BRPI0710919A2 - derivados de diceto-piperazina e piperidina como agentes antivirais - Google Patents

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F. Kadow John
Zhang Zhongxing
Yin Zhiwei
A. Meanwell Nicholas
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Han Ying
J. Carini David
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Abstract

DERIVADOS DE DICETO-PIPERAZINA E PIPERIDINA COMO AGENTES ANTIVIRAIS. Esta descrição fornece compostos tendo fármaco e propriedades bio-afetantes, suas composições farmacêuticas e método de uso. Em particular, a descrição é concernida com derivados de diceto piperazina e piperidina que possuem atividade antiviral única. Mais particularmente, a presente descrição refere-se aos compostos úteis para o tratamento de HIV e AIDS.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "DERIVADOS DE DICETO-PIPERAZINA E PIPERIDINA COMO AGENTES ANTIVIRAIS".
PEDIDOS RELACIONADOS
Este pedido reivindica prioridade ao Pedido Provisório dos Estados Unidos N°. de Série 60/794,700 e Pedido Provisório dos Estados Unidos N°. de Série 60/794,703, ambos depositados em 25 de Abril de 2006.
CAMPO DA DESCRIÇÃO
Esta descrição fornece compostos tendo fármaco e propriedades bio-afetantes, suas composições farmacêuticas e método de uso.
Em particular, a descrição é concernida com derivados de diceto piperazina e piperidina que possuem atividade antiviral única. Mais particularmente, a presente descrição refere-se aos compostos úteis para o tratamento de HIV e AIDS.
TÉCNICA ANTECEDENTE
Infecção por HIV-1 (vírus da imunodeficiência humana -1) permanece um problema médico principal, com uma estimativa de 40 milhões de pessoas infectadas mundialmente no final de 2005. O número de casos de HIV e AIDS (síndrome da imunodeficiência adquirida) tem aumentado rapidamente. Em 2005, aproximadamente 5,0 milhões de novas infecções foram relatados, e 3,1 milhões de pessoas morreram de AIDS. Atualmente fármacos disponíveis para o tratamento de HIV incluem inibidores de trans-criptase reversa de nucleosídeo (RT) ou combinações de pílula única aprovadas: zidovudina (ou AZT ou Retrovir®), didanosina (ou Videx®), estavudina (ou Zerit®), Iamivudina (ou 3TC ou Epivir®), zalcitabina (ou DDC ou Hivid®), sucinato de abacavir (ou Ziagen®), sal de fumarato de disoproxil de Tenofo-vir (ou Viread®), entricitabina (ou FTC), Combivir® (contém -3TC mais AZT), Trizivir® (contém abacavir, lamivudina, e zidovudina), Epzicom® (contém a-bacavir e lamivudina), Truvada® (contém Viread® e entricitabina); inibidores de transcriptase reversa de não nucleosídeo: nevirapina (ou Viramune®), delavirdina (ou Rescriptor®) e efavirenz (ou Sustiva®), e inibidores de protea-se peptidomiméticos ou formulações aprovadas: saquinavir, indinavir, ritona-vir, nelfinavir, amprenavir, lopinavir, e Kaletra® (lopinavir e Ritonavir). Cada destes fármacos pode apenas transitoriamente impedir replicação viral se utilizado sozinho. Entretanto, quando utilizados em combinação, estes fármacos têm um efeito profundo sobre viremia e progressão de doença. De fato, reduções significantes em taxas de morte entre pacientes de AIDS foram recentemente documentadas como uma conseqüência da aplicação estendida de terapia de combinação. Entretanto, a despeito destes resultados impressionantes, 30 a 50% de pacientes ultimamente reprovaram terapias de fármaco de combinação. Potência de fármaco insuficiente, não concordância, penetração de tecido restrita e limitações específicas do fármaco dentro de certos tipos celulares (por exemplo a maioria dos análogos de nu-cleosídeo não podem ser fosforilados em células em repouso) podem ser responsáveis pela supressão incompleta de viroses sensíveis. Além disso, a taxa de replicação elevada e regeneração rápida de HIV-1 combinada com a freqüente incorporação de mutações, levam ao aparecimento de variantes resistentes ao fármaco e fracassos de tratamento quando concentrações de fármaco sub-ideais estão presentes. Portanto, novos agentes anti-HIV exibindo padrões de resistência distintos, e farmacocinético favorável bem como perfis de segurança são necessários para fornecer mais opções de tratamento. Inibidores de fusão de HIV e antagonistas de co-receptor de entrada de HIV melhorados são dois exemplos de novas classes de agentes anti-HIV atualmente sendo estudadas por vários investigadores.
As propriedades de uma classe de inibidores de entrada de HIV chamados inibidores de ligação de HIV foram melhoradas em um esforço de obter compostos com eficácia e utilidade maximizadas como agentes antivirais. Uma descrição descrevendo indóis, dos quais a estrutura mostrada a-baixo para BMS-705 é representativa, foi descrita [Derivados de Indoleoxoa-cetil Piperazina Antivirais]. <formula>formula see original document page 4</formula>
Dois outros compostos, referidos na literatura como BMS-806 e BMS-043 foram descritos tanto na técnica acadêmica quanto de patente:
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Alguma descrição de suas propriedades em experiências clínicas humanas foi descrita na literatura.
Deve ser observado que em todas as três destas estruturas, uma amida de piperazina (nestas três estruturas uma amida de fenila de piperazina) está presente e este grupo é diretamente ligado a uma porção de oxoacetila. O grupo oxoacetila é ligado na posição 3 de 4-Fluoro indol em BMS-705 e à posição 3 de azaindóis substituídos em BMS-806 e BMS-043.
Em um esforço de obter compostos anti-HIV melhorados, publicações mais recentes descritas em parte, padrões de substituição modificados sobre os indóis e azaindóis. Exemplos de tal esforço incluem: (1) novos derivados de piperazina indoloxoacética substituídos, (2) derivados de piperaziniloxoacetilindol substituídos, e (3) derivados de piperazina azaindoloxo-acética substituídos.
Substituição destes grupos com hidrocarbonetos bicíclicos ou heteroaromáticos substituídos ou outros heteraromáticos foi também mostrada ser praticável. Exemplos incluem: (1) indol, azaindol e derivados de amidopiperazina heterocíclicos relacionados; (2) derivados antivirais de bici- cio 4,4,0; e (3) derivados de diazaindol.
Algumas substituições selecionadas para a porção de amida de piperazina das moléculas foram também descritas na técnica e entre estes exemplos são (1) alguns alcenos de piperidina; (2) algumas amidas de pirrolidina; (3) algumas N-aril ou heteroaril piperazinas; (4) algumas piperazinil uréias; e (5) alguns compostos contendo carbolina.
Método(s) para preparação de pró-fármacos para esta classe de compostos foram descritos em Prodrugs of Piperazine and Substituted Pipe-ridine Antiviral Agents (Ueda e outro, pedido não provisório dos Estados Unidos N5. de Série 11/066,745, depositado em 25/02/2005 ou US20050209246A1 ou W02005090367A1).
Um pedido de patente PCT publicado W02003103607A1 (11 de Junho de 2003) descreve um ensaio útil para analisar alguns inibidores de HIV.
Diversos pedidos de patente publicados descrevem estudos de combinação com inibidores de benzamida de piperazina, por exemplo, US20050215543 (W02005102328A1), US20050215544 (W02005102391A1), e US20050215545 (W02005102392A2).
Uma publicação sobre novos compostos nesta classe de inibidores de ligação (Jinsong Wang e outro. Org. Biol. Chem. 2005, 3, 1781-1786.) e um pedido de patente sobre alguns compostos mais remotamente relacionados apareceu W02005/016344 publicado em 24 de Fevereiro de 2005.
Pedidos de patente publicados W02005/016344 e W02005/ 121094 também descrevem derivados de piperazina que são inibidores de HIV. Os compostos descritos nestes pedidos são estruturalmente distintos dos compostos da presente descrição.
Nada nestas referências pode ser construído para descrever ou sugerir os novos compostos desta descrição e seu uso para inibir infecção por HIV.
SUMÁRIO DA DESCRIÇÃO
A presente descrição refere-se aos compostos de Fórmula I, os sais farmaceuticamente aceitáveis e/ou solvatos (por exemplo, hidratos) des- tes, suas formulações farmacêuticas, e seu uso em pacientes sofrendo de ou suscetíveis a um vírus tal como HIV. Os compostos de Fórmula I, seus sais farmaceuticamente aceitáveis e/ou solvato são agentes antivirais eficazes, particularmente como inibidores de HIV. Eles são úteis para o tratamento de HIVe AIDS.
Uma modalidade da presente descrição é direcionada a um composto de Fórmula I, ou sais farmaceuticamente aceitáveis deste,
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em que:
A é selecionado do grupo consistindo em:
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em que
- - representa uma ligação carbono-carbono ou não existe;
R1 é hidrogênio, C1-C4 alquila, ou C1-C4 fluoroalquila;
R2 é hidrogênio;
R4, R5, R6 e R7 são cada qual independentemente selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, hidróxi, halogênio, ciano, nitro, C1-C4 alquila, C1-C4 fluoroalquila, ORa, NRaRb, COORa, e Grupo B;
Ra e Rb são cada qual independentemente selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, C1-C4 alquila, e Grupo B;
R4n é O ou não existe;
Y é selecionado do grupo consistindo em fenila, C5-C7 heteroarila monocíclica,
C9-C10 arila bicíclica, C9-C10 heteroarila bicíclica, C4-C7 heteroalicíclico, e C5-C7 cicloalquila em que a referida heteroarila ou heteroalicíclico contém de 1 a 4 heteroátomos selecionados de O, N, e S e com a condição de que quando Y for uma heteroarila bicíclica tanto X quanto Y sejam ligados a um anel comum em que a referida arila, heteroarila, e heteroalicíclico são opcionalmente substituídos com um a três halogênios iguais ou diferentes ou de um a três substituintes iguais ou diferentes selecionados de oxo, hidroxi-la, C1-C6 alquila, -NR55R56, -OC1-C3 alquila, -S-R1,-S(O)2R1, CF3, CN,; em que a referida C1-C6 alquila pode ser opcionalmente substituída com Grupo B;
Z é selecionado do grupo consistindo em C1-6 alquila,µL alcóxi, C3-7 cicloalquila, -COOR3, N-lactam cíclico de anel de 4, 5, ou 6 membros, C(O)NR42R431 -C(O)R57 em que R57 é opcionalmente substituído com CN ou Grupo B; -NR55R56, arila e heteroarila; em que a referida arila é fenila; a referida heteroarila é selecionada do grupo consistindo em piridinila, pirimidinila, pirazinila, furanila, tienila, pirrolila, imidazolila, tiazolila, isotiazolila, oxazolila, isoxazolila e C9-C10 heteroarila bicíclica com 1-4 heteroátomo(s); a referida arila ou heteroarila é opcionalmente substituída com um ou dois dos membros iguais ou diferentes selecionados do grupo consistindo em amino, nitro, ciano, hidróxi, C1-6 alcóxi, -C(O)NH2, C1-6 alquila, -NHC(O)CH3, halogênio, trifluorometila e Grupo B;
Grupo B é selecionado do grupo consistindo em -C(O)NR40R41, arila, heteroarila, heteroalicíclico, C(O)R3, C(=N-0-R1)R3, acetal, UR8a, (C1-6) alquilNR40R41, (C1-6 alquilCOOR8b; em que a referida arila, heteroarila, e heteroalicíclico são opcionalmente substituídos com um a três halogênios i-guais ou diferentes ou de um a três substituintes iguais ou diferentes selecionados do grupo F; em que arila é naftila ou fenila substituída; em que heteroarila é um sistema mono ou bicíclico que contém de 3 a 7 átomos de a-nel para um sistema monocíclico e até 12 átomos em um sistema bicíclico fundido, incluindo de 1 a 4 heteroátomos; em que heteroalicíclico é um anel monocíclico de 3 a 7 membros que pode ser parcialmente insaturado e pode ser substituído por 1 ou dois grupos oxo e pode conter de 1 a 2 heteroátomos no esqueleto de anel e que pode ser fundido a um anel de benzeno ou piridila;
ou Grupo B é (C1-6alquila e (C2-6)alquenila; em que a referida (C1-6)alquila e (C2-6)alquenila são independentemente opcionalmente substituídas com um membro selecionado do grupo consistindo em fenila, heteroa-rila ou -C(O)NR55R56; ou com de um a três halogênios iguais ou diferentes; em que heteroarila é um sistema monocíclico que contém de 3 a 7 átomos de anel, incluindo de 1 a 4 heteroátomos;
Grupo F é selecionado do grupo consistindo em oxo, (C1-6) alquila, (C3-7)cicloalquila, arila, heteroarila, heteroalicíclico, hidróxi, (Ci-6)alcóxi, arilóxi, (C1-6)tioalcóxi, ciano, halogênio, nitro, -C(O)R57, benzila, -NR42C(O)-(C1-6alquila, -NR42C(0)-(C3-6)cicloalquila, -NR42C(O)-arila, -NR42C(0)-heteroarila, -NR42C(0)-heteroalicíclico, um N-lactam cíclico de anel de 4, 5, ou 6 membros, -NR42S(O)2-(C1-6)alquila, -NR42S(0)2-(C3-6)cicloalquila, -NR42S (O)2-arila, -NR42S(O)2-heteroarila, -NR42S(0)2-heteroalicíclico, S(O)2(C1-6) alquila, S(O)2arila, -S(O)2 NR42R43, NR42R43, (C1-6alquilC(O)NR42R43, C(O)NR42R43, NHC(O)NR42R43, OC(O)NR42R43, NHC(O)OR54, (C1-6alquilNR42R43, COOR54 e (C1-6alquil COOR54; em que a referida (C1-6)alquila, (C3-7)cicloalquila, arila, heteroarila, heteroalicíclico, (C1-6)alcóxi, e arilóxi, são opcionalmente substituídos com um a nove halogênios iguais ou diferentes ou de um a cinco substituintes iguais ou diferentes selecionados do grupo G; em que arila é fenila; heteroarila é um sistema monocíclico que contém de 3 a 7 átomos de anel, incluindo de 1 a 4 heteroátomos; heteroalicíclico é selecionado do grupo consistindo em aziridina, azetidina, pirrolidina, piperazina, piperidina, tetraidrofurano, tetraidropirano, azepina, e morfolina;
Grupo G é selecionado do grupo consistindo em (C1-6)alquila, (C3-7)cicloalquila, arila, heteroarila, heteroalicíclico, hidróxi, (C1-6alcoxi, arilóxi, ciano, halogênio, nitro, -C(O)R57, benzila, heterocíclico não-aromático com 1-2 heteroátomos, -NR48C(O)-C1-6alquila, -NR48C(O)-(C3-6)cicloalquila, -NR48C(O)-arila, -NR48C(O)-heteroarila, -NR48C(O)-heteroalicíclico, um N-lactam cíclico de anel de 4, 5, ou 6 membros, -NR48S(O)2-C1-8alquila, - NR48S(O)2, -(C3-6)cicloalquila, -NR48S(0)2-arila, -NR48S(0)2-heteroarila,
-NR48S(0)2-heteroalicíelico, sulfinila, sulfonila, sulfonamida, NR48R49, (C1-6alquilal C(O)NR48R49, C(O)NR48R49, NHC(O)NR48R49, OC(O)NR48R49, NHC(O)OR54', (C1-6 alquilNR48R49, COOR54, e (C1-6) alquil-COOR54; em que arila é fenila; heteroarila é um sistema monocíclico que contém de 3 a 7 átomos de anel, incluindo de 1 a 4 heteroátomos; heteroali-cíclico é selecionado do grupo consistindo em aziridina, azetidina, pirrolidina, piperazina, piperidina, tetraidrofurano, tetraidropirano, azepina, e morfolina;
R3 é selecionado do grupo consistindo em C1-C4 alquila, arila, heteroarila, e heteroalicíclico; em que a referida C1-C4 alquila, arila, heteroarila, e heteroalicíclico são opcionalmente substituídos com um a três halogê-nios iguais ou diferentes ou com de um a três substituintes iguais ou diferentes selecionados do grupo F;
em que para R3, R8, R8a, R8b arila é fenila; heteroarila é um sistema mono ou bicíclico que contém de 3 a 7 átomos de anel para sistemas monocíclicos e até 10 átomos em um sistema bicíclico, incluindo de 1 a 4 heteroátomos; em que heteroalicíclico é selecionado do grupo consistindo 15 em aziridina, azetidina, pirrolidina, piperazina, piperidina, tetraidrofurano, tetraidropirano, azepina, e morfolina;
R8 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, (C1-6) alquila, (C3-7)cicloalquila, (C2-6alquenila, (C3-7)cicloalquenila, (C2.6)alquinila, arila, heteroarila, e heteroalicíclico; em que a referida (C1-6alquila, (C3-7) C1-20 cloalquila, (C2-6)alquenila, (C3-7)cicloalquenila, (C2-6)alquinila, arila, heteroarila, e heteroalicíclico são opcionalmente substituídos com um a seis halogê-nios iguais ou diferentes ou de um a cinco substituintes iguais ou diferentes selecionados do grupo F;
R8a é um membro selecionado do grupo consistindo em arila, heteroarila, e heteroalicíclico; em que cada membro é independentemente opcionalmente substituído com um a seis halogênios iguais ou diferentes ou de um a cinco substituintes iguais ou diferentes selecionados do grupo F;
R8b é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, (C1*) alquila e fenila;
R9, R10, R11, R12, R13, R14, R151 R16 são cada qual independentemente selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e (C1^alquila; em que a referida (C1-6alquila é opcionalmente substituída com um a três halo- gênios iguais ou diferentes ou um hidróxi ou um O (C1-6)alquila ou um NR55R56; ou um de R9, R10 ou um de R11, R12 pode formar respectivamente com um de R15, R16 ou um de R13, R14, um, dois ou três átomos em ponte compreendidos de alquila ou átomos de nitrogênio;
X é N ou CH, (quando X for CH a configuração no centro X pode ser configuração racêmica ou pura (R) ou pura (S));
U é selecionado do grupo consistindo em NH ou NCH3, O, e S;
R40 e R41 são independentemente selecionados do grupo consistindo em (a) hidrogênio;
(b) (C1-6)alquila substituída com um a três halo-gênios iguais ou diferentes (c) (C1-6)alcóxi, arila, heteroarila ou heteroalicícli-co; ou R40 e R41 tomados juntos com o nitrogênio ao qual eles são ligados formam um membro selecionado do grupo consistindo em aziridina, azetidi-na, pirrolidina, piperazina, 4-NMe piperazina, piperidina, azepina, e morfoli-na; e em que a referida arila, heteroarila, e heteroalicíclico são opcionalmente substituídos com um a dois substituintes iguais ou diferentes selecionados de C1-C3 alquila, halogênio, hidroxila, -OR55, -NR55R56; -C(O)NR55R56; em que para R40 e R41 arila é fenila; heteroarila é um sistema monocíclico que contém de 3 a 6 átomos de anel, incluindo de 1 a 4 heteroátomos; heteroalicíclico é selecionado do grupo consistindo em aziridina, azetidina, pirrolidina, piperazina, piperidina, tetraidrofurano, tetraidropirano, azepina, e morfolina;
R42 e R43 são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, (C1-6alquila, alila, (C1-6alcoxi, (C3-7)cicloalquila, arila, heteroarila e heteroalicíclico; ou R42 e R43 tomados juntos com o nitrogênio ao qual eles são ligados formam um membro selecionado do grupo consistindo em aziridina, azetidina, pirrolidina, piperazina (opcionalmente substituída com Grupo B), 4-NMe piperazina, piperidina, azepina, e morfolina; e em que a referida (C1-6alquila, (C1-6alcoxi, (C3-7)cicloalquila, arila, heteroarila, e heteroalicíclico são opcionalmente substituídos com um a três halogênios iguais ou diferentes ou de um a dois substituintes iguais ou diferentes selecionados do grupo G; em que para R42 e R43 arila é fenila; heteroarila é um sistema monocíclico que contém de 3 a 6 átomos de anel, incluindo de 1 a 4 heteroátomos; heteroalicíclico é um membro selecionado do grupo consistindo em aziridina, azetidina, pirrolidina, piperazina, piperidina, tetraidrofura-no, tetraidropirano, azepina, e morfolina;
R46 é selecionado do grupo consistindo em H, OR57, e NR55R56;
R47 é selecionado do grupo consistindo em H, amino, halogênio, fenila, e (C1-6)alquila;
R48 e R49 são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, (C1-6)alquila e fenila;
R50 é selecionado do grupo consistindo em H, (C1-6)alquila, (C3-6) cicloalquila, e benzila; em que cada das referidas (C1-6)alquila, (C3-7) cicloal-quila e benzila são opcionalmente substituídas com um a três halogênios iguais ou diferentes, amino, OH, CN ou NO2;
R54 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e (C1-6) alquila;
R54' é (C1-6)alquila;
R55 e R56 são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e (C1-6)alquila; e
R57 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, (C1-6) alquila e fenila; e
com a condição de que o composto de Fórmula (I) não seja
Em uma modalidade preferida, R1 é H. Em uma modalidade preferida, R5 é H. Em uma modalidade preferida, R4n não existe. Em uma modalidade preferida, R4 é halogênio ou ORa. Em uma modalidade preferida, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15 R16 são cada qual independentemente selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, C1-C4 alquila e C1-C4 fluoroalquila.
Em uma modalidade preferida, A é <formula>formula see original document page 12</formula>
Em uma modalidade preferida, Y é fenila.
Em uma modalidade preferida, Y é C5-C7 heteroarila monocíclica.
Em uma modalidade preferida, Y é C9-C10 arila bicíclica.
Em uma modalidade preferida, Y é C9-C10 heteroarila bicíclica.
Em uma modalidade preferida, Y é C4-C7 heteroalicíclico.
Em uma modalidade preferida, Y é C5-C7 cicloalquila.
Em uma modalidade preferida, Y é tetrazol, triazol, pirazol, imi-dazol, piridina, pirazina, pirimidina, ou piridazina.
Outra modalidade da presente descrição é um método para tratar mamíferos infectados com um vírus, especialmente em que o referido vírus é HIV, compreendendo administrar ao referido mamífero uma quantidade eficaz antiviral de um composto de Fórmula I, e um ou mais diluentes, excipientes ou veículos farmaceuticamente aceitáveis. Opcionalmente, o composto de Fórmula I pode ser administrado em combinação com uma quantidade eficaz antiviral de um agente de tratamento de AIDS selecionado do grupo consistindo em: (a) um agente antiviral de AIDS; (b) um agente an-tiinfeccioso; (c) um imunomodulador; e (d) inibidores de entrada de HIV.
Outra modalidade da presente descrição é uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade eficaz antiviral de um composto de Fórmula I e um ou mais diluentes, excipientes, veículos farmaceuticamente aceitáveis e opcionalmente em combinação com uma quantidade eficaz antiviral de um agente de tratamento de AIDS selecionado do grupo consistindo em: (a) um agente antiviral de AIDS; (b) um agente antiinfeccio-so; (c) um imunomodulador; e (d) inibidores de entrada de HIV.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
Uma vez que os compostos da presente descrição, podem possuir centros assimétricos e portanto ocorrer como misturas de diastereôme-ros e enantiômeros, a presente descrição inclui as formas diastereoisoméri- cas e enantioméricas individuais dos compostos de Fórmula I em adição às misturas destes.
Definições
O termo "C1-6 alquila" como utilizado aqui e nas reivindicações (a menos que especificado de outra maneira) significa grupos alquila de cadeia linear ou ramificada tal como metila, etila, propila, isopropila, butila, isobutila, t-butila, amila, hexila e similares.
"C1-C4 fluoroalquila" refere-se a C1-C4 alquila substituída por F
em que pelo menos um átomo de H é substituído com átomo de F, e cada 10 átomo de H pode ser independentemente substituído por átomo de F;
"Halogênio" refere-se a cloro, bromo, iodo ou flúor.
Um grupo "arila" refere-se a todos os grupos monocíclicos de carbono ou policíclicos de anel fundidos (isto é, anéis que compartilham pares adjacentes de átomos de carbono) tendo um sistema de pi-elétron completamente conjugado. Exemplos, sem limitação, de grupos arila são fenila, naftalenila e antracenila. O grupo arila pode ser substituído ou não substituído. Quando substituídos o(s) grupo(s) substituídos são preferivelmente um ou mais selecionados de alquila, cicloalquila, arila, heteroarila, heteroalicícli-co, hidróxi, alcóxi, arilóxi, heteroarilóxi, heteroaliciclóxi, tioidróxi, tioarilóxi, 20 tioheteroarilóxi, tioheteroaliciclóxi, ciano, halogênio, nitro, carbonila, O-carba-mila, N-carbamila, C-amido, N-amido, C-carbóxi, O-carbóxi, sulfinila, sulfoni-la, sulfonamido, trihalometila, ureído, amino e -NRxRy, em que Rx e Ry são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, alquila, cicloalquila, arila, carbonila, C-carbóxi, sulfonila, trihalometila, e, um anel heteroalicíclico de cinco ou seis membros, combinado.
Como utilizado aqui, um grupo "heteroarila" refere-se a um grupo de anel monocíclico ou fundido (isto é, anéis que compartilham um par adjacente de átomos) tendo nos anéis um ou mais átomos selecionados do grupo consistindo em nitrogênio, oxigênio e enxofre e, além disso, tendo um sistema de pi-elétron completamente conjugado. A menos que de outra maneira indicado, o grupo heteroarila pode ser ligado em um átomo de carbono ou nitrogênio dentro do grupo heteroarila. Deve ser observado que o termo heteroarila destina-se a abranger um N-óxido da heteroarila origem se um tal N-óxido for quimicamente praticável como é conhecido na técnica. Exemplos, sem limitação, de grupos heteroarila são furila, tienila, benzotienila, tia-zolila, imidazolila, oxazolila, oxadiazolila, tiadiazolila, benzotiazolila, triazolila, tetrazolila, isoxazolila, isotiazolila, pirrolila, piranila, tetraidropiranila, pirazoli-la, piridila, pirimidinila, quinolinila, isoquinolinila, purinila, carbazolila, benzo-xazolila, benzimidazolila, indolila, isoindolila, pirazinila, diazinila, pirazina, triazinila, tetrazinila, e tetrazolila. Quando substituídos o(s) grupo(s) substituídos são preferivelmente um ou mais selecionados de alquila, cicloalquila,arila, heteroarila, heteroalicíclico, hidróxi, alcóxi, arilóxi, heteroarilóxi, hetero-I aliciclóxi, tioalcóxi, tioidróxi, tioarilóxi, tioheteroarilóxi, tioheteroaliciclóxi, dano, halogênio, nitro, carbonila, O-carbamila, N-carbamila, C-amido, N-amido, C-carbóxi, O-carbóxi, sulfinila, sulfonila, sulfonamido, trihalometila, ureído, amino, e -NRxRy, em que Rx e Ry são como definidos acima.
Como utilizado aqui, um grupo "heteroalicíclico" refere-se a um grupo de anel monocíclico ou fundido tendo nos anéis um ou mais átomos selecionados do grupo consistindo em nitrogênio, oxigênio e enxofre. Anéis são selecionados daqueles que fornecem disposições estáveis de ligações e não se destinam a realizar sistemas que não existem. Os anéis podem também ter uma ou mais ligações duplas. Entretanto, os anéis não têm um sistema de pi-elétron completamente conjugado. Exemplos, sem limitação, de grupos heteroalicíclicos são azetidinila, piperidila, piperazinila, imidazolinila, tiazolidinila, 3-pirrolidin-1-ila, morfolinila, tiomorfolinila e tetraidropiranila. Quando substituídos o(s) grupo(s) substituídos são preferivelmente um ou mais selecionados de alquila, cicloalquila, arila, heteroarila, heteroalicíclico, hidróxi, alcóxi, arilóxi, heteroarilóxi, heteroaliciclóxi, tioidróxi, tioalcóxi, tioarilóxi, tioheteroarilóxi, tioheteroaliciclóxi, ciano, halogênio, nitro, carbonila, tio-carbonila, O-carbamila, N-carbamila, O-tiocarbamila, N-tiocarbamila, C-ami-do, C-tioamido, N-amido, C-carbóxi, O-carbóxi, sulfinila, sulfonila, sulfonamido, trihalometanossulfonamido, trihalometanossulfonila, silila, guanila, guani-dino, ureído, fosfonila, amino e -NRxRy, em que Rx e Ry são como definidos acima. Um grupo "alquila" refere-se a um hidrocarboneto alifático saturado incluindo grupos de cadeia linear e cadeia ramificada. Preferivelmente, o grupo alquila tem 1 a 20 átomos de carbono (quando uma faixa numérica; por exemplo, "1-20", é relatada aqui, significa que o grupo, neste caso o grupo alquila pode conter 1 átomo de carbono, 2 átomos de carbono, 3 átomos de carbono, etc. até e incluindo 20 átomos de carbono). Mais preferivelmente, é uma alquila de tamanho médio tendo 1 a 10 átomos de carbono. Mais preferivelmente, é uma alquila inferior tendo 1 a 4 átomos de carbono. O grupo alquila pode ser substituído ou não substituído. Quando substituído, o(s) grupo(s) de substituinte são preferivelmente um ou mais individualmente selecionados de trihaloalquila, cicloalquila, arila, heteroarila, heteroalicíclico, hidróxi, alcóxi, arilóxi, heteroarilóxi, heteroaliciclóxi, tioidróxi, tioalcóxi, tioari-lóxi, tioheteroarilóxi, tioheteroaliciclóxi, ciano, halo, nitro, carbonila, tiocarbo-nila, O-carbamila, N-carbamila, O-tiocarbamila, N-tiocarbamila, C-amido, C-tioamido, N-amido, C-carbóxi, O-carbóxi, sulfinila, sulfonila, sulfonamido, tri-halometanossulfonamido, trihalometanossulfonila, e um anel heteroalicíclico de cinco ou seis membros, combinado.
Um grupo "cicloalquila" refere-se a todos os grupos de anel fundido ou monocíclico de carbono (isto é, anéis que compartilham um par adjacente de átomos de carbono) em que um ou mais anéis não têm um sistema de pi-elétron completamente conjugado. Exemplos, sem limitação, de grupos cicloalquila são ciclopropano, ciclobutano, ciclopentano, ciclopente-no, cicloexano, cicloexadieno, cicloeptano, cicloeptatrieno e adamantano. Um grupo cicloalquila pode ser substituído ou não substituído. Quando substituído, o(s) grupo(s) de substituinte são preferivelmente um ou mais individualmente selecionados de alquila, arila, heteroarila, heteroalicíclico, hidróxi, alcóxi, arilóxi, heteroarilóxi, heteroaliciclóxi, tioidróxi, tioalcóxi, tioarilóxi, tioheteroarilóxi, tioheteroaliciclóxi, ciano, halo, nitro, carbonila, tiocarbonila, O-carbamila, N-carbamila, O-tiocarbamila, N-tiocarbamila, C-amido, C-tio-amido, N-amido, C-carbóxi, O-carbóxi, sulfinila, sulfonila, sulfonamido, triha-lo-metanossulfonamido, trihalometanossulfonila, silila, guanila, guanidino, ureído, fosfonila, amino e -NRxRy com Rx e Ry como definidos acima. Um grupo "alquenila" refere-se a um grupo alquila, como definido aqui, tendo pelo menos dois átomos de carbono e pelo menos uma ligação dupla carbono-carbono.
Um grupo "alquinila" refere-se a um grupo alquila, como definido aqui, tendo pelo menos dois átomos de carbono e pelo menos uma ligação tripla carbono-carbono.
Um grupo "hidróxi" refere-se a um grupo -OH.
Um grupo "alcóxi" refere-se tanto a um grupo-O-alquila quanto -O-cicloalquila como definido aqui.
Um grupo "arilóxi" refere-se tanto a um grupo -O-arila quanto -O-heteroarila, como definido aqui.
Um grupo "heteroarilóxi" refere-se a um grupo heteroaril-O- com heteroarila como definido aqui.
Um grupo "heteroaliciclóxi" refere-se a um grupo heteroalicíclico- O- com heteroalicíclico como definido aqui.
Um grupo "tioidróxi" refere-se a um grupo -SH.
Um grupo "tioalcóxi" refere-se tanto a um grupo S-alquila quanto -S-cicloalquila, como definido aqui.
Um grupo "tioarilóxi" refere-se tanto a um grupo -S-arila quanto -S-heteroarila, como definido aqui.
Um grupo "tioheteroarilóxi" refere-se a um grupo heteroaril-S-com heteroarila como definido aqui.
Um grupo "tioheteroaliciclóxi" refere-se a um grupo heteroalicícli-co-S- com heteroalicíclico como definido aqui.
Um grupo "carbonila" refere-se a um grupo -C(=O)-R", onde R" é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, arila, heteroarila (ligado através de um carbono de anel) e heteroalicíclico (ligado através de um carbono de anel), como cada qual é definido aqui.
Um grupo "aldeído" refere-se a um grupo carbonila onde R" é hidrogênio.
Um grupo "tiocarbonila" refere-se a um grupo -C(=S)-R", com R" como definido aqui.
Um grupo "Ceto" refere-se a um grupo -CC(=0)C- em que o carbono sobre qualquer ou ambos os lados do C=O pode ser alquila, cicloalqui-la, arila ou um carbono de um grupo heteroarila ou heteroaliacíclico.
Um grupo "trihalometanocarbonila" refere-se a um grupo Z3CC(=0)- com o referido Z sendo um halogênio.
Um grupo "C-carbóxi" refere-se a um grupo -C(=0)0-R", com R" como definido aqui.
Um grupo "O-carbóxi" refere-se a um grupo R"C(-0)0, com R" como definido aqui.
Um grupo "ácido carboxílico" refere-se a um grupo C-carbóxi em que R" é hidrogênio.
Um grupo "trihalometila" refere-se a um grupo -CZ3, em que Z é um grupo halogênio como definido aqui. 15 Um grupo "trihalometanossulfonila" refere-se a um grupo Z3CS(=0)2 com Z como definido acima.
Um grupo "trihalometanossulfonamido" refere-se a um grupo Z3CS(=0)2NRx- com Z como definido acima e RxSendo H ou (Ci-6)alquila.
Um grupo "sulfinila" refere-se a um grupo -S(=0)-R", com R" sendo (C1-6)alquila.
Um grupo "sulfonila" refere-se a um grupo -S(=0)2R" com R" sendo (C1-6)alquila.
Um grupo "S-sulfonamido" refere-se a um -S(=0)2NRXRY, com Rx e Ry independentemente sendo H ou (C1-6)alquila.
Um grupo "N-Sulfonamido" refere-se a um grupo R"S(=0)2NRx-,com Rx sendo H ou (C1-6)alquila.
Um grupo Ό-carbamila" refere-se a um grupo -0C(=0)NRxRy, com Rx e RY independentemente sendo H ou (C1-6)alquila.
Um grupo "N-carbamila" refere-se a um grupo ROC(=0)NRy, com Rx e Ry independentemente sendo H ou (C1-6)alquila.
Um grupo "O-tiocarbamila" refere-se a um grupo -OC(=S)NRxRy, com Rx e Ry independentemente sendo H ou (C1-6)alquila. Um grupo "N-tiocarbamila" refere-se a um grupo ROC(=S)NRy-, com Rx e Ry independentemente sendo H ou (C1-6)alquila.
Um grupo "amino" refere-se a um grupo -NH2.
Um grupo "C-amido" refere-se a um grupo -C(=O)NRxRy, com Rx e Ry independentemente sendo H ou (C1-6)alquila.
Um grupo "C-tioamido" refere-se a um grupo -C(=S)NRxRy, com Rx e Ry independentemente sendo H ou (C1-6)alquila.
Um grupo "N-amido" refere-se a um grupo RxC(=O)NRy-, com Rx e Ry independentemente sendo H ou (C1-6)alquila.
Um grupo "ureído" refere-se a um grupo -NRxC(=O)NRyRy2, com Rx, Ry1 e Ry2 independentemente sendo H ou (C1-6)alquila.
Um grupo "guanidino" refere-se a um grupo -RxNC(=N)NRyRy2, com Rx1 Ry, e Ry2 independentemente sendo H ou (C1-6)alquila.
Um grupo "guanila" refere-se a um grupo RxRyNC(=N)-, com Rx e Ryindependentemente sendo H ou (C1-6)alquila.
Um grupo "ciano" refere-se a um grupo -CN.
Um grupo "silila" refere-se a um -Si(Rn)3, com R" sendo (C1-6) alquila ou fenila.
Um grupo "fosfonila" refere-se a um P(=O)(ORx)2 com Rx sendo (C1-6)alquila.
Um grupo "hidrazino" refere-se a um grupo -NRxNRyRy2, com Rx, Ry, e Ry2 independentemente sendo H ou (C1-6)alquila.
Um grupo "N-lactam cíclico de anel de 4, 5, ou 6 membros" refere-se a
<formula>formula see original document page 18</formula>
Quaisquer dois grupos R adjacentes podem combinar-se para formar um anel arila, cicloalquila, heteroarila ou heterocíclico adicional fundido ao anel inicialmente transportando aqueles grupos R.
É conhecido na técnica que átomos de nitrogênio em sistemas de heteroarila podem estar "participando em uma ligação dupla de anel de heteroarila", e isto refere-se à forma de ligações duplas nas duas estruturas tautoméricas que compreendem grupos heteroarila de anel de cinco membros. Isto dita se nitrogênios podem ser substituídos como bem entendido por químicos na técnica. A descrição e reivindicações da presente descrição são baseadas nos princípios gerais conhecidos de ligação química. É entendido que as reivindicações não abrangem estruturas conhecidas ser instáveis ou não capazes de existir com base na literatura.
Sais fisiologicamente aceitáveis e pró-fármacos de compostos descritos aqui incluiem-se no escopo desta descrição. O termo "sal farmaceuticamente aceitável" como utilizado aqui e nas reivindicações destina-se a incluir sais de adição de base não tóxicos. Sais adequados incluem aqueles derivados de ácidos orgânicos e inorgânicos tais como, sem limitação, ácido hidroclórico, ácido hidrobrômico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico, ácido metanossulfônico, ácido acético, ácido tartárico, ácido lático, ácido sulfínico, ácido cítrico, ácido maléico, ácido fumárico, ácido sórbico, ácido aconítico, ácido salicílico, ácido ftálico, e similares. O termo "sal farmaceuticamente aceitável" como utilizado aqui destina-se também a incluir sais de grupos acídicos, tais como um carboxilato, com tais contra-íons como amônio, sais de metal de álcali, particularmente sódio ou potássio, sais de metal alcalino terroso, particularmente cálcio ou magnésio, e sais com bases orgânicas adequadas tais como alquilaminas inferiores (metilamina, etilamina, cicloexi-lamina, e similares) ou com alquilaminas inferiores substituídas (por exemplo alquilaminas substituídas por hidroxila tal como dietanolamina, trietanolami-na ou tris(hidroximetil)-aminometano), ou com bases tal como piperidina ou morfolina.
No método da presente descrição, o termo "quantidade eficaz antiviral" significa a quantidade total de cada componente ativo do método que é suficiente para exibir um benefício ao paciente significativo, isto é, cura de condições agudas caracterizadas por inibição da infecção por HIV. Quando aplicado a um ingrediente ativo individual, administrado sozinho, o termo refere-se àquele ingrediente sozinho. Quando aplicado a uma combinação, o termo refere-se às quantidades combinadas dos ingredientes ativos que resultam no efeito terapêutico, se administradas em combinação, con-secutivamente ou simultaneamente. Os termos "tratar, tratando, tratamento" como utilizados aqui e nas reivindicações significam prevenção ou melhora das doenças associadas com infecção por HIV.
A presente descrição é também direcionada às combinações dos compostos com um ou mais agentes úteis no tratamento de AIDS. Por exemplo, os compostos desta descrição podem ser eficazmente administrados, quer nos períodos de pré-exposição e/ou pós-exposição, em combinação com quantidades eficazes dos antivirais de AIDS, imunomoduladores, antiinfecciosos, ou vacinas, tais como aqueles na seguinte tabela. <table>table see original document page 21</column></row><table> <table>table see original document page 22</column></row><table> <table>table see original document page 23</column></row><table> <table>table see original document page 24</column></row><table> <table>table see original document page 25</column></row><table> <table>table see original document page 26</column></row><table> <table>table see original document page 27</column></row><table> <table>table see original document page 28</column></row><table> <table>table see original document page 29</column></row><table> <table>table see original document page 30</column></row><table> <table>table see original document page 31</column></row><table>
Adicionalmente, os compostos da descrição inclusos podem ser utilizados em combinação com outra classe de agentes para tratar AIDS que são chamados inibidores de entrada de HIV. Exemplos de tais inibidores de entrada de HIV são descritos em DRUGS OF THE FUTURE 1999, 24(12), páginas 1355-1362; CELL1 Vol. 9, páginas 243-246, 29 de outubro de 1999; e DRUG DISCOVERY TODAY, Vol. 5, NQ. 5, Maio de 2000, páginas 183-194 e Inhibitors of the entry of HIV into host cells. Meanwell, Nicholas A.; Kadow, John F. Current Opinion in Drug Discovery & Development (2003), 6(4), 451- 461. Especificamente os compostos podem ser utilizados em combinação com outros inibidores de ligação, inibidores de fusão, e antagonistas de re- ceptor de quimiocina dirigidos ao correceptor CCR5 ou CXCR4.
Será entendido que o escopo das combinações dos compostos desta descrição com antivirais de AIDS, imunomoduladores, anti-infecciosos, inibidores de entrada de HIV ou vacinas não é limitado à lista na Tabela aci- ma porém inclui, em princípio, qualquer combinação com qualquer composi- ção farmacêutica útil para o tratamento de AIDS.
Combinações preferidas são tratamentos simultâneos ou alter- nados com um composto da presente descrição e um inibidor de HIV protea- se e/ou um inibidor de não nucleosídeo de transcriptase reversa de HIV. Um quarto componente opcional na combinação é um inibidor de nucleosídeo de transcriptase reversa de HIV, tal como AZT, 3TC, ddC ou ddl. Um inibidor de HIV protease preferido é Reyataz® (ingrediente ativo Atazanavir). Tipicamen- te uma dose de 300 a 600 mg é administrada uma vez ao dia. Este pode ser co-administrado com uma dose baixa de Ritonavir (50 a 500 mgs). Outro inibidor de HIV protease preferido é Kaletra®. Outro inibidor de HIV protease útil é indinavir, que é o sal de sulfato de etanolato de N-(2(R)-hidróxi-1-(S)-
butilcarboxamido)-piperazinil))-pentanoamida, e é sintetizado de acordo com U.S. 5.413.999. Indinavir é geralmente administrado em uma dosagem de 800 mg três vezes ao dia. Outros inibidores de protease preferidos são nelfi- navir e ritonavir. Outro inibidor de HIV protease preferido é saquinavir que é administrado em uma dosagem de 600 ou 1200 mg tid. Inibidores de não nucleosídeo preferidos de transcriptase reversa de HIV incluem efavirenz. A preparação de ddC, ddl e AZT é também descrita em EPO 0.484.071. Estas combinações podem ter efeitos inesperados sobre a limitação da extensão e j grau da infecção de HIV. Combinações preferidas incluem aquelas com os seguintes (1) indinavir com efavirenz, e, opcionalmente, AZT e/ou 3TC e/ou ddl e/ou ddC; (2) indinavir, e qualquer um de AZT e/ou ddl e/ou ddC e/ou 3TC, em particular, indinavir e AZT e 3TC; (3) estavudina e 3TC e/ou zido- vudina; (4) zidovudina e Iamivudina e 141W94 e 1592U89; (5) zidovudina e lamivudina.
Em tais combinações o composto da presente descrição e ou- tros agentes ativos podem ser administrados separadamente ou em conjun- ção. Além disso, a administração de um elemento pode ser antes, concomi- tante, ou subseqüente à administração de outros agente(s).
Combinações preferidas são tratamentos simultâneos ou alter- nados com um composto da presente descrição e um inibidor de HIV protea- se e/ou um inibidor de não nucleosídeo de transcriptase reversa de HIV. Um quarto componente opcional na combinação é um inibidor de nucleosídeo de transcriptase reversa de HIV, tal como AZT, 3TC, ddC ou ddl. Um inibidor preferido de HIV protease é indinavir, que é o sal de sulfato de etanolato de N-(2(R)-hidróxi-1-(S)-indanil)-2(R)-fenilmetil-4-(S)-hidróxi-5-(1-(4-(3-piridil- metil)-2(S)-N'-(t-butilcarboxamido)-piperazinil))-pentanoamida, e é sintetizado de acordo com U.S. 5.413.999. Indinavir é geralmente administrado em uma dosagem de 800 mg três vezes ao dia. Outros inibidores de protease prefe- ridos são nelfinavir e ritonavir. Outro inibidor preferido de HIV protease é sa- quinavir que é administrado em uma dosagem de 600 ou 1200 mg tid. Inibi- dores de não nucleosídeo preferidos de transcriptase reversa de HIV inclu- em efavirenz. A preparação de ddC, ddl e AZT é também descrita em EPO 0.484.071. Estas combinações podem ter efeitos inesperados sobre a limita- ção da extensão e grau da infecção de HIV. Combinações preferidas inclu- em aquelas com os seguintes (1) indinavir com efavirenz, e, opcionalmente, AZT e/ou 3TC e/ou ddl e/ou ddC; (2) indinavir, e qualquer um de AZT e/ou ddl e/ou ddC e/ou 3TC, em particular, indinavir e AZT e 3TC; (3) estavudina e 3TC e/ou zidovudina; (4) zidovudina e Iamivudina e 141W94 e 1592U89; (5) zidovudina e lamivudina.
Em tais combinações o composto da presente descrição e ou- tros agentes ativos podem ser administrados separadamente ou em conjun- ção. Além disso, a administração de um elemento pode ser antes, concomi- tante, ou subseqüente à administração de outros agente(s).
Abreviações
As seguintes abreviações, a maioria das quais são abreviações convencionais bem conhecidas por aqueles versados na técnica, são utiliza- das em toda a descrição da invenção e nos exemplos. Algumas das abrevia- ções utilizadas são como segue:
<table>table see original document page 33</column></row><table> P-EDC 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida polímero EDC 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida DMF N,N-dimetilformamida Base de Hunig = N,N-diisopropiletilamina MCPBA ácido meía-cloroperbenzóico azaindole = 1H-pirrolo-piridina 4-azaindole = 1 H-pirrolo[3,2-£>]piridina 5-azaindole = 1 H-pirrolo[3,2-c]piridina 6-azaindole = 1 H-pirrolo[2,3-c]piridina 7-azaindole = 1 H-pirrolo[2,3-b]piridina PMB 4-metoxibenzila DDQ 2, 3-dicloro-5, 6-diciano-1,4-benzoquinona OTf trifluorometanossulfonóxi NMM 4-metilmorfolina PIP-COPh = 1-benzoilpiperazina NaHMDS = hexametildisilazida de sódio EDAC 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida TMS trimetilsilila DCM diclorometano DCE dicloroetano MeOH metanol THF tetraidrofurano EtOAc acetato de etila LDA diisopropilamida de lítio TMP-Li 2,2,6,6-tetrametilpiperidinil lítio DME dimetoxietano DIBALH = hidreto de diisobutilalumínio HOBT 1 -hidroxibenzotriazol CBZ benziloxicarbonila PCC clorocromato de piridínio
Os compostos da presente descrição podem ser administrados oralmente, parenteralmente (incluindo injeções subcutâneas, injeção intra- venosa, intramuscular, intraesternal ou técnicas de infusão), por spray de inalação, ou retalmente, em formulações de dosagem única contendo veícu- los, adjuvantes e diluentes farmaceuticamente aceitáveis não tóxicos convencionais.
Desse modo, de acordo com a presente descrição, é também fornecido um método de tratamento e uma composição farmacêutica para tratamento de infecções virais tais como infecção por HIV e AIDS. O trata- mento envolve administrar a um paciente em necessidade de tal tratamento uma composição farmacêutica compreendendo um veículo farmacêutico e uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da presente descrição.
A composição farmacêutica pode ser na forma de comprimidos ou suspensões oralmente administráveis; sprays nasais, preparações injetá- veis estéreis, por exemplo, como suspensões oleosas ou aquosas injetáveis estéreis ou supositórios.
