CN101675041A

CN101675041A - 用作激酶抑制剂的氨基嘧啶类化合物

Info

Publication number: CN101675041A
Application number: CN200880014717A
Authority: CN
Inventors: H·宾奇; S·扬; C·戴维斯; M·莫蒂默尔; J·戈莱克; J·斯塔德利; D·罗宾逊; M·奥丹尼尔; D·伯雅尔; J·宾德; S·艾弗里特
Original assignee: Vertex Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Vertex Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2007-03-20
Filing date: 2008-03-19
Publication date: 2010-03-17
Also published as: US20100137305A1; WO2008115973A2; WO2008115973A3; MX2009010037A; JP2010522194A; AU2008228963A1; JP2013237703A; EP2142537A2; CA2682195A1

Abstract

本发明涉及可用作Aurora蛋白激酶抑制剂的化合物。本发明还提供了包含这些化合物的药学上可接受的组合物，以及在治疗不同疾病、病症和障碍中使用所述化合物和组合物的方法。本发明还提供了制备本发明化合物的方法。

Description

用作激酶抑制剂的氨基嘧啶类化合物

技术领域

[0001]本发明涉及可用作Aurora蛋白激酶抑制剂的化合物。本发明还涉及包含本发明化合物的药学上可接受的组合物，使用所述化合物和组合物治疗不同障碍的方法，以及制备所述化合物的方法。

背景技术

[0002]Aurora蛋白是三种相关的丝氨酸/苏氨酸激酶(称为Aurora-A、-B和-C)的家族，它们对于通过细胞周期的分裂期的进程是必需的。特别地，Aurora-A在中心体成熟和分离、有丝分裂纺锤体的形成和染色体的可靠分离中发挥决定性作用。Aurora-B是一种染色体信使蛋白，其在调节赤道板上的染色体的比对、纺锤体组装检测点和胞质分裂的修正完成中发挥中心性作用。

[0003]已在一系列人类癌症中观察到Aurora-A、-B或-C的过表达，所述癌症包括结肠直肠癌、卵巢癌、胃癌和侵袭性导管腺癌。

[0004]许多研究已证实，Aurora-A或-B在人类癌细胞中的缺失或被siRNA、显性负相抗体或中和抗体的抑制中断了通过具有4NDNA的细胞的蓄积的有丝分裂的进展，并且在某些情况下接着会核内复制和细胞死亡。

[0005]Aurora激酶是有吸引力的靶，因为它们与众多人类癌症以及它们在这些癌症细胞增生中所发挥的作用有关。期望拥有具有有利的药物样性质(例如在人肝微粒体中稳定)的Aurora激酶抑制剂。相应地，需要有抑制Aurora激酶并且还显示出有利的药物样性质的化合物。

发明概述

[0006]本发明提供可用作Aurora蛋白激酶的抑制剂的化合物及其药学上可接受的组合物。更特别地，本发明提供了在人肝微粒体中代谢稳定和/或有效抑制细胞增生的化合物。

[0007]这些化合物由式I表示：

或其药学上可接受的盐，其中各变量如本文中所定义。

[0008]这些化合物及其药学上可接受的组合物可用于体外、体内和离体抑制激酶。这些用途包括治疗或预防骨髓增生性障碍以及增生性障碍例如黑素瘤、骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、成神经细胞瘤和癌症。其它用途包括研究生物学和病理学现象中的激酶；研究由此类激酶介导的细胞内信号转导途径；以及比较评价新型激酶抑制剂。

发明详述

[0009]本发明的一个实施方案提供了式I化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

Ht是

或

R²是H、C_1-3烷基或环丙基；

R²’是H；

Q是-O-、-S-或-C(R’)₂-；

R^X是H或F；

R^Y是

或

J¹是F、NR⁴R⁵、CN、OR⁶、氧代(＝O)或任选被1次出现的OH或

OCH₃取代的C_2-6烷基；

各J²独立地是C_1-6烷基、F、NR⁴R⁵、CN或OR⁶；或者两个J²基团与它们所连接的原子一起形成含有1-2个选自N或O的杂原子的4-7元杂环；其中所述环任选被0-3个J^R取代；

n是1或2；

R⁴是H、C_1-5烷基或C_3-6环烷基；

R⁵是C_1-5烷基或C_3-6环烷基；

或者R⁴和R⁵与它们所连接的氮原子一起形成含有1-2个选自O、N或S的杂原子的3-6元单环；其中所述单环任选被0-3个J^R取代；

R⁶是H、C_1-4烷基或C_3-6环烷基；其中所述C_1-4炕基或C_3-6环烷基任选被1-3个氟原子取代；

J^R是F或R⁷；

R¹是苯基或6元杂芳基环，其中所述的杂芳基具有1-4个选自O、N和S的环杂原子；R¹任选被0-4次出现的-NHC(O)R³或0-4个氟原子取代；

R³是C_1-6脂肪族基团或苯基，其中所述R³任选被0-6个J³取代；

各J³独立地是卤素、C_1-6烷基、-O-(C_1-6烷基)，-S-(C_1-6烷基)、硝基或CN，其中所述C_1-6烷基任选被0-3个氟原子取代；或者两个J³基团与它们所连接的碳原子一起形成含有0-1个选自O、N和S的杂原子的3-5元单环基团；

各R⁷独立地是C_1-6脂肪族基团；含有1-4个选自O、N或S的杂原子的5-6元杂芳基；各R⁷任选被0-3个J⁷取代；以及

J⁷独立地是NH₂、NH(C_1-4脂肪族基团)、N(C_1-4脂肪族基团)₂、卤素、C_1-4脂肪族基团、OH、O(C_1-4脂肪族基团)、NO₂、CN、CO₂H、CO₂(C_1-4脂肪族基团)、O(卤代C_1-4脂肪族基团)或卤代C_1-4脂肪族基团。

[0010]为了避免疑义，应当理解，在本发明化合物中，如果R^X是H，Ht是；R²是环丙基，R²’是H，Q是S，R¹是苯基，以及R³是乙基；则R^Y不是

(4-甲基哌啶)。

[0011]为了避免疑义，还应当理解，当R^X是H，Ht是

；R²是甲基，R²’是H，Q是S，R¹是苯基，以及R³是乙基时；则R^Y不是(4-甲基哌啶)。

[0012]本发明的一个实施方案提供了式I化合物或其药学上可接受的盐，其中各变量如本文中所定义：

J¹是F、NR⁴R⁵、CN、OR⁶或氧代(＝O)，任选被1次出现的OH或OCH₃取代；

各J²独立地是F、NR⁴R⁵、CN或OR⁶，或者两个J²基团与它们所连接的原子一起形成含有1-2个选自N或O的杂原子的4-7元杂环，其中所述环任选被0-3个J^R取代；

n是1或2；以及

其它变量的含义如以上式I中所述。

在一些实施方案中，n是1。

[0013]另一个实施方案提供了式II化合物：

其中各变量如本文中所定义。

[0014]在一些实施方案中，Q是S。

[0015]在其它实施方案中，R^X是H。

[0016]在一些实施方案中，R²是H或任选取代的C_1-6脂肪族基团。在其它实施方案中，R²是C_1-3烷基或环丙基。在一些实施方案中，R²是C_1-3烷基。

[0017]在一些实施方案中，R²’是H。在其它实施方案中，R²’是H以及R²是C_1-3烷基或环丙基。

[00181在另一个实施方案中，R¹是苯基。在这些实施方案的一些中，R¹在对位被取代。在一些实施方案中，R¹任选被1次出现的-NHC(O)R³取代。在一些实施方案中，R¹是

[0019]在一些实施方案中，R³是C_1-6脂肪烃其中所述R³任选被0-6个J³取代。在一些实施方案中，R³是-CH₂CH₃、CH₂CF₃、CH₂CH₂CF₃、环丙基或

[0020]在其它实施方案中，R³是苯基。在这些实施方案的一些中，R³在邻位被J³取代。在一些实施方案中，J³是卤素、CF₃、C_1-3烷基、-S-(C_1-3烷基)或OCF₃。

[0021]在一些实施方案中，Ht是

[0022]在其它实施方案中，Ht是

[0023]在一些实施方案中，n是1。在其它实施方案中，n是2。

[0024]在一些实施方案中，J²独立地是C_1-6烷基、F、NR⁴R⁵、CN、OR⁶或R⁷。

[0025]在一些实施方案中，J¹是F。在其它实施方案中，J¹是NR⁴R⁵。

[0026]在一些实施方案中，R⁴和R⁵与它们所连接的氮原子一起形成含有1-2个选自O、N或S的杂原子的5-6元单环；其中所述单环任选被0-3个J^R取代。

[0027]在一些实施方案中，所述单环是选自哌啶、哌嗪、吗啉或吡咯烷的环。在一些实施方案中，所述哌啶、哌嗪、吗啉或吡咯烷环任选被F或R⁷取代。在一些实施方案中，R⁷是C_1-6脂肪族基团。

[0028]另一个实施方案提供了其中R^Y是的化合物。在一些实施方案中，n是2。在一些实施方案中，R^Y是

以及n是2。

[0029]在一些实施方案中，两个J²基团与它们所连接的原子一起形成含有1-2个选自N或O的杂原子的4-7元杂环；其中所述环任选被0-3个J^R取代。

[0030]在一些实施方案中，该两个J²基团连接到同一原子以形成螺环化合物。在一些实施方案中，所述杂环含有1个杂原子。在一些实施方案中，所述杂原子是氮。在一些实施方案中，所述杂环选自哌啶或吡咯烷。在一些实施方案中，所述杂环任选被1个J^R取代。

[0031]在一些实施方案中，J^R是R⁷并且该R⁷是C_1-6脂肪族基团。在一些实施方案中，R⁷是C_1-6烷基。在一些实施方案中，R⁷是甲基。

[0032]在一些实施方案中，R^Y是

。在其它实施方案中，R^Y是

[0033]另一个实施方案提供了其中R^Y是的化合物。在一些实施方案中，n是1。在一些实施方案中，R^Y是

以及n是1。

[0034]在一些实施方案中，J¹是F并且R¹被被1次出现的-NHC(O)R³取代。在一些实施方案中，R³是C_1-6脂肪族基团，其中所述R³被0-6个J³取代；

[0035]各J³是卤素。在一些实施方案中，R³是CH₂CF₃。在其它实施方案中，R³是CH₂CH₂CF₃。在一些实施方案中，R³是乙基或环丙基。

[0036]在一些实施方案中，R^Y是

。在其它实施方案中，R^Y是

[0037]在一些实施方案中，R^Y是

，n是1，J¹是NR⁴R⁵，R¹被1次出现的-NHC(O)R³取代，以及R³是C_1-6脂肪族基团，其中所述R³被0-6个J³取代；

各J³是卤素。在一些实施方案中，R^Y是

。在一些实施方案中，R^Y是。在一些实施方案中，R³是CH₂CF₃或CH₂CH₂CF₃。在其它实施方案中，R³是CH₂CF₃。在一些实施方案中，R³是乙基或环丙基。

[0038]在一些实施方案中，式I和式II的变量包括以下表1中所示的那些。

[0039]另一个实施方案提供了选自表1的化合物。

表1

I-1 I-2 I-3

I-4 I-5 I-6

I-7 I-8 I-9

I-10 I-11 I-12

I-13 I-14 I-15

I-16 I-17 I-18

I-19 I-20 I-21

I-22 I-23 I-24

I-25 I-26 I-27

I-28 I-29 I-30

I-31 I-32 I-33

I-34 I-35 I-36

I-37 I-38 I-39

I-40 I-41 I-42

I-43 I-44 I-45

I-46 I-47 I-48

I-49 I-50 I-51

I-52 I-53 I-54

I-55 I-56 I-57

I-58 I-59 I-60

I-61 I-62 I-63

I-64 I-65 I-66

I-67 I-68 I-69

I-70 I-71 I-72

I-73 I-74 I-75

I-76 I-77 I-78

I-79 I-80 I-81

I-82 I-83 I-84

I-85

[0040]为了本发明的目的，化学元素根据CAS版本的化学物理手册(Handbook of Chemistry and Physics)第75版的元素周期表定义。此外，有机化学的一般原理描述于本领域技术人员已知的教科书中，包括，例如“Organic Chemistry”，Thomas Sorrell，University Science Books，Sausalito：1999，以及“March’sAdvanced Organic Chemistry”，5^th Ed.，Ed.：Smith，M.B.和March，J.，John Wiley&Sons，New York：2001，其全部内容在此通过引用并入。

[0041]如本文所述，明确说明的原子的数目范围包括其中的任何整数。例如，具有1-4个原子的基团可具有1、2、3或4个原子。表示为“I-1至I-5”的化合物的列举意指I-1、I-2、I-3、I-4和I-5。

[0042]如本文所述，本发明化合物可任选被一个或多个取代基取代，例如上文一般性描述的那些，或者由本发明的特定类、亚类、种示例的那些。应当理解，短语“任选取代的”可与短语“取代或未取代的”互换使用。通常，术语“取代的”，不管前面是否有“任选”，均指在给定结构中的氢原子团被所指明的基团替换。除非另有说明，任选取代的基团可在该基团的每一个可取代的位置上具有取代基，并且当在任意给定结构中有多于一个位置可被多于一个选自特定组的取代基取代时，在每一个位置上的取代基可以相同或者不同。本发明考虑的取代基的组合优选是导致形成稳定的或化学上可行的化合物的那些。

[0043]如本文所用，术语“稳定的”是指当经受允许其产生、检测并优选其回收、纯化的条件和用于本文公开的一个或多个目的时基本不变化的化合物。在一些实施方案中，稳定的化合物或化学上可行的化合物是当维持于40℃或更低的温度，无水份或其它化学反应性条件至少一周时基本不变化的化合物。

[0044]如本文所用，术语“脂肪族化合物”或“脂肪族基团”等表示未分支或分支的、直链或环状、取代或未取代的烃，其是完全饱和的或者含有一个或多个具有与分子剩余部分连接的单一点的不饱和单元。适当的脂肪族基团包括但不限于线性或分支、取代或未取代的烷基、链烯基或炔基。具体实例包括但不限于甲基、乙基、异丙基、正丙基、仲丁基、乙烯基、正丁烯基、乙炔基、叔丁基、环丙基甲基、环丙基乙基、环丁基甲基、环丁基乙基、环戊基甲基或环戊基乙基。

[0045]术语“环脂肪族化合物”(或“碳环”或“碳环基”或“环烷基”等)是指单环C₃-C₈烃或二环C₈-C₁₂烃，其是完全饱和的或者含有一个或多个不饱和单元，但是其不是芳香族的，其具有与分子剩余部分连接的单一点，在所述分子中的所述二环环系中的任何单独环具有3-7个成员。适当的环脂肪族基团包括但不限于环烷基和环烯基。具体实例包括但不限于环己基、环丙烯基和环丁基。

[0046]如本文所用，术语“烷基”表示未分支或分支的、直链或环状烃，其是完全饱和的，并具有与分子剩余部分连接的单一点。除非另外指出，烷基含有1-12个碳原子。烷基的具体实例包括但不限于甲基、乙基、异丙基、正丙基、环丙基、仲丁基和环丁基。

[0047]在本发明的化合物中，环包括线性稠合环、桥接环或螺环。桥接环脂肪族基团的实例包括但不限于二环[3.3.2]癸烷、二环[3.1.1]庚烷和二环[3.2.2]壬烷。

[0048]如本文所用，术语“杂环”、“杂环基”或“杂环化合物”等表示非芳香的单环或二环，其中一个或多个环成员独立地选自杂原子。在一些实施方案中，所述“杂环”、“杂环基”或“杂环化合物”基团具有3-10个环成员，其中一个或多个环成员是独立地选自氧、硫、氮或磷的杂原子，并且系统中的各环含有3-7个环成员。桥接杂环的实例包括但不限于7-氮杂-二环[2.2.1]庚烷和3-氮杂-二环[3.2.2]壬烷。

[0049]适当的杂环包括但不限于3-1H-苯并咪唑-2-酮、3-(1-烷基)-苯并咪唑-2-酮、2-四氢呋喃基、3-四氢呋喃基、2-四氢噻吩基、3-四氢噻吩基、2-吗啉代、3-吗啉代、4-吗啉代、2-硫代吗啉代、3-硫代吗啉代、4-硫代吗啉代、1-吡咯烷基、2-吡咯烷基、3-吡咯烷基、1-四氢哌嗪基、2-四氢哌嗪基、3-四氢哌嗪基、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、1-吡唑啉基、3-吡唑啉基、4-吡唑啉基、5-吡唑啉基、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-哌啶基、2-噻唑烷基、3-噻唑烷基、4-噻唑烷基、1-咪唑烷基、2-咪唑烷基、4-咪唑烷基、5-咪唑烷基、二氢吲哚基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、苯并硫杂环戊烷、苯并二硫杂环己烷和1，3-二氢-咪唑-2-酮。

[0050]如本文所用，术语“Ht”与“Het”和

可互换。

[0051]术语“杂原子”表示一个或多个氧、硫、氮、磷或硅(包括氮、硫、磷或硅的任何氧化形式；任何碱性氮的季铵化形式；或者杂环的可取代氮，例如N(如在3，4-二氢-2H-吡咯基中)、NH(如在吡咯烷基中)或NR⁺(如在N-取代的吡咯烷基中))。

[0052]术语“芳基”是指具有总计5-12个环成员的单环或二环，其中在系统中的至少一个环是芳族的，并且其中系统中的各环含有3-7个环成员。术语“芳基”可与术语“芳基环”互换使用。术语“芳基”还指如下文所定义的杂芳基环系。

[0053]术语“杂芳基”是指具有总计5-12个环成员的单环或二环，其中在系统中的至少一个环是芳族的，在系统中的至少一个环含有一个或多个杂原子，并且其中系统中的各环含有3-7个环成员。术语“杂芳基”可与术语“杂芳基环”或术语“杂芳族基团”互换使用。适当的杂芳基环包括但不限于2-呋喃基、3-呋喃基、N-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、5-咪唑基、苯并咪唑基、3-异噁唑基、4-异噁唑基、5-异噁唑基、2-噁唑基、4-噁唑基、5-噁唑基、N-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、哒嗪基(例如3-哒嗪基)、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、四唑基(例如5-四唑基)、三唑基(例如2-三唑基和5-三唑基)、2-噻吩基、3-噻吩基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基(例如2-吲哚基)、吡唑基(例如2-吡唑基)、异噻唑基、1，2，3-噁二唑基、1，2，5-噁二唑基、1，2，4-噁二唑基、1，2，3-三唑基、1，2，3-噻二唑基、1，3，4-噻二唑基、1，2，5-噻二唑基、嘌呤基、吡嗪基、1，3，5-三嗪基、喹啉基(例如2-喹啉基、3-喹啉基、4-喹啉基)和异喹啉基(例如1-异喹啉基、3-异喹啉基或4-异喹啉基)。

[0054]如本文所用，术语“不饱和”表示具有一个或多个不饱和单元的部分。

[0055]术语“卤素”表示F、Cl、Br或I。

[0056]如本文所用，术语“保护基团”是指用于暂时阻断多官能化合物中的一个或多个希望反应位点的基团。在某些实施方案中，保护基团具有以下特征中的一个或多个，或者优选具有所有以下的特征：a)以高收率选择性反应以得到被保护的底物，其对在一个或多个其它反应位点发生的反应是稳定的；以及b)可通过不攻击再生官能团的试剂以高收率选择性除去。示例性保护基团详细描述于Greene，T.W.，Wuts，P.G，“Protective Groups in OrganicSynthesis”，Third Edition，John Wiley&Sons，New York：1999和此书的其它版本中，其全部内容通过引用并入本文。如本文所用，术语“氮保护基团”是指用于暂时阻断多官能化合物中的一个或多个希望的氮活性位点的基团。优选的氮保护基团也具有上文例举的特征，并且某些示例性氮保护基团也详细描述于Greene，T.W.，Wuts，P.G，“Protective Groups in Organic Synthesis”，第三版，JohnWiley&Sons，New York：1999的第7章中，其全部内容通过引用并入本文。

