄色固体，即化合物190-5。
步骤6：化合物190-6的合成
25mL单口瓶中加入化合物190-5(54.5mg)，溶于DMF(3mL),加入CsF(69.6mg)，室温反应1h。向反应液中加入15mL水,有固体析出，过滤，滤饼用水淋洗，滤饼烘干，得37.8mg黄色固体，即化合物190-6。
步骤7：化合物190的合成
25mL单口瓶中加入化合物190-6(37.8mg)，溶于DCM(2mL)，加入TFA(2mL),室温反应1h。反应液直接蒸干,反相色谱柱层析分离产物(CH3CN/H2O＝30％-55％),得白色固体15.9mg，即化合物190。(纯度99.79％)。LCMS：[M+2H]+/2＝575.06。1H NMR(500MHz,MeOD)δ9.10(s,1H),8.89(d,J＝2.6Hz,1H),8.51(s,1H),8.09(dd,J＝8.5,2.6Hz,1H),7.87(dt,J＝9.2,5.6Hz,1H),7.48–7.28(m,6H),7.21(d,J＝2.0Hz,1H),6.81(d,J＝8.4Hz,1H),5.02(s,1H),4.69(s,1H),4.64–4.59(m,1H),4.58–4.47(m,5H),4.34(dd,J＝26.4,12.1Hz,4H),4.13–3.87(m,5H),3.79(dt,J＝11.0,3.6Hz,1H),3.66–3.49(m,1H),3.34(dd,J＝10.4,2.3Hz,1H),2.86–2.76(m,4H),2.45(t,J＝6.4Hz,3H),2.26–2.03(m,7H),1.29(s,2H),1.08(d,J＝26.2Hz,1H),1.04–0.82(m,13H).
实施例191：(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(1-(4-((1R，5S)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-7-(8-乙炔基-7-氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟吡啶[4，3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)环丙基)甲基(甲基)氨基)甲基)氮杂环丁-1-基)苯甲酰胺)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物191-1的合成
取25mL单口瓶，将3-甲羟基氮杂环丁烷盐酸盐(1.00g)溶于DMF(12.0mL),加入KI(0.82g)，对氟苯甲酸甲酯(1.26g)，K2CO3(8.26g)，加热至120℃反应14h。向反应液中加入适量水,EA萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干柱层析分离产物(PE:EA＝5:1)，得0.88g白色固体，即化合物191-1。
步骤2：化合物191-2的合成
25mL单口瓶中加入化合物191-1(500mg)，溶于THF(5.0mL)，加入邻苯二甲酰亚胺(523mg)，三苯基磷(771mg)，DIAD(595mg)，室温反应过夜。向反应液中加入适量水,EA萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干柱层析分离产物(PE:EA＝5:1)，得445mg白色固体，即化合物191-2。
步骤3：化合物191-3的合成
25mL单口瓶中加入化合物191-2(445mg)，溶于EtOH(3mL)，加入水合肼(2.0mL)，室温反应过夜。向反应液中加入适量水，DCM萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干 柱层析分离产物(MeOH:DCM＝1:10)，得219mg白色固体，即化合物191-3。
步骤4：化合物191-4的合成
25mL单口瓶中加入化合物1-3(100mg)，溶于DCM(3mL)，加化合物191-3(52.0mg)和醋酸(0.1mL)，加热至40℃反应2h后，加入STAB(126mg)，反应过夜。向反应液中加入甲醛水溶液(0.1mL),加热至40℃反应0.5h后,加入STAB(126mg)，反应1h。降温至室温，加入适量饱和碳酸氢钠溶液，DCM萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干柱层析分离产物(MeOH:DCM＝1:10)，得85.0mg白色固体，即化合物191-4。
