EA017279B1 - БИВАЛЕНТНЫЕ МИМЕТИКИ Smac И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к бивалентным миметикам Smac, которые функционируют в качестве ингибиторов ингибитора белков апоптоза. Изобретение также относится к применению этих миметиков для индукции апоптической гибели клеток и для сенсибилизации клеток к индукторам апоптоза.

Description

Предшествующий уровень техники

В заявке на данное изобретение заявлен приоритет по отношению к временной патентной заявке США, серийный номер 60/798018, поданной 05.05.2006, и к временной патентной заявке США, серийный номер 60/923415, поданной 04.13.2007, каждая из которых включена в описание путем ссылки в полном объеме.

Область изобретения

Данное изобретение относится к области медицинской химии. В частности, изобретение относится к бивалентным миметикам Ν-концевой последовательности Зтас, которые функционируют в качестве ингибиторов ингибитора белков апоптоза. Изобретение также относится к применению этих миметиков для индукции или сенсибилизации клетки к индукции апоптической гибели клеток.

Уровень техники

Агрессивный фенотип раковой клетки является результатом ряда генетических и эпигенетических изменений, приводящих к отмене регуляции внутриклеточных биохимических путей передачи сигнала (Ропбег, №щ.1гс. 411:336 (2001)). Общим для всех раковых клеток, однако, является их неспособность к выполнению апоптической программы, и отсутствие правильного апоптоза вследствие дефектов в нормальных апоптических механизмах является отличительной чертой рака (Ьо^е е! а1., Сагсшодепез1з. 21:485 (2000)). Большая часть современных противораковых терапий, включая химиотерапевтические агенты, облучение и иммунотерапию, действуют, косвенно вызывая апоптоз в раковых клетках. Неспособность раковых клеток к выполнению апоптической программы вследствие дефектов в нормальных апоптических механизмах, таким образом, часто связана с увеличением резистентности к химиотерапии, облучению или апоптозу, индуцированному иммунотерапией. Первичная или приобретенная резистентность рака различного происхождения у человека к современным протоколам лечения вследствие дефектов апоптоза является главной проблемой в современной терапии рака (йо\\'е е! а1., Сагсшодепез1з. 21:485 (2000); №сйо1зоп, №Щ.1ге. 407:810 (2000)). Соответственно, усилия в настоящее время и в будущем по созданию и развитию новых молекулярных целевых противораковых терапий для улучшения жизнеспособности и качества жизни пациентов с раком должны включать стратегии, которые специфично направлены против резистентности раковой клетки к апоптозу. В этом отношении направленность на критические отрицательные регуляторы, которые играют центральную роль в прямом ингибировании апоптоза в раковых клетках, представляет весьма многообещающую терапевтическую стратегию для разработки новых противораковых лекарственных средств.

Идентифицировано два класса центральных отрицательных регуляторов апоптоза. Первый класс регуляторов составляет семейство белков Вс1-2, примерами которых являются две эффективные антиапоптические молекулы, белки Вс1-2 и Вс1-ХЬ (Абатз е! а1., Заепсе. 281:1322 (1998); Вееб, Αάν. Рйагтасо1. 47:501 (1997); Вееб е! а1., 1. Се11. Вюсйет. 60:23 (1996)). Широко рассмотрены терапевтические стратегии направленной доставки Вс1-2 и Вс1-ХЬ при раке для восстановления чувствительности раковых клеток и преодоления резистентности раковых клеток к апоптозу (Абатз е! а1., Зс1епсе. 281:1322 (1998); Вееб, Α6ν. Рйагтасо1. 41:501 (1997); Вееб е! а1., 1. Се11. Вюсйет. 60:23 (1996)). Несколько лабораторий занято проектированием небольших молекул - ингибиторов Вс1-2 и Вс1-ХЬ.

Второй класс центральных отрицательных регуляторов апоптоза составляют ингибиторы белков апоптоза (1АР) (^еνе^аиx е! а1., Оепез ^еν. 13:239 (1999); Закезеп е! а1., Ν;·ιΙ. Веν. Мо1. Се11. Вю1. 3:401 (2002)). Этот класс включает белки, такие как Х1АР, с1АР-1, с1АР-2, МБ-1АР, Н1АР, К1АР, ТЗ1АР, ΝΑΙΓ. сурвивин, ливин, ШР-2, аполлон и ВВиСЕ. Белки 1АР эффективно подавляют апоптоз, индуцированный целым рядом апоптических стимулов в раковых клетках, включая химиотерапевтические агенты, облучение и иммунотерапию.

Х-связанный 1АР (Х1АР) является самым эффективным ингибитором при подавлении апоптоза среди всех представителей 1АР (Но1с1к е! а1., Арор!оз1з 6:253 (2001); ЬаСаззе е! а1., Опсодепе 77:3247 (1998); Такайазй1 е! а1., 1. Вю1. Сйет. 273:7787 (1998); ^еνе^аиx е! а1., №щ.1ге. 388:300 (1997); Зип е! а1., №щ.1ге. 401:818 (1999); 1)е\егаи.\ е! а1., ЕМВО 1. 18:5242 (1999); АззеНп е! а1., Сапсег Вез. 61:1862 (2001)). Х1АР играет ключевую роль в отрицательной регуляции апоптоза в обоих биохимических путях как опосредованном рецептором смерти, так и опосредованном митохондриями. Х1АР функционирует как эффективный эндогенный ингибитор апоптоза путем непосредственного связывания и сильного ингибирования трех представителей семейства ферментов каспаз: каспазы-3, -7 и -9 (ТакайазЫ е! а1., 1. Вю1 Сйет. 273:7787 (1998); ^еνе^аиx е! а1., №щ.1ге. 388:300 (1997); Зип е! а1., №щ.1ге. 401:818 (1999); ^еνе^аиx е! а1., ЕМВО 1. 18:5242 (1999); АззеБп е! а1., Сапсег Вез. 61:1862 (2001); В1еб1 е! а1., Се11. 104:791 (2001); Сйа е! а1. Се11. 104:169 (2001); Ниапд е! а1., Се11. 704:781 (2001)). Х1АР содержит три повторяющихся домена бакуловирусного ингибитора апоптоза (В1В), а также С-концевой ΒΙΝΟ-домен. Избирательной мишенью третьего домена В1В (В1В3) является каспаза-9, инициаторная каспаза в митохондриальном биохимическом пути, тогда как область линкера между В1В1 и В1В2 ингибирует и каспазу-3, и каспазу-7 (ЗаВезеп е! а1., ΝηΙ. Веν. Мо1. Се11. Вю1. 3:401 (2002)). В то время как связывание с Х1АР предотвращает активацию всех трех каспаз, очевидно, что взаимодействие с каспазой-9 является наиболее критичным для ингибирования ими апоптоза (Екей е! а1., 1. Се11. Вю1. 152:483 (2001); ЗппВазЫа е! а1., №Щ.1ге. 470:112 (2001)). Поскольку Х1АР блокирует апоптоз в эффекторной фазе по ходу транскрипции, в точке, где сходятся

- 1 017279 многочисленные пути передачи сигналов, для преодоления резистентности раковых клеток к апоптозу особенно эффективными могут оказаться стратегии, нацеленные на ΧΙΑΡ (Ри1йа е! а1., №Шге. Мей. 8:808 (2002); Аги! е! а1., 1. Вю1. СИет. 277:44236 (2002)).

Хотя точная роль ΧΙΑΡ при каждом типе рака далека от полного понимания, появляются свидетельства, указывающие на то, что имеет место обширная гиперэкспрессия ΧΙΑΡ при многих типах рака и может играть важную роль в резистентности раковых клеток к ряду современных терапевтических агентов (Но1с1к е! а1., Αρορΐοκίκ 6:253 (2001); ЬаСакке е! а1., Опсодепе. 77:3247 (1998)).

Обнаружено, что белок ΧΙΑΡ экспрессируется в большинстве линий раковых клеток Νί,Ί 60 человека (Татт е! а1., С1ш. Сапсег Век. 6:1796 (2000)). Анализ образцов опухоли у 78 ранее не подвергавшихся лечению пациентов показал, что пациенты с более низкими уровнями ΧΙΑΡ имели значительно более длительный срок жизни (Татт е! а1., С1ш. Сапсег Век. 6:1796 (2000)). Обнаружено, что ΧΙΑΡ экспрессируется при злокачественной глиоме человека (^адепкпесй! е! а1., Се11. Эеа111 ЭТГег. 6:370 (1999); Ри1йа е! а1., №!иге. Мей. 8:808 (2002)). Обнаружено, что ΧΙΑΡ экспрессируется в раковых клетках простаты человека и блокирует апоптоз, обусловленный лигандом Аро2/фактором некроза опухоли, индуцирующий опосредованный лигандом апоптоз раковых клеток простаты в присутствии митохондриальной активации (МсЕ1епу е! а1., Егок1а1е 51:133 (2002); Ν§ е! а1., Мо1 Сапсег Тйег. 1:1051 (2002)). Имеет место гиперэкспрессия ΧΙΑΡ при немелкоклеточном раке легкого (НМКРЛ) у пациентов, и он вовлечен в патогенез НМКРЛ (НоГтапп е! а1., 1. Сапсег Век. С1ш. Опсо1. 128:554 (2002)). Экспрессия ΧΙΑΡ и отсутствие понижающей регуляции ΧΙΑΡ при лечении цисплатином привели к резистентности к цисплатину при раке яичника человека (Ь1 е! а1. Епйосгшо1оду 142:310 (2001); СИепд е! а1. Эгид Век1к!. Ирйа!е. 5:131 (2002)). Взятые вместе, эти данные дают возможность предположить, что ΧΙΑΡ может играть важную роль в резистентности некоторых видов рака человека к современным терапевтическим агентам.

Апоптоз не является отдельным процессом, вероятнее, он вовлечен в ряд различных, иногда взаимосвязанных, путей передачи сигнала, приводящих к распаду клетки. Пути, участвующие в конкретной форме апоптоза, зависят от многих факторов, таких как поражение или поражения, которые инициируют процесс. Другие факторы включают активацию или гиперактивацию специфичных рецепторов, например активацию рецепторов смерти фактором некроза опухоли альфа (ΤΝΕα), лигандом индукции апоптоза, связанным с фактором некроза опухоли (ΤΒΑΙΕ или Αρο2^), или лигандом ΡΑ8. Другим определяющим фактором является тип вовлеченной клетки, поскольку для клеток так называемого типа Ι и типа ΙΙ после активации рецептора Рак или ΤΝΡα показаны различные пути передачи сигналов.

Показано, что ΤΒΑΙΕ ^ро2Ь) является селективным и эффективным индуктором апоптоза в раковых клетках (но не в нормальных клетках) при связывании с любым из двух проапоптических рецепторов ΤΒΑΙΕ, ΤΒΑΙΕ-Β1 (или ΌΒ4) (Гап е! а1. 8с1епсе. 276:111 (1997)) или ΤΒΑΙΕ-Β2 (КЖЬЕВ или ΌΒ5) (\и е! а1., Νι!. Сепе!. 17:141-143 (1997); Ρап е! а1., 8с1епсе. 277:815 (1997); \\а1с/ак е! а1., ЕМВО 1. 16:5386 (1997)). Активация проапоптических рецепторов смерти посредством ΤΒΑΙΕ индуцирует образование сигнального комплекса, индуцирующего клеточную гибель (ΌΙ8ί.'). который состоит из рецептора ΡΑΌΌ в качестве адаптера (К1ксйке1 е! а1., ΙιηιηιιπίΙν 12:611 (2000); Киапд е! а1., 1. Вю1 СИет. 275:25065 (2000)) и каспазы-8 в качестве инициирующей каспазы. После образования ИЖС каспаза-8 претерпевает самостоятельный процессинг и активируется путем индукции при сближении (Мейета е! а1, ЕМВО 1. 16:2794 (1997); Миао е! а1., 1. Вю1. Сйет. 273:2926 (1998)).

ΤΒΑΙΕ вызвал значительный интерес в качестве потенциального терапевтического средства при лечении рака (Ргепсй е! а1., Ν;·ιΙ. Мей. 5:146 (1999)) в связи с его избирательной направленностью на раковые клетки, тогда как большинство нормальных клеток, по-видимому, является устойчивыми к ΤΒΑΙΕ (АкНкегиШ е! а1., 8с1епсе. 281:1305 (1998); \а№ак е! а1., №11. Мей. 5:157 (1999)). Доказано, что системное введение ΤΒΑΙΕ является безопасным и эффективным при лизисе ксенотрансплантатов опухолей молочной железы или ободочной кишки и при продлении продолжительности жизни мышей (\Уа1схак е! а1., №1. Мей. 5:157 (1999)). Хотя ΤΒΑΙΕ может специфично убивать многие типы раковых клеток, многие другие проявляют резистентность к ΤΒΑΙΕ (К1т е! а1., С1ш. Сапсег Век. 6:335 (2000); Ζΐκ-πιμ е! а1., Сапсег Век. 59:2747 (1999)). Кроме того, раковые клетки уничтожали путем применения антител (моноклональных или поликлональных), которые специфично распознают как ΤΒΑΙΕ-Β1, так и ΤΒΑΙΕ-Β2.

В качестве потенциальных факторов, ответственных за резистентность к ΤΒΑΙΕ, идентифицировано множество механизмов. Такие механизмы существуют на множестве уровней, включая рецепторный уровень, митохондриальный уровень, постмитохондриальный уровень и уровень ИЖС. Например, утрата экспрессии каспазы-8 (Τοΐ!ζ е! а1., №1. Мей. 6:529 (2000); СпГГйН е! а1., 1. Iттиηο1. 767:2833 (1998)) или высокая экспрессия клеточного ингибиторного белка РЫСЕ (сРР-ΙΡ) (К1т е! а1., С1ш. Сапсег Век. 6:335 (2000); ΖΙππίβ е! а1., Сапсег Век. 59:2747 (1999); Ка!аока е! а1., 1. Iттипο1. 767:3936 (1998)) делают раковые клетки устойчивыми к ΤΒΑΙΕ. УеН е! а1. показали, что сРЬЖ-дефицитные эмбриональные фибробласты мыши особенно чувствительны к рецептор-опосредованному апоптозу (УеН е! а1., ΙιηιηιιπίΙν. 72:533 (2000)). Известно несколько вариантов сплайсинга сРЬЖ, включая короткий вариант сплайсинга, сРЬЖ8, и более длинный вариант сплайсинга, сРЕЖ-Ь. Показано, что сРЬЖ-дефицитные эмбриональные фибробласты мыши становятся резистентными к ΤΒΑΙΕ-индуцированному апоптозу в результате опосредо

- 2 017279 ванной ретровирусом трансдукции сРЫР-8 (Βίη е! а1., РЕВ8 Ьей. 510:37 (2002)).

Хотя ТВАЕБ является потенциально многообещающим кандидатом для активации рецептора смерти, селективной для опухоли (т.е. он вызывает апоптоз преимущественно в опухолевых клетках, но не в нормальных тканях), многие раковые клетки являются резистентными к лекарствам, вызывающим апоптоз, как обсуждено выше. В результате для достижения терапевтического эффекта лечение такими лекарствами часто требует сопутствующего лечения облучением и/или цитотоксическими химическими соединениями. Однако как облучение, так и химиотерапия имеют значительные побочные эффекты, и, как правило, их избегают, если возможно.

Таким образом, существует необходимость в агенте, который может селективно и эффективно сенсибилизировать опухолевые клетки к селективным лекарственным средствам, вызывающим апоптоз, таким как ТВАЕБ или антитела к рецептору ТВА1Б, без такой же сенсибилизации окружающих нормальных клеток. Такой агент также был бы полезным для уменьшения или предотвращения резистентности к лекарству, обычно связанной с применением рецептор-опосредованных апоптических противораковых лекарств, таким образом улучшая их эффективность и устраняя потребность в комбинированных терапиях.

Недавно был идентифицирован 8шас/Э1АВБО (второй активатор каспаз митохондриального происхождения) в виде белка, высвобождаемого из митохондрий в цитозоль в ответ на апоптические стимулы (ВибШагйщ е! а1., Аппи. Веу. Се11. Эеу. Βίο1. 15:269 (1999); Эи е! а1., Се11. 102:33 (2000)). 8тас синтезируется с Ν-концевой последовательностью, направленной на митохондрии, которая претерпевает протеолитическое отщепление во время созревания до зрелого полипептида. Показано, что 8тас непосредственно взаимодействует с Х1АР и другими 1АР и прерывает их связывание с каспазами и облегчает активацию каспаз. 8тас является эффективным эндогенным ингибитором Х1АР.

Недавно с высокой разрешающей способностью определены экспериментальные трехмерные (3Ό) структуры домена В1В3 Х1АР в комплексе с белком 8тас и пептидом (8ип е! а1., 1. Βίο1. СНет. 275:36152 (2000); Аи е! а1., №1иге. 408:1008 (2000)) (фиг. 1). Ν-концевой тетрапептид 8тас (А1а-Уа1-Рго-11е или АУР1 (8ЕО Ш ΝΟ: 1)) распознает поверхностную бороздку на домене В1В3 Х1АР путем образования нескольких водородных связей и ван-дер-ваальсовых взаимодействий. Также показано, что во взаимодействие между В1В3 и каспазой-9 вовлечено четыре остатка (А1а-ТНг-Рго-РНе или АТРР (8ЕО Ш ΝΟ: 2)) на аминоконце малой субъединицы каспазы-9 с такой же поверхностной бороздкой на домене В1В3. В нескольких недавних исследованиях убедительно продемонстрировано, что 8тас стимулирует каталитическую активность каспазы-9 путем конкурентного взаимодействия с каспазой-9 за ту же связывающую бороздку на поверхности домена В1В3 (Екей е! а1., 1. Се11. Βίο1. 152:483 (2001); 8πηίν;·ΐ5ΐι1;·ι е! а1., №1Шге. 410:112 (2001)).

В отличие от большинства белок-белковых взаимодействий, взаимодействие 8тас-Х1АР опосредовано только четырьмя аминокислотными остатками на белке 8тас и хорошо выраженной бороздкой на поверхности домена В1В3 Х1АР. Величина Κ,ι для 8тас пептида АУР1 (8ЕО Ш ΝΟ:1) относительно Х1АР (К,|=0.4 мкМ) является, по существу, такой же, как и для зрелого белка 8тас (К,|=0.42 мкМ). Этот хорошо выраженный сайт взаимодействия является идеальным для конструирования непептидных малых молекул, подобных лекарству, которые имитируют связывание 8тас с Х1АР.

Проницаемый для клетки 8тас пептид, который состоит из первых четырех аминокислотных остатков (АУР1 (8ЕО Ю ΝΟ: 1)) Ν-конца 8тас, связанный с пептидом-носителем для облегчения внутриклеточной доставки, как недавно было показано, сенсибилизирует различные опухолевые клетки ίη νί!το и клетки злокачественной глиомы ίη νίνο к апоптозу, индуцированному лигированием рецептора смерти или цитотоксическими лекарственными средствами (Ри1ба е! а1., №Шге. Меб. 8:808 (2002)). Что важно, этот 8тас пептид сильно увеличивал противоопухолевую активность Аρο2^/ТВАI^ в модели ксенотрансплантата внутричерепной злокачественной глиомы ίη νίνο. Полное уничтожение установленных опухолей и выживание мышей были достигнуты только после комбинированной обработки пептидами 8тас и Аρο2^/ТВАI^. Важно отметить, что 8тас пептид не обладает обнаружимой токсичностью по отношению к нормальной ткани головного мозга.

Второе недавнее независимое исследование также показало, что пептиды, состоящие из первых четырех-восьми остатков аминокислоты Ν-конца 8тас, связанные с другим пептидом-носителем, усиливали индукцию апоптоза и долговременные антипролиферативные эффекты разнообразных химиотерапевтических лекарственных средств, включая паклитаксел, этопозид, 8Ν-38 и доксорубицин в МСР-7 и других клеточных линиях рака молочной железы человека (Ат! е! а1., 1. Βίο1. СНет. 277:44236 (2002)). Это исследование окончательно показало, что Х1АР и с1АР-1 представляют собой первичные молекулярные мишени для этих пептидов в клетках.

Третье исследование показало, что пептид 8тас из первых семи остатков Ν-конца, связанный с полиаргинином, восстанавливал апоптосомную активность и вызывал обратное развитие резистентности к апоптозу в клетках Н460 немелкоклеточного рака легкого (У;шд е! а1., Сапсег Век. 63:831 (2003)). Было показано, что Х1АР является ответственным за дефект в апоптосомной активности и подавление активности каспазы в клетках Н460. При использовании в комбинации с химиотерапией проницаемый для клетки пептид 8тас вызывал замедление роста опухоли ίη νίνο при незначительной токсичности для мышей. В своей совокупности эти последние независимые исследования дают веские основания предпо

- 3 017279 дожить, что эффективный, стабильный, проницаемый для клетки миметик 8тас может обладать большим терапевтическим потенциалом при лечении рака молочной железы человека и других типов рака.

Ингибиторы на основе пептидов являются полезными инструментами для объяснения антиапоптической функции ΙΑΡ и роли ΙΑΡ в ответе раковых клеток на химиотерапевтические агенты. Но ингибиторы на основе пептидов обычно имеют ограничения, свойственные им как потенциально полезным терапевтическим агентам. Эти ограничения включают их слабую проницаемость в клетки и слабую стабильность ίη νίνο. Действительно, в этих трех опубликованных исследованиях с использованием пептидных ингибиторов на основе 8тас эти пептиды должны были быть гибридизованы с пептидами-носителями, чтобы сделать их относительно проницаемыми в клетку.

В опубликованной заявке США № 2005/0197403 раскрыты димерные миметические соединения 8тас формулы I

где В¹ и К.¹ выбраны из атома водорода, возможно замещенного метила и гидроксила;

В² и В² выбраны из возможно замещенного метила и возможно замещенного этила;

В³ и В³' выбраны из СН₂, ΝΗ, О и 8;

В⁴ и В⁴' выбраны из СН и Ν;

В⁵-В⁸ и В⁵ -В⁸ выбраны из атома водорода, возможно гетероалкила, возможно замещенного алкила, возможно гетероалкенила, возможно замещенного алкенила, возможно гетероалкинила, возможно заме щенного алкинила, возможно гетероарила, возможно замещенного арила;

Ь представляет собой линкер, ковалентно связывающий В², В⁵, В⁶ или В⁷ с В², В⁵, В⁶ или В⁷, или их фармацевтически приемлемая соль.

Чтобы преодолеть ограничения, свойственные ингибиторам на основе пептидов, настоящее изобретение включает конструирование бивалентных конформационно фиксированных миметиков 8тас.

Краткое изложение сущности изобретения

Общепринято, что неспособность раковых клеток или их поддерживающих клеток подвергаться апоптозу в ответ на генетические повреждения или воздействие индукторов апоптоза (например, противораковых агентов и облучения) является главным фактором в начальной стадии и прогрессировании рака. Полагают, что индукция апоптоза в раковых клетках или их поддерживающих клетках (например, в неоваскулярных клетках в сосудистой сети опухоли) является универсальным механизмом действия практически для всех эффективных противораковых терапевтических лекарственных средств или лучевых терапий, имеющихся в настоящее время в продаже или в практике. Одной из причин неспособности клетки подвергаться апоптозу является повышенная экспрессия и аккумуляция ΙΑΡ.

В настоящем изобретении рассмотрено, что воздействие на животных, страдающих раком или другими гиперпролиферативными расстройствами или заболеваниями, связанными с нарушением регуляции апоптоза, терапевтически эффективных количеств лекарственного средства(средств) (например, малых молекул), которые ингибируют функцию(и) ΙΑΡ, полностью уничтожает больные клетки или поддерживающие клетки (те клетки, длительное выживание которых зависит от гиперактивности или гиперэкспрессии ΙΑΡ) и/или делает такие клетки как популяцию более восприимчивыми к активности терапевтическими противораковых лекарственных средств или лучевых терапий, индуцирующей клеточную гибель. В настоящем изобретении рассмотрено, что ингибиторы ΙΑΡ соответствуют неудовлетворенной потребности в лечении разнообразных типов рака либо при введении в качестве монотерапии, чтобы вызвать апоптоз в раковых клетках, зависимых от функции ΙΑΡ, либо при введении во временном взаимо отношении с другими терапевтическими противораковыми лекарственными средствами или лучевыми терапиями, индуцирующими клеточную гибель, чтобы сделать большую долю раковых клеток или под держивающих клеток восприимчивыми к выполнению программы апоптоза по сравнению с соответствующей долей клеток у животного, подвергающегося лечению только противораковым терапевтическим лекарственным препаратом или только лучевой терапией.

- 4 017279

В определенных воплощениях изобретения комбинированное лечение животных терапевтически эффективным количеством соединения по настоящему изобретению и курсом противоракового агента или облучения дает больший ответ опухоли и клиническую пользу у таких животных по сравнению с животными, которые подвергались лечению только этим соединением или только одними противораковыми лекарственными средствами/облучением. Другими словами, поскольку соединения понижают апоптический порог всех клеток, которые экспрессируют ΙΑΡ, увеличивается доля клеток, которые успешно выполняют программу апоптоз в ответ на индуцирующую апоптоз активность противораковых лекарственных средств/облучения. С другой стороны, соединения по настоящему изобретению можно применять, чтобы дать возможность введения более низкой и поэтому менее токсичной и более переносимой дозы противоракового агента и/или облучения, чтобы давать такой же ответ опухоли/клиническую пользу, как и при общепринятой дозе одного противоракового агента/облучения. Поскольку дозы для всех одобренных противораковых лекарственных средств и лучевой терапии известны, в настоящем изобретении рассмотрены различные их комбинации с соединениями по настоящему изобретению. Кроме того, поскольку соединения по настоящему изобретению действуют, по меньшей мере частично, посредством ингибирования ΙΑΡ, может оказаться, что воздействие терапевтически эффективных количеств соединений на раковые клетки и поддерживающие клетки может быть временно связано таким образом, чтобы совпадать с попытками клеток выполнить программу апоптоза в ответ на противораковый агент или лучевую терапию. Таким образом, в некоторых воплощениях введение композиций по настоящему изобретению при определенной временной взаимосвязи обеспечивает особенно эффективную терапевтическую практику.

Настоящее изобретение относится к миметикам 8шае, которые полезны для ингибирования активности белков ΙΑΡ и увеличения чувствительности клеток к индукторам апоптоза. В одном конкретном

где А₂ и А₂' независимо выбраны из группы, состоящей из атома водорода и С_1-3алкила, который является незамещенным или замещен одним из следующего: ОН или С(О)С_1-3алкил;

X и X' независимо представляют собой С_1-3алкил, который является незамещенным или замещен одним индолом;

и

Ώ и Ώ' независимо выбраны из группы, состоящей из

и и и' независимо выбраны из группы, состоящей из Ν..ΗΖ, и ,

Ζ представляет собой линкер, ковалентно связывающий один из Ώ и и с одним из Ώ' и и', выбранный из группы, состоящей из

- 5 017279

Настоящее изобретение относится к соединениям, представленным формулой II, которые являются ингибиторами белков ΙΑΡ. Изобретение относится к применению, если соединения по изобретению вызывают апоптоз в клетках. Изобретение также относится к применению соединений по изобретению для сенсибилизации клеток к индукторам апоптоза. Соединения полезны для лечения, облегчения или предупреждения расстройств, чувствительных к индукции апоптической гибели клетки, например рас

- 6 017279 стройств, характеризующихся нарушением регуляции апоптоза, включая гиперпролиферативные заболевания, такие как рак. В определенных воплощениях соединения можно применять для лечения, облегчения или предупреждения рака, который характеризуется резистентностью к противораковым терапиям (например, тех, которые являются химиорезистентными, радиационно-резистентными, гормональнорезистентными и т.п.). В других воплощениях соединения можно применять для лечения гиперпролиферативных заболеваний, характеризующихся гиперэкспрессией ΙΑΡ.

В настоящем изобретении предложены фармацевтические композиции, содержащие соединение формулы ΙΙ в терапевтически эффективном количестве, чтобы вызвать апоптоз в клетках или сенсибилизировать клетки к индукторам апоптоза.

В изобретении дополнительно предложены наборы, включающие соединение формулы II и инструкции по введению соединения животному. Эти наборы могут возможно содержать другие терапевтические агенты, например противораковые агенты или агенты модуляции апоптоза.

Краткое описание графических материалов

На фиг. 1 показано конкурентное связывание миметиков 8шае с белком ΧΙΑΡ ΒΙΒ3.

На фиг. 2 показано ингибирование роста клеток в клетках ΜΌΑ-ΜΒ-231, МАМЬЕ-ЗМ, 8К-ОУ-3 и ОУСАВ-4 под действием 8Н-164.

На фиг. 3 показана индукция клеточной гибели в клетках ΜΌΑ-ΜΒ-231, МАМЬЕ-3М и ОУСАВ-4 под действием 8Н-164.

На фиг. 4А-4В показано ингибирование роста клеток в клетках ΜΌΑ-ΜΒ-231 (Α), ΜΌΑ-ΜΒ-453 (Б) и РС-3 (В) под действием 8Н-164 в комбинации с ΤΚΛΙΕ

На фиг. 5 показано ингибирование роста клеток в клетках ΜΌΑ-ΜΒ-231 под действием 8Н-164 в комбинации с цисплатином или митоксантроном.

