BR112014007721B1 - Processos para preparar compostos úteis como inibidores de atr quinase - Google Patents

Abstract

PROCESSOS PARA PREPARAR COMPOSTOS ÚTEIS COMO INIBIDORES DE ATR QUINASE, COMPOSTOS INIBIDORES DE ATR QUINASE, SUA FORMA SÓLIDA, SUA COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA E SEU USO. A presente invenção refere-se aos processos e aos intermediários para preparar compostos úteis como inibidores de ATR quinase, tais como derivados de aminopirazina-isoxazol e moléculas relacionadas. A presente invenção refere-se também aos compostos úteis como inibidores de ATR proteína quinase. A invenção refere-se às composições farmaceuticamente aceitáveis que compreendem os compostos desta invenção; aos métodos para tratamento de várias doenças, distúrbios e condições com o uso de compostos desta invenção; aos processos para preparar os compostos desta invenção; aos intermediários para a preparação dos compostos desta invenção; e às formas sólidas dos compostos desta invenção. Os compostos desta invenção têm fórmula (I) ou (II): (II) em que as variáveis são como aqui definidas.

Description

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[0001] A ATR ("relacionada às ATM e Rad3") quinase é uma proteína envolvida em respostas celulares aos danos ao DNA. A ATR quinase atua com a ATM ("ataxia-telangiectasia mutada") quinase e muitas outras proteínas para regular uma resposta da célula aos danos ao DNA, comumente chamada de Resposta ao Dano ao DNA ("DDR"). A DDR estimula o reparo do DNA, promove a sobrevivência e paralisa a progressão do ciclo celular pela ativação dos pontos de controle do ciclo celular, os quais proporcionam tempo para o reparo. Sem a DDR, as células tornam-se muito mais sensíveis ao dano ao DNA e facilmente morrem devido às lesões ao DNA induzidas por processos celulares endógenos, tais como replicação de DNA ou agentes exógenos que causam dano ao DNA comumente usados no tratamento de câncer.

[0002] Células saudáveis podem contar com inúmeras proteínas diferentes para o reparo de DNA, inclusive a DDR quinase ATR. Em alguns casos, estas proteínas podem compensar umas às outras pela ativação de processos de reparo de DNA funcionalmente redundantes. Pelo contrário, muitas células cancerosas contêm defeitos em alguns dos seus processos de reparo de DNA, tais como a sinalização de ATM e, portanto, apresentam uma maior dependência de que as suas proteínas de reparo de DNA permaneçam intactas, incluindo a ATR.

[0003] Além disso, muitas células cancerosas expressam oncoge nes ativados ou não têm supressores tumorais fundamentais, e isto pode tornar essas células cancerosas propensas às fases desreguladas de replicação de DNA, o que, por sua vez, causa dano ao DNA. A ATR tem estado implicada como um componente crítico da DDR em resposta à replicação de DNA interrompida. Como um resultado, estas células cancerosas são mais dependentes da atividade da ATR para sobrevivência do que as células saudáveis. Consequentemente, os inibidores de ATR podem ser úteis para o tratamento de câncer, tanto em uso isolado como em combinação com os agentes que causam dano ao DNA, porque desativam um mecanismo de reparo de DNA que é mais importante para a sobrevivência de muitas células cancerosas do que para células saudáveis normais.

[0004] De fato, tem sido demonstrado que a interrupção da função da ATR (por exemplo, por deleção de genes) ocasiona a morte de células cancerosas tanto na ausência como na presença dos agentes que causam dano ao DNA. Isto sugere que os inibidores da ATR podem ser eficazes tanto como agentes isolados como potentes sensibilizadores para a radioterapia ou quimioterapia genotóxica.

[0005] Devido a todas estas razões, existe uma necessidade para o desenvolvimento de inibidores de ATR potentes e seletivos para o tratamento de câncer, tanto como agentes isolados como em terapias combinadas com a radioterapia ou quimioterapia genotóxica. Ademais, seria desejável haver uma rota sintética para os inibidores de ATR que sejam passíveis à síntese em grade escala e que obtenham melhores resultados do que os métodos atualmente conhecidos.

[0006] Peptídeo de ATR pode ser expressado e isolado usando uma variedade de métodos conhecidos na literatura (consulte, por exemplo, Ünsal-Kaçmaz et al., PNAS 99: 10, pp6673-6678, 14 de maio de 2002; veja também Kumagai et al. Cell 124, pp943-955, 10 de março de 2006; Unsal-Kacmaz et al. Molecular and Cellular Biology, fev 2004, p1292-1300; e Hall-Jackson et al. Oncogene 1999, 18, 6707-6713).

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0007] FIGURA 1a: XRPD de Composto I-2 base livre

[0008] FIGURA 2a: TGA de Composto I-2 base livre

[0009] FIGURA 3a: DSC de Composto I-2 base livre

[00010] FIGURA 4a: Gráfico ORTEP da unidade assimétrica da estrutura de cristal isolado de Composto I-2 sob forma livre

[00011] FIGURA 1b: XRPD de Composto I-2 • HCl

[00012] FIGURA 2b: TGA de Composto I-2 • HCl

[00013] FIGURA 3b: DSC de Composto I-2 • HCl

[00014] FIGURA 4b: Gráfico ORTEP da unidade assimétrica da estrutura anidra de Composto I-2 • HCl.

[00015] FIGURA 1c: XRPD de Composto I-2 • 2HCl

[00016] FIGURA 2c: TGA de Composto I-2 • 2HCl

[00017] FIGURA 3c: DSC de Composto I-2 • 2HCl

[00018] FIGURA 1d: XRPD de Composto I-2 • HCl monoidrato

[00019] FIGURA 2d: TGA de Composto I-2 • HCl monoidrato

[00020] FIGURA 3d: DSC de Composto I-2 • HCl monoidrato

[00021] FIGURA 1e: XRPD de Composto I-2 • HCl • 2H2O

[00022] FIGURA 2e: TGA de Composto I-2 • HCl • 2H2O

[00023] FIGURA 3e: DSC de Composto I-2 • HCl • 2H2O

[00024] FIGURA 4a: Estado sólido de Composto I-1 base livre

[00025] FIGURA 4b: 13C-RMN no estado sólido de Composto I-1 • HCl

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[00026] A presente invenção refere-se aos processos e aos intermediários para preparar compostos úteis como inibidores de ATR quinase, tais como derivados de aminopirazina-isoxazol e moléculas relacionadas. Os derivados de aminopirazina-isoxazol são úteis como inibidores de ATR e também são úteis para preparar inibidores de ATR. A presente invenção também se refere às formas sólidas de inibidores de ATR, bem como aos inibidores de ATR deuterados.

[00027] Um aspecto da invenção fornece um processo para preparar um composto da fórmula I:

[00028] que compreende preparar um composto da fórmula 4:

[00029] a partir de um composto da fórmula 3:

[00030] sob condições de formação de oxima adequadas.

[00031] Um outro aspecto da presente invenção compreende preparar um composto da fórmula 4:

[00032] a partir de um composto da fórmula 3:

[00033] sob condições de formação de oxima adequadas.

[00034] Um outro aspecto da presente invenção compreende um

[00035] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que cada R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R6, R7, R8, R9a, R9b, R10, R11, R12, e R13 é independentemente hidrogênio ou deutério, e pelo menos 1a 1b 1c 2 3a 3b 3c 4 5 6 7 8 9a 9b 10 um dentre R , R , R , R , R , R , R , R , R , R , R , R , R , R , R , R11, R12, e R13 é deutério.

[00036] Ainda outro aspecto da invenção fornece formas sólidas de um composto da fórmula I-2:

[00037] Outros aspectos da invenção são apresentados neste documento.

[00038] A presente invenção tem várias vantagens em relação aos métodos anteriormente conhecidos. Primeiro, o presente processo tem um número menor de etapas sintéticas totais em comparação com os processos apresentados anteriormente. Segundo, o presente processo tem rendimentos aprimorados em relação aos processos apresentados anteriormente. Terceiro, o presente processo é eficaz para compostos em que R3 é uma ampla variedade de grupos, como grupos alquila ou uma porção impedida, grande, como um anel. Quarto, o presente processo compreende intermediários que são mais estáveis e têm um prazo de validade mais longo. Em certas modalidades, a formação não ácida do grupo oxima no presente processo permite a preservação de grupos protetores sensíveis a ácido como Boc ou CBz durante o curso da síntese. Em outras modalidades, o processo é mais facilmente aumentado em escala para quantidades maiores devido à eliminação de cromatografia como uma etapa de purificação.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[00039] Um aspecto da invenção fornece um processo para preparar um composto de preparação de um composto da fórmula 4:

[00040] a partir de um composto da fórmula 3:

[00041] sob condições de formação de oxima adequadas;

[00042] em que

[00043] R1 é alquilaC1-6;

[00044] R2 é alquilaC1-6;

[00045] ou R1 e R2, juntos com os átomos de oxigênio aos quais estão ligados, formam um anel heterocíclico saturado de 5 ou 6 membros opcionalmente substituído com dois átomos de oxigênio;

[00046] R3 é hidrogênio, alquilaC1-6, ou uma heterociclila saturada ou parcialmente insaturada de 3 a 6 membros tendo 1 a 2 heteroátomos selecionados do grupo que consiste em oxigênio, nitrogênio e enxofre; em que a heterociclila está opcionalmente substituída com 1 ocorrência de halo ou alquilaC1-3;

[00047] J1 é halo, alquilaC1-4, ou alcóxiC1-4;

[00048] PG é um grupo protetor de carbamato.

[00049] Um outro aspecto fornece um processo para preparação de um composto da fórmula I:

[00050] compreendendo as etapas de:

[00051] preparar um composto da fórmula 4:

[00052] a partir de um composto da fórmula 3:

[00053] sob condições de formação de oxima adequadas;

[00054] em que

[00055] R1 é alquilaC1-6;

[00056] R2 é alquilaC1-6;

[00057] ou R1 e R2, juntos com os átomos de oxigênio aos quais estão ligados, formam um anel heterocíclico saturado de 5 ou 6 membros opcionalmente substituído tendo dois átomos de oxigênio;

[00058] R3 é hidrogênio, alquilaC1-6, ou uma heterociclila saturada ou parcialmente insaturada de 3 a 6 membros tendo 1 a 2 heteroátomos selecionados do grupo que consiste em oxigênio, nitrogênio e enxofre; sendo que a heterociclila está opcionalmente substituída com 1 ocorrência de halogênio ou C1-3alquila;

[00059] R4 é

[00060] Q é fenila, piridila, ou uma piridina N-alquilada;

[00061] J1 é H, halo, alquilaC1-4, ou alcóxiC1-4;

[00062] J2 é halo; CN; fenila; oxazolila; ou um grupo alifático C1-6 em que até 2 unidades de metileno estão opcionalmente substituídas com O, NR”, C(O), S, S(O), ou S(O)2; o dito grupo alifático C1-6 está opcionalmente substituído com 1-3 fluoro ou CN;

[00063] q é 0, 1, ou 2;

[00064] P é um grupo protetor de carbamato.

[00065] Uma outra modalidade compreende adicionalmente a etapa de proteger um composto da fórmula 2:

[00066] sob condições de proteção adequadas para formar o composto da fórmula 3.

[00067] Uma outra modalidade compreende adicionalmente a etapa de reagir um composto da fórmula 1:

[00068] com uma amina adequada sob condições de aminação redutora adequadas para formar um composto da fórmula 2.

[00069] Em algumas modalidades, a amina adequada é NHCH3. Em outras modalidades, a amina adequada é

[00070] Uma outra modalidade compreende adicionalmente a etapa de reagir um composto da fórmula 4:

[00071] sob condições de formação de isoxazol adequadas para formar um composto da fórmula 5:

[00072] Uma outra modalidade compreende adicionalmente a etapa de reagir um composto da fórmula 5 sob condições de acoplamento adequadas seguidas por condições de desproteção adequadas para formar um composto da fórmula I.

[00073] Em algumas modalidades, PG é Boc ou Cbz. Em algumas modalidades, PG é Boc.

[00074] Em outras modalidades, R1 é etila e R2 etila.

[00075] Em ainda outras modalidades, R3 é CH3 ou

[00076] Em algumas modalidades, R4 é

[00077] em que Q é fenila. Em algumas modalidades, Q está substituído na posição para com J2, em que q é 1.

[00078] Em algumas modalidades, J1 é H ou halo. Em algumas modalidades, J1 é H. Em outras modalidades, J1 é halo.

[00079] Em outras modalidades, J2 é a um grupo alifático C1-6 em que até 1 unidade metileno está opcionalmente substituída com S(O)2. Em algumas modalidades, J2 é -S(O)2-(alquilaC1-5). Em algumas modalidades, q é 1.

[00080] De acordo com uma outra modalidade,

[00081] R1 é etila;

[00082] R2 é etila;

[00083] R3 é CH3 ou

[00084] PG é Boc ou Cbz;

[00085] J1 é H;

[00086] R4 é

[00087] em que Q é fenila; J2 é -S(O)2-CH(CH3)2;

[00088] q é 1;

[00089] Em algumas modalidades, R3 é CH3. Em algumas modalidades, R3 é CH3. Em ainda outras modalidades, R3 é CH3 ou

[00090] De acordo com uma outra modalidade,

[00091] R1 é etila;

[00092] R2 é etila;

[00093] R3 é

[00094] PG é Boc;

[00095] J1 é H;

[00096] R4 é

[00097] em que Q é piridila; J2 é

[00098] q é 1;

[00099] Em algumas modalidades, R4 é

Condições das reações

[000100] Em algumas modalidades, as condições de formação de oxima adequadas consistem em uma sequência de etapa única ou uma sequência de duas etapas.

[000101] Em algumas modalidades, a sequência de duas etapas consiste em primeiro desproteger o grupo cetal no composto da fórmula 3 em um aldeído sob condições de desproteção adequadas, e, então, formar a oxima de fórmula 4 sob condições de formação de oxima adequadas. Em algumas modalidades, as condições de desproteção adequadas compreendem adicionar quantidades catalíticas de ácido para-toluenossulfônico (pTSA), acetona, e água; e condições de formação de oxima adequadas compreendem misturar juntos hidroxilamina, uma quantidade catalítica de ácido, um agente desidra- tante, e um solvente alcoólico. Em outras modalidades, o ácido é pTSA ou HCl, o agente desidratante são peneiras moleculares ou dimetoxiacetona, e o solvente alcoólico é metanol ou etanol.

[000102] Em outras modalidades, a sequência de etapa única com-preende adicionar NH2OH.HCl e uma mistura de tetra-hidrofurano (THF) e água. Em outras modalidades, a sequência compreende adicionar NH2OH.HCl e uma mistura de 2-metiltetra-hidrofurano e água opcionalmente tamponada com Na2SO4. Em algumas modalidades, 1 equivalente de composto da fórmula 3 é combinado com 1,1 equivalentes de NH2OH.HCl em uma mistura 10:1 v/v de tetra- hidrofurano (THF) e água. Em algumas modalidades, 1 equivalente de composto da fórmula 3 é combinado com 1,1 equivalentes de NH2OH.HCl em uma mistura 10:1 v/v de 2-metiltetra-hidrofurano e água opcionalmente tamponada com Na2SO4.

[000103] Em outras modalidades, as condições de proteção são selecionadas do grupo que consiste em

[000104] • R-OCOCl, uma base amina terciária adequada, e um solvente adequado; em que R é alquilaC1-6 opcionalmente substituída com fenila;

[000105] • R(CO2)OR’, um solvente adequado, e opcionalmente uma quantidade catalítica de base, em que R é e R’ são cada um independentemente alquilaC1-6 opcionalmente substituída com fenila;

[000106] • [RO(C=O)]2O, uma base adequada, e um solvent adequado.

[000107] Em algumas modalidades, a base adequada é Et3N, di- isopropilamina, e piridina; e o solvente adequado é selecionado dentre um solvente clorado, um éter, ou um hidrocarboneto aromático. Em outras modalidades, a base adequada é Et3N, o solvente adequado é um solvente clorado selecionado de DCM. Em ainda outras modalidades, as condições de proteção compreendem adicionar 1,20 equivalentes de (Boc)2O e 1,02 equivalentes de Et3N em DCM.

[000108] De acordo com uma outra modalidade, condições de acoplamento adequadas compreendem adicionar um metal adequado e uma base adequada em um solvente adequado. Em outras modalidades, o metal adequado é Pd[P(tBu)3]2; o solvente adequado é uma mistura de acetonitrila e água; e a base adequada é carbonato de sódio. Em ainda outras modalidades, as condições de acoplamento adequadas compreendem adicionar 0,1 equivalente de Pd[P(tBu)3]2; 1 equivalente de éster ou ácido borônico; e 2 equivalentes de carbonato de sódio em uma razão 2:1 v/v de acetonitrila/água a 60-70°C.

[000109] De acordo com uma outra modalidade, as condições de desproteção adequadas compreendem combinar o composto da fórmula 5 com um ácido adequado em um solvente adequado. Em algumas modalidades, o ácido adequado é selecionado dentre ácido para-toluenossulfônico (pTSA), HCl, TBAF, H3PO4, ou TAG e o solvente adequado é selecionado dentre acetona, metanol, etanol, CH2Cl2, EtOAc, tetra-hidrofurano (THF), 2-MeTHF, dioxano, tolueno, ou dietílico.

[000110] De acordo com uma outra modalidade, as condições de formação de isoxazol adequadas consistem em duas etapas, a primeira etapa compreende reagir i composto da fórmula 4 sob condições de formação de cloro-oxima adequadas para formar uma cloro-oxima intermediária; a segundo etapa que compreende reagir a cloro-oxima intermediária com acetileno sob condições de cicloadição adequadas para formar um composto da fórmula 5.

[000111] De acordo com uma outra modalidade, as condições de formação de cloro-oxima adequadas são selecionadas dentre:

[000112] ■ N-clorossuccinimida e solvente adequado ou

[000113] ■ peroximonossulfato de potássio, HCl, e dioxano.

[000114] Em algumas modalidades, o solvente adequado é selecionado dentre um solvente não prótico, um hidrocarboneto aromático, ou um acetato de alquila. De acordo com uma outra modalidade, as condições de formação de cloro-oxima adequadas são 1,05 equivalentes de N-clorossuccinimida em acetato de isopropila a 40-50°C.

[000115] De acordo com uma outra modalidade, as condições de cicloadição adequadas consistem em uma base adequada e um solvente adequado. Em algumas modalidades, a base adequada é selecionada dentre piridina, DIEA, TEA, t-BuONa, e K2CO3 e o solvente adequado é selecionado dentre acetonitrila, tetra-hidrofurano, 2- metiltetra-hidrofurano, MTBE, EtOAc, i-PrOAc, DCM, tolueno, DMF, e metanol. Em outras modalidades, a base adequada é selecionada dentre Et3N e o solvente adequado é selecionado de DCM.

[000116] De acordo com uma outra modalidade, a segunda etapa compreende reagir 1 equivalente de acetileno com 1,2 equivalentes de cloro-oxima intermediária e 1,3 equivalentes de Et3N em DCM à temperatura ambiente.

[000117] De acordo com uma outra modalidade, as condições de formação de isoxazol adequadas compreendem combinar o composto da fórmula 4 com um oxidante em um solvente adequado. Em algumas modalidades, o dito oxidante é [bis(trifluoro-acetóxi) iodo]benzeno e o dito solvente é uma mistura 1:1:1 de metanol, água, e dioxano.

Síntese dos compostos I-2 e I-3

[000118] Uma modalidade fornece um processo para preparar um composto da fórmula I-2:

[000119] que compreende uma ou mais das seguintes etapas:

[000120] reagir um composto da fórmula 1b:

[000121] com metilamina sob condições de aminação redutora adequadas para formar um composto da fórmula 2b:

[000122] b) reagir um composto da fórmula 2b sob condições de proteção por Boc adequadas para formar o composto da fórmula 3b:

[000123] c) reagir um composto da fórmula 3b sob condições de formação de oxima adequadas para formar o composto da fórmula 4-i:

[000124] d) reagir um composto da fórmula 4-i sob condições de formação de cloro-oxima adequadas para formar o composto da fórmula 4-ii:

[000125] e) reagir o composto da fórmula 4-ii com um composto da fórmula 4-iii

[000126] sob condições de cicloadição adequadas para formar um composto da fórmula 4-iv:

[000127] f) reagir um composto da fórmula 4-iv com um composto da fórmula A-5-i:

[000128] sob condições de acoplamento adequadas para formar o composto da fórmula 5-i:

[000129] g) desproteger um composto da fórmula 5-i sob condições de desproteção de Boc adequadas opcionalmente seguido pelo tratamento sob condições aquosas básicas para formar um composto da fórmula I-2.

[000130] Uma outra modalidade fornece um processo para preparar um composto da fórmula I-3:

[000131] que compreende uma ou mais das seguintes etapas:

[000132] reagir um composto da fórmula A-1:

[000133] com tetra-hidro-2H-pirano-4-amina sob condições de aminação redutora adequadas para formar um composto da fórmula A- 2:

[000134] b) reagir um composto da fórmula A-2 sob condições de proteção por Boc adequadas para formar o composto da fórmula A-3:

[000135] c) reagir um composto da fórmula A-3 sob condições de formação de oxima adequadas para formar o composto da fórmula A-4:

[000136] d) reagir um composto da fórmula A-4:

[000137] sob condições de formação de cloro-oxima adequadas para formar o composto da fórmula A-4-i:

[000138] e) reagir o composto da fórmula A-4-i com um composto da fórmula A-4-ii:

[000139] sob condições de cicloadição adequadas para formar o composto da fórmula A-5:

[000140] f) reagir um composto da fórmula A-5 com um composto da fórmula A-5-i:

[000141] sob condições de acoplamento adequadas para formar o composto da fórmula A-6:

[000142] g) desproteger um composto da fórmula A-6 sob condições de desproteção de Boc adequadas opcionalmente seguido pelo tratamento sob condições básicas aquosas para formar um composto da fórmula I-3.

[000143] As condições de acoplamento adequadas compreendem combinar um catalisador adequado de paládio com uma base adequada em um solvente adequado. Os catalisadores de paládio adequados incluem, mas não se limitam a, Pd[P(tBu)3]2, Pd(dtbpf)Cl2, Pd(PPh3)2Cl2, Pd(PCy3)2Cl2, Pd(dppf)Cl2, e Pd(dppe)Cl2. Os solventes adequados incluem, mas não se limitam a, tolueno, MeCN, água, EtOH, álcool isopropílico, 2-Me-tetra-hidrofurano (THF), ou IPAc. As bases adequadas incluem, mas não se limitam a, K2CO3, Na2CO3, ou K3PO4.

[000144] As condições de formação de oxima adequadas consistem em uma sequência de etapa única ou uma sequência de duas etapas. A sequência de duas etapas consiste em primeiro desproteger o grupo cetal no composto da fórmula A-3 em um aldeído sob condições adequadas para a desproteção, e, então, formar a oxima de fórmula A- 4 sob condições de formação de oxima adequadas.

[000145] A sequência de etapa única compreende, por exemplo, misturar juntos hidroxilamina, um ácido, um solvente orgânico, e água. Em algumas modalidades, NH2OH.HCl é adicionado a uma mistura de tetra-hidrofurano (THF) e água. Em algumas modalidades, 1 equivalente do composto da fórmula 3-A é combinado com um 1,1 equivalentes de NH2OH.HCl em um mistura a 10:1 v/v de tetra- hidrofurano (THF)/água.

[000146] As condições adequadas para a desproteção compreendem adicionar um ácido, acetona, e água. Os ácidos adequados incluem pTSA ou HCl, os solventes orgânicos adequados incluem solventes clorados (por exemplo, diclorometano (DCM), dicloroetano (DCE), CH2Cl2, e clorofórmio); um éter (por exemplo, tetra-hidrofurano (THF), 2-MeTHF e dioxano); um solvente à base de hidrocarbonetos aromáticos (por exemplo, tolueno e xilenos, ou outros solventes apróticos.

[000147] As condições de cicloadição adequadas compreendem uma base adequada (por exemplo, piridina, DIEA, TEA, t-BuONa, ou K2CO3) e um solvente adequado (por exemplo, acetonitrila, tetra-hidrofurano, 2- metiltetra-hidrofurano, MTBE, EtOAc, i-PrOAc, DCM, tolueno, DMF, e metanol.

[000148] As condições de formação de cloro-oxima adequadas compreendem adicionar HCl em dioxano em uma solução da oxima na presença de NCS em um solvente adequado selecionado dentre solventes não próticos (DCM, DCE, THF, e dioxano), hidrocarbonetos aromáticos (por exemplo tolueno, xilenos), e acetatos de alquila (por exemplo, acetato de isopropila, acetato de etila).

[000149] As condições de desproteção de Boc adequadas compreendem adicionar um agente desprotetor de Boc adequado (por exemplo, TMS-Cl, HCl, TBAF, H3PO4, ou TAG) e um solvente adequado (por exemplo, acetona, tolueno, metanol, etanol, 1-propanol, isopropanol, CH2Cl2, EtOAc, acetato de isopropila, tetra-hidrofurano, 2-metiltetra- hidrofurano, dioxano, e éter dietílico). Em algumas modalidades, as condições de desproteção de Boc adequadas incluem adicionar um agente desprotetor selecionado dentre HCl, TAG e um solvente adequado selecionado dentre acetona, tolueno, acetato de isopropila, tetra-hidrofurano, ou 2-metiltetra-hidrofurano.

[000150] As condições adequadas para proteção por Boc incluem (Boc)2O, uma base adequada, e um solvente adequado. As bases adequadas incluem, mas não se limitam a, Et3N, di-isopropilamina, e piridina. Os solventes adequados incluem, mas não se limitam a, solventes clorados (por exemplo, diclorometano (DCM), dicloroetano (DCE), CH2Cl2, e clorofórmio); um éter (por exemplo, THF, 2-MeTHF e dioxano); hidrocarbonetos aromáticos (por exemplo, tolueno e xilenos, ou outros solventes aprótico. Em algumas modalidades, a base adequada é Et3N, o solvente adequado é DCM, tetra-hidrofurano ou 2- metiltetra-hidrofurano. Em certas modalidades, as condições de proteção compreendem adicionar 1,05 equivalentes de (Boc)2O em 2- metiltetra-hidrofurano ou DCM.

[000151] As condições de aminação redutora adequadas compreendem adicionar um agente redutor selecionado dentre NaBH4 NaBH4, NaBH3CN, ou NaBH(OAc)3 na presença de um solvente selecionado dentre diclorometano (DCM), dicloroetano (DCE), um solvente alcoólico selecionado dentre metanol, etanol, 1-propanol, isopropanol, ou um solvente não prótico selecionado dentre dioxano, tetra-hidrofurano, ou 2-metiltetra-hidrofurano e opcionalmente um base selecionado dentre Et3N ou di-isopropiletilamina. Em algumas modalidades, as condições de aminação redutora adequadas compreendem adicionar 1,2 equivalentes de cápsulas de NaBH4 na presença de Et3N em MeOH.

[000152] Um outro aspecto da presente invenção fornece um composto da fórmula II:

[000153] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo,

[000154] em que cada R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R6, R7, R8, R9a, R9b, R10a, R10b, e R10c é independentemente hidrogênio ou deutério, e

[000155] pelo menos um dentre R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R6, R7, R8, R9a, R9b, R10a, R10b, e R10c é deutério.

[000156] Em algumas modalidades, R9a e R9b são iguais. Em outras modalidades, R9a e R9b são deutério, e R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R6, R7, R8, R10, R11a, R11b, R12a, R12b, R13a, R13b, R14a, e R14b são deutério ou hidrogênio. Em ainda outra modalidade, R9a e R9b são deutério, e R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R6, R7, R8, R10, R11a, R11b, R12a, R12b, R13a, R13b, R14a, e R14b são hidrogênio.

