BRPI0214872B1 - unidade peptídica e multipeptídica, método ex vivo para detectar auto-anticorpos de pacientes sofrendo de artrite reumatoide e para seleção de um peptídeo adequado para o diagnóstico da referida doença, e kit de diagnóstico - Google Patents
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Abstract
"métodos de detectar auto-anticorpos de pacientes sofrendo de artrite rumatóide, peptídeo e kit de ensaio". a presente invenção refere-se ao método de detectar auto-anticorpos de pacientes sofrendo de artrite reumatóide. para esta finalidade, de acordo com a invenção, pelo menos duas unidades peptídicas são usadas, das quais pelo menos uma unidade peptídica compreende uma parte não derivada de (pro)filagrina, fibrina, fibrinogênio, vimentina, citoceratina 1 e citoceratina 9, e unidade peptídica esta que compreende o motivo xg, e uma unidade peptídica compreendendo o motivo xnong, em que x é uma citrulina ou um análogo da mesma, e nong é um aminoácido diferente da glicina.
Description
Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "UNIDADE PEPTÍDICA E MULTIPEPTÍDICA, MÉTODO EX VIVO PARA DETECTAR AUTO-ANTICORPOS DE PACIENTES SOFRENDO DE ARTRITE REUMATOIDE E PARA SELEÇÃO DE UM PEPTÍDEO ADEQUADO PARA O DIAGNÓSTICO DA REFERIDA DOENÇA, E KIT DE DIAGNÓSTICO". A presente invenção refere-se a um método de detectar auto-anticorpos de pacientes sofrendo de artrite reumatóide, usando um peptídeo compreendendo um resíduo de citrulina ou seu análogo.
Um tal método é conhecido do pedido de patente internacional PCT/NL97/00624. Esta publicação descreve o uso de peptídeos derivados de fila-grina, e que compreendem a citrulina ou um seu análogo para a detecção de auto-anticorpos de pacientes sofrendo de artrite reumatóide. Os peptídeos usados são, portanto, adequados para aplicações diagnosticas, e comparados com até então, tomam possível uma detecção mais segura. Mais em particular, isto diz respeito a uma diminuição nos falsos positivos, isto é, uma especificidade maior. Além disso, a sensibilidade é relativamente alta. Um peptídeo, indicado como cfc1, foi reconhecido por 36% dos soros de pacientes sofrendo de artrite reumatóide. A variante cíclica do peptídeo pareceu ser reconhecida ainda melhor (63%).
Um método de acordo com o preâmbulo é também conhecido do pedido de patente internacional PCT/FR00/01857. Esta publicação descreve o uso de peptídeos derivados de fibrina ou fibrinogênio, e que compreendem a citrulina ou um análogo da mesma para a detecção de auto-anticorpos de pacientes sofrendo de artrite reumatóide. O PCT/EP98/07714 descreve o uso de peptídeos sintéticos derivados de (pro)filagrina para a diagnose de artrite reumatóide. Este pedido também descreve peptídeos sintéticos derivados de vimentina humana, cito-ceratina 1, citoceratina 9 e outras proteínas de filamentos intermediárias.
Entretanto, os métodos acima mencionados ainda somente detectam um número limitado de todos os pacientes sofrendo de artrite reumatóide. Portanto, há uma forte necessidade por um método pelo qual possa ser obtida uma sensibilidade aumentada, ao mesmo tempo mantendo uma especificidade substancialmente igual ou mesmo melhorada.
Afim de atingir este objetivo, a presente invenção proporciona um método como mencionado no preâmbulo, método este que é caracterizado pelo fato de que os ditos auto-anticorpos são contatados com uma unidade peptídica compreendendo o motivo XG, e uma unidade peptídica compreendendo o motivo XnonG, em que X é um resíduo de citrulina ou um seu análogo, G é o aminoácido glicina e nonG é um aminoácido diferente da gli-cina.
As experiências descritas abaixo mostraram que os soros obtidos de pacientes sofrendo de artrite reumatóide contêm duas populações diferentes de anticorpos. Uma população é reativa com as unidades peptídi-cas XG, tal como foi descrito na literatura pré-publicada acima mencionada. A população pode, em parte, ser detectada com as unidades peptídicas XG pré-publicadas e, para uma parte ainda maior, quando usando as unidades peptídicas de acordo com a presente invenção. A outra população de anticorpos reage com as unidades peptídicas XnonG. Até agora, esta população de anticorpos não tinha ainda sido observada como tal na literatura pré-publicada. Conforme descrito abaixo em mais detalhe, a maior parte dos soros de pacientes sofrendo de artrite reumatóide compreende ambas as populações de anticorpos. Conseqüentemente, estes soros podem ser detectados por meio de um teste diagnóstico compreendendo uma unidade peptídica XG ou uma XnonG. Parece, entretanto, que uma parte significativa dos soros de pacientes sofrendo de artrite reumatóide compreende somente uma das duas populações. Portanto, os soros que compreendem anticorpos para a unidade peptídica XnonG somente não são, ou somente para uma parte muito pequena, detectados com os testes diagnósticos como descritos na literatura publicada acima mencionada. Uma grande parte destes soros pode agora ser detectada se o teste diagnóstico compreender uma unidade peptídica XnonG. Um método diagnóstico aperfeiçoado de acordo com a presente invenção, portanto, compreende pelo menos um peptídeo XG e um XnonG. Assim, o teste diagnóstico de acordo com a invenção pode ser 20% mais sensível do que um teste de acordo com a literatura publicada.
Foram obtidos resultados particularmente bons quando a unidade peptídica com o motivo XnonG compreendeu uma parte não derivada de proteínas naturais, tais como a (pro)filagrina humana, a fibrina, ou o fibrino-gênio, bem como as proteínas relacionadas vimentina, e citoceratina 1 e ci-toceratina 9 ou outras proteínas de filamentos intermediárias relacionadas.
Surpreendentemente foi mostrado que, quando combinando tais peptídeos XnonG não derivados de proteínas naturais com os peptídeos XG de acordo com a invenção, foi obtido um método diagnóstico mais aperfeiçoado. Mais em particular, o uso de uma tal combinação de unidades peptí-dicas no método de acordo com a presente invenção proporciona um método diagnóstico de uma sensibilidade muito grande, ao mesmo tempo mantendo uma excelente especificidade. Isto é ainda mais surpreendente, visto que a literatura publicada acima mencionada é ainda baseada na idéia que os auto-anticorpos de pacientes com RA reagiam especialmente bem com peptídeos derivados de proteína de ocorrência natural, tal como a (pro)filagrna, a fibrina, o fibrinogênio, a vimentina, a citoceratina 1 ou a citoceratina 9. O PCT/EP98/07714, por exemplo, descreve um peptídeo XnonG derivado de filagrina (IPG1249). Ele é reativo cruzado com 3,3% dos soros de pacientes com SLE e tem uma homologia de 82% com a filagrina. São obtidos bons resultados quando a unidade peptídica com o motivo XnonG compreende um tri-peptídeo, no qual o aminoácido central é a citrulina ou um seu análogo, e que uma seleção é preferivelmente feita a partir de XXK, XXY, KXI, MXR, RXY, WXK, MXH, VXK, NXR, WXS, RXW, YXM, IXX, XXF, RXH, TXV, PXH, AXF, FXR, YXF, LXM, LXY, YXP, HXS e PXW.
De preferência, nonG é um aminoácido selecionado de Η, I, W, S, R, K, Y, M, F, V, P, Cit ou um análogo destes. Conforme mostrado nas experiências abaixo, tais unidades peptídicas XnonG são muito eficazes. A unidade peptídica compreendendo o motivo XG pode ou não ser derivada de (pro)filagrina, fibrina, fibrinogênio, vimentina, citoceratina 1 ou citoceratina 9, e efetivamente o cfc1 conhecido do PCT/NL97/00624.
Neste contexto, o termo aminoácido inclui os aminoácidos tanto naturais quanto não-naturais, bem como os aminoácidos tendo uma configuração D ou uma configuração L.
No presente pedido, um aminoácido não-natural é entendido ser um aminoácido do tipo que ocorre em um peptídeo retroinverso, retropeptí-deo, um peptídeo em que a cadeia lateral está localizada sobre o átomo de nitrogênio da amida do esqueleto peptídico, e um peptídeo em que um CO do esqueleto peptídico é substituído por 2, 3 ou preferivelmente um único grupo -CH2- (pseudopeptídeo).
