CN105451726B - 治疗细胞内感染的方法 - Google Patents

治疗细胞内感染的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105451726B
CN105451726B CN201480036777.1A CN201480036777A CN105451726B CN 105451726 B CN105451726 B CN 105451726B CN 201480036777 A CN201480036777 A CN 201480036777A CN 105451726 B CN105451726 B CN 105451726B
Authority
CN
China
Prior art keywords
ciap
smac
infection
bound
substituted
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201480036777.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105451726A (zh
Inventor
麦克·佩莱格里尼
格雷戈尔·克劳斯-皮特·艾伯特
科林·格伦·贝格利
Original Assignee
Walter and Eliza Hall Institute of Medical Research
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from AU2013902327A external-priority patent/AU2013902327A0/en
Application filed by Walter and Eliza Hall Institute of Medical Research filed Critical Walter and Eliza Hall Institute of Medical Research
Priority to CN202010321579.7A priority Critical patent/CN111481669A/zh
Priority to CN202110198940.6A priority patent/CN112957365A/zh
Publication of CN105451726A publication Critical patent/CN105451726A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN105451726B publication Critical patent/CN105451726B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/191—Tumor necrosis factors [TNF], e.g. lymphotoxin [LT], i.e. TNF-beta
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A61K31/52—Purines, e.g. adenine
    • A61K31/522—Purines, e.g. adenine having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. hypoxanthine, guanine, acyclovir
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/05—Dipeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • A61K38/1761—Apoptosis related proteins, e.g. Apoptotic protease-activating factor-1 (APAF-1), Bax, Bax-inhibitory protein(s)(BI; bax-I), Myeloid cell leukemia associated protein (MCL-1), Inhibitor of apoptosis [IAP] or Bcl-2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A61P31/06—Antibacterial agents for tuberculosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
    • C07K14/4703—Inhibitors; Suppressors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1138—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against receptors or cell surface proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
    • C12N2310/141—MicroRNAs, miRNAs
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/50—Physical structure
    • C12N2310/53—Physical structure partially self-complementary or closed
    • C12N2310/531—Stem-loop; Hairpin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications
    • C12N2320/31—Combination therapy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
    • C12N2730/00011—Details
    • C12N2730/10011—Hepadnaviridae
    • C12N2730/10111—Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
    • C12N2730/10171—Demonstrated in vivo effect
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16071—Demonstrated in vivo effect
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Abstract