[000157] Em uma modalidade, R9a, R9b, R10a, R10b, e R10c são iguais. Em uma outra modalidade, R9a, R9b, R10a, R10b, e R10c são deutério, e R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R6, R7, e R8 são deutério ou hidrogênio. Em algumas modalidades, R9a, R9b, R10a, R10b, e R10c são deutério, e R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R6, R7, e R8 são hidrogênio.

[000158] Em outras modalidades, R10a, R10b, e R10c são iguais. Em uma modalidade, R10a, R10b, e R10c são deutério, e R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R6, R7, R8, R9a, e R9b são deutério ou hidrogênio. Em ainda outra modalidade, R10a, R10b, e R10c são deutério, e R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R6, R7, R8, R9a, e R9b são hidrogênio.

[000159] Em algumas modalidades, R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, e R3c são iguais. Em uma outra modalidade R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, e R3c são deutério, e R4, R5, R6, R7, R8, R9a, R9b, R10a, R10b, e R10c são deutério ou hidrogênio. Em ainda outra modalidade, R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, e R3c são deutério, e R4, R5, R6, R7, R8, R9a, R9b, R10a, R10b, e R10c são deutério.

[000160] Em uma outra modalidade, R6 é deutério, e R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R7, R8, R9a, R9b, R10a, R10b, e R10c são deutério ou hidrogênio. Em ainda outra modalidade, R6 é deutério, e R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R7, R8, R9a, R9b, R10a, R10b, e R10c são hidrogênio.

[000161] Em outras modalidades, R2 é deutério, e R1a, R1b, R1c, R3a, R3b, e R3c, R4, R5, R6, R7, R8, R9a, R9b, R10a, R10b, e R10c são deutério ou hidrogênio. Em uma outra modalidade, R2 é deutério, e R1a, R1b, R1c, R3a, R3b, e R3c, R4, R5, R6, R7, R8, R9a, R9b, R10a, R10b, e R10c são hidrogênio.

[000162] Em uma outra modalidade, R7 é deutério, e R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R6, R8, R9a, R9b, R10a, R10b, e R10c são deutério ou hidrogênio. Em outras modalidades, R7 é deutério, e R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R6, R8, R9a, R9b, R10a, R10b, R10c são hidrogênio.

[000163] Em ainda outra modalidade, R8 é deutério, e R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R6, R7, R9a, R9b, R10a, R10b, e R10c são deutério ou hidrogênio. em uma outra modalidade, R8 é deutério, e R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R6, R7, R9a, R9b, R10a, R10b, R10c são hidrogênio.

[000164] Em algumas modalidades, pelo menos um dentre R10a, R10b, ou R10c são iguais. em uma outra modalidade, pelo menos um dentre R10a, R10b, ou R10c são deutério, e R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R6, R7, R8, R9a, e R9b são deutério ou hidrogênio. Em ainda outra modalidade, pelo menos um dentre R10a, R10b, ou R10c são deutério, e R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R6, R7, R8, R9a, e R9b são hidrogênio.

[000165] Em algumas modalidades, pelo menos dois de R10a, R10b, ou R10c são iguais. em uma outra modalidade, pelo menos dois de R10a, R10b, ou R10c são deutério, e R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R6, R7, R8, R9a, e R9b são deutério ou hidrogênio. Em ainda outra modalidade, pelo menos dois de R10a, R10b, ou R10c são deutério, e R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R6, R7, R8, R9a, e R9b são hidrogênio.

[000166] Em uma outra modalidade, R1a, R1b, R1c, R3a, R3b, e R3c são iguais. Em algumas modalidades, R1a, R1b, R1c, R3a, R3b, e R3c são deutério, e R2, R4, R5, R6, R7, R8, R9a, R9b, R10a, R10b, e R10c são deutério ou hidrogênio. Em ainda outra modalidade, R1a, R1b, R1c, R3a, R3b, e R3c é deutério, e R2, R4, R5, R6, R7, R8, R9a, R9b, R10a, R10b, e R10c são hidrogênio.

[000167] Em ainda outra modalidade, R4 é deutério, e R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, R3c, R5, R6, R7, R8, R9a, R9b, R10a, R10b, e R10c são deutério ou hidrogênio. Em outras modalidades, R4 é deutério, e R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, R3c, R5, R6, R7, R8, R9a, R9b, R10a, R10b, e R10c são hidrogênio.

[000168] Em uma outra modalidade, R5 é deutério, e R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R6, R7, R8, R9a, R9b, R10a, R10b, e R10c são deutério ou hidrogênio. Em ainda outra modalidade, R5 é deutério, e R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R6, R7, R8, R9a, R9b, R10a, R10b, e R10c são hidrogênio.

[000169] Em uma outra modalidade, pelo menos um dentre R9a ou R9b são iguais. Em outras modalidades, pelo menos um dentre R9a ou R9b são deutério, e R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R6, R7, R8, R10a, R10b, e R10c são deutério ou hidrogênio. Em algumas modalidades, pelo menos um dentre R9a e R9b são deutério, e R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R6, R7, R8, R10a, R10b, R10c são hidrogênio.

[000170] Em uma modalidade, R6, R9a e R9b são iguais. Em algumas modalidades, R6, R9a e R9b são deutério, e R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b,R3c, R4, R5, R7, R8, R10a, R10b, R10c são deutério ou hidrogênio. Em outras modalidades, R6, R9a e R9b são deutério, e R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R7, R8, R10a, R10b, e R10c são hidrogênio.

[000171] Em algumas modalidades, R2, R10a, R10b, e R10c são iguais. Em uma outra modalidade, R2, R10a, R10b, e R10c são deutério, e R1a, R1b, R1c, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R6, R7, R8, R9a, e R9b são deutério ou hidrogênio. Em ainda outra modalidade, R2, R10a, R10b, e R10c são deutério, e R1a, R1b, R1c, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R6, R7, R8, R9a, e R9b são hidrogênio.

[000172] Em algumas modalidades, R7 e pelo menos dois de R10a, R10b, ou R10c são iguais. Em uma outra modalidade, R7 e pelo menos dois de R10a, R10b, ou R10c são deutério, e R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R6, R8, R9a, e R9b são deutério ou hidrogênio. Em ainda outra modalidade, R7 e pelo menos dois de R10a, R10b, ou R10c são deutério, e R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R6, R8, R9a, e R9b são hidrogênio.

[000173] Em algumas modalidades, R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, R3c, e pelo menos um de R10a, R10b, ou R10c são iguais. Em uma outra modalidade, R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, R3c, e pelo menos um de R10a, R10b, ou R10c são deutério, e R4, R5, R6, R7, R8, R9a, e R9b são deutério ou hidrogênio. Em ainda outra modalidade, R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, R3c, e pelo menos um de R10a, R10b, ou R10c são deutério, e R4, R5, R6, R7, R8, R9a, e R9b são hidrogênio.

[000174] Em algumas modalidades, R1a, R1b, R1c, R3a, R3b, R3c, e R5 são iguais. Em uma outra modalidade, R1a, R1b, R1c, R3a, R3b, R3c, e R5 são deutério, e R2, R4, R6, R7, R8, R9a, R9b, R10a, R10b, e R10c são deutério ou hidrogênio. Em ainda outra modalidade, R1a, R1b, R1c, R3a, R3b, R3c, e R5 são deutério, e R2, R4, R6, R7, R8, R9a, R9b, R10a, R10b, e R10c são hidrogênio.

[000175] Em outras modalidades, R4 e R6 são iguais. Em uma outra modalidade, R4 e R6 são deutério, e R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, R3c, R5, R7, R8, R9a, R9b, R10a, R10b, e R10c são deutério ou hidrogênio. Em ainda outra modalidade, R4 e R6 são deutério, e R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, R3c, R5, R7, R8, R9a, R9b, R10a, R10b, e R10c são hidrogênio.

[000176] Em uma modalidade, R2, R5, R9a, e R9b são iguais. Em algumas modalidades, R2, R5, R9a, e R9b são deutério, e R1a, R1b, R1c, R3a, R3b, R3c, R4, R6, R7, R8, R10a, R10b, e R10c são deutério ou hidrogênio. Em uma outra modalidade, R2, R5, R9a, e R9b são deutério, e R1a, R1b,R1c, R3a, R3b, R3c, R4, R6, R7, R8, R10a, R10b, e R10c são hidrogênio.

[000177] Em ainda outra modalidade, R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, R3c, R5, R6, R9a, R9b, R10a, R10b, e R10c são iguais. Em algumas modalidades, deutério, e R4, R7, e R8 são deutério ou hidrogênio. Em outras modalidades, R1a, R1b, R1c, R2, R3a, R3b, R3c, R5, R6, R9a, R9b, R10a, R10b, e R10c é deutério, e R4, R7, e R8 são hidrogênio.

[000178] Em algumas modalidades, as variáveis são conforme mostradas nos compostos da descrição incluindo os compostos das tabelas abaixo.

[000179] Tabela I

[000180] Tabela II

[000181] Os compostos desta invenção incluem aqueles descritos de modo geral na presente invenção, e são adicionalmente ilustrados pelas classes, subclasses, e espécies descritas na presente invenção. Como aqui usadas, as seguintes definições devem ser aplicadas salvo indicação em contrário. Para os propósitos desta invenção, os elementos químicos são identificados de acordo com a Tabela Periódica dos Elementos, versão CAS, "Handbook of Chemistry and Physics", 75 ed. Adicionalmente, os princípios gerais de química orgânica são descritos em "Organic Chemistry", Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito: 1999, e "March’s Advanced Organic Chemistry", 5 ed., Ed.: Smith, M.B. e March, J., John Wiley & Sons, New York, EUA: 2001, cujos conteúdos integrais são aqui incorporados, a título de referência.

[000182] Conforme aqui descrito, uma faixa numérica especificada de átomos inclui qualquer número inteiro contido na mesma. Por exemplo, um grupo tendo de 1 a 4 átomos pode ter 1, 2, 3, ou 4 átomos.

[000183] Conforme aqui descrito, os compostos da invenção podem, opcionalmente, estar substituídos com um ou mais substituintes, conforme ilustrados de modo geral na presente invenção, ou como exemplificado por classes específicas, subclasses, e espécies da invenção. Será entendido que a expressão "opcionalmente substituído(a)" é usada de forma intercambiável com a expressão "substituído(a) ou não substituído(a)". Em geral, o termo "substituído(a)", precedido ou não pelo termo "opcionalmente", refere- se à substituição de radicais de hidrogênio em uma dada estrutura pelo radical de um substituinte especificado. Salvo indicação em contrário, um grupo opcionalmente substituído pode ter um substituinte em cada posição substituível do grupo, e quando mais de uma posição em qualquer dada estrutura pode estar substituída com mais de um substituinte selecionado de um grupo especificado, o substituinte pode ser igual ou diferente em cada posição. Combinações de substituintes considerados por esta invenção são de preferência aqueles que resultam na formação de compostos estáveis ou quimicamente possíveis.

[000184] Salvo indicação em contrário, um substituinte conectado por uma ligação traçada a partir do centro de um anel significa que o substituinte pode estar ligado em qualquer posição do anel. No exemplo i abaixo, por exemplo, J1 pode estar ligado em qualquer posição no anel piridila. No caso de anéis bicíclicos, uma ligação traçada através de ambos os anéis indica que o substituinte pode estar ligado a partir de qualquer posição do anel bicíclico. No exemplo ii abaixo, por exemplo, J1 pode estar ligado ao anel de 5 membros (no átomo de nitrogênio, por exemplo), e ao anel de 6 membros.

[000185] O termo "estável", como aqui usado, refere-se aos compostos que não são substancialmente alterados quando submetidos às condições para permitir suas produção, detecção, recuperação, purificação, e uso para um ou mais dos propósitos aqui descritos. Em algumas modalidades, um composto estável ou um composto quimicamente possível é um que não é substancialmente alterado quando mantido a uma temperatura de 40°C ou mais baixa, na ausência de umidade ou sob outras condições quimicamente reativas, durante pelo menos uma semana.

[000186] termo "alifático" ou "grupo alifático", como usado aqui, significa um cadeia linear (isto é, não ramificada), ramificada, ou cíclica, cadeia de hidrocarbonetos substituída ou não substituída que está completamente saturada ou que contém uma ou mais unidades de insaturação que tem um único ponto de ligação no resto da molécula.

[000187] Salvo indicação em contrário, os grupos alifáticos contêm 1 a 20 átomos de carbono alifáticos. Em algumas modalidades, os grupos alifáticos contêm 1 a 10 átomos de carbono alifáticos. Em outras modalidades, grupos alifáticos contêm 1 a 8 átomos de carbono alifáticos. Em ainda outras modalidades, os grupos alifáticos contêm 1 a 6 átomos carbono alifáticos, e em ainda outras modalidades os grupos alifáticos contêm 1 a 4 átomos de carbono alifáticos. Os grupos alifáticos podem ser grupos alquila, alquenila ou alquinila lineares ou ramificados, substituídos ou não substituídos. Exemplos específicos incluem, mas não se limitam a, metila, etila, isopropila, n-propila, sec-butila, vinila, n- butenila, etinila, e terc-butila. Os grupos alifáticos podem também ser cíclicos, ou ter uma combinação de grupos lineares ou ramificados e cíclicos. Exemplos destes tipos de grupos alifáticos incluem, mas não se limitam a, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila, ciclo- hexenila, -CH2-ciclopropila, CH2CH2CH(CH3)-ciclo-hexila.

[000188] termo "cicloalifático" (ou "carbociclo" ou "carbociclila") refere- se a um hidrocarboneto monocíclico C3-C8 ou hidrocarboneto bicíclico C8-C12 que está completamente saturado ou que contém uma ou mais unidades de insaturação, o qual não é, contudo, aromático, tendo um único ponto de ligação ao resto da molécula em que qualquer anel individual no dito sistema de anéis bicíclicos tem 3 a 7 membros. Exemplos de grupos cicloalifáticos incluem, mas não se limitam a, grupos cicloalquila e cicloalquenila. Exemplos específicos incluem, mas não se limitam a, ciclo-hexila, ciclopropenila, e ciclobutila.

[000189] termo "heterociclo", "heterociclila", ou "heterocíclico" como aqui usado significa sistemas de anéis não aromático, monocíclico, bicíclico, ou tricíclico em que um ou mais membros de anel são um heteroátomo independentemente selecionado. Em algumas modalidades, o grupo "heterociclo", "heterociclila", ou "heterocíclico" tem três a quatorze membros de anel, no qual um ou mais membros de anel é um heteroátomo independentemente selecionado dentre oxigênio,enxofre, nitrogênio ou fósforo, sendo que cada anel no sistema contém de 3 a 7 membros de anel.

[000190] Exemplos de heterociclos incluem, mas não se limitam a, 3- 1H-benzimidazol-2-ona, 3-(1-alquila)-benzimidazol-2-ona, 2-tetra- hidrofuranila, 3-tetra-hidrofuranila, 2-tetra-hidrotiofenila, 3-tetra- hidrotiofenila, 2-morfolino, 3-morfolino, 4-morfolino, 2-tiomorfolino, 3- tiomorfolino, 4-tiomorfolino, 1-pirrolidinila, 2-pirrolidinila, 3-pirrolidinila, 1- tetra-hidropiperazinila, 2-tetra-hidropiperazinila, 3-tetra-hidropipera- zinila, 1-piperidinila, 2-piperidinila, 3-piperidinila, 1-pirazolinila, 3-pira- zolinila, 4-pirazolinila, 5-pirazolinila, 1-piperidinila, 2-piperidinila, 3- piperidinila, 4-piperidinila, 2-tiazolidinila, 3-tiazolidinila, 4-tiazolidinila, 1- imidazolidinila, 2-imidazolidinila, 4-imidazolidinila, 5-imidazolidinila, indolinila, tetra-hidroquinolinila, tetra-hidroisoquinolinila, benzotiolano, benzoditiano e 1,3-di-hidro-imidazol-2-ona.

[000191] Grupos cíclicos, (por exemplo, cicloalifático e heterociclos), podem estar linearmente fusionados, estar em ponte, ou ser espirocí- clicos.

[000192] termo "heteroátomo" significa um ou mais de oxigênio, enxofre, nitrogênio, fósforo, ou silício (incluindo qualquer forma oxidada de nitrogênio, enxofre, fósforo, ou silício; a forma quaternizada de qualquer nitrogênio básico ou; um nitrogênio substituível de um anel heterocíclico, por exemplo N (como em 3,4-di-hidro-2H-pirrolila), NH (como em pirrolidinila) ou NR+ (como em pirrolidinila N-substituída)).

[000193] termo "insaturado", como usado aqui, significa que uma porção tem uma ou mais unidades de insaturação. Como seria entendido por uma pessoa versada na técnica, os grupos insaturados podem estar parcialmente insaturados ou completamente insaturados. Exemplos de grupos parcialmente insaturados incluem, mas não se limitam a, buteno, ciclo-hexeno, e tetra-hidropiridina. Os grupos completamente insaturados podem ser aromáticos, anti-aromáticos, ou não aromáticos. Exemplos de grupos completamente insaturados incluem, mas não se limitam a, fenila, ciclooctatetraeno, piridila, tienila, e 1-metilpiridin-2(1H)-ona.

[000194] termo "alcóxi", ou "tioalquila", como usado aqui, refere-se a um grupo alquila, conforme anteriormente definido, ligado através de um átomo de oxigênio ("alcóxi") ou enxofre ("tioalquila").

[000195] Os termos "haloalquila", "haloalquenila", "haloalifático", e "haloalcóxi" significam alquila, alquenila ou alcóxi, como for o caso, substituídos com um ou mais átomos de halogênio. Este termo inclui grupos alquila perfluorados, como -CF3 e -CF2CF3.

[000196] Os termos "halogênio", "halo", e "hal" significam F, Cl, Br, ou I.

[000197] termo "arila" usado sozinho ou como parte de uma porção maior como em "arilalquila", "aralcóxi", ou "ariloxialquila", refere-se aos sistemas de anéis monocíclicos, bicíclicos, e tricíclicos, tendo um total de cinco a quatorze membros de anel, em que pelo menos um anel do sistema é aromático e no qual cada anel do sistema contém 3 a 7 membros de anel. O termo "arila" pode ser usado de forma intercam- biável com o termo "anel arila".

[000198] termo "heteroarila", usado sozinho ou como parte de uma porção maior como em "heteroaralquila" ou "heteroarilalcóxi", refere-se aos sistemas de anéis monocíclicos, bicíclicos, e tricíclicos, tendo um total de cinco a quatorze membros de anel, em que pelo menos um anel do sistema é aromático, pelo menos um anel do sistema contém um ou mais heteroátomos, e nos quais cada anel do sistema contém 3 a 7 membros de anel. O termo "heteroarila" pode ser usado de forma intercambiável com o termo "anel heteroarila" ou com o termo "heteroaromático". Exemplos de anéis heteroarila incluem, mas não se limitam a, 2-furanila, 3-furanila, N-imidazolila, 2-imidazolila, 4- imidazolila, 5-imidazolila, benzimidazolila, 3-isoxazolila, 4-isoxazolila, 5- isoxazolila, 2-oxazolila, 4-oxazolila, 5-oxazolila, N-pirrolila, 2-pirrolila, 3- pirrolila, 2-piridila, 3-piridila, 4-piridila, 2-pirimidinila, 4-pirimidinila, 5- pirimidinila, piridazinila (por exemplo, 3-piridazinila), 2-tiazolila, 4- tiazolila, 5-tiazolila, tetrazoíla (por exemplo, 5-tetrazoíla), triazolila (por exemplo, 2-triazolila e 5-triazolila), 2-tienila, 3-tienila, benzofurila, benzotiofenila, indolila (por exemplo, 2-indolila), pirazolila (por exemplo, 2-pirazolila), isotiazolila, 1,2,3-oxadiazolila, 1,2,5-oxadiazolila, 1,2,4- oxadiazolila, 1,2,3-triazolila, 1,2,3-tiadiazolila, 1,3,4-tiadiazolila, 1,2,5- tiadiazolila, purinila, pirazinila, 1,3,5-triazinila, quinolinila (por exemplo, 2-quinolinila, 3-quinolinila, 4-quinolinila), e isoquinolinila (por exemplo, 1-isoquinolinila, 3-isoquinolinila, ou 4-isoquinolinila).

[000199] Deve ser entendido que o termo "heteroarila" inclui certos tipos de anéis heteroarila que existem em equilíbrio entre duas formas diferentes. Mais especificamente, por exemplo, espécies como hidropiridina e piridinona (e de modo semelhante hidroxipirimidina e pirimidinona) destinam-se a serem incluídas na definição de "heteroarila."

[000200] Os termos "grupo que protege" e "grupo protetor" como usados aqui, são intercambiáveis e se referem a um agente usado para bloquear temporariamente um ou mais grupos funcionais desejados em um composto com múltiplos sítios reativos. Em certas modalidades, um grupo protetor tem uma ou mais, ou de preferência todas, as seguintes características: a) é adicionado seletivamente a um grupo funcional em bom rendimento para dar um substrato protegido que é b) estável às reações que ocorrem em um ou mais dos demais sítios reativos; e c) é seletivamente removível em bom rendimento por reagentes que não atacam o grupo funcional desprotegido regenerado. Como seria entendido por uma pessoa versada na técnica, em alguns casos, os reagentes não atacam outros grupos reativos no composto. Em outros casos, os reagentes também podem reagir com outros grupos reativos no composto. Exemplos de grupos protetores são detalhados em Greene, T.W., Wuts, P. G em "Protective Groups in Organic Synthesis", 3 ed., John Wiley & Sons, New York, EUA: 1999 (e outras edições do livro), cujo conteúdo integral é aqui incorporado, a título de referência. O termo "grupo protetor de nitrogênio", como usado aqui, refere-se a um agente usado para bloquear temporariamente um ou mais sítios reativos de nitrogênio desejados em um composto multifuncional. Os grupos protetores de nitrogênio preferenciais também possuem as caracterís-ticas exemplificadas para um grupo protetor acima, e certos grupos protetores de nitrogênio exemplificadores também são detalhados em Capítulo 7 em Greene, T.W., Wuts, P. G em "Protective Groups in Organic Synthesis", Terceira Edição, John Wiley & Sons, New York, EUA: 1999, cujo conteúdo integral é aqui incorporado, a título de referência.

[000201] Em algumas modalidades, uma unidade de metileno de uma cadeia alquila ou alifática está opcionalmente substituída com um outro átomo ou grupo. Exemplos destes átomos ou grupos incluem, mas não se limitam a, nitrogênio, oxigênio, enxofre, -C(O)-, -C(=N-CN)-, -C(=NR)- , -C(=NOR)-, -SO-, e -SO2-. Estes átomos ou grupos podem ser combinados para formar grupos maiores. Exemplos destes grupos incluem, mas não se limitam a, -OC(O)-, -C(O)CO-, -CO2-, -C(O)NR-, - C(=N-CN), -NRCO-, -NRC(O)O-, -SO2NR-, -NRSO2-, -NRC(O)NR-, - OC(O)NR-, e -NRSO2NR-, em que R é, por exemplo, H ou grupo alifático C1-6. Deve ser entendido que estes grupos podem ser ligados às unidades de metileno da cadeia alifática via ligações simples, dupla ou tripla. Um exemplo de uma substituição opcional (átomo de nitrogênio neste caso) que é ligada à cadeia alifática via uma ligação dupla seria - CH2CH=N-CH3. Em alguns casos, especificamente na extremidade terminal, uma substituição opcional pode ser ligada ao grupo alifático via uma ligação tripla. Um exemplo disto seria CH2CH2CH2C=N. Deve ser entendido que nesta situação, o nitrogênio terminal não é ligado a um outro átomo.

[000202] Também deve ser entendido que, o termo "unidade de metileno" também pode se referir às unidades de metileno ramificadas ou substituídas. Por exemplo, em uma porção isopropila [-CH(CH3)2], um átomo de nitrogênio (por exemplo, NR) a substituição da primeira "unidade de metileno" referida resultaria em dimetilamina [-N(CH3)2]. Em exemplos como estes, o versado na técnica deve compreender que o átomo de nitrogênio não terá nenhuns átomos adicionais ligados ao mesmo, e o "R" do "NR" estaria ausente neste caso.

[000203] Salvo indicação em contrário, as substituições opcionais formam um composto quimicamente estável. As substituições opcionais podem ocorrer em ambos na cadeia e/ou em qualquer uma extremidade da cadeia; isto é, tanto no ponto de ligação e/ou também na extremidade terminal. Duas substituições opcionais também podem estar adjacentes uma à outra, dentro de uma cadeia desde que esta configuração resulte em um composto quimicamente estável. Por exemplo, um grupo alifático C3 pode ser opcionalmente substituído por 2 átomos de nitrogênio para formar -C-N=N. As substituições opcionais também podem substituir completamente todos os átomos de carbono de um cadeia. Por exemplo, um grupo alifático C3 pode ser opcionalmente substituído por -NR-, -C(O)-, e -NR- para formar -NRC(O)NR- (uma ureia).

[000204] Salvo indicação em contrário, se a substituição ocorrer na extremidade terminal, o átomo de substituição é ligado a um átomo de hidrogênio na extremidade terminal. Por exemplo, se uma unidade de metileno de -CH2CH2CH3 for opcionalmente substituída por -O-, o composto resultante poderia ser -OCH2CH3, -CH2OCH3, ou - CH2CH2OH. Deve ser entendido que se o átomo terminal não contiver nenhuns elétrons de valência livre, então um átomo de hidrogênio não será necessário na extremidade terminal (por exemplo, -CH2CH2CH=O ou -CH2CH2CSN).

[000205] Salvo indicação em contrário, as estruturas representadas na presente invenção também devem incluir todas as formas isoméricas (por exemplo, enantiomérica, diastereomérica, geométrica, conformacional, e rotacional) da estrutura. Por exemplo, as configu-rações R e S de cada centro assimétrico, isômeros de ligação dupla (Z) e (E), e isômeros conformacionais (Z) e (E) estão incluídos nesta invenção. Conforme seria compreendido por uma pessoa versada na técnica, um substituinte pode girar livremente ao redor de ligações giratórias. Por exemplo, um substituinte descrito como

[000206] também representa

[000207] Portanto, isômeros estereoquímicos isolados, bem como misturas enantioméricas, diastereoméricas, geométricas, conforma- cionais, rotacionais dos presentes compostos estão dentro do escopo da invenção.

[000208] Salvo indicação em contrário, todas as formas tautoméricas dos compostos da invenção estão dentro do escopo da invenção.

[000209] Nos compostos desta invenção qualquer átomo não especificamente designado como um isótopo específico destina-se a significar que representa qualquer isótopo específico daquele átomo. Exceto onde especificado ao contrário, quando uma posição for designada especificamente como "H" ou "hidrogênio", entende-se que a posição tem hidrogênio em sua composição isotópica de abundância natural. Também exceto onde especificado em contrário, quando uma posição é especificamente designada como "D" ou "deutério", é entendido que a posição tem deutério em uma abundância que é pelo menos 3.340 vezes maior que a abundância natural de deutério, que é 0,015% (isto é, pelo menos 50,1% de incorporação de deutério).

[000210] Tanto "D" como "d" referem-se ao deutério.

[000211] Adicionalmente, salvo indicação em contrário, as estruturas representadas na presente invenção também incluem compostos que diferem apenas na presença de um ou mais átomos isotopicamente enriquecidos. Por exemplo, os compostos que apresentam as presentes estruturas exceto a substituição de hidrogênio por deutério ou trítio, ou a substituição de um carbono por um carbono enriquecido em 13C ou 14C estão dentro do escopo da presente invenção. Estes compostos são úteis, por exemplo, como sondas ou ferramentas analíticas em ensaios biológicos.