На фиг. 6 показана индукция апоптоза под действием 8Н-164 в клеточной линии ΜΌΑ-ΜΒ-231 рака молочной железы.

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение относится к бивалентным конформационно фиксированным соединениям, представленным формулой II, которые являются миметиками 8шае и функционируют как ингибиторы ΙΑΡ. Эти соединения сенсибилизируют клетки к индукторам апоптоза и в некоторых случаях непосредственно вызывают апоптоз, ингибируя IΑΡ. Следовательно, изобретение относится к способам сенсибилизации клеток к индукторам апоптоза и к способам индукции апоптоза в клетках, при которых клетки приводят в контакт только с соединениями формулы II или в комбинации с индуктором апоптоза. Кроме того, изобретение относится к способам лечения, облегчения или предупреждения расстройств у животного, которые являются восприимчивыми к индукции апоптоза, при которых животному вводят соединение формулы II и индуктор апоптоза. Такие расстройства включают расстройства, характеризующиеся нарушением регуляции апоптоза, а также расстройства, характеризующиеся гиперэкспрессией IΑΡ.

Термин белки IΑΡ, используемый здесь, относится к любому известному представителю семейства ΜΡ (ингибитора белков апоптоза), включающего, но не ограниченного ими, XIΑΡ, ^ΑΡΗ, сIΑΡ-2, ΜΌΠΑΡ, НIΑΡ, ΤΜΑΡ, ΗΑΡ, ΝΑΦ, сурвивин, ливин, ΒΡ-2, аполлон и ΒΚυΟΈ.

Термин гиперэкспрессия IΛΡ, используемый здесь, относится к повышенному уровню (например, аберрантному уровню) иРНК, кодирующих белок(белки) IΑΡ и/или к повышенным уровням белка(белков) IΑΡ в клетках по сравнению с подобными соответствующими непатологическими клетками, экспрессирующими базальные уровни иРНК, кодирующих белки IΑΡ, или имеющими базальные уровни белков IΑΡ. Способы определения уровней иРНК, кодирующих белки IΑΡ, или уровней белков IΑΡ в клетке включают, но не ограничиваются ими, Вестерн-блоттинг с использованием антител белков IΑΡ, иммуногистохимические методы, а также методы амплификации нуклеиновой кислоты или прямого обнаружения РНК. Столь же важным, как и определение абсолютного уровня белков IΑΡ в клетках, должно быть определение того, что в них имеет место гиперэкспрессия белков IΑΡ, а также уровень белков IΑΡ по отношению к другим проапоптическим сигнальным молекулам (например, проапоптическим белкам семейства Βο1-2) в таких клетках. Когда баланс этих двух параметров таков, что если бы это не относилось к уровням белков IΑΡ, проапоптических, сигнальных молекул было бы достаточно, чтобы заставить клетки выполнить программу апоптоза и погибнуть, то указанные клетки должны быть зависимыми от белков IΑΡ для своего выживания. В таких клетках воздействие ингибирующего эффективного количества ингибитора белка IΑΡ должно быть достаточно, чтобы заставить клетки выполнить программу апоптоза и погибнуть. Таким образом, термин гиперэкспрессия белка IΑΡ также относится к клеткам, которые из-за относительных уровней проапоптических сигналов и антиапоптических сигналов подвергаются апоптозу в ответ на ингибирующие эффективные количества соединений, которые ингибируют функцию белков IΑΡ.

Термины противораковый агент и противораковое лекарственное средство, используемые здесь, относятся к любым терапевтическим агентам (например, химиотерапевтическим соединениям и/или молекулярным терапевтическим соединениям), лучевым терапиям или хирургическим вмешательствам, применяемым при лечении гиперпролиферативных заболеваний, таких как рак (например, у млекопитающих).

- 7 017279

Термин пролекарство, используемый здесь, относится к фармакологически неактивному производному молекулы исходного лекарства, которое требует биотрансформации (например, самопроизвольной или ферментативной) в целевой физиологической системе для высвобождения или преобразования (например, ферментативного, физиологического, механического, электромагнитного) пролекарства в активное лекарственное средство.

Пролекарства разрабатывают для решения проблем, связанных со стабильностью, токсичностью, неспецифичностью или ограниченной биодоступностью. Примерные пролекарства включают непосредственно молекулу активного препарата и химическую маскирующую группу (например, группу, которая обратимо подавляет активность лекарства). Некоторые предпочтительные пролекарства представляют собой вариации или производные соединений, у которых есть группы, отщепляемые в условиях метаболизма. Типичные пролекарства становятся фармацевтически активными ίη νίνο или ίη νίΐτο, где они подвергаются сольволизу в физиологических условиях или подвергаются ферментативному расщеплению или другому биохимическому преобразованию (например, фосфорилированию, гидрогенизации, дегидрогенизации, гликозилированию). Пролекарства часто предоставляют преимущества растворимости, тканевой совместимости или замедленного высвобождения в организме млекопитающего. (См., например, ВипйдагТ Оемдп οί Ргойтидк, р. 7-9, 21-24, ЕРсуюг. АпъЮгйаш (1985); а также 81кеттап, ТПе Огдашс С’ЕетМгу οί Эгид ЭсЧдп апй Эгид Άεΐίοη, р. 352-401, Асайетк Ргекк, 8ап О1едо, СА (1992)). Обычные пролекарства включают производные кислот, такие как сложные эфиры, получаемые взаимодействием исходных кислот с подходящим спиртом (например, низшим алканолом), амиды, получаемые взаимодействием исходного кислого соединения с амином или основными группами, которые реагируют с образованием ацилированного производного основания (например, низшего алкиламида).

Термин фармацевтически приемлемая соль, используемый здесь, относится к любой соли (например, полученной взаимодействием с кислотой или основанием) соединения по настоящему изобретению, которое физиологически переносится целевым животным (например, млекопитающим). Соли соединений по настоящему изобретению можно получать из неорганических или органических кислот и оснований. Примеры кислот включают, но не ограничены ими, соляную, бромисто-водородную, серную, азотную, хлорную, фумаровую, малеиновую, фосфорную, гликолевую, молочную, салициловую, янтарную, паратолуолсульфоновую, винную, уксусную, лимонную, метансульфоновую, этансульфоновую, муравьиную, бензойную, малоновую, сульфоновую, нафталин-2-сульфоновую, бензолсульфоновую кислоты и т.п. Другие кислоты, такие как щавелевая кислота, хотя сами и не являются фармацевтически приемлемыми, можно применять при получении солей, полезных в качестве промежуточных соединений при получении соединений по изобретению и их фармацевтически приемлемых солей присоединения кислоты.

Примеры оснований включают, но не ограничены ими, гидроксиды щелочного металла (например, натрия), гидроксиды щёлочно-земельного металла (например, магния), аммиак и соединения формулы Νν₄ ⁺, где V представляет собой С1_-4алкил, и т.п.

Примеры солей включают, но не ограничены ими, ацетат, адипинат, альгинат, аспартат, бензоат, бензолсульфонат, бисульфат, бутират, цитрат, камфорат, камфорсульфонат, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, этансульфонат, фумарат, глюкогептаноат, глицерофосфат, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, хлорид, бромид, йодид, 2-гидроксиэтансульфонат, лактат, малеат, мезилат, метансульфонат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, оксалат, пальмоат, пектинат, персульфат, фенилпропионат, пикрат, пивалат, пропионат, сукцинат, тартрат, тиоцианат, тозилат, ундеканоат и т. п. Другие примеры солей включают анионы соединений по настоящему изобретению, объединенные с подходящим катионом, например Να', ΝΗ₄ ⁺ и Ν\ν₄' (где V представляет собой С1_-4алкильную группу) и т.п. Соли соединений по настоящему изобретению рассмотрены как фармацевтически приемлемые для терапевтического применения. Однако соли кислот и оснований, которые не являются фармацевтически приемлемыми, могут также найти применение, например, при получении или очистке фармацевтически приемлемого соединения.

Термин терапевтически эффективное количество, используемый здесь, относится к такому количеству терапевтического агента, которого достаточно для того, чтобы привести в результате к облегчению одного или более чем одного симптома расстройства, либо к предупреждению прогрессирования расстройства, либо к вызову регрессии симптомов расстройства. Например, относительно лечения рака, терапевтически эффективное количество предпочтительно относится к количеству терапевтического агента, которое уменьшает скорость роста опухоли, уменьшает массу опухоли, сокращает число метастазов, увеличивает время до прогрессирования опухоли или увеличивает продолжительность жизни по меньшей мере на 5%, предпочтительно по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 55%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 65%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 100%.

- 8 017279

Термины сенсибилизировать и сенсибилизирующий, используемые здесь, относятся к тому, как путем введения первого агента (например, соединения формулы II) сделать животное или клетки животного более восприимчивыми или более чувствительными к биологическим эффектам (например, стимуляции или замедлению аспекта клеточной функции, включая, но не ограничиваясь ими, деление клетки, рост клетки, пролиферацию, инвазию, ангиогенез или апоптоз) второго агента. Сенсибилизирующий эффект первого агента на клетку-мишень может быть измерен как различие в предполагаемом биологическом эффекте (например, стимуляции или замедлении аспекта клеточной функции, включая, но не ограничиваясь ими, рост клетки, пролиферацию, инвазию, ангиогенез или апоптоз), наблюдаемом при введении второго агента с введением и без введения первого агента. Ответ сенсибилизированной клетки можно увеличить по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 100%, по меньшей мере на 150%, по меньшей мере на 200%, по меньшей мере на 250%, по меньшей мере на 300%, по меньшей мере на 350%, по меньшей мере на 400%, по меньшей мере на 450% или по меньшей мере на 500% относительно ответа в отсутствие первого агента.

Термин нарушение регуляции апоптоза, используемый здесь, относится к любой аберрации в способности (например, предрасположенности) клетки претерпевать клеточную гибель посредством апоптоза. Нарушение регуляции апоптоза связано или вызвано множеством состояний, включающих, например, аутоиммунные расстройства (например, системную красную волчанку, ревматоидный артрит, заболевание трансплантат против хозяина, тяжелую миастению или синдром Шегрена), хронические воспалительные состояния (например, псориаз, астму или болезнь Крона), гиперпролиферативные расстройства (например, опухоли, лимфомы В- клеток или лимфомы Т-клеток), вирусные инфекции (например, герпес, папиллому или ВИЧ) и другие состояния, такие как остеоартрит и атеросклероз. Следует отметить, что, когда нарушение регуляции вызвано вирусной инфекцией или связано с ней, вирусная инфекция может быть обнаружима или не обнаружима в то время, когда имеет место или наблюдается нарушение регуляции. Таким образом, индуцированное вирусом нарушение регуляция может иметь место даже после исчезновения симптомов вирусной инфекции.

Термин гиперпролиферативное заболевание, используемый здесь, относится к любому состоянию, при котором локализованная популяция пролиферирующих клеток у животного не управляется обычными ограничениями нормального роста. Примеры гиперпролиферативных расстройств включают, но не ограничены ими, опухоли, новообразования, лимфомы и т.п. Новообразование называют доброкачественным, если оно не претерпевает инвазии или метастазов, и злокачественным, если оно претерпевает любое из них. Метастатическая клетка означает, что клетка может инвазировать и разрушать соседние структуры организма. Гиперплазия представляет собой форму клеточной пролиферации, включающую увеличение числа клеток в ткани или органе без значительного изменения в структуре или функции. Метаплазия представляет собой форму регулируемого роста клетки, при котором один тип полностью дифференцированных клеток заменяется другим типом дифференцированных клеток.

Патологический рост активированных лимфоидных клеток часто приводит в результате к аутоиммунному расстройству или хроническому воспалительному состоянию. Используемый здесь термин аутоиммунное расстройство относится к любому состоянию, при котором организм продуцирует антитела или иммунные клетки, которые распознают молекулы, клетки или ткани собственного организма. Не ограничивающие примеры аутоиммунных расстройств включают аутоиммунную гемолитическую анемию, аутоиммунный гепатит, болезнь Бергера или !§А нефропатию, глютеновую энтеропатию, синдром хронической усталости, болезнь Крона, дерматомиозит, фибромиалгию, заболевание трансплантат против хозяина, диффузный токсический зоб, тиреоидит Хасимото, идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру, красный плоский лишай, рассеянный склероз, тяжелую миастению, псориаз, ревматизм, ревматоидный артрит, склеродерму, синдром Шегрена, системную красную волчанку, диабет 1 типа, неспецифический язвенный колит, витилиго и т.п.

Термин новообразование, используемый здесь, относится к любому аномальному росту клеток, являющихся либо доброкачественными (нераковыми), либо злокачественными (раковыми).

Термин противоопухолевый агент, используемый здесь, относится к любому соединению, которое замедляет пролиферацию, рост или распространение целевого (например, злокачественного) новообразования.

Термины предупреждать, предупреждающий и предупреждение, используемые здесь, относятся к уменьшению возникновения патологических клеток (например, гиперпролиферативных или опухолевых клеток) у животного. Предупреждение может быть полным, например полное отсутствие патологических клеток у субъекта. Предупреждение также может быть частичным, так что возникновение патологических клеток у субъекта является меньшим, чем то, которое произошло бы без настоящего изобретения.

- 9 017279

Термин агенты, модулирующие апоптоз, используемый здесь, относится к агентам, которые вовлечены в модуляцию (например, ингибирование, уменьшение, увеличение, стимуляцию) апоптоза. Примеры агентов, модулирующих апоптоз, включают белки, которые содержат домен смерти, такие как, но не ограниченные ими, Раз/СО95, ТКАМР, ΤΝΡ К1, ΌΚ1, ΌΚ2, ΌΚ3, ΌΚ4, ΌΚ5, ΌΚ6, ΓΆΌΌ и ΚΙΡ. Другие примеры агентов, модулирующих апоптоз, включают, но не ограничены ими, ТОТа, лиганд Раз, антитела к Раз/СО95 и другим рецепторам семейства ΤΝΡ, ТКА1Б (также известный как лиганд Аро2 или Аро2Т/ТКА1Б), агонисты (например, моноклональные или поликлональные агонистические антитела) ТКА1Б-К1 или ТКА1Б-К2, Вс1-2, р53, ВАХ, ΒΑΌ, А1<1, САЦ, ΡΙ3 киназу, ΡΡΙ и белки каспазы. Модулирующие агенты в широком смысле включают агонисты и антагонисты рецепторов семейства ΤNΡ и лиганды семейства ΊΝΡ. Агенты, модулирующие апоптоз, могут быть растворимыми или связанными с мембраной (например, лиганд или рецептор). Предпочтительные агенты, модулирующие апоптоз, являются индукторами апоптоза, такими как ΤNΡ или ΊΝΡ-связанный лиганд, в частности лиганд ТКАМР, лиганд Раз/СО95, лиганд 'ΓΝΡΚ-Ι или ТКА1Б.

Ингибиторы 1АР по настоящему изобретению представляют собой соединения, имеющие общую формулу II

где А₂ и А₂' независимо выбраны из группы, состоящей из атома водорода и С_1-3алкила, который является незамещенным или замещен одним из следующего: ОН или С(О)С_1-3алкил;

X и X' независимо представляют собой С_1-3алкил, который является незамещенным или замещен одним индолом;

и

Ό и Ό' независимо выбраны из группы, состоящей из и и и' независимо выбраны из группы, состоящей из ΝΗΖ

и

Ζ представляет собой линкер, ковалентно связывающий один из Ό и и с одним из Ό' и и', выбранный из группы, состоящей из

- 10 017279

В следующем воплощении Ζ связывает Ό с и'. Еще в одном воплощении Ζ связывает Ό с Ό'. Еще в одном воплощении Ζ связывает и с и'.

- 11 017279

В другом конкретном воплощении промежуточные соединения, пригодные для получения ΙΑΡ по настоящему изобретению, представляют собой соединения формулы XIII

где Ό представляет собой (СН_;)-Я_5с-(СН_;)_т:

и выбран из группы, состоящей из ΘίΒιι. -ОМе, -ОН и АНСНР1ь;

т равно 2 или 3;

К_5с выбран из группы, состоящей из ΝΗ и ЫСО₂СН₂Рй;

К₇ выбран из группы, состоящей из атома водорода, ООдВп и СОСН(К_7Ь)^К_7с)СО₂1Ви;

К₇ь представляет собой незамещенный С1_-3алкил;

К_7с представляет собой незамещенный С_1-3алкил.

Линкер используют для соединения двух соединений-миметиков 8тас в бивалентную структуру. Соединенные вместе, соединения-миметики 8тас могут быть одинаковыми или разными и могут представлять собой любое соединение-миметик 8тас, известное как связывающееся с ΙΑΡ и ингибирующее взаимодействие ΙΑΡ и каспаз. В одном воплощении миметики 8тас являются конформационно фиксированными. В другом воплощении миметики 8тас не содержат каких-либо природных аминокислот. В другом воплощении миметики 8тас не содержат каких-либо пептидных связей. Примеры известных соединений-миметиков 8тас, которые полезны в качестве исходных веществ в настоящем изобретении, включают приведенное ниже.

В публикации \УО 2005/069888 раскрыты соединения-пептидомиметики 8тас формулы VI

или их фармацевтически приемлемая соль или пролекарство, где К₁ представляет собой С_1-2алкил или С_1-2галогеноалкил;

К₂ представляет собой разветвленный или неразветвленный алкил, либо циклоалкил, либо замещенный или незамещенный арил, алкиларил, гетероарил или алкилгетероарил;

К₃ представляет собой разветвленный или неразветвленный алкил, либо циклоалкил, либо замещенный или незамещенный арил, алкиларил, гетероарил или алкилгетероарил;

Υ представляет собой (СН₂)_0-3, где один или более чем один атом углерода может быть замещен одним или более чем одним гетероатомом, выбранным из кислорода, серы и азота, и один или более чем один атом водорода в группах СН2 может быть замещен разветвленным или неразветвленным алкилом, либо циклическим алкилом, либо замещенным или незамещенным арилом, алкиларилом, гетероарилом или алкилгетероарилом; и

Ζ представляет собой СОРТН, СН2О, ΝΗΟ3, (СНДм, (СН2)1-зСОМН(СН2)0-з, (СН₂)1.з8(СН₂)<«, (ОД1^(СН2)0-3, (ОД1^СО(СН2)0-3, (СН2)1^8О2(СН2)0-3, (СН2)1^С(О^(СН2)0-3, (СΗ₂)_1-3NΗС(8)NΗ(СΗ₂)_0-3 или (СΗ₂)_1-3NNК'X(СΗ₂)_0-3, где К' представляет собой разветвленный или неразветвленный алкил, либо циклоалкил, либо замещенный или незамещенный арил, алкиларил, гетероарил или алкилгетероарил.

В публикации \УО 2005/069894 раскрыты миметики 8тас формулы VII

или их фармацевтически приемлемая соль или пролекарство, где К₁ представляет собой С_1-2алкил или С_1-2галогеноалкил;

К₂ представляет собой разветвленный или неразветвленный алкил, либо циклоалкил, либо замещенный или незамещенный арил, алкиларил, гетероарил или алкилгетероарил;

X представляет собой ΓΌΝΗ СН₂О, СΗ₂NΗ, СН₂8 или (СН₂)_1-3;

Υ₁ представляет собой (СН₂)_1-5, где один или более чем один атом углерода может быть замещен одним или более чем одним гетероатомом, выбранным из кислорода, серы и азота, и один или более чем один атом водорода в группах СН2 может быть замещен разветвленным или неразветвленным алкилом, либо циклоалкилом, либо замещенным или незамещенным арилом, алкиларилом, гетероарилом или алкилгетероарилом;

- 12 017279

Υ₂ представляет собой (СН₂)_1-5, где один или более чем один атом углерода может быть замещен одним или более чем одним гетероатомом, выбранным из кислорода, серы и азота, и один или более чем один атом водорода в группах СН₂ может быть замещен разветвленным или неразвегвпенным алкилом, либо циклоалкилом, либо замещенным или незамещенным арилом, алкиларилом, гетероарилом или алкилгетероарилом; и

Ζ представляет собой СОЫН, СН2О, \НС(), (ОДОм, (СН2)1.зСОЬИ(СН2)о-з, (СН2)1-з8(СН2)о-з, (СН2)1-зЖ(СН2)о-3, (СН2)1-зЖСО(СН2)о-3, (СН2)1-зЖ8О2(СН2)о-3, (СН2)1-зЖС(ОЖН(СН2)о-3, (СН2)1зЖС(8)№(СН2)о-з или (СН2)1-зЖ(СН2)о-з, где

К' представляет собой разветвленный или неразвегвленный алкил, либо циклоалкил, либо замещенный или незамещенный арил, алкиларил, гетероарил или алкилгетероарил.

В публикации \\О 2ооб/оЮ118 раскрыты миметики 8тас формулы VIII

или их фармацевтически приемлемая соль или пролекарство, где А представляет собой ΝΚ₁Κ₂ или \К₁К₂К_з;

Κι, К₂ и К_з представляют собой независимо атом водорода или возможно замещенную С_1-8алкильную, С_2-8алкенильную или С_2-8алкинильную группу, в которой один или более чем один атом углерода может быть замещен группой С=О, С=8 или гетероатомом, выбранным из О, 8 и Ν, и один или более чем один атом водорода в группах СН, СН2 или СНз может быть замещен атомом фтора, разветвленным или неразветвленным алкилом, либо циклоалкилом, либо замещенным или незамещенным арилом, алкиларилом, гетероарилом или алкилгетероарилом, либо ОК₄, 8К₄ или ΝΚ₄Κ₅;

К₄ и К₅ представляют собой независимо атом водорода или возможно замещенную алкильную С_1-4, алкенильную С_2-5 или алкинильную С_2-5 группу, в которой один или более чем один атом углерода может быть замещен гетероатомом, выбранным из О, 8 и N или возможно замещенной арильной, алкиларильной, гетероарильной или алкилгетероарильной группой; или любые две группы из К₁, К₂ и К_з, взятые вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклическую группу, в которой один или более чем один атом углерода может быть замещен группами С=О, С=8 или гетероатомом, выбранным из О, 8 и Ν, при условии, что гетероатом отделен от атома азота по меньшей мере двумя атомами углерода;

В представляет собой возможно замещенный С_1-4алкил, С_2-4алкенил или С_2-4алкинил, где один или более чем один атом водорода может быть замещен атомом фтора;

и представляет собой №ΝΑ С(О)О, С(8)О, С(8^Н, С(МН)ЫН или (СН₂)_1-5, где один или более чем один атом углерода может быть замещен гетероатомом, выбранным из О, 8 и Ν;

V и \ независимо представляют собой (СН₂)_1-5, где один или более чем один атом углерода может быть замещен группами С=О, С=8 или гетероатомом, выбранным из О, 8 и Ν, и один или более чем один атом водорода в группах СН2 может быть замещен разветвленным или неразветвленным алкилом, либо циклоалкилом, либо замещенным или незамещенным арилом, алкиларилом, гетероарилом или алкилгетероарилом, либо ОК₄, 8К₄ или ΝΚ₄Κ₅;

X представляет собой возможно замещенный С_1-18алкил, С_2-18алкенил, С_2-18алкинил, арил или гетероарил, где один или более чем один атом углерода может быть замещен группами С=О, С=8 или гетероатомом, выбранным из О, 8 и Ν, и один или более чем один атом водорода в группах СН, СН2 или СНз может быть замещен разветвленным или неразветвленным алкилом, либо цикпоалкилом, либо замещенным или незамещенным арилом, алкиларилом, гетероарилом или алкилгетероарилом, либо ОК4, 8К4 или ΝΚ4Κ5;

Υ представляет собой СН или Ν;

Ζ представляет собой СН₂, С=О, С=8, СН8К, СНОК или СНNΚ;

К представляет собой атом водорода или возможно замещенный С_1-4алкил, С_2-4алкенил или С2-4алкинил.

В опубликованной заявке США 2оо5/о2з4о42 раскрыты соединения согласно формуле IX

где К₁ представляет собой Н; алкильную С₁-С₄; алкенильную С₁-С₄; алкинильную С₁-С₄ или С_з-С1_о циклоалкильную группы, которые являются незамещенными или замещенными;

К₂ представляет собой Н; С1-С₄-алкил; С1-С₄-алкенил; С1-С₄-алкинил или С_з-С1_о-циклоалкил, которые являются незамещенными или замещенными;

К_з представляет собой Н; -СР_з; -С₂Р₅; С₁-С₄-алкил; С₁-С₄-алкенил; С₁-С₄-алкинил; -ίΉ₂-Ζ или К₂ и

- 1з 017279

В3 вместе с атомом азота образует гетероциклическое кольцо;

Ζ представляет собой Н; -ОН; Е; С1; -СН₃; -СЕ₃; -СН₂С1; -СН₂Е или -СН₂ОН;

В₄ представляет собой прямоцепочечный или разветвленный С₁-С₁₆-алкил; С₁-С₁₆-алкенил; С₁-С₁₆алкинил или С₃-С₁₀-циклоалкил; -(СН^й^ь -(СН₂)_0-6-арил и -(СН₂)_0-6-Не1; где алкильная, циклоалкильная и фенильная группы являются незамещенными или замещенными;

Ζ₁ представляет собой -^В^-С^-Ц-С^-алкил; 4(В₈)-С(О)-(СН₂)_1-6-С₃-С₇-циклоалкил; 4(В₈)С(О)-(СН2)0-6-фенил; 4(В8)-С(О)-(СН2)1-6-Не1; -С(О)4(В9)(Вю); -С(О)-О-С1-С^-алкил; -С(О)-О-(СН2)1-6С₃-С₇-циклоалкил; -С(О)-О-(СН₂)_1-6-фенил; -С(О)-О-(СН₂)_1-6-Не1; -О-С(О)-С₁-С₁₀-алкил; -О-С(О)-(СН₂)_1-6С₃-С₇-циклоалкил; -О-С(О)-(СН₂)_0-6-фенил; -О-С(О)-(СН₂)_1-6-Не1; где алкильная, циклоалкильная и фенильная группы являются незамещенными или замещенными;

Не! представляет собой 5-7-членное гетероциклическое кольцо, содержащее 1-4 гетероатома, выбранных из Ν, О и 8, или 8-12-членную конденсированную кольцевую систему, включающую по меньшей мере одно 5-7-членное гетероциклическое кольцо, содержащее 1, 2 или 3 гетероатома, выбранных из Ν, О и 8, где это гетероциклическое кольцо или конденсированная кольцевая система являются незамещенными или замещенными на атоме углерода или азота;

В₈ представляет собой Н; -СН₃; -Се₃; -СН₂ОН или -СН₂С1;

В₉ и В₁₀, каждый независимо, представляют собой Н; С₁-С₄-алкил; С₃-С₇-циклоалкил; -(СН₂)_1-6-С₃С7-циклоалкил; -(СН2)0-6-фенил; где алкильная, циклоалкильная и фенильная группы являются незамещенными или замещенными, либо В₉ и В₁₀ вместе с атомом азота образуют Не!;

В₅ представляет собой Н; С₁-С₁₀-алкил; арил; фенил; С₃-С₇-циклоалкил; -(СН₂)_1-6-С₃-С₇-циклоалкил; -С₁-С₁₀-алкиларил; -(СН₂)_0-6-С₃-С₇-циклоалкил-(СН₂)_0-6-фенил; -(СН₂)_0-4СН-((СН₂)_1-4-фенил)₂;

-(СН₂)_0-6-СН(фенил)₂; -инданил; -С(О)-С₁-С₁₀-алкил; -С(О)-(СН₂)_1-6-С₃-С₇-циклоалкил; -С(О)-(СН₂)_0-6фенил; -(СН₂)_0-6-С(О)-фенил; -(СН₂)_0-6-Не1; -С(О)-(СН₂)_1-6-Не1; либо В₅ представляет собой остаток аминокислоты, где алкильные, циклоалкильные, фенильные и арильные заместители являются незамещенными или замещенными;

и является таким, как показано в структуре X

где η=0-5;

X представляет собой -СН или Ν;

В_а и В_ь представляют собой независимо атом О, 8 или N или С_0-8алкил, где один или более чем один атом углерода в алкильной цепи может быть замещен гетероатомом, выбранным из О, 8 или Ν и где алкильная группа может быть незамещенной или замещенной;

В,1 выбран из (а) -В_е-Р-(В_£)_р(В₆)_ч или (б) Αγ₁-Ό-Αγ₂;

В_с представляет собой Н, либо В_с и В| могут вместе образовывать циклоалкильную или гетероциклическую группу; причем если В-ι и В_с образуют циклоалкильную или гетероциклическую группу, то В₅ присоединена к образованному кольцу на атоме С или Ν;

р и с.| независимо равны 0 или 1;

В_е представляет собой С1-С₈-алкил или алкилиден и В_е может быть незамещенным или замещенным;

представляет собой Ν, О, 8, 8(О) или 8(О)₂;

Αγι и Αγ₂ представляют собой замещенную или незамещенную арильную или гетероциклическую группу;