本发明提供了一种治疗受治者的细胞内感染的方法，其中所述方法包括给药受治者IAP拮抗剂。在某些实施方式中，所述IAP拮抗剂为Smac模拟物。

Description

治疗细胞内感染的方法
本申请要求享有分别于2013年06月25日、2014年03月24日和2014年05月26日提交的澳大利亚专利申请第2013902327、2014901029和2014901977号的优先权。各个申请的公开内容以引用的方式包含于本文中。
技术领域
本发明涉及一种治疗细胞内感染的方法。所述方法包括给药细胞凋亡抑制剂(IAP)拮抗剂。
背景技术
由病原体，如乙型肝炎病毒(HBV)、人类免疫缺陷病毒(HIV)、人类乳头状瘤病毒(Human papilloma virus，HPV)、结核分支杆菌(Mycobacterium tuberculosis)、组织胞浆菌属(Histoplasma spp.)和疟原虫属(Plasmodium spp.)造成的慢性暴发性感染与病原体特异性免疫的缺乏和会导致相关宿主细胞损坏的有害的异常非特异性炎症反应有关。虽然多年来已研发出各种治疗策略，却收效甚微。
乙型肝炎是全世界分布的常见疾病，估计有280,000,000名HBV携带者。全球来看，在东南亚、非洲和部分南美洲的发展中国家中，HBV感染是最为常见的，在那里，对低龄婴幼儿的垂直传播导致很大比例的感染者转变为HBV慢性携带者。婴幼儿时获得HBV的男性死于慢性HBV感染导致的肝硬化或原发性肝癌的几率大约为40％。相比之下，出生时感染的女性死于慢性乙肝感染导致的类似疾病的几率大约为15％。
尽管若干药物现已处于临床应用状态，包括干扰素α2b(IFNα2b)、干扰素α2a、拉米夫定(lamivudine)、阿德福韦(adefovir)和恩替卡韦(entecavir)，但慢性乙肝感染仍旧难以治疗。治疗在最开始时不起作用或会在出现耐药病毒时变得不起作用。而且已知现有的药物疗法面临疗程长、花销大以及与不需要的副作用相关。例如，尽管在治疗HBV感染方面使用拉米夫定取得了某些成功，但其也与耐药性风险的增长有关，所述耐药性会在第二年的治疗之后高达45-55％。此外，凭借这些疗法不能将HBV从肝脏中完全清除，因此甚至在中断治疗后，在许多病例中发生了HBV感染的复发。当慢性HBV感染的患者发生晚期肝衰竭时，肝移植就成为唯一可选的治疗形式。然而，由于HBV感染持续存在，移植物可能会受到感染，因而限制了患者和移植物的存活率。
人类免疫缺陷病毒/获得性免疫缺陷综合征(HIV/AIDS)也象征着全球性的健康危机，特别是在发展中国家。抗逆转录病毒药物的使用显著改变了HIV感染者的生命预期和质量。然而，尽管介入了此抗逆转录病毒药物，持续激活免疫，也仅部分恢复了CD4T细胞和B细胞衰退和失去的免疫功能。患者还会处于非AIDS定义的疾病和死亡因素，例如，癌症、心血管疾病、肝和肾衰竭、中枢神经系统紊乱(例如，弓形虫脑炎)和持续感染的风险下。
本发明涉及治疗细胞内感染的新方法的开发。
发明内容
因此，在第一方面，本发明提供了一种治疗受治者的细胞内感染的方法，所述方法包括给药受治者IAP拮抗剂。
附图说明
图1显示了8周时间内受感染小鼠的血清中血清HBV DNA水平的时间过程(上幅图)。下幅图显示了血清中病毒粒子(左)和亚病毒颗粒(右)的EM显微照片。
图2显示了40周时间内受感染小鼠的血清中的血清HBV DNA水平的时间过程。尽管表面上控制住了病毒血症，但甚至在感染后24周，受感染小鼠在HBV病毒的复制上显示出了复发，其在血清HBV DNA水平上具有短暂的尖峰。
图3显示了用Birinapant或载体对照(DMSO)处理的小鼠的HBV DNA的血清水平。
图4显示了比较Birinapant与载体对照处理的(C57BL/6)HBV受感染小鼠的时间-事件(time to event)(HBV清除)图。
图5显示了cIAP1缺乏(肝特异性缺乏)并且所有器官完全cIAP2缺乏的小鼠，可将HBV感染清除至与用Birinapant治疗的野生型小鼠类似的程度。虚线、红色实线和蓝色实线分别代表了随时间过去清除感染的野生型小鼠、肝脏特异性cIAP1缺乏加全身cIAP2缺乏的小鼠和XIAP缺乏(全身)的小鼠的数目(％)。
图6用Birinapant抑制PBMC中HIV-1 JR-CSF的复制。
图7用Birinapant+10ng/ml TNF-α抑制PBMC中HIV-1 JR-CSF的复制。
图8.使PHA活化的PBMC(分离自两位健康的捐赠者)未受到或受到HIV NL4.3(GFP+)感染，之后用指定浓度的Birinapant或载体对照(NT)处理6小时或24小时。另外，用Birinapant或载体对照来处理未感染的原始PBMC。流式细胞仪(FACS)分析了相对于处理之前存活的受感染细胞，24小时Birinapant处理之后存活的(活性半胱天冬酶3(Caspase 3)阴性)a)HIV感染的(GFP+)培养的CD4+淋巴细胞的比例；相对于未处理的细胞，6小时或24小时Birinapant处理之后存活的b)原始培养的或c)PHA活化的、未感染的CD4+淋巴细胞的比例。
图9相比于DMSO对照(n＝15)，用Birinapant处理的结核分支杆菌受感染小鼠(n＝17，腹膜内注射给药，30μg/g每周一次×3次)中，结核分支杆菌的载菌量(CFU/肺，Log10)，显示出显著的降低，为0.33Log10CFU/肺(P＝0.012)。
图10拮抗性的TNF-α细胞因子抵消了birinipant的效力。
图11用与birinipant不同的SMAC模拟物进行实验的结果。
图12给药birinipant(正方形)或载体对照(圆形)的受感染小鼠的肺中的嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)的载菌量(CFU/ml)。每个点代表一个动物，误差棒代表SEM。*P<0.05。
图13显示了用恩替卡韦、birinipant与恩替卡韦的结合处理HBV受感染小鼠的结果。***p<0.001、**p<0.01、ns＝不显著。
图14显示了利用具有TRAIL、birinipant和TRAIL与birinipant的结合的腺病毒传输系统处理体外感染HBV的原代人肝细胞的结果。
具体实施方式
在本说明书中，除非上下文有另外的规定，否则应当将词语“包括”或其形态变化(如“包含”或“含有”)理解为包含确定的要素或整体或者要素或整体的组，但并不排除任何另外的要素或整体或者要素或整体的组。
本说明书中提及的任何在先专利公开(或从其中获得的资料)或任何已知的材料，不被且不应当被看作是对在先专利公开(或从其中获得的资料)或已知的材料构成了涉及本说明书尝试的领域的普遍公知的部分的承认或认可或任何形式的意见。
本说明书中提及的所有专利公开均以引用的方式并入本文中。
应当注意的是，如本说明书中所使用的，单数形式的“一(a)”、“一(an)”和“所述(the)”包括复数方面，除非上下文明确地规定了例外的情况。因此，例如，提及的“试剂(anagent)”包括单一的试剂，也包括两种以上的试剂；提及的“分子(a molecular)”包括单一的分子，也包括两种以上的分子；如此等等。
根除病原体的机理是使受感染细胞激活程序性细胞死亡过程。这样杀死了病原体和受感染细胞，并防止了微生物的蔓延。然而，许多病原体发展出了对策来防止它们的宿主细胞自杀。宿主细胞中的一组分子，被称作细胞凋亡蛋白抑制剂(IAPs)，在调节细胞死亡程序和在控制炎症方面具有若干作用。
在某种程度上，本发明基于以下发现：通过体内拮抗IAPs，增强了对持续感染的宿主细胞的肃清和对病原体的消除，而不会导致对宿主的明显危害性的间接损害。这可通过使用pan-IAP拮抗剂(其可以是pan-cIAP拮抗剂，例如，cIAP1和/或cIAP2拮抗剂)来实现。
因此，第一方面，本发明提供了一种治疗受治者的细胞内感染的方法，所述方法包括给药受治者IAP拮抗剂。
这里所使用的术语“治疗”的意思是减小了受治疗的生物(例如，人类患者)的造成细胞内感染的病原体的水平或数量。
IAP的蛋白质家族包括：XIAP(BIRC4)、cIAP1(BIRC2)、cIAP2
(BIRC3)；NAIP(BIRC1)、存活素(Survivin)(BIRC5)、Apollon(Bruce；BIRC6)、ML-IAP(BIRC7；Livin，KIAP)和ILP2(BIRC8)。家族成员之间存在着一定程度的重复，但XIAP+cIAP1+cIAP2的标靶化合物缺失导致了小鼠早期胚胎的致死性。这些分子加重了炎症并终止细胞发出死亡信号1。本发明的发明人第一次证实了IAPs在维持宿主的持续细胞内感染方面起到重要作用。
在一个实施方式中，所述IAP为cIAP1或cIAP2，或二者。
cIAP1由GenBank DQ068066.1所示的序列来编码。cIAP1的转录变体包括NCBI参考序列NM_001166.4、NM_001256163.1和NM_001256166.1。
cIAP2由GenBank BC037420.1所示的序列来编码。cIAP2的转录变体包括NCBI参考序列NM_001165.4和NM_182962.2。
XIAP(X连锁凋亡抑制剂)由GenBank NCBI参考序列NG_007264.1来编码。XIAP的转录变体包括NCBI参考序列NM_001167.3、NM_001204401.1和NR_037916.1。
适宜的IAP拮抗剂应当是本领域的技术人员已知的。其实例包括单价的IAP拮抗剂GDC-0145、GDC-0152和GDC-0917(美国Genentech公司)，AT-IAP(英国Astex公司)和AT-406(美国Ascenta公司)，以及二价的IAP拮抗剂AEG40826(美国Aegera Therapeutics公司)、SM-1200(密歇根大学)、HGS1029(美国人类基因组科学公司(Human Genome Sciences))、BV6(美国Genentech公司)、AEG40730(Aegera Therapeutics公司)；SM-164(密歇根大学)；CS3(Genentech公司)；ML101(桑福德-伯纳姆(Sanford-Burnham)医学研究所)；AEG35156(Aegera Therapeutics公司)和birinapant/TL32711(美国TetraLogic公司)。这些IAP拮抗剂中的几个在Fulda和Vucic(Nature Reviews Drug Discovery,2012,vol11,109-124)以及Fulda(Leukemia,2012,vol26,1155-1165)中进行了进一步讨论，这两篇文献的内容以引用的方式并入本文中。尽管目前认为单价和二价IAP拮抗剂均能被用于本发明中，但现在优选所述IAP拮抗剂是二价的。
在一个实施方式中，所述IAP拮抗剂为第二线粒体源半胱天冬酶活化因子(Smac)的模拟物。Smac是为IAPs的内源抑制剂的促凋亡线粒体蛋白。Smac模拟物已被证实激发了程序性细胞死亡，因而在开发新的癌症疗法中成为了焦点2,3。
Smac通过与IAPs的直接相互作用而拮抗了IAP介导的半胱天冬酶抑制，和/或引发了IAP家族(cIAP1和cIAP2)的某些成员的蛋白酶体降解。Smac同时促进半胱天冬酶-3酶原(pro-caspase-3)的蛋白水解活化作用和成熟的半胱天冬酶-3的酶活性的能力依赖于其与IAP特异性相互作用的能力。Smac结合至XIAP的BIR1/BIR2连接子区域和BIR3，干扰了半胱天冬酶-3和-7以及半胱天冬酶-9的抑制，因而促进了细胞凋亡或程序性细胞死亡。Smac和Smac模拟物还引发了cIAP1和cIAP2的蛋白酶体降解，导致了经典NF-κB激活的抑制。许多病毒调节NF-κB激活以促进疾病的发病(参考文献：Rahman and McFadden,Nat Rev Microbio20119:291-306；Hiscott et al Oncogene 2006 30:6844-67；Shukla et alCarcinogenesis 201132:978-985)。不受限于对构成本发明基础的机理的具体理解，这些活性暗示了Smac模拟物可被用于治疗这些感染的机理。
通过阐明Smac与IAPs之间的相互作用的晶体结构，使得Smac模拟物的发现成为可能。Smac模拟物似乎通过多重机理促进了肿瘤细胞中的凋亡性细胞死亡，所述机理包括：直接结合并拮抗IAPs、通过促进cIAPs的自动泛素化(autoubiquitylation)和蛋白酶体降解而消除IAPs以及通过TNF激发而激活细胞外凋亡途径。TNF是控制许多感染所需的关键细胞因子，并且当TNF被拮抗时，为了治疗自身免疫紊乱，许多潜在的感染被再次激活(参见http://cmr.asm.org/content/22/2/274.full#sec-49)。作为推论，在这些感染中提高TNF的活性可促进它们的肃清。
Smac肽模拟物的实例，包括某些上文所指出的，被非限制性地公开在下列文献中：US 7,517,906、US 7,419,975、US 7,589,118、US 7,932,382、US 7,345,081、US 7,244,851、US 7,674,787、US 7,772,177、US 7,989,441、US20100324083、US20100056467、US20090069294、US20110065726、US20110206690和WO2011098904，所有这些文献以引用的方式并入本文中，如同做出了充分的阐述一样。在这些文献中公开的化合物，以及常规Smac模拟物，具有如下结构：
[P1-P2-P3-P4] (式I)
或者
[P1-P2-P3-P4]-L-[P1'-P2'-P3'-P4'] (式II)
其中，P1-P2-P3-和P1'-P2'-P3'-对应于成熟Smac的N端丙氨酸(Ala)-缬氨酸(Val)-脯氨酸(Pro)-三肽的肽置换物(即肽模拟物)，以及P4和P4'对应于第四N端氨基酸苯丙氨酸(Phe)、酪氨酸(Tyr)、异亮氨酸(Ile)或缬氨酸(Val)的氨基酸置换物，以及L为共价连接[P1-P2-P3-P4]与[P1'-P2'-P3'-P4']的连接基团或连接键。
例如，非限制性的，Smac模拟物可存在于以下类型的式II的化合物中：
P1和P1'为NHR1-CHR2-C(O)-；
P2和P2'为-NH-CHR3-C(O)-；
P3和P3'为四氢吡咯、稠合环烷基的四氢吡咯或稠合具有N杂原子的杂环烷基的四氢吡咯，它们在各个情况下可任选被取代，并且其中P3/P3'的四氢吡咯通过酰胺键与P2/P2'相结合；
P4和P4'为-M-Qp-R7。
可变的取代基可以是，例如，
R1：-H或-CH3；
R2：-CH3、-CH2CH3或-CH2OH；
R3：C2-6烷基、C2-6烷氧基、C3-C6环烷基或杂环烷基、或C6-C8芳基或杂芳基，它们在各个情况下可任选被取代；
M：共价键、C1-6亚烷基、取代的C1-C6亚烷基(例如但不限于-C(O)-)；
Q：共价键、C1-6亚烷基、取代的C1-C6亚烷基、-O-或-NR8-；
P：0或1；
R7：环烷基、环烷基芳基、烷基芳基、烷基杂芳基、芳基或杂芳基，它们在各个情况下可任选被取代；
R8：-H或C1-6烷基。
L为共价连接[P1-P2-P3-P4]与[P1'-P2'-P3'-P4']的连接基团或连接键。
“烷基”(一价)和“亚烷基”(二价)在单独或作为另一术语(例如，烷氧基)的一部分时，意思是指支链或非支链的饱和脂肪烃基，且除非另有说明，否则其含有至多12个碳原子。具体的烷基的实例包括但不限于：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、2-甲基丁基、2,2-二甲基丙基、正己基、2-甲基戊基、2,2-二甲基丁基、正庚基、3-庚基、2-甲基己基等。术语“低级的”，用于修饰烷基、烯基等时，意思是指1至4个碳原子、支链或直链的，从而，例如，术语“低级烷基”、“Cl-C4烷基”和“1至4个碳原子的烷基”的意思相同，且可互换使用以表示甲基、乙基、1-丙基、异丙基、1-丁基、仲丁基或叔丁基。亚烷基的实例包括但不限于：亚甲基、亚乙基、正亚丙基、正亚丁基和2-甲基-亚丁基。
术语取代烷基指的是具有取代了烃骨架的一个或多个(通常不超过四个)碳原子上的一个或多个氢的取代基的烷基部分。这些取代基相互独立地选自：卤素(例如，I、Br、Cl或F，特别是氟(F))、羟基、氨基、氰基、巯基、烷氧基(如C1-C6烷氧基或低级(C1-C4)烷氧基，例如，甲氧基或乙氧基，以得到烷氧基烷基)、芳氧基(例如苯氧基，得到芳氧基烷基)、硝基、氧代基(例如，以形成羰基)、羧基(实际上是氧代基和羟基取代基在单个碳原子上的结合)、氨基甲酰基(胺基羰基，如NR2C(O)-，其为氧代基和胺基在单个碳原子上的取代)、环烷基(例如，环烷基烷基)、芳基(导致例如芳烷基，如苄基或苯乙基)、杂环烷基(例如，杂环烷基烷基)、杂芳基(例如，杂芳基烷基)、烷基磺酰基(包括低级烷基磺酰基，如甲基磺酰基)、芳基磺酰基(如苯磺酰基)和-OCF3(为卤素取代的烷氧基)。本发明进一步设想，若干这样的烷基取代基，具体包括烷氧基、环烷基、芳基杂环烷基和杂芳基，如在下面提供的它们的各自定义有关而限定的，可任选被进一步取代。再者，某些烷烃取代基部分由在单个碳原子上的这些取代的结合而产生。例如，酯部分，例如，烷氧基羰基(如甲氧基羰基或叔丁氧基羰基(Boc))由这些取代而产生。特别是，甲氧基羰基和Boc为由分别取代了三个氢的氧代基(＝O)和未取代的烷氧基(例如，甲氧基(CH3-O)或叔丁氧基((CH3)3C-O-))两者在甲基(-CH3)上的取代而产生的取代烷基。类似地，酰胺部分，例如，烷基氨基羰基(如二甲基氨基羰基或甲基氨基羰基)为由取代了三个氢的氧代基(＝O)和单未取代烷基氨基或双未取代烷基氨基(例如，二甲基氨基(-N-(CH3)2)或甲基氨基(-NH-(CH3)))两者在甲基(-CH3)上的取代而产生的取代烷基(类似地，芳基氨基羰基(如二苯基氨基羰基)为由氧代基(＝O)和单未取代芳基(苯基)氨基两者在甲基(-CH3)上的取代而产生的取代烷基)。示例性的取代烷基进一步包括氰基甲基、硝基甲基、羟烷基(如羟甲基)、三苯甲基氧基甲基、丙酰氧基甲基、氨基烷基(如氨基甲基)、羧基烷基(如羧基甲基、羧基乙基、羧基丙基)、2,3-二氯戊基、3-羟基-5-羧基己基、乙酰基(例如，烷酰基，其中在乙酰基的情况下，乙基的-CH2部分上的两个氢原子被氧代基(＝O)所取代)、2-氨基丙基、五氯丁基、三氟甲基、甲氧基乙基、3-羟基戊基、4-氯丁基、1,2-二甲基丙基、五氟乙基、烷氧基羰基甲基、烷氧基羰基氨基甲基、氨基甲酰氧基甲基、甲氧基甲基、乙氧基甲基、叔丁氧基甲基、乙酰氧基甲基、氯甲基、溴甲基、碘甲基、三氟甲基、6-羟基己基、2,4-二氯(正丁基)、2-氨基(异丙基)、环烷基羰基(例如，环丙基羰基)和2-氨基甲酰氧基乙基。特别的取代烷基为取代甲基。取代甲基的实例包括的基团如羟甲基、受保护的羟甲基(例如，四氢吡喃-氧基甲基)、乙酰氧基甲基、氨基甲酰氧基甲基、三氟甲基、氯甲基、羧甲基、羧基(其中，甲基上的三个氢原子被取代，两个氢被氧代基(＝O)取代，另一氢被羟基(-OH)取代)、叔丁氧基羰基(其中，甲基上的三个氢原子被取代，两个氢被氧代基(＝O)取代，另一氢被叔丁氧基(-OC(CH3)3)取代)、溴甲基和碘甲基。当本说明书和特别是权利要求书涉及烷基的具体取代基时，所述取代基可以潜在地占据烷基上的一个或多个可取代位置。例如，列举烷基具有氟取代基将包括在烷基部分上的单取代、双取代和可能更高程度的取代。