Processos

[000212] Os processos e compostos aqui descritos são úteis para produzir inibidores de ATR que contêm um núcleo de aminopirazina- isoxazol. Os procedimentos sintéticos gerais mostrados nos esquemas da presente invenção são úteis para gerar uma ampla variedade de espécies químicas que podem ser usadas na fabricação de compostos farmacêuticos.ESQUEMA A

Etapa 1

[000213] composto da fórmula I pode ser produzido de acordo com as etapas representadas no Esquema A. A etapa 1 ilustra o uso de um aldeído/cetal prontamente disponível como um ponto de partida para o preparo de compostos de fórmula I, I-A, e I-B. Aminação redutiva entre o composto 1 e uma amina primária adequada, sob condições conhecidas por aquelas pessoas versadas na técnica resulta no composto 2 onde um grupo benzilamina foi instalado. Por exemplo, iminas podem ser formadas através da combinação de uma amina e um aldeído em um solvente adequado, como diclorometano (DCM), dicloroetano (DCE), um solvente alcoólico (por exemplo, metanol, etanol), ou um solvente não prótico (por exemplo, dioxano ou tetra- hidrofurano (THF). Estas iminas podem então ser reduzidas por agentes redutores conhecidos incluindo, mas não se limitando a, NaBH4, NaBH3CN, e NaBH(OAc)3 (consulte JOC 1996, 3849). Em algumas modalidades, 1,05 equivalentes de amina são combinados com 1 equivalente de aldeído em metanol. Em outras modalidades, 1,2 equivalentes de amina são combinados com 1 equivalente de aldeído em metanol. Esta etapa é então seguida pela redução com 0,6 a 1,4 (como 1,2) equivalentes de NaBH4. Em alguns casos, se um sal de amina é usado, pode se adicionar também uma base (por exemplo, Et3N ou di-isopropiletilamina).

Etapa 2

[000214] A etapa 2 ilustra a proteção da benzilamina 1 preparada acima, com o uso de um grupo protetor à base de carbamato, sob condições de proteção adequadas conhecidas por aquelas pessoas versadas na técnica. Vários grupos protetores, como Cbz e Boc, podem ser usados. As condições de proteção incluem, mas não se limitam às, seguintes:

[000215] R-OCOCl, uma base amina terciária adequada, e um solvente adequado; em que R é alquilaC1-6 opcionalmente substituída com fenila;

[000216] R(CO2)OR’, um solvente adequado, e opcionalmente um quantidade catalítica de base, em que R e R’ são cada um indepen-dentemente alquilaC1-6 opcionalmente substituída com fenila;

[000217] [RO(C=O)]2O, uma base adequada, e um solvent adequado.

[000218] Exemplos de bases adequadas incluem, mas não se limitam a, Et3N, di-isopropilamina, e piridina. Exemplos de solventes adequados incluem solventes clorados (por exemplo, diclorometano (DCM), dicloroetano (DCE), CH2Cl2, e clorofórmio), éteres (por exemplo, tetra- hidrofurano (THF), 2-MeTHF, e dioxano), hidrocarbonetos aromáticos (por exemplo, tolueno, xilenos) e outros solventes apróticos.

[000219] Em algumas modalidades, a proteção pode ser realizada através da reação da benzilamina com (Boc)2O e Et3N em DCM. Em algumas modalidades, 1,02 equivalentes de (Boc)2O e 1,02 equivalentes de Et3N são usados. Em uma outra modalidade, a proteção pode ser realizada através da reação da benzilamina com (Boc)2O em 2- MeTHF. Em algumas modalidades, 1,05 equivalentes de (Boc)2O são usados.

Etapa 3

[000220] A etapa 3 mostra como o grupo funcional cetal em 3 é então convertido na oxima 4 em uma única etapa. Esta conversão direta de cetal em oxima não é extensivamente descrita na literatura e será reconhecido que essa etapa também poderá ser conduzida em uma sequência de duas etapas, transitando através do aldeído após a desproteção do grupo cetal com o uso metodologias conhecidas por aquelas pessoas versadas na técnica.

[000221] As condições de formação de oxima compreendem misturar juntos hidroxilamina, ácido, opcionalmente um agente desidratante, e um solvente alcoólico. Em algumas modalidades, o ácido é uma quantidade catalítica. Em algumas modalidades, o ácido é pTSA ou HCl, o agente desidratante são peneiras moleculares ou dimetoxiacetona, e o solvente alcoólico é metanol ou etanol. Em algumas modalidades, o cloridrato de hidroxilamina é usado, em cujo caso nenhum ácido adicional é necessário. Em outras modalidades, o produto desejado é isolado via um processamento bifásico e opcionalmente precipitação ou cristalização. Se um processamento bifásico é usado, um agente desidratante não é necessário.

[000222] Em outra modalidade, as condições de formação de oxima compreendem misturar juntos hidroxilamina, um ácido, um solvente orgânico e água. Exemplos de solventes orgânicos adequados incluem solventes clorados (por exemplo, diclorometano (DCM), dicloroetano (DCE), CH2Cl2, e clorofórmio), éteres (por exemplo, tetra-hidrofurano (THF), 2-MeTHF e dioxano), hidrocarbonetos aromáticos (por exemplo, tolueno, xilenos) e outros solventes apróticos. Em algumas modalidades, 1,5 equivalentes de cloridrato de hidroxilamina são usados, o solvente orgânico é 2-MeTHF e a água é tamponada com Na2SO4. Em uma outra modalidade, 1,2 equivalentes de cloridrato de hidroxilamina são usados, o solvente orgânico é tetra-hidrofurano (THF).

[000223] Em algumas modalidades, as condições de desproteção adequadas compreendem adicionar quantidades catalíticas de ácido para-toluenossulfônico (pTSA), acetona, e água; e, então, formar a oxima com o uso de condições conhecidas pela pessoa versada na técnica. Em outras modalidades, uma sequência de etapa única é usada. Em algumas modalidades, a sequência de etapa única compreende adicionar NH2OH.HCl e uma mistura de tetra-hidrofurano (THF) e água. Em algumas modalidades, 1 equivalente do composto da fórmula 3 é combinado com 1,1 equivalentes de NH2OH.HCl em uma mistura a 10:1 v/v de tetra-hidrofurano (THF)/água.

Etapa 4

[000224] A etapa 4 ilustra como a oxima 4 é então transformada e envolvida em uma cicloadição [3+2] para formar o isoxazol 5. Esta transformação pode ser conduzida em um recipiente, mas exige duas etapas distintas. A primeira etapa é uma oxidação do grupo funcional oxima para uma nitrona, ou um intermediário similar com o mesmo grau de oxidação, por exemplo um cloro-oxima. Esta espécie reativa então reage com um alcino em uma cicloadição [3+2] para formar o aduto de isoxazol.

[000225] Em algumas modalidades, as condições de formação de isoxazol adequadas consistem em duas etapas, a primeira etapa que compreende reagir o composto da fórmula 4 sob condições de formação de cloro-oxima adequadas para formar uma cloro-oxima intermediária; a segunda etapa que compreende a reação de cloro-oxima intermediária com acetileno sob condições de cicloadição adequadas para formar um composto da fórmula 5.

[000226] Em algumas modalidades, as condições de formação da cloro-oxima são selecionadas dentre:

[000227] N-clorossuccinimida e solvente adequado;

[000228] peroximonossulfato de potássio, HCl, e dioxano; e

[000229] hipoclorito de sódio e um solvente adequado

[000230] Exemplos de solventes adequados incluem, mas não se limitam a, solventes não próticos (por exemplo, DCM, DCE, tetra- hidrofurano (THF), 2-MeTHF, MTBE e dioxano), hidrocarbonetos aromáticos (por exemplo tolueno, xilenos), e acetatos de alquila (por exemplo, acetato de isopropila, acetato de etila).

[000231] isolamento do produto pode ser obtido pela adição de um antissolvente em uma solução de um composto da fórmula 5. Exemplos de solventes adequados para isolar a cloro-oxima intermediária incluem misturas de solventes adequados (EtOAc, IPAC) com hidrocarbonetos (por exemplo, hexanos, heptano, ciclo-hexano), ou hidrocarbonetos aromáticos (e.g., tolueno, xilenos). Em algumas modalidades, é adicionado heptano em uma solução de cloro-oxima em IPAC.

[000232] As condições de cicloadição adequadas consistem na combinação da cloro-oxima com acetileno com uma base adequada e um solvente adequado. Os solventes adequados incluem solventes próticos, solvente apróticos, solventes polares, e solventes não polares. Exemplos de solvente adequado incluem, mas não se limitam a, acetonitrila, tetra-hidrofurano, 2-metiltetra-hidrofurano, MTBE, EtOAc, i- PrOAc, DCM, tolueno, dimetilformamida, e metanol. Bases adequadas incluem, mas não se limitam a, piridina, DIEA, TEA, t-BuONa, e K2CO3. Em algumas modalidades, as condições de cicloadição adequadas compreendem adicionar 1,0 equivalentes de cloro-oxima, 1,0 equivalentes de acetileno, 1,1 equivalentes de Et3N em DCM.

[000233] isolamento do produto pode ser obtido pela adição de um antissolvente em uma solução de um composto da fórmula 5. Exemplos de solventes adequados para o isolamento da cloro-oxima incluem misturas de solventes adequados (EtOAc, IPAC) com hidrocarbonetos (por exemplo, hexanos, heptano, ciclo-hexano), ou hidrocarbonetos aromáticos (por exemplo, tolueno, xilenos). Em algumas modalidades, é adicionado heptano em uma solução de cloro-oxima em IPAC.

Etapa 5

[000234] A etapa 5 ilustra a(s) etapa(s) final (finais) de preparo de compostos de fórmula I. Quando o grupo R4 é bromo, o intermediário 5 pode ser submetido a um acoplamento cruzado de Suzuki com ésteres ou ácido borônico, sob condições conhecidas por aquelas pessoas versadas na técnica, para formar compostos onde R4 é uma arila, heteroarila ou porções alternativas resultantes da reação de acoplamento mediada por metal. Quando o intermediário 5 é adequadamente funcionalizado, uma etapa de desproteção pode ser realizada para remover os grupos protetores e gerar os compostos de fórmula I.

[000235] As reações de acoplamento mediada por metal são conhecidas na técnica (consulte, por exemplo, Org. Proc. Res. Dev. 2010, 30-47). Em algumas modalidades, as condições de acoplamento adequadas compreendem adicionar 0,1 equivalente de Pd[P(tBu)3]2; 1 equivalente de éster ou ácido borônico ou; e 2 equivalentes de carbonato de sódio em uma razão de 2:1 v/v de acetonitrila/água a 6070°C. Em outras modalidades, as condições de acoplamento adequadas compreendem adicionar 0,010-0,005 equivalente de Pd(dtbpf)Cl2, 1 equivalente de éster ou ácido borônico ou, e 2equivalentes de carbonato de potássio em 7:2 v/v de tolueno e água a 70°C.

[000236] O produto final pode ser tratado com um sequestrante de metal (sílica-gel, resinas funcionalizadas, carvão vegetal) (consulte, por exemplo, Org. Proc. Res. Dev. 2005, 198-205). Em algumas modalidades, a solução do produto é tratada com resina Biotage MP- TMT.

[000237] produto também pode ser isolado por cristalização em um solvente alcoólico (por exemplo, metanol, etanol, isopropanol). Em algumas modalidades o solvente é etanol. Em outras modalidades o solvente é isopropanol.

[000238] A desproteção de grupos Boc é conhecida na técnica (consulte, por exemplo, "Protecting Groups in Organic Synthesis", Greene e Wuts). Em algumas modalidades, as condições de desproteção adequadas são ácido clorídrico em acetona a 35-45°C. Em outras modalidades, as condições de desproteção adequadas são TFA em DCM.

Etapa 6

[000239] A etapa 6 ilustra como os compostos de fórmula I são convertidos em compostos de fórmula I-A com o uso de uma base sob condições adequadas conhecidas por aquelas pessoas versadas na técnica. Em algumas modalidades, o isolamento da forma de base livre dos compostos de fórmula I pode ser obtido pela adição de base adequada, como NaOH, em uma solução alcoólica ácida de compostos de fórmula I para precipitar o produto.

Etapa 7

[000240] A etapa 7 ilustra como compostos de fórmula I-A são convertidos em compostos de fórmula I-B com o uso de um ácido sob condições adequadas conhecidas por aquelas pessoas versadas na técnica.

[000241] Em algumas modalidades as condições adequadas envolvem adicionar HCl aquoso, em um suspensão de compostos de fórmula I-A em acetona a 35°C então aquecer a 50°C.ESQUEMA B: Formação de d1-boronato

[000242] Esquema B mostra uma método sintético geral para o preparo de intermediários d1-boronato. Um 1-halo-(isopropilsulfonil) benzeno adequado é tratado com uma base como, mas não se limitando a, NaH, LiHMDS ou KHMDS seguido de inativação do ânion com fonte de deutério, como D2O. O halogênio é então transformado em um derivado de boronato adequado via, por exemplo, um acoplamento cruzado mediado por metal catalisada, por exemplo, por Pd(tBu3)2 ou Pd(dppf)CbDCM. ESQUEMA C: Formação de d6-boronato

[000243] Esquema C mostra um método sintético geral para o preparo de intermediários d6-boronato. Um 1-halo-(metilsulfonil) benzeno adequado é tratado com uma base como, mas não se limitando a, NaH, LiHMDS ou KHMDS seguido de inativação do ânion com fonte de deutério como D3CI. Esta reação é repetida até que a quantidade desejada de deutério tenha sido incorporada à molécula. O halogênio é então transformado em um derivado de boronato adequado via, por exemplo, acoplamento cruzado mediado por metal catalisada, por exemplo, por Pd(tBu3)2 ou Pd(dppf)C^DCM.ESQUEMA D: Formação de d7-boronato

[000244] Esquema D mostra um método sintético geral para preparação de intermediários d7-boronato. 4-Bromobenzenotiol é tratado com uma base como, mas não se limitando a, NaH, LiHMDS ou KHMDS seguido de inativação do ânion com fonte de deutério como 1,1,1,2,3,3,3-heptadeutério-2-iodo-propano. O sulfeto é então oxidado à sulfona correspondente com o uso de, por exemplo, mCPBA ou Oxone. O halogênio é então transformado em um derivado de boronato adequado via, por exemplo, acoplamento cruzado mediado por metal catalisado por, por exemplo, Pd(tBu3)2 ou Pd(dppf)C^DCM. ESQUEMA E: Formação de boronato de anel arila deuterado

[000245] Esquema E mostra um método sintético geral para o preparo de intermediários de boronato onde o anel arila é substituído com um deutério. Um derivado de 1-iodo-4-bromo-arila adequado é tratado com um tiol substituído como propano-2-tiol sob condições de acoplamento catalisado por metal com o uso de um catalisador como CuI. O sulfeto é então oxidado para a sulfona correspondente com o uso de, por exemplo, mCPBA ou Oxone. O brometo é então transformado em um derivado de boronato adequado via, por exemplo, acoplamento cruzado mediado por metal catalisado, por exemplo, por Pd(tBu3)2 ou Pd(dppf)C^DCM. O substituinte restante é então convertido em deutério por, por exemplo, troca de halogênio-deutério catalisada por metal com o uso de um catalisador metálico adequado, como Pd sobre C sob uma atmosfera de gás deutério. Além disto, o 1-bromo- (isopropilsulfonil)benzeno pode ser tratado com uma base como, mas não se limitando a, NaH, LiHMDS ou KHMDS seguido de inativação do ânion com fonte de deutério como D2O. O brometo é então transformado em um derivado de boronato adequado através de, por exemplo, acoplamento cruzado mediado por metal por, por exemplo, Pd(tBu3)2 ou Pd(dppf)C^DCM. O substituinte restante é então convertido em deutério por, por exemplo, troca de halogênio-deutério catalisada por metal com o uso de um catalisador metálico adequado, como Pd sobre C sob uma atmosfera de deutério gás. ESQUEMA F: Formação de boronato de anel arila deuterado

[000246] Esquema F mostra um outro método sintético geral para o preparo de intermediários de boronato onde o anel arila é substituído com um deutério. Um 4-bromobenzenotiol substituído é tratado com uma base como, mas não se limitando a, NaH, LiHMDS ou KHMDS seguido de inativação do ânion com fonte de deutério como 1,1,1,2,3,3,3-heptadeutério-2-iodo-propano. O sulfeto é então oxidado à sulfona correspondente com o uso, por exemplo, de mCPBA ou Oxone. O halogênio é então transformado em um derivado de boronato adequado via, por exemplo, acoplamento cruzado mediado por metal por, por exemplo, Pd(tBu3)2 ou Pd(dppf)Ch^DCM. O substituinte restante é então convertido em deutério por, por exemplo, troca de halogênio- deutério catalisada por metal com o uso de um catalisador metálico adequado, como Pd sobre C sob uma atmosfera de gás deutério.ESQUEMA G: Formação de boronato de anel arila deuterado

[000247] Esquema G mostra um outro método sintético geral para o preparo de intermediários de boronato onde o anel arila é substituído com um deutério. Um 4-bromobenzenotiol substituído é tratado com uma base como, mas não se limitando a, NaH, LiHMDS ou KHMDS seguido de inativação do ânion com, por exemplo, MeI. O sulfeto é então oxidado à sulfona correspondente com o uso, por exemplo, de mCPBA ou Oxone. A sulfona é tratada com uma base como, mas não se limitando a, NaH, LiHMDS ou KHMDS seguido de inativação do ânion com fonte de deutério como D3CI. Esta reação é repetida até que a quantidade desejada de deutério tenha sido incorporada à molécula. O halogênio é então transformado em um derivado de boronato adequado via, por exemplo, acoplamento cruzado mediado por metal, por exemplo, por Pd(tBu3)2 ou Pd(dppf)Ch^DCM. O substituinte restante é então convertido em deutério por, por exemplo, troca de halogênio- deutério catalisada por metal com o uso um catalisador metálico adequado, como Pd sobre C sob uma atmosfera de gás deutério.ESQUEMA H: Formação de intermediários de anel aril-oxima deuterado

[000248] Esquema H mostra um método sintético geral para o preparo de intermediários de oxima onde o anel arila é substituído com um deutério. O grupo metila de um derivado 4-metilbenzoato de metila adequadamente substituído pode ser convertido no dibrometo correspondente sob condições como bromação catalisada por AIBN com NBS. Este dibrometo é então hidrolisado ao aldeído correspondente, por exemplo, com o uso de AgNO3 em acetona/água. A proteção do aldeído como um acetal adequado, por exemplo o dietil- acetal e subsequente conversão do substituinte restante em deutério por exemplo, por troca de halogênio-deutério catalisada por metal com o uso de um catalisador metálico adequado, como Pd sobre C sob uma atmosfera de gás deutério dá o intermediário éster deuterado. A funcionalidade éster pode ser reduzida com o uso de reagentes como LiAlH4, NaBH4, NaBD4 ou LiAlD4 para dar o aldeído correspondente. Este pode ser submetido às condições de aminação redutora com o uso de uma amina adequada, como metilamina ou d3-metilamina com o uso de um agente redutor como NaBH4 ou NaBD4 para dar o derivado de amina correspondente. Este pode ser protegido com, por exemplo, um grupo Boc e o acetal convertido na oxima com o uso, por exemplo, de cloridrato de hidroxilamina em tetra-hidrofurano (THF)/água.ESQUEMA I: Formação de intermediários de anel aril-oxima deuterado

[000249] Esquema I mostra um outro método sintético geral para o preparo de intermediários de oxima onde o anel arila é substituído com um deutério. O grupo metila de um derivado 4-metilbenzoato de metila adequadamente substituído pode ser convertido no dibrometo correspondente sob condições como bromação catalisada por AIBN com NBS. Este dibrometo é então hidrolisado ao aldeído correspondente, por exemplo, com o uso AgNO3 em acetona/água. A proteção do aldeído como um acetal adequado, por exemplo, o dimetil-acetal e subsequente conversão do substituinte remanescente em deutério por exemplo, por troca de halogênio-deutério catalisada por metal com o uso de um catalisador metálico adequado, como Pd sobre C sob uma atmosfera de gás deutério dá o éster deuterado intermediário. A funcionalidade éster pode ser convertida na amida primária correspondente sob condições padrão, como o aquecimento com uma solução de amônia em metanol. A amida pode ser reduzida à amina correspondente com o uso de reagentes, não se limitando a LiAlH4 ou LiAlD4. Esta pode ser protegida com, por exemplo, um grupo Boc. O NH de carbamato pode ser alquilado sob condições básicas com o uso de, por exemplo, NaH, LiHMDS ou KHMDS seguido de inativação do ânion com fonte de deutério como MeI ou D3CI. O acetal pode ser convertido em oxima com o uso de, por exemplo, cloridrato de hidroxilamina em tetra-hidrofurano (THF)/água.ESQUEMA J: Formação de intermediários de anel aril-oxima deuterado

[000250] Esquema J mostra um outro método sintético geral para o preparo de intermediários de oxima onde o anel arila é substituído com um deutério. O grupo metila de um derivado 4-metilbenzoato de metila adequadamente substituído pode ser convertido no dibrometo corres-pondente sob condições como bromação catalisada por AIBN com NBS. Este dibrometo é então hidrolisado ao aldeído correspondente, por exemplo com o uso AgNO3 em acetona/água. A proteção do aldeído como um cetal adequado, por exemplo, dimetil-acetal e subsequente conversão do substituinte remanescente em deutério através de, por exemplo, troca de halogênio-deutério catalisada por metal com o uso de um catalisador metálico adequado, como Pd sobre C sob uma atmosfera de gás deutério dá o intermediário éster deuterado. A funcionalidade éster pode ser convertida na amida primária correspondente sob condições padrão, como aquecimento com uma solução de amônia em metanol. A amida pode ser reduzida à amina correspondente com o uso de reagentes, não se limitando a LiAlH4 ou LiAlD4. Esta pode ser reagida sob condições de aminação redutiva com o uso uma amina adequada, como metilamina, d3-metilamina, formaldeído ou d2-formaldeído com o uso de um agente redutor como NaBH4 ou NaBD4 para dar o derivado de amina correspondente. Este pode ser protegido com, por exemplo, um grupo Boc. O acetal pode ser convertido na oxima com o uso, por exemplo, de cloridrato de hidroxilamina em tetra-hidrofurano (THF)/água.ESQUEMA K: Formação de intermediários de anel aril-oxima deuterado

[000251] Esquema K mostra um outro método sintético geral para o preparo de intermediários de oxima onde o anel arila é substituído com um deutério. O grupo metila de um derivado de 4-metilbenzoato de metila adequadamente substituído pode ser convertido no dibrometo correspondente sob condições como bromação catalisada por AIBN com NBS. Este dibrometo é então hidrolisado ao aldeído correspondente, por exemplo, com o uso AgNO3 em acetona/água. A proteção do aldeído como um acetal adequado, por exemplo o dimetil-acetal e subsequente conversão do substituinte remanescente em deutério através de, por exemplo, troca de halogênio-deutério catalisada por metal com o uso de um catalisador metálico adequado, como Pd sobre C sob uma atmosfera de gás deutério dá o éster intermediário deuterado. Este pode ser reagido sob condições de aminação redutiva com o uso de uma amina, como hidróxido de amônio, com o uso um agente redutor como NaBH4 ou NaBD4 para dar o derivado de amina correspondente. Este pode ser protegido com, por exemplo, um grupo Boc. O NH de carbamato pode alquilado sob condições básicas com o uso de, por exemplo, NaH, LiHMDS ou KHMDS, seguido de inativação de ânion com fonte de deutério tal como MeI ou D3CI. O éster pode ser reduzido ao álcool correspondente com o uso de um agente redutor adequado como LiBH4 ou NaBH4. O álcool pode ser oxidado ao aldeído com o uso de reagentes como MnO2 ou periodano de Dess-Martin. O acetal pode ser convertido na oxima com o uso de, por exemplo, de hidroxilamina aquosa.ESQUEMA L: Formação de intermediários de oxima deuterada

[000252] Esquema L mostra um método sintético geral para o preparo de intermediários oxima deuterada. 4-(Dietoximetil)benzaldeído pode ser reagido sob condições de aminação redutiva com o uso de uma amina adequada, como metilamina ou d3-metilamina com o uso de um agente redutor como NaBH4 ou NaBD4 para dar o derivado de amina correspondente. Este pode ser protegido com, por exemplo, um grupo Boc e o acetal convertido na oxima com o uso de, por exemplo, cloridrato de hidroxilamina em tetra-hidrofurano (THF)/água.ESQUEMA M: Formação de intermediários de oxima deuterada

[000253] Esquema M mostra um outro método sintético geral para o preparo de intermediários de oxima deuterada. A funcionalidade éster de 4-(dimetóxi metil)benzoato de metila pode ser convertida na amida primária correspondente sob condições padrão, como aquecimento com uma solução de amônia em metanol. A amida pode ser reduzida à amina correspondente com o uso reagentes não se limitando a LiAlH4 ou LiAlD4. Esta pode ser protegida com, por exemplo, um grupo Boc. O NH de carbamato pode ser alquilado sob condições básicas com o uso de, por exemplo, NaH, LiHMDS ou KHMDS, seguido de inativação do ânion com fonte de deutério tal como MeI ou D3CI. O acetal pode ser convertido na oxima com o uso de, por exemplo, cloridrato de hidroxilamina em tetra-hidrofurano (THF)/água.ESQUEMA N: Formação de intermediários de oxima deuterada

[000254] Esquema N mostra um outro método sintético geral para o preparo de intermediários de oxima deuterada. A funcionalidade éster de 4-(dimetoximetil)benzoato de metila pode ser convertida na amida primária correspondente sob condições padrão, como aquecimento com uma solução de amônia em metanol. A amida pode ser reduzido à amina correspondente com o uso de reagentes, não se limitando a LiAlH4 ou LiAlD4. Esta pode ser reagida sob condições de aminação redutiva com o uso de uma amina adequada, como metilamina, d3- metilamina, formaldeído ou d2-formaldeído com o uso de um agente redutor como o NaBH4 ou NaBD4 para dar o derivado de amina correspondente. Este pode ser protegido com, por exemplo, um grupo Boc. O acetal pode ser convertido na oxima com o uso de, por exemplo, cloridrato de hidroxilamina em tetra-hidrofurano (THF)/água.ESQUEMA O: Formação de intermediários de oxima deuterada

[000255] Esquema O mostra um outro método de síntese geral para o preparo dos intermediários de oxima deuterada. Uma benzilmina 4- substituída pode ser protegida com, por exemplo, um grupo Boc. O NH de carbamato pode ser alquilado sob condições básicas com o uso de, por exemplo, NaH, LiHMDS ou KHMDS, seguido de inativação do ânion com fonte de deutério como MeI ou D3CI. O éster pode ser reduzido ao álcool correspondente com o uso de um agente redutor adequado como LiBH4 ou NaBH4. O álcool pode ser oxidado ao aldeído com o uso de reagentes como MnO2 ou periodano de Dess-Martin. O acetal pode ser convertido na oxima com o uso de, por exemplo, hidroxilamina aquosa. ESQUEMA P: Formação de derivados de isoxazol

[000256] Esquema P mostra um método sintético geral para o preparo de derivados de pirazina-isoxazol deuterado. 3,5-dibromopirazin-2- amina é convertida ao alcino silil-protegido correspondente sob condições padrão de Sonagashira utilizando, por exemplo, Pd(PPh3)4 e CuI como catalisadores. A NH2 de pirazina pode então ser protegida como, por exemplo, o derivado di-Boc. O acoplamento de brometo de pirazina com um boronato, por exemplo, aqueles representados nos esquemas 1 a 6 acima, sob condições padrão de acoplamento cruzado de Suzuki, seguida pela remoção do grupo protetor silila dá o alcino intermediário desejado. As oximas, como aquelas representadas nos esquemas 7 a 14 acima, podem ser convertidas nas cloro-oximas correspondentes com o uso, por exemplo, de NCS. Os intermediários alcino e cloro-oxima podem ser submetidos a uma cicloadição [3+2] para dar o isoxazol correspondente sob condições padrão, por exemplo, pela adição de Et3N. Os grupos protetores Boc podem ser removidos sob condições ácidas como TAG em DCM ou HCl em MeOH/DCM para dar os derivados de pirazina-isoxal deuterados.ESQUEMA Q: Formação de derivados de isoxazol deuterado

[000257] Esquema Q mostra um método sintético geral para o prepare de derivados de isoxazol deuterado. A NH2 de pirazina e a NH de benzilamina-amina podem ser protegidas sob condições padrão com o uso de anidrido trifluoroacético. A halogenação do anel isoxazol com, por exemplo, NIS, seguida pela remoção do grupo protetor trifluoroacetato sob condições básicas fornece os intermediários halogenados desejados. O halogênio pode então ser convertido em deutério através de, por exemplo, troca de halogênio-deutério catalisada por metal.

