EA036275B1 - Способ лечения внутриклеточной инфекции - Google Patents

Способ лечения внутриклеточной инфекции Download PDF

Info

Publication number
EA036275B1
EA036275B1 EA201690075A EA201690075A EA036275B1 EA 036275 B1 EA036275 B1 EA 036275B1 EA 201690075 A EA201690075 A EA 201690075A EA 201690075 A EA201690075 A EA 201690075A EA 036275 B1 EA036275 B1 EA 036275B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
iap
infection
antagonist
group
iap antagonist
Prior art date
Application number
EA201690075A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201690075A1 (ru
Inventor
Марк Пеллегрини
Грегор Клаус-Петер Эберт
Колин Гленн Бегли
Original Assignee
Дзе Уолтер Энд Элиза Хол Инститьют Оф Медикал Рисерч
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from AU2013902327A external-priority patent/AU2013902327A0/en
Application filed by Дзе Уолтер Энд Элиза Хол Инститьют Оф Медикал Рисерч filed Critical Дзе Уолтер Энд Элиза Хол Инститьют Оф Медикал Рисерч
Publication of EA201690075A1 publication Critical patent/EA201690075A1/ru
Publication of EA036275B1 publication Critical patent/EA036275B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/191—Tumor necrosis factors [TNF], e.g. lymphotoxin [LT], i.e. TNF-beta
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A61K31/52—Purines, e.g. adenine
    • A61K31/522—Purines, e.g. adenine having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. hypoxanthine, guanine, acyclovir
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/05—Dipeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • A61K38/1761—Apoptosis related proteins, e.g. Apoptotic protease-activating factor-1 (APAF-1), Bax, Bax-inhibitory protein(s)(BI; bax-I), Myeloid cell leukemia associated protein (MCL-1), Inhibitor of apoptosis [IAP] or Bcl-2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A61P31/06—Antibacterial agents for tuberculosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
    • C07K14/4703—Inhibitors; Suppressors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1138—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against receptors or cell surface proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering nucleic acids [NA]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering nucleic acids [NA]
    • C12N2310/141—MicroRNAs, miRNAs
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/50—Physical structure
    • C12N2310/53—Physical structure partially self-complementary or closed
    • C12N2310/531—Stem-loop; Hairpin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications
    • C12N2320/31—Combination therapy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
    • C12N2730/00011—Details
    • C12N2730/10011—Hepadnaviridae
    • C12N2730/10111—Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
    • C12N2730/10171—Demonstrated in vivo effect
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16071—Demonstrated in vivo effect
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Marine Sciences & Fisheries (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Pulmonology (AREA)

Abstract

Изобретение представляет способ лечения внутриклеточной инфекции у индивидуума, где способ содержит введение индивидууму антагониста IAP. В определенных вариантах осуществления изобретения антагонист IAP является Smac миметиком.