Os aminoácidos também podem ser modificados. Por exemplo, os grupos ácidos carboxílicos podem ser esterificados ou podem ser convertidos em uma amida, e um grupo amino pode ser alquilado, por exemplo metilado. Alternativamente, os grupos funcionais sobre o peptídeo podem ser providos com um grupo protetor ou uma marca (por exemplo, uma marca fluorescente ou radioativa). Os grupos amino e os grupos ácidos carboxílicos nos peptídeos podem estar presentes na forma de um sal formado por utilização de um ácido ou uma base. Se os peptídeos sintéticos forem usados, é muito simples preparar todos os tipos de variantes que incidem no escopo da invenção que podem ser usados. Por exemplo, os grupos laterais aromáticos, tais como de fenilalanina e tirosina, podem ser halogenados com um ou mais átomos de halogênio. As modalidades de peptidomiméticos e orga-nomiméticos também incidem no escopo da invenção e a sua aplicação no método de acordo com a invenção. Em vez de um resíduo Cit, é também possível usar um análogo do mesmo, tal como aqueles representados na Fig. 1 na forma do aminoácido. Tais análogos e a sua preparação são conhecidos para a pessoa versada na técnica. Por exemplo, Sonke et al., em Stereoselective Biocatalysís (2000), pp. 23-58, e Greene: Protective groups in Organic synthesis (Wiley, New York 1999). De acordo com uma modalidade favorável, as cadeias laterais dos análogos de citrulina têm a fórmula (I): (0 em que Q = NH2i CH3i NHCH3 ou N(CH3)2; V = O, NH, ou NCH3; Z = O, NH ou CH2; e n = 2, 3 ou 4: nas condições que se Q = NH2 e Z = NH, Y não seja NH.
Neste contexto, uma unidade peptídica é entendida ser um peptídeo que é pelo menos 7 aminoácidos comprido. As unidades peptídicas podem ter uma ou mais cadeias laterais. Também, as unidades peptídicas ou as extremidades terminais da unidade peptídica podem ser acetiladas, glicosiladas, alquiladas, ou fosforiladas independentemente uma da outra.
Uma unidade peptídica neste contexto é indicada como não derivada de (pro)filagrina, fibrina, fibrinogênio, vimentina, citoceratina 1 ou cito-ceratina 9 e outras proteínas de filamentos intermediárias se a homologia (a similaridade da seqüência de aminoácidos) a estas proteínas for menos do que 80%, mais preferivelmente menos do que 75%, tal como menos do que 70% ou 65%, e mais preferivelmente menos do que 60%, tal como menos do que 55% ou 50%. As unidades peptídicas mostradas na Tabela 5, que não são derivadas de (pro)filagrina, fibrina, fibrinogênio, vimentina, citoceratina 1 e citoceratina 9, têm uma homologia entre 15 e 45%. No exame da homologia, a arginina, a citrulina e os análogos de citrulina são considerados serem equivalentes (idênticos).
As unidades peptídicas compreendendo XG e XnonG podem ou não ser parte da mesma molécula. Isto será atacado posteriormente. Para realizar um ensaio de detecção, as unidades peptídicas podem ser ligadas a um veículo e opcionalmente providas com uma marca. O complexo pode ser detectado em qualquer maneira bem-conhecida para a pessoa comum versada na técnica. O complexo pode ser detectado indiretamente, por exemplo no caso de um ensaio de competição, em que o complexo propriamente dito não é marcado. A reação com as duas unidades peptídicas pode ocorrer simultânea ou sucessivamente e no mesmo recipiente (tal como uma cavidade de uma placa de microtítulo) ou em diferentes recipientes.
Este pedido não é pretendido como uma publicação educacional sobre como tornar uma pessoa versada na técnica. Ele está, portanto, limitado a proporcionar informação suficiente para capacitar a pessoa comum versada na técnica a entender a invenção, e a trabalhá-la, e a entender o escopo de proteção.
De preferência, as unidades peptídicas são reconhecidas por pelo menos 2 de 100 soros aleatórios de pacientes com RA reconhecidos. Obviamente, é preferido usar as unidades peptídicas que sejam reconhecidas por uma porcentagem consideravelmente mais alta, preferivelmente pelo menos 30%. O número de unidades peptídicas em um método de acordo com a invenção é preferivelmente 2 ou maior do que 2.
De preferência, a invenção refere-se a um método como mencionado acima, em que a unidade peptídica com o motivo XG e a unidade peptídica com o motivo XnonG são reconhecidas juntas por pelo menos 10% da série de soros dos pacientes. Obviamente, são preferidas as combinações de unidades peptídicas resultando em maiores sensibilidades. Com algumas combinações de unidades peptídicas como descritas neste documento, podem ser realizados testes diagnósticos com sensibilidades de 40, 60, 70, 80 ou mesmo 85 e mais do que 90%.
Foi mostrado que a sensibilidade da detecção pode ser adicionalmente aumentada se pelo menos uma das unidades peptídicas for uma unidade peptídica cíclica. A unidade peptídica com o motivo XG e a unidade peptídica com o motivo XnonG são preferivelmente parte de um multipeptídeo. No contexto da presente invenção, um multipeptídeo é uma molécula compreendida de pelo menos duas unidades peptídicas antigênicas, isto é combinações de unidades peptídicas que podem ou não ser ligadas por uma ligação cova-lente. Tais multipeptídeos pode ser compreendidos de unidades peptídicas lineares, ramificadas, cíclicas ou uma combinação destas. Os multipeptídeos podem ser compreendidos tanto de unidades peptídicas tendo a mesma se-qüência de aminoácidos, quanto de unidades peptídicas tendo diferentes seqüências de aminoácidos. Um multipeptídeo de acordo com a invenção compreende pelo menos 7, preferivelmente pelo menos 10 aminoácidos, isto é as unidades peptídicas podem sobrepor-se. Nem é preciso dizer que os motivos XG e XnonG não podem sobrepor-se. A invenção também refere-se a uma unidade peptídica XnonG, muito útil para o método de acordo com a presente invenção, compreendendo uma seqüência com a fórmula (II): (A1 -A2-A3-A4-A5)-Cit-(A6)-(A7-A8-A9-A10-A11) (II) em que - A1-A2-A3-A4-A5 é uma seqüência de aminoácidos selecionada de -RHGRQ
- IRCitYK - HGRQCit - GRQCitCit - FQMCitH
- CitWRGM
- ARFQM
- QCitYKW
- KPYTV
- RNLRL
- RRRCitY
- RFKSN -RGKSN
- RWVSQ
- MKPRY
- KSFVW
- YSFVW
- FQMRH -RNMNR -RMGRP e as suas seqüências homólogas; - A7 um aminoácido diferente da glicina; - A7-A8-A9-A10-A11 uma seqüência de aminoácidos selecionada de - ΚΥΙΙΥ -TNRKF
- KWCitKI
- CitRAVI
- RCitGHS
- CitGRSR
- CitYIIY
- CitRLIR
- IERKR -FMRKP -FMRRP -ERNHA
- AVITA
-TPNRW -TYNRW
- RTPTR
- RIVW
-HARPR
- RGMCitR
- IRFPV e as suas seqüências homólogas; bem como os análogos funcionais do peptídeo com a fórmula (II). A invenção também refere-se a uma unidade peptídica XnonG, muito útil para o método de acordo com a presente invenção, compreendendo uma seqüência com a fórmula (III): (B1 -B2-B3-B4-B5-B6)-Cit-(B7)-(B8-B9-B10-B11) (III) em que - B1-B2-B3-B4-B5-B6 é uma seqüência de aminoácidos selecionada de - INCitRAS
- ICitKRLY
- KCitCitYNI - RLYFICit - IRQGAR
- CitERCitVQ
- CitHQRIT
- RICitRVCit -GRNQRY
- RCitRQHP
- CitCitRCitVA
- RPKQHV
- RKCitGCitR
- RCitCitRNT
- RCitQCitFT
- QLVYLQ -QYNRFK
- CitLRHIR
- PRCitCitCitK
- RCitQVRY
- GRCitHAH
- ARHVIR
- RCitGHMF
- GRNIRV - QIFYLCit - RQGPIA
- GVYLVR
- NCitCitRRV
- KCitRLCitY
- GRRCitCitL
- RMPHCitH e as suas seqüências homólogas; - B7 é um aminoácido diferente da glicina; - B8-B9-B10-B11 uma seqüência de aminoácidos selecionada de - CitHRR
- CitIRR
- FRRN
- AQTT
- GYPK
- RPPQ
- GCitRK
- PIPR
- YTIH
- RIKA
- CitRVR
- TRRP
- TIRP
- IKCitR
- RNW
- CitRRY
- CitRPR - TRCitCit - CitCitGR - LCitRCit - RVRCit - VPRT
- YCitFR - ARCitCit - RQCitR
- HIRR
- CitMMR - CitRICit - VRKS
- PCitCitR
- CitRRK e as suas seqüências homólogas; bem como os análogos funcionais do peptídeo com a fórmula (III). O termo "seqüência homóloga", como usado em conexão com Α1-Α2-Α3-Α4-Α5, Α7-Α8-Α9-Α10-Α11, Β1-Β2-Β3-Β4-Β5-Β6 e Β8-Β9-Β10-Β11, significa que no máximo dois aminoácidos de cada sequência de ami-noácidos podem ser substituídos por outros tantos aminoácidos (incluindo a citrulina e/ou o seu análogo), no máximo dois aminoácidos (incluindo ou um seu análogo) podem ser introduzidos e no máximo dois aminoácidos podem estar ausentes. O termo "análogo", como usado em conexão com o peptídeo da fórmula (II) ou (III), significa que opcionalmente - um ou mais aminoácidos podem ter a configuração D, - uma ou mais cadeias laterais (diferentes daquela de citrulina ou um análogo da mesma) ou extremidades terminais do peptídeo podem ser acetiladas, glicosiladas, alquiladas, ou fosforiladas independentemente uma da outra, e - um ou mais aminoácidos podem ser substituídos por aminoácidos não-naturais. A6 e B7 (independente um do outro) são preferivelmente selecionados de Cit, Η, I, K, R, S, W, Y, M, F, V e P.