[0057]除非另外指出，本文描述的结构还表示包括此结构的所有异构(例如，对映体、非对映体和几何(或构象))形式；例如，各不对称中心的R和S构型，(Z)和(E)双键异构体，以及(Z)和(E)构象异构体。因此，本发明化合物的单个立体化学异构体以及对映体混合物、非对映体混合物和几何异构体(或构象异构体)混合物在本发明的范围之内。

[0058]除非另外指出，本发明的所有互变异构形式都在本发明的范围之内。如熟练的从业者所理解的，吡唑基团可以不同方式表示。例如，如

所示结构也代表其它可能的互变异构体，如

。同样，如

所示结构也代表其它可能的互变异构体，如

[0059]除非另外指出，取代基可围绕任何可旋转的键自由旋转。例如，如所示的取代基也代表

。同样，如

所示的取代基也代表

[0060]另外，除非另外指出，本文描述的结构还表示包括区别仅在于存在一个或多个同位素富集的原子的化合物。例如，具有除由氘或氚替换氢或由¹³C-或¹⁴C-富集的碳替换碳的本发明结构的化合物在本发明的范围之内。这类化合物可用作，例如生物测定中的分析工具或探针。

[0061]本发明的化合物可根据本说明书使用本领域普通技术人员通常已知的步骤制备。那些化合物可通过已知的方法分析，所述方法包括但不限于LCMS(液相色谱法质谱法)和NMR(核磁共振)。应当理解，下文所示的具体条件仅仅是实例，并且不表示限制可用于制备本发明化合物的条件的范围。此外，本发明还包括根据本说明书对于本领域技术人员是显而易见的用于制备本发明的化合物的条件。除非另外指出，以下方案中的所有变量都如本文中所定义。

方案I

[0062]以上方案I显示了用于制备本发明化合物的一般方法。本发明的化合物可以如上文所示的各种途径制备。基本上，存在向二氯嘧啶原料中添加的三个主要基团。添加这些基团的顺序可变化。涉及的三个主要反应是：添加吡咯烷或哌啶，添加氨基-杂芳基以及添加-Q-R¹(其包括-SMe氧化为适当的离去基团，例如SO₂Me)。如上文所示，吡咯烷或哌啶、氨基-杂芳基和-Q-R¹可以各种不同的顺序添加。例如，氨基-杂芳基可首先添加，随后添加吡咯烷或哌啶，氧化，并且最后添加-Q-R¹。或者，可首先发生氧化，随后添加-Q-R¹，添加氨基-杂芳基，并且最后添加吡咯烷或哌啶。熟练的从业者将理解上文所示的不同反应。

[0063]以上方案中的合成可用于制备本发明的化合物，其中R^Y是被1个J¹或2-3个J²(1个J¹或2-3个J²是如上文所述的1-3个J基团)取代的环。

[0064]另外，本发明的化合物可根据WO 2004/000833中所示的方法制备。

[0065]因此，本发明涉及用于制备本发明化合物的方法。

[0066]用于评估本发明化合物的活性的方法(例如激酶测定法)在本领域中是已知的，并且也描述于阐述的实施例中。

[0067]所述化合物作为蛋白激酶抑制剂的活性可在体外、在体内或在细胞系中测定。体外测定法包括测定活化激酶的激酶活性或ATP酶活性的抑制作用的测定法。其它的体外测定法量化抑制剂结合蛋白激酶的能力，并且可通过在结合之前放射性标记抑制剂、分离抑制剂/激酶复合物，以及测定结合的放射标记物的量测定，或者通过进行竞争性实验来测定，在所述竞争性实验中将新的抑制剂和与已知放射性配体结合的激酶一起孵育。

[0068]本发明的另一方法涉及抑制生物样品中的激酶活性，此方法包括使所述生物样品与式I化合物或包含所述化合物的组合物接触。如本文所用，术语“生物样品”表示体外或离体样品，包括不限于细胞培养物或其提取物；得自哺乳动物的活组织检查材料或其提取物；以及血液、唾液、尿液、粪便、精液、眼泪或其它体液或其提取物。

[0069]生物样品中激酶活性的抑制作用可用于本领域技术人员已知的各种目的。这类目的的实例包括但不限于输血、器官移植、生物样品贮存和生物测定。

[0070]生物样品中激酶活性的抑制作用也可用于研究生物学和病理学现象中的激酶；研究由这类激酶介导的细胞内信号转导途径；以及比较评价新的激酶抑制剂。

[0071]Aurora蛋白激酶抑制剂或其药学盐可制成对动物或人类施用的药物组合物。这些药物组合物包含有效治疗或预防Aurora-介导的病症的量的Aurora蛋白抑制剂和药学上可接受的载体，是本发明的另一个实施方案。

[0072]如本文所用，术语“Aurora-介导的病症”或“Aurora-介导的疾病”表示已知Aurora(Aurora A、Aurora B和Aurora C)在其中起作用的任何疾病或其它有害病症。这类病症包括但不限于癌症、增生性障碍和骨髓增生性障碍。

[0073]骨髓增生性障碍的实例包括但不限于真性红细胞增多症、血小板增多症、伴有骨髓纤维变性的骨髓外化生、慢性髓细胞性白血病(CML)、慢性粒单核细胞型白血病、嗜酸细胞过多综合征、幼年型粒单核细胞型白血病和系统性肥大细胞病。

[0074]术语“癌症”还包括但不限于以下癌症：表皮样口腔：口腔、唇、舌、口、咽；心脏：肉瘤(血管肉瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、脂肪肉瘤)，粘液瘤，横纹肌瘤，纤维瘤，脂肪瘤和畸胎瘤；肺：支气管癌(鳞状上皮细胞或表皮样细胞、未分化的小细胞、未分化的大细胞、腺癌)，小泡状(细支气管)癌，支气管腺瘤，肉瘤，淋巴瘤，软骨错构瘤，间皮瘤；胃肠：食道(鳞状上皮细胞癌、喉、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤)，胃(癌、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)，胰腺(导管腺癌、胰岛素瘤、胰高血糖素瘤、胃泌素瘤、类癌瘤、舒血管肠肽瘤)，小肠或小肠(腺癌、淋巴瘤、类癌瘤、Karposi′s肉瘤、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、神经纤维瘤、纤维瘤)，大肠或大肠(腺癌、管状腺瘤、绒毛状腺瘤、错构瘤、平滑肌瘤)，结肠，结肠-直肠，结肠直肠，直肠；生殖泌尿道：肾(腺癌、Wilm′s瘤[肾胚细胞瘤]、淋巴瘤、白血病)，膀胱和尿道(鳞状上皮细胞癌、移行细胞癌、腺癌)，前列腺(腺癌、肉瘤)、睾丸(精原细胞瘤、畸胎瘤、胚胎性癌、畸胎癌、绒毛膜癌、肉瘤、间质细胞癌、纤维瘤、纤维腺瘤、腺瘤样瘤、脂肪瘤)；肝：肝癌(肝细胞癌)，胆管癌，肝毒细胞瘤，血管肉瘤，肝细胞腺瘤，血管瘤，胆道；骨：成骨肉瘤(骨肉瘤)，纤维肉瘤，恶性纤维组织细胞瘤，软骨肉瘤，Ewing′s肉瘤，恶性淋巴瘤(网状细胞肉瘤)，多发性骨髓瘤，恶性巨细胞瘤脊索瘤，骨软骨瘤(osteochronfroma，骨软骨外生骨疣)，良性软骨瘤，软骨母细胞瘤，软骨粘液样纤维瘤(chondromyxofibroma)，骨样骨瘤和巨细胞瘤；神经系统：颅骨(骨瘤、血管瘤、肉芽肿、黄色瘤、畸形性骨炎)，脑膜(脑脊膜瘤、脑脊膜肉瘤(meningiosarcoma)、神经胶质瘤)，脑(星形细胞瘤、髓母细胞瘤、神经胶质瘤、室管膜细胞瘤、胚组织瘤[松果体瘤]、成胶质细胞瘤、少突神经胶质瘤、神经鞘瘤、视网膜母细胞瘤、先天性肿瘤)，脊髓神经纤维瘤，脑脊膜瘤，神经胶质瘤，肉瘤)；妇科学：子宫(子宫内膜癌)，宫颈(宫颈癌、肿瘤前宫颈发育异常)，卵巢(卵巢癌[浆液性囊腺癌、粘液性囊腺癌、未分类的癌]、颗粒状荚膜细胞瘤(granulosa-thecal cell tumors)、Sertoli-Leydig细胞瘤、无性细胞瘤、恶性畸胎瘤)，外阴(鳞状上皮细胞癌、上皮内癌、腺癌、纤维肉瘤、黑素瘤)，阴道(透明细胞癌、鳞状上皮细胞癌、葡萄糖状肉瘤(胚胎性横纹肌肉瘤)，输卵管(癌)，乳腺；血液学：血液(髓细胞性白血病[急性和慢性]，急性淋巴细胞性白血病，慢性淋巴细胞性白血病，骨髓增生性疾病，多发性骨髓瘤，骨髓增生异常综合征)，何杰金氏病，非何杰金氏淋巴瘤[恶性淋巴瘤]毛细胞；淋巴疾病；皮肤：恶性黑素瘤，基底细胞癌，鳞状上皮细胞癌，Karposi′s肉瘤，角化棘皮瘤，痣发育不良痣，脂肪瘤，血管瘤，皮肤纤维瘤，瘢痕疙瘩，牛皮癣，甲状腺：乳头状甲状腺癌，滤泡性甲状腺癌；甲状腺髓样癌，未分化的甲状腺癌，2A型多发性内分泌瘤病，2B型多发性内分泌瘤病，家族性甲状腺髓样癌，嗜铬细胞瘤，神经节细胞瘤；以及肾上腺：成神经细胞瘤。因此，如本文提供的，术语“癌细胞”包括患有任何一种上述病症的细胞。在一些实施方案中，所述癌症选自结肠直肠癌、甲状腺癌或乳腺癌。

[0075]在一些实施方案中，本发明的化合物可用于治疗癌症，如结肠直肠癌、甲状腺癌、乳腺癌和肺癌；以及骨髓增生性障碍，如真性红细胞增多症、血小板增多症、伴有骨髓纤维变性的骨髓外化生、慢性髓细胞性白血病、慢性粒单核细胞型白血病、嗜酸细胞过多综合征、幼年型粒单核细胞型白血病和系统性肥大细胞病。

[0076]在一些实施方案中，本发明的化合物可用于治疗造血障碍，尤其是急性髓细胞性白血病(AML)、慢性髓细胞性白血病(CML)、急性前髓细胞性白血病(APL)和急性淋巴细胞性白血病(ALL)。

[0077]除本发明的化合物外，本发明化合物的药学上可接受的衍生物或前体药物也可用于组合物中以治疗或预防上述疾病。

[0078]“药学上可接受的衍生物或前体药物”表示本发明化合物的任何药学上可接受的酯、酯的盐或其它衍生物，其对受者施用后，能够直接或间接提供本发明的化合物或其抑制活性的代谢物或残基。这类衍生物或前体药物包括当这类化合物对患者施用时增加本发明化合物生物利用度的那些化合物(例如，使得经口给予的化合物更容易被吸收进入血液)，或者那些相对于母体化合物提高母体化合物递送至生物学腔室(例如，脑部或淋巴系统)的化合物。

[0079]本发明化合物的药学可接受的前体药物的实例包括但不限于酯类、氨基酸酯类、磷酸酯类、金属盐类和磺酸酯类。

[0080]对于治疗，本发明的化合物可以游离形式存在，或者如果合适，以药学上可接受的盐存在。

[0081]如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指化合物的盐，其在合理的医学判断之内，适于与人和低等动物的组织接触使用，而没有过度毒性、刺激、过敏反应等，并且与合理的利益/风险比例相称。

[0082]本发明化合物的药学可接受盐包括那些衍生自适当的无机和有机酸和碱的盐。这些盐可在化合物的最终分离和纯化期间原位制备。酸加成盐可通过以下制备：1)使游离碱形式的纯净化合物与适当的有机或无机酸反应，和2)分离由此形成的盐。

[0083]适当的酸盐的实例包括乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、枸橼酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐(digluconate)、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐(glucoheptanoate)、甘油磷酸盐、羟乙酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、扑酸盐(palmoate)、胶质酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐和十一酸盐。其它酸如草酸，尽管其本身不是药学上可接受的，但是可用于制备盐，该盐可用作获得本发明化合物和其药学上可接受的酸加成盐中的中间体。

[0084]碱加成盐可通过以下制备：1)使酸形式的纯净化合物与适当的有机或无机碱反应，和2)分离由此形成的盐。

[0085]衍生自合适的碱的盐包括碱金属(例如钠和钾)、碱土金属(例如镁)、铵和N⁺(C_1-4烷基)₄盐。本发明还涉及本文公开的化合物的任何碱性含氮基团的季铵化。水或油溶性或可分散的产物可通过这种季铵化获得。

[0086]碱加成盐还包括碱金属盐或碱土金属盐。代表性的碱金属盐或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙、镁盐等。如果合适，其它的药学可接受的盐包括无毒的铵、季铵和胺阳离子，其使用平衡离子如卤化物、氢氧化物、羧酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、低级烷基磺酸盐和芳基磺酸盐形成。其它的酸和碱，尽管其本身不是药学上可接受的，但是可在获得本发明化合物和其药学上可接受的酸或碱加成盐中用于制备可用作中间体的盐。

[0087]可用于这些药物组合物中的药学可接受的载体包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白如人血清白蛋白、缓冲物质如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、硅体二氧化胶、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、基于纤维素的物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物、聚乙二醇和羊毛脂。

[0088]本发明的组合物可经口、胃肠外、通过吸入喷雾、局部、经直肠、经鼻、颊粘膜、阴道或通过植入型储库给予。如本文所用，术语“胃肠外”包括皮下、静脉内、肌内、关节内、滑膜腔内、胸骨内、鞘内、腹膜内、肝内、病变内和颅内注射或输注技术。

[0089]本发明组合物的无菌注射形式可以是水性或油性混悬液。这些混悬液可根据本领域已知的技术使用适当的分散剂或润湿剂和悬浮剂制成。无菌注射制剂还可以是在无毒胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射的溶液或混悬液，例如在1，3-丁二醇中的溶液。在可接受的介质或溶剂中，可以使用的是水、林格氏溶液和氯化钠等渗溶液。另外，无菌不挥发性油常规用作溶剂或悬浮介质。为此，可使用温和的不挥发油，包括合成的单-或二甘油酯。脂肪酸，如油酸及其甘油酯衍生物可用于制备注射剂，如同天然的药学上可接受的油如橄榄油或蓖麻油，尤其是其聚氧乙基化形式。这些油溶液或混悬液还可含有长链醇稀释剂或分散剂，如羧甲基纤维素或在药学上可接受的剂型包括乳剂和混悬液的制造中常规使用的类似分散剂。其它常规使用的表面活性剂如吐温类、司盘类和其它乳化剂或生物利用度提高剂，可常规用于制造药学上可接受的固体、液体或其它剂型，也可用于制剂目的。

[0090]本发明药物组合物可以以任何口服可接受的剂型经口服施用，所述剂型包括但不限于胶囊剂、片剂、水混悬剂或溶液剂。在供口服使用的片剂的情况下，常用的载体可包括乳糖和玉米淀粉。润滑剂例如硬脂酸镁也可以被加入。对于以胶囊剂型的口服施用，有用的稀释剂可包括乳糖和干玉米淀粉。当水混悬剂需要用于口服使用时，可以将活性成分与乳化剂和助悬剂组合。如果需要，某些甜味剂、调味剂或着色剂也可以被加入。

[0091]或者，本发明药物组合物可以以供直肠施用的栓剂形式施用。这些栓剂可以通过将药物与适宜的非刺激性赋形剂混合来制备，所述赋形剂在室温下是固态但在直肠温度下为液态，因此在直肠肠中熔化以释放药物。此类物质可包括可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。

[0092]本发明药物组合物还可以局部施用，特别是当治疗靶包括通过局部施用容易到达的区域或器官时，包括眼、皮肤或下肠道的疾病。可以针对这些区域或器官的每一种制备适宜的局部剂型。

[0093]用于下肠道的局部应用可以以直肠柱剂(见上文)或以适宜的灌肠剂来完成。还可以使用局部透皮贴片。

[0094]对于局部应用，可以将药物组合物配制成适宜的含有混悬或溶解在一种或多种载体中的活性组分的软膏剂。用于局部施用本发明的化合物的载体可包括但不限于矿物油、液体石蜡、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。另外，该药物组合物可以配制成适宜的含有混悬或溶解在一种或多种药学上可接受的载体中的活性组分的洗剂或乳膏剂。适宜的载体可包括但不限于矿物油、脱水山梨醇单硬脂酸酯、聚山梨酯60、十六烷基酯蜡、十六十八烷(cetearyl alcohol)、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。

[0095]对于眼用，可以将药物组合物配制成在等渗、pH调节的无菌盐水中的微粉化混悬剂，或者配制成在等渗、pH调节的无菌盐水中的溶液剂，其含有或者没有防腐剂例如氯化benzylalkonium。或者，对于眼用，可以将药物组合物配制在软膏例如凡士林中。

[0096]本发明药物组合物还可以通过鼻气雾剂或吸入施用。此类组合物可以制备成在盐水中的溶液剂，使用苯甲醇或其它适宜防腐剂、增强生物利用度的吸收促进剂、氟碳化合物、和/或其它常用增溶剂或分散剂。

[0097]可以与载体物质组合以制备单一剂型的激酶抑制剂的量将根据治疗的宿主、具体施用方式和适宜症而改变。在一个实施方案中，该组合物应配制成可使0.01-100mg/kg体重/天的抑制剂的剂量施用于接受这些组合物的患者。在另一个实施方案中，该组合物应配制成可使0.1-100mg/kg体重/天的抑制剂的剂量施用于接受这些组合物的患者。

[0098]还应理解，用于任何特定患者的特定剂量和治疗方案将取决于多种因素，包括所用特定化合物的活性、年龄、体重、一般健康、性别、饮食、施用时间、排泄速率、药物联合、以及治疗医生的判断和所治疗的特定疾病的严重度。抑制剂的量还取决于在组合物中的特定化合物。

[0099]根据另一个实施方案，本发明提供用于治疗或预防癌症、增生性障碍或骨髓增生性障碍的方法，其包含对患者施用本文所述化合物或药物组合物之一的步骤。

[00100]如本文所用，术语“患者”表示动物，包括人类。

[00101]在一些实施方案中，所述方法用于治疗或预防造血障碍，如急性髓细胞性白血病(AML)、急性前髓细胞性白血病(APL)、慢性髓细胞性白血病(CML)或急性淋巴细胞性白血病(ALL)。

[00102]在其它实施方案中，所述方法用于治疗或预防骨髓增生性障碍，如真性红细胞增多症、血小板增多症、伴有骨髓纤维变性的骨髓外化生、慢性髓细胞性白血病(CML)、慢性粒单核细胞型白血病、嗜酸细胞过多综合征、幼年型粒单核细胞型白血病和系统性肥大细胞病。