Description

Область изобретения
Настоящее изобретение относится к способу лечения внутриклеточных инфекций. Способ включает введение антагониста ингибитора апоптоза (IAP).
Предшествующий уровень техники по изобретению
Хронические генерализованные инфекции посредством патогенов, таких как вирус гепатита В (HBV), вирус иммунодефицита человека (ВИЧ), вирус папилломы человека (HPV), Mycobacterium tuberculosis, Histoplasma spp. и Plasmodium spp. связаны с недостаточностью патоген-специфического иммунитета и аберрантным неспецифическим воспалительным ответом, который является болезнетворным, вызывая побочное повреждение клетки-хозяина. В то время как в течение многих лет разрабатывались различные стратегии лечения, они имели слабый эффект.
Гепатит В является широко распространенным во всем мире заболеванием, которое насчитывает 280,000,000 носителей HBV. В глобальном плане HBV инфекция является наиболее распространенной в развивающихся странах Юго-восточной Азии, Африки и разных частях Южной Америки, где вертикальная трансмиссия младенцам в раннем возрасте вызывает высокую долю инфицированных индивидуумов, становящихся хроническими носителями HBV. Младенцы мужского пола, получившие HBV, имеют приблизительно 40% риск смерти от цирроза или первичной печеночноклеточной карциномы в результате хронической HBV инфекции. В отличие от этого, младенцы женского пола, инфицированные при рождении, имеют приблизительно 15% риск смерти по похожим причинам от хронической инфекции гепатита В.
Инфекция гепатит В остается тяжелой для лечения несмотря на то, что в клинической практике в настоящее время существует несколько лекарственных средств, включая интерферон a2b (IFN a2b) , IFN а2а, ламивудин, адефовир и энтекавир. Лечение является либо неэффективным вначале, или может стать таковым из-за возникновения устойчивых к лекарственному средству вирусов. Кроме того, также известно, что недостатком существующих схем лекарственного лечения является то, что они являются длительными, дорогостоящими и связаны с нежелательными побочными эффектами. Например, в то время как ламивудин применяют с некоторым успехом в лечении HBV инфекции, он связан с увеличивающимся риском возникновения резистентности, которая может составлять до 45-55% после второго года лечения. Кроме того, HBV не может быть полностью элиминирован из печени при такой терапии, так что повторная активация HBV инфекции происходит во многих случаях даже после прекращения лечения. Когда у пациентов с хронической HBV инфекцией наступает конечная стадия печеночной недостаточности, единственной альтернативной формой лечения становится трансплантация печени. Однако пока HBV инфекция персистирует, трансплантат может стать инфицированным, таким образом ограничивая выживание пациента и трансплантата.
Вирус иммунодефицита человека/синдром приобретенного иммунодефицита (ВИЧ/ СПИД) также представляет глобальный кризис в здравоохранении, особенно в развивающихся странах. Применение противо-ретровирусных лекарственных средств значительно изменило перспективы и качество жизни ВИЧ-инфицированных индивидуумов. Однако несмотря на такое противо-ретровирусное воздействие лекарственных средств, длительная иммунная активация, разрушение CD4 Т-клеток и В-клеток и потеря иммунной функции являются только частично обратимыми. Пациенты также находятся в состоянии риска заболеваний, не вызванных СПИДом и таких причин смерти, как рак, сердечно-сосудистое заболевание, печеночная и почечная недостаточность, заболевания центральной нервной системы (например, токсоплазменный энцефалит) и персистирующие инфекции.
Настоящее изобретение относится к разработке нового подхода к лечению внутриклеточных инфекций.
Сущность изобретения
Таким образом, в первом аспекте, настоящее изобретение относится к способу лечения внутриклеточной инфекции у индивидуума, способ, включающий введение индивидууму антагониста IAP.
Краткое описание рисунков
На фиг. 1 представлена зависимость от времени уровней HBV ДНК в сыворотке инфицированных мышей в течение 8-недельного периода (верхняя часть рисунка). На нижней части рисунка представлены ЕМ микрофотографии вирионов (слева) и субвирусные частицы (справа) в сыворотке.
На фиг. 2 представлена зависимость от времени уровней HBV ДНК в сыворотке инфицированных мышей в течение 40-недельного периода. Несмотря на очевидный контроль виремии, инфицированные мыши демонстрируют рецидив вирусной репликации HBV с временным подъемом уровня HBV ДНК в сыворотке даже на 24 неделе после инфекции.
На фиг. 3 представлены уровни HBV ДНК в сыворотке у мышей, получивших лечение биринапантом или контролем растворителем (DMSO).
- 1 036275
На фиг. 4 представлен график времени до наступления события (HBV клиренс), на котором сравниваются HBV инфицированные мыши (C57BL/6), получившие лечение биринапантом и контролем растворителем.
На фиг. 5 представлено, что мыши, дефицитные по cIAP1 (печеночно-специфичная недостаточность), вместе с общей недостаточностью cIAP2 во всех органах, могут элиминировать HBV инфекцию до сходной степени с мышами дикого типа, получившими лечение биринапантом. Пунктирная, сплошная красная и сплошная синяя линии указывают на число мышей дикого типа, мышей с печеночноспецифичной cIAP1 недостаточностью плюс с недостаточностью cIAP2 во всем организме и мышей с XIAP недостаточностью (во всем организме) (%), избавлявшихся от инфекции в течение определенного времени, соответственно.
Фиг. 6 - ингибирование репликации ВИЧ-1 JR-CSF в РВМС посредством биринапанта.
Фиг. 7 - ингибирование репликации ВИЧ-1 JR-CSF в РВМС посредством биринапанта +10 нг/мл TNF-α.
Фиг. 8 - РНА-активированные PBMCs, выделенные из двух здоровых доноров, были оставлены неинфицированными или инфицированными ВИЧ L4,3 (GFP+), а затем получившие лечение посредством биринапанта или контроля растворителем (NT) в течение 6 ч или 24 ч в указанных концентрациях. Дополнительно неинфицированные интактные PBMCs обрабатывали биринапантом или контролем растворителем. FACS анализ доли живых (активная каспаза 3 негативные) а) ВИЧ-инфицированных (GFP+) культивируемых CD4+ лимфоцитов после 24 ч лечения биринапантом, относительно живых инфицированных клеток до лечения; доли живых b) интактных культивируемых или с) РНА-активированных, неинфицированных CD4+ лимфоцитов после 6 ч или 24 ч лечения биринапантом относительно необработанных клеток.
Фиг. 9 - бактериальное поражение Mycobacterium tuberculosis (КОЕ/легкое Log10), в М. tuberculosis инфицированных мышах, получавших биринипант (n=17, вводимый в качестве интраперитонеальной инъекции, по 30 мкг/г с недельными интервалами х 3) по сравнению с контролем DMSO (n=15), демонстрирующим значительное уменьшение 0,33 LogicCFU/легкое (Р=0,012).
Фиг. 10 - антагонистичный TNF-цитокин подавляет эффективность биринипанта.
Фиг. 11 - результаты экспериментов со SMAC миметиками, отличными от биринипанта.
Фиг. 12 - бактериальное поражение Legionella pneumophila в легких инфицированных мышей (КОЕ/мл), которым вводили биринапант (квадратики) или контроль растворителем (круги). Каждая точка представляет животное, величины ошибок представляют SEM. *Р<0,05.
На фиг. 13 - представлены результаты лечения HBV инфицированных мышей с применением энтекавира, биринапанта и биринопанта, комбинированного с энтекавиром. ***р<0,001, **р<0,01, И8=не значимо.
На фиг. 14 - представлены результаты лечения первичных гепатоцитов человека, инфицированных HBV in vitro с применением аденовирусной системы доставки с TRAIL, биринапантом и комбинацией TRAIL и биринапанта.
Подробное описание изобретения
На всем протяжении этого описания, если из контекста не следует другое, слово содержать, или вариации, такие как содержит или содержащий, будут поняты как обозначающие включение заявленного элемента или числа или группы элементов или чисел, но не исключение любого другого элемента или числа или группы элементов или чисел.
Отсылка данного описания к любой предшествующей публикации (или информации, полученной из нее), или к любому понятию, которое известно, не является и не должно быть воспринято как признание или допущение или любая форма предположения, что предшествующая публикация (или информация, полученная из нее) или известное понятие образует часть общеизвестного знания в области деятельности, к которой это описание относится.
Все публикации, упоминаемые в этом описании, включены в настоящий документ в качестве ссылки полностью.
Следует отметить, как применяют в настоящем описании, формы единственного числа a, an и the включают множественные аспекты, если из контекста явно не следует другое. Таким образом, например, отсылка к средству включает одно средство, а также два или более средств; отсылка к молекуле включает одну молекулу, а также две или более молекул; и т.д.
Механизм уничтожения патогенов предназначен для инфицированных клеток, чтобы активировать процесс программируемой гибели клеток. Это убивает и патоген, и инфицированную клетку и предотвращает распространение микробов.
Однако многие патогены разработали стратегии предохранения своей клетки-хозяина от совершения самоубийства. Группа молекул в клетках-хозяевах, называемая ингибиторами белков апоптоза (IAPs), играет несколько ролей в регуляции программы гибели клеток и в модулировании воспаления.
Настоящее изобретение основывается, частично, на факте, что антагонизирующие IAPs in vivo, клиренс персистентно инфицированных клеток-хозяев и элиминация патогенов усиливается, не оказывая
- 2 036275 болезнетворного побочного вреда хозяину. Это может быть достигнуто посредством применения антагониста pan-IAP, который может быть антагонистом pan-cIAP, например, антагонист cIAP1 и/или cIAP2.
Таким образом, в первом аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения внутриклеточной инфекции у индивидуума, способ, включающий введение индивидууму антагониста IAP.
Как применяют в настоящем документе термин лечение означает, что уровень или число патогенов, ответственных за внутриклеточную инфекцию в организме, получающем лечение, например, пациенте человеке, уменьшается.
Семейство белков IAP включает XIAP (BIRC4), cIAP1 (BIRC2), CIAP2 (BIRC3); NAIP (BIRC1), сурвивин (BIRC5), Apollon (Bruce; BIRC6), ML-IAP (BIRC7; Livin, KIAP) и ILP2 (BIRC8).
Существует степень избыточности между членами семейства, но таргетная делеция XIAP+cIAP1+ cIAP2 вызывает эмбриональную летальность у мышей. Эти молекулы способствуют воспалению и подавляют сигналинг гибели клеток. Авторы настоящего изобретения впервые продемонстрировали, что IAPs играют важную роль в поддержании персистирующей внутриклеточной инфекции в хозяине.
В одном из вариантов осуществления IAP является cIAP1 или cIAP2, или обоими.
cIAP1 кодируется последовательностью, представленной в GenBank DQ068066,1. Варианты транскриптов cIAP1 включают NCBI эталонные последовательности NM 001166,4, NM 001256163,1 и NM 001256166,1.
cIAP2 кодируется последовательностью, представленной в GenBank BC037420,1. Варианты транскриптов CIAP2 включают NCBI эталонные последовательности NM_001165,4 и NM_182962,2.
XIAP (Х-связанный ингибитор апоптоза) кодируется GenBank NCBI эталонной последовательностью NG 007264,1. Варианты транскриптов XIAP включают NCBI эталонные последовательности NM_001167,3, NM_001204401,1 и NR_037916,1.
Подходящие антагонисты IAP будут известны специалистам в данной области. Примеры включают моновалентные антагонисты IAP GDC-0145, GDC-0152 и GDC-0917 (Genentech, USA), AT-IAP (Astex, UK) и АТ-406 (Ascenta, USA) и бивалентные антагонисты IAP AEG40826 (Aegera Therapeutics, USA), SM-1200 (Univ. of Michigan), HGS1029 (Human Genome Sciences, USA), BV6 (Genentech, USA), AEG40730 (Aegera Therapeutics); SM-164 (Univ. of Michigan); CS3 (Genentech); MLlOl (Sanford-Burnham Medical Research Institute); AEG35156 (Aegera Therapeutics) и биринапантЛЪ32711 (TetraLogic, USA). Некоторые из них дополнительно обсуждают в Fulda и Vucic (Nature Reviews Drug Discovery, 2012, voll 1, 109-124) и Fulda (Leukemia, 2012, vol26, 1155-1165), содержание которых включено в настоящий документ в качестве ссылки. В то время как в настоящее время полагают, что и моновалентные и бивалентные антагонисты IAP можно использовать в настоящем изобретении в настоящем изобретении предпочтительно, чтобы антагонист IAP был бивалентным.
В одном из вариантов осуществления антагонист IAP является миметиком второго полученного из митохондрии активатора каспазы (Smac). Smac является проапоптотическим митохондриальным белком, который является эндогенным ингибитором IAPs. Было продемонстрировано, что Smac миметики стимулируют программируемую гибель клеток и, таким образом, стали центром внимания при разработке новых подходов терапии рака2,3.
Smac антагонизирует IAP-опосредованное ингибирование каспазы посредством прямого взаимодействия с IAPs и/или индуцирует протеосомную деградацию некоторых членов семейства IAP (cIAP1 и cIAP2). Способность Smac промотировать и протеолитическую активацию про-каспазы-3 и ферментативную активность зрелой каспазы-3 зависит от ее способности специфически взаимодействовать с IAP. Smac связывается с BIR1/BIR2 линкерной областью и BIR3 XIAP, нарушая ингибирование каспазы-3 и -7 и каспазы-9, таким образом, облегчая апоптоз или программируемую гибель клеток. Smac и Smac миметики также индуцируют протеосомную деградацию cIAP1 и cIAP2, что приводит к ингибированию канонической NF-кВ активации. Многие вирусы модулируют NF-кВ активацию для промотирования патогенеза заболевания (Reference: Rahman и McFadden, Nat Rev Microbio 2011 9:291-306; Hiscott et al Oncogene 2006 30:6844-67; Shukla et al Carcinogenesis 201132:978-985). He будучи связанным с конкретным пониманием механизма, лежащего в основе этого изобретения, эти действия предполагают механизм, при котором Smac миметики могут быть использованы при лечении таких инфекций.
Открытие Smac миметиков стало возможным благодаря установлению кристаллической структуры взаимодействия между Smac и IAPs. Как выяснилось, Smac миметики облегчают апоптотическую гибель клеток в опухолевых клетках посредством множества механизмов, включая прямое связывание и противодействие IAPs, элиминацию IAPs посредством промотирования автоубиквитинилирования и протеосомной деградации cIAPs и активацию внешнего апоптотического сигнального пути посредством TNF стимуляции. TNF является критическим цитокином, требующимся для контроля многих инфекций, и когда TNF нейтрализуется для лечения аутоиммунных нарушений, многие латентные инфекции реактивируются (см. http://cMr.asm.org/content/22/2/274.full#sec-49). Как следствие, промотирование TNF активности при этих инфекциях может стимулировать их клиренс.
Примеры Smac пептидомиметиков, включая некоторые из идентифицированных выше, описаны, без ограничений, в US 7517906; US 7419975; US 7589118; US 7932382; US 7345081; US 7244851; US 7674787; US 7772177; US 7989441; US 20100324083; US 20100056467; US 20090069294; US 20110065726;
- 3 036275
US 20110206690; WO 2011098904, все из которых включены в настоящий документ в качестве ссылки, как будет изложено далее. Соединения, описанные в настоящем документе, и Smac миметики, как правило, имеют структуру:
или
[Р1-Р2-РЗ-Р4]-L-[Р1’-Р2’-РЗ’-Р4’] (формула II) где Р1-Р2-Р3- и Р1'-Р2'-Р3'- относится к заменам пептидов, т.е.пептидомиметикам, N-концевого AlaVal-Pro- трипептида зрелого Smac, и Р4 и Р4' относится к аминокислотным заменам четвертой Nконцевой аминокислоты, Phe, Tyr, Не или Val, и L является связывающей группой или связью, ковалентно связывающей [Р1-Р2-Р3-Р4] с [Р'-Р2'-Р3'-Р4'].
Например, без ограничений, Smac миметик может находится в следующем виде соединений по формуле II:
Р1 и Р1' является NHR1-CHR2-C(O)-;
Р2 и Р2' является -NH-CHR3-C (O)-;
Р3 и Р3' является пирролидином, пирролидином, слитым с циклоалкилом, или пирролидином, слитым с гетероциклоалкилом, имеющим -N-гетероатом, необязательно замещенный в каждом случае, и где пирролидин Р3/Р3' связан с Р2/Р2' посредством амидной связи;
Р4 и Р4' является -M-Qp-R7.
Различные заместители могут быть, например:
R1: -Н или -СН3;
R2: -СН3, -СН2СН3 или -CH2OH;
R3: С2.6 алкилом, С2.6 алкокси, С3-С6 циклоалкилом или гетероциклоалкилом, или С6-С8 арилом или гетероарилом, необязательно замещенным в каждом случае;
М: ковалентная связь, C1.6 алкилен, замещенный С1-С6 алкиленом, таким как, но не ограничивающимся -С(О)-;
Q: ковалентная связь, C1.6 алкилен, замещенный С1-С6 алкиленом, -О- или -NR8-,
Р: 0 или 1;
R7: циклоалкил, циклоалкил арил, алкиларил, алкилгетероарил, арил или гетероарил, необязательно замещенный в каждом случае;
R8: -Н или С1.6 алкил.
L является связывающей группой или связью, ковалентно связывающей [Р1-Р2-Р3-Р4] с [Р1'-Р2'-Р3'Р4'].
Алкил (моновалентный) и алкилен (дивалентный) в отдельности или в качестве части другого термина (например, алкокси) означает разветвленную или неразветвленную, насыщенную алифатическую углеводородную группу, имеющую до 12 атомов углерода, если не указано иначе. Примеры конкретных алкильных групп в качестве неограничивающих примеров включают, метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изо-бутил, сек-бутил, трет-бутил, н-пентил, 2-метилбутил, 2,2-диметилпропил, нгексил, 2-метилпентил, 2,2-диметилбутил, н-гептил, 3-гептил, 2-метилгексил и т.п. Термин низший когда его используют для модификации алкила, алкенила и т.д., означает от 1 до 4 атомов углерода, разветвленных или линейных, так что, например, термины низший алкил, C1-C4 алкил и алкил из от 1 до 4 атомов углерода являются синонимичными и их применяют взаимозаменяемо, чтобы обозначить метил, этил, 1-пропил, изопропил, 1-бутил, сек-бутил или трет-бутил. Примеры алкиленовых групп в качестве неограничивающих примеров включают метилен, этилен, н-пропилен, н-бутилен и 2-метилбутилен.
Термин замещенный алкил относится к алкильным составным группам, имеющим заместители, замещающие один или несколько водородов на один или несколько (часто не более, чем четыре) атома углерода углеводородного скелета. Такие заместители являются независимо выбранными из группы, состоящей из: галогена (например, I, Br, Cl или F, конкретно фтора (F)), гидрокси, амино, циано, меркапто, алкокси (такого как С1-С6 алкокси, или низший (С1-С4) алкокси, например, метокси или этокси для получения алкоксиалкила) , арилокси (такой как фенокси для получения арилоксиалкила), нитро, оксо (например, для образования карбонила), карбоксил (который в действительности является комбинацией оксо и гидрокси заместителя единичного атома углерода), карбамоил (аминокарбонил, такой как R2C(O)-, является заместителем оксо и амино единичного атома углерода), циклоалкил (например, циклоалкилалкил), арил (приводящий например, к аралкилам, таким как бензил или фенилэтил), гетероциклилалкил (например, гетероциклоалкилалкил), гетероарил (например, гетероарилалкил), алкилсульфонил (включая низший алкилсульфонил, такой как метил сульфонил), арилсульфонил (такой как фенил сульфонил), и OCF3 (который является галогеном, замещающим алкокси). В изобретении дополнительно рассматривается, что несколько из этих алкильных заместителей, включая конкретно алкокси, циклоалкил, арил, гетероциклиалкил и гетероарил, являются необязательно дополнительно замещенными, как определено в связи с каждым из их соответствующих определений, представленных ниже. Кроме того, определенные алкил замещающие функциональные группы происходят от комбинации таких заместителей единичного
- 4 036275 атома углерода. Например, сложноэфирная функциональная группа, например, алкоксикарбонил, такой как метоксикарбонил, или трет-бутоксикарбонил (Boc) является результатом такого замещения. В частности, метоксикарбонил и Boc являются замещенными алкилами, которые являются результатом замещения метиловой группы (-СН3) и оксо (=0), и незамещенного алкокси, например, метокси (СНз-О) или трет-бутокси ((СН3)3С-О-), соответственно замещая три водорода. Сходным образом, амидная функциональная группа, например, алкиламинокарбонил, такой как диметиламинокарбонил или метиламинокарбонил, является замещенным алкилом, который является результатом замещения метильной группы (СН3) и оксо (=O) и моно-незамещенного алкиламино или незамещенного алкил амино, например, диметиламино (-N-(CH3)2), или метиламино (-Н-(СН3)), замещающего три водорода (сходным образом арил аминокарбонил, такой как дифениламинокарбонил является замещенным алкилом, который является результатом замещения метильной группы (-СН3) и оксо (=O) и моно незамещенный арил(фенил)амино). Примерные замещенные алкильные группы дополнительно включают цианометил, нитрометил, гидроксиалкилы, такие как гидроксиметил, тритилоксиметил, пропионилоксиметил, аминоалкилы, такие как аминометил, карбоксил алкилы, такие как карбоксиметил, карбоксиэтил, карбоксипропил, 2,3дихлорпентил, 3-гидрокси-5-карбоксигексил, ацетил (например, алканоил, где в случае ацетила два водородных атома на -СН2 части этиловой группы замещены оксо (=O)), 2-аминопропилом, пентахлорбутилом, трифтор этилом, метокси этилом, 3-гидроксипентилом, 4-хлорбутилом, 1,2-диметил -пропилом, пентафторэтилом, алкилоксикарбонилметилом, аллилоксикарбониламинометилом, карбамоилоксиметилом, метоксиметилом, этоксиметилом, т-бутоксиметилом, ацетоксиметилом, хлорметилом, бромометилом, йодометилом, трифторметилом, 6-гидроксигексилом, 2,4-дихлор (н-бутилом), 2-амино (изопропилом), циклоалкилкарбонилом (например, циклопропилкарбонилом) и 2-карбамоилоксиэтилом. Конкретные замещенные алкилы является замещенными метильными группами. Примеры замещенных метильных групп включают такие группы, как гидроксиметил, защищенный гидроксиметил (например, тетрагидропиранил-оксиметил), ацетоксиметил, карбамоилоксиметил, трифторметил, хлорметил, карбоксиметил, карбоксил (где три водородных атома на метиле замещены, два из водородов замещены оксо (=O) и другой водород замещен гидрокси (-ОН)), трет-бутоксикарбонил (где три водородных атома на метиле замещены, два из водородов замещены оксо (=O) и другой водород замещен трет-бутокси (-О-С(СН3)3), бромметил и йодметил. Когда описание и конкретно формула изобретения относится к конкретному заместителю алкила, таким образом, что заместитель может потенциально занять одну или несколько заместительных позиций на алкиле. Например, излагая, что алкил имеет фтор-заместитель, охватывало бы моно-, ди-, и, возможно, высшую степень замещения на алкильной функциональной группе.
Термин замещенный алкилен относится к алкиленовым функциональным группам, имеющим заместители, замещающие один или несколько водородов на одном или нескольких (часто не более, чем четырех) атомах углерода углеводородного скелета, алкилен является сходным образом замещенным группами, как указано выше для алкила.