术语取代的亚烷基指的是具有取代了烃骨架的一个或多个(通常不超过四个)碳原子上的一个或多个氢的取代基的亚烷基部分，其中所述亚烷基可类似地被用于烷基的以上所述的取代基取代。
烷氧基为-O-烷基。取代烷氧基为-O-取代烷基，其中所述烷氧基可类似地被用于烷基的以上所述的取代基所取代。一种取代的烷氧基为乙酰氧基，其中乙氧基(例如，-O-CH2-CH3)中的两个氢被氧代基(＝O)取代而生成了-O-C(O)-CH3；另一种为芳烷氧基，其中烷氧基中的一个氢被芳基取代，如苄氧基；另一种为氨基甲酸酯，其中甲氧基(例如，-O-CH3)上的两个氢被氧代基(＝O)取代，而另一个氢被氨(胺)基(例如，-NH2、-NHR或-NRR)取代以生成，例如，-O-C(O)-NH2。低级烷氧基为-O-低级烷基。
“烯基”(一价)和“亚烯基”(二价)在单独或作为另一术语的一部分时，意思是指包含至少一个碳碳双键(通常为1或2个碳碳双键)的不饱和烃基，其可以是直链或支链的，且除非另有说明，否则其含有至少2个且至多12个碳原子。代表性的烯基例如包括：乙烯基、烯丙基、异丙烯基、丁-2-烯基、正戊-2-烯基和正己-2-烯基。
术语取代的烯基和取代的亚烯基指的是具有取代了烃骨架的一个或多个(通常不超过四个)碳原子上的一个或多个氢的取代基的烯基和亚烯基部分。这些取代基相互独立地选自：卤素(例如，I、Br、Cl、F)、羟基、氨基、氰基、烷氧基(如C1-C6烷氧基)、芳氧基(如苯氧基)、硝基、巯基、羧基、氧代基、氨基甲酰基、环烷基、芳基、杂环基、杂芳基、烷基磺酰基、芳基磺酰基和-OCF3。
“炔基”意思是指包含至少一个碳碳三键(通常为1个碳碳三键)的一价不饱和烃基，其可以是直链或支链的，且除非另有说明，否则其含有至少2个且至多12个碳原子。代表性的炔基例如包括：乙炔基、炔丙基和丁-2-炔基。
“环烷基”在单独或作为另一术语的一部分时，意思是指饱和的或部分不饱和的环状脂肪烃基(碳环基团)，且除非另有说明，否则其含有3至8个碳原子，如环丙基、环丁基、环戊基和环己基，且其进一步包括多环结构，包含稠合的环烷烃，如1,2,3,4-四氢化萘基(1,2,3,4-四氢化萘-1-基和1,2,3,4-四氢化萘-2-基)、二氢化茚基(二氢化茚-1-基和二氢化茚-2-基)、异茚基(异茚-1-基、异茚-2-基和异茚-3-基)和茚基(茚-1-基、茚-2-基和茚-3-基)。低级环烷烃具有3至6个碳原子，且包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
术语取代的环烷基指的是具有取代了烃骨架的一个或多个(通常不超过四个)碳原子上的一个或多个氢的取代基的环烷基部分。这些取代基相互独立地选自：卤素(例如，I、Br、Cl、F)、羟基、氨基、氰基、烷氧基(如C1-C6烷氧基)、取代烷氧基、芳氧基(如苯氧基)、硝基、巯基、羧基、氧代基、氨基甲酰基、烷基、取代烷基(如三氟甲基)、芳基、取代芳基、杂环基、杂芳基、烷基磺酰基、芳基磺酰基和-OCF3。当本说明书和特别是权利要求书涉及环烷基的具体取代基时，所述取代基可以潜在地占据环烷基上的一个或多个可取代位置。例如，列举环烷基具有氟取代基将包括在环烷基部分上的单取代、双取代和更高程度的取代。环烷基的实例包括：环丙基、环丁基、环戊基、环己基、四氢化萘基和二氢化茚基。
“芳基”在单独或作为另一术语的一部分时，意思是指稠合或未稠合的芳香族碳环基团，其具有指定的碳原子数目，或者如果没有具体指定数目，则具有6至最高14个碳原子。具体的芳基包括：苯基、萘基、联苯基、菲基、并四苯基、吲哚基等(参见，例如，兰氏化学手册(Lang's Handbook of Chemistry)(Dean,J.A.,ed)13th ed.Table 7-2[1985])。
术语取代的芳基指的是具有取代了芳烃核的一个或多个(通常不超过六个)碳原子上的一个或多个氢的取代基的芳基部分。这些取代基相互独立地选自：卤素(例如，I、Br、Cl、F)、羟基、氨基、氰基、烷氧基(如C1-C6烷氧基，且特别为低级烷氧基)、取代烷氧基、芳氧基(如苯氧基)、硝基、巯基、羧基、氨基甲酰基、烷基、取代烷基(如三氟甲基)、芳基、-OCF3、烷基磺酰基(包括低级烷基磺酰基)、芳基磺酰基、杂环基和杂芳基。这样的取代苯基的实例包括但不限于：一或二(卤代)苯基，如2-氯苯基、2-溴苯基、4-氯苯基、2,6-二氯苯基、2,5-二氯苯基、3,4-二氯苯基、3-氯苯基、3-溴苯基、4-溴苯基、3,4-二溴苯基、3-氯-4-氟苯基、2-氟苯基、3-氟苯基、4-氟苯基；一或二(羟基)苯基，如4-羟基苯基、3-羟基苯基、2,4-二羟基苯基、它们的保护羟基的衍生物；硝基苯基，如3-或4-硝基苯基；氰基苯基，例如，4-氰基苯基；一或二(低级烷基)苯基，如4-甲基苯基、2,4-二甲基苯基、2-甲基苯基、4-(异丙基)苯基、4-乙基苯基、3-(正丙基)苯基；一或二(烷氧基)苯基，例如，3,4-二甲氧基苯基、3-甲氧基-4-苄氧基苯基、3-甲氧基-4-(1-氯甲基)苄氧基-苯基、3-乙氧基苯基、4-(异丙氧基)苯基、4-(叔丁氧基)苯基、3-乙氧基-4-甲氧基苯基；3-或4-三氟甲基苯基；一或二羧基苯基或(受保护的羧基)苯基，如4-羧基苯基；一或二(羟甲基)苯基或(受保护的羟甲基)苯基，如3-(受保护的羟甲基)苯基或3,4-二(羟甲基)苯基；一或二(氨基甲基)苯基或(受保护的氨基甲基)苯基，如2-(氨基甲基)苯基或2,4-(受保护的氨基甲基)苯基；或者一或二(N-(甲基磺酰基氨基))苯基，如3-(N-甲基磺酰基氨基)苯基。此外，所述取代基(如在二取代的苯基中的取代基)可以相同的或不同，例如，3-甲基-4-羟基苯基、3-氯-4-羟基苯基、2-甲氧基-4-溴苯基、4-乙基-2-羟基苯基、3-羟基-4-硝基苯基、2-羟基-4-氯苯基，以及对于其中取代基不相同的三取代的苯基，例如，3-甲氧基-4-苄氧基-6-甲基磺酰基氨基、3-甲氧基-4-苄氧基-6-苯基磺酰基氨基，和其中取代基不相同的四取代的苯基，如3-甲氧基-4-苄氧基-5-甲基-6-苯基磺酰基氨基的情况。特别的取代苯基为2-氯苯基、2-氨基苯基、2-溴苯基、3-甲氧基苯基、3-乙氧基-苯基、4-苄氧基苯基、4-甲氧基苯基、3-乙氧基-4-苄氧基苯基、3,4-二乙氧基苯基、3-甲氧基-4-苄氧基苯基、3-甲氧基-4-(1-氯甲基)苄氧基-苯基、3-甲氧基-4-(1-氯甲基)苄氧基-6-甲基磺酰基氨基苯基。当本说明书和特别是权利要求书涉及芳基的具体取代基时，所述取代基可以潜在地占据芳基上的一个或多个可取代位置。例如，列举芳基具有氟取代基将包括在芳基部分上的单取代、双取代、三取代、四取代和更高程度的取代。稠合芳基环也可以以与取代烷基相同的方式被此处具体说明的取代基取代，例如，用1，2或3个取代基取代。术语芳基和取代芳基不包括其中芳环与饱和或部分不饱和的脂肪族环稠合的部分。
“杂环基团”、“杂环的”、“杂环”、“杂环基”、“杂环烷基”或“杂环”单独或用作复合基团中的一部分时，可互换使用并指代任意单、双或三环的、饱和的或不饱和的、非芳香族的含杂原子的环状体系，其具有指定的原子数目，或者如果没有具体指定数目，则具有5至约14个原子，其中环原子为碳和至少一个杂原子，且通常不超过四个杂原子(即氮、硫或氧)。定义中包含任意的双环基团，其中任意的上述杂环与芳香环(即芳基(例如，苯)或杂芳基)稠合。在特别的实施方式中，所述基团包含了1至4个杂原子。通常地，5元环具有0至1个双键，6或7元环具有0至2个双键，以及氮或硫杂原子可任选被氧化(例如，SO、SO2)，任意氮杂原子可任选被季铵化。特别的未取代的非芳香族的杂环包括：吗啉基(吗啉代)、吡咯烷基、环氧乙烷基、吲哚啉基、2,3-二氢吲哚基、异吲哚啉基、2,3-二氢异吲哚基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、2,3-二氢呋喃基、2H-吡喃基、四氢吡喃基、氮丙啶基、氮杂环丁烷基、1-甲基-2-吡咯基、哌嗪基和哌啶基。
术语取代杂环指的是具有取代了杂环骨架的一个或多个(通常不超过六个)原子上的一个或多个氢的取代基的杂环部分。这些取代基相互独立地选自：卤素(例如，I、Br、Cl、F)、羟基、氨基、氰基、烷氧基(如C1-C6烷氧基)、取代烷氧基、芳氧基(如苯氧基)、硝基、羧基、氧代基、氨基甲酰基、烷基、取代烷基(如三氟甲基)、-OCF3、芳基、取代芳基、烷基磺酰基(包括低级烷基磺酰基)和芳基磺酰基。当本说明书和特别是权利要求书涉及杂环烷基的具体取代基时，所述取代基可以潜在地占据杂环烷基上的一个或多个可取代位置。例如，列举杂环烷基具有氟取代基将包括在杂环烷基部分上的单取代、双取代、三取代、四取代和更高程度的取代。
“杂芳基”单独或用作复合基团中的一部分时，指的是任意单、双或三环的芳香族环状体系，其具有指定的原子数目，或者如果没有具体指定数目，则至少一个环为5、6或7元环，且原子总数为5至约14个，并包含一至四个选自氮、氧和硫的杂原子(兰氏化学手册(Lang's Handbook of Chemistry)，同上)。定义中包含任意的双环基团，其中任意的上述杂芳基环与苯环稠合。以下的环状体系为术语“杂芳基”所表示的杂芳基基团的实例：噻吩基(也称为硫代苯基)、呋喃基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、三唑基、噻二唑基、噁二唑基、四唑基、噻三唑基、噁三唑基、吡啶基、嘧啶基(例如、嘧啶-2-基)、吡嗪基、哒嗪基、噻嗪基、噁嗪基、三嗪基、噻二嗪基、噁二嗪基、二噻嗪基、二噁嗪基、噁噻嗪基、四嗪基、噻三嗪基、噁三嗪基、二噻二嗪基、咪唑啉基、二氢嘧啶基、四氢嘧啶基、四唑并[1,5-b]哒嗪基和嘌呤基，以及苯并稠合的衍生物，例如，苯并噁唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并三唑基、苯并咪唑基、异吲哚基、吲唑基、吲嗪基、吲哚基、萘啶基、吡啶并嘧啶基、酞嗪基、喹啉基、异喹啉基和喹唑啉基。
术语取代杂芳基指的是具有取代了杂芳基骨架的一个或多个(通常不超过六个)原子上的一个或多个氢的取代基的杂芳基部分(如以上所述的那些杂芳基)。这些取代基相互独立地选自：卤素(例如，I、Br、Cl、F)、羟基、氨基、氰基、烷氧基(如C1-C6烷氧基)、芳氧基(如苯氧基)、硝基、巯基、羧基、氨基甲酰基、烷基、取代烷基(如三氟甲基)、-OCF3、芳基、取代芳基、烷基磺酰基(包括低级烷基磺酰基)和芳基磺酰基。当本说明书和特别是权利要求书涉及杂芳基的具体取代基时，所述取代基可以潜在地占据杂芳基上的一个或多个可取代位置。例如，列举杂芳基具有氟取代基将包括在杂芳基部分上的单取代、双取代、三取代、四取代和更高程度的取代。
特别的“杂芳基”(包括“取代杂芳基”)包括：1H-吡咯并[2,3-b]吡啶、1,3-噻唑-2-基、4-(羧甲基)-5-甲基-1,3-噻唑-2-基、1,2,4-噻二唑-5-基、3-甲基-1,2,4-噻二唑-5-基、1,3,4-三唑-5-基、2-甲基-1,3,4-三唑-5-基、2-羟基-1,3,4-三唑-5-基、2-羧基-4-甲基-1,3,4-三唑-5-基、1,3-噁唑-2-基、1,3,4-噁二唑-5-基、2-甲基-1,3,4-噁二唑-5-基、2-(羟甲基)-1,3,4-噁二唑-5-基、1,2,4-噁二唑-5-基、1,3,4-噻二唑-5-基、2-巯基-1,3,4-噻二唑-5-基、2-(甲硫基)-1,3,4-噻二唑-5-基、2-氨基-1,3,4-噻二唑-5-基、1H-四唑-5-基、1-甲基-1H-四唑-5-基、1-(1-(二甲基氨基)乙-2-基)-1H-四唑-5-基、1-(羧甲基)-1H-四唑-5-基、1-(甲基磺酸)-1H-四唑-5-基、2-甲基-1H-四唑-5-基、1,2,3-三唑-5-基、1-甲基-1,2,3-三唑-5-基、2-甲基-1,2,3-三唑-5-基、4-甲基-1,2,3-三唑-5-基、吡啶-2-基的N-氧化物、6-甲氧基-2-(N-氧化物)-哒嗪-3-基、6-羟基哒嗪-3-基、1-甲基吡啶-2-基、1-甲基吡啶-4-基、2-羟基嘧啶-4-基、1,4,5,6-四氢-5,6-二氧代-4-甲基-不对称三嗪-3-基、1,4,5,6-四氢-4-(甲酰基甲基)-5,6-二氧代-不对称三嗪-3-基、2,5-二氢-5-氧代-6-羟基-不对称三嗪-3-基、2,5-二氢-5-氧代-6-羟基-不对称三嗪-3-基、2,5-二氢-5-氧代-6-羟基-2-甲基-不对称三嗪-3-基、2,5-二氢-5-氧代-6-羟基-2-甲基-不对称三嗪-3-基、2,5-二氢-5-氧代-6-甲氧基-2-甲基-不对称三嗪-3-基、2,5-二氢-5-氧代-不对称三嗪-3-基、2,5-二氢-5-氧代-2-甲基-不对称三嗪-3-基、2,5-二氢-5-氧代-2,6-二甲基-不对称三嗪-3-基、四唑并[1,5-b]哒嗪-6-基、8-氨基四唑并[1,5-b]哒嗪-6-基、喹啉-2-基、喹啉-3-基、喹啉-4-基、喹啉-5-基、喹啉-6-基、喹啉-8-基、2-甲基喹啉-4-基、6-氟-喹啉-4-基、2-甲基-8-氟-喹啉-4-基、异喹啉-5-基、异喹啉-8-基、异喹啉-1-基和喹唑啉-4-基。“杂芳基”的另一类基团包括：5-甲基-2-苯基-2H-吡唑-3-基、4-(羧甲基)-5-甲基-1,3-噻唑-2-基、1,3,4-三唑-5-基、2-甲基-1,3,4-三唑-5-基、1H-四唑-5-基、1-甲基-1H-四唑-5-基、1-(1-(二甲基氨基)乙-2-基)-1H-四唑-5-基、1-(羧甲基)-1H-四唑-5-基、1-(甲基磺酸)-1H-四唑-5-基、1,2,3-三唑-5-基、1,4,5,6-四氢-5,6-二氧代-4-甲基-不对称三嗪-3-基、1,4,5,6-四氢-4-(2-甲酰基甲基)-5,6-二氧代-不对称三嗪-3-基、2,5-二氢-5-氧代-6-羟基-2-甲基-不对称三嗪-3-基、2,5-二氢-5-氧代-6-羟基-2-甲基-不对称三嗪-3-基、四唑并[1,5-b]哒嗪-6-基和8-氨基四唑并[1,5-b]哒嗪-6-基。
L为共价连接一个单体[P1-P2-P3-P4]与另一个单体[P1'-P2'-P3'-P4']的连接基团或键。通常地，-L-连接P2至P2'的位置(如于R3处)，或者P4至P4'(如于M、G、Q或R7处)，或者同时连接P2至P2'和P4至P4'。因此，L可以是单一或两个共价键，或者1至约100个原子(通常为1至约30个原子)的支链或非支链的、取代或未取代的连续的链，例如，任选带有1-4个选自-O-、-NH-和-S-的杂原子的2至20个原子的任选取代的亚烷基、亚烯基、亚炔基、环烷基、烷基环烷基、烷基芳基烷基链。L的示例性实例为单一或两个共价键、C1-12亚烷基、取代的C1-12亚烷基、C1-12亚烯基、取代的C1-12亚烯基、C1-12亚炔基、取代的C1-12亚炔基、Xn-苯基-Yn、或Xn-(苯基)2-Yn、其中X和Y相互独立地为C1-6亚烷基、取代的C1-6亚烷基、C1-6亚烯基、取代的C1-6亚烯基、C1-6亚炔基、取代的C1-6亚炔基或S(O)2。
示例性的P3/P3'基团包括但不限于：
Figure BDA0000890834870000131
其中，R6为-H、C1-6烷基、取代C1-6烷基、C1-6烷氧基、取代C1-6烷氧基、C1-6烷基磺酰基、芳基磺酰基、环烷基、取代环烷基、杂环烷基、取代杂环烷基、芳基、取代芳基、杂芳基或取代杂芳基；R4、R5和R12相互独立地为-H、-OH、C1-6烷基、C1-6杂烷基、C1-6烷氧基、芳氧基、环烷基、杂环烷基、芳基、C1-6烷基芳基、或杂芳基、或C1-6烷基杂芳基，除了当R4为-H或-OH时之外，它们在各个情况下可任选被取代。
如上所述，在某些示例性实施方式中，在本发明实践中使用的Smac模拟物为二价的。
在某些示例性实施方式中，选定的Smac模拟物去抑制XIAP介导的半胱天冬酶-3抑制，和/或降解未结合TRAF2的cIAP-1(非TRAF2结合的cIAP-1，例如，“细胞质”cIAP-1或“游离”cIAP-1)以及结合TRAF2的cIAP-1，和/或降解结合TRAF2的cIAP-2，但不降解未结合TRAF2的cIAP-2，或相对于结合TRAF2的cIAP-2的降解，微弱地降解未结合TRAF2的cIAP-2。
本发明实践中使用的Smac模拟物可导致未结合TRAF2的cIAP-2的降解，但在百分比基准上，这种降解的程度会低于结合TRAF2的cIAP-2的降解程度。Smac模拟物对未结合TRAF2的cIAP-2的效果的差异的显著性已被观察到与Smac模拟物在动物体内的耐受性(或安全性)有关。如果第一Smac模拟物，相对于结合TRAF2的cIAP-2的降解，导致的未结合TRAF2的cIAP-2的降解少于第二Smac模拟物(即结构上不同的Smac模拟物)，则所述第一Smac模拟物可能会在动物体内有更好的耐受性(即更加安全地给药)。更具体地说，技术人员可选定两种Smac模拟物，每一种都导致未结合TRAF2的cIAP-1、结合TRAF2的cIAP-1和结合TRAF2的cIAP-2的降解，同时一种显示出不同(较小)程度的未结合TRAF2的cIAP-2的降解，则导致未结合TRAF2的cIAP-2的较少降解的化合物，可能会具有更好的耐受性并在抗癌效力方面不会有明显的损失。
未结合TRAF2的cIAP-1、未结合TRAF2的cIAP-2、结合TRAF2的cIAP-1和结合TRAF2的cIAP-2的降解动力学可通过蛋白质印迹分析(western analysis)来测定。在一段时间内在这样的测定中可视觉观测降解程度。例如，刚刚用Smac模拟物处理细胞之后，未结合TRAF2的cIAP-2和结合TRAF2的cIAP-2的降解程度可能看起来基本相同，但几分钟之后，例如，15至30分钟之后，在经处理的细胞中可以观察到结合TRAF2的cIAP-2的降解相对于未结合TRAF2的cIAP-2的降解的增加。所述降解程度的差异也可被量化。例如，在用绿色荧光蛋白标记cIAPs的蛋白质印迹分析的情况下，所述降解程度可利用测定荧光强度的装置来量化。
对于可能会在动物体内有更好的耐受性的Smac模拟物，在相关浓度下至少约15分钟，例如，30至120分钟(或约30至约120分钟)，未结合TRAF2的cIAP-2的降解程度通常会小于结合TRAF2的cIAP-2的降解程度的75％(或约75％)，即为结合TRAF2的cIAP-2的降解程度的约75％以下。在此测定中所用的Smac模拟物的量会随着所述Smac模拟物的效力而变化，但通常会小于1μM，如，例如，在约1nM和约500nM之间或在约10nM和约150nM之间。
在某些情况下，未结合TRAF2的cIAP-2的降解程度会小于结合TRAF2的cIAP-2的降解程度的50％(或约50％)，即为结合TRAF2的cIAP-2的降解程度的约50％以下；或者小于结合TRAF2的cIAP-2的降解程度的25％(或约25％)，即为结合TRAF2的cIAP-2的降解程度的约25％以下；或者小于结合TRAF2的cIAP-2的降解程度的10％(或约10％)，即为结合TRAF2的cIAP-2的降解程度的约10％以下。例如，在采用具有本发明的cIAP降解曲线的Smac模拟物的cIAP降解测定中，结合TRAF2的cIAP-2可在30分钟之后被降解约70-75％(即仅约30％的初始检定量的结合TRAF2的cIAP-2还能被检测到)；然而未结合TRAF2的cIAP-2在30分钟之后可能仅被降解了约35-40％(即60％至65％的初始检定量的未结合TRAF2的cIAP-2还能被检测到)。在此情况下，所述Smac模拟物被称为以结合TRAF2的cIAP-2的降解程度的约50％以下的程度降解未结合TRAF2的cIAP-2(35％至40％除以(70％至75％)＝约50％)。