步骤5：化合物191-5的合成
25mL单口瓶中加入化合物191-4(85.0mg)，溶于THF(1.00mL)，加MeOH(1.00mL)、3M NaOH(1.00mL),加热至40℃反应过夜。将温至室温后，向反应液中加入适量水，用稀盐酸调节溶液pH至2-3，DCM萃取三次，有机相水洗，饱和食盐水洗，蒸干柱层析分离产物(MeOH:DCM＝1:10)，得39.0mg淡黄色固体，即化合物191-5。
步骤6：化合物191-6的合成
25mL单口瓶中加入化合物191-5(39.0mg)，溶于DMF(3mL)，加入(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(20.0mg)，DIEA(0.02mL)和HATU(21.7mg)，室温反应2h。向反应液中加入饱和食盐水(5mL),EA萃取，取有机相无水硫酸钠干燥，柱层析分离产物(DCM:MeOH＝10:1),得41.0mg淡黄色固体，即化合物191-6。
步骤7：化合物191-7的合成
25mL单口瓶中加入化合物191-6(41.0mg)，溶于DMF(3mL),加入CsF(65.3mg)，室温反应1h。向反应液中加入15mL水,有固体析出，过滤，滤饼用水淋洗，滤饼烘干，得35.0mg黄色固体，即化合物191-7。
步骤8：化合物191的合成
25mL单口瓶中加入化合物191-7(35.0mg)，溶于DCM(2mL)，加入TFA(2mL),室温反应1h。反应液直接蒸干,反相色谱柱层析分离产物(CH3CN/H2O＝30％-55％),得白色固体8.1mg，即化合物191。LCMS：[M+2H]+/2＝580.11。1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ9.09(s,1H),8.90(s,1H),8.77–8.69(m,1H),7.89–7.85(m,1H),7.68(s,2H),7.50–7.30(m,7H),7.22(d,J ＝2.6Hz,1H),6.47-6.38(m,2H),4.67–4.50(m,5H),4.41–4.30(m,2H),4.25(s,2H),4.18–4.10(m,2H),4.01–3.81(m,6H),3.78–3.71(m,2H),3.54–3.41(m,3H),3.41–3.38(m,1H),2.98(s,3H),2.46(s,3H),2.29–2.18(m,2H),2.18–2.08(m,5H),1.09(s,9H),1.03–0.89(m,4H).
实施例192：(2S，4R)-1-((2S)-2-(4-(((1-)))-(4-(3,8-二氮杂双环[3.2.21]辛烷-3-基)-7-(8-乙炔基-7-氟氟-3-羟基萘-1-基)-8-氟吡啶-4，3-d]嘧啶-2-基)氧氧基)甲基-环丙基甲基-环丙烯基甲基)哌啶-4-基甲基-甲基-甲基甲基-甲基苯甲酰胺基)-3,3-二甲基丁基甲酰基-4-氢氧基苯甲酰胺-3，3-二甲基杂杂杂-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
步骤1：化合物192-1的合成
化合物4-(羟甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(200mg)的DCM(3ml)中，加入DMP(512mg)，20℃反应2h。反应液加入Na2SO3/NaHCO3＝1：1(20ml)水中，补加10mlDCM，分出有机相，干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到197mg目标化合物，即化合物192-1。直接投下步。 ESI-MS m/z:158.30[M+H-56]+。
步骤2：化合物192-2的合成
化合物192-1(197mg)，4-氨基苯甲酸甲酯(140mg)的DCM(3.0ml)中，加入NaBH(OAc)3(294mg)，1滴醋酸，20℃反应2h。反应液加入15ml饱和碳酸氢钠中，15ml DCM萃取，分出有机相，水相无产品弃，有机相干燥，过滤，浓缩，得到267mg目标化合物，即化合物192-2。直接投下步。ESI-MS m/z:292.10[M+H-56]+。