Ao mesmo tempo que administradas oralmente como uma sus- pensão, estas composições são preparadas de acordo com técnicas bem conhecidas na arte de formulação farmacêutica e podem conter celulose microcristalina para conferir volume, ácido algínico ou alginato de sódio co- mo um agente de suspensão, metilcelulose como um realçador de viscosi- dade, e agentes adoçantes/aromatizantes conhecidos na técnica. Como comprimidos de liberação imediata, estas composições podem conter celu- lose microcristalina, fosfato dicálcico, amido, estearato de magnésio e Iacto- se e/ou outros excipientes, aglutinantes, estensores, desintegrantes, diluen- tes, e lubrificantes conhecidos na técnica.
As suspensões ou soluções injetáveis podem ser formuladas de acordo com a técnica conhecida, utilizando diluentes ou solventes parente- ralmente aceitáveis, não tóxicos adequados, tais como manitol, 1,3-buta- nodiol, água, solução de Ringer ou solução de cloreto de sódio isotônica, ou agentes de suspensão e umectantes ou dispersantes adequados, tais como óleos fixos, brandos, estéreis, incluindo mono- ou diglicerídeos sintéticos, e ácidos graxos, incluindo ácido oléico.
Os compostos desta descrição podem ser administrados oral- mente aos humanos em uma faixa de dosagem de 1 a 100 mg/kg de peso corporal em doses divididas. Uma faixa de dosagem preferida é 1 a 10 mg/kg de peso corporal oralmente em doses divididas. Outra faixa de dosa- gem preferida é 1 a 20 mg/kg de peso corporal em doses divididas. Será entendido, entretanto, que o nível de dose específico e freqüência de dosa- gem para qualquer paciente particular podem ser variados e dependerão de uma variedade de fatores incluindo a atividade do composto específico em- pregado, a estabilidade metabólica e extensão da ação daquele composto, a lidade, peso corporal, saúde geral, sexo, dieta, modo e tempo de administra- ção, taxa de excreção, combinação de fármaco, a severidade da condição particular, e o hospedeiro que passa pela terapia.
Química
A presente descrição compreende compostos de Fórmula I, suas formulações farmacêuticas, e seu uso em pacientes sofrendo de ou suscetí- veis a infecção por HIV. Os compostos de Fórmula I incluem sais farmaceu- ticamente aceitáveis destes. Procedimentos gerais para construir compostos de Fórmula I e intermediários úteis para sua síntese são descritos nos se- guintes Esquemas.
Esquemas Químicos:
Preparação de Compostos de Fórmula I
A preparação de A-CO-CO-Cl e A-CO-CO-OH padrões foi des- crita em detalhes em US6469006B1, US6573262B2, US6900323B2, US20050090522A1, US6825201, US20050261296A1, US20040186292A1, US20050267130A1, US6900206B2, US20040063746, W0-00076521, WO- 00162255, W0-00204440, W0-02062423, W0-02085301, W0-03068221 e US-2004/0063744.
Um químico versado na técnica é ciente de muitas condições padrão para reagir uma amina com um haleto de acila 1 (Esquema 1) e áci- do carboxílico 4 (Esquema 2) que pode ser utilizado para converter o cloreto ácido ou ácido nos produtos de amida desejados. Algumas referências ge- rais destas metodologias e instruções para uso estão contidas em "Compre- hensive Organic Transformation" por Richard C. Larock, Wiley-VCH, New York, 1989, 972 (Ácidos carboxílicos a amidas), 979 (haletos ácidos a amidas).
Esquema 1
<formula>formula see original document page 37</formula>
(compostos de Fórmula I ou precursores)
Esquema 1 representa um método geral para formação de uma amida de amidina de piperazina 2 e cloreto de acila 1. Uma base apropriada (de catalí- tica a uma quantidade em excesso) selecionada de hidreto de sódio, carbo- nato de potássio, trietilamina, DBU, piridina, DMAP ou di-isopropil etil amina foi adicionada em uma solução de agente 2 e cloreto de acila em um solven- te apropriado selecionado de diclorometano, clorofórmio, benzeno, tolueno, THF, éter dietílico, dioxano, acetona, Ν,Ν-dimetilformamida ou piridina em temperatura ambiente. A reação foi realizada em temperatura ambiente ou temperatura ideal experimentalmente determinada até 150QC durante um período de tempo (30 minutos a 16 horas) para fornecer compostos 3 que podem ser compostos de Fórmula I ou precursores. Algumas referências selecionadas envolvendo tais reações incluem a) Indian J. Chem., Sect B 1990, 29, 1077; 2) Chem. Sei. 1998, 53, 1216; 3) Chem. Pharm. Buli. 1992, 40, 1481; 4) Chem. Heterocyci Compd. 2002, 38, 539.
Esquema 2
<formula>formula see original document page 37</formula>
Alternativamente, como mostrado no Esquema 2, estrutura 2 pode ser acoplada com um ácido 4 utilizando-se reagentes de acoplamento de formação de ligação de peptídeo ou ligação de amida padrão. Muitos re- agentes para acoplamentos de ligação de amida são conhecidos por um quí- mico orgânico versado na técnica e quase todos destes são aplicáveis para realizar produtos de amida acoplada. As combinações de EDAC e trietilami- na em tetraidrofurano ou BOPCI e diisopropil etil amina em clorofórmio foram utilizadas mais freqüentemente porém DEPBT, ou outros reagentes de aco- plamento tal como PiBop podem ser utilizados. Outra condição de acopla- mento útil emprega HATU ((a) J.Chem.Soc. Chem Comm. 1994, 201; (b) J. Am. Chem. Soe. 1994, 116,11580). Adicionalmente, DEPBT (3-(dietoxifos- forilóxi)-1,2,3-benzotriazin-4(3H)-ona) e N,N-diisopropiletilamina, comumente conhecida como Base de Hunig, representam outro método eficiente de for- mar a ligação de amida e fornecer compostos de Fórmula I. DEPBT é adqui- rido de Adrich ou preparado de acordo com o procedimento descrito em Or- ganic Lett., 1999, 1, 91. Tipicamente um solvente inerte tal como DMF ou THF é utilizado porém outros solventes apróticos podem ser utilizados.
O agente geral 2 cujos usos são exemplificados nos Esquemas 1 e 2, é comercialmente disponível ou pode ser preparado pelos métodos gerais descritos na seção experimental. Alguns exemplos não Iimitantes de reagentes comercialmente disponíveis ou sintetizados 2 são listados abaixo:
<formula>formula see original document page 38</formula> <formula>formula see original document page 39</formula> <formula>formula see original document page 40</formula>
Quando X for N na Fórmula I, ele poderá ser também preparado por acoplamento de cloreto de acila 1 ou ácido 4 com piperazina Boc- protegida sob as condições descritas nos Esquemas 1 e 2, para fornecer o composto 5. A seguinte desproteção bem estabelecida de grupo Boc sob condições acídicas forneceu amida de piperazina 6. TFA e HCI aquoso são os ácidos típicos utilizados para executar remoção do grupo Boc, enquanto os solventes mais comumente utilizados são éter ou diclorometano. TFA po- de ser empregado tanto como reagente quanto solvente em alguns exem- plos. Outros agentes acídicos tais como ácido fórmico e solventes podem também ser utilizados para executar remoção de BOC. A amida 6 pode rea- gir com haleto sob SN2, SNAr e acoplamento cruzado mediado por metal pa- ra fornecer o composto 3 (compostos de Fórmula I ou precursores).
Esquema 3
<formula>formula see original document page 40</formula> Esquema 4
<formula>formula see original document page 41</formula>
Para reação de SN2 e SNAr, em um solvente aprótico (por exem- plo, THF, DMF, DMSO, benzeno) ou prótico (por exemplo, MeOH, EtOH1 PrOH, BuOH), em temperatura da temperatura ambiente a 150°C, na ausên- cia ou presença de base tal como NaH, piridina, Et3N, di-Pr2NEt, Na2CO3, K2CO3, amida de piperazina 6 pode reagir com haleto ou sulfona de heteroa- rila 7 para fornecer o composto 3.
Para acoplamento cruzado mediado por metal, a temperatura pode variar da temperatura ambiente a 150°C e solventes prefere-se que sejam solventes apróticos tais como THF, dioxano, DME, DMF e DMSO. Ba- ses podem ser selecionadas de NaH, KH, piridina, Et3N, di-Pr2NEt, Na2CO3, K2CO3, NaHMDS, LiHMDS, KHMDS, Na3PO4, Na2HP04 e NaH2PO4. Agen- tes Pd, Rh, Ru, Ni ou Pt podem ser utilizados como catalisadores.
EXEMPLOS
Os seguintes exemplos ilustram sínteses típicas dos compostos de Fórmula I como descrito de modo geral acima. Estes exemplos são ilus- trativos apenas e não se destinam a limitar a descrição de modo algum. Os reagentes e materiais de partida são facilmente disponíveis para alguém versado na técnica.
Química
Procedimentos Típicos e Caracterização de Exemplos Selecionados:
A menos que de outro modo estabelecido, solventes e reagentes foram utilizados diretamente como obtidos de fontes comerciais, e as rea- ções foram realizadas sob uma atmosfera de nitrogênio. Cromatografia flash foi conduzida em Sílica gel 60 (0,040 - 0,063 de tamanho de partícula; EM Science supply). Espectros de 1H RMN foram registrados em Bruker DRX- 500f a 500 MHz (ou Bruker DPX-300B ou Varian Gemini 300 a 300 MHz co- mo estabelecido). Os deslocamentos químicos foram reportados em ppm na escala δ relativa a 5TMS = 0. As seguintes referências internas foram utiliza- das para os prótons residuais nos seguintes solventes: CDCl3 (Ôh 7,26), CD3OD (δΗ 3,30), e DMSO-c/6 (δΗ 2,50). Acrônimos padrão foram emprega- dos para descrever os padrões de multiplicidade: s (singleto), d (dubleto), t (tripleto), q (quarteto), m (multipleto), b (amplo), app (evidente). A constante de acoplamento (J) é em Hertz. Todos os dados de Cromatografia Líquida (LC) foram registrados em uma cromatografia líquida Shimadzu LC-10AS utilizando um detector SPD-10AV UV-Vis com dados de Espectrometria de Massa (MS) determinados utilizando uma Micromass Piatform para LC em modo de eletrovaporização.
Todos os dados de Cromatografia Líquida (LC) foram registra- dos em uma cromatografia líquida Shimadzu LC-10AS utilizando um detector SPD-10AV UV-Vis com dados de Espectrometria de Massa (MS) determina- dos utilizando uma Micromass Platform para LC em modo de eletrovaporização.
A preparação de A-CO-CO-Cl e A-CO-CO-OH padrões a menos que especificamente observado foi descrita em detalhes em US6469006B1, US6573262B2, US6900323B2, US20050090522A1, US6825201, US20050261296A1, US20040186292A1, US20050267130A1, US6900206B2, US20040063746, WO-00076521, WO-00162255, WO-00204440, WO- 02062423, W0-02085301, W0-03068221 ou US-2004/0063744. Mais espe- cificamente, a preparação de 7-bromo-4-fluoro-1H-pirrolo[2,3-c]piridina, áci- do 2-(4-fluoro-7-(1 H-1,2,3-triazol-1 -il)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-oxoacé- tico, ácido 2-(4-metóxi-7-(1H-1,2,3-triazol-1 -il)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2- oxoacético, ácido 2-(7-cloro-4-metóxi-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-oxoacé- tico, e ácido 2-(4-metóxi-7-(3-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)-1H-pirrolo[2,3-c]pi- ridin-3-il)-2-oxoacético foi como descrita em US20050090522A1. Seção A Química de Exemplo
Os seguintes métodos gerais aplicam-se à Seção A Química de Exemplo:
Métodos LC/MS (isto á, identificação de composto)
Coluna A: Coluna Xterra MS C18 5 μm 4,6 χ 30 mm
Coluna B: Coluna Fenomenex 5 μm C18 4,6 χ 30 mm
Coluna C: Coluna Xterra MS C18 4,6 χ 30 mm
Coluna D: Coluna Fenomenex 4,6 χ 50 mm C18 5 μm
Coluna E: Coluna Xterra 4,6 χ 30mm S5
Coluna F: Coluna Fenomenex-Luna 4,6 χ 50 mm S10
Coluna G: Coluna Fenomenex 10 μm 3,0x50 mm
Coluna H: Coluna Fenomenex-Luna 4,6 χ 30 mm S5
Coluna I: Coluna Fenomenex 4,6 χ 30 mm 10 μm
Coluna J: Coluna Fenomenex C18 10 μm 3,0 χ 50 mm
Coluna Κ: Coluna Fenomenex, Onyx Monolithic C18 50 χ 4,6 mm
Gradiente: 100% de Solvente A / 0% de Solvente B a 0% de Solvente A /
100% de Solvente B
Tempo gradiente: Toda a LC-MS, exceto se for especificada de outro modo, utiliza 2 minutos de tempo gradiente.
Tempo de manutenção: 1 minuto
Taxa de fluxo: a. 5 ml/min
b. 4 ml/min
(Toda a LC-MS, exceto se for especificada utilizando a taxa de fluxo b, foi obtida utilizando a taxa de fluxo a.)
Comprimento de onda de detector: 220 nm
Sistema solvente I
Solvente A: 10% de MeOH / 90% de H2O / Ácido Trifluoroacétido a 0,1 %
Solvente B: 10% de H2O / 90% de MeOH / Ácido Trifluoroacétido a 0,1 %
Sistema solvente II
Solvente A: 5% de MeCN / 95% de H2O /10 mm de acetato de amônio
Solvente B: 95% de MeCN / 5% de H2O /10 mm de acetato de amônio
(Toda a LC-MS nas seções seguintes, exceto se for especificada utilizando o Sistema solvente II, foi obtida utilizando o Sistema solvente I.)
Compostos purificados por HPLC preparativa foram diluídos em metanol (1,2 ml) e purificados utilizando os seguintes métodos em um siste- ma de HPLC preparativa automatizado Shimadzu LC-10A.
Método de HPLC Preparativo (isto é, purificação do composto)
Método de purificação: Rampa gradiente inicial (40% de B, 60% de A) para gradiente final (100% de B1 0% de A) durante 20 minutos, manti- da durante 3 minutos (100% de B, 0% de A)
Solvente A: 10% de MeOH / 90% de H2O / Ácido Trifluoroacétido a 0,1 %
Solvente B: 10% de H2O / 90% de MeOH / Ácido Trifluoroacétido a 0,1 %
Coluna: Coluna YMC C18 S5 20 χ 100 mm
Comprimento de onda de detector: 220 nm
Procedimentos Típicos e Caracterização de Exemplos Selecionados:
Preparação de agente 2
Método A
<formula>formula see original document page 44</formula>
Um excesso de piperazina (5-10 eq.) foi adicionado a uma solu- ção de eletrófilo em THF1 dioxano ou DMF. A reação foi agitada durante 17 horas em temperatura ambiente ou 115QC, em seguida saciada com NaH- CO3 aquoso saturado. A fase aquosa foi extraída com EtOAc. A camada or- gânica combinada foi lavada com água e secada sobre MgS04, filtrada, e o filtrado concentrado em um resíduo, que foi utilizado nas outras reações sem purificação, ou purificado por cromatografia de coluna de sílica gel ou Siste- ma de HPLC Preparativa automatizada Shimadzu.
Método B
<formula>formula see original document page 44</formula>
Um excesso de base (1 - 20 eq., tal como Et3N, IPr2NEt ou NaH), foi adicionado a uma solução de piperazina de N-Boc (2 - 5 eq.) em THF, dioxano ou DMF1 seguido por adição de eletrófilo (1 eq.). A reação foi agita- da durante 17 horas em temperatura ambiente ou 115°C, em seguida sacia- da com NaHCO3 aquoso saturado. A fase aquosa foi extraída com EtOAc. A camada orgânica combinada foi secada sobre MgSO4, filtrada, e o filtrado concentrado em um resíduo, que foi utilizado nas outras reações sem purifi- cação, ou purificado por cromatografia de coluna de sílica gel ou Sistema de HPLC Preparativa automatizada Shimadzu.
Derivado de piperazina de N-Boc foi dissolvido em uma solução acídica de TFA ou HCl em CH2Cl2, éter, dioxano ou álcool. Após 0,5 a 17 horas, a solução foi concentrada sob vácuo para fornecer um resíduo de sal, que foi dividido entre NaHCO3 aquoso e EtOAc. A fase aquosa foi extraída com EtOAc. A camada orgânica combinada foi secada sobre MgSO4, filtra- da, e o filtrado concentrado em um resíduo, que foi utilizado nas outras rea- ções sem purificação, ou purificado por cromatografia de coluna de sílica gel ou Sistema de HPLC Preparativa automatizada Shimadzu.
Método C
<formula>formula see original document page 45</formula>
A uma solução agitada de piperazina (2 eq.) em THF seco foi adicionadp n-BuLi (2 a 4 eq.) em THF em temperatura ambiente. Após agita- ção durante 0,5 hora em temperatura ambiente, haleto de arila (1 eq.) foi adicionado à solução de ânion e a mistura reacional foi agitada durante mais 1 a 17 horas em temperatura ambiente a 115°C. A mistura reacional foi saci- ada com MeOH, e os solventes evaporados. O resíduo foi dividido entre E- tOAc e NaHCO3 saturado. A camada aquosa foi extraída com EtOAc. A ca- mada orgânica foi secada sobre MgSO4 e concentrada para fornecer o pro- duto cru, que foi purificado por cromatografia de coluna de sílica gel ou Sis- tema de HPLC Preparativa automatizada Shimadzu.
Método D
<formula>formula see original document page 45</formula> A uma solução de derivado de metil tio (1 eq.) em CH2CI2 seco ou HOAc foi adicionado mCPBA (2-5 eq.) em temperatura ambiente. Após agitação durante 17 horas em temperatura ambiente, a mistura reacional foi saciada com NaHS03, e os solventes evaporados. O resíduo foi dividido en- tre EtOAc e NaHCO3 saturado. A camada aquosa foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi secada sobre MgSO4 e concentrada para fornecer o produto cru, que foi purificado por cromatografia de coluna de sílica gel ou Sistema de HPLC Preparativa automatizada Shimadzu.
Um excesso de piperazina (5-10 eq.) foi adicionado a uma solu- ção de derivado de sulfona ou sulfóxido em 1-butanol ou 1-pentanol. A rea- ção foi refluxada durante 17 horas. Após resfriamento, a reação foi saciada com NaHCO3 aquoso saturado. A fase aquosa foi extraída com EtOAc. A camada orgânica combinada foi lavada com água e secada sobre MgSO4, filtrada, e o filtrado concentrado em um resíduo, que foi utilizado nas outras reações sem purificação, ou purificado por cromatografia de coluna de sílica gel ou Sistema de HPLC Preparativa automatizada Shimadzu.
Método E
<formula>formula see original document page 46</formula>
A uma solução de derivado de álcool (1 eq.) em piridina seca foi adicionado Ts-Cl (1-2 eq.) em temperatura ambiente. Após agitação durante 17 horas em temperatura ambiente, os solventes foram evaporados. O resí- duo foi dividido entre EtOAc e NaHCO3 saturado. A camada aquosa foi ex- traída com EtOAc. A camada orgânica foi secada sobre MgSO4 e concentra- da para fornecer o produto cru, que foi purificado por cromatografia de colu- na de sílica gel ou Sistema de HPLC Preparativa automatizada Shimadzu.
Uma mistura de um excesso de piperazina (5-10 eq.) e tosilato (1 eq.) em tubo selado foi aquecida a 115°C a 170°C durante 1 a 17 horas. Após resfriamento, a reação foi saciada com NaHCO3 aquoso saturado. A fase aquosa foi extraída com EtOAc. A camada orgânica combinada foi Ia- vada com água e secada sobre MgSO4, filtrada, e o filtrado concentrado em um resíduo, que foi utilizado nas outras reações sem purificação, ou purifi- cado por cromatografia de coluna de sílica gel ou Sistema de HPLC Prepara- tiva automatizada Shimadzu.
Método F
<formula>formula see original document page 47</formula>
A uma solução de derivado de dialeto (1 eq.) em THF seco ou dioxano ou DMF foi adicionada amina (1-1,5 eq.) sozinha ou álcool (1-1,5 eq.) com NaH (1-5 eq.) em temperatura ambiente. Após agitação durante 17 horas em temperatura ambiente ou 115°C, derivado de piperazina (1-5 eq.) foi adicionado e a mistura resultante foi aquecida até 115°C durante 1 hora a 1 semana. Em seguida, os solventes foram evaporados. O resíduo foi dividi- do entre EtOAc e NaHCO3 saturado. A camada aquosa foi extraída com E- tOAc. A camada orgânica foi lavada com água, secada sobre MgSO4 e con- centrada para fornecer o produto cru, que foi purificado por cromatografia de coluna de sílica gel ou Sistema de HPLC Preparativa automatizada Shimadzu.
Método G
<formula>formula see original document page 47</formula>
A uma solução de derivado de piperidina N-Boc (1 eq.) e um nu- cleófilo tal como uma amina (1-5 eq.) em THF seco ou dioxano ou DMF foi adicionado IPr2Net (1-10 eq.) em um tubo selado. A reação foi aquecida para 115°C a 170°C durante 1-17 horas antes do resfriamento. Em seguida, a mistura reacional foi saciada com NaHCO3. A camada aquosa foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi secada sobre MgSO4 e concentrada para fornecer o produto cru, que foi purificado por cromatografia de coluna de síli- ca gel ou Sistema de HPLC Preparativa automatizada Shimadzu.
Derivado de piperidina N-Boc foi dissolvido em uma solução ací- dica de TFA ou HCl em CH2CI2, éter, dioxano ou álcool. Após 0,5 a 17 horas, a solução foi concentrada sob vácuo para fornecer um resíduo de sal, que foi dividido entre NaHCO3 aquoso e EtOAc. A fase aquosa foi extraída com E- tOAc. A camada orgânica combinada foi secada sobre MgSO4, filtrada, e o filtrado concentrado em um resíduo, que foi utilizado nas outras reações sem purificação, ou purificado por cromatografia de coluna de sílica gel ou Siste- ma de HPLC Preparativa automatizada Shimadzu.
Método H
<formula>formula see original document page 48</formula>
A uma solução de derivado de amina de piperidina ou piperazina (1-2 eq.) e um éster insaturado (1 eq.) em THF seco ou dioxano foi adiciona- do NaOMe (1-10 eq.). A reação foi agitada em temperatura ambiente ou 120°C durante 1-17 horas. Os solventes foram removidos sob vácuo e o re- síduo foi dividido entre NaHCO3 e EtOAc. A camada aquosa foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi secada sobre MgSO4 e concentrada para fornecer o produto de Iactam cru, que foi purificado por cromatografia de coluna de sílica gel ou Sistema de HPLC Preparativa automatizada Shimadzu.
LiAlH4 (1-5 eq.) foi adicionado em uma solução de derivado de lactam (1 eq.) em THF seco a OgC. A reação foi agitada em temperatura am- biente durante 17 horas antes de ser saciada por MeOH. Os solventes foram removidos sob vácuo e o resíduo foi dividido entre NaHCO3 e EtOAc. A ca- mada aquosa foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi secada sobre MgSO4 e concentrada para fornecer o produto de Iactam cru, que foi purifi- cado por cromatografia de coluna de sílica gel ou Sistema de HPLC Prepara- tiva automatizada Shimadzu.
Método I
<formula>formula see original document page 48</formula>
Em temperatura ambiente, Mel (1-5 eq.) foi adicionado em uma solução de derivado de tio (1 eq.) com KOH (5-10 eq.) em água ou com NaH (5-10 eq.) em THF, dioxano ou DMF. A reação foi agitada em temperatura ambiente durante 1 a 17 horas. Os solventes foram removidos sob vácuo e o resíduo foi dividido entre NaHCO3 e EtOAc. A camada aquosa foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi secada sobre MgS04 e concentrada para fornecer o produto de metil tio cru, que foi purificado por cromatografia de coluna de sílica gel ou Sistema de HPLC Preparativa automatizada Shimadzu.
A uma solução de derivado de metil tio (1 eq.) em CH2CI2 seco ou HOAc foi adicionado mCPBA (2-5 eq.) em temperatura ambiente. Após agitação durante 17 horas em temperatura ambiente, a mistura reacional foi saciada com NaHS03, e os solventes evaporados. O resíduo foi dividido en- tre EtOAc e NaHCO3 saturado. A camada aquosa foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi secada sobre MgSO4 e concentrada para fornecer o(s) produto(s) cru(s), derivado de sulfona ou/e sulfóxido, que foi purificado por cromatografia de coluna de sílica gel ou Sistema de HPLC Preparativa au- tomatizada Shimadzu.
Derivado de Sulfona ou sulfóxido (1 eq.) foi adicionado na solu- ção de THF de ânion de piperazina (5-10 eq.) que foi preparado de piperazi- na e BuLi (eq. de BuLi / eq. de piperazina = 1 a 2) em temperatura ambiente em THF seco. A reação foi agitada em temperatura ambiente ou refluxada durante 17 horas. Após resfriamento, a reação foi saciada com NaHCO3 a- quoso saturado. A fase aquosa foi extraída com EtOAc. A camada orgânica combinada foi lavada com água e secada sobre MgSO4, filtrada, e o filtrado concentrado em um resíduo, que foi utilizado nas outras reações sem purifi- cação, ou purificado por cromatografia de coluna de sílica gel ou Sistema de HPLC Preparativa automatizada Shimadzu.
Método J
<formula>formula see original document page 49</formula>
Derivado de hidroxila ou tio (1 eq.) foi adicionado no POCl3 ou POBr3 com ou sem DMF. A reação foi aquecida para 100°C a 170°C durante 1 a 17 horas. Após resfriamento, a reação foi saciada com NaHCO3 aquoso saturado. A fase aquosa foi extraída com EtOAc. A camada orgânica combi- nada foi lavada com água e secada sobre MgSO4, filtrada, e o filtrado con- centrado em um resíduo, que foi utilizado nas outras reações sem purifica- ção, ou purificado por cromatografia de coluna de sílica gel ou Sistema de HPLC Preparativa automatizada Shimadzu.
Uma mistura de um excesso de piperazina (5-10 eq.) e haleto (1 eq.) em BuOH, PnOH, THF, dioxano ou DMF foi agitada em temperatura ambiente ou aquecida a 170°C durante 1 a 17 horas. Catalisador de Cu ou Pd pode ser utilizado. A reação foi saciada com NaHCO3 aquoso saturado. A fase aquosa foi extraída com EtOAc. A camada orgânica combinada foi la- vada com água e secada sobre MgSO4, filtrada, e o filtrado concentrado em um resíduo, que foi utilizado nas outras reações sem purificação, ou purifi- cado por cromatografia de coluna de sílica gel ou Sistema de HPLC Prepara- tiva automatizada Shimadzu.
Tabela A-1
<table>table see original document page 50</column></row><table> <table>table see original document page 51</column></row><table> <table>table see original document page 52</column></row><table> <table>table see original document page 53</column></row><table> <table>table see original document page 54</column></row><table> <table>table see original document page 55</column></row><table> <table>table see original document page 56</column></row><table> <table>table see original document page 57</column></row><table> <table>table see original document page 58</column></row><table> <table>table see original document page 59</column></row><table>
Preparação do composto 3
Método A
<formula>formula see original document page 59</formula>
EteN ou IPr2NEt (1 -100 eq.) foi adicionado em uma solução de cloreto de 2-ceto acila (1 eq.) e derivado de piperazina ou piperidina (1 - 5 eq.) em um solvente aprótico (tal como THF, DMF, dioxano, éter, acetonitri- lo) e a reação foi agitada em temperatura ambiente ou 50°C ou 80°C ou 115°C durante 17 horas antes de ser saciada com solução de NaHCO3 a- quoso saturado. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila. A fase orgânica combinada e secada sobre MgS04 anidroso. Concentração em vácuo forneceu um produto cru, que foi purificado por titulação, ou recristali- zação, ou cromatografia de coluna de sílica gel, ou Sistema de HPLC Prepa- rativa automatizada Shimadzu. Método B
<formula>formula see original document page 60</formula>
Ácido 2-Ceto (1 eq.), piperazina (1 - 5 eq.), 3-(dietoxifosforilóxi)- 1,2,3-benzotriazin-4(3H)-ona (DEPBT) ou tetrafluoroborato de 0-(1H- benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametilurônio (TBTU) (1 - 5 eq.) e Base de Hu- nig ou N-metil morfolina (1- 100 eq.) foram combinados em THF ou DMF. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 17 horas. THF ou DMF foi removido por meio de evaporação em pressão reduzida e o resíduo foi dividido entre acetato de etila e 5 - 10% de solução aquosa de Na2CO3. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila. A fase orgânica combinada e secada sobre MgSO4 anidroso. Concentração em vácuo forneceu um pro- duto cru, que foi purificado por titulação, ou recristalização, ou cromatografia de coluna de sílica gel, ou Sistema de HPLC Preparativa automatizada Shi- madzu.
Método C
<formula>formula see original document page 60</formula>
Et3N ou IPr2NEt (1 -100 eq.) foi adicionado em uma solução de cloreto de 2-ceto acila (1 eq.) e Boc-piperazina (1 -5 eq.) em um solvente aprótico (tal como THF, DMF1 dioxano, éter, acetonitrilo) e a reação foi agi- tada em temperatura ambiente ou 50-C ou 80°C ou 115°C durante 17 horas antes de ser saciada com solução de NaHCO3 aquoso saturado. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila. A fase orgânica combinada e seca- da sobre MgSO4 anidroso. Concentração em vácuo forneceu um produto cru, que foi purificado por titulação, ou recristalização, ou cromatografia de coluna de sílica gel, ou Sistema de HPLC Preparativa automatizada Shimad- zu.
Derivado de ceto amida de piperazina de N-Boc foi dissolvido em uma solução acídica de TFA ou HCI em CH2Cl2, éter, dioxano ou álcool. Após 0,5 a 17 horas, a solução foi concentrada sob vácuo para fornecer um resíduo de sal, que foi utilizado na próxima etapa sem purificação. Ou, sal precipitou-se da solução, que foi lavada com CH2Cl2, éter, dioxano ou álcool antes do outro uso.
Um excesso de base (1 - 20 eq., tal como Et3N, IPr2NEt ou NaH), foi adicionado a uma solução de piperazina de 2-ceto acila (1 eq.) em THF ou DMF, seguido por adição de eletrófilo (1 a 10 eq.). A reação foi agitada durante 17 horas em temperatura ambiente ou 115°C, em seguida saciada com NaHCO3 aquoso saturado. A fase aquosa foi extraída com EtOAc. A camada orgânica combinada foi secada sobre MgSO4, filtrada, e o filtrado concentrado em um resíduo, que foi utilizado nas outras reações sem purifi- cação, ou purificado por cromatografia de coluna de sílica gel ou Sistema de HPLC Preparativa automatizada Shimadzu.
Método D
<formula>formula see original document page 61</formula>
Ácido 2-Ceto (1 eq.), piperazina de N-Boc (1 - 5 eq.), 3- (dietoxifosforilóxi)-1,2,3-benzotriazin-4(3H)-ona (DEPBT) ou tetrafluoroborato de 0-(1 H-benzotriazol-1 -il)-N,N,N',N'-tetrametilurônio (TBTU) (1 - 5 eq.) e Base de Hunig (1- 100 eq.) foram combinados em THF ou DMF. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 17 horas. THF ou DMF foi re- movido por meio de evaporação em pressão reduzida e o resíduo foi dividido entre acetato de etila e 5 - 10% de solução aquosa de Na2CO3. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila. A fase orgânica combinada e seca- da sobre MgSO4 anidroso. Concentração em vácuo forneceu um produto cru, que foi purificado por titulação, ou recristalização, ou cromatografia de coluna de sílica gel, ou Sistema de HPLC Preparativa automatizada Shimadzu.
Derivado de ceto amida de piperazina de N-Boc foi dissolvido em uma solução acídica de TFA ou HCI em CH2CI2, éter, dioxano ou álcool. Após 0,5 a 17 horas, a solução foi concentrada sob vácuo para fornecer um resíduo de sal, que foi utilizado na próxima etapa sem purificação. Ou, sal precipitou-se da solução, que foi lavada com CH2CI2, éter, dioxano ou álcool antes do outro uso.
Um excesso de base (1 - 20 eq., tal como Et3N, iPr2NEt ou NaH), foi adicionado a uma solução de piperazina de 2-ceto acila (1 eq.) em THF ou DMF, seguido por adição de eletrófilo (1 a 10 eq.). A reação foi agitada durante 17 horas em temperatura ambiente ou 115gC, em seguida saciada com NaHCO3 aquoso saturado. A fase aquosa foi extraída com EtOAc. A camada orgânica combinada foi secada sobre MgSO4, filtrada, e o filtrado concentrado em um resíduo, que foi utilizado nas outras reações sem purifi- cação, ou purificado por cromatografia de coluna de sílica gel ou Sistema de HPLC Preparativa automatizada Shimadzu.
Método E
<formula>formula see original document page 62</formula>
A um tubo selado, haleto de azaindol ou indol (brometo ou clore- to), agente boro ou estanano (1 - 20 eq.), catalisador de Pd (incluindo porém não limitado a Pd(PPh3)4, Pd(PPh3)2CI2, Pd(OAc)2, Pd2(dba)3, PdCI2(dppf)2, 0,05 - 2 eq.), base (incluindo porém não limitada a Na2CO3, K2CO3, Cs2CO3, Na2HPO3, NaH2PO3, Na3PO4, NaOAc, NaOEt, NaOtBu, Et3N, iPr2NEt, NaH, K2HPO3, KH2PO3, K3PO4, KOAc, KOEt, KOtBu, 1 - 20 eq.) foram combina- dos em dioxano, tolueno ou DMF na presença de ou na ausência de água, com ou sem utilização de um ligando (incluindo porém não limitado a BINOL, BINAP, 2,2'-bipiridila, tri-alquilfosfina, dppe, dppf, AsPh3, 1 - 2 eq.). A reação foi aquecida a 50 - 170°C durante 2 -17 h. Após a mistura ser resfriada para rt, ela foi vertida em água. A solução foi extraída com EtOAc ou diclorometa- no. O extrato combinado foi concentrado para fornecer um resíduo que foi purificado por cromatografia de coluna de sílica gel ou Sistema de HPLC Preparativa automatizada Shimadzu.
Tabela A-2
<table>table see original document page 63</column></row><table> <table>table see original document page 64</column></row><table> <table>table see original document page 65</column></row><table> <table>table see original document page 66</column></row><table> <table>table see original document page 67</column></row><table> <table>table see original document page 68</column></row><table> Tempo de interrupção: Tempo gradiente + 1 minuto
Concentração de partida: 0% de B
Eluente A: 10 % de MeOH / 90 % de H2O com TFA a 0,1 %
Eluente B: 90 % de MeOH /10% de H2O com TFA a 0,1 %
Coluna: Fenomenex-Iuna 10u C18 3,0 χ 50 mm
Método 3
Tempo gradiente: 2 min
Taxa de fluxo: 5 mL/min
Tempo de interrupção: Tempo gradiente + 1 minuto Concentração de partida: 0% de B
Eluente A: 5 % de ACN / 95 % de H2O com 10 mm de acetato de amônio
Eluente B: 95 % de ACN / 5 % de H2O com 10 mm de aceta- to de amônio
Coluna: Luna 4,6 χ 500 mm S10
Método 4
Tempo gradiente:
Taxa de fluxo:
Tempo de interrupção:
Concentração de partida:
Método 5
3 min
4 mL/min
Tempo gradiente + 1 minuto 0% de B
Eluente A: 10 % de MeOH / 90 % de H2O com TFA a 0,1%
Eluente B: 90 % de MeOH /10% de H2O com TFA a 0,1%
Coluna: Fenomenex-Iuna 10u C18 3,0 χ 50 mm
Tempo gradiente: 4 min
Taxa de fluxo: 4 mL/min
Tempo de interrupção: Tempo gradiente + 1 minuto Concentração de partida: 0% de B
Eluente A: 10 % de MeOH / 90 % de H2O com TFA a 0,1 %
Eluente B: 90 % de MeOH /10% de H2O com TFA a 0,1 %
Coluna: Fenomenex-Iuna 10u C18 3,0 χ 50 mm
Método 6 Tempo gradiente: 3 min
Taxa de fluxo: 4 mL/min
Tempo de interrupção: Tempo gradiente + 1 minuto
Concentração de partida: 0% de B
Eluente A: 10 % de MeOH / 90 % de H2O com TFA a 0,1 %
Eluente B: 90 % de MeOH /10% de H2O com TFA a 0,1 %
Coluna: Fenomenex-Iuna 10u C18 30 χ 4,6 mm
Método 7
Tempo gradiente: 3 min
Taxa de fluxo: 4 mL/min
Tempo de interrupção: Tempo gradiente + 1 minuto
Concentração de partida: 0% de B
Eluente A: 10 % de MeOH / 90 % de H2O com TFA a 0,1 % Eluente B: 90 % de MeOH /10 % de H2O com TFA a 0,1%
Coluna: Fenomenex-Iuna 10u C18 3,0 χ 50 mm
Preparação de 1 -(7-bromo-4-fluoro-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-( 1 -fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)etano- 1,2-diona (Composto B-1)
<formula>formula see original document page 70</formula>
Composto B-I
7-bromo-4-fluoro-1H-pirrolo[2,3-c]piridina (2,0 g, 9,3 mmols) foi adicionado a uma mistura de AICb (7,5 g, 55,8 mmol) e cloreto de etilmetilimidazólio (2,7 g, 18,6 mmols).
Clorooxoacetato de metila (2,1 mL, 18,6 mmols) foi adicionado lentamente à solução acima e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 3 h. Frasco de reação foi colocado em um banho gelado e água foi lentamente adicionada até um precipitado branco ser formado. O sólido foi coletado por filtração e lavado com água para fornecer ácido 2-(7-bromo-4-fluoro-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-oxoacético (2,4 g, 92%). LCMS: m/e 287 (M+H)+, tempo de retenção 0,91 min (Método 1).
Ácido 2-(7-bromo-4-fluoro-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-oxoacé- tico (5,0 g, 17,5 mmol) foi dissolvido em DMF (100 mL) e tratado com 1-(1- fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazina (4,0 g, 17,5 mmol), Base de Hunig (9,2 mL, 52,6 mmol) e TBTU (5,6 g, 17,5 mmol) e a mistura reacional foi agitada em rt durante 18 h. Solvente foi removido em vácuo e água foi adicionada. Um sólido branco precipitou-se e foi coletado por filtração e recristalizado duas vezes com MeOH para fornecer o composto título (4,58 g) como um sólido branco. O líquido mãe foi concentrado e purificado utilizando sílica gel (CH2CI2 para 5% de MeOH/CH2CI2) para fornecer mais composto título (1,8 g). 1HRMN (500 MHz, DMSO) δ 8,47 (s, 1H), 8,16 (s, 1H), 7,70 - 7,59 (m, 5H), 3,67 (m, 2H), 3,44 (m, 2H), 3,37 (m, 2H), 3,20 (m, 2H). LCMS: m/e 499 (M+H)+, tempo de retenção 1,50 min (Método 1).
Preparação de 1 -(4-fIuoro-7-(3-metil-1H-pirazol-1 -il)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin- 3-il)-2-(4-(1 -fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)etano- 1,2-diona (Composto B- 2) e 1 -(4-fIuoro-7-(5-metil-1 H-pirazol-1 -il)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1- fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)etano- 1,2-diona (Composto B-3)
<formula>formula see original document page 71</formula>
Uma mistura de 1-(7-bromo-4-fluoro-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)- 2-(4-(1 -fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)etano-1,2-diona (50 mg, 0,1 mmol), carbonato de potássio (13 mg, 0,1 mmol), cobre (6,0 mg, 0,1 mmol) e 3- metilpirazol (32 uL, 0,4 mmol) em /V-metilpirrolidinona (0,5 mL) foi aquecida a 160°C durante 6 h. MeOH (3 mL) foi adicionado e a solução foi filtrada atra- vés de Celita. Solvente foi removido em vácuo e resíduo foi dissolvido em DMF e purificado utilizando HPLC prep de fase reversa para fornecer 1-(4- fluoro-7-(3-metil-1 H-pirazol-1 -il)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1 -fenil-1 H- tetrazol-5-il)piperazin-1-il)etano-1,2-diona (6,9 mg) como um sólido branco; 1HRMN (500 MHz, CDCI3) δ 8,46 (d, J = 2 Hz, 1H), 8,19 (s, 1H), 8,93 (d,J = 2,0 Hz, 1H), 7,55 - 7,50 (m, 5H), 6,25 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 3,78 (m, 2H), 3,56 (m, 2Η), 3,35 (m, 2Η), 3,25 (m, 2Η), 2,36 (s, 3Η). LCMS: m/e 501 (M+H)+, tempo de retenção 2,34 min (Método 2) e 1-(4-fluoro-7-(5-metil-1 H-pirazol-1 - il)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1 -fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperazin-1 - il)etano-1,2-diona (13,7 mg); 1HRMN (500 MHz1 CDCI3) δ 8,25 (m, 1H), 8,08 (bs, 1H), 7,65 (m, 1H), 7,60 (m, 5H), 6,27 (m, 1H), 3,87 (m, 2H), 3,66 (m, 2H), 3,46 (m, 2H), 3,36 (m, 2H), 2,83 (s, 3H). LCMS: m/e 501 (M+H)+, tempo de retenção 2,34 min (Método 2).
Preparação de 1 -(7-(3-amino-1 H-pirazol-1 -il)-4-fIuoro-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin- 3-il)-2-(4-(1 -fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)etano-1,2-diona (Composto B- 4) e 1 -(7-(5-amino-1 H-pirazol-1 -il)-4-fIuoro-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4- (1 -fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)etano-1,2-diona (Composto B-5).
<formula>formula see original document page 72</formula>
Uma mistura de 1-(7-bromo-4-fluoro-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)- 2-(4-(1-fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)etano-1,2-diona (100 mg, 0,2 mmol), carbonato de potássio (26 mg, 0,2 mmol), cobre (13 mg, 0,2 mmol) e 3-aminopirazol (100 uL, 1 mmol) em /V-metilpirrolidinona (0,5 mL) foi aqueci- da a 160°C durante 5 h. Solvente foi removido em vácuo e resíduo foi dissol- vido em DMF e purificado utilizando HPLC prep de fase reversa para forne- cer 1 -(7-(3-amino-1 H-pirazol-1 -il)-4-fluoro-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1 - fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)etano-1,2-diona (15,9 mg) como um sólido amarelo pálido; 1HRMN (500 MHz, DMSO) δ 8,34 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,29 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 8,03 (s, 1H), 7,70 - 7,58 (m, 5H), 5,92 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 5,25 (m, 2H), 3,71 (m, 2H), 3,47 (m, 2H), 3,32 (m, 2H), 3,16 (m, 2H). LCMS: m/e 502 (M+H)+, tempo de retenção 1,26 min (Método 3); e 1-(7-(5-amino- 1 H-pirazol-1 -il)-4-fluoro-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1 -fenil-1 H-tetrazol- 5-il)piperazin-1-il)etano-1,2-diona (8,8 mg) como um sólido amarelo pálido; 1HRMN (500 MHz, CDCI3) δ 8,21 (m, 1 Η), 8,11 (bs, 1 Η), 7,60 (m, 6Η), 6,94 (m, 2Η), 5,52 (m, 1Η), 3,71 (m, 2Η), 3,47 (m, 2Η), 3,31 (m, 2Η), 3,16 (m, 2H); LCMS: m/e 502 (Μ+Η)+, tempo de retenção 1,26 min (Método 3).
Preparação de 1-(4-fluoro-7-(1H-pirazol-3-il)- 1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4- (1 -fenil-1H-tetrazol-5'il)piperazin-1 -il)etano- 1,2-diona B-28
<formula>formula see original document page 73</formula>
Uma mistura de ácido 2-(7-bromo-4-fluoro-1H-pirrolo[2,3-c] piri- din-3-il)-2-oxoacético (500 mg, 1,0 mmol)(composto B-1), 3-(tributiletanil)- 1H-pirazol (358 mg, 1 mmol) e tetracís(trifenilfosfina)paládio(0) (346 mg, 0,3 mmol) em 1,4-dioxano (3 mL) foi aquecida a 110°C durante 6 h. A reação foi resfriada para a temperatura ambiente, diluída com DMF e metanol, filtrada através de Celita e concentrada sob pressão reduzida. O cru foi em seguida redissolvido em DMF e purificado utilizando HPLC de fase reversa para for- necer o composto título como um sólido branco (180 mg, 37%). 1H RMN (500 MHz, DMSO-D6) δ ppm 3,17 (s, 2 H) 3,33 (s, 2 H) 3,47 (s, 2 H) 3,72 (s, 2H) 6,97 (s, 1 H) 7,59 (s, 1 H) 7,64 (s, 2 H) 7,69 (s, 2 H) 7,96 (s, 1 H) 8,25 (s, 1 H) 8,31 (s, 1 H). LCMS: m/e 487 (M + H)+, tempo de retenção 1,32 min
(Método 2).
Preparação de 1-(4-fluoro-7-(1-metil-1H-pirazol-3-il)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin- 3-il)-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)etano-1,2-diona B-29
<formula>formula see original document page 73</formula> fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)etano-1,2-diona (30 mg, 0,06 mmol) em DMF (1 mL) foi tratado com hidreto de sódio (60% em óleo, 31,2 mg, 0,78 mmol) e agitado em temperatura ambiente durante 5 min. Iodeto de metila (56 uL, 0,9 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada em rt durante 1 h. A reação foi saciada com H2O e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em DMF e purificado utilizando HPLC prep de fase reversa pa- ra fornecer o composto título como um sólido branco (20 mg, 67%). 1H RMN (500 MHz, DMSO-D6) δ ppm 3,15 (s, 2 H) 3,32 (s, 2 H) 3,47 (s, 2 H) 3,71 (s, 2 H) 4,05 (s, 3 H) 6,92 (s, 1 H) 7,58 - 7,65 (m, 3 H) 7,69 (s, 2 H) 7,91 (s, 1 H) 8,30 (d, J= 12,83 Hz, 2 H) 12,30 (s, 1 H). LCMS: m/e 501 (M + H)+, tempo de retenção 1,37 min (Método 3).
Preparação de 1 -(7-( 1 -(2-(dimetilamino)etil)-1 H-pirazol-3-il)-4-fluoro-1H- pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-( 1 -fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)etano-1,2- diona
<formula>formula see original document page 74</formula>
1 -(4-fluoro-7-(1 H-pirazol-3-il)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1 - fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)etano-1,2-diona (40 mg, 0,08 mmol) em DMF (1 mL) foi tratado com hidreto de sódio (60% em óleo, 33,0 mg, 0,8 mmol) e agitado em temperatura ambiente durante 5 min. Cloridrato de 2- cloro-N,N-dimetiletanamina (115,2 mg, 0,8 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada em rt durante 1 h. A reação foi saciada com H2O e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em DMF e purificado utilizan- do HPLC prep de fase reversa para fornecer o composto título como um só- lido branco (15 mg, 34%). 1H RMN (500 MHz, MeOD) δ ppm 2,96 (s, 6 H) 3,37 (s, 2 H) 3,63 (s, 2 H) 3,82 (s, 2 H) 3,89 (s, 2 H) 4,76 (s, 2 H) 7,11 (s, 1 H) 7,59 (S, 1 H) 7,64 (s, 2 H) 7,68 (s, 2 H) 7,92 (s, 1 H) 8,25 (s, 1 H) 8,36 (s, 1Η). LCMS: m/e 558 (Μ + Η)+, tempo de retenção 1,37 min (Método 3). Preparação de 1 -(4-fluoro-7-(1 -(2-morfolinoetil)-1H-pirazol-3-il)-1 H-pirrolo [2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1 -fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)etano- 1,2-diona B-31
<formula>formula see original document page 75</formula>
1-(4-fluoro-7-(1 H-pirazol-3-il)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1 - fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)etano-1,2-diona (40 mg, 0,08 mmol) em DMF (1 mL) foi tratado com hidreto de sódio (60% em óleo, 33 mg, 0,8 mmol) e agitado em temperatura ambiente durante 5 min. 4-(2-cloroetil) mor- folina (149 mg, 0,8 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada em rt durante 1 h. A reação foi saciada com H2O e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em DMF e purificado utilizando HPLC prep de fase re- versa para fornecer o composto título como um sólido branco (20 mg, 67%). 1H RMN (500 MHz, MeOD) δ ppm 3,43 (s, 1 H) 3,77 (s, 5 H) 3,81 (s, 5 H) 4,08 (s, 2 H) 4,28 (s, 3 H) 4,37 (s, 4 H) 5,27 (s, 6 H) 7,56 (s, 1 H) 8,06 - 8,12 (m, 2 H) 8,13 (s, 2 H) 8,38 (s, 1 H) 8,70 (s, 1 H) 8,85 (s, 1 H). LCMS: m/e 600 (M + H)+, tempo de retenção 1,22 min (Método 3).
Preparação de 7-óxido de 4-metóxi-3-(2-oxo-2-(4-(1 -fenil-1 H-tetrazol-5- il)piperazin-1-il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-b]piridina
B-32
<formula>formula see original document page 75</formula> 7-óxido de 3-(2-(4-benzoilpiperazin-1 -il)-2-oxoacetil)-4-metóxi- 1H-pirrolo[2,3-b]piridina (2,0 g, 4,9 mmol) em uma solução aquosa a 10% de HCl (20 mL) foi aquecido a 100°C durante 18 η. A reação foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi lavado com acetato de etila e clorofór- mio. NaOH (1N) foi adicionado até alcançar pH = 7; em seguida acetato de etila foi adicionado para lavar o sólido. O sólido contendo 7-óxido de 3- (carboxicarbonil)-4-metóxi-1H-pirrolo[2,3-b]piridina foi levado para a próxima etapa sem outra purificação.
Uma mistura do sólido contendo 7-óxido de 3-(carboxicarbonil)- 4-metóxi-1H-pirrolo[2,3-b]piridina do acima (200mg, 0,84 mmol), trietilamina (0,5 mL, sssss), 1-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazina (234 mg, 1,01 mmol) e TBTU (404 mg, 1,26 mmol) foi agitada em rt em DMF (1 mL) durante 24 h. H2O foi adicionada e a mistura reacional foi concentrada sob pressão redu- zida. O resíduo foi purificado utilizando HPLC prep de fase reversa para for- necer o composto título como um sólido branco (15 mg, 4%). 1H RMN (500 MHz, CDCI3) δ ppm 3,32 (s, 2 H) 3,37 (s, 2 H) 3,56 (s, 2 H) 3,79 (s, 2 H) 4,13 (s, 3 H) 6,83 (d, J = 7,32 Hz, 1 H) 7,53 (d, J = 6,71 Hz, 1 H) 7,54 - 7,60 (m, 3 H) 8,16 (s, 1 H) 8,34 (d, J = 6,71 Hz, 1 H). LCMS: m/e 449 (M + H)+, tempo de retenção 0,99 min (Método 2).
Preparação de 1 -(7-cloro-4-metóxi-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1 -fenil- 1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)etano-1,2-diona (Composto B-6)
<formula>formula see original document page 76</formula>
Composto B-6
A uma solução de ácido 2-(7-cloro-4-metóxi-1H-pirrolo[2,3- c]piridin-3-il)-2-oxoacético (5,3 g, 20,8 mmol) (preparado como descrito em US20050090522A1) em DMF (100 mL) foi adicionado 1 -(1 -fenil-1 H-tetrazol- 5-il)piperazina (4,8 g, 20,8 mmol), TBTU (7,4 g, 23,0 mmol), e N1N- diisopropiletilamina (12,0 mL, 68,9 mmol). A mistura foi agitada em rt durante 16 horas. O solvente foi removido sob pressão reduzida, e o resíduo restante foi dissolvido em MeOH quente. Sob resfriamento, precipitado formou-se. O precipitado foi coletado por filtração, e foi lavado com H2O (3 χ 75 mL). O líquido mãe foi concentrado sob pressão reduzida, em seguida submetido a uma segunda cristalização utilizando o mesmo método. Os precipitados combinados forneceram 1 -(7-cloro-4-metóxi-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4- (1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)etano-1,2-diona como um sólido mar- rom claro (7,3 g, 15,6 mmol). 1H RMN (500 MHz, CDCI3) δ 9,64 (s, 1H), 8,11 (s, 1H), 7,76 (s, 1H), 7,62 - 7,50 (m, 5H), 4,00 (s, 3H), 3,83 - 3,81 (m, 2H), 3,57 - 3,56 (m, 2H), 3,43 - 3,41 (m, 2H), 3,33 - 3,32 (m, 2H). LCMS: m/e 467,3 (M + H)+, tempo de retenção 1,99 min (Método 2).
Preparação de 3-(4-metóxi-3-(2-oxo-2-(4-(1 -fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperazin-1 - il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]pirídin-7-il)-1H-pirazol-5-carboxilato de etila (Com- posto B-7)
<formula>formula see original document page 77</formula>
A uma suspensão de 1-(7-cloro-4-metóxi-1H-pirrolo[2,3-c]piridin- 3-il)-2-(4-(1 -fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)etano-1,2-diona (2,50 g, 5,35 mmol) em 1,4-dioxano (60 mL) em um frasco selável foi adicionado 3- (tributiletanil)-1H-pirazol-5-carboxilato de etila (2,30 g, 5,36 mmol) seguido por tetracis(trifenilfosfina)paládio(0) (1,86 g, 1,61 mmol). A mistura foi esti- mulada com N2, o frasco foi selado, e a mistura foi aquecida para 120°C du- rante 16 horas. A mistura foi resfriada para rt e diluída com MeOH (50 mL). Os sólidos restantes foram removidos por filtração da mistura através de uma almofada de celita e foram lavados com MeOH (25 mL). O solvente res- tante foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi dissolvi- do em MeOH, e carregado em uma sílica gel. Após a sílica ser secada, uma coluna foi desenvolvida utilizando o sistema biotage com um gradiente de O a 10% de MeOH em CH2CI2. Após concentração das frações desejadas, 1,05 g de 3-(4-metóxi-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1- il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1H-pirazol-5-carboxilato de etila foi recu- perado como um sólido laranja. LCMS: m/e 571,2 (M + H)+, tempo de reten- ção 2,01 min (Método 2). 1H RMN (500 MHz, DMSO-D6) δ ppm 12,39 - 12,72 (m, 1 H) 8,37 (s, 1 H) 8,11 (s, 1 H) 7,52 - 7,76 (m, 6 H) 4,68 - 4,85 (m, 1H) 4,38 (q, J = 7,02 Hz1 2 H) 3,98 - 4,06 (m, 3 H) 3,67 - 3,73 (m, 2 H) 3,43 - 3,49 (m, 2 H) 3,28 - 3,36 (m, 2 H) 3,14 - 3,22 (m, 2 H) 1,36 (t, J = 7,17 Hz, 3H).
Preparação de N-(2-hidroxietit)-3-(4-metóxi-3-(2-oxo-2-(4-( 5-il)piperazin-1 -il)acetil)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1 H-pirazol-5- carboxamida TFA (Composto B-8)
<formula>formula see original document page 78</formula>
3-(4-Metóxi-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il) acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1 H-pirazol-5-carboxilato de etila (0,100 g, 0,175 mmol) foi combinado com etanolamina (0,75 mL) em um tubo selável.
A mistura foi estimulada com N2, e o tubo foi selado. A mistura foi agitada durante 67 horas em rt. A mistura foi diluída com DMF, e carregada na H- PLC prep de fase reversa durante purificação. Após concentração das fra- ções contendo o produto, 0,085 g do N-(2-hidroxietil)-3-(4-metóxi-3-(2-oxo-2- (4-(1 -fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)acetil)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1H-pirazol-5-carboxamidaTFA foi recuperado como um sólido não totalmente branco. LCMS: m/e 586,3 (M + H)+, tempo de retenção 1,19 min (Método 1). 1H RMN (300 MHz, DMSO-D6) δ ppm 12,51 (s, 1 H) 8,64 (s, 1 H) 8,36 (s, 1 H) 8,10 (s, 1 H) 7,56 - 7,71 (m, 6 H) 7,25 (brs, 1H) 4,01 (s, 3 H) 3,70 (s, 2 H) 3,55 (t, J = 6,22 Hz, 2 H) 3,27 - 3,48 (m, 7 H) 3,16 (s, 2 H). Preparação de N-(2-(2-hidroxietóxi)etil)-3-(4-metóxi-3-(2-oxo-2-(4-( 1 -fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)acetil)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1 H-pirazol-5-carboxamida TFA (Composto B-9)
<formula>formula see original document page 79</formula>
(Composto B-9)
3-(4-Metóxi-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)acetil)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1 H-pirazol-5-carboxilato de etila (0,100 g, 0,175 mmol) foi combinado com 2-(2-aminoetóxi)etanol (0,75 mL) em um 15 tubo selável. A mistura foi estimulada com N2, e o tubo foi selado. A mistura foi agitada durante 67 horas em rt. A mistura foi diluída com DMF, e carregada em uma HPLC prep de fase reversa durante purificação. Após concentração das frações contendo o produto, 0,064 g do N-(2-(2-hidroxietóxi)etil)-3-(4-metóxi-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)acetil)-1 H-20 pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1H-pirazol-5-carboxamida-TFA foi recuperado como um sólido não totalmente branco. LCMS: m/e 630,2 (M + H)+, tempo de retenção 1,84 min (Método 2). 1H RMN (500 MHz, MeOD) δ ppm 8,55 - 8,62 (m, 1 H) 7,99 - 8,07 (m, 1 H) 7,53 - 7,75 (m, 6 H) 4,07 - 4,18 (m, 3 H) 3,79 -3,88 (m, 2 H) 3,58 - 3,76 (m, 8 H) 3,29 - 3,43 (m, 6 H). 25 Preparação de 3-(4-metóxi-3-(2-oxo-2-(4-( 1 -fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperazin-1 - il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-N-(3-(4-metilpiperazin-1 -il)propil)-1H-pirazol-5-carboxamida-TFA (Composto B-10)
<formula>formula see original document page 80</formula>
(Composto B-10)
3-(4-Metóxi-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il) acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1H-pirazol-5-carboxilato de etila (0,100 g, 5 0,175 mmol) foi combinado com 1-(3-aminopropil)-4-metil piperazina (0,75 mL) em um tubo selável. A mistura foi estimulada com N2, e o tubo foi selado. A mistura foi agitada durante 67 horas em rt. A mistura foi diluída com DMF, e carregada em uma HPLC prep de fase reversa durante purificação. Após concentração das frações contendo o produto, 0,093 g do 3-(4-metóxi-3-(2-oxo-2-(4-(1 -fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-d] piridin-7-il)-N-(3-(4-metilpiperazin-1-il)propil)-1H-pirazol-5-carboxamidaTFA foi recuperado como um sólido não totalmente branco. LCMS: m/e 682,4 (M + H)+, tempo de retenção 1,11 min (Método 1). 1H RMN (300 MHz1 DMSO-D6) δ ppm 12,48 (s, 1H) 10,82 (s, 1 H) 8,82 (s, 1 H) 8,35 (s, 1H) 8,11 (s, 1 15 H) 7,53 - 7,72 (m, 6H) 4,01 (s, 3H) 3,10 - 3,79 (m, 20 H) 2,89 (s, 3 H) 1,88 -2,03 (m, 2H).
Preparação de 3-(4-metóxi-3-(2-oxo-2-(4-(1 -fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]pirídin-7-il)-N-(2-(pirrolidin-1-il)etil)-1H-pirazol-5-carboxamida TFA (Composto B-11)
<formula>formula see original document page 80</formula> <formula>formula see original document page 81</formula>
(Composto B-11)
3-(4-Metóxi-3-(2-oxo-2-(4-(1 -fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il) acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1H-pirazol-5-carboxilato de etila (0,100 g, 0,175 mmol) foi combinado com 1-(2-aminoetil)-pirrolidina (0,75 mL) em um tubo selável. A mistura foi estimulada com N2, e o tubo foi selado. A mistura foi agitada durante 67 horas em rt. A mistura foi diluída com DMF, e carregada em uma HPLC prep de fase reversa durante purificação. Após concentração das frações contendo o produto, 0,100 g do 3-(4-metóxi-3-(2-oxo-2-(4-(1 -fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)acetil)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-N-(2-(pirrolidin-1-il)etil)-1H-pirazol-5-carboxamida-TFA foi recuperado como sólido laranja escuro. LCMS: m/e 639,3 (M + H)+, tempo de retenção 1,78 min (Método 2). 1H RMN (500 MHz, MeOD) δ ppm 8,56 (s, 1 H) 8,06 (s, 1 H) 7,55 -7,73 (m, 6 H) 4,11 (s, 3 H) 3,79 - 3,92 (m, 4 H) 3,13 - 3,67 (m, 12 H) 2,03 -2,(m, 4 H).
Preparação de 3-(4-metóxi-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)acetil)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-N-(2-(piridin-4-il)etil)-1H-pirazol-5-carboxamida-TFA (Composto B-12) <formula>formula see original document page 82</formula>
(Composto Β-12)
3-(4-Metóxi-3-(2-oxo-2-(4-(1 -fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1H-pirazol-5-carboxilato de etila (0,100 g, 0,175 mmol) foi combinado com 4-(2-aminoetil)-piridina (0,75 mL) em um tubo selável. A mistura foi estimulada com N2, e o tubo foi selado. A mistura foi agitada durante 67 horas em rt. A mistura foi diluída com DMF, e carregada em uma HPLC prep de fase reversa durante purificação. Após concen-; tração das frações contendo o produto, 0,035 g do 3-(4-metóxi-3-(2-oxo-2-(4-(1 -fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-N-(2-(piridin-4-il)etil)-1H-pirazol-5-carboxamida TFA foi recuperado como um sólido não totalmente branco. LCMS: m/e 647,2 (M + H)+, tempo de retenção 1,77 min (Método 2). 1H RMN (500 MHz, MeOD) δ ppm 8,74 - 8,83 (m, 2H) 8,52 - 8,60 (m, 1H) 8,02 - 8,12 (m, 3 H)7,56 - 7,74 (m, 6H) 4,08 - 4,16 (m, 3H) 3,79 - 3,90 (m, 4H) 3,59 - 3,67 (m, 2H) 3,28 - 3,45 (m, 6H). Preparação de 3-(4-metóxi-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil 1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-N-(2-morfolinoetil)-1H-pirazol-5-carboxamida-TFA (Composto B-13) <formula>formula see original document page 83</formula>
(Composto B-13)
3-(4-Metóxi-3-(2-oxo-2-(4-(1 -fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il) acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1H-pirazol-5-carboxilato de etila (0,075 g, 0,131 mmol) foi combinado com 4-(2-aminoetil)morfolina (0,75 mL) em um tubo selável. A mistura foi estimulada com N2, e o tubo foi selado. A mistura foi agitada durante 67 horas em rt. A mistura foi diluída com DMF, e carregada em uma HPLC prep de fase reversa durante purificação. Após concentração das frações contendo o produto, 0,073 g do 3-(4-metóxi-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-N-(2-10 morfolinoetil)-1H-pirazol-5-carboxamidaTFA foi recuperado como um sólido não totalmente branco. LCMS: m/e 655,3 (M + H)+, tempo de retenção 1,74 min (Método 2). 1H RMN (300 MHz, MeOD) δ ppm 8,57 (s, 1 H) 8,07 (s, 1 H) 7,56 - 7,74 (m, 6 H) 3,17-4,17 (m, 23 H).
Preparação de 3-(4-metóxi-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-N-(2-(piperazin-1-il)etil)-1H-pirazol-5-carboxamida-TFA (Composto B-14) <formula>formula see original document page 84</formula>
(Composto B-14)
3-(4-Metóxi-3-(2-oxo-2-(4-(1 -fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il) acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1H-pirazol-5-carboxilato de etila (0,100 g, 0,175 mmol) foi combinado com 1-(2-aminometil)piperazina (0,75 mL) em um tubo selável. A mistura foi estimulada com N2, e o tubo foi selado. A mistura foi agitada durante 67 horas em rt. A mistura foi diluída com DMF, e carregada em uma HPLC prep de fase reversa durante purificação. Após concentração das frações contendo o produto, 0,089 g do 3-(4-metóxi-3-(2-oxo-2-(4-(1 -fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-N-(2-(piperazin-1-il)etil)-1H-pirazol-5-carboxamida TFA foi recuperado como um sólido castanho. LCMS: m/e 654,3 (M + H)+, tempo de retenção 1,73 min (Método 2). 1H RMN (500 MHz, MeOD) δ ppm 8,54 - 8,62 (m, 1 H) 8,01 -8,10 (m, 1 H) 7,54 - 7,74 (m, 6 H) 4,08 - 4,16 (m, 3 H) 3,77 - 3,89 (m, 4H) 3,60 (s, 10 H) 3,22 - 3,47 (m, 6 H).
Preparação de N-(3-(dimetilamino)propil)-3-(4-metóxi-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1H-pirazol-5-carboxamida-TFA (Composto B-15) <formula>formula see original document page 85</formula>
(Composto B-15)
3-(4-Metóxi-3-(2-oxo-2-(4-(1 -fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il) acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1H-pirazol-5-carboxilato de etila (0,125 g, 0,219 mmol) foi combinado com 3-dimetilaminopropilamina (0,70 mL) em um tubo selável. A mistura foi estimulada com N2, e o tubo foi selado. A mistura foi agitada durante 36 horas em rt. A mistura foi diluída com DMF, e carregada em uma HPLC prep de fase reversa durante purificação. Após concentração das frações contendo o produto, 0,010 g do N-(3-(dimetilamino) pro-pil)-3-(4-metóxi-3-(2-oxo-2-(4-(1 -fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1H-pirazol-5-carboxamida TFA foi recuperado como um sólido não totalmente branco. LCMS: m/e 627,6 (M + H)+, tempo de retenção 1,75 min (Método 2). 1H RMN (300 MHz, DMSO-D6) δ ppm 8,78 -9,19 (m, 2 H) 8,23 (s, 1H) 8,09 (s, 1H) 7,55 - 7,73 (m, 6H) 4,00 (s, 3 H) 2,70 - 2,79 (m, 6 H) 2,68 - 3,93 (m, 12H) 1,96 - 2,15 (m, 2H). Preparação de N-(2-(dimetilamino)etil)-3-(4-metóxi-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1H-pirazol-5-carboxamida-TFA (Composto B-16) <formula>formula see original document page 86</formula>
(Composto Β-16)
3-(4-Metóxi-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 - il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1H-pirazol-5-carboxilato de etila (0,05 g, 0,088 mmol) foi combinado com N,N-dimetiletilenodiamina (0,70 mL) em um tubo selável. A mistura foi estimulada com N2, e o tubo foi selado. A mistura foi agitada durante 38 horas em rt. A mistura foi diluída com DMF, e carregada em uma HPLC prep de fase reversa durante purificação. Após concentração das frações contendo o produto, 0,020 g do N-(2-(dimetilamino)etil)-3-(4-metóxi-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)acetil)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1H-pirazol-5-carboxamidaTFA foi recuperado como um sólido castanho. LCMS: m/e 613,2 (M + H)+, tempo de retenção 1,75 min (Método 2). 1H RMN (500 MHz, MeOD) δ ppm 8,56 (s, 1H) 8,08 (s, 1H) 7,59 - 7,73 (m, 6H) 4,13 (s, 3H) 3,82 - 3,86 (m, 4H) 3,62 - 3,66 (m, 2H) 3,40 - 3,48 (m, 4H) 3,33 - 3,37 (m, 2H) 3,03 (s, 6H).
Preparação de 1 -(7-amino-4-fluoro-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)etano- 1,2-diona (Composto B-17)
<formula>formula see original document page 86</formula>
Composto B-17
4-fluoro-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-amina (2,26 g,15 mmol) foi adicionado a uma mistura de AICI3 (12,0g, 90,0 mmol) e cloreto de etilmeti- limidazólio (4,38 g, 30,0 mmol). Clorooxoacetato de metila (3,6 mL, 30,0 mmol) foi adicionado lentamente à solução acima e a mistura foi agitada em rt durante 3h. O frasco de reação foi colocado em um banho gelado e água foi lentamente adicionada até um precipitado branco formar-se. O sólido foi coletado por filtração e suspenso em DMF. TEA (7mL) foi adicionado e a mistura foi agitada em rt durante 1h. O solvente foi removido em vácuo. Clo-rofórmio (50 mL) foi adicionado e o sólido foi coletado por filtração para fornecer ácido 2-(7-amino-4-fluoro-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-oxoacético como um sólido amarelo brilhante (2,3 g, 90% puro). LCMS: m/e 238 (M+H)+,tempo de retenção 0,96 min (Método 3).
Ácido 2-(7-amino-4-fluoro-1H-pírrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-oxoacé-tico (2,3 g, 10,0 mmol) foi dissolvido em DMF (66 mL) e tratado com 1-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazina (2,31 g, 10,0 mmol), trietilamina (2,8 mL, 20,0 mmol) e TBTU (3,5 g, 11,0 mmol) e uma quantidade catalítica de DMAP. A mistura reacional foi agitada em rt durante 18 h. O solvente foi removido em vácuo e água foi adicionada. Um sólido branco precipitou-se e foi coletado por filtração e recristalizado com MeOH para fornecer o composto título (2,4 g) como um sólido amarelo. 1HRMN (500 MHz, DMSO-D6) δ 8,53 (s, 1H), 7,81 (d, J = 4,0 Hz; 1H), 7,75 - 7,54 (m, 5H), 3,69 (m, 2H), 3,44 (m, 2H), 3,33 (m, 2H), 3,17 (m, 2H). LCMS: m/e 436 (M+H)+, tempo de retenção 1,73 min (Método 2).
Preparação de N-(4-fluoro-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)acetamida (Composto B-18)
<formula>formula see original document page 87</formula>
Composto B-18
1 -(7-amino-4-fluoro-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1 -fenil-1H- tetrazol-5-il)piperazin-1-il)etano-1,2-diona (100 mg, 0,23 mmol) foi dissolvido em piridina (2 mL) e a mistura foi aquecida a 50°C. Cloreto de acetila (65 uL, 0,92 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada nesta temperatura durante 1 h. O solvente foi removido em vácuo e o resíduo foi purificado utilizando HPLC prep de fase reversa para fornecer o composto título como um sólido branco (55 mg). 1HRMN (500 MHz, DMSO-D6) δ 8,34 (s, 1H), 8,04 (d, J = 1,0 5 Hz, 1H), 7,70 - 7,58 (m, 5H), 3,69 (m, 2H), 3,45 (m, 2H), 3,34 (m, 2H), 3,16 (m, 2H), 2,17(s, 3H). LCMS: m/e 478 (M+H)+, tempo de retenção 1,07 min (Método 3).
Preparação de 3-(4-fluoro-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1,1-dimetiluréia (Composto B-19)
<formula>formula see original document page 88</formula>
1 -(7-amino-4-fluoro-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1 -fenil-1H- tetrazol-5-il)piperazin-1-il)etano-1,2-diona (100 mg, 0,23 mmol) foi dissolvido em piridina (1 mL). Cloreto de dimetilcarbamila (0,21 ml_, 2,3 mmol) foi adicionado e a mistura foi aquecida a 50°C durante 18 h. O solvente foi removi-do em vácuo e o resíduo foi purificado utilizando HPLC prep de fase reversa para fornecer o composto título como um sólido castanho pálido (10 mg). 1HRMN (500 MHz, DMSO-D6) δ 8,89 (s, 1H), 8,25 (s, 1H), 7,70 - 7,59 (m, 5H), 3,67 (m, 2H), 3,44 (m, 2H), 3,37 (m, 2H), 3,20 (m, 2H), 3,11 (s, 3H), 2,88 (s, 3H). LCMS: m/e 507 (M+H)+, tempo de retenção 1,04 min (Método 3).
Preparação de N1 -(4-fluoro-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)N2,N2-dimetiloxamida (Composto B-20) <formula>formula see original document page 89</formula>
Composto B-20
1 -(7-amino-4-fluoro-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)etano-1,2-diona (100 mg, 0,23 mmol) foi dissolvido em DMF (2 mL) e tratado com ácido N,N-dimetiloxâmico (27 mg, 0,23 mmol), Base de Hunig (0,14 mL, 0,8 mmol) e TBTU (81 mg, 0,25 mmol). A mistura reacional foi agitada em rt durante 18 h. O solvente foi removido em vácuo e água foi adicionada. Um sólido precipitou-se e foi coletado por filtração, dissolvido em DMF e purificado utilizando HPLC prep de fase reversa para fornecer o composto título como um sólido amarelo pálido (11 mg). 1HRMN (500 MHz1 DMSO-D6) δ 8,47 (s, 1H), 8,16 (s, 1H), 7,70 - 7,50 (m, 5H), 5,76 (m, 1H), 4,10 - 3,10 (m, 6H), 3,16 (s, 6H). LCMS: m/e 535 (M+H)+, tempo de retenção 1,33 min (Método 1).
Preparação de 3-(tributiletanil)-1H-pirazol-5-carbaldeído e (3-(tributiletanil)-1H-pirazol-5-il)metanol
<formula>formula see original document page 89</formula>
Uma solução de 3-(tributiletanil)-1H-pirazol-5-carboxilato de etila (3,94 g, 9,18 mmol) em tolueno (10 mL) foi resfriada para -78 °C. Uma solução a 1M de DIBAL-H em tolueno (11,5 mL, 11,5 mmol) foi lentamente adicionada à mistura. A mistura foi aquecida para 0°C e agitada durante 9 h.
Após as 9 h, a mistura foi cuidadosamente saciada com H2O (50 mL) enquanto a mistura estava ainda sendo resfriada. A mistura foi dividida com EtOAc, e o composto foi extraído (4 X 75 mL) com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaCI saturado, secadas com Na2S04, filtradas, e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi em seguida carregado em uma coluna de sílica gel, e purificado utilizando o sistema biotage com um gradiente de 0 a 40% de EtOAc em hexanos para primeiro remover o aldeído e material de partida não reagido. A coluna foi em seguida estimulada com uma solução de CH2Cl2 em MeOH a 50% para remover o álcool restante. Após concentração das frações desejadas, 3-(tributiletanil)-1H-pirazol-5-carbaldeído (1,125g) foi recuperado como um ó-Ieo incolor, claro, e (3-(tributiletanil)-1H-pirazol-5-il)metanol (0,525g) foi recuperado como um sólido branco. LCMS: m/e 387,2 (M + H)+, tempo de retenção 2,01 min (Método 3) para 3-(tributiletanil)-1H-pirazol-5-carbaldeído e I LCMS: m/e 389,3 (M + H)+, tempo de retenção 2,59 min (Método 2) para (3-(tributiletanil)-1H-pirazol-5-il)metanol.
Os seguintes intermediários de amino pirazol foram formados pelo procedimento de aminação redutiva padronizado que segue: 2-((3-(tributiletanil)-1H-pirazol-5-il)metilamino)etanol (pirazol 1)
N1,N1-dimetil-N2-((3-(tributiletanil)-1H-pirazol-5-il)metil)etano-1,2-diamina (pirazol 2)
N1,N1,N2-trimetil-N2-((3-(tributiletanil)-1H-pirazol-5-il)metil)etano-1,2-diamina (pirazol 3)
2-(piridin-4-il)-N-((3-(tributiletanil)-1H-pirazol-5-il)metil)etanamina (pirazol 4)
<formula>formula see original document page 90</formula>
A uma solução de 3-(tributiletanil)-1H-pirazol-5-carbaldeído (1,0 eq, aproximadamente 0,5 mmol de escala) em DCE (2-3 mL) foi adicionado AcOH (1,0 eq) seguido pela amina (1,05 - 1,1 eq), e finalmente triacetoxibo-roidreto de sódio (1,4 eq). A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 1-3h. A mistura foi tornada básica com 1N de NaOH (pH = 13) e foi extraída três vezes com CH2Cl2. As camadas orgânicas combinadas foram 5 secadas com Na2SO4, o agente de secagem foi removido por filtração, e a solução resultante foi concentrada sob pressão reduzida. Nenhuma outra purificação foi necessária. LCMS: m/e 432,1 (M + H)+, tempo de retenção 2,52 min (Método 2) para 2-((3-(tributiletanil)-1H-pirazol-5-il)metilamino) eta-nol. LCMS: m/e 459,2 (M + H)+, tempo de retenção 3,44 min (Método 4) para
N1 ,N1 -dimetil-N2-((3-(tributiletanil)-1H-pirazol-5-il)metil)etano-1,2-diamina. LCMS: m/e 473,3,1 (M + H)+, tempo de retenção 2,65 min (Método 2) para N1 ,N1 ,N2-trimetil-N2-((3-(tributiletanil)-1H-pirazol-5-il)metil)etano-1,2-diamina. LCMS: m/e 493,6 (M + H)+, tempo de retenção 4,29 min (Método 5) para 2-(piridin-4-il)-N-((3-(tributiletanil)-1H-pirazol-5-il)metil)etanamina.
Preparação de ácido 3-(4-metóxi-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il) pipe-razin-1 -il)acetil)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1 H-pirazol-5-carboxílico (Composto B-21)
<formula>formula see original document page 91</formula>
(Composto B-21)
A uma suspensão de 3-(4-metóxi-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1H-20 tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1 H-pirazol-5-car-boxilato de etila (0,124 g, 0,217 mmol) em DMF (1,5 mL) e H2O (1,5 mL) foi adicionado monoidrato de LiOH (0,027 g, 0,651 mmol). A mistura foi aquecida para 120°C durante 24 h. A reação não foi concluída, assim mais 0,05 g de hidrato de LiOH juntamente com 2 mL de H2O foram adicionados à mistu-25 ra, e foi novamente aquecida para 120°C. Após 24 h de aquecimento, a reação foi quase concluída por LCMS , assim foi resfriada para rt, e tornada a- cídica (pH = 1) com 6N de HCI. A mistura foi diluída com H2O1 e dividida com EtOAc. O produto precipitou-se entre as duas camadas, e foi coletado por filtração. Os sólidos foram lavados com MeOH resfriado e H2O. O ácido 3-(4-metóxi-3-(2-oxo-2-(4-(1 -fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)acetil)-1H-pirrolo 5 [2,3-c] piridin-7-il)-1H-pirazol-5-carboxílico (0,08 g) foi coletado como um sólido amarelo claro. LCMS: m/e 542,97 (M + H)+, tempo de retenção 1,86 min (Método 2). 1H RMN (500 MHz, DMSO-D6) δ ppm 12,10 - 12,22 (s, 1 H) 8,25 (s, 1 H) 8,10 (s, 1 H) 7,56 - 7,77 (m, 5 H) 7,39 (s, 1H) 3,99 (s, 3 H) 3,67 -3,72 (m, 2H) 3,40 - 3,46 (m, 2 H) 3,29 - 3,36 (m, 2 H) 3,14 - 3,20 (m, 2H). Preparação de 1-(7-(5-(hidroximetil)-1H-pirazol-3-il)-4-metóxi-1H-pirrolo[2,3-I c]piridin-3-il)-2-(4-(1 -fértil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)etano- 1,2-diona (Composto B-22)
<formula>formula see original document page 92</formula>
(Composto B-22)
Em um frasco selável, uma mistura de 1-(7-cloro-4-metóxi-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1 -fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)etano-1,2-diona (0,150 g, 0,321 mmol) em 1,4-dioxano (5 mL) foi preparada. (3-(tributiletanil)-1H-pirazol-5-il)metanol (0,137 g, 0,353 mmol) foi adicionado seguido por tetracis(trifenilfosfina)paládio (0) (0,150 g, 0,130 mmol). A mistura foi estimulada com N2, e o frasco foi selado. A mistura foi em seguida a quecida para 120°C durante 14 h. Após resfriamento para rt, a mistura foi diluída com DMF, e filtrada através de uma almofada de celita para remover quaisquer sólidos. O líquido foi concentrado sob pressão reduzida, e o resíduo foi dissolvido em DMF. A solução de DMF foi purificada por HPLC prep para fornecer 0,037 g de um sólido não totalmente branco como o 1 -(7-(5-(hidroximetil)-1H-pirazol-3-il)-4-metóxi-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)etano-1,2-diona. LCMS: m/e 529,2 (M + H)+, tempo de retenção 1,78 min (Método 2). 1H RMN (500 MHz, MeOD) δ ppm 8,65 (s, 1 H) 7,98 (s, 1H) 7,56 - 7,80 (m, 5 H) 7,16 (s, 1 H) 4,81 (s, 2 H) 4,15 (s, 3 H) 3,83 - 3,87 (m, 2H) 3,63 - 3,68 (m, 2 H) 3,40 - 3,44 (m, 2 H) 3,34 - 3,39 (m, 2H).
Preparação de N1,N1 -dimetil-N2-(1H-pirazol-3-il)etano- 1,2-diamina
<formula>formula see original document page 93</formula>
3-aminopirazol (5,0 g, 60,2 mmol) foi dissolvido em AcOH (20 ml). Uma solução de H2O a 50% de cloroacetaldeído (8,0 mL, 63,2 mmol) foi lentamente adicionada à mistura. A mistura foi resfriada para 0°C, e cia-noboroidreto de sódio (4,2 g, 66,8 mmol) foi adicionado em duas porções durante dez minutos à solução resfriada. A mistura foi aquecida para rt e agitada durante 5 h. A mistura foi cuidadosamente tornada básica com 1N de NaOH para pH = 10. A mistura foi dividida com CH2CI2, e foi extraída cinco vezes. As camadas orgânicas combinadas foram secadas com MgSO4, filtradas, e concentradas sob pressão reduzida. Uma coluna foi desenvolvida para purificar o produto utilizando um gradiente de 0 a 5% de MeOH em CH2CI2. O N-(2-cloroetil)-1 H-pirazol-3-amina resultante foi recuperado como um óleo incolor, claro (2,1 g). LCMS: m/e 146,2 (M + H)+, tempo de retenção 0,72 min (Método 3).
Em um frasco selável, o N-(2-cloroetil)-1H-pirazol-3-amina (0,214 g, 1,47 mmol) foi combinado com 1,5 mL de dimetilamina (40 % em H2O). O frasco de mistura foi selado, e a mistura foi aquecida para 100°C durante 16 h. A mistura foi resfriada para rt, e transferida para um frasco de base redonda com MeOH. O solvente foi removido sob pressão reduzida para fornecer o N1,N1-dimetil-N2-(1H-pirazol-3-il)etano-1,2-diamina em produção quantitativa. LCMS: m/e 155,3 (M + H)+, tempo de retenção 0,96 min (Método 3).
Preparação de 1 -(7-(3-(2-(dimetilamino)etilamino)-1H-pirazol-1 -il)-4-fIuoro-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1 -fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)etano- 1,2-diona TFA (Composto B-23)
<formula>formula see original document page 94</formula>
(Composto B-23)
1 -(7-bromo-4-fluoro-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1-fenil-1H- tetrazol-5-il)piperazin-1-il)etano-1,2-diona (0,100 g, 0,200 mmol) foi combinado com o N1,N1-dimetil-N2-(1H-pirazol-3-il)etano-1,2-diamina (0,140 g, 0,200 mmol), 1-metil-2-pirrolidinona (0,5 mL), K2CO3 (0,028 g, 0,200 mmol), e pó de Cu (0,013 g, 0,200 mmol). A mistura foi aquecida para 160°C durante 4,5 h. A mistura foi resfriada para rt, e diluída com DMF. A mistura de DMF foi filtrada através de uma almofada de celita para remover quaisquer 10 sólidos, e a solução foi purificada por HPLC prep. Após purificação, o 1-(7-(3-(2-(dimetilamino)etilamino)-1 H-pirazol-1-il)-4-fluoro-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1 -fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)etano-1,2-dionaTFA (0,01 Og) foi recuperado como um sólido marrom. LCMS: m/e 573,5 (M + H)+, tempo de retenção 1,88 min (Método 2). 1H RMN (500 MHz, MeOD) δ ppm 8,42 (d, 15 J = 2,52 Hz, 1 H) 8,30 (s, 1 H) 7,95 (d, J = 2,06 Hz, 1 H) 7,56 - 7,72 (m, 5 H) 6,01 (d, J = 2,75 Hz, 1H) 3,78 - 3,86 (m, 4 H) 3,59 - 3,64 (m, 2H) 3,42 - 3,46 (m, 2H) 3,34 - 3,39 (m, 4H) 2,95 (s, 6H).
Preparação de 1 -(7-(5-((2-hidroxietilamino)metil)-1H-pirazol-3-il)-4-metóxi-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-( 1 -fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)etano-20 1,2-diona TFA (Composto B-24) <formula>formula see original document page 95</formula>
(Composto B-24)
Em um frasco selável, uma mistura de 1-(7-cloro-4-metóxi-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1 -fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)etano-1,2-diona (0,240 g, 0,509 mmol) em 1,4-dioxano (5 mL) foi preparada. 2-((3-5 (tributiletanil)-1H-pirazol-5-il)metilamino)etanol (0,241 g, 0,560 mmol) foi adicionado seguido por tetracis(trifenilfosfina)paládio (0) (0,177 g, 0,153 mmol). A mistura foi estimulada com N2, e o frasco foi selado. A mistura foi em seguida aquecida para 120°C durante 14 h. Após resfriamento para rt, a mistura foi diluída com DMF, e filtrada através de uma almofada de celita para 10 remover quaisquer sólidos. O líquido foi concentrado sob pressão reduzida, e o resíduo foi dissolvido em DMF. A solução de DMF foi purificada por H-PLC prep para fornecer 0,050 g de um sólido amarelo claro como o 1-(7-(5-((2-hidroxietilamino)metil)-1H-pirazol-3-il)-4-metóxi-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)etano-1,2-dionaTFA. LCMS: m/e 572,5 (M + H)+, tempo de retenção 1,68 min (Método 2). 1H RMN (500 MHz1 MeOD) δ ppm 8,57 (s, 1H) 8,06 (s, 1H) 7,60 - 7,75 (m, 5H) 7,42 (s, 1H) 4,54 (s, 2H) 4,14 (s, 3H) 3,83 - 3,91 (m, 4H) 3,62 - 3,68 (m, 2H) 3,24 -3,45 (m, 6H).
Preparação de 1-(7-(5-((2-(dimetilamino)etilamino)metil)-1H-pirazol-3-il)-4-metáxi-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)etano-1,2-diona TFA (Composto B-25) <formula>formula see original document page 96</formula>
(Composto B-25)
Em um frasco selável, uma mistura de 1-(7-cloro-4-metóxi-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1 -fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)etano-1,2-5 diona (0,140 g, 0,306 mmol) em 1,4-dioxano (5 mL) foi preparada. 2-((3-(tributiletanil)-1H-pirazol-5-il)metilamino)etanol (0,14 g, 0,306 mmol) foi adicionado seguido por tetracis(trifenilfosfina)paládio (0) (0,106 g, 0,092 mmol). A mistura foi estimulada com N2, e o frasco foi selado. A mistura foi em seguida aquecida para 120°C durante 15 h. Após resfriamento para rt, a mistura foi diluída com DMF, e filtrada através de uma almofada de celita para remover quaisquer sólidos. O líquido foi concentrado sob pressão reduzida, e o resíduo foi adsorvido em sílica gel. Uma coluna flash foi desenvolvida utilizando um gradiente de 0 a 100% de MeOH em CH2CI2. Todavia o produto ficou sobre a coluna, assim ela foi estimulada com DMF para remover o produto. O DMF foi principalmente removido sob pressão reduzida, e foi também removido dissolvendo-se o produto em CH2CI2 e lavando a camada orgânica 5 vezes com H2O. A camada orgânica foi secada com Na2SO4, foi filtrada, e concentrada sob pressão reduzida. O 1-(7-(5-((2-(dimetila-mino)etilamino)metil)-1H-pirazol-3-il)-4-metóxi-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2- (4-(1 -fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)etano-1,2-dionaTFA (0,053 g) foi recuperado como um sólido amarelo claro. LCMS: m/e 599,4 (M + H)+, tempo de retenção 1,73 min (Método 2). 1H RMN (500 MHz, MeOD) δ ppm 8,27 (s, 1 H) 7,95 (s, 1H) 7,54 - 7,68 (m, 5 H) 6,92 (s, 1 H) 4,02 (s, 3 H) 3,93 (s, 2 H) 3,77 - 3,82 (m, 2 H) 3,52 - 3,58 (m, 2 H) 3,35 - 3,40 (m, 2 H) 3,24 - 3,30 (m, 2Η) 2,78 (t, J = 6,71 Hz, 2 Η) 2,53 (t, J = 6,71 Hz1 2Η) 2,28 (s, 6Η). Preparação de 1 -(7-5-(((2-(dimetHamíno)etil)(metil)amino)metil)-1 H-pirazol-3-il)-4-metóxi-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)etano-1,2-dionaTFA (Composto B-26)
<formula>formula see original document page 97</formula>
(Composto B-26)
Em um frasco selável, uma mistura de 1-(7-cloro-4-metóxi-1H- pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1 -fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)etano-1,2-diona (0,165 g, 0,353 mmol) em 1,4-dioxano (5 mL) foi preparada. N1,N1,N2-trimetil-N2-((3-(tributiletanil)-1H-pirazol-5-il)metil)etano-1,2-diamina (0,175 g, 0,371 mmol) foi adicionado seguido por tetracis(trifenilfosfina)paládio (0) (0,122 g, 0,106 mmol). A mistura foi estimulada com N2, e o frasco foi selado. A mistura foi em seguida aquecida para 120°C durante 15 h. Após a reação ser incompleta por LCMS, mais 0,050 g de N1,N1,N2-trimetil-N2-((3-(tributiletanil)-1H-pirazol-5-il)metil)etano-1,2-diamina foi adicionado juntamente com 0,075 g de tetracis(trifenilfosfina)paládio (0). A mistura foi estimulada com N2, selada, e reaquecida para 120°C durante 6 h. Após resfriamento para rt, a mistura foi diluída com DMF, e filtrada através de uma almofada de celita para remover quaisquer sólidos. O líquido foi concentrado sob pressão reduzida, e o resíduo foi dissolvido em DMF. A solução de DMF foi purificada por HPLC prep para fornecer 0,040 g de um sólido amarelo claro como o 1 -(7-(5-(((2-(dimetilamino)etil)(metil)amino)metil)-1H-pirazol-3-il)-4-metóxi-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1 -fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)etano-1,2-dionaTFA. LCMS: m/e 613,4 (M + H)+, tempo de retenção 1,80 min (Método 2). 1H RMN (500 MHz1 MeOD) δ ppm 8,66 (s, 1 H) 8,06 (s, 1H) 7,59 -7,74 (m, 5 H) 7,45 (s, 1H) 4,33 (s, 2H) 4,15 (s, 3 H) 3,82 - 3,87 (m, 2 H) 3,62 - 3,67 (m, 2 H) 3,56 (t, J = 6,56 Hz, 2 H) 3,39 - 3,44 (m, 2H) 3,32 -3,38 (m, 4 H) 2,99 (s, 6 H) 2,66 - 2,69 (m, 3H).
Preparação de 1-(4-metóxi-7-(5-((2-(piridin-4-il)etilamino)metil)-1H-pirazol-3-il)-1H-pirrolo[2,3-d]piridin-3-il)-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)etano-1,2-diona TFA (Composto B-27)
<formula>formula see original document page 98</formula>
(Composto B-27)
Em um frasco selável, uma mistura de 1-(7-cloro-4-metóxi-1H-10 pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)etano-1,2-diona (0,195 g, 0,417 mmol) em 1,4-dioxano (7 mL) foi preparada. 2-(piridin-4-il)-N-((3-(tributiletanil)-1H-pirazol-5-il)metil)etanamina (0,205 g, 0,417 mmol) foi adicionado seguido por tetracis(trifenilfosfina)paládio (0) (0,144 g, 0,125 mmol). A mistura foi estimulada com N2, e o frasco foi selado. A mistura foi em seguida aquecida para 120°C durante 14 h. Após resfriamento para rt, a mistura foi diluída com CH2CI2 e MeOH, e filtrada através de uma al-mofada de celita para remover quaisquer sólidos. Os sólidos foram lavados com MeOH para assegurar que nenhum produto foi deixado para trás. O líquido foi concentrado sob pressão reduzida, e o resíduo foi dissolvido em DMF. A solução de DMF foi purificada por HPLC prep para fornecer 0,028 g de um sólido amarelo claro como o 1-(7-(5-((2-hidroxietilamino)metil)-1H-pirazol-3-il)-4-metóxi-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)etano-1,2-diona TFA. LCMS: m/e 633,4 (M + H)+, tempo de retenção 1,70 min (Método 2). 1H RMN (500 MHz1 MeOD) δ ppm 8,80 - 8,85 (m, J = 6,10 Hz1 2 H) 8,60 (s, 1 H) 8,05 - 8,10 (m, 3 H) 7,59 - 7,73 (m, 5 H) 7,50 (s, 1 H) 4,61 (s, 2 H) 4,14 (s, 3 H) 3,81 - 3,87 (m, 2 H) 3,60 - 3,68 (m, 4 H) 3,04-3,07 (m, 6 H).
Preparação de 3-(4-fluoro-3-(2-oxo-2-(4-( 1 -fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)acetil)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1 H-pirazol-5-carboxilato de etila B33
<formula>formula see original document page 99</formula>
A um tubo selado contendo 1 -(7-bromo-4-fIuoro-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)etano- 1,2-diona (Composto B-1) (1,24 g, 2,48 mmol) em 1,4-dioxano (20 mL) foram adicionados 3-(tributiletanil)-1H-pirazol-5-carboxilato de etila (1,12 g, 2,61 mmol) e Pd(PPh3)4 (0,87 g, 0,75 mmol). A mistura foi estimulada com N2, e foi selada e aquecida para 100 °C. Após 14 h de aquecimento, a mistura foi resfriada para rt, foi diluída com MeOH1 e foi filtrada através de uma almofada de celi-ta para remover quaisquer sólidos. A solução foi concentrada sob pressão reduzida, e foi re-dissolvida em DMF. A solução de DMF foi carregada na HPLC prep durante purificação. Após purificação, o produto título foi isolado como um sólido não totalmente branco (0,901 g). LCMS: m/e 559,6 (M + H)+, tempo de retenção 2,283 min (Método 2). 1H RMN (500 MHz, DMSO-D6) δ ppm 14,52 (s, 1 H) 12,35 (s, 1 H) 8,26 - 8,41 (m, 2 H) 7,36 - 7,76 (m, 6 H) 4,29 - 4,47 (m, J = 6,71 Hz, 2 H) 3,09 - 3,80 (m, 8 H) 1,36 (s, 3 H). Preparação de ácido 3-(4-fluoro-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il) pipe-razin-1-il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1H-pirazol-5-carboxílico <formula>formula see original document page 100</formula>
A um frasco de base redonda contendo 3-(4-fluoro-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1H-pirazol-5-carboxilato de etila (0,058 g, 0,10 mmol) em DMF (5 mL) e água (5 mL) foi adicionado monoidrato de hidróxido de lítio (0,044 g, 1,05 mmol). A mistura foi aquecida para 100°C durante 21,5h. A mistura foi resfriada para rt, e HCI foi adicionado para pH = 1. Os sólidos precipitaram da solução, e foram coletados por filtração para fornecer o composto título como um sólido amarelo (0,03 g). LCMS: m/e 531,15 (M + H)+, tempo de retenção 2,10 min (Método 2). 1H RMN (500 MHz, DMSO-D6) δ ppm 14,37 (s, 1 H) 13,58 (s, 1H) 12,23 (s, 1 H) 8,21 - 8,42 (m, 2H) 7,52 - 7,77 (m, 5H) 7,35 (s, 1H) 3,08 -3,76 (m, 8H).
C-7 Pirazol carboxamidas foram preparados utilizando dois métodos diferentes. Um procedimento geral para cada método é fornecido juntamente com caracterizações daqueles compostos de cada método.
Método 1
A um frasco contendo de ácido 3-(4-fluoro-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1 H-pirazol-5-carboxílico (0,02 - 0,07 g, 1 equiv) em DMF (2 mL) foi adicionada Base de Hunig (0,2 mL) seguida pela amina (1,2 equiv) e TBTU (1,1 equiv). A mistura foi estimulada com N2, e foi agitada em rt. Após 15-72 h, a mistura foi sacia- da com água e a solução foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi dissolvido em DMF, e filtrado através de uma almofada de celi-ta para remover quaisquer sólidos restantes. A solução de DMF foi purificada por HPLC prep para fornecer os produtos de amida como seus sais de TFA.
<table>table see original document page 101</column></row><table>
Composto: N-(2-(dimetilamino)etil)-3-(4-fluoro-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1 H-tetra-zol-5-il)piperazin-1-il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-N-metil-1H-pirazol-5-carboxamida-TFA
1H RMN (500 MHz1 MeOD) δ ppm 8,37 - 8,42 (m, 1 H) 8,29 (s, 1 H) 7,58 -7,74 (m, 5 H) 7,49 (s, 1 H) 3,97 - 4,04 (m, 2 H) 3,82 - 3,87 (m, 2 H) 3,61 - 3,67 (m, 2 Η) 3,27 - 3,55 (m, 9 Η) 3,06 (s, 6 Η)
Composto: 3-(4-fluoro-3-(2-oxo-2-(4-(1 -fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il) acetil)-1 H-pirroio[2,3-c]piridin-7-il)-N-(2-hidroxietil)-N-metil-1 H-pirazol-5-carboxamida-TFA
1H RMN (500 MHz, MeOD) δ ppm 8,45 (s, 1 H) 8,28 (d, J = 2,75 Hz, 1 H) 7,57 - 7,71 (m, 5 H) 7,42 (d, J = 6,71 Hz, 1H) 3,71 - 3,89 (m, 6H) 3,62 - 3,66 (m, 2H) 3,16-3,46 (m, 7H)
Composto: 3-(4-fluoro-3-(2-oxo-2-(4-(1 -fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il) acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-N-(2-hidroxietil)-1H-pirazol-5-carboxamida-TFA
1H RMN (500 MHz, MeOD) δ ppm 8,39 (s, 1 H) 8,24 (d, J = 2,44 Hz, 1 H) 7,57 - 7,71 (m, 5 H) 7,44 (s, 1H) 3,81 - 3,85 (m, 2 H) 3,76 (t, J = 5,65 Hz, 2 H) 3,61 - 3,66 (m, 2 H) 3,55 (t, J = 5,65 Hz1 2 H) 3,36 - 3,41 (m, 2 H) 3,29 -3,35 (m, 2 H)
Composto: N-(3-(dimetilamino)propil)-3-(4-fluoro-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-N-metil-1H-pirazol-5-carboxamidaTFA
1H RMN (500 MHz1 MeOD) δ ppm 8,40 (s, 1H) 8,29 (s, 1H) 7,59 - 7,73 (m, 5 H) 7,47 (s, 1 H) 3,81 - 3,87 (m, 2 H) 3,69 - 3,76 (m, 2 H) 3,62 - 3,66 (m, 2 20 H) 3,16 - 3,48 (m, 7H) 2,97 (s, 6 H) 2,87 - 2,91 (m, 2H) 2,11 - 2,25 (m, 2H) Composto: 3-(4-fluoro-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-N-(3-(4-metilpiperazin-1 -il)propil)-1H-pirazol-5-carboxamida-TFA
1H RMN (500 MHz, MeOD) δ ppm 8,37 (s, 1H) 8,27 (d, J = 2,44 Hz, 1 H) 25 7,58 - 7,74 (m, 5 H) 7,46 (s, 1 H) 3,80 - 3,86 (m, 2 H) 3,60 - 3,66 (m, 2 H) 3,27 - 3,58 (m, 14 H) 3,05 - 3,12 (m, 2 H) 2,94 (s, 3 H) 1,99 - 2,07 (m, 2 H) Método 2
A um frasco selável contendo 3-(4-fluoro-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1H-pirazol-5-carboxilato de etila (0,05 g, 0,09 mmol) foi adicionada a amina (0,5 mL). A mistura foi agitada em rt durante três dias, em seguida foi diluída com DMF e passada através de uma almofada de celita para remover quaisquer sólidos. A solução de DMF foi em seguida purificada por HPLC prep para fornecer os produtos de amida desejados.
<table>table see original document page 103</column></row><table>
Composto: 3-(4-fluoro-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il) acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-N-(2-(pirrolidin-1 -il)etil)-1H-pirazol-5-car-5 boxamida-TFA
1H RMN (500 MHz, MeOD) δ ppm 8,38 (s, 1 H) 8,25 (d, J = 2,44 Hz, 1H) 7,56 - 7,70 (m, 5 H) 7,45 (s, 1H) 3,78 - 3,89 (m, 6 H) 3,61 - 3,66 (m, 2 H) 3,50 (t, J = 5,80 Hz, 2 H) 3,35 - 3,41 (m, 2 H) 3,29 - 3,35 (m, 2 H) 3,16 - 3,26 (m, 2H) 2,01 -2,26 (m, 4 H). 10 Composto: 3-(4-fluoro-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il) acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-N-(2-(piridin-4-il)etil)-1H-pirazol-5-carboxa-mida-TFA
1H RMN (500 MHz, MeOD) δ ppm 8,78 (d, J = 6,71 Hz, 2 H) 8,37 (s, 1 H) 8,23 (d, J = 2,44 Hz, 1 H) 8,07 (d, J = 6,71 Hz1 2 H) 7,62 - 7,69 (m, 5 H) 7,38 15 (s, 1 H) 3,80 - 3,86 (m, 4 H) 3,61 - 3,64 (m, 2H) 3,28 - 3,41 (m, 6 H).
Composto: 3-(4-fluoro-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il) acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-N-(2-morfolinoetil)-1H-pirazol-5-carboxa- mida-TFA
1H RMN (500 MHz1 MeOD) δ ppm 8,38 (s, 1 H) 8,27 (d, J = 2,75 Hz, 1 H) 7,58 - 7,71 (m, 5 H) 7,47 (s, 1 H) 4,11 (s, 2 H) 3,68-3,89 (m, 8 H) 3,63 (d, J = 4,88 Hz1 4 H) 3,61 - 3,65 (m, 2 H) 3,48 (t, J = 5,95 Hz, 2 H) 3,37 - 3,40 (m, 2H).
Preparação de 3-(4-fluoro-1-metil-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il) pipe-razin-1-il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-cJpiridin-7-il)-1 -metil-1H-pirazol-5-carboxilato de etila e 3-(4-fluoro-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1 -metil-1H-pirazol-5-carboxilato de etila. B-43 e B-60
<formula>formula see original document page 104</formula>
A uma solução de 3-(4-fluoro-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5- il)piperazin-1 -il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1H-pirazol-5-carboxilato de etila (0,050 g, 0,09 mmol) em DMF (2 mL) foi adicionada uma solução de THF a 2M de NaHMDS (0,11 mL, 0,22 mmol) gota a gota seguida por Mel (0,05 mL, 0,9 mmol). A mistura foi agitada durante 60 minutos em rt, e foi saciada com 2 mL de H2O. O solvente foi removido sob pressão reduzida, e o resíduo foi re-dissolvido em DMF. A solução de DMF foi passada através de uma almofada de celita para remover quaisquer sólidos restantes, e foi purificada por HPLC prep para fornecer 3-(4-fluoro-1-metil-3-(2-oxo-2-(4-(1- fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-d]piridin-7-il)-1-metil- 1H-pirazol-5-carboxilato de etila (0,011g) e 3-(4-fluoro-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1 -metil-1 H-pirazol-5-carboxilato de etila (0,011g) como os produtos.
3-(4-fluoro-1-metil-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)pipera- zin-1 -il)acetil)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1-metil-1H-pirazol-5-carboxilato de etila: LCMS: m/e 587,7(M + H)+, tempo de retenção 2,213 min (Método 2). 1H RMN (500 MHz, MeOD) δ ppm 8,42 (s, 1Η) 8,31 (s, 1Η) 7,51 - 7,70 (m, 5 Η) 7,25 (s, 1Η) 4,40 (q, J = 6,92 Hz, 2Η) 4,27 (s, 3 Η) 3,77 · 3,83 (m, 2 Η) 3,73 (s, 3 Η) 3,57 - 3,63 (m, 2 Η) 3,33 - 3,40 (m, 2Η) 3,26 - 3,33 (m, 2Η) 1,39 (t, J = 7,02 Hz, 3 Η). 3-(4-fluoro-3-(2-oxo-2-(4-(1 -fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 - il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1 -metil-1H-pirazol-5-carboxilato de etila: LCMS: m/e 573,5 (M + H)+, tempo de retenção 1,747 min (Método 1). 1H RMN (500 MHz, CLOROFÓRMIO-D) δ ppm 11,55 (s, 1 H) 8,43 (s, 1 H) 8,29 (s, 1H) 7,73 (s, 1 H) 7,48 - 7,67 (m, 5H) 4,35 - 4,48 (m, 2 H) 4,31 (s, 3 H) 10 3,80 - 3,89 (m, 2 H) 3,62 - 3,72 (m, 2 H) 3,30 - 3,47 (m, 4 H) 1,34 - 1,49 (m, 3H).
Preparação de 3-(4-fluoro-3-(2-oxo-2-(4-(1 -fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-N-(2-hidroxietil)-1 -metil-1H-pirazol-5-carboxamida TFA.
B-44
<formula>formula see original document page 105</formula>
A um frasco selável contendo 3-(4-fluoro-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1 -metil-1 H-pirazol-5-carboxilato de etila (0,047 g, 0,08 mmol) foi adicionada etanolamina 20 (0,7 mL). A mistura foi selada e aquecida para 50°C durante 20,5 h. A mistura foi resfriada para rt, e foi diluída com DMF e foi passada através de uma almofada de celita para remover quaisquer sólidos. A solução de DMF foi purificada por HPLC prep para fornecer 3-(4-fluoro-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-N-(2-hidroxietil)-1-metil-1H-pirazol-5-carboxamidaTFA (0,014g) como um sólido não totalmente branco. LCMS: m/e 588,7 (M + H)+ tempo de retenção 2,03 min (Método 2)1H RMN (500 MHz, CDCl3) δ ppm 8,35 (s, 1H) 8,23 (s, 1H) 7,50 - 7,61 (m, 6 Η) 4,29 (s, 3 Η) 3,78 - 3,85 (m, 4 Η) 3,54 - 3,64 (m, 4 Η) 3,40 (s, 2 Η) 3,29 - 3,34 (m, 2 Η) 2,79 (s, 1Η).
Preparação de N-(3-(dimetilamino)propil)-3-(4-fluoro-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)acetil)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1-metil- 1H-5 pirazol-5-carboxamida· TFA. B-45
<formula>formula see original document page 106</formula>
A um frasco selável contendo 3-(4-fluoro-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1 -metil-1H- pirazol-5-carboxilato de etila (0,058 g, 0,10 mmol) foi adicionado N1,N1-dimetilpropano-1,3-diamina (0,7 mL). A mistura foi selada e aquecida para 50°C durante 20,5 h. A mistura foi resfriada para rt, e foi diluída com DMF e foi passada através de uma almofada de celita para remover quaisquer sólidos. A solução de DMF foi purificada por HPLC prep para fornecer N-(3-(dimetilamino)propil)-3-(4-fluoro-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)pipera-zin-1 -il)acetil)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1-metil-1H-pirazol-5-carboxami-da-TFA. (0,020 g) como um sólido não totalmente branco. LCMS: m/e 629,5 (M + H)+, tempo de retenção 1,93 min (Método 2). 1H RMN (500 MHz, Me-OD) δ ppm 8,75 (s, 1 H) 8,61 (s, 1H) 7,97 - 8,11 (m, 5 H) 7,79 (s, 1 H) 4,69 (s, 3 H) 4,21 - 4,25 (m, 2 H) 4,01 - 4,04 (m, 2H) 3,91 (t, J = 6,26 Hz, 2 H) 3,76 - 3,82 (m, J = 3,66 Hz, 2 H) 3,65 - 3,75 (m, 10H) 2,45 - 2,52 (m, 2H). Preparação de 4-fluoro-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil- 1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridina-7-carbonitrilo. B-46 <formula>formula see original document page 107</formula>
A um frasco selável contendo 1-(7-bromo-4-fluoro-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)etano-1,2-diona (0,10 g, 0,20 mmol) em 1,4-dioxano (5 mL) foi adicionado cianeto de tributilesta-5 nho (0,07 g, 0,22 mmol) seguido por Pd(PPh3)4 (0,07 g, 0,06 mmol). A mistura foi estimulada com N2, e o tubo foi selado e aquecido para 100°C. Após 16 h de aquecimento, a mistura foi resfriada para rt, e o solvente foi removido em vácuo. O resíduo foi dissolvido em DMF e foi filtrado através de uma almofada de celita para remover quaisquer sólidos restantes. A solução de 10 DMF foi purificada por HPLC prep para fornecer o composto título como um sólido não totalmente branco (0,028 g). LCMS: m/e 446,2 (M + H)+, tempo de retenção 1,81 min (Método 2). 1H RMN (500 MHz, DMSO-D6) δ ppm 14,06 (s, 1 H) 8,66 (s, 1H) 8,50 (d, J = 2,14 Hz, 1H) 7,56 -7,70 (m, 5H) 3,67 -3,72 (m, 2H) 3,33 - 3,50 (m, 4 H) 3,13 - 3,17 (m, 2H). 15 Preparação de 1-(7-acetil-4-fluoro-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)etano-1,2-diona. B-47
<formula>formula see original document page 107</formula>
A um frasco selável contendo 1 -(7-bromo-4-fluoro-1 H-pirrolo[2,3-c] piridin-3-il)-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)etano-1,2-diona (0,10 g, 0,20 mmol) em 1,4-dioxano (5 mL) foi adicionado tributil(1-etoxivinil) esta-nho (0,079 g, 0,22 mmol) seguido por Pd(PPh3)4 (0,07g, 0,06 mmol). A mistura foi estimulada com N2, e o tubo foi selado e aquecido para 100°C. Após 16h de aquecimento, a mistura foi resfriada para rt, e o solvente foi removido em vácuo. O resíduo foi dissolvido em DMF e foi filtrado através de uma almofada de celita para remover quaisquer sólidos restantes.
A solução de DMF foi purificada por HPLC prep para fornecer o composto título como um sólido não totalmente branco (0,025 g). LCMS: m/e 463,38 (M + H)+, tempo de retenção 1,88 min (Método 2). 1H RMN (500 MHz, CDCI3) δ ppm 11,02 (s, 1H) 8,35 (s, 1H) 8,31 (d, J = 2,75 Hz, 1H) 7,52 - 7,62 (m, 5H) 3,81 -5 3,85 (m, 2 H) 3,61 - 3,65 (m, 2H) 3,39 - 3,43 (m, 2H) 3,31 - 3,35 (m,2 H) 2,80 - 2,83 (m, 3H).
Preparação de (E)-1-(4-fluoro-7-(1-(metoxiimino)etil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)etano-1,2-diona.
B-48
<formula>formula see original document page 108</formula>
A uma suspensão de 1-(7-acetil-4-fluoro-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin- 3-il)-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)etano-1,2-diona (0,05 g, 0,11 mmol) em EtOH (10 mL) foi adicionado cloridrato de metoxilamina (0,05 g, 0,60 mmol). A mistura foi aquecida ao refluxo durante 1h, e foi em seguida resfriada para rt, e concentrada em vácuo. O resíduo foi diluído com MeOH, e os sólidos que se formaram foram coletados e lavados com água. O composto título foi isolado como um sólido amarelo claro (0,025 g). LCMS: m/e 492,4 (M + H)+, tempo de retenção 2,068 min (Método 2). 1H RMN (500 MHz, DMSO-D6) δ ppm 12,02 (s, 1H) 8,36 (d, J= 2,14 Hz, 1H) 8,27 (d, J = 3,36 Hz, 1 H) 7,56 - 7,71 (m, 5H) 4,13 - 4,16 (m, 3H) 3,68 - 3,73 (m, 2H) 3,43 - 3,48 (m, 2 H) 3,29 - 3,36 (m, 2 H) 3,13 - 3,18 (m, 2 H) 2,36 (s, 3H).
Preparação de (E)-1-(4-fluoro-7-(1-(hidroxiimino)etil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)etano-1,2-diona. <formula>formula see original document page 109</formula>
A uma suspensão de 1-(7-acetil-4-fluoro-1H-pirrolo[2,3-c]piridin- 3-il)-2-(4-(1 -fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)etano-1,2-diona (0,05 g, 0,11 mmol) em EtOH (10 mL) foi adicionado cloridrato de hidroxilamina (0,04 g, 50,58 mmol). A mistura foi aquecida ao refluxo durante 1 h, e foi em seguida resfriada para rt, e concentrada em vácuo. O resíduo foi diluído com MeOH, e os sólidos que se formaram foram coletados e lavados com água. O composto título foi isolado como um sólido não totalmente branco (0,027 g). LCMS: m/e 478,5 (M + H)+, tempo de retenção 1,53 min (Método 1). 1H RMN (500 MHz, DMSO-D6) δ ppm 11,95 (s, 1 H) 11,61 (s, 1 H) 8,34 (d, J = 1,83 Hz, 1 H) 8,30 (d, J = 3,36 Hz, 1 H) 7,56 - 7,71 (m, 5H) 3,68 - 3,72 (m, 2 H) 3,43 - 3,48 (m, 2 H) 3,30 - 3,34 (m, 2H) 3,13 - 3,17 (m, 2 H) 2,35 (s, 3 H). Preparação de 4-fluoro-3-(2-oxo-2-(4-(1 -fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridina-7-carboxamida.
B-50
<formula>formula see original document page 109</formula>
A um frasco selável contendo 1-(7-bromo-4-fluoro-1H-pirrolo[2,3- c]piridin-3-il)-2-(4-(1 -fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)etano-1,2-diona (1,0 g, 2,0 mmol) em 1,4-dioxano (20 mL) foi adicionado cianeto de tributilestanho (0,70 g, 2,2 mmol) seguido por Pd(PPh3)4 (0,12 g, 0,1 mmol). A mistura foi estimulada com N2, e o tubo foi selado e aquecido para 100 °C. Após 20h de aquecimento, a mistura foi resfriada para rt, e foi diluída com MeOH (50 mL) e foi filtrada através de uma almofada de celita para remover os sólidos. À solução foi adicionada H2O (20 mL), e a mistura foi aquecida com uma pistola térmica. Os sólidos formaram-se sob resfriamento, e foram coletados por filtração. O sólidos foram dissolvidos em DMF e foram purificados por HPLC prep para fornecer o composto título como um sólido não totalmente branco (30 mg). LCMS: m/e 464,11 (M + H)+, tempo de retenção 1,095 min (Método 3). 1H RMN (500 MHz, DMSO-D6) δ ppm 12,78 (s, 1 H) 8,34 (d, J = 5 2,14 Hz, 1 H) 8,30 (s, 1H) 8,25 (d, J = 3,36 Hz, 1H) 7,88 (s, 1H) 7,56 - 7,71 (m, 5H) 3,67 - 3,72 (m, 2H) 3,43 - 3,47 (m, 2H) 3,30 - 3,34 (m, 2H) 3,13 -3,17 (m, 2H).
Preparação de 3-(4-fluoro-3-(2-oxo-2-(4-(3-fenil-1H-pirazol-4-il)piperazin-1-il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1 H-pirazol-5-carboxilato de etila.
B-51
<formula>formula see original document page 110</formula>
A um frasco selável contendo ácido 2-(7-bromo-4-fluoro-1H- pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-oxoacético (0,15 g, 0,52 mmol) em 1,4-dioxano (5 mL) foi adicionado ácido 2-(7-(5-(etoxicarbonil)-1H-pirazol-3-il)-4-fluoro-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-oxoacético (0,24 g, 0,55 mmol) seguido por Pd(PPh3)4 (0,18 g, 0,16 mmol). A mistura foi estimulada com N2, e o tubo foi selado e aquecido para 100°C. Após 3 h de aquecimento, a mistura foi res-friada para rt, e foi diluída com MeOH. A solução foi passada através de uma almofada de celita para remover os sólidos, e a solução resultante foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em DMF, e foi carregado na HPLC prep durante purificação. O ácido 2-(7-(5-(etoxicarbonil)-1H-pirazol-3-il)-4-fluoro-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-oxoacético foi isolado como um sólido não totalmente branco (0,043 g). LCMS: m/e 347,3 (M + H)+, tempo de retenção 1,68 min (Método 2).A uma solução de ácido 2-(7-(5-(etoxicarbonil)-1H-pirazol-3-il)-4- fluoro-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-oxoacético (0,017 g, 0,049 mmol) em DMF (1,5 mL) foi adicionado TBTU (0,017 g, 0,054 mmol), diisopropiletilami-na (0,15 mL), e 1-(3-fenil-1H-pirazol-4-il)piperazina (0,011 g, 0,049 mmol). A mistura foi agitada sob N2 em rt durante 14,5h e foi saciada com 10 mL de H2O. O solvente foi removido sob pressão reduzida, e o resíduo foi dissolvido em DMF. A solução de DMF foi passada através de uma almofada de celita para remover os sólidos, e a solução de DMF foi purificada por HPLC prep para fornecer o composto título como um sólido branco (13,3 mg). LCMS: m/e 557,4 (M + H)+, tempo de retenção 1,79 min (Método 1). 1H RMN (500 MHz, MeOD) δ ppm 8,44 (s, 1H) 8,31 (d, J = 2,44 Hz, 1 H) 7,95 (d, J = 7,32 Hz, 2H) 7,63 (s, 1H) 7,56 (s, 1 H) 7,46 (t, J = 7,63 Hz, 2 H) 7,36 (t, J = 7,48 Hz, 1 H) 4,46 (q, J = 7,22 Hz, 2 H) 3,88 - 3,92 (m, 2H) 3,65 - 3,70 (m, 2H) 3,00 - 3,04 (m, 2H) 2,91 - 2,95 (m, 2H) 1,45 (t, J = 7,02 Hz, 3 H). Preparação de 3-(4-fluoro-3-(2-oxo-2-(4-(3-fenil-1H-pirazol-4-il)piperazin-1-il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-N-(2-hidroxietil)-1H-pirazol-5-carboxamida TFA. B-52
A um frasco contendo 3-(4-fluoro-3-(2-oxo-2-(4-(3-fenil-1H-pirazol-4-il)piperazin-1-il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1H-pirazol-5-car-boxilato de etila (0,025 g, 0,045 mmol) foi adicionado etanolamina (0,5 mL). A mistura foi agitada em rt durante 15,5 h, e foi diluída com DMF e passada através de uma almofada de celita para remover quaisquer sólidos. A solução de DMF foi purificada por HPLC prep para fornecer o composto título como um sólido não totalmente branco (0,01 Og). LCMS: m/e 572,4 (M + H)+, tempo de retenção 1,87 min (Método 2). 1H RMN (500 MHz, DMSO-D6) δ ppm 12,23 (s, 1 H) 8,67 (s, 1H) 8,36 (s, 1 H) 8,28 (s, 1H) 7,95 - 8,00 (m, 2 Η) 7,57 - 7,64 (m, 2 Η) 7,38 - 7,44 (m, 6,87 Hz, 2 Η) 7,28 (t, J = 6,56 Hz, 1Η) 3,74 - 3,80 (m, 2Η) 3,32 - 3,62 (m, 7Η) 2,84 - 2,91 (m, 2 Η) 2,73 - 2,80 (m, 2Η).
Preparação de N-(3-(dimetilamino)propil)-3-(4-fluoro-3-(2-oxo-2-(4-(3-fenil-1H-pirazol-4-il)piperazin-1-il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1 H-pirazol-5-carboxamida TFA. B-53
<formula>formula see original document page 112</formula>
A um frasco contendo 3-(4-fluoro-3-(2-oxo-2-(4-(3-fenil-1H-10 pirazol-4-il)piperazin-1-il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1H-pirazol-5-car-boxilato de etila (0,043 g, 0,077 mmol) foi adicionado N1 ,N1-dimetilpropano-1,3-diamina (0,5 mL). A mistura foi agitada em rt durante 113 h, e foi diluída com DMF e passada através de uma almofada de celita para remover quaisquer sólidos. A solução de DMF foi purificada por HPLC prep para fornecer o composto título como um sólido não totalmente branco (0,03g). LCMS: m/e 613,3 (M + H)+, tempo de retenção 1,91 min (Método 6). 1H RMN (500 MHz, MeOD) δ ppm 8,40 (s, 1H) 8,27 (d, J = 2,75 Hz, 1H) 7,94 (d, J = 7,32 Hz, 2 H) 7,64 (s, 1 H) 7,43 - 7,47 (m, 3 H) 7,35 (t, J = 7,32 Hz, 1 H) 3,87 - 3,91 (m, 2 H) 3,64 - 3,68 (m, 2 H) 3,53 (t, J = 6,41 Hz, 2 H) 3,24 - 3,29 (m, 2 H) 2,99 -20 3,03 (m, 2 H) 2,95 (s, 6 H) 2,90 - 2,94 (m, 2H) 2,05 - 2,13 (m, 2H).
Preparação de 3-(4-fluoro-3-(2-oxo-2-(4-(3-fenil-1H-pirazoí-4-H)piperazin-1 - il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-N-(2-morfolinoetil)1H-pirazol-5- carboxamida TFA.
B-54 <formula>formula see original document page 113</formula>
A um frasco contendo 3-(4-fluoro-3-(2-oxo-2-(4-(3-fenil-1H-pi-razol-4-il)piperazin-1 -il)acetil)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1H-pirazol-5-carbo-xilato de etila (0,038 g, 0,068 mmol) foi adicionado 2-morfolinoetanamina (0,5 mL). A mistura foi agitada em rt durante 113 h, e foi diluída com DMF e passada através de uma almofada de celita para remover quaisquer sólidos. A solução de DMF foi purificado por HPLC prep para fornecer o composto título como um sólido não totalmente branco (0,041 g). LCMS: m/e 641,6 (M + H)+, tempo de retenção 1,73 min (Método 2). 1H RMN (500 MHz, MeOD) δ ppm 8,39 (s, 1 H) 8,25 - 8,31 (m, 1 H) 7,92 - 7,97 (m, 2 H) 7,63 (s, 1 H) 7,42 -7,47 (m, 3 H) 7,35 (t, J = 7,48 Hz,1H) 4,07 - 4,16 (m, 2 H) 3,79 - 3,91 (m, 6 H) 3,70 - 3,77 (m, 2 H) 3,63 - 3,69 (m, 2 H) 3,46 - 3,50 (m, 2 H) 3,20 - 3,31 (m, 2 H) 2,98 - 3,03 (m, 2 H) 2,89 - 2,94 (m, 2 H).
Preparação de 4-fluoro-N-(2-hidroxietil)-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridina-7-carboxamida.
<formula>formula see original document page 113</formula>
A um frasco de base redonda de 15 mL contendo 1-(7-bromo-4-fluoro-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)etano-1,2-diona (0,05 g, 0,10 mmol) foram adicionados DMF (2,0 mL), trie- tilamina (0,4 mL), etanolamina (0,02 g, 0,33 mmol), e finalmente Pd(PPh3)4 (0,03 g, 0,03 mmol). O frasco foi colocado em equipadoxom um gauge de pressão e uma válvula de entrada de gás. O vaso foi selado e purgado com N2 três vezes, e foi em seguida purgado com monóxido de carbono três vezes, deixando a pressão de enchimento final de monóxido de carbono em 3,51 kg/cm2. O vaso foi aquecido para 50°C. Após 15 h de aquecimento, a mistura foi resfriada para rt, o monóxido de carbono foi removido por vácuo, e o vaso foi estimulado com N2. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida, e foi diluída com DMF. A solução de DMF foi passada através de uma almofada de celita para remover os sólidos, e foi purificada por HPLC prep.
O composto título foi recuperado como um sólido não totalmente branco (0,014 g). LCMS: m/e 508,3 (M + H)+, tempo de retenção 1,35 min (Método 1). 1H RMN (500 MHz, DMSO-D6) δ ppm 12,85 (s, 1 H) 8,82 (s, 1H) 8,36 (s, 1H) 8,28 (s, 1 H) 7,56 - 7,71 (m, 5 H) 3,67 - 3,72 (m, 2H) 3,55 - 3,60 (m, 2 H) 3,39 - 3,50 (m, 5 H) 3,30 - 3,35 (m, 2 H) 3,13 - 3,17 (m, 2H). Preparação de 4-(dimetilamino)-N-(2-hidroxietil)-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil- 1H-te trazol-5-il)piperazin-1 -il)ace til) -1H-pirrolo[2,3-c]piridina-7-carboxamida TFA. B-56
<formula>formula see original document page 114</formula>
A um frasco de base redonda de 15 mL contendo 1-(7-bromo-4-fluoro-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1 -fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)etano-1,2-diona (0,05 g, 0,10 mmol) foram adicionados DMF (2,0 mL), trie-tilamina (0,4 mL), etanolamina (0,02 g, 0,33 mmol), e finalmente Pd(PPh3)4 (0,03 g, 0,03 mmol). O frasco foi colocado em um vaso de reação Parr equipado com um gauge de pressão e uma válvula de entrada de gás. O vaso foi selado e purgado com N2 três vezes, e foi em seguida purgado com monóxido de carbono três vezes, deixando a pressão de enchimento final de monó- xido de carbono em 3,51 kg/cm2. O vaso foi aquecido para 70 °C. Após 15 h de aquecimento, a mistura foi resfriada para rt, o monóxido de carbono foi removido por vácuo, e o vaso foi estimulado com N2. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida, e foi diluída com DMF. A solução de DMF foi passada através de uma almofada de celita para remover os sólidos, e foi purificada por HPLC prep. O composto título foi recuperado como um sólido amarelo (0,020 g). LCMS: m/e 533,5 (M + H)+, tempo de retenção 1,35 min (Método 2). 1H RMN (500 MHz, MeOD) δ ppm 8,96 (s, 1 H) 8,65 (s, 1 H) 7,59 - 7,72 (m, 5H) 3,86 - 3,89 (m, 2 H) 3,79 (t, J = 5,65 Hz, 2 H) 3,68 - 3,71 (m, 2 H) 3,64 (t, J = 5,65 Hz, 2 H) 3,58 (s, 6 H) 3,40 - 3,44 (m, 2 H) 3,30 -3,35 (m, 2H).
Preparação de 4-fluoro-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil- 1H-tetrazol-5-il)piperazin-1- il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridina-7-carboxilato de etila.
B-57
<formula>formula see original document page 115</formula>
A um frasco de base redonda de 15 mL contendo 1-(7-bromo-4-fluoro-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1 -fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il) etano-1,2-diona (0,10 g, 0,20 mmol) foram adicionados DMF (4,0 mL), trieti-Iamina (0,8 mL), etanol (0,05 g, 1,00 mmol), e finalmente Pd(PPh3)4 (0,06 g, 0,06 mmol). O frasco foi colocado em um vaso de reação Parr equipado com um gauge de pressão e uma válvula de entrada de gás. O vaso foi selado e purgado com N2 três vezes, e foi em seguida purgado com monóxido de carbono três vezes, deixando a pressão de enchimento final de monóxido de carbono em 3,51 kg/cm2. O vaso foi aquecido para 100 °C. Após 6 h de a-quecimento, a mistura foi resfriada para rt, o monóxido de carbono foi removido por vácuo, e o vaso foi estimulado com N2. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida, e foi diluída com DMF. A solução de DMF foi passada através de uma almofada de celita para remover os sólidos, e foi purificada por HPLC prep. O composto título foi recuperado como um sólido não totalmente branco (0,020 g). LCMS: m/e 493,4 (M + H)+, tempo de retenção 1,82 min (Método 2). 1H RMN (500 MHz1 DMSO-D6) δ ppm 12,82 (s, 1 H) 8,43 (s, 1 H) 8,35 (d, J = 3,05 Hz, 1 H) 7,57 - 7,70 (m, 5 H) 4,46 (q, J = 7,12 Hz, 2 H) 3,67 - 3,72 (m, 2 H) 3,43 - 3,47 (m, 2 H) 3,31 - 3,35 (m, 2 H) 3,13 - 3,17 (m, 2 H) 1,39 (t, J = 7,17 Hz, 3 H).
Preparação de 2-( 1,3-dioxolan-2-il)-4-(trimetiletanil)tiazol
<formula>formula see original document page 116</formula>
A um frasco de base redonda com uma armadilha Dean-Stark ligada contendo peneiras moleculares, 4A (0,25g) foi adicionado 4-bromotiazol-2-carbaldeído (4,4 g, 22,91 mmol). O material de partida foi dissolvido em Benzeno (45 ml) e Etileno glicol (1,406 ml, 25,2 mmol) foi adicionado seguido por pTsOH (0,218 g, 1,146 mmol). A mistura foi aquecida ao refluxo durante 3 h. A mistura foi resfriada para rt, e foi dividida com NaHCO3 aquoso saturado. A mistura foi lavada 2x com NaHCO3 saturado (40 mL), em seguida uma vez com NaCI saturado (40 mL). A camada orgânica foi secada com Na2SO4. O agente de secagem foi removido por filtração, e a mistura foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash biotage utilizando uma coluna 40 + M e um gradiente de 0 a 20% de EtOAc em hexanos. O produto, 4-bromo-2-(1,3-dioxolan-2-il) tia-zol (5,1 g, 21,60 mmol, 94% de produção), foi coletado como um óleo amarelo claro.
A uma solução de 4-bromo-2-(1,3-dioxolan-2-il)tiazol (5,09 g, 21,56 mmol) em Tolueno (100 ml) foi adicionado Hexametildiestanho (10 g, 30,5 mmol) seguido por Tetracis (2,491 g, 2,156 mmol). A mistura foi ligada a um condensador de refluxo, e foi estimulada com N2. A mistura foi aquecida para 100°C durante 4 h. A mistura foi resfriada para rt, e foi carregada em um cartucho biotage 40 + M que foi pré-saturado com hexanos com Et3N a 0,1%. O produto desejado foi purificado utilizando um gradiente de 0-20% de EtOAc em hexanos com Et3N a 0,1%. Após concentração em vácuo, o produto, 2-(1,3-dioxolan-2-il)-4-(trimetiletanil)tiazol (4,64 g, 14,50 mmols, 67,3% de produção), foi isolado como um óleo amarelo claro. LCMS: m/e 322,0 (M + H)+, tempo de retenção 2,23 min (Método 7); 1H RMN (500 MHz, CDCI3) δ ppm 7,39 (s, 1 H) 6,20 (s, 1 H) 4,03 - 4,20 (m, 4H) 0,27 - 0,42 (m, 9H).
Preparação de 1 -(7-(2-(1,3-dioxolan-2-il)tiazol-4-il)-4-metóxi-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)etano- 1,2-diona B-58
<formula>formula see original document page 117</formula>
A um frasco de 75 mL selável contendo 1-(7-cloro-4-metóxi-1 H-10 pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)etano-1,2-diona (0,3 g, 0,643 mmol) foi adicionada uma solução de 2-(1,3-dioxolan-2-il)-4-(trimetiletanil)tiazol (0,210 g, 0,655 mmol) em 1,4-Dioxano (10 ml). A mistura foi estimulada com N2 e Pd(PPh3)4 (0,149 g, 0,129 mmol) foi adicionado. A mistura foi novamente estimulada com N2, e o frasco foi selado e aquecido em um banho de óleo para 100 °C. Após 20 h de aquecimento, a mistura foi resfriada para rt. A mistura foi transferida para um frasco de base redonda utilizando MeOH como o solvente de transferência. O solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi re-dissolvido em DMF, e foi passado através de uma almofada de celita para remover quaisquer sólidos restantes. A solução de DMF foi purificada por HPLC prep. Após a HPLC prep, uma amostra principalmente pura foi coletada como um sólido não totalmente branco. Uma pequena porção deste material foi removida e re-purificada por cromatografia flash (gradiente de 0-5% de MeOH em dicloro-metano) [20 mg após a purificação]. O restante do produto foi transportado 25 para a próxima etapa sem nenhuma purificação adicional (0,305 g). LCMS: m/e 588,1 (M + H)+, tempo de retenção 1,30 min (Método 3). 1H RMN (500 MHz, DMSO-D6) δ ppm 12,20 (s, 1H) 8,38 (s, 1H) 8,22 (s, 1H) 8,11 (s, 1H) 7,68 - 7,72 (m, 2 Η) 7,57 - 7,66 (m, 3 Η) 6,29 (s, 1 Η) 4,16 - 4,20 (m, 2 Η) 4,07 - 4,10 (m, 2 Η) 3,99 (s, 3 Η) 3,67 - 3,71 (m, 2 Η) 3,41 - 3,45 (m, 2 Η) 3,30 - 3,32 (m, 2 Η) 3,15 - 3,19 (m, 2 Η).
Preparação de 1 -(4-metóxi-7-(2-((metílamino)metil)tiazol-4-il)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)etano- 1,2-diona TFA. B-59
A uma suspensão de 1-(7-(2-(1,3-dioxolan-2-il)tiazol-4-il)-4-metóxi-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1 -fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)etano-1,2-diona (0,305 g, 0,519 mmol) em H2O (2 mL, 111 mmol) foi adicionado TFA (1 mL, 12,98 mmol). A mistura foi aquecida para 70 °C. Após 18 h de aquecimento, a mistura foi resfriada para rt, e foi agitada em rt durante mais 20 h. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em diclorometano e foi dividido com NaHCO3 saturado. A mistura foi extraída com diclorometano (3x10 mL) e foi secada com Na2SO4. O agente de secagem foi removido por filtração. A solução orgânica foi concentrada sob pressão reduzida, e a mistura resultante foi purificada por croma-tografia flash (gradiente de 0 a 5% de metanol em diclorometano). O produto, 4-(4-metóxi-3-(2-oxo-2-(4-( 1 -fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)acetil)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)tiazol-2-carbaldeído (0,103 g, 0,189 mmol, 36,5 % de produção) foi coletado como um sólido amarelo claro.
A uma solução de 4-(4-metóxi-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)tiazol-2-carbaldeído (0,088 g, 0,162 mmol) em DCE (3 ml) foi adicionado ÁCIDO ACÉTICO (9,27 μL 0,162 mmol) e 2M (em THF) de metilamina (0,405 ml, 0,809 mmol). A mistura foi agitada durante 15 minutos em rt, e triacetoxiboroidreto de sódio foi adicionado à mistura (0,069 g, 0,324 mmol). A mistura foi agitada durante 4 h em rt. Mais 0,05 g de Na(OAc)3BH foi adicionado, e a mistura foi agitada overnight em rt. A mistura foi neutralizada com NaHCO3 saturado. A mistura foi extraída com diclorometano (3x10 mL), e foi secada com Na2S04. O a-gente de secagem foi removido por filtração, e a solução foi concentrada sob pressão reduzida.
O resíduo resultante foi dissolvido em DMF, e foi filtrado através de uma almofada de celita para remover quaisquer sólidos. A solução de DMF foi purificada por HPLC prep para fornecer 1 -(4-metóxi-7-(2-((metilamino)metil)tiazol-4-il)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1 -fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)etano-1,2-diona, TFA (32,6 mg, 0,048 mmol, 29,9 % de produção) como um sólido amarelo claro. LCMS: m/e 559,1 (M + H)+, tempo de retenção 1,12 min (Método 3). 1H RMN (500 MHz, MeOD) δ ppm 8,54 - 8,59 (m, 2 H) 8,08 (s, 1 H) 7,57 - 7,74 (m, 5 H) 4,82 (s, 2 H) 4,11 (s, 3 H) 3,82 - 3,86 (m, 2 H) 3,60 - 3,63 (m, 2 H) 3,39 - 3,42 (m, 2 H) 3,33 (s, 2 H) 2,95 (s, 3 H).
Seção C Química de Exemplo
Os seguintes métodos gerais aplicam-se à Seção C Química de Exemplo:
Métodos de HPLC
#1 Dynamex C18, 4,6 χ 250mm, 8 micrômetros, Sol. A TFA a 0,05% em á-gua/ACN (90:10), Sol. B TFA a 0,05% em água/ACN (10:90), grad. 0% de B a 100% de B;
#2 Fenomenex Gemini C18, 4,6 χ 150mm, 5 micrômetros, Sol. A 10 mM de bicarb de amônio (pH 7,8) em água/ACN (95:5), Sol. B 10 mM de bicarb de amônio (pH 7,8) em água/ACN (10:90), grad. 10% de B a 50% de B; #3 Waters Xterra C18, 4,6 χ 150mm, 3,5 micrômetros, Sol. A 10 nM de acetato de amônio (pH 6,8) em água/ACN (95:5). Sol. B 10 nM de acetato de amônio (pH 6,8) em água/ACN (10:90), grad. 5% de B a 100% de B (retenção de 13,15 min).
Preparação de 1 -((2R, 6S)-2,6-dimetil-4-(1 -fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)-2-(4-fluoro-7-( 1H-1,2,3-triazol-1-H)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)etano-1,2-diona (Composto C-1) <formula>formula see original document page 120</formula>
Composto C-1
(3R,5S)-3,5-dimetil-1 -(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazina foi preparado por meio do Método A na seção química 1 utilizando (2R,6S)-2,6-dimetilpiperazina e 5-cloro-1-fenil-1 H-tetrazol. (3R,5S)-3,5-dimetil-1-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazina foi acoplado com ácido 2-(4-fluoro-7-(1H-1,2,3-triazol-1-il)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-oxoacético utilizando o Método B para a preparação do composto 3 na seção química A para fornecer o produto desejado 1 -((2R,6S)-2,6-dimetil-4-(1 -fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il)-2-(4-fluoro-7-(1 H-1,2,3-triazol-1-il)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)etano-1,2-diona 10 com as seguintes características:
Pureza e tempos de retenção obtidos por meio de cada método de HPLC: Método 1) 98,6% de pureza, 15,8 min. Tempo de Retenção Método 2) 98,8% de pureza, 12,85 min. Tempo de Retenção Método 3) 99,1% de pureza, 13,15 min Tempo de Retenção 15 MS 516 (M+H) +,514 (M-H)-HRMS cal. 516,2020 encontrado 516,2007
mp. 254-256 graus C H1 RMN DMSO-d6: 1,19 - 1,24 (t, 6H, J = 6,6 Hz), 2,99 - 3,05 (dd, 1H, J = 3,9, 12,6 Hz), 3,15 - 3,21 (dd, 1H, J = 4,5, 12,6 Hz), 3,24-3,42 (m, 2H), 3,87 - 3,90 (m, 1H), 4,58 - 4,61 (m, 1H), 7,62 - 7,71 (m, 5H), 8,11 -8,12 (d, 1H, J = 0,9 Hz), 8,30-8,31 (m, 2H), 9,00-9,01 (d, 1H, J = 1,2 20 Hz), 13,04 (s, 1H).
Seção Química D de Exemplo
Os seguintes métodos gerais aplicam-se à Seção Química D de
Exemplo:
Método analítico de LC-MS: 25 Método 1
Tempo gradiente: 4 min Taxa de fluxo: 3 mL/min
Tempo de interrupção: Tempo gradiente + 1 minuto
Concentração de partida: 10% de B
Eluente A: H2O com 10 mM de NH4OAc
Eluente B: ACN
Coluna: Fenomenex, Onyx Monolithic C18 50 χ 4,6mm
Método 2
Tempo gradiente: 3 min Taxa de fluxo: 1 mL/min
Tempo de interrupção: Tempo gradiente + 1 minuto
Concentração de partida: 0% de B
Eluente A: 5:95 de ACN:Água com 10 mM de NH4OAc
Eluente B: 95:5 de ACN:Água com 10 mM de NH4OAc Coluna: Waters Xbridge 2,1 χ 50mm 5 um C18
Método 3
Tempo gradiente: 7,5 min Taxa de fluxo: 1,2 mL/min
Tempo de interrupção: Tempo gradiente + 1 minuto Concentração de partida: 10% de B
Eluente A: Água com 10 mM de NH4OAc
Eluente B: ACN
Coluna: Agilent Zorbax SB-CN 4,6 χ 75 mm 3,5 mícrons
Preparação do composto D
<formula>formula see original document page 121</formula>
Método A
<formula>formula see original document page 121</formula>
Ácido 2-Ceto (1 eq.), piperazina (1 - 5 eq.), tetrafluoroborato de O-(1H-benzotriazol-1 -il)-N,N,N',N'-tetrametilurônio (TBTU) (1 - 5 eq.) e Base de Hunig (1- 5 eq.) foram combinados em DMF. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 17 horas. O produto foi purificado por Sistema de HPLC preparativa automatizado Waters ou Dinox.
Método B
<formula>formula see original document page 122</formula>
Ácido 2-Ceto (1 eq.), piperazina (1 - 5 eq.), (hexafluorofosfato de 2-(7-Aza-1 H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametilurônio) (HATU) (1-5 eq.) e Base de Hunig (1-5 eq.) foram combinados em DMF. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 17 horas. O produto foi purificado por Sistema de HPLC preparativa automatizado Waters ou Dinox.
Tabela D-1
<table>table see original document page 122</column></row><table> <table>table see original document page 123</column></row><table> <table>table see original document page 124</column></row><table> <table>table see original document page 125</column></row><table> <table>table see original document page 126</column></row><table> <table>table see original document page 127</column></row><table> <table>table see original document page 128</column></row><table> <table>table see original document page 129</column></row><table>
Seção Química E de Exemplo
Preparação de 1-(4-fluoro-7-(1H - 1,2,3-triazol-1-H)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridinil-3- il)-2-(4-( 1 -(piridin-2-il)-1 H-tetrazol-5-il)piperazin-1 -il)etano- 1,2-diona (Com- posto E-1)
<formula>formula see original document page 130</formula>
Parte A: A uma solução de 2-aminopiridina (9,41 g, 100 mmol) em cloreto de metileno (200 mL) a 25°C foi adicionado diimidazol de tiocar- bonila (18,75 g, 100 mmol), e a mistura resultante foi agitada a 25°C durante 20 h. À mistura reacional em seguida foi adicionado piperazina-1-carboxilato de terc-butila (18,60 g, 100 mmol), e a mistura resultante foi agitada a 25°C durante mais 24 h. A mistura foi diluída com éter dietílico, lavada com água (X3) e salmoura, secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada, e concen- trada. Cromatografia de coluna sobre sílica gel (eluição: 0-20% de éter dietí- lico/cloreto de metileno) para fornecer 4-(piridin-2-ilcarbamotioil)piperazina-1- carboxilato de terc-butila (13,60 g) como um sólido incolor, seguindo cristali- zação de uma mistura de 1-clorobutano/hexano; 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ7,97 (m, 1H), 7,64 (m, 2H), 6,88 (m, 1H), 4,00 (m, 4H), 3,51 (m, 4H), 1,44 (s, 9H).
Quando comercialmente disponíveis os isotiocianatos foram dei- xados reagir diretamente com piperazina-1-carboxilato de terc-butila em clo- reto de metileno a 25°C. A tiouréia desejada em seguida foi isolada como descrito acima.
Parte B: Uma mistura de 4-(piridin-2-ilcarbamotioil)piperazina-1- carboxilato de terc-butila (15,30 g, 47,5 mmol), carbonato de potássio (13,10 g, 95,0 mmol), iodometano (3,00 mL, 47,5 mmol), e DMSO (200 mL) foi agi- tada a 25°C durante 24 h. A mistura reacional foi diluída com acetato de eti- la, lavada com água (X4) e salmoura, secada sobre sulfato de sódio anidro- so, filtrada, e concentrada para fornecer 4-(metiltio(piridin-2-ilimino)metil) pi- perazina-1-carboxilato de terc-butila (12,00 g) como um sólido seroso; 1H RMN (300 MHz, CDCI3) £8,25 (m, 1H), 7,63 (m, 1H), 6,88 (m, 2H), 3,70 (m, 4H), 3,52 (m, 4H), 2,04 (s, 3H), 1,44 (s, 9H).
Parte C: A uma solução de 4-(metiltio(piridin-2-ilimino)metil) pi- perazina-1-carboxilato de terc-butila (12,00 g, 36,0 mmol) em DMF (200 mL) a 25°C foi adicionado azida de sódio (11,60 g, 178 mmol), seguido por clore- to de mercúrio(ll) (10,90 g, 40,0 mmol), e a mistura resultante foi agitada a 25°C durante 19 d. A mistura em seguida foi filtrada, e os sólidos foram la- vados com DMF. O filtrado combinado foi concentrado sob vácuo, e o resí- duo foi diluído com acetato de etila. A mistura resultante foi filtrada novamen- te. O filtrado foi lavado com água (X3) e salmoura, secado sobre sulfato de sódio anidroso, filtrado, e concentrado. Cromatografia de coluna sobre sílica gel (eluição: 0-20% de éter dietílico/cloreto de metileno) para fornecer 4-(1- (piridin-2-il)-1H-tetrazol-5-il)piperazina-1-carboxilato de terc-butila (10,10 g) como um sólido não totalmente branco, seguindo cristalização de uma mistu- ra de 1-clorobutano/hexano; Espectrometria de Massa: m/e: 332,11 (M+H)+ [calculado: 332,17]; 1H RMN (300 MHz, CDCI3) £8,57 (m, 1H), 7,94 (m, 1H), 7,79 (d, 1H, J= 8Hz), 7,40 (m, 1H), 3,52 (m, 4H), 3,34 (m, 4H), 1,43 (s, 9H).
Os seguintes intermediários de tetrazol foram preparados dos materiais de partida comerciais indicados empregando os procedimentos descritos acima.
<table>table see original document page 131</column></row><table> <table>table see original document page 132</column></row><table>
Parte D: A uma solução de 4-(1 -(piridin-2-il)-1H-tetrazol-5- il)piperazina-1-carboxilato de terc-butila (0,166 g, 0,50 mmol) em 1,4-dioxano (10 mL) a 25°C foram adicionados 4,00 N de HCl em 1,4-dioxano (10 mL), e a mistura foi agitada a 25°C durante 16 h. A mistura em seguida foi concen- trada sob vácuo. Os sólidos resultantes foram dissolvidos em DMF (10 mL). A esta solução foi adicionado seqüencialmente ácido 2-(4-fluoro-7-(1H-1,2,3- triazol-1 -il)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-oxoacético (0,137 g, 0,50 mmol), N- metilmorfolina (0,165 mL, 1,50 mmol), e TBTU (0,176 g, 0,55 mmol), e a mis- tura foi agitada a 25°C durante 24h. A mistura reacional foi filtrada, e o filtra- do foi concentrado sob vácuo. O resíduo foi dissolvido em metanol quente, e a solução em seguida foi deixada resfriar lentamente para a temperatura ambiente. O precipitado foi recuperado por filtração, lavado com metanol, e secado sob vácuo para fornecer 1-(4-fluoro-7-(1H-1,2,3-triazol-1-il)-1H- pirrolo[2,3-c]piridinil-3-il)-2-(4-(1 -(piridin-2-il)-1H-tetrazol-5-il)piperazin-1-il) etano-1,2-diona (0,076 g) como um sólido não totalmente branco; HRMS: 489,1662 (M+H)+ [calculado: 489,1660]; 1H RMN (500 MHz, DMSO-D6) δ 13,08 (br s, 1H), 9,02 (s, 1H), 8,67 (m, 1H), 8,39 (s, 1H), 8,16 (t, 1H, J= 7,8 Hz), 8,13 (s, 1H), 7,85 (d, 1 H, J = 7,8 Hz), 7,64 (m, 1H), 3,74 (m 2H), 3,50 (m, 2H), 3,44 (m, 2H), 3,26 (m, 2H).
Os seguintes compostos foram preparados empregando os pro- cedimentos descritos acima.
<table>table see original document page 133</column></row><table> <table>table see original document page 134</column></row><table> <table>table see original document page 135</column></row><table>
Preparação de 1 -(4-fIuoro-7-(1H-1,2,3-triazol-1-H)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-3- il)-2-(4-( 1 -fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperidin-1 -il)etano- 1,2-diona (Composto E-13)
<formula>formula see original document page 135</formula>
Parte A: A uma solução de ácido N-Boc-isonipecótico (4,85 g, 21,2 mmols) em tetraidrofurano (80 mL) a 25°C foi adicionado diimidazol de carbonila (3,80 g, 23,3 mmols), e a mistura reacional foi agitada durante 1,00 h a 25°C. À mistura resultante foi adicionada anilina (2,10 mL, 23,3 mmols) e 1,8-diazabiciclo[5,4,0]undec-7-eno (DBU) (3,20 mL, 21,2 mmols), e a solu- ção foi agitada a 25°C durante mais 90 h. A mistura reacional foi diluída com água, 1,00 N de ácido hidroclórico (80 mL), e acetato de etila. As fases fo- ram separadas, e a fase orgânica foi lavada com água (X2) e salmoura, se- cada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada, e concentrada. Cromatografia de coluna sobre sílica gel (eluição: 0-20% de éter dietílico/cloreto de metile- no) forneceu 4-(fenilcarbamoil)-piperidina-1-carboxilato de terc-butila (4,25 g) como um sólido branco; 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ 7,48 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,29 (t, 2H, J = 8,0 Hz), 7,20 (br s, 1H), 7,08 (t, 1H, J= 8,0 Hz), 4,16 (m, 2H), 2,75 (m, 2H), 2,35 (m, 1H), 1,89 - 1,61 (m, 4H), 1,43 (s, 9H).
Parte Β: A uma solução de 4-(fenilcarbamoil)piperidina-1- carboxilato de terc-butila (4,24 g, 13,9 mmol) e diisopropilazodicarboxilato (5,40 mL, 27,9 mmol) em tetraidrofurano (100 mL) a 25°C foi adicionada tri- fenilfosfina (7,31 g, 27,9 mmol). A mistura reacional resultante exibiu uma leve exotermia, e a solução em seguida foi agitada em temperatura ambiente durante -0,25 h até a mistura reacional ter retornado para 25°C. À mistura resultante foi adicionado azidotrimetilsilano (3,65 mL, 27,9 mmol). Um preci- pitado formou-se dentro de minutos, e a mistura em seguida foi agitada a 25°C durante 7 dias. A mistura reacional foi concentrada sob vácuo para for- necer o produto cru. Cromatografia de coluna sobre sílica gel (eluição: 10- 50% de acetato de etila/hexano) forneceu 4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)pipe- ridina-1-carboxilato de terc-butila (2,58 g) como um sólido branco, seguindo cristalização de uma mistura de 1-clorobutano/hexano; 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ 7,58 (m, 3H), 7,38 (m, 2H), 4,12 (m, 2H), 2,98 (m, 1H), 2,76 (m, 2H), 1,96 - 1,74 (m, 4H), 1,42 (s, 9H).
Parte C: À solução de 4-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperidina-1- carboxilato de terc-butila (0,165 g, 0,50 mmol) em 1,4-dioxano (10 mL) a 25°C foram adicionados 4,00 N de HCI em 1,4-dioxano (10 mL), e a mistura foi agitada a 25°C durante 16 h. A mistura em seguida foi concentrada sob vácuo. Os sólidos resultantes foram dissolvidos em DMF (10 mL). A esta solução foi adicionado seqüencialmente ácido 2-(4-fluoro-7-(1H-1,2,3-triazol- 1-il)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-oxoacético (0,137 g, 0,50 mmol), N- metilmorfolina (0,165 mL, 1,50 mmol), e TBTU (0,176 g, 0,55 mmol), e a mis- tura foi agitada a 25°C durante 24 h. A mistura reacional foi filtrada, e o filtra- do foi concentrado sob vácuo. O resíduo foi dissolvido em metanol quente, e a solução em seguida foi deixada resfriar lentamente para a temperatura ambiente. O precipitado foi recuperado por filtração, lavado com metanol, e secado sob vácuo para fornecer 1-(4-fluoro-7-(1H-1,2,3-triazol-1-il)-1H- pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-(4-(1 -fenil-1 H-tetrazol-5-il)piperidin-1-il)etano-1,2- diona (0,142 g) como um sólido não totalmente branco; mp: 257-258°C; HRMS: 487,1740 (M+H)+ [calculado: 487,1755]; 1H RMN (500 MHz, DMSO- D6) δ 13,06 (br s, 1H), 9,02 (s, 1H), 8,32 (d, 1H, J= 1,8 Hz), 8,30 (s, 1H), 8,12 (s, 1H), 7,58 (s, 5H), 4,37 (m, 1H), 3,67 (m, 1H), 3,32 (m, 1H), 3,25 (m, 1H), 3,03 (m, 1H), 2,01 (m, 1H), 1,88 (m, 1H), 1,83 - 1,70 (m, 2H).
Seção Química F de Exemplo
Preparação da biblioteca de amido pirazóis
<formula>formula see original document page 137</formula>
Uma mistura de ácido 3-(4-fluoro-3-(2-oxo-2-(4-(1-fenil-1H- tetrazol-5-il)piperazin-1-il)acetil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-il)-1H-pirazol-5- carboxílico (42 mg, 0,8 mmol), uma amina (3,36 mmol), TBTU (0,88 mmol) e DIPEA (38,4 mmol) foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. As misturas reacionais crus foram purificadas utilizando HPLC prep de fase reversa.
Condições de LC utilizadas para analisar os compostos finais:
Coluna: Waters Xbridge 4,6 χ 50mm 5 um C18
Método: 10%B / 90%A + modificador a 95%B / 5%A + modificador
A = água
B = ACN
Modificador = 10 mM de NH40Ac Fluxo = 2,5 mL/min
Tempo gradiente: 4 min
Tempo de interrupção: 5 min
<table>table see original document page 138</column></row><table> <table>table see original document page 139</column></row><table> <table>table see original document page 140</column></row><table> <table>table see original document page 141</column></row><table> <table>table see original document page 142</column></row><table> <table>table see original document page 143</column></row><table>
Seção Química G de Exemplo
Preparação dos compostos G-1a e G-2b
<formula>formula see original document page 143</formula>
Etapa -1
Hidreto de sódio (0,12 g) foi apreendido em DMF seco (5 ml) e uma solução de isoxazol de 3-amino-4-fenila (0,2 g em 2 ml_ de DMF) foi adicionada lentamente a 0°C. A mistura reacional foi agitada durante 30 min a O-C e uma solução de cloridrato de bis-(2-cloroetilamina) (0,22 g) em DMF (1 mL) foi adicionada muito lentamente. A mistura reacional foi deixada agi- tar durante a noite em temperatura ambiente. A mistura reacional foi saciada com água resfriada (5 ml) e extraída com acetato de etila (3 χ 40 ml). Evapo- ração de solvente sob pressão reduzida forneceu o produto cru, o qual, foi purificado por cromatografia de coluna utilizando MeOH/CHCI3 (2:8) como eluente para fornecer G-1-ln como produto sólido puro.
1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 3,02(d, 4H), 3,50 (d, 4H), 7,27 - 7,80 (m, 5H). LCMS: 230,9 (M++ 1). <formula>formula see original document page 144</formula>
Etapa -2
Ácido 2-(4-metóxi-7-(3-metil-1H-1,2,4-triazol-1 -il)-1H-pirrolo[2,3- c]piridin-3-il)-2-oxoacético (0,18 g), G-1-ln (0,1 g), TBTU (0,15 g) e Base de Hunig (0,15 ml) foram combinados em DMF seco (4 ml). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml), lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O cru resultante foi purificado por croma- tografia de coluna utilizando MeOH/CHCI3 (1 : 9) como eluente para fornecer G-1a como sólido amarelo.
1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 2,58 (s, 3H), 3,26 (bs, 2H), 3,36 (bs, 2H), 3,63 (bs, 2H), 3,89 (bs, 2H), 4,06 (s, 3H), 7,53 (s, 3H), 7,77 (d, 3H, J = 8 Hz), 8,21 (s, 1H), 9,13 (S, 1H), 11,04 (s, 1H).
13C RMN (400 MHz, CDCI3): δ 14,04, 40,48, 45,1, 48,91, 49,26, 57,02, 115,77, 121,39, 123,2, 124,14, 126,25, 127,79, 129,21, 129,55, 130,7, 136,52, 141,13, 147,66, 149,71, 158,53, 166,37, 185,23. LCMS: 514,1 (M+ + 1), 512,6 (M+ -1).
HPLC: 97,6% (NH4OAc/ACN; Coluna: C18 XDB, 250 χ 4,6 mm).
<formula>formula see original document page 144</formula> Ácido 2-(4-Fluoro-7-(1 H-1,2,3-triazol-1-il)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin- 3-il)-2-oxoacético (0,18g g), G-1-ln (0,1 g), TBTU (0,15 g) e Base de Hunig (0,15 ml) foram combinados em DMF seco (4 ml). A mistura reacional foi agi- tada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml), lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O cru resultante foi purificado por croma- tografia de coluna utilizando MeOH/CHCI3 (1 : 9) como eluente para fornecer G-1b como sólido amarelo.
1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 3,27 (t, 2H, J = 6 Hz), 3,35 (t, 2H, J = 6 Hz), 3,71 (t, 2H, J = 6 Hz), 3,90 (t, 2H, J = 6 Hz), 7,52 (t, 3H, J = 4 Hz), 7,78 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,94 (s, 1H), 8,16 (s, 1H), 8,39 (s, 1H), 8,77 (s, 1H), 11,29 (s, 1H).
LCMS: 488,1 (M++ 1).
HPLC: 96,6% (NH4OAc/ACN; Coluna: C18 XDB, 250 χ 4,6 mm).
Preparação dos compostos G-2a, G-2b e G-2c
Preparação do intermediário G-2-ln
<formula>formula see original document page 145</formula>
Etapa - 1
A cloridrato de 4,7-dimetóxi-1H-pirrolo[2,3-c]piridina (50 g) colo- cado em um frasco de base redonda de 3 gargalos de 2 L, 250 ml de N- metil-2-pirrolidinona foram adicionados seguidos por 8 ml de água, e foram aquecidos para 90°C durante cerca de 4 horas. A mistura reacional foi resfri- ada para a temperatura ambiente, diluída com água (1L) e a mistura integral foi mantida em ambiente frio durante cerca de uma hora. O sólido resultante foi coletado por filtração, lavado com água resfriada e secado em forno a vácuo a 50°C durante 4 horas para fornecer 7-hidroxil-4-metóxi-6-azaindol como sólido branco.
1H RMN (400 MHz1 DMSO-d6): δ 3,70 (s, 3H), 6,32 - 6,33 (dd, 1H), 6,38 (s, 1H), 7,25-7,26 (d, 1H, J = 4 Hz), 10,5 (bs, 1H), 12,1 (bs, 1H).
Etapa - 2
Ao composto acima 7-hidroxil-4-metóxi-6-azaindol (33 g) coloca- do em um frasco de base redonda de gargalo único, oxicloreto fosforoso (400 ml) foi adicionado e a mistura foi aquecida para 100°C durante 18 ho- ras. A mistura reacional foi resfriada para a temperatura ambiente e concen- trada para remover o excesso de oxicloreto fosforoso. O resíduo foi lenta- mente vertido em gelo e neutralizado com bicarbonato de sódio sólido. A mistura foi extraída com acetato de etila (3 χ 100 ml). A camada orgânica combinada foi secada sobre sulfato de sódio anidroso e concentrada para fornecer 7-cloro-1-4-metóxi-6-azaindol como sólido branco.
1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 4,03 (s, 3H), 6,73 - 6,74 (dd, 1H), 7,36 - 7,37 (t, 1H), 7,63 (s, 1H), 8,9 (bs, 1H). LCMS: 182,7 (M++ 1).
Etapa -3
Uma solução de 7-cloro-4-metóxi-6-azaindol (3 g) e cloreto de alumínio (2,3 g) em 100 ml de diclorometano foi adicionada a uma mistura de metilclorooxalato (6 g) e cloreto de alumínio (3,7 g) em 50 ml de dicloro- metano. A mistura integral foi agitada em temperatura ambiente durante 18 horas sob atmosfera de nitrogênio. A mistura reacional foi saciada com 100 mL de solução de acetato de amônio aquosa saturada e extraída com aceta- to de etila (2 χ 100 ml). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução de salmoura, secadas sobre sulfato de sódio anidroso, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O produto cru resultante foi tratado com metanol e filtrado para fornecer éster puro como sólido branco. 1H RMN (400 MHz, DMSOd6): δ 3,85 - 3,88 (s, 3H), 3,94 (s, 3H), 7,83 (s, 1H), 8,45 (s, 1H), 13,3 (bs, 1H).
Etapa-4
O éster acima (1 g) e K2CO3 (0,95 g) foram combinados em 6 mL de mistura de metanol/ água (1 : 1) e agitados em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi extraída com acetato de etila para remover as impurezas não polares. E a camada aquosa foi neutralizada com 1,5 N de HCl para pH5. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida pa- ra fornecer o ácido desejado, ácido 2-(7-cloro-4-metóxi-1H-pirrolo[2,3- c]piridin-3-il)-2-oxoacético que foi utilizado para a próxima etapa sem outra purificação.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 3,91 (s, 3H), 7,79 (s, 1H), 8,35 (s, 1H), 13,30 (bs, 1H).
LCMS: 254,9 (M++1).
Etapa-5
Ao hidreto de sódio (2,1 g) apreendido em DMF seco (10 ml), 5- cloro-1H-tetrazol (5 g) dissolvido em DMF seco (20 ml) foi adicionado gota a gota a 0°C sob nitrogênio. A mistura reacional foi deixada agitar a O0C duran- te cerca de 30 min e piperazina (2,8 g) em DMF (10 ml) foi adicionada gota a gota a 0°C durante cerca de 10 min. A mistura integral foi aquecida para 80°C durante 18 horas em seguida resfriada para a temperatura ambiente e lentamente vertida em gelo. O sólido resultante foi filtrado, lavado com água e secado para fornecer 1-(1-fenil-1H-tetrazol-5-il)piperazina como um produ- to sólido.
1H RMN (400 MHz1 CDCI3): δ 2,91 - 2,93 (m, 4H), 3,22 - 3,33 (m, 4H), 7,49 - 7,63 (m, 5H).
Etapa-6
Ao ácido 2-(7-cloro-4-metóxi-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2- oxoacético (0,15 g) apreendido em DMF seco (3 ml), 1-(1-fenil-1H-tetrazol-5- ila) pauperizante (0,1 g), TBTU (0,219 g) e Base de Hunig (0,2 ml) foram a- dicionados. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A reação foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram remo- vidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml), lavado com NaHCO3 a 10% (2 χ 20 ml) e salmoura (20 ml). A cama- da orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e após concentração sob pressão reduzida. O cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando MeOH/CHCI3 (1 : 9) como eluente para fornecer G-2-ln como sóli- do amarelo.
1H RMN (400 MHz1 DMSO-d6): δ 3,31 - 3,34 (s, 3H), 3,39 (bs, 2H), 3,47 (bs, 2H), 3,87 - 3,91 (s, 2H), 4,09 (s, 3H), 7,57 0- 7,7 (s, 1H), 8,31 - 8,34 (d, 1H), 13,3 (bs, 1H).
LCMS: 465,3 (M++ 1).
Preparação de G-2a
<formula>formula see original document page 148</formula>
Etapa - 1
Ao hidreto de sódio (0,20 g) apreendido em THF seco (15 ml), N- metil piperazina (0,93 ml) foi adicionada sob nitrogênio a 0°C. 2,3- Dibromopirazina (2 g) apreendido em 15 ml de THF seco foi adicionado à mistura acima a O0C. A mistura reacional foi deixada refluxar durante a noite e saciada com água (5 ml). A camada orgânica foi removida sob vácuo. A
O massa cru resultante foi purificada por cromatografia de coluna para fornecer 2-bromo-5-(4-metilpiperazin-1-il)pirazina como produto puro.
1H RMN (400 MHz1 CDCI3): δ 2,39 (s, 3H), 2,57 (t, 4H, J = 6 Hz), 3,62 (t, 4H, J = 6Hz), 7,88 (s, 1H), 8,14 (s, 1H).
Etapa-2
Ao composto 2-bromo-5-(4-metilpiperazin-1-il)pirazina (0,25 g) dissolvido em DMF seco (5 ml), hexa-n-butil di-estanho (0,615 ml) foi adicio- nado. A mistura reacional foi desgaseificada sob atmosfera de argônio du- rante 3-5 vezes. Tetracis (trifenil fosfina) paládio (0,128 g) foi adicionado à mistura acima e também desgaseificado sob atmosfera de argônio durante 3-5 vezes. A mistura reacional foi refluxada durante a noite, em seguida res- friada para a temperatura ambiente, diluída com acetato de etila e filtrada através de leito de Celita. O filtrado foi concentrado e purificado por croma- tografia de coluna para fornecer o composto 2-(4-metilpiperazin-1-il)-5- (tributiletanil)pirazina como líquido de cor amarelo pálido.
1H RMN (400 MHz1 CDCI3): δ 1,36 (s, 10H), 1,58 (s, 6H), 1,63 (s, 6H), 1,69 (s, 6H), 2,39 (s, 3H), 3,95 (s, 4H), 4,07 (s, 4H), 8,18 (s, 1H), 9,30 (s, 1H).
Etapa - 3
A uma solução agitada do intermediário 2-(4-metilpiperazin-1-il)- 5-(tributiletanil)pirazina (0,25 g) e G-ln-2 (0,38 g) apreendido em xileno seco (15 ml) sob atmosfera de nitrogênio, iodeto de cobre (I) (10 mg) foi adiciona- do. A mistura reacional foi desgaseificada utilizando nitrogênio e àquela mis- tura Pd (Ph) 4 (0,065 g) foi adicionado. A mistura reacional foi refluxada du- rante 24 horas a 130°C. A mistura reacional foi resfriada para a temperatura ambiente e concentrada sob vácuo para remover o solvente. O cru resultan- te foi purificado por cromatografia de coluna utilizando MeOH/CHCI3 (1 : 9) como eluente para fornecer G-2a como produto sólido branco. 1H RMN (400 MHz1 DMSO-d6): δ 2,26 (s, 3H), 3,16 (s, 2H) 3,32 e 3,42 (m, 7H), 3,67 (s, 7H), 3,97 (s, 3H), 7,57 - 7,64 (m, 3H), 7,69 (d, 2H, J = 8 Hz), 8,10 (s, 1H), 8,18 (d, 1H1 J = 4 Hz), 8,33 (s, 1H),9,07(s, 1H), 12,45 (s, 1H). LCMS: 609,2 (M++ 1).
HPLC: 95,3% (NH4OAc + 0,1% de TFA/ACN; Coluna: C18 XDB, 250 χ 4,6 mm).
Preparação de G-2b
<formula>formula see original document page 150</formula>
Etapa-1
Ao hidreto de sódio (0,20 g) apreendido em THF (15 ml), morfo- lina (0,735 ml) foi adicionada sob nitrogênio, a 0°C. A mistura reacional agi- tada durante cerca de 15 minutos, em seguida 2,3-dibromopirazina (2 g) dis- solvido em THF seco (15 ml) foi adicionado. A mistura reacional foi deixada agitar em condições de refluxo durante a noite. A mistura reacional foi sacia- da com água (5 ml), e os voláteis foram removidos sob vácuo. A massa cru resultante foi purificada por cromatografia de coluna para fornecer 4-(5- bromopirazin-2-il)morfolina puro.
1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 3,53 (t, 4H, J = 6 Hz), 3,84 (t, 4H, J = 6 Hz), 7,88 (s, 1H), 8,16 (s, 1H).
Etapa-2
Ao composto 4-(5-bromopirazin-2-il)morfolina (0,25 g) apreendi- do em THF seco (5 ml) e resfriado para -78°C, n-butil lítio (0,4 ml, 1M de so- lução em Hexano) foi adicionado, agitado durante 2 horas a -78°C. À mistura reacional acima cloreto de tri-n-butil estanho (1,1 mmol) foi adicionado gota a gota a -78°C. A mistura reacional foi agitada a -78°C durante uma hora, sa- ciada com solução de cloreto de amônio saturada e extraída com acetato de etila (3 χ 15 ml). A camada orgânica foi lavada com água (20 ml) seguida por salmoura, secada sobre sulfato de sódio anidroso e concentrada utilizando evaporador giratório. O cru resultante foi purificado por cromatografia de co- luna para fornecer 4-(5-(tributiletanil)pirazin-2-il)morfolina como líquido de cor amarelo pálido.
1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,36 (s, 10H), 1,58 (s, 6H), 1,63 (s, 6H), 1,67 (s, 6H), 3,57 (s, 4H), 3,85(s, 4H), 8,13 (s, 1H), 8,36 (s, 1H).
Etapa-3
A uma solução agitada do intermediário 4-(5-(tributiletanil) pira- zin-2-il)morfolina (0,25 g) e G-2-ln (0,38 g) apreendido em xileno seco sob atmosfera de nitrogênio, iodeto de cobre (I) (10 mg) foi adicionado. A mistura reacional foi desgaseificada utilizando nitrogênio e Pd(PPh3) 4 (0,065 g) foi adicionado. A mistura reacional foi refluxada durante 24 horas concentrada sob vácuo para remover o solvente. O cru foi purificado por cromatografia de coluna utilizando MeOH/CHCl3 (1 : 9) como eluente para fornecer G-2b co- mo produto sólido branco.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 3,16 (s, 2H), 3,42 (s, 3H), 3,63, 3,68, 3,75 (3s, 11H), 4,04 (s, 3H), 7,57 - 7,7 (m, 6H), 8,1, 8,19, 8,32 (3s, 3H), 9,09 (s, 1H).
LCMS: 596,1 (M++ 1).
HPLC: 92% (0,1% de TFA/ACN; Coluna: C18 BDS, 4,6 χ 250 mm).
Preparação de G-2c <formula>formula see original document page 152</formula>
Etapa - 1
Ao hidreto de sódio (0,20 g) em THF (15 ml), imidazol (0,57 g) foi adicionado e resfriado para 0°C. À mistura acima 2,3-dibromopirazina (2 g) foi adicionado e a mistura reacional inteira foi deixada refluxar durante a noi- te. A mistura reacional foi saciada com água, 5 ml dos voláteis foram remo- vidos sob vácuo. A massa cru resultante foi purificada por cromatografia de coluna para fornecer 2-bromo-5-(1H-imidazol-1-il)pirazina como produto pu- ro.
1H RMN (400 MHz, CDCI3):õ 7,30 (s, 1H), 7,65 (s, 1H), 8,44 (s, 1H), 8,58 (s, 1H), 8,60 (s, 1H).
Etapa - 2
Ao composto 2-bromo-5-(1H-imidazol-1-il)pirazina (0,25 g) apre- endido em xileno seco, hexa-n-butil diestanho (0,615 ml) foi adicionado. A mistura reacional foi desgaseificada sob atmosfera de argônio durante 3-5 vezes. Aquele tetracis (trifenil fosfina) paládio (0,128 g) foi adicionado e tam- bém desgaseificado sob atmosfera de argônio durante 3-5 vezes. A mistura reacional foi agitada sob condições de refluxo durante a noite. A mistura rea- cional foi resfriada para a temperatura ambiente, diluída com acetato de etila e filtrada através de leito de Celita. O filtrado foi concentrado e purificado por cromatografia de coluna para fornecer 2-(1 H-imidazol-1 -il)-5-(tributiletanil) pirazina como líquido de cor amarelo pálido.
1H RMN (400 MHz1 CDCI3): δ 1,36 (s,10H ), 1,58 (s, 6H), 1,63 (s, 6H), 1,67 (s, 6H), 3,57 (d, 1H), 4,45 (d, 1H), 4,65 (s, 1H), 8,13 (s, 1H), 8,36 (s, 1H).
Etapa-3
A uma solução agitada do intermediário 2-(1H-imidazol-1-il)-5- (tributiletanil)pirazina (0,25 g) e G-2-ln (0,38 g) apreendido em xileno seco sob atmosfera de nitrogênio, iodeto de cobre (I) (10 mg) foi adicionado. A mistura reacional foi desgaseificada utilizando nitrogênio e Pd(PPh3) 4 (0,065 g) foi adicionado. A mistura reacional foi refluxada durante 24 horas e con- centrada sob vácuo para remover o solvente. O cru foi purificado por croma- tografia de coluna utilizando MeOH/CHCI3 (1 : 9) como eluente para fornecer G-2c como produto sólido branco.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 3,17 (t, 2H, J = 8 Hz), 3,44 (t, 2H, J = 4 Hz), 3,69 (t, 2H, J = 6 Hz), 4,04 (s, 3H), 7,24 (bs, 1H), 7,56 - 7,71 (m, 5H), 8,12 (d, 1H, J = 8 Hz), 8,26 (s, 2H), 8,73 (bs, 1H), 9,18 (s, 1H), 9,48 (s, 1H), 12,65 (s, 1H).
LCMS: 575,2 (M+-1).
HPLC: 90,6% (0,1% de TFA/ACN; Coluna: Hypersil BDS C18, 4,6 χ 50 mm).
Preparação dos compostos G-3a e G-3b
<formula>formula see original document page 153</formula>
Etapa -1
Ao 1-(3-iodopiridin-2-il)piperazina (0,5 g) apreendido em tolueno seco (10 ml), foi adicionado ácido fenil borônico (0,25 g) sob atmosfera de nitrogênio. À mistura reacional foram adicionados Pd(PPh3)4 (10 mg) e uma solução de carbonato de sódio (0,3 g) em água (2 ml). A mistura reacional foi borbulhada com gás de nitrogênio durante cerca de 10 min e refluxada du- rante a noite. A mistura reacional foi resfriada para r.t e diluída com EtOAC, lavada com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada so- bre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando EtOAc/Hexano (2 : 8) como eluente para fornecer G-3-ln como líquido viscoso marrom. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 3,06 (d, 4H), 3,14 (d, 4H), 6,94 (s, 1H), 7,31 (s, 1H), 7,38 - 7,68 (m, 5H), 8,25 (s, 1H).
LCMS: 239,9 (M++1).
c]piridin-3-il)-2-oxoacético (0,18 g), G-3-ln (0,1 g), TBTU (0,15 g) e Base de Hunig (0,15 ml) foram combinados em DMF seco (4 ml). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml), lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O cru resultante foi purificado por croma- tografia de coluna utilizando MeOH/CHCI3 (1 : 9) como eluente para fornecer G-3a como sólido amarelo.
1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 2,56 (s, 3H), 3,15 (s, 2H), 3,28 (s, 2H), 3,44 (s, 2H), 3,71 (s, 2H), 4,04 (s, 3H), 7,0 (t, 1H, J = 6 Hz), 7,34 (t, 1H, J = 6 Hz), 7,44 (t, 2H, J = 6 Hz), 7,53 e 7,57 (2 χ d, 3H, J = 8 Hz e 4 Hz), 7,72 (s, 1H), 8,17 (d, 1H, J = 2 Hz), 8,25 (d, 1H, J = 2 Hz), 9,09 (s, 1H), 11,03 (s, 1H). 13C RMN (400 MHz, CDCI3): δ 14,16, 41,12, 45,72, 48,49, 49,09, 56,93, 115,86, 117,62, 121,29, 123,11, 124,14, 127,51, 127,74, 127,89, 128,92,
<formula>formula see original document page 154</formula>
Etapa -2
Acido 2-(4-metóxi-7-(3-metil-1 H-1,2,4-triazol-1 -il)-1 H-pirrolo[2,3- 136,44, 141,32, 149,66, 162,2, 166,47, 185,64. LCMS: 523,1 (M++ 1).
HPLC: 97,7% (NH4OAc/ACN; Coluna: Cl8 XDB, 250 χ 4,6 mm).
<formula>formula see original document page 155</formula>
Ácido 2-(4-Fluoro-7-(1H-1,2,3-triazol-1 -il)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin- 3-il)-2-oxoacético (0,18 g), G-ln-3 (0,1 g), TBTU (0,15 g) e Base de Hunig (0,15 ml) foram combinados em DMF seco (4 ml), a mistura reacional foi agi- tada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml), lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O cru resultante foi purificado por croma- tografia de coluna utilizando MeOH/CHCI3 (1 : 9) como eluente para fornecer G-3b como sólido amarelo.
1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 3,15 (t, 2H, J = 4 Hz), 3,29 (t, 2H, J = 6 Hz), 3,49 (d, 2H, J = 8 Hz), 3,73(t, 2H, J = 4 Hz), 7,01 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,36 (d, 1H,J = 8 Hz), 7,45 (t, 2H, J = 8 Hz), 7,54 e 7,57 (dd, 3H, J = 8 Hz e 4 Hz), 7,93 (s, 1H), 8,14 (s, 1H), 8,25 (d, 1H, J = 4 Hz), 8,33 (d, 1H, J = 4 Hz), 8,76 (s,1H), 11,22 (s, 1H).
LCMS: 497,1 (M++ 1).
HPLC: 95,7% (NH4OAc/ACN; Coluna: C18 XDB, 250 χ 4,6 mm).
Preparação dos compostos G-4a, G-4b, G-4c e G-4d <formula>formula see original document page 156</formula>
Etapa-1
A uma solução agitada do intermediário ciano G-4-ln-1 (300 mg) apreendido em diclorometano seco (10 ml) sob nitrogênio foi adicionado clo- reto de amônio de Ν,Ν-dimetila de N-diclorometileno (0,39 g) em rt sob nitro- gênio. A mistura reacional é deixada agitar em r.t. durante 15 minutos. A mistura reacional foi deixada refluxar a 50°C durante uma hora. A mistura reacional foi resfriada para a temperatura ambiente e adicionadas hidrazina de fenila (0,168 g), trietil amina (0,6 ml) em diclorometano (5 ml) gota a gota durante uma hora. A mistura reacional foi deixada agitar em temperatura ambiente durante 2 horas, e em seguida deixada refluxar a 55°C durante uma hora. A mistura reacional foi deixada resfriar para -10°C e adicionada água (10 ml) e KOH concentrado (2 g em 5 ml) e deixada agitar durante 15 minutos a -10°C. A mistura reacional foi extraída com diclorometano (5 χ 20 ml). A camada orgânica combinada foi secada sobre sulfato de sódio anidro- so e concentrada sob vácuo. A mistura cru resultante de G-4-ln-2 e G-4-ln-3 foi purificada por cromatografia de coluna flash utilizando hexano/acetato de etila (2 : 8) como eluente para fornecer G-4-ln-2 e G-4-ln-3 puros como lí- quidos amarelos pálidos. 1H RMN (400 MHz1 CD3OD): δ 1,45 (s, 9Η), 2,95 (s, 6Η), 3,09 (t, 4Η, J = 4 Hz), 3,44 (bs, 4Η), 7,38 (t, 1Η, J = 8 Hz), 7,51 (t, 2Η, J = 8 Hz), 7,62 (d, 2Η, J = 8 Hz).
LCMS: 373 (M++1).
HPLC: 97,6% (0,1% de HCOOH/ACN; Coluna: Genesis C18, 4,6 χ 50 mm).
Etapa-2
Amina BOC protegida G-4-ln-2 (500 mg) dissolvida em dicloro- metano seco (10 ml) e TFA (5 ml) foi adicionada a ela a O0C. A mistura rea- cional foi deixada alcançar a r.t. e agitada durante a noite. Os voláteis foram completamente removidos sob pressão reduzida e o cru resultante foi diluído com diclorometano (10 ml). A camada orgânica foi lavada com NaHCO3 sa- turado (2 χ 10 ml) e salmoura (20 ml) e secada sobre Na2SO4. Evaporação do solvente forneceu a amina desejada ln-4-ln-4, que foi utilizada na próxi- ma reação sem qualquer purificação.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 2,68 (s, 6H), 2,73 (m, 4H), 3,17 (t, 4H, J = 4 Hz), 7,31 (m, 1H), 7,48 (m, 4H).
13C RMN (DMSO-d6): δ 40,21 (2C), 41,29 (2C), 45,37, 47,06, 123,57 (2C), 127,09, 129,57 (2C), 139,3, 158,16, 162,97. LCMS: 273 (M++ 1).
HPLC: 97,5% (0,1% de TFA/ACN; Coluna: C18 BDS, 4,6 χ 50 mm). Etapa -3
A uma solução agitada de ácido 2-(4-fluoro-7-(1H-1,2,3-triazol-1- il)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-oxoacético (100 mg) em DMF seco (5 ml) foi adicionada amina G-4-ln-4 (0,099 g), e TBTU (0,178g) e DIPEA (0,15 ml) foram combinados nela. A mistura reacional foi agitada em r.t. durante a noi- te. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml) e lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob evaporador giratório. O semi- sólido resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando Me- OH/CHCI3 (0,5 : 9,5) como eluente para fornecer G-4a como sólido amarelo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 2,85 (s, 6H), 3,06 (bs, 2H), 3,17 (bs, 2H), 3,49 (bs, 2Η), 3,71 (bs, 2Η), 7,30 (t, 1H1 J = 8 Hz), 7,47 (t, 2Η, J = 8 Hz), 7,65 (d, 2Η, J = 8 Hz), 8,10 (s, 1 Η), 8,35 (s, 1 Η), 9,01 (s, 1Η), 13,05 (s, 1Η). LCMS: 530,1 (M++ 1).
HPLC: 95,9% (0,1% de TFA/ACN; Coluna: Hypersil BDS C18, 4,6 χ 50 mm).
Etapa -4
A uma solução agitada de ácido 2-(4-metóxi-7-(3-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-oxoacético (100 mg) em DMF seco (5 ml) foi adicionada amina G-4-ln-4 (0,090 g), e TBTU (0,117g) e DIPEA (0,15 ml) foram combinados nela. A mistura reacional foi agitada em r.t. durante a noite. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml) e lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre NaaSO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando MeOH/CHCI3 (0,5 : 9,5) como eluente para fornecer G-4b como sólido amarelo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 2,5 (s, 3H), 2,87 (s, 6H), 3,07 (bs, 2H), 3,16 (bs, 2H), 3,43 (bs, 2H), 3,69 (bs, 2H), 3,99 (s, 3H), 7,30 (t, 1H, J = 8 Hz), 7,48 (t, 2H, J = 8 Hz), 7,66 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,89 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 9,24 (s, 1H), 12,39 (s, 1H). LCMS: 556,1 (M+ + 1), 554,4 (M+ - 1).
HPLC: 98,5% (0,1% de TFA/ACN; Coluna: Hypersil BDS C18, 4,6 χ 50 mm).
Etapa-5
À Amina BOC protegida G-4-ln-3 (500 mg) dissolvida em diclo-rometano seco (10 ml), TFA (5 ml) foi adicionado a O0C. A mistura reacional foi deixada alcançar a r.t. e agitada durante a noite. Os voláteis foram completamente removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi diluído com di-clorometano (10 ml). A camada orgânica foi lavada com NaHCO3 saturado (2 χ 10 ml) e salmoura (20 ml). A camada orgânica foi secada sobre NaaSO4 e concentrada até a secura para fornecer a amina G-4-ln-5, que foi utilizada na próxima etapa sem qualquer purificação.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 2,68 (s, 6H), 2,75 (bs, 4H), 3,18 (bs, 4H), 7,31 (m, 1H), 7,49 (m, 4H). 13C RMN (DMSO-de): δ 40,21 (2C), 41,29 (2C), 45,37 , 47,06, 123,57 (2C), 127,09, 129,57 (2C), 139,3, 158,16, 162,97. LCMS: 272,9 (M++1).
HPLC: 97,5% (0,1% de TFA/ACN; Coluna: C18 BDS, 4,6 χ 50 mm).
Etapa -6
A uma solução agitada de ácido 2-(4-fluoro-7-(1H-1,2,3-triazol-1- il)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-oxoacético (100 mg) em DMF seco (5 ml), amina G-4-ln-5 (0,099 g), TBTU (0,127 g) e DIPEA (0,15 ml) foram adiciona- dos. A mistura reacional foi agitada em r.t. durante a noite. A mistura foi sa- ciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão redu- zida. O óleo foi diluído com acetato de etila (50 ml), lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SÜ4 anidroso e concentrada utilizando evaporador giratório. O cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando MeOH/CHCI3 (0,5 : 9,5) como eluente para fornecer G-4c como um sólido amarelo.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 2,69 (s, 6H), 3,28 (s, 3H), 3,41 (d, 2H, J = 4 Hz), 3,47 (d, 2H, J = 4 Hz), 3,73 (t, 2H, J = 6 Hz), 7,32 (m, 1H), 7,44 - 7,50 (m, 4H), 8,12 (s, 1H), 8,32 (d, 1H, J = 4 Hz), 8,36 (s, 1H), 9,01 (d, 1H, J = 4 Hz).
LCMS: 530,2 (M++1).
HPLC: 96,3% (0,1% de TFA/ACN; Hypersil BDS C18, 4,6 χ 50).
Etapa -7
A uma solução agitada de ácido 2-(4-metóxi-7-(3-metil-1H-1,2,4- triazol-1-il)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-oxoacético (100 mg) em DMF seco (5 ml), amina G-4-in-5 (0,090 g), TBTU (0,117g) e DIPEA (0,15 ml) foram adicionados. A mistura reacional foi agitada em r.t. durante a noite. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os solventes foram removidos sob pres- são reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml) e la- vado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2S04 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O cru foi purificado por cromatografia de coluna utilizando MeOH/CHCI3 (0,5 : 9,5) como eluente para fornecer G-4d como produto sólido. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 2,49 (s, 3Η), 2,70 (s, 6H), 3,28 (bs, 2H), 3,42 (bs, 4H), 3,70 (bs, 2H), 3,99 (s, 3H), 7,32 (m, 1H), 7,49 (m, 4H), 7,89 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 9,24 (s, 1H), 12,39 (s, 1H). LCMS: 556,1 (M+ + 1), 554,4 (M+ - 1).
HPLC: 99,5% (0,1% de TFA/ACN; Coluna: Hypersil BDS C18, 4,6 χ 50 mm). Preparação dos compostos 5a e 5b Preparação do intermediário G-5-In
<formula>formula see original document page 160</formula>
Etapa -1
Um frasco de base redonda de três gargalos de um litro foi car- regado com Boc-piperazina (20 g), carbonato de potássio seco (44,5 g) e DMF seco (150 ml) sob atmosfera de nitrogênio. A mistura reacional foi res-friada para O0C e bromoacetofenona (23,5 g) foi adicionado na mistura reacional muito lentamente. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após consumo do material de partida, água gelada (200 ml) foi adicionada à mistura reacional. O sólido branco precipitado foi filtrado, lavado com água (4 χ 50 ml) e secado para fornecer 4-(2-oxo-2-feniletil)piperazina-1-carboxilato de terc-butila como produto puro.
1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,48 (s, 9H), 2,59 (s, 4H), 3,52 - 3,54 (s, 4H), 3,87 (s, 2H), 7,27 - 7,29(m, 1H).
Etapa-2
Ao composto 4-(2-oxo-2-feniletil)piperazina-1-carboxilato de terc-butila (18 g) apreendido em frasco de base redonda, reagente de Bredereck (11,33 g) foi adicionado muito lentamente sob atmosfera de nitrogênio. A mistura reacional foi agitada a 55°C durante a noite. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após consumo do material de partida, éter dietílico foi adicionado à mistura reacional. O sólido resultante foi filtrado e secado sob pressão reduzida para fornecer 4-(1-(dimetilamino)-3-oxo-3-fenilprop-1-en-2-il)piperazina-1-carboxilato de terc-butila como produto puro. 1H RMN (400 MHz, DMSOd6): δ 1,36 - 1,41 (s, 9H), 2,87 (s, 4H), 3,01 (s, 6H), 3,33 (s, 4H), 6,53 (s, 1H), 7,32 - 7,42 (m, 5H).
Etapa-3
Ao composto 4-(1-(dimetilamino)-3-oxo-3-fenilprop-1-en-2-il) piperazina-1-carboxilato de terc-butila (4 g) dissolvido em etanol (40 ml), hidrato de hidrazina (1,17 g) foi adicionado e a mistura reacional foi refluxada durante 6 horas com agitação vigorosa. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após consumo do material de partida, a mistura reacional foi resfriada para a temperatura ambiente e concentrada sob pressão reduzida para fornecer 4-(3-fenil-1 H-pirazol-4-il)piperazina-1-carboxilato de terc-butila. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,48 (s, 9H), 2,81 (s, 4H), 3,48 - 3,55 (m, 4H), 7,27 - 7,43 (m, 5H), 7,94 (s, 1H), 8,3 (bs, 1H).
Etapa-4
À Amina BOC protegida 4-(3-fenil-1 H-pirazol-4-il)piperazina-1-carboxilato de terc-butila (1 g) dissolvido em diclorometano seco (10 ml), TFA (5 ml) foi adicionado a 0°C. A mistura reacional foi deixada alcançar a temperatura ambiente e agitada durante a noite. Os voláteis foram completamente removidos e o resíduo resultante foi diluído com diclorometano (20 ml). A camada orgânica foi lavada com NaHCO3 saturado (2x10 ml), salmoura, secada sobre Na2S04. Evaporação do solvente forneceu a amina desejada G-5-ln, que foi utilizada na próxima reação sem outra purificação. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 2,81 (s, 4H), 3,48 - 3,55 (m, 4H), 7,27 - 7,43 (m, 5H), 7,94 (s, 1H), 8,3 (bs, 1H). LCMS: 228,29 (M++1).
HPLC: 99,64% (TFA/ACN; Coluna: C18 BDS, 4,6 χ 50 mm).
Preparação de G-5a <formula>formula see original document page 162</formula>
A uma solução agitada de ácido 2-(4-fluoro-7-(1H-1,2,3-triazol-1- il)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-oxoacético (90 mg) em DMF seco (5 ml), G- 5-ln (75 mg), TBTU (0,117 g) e DIPEA (0,1 ml) foram adicionados. A mistura reacional foi agitada em r.t. durante a noite. A reação foi saciada com meta- nol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo re- sultante foi diluído com acetato de etila (50 ml) e lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SC^ anidroso e concen- trada utilizando evaporador giratório. O cru resultante foi purificado por cro- matografia de coluna utilizando MeOH/CHCI3 (2 : 8) como eluente para for- necer G-5a como sólido de cor amarela.
1H RMN (400 MHz, DMSOd6): δ 2,78 (d, 2H), 2,87 (d, 2H), 3,53 (d, 2H), 3,77 (d, 2H), 7,27 - 7,63 (m, 5H), 8,0 (s, 1H), 8,12 (s, 1H), 8,34 (d, 2H), 9,01 (s, 1H), 12,62 ( bs, 1H), 13,06 ( bs, 1H). 13C RMN (DMSOd6): δ 54,14, 51,83, 52,13, 112,53, 122,59, 121,18, 121,39, 122,37, 125,31, 125,58, 126,36, 127,84, 128,24, 130,96, 133,24, 133,58, 140,85, 150,42, 153,0, 164,92, 183,79. LCMS: 486,1 (M++ 1).
HPLC: 98,28% (H20/ACN; Coluna: C18 XDB, 4,6 χ 250 mm).
Preparação de G-5b
<formula>formula see original document page 162</formula>
A uma solução agitada de ácido 2-(4-metóxi-7-(3-metil-1 H-1,2,4- triazol-1-il)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-oxoacético (100 mg) em DMF seco (5 ml), G-5-ln (75 mg), TBTU (0,117 g) e DIPEA (0,1 ml) foram adicionados.
A mistura reacional foi agitada em r.t. durante a noite. A reação foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml) e lavado com NaHCOs a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2S04 anidroso e concentrada utilizando evaporador giratório. O cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando MeOH/CHCh (2 : 8) como eluente para fornecer G-5b como sólido de cor amarela
1H RMN (400 MHz1 DMSOd6): δ 2,48 (s, 3H), 2,78 (m, 2H), 2,87 (m, 2H), 3,35 (m, 2H), 3,49 (m, 2H), 4,01 (s, 3H), 7,27 (m, 5H), 7,40 - 8,23 (m, 3H), 9,24 (s, 1H), 12,39 (bs, 1H), 12,63 (bs, 1H).
13C RMN (DMSO-d6): δ 14,44, 46,02, 52,82, 52,95, 57,34, 114,71, 121,57, 123,27, 124,24, 126,20, 127,35, 128,85, 130,11, 139,18, 142,67, 149,77, 161,85, 166,67, 186,09.
LCMS: 512,0 (M++1).
HPLC: 97,27% (H20/ACN; Coluna: C18 XDB, 4,6 χ 250 mm).
Preparação dos compostos G-6a e G-6b
Preparação do intermediário G-ln-6
<formula>formula see original document page 163</formula>
Etapa-1
Ao hidreto de sódio (0,1 g) apreendido em um frasco de base redonda de 3 gargalos de 100 ml seco resfriado para 0°C, dimetilformamida seca (2 ml) foi adicionada. À mistura acima, o composto 4-(3-fenil-1H- pirazol-4-il)piperazina-1-carboxilato de terc-butila (0,5 g) em DMF (2 ml) foi lentamente adicionado a 0°C. Após 30 min, 2-cloro-N, N-dimetiletilamina (200 mg) em DMF (1ml) foi adicionado à mistura acima. A mistura reacional foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite, saciada com gelo e extraída com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com água (10 ml), salmoura e secada sobre sulfato de sódio. A camada orgânica foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O produto cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando 6% de acetato de etila em hexano como eluente para fornecer 4-(1-(2-(dimetilamino)etil)-3-fenil-1H-pirazol-4-il)piperazina-1-carboxilato de terc-butila como sólido meio branco. 1H RMN (400 MHz1 CDCI3): δ 1,49 (s, 9H), 2,33 (s, 6H), 2,83 - 2,85 (t, 4H), 2,87 (t, 2H), 3,53 (t, 4H), 4,25 (t, 2H), 7,27 - 7,29 (m, 1H), 8,01 (s, 1H). Etapa-2
À Amina BOC protegida, 4-(1-(2-(dimetilamino)etil)-3-fenil-1H-pirazol-4-il)piperazina-1-carboxilato de terc-butila (300 mg) dissolvido em diclorometano seco (5 ml) e solução etérea de HCI (10 ml) foi adicionado a 0°C. A mistura reacional foi deixada alcançar a r.t. e agitada durante uma hora. A mistura reacional foi neutralizada com solução de bicarbonato de sódio saturada e extraída com diclorometano (3x10 ml). A camada orgânica combinada foi secada sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O produto cru resultante G-6-ln foi empregado na próxima etapa sem outra purificação.
1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 2,33 (s, 6H), 2,83 - 2,85(t, 4H), 2,87 (t, 2H), 3,53 (t, 4H), 4,25 (t, 2H), 7,27 - 7,29 (m, 1H), 8,01 (s, 1H). Preparação de G-6a
<formula>formula see original document page 164</formula>
Ao ácido 2-(4-metóxi-7-(3-metil-1 H-1,2,4-triazol-1 -il)-1H-pirrolo [2,3-c]piridin-3-il)-2-oxoacético (0,15 g) apreendido em DMF seco (3 ml), a-mina G-6-ln (0,1 g), TBTU (0,219 g, 0,67 m mol) e Base de Hunig (0,2 ml) foram adicionados. A mistura reacional foi agitada em r.t. durante a noite. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml) e lavado com NaHCO3 a 10% (2 χ 20 ml) e salmoura (20 ml). A camada orgânica foi secada sobre Na2S04 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando Me-OH/CHCI3 (1 : 9) como eluente para fornecer G-6a como produto sólido. 1H RMN (CDCI3): δ 2,58 (s, 8H), 2,8 - 3,0 (m, 5H), 3,35 (bs, 2H), 3,61 (s, 2H), 3,86 (s, 2H), 4,1 (s, 2H), 4,55 (s, 2H), 7,32 (m, 1H), 7,41 (m, 3H), 7,97 (d, 5 2H), 8,24 (s, 1H), 9,12 (s, 1H). LCMS: 583,3 (M+ + 1).
HPLC: 94,1% (Água/ACN; Coluna: C 18, XDB, 4,6 χ 250 mm).
Preparação de G-6b
<formula>formula see original document page 165</formula>
Ao ácido 2-(4-fluoro-7-(1H-1,2,3-triazol-1-il)-1H-pirrolo[2,3-c] piri- din-3-il)-2-oxoacético (0,15 g) apreendido em DMF seco (3 ml), amina G-6-In (0,1 g), TBTU (0,219 g) e Base de Hunig (0,2 ml) foram adicionados. A mis- tura reacional foi agitada em r.t. durante a noite. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml) e lavado com NaHCO3 a 10% (2 χ 20 ml) e salmoura (20 ml). A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando MeOH/CHCI3 (1 : 9) como eluente para fornecer G-6b como produto sólido.
1H RMN (DMSOd6): δ 2,31 (s, 6H), 2,80 (m, 6H), 3,53 (s, 2H), 3,76 (s, 2H), 4,18 (t, 2H, J = 6 Hz), 7,24 (t, 1H, J = 6 Hz), 7,38 (t, 2H, 8 Hz), 7,67 (s, 1H), 7,96 (d, 2H, J = 8 Hz), 8,09 (s, 1H), 8,25 (s, 1H), 8,31 (s, 1H), 9,02 (s, 1H). LCMS: 557,1 (M++ 1).
HPLC: 99% (0,1% de HCOOH/ACN; Coluna: Genesis C18, 50 x 4,6 mm, 3µ).
Preparação dos compostos G-7a e G-7b
Preparação do intermediário G-7-ln <formula>formula see original document page 166</formula>
Etapa-1
Ao hidreto de sódio (0,1 g) apreendido em um frasco de base redonda de 3 gargalos de 100 ml seco resfriado para 0°C, DMF seco (2 ml) foi adicionado sob nitrogênio. À mistura acima, o composto 4-(3-fenil-1H-5 pirazol-4-il)piperazina-1-carboxilato de terc-butila (0,5 g) em DMF (2 ml) foi lentamente adicionado e deixado agitar a 0°C durante 30 minutos. Piridina de 2-clorometila (300 mg) em DMF (1ml) foi lentamente adicionado à mistura acima a 0°C. A mistura reacional foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite e saciada com gelo. O produto foi extraído com acetato de etila (3x10 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com água, salmoura, secada sobre sulfato de sódio e concentrada sob pressão reduzida. O produto cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando 6% de acetato de etila em hexano, para fornecer 4-(3-fenil-1-(piridin-2-ilmetil)-1H-pirazol-4-il)piperazina-1-carboxilato de terc-butila como sólido meio branco.
1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,48 (s, 9H), 2,80 (s, 4H), 3,53 (s, 4H), 5,57 (s, 2H), 7,27 - 7,33 (m, 5H), 7,85 - 8,02 (m, 4H), 8,61 (s, 1H).
Etapa-2
Ao 4-(3-fenil-1 -(piridin-2-ilmetil)-1 H-pirazol-4-il)piperazina-1 -carboxilato de terc-butila (300 mg) dissolvido em diclorometano seco (5 ml), solução etérea de HCl (10 ml) foi adicionada a 0°C. A mistura reacional foi deixada alcançar a temperatura ambiente e agitada durante uma hora. A mistura reacional foi neutralizada com solução de bicarbonato de sódio saturada e extraída com diclorometano (3x10 ml). A camada orgânica combinada foi secada sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O produto cru resultante G-7-ln foi empregado na próxima etapa sem outra purificação. 1H RMN (400 MHz1 CDCl3): δ 2,80 (s, 4Η), 3,53 (s, 4Η), 5,57 (s, 2Η), 7,27 -7,33 (m, 5Η), 7,85 - 8,02 (m, 4Η), 8,61 (s, 1Η).
Preparação de G-7a
<formula>formula see original document page 167</formula>
Ao ácido 2-(4-metóxi-7-(3-metil-1 H-1,2,4-triazol-1 -il)-1H-pirrolo [2,3-c]piridin-3-il)-2-oxoacético (0,15 g) apreendido em DMF seco (3 ml), amina G-7-ln (0,1 g), TBTU (0,219 g) e Base de Hunig (0,2 ml) foram adicionados. A mistura reacional foi agitada em r.t. durante a noite. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml) e lavado com NaHCO3 a 10% (2 χ 20 ml) e salmoura (20 ml). A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada utilizando evaporador giratório. O cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando MeOH/CHCI3 (1 : 9) como eluente para fornecer G-7a como produto sólido. 1H RMN (DMSO-de): δ 2,77 (s, 2H), 2,87 (s, 2H), 3,49 (s, 3H), 3,74 (s, 2H), 4,01 (s, 3H), 5,38 (s, 2H), 7,08 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,35 (m, 4H), 7,79 (m, 2H), 7,89 (s, 1H), 7,96 (d, 2H, J = 4 Hz), 8,23 (s, 1H), 8,53 (s, 1H), 9,25 (s, 1H), 12,38 (bs, 1H). LCMS: 603,2 (M++ 1).
HPLC: 96% (0,1% de TFA/ACN; Coluna: Hypersil BDS C18, 4,6 χ 50 mm, 5 μ).
Preparação de G-7b
<formula>formula see original document page 167</formula>
Ao ácido 2-(4-fluoro-7-(1 H-1,2,3-triazol-1-il)-1H-pirrolo[2,3-c]piri- din-3-il)-2-oxoacético (0,15 g) apreendido em DMF seco (3 ml), amina G-7-ln (0,1 g), TBTU (0,219 g) e Base de Hunig (0,2 ml) foram adicionados. A mistura reacional foi agitada em r.t. durante a noite. A mistura foi saciada com metanol (10 mL) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml) e lavado com NaHCO3 a 10% (2 χ 20 ml) e salmoura (20 ml). A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada utilizando evaporador giratório. O cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando MeOH/CHCl3 (1 : 9) como eluente para fornecer G-7b como produto sólido. 1H RMN (DMSO-de): δ 2,77 (s, 2H), 2,87 (s, 2H), 3,54 (s, 2H), 3,77 (s, 2H), 5,37 (s, 2H), 7,08 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,32 (m, 4H), 7,76 (s, 2H), 7,96 (d, 2H, J = 8 Hz), 8,12 (s, 1H), 8,34 (d, 2H, J = 12 Hz), 8,53 (s, 1H), 9,02 (s, 1H). HPLC: 98% (0,1% de TFA/ACN; Coluna: Hypersil BDS C18, 5μ, 4,6 χ 50 mm).
Preparação dos compostos G-8a e G-8b Preparação de intermediário G-8-Iη
<formula>formula see original document page 168</formula>
Etapa-1
A uma solução agitada de piperazina de N-Boc (1 g) em THF seco (20 ml), trietilamina (3 ml), seguida por cloroacetonitrilo (5,02 ml) foram adicionados gota a gota. A mistura reacional foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi diluído com acetato de etila (20 ml). A camada orgânica foi concentrada até a secura sob pressão reduzida para fornecer 4-(cianometil)piperazina-1- carboxilato de terc-butila, que foi utilizado para a próxima reação sem outra purificação.
1H RMN (400 MHz1 CDCl3): δ 1,47 (s, 9H), 2,55 (t, 4H, J = 6 Hz), 3,49 (t, 4H, J = 4 Hz), 3,55 (s, 2H).
GC MS: 225 Etapa-2
Ao hidreto de sódio (0,1g) apreendido em DMF seco (5 ml), sob nitrogênio, o composto 4-(cianometil)piperazina-1 -carboxilato de terc-butila (0,5 g) foi adicionado e deixado agitar em temperatura ambiente durante meia hora. Benzaldeído (280 mg) foi adicionado à mistura reacional acima e I deixado agitar durante 3 horas em temperatura ambiente. A mistura reacional foi saciada com água gelada (50 ml) e extraída com acetato de etila (3 χ 10 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (10 ml), secada sobre sulfato de sódio e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando MeOH: CH2CI2 (0,5 : 9,5) como um eluente para fornecer 4-(1-ciano-2-fenilvinil) pipe-razina-1-carboxilato de terc-butila como produto puro. 1H RMN (400 MHz1 CDCI3): δ 1,48 (s, 9H), 3,09 (t, 4H, J = 6 Hz), 3,56 (t, 4H, J = 4 Hz), 6,22 (s, 1H), 7,30 (d, 1H, J = 12 Hz), 7,38 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,55 (d, 2H, J = 8 Hz).
Etapa-3
A uma solução agitada de 4-(1-ciano-2-fenilvinil)piperazina-1-carboxilato de terc-butila (100 mg) apreendido em DMSO seco (2 ml) foi adicionado azida de sódio (0,2 g) e aquecido para 110°C durante a noite. A mistura reacional foi cuidadosamente saciada com água (10 ml) e a mistura reacional foi extraída com diclorometano (3x10 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (10 ml), secada sobre sulfato de sódio e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando MeOH: CH2Cl2 (1 : 9) como um eluente para fornecer 4-(5-fenil-1H-1,2,3-triazol-4-il)piperazina-1-carboxilato de terc-butila como sólido branco.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 1,4 (s, 9H), 2,92 (d, 4H, J = 4 Hz), 3,43 (m, 4Η), 7,33 (m, 1 H,J = 12 Hz e 16 Hz), 7,45 (t,2Η, 8 Hz), 7,85 (d, 2H,J = 8 Hz), 14,32 (s, 1Η).
Etapa-4
Ao 4-(5-fenil-1H-1,2,3-triazol-4-il)piperazina-1-carboxilato de terc-butila (500 mg) dissolvido em diclorometano seco (10 ml), TFA (5 ml) foi adicionado a 0°C. A mistura reacional foi deixada alcançar a temperatura ambiente e agitada durante a noite. Os voláteis foram completamente removidos e o resíduo resultante foi diluído com diclorometano (20 ml). A camada orgânica foi lavada com NaHCO3 saturado (2x10 ml), salmoura, secada sobre Na2SO4. Evaporação do solvente forneceu a amina desejada G-8-ln, que foi utilizada na próxima reação sem outra purificação. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 2,84 (2s, 8H), 7,32 (t, 1H, J = 8 Hz), 7,45 (t, 2H, J = 6 Hz), 7,83 (d, 2H, J = 8 Hz). LCMS: 230,1 (M+ + 1).
Preparação de G-8a
<formula>formula see original document page 170</formula>
Etapa-5
A uma solução agitada de ácido 2-(4-fluoro-7-(1H-1,2,3-triazol-1- il)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-oxoacético (100 mg) em DMF seco (5 ml), G-8-ln (0,083 g), TBTU (0,128 g) e DIPEA (0,1 ml) foram adicionados. A mistura reacional foi agitada em r.t. durante a noite. A reação foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml) e lavado com NaHCOs a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada utilizando evaporador giratório. O cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando MeOH/CHCI3 (2 : 8) como eluente para fornecer G-8a como sólido de cor amarela.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 2,99 (s, 2H), 3,09 (s, 2H), 3,57 (s, 2H), 3,8 (s, 2Η), 7,35 (d, 1 Η, J = 8 Hz), 7,45 (t, 2H, J = 6 Hz), 7,87 (d, 2H, J = 8 Hz), 8,12 (s, 1H), 8,34 (d, 2H, J = 16 Hz), 9,02 (s, 1H), 13,08 (s, 1 H), 14,4 (s, 1H). LCMS: 487,1 (M++ 1).
HPLC: 95,2% (0,1% de TFA/ACN; Coluna: Hypersil BDS C18, 4,6 χ 50 mm).
Preparação de G-8b
<formula>formula see original document page 171</formula>
A uma solução agitada de ácido 2-(4-metóxi-7-(3-metil-1H-1,2,4- triazol-1-il)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-oxoacético (100 mg) em DMF seco (5 ml), G-8-ln (0,076 g), TBTU (0,117 g) e DIPEA (0,1 ml) foram adicionados. 10 A mistura reacional foi agitada em r.t. durante a noite. A reação foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml) e lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SCXi anidroso e concentrada utilizando evaporador giratório. O cru resultante foi purificado 15 por cromatografia de coluna utilizando MeOH/CHCI3 (2 : 8) como eluente para fornecer G-8b como um sólido amorfo.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 2,50 (s, 3H), 2,99 (t, 2H, J = 4 Hz), 3,1 (t, 2H, J = 6 Hz), 3,52 (t, 2H, J = 4 Hz), 3,77 (t, 2H, J = 6 Hz), 4,0 (s, 3H), 7,34 (t, 1H, J = 8 Hz), 7,46 (t, 2H, J = 8 Hz), 7,88 (t, 3H, J = 4 Hz), 8,23 (s, 1H), 20 9,25 (s, 1H), 12,4 (bs, 1H), 14,5 (bs, 1H). LCMS: 513,1 (M++1).
HPLC: 90,39% (0,1% de TFA/ACN; Coluna: Hypersil BDS C18, 4,6 χ 50 mm).
Preparação dos compostos G-9a e G-9b
Etapa-1 <formula>formula see original document page 172</formula>
Hidreto de sódio (0,3 g) foi apreendido em DMF seco (2 ml) e uma solução de 5-amino-1-fenil-pirazol (0,5 g) foi adicionada lentamente a 0°C. A mistura reacional foi agitada durante 1 hora em temperatura ambien- te. Novamente a mistura reacional foi resfriada a O0C e uma solução de bis (2-cloroetilamina) hidroclórico (0,61 g) em DMF (2 ml) foi adicionada muito lentamente. A mistura reacional foi deixada agitar durante a noite em tempe- ratura ambiente. A mistura reacional foi saciada com água resfriada (5 ml) e extraída com acetato de etila (3 χ 40 ml). Evaporação do solvente sob pres- são reduzida forneceu o produto cru, o qual, foi purificado por cromatografia de coluna utilizando MeOH/CHCI3 (2 : 8) como eluente para fornecer G-9-ln como produto sólido puro.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 2,36 - 3,06 (m, 8H), 5,95 (s, 1H), 7,29 (m, 1H), 7,30-8,32 (m, 5H).
13C RMN (DMSO-de): δ 45,45, 52,50, 94,80, 122,58, 126,91, 129,47, 140,16, 140,53, 152,63.
Etapa-2
<formula>formula see original document page 172</formula>
Ácido 2-(4-metóxi-7-(3-metil-1 H-1,2,4-triazol-1 -il)-1 H-pirrolo[2,3- c] piridin-3-il)-2-oxoacético (0,098 g), G-9-ln (0,076 g), TBTU (0,116 g) e Ba- se de Hunig (0,1 ml) foram combinados em DMF seco (4 ml). A mistura rea- cional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão re- duzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml), lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando MeOH/CHCI3 (1 : 9) como eluente para fornecer G-9a como sólido amarelo.
1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 2,57 (s, 3H), 2,93 - 2,94 (t, 2H), 3,02 - 3,04 (t, 2H), 3,55 - 3,57 (t, 2H), 3,80 - 3,82 (t, 2H), 4,06 (s, 3H), 5,93 (s, 1H), 7,27 (s, 1H), 7,31- 7,46 (m, 5H), 7,80 (bs, 1H), 8,20 (s, 1H), 9,12 (s, 1H), 11,06 (bs,1H).
13C RMN (CDCI3): δ 14,13, 41,03, 45,63, 50,77, 51,15, 56,97, 94,80, 115,74, 121,38, 123,13, 124,15, 127,22, 129,11, 129,70, 136,51, 139,74, 139,90, 141,28, 149,63, 150,74, 162,12, 166,39, 185,36. LCMS: 512,1 (M++ 1).
HPLC: 96,12% (H20/ACN; Coluna: C18 XDB, 4,6 χ 250 mm).
<formula>formula see original document page 173</formula>
Ácido 2-(4-Fluoro-7-(1 H-1,2,3-triazol-1 -il)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin- 3-il)-2-oxoacético (0,098 g), G-9-ln (0,076 g), TBTU (0,116 g) e Base de Hu- nig (0,1 ml) foram combinados em DMF seco (4 ml). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml), lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O cru resultante foi purificado por croma- tografia de coluna utilizando MeOH/CHCI3 (1:9) como eluente para fornecer G-9b como sólido amarelo.
1H RMN (400 MHz, CD3OD): δ 2,93 - 2,95 (t, 2H), 3,01 - 3,04 (t, 2H), 3,57 - 3,59 (t, 1H), 3,79 - 3,81 (t, 1H), 6,10 (s, 1H), 7,41 (m, 1H), 7,51 - 7,75 (m, 5H), 8,01 (s, 1H), 8,21 (s, 1H), 8,39 (s, 1H), 8,93 (s, 1H). 13C RMN (DMSOd6): δ 31,13, 45,47, 51,06, 51,42, 95,85, 113,44, 113,50, 122,34, 122,55, 122,72, 123,58, 126,27, 127,16, 129,61, 132,22, 134,42, 140,16, 140,22, 142,83, 151,26, 151,47, 154,05, 166,08, 184,49. LCMS: 486,1 (M++ 1).
HPLC: 99,08% (HCOOH/ACN; Coluna: C18 XDB, 4,6 χ 50 mm).
Preparação de G-10a e G-10b
Preparação do intermediário G-10-In
Etapa-1
Ao 4-[(2-aminoetil)amino]piperidina-1-carboxilato de terc-butila (6 g) apreendido em tolueno seco (50 ml) resfriado para -10°C, trimetilalumínio foi adicionado lentamente em tolueno seco sob atmosfera de nitrogênio. A mistura reacional foi deixada aquecer para r.t. e um segundo lote de solução de 4-[(2-aminoetil)amino]piperidina-1-carboxilato de terc-butila (6 g em 50 mL de tolueno) foi adicionado muito lentamente a ela. A mistura combinada foi aquecida até 55°C durante 30 minutos. Uma solução de benzoato de etila (7,4 g em 50 mL de tolueno seco) foi adicionada muito-muito lentamente à mistura reacional a 55°C durante um período de 40 minutos. Após a conclu- são da adição, a mistura reacional foi refluxada durante a noite. A mistura reacional foi resfriada para 0°C e água (3 χ 50 ml) foi adicionada. A mistura combinada foi filtrada através de almofada de Celita. O filtrado foi concentra- do sob pressão reduzida e o óleo resultante foi purificado por cromatografia de coluna para fornecer 4-(2-fenil-4,5-diidro-1H-imidazol-1-il)piperidina-1- carboxilato de terc-butila como um produto puro.
1H RMN (400 MHz, CD3OD): δ 1,45 (s, 9H), 1,71 - 1,75 (m, 4H), 2,62 (m, 2H), 3,85 (m, 1H), 3,95 (m, 4H), 4,91 (m, 2H), 7,56 - 7,63 (m, 5H). LCMS: 330,1 (M++ 1).
Etapa-2
Ao 4-(2-fenil-4,5-diidro-1 H-imidazol-1-il)piperidina-1-carboxilato de terc-butila (2,2 g) dissolvido em diclorometano seco (100 ml), TFA (50ml) foi adicionado a O0C. A mistura reacional foi deixada alcançar a temperatura ambiente e agitada durante a noite. Os voláteis foram removidos e o resíduo foi diluído com diclorometano. A camada orgânica foi lavada com NaHCO3 saturado (2 χ 50 ml), salmoura (40 ml) e secada sobre Na2SO4. Evaporação do solvente forneceu a amina desejada G-10-ln que foi utilizada na próxima etapa sem outra purificação.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 1,88 - 1,91 (m, 2H), 2,15 - 2,21 (m, 2H), 2,85 - 2,90 (m, 2H), 3,22 - 3,25 (m, 2H), 3,88 - 4,05 (m, 5H), 7,46 - 7,74 (m, 5H), 10,98 (bs, 1H).
13C RMN (DMSO-d6): δ 26,05, 42,12, 43,31, 45,48, 51,19, 123,20, 129,07, 129,83, 133,54, 166,19.
LCMS: 229,9 (M+ + 1).
Preparação de G-10a
<formula>formula see original document page 175</formula>
Ao ácido 2-(4-fluoro-7-(1H-1,2,3-triazol-1 -il)-1H-pirrolo[2,3-c] piri- din-3-il)-2-oxoacético (0,09 g) em DMF seco (5 mL), amina G-10-ln (0,08 g), TBTU (0,12 g) e Base de Hunig (0,2 ml) foram adicionados. A mistura rea- cional foi agitada em r.t. durante a noite. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os solventes foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resul- tante foi diluído com acetato de etila (50 ml) e lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concen- trada sob pressão reduzida. O semi-sólido resultante foi purificado por cro- matografia de coluna utilizando MeOH/CHCI3 (1 : 9) como eluente para for- necer G-IOa como sólido.
1H RMN (400 MHz, CD3OD): δ 2,22 (m, 4H), 3,77 (m, 4H), 4,2 (m, 2H), 4,6 (m, 2H), 7,70 (m, 5H), 8,01 (s, 1H), 8,43 (s, 1H), 8,5 (s, 1H), 8,93 (s, 1H). 13C RMN (CD3OD): δ 30,14, 30,89, 41,25, 45,92, 46,23, 48,36, 79,47, 114,44, 124,50, 124,69, 124,96, 126,02, 126,30, 128,26, 129,21, 129,56, 130,32, 132,84, 134,46, 147,54, 153,38, 155,95, 168,48, 185,58.
LCMS: 487,1 (M++ 1).
HPLC: 98,14% (NH4OAc/ACN; Coluna: C18 XDB, 4,6 χ 250 mm).
Preparação de G-10b
Ao ácido 2-(4-metóxi-7-(3-metil-1 H-1,2,4-triazol-1 -il)-1 H-pirrolo [2,3-c]piridin-3-il)-2-oxoacético (0,1 g) apreendido em DMF seco (5 ml), G- 10-ln (0,076 g), TBTU (0,117 g) e Base de Hunig (0,2 ml) foram adicionados. A mistura reacional foi agitada em r.t. durante a noite. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml) e lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada utilizando evaporador giratório. O cru foi purificado por croma- tografia de coluna utilizando MeOH/CHCI3 (1 : 9) como eluente para fornecer G-10b como produto sólido.
1H RMN (400 MHz, CD3OD): δ 2,55 (s, 3H), 2,76 - 2,81 (bs,1H), 3,03 - 3,09 (t, 1H), 3,78 - 3,97 (m, 6H), 4,65 (s, 3H), 4,90 (d, 1H), 7,57 - 7,58 (d, 5H), 7,83 (s, 1H), 8,29 (s, 1H), 9,22 (s, 1H). 13C RMN (CD3OD): δ 13,73, 30,31, 30,77, 41,48, 45,62, 46,36, 48,36, 48,58, 54,70, 57,35, 115,64, 122,02, 124,98, 127,28, 129,17, 130,08, 130,54, 131,53, 132,05, 141,34, 143,24, 151,20, 162,78, 168,53, 168,59,187,35.
LCMS: 513,1 (M++ 1).
HPLC: 95,26% (NH4OAc/ACN; Coluna: C18 XDB, 4,6 χ 250 mm).
Preparação de G-11aeG-11b
Preparação do intermediário G-11-ln <formula>formula see original document page 177</formula>
Etapa -1
Terc-butil-4-(2-fenil-4,5-diidro-1 H- imidazol-1 -il)piperidina-1 - carboxilato (0,1 g) e peróxido de níquel foram dissolvidos em benzeno seco (20 ml) e refluxados a IOO0C durante a noite. A mistura reacional foi deixada atingir a temperatura ambiente, filtrada através de uma almofada de celita e lavada com CHCI3 (2 χ 20 ml). O solvente orgânico removido sob pressão I reduzida forneceu um óleo, que foi purificado por cromatografia de coluna utilizando acetato de etila. Evaporação do solvente forneceu o produto puro, 4-(2-fenil-1 H-imidazol-1 -il)piperidina-1 -carboxilato de terc-butila. 1H RMN (400 MHz, CD3OD): δ 1,47 (s, 9H), 1,89 - 1,96 (m, 4H), 3,0 (m, 2H), 4,23 (m, 2H), 4,32 (d, 1H), 7,08 (d, 1H), 7,38 (s, 1H), 7,52 - 7,55 (m, 5H). LCMS: 328,1 (M++ 1).
Etapa-2
4-(2-Fenil-1 H-imidazol-1 -il)piperidina-1 -carboxilato de terc-butila (600 mg) dissolvido em diclorometano seco (10 ml) e TFA (5 m!) foi adicio- nado a ela a 0°C. A mistura reacional foi deixada agitar em temperatura am- biente e agitada durante a noite. Os voláteis foram completamente removi- dos e o resíduo foi diluído com diclorometano. A camada orgânica foi lavada com NaHCO3 saturado (2 χ 10 ml) e salmoura (20 ml), secada sobre Na2S04. Evaporação do solvente forneceu a amina desejada G-11-ln que foi utilizada na próxima etapa sem outra purificação.
1H RMN (400 MHz1 CD3OD): δ 1,88 - 2,02 (m, 4H), 2,64 (m, 2H), 3,31 (m, 2H), 4,91 (m, 1H), 7,09 (d, 1H), 7,37 (d, 1H), 7,47 - 7,56 (m, 5H). 13C RMN (CD3OD): δ 34,83, 43,73, 46,16, 55,27, 62,18, 118,47, 128,36, 128,47, 128,64, 129,52, 129,61, 130,33, 130,46, 148,59. Preparação de G-11a <formula>formula see original document page 178</formula>
Ao ácido 2-(4-fluoro-7-(1 H-1,2,3-triazol-1 -il)-1H-pirrolo[2,3-c] piri- din-3-il)-2-oxoacético (0,1 g) dissolvido em DMF seco (5 m), amina G-11-ln (0,074 g), TBTU (0,12 g) e Base de Hunig (0,2 ml) foram adicionados e dei- xados agitar em r.t. durante a noite. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml) e lavado com NaHCO3 a 10% (2 χ 20 ml) e salmoura (20 ml). A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidro- so e concentrada sob pressão reduzida. O cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando MeOH/CHCl3 (1 : 9) como eluente para fornecer G-11a como produto sólido.
1H RMN (400 MHz, CD3OD): δ 2,05 - 2,17 (m, 4H), 2,94 (bs,1H), 3,27 - 3,32 (bs, 1H), 3,95 (d, 1H), 4,73 (bs, 1H), 4,90 (d, 1H), 7,11 (s, 1H), 7,44 - 7,92 (m, 5H), 8,01 (s, 1H), 8,21 (s, 1H), 8,41 (s, 1H), 8,92 (s, 1H). 13C RMN (CD3OD): δ 33,69, 34,54, 41,73, 46,44, 55,03, 114,80, 114,85, 118,64, 123,64, 127,23, 127,51, 128,92, 130,02, 130,40, 130,60, 131,52, 134,80, 141,91, 148,70, 167,63, 185,78. LCMS: 485,1 (M++1).
HPLC: 95,38% (0,1% de TFA/ACN; Coluna: C18 BDS, 4,6 χ 250 mm).
Preparação de G-11b
<formula>formula see original document page 178</formula>
Ao ácido 2-(4-metóxi-7-(3-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)-1H-pirrolo [2,3-c] piridin-3-il)-2-oxoacético (0,1 g) dissolvido em DMF seco (5 ml), amina G-11-ln (0,079 g), TBTU (0,11 g) e Base de Hunig (0,1 ml) foram adiciona- dos e a mistura reacional foi agitada em r.t. durante a noite. A mistura foi sa- ciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão redu- zida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml) e lavado com NaHCO3 a 10% (2 χ 20 ml) e salmoura (20 ml). A camada orgânica foi seca- da sobre NaaSO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O cru resul- tante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando MeOH/CHCI3 (1: 9) como eluente para fornecer G-11b como produto sólido.
1H RMN (400 MHz1 CD3OD): δ 2,05 - 2,20 (m, 4H), 2,55 (s, 3H), 2,94 - 3,20 (t,1H), 3,23 - 3,27 (bs, 1H), 3,87 (d, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,51 (bs, 1H), 4,91 (d, 1H), 7,11 (s, 1H), 7,43 (s, 1H), 7,53 - 7,55 (m, 5H), 7,81 (s, 1H), 8,28 (s, 1H), 9,20 (s, 1H).
13C RMN (CD3OD): δ 13,77, 33,80, 34,32, 41,68, 46,43, 55,09, 57,38, 115,74, 118,62, 122,15, 124,64, 125,30, 128,96, 130,01, 130,40, 130,56, 131,03, 131,56, 139,49, 142,80, 148,70, 151,08, 162,93, 168,46, 187,54. LCMS: 511,2 (M++ 1).
HPLC: 95,35% (NH4OAc/ACN; Coluna: C18 XDB, 250 χ 4,6 mm).
Preparação dos compostos G- 12a e G- 12b
Preparação do intermediário G-12-ln
<formula>formula see original document page 179</formula>
Etapa -1
A uma solução agitada de N-fenil etilenodiamina (2 g) em álcool absoluto (30 ml), dissulfeto de carbono (2,23 g) foi adicionado sob nitrogênio.
A mistura reacional foi refluxada durante três horas e foi levada para a tem- peratura ambiente. O sólido branco resultante (intermediário tioamida) foi filtrado, secado e empregado na próxima etapa sem outra purificação.
A uma solução agitada do intermediário tioamida (2 g) em meta- nol seco (20 ml), iodeto de metila (3,1 g) foi adicionado. A mistura reacional
<formula>formula see original document page 179</formula> foi refluxada durante três horas. Os voláteis foram removidos sob vácuo e o sólido de cor branca resultante, 2-(metiltio)-1-fenil-4,5-diidro-1H-imidazol, foi empregado na próxima etapa sem outra purificação.
1H RMN (400 MHz , DMSO-d6): δ 2,65 (s, 3H), 4,06 (t, 2H), 4,38 (t, 2H), 7,46 - 7,57 (m, 5H).
LCMS: 192,9 (M++ 1).
Etapa -2
A uma solução agitada de 2-(metiltio)-1-fenil-4,5-diidro-1 H- imidazol (100 mg) em tolueno (5 ml), piperazina de N-Boc (0,48 g) foi adicio- nada e a mistura reacional integral foi refluxada durante a noite. O solvente foi removido completamente e acetato de etila foi adicionado ao resíduo. O sólido branco resultante, 4-(1-fenil-4,5-diidro-1H-imidazol-2-il)piperazina-1- carboxilato de terc-butila, foi filtrado, secado e utilizado na próxima reação sem outra purificação.
1H RMN (400 MHz, CD3OD): δ 1,49 (s, 9H), 3,17 (m, 4H), 3,32 (m, 4H), 3,89 (t, 2H), 4,25 (t, 2H), 7,40 - 7,56 (m, 5H). LCMS: 331,1 (M++ 1).
Etapa-3
Ao 4-(1 -fenil-4,5-diidro-1 H-imidazo!-2-il)piperazina-1 -carboxilato de terc-butila (500 mg) apreendido em diclorometano seco (10 ml), TFA (5 ml) foi adicionado a O0C. A mistura reacional foi deixada alcançar a tempera- tura ambiente e agitada durante a noite. Os voláteis foram removidos utili- zando pressão reduzida e o resíduo foi diluído com diclorometano (10 ml). A camada orgânica foi lavada com NaHCOs saturado (2x10 ml), salmoura (20 ml) e foi secada sobre Na2SO4. Evaporação do solvente forneceu a amina desejada G-12-in que foi empregada na próxima reação sem outra purifica- ção.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 2,52 (m, 4H), 3,06 (m, 4H), 3,66 (t, 2H), 4,04 (t, 2H), 7,18 - 7,44 (m, 5H). LCMS: 230,9 (M++1).
Preparação de G-12a <formula>formula see original document page 181</formula>
A uma solução agitada de ácido 2-(4-fluoro-7-(1H-1,2,3-triazol-1- il)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-oxoacético (50 mg) em DMF seco (5 ml), amina G-12-ln (41 mg), TBTU (64 mg) e DIPEA (0,1 ml) foram adicionados. A mistura reacional foi agitada em r.t. durante a noite. A reação foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml) e lavado com NaHCOa a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SC^ anidroso e concentrada utilizando evaporador giratório. O cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando MeOH/CHCl3 (1 : 9) como eluente para fornecer G-12a como sólido de cor amarela.
1H RMN (DMSOd6): δ 3,21 (d, 2H), 3,34 (m, 4H), 3,66 (d, 2H), 3,73 - 3,77 (t, 2H), 4,14 - 4,18 (t, 2H), 7,30 - 7,50 (m, 5H), 8,11 (s, 1H), 8,28 (s, 1H), 8,35 (s, 1H), 9,0 (s, 1H).
LCMS: 488,1 (M++1).
HPLC: 99,66% (0,1% de TFA/ACN; Coluna: C18 BDS, 4,6 χ 50 mm). Preparação de G-12b
<formula>formula see original document page 181</formula>
A uma solução agitada de ácido 2-(4-metóxi-7-(3-metil-1H-1,2,4- triazol-1 -il)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-oxoacético (50 mg) em DMF seco (5 ml), amina G-12-ln(38 mg), TBTU (0,117 g) e DIPEA (0,1 ml) foram adicio- nados. A mistura reacional foi agitada em r.t. durante a noite. A reação foi HIVe AIDS. saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão re- duzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml) e lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2S04 anidroso e concentrada utilizando evaporador giratório. O cru resul- tante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando MeOH/CHCl3 (1 : 9) como eluente para fornecer G-12b como sólido de cor amarela. 1H RMN (DMSO-de): δ 2,72 (s, 3H), 3,06 (d, 2H), 3,18 (d, 2H), 3,31 (t, 2H), 3,33 - 3,62 (m, 4H), 3,90 (t, 2H), 3,95 (s, 3H), 7,02 - 7,26 (m, 5H), 7,82 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 9,28 (s, 1H), 11,89 (bs, 1H).
LCMS: 514,2 (M++ 1).
HPLC: 99,25 % (NH4OAc/ACN; Coluna: C18 XDB, 250 χ 4,6 mm).
Preparação de G-13a e G-13b
Etapa-1
A uma solução de 4-bromo-1-metil-5-fenil-1H-pirazol (0,2 g) em tolueno seco (5 ml), piperazina (0,36 g) e terc-butóxido de sódio (0,12 g) fo- ram adicionados e a mistura reacional foi desgaseificada durante 5 minutos.
Em seguida, BINAP (0,05 g), Pd(dba)2 e DMF (0,1 ml) foram adicionados à mistura reacional acima e novamente desgaseificada com nitrogênio durante 5 minutos. A mistura reacional foi deixada refluxar durante a noite. A mistura reacional foi filtrada através de uma almofada de celita e lavada com acetato de etila (2 χ 20 ml). Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O produto cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando MeOH/CHCI3 (2 : 8) como eluente para fornecer G-13-ln como óleo amarelo claro.
1H RMN (400 MHz, DMSOd6): δ 2,50 (m, 4H), 2,64 (m, 4H), 3,67 (s, 3H), 7,30 (s, 1H), 7,36 - 7,53 (m, 5H).
13C RMN (CD3OD): δ 30,77, 41,09, 46,34, 48,37, 52,90, 53,78, 54,09, 129,88, 130,65, 131,21, 134,72, 135,53, 136,39, 163,08.
LCMS: 242,9 (M++ 1).
Etapa-2
A uma solução agitada de ácido 2-(4-fluoro-7-(1H-1,2,3-triazol-1- il)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-oxoacético (150 mg) em DMF seco (5 ml), G- 13-1η (96 mg), TBTU (175mg) e DIPEA (0,2 ml) foram adicionados. A mistura reacional foi agitada em r.t. durante a noite. A reação foi saciada com meta- nol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo re- sultante foi diluído com acetato de etila (50 ml) e lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2S04 anidroso e concen- trada utilizando evaporador giratório. O cru resultante foi purificado por cro- matografia de coluna utilizando MeOH/CHCI3 (1 : 9) como eluente para for- necer G-13a como sólido de cor amarela.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 2,50 (t, 2H), 2,70 (t,2H), 3,38 (bs,2H), 3,61 (t, 2H), 3,69 (s, 3H), 7,39 (s, 1H), 7,42 - 7,55 (m, 5H), 8,12 (s, 1H), 8,31 (bs, 1H), 9,01 (s, 1H), 13,05 (bs, 1H). LCMS: 500,2 (M++ 1).
HPLC: 97,37% (0,1% de TFA /ACN; Coluna: C18 BDS 4,6 χ 50 mm).
A uma solução agitada de ácido 2-(4-metóxi-7-(3-metil-1H-1,2,4- triazol-1-il)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-oxoacético (150 mg) em DMF seco (5 ml), G-13-ln (96 mg), TBTU (0,117 g) e DIPEA (0,2 ml) foram adicionados.
A mistura reacional foi agitada em r.t. durante a noite. A reação foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml) e lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada utilizando evaporador giratório. O cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando MeOH/CHCI3 (1 : 9) como eluente para fornecer G-13b como sólido de cor amarela.
1H RMN (400 MHz1 CDCI3): δ 2,56 (s, 3H), 2,84 (s,1H), 2,93 (bs,1H), 3,50 (bs, 2H), 3,77 (bs, 4H), 4,09 (s, 3H), 7,27 (s, 1H), 7,37 - 7,48 (m, 5H), 8,18 (s, 1H), 9,10 (S, 1H), 11,03 (s, 1H). LCMS: 526,2 (M++ 1).
HPLC: 94,59% (NH4OAc/ACN; Coluna: C18 XDB, 4,6 χ 250 mm). Preparação dos compostos G-14a e G-14b
Preparação do intermediário G-14-1 η
<formula>formula see original document page 184</formula>
Etapa-1
Frasco de base redonda de três gargalos de 100 ml foi carrega- do com 6-fenil-5-(piperazin-1-il)piridazin-3(2H)-ona (2,0 g), carbonato de po- tássio seco (2,1 g) e DMF seco (150 ml) sob atmosfera de nitrogênio. A mis- tura reacional foi agitada em temperatura ambiente e benzoilcloreto (1,5 g) foi adicionado na mistura reacional muito lentamente. A mistura reacional foi aquecida para 120°C durante 4 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após consumo do material de partida, a mistura reacional foi resfri- ada para 0SC, água gelada (20,0 ml) foi adicionada à mistura reacional e o composto orgânico foi extraído em etilacetato (4 χ 20 ml). Camadas orgâni- cas combinadas foram secadas (Na2SO4) e concentradas. O material cru foi purificado por cromatografia de coluna utilizando MeOH/CHCI3 (1 : 9) como eluente para fornecer 5-(4-benzoilpiperazin-1-il)-6-fenilpiridazin-3(2H)-ona. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 2,94 - 3,41 (bs, 4H), 3,49 - 3,73 (bs, 4H), 6,33 (s, 1H), 7,27 - 7,68 (m, 10H), 11,5 (bs, 1H). LCMS: 361,0 (M++ 1).
Etapa-2
Ao 5-(4-benzoilpiperazin-1-il)-6-fenilpiridazin-3(2H)-ona (1,3 g) colocado em um frasco de base redonda de gargalo único, oxicloreto fosfo- roso (10 ml) foi adicionado e a mistura foi aquecida para 80°C durante 4 ho- ras. A mistura reacional foi resfriada para a temperatura ambiente e concen- trada para remover o excesso de oxicloreto fosforoso. O resíduo foi lenta- mente vertido em gelo e neutralizado com bicarbonato de sódio sólido. A mistura foi extraída com acetato de etila (3 χ 100 ml). A camada orgânica combinada foi secada sobre sulfato de sódio anidroso e concentrada para fornecer (4-(6-cloro-3-fenilpiridazin-4-il)piperazin-1-il)(fenil)metanona como sólido branco.
1H RMN (400 MHz1 CDCI3): δ 2,96 - 3,09 (bs, 4H), 3,43 - 3,51 (bs, 2H), 3,80 (bs, 2H), 6,94 (s, 1H), 7,26 - 7,84 (m, 10H).
LCMS: 378,8 (M+-1).
Etapa-3
Ao (4-(6-cloro-3-fenilpiridazin-4-il)piperazin-1-il)(fenil)metanona (1 g) dissolvido em metanol (40 ml), dimetil amina em THF (10 ml) foi adicio- nada sob atmosfera de nitrogênio e a mistura reacional foi aquecida para 60°C durante 18 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após consumo do material de partida, a mistura reacional foi resfriada para a tem- peratura ambiente e neutralizada com bicarbonato de sódio sólido. A mistura foi extraída com diclorometano (3x10 ml). A camada orgânica combinada foi secada sobre sulfato de sódio anidroso e concentrada para fornecer (4- (6-(dimetilamino)-3-fenilpiridazin-4-il)piperazin-1 -il)(fenil)metanona como lí- quido amarelo.
LCMS: 387,9 (M++ 1).
Etapa-4
Ao (4-(6-(dimetilamino)-3-fenilpiridazin-4-il)piperazin-1 -il)(fenil) metanona (18 g) apreendido em frasco de base redonda, ácido hidroclórico concentrado (10ml) foi adicionado. A mistura reacional foi agitada a 85°C durante 6 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após con- sumo do material de partida, a mistura reacional foi resfriada para a tempe- ratura ambiente. O resíduo foi lentamente vertido em gelo e neutralizado com bicarbonato de sódio sólido. A mistura foi extraída com diclorometano (3 χ 10 ml). A camada orgânica combinada foi secada sobre sulfato de sódio anidroso e concentrada para fornecer G-14-ln como líquido amarelo.
1H RMN (400 MHzj CDCI3): δ 2,46 (s, 6H), 2,96 - 3,13 (d, 4H), 3,14 - 3,49 (d, 4H), 6,14 (s, 1H), 7,27 - 7,43 (m, 5H), 7,87 (s, 1H). LCMS: 283,9 (M++ 1).
Preparação de G-14a
<formula>formula see original document page 186</formula>
Ácido 2-(4-Fluoro-7-(1 H-1,2,3-triazol-1 -il)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin- 3-il)-2-oxoacético (0,098 g), G-14-ln (0,076 g), TBTU (0,116 g) e Base de Hunig (0,1 ml) foram combinados em DMF seco (4 ml). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml), lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O cru resultante foi purificado por croma- tografia de coluna utilizando MeOH/CHCI3 (1 : 9) como eluente para fornecer G-14a como sólido amarelo.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 2,90 (t, 2H), 3,0 (t, 2H), 3,11 (s, 6H), 3,31 (m, 2H), 3,31 (t, 2H), 6,38 (s, 1H), 7,36 - 7,47 (m, 5H), 8,12 (s, 1H), 8,31 (t, 2H), 9,01 (s, 1H), 13,01 (bs,1H).
LCMS: 541,1 (M+ + 1).
HPLC: 99,64% (0,1% de TFA/ACN; Coluna: BDS C18, 4,6 χ 50 mm).
Preparação de G-14b
<formula>formula see original document page 186</formula> Ácido 2-(4-metóxi-7-(3-metil-1H-1,2,4-triazol-1 -il)-1H-pirrolo[2,3- c]piridin-3-il)-2-oxoacético (0,098 g), G-14-ln (0,076 g), TBTU (0,116 g) e Base de Hunig (0,1 ml) foram combinados em DMF seco (4 ml). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão re- duzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml), lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando MeOH/CHCI3 (1 : 9) como eluente para fornecer G-14b como sólido amarelo.
1H RMN (400 MHz1 DMSO-d6): δ 2,50 (s, 3H), 2,91 (t, 2H), 2,99 (t, 2H), 3,12 (s, 6H), 3,35 (m, 2H), 3,58 (t, 2H), 3,99 (s, 3H), 6,40 (s, 1H), 7,35 - 7,47 (m, 5H), 7,89 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 9,22 (s, 1H), 12,35 (bs,1 H). LCMS: 567,2 (M++ 1).
HPLC: 99,82% (0,1% de TFA /ACN; Coluna: BDS C18, 4,6 χ 50 mm).
Preparação de G-15a e G-15b
Preparação do intermediário G-15-in
<formula>formula see original document page 187</formula>
Etapa-1
Ao (4-(6-cloro-3-fenilpiridazin-4-il)piperazin-1-il)(fenil)metanona (1 g) dissolvido em metanol (40 ml), carbono de paládio (10 moles%) foi adi- cionado muito lentamente sob atmosfera de nitrogênio e a mistura reacional foi agitada sob atmosfera de hidrogênio (pressão de 1 kg) durante 3 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após consumo do material de partida, a mistura reacional foi filtrada através de Celita, lavada com metanol e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter fenil(4-(3- fenilpiridazin-4-il)piperazin-1-il)metanona como sólido branco.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 2,45 - 4,04 (bs, 8H), 7,40 (s, 1H), 7,42 - 7,95 (m, 10H), 9,0 (s, 1Η).
Etapa-2
Ao fenil(4-(3-fenilpiridazin-4-il)piperazin-1-il)metanona (18 g) a- preendido em frasco de base redonda, ácido hidroclórico concentrado (10 ml) foi adicionado. A mistura reacional foi agitada a 85°C durante 6 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após consumo do material de partida, a mistura reacional foi resfriada para a temperatura ambiente. O re- síduo foi lentamente vertido em gelo e neutralizado com bicarbonato de só- dio sólido. A mistura foi extraída com diclorometano (3x10 ml). A camada orgânica combinada foi secada sobre sulfato de sódio anidroso e concentra- da para fornecer G-15-ln como líquido amarelo.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 2,64 (d, 4H), 2,80 (d, 4H), 4,09 (s, 1H), 7,11 (S, 1H), 7,42 - 7,83 (m, 5H), 8,82 (s, 1H).
Preparação de G- 15a
<formula>formula see original document page 188</formula>
Ácido 2-(4-Fluoro-7-(1 H-1,2,3-triazol-1 -il)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin 3-il)-2-oxoacético (0,098 g), G-15-ln (0,076 g), TBTU (0,116 g) e Base de Hunig (0,1 ml) foram combinados em DMF seco (4 ml). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml), lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O cru resultante foi purificado por croma- tografia de coluna utilizando MeOH/CHCI3 (1:9) como eluente para fornecer G-15a como sólido amarelo.
1H RMN (400 MHz1 DMSO-d6): δ 2,94 (t, 2H), 3,07 (t, 2H), 3,39 (m, 2H), 3,62 (t, 2H), 7,20 (S, 1H), 7,46 - 7,54 (m, 5H), 8,12 (s, 1H), 8,31 (d, 2H), 8,88 (d, 1H), 9,01 (s, 1H), 13,01 (bs,1H). LCMS: 498,1 (M++ 1).
HPLC: 99,41% (0,1% de HCOOH /ACΝ; Coluna: Genesis C18, 4,6 χ 50 mm).
Preparação de G-15b
<formula>formula see original document page 189</formula>
Ácido 2-(4-metóxi-7-(3-metil-1 H-1,2,4-triazol-1 -il)-1 H-pirrolo[2,3- c]piridin-3-il)-2-oxoacético (0,098 g), G-15-ln (0,076 g), TBTU (0,116 g) e Base de Hunig (0,1 ml) foram combinados em DMF seco (4 ml). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão re- duzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml), lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando MeOH/CHCI3 (1 : 9) como eluente para fornecer G-15b como sólido amarelo.
1H RMN (400 MHz, DMSO-de): δ 2,50 (s, 3H), 2,94 (t, 2H), 3,06 (t, 2H), 3,33 (m, 2H), 3,58 (t, 2H), 3,98 (s, 3H), 7,23 (d, 1H), 7,46 - 7,54 (m, 5H), 8,21 (s, 1H), 8,89 (d, 1H), 9,24 (s, 1H), 12,39 (bs,1H).
LCMS: 524,1 (M++ 1).
HPLC: 96,79% (0,1% de HCOOH /ACN; Coluna: Genesis C18, 4,6 χ 50 mm).
Preparação do composto G-16 <formula>formula see original document page 190</formula>
Etapa-1
Hidreto de sódio (0,1 g) foi apreendido em DMF seco (2 ml) e uma solução de 4-(3-fenil-1H-pirazol-4-il)piperazina-1-carboxilato de terc- butila (0,5 g em 2 mL de DMF) foi adicionada lentamente a O0C. A mistura reacional foi agitada durante 30 min a O9C e uma solução de cloridrato de 2- cloroetilmorfolina (0,3 g) em DMF (1 ml) foi adicionada muito lentamente. A mistura reacional foi deixada agitar durante a noite em temperatura ambien- te. A mistura reacional foi saciada com água resfriada (5 ml) e extraída com acetato de etila (3 χ 40 ml). Evaporação do solvente sob pressão reduzida forneceu o produto cru, o qual, foi purificado por cromatografia de coluna utilizando acetato de etila/hexano (2 : 8) como eluente para fornecer o com- posto 4-(1 -(2-morfolinoetil)-3-fenil-1 H-pirazol-4-il)piperazina-1 -carboxilato de terc-butila como produto sólido puro.
1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,48 (s, 9H), 2,65 - 2,70 (m, 4H), 2,84 (t, 2H), 3,3 - 3,54 (m, 4H) 3,63 (m, 6H,), 3,76 (m, 4H), 7,27 - 7,43(m, 5H), 7,54 (s, 1H).
LC-MS: 441 (M++1) Etapa-2
Ao 4-(1 -(2-morfolinoetil)-3-fenil-1H-pirazol-4-il)piperazina-1 -car- boxilato de terc-butila (1 g) dissolvido em diclorometano seco (10 ml), TFA (5 ml) foi adicionado a O0C. A mistura reacional foi deixada alcançar a tempera- tura ambiente e agitada durante a noite. Os voláteis foram completamente removidos e o resíduo resultante foi diluído com diclorometano (20 ml). A camada orgânica foi lavada com NaHCO3 saturado (2x10 ml), salmoura, secada sobre Na2SO4. Evaporação do solvente forneceu a amina desejada G-16-ln, que foi utilizada na próxima reação sem outra purificação.
1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 2,65 - 2,70 (m, 4H), 2,84 (t, 2H), 3,3 - 3,54 (m, 4H) 3,53 (m, 6H,), 3,66 (m, 4H), 7,27 - 7,43(m, 5H), 7,54 (s, 1H). LC-MS: 340 (M++1)
Etapa-3
Ácido 2-(4-fluoro-7-(1H-1,2,3-triazol-1 -il)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin- 3-il)-2-oxoacético (0,098 g), G-16-ln (0,076 g), TBTU (0,116 g) e Base de Hunig (0,1 ml) foram combinados em DMF seco (4 ml). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml), lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O cru resultante foi purificado por croma- tografia de coluna utilizando metanol/clorofórmio (1 : 9) como eluente para fornecer G-16 como sólido amarelo.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 2,41 (m, 4H), 2,69 - 2,75 (m, 4H), 2,84 (s, 2H), 3,53 (d, 6H, 4 Hz): 3,76 (s, 2H), 4,16 (t, 2H, J = 8 Hz), 7,25 (t, 1H, J = 6 Hz), 7,38 (t, 2H, J = 8 Hz), 7,66 (s, 1H), 7,96 (d, 2H, J = 8 Hz), 8,11 (s, 1H), 8,30 e 8,34 (2s, 2H), 9,02 (s, 1H), 13,12 (s, 1H). LCMS: 599,2 (M++ 1).
HPLC: 95,4% (0,1% de TFA/ACN; Coluna: Hypersil BDS C18, 4,6 χ 50 mm).
Preparação dos compostos G-17a e G-17b
Preparação do intermediário G-17-ln
<formula>formula see original document page 191</formula>
Etapa -1
A uma solução agitada de sal de HCl de metil piperidina 4- carboxilato (5 g) em diclorometano, trietilamina foi adicionada até a solução ficar básica. A esta mistura reacional basificada, Boc-anidrido (7,2g) foi adi- cionado e deixado agitar em temperatura ambiente durante a noite. A mistu- ra reacional foi saciada com água (20 ml) e extraída com diclorometano (3 χ 10 ml). As camadas orgânicas combinadas foram secadas sobre Na2SO4 e concentradas até a secura para fornecer 1-terc-butil 4-metil piperidina-1,4- dicarboxilato como um sólido de cor branca, que foi empregado na próxima reação sem outra purificação.
1H RMN (400 MHz1 CDCI3): δ 1,45 (s, 9H), 1,62 - 1,64 (m, 2H), 1,89 (m, 2H), 2,83 (m, 2H), 3,69 (s, 3H), 4,1 (m, 2H). LC-MS: 244 (M++1)
Etapa-2
A uma solução agitada de fenil etileno diamina (3 g) apreendida em tolueno seco (50 ml), resfriada para -10°C, trimetilalumínio (36 ml, 2M de solução em hexano) foi adicionado gota a gota durante 30 minutos. A mistu- ra reacional foi levada para a temperatura ambiente e foi aquecida para 50°C. 1-terc-Butil 4-metil piperidina-1,4-dicarboxiiato (8 g) apreendido em tolueno seco (50 ml) foi adicionado à mistura acima em um modelo gota a gota. A mistura combinada foi agitada a 1100C durante 5 horas, em seguida deixada agitar durante a noite em temperatura ambiente. À mistura reacio- nal, água (50 ml) foi adicionada seguida por metano! (50 ml) e deixada agitar durante 15 minutos a O0C. A mistura integral foi em seguida filtrada através de leito de Celita e lavada com clorofórmio. O filtrado combinado foi concen- trado sob pressão reduzida. O cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando metanol/clorofórmio (2 : 8) como eluente para fornecer 4-(1 -fenil-4,5-diidro-1 H-imidazol-2-il)piperidina-1 -carboxilato de terc-butila como produto sólido.
1H RMN (400 MHz, CD3OD): δ 1,47 (s, 9H), 1,57 - 1,60 (m, 2H), 1,72 - 1,76 (m, 2H), 2,56 - 2,57 (m, 3H), 3,84 (m, 2H), 3,92 (m, 2H), 4,08 (m, 2H), 7,27 - 7,48 (m, 5H). LCMS: 230,1 (M++ 1).
Etapa -3
Ao 4-(1 -fenil-4,5-diidro-1 H-imidazol-2-il)piperidina-1 -carboxilato de terc-butila (500 mg) dissolvido em diclorometano seco (10 ml), TFA (5 ml) foi adicionado a 0°C. A mistura reacional foi deixada alcançar a temperatura ambiente e agitada durante a noite. Os voláteis foram completamente remo- vidos e o resíduo resultante foi diluído com diclorometano (20 ml). A camada orgânica foi lavada com NaHCO3 saturado (2x10 ml), salmoura, secada sobre Na2SO4. Evaporação do solvente forneceu a amina desejada G-17-ln, que foi utilizada na próxima reação sem outra purificação. 1H RMN (400 MHz1 CD3OD): δ 1,93 (m, 2H), 2,01 (m, 2H), 2,94 (m, 2H), 3,33 (m, 2H), 3,42 (m, 2H), 4,11 (m, 2H), 4,36 (m, 1H), 7,51 - 7,62 (m, 5H). 13C RMN (CD3OD): δ 31,28, 35,85, 46,45, 49,45, 52,11, 54,67, 79,48, 126,54, 127,54, 130,76, 142,57, 170,43.
LCMS: 231,0 (M++ 1).
Preparação de G-17a
<formula>formula see original document page 193</formula>
A uma solução agitada de ácido 2-(4-fluoro-7-(1H-1,2,3-triazol-1- il)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-oxoacético (100 mg) em DMF seco (5 ml), G- 17-1 η (0,083 g), TBTU (0,128 g,) e DIPEA (0,1 ml) foram adicionados. A mis- tura reacional foi agitada em r.t. durante a noite. A reação foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml) e lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada utilizando evaporador giratório. O cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando metanol/clorofórmio (2 : 8) como elu- ente para fornecer G-17a como sólido de cor amarela.
1H RMN (DMSO-de): δ 1,5 - 1,9 (m, 4H), 2,73 (t, 2H), 3,01 (t, 1H), 3,58 (d, 1H), 3,77 (t, 2H), 3,94 (t, 2H), 4,36 (d, 1H), 7,3 (m, 3H), 7,45 (m, 2H), 8,0 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 9,03 (s, 1H).
LCMS: 487,1 (M++ 1). HPLC: 94,7% (0,1% de HCOOH/ACN; Coluna: Genesis C18 50 χ 4,6 mm, 3μ)
Preparação de G-17b
<formula>formula see original document page 194</formula>
A uma solução agitada de ácido 2-(4-metóxi-7-(3-metil-1H-1,2,4- triazol-1 -il)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-oxoacético (100 mg) em DMF seco (5 ml), G-17-ln (0,076 g), TBTU (0,117 g) e DIPEA (0,1 ml) foram adiciona- dos. A mistura reacional foi agitada em r.t. durante a noite. A reação foi saci- ada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzi- da. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml) e lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada utilizando evaporador giratório. O cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando metanol/clorofórmio (2 : 8) coinu «mente para Tornecer ü-i7b (30 rng, 17%) corno sóiiuo ue cor amare- la.
1H RMN (DMSO-de): δ 1,65 (m, 4H), 2,49 (s, 3H), 2,80 (m, 2H), 3,01 (t, 1H), 3,55 (t, 1H), 3,72 (m, 4H), 3,95 (s, 3H), 4,29 (d, 1H), 7,20 (m, 3H), 7,40 (t, 2H), 7,83 (s, 1H), 8,15 (s, 1H), 9,24 (s, 1H). LCMS: 513,2 (M++ 1).
HPLC: 90,3% (0,1% de TFA/CAN; Coluna: C18 BDS, 4,6 χ 250 mm).
Preparação do composto G-18
Preparação do intermediário G-18-ln
<formula>formula see original document page 194</formula>
Etapa -1 A uma solução agitada de 4-(1-fenil-4,5-diidro-1H-imidazol-2- il)piperidina-1 -carboxilato de terc-butila (100 mg) em benzeno seco (5 ml), peróxido de níquel (350 mg) dissolvido em benzeno seco (20 ml) foi adicio- nado. A mistura reacional foi refluxada durante a noite e filtrada através de uma almofada de celita utilizando CHCI3 como eluente. A camada orgânica combinada foi removida sob pressão reduzida. O óleo resultante foi purifica- do por cromatografia de coluna utilizando acetato de etila\hexano (3 : 7) para fornecer 4-(1 -fenil-1 H-imidazol-2-il)piperidina-1 -carboxilato de terc-butila co- mo produto puro
1H RMN (400 MHz, CD3OD): δ 1,47 (s, 9H), 1,67 - 1,70 (m, 2H), 1,72 - 1,76 (m, 2H), 2,56 - 2,57 (m, 1H), 3,3 (m, 2H), 3,5 (m, 2H), 7,0 - 7,2 (S, 2H), 7,27 - 7,48 (m, 5H).
LC-MS: 328,1 (M++ 1).
Etapa -2
Ao 4-(1 -fenil-1 H-imidazol-2-il)piperidina-1 -carboxilato de terc- butila (500 mg) apreendido em diclorometano seco (10 ml), TFA (5 ml) foi adicionado a 0°C. A mistura reacional foi deixada alcançar a temperatura ambiente e agitada durante a noite. Os voláteis foram removidos utilizando pressao reduzida e o residuo foi diluido com diclorometano (10ml). A cama- da orgânica foi lavada com NaHCO3 saturado (2x10 ml), salmoura (20 ml) e foi secada sobre Na2SO4. Evaporação do solvente forneceu a amina deseja- da G-18-ln, que foi empregada na próxima reação sem outra purificação. 1H RMN (400 MHz, CD3OD): δ 1,76 - 1,82 (m, 2H), 2,56 (m, 2H), 2,76 - 2,80 (m, 1H), 3,05 (m, 2H), 3,5 (m, 2H), 7,0 - 7,15 (S, 2H), 7,37 - 7,48 (m, 5H). LCMS: 228,1 (M++1).
Preparação de G-18a
<formula>formula see original document page 195</formula> A uma solução agitada de ácido 2-(4-fluoro-7-(1H-1,2,3-triazol-1- il)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-oxoacético (100 mg) em DMF seco (5 ml), G- 18-1 η (0,076 g), TBTU (0,117 g) e DIPEA (0,1 ml) foram adicionados. A mis- tura reacional foi agitada em r.t. durante a noite. A reação foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml) e lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada utilizando evaporador giratório. O cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando metanol/clorofórmio (1 : 9) como elu- ente para fornecer G-18a como sólido de cor amarela.
1H RMN (DMSO-de): δ 1,8 (m, 4H), 3,0 (m, 3H), 3,62 (d, 1H), 4,36 (d, 1H), 6,97 (s, 1H), 7,24 (s, 1H), 7,43 (d, 2H), 7,55 (m, 3H), 8,12 (s, 1H), 8,25 (s, 1H), 8,31 (s, 1H), 9,02 (s, 1H), 13,06 (bs, 1H). LCMS: 485,1 (M++ 1).
HPLC: 97,3% (0,1% de TFA/ACN; Coluna: C18 BDS, 4,6 χ 50 mm).
Preparação de G-18b
<formula>formula see original document page 196</formula>
A uma solução agitada de ácido 2-(4-metóxi-7-(3-metil-1 H-1,2,4- triazol-1 -il)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-oxoacético (100 mg) em DMF seco (5 ml), G-18-ln (0,076 g), TBTU (0,117 g) e DIPEA (0,1 ml) foram adiciona- dos. A mistura reacional foi agitada em r.t. durante a noite. A reação foi saci- ada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzi- da. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml) e lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada utilizando evaporador giratório. O cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando metanol/clorofórmio (1 : 9) como eluente para fornecer G-18b como sólido de cor amarela. 1H RMN (CD3OD): δ 1,9 (m, 4H), 2,56 (s, 3H), 2,85 (m, 1H), 3,12 (m, 2H), 3,8 (d, 1 Η), 4,04 (s, 3H), 4,59 (d, 1H), 7,05 (s, 1H), 7,16 (s, 1H), 7,43 (s, 2H), 7,56 (m, 3H), 7,84 (s, 1H), 8,27 (s, 1H), 9,23 (s, 1H).
13C RMN (CD3OD): δ 13,76, 31,63, 32,18, 34,95, 42,24, 47,52, 57,55, 115,88, 122,15, 122,71, 124,57, 125,39, 127,52 (2C), 127,94, 130,25, 130,98 (2C), 131,65, 138,62, 139,54, 142,83, 151,21, 151,64, 162,93, 168,43, 187,37.
LCMS: 511,2 (M++ 1).
HPLC: 97,3% (0,1% de TFA/ACN; Coluna C18, BDS 4,6 χ 50 mm).
Preparação de G-19ae G-19b
Preparação do intermediário G-19-ln
<formula>formula see original document page 197</formula>
Etapa-1
A uma solução agitada de acetato de formamidina (2,8 g) em trietilamina (6 ml) em um tubo selado, foi adicionado 4-(1-(dimetilamino)-3- oxo-3-fenilprop-1-en-2-il)piperazina-1-carboxilato de terc-butila (1,0 g) e a mistura reacional foi aquecida a 140°C durante 6 h. A mistura reacional foi levada para a temperatura ambiente e trietilamina foi removida sob pressão reduzida. Água (10 ml) foi adicionada ao resíduo e o composto orgânico foi extraído em etilacetato (4 χ 20 ml). As camadas orgânicas combinadas fo- ram secadas (Na2SO4) e concentradas. O material cru foi purificado por cro- matografia de coluna utilizando metanol/clorofórmio (1 : 9) para fornecer 4- (4-fenilpirimidin-5-il)piperazina-1-carboxilato de terc-butila.
1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,48 (s, 9H), 2,59 (s, 4H), 3,52 - 3,54 (s, 4H), 7,27 - 7,50 (m, 5H), 8,41 (s, 1H), 8,97 (s, 1H).
LC-MS: 341 (M++1)
Etapa -2
Ao 4-(4-fenilpirimidin-5-il)piperazina-1-carboxilato de terc-butila (1g) dissolvido em diclorometano seco (10 ml), TFA (5 ml) foi adicionado a 0°C. A mistura reacional foi deixada alcançar a temperatura ambiente e agi- tada durante a noite. Os voláteis foram completamente removidos e o resí- duo resultante foi diluído com diclorometano (20 ml). A camada orgânica foi lavada com NaHCO3 saturado (2 χ 10 ml), salmoura, secada sobre Na2SO4. Evaporação do solvente forneceu a amina desejada G-19-ln (0,5 g), que foi utilizada na próxima reação sem outra purificação.
1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 2,59 (s, 4H), 3,52 - 3,54 (s, 4H), 7,27 - 7,50 (m, 5H), 8,41 (s, 1H), 8,97 (s, 1H).
LC-MS: 240 (M++1)
Preparação de G-19a
<formula>formula see original document page 198</formula>
Ácido 2-(4-fluoro-7-(1H-1,2,3-triazol-1-il)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin- 3-il)-2-oxoacético (0,098 g), G-19-ln (0,076 g), TBTU (0,116 g) e Base de Hunig (0,1 ml) foram combinados em DMF seco (4 ml). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml), lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O cru resultante foi purificado por croma- tografia de coluna utilizando metanol/clorofórmio (1 : 9) como eluente para fornecer G-19a como sólido amarelo.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 2,92 (bs, 2H), 3,02 (bs, 2H), 3,45 (bs, 2H), 3,67 (bs, 2H), 7,47 - 7,53 (m, 3H), 8,09 - 8,12 (m, 3H), 8,33 (m, 2H), 8,56 (s, 1H), 8,89 (s, 1H), 9,01 (s, 1H), 13,06 (bs,1H).
13C RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 14,13, 41,03, 45,63, 50,77, 51,15, 56,97, 94,80, 115,74, 121,38, 123,13, 124,15, 127,22, 129,11, 129,70, 136,51, 139,74, 139,90, 141,28, 149,63, 150,74, 162,12, 166,39, 185,36.
LCMS: 498,1 (M++ 1). HPLC: 96,67% (0,1% de TFA /ACΝ; Coluna: Hypersil, BDS C18, 4,6 χ 50 mm).
Preparação de G-19b
<formula>formula see original document page 199</formula>
Ácido 2-(4-metóxi-7-(3-metil-1 H-1,2,4-triazol-1 -il)-1 H-pirrolo[2,3- c]piridin-3-il)-2-oxoacético (0,098 g), G-19-ln (0,076 g), TBTU (0,116 g) e Base de Hunig (0,1 ml) foram combinados em DMF seco (4 ml). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão re- duzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml), lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando metanol/clorofórmio (1 : 9) como elu- ente para fornecer G-19b como sólido amarelo.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 2,57 (s, 3H), 3,03 (t, 2H), 3,12 (t, 2H), 3,57 (t, 2H), 3,82 (t, 2H), 4,08 (s, 3H), 7,27 - 7,51 (m, 5H), 7,78 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 8,45 (s, 1H), 9,00 (s, 1H), 9,12 (s, 1H), 11,05 (bs, 1H). LCMS: 524,1 (M++ 1).
HPLC: 98,38% (0,1% de TFA em H20/ACN; Coluna: Hypersil BDS C18, 4,6 χ 50 mm).
Preparação do composto 20 <formula>formula see original document page 200</formula>
Etapa-1
Hidreto de sódio (0,1 g) foi apreendido em DMF seco (2 ml) e uma solução de 4-(3-fenil-1H-pirazol-4-il)piperazina-1-carboxilato de terc- butila (0,5 g em 2 mL de DMF) foi adicionada lentamente a 0°C. A mistura reacional foi agitada durante 30 min a 0°C e uma solução de etilbromoaceta- to (1 g) em DMF (1 ml) foi adicionada muito lentamente. A mistura reacional foi deixada agitar durante a noite em temperatura ambiente. A mistura rea- cional foi saciada com água resfriada (5 ml) e extraída com acetato de etila (3 χ 40 mi). Evaporação do solvente sob pressão reduzida forneceu o produ- to cru, o qual, foi purificado por cromatografia de coluna utilizando acetato de etila/hexano (2 : 8) como eluente para fornecer 4-(1-(2-etóxi-2-oxoetil)-3- fenil-1 H-pirazol-4-il)piperazina-1-carboxilato de terc-butila como produto sóli- do puro.
1H RMN (400MHz, CDCI3): δ 1,2 (t, 3H), 1,48 (s, 9H), 2,86 (m, 4H), 3,54 (m, 4H), 4,08 (t, 2H), 5,0 (s, 2H), 7,28 - 7,43 (m, 5H), 7,8 (s, 1H). LC-MS: 415 (M++1)
Etapa-2
Ao 4-(1-(2-etóxi-2-oxoetil)-3-fenil-1 H-pirazol-4-il)piperazina-1 - carboxilato de terc-butila (1 g) dissolvido em diclorometano seco (10 ml), TFA (5 ml) foi adicionado a 0°C. A mistura reacional foi deixada alcançar a temperatura ambiente e agitada durante a noite. Os voláteis foram comple- tamente removidos e o resíduo resultante foi diluído com diclorometano (20 ml). A camada orgânica foi lavada com NaHCO3 saturado (2x10 ml), sal- moura, secada sobre Na2SO4. Evaporação do solvente forneceu a amina desejada G-20-ln, que foi utilizada na próxima reação sem outra purificação.
Etapa-3
Acido 2-(4-Fluoro-7-(1 H-1,2,3-triazol-1 -il)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin- 3-il)-2-oxoacético (0,1 g), amina G-20-ln (0,08 g), TBTU (0,12 g) e Base de Hunig (0,15 ml) foram combinados em DMF seco (5 ml). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml), lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O cru resultante foi purificado por croma- tografia de coluna utilizando 5% de metanol/clorofórmio (1 : 9) como eluente para fornecer G-20.
1H RMN (400MHz,CDCI3): δ 1,2 (t, 3H),2,75 (t, 2H), 2,86 (t, 2H), 3,54 (t, 2H), 3,77 (t, 2H), 4,18 (t, 2H), 5,0 (s, 2H), 7,28 (m, 1H), 7,3 (m, 2H), 7,6 (S, 1H), 7,95 (d, 2H), 8,1 (s, 1H), 8,35 (d, 2H), 9,0 (s,1H), 13 (s,1H). LC-MS: 572 (M++1).
HPLC: 95,166% (0,1% de TFA/ACN; Coluna: Hypersii BDSC18 5u (4,6 χ 50) mm).
Preparação do composto G-21
<formula>formula see original document page 201</formula>
Etapa-1 Hidreto de sódio (0,1 g) foi apreendido em DMF seco (2 ml) e uma solução de 4-(3-fenil-1H-pirazol-4-il)piperazina-1-carboxilato de terc- butila (0,5 g em 2 mL de DMF) foi adicionada lentamente a O0C. A mistura reacional foi agitada durante 30 min a OqC e uma solução de cloroacetonitrilo (0,138 g) em DMF (1 ml) foi adicionada muito lentamente. A mistura reacio- nal foi deixada agitar durante a noite em temperatura ambiente. A mistura reacional foi saciada com água resfriada (5 ml) e extraída com acetato de etila (3 χ 40 ml). Evaporação do solvente sob pressão reduzida forneceu o produto cru, o qual, foi purificado por cromatografia de coluna utilizando ace- tato de etila\hexano (2 : 8) como eluente para fornecer 4-(1-(cianometil)-3- fenil-1H-pirazol-4-il)piperazina-1-carboxilato de terc-butila como produto sóli- do puro.
1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,48 (s, 9H), 2,90 (s, 4H), 3,53 - 3,55 (s, 4H), 5,05 (s, 2H), 7,26 - 7,44 (m, 5H), 7,99 (s, 1H). LC-MS: 367 (M++1).
Etapa-2
Ao 4-(1 -(cianometil)-3-fenil-1 H-pirazol-4-il)piperazina-1 -carbo- xilato de terc-butila (1 g) dissolvido em diclorometano seco (10 ml), TFA (5 ml) foi adicionado a O0C. A mistura reacional foi deixada alcançar a tempera- tura ambiente e agitada durante a noite. Os voláteis foram completamente removidos e o resíduo resultante foi diluído com diclorometano (20 ml). A camada orgânica foi lavada com NaHCO3 saturado (2x10 ml), salmoura, secada sobre Na2SO4. Evaporação do solvente forneceu a amina desejada G-21-ln, que foi utilizada na próxima reação sem outra purificação.
1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 2,90 (s, 4H), 3,53 - 3,55 (s, 4H), 5,05 (s, 2H), 7,26 - 7,44 (m, 5H), 7,99 (s, 1H). LC-MS: 367 (M++1).
Etapa-3
Ácido 2-(4-metóxi-7-(3-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)-1 H-pirrolo[2,3- c]piridin-3-il)-2-oxoacético (0,098 g), composto G-21-ln (0,076 g), TBTU (0,116 g) e Base de Hunig (0,1 ml) foram combinados em DMF seco (4 ml).
A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml), lavado com NaHC03 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada so- bre Na2S04 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando metanol/clorofórmio (1 : 9) como eluente para fornecer G-21 como sólido não totalmente branco. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 2,6 (s, 3H), 2,9 - 3,2 (d, 4H), 3,63 (s, 2H), 3,9 (s, 2H), 4,1 (s, 3H), 5,06 (s, 2H), 7,31 - 7,45 (m, 4H), 7,79 (s, 1H), 7,95 (d, 2H), 8,23 (s, 1H), 9,15 (s, 1H), 11,02 (s, 1H).
LCMS: 551,1 (M++ 1).
HPLC: 95,7% (0,1% de TFA/ACN; Coluna: Hypersil BDS C18, 4,6 χ 50 mm).
Preparação dos compostos G-22a e G-22b
Preparação do intermediário G-22-ln
Etapa-1
<formula>formula see original document page 203</formula>
1,2,3-Triazol (5 g), 2-bromo piridina (8,5 ml) e iodeto de cobre (0,68 g) foram apreendidos em DMF seco sob atmosfera de nitrogênio. 1,2- (N,N-dimetil)cicloexil diamina (1,02 g) e fosfato de potássio (30,73 g) foram adicionados na mistura acima. A mistura reacional foi refluxada a 1100C du- rante a noite. TLC não checou nenhum material de partida e a mistura rea- cional foi filtrada através de Celita. O filtrado foi diluído com água e o produto foi extraído com diclorometano. A camada orgânica foi evaporada e o produ- to cru foi purificado por cromatografia de coluna utilizando 60-120 de sílica gel e éter de petróleo\ acetato de etila como eluente para fornecer o compos- to 2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)piridina como sólido branco.
1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,47 (m, 1H), 8,0 (s, 1H), 8,13 (d, 2H), 8,6 (d, 2H), 8,84 (s, 1H).
LC-MS: 147 (M++1)
Etapa-2
G-22-ln Em um frasco de base redonda de 3 gargalos de 100 ml, 2-(1H- 1,2,3-triazol-1-il)piridina (2 g) foi apreendido em THF seco (2ml) sob nitrogê- nio. n-Butil lítio (2,3 ml) foi adicionado a - 78eC e agitado durante 5 minutos, em seguida bromo (1,86 ml) foi adicionado gota a gota à mistura reacional acima. A mistura reacional foi agitada a -78°C durante 1 hora. TLC não che- cou nenhum material de partida e a mistura reacional foi saciada com cloreto de amônio saturado (50ml) e acetato de etila foi adicionado. A camada orgâ- nica foi lavada com bissulfato de sódio, salmoura, secada e concentrada. O produto cru foi purificado por cromatografia de coluna utilizando éter de pe- tróleo & acetato de etila como eluente para fornecer o composto 2-(5-bromo- 1H-1,2,3-triazol-1-il)piridina como sólido amarelo.
1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,68 (m, 1H), 7,86 (m, 1H), 8,1 (s, 1H), 8,15 (m, 1H), 8,7 (m, 1H). LC-MS: 226 (M++1).
Etapa-3
Em um frasco de base redonda de gargalo único de 100ml, 2-(5- bromo-1H-1,2,3-triazol-1-il)piridina (1,5 g), piperazina (2,8 g) e terc-butóxido de sódio (0,56 g) foram apreendidos em tolueno seco (20 ml) e desgaseifi- cados durante 20 min. Em seguida Pd(dba)2 (0,3 g), BiNAP (0,41 g) foram adicionados e novamente desgaseificados durante 10min. A mistura reacio- nal foi refluxada a 107°C durante a noite. TLC não checou nenhum material de partida. A mistura reacional foi diluída com 25 mL de água e extraída com diclorometano. A camada orgânica foi separada e concentrada. O produto cru foi purificado por cromatografia de coluna utilizando 60-120 de sílica gel e 6 % de metanol\clorofórmio como eluente para fornecer o composto G-22- In como sólido branco.
1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 2,6 - 2,87 (d, 8H), 7,41 (s, 1H), 7,5 - 7,6 (m, 1H), 7,73 (d, 1H), 8,0 (m, 1H), 8,64 (d, 1H).
LC-MS: 231 (M++1). Preparação de G-22a
<formula>formula see original document page 205</formula>
G-22a
Ácido 2-(4-Fluoro-7-(1 H-1,2,3-triazol-1 -il)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin- 3-il)-2-oxoacético (0,119 g), composto G-22-ln (0,1 g), reagente BOP (0,19 g) e Base de Hunig (0,22 ml) foram combinados em DMF seco (4 ml). A mis- tura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistu- ra foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pres- são reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml), lava- do com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando metanol\clorofórmio (1 : 9) como eluente para fornecer G-22a como sólido branco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 2,96 - 2,98 (t, 2H), 3,11 (t, 2H), 3,37 - 3,46 (t, 2H), 3,68 - 3,71 (t, 2H), 7,52 (s,1H), 7,58 (d, 1H), 7,8 (d, 1H), 8,1 (t, 2H), 8,31 - 8,36 (d, 2H), 8,65 (t, 1H), 9,0 (s, 1H), 13 (s, 1H).
LC-MS: 487(M++1)=
HPLC: 84,9% (0,1% de H3PO4MCN; Coluna: YMC-PACK ODS-AQ (4,6 χ 250 mm).
Preparação de G-22b
<formula>formula see original document page 205</formula>
Ácido 2-(4-metóxi-7-(3-metil-1 H-1,2,4-triazol-1 -il)-1 H-pirrolo[2,3- c]piridin-3-il)-2-oxoacético (0,12 g), composto G-22-ln (0,1 g), reagente BOP (0,19 g) e Base de Hunig (0,22 ml) foram combinados em DMF seco (4 ml). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml), lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada so- bre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando metanol\clorofórmio (1 : 9) como eluente para fornecer G-22b como sólido branco.
1H RMN (400 MHz1 DMSO-d6): δ 2,5 (s, 3H), 2,96 - 2,98 (t, 2H), 3,11 (t, 2H), 3,37 - 3,46 (t, 2H), 3,68 - 3,71 (t, 2H), 4,0 (s, 1H), 7,52 (s, 1H), 7,58 (m, 1H), 7,8 (d, 1H), 7,88 (s, 1H) 8,1 (t, 1H), 8,31 - 8,36 (d, 1H), 8,65 (d, 1H), 9,23 (s, 1H).
LC-MS: 513(M++1).
HPLC: 96,9% (0,1% de H3PO4/ACN; Coluna: YMC-PACK ODS-AQ (4,6 χ 250 mm).
Preparação do composto G-23
<formula>formula see original document page 206</formula>
Etapa-1
Hidreto de sódio (0,02 g) foi apreendido em DMF seco (5 ml) e uma solução de 4-(5-fenil-1H-1,2,3-triazol-4-il)piperazina-1-carboxilato de terc-butila (0,015 g em 5 mL de DMF) foi adicionada lentamente a 0°C. A mistura reacional foi agitada durante 30 min a 0°C e iodeto de metila (0,13 g) foi adicionado muito lentamente. A mistura reacional foi deixada agitar du- rante a noite em temperatura ambiente. A mistura reacional foi saciada com água resfriada (5 ml) e extraída com acetato de etila (3 χ 40 ml). Evaporação do solvente sob pressão reduzida forneceu o produto cru, o qual, foi purifica- do por cromatografia de coluna utilizando 60-120 de sílica gel e meta- nol\diclorometano (1 : 9) como eluente para fornecer 4-(2-metil-5-fenil-1H- 1,2,3-triazol-4-il)piperazina-1-carboxilato de terc-butila. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 1,4 (s, 9H), 2,92 (d, 4H), 3,43 (m, 5H), 4,05 (m, 2H), 7,33 (m, 1H), 7,45 (t, 2H), 7,85 (d, 2H).
LCMS: 345,1 (M++1).
Etapa-2
Ao 4-(2-metil-5-fenil-1 H-1,2,3-triazol-4-il)piperazina-1-carboxilato de terc-butila (500 mg) dissolvido em diclorometano seco (10 ml), TFA (5 ml) foi adicionado a O0C. A mistura reacional foi deixada alcançar a temperatura ambiente e agitada durante a noite. Os voláteis foram completamente remo- vidos e o resíduo resultante foi diluído com diclorometano (20 ml). A camada orgânica foi lavada com NaHCO3 saturado (2x10 ml), salmoura, secada sobre Na2SO4. Evaporação do solvente forneceu a amina desejada G-23-ln, que foi utilizada na próxima reação sem outra purificação. 1H RMN (400 MHz1 DMSO-d6): δ 2,92 (d, 4H), 3,23 (m, 5H), 4,05 (m, 2H), 7,33 (m, 1H), 7,45 (t, 2H), 7,85 (d, 2H). LCMS: 245,1 (M++1).
Etapa-3
A uma solução agitada de ácido 2-(4-metóxi-7-(3-metil-1 H-1,2,4- triazol-1-il)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-oxoacético (100 mg) em DMF seco (5 ml), G-23-ln (0,076 g,), TBTU (0,117 g) e DIPEA (0,1 ml) foram adiciona- dos. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noi- te. A reação foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml) e lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada utilizando evaporador giratório. O cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando meta- nol\diclorometano (2 : 8) como eluente para fornecer G-23 como um sólido amorfo.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 2,5 (s, 3H), 2,98 - 3,0 (t, 2H), 3,0 - 3,10 (t, 2H), 3,5 - 3,53 (t, 2H),3,73 - 3,79 (t, 2H), 4,01 (s, 3H), 4,07 (s, 3H), 7,33 (m, 1H), 7,45 (t, 2H), 7,85 (d, 2H), 7,9 (s, 1H),8,23 (s, 1H), 9,25 (s, 1H), 12,42 (s, 1Η).
LCMS: 527 (M++1).
HPLC: 95% (0,1% de H3PO4ZACN; Coluna: YMC-PACK ODS-AQ (4,6 χ 250) mm).
Preparação dos compostos G-24a e G-24b
Preparação do intermediário G-24-ln
<formula>formula see original document page 208</formula>
Etapa-1
A uma solução agitada de piperazina de N-Boc (5 g) em diclo- rometano seco (100 ml), trietil amina (10 ml) seguida por acetonitrilo de cloro (25,02 ml) foram adicionados gota a gota. A mistura reacional foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi diluído com diclorometano (200 ml). A camada orgâni- ca foi lavada com água, salmoura e concentrada até a secura sob pressão reduzida para fornecer 4-(cianometil)piperazina-1-carboxilato de terc-butila, que foi utilizado na próxima reação sem outra purificação.
1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,47 (s, 9H), 2,55 (t, 4H), 3,49 (t, 4H), 3,55 (s, 2H).
GC MS: 225
Etapa-2
Em um frasco de base redonda de 3 gargalos de 100 ml, o in- termediário 4-(cianometil)piperazina-1-carboxilato de terc-butila (7 g) foi a- preendido em THF seco (125 mi) sob nitrogênio, bis Trimetilsilil amida de lítio (10,8 g) foi adicionado gota a gota a - 78°c e agitado durante 1 hora, em se- guida fosfato de dietil cloro (5,84 g) em 5 ml de THF seco foi adicionado gota a gota à mistura reacional acima. A mistura reacionai foi agitada a -78°C du- rante 1 hora. TLC não checou nenhum material de partida e a mistura rea- cional foi saciada com cloreto de amônio saturado (250 ml) e acetato de etila foi adicionado. A camada orgânica foi lavada com salmoura, secada e con- centrada. O produto cru foi purificado por cromatografia de coluna utilizando 230-400 de sílica gel e 2,5% de metanol\clorofórmio como eluente para for- necer o composto 4-(ciano(dietoxifosforil)metil)piperazina-1-carboxilato de terc-butila como líquido amarelo.
1H RMN (400 MHz1 CDCI3): δ 1,37 (t, 6H), 1,47 (s, 9H), 2,55 (t, 2H), 3,0 (t, 2H), 3,55 (m, 4H), 3,87 - 3,93 (d, 1H), 4,3 (q, 4H). LCMS: 262 (M+ -101).
Etapa-3
Em um frasco de base redonda de 3 gargalos de 100 ml, o in- termediário 4-(ciano(dietoxifosforil)metil)piperazina-1-carboxilato de terc- butila (5,5 g) foi apreendido em THF seco (25 ml) sob nitrogênio, bis Trime- tilsilil amida de sódio (3,3 g) foi adicionado gota a gota a OeC e agitado du- rante 30 min, em seguida piridina-2-carboxaldeído (1,67 g) em 15 ml de THF seco foi adicionado gota a gota à mistura reacional acima a 0SC. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. TLC não checou nenhum material de partida e a mistura reacional foi saciada com cloreto de amônio saturado (50 ml) e acetato de etila foi adicionado. A ca- mada orgânica foi lavada com salmoura, secada e concentrada para obter o composto de produto cru 4-(1-ciano-2-(piridin-2-il)vinil)piperazina-1-carbo- xilato de terc-butila como líquido amarelo.
1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,47 (s, 9H), 3,10 - 3,2 (t, 4H), 3,55 (t, 4H), 6,24 (s, 1H), 7,14 (m, 1H), 7,55-7,67 (m, 2H), 8,58-8,6 (d, 1H). LCMS: 315 (M++1). Etapa-4
A uma solução agitada de 4-(1-ciano-2-(piridin-2-il)vinil) pipera- zina-1-carboxilato de terc-butila (2,5 g), azida de sódio (0,4 g) foi apreendido em DMSO seco (4 ml) e aquecido para 110°C durante a noite. A mistura re- acional foi cuidadosamente saciada com água (10 ml) e a mistura reacional foi extraída com diclorometano (3x10 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (10 ml), secada sobre sulfato de sódio e concentra- da sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatogra- fia de coluna utilizando metanol: clorofórmio (1 : 9) como um eluente para fornecer 4-(5-(piridin-2-il)-1 H-1,2,3-triazol-4-il)piperazina-1 -carboxilato de terc-butila como sólido branco.
1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,49 (s, 9H), 3,17 - 3,2 (t, 4H), 3,65 (t, 4H), 7,44 (m, 1H), 8,0 (m, 1H), 8,1 (d, 1H), 8,88 (d, 1H). LCMS: 331 (M++1).
Etapa-5
Ao 4-(5-(piridin-2-il)-1 H-1,2,3-triazol-4-il)piperazina-1 -carboxilato de terc-butila (500 mg) dissolvido em diclorometano seco (10 ml), TFA (5 ml) foi-adicionado a O0C. A mistura reacional foi deixada alcançar a temperatura ambiente e agitada durante a noite. Os voláteis foram completamente remo- vidos e o resíduo resultante foi diluído com diclorometano (20 ml). A camada orgânica foi lavada com NaHCO3 saturado (2x10 ml), salmoura, secada sobre Na2S04. Evaporação do solvente forneceu a amina desejada G-24-ln, que foi utilizada na próxima reação sem outra purificação. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 3,17 - 3,2 (t, 4H), 3,45 (t, 4H), 7,44 (m, 1H), 8,0 (d, 2H), 8,65 (d, 1H), 8,88 (bs, 1H). LCMS: 231 (M++1).
Preparação de G-24a
<formula>formula see original document page 210</formula>
Ácido 2-(4-Fluoro-7-(1 H-1,2,3-triazoM -il)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin- 3-il)-2-oxoacético (95 mg), composto G-24-ln (100 mg), reagente BOP (0,16 mg) e Base de Hunig (0,2 ml) foram combinados em DMF seco (4 ml). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml), lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada so- bre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando diclorometano\metanol (1 : 9) como eluente para fornecer G-24a como sólido branco. 1H RMN (400 MHz1 DMSO-d6): δ 3,17 - 3,2 (t, 4H), 3,55 (t, 2H), 3,8 (t, 2H), 7,44 (m, 1H), 7,9 - 8,0 (m, 2H), 8,15 (s, 1H), 8,33 - 8,36 (d, 2H), 8,5 (m, 1H), 9 (s, 1H), 13 (bs,1H), 14,48 (s, 1H).
LCMS: 488,8 (M++ 1).
HPLC: 90,4% (0,1% de H3POVACN; Coluna: YMC-PACK ODS-AQ (4,6 χ 250) mm).
Preparação de G-24b
<formula>formula see original document page 211</formula>
Ácido 2-(4-metóxi-7-(3-metil-1 H-1,2,4-triazol-1 -il)-1 H-pirrolo[2,3- c]piridin-3-il)-2-oxoacético (95 mg), composto G-24-ln (100 mg), reagente BOP (0,16 mg) e Base de Hunig (0,2 ml) foram combinados em DMF seco (4 ml). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noi- te. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml), lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O cru resultan- te foi purificado por cromatografia de coluna utilizando diclorometa- no\metanol (1 : 9) como eluente para fornecer G-24b como sólido branco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 2,55 (s, 3H), 3,17 - 3,2 (t, 4H), 3,55 (t, 2H), 3,8 (t, 2H), 4 (s, 3H), 7,31 (m, 1H), 7,9 - 8,0 (m, 3H), 8,25 (s, 1H), 8,63 (d, 1H), 9,24 (s, 1H), 12,4 (bs,1H), 14,48 (s, 1H). LCMS: 512,8 (M++ 1). HPLC: 98,0% (0,1% de H3PO4/ACN; Coluna: YMC-PACK ODS-AQ (4,6 χ 250 mm).
Preparação dos compostos G-25a e G-25b
Preparação do intermediário G-25-ln
<formula>formula see original document page 212</formula>
Etapa-1
Em um frasco de base redonda de 3 gargalos de 100 ml, 4- (ciano(dietoxifosforil)metil)piperazina-1-carboxilato de terc-butila (5,0 g) foi apreendido em THF seco (25 ml) sob nitrogênio, bis Trimetilsilil amida de sódio (3,0 g) foi adicionado gota a gota a OqC e agitado durante 30 min, em seguida tiazol-2-carboxaldeído (1,60 g) em 15 ml de THF seco foi adicionado gota a gota à mistura reacional acima a 0SC. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. TLC não checou nenhum material de partida e a mistura reacional foi saciada com cloreto de amônio saturado (50 ml) e acetato de etila foi adicionado. A camada orgânica foi lavada com salmoura, secada e concentrada para obter o produto cru 4-(1-ciano-2- (tiazol-2-il)vinil)piperazina-1-carboxilato de terc-butila como líquido amarelo. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,49 (s, 9H), 3,33 (t, 4H), 3,55 (m, 4H), 6,8 (s, 1H), 7,31 (s, 1H), 7,82 (s, 1H). LCMS: 321 (M++1). Etapa-2
A uma solução agitada de 4-(1-ciano-2-(tiazol-2-il)vinil) piperazi- na-1-carboxilato de terc-butila (2,25 g), azida de sódio (0,4 g) foi apreendido em DMSO seco (4 ml) e aquecido para 110°C durante a noite. A mistura re- acional foi cuidadosamente saciada com água (10 ml) e a mistura reacional foi extraída com diclorometano (3x10 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (10 ml), secada sobre sulfato de sódio e concentra- da sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatogra- fia de coluna utilizando metanol: clorofórmio (1 : 9) como um eluente para fornecer 4-(5-(tiazol-2-il)-1 H-1,2,3-triazol-4-il)piperazina-1 -carboxilato de terc- butila como sólido branco.
1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,55 (s, 9H), 3,33 (t, 4H), 3,68 (m, 4H), 7,45 (s, 1H), 7,98 (s, 1H).
LCMS: 335,7 (M++1).
Etapa-5
Ao 4-(5-(tiazol-2-il)-1 H-1,2,3-triazol-4-il)piperazina-1 -carboxilato de terc-butila (500 mg) dissolvido em diclorometano seco (10 ml), TFA (5 ml) foi adicionado a O0C. A mistura reacional foi deixada alcançar a temperatura ambiente e agitada durante a noite. Os voláteis foram completamente remo- vidos e o resíduo resultante foi diluído com diclorometano (20 ml). A camada orgânica foi lavada com NaHCO3 saturado (2x10 ml), salmoura, secada sobre Na2SO4. Evaporação do solvente forneceu a amina desejada G-25-ln, que foi utilizada na próxima reação sem outra purificação.
1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 3,33 (t, 4H), 3,68 (m, 4H), 7,45 (s, 1H), 7,98 (s, 1H).
LCMS: 237 (M+ +1).
Preparação de G-25a
<formula>formula see original document page 213</formula>
Ácido 2-(4-Fluoro-7-(1 H-1,2,3-triazol-1 -il)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin- 3-il)-2-oxoacético (95mg), composto G-25-In (100 mg), reagente BOP (0,16 mg) e Base de Hunig (0,2 ml) foram combinados em DMF seco (4 ml). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml), lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada so- bre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando diclorometano\metanol (1:9) como eluente para fornecer G-25a como sólido branco.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 3,47 - 3,56 (dd, 6H), 3,8 (t, 2H), 7,7 - 7,9 (s, 2H), 8,15 (s, 1H), 8,33 - 8,36 (d, 2H), 9 (s, 1H), 13 (bs, 1H), 14,7 (s, 1H). LCMS: 492 (M+-1).
HPLC: 86,6% (0,1% de H3PO4/ACN; Coluna: YMC-PACK ODS-AQ (4,6 χ 250) mm).
Preparação de G-25b
c]piridin-3-il)-2-oxoacético (95 mg), composto G-25-ln (100 mg), reagente BOP (0,16 mg) e Base de Hunig (0,2 ml) foram combinados em DMF seco (4 ml). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noi- te. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml), lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O cru resultan- te foi purificado por cromatografia de coluna utilizando diclorometa- no\metanol (1 : 9) como eluente para fornecer G-25b como sólido branco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 2,5 (s, 3H), 3,37 - 3,46 (m, 2H), 3,5 (m, 4H), 3,8 (t, 2H), 3,99 (s, 3H), 7,7 (s, 1H), 7,9 (s, 2H), 8,25 (s, 1H), 9,24 (s, 1H), 12,4 (bs, 1H), 14,7 (s, 1H).
LCMS: 518,6 (M+-1).
HPLC: 91,2% (0,1% de H3PO4ZACN; Coluna: YMC-PACK ODS-AQ (4,6 χ 250 mm).
Preparação dos compostos G-26a e G-26b
Preparação do intermediário G-26-ln
<formula>formula see original document page 215</formula>
Etapa-1
A uma solução agitada de hidrazina de fenila (3 g) em álcool ab- soluto (30 ml) foi adicionado dimetil-N-cianoditiocarbonato (4 g) lentamente sob atmosfera de nitrogênio. A mistura reacional foi agitada a 80°C durante duas horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após consumo do material de partida, os voláteis foram removidos sob pressão reduzida da mistura reacional. O resíduo resultante foi recristalizado de éter de petróleo para fornecer 3-(metiltio)-1-fenil-1H-1,2,4-triazol-5-amina como sólido amare- lo. Os sólidos obtidos foram levados para a próxima etapa sem outra purificação.
1H RMN (400 MHz1 DMSO-d6): δ 2,50 (s, 3H), 6,54 (s, 2H), 7,33 - 7,53 (m, 5H).
LCMS: 206,7 (M++ 1).
Etapa-2
Hidreto de sódio (4,7 g) foi apreendido em DMF seco (100 ml) e uma solução do composto 3-(metiltio)-1-fenil-1H-1,2,4-triazol-5-amina (4 g em 10 mL de DMF) foi adicionada lentamente a 0°C. A mistura reacional foi agitada durante 30 min a 0°C e uma solução de cloridrato de bis (2-cloroetil) amina (4,15 g) em DMF seco (20 ml) foi adicionada muito lentamente. A mis- tura reacional foi deixada agitar durante a noite em temperatura ambiente. A mistura reacional foi saciada com água resfriada (5 ml) e extraída com ace- tato de etila (3 χ 40 mi). Evaporação do solvente sob pressão reduzida for- neceu o produto cru, o qual, foi purificado por cromatografia de coluna utili- zando metanol\diclorometano (1 : 9) como eluente para fornecer 1-(3- (metiltio)-1-fenil-1H-1,2,4-triazol-5-il)piperazina, G-26-ln, como óleo marrom. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de): δ 2,50 (s, 3H), 2,54 - 2,72 (m, 4H), 2,82 - 3,37 (m, 4H), 7,38 - 7,60 (m, 5H). LCMS: 275,9 (M++1).
Preparação de G-26a
<formula>formula see original document page 216</formula>
Ácido 2-(4-Fluoro-7-(1 H-1,2,3-triazol-1 -il)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin- 3-il)-2-oxoacético (0,1 g), amina G-26-ln (0,09 g), TBTU (0,128 g) e Base de Hunig (0,15 ml) foram combinados em DMF seco (5 ml). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml), lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O cru resultante foi purificado por croma- tografia de coluna utilizando metanol\diclorometano (1 : 9) como eluente pa- ra fornecer G-26a.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 2,54 (s, 3H), 3,0 (m, 2H), 3,08 (m, 2H), 3,38 (m, 2H), 3,69 (m, 2H), 7,38 - 7,66 (m, 5H), 8,12 (s, 1H), 8,31 (d, 2H), 9,01 (s, 1H).
LCMS: 532,9 (M++1).
HPLC: 97,66% (0,1% de TFA/ACN; Coluna: C18 BDS, 250 χ 4,6 mm).
Preparação de G-26b
<formula>formula see original document page 216</formula> Acido 2-(4-metóxi-7-(3-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)-1H-pirrolo[2,3- c]piridin-3-il)-2-oxoacético (0,1 g), amina G-26-ln (0,09 g), TBTU (0,11 g) e Base de Hunig (0,15 ml) foram combinados em DMF seco (5 ml). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão re- duzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml), lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando metanol\diclorometano (1 : 9) como eluente para fornecer G-26b.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 2,48 (s, 3H), 2,50 (s, 3H), 3,08 (m, 2H), 3,20 (m, 2H), 3,42 (m, 2H), 3,67 (m, 2H), 3,98 (s, 3H), 7,39 - 7,67 (m, 5H), 7,88 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 9,23 (s, 1H). LCMS: 559,0 (M++1).
HPLC: 99,71% (0,1% de TFA/ACN; Coluna: C18 BDS, 50 χ 4,6 mm).
Preparação dos compostos G-27a e G-27b
Preparação do intermediário G-27-ln
<formula>formula see original document page 217</formula>
A uma solução agitada de níquel Raney (2 g) em THF seco (10 ml) foi adicionado o composto 1-(3-(metiltio)-1-fenil-lH-1,2,4-triazol-5- il)piperazina (1 g) em THF seco (10 ml) lentamente sob atmosfera de nitro- gênio. A mistura reacional foi refluxada a 70°C durante três horas. O pro- gresso da reação foi monitorado por TLC. Após consumo do material de par- tida, os catalisadores foram removidos por filtração com a ajuda de metanol (10x2 ml). O filtrado foi concentrado para remover os voláteis. O produto cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna meta- nol\diclorometano (1 : 9) como eluente para fornecer G-27-ln como líquido incolor.
1H RMN (400 MHz, CD3OD): δ 2,84 - 2,87 (t, 4H), 3,11 - 3,13 (t, 4H), 7,45 - <formula>formula see original document page 218</formula>
Ácido 2-(4-Fluoro-7-(1 H-1,2,3-triazol-1 -il)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin- 3-il)-2-oxoacético (0,1 g), amina G-27-ln (0,08 g), TBTU (0,12 g) e Base de Hunig (0,15 ml) foram combinados em DMF seco (5 ml). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml), lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O cru resultante foi purificado por croma- tografia de coluna utilizando metanol\diclorometano (1:9) como eluente pa- ra fornecer G-27a.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 3,07 (m, 2H), 3,20 (m, 2H), 3,48 (m, 2H), 3,71 (m, 2H), 7,40 - 7,83 (m, 5H), 8,12 (s, 1H), 8,31 (s, 2H), 8,35 (s, 1H), 9,01 (s, 1H), 13,01 (bs, 1H). LCMS: 487,1 (M++1).
HPLC: 94,16% (0,1% de TFA/ACN; Coluna: C18 BDS, 250 χ 4,6 mm).
Preparação de G-27b
<formula>formula see original document page 218</formula>
ácido 2-(4-metóxi-7-(3-metil-1 H-1,2,4-triazol-1 -il)-1 H-pirrolo[2,3- c]piridin-3-il)-2-oxoacético (0,1 g), amina G-27-ln (0,076 g), TBTU (0,11 g) e Base de Hunig (0,15 ml) foram combinados em DMF seco (5 ml). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão re- duzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml), lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2S04 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando metanol\diclorometano (1 : 9) como eluente para fornecer G-27b.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 2,50 (s, 3H), 3,09 (m, 2H), 3,20 (m, 2H), 3,43 (m, 2H), 3,67 (m, 2H), 3,98 (s, 3H), 7,40 - 7,57 (m, 5H), 7,84 (s, 1H), 7,88 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 9,24 (s, 1H), 12,39 (bs, 1H).
LCMS: 513,1 (M++ 1).
HPLC: 99,01% (0,1% de TFA/ACN; Coluna: C18 BDS, 250 χ 4,6 mm).
Preparação dos compostos G-28a e G-28b
Preparação do intermediário G-28-ln
Etapa-1
A uma solução agitada de G-26-lη (5 g) em diclorometano (10 ml), trietilamina (7,6 ml) foi adicionada até a solução ficar básica. A esta mis- tura reacional basificada, Boc-anidrido (4,8 g) foi adicionado e deixado agitar em temperatura ambiente durante a noite. A mistura reacional foi saciada com água (20 ml) e extraída com diclorometano (3x10 ml). As camadas orgânicas combinadas foram secadas sobre Na2SO4 e concentradas até a secura para fornecer 4-(3-(metiltio)-1-fenil-1H-1,2,4-triazol-5-il)piperazina-1- carboxilato de terc-butila (6 g) como um sólido de cor branca, o qual foi em- pregado na próxima reação sem outra purificação.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 1,49 (s, 9H), 2,50 (s, 3H), 2,54 - 2,72 (m, 4H), 2,82 - 3,37 (m, 4H), 7,38 - 7,60 (m, 5H). LC-MS: 378 (M+ + 1).
Etapa-2 A uma solução agitada de 4-(3-(metiltio)-1 -fenii-1 H-1,2,4-triazol- 5-il)piperazina-1 -carboxilato de terc-butila (3 g) em diclorometano (25 ml), ácido m-cloro per benzóico (5,5 g) foi adicionado e deixado agitar em tempe- ratura ambiente durante a noite. A mistura reacional foi filtrada através de Celita e a almodada de celita foi lavada com clorofórmio (3x10 ml). As ca- madas orgânicas combinadas foram lavadas com solução de bicarbonato de sódio saturada, salmoura e concentradas até a secura para obter 4-(3- (metilsulfonil)-l -fenil-1 H-1,2,4-triazol-5-il)piperazina-1 -carboxilato de terc- butila cru. Este foi levado para cromatografia de coluna utilizando 60-120 de sílica gel e 1,0% de metanol/clorofórmio como eluente para obter o compos- to puro 4-(3-(metilsulfonil)-1-fenil-1 H-1,2,4-triazol-5-il)piperazina-1-carbo- xilato de terc-butila como sólido branco.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 1,49 (s, 9H), 3,1 (t, 4H), 3,31 - 3,36 (m, 7H), 7,38 - 7,60 (m, 5H). LC-MS:411 (M++1).
Etapa-3
Ao 4-(3-(metilsulfonil)-1 -fenil-1 H-1,2,4-triazol-5-il)piperazina-1 - carboxilato de terc-butila (500 mg) dissolvido em diclorometano seco (10 ml), TFA (5 ml) foi adicionado a O0C. A mistura reacional foi deixada alcançar a temperatura ambiente e agitada durante a noite. Os voláteis foram comple- tamente removidos e o resíduo resultante foi diluído com diclorometano (20 ml). A camada orgânica foi lavada com NaHCO3 saturado (2x10 ml), sal- moura, secada sobre Na2SO4. Evaporação do solvente forneceu a amina desejada G-28-ln, que foi utilizada na próxima reação sem outra purificação. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 3,1 (t, 4H), 3,31 - 3,36 (m, 4H), 3,4 - 3,5 (s, 3H), 7,38 - 7,60 (m, 5H).
LC-MS: 310 (M+ + 1).
Preparação de G-28a <formula>formula see original document page 221</formula>
Ácido 2-(4-Fluoro-7-(1H-1,2,3-triazol-1 -il)-1H-pirrolo[2,3-c]pirídin-3-il)-2-oxoacético (60 mg), composto G-28-In (80 mg), reagente BOP (0,1 g) e Base de Hunig (0,2 ml) foram combinados em DMF seco (4 ml). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml), lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando diclorometano/metanol (1 : 9) como eluente para fornecer G-28a como sólido branco.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 3,15 (t, 2H), 3,28 (t, 2H), 3,3 (s, 3H), 3,48 (t, 2H), 3,69 (t, 2H), 7,5 (m, 1H), 7,53 (m, 2H), 7,71 (d, 2H), 8,12 (s, 1H), 8,31 (s, 1H), 8,36 (s, 1H), 9,01 (s, 1H),13,07 (s, 1H). LC-MS: 565 (M++1).
HPLC: 95,2% (0,1% de H3PO4ZACN; Coluna: YMC-PACK ODS-AQ (4,6 χ 250 mm).
Preparação de G-28b
<formula>formula see original document page 221</formula>
Ácido 2-(4-metóxi-7-(3-metil-1H-1,2,4-triazol-1 -il)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-oxoacético (75 mg), composto G-28-ln (80 mg), reagente BOP (0,1 g) e Base de Hunig (0,2 ml) foram combinados em DMF seco (4 ml). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml), lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando diclorometa-no/metanol (1 : 9) como eluente para fornecer G-28b como sólido branco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 2,5 (s, 3H), 3,15 (t, 2H), 3,28 (t, 2H), 3,3 (s, 3H), 3,48 (t, 2H), 3,69 (t, 2H), 3,97 (s, 3H), 7,5 (m, 1H), 7,53 (m, 2H), 7,61 (d, 2H), 7,88 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 9,21 (s, 1H),12,4 (s, 1H). LC-MS: 591 (M++1).
HPLC: 96,0% (0,1% de H3PO4/ACN; Coluna: YMC-PACK ODS-AQ (4,6 χ 250 mm).
Preparação dos compostos G-29a e G-29b
Preparação do intermediário G-29-ln
<formula>formula see original document page 222</formula>
Etapa-1
Metanol seco (10 ml) foi carregado para um frasco de base redonda de 3 gargalos limpo e seco equipado com condensador de refluxo, barra de agitação e um borbulhador de nitrogênio. Metal de sódio (564 mg) foi adicionado porção a porção à mistura reacional acima em temperatura ambiente. Após dissolução completa de metal de sódio, 4-(3-(metilsulfonil)-1-fenil-1H-1,2,4-triazol-5-il)piperazina-1-carboxilato de terc-butila (1,0 g) em 5 ml de metanol foi adicionado e a massa de reação foi aquecida para 60°C. A mistura reacional foi deixada agitar a 60°C durante a noite. A mistura reacional foi resfriada para a temperatura ambiente e lentamente saciada com gelo. O produto foi extraído com acetato de etila e a camada orgânica foi lavada com água, salmoura, secada e concentrada para obter 4-(3-metóxi-1-fenil-1H-1,2,4-triazol-5-il)piperazina-1-carboxilato de terc-butila puro como sólido não totalmente branco.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 1,49 (s, 9H), 3,0 (t, 4H), 3,3 (m, 4H), 4,0 (s, 3Η), 7,38 - 7,60 (m, 5Η). LC-MS: 360 (M+ + 1).
Etapa-2
Ao 4-(3-metóxi-1 -fenil-1H-1,2,4-triazol-5-il)piperazina-1 -carboxi-Iato de terc-butila (500 mg) dissolvido em diclorometano seco (10 ml), TFA (5 ml) foi adicionado a O9C. A mistura reacional foi deixada alcançar a temperatura ambiente e agitada durante a noite. Os voláteis foram completamente removidos e o resíduo resultante foi diluído com diclorometano (20 ml). A camada orgânica foi lavada com NaHCO3 saturado (2x10 ml), salmoura, secada sobre Na2S04. Evaporação do solvente forneceu a amina desejada, composto G-29-ln, que foi utilizada na próxima reação sem outra purificação. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 3,0 (t, 4H), 3,3 (m, 4H), 4,0 (s, 3H), 7,38 -7,60 (m, 5H). LC-MS: 259 (M++ 1).
Preparação de G-29a
<formula>formula see original document page 223</formula>
Ácido 2-(4-Fluoro-7-(1H-1,2,3-triazol-1 -il)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-oxoacético (95 mg), composto G-29-ln (100 mg), reagente BOP (0,16 mg) e Base de Hunig (0,2 ml) foram combinados em DMF seco (4 ml). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml), lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando diclorometano/metanol (1 : 9) como eluente para fornecer G-29a como sólido branco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 3,08 (t, 2H), 3,2 (t, 2H), 3,46 (t, 2H), 3,68 (t, 2H), 3,83 (s, 3H), 7,36 (m, 1H), 7,48 (m, 2H), 7,65 (m, 2H),8,11 (s, 1H), 8,3 (s,1Η), 8,35 (s, 1 Η), 9,01 (s, 1 Η), 13,06 (s, 1Η). LC-MS: 517 (M+ + 1).
HPLC: 97,4% (0,1% de H3PO4/ACN; Coluna: YMC-PACK ODS-AQ (4,6 χ 250 mm).
Preparação de G-29b
<formula>formula see original document page 224</formula>
Ácido 2-(4-metóxi-7-(3-metil-1H-1,2,4-triazol-1 -il)-1H-pirrolo[2,3- c]piridin-3-il)-2-oxoacético (116 mg), composto G-29-ln (100 mg), reagente BOP (0,176 mg) e Base de Hunig (0,2 ml) foram combinados em DMF seco (4 ml). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 mi), lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre I^SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando diclorometa-no/metanol (1 : 9) como eluente para fornecer G-29b como sólido branco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 2,48 (s, 3H), 3,08 (t, 2H), 3,2 (t, 2H), 3,46 (t, 2H), 3,68 (t, 2H), 3,83 (s, 3H), 3,98 (s, 3H), 7,36 (m, 1H), 7,48 (m, 2H), 7,65 (m, 2H), 7,88 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 9,23 (s, 1H). LC-MS: 543 (M++ 1).
HPLC: 97,1% (0,1% de H3PO4ZACN; Coluna: YMC-PACK ODS-AQ (4,6 χ 250 mm).
Preparação dos compostos G-30a e G-30b
Preparação do intermediário G-30-In <formula>formula see original document page 225</formula>
Etapa-1
1,2,3-Triazol (5 g), iodobenzeno (9,72 ml) e iodeto de cobre (0,68 g) foram apreendidos em DMF seco sob atmosfera de nitrogênio. 1,2-(Ν,Ν-dimetil) cicloexil diamina (1,02 g) e fosfato de potássio (30,73 g) foram adicionados à mistura acima. A mistura reacional foi refluxada a 110°C durante a noite. TLC não checou nenhum material de partida e a mistura reacional foi filtrada através de Celita. O filtrado foi diluído com água e o produto foi extraído com diclorometano. A camada orgânica foi evaporada e o produto cru foi purificado por cromatografia de coluna utilizando 60-120 de sílica gel e éter de petróleo / acetato de etila como eluente para fornecer 1-fenil-1H-1,2,3-triazol como sólido branco.
1H RMN (400 MHzi CDCl3): δ 7,47 (m, 1H), 7,5 - 7,6 (m, 2H), 7,9 (d, 2H), 7,98 (s, 1H), 8,84 (s, 1H). LC-MS: 145,6 (M++1).
Etapa-2
Em um frasco de base redonda de 3 gargalos de 100 ml, 1-fenil-1 H-1,2,3-triazol (1,2 g) foi apreendido em THF seco (25 ml) sob nitrogênio. n-Butil lítio (3,36 ml) foi adicionado a - 78eC e agitado durante 5 minutos, em seguida bromo (3,76 ml) foi adicionado gota a gota à mistura reacional acima. A mistura reacional foi agitada a -78°C durante 1 hora. TLC não checou nenhum material de partida e a mistura reacional foi saciada com cloreto de amônio saturado (50 ml) e acetato de etila foi adicionado. A camada orgânica foi lavada com bissulfato de sódio, salmoura, secada e concentrada. O produto cru foi purificado por cromatografia de coluna utilizando éter de petróleo & acetato de etila como eluente para fornecer 5-bromo-1-fenil-1H-1,2,3-triazol como sólido amarelo.
1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,47 (m, 1H), 7,5 - 7,6 (m, 2H), 7,9 (d, 2H), 8,05 (s, 1
LC-MS: 225 (M++1). Etapa-3
Em um frasco de base redonda de gargalo único de 100 ml, 5- bromo-1 -fenil-1 H-1,2,3-triazol (0,6 g), piperazina (1,11g) e terc-butóxido de sódio (0,38 g) foram apreendidos em tolueno seco (20 ml) e desgaseificados durante 20 min. Em seguida Pd(dba)2 (0,11 g), BiNAP (0,16 g) foram adicionados e novamente desgaseificados durante 10 min. A mistura reacional foi refluxada a 107-C durante a noite. TLC não checou nenhum material de partida. A mistura reacional foi diluída com 25 mL de água e extraída com diclo-rometano. A camada orgânica foi separada e concentrada. O produto cru foi purificado por cromatografia de coluna utilizando 60-120 de sílica gel e 6 % de metanol/clorofórmio como eluente para fornecer o composto G-30-ln como sólido branco.
1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 2,5 - 2,72 (d, 8H), 7,41 (s, 1H), 7,5 - 7,6 (m, 3H), 7,73 (d, 2H). LC-MS: 230 (M++1).
Preparação de G-30a
<formula>formula see original document page 226</formula>
Ácido 2-(4-Fluoro-7-(1 H-1,2,3-triazol-1 -il)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin- 3-il)-2-oxoacético (60 mg), composto G-30-ln (50 mg), reagente BOP (0,094 g) e Base de Hunig (0,2ml) foram combinados em DMF seco (4 ml). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml), lavado com NaHCOs a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando MeOH/CHCI3 (1 : 9) como eluente para fornecer G-30a como sólido branco. 1H RMN (400 MHz1 DMSO-d6): δ 2,86 - 2,88 (t, 3H), 2,97 - 2,99 (t, 3H), 3,45 -3,38 (t, 3H), 3,67 - 3,7 (t, 3H), 7,52 (s, 2H), 7,6 (m, 2H), 7,78 (m, 2H), 8,12 (s, 1H), 8,3 - 8,35 (d, 2H), 9,0 (s, 1H), 13,0 (s, 1H). LC-MS: 487 (M++1).
HPLC: 96,4% (0,1% de H3POVACN; Coluna: YMC-PACK ODS-AQ (4,6 χ 250 mm).
Preparação de G-30b
<formula>formula see original document page 227</formula>
Acido 2-(4-metóxi-7-(3-metil-1 H-1,2,4-triazol-1-il)-1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-3-il)-2-oxoacético (60mg), composto G-30-ln (50 mg), reagente BOP (0,094 g) e Base de Hunig (0,2ml) foram combinados em DMF seco (4 ml). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi saciada com metanol (10 ml) e os voiáteis foram removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi diluído com acetato de etila (50 ml), lavado com NaHCO3 a 10% e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O cru resultante foi purificado por cromatografia de coluna utilizando MeOH/CHCI3 (1:9) como eluente para fornecer G-30b como sólido branco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 2,5 (s, 3H), 2,86 - 2,88 (t, 2H), 2,95 - 2,98 (t, 2H), 3,4 - 3,42 (t, 2H), 3,65 - 3,67 (t, 2H), 3,97 (s, 3H), 7,52 (s, 2H), 7,6 (m, 2H), 7,76 - 7,78 (d, 2H), 7,89 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 9,24 (s, 1H),12,4 (s, 1H). LC-MS: 513 (M++1).
HPLC: 97,7% (0,1% de H3PO4ZACN; Coluna: YMC-PACK ODS-AQ (4,6 χ 250 mm).
Biologia
"μΜ" significa micromolar
"mL" significa mililitro;
"μl" significa microlitro;
"mg" significa miligrama; Os materiais e procedimentos experimentais utilizados para obter os resultados apresentados nas Tabelas 3-4 são descritos abaixo. Células:
o Produção de Vírus - Linhagem de célula de rim embrionária 15 humana, 293T, foi propagada em Dulbecco's Modified Eagle Médium (Invitrogen, Carlsbad, CA) contendo 10% de soro bovino fetal (FBS, Sigma, St. Louis, MO).
o Infecção por Vírus - Linhagem de célula epitelial humana, HeLa, expressando o receptor de HIV-1 CD4 foi propagada em Dulbecco's Modified Eagle Médium (Invitrogen, Carlsbad, CA) contendo 10% de soro bovino fetal (FBS, Sigma, St. Louis , MO) e suplementada com 0,2 mg/mL de Geneticina (Invitrogen, Carlsbad, CA).
Vírus - vírus repórter infeccioso de ciclo único foi produzido por cotransfecção de células 293 de rim embrionárias humanas com um vetor de expressão de DNA envelope de HIV-1 e um cDNA pró-viral contendo uma mutação de deieção de envelope e o gene repórter de Iuciferase inserido no lugar de seqüências nef de HIV-1 (Chen e outro, Ref. 41). Transfecções foram realizadas utilizando reagente lipofectAMINE PLUS como descrito pelo fabricante (Invitrogen, Carlsbad, CA). Experimento
1. Células CD4 HeLa foram colocadas em placas de 96 cavidades em uma densidade celular de 1 X 104 células por cavidade em 100 μΙ de Dulbecco's Modified Eagle Médium contendo 10 % de soro bovino fetal e incubadas durante a noite.
2. O composto foi adicionado em uma solução de dimetilsulfóxido de 2 μl, a fim de que a concentração de ensaio final seja £ 10 μΜ.
100 μl de vírus repórter infeccioso de ciclo único em Dulbecco's 30 Modified Eagle Médium foram em seguida adicionados às células semeadas e composto em uma multiplicidade aproximada de infecção (MOI) de 0,01, resultando em um volume final de 200 μl por cavidade.
Células viralmente infectadas foram incubadas a 37 graus Celsi-us, em uma incubadora de CO2, e colhidas 72 h após a infecção. Infecção viral foi monitorada avaliando-se a expressão de lucife-rase de DNA viral nas células infectadas utilizando um kit de ensaio de gene repórter de luciferase, como descrito pelo fabricante (Roche Molecular Biochemicals, Indianapolis, IN). Sobrena-dantes de célula infectada foram removidos e 50 μl de tampão de lise foram adicionados por cavidade. Após 15 minutos, 50 μl de reagente de ensaio de luciferase recentemente reconstituído foram adicionados por cavidade. Atividade de luciferase foi em seguida quantificada avaliando-se a luminescência utilizando uma contadora de cintilação microbeta Wallac. A inibição percentual para cada composto foi calculada quantifi-cando-se o nível de expressão de luciferase em células infectadas na presença de cada composto como uma porcentagem daquele observado para células infectadas na ausência de composto e subtraindo um tal valor determinado de 100. Uma EC5O fornece um método para comparar a potência antiviral dos compostos desta descrição. A concentração eficaz para inibição de cinqüenta porcento (EC50) foi calculada com o software de ajuste de curva Microsoft Excel Xlfit. Para cada composto, as curvas foram geradas a partir da inibição percentual calculada em 10 diferentes concentrações utilizando-se um modelo logístico de quatro parâmetros (modelo 205). Os dados de EC50 para os compostos são mostrados na Tabela 4. A Tabela 3 é essencial para os dados na Tabela 4. Tabela 3. Dados Biológicos Essenciais para EC50S
<table>table see original document page 230</column></row><table>
Tabela 4
<table>table see original document page 230</column></row><table> <formula>formula see original document page 231</formula> <formula>formula see original document page 232</formula> <formula>formula see original document page 233</formula> <formula>formula see original document page 234</formula> <formula>formula see original document page 235</formula> <formula>formula see original document page 236</formula> <formula>formula see original document page 237</formula> <formula>formula see original document page 238</formula> <formula>formula see original document page 239</formula> <formula>formula see original document page 240</formula> <formula>formula see original document page 241</formula> <formula>formula see original document page 242</formula> <formula>formula see original document page 243</formula> <formula>formula see original document page 244</formula> <formula>formula see original document page 245</formula> <formula>formula see original document page 246</formula> <formula>formula see original document page 247</formula> <formula>formula see original document page 248</formula> <formula>formula see original document page 249</formula> <formula>formula see original document page 250</formula> <formula>formula see original document page 251</formula> <formula>formula see original document page 252</formula> <formula>formula see original document page 253</formula> <formula>formula see original document page 254</formula> <formula>formula see original document page 255</formula> <formula>formula see original document page 256</formula> <formula>formula see original document page 257</formula> <formula>formula see original document page 258</formula> <formula>formula see original document page 259</formula> <formula>formula see original document page 260</formula> <formula>formula see original document page 261</formula> <formula>formula see original document page 262</formula> <formula>formula see original document page 263</formula> <formula>formula see original document page 264</formula> <formula>formula see original document page 265</formula> <formula>formula see original document page 266</formula> <formula>formula see original document page 267</formula> <formula>formula see original document page 268</formula> <formula>formula see original document page 269</formula> <formula>formula see original document page 270</formula> <formula>formula see original document page 271</formula> <formula>formula see original document page 272</formula> <formula>formula see original document page 273</formula> <formula>formula see original document page 274</formula> <formula>formula see original document page 275</formula> <formula>formula see original document page 276</formula> <formula>formula see original document page 277</formula> <formula>formula see original document page 278</formula> <formula>formula see original document page 279</formula> <formula>formula see original document page 280</formula> <formula>formula see original document page 281</formula>

Claims (41)

1. Composto de Fórmula I, ou sais farmaceuticamente aceitáveis deste, <formula>formula see original document page 282</formula> em que: A é selecionado do grupo consistindo em: <formula>formula see original document page 282</formula> em que - - representa uma ligação carbono-carbono ou não existe; R1 é hidrogênio, C1-C4 alquila, ou C1-C4 fluoroalquila; R2 é hidrogênio; R4, R5, R6 e R7 são cada qual independentemente selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, hidróxi, halogênio, ciano, nitro, C1-C4 alquila, C1-C4 fluoroalquila, ORa, NRaRb, COORa, e Grupo B; Ra e Rb são cada qual independentemente selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, C1-C4 alquila, e Grupo B; R4n é O ou não existe; Y é selecionado do grupo consistindo em fenila, C5-C7 heteroarila monocíclica, C9-C10 arila bicíclica, C9-C10 heteroarila bicíclica, C4-C7 hete-roalicíclico, e C5-C7 cicloalquila em que a referida heteroarila ou heteroalicí-clico contém de 1 a 4 heteroàtomos selecionados de O, N, e S e com a condição de que quando Y for uma heteroarila bicíclica tanto X quanto Y sejam ligados a um anel comum em que a referida arila, heteroarila, e heteroalicíclico são opcionalmente substituídos com um a três halogênios iguais ou diferentes ou de um a três substituintes iguais ou diferentes selecionados de oxo, hidroxila, C1-C6 alquila, -NR55R56, -OC1-C3 alquila, -S-R1,-S(O)2R1, CF3, CN; em que a referida C1-C6 alquila pode ser opcionalmente substituída com Grupo B; Z é selecionado do grupo consistindo em C1-6 alquila, C1-6 alcóxi, C3-7 cicloalquila, -COOR3, N-Iactam cíclico de anel de 4, 5, ou 6 membros, 5 -C(O)NR42R43, -C(O)R57 em que R57 é opcionalmente substituído com CN ou Grupo B; -NR55R561 arila e heteroarila; em que a referida arila é fenila; a referida heteroarila é selecionada do grupo consistindo em piridinila, pirimidinila, pirazinila, furanila, tienila, pirrolila, imidazolila, tiazolila, isotiazolila, oxazolila, isoxazolila e C9-Ci0 heteroarila bicíclica com 1-4 heteroátomo(s); a referida arila ou heteroarila é opcionalmente substituída com um ou dois dos membros iguais ou diferentes selecionados do grupo consistindo em amino, nitro, ciano, hidróxi, C1-6 alcóxi, -C(O)NH2, C1-6 alquila, -NHC(O)CH3, halogênio, trifluorometila e Grupo B; Grupo B é selecionado do grupo consistindo em -C(O)NR40R41, arila, heteroarila, heteroalicíclico, C(O)R3, C(=N-0-R1)R3, acetal, UR8a, (C1-6) alquilNR40R41, (C1-6)alquilCOOR8b; em que a referida arila, heteroarila, e heteroalicíclico são opcionalmente substituídos com um a três halogênios i-guais ou diferentes ou de um a três substituintes iguais ou diferentes selecionados do grupo F; em que arila é naftila ou fenila substituída; em que heteroarila é um sistema mono ou bicíclico que contém de 3 a 7 átomos de a-nel para um sistema monocíclico e até 12 átomos em um sistema bicíclico fundido, incluindo de 1 a 4 heteroátomos; em que heteroalicíclico é um anel monocíclico de 3 a 7 membros que pode ser parcialmente insaturado e pode ser substituído por 1 ou dois grupos oxo e pode conter de 1 a 2 heteroátomos no esqueleto de anel e que pode ser fundido a um anel de benzeno ou piridila; ou Grupo B é (C1-6)alquila e (C2-6)alquenila; em que a referida (C1-6)alquila e (C2-6alquenila são independentemente opcionalmente substituídas com um membro selecionado do grupo consistindo em fenila, heteroa-30 rila ou -C(O)NR55R56; ou com de um a três halogênios iguais ou diferentes; em que heteroarila é um sistema monocíclico que contém de 3 a 7 átomos de anel, incluindo de 1 a 4 heteroátomos; Grupo F é selecionado do grupo consistindo em oxo, (C1-6) alqui- la, (C3.7)cicloalquila, arila, heteroarila, heteroalicíclico, hidróxi, (C1-6)alcoxi, arilóxi, (C1-6)tioalcóxi, ciano, halogênio, nitro, -C(O)R57, benzila, -NR42C(O)- (C1-6)alquila, -NR42C(0)-(C3-6)cicloalquÍla, -NR42C(0)-arila, -NR42C(O)-hetero- arila, -NR42C(0)-heteroalicíelico, um N-lactam cíclico de anel de 4, 5, ou 6 membros, -NR42S(0)2-(C1-6)alquila, -NR42S(O)2-(C3-6)CiCloalquila, -NR42S(0)2-ari- la, -NR42S(0)2-heteroarila, -NR42S(0)2-heteroalicíclico, S(O)2(C1-6)alquila, S(O)2arila, -S(O)2 NR42R43, NR42R43, (C1-6)alquilC(O)NR42R43, C(O)NR42R431 NHC(O)NR42R43, OC(O)NR42R43, NHC(O)OR54, (C1-6)alquilNR42R43, COOR54, e (C1-6)aquilCOOR54; em que a referida (C1-6alquilal (C3-7)cicloalquila, arila, heteroarila, heteroalicíclico, (C1- 6) alcóxi, e arilóxi, são opcionalmente substituídos com um a nove halogê- nios iguais ou diferentes ou de um a cinco substituintes iguais ou diferentes selecionados do grupo G; em que arila é fenila; heteroarila é um sistema monocíclico que contém de 3 a 7 átomos de anel, incluindo de 1 a 4 heteroá- tomos; heteroalicíclico é selecionado do grupo consistindo em aziridina, aze- tidina, pirrolidina, piperazina, piperidina, tetraidrofurano, tetraidropirano, aze- pina, e morfolina; Grupo G é selecionado do grupo consistindo em (C1^alquila, (C3-7)cicloalquila, arila, heteroarila, heteroalicíclico, hidróxi, (C1-^alcoxi, ariló- xi, ciano, halogênio, nitro, -C(O)R57, benzila, heterocíclico não-aromático com 1-2 heteroátomos, -NR48C(O)-(C16)-alquila, -NR48C(O)-C3-6)cicloalquila, -NR48C(O)arila, -NR48C(0)-heteroarila, -NR48C(0)-heteroalicíclico, um N- lactam cíclico de anel de 4, 5, ou 6 membros, -NR48S(O)-(C1-6)alquila, - NR48S{0)2, -(C3-6)cicloalquila, -NR48S(0)2-arila, -NR48S(O)2-heteroarila, -NR48S(0)2-heteroalicíclico, sulfinila, sulfonila, sulfonamida, NR48R49, (C1-6) alquila C(O)NR48R49, C(O)NR48R49, NHC(O)NR48R49, OC(O)NR48R49, NHC(O)OR54', (C1-6)alquilNR48R49, COOR54, e (C1-6)alquilCOOR54; em que arila é fenila; heteroarila é um sistema monocíclico que contém de 3 a 7 á- tomos de anel, incluindo de 1 a 4 heteroátomos; heteroalicíclico é seleciona- do do grupo consistindo em aziridina, azetidina, pirrolidina, piperazina, pipe- ridina, tetraidrofurano, tetraidropirano, azepina, e morfolina; R3 é selecionado do grupo consistindo em C1-C4 alquila, arila, heteroarila, e heteroalicíclico; em que a referida C1-C4 alquila, arila, heteroa- rila, e heteroalicíclico são opcionalmente substituídos com um a três halogê- nios iguais ou diferentes ou com de um a três substituintes iguais ou diferen- tes selecionados do grupo F; em que para R3, R81 R8a, R8b arila é fenila; heteroarila é um sis- tema mono ou bicíclico que contém de 3 a 7 átomos de anel para sistemas monocíclicos e até 10 átomos em um sistema bicíclico, incluindo de 1 a 4 heteroátomos; em que heteroalicíclico é selecionado do grupo consistindo em aziridina, azetidina, pirrolidina, piperazina, piperidina, tetraidrofurano, tetraidropirano, azepina, e morfolina; R8 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, (C1-6) al- quila, (C3-7)cicloalquila, (C2-6)alquenila, (C3-7)cicloalquenila, (C2-6)alquinila, arila, heteroarila, e heteroalicíclico; em que a referida (C1-6)alquila, (C3-7) ci- cloalquila, (C2-6)alquenila, (C3.7)cicloalquenila, (C2-6alquinilal arila, heteroari- la, e heteroalicíclico são opcionalmente substituídos com um a seis halogê- nios iguais ou diferentes ou de um a cinco substituintes iguais ou diferentes selecionados do grupo F; R8a é um membro selecionado do grupo consistindo em arila, heteroarila, e heteroalicíclico; em que cada membro é independentemente opcionalmente substituído com um a seis halogênios iguais ou diferentes ou de um a cinco substituintes iguais ou diferentes selecionados do grupo F; R8b é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, (Ci-6) alquila e fenila; R9, R10, R111 R12, R13, R14, R15, R16 são cada qual independente- mente selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e (C1-6alquila; em que a referida (Ci.6)alquila é opcionalmente substituída com um a três halo- gênios iguais ou diferentes ou um hidróxi ou um O (C1-6)alquila ou um NR55R56; ou um de R9, R10 ou um de R11, R12 pode formar respectivamente com um de R15, R16 ou um de R13, R14, um, dois ou três átomos em ponte compreendidos de alquila ou átomos de nitrogênio; X é N ou CH1 (quando X for CH a configuração no centro X pode ser configuração racêmica ou pura (R) ou pura (S)); U é selecionado do grupo consistindo em NH ou NCH3, O1 e S; R40 e R41 são independentemente selecionados do grupo consis- tindo em (a) hidrogênio; (b) (Ci-6)alquila substituída com um a três halo- gênios iguais ou diferentes (c) (Ci-6)alcóxi, arila, heteroarila ou heteroalicícli- co; ou R40 e R41 amados juntos com o nitrogênio ao qual eles são ligados formam um membro selecionado do grupo consistindo em aziridina, azetidi- na, pirrolidina, piperazina, 4-NMe piperazina, piperidina, azepina, e morfoli- na; e em que a referida arila, heteroarila, e heteroalicíclico são opcionalmen- te substituídos com um a dois substituintes iguais ou diferentes selecionados de CrC3alquila, halogênio, hidroxila, -OR55, -NR55R56; -C(O)NR55R56; em que para R40 e R41 arila é fenila; heteroarila é um sistema monocíclico que contém de 3 a 6 átomos de anel, incluindo de 1 a 4 heteroátomos; heteroalicíclico é selecionado do grupo consistindo em aziridina, azetidina, pirrolidina, piperazina, piperidina, tetraidrofurano, tetrai- dropirano, azepina, e morfoiina; R42G R43 são independentemente selecionados do grupo consis- tindo em hidrogênio, (Ci-6)alquila, alila, (Ci-6)alcóxi, (C3-7)cicloalquila, arila, heteroarila e heteroalicíclico; ou R42 e R43 tomados juntos com o nitrogênio ao qual eles são ligados formam um membro selecionado do grupo consis- tindo em aziridina, azetidina, pirrolidina, piperazina (opcionalmente substituí- da com Grupo B), 4-NMe piperazina, piperidina, azepina, e morfoiina; e em que a referida (Ci.6)alquila, (Ci-6)alcóxi, (C3.7)cicloalquila, arila, heteroarila, e heteroalicíclico são opcionalmente substituídos com um a três halogênios iguais ou diferentes ou de um a dois substituintes iguais ou diferentes sele- cionados do grupo G; em que para R42 e R43 arila é fenila; heteroarila é um sistema monocíclico que contém de 3 a 6 átomos de anel, incluindo dé 1 a 4 heteroátomos; heteroalicíclico é um membro selecionado do grupo consis- tindo em aziridina, azetidina, pirrolidina, piperazina, piperidina, tetraidrofura- no, tetraidropirano, azepina, e morfoiina; R46 é selecionado do grupo consistindo em H, OR57, e NR55R56; R47 é selecionado do grupo consistindo em H, amino, halogênio, fenila, e (Ci-6)alquila; R48 e R49 são independentemente selecionados do grupo consis- tindo em hidrogênio, (C1-6)alquila e fenila; cicloalquila, e benzila; em que cada das referidas (C1-6)alquila, (C3-7) cicloal- quila e benzila são opcionalmente substituídas com um a três halogênios iguais ou diferentes, amino, OH, CN ou NO2; R54 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e (Ci-β) alquila; tindo em hidrogênio e (Ci-6)alquila; e R57 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, (Ci-β) alquila e fenila; e com a condição de que o composto de Fórmula (I) não seja
2. Composto de acordo com a reivindicação 1 em que R1 é H, R5 é H, R4n não existe.
3. Composto de acordo com a reivindicação 2 em que R4 é halo- gênio ou ORa.
4. Composto de acordo com a reivindicação 3 em que R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15 R16 são cada qual independentemente selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, C1-C4 alquila e C1-C4 fluoroalquila.
5. Composto de acordo com a reivindicação 4 em que A é R50 é selecionado do grupo consistindo em H, (C1-6)alquila, (C3-6) R54' é (C1-6)alquila; R55 e R56 são independentemente selecionados do grupo consis-
6. Composto de acordo com a reivindicação 5 em que Y é fenila.
7. Composto de acordo com a reivindicação 5 em que Y é C5-C7 heteroarila monocíclica.
8. Composto de acordo com a reivindicação 5 em que Y é C9-C10 arila bicíclica.
9. Composto de acordo com a reivindicação 5 em que Y é C9-C10 heteroarila bicíclica.
10. Composto de acordo com a reivindicação 5 em que Y é C4- C7 heteroalicíclico.
11. Composto de acordo com a reivindicação 5 em que Y é C5- Cycicloalquila.
12. Composto de acordo com a reivindicação 5 em que Y é te- trazol.
13. Composto de acordo com a reivindicação 5 em que Y é triazol.
14. Composto de acordo com a reivindicação 5 em que Y é pirazol.
15. Composto de acordo com a reivindicação 5 em que Y é imidazol.
16. Composto de acordo com a reivindicação 5 em que Y é piridina.
17. Composto de acordo com a reivindicação 5 em que Y é pirazina.
18. Composto de acordo com a reivindicação 5 em que Y é pirimidina.
19. Composto de acordo com a reivindicação 5 em que Y é piridazina.
20. Composto de acordo com a reivindicação 4 em que A é <formula>formula see original document page 288</formula>
21. Composto de acordo com a reivindicação 20 em que Y é fenila.
22. Composto de acordo com a reivindicação 20 em que Y é C5-C7 heteroarila monocíclica.
23. Composto de acordo com a reivindicação 20 em que Y é C9- C10 arila bicíclica.
24. Composto de acordo com a reivindicação 20 em que Y é C9- C10 heteroarila bicíclica.
25. Composto de acordo com a reivindicação 20 em que Y é C4- C7 heteroalicíclico.
26. Composto de acordo com a reivindicação 20 em que Y é C5- C7-cicloalquila.
27. Composto de acordo com a reivindicação 20 em que Y é tetrazol.
28. Composto de acordo com a reivindicação 20 em que Y é triazol.
29. Composto de acordo com a reivindicação 20 em que Y é pirazol.
30. Composto de acordo com a reivindicação 20 em que Y é imidazol.
31. Composto de acordo com a reivindicação 20 em que Y é piridina.
32. Composto de acordo com a reivindicação 20 em que Y é pirazina.
33. Composto de acordo com a reivindicação 20 em que Y é pirimidina.
34. Composto de acordo com a reivindicação 20 em que Y é piridazina.
35. Composto selecionado do grupo consistindo em: <formula>formula see original document page 290</formula> <formula>formula see original document page 291</formula> <formula>formula see original document page 292</formula> <formula>formula see original document page 293</formula> <formula>formula see original document page 294</formula> <formula>formula see original document page 295</formula> <formula>formula see original document page 296</formula> <formula>formula see original document page 297</formula> <formula>formula see original document page 298</formula> <formula>formula see original document page 299</formula> <formula>formula see original document page 300</formula> <formula>formula see original document page 301</formula> <formula>formula see original document page 302</formula> <formula>formula see original document page 303</formula> <formula>formula see original document page 304</formula> <formula>formula see original document page 305</formula> <formula>formula see original document page 306</formula> <formula>formula see original document page 307</formula> <formula>formula see original document page 308</formula> <formula>formula see original document page 309</formula> <formula>formula see original document page 310</formula> <formula>formula see original document page 311</formula> <formula>formula see original document page 312</formula> <formula>formula see original document page 313</formula> <formula>formula see original document page 314</formula> <formula>formula see original document page 315</formula> <formula>formula see original document page 316</formula> <formula>formula see original document page 317</formula> <formula>formula see original document page 318</formula> <formula>formula see original document page 319</formula> <formula>formula see original document page 320</formula> <formula>formula see original document page 321</formula> <formula>formula see original document page 322</formula> <formula>formula see original document page 323</formula> <formula>formula see original document page 324</formula> <formula>formula see original document page 325</formula> <formula>formula see original document page 326</formula> <formula>formula see original document page 327</formula> <formula>formula see original document page 328</formula> <formula>formula see original document page 329</formula> <formula>formula see original document page 330</formula> <formula>formula see original document page 331</formula> <formula>formula see original document page 0</formula> <formula>formula see original document page 333</formula> <formula>formula see original document page 334</formula> <formula>formula see original document page 335</formula> <formula>formula see original document page 336</formula> <formula>formula see original document page 337</formula> <formula>formula see original document page 338</formula> <formula>formula see original document page 339</formula> <formula>formula see original document page 340</formula> <formula>formula see original document page 341</formula> <formula>formula see original document page 342</formula> <formula>formula see original document page 343</formula>
36. Composição farmacêutica que compreende uma quantidade eficaz antiviral de um composto de Fórmula I, ou sais farmaceuticamente aceitáveis deste, de acordo com a reivindicação 1, e um ou mais diluentes, excipientes ou veículos farmaceuticamente aceitáveis.
37. Composição de acordo com a reivindicação 36, também compreendendo um segundo composto tendo atividade anti-HIV.
38. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 36, útil para tratar infecção por HIV, que adicionalmente compreende uma quantidade eficaz antiviral de um agente de tratamento de AIDS selecionado do grupo consistindo em: (a) um agente antiviral de AiDS; (b) um agente antiinfeccioso; (c) um imunomodulador; e (d) inibidores de entrada de HIV.
39. Método para tratar um mamífero infectado com um vírus compreendendo administrar ao referido mamífero uma quantidade eficaz antiviral de um composto de Fórmula I, ou sais farmaceuticamente aceitáveis deste, de acordo com a reivindicação 1, e um ou mais diluentes, excipientes ou veículos farmaceuticamente aceitáveis.
40. Método de acordo com a reivindicação 39, compreendendo administrar ao referido mamífero uma quantidade eficaz antiviral de um composto de Fórmula I em combinação com uma quantidade eficaz antiviral de um agente de tratamento de AIDS selecionado do grupo consistindo em: um agente antiviral de AIDS; um agente antiinfeccioso; um imunomodulador; e um inibidor de entrada de HIV.
41. Método de acordo com a reivindicação 39 em que o referido vírus é HIV.
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