细胞凋亡的诱导对敏感肿瘤是高度特异性的，而正常组织则显现为免于受伤害。例如，某些Smac模拟物能够在皮摩尔浓度范围内体外杀死肿瘤细胞，同时在100微摩尔的范围内对非肿瘤细胞没有影响。
已开发出在临床前研究中具有显著的抗肿瘤活性的几种Smac模拟物。在已进入临床的那些Smac模拟物中，birinapant(TL32711)为强效的二价小分子Smac模拟物。Birinapant在US 8283372中被确认为化合物15。在一个实施方式中，所述IAP拮抗剂为birinapant。
Figure BDA0000890834870000151
birinapant(TL32711)
在USSN 17/246,956中提供了关于birinapant及类似化合物的补充信息，其公开内容以引用的方式并入本文中。
Smac模拟物的药物组合物可包含治疗有效量的如上所述的化合物，或者它们的药学上可接受的盐或其它形式，以及一种或多种药学上可接受的辅料。所述用语“药物组合物”指的是在医学或兽医学用途上适于给药的组合物。所述组合物还可包含另外的活性剂。例如，所述组合物可包含细胞因子(如TNF-α)或小分子抑制剂或抗生素。应当理解的是，针对具体患者的适合的剂型、剂量和给药途径的确定均在药物和医学技术领域的普通技术人员的水平范围之内。
适于胃肠外给药的组合物适宜地包括本发明的化合物或组合物的无菌水溶液制剂，其优选与接受者的血液等渗。此水溶液制剂可根据公知的方法利用适合的分散或润湿剂、乳化和混悬剂而配制。也可以包含各种抗菌和抗真菌剂，例如，对羟基苯甲酸类、氯丁醇、苯酚和山梨酸。无菌注射剂也可以是在无毒的胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液或混悬液，例如，作为在1,3-丁二醇中的溶液。在可接受的载体和溶剂中，可使用的有：水、林格氏溶液(Ringer’s solution)和等渗氯化钠溶液。此外，无菌的不挥发性油也常用作溶剂或混悬媒介。为此，可使用任意温和的不挥发性油，包括合成的单或二甘油酯。此外，脂肪酸，如油酸可被用于注射剂的制备中。持久吸收的注射药物形式可通过使用延缓吸收的试剂而得到，例如，单硬脂酸铝和明胶。适于皮下注射、静脉注射、肌肉注射等给药的载体剂型可在Remington's Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co.,Easton,PA中找到，其全本以引用的方式并入本文。
静脉注射的单位剂量形式的药物组合物可包括，例如，药瓶或载药注射器，或者输液袋或装置，每一个均包含有效量或有效量的适宜分数，以使得一个药瓶或注射器的含量一次给药。
如果需要实现累积的有效剂量，例如，有效产生对感染的控制的累积剂量，则在一段时间内，给药每天可最多重复约4次。剂量方案可以是，例如，每日或每周两次静脉或皮下注射或者口服或者局部给药，或者，例如，在三周给药和一周暂停的循环周期内或者连续地每周一次给药，直到所述治疗起效，例如，直至感染被控制或药物不再有耐受性。在每次注射中给药的有效剂量为有效且可耐受的量。
有效剂量是在疗程(可能是，例如1或数周)中取得了疾病的治疗(即减弱了病情发展的速度，终结疾病)的剂量。
用于口服给药的固体剂型包括：胶囊剂、片剂、丸剂、粉剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，所述化合物混合了至少一种惰性的药学上可接受的赋形剂，如(a)填料或填充剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸，(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶，(c)保湿剂，例如，甘油，(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些复合硅酸盐、以及碳酸钠，(e)溶液阻滞剂，例如石蜡，(f)吸收促进剂，例如，季铵化合物，(g)润湿剂，例如，鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯，(H)吸附剂，例如，高岭土和膨润土，以及(i)润滑剂，例如，滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠，或它们的混合物。在胶囊剂、片剂和丸剂的情况下，所述剂型还可包含缓冲剂。固体剂型，如片剂、糖衣丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂，还制备有包衣和包壳，如肠溶包衣和本领域所公知的其它类。所述固体剂型还可包含遮光剂，且还可以是以延时的方式在肠道的某一部分释放活性化合物的组合物。可被利用的包埋组合物的实例为聚合物质和蜡。如果合适的话，所述活性化合物还可以是包含一种或多种上述赋形剂的微囊形式。这些固体剂型通常可包含1％至95％(w/w)的活性化合物。在某些实施方式中，所述活性化合物的范围为5％至70％(w/w)。
由于本发明的一个方面仔细考虑了采用可被单独给药的药物活性剂的组合来治疗疾病/症状，故本发明进一步涉及以试剂盒形式组合独立的药物组合物。所述试剂盒包括两种独立的药物组合物：一种包含本发明的方法中所用的Smac模拟物，第二种包含第二药物活性成分。所述试剂盒包括用以容纳所述独立的药物组合物的容器，如分开的瓶子或分开的金属箔包。容器的另外的实例包括：注射器(例如，载药注射器)、盒子和袋子。通常地，所述试剂盒包括使用所述独立组分的说明书。当所述独立组分优选以不同的剂型(例如，口服和胃肠外给药)给药，在不同的剂量间隔给药时，或当处方医师或兽医需要测定所述组合中的各个组分的量时，所述试剂盒形式是特别有利的。
此试剂盒的一个实例为所谓的泡罩包装。泡罩包装在包装工业上是众所周知的，可广泛用作药物的单位剂型(片剂、胶囊剂等)的包装。泡罩包装通常由覆盖着优选为透明塑料材料的薄膜的相对较硬材料的薄片组成。在包装过程中，在塑料薄膜中形成了凹坑。所述凹坑具有待包装的片剂或胶囊剂的尺寸和形状。之后，将所述片剂或胶囊剂放置于所述凹坑中，并在形成所述凹坑的相反方向的薄膜表面上将所述相对较硬材料的薄片密封住所述塑料薄膜。由此，所述片剂或胶囊剂被密封于所述塑料薄膜与所述薄片之间的凹坑里。优选所述薄片的强度为：通过在所述凹坑上手工施加压力而在所述凹坑的位置处在薄片上形成开口，可从泡罩包装中取出所述片剂或胶囊剂。然后所述片剂或胶囊剂可经由所述开口而被取出。
可能需要在所述试剂盒上提供记忆辅助，例如，以在所述片剂或胶囊剂旁的数字的形式，由此该数字对应于应当服用的明确规定的片剂或胶囊剂的给药方案的天数。此记忆辅助的另一个实例为印在卡片上的日历，例如，如下所示“第一周，周一、周二、…等等…第二周，周一、周二、…”等。记忆辅助的其它变体也是显而易见的。“日剂量”可以是在给定的一天内将会服用的单个药片或胶囊或者若干药丸或胶囊。而且，本发明的物质的日剂量可由一颗药片或胶囊组成，而第二物质的日剂量可由若干药片或胶囊组成，反之亦然。所述记忆辅助应当反映出这个内容，并在活性药剂的正确服用上有所帮助。
在本发明的另外的具体实施方式中，提供了一种分配器，其设计为以它们预期使用的顺序，一次一个地分配日剂量。优选地，所述分配器配备有记忆辅助，以便进一步有利于遵从给药方案。此记忆辅助的一个实例为机械计数器，其指示已被分配的日剂量的数量。此记忆辅助的另一个实例为电池供电的连接有液晶读出器的微电子芯片存储器，或者声音提醒信号，例如，其读取已被服用的最近的日剂量的数据和/或提醒人们何时服用下次的剂量。
用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳剂、溶液、混悬剂、糖浆剂和酏剂。除了所述化合物或组合物之外，所述液体剂型可包含本领域常用的惰性稀释剂(如水或其它溶剂)、增溶剂和乳化剂，例如，乙醇、异丙醇、碳酸二乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(尤其是棉籽油、花生油、玉米胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、丙三醇、四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨醇的脂肪酸酯或这些物质的混合物。除了这些惰性稀释剂之外，所述组分还可包括佐剂，如润湿剂、乳化和混悬剂、甜味剂、调味剂和芳香剂。
本发明的方法中所用的化合物和组合物还可受益于多种的输送系统，其包括延时释放、延缓释放或持续释放的输送系统。当与将在以下更详细地予以叙述的其它治疗方案协力使用所述化合物和组合物时，这些选择可能是特别有利的。
许多类型的控释输送系统是本领域的普通技术人员可得到的和知晓的。它们包括基于聚合物的系统，如聚(丙交酯-乙交酯)、共聚草酸酯、聚己内酯、聚酯酰胺、聚原酸酯、聚羟基丁酸和聚酐。包含药物的前述聚合物的微囊剂被描述于，例如，U.S.专利第5,075,109号中。输送系统还包括非聚合物系统，即包括固醇类(如胆固醇、胆固醇酯)以及脂肪酸类或中性脂类(如单、双或三甘油酯)的脂质类；水凝胶释放系统；sylastic系统；基于肽的系统；蜡包衣；使用常规粘合剂和赋形剂的压制片；部分融合的植入物等。具体实例包括但不限于：(a)侵蚀系统，其中活性化合物以一种形式包含在基体内部，如描述于U.S.专利第4,452,775、4,667,014、4,748,034和5,239,660号中的那些；以及(b)扩散系统，其中活性组分以受控的速率从聚合物中渗出，如描述于U.S.专利第3,832,253和3,854,480号中的那些。另外，也可使用基于泵的硬件输送系统，其中的某些适于植入。
可能需要使用长期持续释放的植入物。如本文中所使用的长期释放，意思是所述植入物被构建和布置为释放治疗水平的活性化合物至少30天，且优选为60天。长期持续释放的植入物对本领域的普通技术人员来说是公知的，且包括如上所述的某些释放系统。
IAP拮抗剂也包括减少IAP基因(如cIAP1和cIAP2)的表达的分子。能够减少IAP基因的表达的适合的拮抗剂将是本领域的技术人员所公知的。实例包括核酸分子，如RNA或DNA分子(包括双链的或单链的)，以及肽类，如反义肽核酸，它们干扰靶基因的表达。
有用的DNA分子包括反义的，以及正义的(例如，编码的和调控的)DNA分子。反义DNA分子包括短低聚核苷酸。本领域的技术人员将能够设计出适合的短低聚核苷酸以根据本发明使用。一个实例是如Carter等(Apoptosis,2011Vol.16(1):67-74)所述的XIAP反义低聚核苷酸AEG35156。有用的DNA分子的其它实例包括编码干扰RNA(如shRNA和siRNA)的那些DNA分子。再一个实例为已知为脱氧核酶(DNAyme)催化性DNA分子。
能够减少IAP基因的表达的有用的RNA分子，在本文中还指的是RNA干扰分子，包括siRNA、dsRNA、stRNA、shRNA和miRNA(例如，短时序RNA(short temporal RNAs)和小分子调控RNA(small modulatory RNAs))。
RNA干扰(RNAi)对于特异性地抑制特定蛋白质的生成来说是特别有用的。虽然不希望受到理论的限制，但Waterhouse等(1998)已提供了dsRNA可被用于减少蛋白质的生成的机理的模型。此技术依赖于包含与所目的基因的mRNA或其部分(在本发明的情况下，编码根据本发明的多肽的mRNA)基本上相同的序列的dsRNA分子的存在。便利地是，所述dsRNA可由重组载体或宿主细胞中的单一启动子来制造，其中正义和反义序列的侧翼为不相关序列，所述不相关的序列能够使所述正义和反义序列杂交以形成具有形成环状结构的不相关序列的dsRNA分子。用于本发明的适合的dsRNA分子的设计与制造完全在本领域技术人员的能力范围之内，尤其是考虑到Waterhouse等(1998,Proc Natl Acad Sci USA.95(23):13959-64)、Smith等(2000,Nature.407:319-320)、WO 99/32619、WO 99/53050、WO 99/49029和WO 01/34815。
在一个实例中，引入了DNA，所述DNA引导与待去活化的靶基因同源的至少部分双链的RNA产物的合成。所述DNA因此同时包含正义和反义序列，当被转录为RNA时，所述正义和反义序列能够杂交而形成双链RNA区域。在一个优选的实施方式中，所述正义和反义序列被包含内含子的间隔子区域所分隔，当被转录为RNA时所述内含子会被剪切。此安排已显示出导致了更加高效的基因沉默。双链区域可包含由一个或两个DNA区域转录的一个或两个RNA分子。双链分子的存在被认为是引起细胞的响应，该响应破坏了所述双链RNA和靶基因的同源RNA转录物，有效降低或消除所述靶基因的活性。
杂交的正义和反义序列的长度应当分别为至少19个毗连的核苷酸，优选为至少30或50个核苷酸，更优选为至少100、200、500或1000个核苷酸。可采用对应于整个基因转录物的全长序列。长度最优选为100-2000个核苷酸。所述正义和反义序列与靶转录物的同一性程度应当至少为85％，优选至少为90％，更优选为95-100％。所述RNA分子当然可以包含可起到稳定分子的作用的不相关序列。所述RNA分子可在RNA聚合酶II或RNA聚合酶III启动子的调控下被表达。后者的实例包括tRNA或snRNA启动子。
优选的小干扰RNA(small interfering RNA，“siRNA”)分子包括与靶mRNA的约19-21个毗连核苷酸等同的核苷酸序列。优选地，例如，由标准BLAST搜索所确定的，所述靶mRNA序列始于双核苷酸AA，包括约30-70％(优选为30-60％，更优选为40-60％，更优选为约45-55％)的GC含量，且不与除了将被引入的细胞基因组中的标靶之外的任何核酸序列具有高百分比的同一性。
适合于与本发明一起使用的RNAi分子的合成可通过首先扫描用于AA双核苷酸序列的AUG起始密码子的标靶下游的mRNA序列来实现。每个AA和3'相邻的19个核苷酸的出现被记录为潜在的siRNA靶点。优选地，siRNA靶点选自开放阅读框(open reading frame)。其次，利用任意的序列比对软件(如BLAST)将潜在的靶点与适合的基因组数据库对比。过滤出显示出与其它编码序列显著的同源性的推定靶点。选出合格的标靶序列作为siRNA合成的模板。优选的序列为含有低G/C含量的那些序列，因为相比于具有高于55％的G/C含量的那些序列，这些序列已被证实在介导基因沉默方面更加有效。优选沿着靶基因的长度选取若干靶点来进行评价。
microRNA调控为向基因调控方向发展的RNA沉默途径的明确专门分支，与常规的RNAi/PTGS背道而驰。microRNA为以特征性反向重复构成的基因样元件编码的特殊类别的小RNA。当转录时，microRNA基因产生茎-环结构的前体RNA，随后该microRNA被加工。microRNA在长度上通常为约21个核酸。所释放出的miRNA被合并入包含起到序列特异性基因抑制作用的特定亚型的Argonaute蛋白质的RISC样复合物中(参见，例如，Millar andWaterhouse,2005,Funct Integr Genomics,5(3):129-35；Pasquinelli et al.,2005,Curr Opin Genet Dev.15(2):200-5；Almeida and Allshire,2005,TRENDS Cell Biol,15(5):251-8)。
脱氧核酶是能够切割单链和双链多核苷酸(能够切割单链和双链标靶序列)的单链多核苷酸(Breaker and Joyce.Chemistry and Biology 1995；2:655；Santoro andJoyce.Proc.Natl,Acad.Sci.USA 1997；943:4262)。脱氧核酶的一般模型(“10-23”模型)已被提出。“10-23”脱氧核酶具有15个脱氧核糖核苷酸的催化域，侧翼为两个各为7-9个脱氧核糖核苷酸的底物识别域。这种类型的脱氧核酶能够在嘌呤：嘧啶结合点有效切割它的底物RNA(Santoro and Joyce.supra；对于DNAzymes的综述,参见Khachigian,Curr Opin MolTher 4:119-21；2002)。
识别单链和双链靶标的切割位点的合成生物工程脱氧核酶的构建与扩增的实例已被公开于授予Joyce等的美国专利第6,326,174号中。
术语“双链RNA”或“dsRNA”指的是包含两条链的RNA分子。双链分子包括由自身对折而形成双链结构的单个RNA分子所组成的那些分子。例如，衍生出单链miRNA的前体分子的茎环结构(称之为前-miRNA)包含dsRNA分子。
其它适合的RNA干扰分子包括未修饰的和修饰的双链(ds)RNA分子，包括短时序RNA(stRNA)、小干扰RNA(siRNA)、短发夹状RNA(shRNA)、microRNA(miRNA)和双链RNA(dsRNA)。所述dsRNA分子(例如，siRNA)还可包含3′突出端，如3′UU或3′TT突出端。
在一个实施方式中，本发明的siRNA分子具有双链结构。在一个实施方式中，本发明的siRNA分子的长度的大于约25％、大于约50％、大于约60％、大于约70％、大于约80％、大于约90％为双链分子。
如本文中所用的，由RNA干扰所诱导的“基因沉默”指的是对于靶基因(例如，cIAP1基因和/或cIAP2基因)在细胞中的mRNA水平下降至少约5％、约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％、约99％、约100％的不存在RNA干扰时所述细胞中所发现的mRNA水平。
RNA干扰分子还包括含有一个或多个非天然核苷酸(即除了腺嘌呤“A”、鸟嘌呤“G”、尿嘧啶“U”或胞嘧啶“C”之外的核苷酸)的修饰RNA分子。修饰核苷酸残基或者天然核苷酸的衍生物或类似物也可被使用。任意的修饰残基、衍生物或类似物可在其不会消除或大幅降低(至少50％)分子的RNAi活性的范围内使用。适合的修饰残基的实例包括氨基烯丙基UTP、伪-UTP、5-I-UTP、5-I-CTP、5-Br-UTP、α-S ATP、α-S CTP、α-S GTP、α-S UTP、4-硫代UTP、2-硫代-CTP、2′NH2UTP、2′NH2CTP和2′F UTP。适合的修饰核苷酸还包括：氨基烯丙基尿苷、伪尿苷、5-I-尿苷、5-I-胞苷、5-溴-尿苷、α-S腺苷、α-S胞苷、α-S鸟苷、α-S尿苷、4-硫代尿苷、2-硫代-胞苷、2'NH2尿苷、胞苷2'NH2和2'F尿苷，包括游离的pho(NTP)RNA分子，以及核苷酸的所有其他有用的形式。
RNA干扰分子还可包括在核糖糖类上的修饰，以及在核苷酸链的磷酸酯骨架上的修饰。例如，包含代替RNA中发现的天然产生的α-D-核糖核苷的α-D-阿拉伯呋喃糖基结构的siRNA或miRNA分子可被用作根据本发明的RNA干扰分子。其它的实例包括在核苷酸的糖与杂环碱基之间包含O连接键的RNA分子，其提供了耐核酸酶性和与类似于包含2′-O甲基核糖、阿拉伯糖和尤其是α-阿拉伯糖的低聚核苷酸的低聚核苷酸分子结合的紧密互补链。硫代磷酸酯连接键也可被用于稳定siRNA和miRNA分子。
“siRNA”指的是形成双链RNA的核酸，当所述siRNA在与基因或靶基因相同的细胞中表达时，此双链RNA具有降低或抑制所述基因或靶基因的表达的能力。“siRNA”由此指的是由互补链形成的双链RNA。杂交以形成双链分子的所述siRNA的互补部分通常具有实质的或完全的一致性。在一个实施方式中，siRNA指的是与靶基因具有基本上的或完全的同一性且形成双链siRNA的核酸。所述siRNA的序列可对应于全长度的靶基因或其子序列。
在一个实施方式中，所述siRNA在长度上为至少约15-50个核苷酸(例如，所述双链siRNA的各个互补序列在长度上为至少约15-50个核苷酸，且所述双链siRNA在长度上为约15-50个碱基对，优选为约19-30个碱基核苷酸，优选在长度上为约20-25个核苷酸，例如，在长度上为20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核苷酸)。
适合的siRNA还包括小发夹状(也被称作茎环)RNA(shRNA)。在一个实施方式中，所述shRNA包括短(例如，约19个至约25个核苷酸)反义链，紧接着约5个至约9个核苷酸的核苷酸环，以及类似的正义链。或者，所述正义链可在所述核苷酸环结构之前，而所述反义链可在其之后。
在一个实施方式中，IAP的拮抗剂为siRNA、shRNA或miRNA。
关注所述靶基因的序列的本领域技术人员可容易地设计具体的RNA干扰分子，如siRNA、shRNA和miRNA分子。
在一个实施方式中，所述siRNA、shRNA或miRNA被靶向针对选自下列序列的序列：NCBI参考序列：NM_001166.4、NCBI参考序列：NM_001256163.1、NCBI参考序列：NM_001256166.1、GenBank：DQ068066.1、NCBI参考序列：NM_001165.4、NCBI参考序列：NM_182962.2、GenBank：BC037420.1、NCBI参考序列：NM_001167.3、NCBI参考序列：NM_001204401.1、NCBI参考序列：NR_037916.1和NCBI参考序列：NG_007264.1的序列。
单链的或未被考虑作为RNA干扰分子的其它RNA分子也可被用作根据本发明的治疗剂，包括信使RNA(以及前体前信使RNA(progenitor pre-messenger RNAs))、小核RNA(small nuclear RNAs)、小核仁RNA(small nucleolar RNAs)、转录RNA和核糖体RNA。
能够减少IAP基因的表达的IAP拮抗剂，如本文所述的(例如，RNA干扰分子，如siRNA、dsRNA、stRNA、shRNA和miRNA)，可通过正如本领域的技术人员所公知的任意适合的给药装置和途径(例如，基因治疗或基因输送法)给药至需要该药的受治者。应当理解的是，IAP拮抗剂将以这样的方式被给药至受治者，所述方式确保所述拮抗剂能够接触和进入所述受治者的细胞中，无论所述细胞被病原体所感染或是至少能够被病原体所感染。适合的给药途径的实例包括静脉注射、肌肉注射、局部给药、口服给药、鼻内给药或通过基因枪或皮下注射工具给药。
或者，治疗方法可包括在会有利于所述IAP拮抗剂进入细胞(即转染)的条件下，用所述IAP拮抗剂体外(ex vivo或in vitro)接触源自受治者的细胞。标准的转染技术是本领域技术人员所公知的。在一个实施方式中，在有利于所述IAP拮抗剂进入细胞及其之后的转染的条件下，使所述IAP拮抗剂接触来自受治者的自体细胞，以使得所述IAP拮抗剂能够阻断或至少部分抑制所转染的细胞中的IAP基因的表达。然后所转染的细胞被给药至受治者，在那里它将会至少部分地抵御感染。为体外转染选择的细胞的类型优选为至少能够被病原体所感染的细胞。所述为体外转染选择的细胞的类型可因而取决于受治者体内要被治疗的感染的类型。例如，在传染性病原体为HIV的情况下，所述自体细胞可以是T型淋巴细胞。根据本发明的可适合于体外转染的其它细胞类型包括巨噬细胞、成纤维细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、B型淋巴细胞、干细胞(例如，成体干细胞)和祖细胞。根据本发明方法的能够转染的祖细胞的实例包括红细胞和造血干细胞的前体。
本发明的方法还可被用于治疗由其它病原体引起的细胞内感染。例如，结核分支杆菌(Mycobacterium tuberculosis)的当务之急是在宿主细胞中建立潜伏，这对驻留于巨噬细胞中的胞内细菌来说是高度复杂的尝试。因此，结核分支杆菌必须严格禁止所有细胞发出死亡信号4-6，以允许其在巨噬细胞中的持续存在10-13。结核分支杆菌感染的巨噬细胞处于应当导致细胞凋亡的大量的细胞应激下14。尽管对机制知之甚少，但应当确保感染细胞和其驻留的微生物的死亡的细胞死亡程序，被此病原体所拮抗14。本发明的发明人已经展现出的数据有力地支持了以下观点：推动感染了结核分支杆菌的细胞的程序性细胞死亡将会有助于对病原体的清除。类似地，为了实现富有成效的生命周期和为了促进潜伏，某些细胞中的HIV在某些时刻必须拮抗宿主细胞的死亡15-19。宿主细胞的死亡可以是感受到微生物感染的结果或通过免疫细胞所释放的死亡诱导分子的影响的结果。胞内病原体拮抗了这些响应以利于它们的持续存在与传播4-6。用IAP干涉是可被用于使感染细胞对细胞死亡诱导因子和促进病原体清除的途径再次敏感的机制。
在一个实施方式中，感染由病毒、细菌、真菌、酵母菌或原生动物引发。
在一个实施方式中，感染由选自人乳头状瘤病毒(Human papilloma virus)、疱疹病毒(Herpes virus)(包括单纯疱疹1/2(herpes simplex 1/2))、水痘带状疱疹(varicella zoster)、EBV、CMV、HHV-6/7、HTLV、人乳多空病毒(Human papovaviruses)(包括JC病毒和BK病毒)、腺病毒和细小病毒(adeno and parvoviruses)、HIV、HBV和HCV的病毒引发。
在一个实施方式中，感染由选自沙门氏菌属(Salmonella spp.)、埃里希体属(Ehrlichia spp.)、分枝杆菌属(Mycobacteria spp.)、螺旋体属(Spirochetes)、军团菌属(Legionella spp.)、李斯特菌属(Listeria spp.)、立克次体属(Rickettsia spp.)、衣原体属(Chlamydia spp.)、支原体属(Mycoplasma spp.)、柯克斯体属(Coxiella spp.)、耶尔森菌属(Yersinia spp.)、弗朗西丝菌属(Francisella spp.)、布鲁杆菌属(Brucellaspp.)、奈瑟球菌属(Neisseria spp.)和诺卡尔菌属(Nocardia spp.)的细菌引发。
在一个实施方式中，感染由选自组织胞浆菌属(Histoplasma spp.)、曲霉菌属(Aspergillus spp.)、隐球菌属(Cryptococcus spp.)和杰氏肺囊虫(Pneunocystisjirovecii)的真菌或酵母菌引发。
在一个实施方式中，感染由选自锥虫科(Trypanosomatid)(例如，利什曼原虫属(Leishmania spp.))、顶复门寄生虫(Apicomplexan)(包括肝脏形式的疟原虫属的)、弓形虫属(Toxoplasma spp.)和隐孢子虫属(Cryptosporidium spp.)的原生动物引发。
本发明还提供了IAP拮抗剂用于治疗受治者的细胞内感染的用途。
本发明的方法可进一步包括给药一种或多种额外的治疗剂。本领域的技术人员应当理解的是：额外的治疗剂的类型将取决于待治疗的感染。例如，在所述感染为病毒感染(如HBV感染)的情况下，可进一步给予受治者核苷类似物抗病毒剂。此药剂的实例包括：核苷类似物药物，包括去羟肌苷(Didanosine)、阿糖腺苷(Vidarabine)、阿糖胞苷(Cytarabine)、恩曲他滨(Emtricitabine)、拉米夫定(Lamivudine)、扎西他滨(Zalcitabine)、阿巴卡韦(Abacavir)、阿昔洛韦(Aciclovir)、恩替卡韦(Entecavir)、司他夫定(Stavudine)、替比夫定(Telbivudine)、齐多夫定(Zidovudine)(叠氮胸腺嘧啶(azidothymidine)或AZT)和碘苷(Idoxuridine)。优选的药剂选自拉米夫定、阿德福韦(adefovir)、替诺福韦(tenofovir)、替比夫定和恩替卡韦。在所述感染为HCV感染的情况下，所述受治者可被进一步给药聚乙二醇化IFNα和利巴韦林(ribavirin)，和/或米拉韦生(Miravirsen)(Janssen et al.N Engl J Med,2013,vol.368(18):1685-94)。
另外优选的额外的治疗剂为TRAIL。关于TRAIL的额外信息可在WO 97/01633、WO02/085946、WO 02/22175和WO 2009/025743中找到。这些文献中的每一个的公开内容以引用的方式包含于本文中。
所述额外的治疗剂可被同时(例如，以与所述IAP拮抗剂相同的制剂中)或顺序(即在所述IAP拮抗剂的给药之前或之后)给药。对于顺序给药，所述额外的治疗剂可在所述IAP拮抗剂的几秒、几分钟、几小时、几天或几周内被给药。
所述IAP拮抗剂可以本领域的技术人员所公知的任意适合的方式被输送至需要该IAP拮抗剂的受治者。例如，本领域的技术人员将理解的是，在所述IAP拮抗剂为RNA干扰分子的情况下，给药方法将需要有利于将所述IAP拮抗剂输送至细胞的细胞质，在此处其可与标靶序列相互作用。在所述IAP拮抗剂为siRNA分子的情况下，所述RNA干扰分子可以通过联合给药靶向肝细胞的N-乙酰半乳糖胺共轭的蜂毒肽样肽(N-acetylgalactosamine-conjugated melittin-like peptide(NAG-MLP))与嗜肝胆固醇共轭的siRNA(liver-tropic cholesterol-conjugated siRNA)而被输送至受治者(参见，例如，Woodell etal.,Molecular Therapy,2013May；21(5):973–985)。在所述分子为反义DNA低聚核苷酸分子的情况下，其可以用Janssen等描述的方法输送至需要该药物的受治者(N Engl J Med,2013,vol.368(18):1685-94)。
在另外的实施方式中，可对受治者进行基因疗法以减少受治者体内的一个或多个IAP基因的表达或使其失活。
输送的方法包括使用可给药至所述受治者的溶液或混悬剂。适合的给药方式将是本领域技术人员所公知的。实例包括静脉注射、皮下注射、肌肉注射或腹膜内注射。
感染要被治疗的受治者可以是人类或对人类有经济价值和/或社会价值的哺乳动物，例如，除了人类之外的食肉动物(如猫和狗)、猪(猪、阉猪和野猪)、反刍动物(如牛、公牛、绵羊、长颈鹿、鹿、山羊、野牛和骆驼)、马和鸟类(包括那些濒危的、养在动物园的鸟类)，以及飞禽，以及更加特别的，驯养飞禽，例如，家禽，如火鸡、鸡、鸭、鹅、珍珠鸡等)，因为它们同样对人类有经济价值。所述术语“受治者”不表示特定的年龄。因此，成年的和新生的受治者均要覆盖在内。
本发明还提供了IAP拮抗剂在制造用于治疗受治者的细胞内感染的药物方面的用途。
所述药物可包含附加量的药学上可接受的和适合的载体、稀释剂或赋形剂。这些载体、稀释剂或赋形剂包括所有已知的溶剂、分散介质、填充剂、固体载体、铸件(castings)、抗真菌和抗菌剂、表面活性剂、等渗和吸收剂等。应当理解的是，所述药物还可包含如本文中所述一种或多种额外的治疗剂(即除了所述IAP拮抗剂之外的治疗剂)。例如，在感染为HBV感染的情况下，所述药物可进一步包含选自拉米夫定、阿德福韦、替诺福韦、替比夫定和恩替卡韦的HBV抗病毒剂。在感染为HCV感染的情况下，所述药物可进一步包含聚乙二醇化IFNα和利巴韦林，和/或米拉韦生(Janssen et al.N Engl J Med,2013,vol.368(18):1685-94)。
本发明还设想了与其它药物活性剂的联合制剂和/或联合给药，所述其它药物活性剂包括但不限于TNF-α激动剂(如TNF-α)，TRAIL(TNF相关凋亡诱导配体)，或TRAIL激动剂，例如但不局限于TRAIL受体抗体。
本领域的技术人员将会理解的是，本文中所描述的本发明容许除了这些具体描述的之外的变体和修饰。会被理解的是，本发明包括所有落入其精神和范围之内的变体和修饰。本发明还包括所有在本说明书中单独或共同提及或指出的步骤、特征、组合物和化合物，以及两种以上的所述步骤或特征的任意或全部的组合。
除非另有定义，否则本文中所用的所有技术或科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员的常规理解相同的含义。尽管任何与本文所述的这些相类似或等同的材料和方法可被用于实践和检验本发明，但现在描述的是优选的材料和方法。
实施例
实施例1：小鼠的乙型肝炎感染
本发明的发明人采用了可用于引起小鼠的HBV感染的技术7,8。将含有大于基因组长度HBV1.2(侧翼为腺伴随病毒的末端反向重复)的裸质粒DNA液压注射以产生大量的下腔静脉压来迫使DNA进入肝脏，在此其被纳入肝细胞7,8。重要的是，注入动物的DNA不包含任何的腺伴随病毒的编码序列。所述质粒未被封装，故在注射制剂中不存在病毒结构或非结构蛋白。
对小鼠进行间歇放血并分离其血清。采用Qiagen病毒DNA提取试剂盒来纯化病毒DNA。如前所述9，通过RT-PCR实现HBV基因组的绝对定量。
采用这种技术，C57BL/6小鼠(任一性别为6-12周龄)被感染了HBV，它们表达表面抗原、核心抗原和e-抗原，以及表现出高水平的血清HBV DNA(见图1)。还有，在受感染动物的血清中识别出了病毒粒子，且肝脏的组织学检查显示出约20％的肝细胞被感染了HBV(表达HBcAg(乙肝核心抗原))。这个非常接近地模拟了人类感染。而且，非常类似于人类感染，小鼠在感染后的8至12周开始控制病毒血症，但超过感染后的24周仍旧在小鼠的血清中发现了HBV DNA(见图2)。这表明HBV的全复制生命周期在小鼠肝脏细胞中进行了重演，游离型HBV转录模板可能持续存在于某些肝细胞中，导致在感染后的24周观察到病毒血症的复发。
实施例2：用birinapant对小鼠的治疗
用HBV来感染C57BL/6小鼠，并在感染后6天接受birinapant(30mg/kg腹膜内给药)或载体对照(DMSO)每周一次给药总共3周(3次剂量)的治疗。
HBV感染后六天，小鼠接受birinapant或载体对照的治疗。相比于用载体对照治疗的小鼠的病毒载量，在三次剂量的birinapant之后，HBV病毒载量减少了两个数量级。在首次剂量的birinapant之后的39天，所有birinapant治疗的HBV感染小鼠在它们的血清中不具有可察觉到的HBV DNA。平均来看，在此时间点用载体对照治疗的小鼠在它们的血清中仍旧具有约106个拷贝的HBV DNA(见图3)。结果发现，3次剂量的birinapant在促进HBV清除方面具有相当于6次剂量的birinapant的同等效力。birinapant治疗早在首次治疗剂量后的10天就实现了HBV的清除(见图4)。
实施例3：cIAP1和cIAP2的基因靶向重演了用birinapant治疗所看到的HBV清除动力学
具有cIAP1缺陷(肝特异性缺陷)并且所有组织中cIAP2缺陷的基因靶向小鼠，能够以与用birinapant治疗的小鼠相似的动力学来清除HBV感染(见图5)。
实施例4：birinapant在人类外周血单核细胞(PBMC)中抗HIV-1JR-CSF的活性
方法
病毒分离
从NIAID艾滋病研究和参考试剂计划(NIAID AIDS Research and ReferenceReagent Program)处获得了HIV-1分离种群JR-CSF(M组，B亚型，嗜CCR-5的(CCR5-tropic)，分离自过滤的AIDS痴呆患者的脑脊液)。利用新鲜的人PBMC制备病毒的近传代原种(lowpassage stocks)，并将其储存在液氮中。在临用之前，将病毒的预滴定小样(pre-titeredaliquots)从冷藏库取出，在生物安全柜中快速解冻至室温。
在新鲜的人PBMC中的抗HIV效力评价
从筛选的捐赠者(Biological Specialty Corporation，Colmar，PA)中分离HIV和HBV血清阴性的新鲜人PBMC。细胞通过低速离心和在PBS中重新混悬来沉淀/洗涤2-3次，以除去污染性的血小板。然后在50mL离心管内将白细胞化的血液用Dulbecco磷酸盐缓冲盐水(DPBS)1:1稀释，并通过14mL的淋巴细胞分离介质(Lymphocyte Separation Medium，LSM；Mediatech,Inc.的
Figure BDA0000890834870000281
密度1.078+/-0.002g/ml；Cat.#85-072-CL)来分层，然后在600X g下离心30分钟。将带状的PBMC轻轻地从生成的界面吸出，随后通过低速离心用PBS洗涤2次。最终的洗涤之后，细胞通过台盼蓝排除法(trypan blue exclusion)来计数，并以1×106细胞/mL在补充了15％胎牛血清(Fetal Bovine Serum，FBS)和2mM L-谷氨酰胺、4μg/mL植物血球凝集素(Phytohemagglutinin，PHA；Sigma公司)的RPMI 1640中重新混悬。使所述细胞在37℃下孵育48-72小时。孵育后，将PBMC离心并重新混悬在含15％FBS、2mM L-谷氨酰胺、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素和20U/mL重组人IL-2(R&D Systems,Inc公司)的RPMI 1640中。于培养基中包含IL-2以维持PHA促有丝分裂刺激(mitogenic stimulation)引发的细胞分裂。将PBMC以1-2×106细胞/mL的浓度保持于此培养基中，两周更换一次培养基，直至用于测定。细胞在被认为用于测定太老并被舍弃之前，最多保持在培养液中两周。单核细胞衍生的巨噬细胞(MDM)由于贴附于组织培养瓶上的结果而在培养中耗尽。
对于标准PBMC测定，将来自至少两个正常捐赠者的PHA受激细胞合并(混合在一起)，在新鲜的培养基中稀释至1×106细胞/mL的最终浓度，以50μL/孔(5×104细胞/孔)置入96孔的圆底微培养板的内孔中。合并(混合)来自多于一个正常捐赠者的单核细胞是用于使在个体捐赠者之间观察到的变化降至最低，所述变化源自在HIV感染及对原代淋巴细胞群体的PHA和IL 2的全面反应方面的定量和定性差异。各个培养板均包含病毒/细胞对照孔(细胞+病毒)和试验孔(药物+细胞+病毒)。在此体外测定中，在整个孵育期间保持高的PBMC活力。因此，受感染的孔被用于评价抗病毒活性和细胞毒性。在微量滴定管中以2×浓度制备测试药物的稀释度，并采用标准形式将100μL的各个浓度(总共九个浓度)放入适当的孔中。将50μL预定稀释度的病毒原种放入各个测试孔(最终MOI≌0.1)中。在感染后六天内将PBMC培养物保持在37℃、5％CO2的条件下。此期间之后，收集无细胞的上清液样本以分析逆转录酶的活性。取出上清液样本之后，通过向所述培养板添加MTS来测定化合物的细胞毒性，以确定细胞活力。还在显微镜下检查了各个孔，并记录下任何的异常情况。
逆转录活性测定
利用了基于微量滴定板的逆转录(RT)反应(Buckheit et al.,AIDS Researchand Human Retroviruses 7:295-302,1991)。将氚标记的胸苷三磷酸(3H-TTP，80Ci/mmol，NEN)以1mCi/ml溶于1:1dH2O:乙醇中。通过混合150μPoly rA(20mg/ml)与0.5ml寡脱氧胸苷酸(oligodT)(20单位/ml)及5.35ml无菌dH2O而制得了Poly rA:oligodT模板:引物(Pharmacia公司)作为原液，随后取样(1.0ml)并在-20℃下储存。每天新鲜制取RT反应缓冲液，其由125μl 1.0M EGTA、125μl dH2O、125μl 20％Triton X100、50μl 1.0M Tris(pH7.4)、50μl 1.0M DTT和40μl 1.0M MgCl2组成。通过混合1份3H-TTP、4份dH2O、2.5份polyrA:oligodT原液和2.5份反应缓冲剂而制得了最终的反应混合物。将十微升的此反应混合物放入圆底微量滴定板中，加入15μl含病毒的上清液并混合。所述微量滴定板在37℃下孵育60分钟。孵育之后，将反应体积点样到DE81过滤垫(Wallac公司)上，在5％磷酸钠缓冲液或2X SSC(Life Technologies公司)中清洗5次，每次5分钟，在蒸馏水中清洗2次，每次1分钟，在70％乙醇中清洗2次，每次1分钟，然后干燥。结合的放射性(每分钟计数，CPM)采用标准液体闪烁技术来量化。
针对PBMC活力的MTS染色来测量细胞毒性
在测定结束时，用可溶性的基于四氮唑的染料MTS(
Figure BDA0000890834870000291
96Reagent，Promega公司)将测定板染色，以确定细胞活力和量化化合物毒性。MTS被代谢活性的细胞的线粒体酶代谢而产生可溶性甲臜(formazan)产物，允许快速定量分析细胞活力和化合物毒性。此试剂是稳定的单一溶液，不要求使用前制备。在所述测定结束时，每孔加入10-25μL的MTS(基于体积的10％的最终浓度)，然后将微量滴定板在37℃、5％CO2下孵育4-6小时以评价细胞活力。采用粘性板密封器来代替盖子，将密封的滴定板倒置几次以混合所述可溶性甲臜产物，并以Molecular Devices Vmax或SpectraMax Plus酶标仪在490/650nm处用分光光度法读取所述板。
数据分析
运用自用计算机程序，PBMC数据分析包括了IC50(病毒复制的50％抑制)、IC90(病毒复制的90％抑制)、IC95(病毒复制的95％抑制)、TC50(50％细胞毒性)、TC90(90％细胞毒性)、TC95(95％细胞毒性)和治疗指数值(TI＝TC/IC；也称为抗病毒指数或AI)的计算。以下提供了抗病毒活性和毒性二者的原始数据和所述数据的图表形式。
结果
评价了含有或不含固定浓度的TNF-α的birinapant抗HIV-1的抗病毒效力，其结果总结于表1中。还有，图6和7分别显示了用单独的或与10ng/ml TNF-α结合的各种浓度的birinapant在PBMC中对HIV JR_CSF复制的抑制。
表1：在PBMC中Birinapant±TNF-α抗HIV-1JR-CSF的活性
Figure BDA0000890834870000301
Birinapant在PBMC中展现抗HIV-1的抗病毒活性及某些细胞毒性。在固定浓度(10ng/mL)的TNF-α的存在下，在抗病毒效力方面有了6倍的增长。在细胞毒性方面的1.6倍的增长是在所述测定的预期生物差异的范围内。单独使用TNF-α在此测定中发挥了减少35％的HIV复制的效力，且利用MTS端点不会影响细胞活力。
实施例5：birinapant抗HIV-1受感染细胞的活性
方法
分离和活化。来自健康捐赠者的PBMC通过Ficoll(GE)梯度离心来分离，并用磁珠(Miltenyi公司)来去除CD8+细胞。余下的PBMC或者保持在幼稚态(
Figure BDA0000890834870000302
state)，或者在PHA(10μg/mL)中活化并在RF10(RPMI，10％FCS，2％谷氨酰胺)(补充有IL-2(10U/mL)和IL-7(25ng/mL))中培养3天。
HIV感染。在37℃下以0.1的MOI用HIV NL4.3(GFP+，nef缺陷)将活化的PBMC感染2小时，或弃去未被感染的。孵育后，将细胞在PBS中洗涤3次，并在补充有IL-2和IL-7的RF10中混悬，并在1×106细胞/mL下进一步培养3天。
birinapant处理。向PBMC补充新鲜的培养基，然后用birinapant(0.1μM、1μM或10μM)或单独的DMSO(1％最终浓度)处理6小时或12小时。处理之后，将细胞在最终浓度2％(w/v)的多聚甲醛中固定。
FACS。固定的细胞用PermWash(BD公司)进行可渗透化处理，并在4℃下用针对CD4(APC-H7；1:20)、CD3(PE-Cy7，1:40)和活性半胱天冬酶3(AF647，1:25)的抗体(所有的抗体均购自BD公司)染色1小时。
结果
结果显示于图8中。单次剂量的10μM birinapant之后，55％的HIV受感染细胞在24小时内死亡。birinapant对幼稚细胞的活力具有极小的影响，并对活化T细胞具有小的影响。
实施例5：birinapant抗结核分支杆菌感染的活性
用结核分支杆菌(Mycobacterium tuberculosis)(H37Rv菌株)来感染总数32只小鼠，休养4周后，17只小鼠用Birinipant处理(通过腹膜内注射，30μg/g)，15只小鼠用DMSO处理，二者均以每周一次的剂量给药。三次剂量之后，安乐死小鼠并将肺取出、匀浆化并将匀浆在Middlebrook 7H11琼脂板上连续稀释上样。培养3周后确定菌落形成单位(CFU)，结果显示于图9中。
解剖小鼠时，用显微镜注意到birinipant处理组的肺外观呈现粉色，一致且健康。与DMSO组相比，脾也是增大了的。结果显示出birinipant组中载菌量(0.33Log10CFU/肺)在统计学上显著降低(p＝0.012)。
实施例6：拮抗TNF-α细胞因子对birinapant活性的影响
用HBV来感染小鼠，然后在各种指示的时间点注射(腹膜内)TNF-α拮抗抗体。作为对照组，给另一群HBV感染小鼠注射不相关的IgG1同型对照抗体。
此实验的结果显示于图10中。如此图所示，对TNF-α活性的拮抗抵消了birinapant的效力。因此，birinapant，至少部分地，提升了内源性产生的TNF-α杀死受感染肝细胞和/或降低HBV水平的能力。
birinapant显示出促进和提高内源性产生的TNF-α的能力，以及提升此细胞因子消除感染的能力。已知IAP同样用于调节内源TRAIL信号(另一TNF超家族成员)，因而birinapant，通过其拮抗IAP的能力，也可提升TRAIL摧毁受感染细胞的能力。
数据表明birinapant提升了内源TNF-α的活性，并促进了此细胞因子摧毁受感染细胞的能力。与单独的birinapant相比，birinapant与同时给药的外源性TNF-α样分子的组合，随后将很可能会显示出在摧毁HBV方面的显著提高的效力(这已在实施例4中用HIV予以说明)。由于它的毒性，TNF-α难以被给药人体，但相关分子TRAIL已被用于人体试验且未发现有毒。因此，本发明的IAP拮抗剂(特别是birinapant)与TRAIL的组合可被用于提高birinapant的效力并促进对感染细胞的清除。
实施例7：其它IAP拮抗剂的活性
用HBV来感染小鼠，并用birinapant或描述于Fan等2013(20)的称之为GT13072的另一IAP拮抗剂(SMAC模拟物)来处理。
用HBV来感染C57BL/6小鼠，并在感染后6天将小鼠随机分为3群。一群用birinapant来处理(如实施例2所述)，另一群接受GT13072每周一次给药的处理(15mg/kg腹膜内给药-3周内共3次剂量)，以及第三群用载体对照来处理。其结果显示于图11中。
图11中所示的结果显示了birinapant清除HBV感染的能力被其它SMAC模拟物所共享。因此，SMAC模拟物/IAP拮抗剂作为一类药物在细胞内感染的治疗方面是有效的。
实施例8：birinapant抗嗜肺军团菌感染的活性
用嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)(50μl磷酸盐缓冲盐水中2.5×106个菌落形成单位)鼻内感染6至12周龄的C57BL/6小鼠。感染后六小时，用单次剂量的birinapant(10mg/kg腹膜内给药-方形)来处理或用载体对照(圆圈)来处理小鼠。感染后两天，从动物身上割取肺，通过培养来量化细菌数量。其结果显示于图12中，其中每个点代表一个动物，误差棒代表SEM。*P<0.05。与对照处理相比，数据显示了birinapant处理促进了嗜肺军团菌的清除和疾病的消退。
实施例9：恩替卡韦结合birinapant的效果
用HBV来感染C57Bl/6小鼠，并在6天后以单独的birinapant(30mg/Kg每周腹膜内给药一次，给药2周共2次)或恩替卡韦(entecavir)(3.2mg/Kg通过管饲法一天给药一次，给药8天共8次)或以所述剂量的birinapant+恩替卡韦来开始治疗，持续期间如上所示。
其结果显示于图13中，其中灰色阴影面积代表恩替卡韦处理的持续时间，箭头代表birinapant剂量。***p<0.001、**p<0.01、ns＝不显著，在每组中六只小鼠并在3个独立的实验中重现了实验发现。
这些结果可以明显看出，与作为单独的药剂给药的任一药物的效力相比，birinapant与核苷类似物恩替卡韦的组合在促进感染小鼠体内的血清HBV DNA的清除方面提高了效力。
实施例10：TRAIL结合birinapant的效果
利用前面所述的腺病毒传输系统(Chin R,Earnest-Silveira L,Koeberlein B,Franz S,Zentgraf H,Bowden S,Bock C-T,Torresi J.Modulation of MAPK pathwaysand cell cycle byreplicating hepatitis B virus:factors contributingtohepatocarcinogenesis.J Hepatology 2007；47:325-37)用HBV体外感染原代人肝细胞。所述传输系统包括绿色荧光蛋白标记物，以使得可以量化受感染细胞的比例。利用此系统，约100％的肝细胞被感染了HBV。感染后使细胞休养2天，然后使它们接受指定药剂的处理。处理后48小时，根据制造商手册使用
Figure BDA0000890834870000331
(Promega公司，Madison WI USA)来评价处理细胞活力。此实验以三个平行样进行并使用2个独立的捐赠者重复2次。来自所述三个平行未处理样本中的最高CellTiter-Glo结果被用来设定为100％活力记录。其结果显示于图14中。
根据此实验的结果可以明显看出，TRAIL，当被用作单独的药剂时，在促进感染了HBV的人原代肝细胞的死亡方面实际上不具有效力。本发明的发明人已经展示，当TNF-α信号被终止时，birinapant在控制HBV体内感染上是无效的。同样地，当不存在TNF-α时，birinapant在体外杀死受感染肝细胞方面不会起效。然而，即使当不存在TNF-α时，TRAIL与birinapant的组合也非常有效地杀死了感染了HBV的人原代肝细胞。这些数据表明TRAIL能够提升birinapant在清除感染细胞方面的效力，并表明birinapant的体内效力可凭借同时给药TRAIL激动剂得到提升。
总结
结果显示birinapant治疗清除了HBV感染。同样地，IAP的基因靶向缺失促进了HBV感染的清除。总的来说，数据显示，拮抗IAP的任意方法在消除HBV感染方面具有疗效。在HBV受感染小鼠中没有鉴别出关于birinapant治疗的毒性，感染了HBV的IAP缺陷动物也表现出了健康。这些数据表明，拮抗IAP敏化受感染细胞死亡，但其不能敏化正常或未感染细胞程序性细胞死亡。此外，IAP的抑制防止了有害的炎症反应。这些结果还显示出birinapant抗HIV、结核分支杆菌和嗜肺军团菌受感染细胞的活性。相信这些结果可被容易地拓展到存在于宿主细胞的其它感染，包括HCV、HPV、CMV和其它细胞内病毒、细菌、真菌、酵母菌和寄生虫。
参考资料：
1.Du C,Fang M,Li Y,Li L,Wang X.Smac,a mitochondrial protein thatpromotes cytochrome c-dependent caspase activation by eliminating IAPinhibition.Cell.2000；102:33-42.
2.Vince JE,Wong WW,Khan N,Feltham R,Chau D,Ahmed AU,et al.IAPantagonists target cIAP1 to induce TNF alpha-dependent apoptosis.Cell.2007；131:682-93.
3.Vince JEW,W.W.Gentle,I.Lawlor,K.E.Allam,R.O'Reilly,L.Mason,K.Gross,O.Ma,S.Guarda,G.Anderton,H.Castillo,R.Hacker,G.Silke,J.Tschopp,J.Inhibitor ofApoptosis Proteins Limit RIP3Kinase-Dependent Interleukin-1Activation.Immunity.2012；36:215-27.
4.Lamkanfi M,Dixit VM.Manipulation of host cell death pathways duringmicrobial infections.Cell Host Microbe.2010；8:44-54.
5.Yatim N,Albert ML.Dying to replicate:the orchestration of the virallife cycle,cell death pathways,and immunity.Immunity.2011；35:478-90.
6.Mocarski ES,Upton JW,Kaiser WJ.Viral infection and the evolution ofcaspase 8-regulated apoptotic and necrotic death pathways.Naturereviews.2012；12:79-88.
7.Lin YJ,Huang LR,Yang HC,Tzeng HT,Hsu PN,Wu HL,et al.Hepatitis Bvirus core antigen determines viral persistence in a C57BL/6mousemodel.Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States ofAmerica.2010；107:9340-5.
8.Huang LR,Wu HL,Chen PJ,Chen DS.An immunocompetent mouse model forthe tolerance of human chronic hepatitis B virus infection.Proceedings of theNational Academy of Sciences of the United States of America.2006；103:17862-7.
9.Ebert G,Poeck H,Lucifora J,Baschuk N,Esser K,Esposito I,et al.5'Triphosphorylated small interfering RNAs control replication of hepatitis Bvirus and induce an interferon response in human liver cells andmice.Gastroenterology.2011；141:696-706,e1-3.
10.Cooper AM,Torrado E.Protection versus pathology in tuberculosis:recent insights.Current opinion in immunology.2012；24:431-7.
11.Saunders BM,Britton WJ.Life and death in the granuloma:immunopathology of tuberculosis.Immunol Cell Biol.2007；85:103-11.
12.Lin PL,Flynn JL.Understanding latent tuberculosis:a movingtarget.J Immunol.2010；185:15-22.
13.Abebe M,Kim L,Rook G,Aseffa A,Wassie L,Zewdie M,et al.Modulationof cell death by M.tuberculosis as a strategy for pathogen survival.Clin DevImmunol.2011；2011:678570.
14.Behar SM,Divangahi M,Remold HG.Evasion of innate immunity byMycobacterium tuberculosis:is death an exit strategy？Nat Rev Microbiol.2010；8:668-74.
15.Melki MT,Saidi H,Dufour A,Olivo-Marin JC,Gougeon ML.Escape of HIV-1-infected dendritic cells from TRAIL-mediated NK cell cytotoxicity duringNK-DC cross-talk--a pivotal role of HMGB1.PLoS Pathog.2010；6:e1000862.
16.Gougeon ML,Piacentini M.New insights on the role of apoptosis andautophagy in HIV pathogenesis.Apoptosis.2009；14:501-8.
17.Herbein G,Khan KA.Is HIV infection a TNF receptor signalling-driven disease？Trends Immunol.2008；29:61-7.
18.Kaminskyy V,Zhivotovsky B.To kill or be killed:how virusesinteract with the cell death machinery.Journal of internal medicine.2010；267:473-82.
19.Shedlock DJ,Hwang D,Choo AY,Chung CW,Muthumani K,Weiner DB.HIV-1viral genes and mitochondrial apoptosis.Apoptosis.2008；13:1088-99.
20.Fan LX,Zhou X,Sweeney WE Jr,Wallace DF,Avner ED,Grantham JJ,LiX.Smac-mimetic-induced epithelial cell death reduces the growth of renalcyts.J Am Soc Nephrol 2013；24:2010-22.

Claims (4)

1.细胞凋亡抑制剂(IAP)拮抗剂在制备用于治疗受治者的持续细胞内感染的药物中的用途，在所述感染中产生了肿瘤坏死因子(TNF)，其中所述感染由乙型肝炎病毒(HBV)引发，其中所述IAP拮抗剂选自二价的Smac模拟物和单价的Smac模拟物，其中所述Smac模拟物具有[P1-P2-P3-P4]或[P1-P2-P3-P4]-L-[P1'-P2'-P3'-P4']的一般结构，其中P1-P2-P3-和P1'-P2'-P3'-对应于成熟Smac的N端丙氨酸-缬氨酸-脯氨酸-三肽的肽置换物或肽模拟物，以及P4和P4'对应于苯丙氨酸、酪氨酸、异亮氨酸或缬氨酸的氨基酸置换物，以及L为共价连接[P1-P2-P3-P4]与[P1'-P2'-P3'-P4']的连接基团或连接键，以及其中所述IAP拮抗剂为针对cIAP1和cIAP2的拮抗剂。
2.根据权利要求1所述的用途，其中所述拮抗剂为单价的Smac模拟物。
3.根据权利要求1所述的用途，其中所述Smac模拟物包括一种或多种以下特性：
(a)所述Smac模拟物为二价的；
(b)所述Smac模拟物去抑制XIAP介导的半胱天冬酶-3抑制；
(c)所述Smac模拟物降解未结合TRAF2的cIAP-1以及结合TRAF2的cIAP1；
(d)所述Smac模拟物降解结合TRAF2的cIAP-2，但不降解未结合TRAF2的cIAP-2；
(e)相对于结合TRAF的cIAP-2的降解，所述Smac模拟物微弱地降解未结合TRAF2的cIAP-2。
4.根据权利要求3所述的用途，其中所述Smac模拟物为birinapant。
CN201480036777.1A 2013-06-25 2014-06-25 治疗细胞内感染的方法 Active CN105451726B (zh)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010321579.7A CN111481669A (zh) 2013-06-25 2014-06-25 治疗细胞内感染的方法
CN202110198940.6A CN112957365A (zh) 2013-06-25 2014-06-25 治疗细胞内感染的方法