В_£ и В₈, каждый независимо, представляют собой Н; -С1-С1₀-алкил; С1-С1₀-алкиларил; -ОН; -О-С1-С1₀-алкил; -(СН₂)_0-6-С₃-С₇-циклоалкил; -О-(СН₂)_0-6-арил; фенил; арил; фенил-фенил; -(СН₂)_1-6-Не1; -О-(СН2)1-6-Не1; -ОВ_П; -С(О)-В_П; .С(0).N(В₁₁)(В₁₂); ^(В_П)(В₁₂); -8-В_п; -8(О)-В_П; -8(О)2-В_П; -8(О)₂-NВ₁₁В₁₂; -NВ₁₁-8(О)₂-В₁₂; 8-С₁-С₁₀-алкил; арил-С₁-С₄-алкил; Не1-С₁-С₄-алкил, где алкильная,циклоалкильная, гетероциклическая или арильная группы являются незамещенными или замещенными; -8О₂-С₁-С₂-алкил; -8О₂-С₁-С₂-алкилфенил; -О-С₁-С₄-алкил; либо В_д и В_£ образуют кольцо, выбранное из Не! или арила;

Ό представляет собой -СО-; -С(О)-С_1-7алкилен или арилен; -СЕ₂-; -О-; -8(О)_Г, где г равно 0-2; 1,3-диоксолан; или С_1-7алкил-ОН; где алкильная, алкиленовая или ариленовая группа может быть незамещенной или замещенной одним или более чем одним атомом галогена, ОН, -О-С1-С6-алкилом, -8-С₁-С₆-алкилом или -СЕ₃; либо Ό представляет собой 4(В_Ь), где В_ь представляет собой Н; С_1-7алкил (незамещенный или замещенный); арил; -О(С1-7циклоалкил) (незамещенный или замещенный);

С(О)-С₁-С₁₀-алкил; С(О)-С₀-С₁₀-алкиларил; С-О-С₁-С₁₀-алкил; С-О-С₀-С₁₀-алкиларил или 8О₂-С₁-С₁₀алкил; 8О2-(С0-С10-алкиларил);

- 14 017279

К₆, Н-. К'₆ и К'₇, каждый независимо, представляют собой Н; -С₁-С₁₀-алкил; -С₁-С₁₀-алкокси-; арил-С₁-С₁₀-алкокси-; -ОН; -О-С₁-С₁₀-алкил; -(СН₂)_0-6-С₃-С₇-циклоалкил; -О-(СН₂)_0-6-арил; фенил; -(СН₂)1-б-Не1; -О-СОД^-Не!; -ОК_П; -С(О)-К_П; -С(О)-К(К_П)(К₁₂); -Ν(Κ_η)(Κ₁₂); -8-К_п; -8(О)-К_11;

незамещенными или замещенными; и К.₆, К₇, К'₆ и К'₇ могут быть объединены с образованием кольцевой системы;

К.п и К₁₂ независимо представляют собой Н; С₁-С₁₀-алкил; -(СН₂)_0-6-С₃-С₇-циклоалкил;

-(СН2)0-6-(СН)0-1(арил)1-2; -С(О)-С1-С10-алкил; -С(О)-(СН2)1-6-С3-С7-циклоалкил; -С(О)-О-(СН2)0-6-арил; -С(О)-(СН2)0-6-О-флуоренил; -С(0)-\Н-(СН_;) .-арил; -С(О)-(СН2)0-6-арил; -С(О)-(СН2)1-6-Не1;

-С(8)-С₁-С₁₀-алкил; -С(8)-(СН₂)_1-6-С₃-С₇-циклоалкил; -С(8)-О-(СН₂)_0-6-арил; -С(8)-(СН₂)_0-6-О-флуоренил; -С(8)-ЫН-(СН₂)_0-6-арил; -С(8)-(СН₂)_0-6-арил; -С(8)-(СН₂)_1-6-Не1; где алкильная, циклоалкильная и арильная группы являются незамещенными или замещенными; либо К₁₁ и К₁₂ представляют собой заместители, которые способствуют транспорту молекулы через клеточную мембрану; либо К₁₁ и К₁₂ вместе с атомом азота образуют Не!;

где алкильные заместители К₁₁ и К₁₂ могут быть незамещенными или замещенными одним или более чем одним заместителем, выбранным из С₁-С₁₀-алкила, галогено, ОН, -О-С₁-С₆-алкила, -8-С₁-С₆алкила или -СЕ₃;

замещенные циклоалкильные заместители К₁₁ и К₁₂ замещены одним или более чем одним заместителем, выбранным из С₁-С₁₀-алкена; С₁-С₆-алкила; галогено; ОН; -О-С₁-С₆-алкила; -8-С₁-С₆-алкила или -СЕ₃; либо замещенные фенильные или арильные группы К₁₁ и К₁₂ замещены одним или более чем одним заместителем, выбранным из галогено; гидрокси; С^Сд-алкила; С₁-С₄-алкокси; нитро; -СЫ; -О-С(О)-С₁-С₄-алкила и -С(О)-О-С₁-С₄-арила, или их фармацевтически приемлемые соли.

В опубликованной заявке США № 2005/0261203 раскрыты соединения формулы XI

XI где Х₁ и Х₂ независимо представляют собой О или 8;

Ь представляет собой связь, -С(Х₃)-, -С(Х₃)ЫК₁₂ или -С(Х₃)О-, где Х₃ представляет собой О или 8 и К₁₂ представляет собой Н или К₁;

Кд представляет собой алкил, карбоциклил, алкил, замещенный карбоциклилом, гетероциклил или алкил, замещенный гетероциклилом, где каждая группа возможно замещена галогеном, гидроксилом, меркапто, карбоксилом, алкилом, галогеноалкилом, алкокси, алкилсульфонилом, амино, нитро, арилом и гетероарилом;

К₂ представляет собой алкил, циклоалкил, циклоалкилалкил, арил, аралкил, гетероцикл или гетероциклилалкил;

К₃ представляет собой Н или алкил;

К₄ и К₄' независимо представляют собой Н, алкил, арил, аралкил, циклоалкил, циклоалкилалкил, гетероарил или гетероаралкил, где каждая группа возможно замещена галогеном, гидроксилом, меркапто, карбоксилом, алкилом, галогеноалкилом, алкокси, амино и нитро;

К₅ и К₅', каждый независимо, представляют собой Н или алкил;

К₆ представляет собой Н или алкил;

а также их соли и сольваты.

В опубликованной заявке США № 2006/0014700 раскрыты соединения формулы XII

XII где Х1, Х2 и Х3 независимо представляют собой О или 8;

Υ представляет собой (СНК₇)_П, О или 8; где η равно 1 или 2 и К₇ представляет собой Н, галоген, алкил, арил, аралкил, амино, ариламино, алкиламино, аралкиламино, алкокси, арилокси или аралкилокси;

- 15 017279

А представляет собой 5-членный гетероцикл, содержащий от 1 до 4 гетероатомов, возможно замещенных амино, гидроксилом, меркапто, галогеном, карбоксилом, амидино, гуанидино, алкилом, алкокси, арилом, арилокси, ацилом, ацилокси, ациламино, алкоксикарбониламино, циклоалкилом, алкилтио, алкилсульфинилом, алкилсульфонилом, аминосульфонилом, алкиламиносульфонилом, алкилсульфониламино или гетероциклом; где каждый алкильный, алкокси-, арильный, арилокси-, ацильный, ацилокси-, ациламино-, циклоалкильный и гетероциклический заместитель возможно замещены гидроксилом, галогеном, меркапто, карбоксилом, алкилом, алкокси, галогеноалкилом, амино, нитро, циано, циклоалкилом, арилом или гетероциклом;

Κι представляет собой Н либо Κι и ΙΥ вместе образуют 5-8 членное кольцо;

ΙΥ представляет собой алкил, циклоалкил, циклоалкилалкил, арил, аралкил, гетероцикл или гетероциклоалкил; где каждый возможно замещен гидроксилом, меркапто, галогеном, амино, карбоксилом, алкилом, галогеноалкилом, алкокси или алкилтио;

Кз представляет собой Н или алкил;

К4 и К4' независимо представляют собой Н, гидроксил, амино, алкил, арил, аралкил, циклоалкил, циклоалкилалкил, гетероарил или гетероарилалкил, где каждая алкильная, арильная, аралкильная, циклоалкильная, циклоалкилалкильная, гетероарильная и гетероарилалкильная группа возможно замещена галогеном, гидроксилом, меркапто, карбоксилом, алкилом, алкокси, амино и нитро;

К5 и К₅', каждый независимо, представляют собой Н или алкил;

К₆ и Кб', каждый независимо, представляют собой Н, алкил, арил или аралкил; а также их соли и сольваты.

Некоторые из соединений по настоящему изобретению могут существовать в виде стереоизомеров, включая оптические изомеры. Изобретение охватывает все стереоизомеры, как чистые индивидуальные препараты стереоизомеров, так и препараты, обогащенные каждым из них, а также как рацемические смеси таких стереоизомеров, так и индивидуальные энантиомеры, которые могут быть выделены согласно методам, которые хорошо известны специалистам в данной области техники.

В некоторых воплощениях изобретения соединение формулы II выбрано из группы, состоящей из:

- 1б 017279

- 17 017279

- 18 017279

- 19 017279

или их свободных оснований или их других фармацевтически приемлемых солей.

Соединения по настоящему изобретению можно получать с использованием способов, известных специалистам в данной области техники. Конкретно, соединения формулы II можно получить, как проиллюстрировано примерными реакциями в примерах.

Важным аспектом настоящего изобретения является то, что соединения формулы II вызывают апоптоз, а также потенцируют индукцию апоптоза в ответ на сигналы индукции апоптоза. Поэтому предполагают, что эти соединения сенсибилизируют клетки к индукторам апоптоза, включая клетки, которые являются резистентными к таким индукторам. Ингибиторы МР по настоящему изобретению можно применять для индукции апоптоза при любом расстройстве, которое можно лечить, облегчать или предупреждать путем индукции апоптоза. Таким образом, в настоящем изобретении предложены композиции и способы, направленные на животных, характеризующихся гиперэкспрессией белка МР. В некоторых из воплощений клетки (например, раковые клетки) проявляют повышенные уровни экспрессии белков МР по сравнению с непатологическими образцами (например, не раковыми клетками). В других воплощениях клетки оперативно проявляют повышенные уровни экспрессии белков МР посредством выполнения программы апоптоза и гибели в ответ на ингибирующее эффективное количество соединения формулы I, причем указанный ответ проявляется, по меньшей мере частично, вследствие зависимости в таких клетках от функции белка МР для их выживания.

В другом воплощении изобретение относится к модулированию состояния, обусловленного апоптозом, которое связано с одним или более чем одним агентом, модулирующим апоптоз. Примеры агентов, модулирующих апоптоз, включают, но не ограничены ими, Ра8/СБ95, ΤΚΑΜΡ, ΤΝΡ К1, БК1, БК2, БК3, БК4, БК5, БК6, ΡΑϋϋ, КГР, ΤΝΡα, лиганд Раз, ТКАТЬ, антитела к ТКАТЬ-К1 или ТКАТЬ-К2, Вс1-2, р53, ВАХ, ВАБ, АкР САБ, ΡΟ киназу, РР1 и белки каспазы. Также включены другие агенты, которые вовлечены в фазу инициации, выбора решения и деградации апоптоза. Примеры агентов, модулирующих апоптоз, включают агенты, активность, присутствие или изменение в концентрации которых может модулировать апоптоз у субъекта. Предпочтительные агенты, модулирующие апоптоз, представляют собой индукторы апоптоза, например ΤΝΡ или ΤΝΡ-связанный лиганд, в частности лиганд ТКАМР, лиганд Раз/СБ95, лиганд ΤΝΡΚ-1 или ВПАРЬ.

- 20 017279

В некоторых воплощениях композиции и способы по настоящему изобретению применяют для лечения больных клеток, тканей, органов или патологических состояний и/или болезненных состояний у животного (например, у субъекта млекопитающего, включая, но не ограничиваясь ими, людей и домашних животных). В этой связи различные заболевания и патологии поддаются лечению или профилактике с использованием настоящих способов и композиций. Не ограничивающий примерный перечень этих заболеваний и состояний включает, но не ограничен ими, рак молочной железы, рак простаты, лимфому, рак кожи, рак поджелудочной железы, рак ободочной кишки, меланому, злокачественную меланому, рак яичника, рак головного мозга, первичную карциному головного мозга, рак головы и шеи, глиому, глиобластому, рак печени, рак мочевого пузыря, немелкоклеточный рак легкого, карциному головы или шеи, карциному молочной железы, карциному яичника, карциному легкого, мелкоклеточный рак легкого, опухоль Вильмса, карциному шейки матки, карциному яичка, карциному мочевого пузыря, карциному поджелудочной железы, карциному желудка, карциному ободочной кишки, карциному простаты, карциному мочеполовых путей, карциному щитовидной железы, карциному пищевода, миелому, множественную миелому, карциному надпочечников, рак почки, карциному эндометрия, карциному коры надпочечников, злокачественную инсулиному поджелудочной железы, злокачественную карциноидную карциному, хориокарциному, грибовидный микоз, злокачественную гиперкальцемию, гиперплазию шейки матки, лейкоз, острый лимфоцитарный лейкоз, хронический лимфоцитарный лейкоз, острый миелогенный лейкоз, хронический миелогенный лейкоз, хронический гранулоцитарный лейкоз, острый гранулоцитарный лейкоз, волосатоклеточный лейкоз, нейробластому, рабдомиосаркому, саркому Капоши, истинную полицитемию, идиопатический тромбоцитоз, болезнь Ходжкина, неходжкинскую лимфому, саркому мягких тканей, остеогенную саркому, первичную макроглобулинемию, ретинобластому и т.п., аутоиммунные заболевания, опосредованные Т- и В-клетками; воспалительные заболевания; инфекции; гиперпролиферативные болезни; СПИД; дегенеративные состояния, заболевания кровеносных сосудов и т.п. В некоторых воплощениях раковые клетки, подлежащие лечению, являются метастатическими. В других воплощениях раковые клетки, подлежащие лечению, являются резистентными к противораковым агентам.

В некоторых воплощениях инфекции, пригодные для лечения композициями и способами по настоящему изобретению, включают, но не ограничены ими, инфекции, вызванные вирусами, бактериями, грибами, микоплазмой, прионами и т. п.

В некоторых воплощениях настоящего изобретения предложены способы введения эффективного количества соединения формулы I и по меньшей мере одного дополнительного терапевтического агента (включая, но не ограничиваясь ими, химиотерапевтические противоопухолевые средства, агенты, модулирующие апоптоз, антибактериальные средства, противовирусные средства, противогрибковые средства и противовоспалительные агенты) и/или терапевтическую методику (например, хирургическое вмешательство и/или лучевую терапию).

Для применения в способах по настоящему изобретению рассмотрен ряд подходящих противораковых агентов. Действительно, в настоящем изобретении рассмотрено, но не ограничено, введение многочисленных противораковых агентов, таких как агенты, которые индуцируют апоптоз; полинуклеотиды (например, антисмысловые, рибозимы, малая интерферирующая РНК); полипептиды (например, ферменты и антитела); биологические миметики (например, госсипол или миметики ВН3); агенты, которые связываются (например, образуют олигомеры или комплекс) с белком семейства Вс1-2, таким как Вах; алкалоиды; алкилирующие агенты; противоопухолевые антибиотики; антиметаболиты; гормоны; соединения платины; моноклональные или поликлональные антитела (например, антитела, конъюгированные с противораковыми лекарственными средствами, токсинами, дефензинами), токсины; радионуклиды; модификаторы биологического ответа (например, интерфероны (например, ИФН-α) и интерлейкины (например, 1Ь-2)); агенты для адоптивной иммунотерапии; гемопоэтические факторы роста; агенты, которые вызывают дифференциацию клетки опухоли (например, полностью трансретиноевая кислота); реагенты для генотерапии (например, реагенты и нуклеотиды для антисмысловой терапии); противоопухолевые вакцины; ингибиторы ангиогенеза; ингибиторы протеосом: модуляторы ΝΡ-КВ; соединения анти-СОК; ингибиторы НОАС и т.п. Многочисленные другие примеры химиотерапевтических соединений и противораковых терапий, пригодные для совместного введения с раскрытыми соединениями, известны специалистам в данной области техники.

В предпочтительных воплощениях противораковые агенты включают агенты, которые вызывают или стимулируют апоптоз. Агенты, которые вызывают апоптоз, включают, но не ограничены ими, облучение (например, рентгеновские лучи, гамма-лучи, УФ-облучение); факторы, связанные с фактором некроза опухоли (ΤΝΡ) (например, белки рецептора семейства ΤΝΡ, лиганды семейства ΤΝΡ, ТКА1Б, антитела к ТКА1Б-К.1 или ТКА1Б-К.2); ингибиторы киназ (например, ингибитор киназы рецептора эпидермального фактора роста (ЕОРВ), ингибитор киназы рецептора сосудистого фактора роста (УОРН), ингибитор киназы рецептора фактора роста фибробластов (РОРК), ингибитор киназы рецептора фактора роста тромбоцитарного происхождения (РОСРВ) и ингибиторы киназы Всг-АЫ (например, гливек)); антисмысловые молекулы; антитела (например, герцептин, ритуксан, зевалин и авастин); антиэстрогены (например, ралоксифен и тамоксифен); антиандрогены (например, флутамид, бикалутамид, финастерид, аминоглутетамид, кетоконазол и кортикостероиды); ингибиторы циклооксигеназы 2 (СОХ-2) (например,

- 21 017279 целекоксиб, мелоксикам, N8-398, а также нестероидные противовоспалительные лекарственные средства (НСПВЛ)); противовоспалительные лекарственные средства (например, бутазолидин, декадрон, дельтазон, дексаметазон, дексаметазон интензол, дексон, гексадрол, гидроксихлорохин, метикортен, орадексон, орасон, оксифенбутазон, педиапред, фенилбутазон, плаквенил, преднизолон, преднизон, прелон и тандеарил) и химиотерапевтические противораковые лекарственные средства (например, иринотекан (камптосар), СРТ-11, флударабин (флудара), дакарбазин (ДТИК), дексаметазон, митоксантрон, милотарг, УР16, цисплатин, карбоплатин, оксалиплатин, 5-ФУ, доксорубицин, гемцитабин, бортезомиб, гефитиниб, бевацизумаб, таксотер или таксол); молекулы клеточной передачи сигнала; керамиды и цитокины; стауроспорин и т.п.

Еще в других воплощениях композиции и способы по настоящему изобретению обеспечивают соединение формулы II и по меньшей мере один антигиперпролиферативный или противоопухолевый агент, выбранный из алкилирующих агентов, антиметаболитов и натуральных продуктов (например, лекарственных растений и других соединений растительного и/или животного происхождения).

Алкилирующие агенты, пригодные для применения в настоящих композициях и способах, включают, но не ограничены ими: 1) азотистый иприт (например, мехлорэтамин, циклофосфамид, ифосфамид, мелфалан (Ь-сарколизин) и хлорамбуцил); 2) этиленимины и метилмеламины (например, гексаметилмеламин и тиотепа); 3) алкилсульфонаты (например, бусульфан); 4) нитрозомочевины (например, карму стин (ΒΟΝυ); ломустин (ΟΟΝυ); семустин (метил-ССNυ) и стрептозоцин (стрептозотоцин)); 5) триазены (например, дакарбазин (ДТИК; диметилтриазеноимидазолкарбоксамид).

В некоторых воплощениях антиметаболиты, пригодные для применения в настоящих композициях и способах, включают, но не ограничены ими: 1) аналоги фолиевой кислоты (например, метотрексат (аметоптерин)); 2) аналоги пиримидинов (например, фторурацил (5-фторурацил; 5-ФУ), флоксуридин (фтордезоксиуридин; ЕибВ) и цитарабин (цитозин арабинозид)); 3) аналоги пуринов (например, меркаптопурин (6-меркаптопурин; 6-МП), тиогуанин (6-тиогуанин; ТГ) и пентостатин (2'-дезоксикоформицин)).

Еще в одних других воплощениях химиотерапевтические агенты, пригодные для применения в композициях и способах по настоящему изобретению, включают, но не ограничены ими: 1) алкалоиды барвинка (например, винбластин (УЕВ), винкристин); 2) эпиподофиллотоксины (например, этопозид и тенипозид); 3) антибиотики (например, дактиномицин (актиномицин Ό), даунорубицин (дауномицин; рубидомицин), доксорубицин, блеомицин, пликамицин (митрамицин) и митомицин (митомицин С)); 4) ферменты (например, Ь-аспарагиназа); 5) модификаторы биологического ответа (например, интерферональфа); 6) координационные комплексы платины (например, цисплатин (цис-ДДП) и карбоплатин); 7) антрацендионы (например, митоксантрон); 8) замещенные мочевины (например, гидроксимочевина); 9) производные метилгидразина (например, прокарбазин (Ν-метилгидразин; М1Н)); 10) адренокортикальные супрессивные средства (например, митотан (ο,ρ'-ΌΌΌ) и аминоглутетимид); 11) адренокортикостероиды (например преднизон); 12) прогестины (например, гидроксипрогестерон капроат, медроксипрогестерон ацетат и мегестрол ацетат); 13) эстрогены (например, диэтилстильбэстрол и этинилэстрадиол); 14) антиэстрогены (например, тамоксифен); 15) андрогены (например, пропионат тестостерона и флуоксиместерон); 16) антиандрогены (например, флутамид); 17) аналоги гонадотропин-рилизинг гормона (например, лейпролид).

Любой онколитический агент, который обычно применяют при лечении рака, находит применение в композициях и способах по настоящему изобретению. Например, ΕΌΑ (Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США) утверждает формуляр онколитических агентов, одобренных для применения в Соединенных Штатах. Международные агентства, являющиеся партнерами ΕΌΑ, утверждают подобные формуляры. В табл. 1 представлен список примерных противоопухолевых агентов, одобренных для применения в США. Специалистам в данной области техники должно быть понятно, что в товарных этикетках, требуемых для всех одобренных в США химиотерапевтических агентов, описаны утвержденные указания по применению, информация о дозировке, данные о токсичности и т.п. для этих примерных агентов.

- 22 017279

Таблица 1

Апьдеслейкин (дез-аланил-1, серин-125 человеческий интерлейкин-2)	Пролейкин	СЫгоп Согр., Эмервилль, Калифорния
Алемтузумаб (антитело анти-1дб!К СО52)	Кампат	ΜίΙΙεηηίιιιη апб НЕХ РаПпеге, ЬР, Кембридж, Массачусетс
Алитретиноин (9-цис-ретиноевая кислота)	Панретин	Ыдапб РИагтасеи11са1г, 1пс., Сан Диего, Калифорния
Аллопуринол (1,5-дигидро-4Н-пиразоло[3,4-с1]пиримидин-4он мононатриевая соль)	Зилоприм	61ахо5т№|КНпе, ЕеэеагсЬ Тпапд1е Рагк, Сев. Каролина
Альтретамин (Ν,Ν, Ν', Ν', Ν’'Ν''-гекса метил-1,3,5-триазин-2,4,6триамин)	Гексален	Ц8 Вюааепсе, УУез( Коншохокен, Пенсильвания
Амифостин (этантиол, 2-[(3-аминопропил)амино]дигидрофосфат (эфир))	Этиол	из Вюзаепсе
Анастрозол (1,3-бензолдиацетонитрил, а, а, а', а'тетраметил-5-(1 Н-1,2,4-триазол-1-илметил))	Аримидекс	Аз1га2епеса РпагтасеиНса1з, ЬР, Уилмингтон, Делавэр
Мышьяка триоксид	Трисенокс	Се11 Тпегареибс, 1пс., Сиэтл, Вашингтон
Аспарагиназа (ί-аспарагин амидогидролаза, тип ЕС-2)	Элспар	Мегск & Со., 1пс., Уайтхаус-стейшн, Нью-Джерси
БЦЖ живая вакцина (лиофилизированный препарат	Т1СЕ ВС6	Огдапоп Текл1ка, Согр., Дурам, Сев.
аттенуированного штамма МусоЬас(епит ύονίε (ВасШиз Са1теКе-(Зик1п [ВСО], субштамм Моп1геа1)		Каролина
Бексаротен капсулы (4-(1-(5,6,7,8-тетрагидро-3,5,5,8,8-пентаметил2-нафталенил) этенил] бензойная кислота)	Таргретин	Мдапб РЬагтасеи1юа1э
Бексаротен гель	Таргретин	Ыдапб Рпагтасеи1гса1з
Блеомицин (цитотоксический гликопептидный антибиотик продуцируемый 8(гер1отусез уегИсШиз; блеомицин Аг и блеомицин В?)	Бленоксан	Вп5(о1-Муегз ЗцшЬЬ Со., Нью- Йорк, Нью-Йорк
Капецитабин (5'-дезокси-5-фтор-№[(пентилокси)карбонил]цитидин)	Кселода	КосИе
Карбоплатин (платина, диаммино[1,1- циклобутандикарбоксилато (2-)-0, О']-,(5Р-4-2))	Параплатин	Впз1о1-Муега Зци|ЬЬ
Кармустин (1,3-бис(2-хлорэтил)-1-нитрозомочевина)	БХНМ	Впз(о1-Муег$ ЗцшЬЬ
Имплант кармустина с полифепросаном 20	Глиадел Вафер	ΘϋίΙίοΓά Рбагтасеи(1са1з, 1пс., Балтимор, ЮТ,Ц
Целекоксиб (в виде 4-[5-(4-метилфенил)-3(трифторметил)-1 Н-пиразол-1-ил] бензол сульфонамида)	Целебрекс	Зеаг1е РМатпасеи(1са1з, Англия
Хлорамбуцил (4-[бис(2хлорэтил)амино]бензолбутановая кислота)	Лейкеран	01ахоЗтйпК1|пе
Цисплатин (Р1С1гНб^)	Платинол	Вг!5(о1-Муегз ЗцшЬЬ
Кладрибин (2-хлор-2'-дезокси-Ь-0-аденозин)	Лейстатин, 2ХдА	Р.М. Зоппзоп РРагтасеи11са1 РезеагсИ 1пзМ1и1е, Раритан, НьюДжерси
Циклофосфамид (2-[бис(2-хлорэтил)амино]тетрагидро-2Н-13,2оксазафосфорин 2-оксид моногидрат)	Цитоксан, Неозар	Влз1о1-Муегз 3ςιιίΡΡ
Цитарабин (1-Ь-О-арабинофуранозилцитозин, Ο9Ηι3Ν3Ο5)	Цитозар-У	РЬагтааа & ийоПп Сотрапу
Цитарабин липосомальный	ДепоЦит	Зкуе РЬагтасеи(1са18, 1пс., Сан Диего, Калифорния

- 23 017279

Дакарбазин (5-(3,3-диметил-1-триазено)-имидазол-4карбоксамид (ДТИК))	ОТ1С-Ооте	Вауег АО, Леверкузен, Германия
Дактиномицин, Актиномицин ϋ (актиномицин, продуцируемый 5(гер1отусе$ рапгиНиз, С62На6Ы12О16)	Космеген	Мегск
Дарбепоэтин альфа (рекомбинантный пептид)	Аранесп	Атдеп, 1пс., Т ысяча Дубов,Калифорния
Даунорубицин липосомный ((83-цис)-8-ацетил-10-[(3-амино-2,3,6тридезокси-а-1.-ликсо-гексопиранозил)окси]7,8,9,10-тетра гидро-6,8,11 -тригидрокси-1 метокси-5,12-нафтацендион гидрохлорид)	ОапиоХоте	Мехз(аг РЬагтасеи1|са15, 1пс., Боулдер, Колорадо
Даунорубицин НС1, Дауномицин ((13,33)-3-ацетил-1,2,3,4,6,11 -гексагидро3,5,12-тригидрокси-10-метокси-6,11 -диоксо-1нафтаценил 3-амино-2,3,6-тридезокси(альфаН-ликсо-гексопиранозид гидрохлорид)	Церубидин	\Л/уеФ Ауегэ(, Мэдисон, НьюДжерси
Денилейкин дифтитокс (рекомбинантный пептид)	Онтак	Зегадеп, 1пс., Хопкинтон, Массачусетс
Дексразоксан ((5)-4,4'-(1 -метил-1,2-этандиил)бис-2,6пиперазиццион)	Зинкард	Рпаггпас1а & иррЬп Сотрапу
Доцетаксел ((2К,33)-И-карбокси-3-фенилизосерин, Ν-третбутиловый эфир. 13-эфир с 5Ь-20-эпокси12а,4,7Ь, 10Ь, 13а-гекса гидрокситако-11 -ен-9-он 4-ацетат 2-бензоатом, тригидрат)	Таксотер	ΑνβηΙίβ РЬагтасеийса1э, 1пс., Бриджуотер, Нью-Джерси
Доксорубицин НС1 (88,103)-10-[(3-амино-2,3,6-тридезокси -а-Ьликсо-гексопиранозил)окси]-8-гликолил7,8,9,10-тетрагидро-6,8,11 -тригидрокси-1 метокси-5,12-нафтацендион гидрохлорид)	Адриамицин, Рубеке	РИагтааа & υρίοΙιπ Сотрапу
Доксорубицин	Адриамицин РРЗ для в/в инъекций	РЛагтааа & υρίοΙιπ Сотрапу
Доксорубицин липосомный	Доксил	Зедииз Рпагтасеийса!®, 1пс., Менло Парк, Калифорния
Дромостанолон пропионат (17₽-гидрокси-2а-метил-5а-андростан-3-он пропионат)	Дромостанол он	ΕΙί 1Л1у & Сотрапу, Индианаполис, Индиана

- 24 017279

Дромостанолон пропионат	Мастерон для инъекций	Зуп1ех, Согр., Пало Альто, Калифорния
Раствор Эллиота Б	Раствор Эллиота Б	ОгрЬап МеФса1,1пс
Эпирубицин ((88-цис)-10-[(3-амино-2,3,6-тридезокси-а-Сарабино-гексопиранозил)окси]-7,8,9,10тетрагидро-6,8,11-тригидрокси-8(гидроксиацетил)-1 -метокси-5,12нафтацендион гидрохлорид)	Элленс	РЬагтааа & ΙΙρίοΙιη Сотрапу
Эпоэтин альфа (рекомбинантный пептид)	Эпоген	Атдеп, 1пс
Эстрамустин (эстра-1,3,5(10)-триен-3,17-диол(17(бета))-, 3[бис(2-хлорэтил)карбамат] 17(дигидрофосфат), динатриевая соль, моногидрат или эстрадиол 3-[бис(2-хлорэтил карбамат] 17-(дигидрофосфат), динатриевая соль, моногидрат)	Эмцит	РЬагтааа & υρίοΙιη Сотрапу
Этопозид фосфат (4'-деметилэпиподофилиотоксин 9-[4,6-О-(Р)этилиден-(бета)-Э-глюкопиранозид], 4'(дигидрофосфат))	Этопофос	Впз1о1-Муегв ЗдшЬЬ
Этопозид, УР-16 (4'-деметилэпиподофинотоксин 9-[4,6-О-(К)этилиден-(бета)-О-глюкопиранозид])	Вепезид	Впз1о1-Муегз δςιιίΰβ
Экземестан (6-метиленандроста-1,4-диен-3,17-дион)	Аромазин	РКагтааа & υρϊοίτη Сотрапу
Филграстим (г-теГНиС-СЗГ)	Нейпоген	Атдеп, 1пс
Флоксуридин (внутриартериальный) (2'-дезокси-5-фторуридин)	ФУДР	Роспе
Флударабин (фторированный нуклеотидный аналог противовирусного средства видарабин, 9-Ь-Эарабинофуранозиладенин (ара-А))	Флудара	Вег!ех 1_аЬога1опев, 1пс., Сидар Нолле, Нью-Джерси
Фторурацил, 5-ФУ (5-фтор-2,4(1Н,ЗН)-пиримидицдион)	АбгисП	1СЫ Р1лагтасеи1юа18, 1пс., Хумакао, Пуэрто-Рико
Фулвестрант (7-альфа-[9-(4,4,5,5,5пентафторпентилсульфинил) нонил]эстра1,3,5-( 10)-триен-3,17-бета-диол)	Фазлодеко	ЕРК Р11агтасеи1юа1в, Гуаяма, ПуэртоРико
Гемцитабин (2'-дезокси-2',2'-дифторцитидин моногидрохлорид (Ь-изомер))	Гемзар	ΕΙί ину

- 25 017279

Гемтузумаб Озогамицин (анти-СйЗЗ МР67.6)	Милотарг	\Л/уе111 Ауеге1
Гозерелин ацетат (ацетат [□-Зег(Ви1)6,Агд1у’0]ЬНКН; руго-С1и-Н13Т гр-Зег-Т уг-О-Зег(Ви1)-1_еи-Агд-Рго-Агд1у-МН2 ацетат [СддНадМ.дО., *(С2Н4О2)х	Золадекс имплант	Аз1га/епеса РЬагтасеийса1а
Гидроксимочевина	Гидреа	Впз1о1-Муегв ЗдшЬЬ
Ибритумомаб тиуксетан (иммуноконъюгат, образующийся через ковалентную связь тиомочевины между моноклональным антителом ибритумомабом и мостиковым хелатообразующим веществом тиуксетаном [М-[2-бис(карбоксиметил)амино]3-(п-изотиоцианатофенил)-пропил]-[М-[2бис(карбоксиметил)амино]-2-(метил)этил глицин)	Зевалин	Вюдеп ЮЕС, 1пс., Кембридж, Массачусетс
Идарубицин (5,12-нафтацендион, 9-ацетил-7-[(3-амино2,3,6-тридезокси-(альфа)-Ьликсогексопиранозил)окси]-7,8,9,10-тетрагидро6,9,11-тригидроксигидрохлорид, (73-цис))	Идамицин	РЬагтас1а & ииоПп Сотрапу
Ифосфамид ГО /9 О Г/О ι«Κο ι ги ι,-ί.-μ.ί.хлорэтил)амино]тетрагидро-2Н-1,3,2оксазафосфорин 2-оксид)	Ифекс	Впв1о1-Муегз <;кк
Иматиниб мезилат (4-[(4-метил-1-пиперазинил)метил]-М-[4-метил3-[[4-(3-пиридинил)-2-пиримидинил]амино]фенил]бензамид метансульфонат)	Гливек	Νονβιΐιβ АС, Базель, Швейцария
Интерферон альфа-2а (рекомбинантный пептид)	Роферон-А	Но1Гтапп-1_а КосЛе, 1пс., Натри, Нью-Джерси
Интерферон альфа-2Ь (рекомбинантный пептид)	Интрон А (лиофилизиро ванный Бетасерон)	ЗсЬеппд АС, Берлин, Германия
Иринотекан НС1 ((43)-4,11 -диэтил-4-гидрокси-9-[(4пиперидинопиперидино)карбонилокси1-1Нпирано[3',4':6,7] индолизино[1,2-Ь] хинолин3,14(4Н,12Н) дион гидрохлорид тригидрат)	Камптосар	РИагтаФа & υρϊοΓιη Сотрапу
Леналидомид 3-(4-амино-1 -оксо 1,3-дигидро-2Н-изоиндол-2ил) пиперидин-2,6-дион	Ревлимид	Се1депе
Летрозол (4,4'-(1 Н-1,2,4-триазол-1 -илметилен)	Фемара	ΝονβΠίδ

- 26 017279

дибензонитрил)
Лейковорин (ί-глутаминовая кислота, М-[4[[(2-амино-5формил 1,4,5,6,7,8-гексагидроД-оксо-6птеридинил)метил]амино]бензоил], кальциевая соль (1:1))	Веллковорин, Лейковорин	1ттилех, Согр., Сиэтл, Вашингтон
Левамизол НС1 (()( 3)-2,3,5,6-тетрагидро-6-фенилимидазо [2,1-Ь] тиазол моногидрохлорид, ΟιιΗι2Ν23*ΗΘΙ)	Эргамизол	Лапззеп Кезеагсб Еоилс1а(юп, Титусвилл, НьюДжерси
Ломустан (1-(2-Хлорэтил)-3-циклогексил-1нитрозомочевина)	СииНУ	ВпзЫ-Муегз ЗдшЬЬ
Мехлорэтамин, нитроген мустард (2-хлор-Ы-(2-хлорэтил)-М-метилэтанамин гидрохлорид)	Мустарген	Мегск
Мегестрол ацетат 17а(ацетилокси)-6-метил пре гна-4,6-диен-3,20дион	Мегейс	Впз1о1-Муегз ЗцшЬЬ
Мелфалан, Ι.-ΡΑΜ (4-[бис(2-хлорэтил) амино]-!-фенилаланин)	Алкеран	С1ахо5тИККПпе
Меркаптопурин, 6-МП (1,7-дигидро-6Н-пурин-6-тион моногидрат)	Пуринтиол	(31ахо8т№К1|пе
Месна (натрий 2-меркаптоэтан сульфонат)	Меснекс	Аз1а Мебюа
Метотрексат (М-[4-[[(2,4-диамино-6птеридинил)метил]метиламино]бензоил]-Ьглутаминовая кислота)	Метотрексат	Ьес1ег1е иаЬогаЕопеэ
Метоксален (9-метокси-7Н-фуро[3,2-д][1 ]-бензопиран-7-он)	Увадекс	ТНегакоз, 1пс., Уэй Экстон, Пенсильвания
Митомицин С	Мутамицин	ΒπεΙοΙ-Муегз Зци|ЬЬ
Митомицин С	Митозитрекс	ЗирегОеп, 1пс., Дублин, Калифорния
Митотан (1,1 -дихпор-2-(о-хлорфенил)-2-(пхлорфенил)этан)	Лизодрен	ΒΓίδίοΙ-Муега 8ςιιί№
Митокса нтрон (1,4-дигидрокси-5,8-био[[2-[(2гидроксиэтил)амино]этил]амино]-9,10антрацендион дигидрохлорид)	Новантрон	1ттипех Согрогайоп
Нандролон фенпропионат	Дурабол ин-50	Огдапоп, 1лс., УэстОриндж, Нью-

- 27 017279

		Джерси
Нофетумомаб	УеНита	ВоеЬппдег 1пде1Ие1т Рйагта КС, Германия
Опрелвекин (ИЛ-11)	Ньюмега	Сепейсз 1пзШи1е, 1пс„ Александрия, Вирджиния
Оксалиплатин (цис-[(1 Р,2К)-1,2-циклогександиамин-М,М'] [оксалато(2-)-0,0'1 платина)	Элоксатин	Запой 8упИ1е1аЬо, 1пс., Нью-Йорк, Нью-Йорк
Паклитаксел (5Р,20-ЭпОкСи-1,2α,4,7β,10β,1 Загексагидрокситакс-11-ен-9-он 4,10-диацетат 2бензоат 13-эфир с (2К, 38)-Ы-бензоил-3фенилизосерином)	Таксол	Впз1о1-Муегз ЗцшЬЬ
Памидронат (фосфоновая кислота (З-амино-1гидроксипропифиден) бис-, динатриевая соль, пентагидрат, (АФД))	Аредиа	ЫоуагНэ
Пегадемаза ((монометоксиполиэтиленгликоль сукцинимидил) 11-17-аденозин деаминаза)	Адаген (пегадемаза бычья)	Εηζοη РЬагтасеи11са1з. 1пс., Бриджуотер, Нью-Джерси
Пегаспаргаза (монометоксиполиэтиленгликоль сукцинимидил Ь-аспарагиназа)	Он каспар	Επζοη
Пегфилграстим (ковалентный коньюгат рекомбинантного метионил С-С5Е человека (Филграстим) и монометоксиполиэтиленгликоля)	Невласта	Атдеп, 1пс
Пентостатин	Нипент	Рагке-0ач18 РКагтасеийса! Со., Роквилл, Мэриленд
Пипоброман	Верцит	АЬЬой 1_аЬога1опез, Эббот Парк, Иллинойс
Пликамицин, Митрамицин (антибиотик продуцируемый 31гвр1отусез рНса1из)	Митрацин	ΡίίζβΓ, 1пс., НьюЙорк, Нью-Йорк
Порфимер натрия	Фотофрин	СН-Т Р(ю1ой1егареи11С5, 1пс., Ванкувер, Канада
Прока рбаз ин (Й-изопропил-пара-(2-метилгидразино)-лара-	Матулан	3|дта Таи Р(1агтасеийса1з,

- 28 017279

толуамид моногидрохлорид)	1пс., Гейтерсберг, Мэриленд
Хинакрин (6-хлор-9-(1-метил-4-диэтиламин)бутиламино2-метоксиакридин)	Атабрин	АЬЬой 1_аЬз
Расбуриказа (рекомбинантный пептид)	Элитек	Запо1|-Зуп111е1аЬо, 1пс.,
Ритуксимаб (рекомбинантное антитело анти-СО20)	Ритуксан	ОепепГесЬ, 1пс., Зои111 СанФранциско, Калифорния
Сарграмостим (рекомбинантный пептид)	Прокин	1ттипех Согр
Стрептозоцин (стрептозоцин 2-дезокси-2[[(метилнитрозоамино)карбонил] амино]-а (и р)-О-гпюкопираноза и 220 мг лимонной кислоты безводной)	Занозар	РКагтааа & иррЬп Сотрапу
Тальк (Мд33!4О10(ОН)2)	Зс1егозо1	Вгуап, Согр., Вобурн, Массачусетс
Тамоксифен ((Ζ)2-[4-(1,2-дифенил-1-бутенил) фенокси]- Ν,Ν-диметилэтанамин 2-гидрокси-1,2,3пропантрикарбоксилат (1:1))	Нолвадекс	Азйагепеса РпагтасеиИса1з
Темозоломид 3,4-ДИГИДро-3-метил-4-оксоимидазо [5,1 -с!]- 1,2,3,5-тетразин-8-карбоксамид	Темодар	ЗоЬеггпд
Тенипозид, УМ-26 (4'-деметилэпиподофиллотоксин 9-[4,6-0-(К)-2фенилиден-(бета)-О-глюкопиранозид)	Вумон	Впз1о1-Муегз ЗдшЬЬ
Тестолактон (13-гидрокси-З-оксо-13,17-секоандроста-1,4диен-17-карбоновой кислоты лактон)	Теслак	Вп8(о1-Муег$ 5ц1лЬЬ
Тиогуанин, 6-ТГ (2-амино-1,7-дигидро-6Н-пурин-6-тион)	Тиогуанин	С1ахо5т|И1КНпе
Т иотепа (азиридин, Ι,Γ,Γ'-фосфинотиоилидинтрис- или трис(1-азиридинил)фосфин сульфид)	Тиоплекс	1ттипех Согрогабоп
Топотекан НС1 ((3)-10-[(диметиламино)метил]-4-этил-4,9дигидрокси-1 Н-пирано[3',4':6,7] индолизино[1,2-Ь] хинолин-3,14-(4Н,12Н)-дион моногидрохлорид)	Г икамтин	С1ахоЗгп|№К1|пе
Торемифен (2-(π-[(Ζ)-4-χπορ-1,2-дифен ил-1 -бутенил]фенокси)-М,1Ч-диметилэтиламин цитрат (1:1))	Фарестон	КоЬейз РНагтасеиНса! Согр., Итонтаун,

		Нью-Джерси
Тозитумомаб, 1131 Тозитумомаб (рекомбинантное мышиное иммунотерапевтическое моноклональное антитело 1д628 ламбда апй-СО20 (1131 представляет собой радиоиммунотерапевтическое антитело))	Бексар	Сопха Согр., Сиэтл, Вашингтон
Трастузумаб (рекомбинантное моноклональное антитело ΙαΘ, каппа ап1|-НЕК2)	Герцептин	Оепеп1ес1т,1пс
Третиноин, АТКА (полностью-транс ретиноевая кислота)	Весаноид	Косйе
Урацилиприт	Урацилиприт капсулы	РоЬегГз 1_аЬз
Вальрубицин, Ν-трифторацети ладриамицин-14-валерат ((28цис)-2-[1,2,3,4,6,11-гексагцдро-2,5,12тригидрокси-7 метокси-6,11-диоксо-[[4 2,3,6тридезокси-3-[(трифторацетил)-амино-а-!_ликсо-гексопиранозил]оксил]-2-нафтаценил]-2оксоэтил пентаноат)	Вальстар	АпИтга -Э Мебеуа
Винбластин, Лейкокристин (СдвН 56 ЫдО1 о*Нг5 Од)	Велбан	ΕΙΪ 1Л1у
Винкристин (04βΗ5βΝ4Οιο*Η2804)	Онковин	ЕН Г!|1у
Винорелбин (3',4'-дидегидро-4'-дезокси-С'норвинкалейкобластин [К-(Р*,К*)-2,3дигидроксибутандиоат (1:2) (соль)])	Навельбин	С1ахоЗт№КНпе
Золедронат, Золедроновая кислота ((1-гидрокси-2-имидазол-1-ил-фосфоноэтил) фосфоновая кислота моногидрат)	Зомета	Ыоуагбз

Противораковые агенты дополнительно включают соединения, которые идентифицированы как обладающие противораковой активностью, но в настоящее время не одобрены Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США или другими партнерскими агентствами или проходят испытания для нового применения. Примеры включают, но не ограничены ими, 3-АР, 12-О-тетрадеканоилфорбол-13-ацетат, 17ΑΑ6, 852А, АВГ007, АВК-217620, АВТ-751, ΑΟΙ-ΡΕΕ, 20,

- 29 017279

АЕ-941, АС-013736, АСК0100, аланозин, АМС 706, антитело 6250, антинеопластоны, АР23573, апазиквон, АРС8015, атипримод, ΑΤN-161, атрасентен, азацитидин, ВВ-10901, ВСХ-1777, бевацизумаб, ВС00001, бикалутамид, ВМ8 247550, бортезомиб, бриостатин-1, бусерелин, кальцитриол, СС1-779, СОВ-2914, цефиксим, цетуксимаб, СС0070, циленгитид, клофарабин, комбретастатин А4 фосфат, СР-675206, СР-724714, СрС 7909, куркумин, децитабин, ΌΕΝ8ΡΜ, доксеркальциферол, Е7070, Е7389, эктеинасцидин 743, эфапроксирал, эфломитин, ЕКВ-569, энзастаурин, эрлотиниб, эксисулинд, фенретинид, флавопиридол, флударабин, флутамид, фотемустин, ΡΚ901228, 617ΌΤ, галиксимаб, гефитиниб, генистеин, глюфосфамид, 6П-2040, гистрелин, НКЕ272, гомогаррингтонин, Η8ΡΡ^96, гибридный белок 1ш14.18-интерлейкин-2. НиМах-СЭ4, илопрост, имихимод, инфликсимаб, интерлейкин 12, ΚΡ1-504, ирофульвен, иксабепилон, лапатиниб, лестауртиниб, лейпролид, иммунотоксин ЬМВ-9, лонафарниб, лумиликсимаб, мафосфамид, МВ07133, МОХ-010, МЬ№704, моноклональное антитело 3Ρ8, моноклональное антитело 1591, мотексафин, М8-275, МУА-МиС1-ГЕ2, нилутамид, нитрокамптотецин, нолатрексед дигидрохлорид, нолвадекс, Ν8-9, 06-бензилгуанин, облимерсен натрий, ΟΝΥΧ-015, ореговомаб, Ο8Ε774, панитумумаб, параплатин, ΡΌ-0325901, пеметрексед, ΡΗΥ906, пиоглитазон, пирфенидон, пиксантрон, Ρ8-341, Ρ8С 833, ΡΧΌ101, пиразолоакридин, К115777, КАЭ001, ранпирназа, аналог ребеккамицина, белок гйиАпдюйабп, гйиМаЬ 2С4, розиглитазон, рубитекан, 8-1, 8-8184, сатраплатин, 8В-15992, 86Ν-0010, 86Ν-40, сорафениб, 8К31747А, 8Τ1571, 8И011248, субероиланилид-гидроксамовая кислота, сурамин, талабостат, талампанел, тарихидар, темсиролимус, иммунотоксин Τ6Ρα-ΡΕ38, талидомид, тимальфазин, типифарниб, тирапазамин, ΤΕΚ286, трабектедин, триметрексат глюкуронат, ΤϊΌνηχ, υ6Ν-1, вальпроевая кислота, винфлунин, VNΡ40101Μ, волоциксимаб, вориностат, νΧ-680, ΖΌ1839, ΖΌ6474, зилейтон и зосуквидар тригидрохлорид.

Для более подробного описания противораковых агентов и других терапевтических агентов специалистов в данной области техники отсылают к любому числу инструктивных материалов, включающих, но не ограниченных ими, публикации ^1^5103115 Эезк КеГегепсе, а также Сообщав апб Сбтап'з Ρйа^тасеиΐ^са1 Ва515 оГ Τйе^ареиΐ^С8 1еп1Н ебйюп, Ебз. Нагбтап е! а1., 2002.

В настоящем изобретении предложены способы введения соединения формулы II с лучевой терапией. Изобретение не ограничено типами, количеством или системами доставки и введения, используемыми для доставки терапевтической дозы радиации животному. Например, животное может получать фотонную лучевую терапию, лучевую терапию потоком частиц, другие типы лучевой терапии и их комбинации. В некоторых воплощениях животное подвергают облучению с использованием линейного ускорителя. Еще в других воплощениях облучение доставляют с использованием гамма-скальпеля.

Источник облучения может быть внешним или внутренним по отношению к животному. Внешняя лучевая терапия наиболее распространена и включает направление луча высокоэнергетического излучения на участок опухоли через кожу с использованием, например, линейного ускорителя. Поскольку пучок лучей ограничен участком опухоли, почти невозможно избежать воздействия на нормальную, здоровую ткань. Однако внешнее облучение обычно хорошо переносится животными. Внутренняя лучевая терапия включает введение источника излучения, например бусинок, проводов, гранул, капсул, частиц и т.п. внутрь тела в участок опухоли или возле него, включая применение систем доставки, которые специфично направлены на раковые клетки (например, с использованием частиц, прикрепленных к лигандам, связывающимся с раковой клеткой). Такой имплантат можно удалить после лечения или оставить в организме в неактивном состоянии. Типы внутренней лучевой терапии включают, но не ограничены ими, брахитерапию, внутритканевое облучение, внутриполостное облучение, радиоиммунотерапию и т.п.

Животное может возможно получать радиосенсибилизирующие средства (например, метронидазол, мизонидазол, БДУ внутриартериально, йододезоксиуридин (к.1бК) внутривенно, нитроимидазол, 5-замещенные-4-нитроимидазолы, 2Н-изоиндолдионы, [[(2-бромэтил)амино]метил]нитро-1Н-имидазол1-этанол, производные нитроанилина, селективные гипоксические цитотоксины со сродством к ДНК, галогенированные ДНК лиганды, оксиды 1,2,4-бензотриазина, производные 2-нитроимидазола, фторсодержащие производные нитроазола, бензамид, никотинамид, акридин-интеркалатор, производные 5-тиотретразола, 3-нитро-1,2,4-триазол, производные 4,5-динитроимидазол, гидроксилированные тексафрины, цисплатин, митомицин, тирипазамин, нитрозомочевина, меркаптопурин, метотрексат, фторурацил, блеомицин, винкристин, карбоплатин, эпирубицин, доксорубицин, циклофосфамид, виндезин, этопозид, паклитаксел, высокая температура (гипертермия) и т.п.), радиопротекторы (например, цистеамин, аминоалкилдигидрофосфотиоаты, амифостин (ХУК 2721), ГС-1, ГЕ-6 и т.п.). Радиосенсибилизирующие вещества усиливают лизис опухолевых клеток. Радиопротекторы защищают здоровую ткань от вредных эффектов излучения.

Любой тип излучения можно вводить животному настолько долго, насколько доза облучения переносится пациентом без неприемлемых отрицательных побочных эффектов. Пригодные типы радиотерапии включают, например, ионизирующую (электромагнитную) радиотерапию (например, рентгеновскими или гамма-лучами) или терапию пучком лучей (например, излучением высокой энергии). Ионизирующее излучение определяют как излучение, содержащее частицы или фотоны, которые имеют достаточную энергию, чтобы осуществить ионизацию, т.е. приобретение или потерю электронов (как описано, например, в патенте США 5770581, включенном здесь путем ссылки в полном объеме). Эффектами об

- 30 017279 лучения, по меньшей мере частично, может управлять врач-клиницист. Дозу облучения предпочтительно фракционируют для максимального воздействия на клетку-мишень и уменьшения токсичности.

Суммарная доза облучения, которую вводят животному, предпочтительно составляет от примерно 0,01 до примерно 100 Гр (Грей). Более предпочтительно в течение курса лечения вводят от примерно 10 до примерно 65 Гр (в частности, примерно 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55 или 60 Гр). Тогда как в некоторых воплощениях полную дозу облучения можно вводить в течение одних суток, в идеале суммарную дозу фракционируют и вводят за несколько суток. По желанию, радиотерапию вводят в течение курса по меньшей мере примерно 3 суток, например по меньшей мере 5, 7, 10, 14, 17, 21, 25, 28, 32, 35, 38, 42, 46, 52 или 56 суток (примерно 1-8 недель). Соответственно, суточная доза облучения включает примерно 1-5 Гр (в частности, примерно 1, 1,5, 1,8, 2, 2,5, 2,8, 3, 3,2, 3,5, 3,8, 4, 4,2 или 4,5 Гр), предпочтительно 1-2 Гр (например, 1,5-2 Гр). Суточная доза облучения должна быть достаточной, чтобы вызывать разрушение клеток-мишеней. При растяжении во времени облучение предпочтительно не назначают ежесуточно, таким образом давая животному возможность покоя и осуществления эффектов терапии.

Например, облучение, по желанию, назначают последовательно в течение 5 суток и не назначают в течение 2 суток, в течение каждой недели обработки, таким образом давая 2 суток покоя в неделю. Однако облучение можно назначать 1 сутки в неделю, 2 суток в неделю, 3 суток в неделю, 4 суток в неделю, 5 суток в неделю, 6 суток в неделю или все 7 суток в неделю, в зависимости от реакции животного и каких-либо потенциальных побочных эффектов. Лучевую терапию можно начать в любое время в период лечения. Предпочтительно облучение начинают через 1 неделю или через 2 недели и назначают в течение остающейся продолжительности периода лечения. Например, облучение назначают на 1-6 неделях или 2-6 неделях периода лечения, включая 6 недель для лечения, например, солидной опухоли. С другой стороны, облучение назначают на 1-5 неделях или 2-5 неделях периода лечения, включающего 5 недель. Эти примерные режимы назначения радиотерапии, однако, не предназначены для ограничения настоящего изобретения.

В качестве терапевтических агентов в настоящем изобретении также можно применять антибактериальные терапевтические агенты. Можно применять любой агент, который может уничтожать, ингибировать или иным образом ослаблять функцию микробных организмов, а также любой агент, который считают обладающим такой активностью. Антибактериальные агенты включают, но не ограничены ими, натуральные и синтетические антибиотики, антитела, ингибиторные белки (например, дефензины), антисмысловые нуклеиновые кислоты, агенты, вызывающие разрушение мембраны и т.п., применяемые отдельно или в комбинации. Действительно, можно применять любой тип антибиотика, включая, но не ограничиваясь ими, антибактериальные агенты, противовирусные агенты, противогрибковые агенты и т. п.

В некоторых воплощениях настоящего изобретения соединение формулы II и один или более чем один терапевтический агент или противораковый агент вводят животному при одном или больше чем одном из приведенных ниже условий: при различных периодичностях, при различных продолжительностях, при различных концентрациях, при различных путях введения и т. д. В некоторых воплощениях соединение вводят перед терапевтическим агентом или противораковым агентом, например, за 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 12 или 18 ч, за 1, 2, 3, 4, 5 или 6 суток, за 1, 2, 3 или 4 недели до введения терапевтического агента или противоракового агента. В некоторых воплощениях соединение вводят после терапевтического агента или противоракового агента, например, через 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 12 или 18 ч, через 1, 2, 3, 4, 5 или 6 суток, через 1, 2, 3 или 4 недели после введения противоракового агента. В некоторых воплощениях соединение и терапевтический агент или противораковый агент вводят одновременно, но в различных режимах, например соединение вводят ежесуточно, в то время как терапевтический агент или противораковый агент вводят один раз в неделю, один раз в две недели, один раз в три недели или один раз в четыре недели. В других воплощениях соединение вводят один раз в неделю, в то время как терапевтический агент или противораковый агент вводят ежесуточно, один раз в неделю, один раз в две недели, один раз в три недели или один раз в четыре недели.

Композиции в пределах объема данного изобретения включают все композиции, где соединения по настоящему изобретению содержатся в количестве, которое является эффективным для достижения намеченной цели. Поскольку индивидуальные потребности варьируют, определение оптимальных диапазонов эффективных количеств каждого компонента относится к компетенции специалиста в данной области техники. Обычно соединения можно вводить млекопитающим, например людям, перорально в дозе от 0,0025 до 50 мг/кг или эквивалентное количество его фармацевтически приемлемой соли в сутки массы тела млекопитающего, подлежащего лечению от расстройств, чувствительных к индукции апоптоза. Предпочтительно вводят от примерно 0,01 до 25 мг/кг перорально для лечения, облегчения или предупреждения таких расстройств. Для внутримышечной инъекции доза обычно составляет примерно половину пероральной дозы. Например, пригодная внутримышечная доза должна составлять от примерно 0,0025 до примерно 25 мг/кг и наиболее предпочтительно от примерно 0,01 до примерно 5 мг/кг.

- 31 017279

Однократная пероральная доза может включать от примерно 0,01 до примерно 1000 мг, предпочтительно от примерно 0,1 до примерно 100 мг соединения. Однократную дозу можно вводить один или более чем один раз в сутки в виде одной или более чем одной таблетки или капсулы, где каждая содержит от примерно 0,1 до примерно 10, для удобства от примерно 0,25 до примерно 50 мг соединения или его сольватов.

В препарате для местного введения соединение может присутствовать в концентрации от примерно 0,01 до 100 мг на 1 г носителя. В предпочтительном воплощении соединение присутствует в концентрации примерно 0,07-1,0 мг/мл, более предпочтительно примерно 0,1-0,5 мг/мл, наиболее предпочтительно примерно 0,4 мг/мл.