步骤3：化合物192-3的合成
化合物192-2(267mg)，37％甲醛水溶液(310mg)的MeOH(5.0ml)中，加入氰基硼氢化钠(241mg),45℃反应8.0h。反应液加入15ml水中，加入15mlEA，分出有机相，水相无产品弃，有机相干燥，过滤，浓缩，残留物prep-TLC纯化(EA：PE＝1:3)，得到116mg目标化合物，即化合物192-3。ESI-MS m/z:306.10[M+H-56]+。
步骤4：化合物192-4的合成
化合物192-3(116mg)的DCM(2.0ml)中，加入三氟乙酸(0.24ml),20℃反应0.5h。反应液减压浓缩，得到84mg目标化合物，即化合物192-4。直接投下步。ESI-MS m/z:262.10[M+H]+。
步骤5：化合物192-5的合成
化合物192-4(84mg)的DCM(3.0ml)中，加入DIPEA(126.63mg),PH呈中性，加入化合物1-3(250mg)，NaBH(OAc)3(125.85mg)，1滴醋酸，35℃反应16h。反应液加入15ml饱和碳酸氢钠水中，加入15mlDCM，分出有机相，水相无产品弃，有机相干燥，过滤，浓缩，残留物prep-TLC纯化(MeOH：DCM＝1：20)，得到150mg目标化合物，即化合物192-5。ESI-MS m/z:545.20[M+2H]+/2。
步骤6：化合物192-6的合成
化合物192-5(150mg)的甲醇(1.1ml)和THF(1.1ml)中，加入4M氢氧化钠水溶液(1.28ml),40℃反应15h。反应液加入5ml水中，4M盐酸调PH至6-7，加入15mlEA，分出有机相，水相无产品弃，有机相干燥，过滤，浓缩，残留物prep-TLC纯化(MeOH：D CM＝7％)，得到30mg目标化合物，即化合物192-6。ESI-MS m/z:538.20[M+2H]+/2。
步骤7：化合物192-7的合成
化合物192-6(30mg)，(2S，4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(14.74mg)的DMF(1ml)中，加入HATU(15.93mg),DIPEA(10.82mg),20℃反应2h。反应液加入15ml水中，加入15mlEA，分出有机相，水相无产品弃，有机相干燥，过滤，浓缩，残留物prep-TLC纯化(MeOH：DCM＝7％)，得到31mg目标化合物，即化合物192-7。ESI-MS m/z:751.10[M+2H]+/2。
步骤8：化合物192-8的合成
化合物192-7(31mg)的DMF(1ml)中，加入氟化铯(30.38mg),20℃反应1h。反应液加入15ml水中，加入15mlEA，分出有机相，水相无产品弃，有机相干燥，过滤，浓缩，得到26mg目标化合物，即化合物192-8，直接投下步。ESI-MS m/z:673.20[M+2H]+/2。
步骤9：化合物192的合成
化合物192-8(26mg)的DCM(1.0mL)中，加入TFA(0.2ml)，20℃反应1h。反应液减压浓缩，残留物Prep-HPLC分离得6.0mg目标化合物，即化合物192的三氟乙酸盐。ESI-MS m/z:601.20[M+2H]+/2。1H NMR(500MHz,MeOD-d4)δ8.99(s,1H),8.42-8.40(m,1H),8.01-7.98(m,1H),7.86-7.84(m,2H),7.75-7.73(m,1H),7.45-7.38(m,5H),7.18-7.17(m,1H),6.90-6.88(m,2H),5.35–5.33(m,1H),4.94–4.91(m,1H),4.84–4.82(m,1H),4.75-4.73(m,2H),4.70-4.68(d,J＝10.0Hz,1H),4.58-4.53(d,J＝10.0,1H),4.45-4.42(m,2H),4.34-4.30(m,2H),4.22(s,2H),3.89(s,2H),3.66-3.64(m,3H),3.17(s,4H),2.46(s,4H),2.02-1.94(m,8H),1.39-1.37(m，3H),1.24(m,9H),1.02(s,9H).