Алкокси является -O-алкилом. Замещенный алкокси является -О-замещенным алкилом, где алкокси является сходным образом замещенным группами, как указано выше для алкила. Один замещенный алкокси является ацетокси, где два из водородов в этокси (например, -0-СН2-СН3) замещены оксо, (=0) чтобы получить -0-С(0)-СН3; другим является аралкокси, где один из водородов в алкокси замещен арилом, таким как бензилокси, и другой является карбаматом, где два из водородов на метокси (например, -0-СН3) замещены оксо (=0) и другой водород замещен амино (например, -Н2, -NHR или - RR) чтобы получить, например, -О-С(0)- Н2. Низший алкокси является -0-низшим алкилом.
Алкенил (моновалентный) и алкенилен (диавлентный) в отдельности или в качестве части другого термина означает ненасыщенную углеводородную группу, содержащую, по меньшей мере, одну двойную связь углерод-углерод, как правило 1 или 2 двойные связи углерод-углерод, которые могут быть линейными или разветвленными и которые имеют, по меньшей мере, 2 и до 12 атомов углерода, если не указано иначе. Типичные алкенильные группы включают, в качестве примера, винил, аллил, изопропенил, но -2-енил, н-пент-2-енил, и н-гекс-2-енил.
Термины замещенный алкенил и замещенный алкенилен относятся к алкенильным и алкениленовым функциональным группам, имеющим заместители, замещающие один или несколько водородов на одном или нескольких (часто не более, чем четыре) атомах углерода углеводородного скелета. Такие заместители являются независимо выбранными из группы, состоящей из: галогено (например, I, Br, Cl, F) , гидрокси, амино, циано, алкокси (такого как С1-С6 алкокси), арилокси (такой как фенокси), нитро, меркапто, карбоксил, оксо, карбамоил, циклоалкил, арил, гетероциклил, гетероарил, алкилсульфонил, арилсульфонил и 0CF3.
Алкинил обозначает моновалентную ненасыщенную углеводородную группу, содержащую, по меньшей мере, одну тройную связь углерод-углерод, как правило, 1 тройную связь углерод-углерод, которая может быть линейной или разветвленной и которая имеет по меньшей мере 2 и до 12 атомов углерода, если не указано иначе. Типичные алкинильные группы включают, в качестве примера, этинил, пропаргил и бут-2-инил.
Циклоалкил в отдельности или в качестве части другого термина означает насыщенную или частично ненасыщенную циклическую алифатическую углеводородную группу (углеродную циклическую
- 5 036275 группу), имеющую от 3 до 8 атомов углерода, если не указано иначе, такие как циклопропил, циклобутил, циклопентил и циклогексил, и дополнительно включает полициклические, включая слитые циклоалкилы, такие как 1,2,3,4-тетрагидронафталенилы (1,2,3,4-тетрагидронафтален-1-ил, и 1,2,3,4тетрагидронафтален-2-ил), инданилы (индан-1-ил, и индан-2-ил), изоинденилы (изоинден-1-ил, изоинден-2-ил, и изоинден-3-ил) и инденилы (инден-1-ил, инден-2-ил и инден-3-ил). Низший циклоалкил имеет от 3 до 6 атомов углерода и включает циклопропил, циклобутил, циклопентил и циклогексил.
Термин замещенный циклоалкил относится к циклоалкильным функциональным группам, имеющим заместители, замещающие один или несколько водородов на одном или нескольких (часто не более, чем четырех) атомах углерода углеводородного скелета. Такие заместители являются независимо выбранными из группы, состоящей из: галогено (например, I, Br, Cl, F) , гидрокси, амино, циано, алкокси (такого как C1-C6 алкокси), замещенного алкокси, арилокси (такого как фенокси), нитро, меркапто, карбоксил, оксо, карбамоил, алкил, замещенных алкилов, таких как трифторметил, арил, замещенные арилы, гетероциклил, гетероарил, алкил сульфонил, арилсульфонил и -OCF3. Где описание и конкретно формула изобретения относится к конкретному заместителю циклоалкила таким образом, что заместитель может потенциально занять одну или несколько заместительных позиций на циклоалкиле. Например, заявление что циклоалкил имеет фтор-заместитель, охватывало бы моно-, ди-, и более высокую степень замещения на циклоалкильной функциональной группе. Примеры циклоалкилов включают циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, тетрагидронафтил и инданил.
Арил в отдельности или в качестве части другого термина обозначает ароматическую карбоциклическую группу слитую или не слитую, имеющую определенное число атомов углерода, или если никакого числа не определено, от 6 до 14 атомов углерода. Конкретные арильные группы включают фенил, нафтил, бифенил, фенантренил, нафтаценил, индолил и т.п. (см. например, Lang's Handbook of Chemistry (Dean, J. A., ed) 13th ed. Table 7-2 [1985]).
Термин замещенный арил относится к арильным функциональным группам, имеющим заместители, замещающие один или несколько водородов на одном или нескольких (как правило, не более, чем шести) атомах углерода ароматического углеводородного ядра. Такие заместители являются независимо выбранными из группы, состоящей из: галогено (например, I, Br, Cl, F), гидрокси, амино, циано, алкокси (такого как C1-C6 алкокси и конкретно низшего алкокси), замещенного алкокси, арилокси (такого как фенокси), нитро, меркапто, карбоксил, карбамоил, алкил, замещенного алкила (такого как трифторметил), арил, -OCF3, алкилсульфонил (включая низший алкил сульфонил), арилсульфонил, гетероциклил и гетероарил. Примеры таких замещенных фенилов в качестве неограничивающих примеров включают моно- или ди (галогено) фенильную группу, такую как 2-хлорфенил, 2-бромфенил, 4-хлорфенил, 2,6дихлорфенил, 2,5-дихлорфенил, 3,4-дихлорфенил, 3-хлорфенил, 3-бромфенил, 4-бромфенил, 3,4дибромфенил, 3-хлор-4-фторфенил, 2-фторфенил; 3-фторфенил, 4-фторфенил, моно- или ди (гидрокси) фенильную группу, такую как 4-гидроксифенил, 3-гидроксифенил, 2,4-дигидроксифенил, их защищенные гидрокси производные;
нитрофенильную группу, такую как 3-или 4-нитрофенил; цианофенильную группу, например, 4цианофенил; моно- или ди (низший алкил) фенильную группу, такую как 4-метилфенил, 2,4диметилфенил, 2-метилфенил, 4-(изопропил) фенил, 4-этилфенил, 3-(н-пропил) фенил; моно или ди (алкокси) фенильную группу, например, 3,4-диметоксифенил, 3-метокси-4-бензилоксифенил, 3-метокси-4(1-хлорметил)бензилокси-фенил, 3-этоксифенил, 4-(изопропокси)фенил,4-(т-бутокси) фенил, 3-этокси-4метоксифенил; 3-или 4-трифторметилфенил; моно- или дикарбоксифенил или (защищенный карбокси) фенильную группу, такую как 4-карбоксифенил,; моно- или ди (гидроксиметил) фенил или (защищенный гидроксиметил) фенил, такой как 3-(защищенный гидроксиметил) фенил или 3,4-ди(гидроксиметил) фенил; моно- или ди (аминометил) фенил или (защищенный аминометил) фенил, такой как 2-(аминометил) фенил или 2,4-(защищенный аминометил) фенил; или моно- или ди(№(метилсульфониламино)) фенил, такой как 3-(№метил сульфонил амино) фенил. Кроме того, заместители, такие как в дизамещенных фенильных группах, могут быть такими же или отличными, например, 3-метил-4-гидроксифенил, 3-хлор-4гидроксифенил, 2-метокси-4-бромфенил, 4-этил-2-гидроксифенил, 3-гидрокси-4-нитрофенил, 2-гидрокси-4-хлорфенил, а также для тризамещенных фенильных групп, где заместители являются отличными, как например, 3-метокси-4-бензилокси-6-метил сульфониламино, 3-метокси-4-бензилокси-6-фенил сульфониламино, и тетра-замещенные фенильные группы, где заместители являются отличными, такие как 3-метокси-4-бензилокси-5-метил-6-фенил сульфониламино. Конкретными замещенными фенильными группами являются 2-хлорфенильные, 2-аминофенильные, 2-бромфенильные, 3-метоксифенильные, 3-этокси-фенильные, 4-бензилоксифенильные, 4-метоксифенильные, 3-этокси-4-бензилоксифенильные, 3,4-диэтоксифенильные, 3 -метокси-4-бензилоксифенильные, 3 -метокси-4-( 1 -хлорметил)бензилоксифенильные, 3-метокси-4-(1-хлорметил) бензилокси-6-метил сульфонил аминофенильные группы. Когда описание и конркетно формула изобретения относится к конкретному заместителю для арила, таким образом, что заместитель может потенциально занять одну или несколько заместительных позиций на ариле. Например, заявление что арил имеет фтор-заместитель, охватывало бы моно-, ди-, три, тетра и более высокую степень замещения на арильной функциональной группе. Слитые арильные кольца также могут быть замещены заместителями, описанными в настоящем документе, например, 1, 2 или 3 заместителя- 6 036275 ми, таким же образом, как и замещенные алкильные группы. Термины арил и замещенный арил не включают функциональные группы, в которых ароматическое кольцо слито с насыщенным или частично ненасыщенным алифатическим кольцом.
Гетероциклическая группа, гетероциклический, гетероцикл, гетероциклил, гетероциклоалкил или гетероцикло в отдельности и при использовании в качестве функциональной группы в комплексной группе, применяют взаимозаменяемо и относят к любой моно-, би-, или трициклической, насыщенной или ненасыщенной, неароматической гетеро-атом-содержащей циклической системе, имеющей определенное число атомов, или, если нет никакого конкретно обозначенного числа, тогда от 5 до приблизительно 14 атомов, где атомами кольца являются углерод и по меньшей мере один гетероатом и, как правило, не более чем четыре гетероатома (т.е. азот, сера или кислород). Включенными в определение являются любые бициклические группы, где любое из вышеупомянутых гетероциклических колец слито с ароматическим кольцом (т.е. арилом (например, бензолом) или гетероарильным кольцом). В конкретном варианте осуществления группа включает от 1 до 4 гетероатомов. Как правило, 5-членное кольцо имеет от 0 до 1 двойных связей и 6- или 7-членное кольцо имеет от 0 до 2 двойных связей и гетероатомы азота или серы могут необязательно быть окислены (например, SO, SO2) , и любой гетероатом азота может необязательно быть кватернизован. Конкретные незамещенные неароматические гетероциклы включают морфолинил (морфолино), пирролидинилы, оксиранил, индолинилы, 2,3-дигидроиндолил, изоиндолинилы, 2,3-дигидроизоиндолил, тетрагидрохинолинилы, тетрагидроизохинолинилы, оксетанил, тетрагидрофуранилы, 2,3-дигидрофуранил, 2Н-пиранилы, тетрагидропиранилы, азиридинилы, азетидинилы, 1-метил-2-пирролил, пиперазинилы и пиперидинилы.
Термин замещенный гетероцикло относится к гетероцикло функциональным группам, имеющим заместители, замещающие один или несколько водородов на одном или нескольких (как правило, не более, чем шести) атомах гетероцикло скелета. Такие заместители являются независимо выбранными из группы, состоящей из галогено (например, I, Br, Cl, F), гидрокси, амино, циано, алкокси (такой как Ο1-Ο6 алкокси), замещенный алкокси, арилокси (такой как фенокси), нитро, карбоксил, оксо, карбамоил, алкил, замещенный алкил (такой как трифторметил), -OCF3, арил, замещенный арил, алкилсульфонил (включая низший алкил сульфонил), и арилсульфонил. Когда опсиание и конкретно формула изобретения относится к конкретному заместителю гетероциклоалкила, таким образом, что заместитель может потенциально занять одну или несколько заместительных позиций на гетероциклоалкиле. Например, заявление, что гетероциклоалкил имеет фтор-заместитель, охватывало бы моно-, ди-, три, тетра и более высокую степень замещения на гетероциклоалкильной функциональной группе.
Гетероарил в отдельности и при использовании в качестве функциональной группы в комплексной группе относится к любой моно-, би-, или трициклической ароматической циклической системе, имеющей определенное число атомов, или, если никакое число конкретно не определено, тогда, по меньшей мере, одно кольцо является 5-, 6-или 7-членным кольцом, и общее число атомов составляет от 5 до приблизительно 14, и состоит из от одного до четырех гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из азота, кислорода и серы (Lang's Handbook of Chemistry, выше) . Включенными в определение являются бициклические группы, где любое из перечисленных выше гетероарильных колец слито с бензольным кольцом. Следующие циклические системы являются примерами гетероарильных групп, обозначенных термином гетероарил: тиенилы (альтернативно названные тиофенил), фурилы, имидазолилы, пиразолилы, тиазолилы, изотиазолилы, оксазолилы, изоксазолилы, триазолилы, тиадиазолилы, оксадиазолилы, тетразолилы, тиатриазолилы, оксатриазолилы, пиридилы, пиримидинилы (например, пиримидин-2-ил), пиразинилы, пиридазинилы, тиазинилы, оксазинилы, триазинилы, тиадиазинилы, оксадиазинилы, дитиазинилы, диоксазинилы, оксатиазинилы, тетразинилы, тиатриазинилы, оксатриазинилы, дитиадиазинилы, имидазолинилы, дигидропиримидилы, тетрагидропиримидилы, тетразоло [1, 5-b] пиридазинилы и пуринилы, а также бензослитые производные, например, бензоксазолилы, бензофурилы, бензотиенилы, бензотиазолилы, бензотиадиазолилы, бензотриазолилы, бензоимидазолилы, изоиндолилы, индазолилы, индолизинилы, индолилы, нафтиридины, пиридопиримидины, фталазинилы, квинолилы, изоквинолилы и хиназолинилы.
Термин замещенный гетероарил относится к гетероарильным функциональным группам (таким как идентифицированные выше), имеющим заместители, замещающие один или несколько водородов на одном или нескольких (как правило, не более, чем шести) атомах гетероарильного скелета. Такие заместители являются независимо выбранными из группы, состоящей из: галогено (например, I, Br, Cl, F) , гидрокси, амино, циано, алкокси (такого как С1-С6 алкокси), арилокси (такой как фенокси), нитро, меркапто, карбоксил, карбамоил, алкил, замещенный алкил (такой как трифторметил), -OCF3, арил, замещенный арил, алкилсульфонил (включая низший алкилсульфонил), и арилсульфонил. Когда описание и конкретно формула изобретения относится конкретному заместителю гетероарила таким образом, что заместитель может потенциально занять одну или несколько заместительных позиций на гетероариле. Например, заявление о том, что гетероарил имеет фтор-заместитель, охватывало бы моно-, ди-, три, тетра и более высокую степень замещения на гетероарильной функциональной группе.
Конкретные гетероарилы (включая замещенные гетероарилы) включают; 1Н-пирроло[2,3-Ь]пиридин, 1,3-тиазол-2-ил, 4-(карбоксиметил)-5-метил-1, 3-тиазол-2-ил, 1,2,4-тиадиазол-5-ил, 3-метил-1,2,4- 7 036275 тиадиазол-5-ил, 1,3,4-триазол-5-ил, 2-метил-1,3,4-триазол-5-ил, 2-гидрокси-1,3, 4-триазол-5-ил, 2карбокси-4-метил-1,3,4-триазол-5-ил, 1,3-оксазол-2-ил, 1,3,4-оксадиазол-5-ил, 2-метил-1,3,4-оксадиазол5-ил, 2-(гидроксиметил)-1,3,4-оксадиазол-5-ил, 1,2,4-оксадиазол-5-ил, 1,3,4-тиадиазол-5-ил, 2-тиол-1,3,4тиадиазол-5-ил, 2-(метилтио)-1,3,4-тиадиазол-5-ил, 2-амино-1,3,4-тиадиазол-5-ил, 1Н-тетразол-5-ил, 1метил-1 Н-тетразол-5-ил, 1-(1 -(диметиламино)ет-2-ил)-1 Н-тетразол-5 -ил, 1 -(карбоксиметил)-1 Н-тетразол5-ил, 1-(метилсульфоновая кислота) Н-тетразол-5-ил, 2-метил-1Н-тетразол-5-ил, 1,2,3-триазол-5-ил, 1метил-1,2,3-триазол-5-ил, 2-метил-1,2,3-триазол-5-ил, 4-метил-1,2,3-триазол-5-ил, пирид-2-ил N-оксид, 6метокси-2-(н-оксид)пиридаз-3-ил, 6-гидроксипиридаз-3-ил, 1-метилпирид-2-ил, 1-метилпирид-4-ил, 2гидроксипиримид-4-ил, 1,4,5,6-тетрагидро-5,6-диоксо-4-метил-аз-триазин-3-ил, 1,4,5,6-тетрагидро-4(формилметил)-5,6-диоксо-аз-триазин-3-ил, 2,5-дигидро-5-оксо-6-гидроксиазтриазин-3-ил, 2,5-дигидро5-оксо-6-гидрокси-аз-триазин-3-ил, 2,5-дигидро-5-оксо-6-гидрокси-2-метилазтриазин-3-ил, 2,5-дигидро5-оксо-6-гидрокси-2-метил-аз-триазин-3-ил, 2,5-дигидро-5-оксо-6-метокси-2-метил-аз-триазин-3-ил, 2,5дигидро-5-оксо-аз-триазин-3-ил, 2,5-дигидро-5-оксо-2-метил-аз-триазин-3-ил, 2,5-дигидро-5-оксо-2,6диметил-аз-триазин-3-ил, тетразоло [1,5-b] пиридазин-6-ил, 8-аминотетразоло [1,5-b]-пиридазин-6-ил, квинол-2-ил, квинол-3-ил, квинол-4-ил, квинол-5-ил, квинол-6-ил, квинол-8-ил, 2-метил-квинол-4-ил, 6фтор-квинол-4-ил, 2-метил,8-фтор-квинол-4-ил, изоквинол-5-ил, изоквинол-8-ил, изоквинол-1-ил и квиназолин-4-ил.
Альтернативная группа гетероарил включает 5-метил-2-фенил-2Н-пиразол-3-ил, 4-(карбоксиметил)-5-метил-1,3-тиазол-2-ил, 1,3,4-триазол-5-ил, 2-метил-1,3,4-триазол-5-ил, 1Н-тетразол-5-ил, 1метил-1Н-тетразол-5-ил, 1-(1-(диметиламино)ет-2-ил) Н-тетразол-5-ил, 1-(карбоксиметил)-1Н-тетразол5-ил, 1-(метил сульфоновая кислота)-1Н-тетразол-5-ил, 1,2,3-триазол-5-ил, 1,4,5,6-тетрагидро-5,6-диоксо4-метил-аз-триазин-3-ил, 1,4,5,6-тетрагидро-4-(2-формилметил)-5,6-диоксо-аз-триазин-3-ил, 2,5-дигидро5-оксо-6-гидрокси-2-метил-аз-триазин-3-ил, 2,5-дигидро-5-оксо-6-гидрокси-2-метил-аз-триазин-3-ил, тетразоло [1,5-b] пиридазин-6-ил, и 8-аминотетразоло [1,5-b] пиридазин-6-ил.
L является связывающей группой или связью, ковалентно связывающей один мономер [Р1-Р2-Р3Р4] с другим мономером [Р1'-Р2'-Р3'-Р4']. Как правило, -L- связывает Р2 с Р2' позицией, таким образом как в R3, или Р4 с Р4' , таким образом как в М, G, Q, или R7, или оба Р2 с Р2', и Р4 с Р4'. L, таким образом, единичная или двойная ковалентная связь или смежная цепь, разветвленная или неразветвленная, замещенная или незамещенная, от 1 до приблизительно 100 атомов, как правило, от 1 до приблизительно 30 атомов, например, необязательно замещенная алкиленовая, алкениленовая, алкилиновая, циклоалкильная, алкилциклоалкильная, алкиларилалкильная цепь из от 2 до 20 атомов необязательно с 1-4 гетероатомами, выбранными из -O-, -Н-, и -S-. Иллюстративными примерами L является единичная или двойная ковалентная связь, С1-12 алкилен, замещенный С1-12 алкилен, С1-12 алкенилен, замещенный С1-12 алкенилен, С1-12 алкинилен, замещенный С1-12 алкинилен, Xn-фенил-Yn, или Xn-(фенил)2-Yn, где X и Y являются независимо С1-6 алкилен, замещенным C1-6 алкиленом, Cl-6 алкениленом, замещенный C1-6 алкенилен, C1-6 алкинилен, замещенный C1-6 алкинилен, или S(O)2.
Группы в качестве неограничивающих примеров включают:
где R6 является -Н, C1-6 алкилом, замещенным C1-6 алкилом, C1-6 алкокси, замещенным C1-6 алкокси, C1-6 алкилсульфонилом, арилсульфонилом, циклоалкилом, замещенным циклоалкилом, гетероциклоалкилом, замещенным гетероциклоалкилом, арилом, замещенным арилом, гетероарилом или замещенным гетероарилом;
R4, R5 и R12 являются, независимо, -Н, -ОН, C1-6 алкилом, C1-6 гетероалкилом, C1-6 алкокси, арилокси, циклоалкилом, гетероциклоалкилом, арилом, C1-6 алкил арилом или гетероарилом, или C1-6 алкил гетероарилом, необязательно замещенным в каждом случае, кроме того, когда R4 является -Н или -ОН.
Как упомянуто, в определенных иллюстративных вариантах осуществления, Smac миметик, применяемый в практическом осуществлении изобретения, является бивалентным.
В определеных иллюстративных вариантах осуществления выбранный Smac миметик дерепрессирует XIAP-опосредованную репрессию каспазы-3 и/или расщепляет cIAP-1, не связанный с TRAF2 (не TRAF2-связанный, например, цитоплазматический cIAP-1 или свободный cIAP-1) а также cIAP1, связанный с TRAF2, и/или расщепляет cIAP-2, связанный с TRAF2, но не расщепляет cIAP-2, не связанный с TRAF2, или слабо расщепляет cIAP-2, не связанный с TRAF2, относительно расщепления cIAP-2, связанного с TRAF2.
Smac миметики, применяемые в практическом осуществлении настоящего изобретения, могут вызывать расщепление cIAP-2, не связанного с TRAF2, но такого расщепления в процентах будет меньше, чем степень расщепления TRAF2-связанного cIAP-2. Как было замечено, значение различия в эффектах Smac миметика на cIAP-2, не связанный с TRAF2, коррелирует с переносимостью (или профилем безопасности) Smac миметика у животных. Если первый Smac миметик вызывает меньшее расщепление
- 8 036275 cIAP-2, не связанного с TRAF2, относительно расщепления ТКАРШ-связанного cIAP-2, чем второй Smac миметик, т.е. структурно отличный Smac миметик, тогда первый Smac миметик скорее будет обладать лучшей переносимостью (т.е. более безопасен для введения) у животных. Более конкретно, специалист может выбрать два Smac миметика, каждый из которых вызывает расщепление cIAP-1, не связанного с TRAF2, ТКАР2-связанного cIAP-1 и ТКАР2-связанного cIAP-2 с тем, который демонстрирует отличную (меньшую) степень расщепления cIAP-2, не связанного с TRAF2, тогда соединение, которое вызывает меньшее расщепление cIAP-2, не связанного с TRAF2, обладает скорее лучшей переносимостью без значимой потери противоопухолевой активности.
Кинетика расщепления ТКАР2-несвязанного cIAP-1, ТКАР2-несвязанного cIAP-2, TRAF2связанного cIAP-1 и TRAF'2-связанного cIAP-2 можно измерять посредством вестерн-блоттинга. Степень расщепления можно наблюдать визуально при таких анализах в течение некоторого периода времени. Например, по-видимому, степень расщепления TRAF'2-несвязанного cIAP-2 и TRAF'2-связанного cIAP-2 может по существу являться одинаковой незамедлительно после обработки клеток Smac миметиком, но через несколько минут, например, через от 15 до 30 мин, повышенное расщепление TRAF'2-связанного cIAP-2 относительно расщепления ТЕХЕД-несвязанного cIAP-2 можно наблюдать в обрабатываемых клетках. Различия в степени расщепления также могут быть подсчитаны. Например, в случае вестернблоттинга с применением зеленого флуоресцентного белка, меченного cIAPs, степень расщепления может быть подсчитана с применением устройства, которое измеряет интенсивность флуоресценции.
Для Smac миметика, который скорее обладает лучшей переносимостью у животных, степень расщепления ТЕЛР2-несвязанного cIAP-2 будет, как правило, менее чем 75% (или приблизительно 75%), т.е., приблизительно 75% или менее, чем степень расщепления ТЕЛР2-связанного cIAP-2 при релевантной концентрации, в течение, по меньшей мере, приблизительно 15 мин, например, от 30 до 120 мин (или приблизительно от 30 до приблизительно 120 мин). Количество Smac миметиков, применяемых в этом анализе, будет варьировать с активностью Smac миметика, но будет составлять, как правило, менее чем 1 мкМ, например, приблизительно от 1 до приблизительно 500 нМ или приблизительно от 10 до приблизительно 150 нМ.
В некоторых случаях степень расщепления ТЕЛР2-несвязанного cIAP-2 будет составлять менее чем 50% от (или приблизительно 50% от), т.е., приблизительно 50% или менее чем; или менее чем 25% от (или приблизительно 25% от), т.е., приблизительно 25% или менее чем; или менее чем 10% от (или приблизительно 10% от), т.е., приблизительно 10% или менее чем, степень расщепления TRAF'2-связанного cIAP-2. Например, при анализе расщепления cIAP посредством Smac миметика, имеющего профиль расщепления cIAP по изобретению, ТЕЛЕД-связанный cIAP-2 может быть приблизительно на 70-75% расщепленным через 30 мин (т.е., только приблизительно 30% исходно выявляемого количества TRAF2связанного cIAP-2 все еще выявляется); в то время как TRAF2-несвязанный cIAP-2 может быть приблизительно на 35-40% расщепленным (т.е. от 60 до 65% от исходно выявленного количества TRAF2несвязанного cIAP-2 все еще выявляется) через 30 мин. В этом случае, указано, что Smac миметик расщепляет TRAF2-несвязанный cIAP-2 при приблизительно 50% или менее, чем степень расщепления TRAF2-связанного cIAP-2 (от 35 до 40%, разделенные на (от 70 до 75%)=приблизительно 50%).
Индукция апоптоза является высоко специфичной для чувствительных опухолей, в то время как нормальная ткань, по-видимому, будет сохранена. Например, определенные Smac миметики способны убивать опухолевые клетки in vitro в пикомолярном диапазоне концентраций, не оказывая влияния на неопухолевые клетки в 100 микромолярном диапазоне.
Были разработаны несколько Smac миметиков, которые обладают значимой противоопухолевой активностью в доклинических исследованиях. Из тех, которые вошли в клиническую практику, биринапант (TL32711) является высокоактивным бивалентным низкомолекулярным Smac миметиком. Биринапант идентифицируют в US 8283372 в качестве Соединения 15. В одном из вариантов осуществления антагонистом IAP является биринапант.
биринапант (TL32711).
Дополнительная информация относительно активности биринапанта и сходных соединений предоставлена в USSN 17/24 6956, описание которого включено в настоящий документ в качестве ссылки.
Фармацевтические композиции Smac миметиков могут содержать терапевтически эффективное количество соединения, как описано выше, или фармацевтически приемлемую соль или другие его формы
- 9 036275 совместно с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми эксципиентами. Фраза фармацевтическая композиция относится к композиции, подходящей для введения в медицинскую или ветеринарную практику. Композиция может также содержать дополнительные активные средства. Например, композиция может включать цитокины, такие как TNF-α или низкомолекулярные ингибиторы или антибиотики. Следует учитывать, что выбор подходящих лекарственных форм, величин доз и путей введения для конкретного пациента находятся в компетенции специалиста в фармацевтической и медицинской областях.
Композиции, подходящие для парентерального введения, в целях удобства содержат стерильный водный препарат соединения или композиция по изобретению, который предпочтительно является изотоническим с кровью реципиента. Этот водн препарат можно формулировать в соответствии с известными способами с применением подходящих диспергирующих средств или средств для смачивания, эмульгирующих и суспендирующих средств. Кроме того, могут быть включены различные антибактериальные и противогрибковые средства, например, парабены, хлорбутанол, фенол и сорбиновая кислота. Стерильный инъецируемый препарат также может быть стерильным инъецируемым раствором или суспензией в нетоксическом парентерально-приемлемом разбавителе или растворителе, например, в качестве раствора в 1,3-бутан диоле. Среди приемлемых носителей и растворителей, которые могут быть использованы, есть вода, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, стерильные, нелетучие масла являются общеизвестно применимыми в качестве растворителя или суспендирующей среды. Для этой цели любое легкое нелетучее масло можно применять, включая синтетические моно- или диглицериды. Кроме того, жирные кислоты, такие как олеиновая кислота, можно использовать при получении инъецируемых препаратов. Пролонгированная абсорбция инъецируемой фармацевтической формы может быть обусловлена применением средств, отсрочивающих абсорбцию, например, алюминий моностеарата и желатина. Состав носителя, подходящий для подкожных, внутривенных, внутримышечных и т.д. введений, можно найти в Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA, который полностью включен в настоящий документ посредством ссылки.
Фармацевтическая композиция во внутривенной стандартной лекарственной форме может содержать, например, флакон или предварительно наполненный шприц, или инфузионный мешок или устройство, каждый из которых содержат эффективное количество или подходящую долю эффективного количества, такую, чтобы содержимое флакона или шприца вводили за один раз.
Введение можно повторять до приблизительно 4 раз в сутки в течение некоторого периода времени, если необходимо достичь кумулятивной эффективной дозы, например, кумулятивной дозы, эффективной для контроля над инфекцией. Режим дозирования может быть, например, ежесуточными или проводимыми дважды в неделю внутривенными или подкожными инъекциями или пероральной или местной доставкой, или, например, вводимыми раз в неделю дозами в циклах из трех недель введения и одной недели отдыха, или постоянным, при условии, что лечение является эффективным, например, пока инфекция находится под контролем или лекарственное средство является непереносимым. Эффективной дозой, вводимой при каждой инъекции, является количество, которое является эффективным и переносимым.
Эффективной дозой является такая, которая на протяжении курса терапии, которая может проводиться, например, в течение 1 или нескольких недель, результатом которой является лечение нарушения, т.е., снижение скорости прогрессирования заболевания, прекращение заболевания.
Твердые лекарственные формы для перорального введения включают капсулы, таблетки, пилюли, порошки и гранулы. В таких твердых лекарственных формах соединение смешивают по меньшей мере с одним инертным фармацевтически приемлемым эксципиентом, таким как (а) наполнители или разбавители, как, например, крахмалы, лактоза, сахароза, глюкоза, маннит и кремниевая кислота, (b) связывающие средства, как, например, карбоксиметилцеллюлоза, альгинаты, желатин, поливинилпирролидон, сахароза и гуммиарабик, (с) увлажнители, как, например, глицерин, (d) дезинтегрирующие средства, как, например, агар-агар, карбонат кальция, крахмал из картофеля или тапиоки, альгиновая кислота, определенные комплексные силикаты, и карбонат натрия, (е) замедлители растворов, как, например, парафин, (f) ускорители всасывания, как, например, соединения четвертичного аммония, (g) средства для смачивания, как, например, цетиловый спирт, и глицерин моностеарат, (h) адсорбенты, как например, каолин и бентонит, и (i) смазочные средства, как например, тальк, стеарат кальция, стеарат магния, твердые полиэтиленгликоли, лаурилсульфат натрия или их смеси. В случае капсул, таблеток и пилюль лекарственн формы могут также содержать буферные средства. Твердые лекарственные формы, такие как таблетки, драже, капсулы, пилюли и гранулы также можно получать с покрытиями и оболочками, такими как растворяющиеся в кишечнике покрытия и другие хорошо известные в данной области. Твердая лекарственная форма также может содержать средства, снижающие прозрачность, и также может состоять из такой композиции, что они высвобождают активное соединение или соединения в определенной части желудочно-кишечного тракта с отсрочкой во времени. Примерами заливочных композиций, которые можно использовать, являются полимерные вещества и воска. Активные соединения могут находится также в микроинкапсулированной форме, при необходимости, с одним или несколькими из указанных выше эксципиентов. Такие твердые лекарственные формы могут, как правило, содержать от 1 до 95% (мас./мас.)
- 10 036275 активного соединения. В определенных вариантах осуществления активное соединение варьирует в диапазоне от 5 до 70% (мас./мас.).
Так как в одном из аспектов настоящего изобретения рассматривают лечение заболевания/состояний с комбинацией фармацевтически активных средств, которые можно вводить раздельно, изобретение дополнительно относится к комбинированию раздельных фармацевтических композиций в форме набора. Набор содержит две раздельные фармацевтические композиции: одна содержит Smac миметик, применяемый в способе по настоящему изобретению, и вторая содержит второй активный фармацевтический ингредиент. Набор содержит контейнер для содержания раздельных композиций, таких как разделенную бутылку или разделенный пакет из фольги. Дополнительные примеры контейнеров включают шприцы, например, предварительно заполненные шприцы, коробки и мешки. Как правило, набор содержит инструкции для использования отдельных компонентов. Конкретно предпочтительной является та форма набора, в которой отдельные компоненты предпочтительно вводят в различных лекарственных формах (например, пероральной и парентеральной), вводят при различных дозировочных интервалах, или когда титрование индивидуальных компонентов комбинации является желательным по предписанию лечащего врача или ветеринара.
Примером такого набора является так называемая блистерная упаковка. Блистерные упаковки хорошо известны в упаковочной индустрии и широко применяются для упаковки фармацевтических стандартных лекарственных форм (таблеток, капсул и т.п.). Блистерные упаковки, как правило, состоят из листа относительно жесткого материала, покрытого пленкой из предпочтительно прозрачного пластического материала. Во время процесса упаковки образуются углубления в полимерной пленке. Углубления имеют размер и форму упаковываемых таблеток или капсул. Затем, таблетки или капсулы помещают в углубления и лист из относительно жесткого материала герметизируют полимерной пленкой на лицевой стороне пленки, которая находится на противоположной стороне от направления, в котором образованы углубления. В результате, таблетки или капсулы герметизируют в углублениях между полимерной пленкой и листом. Предпочтительно прочность листа такова, что таблетки или капсулы можно удалить из блистерной упаковки вручную, применяя давление на углубления, в результате чего в листе образуется отверстие на месте углубления. Таблетку или капсулу затем можно удалить через указанное отверстие.
Может быть желательным обеспечить набор памяткой, например, в форме номеров рядом с таблетками или капсулами, где номера соответствуют дням схемы лечения, в соответствии с которой таблетки или капсулы, оформленные таким образом, следует принимать. Другим примером такой памятки является календарь, напечатанный на карточке, например, как следует далее Первая неделя, понедельник, вторник,.. и т.д. Вторая неделя, понедельник, вторник,.. и т.д. Другие варианты памяток являются явно очевидными. Суточная доза может быть единичной таблеткой или капсулой, или несколько пилюль или капсул принимают в определенный день. Кроме того, суточная доза вещества, по настоящему изобретению может состоять из одной таблетки или капсулы, в то время как суточная доза второго вещества может состоять из нескольких таблеток или капсул и наоборот. Памятка должна отражать это и помогать в правильном введении активных средств.
В другом конкретном варианте осуществления изобретения дозатор сконструирован для того, чтобы отмерять суточные дозы индивидууму за один раз, чтобы обеспечить назначаемое применение. Предпочтительно, дозатор оснащен памяткой, чтобы дополнительно облегчить соблюдение схемы лечения. Примером такой памятки является механический счетчик, который указывает число ежесуточных доз, которые были отмерены. Другим примером такой памятки является микрочип памяти на батарейках, объединенный с жидко-кристаллическим считывающим устройством, или акустическим напоминающим сигналом, который, например, считывает дату, когда была принята последняя суточная доза и/или напоминает пациенту, когда нужно принимать следующую дозу.
Жидкие лекарственные формы для перорального введения включают фармацевтически приемлемые эмульсии, растворы, суспензии, сиропы и эликсиры. В дополнение к соединению или композиции жидкие лекарственные формы могут содержать инертные разбавители, широко используемые в данной области, такие как вода или другие растворители, солюбилизаторы и эмульгаторы, как, например, этиловый спирт, изопропиловый спирт, этилкарбонат, этилацетат, бензиловый спирт, бензил бензоат, пропиленгликоль, 1,3-бутиленгликоль, диметилформамид, масла, в частности, хлопковое масло, арахисовое масло, кукурузное масло, оливковое масло, касторовое масло и сезамовое масло, глицерин, тетрагидрофурфуриловый спирт, полиэтиленгликоли и сложные эфиры жирных кислот и сорбитана или смеси этих вещество. Помимо таких инертных разбавителей, композиция может также включать адъюванты, такие как средства для смачивания, эмульгирующие и суспендирующие средства, подсластители, вкусоароматические вещества и ароматизирующие добавки.
Соединениям и композициям, применяемым в способе по настоящему изобретению, также могут принести пользу различные системы доставки, включая системы доставки с медленным высвобождением, отсроченным высвобождением или длительным высвобождением. Такая возможность может быть конкретно полезной, когда соединения и композицию применяют в сочетании с другими протоколами лечения, как подробно описано ниже.
Многие типы систем доставки с контролируемым высвобождением доступны и известны специали- 11 036275 стам в данной области. Они включают полимерные базовые системы, такие как поли(лактид-гликолид), сополиоксалаты, поликапролактоны, сложные полиэфирамиды, полиортоэфиры, полигидроксимасляную кислоту и полиангидриды. Микрокапсулы указанных выше полимеров, содержащих лекарственные средства, описаны, например, в патенте США № 5075109. Системы доставки также включают неполимерные системы, такие как: липиды, включая стеролы, такие как холестерин, сложные эфиры холестерина и жирных кислот или нейтральные жиры, такие как моно-, ди- и триглицериды; гидрогелевые системы высвобождения; силастиковые системы; системы на основе пептидов; восковые покрытия; пресованные таблетки с применением общепринятых связывающих средств и эксципиентов; частично слитые имплантаты; и т.п. Конкретные примеры в качестве неограничивающих примеров включают: (а) эрозионные системы, в которых активное соединение содержится в форме внутри матрикса, такого как описан в патентах США №№ 4452775, 4667014, 4748034 и 5239660 и (b) диффузионные системы, в которых активный компонент просачивается с контролируемой скоростью из полимера, как описано в патентах США №№ 3832253, и 3854480. Кроме того, можно использовать системы доставки в виде оборудования с системой накачки, некоторые из которых адаптированы к имплантации.
Предпочтительным может быть применение импланта с долгосрочным устойчивым высвобождением. Длительное высвобождение, как применяют в настоящем документе, означает, что имплантат конструируют и приспосабливают для доставки терапевтических уровней активного соединения в течение по меньшей мере 30 суток и предпочтительно 60 суток. Долгосрочное длительное высвобождение имплантатов является хорошо известным специалистам в данной области и включает некоторые системы высвободжения, описанные выше.
Антагонисты IAP также включают молекулы, которые снижают экспрессию гена IAP, такие как cIAP1 или cIAP2. Подходящие антагонисты, которые способны уменьшать экспрессию гена IAP должны быть известны специалистам в данной области. Примеры включают молекулы нуклеиновой кислоты, такие как РНК или молекулы ДНК (включая двухцепочечные или одноцепочечные), и пептиды, такие как антисмысловые пептидные нуклеиновые кислоты, которые интерферируют с экспрессией таргетного гена.
Пригодные молекулы ДНК включают антисмысловые, а также смысловые (например, кодирующие и/или регуляторные) молекулы ДНК. Антисмысловые молекулы ДНК включают короткие олигонуклеотиды. Специалисты в данной области будут способны сконструировать подходящие короткие олигонуклеотиды для применения в соответствии с настоящим изобретением. Примером является XIAP антисмысловой олигонуклеотид, AEG35156, как описано Carter et al. (Apoptosis, 2011 Vol. 16 (1):67-74). Другие примеры пригодных молекул ДНК включают такие молекулы, которые кодируют интерферирующую РНК, такую как кшРНК и миРНК. Однако другим примером явлются каталитические молекулы ДНК, известные как ДНК-ферменты.
Пригодные молекулы РНК, способные уменьшать экспрессию гена IAP, также упоминаемые в настоящем документе как интерферирующие молекулы РНК, включают миРНК, дцРНК, квРНК, кшРНК, и миРНК (например, короткая временная РНК и малые модуляторные РНК) и рибозимы.
РНК-интерференция (PHKi) является особенно пригодной для специфического ингибирования получения конкретного белка. Хотя не желая ограничиваться теорией, Waterhouse et al. (1998) представили модель механизма, с помощью которого дцРНК можно использовать для снижения продукции белка. Эта технология основана на присутствии молекулы дцРНК, которая содержит последовательность, которая является по существу идентичной мРНК гена, представляющего интерес, или его части, в данном случае мРНК, кодирующей полипептид по изобретению. Подходящим способом, дцРНК можно получать из единичного промотора в рекомбинантном векторе или клетке-хозяине, где смысловые и антисмысловые последовательности поддерживаются не относящейся последовательностью, которая дает возможность смысловым и антисмысловым последовательностям гибридизироваться для образования молекулы дцРНК с неотносящейся последовательностью, образуя петлеобразную структуру. Дизайн и получение подходящих молекул дцРНК по настоящему изобретению входит в рамки возможностей специалиста в данной области, конкретно рассматривая Waterhouse et al. (1998, Proc Natl Acad Sci USA. 95(23): 1395964), Smith et al. (2000, Nature. 407:319-320), WO 99/32619, WO 99/53050, WO 99/49029, и WO 01/34815.
В одном примере вводят ДНК, которая направляет синтез, по меньшей мере, частично двухцепочечного РНК продукта(ов) с гомологией к таргетному гену, который следует инактивировать. ДНК, таким образом, содержит как смысловую, так и антисмысловую последовательности, которые при транскрибировании в РНК, могут гибридизироваться для образования области двухцепочечной РНК. В предпочтительном варианте осуществления смысловые и антисмысловые последовательности разделяют посредством спейсерной области, которая содержит интрон, который при транскрибировании в РНК, удаляется. Было продемонстрировано, что это распределение приводит к более высокой эффективности подавления гена. Двухцепочечная область может содержать одну или две молекулы РНК, транскрибируемые либо из одной области ДНК, либо из двух. Полагают, что присутствие двухцепочечной молекулы запускает ответ клетки, которая разрушает и двухцепочечную РНК, и также гомологичный РНК транскрипт от таргетного гена, эффективно уменьшая или устраняя активность таргетного гена.
Длина смысловых и антисмысловых последовательностей, которые гибридизируются, каждая
- 12 036275 должна составлять по меньшей мере 19 смежных нуклеотидов, предпочтительно по меньшей мере 30 или 50 нуклеотидов и более предпочтительно по меньшей мере 100, 200, 500 или 1000 нуклеотидов. Можно использовать полноразмерную последовательность, соответствующую полному транскрипту гена. Длины наиболее предпочтительно составляют 100-2000 нуклеотидов. Степень идентичности смысловых и антисмысловых последовательностей с таргетным транскриптом должна составлять по меньшей мере 85%, предпочтительно по меньшей мере 90% и более предпочтительно 95-100%). Молекула РНК может несомненно содержать неотносящиеся последовательности, функцией которых является стабилизация молекулы. Молекула РНК может быть экспрессирована под контролем промотора РНК-полимеразы II или РНК-полимеразы III. Примеры последних включают промоторы тРНК или мяРНК.
Предпочтительные малые интерферирующие РНК ('миРНК) молекулы содержат нуклеотидную последовательность, которая является идентичной до приблизительно 19-21 смежных нуклеотидов мРНК-мишени. Предпочтительно, последовательность мРНК-мишени начинается с динуклеотида АА, содержит GC-контент из приблизительно 30-70% (предпочтительно, 30-60%, более предпочтительно 4060% и более предпочтительно приблизительно 45%-55%), и не имеет высокого процента идентичности с любой нуклеотидной последовательностью, отличной от мишени в геноме клетки, в которую ее нужно ввести, например, как определено в стандартном исследовании в BLAST.
Синтез молекул РНКи, пригодных для использования в настоящем изобретении, можно оптимизировать посредством первичного сканирования последовательности мРНК таргентного участка в направлении считывания AUG стартового кодона для динуклеотидных последовательностей АА. Наличие каждого АА и 3' смежных 19 нуклеотидов записано в качестве потенциальных таргетных сайтов миРНК. Предпочтительно, таргетные сайты миРНК выбраны из открытой рамки считывания. Во-вторых, потенциальные таргетные сайты сравнивают с надлежащей геномной базой данных с применением любого программного обеспечения для выравнивания последовательностей, такого как BLAST. Предполагаемые таргетные сайты, которые демонстрируют значительную гомологию с другими кодирующими последовательностями, отфильтровывают.
Квалифицирующие таргетные последовательности выбраны в качестве матрицы для синтеза миРНК. Предпочтительными последовательностями являются последовательности, включающие небольшое содержание G/C, так как доказано, что они являются более эффективными при опосредовании подавления гена по сравнению с теми, у которых содержание G/C выше 55%. Несколько таргетных сайтов являются предпочтительно выбранными по длине таргентного гена для оценки.
Регуляция микроРНК является очевидно специализированной ветвью сигнального пути сайленсинга РНК, который развился в направлении регуляции гена, отклоняясь от общепринятых РНКи/PTGS. МикроРНК составляют специфический класс малых РНК, которые кодируются в геноподобных элементах, организованных в характеристических инвертированных повторах. При транскрибировании гены микроРНК приводят к образованию прекурсоров РНК типа стебель-петля, из которых затем процессируются микроРНК. МикроРНК, как правило, приблизительно состоит из 21 нуклеотида в длину. Высвобожденные мкРНК включены в RISC-подобные комплексы, содержащие конкретную субпопуляцию белков Argonaute, которые воздействуют на последовательность-специфическую репрессию гена (см., например, Millar и Waterhouse, 2005, Funct Integr Genomics, 5(3): 129-35; Pasquinelli et al. , 2005, Curr Opin Genet Dev. 15(2):200-5; Almeida and Allshire, 2005, TRENDS Cell Biol, 15 (5):251-8).
ДНК-ферменты являются одноцепочечными полинуклеотидами, которые способны к расщеплению одно- и двухцепочечных полинуклеотидов, которые способны к расщеплению и одно- и двухцепочечных таргетных последовательностей (Breaker и Joyce. Chemistry и Biology 1995; 2:655; Santoro and Joyce. Proc. Natl, Acad. Sci. USA 1997; 943:4262) Была предложена общая модель (модель 10-23) для ДНКфермента. 10-23 ДНК-ферменты обладают каталитическим доменом из 15 дезоксирибонуклеотидов, контактирующих по бокам с двумя доменами распознавания субстрата из от семи до девяти дезоксирибонуклеотидов каждый. Этот тип ДНК-фермента может эффективно расщеплять свой субстрат РНК в соединениях пурин:пиримидин (Santoro and Joyce, выше; для обзора ДНК-ферментов см. Khachigian, Curr Opin Mol Ther 4: 119-21; 2002).
Примеры конструирования и амплификации синтетических, спроектированных ДНК-ферментов, распознающих одно- и двухцепочечные таргетные участки расщепления, были описаны в патенте США № 632 6174 Joyce et al.
Термины двухцепочечная РНК или дцРНК относятся к молекулам РНК, которые содержатся в двух цепочках. Двухцепочечные молекулы включают такие молекулы, которые содержат единственную молекулу РНК, которая удваивается для образования двухцепочечной структуры. Например, структура стебель-петля прогениторной молекулы, из которой получают одноцепочечную мкРНК, называемую пре-мкРНК, содержит молекулу дцРНК.
Другие подходящие интерферирующие молекулы РНК включают немодифицированные и модифицированные двухцепочечные (дц) молекулы РНК, включая короткую временную РНК (квРНК), малую интерферирующую РНК (миРНК), короткую шпильку РНК (кшРНК), микроРНК (мкРНК) и двухцепочечную РНК (дцРНК). Молекулы дцРНК (например, миРНК) также могут содержать 3' липкие концы, такие как 3'UU или 3 'ТТ липкие концы.
- 13 036275
В одном из вариантов осуществления молекулы миРНК по настоящему изобретению обладают двухцепочечной структурой. В одном из вариантов осуществления миРНК молекулы! по настоящему изобретению являются двухцепочечными более чем на приблизительно 25%, более чем приблизительно
50%, более чем приблизительно 60%, более чем приблизительно 70%, более чем приблизительно 80%, более чем приблизительно 90% от их длины!.
Как применяют в настоящем документе, подавление гена, индуцированное РНК-интерференцией, относится к снижению уровня мРНК в клетке для таргетного гена (например, cIAP1 ген и/или cIAP2 ген) на, по меньшей мере, приблизительно 5%, приблизительно 10%, приблизительно 20%, приблизительно 30%, приблизительно 40%, приблизительно 50%, приблизительно 60%, приблизительно 70%, приблизительно 80%, приблизительно 90%, приблизительно 95%, приблизительно 99%, приблизительно 100% уровня мРНК, выявленного в клетке в отсутствие РНК-интерференции .
Интерферирующие молекулы РНК также включают модифицированные молекулы! РНК, обладающие одним или несколькими неприродными нуклеотидами; то есть, нуклеотидами, отличными от аденина А, гуанина G, урацила U или цитозина С. Модифицированный нуклеотидный остаток или производное или аналог природного нуклеотида также можно использовать. Любой модифицированный остаток, производное или аналог можно использовать до степени, при которой он не устраняет или существенно снижает (на по меньшей мере 50%) активность молекулы! РНКи. Примеры подходящих модифицированных остатков включают аминоаллил UTP, псевдо-UTP, 5-I-UTP, 5-I-CTP, 5-Br-UTP, альфа-S АТФ, альфа-S СТР, альфа-S GTP, альфа-S UTP, 4-тио UTP, 2-тио-СТР, 2NH2 UTP, 2NH2 СТР и 2'F UTP. Кроме того, подходящие модифицированные нуклеотиды включают аминоаллил уридин, псевдо-уридин, 5-1-УРидин, 5-1-цитидин, 5-Вг-уридин, альфа-S аденозин, альфа-S цитидин, альфа-S гуанозин, альфа-S уридин, 4-тио уридин, 2-тио-цитидин, 2NH2 уридин, 2TS[H2 цитидин, и 2'F уридин, включая свободные pho(NTP) молекулы! РНК, а также все другие пригодные формы нуклеотидов.
Интерферирующие молекулы РНК могут также содержать модификации в сахаре рибозе, а также модификации в фосфатном скелете нуклеотидной цепи. Например, молекулы миРНК или мкРНК, содержащие a-D-арабинофуранозильные структуры вместо природных a-D-рибонуклеозидов, выявленных в РНК, можно использовать в качестве интерферирующих молекул РНК по настоящему изобретению. Другие примеры включают молекулы! РНК, содержащие о-связь между сахаром и гетероциклическим основанием нуклеозида, которая обеспечивает устойчивость нуклеазы и прочное связывание комплементарной цепи с олигонуклеотидными молекулами, сходными с олигонуклеотидами, содержащими 2'-Oметил рибозу, арабинозу и конкретно α-арабинозу. Тиофосфатные связи также можно использовать для стабилизации молекул миРНК и мкРНК.
МиРНК относится к нуклеиновой кислоте, которая образует двухцепочечную РНК, двухцепочечная РНК которой обладают способностью уменьшать или ингибировать экспрессию гена или таргетного гена, когда миРНК экспрессируется в той же клетке, что и ген или таргетный ген. МиРНК, таким образом, относится к двухцепочечной РНК, образованной комплементарными цепями. Комплементарные доли миРНК, которые гибридизируются для образования двухцепочечной молекулы, как правило, обладают существенной или полной идентичностью. В одном из вариантов осуществления миРНК относится к нуклеиновой кислоте, которая обладает существенной или полной идентичностью с таргетным геном и образует двухцепочечную миРНК. Последовательность миРНК может соответствовать полноразмерному таргетному гену, или его субпоследовательности.
В одном из вариантов осуществления миРНК составляет, по меньшей мере, приблизительно 15-50 нуклеотидов по длине (например, каждая комплементарная последовательность двухцепочечной миРНК составляет приблизительно 15-50 нуклеотидов по длине, и двухцепочечная миРНК составляет приблизительно 15-50 пар оснований по длине, предпочтительно приблизительно 19-30 основных нуклеотидов, предпочтительно приблизительно 20-25 нуклеотидов по длине, например, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, или 30 нуклеотидов по длине).
Подходящая миРНК также включает малую шпильку (также называемую стебель-петля) РНК (кшРНК). В одном из вариантов осуществления кшРНК содержит короткую, например, приблизительно от 19 до приблизительно 25 нуклеотидов, антисмысловую цепь, за которой следует нуклеотидная петля из приблизительно от 5 до приблизительно 9 нуклеотидов, и аналогичная смысловая цепь. Альтернативно, смысловая цепь может предшествовать нуклеотидной петлевой структуре и далее может следовать антисмысловая цепь.
В одном из вариантов осуществления антагонистом IAP является миРНК, кшРНК или мкРНК.
Специфические интерферирующие молекулы РНК, такие как миРНК, кшРНК и мкРНК молекулы, могут быть с легкостью спроектированы специалистом в данной области, принимающим во внимание последовательность таргетного гена.
В одном из вариантов осуществления миРНК, кшРНК или мкРНК направлены против последовательности, выбранной из группы, состоящей из NCBI эталонной последовательности: NM 001 166,4, NCBI эталонной последовательности: NM_001256163,1, NCBI эталонной последовательности: NM 001256166,1, GenBank: DQ068066,1, NCBI эталонной последовательности: NM 001165,4, NCBI эталон- 14 036275 ной последовательности: NM 182962,2, GenBank: ВС037420,1, NCBI эталонной последовательности:
NM_001167,3, NCBI эталонной последовательности: NM_001204401,1, NCBI эталонной последовательности: NR 037916,1, и NCBI эталонной последовательности: NG_007264,1.
Другие молекулы РНК, которые являются одноцепочечными, или их не рассматривают как интерферирующие молекулы РНК, могут также быть пригодными в качестве терапевтических средств в соответствии с настоящим изобретением, включая информационную РНК (и прогениторную прединформационную РНК), малую ядерную РНК, малую ядрышковую РНК, транспортную РНК и рибосомную РНК.
Антагонисты IAP, способные снижать экспрессию IAP гена, как описано в настоящем документе (например, интерферирующие молекулы РНК, такие как миРНК, дцРНК, квРНК, кшРНК и мкРНК), можно вводить индивидууму, нуждающемуся в этом, посредством любых подходящих средств и путей введения, которые, как предполагается, известны специалистам в данной области (например, генотерапия или способы доставки генов). Следует понимать, что антагонист IAP должен быть введен индивидууму таким способом, чтобы удостовериться, что антагонист способен контактировать и входить в клетку в индивидууме, является ли клетка инфицированной патогеном или, по меньшей мере, способна ли становиться инфицированной патогеном. Примеры подходящих путей введения включают внутривенный, внутримышечный, местный, пероральный, интраназальный или посредством генетической пушки или безыгольного инжектора.
Альтернативно, способ лечения может включать контактирование клетки, полученной от индивидуума, ex vivo или in vitro с антагонистом IAP и в условиях, которые облегчат вход антагониста IAP в клетку (т.е. трансфекция). Стандартные методы трансфекции известны специалистам в данной области. В одном из вариантов осуществления антагонист IAP приводят в контакт с аутологичной клеткой от индивидуума и в условиях, которые способствуют входу антагониста IAP в клетку и его последующей трансфекции, таким образом, что антагонист IAP способен блокировать или, по меньшей мере, частично ингибировать экспрессию IAP гена в трансфицированной клетке, трансфицированную клетку затем вводят индивидууму, где она, по меньшей мере, частично будет устойчива к инфекции. Тип клетки, который выбран для трансфекции in vitro или ex vivo, предпочтительно является клеткой, которая, по меньшей мере, способна становиться инфицированной патогеном. Тип клетки, который выбран для трансфекции in vitro или ex vivo может, таким образом, зависеть от типа инфекции, которую необходимо вылечить у индивидуума. Например, когда инфекционным патогеном является ВИЧ, аутологичная клетка может быть Т-лимфоцитом. Другие типы клеток, которые могут являться подходящими для трансфекции in vitro или ex vivo, в соответствии с настоящим изобретением включают макрофаги, фибробласты, моноциты, нейтрофилы, В-лимфоциты, стволовые клетки (например, соматические стволовые клетки) и клеткипредшественники. Примеры клеток-предшественников, которые могут быть трансфицированы в соответствии со способами по настоящему изобретению, включают предшественников эритроцитов и гемопоэтические стволовые клетки.
Способ по настоящему изобретению также можно использовать для лечения внутриклеточной инфекции другими патогенами. Например, обязательным для Mycobacterium tuberculosis является установление латентности в клетке-хозяине, которая является высоко комплексным мероприятием для внутриклеточной бактерии, которая находится в макрофагах. Таким образом, Mycobacterium tuberculosis должна критическим образом заблокировать всю передачу сигнала о гибели клеток4-6, чтобы обеспечить продолжительную персистенцию в макрофагах10-13. Макрофаги, инфицированные mycobacterium tuberculosis, испытывают существенный клеточный стресс, который должен индуцировать апоптоз. Посредством плохо изученных механизмов программы гибели клеток, которые должны обеспечить смерть инфицированной клетки и населяющего ее микроорганизма, подвергаются противодействию со стороны этого патогена14. Авторы изобретения продемонстрировали данные, которые решительно поддерживают концепцию о том, что поддержка программируемой гибели клеток в клетках, инфицированных Mycobacterium tuberculosis, будет помогать в элиминации патогена.
Сходным образом, чтобы обеспечить продуктивный жизненный цикл и обеспечить латентность, ВИЧ в некоторых клетках и в некоторый момент времени, должен противодействовать смерти клеткихозяина15-19. Смерть клетки-хозяина может быть следствием распознавания микробной инфекции или эффектов молекул, индуцирующих смерть, высвобождаемых иммунными клетками. Внутриклеточные патогены противодействуют этим ответам, чтобы облегчить их персистенцию и диссеминацию4-6. Интерферирование с применением IAPs является механизмом, который можно использовать для повторной сенсибилизации инфицированных клеткок к факторам и сигнальным путям, индуцирующим гибель клеток, которые содействуют элиминации патогенов.
В одном из вариантов осуществления инфекция вызвана вирусом, бактерией, грибом, дрожжами или простейшими.
В одном из вариантов осуществления инфекция вызвана вирусом, выбранным из группы, состоящей из папилломавирусов человека, вирусов герпеса, включая простой герпес 1/2, вируса ветряной оспы, EBV, CMV, HHV-6/7, HTLV, паповавирусов человека, включая JC вирус и ВК вирус, адено- и парвовирусов, ВИЧ, HBV и HCV.
- 15 036275
В одном из вариантов осуществления инфекция вызвана бактерией, выбранной из группы, состоящей из Salmonella spp., Ehrlichia spp., Mycobacteria spp., Spirochetes, Legionella spp., Listeria spp., Rickettsia spp., Chlamydia spp., Mycoplasma spp., Coxiella spp., Yersinia spp., Francisella spp., Brucella spp., Neisseria spp и Nocardia spp.
В одном из вариантов осуществления инфекция вызвана грибом или дрожжами, выбранными из группы, состоящей из Histoplasma spp., Aspergillus spp., Cryptococcus spp. и Pneunocystis jirovecii.
В одном из вариантов осуществления инфекция вызвана простейшим, выбранным из группы, состоящей из Trypanosomatids (например, Leishmania spp.), Apicomplexans, включая печеночные формы Plasmodium spp., Toxoplasma spp. и Cryptosporidium spp.
Настоящее изобретение также относится к применению антагониста IAP для лечения внутриклеточной инфекции у индивидуума.
Способ по настоящему изобретению может дополнительно содержать введение одного или нескольких дополнительных терапевтических средств. Специалисты в данной области поймут, что тип дополнительного(ых) терапевтического(их) средств(а) будет зависеть от инфекции, которую надо лечить. Например, когда инфекция является вирусной инфекцией, такой как HBV инфекция, индивидууму можно дополнительно вводить нуклеозидный аналог противовирусного средства. Примеры таких средств включают препараты нуклеозидных аналогов включая диданозин, видарабин, цитарабин, эмтрицитабин, ламивудин, зальцитабин, абакавир, ацикловир, энтекавир, ставудин, телбивудин, зидовудин (азидотимидин, или AZT) и идоксуридин. Предпочтительные средства выбраны из группы, состоящей из ламивудина, адефовира, тенофовира, телбивудина и энтекавира. Когда инфекция является HCV инфекцией, индивидууму можно дополнительно вводить пегилированный IFN и рибавирин и/или миравирсен (Janssen et al. N Engl J Med, 2013, vol.368(18): 1685-94).
Другим предпочтительным дополнительным терапевтическим средством является TRAIL. Дополнительную информацию, касающуюся TRAIL, можно найти в WO 97/01633, WO 02/085946, WO 02/22175 и WO 2009/025743. Описание каждого из этих документов включено в настоящий документ в качестве ссылки.
Дополнительное(ые) терапевтическое(ие) средство(а) можно вводить одновременно (например, в той же лекарственной форме, что антагонист IAP) или последовательно; другими словами, или до или после введения антагониста IAP. Для последовательного введения дополнительное(ые) терапевтическое(ие) средство(а) можно вводить в течение секунд, минут, часов, суток или недель относительно антагониста IAP.
Антагонист IAP может быть введен нуждающемуся в этом индивидуума посредством любых подходящих способов, известных специалистам в данной области. Например, специалисты в данной области поймут, что когда антагонист IAP является интерферирующей молекулой РНК, способ введения должен будет облегчать доставку антагониста IAP к клеточной цитоплазме, где он сможет взаимодействовать с таргетной последовательностью. Когда антагонист IAP является молекулой миРНК, интерферирующая молекула РНК может быть доставлена индивидууму посредством совместного введения направленного на гепатоциты, N-ацетилгалактозамин-конъюгированного мелитин-подобного пептида (NAG-MLP) с обладающей тропностью к печени холестерин-конъюгированной миРНК (см., например, Woodell et al, Molecular Therapy, 2013 May; 21(5): 973-985). Когда молекула является олигонуклеотидной молекулой антисмысловой ДНК, она может быть доставлена нуждающемуся в этом индивидууму посредством способов, описанных Janssen et al. (N Engl J Med, 2013, vol.368 (18) : 1685-94) .
В альтернативном варианте осуществления генотерапию можно проводить у индивидуума для снижения экспрессии или инактивации одного или нескольких IAP генов у индивидуума.
Способ доставки включает применение растворов и суспензий, которые пригодны для введения индивидууму. Подходящие способы введения будут известны специалистам в данной области. Примеры включают внутривенный, подкожный, внутримышечный или интраперитонеальный.
Индивидуум, у которого надо лечить инфекцию, может быть человеком или млекопитающим, важным для людей в экономическом и/или социальном аспекте, например, платоядными, отличными от людей (такими как кошки и собаки), свиньей (домашними свиньями, дикими свиньями и кабанами), жвачными животными (такими как крупный рогатый скот, бык, овца, жирафы, олень, козы, зубр и верблюды), лошади и птицы, включая те виды птиц, которые представляют опасность, содержаться в зоопарках и подвергаются охоте, и более конкретно одомашненная птица, например, используемая в птицеводстве, такая как индейки, курицы, утки, гуси, цесарки и т.п., так как они также обладают экономической значимостью для людей. Термин индивидуум не обозначает конкретный возраст. Таким образом, и взрослые и новорожденные индивидуумы, как предполагается, охвачены настоящим изобретением.
Настоящее изобретение также относится к применению антагониста IAP в производстве лекарственного средства для лечения внутриклеточной инфекции у индивидуума.
Лекарственное средство может включать дополнительные количества фармацевтически приемлемых и подходящих носителей, разбавителей или эксципиентов. Они включают все известные растворители, диспергирующие среды, наполнители, твердые носители, жидкие носители, противогрибковые и антибактериальные средства, поверхностно-активные вещества, изотонические и абсорбирующие веще- 16 036275 ства и т.п. Следует понимать, что лекарственное средство также может включать одно или несколько дополнительных терапевтических средств (т.е. в дополнение к антагонисту IAP), как описано в настоящем документе. Например, когда инфекцией является HBV инфекция, лекарственное средство может дополнительно содержать HBV противовирусное средство, выбранное из группы, состоящей из ламивудина, адефовира, тенофовира, телбивудина и энтекавира. Когда инфекцией является HCV инфекция, лекарственное средство может дополнительно содержать пегилированный IFN-α и рибавирин, и/или миравирсен (Janssen et al. N EnglJ Med, 2013, vol.368(18): 1685-94).
Настоящее изобретение также предполагает со-состав и/или со-введение с другими фармацевтическими активными средствами, включая, без ограничения, TNF-агонисты, такие как TNF-α, TRAIL (TNFзависимый лиганд, индуцирующий апоптоз) или TRAIL агонисты, такие как, но без ограничения, антитела к TRAIL рецептору.
Специалисты в данной области оценят, что изобретение, описываемое в настоящем документе, подвержено вариациям и модификациям, отличным от тех, которые конкретно описаны. Следует понимать, что изобретение включает все такие вариации и модификации, которые соответствуют духу и объему изобретения. Изобретение также включает все этапы, черты, композиции и соединения, упоминаемые или указанные в этом описании, в отдельности или в совокупности, и любые и все комбинации любых двух или более из указанных этапов или черт.
Если не определено иначе, все технические и научные термины, применяемые в настоящем документе, имеют то же значение, что и обычно понимаемые специалистом в данной области, к которой принадлежит данное изобретение. Хотя любые материалы и способы, подобные или эквивалентные описываемым в настоящем документе, можно использовать для применения на практике или тестирования настоящего изобретения, предпочтительные материалы и способы описаны далее.
Примеры
Пример 1. Инфицирование мышей гепатитом В.
Авторы настоящего изобретения адаптировали метод7,8, который можно использовать, чтобы вызывать HBV инфекцию у мышей. Голая плазмидная ДНК, содержащая больше чем длину генома HBV1,2, с расположенными по бокам инвертированными концевыми повторами аденоассоциированного вируса инъецируют гидродинамически, чтобы вызвать существенное давление нижней полой вены, чтобы усилить введение ДНК в печень, где она встраивается в гепатоциты7,8. Важно отметить, что ДНК, инъецированная в животных, не содержит каких-либо адено-ассоциированных вирусных кодирующих последовательностей. Плазмида не инкапсулирована, таким образом, не содержит вирусных структурных или неструктурных белков в инъецируемом препарате.
У мышей периодически забирали кровь и выделяли их сыворотку. Набор для выделения вирусной ДНК Qiagen применяли для очищения вирусной ДНК. Абсолютный количественный анализ HBV генома производили посредством ПЦР-РВ, как описано ранее9.
С применением этого метода, мышей линии C57BL/6 (6-12 недельного возраста обоих полов) инфицировали HBV, и они экспрессировали поверхностный антиген, ядерный антиген, и е-антиген и демонстрировали высокие уровни HBV ДНК в сыворотке (см. фиг. 1). Дополнительно, вирионы идентифицировали в сыворотке инфицированных животных, и гистологическое исследование печени, продемонстрировало, что приблизительно 20% гепатоцитов были инфицированы HBV (экспрессировали HBcAg). Это очень близко имитирует инфекцию у человека. Кроме того, очень похоже на инфекцию человека, мыши начинали контролировать виремию на от 8 до 12 неделе после инфицирования, но HBV ДНК могло продолжать детектироваться в сыворотке мышей более 24 недель после инфицирования (см. фигура 2). Это указывает на то, что полный репликативный жизненный цикл HBV был воспроизведен в гепатоцитах мышей, и эписомальная HBV транскрипционная матрица вероятно сохраняется в некоторых гепатоцитах, давая начало рецидиву виремии, наблюдаемой на 24 неделе после инфекции.
Пример 2. Лечение мышей биринапантом.
Мыши линии C57BL/6 были инфицированн HBV и через 6 суток после инфицирования получали еженедельную дозу биринапанта (30 мг/кг, вводимые интраперитонеально) или контроль растворителем (ДМСО) в течение 3 недель (3 дозы).
Через шесть суток после инфицирования HBV мышам давали биринапант или контроль растворителем. После трех доз биринапанта HBV вирусная нагрузка была уменьшена на 2 логарифма по сравнению с вирусными нагрузками у мышей, получавших контроль растворителем. У всех получавших биринапант HBV-инфицированных мышей HBV ДНК не выявлялась в их сыворотке через 39 суток после первой дозы биринапанта. В среднем, мыши, получавшие контроль растворителем по-прежнему имели приблизительно 106 копий HBV ДНК в их сыворотке в этот момент времени (см. фигура 3). Выявлено, что 3 дозы биринапанта обладали эквивалентной эффективностью с 6 дозами биринапанта в активизации элиминации HBV. Обработка биринапантом приводила к элиминации HBV уже через 10 суток после введения первой дозы (см. фиг. 4).
Пример 3. Генетическое нацеливание CIAPL и CIAP2 повторяло кинетику элиминации HBV, наблюдаемую при лечении биринапантом.
- 17 036275
Мыши, подвергнутые генетическому нацеливанию, у которых был дефицит cIAPl (печеночноспецифическая недостаточность) вместе с дефицитом cIAP2 во всех тканях, были способны элиминировать
HBV инфекцию с кинетикой, сходной с мышами, получавшими биринапант (см. фиг. 5).
Пример 4. Активность биринапанта против ВИЧ-UR-CSF в мононуклеарных клетках периферической крови человека (PBMCS).
Способы.
Изолят вируса.
Изолят ВИЧ-1 JR-CSF (группа М, подтип В, ССИ5-тропный, выделенный из профильтрованной цереброспинальной жидкости пациента со СПИД-деменцией) получали из NIAID СПИД Research and Reference Reagent Program. Стоковые растворы первых пассажей вируса получали с применением PBMCs человека и хранили в жидком азоте. Предварительно профильтрованные аликвоты вируса вынимали из холодильника и быстро размораживали до комнатной температуры в боксе биологической безопасности непосредственно до использования.
Оценка эффективности против ВИЧ в свежих PBMCs.
Свежие PBMCs человека, серонегативные к ВИЧ и HBV, выделяли от отобранных в результате скрининга доноров (Biological Specialty Corporation, Colmar, PA). Клетки осаждали/промывали 2-3 раза посредством низкоскоростного центрифугирования и ресуспендировали в PBS для удаления контаминирующих тромбоцитов. Кровь, подвергнутую лейкаферезу, затем разбавляли 1:1 с применением модифицированного Дульбекко фосфатно-солевого буфера (DPBS) и наслаивали поверх 14 мл среды для разделения лимфоцитов (LSM; Cellgro® от Mediatech, Inc.; плотность 1,078+/-0,002 г/мл; Cat.# 85-072-CL) в 50 мл центрифужной пробирке, а затем центрифугировали в течение 30 минут при 600 X g. Разделенные на слои PBMCs аккуратно отсасывали из полученной поверхности и затем промывали 2Х с применением PBS посредством низкоскоростного центрифугирования. После завершающей промывки, клетки пересчитывали посредством эксклюзии трипанового синего и ресуспендировали в концентрации 1х 106 клеток/мл в RPMI 1640, дополненной 15% эмбриональной телячьей сывороткой (FBS) и 2 мМ Lглутамином, 4 мкг/мл фитогемагглютинином (PHA, Sigma). Клетки инкубировали в течение 48-72 ч при 37°С. После инкубации, PBMCs центрифугировали и ресуспендировали в RPMI 1640 с 15% FBS, 2 мМ Lглутамина, 100 Ед/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина и 20 Ед/мл рекомбинантного IL-2 человека (R&D Systems, Inc). IL-2 включен в среду для культивирования для поддержания деления клеток, запускаемого митогенной стимуляцией PHA. PBMCs поддерживали в этой среде в концентрации 1-2х106 клеток/мл со сменой среды раз в две недели до использования в анализе. Клетки поддерживали в культуре максимум в течение двух недель до момента, когда их признавали слишком старыми для применения в анализах и утилизировали. Макрофаги, полученные из моноцитов, (MDMs) были удалены из культуры в результате адгезии к флакону для тканевых культур.
Для стандартного РВМС анализа клетки, стимулированные РИА, от, по меньшей мере двух нормальных доноров, были объединены (смешаны вместе), разбавлены в свежей среде до конечной концентрации 1х106 клеток/мл, и помещены в нижние лунки 96-луночного круглодонного микропланшета в концентрации 50 мкл/лунку (5х 104 клеток/лунку). Объединение (смешивание) мононуклеарных клеток более чем от одного донора применяли, чтобы минимизировать вариабельность, наблюдаемую между отдельными донорами, которая является результатом количественных и качественных различий инфицирования ВИЧ и общего ответа на РНА и IL-2 первичных популяций лимфоцитов. Каждый планшет содержит контрольные лунки вирус/клетка (клетки плюс вирус) и экспериментальные лунки (лекарственное средство плюс клетки плюс вирус). В этом in vitro анализе, жизнеспособность РВМС остается высокой в течение продолжительности инкубационного периода. Таким образом, инфицированные лунки применяют при оценке как противовирусной активности, так и цитотоксичности. Разведения тестируемого лекарственного средства получали при 2Х концентрации в микротитровальных пробирках и 100 мкл каждой концентрации (девять суммарных концентраций) помещают в соответствующие лунки с применением стандартного формата. 50 мкл предопределенного разведения стокового раствора вируса помещали в каждую тестируемую лунку (окончательный MOI=0,1). Культуры РВМС поддерживали в течение шести суток после инфицирования при 37°С, 5% СО2. После этого периода, образцы супернатанта, свободные от клеток, собирали для анализа активности обратной транскриптазы. После удаления образцов супернатанта, цитотоксичность соединения измеряли посредством добавления MTS к планшетам для определения жизнеспособности клеток. Лунки также исследовали с применением микроскопа и отмечали любые отклонения.
Анализ активности обратной транскрипции.
Был использован микротитровальный планшет для проведения реакции с обратной транскрипцией (RT) (Buckheit et al., AIDS Research and Human Retroviruses 7:295-302, 1991). Меченый тритием тимидин трифосфат (3Н-ТТР, 80 Ci/ммоль, NEN) получали в 1:1 dH2O: этанол в концентрации 1 MCi/мл. Поли rA:oligodTtemplate:праймер (Pharmacia) получали в качестве стокового раствора посредством комбинирования 150 мкл поли rA (20 мг/мл) с 0,5 мл oligodT (20 единиц/мл) и 5,35 мл стерильной dH2O с последующим разделением на аликвоты (1,0 мл) и хранением при -20°С. Буфер для RT реакции получали све- 18 036275 жим ежедневно, и он состоял из 125 мкл 1,0 М EGTA, 125 мкл dH2O, 125 мкл 20% тритона Х100, 50 мкл 1,0 М трис (рН 7,4), 50 мкл 1,0 М DTT, и 40 мкл 1,0 М MgCl2. Окончательную реакционную смесь получали посредством комбинирования 1 части 3Н-ТТР, 4 частей dH2O, 2,5 частей поли rA:oligodT стокового раствора и 2,5 частей реакционного буфера. Десять микролитров этой реакционной смеси помещали в круглодонный планшет для микротитрования и 15 мкл супернатанта, содержащего вирус, добавляли и смешивали. Планшет инкубировали при 37 °С в течение 60 мин. После инкубации объем реакционной смеси наносили пятнами на DE81 плоский фильтр (Wallac), промывали 5 раз в течение 5 мин, каждый раз в 5% натрий фосфатном буфере или 2Х SSC (Life Technologies), 2 раза в течение 1 мин, каждый раз в дистиллированной воде, 2 раза в течение 1 мин, каждый раз в 70% этаноле, а затем высушивали. Включенную радиоактивность (число импульсов в минуту, ИМП/МИН) количественно определяли с применением стандартных жидкостно-сцинтилляционных методов.
MTS окрашивание на жизнеспособность РВМС для измерения цитотоксичности.
При завершении анализа планшеты для анализа окрашивали с применением растворимого красителя на основе тетразолия MTS (CellTiter®96 Reagent, Promega) для определения жизнеспособности клеток и количественного измерения токсичности соединения. MTS метаболизируется митохондриальными ферментами метаболически активных клеток до образования растворимого продукта формазана, что делает возможным быстрый количественный анализ клеточной жизнеспособности и цитотоксичности соединения. Этот реагент является стабильным, простым раствором, который не требует приготовления перед использованием. При завершении анализа, 10-25 мкл реагента MTS добавляли на лунку (10% конечная концентрация на основе объема) и планшеты для микротитрования затем инкубировали в течение 4-6 часов при 37°С, 5% СО2 для оценки жизнеспособности клеток. Клейкие приспособления для заклеивания планшетов применяли вместо крышек, заклеенный планшет переворачивали несколько раз чтобы перемешать растворимый продукт формазан и спектрофотометрически снимали показания с планшета при 490/650 нм с применением спектрофотометра для чтения планшетов Molecular Devices Vmax или SpectraMax plus.
Анализ данных.
С применением внутрилабораторной компьютерной программы анализ данных РВМС включает вычисление IC50 (50% ингибирование репликации вируса), IC90 (90% ингибирование репликации вируса), IC95 (95% ингибирование репликации вируса), ТС50 (50% цитотоксичность) , ТС90 (90% цитотоксичность), ТС95 (95% цитотоксичность) и значения терапевтического индекса (TI =ТС/1С; также обозначаемые как Противовирусный индекс или AI). Сырые данные как для противовирусной активности, так и для токсичности с графическим представлением данных представлены ниже.
Результаты.
Биринапант с и без фиксированной концентрации TNF-а оценивали на предмет противовирусной активности против ВИЧ-1 и результаты обобщены в табл. 1. Кроме того, ингибирование ВИЧ JR CSF репликации в РВМС посредством различных концентраций биринапанта в отдельности и в комбинации с 10 нг/мл TNF-α представлены на фигурах 6 и 7, соответственно.
Таблица 1
Активность биринапанта ±TNF-a против ВИЧ-1 JR-CSF в PBMCs
Соединение Установленная в результате тестирования концентрация 1С50 тс50 Противовирусный индекс (TC50/IC50)
Биринапант 10 мкМ 0,25 6, 47 26,1
Биринапант +TNF-a 10 мкМ+ фиксированные 10 нг/мл 0, 04 3, 98 101
AZT 1000 нМ 1,71 >1000 >5 8 4
Была продемонстрирована противовирусная активность биринапанта против ВИЧ-1, а также некоторая степень цитотоксичности в РВМС. В присутствии фиксированной концентрации (10 нг/мл) TNF-α, происходило 6-кратное повышение противовирусной активности. 1,6-кратное повышение цитотоксичности находится в пределах ожидаемой вариабельности анализа. TNF-α в отдельности вызывал 35% снижение репликации ВИЧ в этом анализе и не оказывал влияние на жизнеспособность клетки, ориентируясь на конечный показатель MTS.
Пример 5. Активность биринапанта против ВИЧ-инфицированных клеток.
Способы.
Выделение и активация. PBMCs от здоровых доноров выделяли посредством центрифугирования в градиенте фиколла (GE) и извлекали CD8+ клетки с применением магнитных частиц (Miltenyi). Оставшиеся PBMCs либо поддерживали в интактном состоянии, либо активировали в РНА (10 мкг/мл) и куль- 19 036275 тивировали в RF10 (RPMI, 10% ЭТС, 2% глутамин) , с добавлением IL-2 (10 Ед/мл) и IL-7 (25 нг/мл) в течение 3 суток.
Инфицирование ВИЧ. Активированные PBMCs инфицировали с применением ВИЧ NL4.3 (GFP+, nef-дефицитный) при MOI 0,1 при 37°С в течение 2 ч или оставляли неинфицированными. После инкубации клетки отмывали 3 раза в PBS и ресуспендировали в RF10, с добавлением IL-2 и IL-7, и культивировали в концентрации 1х 106 клеток/мл в течение последующих 3 суток.
Обработка биринапантом. К PBMCs добавляли свежую среду, с последующей обработкой биринапантом (0,1 мкМ, 1 мкМ или 10 мкМ) , или ДМСО в отдельности (1% окончательная концентрация), в течение 6 часов или 24 часов. После обработки клетки фиксировали в конечной концентрации 2% (масс./об.) параформальдегидом.
FACS. Фиксированные клетки пермеабилизировали с использованием PermWash (BD) и окрашивали при 4°С в течение 1 ч с применением антител, направленных против CD4 (АРС-Н7; 1:20), CD3 (РЕСу7, 1:40) и активной каспазы 3 (AF647, 1:25) (все антитела приобретали в BD).
Результаты.
Результаты представлены на фиг. 8. После добавления однократной дозы 10 мкМ биринапанта, 55% ВИЧ-инфицированных клеток умирали в течение 24 ч. Биринапант оказывал минимальное действие на жизнеспособность интактных клеток и небольшое действие на активированные Т-клетки.
Пример 5. Активность биринапанта против инфекции Mycobacterium tuberculosis.
Всего 32 мыши были инфицированы Mycobacterium tuberculosis (штамм H37Rv) и после 4 недель покоя 17 мышам вводили биринипант (посредством интраперитонеальной инъекции, в концентрации 30 мкг/г) и 15 мышам вводили ДМСО, каждый из которых вводили еженедельно.
После трех введений дозы, мышей подвергали эвтаназии и легкие извлекали, гомогенизировали и гомогенат помещали посредством серийных разведений в планшеты с агаром Middlebrook 7Н11. Колониеобразующие единицы (КОЕ) определяли после 3 недель культивирования, и результаты представлены на фиг. 9.
В результате диссекции мышей макроскопически было отмечено, что легкие, извлеченные из групп, получавших биринипант, стали розовыми, однородными и здоровыми по внешнему виду. Селезенки были также увеличены по сравнению с группой, получавшей ДМСО. Результаты продемонстрировали статистически значимое снижение (р=0,012) бактериальной нагрузки в группе, получавшей биринипант (0,33 Logl0CFU/легкое).
Пример 6. Эффект противодействия TNF-цитокина активности биринапанта.
Мыши были инфицированы HBV, а затем получали инъекции (интраперитонеально) антител, противодействующих TNF-α, в различные указанные моменты времени. В качестве контроля другую когорту HBV инфицированных мышей инъецировали с применением нерелевантного антитела изотипического контроля IgG1.
Результаты этого эксперимента представлены на фиг. 10. Как представлено на этой фигуре, противодействие активности TNF-α нейтрализует эффективность биринапанта. Таким образом, биринапант, по меньшей мере, частично стимулирует способность эндогенно продуцируемого TNF-α убивать инфицированные гепатоциты и или снижать уровни HBV.
Биринапант, как оказалось, облегчает и усиливает активность эндогенно продуцируемого TNF-α и стимулирует способность этого цитокина элиминировать инфекцию. IAPs также, как известно, модулируют эндогенный сигналлинг TRAIL (другого члена суперсемейства TNF) и, таким образом, биринапанта, посредством их способности противодействовать IAPs, может также стимулировать способность TRAIL уничтожать инфицированные клетки.
Данные указывают на то, что биринапант стимулирует активность эндогенного TNF-α и облегчает способность этого цитокина уничтожать инфицированные клетки. Комбинация биринапанта и экзогенной одновременно вводимой TNF-α-подобной молекулы, тогда вероятно продемонстрирует выраженное повышение эффективности уничтожения HBV по сравнению с биринапантом в отдельности. (Это было продемонстрировано для ВИЧ в примере 4). Вследствие своей токсичности TNF-α сложно вводить людям, но родственная молекула TRAIL была применена в испытаниях на людях и не было выявлено ее токсичности. Таким образом, комбинация антагонистов IAP по настоящему изобретению, и в частности биринапанта и TRAIL могла бы быть использована для усиления эффективности биринапанта и стимулирования клиренса инфицированных клеток.
Приммер 7. Активность других антагонистов IAP.
Мышей инфицировали HBV и вводили им или биринапант, или другой антагонист IAP (SMAC миметик), называемый GT13072, описанный Fan et al 2 013 (20).
C57BL/6 мышей инфицировали HBV и через 6 суток после инфицирования мышей рандомным образом делили на 3 когорты. Одной когорте вводили биринапант (как описано в примере 2), другой когорте вводили еженедельные дозы GT13072 (15 мг/кг вводили интраперитонеально - в целом 3 дозы в течение 3 недель) и 3ей когорте вводили контроль растворителем. Результаты представлены на фиг. 11.
Согласно результату, представленному на фиг. 11, способность биринапанта элиминировать HBV
- 20 036275 инфекцию является общей и для других SMAC миметиков. Таким образом, SMAC миметики/антагонисты IAP как класс лекарственных средств является эффективным при лечении внутриклеточных инфекций.
Пример 8. Активность биринапанта против инфекции Legionella pneumophila.
Мышей линии C57BL/6 возрастом от шести до 12 недель инфицировали Legionella pnemophila (2,5х106 колониеобразующих единиц в 50 мкл фосфатно-солевого буфера) интраназально. Через шесть часов после инфицирования мышам вводили однократную дозу биринапанта (10 мг/кг вводили интраперитонеально - квадраты) или вводили контроль растворителем (круги). Через двое суток после инфицирования легкие забирали на исследование от животных и число бактерий количественно определяли посредством культивирования. Результаты представлены на фиг. 12, где каждая точка представляет животное, величины ошибок представляют SEM. *Р<0,05. Данные демонстрируют, что лечение биринапантом стимулирует клиренс Legionella pnemophila и разрешение заболевания по сравнению с введением контроля.
Пример 9. Эффект энтекавира в комбинации с биринапантом.
Мышей линии С57В1/6 инфицировали HBV и через 6 суток после лечения вводили биринапант в отдельности (30 мг/кг давали еженедельно интраперитонеально в течение 2 недель в общей сложности 2 дозы) или энтекавир (3,2 мг/кг вводили один раз в сутки посредством принудительного кормления в течение 8 суток в общей сложности 8 доз) или биринапант плюс энтекавир в дозах и продолжительности, указанной выше.
Результаты представлены на фиг. 13, где серая заштрихованная область указывает на продолжительность лечения энтекавиром и стрелки указывают на дозы биринапанта. ***р<0,001, **р<0,01, 1ъ=не значимо, шесть мышей в каждой группе и полученные данные были воспроизведены в 3 независимых экспериментах.
Как очевидно из этих результатов, комбинирование биринапанта с нуклеозидным аналогом энтекавира улучшает эффективность стимулирования клиренса HBV ДНК в сыворотке у инфицированных мышей по сравнению с эффективностью любого лекарственного средства, вводимого в качестве единственного средства.
Пример 10. Эффект Trail в комбинации с биринапантом.
Первичные гепатоциты человека инфицировали in vitro HBV с применением аденовирусной системы доставки, как описано ранее (Chin R, Earnest- Silveira L, Koeberlein В, Franz S, Zentgraf H, Bowden S,Bock C-T, Torresi J. Modulation of МАРК pathways and cell cycle byreplicating hepatitis В virus: factors contributing to hepatocarcinogenesis. J Hepatology 2007;47:325-37). Система доставки включала зеленый флуоресцентный белок-маркер, так что пропорция инфицированных клеток могла быть подсчитана. С применением этой системы приблизительно 100% гепатоцитов были инфицированы HBV. Клетки оставляли в покое в течение 2 суток после инфицирования, а затем их обрабатывали указанными средствами. Через сорок восемь часов после лечения жизнеспособность клеток оценивали с применением CellTiterGlo® (Promega, Madison WI USA) no протоколу производителя. Этот эксперимент проводили в трех параллелях и повторяли 2 раза с применением 2 независимых доноров. Наивысший CellTiter-Glo результат от одного из трех параллелей необработанных образцов применяли, чтобы настроить отметку 100% жизнеспособности. Результат представлен на фигуре 14.
Исходя из результатов этого эксперимента, было очевидно, что TRAIL, при применении в качестве единственного средства, фактически не обладал эффективностью при стимулировании смерти первичных гепатоцитов человека, инфицированных HBV. Авторы настоящего изобретения продемонстрировали, что биринапант является неэффективным для контроля над HBV инфекцией in vivo, когда нейтролизован TNF-α сигналлинг. Аналогичным образом, в отсутствие TNF-α, биринапант не эффективен при уничтожении инфицированных гепатоцитов in vitro.
Однако комбинирование TRAIL и биринапанта очень эффективно уничтожает первичные гепатоциты человека, инфицированные HBV даже в отсутствие TNF-α. Эти данные указывают на то, что TRAIL способен стимулировать эффективность биринапанта в отношении элиминации инфицированных клеток, и что in vivo эффективность биринапанта может быть стимулирована посредством сопутствующего введения TRAIL агониста.
Сущность.
Данные результаты демонстрируют, что лечение биринапантом элиминирует HBV инфекцию. Аналогичным образом, нацеленная на ген делеция IAPs стимулирует клиренс HBV инфекции. В совокупности, эти данные демонстрируют, что любой способ противодействия IAPs обладает терапевтической эффективностью при элиминации HBV инфекции. Никакой токсичности, связанной с лечением биринапантом, в HBV-инфицированных мышах выявлено не было, и IAP-дефицитные животные, инфицированные HBV, также становились здоровыми. Эти данные указывают на то, что противодействие IAPs сенсибилизирует инфицированные клетки к смерти, но не сенсибилизирует нормальные или неинфицированные клетки к программируемой гибели клеток. Кроме того, ингибирование IAPs предотвращало разрушительные воспалительные ответы. Эти результаты также демонстрируют активность биринапанта против
- 21 036275 клеток, инфицированных ВИЧ, М. tuberculosis и Legionella pneumophila. Полагают, что эти результаты могут быть с легкостью распространены на другие инфекции, которые персистируют в клетках-хозяевах, включая HCV, HPV, CMV и другие внутриклеточные вирусы, бактерии, грибы, дрожжи и паразиты.
Ссылки:
1. Du С, Fang М, Li Y, Li L, Wang X. Smac, a mitochondrial protein that promotes cytochrome c-dependent caspase activation by eliminating IAP inhibition. Cell. 2000; 102: 33-42.
2. Vince JE, Wong WW, Khan N, Feltham R, Chau D, Ahmed AU, et al. IAP antagonists target cLAPl to induce TNF alphadependent apoptosis. Cell. 2007; 131: 682-93.
3. Vince JEW, W.W. Gentle, I. Lawlor, K.E. Allan, R. O'Reilly, L. Mason, K. Gross, 0. Ma, S. Guarda, G. Anderton, H. Castillo, R. Hacker, G. Silke, J. Tschopp, J. Inhibitor of Apoptosis Proteins Limit RIP3 Kinase-Dependent Interleukin-1 Activation. Immunity. 2012; 36: 215-27.
4. Lamkanfi M, Dixit VM. Manipulation of host-cell death pathways during microbial infections. Cell Host Microbe. 2010; 8: 44-54.
5. Yatim N, Albert MJI. Dying to replicate: the orchestration of viral life cycle, cell death pathways, and immunity. Immunity. 2011; 35: 478-90.
6. Mocarski ES, Upton JW, Kaiser WJ. Viral infection and the evolution of caspase 8-regulated apoptotic and necrotic death pathways. Nature reviews. 2012; 12: 79-88.
7. Lin YJ, Huang LR, Yang HC, Tzeng HT, Hsu PN, Wu HL, et al. Hepatitis В virus core antigen determines viral persistence in a C57BL/6 mouse model. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2010; 107: 9340-5.
8. Huang LR, Wu HL, Chen PJ, Chen DS. An immunocompetent mouse model for the tolerance of human chronic hepatitis В virus infection. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2006; 103: 17862- 7.
9. Ebert G, Poeck H, Lucifora J, Baschuk N, Esser K, Esposito I, et al. 5' triphosphorylated small interfering RNAs control replication of hepatitis В virus and induce an interferon response in human liver cells and mice. Gastroenterology. 2011; 141: 696-706, el-3.
10. Cooper AM, Torrado E. Protection versus pathology in tuberculosis: recent insights. Current opinion in immunology. 2012; 24: 431-7.
11. Saunders BM, Britton WJ. Life and death in the granuloma: immunopathology of tuberculosis. Immunol Cell Biol. 2007; 85: 103-11.
12. Lin PL, Flynn JL. Understanding latent tuberculosis: a moving target. J Immunol. 2010; 185: 15-22.
13. Abebe M, Kim L, Rook G, Aseffa A, Wassie L, Zewdie M,
- 22 036275 et al. Modulation of cell death by M. tuberculosis as a strategy for pathogen survival. Clin Dev Immunol. 2011; 2011: 678570.
14. Behar SM, Divangahi M, Remold HG. Evasion of innate immunity by Mycobacterium tuberculosis: is death an exit strategy? Nat Rev Microbiol. 2010; 8: 668-74.
15. Melki MT, Said! H, Dufour A, Olivo-Marin JC, Gougeon ML. Escape of HIV-l-infected dendritic cells from TRAILmediated NK cell cytotoxicity during NK-DC cross-talk--a pivotal role of HMGB1. PLoS Pathog. 2010; 6: el000862.
16. Gougeon МЛ, Piacentini M. New insights on the role of apoptosis and autophagy in HIV pathogenesis. Apoptosis. 2009; 14: 501-8.
17. Herbein G, Khan KA. Is HIV infection a TNF receptor signalling-driven disease? Trends Immunol. 2008; 29: 61-7.
18. Kaminskyy V, Zhivotovsky B. To kill or be killed: how viruses interact with cell death machinery. Journal of internal medicine. 2010; 267: 473-82.
19. Shedlock DJ, Hwang D, Choo AY, Chung CW, Muthumani K, Weiner DB. HIV-1 viral genes and mitochondrial apoptosis. Apoptosis. 2008; 13: 1088-99.
20. Fan LX, Zhou X, Sweeney WE Jr, Wallace DE, Avner ED, Grantham JJ, Li X. Smac-mimetic-induced epithelial Cell death reduces the growth of renal cyts. J Am Soc Nephrol 2013; 24:2010-22.

Claims (26)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Способ лечения персистирующей внутриклеточной инфекции, включающий введение нуждающемуся в этом индивидууму эффективного количества антагониста ингибитора апоптоза (IAP), где инфекция вызвана одним из следующего:
    (a) вирусом, выбранным из группы, состоящей из Т-лимфотропного вируса человека (HTLV), вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) и вируса гепатита В (HBV);
    (b) бактериями, выбранными из группы, состоящей из Mycobacteria tuberculosis и Legionella pneumophila; или (c) простейшими, выбранными из группы, состоящей из Leishmania donovani и Plasmodium berghei, и где антагонист IAP выбран из группы, состоящей из моновалентного антагониста IAP, бивалентного антагониста IAP, антагониста IAP, не являющегося пептидомиметиком, и антагониста IAP, который снижает экспрессию гена IAP.
  2. 2. Способ по п.1, в котором антагонист IAP является антагонистом cIAP2 и/или cIAP2.
  3. 3. Способ по п. 1 или 2, в котором антагонист IAP является моновалентным антагонистом IAP.
  4. 4. Способ по п.1 или 2, в котором антагонист IAP является миметиком второго полученного из митохондрии активатора каспазы (Smac).
  5. 5. Способ по п.4, в котором миметик Smac проявляет одну или несколько из следующих характеристик:
    (a) миметик Smac является бивалентным;
    (b) миметик Smac дерепрессирует опосредованную Х-связанным ингибитором апоптоза (XIAPопосредованную) репрессию каспазы-3;
    (c) миметик Smac расщепляет cIAP-1, не связанный со связанным с рецептором TNF фактором 2 (TRAF2), и cIAP1, связанный с TRAF2;
    (d) миметик Smac расщепляет cIAP-2, связанный с TRAF2, но не расщепляет cIAP-2, не связанный с TRAF2;
    (e) миметик Smac слабо расщепляет cIAP-2, не связанный с TRAF2, относительно расщепления cIAP-2, связанного с TRAF; и (f) Smac миметик имеет общую структуру [Р1-Р2-Р3-Р4] или [P1-P2-P3-P4]-L-[P1'-P2'-P3'-P4'], где Р1-Р2-Р3- и Р1'-Р2'-Р3'-соответствуют пептидным заменам, или пептидомиметикам N-концевого Ala-ValPro- трипептида зрелого Smac, и Р4 и Р4' соответствует аминокислотным заменам Phe, TyR, Ile или Val, и
    - 23 036275
    L является соединяющей группой или связью, ковалентно связывающей [Р1-Р2-Р3-Р4] с [Р1'-Р2'-Р3'-Р4'].
  6. 6. Способ по п.4 или 5, в котором Smac миметик является биринапантом.
  7. 7. Способ по п.1, в котором антагонист снижает экспрессию IAP гена.
  8. 8. Способ по п.7, в котором IAP геном является cIAP1 или CIAP2 ген.
  9. 9. Способ по п.7 или 8, в котором антагонистом IAP является малая интерферирующая РНК (миРНК), короткая шпилька РНК (кшРНК) или микроРНК (мкРНК).
  10. 10. Способ по п.9, в котором миРНК, кшРНК или мкРНК является нацеленной против последовательности, выбранной из группы, состоящей из NCBI эталонной последовательности: NM_001166,4, NCBI эталонной последовательности: NM 001256163,1, NCBI эталонной последовательности: NM 001256166,1, GenBank: DQ068066,1, NCBI эталонной последовательности: NM_001165,4, NCBI эталонной последовательности: NM 182962,2, GenBank: ВС037420,1, NCBI эталонной последовательности: NM_001167,3, NCBI эталонной последовательности: NM 001204401,1, NCBI эталонной последовательности: NR_037916,1, и NCBI эталонной последовательности: NG 007264,1.
  11. 11. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором инфекцию вызывает вирус, выбранный из группы, состоящей из ВИЧ, HBV и HTLV.
  12. 12. Способ по п.11, в котором антагонист является моновалентным антагонистом IAP.
  13. 13. Способ по п.11, в котором инфекция вызвана HBV.
  14. 14. Способ по п.11, в котором инфекция вызвана ВИЧ.
  15. 15. Способ по п.11, в котором инфекция вызвана HTLV.
  16. 16. Способ по любому из пп. 1-10, в котором инфекция вызвана Mycobacteria tuberculosis.
  17. 17. Способ по любому из пп. 1-10, в котором инфекция вызвана Legionella pneumophila.
  18. 18. Способ по любому из пп. 1-10, в котором инфекция вызвана Leishmania donovani.
  19. 19. Способ по любому из пп. 1-10, в котором инфекция вызвана Plasmodium berghei.
  20. 20. Способ по п.14, в котором инфекция вызвана ВИЧ, и антагонист IAP вводят в комбинации с TNF-α.
  21. 21. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором антагонист IAP вводят совместно с TNF-α или другим агонистом TNF рецептора.
  22. 22. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором антагонист IAP вводят совместно с TNF-зависимым лигандом, индуцирующим апоптоз (TRAIL).
  23. 23. Способ по любому из пп.1-9, в котором антагонист IAP вводят совместно с противовирусным нуклеозидным аналогом.
  24. 24. Способ по п.23, в котором нуклеозидным аналогом является энтекавир.
  25. 25. Применение антагониста IAP в лечении персистирующей внутриклеточной инфекции у индивидуума, где инфекция вызвана одним из следующего:
    (a) вирусом, выбранным из группы, состоящей из HTLV, ВИЧ и HBV;
    (b) бактериями, выбранными из группы, состоящей из Mycobacteria tuberculosis и Legionella pneumophila; или (c) простейшими, выбранными из группы, состоящей из Leishmania donovani и Plasmodium berghei, и где антагонист IAP выбран из группы, состоящей из моновалентного антагониста IAP, бивалентного антагониста IAP, антагониста IAP, не являющегося пептидомиметиком, и антагониста IAP, который снижает экспрессию гена IAP.
  26. 26. Применение антагониста IAP в получении лекарственного средства для лечения персистирующей внутриклеточной инфекции у индивидуума, где инфекция вызвана одним из следующего:
    (а) вирусом, выбранным из группы, состоящей из HTLV, ВИЧ и HBV;
    (b) бактериями, выбранными из группы, состоящей из Mycobacteria tuberculosis и Legionella pneumophila; или (c) простейшими, выбранными из группы, состоящей из Leishmania donovani и Plasmodium berghei, и где антагонист IAP выбран из группы, состоящей из моновалентного антагониста IAP, бивалентного антагониста IAP, антагониста IAP, не являющегося пептидомиметиком, и антагониста IAP, который снижает экспрессию гена IAP.
EA201690075A 2013-06-25 2014-06-25 Способ лечения внутриклеточной инфекции EA036275B1 (ru)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AU2013902327A AU2013902327A0 (en) 2013-06-25 Method of treating intracellular infection
AU2014901029A AU2014901029A0 (en) 2014-03-24 Method of treating intracellular infection
AU2014901977A AU2014901977A0 (en) 2014-05-26 Method of treating intracellular infection
PCT/AU2014/050092 WO2014205516A1 (en) 2013-06-25 2014-06-25 Method of treating intracellular infection

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201690075A1 EA201690075A1 (ru) 2016-05-31
EA036275B1 true EA036275B1 (ru) 2020-10-21

Family

ID=52140681

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201690075A EA036275B1 (ru) 2013-06-25 2014-06-25 Способ лечения внутриклеточной инфекции

Country Status (14)

Country Link
US (1) US10500252B2 (ru)
EP (2) EP3013329B1 (ru)
JP (2) JP6785653B2 (ru)
KR (3) KR20160030099A (ru)
CN (3) CN111481669A (ru)
AU (1) AU2014301958B2 (ru)
CA (1) CA2913189C (ru)
EA (1) EA036275B1 (ru)
ES (2) ES2828642T3 (ru)
IL (1) IL242678B (ru)
MX (2) MX381320B (ru)
NZ (2) NZ714347A (ru)
SG (1) SG11201509525XA (ru)
WO (1) WO2014205516A1 (ru)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2974651A1 (en) 2014-01-24 2015-07-30 Children's Hospital Of Eastern Ontario Research Institute Inc. Smc combination therapy for the treatment of cancer
CN106265764B (zh) * 2016-08-18 2018-03-16 广州威溶特医药科技有限公司 Iap抑制剂和溶瘤病毒在制备抗肿瘤药物中的应用
CN108440507B (zh) * 2017-02-16 2022-10-18 南京圣和药物研发有限公司 作为细胞凋亡蛋白抑制剂的化合物及其应用
CN107987083A (zh) * 2017-11-24 2018-05-04 江苏亚盛医药开发有限公司 用于治疗和/或预防与肝炎病毒相关的疾病或病症的双二氮杂双环化合物
CN112933085B (zh) * 2020-12-28 2021-12-21 中以海德人工智能药物研发股份有限公司 一种化合物在制备治疗或预防病毒性肝炎用药物中的应用
US20230158000A1 (en) * 2020-12-28 2023-05-25 Holy Haid Lab Corp Pharmaceutical composition for treating or preventing viral hepatitis and the use thereof

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009140447A1 (en) * 2008-05-16 2009-11-19 Novartis Ag Immunomodulation by iap inhibitors
WO2013071035A1 (en) * 2011-11-09 2013-05-16 Ensemble Therapeutics Macrocyclic compounds for inhibition of inhibitors of apoptosis

Family Cites Families (42)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3854480A (en) 1969-04-01 1974-12-17 Alza Corp Drug-delivery system
US3832253A (en) 1973-03-21 1974-08-27 Baxter Laboratories Inc Method of making an inflatable balloon catheter
US4667014A (en) 1983-03-07 1987-05-19 Syntex (U.S.A.) Inc. Nonapeptide and decapeptide analogs of LHRH, useful as LHRH antagonists
US4452775A (en) 1982-12-03 1984-06-05 Syntex (U.S.A.) Inc. Cholesterol matrix delivery system for sustained release of macromolecules
CA1200416A (en) 1983-05-13 1986-02-11 Societe Des Produits Nestle S.A. Food process
US5075109A (en) 1986-10-24 1991-12-24 Southern Research Institute Method of potentiating an immune response
JPH04167172A (ja) 1990-10-31 1992-06-15 Nec Corp ベクトルプロセッサ
US5807718A (en) 1994-12-02 1998-09-15 The Scripps Research Institute Enzymatic DNA molecules
CA2225378C (en) 1995-06-29 2012-04-17 Immunex Corporation Cytokine that induces apoptosis
US5705109A (en) 1996-06-20 1998-01-06 Westvaco Corporation Ozone treatment for composite paperboard/polymer package
US6506559B1 (en) 1997-12-23 2003-01-14 Carnegie Institute Of Washington Genetic inhibition by double-stranded RNA
AU743316C (en) 1998-03-20 2005-09-15 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Control of gene expression
DK1068311T3 (da) 1998-04-08 2011-08-08 Commw Scient Ind Res Org Fremgangsmåder og midler til opnåelse af modificerede fænotyper
US6326193B1 (en) 1999-11-05 2001-12-04 Cambria Biosciences, Llc Insect control agent
AU2001290720A1 (en) 2000-09-11 2002-03-26 Musc Foundation For Research Development Method and composition for treating tumors by selective induction of apoptosis
US20020155109A1 (en) 2001-04-20 2002-10-24 Lynch David H. Bispecific antibodies that bind TRAIL-R1 and TRAIL-R2
US20040138119A1 (en) 2002-09-18 2004-07-15 Ingo Tamm Use of hepatitis B X-interacting protein (HBXIP) in modulation of apoptosis
US7713738B2 (en) * 2003-02-10 2010-05-11 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds for the modulation of survivin expression
EP1718300A4 (en) 2004-01-16 2008-05-14 Univ Michigan CONFORMATIVELY IMPROVED SMAC MIMETIKA AND ITS USES
WO2005094818A1 (en) 2004-03-23 2005-10-13 Genentech, Inc. Azabicyclo-octane inhibitors of iap
TWI417092B (zh) 2004-04-07 2013-12-01 Novartis Ag Ｉａｐ抑制劑
ZA200700032B (en) 2004-07-02 2008-05-28 Genentech Inc Inhibitors of IAP
WO2006010118A2 (en) 2004-07-09 2006-01-26 The Regents Of The University Of Michigan Conformationally constrained smac mimetics and the uses thereof
CN103083644B (zh) 2005-02-25 2014-05-28 泰特拉洛吉克药业公司 Iap二聚体抑制剂
JP4954983B2 (ja) 2005-05-18 2012-06-20 ファーマサイエンス・インコーポレイテッド Ｂｉｒドメイン結合化合物
BRPI0611922A2 (pt) 2005-06-08 2010-10-05 Novartis Ag compostos orgánicos
JP2009512719A (ja) 2005-10-25 2009-03-26 アエゲラ セラピューティクス インコーポレイテッド Ｉａｐｂｉｒドメイン結合化合物
MX2008008191A (es) 2005-12-20 2008-11-04 Novartis Ag Combinacion de un inhibidor iap y un taxano 7.
EA017279B1 (ru) * 2006-05-05 2012-11-30 Дзе Риджентс Оф Дзе Юниверсити Оф Мичиган БИВАЛЕНТНЫЕ МИМЕТИКИ Smac И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
PE20080951A1 (es) 2006-08-02 2008-09-11 Novartis Ag DERIVADOS DE 2-OXO-ETIL-AMINO-PROPIONAMIDA-PIRROLIDIN-2-IL-SUSTITUIDOS COMO INHIBIDORES DEL ENLACE DE LA PROTEINA Smac AL INHIBIDOR DE LA PROTEINA DE APOPTOSIS
KR20090087094A (ko) 2006-11-28 2009-08-14 노파르티스 아게 Ｉａｐ 억제제 및 ｆｌｔ3 억제제의 조합물
US20090010941A1 (en) * 2007-04-09 2009-01-08 University Of Massachusetts Methods for treating HIV
WO2009025743A2 (en) 2007-08-17 2009-02-26 University Of Massachusetts Medical School Use of trail compositions as antiviral agents
KR101150254B1 (ko) 2008-12-26 2012-06-12 한미사이언스 주식회사 신규 중간체 및 이를 활용한 엔테카비르 제조방법
JP5720569B2 (ja) 2009-06-24 2015-05-20 味の素株式会社 核酸アナログの活性増強剤
US8283372B2 (en) 2009-07-02 2012-10-09 Tetralogic Pharmaceuticals Corp. 2-(1H-indol-3-ylmethyl)-pyrrolidine dimer as a SMAC mimetic
MX340870B (es) 2010-02-12 2016-07-27 Pharmascience Inc Compuestos de unión del dominio de repetición de inhibidores de proteínas de apoptosis de baculovirus.
US8481728B2 (en) 2010-02-16 2013-07-09 Scinopharm Taiwan, Ltd. Process for preparing entecavir and its intermediates
UY33236A (es) 2010-02-25 2011-09-30 Novartis Ag Inhibidores dimericos de las iap
JP2014528409A (ja) 2011-09-30 2014-10-27 テトラロジック ファーマシューティカルズ コーポレーション 増殖性疾患（がん）の治療において使用するためのＳＭＡＣ模倣体（ビリナパント（ｂｉｒｉｎａｐａｎｔ））
US20140303090A1 (en) 2013-04-08 2014-10-09 Tetralogic Pharmaceuticals Corporation Smac Mimetic Therapy
EP3151920A4 (en) * 2014-06-04 2017-12-27 Sanford-Burnham Medical Research Institute Use of inhibitor of apoptosis protein (iap) antagonists in hiv therapy

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009140447A1 (en) * 2008-05-16 2009-11-19 Novartis Ag Immunomodulation by iap inhibitors
WO2013071035A1 (en) * 2011-11-09 2013-05-16 Ensemble Therapeutics Macrocyclic compounds for inhibition of inhibitors of apoptosis

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Busca, A. et al. "Critical role for antiapoptotic Bd-xLand Mel-1 in human macrophage survival and cellular 1AP1/2 (clAP1/2) in resistance to HIV-Vpr-induced apoptosis" J Biol Chem. 2012. Vol. 287, No. 18, pages 15118-15133. see title, abstract, discussion *
Inhibitor of apoplosis protein (IAP) antagonists inhibit anti-viral immunity by interfering with T ceil expansion during LCMV infection [retrieved on 22 July 2014] Retrieved from the internet < URL: http://events.uninelb.eden.au/events/2607-inhibitors-of-apoptosis-protein-iap-antagonists-inhibit-and-viral-immunity-by>published 12 March 2012 as per the document see whole document *
Srivastava, P. et al. "Azithromycin Treatment Modulates the Extracellular Signal-Regulated Kinase Mediated Pathway and Inhibits Inflammatory Cytokincs and Chemokines in Epithelial Cells from Infertile Women with Recurrent Chlamydia trachomatis Infection" DNA and Cell Biology. 2011, Vol. 30, No. 8, pages 545-554 see title, abstract, page 551 LHS last paragraph *
Zhang, X. et al. "Altered regulation of extrinsic apoptosis pathway in HCV-infected HCC cells enhances susceptibility to irmparumumab-mduced apoptosis" Hepatol Res. 2009. Vol. 39. No. 12, pages 1178-1189. sec abstract, page 1186 RHS *

Also Published As

Publication number Publication date
IL242678B (en) 2021-08-31
NZ714347A (en) 2020-01-31
KR20200108904A (ko) 2020-09-21
CA2913189C (en) 2020-08-25
EP3682873B1 (en) 2024-06-12
JP7203682B2 (ja) 2023-01-13
JP2019147823A (ja) 2019-09-05
ES2828642T3 (es) 2021-05-27
EP3682873A1 (en) 2020-07-22
CA2913189A1 (en) 2014-12-31
EP3013329B1 (en) 2020-08-05
HK1224230A1 (en) 2017-08-18
JP6785653B2 (ja) 2020-11-18
AU2014301958A1 (en) 2015-12-10
SG11201509525XA (en) 2016-01-28
JP2016523261A (ja) 2016-08-08
WO2014205516A1 (en) 2014-12-31
MX381320B (es) 2025-03-12
CN105451726A (zh) 2016-03-30
AU2014301958B2 (en) 2017-11-16
MX2020011591A (es) 2020-12-07
EP3013329A1 (en) 2016-05-04
MX2015016628A (es) 2016-06-29
US10500252B2 (en) 2019-12-10
CN111481669A (zh) 2020-08-04
EA201690075A1 (ru) 2016-05-31
KR20200108903A (ko) 2020-09-21
ES2982449T3 (es) 2024-10-16
NZ754814A (en) 2021-07-30
US20160143995A1 (en) 2016-05-26
EP3013329A4 (en) 2017-05-31
KR20160030099A (ko) 2016-03-16
CN105451726B (zh) 2021-03-16
CN112957365A (zh) 2021-06-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7203682B2 (ja) 細胞内感染の処置方法
Li et al. Virus–host interactions in foot-and-mouth disease virus infection
Li et al. Regulating STING in health and disease
US9861679B2 (en) Method of treating cancer
Huang et al. Recent trends in the development of Toll-like receptor 7/8-targeting therapeutics
Baeza Garcia et al. Suppression of Plasmodium MIF‐CD74 signaling protects against severe malaria
Lange et al. Epstein-Barr Virus-Positive Lymphomas Exploit Ectonucleotidase Activity To Limit Immune Responses and Prevent Cell Death
HK40032818A (en) Smac mimetics for use in the treatment of persistent hiv infection
HK40032774A (en) Method of treating intracellular infection
HK1224230B (en) Smac mimetics for the treatment of persistent intracellular hbv infection
Nakasone et al. Single oral administration of the novel CXCR4 antagonist, KRH-3955, induces an efficient and long-lasting increase of white blood cell count in normal macaques, and prevents CD4 depletion in SHIV-infected macaques: a preliminary study
Li et al. Myeloid cells are tunable by a polyanionic polysaccharide derivative and co-determine host rescue from lethal virus infection
WO2016097773A1 (en) Therapeutic iap antagonists for treating proliferative disorders
Cook Host Determinants of Protection and Pathogenesis during Chikungunya Virus Infection
Li TMEM203 is a putative co-receptor of innate immune adaptor protein STING
Lang Innate immune functions during chronic infections
Bianchi et al. IL-6 modulation of lymphoid-related
Shinde Investigating the Role of Lipopolysaccharide and Polyinosinic: Polycytidylic Acid in Boosting CD4 T cell Responses
Klein Chemokines and Clearance of West Nile Virus Infection
Shaabani Mechanistical and therapeutical aspects of preventing diabetes
WO2013128022A1 (en) Method for preventing or treating a hepatitis c virus infection or a hepatitis b virus infection by administration of suicide gene-modified lymphocytes

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM