DE2138588A1

DE2138588A1 - Antibiotikum CP 21 635 und Verfahren zu seiner Herstellung

Info

Publication number: DE2138588A1
Application number: DE19712138588
Authority: DE
Inventors: Frank Niantic Routien John Lyme Tynan Edward Celmer Walter Daniel New London Conn Sciavohno (V St A)
Original assignee: Pfizer Inc
Current assignee: Pfizer Inc
Priority date: 1970-08-07
Filing date: 1971-08-02
Publication date: 1972-02-10
Also published as: FR2102097A1; BE770805A; FR2102097B1; JPS5416595B1; GB1291948A; US3655876A

Description

Antibiotikum CP 21.635 und Verfahren zu seiner Herateilung.

Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein neues, Antibiotikum CP-21.635 benanntes Fermentationsprodukt, seine Herstellung durch Fermentation, Verfahren zu seiner Gewinnung und Konzentration aus rohen Lösungen, wie z.B. Fermentationsbrühen und Verfahren zu seiner Reinigung. In den Rahmen der vorliegenden Erfindung fallen diese Produkte in verdünnter Form als rohe Konzentrationen, sowie auch die reine kristalline Form derselben. Alle diese neuen Produkte sind wertvoll bei der Bekämpfung von Mikroorganismen, insbesondere von verschiedenen Gram-positiven Mikroorganismen. Außerdem sind sie wertvoll als Desinfektions mittel gegen derartige Mikroorganismen und ferner als Hilfe bei der Reinigung von Mischkulturen für medizinisch diagnostische und biologische Forschungszwecke.

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-z-

Das Antibiotikum GP-21.bj>p wird während der unter regulierten Bedingungen vorgenommenen Kultivierung eines Stabiles einer als Streptopyces olivaceus sensu Kutter bekannten i-IikroorganisuGpeclos hergestellt, der durch Sucht und Untersuchung einer Kultur desselben in i-iedlen, die gewöhnlich sur Identifizierung von derartigen Mikroorganismen verwendet werden, identifiziert v/urde. Jine Kultur des Mikroorganismus v/urde bei der American uJype Culture Collection, Tcockville, Maryland hinterlegt und in deren Bestand mit der jsszsicimunr; A'TCC Zl.ykZ auf.^eiio minen.

Die Eigenschaften der Kultur des Standes Btreptomyces olivaceus sensu Hutter werden in der nachfolgenden Tabelle aufgeführt. Die für das Luitmycel angegebenen Farben entsprechen der Farbscheibe nach Tresner und Backus und dem Farbführer (Color Guide) von IdLdgeway.

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Medium

Wachstum

x''aroe cles Luftmycel

Wassera^ar schwach, dann v/ei.': flach

i''arbe des

να/"otat. Hy eel

wo iß

Synthet. mUßi,', ,^r;rau (> fe) farblos Aparplatten flach, oder schwach (spreading) mausgrau n.

Glukose- cut, er-Asparaßinhaben Aßarplatten

iiährar;arplatten

Glukose-Agarplatten

<"ut, flach rut, flach

A^arplatten ^ut, etwas η. Emerson eriiaben

Hefeextraltt ausnez. Aßarplatten flach, vcrnach" Pridham teilt

/;;rau (nahe brüunlich- :) £q) oder grau scnwach mausgrau n,"' way

schwach, weiß

sehr schwach r-;elb

braun

rot (^ de) braun oder scnwach mausgrau n. Uid^eway

Cr au (J5 fo) dunliclbraun oder schwach n.

i-'iidr;eway Pi_t;ment

Ir.oin

kein

schwacii

kein
lioll braun

scnwacnb rau Ii

braun

Sporenlietten v. Iil^?-Typ, meist mohr als >·0 Sporen, unmittelbar von Atiarböden o. Qnp; verwandten Buden

Sporenkutten wie bei synth. A,^r:;ar, Sporen im Elektronenmikrο sko ρ glatt (smooth)

ο to 00 00

cn ο

Medium	V/ac lic turn	!''arbe des Luftmycel
Tomaten mark-Ha fer mehl- A^car - platten	au s ge ζ., flach, verteilt	r;rau (3 fe) oder schwach mausgrau n»
'i'yrosin- platten	^'Ut , flach, dünn	-schwach, v/o i li
Galcium- Malat-A^ar- platten	dünn	keine
Kasein- Ar:ar- platton	r:ut, flach	keine
Stärke- Agar- platten	flach .	sehr schwach Grau
Gelatine, A, ;ar- platten	,",'Ut, flach	schwach, v/oiii
Kar to I'f οί ε bücke		keine

Farbe dec lösliches

vegetat. Mycel Pi^nent üemerkuntceu

dunkelbraun

Drauη-orange

kremfarbig

brciunlichlachsfarljoi

L.üil\/t-lL.ij.l-<j. (

braun sylindr. Sporen,

viereckige ilnden, nieist 1,1 zi 0,6 j-i., Bereich von Ο,ΰ χ 0,6 bis 1,6 χ 0,7m·.

braun Direction von Tyro-

siniiristallon

hellrütlich- kein

braun

kein

keine Digestion

vollständige Di-"ostion

ο mm Sone d.Hydrolyse in 3 barren, 10 bis Ip mm in 14 ¹^agan

chwach- ij. nn Zone der Ver olb-'braun flücsi^ünr; in 3 'i¹ ,:on, 12 iu;:i in 14

-P-I

HpS Produktion ( δ Tage, Bleiacetatstreifentest): starke Produktion aus Pepton, Proteose-Pepton, i'rypton, IVa₂SpO^, Peptoneisen-Agar-Schrägnährböden, Peptoneisen-Agar plus Hefeextrakt (kein lösliches Pigment, in wenigstens zwei Fällen (indicates) keine "Melarainbildung);

I.itratraduktion: keine Reduktion von Nitrat zu. Hi tr it in 14 Tagen sowohl sei Dextrose-Hitratbrühe als auch bei organische!*. iTltratbx'ühe.

i'rypton-Eeieoxtralit brühe: ho in nelanin in drei "agen.

IDntralihite HiIcIi: nach sieben Tagen begann die Koagulation und Paptonisation, sehr schwach rosafarbenes lösliches Pigr-iont, in 14 .2 agon gute Koagulation, Peptonisation zu einem Drittel abgeschlossen, schwach lachsfarbenes lösliches Pigment und der pH-Wert änderte sich von 6,4' auf b,7>

Wachstum bei 50⁰C : kein Wachstum.

Aeroblose: Wachstum nur an' der Oberfläche eines geimpften Agarbodens (tube).

Kohlenstoffausnutzung: gute Ausnutzung: Arabinose, Galactose, Glucose, Glycerin, Fructose, Maltose, Mannose, Starke, Saccharose, Trehalose, Xylose. Ausnutzung nicht so gut, jedoch sicher: P.affinose, Natriumsiiccinat. Ausnutzung zweifelhaft: Inosit, Lactose, Rhamnose. Keine Ausnutzung: Cellulose, Dulcit, Mannit _t Sorbit, Δatrlumacetat.

In den Rahmen der vorliegenden Erfindung fallen ferner zy... Jachstuu des Mikroorganismus S. olivaceus A'i'CC 21

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Die Kultivierung dieses Mikroorganismus.findet Vorzugs-weise in wässrigen liährmedlea. bei etwa 2.l\ bis 30 ö und unter submergen aeroben Bedingungen und unter Rühren statt, iolhrmedien, die für solche Zwecke geeignet sind, ent - \ halten ein. Kohlehydrat, wie ζ.E. Zucker, Stärke, Glycerin, Melasse, eine Quelle organischen Stickstoffs, wie z.B. Kasein, Sojabohnenniehl, Fleischmehl, Weizengluten, Bautawollsamenmehl, enzymatischem Digest von Kasein. Eine Quelle von Wachstumssubstaiizen, v/ie z.B. Destillationsrückstände, Hefeextrakte, sowie Mineralsalze, wie z.a. !Natriumchlorid, Kaliumchlorid, Kaliimpkosphat, Magnesiumsulfat und Spurenmineralien, -wie z.B. Kupier, Zink und Eisen können gleichfalls unter Erzielung vorteilhafter Ergebnisse verwendet werden. Falls xvährend der Fermentation eine übermäßige Schaumbildung stattfindet, können Antischaummittel, wie z.B. pflanzliche Öle dem Fermentationsmedium zugesetzt werden. Der pH-Wert der Fermentation neigt dazu, ziemlich konstant zu bleiben, falls Jedoch Veränderungen eintreten, kann ein Puffer, wie z.B. Calciumcarbonat, gleichfalls dem Medium, zugesetzt.werden.

Das Inokulum zur Herstellung des Antibiotikums CP 21.635 kann dadurch erhalten werden, daß man das Wachsturn, von Schrägnährböden der vorgenannten Mikroorganismen in Medien, wie z.B. dem Agar- nach Emerson oder Binder lactose verwendet. Das Wachstum kann dazu verwendet wer- -den, Schüttelkolben oder Jnokulumtanks zu inokulieren oder die Inokulumtanks können mit dem Inhalt der Schüttelkolben geimpft werden. Das Wachstum des Mikroorganismus erreicht gewöhnlich sein Maximum in etwa 2 oder 3 Tagen* Veränderungen hinsichtlich der verwendeten Anlage, der

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üelüftuv:, dar Rührgeschwindigkeit usw. können die Geschwind! iie.it beeinflussen mit der die' Maximalaktivität· erzielt wird. Im allgemeinen wird die Fermentation fortgesetzt bis dem Medium eine erhebliche antimikrobiale Aktivität verliehen wird. Ein Zeitraum von etwa 2.1+ Stunden bis etwa 4 Tagen reicht für die meisten Zwecke aus. Die Belüftung des in Tanks"für submerges Wachstum befindli chen Mediums wird vorzugsweise so gehalten, daß etwa 1/2 bis 2 Volumen freie Luft pro Volumen· Brühe pro Minute zugeführt werden. Das Rühren "'wird mit den üblichen bei Fermentationen verwendeten Rührwerken vorgenommen. Asepti sehe Bedingungen müssen natürlich während der Übertragung des Mikroorganismus und während dessen Wachstums ein- ■ gehalten werden.

Das Verfahren zur Herstellung des Antibiotikums wird zweckmäßigerweise dadurch verfolgt, daß man während der Fermentation -biologische Untersuchungen der Brühe unter Verwendung eines empfindlichen Stammes von Staphylococcus aureus durchführt. Dabei werden herkömmliche Probetests, bei denen die Inhibitions'zoue, die eine mit der Brühe gesättigte Filterpapierscheibe umgibt, als Maß für die antibiotisehe Wirkung angesehen wird, angewendet. nachdem die Formentatiöiisbrülie. ein geeignetes antibiotisches V/irkungsvermögen erreicht hat, wird das My eel, gewöhnlich ohne den pH-Wert "-zu regulieren, filtriert. Eine Diatomeenerde-Filterhilfe, wie z.B. Super-Gel, erleichtert das Filtrieren sehr. Es können verschiedene Vorrichtungen verwendet werden., wie s.3. Filterpressen, Zentrifugen, usw.. Die filtrierte Brühe kann als solche verwendet oder getrocknet v/erden. Vorzugsweise wird das Produkt jedoch wei-

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ο —

DUnnschicht- und Papier Chromatographie sind wertvoll ο Iiittel zur Analyse der Zusammensetzung von rohon und ge-' reinigten Materialien, die. das Antibiotikum CP. 21.635 enthalten. Tabelle ΐ erläutert einige der verschiedenen chromatographischen Systeme und die" entsprechenden E-Worto des Antibiotikuns CP. 21.635· Die bioautographische Er-■ . mittlung der antibiotischen Wirksamkeit unter Verwendung " von Agarplatten, die mit S. aureus geimpft wurden, stellt ein wertvolles Mittel zur Ermittlung der Gegenwart und Homogenität des Antibiotikums CP. 21.635 dar. Weitere Reagenzien, die bei der Feststellung des Antibiotikums auf Dünnschichten von Y/ert sind, sind Schwefelsäure und Van-Urks-Eeagens (0,125 g p-Dimethylaminobenzaldehyd und 0,1 ml 5-prozentiges Eiseii-III-chlorid in 100 ml 65-prozentiger Schwefelsäure). Ültraviölettlicht ist noch ein anderes Mittel ztir Feststellung der Homogenität des Antibiotikuns CP. 21.635 bei der Dünnschicht- und Papierciiromatographie. Seine Verwendung ist ferner zweckmäßig, U;:: den I^:?einigungsvorgang des Antibiotikums bei Chromate— graphie-Säulensu verfolgen. . .

Tabelle I:

Chromatograph. Trägor - Losungsmittelsystem " "'f-Wert

* - : A 0,15

ο 0,32

Silicaeel C 0,37

D ■" - 0,62

E 0,70

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BAÖ

Tabelle I (Fortsetzung:

-I- ο

Chromatograph. Träger Lösungsmittelsysten ^'i-Wert

E 0,29

G 0,81

Papier H 0,88

I 0,66

J 0,36

A = iithylacetat, B = Chloroform:Aceton (1:1), C = Äthylacetat: Methanol (1:1), D = Chloroform:Methanol (9:1), E = Butanol, F = ■ 5 % wässriges ITK₁ Cl, G = Methanol: 1,5% wässriges IraXJl (^-:1), Papier ge puffert mit 0,95 M lla.pSO_L , H= wassergesättigtes Methylisobutylketon:' Piperidin (100 : 1), Ϊ = v/asser gesättigt es Methylisobutylketon: Eisessig (100:1), J = benzolgesättigt mit 25 % Methanol in ^v Wasser. .

Das Antibiotikum wird aus der Fermentationsbrühe nach zahlreichen verschiedenen Verfahren, wie z.B. Lösungsmittelextraktion und Säulenchromatographie oder Kombinationen derselben gewonnen. Verschiedene organische Lösungs uitbül sind beim Extrahieren des Antibiotikums CP. "21.635 aus der filtrierten Brühe von Wert. Chloroform ist ein besonders wirksamen Lösungsmittel. Die Lösungsmittel extraktion wird vorzugsweise unter Verwendung eines Lö sungsmittelvolumens durchgeführt, das et\va gleich dem Brühevolumen ist, aus dem das Antibiotikum gewonnen werden soll. Es ist oft zweckmäßig, zwei Extraktionen vorzu nehmen, wobei das Lösungsmittelvolumen jeweils etwa gleich dem halben ßrühenvolumen ist. Verschiedene Vorrichtungen, wie z.B. Abscheidetrichter , mit Rührvorrichtung ausgestattete Tanks und mechanische Extraktionsvorrichtungen, wie z.B. Zentrifugalabscheider, sind bei den Extraktionen

1098877 ifSO
BAD ORIGINAL

- ίο -

von iiutzen.

Da.s bevorzugte Verfahren zur Gewinnung des Antibiotikums CP. 21.635 verlauft nie fol^r;t. Die filtrierte isrülie wird ohne pH-iic-gulierung zweimal mit 1/3 bis 1/Z Volumen Chloroform extrahiert. Die Chloroformsxtrakte τ/erden vereinigt, und das Lösungsmittel v/ird unter Vakuum bei einer Badteciperatur von etwa. _35 bis 37 enbfernt, n-Propanol wird zugesetzt, ura restliches Wasser zu entfernen,

w und die Lösung wird zu einer teerartigen ϊ-iasse konzentriert. DaG- teerartige Konzentrat wird in Methanol aufgenommen und wiederholt :.:it Heptan, das verwerfen wird, extrahiert. Die MethanolphaGο v/ird unter Vakuum zu einer tc-erartigert kasse'konzentriert, die bei Verreiben mit Diäthyläther einen Feststoff ergibt. Der in Jither unlösliche Feststoff v/ird wiederholt mit Äther gewaschen ( bis nur wenig oder gar keine. Farbe mehr entfernt v/ird) und an der Luft ge trocknet. Das das rohe Antibiotikum enthaltende Material wird an Sephadex LZ-20 (Pliarnacia Fine Chemicals Inc., Piscataway, ϊϊον/ Harket, ϊί.Η.) unter Verwendung von Methanol als Lösungsmittel zur Entv/icklung chromatographiert» Die

k Säulenfralitionen v/erden auf ihre biologische Alztivität nach dem Plattenverfahren unter Verwendung von mit S. aureus geimpften Agarplatten untersucht. Die aktiver! Fralitlonen werden vereinigt, unter reduziertem Druck eingedampft und weiter durch Chromatographie an Silicagel oder neutraler Tonerde unter Vorweiidimg von Chloroforra-Hethanol (9:1) > Äthylacetat oder Äthylacetat-Methanol (9:1) als EntwicklungslösmngsmittelsysteEi gereinigt. Die aktiven Fraktionen aus der Sephadexfiltration können auch durch Chrotiato an Cellulose unter Verwendung von mit Wasser ge-

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BADiÖRJÖtNAi.

sat'ci^tem l-Iethylisobutylketon als Lösungsmittel gereinigt werde::. ITacIi Eindampfen der aktiven !Fraktionen im Vakuum bei Ra".i. Temperatur trennt sich-das Antibiotikum CP. 21.635 als kristalliner Feststoff aus dem'Äthylacetat-ab.

■ Das Antibiotikum CP. 21.635 -ist in der Hauptsache aktiv gegenüber einer Vielzahl vonStämmen des Staphylo -coccus aureus, die gegenüber anderen bekannten Antibiotika .resiste-nt sind. iPabelle II erläutert das antibiotische Spektrum gegenüber diesen und anderen Mikroorganismen. Diese Tests wurden dergestalt durchgeführt,, daß man die verschiedenen Konzenti-ationen des reinen Antibiotikums enthaltende Nährbrühe "mit dem jeweilig angegebenen Or - ganisnus infizierte. .Die in"Tabelle II angegebene "minimale Hemm-lConzentration" ist die minimale Konzentration des Antibiotikums in Milirogramm/Milliliter)-bei der das Wachstum des Mikroorganismus nicht mehr stattfand. Da die bei diesem Test angewandte höchste Konsentration 200 meg/ nil betrug, ist die "minimale Hemia-Konzentratioii" nicht genau angegeben, wo sie über 200 mcg/rnl lag. Der Test wurdo unter Rormbedingungen durchgeführt. Das Antibiotikum CP. 21.635 schützt 1-Iäuse, die -experimentell mit verschiedenen Stämmen ve-n Staphylococcus aureus infisiert worden waren. Es wirkt sowohl bei oraler als auch subkutaner Verabreichung und ist bei therapeutisch wirksamen Dosierungsmengen nicht toxisch. Tabelle III erläutert die in vivo -Aktivität des Antibiotikums CP. 21.535·

Tabelle' II: ' .

minimale Hemm-Konsentra-Staphylo co ecus aureus - '--"". tion ' ,_ '

Stämme :

5 (normal) ." 12,5

109887/1750 PAD

Tabelle II (Fortsetzung):

minimale Hemni-Konzentra-Staphylococcus aureus . tion _

Ä/H 400 multi-resistent- 3,12

A/R.376 " » 25,0

A/R ItJ ' π η _12>5

A/R Kk η .-■-- «' ■■-.-■■■ 12,5

HI I^ Pen/res - 25,0

HI 22 Pen/res ' . "" 25,0

S 51 T/Oleand/res 3,12

96 " -■■■■. 12,50

134 "■ 12,50

Streptococcus

pyogenes C203 . ?200

» 8668 >200

¹¹ E1Ö9. resist* .■ >200

faecalis A121 ■ >200

Di'plo coc cus pneumo niae I > 200

Hy co bac t er ium s-p» 607 >200

* Escherichi-a cöli 266 >200

PseudoMonas aeruginosa 173 >200 ^w pyocyanea 10490 . >200

Aei-pbacter aero genes 2 >200

Klefeiella ioneumoniae 132 >200

Shigella sonnei SH4 . >200

Salmonells. choleraesuis ZkZ >200

Pasteurella multoclda PM > 200

Malleomyces mallei 10399 >200

Vibrio comma " >200

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213 8 5

Tabelle III:

Prozentualer Schutz Infizierender- Organismus Pools mg/kg oral

S. aureus ΙμΟΟ 2ÖS0

352

176

oral	subkutan
	100
_	δϋ
100	80
60	— -
20	—
60	ÖO
60 '	60

S. aureus 5 '■ 522

261

Die nachfolgenden Beispiele dienen der Erläuterung und ohne die Erfindung zu beschränken.

Beispiel 1:

Es wurde ein steriles wässriges Medium mit der folgenden' Zusammensetzung hergestellt: ■

3 t and teil

Sojabohnenmehl

Cerelose

Maisstärke

lösliche Destillatrückstände (distillers solubles)

Natriumchlorid
Calciumcarbonat

Eine' Schrägkultur von Streptomyces olivaceus sensu Hütter ATCC 21.542 wurde in einem 300 ml fassenden Erlen-

Gramm/Liter	0
10,	0
10,	0
10,
5,0
5,0
1,0

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BAD ORIGfNAl.

meyerkolben auf 100 ial dieses !-!odiums gebracht und 69 bis¹ 72 Stcl. geschüttelt bis ein gutes V/acIi-stura" erhalten

wurde.

l^pernentoren, eile das vorstehend beschriebene sterile I-Iediun enthielten, mir de η sit 5> % Vol/Yol des "ev/achscnen Inokulums goipft. Die Temperatur vmrde bei 2? bis ^ 2.6 C gehalten und die Brühe wurde bei 1700 ü/Lin gerührt und mit einer Geschv/indiriceit von 1 Volumen Luft yso Volumen Brühe pro Minute belüftet, i/ach Gy bis 72 3td. wurde die Brähe mit Hilfe von Super-Gel filtriert und zv/elmal mit den halbsn /oluaen Chloroform extrahiert. JDio Ghlorolornextraicte 'v/urden vereinigt, das Lösungsmittel vrords unter Valaium entfernt und die teerartige Hasse v/urde ia Heühanol aufgeno:::i.:oii. Die Methaiiollöaung v/urd& sechsEal mit Heptan extrahiert. Die Ilsthanolphase vnxruo unter Vakuum zu einem Teer Iionsentriert. Ifach Verreiben dieses Materials mit Diäthyläther vmrde ein Feststoff erhalten, der v/iederholt mit Äther gev/asclien und dann luft getrocknet -wurde.

r Das rohe Antibiotikum wurde durch Gelfiltration und

Chromatographie untei- Yarv/endung von Sephadex LH-20 (Pharmacia Fine .Chemicals Inc., Pscataway, ϊίον; Market, If.J.) mit Methanol als Entwicklungslösungsmittel fiereinigt. Die alitiven Fralztionen vrarclen vereinigt, untor reduziertem Druck konzentriert und aii neuti*alox^ Tonerde unter Verwendung von Äthylacetat als Entwicklmigslosuagsmittel chromatographiert. Mach Konzentration der aktiven Fraktionen bei Eauintenperatur trennte sich das Antibiotikum CP. 21.635 von dem Äthylacetat als kristalliner

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BADORlGfNAL

Feststoff ab.

Das Antibiotikum CP ».-..2.1 »655 ist ©iai ^sut-ralor kristalliner Feststoff, der in. Beräicli tob. 244 "bis- 254°C unter Zersetzung schmilzre, Eins Jsslyse ergab die folgenden durchsclmittlicheii Anteile: .

.■ Kohlenstoff . . γ "Ϊ . ;. -. 55,3-7 ."Wasserstoff ■- . - 5,%

-·. Stickstoff --. . ." „ -_: . 15,95 - ßcnv;efel . ■- -.■"·;. " %._?02 ■

Sauerstoff (Eestmenge) . ; ' " l3,9ß .

Im Mas s ens pekt ro met el·· zeigt das Antibiotikum ■ CP. 21*635 Binsη molekularen-icaenpeak bei 779 Hasseneinheiten. Aus diesen Daten ergiöt sich die Molekularformel G₃₆H₄₅W₉SO₉.. ·

-—■ Das AntibiotÜäim CP. 21.635 ist optisch aktiv und hat eine Drehung von /OlJ^q₀ = ■ * 88,2° (C, 1,17 % In Methanol). Seine iJV-AbsorptionssasiMa ±11 Kethanollösung liegen bei 222, 283 und 291 MfJL 'rät Sxtiaktionskoeffiaienten von 49.000, 5.100 bzvr. 4-300.

Das InfrarotSpektrum des "Antibiotikums GP. 21.635 ist aus der Anlage ersichtlich. Eine Ghloi-Qforalösung seigt eine eharakteristische Absor-ption. iE Infrarotbe reich bei den folgenden in. ίΛ.-angegebenen .Wellenlängen.: 2,95, 3,03,', 3Α3, 5,78, 6,00,_:-6-,Ο7_Λ 6,17, 6,50,-(S,55, ö,63, 6,70, 6,80, 7,10, 7,35, 7,50, 7,70 7,80, 8,85, 9,03, 9,15, 9Λ5, 9,67, 9,95, 10,30,

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10,70 und 10,85. Das Antibiotikum CP. 2.1.655 zeigt positive Reaktionen mit 2,/!.-Dinitrophenylliydrazin und Van Urk's Reagenz, setzt sich" jedoch nicht mit lTiiahydrin um.

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Claims

Patentansprüche:

1. Verfahren zur Herstellung des Antibiotikums CP* 21.635, dadurch gekennzeichnet, daß man den Mikroorganismus Streptomyces plivaceus sensu Hutter in einem eine Kohlehydratqueile, eins Quelle für organischen Stickstoff Und für anorganische Salze enthaltenden wässrigen Nähr medium unter submer^eii aeroben Bedingungen kultiviert bis dem Medium erhebliche antimikrobiale Aktivität liehen wird*

z\ Verfahren nach Anspruch 1» dadurch net j daß man das Antibiotikum aus der Fermehtätiöni3brühe gewinnt *

Heuträle Verbindung* kennz§ichn§nd durch die

empirische Formel CkgH, Sq^qi £ΐη@η Bßhfflgllpünkt in kristalliner Form von 2.kk bie S5ü-°ö uütsr 2grsetzungj eine öptisehe ßrehüng von /läLj^fin - ⁺ B8j£° bei §iner Konzentration von 1,1? % in Methanol» AbsörptiöftSmäl&mä im ÜV-Bereißh des Spöfetrüiäs bei ΜΙ»:ΙΒ5 üftd 19-1 BiH mit Extiüktionskoeffizienten V0'a.A9»QQÖ| ^alQÖ bz"W* 4*300» eine duröhsöhnittliGhe lüsämmenBötgUng ?ön 33>1? KöhleiiBtöffi ^_t8ij. gew*«?g Wasserstoff» 1^»99 Qe BtiekstOffj 4,öä ddW»«$ Schwefel ün'd 18 fflenge) Sauerstoff und in Öhloröform eine

Absorption is ZR-r>ereich bei den folgenden in u, angegebenen Wellenlängen: 2,95, 3,03, 3,43, 7,7ö, 5,87, 6,00, 6,07, 6,17, 6,50, 6,55, 6,63, 6,70, 6,00, 7,10, 7,35, 7,50, 7,70, 7,80,. 8,85, 9,03, 9,15, 9Λ5, 9,67, 9,95, 10,30, 10,70 und 10,85.

Für: Pfiz e r, Ine,

Rechtsanv/alt

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