BRPI0619704A2 - composto, composição, método para inibir a atividade da proteìna aurora quinase numa amostra biológica, método para tratar um distúrbio proliferativo e método para tratar cáncer - Google Patents

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Michael Mortimore
Chris Davis
Dean Boyall
Simon Everitt
Daniel Robinson
Sharn Ramaya
Damien Fraysse
John Studley
Andrew Milier
Michael O'donnell
Alistair Rutherford
Joanne Pinder
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Abstract

COMPOSTO, COMPOSIçãO, MéTODO PARA INIBIR A ATIVIDADE DA PROTEìNA AURORA QUINASE NUMA AMOSTRA BIOLóGICA, MéTODO PARA TRATAR UM DISTúRBIO PROLIFERATIVO E MéTODO PARA TRATAR CáNCER. A presente invençâo refere-se a compostos úteis como inibidores de proteínas quinase. A invenção também provê composições farmaceuticamente aceitáveis compreendendo os compostos e métodos para utilizar os compostos e composições no tratamento de diversas doenças, condições e distúrbios. A invenção também provê processos para preparar compostos da invenção.

Description

"COMPOSTO, COMPOSIÇÃO, MÉTODO PARA INIBIR A ATIVIDADE DA PROTEÍNA AURORA QUI NAS E NUMA AMOSTRA BIOLÓGICA, MÉTODO PARA TRATAR UM DISTÚRBIO PROLIFERATIVO E MÉTODO PARA TRATAR CÂNCER".
CAMPO TÉCNICO DA INVENÇÃO
A presente invenção refere-se a compostos úteis como inibidores de quinases. A invenção também refere-se a composições farmaceuticamente aceitáveis compreendendo os compostos da invenção, a métodos para utilizar os compostos e composições no tratamento de diversos distúrbios, e a processos para a preparação dos compostos.
HISTÓRICO DA INVENÇÃO
A busca por novos agentes terapêuticos vem sendo amplamente amparada nos últimos anos por uma melhor compreensão da estrutura das enzimas e de outras biomoléculas associadas com doenças alvo. Uma importante categoria de enzimas que tem sido objeto de estudos é a proteína quinase. As proteínas quinases constituem uma grande família de enzimas estruturalmente relacionadas que são responsáveis pelo controle de uma variedade de processos de transdução de sinal dentro da célula. Acredita-se que as proteínas quinase evoluíram a partir de um gene ancestral comum devido à conservação de sua estrutura e função catalítica. Quase todas as quinases contém um domínio catalítico similar de 250-300 aminoácidos. As quinases podem ser classificadas em famílias pelos substratos que fosforilam (ex: proteína- tirosina, proteína-serina/treonina, lipídeos, etc.). Os padrões ("motifs") seqüenciais foram identificados e geralmente correspondem a cada uma dessas famílias de quinase.
Em geral, as proteínas quinase mediam a sinalização intracelular efetuando uma transferência de grupo fosforila de um nucleosídeo trifosfato para um aceptor de proteína envolvido numa via de sinalização. Esses eventos de fosforilação atuam como chaves moleculares ativadas/desativadas ("on/off") que podem modular ou regular a função biológica de proteína alvo. Esses eventos de fosforilação são finalmente ativados em resposta a uma variedade de estímulos extracelulares e outros estímulos. Exemplos de tais estímulos incluem sinais de estresse ambiental e químico (ex: choque osmótico, choque térmico, radiação ultravioleta, endotoxina bacteriana, e H2O2), citocinas (ex: interleucina-1 (IL-I) e fator de necrose tumoral a (TBF-a)), e fatores de crescimento (ex: fator estimulante de colônias de macrófagos-granulócitos (GM- CSF) e fator de crescimento fibroblástico (FGF) ). Um estímulo extracelular pode afetar uma ou mais respostas celulares relacionadas com crescimento celular, migração, diferenciação, secreção de hormônios, ativação de fatores de transcrição, contração muscular, metabolismo de glicose, controle de síntese protéica, e regulação do ciclo celular.
Muitas doenças estão associadas com respostas celulares anormais ativadas por eventos mediados pela proteína quinase. Essas doenças incluem doenças autoimunes, doenças inflamatórias, doenças ósseas, doenças metabólicas, doenças neurológicas e neurodegenerativas, câncer, doenças cardiovasculares, alergias e asma, doença de Alzheimer, e doenças hormônio-relacionadas.
Conseqüentemente, há um esforço substancial na química medicinal no sentido de encontrar inibidores da proteína quinase que sejam eficazes como agentes terapêuticos. Porém, considerando a falta de opções de tratamento atualmente disponíveis para a maioria das condições associadas com as proteínas quinase, ainda existe uma grande necessidade de novos agentes terapêuticos que inibam esses alvos de proteína.
As proteínas Aurora são uma família de três serina/treonina quinases relacionadas (denominadas Aurora-A, -B e -C) que são essenciais para a progressão através da fase mitótica do ciclo celular. Especificamente, a Aurora-A desempenha um papel crucial na maturação e segregação centrossômica, na formação do fuso mitótico e na segregação constante de cromossomos.
A Aurora-B é uma proteína cromossomal transitória ("chromosomal passenger protein") que desempenha um papel central na regulação do alinhamento de cromossomos na placa metafásica, do ponto de controle de montagem do fuso e para a finalização correta da citocinese.
A superexpressão de Aurora-A, -B ou -C foi observada numa categoria de cânceres humanos, inclusive o colorretal, ovariano, gástrico e adenocarcinomas ductais invasivos. Diversos estudos demonstram agora que a depleção ou inibição de Aurora-A ou -B nas linhagens de células cancerosas humanas pelo siRNA, anticorpos negativos dominantes ou anticorpos neutralizantes interrompe o progresso através de mitose com o acúmulo de células com 4N DNA, e, em alguns casos, isso é acompanhado pela endoreduplicação e morte celular.
As proteínas quinase são alvos atrativos e comprovados para novos agentes terapêuticos para tratar uma categoria de doenças humanas, com exemplos de inibidores de quinase incluindo Gleevec® e Tarceva®. As Aurora quinases são alvos especialmente atrativos devido à sua associação com numerosos cânceres humanos e à função que desempenham na proliferação dessas células cancerosas. Existe, portanto, a necessidade de compostos que inibam as proteínas quinase.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
A presente invenção provê compostos e suas composições farmaceuticamente aceitáveis que são úteis como inibidores das proteínas Aurora quinase. Esses compostos são representados pela fórmula I: <formula>formula see original document page 5</formula>
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, onde R1, Rx, RY, Q e Ht são conforme aqui definido. Esses compostos e suas composições farmaceuticamente aceitáveis são úteis para inibir as quinases in vitro, in vivo, e ex vivo. Tais usos incluem tratar ou prevenir uma variedade de doenças, distúrbios ou condições, inclusive, porém não restritos a doenças autoimunes, doenças inflamatórias, doenças ósseas, doenças metabólicas, doenças neurológicas e neurodegenerativas, câncer, doenças cardiovasculares, alergias e asma, doença de Alzheimer, e doenças hormônio-relacionadas. Outros usos incluem o estudo das quinases em fenômenos biológicos e patológicos; o estudo de vias de transdução de sinal intracelular mediadas por tais quinases; e a avaliação comparativa de novos inibidores de quinase.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
A presente invenção provê um composto da fórmula I:
<formula>formula see original document page 5</formula>
ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, onde:
Ht é tiazol ou pirazol, sendo que cada Ht é opcionalmente e independentemente substituído com R2 e R2 Q é -O-, -NR'-, -S-, ou -C(R')2";
Rx é T1-R3 OU L-Z-R3;
Ry é T2-R10 OU L-Z-R10;
R1 é T3- (Anel D) ;
O Anel D é um anel monocíclico de 5-7 membros ou um anel bicíclico de 8-10 membros selecionado de um anel arila ou heteroarila, dito anel heteroarila tendo de 1- 4 heteroátomos no anel selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre, sendo que cada carbono de anel substituível do Anel D é independentemente substituído com oxo, T4-R5, ou V-Z-R5, e cada nitrogênio de anel substituído do Anel D é independentemente substituído com -R4;
cada T, T1, T2, T3, e T4 é independentemente uma cadeia de alquilideno C1-4 ou está ausente;
Z é uma cadeia de alquilideno C1-4 ou está ausente;
L é -0-, -S-, -SO-, -SO2-, -N(R6)SO2-, -SO2N(Re)-,
-N(Rs)-, -CO-, -CO2-, -N(R6)CO-, -N(R6)C(O)O-,
-N(R6)CON(Rs)-, -N(R6)SO2N(Re)-, -N(R6)N(Rs)-,
-C(O)N(Re)-, -OC(O)N(Re)-, -C(R6)2O-, -C(R6)2S-,
-C(R6)2SO-, -C(R6)2SO2-, -C(R6)2SO2N(Re)-, -C(R6)2N(Rs)-,
-C(R6)2N(R6)C(O)-, -C(R6)2N(R6)C(O)O-, -C(R6)=NN(Re)-,
-C(R6)=N-O-, -C(R6)2N(R6)N(Re)-, -C(R6)2N(R6)SO2N(Rs)-, or
-C(R6)2N(R6)CON(Re) -;
R2 e R2' são independentemente -R, -T-W-Rs, ou R8, ou R2 e R2' são tomados conjuntamente com os átomos intervenientes para formar um anel fundido, de 5-8 membros, insaturado ou parcialmente insaturado tendo de 0-3 heteroátomos de anel selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre, sendo que cada carbono de anel substituível de dito anel fundido formado por R2 e R2 é independentemente substituído com halo, oxo, -CN, -NO2, -R7, ou -V-R6, e cada nitrogênio de anel substituível de dito anel formado por R2 e R2' é independentemente substituído com R4;
cada R3 e R5 é independentemente -R, -halo, -OR, C (=0) R, -CO2R, -C0C0R, COCH2COR, -NO2, -CN, -S(O)R, - S(O)2R, -SR, -N(R4)2, -CON(R7)2, -SO2N(R7)2, -0C(=0)R, - N(R7)COR, -N(R7) CO2 (C1-6 alifático) , -N(R4)N(R4)2, -C=NN(R4)2, -C=N-OR, -N(R7)CON(R7)2, -N(R7)SO2N(R7)2, -N(R4)SO2R, or -OC (=0) N (R7)2; cada R é hidrogênio, um grupo alifático C1-6, um anel arila C6-10, um anel heteroarila tendo de 5-10 átomos de anel, ou um anel heterociclila tendo de 4-10 átomos de anel, o anel heteroarila ou heterociclila tendo de 1-4 heteroátomos de anel selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre, o grupo alifático e cada anel R sendo opcionalmente substituído com R9;
cada R4 é -R7, -COR7, -CO2 (alifático C1-6 opcionalmente substituído);
V é -0-, -S-, -S0-, -SO2-, -N(R6)SO2-, -SO2N(Rs)-, -N (R6) -, -CO-, -CO2-, -N(R6)CO-, -N(R6)C(O)O-, -N(R6)CON(Rs)-, -N(R6)SO2N(Rs)-, -N(R6)N(Re)-, -C(O)N(Rs)-, -OC(O)N(Rs)-, -C(R6)2O-, -C(R6)2S-, -C(R6)2SO-, -C(Rs)2SO2-, -C(R6)2SO2N(Re)-, C(R6)2N(Re)-, -C(R6)2N(R6)C(O)-, -C(R6)2N(R6)C(O)O-, C(R6)=NN(Re)-, -C(R6)=N-O-, -C(R6)2N(R6)N(Re)-, -C(R6)2N(R6)SO2N(Re)-, or -C(R6)2N(R6)CON(Re) - ;
W é -C(R6)2O-, -C(R6)2S-, -C(R6)2SO-, -C(R6)2SO2-, -C(R6)2SO2N(Re)-, -C(R6)2N(Re)-, -CO-, -CO2-, -C(R6)2OC(O)-, -C(R6)2OC(O)N(Re)-, -C(R6)2N(R6)CO-, -C(R6)2N(R6)C(O)O-, -C(Rs)=NN(Re)-, -C(R6)=N-O-, -C(R6)2N(R6)N(Re) -, -C(R6)2N(R6)SO2N(Re) -C(R6)2N(R6)CON(Re)-, or -CON(Re)-;
cada R6 é independentemente hidrogênio ou um grupo alifático Ci-6 opcionalmente substituído, ou dois grupos R6 no mesmo átomo de nitrogênio são tomados conjuntamente com o átomo de nitrogênio para formar um anel heterociclila ou heteroarila de 4-6 membros opcionalmente substituído;
cada R7 é independentemente hidrogênio ou um grupo alifático C1-6 opcionalmente substituído, ou dois R7 no mesmo nitrogênio são tomados conjuntamente com o nitrogênio para formar um anel heterociclila ou heteroarila de 5-8 membros opcionalmente substituído; cada R8 é halogênio, -CN, ou -NO2;
cada R9 é -R', -halo, -OR', -C(=0)R', -CO2R', -COCOR', COCH2COR', -NO2, -CN, -S(O)R', -S(O)2R', -SR', -N(R')2, -CON(Rf)2, -SO2N(R)2, -0C(=0)R', -N(Rf)COR', -N(R') CO2 (Ci-6 aliphatic) , -N (R') N (R') 2, -C=NN(Rf)2, -C=N-OR', -N (R' ) CON (R)2, -N (R') SO2N (R') 2 , -N(Ri)SO2R', or -OC(=0)N(R')2i
cada R10 é um anel heterocíclico de 4 membros contendo de 1-2 heteroátomos selecionados de O, NR11, e S; cada R10 é opcionalmente substituído com 0-3 ocorrências de J;
cada J é independentemente -halo, -OR, oxo, alifático C1-6, -C (=0) R, -CO2R, -C0C0R, COCH2COR, -NO2, -CN, - S(O)R, -S(O)2R, -SR, -N(R4)2, -CON(R7)2, -S02N(R7)2, - OC (=0) R, -N(R7)COR, -N(R7) CO2 (Ci-6 aliphatic), N(R4)N(R4)2, =NN(R4)2, =N-OR, -N(R7)CON(R7)2, N(R7)SO2N(R7)2, -N(R4)SO2R, or -OC (=0) N (R7) 2 ; OU 2 grupos J, no mesmo átomo ou em átomos diferentes, juntamente com o átomo(s) ao qual estão ligados, formam um anel de 3-8 membros, saturado, parcialmente saturado ou insaturado tendo de 0-2 heteroátomos selecionados de 0, N, ou S;
cada R11 é -R7, -COR7, -CO2 (alifático C1-6 optionalmente substituído), -CON(R7)2, ou -SO2R7;
cada R' é independentemente hidrogênio ou um grupo alifático C1-6 opcionalmente substituído com 0-4 ocorrências de NH2, NH(alifático C1-4) , N(alifático C1- 4)2, halogênio, alifático C1-4, OH, O(alifático C1-4) , NO2, CN, CO2H, CO2 (alifático C1-4) , 0 (haloalifático C1-4) , ou haloalifático C1-4; ou, dois R', juntamente com o(s) átomo(s) ao(s) qual(ais) está(ão) ligados, formam um carbociclila ou heterociclila de 3-6 membros opcionalmente substituído. Em algumas concretizações, a presente invenção provê um composto de fórmula I: ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, onde: Ht é tiazol ou pirazol, onde cada anel é opcional e independentemente substituído com R2 e R2' ; Q é -O-, -NR'-, -S-, ou -C(R7)2-;
Rx é H, alifático C1-6, NO2, CN, halo, NH2, N(alifático C1-4) , N(alifático C1-4)2, O(alifático C1-4) , OH, ou -N(C=O) (alifático C1-4) ; onde dito alifático é opcionalmente substituído com 1-3 fluoro; Ry é T2-R10 OU L-Z-R10; R1 é T3-(Anel D);
O Anel D é um anel arila ou heteroarila monocíclico de 5-7 membros, onde dito heteroarila possui de 1-4 heteroátomos de anel selecionados de 0, N ou S; o Anel D pode ser opcionalmente fundido com o Anel D';
O Anel D' é um anel de 5-8 membros, aromático, parcialmente saturado ou totalmente insaturado contendo de 0-4 heteroátomos de anel selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre; cada carbono de anel substituível do Anel D e do Anel D' é independentemente substituído com oxo, T4-R5, ou V-Z-R5;
cada nitrogênio de anel substituível do Anel D e do Anel D' é independentemente substituído com -R4; cada T, T3, e T4 é independentemente uma cadeia de alquilideno C1-4 ou está ausente;
Z é uma cadeia de alquilideno C3.-4 ou está ausente; L é -0-, -S-, -SO-, -SO2-, -N(R6)SO2-, -SO2N(Re)-, -N (R6) -, -CO-, -CO2-, -N(R6)CO-, -N(R6)C(O)O-, -N(R6)CON(Rs)-, -N(R6)SO2N(Re)-, -N(R6)N(Re)-,
-C(O)N(Re)-, -OC(O)N(Re)-, -C(Re)2O-, -C(R6)2S-, -C(R6)2SO-, -C(R6)2SO2-, -C(R6)2SO2N(Re)-, -C(R6)2N(Rs)-, -C(R6)2N(R6)C(O)-, -C(R6)2N(Re) C(O)O-, -C(R6)=NN(Re)-, -C(R6)=N-O-, -C(R6)2N(R6)N(Re)-, -C(Re)2N(Re)SO2N(Re)-, or -C(R6)2N(R6)CON(Re) - ;
T2 está independentemente ausente ou é uma cadeia de alquilideno Ci-I0 alkylidene, onde até seis unidades C da cadeia de alquilideno são opcionalmente substituídas com -0-, -C (=0)-, -S(O)-, -S(O)2-, -S-, ou -N (R4) -; T2 é opcionalmente substituído com 0-6 grupos Jt;
R2 e R2' são independentemente -R, -T-W-R6, ou R8, ou R2 e R2' são tomados em conjunto com seus átomos intervenientes para formar um anel fundido, de 5-8 membros, insaturado ou parcialmente insaturado tendo de 0-3 heteroátoamos de anel selecionados de nitrogênio, oxigênio, ou enxofre, onde cada carbono de anel substituível de dito anel fundido formado por R2 e R2' é independentemente substituído com R4;
R5 é -R, -halo, -0R, -C(=0)R, -CO2R, -C0C0R, COCH2COR, -NO2, -CN, -S(O)R, -S(O)2R, -SR, -N(R4)2, -CON(R7)2, -SO2N(R7)2, -OC (=0) R, -N(R7)COR, -N (R7) CO2 (alifático C1-6), -N(R4)N(R4)2, -C=NN(R4)2, -C=N-OR, -N(R7)CON(R7)2, -N(R7)SO2N(R7)2, -N(R4)SO2R, ou -OC (=0) N (R7) 2; cada R é hidrogênio, um grupo alif ático C1-10, um anel arila C6-10, um anel heteroarila tendo de 5-10 átomos de anel, ou um anel heterociclila tendo de 4-10 átomos de anel, o anel heteroarila ou heterociclila tendo de 1-4 heteroátomos de anel selecionados de nitrogênio, oxigênio, ou enxofre, o grupo alifático e cada R sendo opcionalmente substituído com 0-6 R9,- cada R4 é -R7, -COR7, -CO2 (alifático C1-6 opcionalmente substituído), -CON(R7)2, ou -SO2R7;
V é -0-, -S-, -S0-, -SO2-, -N(Re)SO2-, -SO2N(Re)-, -N(Re)-, -CO-, -CO2-, -N(R6)CO-, -N(Re)C(O)O-, -N(R6)CON(Re)-, -N(R6)SO2N(Re)-, -N(R6)N(Re)-, -C(O)N(Re)-, -OC(O)N(Re)-, -C(R6)2O-, -C(R6)2S-, -C(R6)2SO-, -C(R6)2SO2-, -C(R6)2SO2N(Re)-, C(Re)2N(Re)-, -C(Re)2N(R6)C(O)-, -C(R6)2N(R6)C(O)O-, C(Re)=NN(Re)-, -C(R6)=N-O-, -C(R6)2N(R6)N(R6)-, -C(R6)2N(R6)SO2N(R6)-, or -C(R6)2N(R6)CON(R6) - ;
W é -C(R6)2O-, -C(R6)2S-, -C(R6)2SO-, -C(R6)2SO2-, -C(R6)2SO2N(R6)-, -C(R6)2N(R6)-, -CO-, -CO2-,
-C(R6)2OC(O)-, -C(R6)2OC(O)N(R6)-, -C(R6)2N(R6)CO-,
-C(R6)2N(R6)C(O)O-, -C(R6)=NN(R6)-, -C(R6)=N-O-,
-C(R6)2N(R6)N(R6) -, -C(R6)2N(R6)SO2N(R6) -,
-C(R6)2N(R6)CON(R6)-, OU -CON(R6)-;
cada R6 é independentemente hidrogênio ou alifático C1-6 opcionalmente substituído com 0-3 J6; ou dois grupos R6 no mesmo átomo de nitrogênio são tomados conjuntamente com o átomo de nitrogênio para formar um anel heterociclila ou heteroarila de 4-8 membros; onde dito anel heterociclila ou heteroarila é opcionalmente substituído com 0-4 J6;
cada R7 é independentemente hidrogênio; alifático C1-6; um heteroarila de 5 membros contendo de 0-4 heteroátomos selecionados de 0, N ou S; ou fenila; cada R7 é opcionalmente substituído com 0-3 J7; ou dois R7 no mesmo nitrogênio são tomados conjuntamente com o nitrogênio para formar um anel heterociclila ou heteroarila de 4-8 membros opcionalmente substituído; onde dito anel heterociclila ou heteroarila é opcionalmente substituído com 0-4 J7; cada R8 é halogênio, -CN, ou -NO2;
cada R9 é -R', -halo, -OR', -C(=0)R', -CO2R', -C0C0R', COCH2COR', -NO2, -CN, -S(O)R', -S(O)2R', -SR', -N(R')2, -CON(Rf)2, -SO2N (R)2, -OC (=0) R' , -N(R')C0R',
-N(R ) CO2 (alifático C1-6) , -N(R1)N(Rr)2, -N(Rf)CON(Rf)2, -N (R') SO2N (R)2, -N (R') SO2R', -OC (=0) N (R') 2 , =NN(R')2, =N-OR', =NR', OU =0;
cada R10 é um anel heterocíclico de 4 membros contendo 1 heteroátomo selecionado de 0, NR11, e S; cada R10 é opcionalmente substituído com 0-6 ocorrências de J; cada J e JT é independentemente R, -halo, -0R, -C(=O)R, -CO2R, -C0C0R, COCH2COR, -NO2, -CN, -S(O)R, -S(O)2R, -SR, -N(R4)2, -CON(R7)2, -SO2N (R7) 2, -OC (=0) Rf -N(R7)COR, -N(R7) CO2 (alifático Ci-e) , -N(R4)N(R4)2, =NN(R4)2, =N-OR, =NR', =0, -N(R7)CON(R7)2, -N(R7)SO2N(R7)2, -N(R4)SO2R, - OC (=0)N(R7)2, ou -OP (=0) (OR")2; ou
cada J6 e J7 é independentemente NH2, NH(alifático C1-4), N (alifático C1-4)2, halogênio, alifático C1-4, OH, O (alifático C1-4) , NO2, CN, CO2H, CO2 (alifático C1-4), O (haloalifático C1-4) , ou haloalifático C1-4; 2 grupos J ou Jt , no mesmo átomo ou em átomos diferentes, juntamente com o(s) átomo(s) ao qual(quais) cada conjunto de J ou Jt estão ligados, formam um anel de 3-8 membros saturado, parcialmente saturado ou insaturado tendo de 0-2 heteroátomos selecionados de O, N ou S; onde 1-4 átomos de hidrogênio no anel formado pelos 2 grupos J ou Jt é opcionalmente substituído com halo, alquila Ci-3, ou -0(alquila C1-3); onde dito alquila C3-3 é opcionalmente substituído com 1-3 flúor; ou
dois átomos de hidrogênio no mesmo átomo no anel formado pelos 2 grupos J ou Jt são opcionalmente substituídos com oxo;
cada R11 é -R7, -COR7, -CO2 (alifático C1-6 opcionalmente substituído) -CON(R7)2, ou -SO2R7;
cada R' é independentemente hidrogênio ou um grupo alifático C1-6 opcionalmente substituído com 0-4 ocorrências de NH2, NH(alifático C1-4) , N(alifático C1- 4)2, halogênio, alifático C^4, OH, 0 (alifático C1-J , NO2, CN, CO2H, CO2 (alifático C1-J, CONH2, CONH (alifático C1-J, CON (C1-4alifático) 2, 0 (haloalifático C1-J , ou haloalif ático C1-4; ou, dois R', juntamente com o(s) átomo(s) ao(s) qual estão ligados formam =0, um
carbociclica ou heterociclila de 3-6 membros opcionalmente substituído;
cada R" é independentemente H ou alquila C1-2.
Em algumas concretizações, Ht é onde cada anel é opcionalmente e independentemente substituído com R2 e R2'.
Em algumas concretizações, Q é heteroátomo selecionado de -0-, -NR'- ou -S-. Em algumas concretizações, Q é -NR'- ou -S-. Em algumas concretizações, Q é -NR'- ou -O-. Em algumas concretizações, Q é -S-. Em outra concretização, é -O-. Em outras concretizações ainda, Q é -NR'-.
Em algumas concretizações, R1 é T3-(Anel D);
Em algumas concretizações, o Anel D é um arila ou heteroarila de 5-7 membros opcionalmente substituído. Em outras concretizações, o Anel D é um arila ou heteroarila de 8-10 membros opcionalmente substituído.
Em algumas concretizações, o Anel D é um anel arila de 5-10 membros opcionalmente substituído. En outras concretizações, o Anel D é um anel heteroarila de 5-10 membros opcionalmente substituído. Em algumas concretizações, o Anel D é um anel arila ou heteroarila monocíclico de 5-6 membros. Em algumas concretizações, o Anel D' é fundido com o anel D. Em algumas concretizações, o Anel D é fenila. Em algumas concretizações, o Anel D' é fenila ou imidazol. Em algumas concretizações, o anel bicíclico formado pela fusão do Anel D' e do Anel D (Anel D-D') é naftila, benzimidazol, quinolina, ou isoquinolina. Em outras concretizações, o Anel D-D' é benzimidazol, isoquinolina, quinolina ou isoindolinona.
Conforme é entendido por um habilitado na técnica, quando dois anéis são fundidos, os dois anéis compartilham dois átomos adjacentes e também a ligação ou ligações entre os átomos adjacentes. Por exemplo, fenila fundido com pirimidina poderia formar quinazolina. fundido cora
<formula>formula see original document page 14</formula>
poderia formar
<formula>formula see original document page 14</formula>
Fenila fundido com pirrolidina poderia formar indolina.
<formula>formula see original document page 14</formula>
fundido com
<formula>formula see original document page 14</formula>
poderia formar
<formula>formula see original document page 14</formula>
O anel fundido pode ser girado em qualquer orientação quimicamente estável. Por exemplo, um fenila fundido com um imidazol poderia formar um de três possíveis compostos:
<formula>formula see original document page 14</formula>
Em algumas concretizações, o Anel D é monosubstituído na posição 4 com T4-R5 ou V-Z-R5. Em algumas concretizações, o Anel D é opcionalmente substituído na posição 4 com V-Z-R5. Era algumas concretizações, V é - N(R6)CO-, -C(O)N(Re)-, -0-, -N (R6)-, ou -N(R6)SO2-. Em outras concretizações, V é -N(R6)CO- ou -C(O)N(Re)-. Em algumas concretizações, T3 está ausente. Em outras concretizações, T3 é uma cadeia de
fundido com
H
poderia formar alquilideno C1-4.
Em outras concretizações, T2 é uma cadeia de
alquilideno C1-10, onde até seis unidades C da cadeia de alquilideno são opcionalmente substituídas com -0-, C(=0)-, -S(O)-, -S(O)2-, -S-, OU -N (R4) - .
Em algumas concretizações, Z é uma cadeia de alquilideno Ci-4. Em outras concretizações, Z está ausente.
Em certas concretizações, os substituintes em R6 e R' são independentemente selecionados de R9.
Em outra concretização, o grupo alifático opcionalmente substituído de R6 é um grupo alifático 0χ.4. Em outra concretização, R2 é H ou alifático Ci-6 (que é não substituído em certas concretizações). Em outra concretização, R2 é H ou alifático Ci-3 (que é não substituído em certas concretizações). Em outra concretização, R2 é H ou alifático Ci-3 (que é não substituído em certas concretizações). Em algumas concretizações, R2 é alifático Ci_6 e R2 é H.
Em uma concretização, Rx é -R, halogênio, -NO2, -CN, - CO2R, -0R, ou -SR.
Em outra concretização, Rx é H, halogênio, -NO2, ou - CN.
Em outra concretização, Rx é H ou F. Em algumas concretizações, Rx é H.
Em uma concretização, Ry é T2-T10. Em algumas concretizações, T2 está ausente. Em outras concretizações, R10 é um anel heterocíclico de 4 membros opcionalmente substituído contendo 1 heteroátomo. Em algumas concretizações, R10 é uma azetidina opcionalmente substituída. Em algumas concretizações, Ry é representado pela fórmula i: Em outra concretização, Ry é L-Z-R10. Em algumas concretizações, L é -O-, -N (R6) -, ou -S-. Em algumas concretizações, Z é uma cadeia de alquilideno Ci-4. Em outras concretizações, Z está ausente. Em algumas concretizações, RY é representado pela fórmula ii-a:
<formula>formula see original document page 16</formula>
Em outras concretizações, R^y é representado pela fórmula ii-b:
<formula>formula see original document page 16</formula>
Em algumas concretizacoes, R^11 e H. Em outras concretizações, R^11 é um grupo alifático opcionalmente substituído. Em outras concretizações ainda, R^11 è - COR7, -CO2.(alifático C1-6 opcionalmente substituído), - CON(R7)2, ou -SO2R7.
Em uma concretização, um composto da presente invenção é representado pela fórmula Ia:
<formula>formula see original document page 16</formula>
onde as variáveis são conforme aqaii definidas. Em uma concretização, um composto da presente invenção é representado pela fórmula Ib:
<formula>formula see original document page 17</formula>
onde as variáveis são conforme aqui definidas. Em uma concretização da fórmula Ib, R2 é hidrogênio. Em uma concretização, um composto da presente invenção é representado pela fórmula II-a:
<formula>formula see original document page 17</formula>
onde
R2 , R2 , Rx, and Q, são conforme aqui definidos; O Anel D é um arila ou heteroarila de 6 membros; e R5 é um arila C6-io opcionalmente substituído com R9.
Em algumas concretizações, o Anel D é fenila. Em outras concretizações, R5 é fenila opcionalmente substituído com R9. Em algumas concretizações, dito fenila é substituído na posição orto com R9. Em algumas concretizações, R9 é halogênio, CF3, alquila C1-3, -S-(alquila C1-3) / ou OCF3.
Em outra concretização, um composto da presente invenção é representado pela fórmula II-b:
<formula>formula see original document page 18</formula>
onde
R2, R2', Rx, Q, e J são conforme aqui definidos; O Anel D é fenila ou um heteroarila de 6 membros contendo 1-2 heteroátomos selecionados de O, N ou S; e R5 é um arila C6-io opcionalmente substituído com R9. Em algumas concretizações, o Anel D é fenila. Em outras concretizações, R6 é fenila opcionalmente substituído com R9. Em algumas concretizações, dito fenila é substituído com R9. Em algumas concretizações, dito fenila é substituído na posição orto com R9. Em algumas concretizações, R9 é halogênio, CF3, alquila C1-3, -S-(alquila C1-3) , ou. OCF3. Em outras concretizações, J é alquila C1-4, alquila C3-6 O (C-alquila1.34) , OH, CN, ou F. Em outras concretizações, J é CH3, OCH3, O(CH2CH3), OCH(CH3)2, OC(CH3)3, OH, CN, ou F.