Os peptídeos preferidos específicos a serem usados no método de acordo com a invenção são caracterizados pelo fato de que eles compreendem pelo menos uma seqüência de peptídeos selecionada de RHG RQCitCitKYI I Y I RCitYKCitITN RKF R H G R Q Cit Cit Cit Y I I Y A R F Q M Cit H Cit R L I R Q Cit Y K W Cit K I E R K R KPYTVCitKFMRKP KPYTVCitKFMRRP RNLRLCitRERNHA R R R Cit Y Cit R A V I T A RFKSNCitRTPNRW RGKSNCitRTYNRW RFKSNCitRTYNRW RGKSNCitRTPNRW RWVSQCitRRTPTR MKPRYCitRRI VVV KSFVWCitSHARPR YSFVWCitSHARPR R N Μ N R Cit W R G M Cit R, e RMGRPCitWIRFPV bem como I N Cit R A S Cit K Cit H R R I Cit K R L Y Cit M Cit I R R K Cit Cit Y N I Cit Cit F R R N R L Y F I Cit Cit R A Q T T IRQGARCitRGYPK Cit E R Cit V Q Cit R R P P Q Cit H Q R I T Cit V G Cit R K R I Cit R V Cit Cit T P I P R GRNQRYCitLYTIH R Cit R Q Η P Cit H R I K A Cit Cit R Cit V A Cit F Cit R V R RPKQHVCitHTRRP R K Cit G Cit R Cit Cit T I R P R Cit Cit R N T Cit Η I K Cit R R Cit Q Cit F T Cit Cit R N V V Q L V Y L Q Cit Cit Cit R R Y Q Y N R F K Cit Cit Cit R P R Cit L R Η I R Cit Q T R Cit Cit P R Cit Cit Cit K Cit R Cit Cit G R R Cit Q V R Y Cit Cit L Cit R Cit G R Cit Η A H Cit P R V R Cit ARHVI RCitCitVPRT R Cit G Η M F Cit V Y Cit F R GRNI RVCit Cit AR Cit Cit Q I F Y L Cit Cit H R Q Cit R RQGPIACitLHIRR G V Y L V R Cit L Cit Μ M R N Cit Cit R R V Cit M Cit R I Cit K Cit R L Cit Y Cit P V R K S G R R Cit Cit L Cit R P Cit Cit R R Μ P H Cit H Cit S Cit R R K ou um seu análogo.
Os peptídeos XG adequados, a serem usados no método de acordo com a invenção, preferivelmente compreendem a seqüência com a fórmula (IV) (C1 -C2)-(C3-C4-C5)-X-G-C6-(C7-C8-C9-C10) (IV) em que C1-C2 é HQ, GF, EG ou GV; C3-C4-C5 representa 3 aminoácidos dos quais pelo menos 1, e preferivelmente 2 independentemente um do outro são básicos, aromáticos ou V; C6 é igual a um aminoácido básico ou aromático, ou igual a A, G, E, P, V, S ou Cit ou seu análogo; e C7-C8-C9-C10 é SRAA, SCitAA, RPLD, RWE ou PGLD; bem como os análogos do peptídeo com a fórmula (IV). O termo 'análogo', como usado em conexão com o peptídeo da fórmula (IV), significa que opcionalmente - um ou mais aminoácidos podem ter a configuração D, - uma ou mais cadeias laterais (diferentes daquela de citrulina ou um análogo da mesma) ou extremidades terminais do peptídeo independentemente uma da outra podem ser acetiladas, glicosiladas, alquiladas, ou fosforiladas, e - um ou mais aminoácidos podem ser substituídos por aminoácidos não-naturais.
Os exemplos específicos de peptídeos XG adequados para serem usados no método de acordo com a invenção compreendem uma seqüência selecionada de HQRKWCitGASRAA
HQHWRCitGASRAA
H Q F R F Cit G Cit S R A A
HQERRCitGESRAA
HQKWRCitGFSRAA
HQRWKCitGGSRAA
HQRRTCitGGSRAA
HQRRGCitGGSRAA
H Q Cit F R Cit G H S R A A
GFFSACitGHRPLD
HQERGCitGKSRAA
HQEKRCitGKSRAA
HQRWLCitGKSRAA
HQKRNCitGKSRAA
EGGGVCitGPRVVE
H Q W R H Cit G R S Cit A A
HQKWNCitGRSRAA
HQKFWCitGRSRAA
H Q K Cit K Cit G R S R A A
H Q K W R Cit G R S Cit A A
H Q A W R Cit G R S Cit A A
HQNQWCitGRSRAA
HQNSKCitGRSRAA
HQKRRCitGRSRAA
HQKRFCitGRSRAA
HQKRYCitGRSRAA
HQKRHCitGRSRAA
HQERACitGSSRAA
HQEKMCitGVSRAA
HQKRGCitGWSRAA
HQRRVCitGWSRAA
HQWNRCitGWSRAA
HQQRMCitGWSRAA
HQSHRCitGWSRAA
HQFRFCitGWSRAA
HQKRRCitGWSRAA
GVKGHCitGYPGLD ou um seu análogo.
Os peptídeos de acordo com a invenção são preferivelmente peptídeos cíclicos dos quais o anel compreende pelo menos 10 aminoáci-dos, e mais preferivelmente pelo menos 11 aminoácidos. A pessoa versada na técnica está inteirada com os diversos métodos para a preparação de peptídeos cíclicos e uma explicação adicional não é requerida.
De acordo com o método mais preferido da invenção, um peptí-deo XG é usado em combinação com pelo menos um peptídeo XnonG, em que o peptídeo XG é selecionado do grupo compreendido de: 0002-27 HQKRGCitGWSRAA
0002-29 HQRRVCitGWSRAA
0002-31 HQRRTCitGGSRAA
0002-32 HQRKWCitGASRAA
0002-36 H Q F R F Cit G Cit S R A A
0002-37 H Q K W R Cit G R S Cit A A
0002-63 HQFRFCitGWSRAA e o peptídeo XnonG é escolhido do grupo compreendido de: 0107-32 KPYTVCitKFMRRP 0107-35 A R F Q M Cit H Cit R L I R 0107-45 YSFVWCitSHARPR 0113-30 ARFQMRHCitRLIR 0218-36 RNLRLCitRERNHA
Dependendo da especificidade desejada e da sensibilidade do teste diagnóstico e da população respectiva de soro de artrite reumatóide sob exame, é selecionada uma combinação preferida de unidades peptídi-cas XG e XnonG a partir do grupo compreendido de: 0002-27 e 0107-32; 0002-27 e 0107-35; 0002-27 e 0107-45; 0002-27 e 0113-30; 0002-27 e 0218-36; 0002-29 e 0107-32; 0002-29 e 0107-35; 0002-29 e 0107-45; 0002-29 e 0113-30; 0002-29 e 0218-36; 0002-31 e 0107-32; 0002-31 e 0107-35; 0002-31 e 0107-45; 0002-31 e 0113-30; 0002-31 e 0218-36; 0002-32 e 0107-32; 0002-32 e 0107-35; 0002-32 e 0107-45; 0002-32 e 0113-30; 0002-32 e 0218-36; 0002-36 e 0107-32; 0002-36 e 0107-35; 0002-36 e 0107-45; 0002-36 e 0113-30; 0002-36 e 0218-36; 0002-37 e 0107-32;0002-37 e 0107-35; 0002-37 e 0107-45; 0002-37 e 0113-30; 0002-37 e 0218-36; 0002-63 e 0107-32; 0002-63 e 0107-35; 0002-63 e 0107-45; 0002-63 e 0113-30; 0002-63 e 0218-36.
As combinações acima mencionadas foram mostradas produzir um aumento médio na sensibilidade de 6%, levando a sensibilidade total de um tal teste de combinação de um peptídeo XG e um XnonG para 75 a 78%.
Os resultados descritos nos exemplos abaixo adicionalmente mostraram que as diversas unidades peptídicas também detectaram diferentes coortes de soros. Foi obtido um aumento adicional na sensibilidade por adição de uma terceira unidade peptídica ou mesmo uma quarta ou mais unidades peptídicas. Dependendo da combinação de unidades peptídicas selecionadas a partir dos grupos acima mencionados, um teste diagnóstico de acordo com a invenção permitiu que sensibilidades de 88-92% fossem atingidas. A invenção também refere-se a um multipeptídeo, caracterizado pelo fato de que ele é um multipeptídeo linear ou ramificado, compreendendo pelo menos duas seqüências de peptídeos lineares ou cíclicas selecionadas independentemente uma da outra de - uma unidade peptídica selecionada de unidades peptídicas com as fórmulas (II) e (III) e seus análogos; - uma unidade peptídica com a fórmula (IV) e seus análogos.
Um tal multipeptídeo é muito adequado para uso no método de acordo com a invenção. Ele torna possível realizar o método de modo mais simples e mais seguro, visto que os peptídeos são usados na mesma razão conhecida, e as operações extras durante o ensaio ou durante o trabalho preliminar (por exemplo, o revestimento de uma placa de microtítulo com o multipeptídeo) são evitadas. A invenção adicionalmente refere-se a um kit diagnóstico para determinar a presença de auto-anticorpos de pacientes sofrendo de artrite reumatóide, em que o kit diagnóstico compreende um peptídeo de acordo com uma das reivindicações 5 a 13, ou um multipeptídeo de acordo com a reivindicação 14, ou uma mistura destes, juntamente com pelo menos um reagente adicional. A invenção também se refere a um peptídeo ou um anticorpo de uma molécula de imunotoxina como descrita acima, ou uma composição destes para uso como uma composição farmacêutica. A presente invenção adicionalmente se refere a um peptídeo ou um anticorpo de uma molécula de imunotoxina como descrita acima, ou uma composição destes para preparar uma composição farmacêutica ou um agente diagnóstico para artrite reumatóide. A presente invenção também se refere à aplicação de um peptídeo ou uma composição deste como descrita acima para a preparação de uma composição farmacêutica para o tratamento de doenças auto-imunes, por aumento do tamanho dos complexos imunológicos de antígenos, o que aperfeiçoa a clarificação dos complexos imunológicos formados. A presente invenção, portanto, também se refere a um método para o tratamento de artrite reumatóide, por introdução no corpo de um paciente requerendo tal tratamento de pelo menos um peptídeo de acordo com a invenção. A invenção adicionalmente refere-se a um método para a seleção de um peptídeo adequado para a diagnose de RA, em que a biblioteca de peptídeos é examinada com os anticorpos obtidos de pacientes com RA e em que a biblioteca de peptídeos é selecionada de um grupo compreendido de: Bib(1): HQEXXCitXXS RAA Em que X = qualquer aminoácido, exceto a cisteína e o triptofano Bib (2): HQXXXCitGXS R/CitAA
Em que X = qualquer aminoácido, exceto a cisteína, porém incluindo a Citru- lina Bib (3): HQEXXCitXXS R/Cit A A
Em que X = qualquer aminoácido, exceto a cisteína, porém incluindo a Citru-lina Bib (4): XXXXXXCitXXXXX
Em que X = qualquer aminoácido, exceto a cisteína, porém incluindo a Citru-lina ou seus equivalentes.
Finalmente, a invenção refere-se a um peptídeo que pode ser obtido com o auxílio do método antes mencionado a ser usado em um ensaio diagnóstico.
Os termos "uma composição farmacêutica para o tratamento" ou "uma droga para o tratamento" ou "o uso de proteínas para a preparação de uma droga para o tratamento" referem-se a uma composição compreendendo um peptídeo, como descrito acima, ou um anticorpo que se liga especificamente ao peptídeo e um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável (os dois termos são intercambiáveis) para o tratamento de doenças, como descrito acima. Os veículos ou os excipientes adequados com os quais a pessoa comum versada na técnica está familiarizada são a solução salina, a solução de Ringer, a solução de dextrose, a solução de Hank, os óleos, o oleato de etila, a dextrose a 5% em solução salina, as substâncias que aperfeiçoam a isotonicidade e a estabilidade química, os tampões e os conservantes. Os outros veículos adequados incluem qualquer veículo que não induza, ele próprio, a produção de anticorpos nocivos para o indivíduo recebendo a composição, tal como as proteínas, os polissacarídeos, os ácidos polilácticos, os ácidos de poliglicol, os aminoácidos poliméricos e os polímeros de aminoácidos. A "droga" pode ser administrada em qualquer maneira conhecida para a pessoa comum, versada na técnica.
Os peptídeos de acordo com a invenção podem ser marcados (radioativos, fluorescentes ou de outro modo, conforme bem-conhecido na técnica) ou podem ser providos com um veículo. Nesta forma também tais peptídeos incidem no escopo da invenção. Por exemplo, um peptídeo pode ser acoplado a uma proteína veículo, tal como a Hemocianina de Lapa de Buraco de Fechadura ou a soro albumina bovina. Também, o peptídeo de acordo com a invenção pode ser acoplado de modo não-co va lente ou co valente a um veículo sólido, tal como uma microesfera (ouro, poliestireno, etc.), lâminas, fragmentos, ou uma parede de um vaso reator ou de uma cavidade de uma placa de microtítulo. O peptídeo pode ser marcado com uma marca direta ou uma indireta. Os exemplos incluem a biotina, a fluoresceína e uma enzima, tal como a peroxidase da raiz-forte. Tudo isto é geralmente conhecido para a pessoa comum, versada na técnica, e não requer nenhuma explicação adicional.
EXEMPLOS
Exemplo 1: Síntese dos Peptídeos Os peptídeos citrulinados foram sintetizados conforme descrito por De Koster H.S. et al., (J. Immunol. Methods, 187. pp. 177-188, (1995)). Foram usadas contas, às quais foram ligadas as moléculas peptídicas via uma ligação de amida de modo que, após a remoção dos grupos protetores, as moléculas peptídicas ainda estavam ligadas à conta. Para a síntese dos peptídeos, foi usado um sintetizador de peptídeos múltiplos automatizado (Abimed AMS422, Abimed, Langenfeld, Alemanha). Os aminoácidos incorporados e o ligador de peptídeo ácido 6-aminoexano foram protegidos por um grupo Fmoc, e para facilitar o acoplamento, os aminoácidos protegidos foram ativados com PyBOP e N-metilmorfolina. Onde necessário, as cadeias laterais foram protegidas com grupos que protegem as cadeias laterais sensíveis a ácidos. As contas usadas tinham um diâmetro de aproximadamente 100 pm e compreendiam aproximadamente 100 pmoles de peptídeo cada. É estimado que aproximadamente 0,5% desta quantidade é ligada ao lado de fora e está, em princípio, acessível para os anticorpos.
Para a síntese em quantidades maiores, foram usadas contas que foram proporcionadas com um ligador sensível a ácido. A química da síntese de peptídeos era largamente comparável com a já descrita acima. Os peptídeos foram separados com ácido trifluoracético e isolados por meio de precipitação com éter, tudo em concordância com os métodos bem- conhecidos na técnica e para os quais a pessoa comum versada na técnica não requer nenhuma explicação adicional. É obviamente também possível adquirir peptídeos com uma seqüência desejada comercialmente. A pureza e a identidade dos peptídeos individuais foram checadas por meio de RP-HPLC analítica e espectrometria de massa de tempo de vôo (MALDI-TOF).
Com o auxílio do método acima mencionado, 4 bibliotecas de peptídeos foram criadas, cada uma compreendendo um grande número (8 x 106) de peptídeos citrulinados. As fórmulas abaixo mostram a seqüência de aminoácidos dos peptídeos em cada biblioteca.
Bib(1): HQEXXCitXXSRAA Em que X = qualquer aminoácido, exceto a cisteína e o triptofano Bib (2): HQXXXCitGXS R/Cit A A
Em que X = qualquer aminoácido, exceto a cisteína, porém incluindo a Citru-lina Bib (3): HQEXXCitXXS R/Cit A A
Em que X = qualquer aminoácido, exceto a cisteína, porém incluindo a Citru-lina Bib(4): XXXXXXCitXXXXX
Em que X = qualquer aminoácido, exceto a cisteína, porém incluindo a Citru-lina Estas bibliotecas foram examinadas de acordo com o método descrito abaixo, usando soros de pacientes sofrendo de artrite reumatóide. Exemplo 2: Reação dos peptídeos ligados às contas com os soros de pacientes sofrendo de artrite reumatóide (RA) Com o auxílio da Proteína A-Sepharose, a IgG foi isolada do soro de pacientes clinicamente diagnosticados estarem sofrendo de RA. As contas foram incubadas com uma solução compreendendo i) soro total do paciente, ou ii) IgG de um paciente conjugada a uma enzima relatora (kit de marcação de fosfatase alcalina; Roche/Boehringer, Mannheim, Alemanha). Para o soro (i) foi efetuada uma segunda incubação com um anticorpo anti-IgG humana conjugado à fosfatase alcalina (Dako D0336; Dako Immunoglo-bulins, Glostrup, Dinamarca). Após cada incubação, as contas foram com- pletamente lavadas com tampão Tris-HCI pH 8,9 (50 mM de Tris pH 8,9, 150 mM de NaCI, 0,5% de Tween® 20).
As contas com os peptídeos que tinham ligado a maior quantidade de IgG humana (após tingimento com um substrato de fosfatase alcalina que é convertido em um produto colorido insolúvel, estas tornaram-se as contas mais intensamente coloridas) foram selecionadas com o auxílio de um microscópio.
Exemplo 3: ELISA
Os peptídeos mais interessantes foram sintetizados em uma quantidade ligeiramente maior para formar uma variante linear e uma cíclica, e na maioria dos casos em uma variante de citrulina e arginina (=controle). Estes peptídeos foram testados quanto à reatividade com uma série de soros de pacientes com RA. Os peptídeos foram revestidos para placas de ELISA e incubados com os soros de pacientes com RA. Cada soro foi testado em duplicata. Os soros de pessoas saudáveis foram usados como controle negativo.
Exemplo 4: A família dos peptídeos XG
Por utilização dos soros que deram uma reação positiva com cfc1 (ver o PCT/NL97/00624, que é desse modo incluído como forma de referência), os peptídeos com glicina foram encontrados sobre a posição +1 (isto é, C-terminal) em relação ao resíduo de citrulina. A substituição de G sobre +1 com, por exemplo, A (alanina) reduz a reatividade em 65%. Em certos peptídeos, o E (ácido glutâmico) sobre a posição -3 é preferivelmente não substituído por A (47% de perda de atividade). Similarmente, o Q (glu-tamina) sobre -4, o H (histidina) sobre -5 e o S (serina) sobre +3 com fre-qüência pareceram ser vantajosos.
Assim, foram selecionadas diversas seqüências dos peptídeos com a combinação -XG-, todas as quais reagiram com os soros de RA. Os exemplos específicos de membros preferidos desta família de XG são Tabela 1: Família dos peptídeos XG: HQRKWCitGASRAA (0002-32) HQHWRCitGASRAA (0002-42) H Q F R F Cit G Cit S R A A (0002-36) HQERRCitGESRAA (020699-2) HQKWRCitGFSRAA (0102-74) HQRWKCitGGSRAA (0002-28) HQRRTCitGGSRAA (0002-31) HQRRGCitGGSRAA (0002-33) H Q Cit F R Cit G H S R A A (0002-43) GFFSACitGHRPLD (0101-7) HQERGCitGKSRAA (020699-1) HQEKRCitGKSRAA (020699-4) HQRWLCitGKSRAA (0002-30) HQKRNCitGKSRAA (0002-38) EGGGVCitGPRVVE (0101-5) H Q W R H Cit G R S Cit A A (0002-34) HQKWNCitGRSRAA (0002-24) HQKFWCitGRSRAA (0002-25) H Q K Cit K Cit G R S R A A (0002-26) H Q K W R Cit G R S Cit A A (0002-37) H Q A W R Cit G R S Cit A A (0002-40) HQNQWCitGRSRAA (0002-44) HQNSKCitGRSRAA (0002-45) HQKRRCitGRSRAA (0102-76) HQKRFCitGRSRAA (0102-77) HQKRYCitGRSRAA (0102-78) HQKRHCitGRSRAA (0102-79) HQERACitGSSRAA (020699-3) HQEKMCitGVSRAA (020699-5) HQKRGCitGWSRAA (0002-27) HQRRVCitGWSRAA (0002-29) HQWNRCitGWSRAA (0002-35) HQQRMCitGWSRAA (0002-41) HQSHRCitGWSRAA (0002-39) HQFRFCitGWSRAA (0002-63) HQKRRCitGWSRAA (0102-75) GVKGHCitGYPGLD (0101-3) A partir dos dados acima, uma seqüência de consenso é derivada de aminoácidos que parecem ter uma preferência por uma posição particular. Uma unidade peptídica XG sendo preferivelmente reconhecida por soros de RA pode, portanto, ser representada por: -3 -2 -1 0 +1 +2 K R R X G R
R W W
E K
Todos estes peptídeos mostraram resultados bons a excelentes. Especialmente os peptídeos 0002-35, 0002-36 e 0002-63 foram muito satisfatórios. Na maioria dos casos, a variante cíclica de um tal peptídeo reagiu ainda melhor (ver posteriormente). Incidentalmente, este não é sempre o caso. Por exemplo, o peptídeo linear 0101-7 reagiu com 55% dos soros. A variante cíclica deste peptídeo reagiu com "somente" 45% dos 186 soros de RA. Conforme esperado, as variantes de arginina destes peptídeos (em que a(s) citrulina(s) é/são substituída(s) por arginina(s)) não reagiram com os soros de RA.
Exemplo 5: Variantes cíclicas dos peptídeos XG
Os peptídeos descritos abaixo foram ciclizados de acordo com o método de cisteína-ácido bromoacético. Diversas variantes cíclicas foram testadas, com, em particular, as variantes cíclicas dos peptídeos 0002-27, 0002-29, 0002-31,0002-36, e 0002-63 provando serem de interesse.
Tamanho do anel: diversos peptídeos que reagem adequadamente foram usados para sintetizar peptídeos cíclicos adicionais que cada um tinha um tamanho de anel diferente. Destes, os meros 8, 9, 10, 11 e 12 foram subseqüentemente testados. Todos estes peptídeos foram testados em ELISA com 48 soros de RA e 8 soros normais, respectivamente. Os meros 8 e 9 reagiram com alguns dos soros (com 22% (título 0,47) e 28% (título 0,5), respectivamente), porém os títulos (os valores de DO encontrados) eram muito menores do que quando foram usados anéis maiores (mero 10, 33%, com um título de 0,60; meros 11 e 12, 50%, com um título médio de 0,74).
Tabela 2: Resultados das análises dos soros usando o peptídeo cíclico 0002-36. A tabela acima descrita representa os ELISAs com soros obtidos de pacientes sofrendo de RA e de pacientes sofrendo de diversas outras doenças auto-imunes. Isto mostra a alta especificidade dos soros de RA por um peptídeo tal como o 0002-36. Praticamente nenhum dos casos mostrou serem positivos os soros obtidos de outras doenças auto-imunes e o material de pessoas saudáveis normais. A variante de arginina do peptídeo 0002-36 (R sobre a posição 0 e +2, isto é, em vez de Cit na fórmula) foi também testada e mostrada ser negativa com todos os soros de RA e normais testados.
Tabela 3: ELISA com 132 soros de RA com o peptídeo 36 comparado com o peptídeo cfc1 do [PCT/NL97/00624]: Por utilização do cfc1 cíclico, bem como do 0002-36 cíclico, pode ser ganha uma sensibilidade de 2% adicional (total 73%, ver a Tabela 4), que, para este tipo de aplicação, é um aperfeiçoamento bem-vindo, desde que não seja acompanhado por uma especificidade declinante. Este não parece ser o caso. Assim, dentro do grupo de peptídeos XG há uma diversidade com relação à sua capacidade de reagir com os anticorpos RA.
Tabela 4: ELISA com 186 soros de RA e variantes cíclicas de cf1, 0002-36, e 0002-63 Comparando as variantes lineares e as cíclicas de 0002-36 em duas coortes de soros de RA (no total 318 soros), a variante cíclica foi mostrada reagir mais freqüentemente (e melhor) do que a variante linear. Melhor, porque os valores de DO verificados com a variante cíclica eram também muito maiores do que com a composição linear. Quer fosse a variante cíclica criada via ligações -S-S- entre duas cisteínas, quer fosse via um tioéter formado, por exemplo, reagindo uma cisteína e um grupo bromoacetila (formado por reação de um tiol na cadeia lateral de uma cisteína com um grupo bromoacetila N-terminal, formando um tioéter), é irrelevante. O grupo bromoacetila N-terminal é formado, após a síntese do peptídeo, deixando o peptídeo ligado à conta (resina de peptila) reagir com o éster de N-hidróxi succinimida de ácido bromoacético no mesmo peptídeo. O fechamento do anel ocorre em uma solução de acetonitrila aquosa tamponada com fosfato, pH = 8.
Exemplo 6: A família dos peptídeos XnonG
Surpreendentemente, existiam também peptídeos encontrados que não foram derivados de (pro)filagrína, fibrina, fibrinogênio, vimentina, citoceratina 1 e citoceratina 9, e que foram reconhecidos pelos soros de RA que não, ou somente ligeiramente, reagiram com os peptídeos da família de XG descrita acima. Uma característica destes peptídeos é que a cadeia de aminoácidos e a C-terminal do Cit é básica (R, K, H), aromática (W, Y, F) alifática (Μ, I, V) ou Cit, S ou P (ver a tabela 5), porém não G. Daí, o nome família de XnonG. Notavelmente, os peptídeos XnonG compreendem de modo relativo aminoácidos muito positivamente carregados sobre as posições -2, -1, +1 e +2. Assim, os anticorpos nestes soros de RA reagem com uma citrulina em um contexto de peptídeo diferente.
Os peptídeos XnonG mencionados todos reagem com um ou mais soros negativos para XG. Por exemplo, os peptídeos 0107-32, 0107-35, e 0107-45 reagem com aproximadamente 15-18% dos soros negativos para XG. Um teste de ELISA baseado em um ou mais destes peptídeos in-duz um aumento na sensibilidade de pelo menos 5% (até 73% a 78%) comparado com a combinação de cfc1 cíclico e 0002-36 cíclico. De maneira muito importante, nenhum dos peptídeos XnonG mencionados reagiu com os soros de controle.
Tabela 5: Peptídeos da família de XnonG: R H G R Q Cit Cit K Y 11 Y (0107-33) R H G R Q Cit Cit Cit Y 11 Y (0107-34) I R Cit Y K Cit IT N R K F (0107-37) A R F Q M Cit H Cit R L I R (0107-35) Q Cit Y K W Cit K I E R K R (0107-43) KPYTVCitKFMRKP (0107-31) KPYTVCitKFMRRP (0107-32) RNLRLCitRERNHA (0107-36) R R R Cit Y Cit R A V I T A (0107-38) RFKSNCitRTPNRW (0107-42) RGKSNCitRTYNRW (0107-39) RFKSNCitRTYNRW (0107-40) RGKSNCitRTPNRW (0107-41) RWVSQCitRRTPTR (0102-71) MKPRYCitRRIVVV (0102-73) KSFVWCitSHARPR (0107-44) YSFVWCitSHARPR (0107-45) R N Μ N R Cit W R G M Cit R (0107-30) RMGRPCitWIRFPV (0102-72) assim como I N Cit R A S Cit K Cit H R R 0215-46 I CitKRLYCitMCitl RR 0219-44 K Cit Cit Y N I Cit Cit F R R N 0222-56 R L Y F I Cit Cit R A Q T T 0222-57 IRQGARCitRGYPK 0223-12 Cit E R Cit V Q Cit R R P P Q 150202RA02 Cit H Q R I T Cit V G Cit R K 150202RA03 R I Cit R V Cit Cit T P I P R 061102RA01 GRNQRYCitLYTIH 061102RA02 R Cit R Q Η P Cit H R I K A 061102RA03 Cit Cit R Cit V A Cit F Cit R V R 061102RA05 RPKQHVCitHTRRP 061102RA06 R K Cit G Cit R Cit Cit T I R P 061102RA07 R Cit Cit R N T Cit Η I K Cit R 061102RA08 R Cit Q Cit F T Cit Cit R N V V 061102RA09 Q L V Y L Q Cit Cit Cit R R Y 061102RA11 Q Y N R F K Cit Cit Cit R P R 061102RA12 CitLRH I R Cit Q T R Cit Cit 061102RA14 P R Cit Cit Cit K Cit R Cit Cit GR 061102RA15 R Cit Q V R Y Cit Cit L Cit R Cit 061102RA16 G R Cit Η A H Cit P R V R Cit 061102RA17 A R Η V I R Cit Cit V P R T 181102RA01 R Cit G Η M F Cit V Y Cit F R 181102RA02 G R N I R V Cit Cit A R Cit Cit 181102RA04 Q I F Y L Cit Cit H R Q Cit R 221102RA01 RQGPIACitLHIRR 221102RA02 G V Y L V R Cit L Cit Μ M R 0218-36 N Cit Cit R R V Cit M Cit R I Cit 271102RA01 K Cit R L Cit Y Cit P V R K S 271102RA02 G R R Cit Cit L Cit R P Cit Cit R 271102RA03 R Μ P H Cit H Cit S Cit R R Κ 271102RA04 A partir dos dados acima descritos, é possível derivar uma se-qüência de consenso de aminoácidos que parecem ter uma preferência por certas posições. Portanto, uma unidade peptídica XnonG preferivelmente reconhecida pelos soros de RA pode ser representada por: -5 -4 3 -2-10 +1 +2 +3 +4 +5 RRRRRXR R R R R N Y V Q Η T I I K F I Y Y P P
H S V N
G
As experiências mostraram que, por exemplo, o peptídeo 0107-35 na forma cíclica reage com 18% dos soros que não são reativos com o 0002-36 cíclico. Esta sensibilidade pode ser mais aumentada por outros peptídeos. Por exemplo, uns 8% mais podem ser adicionados pelo peptídeo cíclico 0107-32. Isto permite que a sensibilidade seja aumentada até 80%. Um valor similar foi verificado para o peptídeo 0107-45. No total, 17 dos 52 (32%) soros negativos para XG foram mostrados reagir com um ou mais peptídeos XnonG. Isto significa que, com as combinações de mais do que 2 peptídeos XG e XnonG, uma modalidade preferida da invenção, pode ser atingida uma sensibilidade de acima de 80%. Isto é, portanto, melhor do que o que pode ser obtido por uma combinação dos peptídeos com a fórmula IV, e aqueles conhecidos do PCT/NL97/00624. A sensibilidade pode ser aumentada até mais por utilização de mais peptídeos ainda. Quando testando os soros de RA com um peptídeo cíclico XG (por exemplo, o 0002-63 ou o 0002-36) juntamente com um peptídeo linear ou cíclico XnonG (por exemplo, o 0107-35), uma sensibilidade de 78% foi obtida para os 318 soros de RA. A adição de um 3S, 4e e possivelmente 5S peptídeo aumentou a sensibilidade para 85% (peptídeos 0107-32, 0107-42, respectivamente, 0107-34). Um mero 48 dos 318 soros de RA não reagiu com um dos peptídeos mencionados.
Exemplo 7: Sensibilidade e especificidade de testes diagnósticos compreendendo unidades peptídicas XG e XnonG
Usando os métodos acima descritos, sete unidades peptídicas XG foram testadas quanto à reatividade com os 318 soros mencionados na Tabela 2 a partir de pacientes sofrendo de artrite reumatóide. A especificidade foi determinada com o auxílio dos soros mencionados na Tabela 2 de pacientes de controle e doadores normais. A Tabela 6 mostra a especificidade e a sensibilidade das unidades peptídicas individuais.
Tabela 6 De acordo com os métodos descritos neste documento, cinco unidades peptídicas XnonG foram testadas quanto à reatividade com os mesmos 318 soros mencionados na tabela 2 de pacientes sofrendo de artrite reumatóide. A especificidade foi novamente determinada com o auxílio dos soros mencionados na tabela 2 de pacientes de controle e doadores normais. A Tabela 7 mostra a especificidade e a sensibilidade das unidades peptídicas individuais.
Tabela 7 A reatividade das unidades peptídicas XnonG mencionadas na tabela 7 foi testada com 80 soros do painel de 318 soros descritos acima que não reagiram com nenhum peptídeo XG da tabela 6. As porcentagens mencionadas na tabela 8, portanto, mostram a porcentagem dos soros que de fato compreendiam anticorpos para as unidades peptídicas XnonG, porém não compreendiam nenhum anticorpo reativo para XG.
Tabela 8 Os resultados acima mencionados mostram que pode ser esperada uma sensibilidade aumentada se cada uma das unidades peptídicas XG da Tabela 6 for combinada com cada uma das unidades peptídicas da Tabela 7. Todas as combinações de unidades peptídicas dadas abaixo foram testadas com uma porção representativa do painel acima mencionado de 318 soros de pacientes sofrendo de artrite reumatóide. Esta experiência de fato mostra que foi obtido um ganho médio na sensibilidade de 6%, levando a sensibilidade total de um teste de combinação para 75 a 78%.
As combinações testadas de unidades peptídicas relacionaram- se à: unidade peptídica 0002-27 com 0107-32; 0002-27 com 0107-35; 0002-27 com 0107-45; 0002-27 com 0113-30; 0002-27 com 0218-36; 0002-29 com 0107-32; 0002-29 com 0107-35; 0002-29 com 0107-45; 0002-29 com 0113-30; 0002-29 com 0218-36; 0002-31 com 0107-32; 0002-31 com 0107-35; 0002-31 com 0107-45; 0002-31 com 0113-30; 0002-31 com 0218-36; 0002-32 com 0107-32; 0002-32 com 0107-35; 0002-32 com 0107-45; 0002-32 com 0113-30; 0002-32 com 0218-36; 0002-36 com 0107-32; 0002-36 com 0107-35; 0002-36 com 0107-45; 0002-36 com 0113-30; 0002-36 com 0218-36; 0002-37 com 0107-32; 0002-37 com 0107-35; 0002-37 com 0107-45; 0002-37 com 0113-30; 0002-37 com 0218-36; 0002-63 com 0107-32; 0002-63 com 0107-35; 0002-63 com 0107-45; 0002-63 com 0113-30 e finalmente 0002-63 com 0218-36.
Com relação aos resultados da Tabela 6 e da Tabela 8, deve-se também ser observado que as diversas unidades peptídicas também detectaram diferentes coortes de soros. A partir disto pode ser deduzido que as combinações acima mencionadas de unidades peptídicas XG e XnonG também são capazes de produzir um ganho adicional na sensibilidade se uma terceira unidade peptídica ou até uma quarta ou mais unidades peptídicas forem adicionadas. Dependendo da combinação selecionada de unidades peptídicas, o teste diagnóstico de acordo com a invenção de fato torna possível atingir uma sensibilidade de 88-92%.
REIVINDICAÇÕES
Claims (8)
1. Unidade peptídica, caracterizada pelo fato de que compreende uma sequência selecionada a partir do grupo que consiste de peptídeo 0002-27 HQKRGCitGWSRAA, peptídeo 0002-29 HQRRVCitGWSRAA, peptídeo 0002-31 HQRRTCitGGSRAA, peptídeo 0002-32 HQRKWCitGASRAA, peptídeo 0002-36 HQFRFCitGCitSRAA, peptídeo 0002-37 HQKWRCitGRS-CitAA e peptídeo 0002-63 HQFRFCitGWSRAA.
2. Unidade peptídica, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que adicionalmente compreende uma unidade peptídica que compreende uma sequência selecionada a partir do grupo que consiste de peptídeo 0107-32 KPYTVCitKFMRRP, peptídeo 0107-35 ARFQMCitHCi-tRLIR, peptídeo 0107-45 YSFVWCitSHARPR, peptídeo 0113-30 ARFQM-RHCitRLIR e peptídeo 0218-36 RNLRLCitRERNHA.
3. Unidade peptídica, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que é cíclica.
4. Unidade peptídica, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que forma uma estrutura de anel cujo anel compreende pelo menos 8 aminoácidos.
5. Unidade multipeptídica, caracterizada pelo fato de que compreende uma unidade peptídica como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 4.
6. Método ex vivo para detectar auto-anticorpos de pacientes sofrendo de artrite reumatóide, caracterizado pelo fato de que pelo menos um peptídeo reativo compreendendo um resíduo de citrulina é contatado com os auto-anticorpos por um tempo suficientemente longo para permitir que um complexo seja formado entre o dito peptídeo reativo e os ditos auto-anticorpos, após o que o complexo é detectado, em que o dito peptídeo reativo compreende uma unidade peptídica como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 5.
7. Método para a seleção de um peptídeo adequado para a di-agnose ex vivo de artrite reumatóide, caracterizado pelo fato de que uma biblioteca de peptídeos é examinada com os anticorpos obtidos de pacientes com artrite reumatóide e em que a biblioteca de peptídeos é selecionada a partir de um grupo compreendido de: Bib (1): HQEXXCitXXSRAA Em que X = qualquer aminoácido exceto cisteína e triptofano Bib (2): HQXXXCitGXS R/Cit A A Em que X = qualquer aminoácido exceto cisteína porém incluindo Citrulina Bib (3): HQEXXCitXXS R/Cit A A Em que X = qualquer aminoácido exceto cisteína porém incluindo Citrulina
8. Kit de teste diagnóstico ex vivo para determinar a presença de auto-anticorpos de pacientes sofrendo de artrite reumatóide, caracterizado pelo fato de que, compreende um peptídeo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 5, juntamente com pelo menos um reagente adicional.
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| NL1019540A NL1019540C2 (nl) | 2001-12-11 | 2001-12-11 | Werkwijze voor het detecteren van auto-antilichamen van patienten die lijden aan reumatoïde artritis, peptide en assaykit. |
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Families Citing this family (44)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NL1019540C2 (nl) | 2001-12-11 | 2003-07-01 | Stichting Tech Wetenschapp | Werkwijze voor het detecteren van auto-antilichamen van patienten die lijden aan reumatoïde artritis, peptide en assaykit. |
| EP1882946B1 (en) | 2003-12-23 | 2010-02-17 | Roche Diagnostics GmbH | Method of assessing rheumatoid arthritis by measuring anti-CCP and interleukin 6 |
| DK1721162T3 (da) | 2004-02-27 | 2008-12-15 | Hoffmann La Roche | Fremgangsmåde til at bedömme rheumatoid arthritis ved at måle anti-CCP og serumamyloid A |
| FR2879604B1 (fr) * | 2004-12-22 | 2010-08-13 | Biomerieux Sa | Peptides citrullines derives de la fibrine reconnus par des auto-anticorps specifiques de la polyarthrite rhumatoide, et leurs utilisations |
| ES2310853T3 (es) * | 2004-11-04 | 2009-01-16 | Biomerieux | Peptidos citrulinados derivados de la fibrina reconocidos por autoanticuerpos especificos de la poliartritis reumatoide y usos de los mismos. |
| EP1877795A4 (en) * | 2005-05-02 | 2010-04-28 | Brigham & Womens Hospital | DIAGNOSTIC PROFILE MANUFACTURE OF SERUM ANTIBODIES |
| FI20050814A0 (fi) * | 2005-08-11 | 2005-08-11 | Procollagen Oy | Menetelmä nivelreumassa muodostuvien kollageeniautovasta-aineiden havaitsemiseksi |
| EP2074428B1 (en) | 2006-09-29 | 2015-07-01 | Roche Diagnostics GmbH | Assessing the risk of disease progression for a patient with rheumatoid arthritis |
| US20100047256A1 (en) | 2007-01-25 | 2010-02-25 | Imperial Innovations Limited | Methods |
| ES2307421B1 (es) * | 2007-04-30 | 2009-09-28 | Consejo Superiorde Investigaciones Cientificas (Csic) | Polipeptido quimerico fibrina-filagrina citruinado capaz de detectar los anticuerpos generados en la artritis reumatoide. |
| EP2058663A1 (en) | 2007-11-12 | 2009-05-13 | Euro-Diagnostica B.V. | Method for the immobilization of an analyte on a solid support |
| JP5611831B2 (ja) * | 2007-12-03 | 2014-10-22 | エスキューアイ・ダイアグノスティクス・システムズ・インコーポレイテッドＳＱＩ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ． | リウマチ性関節炎自己抗体との免疫反応性合成ペプチド |
| US20090286256A1 (en) * | 2008-05-19 | 2009-11-19 | Abbott Laboratories | Isolated human autoantibodies to natriuretic peptides and methods and kits for detecting human autoantibodies to natriuretic peptides |
| WO2010075249A2 (en) | 2008-12-22 | 2010-07-01 | Genentech, Inc. | A method for treating rheumatoid arthritis with b-cell antagonists |
| FR2940292B1 (fr) * | 2008-12-23 | 2013-05-10 | Isp Investments Inc | Peptides derives d'hmg-coa reductase et composition cosmetique et/ou pharmaceutique les contenant |
| EP2204655A1 (en) | 2008-12-23 | 2010-07-07 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Diagnostic prediction of rheumatoid arthritis and systemic lupus erythematosus |
| CN102004154B (zh) * | 2009-08-28 | 2013-06-19 | 上海荣盛生物药业有限公司 | 斑点金免疫渗滤法检测类风湿关节炎免疫抗体的组合物 |
| CN102012431B (zh) * | 2009-09-04 | 2013-06-19 | 上海荣盛生物药业有限公司 | 斑点金免疫渗滤法检测类风湿关节炎免疫抗体的ccp肽 |
| EP2325195A1 (en) | 2009-11-23 | 2011-05-25 | Toscana Biomarkers S.r.l. | Viral citrullinated peptides and uses thereof |
| EP2336769A1 (en) | 2009-12-18 | 2011-06-22 | F. Hoffmann-La Roche AG | Trigger assay for differentiating between rheumatic and non-rheumatic disorders |
| EP2402368A1 (en) | 2010-07-02 | 2012-01-04 | Toscana Biomarkers S.r.l. | Histone citrullinated peptides and uses thereof |
| JP6154748B2 (ja) * | 2011-02-02 | 2017-06-28 | アカデミス ズィーケンハイス レイデン ハー．オー．デー．エン． エルユーエムセー | 抗カルバミル化タンパク質抗体及び関節炎リスク |
| EP3412680B1 (en) | 2011-04-05 | 2020-11-04 | Curara AB | Novel peptides that bind to types of mhc class ii and their use in diagnosis and treatment |
| EP2527841A1 (en) | 2011-05-25 | 2012-11-28 | Toscana Biomarkers S.r.l. | Methods for the diagnosis of rheumatoid arthritis |
| KR101968779B1 (ko) * | 2011-05-27 | 2019-04-12 | 노르딕 바이오사이언스 에이/에스 | 진단용 펩티드의 검출 |
| CN102590530B (zh) * | 2012-03-02 | 2014-06-25 | 常晓天 | Krt84自我免疫抗体作为诊断、检测类风湿性关节炎的诊断标记物的应用 |
| US10017551B2 (en) | 2013-03-15 | 2018-07-10 | The Regents Of The University Of California | Peptides having reduced toxicity that stimulate cholesterol efflux |
| WO2015010791A2 (en) | 2013-07-24 | 2015-01-29 | Klareskog, Lars | Novel antibodies for the diagnosis and treatment of rheumatoid arthritis |
| AU2015257929B2 (en) * | 2014-05-05 | 2020-06-25 | Novio Th B.V. | Method for the serological diagnosis of rheumatoid arthritis. |
| CN104262489B (zh) * | 2014-09-30 | 2017-01-11 | 陈仁奋 | 一种环状瓜氨酸嵌合肽抗原及其应用 |
| WO2016128348A1 (en) | 2015-02-13 | 2016-08-18 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method of assessing rheumatoid arthritis by measuring anti-ccp and anti-pik3cd |
| EP3056904A1 (en) | 2015-02-13 | 2016-08-17 | F. Hoffmann-La Roche AG | Method of assessing rheumatoid arthritis by measuring anti-CCP and anti-MCM3 |
| EP3056903A1 (en) | 2015-02-13 | 2016-08-17 | F. Hoffmann-La Roche AG | Method of assessing rheumatoid arthritis by measuring anti-CCP and anti-Casp8 |
| US20180313830A1 (en) * | 2015-10-30 | 2018-11-01 | Oxford University Innovation Ltd. | Peptide and biomarker associated with inflammatory disorders, and uses thereof |
| WO2018065300A1 (en) | 2016-10-04 | 2018-04-12 | F. Hoffmann-La Roche Ag | System and method for identification of a synthetic classifier |
| CN106543277B (zh) * | 2016-10-31 | 2020-02-14 | 中南大学 | 一种与移植排斥相关的内皮细胞抗原及其应用、试剂盒 |
| CN108196073B (zh) * | 2018-03-13 | 2019-09-13 | 江苏浩欧博生物医药股份有限公司 | 一种测定抗环瓜氨酸肽抗体的试剂盒及其应用 |
| CN108948173B (zh) * | 2018-05-22 | 2020-11-03 | 北京蛋白质组研究中心 | 一种瓜氨酸修饰肽及其应用 |
| CN108948153B (zh) * | 2018-05-22 | 2020-11-03 | 北京蛋白质组研究中心 | 一种瓜氨酸修饰肽抗原组合及其应用 |
| CN112638935A (zh) * | 2019-01-27 | 2021-04-09 | 中国医药大学 | 一种类风湿性关节炎自体抗体结合的肽及其应用 |
| CN109929009B (zh) * | 2019-03-20 | 2021-06-04 | 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 | Ccp肽段、包含其的抗原、试剂、试剂盒及应用 |
| US20220214340A1 (en) * | 2019-04-28 | 2022-07-07 | Leide Biosciences Co., Ltd. | Zipper structure that helps the formation of protein dimer and application thereof |
| WO2020221153A1 (zh) * | 2019-04-28 | 2020-11-05 | 广州市雷德生物科技有限公司 | 一种促进蛋白二聚体形成的拉链扣结构及其应用 |
| CN110456074B (zh) * | 2019-08-27 | 2022-06-03 | 广东菲鹏生物有限公司 | 瓜氨酸肽及其应用、类风湿关节炎的检测试剂与试剂盒 |
Family Cites Families (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4162259B2 (ja) * | 1991-04-26 | 2008-10-08 | ビオメリュー・ソシエテ・アノニム | リウマチ性関節炎抗体により認識される抗原、抗原製剤及びその適用方法 |
| US5650508A (en) * | 1991-12-27 | 1997-07-22 | Georgia Tech Research Corporation | Peptide ketoamides |
| US5314804A (en) * | 1992-03-24 | 1994-05-24 | Serim Research Corporation | Test for Helicobacter pylori |
| CN1153530A (zh) * | 1995-03-09 | 1997-07-02 | 比奥美希奥公司 | 相关于类风湿性关节炎的msrv-1病毒和致病性和/或感染性msrv-2因子 |
| KR0182853B1 (ko) * | 1995-08-07 | 1999-05-15 | 김신규 | 자가면역 질환의 진단 방법 |
| FR2752842B1 (fr) * | 1996-08-30 | 1998-11-06 | Biomerieux Sa | Antigenes derives des filaggrines et leur utilisation pour le diagnostic de la polyarthrite rhumatoide |
| NL1004539C2 (nl) * | 1996-11-15 | 1998-05-20 | Stichting Tech Wetenschapp | Peptide afgeleid van een door auto-antilichamen van patiënten met reumatoïde artritis herkend antigeen, antilichaam daartegen en werkwijze voor het detecteren van auto-immuunantilichamen. |
| AU2155899A (en) * | 1997-11-28 | 1999-06-16 | Innogenetics N.V. | Synthetic peptides containing citrulline recognized by rheumatoid arthritis sera as tools for diagnosis and treatment |
| FR2773157B1 (fr) * | 1997-12-30 | 2001-10-05 | Bio Merieux | Epitopes peptidiques reconnus par des auto-anticorps antifilaggrine presents dans le serum des patients atteints de polyarthrite rhumatoide |
| GB9805477D0 (en) * | 1998-03-13 | 1998-05-13 | Oxford Glycosciences Limited | Methods and compositions for diagnosis of rheumatoid arthritis |
| GB9822115D0 (en) * | 1998-10-09 | 1998-12-02 | King S College London | Treatment of inflammatory disease |
| FR2795735B1 (fr) | 1999-07-01 | 2001-09-07 | Univ Toulouse | Derives citrullines de la fibrine et leur utilisation pour le diagnostic ou le traitement de la polyarthrite rhumatoide |
| ES2174770T1 (es) * | 1999-12-21 | 2002-11-16 | Innogenetics Nv | Peptidos diseñados para el diagnostico y el tratamiento de artritis reumatoide. |
| AUPQ776100A0 (en) * | 2000-05-26 | 2000-06-15 | Australian National University, The | Synthetic molecules and uses therefor |
| NL1019540C2 (nl) | 2001-12-11 | 2003-07-01 | Stichting Tech Wetenschapp | Werkwijze voor het detecteren van auto-antilichamen van patienten die lijden aan reumatoïde artritis, peptide en assaykit. |
-
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