В дополнение к введению соединения в виде необработанного химического вещества соединения по изобретению можно вводить в виде части фармацевтического препарата, содержащего подходящие фармацевтически приемлемые носители, включающие наполнители и вспомогательные средства, которые облегчают технологическую обработку соединений для получения препаратов, которые можно применять фармацевтически. Предпочтительно препараты, в частности те препараты, которые можно вводить перорально или местным путем и которые можно применять для предпочтительного типа введения, например в виде таблеток, драже, таблеток для рассасывания медленного высвобождения и капсул, растворов для полоскания полости рта и зубных эликсиров, гелей, жидких суспензий, ополаскивателей для волос, гелей для укладки волос, шампуней, а также препаратов, которые можно вводить ректально, например суппозиториев, а также подходящих растворов для введения путем внутривенной инфузии, инъекции, местным путем или перорально, содержат от примерно 0,01 до 99%, предпочтительно от примерно 0,25 до 75% активного соединения(ий) вместе с наполнителем.

Фармацевтические композиции по изобретению можно вводить любому животному, которое может подвергаться благоприятному воздействию соединений по изобретению. Прежде всего, среди таких животных находятся млекопитающие, например люди, хотя изобретение не подразумевает такое ограничение. Другие животные включают домашних животных (коров, овец, свиней, лошадей, собак, кошек и т.п.).

Соединения и их фармацевтические композиции можно вводить любым способом, при котором достигается намеченная цель. Например, введение можно осуществлять парентеральным, подкожным, внутривенным, внутримышечным, внутрибрюшным, чрескожным, трансбуккальным, подоболочечным, внутричерепным, интраназальным или местным путем. Альтернативно или одновременно введение можно осуществлять пероральным путем. Вводимая дозировка зависит от возраста, состояния здоровья и массы реципиента, вида сопутствующего лечения, если оно есть, частоты лечения и природы желаемого эффекта.

Фармацевтические препараты по настоящему изобретению готовят любым способом, который сам по себе известен, например общепринятыми способами смешивания, грануляции, дражирования, растворения или лиофилизации. Таким образом, фармацевтические препараты для перорального применения можно получать путем объединения активных соединений с твердыми эксципиентами, возможного измельчения полученной в результате смеси и обработки смеси гранул после добавления подходящих вспомогательных средств, если желательно или необходимо, для получения таблеток или сердцевин драже.

Подходящими вспомогательными веществами являются, в частности, наполнители, например сахариды, например лактоза или сахароза, маннит или сорбит, препараты целлюлозы и/или фосфаты кальция, например трикальция фосфат или кальция гидрофосфат, а также связующие агенты, например крахмальная паста с использованием, например, кукурузного крахмала, пшеничного крахмала, рисового крахмала, картофельного крахмала, желатин, трагакант, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза натрия и/или поливинилпирролидон. Если желательно, может быть добавлен разрыхлитель, например вышеупомянутые крахмалы, а также карбоксиметилкрахмал, сшитый поливинилпирролидон, агар или альгиновая кислота или ее соль, например альгинат натрия. Вспомогательными веществами являются, прежде всего, агенты, регулирующие текучесть, и смазывающие агенты, например кремнезем, тальк, стеариновая кислота или ее соли, например, стеарат магния или стеарат кальция, и/или полиэтиленгликоль. Сердцевины драже готовят с подходящими покрытиями, которые, если желательно, являются устойчивыми к желудочному соку. С этой целью можно применять концентрированные растворы сахаридов, которые могут возможно содержать аравийскую камедь, тальк, поливинилпирролидон, полиэтиленгликоль и/или диоксид титана, растворы лака и подходящие органические растворители или смеси растворителей. Чтобы получить покрытия, применяют устойчивые к желудочному соку растворы подходящих препаратов целлюлозы, например ацетофталата целлюлозы или фталата гидроксипропилметилцеллюлозы. К таблеткам или покрытиям драже могут быть добавлены красители или пигменты, например, для идентификации или для того, чтобы охарактеризовать сочетания доз активных соединений.

Другие фармацевтические препараты, которые можно применять перорально, включают плотно заполненные капсулы, изготовленные из желатина, а также мягкие герметичные капсулы, изготовленные из желатина и пластификатора, например глицерина или сорбита. Плотно заполненные капсулы могут содержать активные соединения в форме гранул, которые могут быть смешаны с наполнителями, напри

- 32 017279 мер лактозой, связующими веществами, например крахмалами, и/или смазывающими агентами, например, тальком или стеаратом магния и, возможно, стабилизаторами. В мягких капсулах активные соединения предпочтительно растворены или суспендированы в подходящих жидкостях, например жирном масле или жидком парафине. Кроме того, могут быть добавлены стабилизаторы.

Возможные фармацевтические препараты, которые можно применять ректально, включают, например, суппозитории, которые состоят из сочетания одного или больше чем одного активного соединения с основой суппозитория. Подходящими основами суппозитория являются, например, натуральные или синтетические триглицериды или парафиновые углеводороды. Кроме того, также возможно применять желатиновые ректальные капсулы, которые состоят из сочетания активных соединений с основой. Возможные материалы основы включают, например, жидкие триглицериды, полиэтиленгликоли или парафиновые углеводороды.

Пригодные препараты для парентерального введения включают водные растворы активных соединений в водорастворимой форме, например водорастворимых солей, и щелочные растворы. Кроме того, можно вводить суспензии активных соединений в виде подходящих масляных суспензий для инъекции. Подходящие липофильные растворители или носители включают жирные масла, например кунжутное масло, или синтетические эфиры жирных кислот, например этилолеат, либо триглицериды, либо полиэтиленгликоль 400. Водные суспензии для инъекций могут содержать вещества, которые увеличивают вязкость суспензии, включающие, например, карбоксиметилцеллюлозу натрия, сорбит и/или декстран. Возможно суспензия может также содержать стабилизаторы.

Местные препараты композиций по данному изобретению предпочтительно готовят в виде масел, кремов, лосьонов, мазей и т.п. путем выбора соответствующих носителей. Подходящие носители включают растительные или минеральные масла, белый вазелин (белый мягкий парафин), жиры или масла с разветвленной цепью, животные жиры и высокомолекулярный спирт (более чем С12). Предпочтительными носителями являются носители, в которых активный ингредиент является растворимым. Также могут быть включены эмульгаторы, стабилизаторы, увлажнители и антиоксиданты, а также, если желательно, агенты, которые придают цвет или аромат. Дополнительно в этих местных препаратах можно использовать усилители кожной проницаемости. Примеры таких усилителей можно найти в патентах США № 3989816 и 4444762.

Кремы предпочтительно готовят из смеси минерального масла, самоэмульгирующего пчелиного воска и воды, с которой смешивают активный ингредиент, растворенный в небольшом количестве масла, например миндального масла. Типичным примером такого крема является крем, который включает примерно 40 частей воды, примерно 20 частей пчелиного воска, примерно 40 частей минерального масла и примерно 1 часть миндального масла.

Мази можно готовить путем смешения раствора активного ингредиента в растительном масле, например миндальном масле, с теплым мягким вазелином и охлаждения этой смеси. Типичным примером такой мази является мазь, которая включает примерно 30% мас./мас. миндального масла и примерно 70% мас./мас. белого мягкого вазелина.

Лосьоны удобно готовить путем растворения активного ингредиента в подходящем высокомолекулярном спирте, например пропиленгликоле или полиэтиленгликоле.

Приведенные ниже примеры являются иллюстративными, но не ограничивают способ и композиции по настоящему изобретению. Другие подходящие модификации и адаптации разнообразных условий и параметров, с которыми обычно сталкиваются в клинической терапии и которые являются очевидными для специалистов в данной области техники, находятся в пределах сущности и объема изобретения.

Пример 1. Синтез бивалентных миметиков 8тас.

Общие методы.

Спектры ЯМР регистрировали при резонансной частоте протона 300 МГц. Химические сдвиги ¹Н приведены относительно Με4δί (0,00%*), СНС13 (7,26%*), СО2НОО (3,31%*) или ОНО (4,79%*) в качестве внутренних стандартов. Химические сдвиги ¹³С приведены относительно СОС13 (77,00%*), СО₃ОО (49.00%з) или 1,4-диоксана (67,16%з) в качестве внутренних стандартов. Значения оптического вращения измеряли при комнатной температуре.

Общая методика А (конденсация).

К раствору двух субстратов в СН2С12 (20 мг/мл для субстрата, находящегося в меньшем количестве) добавляли ЕОС (1,1 экв. на аминогруппу), НОВ! (1,1 экв. на аминогруппу) и Ν,Ν-диизопропилэтиламин (4 экв. на аминогруппу) при 0°С при перемешивании. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 8 ч и затем конденсировали. Остаток очищали хроматографией с получением продукта.

Общая методика Б (клик химия).

К раствору Си8О₄ (10 мг/мл) добавляли (+)-Ь-аскорбат натрия (2 экв.). Смесь встряхивали до тех пор, пока цвет не стал ярко-желтым. К раствору этих двух субстратов в ацетонитриле или 2-метилпропаноле (20 мг/мл для субстрата, находящегося в меньшем количестве) добавляли предварительно полученную смесь Си8О₄ и Ь-аскорбата натрия (0,1 экв. Си8О₄ на 1 экв. субстрата, находящегося в меньшем количестве). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и затем экстра

- 33 017279 гировали дихлорметаном три раза. Объединенный органический слой промывали рассолом, высушивали над №1₂8О.-| и конденсировали. Остаток очищали хроматографией с получением продукта.

Общая методика В (удаление защиты Вос).

К раствору субстрата в метаноле (2о мг/мл) добавляли раствор НС1 в 1,4-диоксане (4 М, 1о-2о экв. на одну Вос-группу). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и затем конден сировали с получением продукта.

Пример 2. Синтез ΌΡ-24, 8Н-14з, 8Н-155 и 8Н-142.

Соединения 00-24, 8Н-14з, 8Н-155 и 8Н-142 синтезировали согласно схеме I.

Схема I нн_г б1нсос₽_а

Реагенты и условия:

(а) 1. трифторуксусный ангидрид, Εΐ^Ν, СН₂С1₂. комнатная температура; и №НСО_з, МеОН, 95%;

(б) ΝαΙ I, пропаргилбромид, ДМФ, 92%;

(в) 1. МзС1, ΕμΝ; ίί. ΝαΝ^ ДМФ, 1оо°С, 85% для двух стадий;

(г) 1. з, Си8О₄, натрий Ь(+)-аскорбат, СН_зС№Н₂О з:1; ίί. 2н. Ь1ОН, 1,4-диоксан-Н₂О 1:1, 74% для двух стадий;

(д) ΐ. ШИ, бензил-2-бромэтиловый эфир; ίί. 1о% Рй-С, Н₂, МеОН; ш. МзС1, Εΐ^Ν; ίν.

ΝαΝ^ ДМФ, 65% для четырех стадий;

(е) 1. з, Си8О₄, натрий Ь(+)-аскорбат, СН_зС№Н₂О з:1; ίί. 2н. Ь1ОН, 1,4-диоксан-Н₂О 1:1,

72% для двух стадий:

(ж) пропаргиловый эфир (5 экв.), Си8О₄, натрий Ь(+)-аскорбат, С1 Ρ,ΟΝ-11₂О з:1, 69%;

(з) 1. 8, Си8О₄, натрий Ь(+)-аскорбат, С11_зсЛ-Н₂О з:1; ίί. 4н. НС1 в 1,4-диоксане, МеОН,

95%;

(и) ΝαΙ I, пропаргилбромид, ДМФ, 82%;

(к) 1. 8 (2,2 экв.), Си8О₄. натрий Ь(+)-аскорбат, С11_зСЩН₂О з:1, ίί. 4н. НС1 в 1,4-диоксане, МеОН, 62% для двух стадий.

В результате избирательной защиты аминогруппы в Ь-фенилглициноле 1 трифторуксусным ангидридом получили спирт 2. В результате алкилирования 2 пропаргилбромидом получили алкин з. В результате взаимодействия 2 с метансульфонилхлоридом и последующего замещения полученного в результате мезилата ΝαΝ получили азид 4. В результате циклоприсоединения з и 4 при катализе Си8О₄натрий-Ь(+)-аскорбатом с последующим удалением трифторацетильных групп получили диамин 5.

- з4 017279

В результате алкилирования 2 бензил-2-бромэтиловым эфиром с последующим гидролизом защитной бензильной группы получили спирт. В результате взаимодействия этого спирта с метансульфонилхлоридом и последующего замещения полученного в результате мезилата Ν;ιΝ₃ получили азид 6. В результате циклоприсоединения 6 и 3 при катализе Си8О₄-натрий-Ь(+)-аскорбатом с последующим удалением трифторацетильных групп получили диамин 7.

Соединение 8 синтезировали согласно способу, ранее опубликованному авторами изобретения (8ип е! а1., Τеΐ^аЬей^οп Ьейегк, 46:7015 (2005)). В результате циклоприсоединения соединения 8 с избытком пропаргилового эфира (5-10 экв.) получили алкин 9. В результате циклоприсоединения 9 и 8 при катализе Си8О₄-натрий-Ь(+)-аскорбатом с последующим удалением защитной группы Вос получили диамин 10.

Соединение 11 синтезировали согласно способу, ранее опубликованному авторами изобретения (8ип е! а1., Τеί^айей^οп Ье!!егк, 46:7015 (2005)). В результате алкилирования 11 пропаргилбромидом получили алкин 12. В результате циклоприсоединения 2,2 экв. 8 и 1 экв. 12 при катализе Си8О₄-натрий-Ь(+)аскорбатом с последующим удалением защитной группы Вос получили диамин 13.

Схема II

Реагенты и условия:

(а) 10% Ρά-С, МеОН, Н₂, 100%;

(б) 1. диамин, ЕБС, НОВ!; N.N-диизопропилэтиламин. СН₂С1₂; и. 4н. НС1 в

1,4-диоксине, МеОН; ш. Ь-Ы-Вос-Ы-метилаланин, ЕБС, НОВ!,

N.N-диизопропилэтиламин. СН₂С1₂; ιν. 4н. НС1 в 1,4- диоксане.

Соединение 14 можно синтезировать способами, описанными в литературе (Биддап е! а1., Огд. В1ото1. СИет., 3:2287 (2005)) (схема ΙΙ). В результате восстановления двойной связи С=С и гидролиза бензилового эфира в соединении 14 получили кислоту 15. В результате конденсации 2,2 экв. 15 с вышеупомянутыми диаминами, соответственно с последующим удалением защитной группы Вос получили четыре аммонийные соли. В результате конденсации этих солей с ^-N-Βοс-N-метилаланином, соответственно с последующим удалением защитной группы Вос были получены бивалентные миметики 8тас БО-24, 8Н-143, 8Н-142 и 8Н-155. Эффективность схемы синтеза для каждого соединения представлена в табл. 2.

Таблица 2

Наименование	Выход (%, для четырех стадий)
00-24	61
8Н-143	62
ЗН-155	59
ЗН-142	55

Ή ЯМР (300 МГц, СБС1₃): δ 7,50 (к, 1Н), 7,38-7,20 (т, 3Н), 7,28-7,20 (т, 2Н), 7,26-7,05 (т, 5Н), 4,98-4,75 (т, 2Н), 4,23 (к, 2Н), 4,36 (т, 2Н), 3,50 (т, 2Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СБС1₃): δ 143,78, 133,54, 132,53, 130,26, 129,97, 129,70, 129,62, 127,47, 127,10,

126,40, 69,89, 63,23, 54,67, 54,60, 52,40.

Ή ЯМР (300 МГц, СБС1₃): δ 7,59 (к, 1Н), 7,32-7,22 (т, 3Н), 7,22-7,13 (т, 5Н), 7,12-7,05 (т, 2Н), 4,55-4,29 (т, 6Н), 3,85-3,75 (т, 1Н), 3,75-3,56 (т, 5Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СБС1₃): δ 143,51, 133,88, 133,63, 129,83, 129,61, 129,52, 129,38, 127,36, 127,32, 125,59, 70,89, 70,20, 69,25, 63,42, 54,62, 54,39, 50,49.

- 35 017279 ¹Н ЯМР (300 МГц, СБС1₃): δ 7,55 (8, 1Н), 7,40-7,08 (т, 9Н), 5,90 (Ь8, 1Н), 5,24 (Ь8, 1Н), 4,74 (8, 2Н), 4,34 (ΐ, 1=7,1 Гц, 2Н), 4,23 (й, 1=2,4 Гц, 1Н), 2,96 (ΐ, 1=7,3 Гц, 2Н), 2,49 (ΐ, 1=2,4 Гц, 1Н), 2,22 (т, 2Н), 1,43 (Ь8, 9Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СБС1₃): δ 154,93, 144,26, 141,98, 140,15, 139,04, 128,54, 128,50, 127,36, 127,22, 127,07, 122,56, 79,67, 79,16, 74,89, 62,91, 58,06, 57,37, 49,37, 31,94, 31,44, 28,25.

’Н ЯМР (300 МГц, СБС1₃): δ 7,52 (8, 2Н), 7,38-7,12 (т, 10Н), 7,08-6,99 (т, 4Н), 6,92-6,79 (т, 4Н), 5,42 (8, 2Н), 4,40 (8, 4Н), 4,02 (т, 4Н), 2,18 (т, 4Н), 1,78 (т, 4Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СБС1₃): δ 144,10, 139,59, 137,31, 132,04, 131,80, 131,72, 129,70, 129,64, 127,47, 65,29, 60,60, 52,51, 34,08, 33,18.

’Н ЯМР (300 МГц, СБС1₃): δ 7,40-7,18 (т, 5Н), 7,15 (Ь8, 4Н), 6,45 (Ь8, 1Н), 4,24 (й, 1=2,4 Гц, 2Н), 3,90 (й, 1=1,9 Гц, 2Н), 3,55 (ΐ, 1=6,3 Гц, 2Н), 2,72 (йй, 1=8,9, 7,4 Гц, 2Н), 2,77 (ΐ, 1=2,4 Гц, 1Н), 2,04 (ΐ, 1=1,9 Гц, 1Н), 1,92 (т, 2Н), 1,43 (Ь8, 9Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СБС1₃): δ 155,17, 140,92, 139,85, 136,99, 128,76, 80,68, 80,58, 79,86, 74,19, 70,26, 69,16, 58,01, 34,75, 31,79, 30,99, 28,23.

128,53, 128,40, 128,22, 127,22,

’Н ЯМР (300 МГц, Б₂О): δ 7,50 (8, 1Н), 7,33 (8, 1Н), 7,23-7,03 (т, 17Н), 6,99-6,92 (т, 6Н), 6,80-6,68 (т, 4Н), 5,38 (8, 1Н), 5,34 (8, 1Н), 5,10 (8, 1Н), 4,08 (8, 2Н), 4,08 (ΐ, 1=6,8 Гц, 1Н), 3,99 (8, 2Н), 3,92 (ΐ, 1=6,8 Гц, 2Н), 3,02 (ΐ, 1=6,2 Гц, 2Н), 2,30 (ΐ, 1=7,3 Гц, 2Н), 2,17 (ΐ, 1=7,3 Гц, 2Н), 2,11 (ΐ, 1=7,3 Гц, 2Н), 1,891,80 (т, 2Н), 1,78-1,62 (т, 2Н), 1,48-1,35 (т, 2Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, Б₂О): δ 163,46, 162,99, 144,04, 143,16, 141,81, 141,56, 137,61, 137,05, 134,70, 129,75, 129,64, 129,57, 129,54, 129,41, 129,28, 127,64, 127,45, 127,28, 127,16, 126,49, 125,00, 118,54, 114,67, 68,74, 65,33, 62,55, 58,06, 50,20, 49,98, 40,52, 31,70, 31,60, 30,98, 30,67, 30,42, 29,96.

’Н ЯМР (300 МГц, О₂О): δ 7,77 (8, 1Н), 7,78-7,21 (т, 10Н), 5,32 (т, 1Н), 4,91 (т, 1Н), 4,75-4,56 (т, 4Н), 4,50 (8, 2Н), 4,33 (т, 1Н), 4,17 (т, 3Н), 3,79 (т, 2Н), 3,60 (т, 2Н), 2,55 (8, 3Н), 2,53 (8, 3Н), 2,25-1,80 (т, 4Н), 1,79-1,61 (т, 7Н), 1,60-1,45 (т, 9Н), 1,40-1,38 (т, 4Н), 1,37 (й, 1=7,5 Гц, 3Н), 1,33 (й, 1=7,2 Гц, 3Н);

’³С ЯМР (75 МГц, Б₂О): δ 173,82, 173,65, 172,34, 172,29, 144,94, 138,64, 137,46, 129,41, 129,25,

128,87, 128,23, 126,91, 126,88, 125,73, 72,14, 63,14, 62,15, 61,16, 60,96, 57,28, 54,14, 53,64, 53,34, 51,10, 35,94, 32,94, 32,33, 31,31, 27,95, 25,86, 21,99, 15,60.

¹Н ЯМР (300 МГц, Б₂О): δ 7,50 (8, 1Н), 7,30-7,08 (т, 10Н), 4,95-4,80 (т, 3Н), 4,75 (т, 1Н), 4,47 (8, 2Н), 4,39 (т, 2Н), 4,32-4,10 (т, 4Н), 4,35-4,08 (т, 4Н), 3,66-3,50 (т, 4Н), 2,55 (8, 6Н), 2,22-1,43 (т, 24Н), 1,39 (т, 6Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, Э₂О): δ 173,71, 172,30, 169,52, 143,92, 138,73, 129,07, 128,18, 126,96, 125,53,

72,87, 72,32, 68,99, 63,36, 62,21, 62,14, 61,05, 57,20, 53,40, 53,24, 51,14, 50,42, 35,96, 32,99, 32,32, 31,32, 27,89, 25,08, 21,94, 15,63.

- 36 017279

¹Н ЯМР (300 МГц, Б₂О): δ 7,29 (₈, 2Н), 7,10-6,92 (т, 10Н), 6,85 (Ф, 1=8,0 Гц, 4Н), 6,58 (Ф, 1=8,0 Гц, 4Н), 5,78 (₈, 2Н), 4,65 (т, 2Н), 4,38 (₈, 4Н), 4,22 (т, 2Н), 4,08 (т, 2Н), 3,95-3,73 (т, 6Н), 2,55 (₈, 6Н), 2,211,28 (т, 36Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, Б₂О): δ 179,33, 172,64, 172,07, 144,32, 141,56, 140,08, 139,74, 129,15, 127,99, 127,69, 127,53, 124,85, 63,13, 62,04, 61,01, 57,48, 57,30, 51,12, 49,98, 36,03, 33,27, 32,47, 31,77, 31,44, 31,22,

27,87, 25,25, 21,99, 15,78.

8Н-142 (<гее атте)

Ή ЯМР (300 МГц, СБС1₃): δ 7,92 (ЬФ, 1=8,4 Гц, 2Н), 7,82 (ЬФ, 1=8,4 Гц, 2Н), 7,49 (8, 1Н), 7,45-7,06 (т, 28Н), 6,21 (8, 1Н), 6,19 (8, 1Н), 4,90 (т, 2Н), 4,85 (8, 1Н), 4,75 (т, 2Н), 4,62 (8, 2Н), 4,33 (ΐ, 1=7,1 Гц, 4Н), 4,20 (т, 2Н), 3,82 (8, 2Н), 3,49 (ΐ, 1=7,1 Гц, 2Н), 3,06 (т, 2Н), 2,70-2,55 (т, 8Н), 2,38 (8, 6Н), 2,30-1,35 (т, 28Н), 1,30 (Ф, 1=6,9 Гц, 6Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СБС1₃): δ 174,16, 172,05, 169,69, 145,37, 141,64, 140,60, 139,70, 139,15, 139,11, 128,60, 128,56, 128,50, 127,59, 127,47, 127,32, 127,29, 127,27, 127,02, 122,22, 121,52, 69,87, 66,39, 64,35, 60,15, 59,75, 59,18, 56,78, 53,41, 49,41, 49,26, 42,65, 36,71, 35,97, 35,12, 32,03, 31,59, 31,55, 31,09, 24,91, 24,06, 23,20, 19,44.

Пример 3. Синтез 8Н-156, 8Н-158, 8Н-159, 8Н-164, 8Н-165, 8Н-166 и 8Н-167.

Соединения 8Н-156, 8Н-158, 8Н-159, 8Н-164, 8Н-165, 8Н-166 и 8Н-167 синтезировали согласно схеме ΙΙΙ.

Схема III

Реагенты и условия:

(а) 1. 17, ЕБС, НОВ!, Ν,Ν-диизопропилэтиламин, СН₂С1₂; ίί. 4н. НС1 в

1,4-диоксане, МеОН; ш. Ь-ЮВос-Юметилаланин, ЕБС, НОВ!, СН₂С1₂, 78% для трех стадий;

(б) 1. диазид, Си8О₄, натрий Ь(+)-аскорбат, !-ВиОН-Н₂О 3:1, ίί. 4н. НС1 в

1,4-диоксане, МеОН.

Хиральный амин 17 можно получить из соединения 16 согласно опубликованным в литературе способам [Ме88ша е! а1., 1. Огд. СЬет.. 64:3767 (1999)]. В результате конденсации кислоты 15 с хиральным амином 17 и последующего удаления защитной группы Вос с помощью НС1 в метаноле получили соль аммония. В результате конденсации этой соли с Ь4-Вос4-метилаланином получили промежуточное соединение 18. В результате циклоприсоединения 18 и соответствующего диазида при катализе Си8О₄натрий-Ь(+)-аскорбатом с последующим удалением защитной группы Вос получили соответствующие целевые бивалентные миметики 8тас 8Н-156, 8Н-158, 8Н-159, 8Н-164, 8Н-165, 8Н-166 и 8Н-167. Эффективность схемы синтеза для каждого соединения представлена в табл. 3.

- 37 017279

Таблица 3

Наименование	Выход (%, для двух стадий)
ЗН-156	63
8Н-158	65
8Н-159	61
8Н-164	62
8Н-165	59
8Н-166	58
8Н-167	59

¹Н ЯМР (300 МГц, СЭС1₃): δ 7,75 (М, 1=8,5 Гц, 1Н), 7,50-7,44 (т, 2Н), 7,38-7,23 (т, 3Н), 6,90 (Ьз, 1Н), 5,95 (άά, 1=8,5, 2,4 Гц, 1Н), 4,80 (т, 1Н), 4,64 (άά, 1=8,4, 6,2 Гц, 1Н), 4,60 (Ьт, 1Н), 4,15 (т, 1Н), 2,88 (δ, 3Н), 2,62 (т, 1н), 2,53 (ά, >2,4 Гц, 1Н), 2,20-1,70 (т, 5Н), 1,51 (Ьз, 9н), 1,56-1,05 (т, 9Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СЭС1₃): δ 171,99, 170,95, 169,73, 138,96, 129,03, 128,55, 127,53, 82,13, 73,25, 60,03, 59,47, 50,32, 45,21, 36,94, 36,30, 32,36, 30,48, 28,80, 25,29, 24,42, 23,45, 14,16.

¹Н ЯМР (300 МГц, Ό₂Ο): δ 7,58 (δ, 2Н), 7,29-7,13 (т, 10Н), 6,08 (δ, 2Н), 4,70 (т, 2Н), 4,38 (т, 4Н), 4,27 (т, 2Н), 4,22 (т, 2Н), 3,85 (т, 2Н), 3,73 (т, 4Н), 3,32 (т, 4Н), 3,25 (т, 4Н), 2,58 (δ, 6Н), 2,25-1,48 (т, 22Н), 1,40 (ά, >7,0 Гц, 6Н), 1,39 (т, 2Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, Ό₂Ο): δ 173,36, 172,32, 169,56, 148,12, 139,21, 129,32, 128,54, 127,40, 124,51, 69,98, 69,75, 68,97, 62,07, 61,07, 57,20, 51,13, 50,46, 50,41, 35,94, 33,01, 32,35, 31,31, 27,81, 25,07, 21,92, 15,63.

¹Н ЯМР (300 МГц, Ό₂Ο): δ 7,56 (δ, 2Н), 7,29-7,13 (т, 10Н), 6,05 (δ, 2Н), 4,70 (т, 2Н), 4,38-4,14 (т, 8Н), 3,85 (т, 2Н), 3,63 (т, 4Н), 3,35 (δ, 4Н), 2,55 (δ, 6Н), 2,22-1,45 (т, 22Н), 1,42 (ά, 1=7,1 Гц, 6Н), 1,40 (т, 2Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, Ό₂Ο): δ 173,31, 172,28, 169,54, 148,15, 139,23, 129,30, 128,53, 127,38, 124,45, 69,85, 68,90, 62,05, 61,05, 57,20, 51,12, 50,39, 35,93, 33,03, 32,34, 31,32, 27,78, 25,07, 21,93, 15,63.

¹Н ЯМР (300 МГц, Ό₂Ο): δ 7,51 (δ, 2Н), 7,28-7,04 (т, 10Н), 6,04 (δ, 2Н), 4,70 (т, 2Н), 4,39-4,15 (т, 8Н), 3,82 (т, 2Н), 3,70 (т, 4н), 2,56 (δ, 6Н), 2,20-1,45 (т, 22Н), 1,40 (ά, 1=6,9 Гц, 6Н), 1,38 (т, 2Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, Ό₂Ο): δ 173,28, 172,22, 169,52, 148,14, 139,30, 129,31, 128,48, 127,33, 124,36, 68,99, 62,04, 61,06, 57,21, 51,10, 50,42, 50,35, 35,93, 33,06, 32,35, 31,32, 27,81, 25,09, 21,93, 15,64.

¹Н ЯМР (300 МГц, Ό₂Ο): δ 7,40 (δ, 2Н), 7,15-6,85 (т, 10Н), 6,65 (δ, 4Н), 6,08 (δ, 2Н), 4,65 (т, 2Н), 4,32 (т, 2Н), 4,08 (т, 2Н), 3,92-3,74 (т, 6Н), 2,84 (т, 4Н), 2,54 (δ, 6Н), 2,28-1,04 (т, 38Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, Ό₂Ο): δ 172,24, 171,83, 169,34, 148,50, 139,56, 139,41, 129,07, 128,53, 127,43, 122,92, 61,70, 60,72, 57,20, 51,23, 50,86, 50,15, 36,08, 34,96, 34,64, 31,34, 29,61, 28,63, 28,57, 28,20, 27,60, 25,20, 15,71.

- 38 017279

Ή ЯМР (300 МГц, Ό₂Ο): δ 7,55 (б, 2Н), 7,19-7,05 (т, 10Н), 6,85 (б, 4Н), 5,98 (б, 2Н), 5,15 (б, 4Н), 4,65 (т, 2Н), 4,25 (!, 1=7,2 Гц, 2Н), 4,10 (т, 2Н), 3,82 (т, 2Н), 2,54 (б, 6Н), 2,12-1,20 (т, 30Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, Ό₂Ο): δ 173,04, 172,16, 169,49, 148,55, 139,08, 135,38, 129,27, 128,82, 128,51,

127,40, 123,90, 62,92, 60,92, 57,19, 53,62, 51,05, 50,39, 35,88, 33,05, 32,28, 31,32, 27,66, 25,06, 21,91, 15,64.

Ή ЯМР (300 МГц, Ό₂Ο): δ 7,59 (б, 2Н), 7,28-7,10 (т, 10Н), 6,02 (б, 2Н), 4,65 (т, 2Н), 4,29 (т, 2Н), 4,22-4,08 (т, 6Н), 3,82 (т, 2Н), 2,53 (б, 6Н), 2,20-1,42 (т, 26Н), 1,40 (б, 1=7,1 Гц, 6Н), 1,35 (т, 2Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, Ό₂Ο): δ 173,35, 172,29, 169,53, 148,20, 139,07, 129,31, 128,54, 127,36, 124,06, 62,05, 61,03, 57,19, 51,11, 50,32, 50,05, 35,92, 33,02, 32,33, 31,31, 27,76, 26,68, 25,06, 21,93, 15,63.

Ή ЯМР (300 МГц, Ό₂Ο): δ 7,62 (б, 2Н), 7,28-7,12 (т, 10Н), 6,07 (б, 2Н), 4,65 (т, 2Н), 4,30 (!, 1=8,8 Гц, 2Н), 4,25-4,10 (т, 6Н), 3,84 (т, 2Н), 2,55 (б, 6Н), 2,23-1,95 (т, 4Н), 1,95-1,45 (т, 22Н), 1,40 (б, 1=7,0 Гц, 6Н), 1,35 (т, 2Н), 1,05-0,85 (т, 8Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, Ό₂Ο): δ 173,33, 172,28, 169,55, 148,22, 139,18, 129,30, 128,54, 127,43, 123,96, 62,04, 61,02, 57,18, 51,10, 50,72, 50,44, 35,94, 33,03, 32,34, 31,32, 29,35, 27,86, 25,40, 25,09, 21,90, 15,64.

Пример 4. Синтез 8Н-153 и 8Н-172.

Соединения 8Н-153 и 8Н-172 синтезировали согласно схемам IV и V.

Реагенты и условия:

(а) 9-ΒΒΝ, ТГФ, затем Н₂О₂ (35% в воде), 3н. ΝιΟΙ I;

(б) периодинан Десса-Мартина, СН₂С1₂, выход для 20 33%, выход для 21 62%;

(в) периодинан Десса-Мартина, СН₂С1₂, 96%;

(г) №ВН₃СЦ МеΟΗ, Η₂δΟ₄ (кат.), 94%.

В результате гидроборирования двойной связи С=С в соединении 14 обработкой 9-ΒΒΝ с последующим окислением полученного в результате борана щелочным Н₂О₂ получили смесь четырех спиртов. Спирт 19 можно отделить от других трех изомеров хроматографией, и его структура была подтверждена рентгеноструктурным анализом. Окисление смеси трех других изомеров реагентом Десса-Мартина (периодинаном) приводило к двум кетонам 20 и 21, которые можно разделить с помощью хроматографии. В результате восстановления кетона 20 с помощью NаΒΗ₃СN в присутствии каталитического количества Η₂§Ο₄ получили спирт 22 в виде единственного изомера. В результате окисления спирта 19 периодинаном Десса-Мартина также получили кетон 20, таким образом, структура спирта 22 также была подтверждена.

- 39 017279

Схема V

а-форма, 64% для четырех стадии

К-форма, 62% для четырех стадий

8Η-Ι72 (8,8), 74% для трех стадий

8Н-153 (К,К), 72% для трех стадий

Реагенты и условия:

(а) 1. 10% Рй-С, Н₂, МеОН; ίί. (К)-(-)-1,2,3,4-тетрагидро-1-нафтиламин, ЕБС, НОВ!, Ν,Ν-диизопропилэтиламин, СН₂С1₂; ίίϊ. МзС1, Ν,Ν-диизопропилэтиламин, СН₂С1₂; ίν. ΝαΝ₃, ДМФ;

(б) пропаргиловый эфир (5 экв.), Си8О₄, натрий Ь(+)-аскорбат, АсСЫ:!ВиОН:Н₂О 2:2:1, комнатная температура;

(в) 23 или 24, Си8О₄, натрий Ь(+)-аскорбат, !-ВиОН:Н₂О 1:1, комнатная температура;

(г) 1. 4н. НС1 в 1,4-диоксане, МеОН, ίί. ^-N-Βос-N-метилаланин, ЕБС, НОВ!, Ν,Ν-диизопропилэтиламин, СН₂С1₂; ίίϊ. 4н. НС1 в 1,4-диоксане, МеОН.

В результате гидролиза бензиловых эфиров в 19 и 22 с последующей конденсацией полученной в результате кислоты с (К)-(-)-1,2,3,4-тетрагидро-1-нафтиламином получили два амида (схема V). В результате взаимодействия этих двух амидов с метансульфонилхлоридом и последующего замещения двух полученных в результате мезилатов ΝαΝ₃ получили два азида 23 и 24. В результате циклоприсоединения этих двух азидов и избытка пропаргилового эфира при катализе Си8О₄-натрий-Ь(+)-аскорбатом получили два алкина 25 и 26. В результате циклоприсоединения 23 и 24 к этим двум алкинам получили соответственно соединения 27 и 28. Удаление защитных групп Вос в этих двух соединениях с последующей конденсацией с Ь-Н-Вос-Н-метилаланином приводило к двум амидам. В результате удаления защитных групп Вос в этих двух амидах получили 8Н-153 и 8Н-172 соответственно.

19 смесь трех изомеров

К раствору соединения 14 (1,25 г, 3 ммоль) в 50 мл сухого ТГФ добавляли 9 мл раствора 9-ВВИ (0,5 М в ТГФ, 4,5 ммоль). После нагревания раствора при кипении в течение 12 ч 1,5 мл 3 М раствора №ОН и 2 мл раствора Н₂О₂ (35% в воде) добавляли по каплям при 0°С. После нагревания до комнатной температуры и перемешивания в течение 2 ч смесь экстрагировали этилацетатом три раза. Объединенный органический слой высушивали над Иа₂8О₄ и затем конденсировали. Остаток очищали хроматографией с получением соединения 19 (330 мг, 25%) и смеси трех других изомеров (580 мг, 45%).

Химические данные для соединения 19: Ή ЯМР (300 МГц, СБС1₃): δ 7,40-7,28 (т, 5Н), 5,43 (Ьй, 1=7,8 Гц, 1Н), 5,28, 5,18 (АВ (]наПе1. 1=Гц, 2Н), 4,67 (!, 1=8,4 Гц, 1Н), 4,65 (т, 1Н), 4,20 (т, 1Н), 3,96 (т, 1Н), 2,45-1,60 (т, 10Н), 1,38 (Ь§, 9Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СБС1₃): δ 172,38, 170,83, 155,13, 135,39, 128,58, 128,40, 128,34, 79,70, 70,63, 67,14, 60,13, 56,16, 50,70, 45,22, 32,67, 31,70, 28,35, 27,34.

- 40 017279

20 21

К раствору смеси трех изомеров, полученной выше (570 мг, 1,3 ммоль), в 15 мл СН₂С1₂ добавляли периодинан Десса-Мартина (660 мг, 1,56 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при той же температуре в течение 2 ч и затем конденсировали. Остаток очищали хроматографией с получением соединения 20 (160 мг, 28%) и 21 (330 мг, 58%). Соединение 19 можно окислить с получением соответствующего соединения 20 таким же способом.

Химические данные для соединения 20: ’Н ЯМР (300 МГц, СОС1₃): δ 7,40-7,28 (т, 5Н), 5,42 (Ьй, 1=8,2 Гц, 1Н), 5,28, 5,18 (АВ диагЮ, 1=12,2 Гц, 2Н), 4,62 (ΐ, 1=8,4 Гц, 1Н), 4,37 (т, 1Н), 3,13 (т, 1Н), 3,02 (ΐ, 1Н), 2,50-1,98 (т, 8Н), 1,83 (т, 1Н), 1,60 (т, 1Н), 1,38 (Ь8, 9Н);

’³С ЯМР (75 МГц, СОС1₃): δ 211,37, 172,20, 170,94, 154,92, 135,23, 128,56, 128,41, 128,22, 79,81, 67,17, 60,53, 56,06, 53,39, 52,88, 36,79, 32,36, 30,18, 28,22, 27,00.

Химические данные для соединения 21: ’Н ЯМР (300 МГц, СОС1₃): δ 7,40-7,20 (т, 5Н), 5,49 (Ь8, 1=7,7 Гц, 1Н), 5,17 (8, 2Н), 5,09 (т, 1Н), 4,52 (ΐ, 1=8,5 Гц, 1Н), 4,22 (т, 1Н), 3,08 (йй, 1=12,7, 4,5 Гц, 1Н), 2,92 (т, 1Н), 2,60 (т, 2Н), 2,36-1,72 (т, 6Н), 1,43 (Ь8, 9Н);

’³С ЯМР (75 МГц, СОС1₃): δ 207,72, 170,93, 170,15, 154,74, 135,58, 128,37, 128,30, 128,14, 80,00, 66,67, 60,10, 59,74, 52,13, 48,52, 39,65, 34,18, 32,36, 28,21, 26,90.

К раствору соединения 20 (160 мг, 0,37 ммоль) в 15 мл метанола добавляли №1ВН₃СЫ (120 мг, 1,9 ммоль) и 3 капли Н₂8О₄ (98%) при -15°С. После перемешивания при той же температуре в течение 4 ч добавляли 10 мл воды и смесь экстрагировали этилацетатом (4x30 мл). Объединенные органические слои высушивали над Ыа₂8О₄ и затем конденсировали. Остаток очищали хроматографией с получением соединения 22 (147 мг, 92%).

’Н ЯМР (300 МГц, СОС1₃): δ 7,30 (Ь8, 5Н), 5,45 (Ьй, 1=8,4 Гц, 1Н), 5,20, 5,10 (АВ диагЮ, 1=14,1 Гц, 2Н), 4,85 (т, 1Н), 4,48 (т, 2Н), 4,13 (т, 1Н), 3,16 (Ь8, 1Н), 2,42-1,45 (т, 10Н), 1,38 (Ь8, 9Н);

’³С ЯМР (75 МГц, СОС1₃): δ 172,30, 171,03, 155,06, 135,43, 128,49, 128,27, 128,15, 79,36, 67,70, 66,87, 59,74, 54,00, 51,65, 43,62, 32,12, 31,82, 29,30, 28,29, 27,11.

К раствору соединения 19 (170 мг, 0,39 ммоль) в 10 мл СН₂С1₂ добавляли метансульфонилхлорид (0,05 мл, 0,6 ммоль). Раствор охлаждали до 0°С и затем по каплям добавляли 0,2 мл Ν,Νдиизопропилэтиламина. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч и затем конденсировали. Остаток очищали хроматографией с получением мезилата. К раствору этого мезилата в 10 мл метанола добавляли 50 мг 10% Рй-С. После перемешивания смеси при комнатной температуре в атмосфере Н2 в течение 3 ч катализатор отфильтровывали и фильтрат конденсировали с получением кислоты. Кислоту растворяли в 10 мл СН₂С1₂. К этому раствору последовательно добавляли (К)-(-)-1,2,3,4тетрагидро-1-нафтиламин (60 мг, 0,4 ммоль), БОС (77 мг, 0,4 ммоль), НОВ1 (55 мг, 0,4 ммоль) и 0,3 мл Ν,Ν-диизопропилэтиламина. Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и затем конденсировали. Остаток очищали хроматографией с получением амида. К раствору этого амида в 5 мл ДМФ добавляли 0,2 г ΝαΝ₃. Смесь перемешивали при 110°С в течение 6 ч и затем распределяли между 60 мл этилацетата и 15 мл рассола. Органический слой высушивали над №ь8О₄ и затем конденсировали. Остаток очищали хроматографией с получением соединения 23 (132 мг, 68% для четырех стадий).

’Н ЯМР (300 МГц, СОС1₃): δ 7,30 (т, 1Н), 7,20-7,03 (т, 3Н), 6,81 (Ьй, 1=8,2 Гц, 1Н), 5,50 (Ьй, 1=8,4 Гц, 1Н), 5,18 (т, 1Н), 4,65 (т, 1Н), 4,48 (т, 1Н), 4,35 (т, 1Н), 3,84 (т, 1Н), 2,80 (т, 2Н), 2,45 (т, 1Н), 2,30-1,78 (т, 13Н), 1,45 (Ь8, 9Н);

’³С ЯМР (75 МГц, СОС1₃): δ 171,19, 170,26, 154,87, 137,18, 136,41, 129,07, 128,73, 127,28, 126,16,

79,56, 60,47, 59,30, 54,47, 50,79, 47,57, 40,40, 33,19, 32,56, 29,83, 29,02, 28,32, 27,82, 25,43, 19,74.

- 41 017279

Соединение 24 синтезировали из соединения 22 в такой же последовательности, как и соединение 6 (63% для четырех стадий).

Ή ЯМР (300 МГц, СБС1₃): δ 7,32 (т, 1Н), 7,15 (т, 2Н), 7,06 (т, 1Н), 6,77 (Ьй, 1=8,3 Гц, 1Н), 5,43 (Ьй, 1=8,2 Гц, 1Н), 5,16 (т, 1Н), 4,54 (т, 1Н), 4,48 (!, 1=7,5 Гц, 1Н), 4,25 (т, 1Н), 3,52 (т, 1Н), 2,80 (т, 2Н), 2,48-1,50 (т, 14Н), 1,42 (Ьк, 9Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СБС1₃): δ 171,02, 170,07, 154,94, 137,11, 136,33, 128,98, 128,76, 127,20, 126,23, 79,76, 61,17, 60,35, 56,99, 49,85, 47,47, 42,20, 32,74, 29,84, 29,14, 29,01 ,28,25, 26,08, 19,76.

К раствору 20 мг Си8О₄ в 2 мл воды добавляли 40 мг (+)-Ь-аскорбата натрия. Смесь встряхивали до тех пор, пока она не приобретала ярко-желтый цвет. Эту смесь добавляли по каплям к раствору соединения 23 (120 мг, 0,24 ммоль) и 0,2 мл пропаргилового эфира в 3 мл ацетонитрила и 3 мл !-ВиОН при комнатной температуре. Смесь перемешивали при той же температуре в течение ночи и затем распределяли между 60 мл СН₂С1₂ и 15 мл рассола. Органический слой высушивали над Ма₂8О₄ и затем конденсировали. Остаток очищали хроматографией с получением соединения 25 (105 мг, 74%).

Ή ЯМР (300 МГц, СБС1₃): δ 7,64 (к, 1Н), 7,39 (т, 1Н), 7,18 (т, 2Н), 7,07 (т, 1Н), 6,50 (Ьй, 1=8,3 Гц, 1Н), 5,83 (Ьй, 1=7,1 Гц, 1Н), 5,19 (т, 1Н), 4,76 (т, 1Н), 4,70 (к, 2Н), 4,55-4,32 (т, 3Н), 4,23 (й, 1=2,4 Гц, 2Н), 2,80 (т, 2Н), 2,50 (!, 1=2,4 Гц, 1Н), 2,46-1,63 (т, 14Н), 1,48 (Ьк, 9Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СБС1₃): δ 170,63, 170,48, 154,79, 143,58, 137,35, 136,30, 129,11, 128,59, 127,36,

126,41, 122,65, 79,71, 79,31, 74,87, 62,96, 60,83, 59,13, 57,49, 54,65, 53,29, 47,84, 41,98, 34,53, 32,49, 31,26, 30,15, 29,10, 28,34, 25,81, 20,06.

Соединение 26 синтезировали из соединения 24 таким же способом, как для соединения 25 (выход 73%).

Ή ЯМР (300 МГц, СБС1₃): δ 7,59 (к, 1Н), 7,36 (т, 1Н), 7,13 (т, 2Н), 7,04 (т, 1Н), 6,68 (Ьй, 1=8,2 Гц, 1Н), 5,48 (Ьй, 1=8,3 Гц, 1Н), 5,15 (т, 1Н), 4,89 (т, 1Н), 4,72 (т, 1Н), 4,70 (к, 2Н), 4,56-4,35 (т, 2Н), 4,14 (й, 1=2,3 Гц, 1Н), 2,80 (т, 2Н), 2,58-1,55 (т, 15Н), 1,43 (Ьк, 9Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СБС1₃): δ 170,83, 170,60, 155,02, 144,76, 137,22, 136,29, 129,03, 128,79, 127,31, 126,32, 120,18, 79,86, 79,18, 74,97, 62,97, 61,36, 60,02, 57,52, 57,22, 49,65, 47,76, 43,81, 32,84, 32,72, 30,50, 29,92, 29,01, 28,29, 26,56, 19,86.

К раствору соединений 23 и 25 в 3 мл ацетонитрила и 3 мл !-ВиОН добавляли смесь 20 мг Си8О₄ и 40 мг (+)-Ь-аскорбата натрия в 2 мл воды. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и затем распределяли между 60 мл СН2С12 и 15 мл рассола. Органический слой высушивали над №ь8О₄ и затем конденсировали. Остаток очищали хроматографией с получением соединения 27 (79%).

Ή ЯМР (300 МГц, СБС1₃): δ 7,70 (к, 2Н), 7,40 (т, 2Н), 7,19 (т, 4Н), 7,11 (т, 2Н), 6,54 (Ьй, 1=8,3 Гц, 2Н), 5,79 (Ьй, 1=7,1 Гц, 2Н), 5,19 (т, 2Н), 4,75 (т, 2Н), 4,67 (к, 4Н), 4,47 (т, 4Н), 4,35 (!, 1=8,5 Гц, 2Н), 2,79 (т, 4Н), 2,45-1,60 (т, 28Н), 1,43 (Ьк, 18Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СБС1₃): δ 170,57, 170,48, 154,78, 143,89, 137,31, 136,32, 129,06, 128,62, 127,31,

126,39, 122,60, 79,66, 63,66, 60,80, 59,06, 54,65, 53,27, 47,80, 41,93, 34,49, 32,49, 30,13, 29,21, 29,09, 28,32,

25,78, 20,03.

- 42 017279

Соединение 28 синтезировали из соединения 24 и 26 таким же способом, как для соединения 27.

Ή ЯМР (300 МГц, СОС1₃): δ 7,61 (б, 2Н), 7,38 (т, 1Н), 7,20-6,99 (т, 6Н), 6,60 (Ьб, 1=8,0 Гц, 2Н), 5,48 (Ьб, 1=8,1 Гц, 2Н), 5,16 (т, 2Н), 4,89 (т, 2Н), 4,73 (т, 2Н), 4,70 (б, 4Н), 4,52-4,33 (т, 4Н), 2,78 (т, 4Н), 2,56-1,58 (т, 28Н), 1,43 (Ьб, 18Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СОС1₃): δ 170,89, 170,51, 155,01, 137,22, 136,25, 129,03, 128,81, 127,33, 126,35, 120,21, 79,87, 63,85, 61,38, 60,03, 57,27, 49,65, 47,75, 43,86, 32,85, 32,73, 30,51, 29,21, 29,03, 28,30, 26,54, 19,84.

Ν=Ν Ν=Ν

М. .О. -Ν

8Н-172

К раствору соединения 27 в 5 мл метанола добавляли 1 мл раствора НС1 (4н. в 1,4-диоксане). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и затем конденсировали. Остаток суспендировали в 5 мл СН₂С1₂. К этой смеси добавляли Ь-Ы-метил-Ы-Вос-аланин, ЕЭС, ΗΟΒ! и Ν,Νдиизопропилэтиламин. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и затем конденсировали. Остаток очищали хроматографией с получением амида. К раствору этого амида в 5 мл метанола добавляли 1 мл раствора НС1 (4н. в 1,4-диоксане). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и затем конденсировали с получением неочищенного 8Н-172 в виде соли НС1. Это соединение очищали с помощью ВЭЖХ с получением чистого продукта. Градиент изменялся от 75% растворителя А (вода, содержащая 0,1% ТФУ) и 25% растворителя Б (ацетонитрил, содержащий 0,1% ТФУ) до 55% растворителя А и 45% растворителя Б в течение 25 мин. Аналитическая ВЭЖХ показала, что чисто-

Ή ЯМР (300 МГц, Ό₂Ο): δ 7,85 (б, 2Н), 7,22-7,02 (т, 8Н), 4,98-4,79 (т, 4Н), 4,80-4,60 (т, 4Н), 4,52 (б, 4Н), 4,28 (!, 1=8,7 Гц, 2Н), 3,82 (т, 2Н), 2,72-2,50 (т, 10Н), 2,48-1,55 (т, 28Н), 1,45 (б, 1=7,0 Гц, 6Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, Ό₂Ο): δ 173,57, 171,59, 169,27, 138,30, 136,14, 129,54, 128,56, 127,82, 126,61, 124,46, 62,79, 61,98, 59,66, 57,28, 55,45, 53,24, 48,38, 41,25, 31,93, 31,32, 31,11, 29,86, 28,81, 27,24, 20,27, 15,64.

8Н-153

8Н-153 синтезировали из соединения 28 таким же способом, как соединение 8Н-172.

Ή ЯМР (300 МГц, Ό₂Ο): δ 7,95 (б, 2Н), 7,20-6,95 (т, 8Н), 4,92-4,74 (т, 6Н), 4,59 (б, 4Н), 4,55 (т, 2Н), 4,27 (т, 2Н), 3,86 (т, 2Н), 2,78-2,52 (т, 12Н), 2,42-2,08 (т, 8Н), 1,99-1,55 (т, 18Н), 1,45 (б, 1=7,0 Гц, 6Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, Ό₂Ο): δ 172,99, 171,58, 169,78, 138,23, 136,07, 129,46, 128,57, 127,78, 126,57,

123,39, 62,82, 62,56, 60,59, 58,14, 57,13, 50,49, 48,38, 42,62, 32,49, 31,30, 29,84, 29,53, 28,78, 27,86, 20,20,

15,61.

- 43 017279

Пример 5 Синтез 8Н-146.

Соединение 8Н-146 синтезировали согласно схеме VI.

Схема VI

5Н-146

Реагенты и условия:

(а) ΐ. 2 н. ЫОН, 1,4-диоксан:Н₂О 1:1; ίί. 15, ЕБС, НОВ!, N.N-диизопропилэтиламин. СН₂С1₂. 88% для двух стадий;

(б) 1. 24, Си8О|, натрий Б(+)-аскорбат, !-ВиОН-Н₂О 1:1; ίί. 4н. НС1 в

1,4-диоксапе, МеОН; ίϊί. ^-N-Вοс-N-метилаланин. ЕБС, НОВ!, N.N-диизопропилэтиламин. СН₂С1₂; ίν. 4н. НС1 в 1.4-диоксане. МеОН, 55% для четырех стадий.

В результате удаления трифторацетильной защитной группы в соединении 3 с последующей конденсацией полученного в результате амина с кислотой 15 получили амид 29. В результате циклоприсоединения азида 24 и алкина 29 при катализе Си8О₄-натрий-Ь(+)-аскорбатом с последующим удалением защитных групп Вос получили аммонийную соль. После конденсации этой соли с ЬЖ-ВосЖметилаланином защитные группы Вос удаляли путем обработки НС1 в метаноле с получением бивалентного миметика 8тас 8Н-146.

^!Н ЯМР (300 МГц, СБС1₃): δ 7,75 (Ь8, 1=7,4 Гц, 1Н), 7,32-7,15 (т, 5Н), 5,53 (ЬФ, 1=7,1 Гц, 1Н), 5,08 (т, 1Н), 4,73 (!, 1=6,6 Гц, 1Н), 4,60 (т, 1Н), 4,19 (Ь8, 2Н), 4,12 (т, 1Н), 3,80 (т, 2Н), 2,62 (т, 1Н), 2,45 (!, 1=2,3 Гц, 1Н), 2,23-1,65 (т, 4Н), 1,55-1,10 (т, 16Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СБС1₃): δ 172,20, 169,94, 155,03, 139,45, 128,37, 127,46, 127,05, 79,59, 79,23, 74,91, 72,23, 59,76, 59,27, 58,34, 52,96, 51,08, 36,44, 32,00, 28,37, 24,93, 24,12, 23,08.

Ή ЯМР (300 МГц, 1)0): δ 7,84 (8, 1Н), 7,40-7,25 (т, 6Н), 7,24-7,02 (т, 3Н), 4,98-4,85 (т, 4Н), 4,74 (т, 2Н), 4,53 (8, 2Н), 4,30 (т, 2Н), 4,27 (т, 1Н), 3,97-3,80 (т, 2Н), 3,78-3,65 (т, 2Н), 2,92 (т, 2Н), 2,56 (8, 3Н), 2,55 (8, 3Н), 2,35-1,45 (т, 26Н), 1,43 (Ф, 1=7,0 Гц, 3Н), 1,38 (Ф, 1=7,0 Гц, 3Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, Б₂О): δ 173,88, 173,59, 172,24, 171,57, 169,52, 169,26, 143,92, 138,65, 138,31, 136,20, 129,51, 129,12, 128,48, 128,17, 127,80, 126,95, 126,60, 124,24, 72,30, 63,35, 62,21, 61,98, 61,05, 59,61, 57,27, 57,19, 55,46, 53,35, 53,20, 51,12, 48,41, 41,21, 35,95, 33,00, 32,34, 31,30, 29,83, 28,80, 27,94, 25,08, 21,91, 20,30, 15,62.

- 44 017279

Пример 6. Синтез ΥΡ-зП, ΥΡ^81, ΥР-383 и ΥΡ^85. Соединение УР-з17 синтезировали согласно схеме VII.

ΐ—ι Ссылка 1

соынснрьа

ΥΡ-317

Реагенты и условия:

(а) трет-бутилдиметилсилилхлорид, Ν,Ν-диизопропилэтиламин, метиленхлорид;

(б) 1о% Рй-С, метанол, Н₂, 88% для двух стадий;

(в) Вос-РРцх'/р-О! Р ЕБС, НОВ1, Ν,Ν-диизопропилэтиламин, метиленхлорид;

(г) 1 М тетрабутиламмоний фторид в тетрагидрофуране, тетрагидрофуран, 87% для двух стадий;

(д) периодинан Десса-Мартина, метиленхлорид, 96%;

(е) 1о% Рй-С, метанол, Н₂, 64%;

(ж) бензилхлорформиат, натрия бикарбонат, 1,4-диоксан, 95%;

(з) тионилхлорид, метанол;

(и) Вос-ангидрид, натрия бикарбонат, 1,4-диоксан, 71% для двух стадий;

(к) 2 М лития гидроксид в Н2О, 1,4-диоксан-Н2О;

(л) аминодифенилметан, ЕБС, НОВР Ν,Ν-диизопропилэтиламин, метиленхлорид, 74% для двух стадий;

(м) 4 М хлористый водород в 1,4-диоксане, метанол;

(н) Ь-№Вос-№метилаланин, ЕБС, НОВ1, Ν,Ν-диизопропилэтиламин, метиленхлорид, 78% для двух стадий;

(о) 1о% Рй-С, метанол, Н₂, 9о%;

(п) α,α'-дибром-пара-ксилол, натрий бикарбонат, 1,4-диоксан;

(р) соединение 21, натрия бикарбонат, 1,4-диоксан;

(с) 4 М хлористый водород в 1,4-диоксане, метанол, з4% для трех стадий.

- 45 017279

Соединение 31 получали в шесть стадий из пироглутаминовой кислоты (соединение 30) опубликованными способами (Ζΐιηπβ е! а1., 0гд. Ье!!, 4:4029-4032 (2002); Ρо1уак е! а1., 1. 0гд. С1ет. 63:5937-5949 (1998)). Гидроксильную группу в соединении 31 защищали с помощью ТБС с получением соединения 32. Защитную бензильную группу удаляли каталитической гидрогенизацией с получением амина 33, который сшивали с Вос-0ар^)-0Н с получением амида 34. Защитную группу ТБС в соединении 34 удаляли с помощью 1 М тетрабутиламмония фторида в тетрагидрофуране с получением спирта 35, который затем окисляли до альдегида 36 с помощью периодинана Десса-Мартина. Удаление защитной группы С'Ьх в соединении 36 путем каталитической гидрогенизации, внутримолекулярную конденсацию целевого амина с альдегидом и последующее восстановление конечного енамина выполняли в одном реакторе с получением бициклического соединения 37. Амин 37 защищали защитной группой С'Ьх с получением соединения 38. Защитную группу Вос в соединении 38 удаляли и трет-бутиловый эфир преобразовывали в метиловый эфир путем обработки тионилхлоридом в метаноле с получением соединения 39. Аминогруппу защищали защитной группой Вос с получением соединения 40. Метиловый эфир 40 преобразовывали в карбоновую кислоту 41, которую конденсировали с аминодифенилметаном с образованием амида 42. Защитную группу Вос в соединении 42 удаляли с получением свободного амина 43, который сшивали с Ь-М-Вос-Н-метилаланином с получением амида 44. Защитную группу С'Ьх в соединении 44 удаляли каталитической гидрогенизацией с получением амина 45, который обрабатывали α,α'-дибромпара-ксилолом с получением соединения 46. Соединение 46 обрабатывали соединением 45 и бикарбонатом натрия с получением защищенного димера 47, защитные группы Вос которого удаляли с образованием целевого димера ΥΡ-317.

¹Н ЯМР (Ό₂0): δ 9,23-9,26 (т, 1Н), 7,18-7,22 (т, 8Н), 7,06-7,08 (т, 4Н), 6,02-6,05 (т, 1Н), 5,30-5,36 (т, 1Н), 4,59 (т, 1Н), 4,52 (т, 1Н), 4,27 (₈, 2Н), 3,78-3,86 (т, 2Н), 3,53-3,58 (т, 2Н), 2,99 (!, 1=2 Гц, 1Н), 2,56 (з, 3Н), 2,32 (т, 1Н), 1,84-1,92 (т, 1Н), 1,67-1,75 (т, 4Н), 1,35-1,37 (б, 1=7 Гц, 3Н);

¹³С ЯМР (Ό₂0): δ 173,93, 170,13, 167,90, 163,54, 163,07, 140,74, 140,62, 132,39, 130,59, 129,39, 129,26, 128,40, 128,13, 127,85, 127,58, 118,58, 114,72, 62,98, 61,07, 59,03, 58,25, 57,10, 56,42, 55,26, 54,18, 47,98, 31,65, 31,24, 30,98, 27,01, 15,42.

Масс-спектрометрия высокого разрешения: найдено [М+Н]⁺ 1057,6057 (рассчитано 1057,6028). ΥΡ-381, ΥΡ-383 и ΥΡ-385 синтезировали аналогично путем ацилирования соединения 45.

¹Н ЯМР (300 МГц, (Ί);01λ ТМС): δ 8,94-8,91 (б, 1=7,9 Гц, 1Н), 7,37-7,24 (т, 10Н), 6,17-6,14 (б, 1=8,2 Гц, 1Н), 4,58-4,55 (т, 1Н), 4,24 (Ь, 1Н), 3,99-3,90 (т, 2Н), 3,50-3,38 (т, 1Н), 2,70 (з, 3Н), 2,65-2,40 (т, 2Н), 2,31 (т, 1Н), 2,09-1,78 (т, 6Н), 1,61 (т, 2Н), 1,56-1,53 (б, 1=7,0 Гц, 3Н), 1,32 (з, 4Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, С1С01)): δ 176,5, 175,9, 173,2, 169,6, 143,0, 129,6, 128,8, 128,2, 62,7, 58,2, 53,7,

34,4, 33,4, 32,3, 31,8, 30,3, 28,3, 26,1, 16,2.

Масс-спектрометрия высокого разрешения: рассчитано т/ζ для |М+№1|' 1143,6371; найдено 1143,6387.

¹Н ЯМР (300 МГц, (Ό_;01λ ΤΜС): δ 7,35-7,27 (т, 10Н), 6,16 (з, 1Н), 4,59-4,52 (т, 1Н), 4,24 (Ь, 1Н), 4,02-3,99 (т, 1Н), 3,97-3,92 (т, 1Н), 3,90-3,87 (т, 1Н), 3,58-3,48 (т, 2Н), 2,70 (з, 3Н), 2,56-2,34 (т, 2Н), 2,34-2,32 (т, 1Н), 2,06-1,19 (т, 6Н), 1,56-1,53 (б, 1=7,0 Гц, 3Н), 1,30 (з, 6Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, С1С01)): δ 176,5, 175,9, 173,2, 169,6, 143,0, 129,6, 128,8, 128,2, 62,7, 58,2, 53,7,

34,4, 33,4, 31,7, 30,6, 30,4, 28,3, 26,3, 16,1.

Масс-спектрометрия высокого разрешения: рассчитано т/ζ для |М+№1|' 1171,6684; найдено 1171,6680.

- 46 017279

Ή ЯМР (300 МГц, С1);О1Т ТМС): δ 8,95-8,93 (6, 1=8,1 Гц, 1Н), 7,37-7,24 (т, 10Н), 6,17-6,14 (6, 1=8,0 Гц, 1Н), 4,58-4,56 (т, 1Н), 4,24 (Ь, 1Н), 3,99-3,92 (т, 2Н), 3,82-3,70 (т, 1Н), 2,70 (8, 3Н), 2,62-2,40 (т, 2Н), 2,33 (т, 1Н), 2,04-1,75 (т, 6Н), 1,60-1,56 (т, 2Н), 1,55-1,52 (6, 1=7,0 Гц, 3Н), 1,34-1,30 (т, 2Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СБ₃ОП): δ 176,5, 175,8, 173,3, 169,7, 143,0, 129,6, 128,8, 128,2, 62,7, 58,2, 53,7,

34,5, 33,4, 31,7, 30,2, 28,3, 26,2, 16,1.

Масс-спектрометрия высокого разрешения: рассчитано т/ζ для |М+№1|' 1115,6058; найдено 1115,6055.

Пример 7. Синтез промежуточных соединений для получения миметиков §тас.

Схема VIII

Реагенты и условия:

(а) ί. 4н. НС1 в 1,4-диоксане, метанол; ц. Вос-Ι )ар('/.)-ОН, ЕБС, НОВ!, Ν,Νдиизопропилэтиламин, СН₂С1₂, 52% для двух стадий;

(б) О₃, затем РРй₃, СН₂С1₂, 90%;

(в) Н₂, 10% Р6-С, изо-РгОН, 41%;

(г) 9-ΒΒΝ (2 экв.), ТГФ, нагревание с обратным холодильником, 12 ч, затем 3н. ШО11 (2 экв.), 35% Н₂О₂ (2,5 экв.), 0°С - комнатная температура, 85%;

(д) 1. периодинан Десса-Мартина, СН₂С1₂; и. Н₂, 10% Р6-С, изо-РгОН, 50% для двух стадий.

Синтез промежуточных соединений 51 и 53 показан на схеме VIII. Соединение 48 можно получить в пять стадий из пироглутаминовой кислоты 30 согласно опубликованным способам (см.: (1) Ζΐιαημ. 1.; Хюпд, С.; Жапд, ^.; Υίη§, I.; НгиЬу, V., 1. Отд. Ьей., 2002, 4 (23), 4029-4032, а также (2) Ро1уак, Г. апб ЬиЬе11, \У.Б. I. Огд., Сйет. 1998, 63, 5937-5949) в виде смеси двух диастереомеров с Реформой в качестве основного продукта (соотношение равно приблизительно 4:1). В результате удаления группы Вос в 48 и последующей конденсации с №а-(трет-бутоксилкарбонил)-П-3-(бензоксилкарбонил)-Г-диаминопропионовой кислотой (Вос-Эар^)-ОН) получили амид 49. Окисление озоном двойной связи С=С в 49 приводило к альдегиду 50. Отщепление группы ί'Τζ в 4, внутримолекулярная конденсация образующегося амина с альдегидной группой и последующее восстановление енамина осуществляли в одном реакторе с получением соединения 51. В этом превращении получали только соединение 51 и не было обнаружено образования его изомера, что дает возможность предположить, что аминоальдегид из изомера, находящегося в меньшем количестве, не циклизуется в этих условиях.

Гидроборирование двойной связи С=С в 49 с помощью 9-ВВN с последующим щелочным окислением полученного в результате борана приводило к спиртам 52. Окисление 52 с помощью периодинана Десса-Мартина приводило к смеси двух альдегидов, которые циклизовали по такой же методике, как и для соединения 51, с получением соединения 53. Как и в случае с 51, во время этого преобразования получали только один изомер.

- 47 017279

Аналитические данные для соединения 51: [а]²⁰ _с -30,2 (с=1,7, СНС1₃);

¹Н ЯМР (300 МГц, СБС1₃, ТМС): δ 5,45 (Ь6, 1=8,0 Гц, 1Н), 4,67 (т, 1Н), 4,52 (1, 1=9,0 Гц, 1Н), 4,23 (т, 1Н), 3,74 (δ, 3Н), 3,20 (т, 2Н), 2,94 (т, 1Н), 2,74 (άά, 1=13,6, 10,9 Гц, 1Н), 2,35 (т, 1Н), 2,14 (т, 1Н), 1,99 (т, 1Н), 1,86-1,74 (т, 3Н), 1,66 (т, 1Н), 1,43 (Ьз, 9Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, ТМС): δ 173,42, 170,60, 155,16, 79,68, 59,46, 58,39, 54,92, 52,44, 46,72,

37,45, 32,15, 29,64, 28,29, 26,98.

Аналитические данные для соединения 53: [а]²⁰ _с -23,2 (с=1,0, СНС1₃);

¹Н ЯМР (300 МГц, ТМС): δ 5,23 (Ь6, 1=8,0 Гц, 1Н), 4,79 (т, 1Н), 4,65 (άά, 1=9,7, 8,2 Гц), 4,22 (т, 1Н), 3,74 (δ, 3Н), 3,02-2,80 (т, 4Н), 2,38-1,70 (т, 9Н), 1,43 (Ьз, 9Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, ТМС): δ 173,38, 171,59, 155,09, 79,68, 62,03, 59,82, 53,72, 53,15, 52,48,

50,09, 34,66, 34,55, 29,47, 28,31, 27,33.

Пример 8. Синтез 8Н-188, 189 и 190.

Схема IX

Реагенты и условия:

(а) ЕБС, НΟΒΐ, Ν,Ν-диизопропилэтиламин, СН₂С1₂;

(б) 1. 4н. НС1 в 1,4-диоксане, МеОН; ίί. (8)-ЮВос-Юметилаланин, ЕБС, НΟΒΐ, Ν,Ν-диизопропилэтиламин, СН₂С1₂; Νί, 10% Ρά-С, Н₂, МеОН;

(в) тиофосген или трифосген, СН₂С1₂; ίί. 4н. НС1 в 1,4-диоксане, МеОН.

Конденсация кислоты 15 с амином 54 или 55 приводила к амидам 56 и 57 соответственно (схема IX). В результате удаления защитной группы Вос в 56 или 57 и последующей конденсации полученных в результате аминов с (5)-№Вос-№метилаланином получили два амида. В результате удаления защитной группы СЬх в этих двух амидах получили амины 58 и 59. В результате конденсации 58 или 59 с 0,5 экв. трифосгена получили две мочевины. В результате удаления защитных групп Вос в этих двух мочевинах получили 8Н-188 и 8Н-190 соответственно. В результате конденсации 58 с 0,5 экв. трифосгена получили тиомочевину. В результате удаления защитной группы Вос в этой тиомочевине получили 8Н-189.

Пример 9. Синтез 8Н-202.

Схема X

Реагенты и условия:

(а) ί. ΝαΙΙ (2,5 экв.), 1,12-дибромдодекан, ДМФ; ίί. 3н. Ι,ίΟΙ I. 1,4-диоксан;

(б) кислота 15 (2,2 экв.), ЕБС, НΟΒΐ, Ν,Ν-диизопропилэтиламин, СН₂С1₂;

(в) ί. 4н. НС1, 1,4-диоксан, МеОН; ίί. (8)-ЮВос-Юметилаланин, ЕБС, НΟΒΐ, Ν,Ν-диизопропилэтиламин, СН₂С1₂; ίίί. 4н. НС1, 1,4-диоксан, МеОН.

- 48 017279

В результате замещения алкоголята натрия, полученного из соединения 60, 1,12-дибромдодеканом с последующим удалением трифторацетильной группы получили диамин 61. Конденсация 61 с 2 экв. кислоты 15 приводила к амиду 62. В результате удаления защитной группы Вос в 62 и последующей конденсации с (8)-N-Βοс-N-метилаланином получили амид. В результате удаления защитной группы Вос в этом амиде получили 8Н-202.

Пример 10. Синтез промежуточных соединений для получения миметиков 8тас.

Схема XI

Реагенты и условия:

(а) 1. 4н. НС1 в 1,4-диоксане, метанол; и. Вос-Ι )ар(У)-ОН, ЕБС, НОВ!, N.N-диизопропилэтиламин. СН2С12;

(б) О₃, затем ΡΡΗ₃, СН₂С1₂;

(в) Н₂, 10% Ρά-С, и;о-1Т( )Ι I;

(г) 1. С^С1, Ш11СО₃, 1,4-диоксан; и. 3н. ЬЮН, 1,4-диоксан, затем 1н. НС1;

д) 1. амин, ЕБС, НОВ!, Ν,Ν-диизопропилэтиламин, СН₂С1₂; н. 4н. НС1 в 1,4-диоксане, метанол; ш. (8)-Νзащищенная аминокислота, ЕБС, НОВ!, Ν,Ν-диизопропилэтиламин, СН₂С1₂;

(е) 1. дикарбоновая кислота (0,5 экв.), ЕБС, НОВ!, Ν,Ν-диизопропилэтиламин, СН₂С1₂; н. 4н. НС1 в

1,4-диоксане, метанол.

Новый и эффективный способ синтеза ключевых промежуточных соединений 41 представлен на схеме ΧΙ. Соединение 48 можно получить в пять стадий из пироглутаминовой кислоты 30 согласно опубликованным способам (см.: (1) Ζ^^, 1.; Χω^, С.; \апд, \.; Утд, 1. апй НгиЬу, V., 1. Огд. Ьей, 2002, 4 (23), 4029-4032, а также (2) Ρο1уак, Р. апй ЬиЬе11, \.Б. 1. Огд, СИет. 1998, 63, 5937-5949) в виде смеси двух диастереомеров с В-формой изомера в качестве основного продукта (соотношение составляет приблизительно 4:1). В результате удаления Вос-группы в 48 и последующей конденсацией с Ν-α-Сгретбутоксилкарбонил-М-З-бензоксилкарбонил-Ь-диаминопропионовой кислотой (Вос-Бар^)-ОН) получили амиды 49. Окисление озоном двойной связи С=С в 49 с последующим восстановлением с помощью ΡΡ1₃ приводило к альдегиду 50. Отщепление группы ί,'όζ в 50, внутримолекулярную конденсацию полученного в результате амина с альдегидной группой и последующее восстановление енамина осуществляли в одном реакторе с образованием целевого соединения 51. Защита аминогруппы с последующим гидролизом метилового эфира в 51 приводила к кислоте 41.

В результате конденсации 41 с различными диаминами получили ряд амидов. В результате удаления Вос-групп в этих амидах и последующей конденсации полученных в результате аммонийных солей с ^-Н-защищенными аминокислотами получили ряд амидов 63. В результате удаления защитных групп в этих амидах получили целевые бивалентные миметики 8тас 64.

Пример 11. Бивалентные миметики 8тас.

ЗН471

8Н-173: '11 ЯМР (300 МГц, СБС1₃): δ 8,70 (к, 2Н), 8,32 (й, 1=8,0 Гц, 2Н), 7,60 (й, 1=7,4 Гц, 2Н), 7,406,80 (т, 26Н), 6,47 (й, 1=7,9 Гц, 2Н), 6,25 (й, 1=8,0 Гц, 2Н), 4,81 (т, 2Н), 4,70 (т, 2Н), 4,50 (т, 2Н), 4,27 (!, 1=7,1 Гц, 4Н), 3,95 (т, 2Н), 3,30-3,08 (т, 4Н), 2,60 (!, 1=2,61 Гц, 4Н), 2,45-2,25 (т, 2Н), 2,12-1,20 (т, 36Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СБС1₃): δ 170,78, 170,41, 170,14, 169,88, 148,00, 140,45, 138,98, 136,19, 128,53, 128,44, 127,68, 127,56, 127,28, 123,70, 121,67, 121,55, 119,13, 118,57, 111,29, 110,25, 59,98, 59,06, 54,01, 50,40, 50,20, 50,01, 47,76, 35,93, 34,61, 31,74, 29,53, 29,09, 28,08, 24,83, 23,30, 22,95, 20,82.

- 49 017279

8Н-175

8Η-175: Ή ЯМР (300 МГц, Ό₂Ο): δ 7,87 (к, 1Η), 7,71 (к, 2Η), 7,30-7,11 (т, 10Η), 6,05 (к, 2Н), 4,64 (т, 2Н), 4,35-4,16 (т, 10Η), 3,81 (т, 2Н), 2,60 (ΐ, 1=6,2 Гц, 2Н), 2,54 (к, 6Н), 2,10 (т, 2Н), 1,98 (т, 2Н), 1,751,42 (т, 34Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, Ό₂Ο): δ 175,85, 174,79, 172,08, 150,63, 147,37, 141,60, 131,85, 131,09, 129,93, 128,50, 126,79, 64,57, 63,53, 59,73, 54,54, 53,66, 52,90, 52,59, 38,49, 35,57, 34,90, 33,93, 31,29, 30,32, 28,96,

28,65, 27,63, 27,38, 25,24, 24,49, 18,22.

8Η-176: Ή ЯМР (300 МГц, Ό₂Ο): δ 7,48 (к, 2Н), 7,10-6,67 (20Н), 5,84 (к, 2Н), 4,65 (т, 2Η), 4,55 (т, 2Η), 4,42-4,16 (т, 8Η), 3,80 (т, 2Η), 2,53 (к, 6Η), 2,25-1,30 (т, 26Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, Ό₂Ο): δ 172,72, 171,00, 169,10, 143,67, 141,49, 141,30, 129,07, 127,96, 127,58, 127,39, 124,10, 62,76, 61,24, 59,43, 57,67, 57,27, 55,00, 53,20, 41,26, 32,12, 31,31, 26,98, 24,69, 15,62.

8Η-177: Ή ЯМР (300 МГц, Ό₂Ο): δ 7,62 (к, 2Н), 7,15-6,90 (20Н), 5,90 (к, 2Η), 4,75 (т, 4Η), 4,43 (к, 4Η), 4,39 (т, 4Η), 3,83 (т, 2Η), 2,80 (к, 6Η), 2,46 (т, 2Η), 2,22-1,90 (т, 8Н), 1,75-1,43 (т, 10Η), 1,36 (й, 1=8,4 Гц, 6Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, Ό₂Ο): δ 175,14, 173,74, 172,25, 146,86, 144,06, 143,66, 131,72, 131,66, 130,55, 130,21, 129,97, 125,60, 65,46, 64,63, 62,98, 60,36, 59,70, 52,87, 45,02, 34,98, 33,87, 32,30, 30,26, 18,17.

еь

Ν'νΉι

Ν=Ν Η

8Η-178: Ή ЯМР (300 МГц, Ό₂Ο): δ 7,88 (к, 2Η), 7,46-7,30 (т, 10Η), 6,19 (к, 2Н), 4,78 (т, 6Н), 4,42 (т, 2Н), 4,30 (т, 2Н), 3,90 (т, 2Н), 3,74 (т, 4Н), 3,60 (т, 4Н), 3,52 (т, 2Н), 3,28 (т, 2Н), 2,64 (к, 6Н), 2,401,56 (т, 24Н), 1,49 (й, 1=7,0 Гц, 6Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, Ό₂Ο): δ 176,14, 174,90, 172,10, 151,28, 141,51, 131,90, 131,19, 130,01, 127,32, 64,64, 63,61, 59,73, 58,06, 53,68, 52,96, 52,05, 47,49, 38,50, 35,53, 34,90, 33,89, 30,35, 27,61, 24,48, 18,18.

8Η-179: Ή ЯМР (300 МГц, Ό₂Ο): δ 7,87 (к, 2Н), 7,40-7,22 (т, 10Η), 6,19 (к, 2Н), 4,74 (т, 6Η), 4,42 (т, 2Η), 4,30 (т, 2Η), 4,05 (т, 2Η), 3,79 (ΐ, 1=5,1 Гц, 4Н), 3,71 (ΐ, 1=5,1 Гц, 4Н), 3,53 (Ьк, 8Η), 3,10 (т, 4Η), 2,40-1,60 (т, 24Η), 1,50 (й, 1=7,0 Гц, 6Η);

¹³С ЯМР (75 МГц, Ό₂Ο): δ 176,15, 174,92, 172,00, 151,25, 141,51, 131,90, 131,19, 130,07, 127,28, 64,64, 63,60, 59,57, 58,60, 58,06, 53,69, 52,95, 52,14, 50,67, 47,56, 38,49, 35,53, 34,89, 30,34, 27,60, 24,47, 18,46.

ЗН-180

8Η-180: Ή ЯМР (300 МГц, Ό₂Ο): δ 7,60 (к, 2Η), 7,30-7,10 (т, 10Η), 6,68 (к, 4Η), 6,15 (к, 2Н), 4,74 (т, 2Н), 4,52-4,30 (т, 4Н), 4,20 (т, 2Н), 4,19-4,02 (т, 8Н), 3,80 (т, 2Н), 3,13 (т, 2Н), 2,40-1,12 (т, 42Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, Ό₂Ο): δ 172,79, 170,36, 169,39, 148,33, 139,54, 129,24, 128,55, 127,41, 123,46, 61,91, 60,88, 60,28, 57,02, 56,06, 50,99, 50,38, 49,08, 48,13, 35,98, 34,26, 33,10, 32,32, 29,20, 27,85, 25,11, 21,95, 16,84.

- 50 017279

8Н-181: ’Н ЯМР (300 МГц, П₂О): δ 7,87 (8, 2Н), 7,31 (т, 4Н), 7,08 (т, 4Н), 6,16 (8, 2Н), 4,82-4,72 (т, 6Н), 4,50 (т, 2Н), 4,26 (т, 2Н), 3,88 (т, 2Н), 3,78 (т, 4Н), 3,68 (Ь8, 8Н), 2,61 (8, 6Н), 2,36-1,53 (т, 24Н), 1,50 (ΐ, 1=7,0 Гц, 6Н);

’³С ЯМР (75 МГц, О₂О): δ 176,03, 174,85, 172,05, 163,45, 151,16, 137,40, 131,90, 127,33, 118,51, 64,59, 63,58, 59,73, 58,02, 53,64, 52,30, 51,87, 47,26, 38,48, 35,53, 34,86, 33,85, 30,27, 27,60, 24,47, 18,16.

8Н-182: ’Н ЯМР (300 МГц, П₂О): δ 7,61 (8, 2Н), 7,23 (т, 4Н), 6,78 (т, 4Н), 6,53 (т, 4Н), 6,12 (8, 2Н), 4,70 (т, 2Н), 4,32 (т, 2Н), 4,18 (т, 2Н), 4,10-3,83 (т, 6Н), 2,61 (8, 6Н), 2,22-1,03 (т, 42Н);

’³С ЯМР (75 МГц, О₂О): δ 172,53, 171,92, 169,39, 160,60, 148,31, 139,38, 134,84, 129,40, 128,42, 115,60, 61,76, 60,78, 57,20, 50,94, 50,27, 49,59, 35,99, 34,42, 33,22, 32,32, 31,33, 29,41, 27,95, 25,14, 21,99, 15,66.

8Н-183: ’Н ЯМР (300 МГц, П₂О): δ 7,87 (8, 2Н), 7,38-7,22 (т, 4Н), 7,12-6,99 (т, 4Н), 6,17 (8, 2Н), 4,85-4,74 (т, 6Н), 4,34 (т, 2Н), 4,27 (т, 2Н), 3,98 (т, 2Н), 3,80-3,65 (т, 8Н), 3,55 (8, 8Н), 3,10 (т, 2Н), 2,37-1,40 (т, 30Н).

8Н-184: ’Н ЯМР (300 МГц, П₂О): δ 7,62 (8, 2Н), 7,20 (т, 4Н), 6,90-6,70 (т, 4Н), 6,69-6,50 (Ь8, 4Н), 6,19 (8, 2Н), 4,72 (т, 2Н), 4,50-4,28 (т, 4Н), 4,20-3,80 (т, 6Н), 3,12 (т, 4Н), 2,22-0,98 (т, 42Н).

8Н-185: ’Н ЯМР (300 МГц, П₂О): δ 7,67 (8, 2Н), 7,26-7,10 (т, 10Н), 6,07 (8, 2Н), 4,73 (т, 2Н), 4,28 (т, 2Н), 4,25-4,10 (т, 6Н), 3,83 (т, 2Н), 2,54 (8, 6Н), 2,20-1,92 (т, 4Н), 1,86-1,30 (т, 34Н), 0,98-0,80 (т, 12Н );

’³С ЯМР (75 МГц, О₂О): δ 177,43, 173,05, 172,22, 148,26, 139,29, 129,28, 128,50, 127,43, 123,81, 62,00, 60,99, 57,20, 51,08, 50,76, 50,40, 36,00, 33,06, 32,36, 31,32, 29,52, 28,62, 28,26, 27,77, 25,76, 25,10, 21,93, 15,65.

8Н-186: ’Н ЯМР (300 МГц, П₂О): δ 7,58 (8, 2Н), 7,20-6,90 (т, 10Н), 6,61 (8, 4Н), 6,08 (8, 2Н), 4,72 (т, 2Н), 4,30 (т, 2Н), 4,10 (т, 2Н), 3,95 (т, 4Н), 3,80 (т, 2Н), 2,52 (8, 6Н), 2,25-1,05 (т, 36Н), 1,02-0,75 (т, 14Н );

’³С ЯМР (75 МГц, О₂О): δ 174,88, 174,40, 171,91, 151,04, 142,52, 142,31, 131,63, 130,92, 130,00, 125,57, 125,09, 64,30, 63,24, 59,74, 53,42, 52,90, 38,63, 38,20, 35,90, 34,85, 34,28, 33,87, 32,69, 32,05, 31,73, 30,20, 29,07, 27,76, 24,49, 18,23.

- 51 017279

8Н-187: ¹Н ЯМР (зоо МГц, Б₂О): δ 7,56 (к, 2Н), 7,4о-7,о5 (т, 16Н), 7,о2 (т, 2Н), 6,9о (т, 2Н), 6,78 (т, 4Н), 6,11 (к, 2Н), 4,75 (т, 2Н), 4,49 (т, 2Н), 4,25 (т, 4Н), 4,2о (т, 2Н), з,98 (т, 2Н), з,84 (т, 2Н), 2,49 (к, 6Н), 2,з8 (т, 4Н), 2,24-1,22 (т, з6Н).

8Н-188: ¹Н ЯМР (зоо МГц, Б₂О): δ 7,Ю-6,92 (т, ЮН), 6,85 (т, 4Н), 6,7о (т, 4Н), 5,85 (к, 2Н), 4,65 (т, 2Н), 4,з2 (т, 2Н), 4,о6 (т, 2Н), з,82 (т, 2Н), 2,74 (т, 4Н), 2,54 (к, 6Н), 2,15 (т, 4Н), 2,о2-1,2о (т, з4Н);

^1зС ЯМР (75 МГц, Б₂О): δ 172,з6, 171,92, 169,41, 16о,17, 141,4Θ, 141,15, 1з9,27, 129,о1, 127,66,

127,46, 61,88, 6о,87, 57,18, 5о,94, з9,72, з5,99, зз,2о, з2,49, з1,6о, з1,зз, 27,79, 25,19, 21,91, 15,69.

5Н-189

8Н-189: ¹Н ЯМР (зоо МГц, Б₂О): δ 7,18-6,99 (т, ЮН), 6,95 (т, 4Н), 6,8о (т, 4Н), 5,9о (к, 2Н), 4,72 (т, 2Н), 4,з6 (т, 2Н), 4,1з (т, 2Н), з,89 (т, 2Н), з,зо (Ьт, 4Н), 2,6з (к, 6Н), 2,зо (т, 4Н), 2,12-1,18 (т, з4Н).

8Н-19о: Ί1 ЯМР (зоо МГц, Б₂О): δ ^1зС ЯМР (75 МГц, IX)): δ 7,15-6,9з (т, ЮН), 6,95 (т, 4Н), 6,79 (т, 4Н), 6,85 (к, 2Н), 4,74 (т, 2Н), 4,з6 (т, 2Н), 4,1з (т, 2Н), з,88 (т, 2Н), 2,8о (т, 4Н), 2,58 (к, 6Н), 2,з61,о8 (т, 42Н).

8Н-191: ^!Н ЯМР (зоо МГц, IX)): δ 7,75 (к, 2Н), 7,4о-7,2о (т, ЮН), 6,16 (к, 2Н), 4,74 (т, 2Н), 4,з6 (т, 2Н), 4,з2-4,2о (т, 6Н), з,89 (т, 2Н), 2,95 (ΐ, 1=6,6 Гц, 4Н), 2,64 (к, 6Н), 2,з2-1,2о (т, з8Н).

8Н-198: ^!Н ЯМР (зоо МГц, IX)): δ 7,7о (к, 2Н), 7,зо-7,12 (т, ЮН), 6,о7 (к, 2Н), 4,65 (т, 2Н), 4,з2 (т, 2Н), 4,25-4,Ю (т, 6Н), з,84 (т, 2Н), з,Ю (т, 4Н), 2,55 (к, 6Н), 2,2о-1,2о (т, з8Н), о,98 (т, 2Н);

^1зС ЯМР (75 МГц, IX)): δ 17з,17, 172,22, 169,5з, 148,15, 1з9,16, 129,з2, 128,54, 127,4о, 124,о4, 7о,2о, 69,6з, 62,о1, 6о,98, 57,19, 51,1о, 5о,82, 5о,6з, 5о,з5, з5,97, зз,о6, з2,з6, з1,з7, 29,29, 28,17, 27,77, 26,48, 25,8о, 25,Ю, 22,58, 21,95, 15,67.

8Н-199: ^!Н ЯМР (зоо МГц, IX)): δ 7,7з (к, 2Н), 7,2о-7,о2 (т, ЮН), 6,о5 (к, 2Н), 4,65 (т, 2Н), 4,зо (т, 2Н), 4,22-4,о8 (т, 6Н), з,84 (т, 2Н), з,о8 (т, 4Н), 2,52 (к, 6Н), 2,25-о,9о (т, 42Н);

^1зС ЯМР (75 МГц, IX)): δ 17з,о2, 172,1з, 169,49, 147,91, 1з9,о7, 129,з1, 128,55, 127,41, 124,14, 7о,25, 66,87, 61,9з, 6о,9о, 57,18, 5о,97, 5о,22, з6,о1, зз,о8, з2,з7, з1,4о, 29,зз, 28,2з, 27,74, 25,11, 22,62, 21,97, 15,7о.

- 52 017279

8Н-200: Ή ЯМР (300 МГц, Ό₂Ο): δ 7,77 (б, 2Н), 7,22-7,08 (т, 10Н), 6,05 (б, 2Н), 4,65 (т, 2Н), 4,374,22 (т, 6Н), 4,16 (т, 2Н), 3,82 (т, 2Н), 3,48 (т, 4Н), 3,08 (т, 4Н), 2,52 (б, 6Н), 2,16-1,42 (т, ЗОН), 1,01 (т, 4Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, Ό₂Ο): δ 173,11, 172,16, 169,49, 148,01, 139,10, 129,32, 128,56, 127,38, 124,62, 70,59, 68,39, 66,87, 61,96, 60,95, 57,19, 50,73, 50,24, 35,98, 33,09, 32,36, 31,40, 27,77, 25,43, 25,12, 21,96, 15,69.

8Н-201: Ή ЯМР (300 МГц, Ό₂Ο): δ 7,60 (б, 2Н), 7,40-6,70 (т, 20), 6,16 (б, 2Н), 4,75 (т, 2Н), 4,49 (т, 2Н), 4,25 (т, 4Н), 4,20 (т, 2Н), 3,98 (т, 2Н), 3,84 (т, 2Н), 2,49 (б, 6Н), 2,40-1,20 (т, 48Н).

8Н-202: Ή ЯМР (300 МГц, Ό₂Ο): δ 7,35-7,16 (т, 10Н), 5,02 (т, 2Н), 4,74 (т, 2Н), 4,39 (т, 2Н), 4,27 (т, 2Н), 3,92 (т, 2Н), 3,55 (т, 4Н), 3,34 (т, 4Н), 2,64 (б, 6Н), 2,28-1,20 (т, 54Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, Ό₂Ο): δ 175,35, 174,62, 172,04, 141,98, 131,60, 130,66, 129,70, 75,84, 73,59, 64,68, 63,33, 59,74, 55,57, 53,55, 38,93, 35,65, 35,05, 33,93, 32,55, 32,31, 30,64, 28,86, 27,85, 24,68, 18,29.

8Н-206: Ή ЯМР (300 МГц, Ό₂Ο): δ 7,44 (б, 2Н), 7,30-6,80 (т, 10Н), 6,49 (б, 4Н), 5,99 (б, 2Н), 4,63 (т, 2Н), 4,28 (т, 2Н), 4,06 (т, 2Н), 3,92 (т, 2Н), 3,80 (т, 4Н), 2,55 (б, 6Н), 2,28-0,95 (т, 42Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, Ό₂Ο): δ 175,04, 174,33, 171,97, 150,65, 143,08, 141,97, 131,63, 131,00, 130,59, 129,60, 126,25, 64,31, 63,33, 59,74, 53,47, 52,92, 38,47, 36,87, 35,85, 34,86, 33,87, 31,85, 30,42, 27,65, 24,52, 18,26.

8М-410: Ή ЯМР ^Ο^6₄, 300 МГц): δ 8,91 (т, 2Н), 7,37-7,13 (т, 24Н), 6,16 (т, 2Н), 4,73 (т, 2Н), 4,53 (т, 2Н), 4,06-3,73 (т, 8Н), 3,37-3,27 (т, 6Н), 2,92 (т, 6Н), 2,68 (т, 6Н), 2,30 (т, 2Н), 2,05-1,81 (т, 10Н), 1,55 (т, 6Н);

¹³С ЯМР (МеΟΗ-б₄, 300 МГц): δ 174,4, 172,3, 169,3, 168,6, 142,2, 142,0, 139,3, 129,1, 128,7, 128,5, 127,8, 127,5, 127,3, 61,8, 57,3, 52,6, 51,8, 46,6, 34,9, 32,4, 31,4, 30,9, 27,3, 15,3.

Пример 12. Связывание ингибиторов с Х1АР ΒΙΒ3.

Для исследования связывающей способности бивалентных миметиков 8тас с белками 1АР был разработан и применен чувствительный и количественный анализ связывания ίη νίίτο с использованием метода, основанного на флуоресцентной поляризации (ФП), чтобы определить связывающее сродство миметиков 8тас к белку Х1АР (N^кο1ονБка-Сο1еБка е! а1., Апа1 Вюсйет. 332:261-73 (2004)). В этом анализе 5-карбоксифлуоресцеин (5-Рат) сшивали с боковой цепью лизина мутантного пептида 8тас, АЬиКРР-К(5-Рат)-№Н₂ (обозначаемого как 8М5Р). Определено, что значение К₄ связывания пептида 8М5Р с белком Х1АР ΒΙΒ3 составляет 17,92 нМ, указывая на то, что этот пептид связывается с поверхностным карманом белка Х1АР с высоким сродством. Рекомбинантный белок Х1АР ΒΙΒ3 человеческого Х1АР (остатки 241-356), гибридизованный с гистидиновой меткой, является устойчивым и растворимым, и его использовали для анализа связывания на основе ФП.

Эксперименты по связыванию в зависимости от дозы выполняли путем последовательных разведений тестируемых соединений в диметилсульфоксиде. 5 мкл тестируемых образцов и предварительно инкубированный белок Х1АР ΒΙΒ3 (30 нМ) и пептид 8М5Р (5 нМ) в аналитическом буфере (100 мМ фосфат калия, значение рН 7,5; 100 мкг/мл бычьего гамма-глобулина; 0,02% азида натрия, приобретенного у компании ΙηνίΒο^η™ Ь1Ре ТесНгю^ду) добавляли в 96-луночные черные круглодонные планшеты Оупех

- 53 017279 (Р18Йег 8с1еп!1йс) с получением конечного объема 125 мкл. Каждый анализ включал контроль связывания пептида, включающий рекомбинантный ген Х1АР В1К3 белок и 8М5Р (эквивалентный 0% ингибирования), и контроль свободного пептида, содержащий только свободный 8М5Р (эквивалентный 100% ингибирования). Величины поляризации измеряли после 3 ч инкубации, когда связывание достигало равновесия, с использованием устройства ИЬТКА КЕАБЕК (Тесап И.8. 1пс., Кекеагсй Тпаид1е Рагк, ИС). Значения 1С₅₀, ингибирующей концентрации, при которой замещается 50% связанного пептида, определяли графически методом наименьших квадратов для нелинейных функций. Подбор аппроксимирующей функции осуществляли с использованием программы СКАРНРАБ РК18М (СгарйРай 8ой^аге, 1пс., 8ап Б1едо, СА).

Пример 13. Анализ связывания с белком Х1АР на основе флуоресцентной поляризации.

Миметик 8тас инкубировали с человеческим белком Х1АР (остатки 120-356) (10 нМ) и бивалентным пептидом на основе 8тас с флуоресцентной меткой, называемым 8тас2-Р (0,5 нМ), в качестве метки в аналитическом буфере (100 мМ фосфат калия, значение рН 7,5; 100 мкг/мл бычьего гаммаглобулина; 0,02% азида натрия) в 96-луночных черных круглодонных планшетах Бупех (Р18Йег 8с1епййс). Определяли, что 8тас2-Р связывается с Х1АР, при этом значение К₄ составляет 1,2 нМ. Каждый анализ включал контроль, содержащий Х1АР и пептид 8тас2-Р (эквивалентно 0%-ному ингибированию), а также только 8тас-2Р (эквивалентно 100%-ному ингибированию). Величины поляризации измеряли после инкубации в течение 2 ч с использованием устройства И1!га Р1а!е Кеайег. Значение 1С₅₀, ингибирующей концентрации, при которой замещается 50% связанной метки, определяли графически методом наименьших квадратов для нелинейных функций. Подбор аппроксимирующей функции осуществляли с использованием программы Сгарйрай Ргып®.

Бивалентная метка

8тас2-Г

ЕАМ

При проведении анализа связывания бивалентный миметик 8тас 8Н-164 имел значение 1С₅₀ 1,9±0,5 нМ (фиг. 1). Это значение было более чем в 500 раз лучшим, чем сродство к связыванию одновалентного миметика 8тас 8Н-122, и более чем в 5000 раз более эффективным, чем для природного пептида 8тас АVРI (ЗЕЦ 1Б ΝΌ: 1). Эти данные дают возможность предположить, что бивалентные миметики 8тас действуют как эффективные ингибиторы активности 1АР. Значения сродства к связыванию дополнительных бивалентных миметиков 8тас представлены в табл. 4.

Таблица 4

Наименование	Значения сродства к связыванию ΧΙΑΡ ΒΙΚ3 (1С50 [мкМ])
ΥΡ-245Ρ3	1-10
ΥΡ-246Ρ	0,1-1

ΥΡ-330	<0,1
ΥΡ-337	<0,1
ΥΡ-350	<0,1
ΥΡ-356	<0,1
ΥΡ-376	<0,1
ΥΡ-377	<0,1
8М-401	<0,1
ЗМ-402	<0,1
3Μ-403	<0,1
5М-404	<0,1
5М-405	<0,1
5М-406	<0,1
8М-407	<0,1
ЗМ-408	<0,1
ЗМ-409	<0,1
8Н-207	<1

- 54 017279

Пример 14. Ингибирование роста клеток бивалентными миметиками 8тас.

Исследовали влияние 8Н-164 на рост различных линий раковых клеток. Клетки высевали в 96-луночные плоскодонные планшеты для клеточных культур при плотности 3000 клеток на лунку с тестируемым соединением и инкубировали при 37°С в атмосфере, состоящей из 95% воздуха и 5% СО₂, в течение 4 суток. Коэффициент ингибирования роста клеток после обработки при различных концентрациях соединения определяли с использованием набора \У8Т-8 (2-(2-метокси-4-нитрофенил)-3-(4нитрофенил)-5-(2,4-дисульфофенил)-2Н-тетразолия мононатриевая соль; БоцпФо Мо1еси1аг ТесЬпо1од1е8, 1пс., Гейтерсберг, Мэриленд). ХУ8Т-8 добавляли в каждую лунку до достижения концентрации 10%, а затем планшеты инкубировали при 37°С в течение 2-3 ч. Оптическую плотность образцов измеряли при 450 нм с использованием устройства иЬТВЛ Тесап ВеаФег (Мо1еси1аг Бе\тсе). Концентрацию тестируемого соединения, которая ингибирует рост клеток на 50% (1С₅₀), рассчитывали путем сравнения оптической плотности в необработанных клетках и в клетках, обработанных тестируемым соединением.

При проведении испытания с клеточной линией Μ^Α-ΜВ-231 рака молочной железы человека и клеточной линией ΜΑΜΗΓ-ΒΜ меланомы 8Н-164 показал значение 1С₅₀ 1,4 нМ (фиг. 2). Кроме того, 8Н-164 также является эффективным ингибитором нескольких других линий раковых клеток (фиг. 2).

Пример 15. Индукция клеточной гибели бивалентными миметиками 8тас.

Способность 8Н-164 вызывать клеточную гибель в различных линиях раковых клеток проверяли с использованием анализа на жизнеспособность клеток с трипановым синим. 0,3 х10⁶ клеток высевали в 6луночные планшеты и инкубировали при 37°С в атмосфере, состоящей из 95% воздуха и 5% СО2 без тестируемого соединения или с ним в течение 2 суток. Для определения жизнеспособности клеток использовали разведение 1:1 0,4% раствором трипанового синего (ЧпуЦгодеп Согрогайоп). Было видно, что 8Н164 является эффективным индуктором клеточной гибели при инкубации с клетками Μ^Α-ΜВ-231, ΜΑΜ^Е-3Μ и ОVСЛВ-4 (фиг. 3). В каждом случае 8Н-164 вызывал по меньшей мере 70% гибель клеток при концентрации 100 нМ.

Пример 16. Влияние комбинаций бивалентных миметиков 8тас и других агентов на ингибирование роста клеток.

Чтобы проверить способность бивалентных миметиков 8тас к сенсибилизации раковых клеток к эффектам ингибирования роста другими веществами, тест на ингибирование роста клеток выполняли с различными веществами, отдельно или в комбинации с увеличивающимися дозами бивалентных миметиков 8тас. Воздействие ТВΑI^ на клетки рака молочной железы Μ^Α-ΜВ-231 (2ЬМР) дало значение 1С₅₀ 2,2 нг/мл (фиг. 4А). Комбинация ΊΉ-ΑΙΕ и 8Н-164 значительно понизила значение 1С₅₀, причем в присутствии 100 нМ 8Н-164 значение 1С₅₀ для ΙΉ-ΑΙΕ составляет 0,008 нг/мл. Подобный результат был отмечен для клеток Μ^Α-ΜВ-453 рака молочной железы, где ТВΑI^ отдельно имел значение 1С₅₀>1000 нг/мл, а сочетание ТВΑI^ и 100 нМ 8Н-164 имело значение 1С₅₀ 16 нг/мл (фиг. 4Б). Для клеток РС-3 рака простаты человека ТВΑI^ отдельно имел значение 1С₅₀>300 нг/мл, в то время как ΙΉ-ΑΙΕ в присутствии 100 нМ 8Н-164 имел значение Ιί.'₅₀ 2 нг/мл (фиг. 4В). 8Н-122 имело подобный, хотя и менее сильный эффект, причем комбинация ΙΉ-ΑΙΕ и 1000 нМ 8Н-122 имела значение Ю₅₀ 3 0 нг/мл. Напротив, 500 нМ 8Н-149 не понижали значение Ιί’₅₀ для 'ΓΡΑΙΕ.

8Н-164 также проверяли на его способность увеличивать эффекты ингибирования роста под действием химиотерапевтических агентов цисплатина и митоксантрона. При испытании на клетках Μ^Α-ΜВ231 (2ЬМР) рака молочной железы человека 8Н-164 при концентрации 100 нМ сенсибилизировало клетки к ингибированию роста под действием обоих агентов (фиг. 5). Эти данные указывают на то, что бивалентные 8тас миметики способны сенсибилизировать клетки к эффектам ингибирования роста под действием разнообразных агентов для лечения рака.

Пример 17. Анализ апоптоза.

Анализ апоптоза проводили с использованием набора для определения апоптоза (Вю ^8юп Ве8еагсй РгоФис!8, Маунтин Вью, Калифорния) в соответствии с протоколом изготовителя. Кратко, клетки подвергали воздействию миметиков 8тас в течение 12 ч, собирали и промывали ледяным буфером ФСБ. Клетки окрашивали с помощью Аннексина V-ЕIТС и пропидиумиодида (Ρ.Ι.) в течение 15 мин при комнатной температуре в темноте и немедленно анализировали с помощью проточного цитометра ЕΑС8 СЛ^IВυВ (Вес!оп Б1скт8оп, Эрембодегем, Бельгия). Клетки, которые были окрашены Аннексином V (+) и Ρ.Ι. (-), рассматривали как клетки на ранней стадии апоптоза. Клетки, которые были окрашены Аннексином V (+) и Ρ.Ι. (+), рассматривали как апоптические клетки на поздней стадии, а клетки, которые были окрашены Аннексином V (-) и Ρ.Ι. (+), рассматривали как погибшие клетки (фиг. 6).

Пример 18. Сродство к связыванию с ΧΙΑΡ и активность при ингибировании роста клеток.

Сродство к связыванию с ΧΙΑΡ и активность при ингибировании роста клеток миметиками 8тас представлены в табл. 5.

- 55 017279

Таблица 5

Соединение	Связывание с ΧΙΑΡ, значения Ю50 [нМ]	Значения 1С50 (нМ) в МЗТ-анализе (МОА-МВ231)	Значения 1С5ц (нМ) в \Л/ЗТ-анализе ЗК-ОУ3
8Н-142	<50	<100
3Η-143	<50
ЗН-146	<50
8Н-153	<10	<1000
ЗН-155	<10	<100	<100
ЗН-156	<10	<1000	<1000
ЗН-158	<10	<1000	<1000

ЗН-159	<10	<1000	<1000
ЗН-164	<10	<10	<10
8Н-165	<10	<1000	<1000
ЗН-166	<10	<1000	<1000
8Н-167	<10	<10	<10
ЗН-172	<10	<1000
3Η-173	>10 000	>10 000	>10 000
ЗН-175	<50	<100	<100
ЗН-176	<10	<100
8Н-177	<10	<100
ЗН-178	<100	<10 000
ЗН-179	<100	<10 000
ЗН-180	<100	<1000	<1000
ЗН-181	<100	<10 000
ЗН-182	<100	<10	<10
3Η-183	<100	<10 000
ЗН-184	<100	<10	<100
ЗН-185	<50	<10	<10
ЗН-186	<50	<10	<10
ЗН-187	>10 000	>10 000	>10 000
ЗН-188	<100	<100	<100
ЗН-189	<100	<100	<100
ЗН-190	<100	<10	<10
ЗН-191	<100	<100	<100
ЗН-198	<100	<10	<10
ЗН-199	<10	<10	<10
ЗН200	<10	<100	<100
ЗН-201	>10 000	>1000	>1000
ЗН-202	<100	<10	<10
ЗН-206	<1000	<1000	<1000
ΥΡ-317	<100	<100
ΥΡ-343	<100	<100
ΥΡ-381	<10	<10	<10
ΥΡ-383	<10	<10	<10
ΥΡ-385	<10	<10	<10
8М-410	<100	<500	<500

После полного описания изобретения специалистам в данной области техники понятно, что то же самое можно осуществить при широком и эквивалентном диапазоне условий, соединений и при других параметрах, не влияя на объем изобретения или какого-либо его воплощения. Все патенты, патентные заявки и публикации, упомянутые здесь, включены в описании путем ссылки в полном объеме.

Claims (51)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Соединение, имеющее формулу где А₂ и А₂' независимо выбраны из группы, состоящей из атома водорода и С_1-3алкила, который является незамещенным или замещен одним из следующего: ОН или С(О)С_1-3алкил;

   X и X' независимо представляют собой С_1-3алкил, который является незамещенным или замещен одним индолом;

   и Ώ' независимо выбраны из группы, состоящей из

   - 5б 017279 и и и¹ независимо выбраны из группы, состоящей из ΝΗΖ, и

   РЬ

   Ζ представляет собой линкер, ковалентно связывающий один из Ό и υ с одним из Ό' и и', выбранный из группы, состоящей из или его фармацевтически приемлемые соли.

   - 57 017279
2. 2. Соединение по п.’, где Ζ связывает ϋ с и'.
3. 3. Соединение по п.’, где Ζ связывает Ώ с Ώ'.
4. 4. Соединение по п.’, где Ζ связывает и с и'.
5. 5. Соединение по п.’, выбранное из группы, состоящей из

   ΝΗ

   - 58 017279

   - 59 017279

   - 60 017279

   8Н-199 или их свободного основания, или их другой фармацевтически приемлемой соли.
6. 6. Соединение, имеющее формулу где Ό представляет собой (СН₂)-К_5с-(СН₂)_т;

   υ выбран из группы, состоящей из 0!Ви, -0Ме, -ОН и -NΗСΗΡЬ₂;

   т равно 2 или 3;

   К_5с выбран из группы, состоящей из ЯН и Νί.’02ί.Ή₂Ρ1ι;

   К₇ выбран из группы, состоящей из атома водорода, С0₂!Ви и СΟСΗ(К_7Ь)N(К_7с)СΟ₂ίВи;

   К_7Ь представляет собой незамещенный С1_-3алкил;

   К7с представляет собой незамещенный С1-3алкил.
7. 7. Соединение по п.6, выбранное из группы, состоящей из

   - 61 017279
8. 8. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по п.1 и фармацевтически приемлемый носитель.
9. 9. Способ индукции апоптоза в клетке, при котором клетку приводят в контакт с соединением по п.1.
10. 10. Способ сенсибилизации клетки к индуктору апоптоза, при котором клетку приводят в контакт с соединением по п.1.
11. 11. Способ по п.10, дополнительно включающий приведение клетки в контакт с индуктором апоптоза.
12. 12. Способ по п.11, где указанный индуктор апоптоза представляет собой химиотерапевтический агент.
13. 13. Способ по п.11, где указанный индуктор апоптоза представляет собой облучение.
14. 14. Способ по п.11, где указанный индуктор апоптоза представляет собой фактор некроза опухоли (ΊΝΡ), Т^Р-связанный лиганд либо агонист ТКА1Б-К1 или ТКА1Б-К2.
15. 15. Способ по п.14, где указанный ΤNΡ-связанный лиганд выбран из группы, состоящей из лиганда ТКАМР, лиганда Раз/СО95, лиганда Т№К-1 и ТКА1Б.
16. 16. Способ по п.15, где указанный ΤNΡ-связанный лиганд представляет собой ТКА1Б.

    - 62 017279
17. 17. Способ по п.15, где указанный агонист ТКА1Б-К1 или ТКА1Б-К2 представляет собой антитело.
18. 18. Способ лечения, облегчения или предупреждения расстройств, чувствительных к индукции апоптоза, у животного, при котором указанному животному вводят терапевтически эффективное количество соединения по п.1.
19. 19. Способ по п.18, при котором дополнительно вводят индуктор апоптоза.
20. 20. Способ по п.18, где указанный индуктор апоптоза представляет собой химиотерапевтический агент.
21. 21. Способ по п.19, где указанный индуктор апоптоза представляет собой облучение.
22. 22. Способ по п.19, где указанный индуктор апоптоза представляет собой ΤΝΡ, ΊΝΡ-связанный лиганд либо агонист ТКА1Б-К1 или ТКА1Б-К2.
23. 23. Способ по п.22, где указанный Т№-связанный лиганд выбран из группы, состоящей из лиганда ТКАМР, лиганда Ра8/СО95, лиганда ТНРК-1 и ТКА1Б.
24. 24. Способ по п.23, где указанный Т№-связанный лиганд представляет собой ТКА1Б.
25. 25. Способ по п.22, где указанный агонист ТКА1Б-К1 или ТКА1Б-К2 представляет собой антитело.
26. 26. Способ по п.18, где указанное расстройство, чувствительное к индукции апоптоза, представляет собой гиперпролиферативное заболевание.
27. 27. Способ по п.26, где указанное гиперпролиферативное заболевание представляет собой рак.
28. 28. Способ по п.19, где указанное соединение по п.1 вводят перед указанным индуктором апоптоза.
29. 29. Способ по п.19, где указанное соединение по п.1 вводят после указанного индуктора апоптоза.
30. 30. Способ по п.19, где указанное соединение по п.1 вводят одновременно с указанным индуктором апоптоза.
31. 31. Способ лечения, облегчения или предупреждения гиперпролиферативного заболевания у животного, при котором указанному животному вводят терапевтически эффективное количество соединения по п.1.
32. 32. Способ по п.31, при котором дополнительно вводят индуктор апоптоза.
33. 33. Способ по п.32, где указанный индуктор апоптоза представляет собой химиотерапевтический агент.
34. 34. Способ по п.32, где указанный индуктор апоптоза представляет собой облучение.
35. 35. Способ по п.32, где указанный индуктор апоптоза представляет собой Т№, 'ТИР-связанный лиганд или агонист ТКА1Б-К1 или ТКА1Б-К2.
36. 36. Способ по п.35, где указанный Т№-связанный лиганд выбран из группы, состоящей из лиганда ТКАМР, лиганда Ε;·ΐ8/ί.Ό95, лиганда 'ТМРК-1 и ТКА1Б.
37. 37. Способ по п.36, где указанный Т№-связанный лиганд представляет собой ТКА1Б.
38. 38. Способ по п.35, где указанный агонист ТКА1Б-К1 или ТКА1Б-К2 представляет собой антитело.
39. 39. Способ по п.31, где указанное гиперпролиферативное заболевание представляет собой рак.
40. 40. Способ по п.32, где указанное соединение по п. 1 вводят перед указанным индуктором апоптоза.
41. 41. Способ по п.32, где указанное соединение по п. 1 вводят после указанного индуктора апоптоза.
42. 42. Способ по п.32, где указанное соединение по п.1 вводят одновременно с указанным индуктором апоптоза.
43. 43. Набор, включающий соединение по п.1, и инструкции по введению указанного соединения животному.
44. 44. Набор по п.43, дополнительно включающий индуктор апоптоза.
45. 45. Набор по п.44, где указанный индуктор апоптоза представляет собой химиотерапевтический агент.
46. 46. Набор по п.45, где указанный индуктор апоптоза представляет собой ТХР, ТХР-связанный лиганд либо агонист ТКА1Б-К1 или ТКА1Б-К2.
47. 47. Набор по п.46, где Т№-связанный лиганд выбран из группы, состоящей из лиганда ТКАМР, лиганда Ε;·ΐ8/ί.Ό95, лиганда ТХЕК-1 и ТКА1Б.
48. 48. Набор по п.47, где указанный Т№-связанный лиганд представляет собой ТКА1Б.
49. 49. Набор по п.46, где указанный агонист ТКА1Б-К1 или ТКА1Б-К2 представляет собой антитело.
50. 50. Набор по п.43, где указанные инструкции даны для введения указанного соединения животным, страдающим гиперпролиферативным заболеванием.
51. 51. Набор по п.50, где указанное гиперпролиферативное заболевание представляет собой рак.

    - 63 017279

    Соединения (Юзд ± СО) [нМ] • 8Н-164(1.9±0.5) о 8 Н-173 (>10,000) ▼ АУР! (18,063 ±1,800) О 5Н-122 (1,396± 122)

    -2 -1 0 1 2 3 4 5 [Соединения] (1од [нМ])

    Фиг. 1 [8Н-164] (нМ)

    Фиг. 2

    Фиг. 3

    - 64 017279

    Только ΤΡΑΙΕ

    Линия клеток (А) железы

    Концентрация препарата (нг/мл)

    Фиг. 4А-4В

    Концентрация препарата (нг/мл) (1С_ЙО >1000)

    Клетки МОА-МВ-453 рака молочной железы Только ТКАН.

    Линия клеток ΜϋΑ-ΜΒ-231 (2ЬМР) рака молочной железы

    Только цисплатин (1С₅о = 0,15)

    Цисплатин + 100 нМ 5Н-164 (1С₅₀ = 0,030) цисплатин + Ю нМ 8Н-164 (1С₅о = 0,026) [цисплатин] (нМ)

    Линия клеток МОА-МВ-231 (2ЬМР) рака молочной железы

    Только митоксантрон (1С₅₀ = 1,7)

    Митоксантрон + 100 нМ 5Н-164 (1С₅о = 0,24) га [митоксантран] (нМ)

    Фиг. 5

    - 65 017279

    Необработанный контроль

    5Н-164 (0,1 нМ) 5Н-164 (1 нМ)

    5Н-164 (10 нМ)

    Γ*^>ν ' -!

    Аннекемн-ν

    Фиг. 6

    Евразийская патентная организация, ЕАПВ

    Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2