Em outra concretização ainda, um composto da presente invenção é representado pela fórmula II-c: <formula>formula see original document page 19</formula>
onde:
R2, R2', Rx, e Q, são conforme aqui definidos; o Anel D é fenila ou um heteroarila de 6 membros contendo 1-2 heteroátomos selecionados de O, N, ou S; e R5 é um alquila C1-6 opcionalmente substituído com R9. Em algumas concretizações, R5 é opcionalmente substituído com 1-6 grupos halogênio. Em algumas concretizações, 1-3 grupos halogênio. Em algumas concretizações, dito halogênio é fluoro. Em outra concretização, um composto da presente invenção é representado pela fórmula II-d:
<formula>formula see original document page 19</formula>
R2, R2', Rx, Q, e J são conforme aqui definido; O Anel D é fenila ou um heteroarila de 6 membros contendo 1-2 heteroátomos selecionados de O, N, ou S; e R5 é alquila C1-6 ou cicloalif ático C3-6, onde dito alquila C1-6 ou cicloalifático C3-6 é opcionalmente substituído com 0-6 R9. Em algumas concretizações, o Anel D é fenila. Em algumas concretizações, R5 é substituído com 1-6 R9. Em algumas concretizações, R9 é halogênio. Em outras concretizações, R9 é CF3.
Em algumas concretizações, a azetidina de fórmula II-d é substituída com 1-2 grupos J onde J é selecionado de alifático C1-6, cicloalifático C3-6, halogênio, OH, OR, NH2, NH(C1-6), N(C1-6)2, CN ou um heterociclila de 4-7 membros contendo 1-2 heteroátomos selecionados de O, N e S.
Em algumas concretizações, dito grupo heterociclila é um heterociclila de 3-6 membros contendo 1-2 heteroátomos selecionados de O, N ou S. Em algumas concretizações, dito heterociclila é azetidina, morfolina, piperidina, piperazina, ou pirrolidina.
Em algumas concretizações, a azetidina de fórmula II-d é mono-substituída com um heterociclila de 4-7 membros contendo 1-2 heteroátomos selecionados de O, N e S.
Em outras concretizações, a azetidina de fórmula II-d é substituída com 2 grupos J. Em algumas concretizações,
J é selecionado de alifático C1-6, cicloalifático C3-6, ou halogênio. Em algumas concretizações, J é cicloalifático C3.
Em outras concretizações, a azetidina de fórmula II-d é substituído com dois grupos J; um heterociclila de 4-7 membros contendo 1-2 heteroátomos selecionados de 0, N e S; e um grupo alquila C1-3. Em algumas concretizações, dito grupo alquila C1-3 é metila. Em algumas concretizações, o heterociclila de 4-7 membros é ligado à azetidina via átomo de nitrogênio. Em algumas concretizações, o heterociclila de 4-7 membros é ligado à posição 3 da azetidina. Em algumas concretizações, dito heterocidlila é azetidina, morfolina, piperidina, piperazina, ou pirrolidina. Em algumas concretizações, o halogênio de J é fluoro. Em outra concretização, um composto da presente invenção é representado pela fórmula II-e: <formula>formula see original document page 21</formula>
R2, R2', RX, Q, J, e o Anel D' sao coforme aqui definidos;
O Anel D e fenila ou um heteroarila de 6 membros contendo de 1-2 heteroatomos selecionados de O,N, ou S; e
R5 é alifático Ci-6, cicloalifático C3-6, ou halogênio, onde dito alifático C1^ ou cicloalifático C3.6 é opcionalmente substituído com R9. Em algumas concretizações, R9 é halogênio. Em outras concretizações, o Anel D' é fenila., um heteroarila de 5-6 membros, ou um heterociclila de 5-6 membros; onde dito heteroarila ou heterociclila contém de 1-2 heteroátomos selecionados de O, N ou S. Em outras concretizações ainda, a azetidina da fórmula ΙΙ-e é substituída com 1-2 grupos J onde J é selecionado de alifático Ci-6, cicloalifático C3-6, halogênio, OH, OR, NH2, NH(Ci-6), N (Ci-õ) 2/ CN, ou um heterociclila de 4-7 membros contendo 1-2 heteroátomos selecionados de O, N e S. Em algumas concretizações, D-D' é benzimidazol, isoquinolina, quinolina, ou isoindolinona. Em outra concretização ainda, um composto da presente invenção é representado pela fórmula II-f: <formula>formula see original document page 22</formula>
onde
R21 R2', Rx, Q, J7 e o Anel D são conforme aqui definidos;
0 Anel D é fenila ou um heteroarila de 6 membros contendo 1-2 heteroátomos selecionados de O, N ou S; e R5 é um anel arila C6-10, um anel heteroarila tendo de 5-10 átomos de anel, ou um anel heterociclila tendo de 4-10 átomos de anel, o anel heteroarila ou heterociclila tendo de 1-4 heteroátomos de anel, selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre. Em uma concretização, um composto da presente invenção é representado pela fórmula II-g:
<formula>formula see original document page 22</formula>
onde
R2, R2', Rx, Q, J, R4, e o Anel D são conforme aqui definidos;
O Anel D é fenila ou um heteroarila de 6 membros contendo de 1-2 heteroátomos selecionados de O, N, ou algumas
S7- e
R5 é alquila Ci-6 opcionalmente substituído com R9.
Em algumas concretizações, Q é O, -NR'-, ou S.
Em algumas concretizações, Q é 0 ou S; em concretizações, Q é S.
Em outra concretização, um composto da presente invenção é representado pela fórmula II-h:
<formula>formula see original document page 23</formula>
Em algumas concretizações, as variáveis são conforme representadas nos compostos da Tabela 1 ou Tabela 2.
Em uma concretização, a presente invenção inclui um composto selecionado da Tabela 1 (ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo):
Tabela 1
<table>table see original document page 23</column></row><table> <table>table see original document page 24</column></row><table> <table>table see original document page 25</column></row><table> <table>table see original document page 26</column></row><table> <table>table see original document page 27</column></row><table> <table>table see original document page 28</column></row><table> <table>table see original document page 29</column></row><table> <table>table see original document page 30</column></row><table> <table>table see original document page 31</column></row><table> <table>table see original document page 32</column></row><table> <table>table see original document page 33</column></row><table> <table>table see original document page 34</column></row><table> <table>table see original document page 35</column></row><table> <table>table see original document page 36</column></row><table> <table>table see original document page 37</column></row><table> <table>table see original document page 38</column></row><table> <table>table see original document page 39</column></row><table> <table>table see original document page 40</column></row><table> <table>table see original document page 41</column></row><table> <table>table see original document page 42</column></row><table> <table>table see original document page 43</column></row><table> <table>table see original document page 44</column></row><table> <table>table see original document page 45</column></row><table> <table>table see original document page 46</column></row><table> <formula>formula see original document page 47</formula> <table>table see original document page 48</column></row><table> <table>table see original document page 49</column></row><table> <table>table see original document page 50</column></row><table> <table>table see original document page 51</column></row><table> <table>table see original document page 52</column></row><table> <table>table see original document page 53</column></row><table> <table>table see original document page 54</column></row><table> <table>table see original document page 55</column></row><table>
Para fins da presente invenção, os elementos químicos são identificados de acordo com a Tabela Periódica de Elementos, versão CAS, Handbook of Chemistry and Physics, 75thEd. Adicionalmente, princípios gerais de química orgânica são descritos em textos conhecidos pelo habilitado na técnica, inclusive, por exemplo, "Organic Chemistry", Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito: 1999, e "Marchas Advanced Organic Chemistry", 5thEd., Ed.: Smith, M.B. e March, J., John Wiley & Sons, New York: 2001, cujos conteúdos são aqui incorporados por referência.
Conforme aqui descrito, uma faixa numérica especificada de átomos inclui qualquer número inteiro nela contida. Por exemplo, um grupo que possui de 1-4 átomos poderia ter 1, 2, 3, ou 4 átomos.
Conforme aqui descrito, os compostos da invenção podem ser opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes, tais como geralmente ilustrados acima, ou conforme exemplificado por classes, subclasses e espécies específicas da invenção. Será apreciado que a expressão "opcionalmente substituído" é utilizada alternativamente com a expressão "substituído ou não substituído". Em geral, o termo "substituído", seja precedido ou não pelo termo "opcionalmente", refere-se à substituição de radicais hidrogênio numa dada estrutura com o radical de um substituinte especificado. Salvo se indicado de outra forma, um grupo opcionalmente substituído pode ter um substituinte em cada posição substituível do grupo e, quando mais de uma posição em qualquer dada estrutura puder ser substituída com mais de um substituinte selecionado de um grupo especificado, o substituinte pode ser ou igual ou diferente em cada posição. Combinações de substituintes previstos na presente invenção são pref erivelmente os que resultam na formação de compostos estáveis ou quimicamente viáveis. O termo "estável", conforme aqui utilizado, refere-se a compostos que não são substancialmente alterados quando submetidos a condições que permitam sua produção, detecção e preferivelmente sua recuperação, purificação, e uso para uma ou mais das finalidades aqui descritas. Em algumas concretizações, um composto estável ou quimicamente viável é um composto não substancialmente alterado quando mantido a uma temperatura de 4O0C ou menos, na ausência de umidade ou de outras condições quimicamente reativas, por pelo menos uma semana.
O termo "alifático" ou "grupo alifático" e similares, conforme aqui utilizado, significa um hidrocarboneto não ramificado ou ramificado, de cadeia linear ou cíclico, substituído ou não substituído que é completamente saturado ou que contém uma ou mais unidades de insaturação possuindo um único ponto de ligação ao restante da molécula. Salvo se especificado de outra forma, grupos alifáticos contém de 1-20 átomos de carbono alifáticos. Em algumas concretizações, os grupos alifáticos contém de 1-10 átomos de carbono alifáticos. Em outras concretizações, grupos alifáticos contém de 1-8 átomos de carbono alifáticos. Em outras concretizações ainda, os grupos alifáticos contém de 1- 6 átomos de carbono alifáticos, e em outras concretizações ainda os grupos alifáticos contém de 1-4 átomos de carbono alifáticos. Grupos alifáticos apropriados incluem, porém não se restringem a grupos alquila, alquenila, ou alquinila lineares ou ramificados, substituídos ou não substituídos. Exemplos específicos incluem, porém não se restringem a metila, etila, isopropila, n-propila, sec-butila, vinila, n- butenila, etinila e ter-butila.
O termo "cicloalifático" (ou "carbociclo" ou "carbociclila" ou "cicloalquila" e similares) refere-se a um hidrocarboneto monocíclico C3-C8 ou hidrocarboneto bicíclico C8-Ci2 que é completamente saturado ou que contém uma ou mais unidades de insaturação, mas que não é aromático, que possui um ponto único de ligação ao restante da molécula onde qualquer anel individual em dito sistema de anel bicíclico possui de 3-7 membros. Grupos cicloalifáticos apropriados incluem, porém não se restringem a grupos cicloalquila e cicloalquenila. Exemplos específicos incluem, porém não se restringem a ciclohexila, ciclopropenila, e ciclobutila. Nos compostos da presente invenção, os anéis incluem anéis linearmente fundidos, em ponte, ou espirocíclicos. Exemplos de grupos cicloalifáticos em ponte incluem, porém não se restringem a biciclo [3.3.2]decano, biciclo[3.1.1]heptano e biciclo [3.2.2]nonano.
O termo "heterociclo", "heterociclila", "heterocicloalifático" ou "heterocíclico" e similares, conforme aqui utilizados, significa sistemas de anel não aromáticos, monocíclicos, bicíclicos ou tricíclicos, nos quais um ou mais membros de anel são um heteroãtomo independentemente selecionado. Em
"heterocíclico" possui de três a quatorze membros de anel nos quais um ou mais membros de anel é um heteroátomo independentemente selecionado de oxigênio, enxofre, nitrogênio ou fósforo, e cada anel no sistema contém de 3 a 7 membros de anel. Exemplos de heterociclos em ponte incluem, porém não se restringem a 7-aza-biciclo [2.2.1]heptano e 3-aza- biciclo [3.2.2] nonano.
Heterociclos apropriados incluem, porém não se restringem a 3-lH-benzimidazol-2-ona, 3 -(1-alquil)- benzimidazol-2-ona, 2-tetrahidrofuranila, 3- tetrahidrofuranila, 2-tetrahidrotiofenila, 3- tetrahidrotiofenila, 2-morfolino, 3-morfolino, 4- morfolino, 2-tiomorfolino, 3-tiomorfolino, 4- tiomorfolino, 1-pirrolidinila, 2-pirrolidinila, 3- pirrolidinila, 1-tetrahidropiperazinila, 2- tetrahidropiperazinila, 3-tetrahidropiperazinila, 1- piperidinila, 2-piperidinila, 3-piperidinila, 1- pirazolinila, 3-pirazolinila, 4-pirazolinila, 5- pirazolinila, 1-piperidinila, 2-piperidinila, 3- piperidinila, 4-piperidinila, 2-tiazolidinila, 3- tiazolidinila, 4-tiazolidinila, 1-imidazolidinila, 2- imidazolidinila, 4-imidazolidinila, 5-imidazolidinila, indolinila, tetrahidroquinolinila, tetrahidroisoquinolinila, benzotiolano, benzoditiano, e 1,3-dihidro-imidazol-2-ona.
Conforme aqui utilizado, o termo "Ht" é intercambiável com "Het" e
<formula>formula see original document page 58</formula>
0 termo "heteroátomo" significa um ou mais de oxigênio, enxofre, nitrogênio, fósforo, ou silício (inclusive, qualquer forma oxidada de nitrogênio, enxofre, fósforo ou silício; a forma quaternizada de qualquer nitrogênio básico ou; um nitrogênio substituível de um anel heterocíclico, por exemplo N (como em 3,4-dihidro-2H- pirrolila) , NH ( como em pirrolidinila) ou NR+ (como em pirrolidinila N-substituído)).
O termo "insaturado" conforme aqui utilizdo, significa que uma porção possui uma ou mais unidades de insaturação.
O termo "alcoxi" ou 11 tioalquila", conforme aqui utilizados, refere-se a um grupo alquila, conforme previamente definido, ligado à cadeia carbônica principal através de um átomo de oxigênio ("alcoxi") ou de enxofre ("tioalquila").
Os termos "haloalquila", "haloalquenila" e "haloalcoxi" significam alquila, alquenila ou alcoxi, conforme o caso, substituído com um ou mais átomos de halogênio. 0 termo "halogênio" significa F, Cl, Br ou I.
O termo "arila" usado isoladamente ou como parte de uma porção maior como em "aralquila", "aralcoxi" ou "ariloxialquila" refere-se a sistemas de anel monocíclicos, bicíclicos e tricíclicos com um total de cinco a quatorze membros de anel, onde pelo menos um anel no sistema é aromático e onde cada anel no sistema contém de 3 a 7 membros de anel. 0 termo "arila" pode ser usado alternativamente com o termo "anel arila". 0 termo "arila" também refere-se a sistemas de anel heteroarila conforme definido abaixo.
O termo "heteroarila" usado isoladamente ou como parte de uma porção maior como em "heteroaralquila" ou "heteroarilalcoxi" refere-se a sistemas de anel monocíclicos, bicíclicos ou tricíclicos com um total de cinco a quatorze membros de anel, onde pelo menos um anel no sistema é aromático, pelo menos um anel no sistema contém um ou mais heteroátomos, e onde cada anel no sistema contém de 3 a 7 membros de anel. 0 termo "heteroarila" pode ser usado permutavelmente com o termo "anel heteroarila" ou com o termo "heteroaromático". Anéis heteroarila apropriados incluem, porém não se restringem a 2-furanila, 3- furanila, N-imidazolila, 2-imidazolila, 4-imidazolila, 5-imidazolila, benzimidazolila, 3-isoxazolila, 4- isoxazolila, 5-isoxazolila, 2-oxazolila, 4-oxazolila, 5-oxazolila, N-pirrolila, 2-pirrolila, 3-pirrolila, 2- piridila, 3-piridila, 4-piridila, 2-pirimidinila, 4- pirimidinila, 5-pirimidinila, piridazinila (e.g., 3- piridazinila), 2-tiazolila, 4-tiazolila, 5-tiazolila, tetrazolila (e.g., 5-tetrazolila), triazolila (ex: 2- triazolila e 5-triazolila), 2-tienila, 3-tienila, benzofurila, benzotiofenila, indolila (ex: 2-indolila), pirazolila (ex: 2-pirazolila), isotiazolila, 1,2,3- oxadiazolila, 1,2,5-oxadiazolila, 1, 2,4-oxadiazolila, 1,2,3-triazolila, 1, 2 , 3-tiadiazolila, 1,3,4- tiadiazolila, 1,2,5-tiadiazolila, purinila, pirazinila, 1,3,5-triazinila, quinolinila (ex: 2-quinolinila, 3- quinolinila, 4-quinolinila), e isoquinolinila (ex: 1- isoquinolinila, 3-isoquinolinila, ou 4-isoquinolinila). Um grupo arila (incluindo aralquila, aralcoxi, ariloxialquila e similares) ou grupo heteroarila (incluindo heteroaralquila e heteroarilalcoxi e similares) pode conter um ou mais substituintes e assim pode ser "opcionalmente substituído". Salvo se definido de outra forma acima e nesta patente, substituintes apropriados no átomo de carbono insaturado de um grupo arila ou heteroarila são geralmente selecionados de halogênio; -R°; -0R°; -SR°; fenila opcionalmente substituído com R°; -O(pH) opcionalmente substituído com R°; - (CH2) i-2 (F) , opcionalmente substituído com R°; -CH=CH(pH), opcionalmente substituído com R°; um anel heteroarila ou heterocíclico de 4-6 membros opcionalmente substituído com R°; -NO2; -CN; -N(R0)2; - NR0C(O)R0; -NR0C(S)R0; -NR0C(O)N(R0)2; -NR0C(S)N(R0)2; -NR0CO2R0; -NR0NR0-, -NR0NR0C(O)R0; -NR0NR0C(O)N(R0)2; -NR0NR0CO2R0; -C(O)C(O)R0; -C(O)CH2C(O)R0; -CO2R0; C(O)R0; -C(S)R0; -C(O)N(R0)2; -C(S)N(R0)2; -OC(O)N(R0)2; -OC(O)R0; -C(O)N(OR0)R0; -C(NOR0)R0; -S(O)2R0; -S(O)3R0; -SO2N(R0)2; -S(O)R0; -NR0SO2N(R0)2; -NR0SO2R0; -N(OR0)R0; -C (=ΝΗ) -N(R0)2; -C(=NH)-0R°; -P(O)2R0; -PO(R0)2,. OPO(R0)2; or - (CH2) 0-2NHC (O) R0; onde cada ocorrência independente de R0 é selecionada de hidrogênio, alifático Ci-6 opcionalmente substituído, um anel heteroarila ou heterocíclico de 4-6 membros não substituído, fenila, -O(F), ou -CH2(F) ou, não obstante a definição acima, duas ocorrências independentes de R°, no mesmo substituinte ou em substituintes diferentes, tomados conjuntamente com o(s) átomo(s) ao qual cada grupo R0 está ligado, para formar um anel monocíclico ou bicíclico de 3-12 membros opcionalmente substituído, parcialmente insaturado ou totalmente insaturado tendo de 0-4 heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre. Substituintes opcionais no grupo alifático de R0 são selecionados de NH2, NH(alifático C1-4) , N(alifático C1- 4)2/ halogênio, alifático C1-4/ 0H, O(alifático C1-4) , NO2, CN, CO2H, CO2 (alifático C1-4), O (haloalifático Ci-4) , ou haloalif ático C1-4, onde cada um dos grupos alifáticos C1-4 de R0 anteriormente citados é não substituído.
Um grupo alifático ou um anel heterocíclico não- aromático pode conter um ou mais substituintes e, assim, pode ser "opcionalmente substituído". Salvo se indicado de outra forma acima e na presente invenção, substituintes apropriados no carbono saturado de um grupo alifático ou heteroalifático, ou de um anel heterocíclico não-aromático são selecionados daqueles relacionados acima para o carbono insaturado de um grupo arila ou heteroarila e adicionalmente inclui o seguinte :=0, =S, =NNHR*, =NN(R*)2, =NNHC(O)R*, =NNHCO2 (alquila) , =NNHSO2 (alquila) , =N-OH, =N-(0R*) ou =NR*, onde cada R* é independentemente selecionado de hidrogênio ou de um grupo alifático Ci-6 opcionalmente substituído.
Salvo se definido de outra forma acima e na presente invenção, substituintes opcionais no nitrogênio de um anel heterocíclico não-aromático são geralmente selecionados de -R+, -N (R+) 2, -C(O)R+, -CO2R+, C(O)C(O)R+, -C(O)CH2C(O)R+, -SO2R+, -SO2N(R+) 2,
-C(=S)N(R+1)2, -C (=NH) -N (R+) 2, ou -NR+SO2R+; onde R+ é hidrogênio, um alifático C1-6 opcionalmente substituído, fenila opcionalmente substituído, -O(F) opcionalmente substituído, -CH2(F) opcionalmente substituído, - (CH2) 1-2 (F) opcionalmente substituído; -CH=CH(F) opcionalmente substituído; ou um anel heteroarila ou heterocíclico não substituído de 4-6 membros tendo de um a quatro heteroátomos independentemente selecionados de oxigênio, nitrogênio ou enxofre, ou, não obstante a definição acima, duas ocorrências independentes de R+, no mesmo substituinte ou em substituintes diferentes, tomados conjuntamente com o(s) átomo(s) ao qual cada grupo R+ está ligado, formam um anel monocíclico ou bicíclico de 3-12 membros, opcionalmente substituído, saturado, parcialmente insaturado ou totalmente insaturado tendo de 0-4 heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre. Substituintes opcionais no grupo alifático ou o anel fenila de R+ são selecionados de -NH2, -NH(alifático C1-4) , -N(alifático C1-4) 2 / halogênio, alifático C1-4, -0H, -0 (alifático C1-4) , -NO2, -CN, -CO2H, -CO2 (alifático C1-4) , -0 (haloalifático C1-4) , ou halo (alifático C1-4) , 30 onde cada um dos grupos alifáticos C1-4 anteriormente citados de R+ é não substituído.
O termo "cadeia de alquilideno" refere-se a uma cadeia carbônica linear ou ramificada que pode ser totalmente saturada ou ter uma ou mais unidades de insaturação e que possui dois pontos de ligação ao restante da molécula. Exemplos de cadeias de alquilideno incluem, porém não se restringem a -CH2-CH=CH-, -CH2-CH2-CH2-CH2-, -CH2-C- = -, -C = C-C(CH3)2-, e =CH-CH2-CH (CH2-CH3)-.
O termo "grupo protetor" conforme aqui utilizado, refere-se a um agente utilizado para temporariamente bloquear um ou mais sítios reativos desejados num composto multifuncional. Em certas concretizações, um grupo protetor possui uma ou mais, ou preferivelmente todas as seguintes características: a). reage seletivamente com bom rendimento para dar um substrato protegido que é estável para as reações que ocorrem em um ou mais dos outros sítios reativos; e b). é seletivamente removível com bom rendimento por reagentes que não ataquem o grupo funcional regenerado. Grupos protetores representativos estão detalhados em Greene, T.W.,Wuts, P.G em "Protective Groups in Organic Synthesis", Third Edition, John Wiley & Sons, New York: 1999 e outras edições deste livro, cujo conteúdo é aqui incorporado por referência. 0 termo "grupo nitrogênio protetor", conforme aqui utilizado, refere-se a agentes utilizados para temporariamente bloquear um ou mais sítios reativos de nitrogênio num composto multifuncional. Grupos nitrogênio protetores preferidos também possuem as características exemplificadas acima, e certos grupos nitrogênio protetores representativos são também detalhados no Capítulo 7 em Greene, T.W., Wuts, P.G. em "Protective Groups in Organic Synthesis", Third Edition, John Wiley & Sons, New York: 1999, cujo conteúdo foi aqui incorporado por referência. Em algumas concretizações, duas ocorrências independentes de um grupo são tomadas conjuntamente com o(s) átomo (s) ao qual estão ligadas para formar um anel. Esse anel é um anel opcionalmente substituído, de 3-12 membros, parcialmente insaturado ou totalmente insaturado, monocíclico ou bicíclico tendo de 0-4 heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre. Exemplos de tais anéis incluem, porém não se restringem ao seguinte: grupo piperidin-l-ila, piperazin-l-ila, ou morfolin-4-ila.
Em algumas concretizações, uma unidade de carbono (ou unidade C) de uma cadeia de alquila, alquilideno ou alifática, é opcionalmente substituída com outro átomo ou grupo. Exemplos de tais átomos ou grupos incluem, porém não se restringem a -NR-, -O-, -S-, -CO2-, -OC(O)-, -C(O)CO-, -C(O)-, -C(O)NR-, -C(=N-CN), -NRCO-, -NRC(O)O-, -SO2NR-, -NRSO2-, -NRC(O)NR-, -OC(O)NR-, -NRSO2NR-, -SO-, ou -SO2-, onde R é aqui definido. Exemplos de unidades C incluem -CH2- e =CH-. Salvo se especificado de outra forma, as substituições opcionais formam um composto quimicamente estável.
Substituições opcionais podem ocorrem tanto dentro da cadeia como em qualquer extremidade da cadeia, ou seja, tanto no ponto de ligação e/ou como também na extremidade terminal. Duas substituições opcionais podem também ser adjacentes entre si dentro de uma cadeia contanto que isso resulte num composto quimicamente estável. Salvo se especificado de outra forma, se a substituição ocorrer na extremidade terminal, o átomo de substituição é ligado a um H na extremidade terminal. Por exemplo, se uma unidade C de -CH2 CH2 CH3 for opcionalmente substituída com -O-, o composto resultante poderia ser -OCH2CH3, -CH2OCH3, or -CH2CH2OH.
Salvo se indicado de outra forma, as estruturas aqui apresentadas também pretendem incluir todas as formas isoméricas (ou conformacionais) (ex: enantioméricas, diastereoméricas e geométricas da estrutura; por exemplo, a configuração ReS para cada centro assimétrico, isômeros de dupla ligação (Z) e (E), e isômeros conformacionais (Z) e (E) . Portanto, isômeros estereoquímicos simples, bem como misturas enantioméricas, diastereoméricas e geométricas (ou conformacionais) dos compostos da presente invenção estão incluídos no escopo da invenção.
Salvo se indicado de outra forma, todas as formas tautoméricas dos compostos da invenção estão incluídas no escopo da invenção. Conforme é entendido pelo habilitado na técnica, um grupo pirazol pode ser representado de várias formas. Por exemplo, uma estrutura representada como
<formula>formula see original document page 65</formula>
também representa outros possíveis tautômeros, tal como
<formula>formula see original document page 65</formula>
Da mesma forma, uma estrutura representada como
<formula>formula see original document page 65</formula>
também representa outros possíveis tautômeros, tal como
<formula>formula see original document page 65</formula>
Salvo se indicado de outra forma, um substituinte pode girar livremente em torno de quaisquer ligações giratórias. Por exemplo, um substituinte representado como
<formula>formula see original document page 65</formula> também representa
<formula>formula see original document page 66</formula>
Da mesma forma, um substituinte representado como
<formula>formula see original document page 66</formula>
também representa
<formula>formula see original document page 66</formula>
Adicionalmente, salvo se indicado de outra forma, as estruturas aqui representadas, também pretendem incluir compostos que diferem somente quanto à presença de um ou mais átomos isotopicamente enriquecidos. Por exemplo, os compostos que possuem as estruturas da presente invenção, exceto quanto à substituição de hidrogênio com deutério ou trítio, ou a substituição de um carbono com um carbono 13C ou 14C enriquecido também estão incluídos no escopo da presente invenção. Tais compostos são úteis, por exemplo, como ferramentas ou sondas analíticas em ensaios biológicos.
Os compostos da presente invenção podem ser preparados à luz do relatório utilizando etapas geralmente conhecidas pelo habilitado na técnica. Tais compostos podem ser analisados através de métodos conhecidos, inclusive, mas não limitados a LCMS (espectrometria de massa acoplada à cromatografia líquida) e NMR (ressonância magnética nuclear). Deve ficar entendido que as condições específicas mostradas abaixo são apenas exemplos, e não pretendem limitar o escopo das condições que podem ser usadas no preparo dos compostos da presente invenção. Em vez disso, a presente invenção também inclui condições que seriam evidentes aos habilitados na técnica à luz do presente relatório para preparo dos compostos da presente invenção. Salvo se indicado de outra forma, todas as variáveis nos esquemas seguintes são aqui definidas. São utilizadas as seguintes abreviações:
BOC é t-butiloxicarbonila
DIPEA é diisopropiletilamina
DMF é dimetilformamida
i-PrOH é álcool isopropílico
n-BuOH é n-butanol
t-BuOH é ter-butanol
EtOH é etanol
MeOH é metanol
EtOAc é acetato de etila
TFA é ácido trifluoroacético
DMSO é dimetil sulfoxido
Rt é tempo de retenção
F é fenila
DCM é diclorometano
MeCN é acetonitrila
THF tetrahidrofurano
TBTU é tetrafluoroborato de 2-(1Η-benzotriazol-1-il)- 1,1,3,3-tetrametilurônio
HPLC é cromatografia líquida de alto desempenho
LCMS espectrometria de massa acoplada à cromatografia líquida
1H NMR é ressonância magnética nuclear Esquema Geral
<formula>formula see original document page 68</formula> O esquema geral acima mostra alguns métodos para o preparo de compostos da presente invenção, onde a azetidina é diretamente ligada através de um átomo de nitrogênio.
Esquema I
<formula>formula see original document page 69</formula>
O Esquema I acima mostra uma via geral para a preparação de compostos da fórmula 3 (do Esquema I), onde Rx, R1, R2 e J são conforme aqui definidos e Q é - O-, -NR'-, ou -S-. Em algumas concretizações, a pirimidina desclorada da fórmula 1 é aquecida na presença de uma base apropriada (ex: NaI/DIPEA) e um solvente apropriado (ex: DMF) com um amonitiazol opcionalmente substituído para formar um composto da fórmula 2. Em outras concretizações, a pirimidina desclorada da fórmula 1 é aquecida na presença de um catalisador apropriado (vide esquema I), um solvente apropriado (ex: dioxano), e um aminotiazol opcionalmente substituído sob condições de acoplamento conhecidas pelos habilitados na técnica para formar um composto de fórmula 2. O composto de fórmula 2 é então aquecido na presença de uma base apropriada (ex: DIPEA/Nal) e um solvente apropriado (ex: n-BuOH) com derivado de azetidina para formar um composto de fórmula 3. Esquema II
<formula>formula see original document page 70</formula> O Esquema II acima mostra uma via geral para a preparação de compostos de fórmula 7 (do Esquema II) , onde Rx, R1, R2, R2', e J são conforme aqui definidos e Q é -0-, -NR'-, ou -S-. A pirimidina desclorada da fórmula 4 é combinada com HQ-R1 para formar um composto de fórmula 5. Em algumas concretizações, os dois compostos são aquecidos na presença de um solvente apropriado (ex: t-BuOH) por 16 horas. Em outras concretizações, os dois compostos são misturados a 0°C na presença de acetonitrila e trietilamina por 1 hora. O composto de fórmula 5 é então aquecido na presença de um solvente apropriado (ex: DMF) e uma base apropriada (ex: DIPEA/Nal) com um aminopirazol opcionalmente substituído para formar um composto de fórmula 6, que é aquecido na presença de um derivado de azetidina na presença de um solvente apropriado (ex: n-BuOH) para formar um composto de fórmula 7.
Esquema III
<formula>formula see original document page 71</formula> <formula>formula see original document page 72</formula>
O Esquema III acima mostra uma via geral para a preparação de compostos de fórmula 12 (do Esquema III), onde Rx, R1, R10, e Ht são conforme aqui definidos, e Q é -0-, -NR' -, ou -S-. 0 cetoéster da fórmula 8 é ciclizado na presença de uréia, um solvente adequado (ex: MeOH, EtOH) , e uma base apropriada (ex: NaOMe) para formar dihidroxi pirimidina da fórmula 9. 0 composto de fórmula 9 é então clorado sob condições de cloração apropriadas, tais como aquecimento na presença de POCl3 e DIPEA, para formar uma dicloropirimidina da fórmula 10. A dicloropirimidina é então aquecida na presença de um amino-heteroarila apropriado sob condições adequadas conhecidas no estado da técnica (vide Esquema III por exemplo) para formar um composto de fórmula 11, que é posteriormente aquecido com HQ-R1 na presença de um solvente apropriado (ex: t-BuOH) para formar um composto de fórmula 12. Esquema IV
<formula>formula see original document page 72</formula> <formula>formula see original document page 73</formula>
O Esquema IV acima mostra uma via geral para a preparação de compostos de fórmula 16(do Esquema IV), onde L é um nucleófilo (tal como N, O, ou S), Q é -O-, -NR'-, ou -S-, e Z, R1, R10, Rx, e Ht são conforme aqui definidos. Dicloropirimidina da fórmula 4 é aquecida na presença de HQ-R1 para formar a dicloropirimidina substituída da fórmula 5. O composto de fórmula 5 é então aquecido na presença de um amino-heteroarila apropriado sob condições apropriadas conhecidas no estado da técnica (vide Esquema IV acima para os exemplos) para formar um composto de fórmula 15, que é aquecido com R10-Z-L, onde L é um nucleófilo apropriado (N, O, ou S) , e Z e R10 são conforme aqui definido, para formar um composto de fórmula 16.
Esquema V
<formula>formula see original document page 73</formula> <formula>formula see original document page 74</formula>
O Esquema V acima mostra uma via geral para a preparação de compostos de fórmula 20 (do Esquema 5), onde R1, Rx, RY, R' e Ht são conforme aqui definidos. O cetoéster da fórmula 17, juntamente com uma amidina substituída, cicliza para formar a hidroxipirimidina da fórmula 18. O composto de fórmula 18 é então clorado sob condições apropriadas de cloração conhecidas no estado da técnica (ex: P0C13/DIPEA), para formar a cloropirimidina da fórmula 19. A cloropirimidina é então aquecida na presença de um aminoheteroarila apropriado sob condições apropriadas conhecidas no estado da técnica (esquema V acima para exemplos) para formar um composto de fórmula 20.
Esquema VI
<formula>formula see original document page 74</formula> <formula>formula see original document page 75</formula>
O Esquema VI acima mostra uma via geral para a preparação de compostos de fórmula 23 (do Esquema VI), onde Rx7 R2, R2', R5, R6, Z, J, e Ht são conforme aqui definidos. 0 ácido protegido da fórmula 21 é desprotegido com uma base apropriada (ex: NaOH) na presença de um solvente ou solventes apropriados (ex: THF/MeOH) para formar o ácido de fórmula 22. O ácido de fórmula 22 é então combinado com uma amina apropriada na presença de reagentes de acoplamento conhecidos pelo habilitado na técnica (ex: TBTU), uma base apropriada (ex: DIPEA) , e um solvente apropriado (ex: DMF) para formar o composto de fórmula 23. <formula>formula see original document page 76</formula>
O Esquema VII acima mostra uma via geral de preparação dos compostos de fórmula 25 (do Esquema VII), onde Rxi R2, R2', R6, e J são conforme aqui definidos e ZZ é -N(R6)-ZR5, -O-ZR5, ou -ZR5 onde R5, R6, e Z são conforme aqui definidos. 0 composto de 24 é combinado com um cloreto ácido apropriado (onde X" é Cl) na presença de piridina para formar um composto intermediário que, mediante mistura na presença de metóxido de sódio e metanol, forma o composto da fórmula 25. Em algumas concretizações, X" pode ser OH, situação em que um reagente de acoplamento ácido apropriado é usado para acoplar o ácido à amina. Exemplos de reagentes de acoplamento de ácido apropriados incluem, porém não se restringem a EDC, DCI, e HOBT. Solventes apropriados para essas reações de acoplamento incluem, porém não se restringem a THF, CH2Cl2, e dioxano. Esquema VIII
<formula>formula see original document page 77</formula>
O Esquema VIII acima mostra uma via geral para a preparação de compostos de fórmula 30 (do Esquema VIII) onde Z é -C = C-CH2-. Dicloropirimidina 26 é convertida em pirimidina di-iodada 27 na presença de NaI e HI. 0 Composto 27 é combinado com um aminoheteroarila para formar o composto 28. O Composto 29 é então combinado com azetidina sob condições de deslocamento básicas para formar propinil-azetidina opcionalmente substituída que é combinada com o composto 28 sob condições de acoplamento de paládio para formar um composto de fórmula 30. Esquema IX
<formula>formula see original document page 78</formula> <formula>formula see original document page 79</formula>
O Esquema IX acima mostra uma via geral para a preparação de compostos de fórmula 3 6 (no Esquema IX) onde R2, R2', R1, e J são conforme aqui definido e Q é - O-, -NR'-, ou -S-. O Composto 31 é convertido em dicloro pirimidina 32 tratando 31 com POCl3 na presença de um solvente apropriado (ex: tolueno) e na presença de uma base apropriada (ex: tripropilamina) . 0 Composto 32 é então aquecido na presença de um solvente apropriado (ex: DMF) e uma base apropriada (ex: DIPEA/Nal) com um aminopirazol opcionalmente substituído para formar um composto de fórmula 33. A pirimidina clorada de fórmula 3 3 é combinada com HQ-R1 para formar um composto de fórmula 34 e os dois compostos são aquecidos na presença de um solvente apropriado (ex: t-BuOH) . A redução do éster e o tratamento do álcool correspondente com PBr3 leva à formação de bromoderivado 35. O bromoderivado 3 5 pode ser então tratado com uma variedade de azetidinas à temperatura ambiente na presença de um solvente apropriado (ex: DMF) para dar o composto final 36. Os esquemas seguintes mostram métodos para sintetizar diversos tipos de azetidinas. Essas azetidinas podem ser usadas para formar compostos da presente invenção de acordo com os métodos aqui descritos. Esquema A
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O Esquema A acima mostra uma via geral para a preparação de azetidinas N-substituídas onde pelo menos um grupo J é ligado à azetidina através de um átomo de nitrogênio. A azetidina protegida 31 é ativada com um grupo de saída apropriado sob condições apropriadas para formar azetidina 32, que, mediante tratamento com NHRaRb sob condições básicas, forma azetidina substituída com amina 34. A azetidina 34 é então desprotegida sob condições apropriadas de desproteção de nitrogênio para formar o composto 35. Esquema B <formula>formula see original document page 81</formula>
O Esquema B acima mostra uma via geral para a preparação de azetidinas O-substituídas onde pelo menos um grupo J é OR onde R é H ou alquila C3-6. Esquema C
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O Esquema C acima mostra uma via geral para a preparação de azetidinas substituídas onde J é CN e alquila C1-6. Esquema D
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O Esquema D mostra uma via geral para a preparação de azetidinas substituídas com ciclopropil-fluoro. O Composto 42 é oxidado sob condições apropriadas para formar o composto 43, que, sob condições Grignard apropriadas, é combinado com ciclopropil-MgBr para formar a azetidina substituída com ciclopropila 44. 0 Composto 44 é então fluorado sob condições adequadas de fluoração para formar 45, que é hidrogenado sob condições Pd/C para formar a azetidina desprotegida livre 46.
Esquema E
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0 Esquema E mostra uma via geral para a preparação de azetidinas espirocíclicas de 4 membros. A azetidinona 47 protegida é combinada com etil-2-bromoisobutirato para formar o composto 48. 0 Composto 4 8 é então desprotegido com DiBAL para formar o composto 49. 0 Composto 49 é então ciclizado sob condições apropriadas para formar a azetidina espirocíclica 50. 0 Composto 50 é então desprotegido sob condições padrão para formar o composto 51.
Esquema F
<formula>formula see original document page 84</formula>
Os Esquemas EeF acima mostram uma via geral para a preparação azetidinas espirociclicas de 4 e 5 membros. No esquema acima, PG significa grupos protetores de nitrogênio conhecidos no estado da técnica. R é alquila C1-6. A azetidinona protegida 52 é combinada com um alquinil éster para formar o composto 53. 0 grupo alquinila de composto 53 é então reduzido, seguido pela redução do éster no composto 53 para formar o composto 54, que é ciclizado sob condições apropriadas (ex: TsCl, KOtBu) para formar o espirociclo 55. A redução de alquinos e ésteres são conhecidos no estado da técnica. Conseqüentemente, a presente invenção refere-se a processos para preparar os compostos da presente invenção.
Um aspecto da presente invenção refere-se a um método para tratar um estado patológico em pacientes e que é atenuado através do tratamento com um inibidor de proteína quinase, método que compreende administrar a um paciente necessitado de tal tratamento uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula I(aqui incluindo Ia, Ib, Il-a, ΙΙ-b, II-c, II- d, II-e, ΙΙ-f, e Il-g). 0 método é particularmente útil para tratar um estado patológico que é aliviado pelo uso de um inibidor de uma quinase tal como Aurora quinases ((Aurora A, Aurora B, Aurora C), FLT-3, JAK-2, JAK- 3, ITK, Abl, Abl(T315I), Arg, FGFR1, MELK, MLK1, MuSK, Ret, TrkA, PLK4, Tie-2, e TrkA.
A atividade dos compostos como inibidores de proteína quinase pode ser testada in vitro, in vivo ou numa linhagem celular. Ensaios in vitro incluem ensaios que determinam a inibição ou da atividade da quinase ou da atividade de ATPase da quinase ativada. Os ensaios alternados in vitro quantificam a capacidade de o inibidor ligar-se à proteína quinase e podem ser medidos radiomarcando-se o inibidor antes da ligação, isolando-se o complexo inibidor/quinase e determinando- se a quantidade de ligado radiomarcado, ou executando- se um experimento competitivo no qual novos inibidores são incubados com o ligado de quinase a radioligantes conhecidos.
Outro aspecto da presente invenção é dirigido a um método para tratar câncer num indivíduo necessitado do mesmo, compreendendo a administração seqüencial ou a co-administração de um composto da presente invenção ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e outro agente terapêutico. Em algumas concretizações, dito agente terapêutico adicional é selecionado de um agente antineoplásico, agente anti-proliferativo, ou de um agente quimioterápico.
Em algumas concretizações, dito agente terapêutico adicional é selecionado de camptotecina, o inibidor de MEK: U0126, um inibidor de KSP (proteína de fuso tipo cinesina) , adriamicina, interferons, e derivados de platina, tal como Cisplatina.
Em outras concretizações, dito agente terapêutico adicional é selecionado de taxanos, inibidores de bcr- abi (tal como Gleevec, dasatinibe, e nilotinibe); inibidores de EGFR (tal como Tarceva e Iressa); agentes danificadores de DNA (tal como cisplatina, oxaliplatina, carboplatina, inibidores de topoisomerase, e antraciclinas); e anti-metabólitos (tal como AraC e 5-FU).
Em outras concretizações ainda, dito agente terapêutico adicional é selecionado de camptotecina, doxorrubicina, idarubicina, cisplatina, taxol, taxotere, vincristina, tarceva, o inibidor de MEK, U0126, um inibidor de KSP, vorinostat, Gleevec, dasatinibe e nilotinibe.
Em outra concretização, dito agente terapêutico adicional é selecionado de inibidores de Her-2 (tal como Herceptina) ; inibidores de HDAC (tal como vorinostat) , inibidores de VEGFR (tal como Avastin), inibidores de c-KIT e FLT-3 (tal como sunitinibe) inibidores de BRAF (tal como BAY 43-9006 da Bayer) , inibidores de MEK (tal como o PD0325901 da Pfizer) ; venenos do fuso (tal como Epothilonas e partículas de paclitaxel ligadas a proteína (tal como Abraxane®). Outras terapias ou agentes antineoplásicos que podem ser usados em combinação com os agentes antineoplásicos da presente invenção incluem cirurgia, radioterapia (em alguns exemplos, radiação gama, radioterapia por feixe de neutrons, radioterapia por feixe de elétrons, terapia protônica, braquiterapia, e isótopos radioativos sistêmicos, para citar alguns), terapia endócrina, modificadores de resposta biológica (interferons, interleucinas, e fator de necrose tumoral (TNF) para citar alguns), hipertermia e crioterapia, agentes para atenuar quaisquer efeitos adversos (ex: antieméticos) , e outros fármacos quimioterápicos aprovados, inclusive, porém não restritos a fármacos alquilantes (mecloretamina, clorambucil, ciclofosfamida, Melfalan, Ifosfamida), antimetabólitos (Metotrexate), antagonistas de purina e antagonistas de pirimidina (6-raercaptopurina, 5-Fluorouracil, Cytarabile, Geraciutabine) , venenos do fuso (Vinblastina, Vincristina, Vinorelbina, Paclitaxel), podofilotoxinas (Etoposide, Irinotecan, Topotecan), antibióticos (Doxorubicina, Bleomicina, Mitomicina), nitrosouréias (Carmustina, Lomustina), íons inorgânicos (Cisplatina, Carboplatina) , enzimas (Asparaginase), e hormônios (Tamoxifeno, Leuprolida, Flutamida, e Megestrol), Gleevec™, dexametasona, e ciclofosfamida.
Um composto da presente invenção pode também ser útil para tratar câncer em combinação com os seguintes agentes terapêuticos: abarelix (Plenaxis depot®); aldesleucina (Prokine®) ; Aldesleukin (Proleukin®); Alemtuzumabb (Campath®); alitretinoína (Panretin®); alopurinol (Zyloprim®); altretamina (Hexalen®); amifostina (Ethyol®); anastrozol (Arimidex®); trióxido arsênico (Trisenox®); asparaginase (Elspar®); azacitidina (Vidaza®); bevacuzimab (Avastin®); cápsulas de bexaroteno (Targretin ) ; gel de bexaroteno (Targretin®); bleomicina (Blenoxane®); bortezomib (Velcade®); busulfan intravenoso (Busulfex®); busulfan oral (Myleran®); calusterona (Methosarb®); capecitabina (Xeloda®); carboplatina (Paraplatin®); carmustina (BCNU®, BiCNU®); carmustina (Gliadel®); carmustina com Polifeprosan 20 Implante (Gliadel Wafer®); celecoxibe (Celebrex®); cetuximabe (Erbitux®); clorambucil (Leukeran®); cisplatina (Platinol®); cladribina (Leustatin®, 2-CdA®); clofarabina (Clolar®); ciclofosfamida (Cytoxan , Neosar ); ciclofosfamida (Cytoxan Injection®); ciclofosfamida (Cytoxan Tablet®); citarabina (Cytosar-U®) ; citarabina liposomal (DepoCyt®); dacarbazina (DTIC-Dome®); dactinomicina, actinomicina D (Cosmegen ); Darbepoetin alfa (Aranesp®); daunorubicina lipossômica (DanuoXome®); daunorubicina, daunomicina (Daunorubicin® ); daunorubicina, daunomicina (Cerubidine® ); Denileukin diftitox (Ontak®); dexrazoxano (Zinecard®); docetaxel (Taxotere®); doxorubicina (Adriamycin PFS®); doxorubicina (Adriamycin®, Rubex®); doxorubicina (Adriamycin PFS Injection® ); doxorubicina lipossomica (Doxil®); propionato de dromostanolona dromostanolone®); propionato de dromostanolona (Masterone injection®); Solução de Elliott1S B (Elliott1S B Solution®); epirubicina (Ellence®); Epoetina alfa (epogen®); erlotinibe (Tarceva®); estramustina (Emcyt ); fosfato de etoposídeo (Etopophos®); etoposídeo, VP-16 (Vepesid®); exemestano (Aromasin®); Filgrastim (Neupogen®) ; floxuridina (intraarterial) (FUDR®) ; fludarabina (Fludara®); fluorouracil, 5-FU (Adrucil®); fulvestrant (Faslodex®); gefitinibe (Iressa®) ; gemcitabina (Gemzar®); gemtuzumab ozogamicina (Mylotarg®); acetato de goserelina (Zoladex Implant®); acetato de goserelina (Zoladex®); acetato de histrelina (Histrelin implant®); hidroxiuréia (Hydrea®); Ibritumomab Tiuxetan (Zevalin®); idarubicina (Idamycin®); ifosfamida (IFEX®); mesilato de imatinibe (Gleevec®); interferon alfa 2a (Roferon A®); Interferon alfa-2b (Intron A®) ; irinotecan (Camptosar®); lenalidomida (Revlimid®); letrozol (Femara®); leucovorin (Wellcovorin®, Leucovorin®); Acetato de Leuprolide (Eligard®); levamisol (Ergamisol®); lomustina, CCNU (CeeBU®); mecloretamina, mostarda de nitrogênio (Mustargen®); acetato de megestrol (Megace®); melfalan, L-PAM (Alkeran®); mercaptopurina, 6-MP (Purinethol®); mesna (Mesnex®); mesna (Mesnex tabs®); metotrexato (Methotrexate® ); metoxsalen (Uvadex®); mitomicina C (Mutamycin®); mitotano (Lysodren®); mitoxantrona (Novantrone®); fenpropionato de nandrolona (Durabolin-50®); nelarabina (Arranon®); Nofetumomab (Verluma®); Oprelvekin (Neumega®); oxaliplatina (Eloxatin®); paclitaxel (Paxene®); paclitaxel (Taxol®); partículas de paclitaxel ligadas a proteína (Abraxane®); palifermin (Kepivance®); pamidronato (Aredia®); pegademase (Adagen (Pegademase Bovine)®); pegaspargase (Oncaspar®); Pegfilgrastim (Neulasta®); pemetrexed dissódico (Alimta®); pentostatina (Nipent®); pipobroman (Vercyte®); plicamicina, mitramicina (Mithracin ); porfimer sodico (Photofrin®); procarbazina (Matulane®); quinacrina (Atabrine®);Rasburicase(Elitek®); Rituximab (Rituxan®); sargramostim (Leukine®); Sargramostim (Prokine®); sorafenib (Nexavar®); estreptozocina (Zanosar®); maleato de sunitinibe (Sutent®); talco (Sclerosol®); tamoxifeno (Nolvadex®); temozolomida (Temodar®); teniposídeo, VM-26 (Vumon®); testolactona (Teslac®) ; tioguanina, 6-TG (Thioguanine®) ; tiotepa (Thioplex®); topotecan (Hycamtin®); toremifeno (Fareston®); Tositumomab (Bexxar®); Tositumomab/l-131 tositumomab (Bexxar®); Trastuzumab (Herceptin®);
tretinoína, ATRA (Vesanoid ) ; Uracil Mustard (Uracil Mustard Capsules®); valrubicina (Valstar®); vinblastina (Velban®); vincristina (Oncovin®); vinorelbina (Navelbine®); zoledronato (Zometa®) e vorinostat (Zolinza®).
Para uma discussão abrangente de terapias antineoplásicas consulte http://www.nci.nih.gov/, uma listagem de fármacos oncológicos aprovados pelo FDA em http: //www. fda. gov/cder/câncer/druglistf rame . htm, and The Merck Manual, Seventeenth Ed. 1999, cujos conteúdos são aqui incorporados por referência.
Os inibidores da proteína quinase ou de seus sais farmacêuticos podem ser formulados em composições farmacêuticas para administração em animais ou humanos. Essas composições farmacêuticas, que compreendem uma quantidade do inibidor da proteína eficaz para tratar ou prevenir uma condição mediada por quinase e um portador farmaceuticamente aceitável, são outra concretização da presente invenção. O termo "condição mediada por proteína quinase" conforme aqui utilizado, significa doenças ou outras condições nocivas à saúde na qual uma proteína quinase é conhecida por desempenhar alguma função. Tais condições incluem, sem limitação, doenças autoimunes, doenças inflamatórias, doenças neurológicas e neurodegenerativas, câncer, doenças cardiovasculares, alergia e asma.
O termo "câncer" inclui, porém não se restringe aos seguintes tipos de câncer: mama, ovário; colo do útero; próstata; testículos, trato genitourinário; esôfago; laringe; glioblastoma; neuroblastoma; estômago; pele; ceratoacantoma; pulmão, carcinoma epidermóide, carcinoma de grandes células, carcinoma de pequenas células, adenocarcinoma pulmonar, de pulmão não de pequenas células; ossos; cólon; adenoma; pâncreas; adenocarcinoma; tireóide, carcinoma folicular, carcinoma indiferenciado, carcinoma papilar; seminoma; melanoma; sarcoma; carcinoma de bexiga; carcinoma hepático e de vias biliares; carcinoma renal; distúrbios mielóides,· distúrbios linfóides; Hodgkins, células pilosas; cavidade bucal e faringe (oral), lábios, língua, boca, faringe,· intestino delgado; cólon-reto, intestino grosso, reto; cérebro e sistema nervoso central; e leucemia.
O termo "câncer" também inclui, porém não se restringe aos seguintes cânceres: epidermóide Oral: cavidade bucal, lábios, língua, boca, faringe; Cardíaco: sarcoma (angiosarcoma, fibrosarcoma, rabdomiosarcoma, liposarcoma), mixoma, rabdomioma, fibroma, lipoma e teratoma; Pulmão: carcinoma broncogênico (de célula escamosa ou epidermóide, indiferenciado de pequenas células, indiferenciado de grandes células, não de pequenas células, adenocarcinoma, carcinoma alveolar (bronquiolar), adenoma bronquial, sarcoma, linfoma, hamartoma condromatoso, mesotelioma; Gastrointestinal: esôfago (carcinoma de células escamosas, laringe, adenocarcinoma, leiomiosarcoma, linfoma), estômago (carcinoma, linfoma, leiomiosarcoma), pâncreas (adenocarcinoma ductal, insulinoma, glucagonoma, gastrinoma, tumores carcinóides, vipoma), intestino grosso ou delgado (adenocarcinoma, linfoma, tumores carcinóides, sarcoma de Kaposi, leiomioma, hemangioma, lipoma, neurofibroma, fibroma), intestino grosso ou intestino delgado (adenocarcinoma, adenoma tubular, adenoma viloso, hamartoma, leiomioma), cólon, cólon- reto, colorretal; reto. Trato Genito-urinário: rins (adenocarcinoma, tumor de Wilm [nefroblastoma], linfoma, leucemia), bexiga e uretra (carcinoma de células escamosas, carcinoma celular transitório, adenocarcinoma), próstata (adenocarcinoma, sarcoma), testículo (seminoma, teratoma, carcinoma embrionário, teratocarcinoma, coriocarcinoma, sarcoma, carcinoma celular intersticial, carcinoma, fibroma, fibroadenoma, tumores adenomatóides, lipoma); Fígado: hepatoma (carcinoma hepatocelular), colangiocarcinoma, hepatoblastoma, angiosarcoma, adenoma hepatocelular, hemangiona, vias biliares; Ósseo: sarcoma osteogênico (osteosarcoma), fibrosarcoma, histiocitoma fibroso maligno, condrosarcoma, sarcoma de Ewing, linfoma maligno (sarcoma de célula reticular), mieloma múltiplo, tumor maligno de célula gigante, cordoma, osteocondroma, (exostoses osteocartilaginosas), condroma benigno, condroblastoma, condromixofibroma, osteoma osteóide e tumores de célula gigante; Sistema Nervoso Central: Esqueleto (osteoma, hemangioma, granuloma, xantoma, osteíte deformante), meninges (meningioma, meningiosarcoma, gliomatose), cérebro (astrocitoma, meduloblastoma, glioma, ependimoma, germinoma [pinealoma], glioblastoma multiforme, oligodendroglioma, schwanoma, retinoblastoma, tumores congênitos), medula espinhal, neurofibroma, meningioma, glioma, sarcoma); Ginecológico: útero (carcinoma endometrial), colo do útero (carcinoma cervical, displasia cervical pré-tumoral) , ovários (carcinoma ovariano [cistadenocarcinoma seroso, cistadenocarcinoma mucinoso, carcinona não classificado], tumores de células granulosas-tecais, tumores de células de Sertoli-Leydig, disgerminoma, teratoma maligno), vulva (carcinoma de célula escamosa, carcinoma intraepitelial, adenocarcinoma, fibrosarcoma, melanoma), vagina (carcinoma de células claras, carcinoma de células escamosas, sarcoma botrióide (rabdomiosarcoma embrionário), trompas de Falópio (carcinoma), mama; Hematológico: sangue (leucemia mielóide[aguda e crônica], leucemia linfoblástica aguda, leucemia linfocítica crônica, doenças mieloproliferativas, mieloma múltiplo, síndrome mielodisplásica); doença de Hodgkin, linfoma não- Hodgkin [linfoma maligno] célula pilosa; distúrbios linfóides; Pele: melanoma maligno, carcinoma de célula basal, carcinoma de célula escamosa, sarcoma de Kaposi, ceratoacantoma, nevo displásico (mola), lipoma, angioma, dermatofibroma, quelóides, psoríase; Glândula Tireóide: carcinoma papilar da tireóide, carcinoma folicular da tireóide; carcinoma medular da tireóide, câncer de tireóide indiferenciado, neoplasia endócrina múltipla tipo 2A, neoplasia endócrina múltipla tipo 2B, câncer medular de tireóide familiar, feocromocitoma, paraganglioma; e Glândulas Supra-Renais: neuroblastoma. Assim, o termo "célula cancerosa", conforme aqui citado, inclui uma célula afetada por qualquer uma das condições acima identificadas. Em algumas concretizações, o câncer é selecionado de colorretal, tireóide, ou câncer de mama.
O termo "condição mediada por Aurora" ou "doença mediada por Aurora" conforme aqui utilizado, significa qualquer doença ou outra condição nociva à saúde na qual a Aurora (Aurora A, Aurora B e Aurora C) é conhecida por desempenhar alguma função. Tais condições incluem, sem limitação, câncer, tal como o colorretal, de tireóide, e câncer de mama; e distúrbios mieloproliferativos, tais como policitemia vera, trombocitemia, metaplasia mielóide com mielofibrose, leucemia mielógena crônica (CML), leucemia mielomonocítica crônica, síndrome hipereosinofílica, leucemia mielomonocítica juvenil, e doença mastocitária sistêmica.
Em algumas concretizações, os compostos da presente invenção são úteis para tratar câncer, tais como colorretal, tireóide, de mama, e câncer de pulmão; e distúrbios mieloproliferativos, tais como policitemia vera, trombocitemia, metaplasia mielóide com mielofibrose, leucemia mielógena crônica, leucemia mielomonocítica crônica, síndrome hipereosinofílica, leucemia mielomonocítica juvenil, e doença mastocitária sistêmica.
Em algumas concretizações, os compostos da presente invenção são úteis para tratar distúrbios hematopoiéticos, em especial, leucemia mielógena aguda (AML), leucemia mielógena crônica (CML), leucemia promielocítica aguda (APL), e leucemia linfocítica aguda (ALL).
Além dos compostos da presente invenção, derivados ou profármacos farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da presente invenção podem também ser empregados em composições para tratar ou prevenir os distúrbios acima identificados.
Um "derivado ou profármaco farmaceuticamente aceitável" significa qualquer sal, éster, sal de um éster ou outro derivado farmaceuticamente aceitável de um composto da presente invenção que, mediante administração a um receptor, é capaz de prover, seja direta ou indiretamente, um composto da presente invenção ou um metabólito inibitoriamente ativo ou seu resíduo. Tais derivados ou profármacos incluem os que aumentam a biodisponibilidade dos compostos da presente invenção, quando tais compostos são administrados a um paciente (ex: permitindo que um composto administrado oralmente seja mais facilmente absorvido pela corrente sangüínea) ou que aumentam a liberação do composto original para um compartimento biológico (ex: cérebro ou sistema linfático) em relação às espécies originais.
Exemplos de profármacos farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da presente invenção incluem, sem restrição, ésteres, ésteres de aminoácido, ésteres de fosfato, sais metálicos e ésteres de sulfonato. Os compostos da presente invenção podem existir na forma livre para tratamento, ou, quando apropriado, como um sal farmaceuticamente aceitável. Conforme aqui utilizado, o termo "sal farmaceuticamente aceitável" refere-se a sais de um composto que são, no escopo de critério médico confiável, adequados para üso em contato com os tecidos de humanos e animais inferiores sem toxicidade, irritação, resposta alérgica indevidas e similares, e são proporcionais à razoável relação risco/benefício. Sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da presente invenção incluem os derivados de ácidos e bases inorgânicos e orgânicos. Esses sais podem ser preparados in situ durante o isolamento e purificação final dos compostos. Sais de adição de ácido podem ser preparados 1). reagindo-se o composto purificado na sua forma em base livre com um ácido orgânico ou inorgânico apropriado e 2). isolando-se o sal assim formado. Exemplos de sais de adição de ácido apropriados incluem acetato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, benzenossulfonato, bissulfato, butirato, citrato, canforato, canforsulfonato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanossulfonato, formiato, fumarato, glucoheptanoato, glicerofosfato, glicolato, hemissulfato, heptanoato, hexanoato, cloridrato, bromidrato, iodidrato, 2-hidroxietanossulfonato, lactato, maleato, malonato, metanossulfonato, 2- naftalenossulfonato, nicotinato, nitrato, oxalato, palmoato, pectinato, perssulfato, 3-fenilpropionato, fosfato, picrato, pivalato, propionato, salicilato, succinato, sulfato, tartarato, tiocianato, tosilato e undecanoato. Outros ácidos, tais como oxálico, embora não sejam por si próprios farmaceuticamente aceitáveis, podem ser empregados na preparação de sais úteis como intermediários para obter compostos da invenção e seus sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis. Sais de adição de base podem ser preparados 1) . reagindo-se o composto purificado em sua forma ácida com uma base orgânica ou inorgânica apropriada e 2) . isolando-se o sal assim formado.
Sais derivados de bases apropriadas incluem sais metálicos alcalinos (ex: sódio e potássio), sais metálicos alcalinoterrosos (ex: magnésio), amônio e N+(alquila C1-4)4. A presente invenção também prevê a quaternização de quaisquer grupos básicos contendo nitrogênio dos compostos aqui descritos. Produtos solúveis em água ou óleo ou dispersíveis podem ser obtidos através de tal quaternização.
Sais de adição de base também incluem sais metálicos alcalinos ou metálicos alcalinoterrosos. Sais metálicos alcalinos ou metálicos alcalinoterrosos representativos incluem sódio, lítio, potássio, cálcio, magnésio e similares. Outros sais farmaceuticamente aceitáveis incluem, quando apropriado, cátions atóxicos de amônio, amônio quaternário e de amina formados utilizando contra-íons tais como haleto, hidróxido, carboxilato, sulfato, fosfato, nitrato, sulfonato de alquila inferior e sulfonato de arila. Outros ácidos e bases, embora não sejam por si próprios farmaceuticamente aceitáveis, podem ser empregados na preparação de sais úteis como intermediários na obtenção dos compostos da invenção e seus sais de adição de ácido ou de base farmaceuticamente aceitáveis.
Portadores farmaceuticamente aceitáveis que podem ser usados nessas composições farmacêuticas incluem, porém não se restringem a trocadores iônicos, alumina, estearato de alumínio, lecitina, proteínas séricas, tais como albumina sérica humana, substâncias tampão tais como fosfatos, glicina, ácido sórbico, sorbato de potássio, misturas glicerídicas parciais de ácidos graxos vegetais saturados, água, sais ou eletrólitos, tais como sulfato de protamina, hidrogeno fosfato dissódico, hidrogeno fosfato de potássio, cloreto de sódio, sais de zinco, sílica coloidal, trisilicato de magnésio, polivinil pirrolidona, substâncias à base de celulose, polietileno glicol, carboximetilcelulose sódica, poliacrilatos, ceras, polímeros em bloco de polietileno-polioxipropileno, polietileno glicol e gordura de lã.
As composições da presente invenção podem ser administradas oralmente, parenteralmente, através de inalação por pulverização, topicamente, retalmente, nasalmente, bucalmente, vaginalmente ou através de um reservatório implantado. O termo "parenteral", conforme aqui utilizado, inclui injeção subcutânea, intravenosa, intramuscular, intra-articular, intra-sinovial, intraesternal, intratecal, intraperitoneal, intrahepática, intralesional e intracraniana ou técnicas de infusão.