下述的实施例采用上述方法合成，或使用相应中间体的类似方法合成。



























药理实验
实施例1：细胞增殖实验(AGS)
将KRas-G12D突变型肿瘤细胞AGS(CRL-1739TM)按1×103/孔的细胞密度铺于低吸附96孔板中，置于细胞培养箱隔夜培养。待细胞贴壁后，将待测化合物按照终浓度20000、6666.67、2222.22、740.74、246.91、82.30、27.43、9.14、3.05、0nM(DMSO终浓度均为0.5％)加入96孔板中，37℃培养96h后向各孔加入50μL Cell-titer GLO工作液，震荡混匀后室温孵育10min，在多功能酶标仪读取Luminescence发光值，将发光值数据计算转换为抑制百分数。并根据以下公式，计算细胞增殖抑制百分数：
抑制百分数＝(最大值-所测值)/(最大值-空白值)×100
(“最大值”来自0.1％二甲基亚砜(DMSO)对照孔，“所测值”来自化合物处理孔)。
利用GraphPadPrism软件进行曲线拟合并获取IC50值。
表1
化合物名称 AGSIC50(nM) 化合物名称 AGSIC50(nM)
1 57 156 74
2 331 157 91
3 186 158 115
4 1612 159 50
5 169 160 154
7 268 161 70
8 68 162 87
9 394 163 44
10 232 164 27
11 135 165 61
12 1558 166 232
13 1584 167 54
14 39 168 238
15 1748 169 118
16 27 170 578
17 372 171 183
18 48 172 51
19 778 173 35
26 89 174 18
47 88 175 26
71 268 176 30
92 76 177 55
107 60 178 69
118 73 179 96
129 22 180 46
130 43 181 60
132 60 182 64
133 24 183 52
148 71 186 60
149 109 187 50
150 139 188 29
151 154 189 69
152 14 190 61
153 226 191 60
154 276 192 91
155 1229    
测试化合物对AGS细胞增殖具有不同程度的抑制作用，最优化合物的IC50低于15nM，能够强效的抑制AGS细胞的增殖。
实施例2：化合物对KRASG12D降解作用
本实验采用免疫印迹法对化合物降解KRASG12D的能力进行测试。将生长状况良好，处于对数生长期的AGS细胞以3×105铺到12孔板内，37℃，5％CO2培养过夜。第二日，将化合物稀释到相应的浓度，给药，使化合物的最终浓度分别为0.2，1，5μM。37℃，5％CO2孵育24h后，弃培养液，加入PBS清洗一次，50μl/孔裂解液冰上裂解10min，离心，收 集总蛋白。BCA蛋白定量后，统一将样品按20μg/孔上样到SDS-PAGE胶，电泳程序设置为80V,0.5h，然后120V,1h。电泳结束后，将PAGE胶转印到0.22μm PVDF膜上，5％BSA封闭1h，在35kD marker处将PVDF膜剪开，分别孵育KRAS(Sigma#SAB1404011-100UG)、β-肌动蛋白(CST#5057S)一抗，4℃孵育过夜。第二日，将PVDF膜从一抗液中取出，TBST洗4次，每次5min，之后室温孵育对应二抗1.5hr，TBST清洗4次之后，在iBright FL1000上进行曝光。
实验结果表明，在化合物处理24hr条件下，5μM的化合物1对KRASG12D具有很明显的降解作用(图1)。
实施例3：KRASG12D降解实验(AGS)
本实验采用细胞内免疫印迹法对化合物降解KRASG12D的能力进行检测。将生长状况良好、且处于对数生长期的AGS细胞铺在96孔透明底的黑板中，使每孔的细胞数为5×104；37℃，5％CO2培养过夜。
第二日，将化合物稀释到相应的浓度，给药，使化合物的最终浓度分别为20000，5000,1250，312.5，78.1，19.5，4.9，1.2，0nM(DMSO终浓度均为0.5％；第十列加入对应浓度的DMSO，作为背景孔)，将加药后的板置于37℃，5％CO2培养24hr。