Abreviações

[000258] ATP adenosina-trifosfato Boc carbamato de terc-butila Cbz Carboxibenzila DCM diclorometano DMSO sulfóxido de dimetila Et3N trietilamina 2-MeTHF 2-metiltetra-hidrofurano NMM N-metilmorfolina DMAP 4-dimetilaminopiridina TMS Trimetilsilila MTBE éter metílico e terc-butílico EtOAc acetato de etila i-PrOAc acetato de isopropila IPAC acetato de isopropila DMF dimetilformamida DIEA di-isopropiletilamina TEA trietilamina t-BuONa terc-butóxido de sódio K2CO3 carbonato de potássio PG Grupo protetor pTSA TBAF ácido para-toluenossulfônico Fluoreto de tetra-n-butilamônio 1HRMN ressonância nuclear magnética de prótons HPLC cromatografia líquida de alta eficiência LCMS cromatografia líquida-espectrometria de massas TLC cromatografia em camada fina Rt tempo de retenção

Esquemas e exemplos

[000259] Os compostos da descrição podem ser preparados à luz do relatório descritivo com o uso de etapas de conhecimento geral para aquelas pessoas versadas na técnica. Aqueles compostos podem ser analisados por métodos conhecidos, incluindo, mas não se limitando a, LCMS (cromatografia líquida-espectrometria de massas) e RMN (ressonância nuclear magnética). Os seguintes esquemas genéricos e exemplos ilustram como preparar os compostos da presente descrição. Os exemplos são apenas para propósitos ilustrativos e não são em nenhuma maneira para serem interpretados como limitadores do escopo da invenção. Os espectros de 1H-RMN foram registrados a 400 MHz com o uso de um instrumento Bruker DPX 400. Amostras para espectroscopia de massas foram analisadas em um espectrômetro de massas MicroMass Quattro Micro operado em um modo MS simples com ionização por eletropulverização.Exemplo 1: Síntese de 2-(4-(5-amino-6-(3-(4-((tetra-hidro-2 H-piran-4- ilamino)metil)fenil)isoxazol-5-il)pirazin-2-il)piridin-2-il)-2- metilpropanonitrila (Composto I-1)

Método 1:

[000260] Em uma solução de tetra-hidropiran-4-amina (100 g, 988,7 mmol) em MeOH (3,922 L) foi adicionado 4-(dietoximetil)benzaldeído (196,1 g, 941,6 mmol) durante 2 min à RT. A mistura de reação foi agitada à RT durante 80 min, até que fosse completa a formação de aldimina (conforme vista por RMN). NaBH4 (44,49 g, 1,176 mol) foi cuidadosamente adicionado durante 45 min, mantendo a temperatura entre 24°C e 27°C por meio de um banho de gelo. Após 75 min à RT, a reação alcançou a completitude. A mistura de reação foi inativada com NaOH 1 M (1 L). A mistura de reação foi particionada entre salmoura (2,5 L) e TBDME (4 L então 2 x 1 L). A fase orgânica foi lavada com salmoura (500 mL) e concentrada em vácuo. A mistura bruta foi dissolvida de novo em DCM (2 L). A fase aquosa foi separada, a fase orgânica foi seca com MgSO4, filtrada e concentrada em vácuo para dar o composto do título como um óleo amarelo (252,99 g, 91%).

Método 2:

[000261] Uma solução de N-[[4-(dietoximetil)fenil]metil] tetra-hidropi- ran-4-amina (252,99 g, 862,3 mmol) e Boc-anidrido (191,9 g, 202,0 mL, 879,5 mmol) em DCM (2,530 L) foi resfriada para 3,3°C. Et3N (89,00 g, 122,6 mL, 879,5 mmol) foi adicionado durante 4 min, mantendo a temperatura interna abaixo de 5°C. O banho foi removido 45 min após o término da adição. E a mistura de reação foi agitada à RT de um dia para outro. A mistura de reação foi sequencialmente lavada com ácido cítrico 0,5 M (1 L), solução de NaHCO3 saturada (1 L) e salmoura (1 L). A fase orgânica foi seca (MgSO4), filtrada e concentrada em vácuo para dar um óleo incolor (372,38 g, 110%). 1H RMN (400,0 MHz, DMSO); MS (ES+)

Método 3:

[000262] N-[[4-(dietoximetil)fenil]metil]-N-tetra-hidropiran-4-il-carbamato de terc-butila (372,38 g, 946,3 mmol) foi dissolvido em THF (5 L) e água (500 mL). Cloridrato de hidroxilamina (72,34 g, 1,041 mol) foi adicionado em uma porção e a mistura de reação foi agitada de um dia para outro à RT. A mistura de reação foi particionada entre DCM (5 L) e água. O extrato orgânico combinado foi lavado com água (1L x 2). A fase orgânica foi concentrada em vácuo para um volume de cerca de 2L. A camada orgânica foi seca com MgSO4, filtrada e concentrada em vácuo para dar um óleo incolor pegajoso que cristalizou durante repouso sob vácuo. (334,42 g, 106%). 1H RMN (400,0 MHz, CDCl3); MS (ES+)

Método 4:

[000263] N-[[4-[(E)-hidroxi-iminometil]fenil]metil]-N-tetra-hidropiran-4- il-carbamato de terc-butila (334,13 g, 999,2 mmol) foi dissolvido em acetato de isopropila (3,0 L) (a mistura foi aquecida para 40°C para permitir a dissolução dos sólidos). N-clorossuccinimida (140,1 g, 1,049 mol) foi adicionada em porções durante 5 min e a mistura de reação foi aquecida para 55°C (temperatura de bloco externo). Após 45 min a 55°C A reação alcançou a completitude. A mistura de reação foi resfriada para RT. Os sólidos foram filtrados e lavados com acetato de isopropila (1 L). O extrato orgânico combinado foi sequencialmente lavado com água (1,5 L, 5 vezes) e salmoura, seco com MgSO4, filtrado e concentrado em vácuo para dar um óleo amarelo viscoso (355,9 g; 96%). 1H RMN (400,0 MHz, CDCl3); MS (ES+)

Método 5:

[000264] Et3N (76,97 g, 106,0 mL, 760,6 mmol) foi adicionado durante 20 minutos em uma solução de N-(5-bromo-3-etinil-pirazin-2-il)-N-terc- butoxicarbonil-carbamato de terc-butila (233,0 g, 585,1 mmol) e N-[[4- [(Z)-C-cloro-N-hidróxi-carbonimidoil]fenil]metil]-N-tetra-hidropiran-4-il- carbamato de terc-butila (269,8 g, 731,4 mmol) em DCM (2,330 L) à RT. Durante a adição de trietilamina, a exoterma foi estabilizada por resfriamento da mistura em um banho de gelo, então a mistura de reação foi gradualmente aquecida para a RT e a mistura foi agitada à RT de um dia para outro. A mistura de reação foi sequencialmente lavada com água (1,5 L, 3 vezes) e salmoura. O extrato orgânico foi seco com MgSO4, filtrado e parcialmente concentrado em vácuo. Heptano (1,5L) foi adicionado e a concentração foi continuada dando 547,63 g de um óleo amarelo-laranja.

[000265] 542,12 g foram recolhidos em ~2 vol (1 L) de acetato de etila.A mistura foi aquecida para 74-75°C internamente e agitada até que todo o sólido se solubilizasse. Heptano (3,2 L) foi adicionado lentamente via funil de adição na solução quente mantendo a temperatura interna entre 71°C e 72°C. Ao término da adição, a solução marrom escura foi semeada com um pouco de produto recristalizado, e a mistura de reação foi permitida resfriar para a RT sem nenhuma agitação para cristalizar O/N. O sólido foi filtrado e lavado com heptano (2 x 250 mL), então seco em vácuo para dar 307,38 g do produto do título (72%). 1H RMN (400,0 MHz, CDCl3); MS (ES+)

Método 6:

[000266] N-[[4-[5-[3-[bis(terc-butoxicarbonil)amino]-6-bromo-pirazin- 2-il] isoxazol-3-il]fenil]metil]-N-tetra-hidropiran-4-il-carbamato de terc- butila (303 g, 414,7 mmol) e 2-metil-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)-2-piridil]propanonitrila (112,9 g, 414,7 mmol) foram suspensos em MeCN (2 L) e H2O (1 L). Na2CO3 (414,7 mL de 2 M, 829,4 mmol) seguido por Pd[P(tBu)3]2 (21,19 g, 41,47 mmol) foram adicionados e a mistura de reação foi desgaseificada com N2 durante 1 h. A mistura de reação foi posta sob uma atmosfera de nitrogênio e aquecida a 70°C (temperatura de bloco) durante 4 h (a temperatura interna oscilou entre 60°C e 61°C). A reação foi resfriada para a temperatura ambiente e agitada à RT de um dia para outro. A mistura de reação foi particionada entre EtOAc (2 L) e água (500 mL). O extrato orgânico combinado foi lavado com salmoura (500 mL), filtrado através de uma camada estreita de celite e concentrado sob pressão reduzida para um volume de cerca de 3 L. A solução foi seca com MgSO4, filtrada e parcialmente concentrada em vácuo. iPrOH (1,5 L) foi adicionado e o solvente foi removido em vácuo para dar o produto desejado como uma espuma marrom clara (405 g).

[000267] 400 g foram recolhidos em ~5 vol (2 L) de iPrOH e a mistura foi aquecida para 80°C até que todo o sólido estivesse dissolvido. A solução marrom escura foi semeada, e a mistura de reação foi permitida resfriar lentamente para a RT de um dia para outro. O sólido foi filtrado e lavado com iPrOH (2 x 250 mL) e éter de petróleo (2 x 200 mL). O sólido resultante foi transformado em pasta fluida em éter de petróleo (2,5 L), filtrado e seco em vácuo. O sólido resultante foi dissolvido em DCM (2,5 L) e agitado lentamente durante 1 h com 30 g de SPM32 (3- mercaptopropiletil-sulfeto sobre sílica). A sílica foi filtrada através de uma camada de florisil e lavada com DCM. O procedimento foi repetido duas vezes, então a solução de DCM foi concentrada em vácuo para dar 238,02 g de um sólido amarelo claro.

Método 7:

[000268] N-[[4-[5-[3-[bis(terc-butoxicarbonil)amino]-6-[2-(1-ciano-1- metil-etil)-4-piridil]pirazin-2-il]isoxazol-3-il]fenil]metil]-N-tetra-hidropiran- 4-il-carbamato de terc-butila (238 g, 299,0 mmol) foi dissolvido em DCM (2,380 L). TFA (500 mL, 6,490 mol) foi adicionado à RT durante 3 min. A mistura de reação foi agitada à RT durante 3,5 h. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida então azeotropada com heptano (2 x 300 ml). O óleo foi então transformado em pasta fluida em EtOH abs. (2,5 L) e filtrado. O sólido foi dissolvido em uma mistura de etanol (1,190 L) e água (1,190 L). Carbonato de potássio (124,0 g, 897,0 mmol) em água (357,0 mL) foi adicionado na solução e a mistura foi agitada à RT de um dia para outro.

[000269] O sólido foi filtrado, foi lavado com água (2,5 L), e seco a 50°C em vácuo para dar 108,82 g do composto do título (Composto I-1) como um pó amarelo. (73%) Métodos 6a e 7a

[000270] Uma mistura de N-[[4-[5-[3-[bis(terc-butoxicarbonil)amino]-6- bromo-pirazin-2-il]isoxazol-3-il]fenil]metil]-N-tetra-hidropiran-4-il-carbamato de terc-butila (110,0 g, 151 mmol), K2CO3 (41,6 g, 301 mmol), e 2-metil-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-2-piri- dil] propanonitrila (41,0 g, 151 mmol) em tolueno (770 mL) e água (220 mL) é agitada e desgaseificada com N2 durante 30 min. a 20°C. O catalisador Pd(dtbpf)Cl2 (1,96 g, 3,01 mmol) é adicionado e a mistura é desgaseificada durante um adicional de 10 min. A mistura é aquecida a 70°C até a completitude da reação. A mistura é resfriada para a temperatura ambiente, diluída com água (220 mL), e filtrada através de um leito de Celite. A fase orgânica é concentrada para remover o máximo de solvente. O concentrado é diluído com i-PrOH (550 mL). A suspensão resultante é agitada durante pelo menos 1 h e então o sólido é coletado por filtração para dar um pó castanho-amarelado. O sólido é dissolvido em tolueno (990 mL) e agitado com resina Biotage MP-TMT (18,6 g) durante 2 h à temperatura ambiente. A resina é então removida por filtração. O filtrado é concentrado então diluído com i-PrOH (550 mL) e então concentrado de novo. Adicionar i-PrOH (550 mL) e agitar durante 1 h à temperatura ambiente. Resfriar a suspensão para 5°C e coletar o sólido por filtração então secar para dar N-[[4-[5-[3-[bis(terc- butoxicarbonil)amino]-6-[2-(1-ciano-1-metil-etil)-4-piridil]pirazin-2- il]isoxazol-3-il]fenil]metil]-N-tetra-hidropiran-4-il-carbamato de terc-butila (Composto I-1) (81,9 g; rendimento de 68%, pureza de 98,7% em área por HPLC) como um pó de cor creme.Mudança de forma para composto I-^HCH,5 H2O

[000271] Uma suspensão de N-[[4-[5-[3-[bis(terc-butoxicarbonil) ami- no]-6-[2-(1-ciano-1-metil-etil)-4-piridil]pirazin-2-il]isoxazol-3-il]fenil]metil]-N-tetra-hidropiran-4-il-carbamato de terc-butila (Composto I-1) (36,0 g, 72,6 mmol) em CH3CN (720 mL) é agitada à temperatura ambiente (20°C) em um frasco equipado com agitador mecânico. Uma solução aquosa 1 M de HCl (72,6 mL; 72,6 mmol) é adicionada. A suspensão é agitada à temperatura ambiente durante 20 h. O sólido é coletado por filtração. O bolo do filtro é lavado com CH3CN (3 x 50 mL) então seco sob vácuo com umidade alta durante 2 h para dar o Composto I-1«HCl«1,5 H2O com rendimento de (30,6 g; 74%), pureza de 98,8% em área por HPLC) como um pó amarelo. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 9,63 (d, J = 4,7 Hz, 2H), 9,05 (s, 1H), 8,69 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 8,21 (s, 1H), 8,16 - 8,03 (m, 3H), 7,84 (t, J = 4,1 Hz, 3H), 7,34 (br s, 2H), 4,40 - 4,18 (m, 2H), 3,94 (dd, J = 11,2, 3,9 Hz, 2H), 3,32 (t, J = 11,2 Hz, 3H), 2,17 - 2,00 (m, 2H), 1,81 (s, 6H), 1,75 (dd, J = 12,1, 4,3 Hz, 2H).Exemplo 2: Síntese de 3-[3-[4-[dideutério(metilamino)metil]fenil] iso- xazol-5-il]-5-(4-isopropilsulfonilfenil)pirazin-2-amina (Composto II-1)

Etapa 1: 5-Bromo-3-((trimetilsilil)etinil)pirazin-2-amina

[000272] (Trimetilsilil)acetileno (1,845 g, 2,655 mL, 18,78 mmol) foi adicionado por gotejamento em uma solução de 3,5-dibromopirazin-2- amina (composto i) (5 g, 19,77 mmol) em DMF (25 mL). Trietilamina (10,00 g, 13,77 mL, 98,85 mmol), iodeto de cobre(I) (451,7 mg, 2,372 mmol) e Pd(PPh3)4 (1,142 g, 0,9885 mmol) foram então adicionados e a solução resultante foi agitada à RT durante 30 minutos. A mistura de reação foi diluída com EtOAc e água e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída adicionalmente com EtOAc e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas (MgSO4) e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna eluindo com EtOAC 15%/éter de petróleo para dar o produto como um sólido amarelo (3,99 g, rendimento de 75%). 1H RMN (400,0 MHz, DMSO) δ 0,30 (9H, s), 8,06 (1H, s); MS (ES+) 271,82.Etapa 2: Butoxicarbonil-N-[5-bromo-3-((trimetilsilil)etinil)pirazin-2-il]car- bamato de terc-butila

[000273] 5-Bromo-3-(2-trimetilsililetinil)pirazin-2-amina (2,85 g, 10,55 mmol) foi dissolvida em DCM (89,06 mL) e tratada com Boc-anidrido (6,908 g, 7,272 mL, 31,65 mmol) seguido por DMAP (128,9 mg, 1,055 mmol). A reação foi permitida agitar à temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura foi então diluída com DCM e NaHCO3 e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída adicionalmente com DCM, seca (MgSO4), filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna eluindo com diclorometano para dar o produto desejado como um óleo incolor (4,95 g, rendimento de 99%). 1H RMN (400,0 MHz, DMSO) δ 0,27 (9H, s), 1,42 (18H, s), 8,50 (1H, s); MS (ES+) 472,09.Etapa 3: terc-Butil N-(3-etinil-5-(4-(isopropilsulfonil)fenil)pirazin-2-il)N- terc-butoxicarbonil-carbamato de terc-butila

[000274] N-[5-Bromo-3-(2-trimetilsililetinil)pirazin-2-il]-N-terc-butoxicarbonilcarbamato (3 g, 6,377 mmol) e ácido (4-isopropilsulfonilfenil) borônico (1,491 g, 6,536 mmol) foram dissolvidos em MeCN/água (60/12 mL). K3PO4 (2,706 g, 12,75 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi desgaseificada com um fluxo de nitrogênio (5 ciclos). Pd[P(tBu)3]2 (162,9 mg, 0,3188 mmol) foi adicionado e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. A mistura de reação foi vertida rapidamente em uma mistura de acetato de etila (500 mL), água (90 mL) e metabissulfito de sódio aquoso 1% a 4°C, bem agitada, e a camada foi separada. A fração orgânica foi seca com MgSO4, filtrada e o filtrado foi tratado com 3-mercaptopropil-etil-sulfeto sobre sílica (0,8 mmol/g, 1 g), pré-absorvido sobre sílica-gel então purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel eluindo com EtOAc 30-40%/éter de petróleo. Os solventes foram concentrados em vácuo para deixar o produto como um óleo viscoso amarelo que foi triturado com éter de petróleo para dar o produto como cristais beges (1,95 g, rendimento de 61%); 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 1,20 (m, 6H), 1,39 (s, 18H), 3,50 (m, 1H), 5,01 (s, 1H), 8,03 (m, 2H), 8,46 (m, 2H) e 9,37 (s, IH).Etapa 4: 4-(Dimetoximetil)benzamida

[000275] Uma mistura de 4-(dimetoximetil)benzoato de metila (3,8 g, 18,08 mmol) e NH3 7M em MeOH (30 mL de 7 M, 210,0 mmol) em um tubo fechado foi aquecida a 110°C durante 22 horas. Uma porção adicional de NH3 7M em MeOH (20 mL de 7 M, 140,0 mmol) foi adicionada e a reação foi aquecida a 135°C durante 23 horas. A reação foi resfriada para a temperatura ambiente e o solvente foi removido em vácuo. O resíduo foi submetido de novo às condições de reação (NH3 7M em MeOH (30 mL de 7 M, 210,0 mmol) a 115°C) durante mais 16 horas. O solvente foi removido em vácuo e o resíduo foi triturado em Et2O. O precipitado resultante foi isolado por filtração para dar o composto do subtítulo como um sólido branco (590 mg, rendimento de 17%). O filtrado foi purificado por cromatografia em coluna (coluna ISCO Companion, de 40 g, eluindo com EtOAc 0% a 100%/éter de petróleo a MeOH 10% /EtOAc, carregado em EtOAc/MeOH) para dar uma porção adicional do produto do subtítulo como um sólido branco (225 mg, rendimento de 6%). Isolado total (815 mg, rendimento de 23%); 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 3,26 (s, 6H), 5,44 (s, 1H), 7,37 (s, 1H), 7,46 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,84 - 7,91 (m, 2H) e 7,98 (s, 1H) ppm; MS (ES+) 196,0.Etapa 5: Dideutério-[4-(dimetoximetil)fenil]metanamina

[000276] LiDH4 (12,52 mL de 1 M, 12,52 mmol) foi adicionado por gotejamento em uma solução agitada de 4-(dimetoximetil)benzamida (815 mg, 4,175 mmol) em THF (20 mL) a 0°C sob uma atmosfera de nitrogênio. A reação foi aquecida sob refluxo durante 16 horas então resfriada para a temperatura ambiente. A reação foi inativada por adição sequencial de D2O (1 mL), NaOH 15% em D2O (1 mL) e D2O (4 mL). O sólido resultante foi removido por filtração e lavado com EtOAc. O filtrado foi concentrado em vácuo e o resíduo foi seco por destilação azeotrópica com tolueno (x 3) para dar o composto do subtítulo como um óleo amarelo (819 mg) que foi usado sem purificação adicional; 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 3,23 (s, 6H), 5,36 (s, 1H) e 7,30 -7,35 (m, 4H) ppm; MS (ES+) 167,0.Etapa 6: N-[dideutério-[4-(dimetoximetil)fenil]metil]carbamato de terc- butila

[000277] Et3N (633,7 mg, 872,9 μL, 6,262 mmol) foi adicionado em uma suspensão agitada de dideutério-[4-(dimetoximetil) fenil] me- tanamina (765 mg, 4,175 mmol) em THF (15 mL) a 0°C. A reação foi permitida agitar nesta temperatura durante 30 minutos então Boc2O (956,8 mg, 1,007 mL, 4,384 mmol) foi adicionado em porções. A reação foi permitida aquecer para a temperatura ambiente e agitada durante 18 horas. O solvente foi removido em vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (coluna ISCO Companion, de 120 g, eluindo com EtOAc 0% a 50%/éter de petróleo, carregado em DCM) para dar o produto do subtítulo como um óleo incolor (1,04 g, rendimento de 88%); 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 1,40 (s, 9H), 3,23 (s, 6H), 5,36 (s, 1H), 7,24 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,33 (d, J = 8,0 Hz, 2H) e 7,38 (s, 1H) ppm.Etapa 7: N-[dideutério-[4-(dimetoximetil)fenil]metil]-N-metil-carbamato de terc-butila

[000278] LiHMDS (1M em THF) (1,377 mL de 1 M, 1,377 mmol) foi adicionado por gotejamento em uma solução agitada de N-[dideutério- [4-(dimetoximetil)fenil]metil]carbamato de terc-butila (300 mg, 1,059 mmol) em THF (5 mL) a -78°C. A solução foi agitada nesta temperatura durante 10 minutos então iodometano (225,4 mg, 98,86 μL, 1,588 mmol) foi adicionado por gotejamento e a mistura foi permitida aquecer para a temperatura ambiente durante 1 hora. A reação foi de novo resfriada para -78°C e LiHMDS (1M em THF) (635,4 μL de 1 M, 0,6354 mmol) foi adicionado. Após 10 minutos iodometano (105,2 mg, 46,14 μL, 0,7413 mmol) foi adicionado e a reação foi permitida aquecer para a temperatura ambiente durante 6 horas. A mistura foi diluída com EtOAc e a camada orgânica foi lavada com NaHCO3 aquoso saturado (x 2), salmoura (x 1), seca (MgSO4) filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (coluna ISCO Companion, de 24 g, eluindo com EtOAc 0% a 30%/éter de petróleo, carregado em DCM) para dar o produto do subtítulo como um óleo incolor (200 mg, rendimento de 63%); 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 1,41 (d, J = 27,7 Hz, 9H), 2,76 (s, 3H), 3,24 (s, 6H), 5,37 (s, 1H), 7,23 (d, J = 7,9 Hz, 2H) e 7,37 (d, J = 8,0 Hz, 2H) ppm.Etapa 8: N-[dideutério-[4-[hidróxi-iminometil]fenil]metil]-N-(metil) carbamato de terc –butila

[000279] Cloridrato de hidroxilamina (51,15 mg, 0,7361 mmol) foi adicionado em uma solução agitada de N-[dideutério-[4-(dimetoximetil) fenil]metil]-N-metil-carbamato de terc-butila (199 mg, 0,6692 mmol) em THF (10 mL)/água (1,000 mL) e a reação foi permitida agitar à temperatura ambiente durante 4 horas. A reação foi particionada entre DCM e salmoura e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com DCM (x 2) e os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (x 1), secos (MgSO4), filtrados e concentrados em vácuo para dar o composto do subtítulo como um sólido branco (180 mg, rendimento de 100%); 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 1,41 (d, J = 24,6 Hz, 9H) 2,76 (s, 3H), 7,25 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,58 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 8,13 (s, 1H) e 11,20 (s, 1H) ppm; MS (ES+) 211,0 (M-Boc).Etapa 9: N-[[4-[cloro-N-hidróxi-carbonimidoil]fenil]-dideutério-metil]-N- metil-carbamato de terc-butila

[000280] N-[dideutério-[4-[hidróxi-iminometil]fenil]metil]-N-(metil) carbamato de terc-butila (178 mg, 0,6683 mmol) em DMF (2 mL) foi tratado com NCS (89,24 mg, 0,6683 mmol) e a reação foi aquecida para 65°C durante 1 hora. A reação foi resfriada para a temperatura ambiente e diluída com água. A mistura foi extraída com EtOAc (x 2) e os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (x 4), secos (MgSO4), filtrados e concentrados em vácuo para dar o composto do subtítulo como um sólido branco (188 mg, rendimento de 94%); 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 1,42 (d, J = 24,7 Hz, 9H), 2,78 (s, 3H), 7,32 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,78 (d, J = 8,2 Hz, 2H) e 12,36 (s, 1H) ppm.Etapa 10: N-[[4-[5-[3-[bis(terc-butoxicarbonil)amino]-6-(4-isopropilsul-fonilfenil)pirazin-2-il]isoxazol-3-il]fenil]-dideutério-metil]-N-metil-carba- mato de terc-butila

[000281] EtβN (36,31 mg, 50,01 μL, 0,3588 mmol) foi adicionado por gotejamento em uma solução agitada de N-terc-butoxicarbonil-N-[3- etinil-5-(4-isopropilsulfonilfenil)pirazin-2-il]carbamato de terc-butila (150 mg, 0,2990 mmol) e N-[[4-[cloro-N-hidróxi-carbonimidoil]fenil]- dideutério-metil]- N-metil-carbamato de terc-butila (89,93 mg, 0,2990 mmol) em THF anidro (3 mL) e a mistura de reação foi aquecida a 65°C durante 3 horas. A mistura de reação foi resfriada para a temperatura ambiente e diluída com EtOAc/salmoura. Água foi adicionada até que a camada aquosa se tornasse transparente e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (x 1) e os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (x 1), secos (MgSO4), filtrados e concentrados em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (coluna ISCO Companion, de 40 g, eluindo com EtOAc 0% a 30%/éter de petróleo, carregado em DCM) para dar o produto do subtítulo como um sólido branco (134 mg, rendimento de 59%); 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 1,22 (d, J = 6,8 Hz, 6H) 1,32 (s, 18H), 1,43 (d, J = 23,1 Hz, 9H), 2,82 (s, 3H), 3,56 (pent, 1H), 7,43 (d, J = 8,3 Hz, 3H), 8,02 - 8,03 (m 3H), 8,06 - 8,11 (m, 2H), 8,62 - 8,67 (m, 2H) e 9,51 (s, 1H) ppm; MS (ES+) 666,2 (M-Boc).Etapa 11: 3-[3-[4-[Dideutério(metilamino)metil]fenil]isoxazol-5-il]-5-(4-isopropilsulfonilfenil)pirazin-2-amina (composto II-1)

[000282] HCl 3M em MeOH (1,167 mL de 3 M, 3,500 mmol) foi adicionado em uma solução agitada de N-[[4-[5-[3-[bis(terc-butoxicar- bonil)amino]-6-(4-isopropilsulfonilfenil)pirazin-2-il]isoxazol-3-il]fenil]-di- deutério-metil]-N-metil-carbamato de terc-butila (134 mg, 0,1750 mmol) em DCM (5 mL) e a reação foi aquecida sob refluxo durante 16 horas. A reação foi resfriada para a temperatura ambiente e o precipitado resultante foi isolado por filtração e seco sob vácuo a 40°C para dar o sal de di-HCl do composto do título como um sólido amarelo (58,8 mg, rendimento de 62%); 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 1,20 (d, J = 6,8 Hz, 6H), 2,60 (t, J = 5,4 Hz, 3H), 3,48 (hept, J = 6,8 Hz, 1H), 7,22 (br s, 2H), 7,69 - 7,75 (m, 2H), 7,85 (s, 1H), 7,92 - 7,99 (m, 2H), 8,08 - 8,15 (m, 2H) 8,37 - 8,42 (m, 2H), 8,97 (s, 1H) e 9,10 (d, J = 5,8 Hz, 2H) ppm; MS (ES+) 466,2.Exemplo 3: Síntese de 3-[3-[4-[dideutério-(trideuteriometilamino) metil] fenil]isoxazol-5-il]-5-(4-isopropilsulfonilfenil)pirazin-2-amina (Composto II-2)

Etapa 1: N-[dideutério-[4-(dimetoximetil)fenil]metil]-1-(trideuteriometil) carbamato de terc -butila

[000283] LiHMDS (1 M em THF) (1,181 mL de 1 M, 1,181 mmol) foi adicionado por gotejamento em uma solução agitada de N-[dideutério- [4-(dimetoximetil)fenil]metil]carbamato de terc-butila (300 mg, 1,059 mmol) em THF (5 mL) a -78°C. A solução foi agitada nesta temperatura durante 30 minutos então trideutério(iodo)metano (198,0 mg, 84,98 μL, 1,366 mmol) foi adicionado por gotejamento e a mistura foi permitida aquecer para a temperatura ambiente durante 21 horas. A reação foi de novo resfriada para -78°C e uma porção adicional de LiHMDS (1M em THF) (635,4 μL de 1 M, 0,6354 mmol) foi adicionada. Após 15 minutos mais trideutério(iodo)metano (76,75 mg, 32,94 μL, 0,5295 mmol) foi adicionado e a reação foi permitida aquecer para a temperatura ambiente durante 5 horas. A mistura foi diluída com EtOAc e a camada orgânica foi lavada com NaHCO3 aquoso saturado (x 2), salmoura (x 1), seca (MgSO4) filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (coluna ISCO Companion, de 24 g, eluindo com EtOAc 0% a 30%/éter de petróleo, carregado em DCM) para dar o produto do subtítulo como um óleo incolor (213 mg, rendimento de 67%); 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 1,36 - 1,42 (m, 9H) 3,22 (s, 6H), 5,35 (s, 1H), 7,21 (d, J = 7,8 Hz, 2H) e 7,35 (d, J = 7,7 Hz, 2H) ppm.Etapa 2: N-[dideutério-[4-[hidróxi-iminometil]fenil]metil]-N-(trideuterio-metil) carbamato de terc-butila

[000284] Cloridrato de hidroxilamina (53,95 mg, 0,7763 mmol) foi adi-cionado em uma solução agitada de N-[dideutério-[4-(dimetoximetil) fenil]metil]-N-(trideuteriometil)carbamato de terc-butila (212 mg, 0,7057 mmol) em THF (10 mL)/água (1,000 mL) e a reação permitida agitar à temperatura ambiente durante 22 horas. A reação foi particionada entre DCM e salmoura e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com DCM (x 2) e os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (x 1), secos (MgSO4), filtrados e concentrados em vácuo para dar o composto do subtítulo como um sólido branco (190 mg, rendimento de 100%); 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 1,41 (d, J = 24,2 Hz, 9H)), 7,25 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,58 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 8,13 (s, 1H) e 11,20 (s, 1H) ppm. Etapa 3: N-[[4-[cloro-N-hidróxi-carbonimidoil]fenil]-dideutério-metil]-N-(trideuteriometil)carbamato de terc-butila

[000285] N-[Dideutério-[4-[hidróxi-iminometil]fenil]metil]-N-(trideu- teriometil) carbamato de terc-butila (190,0 mg, 0,7054 mmol) em DMF (2 mL) foi tratado com NCS (94,19 mg, 0,7054 mmol) e a reação foi aquecida para 65°C durante 1 hora. A reação foi resfriada para a temperatura ambiente e diluída com água. A mistura foi extraída com EtOAc (x 2) e os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (x 4), secos (MgSO4), filtrados e concentrados em vácuo para dar o composto do subtítulo como um sólido branco (198 mg, rendimento de 93%); 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 1,41 (d, J = 26,0 Hz, 9H), 7,32 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,78 (d, J = 8,2 Hz, 2H) e 12,36 (s, 1H) ppm.Etapa 4: N-[[4-[5-[3-[bis(terc-butoxicarbonil)amino]-6-(4-isopropilsulfo- nilfenil)pirazin-2-il]isoxazol-3-il]fenil]-dideutério-metil]-N-(trideuterio- metil) carbamato de terc-butila

[000286] EtβN (36,31 mg, 50,01 μL, 0,3588 mmol) foi adicionado por gotejamento em uma solução agitada de N-terc-butoxicarbonil-N-[3- etinil-5-(4-isopropilsulfonilfenil)pirazin-2-il]carbamato de terc-butila (150 mg, 0,2990 mmol) e N-[[4-[cloro-N-hidróxi-carbonimidoil]fenil]-dideuté- rio-metil]-N-(trideuteriometil)carbamato de terc-butila (90,84 mg, 0,2990 mmol) em THF anidro (3 mL) e a mistura de reação foi aquecida a 65°C durante 3,5 horas. A mistura de reação foi resfriada para a temperatura ambiente e diluída com EtOAc/salmoura. Água foi adicionado até que a camada aquosa se tornasse transparente e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (x 1) e os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (x 1), secos (MgSO4), filtrados e concentrados em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (coluna ISCO Companion, de 40 g, eluindo com EtOAc 0% a 35%/éter de petróleo, carregado em DCM) para dar o produto do subtítulo como um sólido branco (158 mg, rendimento de 69%); 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 1,22 (d, J = 6,8 Hz, 6H)), 1,44 (d, J = 22,0 Hz, 9H), 3,56 (dt, J = 13,5, 6,7 Hz, 2H), 7,43 (d, J = 8,2 Hz, 3H), 8,02 (d, J = 6,9 Hz, 2H), 8,08 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 8,65 (d, J = 8,8 Hz, 2H) e 9,51 (s, 1H) ppm; MS (ES+) 669,3 (M-Boc).Etapa 5: 3-[3-[4-[Dideutério-(trideuteriometilamino)metil]fenil]isoxazol-5- il]-5-(4-isopropilsulfonilfenil)pirazin-2-amina (composto II-2)

[000287] HCl 3 M em MeOH (1,361 mL de 3 M, 4,084 mmol) foi adi-cionado em uma solução agitada de N-[[4-[5-[3-[bis(terc-butoxicarbonil) amino]-6-(4-isopropilsulfonilfenil)pirazin-2-il]isoxazol-3-il]fenil]- dideutério-metil]-N-(trideuteriometil)carbamato de terc-butila (157 mg, 0,2042 mmol) em DCM (5 mL) e a reação foi aquecida sob refluxo durante 16 horas. A reação foi resfriada para a temperatura ambiente e o precipitado resultante foi isolado por filtração e seco sob vácuo a 40°C para dar o sal de di-HCl do composto do título como um sólido amarelo (72,5 mg, rendimento de 66%); 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 1,20 (d, J = 6,8 Hz, 6H), 3,48 (dq, J = 13,6, 6,7 Hz, 1H), 7,21 (s, 2H), 7,68 - 7,78 (m, 2H), 7,85 (s, 1H), 7,91 - 7,99 (m, 2H), 8,08 - 8,13 (m, 2H), 8,36 - 8,42 (m, 2H), 8,96 (s, 1H) e 9,14 (s, 2H) ppm; MS (ES+) 469,1.Exemplo 4: Síntese de 5-(4-isopropilsulfonilfenil)-3-[3-[4-[(trideuteriome- tilamino)metil]fenil]isoxazol-5-il]pirazin-2-amina (Composto II-3)

Etapa 1: 4-[( terc-Butoxicarbonilamino)metil]benzoato de metila

[000288] Et3N (1,882 g, 2,592 mL, 18,60 mmol) foi adicionado em uma suspensão agitada de 4-(aminometil)benzoato de metila (ácido clorídrico (1)) (1,5 g, 7,439 mmol) em THF (20 mL) a 0°C. A reação foi permitida agitar nesta temperatura durante 30 minutos então Boc2O (1,705 g, 1,795 mL, 7,811 mmol) foi adicionado em porções. A reação foi permitida aquecer para a temperatura ambiente e agitada durante 18 horas. A mistura foi diluída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com HCl aquoso 1 M (x 2), NaHCO3 aquoso saturado (x 2) e salmoura (x 1). A camada orgânica foi seca (MgSO4), filtrada e concentrada em vácuo para dar o composto do subtítulo como um sólido branco que foi usado sem purificação adicional (1,93 g, rendimento de 98%); 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 1,40 (s, 9H), 3,85 (s, 3H), 4,20 (d, J = 6,1 Hz, 2H), 7,38 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,49 (t, J = 6,1 Hz, 1H) e 7,92 (d, J = 8,2 Hz, 2H) ppm; MS (ES+) 251,1 (M-Me).Etapa 2: 4-[[terc-Butoxicarbonil(trideuteriometil)amino]metil]benzoate de metila

[000289] LiHMDS (1 M em THF) (8,112 mL de 1 M, 8,112 mmol) foi adicionado por gotejamento em uma solução agitada de 4-[(terc- butoxicarbonilamino)metil]benzoato de metila (1,93 g, 7,275 mmol) em THF (10 mL) a -78°C. A solução foi agitada nesta temperatura durante 30 minutos então trideutério(iodo)metano (1,360 g, 9,385 mmol) foi adicionado por gotejamento e a mistura foi permitida aquecer para a temperatura ambiente durante 3 horas. A reação foi resfriada para -78°C e uma porção adicional de LiHMDS (1 M em THF) (2,182 mL de 1 M, 2,182 mmol) foi adicionada. Após 10 minutos uma porção adicional de trideutério(iodo)metano (527,4 mg, 3,638 mmol) foi adicionada e a reação foi permitida aquecer para a temperatura ambiente durante 17 horas. A mistura foi diluída com EtOAc e a camada orgânica foi lavada com NaHCO3 aquoso saturado (x 2), salmoura (x 1), seca (MgSO4) filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (coluna ISCO Companion, de 120 g, eluindo com EtOAc 0% a 30%/éter de petróleo, carregado em DCM) para dar o produto do subtítulo como um óleo amarelo pálido (1,37 g, rendimento de 67%); 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 1,38 (d, J = 44,2 Hz, 9H), 3,83 (s, 3H), 4,43 (s, 2H), 7,33 (d, J = 8,2 Hz, 2H) e 7,94 (d, J = 8,1 Hz, 2H) ppm; MS (ES+) 268,1 (M-Me)Etapa 3: N-[[4-(hidroximetil)fenil]metil]-N-(trideuteriometil)carbamato de terc-butila

[000290] LiBH4 (158,5 mg, 7,278 mmol) foi adicionado em uma solução agitada de 4-[[terc-butoxicarbonil(trideuteriometil)amino] metil]benzoato de metila (1,37 g, 4,852 mmol) em THF (10 mL) e a reação foi aquecida para 85°C durante 15 horas. Uma porção adicional de LiBH4 (158,5 mg, 7,278 mmol) foi adicionada e a reação agitado a 65°C durante mais 7 horas. A mistura de reação foi resfriada para a temperatura ambiente então vertida sobre gelo triturado sob agitação, HCl 1 M foi adicionado por gotejamento até que efervescência não fosse mais observada. A mistura foi agitada durante 10 minutos então NaHCO3 aquoso saturado foi adicionado até que a mistura alcançasse o pH 8. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (x 3) e os extratos orgânicos combinados foram secos (MgSO4), filtrados e concentrados em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (coluna ISCO Companion, de 120 g, eluindo com EtOAc 0% a 100%/éter de petróleo, carregado em DCM) para dar o produto do subtítulo como um óleo incolor (1,03 g, rendimento de 84%); 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 1,42 (d, J = 14,6 Hz, 9H), 4,35 (s, 2H), 4,48 (d, J = 5,7 Hz, 2H), 5,15 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 7,18 (d, J = 7,9 Hz, 2H) e 7,30 (d, J = 7,7 Hz, 2H) ppm;MS (ES+) 181,1 (M-OtBu).

[000291] Etapa 4: N-[(4-formilfenil)metil]-N-(trideuteriometil) carbama- to de terc-butila

[000292] MnO2 (5,281 g, 1,051 mL, 60,75 mmol) foi adicionado em uma solução agitada de N-[[4-(hidroximetil)fenil]metil]-N-(trideuteriome- til) carbamato de terc-butila (1,03 g, 4,050 mmol) em DCM (10 mL) e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante 20 horas. A reação foi filtrada através de uma camada de Celite e lavada com DCM. O filtrado foi concentrado em vácuo para dar o composto do subtítulo como um óleo incolor (891 mg, rendimento de 88%); 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 1,40 (d, J = 43,4 Hz, 9H), 4,48 (s, 2H), 7,43 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,91 (d, J = 7,9 Hz, 2H) e 10,00 (s, 1H), ppm.

[000293] Etapa 5: N-[[4-[hidróxi-iminometil]fenil]metil]-N-(trideuterio- metil)carbamato de terc-butila

[000294] Hidroxilamina (466,0 μL de 50% p/v, 7,054 mmol) foi adicionada em uma solução agitada de N-[(4-formilfenil)metil]-N- (trideuteriometil)carbamato de terc-butila (890 mg, 3,527 mmol) em etanol (5 mL) e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 45 minutos. A mistura de reação foi concentrada em vácuo e o resíduo foi recolhido em água e extraído com EtOAc (x 3). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (x 1), secos (MgSO4), filtrados e concentrados em vácuo. O resíduo foi triturado em éter de petróleo e o precipitado foi isolado por filtração para dar o produto do subtítulo como um sólido branco (837 mg, rendimento de 89%); 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 1,41 (d, J = 25,8 Hz, 9H), 4,38 (s, 2H), 7,24 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,58 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 8,13 (s, 1H) e 11,20 (s, 1H) ppm; MS (ES+) 212,0 (M-tBu).Etapa 6 N-[[4-[cloro-N-hidróxi-carbonimidoil]fenil]metil]-N- trideuteriometil)carbamato de terc -butila

[000295] N-[[4-[hidróxi-iminometil]fenil]metil]-N-(trideuteriometil)carbamato de terc-butila (250 mg, 0,9351 mmol) em DMF (2,5 mL) foi tratado com NCS (124,9 mg, 0,9351 mmol) e a reação foi aquecida para 65°C durante 1 hora. A reação foi resfriada para a temperatura ambiente e diluída com água. A mistura foi extraída com EtOAc (x 2) e os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (x 4), secos (MgSO4), filtrados e concentrados em vácuo para dar o composto do subtítulo como um sólido branco (259 mg, rendimento de 92%); 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 1,41 (d, J = 29,6 Hz, 9H), 4,42 (s, 2H), 7,31 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,78 (d, J = 8,0 Hz, 2H), and 12,38 (s, 1H), ppm.Etapa 7: N-[[4-[5-[3-[bis(terc-butoxicarbonil)amino]-6-(4-isopropilsulfo- nilfenil)pirazin-2-il]isoxazol-3-il]fenil]metil]-N-(trideuteriometil)carbamato de terc-butila

[000296] Et3N (48,41 mg, 66,68 μL, 0,4784 mmol) foi adicionado por gotejamento em uma solução agitada de N-terc-butoxicarbonil-N-[3- etinil-5-(4-isopropilsulfonilfenil)pirazin-2-il]carbamato de terc-butila (200 mg, 0,3987 mmol) e N-[[4-[cloro-N-hidróxi-carbonimidoil]fenil]metil]-N- (trideuteriometil)carbamato de terc-butila (120,3 mg, 0,3987 mmol) em THF anidro (5 mL) e a mistura de reação foi aquecida a 65°C durante 2,5 horas. A mistura de reação foi resfriada para a temperatura ambiente e diluída com EtOAc/salmoura. Água foi adicionada até que a camada aquosa se tornasse transparente e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (x 1) e os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (x 1), secos (MgSO4), filtrados e concentrados em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (coluna ISCO Companion, de 40 g, eluindo com EtOAc 0% a 20%/éter de petróleo, carregado em DCM) para dar o produto do subtítulo como um sólido branco (213,5 mg, rendimento de 70%); 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 1,22 (d, J = 6,8 Hz, 6H), 1,31 (s, 18H), 1,43 (d, J = 26,2 Hz, 9H), 3,51 - 3,60 (m, 1H), 4,47 (s, 2H), 7,42 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 8,03 (d, J = 5,2 Hz, 3H), 8,08 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 8,65 (d, J = 8,6 Hz, 2H) e 9,52 (s, 1H) ppm; MS (ES+) 667,4 (M-Boc).Etapa 8: 5-(4-Isopropilsulfonilfenil)-3-[3-[4-[(trideuteriometilamino) metil] fenil]isoxazol-5-il]pirazin-2-amina (Composto II-3)

[000297] HCl 3 M em MeOH (1,5 mL de 3 M, 4,500 mmol) foi adicionado em uma solução agitada de N-[[4-[5-[3-[bis(terc-butoxicarbo- nil)amino]-6-(4-isopropilsulfonilfenil)pirazin-2-il]isoxazol-3-il]fenil]metil] - N-(trideuteriometil)carbamato de terc-butila (213 mg, 0,2777 mmol) em DCM (6 mL) e a reação foi aquecida sob refluxo durante 15 horas. Uma porção adicional de HCl 3 M em MeOH (0,5 mL de 3 M, 1,500 mmol) foi adicionada e a reação foi aquecida sob refluxo durante mais 7 horas. A reação foi resfriada para a temperatura ambiente e o precipitado resultante foi isolado por filtração e seco sob vácuo a 40°C para dar o sal de di-HCl do composto do título como um sólido amarelo (97,6 mg, rendimento de 65%); 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 1,20 (d, J = 6,8 Hz, 6H), 3,47 (tt, J = 14,0, 6,9 Hz, 1H), 4,19 - 4,25 (m, 2H), 7,23 (s, 2H), 7,72 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,85 (s, 1H), 7,95 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 8,11 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 8,39 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 8,97 (s, 1H) e 9,11 (s, 2H) ppm; MS (ES+) 467,2.Exemplo 5: Síntese de 3-[3-[4-(metilaminometil)fenil]isoxazol-5-il]-5-[4- [1,2,2,2-tetradeutério-1-(trideuteriometil)etil]sulfonilfenil] pirazin-2-amina (Composto II-4)

Etapa 1: 1-[4-(Dietoximetil)fenil]-N-metil-metanamina

[000298] Metilamina 2M em MeOH (288,1 mL, 576,2 mmol) foi diluída com metanol (1,000 L) e agitada a ~20°C. 4-(Dietoximetil)benzaldeído (100 g, 480,2 mmol) foi adicionado por gotejamento durante 1 minuto e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1,25 horas. Boro- hidreto de sódio (29,07 g, 30,76 mL, 768,3 mmol) foi adicionado em porções durante 20 minutos ao mesmo tempo mantendo a temperatura entre 20°C e 30°C com um banho de gelo-água. A solução de reação foi agitada à temperatura ambiente de um dia para outro então inativada por adição por gotejamento de NaOH (960,4 mL de 1,0 M, 960,4 mmol) durante 20 minutos. A reação foi agitada durante 30 minutos e concentrada em vácuo para remover MeOH. A reação foi particionada com MTBE (1,200 L) e as fases foram separadas. A fase orgânica foi lavada com água (300,0 mL), seca (Na2SO4), e concentrada em vácuo para dar o composto do título como um óleo amarelo (102,9 g, rendimento de 96%); 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 1,25 (t, 6H), 2,46 (s, 3H), 3,45 - 3,65 (m, 4H), 3,75 (s, 2H), 5,51 (s, 1H), 7,32 (d, 2H) e 7,44 (d, 2H) ppm.Etapa 2: N-[[4-(dietoximetil)fenil]metil]-N-metil-carbamato de terc-butila

[000299] Um reator de vidro encamisado de 1 L foi equipado com um agitador suspenso, termopar, e resfriador. Uma solução de 1-[4- (dietoximetil)fenil]-N-metil-metanamina (80,0 g, 358,2 mmol) em DCM (480,0 mL) foi agitada a 18°C. Uma solução de Boc-anidrido (79,75 g, 83,95 mL, 365,4 mmol) em DCM (160,0 mL) foi adicionada durante 10 minutos e a solução foi agitada a 20-25°C de um dia para outro. A mistura de reação foi filtrada, lavada com DCM (3 x 50 mL) e o filtrado foi concentrado em vácuo para dar o composto do título como um líquido amarelo pálido (116,6 g, rendimento quantitativo); 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 1,25 (t, 6H), 1,49 - 1,54 (2 x s, 9H), 2,78 - 2,83 (2 x s, 3H), 3,50 - 3,66 (m, 4H), 4,42 (s, 2H), 5,49 (s, 1H), 7,22 (d, 2H) e 7,45 (d, 2H) ppm.Etapa 3: N-[[4-[hidróxi-iminometil]fenil]metil]-N-metil-carbamato de terc- butila

[000300] Uma solução bifásica de N-[[4-(dietoximetil)fenil]metil]-N- metil-carbamato de terc-butila (50,0 g, 154,6 mmol) em 2-MeTHF (400,0 mL) e Na2SO4 (100,0 mL de 10% p/v, 70,40 mmol) foi agitada a 8-10°C em um reator de vidro encamisado de 1L. Cloridrato de hidroxilamina (46,38 mL de 5,0 M, 231,9 mmol) foi adicionado e a solução bifásica foi agitada a 30°C durante 16 horas. A reação foi diluída com MTBE (200,0 mL) e as camadas foram separadas. A fase orgânica foi lavada com água (200,0 mL), seca (Na2SO4), filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi diluído com heptano (200,0 mL) e a suspensão resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos. O sólido foi coletado por filtração para dar o composto do título como um sólido branco (36,5 g, rendimento de 89%); 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 1,50 (s, 9H), 2,88 (br s, 3H), 4,60 (s, 2H), 7,26 (d, 2H), 7,52 (d, 2H) e 8,15 (s, 1H) ppm.Etapa 4: N-[[4-[cloro-N -hidróxi-carbonimidoil]fenil]metil]-N-metil-carbamato de terc-butila

[000301] Uma suspensão de N-[[4-[hidróxi-iminometil]fenil]metil]-N- metil-carbamato de terc-butila (100 g, 378,3 mmol) em acetato de isopropila (1,000 L) foi agitada à temperatura ambiente. N- Clorossuccinimida (53,04 g, 397,2 mmol) foi adicionada e agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. A reação foi particionada com água (500,0 mL) e as fases foram separadas. A fase orgânica foi lavada com água (500,0 mL) (2 x), seca (Na2SO4), filtrada e concentrada em vácuo para remover o máximo de solvente. Heptano (1,000 L) foi adicionado e a mistura foi concentrada em vácuo para remover o máximo de solvente. Heptano (1,000 L) foi adicionado e o precipitado resultante foi isolado por filtração. O bolo do filtro foi lavado com heptano (500 mL) e seco com ar para dar o composto do título como um pó quase branco (105,45 g, rendimento de 93%); 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 1,48 (2 x s, 9H), 2,90 (2 x s, 3H), 4,47 (s, 2H), 7,26 (d, 2H), 7,77 (d, 2H) e 8,82 (s, 1H) ppm.Etapa 5: N-[[4-[5-[3-[bis(terc-butoxicarbonil)amino]-6-bromo-pirazin-2-il] isoxazol-3-il]fenil]metil]-N-metil-carbamato de terc-butila

[000302] Uma suspensão de N-[[4-[cloro-N-hidróxi-carbonimidoil] fenil]metil]-N-metil-carbamato de terc-butila (100,0 g, 334,7 mmol) e N- terc-butoxicarbonil-N-[3-etinil-5-(4-isopropilsulfonilfenil)pirazin-2-il]car- bamato de terc-butila (121,2 g, 304,3 mmol) em DCM (1,212 L) foi agitada à temperatura ambiente. Trietilamina (33,87 g, 46,65 mL, 334,7 mmol) foi adicionada em uma porção e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. A reação foi particionada com água (606,0 mL) e as fases foram separadas. A fase orgânica foi lavada com água (606,0 mL), seca (Na2SO4), filtrada e concentrada em vácuo para quase a secura. Heptano (363,6 mL) foi adicionado e a mistura foi concentrada para cerca de 300 mL. Mais heptano (1,212 L) foi adicionado e a mistura foi aquecida para 90°C com agitação. A mistura foi lentamente resfriada para a temperatura ambiente e agitada nesta temperatura durante 1 hora. O precipitado resultante foi isolado por filtração e o bolo do filtro foi lavado com heptano (2 x 363,6 mL) e seco com ar para dar o composto do título como um sólido bege (181,8 g, rendimento de 90%); 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 1,41 (s, 18H), 1,51 (s, 9H), 2,88 (2 x s, 3H), 4,50 (s, 2H), 7,36 - 7,38 (m, 3H), 7,86 (d, 2H) e 8,65 (s, 1H) ppm.Etapa 6 1 -Bromo-4-[1,2,2,2-tetradeutério-1-(trideuteriometil)etil]sulfanil-benzeno

[000303] Hidreto de sódio (246,5 mg, 6,163 mmol) foi adicionado em porções em uma solução agitada de 4-bromobenzenotiol (composto xxxi) (970,9 mg, 5,135 mmol) em DMF (10 mL) a 0°C. Após agitação nesta temperatura durante 15 minutos 1,1,1,2,3,3,3-heptadeutério-2- iodo-propano (1 g, 5,649 mmol) foi adicionado e a reação foi permitida aquecer para a temperatura ambiente durante 18 horas. A reação foi inativada pela adição de água e a mistura foi agitada durante 10 minutos. A mistura foi extraída com éter dietílico (x 3) e os extratos orgânicos combinados foram lavados com água (x 2), salmoura (x 2), secos (MgSO4), filtrados e concentrados em vácuo para dar o composto do subtítulo que foi usado diretamente sem purificação adicional assumindo pureza e rendimento de 100%; 1H RMN (500 MHz, DMSO) δ 7,25 - 7,37 (m, 2H) e 7,48 - 7,55 (m, 2H) ppm.Etapa 7: 1-Bromo-4-[1,2,2,2-tetradeutério-1-(trideuteriometil)etil] sulfonil-benzeno

[000304] mCPBA (2,875 g, 12,83 mmol) foi adicionado em porções em uma solução agitada de 1-bromo-4-[1,2,2,2-tetradeutério-1- (trideuteriometil)etil]sulfanil-benzeno (1,223 g, 5,134 mmol) em DCM (20 mL) a 0°C e a reação foi permitida aquecer para a temperatura ambiente durante 17 horas. A mistura foi lavada com NaOH aquoso 1M (x 2), Na2S2O3 aquoso saturado (x 3), salmoura (x 1), seca (MgSO4), filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (coluna ISCO Companion, de 80 g, eluindo com EtOAc0% a 40%/éter de petróleo, carregado em DCM) para dar o composto do subtítulo como um óleo incolor (1,19 g, rendimento 86%); 1H RMN (500 MHz, DMSO) δ 7,77 - 7,81 (m, 2H) e 7,88 - 7,92 (m, 2H) ppm.Etapa 8: 4,4,5,5-Tetrametil-2-[4-[1,2,2,2-tetradeutério-1-(trideuterio-metil) etil] sulfonilfenil]-1,3,2-dioxaborolano

[000305] Pd(dppf)Cl2.DCM (179,8 mg, 0,2202 mmol) foi adicionado em uma suspensão agitada de 1-bromo-4-[1,2,2,2-tetradeutério-1- (trideuteriometil) etil]sulfonil-benzeno (1,19 g, 4,404 mmol), bis(dipinacolato)diboro (1,342 g, 5,285 mmol) e KOAc (1,296 g, 13,21 mmol) em dioxano (10 mL). A reação foi posta sob uma atmosfera de nitrogênio via 5 ciclos de vácuo/nitrogênio e a mistura foi aquecida a 80°C durante 4,5 horas. A reação foi resfriada para a temperatura ambiente e o solvente foi removido em vácuo. O resíduo foi particionado entre Et2O e água e as camadas foram separadas. A camada orgânica foi seca (MgSO4), filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi dissolvido em EtOAc30% /éter de petróleo (35 mL) e 1,2 g de Florosil foram adicionados. A mistura foi agitada durante 30 minutos então filtrada, lavando os sólidos com outras alíquotas de EtOAc30%/éter de petróleo (x 3). O filtrado foi concentrado em vácuo e triturado em EtOAc10% /éter de petróleo. O sólido resultante foi isolado por filtração, lavado com éter de petróleo e seco em vácuo para dar o composto do subtítulo como um sólido quase branco (1052,1 mg, rendimento de 75%); 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 1,33 (s, 12H), 7,87 (d, J = 8,4 Hz, 2H) e 7,94 (d, J = 8,4 Hz, 2H) ppm.Etapa 9: N-[[4-[5-[3-[bis(terc-butoxicarbonil)amino]-6-[4-[1,2,2,2-tetra-deutério-1-(trideuteriometil)etil]sulfonilfenil]pirazin-2-il]isoxazol-3-il]fe- nil]metil]-N-metil-carbamato de terc-butila

[000306] [1,1‘-Bis(di-terc- butilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(II) (106,8 mg, 0,1639 mmol) foi adicionado em uma mistura de 4,4,5,5- tetrametil-2-[4-[1,2,2,2-tetradeutério-1-(trideuteriometil)etil]sulfonilfenil]- 1,3,2-dioxaborolano (1,3 g, 4,098 mmol), N-[[4-[5-[3-[bis(terc-butoxi- carbonil)amino]-6-bromo-pirazin-2-il]isoxazol-3-il]fenil]metil]-N-metil- carbamato de terc-butila (2,707 g, 4,098 mmol) e K2CO3 (1,133 g, 8,200 mmol) em tolueno (9,100 mL), EtOH (2,600 mL) e água (2,600 mL) e a mistura de reação foi desgaseificada com um fluxo de nitrogênio (5 ciclos).

[000307] A mistura foi aquecida a 75°C durante 1,5 horas. A reação foi resfriada para a temperatura ambiente e água (5,2 mL) foi adicionada. Após agitação as camadas foram separadas e a camada orgânica foi seca (Na2SO4), filtrada, e concentrada em vácuo. O resíduo foi triturado com IPA e o precipitado resultante foi isolado por filtração, lavado com IPA (3 x 4 mL) e seco em vácuo a 50°C para dar o composto do título como um sólido branco (2,4 g, rendimento de 76%); 1H RMN (400 MHz, CDCI3) δ 1,41 (s, 18H), 1,50 (s, 9H), 2,85 - 2,89 (m, 3H), 4,50 (s, 2H), 7,36 - 7,38 (m, 3H), 7,87 (d, 2H), 8,09 (d, 2H), 8,35 (d, 2H) e 9,06 (s, 1H) ppm.Etapa 10: 3-[3-[4-(Metilaminometil)fenil]isoxazol-5-il]-5-[4-[1,2,2,2-tetra- deutério-1-(trideuteriometil)etil]sulfonilfenil]pirazin-2-amina (composto II-4)

[000308] HCl concentrado (3,375 g, 2,812 mL de 37%p/p, 34,25 mmol) foi adicionado em uma solução de N-[[4-[5-[3-[bis(terc-butoxicarbonil) amino]-6-[4-[1,2,2,2-tetradeutério-1-(trideuteriometil)etil] sulfonilfenil] pirazin-2-il]isoxazol-3-il]fenil]metil]-N-metil-carbamato de terc-butila (2,2 g, 2,854 mmol) em acetona (28,60 mL) e a reação foi aquecida sob refluxo durante 7 horas. A reação foi resfriada para a temperatura am-biente e o precipitado resultante foi isolado por filtração, lavado com acetona (2 x 4,5 mL) e seco em vácuo a 50°C para dar o sal de di-HCl do composto do título como um sólido amarelo (1,42 g, rendimento de 92%); 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 2,58 (t, 3H), 4,21 (t, 2H), 5,67 (br s, 2H), 7,74 (d, 2H), 7,85 (s, 1H), 7,94 (d, 2H), 8,10 (d, 2H), 8,38 (d, 2H), 8,96 (s, 1H) e 9,33 (br s, 2H) ppm; MS (ES+) 471,8.Exemplo 6: Síntese de 5-(4-(terc-butilsulfonil)fenil)-3-(3-(4-((metila-mino)metil)fenil)isoxazol-5-il)pirazin-2-amina (Composto I-2)

Etapa 1: Preparação de composto 4-ii

[000309] Uma suspensão de 4-((hidróxi-imino)metil)benzil (metil) carbamato de terc-butila (Composto 4-i) (650 g, 2,46 mol) em acetato de isopropila (6,5 L) é agitada à temperatura ambiente. N-Cloros- succinimida (361 g, 2,71 mol) é adicionada e a temperatura de reação é mantida de um dia para outro a 20-28°C para garantir a reação completa. A mistura de reação é diluída com água (3,25 L) e EtOAc (1,3 L) e as fases são separadas. A fase orgânica é lavada com água (2 x 3,25 L), seca (Na2SO4), e concentrada para um bolo úmido. O con-centrado é diluído com heptano (9,1 L), ~2 L de solvente são removidos, e então agitado à temperatura ambiente durante 2-20 h. O sólido é coletado por filtração. O bolo do filtro é lavado com heptano (2 x 975 mL) e seco para dar o Composto 4-ii (692 g; rendimento de 94%, pureza de 99,2% em área por HPLC) como um pó incolor.Etapa 2: Preparação de (5-bromo-3-(3-(4-((( terc- butoxicarbonil) (metil)amino) metil)fenil)isoxazol-5-il)pirazin-2-il)( terc- butoxicarbonil)carbamato de terc-butila (composto 4-iv)

[000310] Uma suspensão de N-(5-bromo-3-etinilpirazin-2-il)-N-terc- butoxicarbonilcarbamato de terc-butila (Composto 4-iii)(1,59 kg, 3,99 mol) e 4-(cloro(hidróxi-imino)metil)benzil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)carbamato de terc-butila (1,31 kg, 4,39 mol; 1,10 equiv.) em CH2Cl2 (12,7 L) é agitada à temperatura ambiente. Trietilamina (444 g, 611 mL, 4,39 mol) é adicionada na suspensão e a temperatura de reação é mantida entre 20°C e 30°C durante 20-48 h para garantir a reação completa. A mistura de reação é diluída com água (8 L) e totalmente misturada, então as fases são separadas. A fase orgânica é lavada com água (8 L), seca (Na2SO4), e então concentrada até que permaneça cerca de 1 L de CH2Cl2. O concentrado é diluído com heptano (3,2 L) e reconcentrado a 40°C/20,7 kPa (200 torr) até que destilado não seja mais observado. O concentrado é agitado e adicionalmente diluído com heptano (12,7 L) para precipitar um sólido. A suspensão é agitada de um dia para outro. O sólido é coletado por filtração, lavado com heptano (2 x 3 L) então seco para dar o Composto 4-iv (2,42 kg; rendimento de 92%, pureza de 100% em área por HPLC) como um pó castanho- amarelado claro. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,61 (s, 1H), 7,82 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,31 (m, 3H), 4,46 (br s, 2H), 2,84 (br d, 3H), 1,57 (s, 2H), 1,44 (br s, 9H), 1,36 (s, 18H).Etapa 3: Preparação de composto 5-I

[000311] Uma mistura de (5-bromo-3-(3-(4-(((terc-butoxicarbonil)(metil) amino)metil)fenil)isoxazol-5-il)pirazin-2-il)(terc-butoxicarbonil)carbamato de terc-butila (Composto 4-iv)(1,00 kg, 1,51 mol), K2CO3 (419 g, 3,02 mol), e ácido (4-(isopropilsulfonil)fenil)borônico (345 g, 1,51 mol) em tolueno (7,0 L) e água (2,0 L) foi agitada e desgaseificada com N2 durante 30 min. 1,1’-Bis(di-t- butilfosfino)ferrocenodicloropaládio(II) [Pd(dtbpf)Cl2; 19,7 g, 30,3 mmol] foi então adicionado e a mistura foi desgaseificada durante um adicional de 20 min. A mistura de reação foi aquecida a 70°C durante pelo menos 1 h para garantir a reação completa. A mistura de reação foi resfriada para a temperatura ambiente então foi filtrada através de Celite. O vaso de reação e a camada de filtro foram lavados com tolueno (2 x 700 mL). Os filtrados são combinados e as fases são separadas. A fase orgânica é agitada com resina Biotage MP-TMT (170 g) durante 4-20 h. A resina é então removida por filtração através de Celite e a camada de filtro é lavada com tolueno (2 x 700 mL). O filtrado e as lavagens são combinados e concentrados para quase a secura então o resíduo quase seco é diluído com i-PrOH (5,75 L) e a mistura diluída é concentrada de novo. O concentrado é de novo dissolvido em (45°C) i-PrOH quente (5,75 L) e então resfriado para a temperatura ambiente com agitação para induzir a cristalização e então agitado durante cerca de 16-20 h. O sólido é coletado por filtração, lavado com i-PrOH (2 x 1 L), e seco para dar VRT-1018729 (967 g; 84%) como um pó bege. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 9,04 (s, 1H), 8,33 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 8,06 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,85 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,34 (m, 3H), 4,47 (br s, 2H), 3,25 (hept, J = 7,0 Hz, 1H), 2,85 (br d, 3H), 1,47 (s, 9H), 1,38 (s, 18H), 1,33 (d, J = 6,9 Hz, 6H).

Etapa 4: Preparação de composto I-2^2HCl

[000312] Uma solução de Composto 5-i (950 g, 1,24 mol) em acetona (12,35 L) é aquecida para 40°C então HCl concentrado (1,23 kg, 1,02 L de 37%p/p, 12,4 mol) é adicionado em uma vazão para manter a temperatura de reação entre 40°C e 45°C durante pelo menos 5 h para garantir a reação completa. A suspensão é resfriada para abaixo de 30°C e o sólido é coletado por filtração. O bolo do filtro é lavado com acetona (2 x 950,0 mL) então seco para dar o Composto I-2^2HCl (578 g; rendimento de 87%, pureza de 99,5% em área por HPLC) como um pó amarelo. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 9,53 (br d, J = 4,8 Hz, 2H), 8,93 (s, 1H), 8,37 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 8,07 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,92 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,84 (s, 1H), 7,75 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 4,23 - 4,15 (m, 2H), 3,43 (hept, J = 6,8 Hz, 1H), 2,55 (t, J = 5,3 Hz, 3H), 1,17 (d, J = 6,8 Hz, 6H).Etapa 5: Preparação de Composto I-2^HCl a partir de Composto I-2 • 2HCl

Processo em dois recipientes

[000313] Uma suspensão agitada de Composto I-2^2HCl (874 g, 1,63 mol) em i-PrOH (3,50 L) e água (0,87 L) é aquecida a 50°C durante 1-2 h, resfriada para a temperatura ambiente, e agitada durante 1-20 h. XRPD é realizada em uma amostra pequena para garantir que o Composto I-2^2HCl foi convertido em outra forma. A suspensão é resfriada para 5°C e agitada durante 1 h. O sólido é coletado por filtração, então o bolo do filtro é lavado com i-PrOH/água 80/20 (2 x 874 mL), e brevemente seco.

[000314] Se a XRPD mostra o Composto I-2^HCl/forma anidra, o sólido é seco para dar o Composto I-2 •HCl/anidro (836 g, rendimento de 99%, pureza de 99,2% em área por HPLC) como um sólido amarelo. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 9,38 (s, 2H), 8,96 (s, 1H), 8,46 - 8,34 (m, 2H), 8,10 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,94 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,85 (s, 1H), 7,75 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,23 (br s, 2H), 4,21 (s, 2H), 3,47 (hept, J = 6,7 Hz, 1H), 2,58 (s, 3H), 1,19 (d, J = 6,8 Hz, 6H).

[000315] Se a XRPD mostra o Composto I-2 •HCl/forma hidrato, o sólido é agitado em i-PrOH novo (3,50 L) e água (0,87 L) a 50°C durante pelo menos 2 h até que a XRPD mostre a conversão completa em Composto I-2 •HCl/anidro. A suspensão é então resfriada para 5°C e agitada durante 1 h. O sólido é coletado por filtração então o bolo do filtro é lavado com i-PrOH/água 80/20 (2 x 874 mL) então seca para dar o Composto I-2^HCl/anidro.

Procedimento alternativo (um recipiente) usado

[000316] Composto I-2^2HCl (392 g) é carregado ao reator. IPA/água (8 L) 4:1 é carregado a um reator agitado à temperatura ambiente de um dia para outro. XRPD é usada para confirmar a conversão para a forma mono-hidratada de sal de mono-HCl. A mistura é aquecida para 50°C. Sementes de Composto I-2^HCl/anidro (16 g) são adicionadas e a mistura é aquecida a 50°C até que a XRPD confirme a conversão completa para a forma anidra desejada. A mistura é resfriada para a temperatura ambiente, filtrada e o sólido é lavado com IPA/água 4:1 (2 x 800 mL) então seco para dar o Composto I-2^HCl/anidro (343 g, rendimento de 94%).Etapa 4: Método alternativo 1: Preparação de composto I-2 base livre

[000317] Uma solução de Composto 5-i (100 g, 131 mmol) em DCM (200 mL) foi agitada à temperatura ambiente então TFA (299 g, 202 mL, 2,62 mol) foi adicionado. Após 2 h a solução de reação foi resfriada para 5°C. A mistura de reação foi diluída com EtOH (1,00 L) durante cerca de 5 min resultando em uma suspensão amarela brilhante. A suspensão foi resfriada para 10°C então NaOH (1,64 L de 2,0 M, 3,28 mol) foi adicionado durante 30 min então agitado à temperatura ambiente de um dia para outro. O sólido foi coletado por filtração então lavado com água (2 x 400 mL), EtOH (2 x 200 mL) então seco para dar o Composto I-2 base livre (57,0 g, rendimento de 94%, pureza de 99,7% em área por HPLC) como um pó amarelo, fino. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,95 (s, 1H), 8,39 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,95 (dd, J = 11,6, 8,4 Hz, 4H), 7,78 (s, 1H), 7,51 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,21 (br s, 2H), 3,72 (s, 2H), 3,47 (hept, J = 6,8 Hz, 1H), 2,29 (s, 3H), 1,19 (d, J = 6,8 Hz, 6H).Etapa 4: Método alternativo 2: Preparação de composto I-2^HCl

[000318] Uma suspensão de Composto I-2 base livre (10,0 g, 21,6 mmol) em acetona (80 mL) foi agitada e aquecida para 35°C. Uma solução aquosa de HCl (11,9 mL de 2,0 M, 23,8 mmol) diluída com água (8,0 mL) foi adicionada e a mistura foi aquecida a 50°C durante 4 h. A suspensão foi permitida resfriar para a temperatura ambiente então agitada de um dia para outro. O sólido foi coletado por filtração. O bolo do filtro foi lavado com acetona (2 x 20 mL) então seco para dar 10,2 g de Composto I-2 cloridrato (rendimento de 95%) como um pó amarelo.Exemplo 7: Síntese de 5-(4-(Isopropilsulfonil)fenil)-3-(3-(4-(tetra- hidropiran-4-ilamino)metil)fenil)isoxazol-5-il)pirazin-2-amina (Composto I-3)Esquema: Síntese exemplificadora de composto I-3

Etapa 1: Preparação de N-(4-(dietoximetil)benzil)tetra-hidro-2H-piran-4- amina(A-2)

[000319] Uma solução de cloridrato de tetra-hidro-2H-piran-4-amina (1,13 kg, 8,21 mol) em MeOH (14,3 L) é agitada a cerca de 20°C. Então Et3N (1,06 kg, 1,43 L, 8,21 mol) é adicionado. A mistura é agitada durante pelo menos 5 min então tereftaldeído-dietil-acetal (1,43 kg, 6,84 mol) é adicionado ao mesmo tempo mantendo a temperatura da reação entre 20°C e 25°C. A mistura é agitada durante pelo menos 45 min para formar a imina. Cápsulas de NaBH4 (414 g, 11,0 mol) são adicionadas ao mesmo tempo mantendo a temperatura da reação abaixo de cerca de 25°C. A mistura é agitada durante 1 h após a completitude da adição. A mistura de reação é inativada pela adição de NaOH 1 M (13,7 L) então é extraída com MTBE. A solução orgânica foi lavada com salmoura (7,13 L) então seca (Na2SO4) e concentrada para dar o Composto A-2 (2197 g; rendimento de 109%, pureza de 94,4% em área por HPLC) como um óleo turvo. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,43 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,31 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 5,49 (s, 1H), 4,66 (br s, 1H), 4,03 - 3,91 (m, 2H), 3,82 (s, 2H), 3,69 - 3,47 (m, 4H), 3,38 (td, J = 11,6, 2,1 Hz, 2H), 2,78 - 2,65 (m, 1H), 1,90 - 1,81 (m, 2H), 1,53 - 1,37 (m, 2H), 1,23 (t, J = 7,1 Hz, 6H).Etapa 2: Preparação de 4-(dietoximetil)benzil(tetra-hidro-2H-piran-4- il)carbamato de terc- butila (A-3)

[000320] Uma mistura de N-(4-(dietoximetil)benzil)tetra-hidro-2H- piran-4-amina (A-2) (2195 g, 7,48 mol) em CH2Cl2 (22,0 L) é agitada a 25°C então dicarbonato de di-t-butila (1,71 kg, 7,86 mol) é adicionado. Et3N (795 g, 1,10 L) é então adicionado ao mesmo tempo mantendo a temperatura da reação entre 20°C e 25°C. A mistura de reação é agitada a cerca de 25°C durante 12 - 20 h. Após a completitude da reação, a mistura é resfriada para cerca de 20°C e inativada com ácido cítrico aquoso 0,5 M (7,48 L, 3,74 mol) ao mesmo tempo mantendo a temperatura da reação entre 20°C e 25°C. A fase orgânica é coletada, lavada com NaHCO3 sat. (6,51 L, 7,48 mol), lavada com salmoura (6,59 L), e seca (Na2SO4) então concentrada para dar 4-(dietoximetil) benzil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)carbamato de terc-butila (A-3) (2801 g; rendimento de 95%, pureza de 98,8% em área por HPLC) como um óleo âmbar, espesso. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,40 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,21 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 5,49 (s, 1H), 4,39 (br s, 3H), 3,93 (br dd, J = 10,8, 3,8 Hz, 2H), 3,67 - 3,47 (m, 4H), 3,40 (br m, 2H), 1,68 - 1,59 (m, 4H), 1,39 (br s, 9H), 1,23 (t, J = 7,1 Hz, 6H).Etapa 3: Preparação de 4-((hidróxi-imino)metil)benzil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)carbamato de terc- butila (A-4)

[000321] Uma solução de 4-(dietoximetil)benzil(tetra-hidro-2H-piran- 4-il)carbamato de terc-butila (A-3) (2,80 kg, 7,12 mol) em THF (28,0 L) e água (2,80 L) é agitada a cerca de 20°C. Cloridrato de hidroxilamina (593 g, 8,54 mol) é adicionado ao mesmo tempo mantendo a temperatura da reação entre 20°C e 25°C. A mistura de reação é agitada a cerca de 20°C durante 16 - 20 h então diluída com CH2Cl2 (8,4 L) e salmoura 50% (11,2 L) e agitada durante pelo menos 5 min. As fases são separadas então a fase orgânica é lavada com salmoura 50% (2 x 2,8 L), seca (Na2SO4) e concentrada. O concentrado é diluído com MeOH (1,4 L) e concentrado de novo. O concentrado é diluído com MeOH (14,0 L) e transferido para um vaso de reação. A solução é aquecida para cerca de 25°C então água (14,0 L) é adicionada durante cerca de 1 - 1,5 h; após a adição de cerca de 10 L de água, a mistura é semeada e é observada uma suspensão turva. Mais água (8,4 L) é adicionada durante 1,5 h para adicionalmente precipitar o produto. Após maturação, o sólido é coletado por filtração. O bolo do filtro é lavado com heptano (5,6 L) e seco para dar 4-((hidróxi-imino)metil)benzil(tetra- hidro-2H-piran-4-il)carbamato de terc-butila (A-4) (1,678 g; 71%, 91,5% em área por HPLC) como um pó quase branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,12 (s, 1H), 7,51 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,24 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 4,40 (br s, 3H), 3,96 (dd, J = 10,4, 3,6 Hz, 2H), 3,41 (br m, 2H), 1,69 - 1,61 (m, 4H), 1,39 (br s, 9H).Etapa 4: Preparação de (4-(cloro(hidróxi-imino)metil)benzil(tetra-hidro- 2 H-piran-4-il)carbamato de terc- butila (A-4-i)

[000322] Uma suspensão de 4-((hidróxi-imino)metil)benzil(tetra-hidro- 2H-piran-4-il)carbamato de (E)-terc-butila (A-4) (1662 g, 4,97 mol) em i- PrOAc (16,6 L) é agitada a 20°C em um reator. N-clorossuccinimida (730 g, 5,47 mol) é adicionada mantendo a cerca de 20°C. A suspensão é agitada a cerca de 20°C para completar a reação. A suspensão é diluída com água (8,3 L) e agitada para dissolver o sólido. As fases são separadas e a fase orgânica é lavada com água (8,3 L). A fase orgânica é concentrada então diluída com i-PrOAc (831 mL). Heptano (13,3 L; 8 V) é lentamente adicionado para induzir a cristalização. A suspensão espessa é então agitada durante 1 h. O sólido é coletado por filtração; o bolo do filtro é lavado com heptano (2 x 1,6 L; 2 x 1 V) e seco para dar 4-(cloro(hidróxi-imino)metil)benzil (tetra-hidro-2H-piran-4-il)carbamato de (Z)-terc-butila (A-4-i) (1628 g; 89%, 98,0% em área por HPLC) como um pó branco.Etapa 5: Preparação de (5-bromo-3-(3-(4-((( terc- butoxicarbonil)(tetra- hidro-2 H-piran-4-il)amino)metil)fenil)isoxazol-5-il)pirazin-2-il)( terc- butoxicarbonil)carbamato de terc- butila (A-5)

[000323] Uma solução de 4-(cloro(hidróxi-imino)metil)benzil(tetra- hidro-2H-piran-4-il)carbamato de terc-butila (A-4-i) (1,60 kg, 4,34 mol) e N-(5-bromo-3-etinilpirazin-2-il)-N-terc-butoxicarbonilcarbamato de terc- butila (Composto A-4-ii) (1,73 kg, 4,34 mol) em CH2Cl2 (12,8 L) é agitada a 20°C. Et3N (483 g, 665 mL; 4,77 mol) é adicionado e a temperatura da reação é mantida abaixo de 30°C. A suspensão é agitada a 20°C para completar a reação então é diluída com água (8,0 L) e agitada. As fases são separadas e a fase orgânica é lavada com água (8,0 L) e então concentrada. i-PrOAc (1,6 L) é adicionado e a mistura é aquecida a 50°C. Heptano (4,0 L) foi lentamente adicionado então a suspensão é permitida resfriar para a temperatura ambiente e é agitada de um dia para outro. Mais heptano (7,2 L) é adicionado na suspensão e ela é agitada durante 1 h. O sólido é coletado por filtração. O bolo do filtro é lavado com heptano (2 x 1,6 L) e seco para dar (5- bromo-3-(3-(4-(((terc-butoxicarbonil)(tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)metil)fenil)isoxazol-5-il)pirazin-2-il)(terc-butoxicarbonil) carbamato de terc-butila (A-5) (2,478 kg; 78%, 97,8% em área por HPLC) como um pó castanho-amarelado, fino. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,60 (s, 1H), 7,78 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,31 (m, 3H), 4,42 (br m, 3H), 4,03 - 3,82 (m, 2H), 3,38 (br s, 2H), 1,60 (m, 4H), 1,36 (s, 27H).Etapa 6: Preparação de terc-butoxicarbonil(3-(3-(4-(((terc-butoxicar- bonil) (tetra-hidro-2 H-piran-4-il)amino)metil)fenil)isoxazol-5-il)-5-(4-(isopropilsulfonil)fenil)pirazin-2-il)carbamato de terc- butila

[000324] Uma mistura de (5-bromo-3-(3-(4-(((terc-butoxicarbonil) (tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)metil)fenil)isoxazol-5-il)pirazin-2-il)(terc- butoxicarbonil)carbamato de terc-butila (A-5) (425 g, 582 mmol), K2CO3 (161 g, 1,16 mol; 2,0 equiv.), e ácido (4-(isopropilsulfonil)fenil)borônico (133 g, 582 mmol) em tolueno (2,98 L) e água (850 mL) é agitada e desgaseificada com N2 à temperatura ambiente. O catalisador [1,1‘- bis(di-terc-butilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(II), (Pd(dtbpf)Cl2; 1,90 g, 2,91 mmol) é adicionado e a mistura é desgaseificada durante um adicional de 10 min. A mistura é aquecida a 70°C até a completitude da reação. A mistura é resfriada para 50°C, diluída com água (850 mL) e filtrada através de um leito de Celite. As fases são separadas. A fase orgânica é concentrada então o resíduo é diluído com EtOH (1,70 L) e a mistura diluída é concentrada de novo. Com misturação a 40°C, o concentrado é diluído com EtOH (1,70 L) para induzir a cristalização. A suspensão é resfriada para 20°C e agitada durante 4 h. O sólido é coletado por filtração. O bolo do filtro é lavado com EtOH (2 x 425 mL) e seco com ar para dar terc-butoxicarbonil(3-(3-(4-(((terc-butoxicarbonil) (tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)metil)fenil)isoxazol-5-il)-5-(4-(isopropil- sulfonil) fenil)pirazin-2-il)carbamato de terc-butila (A-6) como um pó bege. O sólido é dissolvido em THF (2,13 L) e transformado em pasta fluida com resina Biotage MP-TMT (48 g) à temperatura ambiente. A resina é então removida por filtração e o filtrado concentrado para remover o máximo de THF. O concentrado é diluído com EtOH (970 mL) e concentrado de novo para cerca da metade do volume original. O concentrado é diluído de novo com EtOH (970 mL) e misturado durante 1 h a 40°C. A suspensão é resfriada para a temperatura ambiente e o sólido é coletado por filtração então seco para dar terc-butoxicarbonil(3- (3-(4-(((terc-butoxicarbonil)(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)metil)fenil) isoxazol-5-il)-5-(4-(isopropilsulfonil)fenil)pirazin-2-il)carbamato de terc- butila (A-6) (416 g; rendimento de 86%, pureza de 99,3% em área por HPLC) como um pó branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 9,04 (s, 1H), 8,38 - 8,28 (m, 2H), 8,10 - 8,01 (m, 2H), 7,82 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,34 (m, 3H), 4,44 (br s, 2H), 3,94 (dd, J = 10,5, 3,5 Hz, 2H), 3,40 (br s, 2H), 3,25 (hept, J = 6,8 Hz, 1H), 1,65 (m, 4H), 1,38 (br s, 27H), 1,33 (d, J = 6,9 Hz, 6H).Etapa 7: Preparação de 5-(4-(isopropilsulfonil)fenil)-3-(3-(4-(((tetra- hidro-2 H-piran-4-il)amino)metil)fenil)isoxazol-5-il)pirazin-2-amina (I-3) sob forma de base livre

[000325] Uma suspensão de terc-butoxicarbonil(3-(3-(4-(((terc-butoxi- carbonil)(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)metil)fenil)isoxazol-5-il)-5-(4- (isopropilsulfonil)fenil)pirazin-2-il)carbamato de terc-butila (A-6) (410 g; 492 mmol) em CH2Cl2 (410 mL) é agitada à temperatura ambiente em um frasco. TFA (841 g, 568 mL; 7,4 mol) é adicionado ao mesmo tempo mantendo a temperatura da reação entre 20°C e 25°C. A solução é agitada à temperatura ambiente durante cerca de 3 h quando análise mostra completitude da reação. A solução é resfriada para cerca de 5-10°C e diluída com EtOH (3,3 L) ao mesmo tempo mantendo a temperatura abaixo de 20°C. Uma solução aquosa de NaOH 5,0 M (1,77 L; 8,85 mol) é adicionada enquanto que é permitido que a temperatura da reação suba para cerca de 14°C a cerca de 42°C. A suspensão é aquecida a 70-75°C durante 6 h enquanto se remove o destilado. A suspensão é permitida resfriar para a temperatura ambiente. O sólido é coletado por filtração e o bolo do filtro é lavado com água (4 x 1,64 L). O bolo do filtro é lavado com EtOH (2 x 820 mL) e seco para dar 5-(4- (isopropilsulfonil)fenil)-3-(3-(4-(((tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)metil)fenil) isoxazol-5-il)pirazin-2-amina (Composto I-1) (257 g; rendimento de 98%, pureza de 99,5% em área por HPLC) como um pó amarelo.

[000326] 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,94 (s, 1H), 8,44 - 8,33 (m, 2H), 7,94 (t, J = 8,2 Hz, 4H), 7,76 (s, 1H), 7,53 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,20 (s, 2H), 3,83 (m, 1H), 3,80 (s, 3H), 3,46 (hept, J = 6,8 Hz, 1H), 3,25 (td, J = 11,4, 2,1 Hz, 2H), 2,66 - 2,54 (m, 1H), 1,79 (br dd, 2H), 1,36 - 1,22 (m, 2H), 1,19 (d, J = 6,8 Hz, 6H). 13C RMN (101 MHz, DMSO) δ 167,57, 151,76, 141,07, 137,58, 135,75, 129,16, 128,53, 126,57, 126,41, 125,69, 124,52, 102,13, 65,83, 54,22, 52,60, 49,19, 33,18, 15,20.Dados analíticos dos compostos

Intermediários Exemplo 8: Preparação de oxima 5a ESQUEMA BB:

Etapa 1b

[000327] Adicionar MeOH (28,00 L) e 4-(dietoximetil)benzaldeído (Composto 1b) (3,500 g, 16,81 mol) em um reator a 20°C. Adicionar metilamina, 33% em EtOH (1,898 kg, 2,511 L de 33%p/p, 20,17 mol) mantendo a 20-30°C então agitar durante 1,5 h para formar a imina. Adicionar cápsulas de NaBH4 (381,7 g, 10,09 mol) mantendo a temperatura entre 20°C e 30°C. Agitar à temperatura ambiente durante pelo menos 30 min para garantir a reação completa. Adicionar NaOH aquoso (16,81 L de 2,0 M, 33,62 mol) mantendo a aproximadamente 20°C. Adicionar MTBE (17,50 L) e salmoura (7,0 L), agitar durante pelo menos 5 min então permitir a separação das fases. Extrair a camada aquosa com MTBE (7,0 L) então combinar as fases orgânicas e lavar com salmoura (3,5 L) então secar (Na2SO4) então concentrar para 6 L. A mistura bifásica foi transferida para um funil de separação e a fase aquosa foi removida. A fase orgânica foi concentrada para dar 1-(4- (dietoximetil)fenil)-N-metilmetanamina (Composto 2b) (3,755 g,16,82 mol, rendimento de 100%) como um óleo. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,43 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,31 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 5,49 (s, 1H), 3,75 (s, 2H), 3,68 - 3,46 (m, 4H), 2,45 (s, 3H), 1,23 (t, J = 7,1 Hz, 6H).

Etapas 2b e 3b

[000328] Adicionar 2-MeTHF (15,00 L) e 1-(4-(dietoximetil)fenil)-N- metilmetanamina (Composto 2b) (3750 g, 16,79 mol) em um reator a 20°C. Adicionar uma solução de Boc-anidrido (3,848 kg, 4,051 L, 17,63 mol) em 2-MeTHF (7,500 L) mantendo aproximadamente a 25°C. Agitar durante pelo menos 30 min para garantir a conversão completa em 4- (dietoximetil)benzil(metil)carbamato de terc-butila (Composto 3b), então adicionar uma solução de Na2SO4 (1,192 kg, 8,395 mol) em água (11,25 L). Aquecer para 35°C então adicionar uma solução de cloridrato de hidroxilamina (1,750 kg, 25,18 mol) em água (3,75 L) então agitar durante pelo menos 6 h para garantir a reação completa. Resfriar para 20°C, interromper a agitação e remover a fase aquosa. Lavar a camada orgânica com salmoura (3,75 L), secar (Na2SO4), filtrar e concentrar para cerca de 9 L. Adicionar heptano (15,00 L) e 4-((hidróxi-imino) metil)benzil(metil) carbamato de terc-butila cristalino (Composto 5a) (porções de 1,0 g a cada 10 min) até que nucleação seja evidente, então concentrar para dar uma pasta fluida de sólidos. Adicionar heptano (3,75 L) então resfriar para a temperatura ambiente e filtrar. Lavar com heptano (5,625 L) então secar para dar 4-((hidróxi-imino)metil) benzil(metil)carbamato de terc-butila (Composto 5a) (4023 g, 15,22 mol, rendimento de 91%, pureza de 97,2% em área por HPLC) como um sólido incolor. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,13 (s, 1H), 7,54 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,25 (br d, 2H), 4,44 (br s, 2H), 2,83 (br d, 3H), 1,47 (br s, 9H). Esquema CC: Síntese de intermediário A-4-ii

[000329] O composto de formula A-4-ii pode ser preparado de acordo com as etapas representadas em Esquema C. Reações de acoplamento de Sonogashira são conhecidas na técnica (consulte, por exemplo, Chem. Rev. 2007, 874-922). Em algumas modalidades, as condições de acoplamento de Sonogashira compreendem adição de 1 equivalente do composto de formula C-1, 1 equivalente de TMS-acetileno, 0,010 equivalente de Pd(PPh3)2Cl2, 0,015 equivalente de CuI e 1,20 equivalentes de NMM em isopropanol. O produto pode ser isolado pela adição de água na mistura de reação alcoólica.

[000330] Sais de amina de um produto podem ser formados pela dissolução da amina em um solvente orgânico comum e adição de um ácido. Exemplos de solventes adequados incluem solventes clorados (por exemplo, diclorometano (DCM), dicloroetano (DCE), CH2Cl2, e clorofórmio), éteres (por exemplo, THF, 2-MeTHF e dioxano), ésteres (por exemplo, EtOAc, IPAC) e outros solventes apróticos. Exemplos de ácidos adequados incluem, mas não se limitam a HCl, H3PO4, H2SO4, MSA, e PTSA. Em algumas modalidades, o solvente é IPAC e o ácido é PTSA. Em algumas modalidades, o sal de adição de ácido é convertido de volta à base amina livre na presença de um solvente adequado e uma base adequada. Os solventes adequados incluem EtOAc, IPAC, diclorometano (DCM), dicloroetano (DCE), CH2Cl2, clorofórmio, 2-MeTHF, e as bases adequadas incluem NaOH, NaHCO3, Na2CO3, KOH, KHCO3, K2CO3, e Cs2CO3. Em algumas modalidades, o solvente adequado é EtOAc e a base adequada é KHCO3.

[000331] A amina de Composto C-2 pode ser protegida com vários grupos protetores de amina, como Boc (terc-butoxicarbonila). A intro-dução de grupos protetores Boc é conhecida na técnica (consulte, por exemplo, "Protecting Groups in Organic Synthesis", Greene e Wuts). Em algumas modalidades, as condições adequadas envolvem adição de 1,00 equivalente da amina, 2,10 equivalentes de dicarbonato de di-terc- butila, e 0,03 equivalente de DMAP em EtOAc.

[000332] A redução em Pd é realizada pelo tratamento com um sequestrante de metal (sílica-gel, resinas funcionalizadas, carvão ve-getal). Em algumas modalidades, as condições adequadas envolvem a adição de carvão vegetal.

[000333] grupo protetor TMS (trimetilsilila) no Composto C-3 pode ser removido via condições conhecidas por uma pessoa versada na técnica. Em algumas modalidades, as condições de remoção de TMS compreendem a reação do composto TMS-protegido com uma base adequada em um solvente adequado. Exemplos de solventes adequados incluem solventes clorados (por exemplo, diclorometano (DCM), dicloroetano (DCE), CH2Cl2, e clorofórmio), éteres (por exemplo, THF, 2-MeTHF e dioxano), ésteres (por exemplo, EtOAc, IPAC), outros solventes apróticos e solventes alcoólicos (por exemplo, MeOH, EtOH, iPrOH). Exemplos de bases adequadas incluem, mas não se limitam a (por exemplo, NaOH, KOH, K2CO3, Na2CO3). Em certas modalidades, as condições adequadas compreendem adição de 1,00 equivalente do acetileno TMS-protegido, 1,10 equivalentes de K2CO3, EtOAc e EtOH.Em algumas modalidades, o solvente alcoólico, tal como EtOH, é adicionado no final na reação. Em algumas modalidades o produto acetileno é isolado pela adição de água.Esquema DD: Síntese exemplificadora de composto A-4-ii

Exemplo 9: Síntese de composto A-4-ii

Etapa 1: Preparação de 5-bromo-3-((trimetilsilil) etinil) pirazin-2-amina (composto C-2)

[000334] Carregar isopropanol (8,0 L) em um reator e agitar e aspergir com uma corrente de N2. Adicionar 3,5-dibromopirazin-2-amina (Composto C-1) (2,000 g, 7,91 moles), Pd(PPh3)2Cl2 (56 g, 0,079 moles), CuI (23 g, 0,119 moles), e NMM (1043 mL, 9,49 moles) no reator sob uma atmosfera de N2. Ajustar a temperatura de reação para 25°C. Purgar o reator com N2 realizando três ciclos de vácuo/purga com N2. Carregar TMS-acetileno (1,12 L, 7,91 moles) na mistura de reação e manter a temperatura de reação abaixo de 30°C. Quando a reação estiver completa abaixar a temperatura da mistura de reação para 15°C então adicionar água (10 L) e agitar durante pelo menos 2 h. O sólido é coletado por filtração lavando o sólido com IPA/água 1:1 (2 x 6 L). O bolo do filtro é seco sob vácuo então carregado a um reator e dissolvido em EtOAc (12,5 L). PTSA hidratado (1,28 kg, 6,72 mol) é carregado como um sólido ao reator. A mistura é agitada à temperatura ambiente durante pelo menos 5 h então o sólido é coletado por filtração, lavado com heptano/EtOAc 1:1 (3,5 L) seguido por heptano (3,5 L). O bolo do filtro é seco para dar 5-bromo-3-((trimetilsilil)etinil)pirazin-2-amina (Composto C-2) como um sal de PTSA (2356 g, rendimento de 67%, pureza de 98,9% em área por HPLC). 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,12 (s, 1H), 7,48 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,12 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 2,29 (s, 3H), 0,26 (s, 9H).Etapas 2 e 3

Etapa 2: Preparação de N - terc- butoxicarbonil-N-[5-bromo-3- ((trimetilsilil)etinil) pirazin-2-il]carbamato de terc- butila (composto C-3)

[000335] Uma solução de sal de PTSA de 5-bromo-3-((trimetilsilil) etinil)pirazin-2-amina (Composto C-2) (2,350 g, 5,31 mol) em EtOAc (11,5 L) é agitada com uma solução aq. de KHCO3 20% p/p (4,5 kg, 1,5 eq.) durante pelo menos 30 min. As camadas são separadas e a camada orgânica é concentrada então dissolvida em EtOAc (7 L) e adicionada a um reator. DMAP (19,5 g, 0,16 mol) é adicionado seguido por uma solução de Boc2O (2436 g, 11,16 mol) em EtOAc (3 L) adicionada lentamente. A reação é agitada durante pelo menos 30 min para garantir a reação completa então carvão vegetal ativado (Darco G- 60, 720 g) e Celite (720 g) são adicionados e agitados durante pelo menos 2 h. A mistura é filtrada lavando a camada sólida com EtOAc (2 x 1,8 L). O filtrado é concentrado para dar N-terc-butoxicarbonil-N-[5- bromo-3-((trimetilsilil)etinil)pirazin-2-il]carbamato de terc-butila (Composto C-3) que é usado diretamente na etapa seguinte.

Etapa 3: Preparação de N-(5-bromo-3-etinilpirazin-2-il)-N-terc-butoxi- carbonilcarbamato de terc- butila (composto A-4-ii)

[000336] K2CO3 (811 g, 5,87 mol) é carregado a um reator seguido por uma solução de Composto C-3 (2300 g, 4,89 mol) dissolvido em EtOAc (4,6 L) e agitação é iniciada. EtOH (9,2 L) é adicionado lentamente e a mistura foi agitada durante pelo menos 1 h para garantir que a reação é completa então água (4,6 L) é adicionada e agitada durante pelo menos 2 h. O sólido é coletado por filtração e lavado com EtOH/água 1:1 (4,6 L seguido por 2,3 L) seguido por EtOH (2,3 L). O bolo do filtro é seco para dar N-(5-bromo-3-etinilpirazin-2-il)-N-terc-butoxicarbonilcarbamato de terc-butila (Composto A-4-ii) (1,568 g, rendimento de 78%, 97,5% em área por HPLC). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,54 (s, 1H), 3,52 (s, 1H), 1,42 (s, 18H).

Formas sólidas de composto I-2

[000337] Composto I-2 tem sido preparado sob várias formas sólidas, incluindo sais e cossolvatos. As formas sólidas da presente invenção são úteis na fabricação de medicamentos para o tratamento de câncer. Uma modalidade fornece o uso de uma forma sólida aqui descrita para o tratamento de câncer. Em algumas modalidades, o câncer é câncer pancreático ou câncer pulmonar de célula não pequena. Outra modalidade fornece uma composição farmacêutica que compreende uma forma sólida aqui descrita e um veículo farmaceuticamente aceitável.

[000338] Os requerentes descrevem aqui cinco formas sólidas novas de Composto I-2. Os nomes e a estequiometria de cada uma destas formas sólidas são apresentados na Tabela S-1 abaixo:Tabela S-1

[000339] Os espectros de RMN no estado sólido foram adquiridos com o uso do espectrômetro Bruker-Biospin 400 MHz Advance III Wide-Bore equipado com suporte de amostra ["probe"] Bruker-Biospin HFX de 4 mm. As amostras foram acondicionadas em rotores de ZrO2 de 4 mm (aproximadamente 70 mg ou menos, dependendo da disponibilidade de amostra). Foi aplicada velocidade de rotação no ângulo mágico ["Magic angle spinning (MAS)"] de tipicamente 12,5 kHz. A temperatura da cabeça do suporte de amostra ["probe"] foi ajustada a 275K para minimizar o efeito do aquecimento friccional durante a rotação. O tempo de relaxação de próton foi medido com o uso de experimento de relaxação por saturação-recuperação 1H MAS T1 com o propósito de ajustar o tempo de repetição ("recycle delay") apropriado do experimento de "13C cross-polarization CP-MAS" (13C com polarização cruzada e rotação da amostra em torno do ângulo mágico). O tempo de repetição do experimento de 13C- CP-MAS foi ajustado para ser pelo menos 1,2 vezes mais longo do que o tempo de relaxação 1H T1 medido com o propósito de maximizar a razão entre sinal e ruído do espectro de carbono. O tempo de contato da CP de experimento de 13C-CP-MAS foi ajustado em 2 ms. Foi utilizado um pulso de CP de próton com rampa linear (de 50% a 100%). A condição de Hartmann-Hahn foi otimizada em amostra de referência externa (glicina). Os espectros de carbono foram adquiridos com desacoplamento SPINAL 64 com uma intensidade de campo de aproximadamente 100 kHz. O deslocamento químico foi referido em relação ao padrão externo adamantano com sua ressonância em campo magnético crescente ajustada para 29,5 ppm.

[000340] Os dados de XRPD para os Exemplos 13-14 foram medidos em Bruker D8 Advance System (Asset V014333) equipado com uma fonte de Cu em tubo vedado e um detector Vantec-1 (Bruker AXS, Madison, WI, EUA) à temperatura ambiente. O gerador de raios X foi operado em uma voltagem de 40 kV e uma corrente de 40 mA. A amostra de pó foi posicionada dentro de um suporte de silício raso. Os dados foram registrados em um modo de varredura por reflexão ("locked coupled") sobre uma faixa de 3°-40° 2 teta com um tamanho mínimo de passo de 0,0144° e um tempo de aquisição ("dwell time") de 0,25 s (105 s por passo). Foram usadas fendas de divergência variáveis.

Exemplo 10: Composto I-2 (base livre)

[000341] Composto I-2 base livre pode ser formado de acordo com os Métodos descritos em Exemplo 6, Etapa 4: Método Alternativo1.

XRPD de Composto I-2 (base livre)

[000342] Figura 1a mostra um difratograma de raios X de pó da amostra que é característico da substância droga cristalina.

[000343] Picos de XRPD representativos de Composto I-2 base livre:

Análise térmica de composto I-2 base livre

[000344] Uma análise termogravimétrica ("thermal gravimetric analysis", TGA) de Composto I-2 base livre foi realizada para determinar a perda de peso percentual como uma função do tempo. A amostra foi aquecida desde a temperatura ambiente até 350°C em uma velocidade de 10°C/min em TA Instrument TGA Q5000 (Asset V014258). A Figura 2a mostra o resultado de TGA com uma perda de peso em uma etapa antes da evaporação ou da decomposição térmica. Desde a temperatura ambiente até 215°C, a perda de peso foi ~1,9%.

Calorimetria diferencial de varredura de composto I-2 base livre

[000345] As propriedades térmicas de Composto I-2 base livre foram medidas com o uso de um TA Instrument DSC Q2000 (Asset V014259). Uma amostra de Composto I-2 base livre (1,6900 mg) foi pesada em um recipiente hermético de alumínio pré-perfurado com furo muito pequeno e aquecida desde a temperatura ambiente até 350°C a 10°C/min. Um pico endotérmico é observado a 210°C com sua temperatura inicial a 201°C (Figura 3a). A entalpia associada com o pico endotérmico é 78 J/g.

RMN no estado sólido de composto I-2 base livre

[000346] 13C CPMAS do Composto I-2 base livre

[000347] 275K; 1H T1=1,30 s

[000348] rotação a 12,5 kHz; ref. adamantano 29,5 ppm

[000349] Para o espectro completo, veja a Figura 4a.

[000350] Picos representativos

Estrutura de cristal de composto I-2 base livre

[000351] A forma livre de Composto I-2 foi preparada a partir do Composto I-2 sal de HCl. 200 mg de Composto I-2 sal de HCl foram adicionados em 1 mL de solução de NaOH 6N. 20 mL de diclorometano foram usados para extrair a forma livre. A camada de diclorometano foi seca com K2CO3. A solução foi filtrada e 5 mL de n-heptano foram adicionados nela. Os cristais foram obtidos por evaporação lenta da solução à temperatura ambiente de um dia para outro.

[000352] Os cristais obtidos foram em sua maioria placas finas. Entre os cristais foram encontrados alguns cristais sob forma prismática.

[000353] Um cristal prismático amarelo com dimensões de 0,2* 0,1*0,1 mm3 foi selecionado, montado em um MicroMount e centrado em um difratômetro Bruker APEX II. Três séries de 40 quadros separados em espaço recíproco foram obtidas para fornecer uma matriz de orientação e parâmetros de célula iniciais. Os parâmetros de célula finais foram obtidos e refinados após a completitude da coleta de dados com base no conjunto de dados total.

[000354] Um conjunto de dados de difração de espaço recíproco foi obtido em uma resolução de ângulo 116,96° 2θ com o uso de passos de 0,5° com exposição de 10 s para cada quadro. Os dados foram coletados em temperatura de 100 (2) K com criossistema de fluxo de nitrogênio. A integração das intensidades e o refinamento dos parâmetros de célula foram realizados com o uso de programa de computador APEXII.Dados de cristal

Exemplo 11: Composto I-2 • HCl

[000355] Composto I-2 • HCl pode ser formado de acordo com os Métodos descritos em Exemplo 6, Etapa 4: Método Alternativo 2 e Exemplo 6, Etapa 5.

XRPD de Composto I-2 • HCl

[000356] A Figura 1b mostra um difratograma de raios X de pó da amostra que é característico da substância droga cristalina.

[000357] Picos representativos de XRPD de Composto I-2 • HCl

Análise térmica de composto I-2 • HCl

[000358] Uma análise termogravimétrica de Composto I-2 • HCl foi realizada para determinar a perda de peso percentual como uma função do tempo. A amostra foi aquecida desde a temperatura até 350°C na velocidade de 10°C/min em TA Instrument TGA Q5000 (Asset V014258). A Figura 2b mostra os resultados de TGA com uma perda de peso em duas etapas antes da evaporação ou da decomposição térmica. Desde a temperatura ambiente até 100°C, a perda de peso foi ~1,1%, e desde 110°C até 240°C a perda de peso foi ~0,8%.

Calorimetria diferencial de varredura de composto I-2 • HCl

[000359] As propriedades térmicas de Composto I-2 • HCl foram medidas com o uso do TA Instrument DSC Q2000 (Asset V014259). Uma amostra de Composto I-2 • HCl (3,8110 mg) foi pesada em um recipiente hermético de alumínio pré-perfurado com furo muito pequeno e aquecida desde a temperatura ambiente até 350°C a 10°C/min. Um pico endotérmico é observado a 293°C com sua temperatura inicial a 291°C (Figura 3b). A entalpia associada com o pico endotérmico é 160,3 J/g. O segundo pico endotérmico está a cerca de 321°C. Ambos os picos foram acoplados com evaporação e decomposição de amostra.

RMN no estado sólido de composto I-2 • HCl

[000360] 15 CPMAS em Composto I-2 • HCl

[000361] 275K; rotação a 12,5 kHz; ref. adamantano 29,5 ppm

[000362] Para o espectro total, veja a Figura 4b.

[000363] Picos representativos

Estrutura de cristal de Composto I-2 • HCl

[000364] 180 mg de Composto I-2 • HCl foram adicionados em um frasco com 0,8 mL de 2-propanol e 0,2 mL de água. O frasco fechado foi mantido dentro de um forno a 70°C durante duas semanas. Foram observados cristais com qualidade de difração.

[000365] Um cristal acicular amarelo com dimensões de 0,15* 0,02x0,02 mm3 foi selecionado, montado em um MicroMount e centrado em um difratômetro Bruker APEX II (V011510). Três séries de 40 quadros separadas em espaço recíproco foram obtidas para fornecer uma matriz de orientação e parâmetros de célula iniciais. Os parâmetros de célula finais foram coletados e refinados após a completitude da coleta de dados com base no conjunto de dados total.

[000366] Um conjunto de dados de difração de espaço recíproco foi obtido em uma resolução de ângulo 106° 2θ com o uso de passos de 0,5° com tempos de exposição de 20 s para cada quadro para quadros de ângulo baixo e de 60 s para cada quadro para quadros de ângulo alto. Os dados foram coletados à temperatura ambiente.

[000367] Para se obterem os dados em tabela 1, nitrogênio seco foi soprado sobre o cristal na velocidade de 6 Litros/min para manter afastada a umidade ambiente. Os dados na tabela 2 foram obtidos sem nitrogênio. A integração de intensidades e o refinamento de parâmetros de célula foram conduzidos com o uso do programa de com Tabela 1 Tabela 2

Análise elementar de CHN

[000368] A análise elementar de CHN de Composto I-2 • HCl sugere um mono sal de HCl.

Exemplo 12: Composto I-2 • 2HCl

[000369] Composto I-2 • 2HCl pode ser formado de acordo com os Métodos descritos em Exemplo 6, Etapa 4.

XRPD de Composto I-2 • 2HCl

[000370] Os padrões de XRPD são adquiridos à temperatura ambiente no modo de reflexão com o uso de um sistema Bruker D8 Discover (Asset Tag V012842) equipado com uma fonte em tubo selado e um detector de área Hi-Star (Bruker AXS, Madison, WI, EUA). O gerador de Raios X é operado em uma voltagem de 40 kV e uma corrente de 35 mA. A amostra de pó é posicionada em um suporte de níquel. Dois quadros são gerados com um tempo de exposição de 120 s cada. Os dados são subsequentemente integrados sobre a faixa de 4,5°-39° 2 Teta com um tamanho de passo de 0,02° e unidos em um padrão contínuo.

[000371] A Figura 1c mostra um difratograma de raios X de pó da amostra que é característico da substância droga cristalina.

[000372] Picos representativos de XRPD de Composto I-2 • 2HCl

Análise térmica de composto I-2 • 2HCl

[000373] Uma análise termogravimétrica de Composto I-2 • 2HCl foi realizada no TA Instruments TGA modelo Q5000. O Composto I-2 • 2HCl foi posicionado dentro de um recipiente de platina e aquecido a 10°C/min para 350°C desde a temperatura ambiente. A Figura 2c mostra o resultado de TGA, que demonstra uma perda de peso de 7,0% desde a temperatura ambiente até 188°C, o que está consistente com a perda de 1 equivalente de HCl (6,8%). A temperatura inicial de degradação/fusão é 263°C.

Calorimetria diferencial de varredura de composto I-2 • 2HCl

[000374] Um termograma de DSC para a substância droga Composto I-2 • 2HCl de lote 3 foi obtido com o uso de TA Instruments DSC Q2000. O Composto I-2 • 2HCl foi aquecido a 2°C/min até 275°C desde -20°C, e modulado a ± 1°C a cada 60 s. O termograma de DSC (Figura 3c) descreve um pico endotérmico abaixo de 200°C, que poderia corresponder à perda de 1 equivalente de HCl. Fusão/ recristalização ocorre entre 215°C e 245°C, seguida por degradação.

RMN no estado sólido de composto I-2 • 2HCl

[000375] 13C CPMAS em Composto I-2 • 2HCl

[000376] 275K; 1H T1=1,7 s

[000377] rotação 12,5 kHz; ref. adamantano 29,5 ppm

[000378] Para o espectro total, veja a Figura 4c.

Estrutura de cristal de composto I-2 • 2HCl

[000379] 180 mg de Composto I-2 • HCl foram adicionados em um frasco com 0,8 mL de 2-propanol e 0,2 mL de água. O frasco vedado foi mantido dentro de um forno a 70°C durante duas semanas. Foram observados cristais de qualidade de difração.

[000380] Um cristal acicular amarelo com dimensões de 0,15* 0,02x0,02 mm3 foi selecionado, montado em um MicroMount e centrado em um difratômetro Bruker APEX II (V011510). Três séries de 40 quadros separadas em espaço recíproco foram obtidas para fornecer uma matriz de orientação e parâmetros de célula iniciais. Os parâmetros de célula finais foram coletados e refinados após a completitude da coleta de dados com base no conjunto de dados total.

[000381] Um conjunto de dados de difração de espaço recíproco foi obtido em uma resolução de ângulo 106° 2θ com o uso de passos de 0,5° com tempos de exposição de 20 s para cada quadro para quadros de ângulo baixo e de 60 s para cada quadro para quadros de ângulo alto. Os dados foram coletados à temperatura ambiente. Nitrogênio seco foi soprado sobre o cristal na velocidade de 6 Litros/min para manter afastada a umidade ambiente. A integração de intensidades e o refinamento de parâmetros de célula foram conduzidos com o uso do programa de computador APEXII.Dados de cristal

Exemplo 13: Composto I-2 • HCl • H2O

[000382] Composto I-2 • HCh H2O pode ser formado a partir de Composto I-2 • 2 HCl. (E29244-17) Uma suspensão de Composto I-2 • 2 HCl (10,0 g, 18,6 mmol) em álcool isopropílico (40 mL) e água (10 mL) é aquecida a 50°C durante cerca de 1 h e então resfriada para abaixo 10°C. O sólido é coletado por filtração. O bolo do filtro é lavado com álcool isopropílico/água 80/20 (2 x 10 mL) e seco com ar para dar o Composto I-2 • HCh 2H2O como um pó amarelo.

XRPD de Composto I-2 • HCl • H2O

[000383] Os padrões de XRPD são adquiridos à temperatura ambiente no modo de reflexão com o uso de um sistema Bruker D8 Discover (Asset Tag V012842) equipado com uma fonte em tubo selado e um detector de área Hi-Star (Bruker AXS, Madison, WI, EUA). O gerador de Raios X é operado em uma voltagem de 40 kV e uma corrente de 35 mA. A amostra de pó é posicionada em um suporte de níquel. Dois quadros são registrados com um tempo de exposição de 120 s cada. Os dados são subsequentemente integrados sobre a faixa de 4,5°-39° 2 Teta com um tamanho de passo de 0,02° e unidos em um padrão contínuo.

[000384] A Figura 1d mostra um difratograma de raios X de pó da amostra que é característico da substância droga cristalina.

[000385] Picos representativos de XRPD de Composto I-2 • HCl • H2O

Análise térmica de composto I-2 • HCl • H2O

[000386] Análise termogravimétrica (TGA) para Composto I-2 • HCl • H2O foi realizada no TA Instruments TGA modelo Q5000. O Composto I-2 • HCl • H2O foi posto em um recipiente de amostra de platina e aquecido a 10°C/min para 400°C desde a temperatura ambiente. O termograma (Figura 2d) demonstra uma perda de peso de 2,9% desde a temperatura ambiente até 100°C, e uma perda de peso de 0,6% desde 100°C até 222°C, o que está consistente com o mono-hidrato teórico (3,5%).

Calorimetria diferencial de varredura de composto I-2 • HCl • H2O

[000387] Um termograma de DSC para o Composto I-2 • HCl • H2O foi obtido com o uso de TA Instruments DSC Q2000. O Composto I-2 • HCl • H2O foi aquecido a 2°C/min para 275°C desde -20°C, e modulado a ± 1°C a cada 60 s. O termograma de DSC (Figura 3d) descreve um pico endotérmico abaixo de 200°C, que poderia corresponder à perda de 1 equivalente de HCl. Fusão/recristalização ocorre entre 215°C e 245°C, seguida por degradação.

Exemplo 14: Composto I-2 • HCl • 2H2O

[000388] Composto I-2 • HCh 2H2O pode ser formado a partir de Composto I-2 • 2 HCl. (E29244-17) Uma suspensão de Composto I-2 • 2 HCl (10,0 g, 18,6 mmol) em álcool isopropílico (40 mL) e água (10 mL) é aquecida a 50°C durante cerca de 1 h e então resfriada para abaixo de 10°C. O sólido é coletado por filtração. O bolo do filtro é lavado com álcool isopropílico/água 80/20 (2 x 10 mL) e seco com ar para dar o Composto I-2 • HCh 2H2O como um pó amarelo.

XRPD de Composto I-2 • HCl • 2H2O

[000389] As medições de difração de raios X em pó foram realizadas com o uso de difratômetro PANalytical’s X-pert Pro à temperatura ambiente com radiação de cobre (1,54060 A). O sistema óptico de feixe incidente foi compreendido de uma fenda de divergência variável para garantir um comprimento iluminado constante sobre a amostra e no lado de feixe difratado, um detector de estado sólido linear rápido foi usado com um comprimento ativo de 2,12 graus 2 Teta medido em um modo de varredura. A amostra de pó foi condicionada sobre a área recortada de um suporte de silício com ruído de fundo zero e a rotação foi realizada para alcançar melhor estatística. Uma varredura simétrica foi medida de 4 a 40 graus 2 Teta com um tamanho de passo de 0,017 graus e um tempo de passo de varredura de 15,5 s.

[000390] A Figura 1d mostra um difratograma de raios X de pó da amostra que é característico da substância droga cristalina.

[000391] Picos representativos de XRPD de Composto I-2 • HCl • 2H2O

Análise térmica de composto I-2 • HCl • 2H2O

[000392] Os termogramas de TGA ("Thermogravimetric Analysis", análise termogravimétrica) foram obtidos com o uso de um TA instrument TGA Q500 respectivamente em uma velocidade de varredura de 10°C/min sobre uma faixa de 25-300°C. Para a análise TGA, as amostras foram posicionadas em um recipiente aberto. O termograma demonstra uma perda de peso de ~6 desde a temperatura ambiente até 100°C, o que está consistente com o di-hidrato teórico (6,7%).

Calorimetria diferencial de varredura de composto I-2 • HCl • 2H2O

[000393] Os termogramas de DSC ("Differential Scanning Calorimetry", calorimetria diferencial de varredura) foram obtidos com o uso de TA instruments DSC Q2000 em uma velocidade de varredura de 10°C/min sobre uma faixa de temperatura de 25-300°C. Para a análise de DSC, as amostras foram pesadas para dentro de recipientes herméticos de alumínio de T-zero que foram selados e perfurados com um único orifício. O termograma de DSC descreve desidratação entre a temperatura ambiente e 120°C seguida por fusão/recristalização entre 170°C e 250°C.

Estrutura de cristal de composto I-2 • HCl com água

[000394] 180 mg de Composto I-2 • HCl foram adicionados em um frasco com 0,8 mL de 2-propanol e 0,2 mL de água. O frasco fechado foi mantido dentro de um forno a 70°C durante duras semanas. Foram observados cristais de qualidade de difração.

[000395] Um cristal acicular amarelo com dimensões de 0,15* 0,02x0,02 mm3 foi selecionado, montado em um MicroMount e centrado em um difratômetro Bruker APEX II (V011510). Então um tubo kapton com água dentro cobriu o pino. O tubo foi selado para garantir que o cristal permanecesse equilibrado com a água durante dois dias antes dos experimentos de difração. Três séries de 40 quadros separadas em espaço recíproco foram obtidas para fornecer uma matriz de orientação e parâmetros de célula iniciais. Os parâmetros de célula finais foram coletados e refinados após a completitude da coleta de dados com base no conjunto de dados total.

[000396] Um conjunto de dados de difração de espaço recíproco foi obtido em uma resolução de ângulo 106° 2θ com o uso de passos de 0,5° com tempos de exposição de 20 s para cada quadro para quadros de ângulo baixo e de 60 s para cada quadro para quadros de ângulo alto. Os dados foram coletados à temperatura ambiente. A integração de intensidades e o refinamento de parâmetros de célula foram conduzidos com o uso do programa de computador APEXII.Dados de cristal

Exemplo 15: Ensaio de inibição de ATR celular:

[000397] Os compostos podem ser ensaiados para a sua capacidade para inibir a ATR intracelular com o uso de um ensaio por microscopia de imunofluorescência para detectar a fosforilação do substrato de ATR, histona H2AX, em células tratadas com hidroxiureia. Células HT29 foram plaqueadas a 14.000 células por cavidade em placas pretas de 96 cavidades para imageamento (BD 353219) em meio 5A de McCoy (Sigma M8403) suplementado com soro fetal bovino 10% (JRH Biosciences 12003), solução de Penicilina/Estreptomicina diluída 1:100 (Sigma P7539), e L-glutamina 2 mM (Sigma G7513), e permitidas aderirem de um dia para outro a 37°C em CO2 5%. Os compostos são então adicionados no meio celular a partir de uma concentração final de 25 μM em diluições seriais triplas e as células são incubadas a 37°C em CO2 5%. Após 15 min, hidroxiureia (Sigma H8627) é adicionada para uma concentração final de 2 mM.

[000398] Após 45 min de tratamento com hidroxiureia, as células são lavadas em PBS, fixadas durante 10 min em formaldeído 4% diluído em PBS (Polysciences Inc 18814), lavadas em Tween-20 0,2% em PBS (tampão de lavagem), e permeabilizadas durante 10 min em Triton X100 0,5% em PBS, todo o procedimento à temperatura ambiente. As células são então lavadas uma vez em tampão de lavagem e bloqueadas durante 30 min à temperatura ambiente em soro de cabra 10% (Sigma G9023) diluído em tampão de lavagem (tampão de bloqueio). Para detectar os níveis de fosforilação de H2AX, as células são então incubadas durante 1 h à temperatura ambiente em anticorpo primário (anticorpo monoclonal de camundongo anti-histona H2AX Ser139 fosforilada; Upstate 05-636) diluído 1:250 em tampão de. As células são então lavadas cinco vezes em tampão de lavagem antes da incubação durante 1 h à temperatura ambiente no escuro em uma mistura de anticorpo secundário (anticorpo de cabra anti-Alexa Fluor 488 de camundongo conjugado; Invitrogen A11029) e corante Hoechst (Invitrogen H3570); diluídos 1:500 e 1:5.000, respectivamente, em tampão de lavagem. As células são então lavadas cinco vezes em tampão de lavagem e finalmente 10 μL de PBS são adicionados em cada cavidade antes do imageamento.

[000399] As imagens das células são obtidas para as Intensidades de Alexa Fluor 488 e de Hoechst Intensidade com o uso do BD Pathway 855 Bioimager e do programa de computador Attovision (BD Biosciences, Versão 1.6/855) para quantificar H2AX Ser139 fosforilada e corar DNA, respectivamente. A porcentagem de núcleos positivos para H2AX fosforilada em uma montagem de 9 imagens em uma magnificação de 20x é então calculada para cada cavidade com o uso do programa de computador BD Image Data Explorer (BD Biosciences Versão 2.2.15). Os núcleos positivos para H2AX fosforilada são definidos como regiões positivas para Hoechst de interesse que contêm a Intensidade de Alexa Fluor 488 a 1,75 vez a Intensidade média de Alexa Fluor 488 em células não tratadas com hidroxiureia. A porcentagem de núcleos positivos para H2AX é finalmente representada em gráfico contra a concentração para cada composto e as IC50s para inibição de ATR intracelular são determinadas com o uso do programa de computador Prism (GraphPad Prism versão 3.0cx parar Macintosh, GraphPad Software, San Diego California, EUA).

[000400] Os compostos aqui descritos também podem ser testados de acordo com outros métodos conhecidos na técnica (consultar Sarkaria et al., "Inhibition of ATM and ATR Kinase Activities by the Radiosensitizing Agent, Caffeine": Cancer Research 59: 4375-5382 (1999); Hickson et al., "Identification and Characterization of a Novel and Specific Inhibitor of the Ataxia-Telangiectasia Mutated Kinase ATM" Cancer Research 64: 9152-9159 (2004); Kim et al., "Substrate Specificities and Identification of Putative Substrates of ATM Kinase Family Members" The Journal of Biological Chemistry, 274(53): 37538-37543 (1999); e Chiang et al., "Determination of the catalytic activities of mTOR and other members of the phosphoinositide-3-kinase-related kinase family" Methods Mol. Biol. 281:125-41 (2004)).

Exemplo 16: Ensaio de inibição de ATR:

[000401] Os compostos podem ser ensaiados para a sua capacidade para inibir a ATR quinase com o uso de um ensaio de incorporação de fosfato radioativo. Os ensaios são realizados em uma mistura de Tris/HCl 50 mM (pH 7,5), MgCl2 10 mM e DTT 1 mM. As concentrações de substratos finais são [Y-33P]ATP 10 μM (3mCi 33P ATP/mmol ATP, Perkin Elmer) e peptídeo-alvo 800 μM (ASELPASQPQPFSAKKK).

[000402] Os ensaios são realizados a 25°C na presença de ATR de comprimento total a 5 nM. Uma solução de tampão de estoque de ensaio é preparada contendo todos os reagentes listados acima, exceto o ATP e o composto de teste de interesse. 13,5 μL da solução de estoque são posicionados em uma placa de 36 cavidades seguido pela adição de 2 μL de solução de estoque de DMSO contendo diluições seriais do composto de teste (tipicamente partindo de uma concentração final de 15 μM com diluições seriais triplas) em duplicata (concentração final de DMSO de 7%). A placa é pré-incubada durante 10 minutos a 25°C e a reação é iniciada pela adição de 15 μL de [Y-33P]ATP (concentração final de 10 μM).

[000403] A reação é interrompida após 24 horas pela adição de 30 μL de ácido fosfórico 0,1 M contendo ATP 2 mM. Uma placa de 96 cavidades de filtro de fosfocelulose multiscreen (Millipore, n° de catálogo MAPHN0B50) é pré-tratada com 100 μL de ácido fosfórico 0,2 M antes da adição de 45 μL da mistura de ensaio interrompido. A placa é lavada com 5 x 200 μL de ácido fosfórico 0,2 M. Após secagem, 100 μL de coquetel de cintilação líquida Optiphase ‘SuperMix’ (Perkin Elmer) são adicionados na cavidade antes da contagem de cintilação (1450 Microbeta Liquid Scintillation Counter, Wallac).

[000404] Após remoção dos valores basais ("background") médios para todos os pontos de dados, os dados de Ki(app) são calculados a partir de análise de regressão não linear dos dados de taxa inicial com o uso do pacote de programas de computador Prism (GraphPad Prism versão 3.0cx para Macintosh, GraphPad Software, San Diego California, EUA).

[000405] Em geral, os compostos da presente invenção são eficazes para inibir ATR. Os Compostos I-1, I-2, II-1, II-2, II-3 e II-4 inibem ATR em valores de Ki abaixo de 0,001 μM.

Exemplo 17: Ensaio de sensibilização à cisplatina

[000406] Os compostos podem ser ensaiados para a sua capacidade para sensibilizar células de câncer colorretal HCT116 à Cisplatina com o uso de um ensaio de viabilidade celular de 96 h (MTS). As células HCT116, que possuem um defeito em sinalização de ATM para Cisplatina (consulte, Kim et al.; Oncogene 21:3864 (2002); também consulte, Takemura et al.; JBC 281:30814 (2006)) são plaqueadas a 470 células por cavidade em placas de poliestireno de 96 cavidades (Costar 3596) em 150 μL de meio 5A de McCoy (Sigma M8403) suplementado com soro fetal bovino 10% (JRH Biosciences 12003), solução de Penicilina/Estreptomicina diluída 1:100 (Sigma P7539), e L-glutamina 2 mM (Sigma G7513), e permitidas aderirem de um dia para outro a 37°C em CO2 5%. Os compostos e Cisplatina são ambos adicionados simultaneamente no meio celular em diluições seriais duplas a partir de uma concentração final de topo de 10 μM como uma matriz completa de concentrações em um volume de célula final de 200 μl, e as células são então incubadas a 37°C em CO2 5%. Após 96h, 40 μL de reagente MTS (Promega G358a) são adicionados em cada cavidade e as células são incubadas durante 1 h a 37°C em CO2 5%. Finalmente, a absorbância é medida a 490 nm com o uso de um leitora SpectraMax Plus 384 (Molecular Devices) e a concentração de composto necessária para reduzir a IC50 de Cisplatina sozinha em pelo menos 3 vezes (até 1 casa decimal) pode ser relatada.

Exemplo 18: Atividade como agente único contra HCT116

[000407] Os compostos podem ser ensaiados para atividade como agente único contra células de câncer colorretal HCT116 com o uso de um ensaio de viabilidade celular de 96 h (MTS). Células HCT116 são plaqueadas a 470 células por cavidade em placas de poliestireno de 96 cavidades (Costar 3596) em 150 μL de meio 5A de McCoy (Sigma M8403) suplementado com soro fetal bovino 10% (JRH Biosciences 12003), solução de Penicilina/ Estreptomicina diluída 1:100 (Sigma P7539), e L-glutamina 2 mM (Sigma G7513), e permitidas aderirem de um dia para outro a 37°C em CO2 5%. Os compostos são então adicionados no meio de células em diluições seriais duplas a partir de uma concentração final de topo de 10 μM como uma matriz completa de concentrações em um volume de células final de 200 μL, e as células são então incubadas 37°C em CO2 5%. Após 96h, 40 μL de reagente MTS (Promega G358a) são adicionados em cada cavidade e as células são incubadas durante 1 h a 37°C em CO2 5%. Finalmente, aabsorbância é medida a 490 nm com o uso de um leitor SpectraMax Plus 384 (Molecular Devices) e os valores de IC50 podem ser calculados. Dados para os exemplos 18 a 21

[000408] Embora descritas as numerosas modalidades desta invenção, é evidente que nossos exemplos básicos podem ser alterados para fornecer outras modalidades que utilizam os compostos, os métodos, e os processos desta invenção. Portanto, será reconhecido que o escopo desta invenção é para ser definido pelas reivindicações anexadas em vez de pelas modalidades específicas que têm sido representadas aqui por meio de exemplos.

Claims (9)

1. Processo para preparar um composto da fórmula I-2:

caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de (a) reagir um composto da fórmula 4-I

sob condições de formação de cloro-oxima adequadas para formar o composto da fórmula 4-ii:

em que as condições de formação de cloro-oxima adequadas compreendem a adição de HCl em dioxano a uma solução da oxima na presença de NCS em um solvente adequado selecionado dentre solventes não próticos, hidrocarbonetos aromáticos e acetatos de alquila; (b) reagir o composto da fórmula 4-ii com um composto da fórmula 4-iii:

sob condições de cicloadição adequadas para formar o composto da fórmula 4-iv:

em que as condições de cicloadição adequadas compreendem uma base adequada selecionada dentre piridina, di-isopropiletilamina (DIEA), trietilamina (TEA), terc-butóxido de sódio (t-BuONa), e K2CO3, e um solvente adequado selecionado dentre acetonitrila, tetra- hidrofurano, 2-metiltetra-hidrofurano, éter metílico e terc-butílico (MTBE), acetato de etila (EtOAc), acetato de isopropila (i-PrOAc), diclorometano (DCM), tolueno, dimetilformamida (DMF), e metanol; (c) reagir um composto da fórmula 4-iv:

com

sob condições de acoplamento adequadas para formar o composto de fórmula 5-i:

em que as condições de acoplamento adequadas compreendem combinar um catalisador de paládio adequado com uma base adequada em um solvente adequado, opcionalmente em que o catalisador de paládio adequado é selecionado dentre Pd[P(tBu)3]2, Pd(dtbpf)Cl2, Pd(PPh3)2Cl2, Pd(PCy3)2Cl2, Pd(dppf)Cl2 e Pd(dppe)Cl2; o solvente adequado é selecionado dentre um ou mais dentre os seguintes: tolueno, MeCN, água, EtOH, IPA, 2-metiltetra-hidrofurano (2- Me-THF) e acetato de isopropila (IPAc); e a base adequada é selecionada dentre K2CO3, Na2CO3 e K3PO4; e (d) desproteger o composto de fórmula 5-i sob condições de desproteção de carbamato de terc-butila (Boc) adequadas, opcionalmente seguido por tratamento sob condições aquosas básicas para formar o composto de fórmula I-2, em que as condições de desprotecção de Boc adequadas compreendem a adição de um agente de desproteção de Boc adequado selecionado dentre Trimetilsilila (TMS)-Cl, HCl, Fluoreto de tetra-n-butilamônio (TBAF), H3PO4 e TFA, e o solvente adequado é selecionado a partir de acetona, tolueno, metanol, etanol, 1-propanol, isopropanol, CH2Cl2, EtOAc, acetato de isopropil, tetrahidrofurano, 2 metiltetraidrofurano, dioxano e éter dietílico.

2. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende ainda reagir um composto da fórmula 3b:

sob condições de formação de oxima adequadas para formar o composto da fórmula 4-i, em que as condições de formação de oxima adequadas consistem em uma sequência de etapa única ou uma sequência de duas etapas.

3. Processo, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que: a) a sequência de etapa única compreende adicionar NH2OH.HCl e uma mistura de THF e água, opcionalmente em que 1 equivalente do composto da fórmula 3b é combinado com 1,1 equivalentes de NH2OH.HCl em uma mistura de THF/água de 10:1 volume/volume; ou b) a sequência de duas etapas consiste em primeiro desprogeter o grupo cetal no composto da fórmula 3b:

em um aldeído sob condições de desproteção adequadas, e então formar a oxima da fórmula 5a:

sob condições de formação de oxima adequadas, opcionalmente: i) em que condições de desproteção adequadas compreendem adicionar um ácido, acetona e água; e condições de formação de oxima adequadas compreendem misturar juntos hidroxilamina, um ácido opcional, um solvente orgânico e água, opcionalmente: em que o ácido é pTSA ou HCl, o solvente orgânico é um solvente clorado selecionado dentre diclorometano (DCM), dicloroetano (DCE), CH2Cl2, e clorofórmio; um éter selecionado dentre THF, 2- MeTHF e dioxano; ou um hidrocarboneto aromático dentre tolueno e xilenos, opcionalmente em que as condições de formação de oxima adequadas compreendem adicionar cloridrato de hidroxilamina a uma solução do composto de 3b em THF e água.

4. Processo, de acordo com a reivindicação 2 ou 3, caracterizado pelo fato de que compreende ainda a etapa de reagir um composto da fórmula 2b:

sob condições de proteção de Boc adequadas para formar o composto da fórmula 3b, em que, opcionalmente as condições de proteção por Boc são adicionar (Boc)2O, uma base adequada, e um solvente adequado.

5. Processo, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que compreende ainda a etapa de reagir um composto da fórmula 1b:

com metilamina sob condições de aminação redutiva adequadas para formar o composto da fórmula 2b, opcionalmente em que as condições de aminação redutiva adequadas compreendem adicionar um agente redutor selecionado dentre NaBH4, NaBH3CN e NaBH(OAc)3 na presença de um solvente selecionado dentre diclorometano (DCM), dicloroetano (DCE), um solvente alcoólico selecionado dentre metanol, etanol, 1-propanol, isopropanol e um solvente não prótico selecionado dentre dioxano, tetra-hidrofurano e 2-metiltetra-hidrofurano e opcionalmente uma base selecionada dentre Et3N e di- isopropiletilamina, opcionalmente em que as condições de aminação redutiva adequadas compreendem adicionar 1,2 equivalentes de cápsulas de NaBH4 na presença de Et3N em MeOH.

6. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que compreende ainda preparar um composto da fórmula 4-ii:

r que compreende uma ou mais dentre as seguintes etapas: (i) reagir um composto da fórmula C-1:

sob condições de copulação mediadas por metal adequadas com TMS- acetileno para formar um composto da fórmula C-2:

(ii) reagir um composto da fórmula C-2 sob condições de proteção por Boc adequadas para formar um composto da fórmula C-3:

(iii) reagir um composto da fórmula C-3 sob condições de desproteção de TMS adequadas para formar um composto da fórmula 4-ii.

7. Processo, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que: a) as condições de proteção por Boc são adicionar (Boc)2O, uma base adequada, e um solvente adequado, opcionalmente em que a base adequada é Et3N, di-isopropilamina, e piridina; e o solvente adequado é selecionado dentre um solvente clorado, um éter e um hidrocarboneto aromático, opcionalmente em que a base adequada é Et3N, o solvente adequado é DCM, tetra-hidrofurano ou 2-metiltetra- hidrofurano, opcionalmente em que as condições de proteção por Boc compreendem adicionar 1,05 equivalentes de (Boc)2O em 2-metiltetra- hidrofurano ou DCM; ou b) as condições de acoplamento mediado por metal adequadas são condições de acoplamento de Sonogashira; as condições de proteção por Boc compreendem adicionar (Boc)2O em 2- metiltetra-hidrofurano ou DCM; e as condições de desproteção de TMS adequadas compreendem adicionar uma base adequada, solvente orgânico adequado, e água, opcionalmente em que as condições de acoplamento de Sonogashira compreendem combinar 1 equivalente de TMS-acetileno, 0,010 equivalentes de Pd(PPH3)2Cl2, 0,015 equivalentes de CuI e 1,20 equivalentes de NMM com o Composto C-1 em isopropanol; as condições de proteção por Boc compreendem adicionar 1,05 equivalentes de (Boc)2O em 2-metiltetra-hidrofurano ou DCM; e as condições de desproteção de TMS compreendem adicionar K2CO3, EtOAc, EtOH e água.

8. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que as condições de formação de cloro-oxima adequadas compreendem a adição de HCl em dioxano a uma solução da oxima na presença de NCS em um solvente selecionado dentre DCM, DCE, THF e dioxano, tolueno, xilenos, acetato de isopropila e etil acetato.

9. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que as condições de desprotecção de Boc adequadas para desproteger o composto de fórmula 5-i compreendem a adição de um agente de desprotecção de Boc adequado selecionado dentre TMS-Cl, HCl, TBAF, H3PO4 e TFA e o solvente adequado é selecionado a partir de acetona, tolueno, metanol, etanol, 1-propanol, isopropanol, CH2Cl2, EtOAc, acetato de isopropila, tetra-hidrofurano, 2 metiltetraidrofurano, dioxano e éter dietílico, opcionalmente em que o agente de desproteção Boc adequado é HCl ou TFA e o solvente adequado é acetona ou CH2Cl2.

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