Formas injetáveis estéreis das composições da presente invenção podem ser uma suspensão aquosa ou oleaginosa. Essas suspensões podem ser formuladas de acordo com as técnicas conhecidas no estado da técnica utilizando agentes de dispersão ou umectantes apropriados e agentes de suspensão. A preparação injetável estéril pode também ser uma solução ou suspensão estéril injetável num diluente ou solvente atóxico parenteralmente aceitável, por exemplo, como uma solução em 1,3-butanodiol. Entre os veículos e solventes aceitáveis que podem ser empregados estão a água, solução de Ringer e solução isotônica de cloreto de sódio. Além disso, óleos fixos estéreis são convencionalmente empregados como meio solvente ou de suspensão. Para essa finalidade, um óleo fixo suave pode ser empregado, incluindo os mono ou diglicerídeos sintéticos. Ácidos graxos, tais como ácido oleico e seus derivados de glicerídeo são úteis na preparação de injetáveis, da mesma forma que os óleos naturais farmaceuticamente aceitáveis, tais como óleo de oliva ou óleo de rícino, especialmente em suas versões polioxietiladas. Essas soluções ou suspensões oleosas podem também conter um diluente ou dispersante alcoólico de cadeia longa, tais como carboximetil celulose ou agentes dispersantes similares que são comumente utilizados na formulação de formas de dosagem farmaceuticamente aceitáveis incluindo emulsões e suspensões. Outros surfactantes comumente utilizados, tais como os Tweens, Spans e outros agentes emulsificantes ou intensificadores de biodisponibilidade que são comumente utilizados na fabricação de formas de dosagem sólidas, líquidas ou outras formas de dosagem farmaceuticamente aceitáveis podem também ser usados para fins da formulação. As composições farmacêuticas da presente invenção podem ser oralmente administradas em qualquer forma de dosagem oralmente aceitável inclusive, porém não restrito a cápsulas, comprimidos, suspensões ou soluções aquosas. No caso de comprimidos para uso oral, portadores comumente utilizados podem incluir lactose e amido de milho. Agentes lubrificantes, tais como estearato de magnésio, podem também ser adicionados. Para administração oral na forma de cápsula, diluentes úteis podem incluir lactose e amido de milho seco. Quando suspensões aquosas são necessárias para uso oral, o ingrediente ativo pode ser combinado com agentes emulsificantes e de suspensão. Se desejado, certos agentes adoçantes, aromatizantes ou corantes podem também ser adicionados. Alternativamente, as composições farmacêuticas da presente invenção podem ser administradas na forma de supositórios para administração retal. Estes podem ser preparados misturando-se o agente com um excipiente não irritante apropriado que seja sólido à temperatura ambiente, mas líquido à temperatura retal de forma a se derreter no reto para liberação do fármaco. Tais materiais podem incluir manteiga de cacau, cera de abelhas e polietileno glicóis.
As composições farmacêuticas da presente invenção podem também ser administradas topicamente, especialmente quando o alvo de tratamento inclui áreas ou órgãos de fácil acesso pelas aplicações tópicas, incluindo doenças dos olhos, pele, ou do trato intestinal inferior. Formulações tópicas apropriadas podem ser preparadas para cada uma dessas áreas ou órgãos. A aplicação tópica no trato intestinal inferior pode ser efetuada numa formulação de supositório retal (vide acima) ou numa formulação de enema apropriada. Adesivos transdérmicos topicamente podem também ser usados.
Para aplicações tópicas, as composições farmacêuticas podem ser formuladas numa pomada apropriada contendo o componente ativo suspenso ou dissolvido em um ou mais portadores. Portadores para administração tópica dos compostos da presente invenção podem incluir, porém não se restringem a óleo mineral, petrolato líquido, petrolato branco, composto de propileno glicol, polioxietileno, polioxipropileno, cera emulsificante e água. Alternativamente, as composições farmacêuticas podem ser formuladas numa loção ou creme adequado contendo os componentes ativos suspensos ou dissolvidos em um ou mais portadores farmaceuticamente aceitáveis. Portadores apropriados podem incluir, porém não se restringem a óleo mineral, monoestearato de sorbitan, polisorbato 60, cera de cetil ésteres, álcool cetearílico, 2-octildodecanol, álcool benzílico e água. Para uso oftálmico, as composições farmacêuticas podem ser formuladas na forma de suspensões micronizadas em solução salina estéril isotônica de pH ajustado, ou na forma de soluções em solução salina estéril isotônica com pH ajustado, com ou sem preservativo tal como cloreto de benzilalcônio. Alternativamente, para usos oftálmicos, as composições farmacêuticas podem ser formuladas numa pomada tal como petrolato. As composições farmacêuticas da presente invenção podem também ser administradas através de aerosol ou inalação nasal. Tais composições podem ser preparadas como soluções em solução salina, empregando álcool benzílico ou outros preservativos, promotores de absorção para aumentar a biodisponibilidade, fluorocarbonetos, e/ou outros agentes solubilizantes ou dispersantes convencionais.
A quantidade de inibidor de quinase que pode ser combinada com os materiais portadores para produzir uma forma de dosagem única variará dependendo do hospedeiro tratado, do modo específico de administração e da indicação. Em uma concretização, as composições devem ser formuladas de forma que uma dosagem entre 0,01 - 100 mg/kg peso corporal/dia do inibidor possa ser administrada a um paciente recebendo essas composições. Deve ficar entendido que uma dosagem e regime de tratamento específicos para qualquer paciente em particular dependerá de uma variedade de fatores, inclusive da atividade do composto específico empregado, da faixa etária, peso corporal, saúde geral, sexo, dieta, tempo de administração, taxa de excreção, combinação farmacológica, e do critério do médico responsável e da gravidade da doença específica que estiver sendo tratada. A quantidade de inibidor também dependerá do composto específico na composição. De acordo com outra concretização, a invenção provê métodos para tratar ou prevenir uma condição mediada por quinase, compreendendo a etapa de administrar a um paciente um dos compostos ou composições farmacêuticas acima descritos. 0 termo "paciente", conforme aqui utilizado, significa um animal, incluindo um ser humano.
Em algumas concretizações, dita condição mediada por quinase é um distúrbio proliferativo ou câncer. Em algumas concretizações, dita condição mediada por quinase é selecionada de um distúrbio hematopoiético, em especial, leucemia mielógena aguda (AML), leucemia promielocítica aguda (APL), leucemia mielógena crônica (CML), e leucemia linfocítica aguda (ALL).
Preferivelmente, o método é utilizado para tratar ou prevenir uma condição selecionada de cânceres, tais como câncer de mama, cólon, próstata, pele, pâncreas, cérebro, trato genitourinário, sistema linfático, estômago, laringe, e pulmão, incluindo adenocarcinoma pulmonar, câncer pulmonar de pequenas células, e câncer pulmonar não de pequenas células; derrame (AVC), diabete, mieloma, hepatomegalia, cardiomegalia, doença de Alzheimer, fibrose cística, e doença viral, ou qualquer doença ou distúrbio específico acima descrito. De acordo com outra concretização, a invenção provê métodos para tratar ou prevenir câncer, um distúrbio proliferativo ou um distúrbio mieloproliferativo, compreendendo a etapa de administrar a um paciente um dos compostos acima descritos ou composições farmacêuticas.
Em algumas concretizações, dito método é utilizado para tratar ou prevenir um distúrbio hematopoiético, tal como
leucemia mielógena aguda (AML), leucemia promielocítica aguda (APL), leucemia mielógena crônica (CML), e leucemia linfocítica aguda (ALL).
Em outras concretizações, dito método é utilizado para tratar ou prevenir distúrbios mieloproliferativos, tais como policitemia vera, trombocitemia, metaplasia mielóide com mielofibrose, leucemia mielógena crônica (CML) , leucemia mielomonocítica crônica, síndrome hipereosinofílica, leucemia mielomonocítica juvenil, e doença mastocitária sistêmica.
Em outras concretizações ainda, dito método é utilizado para tratar ou prevenir câncer, tais como câncer de mama, cólon, próstata, pele, pâncreas, cérebro, trato genitourinário, sistema linfático, estômago, laringe, e pulmão, incluindo adenocarcinoma pulmonar, câncer pulmonar de pequenas células, e câncer pulmonar não de pequenas células.
De acordo com outra concretização, a invenção provê métodos para tratar ou prevenir uma condição mediada por quinase, compreendendo a etapa de administrar a um paciente um composto de fórmula I ou uma composição compreendendo dito composto. Em algumas concretizações, dita quinase é uma Aurora quinase.
Outro aspecto da invenção refere-se a inibir a atividade da quinase num paciente, compreendendo administrar ao paciente um composto de fórmula I ou uma composição compreendendo dito composto. Em algumas concretizações, dita quinase é uma Aurora quinase (Aurora A, Aurora B, Aurora C) FLT-3, JAK-2, JAK-3, ITK, Abi, Abl (T315I) , Arg, FGFRl, MELK, MLKl, MuSK, Ret, TrkA, PLK4, Tie-2, e TrkA.
Outro aspecto da invenção refere-se a inibir a atividade da quinase numa amostra biológica, cujo método compreende contatar dita amostra biológica com um composto de fórmula I ou uma composição compreendendo dito composto. O termo "amostra biológica", conforme aqui utilizado, significa uma amostra in vitro ou ex-vivo, incluindo, sem limitação, culturas celulares ou seus extratos; material biopsiado obtido de um mamífero ou seus extratos; e sangue, saliva, urina, fezes, sêmen, lágrimas ou outros fluidos corporais ou seus extratos.
A inibição da atividade da quinase numa amostra biológica é útil para uma variedade de objetivos conhecidos pelo habilitado na técnica. Exemplos de tais objetivos incluem, porém não se restringem à transfusão de sangue, armazenamento de amostra biológica para transplante de órgão, e ensaios biológicos.
Dependendo das condições específicas a serem tratadas ou prevenidas, fármacos adicionais, que são normalmente administrados para tratar ou prevenir aquela condição, podem ser administrados juntamente com os compostos da presente invenção. Por exemplo, os agentes quimioterápicos ou outros agentes anti-proliferativos podem ser combinados com os compostos da presente invenção para tratar doenças proliferativas. Exemplos de agentes quimioterápicos conhecidos incluem, porém não se restringem a Gleevec®, adriamicina, dexametasona,vincristina, ciclofosfamida, fluorouracil, topotecan, taxol, interferons, e derivados de platina.
Outros exemplos de agentes dos compostos da presente invenção podem também ser combinados com, inclusive, sem limitação: tratamentos para doença de Alzheimer tais como Aricept® e Excelon®; tratamento para doença de Parkinson tais como L-DOPA/carbidopa, entacapone, ropinrole, pramipexol, bromocriptina, pergolide, trihexefenidila, e amantadina; agentes para tratar Esclerose Múltipla (EM) tal como beta-interforon (ex: Avonex® e Rebif®), Copaxone® e mitoxantrona; tratamento para asma tal como albuterol e Singulair®; agentes para tratar esquizofrenia tal como zyprexa, risperidona (Risperdal) , seroquel e haloperidol; agentes antiinf lamatórios tais como os corticosteróides, bloqueadores de TNF, IL-I RA, azatioprina, ciclofosfamida, e sulfasalazina; agentes imunomoduladores e imunossupressores tais como ciclosporina, tacrolimus, rapamicina, micofenolato de mofetila, interferons, corticosteróides, ciclofofamida, azatioprina, e sulfasalazina; fatores neurotróficos tais como inibidores de acetilcolinesterase, inibidores de ΜΑΟ, interferons, anticonvulsivantes, bloqueadores dos canais iônicos, riluzol, e agentes antiparkinsonianos; agentes para tratar doença cardiovascular, tais como os betabloqueadores, inibidores de ACE, diuréticos, nitratos, bloqueadores de canais de cálcio, e estatinas; agentes para tratar doença hepática tais como os corticosteróides, colestiramina, interferons, e agentes antivirais; agentes para tratar distúrbios sangüíneos, tais como os corticosteróides, agentes antileucêmicos, e fatores de crescimento; e agentes para tratar distúrbios de imunodeficiência tal como a gamaglobulina. Outra concretização provê um uso simultâneo, separado ou seqüencial de uma preparação combinada.
Os agentes adicionais podem ser administrados separadamente, como parte de um regime de dosagem múltiplo, do composto ou composição contendo inibidor de quinase. Alternativamente, tais agentes podem fazer parte de uma forma de dosagem única, misturados juntamente com o inibidor de quinase numa composição única.
Métodos para avaliar a atividade dos compostos da presente invenção (ex: ensaios de quinase) são conhecidos no estado da técnica e também são descritos no exemplo citado.
Para que a presente invenção seja melhor compreendida, são descritos os seguintes exemplos de preparação e teste. Esses exemplos são para fins de ilustração apenas e não devem ser interpretados como restringindo o escopo da invenção em nenhum aspecto. Todos os documentos aqui citados são aqui incorporados por referência.
EXEMPLOS
Conforme aqui utilizado, o termo "Rt(min)" refere-se ao tempo de retenção de HPLC, em minutos, associado com o composto. Salvo se indicado de outra forma, o método de HPLC utilizado para obter o tempo de retenção relatado é o seguinte:
Coluna : Coluna ACE C8, 4,6 χ 150 mm
Gradiente: 0-100% acetonitrila+metanol 60:40 (20 mM Tris fosfato)
Taxa de escoamento : 1,5 ml/minuto Detecção: 225 nm.
Amostras de espectrometria de massa foram analisadas num espectrômetro de massa MicroMass Quattro Micro operado num modo MS simples com ionização por eletropulverização. As amostras foram introduzidas no espectrômetro de massa utilizando cromatografia. A fase móvel para todas as análises de espectrometria de massa consistia de 10 mM acetato de amônio pH 7 e uma mistura 1:1 de acetonitrila-metanol, as condições de gradiente de coluna foram de 5%-100% acetonitrila-metanol durante um tempo de gradiente de 3,5 min e 5 mins de tempo de operação numa coluna ACE C8 3,0 χ 75 mm. Taxa de escoamento foi de 1,2 ml/min.
Os espectros 1H-NMR foram registrados a 4 00 MHz utilizando um instrumento Bruker DPX 400. Os compostos seguintes de fórmula I foram preparados e analisados como segue.
Exemplo 1
<formula>formula see original document page 104</formula>
N- (4- (4- (5-metiltiazol-2-ilamino)-6-cloropirimidin-2- iltio)fenil)ciclopropanocarboxamida:
Uma suspensão de N-(4 -(4,6-dicloropirimidin-2- iltio)fenil)ciclopropano-carboxamida (5.Og, 14.7 mmol), amino-5-metiltiazol (1.85g, 16.2 mmol), tris(dibenzilidenoacetona) dipaládio (0.673g,
0.74mmol), 4,5-bis(difenilfosfino)-9, 9-dimetil-xanteno (0.636g, l.lOmmol) e bicarbonato de sódio (2.18g, 20.58mmol) em dioxano (120ml) foi aquecida a IOO0C durante 2h. A mistura de reação foi então deixada esfriar até temperatura ambiente antes que o precipitado marrom-claro fosse coletado por filtração, lavado com acetato de etila (50 ml) água (3 χ 30 ml) e então dietil éter (50 ml) e secado para dar o composto título na forma de um sólido marrom-claro (4.32g, 70%). 1H NMR (DMSO) 0.81 (4 H7 d), 1.83 (1 H, m), 2.09 (3 H, s), 6.35 (1 H, br s), 6.88 (1 H, s), 7.53 (2 H, d), 7.74 (2 H, d), 10.48 (1 H, s). MS(ES+): 418. Exemplo 2
<formula>formula see original document page 105</formula>
N- (4- (4- (5-metiltiazol-2-ilamino) -6- (3- (dimetilamino) azetidin-l-il)pirimidin-2 iltio)fenil) ciclopropano carboxamida:
Uma suspensão de N- (4-(4-(5-metiltiazol-2-ilamino)-6- cloropirimidin-2-iltio) fenil) ciclopropanocarboxamida (13 8mg, 0.33mmol), dicloridrato de 3- dimetilaminoazetidina (178mg, l.Ommol), N,N- diisopropiletilamina (0.34ml, 1.98mmol) em n-butanol (10ml) foi aquecida a 90°C durante 17 h. A mistura de reação foi então deixada esfriar até temperatura ambiente, concentrada em vácuo. O produto bruto foi purificado em HPLC para dar o composto título na forma de um sólido esbranquiçado (106mg, 58%). 1H NMR (DMSO) 0.82-0.81 (4 Η, m) , 1.87-1.81 (1 Η, m) , 2.07 (3 Η, s) , 2.78-2.77 (6 Η, m) , 4.20 (5 Η, s) , 5.56 (1 Η, s) , 6.94 (1 Η, s), 7.52 (2 Η, d), 7.76 (2 Η, d), 10.55 (1 Η, s). MS (ES+) : 482.
A Tabela 3 abaixo mostra dados para certos compostos representativos preparados de acordo com o método descrito no Esquema I e nos Exemplos 1-2. Os números do composto correspondem aos compostos que constam da Tabela 1.
Tabela 3
<table>table see original document page 106</column></row><table> Exemplo 3
<formula>formula see original document page 107</formula>
2,6-Difluoro -N-[4-(4, 6-dicloro-pirimidin-2- ilsulfanil)-fenil]-benzamida:
Um frasco de fundo redondo de 250 ml equipado com um condensador foi carregado com 4,6-dicloro-2- me tanossulfonil pirimidina (4.2g, 18.8mmol), 2,6- difluoro-,Ν- (4-mercapto-fenil) -benzamida (4 . 98g, 18.8mmol) e ter-butanol (75ml) sob nitrogênio. A mistura de reação foi completamente degasificada e então aquecida a 90°C durante 2h. A mistura de reação foi deixada esfriar até temperatura ambiente e concentrada em vácuo. 0 resíduo sólido foi recolhido em acetato de etila (50 ml) e lavado com solução saturada de bicarbonato de sódio e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio, filtrada e concentrada até que o produto começasse a precipitar. A mistura foi então resfriada e envelhecida durante 12 horas. 0 produto foi coletado por filtração, lavado com acetato de etila frio e secado o que deu o composto título na forma de um sólido esbranquiçado (2,7g, 35%) 1H NMR (DMSO) 7.32 (2H, m) , 7.61 (3H, m) , 7.79 (1H, s), 7.82 (2H, d), 10.9 (1H, s). MS (ES+): 412.19
Exemplo 4
<formula>formula see original document page 107</formula>
2,6-DifIuoro-N- {4-[4-cloro-6-(5-metil-2H-pirazol-3- ilamino) -pirimidin-2-ilsulfanil]-fenil}-benzamida: Um frasco de fundo redondo de 5 0 ml foi carregado com 2 , 6-dif luoro-2\7- [4- (4 , 6-dicloro-pirimidin-2-ilsulfanil) - fenil]-benzamida (l.Og, 2.3mmol), 5-metil-2Jí-pirazol-3 - ilamina (250mg, 2.58mmol), iodeto de sódio (351mg, 2.34mmol), diisopropiletilamina (333mg, 2.58mmol) e dimetilformamida (5ml) sob nitrogênio. A mistura de reação foi agitada a 90°C durante 18h, então deixada esfriar até temperatura ambiente. A mistura de reação foi diluída com acetato de etila (25 ml) , lavada com solução saturada de bicarbonato de sódio e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio, filtrada e concentrada em vácuo. 0 composto foi purificado através de cromatografia de flasheamento (75% a 80% acetato de etila/petróleo) para dar o composto título (1.08g, 98%). IH NMR (DMSO) 2.00 (3H, s) , 5.25 (IHf brs) , 6.48 (1H, brs) , 7.30-7.97 (7H, m) , 10.28 (1H, s) , 10.89 (1H, s), 11.90 (1H, s) ; MS(ES+): 473.4.
Exemplo 5
<formula>formula see original document page 108</formula>
N-{4- [4-Azetidin-l-il-6-(5-metil-2H-pirazol-3-ilamino)- pirimidin-2-ilsulfanil] - fenil}-2 , 6-Difluoro -benzamida: Um frasco de fundo redondo de 10 ml foi carregado com 2,6-difIuoro-W-{4-[4-cloro-6-(5-metil-2H-pirazol-3 - ilamino)-pirimidin-2-ilsulfanil]-fenil}-benzamida (150mg, 0.31mmol), azetidina (35mg, 0.62mmol), diisopropiletilamina (80mg, 0.62mmol) e n-butanol (1.5ml). A mistura de reação foi agitada a 8O0C por 4h, então resfriada e concentrada em vácuo. 0 composto foi purificado através de HPLC preparatória (MeCN/água + 0.05% TFA 10/90 a 100/0 durante 10 min)para dar o composto título na forma de um sal de ácido trifluoroacético (54mg, 29%). IH NMR (DMSO) 2.05 (3H, s) , 2.25-2.36 (2H, m) , 3.70-3.98 (4H, m, mascarado), 5.31 (IH, s) , 5.52 (IH, brs), 7.39 (2H, m) , 7.46-7.67 (3H, m) , 7.79 (2H, d), 9.35 (IH, brs), 11.04 (IH, s) , 11.80 (IH, brs); MS (ES+):494.5.
A Tabela 4 abaixo mostra dados para certos compostos representativos preparados de acordo com o método descrito no Esquema II e nos Exemplos 3-5. Os números do composto correspondem aos compostos apresentados na Tabela 1.
Tabela 4
<table>table see original document page 109</column></row><table> <table>table see original document page 110</column></row><table> <table>table see original document page 111</column></row><table> Exemplo 6
<formula>formula see original document page 112</formula>
2-Cloro-.W- [4- (4 , 6-dicloro-pirimidin-2-ilsulfanil) - fenil]-benzamida:
Um frasco de fundo redondo de 250 ml foi carregado com 4,6-dicloro-2-metanossulfonilpirimidina (7.00 g, 26.6 mmol), 2-cloro-W-(4-mercapto-fenil) -benzamida (6.33 g, 27.9 mmol) e acetonitrila (100 mL) sob nitrogênio. Uma vez dissolvido o sólido, a mistura de reação foi resfriada até 0°C e trietilamina ( (2 x 10 mL) para dar o composto titulo na forma de um sólido branco (8.03 g, 74%). IH NMR (DMSO) 7.4-7.6 (5H, m) , 7.7 (1H, s), 7.80-7.85 (2H, d), 10.9 (1H, s). MS (ES+): 412 Exemplo 7
2-Cloro-N- {4-[4-cloro-6-(5-metil-2H-pirazol-3-ilamino) - pirimidin-2-ilsulfanil]-fenil}-benzamida:
Um frasco de fundo redondo de 250 ml foi carregado com 2-cloro-Jí- [4- (4, 6-dicloro-pirimidin-2-ilsulfanil) - fenil]-benzamida (12.5 g, 30.4 mmol), 5-metil-2H- pirazol-3-ilamina (3.55 g, 36.5 mmol), iodeto de sódio (4.56 g, 30.4 mmol), N,N-diisopropiletilamina (6.9 mL, 40.0 mmol) e N,N- dimetilf ormamida (125 mL) sob nitrogênio. A mistura de reação foi agitada a 90°C durante 5 horas, e então deixada esfriar até temperatura ambiente. Água (600 mL) foi adicionada e a suspensão resultante agitada à temperatura ambiente durante 2hs e o sólido coletado por filtração e secado. O sólido branco resultante foi triturado com acetato de etila quente (50 ml) , filtrado e lavado com acetato de etila (1 χ 2 0 ml) para dar o composto título na forma de um sólido branco (11.76 g, 82 %). IH NMR (DMSO) : 2.16 (3H, s), 5.30 (1H, s), 6.48 (1H, s), 7.49-7.62 (6H, m), 7.89 (2H, m), 10.28 (1H, s), 10.84 (1H, s), 11.93 (1H, s); MS (ES+): 471.
Exemplo 8
<formula>formula see original document page 113</formula>
N-{4-[4-Azetidin-1-il-6-(5-metil-2H-pirazol-3-ilamino)- pirimidin-2-ilsulfanil]-fenil}-2 -cloro-benzamida: Um frasco de fundo redondo de 500 ml foi carregado com 2-cloro-N-{4- [4-cloro-6-(5-metil-2H-pirazol-3-ilamino)- pirimidin-2-ilsulfanil]-fenil}-benzamida (16.0 g, 34.0 mmol) , azetidina (3.87 g, 68.0 mmol) , N,N- diisopropiletilamina (13.0 mL, 74.7 mmol) e n-butanol (250 mL) . A mistura de reação foi agitada a 90°C durante 5 h. A mistura de reação foi resfriada e concentrada em vácuo. Dietil éter (200 mL) foi adicionado, ocorrendo a precipitação de um sólido marrom-claro. A solução foi filtrada e o sólido recristalizado de etanol para dar o produto puro na forma de um sólido branco (9.42 g, 52%) 1H NMR (DMSO) : 2.04 (3H, s), 2.32 (2H, m) , 3.87 (4H, m), 5.39 (1H, s), 5.66 (1H, br s), 7.48-7.59 (6H, m), 7.82 (2H, m), 9.87 (1H, s), 10.74 (1H, s), 11.68 (1H, s); MS (ES+): 492. Outro método utilizado para preparar o Exemplo 8 é descrito abaixo:
A uma suspensão de 2-cloro-N-{4-[4-cloro-6-(5-metil-2H- pirazol-3-ilamino)-pirimidin-2-ilsulfanil]-fenil}- benzamida (169 g, 0.36 mol) em 2-propanol (1.3 L) azetidina (100 g, 1.76 mol) foi adicionado em porções. A mistura de reação foi aquecida até 80-82°C. Após 24 horas, di-isopropiletilamina (73.4 g, 0.57 mol) foi adicionada. O progresso da reação foi monitorado através de HPLC. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida até secagem, submetida à azeotropia com metanol três vezes (3 χ 650 mL) , agitada durante 2 hours em metanol (1 L) a 40°C, e resfriada até 10°C. O sólido esbranquiçado resultante foi filtrado. O material isolado foi transformado em pasta em acetonitrila refluxante durante 3 horas, resfriado até 20-25°C, filtrado e secado num forno a vácuo da noite para o dia. O material foi novamente transformado 1 em pasta em acetonitrila refluxante durante 3 horas, resfriado até 20-25°C e filtrado. O material foi deixado secar até que apresentasse peso constante. O produto desejado foi isolado na forma de um sólido esbranquiçado (154 g, 86%). 2 0 A Tabela 5 abaixo mostra dados para certos compostos representativos preparados de acordo com o método descrito no Esquema II e nos Exemplos 6-8. Os números do composto correspondem aos compostos apresentados na Tabela 1. 25 Tabela 5
Composto No. M+l (obs) IH NMR Rt (mins) 1-5 492 (DMS0-d6): 2.04 (3H, s), 2.32 (2H, m) , 3.87 (4H, m) , 5.39 (IH, s) , 5.66 (IH, br s) , 7.48-7.59 (6H, m), 7.82 (2H, m), 9.87 (IH, s), 10.74 (IH, s), 11.68 (IH, s) 9 . 00 1-26 454 (DMS0-d6) : 1.49 (9H, s) , 1.99 (3H, brs) , 2.29 (2H, qn) , 3.87 (4H, t), 5.33 (IH, brs), 5.50 (IH, vbrs), 7.44 (2H, d), 7.55 (2H, d), 9.19 (IH, brs), 9.62 (IH, s), 11.66 (IH, brs) 9.49 <table>table see original document page 115</column></row><table> <table>table see original document page 116</column></row><table> Exemplo 9
<formula>formula see original document page 117</formula>
Ácido 4- [4-Azetidin-l-il-6-(5-metil-2H-pirazol-3- ilamino)-pirimidin-2-ilsulfanil] -benzóico: Um frasco de fundo redondo de 50 ml equipado com um condensador foi carregado com metil éster de ácido 4- [4-azetidin-1-il-6-(5-metil-2H-pirazol-3-ilamino) - pirimidin-2-ilsulfanil]-benzóico (800mg, 2.0mmol), solução aquosa de hidróxido de sódio 2M (5ml), tetrahidrofurano (30ml) e metanol (5ml). A mistura de reação foi aquecida até refluxo durante uma hora. A mistura de reação foi deixada esfriar até temperatura ambiente e concentrada em vácuo. O resíduo sólido foi recolhido em metanol (30 ml) e concentrado em ácido clorídrico (1ml). O solvente foi então removido sob pressão reduzida para dar o composto título (0.84g, 100%) na forma de um sal mono HCl. IH NMR (DMSO) 2.05-2.10 (3H, s), 2.20-2.30 (2H, m), 3.80-3.85 (2H, t), 4.05-4.10 (2H, s), 7.40-7.45 (2H, d), 7.85-7.90 (2H, d). MS (ES+): 383
Exemplo 10
4- [4-Azetidin-1-il-6-(5-metil-2H-pirazol-3-ilamino)- piriraidin-2-ilsulfanil] -N-ciclopentil-benzamida: Um frasco de fundo redondo de 25 ml foi carregado com ácido 4- [4-azetidin-l-il-6- (5-metil-2fí-pirazol-3- ilamino)-pirimidin-2-ilsulfanil]-benzóico (200mg, 0.48mmol), ciclopentil amina (85mg, lmmol), tetrafluoroborato de 2-(ΙΗ-benzotriazol-l-il)- 1,1,3,3,-tetrametilurônio (32Img, lmmol), diisopropiletilamina (0.34ml, 2mmol) em dimetilformamida (5ml), sob nitrogênio. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 18 horas e então foi diluída com acetato de etila (40 ml) , lavada com uma solução aquosa saturada de hidrogeno carbonato de sódio (40 ml) e salmoura (40 ml). A camada orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio, filtrada e concentrada em vácuo. 0 resíduo foi triturado em diclorometano para dar o composto título. IHNMR (DMS0-d6): 1.60-1.65 (4H, m), 1.70-1.80 (2H, m), 1.95-2.10 (5H, m) , 2.20-2.30 (2H, m) , 3.90-4.00 (4H, s) , 4.30-4.35 (1H, m) , 5.35-5.40 (1H, s) , 7.70-7.75 (2H, d), 8.00-8.05 (2H, d), 8.45-8.50 (1H, d), 9.3 (1H, S). MS (ES+): 450.
A Tabela 6 abaixo mostra dados para certos compostos representativos preparados de acordo com o método descrito no Esquema VI e nos Exemplos 9-10. Os números do composto correspondem aos compostos apresentados na Tabela 1. Tabela 6
<table>table see original document page 118</column></row><table> <table>table see original document page 119</column></row><table> Exemplo 11
<formula>formula see original document page 120</formula>
2- (4-aminofeniltio)-6-(azetidin-l-il)-N- (3-metil-lH- pirazol-5-il)pirimidin-4-amina.
0 Composto 1-26 (2.53g, 5.6 mmol) foi dissolvido em 1:1 TFA-DCM (20 mL) e a solução resultante deixada repousar da noite para o dia à temperatura ambiente. A solução foi concentrada em vácuo. O resíduo foi recolhido em EtOAc e lavado com solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (x2) e então salmoura e secado sobre sulfato de sódio. 0 sólido marrom-claro resultante (1.8g, 91%) [MS (ES+) 354] foi usado sem purificação ou caracterização adicional na etapa seguinte.
Exemplo 12
<formula>formula see original document page 120</formula>
N- (4- (4- (3-metil-lH-pirazol-5-ilamino)-6-(azetidin-l- il) pirimidin-2-iltio) fenil)-4-metilbenzamida. 2-(4-Aminofeniltio)-6-(azetidin-l-il)-N-(3-metil-lH- pirazol-5-il)pirimidin-4-amina (200mg, 0.57 mmol) foi recolhido em piridina (2ml) e cloreto de p-toluoíla (0.187 mL, 1.42 mmol) foi adicionado em gotas à temperatura ambiente. Após 15 minutos, a mistura de reação foi concentrada em vácuo e o resíduo recolhido em metanol (3 ml) . Metóxido de sódio (solução 2 5% em peso em MeOH, 1 ml) foi adicionado e a solução turva resultante agitada à temperatura ambiente durante 15 minutos. A mistura de reação foi purificada diretamente através de cromatografia (sílica, eluição gradiente 5- 100% EtOAc-petróleo) para dar o composto título (91mg, 34%) na forma de um sólido branco. 1H NMR: (4 00 MHz, DMSO) 1.99 (3H, brs), 2.33 (2H, qn) , 2.40 (3H, s) , 3.88 (4H, t), 5.38 (1H, brs), 5.59 (1H, vbrs), 7.36 (2H, d), 7.53 (2H, d), 7.87 (2H, d), 7.91 (2H, d), 9.20 (1H, brs), 10.36 (1H, s), 11.66 (IH, brs); MS (ES+) 472. A Tabela 7 abaixo mostra dados para certos compostos representativos preparados de acordo com o método descrito no Esquema VII e nos Exemplos 11-12. Os números do composto correspondem aos compostos apresentados na Tabela 1.
Tabela 7
<table>table see original document page 121</column></row><table> <table>table see original document page 122</column></row><table>
Exemplo 13
<formula>formula see original document page 122</formula>
N- (4-(4,6-diiodopirimidin-2-iltio)fenil) propionamida Iodeto de sódio (13.5g, 90mmol) foi adicionado a uma solução de N-(4-(4,6-dicloropirimidin-2-iltio)fenil) propionamida (5g, 15mmol) em 60% HI (50ml). A mistura de reação foi agitada a 70°C por 10h. A suspensão foi filtrada. O sólido recuperado foi recolhido em solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (~ 2 00ml). As extrações foram executadas com acetato de etila (3 x 100ml). A camada orgânica foi lavada com solução saturada de bicarbonato de sódio e salmoura. O sólido foi triturado numa quantidade mínima de diclorometano para dar o composto título na forma de um sólido branco (6g, 78%). ES+ 512.
<formula>formula see original document page 122</formula>
N-(4-(4-(4,5-dimetil-1H-pirazol-3-ilamino)6- iodopirimidin-2-iltio)fenil)propionamida 5-metil-1H-pirazol-3-amina (580mg, 6 mmol) foi adicionado a uma mistura agitada de N-4-(4.6- diiodopirimidin-2-iltio)fenil)propionamida (3g, 5.9 mmol)e diisopropil-etilamina (1.4ml, 8.3mmol) em dimetilformamida (40 ml) . A mistura de reação foi agitada a 90°C durante 6 horas. A mistura de reação foi diluída com acetato de etila 9200 ml) e lavada com solução saturada de bicarbonato de sódio (-100 ml) e salmoura, secada sobre sulfato de magnésio, e então concentrada em vácuo. 0 resíduo foi purificado através de cromatograf ia de f lasheamento (40g SiO2, pentano/acetato de etila) para dar o composto título (1.8g, 64%).
<formula>formula see original document page 123</formula>
N- (4- (4-(4,5-dimetil-lH-pirazol-3-ilamino)-6-(3- azetidin-l-il)-3-metilbut-l-inil)pirimidin-2- iltio)fenil)propionamida
Azetidina (57mg, lmmol) foi adicionada a uma solução agitada de 3-cloro-3-metilbut-l-ino (102.5mg, lmmol), trietilamina ( 202mg, 2mmol) e cloreto de cobre (I) (7.5mg, catalisador) em dimetilformamida (5ml)sob nitrogênio. A mistura de reação foi agitada durante 2 horas à temperatura ambiente. Então, N-(4-(4-(4,5- dimetil-lH-pirazol-3-ilamino) -6-iodopirimidin-2- iltio)fenil)propionamida (150mg, 0.3 mmol) e dicloro- di-(trifenilfosfino)-paládio (50mg, catalisador) foram adicionados à mistura de reação, que foi agitada por mais 18 horas. A solução foi concentrada em vácuo. 0 resíduo foi purificado sobre sílica gel, eluindo com acetato de etila/petróleo/trietilamina (0-100-0 a 98-0- 2) . 0 produto foi obtido na forma de um sólido branco (130mg, 90%); 1H NMR CD3OD δ 1.20-1.25 (3H, t), 1.30- 1.35 (6Η, s), 2.00-2.05 (3Η, s), 2.1 (2Η, s), 2.35-2.40 (2Η, qd) , 3.60-3.75 (6Η, br s) , 5.35-5.45 (1Η, s), 6.50-6.60 (1Η, s) , 7.50-7.55 (2H, d), 7.75-7.80 (2H, d) ; ES+ 476
Exemplo 14
<formula>formula see original document page 124</formula>
2-(2-metilquinolin-6-iltio) -6-(3-ciclopropil-3- fluoroazetidin-1-il)-N-(3-metil-1H-pirazol-5- il)pirimidin-4-amina
<formula>formula see original document page 124</formula>
6-Cloro-N-(3-metil-lH-pirazol-5-il)-2- (metiltio)pirimidin-4-amina
A uma solução agitada de 4,6-dicloro-2- (metiltio) pirimidina (25 g, 0.128 mol) em DMF (100 ml) adicionou-se diisopropilamina (19.8 g, 0.154 mol) seguido de 3-amino-5-metilpirazol (13.7 g, 0.154 mol) em porções durante 10 minutos. A solução foi aquecida até 50°C durante 16 horas, após o que todo o material de partida reagiu (através de análise LC/MS). A mistura foi resfriada até temperatura ambiente e despejada em água (250 ml). O precipitado foi filtrado e o sólido úmido transformado em pasta em dietil éter (300 ml). O sólido foi novamente filtrado e transformado novamente em pasta em metanol (100 ml) . O produto filtrado foi secado ao ar no sinterizador, e então secado sob vácuo o que deu o composto titulo na forma de um sólido esbranquiçado (22.lg, rendimento 66%). 1H NMR (d6-DMS0) δ 2.22 (3H, s, CH3), 3.31 (3H, s, CH3), 6.00-7.50 (2H, br, CH), 10.17 (1H, s, NH), 12.10 (1H, s, NH); MS ES + 256.08, ES - 254.25.
<formula>formula see original document page 125</formula>
6-cloro-W- (3-metil-lH-pirazol-5-il) -2- (metilssulfonil) pirimidin-4-amina
A uma suspensão agitada de 6-cloro-N- (3-metil-lH- pirazol-5-il) -2-(metilssulf inil) pirimidin-4-amina (8 g, 31.2 mmol) em metanol (200 ml) a 0°C foi adicionada uma suspensão de Oxone (44 g, 71.7 mmol) em água (100 ml) em porções durante 10 minutos. A mistura foi agitada durante 30 minutos a 0°C e então aquecida até temperatura ambiente e agitada por mais 2 horas. A mistura de reação foi filtrada e o sólido resultante transformado em pasta
em bicarbonato de sódio aquoso. A mistura foi filtrada e o sólido lavado com água, e então dietil éter. 0 sólido foi transformado em pasta em acetato de etila, filtrado e secado o que deu o produto título na forma de um sólido esbranquiçado (7.9 g, 88%); 1H NMR (d6- DMSO) δ 2.24 (3H, s) , 3.35 (3H, s) , 5.85 (0.5H, brs), 6.50 (0.5H, brs), 6.95 (0.5H, brs), 8.00 (0.5H, brs), 10.95 (1H, s) , 12.28 (1H, s) ; MS ES + 288.07, ES - 286 . 25. <formula>formula see original document page 126</formula>
2-(2-metilquinolin-6-iltio)-6-cloro-N-(3-metil-lH- pirazol-5-il)pirimidin-4-amina
<formula>formula see original document page 126</formula>
2-metil-6-(2-(2-metilquinolin-6- il)dissulfanil)quinolina
A uma pasta agitada de dissulfeto de 4-aminofenila (5.0 g, 0.02 mol) em HCl 6M refluxante (65 ml) adicionou-se crotonaldeído (4.2 g, 0.06 mol) em gotas durante 90 minutos. A mistura resultante foi refluxada por mais 2 horas, e então resfriada até temperatura ambiente. Amônia aquosa conc. foi adicionada para ajustar o pH em neutro e a mistura extraída com acetato de etila. Os extratos combinados foram lavados com água, e então com salmoura aquosa saturada, secados (MgSO4) , filtrados e concentrados. O produto bruto foi purificado sobre sílica gel, eluindo com 50 a 100% acetato de etila/petróleo. O produto era um óleo (2.57 g, 37%); MS ES + 349.17.
<formula>formula see original document page 126</formula>
2-metilquinolino-6-tiol
A uma solução de dissulfeto (886 mg, 2.55 mmol) em DMF (12 ml)/ água (0.5 ml) adicionou-se trietilamina (284 mg)seguido de cloridrato de tris-(2-carboxietil)fosfina (1.52 g, 5.32 mmol) . A mistura foi agitada durante 30 minutos, e então diluída com acetato de etila/água. A fase orgânica foi separada e a fase aquosa extraída com acetato de etila. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura, secados (MgSO4) , filtrados e concentrados. 0 tiol bruto (870 mg) foi usado diretamente sem purificação adicional; MS ES +176.02, ES - 174.13
<formula>formula see original document page 127</formula>
2-(2-metilquinolin-6-iltio) -6-cloro-N-(3-metil-1H- pirazol-5-il)pirimidin-4-amina
A uma suspensão agitada de õ-cloro-N- (3-metil-1H- pirazol-5-il) -2- (metilssulf onil) pirimidin-4 -amina (2 . 02 g, 7.03 mmol) em ter-butanol (20 ml) adicionou-se 2- metilquinolino-6-tiol (1.23 g, 7.03 mmol). A mistura foi aquecida até 70°C durante 4 horas, e então resfriada até temperatura ambiente e diluída com acetato de etila/carbonato de potássio aquoso saturado. A mistura foi filtrada para remover material de partida não reagido e a camada orgânica removida do filtrado. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila e os extratos orgânicos combinados lavados com salmoura, secados (MgSO4), filtrados e concentrados. 0 produto bruto foi purificado sobre sílica gel, eluindo com 90 a 100% acetato de etila/petróleo. 0 composto título foi ainda purificado através de trituração com diclorometano o que deu o produto na forma de um sólido branco (514 mg, 19%); MS ES + 383.25, ES - 381.36. <formula>formula see original document page 128</formula>
2-(2-metilquinolin-6-iltio)-6-(3-ciclopropil-3- fluoroazetidin-1-il)-N-(3-metil-lH-pirazol-5- il)pirimidin-4-amina
2-(2-metilquinolin-6-iltio) -6-cloro-2V-(3-metil-lH- pirazol-5-il)pirimidin-4-amina (50 mg, 0.13 mmol) foi transformado em pasta em n-butanol (1ml). Diisopropilamina foi adicionada (151 mg, 1.17 mmol) seguida de 4-(1-pirrolidinil)-piperidina (58 mg, 0.46 mmol). A mistura foi aquecida até 85°C durante 14 horas, e então deixada esfriar até temperatura ambiente. A mistura de reação foi purificada através de cromatografia de coluna (5% MeoH/95% diclorometano) para dar um sólido esbranquiçado (25 mg, 21%) ; 1H NMR (400 MHz, (DMSO) δ 0.42-0.46 (2H, m), 0.59 - 0.63 (2H, 15 m), 1.36 - 1.38 (1H, m), 1.60 (3H, brs), 2.69 (3H, s), 3.80 - 3.94 (4H, m), 5.10 (1H, brs), 5.76 (1H, s), 7.48 (1H, d), 7.82 (1H, dd), 7.95 (1H, d), 8.22 (1H, d), 8.30 (1H, d), 9.33 (1H, s) , 11.62 (1H, s) ; MS ES +462, ES -460.
Exemplo 15
<figure>figure see original document page 128</figure>
Metanossulfonato de 1-benzidril-3-metilazetidin-3-ila A uma pasta de cloridrato de 1-benzidril-3- metilazetidin-3-ol (10.00 g, 34.54 mmol) em diclorometano (80 ml) adicionou-se trietilamina (8.00 g, 79.20 mmol) e a mistura resfriada até 0°C. Cloreto de metanossulfonila (5.20 g, 45.41 mmol) foi adicionado gota a gota e a mistura de reação deixada aquecer até temperatura ambiente e agitada durante 4hs. A reação foi diluída com água e diclorometano e a camada orgânica lavada com água, salmoura e então secada (MgSO4) e concentrada para dar um sólido rosa-pálido. 0 sólido foi purificado sobre sílica gel eluindo com acetato de etila/petróleo 20% para prover o composto título na forma de um sólido branco (1.69 g, 64 %) . IH NMR (CDCl3) 1.92 (3H, s), 3.05 (3H, s) , 3.33 (4H, s), 4.42 (1H, s) , 7.18 - 7.20 (2H, m) , 7.23 - 7.30 (4H, m) , 7.39 - 7.52 (4H, m).
Cloridrato de N- ter-butil-l-benzidril-3-metilazetidin- 3-amina
A uma solução de metanossulfonato de l-benzidril-3- metilazetidin-3-ila (2.00 g, 6.23 mmol) em iso-propanol (10 ml)adicionou-se ter-butilamina (1.36 g, 18.63 mmol) . A mistura foi aquecida a 80°C por 3h. A mistura de reação foi então deixada esfriar até temperatura ambiente e concentrada. 0 resíduo foi transformado em pasta com acetato de etila e filtrado, lavando-se com mais acetato de etila e então concentrado para dar um sólido. 0 sólido foi transformado em pasta em éter e ácido clorídrico (20 ml, 2M em éter) foi adicionado e então agitado por 10 min e filtrado para prover o composto título na forma de um sólido marrom-claro (1.69 g, 74 %) . IH NMR (DMSO) 1.40 (9H, s) , 1.99 (3H, s) , 3.85 (2H, brs) , 4.11 (2H, brs) , 4.71 (1H, brs) , 7.35 - 7.50 (6H, m) , 7.70 - 7.81 (4H, m) , 10.23 (1H, s) .
Cloridrato de N- ter-butil-3-metilazetidin-3-amina A uma pasta de cloridrato de N-ter-butil-l-benzidril-3- metilazetidin-3-amina (1.69 g, 4.91 mmol) em etanol (30 ml) adicionou-se hidróxido de paládio a 10% sobre carbono (160 mg) e a mistura degasificada três vezes com nitrogênio e três vezes com hidrogênio. A mistura foi então agitada sob atmosfera de hidrogênio 4O°C(banho maria quente) por 3 horas e então à temperatura ambiente por mais 12 horas. A reação foi degasificada com nitrogênio e filtrada em placa de celite e concentrada. O composto foi usado na forma bruta em reação química posterior. 1H NMR (MeOH) 1.50 (9H, s), 1.99 (3H, s), 4.19 (2H, d), 4.91 (2H, d). Exemplo 16
<formula>formula see original document page 130</formula>
Cloridrato de 1-benzidril-3-isopropoxi-3-metilazetidina Uma pasta de metanossulfonato de 1-benzidril-3- metilazetidin-3-ila(2.75 g, 8.56 mmol) em iso-propanol (150 ml) foi aquecida ate" 60°C. Hidróxido dé "potássio triturado na hora (1,40 g, 25.0 mmol) foi adicionado e a agitação prosseguiu a 60°C da noite para o dia. A mistura de reação foi deixada esfriar até temperatura ambiente e diluída com acetato de etila e água. A fase orgânica foi lavada com salmoura, secada (MgSO4) e concentrada. O resíduo foi purificado sobre sílica gel eluindo com 5 a 8% acetato de etila/petróleo para prover um óleo incolor (1.29 g). O óleo foi dissolvido em éter e ácido clorídrico (5 ml, 2M em éter) foi adicionado e agitado à temperatura ambiente durante 10 minutos. O precipitado resultante foi filtrado e lavado com éter para prover o composto título na forma de um sólido branco (1.23 g, 43 %). IH NMR (CDCl3). 1.12 (6H, d), 1.62 (3H, s), 2.95 (2H, d), 3.15 (2H, d), 3.75 (1H, m), 4.41 (1H, s), 7.15 - 7.30 (6H, m), 7.41 - 7.50 (4H, m). ES+ 296.
Cloridrato de 3-isopropoxi-3-metilazetidina A uma pasta de cloridrato de 1-benzidril-3-isopropoxi- 3-metilazetidina (1.23 g, 3.71 mmol) em etanol (30 ml) adicionou-se hidróxido de paládio a 10% sobre carbono (200 mg) e a mistura degasificada três vezes com nitrogênio e três vezes com hidrogênio. A mistura foi então agitada sob atmosfera de hidrogênio à temperatura ambiente durante 12 h. A reação foi degasifiçada com nitrogênio e filtrada em placa de celite e concentrada. O composto foi usado na forma bruta na reação química seguinte. Exemplo 17
N-(4-((4-(3-metil-1Η-pirazol-5-ilamino)-6-(3-ciano-3- metilazetidin-l-il)pirimidin-2-il)sulfanil)fenil) propionamida
<formula>formula see original document page 131</formula>
3-ciano-3-metilazetidino-l-carboxilato de t-butila Uma solução de 3-cianoazetidino-l-carboxilato de t- butila(0.55 g, 3.04 mmol) in THF (10 ml) foi resfriada até -780C sob uma atmosfera de nitrogênio. LHMDS (3.34 ml, IM TF) foi adicionado em gotas e a solução agitada a -78°C durante 1 hr. lodeto de metila foi adicionado em gotas e a agitação prosseguiu por mais 2 horas. A reação foi rapidamente resfriada com água e diluída com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com salmoura, secada (Na2S04) e concentrada. 0 resíduo foi purificado sobre sílica gel eluindo com acetato de etila/petróleo 20% para prover o composto título na forma de um óleo amarelo-claro (0.46 g, 77 %) . IH NMR (CDCl3) 1.48 (9H, s) , 1.71 (3H, s), 3.82 (2H, d), 4.31 (2H, d) .
Ácido trifluoroacético de 3-metilazetidino-3- carbonitrila
A uma solução de 3-ciano-3-metilazetidino-l-carboxilato de ter-butila (30.0 mg, 0.15 mmol) em diclorometano (5 ml) adicionou-se ácido trifluoroacético (2 ml) e a solução foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. A reação foi concentrada e secada sob vácuo para dar um óleo viscoso que foi usado bruto na reação química seguinte.
<formula>formula see original document page 132</formula>
N- (4- ( (4- (3-metil-lH-pirazol-5-ilamino)-6-(3-ciano-3- metilazetidin-l-il)pirimidin-2-il)sulfanil)fenil) propionamida
A uma suspensão de N- (4-(4-(3-metil-lH-pirazol-5- ilamino) -6-cloropirimidin-2-iltio) fenil) propionamida (150 mg, 0.387 mmol) em n-butanol (4 ml) adicionou-se diisopropilamina (500 mg, 3.87 mmol) seguido de cloridrato de 3-metilazetidino-3-carbonitrila (255 mg, 1.94 mmol). A mistura foi aquecida a 85°C durante 18 horas e então concentrada e o resíduo purificado através de HPLC dirigida à massa o que deu o composto título na forma de um sal de TFA (72 mg, 41%) ; IH NMR (DMSO) 1.05 (3H, t) , 1.65 (3H, s), 2.03 (3H, s) , 2.37 (2H, q) , 3.88 (2H, d), 4.18 (2H, d), 5.37 (1H, s) , 5.60 (1H, brs), 7.50 (2H, d), 7.71 (2H, d), 9.50 (1H, brs), 10.11 (1H, brs); MS ES + 449.4, ES - 447.6.
Exemplo 18
<formula>formula see original document page 132</formula>
N-Benzidrilazetidin-3-ona A uma pasta agitada de 1-(difenilmetil)-3 - hidroxiazetidina (30g, 0.126 mol) em trietilamina (63g, 0.628 mol) adicionou-se uma solução de complexo de trióxido de enxofre-piridina (60g, 0.376 mol) em DMSO anidro (300 ml) em gotas durante 30 minutos. A mistura resultante foi aquecida até 50°C durante 3 0 minutos. A mistura de reação foi então resfriada até temperatura ambiente e despejada numa mistura de água (IL) e acetato de etila (800 ml) . A camada orgânica foi separada e a camada aquosa extraída com acetato de etila (3 χ 200 ml) . As soluções orgânicas combinadas foram então lavadas com água (3 χ 2 00 ml) , então salmoura saturada (200 ml) , secadas (sulfato de magnésio) , filtradas e concentradas. O resíduo foi purificado sobre sílica gel, elüindo com 5-10% acetato de etila/petróleo. 0 produto foi obtido na forma de um sólido branco (26,2g, 86%); 1H NMR CDCl3 δ 4.07 (4H, s) , 4.62 (1H, s) , 7.20-7.39 (6H, m) , 7.53 (4H, d).
<formula>formula see original document page 133</formula>
Cloridrato de 1-Benzidril-3-ciclopropilazetidin-3-ol Uma solução de brometo de ciclopropilmagnégio em THF (0.5M, 6 OOml, 0.5 mol) foi resfriada até -78°C sob atmosfera de nitrogênio. A precipitação pareceu ocorrer nessa temperatura. Uma solução de N-benzidrilazetidin- 3-ona (24.2g, 0.102 mol) em THF anidro (130 ml) foi adicionada em gotas durante 30 minutos. A mistura foi agitada por mais 90 minutos a -78°C após o que solução saturada de bicarbonato de sódio (4 00 ml) e água (100 ml) foram adicionadas lentamente. A mistura foi então diluída com acetato de etila (IL) e deixada aquecer até temperatura ambiente. A fase orgânica era uma emulsão de sais de magnésio mas facilmente separável da camada orgânica) e a fase aquosa extraída com acetato de etila (3x2 00 ml) . As soluções orgânicas combinadas foram então lavadas com salmoura saturada (300 ml) , secadas (sulfato de magnésio) , filtradas e concentradas para dar um óleo amarelo pálido. O produto bruto foi purificado sobre sílica gel, eluindo com 20-30% acetato de etila/petrõleo. 0 álcool resultante (28.3g) foi dissolvido em éter (350 ml) e a solução resfriada até 0°C. Uma solução de HCl em éter (2M, 13 0 ml) foi então adicionada em gotas durante 15 minutos. 0 sal de HCl precipitou da solução. A pasta resultante foi agitada a 0°C por mais 10 minutos e então filtrada. A torta do filtro foi "lavada" com éter(2x10 0 ml) e o solido secado sob vácuo o que deu o produto na forma de um sólido branco. (28.2g, 88%); 1H NMR d6-DMSO δ 0.31-0.50 (4H, m) , 1.35 (0.3H, m) , 0.51 (0.7H, m) , 3.41-4.10 (5H, m) , 5.88 (0.3H, d), 6.05 (0.7H, d), 6.35 (1H, brs) , 7.30- 7.50 (6H, m) , 7.61-7.82 (4H, m) ; ES+ 280.71.
<formula>formula see original document page 134</formula>
Cloridrato
de fluoroazetidina
NaHCO3 saturado (100 ml) foi adicionado a uma suspensão de cloridrato de l-Benzidril-3-ciclopropilazetidin-3-ol 7.78 g, 24.50 mmol) em acetato de etila(100 ml). A mistura foi transferida para um funil de separação e sacudida vigorosamente até que todo o sólido se dissolvesse. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa extraída com acetato de etila (50 ml) . Os extratos orgânicos combinados foram secados (Na2SO4) e concentrados até que se tornassem um óleo. O óleo foi dissolvido em diclorometano (100 ml) e resfriado até -78°C. Trifluoreto de [bis (2-metoxietil) amino] enxofre (5.98 g, 27.05 mmol, 5.0 ml) foi adicionado em gotas e a solução agitada durante 3 0 min a -78°C e então aquecida até O0C e agitada por mais 1 hora. A reação foi rapidamente resfriada com NaHCO3 saturada (50 ml) e salmoura (50 ml) e a camada aquosa extraída com diclorometano (50 ml). Os extratos orgânicos combinados foram secados (Na2SO4) e concentrados para dar um óleo amarelo. 0 produto bruto foi purificado sobre sílica gel, eluindo com 5% acetato de etila/petróleo. 0 álcool resultante foi dissolvido em éter (100 ml) e a solução resfriada até 0°C. Uma solução de HCl em éter (2M, 25 ml) foi então adicionada em gotas durante 5 minutos. 0 sal de HCl precipitou da solução. A pasta resultante foi agitada a O0C por mais 10 minutos e então filtrada. A torta de filtro foi lavada com éter (20 ml) e o sólido secado sob vácuo o que deu o produto na forma de um sólido branco (4.71 g, 61%). 1H NMR d4-MeOH δ 0.30- 0.52 (4H, m) , 1.22 (1H, brs) , 4.01-4.23 (4H, m) , 5.50- 5.60 (1H, brs), 7.13-7.46 (10H, m); ES+ 282.
<formula>formula see original document page 135</formula>
Cloridrato de 3-ciclopropil-3-fluoroazetidina A paládio úmido a 10% sobre carbono (catalisador da Degussa) sob nitrogênio adicionou-se etanol (100 ml). Uma solução de cloridrato de benzidril-3-ciclopropil-3- fluoroazetidina (6.74 g, 21.23 mmol) em etanol (50 ml) foi adicionada ao catalisador e a mistura hidrogenada a 60 psi no aparelho de hidrogenação e agitação Parr durante 5 horas. A reação foi filtrada em placa de celite e concentrada até se tornar um óleo. Éter (50 ml) foi adicionado e a mistura resfriada até 0°C e agitada até que um precipitado se formasse. A suspensão foi filtrada e a torta de filtro foi lavada com éter (20 ml) e o sólido secado sob vácuo o que deu o produto na forma de um sólido esbranquiçado (3.00 g, 93%) . 1H NMR dô-DMSO δ 0.52-0.56 (2H, m) , 0.59-0.64 (2H, m),1.35-1.40 (IH1 m) , 3.91-4.10 (4H, m) , 4.01-4.23 (4H, m) , 9.50 (1H, brs), 9.63 (1H, brs) .
Exemplo 19
<formula>formula see original document page 136</formula>
(2- (etoxicarbonil)propan-2-il)-3-hidroxiazetidino-l- carboxilato de ter-butila
Pó de índio foi adicionado a uma solução de etil-2- bromoisobutirato (1.71 g, 8.76 mmol) e 3-oxoazetidino- 1-carboxilato de ter-butila em DMF seco (5 ml). A suspensão foi aquecida até 60°C durante 2 mins. e a fonte de calor foi removida (a temperatura interna permaneceu a 60°C por um período contínuo após remoção da fonte de calor) . A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 90 minutos e rapidamente resfriada com gelo. A fase aquosa foi extraída com acetato de etila (2 χ 50 ml) , secada (Na2SO4) e concentrada para dar um óleo. 0 óleo foi purificado através de cromatografia de coluna de flasheamento eluindo com 3 0% acetato de etila/hexanos para dar o composto título na forma de um sólido esbranquiçado 1.40 g, 84%. 1H NMR (CDCl3, 400 Mhz) 1.29 - 1.33 (9H, m), 1.48 (9H, s), 3.55 (1H, s), 3.79 (2H, d), 4.03 (2H, d), 4.18 (2H, q). <formula>formula see original document page 137</formula>
3-hidroxi-3- (l-hidroxi-2-metilpropan-2-il) azetidino-1- carboxilato de ter-butila
Uma solução de 3-(2-(etoxicarbonil) propan-2-il)-3- hidroxiazetidino-l-carboxilato de ter-butila (0.50 g, 1.74 mmol) em DCM (5 ml) foi resfriada até -78°C. Uma solução de DIBAL-H em DCM (5.23 mmol, 5.23 ml, 1M) foi adicionada em gotas e a solução deixada aquecer até 0°C e agitada durante 4 horas. NH4Cl sat. (20 ml) e acetato de etila (40 ml) foram adicionados. A camada orgânica foi lavada com salmoura (30 ml), secada (Na2SO4) e concentrada até dar um óleo. 0 óleo foi purificado através de cromatografia de coluna de flasheamento eluindo com 30 a 70% acetato de etila/hexanos para dar o composto título na forma de um óleo incolor 0.20 g, 47%. 1H NMR (CDCl3, 400 Mhz) 1.01 (6H, s), 1.43 (9H, s), 3.58 (2H, s), 3.75 (2H, d), 4.03 (2H, d).
<formula>formula see original document page 137</formula>
ter-butil éster de ácido 3,3-dimetil-l-oxa-6-aza- spiro[3.3]heptano-6-carboxílico
A uma solução de 3-hidroxi-3-(l-hidroxi-2-metilpropan- 2-il)azetidino-l-carboxilato de ter-butila (0.20 g, 0.82 mmol) em THF (4 ml) adicionou-se em rápida sucessão, KOtBu (0.19 g, 1.72 mmol) e cloreto de p- toluenossulfonila (0.16 g, 0.82 mmol) e a solução agitada à temperatura ambiente durante 90 minutos. Água (10 ml) foi adicionada e extraída com acetato de etila.
A camada orgânica foi secada (Na2SO4) e concentrada para dar um óleo. 0 óleo foi purificado através de cromatografia de coluna de flasheamento eluindo com 30 a 70% acetato de etila/hexanos para dar o composto título na forma de um óleo incolor 0.13 g, 70%. 1H NMR (CDCl3, 400 Mhz) 1.25 (6H, s) , 1.45 (9H, s), 3.89 (2H, d), 4.12 (2H, d), 4.20 (2H, s).
<formula>formula see original document page 138</formula>
N- {4- [4-(3,3-Dimetil-1-oxa-6-aza-spiro[3.3]hept-6-il)- 6- (5-metil-2H-pirazol-3-ilamino)-pirimidin-2- ilsulfanil]-fenil}-propionamida
A uma solução de ter-butil éster de ácido 3,3-Dimetil- 1-oxa-6-aza-spiro [3 . 3] heptano-6-carboxílico (60 mg, 0.27 mmol) em DCM (3 ml) a OC adicionou-se ácido trifluoroacético e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. A reação foi concentrada para dar um óleo que foi usado bruto na etapa seguinte. O resíduo oleoso foi dissolvido em n-BuOH (3 ml) e diisopropiletilamina (171 mg, 1.35 mmol, 0.24 ml) e N- {4- [4-Cloro-6- (5-metil-2H-pirazol-3-ilamino) -pirimidin- 2-ilsulfanil]-fenil}-propionamida (93 mg, 0.24 mmol) foi adicionada. A mistura foi aquecida até IOO0C e agitada por 18 horas. A reação foi deixada resfriar até temperatura ambiente e diluída com salmoura (2 0 ml) e acetato de etila (20 ml) . A camada orgânica foi secada (Na2SO4 e concentrada para dar um óleo. 0 óleo foi purificado através de cromatografia de coluna de flasheamento eluindo com MeOH 2,5% em acetato de etila para dar o composto título na forma de um sólido laranja pálido 25 mg, 20% 1H NMR (d6-DMS0, 400MHz) 1.08 (3H, m) , 1.20 (6H, s) , 1.98 (3H, s) , 2.34 (2H, q) , 3.78 (2H, d), 4.14 - 4.15 (4H, m) , 5.35 (1H, s) , 5.61 (1H, brs) , 7.47 (2H, d), 7.70 (2H, d), 9.24 (1H, s) , 10.07 (1H7 s), 11.43 (1Η, s). ES+ 480.
Exemplo 20
<formula>formula see original document page 139</formula>
3-(2-(etoxicarbonil) etinil)-3-hidroxiazetidino-l- carboxilato de ter-butila
n-butil lítio(1.17 mmol, 0.47 ml, 2.5 M) foi adicionado em gotas a uma solução de diisopropilamina (13 0 mg, 1.2 9 mmol, 0.18 ml) em THF (8 ml) a -78°C. A solução foi aquecida até 0°C, agitada durante 15 minutos, e novamente resfriada até -78°C. Propiolato de etila (126 mg, 1.29 mmol, 0.13 ml) foi adicionado em gotas e a solução agitada durante 1 hora a -78°C. Uma solução de 3-oxoazetidino-l-carboxilato de t-butila (200 mg, 1.17 mmol) em THF (2 ml) foi adicionada em gotas, e a agitação prosseguiu por 3 0 minutos, e a solução foi aquecida até O0C e agitada por mais 15 minutos. A reação foi rapidamente resfriada com NH4Cl sat. (20 ml) e extraída em acetato de etila (20 ml) , secada (Na2SO4) e concentrada para dar um óleo marrom. O óleo foi purificado através de cromatografia de coluna de flasheamento eluindo com acetato de etila/hexanos a 30% para dar o composto título na forma de um óleo incolor 0.20 g, 64%. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) 1.33 (3H, t), 1.48 (9H, s) , 2.92 (1H, s) , 4.04 (2H, d), 4.22- 4.31 (4H, m).
<formula>formula see original document page 139</formula>
3- (2- (etoxicarbonil)etil)-3-hidroxiazetidino-1- carboxilato de ter-butila
A paládio sobre carbono (10%, 75 mg) sob atmosfera de (etoxicarbonil) etinil) -3-hidroxiazetidino-l-carboxilato de ter-butila (0.20 g, 0.74 mmol) em etanol (10 ml). A nitrogênio adicionou-se uma solução de 3-(2- suspensão foi submetida a hidrogênio (aparelho de hidrogenação Parr) a 45 psi durante 3 hs. A reação foi filtração e concentrada para dar um óleo. 0 óleo foi purificado através de cromatografia de coluna de flasheamento eluindo com 30 a 50% de acetato de etila/hexanos para dar o composto título na forma de um óleo incolor 0.11 g, 50%. IH NMR (CDCl3, 400 MHz) 1.28 (3H, t) , 1.43 (9H, s) , 2.15 (2H, t), 2.50 (2H, t), 3.32 (1H, s), 3.83 (4H, dd), 4.18 (2H, q).
<formula>formula see original document page 140</formula>
3-hidroxi-3-(3-hidroxipropil)azetidino-1-carboxilato de ter-butila
Hidreto de diisobutil alumínio (1.48 mmol, 1.48 ml, IM DCM) foi adicionado em gotas a uma solução de 3-(2- (etoxicarbonil) etil) -3-hidroxiazetidino-l-carboxilato de ter-butila (0.10 g, 0.37 mmol) em DCM (3 ml) a - 78°C. A solução foi deixada aquecer até 0°C e agitada por mais 5 horas. A reação foi rapidamente resfriada com NH4Cl sat. (10 ml) e extraída com acetato de etila (10 ml) , secada (Na2SO4) e concentrada para dar um óleo. O óleo foi purificado através de cromatograf ia de coluna de flasheamento eluindo com 6 0% acetato de etila/hexanos para dar o composto título na forma de um óleo incolor 27 mg, 32%. IH NMR (CDC13, 400 MHz) 1.48 (9H, s) , 1.69 - 1.75 (2H, m) , 1.93 (2H, t) , 3.76 (2H,
<formula>formula see original document page 140</formula>
ter-butil éster de ácido l-oxa-7-aza-espiro[4.3]octano- 7-carboxílico
A uma solução de 3-hidroxi-3-(3- hidroxipropil)azetidino-l-carboxilato de ter-butila (27 mg, 0.13 mmol) em THF (2 ml) adicionou-se em rápida sucessão, KOtBu (31 mg, 0.2 7 mmol) e cloreto de p- toluenossulfonila(25 mg, 0.13 mmol) e a solução foi agitada à temperatura ambiente durante 90 min. Água (10 ml) foi adicionada e extraída com acetato de etila. A camada orgânica foi secada (Na2SO4) e concentrada para dar um óleo. 0 óleo foi usado na forma bruta na etapa seguinte.
Exemplo 21
<formula>formula see original document page 141</formula>
N- (4- (4-(3-metil-lH-pirazol-5-ilamino)-6-(3- ciclopropil-3-fluoroazetidin-l-il)-5-fluoropirimidin-2 - iltio)fenil)-3,3,3-trifluoropropanamida
<formula>formula see original document page 141</formula>
6-cloro-5-fIuoro-N-(3-metil-lH-pirazol-5-il)-2- (metilssulfonil)pirimidin-4-amina
A uma solução de 4,6-dicloro-5-fluoro-2- (metilssulfonil)pirimidina em THF (25 ml) adicionou-se diisopropilamina (1.32 g, 10.20 mmol, 1.82 ml) e 3- metil-lH-pirazol-5-amina (1.04 g, 10.71 mmol) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 3 0 minutos. A reação foi diluída com acetato de etila (100 ml) e água (100 ml) , a camada orgânica foi lavada com salmoura (50 ml), secada (Na2S04), e parcialmente concentrada até que um sólido começasse a precipitar. A suspensão foi resfriada num banho de gelo durante uma hora e filtrada para dar o composto título na forma de um sólido amarelo-pálido. Uma segunda coleta foi obtida deixando o filtrado repousar da noite para o dia (total 1,55g, 50%). IH NMR (DMSO, 400 MHz) 2.26 (3H, s) , 3.32 (3H, s) , 6.48 (1H, s) , 11.03 (1H, s) , 12.35 (1H, s) ES+ 306.
<formula>formula see original document page 142</formula>
6-(3-ciclopropil-3-fluoroazetidin-l-il)-5-fluoro-N- (3- metil-lH-pirazol-5-il)-2- (metilssulfonil)pirimidin-4- amina
Uma suspensão de 6-cloro-5-fIuoro-N-(3-metil-lH- pirazol-5-il)-2-(metilssulfonil)pirimidin-4-amina (100 mg, 0.33 mmol) e 3-ciclopropil-3-fluoroazetidina (50 mg, 0.33 mmol) em acetonitrila (5 ml) foi aquecida até 50°C e agitada durante 1 hora. A mistura foi deixada resfriar e diluída com acetato de etila (20 ml) e água (20 ml) . A camada orgânica foi secada (Na2S04) e concentrada para dar um sólido. A purificação através de cromatografia de flasheamento eluindo com 40% acetato de etila/hexanos e acetato de etila deu o composto título na forma de um sólido esbranquiçado. (64 mg, 51%). IH NMR (DMSO, 400 MHz) 0.51 - 0.52 (2H, m) , 0.68 - 0.76 (2H, m) , 1.42 - 1.59 (1H, m) , 2.29 (3H, s) , 3.31 (3H, s) , 4.20 - 4.36 (4H, m) , 6.41 (1H, s) , 9.98 (1H, s), 12.13 (1H, s). ES+ 385. <formula>formula see original document page 143</formula>
N- (4- (4- (3-metil-lH-pirazol-5-ilamino)-6-(3- ciclopropil-3-fluoroazetidin-l-il) -5-fluoropirimidin-2- iltio)fenil)-3,3,3-trifluoropropanamida
Uma solução de 6-(3-ciclopropil-3-fluoroazetidin-l-il)- 5-fIuoro-N-(3-metil-lH-pirazol-5-il)-2- (metilssulfonil)pirimidin-4-amina (64 mg, 0.17 mmol) e 3,3,3-trifIuoro-N-(4-mercaptofenil)propanamida (47 mg, 0.2 0 mmol) em DMF (3 ml)foi aquecida até 8O0C e agitada durante 6 horas. A reação foi diluída com acetato de etila (20 ml) e NaHCO3 sat. (20 ml) e a camada orgânica lavada com salmoura (20 ml) , secada (Na2SO4) e concentrada para dar um óleo. 0 composto foi purificado através de HPLC preparatória dirigida à massa, eluído com acetonitrila/água/TFA para dar o composto título na forma de um sólido branco (sal de TFA, 41.2 mg, 37%). IH NMR (DMSO, 400 MHz) 0.46 - 0.50 (2H, m) , 0.61 - 0.64 (2H, m) , 1.38 - 1.45 (1H, m) , 1.93 (3H, s) , 3.55 (2H, q) , 4.00 - 4.18 (4H, m) , 5.27 (1H, s) , 7.54 (2H, d), 7.71 (2H, d), 9.39 (1H, s) , 10.57 (1H, s). ES+ 540.
Exemplo 22
<formula>formula see original document page 143</formula> N- (4- (4- (5-metil-lH-pirazol-3-ilamino) -6- (3-fluoro-3- metilazetidin-l-il)pirimidin-2-iltio)fenil)-3,3,3- trifluoropropanamida (1-16 8)
O álcool N- (4- ( (4-(5-metil-ΙΗ-pirazol-3-ilamino)-6- (3- hidroxi-3-metilazetidin-l-il) pirimidin-2-
il)sulfanil)fenil)-3,3,3-trifluoropropanamida (24mg, 0.05 mmol) foi dissolvido com diclorometano seco (3 ml)sob nitrogênio. A mistura foi sonificada durante 10 minutos e a suspensão turva de cor rosa pálido resultante foi resfriada em banho de gelo. Deoxoflúor (11μl, 0,06 mmol) foi adicionado em gotas. Após 10 minutos, LC-MS da solução clara resultante mostrou conversão completa para o composto titulo. A mistura de reação foi diluída com DCM e lavada com solução saturada de bicarbonato de sódio, e então salmoura. A fase orgânica foi secada sobre sulfato de sódio e concentrada em vácuo. 0 resíduo foi recolhido em acetato de etila e purificado através de cromatografia de coluna(sílica, 0-100% EtOAc-éter de petróleo eluição gradiente 40-60) para dar o produto na forma de um sólido branco após liofilização (14 mg, 60%) . Exemplo 23 <formula>formula see original document page 144</formula> N- (4- (4-(5-metil-lH-pirazol-3-ilamino)-6-(2-(azetidin- 1-il) etil) pirimidin-2-iltio) fenil) propionamida
<formula>formula see original document page 144</formula> 2-(2,6-dicloropirimidin-4-il) acetato de etila A uma solução de 2 -(1,2,3,6-tetrahidro-2,6- dioxopirimidin-4-il)acetato de etila (10 g, 50.5 mmol) era tolueno (150 ml) e POC13 (14.1 ml, 151.5 mmol) adicionou-se tripropilamina (9ml) em gotas (ocorreu reação exotérmica). Quando da adição completa, a mistura de reação foi aquecida sob refluxo durante 3 horas. A mistura de reação foi então resfriada até temperatura ambiente e então despejada sobre gelo triturado e água com agitação rápida. A mistura foi agitada durante 3 0 minutos, e então basifiçada com carbonato de sódio e extraída com acetato de etila (3 χ 150 ml) . As camadas orgânicas foram combinadas, lavadas com água, salmoura, secadas (MgSO4) , filtradas e evaporadas em vácuo para dar um óleo vermelho escuro. 0 produto bruto foi purificado através de cromatografia de f lasheamento (120 g SiO2, 0 a 35% EtOAc/petróleo) para dar o composto título na forma de um óleo vermelho (8 .95g, 75%). IH NMR (CDCl3) 1.31 (3 H, t), 3.83 (2 H, S), 4.24 (2 H, q), 7.41 (1 H, s); ES+ 235.
<formula>formula see original document page 145</formula>
2- (6- (5-metil-lH-pirazol-3-ilamino) -2-cloropirimidin-4- il)acetato de etila
Uma solução de 2-(2,6-dicloropirimidin-4-il)acetato de etila (1.0 g, 4.25 mmol), iodeto de sódio (0.637 g, 4.25 mmol), 3-araino-5-metilpirazol (0.413 g, 4.25 mmol), e N,N-diisopropiletilamina (0.96 ml, 5.53 mmol) foi aquecida até 90°C até que a reação se completasse (~3h) . A mistura de reação foi então resfriada até temperatura ambiente, diluída com acetato de etila (100 ml), lavada com solução de hidrogeno carbonato de sódio (1 x 3 0 ml) , água (3 x 3 0 ml) , salmoura (30 ml) , (MgS04) secado, filtrada e evaporada em vácuo para dar um óleo laranja. O produto bruto foi purificado através de cromatografia de flasheamento (Si02, 60-100% EtOAc/Petróleo) para dar o composto titulo na forma de um óleo pegajoso verme1Ho (0.520 g, 41%). 1H NMR (CDCl3) 1.29 (3 H, t), 2.41 (3 H, s), 3.52 (2 H, s) , 4.23 (2 H, q), 5.20-4.60 (2 H, sinal muito amplo); ES + 296.
2-(6-(5-metil-1H-pirazol-3-ilamino)-2-((4- (propionamido) fenil) sulfanil)pirimidin-4-il)acetato de etila:
Uma suspensão de 2-(6-(5-metil-1H-pirazol-3-ilamino)-2- cloropirimidin-4-il)acetato de etila (0.676 g, 2.29 mmol) e N-(4-mercaptof enil) propionamida (0.415 g, 2.29 mmol) em t-butanol (10 ml) foi aquecida sob refluxo da noite para o dia. A mistura de reação foi então resfriada até temperatura ambiente, acetato de etila (20 ml) adicionado causando precipitação do produto. O sólido foi coletado por filtração, lavado com solução saturada de hidrogeno carbonato de sódio, água, dietil éter e então secado através de sucção para dar o composto título na forma de um sólido amarelo (0.425 g, 43%). 1H NMR (DMSO) 1.12 (3 H, t), 1.20 (3 H, t), 2.00 (3 H, s), 2.40 (2 H, q), 3.66 (2 H, s), 4.11 (2 H, q) , 5.05 (1H, br s), 5.30 (1 H, br s), 7.53 (2 H, d), 7.79 (2 H, d), 10.20 (1 H, s); ES+ 441. <formula>formula see original document page 147</formula>
N-(4-(4-(5-metil-lH-pirazol-3-ilamino)-6-(2- bromoetil) piriraidin-2-iltio) fenil) propionamida Uma solução 2M de borohidreto de lítio em tetrahidrof urano (3,5 ml, 6,8 mmol) foi adicionada a uma suspensão de 2-(6-(5-metil-lH-pirazol-3-ilamino)-2- ((4-(propionamido) fenil) sulfanil)pirimidin-4- il)acetato de etila (lg, 2.3 mmol) em tetrahidrofurano (10ml) sob uma atmosfera de nitrogênio. A suspensão foi agitada a 70°C durante uma hora. A mistura de reação foi hidrolisada com solução saturada de bicarbonato de sódio (15 ml) . As extrações foram realizadas com acetato de etila (3x25ml). A camada orgânica foi retrolavada com salmoura e então secada sobre sulfato de magnésio. 0 resíduo foi recolhido em acetonitrila (25 ml). Tribrometo de potássio (1,3 ml) foi adicionado à mistura de reação que foi então agitada a 70°C durante uma hora. A mistura de reação foi hidrolisada com uma solução saturada de bicarbonato de sódio (15 ml) . As extrações foram realizadas com acetato de etila (3 x 25 ml) . A camada orgânica foi retrolavada com salmoura e então secada sobre sulfato de magnésio para dar o composto título sem qualquer purificação adicional (3OOmg, 30%). ES+ 462 <formula>formula see original document page 148</formula>
N- (4- (4-(5-metil-lH-pirazol-3-ilamino)-6-(2-(azetidin- 1-il)etil)pirimidin-2-iltio)fenil)propionamida Uma mistura de N- (4-(4-(5-metil-lH-pirazol-3-ilamino)- 6- (2-bromoetil) pirimidin-2-iltio) fenil) propionamida (lOOmg, 0.21mmol) e azetidina (36mg, 0.63mmol) em dimetilformamida (2ml) foi agitada à temperatura ambiente sob atmosfera de nitrogênio durante 24 horas. A mistura de reação foi lavada com uma solução saturada de bicarbonato de sódio (10 ml) e salmoura (10 ml) e então secada sobre sulfato de magnésio. O resíduo foi purificado através de HPLC Gilson para dar o composto título na forma de um sla de ácido bis-trifluoro acético (0.5mg; 1%). IH NMR (CD3OD): 1.30-1.37 (3H, m) , 2.15-2.20 (3H, s) , 2.40-2.50 (4H, m) , 2.80-2.90 (2H, t) , 3.50-3.55 (2H, t) , 4.00-4.15 (4H, s) , 6.50-6.55 (1H, s) , 7.55-7.65 (2H, m) , 7.75-7.80 (2H, m) . ES+ 438 Exemplo 24
<formula>formula see original document page 148</formula>
N- (4-(4-(3-metil-lH-pirazol-5-ilamino)-6- (3- ciclopropil-3-fluoroazetidin-l-il) pirimidin-2- iltio)fenil)-3,3,3-trifluoropropanamida <formula>formula see original document page 149</formula>
6- (3-ciclopropil-3-fluoroazetidin-1-il) -N- (3-metil-1H- pirazol-5-il)-2-(metiltio) pirimidin-4-amina A uma mistura de 6-cloro-N-(3-metil-1H-pirazol-5-il)-2- (metiltio) pirimidin-4-amina (150 g, 0.58 mol) e cloridrato de 3-ciclopropil-3-fluoroazetidina (132.2 g, 0.87 mol) adicionou-se diisopropiletilamina (208 g, 1.61 mol) e isopropanol (1.125 L) . A mistura foi aquecida até refluxo durante 23 horas. A reação foi então resfriada até 85°C(uma solução levemente turva) e filtrada. A solução homogênea foi concentrada até um volume mínimo. EtOAc foi então adicionado (IL) e a solução concentrada até um volume mínimo. EtOAc (IL) e H2O (IL) foram então adicionados e as camadas separadas. o produto cristalizado começou a cristalizar da camada orgânica durante a extração. A camada aquosa foi também extraída com EtOAc (500 ml) . A primeira camada orgânica foi concentrada até secagem para dar um sólido branco. Hexano (750 ml) foi adicionado ao segundo extrato orgânico e a pasta agitada à temperatura ambiente e então resfriada até O0C durante 30 minutos. A pasta foi filtrada e lavada com bastante heptano. A torta de filtro foi secada sob vácuo. A torta de filtro e o sólido branco da primeira extração foram combinados para dar 155,1 g do produto desejado. (155.1 g, 77 %) . IH NMR (DMSO, 400 MHz) 0.44 (2H, m) , 0.60 (2H, m) , 1.38-1.43 (1H, m) , 2.18 (3H, s) , 2.42 (3H, s) , 3.89-3.97 (4H, m) , 5.92 (1H, br s) , 6.04 (1H, br s) , 9.23 (1H, s) , 11.86 (1H, s) . ES+ 335 (155.1 g, 77 %). IH NMR (DMSO, 400 MHz) 0.44 (2Η, m), 0.60 (2Η, m) , 1.38-1.43 (1Η, τη), 2.18 (3Η, s) , 2.42 (3Η, s) , 3.89-3.97 (4Η, m) , 5.92 (1Η, br s) , 6.04 (1Η, br s), 9.23 (1Η, s), 11.86 (1H, s) . ES+ 335
<formula>formula see original document page 150</formula>
6- (3-ciclopropil-3-fluoroazetidin-l-il)-N-(3-metil-lH- pirazol-5-il) -2- (metilssulfon.il) pirimidin-4-amina Uma solução de 6-(3-ciclopropil-3-fluoroazetidin-1-il)- N-(3-metil-lH-pirazol-5-il)-2-(metiltio)pirimidin-4- amina (130 g, 389 mmol) em MeOH (5.2 L) foi resfriada até 0 °C. Uma solução de oxone (526g, 855 mmol) em H2O (5.2 L) foi lentamente adicionada à pasta mantendo-se a temperatura abaixo de 5°C. Após adição, a reação foi deixada aquecer até temperatura ambiente da noite para o dia. Uma solução a 10% de NaHSO3 (325 ml) e uma solução a 10% de K2CO3 (2,6 L) foi então adicionada para neutralizar a mistura de reação, a solução e a torta de filtro lavados com H2O (3,3 L) . 0 sólido foi transformado em pasta em H2O (2,6 L) , a solução filtrada e a torta de filtro lavada com H2O (3,3 L). 0 sólido foi secado sob vácuo (72.3 g, 51 %) . IH NMR (DMSO): 0.47 (2H, m) , 0.60 (2H, m) , 1.43-1.46 (1H, m) , 2.20 (3H, s) , 3.25 (3H, s) , 3.97-4.11 (4H, m) , 5.93 (1H, br s) , 6.47 (1H, br s) . 9.88 (1H, s) , 12.01 (1H, br s). ES+ 367 N- (4-(4-(3-metil-lH-pirazol-5-ilamino)-6- (3- ciclopropil-3-fluoroazetidin-l-il)pirimidin-2- iltio)fenil)-3,3,3-trifluoropropanamida (Composto 1-13) Uma pasta de 6 -(3-ciclopropil-3-fluoroazetidin-1-il)-N- (3-metil-lH-pirazol-5-il) -2- (metilsulf onil) pirimidin-4- amina (61g, 170 mmol) e 3,3,3-trifIuoro-N-(4 - mercaptofenil) propanamida (41 g, 175 mmol) em CH3CN (13 00 mL) foi aquecida até refluxo durante 1,5 horas. Durante esse tempo, a pasta fina e amarelada tornou-se espessa e de um branco brilhante. A mistura foi então resfriada até 0°C e agitada nessa temperatura durante 15 minutos. A mistura foi então filtrada e lavada com CH3CN frio (650 ml) . O sólido resultante foi secado durante 20 horas a 38° C sob vácuo doméstico. O sólido branco foi carregado para um reator apropriado com EtOAc (1300 ml) e NaHCO3 (sat) (1300 ml) . A mistura foi agitada até que não restasse nenhum sólido. Então, as camadas aquosa e orgânica foram separadas e a camada aquosa lavada com EtOAc (390 ml). As camadas orgânicas combinadas foram secadas sobre MgSO4, filtradas, lavadas com EtOAc (130 ml) e concentradas até um volume mínimo num evaporador rotativo. A mistura resultante foi recristalizada de EtOAc e hexano para dar o produto desejado na forma de um sólido branco (56,2g, 72%) IH NMR (MeOD, 400 MHz): 0.40-0.45 (2H, m), 0.60-0.65 (2H, m) , 1.3-1.4 (1H, m) , 2.05 (2H, s) , 3.25-3.40 (2H, m) , 3.85-3.40 (4H, m) , 5.40-5.50 (2H, m) , 7.50-7.55 (2H, d), 7.65-7.70 (2H, d). ES+ 522. Exemplo 25
<formula>formula see original document page 152</formula>
2-(6-aminopiridin-3-iltio)-6-(3-ciclopropil-3- fluoroazetidin-l-il)-N-(3-metil-ΙΗ-pirazol-5 - il)pirimidin-4-amina
Uma solução de 6- (3-ciclopropil-3-fluoroazetidin-1-il)- N-(3-metil-lH-pirazol-5-il)-2- (metilssulfonil)pirimidin-4-amina (880 mg, 2.4 mmol) e 6-aminopiridino-3-tiol) (300 mg, 2.4 mmol) em DMF (10 ml) foi aquecida durante 2 horas. A reação foi diluída com acetato de etila (150 ml) e NaHCO3 sat. (50 ml) e a camada orgânica lavada com salmoura (50 ml) , secada (MgSO4) e concentrada até dar um óleo. 0 resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna de flasheamento eluindo com pentano/EtOAc (MeOH 5%) 0 a 100%. 0 composto resultante foi triturado em 10:1 DCM:MeOH e filtrado para dar o composto título na forma de um sólido branco (300 mg, 30%) . IH NMR (DMSO, 400 MHz) 0.42-0.44 (2H, m) , 0.55-0.60 (2H, m) , 1.35-1.45 (1H, m) , 2.11 (3H, s) , 3.81-3.90 (4H, m) , 5.55-5.80 (2H, m) , 6.35 (2H, s) , 6.49-6.52 (1H, d), 7.46-7.49 (1H, d), 7.97 (1H, s) , 9.30-9.35 (1H, s) . ES+ 413 Exemplo 26
<formula>formula see original document page 153</formula>
2-((4-(2-clorobenzaraido) fenil)sulfanil)-6-(5-metil-1H- pirazol-3-ilamino)-(azetidin-l-il)pirimidino-4- carboxamida
A uma suspensão de 2-((4-(2-clorobenzamido) fenil)sulfanil)-6-(5-metil-1H-pirazol-3- ilamino)pirimidino-4-carboxilato de metila (235mg, 0.46 mmol) em álcool etílico adicionou-se um grande excesso de azetina (0.5 ml, 7.4 mmol). O tubo foi então vedado e aquecido até 90°C durante 16 horas, e então deixado resfriar até temperatura ambiente. Os componentes voláteis foram então removidos em vácuo e o resíduo purificado através de HPLC preparatória dirigida à massa, eluídos com acetonitrila/água/TFA para dar o produto na forma de um sólido branco após liofilização (3.5 mg, 1.2 %) . IH NMR (DMSO-d6) : 2.16 (5H, m), 3.24 (2H, m), 3.98 (2H, m), 4.18 (1H, s), 5.62 (1H, br s), 6.94 (1H, br s), 7.54 (6H, m), 7.87 (2H, d), 10.25 (1H, s), 10.78 (1H, s), 11.92 (1H, s). ES+ 520
Exemplo 27
<formula>formula see original document page 153</formula> N- (4- (4- (5-metil-ΙΗ-pirazol-3 -ilamino)-6-(3- ciclopropil-3-metoxiazetidin-1-il)pirimidin-2- iltio)fenil)ciclo propanocarboxamida Fosfato de 3-ciclopropilazetidin-3-il dietila (103 mg, 0.36 mmol) foi adicionado a uma solução de N-(4-(4-(5- metil-1H-pirazol-3-ilamino)-6-cloropirimidin-2- iltio) fenil) ciclopropanocarboxamida (96 mg, 0.24 mmol) e DIPEA (0.40 ml, 2.32 mmol) em metanol (5 ml), e a mistura foi aquecida até 65°C durante 16 horas. Os componentes voláteis da mistura foram então removidos em vácuo e o resíduo purificado em HPLC preparatória dirigida à massa, eluídos com acetonitrila/água/TFA para dar o produto na forma de um sólido branco após liofilização (6.3 mg, 5.3%). DMSO-d6: 0.34 (2H, m), 0.55 (2H, m), 0.81 (4H, d), 1.14 (1H, m), 1.81 (1H, m), 1.99 (3H, s), 3.26 (3H, s), 3.79 (4H, m), 5.37 (1H, s), 5.71 (1H, br s), 7.49 (2H, d), 7.71 (2H, d), 9.34 (1H, s), 10.39 (1H, s). ES+ 492
Os experimentos mostrados abaixo descrevem a preparação de alguns dos compostos usados nos exemplos aqui descritos.
Composto a
<formula>formula see original document page 154</formula>
Quinolino-6-tiol
A uma solução de 6-bromoquinolina (700 mg) em dimetilacetamida (3 ml) adicionou-se tiometóxido de sódio (1.9 g, 26.96 mmol). A mistura foi aquecida a 150°C durante 2 horas e então aquecida até temperatura ambiente e diluída com IM HCl/acetato de etila. A camada orgânica foi removida e a camada aquosa extraída com mais acetato de etila. Os extratos combinados foram lavados com água, e então salmoura, secados (MgSO4), filtrados e concentrados. O tiol bruto (500 mg) foi usado diretamente sem purificação adicional MS ES +, ES - 174.13
Composto b
<formula>formula see original document page 155</formula>
2 - (2,2, 2 - trif luoroetil) -5-mercaptoisoindolin-l-ona
<formula>formula see original document page 155</formula>
4-bromo-N-(2,2,2-trifluoroetil)-2- (hidroximetil)benzamida
A uma suspensão agitada de tricloreto de alumínio (4.07g, 30.5 mmol) em dicloroetano (60ml) resfriado até 5oC sob uma atmosfera de nitrogênio adicionou-se a solução de trifluoroetilamina (5.84g, 38.7 mmol) a uma velocidade para manter a temperatura da mistura de reação abaixo de 10°C. Após completa adição, a mistura de reação foi deixada aquecer até temperatura ambiente e agitada a essa temperatura durante 4 horas. Após esse período pó de bromoftalida (5g, 23.5 mmol) foi adicionado numa única porção e a mistura de reação foi então aquecida até 80°C durante 18 horas. TLC mostrou completa conversão de material de partida em produto e a reação foi cuidadosamente resfriada com água gelada (100 ml) e agitada durante 3 0 minutos até que todo o gelo derretesse. Diclorometano foi adicionado e a mistura filtrada em placa de celite e lavada com quantidades copiosas de DCM para remover os resíduos de alumínio. 0 filtrado foi separado e a camada aquosa extraída com DCM (2 χ 100 ml) . As camadas orgânicas foram combinadas e secadas sobre pó de sulfato de magnésio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para dar um pó esbranquiçado. Produto bruto 3,3 7g (rendimento 4 6%)
NMR (DMSO 4 0OMHz) 4.02-4.11 (2H, m, alk), 4..60-4.61 (2H, m, alk), 5.43-5.46 (H, m, alk), 7.36-7.39 (H, d, ar), 7.55-7.57 (H, m, alk), 7.76 (H, s, ar) e 9.09-9.12 (H, m, NH). F19 NMR (DMSO 400Mhz) -70.59. ES+ 312
5-bromo-2- (2,2, 2-trif luoroetil) isoindolin-l-ona A uma solução agitada de 4-bromo-2-hidroximetil-N- (2,2,2 -trifluoro-etil)-benzamida (3.37g, 10.8 mmol) em tetrahidrofurano anidro (50ml), N-metil-2-pirrolinona (20mL), resfriada até 5°C sob atmosfera de nitrogênio adicionou-se uma solução de 2M cloreto de isopropil magnésio em THF anidro (2 5 ml) a uma velocidade para manter a temperatura da mistura de reação abaixo de 10°C. Após completa adição, aproximadamente 4 5 minutos a reação foi agitada a essa temperatura por mais 60 minutos e então à temperatura ambiente durante 6 0 minutos. Após esse período a mistura de reação foi novamente resfriada até 5°C e uma solução de cloreto de bis(dimetil amino) fosforila (1.85g, 14.1 mmol) foi adicionada em gotas. Não foi observada exotermia e a reação foi aquecida sob refluxo durante 72 horas uma vez concluída a adição. Após esse período, não se observou presença de material de partida tanto através de TLC como de LCMS e a mistura de reação foi cuidadosamente resfriada com água e acidificada com ácido clorídrico aquoso IM. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (3 χ 100 ml) e as camadas orgânicas foram combinadas e secadas sobre sulfato de magnésio. A purificação através de cromatografia de coluna eluindo com acetato de etila 25% 75% éter de petróleo deu o produto na forma de um pó branco 2,81 156
(88% rendimento). NMR (DMSO 400MHz) 4.36-4.43 (2H, m, alk), 4.62 (2H, s, alk), 7.68-7.74 (2H, m, ar) e 7.93 (H, s, ar). F19 NMR (DMSO 400Mhz) -69.03. ES+ 296
<formula>formula see original document page 157</formula>
2-(2,2,2-trifluoroetil)-5-((triisopropilsilil)sulfanil) isoindolin-l-ona
A uma solução agitada de triisopropilsilano tiol (648 mg, 3.4 mmol em THF anidro (IOml) , resfriada até 5°C sob atmosfera de nitrogênio adicionou-se pó de hidreto de sódio a 60% (143mg, 3.57 mmol) em porções durante 10 minutos. A solução amarela resultante foi agitada durante 20 minutos e então uma solução de 5-bromo-2- (2,2,2- trifluoro-etil)-2 , 3-dihidro-isoindol-l-ona (lg, 3.4 mmol) em THF anidro (IOml) e trif enilf osf ino tetracis paládio (393mg 0.34 mmol)foi adicionado. A mistura de reação foi degasificada com nitrogênio e aquecida a 90°C durante 2 horas. A mistura foi concentrada e o resíduo purificado utilizando cromatografia de coluna eluindo com acetato de etila a 30% 70% éter de petróleo para isolar tanto o tiol protegido (406 mg, 30% rendimento com base em FW) como o tiol não protegido (171 mg, 20% rendimento com base em FW) . ES+ 248 . 14
<formula>formula see original document page 157</formula>
2- (2,2,2-trifluoroetil)-5-mercaptoisoindolin-l-ona 2-(2,2,2-trifluoroetil)-5-((triisopropilsilil) sulfanil)isoindolin-l-ona foi dissolvido numa solução de ácido clorídrico em metanol (2 ml) e tetrahidrofurano (2 ml) e agitado à temperatura ambiente durante 2 horas ou até o desaparecimento de material de partida. A mistura de reação foi concentrada para dar o material desejado (rendimento quant.).ES+24 8
Composto C
<formula>formula see original document page 158</formula>
2-(2,2, 2-trifluoroetil) -7-mercaptoisoquinolin-1 (2H) -ona
<formula>formula see original document page 158</formula>
7-bromo-2- (2,2, 2-trif luoroetil) isoquinolin-1 (2H) -ona A uma solução agitada de 7-bromoisoquinolin-l(2H)-ona (5g, 22.3 mmol) e iodotrifluoroetano (4.9g, 23.4mmol) em dimetilacetimida resfriada até 5°C adicionou-se hidreto de sódio 60% em peso (0.89g 22.3 mmol) em porções durante 5 minutos. Após adição completa a mistura de reação foi deixada aquecer até temperatura ambiente durante 2 horas e então aquecida até 5 O0C durante 24 horas. A mistura de reação foi evaporada para dar um resíduo, que foi diluído com acetato de etila (200 ml) e água (200 ml). A camada aquosa foi ainda extraída com acetato de etila (2 x 50 ml) e as camadas orgânicas combinadas e lavadas com bicarbonato de sódio saturado (200 ml), salmoura (200 ml) e secadas sobre pó de sulfato de magnésio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para dar um resíduo e purificadas utilizando cromatografia de coluna eluindo com 50% acetato de etila/éter de petróleo para dar um sólido amarelo que ainda estava impuro através de LCMS (1.53g, 22% rendimento) <formula>formula see original document page 159</formula>
2- (2,2,2-trifluoroetil)-7-((triisopropilsilil)sulfanil) isoquinolin-1(2H)-ona
7-bromo-2- (2,2, 2-trif luoroetil) isoquinolin-1 (2H) -ona (0.5g, 1.63 mmol), carbonato de césio (0.693g 2.1 mmol),
acetato de paládio (0.018g, 0.08 mmol) e trifenilfosfino (0.094g, 0.36 mmol) em tolueno anidro num recipiente de microondas foram degasifiçados com nitrogênio, triisopropilsilano tiol (0.404g 0.36 mmol) foi adicionado ao recipiente e este foi então submetido a aquecimento a IOOoC num reator de microondas durante 2 horas. A mistura de reação foi diluída com éter de petróleo e o precipitado sólido removido por filtração e o filtrado evaporado e o resíduo purificado através de cromatografia de coluna eluindo com acetato de etila/éter de petróleo para dar um óleo (1,05 g, 50% rendimento).
<formula>formula see original document page 159</formula>
2- (2,2, 2-trifluoroetil) -7-mercaptoisoquinolin-l(2H) -ona 2- (2,2,2-trifluoroetil)-7-((triisopropilsilil) sulfanil)isoquinolin-1(2H)-ona foi dissolvido numa solução de ácido clorídrico em metanol (2 ml) e tetrahidrofurano (2 ml) e agitado à temperatura ambiente durante 2 horas ou até o desaparecimento do material de partida. A mistura de reação foi concentrada para dar o material desejado (rendimento quant.). Composto d
<formula>formula see original document page 160</formula>
2 -cloro-.N- (4 -mercaptof enil) benzamida
<formula>formula see original document page 160</formula>
2-clorobenzotioato de S-4-(2-clorobenzamido)fenila EtOAc (3.2 L) degasifiçado foi carregado num frasco. O solvente é resfriado até O0C sob nitrogênio. 0 4- aminobenzenotiol (435 g, 3.48 mol) é derretido e adicionado diretamente ao frasco. Trietilamina (773 g, 7.65 mol) é adicionada durante 30 minutos formando um precipitado. Então, cloreto de 2-clorobenzoíIa (1340g, 7,65 mol) é adicionado puro mantendo-se a temperatura abaixo de 5°C. Após adição completa, a mistura é aquecida até 20°C durante uma hora. A pasta é filtrada e a torta lavada com EtOAc (780 ml) . 0 material é secado a 50° C sob vácuo com uma varredura de nitrogênio até que um peso constante fosse obtido e transferido para a reação seguinte sem purificação adicional.
<formula>formula see original document page 160</formula>
2 -cloro-N- (4 -mercaptof enil) benzamida
2-clorobenzotioato de S-4-(2-clorobenzamido)fenila (305 g, 0.76 mol), EtOAc (325 mL) , e água (65 mL) são carregados para um frasco adaptado com condensador de refluxo. Uma solução de NaOH (3 eq., 50% aq.) é adicionada e a mistura aquecida até 70°C durante 30-40 minutos. EtOAc foi removido por destilação a IOOmmHg e a mistura resfriada até 5°C. A mistura foi acidifiçada com HCl 6N até pH 2. O sólido é coletado através de filtração a vácuo e lavado com água (390 ml) . 0 sólido é recolhido em CH2Cl2 (52 0 ml) e lavado com NaHCO3 aquoso saturado. A camada orgânica é secada sobre Na2SO4, filtrada e concentrada para dar o material desejado (174 g, 87%).
Composto e
<formula>formula see original document page 161</formula>
3,3, 3-trifluoro-N-(4-mercaptofenil)propanamida
<formula>formula see original document page 161</formula>
3,3,3-trifluoropropanotioato de
S-4-(3,3,3-trifluoropropanamido)fenila
4-Aminotiofenol é derretido e carregado em um frasco. EtOAc degasif içado (1950 ml) foi adicionado. Uma solução de K2CO3 (92g, 670 mmol) em H2O degasifiçado(1300 vol) foi então adicionada. A solução foi resfriada até 0°C e o cloreto de 3,3,3- trifluoropropanoíla (55.2 g, 600 mmol) foi lentamente adicionado para manter a temperatura abaixo de 10°C). A reação foi então aquecida até temperatura ambiente. A camada orgânica foi separada e lavada com salmoura (1300 ml). A camada orgânica foi então concentrada num evaporador rotativo. O sólido foi transformado em pasta em hept ano/Et OAc (390 mL/3 90 mL) durante 30 min. Heptano (780 mL) foi então adicionado e a pasta resfriada até 0°C durante 30 minutos. A pasta foi filtrada e a torta de filtro secada sob vácuo para dar o composto desejado (51.3 g, 87.2%).
<formula>formula see original document page 162</formula>
3,3,3-trifIuoro-N- (4-mercaptofenil)propanamida 3,3,3-trifluoropropanotioato de S-4-(3,3,3- trifluoropropanamido)fenila (44.8 g, 189 mmol) e EtOH (70 mL) são carregados num frasco. HCl concentrado (22.5 mL) é lentamente adicionado para manter a temperatura abaixo de 30°C. A reação é então aquecida até 50°C durante 17,5 horas. A mistura de reação é reduzida para 41 ml através de destilação a vácuo a 50°C. A reação é resfriada até temperatura ambiente e H2O (51 ml) é adicionado. A pasta é filtrada e a torta de filtro lavada com H2O (3 x 3 5 ml). O sólido é secado sob vácuo para produzir o composto desejado (19.9 g, 58%).
A Tabela 8 mostra os dados dos composto representativos adicionais da presente invenção. Os Compostos 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 63, 64, 65, 66, 67, 69, 71, 75, 76, 78, 80, 81, 82, 84, 85, 86, 88, 89, 90, 91, 93, 94, 95, 97, 98, 99, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 109, 111, 115, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 133, 134, 135, 136, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 153, 155, 156, 157, 159, 160, 169, 174, 176, 178, 180, 182, 184, 185, 187, 191, 193, 198, 199, 200, 203, 204 e 208 foram preparados de acordo com o método descrito no Esquema II e nos Exemplos 6-8. Os Compostos 68, 70, 96, 100, 110, 112, 113, 119, 141, 170, 172, 173, 175, 177, 186, 194, 195 e 202 foram preparados de acordo com o método descrito no Esquema
Geral (Método B) e no Exemplo 14. Os Compostos 171, 179, 188, 189, 190, 201, 206 e 210 foram preparados de acordo com o método descrito no Esquema Geral (método A) e no Exemplo 24 . Os Compostos 72, 73, 74, 83, 87, 108, 114, 116, 117, 120, 121, 137, 138, 139, 140, 152, 158, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 207 e 211 foram preparados de acordo com o método descrito no Esquema VII e no
Exemplo 11.
O Composto 181 foi preparado de acordo com o método descrito no Esquema I e no Exemplo 1-2.
O Composto 132 foi preparado de acordo com o método descrito no Esquema IX e no Exemplo 23.
O Composto 192 foi preparado de acordo com o método descrito no Esquema II e no Exemplo 21.
Os Compostos 183, 196 foram preparados de acordo com o método descrito no Exemplo 22.
O Composto 2 05 foi preparado de acordo com o método descrito no Exemplo 9-10.
Tabela 8
<table>table see original document page 163</column></row><table> <table>table see original document page 164</column></row><table> <table>table see original document page 165</column></row><table> <table>table see original document page 166</column></row><table> <table>table see original document page 167</column></row><table> <table>table see original document page 168</column></row><table> <table>table see original document page 169</column></row><table> <table>table see original document page 170</column></row><table> <table>table see original document page 171</column></row><table> <table>table see original document page 172</column></row><table> <table>table see original document page 173</column></row><table> <table>table see original document page 174</column></row><table> <table>table see original document page 175</column></row><table> <table>table see original document page 176</column></row><table> <table>table see original document page 177</column></row><table> <table>table see original document page 178</column></row><table> <table>table see original document page 179</column></row><table> <table>table see original document page 180</column></row><table> <table>table see original document page 181</column></row><table> <table>table see original document page 182</column></row><table> <table>table see original document page 183</column></row><table> <table>table see original document page 184</column></row><table> <table>table see original document page 185</column></row><table> <table>table see original document page 186</column></row><table> <table>table see original document page 187</column></row><table> <table>table see original document page 188</column></row><table> <table>table see original document page 189</column></row><table> <table>table see original document page 190</column></row><table> <table>table see original document page 191</column></row><table>
Exemplo 28: Ensaio de Inibição de Aurora-2 (Aurora A)
Os compostos foram identificados quanto à sua capacidade de inibir a Aurora-2 utilizando um ensaio padrão de enzima acoplada (Fox et al., Protein Sci., (1998) 7, 224 9). Os ensaios foram conduzidos numa mistura de IOOmM Hepes (pH 7,5), 10mM MgCl2, ImM DTT, 25mM NaCl, 2.5mM fosfoenolpiruvato, 3 00 μΜ NADH, 30 μ9/ml piruvato quinase e 10 μ9/m1 lactato desidrogenase. As concentrações finais de substrato no ensaio foram de 400μΜ ATP (Sigma Chemicals) e 570μΜ peptídeo (Kemptide, American Peptide, Sunnivale, CA) . Os ensaios foram conduzidos a 30°C e na presença de 4OnM Aurora-2.
Uma solução tampão de ensaio concentrada foi preparada contendo todos os reagentes relacionados acima, com exceção da Aurora-2 e do composto de teste de interesse. 55 μl da solução concentrada foram colocados numa placa de 96 cavidades seguido de adição de 2 μl de diluições seriais contendo DMSO concentrado do composto de teste (tipicamente iniciando a partir de uma concentração final de 7,5 μΜ) . A placa foi pré-incubada por 10 minutos a 30°C e a reação iniciada mediante adição de 10 μl de Aurora-2. As taxas iniciais de reação foram determinadas com um leitor de placas Molecular Devices SpectraMax Plus por um período de 10 minutos. Os dados de IC50 e Ki foram calculados a partir de uma análise de regressão não-linear utilizando o pacote de software Prism (GrafPad Prism versão 3.Ocx para Macintosh, GraphPad Software, San Diego Califórnia, USA).
Os Compostos 1-15, 16-17, 19, 21-22, 23-48, 50-68, 70- 72, 76-90, 92-136, 141-165, 167-211 demonstraram possuir atividade de Aurora quinase A a < 25nM Ki.
Os Compostos 1, 2, 6, 10, 11, 18-24, 26, 41, 47, 49, 52, 63, 69, 72-75, 82, 91, 108, 124, 132, 137-140, 145, 150, 166, 167, 174-175, 188, 197, 200-201, e 209 demonstraram inibir a Aurora quinase A num valor Ki entre 0,005 uM e 0,2 uM.
Os Compostos 3, 4, 7-9, 14-15, 17, 25, 27-30, 32-33, 35, 39, 43-45, 48, 53-54, 58-60, 62, 70-71, 76-77, 79- 80, 94-96, 98-99, 112, 114, 117, 120-121, 123, 125, 127-128, 130, 134, 141-142, 147-149, 158-159, 165, 176, 35 182, 189, 190, 192-193, 195, 198, 202, 207, e 210 demonstraram inibir a Aurora quinase A num valor Ki entre 0,001 uM e 0,005 uM. Os Compostos 5, 12-13, 16, 31, 34, 36-38, 40, 42, 46, 50-51, 55-57, 61, 64-68, 78, 81, 83-90, 92-93, 97, 100-107, 109-111, 113, 115-116, 118-119, 122, 126, 129, 131, 133, 135, 136, 143-144, 146, 151-157, 160-164, 168-173, 177-181, 183-187, 191, 194, 196, 199, 203-206, 2 08, e 211 demonstraram inibir a Aurora quinase A a um valor Ki de < 0.0 01 uM.
Exemplo 29: Ensaio de Inibição de Aurora-I (Aurora B) (radiométricô)
Uma solução tampão de ensaio foi preparada, consistindo de 25 mM HEPES (pH 7,5), 10 mM MgCl2, 0,1% BSA e 10% glicerol. Uma solução 22 nM de Aurora-B, também contendo 1,7 mM DTT e 1,5 mM Kemptide (LRRASLG) foi preparada em tampão de ensaio. A 22 μL de solução de Aurora-B, numa placa de 96 cavidades, adicionou-se 2μL de uma solução concentrada de composto em DMSO e a mistura deixada equilibrar durante 10 minutos a 25°C. A reação enzimática foi iniciada mediante adição de 16 μL solução concentrada [γ-33Ρ) -ATP (-20 nCi/μL) preparada em tampão de ensaio, até uma concentração final de ensaio de 800 μΜ. A reação foi interrompida após 3 horas mediante adição de 16 μL. 500 mM ácido fosfórico e os níveis de incorporação de 33P no substrato peptidico foram determinados através do método a seguir descrito. Uma placa de fosfocelulose de 96 cavidades (Millipore, Cat. No. MAPHN0B5 0) foi pré-tratada com 100 μL; de 100 mM ácido fosfórico antes da adição da mistura de reação enzimática (40 μL). A solução foi deixada impregnar na membrana de fosfocelulose durante 30 minutos e a placa posteriormente lavada quatro vezes com 200 μL de 100 mM ácido fosfórico. A cada cavidade da placa seca adicionou-se 30 μL de coquetel de cintilação líquida Optiphase "Supermix" (Perkin Elmer) antes da contagem de cintilação (Contador de Cintilação Líquida 1450 Microbeta, Wallac). Os níveis de radioatividade de referência não catalisada com enzima foram determinados mediante adição de 16 μL de 500 mM ácido fosfórico às cavidades de controle, contendo todos os componentes de ensaio (que atuam para desnaturação da enzima), antes da adição da solução [γ-33Ρ)-ΑΤΡ. Os níveis de incorporação de 33P catalisada com enzima foram calculados subtraindo-se as contagens médias de referência daquelas medidas em cada concentração de inibidor. Para cada determinação de Ki, 8 pontos de dados, tipicamente abrangendo a faixa de concentração 0 10 μΜ do composto, foram obtidos em duplicata (concentrados DMSO foram preparados a partir de um concentrado de composto de 10 mM com diluições seriais posteriores de 1:2,5). Valores Ki foram calculados a partir de dados de taxa inicial através de regressão não linear utilizando o pacote de software Prism (Prism 3,0, Graphpad Software, San Diego, CA).
Os Compostos 2, 4, 10-11, 21-27, 41, 47, 49, 52, 54, 62, 67-70, 72-75, 77, 82, 93, 108, 124-125, 131, 136-141, 145, 148, 150-151, 166-167, 174-175, 189, 193, 197, 200-201, 203, 209-210 demonstraram inibir a Aurora quinase B a um valor de Ki entre 0.05 uM e 2.0 uM.
Os Compostos 1, 6, 14-15, 17-18, 20, 28-32, 34-36, 39, 43-45, 53, 58, 60, 63, 71, 79-80, 92, 94-96, 98-99, 107, 109, 112, 114, 117, 120-121, 127-128, 130, 132- 134, 144, 147, 149, 154, 156-157, 162, 170-171, 173, 176, 178, 180-182, 184, 188, 190, 192, 194, 198, 202, e 2 05-2 07 demonstraram inibir a Aurora quinase B a um valor de Ki entre 0.01 uM e 0.05 uM.
Os Compostos 3, 5, 7-9, 12-13, 16, 19, 33, 37-38, 40, 42, 46, 48, 50-51, 55-57, 59, 61, 64-66, 76, 78, 81, 83-90, 97, 100-106, 110-111, 113, 115-116, 118-119, 122-123, 126, 129, 135, 142-143, 146, 152-153, 155, 158-161, 163-165, 168-169, 172, 177, 179, 183, 185-187, 191, 195-196, 199, 204, 208, e 211 demonstraram inibir a Aurora B quinase a um valor de Ki de £ 0.01 uM.
Os Compostos 3, 5-9, 12-16, 18-19, 29, 31, 33-34, 36- 40, 42, 46, 48, 50-51, 53, 55-59, 61, 64-66, 76, 78-79, 81, 83-90, 94-106, 110-113, 115-116, 118-123, 126-130, 133-135, 142-144, 146-147, 152-165, 168-173, 176-177, 179, 182-187, 191, 194-196, 198-199, 202, 204-205, 207- 208, e 211 demonstraram inibir a Aurora quinase B a um valor de Ki de < 0.025 uM.
Exemplo 30: Ensaio de Inibição de Itk
Os compostos da presente invenção foram avaliados como inibidores de Itk quinase humana utilizando um ensaio baseado em radioatividade. Esses compostos podem também ser avaliados utilizando um ensaio espectrofotométrico ou "alphascreen".
Ensaio de Inibição de Itk: Ensaio baseado em Radioatividade
Os ensaios foram conduzidos numa mistura de 2 0 mM MOPS (pH 7,0), 10 mM MgCl2, 0,1% BSA e ImM DTT. As concentrações finais de substrato no ensaio foram de 7,5 μΜ [γ-33Ρ]ΑΤΡ (4 00 μCi 33P ΑΤΡ/μmol ATP, Amersham Pharmacia Biotech/Sigma Chemicals) e 3μΜ peptídeo (proteína SAM68 Δ332-443). Os ensaios foram conduzidos a 25°C na presença de 50 nm Itk. Uma solução tampão de ensaio concentrada foi preparada contendo todos os reagentes relacionados acima, com exceção de ATP e do composto de teste de interesse. 50 μl da solução concentrada foram colocados numa placa de 96 cavidades seguido da adição de 2μl de concentrado de DMSO contendo diluições seriais do composto de teste (tipicamente iniciando a partir de uma concentração final de 50 μΜ com diluições seriais duplas) em duplicata (concentração final de DMSO 2%) . A placa foi pré-incubada durante 10 minutos a 25°C e a reação iniciada mediante adição de 50 μl [γ-33Ρ]ΑΤΡ (concentração final 7,5 μΜ).
A reação foi interrompida após 10 minutos mediante adição de 100 μl; 0, 2M ácido fosfórico + 0,01% TWEEN 20. Uma placa de 96 cavidades com filtro de fosfocelulose "multiscreen" (Millipore, Cat. No. MAPHNOB50) foi pré- tratada com 100 μl; 0,m2 M ácido fosfórico + 0,01% TWEEN 20 antes da adição de 170 μl; da mistura de ensaio interrompido. A placa foi lavada com 4 x 2 00 μL. 0, 2M ácido fosfórico + 0,01% TWEEN 20. Após secagem, 30 μL de coquetel de cintilação líquida Optiphase "Supermix" (Perkin Elmer) foi adicionado à placa antes da contagem de cintilação (Contador de Cintilação Líquida 1450 Microbeta, Wallac).
Os dados Ki(app) foram calculados a partir da análise de regressão não-linear dos dados da taxa inicial utilizando o pacote de software Prism (GraphPad Prism versão 3,Ocx para Macintosh, GraphPad Software, San Diego, Califórnia, USA).
Os Compostos 7, 12-13, 16, 37-39, 46, 50-51, 60-61, 64- 65, 76, e 81 demonstraram ter um valor de Ki de ≤ 0.1 uM.
Os Compostos 1-6, 8-9, 14-15, 17, 20, 28-35, 40, 44, 52-59, 66-68, 71, 77, 79-80, 82, e 161-164 demonstraram ter um valor de Ki de > 0.1 uM e £ 1.0 uM. Os Compostos 10, 25-27, 49, 69, 75, 166, e 167 demonstraram ter um valor de Ki de > 1.0 uM e £ 2.0 uM. Exemplo 31: Ensaio de Inibição de Itk: Ensaio "Alphascreen"
Os ensaios foram conduzidos numa mistura de 2 0 mM MOPS (pH 7,0), 10 mM MgCl2, 0,1% BSA e ImM DTT. As concentrações finais de substrato no ensaio foram de 100 μΜ ATP (Sigma Chemicals) e 2μΜ peptídeo (SAM6 8 Δ332-443) biotinilado) Os ensaios foram conduzidos a 25°C na presença de 10 nm Itk. Uma solução tampão de ensaio concentrada foi preparada contendo todos os reagentes relacionados acima, com exceção de ATP e do composto de teste de interesse. 25 μL da solução concentrada foram colocados em cada cavidade de uma placa de 96 cavidades seguido da adição de 1μL de DMSO contendo diluições seriais do composto de teste (tipicamente iniciando a partir de uma concentração final de 15 μΜ) em duplicata (concentração final de DMSO 2%). A placa foi pré-incubada durante 10 minutos a 25°C e a reação iniciada mediante adição de 25 μl ATP (concentração final 100 μΜ). As contagens de referência são determinadas mediante adição de 5μ1 de 500mM EDTA para controlar as cavidades contendo tampão de ensaio concentrado e DMSO antes da iniciação com ATP.
A reação foi interrompida após 3 0 minutos diluindo a reação 225 vezes em tampão de MOPS (20 mM MOPS (pH 7,0), ImM DTT, 10 mM MgCl2, 0,1% BSA) contendo 50 mM EDTA para trazer a concentração final do peptídeo para 9nM.
Os reagentes "Alphascreen" são preparados de acordo com instruções do fabricante (kit de ensaio fosfotirosina Alphascreen™ (P-Tyr-100) , número do catálogo PerkinElmer 6760620C) . Sob iluminação reduzida, 20 μ]^ de reagentes Alphascreen™ são colocados em cada cavidade de uma placa de 96 cavidades com metade da área branca (Corning Inc. - COSTAR 3 693) com 30 μΙ. das reações de quinase diluídas e interrompidas. As placas foram incubadas no escuro durante 60 minutos antes da leitura num leitor de placas Fusion Alpha (PerkinElmer).
Após remover os valores médios de referência para todos os pontos de dados, os dados Ki(app) são calculados a partir de uma análise de regressão não-linear utilizando o pacote de software Prism (GraphPad Prism versão 3,Ocx para Macintosh, GraphPad Software, San Diego, Califórnia, USA).
Exemplo 32 : Ensaio de Inibição de Itk: Ensaio Espectrofotométricô
Os compostos foram identificados quanto à sua capacidade de inibir Itk utilizando o ensaio padrão de enzima acoplada (Fox et al. , Protein Sei. (1998) 7, 2249).
Os ensaios são realizados numa mistura de 20 mM MOPS (pH 7,0), 10 mM MgCl2, 0,1% BSA, ImM DTT, 2,5 mM fosfoenolpiruvato, 200 μΜ NADH, 30 μg/ml piruvato quinase e 10 μg/ml lactato desidrogenase. As concentrações finais de substrato no ensaio são de 100 μΜ ATP (Sigma Chemicals) e 3μΜ peptídeo (SAM68 Δ332-443 biotinilado). Os ensaios foram conduzidos a 25°C e na presença de 100 nM Itk.
Uma solução concentração de tampão de ensaio é preparada contendo todos os reagentes acima citados, com exceção de ATP e do composto de teste de interesse. 60μ1 de solução concentrada são colocados numa placa de 96 cavidades seguido de adição de 2 μl de concentrado de DMSO contendo diluições seriais do composto de teste (tipicamente iniciando a partir de uma concentração final de 15 μΜ). A placa é pré-incubada durante 10 minutos a 25°C e a reação iniciada mediante adição de 5 μl de ATP. As taxas iniciais de reação são determinadas com um leitor de placas Spectramax Plus Molecular Devices durante um período de 10 minutos. Os dados de IC50 e Ki são calculados a partir de uma análise de regressão não-linear utilizando o pacote de software Prism (GraphPad Prism Versão 3.Ocx para Macintosh, GraphPad Software, San Diego, Califórnia, USA).
Exemplo 33: Ensaio de Inibição de JAK3
Os compostos foram identificados quanto à sua capacidade de inibir JAK utilizando o ensaio mostrado abaixo. As reações foram conduzidas num tampão de quinase contendo 100 mM HEPES (pH 7,4), 1 mM DTT, 10 mM MgCl2, 25 mM NaCl, e 0,01% BSA.
As concentrações de substrato no ensaio foram de 5 μΜ ATP (200 uCi/μmοl ATP) e 1 μΜ poli (Glu) 4Tir. As reações foram executadas a 25°C e 1 nM JAK 3.
A cada cavidade de uma placa de policarbonato de 96 30 cavidades adicionou-se 1,5 μl de um inibidor JAK 3 candidato juntamente com 50 μl de tampão de quinase contendo 2 μΜ poli (Glu) 4Tir e 10 μΜ ATP que foram então misturados e 50 μl de tampão quinase contendo 2 nM de enzima JAK 3 foram adicionados para dar início à reação. Após 20 minutos à temperatura ambiente (25oC), a reação foi interrompida com 50 μΐ de ácido tricloroacético a 20% (TCA) que também continha 0,4 mM ATP. Todo o conteúdo de cada cavidade foi então transferido para uma placa de filtro em fibra de vidro contendo 96 cavidades utilizando um Coletor de Células TomTek. Após lavagem, 60 μΐ de um fluido de cintilação foram adicionados e a incorporação de 33P detectada num contator TopCount da Perkin Elmer.
Os Compostos 12-13, 21, 25, 37, 50, 65, 76, 78, 81, 88, 92, 99, 102, 105, 108, 110, 112-113, 115, 131, 135, 150-151, 158-161, 164, 172-173, 180-181, 183, 185, 199, 202, 206, 209, e 211 demonstraram ter um valor de Ki de < 0.01 uM.
Os Compostos 1, 3, 5, 7-11, 14-17, 19-20, 22, 28-31, 33, 38-40, 44, 46, 48-49, 51-57, 60-61, 64, 66-68, 71, 74, 79, 80, 83, 85, 89-90, 94-97, 100, 103-104, 109, 116-117, 119-121, 126, 128, 134, 144-146, 148-149, 155, 162-163, 166-170, 175, 177, 179, 182, 184, 186, 188- 191, 194-195, 198, 204-205, e 207 demonstraram ter um valor de Ki de > 0.01 uM e £ 0.5 uM.
Os Compostos 2, 4, 23-24, 26-27, 32, 34-35, 58, 69, 73, 77, 82, 87, 114, 124, 127, 132, 137-138, 152, 171, 178, 192, e 2 03 demonstraram ter um valor de Ki de > 0.5 uM e < 2.0 uM.
Exemplo 34: Ensaio de Inibição de JAK2
Os ensaios são conduzidos conforme descrito acima no Exemplo 33, com exceção de que a enzima JAK-2 foi utilizada, a concentração final de poli (Glu) 4Tir foi de 15 μΜ e a concentração final de ATP foi de 12 μΜ. Exemplo 3 5 : Ensaio de Inibição de FLT-3 Os compostos foram identificados quanto à sua capacidade de inibir a atividade de FLT-3 utilizando um ensaio de ligação a filtro radiométrico. Este ensaio monitora a incorporação de 3 3P por um substrato poli(Glu,Tyr) 4:1 (pE4Y). As reações foram executadas numa solução contendo 100 mM HEPES (pH 7,5), 10 mM MgCl2, 25 mM NaCl, 1 mM DTT, 0,01% BSA e 2,5% DMSO. As concentrações finais de substrato no ensaio foram de 90 μΜ ATP e 0,5 mg/ml pE4Y (ambos da Sigma Chemicals, St. Louis, MO) . A concentração final de um composto da presente invenção estava geralmente entre 0,01 e 5 μΜ. Tipicamente, uma titulação de 12 pontos foi conduzida preparando-se diluições seriais de concentrado de DMSO 10 mM do composto de teste. As reações foram conduzidas â temperatura ambiente.
Duas soluções de ensaio foram preparadas. A solução 1 contém 100 mM HEPES (pH 7,5), 10 mM MgCl2, 25 mM NaCl, 1 mg/ml pE4Y e 180 mM ATP (contendo 0,3 mCi de [γ- 33p]ATP para cada reação) . A solução 2 contém 100 mM HEPES (pH 7,5), 10 mM MgCl2, 25 mM NaCl, 2 mM DTT, 0,02% BSA e 3 nM FLT-3 . 0 ensaio foi conduzido numa placa de 96 cavidades misturando-se 50 μΐ cada da Solução 1 e 2,5 ml dos compostos da presente invenção.
A reação foi iniciada com a Solução 2. Após incubação durante 2 0 minutos à temperatura ambiente, a reação foi interrompida com 50 μΐ de TCA 2 0% contendo 0,4 mM de ATP. Todo o volume de reação foi então transferido para uma placa de filtro e lavado com TCA 5% através de um
Coletor 9600 da TOMTEC (Hamden, CT) . A quantidade de incorporação de 33P pelo pE4Y foi analisada através de um Contador de Cintilação em Microplaca Packard Top Count (Meriden, CT) . Os dados foram ajustados utilizando o software Prism para obter um IC50 ou Ki.
Os Compostos 2, 3, 25, 50, 76, 78-79, 81, 85, 88-90, 92, 94, 97, 99-100, 102-103, 105, 108-110, 112-113, 119, 128, 131, 144, 150-151, 159-160, 168-169, 173, 181, 183, 199, 202, 206, e 209 demonstraram ter um valor de Ki de <_ 0.05 uM.
Os Compostos 1, 4-5, 8, 10, 12, 14-17, 20, 22, 26-27, 31-32, 35, 37, 39-40, 46, 51, 60, 64-65, 67, 68, 71, 73-74, 80, 95-96, 104, 115, 121, 126, 134-135, 137, 148, 155, 158, 171-172, 182, 184-186, 188-189, 194, 198, 204-205, e 211 demonstraram ter um valor de Ki de
> 0.05 uM e < .15 uM.
Os Compostos 6-7, 9, 11, 19, 23-24, 28-30, 33-34, 38, 44, 48-49, 52-59, 61, 66, 69, 77, 82-83, 114, 117, 120, 124, 127, 132, 139, 142, 145-146, 149, 152, 161-164, 166-167, 170, 175, 177-178, 190-191, 193, 195, 203, e 207 demonstraram ter um Ki > .15 uM e < 1.0 uM.
Exemplo 36 : Ensaio de Estabilidade Microssomal
A estabilidade microssomal foi monitorada através da geração de perfis de depleção-tempo em microssomos de uma categoria de espécies (camundongo CD-I macho, rato Sprague-Dawley, cão Beagle, macaco cinomolgo, e humano de sexo misto dividido em grupos).
As soluções de composto reforçadas foram preparadas diluindo-se a solução concentrada de composto em DMSO (tipicamente 10 mM) para dar uma solução em acetonitrila (0,5 mM) . 0 composto (para dar uma concentração final de 5 μΜ) foi incubado com uma mistura final de reação (1000 μΐ) consistindo de proteína de microssomo hepático (1 mg/ml) e um β- nicotinamida adenina dinucleotídeo fosfato, sistema regenerador (NADPH) na forma reduzida (RGS) [consistindo de 2mM β-nicotinamida adenina dinucleotídeo fosfato (NADP), 20,5 mM ácido isocítrico, 0,5 U de isocitrato desidrogenase/ml, 3 0 mM cloreto de magnésio, e 0,1 M tampão fosfato (PB) pH 7,4] na presença de 0,1 M PB (pH 7,4) .
A reação foi iniciada mediante adição (250 μΐ) do RGS pré-incubado à mistura pré-incubada de microssomo /VRT/PB (a pré-incubação em ambos os casos foi realizada por 10 minutos a 3 7°C) . As amostras foram incubadas em frascos Eppendorf (1,5 ml) num agitador aquecedor (DPC Micromix 5 (ajustes; forma 20, amplitude 4) modificado para ser aquecido-, até 3 7°C, com aquecedores de dupla placa fixados à plataforma e controlados por um aquecedor manual Packard) ligado a um manipulador de líquidos automatizado Multiprobe II HT Ex. 0 manipulador de líquidos foi programado software WinPREP) para amostrar a mistura de incubação microssomal após 0, 2, 10, 3 0 e 60 minutos de incubação e transferir uma alíquota (100 μΐ) para um bloco interruptor (bloco de 96 cavidades) contendo 100 μl de metanol resfriado. A % orgânicos na mistura de interrupção foi otimizada para a análise mediante adição de volumes apropriados de aquoso/orgânico (tipicamente 100 μL de 50:50 metanol:água).
Antes da análise o bloco de interrupção foi colocado sobre um agitador (DPC Micromix 5; 10 min, forma 20, amplitude 5) para precipitar as proteínas. O bloco foi então centrifugado (Jouan GR412; 2000 rpm, 15 min, 4°C) . Uma alíquota de amostra (200 μΐ) foi então transferida para um bloco de análise e o bloco centrifugado novamente (Jouan GR412; 2000 rpm, 5 min, 4°C) antes de ser enviado para análise. Os perfis de depleção .foram determinados monitorando-se o desaparecimento de VRT através de cromatografia líquida-espectrometria de massa seqüencial (LC-MS/MS). As amostras foram injetadas (2 0 μΐ; sistema cromatográfico líquido Agilent 1100 equipado com autoamostrador) sobre uma coluna analítica. A fase móvel consistiu de água + 0,05% (v/v) ácido fórmico (A) e metanol + 0,05% (v/v) ácido fórmico (B).
A execução de um método de gradiente otimizado para o composto de interesse realizou a eluição do composto da coluna analítica: o tempo total de operação foi de 6 minutos com uma taxa de escoamento de 0,35 ml/min. Todo o efluente da coluna ingressou na fonte de ionização de eletropulverização (modo positivo) de um espectrômetro de massa seqüencial Micromass Quattro LC entre 0,5 e 5,9 min da operação. A espectrometria de massa foi otimizada para o composto de interesse. Todas as incubações foram conduzidas em duplicata e os resultados expressados como % remanescente original a 30 minutos ou 6 0 minutos em relação à amostra a 0 minuto.
Os Compostos 5, 7, 9-17, 20-22, 25-35, 37-40, 44, 48-50, 52-61, 64-66, 68-69, 71, 75-76, 78-80, 82-83, 85, 87-99, 94, 97, 99-100, 102-105, 108-110, 112-117, 120-121, 126-128, 132, 134-135, 137-139, 142, 144-146, 148-153, 155, 159-163, 166-173, 175, 177-178, 180-181, 183-184, 186, 188, 190-192, 194-195, 199-200, 202, 205- 206, 209, e 211 demonstraram ter estabilidade a microssomos hepáticos humanos a > 50% remanescente após 30 minutos.
Os Compostos 5, 7, 9, 12-14, 16, 18, 31, 33, 36, 37, 39, 40, 42, 46, 50, 52, 55, 56, 59, 61, 63, 64, 68, 71, 76, 79, 80, 84, 85, 94, 98, 102, 103, 105, 109, 112- 117, 120-122, 126-128, 130, 132, 134-136, 142-145, 147, 150-157, 168-171, 194, e 202 demonstraram ter estabilidade a microssomos hepáticos humanos a > 50% remanescente após 6 0 minutos. Exemplo 37: Análise de proliferação e viabilidade celular
Os compostos foram identificados quanto à sua capacidade de inibir a proliferação celular e seus efeitos sobre a viabilidade celular utilizando células de Colo2 05 obtidas de ECACC e utilizando o ensaio mostrado abaixo.
As células Colo205 foram inoculadas em placas de 96 cavidades e o composto serialmente diluído adicionado às cavidades em duplicata. Os grupos de controle incluíram células não tratadas, o diluente do composto (0,1% DMSO isoladamente) e o meio de cultura sem células. As células foram então incubadas durante 72 ou 96 horas a 37°C numa atmosfera de 5% C02/95% umidade. Para medir a proliferação, 3 horas antes do final do experimento, 0,5 μCi de 3H timidina foi adicionado a cada cavidade. As células foram então coletadas e a radioatividade incorporada contada num beta-contador de microplaca Wallac. A viabilidade celular foi avaliada utilizando Promega CellTiter 96AQ para medir a conversão de MTS. As curvas de resposta à dose foram calculadas utilizando software Prism 3,0 (GraphPad) ou SoftMax Pro 4.3.1 LS (Molecular Devices). Incubação de 72 horas:
Os compostos a seguir foram incubados durante 72 horas e demonstraram ter um valor IC50 de £0.03 uM: Compostos 50-51, 81, 85, 89, 97, 113, 118, 133, 135, 143-144, 146, 157, 159-160, 170, 172, 176, 182-183, 185, 187, 191, 194, 196, 198-199, 204-205, e 211. Os compostos seguintes foram incubados durante 72 horas e demonstraram ter um valor IC50 > 0.03 uM e _< 0.20 uM: Compostos 5, 16, 40, 56, 83, 87, 103, 115, 119, 121-123, 126-128, 130, 134, 142, 147, 151-152, 156, 168-169, 171, 173, 177-181, 184, 186, 190, 195, 202- 203, e 208.
Os compostos a seguir foram incubados durante 72 horas e demonstraram ter um valor IC50 > 0,20 uM: Compostos 59, 112, 114, 116-117, 120, 124-125, 129, 131-132, 136, 141, 145, 148-150, 158, 174-175, 188-189, 192-193, 197, 200, 206-207, 209-210.
Incubação de 96 horas
Os compostos seguintes foram incubados durante 96 horas e demonstraram ter um valor IC50 de ≤ 0.05 uM: Compostos 7, 12, 38, 50-51, 56, 70-71, 78, 80-81, 84- 85, 88-90, 92, 95-96, 99-105, 107, 110-111, 128, 135, 153, 155, 157, e 164.
Os compostos seguintes foram incubados durante 96 horas e demonstraram ter um valor IC50 de > 0.05 uM e £ 1.0 uM: Compostos 1-2, 4-6, 8-9, 11, 13-18, 20, 28-37, 39- 46, 48, 52-55, 57-61, 64-68, 76-77, 79, 86, 93-94, 98, 106, 109, 132, 137-140, 154, 156, 161-163, 165, e 201. Os compostos seguintes foram incubados durante 96 horas e demonstraram ter um valor IC50 de > 1.0 uM: Compostos 3, 19, 21-27, 47, 49, 62-63, 72-74, 97, 108, 166, e 167.
Exemplo 38: Ensaio de Inibição de Atividade de Abl Quinase e Determinação da Constante de Inibição Ki Os compostos foram identificados quanto à sua capacidade de inibir a atividade de Abl quinase truncada no terminal N (Δ 27) utilizando um sistema padrão de enzima acoplada (Fox et al. , Protein Sci., 7, p.2249 (1998). As reações foram conduzidas numa solução contendo 100 mM HEPES (pH 7,5), 10 mg MgCl2, 25 mM NaCl, 3 00 μΜ NADH, 1 mM DTT e 3% DMSO. As concentrações finais de substrato no ensaio foram de 110 μΜ ATP (Sigma Chemicals, St Louis, MO) e 70 μΜ peptídeo (EAIYAAPFAKKK, American Peptide, Sunnyvale, CA). As reações foram executadas a 3 O0C e 21 nM Ab quinase. As concentrações finais dos componentes do sistema de enzima acoplada foram de 2,5 mM fosfoenolpiruvato, 200 μΜ NADH, 60 μg/ml piruvato quinase e 20 μg/ml lactato desidrogenase.
Uma solução tampão de ensaio concentrada foi preparada contendo todos os reagentes listados acima com exceção de ATP e do composto de teste de interesse. A solução tampão de ensaio concentrada (60 μΐ) foi incubada numa placa de 96 cavidades com 2μ1 do composto de teste de interesse a concentrações finais tipicamente estendendo-se de 0,002 μΜ a 30 μΜ a 30°C durante 10 minutos. Tipicamente, uma titulação de 12 pontos foi preparada através de diluições seriais (de concentrados de composto de ImM) com DMSO dos compostos de teste em placas filhas. A reação foi iniciada mediante adição de 5 μΐ de ATP (concentração final de 110 μΜ) . As taxas de reação foram obtidas utilizando um leitor de placa Spectramax da Molecular Devices (Sunnyvale, CA) durante 10 minutos a 30°C. Os valores. Ki foram determinados com base nos dados da taxa residual como uma função de concentração de inibidor utilizando regressão não linear (Prism 3.0, Software Graphpad, San Diego, CA).
Exemplo 39: Ensaio de Inibição da Atividade da Abl Quinase Mutante (T315I) e Determinação da Constante de Inibição IC50
Os compostos foram identificados quanto à sua capacidade de inibir a forma mutante T315I de Abl humana em Soluções de Sinalização Celular Upstate (Dundee, UK) . Num volume final de reação de 2 5 μl, a mutante T315I de Abl humana (5-10 mU) foi incubada com 8 mM MOPS pH 7,0, 0,2 mM EDTA, 50 μΜ EAIYAAPFAKKK, 10 mM Acetato Mg, [γ"33Ρ-ΑΤΡ] (atividade específica aprox.
500 cpm/pmol, 10 mM concentração final do ensaio) e o composto de teste de interesse em concentrações finais acima da faixa de 0-4μΜ. A reação foi iniciada mediante adição da mistura de MgTAP. Após incubação durante 4 0 minutos a temperatura ambiente, a reação foi interrompida mediante adição de 5 μl de uma solução de ácido fosfórico a 3%. 10 μl da reação foi então borrada sobre uma placa de filtro e lavada três vezes durante 5 minutos em 75 mM ácido fosfórico e uma vez em metanol antes da secagem e contagem de cintilação. Os valores de inibição IC50 foram determinados com análise de regressão não-linear das atividades enzimáticas residuais como uma função da concentração do inibidor (Prism 3.0, GraphPad Software, San Diego, CA).
Exemplo 40: Ensaio de Inibição de Plk4 Os compostos foram identificados quanto à sua capacidade de inibir Plk4 utilizando um ensaio de incorporação radioativo-fosfato. Os ensaios foram conduzidos numa mistura de 8mM MOPS (pH 7,5), 10 mM MgCl2, 0,1% BSA e 2 mM DTT. As concentrações finais de 25 substrato no ensaio foram de 15 μΜ [γ-33Ρ]ΑΤΡ (227 mCi 33P ATP / μmol ATP, Amersham Pharmacia Biotech/Sigma Chemicals) e 300μΜ peptídeo (KKKMDATFADQ). Os ensaios foram conduzidos a 25°C na presença de 25 nm Plk4. Uma solução tampão de ensaio concentrada foi preparada contendo todos os reagentes relacionados acima, com exceção de ATP e do composto de teste de interesse. 30 μl da solução concentrada foram colocados numa placa de 96 cavidades seguido da adição de 2μ1 de concentrado de DMSO contendo diluições seriais do composto de teste (tipicamente iniciando a partir de uma concentração final de 10 μΜ com diluições seriais duplas) em duplicata (concentração final de DMSO 5%) . A placa foi pré-incubada durante 10 minutos a 25°C e a reação iniciada mediante adição de 8 μl [γ-33Ρ]ΑΤΡ (concentração final 15 μΜ) .
A reação foi interrompida após 18 0 minutos mediante adição de 100 μL 0,14M ácido fosfórico. Uma placa de 96 cavidades com filtro de fosfocelulose "multiscreen" (Millipore, Cat. No. MAPHNOB50) foi pré-tratada com 100 μL 0,m2 M ácido fosfórico antes da adição de 125 μL da mistura de ensaio interrompido. A placa foi lavada com 4 x 200 μL; 0,2M ácido fosfórico. Após secagem, 100 μL de coquetel de cintilação liquida Optiphase "Supermix" (Perkin Elmer) foi adicionado à placa antes da contagem de cintilação (Contador de Cintilação Líquida 1450 Microbeta, Wallac). Após remover os valores médios de referência para todos os pontos de dados, os dados Ki(app) foram calculados a partir de uma análise de regressão não-linear utilizando o pacote de software Prism (GraphPad Prism versão 3,0 cx para Macintosh, GraphPad Software, San Diego, Califórnia, USA) .
Embora diversas concretizações da presente invenção tenham sido descritas, é evidente que nossos exemplos básicos podem ser alterados para prover outras concretizações que utilizem ou abranjam os compostos, métodos e processos da presente invenção. Portanto, será apreciado que o escopo da presente invenção seja definido pelas reivindicações anexas.

Claims (73)

1. Composto, caracterizado pelo fato de apresentar a fórmula I: <formula>formula see original document page 208</formula> ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, onde: Ht é tiazol ou pirazol, onde cada anel é opcional e independentemente substituído com R2 e R2 ; Q ê -O-, -NR'-, -S-, ou -C(R')2-; Rx é H, alifático C1-6, NO2, CN, halo, NH2, N(alifático C1- 4), N( (alifático C1-4)2, O(alifático C1-4) , OH ou -N(C=O) (alifático C1-4); onde dito ,alifático é opcionalmente substituído com 1-3 fluoro; Ry é T2-R10 ou L-Z-R10; R1 é R3-(Anel D); O Anel D é um anel de arila ou heteroarila monocíclico de 5-7 membros, onde dito heteroarila possui de 1-4 heteroátomos no anel selecionado de O, N e S; o Anel D pode ser opcionalmente fundido com o Anel D'; O Anel D' é um anel aromático de 5-8 membros parcialmente insaturado ou totalmente insaturado contendo de 0-4 heteroátomos de anel selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre; cada carbono de anel substituível do Anel D e do Anel D' é indepentemente substituído com oxo, T4-R5 ou V-Z-R5; cada nitrogênio de anel substituível do Anel D e do Anel D' é independentemente substituível com -R4; cada T, T3 e T4 é independentemente uma cadeia de alquilideno C1-4 ou está ausente; Z é uma cadeia de alquilideno C1-4 ou está ausente; L é -O-, -S-, -S0-, -SO2-, -N(R6)SO2-, -SO2N(Re)-, -N (R6) - , -CO-, -CO2-, -N(R6)CO-, -N(R6)C(O)O-, -N(R6)CON(Re)-, -N(R6)SO2N(Re)-, -N(R6)N(Re)-, -C(O)N(Re)-, -OC(O)N(Re), -C(Re)2O-, -C(Re)2S-, -C(R6)2SO-, -C(R6)2SO2-, -C(R6)2SO2N(Re)-, -C(R6)2N(Re)-, -C(R6)2N(R6)C(O)-, -C(R6)2N(Re)C(O)O-, -C(R6)=NN(Re)-, -C(R6)=N-O-, -C(R6)2N(R6)N(Re)-, -C(R6)2N(R6)SO2N(Re)-, ou -C(R6)2N(Re)CON(Re) - ; T2 está independentemente ausente ou é uma cadeia de alquilideno C1-10, onde até seis unidades C da cadeia de alquilideno são opcionalmente substituídas com -O-, -C(=0)-, -S(O)-, -S(O)2-, -S-, ou -N (R4) - ; T2 é opcionalmente substituído com 0-6 grupos JT; R2 e R2 são independentemente -R, -T-W-Re ou R8 ou R2 e R2 são considerados em conjunto com seus átomos intervenientes para formar um anel fundido, de 5 a 8 membros, insaturado ou parcialmente insaturado, tendo de 0-3 heteroátomos de anel selecionados de hidrogênio, oxigênio ou enxofre, onde cada carbono de anel substituível de dito anel fundido formado por R2 e R2 é independentemente substituído com halo, oxo, -CN7 -NO2, -R7 ou -V-R6 e cada nitrogênio de anel substituível de dito anel formado por R2 e R2 é independentemente substituído com R4; R5 é -R, -halo, -0R, -C(=0)R, -CO2R, -C0C0R, COCH2COR, -NO2, -CN, -S(O)R, -S(O)2R, -SR, -N(R4)2, -CON(R7)2, -SO2N(R7)2, -OC (=0) R, -N(R7)COR, -N (R7) CO2 (alif ático C1-6) , -N(R4)N(R4)2, -C=NN(R4)2, -C=N-OR, -N(R7)CON(R7)2, -N(R4)SO2R7 ou -OC- (=0) N (R7) 2; cada R é hidrogênio, um grupo alifático C1-10, um anel de arila C6-10, um anel de heteroarila tendo de 5-10 átomos de anel, ou um anel de heterociclila tendo de 4-10 átomos de anel, o anel de heteroarila ou heterociclila tendo de 1-4 heteroátomos de anel selecionados de nitrogênio, oxigênio, ou enxofre, o grupo alifático e cada R sendo opcionalmente substituído com 0-6 R9; cada R4 é -R7, -COR7, -CO2 (alifático C1-S opcionalmente substituído), -CON(R7)2, ou -SO2R7; Vé -O-, -S-, -S0-, -SO2-, -N(R6)SO2-, -SO2N(Re)-, -N(R6)-, -CO-, -CO2-, -N(R6)CO-, -N(R6)C(O)O-, -N(R6)CON(Re)-, -N(R6)SO2N(Re)-, -N(R6)N(Re)-, -C(O)N(Re)-, -OC(O)N(R6)7 -C(R6)2O-, -C(R6)2S-, -C(R6)2SO-, -C(R6)2SO2-, -C(R6)2SO2N(Re)-, -C(R6)2N(Re)-, -C(R6)2N(R6)C(O)-, -C(R6)2N(R6)C(O)O-, -C(R6)=NN(Re)-, -C(R6)=N-O-, -C(R6)2N(R6)N(Re)-, -C(R6)2N(R6)SO2N(Re)-, ou -C(R6)2N(R6)CON(Re) - ; W é -C(R6)2O-, -C(R6)2S-, -C(R6)2SO-, -C(R6)2SO2-, -C(R6)2SO2N(Re)-, -C(R6)2N(Re)-, -CO-, -CO2, -C(R6)2OC(O)-, -C(R6)2OC(O)N(Re)-, -C(Re)2N(R6)CO-, -C(R6)2N(R6)C(O)O-, -C(Re)=NN(Re)-, -C(Re)=N-O-, -C (Re) 2N (Re) N (Re) - , -C (Re) 2N (Re) SO2N (Re) , -C (Re) 2N (Re) CON (Re) - , -C (Re) 2N (Re) SO2N (Re) - , -C(R6)2N(R6)CON(Re)- ou -CON(Re)-; cada R6 é independentemente hidrogênio ou alifático C1-6 opcionalmente substituído com 0-3 J6; ou dois grupos R6 no mesmo átomo de nitrogênio são tomados conjuntamente com o átomo de nitrogênio para formar um anel de heterociclila ou heteroarila de 4-8 membros; onde dito anel de heterociclila ou heteroarila é opcionalmente substituído com 0-4 J6; cada R7 é independentemente hidrogênio; alifático C1-6; um heteroarila de 5 membros contendo de 0-4 heteroátomos selecionados de 0, N, ou S; ou fenila; cada R7 é opcionalmente substituído com 0-3 J7; ou dois R7 no mesmo nitrogênio são tomados conjuntamente com o nitrogênio para formar um anel de heterociclila ou heteroarila de 4 a 8 membros opcionalmente substituído; onde dito anel de heterociclila ou heteroarila é opcionalmente substituído com 0-4 J7; cada R8 é halogênio, -CN, ou -NO2; cada r9 é -r', -halo, -or', -C(=0)r', -co2r', -c0c0r', coch2cor', -no2, -cn, -s(o)r', -s(o)2r', -sr', -N(r')2, -con (r') 2, -so2n(r')2, -oc(=o)r', -n(r')c0r', -n(r') co2 (alifático ci_6) , -n (r') n (r') 2 , -n (r') con (r') 2 ; -n (r') s02n(r') 2, -n(r')s02r', -0c(=0)n(r')2, =nn(r')2, =n- or , =nr', ou =0; cada R10 é um anel de heterociclila de 4 membros, contendo 1 heteroátomo selecionado de O, NR11 e S; cada R10 é opcionalmente substituído com 0-6 ocorrências de J; cada J e Jt é independentemente R, -halo, -OR, -C(=0)R, -CO2R, -C0C0R, COCH2COR, -NO2, -CN, -S(O)R, -S(O)2R, -SR, -N(R4)2, -CON(R7)2, -SO2N(R7)2, -0C(=0)R, -N(R7)COR, -N (R7) CO2 (alifático C1^), -N(R4)N(R4)2, =NN(R4)2, =N-OR, =NR, =0, -N(R7)CON(R7)2, -N(R7)SO2N(R7)2, -N(R4)SO2R, OC (=0) N (R7)2 ou -OP (=0) (ORm)2; ou cada J6 e J7 é independentemente NH2, NH (alifático C1-4) , N(alifático C1-4) , halogênio, alifático C1-4, OH, 0 (alifático C1-4) , NO2, CN, CO2H, CO2 (alifático C1-4) , 0(halo alifático C1-4) , ou halo alifático C1-4 ; 2 grupos J ou Jt, no mesmo átomo ou em átomos diferentes, juntamente com o(s) átomo (s) ao qual cada conjunto de átomos J ou Jt está ligado, formam um anel de 3 a 8 membros, saturado, parcialmente saturado ou insaturado tendo de 0-2 heteroátomos selecionados de 0, N ou S-; onde 1-4 átomos de hidrogênio no anel formado pelos 2 grupos J ou Jt é opcionalmente substituído com halo, alquila Ci_3, ou -0(alquila C1-3) ; sendo que dito alquila C1-3 é opcionalmente substituído com 1-3 flúor; ou dois átomos de hidrogênio no mesmo átomo no anel formado pelos 2 grupos J ou Jt são opcionalmente substituídos com oxo; cada R11 é -R7, -COR7, -CO2 (alifático Ci-6 opcionalmente substituído), -CON(R7)2, ou -SO2R7; cada R é independentemente hidrogênio ou um grupo alifático C1-6 opcionalmente substituído com 0-4 ocorrências de NH2, NH (alifático C1-4) , N(alifático C1-4)2, halogênio, alifático C1-4, 0H, 0 (alifático C1-4) , NO2, CN, CO2H, CO2 (alifático C1-4) , CONH2, CONH (alifático C1-4) , CON (alifático C1-4) , 0 (halo alifático C114), ou halo alifático C1-4; ou dois R , juntamente com o(s) átomo (s) ao qual estão ligados, formam =0, um carbociclila ou heterociclila de 3-6 membros opcionalmente substituído; cada R" é independentemente H ou alquila C1-2.
2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de Ht ser <formula>formula see original document page 212</formula> onde cada anel é opcionalmente e independentemente substituído com R2 e R2.
3. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizado pelo fato de Q ser - S-.
4. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizado pelo fato de Q ser -O-.
5. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-4, caracterizado pelo fato de R2 ser H ou alifático C1-6 opcionalmente substituído.
6. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-5, caracterizado pelo fato de Rx ser H, halogênio, -NO2, ou -CN.
7. Composto, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de Rx ser H ou F.
8. Composto, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de Rx ser H.
9. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-8, caracterizado pelo fato de Ry ser T2- R10,
10. Composto, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de T2 estar ausente.
11. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-7, caracterizado pelo fato de Ry ser L- Z-R10.
12. Composto, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de L ser O, -N(R6) - ou S.
13. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 ou 12, caracterizado pelo fato de Z estar ausente.
14. Composto,de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de R10 ser azetidina opcionalmente substituída.
15. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-7, caracterizado pelo fato de Ry ser representado pela fórmula i: <formula>formula see original document page 213</formula>
16. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-7, caracterizado pelo fato de Ry ser representado pela fórmula ii-a: <formula>formula see original document page 213</formula>
17. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-16, caracterizado pelo fato de ser representado pela fórmula Ia: <formula>formula see original document page 213</formula>
18. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-16, caracterizado pelo fato de ser representado pela fórmula Ib: <formula>formula see original document page 214</formula>
19. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 17 ou 18, caracterizado pelo fato de R2 ser H ou alifático Ci-3 opcionalmente substituído.
20. Composto, de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de R2 ser H.
21. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 17-20, caracterizado pelo fato de R2 ser H ou alifático Ci-3 opcionalmente substituído.
22. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-21, caracterizado pelo fato de o Anel D ser um anel de arila ou heteroarila monocíclico de 5-6 membros; e o Anel D ser fundido com o Anel D".
23. Composto, de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pelo fato de o Anel D-D' ser naftila, benzimidazol, quinolina, ou isoquinolina.
24. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-21, caracterizado pelo fato de o Anel D ser um anel de arila ou heteroarila monocíclico de 5-6 membros; e sendo que D não é fundido com D'.
25. Composto, de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pelo fato de o Anel D ser fenila.
26. Composto, de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de o Anel D ser monosubstituído na posição 4 com T4-R5 ou V-Z-R"5.
27. Composto, de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de o Anel D ser opcionalmente substituído na posição 4 com V-Z-R5.
28. Composto, de acordo com a reivindicação 27, caracterizado pelo fato de V ser -N(R6)CO-, -C(O)N(Re), -0-, -N (R6)- ou -N(R6)SO2-.
29. Composto, de acordo com a reivindicação 27, caracterizado pelo fato de V ser -N(R6)CO, ou -C(O)N(Re)-
30. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 26-29, caracterizado pelo fato de Z ser uma cadeia de alquilideno C1-4.
31. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 26-29, caracterizado pelo fato de Z estar ausente.
32. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser representado pela fórmula II -a: <formula>formula see original document page 215</formula> onde R2, R2 , Rx e Q são conforme definido na reivindicação 1; O Anel D é fenila ou um heteroarila de 6 membros contendo de 1-2 heteroátomos selecionados de 0, N, ou S; e R5 é um arila C6-io opcionalmente substituído com R9.
33. Composto, de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de o Anel D ser fenila.
34. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 31 ou 33, caracterizado pelo fato de R5 ser fenila opcionalmente substituído com R .
35. Composto, de acordo com a reivindicação 34, caracterizado pelo fato de dito fenila ser substituído na posição orto com R9.
36. Composto, de acordo com a reivindicação 35, caracterizado pelo fato de R9 ser halogênio, CF3, alquila C1-3, -S-(alquila C1-3), ou OCF3.
37. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser representado pela fórmula II-b: <formula>formula see original document page 216</formula> onde R2, R2', Rx, Q, e J são conforme definido na reivindicação -1, o Anel D é fenila ou um heteroarila de 6 membros, contendo 1-2 heteroátomos selecionados de O, N ou S; e R5 é arila C6-io opcionalmente substituído com R9.
38. Composto, de acordo com a reivindicação 37, caracterizado pelo fato de o Anel D ser fenila.
39. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 37 ou 38, caracterizado pelo fato de R5 ser fenila opcionalmente substituído com R9.
40. Composto, de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de dito fenila ser substituído na posição orto com R9.
41. Composto, de acordo com reivindicação 40, caracterizado pelo fato de R9 ser halogênio, CF3, alquila C1-3, -S-(alquila C1-3) ou OCF3.
42. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 39 ou 40, caracterizado pelo fato de J ser alquila C1-4, alquila C3-6 0(alquila C1-4), OH, CN ou F.
43. Composto, de acordo com a reivindicação 42, caracterizado pelo fato de J ser CH3, OCH3, O(CH2CH3), OCH(CH3)2, OC(CH3)3, 0H, CN, ou F.
44. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser representado pela fórmula II-C : <formula>formula see original document page 217</formula> onde R2, R2 , Rx, e Q são conforme definido na reivindicação 1, o Anel D é fenila ou um heteroarila de 6 membros, contendo 1-2 heteroátomos selecionados de O, N ou S; e R5 é um alquila C1^e ou cicloalifático C3-6 opcionalmente substituído com R9.
45. Composto, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de o Anel D ser fenila.
46. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 44 ou 45, caracterizado pelo fato de R5 ser alquila C1-6 opcionalmente substituído com 1-6 halogênio.
47. Composto, de acordo com a reivindicação 46, caracterizado pelo fato de R ser alquila C1- opcionalmente substituído com 1-3 halogênio.
48. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 46 ou 47, caracterizado pelo fato de dito halogênio ser fluoro.
49. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser representado pela fórmula II-d: <formula>formula see original document page 218</formula> onde: R2, R2 , Rx, QeJ são conforme definido na reivindicação -1, o Anel D é fenila ou um heteroarila de 6 membros, contendo 1-2 heteroátomos selecionados de O, N ou S; e R5 é um alquila Ci-6 ou cicloalifático C3-6, sendo que dito alquila C1-6 ou cicloalif ático C3-6 é opcionalmente substituído com 0-6 R9.
50. Composto, de acordo com a reivindicação 49, caracterizado pelo fato de R5 ser opcionalmente substituído com 1-6 halogênio ou um grupo CF3.
51. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 49 ou 50, caracterizado pelo fato de a azetidina da fórmula II-d ser substituída com 1-2 grupos J, onde J é selecionado de alifático C1-6, cicloalif ático C3-6, halogênio, OH, OR, NH2, NH(C1-6) 2, CN ou um heterociclila de 4-7 membros contendo de 1-2 heteroátomos selecionados de O, N, e S.
52. Composto, de acordo com a reivindicação 51, caracterizado pelo fato de a azetidina da fórmula II-d ser substituída com 2 grupos J, onde J é selecionado de alifático Ci-6, cicloalifático C3-6, ou halogênio.
53. Composto, de acordo com a reivindicação 52, caracterizado pelo fato de J ser cicloalifático C3.
54. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 50-52, caracterizado pelo fato de dito halogênio de J ser F.
55. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser representado pela fórmula II-e: <formula>formula see original document page 219</formula> onde: R2, R2 , Rx, Q, J e o Anel D' são conforme definido na reivindicação 1, o Anel D é fenila ou um heteroarila de 6 membros, contendo 1-2 heteroátomos selecionados de O, N ou S; e R5 é um alifático Ci-6, cicloalifático C3_6 ou halogênio, sendo que dito alifático Ci-6 ou cicloalif ático C3-6 é opcionalmente substituído com halogênio.
56. Composto, de acordo com a reivindicação 55, caracterizado pelo fato de o Anel D' ser fenila, um heteroarila de 5-6 membros, ou um heterociclila de 5-6 membros, sendo que dito heteroarila ou heterociclila contém de 1-2 heteroátomos selecionados de O, N ou S.
57. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 55 ou 56, caracterizado pelo fato de a azetidina da fórmula ΙΙ-e ser substituída com 1-2 grupos J, onde J é selecionado de alifático C1-6, cicloalifático C3-6, halogênio, OH, OR, NH2, NH(C1-6), N(Ci-6)2, CN ou um heterociclila de 4-7 membros contendo 1-2 heteroátomos selecionados de O, N e S.
58. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 55-57, caracterizado pelo fato de D-D' ser benzimidazol, isoquinolina, quinolina ou isoindolinona.
59. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser representado pela fórmula <formula>formula see original document page 220</formula> onde R2, R2', Rx, Q, e J são conforme definido na reivindicação -1, o Anel D é fenila ou um heteroarila de 6 membros, contendo 1-2 heteroátomos selecionados de O, N ou S; e R5 é um anel arila C6-io, um anel heteroarila tendo de 5- átomos de anel, ou um anel heterociclila tendo de 4-10 átomos de anel, o anel de heteroarila ou heterociclila tendo de 1-4 heteroátomos de anel selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre.
60. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser representado pela fórmula II-G: <formula>formula see original document page 221</formula> onde R2, R2 , Rx, Q, J e R4 são conforme definido na reivindicação 1, o Anel D é fenila ou um heteroarila de 6 membros, contendo 1-2 heteroátomos selecionados de O, N ou S; e R5 é um alquila C1-6 opcionalmente substituído com R9.
61. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 32-60, caracterizado pelo fato de Q ser O, -NR-, ou S.
62. Composto, de acordo com a reivindicação 61, caracterizado pelo fato de Q ser 0 ou S.
63. Composto, de acordo com a reivindicação 62, caracterizado pelo fato de Q ser S.
64. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser representado pelos seguintes compostos: <formula>formula see original document page 221</formula> <formula>formula see original document page 222</formula> <formula>formula see original document page 223</formula> <formula>formula see original document page 224</formula>
65. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser representado pelos seguintes compostos: <formula>formula see original document page 224</formula> <formula>formula see original document page 225</formula> <formula>formula see original document page 226</formula> <formula>formula see original document page 227</formula> <formula>formula see original document page 228</formula> <formula>formula see original document page 229</formula> <formula>formula see original document page 230</formula> <formula>formula see original document page 231</formula> <formula>formula see original document page 232</formula> <formula>formula see original document page 233</formula> <formula>formula see original document page 234</formula> <formula>formula see original document page 235</formula> <formula>formula see original document page 236</formula> <formula>formula see original document page 237</formula> <formula>formula see original document page 238</formula>
66. Composição, caracterizada pelo fato de compreender um composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1-65 e um portador, adjuvante ou veículo farmaceuticamente aceitável.
67. Método para inibir a atividade da proteína Aurora quinase numa amostra biológica, caracterizado pelo fato de compreender contatar dita amostra biológica com um composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1-65.
68. Método para tratar um distúrbio proliferativo, num paciente, caracterizado pelo fato de compreender a etapa de administrar a dito paciente um composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1-65.
69. Método, de acordo com a reivindicação 68, no qual dito distúrbio proliferativo é selecionado de melanoma, mieloma, leucemia, linfoma, neuroblastoma, ou câncer selecionado de cólon, mama, gástrico, ovariano, cervical, pulmonar, do sistema nervoso central (SNC), renal, prostático, de bexiga, pancreático, cerebral (gliomas), de cabeça e pescoço, renal, hepático, melanoma, sarcoma ou câncer de tireóide, num paciente necessitado de tal método, caracterizado pelo fato de compreender administrar a dito paciente um composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1-65.
70. Método para tratar câncer num indivíduo, necessitado do mesmo, caracterizado pelo fato de compreender a administração seqüencial ou a co-administração de um composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações de 1-65, ou de um sal f armaceut icamente aceitável do mesmo, e de outro agente terapêutico.
71. Método, de acordo com a reivindicação 70, caracterizado pelo fato de dito agente terapêutico ser selecionado de taxanos, inibidores de bcr-abl, inibidores de EGFR, agentes danificadores do DNA, e antimetabólitos.
72. Método, de acordo com a reivindicação 70, caracterizado pelo fato de dito agente terapêutico ser selecionado de Paclitaxel, Gleevec, dasatinibe, nilotinibe, Tarceva, Iressa, cisplatina, oxaliplatina, carboplatina, antraciclinas, Arac e 5-FU.
73. Método, de acordo com a reivindicação 70, caracterizado pelo fato de dito agente terapêutico ser selecionado de camptotecina, doxorrubicina, idarubicina, cisplatina, taxol, taxotere, vincristina, tarceva, o inibidor de MEK, U0126, um inibidor de KSP, vorinostat, Gleevec, dasatinibe e nilotinibe.
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