孵育时间结束后，弃培养液，将准备好的4％多聚甲醛沿着孔壁轻轻加到板中(150μL/孔)，室温固定20min；弃固定液，用含0.5％吐温20的磷酸缓冲液，在摇床上洗5min/4次；然后用0.5％Triton X-100150μL/孔固定20min；弃打孔液，用含0.5％吐温20的磷酸缓冲液，在摇床上洗5min/4次；加入150μL/孔封闭液室温封闭1.5h；弃掉封闭液，每孔加入50μL一抗稀释液(KRASG12D-1:200，GAPDH-1:400，背景孔加封闭液)，4℃孵育过夜或室温孵育2hr。
一抗孵育结束后，弃一抗，用含0.5％吐温20的磷酸缓冲液，在摇床上洗5min/4次；每孔加入50μL二抗稀释液(Rb二抗800:1/500；Ms二抗680:1/500)，室温孵育1.5hr；孵育结束后，弃二抗，用含0.5％吐温20的磷酸缓冲液，在摇床上洗5min/4次，倒置离心1000rpm/1min，上机(时间允许的话，将板子倒置在避光的地方放置一天，第二天读数结果会更加准确)。将测定得到的Relative ICW800信号值导入Prism软件，进行拟合，并计算DC50。
表2
化合物名称 AGSDC50(nM) 化合物名称 AGSDC50(nM)
1 54 173 24
92 55 174 40
129 20 180 52
130 29 187 52
133 21 188 68
152 24 189 70
163 83 190 51
172 72    
测试化合物具有较强的细胞内降解KRASG12D的能力，测定得到的半数降解浓度(DC50)都在100nM以内，若干化合物的DC50甚至可以达到20～30nM，证明上述化合物在细胞水平，就可以实现对KRASG12D高效的降解。
实施例4：PROTAC作用机制验证
将生长状况良好，处于对数生长期的AGS细胞以3×105铺到12孔板内，37℃，5％CO2培养过夜。第二日，先分别使用DMSO、10μM的VH032(MCE#HY-120217)或3μM的MG132(MCE#HY-13259)对细胞预处理2hr，两小时后，加入5μM化合物，37℃，5％CO2孵育24h。处理结束后，弃培养液，加入PBS清洗一次，50μl/孔裂解液冰上裂解10min，离心，收集总蛋白。BCA蛋白定量后，统一将样品按20μg/孔上样到SDS-PAGE胶，电泳程序设置为80V,0.5h，然后120V,1h。电泳结束后，将PAGE胶转印到0.22μm PVDF膜上， 5％BSA封闭1h，在35kD marker处将PVDF膜剪开，分别孵育KRAS(Sigma#SAB1404011-100UG)、β-肌动蛋白(CST#5057S)一抗，4℃孵育过夜。第二日，将PVDF膜从一抗液中取出，TBST洗4次，每次5min，之后室温孵育对应二抗1.5hr，TBST清洗4次之后，在iBright FL1000上进行曝光。
实验结果证明，5μM的化合物1可以降解KRASG12D。在加入VHL配体VH032或者蛋白酶抑制剂MG132预处理之后，化合物1对KRASG12D的降解作用减弱或消失(图2)

Claims (19)

  1. 一种具有X-Y-Z结构的化合物、其立体异构体、互变异构体、氘代物或药用盐，其特征在于，X为通式(I)所示的KRAS蛋白结合配体化合物，Y为连接X和Z的连接链，Z为E3连接酶结合配体化合物；
    X1选自N或CR6；R6选自H、氨基、取代的氨基、氰基、C1-6烷基、取代的C1-6烷基、卤素、C2-6烯基、取代的C2-6烯基、C3-6环烷基或取代的C3-6环烷基；
    L选自键、O、S、NR7或亚炔基；R7选自H、C1-6烷基或C3-6环烷基；
    R1选自H、羟基、氰基、卤素或C1-3烷基，所述C1-3烷基任选地被一个或多个选自卤素、羟基或氰基的取代基所取代；
    R2选自键、C1-6烷基、 R2任选地进一步被一个或多个R9所取代；
    R3选自H、卤素、C1-6烷基或-OR10，所述R10选自C1-6烷基或C3-8环烷基，R10任选地进一步被一个或多个选自羟基、卤素、C1-3烷基、C1-3烷氧基或环丙基的取代基所取代；
    R4选自C6-14芳基或5-14元杂芳基，所述芳基或杂芳基任选地进一步被一个或多个R11取代；R11选自H、氰基、卤素、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、-C0-6亚烷基-ORa、-C0-6亚烷基-OC(O)N (Ra)2、-C0-6亚烷基-N(Ra)2、-C0-6亚烷基-NRaC(O)Ra、-C0-6亚烷基-NRaC(O)N(Ra)2、-C0-6亚烷基-NRaS(O)Ra、-C0-6亚烷基-NRaS(O)2Ra、-C0-6亚烷基-S(＝O)Ra、-C0-6亚烷基-S(＝O)2Ra、-C0-6亚烷基-SRa、-C0-6亚烷基-S(Ra)5、-C0-6亚烷基-C(＝O)Ra、-C0-6亚烷基-C(＝O)ORa、-C0-6亚烷基-C(＝O)N(Ra)2、C2-6烯基、C2-6炔基、-C0-6亚烷基-C3-14环烷基、-C0-6亚烷基-(3-14元杂环基)、-C0-6亚烷基-C6-14芳基或-C0-6亚烷基-(5-14元杂芳基)，所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-C0-6亚烷基-C3-14环烷基、-C0-6亚烷基-(3-14元杂环基)、-C0-6亚烷基-C6-14芳基或-C0-6亚烷基-(5-14元杂芳基)任选地还可被1个或多个Ra所取代；
    R5选自H、氨基、取代的氨基、氰基、C1-6烷基、取代的C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-14环烷基-O-、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、羟基、卤素、C2-6烯基、取代的C2-6烯基、C3-6环烷基或取代的C3-6环烷基；所述C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-14环烷基-O-、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C2-6烯基或C3-6环烷基任选地还可被1个或多个Ra所取代；
    R8选自H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基或C1-6氨基烷基；
    R9各自独立地选自H、卤素、羟基、氨基、氧代基、硝基、氰基、羧基、C1-6烷基、C1-6羟基烷基、C1-6氨基烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、C1-6杂烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C6-14芳基或5-14元杂芳基；
    环A选自C3-14环烷基、3-14元杂环基、C6-14芳基或5-14元杂芳基；
    Ra各自独立地选自H、卤素、羟基、氨基、氧代基、硝基、氰基、羧基、C1-6烷基、C1-6羟基烷基、C1-6氨基烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、C1-6杂烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C6-14芳基或5-14元杂芳基；
    m选自0、1、2、3或4。
  2. 根据权利要求1所述的化合物、其立体异构体、互变异构体、氘代物或药用盐，其特征在于，X为通式(I)所示的KRAS蛋白结合配体化合物，Y为连接X和Z的连接链，Z为E3连接酶结合配体化合物；
    其中，
    R5选自H、氨基、取代的氨基、氰基、C1-6烷基、取代的C1-6烷基、卤素、C2-6烯基、取代的C2-6烯基、C3-6环烷基或取代的C3-6环烷基；
    R1、R2、R3、R4、X1、L、m的定义如权利要求1所示。
  3. 根据权利要求1或2所述的化合物、其立体异构体、互变异构体、氘代物或药用盐，其特征在于，X选自如下所示结构：

    其中，R3、R4、R5、R6、R8的定义如权利要求1所示。
  4. 根据权利要求1-3任一项所述的化合物、其立体异构体、互变异构体、氘代物或药用盐，其特征在于，所述R4选自 所述 任选地进一步被一个或多个R11取代，所述R11各自独立地选自H、羟基、氰基、氨基、卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基或-C0-3亚烷基-C3-14环烷基。
  5. 根据权利要求4所述的化合物、其立体异构体、互变异构体、氘代物或药用盐，其特征在于，R4选自所述R11选自H、卤素、C1-3烷基或C2-3炔基。
  6. 根据权利要求1-5任一项所述的化合物、其互变异构体、氘代物或药用盐，其特征在于，所述Y选自如下结构：
    其中，
    G环或D环各自独立选自C6-14芳基、C3-14环烷基、5-14元杂芳基或3-14元杂环基，所述C6-14芳基、3-14元环烷基、5-14元杂芳基或3-14元杂环基任选地进一步被一个或多个选自卤素或C1-3烷基的取代基所取代；
    E选自-O-、-NH-或-NCH3-；
    n、n1、n2、n3各自独立地选自0-10的整数。
  7. 根据权利要求6所述的化合物、其立体异构体、互变异构体、氘代物或药用盐，其特征在于，所述G或D各自独立选自C6-14芳基、5-14元杂芳基或3-14元杂环基，所述C6-14芳基、5-14元杂芳基或3-14元杂环基任选地进一步被一个或多个选自卤素或C1-3烷基的取代基所取代；
    所述C6-14芳基优选为
    所述C3-14环烷基优选为
    所述5-14元杂芳基优选自
    所述3-14元杂环基优选自
  8. 根据权利要求1-7任一项所述的化合物、其立体异构体、互变异构体、氘代物或药用盐，其特征在于，所述Y选自如下所示结构：

    其中，n、n1、n2、n3各自独立地选自0-10的整数。
  9. 根据权利要求1-7任一项所述的化合物、其立体异构体、互变异构体、氘代物或药用盐，其特征在于，所述Y选自如下所示结构：


    其中，n、n1、n2、n3各自独立地选自0-10的整数。
  10. 根据权利要求1-7任一项所述的化合物、其立体异构体、互变异构体、氘代物或药用盐，其特征在于，所述Y选自如下所示结构： 其中，n选自0-10的整数。
  11. 根据权利要求1-10任一项所述的化合物、其立体异构体、互变异构体、氘代物或药用盐，其特征在于，所述Z选自如下所示结构：
  12. 根据权利要求1-10任一项所述的化合物、其立体异构体、互变异构体、氘代物或药用盐，其特征在于，所述Z选自如下所示结构：
  13. 根据权利要求1所示的化合物、其互变异构体、氘代物或药用盐，其特征在于，X-Y选自如下所示结构：
    其中，
    所述R3、R4、R5、X的定义同权利要求1所述；
    所述G环选自C3-14环烷基、3-14元杂环基、C6-14芳基或5-14元杂芳基，所述3-14元杂环基为单环或螺环；所述C3-14环烷基、C6-14芳基、5-14元杂芳基或3-14元杂环基任选地进一步被一个或多个选自卤素或C1-3烷基的取代基所取代。
  14. 根据权利要求13所示的化合物、其互变异构体、氘代物或药用盐，其特征在于，
    所述C6-14芳基为
    所述5-14元杂芳基选自
    所述3-14元杂环基选自 所述C3-14环烷基、C6-14芳基、5-14元杂芳基或3-14元杂环基任选地进一步被一个或多个选自卤素或C1-3烷基的取代基所取代。
  15. 一种通式(I)所示的化合物、其互变异构体、氘代物或药用盐，其选自下式化合物：








  16. 一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物含有治疗有效量的权利要求1-15中任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体、氘代物或药用盐。
  17. 权利要求1-15中任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体、氘代物或药用盐或权利要求16所述的药物组合物在制备药物中的应用。
  18. 一种治疗和/或预防疾病的方法，包括向治疗对象施用治疗有效量的权利要求1-15中任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体、氘代物或药用盐或权利要求16所述的药物组合物。
  19. 根据权利要求18所述的方法，其特征在于，所述治疗和/或预防的疾病为由KRASG12D介导的疾病，所述的癌症或疾病选自乳腺癌、多发性骨髓瘤、膀胱癌、子宫内膜癌、胃癌、宫颈癌、横纹肌肉瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、多形性肺癌、卵巢癌、食管癌、黑色素瘤、结肠直肠癌、肝细胞瘤、头颈部肿瘤、肝胆管细胞癌、骨髓增生异常综合征、恶性胶质瘤、前列腺癌、甲状腺癌、徐旺氏细胞瘤、肺鳞状细胞癌、苔藓样角化病、滑膜肉瘤、皮肤癌、胰腺癌、睾丸癌或脂肪肉瘤。
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