[00103]在其它的实施方案中，所述方法用于治疗或预防癌症，如乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、皮肤癌、胰腺癌、脑癌、生殖泌尿道癌、淋巴系统癌、胃癌、喉癌和肺癌，包括肺腺癌、小细胞肺癌和非小细胞肺癌。

[00104]另一个实施方案提供了一种治疗或预防癌症的方法，其包含对患者施用式I化合物或包含所述化合物的组合物的步骤。

[00105]本发明的另一方面涉及在患者中抑制激酶活性，此方法包含对所述患者施用式I化合物或包含所述化合物的组合物。在一些实施方案中，所述激酶是Aurora激酶(Aurora A、Aurora B和Aurora C)、Abl、Arg、FGFR1、MELK、MLK1、MuSK、Ret或TrkA。

[00106]根据所治疗或预防的特定病症，其它药物可与本发明的化合物一起给予。在一些情况下，常规地给予这些其它药物，以治疗或预防相同的病症。例如，化学治疗剂或其它抗增生剂可与本发明的化合物组合以治疗增生性疾病。

[00107]本发明的另一个方面涉及在有此需要的受试者中治疗癌症的方法，其包含依次或共同给予本发明化合物或其药学上可接受的盐，以及治疗剂。在一些实施方案中，所述治疗剂选自抗癌剂、抗增生剂或化学治疗剂。

[00108]在一些实施方案中，所述治疗剂选自喜树碱，MEK抑制剂：U0126，KSP(驱动蛋白纺锤体蛋白)抑制剂，阿霉素，干扰素类和铂衍生物如顺铂。

[00109]在其它实施方案中，所述治疗剂选自紫杉烷类；bcr-abl抑制剂(如格列卫Gleerec、达沙替尼和尼洛替尼)；EGFR抑制剂(如特罗凯(Tarceva)和易瑞沙(Iressa))；DNA损伤剂(如顺铂、奥沙利铂、卡铂、拓扑异构酶抑制剂和蒽环类)；以及抗代谢物(如AraC和5-FU)。

[00110]在其它实施方案中，所述治疗剂选自喜树碱、多柔比星、伊达比星、顺铂、紫杉醇、泰索帝、长春新碱、特罗凯、MEK抑制剂、U0126、KSP抑制剂、伏林司他、格列卫、达沙替尼和尼洛替尼。

[00111]在另一个实施方案中，所述治疗剂是达沙替尼。

[00112]在另一个实施方案中，所述治疗剂是尼洛替尼。

[00113]在另一个实施方案中，所述治疗剂选自Her-2抑制剂(如Herceptin)；HDAC抑制剂(如伏林司他)，VEGFR抑制剂(如Avastin)，c-KIT和FLT-3抑制剂(如舒尼替尼)，BRAF抑制剂(如Bayer的BAY 43-9006)MEK抑制剂(如Pfizer的PD0325901)；以及纺丝体毒剂(例如埃坡霉素类和紫杉醇蛋白结合颗粒(例如

)。

[00114]可以与本发明抗癌剂组合的其它治疗或抗癌剂包括手术、放射治疗(例如，γ辐射、中子束辐射治疗、电子束辐射治疗、质子疗法、近距离照射疗法和全身放射性同位素，等等)、内分泌疗法、生物反应调节剂(干扰素类、白细胞介素和肿瘤坏死因子(TNF)等等)、高温和冷冻疗法、减弱任何副作用的药物(例如止吐药)，以及其它已批准的化学治疗药，包括但不限于烷化剂(氮芥、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、美法仑、异环磷酰胺)、抗代谢药(甲氨蝶呤)、嘌呤拮抗剂和嘧啶拮抗剂(6-巯嘌呤、5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、吉西他滨)、纺丝体毒剂(长春碱、长春新碱、长春瑞滨、紫杉醇)、鬼臼毒素类(依托泊苷、伊立替康、托泊替康)、抗生素(多柔比星、博来霉素、丝裂霉素)、亚硝基脲(卡莫司汀、洛莫司汀)、无机离子(顺铂、卡铂)、酶类(门冬酰胺酶)和激素类(他莫昔芬、醋酸亮丙瑞林、氟他胺和甲地孕酮)、格列卫^TM、地塞米松和环磷酰胺。

[00115]本发明化合物还可以与以下治疗剂组合用于治疗癌：阿巴瑞克(Plenaxis

)；阿地白介素(

)；阿地白介素(

)；阿仑单抗(

)；阿利维A酸(

)；别嘌醇(

)；六甲蜜胺(

)；氨磷汀(

)；阿那曲唑(

)；三氧化二砷(

)；门冬酰胺酶(

)；阿扎胞苷()；贝伐珠单抗(

)；贝沙罗汀胶囊(

)；贝沙罗汀凝胶(

)；博来霉素(

)；硼替佐米(

)；静脉用白消安(

)；口服用白消安()；卡普睾酮(

)；卡培他滨(

)；卡铂(

)；卡莫司汀()；卡莫司汀(

)；卡莫司汀与聚苯丙生20植入剂(Gliadel

)；塞来考昔(

)；西妥昔单抗(

)；苯丁酸氮芥(

)；顺铂()；克拉屈滨(

、2-

)；氯法拉滨(

)；环磷酰胺(

)；环磷酰胺(Cytoxan注射剂

)；环磷酰胺(Cytoxan片

)；阿糖胞苷(

)；阿糖胞苷脂质体(

)；达卡巴嗪(DTIC-

)；更生霉素、放线菌素D(

)；达贝泊汀α()；柔红霉素脂质体()；柔红霉素、道诺霉素(

)；柔红霉素、道诺霉素(

)；白介素2-白喉毒素融合蛋白()；右雷佐生(

)；多西他赛(

)；多柔比星(阿霉素

)；多柔比星(

)；多柔比星(阿霉素PFS注射剂

)；多柔比星脂质体(

)；丙酸屈他雄酮(屈他雄酮

)；丙酸屈他雄酮(屈他雄酮丙酸酯注射剂

)；Elliott′s B溶液(Elliott′s B溶液

)；表柔比星(

)；阿法依伯汀(

)；厄洛替尼(特罗凯

)；雌莫司汀()；磷酸依托泊苷(

)；依托泊苷、VP-16(

)；依西美坦()；非格司亭(

)；氟脲嘧啶脱氧核苷(动脉内用)()；氟达拉滨(

)；氟尿嘧啶、5-FU(

)；氟维司群(

)；吉非替尼(易瑞沙

)；吉西他滨()；吉姆单抗奥佐米星(

)；醋酸戈舍瑞林(Zoladex植入剂

)；醋酸戈舍瑞林(

)；醋酸组氨瑞林(Histrelin植入剂

)；羟基脲(

)；替伊莫单抗(

)；伊达比星(

)；异环磷酰胺(

)；甲磺酸伊马替尼(格列卫

)；干扰素α2a(Roferon

)；干扰素α-2b(Intron

)；伊立替康(

)；来那度胺()；来曲唑()；亚叶酸钙(

)；醋酸亮丙瑞林(

)；左旋咪唑()；洛莫司汀、CCNU(

)；氮芥(meclorethamine)、氮芥(

)；醋酸甲地孕酮(

)；美法仑、L-PAM()；巯嘌呤、6-MP(

)；美司钠(

)；美司钠(Mesnex片

)；甲氨蝶呤(

)；甲氧沙林(

)；丝裂霉素C(

)；米托坦(

)；米托蒽醌(

)；苯丙酸诺龙(Durabolin-50

)；奈拉滨(

)；诺非单抗(

)；奥普瑞白介素(

)；奥沙利铂(

)；紫杉醇(

)；紫杉醇(紫杉醇)；紫杉醇蛋白结合颗粒(

)；帕利夫明(

)；帕米膦酸盐(

)；培加酶(Adagen(Pegademase Bovine))；培门冬酶(

)；培非司亭(

)；培美曲塞二钠(

)；喷司他丁(

)；哌泊溴烷(

)；普卡霉素、光辉霉素(

)；卟吩姆钠(

)；丙卡巴肼(

)；奎纳克林()；拉布立酶()；利妥昔单抗(

)；沙格司亭(

)；沙格司亭()；索拉非尼(

)；链佐星(

)；马来酸舒尼替尼()；talc(

)；他莫昔芬(

)；替莫唑胺(

)；替尼泊苷、VM-26(

)；睾内酪(

)；硫鸟嘌呤、6-TG(

)；塞替派()；托泊替康(

)；托瑞米芬(

)；托西莫单抗()；托西莫单抗/I-131托西莫单抗(

)；曲妥单抗(

)；维A酸、ATRA()；乌拉莫司汀(Uracil Mustard

)；戊柔比星()；长春碱(

)；长春新碱(

)；长春瑞滨(

)；唑来膦酸盐(

)和伏林司他(

)。

[00116]对于最新的癌症治疗的广泛讨论参见http://www.nci.nih.gov/，FDA批准的肿瘤药物清单http://www.fda.gov/cder/cancer/druglistframe.htm以及TheMerck Manual，第17版.1999，它们的全部内容通过引用并入于此。

[00117]另一个实施方案提供了组合制剂的同时、分别或依次应用。

[00118]这些附加的药物可以作为多剂量方案的一部分与含有激酶抑制剂的化合物或组合物分开施用。或者，这些药物可以为单个剂型的一部分，在单一组合物中与所述激酶抑制剂一起混合。

[00119]为了更充分地理解本发明，提供以下制备和试验实施例。这些实施例仅仅是为说明的目的，而不应解释为以任何方式限制本发明范围。本文引述的所有文献通过引用并入于此。

实施例

[00120]如用于本文的，术语“Rt(min)”是指与化合物有关的HPLC保留时间，单位为分钟。除非另有指明，用于获得报告的保留时间的HPLC方法如下：

柱：ACE C8柱，4.6x150mm

梯度：0-100％乙腈+甲醇60∶40(20mM Tris磷酸盐)

流速：1.5mL/分钟

检测：225nm。

[00121]质谱样品是在MicroMass Quattro Micro质谱仪上分析的，以单MS模式操作，采用电喷射离子化。使用色谱法将样品引入质谱仪。用于所有质谱分析研究的流动相是由10mM pH 7乙酸铵和1∶1乙腈-甲醇混合物组成的，柱梯度条件为5％-100％乙腈-甲醇，在ACE C83.0x 75mm柱上历经3.5分钟梯度时间和5分钟运行时间。流速为1.2ml/min。

[00122]使用Bruker DPX 400仪器在400MHz下记录¹H-NMR光谱。

[00123]以下式I化合物是根据本文所述方案(方案I、方案II，方法A、B、C和D)中所示方法以及类似于本文针对化合物I-69所述的方法制备的。还根据本文描述的方法对所述化合物进行了分析。

方案II

实施例1：

3，3，3-三氟-N-(4-(4-(3-甲基-1H-吡唑-5-基氨基)-6-(1-甲基四氢-1H-吡咯并[3，4-b]吡啶-6(2H，7H，7aH)-基)嘧啶-2-基硫基)苯基)丙酰胺(I-69)

方法A：4，6-二氯-2-(甲基磺酰基)嘧啶

[00124]在0℃下历经40分钟的时间向4，6-二氯-2-(甲基硫基)嘧啶(25g，0.13mol)在二氯甲烷(500ml)中的溶液中加入间氯过苯甲酸(74g，0.33mol)。使该溶液温热至室温，再搅拌另外的4小时。将该混合物用二氯甲烷(750ml)稀释，然后用50％Na₂S₂O₃/NaHCO₃溶液、饱和碳酸氢钠溶液和盐水处理。有机层用硫酸镁干燥，再在真空中浓缩，得到标题化合物为白色固体(26.75g，91％收率)。

¹H NMR(DMSO D⁶，400MHz)δ3.44(3H，s)，8.43(1H，s)；MS(ES⁺)229。

方法B：N-(4-(4，6-二氯嘧啶-2-基硫基)苯基)-3，3，3-三氟丙酰胺

[00125]将4，6-二氯-2-(甲基磺酰基)嘧啶(8g，35mmol)和3，3，3-三氟-N-(4-巯基苯基)丙酰胺(8.7g，37mmol)在乙腈(250ml)中的溶液冷却至-10℃。历经20分钟滴加三乙胺(4.9ml，35mmol)同时维持温度为-10℃。一旦加入，使该溶液在此温度下搅拌另外的20分钟，然后使之温热至室温，再浓缩至150ml。将水(250ml)加至该反应混合物中。通过过滤收集固体，吸干。将此橙色固体在最小量的乙酸乙酯中浆化。将灰白色固体通过过滤收集，再在真空中干燥。重复此过程，得到更多的固体。合并各批次，得到需要的化合物(7.9g，56％收率)。¹H NMR(DMSO D⁶，400MHz)δ3.59(2H，q)，7.59(2H，d)，7.70(2H，d)，7.74(1H，s)，10.58(1H，s)；MS(ES⁺)383。

方法C：N-(4-(4-氯-6-(3-甲基-1H-吡唑-5-基氨基)嘧啶-2-基硫基)苯基)-3，3，3-三氟丙酰胺

[00126]将N-(4-(4，6-二氯嘧啶-2-基硫基)苯基)-3，3，3-三氟丙酰胺(14.2g，37mmol)、3-氨基-5-甲基吡唑(4g，41mmol)、碘化钠(6.1g，41mmol)和二异丙基乙胺(19.3ml，0.11mol)在二甲基甲酰胺(130ml)中的溶液在90℃下加热18小时。该反应混合物浓缩至干燥。将该残余物溶解于乙酸乙酯，用饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤。有机层用硫酸镁干燥，再在真空中浓缩，得到橙色泡沫状物。将残余物在二氯甲烷中浆化，并声处理20分钟。通过过滤收集固体。重复此过程，得到更多的纯产物。将纯的批次合并，得到需要的产物为淡黄色固体(11.77g，72％收率)。

¹H NMR(DMSO D⁶，400MHz)δ1.96(3H，s)，3.56(2H，q)，5.26(1H，br s)，6.49(1H，br s)，7.59(2H，d)，7.74(2H，d)，10.21(1H，brs)，10.57(1H，br s)，11.90(1H，br s)；MS(ES⁺)443。

方法D：3，3，3-三氟-N-(4-(4-(3-甲基-1H-吡唑-5-基氨基)-6-(四氢-1H-吡咯并[3，4-b]吡啶-6(2H，7H，7aH)-基)嘧啶-2-基硫基)苯基)丙酰胺

[00127]向微波瓶中装入N-(4-(4-氯-6-(3-甲基-1H-吡唑-5-基氨基)嘧啶-2-基硫基)苯基)-3，3，3-三氟丙酰胺(2.5g，5.92mmol)、顺式-八氢吡咯并[3，4-b]吡啶(2.23g，17.8mmol)、二异丙基乙胺(10.3ml，59.2mmol)和二噁烷(30ml)。将该瓶在CEM微波中在130℃下加热90分钟。将反应混合物用乙酸乙酯稀释，用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤。有机层用硫酸镁干燥，再在真空中浓缩。将残余物通过反相制备型HPLC纯化[Waters Sunfire C18，10μM，100柱，梯度10％-95％B(溶剂A：0.05％TFA水溶液；溶剂B：CH3CN)，经历16分钟，25mL/min]，得到需要的产物为三氟乙酸盐(620mg，16％收率)。¹H NMR(DMSO D⁶，400MHz)δ1.60-1.82(4H，m)，1.95-2.05(4H，m)，2.92(1H，m)，3.10-3.90(7H，m，水峰掩蔽了一些信号)，5.43-5.85(2H，m)，7.53(2H，d)，7.69(2H，d)，8.32(1H，br s)，8.83(1H，br d)，9.24(1H，s)，10.5(1H，s)，11.69(1H，brs)。

方法E：3，3，3-三氟-N-(4-(4-(3-甲基-1H-吡唑-5-基氨基)-6-(1-甲基四氢-1H-吡咯并[3，4-b]吡啶-6(2H，7H，7aH)-基)嘧啶-2-基硫基)苯基)丙酰胺

[00128]将三乙酰氧基硼氢化钠(382mg，1.8mmol)加至3，3，3-三氟-N-(4-(4-(3-甲基-1H-吡唑-5-基氨基)-6-(四氢-1H-吡咯并[3，4-b]吡啶-6(2H，7H，7aH)-基)嘧啶-2-基硫基)苯基)丙酰胺2，2，2-三氟乙酸盐(584mg，0.90mmol)、二异丙基乙胺(0.313ml，1.80mmol)和37％甲醛(0.073ml，0.90mmol)在二氯乙烷(30ml)中的混悬液中。使反应混合物在室温下搅拌20分钟。将反应通过添加碳酸氢钠饱和溶液淬灭。水相用二氯甲烷(3次)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥，再在真空中浓缩。将残余物在硅胶上通过急骤柱色谱法纯化，再从热EtOAc/环己烷中重结晶，得到需要的产物为白色固体(144.1mg，29％收率)。¹H NMR(DMSO D⁶，400MHz)δ1.40-1.51(1H，m)，1.52-1.69(3H，m)，2.01(3H，brs)，2.01-2.09(1H，部分掩蔽的m)，2.15(3H，brs)，2.30-2.41(1H，m)，2.06-2.68(2H，m)，3.11-3.28(2H，m)，3.53(2H，q)，5.45(1H，brs)，5.77(1H，vbrs)，.54(2H，d)，7.67(2H，d)，9.07(1H，brs)，10.48(1H，s)，11.65(1H，brs)。NB溶剂/水峰掩蔽了一些信号。

[00129]用于制备式I化合物的各种R^yH部分是商业可得的(4-(哌啶-4-基)-吗啉；(S)-(-)-3-吡咯烷醇；(R)-(+)-3-吡咯烷醇；(S)-(-)-3-(甲基氨基)吡咯烷；(R)-(+)-3-(甲基氨基)吡咯烷；1，4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷；4-氰基哌啶；4-(三氟甲基)哌啶；4-哌啶酮一水合物盐酸盐；(R)-(-)-3-氟吡咯烷盐酸盐；(S)-(+)-3-氟吡咯烷盐酸盐；4-甲基哌啶-4-醇盐酸盐；4-叔丁基-哌啶；(3S)-(-)-3-(二甲基氨基)吡咯烷；(3R)-(+)-3-(二甲基氨基)吡咯烷；3，3-二氟哌啶盐酸盐；3，3-二氟吡咯烷盐酸盐；4-(1-吡咯烷基)哌啶；(3S)-(-)-3-(乙基氨基)吡咯烷；[1，3′]联吡咯烷基；1-甲基-4-(哌啶-4-基)哌嗪；4-羟基哌啶；4，4-二氟哌啶)，文献(参见Palmer，J.T.等人；J.Med.Chem.，2005，48，7520中关于合成叔丁基-哌啶-4-基-胺中所述的；Osakada，K.；Ikariya，T.；Saburi，M.；Yoshikawa，S.；Chem.Lett.，1981，1691中关于合成(S)-N-甲基哌啶-3-胺所述的；US 5521199中关于合成2-(哌啶-4-基)丙烷-2-醇)所述的，或者可以根据类似于下述的方法制备。

实施例2：

(R)-N-异丙基吡咯烷-3-胺双(2，2，2-三氟乙酸盐)

方法F：(R)-3-(丙烷-2-亚基氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯

[00130]使(3R)-3-氨基-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷(0.5g，2.69mmol)溶解于二氯甲烷(10ml)和丙酮(2ml)的混合物中。加入硫酸镁(0.5g)，并使反应混合物在室温下搅拌18小时。将该混合物过滤，在减压下浓缩，得到标题化合物为油状物(601mg，99％收率)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ1.46(9H，s)，2.10(4H，m)，3.10(1H，dd)，3.33-3.65(4H，m)。

方法G：(R)-3-(异丙基氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯

[00131]将氧化铂(60mg)加至(R)-3-(丙烷-2-亚基氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(600mg，2.65mmol)在甲醇(4ml)中的溶液中。在氢气气氛下将反应搅拌18小时。将该反应混合物通过硅藻土管柱(path)过滤，再用更多的甲醇洗涤。使滤液在真空下浓缩，得到油状物，其放置固化(320mg，53％收率)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ1.02(6H，d)，1.38(9H，s)，1.58-1.72(2H，m)，2.02(1H，m)，2.82(1H，m)，3.08(1H，m)，3.20(1H，m)，3.35(1H，m)，3.40-3.60(2H，m)。

方法H：(R)-N-异丙基吡咯烷-3-胺双(2，2，2-三氟乙酸盐)

[00132]将三氟乙酸(2ml)加至在二氯甲烷(3ml)中的(R)-3-(异丙基氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(520mg，2.28mmol)。使反应在室温下搅拌7小时。该反应混合物在真空下浓缩。将残余物与石油醚研磨，得到需要的化合物为固体(721mg，89％收率)。¹H NMR(DMSO D⁶，400MHz)δ1.25(6H，d)，2.02(1H，m)，2.31(1H，m)，3.12-3.70(5H，m)，3.85-4.10(1H，m)，8.90-9.50(4H，br m)。

[00133]用于制备式I化合物的其它R^yH部分可通过类似于实施例2(方法F、G和H)中所述的顺序制备：(S)-N-异丙基吡咯烷-3-胺双(2，2，2-三氟乙酸盐)

实施例3：

3-新戊基吡咯烷-3-醇2，2，2-三氟乙酸盐

方法I：3-羟基-3-新戊基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯

[00134]将氯化铈(III)七水合物(3.42g，9.17mmol)在高真空和140℃下加热18小时。将氩气引入热烧瓶中，然后冷却至0℃，接着在快速搅拌下加入四氢呋喃(30ml)。然后使该混悬液温热至室温，并搅拌18小时。将该混悬液冷却至0℃，加入在二乙醚中的1M氯化新戊基镁(9.17ml，9.17mmol)，并在0℃下搅拌90分钟。在0℃下滴加在四氢呋喃(10ml)中的N-(叔丁氧基羰基)-3-吡咯烷酮(1.13g，6.11mmol)。添加完毕后，使该反应混合物在0℃下搅拌另外2小时。将该反应混合物用饱和氯化铵溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取。有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，再在真空中浓缩。粗产物通过硅胶急骤色谱法纯化，得到标题化合物为白色固体(281mg，19％收率)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ1.07(9H，s)，1.48(9H，s)，1.55(1H，br s)，1.65(2H，dd)，1.85(1H，m)，1.96(1H，tq)，3.26(1H，d)，3.41-3.53(3H，m)。

方法J：3-新戊基吡咯烷-3-醇2，2，2-三氟乙酸盐

[00135]在0℃下将三氟乙酸(1ml)加至3-羟基-3-新戊基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(281mg，1.14mmol)在二氯甲烷(8ml)中的溶液中。在0℃下将反应搅拌2小时。将反应混合物在真空下浓缩，得到需要的化合物为棕色油(281mg，91％收率)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ1.07(9H，s)，1.74(2H，dd)，2.03(1H，m)，2.25(1H，m)，3.07(1H，m)，3.46-3.63(3H，m)，8.66(1H，br s)，9.10(1H，br s)。

[00136]用于制备式I化合物的其它R^yH部分可通过类似于实施例3(方法I和J)中所述的顺序制备：3-叔丁基吡咯烷-3-醇2，2，2-三氟乙酸盐；4-乙基哌啶-4-醇2，2，2-三氟乙酸盐；4-异丙基哌啶-4-醇2，2，2-三氟乙酸盐；4-叔丁基哌啶-4-醇2，2，2-三氟乙酸盐。

实施例4：

4-((2R，5R)-2，5-二甲基吡咯烷-1-基)哌啶2，2，2-三氟乙酸盐

方法K：4-((2R，5R)-2，5-二甲基吡咯烷-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

[00137]将氰基硼氢化钠(315mg，5.01mmol)一次性加至1-叔丁氧基羰基-哌啶-4-酮(1g，5.01mmol)和(2R，5R)-(-)-反式-2，5-二甲基吡咯烷(0.5g，5.01mmol)在三氟乙醇(12ml)中的搅拌的溶液中。使反应混合物在室温下搅拌3小时。用饱和碳酸氢钠水溶液将其水解。用乙酸乙酯进行萃取。有机层用水和盐水洗涤，用硫酸镁干燥，再在真空中浓缩。将残余物在硅胶上通过急骤柱色谱法纯化(石油醚中的20％乙酸乙酯)，得到标题化合物为油状物(400mg，28％收率)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ1.02和1.07(6H，d，旋转异构体)，1.32-1.45(2H，m)，1.47和1.48(9H，s，旋转异构体)，1.51-1.65(1H，m)，1.67-1.95(3H，m)，2.01-2.12(2H，m)，2.66-2.76(3H，m)，3.25-3.35(2H，m)，4.05-4.25(2H，m)。

4-((2R，5R)-2，5-二甲基吡咯烷-1-基)哌啶2，2，2-三氟乙酸盐

4-((2R，5R)-2，5-二甲基吡咯烷-1-基)哌啶2，2，2-三氟乙酸盐是通过使用方法J制备的。

[00138]用于制备式I化合物的其它R^yH部分可通过类似于实施例4(方法K和J)中所述的顺序制备：2，2-二甲基-1，3′-联吡咯烷2，2，2-三氟乙酸盐；4-(2，2-二甲基吡咯烷-1-基)哌啶2，2，2-三氟乙酸盐；(R)-4-(3-氟吡咯烷-1-基)哌啶2，2，2-三氟乙酸盐；(S)-4-(3-氟吡咯烷-1-基)哌啶2，2，2-三氟乙酸盐；4-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)哌啶2，2，2-三氟乙酸盐。

实施例5：

(S)-3-异丙氧基吡咯烷2，2，2-三氟乙酸盐

方法L：(S)-3-异丙氧基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯

[00139]向(S)-(+)-3-羟基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.0g，5.34mmol)在异丙基碘(15ml)中的搅拌的溶液中加入氧化银(I)(1.49g，6.41mmol)。将反应混合物在室温下搅拌24小时，然后在40℃下加热另外24小时。然后使反应混合物冷却至室温，通过硅藻土垫过滤，用乙醚(2x10ml)洗涤。滤液在真空中浓缩，使残余物在硅胶上通过急骤柱色谱法纯化，使用石油醚中的20％乙酸乙酯洗脱，得到标题化合物为无色油状物(0.50g，41％收率)。

¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ1.02和1.07(6H，d，旋转异构体)，1.32-1.45(2H，m)，1.47和1.48(9H，s，旋转异构体)，1.51-1.65(1H，m)，1.67-1.95(3H，m)，2.01-2.12(2H，m)，2.66-2.76(3H，m)，3.25-3.35(2H，m)，4.05-4.25(2H，m)。

(S)-3-异丙氧基吡咯烷2，2，2-三氟乙酸盐

(S)-3-异丙氧基吡咯烷2，2，2-三氟乙酸盐是从(S)-3-异丙氧基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯通过使用方法J制备的。

实施例6：

(R)-N，N-二甲基哌啶-3-胺盐酸盐

方法M：(S)-3-(甲基磺酰基氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

[00140]在0℃下向(S)-(+)-3-羟基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(10.0g，49.7mmol)和三乙胺(13.9ml，99.4mmol)在二氯甲烷(150ml)中的搅拌的溶液中加入甲磺酰氯(4.25ml，54.7mmol)。使该反应混合物温热至室温，搅拌18小时。该反应混合物用碳酸氢钠饱和溶液、水和盐水洗涤。有机层用硫酸镁干燥，再在真空中浓缩，得到标题化合物为白色固体(11.78g，85％收率)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ1.48(9H，s)，1.55(1H，br s)，1.76-2.05(3H，m)，3.07(3H，s)，3.35(1H，m)，3.48(1H，m)，3.53-3.74(2H，m)，4.73(1H，br s)。

方法N：(R)-3-(二甲基氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

[00141]将(S)-3-(甲基磺酰基氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.0g，3.58mmol)和2M二甲胺在甲醇(60ml)中的溶液置于密封管中，加热至90℃达48小时。使反应混合物冷却至室温，并在真空下浓缩。将乙酸乙酯加至该残余物中。使剩余的甲磺酸酯破碎，并通过过滤除去。在真空下浓缩滤液，得到需要的化合物为粘稠的橙色油状物(0.808g，99％收率)。

方法O：(R)-N，N-二甲基哌啶-3-胺盐酸盐

[00142]将甲醇的1.25M盐酸(13ml)加至(R)-3-(二甲基氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(808mg，3.54mmol)在甲醇(5ml)中的溶液中。使反应混合物在室温下搅拌3小时，然后在真空下浓缩，留下需要的产物为橙色油状物(0.737g，定量收率)。

[00143]用于制备式I化合物的其它R^yH部分可通过类似于实施例6(方法M、N和O)中所述的顺序制备：(S)-N，N-二甲基哌啶-3-胺盐酸盐；(R-)-1，3′-联吡咯烷盐酸盐，(S)-N-乙基-N-甲基吡咯烷-3-胺盐酸盐，(S)-1，3′-联吡咯烷盐酸盐。

[00144]包括在本发明式I化合物中的其它R^yH部分可通过方法

O制备：八氢-1H-吡咯并[3，4-b]吡啶二盐酸盐。

实施例7：

3-甲基吡咯烷-3-醇

方法P：1-苄基-3-甲基吡咯烷-3-醇

[00145]在0℃下将1-苄基-3-吡咯烷酮(2ml，12.2mmol)在二乙醚(20ml)中的溶液滴加至3M溴化甲基镁(5.29ml，15.86mmol)在二乙醚(10ml)和四氢呋喃(5ml)中的搅拌的溶液中。使该反应混合物在0℃下搅拌另外40分钟。将反应混合物用氯化铵水溶液淬灭，再将化合物萃取到乙酸乙酯中。将该有机相用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，再在真空中浓缩。将残余物在硅胶上通过急骤柱色谱法纯化，得到标题化合物为黄色油状物(1.04g，45％收率)。

¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ1.37(3H，s)，1.87-2.00(2H，m)，2.32(1H，d)，2.43(1H，q)，2.66(1H，br s)，2.80(1H，d)，3.05(1H，dt)，3.71(2H，s)，7.26-7.33(5H，m)。

方法Q：3-甲基吡咯烷-3-醇

[00146]将1-苄基-3-甲基吡咯烷-3-醇(1.04g，5.44mmol)和10％钯披碳(50％wet)(300mg)在甲醇中的混悬液在氢气气氛下在Parr瓶中在60psi下振摇48小时。反应混合物通过硅藻土短管柱过滤，用甲醇洗涤。滤液在真空下浓缩，得到橙色油状物(472mg，86％收率)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ1.38(3H，s)，1.77-1.97(2H，m)，2.21(2H，br s)，2.76(1H，d)，2.98-3.10(2H，m)，3.22-3.30(1H，m)。

实施例8：

(S)-3-甲氧基吡咯烷盐酸盐

方法R：(S)-3-甲氧基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯

[00147]在0℃下将氢化钠(60％，256mg，6.40mmol)分批加至(S)-N-(叔丁氧基羰基)-3-羟基吡咯烷(1g，5.34mmol)在四氢呋喃(30ml)中的溶液中。将该反应混合物温热至室温，并搅拌30分钟。使反应冷却至0℃，加入甲基碘(0.7ml，10.68mmol)。将该混合物温热至室温，再搅拌另外的18小时。加入水(20ml)和二乙醚(20ml)。水层进一步用二乙醚萃取。将合并的有机层用硫酸镁干燥，再在真空中浓缩，得到标题化合物为淡黄色油状物(0.794mg，74％收率)。

(S)-3-甲氧基吡咯烷盐酸盐

(S)-3-甲氧基吡咯烷盐酸盐是从(S)-3-甲氧基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯通过使用方法O制备的。

实施例9：

2-异丙基-2，8-二氮杂螺[4.5]癸烷双(2，2，2-三氟乙酸盐)

方法S：2-异丙基-2，8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁酯

[00148]使2，8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁酯(1.5g，6.25mmol)(根据文献中所述的操作制备：US20060019985)、三乙酰氧基硼氢化钠(2.1g，10mmol)和乙酸(2滴)在丙酮(20ml)中的溶液在室温下搅拌16小时。用饱和碳酸氢钠水溶液(20ml)使反应混合物水解，再将该化合物用乙酸乙酯(3x50ml)萃取。有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，再在减压下浓缩。将残余物在硅胶上通过急骤柱色谱法纯化，得到需要的化合物(150mg，8％收率)。¹H NMR(CD₃OD，400MHz)δ1.33-1.36(6H，d)，1.45(9H，s)，1.60-1.65(4H，m)，1.95-2.05(2H，m)，3.30-3.40(2H，m)，3.45-3.55(2H，m)。

2-异丙基-2，8-二氮杂螺[4.5]癸烷双(2，2，2-三氟乙酸盐)

[00149]2-异丙基-2，8-二氮杂螺[4.5]癸烷双(2，2，2-三氟乙酸盐)是从2-异丙基-2，8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁酯通过使用方法J制备的。

[00150]用于制备式I化合物的其它R^yH部分可通过类似于实施例9(方法S和J)中所述的顺序制备：2-异丙基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷双(2，2，2-三氟乙酸盐)、2-异丙基八氢吡咯并[3，4-c]吡咯双(2，2，2-三氟乙酸盐)。

实施例10：

2-甲基-2，8-二氮杂螺[4.5]癸烷盐酸盐

方法T：2-甲基-1-氧代-2，8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁酯

[00151]将4-螺-[3-(N-甲基-2-吡咯烷酮)]-哌啶盐酸盐(1.0g，5mmol)、二碳酸二叔丁酯(1.4g，6mmol)和三乙胺(1.7ml，12mmol)在二氯甲烷(20ml)中的溶液在室温下搅拌18小时。使反应混合物用二氯甲烷稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤。有机层用硫酸镁干燥，再在减压下浓缩。将残余物在硅胶上通过急骤柱色谱法纯化，得到需要的化合物(1.3g，99％收率)。

¹H NMR(DMSO D⁶，400MHz)δ1.26-1.35(2H，m)，1.40(9H，s)，1.52(2H，dt)，1.91(2H，t)，2.72(3H，s)，2.83-2.98(2H，m)，3.27(2H，t)，3.77-3.87(2H，m)。

方法U：2-甲基-2，8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁酯

[00152]将2-甲基-1-氧代-2，8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁酯(1.3g，4.84mmol)置于四氢呋喃(25ml)中，冷却至0℃。滴加在四氢呋喃(15ml，15mmol)中的1M硼烷。然后将反应混合物加热至回流持续18小时。使反应冷却至0℃，用甲醇(15ml)淬灭，再在真空中浓缩，得到需要的化合物(1.23g，定量收率)。¹H NMR(CD₃OD，400MHz)δ1.47(9H，s)，1.50-1.60(4H，m)，1.74(2H，t)，2.37(3H，s)，2.49(2H，s)，2.66(2H，t)，3.30-3.50(4H，m)。

2-甲基-2，8-二氮杂螺[4.5]癸烷盐酸盐

[00153]2-甲基-2，8-二氮杂螺[4.5]癸烷盐酸盐是从2-甲基-2，8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁酯通过使用方法O制备的。

实施例11：

4-甲基-4-(吡咯烷-1-基)哌啶双(2，2，2-三氟乙酸盐)

方法V：1-叔丁基4-乙基4-甲基哌啶-1，4-二甲酸酯

[00154]将在己烷中的2.5M丁基锂(15ml，37.5mmol)历经15分钟滴加至冰冷的二异丙胺(5.35ml，37.5mmol)在四氢呋喃(200ml)中的溶液中。使溶液在0℃下搅拌15分钟，然后冷却至-70℃。经15分钟滴加入1-叔丁基4-乙基哌啶-1，4-二甲酸酯(9.0g，35mmol)在四氢呋喃(30ml)中的溶液。使反应混合物在-70℃下搅拌另外1小时。经15分钟滴加入甲基碘(3.2ml，52mmol)在四氢呋喃(30ml)中的溶液。使反应混合物在-70℃下搅拌另外2小时，然后使之温热至室温过夜。使反应混合物在EtOAc和饱和氯化铵溶液之间分配。有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，再在真空中浓缩。将残余物在硅胶上通过急骤柱色谱法纯化，得到需要的化合物(5.7g，60％收率)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ1.21(3H，s)，1.28(3H，t)，1.32-1.42(2H，m)，1.47(9H，s)，2.08(2H，dt)，2.95-3.03(2H，m)，3.79(2H，dt)，4.18(2H，q)。

方法W：1-(叔丁氧基羰基)-4-甲基哌啶-4-甲酸

[00155]将2.0M氢氧化钠(20ml)加至在四氢呋喃(40ml)和甲醇(5ml)中的1-叔丁基4-乙基4-甲基哌啶-1，4-二甲酸酯(4g，14.76mmol)中。将该溶液在室温下搅拌48小时。将反应混合物用乙酸乙酯萃取。用浓HCl溶液将水层酸化至pH 1-2。将该酸用EtOAc萃取。有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，再在真空中浓缩，得到需要的化合物(2.7g，75％收率)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ1.29(3H，s)，1.36-1.48(2H，m)，1.47(9H，s)，2.09(2H，dt)，3.08(2H，t)，3.79(2H，br d)。

方法X：4-异氰酰-4-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯

[00156]将氯甲酸乙酯(1.64ml，17mmol)滴加至冷却至-15℃的1-(叔丁氧基羰基)-4-甲基哌啶-4-甲酸(2.7g，11mmol)和三乙胺(2.1ml，(15.5mmol)在四氢呋喃(40ml)中的溶液中。将该溶液在-15℃下搅拌20分钟。加入叠氮化钠(1.44g，22mmol)，再将该反应混合物在-15℃下搅拌另外1小时，然后使之温热至室温。该反应混合物在水和甲苯之间分配。将有机相用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，再在真空中浓缩至约50ml的体积。将该溶液在回流下加热1小时，此后，氮气释放停止。使反应混合物在真空下浓缩，再在硅胶上通过急骤柱色谱法纯化，得到需要的化合物(560mg，22％收率)。¹HNMR(CDCl₃，400MHz)δ1.43(3H，s)，1.48(9H，s)，1.49-1.57(2H，m)，2.67-2.73(2H，dt)，3.05(2H，t)，3.96(2H，m)。

方法Y：4-氨基-4-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯

[00157]使氢氧化钾(400mg，7mmol)和4-异氰酰-4-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(560mg，2.3mmol)在四氢呋喃(4ml)和水(4ml)中的混合物在室温下搅拌18小时。将该胺用乙酸乙酯萃取。将该有机相用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，再在真空中浓缩，得到需要的化合物(500mg，定量收率)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ1.17(3H，s)，1.36-1.56(4H，m)，1.47(9H，s)，3.38-3.52(4H，m)。

方法Z：4-甲基-4-(吡咯烷-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

[00158]将4-氨基-4-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(300mg，1.4mmol)、碳酸钾(390mg，2.8mmol)和1，4-二溴丁烷(367mg，1.7mmol)在乙腈(10ml)中的混合物置于密封管中，再在100℃下搅拌18小时。滤出固体，滤液在真空中浓缩。将残余物在硅胶上通过急骤柱色谱法纯化，得到需要的化合物(102mg，27％收率)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ1.00(3H，s)，1.38-1.50(11H，m)，1.69-1.83(6H，m)，2.60-2.72(4H，m)，3.33-3.54(4H，m)。

4-甲基-4-(吡咯烷-1-基)哌啶双(2，2，2-三氟乙酸盐)

[00159]4-甲基-4-(吡咯烷-1-基)哌啶双(2，2，2-三氟乙酸盐)是从4-甲基-4-(吡咯烷-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯通过使用方法I制备的。

实施例12：

4-(2-甲氧基丙烷-2-基)哌啶

方法AA：1-苄基4-乙基哌啶-1，4-二甲酸酯

[00160]在0℃下将氯甲酸苄酯(4.99ml，34.98mmol)滴加至六氢异烟酸乙酯(5.0g，31.8mmol)和三乙胺(5.76ml，41.34mmol)在氯仿(70ml)中的溶液中。添加之后，使反应混合物在0℃下搅拌1小时，然后温热至室温，再搅拌18小时。将该反应混合物用1M HCl洗涤2次，再用盐水洗涤。将该溶液用硫酸镁干燥，再在真空中浓缩。将残余物在硅胶上通过急骤柱色谱法纯化，得到需要的化合物为无色油状物(6.10g，66％收率)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ1.26(3H，t)，1.66(2H，dq)，1.82-1.97(2H，m)，2.46(1H，tt)，2.93(2H，t)，4.02-4.19(4H，m)，5.13(2H，s)，7.28-7.39(5H，m)。

方法BB：4-(2-羟基丙烷-2-基)哌啶-1-甲酸苄酯

[00161]在-78℃下将在四氢呋喃(15ml)中的1-苄基4-乙基哌啶-1，4-二甲酸酯(3.0g，10.3mmol)滴加至在四氢呋喃(10ml)中的3M氯化甲基镁(8.58ml，31.8mmol)溶液中。添加之后，使反应混合物在-78℃下搅拌1小时，然后使之温热至室温，再搅拌另外的1小时。将反应混合物通过添加1M HCl溶液淬灭，然后用乙酸乙酯萃取2次。将合并的有机物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，再在真空中浓缩。将残余物在硅胶上通过急骤柱色谱法纯化，得到需要的化合物为无色油状物(2.04g，71％收率)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ1.18(6H，s)，1.26(2H，dt)，1.45(1H，tt)，1.77(2H，d)，2.72(2H，t)，4.28(2H，br s)，5.13(2H，s)，7.28-7.37(5H，m)。

方法CC：4-(2-甲氧基丙烷-2-基)哌啶-1-甲酸苄酯

[00162]向矿物油中的60％氢化钠(242mg，6.06mmol)和甲基碘(0.74ml，12.12mmol)在四氢呋喃(10ml)中的混悬液在室温下小心分批加入在四氢呋喃(10ml)中的4-(2-羟基丙烷-2-基)哌啶-1-甲酸苄酯(1.12g，4.04mmol)中。使反应混合物加热至50℃达18小时。使反应混合物冷却至0℃，再通过添加饱和氯化铵溶液小心淬灭，然后用乙酸乙酯萃取2次。将合并的有机物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，再在真空中浓缩。将残余物在硅胶上通过急骤柱色谱法纯化，得到需要的化合物为无色油状物(634mg，54％收率)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ1.11(6H，s)，1.20-1.30(2H，m)，1.60(1H，tt)，1.71(2H，br d)，2.73(2H，t)，3.20(3H，s)，4.28(2H，br s)，5.15(2H，s)，7.30-7.40(5H，m)。

方法DD：4-(2-甲氧基丙烷-2-基)哌啶

[00163]将4-(2-甲氧基丙烷-2-基)哌啶-1-甲酸苄酯(0.634g，2.18mmol)和含有50％水的10％钯披碳(0.120g)在甲醇(20ml)中的混悬液在氢气气氛下搅拌3天。该反应混合物通过硅藻土过滤，滤液在真空中浓缩。将该残余物再溶解于甲醇(～4ml)，加入SCX-2柱中，用甲醇洗涤，再通过用甲醇中的2N NH₃洗涤将其释出。将该混合物在真空下浓缩，得到标题化合物为黄色油状物(0.273g，80％收率)。

¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ1.11(6H，s)，1.22-1.50(2H，m)，1.53-1.75(2H，m)，1.90(1H，t)，2.34(1H，br s)，2.62(1H，tt)，3.07(1H，dt)，3.16-3.24(4H，m)。

实施例13：

N-叔丁基-N-甲基哌啶-4-胺

1-苄基-N-叔丁基哌啶-4-胺

[00164]1-苄基-N-叔丁基哌啶-4-胺是从N-苄基-4-哌啶酮和叔丁胺通过使用方法K制备的。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ1.12(9H，s)，1.35-1.55(2H，m)，1.60-1.55(3H，m)，2.04(2H，dt)，2.54(1H，m)，2.85(2H，td)，3.51(2H，d)，7.25-7.35(5H，m)。

方法EE：1-苄基-N-叔丁基-N-甲基哌啶-4-胺

[00165]将1-苄基-N-叔丁基哌啶-4-胺(300mg，1.22mmol)、88％甲酸(0.2ml，2.44mmol)和37％甲醛(0.3ml，1.83mmol)加热至55℃达12小时。与一些盐水混合加入8M氢氧化钾(0.4ml)。水相用乙酸乙酯萃取。将有机相用硫酸钠干燥，再在真空中浓缩，得到需要的化合物为油状物(117mg，40％收率)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ1.12(9H，s)，1.57(2H，br d)，1.77(2H，dq)，2.00(2H，dt)，2.27(3H，s)，2.78(1H，br t)，2.94(2H，br td)，3.50(2H，s)，7.25-7.36(5H，m)。

N-叔丁基-N-甲基哌啶-4-胺

[00166]N-叔丁基-N-甲基哌啶-4-胺是从1-苄基-N-叔丁基-N-甲基哌啶-4-胺通过使用方法Q制备的。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ1.36(9H，s)，1.90-2.05(4H，m)，2.58(3H，s)，3.07(2H，dt)，3.43(2H，d)，3.68(1H，m)。

[00167]用于制备其中的Q是硫原子的式I化合物的不同的R¹QH部分是通过三种不同方法从商业可得的4-氨基苯硫酚、双-(4-氨基苯基)二硫化物或从碘衍生物开始制备的。三种策略概括如下。

实施例14：

方法FF：N-(4-巯基苯基)环丙烷甲酰胺

[00168]将三乙胺(160.6ml，1.14mol)加至冷却至0℃的4-氨基苯硫酚(65.02g，520mmol)在四氢呋喃(1L)中的溶液中。滴加环丙烷甲酰氯(103.7ml，1.14mol)，以保持温度低于10℃。使该反应混合物在0℃下搅拌20分钟，然后温热至室温达1小时。滤出固体，滤液在真空中浓缩。

[00169]将该残余物用在乙醇(375ml)和水(625ml)中的氢氧化钠(65.02g，1.63mol)处理。该反应混合物加热至100℃达1小时，过滤，再在减压下浓缩。将残余物用水稀释，再通过硅藻土管柱过滤。滤液用浓盐酸酸化，再将所得固体过滤。将该固体溶解于乙酸乙酯(3.75L)，再用盐水洗涤。该有机相用硫酸镁干燥，再在真空中浓缩，得到标题化合物(86.3g，86％收率)。¹H NMR(DMSO D⁶，300MHz)0.76-0.85(4H，m)，1.76(1H，m)，5.19(1H，s)，7.23(2H，d)，7.5(2H，d)，10.18(1H，s)；MS(ES⁺)194。

[00170]用于制备其中的Q是硫原子的本发明式I化合物的其它R¹QH部分可通过类似于实施例14(方法FF)中所述的顺序制备：3，3，3-三氟-N-(4-巯基苯基)丙酰胺。

实施例15：

N-(4-巯基苯基)丙酰胺

方法GG：N，N′-(4，4′-二硫烷二基双(4，1-亚苯基))二丙酰胺

[00171]将丙酰氯(18.3ml，0.21mol)加至冷却至0℃的双-(4-氨基苯基)二硫化物(26g，0.10mmol)和三乙胺(42ml，0.30mol)在二氯甲烷(600ml)中的溶液中。使该反应混合物在0℃下搅拌5分钟，然后温热至室温达1小时。在此期间，形成白色沉淀。使反应混合物浓缩至一半体积，再滤出白色固体，再用少量二氯甲烷洗涤。滤液再次部分浓缩，并滤出剩余的白色固体，洗涤。合并2个批次的固体(32.4g，90％收率)。MS(ES⁺)361，(ES^-)359。

方法HH：N-(4-巯基苯基)丙酰胺

[00172]将三-(2-羧乙基)膦盐酸盐(TCEP.HCl，3.66g，12.77mmol)加至冷却至0℃的N，N′-(4，4′-二硫烷二基双(4，1-亚苯基))二丙酰胺(4g，11.1mmol)和三乙胺(1.67ml，11.99mmol)在水(4ml)和二甲基甲酰胺(25ml)的混合物中。使该反应混合物温热至室温，并在室温下搅拌90分钟。将反应混合物用水(100ml)稀释，引起所需产物沉淀。将该白色固体通过过滤分离，再用水洗涤。将该固体溶解于乙酸乙酯，用硫酸镁干燥，再在真空中浓缩，得到标题化合物为白色固体(3.13g，78％收率)。¹H NMR(DMSO D⁶，400MHz)1.07(3H，t)，2.29(2H，q)，5.24(1H，s)，7.21(2H，d)，7.48(2H，d)；MS(ES⁺)182，(ES^-)180。

[00173]用于制备其中的Q是硫原子的式I化合物的其它R¹QH部分可通过类似于实施例15(方法GG和HH)中所述的顺序制备：4，4，4-三氟-N-(4-巯基苯基)丁酰胺、N-(4-巯基苯基)-1-(三氟甲基)环丙烷甲酰胺、2，2-二氟-N-(4-巯基苯基)环丙烷甲酰胺、2-环丙基-N-(4-巯基苯基)乙酰胺、2-环戊基-N-(4-巯基苯基)乙酰胺、2-氯-N-(4-巯基苯基)苯甲酰胺、N-(4-巯基苯基)-2-(三氟甲基)苯甲酰胺。

实施例16：

N-(2-氟-4-巯基苯基)环丙烷甲酰胺

方法II：N-(2-氟-4-碘苯基)环丙烷甲酰胺

[00174]将三乙胺(8ml，57.40mmol)加至冷却至0℃的2-氟-4-碘苯胺(11g，46.41mmol)在四氢呋喃(60ml)中的溶液中。滴加环丙烷甲酰氯(4.6ml，50.60mmol)，以保持温度低于10℃。使该反应混合物在0℃下搅拌1小时，然后温热至室温达30分钟。将反应混合物用乙酸乙酯稀释，用1M盐酸、碳酸氢钠饱和溶液洗涤，再用盐水洗涤。该有机相用硫酸镁干燥，再在真空中浓缩。将残余物在硅胶上通过急骤柱色谱法纯化，得到标题化合物为橙色固体(14g，99％收率)。

方法JJ：N，N′-(4，4′-二硫烷二基双(2-氟-4，1-亚苯基))二环丙烷甲酰胺

[00175]向圆底烧瓶中装入N-(2-氟-4-碘苯基)环丙烷甲酰胺(15g，49.17mmol)、硫脲(7.5g，98.53mmol)、镍披硅石(2.5g)和NMP(100ml)。使该混合物在140℃下加热18小时。使反应混合物冷却，通过硅藻土过滤，用乙酸乙酯稀释，再用水和盐水洗涤两次。有机层用硫酸镁干燥，过滤，再在真空中浓缩。将残余物通过急骤柱色谱法纯化，得到N，N′-(4，4′-二硫烷二基双(2-氟-4，1-亚苯基))二环丙烷甲酰胺(2.2g，23％收率)和N-(2-氟-4-巯基苯基)环丙烷甲酰胺(2.4g，11％收率)的混合物。

方法KK：N-(2-氟-4-巯基苯基)环丙烷-甲酰胺

[00176]将三-(2-羧乙基)膦盐酸盐(TCEP.HCl，2.3g，8.04mmol)加至N，N′-(4，4′-二硫烷二基双(2-氟-4，1-亚苯基))二环丙烷甲酰胺(3.31g，7.87mmol)和三乙胺(1.1ml，7.91mmol)在水(2ml)和二甲基甲酰胺(10ml)的混合物中的溶液中。使反应混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物用水(200ml)稀释。滤出固体，重新溶解于乙酸乙酯中，然后用盐水洗涤。有机层用硫酸镁干燥，再在真空中浓缩，得到该化合物。

[00177]用于制备其中的Q是硫原子的式I化合物的其它R¹QH部分可通过类似于实施例16(方法II、JJ和KK)中所述的顺序制备：N-(3-氟-4-巯基苯基)环丙烷甲酰胺。

[00178]以下表2描述了表1化合物的数据。化合物编号与表1所示那些化合物相对应。

表2

化合物编号	M+1(测得值)	1H NMR	Rt(分钟)
化合物编号	M+1(测得值)	1H NMR	Rt(分钟)	I-1	481.57	(d6-DMSO，400MHz)1.10(3H，t)，1.38(6H，m)，2.03(3H，s)，2.10(1H，m)，2.20-2.50(3H，m)，3.20-3.52(3H，m)，3.67(1H，m)，4.00(1H，m)，5.40(1H，m)，5.80(1H，m)，7.50(2H，d)，7.7191H，d)，8.56(2H，brs)，9.31(1H，brs)，10.10(1H，brs)	2.92
I-2	510.52	(d6-DMSO，400MHz)0.99(9H，br s)，1.10(3H，t)，1.63-1.60(2H，m)，1.91-1.80(2H，br m)，2.02(3H，br s)，2.34(2H，q)，3.32-3.05(2H，br m)，3.52(1H，br m)，4.45-4.37(1H，br m)，5.48(1H，br s)，5.80(1H，br s)，7.47(2H，d)，7.68(2H，d)，9.10(1H，br s)，10.05(1H，s)，11.68(1H，br s)。	3.61	I-1	481.57		2.92
I-2	510.52		3.61	I-3	521.0	(CD₃OD)：1.20-1.30(3H，t)，1.40-1.50(4H，m)，1.55-1.60(1H，s)，2.00-2.30(7H，m)，2.40-2.45(2H，qd)，2.50-2.55(1H，m)，2.65-2.70(1H，m)，3.30-3.50(2H，m)，3.65-3.80(2H，m)，4.00-4.20(2H，m)，5.50-5.55(1H，s)，5.70-5.75(1H，s)，7.60-7.70(4H，m)。	3.18
I-4	552.53	(d6-DMSO，400MHz)0.80(4H，d)，1.25-1.33(2H，m)，1.80-1.89(3H，m)，2.09(3H，s)，2.46掩蔽的信号，2.83(2H，m)，3.36掩蔽的信号，3.56(4H，m)，4.04(2H，m)，5.85(1H，s)，6.87(1H，m)，7.50(2H，m)，7.75(2H，m)	3.56	I-3	521.0		3.18
I-4	552.53		3.56	I-5	511.5	(d6-DMSO，400MHz)：0.82(4H，m)，1.09(6H，m)，1.83(1H，m)，1.97(2H，m)，2.09(3H，s)，3.44(1H，m)，3.66(1H，m)，4.23(1H，br s)，5.56(1H，br s)，6.86(1H，m)，7.52(2H，m)，7.74(2H，m)，10.43(1H，s)，10.78(1H，s)	3.69

化合物编号	M+1(测得值)	¹H NMR	Rt(分钟)
化合物编号	M+1(测得值)	¹H NMR	Rt(分钟)	I-6	469.43	(d6-DMSO，400MHz)0.81(4H，m)，1.75-2.02(4H，m)，2.08(3H，s)，3.25-4.40(4H，掩蔽的信号)，5.51(1H，s)，6.90(1H，s)，7.51(2H，d)，7.71(2H，d)，10.45(1H，brs)，10.75(1H，brs)	3.29
I-7	509.0	(d6-DMSO，400MHz)1.10(3H，t)，1.33(9H，s)，1.45-1.53(1H，m)，1.91-2.01(5H，m)，2.34(2H，q)，2.89(2H，t)，4.07(2H，d)，5.43(1H，s)，6.08(1H，brs)，7.47(2H，d)，7.71(2H，d)，8.08(2H，s)，9.29(1H，s)，10.10(1H，s)，11.75(1H，brs)	3.11	I-6	469.43		3.29
I-7	509.0		3.11	I-8	510.0	(d6-DMSO，400MHz)0.83-0.81(4H，m)，1.49-1.46(1H，m)，1.85-1.76(3H，m)，2.08(1H，m)，2.13(3H，s)，2.75-2.72(6H，m)，3.00(1H，m)，3.21(1H，br m)，3.40-3.33(2H，m)，4.30-4.27(1H，m)，5.93(1H，s)，6.94(1H，s)，7.52(2H，d，J8.5)，7.74(2H，d，J 8.5)，9.99(1H，br s)，10.52(1H，s)，11.12(1H，br s)。	3.57
I-9	453.0	(d6-DMSO，400MHz)1.10(3H，t，J 7.5)，2.01(3H，s)，2.13(1H，m)，2.38-2.26(3H，m)，2.62(3H，s)，3.34-3.32(1H，m)，3.49-3.42(2H，m)，3.63-3.59(1H，m)，3.82(1H，m)，5.41(1H，m)，5.76(1H，br s)，7.48(2H，d，J 8.6)，7.71(2H，d，J 8.6)，8.65-8.64(2H，m)，9.30(1H，s)，10.10(1H，s)。	2.73	I-8	510.0		3.57
I-9	453.0		2.73	I-10	496.53	(d6-DMSO，400MHz)0.95(9H，s)，1.10(3H，t)，1.70(1H，m)，1.98(1H，m)，2.03(3H，s)，2.34(2H，q)，3.49-3.19(4H，掩蔽的信号)，5.48(1H，s)，5.75(1H，br s)，7.48(2H，d)，7.70(2H，d)，9.18(1H，br s)，10.04(1H，s)。	3.42
I-11	454.48	(d6-DMSO，400MHz)1.10(3H，t)，1.31(3H，s)，1.84(2H，br m)，2.01(3H，s)，2.34(2H，q)，2.50(2H，掩蔽的信号)，3.12(2H，d)，4.79(1H，br s)，5.42(1H，s)，5.72(1H，br s)，7.48(2H，d)，7.69(2H，d)，9.14(1H，s)，10.07(1H，s)，11.70(1H，brs)。	3.12	I-10	496.53		3.42
I-11	454.48		3.12	I-12	469.37	(d6-DMSO，400MHz)0.81(4H，m)，1.75-2.02(4H，m)，2.08(3H，s)，3.25-3.40(2H，m)，4.32(1H，m)，4.98(1H，m)，5.51(1H，s)，6.90(1H，s)，7.51(2H，d)，7.71(2H，d)，10.45(1H，brs)，10.75(1H，brs)	3.31
I-13	510.0	(d6-DMSO，400MHz)0.83-0.81(4H，m)，1.49-1.46(1H，m)，1.85-1.76(3H，m)，2.08(1H，m)，2.13(3H，s)，2.75-2.72(6H，m)，3.00(1H，m)，3.21(1H，br m)，3.40-3.33(2H，m)，4.30-4.27(1H，m)，5.93(1H，s)，6.94(1H，s)，7.52(2H，d，J8.5)，7.74(2H，d，J 8.5)，9.99(1H，br s)，10.52(1H，s)，11.12(1H，br s)。	3.58	I-12	469.37		3.31
I-13	510.0		3.58	I-14	483.49	(d6-DMSO，400MHz)：0.97(4H，m)，1.96(1H，m)，2.06-2.23(5H，m)，3.40(5H，m)，5.74(1H，s)，7.06(1H，s)，7.66(2H，m)，7.89(2H，m)，10.59(1H，s)，11.20(1H，br s)	3.4

化合物编号	M+1(测得值)	¹H NMR	Rt分钟)
化合物编号	M+1(测得值)	¹H NMR	Rt分钟)	I-15	496.47	(d6-DMSO，400MHz)1.10(3H，t)，1.57(4H，m)，2.01(3H，s)，2.35(2H，q)，3.47(4H，m)，3.91(4H，s)，5.43(1H，s)，6.07(1H，s)，7.48(2H，d)，7.76(2H，d)，9.21(1H，s)，10.14(1H，s)，11.70(1H，s)	3.31
I-16	463.54	(d6-DMSO，400MHz)：1.10(3H，m)，1.65(2H，m)，1.86(2H，m)，2.01(3H，s)，2.36(2H，m)，3.10(1H，m)，3.21(2H，m)，3.63(2H，m)，5.43(1H，s)，6.65(1H br s)，7.47(2H，m)，7.69(2H，m)，9.25(1H，s)，10.08(1H，s)，11.72(1H，br s)	3.37	I-15	496.47		3.31
I-16	463.54		3.37	I-17	452.36	(d6-DMSO，400MHz)1.09(3H，t)，2.03(3H，s)，2.39(6H，m)，3.70(4H，t)，5.52(1H，br s)，6.14(1H，br s)，7.48(2H，d)，7.71(2H，d)，9.37(1H，s)，10.08(1H，s)	3.24
I-18	442.4	(d6-DMSO，400MHz)1.14(3H，t)，2.03(3H，s)，2.2-2.28(2H，m)，2.42(2H，q)，3.27-3.32(1H，m)，3.45-3.62(3H，m)，5.32(0.5H，s)，5.43-5.48(1.5H，m)，5.891H，brs)，7.52(2H，d)，7.72(2H，d)，9.25(1H，brs)，10.09(1H，s)，11.69(1H，s)	3.32	I-17	452.36		3.24
I-18	442.4		3.32	I-19	479.5	(d6-DMSO，400MHz)1.0-1.2(3H，m，alk)，1.2-1.8(5H，m，alk)，1.9-2.7(6H，m，alk)，2.8(H，m，alk)，3.0-3.7(5H，m，alk)，5.4(H，brs，ar)，5.75(H，brs，ar)，7.4-7.6(2H，m，ar)，7.6-7.8(2H，m，ar)，9.1(H，s，NH)，10.05(H，s，NH)和11.7(H，brs，NH)	2.87
I-20	468.4	(d6-DMSO，400MHz)1.14(3H，t)，2.03(3H，s)，2.2-2.28(2H，m)，2.42(2H，q)，3.27-3.32(1H，m)，3.45-3.62(3H，m)，5.32(0.5H，s)，5.43-5.48(1.5H，m)，5.891H，brs)，7.52(2H，d)，7.72(2H，d)，9.25(1H，brs)，10.09(1H，s)，11.69(1H，s)	3.4	I-19	479.5		2.87
I-20	468.4		3.4	I-21	468.0	(d6-DMSO，400MHz)1.08-1.18(6H，m)，1.30-1.45(4H，m)，2.03(3H，s)，2.34-2.38(2H，m)，3.20(2H，t)，3.64(2H，d)，5.47(1H，s)，6.05(1H，brs)，7.48(2H，d)，7.69(2H，d)，9.28(1H，s)，10.09(1H，s)，12.00(1H，brs)	3.21
I-22	453.45	(d6-DMSO，400MHz)1.10(3H，t，J 7.5))，2.01(3H，s)，2.13-2.12(1H，m)，2.38-2.27(3H，m)，2.63-2.61(3H，m)，3.32(1H，m)，3.46-3.42(2H，m)，3.61-3.59(1H，m)，3.82(1H，m)，5.41(1H，s)，5.76(1H，br s)，7.48(2H，d，J 8.6)，7.71(2H，d，J8.6)，8.68-8.66(2H，m)，9.32(1H，s)，10.10(1H，s)。	2.88	I-21	468.0		3.21
I-22	453.45		2.88	I-23	494.0	(d6-DMSO，400MHz)0.83(9H，s)，0.98-1.08(2H，部分掩蔽的m)，1.10(3H，t)，1.18-1.25(1H，m)，1.65(2H，brd)，2.01(3H，brs)，2.35(2H，q)，2.65(2H，b rt)，4.13(2H，brd)，5.43(1H，brs)，6.05(1H，vbrs)，7.47(2H，d)，7.70(2H，d)，9.16(1H，brs)，10.08(1H，s)，11.69(1H，brs)。	4.1

化合物编号	M+1(测得值)	¹H NMR	Rt(分钟)
化合物编号	M+1(测得值)	¹H NMR	Rt(分钟)	I-24	467.0	(d6-DMSO，400MHz)1.09(3H，t，J 7.5)，1.75-1.73(1H，m)，2.01(3H，s)，2.16-2.07(2H，掩蔽的信号)，2.16(6H，s)，2.33(2H，q，J 7.5)，2.67(1H，br m)，2.96-2.92(1H，m)，3.19-3.18(1H，m)，3.65-3.50(1H，br m)，5.43(1H，s)，5.78(1H，br s)，7.47(2H，d，J 8.6)，7.69(2H，d，J 8.6)，9.13(1H，s)，10.06(1H，s)。	465.0
I-25	496.0	(d6-DMSO，400MHz)0.83-0.81(4H，m)，1.50(1H，m)，1.67(1H，m)，1.84-1.79(2H，m)，2.07(2H，m)，2.11(3H，s)，3.17-3.15(2H，m)，3.44-3.28(1H，m)，3.55-3.52(1H，m)，4.08-3.68(1H，掩蔽的信号)，5.90(1H，s)，6.90(1H，s)，7.51(2H，d，J 8.6)，7.74(2H，d，J 8.6)，8.68-8.57(2H，m)，10.49(1H，s)，10.98(1H，br s)。	3.29	I-24	467.0		465.0
I-25	496.0		3.29	I-26	528.24	(d6-DMSO，400MHz)1.69(3H，s)，2.06(6H，m)，3.53(2H，q)，3.76(2H，t)，4.79(1H，s)，6.12(1H，brs)，7.55(2H，d)，7.74(2H，d)，9.31(1H，s)，10.66(1H，s)	3.53
I-27	514.19	(d6-DMSO，400MHz)2.01(3H，s)，3.50(6H，m)，3.69(2H，m)，5.45(1H，s)，5.80(1H，br s)，7.55(2H，d)，7.75(2H，d)，9.33(1H，s)，10.50(1H，s)	3.49	I-26	528.24		3.53
I-27	514.19		3.49	I-28	481.46	(d6-DMSO，400MHz)：1.11(3H，t)，1.24(6H，d)，2.01(3H，s)，2.10(1H，m)，2.34(3H，m)，2.54(4H，m)，3.65(1H，s)，3.97(1H，s)，5.43(1H，s)，5.78(1H，br s)，7.49(2H，d)，7.70(2H，d)，8.56(2H，brs)，9.32(1H，s)，10.10(1H，s)	2.89
I-29	496.51	(d6-DMSO，400MHz)：0.82(4H，m)，1.80(2H，m)，2.08(4H，m)，2.17(6H，s)，3.00(1H，m)，3.25(1H，m)，3.35掩蔽的信号，5.56(1H，s)，6.87(1H，m)，7.52(2H，m)，7.72(2H，m)	3.44	I-28	481.46		2.89
I-29	496.51		3.44	I-30	496.45	(d6-DMSO，400MHz)：0.81(4H，d)，1.79(2H，s)，1.82(1H，m)，2.09(3H，s)，2.17(5H，s)，2.54(1H，s)，3.02(6H，s)，5.55(1H，s)，6.86(1H，s)，7.52(2H，d)，7.73(2H，d)，10.42(1H，s)	3.5
I-31	547.0	(CD₃OD，400MHz)：0.80-0.87(2H，m)，0.90-0.95(2H，m)，1.02-1.07(6H，d)，1.45-1.50(4H，m)，1.65-1.70(2H，t)，1.75-1.80(1H，m)，2.10(3H，s)，2.30-2.40(1H，m)，2.50(2H，s)，2.65-2.70(2H，t)，3.25-3.37(4H，m)，3.45-2.50(2H，m)，5.50-5.60(1H，brs)，5.80-5.90(1H，br s)，7.45-7.50(2H，m)，7.62-7.65(2H，m)。	3.08	I-30	496.45		3.5
I-31	547.0		3.08	I-32	-	(CD₃OD，400MHz)：0.95-1.05(4H，m)，1.65-1.80(4H，m)，1.90-2.05(2H，m)，2.10-2.20(4H，m)，2.90-2.95(4H，m)，3.20-3.25(1H，m)，3.50-3.75(6H，m)，5.67(1H，s)，5.80(1H，s)，7.50-7.60(2H，d＊d)，7.85-7.90(1H，t)。	-

化合物编号	M+1(测得值)	¹H NMR	Rt(分钟)
化合物编号	M+1(测得值)	¹H NMR	Rt(分钟)	I-33	535.0	(CD₃OD，400MHz)：1.20-1.30(5H，m)，1.45(3H，s)，1.55(3H，s)，1.60-1.70(2H，m)，1.95-2.10(4H，m)，2.20(3H，s)，2.25-2.30(1H，m)，2.40-2.45(2H，qd)，2.95-3.05(2H，m)，3.30-3.40(2H，m)，3.65-3.75(2H，m)，4.35-4.65(2H，m)，5.65(1H，s)，5.80(1H，s)，7.60-7.70(4H，qd)。	3.09
I-34	521.0	(CD₃OD，400MHz)：1.20-1.40(5H，m)，1.55(3H，s)，1.90-2.15(6H，m)，2.25(3H，s)，2.40-2.45(2H，qd)，3.2-3.5(8H，m)，4.3-4.4(2H，m)，5.70(1H，s)，5.80(1H，s)，7.60-7.65(2H，d)，7.70-7.75(2H，d)。	2.96	I-33	535.0		3.09
I-34	521.0		2.96	I-35	524.6	(d6-DMSO，400MHz)2.06(3H，s)，2.16-2.23(2H，m)，3.42-3.55(3H，m)，5.33(0.5H，s)，5.45(1H，s)，5.75(1H，vbrs)，7.46-7.62(6H，m)，7.84(2H，d)，9.24(1H，brs)，10.74(1H，s)，11.69(1H，brs)	3.58
I-36	482.46	(d6-DMSO，400MHz)0.83-0.81(4H，m)，1.85-1.79(1H，m)，2.09(3H，s)，2.16(1H，m)，2.33(1H，m)，2.68-2.62(3H，m)，3.37(1H，m)，3.55-3.48(2H，br m)，3.66(1H，m)，3.84(1H，m)，5.61(1H，s)，6.88(1H，s)，7.51(2H，d，J 8.6)，7.74(2H，d，J 8.6)，8.69(2H，br m)，10.46(1H，s)，10.91(1H，br s)。	3.18	I-35	524.6		3.58
I-36	482.46		3.18	I-37	522.56	(d6-DMSO，400MHz)0.86(4H，m)，1.70-2.10(7H，m)，2.11-2.50(3H，m)，3.05-4.15(9H，m)，5.60(1H，s)，6.91(1H，s)，7.55(2H，d)，7.80(2H，d)，10.00(1H，brs)，10.45(1H，s)，10.98(1H，brs)。	3.36
I-38	536.63	(d6-DMSO，400MHz)：0.82(4H，m)，1.48(2H，m)，1.82(3H，m)，2.01(2H，m)，2.10(5H，m)，2.86(2H，m)，3.09-3.15(2H，m)，3.40(1H，m)，3.53(2H，m)，4.20(2H，m)，5.89(1H，s)，6.89(1H，s)，7.53(2H，d)，7.75(2H，d)，9.49(1H，br s)，10.46(1H，s)，10.90(1H，br s)	3.32	I-37	522.56		3.36
I-38	536.63		3.32	I-39	467.0	(d6-DMSO，400MHz)1.10(3H，t，J 7.5)，1.20(3H，t，J 7.2)，2.01(3H，s)，2.13(1H，m)，2.38-2.27(3H，m)，3.04-3.00(2H，m)，3.33-3.31(1H，m)，3.48-3.46(2H，m)，3.64-3.60(1H，m)，3.87(1H，m)，5.42(1H，s)，5.77(1H，br s)，5.77(1H，br s)，7.48(2H，d，J 8.6)，7.71(2H，d，J 8.6)，8.59(2H，m)，9.33(1H，s)，10.11(1H，s)。	2.79
I-40	523.7	(d6-DMSO，400MHz)1.09(3H，t)，1.22-1.30(2H，m)，1.75-1.80(2H，m)，2.01(3H，s)，2.37-2.47(2H，m)，2.70-2.80(2H，m)，3.53-3.58(4H，m)，4.02-4.08(2H，m)，5.44(1H，brs)，7.47(2H，d)，7.70(2H，d)，9.18(1H，brs)，10.07(1H，brs)，11.69(1H，brs)	3.29	I-39	467.0		2.79

化合物编号	M+1(测得值)	¹H NMR	Rt(分钟)
化合物编号	M+1(测得值)	¹H NMR	Rt(分钟)	I-41	507.0	(d6-DMSO，400MHz)1.05-1.15(3H，t，Et)，1.4-1.5(2H，m，alk)，1.75-1.9(2H，m，alk)，1.9-2.1(7H，m，alk)，2.3-2.4(2H，q，Et)，2.7-2.9(2H，m，alk)，3.0-3.15(2H，m，alk)，3.35(H，m，alk)，3.5-3.6(2H，m，alk)，4.1-4.2(2H，m，alk)，5.4(H，s，ar)，6.1(H，s，ar0，7.45(2H，d，ar)，7.7(2H，d，ar)，9.3(H，s，NH)，9.5(H，brs，NH)和10.1(H，s，NH)。	2.91
I-42	496.0	(d6-DMSO，400MHz)1.03(6H，s)，1.11-1.08(5H，m)，1.38(1H，m)，1.69(2H，d)，2.01(3H，s)，2.34(2H，q)，2.68-2.65(2H，m)，4.14-4.12(3H，m)，5.44(1H，br s)，6.07(1H，br s)，7.47(2H，d)，7.69(2H，d)，9.15(1H，br s)，10.07(1H，s)，11.70(1H，br s)。	3.34	I-41	507.0		2.91
I-42	496.0		3.34	I-43	525.7	(d6-DMSO，400MHz)1.14 93H，t)，1.25-1.35(2H，m)，1.86-1.94(2H，m)，2.06(3H，s)，2.25-2.3(1H，m)，2.42(2H，q)，2.65-2.8(1H，m)，2.85-2.97(3H，m)，3.92-3.96(2H，m)，5.13-5.15(0.5H，m)，5.31-5.34(0.5H，m)，5.5(1H，s)，6.15(1H，vbrs)，7.52(2H，d)，7.78(2H，d)，9.25(1H，brs)，10.14(1H，s)，11.65(1H，brs)	3.38
I-44	482.0	(d6-DMSO，400MHz)0.83(3H，t)，1.09(3H，t)，1.23-1.44(4H，m)，2.01(3H，s)，2.33(2H，q)，3.10-3.18(2H，m)，3.73(2H，d)，4.17(1H，s)，5.44(1H，s)，6.11(1H，brs)，7.47(2H，d)，7.73(2H，d)，9.14(1H，s)，10.13(1H，s)，11.70(1H，brs)	3.37	I-43	525.7		3.38
I-44	482.0		3.37	I-45	510.55	(d6-DMSO，400MHz)1.03(6H，s)，1.15-1.08(5H，m)，1.63(3H，m)，2.02(3H，s)，2.34(2H，q)，2.67(2H，t)，3.08(3H，s)，4.13(2H，d)，5.46(1H，s)，5.77(1H，s)，6.05(1H，br s)，7.48(2H，d)，7.70(2H，d)，9.28(1H，s)，10.09(1H，s)。	3.69
I-46	467.48	(d6-DMSO，400MHz)：1.09(3H，t)，2.00(3H，s)，2.37(2H，q)，2.82(6H，s)，3.29(1H，m)，3.46(2H，m)，3.78(2H，m)，3.99(2H，m)，5.40(1H，s)，5.70(1H，br s)，7.49(2H，d)，7.72(2H，d)，9.31(1H，s)，9.82(1H，s)，10.09(1H，s)	3.06	I-45	510.55		3.69
I-46	467.48		3.06	I-47	523.0	(d6-DMSO，400MHz)1.10(3H，t)，1.37(9H，s)，1.58-1.87(4H，m)，2.34(2H，q)，2.90-2.98(2H，m)，3.58-3.66(1H，m)，3.86-3.92(1H，m)，4.10(1H，d)，4.20(1H，d)，5.44(1H，s)，6.04(1H，brs)，7.48(2H，d)，7.70(2H，d)，8.26(0.5H，brs)，8.58(1H，s)，9.28(1H，s)，10.10(1H，s)，11.72(1H，brs)。	3.35
I-48	493.0	(CD3OD)：1.20-1.30(3H，t)，2.00-2.25(7H，m)，2.30-2.40(1H，br s)，2.45-2.60(3H，m)，3.20-3.30(2H，m)，3.50-3.60(1H，m)，3.70-3.80(3H，m)，4.00-4.20(2H，m)，5.55(1H，s)，5.80(1H，s)，7.60-7.65(2H，d)，7.80-7.85(2H，d)。	3.17	I-47	523.0		3.35

化合物编号	M+1(测得值)	¹H NMR	Rt(分钟)
化合物编号	M+1(测得值)	¹H NMR	Rt(分钟)	I-49	524.33	(d6-DMSO，400MHz)1.05-1.1(3H，t，CH3)，1.4-1.55(2H，m，alk)，1.8-1.95(2H，m，alk)，1.95-2.1(2H，q，CH2)，2.8-2.9(2H，m，alk)，3.0-3.15(22H，m，alk)，3.4(H，m，alk)，3.45-3.6(2H，m，alk)，4.1-4.25(2H，m，alk)，5.9(H，s，ar)，6.9(H，s，ar)，7.5-7.55(2H，d，ar)，7.75-7.8(2H，d，ar)，9.6(H，brs，NH)，10.15(H，s，NH)和10.95(H，brs，NH)。	3.11
I-50	481.61	(d6-DMSO，400MHz)1.1-1.15(3H，t，CH3)，1.25-1.35(3H，m，CH3)，2.05(3H，s，CH3)，2.3(H，m，alk)，2.35-2.45(3H，m，alk)，2.75(2H，m，alk)，3.0-3.35(4H，m，alk)，3.5-3.6(2H，m，alk)，3.8(H，m，alk)，4.0(H，m，alk)，5.5(H，m，ar)，6.75(H，m，ar)，7.5(2H，d，ar)，7.75(2H，d，ar)，9.65(H，alk，NH)，10.2(H，s，NH)和10.7(H，brs，alk)	3.17	I-49	524.33		3.11
I-50	481.61		3.17	I-51	545.0	(CD₃OD，400MHz)：0.55-0.60(2H，m)，0.85-0.95(4H，m)，0.95-1.00(2H，m)，1.50-1.55(4H，m)，1.70-1.80(4H，m)，2.35(3H，s)，2.48(2H，s)，2.60-2.67(2H，t)，3.35-3.50(5H，m)，5.50-5.65(1H，brs)，5.90-6.00(1H，br s)，7.40-7.50(2H，m)，7.62-7.67(2H，m)。	3.23
I-52	482.0	(d6-DMSO，400MHz)0.83-0.81(4H，m)，1.82-1.80(1H，m)，2.09(3H，s)，2.16-2.14(1H，m)，2.39-2.30(1H，m)，2.65(3H，s)，4.24-3.28(5H，掩蔽的信号)，5.61(1H，s)，6.88(1H，s)，7.51(2H，d，J 8.6)，7.74(2H，d，J 8.6)，8.66(2H，m)，10.45(1H，s)，10.90(1H，br s)。	3.15	I-51	545.0		3.23
I-52	482.0		3.15	I-53	507.6	(d6-DMSO，400MHz)1.09(3H，t)，1.5-1.6(3H，m)，1.78-1.85(1H，m)，2.03(3H，s)，2.34(2H，q)，2.84(3H，s)，3.1-3.17(1H，m)，3.3-3.55(7H，m)，5.45(1H，s)，6.05(1H，s)，7.47(2H，d)，7.70(2H，d)，9.27(1H，s)，9.80(1H，brs)，10.10(1H，brs)，	3.03
I-54	-	(CD₃OD，400MHz)：0.95-1.05(4H，m)，1.60-1.80(4H，m)，1.90-2.05(1H，m)，2.10-2.20(4H，m)，2.90-2.95(4H，m)，3.20-3.25(1H，m)，3.45-3.75(6H，m)，5.70(1H，s)，5.80(1H，s)，7.30-7.35(2H，d)，7.57-7.62(1H，t)，7.63-7.68(1H，d)。	-	I-53	507.6		3.03
I-54	-		-	I-55	493.52	(d6-DMSO，400MHz)1.1-1.5(3H，m，alk)，1.75-2.15(7H，m，alk)，2.3(H，m，alk)，2.35-2.45(2H，m，alk)，3.05-3.25(4H，m，alk)，3.3(H，m，alk)，3.4-3.65(4H，m，alk)，3.8(H，m，alk)，4.0(H，m，alk)，5.5(H.s，ar)，5.8(H，s，ar)，7.5(2H，d，ar)，7.75(2H，d，ar)，9.4(H，s，NH)，10.3(H，s，NH)和10.9(H，brs，NH)。	3.09

化合物编号	M+1(测得值)	¹H NMR	Rt(分钟)
化合物编号	M+1(测得值)	¹H NMR	Rt(分钟)	I-56	533.62	(d6-DMSO，400MHz)0.5-0.6(2H，m，alk)，0.8-0.9(2H，m，alk)，1.05-1.15(3H，t，CH3)，1.45-1.6(2H，m，alk)，1.75(H，m，alk)，1.85(H，m，alk)，1.95-2.1(2H，m，alk)，2.35-2.4(2H，m，alk)，2.75-2.85(2H，m，alk)，3.0-3.15(2H，m，alk)，3.35(H，m，alk)，3.5(2H，m，alk)，4.15(2H，m，alk)，5.5(H，s，ar)，6.15(H，brs，ar)，7.5-7.55(2H，d，ar)，7.7-7.75(2H，d，ar)，9.5(H，s，NH)，10.1(H，s，NH)和10.25(H，brs，NH)。	3.03
I-57	535.6	(d6-DMSO，400MHz)0.9-0.98(6H，m)，1.1(3H，t)，1.25-1.3(4H，m)，1.7-1.9(2H，m)，2.03(3H，s)，2.34(2H，q)，2.7-2.8(2H，m)，3.17-3.27(1H，m)，3.98-4.12(2H，m)，5.43(1H，s)，6.05(1H，brs)，7.47(2H，d)，7.70(2H，d)，9.18(1H，brs)，10.07(1H，s)，11.69(1H，s)	3.06	I-56	533.62		3.03
I-57	535.6		3.06	I-58	496.0	(d6-DMSO，400MHz)0.83(6H，d)，1.09(3H，t)，1.29-1.52(5H，m)，2.00(3H，s)，2.33(2H，q)，3.05(2H，t)，3.84(2H，d)，4.07(1H，s)，5.44(1H，s)，6.10(1H，brs)，7.47(2H，d)，7.69(2H，d)，9.16(1H，s)，10.07(1H，s)，11.71(1H，brs)	3.49
I-59	508.49	(d6-DMSO，400MHz)0.81(4H，d，J 6.1)，1.40(1H，br m)，1.70-1.51(3H，br m)，1.84-1.78(1H，m)，2.08(3H，s)，2.34-2.20(1H，m)，2.55-2.50(2H，掩蔽的信号)，2.85-2.82(1H，m)，3.17-3.01(1H，m)，3.50-3.25(3H，掩蔽的信号)，5.53-5.51(1H，m)，6.85(1H，s)，7.51(2H，d，J 8.6)，7.72(2H，d，J8.6)，10.43(1H，s)，10.76(1H，br s)。	3.19	I-58	496.0		3.49
I-59	508.49		3.19	I-60	507.53	(d6-DMSO，400MHz)：0.63(1H，m)，1.09(3H，m)，1.28(6H，m)，1.81(1H，m)，2.39(2H，m)，2.90-3.06(8H，m)，3.31-3.56(3H，m)，3.73(1H，m)，5.41(1H，s)，5.77(1H，br s)，7.49(2H，m)，7.72(2H，m)，9.68(1H，m)，10.18(1H，s)，10.73(1H，s)	3.0
I-61	510.0	(d6-DMSO，400MHz)0.84(9H，s)，1.09(3H，t)，1.45(4H，brs)，2.01(3H，s)，2.34(2H，q)，2.98-3.05(2H，m)，3.87-3.90(2H，m)，5.44(1H，s)，6.15(1H，brs)，7.47(2H，d)，7.69(2H，d)，9.14(1H，s)，10.07(1H，s)，11.70(1H，s)	3.63	I-60	507.53		3.0
I-61	510.0		3.63	I-62	519.57	(d6-DMSO，400MHz)0.5-0.55(2H，m，alK)，0.8-0.85(2H，m，alk)，1.05-1.15(3H，t，CH3)，1.65(H，m，alk)，1.8-1.95(2H，m，alk)，2.0-2.1(2H，m，alk)，2.25(H，m，alk)，2.3-2.4(2H，q CH2)，3.1-3.25(4H，m，alk)，3.3(H，m，alk)，3.75(2H，m，alk)，3.95(2H，m，alk)，5.5(H，s，ar)，5.85(H，brs，ar)，7.45-7.5(2H，d，ar)，7.7-7.75(2H，d，ar)，9.35(H，s，NH)，10.1(H，s，NH)和10.4(H，s，NH)。	3.18

化合物编号	M+1(测得值)	¹H NMR	Rt(分钟)
化合物编号	M+1(测得值)	¹H NMR	Rt(分钟)	I-63	579.3	(d6-DMSO，400MHz)1.1-1.2(2H，m)，1.65-1.72(1H，m)，1.85(3H，s)，2.2-2.3(1H，m)，2.6-2.75(4H，m)，3.4(2H，q)，3.75-3.8(2H，m)，5.15(0.5H，m)，5.23-5.28(1.5H，m)，5.91(1H，vbrs)，6.38(1H，brs)，7.38(2H，d)，7.5(2H，d)，9.16(1H，brs)，10.33(1H，brs)，11.7(1H，brs)	3.34
I-64	616.68	(CDCl₃)1.51(6H，m)，2.05(2H，d)，2.20(3H，s)，2.84(3H，s)，3.02(6H，m)，3.33(6H，m)，5.64(1H，s)，5.78(1H，s)，7.58(2H，d)，7.78(2H，d)	3.36	I-63	579.3		3.34
I-64	616.68		3.36	I-65	587.0	(d6-DMSO，400MHz)1.35-1.39(2H，m)，1.41-1.49(5H，m)，1.82-1.87(2H，m)，1.99-2.09(7H，m)，2.78-2.84(2H，m)，3.05-3.17(2H，m)，3.34-3.37(1H，m)，3.49-3.55(2H，m)，4.13-4.16(2H，m)，5.34-5.40(1H，s)，6.0-6.1(1H，br s)，7.51-7.53(2H，d)，7.74-7.76(2H，d)，9.33(1H，s)，9.47-9.48(1H，s)，10.04(1H，s)。	3.2
I-66	607.0	(d6-DMSO，400MHz)1.40-1.52(2H，m)，1.79-1.80(2H，m)，1.99(3H，s)，2.18-2.29(4H，m)，2.91(2H，brs)，3.35-3.46(4H，m)，3.55(2H，q)，5.81(1H，s)，6.87(1H，s)，7.57(2H，d)，7.70(2H，d)，10.57(1H，s)，10.85(1H，s)	3.45	I-65	587.0		3.2
I-66	607.0		3.45	I-67	603.63	(CDCl₃)1.44(2H，m)，1.55(2H，m)，1.70(2H，m)，2.18(3H，s)，2.23(2H，m)，2.99(2H，t)，3.32(6H，br m)，3.43(1H，m)，3.95(4H，m)，5.66(1H，s)，5.92(1H，s)，7.57(2H，d)，7.74(2H，d)	3.48
I-68	561.4	(d6-DMSO，400MHz)1.3-1.4(4H，m)，1.65-1.72(4H，m)，1.8-1.9(2H，m)，2.03(3H，s)，2.2-2.3(1H，m)，2.83-2.89(2H，m)，3.55(2H，q)，3.9-3.98(2H，m)，5.45(1H，brs)，5.91(1H，vbrs)，6.38(1H，brs)，7.55(2H，d)，7.7(2H，d)，9.26(1H，brs)，10.55(1H，brs)，11.8(1H，brs)	3.03	I-67	603.63		3.48
I-68	561.4		3.03	I-69	547.0	(d6-DMSO，400MHz)1.40-1.51(1H，m)，1.52-1.69(3H，m)，2.01(3H，brs)，2.01-2.09(1H，部分掩蔽的m)，2.15(3H，brs)，2.30-2.41(1H，m)，2.06-2.68(2H，m)，3.11-3.28(2H，m)，3.53(2H，q)，5.45(1H，brs)，5.77(1H，vbrs)，.54(2H，d)，7.67(2H，d)，9.07(1H，brs)，10.48(1H，s)，11.65(1H，brs)。NB溶剂/水峰掩蔽了一些信号.	3.3
I-70	583.22	(d6-DMSO，400MHz)2.09(3H，s)，2.46-2.27(2H，m)，2.79-2.77(6H，m)，3.32-3.29(1H，m)，3.57-3.53(2H，m)，3.79-3.77(1H，m)，3.93-3.91(1H，m)，5.57(1H，s)，5.81(1H，br s)，7.59(2H，d)，7.89-7.68(6H，m)，9.64(1H，br s)，10.82(1H，s)，10.99(1H，br s)。	3.39	I-69	547.0		3.3
I-70	583.22		3.39	I-71	496.2	(d6-DMSO，400MHz)2.03(3H，s)，2.2-2.3(2H，m)，3.45-3.65(5H，m)，5.32(0.5H，s)，5.5(1.5H，s)，5.85(1H，vbrs)，7.58(2H，d)，7.72(2H，d)，9.21(1H，s)，10.5(1H，s)，11.65(1H，s)	3.32

化合物编号	M+1(测得值)	¹H NMR	Rt(分钟)
化合物编号	M+1(测得值)	¹H NMR	Rt(分钟)	I-72	577.3	(d6-DMSO，400MHz)1.25-1.35(2H，m)，1.7-1.75(2H，m)，2.05(3H，s)，2.2-2.3(2H，m)，3.53-3.58(6H，m)，4.02-4.05(2H，m)，5.45(1H，brs)，6.1(1H，vbrs)，7.52(2H，d)，7.67(2H，d)，9.1391H，brs)，10.45(1H，s)，11.7(1H，brs)	3.31
I-73	590.0	(d6-DMSO，400MHz)1.33-1.38(4H，m)，1.82-1.85(2H，m)，2.10(3H，brs)，2.25(4H，brs)，2.81-2.87(2H，m)，3.63(2H，q)，4.10-4.15(2H，m)，5.54(1H，s)，6.10(1H，vbrs)，7.62(2H，d)，7.75(2H，d)，9.23(1H，brs)，10.56(1H，s)，11.75(1H，brs)。NB溶剂/水峰掩蔽了一些信号	8.52	I-72	577.3		3.31
I-73	590.0		8.52	I-74	558.3	(d6-DMSO，400MHz)2.10(3H，s)，2.2-2.3(2H，m)，3.45-3.65(3H，m)，5.3290.5H，s)，5.5(0.5H，s)，5.55(1H，brs)，5.8(1H，vbrs)，7.6(2H，d)，7.65-7.9(5H，m)，9.25(1H，s)，10.8(1h，s)，11.65(1H，s)	3.49
I-75	571.9	(d6-DMSO，400MHz)0.8-0.86(2H，m)，1.2-1.3(4H，m)，1.8-1.9(2H，m)，2.0(3H，s)，2.3-2.45(4H，m)，2.7-2.85(3H，m)，3.5-3.53(4H，m)，4.0-4.05(2H，m)，5.4(1H，brs)，6.0(1H，brs)，7.45(2H，d)，7.75(2H，d)，9.2(1H，brs)，10.7(1H，brs)，11.7(1H，brs)	3.33	I-74	558.3		3.49
I-75	571.9		3.33	I-76	558.3	(d6-DMSO，400MHz)2.10(3H，s)，2.2-2.3(2H，m)，3.45-3.65(3H，m)，5.32(0.5H，s)，5.5(0.5H，s)，5.55(1H，brs)，5.8(1H，vbrs)，7.6(2H，d)，7.65-7.9(5H，m)，9.25(1H，s)，10.8(1h，s)，11.65(1H，s)	3.49
I-77	561.54	(d6-DMSO，400MHz)1.35(2H，m)，1.62(6H，m)，1.90(4H，m)，2.10(6H，m)，2.40(4H，m)，2.88(2H，t)，3.20(2H，m)，3.48(1H，m)，3.61(2H，m)，4.23(2H，d)，5.53(1H，s)，6.20(1H，br s)，7.55(2H，d)，7.79(2H，d)，9.34(1H，s)，9.55(1H，s)，10.11(1H，s)	3.34	I-76	558.3		3.49
I-77	561.54		3.34	I-78	496.2	(d6-DMSO，400MHz)2.03(3H，s)，2.2-2.3(2H，m)，3.45-3.65(5H，m)，5.32(0.5H，s)，5.5(1.5H，s)，5.85(1H，vbrs)，7.58(2H，d)，7.72(2H，d)，9.21(1H，s)，10.5(1H，s)，11.65(1H，s)	3.32
I-79	550.22	(d6-DMSO，400MHz)1.53(4H，m)，2.02(3H，s)，3.29(2H，q)，3.47(4H，m)，3.88(4H，s)，5.53(1H，br s)，5.82(1H，br s)，7.47(2H，d)，7.58(2H，d)	3.46	I-78	496.2		3.32
I-79	550.22		3.46	I-80	508.21	(d6-DMSO，400MHz)1.29(2H，m)，1.70(2H，m)，2.03(3H，s)，3.04(2H，m)，3.58(2H，q)，3.76(3H，m)，5.49(1H，s)，6.06(1H，br s)，7.53(2H，d)，7.68(2H，d)，9.27(2H，d)，10.49(1H，s)	3.17
I-81	510.29	(d6-DMSO，400MHz)2.02(3H，s，CH3)，2.33(2H，m，alk)，3.26-3.33(3H，m，alk)，3.41-3.45(H，m，alk)，3.50-3.58(3H，m，alk)，5.32(H，brs，alk)。5.45-5.47(2H，2xs，alk，ar)，5.8(H，brs，ar)，7.51-7.54(2H，d，ar)，7.68-7.70(2JH，d，ar)，9.37(s，NH)和10..31(H，s，NH)	3.35	I-80	508.21		3.17

化合物编号	M+1(测得值)	¹H NMR	Rt(分钟)
化合物编号	M+1(测得值)	¹H NMR	Rt(分钟)	I-82	597.33	(d6-DMSO，400MHz)1.44(2H，m)，2.01(5H，br s)，2.84(2H，t)，3.56(4H，q)，4.13(4H，d)，5.46(1H，s)，6.10(1H，s)，7.54(2H，d)，7.69(2H，d)，9.26(1H，s)，10.50(1H，s)	3.59
I-83	533.4	(d6-DMSO，400MHz)0.10(2H，m)，0.31(2H，m)，0.85(1H，m)，1.24(2H，m)，1.58(4H，m)，1.75(2H，d)，1.89(2H，s)，2.09(3H，m)，2.63(6H，m)，3.84(2H，d)，4.01(1H，s)，7.27(2H，d)，7.45(2H，d)，8.98(1H，s)，9.79(1H，s)	3.01	I-82	597.33		3.59
I-83	533.4		3.01	I-84	528.24	(d6-DMSO，400MHz)1.96(4H，m)，2.01(3H，s)，3.50(6H，m)，5.46(1H，s)，6.04(1H，br s)，7.55(2H，d)，7.66(2H，d)，9.31(1H，s)，10.50(1H，s)	3.61
I-85	510.00	(d6-DMSO，400Mbz)d 1.09(3H，t)，1.15(9H，s)，1.25-1.35(2H，m)，1.65-1.69(2H，m)，2.01(3H，s)，2.34(2H，q)，3.02(2H，t)，3.67-3.72(1H，m)，3.78-3.81(2H，m)，5.44(1H，s)，6.04(1H，brs)，7.47(2H，d)，7.69(2H，d)，9.17(1H，s)，10.07(1H，s)，11.70(1H，s)	3.76	I-84	528.24		3.61

实施例17：Aurora-2(Aurora A)抑制作用分析

[00179]使用标准偶合酶分析法(Fox等人，Protein Sci.，(1998)7，2249)针对它们抑制Aurora-2的能力筛选化合物。分析是在100mMHepes(pH7.5)、10mM MgCl₂、1mM DTT、25mM NaCl、2.5mM磷酸烯醇丙酮酸、300μM NADH、30μg/ml丙酮酸激酶和10μg/ml乳酸脱氢酶的混合物中进行的。在该分析中的最终底物浓度为400μM ATP(Sigma Chemicals)和570μM肽(Kemptide，AmericanPeptide，Sunnyvale，CA)。分析是在30℃下并在40nM Aurora-2的存在下进行的。

[00180]制备分析贮备缓冲溶液，其含有以上所列所有试剂，除了Aurora-2和目的测试化合物。将55μl的贮备溶液置于96孔板中，接着添加2μl的含有系列稀释的测试化合物的DMSO贮备液(通常从7.5μM的最终浓度开始)。在30℃下将板预孵育10分钟，再通过添加10μl的Aurora-2引发反应。用Molecular DevicesSpectraMax Plus读板器经10分钟过程测定开始反应速率。IC50和Ki数据是使用Prism软件包(GraphPad Prism，3.0cx版本，Macintosh，GraphPad Software，San Diego California，USA)由非线性回归分析计算的。

[00181]发现化合物I-2至I-7、I-9至I-12、I-14至I-27、I-29至I-85的Aurora A激酶活性为≤10nM Ki。

[00182]发现化合物I-1、I-8、I-13、和I-28的Aurora A激酶活性为＞10nM Ki且≤50nM Ki。

实施例18：Aurora-1(Aurora B)抑制作用分析(放射测定法)

[00183]制备分析缓冲溶液，其组成为25mM HEPES(pH 7.5)、10mM MgCl₂、0.1％BSA和10％甘油。还含有1.7mM DTT和1.5mM肯普肽(Kemptide，LRRASLG)的22nM Aurora-B溶液是在分析缓冲液中制备的。向在96-孔板中的22μL的Aurora-B溶液中加入在DMSO中的2μl化合物贮备溶液，再使该混合物在25℃下平衡10分钟。通过添加在分析缓冲溶液中制备的16μl贮备[γ-³³P]-ATP溶液(～20nCi/μL)，至最终分析浓度为800μM，引发酶反应。3小时后通过添加16μL 500mM磷酸中止反应，结合到肽底物中的³³P的水平是通过以下方法测定的。

[00184]将磷酸纤维素96-孔板(Millipore，Cat no.MAPHNOB50)用100μL的100mM磷酸预处理，然后添加酶反应混合物(40μL)。使溶液浸泡到该磷酸纤维素膜上达30分钟，然后将板用200μL的100mM磷酸洗涤4次。向该干燥板的每个孔中加入30μL的Optiphase‘SuperMix’液体闪烁混合物(Perkin Elmer)，然后闪烁计数(1450 Microbeta Liq uid Scintillation Counter，Wallac)。非酶催化的背景放射活性水平是通过向对照孔中添加16μL的500mM磷酸来测定的，该对照孔中含有所有分析组分(其起使酶变性的作用)，然后添加[γ-³³P]-ATP溶液。酶催化的³³P结合是通过由每一抑制剂浓度下测定的计数减去平均背景计数来计算的。对于每个Ki测定，通常涵盖0-10μM化合物浓度范围的8个数据点是以一式双份获得的(DMSO贮备液是从10mM的起始化合物贮备液以连续1∶2.5系列稀释制备的)。使用Prism软件包(Prism 3.0，Graphpad Software，San Diego，CA)通过非线性回归法从起始速率数据计算Ki值。

[00185]发现化合物I-20、I-32、I-35、I-63、I-67、I-69至I-72、I-74、I-76、和I-78至I-80的Aurora B激酶活性为≤10nMKi。

[00186]发现化合物I-5至I-7、I-9、I-11、I-14至I-18、I-21、I-22、I-26、I-27、I-29、I-31、I-33、I-38至I-40、I-42至I-47、I-49、I-51、I-54、I-56至I-62、I-64至I-66、I-68、I-73、I-75、I-77、I-81、I-82、I-84和I-85的Aurora B激酶活性为＞10nM并且≤50nM Ki。

[00187]发现化合物I-1至I-4、I-8、I-10、I-12、I-13、I-19、I-23至I-25、I-28、I-30、I-34、I-36、I-37、I-41、I-48、I-50、I-52、I-53，I-55和I-83的Aurora B激酶活性为＞50nM Ki并且≤1uM Ki。

实施例19：微粒体稳定性分析

[00188]微粒体稳定性是通过由一系列物种(雄性CD-1小鼠、雄性Sprague-Dawley大鼠、雄性Beagle犬、雄性Cynomolgus猴和集群混合性别人)的微粒体中消耗-时间模式的生成来监测的。掺入了化合物的溶液是通过将在DMSO中的化合物贮备溶液稀释(通常为10mM)以得到在乙腈中的溶液(0.5mM)来制备的。使化合物(得到最终浓度为5μM)与最终反应混合物(1000μL)孵育，该最终反应混合物组成为肝微粒体蛋白(1mg/mL)和β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸、还原型(NADPH)-生成系统(RGS)[组成为2mM β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)、20.5mM异枸橼酸、0.5U的异柠檬酸盐脱氢酶/mL、30mM氯化镁和0.1M磷酸盐缓冲液(PB)pH 7.4]，存在0.1M PB(pH 7.4)。

[00189]通过将(250μL)的预孵育的RGS添加到预孵育的微粒体/VRT/PB混合物(在两种情况下预孵育均为10分钟，37℃)来引发反应。使样品在Eppendorf瓶(1.5ml)中孵育，该Eppendorf瓶在与多探头II HT Ex自动液体处理器连接的加热振荡器(DPC Micromix5(装置；排列(form)20，振幅4)上，该振荡器通过两个与盖(deck)固定并受Packard Manual Heater控制的板加热器被调整加热至37℃)。孵育0、2、10、30和60分钟之后液体处理器按程序(WinPREP软件)对该微粒体孵育混合物取样，再将等分样(100μL)转移到含有100μL冷却的甲醇的中止板(stop block)(96-孔板)中。通过添加适量体积的水性物/有机物(通常为100μL的50∶50甲醇∶水)来优化有机物在该中止混合物中的％，以用于分析。

[00190]分析之前，将该中止板置于振荡器(DPC Micromix 5；10min，排列(form)20，振幅5)上以沉淀出蛋白。然后将该板离心(Jouan GR412；2000rpm，15min，4℃)。然后将等分样品(200μL)转移至分析板，再次将该板离心(Jouan GR412；2000rpm，5min，4℃)，然后送去分析。消耗模式是通过由液相色谱法-串联质谱法(LC-MS/MS)监测VRT的消失来测定的。将样品注射(20μL；Agilent 1100液相色谱系统，装配有自动进样器)到分析柱中。流动相组成为水+0.05％(v/v)甲酸(A)和甲醇+0.05％(v/v)甲酸(B)。

[00191]运行针对目的化合物优化的梯度方法，使化合物从分析柱中洗脱。总运行时间为6分钟，流速为0.35mL/min。在运行的0.5至5.9min之间，使全部的柱流出液进入Micromass Quattro LC串联质谱仪的电喷射离子化源(正模式)。针对目的的化合物优化质谱分析法。所有孵育均以一式双份进行，结果表示为：相对于0分钟样品，在30分钟或60分钟时的％母体残余(parent remaining)。

[00192]发现以下化合物与人肝微粒体孵育30分钟后有＞50％的母体残余：I-2、I-11、I-16、I-18至I-20、I-32、I-34、I-35、I-40、I-43、I-47至I-50、I-53至I-57、I-60、I-62至I-65、I-67、I-70至I-78、I-80、I-81和I-83。

[00193]发现以下化合物与人肝微粒体孵育60分钟后有＞50％的母体残余：I-7、I-11、I-18至I-20、I-26、I-31至I-35、I-41、I-47、I-49、I-51、I-53、I-54、I-56、I-57、I-59、I-65、I-68、I-71、I-73、I-74、I-76至I-78、I-81和I-83。

实施例20：细胞增生的分析

[00194]使用得自ECACC的Colo205细胞并使用下文所示的分析法针对它们抑制细胞增生的能力筛选化合物。

[00195]将Colo205细胞种于96孔板，再将连续稀释的化合物加至孔中，一式双份。对照组包括未处理细胞、化合物稀释剂(仅0.1％DMSO)和无细胞的培养基。然后使细胞在37℃下在5％CO₂/95％湿度的气氛中孵育72或96小时。

[00196]为了测定增生，在试验结束前3h，将0.5μCi的3H胸腺嘧啶核苷加至各孔中。然后收集细胞，再将掺入的放射性在Wallac微量培养板β-计数器上计数。使用Prism 3.0(GraphPad)或SoftMax Pro 4.3.1LS(Molecular Devices)软件计算剂量反应曲线。

[00197]下列化合物在72小时之后的IC50值≤25nM：I-56、I-59和I-63至I-74。

[00198]下列化合物在72小时之后的IC50值＞25nM并且≤125nM：I-26、I-27、I-41、I-53和I-75至I-84。

[00199]下列化合物在96小时之后的IC50值≤50nM：I-36至I-62。

[00200]下列化合物在96小时之后的IC50值＞50nM并且≤200nM：I-8至I-35。

[00201]下列化合物在96小时之后的IC50值＞200nM并且≤1uM：I-1至I-7和I-85。

实施例21：Abl激酶活性抑制分析和抑制常数Ki的测定

[00202]使用标准偶合酶系统(Fox等人.，Protein Sci.，7，pp.2249(1998))针对化合物抑制N-末端截短的(Δ27)Abl激酶活性的能力筛选化合物。在含有100mM HEPES(pH 7.5)、10mM MgCl₂、25mM NaCl、300μM NADH、1mM DTT和3％DMSO的溶液中进行反应。在该分析中的最终底物浓度为110μM ATP(SigmaChemicals，St Louis，MO)和70μM肽(EAIYAAPFAKKK，American Peptide，Sunnyvale，CA)。在30℃下和21nM Abl激酶中进行反应。偶合酶系统的各组分最终浓度为2.5mM磷酸烯醇丙酮酸、200μM NADH、60μg/ml丙酮酸激酶和20μg/ml乳酸脱氢酶。

[00203]制备分析贮备缓冲溶液，除了ATP和目的测试化合物外，其含有上面所列的所有试剂。使分析贮备缓冲溶液(60μl)在含有2μl目的测试化合物的96孔板中在30℃下孵育10min，该测试化合物最终浓度通常为0.002μM至30μM。通常，在子体(daughter)板中，通过用DMSO系列稀释(从1mM化合物贮备液)测试化合物制备12点滴定。通过添加5μl的ATP(最终浓度110μM)引发反应。在30℃下使用Molecular Devices Spectramax板读数器(Sunnyvale，CA)经10min获得反应速率。使用非线性回归以抑制剂浓度的函数从剩余速率数据测定Ki值(Prism 3.0，Graphpad Software，San Diego，CA)。

[00204]发现化合物I-4、I-18、I-24、I-29、I-38、I-39、I-46、I-52、I-53、I-57、I-60、I-68和I-78抑制Abl激酶的Ki值为＜25nM。

[00205]发现化合物I-7、I-12、I-27、I-41、I-42、I-63、I-65、I-69、I-71、I-80和I-81抑制Abl激酶的Ki值为≥25nM并且≤100nM。

实施例22：突变体Abl激酶(T315I)活性抑制分析和抑制常数IC50的测定

[00206]在Upstate细胞信号溶液(Dundee，UK)中针对化合物抑制人Abl的T315I突变体形式的能力筛选化合物。在25μl的最终反应体积中，使人Abl的T315I突变体(5-10mU)与8mM MOPS pH7.0、0.2mM EDTA、50μM EAIYAAPFAKKK、10mM乙酸镁、[γ-³³P-ATP](比活性约500cpm/pmol，10mM的最终分析浓度)以及最终浓度范围为0-4μnM的目的测试化合物孵育。通过添加MgATP混合物引发反应。在室温下孵育40分钟之后，通过添加5μl的3％磷酸溶液中止反应。然后将10μl的反应物点样到P30过滤垫上，再在75mM磷酸中洗涤3次达5分钟，并在甲醇中洗涤1次，然后干燥，再闪烁计数。根据残余酶活性作为抑制剂浓度的函数的非线性回归分析测定抑制作用IC50值(Prism 3.0，GraphpadSoftware，San Diego，CA)。

[00207]发现化合物I-7、I-27、I-29、I-41、I-53、I-63、I-65、I-68、I-69、I-71、I-72、I-78、I-80和I-81抑制突变体Abl激酶(T315I)激酶的Ki值为＜200nM。

[00208]发现化合物I-18、I-42、I-55、I-61和I-82抑制突变体Abl激酶(T315I)激酶的Ki值为≥200nM并且≤500nM。

[00209]虽然我们描述了本发明的许多实施方案，显然，可以改变我们的基本的实施例以提供使用或包含本发明化合物、方法、过程的其它实施方案。因此，可以理解，本发明范围应由所附权利要求来定义。

Claims

1.式I的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

R²是H、C_1-3烷基或环丙基；

R²’是H；

Q是-O-、-S-或-C(R’)₂-；

R^X是H或F；

R^Y是

J¹是F、NR⁴R⁵、CN、OR⁶、氧代(＝O)或任选被1次出现的OH或OCH₃取代的C_2-6烷基；

n是1或2；

R⁴是H、C_1-5烷基或C_3-6环烷基；

R⁵是C_1-5烷基或C_3-6环烷基；

R⁶是H、C_1-4烷基或C_3-6环烷基；其中所述C_1-4烷基或C_3-6环烷基任选被1-3个氟原子取代；

J^R是F或R⁷；

各J³独立地是卤素、C_1-6烷基、-O-(C_1-6烷基)、-S-(C_1-6烷基)、硝基或CN，其中所述C_1-6烷基任选被0-3个氟原子取代；或者两个J³基团与它们所连接的碳原子一起形成含有0-1个选自O、N和S的杂原子的3-5元单环基团；

2.权利要求1的化合物，其中Q是S。

3.权利要求1或权利要求2的化合物，其中R^X是H。

4.权利要求1-3任一项的化合物，其中R²是C_1-3烷基或环丙基。

5.权利要求4的化合物，其中R²是C_1-3烷基。

6.权利要求1-5任一项的化合物，其中R²’是H。

7.权利要求1-6任一项的化合物，其中R¹是苯基。

8.权利要求7的化合物，其中Ht是

9.权利要求7的化合物，其中Ht是

1O.权利要求8或权利要求9的化合物，其中n是1。

11.权利要求8或权利要求9的化合物，其中n是2。

12.权利要求10或权利要求11的化合物，其中各J²独立地是C_1-6烷基、F、NR⁴R⁵、CN或OR⁶。

13.权利要求10或权利要求11的化合物，其中两个J²基团与它们所连接的原子一起形成含有1-2个选自N或O的杂原子的4-7元杂环；其中所述环任选被0-3个J^R取代。

14.权利要求12或权利要求13的化合物，其中R¹在对位被取代。

15.权利要求14的化合物，其中R¹任选被1次出现的-NHC(O)R³取代。

16.权利要求15的化合物，其中R³是C_1-6脂肪族基团，其中所述R³任选被0-6个J³取代。

17.权利要求16的化合物，其中R³是-CH₂CH₃、-CH₂CF₃、-CH₂CH₂CF₃、环丙基或

18.权利要求15的化合物，其中R³是苯基。

19.权利要求18的化合物，其中R³在邻位被J³取代。

20.权利要求19的化合物，其中J³是卤素、-CF₃、C_1-3烷基、-S-(C_1-3烷基)或OCF₃。

21.权利要求1-9、14-20任一项的化合物，其中

R^Y是

n是2；并且

两个J²基团与它们所连接的原子一起形成含有1-2个选自N或O的杂原子的4-7元杂环；其中所述环任选被0-3个J^R取代。

22.权利要求21的化合物，其中所述的两个J²基团与它们所连接的原子一起形成含有1-2个选自N或O的杂原子的4-7元螺环杂环；其中所述环任选被0-3个J^R取代。

23.权利要求21的化合物，其中所述的两个J²基团与它们所连接的原子一起形成含有1个选自N或O的杂原子的5元螺环杂环；其中所述环任选被0-3个J^R取代。

24.权利要求23的化合物，其中所述的两个J²基团与它们所连接的原子一起形成含有1个N杂原子的5元螺环杂环；其中所述环任选被0-3个J^R取代。

25.权利要求24的化合物，其中所述的两个J²基团与它们所连接的原子一起形成含有1个N杂原子的5元螺环杂环；其中所述环任选被1个J^R取代。

26.权利要求25的化合物，其中J^R是R⁷并且R⁷是C_1-6烷基。

27.权利要求26的化合物，其中R¹是苯基并且R¹被0-4次出现的-NHC(O)R³取代。

28.权利要求27的化合物，其中R³是C_1-6烷基。

29.权利要求27的化合物，其中R³是环丙基。

30.权利要求25的化合物，其中R^Y是

31.权利要求30的化合物，其中R^Y是

32.权利要求31的化合物，其中J^R是CH₃。

33.权利要求30-32任一项的化合物，其中R¹是

34.权利要求33的化合物，其中R³是C_1-6脂肪族基团。

35.权利要求34的化合物，其中R³是乙基或环丙基。

36.权利要求1-9任一项的化合物，其中

R^Y是

n是1；

J¹是F；

R¹被1次出现的-NHC(O)R³取代；

R³是C_1-6脂肪族基团，其中所述R³被0-6个J³取代；

各J³是卤素。

37.根据权利要求36的化合物，其中R^Y是

38.根据权利要求37的化合物，其中R^Y是

39.根据权利要求36-38任一项的化合物，其中R³是CH₂CF₃或CH₂CH₂CF₃。

40.根据权利要求36-38任一项的化合物，其中R³是乙基或环丙基。

41.根据权利要求39的化合物，其中R³是CH₂CF₃。

42.权利要求1-9任一项的化合物，其中

R^Y是

n是1；

J¹是NR⁴R⁵；

R¹被1次出现的-NHC(O)R³取代；

R³是C_1-6脂肪族基团，其中所述R³被0-6个J³取代；

各J³是卤素。

43.根据权利要求41的化合物，其中R^Y是

44.根据权利要求42的化合物，其中R^Y是

45.根据权利要求42-44任一项的化合物，其中R³是CH₂CF₃或CH₂CH₂CF₃。

46.根据权利要求42-44任一项的化合物，其中R³是乙基或环丙基。

47.根据权利要求45的化合物，其中R³是CH₂CF₃。

48.权利要求1的化合物，其中所述化合物选自以下化合物：

49.一种组合物，其包含式I的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中的变量具有权利要求1-48任一项中所定义的含义。

50.抑制生物样品中的Aurora蛋白激酶活性的方法，该方法包括使所述生物样品与式I化合物接触：

51.治疗患者中增生性障碍的方法，该方法包括给所述患者施用式I化合物的步骤：

52.根据权利要求49的方法，其中所述增生性障碍是癌症。

53.根据权利要求49的方法，其中所述增生性障碍选自黑素瘤、骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、成神经细胞瘤，或者选自以下的癌症：结肠癌、乳腺癌、胃癌、卵巢癌、宫颈癌、肺癌、中枢神经系统(CNS)癌、肾癌、前列腺癌、膀胱癌、胰腺癌、脑癌(神经胶质瘤)、头颈癌、肾癌、肝癌、黑素瘤、肉瘤或甲状腺癌。

54.根据权利要求51-53的方法，其进一步包括依次或共同给予治疗剂。

55.根据权利要求54的方法，其中所述治疗剂选自紫杉烷类、bcr-abl的抑制剂、EGFR的抑制剂、DNA损伤剂和抗代谢药。

56.根据权利要求54的方法，其中所述治疗剂选自紫杉醇、格列卫、达沙替尼、尼罗替尼、特罗凯、易瑞沙、顺铂、奥沙利铂、卡铂、蒽环类、AraC和5-FU。

57.根据权利要求54的方法，其中所述治疗剂选自喜树碱、多柔比星、伊达比星、顺铂、紫杉醇、泰索帝、长春新碱、特罗凯、MEK抑制剂、U0126、KSP抑制剂、伏林司他、格列卫、达沙替尼和尼罗替尼。

58.根据权利要求54的方法，其中所述治疗剂是达沙替尼。

59.根据权利要求54的方法，其中所述治疗剂是尼罗替尼。