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AU2013902327A AU2013902327A0 (en) 2013-06-25 Method of treating intracellular infection
AU2013902327 2013-06-25
AU2014901029 2014-03-24
AU2014901029A AU2014901029A0 (en) 2014-03-24 Method of treating intracellular infection
AU2014901977A AU2014901977A0 (en) 2014-05-26 Method of treating intracellular infection
AU2014901977 2014-05-26
PCT/AU2014/050092 WO2014205516A1 (en) 2013-06-25 2014-06-25 Method of treating intracellular infection

Related Child Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110198940.6A Division CN112957365A (zh) 2013-06-25 2014-06-25 治疗细胞内感染的方法
CN202010321579.7A Division CN111481669A (zh) 2013-06-25 2014-06-25 治疗细胞内感染的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105451726A CN105451726A (zh) 2016-03-30
CN105451726B true CN105451726B (zh) 2021-03-16

Family

ID=52140681

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010321579.7A Pending CN111481669A (zh) 2013-06-25 2014-06-25 治疗细胞内感染的方法
CN201480036777.1A Active CN105451726B (zh) 2013-06-25 2014-06-25 治疗细胞内感染的方法
CN202110198940.6A Pending CN112957365A (zh) 2013-06-25 2014-06-25 治疗细胞内感染的方法

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010321579.7A Pending CN111481669A (zh) 2013-06-25 2014-06-25 治疗细胞内感染的方法

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110198940.6A Pending CN112957365A (zh) 2013-06-25 2014-06-25 治疗细胞内感染的方法

Country Status (15)

Country Link
US (1) US10500252B2 (zh)
EP (2) EP3013329B1 (zh)
JP (2) JP6785653B2 (zh)
KR (3) KR20200108904A (zh)
CN (3) CN111481669A (zh)
AU (1) AU2014301958B2 (zh)
CA (1) CA2913189C (zh)
EA (1) EA036275B1 (zh)
ES (1) ES2828642T3 (zh)
HK (1) HK1224230A1 (zh)
IL (1) IL242678B (zh)
MX (2) MX2015016628A (zh)
NZ (2) NZ754814A (zh)
SG (1) SG11201509525XA (zh)
WO (1) WO2014205516A1 (zh)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10441654B2 (en) 2014-01-24 2019-10-15 Children's Hospital Of Eastern Ontario Research Institute Inc. SMC combination therapy for the treatment of cancer
CN106265764B (zh) 2016-08-18 2018-03-16 广州威溶特医药科技有限公司 Iap抑制剂和溶瘤病毒在制备抗肿瘤药物中的应用
CN108440507B (zh) * 2017-02-16 2022-10-18 南京圣和药物研发有限公司 作为细胞凋亡蛋白抑制剂的化合物及其应用
CN107987083A (zh) * 2017-11-24 2018-05-04 江苏亚盛医药开发有限公司 用于治疗和/或预防与肝炎病毒相关的疾病或病症的双二氮杂双环化合物
JP7414981B2 (ja) * 2020-12-28 2024-01-16 中以海▲徳▼人工智能▲薬▼物研▲発▼股▲ふん▼有限公司 ウイルス性肝炎を治療又は予防するための薬物組成物及びその応用
CN112933085B (zh) * 2020-12-28 2021-12-21 中以海德人工智能药物研发股份有限公司 一种化合物在制备治疗或预防病毒性肝炎用药物中的应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080089896A1 (en) * 2006-05-05 2008-04-17 Regents Of The University Of Michigan Bivalent SMAC mimetics and the uses thereof
WO2013049350A1 (en) * 2011-09-30 2013-04-04 Tetralogic Pharmaceuticals Corporation Smac mimetic (birinapant) for use in the treatment of proliferative diseases (cancer)

Family Cites Families (42)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3854480A (en) 1969-04-01 1974-12-17 Alza Corp Drug-delivery system
US3832253A (en) 1973-03-21 1974-08-27 Baxter Laboratories Inc Method of making an inflatable balloon catheter
US4667014A (en) 1983-03-07 1987-05-19 Syntex (U.S.A.) Inc. Nonapeptide and decapeptide analogs of LHRH, useful as LHRH antagonists
US4452775A (en) 1982-12-03 1984-06-05 Syntex (U.S.A.) Inc. Cholesterol matrix delivery system for sustained release of macromolecules
CA1200416A (en) 1983-05-13 1986-02-11 Societe Des Produits Nestle S.A. Food process
US5075109A (en) 1986-10-24 1991-12-24 Southern Research Institute Method of potentiating an immune response
JPH04167172A (ja) 1990-10-31 1992-06-15 Nec Corp ベクトルプロセッサ
US5807718A (en) 1994-12-02 1998-09-15 The Scripps Research Institute Enzymatic DNA molecules
IL122408A0 (en) 1995-06-29 1998-06-15 Immunex Corp Dna encoding a trail polypeptide and its preparation
US5705109A (en) 1996-06-20 1998-01-06 Westvaco Corporation Ozone treatment for composite paperboard/polymer package
US6506559B1 (en) 1997-12-23 2003-01-14 Carnegie Institute Of Washington Genetic inhibition by double-stranded RNA
KR101085210B1 (ko) 1998-03-20 2011-11-21 커먼웰쓰 사이언티픽 앤드 인더스트리얼 리서치 오가니제이션 유전자 발현 조절방법
JP5015373B2 (ja) 1998-04-08 2012-08-29 コモンウェルス サイエンティフィック アンド インダストリアル リサーチ オーガニゼイション 改良表現型を得るための方法及び手段
US6326193B1 (en) 1999-11-05 2001-12-04 Cambria Biosciences, Llc Insect control agent
AU2001290720A1 (en) 2000-09-11 2002-03-26 Musc Foundation For Research Development Method and composition for treating tumors by selective induction of apoptosis
US20020155109A1 (en) 2001-04-20 2002-10-24 Lynch David H. Bispecific antibodies that bind TRAIL-R1 and TRAIL-R2
US20040138119A1 (en) 2002-09-18 2004-07-15 Ingo Tamm Use of hepatitis B X-interacting protein (HBXIP) in modulation of apoptosis
US7713738B2 (en) 2003-02-10 2010-05-11 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds for the modulation of survivin expression
CN1960728A (zh) 2004-01-16 2007-05-09 密歇根大学董事会 构象受限的smac模拟物及其应用
US7345081B2 (en) 2004-03-23 2008-03-18 Genentech, Inc. Azabicyclo-octane inhibitors of IAP
PL2253614T3 (pl) 2004-04-07 2013-03-29 Novartis Ag Inhibitory IAP
EP1778718B1 (en) 2004-07-02 2014-10-08 Genentech, Inc. Inhibitors of iap
WO2006010118A2 (en) 2004-07-09 2006-01-26 The Regents Of The University Of Michigan Conformationally constrained smac mimetics and the uses thereof
EP2385038A1 (en) 2005-02-25 2011-11-09 Tetralogic Pharmaceuticals Corporation Dimeric IAP inhibitors
EP1883627B1 (en) 2005-05-18 2018-04-18 Pharmascience Inc. Bir domain binding compounds
KR20080022092A (ko) 2005-06-08 2008-03-10 노파르티스 아게 유기 화합물
WO2007048224A1 (en) 2005-10-25 2007-05-03 Aegera Therapeutics Inc. Iap bir domain binding compounds
BRPI0620058A2 (pt) 2005-12-20 2011-11-01 Novartis Ag combinação farmacêutica compreendendo compostos inibidores da ligação da proteìna smac a proteìnas inibidoras de apoptose, e um taxano, bem como uso da mesma
PE20110224A1 (es) 2006-08-02 2011-04-05 Novartis Ag PROCEDIMIENTO PARA LA SINTESIS DE UN PEPTIDOMIMETICO DE Smac INHIBIDOR DE IAP, Y COMPUESTOS INTERMEDIARIOS PARA LA SINTESIS DEL MISMO
JP5394249B2 (ja) 2006-11-28 2014-01-22 ノバルティス アーゲー Ｉａｐ阻害剤とｆｌｔ３阻害剤の組合せ剤
WO2008124129A2 (en) * 2007-04-09 2008-10-16 University Of Massachusetts Treating hiv with a m-csf effector kinase inhibitor like imatinib
WO2009025743A2 (en) 2007-08-17 2009-02-26 University Of Massachusetts Medical School Use of trail compositions as antiviral agents
CN102099035A (zh) * 2008-05-16 2011-06-15 诺瓦提斯公司 Iap抑制剂的免疫调节
KR101150254B1 (ko) 2008-12-26 2012-06-12 한미사이언스 주식회사 신규 중간체 및 이를 활용한 엔테카비르 제조방법
JP5720569B2 (ja) 2009-06-24 2015-05-20 味の素株式会社 核酸アナログの活性増強剤
US8283372B2 (en) 2009-07-02 2012-10-09 Tetralogic Pharmaceuticals Corp. 2-(1H-indol-3-ylmethyl)-pyrrolidine dimer as a SMAC mimetic
WO2011098904A1 (en) 2010-02-12 2011-08-18 Aegera Therapeutics, Inc. Iap bir domain binding compounds
US8481728B2 (en) 2010-02-16 2013-07-09 Scinopharm Taiwan, Ltd. Process for preparing entecavir and its intermediates
UY33236A (es) 2010-02-25 2011-09-30 Novartis Ag Inhibidores dimericos de las iap
JP2015504425A (ja) * 2011-11-09 2015-02-12 アンサンブル・セラピューティクス アポトーシスのインヒビターを阻害するための大環状化合物
US20140303090A1 (en) 2013-04-08 2014-10-09 Tetralogic Pharmaceuticals Corporation Smac Mimetic Therapy
US10300074B2 (en) * 2014-06-04 2019-05-28 Sanford Burnham Prebys Medical Discovery Institute Use of inhibitor of apoptosis protein (IAP) antagonists in HIV therapy

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080089896A1 (en) * 2006-05-05 2008-04-17 Regents Of The University Of Michigan Bivalent SMAC mimetics and the uses thereof
WO2013049350A1 (en) * 2011-09-30 2013-04-04 Tetralogic Pharmaceuticals Corporation Smac mimetic (birinapant) for use in the treatment of proliferative diseases (cancer)

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
IAP-IAP Complexes Required for Apoptosis Resistance of C. trachomatis–Infected Cells;Krishnaraj Rajalingam等;《PLoS Pathogens》;20061031;第2卷(第10期);1013-1023 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN105451726A (zh) 2016-03-30
JP6785653B2 (ja) 2020-11-18
ES2828642T3 (es) 2021-05-27
AU2014301958B2 (en) 2017-11-16
MX2015016628A (es) 2016-06-29
AU2014301958A1 (en) 2015-12-10
KR20160030099A (ko) 2016-03-16
IL242678B (en) 2021-08-31
CN111481669A (zh) 2020-08-04
EP3013329A4 (en) 2017-05-31
JP2016523261A (ja) 2016-08-08
NZ754814A (en) 2021-07-30
KR20200108903A (ko) 2020-09-21
EA201690075A1 (ru) 2016-05-31
JP7203682B2 (ja) 2023-01-13
EA036275B1 (ru) 2020-10-21
JP2019147823A (ja) 2019-09-05
SG11201509525XA (en) 2016-01-28
CN112957365A (zh) 2021-06-15
CA2913189A1 (en) 2014-12-31
EP3013329A1 (en) 2016-05-04
CA2913189C (en) 2020-08-25
US10500252B2 (en) 2019-12-10
US20160143995A1 (en) 2016-05-26
KR20200108904A (ko) 2020-09-21
EP3682873A1 (en) 2020-07-22
EP3013329B1 (en) 2020-08-05
NZ714347A (en) 2020-01-31
HK1224230A1 (zh) 2017-08-18
WO2014205516A1 (en) 2014-12-31
MX2020011591A (es) 2020-12-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7203682B2 (ja) 細胞内感染の処置方法
US9861679B2 (en) Method of treating cancer
JP2019506438A (ja) がんの処置のためのｓｍｃ組合せ療法
Lv et al. Nanoparticles encapsulating hepatitis B virus cytosine‐phosphate‐guanosine induce therapeutic immunity against HBV infection
WO2022217154A2 (en) Modified nucleosides and nucleotides analogs as antiviral agents for corona and other viruses
JP2014532657A (ja) Ｃ型肝炎ウイルスを処置するための方法および組成物
EP4359413A1 (en) Diacylglyercol kinase modulating compounds
CA3220923A1 (en) Diacylglyercol kinase modulating compounds
US20230046340A1 (en) Diacylglyercol kinase modulating compounds
Gattoni et al. Interferon-gamma: biologic functions and HCV therapy (type I/II)
Mozer-Lisewska et al. The incidence and significance of pattern-recognition receptors in chronic viral hepatitis types B and C in man
JP5815767B2 (ja) 免疫学的疾患の処置のためのチモシンα１の使用
WO2016097773A1 (en) Therapeutic iap antagonists for treating proliferative disorders
Khaja Uric acid as a growth factor for activated B cells
WO2013128022A1 (en) Method for preventing or treating a hepatitis c virus infection or a hepatitis b virus infection by administration of suicide gene-modified lymphocytes

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20171226

Address after: Vitoria, Australia

Applicant after: THE WALTER AND ELIZA HALL INSTITUTE OF MEDICAL RESEARCH

Address before: Vitoria, Australia

Applicant before: THE WALTER AND ELIZA HALL INSTITUTE OF MEDICAL RESEARCH

Applicant before: Tetralogic Pharmaceuticals

TA01 Transfer of patent application right
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant