CH630663A5

CH630663A5 - Verfahren zum erzeugen von multhiomycin.

Info

Publication number: CH630663A5
Application number: CH1323576A
Authority: CH
Inventors: Eisuke Ishihara; Hiroshi Yonehara; Katsuyuki Akasaki; Masao Minowa; Katsumi Kobayashi
Original assignee: Kumiai Chemical Industry Co
Priority date: 1975-10-28
Filing date: 1976-10-19
Publication date: 1982-06-30
Also published as: IL50214A; SU685132A3; US4276286A; NZ181668A; DD130626A5; GB1543353A; AU501828B2; JPS6011012B2; NL7609445A; IL50214A0; US4229535A; BE847684A; DK147569B; US4243661A; AU1672176A; JPS5254013A; DK147569C; FR2361907B1; IT1070584B; DE2647158A1

Description

Die Erfindung schafft ein Verfahren zum Erzeugen und Extrahieren von Multhiomycin, einem Antibioticum, in dem ein Multhiomycin erzeugender Pilz, beispielsweise der zur Gattung Streptomyces gehörende Streptomyces sp. 8446-CC1, in 5 einem Nährmedium gezüchtet wird, das eine schwefelhaltige Carbonsäure oder ein Salz oder Amid davon enthält, worauf vorzugsweise das Kulturmedium mit einem Lösungsmittelgemisch aus Alkoholen und halogenierten Kohlenwasserstoffen oder Ketonen behandelt wird.

io In den Zeichnungen sind in

Fig. 1 in einem Kurvenbild die Ultraviolettabsorptionskur-ven des Multhiomycins in alkalischem Methanol (A) und in neutralem oder saurem Methanol (B) und ist in

Fig. 2 eine bei Messung an einer Kaliumbromidtablette 15 erhaltene Infrarotabsorptionskurve des Multhiomycins dargestellt.

Eine Kultur des im Rahmen der vorliegenden Erfindung verwendeten Pilzes Streptomyces sp. 8446-CC1 hat folgende morphologische und physiologische Eigenschaften:

20

Eigenschaften einer Kultur von Streptomyces sp. 8446-CC1 in 25 verschiedenen Nährmedien

Nährmedium

Eigenschaften der Kultur

30 Sucrose-Nitrat-Agar

Glycerin-Nitrat-Agar

Glucose-Asparagin-Agar

40

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zum Erzeugen von Multhiomycin, einem Antibioticum.

Die Erfinder haben umfangreiche Untersuchungen mit verschiedenartigen Antibiotica durchgeführt, die von Mikroorganismen erzeugt werden, und haben dabei auch das Multhiomycin untersucht. Dieses Antibioticum ist in dem Journal of Anti-biotics, Band XXIII, Nr. 5, S. 231-237 (1970) von H. Yonehara, einem der Erfinder und Mitarbeitern beschrieben worden.

In der genannten Veröffentlichung haben H. Yonehara und seine Mitarbeiter berichtet, dass das Multhiomycin ein neues Antibioticum ist, das aus dem Myzel des Streptomyces sp. 8446-CCI durch Extraktion mit Methanol gewonnen und durch Chromatographie mit Kieselgel gereinigt wird. Es bildet gelbe Kristallnadeln, schmilzt oberhalb 300 °C und hat keine oder nur eine vernachlässigbar kleine optische Aktivität. Auf Grund der Elementaranalyse und der Molekulargewichtsbestimmung wird angenommen, dass es die Molekularformel C44H45O11N11S5 hat. Es hat sich gezeigt, dass dieses Antibioticum eine Hemmwirkung gegen grampositive Bakterien, aber keine Wirksamkeit gegen gramnegative Bakterien, sowie gegen Mykobakterien und Pilze hat. Die genannten Verfasser hatten jedoch nicht erkannt, dass Multhiomycin als Arzneimittel in der Tiermedizin verwendbar ist.

Die Aufgabe der Erfindung besteht in der Schaffung eines verbesserten Verfahrens zum Erzeugen von Multhiomycin.

Schliesslich besteht eine Aufgabe der Erfindung auch in der Schaffung eines Verfahrens zum Reinigen von Multhiomycin.

Glycerin-Calciumma-lat-Agar

45

Stärke-Agar

Pepton-Rindfleisch-extrakt-Agar

55

60

Glucose-Pepton-

Rindfleischextrakt-

Agar

1

Glucose-Pepton-Agar

Glucose-Caseindige-65 stionsprodukt-Hefe-Rindfleisch-Agar

W: Dünn, farblos bis gelblichgrau

LM: Reichlich, pulverig, weiss

LP: Sehr wenig, gelblichgrau

W: Dünn, farblosbis gelblichgrau

LM: Wenig, pulverig, weiss

LP: Sehr wenig, gelblichgrau

W: Mässig, gelblichgrau mit blassgelblichbrauner Rückseite

LM: Reichlich, samtig, hellbraun bis hellbräunlichgrau

LP: Wenig, blassgelblichbraun

W: Mässig, sich ausbreitend und in das

Agar eindringend, gelblichgrau

LM: Reichlich, samtig, hellbräunlichgelb mit weisslichem Fleck

LP: Sehr wenig, gelblichgrau

W: Mässig, sich ausbreitend und in das

Agar eindringend, gelblichgrau mit hellbräunlichgrauer Rückseite

LM: Reichlich, samtig, hellgrau mit bräunlichem Stich

LP: Sehr wenig, gelblichgrau

W: Mässig, blassgelblichbraun mit gelblichbrauner Rückseite

LM: Gering, pulverig, am Rand der

Kolonie weiss

LP: Gelblichbraun

W: Dick und faltig, gelblichgrau

LM: Wenig, pulverig, am Rand der

Kolonie weiss

LP: Gelblichbraun

W: Dünn, blassgelb

LM: Keins

LP: Gering, blassgelb

W: Mässig und faltig, Rückseite blassgelblichbraun

LM: Mässig, samtig, hellbraun mit bräunlichem Stich

LP: Wenig, blassgelblichbraun

Nährmedium

Eigenschaften der Kultur

Hafermehl-Hefeex-

W: Mässig, sich ausbreitend und in das trakt-Agar

Agar eindringend, gelblichbraun

LM: Reichlich, samtig, hellgrau mit

bräunlichem Stich

LP: Sehr wenig, gelblich

Kartoffelscheibe

W:Dick und faltig

LM: Reichlich, hellgrau mit bräunlichem

Stich

LP: Dunkelbraun

Löffler-Blutserum

W: Mässig, dunkelbraun

LM: Wenig, pulverig, weiss

LP: Dunkelbraun

Gelierung

W: Ring an der Oberfläche,

blassgelblichbraun

LM: Keins

LP: Braun

Milch

W: Ring an der Oberfläche,

blassgelblichbraun

LM: Reichlich, pulverig, weiss

LP: Braun bis dunkelbraun

Cellulose-N ährme-

W: Dünn, farblos dium

LM: Reichlich, pulverig, hellgrau

LP: Keine

Glycerin-Asparagin-

W: Mässig, gelblichgrau bis blassgelb

Agar

LM: Reichlich, pulverig, bräunlich weiss

bis hellbräunlichgrau

LP: Sehr wenig, gelblichgrau

Tyrosin-Agar

W: Mässig, gräulichgelbbraun

LM: Mässig, pulverig, weiss

LP: Dunkelgelbbraun

Hefe-Malz-Agar

W: Dick, blassgelbbraun bis

gräulichgelblichbraun

LM: Reichlich, samtig, hellbräunlichgrau

LP: Blassgelbraun

Hafermehl-Agar

W: Dünn, gelblichgrau

LM: Reichlich, samtig, hellbräunlichgrau

LP: Wenig, gelblichgrau

G = Wachstum

LM = Luftmyzel

LP = Lösliche Pigmente

In der vorstehenden Zusammenstellung wurden die Farben nach dem Verfahren bestimmt, das in dem «Color Harmony Manual», verlegt bei Container Corporation of America, beschrieben ist.

Physiologische Eigenschaften

Optimale Bedingung für das Wachstum: pH-Wert 7,0 -aerob. Wachstum bei einem pH-Wert von 6,2 bis 7,8. Kein Wachstum unter 5 °C und über 45 °C. Kein Wachstum unter aeroben Bedingungen. (Kein Wachstum in der unter Schicht einer Stichkultur in einem Hefe-Malz-Agar-Nährmedium.) Farberzeugung: Erzeugung einer tiefbraunen Farbe in einem natürlichen Nährmedium und von Melaminfarbe in einem Tyrosin-Nährmedium. Hydrierung der Stärke: Verflüssigung. Abbau der Cellulose: Kein Abbau. Reduktion von Nitrat: Reduktion. Eiweissabbauvermögen: Gelverflüssigung, Peptoni-sierung der Milch, Verflüssigung von Blutserum. Verwertung von Kohlenwasserstoffen: Verwertung von Glucose, Rhamose, Mannose, Lactose, Raffinose, Mannitol, Sucrose und Salicin als Kohlenstoffquelle. Keine Verwertung von Arabinose, Fructose und Cellulose.

630663

Vorstehend sind die physiologischen und Kultureigenschaften des Stammes sp. 8446-CC1 angegeben worden. Es wurde festgestellt, dass dieser Stamm zu der von Treser und Backus beschriebenen «grauen Variante» gehört, weil die Farbe des Luftmyzels hellgrau bis bräunlichgrau war. Das substratseitige Myzel bzw. die Rückseite der Kolonie zeigte auf allen Nährmedien keine markanten Farben (gelblichgrau bis gelblichbraun). Auf synthetischen und einigen organischen Nährmedien wurden in geringen Mengen lösliche Pigmente erzeugt, die nicht markant waren (gelblichbraun bis blassgelblichbraun). Auf den meisten organischen Nährmedien wurden chromogene Pigmente (gelblichbraun bis dunkelbraun) und auf Tyrosin-Agar wurde ein melanoidfarbiges Pigment erzeugt.

Angesichts der vorstehend angegebenen morphologischen und physiologischen Eigenschaften der Kulturen wird angenommen, dass der Stamm Streptomyces sp. 8446-CC1 zu der Art Streptomyces antibioticus gehört. Der Stamm wurde am 14.10.1975 unter der Bezeichnung ITSM Strain Deposit FERM-P No. 3284 bei dem Fermentation Research Institute of Japan, Agency of Industriai Science Technology 8-1 Inage-Igashi 5 chôme, Chiba Cita - JA, deponiert. Proben des Stammes können an Dritte ausgegeben werden, wenn die die Priorität dieser Anmeldung begründende japanische Patentmeldung Nr. 128910/1975 offengelegt worden ist.

Der vorgenannte Stamm Streptomyces sp. 8446-CCI gehört zu der Gattung Streptomyces und ist nicht der einzige Stamm, der zur Erzeugung des Multiomycins im Rahmen der Erfindung geeignet ist, da man auch jeden anderen zum Erzeugen von Multhiomycin befähigten Stamm der Gattung Streptomyces verwenden kann.

Zum Erzeugen von Multhiomycin wird ein Multhiomycin erzeugender Stamm der Gattung Streptomyces in einem Nährmedium gezüchtet, das eine Kohlenstoffquelle, wie Glucose, Maltose, Fructose, Sucrose, Lactose, Melasse, Stärke, Dextrin oder dergleichen, ferner eine Stickstoffquelle, wie Sojabohnenmehl, Erdnussmehl, Baumwollsamenmehl, Fleischextrakt, Maisquellwasser, Hefe, Glutaminsäure, Harnstoff, Natriumnitrat, Ammoniumnitrat, Ammoniumphosphat oder dergleichen und als wesentlichen Nährstoff in der Regel in einer Konzentration von 0,0005 bis 10 Gewichtsprozent, vorzugsweise 0,01 bis 5 Gewichtsprozent, eine schwefelhaltige Carbonsäure, beispielsweise Thioglycolsäure, Thioglycolsäureamid, Thioapfelsäure, Thiobenzoesäure, Methionin, Cystin, oder ein Ammonsalz, ein Alkalimetallsalz oder ein Erdalkalimetallsalz derselben, enthält. Die bei der Zugabe der genannten schwefelhaltigen Carbonsäure zu dem Nährmedium erzeugte Menge des Multhiomycins ist 2- bis 4mal so gross wie die ohne diese Zugabe erzeugte Menge. Erforderlichenfalls kann man dem Nährmedium auch Natriumchlorid, Phosphat oder eine sehr kleine Menge von Metallionen zusetzen. Für die Erzeugung des Multhiomycins am besten geeignet sind ein Nährmedium, das Dextrin, Trok-kenhefe, Methionin, Natriumchlorid und Calciumcarbonat und ein Nährmedium, das Stärke, Baumwollsamenmehl, Methionin, Natriumchlorid und Calciumcarbonat enthält.

Man kann den Multhiomycin erzeugenden Stamm zwar auch in Form einer Festkultur züchten, doch ist zur Massenproduktion die Züchtung in Form einer Flüssigkultur, insbesondere Submerskultur, besonders vorteilhaft. Die Züchtung kann unter aeroben oder halbaeroben Bedingungen erfolgen. Beispielsweise kann man die Züchtung unter einem Strom keimfreier Luft oder in Form einer nichtbelüfteten Oberflächenkultur durchführen. Gewöhnlich wird die Züchtung bei einer Temperatur im Bereich von 10° bis 50 °C, vorzugsweise 23° bis 32 °C, durchgeführt. In den meisten Fällen hat sich eine Temperatur von etwa 27 °C als optimal erwiesen.

Gewöhnlich erreicht die Erzeugung von Multhiomycins ihr Maximum bei einer Schüttelkultur nach etwa 1 bis 9 Tagen und bei einer Kultur in einem belüfteten Tank nach etwa 1 bis 8

3

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

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4

Tagen. Damit möglichst viel Multhiomycin erzeugt wird, hält man den pH-Wert der Kulturbrühe während der Züchtung durch Zusatz einer Mineralsäure, wie Salzsäure oder Schwefelsäure, oder einer organischen Säure, wie Essigsäure oder Oxalsäure, in einer geeigneten Menge im Bereich von 4,0 bis 9,0, vorzugsweise von 5,5 bis 8,5.

Da das Multhiomycin sowohl in der Kulturbrühe als auch in den myzeihaltigen Feststoffen vorhanden ist, kann man nach der Züchtung das Multhiomycin aus dem Züchtungsprodukt erhalten, indem man nach dem Abfiltrieren der Feststoffe das Multhiomycin aus dem Filtrat und das Multhiomycin aus dem Feststoff getrennt gewinnt und dann die gewonnenen Multhio-mycinmengen vereinigt oder indem man das Multhiomycin direkt aus der die Feststoffe enthaltenden Kulturbrühe gewinnt. Man kann das Multhiomycin nach jedem geeigneten bekannten Verfahren gewinnen, das allgemein zum Abtrennen von Antibiotica von einer Kultur von Mikroorganismen verwendet wird, oder durch eine Kombination derartiger Verfahren.

Zur Gewinnung des Multhiomycins aus der Kulturbrühe, von der die myzeihaltigen Feststoffe abfiltriert worden sind, hat man im allgemeinen versucht, das Multhiomycin mit einem in Wasser unlöslichen Lösungsmittel zu extrahieren, beispielsweise mit Estern, Butanol, Amylalkohol, Benzol, Methylisobu-tylketon oder dergleichen. Von den Erfindern mit verschiedenen Lösungsmitteln durchgeführte Extraktionsversuche haben jedoch zu der Erkenntnis geführt, dass das in dem Filtrat enthaltene Multhiomycin mit höherem Wirkungsgrad extrahiert werden kann, wenn man ein Lösungsmittelgemisch verwendet, zu dessen Herstellung man ein alkoholisches Lösungsmittel, wie Methanol, Äthanol, Isopropanol, n-Propanol, Butanol, Cellosole oder dergleichen mit einem Lösungsmittel in Form eines halogenierten Kohlenwasserstoffes, wie Methylchlorid, Dichlor-äthan, Chloroform, Kohlenstofftetrachlorid, Chlorbrommethan, Trichloräthan, Dichlorpropan, Chlorbutan oder dergleichen, in einem Mischungsverhältnis von 1:0,1 bis 1:10, vorzugsweise von 1:1 bis 1:7, mischt.

Wenn man beispielsweise eine durch die Züchtung erhaltene Kulturbrühe in zwei Teilmengen teilt und die eine Teilmenge dreimal nacheinander mit Butylacetat extrahiert und die andere Teilmenge mit einem Lösungsmittelgemisch aus 1 Teil Methanol und 4 Teilen Chloroform extrahiert, stellt man fest, dass mit dem Lösungsmittelgemisch viermal so viel Multhiomycin extrahiert wird als mit dem Butylacetat allein. Auch aus den myzeihaltigen Feststoffen kann man das Multhiomycin mit einem einzigen Lösungsmittel extrahieren. Unsere Untersuchungen hinsichtlich der Extraktion des Multhiomycins aus Feststoffen haben jedoch zu der Erkenntnis geführt, dass man zu Extraktion vorzugsweise ein Lösungsmittelgemisch verwendet, das aus einem Keton, wie Aceton, Methyläthylketon oder dergleichen, und einem alkoholischen Lösungsmittel, wie Methanol, Äthanol, Butanol, Phenol oder dergleichen, in einem Mischungsverhältnis von 1:0,1 bis 1:20 besteht, oder ein Lösungsmittelgemisch, das wie das zur Extraktion des Multhiomycins aus der Kulturbrühe verwendete Lösungsmittelgemisch aus einem Lösungsmittel in Form eines halogenierten Kohlenwasserstoffs und einem alkoholischen Lösungsmittel besteht. Beispielsweise wurde durch dreimalige Extraktion der pilzhalti-gen Feststoffe Multhiomycin in einer Menge enthalten, die 2,62 g reinem Multhiomycin entspricht. Wenn man dagegen die pilzhaltigen Feststoffe zuerst mit Methanol und danach mit einem Lösungsmittelgemisch aus 1 Teil Methanol und 4 Teilen Methylenchlorid extrahierte, wurden 4,46 g Multhiomycin gewonnen.

Nachstehend werden in Ausführungsbeispielen Züchtungserfahren und Verfahren zur Gewinnung von Multhiomycin gemäss der Erfindung beschrieben.

Beispiel 1

Erzeugung von Multhiomycin (Zusatz einer schwefelhaltigen Carbonsäure)

Methionin, Cystin bzw. Thioglycolsäure wurden in den in s der Tabelle 1 angegebenen Mengen einer Basis-Nährlösung der folgenden Zusammensetzung zugesetzt:

Dextrin 2,5%

Trockenhefe 2,0%

Natriumchlorid 0,5%

io Calciumcarbonat 0,4%

Jede der auf diese Weise erhaltenen Nährlösungen wurde mit dem Stamm Streptomyces sp. 8446-CC1 geimpft, der dann bei 28 °C gezüchtet wurde. Am vierten Tag nach dem Beginn der Züchtung wurde die Multhiomycinpotenz gemessen. Die 15 Ergebnisse sind in der Tabelle 1 angegeben. Aus dem abzentri-fugierten Myzel wurde durch Extraktion mit einem Lösungsmittelgemisch aus 4 Teilen Aceton und 1 Teil Methanol das Multhiomycin gewonnen, das mit einer Pufferlösung aus 30% Aceton enthaltener, 0,1-molarer Phosphorsäure (pH-Wert 8) 20 verdünnt wurde.

Die Potenz der Lösung wurde unter Verwendung des Bacil-lis subtilis als Prüforganismus und einer zylindrischen Agar-platte bestimmt.

25 Tabelle 1

Mengen der dem Basis-Nährmedium zugesetzten Stoffe (Gew.-%/Gew.-%)

30

Methionin

Cystin

Konzentration am 4. Tag

Thioglycolsäure ( y Imi)

50

0,001

353

0,005

401

0,01

517

0,05

728

0,1

1012

0,5

869

1,0

470

3,0

329

0,001

305

0,01

634

0,1

842

1,0

540

3,0

423

0,001

282

0,01

336

0,1

578

1,0

719

3,0

318

Basis-Nährmedium (ohne Zusatz)

235

Beispiel 2

Gewinnung des Multhiomycins mit Hilfe eines Lösungsmittel-55 gemisches

1001 eines auf einen pH-Wert von 5,6 eingestellten Nährmediums, das 2,5% Stärke, 2% Baumwollsamenmehl, 0,1% Methionin, 0,5% Natriumchlorid und 0,4% Calciumcarbonat enthielt, wurden mit einer Impfkulturlösung des Stammes Streptomyces 6o sp. 8446-CC1 geimpft. Die Kultur wurde bei 27 °C gezüchtet, wobei das Kulturmedium mit 300 U/min gerührt und mit 15 1/min belüftet wurde. Nach einer Züchtungsdauer von 80 Stunden hatte die Erzeugung von Multhiomycins ihr Maximum erreicht. Jetzt wurde die Züchtung abgebrochen und das Myzel 65 abfiltriert. Auf diese Weise wurden etwa 48 kg nasses Myzel gewonnen. Dieses Myzel wurde gut durchgemischt und in 27 Teilmengen von je 1 kg geteilt. Jede Teilmenge wurde mit 1,51 Methanol extrahiert und danach filtriert. Danach wurde jede

Teilmenge ein zweites Mal mit 1,51 je eines der in der Tabelle 2 angegebenen Lösungsmittelgemische extrahiert. Dann wurde jeweils eine Methanol-Extraktlösung und eine der Lösungsmittelgemisch-Extraktlösungen miteinander vereinigt und zum Abfraktionieren der verschiedenen Lösungsmittel von der Extraktlösung bei 60 °C vakuumdestilliert. 50 cm3 der jeder verbleibenden wässrigen Lösung wurde danach mit 100 cm3 Äthylacetat extrahiert, das danach von der so erhaltenen Äthy-lacetat-Extraktlösung im Vakuum abdestilliert wurde. Die jeweils zurückbleibende ölige Substanz wurde in einem der in der Tabelle 2 angegebenen Lösungsmittelgemische aufgelöst. Der Lösung wurde n-Hexan in dem l,5fachen der Menge der Lösung zugesetzt, wobei gelbes Multhiomycin ausgefällt wurde. Dieser Niederschlag wurde mit einem Glasfilter abfiltriert und einmal mit 10 ml Methanol gewaschen, wobei Mul-thiomycin-Rohrkristalle erhalten wurden. Die Reinheit jeder Rohkristallmenge wurde dann nach den vorerwähnten Topf-Verfahren bestimmt. Auf Grund des erhaltenen Werts für die Reinheit und des Kristallgewichts wurde das Gesamtgewicht an reiner Substanz (die Bruttoaktivität) bestimmt.

Tabelle 2

Lösungsmittelgemisch

Rohkristalle

Umgerechnet

auf für 2. Extraktion

Reinsubstanz

Gew.

Reinheit

Gesamtgewicht

mg

%

mg

Chloroform

10: Methanol 1

2242

68,6

1538

5: Methanol 1

2574

77,3

1990

4: Methanol 1

2231

91,5

2041

2: Methanol 1

2299

82,4

1895

1 : Methanol 1

2738

73,3

2007

1,2-Dichloräthan

10: Methanol 1

2324

70,5

1638

5: Methanol 1

2540

82,0

2083

4: Methanol 1

2563

80,2

2056

2: Methanol 1

2271

63,5

1442

1 : Methanol 1

1919

71,3

1368

Trichloräthylen

10: Methanol 1

1913

69,8

1335

5: Methanol 1

2414

74,0

1786

4: Methanol 1

2515

68,2

1715

2: Methanol 1

1822

82,5

1503

1: Methanol 1

2000

78,7

1574

Aceton

10: Methanol 1

2072

73,5

1523

5: Methanol 1

2593

72,3

1875

4: Methanol 1

2855

70,5

2013

2: Methanol 1

2263

93,0

2105

1: Methanol 1

2134

88,3

1884

Chloroform

10: Phenol 1

2345

63,2

1482

5: Phenol 1

2420

83,6

2006

4: Phenol 1

2755

94,5

2603

2: Phenol 1

2642

82,3

2174

1 : Phenol 1

2015

72,7

1465

630663

Lösungsmittelgemisch Rohkristaile Umgerechnet auf für 2. Extraktion Reinsubstanz

Gew. Reinheit Gesamtgewicht mg % mg

Aceton

10: Phenol 1

2445

50,7

1240

5: Phenol 1

2721

84,2

2291

4: Phenol 1

2863

91,3

2614

2: Phenol 1

2821

86,4

2437

1 : Phenol 1

2562

75,6

1937

Chloroform

4 : Äthanol 1

2239

76,3

1708

1,2-Dichloräthan

4: Äthanol 1

2197

73,7

1619

Trichloräthylen

4: Äthanol 1

2440

69,8

1703

Aceton

4: Äthanol 1

2716

81,3

2208

Methanol

als alleiniges Lösungsmittel 2076

55,3

1143

Äthanol

als alleiniges Lösungsmittel 2183

41,5

906

Das erfindungsgemäss erhaltene Antibioticum Multhiomycin hat folgende physikalische und chemische Eigenschaften.

Die Elementaranalyse des Multhiomycins ergab folgende Bestandteile: C 49,74; H 4,17; O 16,74; N 15,13; S 15,03. Das mittels der Dampfdruckerniedrigung bestimmte Molekulargewicht betrug 1064. Auf Grund dieser Tatsachen wird angenommen, dass das Multhiomycin die Molekularformel C44H45O11S5 hat. Der Schmelzpunkt (Zersetzungspunkt) dieses Antibioti-cums liegt über 300 °C.

Die Ultraviolettabsorptionskurve des Multhiomycins ist in Fig. 1 dargestellt. Aus dem Kurvenbild erkennt man, dass das maximale Absorptionsvermögen in dem neutralen oder sauren Methanol (B) bei 328 nm (Et cm 220) und 420 nm (Et c1m20) und in dem alkalischen Methanol (A) bei 292 nm (E] Cm°255) und 406 nm (Ei cm 132) liegt. Die Infrarotabsorptionskurve des Multhiomycins (in einer Kaliumbromidtablette) ist in Fig. 2 dargestellt, aus der hervorgeht, dass ein hohes Absorptionsvermögen bei 3380 cm"1,1660 cm"1,1520 cm"1,1470 cm"1,1200 cm"1,1110 cm-1,1015 cm-1,910 cm-1 und 750 cm-1 vorhanden ist.

Multhiomycin ist in Dimethylformamid, Dimethylsulfoxid und Pyridin löslich, in Äthylacett, Methanol, Äthanol und Dio-xan nur sehr wenig löslich und im Wasser, Essigsäure, n-Hexan, Äther, Chloroform und vielen anderen organischen Lösungsmitteln unlöslich.

Hinsichtlich der Farbreaktion des Multhiomycins sei festgestellt, dass es mit Eisen(III)-chlorid, dem Folin-Reagenz und dem Lemieux-Reagenz verschiedene Farben erzeugt. Dagegen erzeugt es mit dem Ninyhdrin, der Fehlingschen Lösung und dem Ponceau-3R-Reagenz oder bei der Titration keine Farben.

Multhiomycin bleibt beständig, wenn es in einer wässrigen Lösung mit einem pH-Wert von 2 bis 5 Minuten lang auf 100 °C erhitzt wird. Es ist schwach sauer und liegt in Form von gelben Kristallnadeln vor. In seiner l%igen Lösung zeigt es keine optische Aktivität.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

G

1 Blatt Zeichnungen

Claims

630663

1. Verfahren zum Erzeugen von Multhiomycin, dadurch gekennzeichnet, dass ein Stamm der Gattung Streptomyces in einem Nährmedium gezüchtet wird, das eine schwefelhaltige Carbonsäure, oder ein Salz oder Amid davon enthält.

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die schwefelhaltige Carbonsäure eine schwefelhaltige Aminosäure ist.

2

PATENTANSPRÜCHE

3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass das Nährmedium die schwefelhaltige Carbonsäure in einer Menge von 0,0005 bis 5 Gewichtsprozent enthält.

4. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass das Nährmedium auf einen pH-Wert von 4,0 bis 9,0 eingestellt wird.

5. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass zum Einstellen des pH-Werts eine Mineralsäure verwendet wird.

6. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass zum Extrahieren von Multhiomycin als Lösungsmittel ein Gemisch aus einem Alkohol und einem halogenierten Kohlenwasserstoff verwendet wird.

7. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass zum Extrahieren von Multhiomycin als Lösungsmittel ein Gemisch aus einem Keton und einem Alkohol verwendet wird.

8. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass als Alkohol ein Alkohol mit 1 bis vier C-Atomen oder 2-Methoxy-äthanol und als halogenierter Kohlenwasserstoff ein mono- oder polyhalogeniertes Alkyl verwendet wird.

9. Verfahren nach einem der Ansprüche 6 bis 8, dadurch gekennzeichnet, dass das Gemisch 1 Teil Alkohol und 0,1 bis 20 Teile halogenierten Kohlenwasserstoff enthält.

10. Verwendung des gemäss dem Verfahren nach Anspruch 1 hergestellten Multhiomycins für die Herstellung eines Mittels zur Förderung des Wachstums von Tieren, dadurch gekennzeichnet, dass das Multhiomycin mit einem Futter gemischt wird.