MX2007001126A - Moduladores de heterociclo cinasa de anillo fusionado. - Google Patents

Abstract

La presente invencion proporciona moduladores de heterociclo cinasa de anillo fusionada novedosos y metodos para utilizar los moduladores de heterociclo cinasa de anillo fusionado novedosos para tratar enfermedades mediadas por la actividad de cinasa.

Description

MODULADORES DE HETEROCICLO CINASA DE ANILLO FUSIONADO Referencia Cruzada a las Solicitudes Relacionadas Esta solicitud reivindica el beneficio de la Solicitud de Patente Provisional Norteamericana No. 60/591,778, presentada el 27 de julio de 2004, la Solicitud de Patente Provisional No. 60/591,886 presentada el 27 de julio de 2004, y la Solicitud de Patente Provisional No. 60/680,091, presentada el 11 de mayo de 2005, cada una de las cuales se incorpora en la presente por referencia en su totalidad para todos los propósitos. Antecedentes de la Invención Las proteínas cinasas de mamífero son reguladores importantes de funciones celulares. Debido a que las disfunciones en la actividad de la proteína cinasa se han asociado con varias enfermedades y trastornos, las proteínas cinasas son importantes para el desarrollo del fármaco. El receptor de tirosina cinasa, tirosina oinasa tipo FMS 3 (FLT3), está involucrado en cánceres, incluyendo leucemia, tal como leucemia mieloide aguda (AML), leucemia linfoblástica aguda (ALL), y mielodisplasia. Aproximadamente un cuarto a un tercio de pacientes con AML tiene mutaciones de la FLT3 que conducen a la activación constitutiva de la cinasa y trayectorias de señalización descendentes. Aunque en humanos normales, la FLT3 es expresada principalmente por mieloide normal y células progenitoras linfoides, la FLT3 se expresa en las células leucémicas del 70-80% de pacientes con AML y ALL. Los inhibidores dirigidos a la FLT3 se han reportado por ser tóxicos a las células leucémicas que expresan la FLT3 mutada y/o constitutivamente activa. Así, existe una necesidad de desarrollar inhibidores de FLT3 potentes que puedan utilizarse para tratar enfermedades y trastornos tales como la leucemia. La tirosina cinasa sin receptor de Abelson (c-Abl) está involucrada en el transducción de señal, vía la fosforilación de sus proteínas de sustrato. En la célula, c-Abl se transporta entre el citoplasma y el núcleo, y su actividad es regulada normalmente de manera íntegra a través de un número de mecanismos diversos. Abl se ha involucrado en el control del factor de crecimiento y señalización de la integrina, ciclo celular, diferenciación y neurogénesis celular, apoptosis, adhesión celular, estructura citoesquelética y respuesta al daño del ADN y tensión oxidativa. La proteína c-Abl contiene aproximadamente 1150 residuos de aminoácidos, organizados en una región extrema N-terminal, un dominio SH3 y SH2, un dominio de la tirosina cinasa, una secuencia de localización nuclear, un dominio de unión al ADN, y un dominio de unión de actina. La leucemia mielógena crónica (CML) se asocia con la transposición cromosómica Philadelphia, entre los cromosomas 9 y 22. Esta transposición genera una fusión aberrante entre el gen bcr y la c-Abl que codifica el gen. La proteína de fusión Bcr-Abl resultante tiene actividad de tirosina-cinasa activa constitutivamente. La actividad de la cinasa elevada se reporta que es el factor causativo principal de CML, y es responsable de la transformación celular, pérdida de dependencia del factor de crecimiento, y proliferación celular. El compuesto 2-fenilaminopirimidina "imatinib" (también referido como ST1-571, CGP 57148, o Gleevec) se ha identificado como un inhibidor específico y potente de Bcr-Abl, así como otras dos tirosinas cinasas, c-kit y receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas. El imatinib bloquea la actividad de la tirosina-cinasa de estas proteínas. El imatinib se ha reportado que es un agente terapéuticamente efectivo para el tratamiento de todas las fases de CML. Sin embargo, la mayoría de los pacientes con CML en etapa avanzada o crisis explosiva sufre una recaída a pesar de la terapia con imatinib continua, debido al desarrollo de resistencia al fármaco. Frecuentemente, la base molecular para esta resistencia es la aparición de variantes resistentes al imatinib del dominio de la cinasa de Bcr-Abl. Las sustituciones de aminoácidos fundamentales más comúnmente observadas incluyen Glu255Lys, Thr315lle, Tyr293Phe, y Met351Thr. MET primero se identificó como una transformación de la reconfiguración del ADN (TPR-MET) en una línea celular de osteosarcoma humano que se había tratado con N-metil-N'-nitro-nitrosoguanidina (Cooper y colaboradores 1984). La tirosina cinasa del receptor MET (también conocido como receptor del factor de crecimiento del hepatocito, HGFR, MET o c-Met) y su factor de crecimiento de hepatocito del ligando ("HGF") tienen numerosas actividades biológicas incluyendo la estimulación de la proliferación, supervivencia, diferenciación y morfogénesis, tubulogénesis de ramificación, motilidad celular y crecimiento invasivo. Patológicamente, MET se ha involucrado en el crecimiento, invasión y metástasis de muchas diferentes formas de cáncer incluyendo cáncer de riñon, cáncer de pulmón, cáncer ovárico, cáncer de hígado y cáncer de mama. Las mutaciones somáticas, de activación en MET se han encontrado en la metástasis del carcinoma humano y en cánceres esporádicos tales como carcinoma celular papilarmente renal. La evidencia creciente es que MET es uno de los oncógenos desde hace tiempo buscado que controla la progresión de la metástasis y por lo tanto un objetivo muy interesante. Además del cáncer existe evidencia de que la inhibición de MET puede tener valor en el tratamiento de varias indicaciones incluyendo: Invasión de Listeria, Osteólisis asociada con mieloma múltiple, infección de Malaria, retinopatías diabéticas, psoriasis y artritis. La tirosina cinasa RON es el receptor para la proteína que estimula el macrófago y pertenece a la familia MET de las tirosinas cinasas receptoras. Como MET, RON está involucrado en el crecimiento, invasión y metástasis de varias diferentes formas de cáncer incluyendo cáncer gástrico y cáncer de vejiga. La familia Aurora de las serina/teronina cinasas es esencial para la progresión mitótica. La expresión y actividad de las cinasas Aurora se regulan firmemente durante el ciclo celular. Una variedad de proteínas que desempeña roles en la división celular se ha identificado como sustratos de la cinasa Aurora. Basándose en la función conocida de las cinasas Aurora, la inhibición de su actividad se desea para interrumpir el ciclo celular y bloquear la proliferación y por lo tanto la viabilidad celular del tumor. Harrington y colaboradores, Nature Medicine, advanced publication online (2004). La cinasa 1 dependiente de 3-fosfoinositida (PDK1) es una proteína cinasa Ser/Thr que puede fosforilar y activar un número de cinasas en la superfamilia de la cinasa AGC, incluyendo Akt/PKB, proteína cinasa C (PKC), cínasas relacionadas por PKC (PRK1 y PRK2), p70 ribosomal cinasa-S6 (S6K1), y cinasa regulada por glucocorticoides y suero (SGK). El primer sustrato PDK1 identificado es el proto-oncógeno Akt. Numerosos estudios han encontrado un alto nivel de Akt activado en un gran porcentaje (30-60%) de tipos de tumores comunes, incluyendo melanoma y cánceres de mama, pulmón, gástrico, próstata, hematológico y ovárico. La trayectoria de señalización del PDK1/Akt así representa un objetivo atractivo para el desarrollo de inhibidores de molécula pequeña que puede ser útil en el tratamiento del cáncer. Feldman y colaboradores, JBC Papers in Press. Publicado el 16 de marzo de 2005 como Manuscript M501367200. Debido a que las cínasas se han involucrado en numerosas enfermedades y condiciones, tales como cáncer, existe una necesidad de desarrollar nuevos y potentes moduladores de la proteína cinasa que puedan utilizarse para el tratamiento. La presente invención satisface éstas y otras necesidades en la técnica. Aunque ciertas proteínas cinasas se nombran específicamente en la presente, la presente invención no se limita a los moduladores de estas cinasas, e, incluye, dentro de su alcance, moduladores de las proteínas cinasas relacionadas y moduladores de las proteínas homologas. Breve Descripción de los Dibujos La figura 1 muestra la numeración de ABL tipo silvestre de acuerdo al exón la de ABL. Breve Descripción de la Invención Se ha descubierto que, sorpresivamente, los compuestos heterociclo del anillo fusionado de la presente invención pueden utilizarse para modular la actividad de cinasa y tratar enfermedades mediadas por la actividad de cinasa. Estos nuevos moduladores de heterociclo cinasa de anillo fusionado se describen detalladamente más adelante. Además, las actividades inhibidoras de compuestos seleccionados se describen en la presente. En un aspecto, la presente invención proporciona un modulador de heterociclo cinasa de anillo fusionado que tiene la fórmula: En la fórmula (I), L1 y L2 son independientemente un enlace, -S(O)p-, -O-, -NH-, alquileno 1-5 átomos de carbono insustituido, o heteroalquileno de 2 a 5 miembros insustituido. El símbolo n es un número entero de 0 a 2. R1 y R2 son cicloalquilo independientemente sustituido o insustituido o heterocicloalquilo sustituido o insustituido, heteroarilo sustituido o insustituido, o arilo sustituido o ¡nsustituido. En algunas modalidades, R1 no es pirrolilo sustituido o insustituido. En otras modalidades, L1 no es heteroalquileno de 2 a 5 miembros insustituido cuando R1 y R2 son ambos fenilo insustituido. En otras modalidades, L1 no es -S(O)2- donde R2 es piperazinilo insustituido.

En otro aspecto, la presente invención proporciona un modulador de heterociclo cinasa de anillo fusionado (también referido en la presente como un "compuesto de la presente invención") que tiene la fórmula: En la fórmula (li), L1, L2, R1 y R2 son como se define anteriormente en la discusión de fórmula (I). En otro aspecto, la presente invención proporciona un modulador de heterociclo cinasa de anillo fusionado (también referido en la presente como un "compuesto de la presente invención") que tiene la fórmula: En la fórmula (lll), L1, L2, R1 y R2 son como se define anteriormente en la discusión de fórmula (I).

En otro aspecto, la presente invención proporciona métodos para modular la actividad de la proteína cinasa usando los moduladores de heterociclo cinasa de anillo fusionado de la presente invención. El método incluye poner en contacto la proteína cinasa con un modulador de heterociclo cinasa de anillo fusionado. En otro aspecto, la presente invención proporciona métodos para tratar una enfermedad mediada por la actividad de la cinasa (enfermedad o trastorno mediado por cinasa) en un sujeto (por ejemplo mamíferos, tales como humanos) en necesidad de tal tratamiento. El método incluye administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un modulador de heterociclo cinasa de anillo fusionado de la presente invención. En otro aspecto, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que incluye un modulador de heterociclo cinasa de anillo fusionado mezclado con un excipiente farmacéuticamente aceptable. Descripción Detallada de la Invención Definiciones Las abreviaturas usadas en la presente tienen su significado convencional dentro de las técnicas químicas y biológicas. Donde los grupos de sustituyentes son especificados por sus fórmulas químicas convencionales, escritos de izquierda a derecha, igualmente incluyen los sustituyentes químicamente idénticos que resultarán de escribir la estructura de derecha a izquierda, por ejemplo, -CH2O- es equivalente a -OCH2-.

El término "alquilo", por sí mismo o como parte de otro sustituyente, significa, a menos que se indique lo contrario, una cadena lineal (es decir no ramificada) o ramificada, o un radical hidrocarburo cíclico, o combinación de los mismos, que puede ser completamente saturado, mono- o poliinsaturado y puede incluir radicales di- y multivalentes, que tiene el número de átomos de carbono designado (es decir C^Cio significa uno a diez carbonos). Los ejemplos de radicales hidrocarburo saturados incluyen, pero no se limitan a, grupos tales como metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, t-butilo, isobutilo, sec-butilo, ciciohexilo, (ciclohexil)metilo, ciclopropilmetilo, homólogos e isómeros de, por ejemplo, n-pentilo, n-hexilo, n-heptilo, n-octilo, y similares. Un grupo alquilo insaturado es uno que tiene uno o más dobles enlaces o triples enlaces. Los ejemplos de grupos alquilo insaturados incluyen, pero no se limitan a, vinilo, 2-propenilo, crotilo, 2-¡sopentenilo, 2-(butadienil), 2,4-pentadienilo, 3-(1 ,4-pentadienil), etinilo, 1- y 3-propinilo, 3-butinilo, y los homólogos e isómeros superiores. Los grupos alquilo que se limitan a grupos hidrocarburo son llamados "homoalquilo". El término "alquileno" por sí mismo o como parte de otro sustituyente significa un radical divalente derivado de un alquilo, como se ejemplifica, pero sin limitarse, por -CH2CH2CH2CH2-, -CH2CH = CHCH2-, -CH2C=CCH2-, -CH2CH2CH(CH2CH2CH3)CH2-.

Normalmente, un grupo alquilo (o alquileno) tendrá de 1 a 24 átomos de carbono, siendo estos grupos que tienen 10 o menos átomos de carbono preferidos en la presente invención. Un "alquilo inferior" o un "alquileno inferior" es un grupo alquilo o alquileno de cadena más corta, generalmente con ocho o menos átomos de carbono. El término "heteroalquilo" por sí mismo o en combinación con otro término, significa, a menos que se indique lo contrario, una cadena lineal o ramificada estable, o un radical hidrocarburo cíclico, o combinaciones de los mismos, que consiste de por lo menos un átomo de carbono y por lo menos un heteroátomo seleccionado del grupo que consiste de O, N, P, Si y S, y en donde los átomos de nitrógeno, fósforo y azufre pueden opcionalmente oxidarse y el heteroátomo de nitrógeno puede opcionalmente cuaternizarse. El heteroátomo(s) O, N, P y S y Si puede ubicarse en cualquier posición interior del grupo heteroalquilo o en la posición en la cual el grupo alquilo se une al resto de la molécula. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a, -CH2-CH2-O-CH3, -CH2-CH2-NH-CH3, -CH2-CH2-N(CH3)-CH3, -CH2-S-CH2-CH3, -CH2-CH2, -S(O)-CH3, -CH2-CH2- S(O)2-CH3, -CH-CH-O-CH3, -Si(CH3)3, -CH2-CH-N-OCH3, -CH = CH-N(CH3)-CH3, O-CH3, -O-CH2-CH3, y -CN. Hasta dos o tres heteroátomos puede ser consecutivos, tal como, por ejemplo, -CH2-NH-OCH3 y -CH2-O-Si(CH3)3. Simílarmente, el término "heteroalquileno" por sí mismo o como parte de otro sustituyente significa un radical divalente derivado de heteroalquilo, corno se ejemplifica, pero sin limitarse por, -CH2-CH2-S-CH2-CH2- y -CH2-S-CH2-CH2-NH-CH2-. Para grupos heteroalquileno, los heteroátomos puede también ocupar cualquiera o ambas terminales de la cadena (por ejemplo, alquilenoxo, alquilendioxo, alquilenamino, alquilendiamino, y similares). Además, para los grupos de enlace alquileno y heteroalquileno, no se implica ninguna orientación del grupo de enlace por la dirección en la cual la fórmula del grupo de enlace se escribe. Por ejemplo, la fórmula -C(O)OR'- representa -C(O)OR'- y -R'OC(O)-. Como se describe anteriormente, los grupos heteroalquilo, como se utiliza en la presente, incluyen grupos que se unen al resto de la molécula a través de un heteroátomo, tal como -C(O)R\ -C(O)NR\ -NR'R", -OR', -SR y/o -SO2R'. Donde se cita "heteroalquilo", seguido por las citas de grupos heteroaiquilo específicos, tal como -NR'R" o similares, se entenderá que los términos heteroalquilo y -NR'R" no son redundantes o mutuamente exclusivos. Más bien, los grupos heteroalquilo específicos se citan para agregar claridad. Así, ei término "heteroalquilo" no debe interpretarse en la presente que excluyen los grupos heteroalquilo específicos, tal como -NR'R" o similares. Los términos "cicloalquilo" y "heterocicloalquilo", por sí mismos o en combinación con otros términos, representan, a menos que se indique lo contrario, las versiones cíclicas del "alquilo" y "heteroalquilo", respectivamente. Además, para el heterocicloalquilo, un heteroátomo puede ocupar la posición en la cual el heterociclo se une al resto de la molécula. Los ejemplos de cicloalquilo incluyen, pero no se limitan a, ciclopentilo, ciciohexilo, 1-ciclohexenilo, 3-ciclohexenilo, cicioheptilo, y similares. Los ejemplos de heterocicloalquilo incluyen, pero no se limitan a, 1 -(1 ,2,5,6-tetrahidropiridil), 1 -piperidinilo, 2-piperidinilo, 3-piperidinilo, 4- morfolinilo, 3-morfolinilo, tetrahidrofuran-2-ilo, tetrahidrofuran-3-ilo, tetrahidrotien-2-ilo, tetrahidrotien-3-ilo, 1-piperazinilo, 2-piperazinilo, y similares. Los términos "cicloalquileno" y "heterocicloalquileno" se refieren a derivados divalentes del cicloalquilo y heterocicloalquilo, respectivamente. Los términos "halo" o "halógeno," por sí mismos o como parte de otro sustítuyente, significa, a menos que se indique lo contrario, un átomo de flúor, cloro, bromo, o yodo. Además, los términos tales como "haloalquilo," se entiende que incluyen monohaloalquilo y polihaloalquilo. Por ejemplo, el término "haloalquilo (1 a 4 átomos de carbono)" se entiende que incluye, pero no limitado a, trifluorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo, 4-clorobutilo, 3-bromopropilo, y similares. El término "arilo", significa, a menos que se indique lo contrario, un sustituyente hidrocarburo poliinsaturado, aromático, que puede ser de un solo anillo o anillos múltiples (preferiblemente de 1 a 3 anillos) que están fusionados junto o ligados de manera covalente. El término "heteroarilo" se refiere a grupos arilo (o anillos) que contienen de uno a cuatro heteroátomos (en cada anillo separado en el caso de anillos múltiples) seleccionados de N, O, y S, en donde los átomos de nitrógeno y azufre se oxidan opcionalmente, y los átomos de nitrógeno se cuaternizan opcionalmente. Un grupo heteroarilo puede estar unido al resto de la molécula a través de un carbono o heteroátomo. Los ejemplos no-limitantes de grupos arilo y heteroarilo incluyen fenilo, 1 -naftilo, 2-naftilo, 4-bifenilo, 1 -pirrolilo, 2-pirrolilo, 3-pirrolilo, 3-pirazolilo, 2-¡midazolilo, 4-imidazolilo, pirazinilo, 2-oxazolilo, 4-oxazolilo, 2-fenil-4-oxazolilo, 5-oxazolilo, 3-isoxazolilo, 4-isoxazolilo, 5-isoxazolilo, 2-tiazolilo, 4-tiazolilo, 5-tiazolilo, 2-furilo, 3-furilo, 2-tienilo, 3-tienilo, 2-piridilo, 3-piridilo, 4-piridilo, 2-pirimidilo, 4-pirimidilo, 5-benzotiazolilo, purinilo, 2-benzimidazolilo, 5-indolilo, 1-isoquinolilo, 5-isoquinolilo, 2-quinoxalinilo, 5-quinoxalinilo, 3-quinolilo, y 6-quinolilo. Los sustituyentes para cada uno de los sistemas de anillo arílo y heteroarilo arriba anotados se seleccionan del grupo de sustituyentes aceptables descritos abajo. Los términos "arileno" y "heteroarileno" se refieren a radicales divalentes de arilo y heteroarilo, respectivamente. Por brevedad, el término "arílo" cuando es utilizado en combinación con otros términos (por ejemplo, ariloxo, ariltioxo, arilalquilo) incluye anillos arilo y heteroarilo de acuerdo a lo definido anteriormente. Así, el término "arilalquilo" se entiende que incluye los radicales en los cuales un grupo arilo se une a un grupo alquilo (por ejemplo, bencilo, fenetilo, piridilmetilo y similares) incluyendo los grupos alquilo en donde un átomo de carbono (por ejemplo, un grupo metileno) se ha sustituido, por ejemplo, por un átomo de oxígeno (por ejemplo, fenoximetilo, 2-piridiloximetilo, 3-(1-naftiloxi)propilo, y similares). Sin embargo, el término "haloarilo," como se utiliza en la presente se entiende que abarca solamente arilos sustituidos con uno o más halógenos. Donde un heteroalquilo, heterocicloalquilo, o un heteroarilo incluye un número específico de miembros (por ejemplo "3 a 7 miembros"), el término "miembro" se refiere a un carbono o heteroátomo. El término "oxo" como se utiliza en la presente se entiende un oxígeno que tiene un enlace doble a un átomo de carbono. Cada uno de los términos anteriores (por ejemplo, "alquilo," "heteroalquilo," "cicloalquilo, y "heterocicloalquilo", "arilo," "heteroarilo" así como sus derivados radicales divalentes) se entiende que incluye las formas sustituidas e insustituidas del radical indicado. Los sustituyentes preferidos para cada tipo de radical se proporcionan más adelante. Los sustituyentes para los radicales derivados monovalentes y divalentes de alquilo, heteroalquilo, cicloalquiio, heterocicloalquilo (incluyendo los grupos designados frecuentemente como alquileno, alquenilo, heteroalquileno, heteroalquenilo, alquinilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, cicloalquenilo, y heterocicloalquenilo) pueden ser una o más de una variedad de grupos seleccionados de, pero sin limitarse a: -OR\ =O, =NR\ =N-OR', -NR'R",-SR', -halógeno, -SiR'R"R'", -OC(O)R', -C(O)R\ -CO2R\ -C(O)NR'R", -OC(O)NR'R", -NR"C(O)R\ -NR'-C(O)NR"R"\ -NR"C(O)OR', -NR-C(NR'R") = NR"\ -S(O)R', -S(O)2R', -S(O)2NR'R", -NRSO2R', -CN y -NO2 en un número que va de cero a (2m' + 1), donde m' es el número total de átomos de carbono en tal radical. R', R", R"' y R"" cada uno se refiere preferible e independientemente a hidrógeno, heteroalquilo sustituido o insustituido, cicloalquilo sustituido o insustituido, heterocicloalquilo sustituido o insustituido, arilo sustituido o insustituido (por ejemplo, arilo sustituido con 1-3 halógenos), grupos alquilo, alcoxi o tioalcoxi, o grupos arilalquilo sustituidos o insustituidos. Cuando un compuesto de la invención incluye más de un grupo R, por ejemplo, cada uno de los grupos R se selecciona independientemente al igual que cada grupo R', R", R'" y R"" cuando más de uno de estos grupos está presente. Cuando R' y R" se unen al mismo átomo de nitrógeno, pueden combinarse con el átomo de nitrógeno para formar un anillo de 4-, 5-, 6-, o 7-miembros. Por ejemplo, -NR'R" se entiende que incluye, pero no limitado a, 1 -pirrolidinilo y 4-morfolinilo. De la discusión anterior de sustituyentes, un experto en la técnica entenderá que el término "alquilo" se entiende que incluye grupos que incluyen átomos de carbono unidos a grupos distintos de los grupos hidrógeno, tales como haloalquilo (por ejemplo, -CF3 y -CH2CF3) y acilo (por ejemplo, -C(O)CH3, -C(O)CF3, -C(O)CH2OCH3, y similares). Similar a los sustituyentes descritos para los radicales alquilo anteriores, los sustituyentes' ejemplares para los grupos arilo y heteroarilo (así como sus derivados divalentes) son variados y se seleccionan de, por ejemplo: halógeno, -OR', -NR'R", -SR', -halógeno, -SiR'R"R"\ -OC(O)R', -C(O)R', -CO2R\ -C(O)NR'R", -OC(O)NR'R", -NR"C(O)R', -NR,-C(O)NR"R"', -NR"C(O)OR', -NR-C(NR'R"R'") = NR"", -NR-C(NR'R") = NR"', -S(O)R', -S(O)2R', -S(O)2NR'R", -NRSO2R', -CN y -NO2, -R1, -N3, -CH(Ph)2, fluoroaicoxo (1 a 4 átomos de carbono), y fluoroalquilo (1 a 4 átomos de carbono), en un número que va de cero al número total de valencias abiertas en el sistema de anillo aromático; y donde R', R", R"' y R"" son preferiblemente independientes seleccionados de hidrógeno, alquilo sustituido o insustituido, heteroalquilo sustituido o insustituido, cicloalquilo sustituido o insustituido, heterocicloalquilo sustituido o insustituido, arilo sustituido o insustituido y heteroarilo sustituido o insustituido. Cuando un compuesto de la invención incluye más de un grupo R, por ejemplo, cada uno de los grupos R se selecciona independientemente al igual que cada grupo R', R", R"' y R"" cuando más de uno de estos grupos está presente. Dos de los sustituyentes en átomos adyacentes del anillo de arilo o heteroarilo pueden formar opcionalmente un anillo de fórmula -T-C(O)-(CRR')q-U-, en donde T y U son independientemente -NR-, -O-, -CRR'- o un solo enlace, y q es un número entero de 0 a 3. Alternativamente, dos de los sustituyentes en los átomos adyacentes del anillo arilo o heteroarilo se pueden sustituir opcionalmente por un sustituyente de fórmula -A-(CH2)r-B-, en donde A y B son independientemente -CRR'-, -O-, -NR-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2NR'- o un solo enlace, y r es un número entero de 1 a 4. Uno de los solos enlaces únicos del nuevo anillo así formado puede sustituirse opcionalmente por un enlace doble. Alternativamente, dos de los sustituyentes en los átomos adyacentes del anillo arilo o heteroarilo se pueden sustituir opcionalmente por un sustituyente de fórmula -(CRR')s-X,-(C"R"')d-, donde s y d independientemente son números enteros de 0 a 3, y X' es -O-, -NR'-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, o -S(O)2NRA Los sustituyentes R, R', R" y R'" se seleccionan preferible e independientemente de hidrógeno, alquilo sustituido o insustituido, cicloalquilo sustituido o insustituido, heterocicloalquilo sustituido o ¡nsustituido, arilo sustituido o insustituido, y heteroarilo sustituido o insustituido. Como se utiliza en la presente, el término "heteroátomo" o "heteroátomo del anillo" se entiende que incluye oxígeno(O), nitrógeno (N), azufre (S), fósforo (P), y silicio (Si). Un "aminoalquilo" como se utiliza en la presente se refiere a un grupo amino covalente unido a un enlazador de alquileno. El grupo amino es -NR'R", en donde R' y R" se seleccionan normalmente de hidrógeno, alquilo sustituido o insustituido, heteroalquilo sustituido o insustituido, cicloalquilo sustituido o insustituido, heterocicloalquilo sustituido o insustituido, arilo sustituido o insustituido, o heteroarilo sustituido o insustituido. Un "grupo sustituyente," como se utiliza en la presente, se entiende un grupo seleccionado de las porciones siguientes: (A) -OH, -NH2, -SH, -CN, -CF3, -NO2, oxo, halógeno, alquilo insustituido, heteroalquilo insustituido, cicloalquilo insustituido, heterocicloalquilo insustituido, arilo insustituido, heteroarilo ¡nsustituido, y (B) alquilo, heteroalquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, y heteroarilo, sustituidos con por lo menos un sustituyente seleccionado de: (i) oxo, -OH, -NH2, -SH, -CN, -CF3, -NO2, halógeno, alquilo insustituido, heteroalquilo insustituído, cicloalquilo insustituido, heterocicloalquilo insustituido, arilo insustituido, heteroarilo ¡nsustituido, y (ii) alquilo, heteroalquilo, cicloaiquilo, heterocicloalquiio, arilo, y heteroarilo, sustituido con por lo menos un sustituyente seleccionado de: (a) oxo, -OH, -NH2, -SH, -CN, -CF3, -NO2, halógeno, alquilo insustituido, heteroalquilo insustituido, cicloalquilo insustituido, heterocicloalquilo insustituido, arilo insustituido, heteroarilo insustituido, y (b) alquilo, heteroalquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, o heteroarilo, sustituido con por lo menos un sustituyente seleccionado de oxo, -OH, -NH2, -SH, -CN, -CF3, -NO2, halógeno, alquilo insustituido, heteroalquilo insustituido, cicloalquilo insustituido, heterocicloalquilo ¡nsustituido, arilo insustituido, y heteroarilo insustituido. Un "sustituyente de tamaño-limitado" o "grupo sustituyente de tamaño-limitado," como se utiliza en la presente significa un grupo seleccionado de todos los sustituyentes descritos anteriormente para un "grupo del sustituyente," en donde cada alquilo sustituido o insustituido es un alquilo de 1 a 20 átomos de carbono sustituido o insustituido, cada heteroalquilo sustituido o insustituido es un heteroalquilo de 2 a 20 miembros sustituido o insustituido, cada cicloalquilo sustituido o insustituido es un cicloalquilo de 4 a 8 átomos de carbono sustituido o insustituido, y cada heterocicloalquilo sustituido o insustituido es un heterocicloalquílo de 4 a 8 miembros sustituido o insustituido. Un "sustituyente inferior" o un "grupo sustituyente inferior," como se utiliza en la presente significa un grupo seleccionado de todos los sustituyentes descritos anteriormente para un "grupo sustituyente," en donde cada alquilo sustituido o insustituido es un alquilo de 1 a 8 átomos de carbono sustituido o insustituido, cada heteroalquilo sustituido o insustituido es un heteroalquilo de 2 a 8 miembros sustituido o insustituido, cada cicloalquilo sustituido o insustituido es un cicloalquilo de 5 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, y cada heterocicloalquilo sustituido o insustituido es un heterocicloalquilo de 5 a 7 miembros sustituido o insustituido. Los compuestos de la presente invención pueden existir como sales. La presente invención incluye tales sales. Los ejemplos de formas de sal aplicables incluyen clorhidratos, hidrobromuros, sulfatos, metansulfonatos, nitratos, maleatos, acetatos, citratos, fumaratos, tartratos (por ejemplo, (+)-tartratos, (-)-tartratos o mezclas de los mismos incluyendo mezclas, succinatos, benzoatos y sales racémicas con aminoácidos tales como ácido glutámico. Estas sales se pueden preparar por métodos conocidos a los expertos en la técnica. También se incluyen sales de adición base tales como sal de sodio, potasio, calcio, amonio, amino orgánico, o magnesio o una sal similar. Cuando los compuestos de la presente invención contienen funcionalidades relativamente básicas, las sales de adición de ácido pueden ser obtenidas por poner en contacto la forma neutral de tales compuestos con una cantidad suficiente de ácido deseado, ya se puro o en un solvente inerte conveniente. Los ejemplos de las sales de adición de ácido aceptables incluyen los derivados de ácidos inorgánicos tales como los ácidos clorhídricos, bromhídricos, nítricos, carbónicos, monohidrogencarbónicos, fosfóricos, monohidrogenfosfóricos, dihidrogenfosfóricos, sulfúricos, monohidrogensulfúricos, yodhídricos, o fosforosos, y similares, así como las sales derivadas de ácidos orgánicos tales como acético, propiónico, isobutíríco, maleico, malónico, benzoico, succínico, subérico, fumárico, láctico, mandélico, itálico, bencensulfónico, p-tolilsulfónico, cítrico, tartárico, metansulfónico, y similares.

También se incluyen las sales de aminoácidos tales como arginato y similares, y las sales de ácidos orgánicos tales como los ácidos glucurónicos o galactunóricos y similares. Ciertos compuestos específicos de la presente invención contienen funcionalidades básicas y acidas que permiten que los compuestos sean convertidos sales de adición de ácido o base. Las formas neutrales de los compuestos son regeneradas preferiblemente haciendo contacto la sal con una base o ácido y aislando el compuesto asociado de la manera convencional. La forma asociada del compuesto difiere de las varias formas de la sal en ciertas propiedades físicas, tales como solubilidad en solventes polares. Ciertos compuestos de la presente invención pueden existir en formas no solvatadas así como formas solvatadas, incluyendo formas hidratadas. En general, las formas solvatadas son equivalente a las formas no solvatadas y se incluyen dentro del alcance de la presente invención . Ciertos compuestos de la presente invención pueden existir en form as cristalinas o amorfas múltiples. En general , todas las formas físicas son equivalentes para los usos contem plados por la presente invención y se desean q ue estén dentro del alcance de la presente invención . Ciertos com puestos de la presente invención poseen átomos de carbono asimétricos (centros ópticos o q uirales) o enlaces dobles; las formas de enantiómeros, racematos , diastereómeros, tautómeros, isómeros geométricos, estereoisométricas que pueden definirse, en térm inos de la estereoquím ica absoluta, como (R)- o (S)- o , com o (D)- o (L)- para los aminoácidos, e isómeros individ uales , se incluyen dentro del alcance de la presente invención . Los compuestos de la presente invención no incluyen los conocidos en la técnica por ser demasiado inestables para sintetizar y/o aislar. La presente invención se entiende que incl uye compuestos en formas racémicas y ópticamente puras . Los isómeros (R)- y (S)-, o (D)- y (L)- ópticamente activos se pueden preparar usando sintones quirales o reactivos quirales, o resolver usando técnicas convencionales. Cuando los compuestos descritos en la presente contienen enlaces olefínicos u otros centros de asimetría geométrica, y salvo que se especifiq ue lo contrario , se desea q ue los compuestos incl uyan isómeros geométricos E y Z. El térm in o "tautómero, " como se utiliza en la presente, se refiere a uno de dos o más isómeros estructu rales q ue existen en equilibrio y que se conviertan fácilmente de una forma isomérica a otra. Será evidente a un experto en la técnica que ciertos compuestos de esta invención pueden existir en formas tautoméricas, todas las formas tautoméricas de los compuestos que están dentro del alcance de la invención. A menos que se indique lo contrario, las estructuras representadas en la presente también se entiende que incluyen todas las formas estereoquímicas de la estructura; es decir, las configuraciones R y S para cada centro asimétrico. Por lo tanto, los isómeros estereoquímicos únicos así como las mezclas enantioméricas y diastereoméricas de los presentes compuestos están dentro del alcance de la invención. A menos que se indique lo contrario, las estructuras representadas en la presente también se entiende que incluyen los compuestos que difieren solamente en la presencia de uno o más átomos isotópicamente enriquecidos. Por ejemplo, los compuestos que tienen las presentes estructuras a excepción del reemplazo de un hidrógeno por un deuterio o tritio, o del reemplazo de un carbono por carbono enriquecido de 13C- o 14C- están dentro del alcance de esta invención. Los compuestos de la presente invención pueden también contener proporciones artificiales de isótopos atómicos en uno o más de los átomos que constituyen tales compuestos. Por ejemplo, los compuestos pueden ser radiactivos con isótopos radiactivos, tal como por ejemplo tritio (3H), yoduro-125 (125l) o carbono- 4 ( 4C). Todas las variaciones isotópicas de los compuestos de la presente invención, sea radiactivo o no, se incluyen dentro del alcance de la presente invención. El término "sales farmacéuticamente aceptables" se entiende que incluye las sales de compuestos activos que están preparados con ácidos o bases relativamente no tóxicos, dependiendo de las porciones sustituyentes particulares encontradas en los compuestos descritos en la presente. Cuando los compuestos de la presente invención contienen funcionalidades relativamente acidas, las sales de adición base pueden ser obtenidas por poner en contacto la forma neutral de tales compuestos con una cantidad suficiente de la base deseada, ya sea pura o en un solvente inerte conveniente. Los ejemplos de sales de adición base farmacéuticamente aceptables incluyen sal de sodio, potasio, calcio, amonio, amino orgánico, o magnesio, o una sal similar. Cuando los compuestos de la presente invención contienen funcionalidades relativamente básicas, las sales de adición de ácido pueden ser obtenidas poniendo en contacto la forma neutral de tales compuestos con una cantidad suficiente del ácido deseado, puro o en un solvente inerte conveniente. Los ejemplos de sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables incluyen las derivadas de ácidos inorgánicos tales como ácidos clorhídricos, bromhídricos, nítricos, carbónicos, monohidrogencarbónicos, fosfóricos, monohidrogenfosfóricos, dihidrogenfosfóricos, sulfúricos, monohidrogensulfúricos, yodhídricos, o fosforosos, y similares, así como las sales derivadas de ácidos orgánicos relativamente no tóxicos tales como acético, propiónico, isobutírico, maleíco, malónico, benzoico, succínico, subérico, fumárico, láctico, mandélico, itálico, bencensulfónico, p-tolilsulfónico, cítrico, tartárico, metansulfónico, y similares. También se incluyen las sales de aminoácidos tales como arginato y similares, y sales de ácidos orgánicos tales como ácidos glucurónicos o galactunóricos y similares (ver por ejemplo, Berge y colaboradores, "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Science, 1977, 66, 1-19). Ciertos compuestos específicos de la presente invención contienen las funcionalidades básicas y acidas que permiten que los compuestos sean convertidos en sales de adición de ácido o base. Además de las formas de sal, la presente invención proporciona compuestos, que están en una forma de profármaco.

Los profármacos de los compuestos descritos en la presente son los compuestos que experimentan fácilmente cambios químicos bajo condiciones fisiológicas para proporcionar los compuestos de la presente invención. Además, los profármacos se pueden convertir a los compuestos de la presente invención por métodos químicos o bioquímicos en un ambiente ex vivo Por ejemplo, los profármacos se pueden convertir lentamente a los compuestos de la presente invención cuando se ubican en un depósito de parche transdérmico con un reactivo químico o enzima conveniente. Los términos "uno," "una," o "uno(a)", cuando se utilizan en referencia a un grupo de sustituyentes en la presente, significan por lo menos uno. Por ejemplo, donde un compuesto se sustituye con "un" alquilo o arilo, el compuesto se sustituye opcionalmente con por lo menos un alquilo y/o por lo menos un arilo. Por otra parte, donde una porción se sustituye con un sustituyente R, el grupo puede ser referido como "R-sustituido". Donde una porción es R-sustituido, la porción se sustituye con por lo menos un sustituyente R y cada sustituyente R es opcionalmente diferente. La descripción de compuestos de la presente invención es limitada por los principios del enlace químico conocidos por los expertos en la técnica. Por consiguiente, donde un grupo puede ser sustituido por uno o más de un número de sustituyentes, tales sustituciones se seleccionan para cumplir con los principios del enlace químico y dar los compuestos que no son intrínsecamente inestables y/o conocidos a un experto en la técnica como probablemente inestables bajo condiciones ambiente, tales como acuosas, neutrales, y varias condiciones fisiológicas conocidas. Por ejemplo, un heterocicloalquilo o un heteroarilo se une al resto de la molécula vía un heteroátomo del anillo en conformidad con los principios del enlace químico conocidos por los expertos en la técnica de tal modo que se eviten los compuestos intrínsecamente inestables. Los términos "tratar" o "tratamiento" en referencia a una enfermedad particular incluyen la prevención de la enfermedad. El símbolo «^w significa el punto de unión de una porción al resto de la molécula. I. Moduladores de Heterociclo Cinasa de Anillo Fusionado En un aspecto, la presente invención proporciona un modulador de heterociclo cinasa de anillo fusionado (también referido en la presente un "compuesto de la presente invención") que tiene la fórmula: En la fórmula (1), L1 y L2 son independientemente un enlace, -S(O)n-, -O-, -NH-, alquileno de 1 a 5 átomos de carbono sustituido o insustituido, o heteroalquileno de 2 a 5 miembros sustituido o insustituido. En algunas modalidades, L1 y L2 son independientemente un enlace, -S(O)n-, -O-, -NH-, alquileno de 1 a 5 átomos de carbono insustituido, o heteroalquileno de 2 a 5 miembros insustituido. El símbolo n es un número entero de 0 a 2. R1 y R2 son cicloalquilo independientemente sustituido, heterocicloalquilo sustituido o insustituido, heteroarilo sustituido o insustituido, o arilo sustituido o insustituido. En algunas modalidades, R1 no es pirrolilo sustituido o insustituido. En otras modalidades, L1 no és heteroalquileno de 2 a 5 miembros insustituido cuando R1 y R2 son ambos fenilo insustituido. En otras modalidades, L no es -S(O)2- donde R2 es piperazinilo insustituido. En algunas modalidades, R1 no es heteroarilo de 5 miembros sustituido o insustituido. En otras modalidades R1 es heteroarilo de 6 miembros sustituido o insustituido, heterocicloalquilo sustituido o insustituido, arilo sustituido o insustituido, o heteroarilo de 6 miembros sustituido o insustituido. R1 también puede ser un heteroarilo de 6 miembros sustituido o insustituido, o arilo sustituido o insustituido. En otras modalidades, L1 no es heteroalquileno de 2 a 5 miembros insustituido cuando R1 y R2 son arilo insustituido. En otras modalidades, L1 no es heteroalquileno de 2 a 5 miembros insustituido cuando R1 y R2 son fenilo sustituido o insustituido. En otras modalidades, L1 se selecciona de un enlace, -S(O)n-, -O-, -NH- y alquileno de 1 a 5 átomos de carbono insustituido. En otras modalidades, n son 0 ó 1. En otras modalidades, L1 se selecciona de un enlace, -O-, -NH-, y alquileno de 1 a 5 átomos de carbono insustituido. En algunas modalidades, L1 no es -S(O)2- donde R2 es piperazinilo sustituido o insustituido. En otras modalidades, L1 no es -S(O)2- donde R2 es heterocicloalquilo insustituido. En otras modalidades, L1 no es -S(O)2- donde R1 es heterocicloalquilo sustituido o insustituido. En otras modalidades, n es 0 ó 1. En otras modalidades, L1 no es -S(O)2- donde L2 es un enlace. En algunas modalidades, R2 no es un heterocicloalquilo de 6 miembros insustituido. En otras modalidades, R2 no es un heterocicloalquilo de 6 miembros sustituido o insustituido. En otras modalidades, R2 se selecciona de heteroarilo sustituido o insustituido, heterocicloalquilo de 5 miembros sustituido o ¡nsustituido, arilo sustituido o insustituido, y cicloalquilo sustituido o insustituido. R2 también puede ser cicloalquilo sustituido o ¡nsustituido, heterocicloalquilo sustituido, heteroarilo sustituido o insustituido, o arilo sustituido o insustituido. En algunas modalidades, R1 no es isoxazolilo sustituido o insustituido donde R2 es piridinilo insustituido. En otras modalidades, R1 no es isoxazolilo sustituido o insustituido donde L1 es un enlace o -CH2-. En otras modalidades, R1 no es isoxazolilo sustituido o insustituido. En otras modalidades, R1 no es un 4-isoxazolilo sustituido. En otras modalidades, R1 no es un 5-il-isoxazolilo. En otras modalidades, R1 no es un 4-sustituido-5-il-isoxazolilo. En otras modalidades, R1 no es un isoxazolilo sustituido con un fluoro-arilo sustituido. L1 y L2 pueden independientemente ser un enlace, -S(O)n-, -O-, -NH-, o alquileno de 1 a 5 átomos de carbono insustituido. En algunas modalidades, L1 y L2 son un enlace, en otras modalidades, L1 o L2 es un enlace. R1 puede ser un cicloalquilo sustituido o insustituido, heterocicloalquilo sustituido o insustituido, heteroarilo de 5- o 6-miembros sustituido o ¡nsustituido, o arilo sustituido o insustituido. R1 también puede ser un heteroarilo de 6-miembros sustituido o insustituido, o arilo sustituido o insustituido. En otras modalidades, R1 es (1) cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono insustituido; (2) heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros insustituido; (3) heteroarilo insustituido; (4) arilo insustituido; (5) cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido; (6) heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido; (7) arilo sustituido; o (8) heteroarilo sustituido. En algunas modalidades relacionadas, (5) y (6) se sustituyen con un oxo, -OH, -CF3, -COOH, ciano, halógeno, R11 -alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R1-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R1-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R1-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R12-arilo sustituido o insustituido, R12-heteroarilo sustituido o ¡nsustituido, -L12-C(X1)R7, -L12-OR8, -L12-NR91R92, o -L12-S(O)mR10. X1 es =S, =O, o =NR15, donde R15 es H, -OR151, R11-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R11-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R11-cicloaiquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R11-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R1 -arilo sustituido o ¡nsustituido, o R12-heteroarilo sustituido o insustituido. R151 es hidrógeno o R11-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido. El símbolo m es un número entero de 0 a 2. En otras modalidades relacionadas, (7) y (8) se sustituyen con un -OH, -CF3, -COOH, ciano, halógeno, R11-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R11-sustituido o insustituido heteroalquilo de 2 a 10 miembros, R11-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R1 -heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R12-arilo sustituido o insustituido, R12-heteroarilo sustituido o insustituido, -L12-C(X1)R7, -L12-OR8, -L12-NR91R92, o -L12-S(O)mR10. L12 es un enlace, alquileno de 1 a 10 átomos de carbono insustituido, o heteroalquileno insustituido. X1 y m son como se define anteriormente. R7 es hidrógeno, R11-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R11-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R11-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R11-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R12-arilo sustituido o insustituido, R12-heteroarilo sustituido o insustituido, -OR71, o -NR72R73. R71, R72 y R73 son independientemente hidrógeno, R 1-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R11-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R11-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o ¡nsustituido, R11-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R 2-arilo sustituido o insustituido, o R12-heteroarilo sustituido o insustituido. R72 y R73 se unen opcionalmente con el nitrógeno al cual se unen para formar un R1 -heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, o R 2-heteroarilo sustituido o insustituido. R8, R91 y R92 son independientemente hidrógeno, -CF3, Realquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R11-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R11-cicloalquílo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R11-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R12-arilo sustituido o insustituido, R12-heteroarilo sustituido o insustituido, -C(X2)R8\ o -S(O)wR81. X2 es =S, =O, o =NR16. R16 es R11-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R11-heteroaIquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R11-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R11-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R12-arilo sustituido o ¡nsustituido, o R12-heteroarilo sustituido o insustituido. El símbolo w es un número entero de 0 a 2. R91 y R92 se unen opcíonalmente con el nitrógeno al cual se unen para formar un R11-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, o R12-heteroarilo sustituido o ¡nsustituido. R81 es hidrógeno, R11-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R11-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R11-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R 1-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R12-arilo sustituido o insustituido, R12-heteroarilo sustituido o insustituido, o -NR811R812. R811 y R812 son independientemente hidrógeno, R11-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R11-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R11-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R11-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R12-arilo sustituido o insustituido, o R12-heteroarilo sustituido o insustituido. R811 y R812 se unen opcionalmente con el nitrógeno al cual se unen para formar un R11-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, o R12-heteroarilo sustituido o insustituido.

En algunas modalidades, R81 y R16 se unen opcionalmente con los átomos a los cuales se unen para formar un heterocicloalquilo sustituido o insustituido o heteroarilo sustituido o insustituido. En otras modalidades, R811 y R16 se unen opcionalmente con los átomos a los cuales se unen para formar un heterocicloalquilo sustituido o insustituido o heteroarilo insustituido. En otras modalidades, R81 y R92 se unen opcionalmente con los átomos a los cuales se unen para formar un heterocicloalquilo sustituido o insustituido o heteroarilo insustituido. En otras modalidades, R811 y R92 se unen opcionalmente con los átomos a los cuales se unen para formar un heterocicloalquilo sustituido o insustituido o heteroarilo insustituido.

R10 es hidrógeno, R11-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R11-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R11-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R11-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R12-arilo sustituido o insustituido, R12-heteroarilo sustituido o insustituido, o -NR101R102. R101 y R1C2 son independientemente hidrógeno, R 1-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R11-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R11-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o ¡nsustituido, R11-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R12-arilo sustituido o insustituido, o R 2-heteroarilo sustituido o insustituido. R101 y R102 se unen opcionalmente con el nitrógeno al cual se unen para formar un R11-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, o R12- heteroarilo sustituido o insustituido. R11 es oxo, -OH, -COOH, -CF3, -OCF3, -CN, amino, halógeno, R13-alquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R13-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R13-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R13-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R14-arilo sustituido o ¡nsustituido, o R14-heteroarilo sustituido o insustituido. R12 es -OH, -COOH, amino, halógeno, -CF3, -OCF3, -CN, R13-alquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R13-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R13-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R13-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R14-arilo sustituido o ¡nsustituido, o R14-heteroarilo sustituido o insustituido. R13 es oxo, -OH, -COOH, amino, halógeno, -CF3, -OCF3, -CN, alquilo de 1 a 10 átomos de carbono insustituido, heteroalquilo de 2 a 10 miembros insustituido, cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono insustituido, heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros insustituído, arilo insustituido, heteroarilo insustituido. R14 es -OH, -COOH, amino, halógeno, -CF3, -OCF3, -CN, alquilo de 1 a 10 átomos de carbono insustituido, heteroalquilo de 2 a 10 miembros insustituido, cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono insustituido, heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros insustituido, arilo insustituido, heteroarilo insustituido.

En algunas modalidades, R1 es (1), (2), (4), (5,) (6) o (7) (es decir cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono insustituido, heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros insustituido, arilo insustituido, cicloalquílo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido, heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido, o arilo sustituido, respectivamente). En algunas modalidades, donde R es (3) u (8), entonces el heteroarilo es un heteroarilo de 6-miembros. Donde R1 es (7) u (8) (es decir arilo sustituido o heteroarilo sustituido), (7) y (8) pueden sustituirse con un -OH, -CF3, -OCF3, halógeno, alquilo de 1 a 10 átomos de carbono insustituido, heteroalquilo de 2 a 10 miembros insustituido, cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono insustituido, heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros insustituido, arilo insustituido, heteroarilo ¡nsustituido, o -L12-OR8. En una modalidad relacionada, L12 es un enlace. En otras modalidades relacionadas, (7) y (8) pueden sustituirse con un -OCH3, -OCF3, -CH3, -CF3, -OCH2CH3, halógeno, o ciclopropiloxi. R2 puede ser: (1) cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono insustituido; (2) heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros insustituido; (3) heteroarilo ¡nsustituido; (4) arilo insustituido; (5) cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido; (6) heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido; (7) arilo sustituido; u (8) heteroariio sustituido. En algunas modalidades relacionadas, (5) y (6) se sustituyen con un oxo, -OH, -CF3, -COOH, ciano, halógeno, R21-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R21-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R22-arilo sustituido o insustituido, o R22-heteroarilo sustituido o insustituido, -L22- C(X3)R3, -L22-OR4, -L22-NR51R52, o -L22-S(O)qRa. X3 es =S, =O, o =NR17, donde R17 es H, -OR171, R21-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o ¡nsustituido, R21-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R2 -cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R22-arilo sustituido o insustituido, o R22-heteroarilo sustituido o insustituido. R171 es H o R21-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido. El símbolo q es un número entero de 0 a 2. En otras modalidades relacionadas, (7) y (8) se sustituyen con un -OH, -CF3, -COOH, ciano, halógeno, R21-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heteroalquilo de de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R2 -cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R22-arilo sustituido o insustituido, R22-heteroarilo sustituido o insustituido, -L22-C(X3)R3, -L22-OR4, -L22-NR51R52, o -L22-S(O)qR6. L22 es un enlace, alquilo de 1 a 10 átomos de carbono insustituido o heteroalquileno insustituido. X3 y q son como se define anteriormente. R3 es hidrógeno, R21-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R2 -cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R -heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o ¡nsustituido, R -arilo sustituido o insustituido.. R 22 heteroarilo sustituido o insustituido, -OR31, o -NR32R33. R32 y R33 se unen opcionalmente con el nitrógeno al cual se unen para formar un R21-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, o R22-heteroarilo sustituido o insustituido. R31, R32 y R33 son independientemente hidrógeno, R21-alqu¡Io de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o ¡nsustituido, R21-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R21-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o ¡nsustituido, R21-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R22-arilo sustituido o insustituido, o R22-heteroarilo sustituido o insustituido. R4, R5 y R52 son independientemente hidrógeno, -CF3, R21-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R21-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o ins'ustituido, R21-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R22-arilo sustituido o insustituido, R 2-heteroarilo sustituido o insustituido, -C(X4)R41, o -S(O)vR41. R51 y R52 se unen opcionalmente con el nitrógeno al cual se unen para formar un R21-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, o R22-heteroarilo sustituido o insustituido. X4 es =S, =O, o =NR18, donde R18 es R21-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R 1-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R22-arilo sustituido o insustituido, o R22-heteroarilo sustituido o insustituido. El símbolo v es un número entero de 0 a 2. R41 es hidrógeno, R21-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R21-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o ¡nsustituido, R22-arilo sustituido o insustituido, R22-heteroarilo sustituido o insustítuido, o -NR411R412. R411 y R412 son independientemente seleccionados de hidrógeno, R21-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o ¡nsustituido, R21-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R21-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o ¡nsustituido, R22-arilo sustituido o ¡nsustituido, o R22-heteroarilo sustituido o ¡nsustituido. R411 y R4 2 se unen opcionalmente con el nitrógeno al cual se unen para formar un R2 -heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, o R22-heteroarilo sustituido o ¡nsustituido. En algunas modalidades, R41 y R18 se unen opcionalmente con los átomos a los cuales se unen para formar un heterocicloalquilo sustituido o insustituido o heteroarilo sustituido o insustituido. En otras modalidades, R411 y R18 se unen opcionalmente con los átomos a los cuales se unen para formar un heterocicloalquilo sustituido o insustituido o heteroarilo sustituido o insustituido. En otras modalidades, R41 y R52 se unen opcionalmente con los átomos a los cuales se unen para formar un heterocicloalquilo sustituido o insustituido o heteroarilo sustituido o insustituido. En otras modalidades, R411 y R52 se unen opcionalmente con los átomos a los cuales se unen para formar un heterocicloalquilo sustituido o insustituido o heteroarilo sustituido o insustituido. R6 es hidrógeno, R21-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R2 -cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o ¡nsustituido, R22-arilo sustituido o insustituido, R22-heteroarilo sustituido o insustituido, o -NR61R62. R61 y R62 son hidrógeno, R21-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituído, R21-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R21-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R22-arilo sustituido o insustituido, o R22-heteroarilo sustituido o insustituido. R61 y R62 se unen opcionalmente con el nitrógeno al cual se unen para formar un R21-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, o R22-heteroarilo sustituido o insustituido. R21 es oxo, -OH, -COOH, -CF3l -OCF3, -CN, amino, halógeno, R23-alquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R23-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R23- cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R23-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o ¡nsustituido, R24-arilo sustituido o insustituido, o R24-heteroarilo sustituido o insustituido. R22 es -OH, -COOH, amino, halógeno, -CF3, -OCF3, -CN, Realquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R23-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R23-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R23-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R24-arilo sustituido o ¡nsustituido, o R24-heteroarilo sustituido o insustituido. R23 es oxo, -OH, -COOH, amino, halógeno, -CF3, -OCF3, -CN, alquilo de 1 a 10 átomos de carbono insustituido, heteroalquilo de 2 a 10 miembros insustituido, cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono ¡nsustituido, heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros insustituido, arilo insustituido, heteroarilo insustituido. R24 es -OH, -COOH, amino, halógeno, -CF3, -OCF3, -CN, alquilo de 1 a 10 átomos de carbono insustituido, heteroalquilo de 2 a 10 miembros insustituido, cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono insustituido, heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros insustituido, arilo insustituido, heteroarilo insustituido. En algunas modalidades, R2 es (1), (3), (4), (5,) (6), (7) u (8) (es decir cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono insustituido, heteroarilo insustituido, arilo insustituido, cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido, heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido, arilo sustituido, o heteroarilo sustituido, respectivamente). R2 también puede ser (3), (4), (7) u (8). En otras modalidades, R2 es (7) u (8). En algunas modalidades, donde R2 es (7) y (8), entonces (7) y (8) se sustituyen con un -L22-C(X3)R3, -L22-OR4, -L22-NR51R52, -L22- C(NH)-NR32R33, o -L22-S(O)qR6. En algunas modalidades, R3 es -NR32R33. X3 puede ser =O o = NR17. R6 puede ser -NR61R62. R4 puede ser -C(O)R41 o -S(O)vR41. R41 puede ser -NR411R412. En otras modalidades donde R2 es (7) y (8), entonces (7) u (8) pueden sustituirse con un -OH, -CF3, -COOH, amino, halógeno, heteroalquilo de 2 a 10 miembros insustituido, cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono insustituido, heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros insustituido, arilo insustituido, heteroarilo ¡nsustituido, o -L22-C(X3)R3. X3 puede ser =O. R3 puede ser alquilo de 1 a 10 átomos de carbono insustituido, heteroalquilo de 2 a 10 miembros insustituido, cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono insustituido, heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros insustituido, arilo insustituido, heteroarilo insustituido, o -NR32R33. R32 y R33 pueden independientemente ser hidrógeno, R21-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R21-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R22-arilo sustituido o insustituido, o R22-heteroarilo sustituido o insustituido. R32 y R33 se unen opcionalmente con el nitrógeno al cual se unen para formar un R21-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, o R22-heteroarilo sustituido o insustituido. En otra modalidad donde R2 es (7) u (8), entonces (7) y (8) pueden sustituirse con heteroalquilo de 2 a 10 miembros insustituido, o -L22-C(O)R3. L22 puede ser un enlace. R3 puede ser -NR32R33. R32 y R33 pueden independientemente ser hidrógeno, R21-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R2 -cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R22-arilo sustituido o insustituido, o R22-heteroarilo sustituido o ¡nsustituido. R32 y R33 se unen opcionalmente con el nitrógeno al cual se unen para formar un R21-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, o R22-heteroarilo sustituido o insustituido. En algunas modalidades, R1 es un arilo del anillo fusionado sustituido o ¡nsustituido o heteroarilo del anillo fusionado sustituido o ¡nsustituido. En otras modalidades, R2 es indolilo sustituido o ¡nsustituido, sustituido o quinolinilo insustituido, o benzodioxolilo sustituido o insustituido. R2 puede ser un arilo del anillo fusionado sustituido o insustituido o heteroarilo del anillo fusionado sustituido o insustituido. R1 puede ser un indolilo sustituido o insustituido, sustituido o quinolinilo insustituido, o benzodioxolilo sustituido o insustituido. R1 y R2 pueden independientemente ser un hidantoinilo sustituido o insustituido, dioxolanilo sustituido o insustituido, dioxanilo sustituido o insustituido, trioxan ilo sustituido o ins ustituido , tetrahidrotieni lo sustituido o ¡nsustituido, tetrahidrofu ranilo s ustituido o insustitu ido, tetrahidrotiofenilo sustituido o insustituido , tetrahidropiranilo sustituido o insustituido , tetrahidrotíopiranilo sustituido o insustituido, pirrolidinilo sustituido o i nsustituido, morfolino sustituido o insustituido, piperidinilo sustituido o insustituido, pirazoiilo sustituido o insustituido, furanilo sustituido o insustituido, im idazolilo sustituido o ¡nsustituido, isoxazolilo sustituido o insustituido, oxadiazolilo sustituid o o insustituido , oxazolilo sustituido o ins ustituido, piridilo sustituido o ins ustituido , pirazilo sustituido o insustituido, pirimidilo sustitu ido o insustituido, piridazinilo sustituido o insustituido, tiazolilo s ustituido o insustituido, isotioazolilo sustituido o insustituido , triazolilo sustituido o insustituido , tienilo sustituido o insustituido, triazinilo sustituido o insustituido, tiadiazolilo s ustituido o ¡nsustituido, o tetrazolilo sustitu ido o ¡nsustituido. En otra modalidad, el compuesto de la presente invención es cualq uiera de los compuestos de las Tablas 1 - 1 8 ó 20, y/o de los métodos 2-61 en la sección de los Ejemplos más adelante .

En otro aspecto, la presente invención proporciona u n m odulador de heterociclo cinasa del anillo fusion ado (también referido en la presente com o un "compuesto de la presente invención") q ue tiene la fórm ula: En la Fórmula (II), L1, L2, R1 y R2 son como se define anteriormente en la discusión de Fórmula (l). En otro aspecto, la presente invención proporciona un modulador de heterociclo cinasa del anillo fusionado (también referido en la presente como un "compuesto de la presente invención") que tiene la fórmula: En la Fórmula (lll), L1, L2, R1 y R2 son como se define anteriormente en la discusión de Fórmula (I). En algunas modalidades, cada grupo sustituido descrito antes en los compuestos de Fórmulas (l)-(lll) es sustituido con por lo menos un grupo sustituyente. Más específicamente, en algunas modalidades, cada alquilo sustituido, heteroalquilo sustituido, cicloalquilo sustituido, heterocicloalquilo sustituido, arilo sustituido, heteroarilo sustituido, alquileno sustituido y/o heteroalquileno sustituido, descritos anteriormente en los compuestos de Fórmulas (l)-(lll) se sustituyen con por lo menos un grupo sustituyente. En otras modalidades, por lo menos uno o todos los grupos se sustituyen con por lo menos un grupo sustituyente de tamaño limitado. Alternativamente, por lo menos uno o todos los grupos se sustituyen con por lo menos un grupo sustituyente inferior. En otras modalidades los compuestos de Fórmulas (l)-(lll), cada alquilo sustituido o insustituido es un alquilo de 1 a 20 átomos de carbono sustituido o insustituido, cada heteroalquilo sustituido o insustituido es un heteroalquilo 2 a 20 miembros sustituido o insustituido, cada cicloalquilo sustituido o insustituido es un cicloalquilo de 4 a 8 átomos de carbono sustituido o insustituido, cada heterocicloalquilo sustituido o insustituido es un heterocicloalquilo de 4 a 8 miembros sustituido o insustituído, cada alquileno sustituido o insustituido es un alquileno de 1 a 20 átomos de carbono sustituido o ¡nsustituido, y/o cada heteroalquileno sustituido o insustituido es un heteroalquileno de 2 a 20 miembros sustituido o insustituido.

Alternativamente, cada alquilo sustituido o insustituido es un alquilo de 1 a 8 átomos de carbono sustituido o insustituido, cada heteroalquilo sustituido o insustituido es un heteroalquilo de 2 a 8 miembros sustituido o insustituido, cada cicloalquilo sustituido o insustituido es un cicloalquilo de 5 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, cada heterocicloalquilo sustituido o insustituido es un heterocicloalquilo de 5 a 7 miembros sustituido o insustituido, cada alquileno sustituido o insustituido es un alquileno de 1 a 8 átomos de carbono sustituido o insustituido, y/o cada heteroalquileno sustituido o insustituido es un heteroalquileno de 2 a 8 miembros sustituido o insustituido.

Síntesis Ejemplares Los compuestos de la invención son sintetizados por una combinación apropiada de métodos sintéticos generalmente bien conocidos. Las técnicas útiles en la sintetización de los compuestos de la invención son ambas fácilmente evidentes y accesibles para los expertos en la técnica. La discusión más adelante se ofrece para ilustrar cómo, en principio, para acceder a los compuestos reivindicados bajo esta invención y para dar detalles de ciertos de los diversos métodos disponibles para uso para formular los compuestos de la invención. Sin embargo, la discusión no se desea para definir o limitar el alcance de las reacciones o secuencias de reacción que son útiles en la preparación de compuestos de la presente invención. Los compuestos de esta invención pueden hacerse mediante los procedimientos y técnicas descritas en la sección de Ejemplos más adelante, así como por técnicas de síntesis orgánicas conocidas. En los Esquemas de Reacción 1, 2 y 3, L1, R1, L2 y R2 son como se define anteriormente. Los intermediarios clave para la síntesis de los derivados de 3,5-disustituido 1 H-pirazolo[3,4-b]piridina son 5-bromo-1H-pirazolo[3,4-b]piridina y 5-bromo-3-yodo-1 H-pirazolo[3,4-b]piridina.

Los sustituyentes de yodo y/o bromo en sp2-hibridizados, átomos de carbono aromáticos presentes en estos bloques de unión ofrecen numerosas posibilidades sintéticas para la funcionalización de cualquier posición. Existe una gran variedad de tales métodos sintéticos y estos procedimientos son generalmente bien conocidos y familiares un experto en la técnica e incluyen, por medio de ejemplo y sin limitación: procesos catalizados de metal de transición, más notablemente procesos que utilizan catalizadores de paladio, hierro, níquel o cobre, así como reacciones de intercambio metal-halógeno, más notablemente tales procedimientos que introducen litio o magnesio, y la reacción subsiguiente del derivado organometálico transitorio o aislado con un electrófilo de reactividad adecuada o directamente o vía transmetalación a un ajuste fino de la reactividad de la especie organometálica.

Usando tales métodos, la introducción de diferentes sustituyentes en la posición 3- y 5- del núcleo de 1 H-pirazolo[3,4-bjpiridina pueden lograrse introduciendo un sustituyente elegido en la posición 5 que inicia a partir de 5-bromo-1 H-pirazolo[3,4-b]piridina y halogenación subsiguiente, especialmente yodinación, en la posición 3 del núcleo de 1 H-pirazolo[3,4-b]piridina permitiendo el uso de los métodos anteriormente mencionados para introducir otro sustituyente de elección en la posición. Alternativamente, algunos de los métodos descritos antes pueden utilizarse para selectivamente funcionalizar la 5-bromo-3-yodo-1 H-pirazolo[3,4-b]piridina en la posición 3 selectivamente reaccionando con el sustituyente de yodo sobre el sustituyente de bromo. Es generalmente bien conocido y familiar para un experto en la técnica, que una variedad de catalizadores de paladio se conocen y están fácilmente disponible o accesibles los cuales exhibe índices de reacción altos con sustituyentes de yodo aromáticos con respecto a los sustituyentes de bromo aromáticos y tales catalizadores pueden utilizarse bajo condiciones adecuadas para efecto de la sustitución de yodo selectiva. La 5-bromo-1H-pirazolo[3,4-b]piridina o un derivado que contiene un grupo protector apropiado también puede funcionalizarse en la posición 3 vía varias reacciones de sustitución aromáticas electrofílicas que son generalmente bien conocidas y familiares para un experto en la técnica, tal como la acilación de FRIEDEL-CRAFTS. Los sustituyentes introducidos en o la posición en tal forma pueden o representan compuestos completamente elaborados, tales como los reivindicados bajo esta invención, o pueden contener grupos funcionales, tal como, por ejemplo y sin limitarse, aminas, ácidos carboxílicos o esteres, nitrilos, olefinas o halógeno, o libres o que producen grupos protectores adecuados, que a su vez pueden utilizarse como material de inicio en generalmente transformaciones sintéticas bien conocidas para compuestos sintetizados que se reivindican bajo esta invención. Los derivados de pirazolo[3,4-b]piridina adecuadamente funcionalizados, particularmente 5-bromo-1 H-pirazolo[3,4-b]piridina y 5-bromo-3-yodo-1 H-pirazolo[3,4-b]piridina, útiles en los compuestos de sintetización de la presente invención puede prepararse conforme al Esquema de Reacción 1 a partir de la 5-bromo-2-fluorop?ridina disponible comercialmente. La 5-bromo-2-fluoropiridina puede selectivamente funcionalizarse en la posición 3 por la metalación selectiva generalmente bien conocida de 2-fluoropiridinas de una manera semejante a los métodos generales descritos en Schlosser, M., Organometallics in Synthesis, 2a. ed., Wiley-VCH5 2002; Clayden, J., Organolithiums: Selectivity for Synthesis, Pergamon, 2002; y Mongin y colaboradores, Tetrahedron (2001) 57, 4059-4090. Así, la metilación puede ser llevarse a cabo mediante el tratamiento con una base fuerte no-nucleofílica adecuada, (por ejemplo di-iso-propilamida de litio o 2,2,6,6-tertrametilpiperidido de litio) en un solvente aprótico (por ejemplo THF, hexanos, éter o mezclas de los mismos) a baja temperatura, normalmente -78°C o menor. El intermediario metalado no purificado puede convertirse al 3-carbaldehído correspondiente 2 mediante el tratamiento con un reactivo de formulación tal como DMF, N-formil-N-metilanilina, N-formilmorfolina, N-formilpiperidina o etilformiato. La reacción del carbaldehído con hidracina o un derivado de hidracina adecuado (por ejemplo hidrazina-terc-butilcarbazato, o una sal orgánica o inorgánica soluble derivada de la hidracina tal como clorhidrato de hidracina) directamente o sobre la protección del aldehido que utiliza un grupo protector adecuado (por ejemplo acetal) proporcionará el acceso a 5-bromo-1 H-pirazolo[3,4-b]piridina. La introducción de un grupo adecuado en la posición 3 para la elaboración adicional puede lograrse vía los métodos generalmente bien conocidos en la técnica, tal como una sustitución aromática electrofílica (por ejemplo brominación o yodinación). Así, el yoduro 4 es accesible a partir del 3 mediante el tratamiento con reactivo adecuados, tales como N-yodosuccinimida, monocloruro de yodo o yodo, bajo condiciones que facilitan tal transformación. Otros ejemplos de funcionalización vía la sustitución aromática electrofílica están, por medio de ejemplo y sin limitación, acilación de FRIEDEL-CRAFTS utiliza haluros de acilo funcionaiizados tal como, por ejemplo, cloruro de bromoacetilo, cloruro de acriloilo o cloruro de tricloroacetilo en presencia de tricloruro de aluminio en diclorometano a temperatura ambiente o menor. Como se apreciará por el experto, los productos de tales reacciones pueden utilizarse como materiales de inicio para la síntesis de ciertos compuestos heterocíclicos.

Alternativamente, el intermediario metalado derivado de la desprotonación de 5-bromo-2-fluoropiridina puede transmetalarse bajo condiciones adecuadas para formar un reactivo de organocuprato (ver Lipshutz, B., Organometallics in Synthesis, 2a. ed., Wiley-VCH, 2002). La reacción del cuprato generado de tal manera con un haluro de acilo da acceso a cetonas de estructura general 5, que pueden ciclizarse mediante la reacción con hidracina o una sal orgánica o inorgánica soluble derivada de la hidracina (por ejemplo clorhidrato de hidracina) para producir las 5-bromo-1H-pirazolo[3,4-b]piridinas 3-sustituídas correspondientes de estructura general 6.

Esquema de Reacción 1 La elaboración de los haluros 3, 4 ó 6 puede llevarse a cabo fácilmente mediante métodos generalmente bien conocidos, tales como los descritos en el Esquema de Reacción 2 siguiente. Por ejemplo, las reacciones de acoplamiento cruzado catalizadas de metal se pueden usar usando varios compuestos de metal de transición conocidos (por ejemplo compuestos derivados de paladio, níquel o hierro). Los ejemplos de tales transformaciones se pueden encontrar en las siguientes referencias: Diederich, F., Stang, PJ. -Metal-catalyzed Cross- coupling Reactions, Wiley-VCH, 1998; Beller, M., Transition Metals for Organic Synthesis, Wiley-VCH, 1998; Tsuji, J., Palladium Reagents y Catalysts, Wiley- VCH, 1a. & 2a eds., 1995, 2004; Fuerstner, A., y colaboradores, J.Am. Chem. Soc. (2002) 124, 13856; y Bolm, C, y colaboradores, Chem. Rev. (2004) 104, 6217. Otros métodos útiles implican la conversión de un sustituyente de bromo o yodo en un sustituyente de metal o metaloide (por ejemplo compuesto organoboro, organolitio, organoestaño, organosilicio, organozinc, organocobre u organomagnesio) usando métodos generalmente bien conocidos (por ejemplo intercambio de halógeno metal y, según lo apropiado o requerido, transmetalación subsiguiente usando compuestos solubles y reactivos de boro, magnesio, zinc, estaño, silicio o cobre; para los ejemplos representativos de tal metodología, ver: Schlosser, M., Organometallics in Synthesis, 2nd. ed., Wiley-VCH, 2002.). Los derivados organometálicos obtenidos de tal manera pueden por sí mismos ser de uso en reacciones de acoplamiento catalizadas de metal de transición con haluros o triflatos aromáticos u olefínicos, o, si son suficientemente reactivos, se hacen reaccionar directamente con los electrófilos adecuados, tal como, por ejemplo, ciertos haluros orgánicos, aceptores de MICHAEL, oxiranos, aziridinas, aldehidos, haluros de acilo, o nitrilos. La funcionalización selectiva en la posición 3- o 5-, puede requerir diferentes estrategias dependiendo de la naturaleza de las transformaciones utilizadas para introducir funcionalidades en cualquier posición, especialmente la secuencia de funcionalización en cualquier posición. Así, puede ser ventajoso o necesario lograr la funcionalización en la posición 3 antes de la funcionalización de la posición 5 en algunos casos mientras que el proceso opuesto se puede requerir en otros casos, dependiendo de la naturaleza de los grupos específicos que se introducirán, de los métodos requeridos para lograr tales transformaciones, o de la selectividad inherente de los métodos utilizados. Por ejemplo, algunos reactivos, tal como por ejemplo algunos ácidos borónicos o sus esteres que sean deficientes de electrones (es decir contengan uno o más sustituyentes que eliminan electrones o que representen los derivados de ciertos sistemas heterocíclicos) y/o contengan uno o más sustituyentes orto al enlace de boro-carbono pueden requerir el uso de los catalizadores de paladio altamente activos (tal como, por ejemplo, los mencionados en Vilar, R., Christman, U. Angew. Chem. (2005) 117, 370; Littke, A.F., Fu, G.- Angew. Chem. (2002) 114, 4350.) y condiciones más forzosas, tal como por ejemplo temperaturas más altas y/o tiempos de reacción más largos. Tales condiciones pueden no ser conducentes para lograr las selectividades apreciables en las reacciones de 5-bromo-3-yodo-1 H-pirrolo[3,4-b]piridina. Por lo tanto, en tales casos, será ventajoso evitar los problemas de selectividad en conjunto por la sustitución secuencial del bromo en 5-bromo-1H-pirrolo[3,4-b]piridina, yodinación en la posición 3 e introducción subsiguiente del segundo sustituyente en la posición 3 utilizando los métodos detallados anteriormente. Generalmente hablando, cuando la sustitución del átomo de halógeno en cualquier posición pueda requerir condiciones que impliquen catalizadores altamente reactivos o reactivos bajo condiciones que no favorezcan generalmente los altos niveles de selectividad entre los dos átomos de halógeno presentes en 5-bromo-3-yodo-1 H-pirrolo[3,4-b]piridina será ventajoso recurrir a este proceso secuencial.

También será apreciado que la protección de grupos reactivos dentro de L1, L2, R1 y/o R2 así como el andamio de pirrolo[3,4-bjpiridina, (por ejemplo el protón en la posición 1), con un grupo protector adecuada puede ser ventajoso o requerido. Por ejemplo se descubrió que es ventajoso en algunas reacciones de acoplamiento cruzado proteger el nitrógeno en la posición 1 del andamio de 1H-pirrolo[3,4-b]píridina por la introducción de, por ejemplo, un grupo 4-toluoilsulfonilo, tri-iso-propilsililo o tetrahidro-1 H-piranilo en esta posición. La introducción y el retiro de estos grupos protectores se pueden lograr adecuadamente por los métodos bien conocidos en la literatura química, Como será evidente a algún experto en la técnica, los compuestos obtenidos por cualquiera de los métodos ya mencionados pueden contener los grupos funcionales, ya sea libres o protegidos, que pueden ser elaborados además por los métodos generalmente bien conocidos.

Una descripción más detallada de la utilización de procedimientos de acoplamiento cruzado en la síntesis de los compuestos reivindicados bajo esta invención se ilustra en el esquema de reacción 2: X1 y X2 se seleccionan de, pero no se limitan a, halógeno, ácido o éster borónico, sal del trifluoroborato, organomagnesio, organozinc, u organoestaño. Con respecto a la introducción de los residuos individuales -L1-R1 o -L2-R2 tales transformaciones, de acuerdo a lo detallado arriba, se pueden lograr vía metodologías de acoplamiento cruzado del halógeno estándares.

Esquema de reacción 2 Los acoplamientos del bromuro o yoduro correspondientes (X1, X2 = Br, I) con los reactivos adecuados tales como ácidos borónicos y boronatos, organoboranos, organoestannanos, compuestos organozinc, compuestos organomagnesio, olefinas o alquinos terminales (comprados u obtenidos vía los protocolos generalmente bien conocidos) se pueden realizar en presencia de un catalizador de metal de transición adecuado (por ejemplo compuestos de paladio). El acoplamiento no se puede realizar opcionalmente en presencia de ligandos tales como fosfinas, difosfinas, carbenos heterocíclicos tipo Arduengo. Las bases orgánicas o inorgánicas (por ejemplo aminas terciarias o secundarias, carbonatos alcalinos, bicarbonatos, fluoruros o fosfatos) y/u otros aditivos bien conocidos (por ejemplo cloruro de litio, haluros de cobre o sales de plata) se pueden utilizar para asistir o acelerar tales transformaciones. Estas reacciones de acoplamiento cruzado se pueden realizar en solventes adecuados tales como THF, dioxano, dimetoxietano, diglima, diclorometano, dicloroetano, acetonitrilo, DMF, N-metilpirrolidona, agua, o mezclas de los mismos a temperaturas que van de 25°C a 200°C. La temperatura se puede mantener opcionalmente con calentamiento, calentamiento convencional o irradiación de microondas. En el caso del 3-yodo-5-bromo-1 H-pirrolo[3,4-b]piridina, la sustitución selectiva o preferencial del sustituyente de yodo sobre el sustituyente de bromo es posible generalmente bajo condiciones menos forzosas, tal como una temperatura más baja y tiempos de reacción más cortos usando un catalizador de metal de transición adecuado. Las funcionalizaciones selectivas de compuestos de di- o oligohalógeno por medio de transformaciones catalizadas de metal de transición están bien precedidas en la literatura química: ver por ejemplo Ji, J., y colaboradores, Org. Lett (2003) 5, 4611; Bach, T. y colaboradores, J. Org. Chem (2002) 67, 5789, Adamczyk, M. y colaboradores, Tetrahedron (2003) 59, 8129. Esta metodología se puede extender a la incorporación de los nucleófilos basados en no-carbono (por ejemplo alcoholes, tioles, aminas primarias o secundarias) que pueden contener opcionalmente grupos protectores adecuados de alcoholes, tioles o aminas. Los ejemplos de tales grupos se pueden encontrar en Greene, T., y colaboradores, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd ed., John Wiley & Sons, 1999. Métodos ejemplares de tal utilización de nucleófilos sin carbono en las reacciones de acoplamiento cruzado relacionadas pueden encontrarse en Ley, S., y colaboradores, Angew. Chem. (2003) 115, 5558; Wolfe, J., y colaboradores, Acc. Chem. Res. (1998) 31, 805; Hartwig, Acc. Chem. Res. (1998) 31, 852; Navarro, O., y colaboradores, J. Org. Chem. (2004) 69, 3173, Ji, J., y colaboradores, Org. Lett (2003) 5, 4611. Los compuestos obtenidos por tales métodos se pueden elaborar además por métodos bien conocidos para obtener otros compuestos de la presente invención. En algunos casos puede ser ventajoso lograr acoplamientos cruzados a los átomos de carbono o sin carbono, primero convirtiendo el derivado de halógeno respectivo en el derivado organometálico correspondiente (por ejemplo, un ácido o éster borónico, sal de trifluoroborato, compuesto de organomagnesio, organozinc u organoestaño). Tales compuestos son accesibles por medio de la sustitución de la porción haluro con un metal o metaloide apropiado. Cualquier grupo funcional presente (por ejemplo el nitrógeno del anillo en la posición 1 del pirrolo[3,4-b]piridina), puede necesitar protegerse por un grupo protector adecuado ("PG"). Ver Greene, y colaboradores, 1999. La introducción de tales metales o metaloides se puede lograr por métodos generalmente bien conocidos, tales como metalación usando metales o una reacción de intercambio de metal-halógeno.

Los metales útiles para la metalación incluyen los metales alcalinotérreos o alcalinos o formas activadas de tales metales. Los reactivos adecuados para uso en reacciones de intercambio de metal-halógeno incluyen compuestos de organolitio u organomagnesio (por ejemplo cloruro o bromuro de n-butilitio, tere- butilitio o iso-propilmagnesio). Las reacciones de la transmetalación subsiguientes del intermediario organometálico se pueden realizar según sea necesario con un compuesto de metal soluble y reactivo adecuado tal como cloruro de magnesio, bromuro de magnesio, cloruro de tri-n-butilestaño, cloruro de trimetilestaño, borato de trimetilo, borato de trietilo, borato de tri-iso-propilo, triflato de zinc o cloruro de zinc. La introducción de un éster pinacol del ácido borónico puede obtenerse adecuadamente reaccionando el derivado de halógeno directamente con bis(pinacolato)diboro en presencia de dicloro[1,1'-bis(difenilfosf¡no)ferroceno]paladio (II) y bases adecuadas (por ejemplo acetato de potasio o sodio) en solventes tales como DMSO, DMF, DMA o N-metilpirrolidona a temperaturas que van de 80-160°C. La irradiación de microondas o calentamiento convencional se puede usar para mantener la temperatura apropiada (para la literatura precedente de transformaciones similares, ver Ishiyama, T. y colaboradores, -J. Org. Chem. (1995) 60, 7508). Los métodos para la conversión del éster pinacol del ácido borónico obtenido con este método en otros derivados ácidos borónicos tales como ácidos borónicos, boronatos, o sales de trifluoroborato, son generalmente bien conocidos. Como será evidente al experto, tales derivados organometálicos se pueden utilizar en reacciones de acoplamiento cruzado similares a las descritas anteriormente en el caso de los derivados que contienen halógeno de pirrolo[3,4-b]piridina. Tales acoplamientos se pueden efectuar utilizando asociados de acoplamiento adecuados, tales como haluros aromáticos, heteroaromáticos o reactivos olefínicos bajo condiciones idénticas o evidentemente similares y/o relacionadas a los métodos descritos anteriormente. Otros métodos pueden utilizar la reactividad de los derivados organometálicos generados de los derivados que contienen halógeno de pirrolo[3,4-b]piridina por cualquiera de los métodos descritos anteriormente. Por ejemplo, los derivados que contienen metales alcalinotérreos o alcalinos (por ejemplo compuestos de organolitio, organomagnesio u organozinc) se pueden usar en acoplamientos directos a una gama de otros asociados de acoplamiento electrofílicos, tal como, por ejemplo, olefinas activadas (aceptores-MICHAEL), aldehidos, nitrilos, compuestos nitro aromáticos, derivados ácidos carboxílicos, oxiranos, aziridinas, disulfuros orgánicos o haluros orgánicos. Tales transformaciones son generalmente bien conocidas en la técnica (para reacciones con compuestos nitro aromáticos, ver por ejemplo Sapountzis, I, y colaboradores, J. Am. Chem. Soc. (2002) 124, 9390).

Las estrategias sintéticas generales para el acceso a derivados de 3,5-disustituido 1 H-pirrolo[2,3-b]piperazina de 5-bromo-1H-pirazolo[3,4-b]piridina descritas anteriormente también se relacionan para acceder a los derivados de 3,5-disustituido 1 H-pirrolo[2,3-bjpiperazina de 5-bromo-1 H-pirrolo[2,3-b]pirazina y derivados de 3- sustituido 5-yodo-1H-pirrolo[2,3-b]pirazina. Sin embargo, las condiciones exactas para o de otra manera transformaciones similares o idénticas pueden muy bien ser diferentes para los derivados de 1 H-pirrolo[2,3-b]pirazina y puede requerirse la optimización dependiendo del andamio utilizado. La 5-bromo-1 H-pirrolo[2,3-b]piperazina es accesible vía el acoplamiento de SONOGASHIRA regioselectivo de 3-amino-2,6-dibromo-piperazina con trimetolsilílacetileno (ver Adamczyk.M., y colaboradores - Tetrahedron (2003) 59, 8129.), la N-acilación, y ciclización subsiguiente utilizando fluoruro de -n-butilamonio (para el precedente de esta reacción ver por favor el documento WO2004/032874A2). Iniciando a partir de la 3-amino-2,6-dibromo-piperazina disponible comercialmente, la 5-bromo-3-trimetilsilaniletinil-pirazin-2-ilamina puede obtenerse mediante la reacción con trimetilsililacetileno en presencia de un catalizador de paladio, tal como tetraquis(trifenilfosfino)paladio(0) y una cantidad catalítica de un co-catalizador de cobre, tal como cobre(l)-yoduro en una mezcla de DMF y una amina orgánica terciaria básica, tal como trietilamina a temperaturas elevadas. La acetilación con cloruro de acetilo en piridina a 20-60°C da acceso a la N-(5-bromo-3-trimetilsilaniletinil-pirazin-2-il)-acetamida y la ciclización subsiguiente con fluoruro de tetra-n-butilamonio en THF bajo reflujo produce la 5-bromo-1 H-pirrolo[2,3-b]piperazina. La introducción de un grupo adecuado en la posición 3 para la elaboración adicional puede lograrse vía métodos generalmente bien conocidos en la técnica, tal como una sustitución aromática electrofílica (por ejemplo brominación o yodinación). Así, la 5-bromo-3-yodo-1H-pirrolo[2,3-b]piperazina es accesible a partir de 5-bromo-1 H-pirrolo[2,3-b]piperazina mediante el tratamiento con reactivo adecuados, tales como N-yodosuccinimida, monocloruro de yodo o yodo, bajo condiciones que facilitan tal transformación. Otros ejemplos de funcionalización vía la sustitución aromática electrofílica son, por medio de ejemplo y no limitantes, la acilación de FRIEDEL-CRAFTS utilizando haluros de acilo funcionalizados tal como, por ejemplo, cloruro de bromoacetilo, cloruro de acriloilo o cloruro de tricloroacetilo en presencia de tricloruro de aluminio en diclorometano a temperatura ambiente de menor. Como se apreciará por el experto, los productos de tales reacciones o representan los compuestos reivindicados bajo esta invención o pueden utilizarse como materiales de inicio para la síntesis de tales compuestos, más notablemente ciertos compuestos heterocíclicos. La elaboración adicional del haluro D (X2=Br, I) así como la sustitución secuencial selectiva de ambos sustituyentes de halógeno en 5-bromo~3-yodo-1 H-pirrolo[2,3-b]piperazina pueden llevarse a cabo fácilmente por métodos generalmente bien conocidos, tales como, por ejemplo, las reacciones de acoplamiento cruzado catalizadas de metal secuenciales pueden emplearse utilizando varios compuestos metálicos de transición conocidos (por ejemplo compuestos derivados de paladio, hierro o níquel). Los ejemplos de tales transformaciones se pueden encontrar en las siguientes referencias: Diederich, F., Stang, PJ. -Metal-catalyzed Cross-coupling Reactions, Wiley- VCH, 1998; Beller, M., Transition Metals for Organic Synthesis, Wiley-VCH, 1998; Tsuji, J., Palladium Reagents and Catalysts, Wiley-VCH, 1a. & 2a eds., 1995, 2004; Fuerstner, A., y colaboradores, J.Am. Chem. Soc. (2002) 124, 13856; y Bolm, C, y colaboradores, Chem. Rev. (2004) 104, 6217. Los métodos generales conocidos en la literatura química y familiar para algunos expertos en la técnica son esencialmente los mismos métodos que los describieron antes para transformaciones similares o idénticas que utilizan derivados de 1H-pirazolo[3,4-b]piridina. Como se discutió para 1 H-pirazolo[3,4-b]piridinas el experto apreciará que el funcionalización selectiva en cualquiera que las 3 o posición 5 puede requerir diversas estrategias dependiendo de la naturaleza de las transformaciones utilizadas para introducir funcionalidades en cualquier posición, especialmente la secuencia de funcionalización en cualquier posición. Así, puede ser ventajoso o necesario para realizar una funcionalización en la posición 3 anterior a la funcionalización de la posición 5 en algunos casos mientras que el proceso opuesto puede requerirse en otros casos, dependiendo de la naturaleza de los grupos específicos a introducirse, se requieren métodos para lograr tales transformaciones, o la selectividad inherente de los métodos utilizados. En el caso de la 3-yodo-5-bromo-1H-pirrolo[2,3-b]piperazina, la sustitución selectiva o preferencial del sustituyente de yodo sobre el sustituyente de bromo es posible generalmente bajo condiciones menos forzadas, tales como temperatura inferiores y tiempos de reacción más cortos utilizando un catalizador metálico de transición adecuado. Las funcionalizaciones selectivas de los compuestos di- u oligohalógeno por medio de transformaciones catalizadas de metal de transición son bien precedidas en la literatura química: ver por ejemplo Ji, J., y colaboradores Org. Lett (2003) 5, 4611; Bach, T., y colaboradores, J. Org. Chem (2002) 67, 5789, Adamczyk, M. y colaboradores, Tetrahedron (2003) 59, 8129. En el caso del haluro D (X2=Br, I) otros métodos útiles pueden implicar la conversión de un sustituyente de bromo o yodo en un sustituyente metaloide metálico (por ejemplo compuesto organoboro, organolitio, organoestaño, organosilicio, organozinc, organocobre u organomagnesio) usando métodos generalmente bien conocidos (por ejemplo intercambio de halógeno metal y, según lo apropiado o requerido, transmetalación subsiguiente usando compuestos solubles y reactivos de boro, magnesio, zinc, estaño, silicio o cobre; para los ejemplos representativos de tal metodología, ver: Schlosser, M., Organometallics in Synthesis, 2nd. ed., Wiley-VCH, 2002.). Los derivados organometálicos obtenidos de tal manera pueden por sí mismos ser de uso en reacciones de acoplamiento catalizadas de metal de transición con haluros o triflatos aromáticos u olefínicos, o, si son suficientemente reactivos, se hacen reaccionar directamente con los electrófilos adecuados, tal como, por ejemplo, ciertos haluros orgánicos, aceptores de MICHAEL, oxiranos, aziridinas, aldehidos, haluros de acilo, o nitrilos. De nuevo, los métodos generales conocidos en la literatura química son esencialmente ¡guales que los descritos antes para transformaciones similares o idénticas que utilizan derivados de 1 H-pirazolo[3,4-b]piridina. En ciertas tales transformaciones, puede ser ventajoso o requerido para introducir uno o más grupos protectores adecuados, en orden para temporalmente sustituir los protones ácidos, tal como, por ejemplo, los átomos de hidrógeno unidos al nitrógeno u oxígeno, como sea necesario, y en particular el átomo de hidrógeno en ia posición 1 del andamio de 1H-pirrolo[2,3-b]piperazina, por métodos bien conocidos en la literatura química (ver T.W. Greene, P.

G.M. Wuts - Protective Groups in Organic Synthesis, 3a ed., John Wiley & Sons, 1999). La metodología de acoplamiento cruzado descrita anteriormente puede ampliarse a la incorporación de nucleófilos basados en no-carbono (por ejemplo alcoholes, tioles, aminas primarias o secundarias) que pueden opcionalmente contener grupos protectores adecuados de alcoholes, tioles o aminas. Los ejemplos de tales grupos pueden encontrarse en Greene, T., y colaboradores, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd ed., John Wiley & Sons, 1999. Exemplary methods of protection are described ¡n Ley, S., y colaboradores, Angew. Chem. (2003) 115, 5558; Wolfe, J., y colaboradores, Ace. Chem. Res. (1998) 31, 805; Hartwig, Acc. Chem. Res. (1998) 31, 852; Navarro, O., y colaboradores, J. Org. Chem. (2004) 69, 3173, Ji, J., y colaboradores, Org. Lett (2003) 5, 4611. Los compuestos obtenidos por tales métodos pueden además elaborarse por métodos bien conocidos para obtener otros compuestos de la presente invención. En algunos casos, la sustitución directa del sustituyente de 5-yodo o 5-bromo en 1H-pirrolo[2,3-b]pirazina con una amina, alcohol o tiol puede sustancialmente realizarse a temperaturas ambiente o elevadas en presencia de ácidos débiles, tal como, por ejemplo, ácido acético, o una base fuerte, no-nucleofílica, tal como, por ejemplo, hidruro de sodio o en amina pura, alcohol o tiol, respectivamente o en un solvente aprótico adecuado, tai como, por ejemplo, DMF, NMP, DMSO, o acetonitrilo. Esquema de Reacción 3 Un método alternativo para la síntesis de los derivados de 3,5-disustituido 1 H-pirrolo[2,3-b]pirazina se desarrolló, iniciando a partir de 2-amino-3-pirazincarboxilato de metilo, la incorporación de un átomo de yodo en la posición 5 para dar el 2-amino-5-yodo-3-pirazinacarboxilato de metilo se puede obtener por varios métodos conocidos, tal como la reacción con N-yodosuccinimida en etanol reflujo. El éster halogenado obtenido por tal medio puede entonces hidrolizarse por métodos estándares. Por ejemplo, el tratamiento con hidróxído de litio en mezclas de THF-agua a temperatura ambiente produce el ácido correspondiente. La síntesis de una intermediario de cetona B puede llevarse a cabo tratando la amida de WEINREB A correspondiente (metoxi-metil-amida del ácido 3-amino-6-yodo-pirazina-2-carboxílico) o su sal clorhidrato con especies organometálicas adecuadas, por ejemplo, con un compuesto de organomagnesio u organolitio. (Para ejemplos de uso de N-metoxi-N-metilamidas (Weinreb Amides) en síntesis de cetona, ver S.Nam, S.M. Weinreb - Tetrahedron Lett. 1981, 22,3815.) La metoxi-metil-amida de ácido 3-amino-6-yodo-pirazina-2-carboxílico (A) es accesible mediante la condensación del ácido asociado con N,O-dimetilhidroxilamina usando métodos estándares para la formación de amida, o mediante la activación anterior del ácido o condensación in situ o vía directa. Los métodos y reactivos para ambas transformaciones se describen en la literatura química y son bien conocidos por el experto en la técnica, tal como en el caso de métodos directos usando reactivos de acoplamiento adecuados tal como, pero sin limitarse a, PyBOP, HBTU o HATU. Los reactivos organometálicos requeridos para la introducción de un residuo de cetona L1R1 en B pueden obtenerse comercialmente o sintetizarse por varios métodos descritos en la literatura, tal como, pero sin limitarse a la reacción de GRIGNARD de cloruros, bromuros, o yoduros orgánicos, con magnesio (ver J. March - Advanced Organic Chemistry, 3rd ed., John Wiley & Sons, 1992), reacciones de intercambio de metal-halógeno de yoduros o bromuros orgánicos o usando compuestos de organomagnesio u organolitio adecuados tal como, pero sin limitarse a, cloruro o bromuro de n-butilitio, tere-butilitio o iso-propilmagnesio (por ejemplo, J. Clayden -Organolithiums: Selectivity for Synthesis, Pergamon, 2002; A.Boudier, L.O.Bromm, M.Lotz, P.Knochel-Angew. Chem. Int. Ed. (2000) 39, 4414) o desprotonación de compuestos suficientemente ácidos, tal como por ejemplo pirimidinas, pirazinas, 2-cloro- o 2-fluoropiridinas usando una base conveniente, tal como por ejemplo litio N,N-diisopropilamida o litio 2,2,6,6-tetrametilpiperidida (ver, J. Clayden -Organolithiums: Selectivity for Synthesis, Pergamon, 2002; A.Turck, N.PIé, F.Mongin, G.Quéguiner - Tetrahedron (2001) 57, 4489; F.Mongin, G.Quéguiner -Tetrahedron (2001) 57, 4059). En ciertas transformaciones, puede ser ventajoso o requerir introducir uno más grupos de protección convenientes, para sustituir temporalmente los protones ácidos (por ejemplo, átomos de hidrógeno unidos a un oxígeno o nitrógeno) según sea necesario, por los métodos bien conocidos en la literatura química (ver, T.W. Greene, P. G.M. Wuts - Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd ed., John Wiley & Sons, 1999). La conversión del intermediario de cetona B al derivado de metoxivinilo C se puede alcanzar por varios métodos conocidos pero es más conveniente realizarla vía una reacción de WITTIG (ver, B.E.

Maryanoff, A.B.Reitz - Chem. Rev. (1989) 89, 863) usando una ilida generada del cloruro de metoximetiltrifenilofosfonio disponible comercialmente y una base conveniente, por ejemplo, pero no se limita a, una base organometálica fuerte por ejemplo, pero sin limitarse a, una amida no-nucleofílica tal como litio, sal de potasio o de sodio de bis(trimetilsilil)amina.

La ciclización subsecuente de la olefina resultante C, que se puede utilizar en cualquier forma E- o Z- o una mezcla de estas formas, se puede alcanzar bajo condiciones de catálisis acida generales para producir 1 H-5-yodo-pirrolo[2,3-b]pirazinas 3-sustituidas. Tales métodos pueden utilizar ácidos orgánicos o inorgánicos fuertes, tales como ácido sulfúrico, ácido perclórico, ácido clorhídrico, ácido trifluoroacético o ácido trifluorometansulfónico en solventes convenientes (por ejemplo, THF, dioxano, dietiléter, dimetoxietano, diglima, diclorometano, dicloroetano o cloroformo, agua, metanol, etanol o mezclas de los mismos) a temperaturas que van de 0°C a 160°C. Una ciciización similar se ha descrito por Sakamoto y colaboradores, Heterocycles (1992), 34(12), 2379-84. Aquí los autores describen la conversión de 2-nitro-3-(2-etoxivinil)piridina a pirrolo[2,3-b]piridina asociada. Se reportó que la formación del grupo vinilo se alcanza vía un acoplamiento de STILLE del análogo 3-bromo con tributil-2-etoxivinilestannano. La utilidad de 1 H-5-yodo-pirrolo[2,3-b]pirazinas 3-sustituidas en la síntesis de los compuestos reivindicadados bajo esta invención será evidente a algún experto en la técnica basado en los métodos descritos arriba. Uno experto entenderá inmediatamente que elaboraron los métodos sintéticos descritos adjunto, incluyendo la sección de los ejemplos más adelante, puede y/o usarse para obtener los compuestos de las Fórmulas (I), (II), y/o (lll).

A. Grupos Protectores El término "grupo protector" se refiere a porciones químicas que bloquean alguna o todas las porciones reactivas de un compuesto y evita que tales porciones participen en las reacciones químicas hasta que se elimine al grupo protector, por ejemplo, las porciones listadas y descritas en T.W. Greene, P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd ed. John Wiley & Sons (1999). Puede ser ventajoso, donde se emplean diversos grupos protectores, que cada (diferente) grupo protector pueda eliminarse por diversos medios. Los grupos protectores que se dividen bajo condiciones de reacción totalmente dispares permiten el retiro diferenciado de tales grupos protectores. Por ejemplo, los grupos protectores pueden eliminarse por ácido, base, e hidrogenólisis. Los grupos tales como tritilo, dimetoxitritilo, acetal y terc-butildimetilsililo son lábiles ácidos y se pueden utilizar para proteger las porciones reactivas carboxi e hidroxi en presencia de los grupos amino protegidos con grupos Cbz, que se pueden eliminar por hidrogenólisis, y grupos Fmoc, que son lábiles base. El ácido carboxílico y porciones reactivas hidroxi se pueden bloquear con grupos lábiles base por ejemplo, sin limitación, metilo, etilo, y acetilo en presencia de aminas bloqueadas con grupos lábiles ácidos tales como terc-butil carbamato o carbamatos que son ácidos y de base estable pero hidrolíticamente pueden eliminarse. El ácido carboxílico y porciones reactivas hidroxi se pueden también bloquear con grupos protectores que pueden eliminarse hidrolíticamente tales como el grupo benzilo, mientras que los grupos amina capaces de ligar el hidrógeno con ácidos se pueden bloquear con grupos lábiles base tales como Fmoc. Las porciones reactivas del ácido carboxílico se pueden bloquear con grupos protectores oxidativamente eliminables tales como 2,4-dimetoxibenzilo, mientras que los grupos amino co-existentes pueden bloquearse con sililcarbamatos lábiles de fluoruro. Los grupos de bloqueo alílicos son útiles en presencia de grupos protectores ácidos y base puesto que los anteriores son estables y se pueden eliminar posteriormente por los catalizadores de metal o pi-ácidos. Por ejemplo, un ácido carboxílico bloqueado alíl¡co puede desprotejerse con una reacción de paladio(O)-catalizado en presencia de grupos protectores de t-butilcarbamato lábil o acetato amina de base-lábil ácidos . Otra forma de grupo protector es una resina a la cual un com puesto o intermediario puede unirse. Siempre y cuando el residuo se u na a la resina, el grupo funcional se bloq uea y no puede reaccionarse. U na vez libre de la resina, el grupo funcional está disponible para reaccionar.

Los grupos típicos de bloqueo/protectores incluyen , pero no se lim itan a las porciones sig uientes: alilo Bn Cbz alloc Me t-butilo TBDMS Teoc Boc I I. Métodos de I n hibi r Cinasas En otro aspecto, la presente invención proporciona métodos para modular la actividad de la proteína cinasa usando los moduladores de heterociclo cinasa de anillo fusionado de la presente invención. El término "modu lar la actividad de la cinasa ," como se utiliza en la presente, significa que la actividad de la proteína cinasa es aumentada o disminuida cuando se pone en contacto con un modulador de heterociclo cinasa de anillo fusionado de la presente invención con relación a la actividad en la ausencia del modulador de heterociclo cinasa de anillo fusionado. Por lo tanto, la presente invención proporciona un método de modular la actividad de la proteína cinasa poniendo en contacto la proteína cinasa con un modulador de heterociclo cinasa de anillo fusionado de la presente invención (por ejemplo, los compuestos de cualquiera de las fórmulas (l)-(XV)). En algunas modalidades, el modulador de heterociclo cinasa de anillo fusionado inhibe la actividad de la cinasa. El término "inhibe," como se utiliza en la presente en referencia a la actividad de la cinasa, significa que la actividad de la cinasa es disminuida cuando está en contacto con un modulador de heterociclo cinasa de anillo fusionado con relación a la actividad en ausencia del modulador de heterociclo cinasa de anillo fusionado. Por lo tanto, la presente invención además proporciona un método de inhibir la actividad de la proteína cinasa al poner en contacto la proteína cinasa con un modulador de heterociclo cinasa de anillo fusionado de la presente invención. En ciertas modalidades, la proteína cinasa es una proteína tirosin cinasa. Una proteína tirosin cinasa, como se utiliza en la presente, se refiere a una enzima que cataliza la fosforilación de los residuos de tirosina en proteínas con donantes de fosfato (por ejemplo donante de fosfato del nucleótido tal como ATP). Las proteínas tirosin cinasas incluyen, por ejemplo, las tirosina cinasas de Abelson ("Abl") (por ejemplo c-Abl y v-Abl), tirosina cinasas del receptor Ron ("RON"), las tirosina cinasas del receptor MET ("MET"), las tirosina cinasas tipo Fms ("FLT") (por ejemplo FLT3), tirosina cinasas de la familia-src (por ejemplo lyn, CSK), y cinasa-4 de p21-activada ("PAK"), FLT3, cinasas aurora, tirosina cinasas B-linfoides ("B1k"), cinasas dependientes de ciclina ("CDK") (por ejemplo CDK1 y CDK5), proteínas tirosin cinasas relacionadas a la familia src (por ejemplo cinasa Fyn), las sintasa cinasas de glicógeno ("GSK"), (por ejemplo GSK3a y GSK3ß), proteínas tirosin cinasas del linfocito ("Lck"), cinasas ribosomal S6 (por ejemplo Rsk1, Rsk2, y Rsk3), tirosina cinasas de esperma (por ejemplo Yes), y subtipos y homólogos de las mismas que exhiben la actividad de la tirosina cinasa. En ciertas modalidades, la proteína tirosin cinasa es Ab1, RON, MET, PAK, o FLT3. En otras modalidades, la proteína tirosin cinasa es un miembro de la familia de FLT3 o Ab1. En algunas modalidades, la cinasa se selecciona de la tirosina cinasa de Abelson, tirosina cínasa del receptor Ron, tirosina cinasa del receptor MET, tirosina cinasa-3 tipo Fms, cinasas de Aurora, cinasa-4 activada-p21 , y cinasa-1 dependiente de 3-fosfoinositida. En otra modalidad, el cinasa es cinasa mutante, tal como una cinasa mutante Bcr-Ab1, una cinasa FLT3 o cinasas aurora. Las cinasas mutantes Bcr-Ab1 útiles incluyen las que tienen por lo menos una de las mutaciones aisladas clínicamente siguientes: M244V, L248V, G250E, G250A, Q252H, Q252R, Y253F, Y253H, E255K, E255V, D276G, F311L, T315I, T315N, T315A, F317V, F317L, M343T, M351T, E355G, F359A, F359V, V379I, F382L, L387M, H396P, H396R, S417Y, E459K y F486S. En algunas modalidades, la cinasa mutante Ab1 tiene una mutación de T315I. El sistema de numeración que denota la posición de la mutación del aminoácido anterior es la numeración ABL tipo silvestre bien conocida de acuerdo al exón la de ABL. Ver Deininger, M., y colaboradores, Blood 105(7), 2640 (2005). El sistema de numeración se reproduce en la figura 1. En algunas modalidades, el cinasa mutante Bcr-Ab1 incluye por lo menos una de las mutaciones numeradas anteriormente y tiene por lo menos 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 100% de identidad de secuencia a la secuencia de la figura 1. En algunas modalidades, la cinasa mutante Bcr-Ab1 incluye por lo menos una de las mutaciones numeradas anteriormente, tiene una identidad de secuencia a la figura 1 de acuerdo a lo discutido anteriormente, e incluye por lo menos 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450. 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050, o 1100 aminoácidos. En algunas modalidades, la cinasa es homologa a una cinasa conocida (también referida en la presente como una "cinasa homologa"). Los compuestos y composiciones útiles para inhibir la actividad biológica de cinasas homologas se pueden analizar inicialmente, por ejemplo, en ensayos de enlace. Las enzimas homologas incluyen una secuencia del aminoácido de la misma longitud que es por lo menos 50%, por lo menos 60%o, por lo menos 70%, por lo menos 80%, o por lo menos 90%> idéntica a la secuencia del aminoácido de la cinasa conocida de longitud completa, o 70%, 80%, o 90%o de homología a los dominios activos conocidos de la cinasa. La homología no se puede determinar usando, por ejemplo, una búsqueda de PSI BLAST, por ejemplo, pero sin limitarse a la descrita en Altschul, y colaboradores, Nuc. Acids Rec. 25:3389-3402 (1997). En ciertas modalidades, por lo menos 50%, o por lo menos 70% de la secuencia se alinea en este análisis. Otras herramientas para realizar, la alineación incluyen, por ejemplo, DbClustal y ESPript, que se pueden utilizar para generar la versión de PostScript de la alineación. Vea Thompson y colaboradores, Nucleic Acids Research, 28:2919-26, 2000; Gouet, y colaboradores, Bioinformatics, 15:305-08 (1999). Los homólogos pueden, por ejemplo, tener un valor BLAST E de 1 x 10"6 sobre por lo menos 100 aminoácidos (Altschul y colaboradores, Nucleic Acids Res., 25:3389-402 (1997) con FLT3, Abl, u otras cinasas conocidas, o cualquier dominio funcional de FLT3, Ab1, o de otra cinasa conocida. La homología también puede determinarse comparando la cavidad de enlace del sitio activo de la enzima con las cavidades de enlace del sitio activo de una cinasa conocida. Por ejemplo, en las enzimas homologas, por lo menos 50%, 60%, 70%, 80%, o 90% de los aminoácidos de la molécula u homólogos tienen coordenadas estructurales del aminoácido de un dominio comparable en tamaño al dominio de la cinasa que tiene una desviación de raíz cuadrada media de los átomos de carbono alfa hasta aproximadamente 1.5Á, aproximadamente 1.25A, aproximadamente 1A, aproximadamente 0.75A, aproximadamente 0.5A, y o aproximadamente 0.25A. Los compuestos y composiciones de la presente invención son útiles para inhibir la actividad de la cinasa y también para inhibir otras enzimas que unen ATP. Son así útiles para el tratamiento de enfermedades y trastornos que pueden ser aliviados inhibiendo tal actividad enzimática de unión a ATP. Los métodos de determinar tales enzimas de unión a ATP incluyen los conocidos a los expertos en la técnica, los discutidos en la presente que se relacionan a seleccionar enzimas homologas, y por el uso de la base de datos PROSITE, donde señales, patrones de secuencia, motivos, o perfiles de las familias o dominios de ia proteína que contienen las enzimas pueden identificarse. Los compuestos de la presente invención, y sus derivados, se pueden también utilizar como agentes de enlace de cinasa. Como agentes de enlace, tales compuestos y derivados se pueden unir a una resina estable tal como sustrato atado para aplicaciones de cromatografía de afinidad. Los compuestos de esta invención, y sus derivados, pueden también ser modificados (por ejemplo, radioetiquetados o etiquetados por afinidad, etc.) para utilizarlos en la investigación de la caracterización de la enzima o del polipéptido, estructura, y/o función. En una modalidad ejemplificada, el modulador de heterociclo cinasa de anillo fusionado de la presente invención es un inhibidor de la cinasa. En algunas modalidades, el inhibidor de la cinasa tiene un Cl50 de la constante de inhibición (K,) de menos de 1 micromolar. En otra modalidad, el inhibidor de la cinasa tiene una constante Cl50 o de inhibición (K,) de menos de 500 micromolares. En otra modalidad, el inhibidor de la cinasa tiene un CISo o K, de menos de 10 micromolares. En otra modalidad, el inhibidor de la cinasa tiene un Cl50 o K, de menos de 1 micromolar. En otra modalidad, el inhibidor de cinasa tiene un CI50 o K, de menos de 500 nanomolares, en otra modalidad, el inhibidor de la cinasa tiene un Cl50 o K, de menos de 10 nanomolares. En otra modalidad, el inhibidor de la cinasa tiene un Cl50 o K, de menos de 1 nanomolar. lll. Métodos de Tratamiento En otro aspecto, la presente invención proporciona métodos para tratar una enfermedad mediada por la actividad de la cinasa (enfermedad o trastorno mediado por cinasa) en un sujeto (por ejemplo mamíferos, tales como humanos). Por enfermedades "mediadas por cinasa" o "asociadas a cinasa", se entiende que son enfermedades en las cuales la enfermedad o síntoma puede aliviarse inhibiendo la actividad de la cinasa (por ejemplo donde la cinasa está involucrada en el señalamiento, mediación, modulación, o regulación del proceso de la enfermedad). Por "enfermedades" se entiende que son enfermedades, o los síntomas de la enfermedad.

El método incluye administrar al sujeto una cantidad efectiva de un modulador de heterociclo cinasa de anillo fusionado de la presente invención (por ejemplo los compuestos de cualquiera de las fórmulas (l)-(XV)). Los ejemplos de enfermedades asociadas a la cinasa incluyen cáncer (por ejemplo leucemia, tumores, y metástasis), alergia, asma, obesidad, inflamación (por ejemplo, enfermedades inflamatorias tales como enfermedad inflamatoria de las vías respiratorias), trastornos hematológicos, enfermedad obstructora de las vías respiratorias, asma, enfermedades autoinmunes, enfermedades metabólicas, infección (por ejemplo, bacteriana, viral, levadura, hongos), enfermedades de CNS, tumores del cerebro, enfermedades neurodegenerativas, enfermedades cardiovasculares, y enfermedades asociadas a angiogénesis, neovascularización, y vasculogénesis. En una modalidad ejemplar, los compuestos son útiles para tratar cáncer, incluyendo leucemia, y otras enfermedades o trastornos que implican la proliferación anormal de la célula, tal como trastornos mieloproliferativos. Ejemplos más específicos de cánceres tratados con los compuestos de la presente invención incluyen cáncer de mama, cáncer de pulmón, melanoma, cáncer colorectal, cáncer de vejiga, cáncer ovárico, cáncer de próstata, cáncer renal, cáncer de célula escamosa, glioblastoma, cáncer pancreático, sarcoma de Kaposi, mieloma múltiple, y leucemia (por ejemplo mieloide, mieloide crónico, limfoblástico agudo, limfoblástico crónico, Hodgkins, y otras leucemias y cánceres hematológicos). Otros ejemplos específicos de enfermedades o trastornos para los cuales el tratamiento por los compuestos o composiciones de la invención son útiles para el tratamiento o prevención, incluyen, pero no se limitan a, rechazo de trasplante (por ejemplo, riñon, hígado, corazón, pulmón, células islote, páncreas, médula, córnea, intestino delgado, homoinjertos o xenoinjertos de piel y otros trasplantes), injerto contra enfermedad hospedadora, osteoartritis, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, diabetes, retinopatía diabética, enfermedad inflamatoria del intestino (por ejemplo, enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa, y otras enfermedades del intestino), enfermedad renal, caquexia, choque séptico, lupus, miastenia gravis, psoriasis, dermatitis, eczema, seborrea, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, protección celular del tronco durante quimioterapia, selección ex vivo o laxar ex vivo para autoplastia o transplante de médula alogénico, enfermedad ocular, retinopatías (por ejemplo, degeneración macular, retinopatía diabética, y otras retinopatías), enfermedad de córnea, glaucoma, infecciones (por ejemplo bacteriana, viral, o por hongos), enfermedad cardíaca, incluyendo, pero sin limitarse a, restenosis.

IV. Ensayos Los compuestos de la presente invención se pueden ensayar fácilmente para determinar su capacidad de modular las proteínas cinasas, enlazar las proteínas cinasas, y/o prevenir el crecimiento o proliferación celular. Algunos ejemplos de análisis útiles se presentan a continuación.

A. Ensayos de I nhibición y Enlace de la Cinasa La inh ibición de varias cinasas es medida por m étodos conocidos a los expertos en la técnica , tal com o los varios métodos presentados en la presente, y los discutidos en la publicación de j unio del 2003 Upstate CinasaProfíler Assay Protocols. Por ejemplo , donde se realizan los ensayos in vitro, la cinasa se diluye normalmente a la concentración apropiada para formar una sol ución de cinasa. Se agrega un sustrato de la cinasa y donante de fosfato, tal como ATP , a la solución de cinasa. La cinasa se deja para transferir un fosfato al sustrato de cinasa para formar un sustrato fosforado. La form ación de un sustrato fosforado se puede detectar directamente por cualquier medio apropiado , tal como radiactividad (por ejem plo [?-32P-ATP]) , o el uso de anticuerpos secundarios detectables (por ejem plo ELISA) . Alternativamente, la formación de un sustrato fosforado se puede detectar usando cualq uier técnica apropiada, tal como la detección de la concentración del ATP (por ejem plo sistema de ensayo Ci nasa-Glo® (Promega)) . Los inhibidores de la cinasa son identificados detectando la formación de un sustrato fosforado en presencia y ausencia de un com puesto de prueba (ver sección de ejem plos sig uiente) . La capacidad del compuesto para inhibir una cinasa en una célula se también puede ensayar usando los métodos bien conocidos en la técnica. Por ejem plo , las células que contienen u na cinasa se pueden poner en contacto con un agente de activación (tal como un factor de crecimiento) que active la cinasa. La cantidad de sustrato fosforado intracelular formado en ausencia y presencia del compuesto de prueba puede ser determinada sometiendo a lisis las células y detectando la presencia del sustrato fosforado por cualquier método apropiado (por ejemplo ELISA). Donde la cantidad de sustrato fosforado producida en la presencia del compuesto de prueba se disminuye con relación a la cantidad producida en ausencia del compuesto de prueba, se indica la inhibición de la cinasa. Ensayos celulares de la cinasa más detallados se discuten en la sección de ejemplos siguiente. Para medir el enlace de un compuesto a una cinasa, cualquier método conocido a los expertos en la técnica puede utilizarse. Por ejemplo, un kit de prueba fabricado por Discoverx (Fremont, CA), ED-Staurosporine NSIP™ Enzyme Binding Assay Kit (ver Patente Norteamericana No. 5,643,734) puede utilizarse. La actividad de la cinasa también se puede ensayar como en la Patente Norteamericana 6,589,950, publicada el 8 de julio de 2003. Los inhibidores de la cinasa adecuados se pueden seleccionar de los compuestos de la invención a través del análisis cristalográfico de la proteína, de acuerdo a lo descrito en, por ejemplo Antonysamy, y colaboradores, No. de Publicación PCT WO03087816A1 , que es incorporada en la presente por referencia en su totalidad para todos los fines. Los compuestos de la presente invención se pueden analizar por computadora para ensayar y visualizar su capacidad de enlace a y/o inhibir varias cinasas. La estructura se puede analizar por computadora con una pluralidad de compuestos de la presente invención para determinar su capacidad de enlace a una cinasa en varios sitios. Tales compuestos se pueden utilizar como objetivos o blancos en los esfuerzos de la química medicinal para identificar, por ejemplo, inhibidores de importancia terapéutica potencial (Travis, Science, 262:1374, 1993). Las estructuras tridimensionales de tales compuestos se pueden superimponer en una representación tridimensional de cinasas o sitio activo o cavidad de enlace de la misma para determinar si el compuesto se ajusta espacialmente en la representación y por consiguiente la proteína. En esta investigación, la calidad del ajuste de tales entidades o compuestos a la cavidad de enlace se puede juzgar por complementariedad de la forma o por la energía de interacción estimada (Meng, y colaboradores, J. Comp. Chem. 13:505-24, 1992). El análisis de los compuestos de la presente invención que se enlazan a y/o modulan las cinasas (por ejemplo inhibir o activar las cinasas) de acuerdo a esta invención implica generalmente la consideración de dos factores. Primero, el compuesto debe ser capaz de asociarse física y estructuralmente, covalente o no-covalente a las cinasas. Por ejemplo, las interacciones covalentes pueden ser importantes para diseñar inhibidores irreversibles o suicidas de una proteína. Las interacciones moleculares no-covalentes importantes en la asociación de cinasas con el compuesto incluyen el enlace del hidrógeno, interacciones iónicas, van der Waals, e interacciones hidrofóbicas. En segundo lugar, el compuesto debe poder asumir una conformación y orientación en relación a la cavidad de enlace, que permita que se asocie a las cinasas. Aunque ciertas porciones del compuesto no participarán directamente en esta asociación con las cinasas, estas porciones pueden aún influenciar la conformación total de la molécula y pueden tener un impacto significativo en potencia. Los requisitos conformacionales incluyen la estructura tridimensional total y la orientación del grupo o compuesto químico en relación a toda o a una porción de la cavidad de enlace, o el espaciamiento entre los grupos funcionales de un compuesto que comprende varios grupos químicos que interactúan directamente con las cinasas. Los programas de clasificación descritos en la presente, tal como, por ejemplo, DOCK, o GOLD, se utilizan para identificar los compuestos que se enlazan al sitio activo y/o cavidad de enlace.

Los compuestos se pueden analizar contra más de una cavidad de enlace de la estructura de proteína, o a más de un grupo de coordenadas para la misma proteína, considerando diversas conformaciones dinámicas moleculares de la proteína. La puntuación del consenso se puede entonces utilizar para identificar los compuestos que son el mejor ajuste para la proteína (Charifson, P.S. y colaboradores, J. MeJ. Chem. 42: 5100-9 (1999)). Los datos obtenidos de más de una estructura de la molécula de proteína se pueden también anotar de acuerdo a los métodos descritos en Klingler y colaboradores, U.S. Utility Application, presentada el 3 de mayo de 2002, titulada "Computer Systems and Methods for Virtual Screening of Compounds." Los compuestos que tienen el mejor ajuste entonces se obtienen del productor del banco químico, o se sintetizan, y se utilizan en ensayos y pruebas biológicas de enlace. Las técnicas de modelaje por computadora se pueden utilizar para determinar el efecto de modulación o enlace potencial de un compuesto químico en cinasas. Si el modelado por computadora indica una interacción fuerte, la molécula se puede después sintetizar y probar para que su capacidad enlace a las cinasas y afecte (inhibiendo o activando) su actividad. Los compuestos de modulación u otros de enlace de cinasas se pueden evaluar por computadora por medio de una serie de etapas en las cuales los grupos o fragmentos químicos se analizan y seleccionan por su capacidad de asociarse a las cavidades de enlace individuales u otras áreas de cinasas. Este proceso puede comenzar por la inspección visual de, por ejemplo, el sitio activo en la pantalla de computadora basado en las coordenadas de las cinasas. Los fragmentos o grupos químicos seleccionados se pueden entonces colocar en una variedad de orientaciones, o registrar, dentro de una cavidad de enlace individual de las cinasas (Blaney, J.M. and Dixon, J.S., Perspectives in Drug Discovery and Design, 1:301, 1993). El registro manual se puede realizar usando un software tal como Insight II (Accelrys, San Diego, CA) MOE (Chemical Computing Group, Inc., Montreal, Quebec, Canadá); y SYBYL (Tripos, Inc., St. Louis, MO, 1992), seguido por la minimización de energía y/o la dinámica molecular con los campos de fuerza mecánicos moleculares estándares, tales como CHARMM (Brooks, y colaboradores, J. Comp. Chem. 4:187-217, 1983), AMBER (Weiner, y colaboradores, J. Am. Chem. Soc. 106: 765-84, 1984) y C2MMFF (Merck Molecular Forcé Field; Accelrys, San Diego, CA). Un registro más automatizado puede lograrse usando programas tales como DOCK (Kuntz y colaboradores, J. MoL Biol., 161:269-88, 1982; DOCK disponible de University of California, San Francisco, CA); AUTODOCK (Goodsell & Olsen, Proteins: Structure, Function, and Genetics 8:195-202, 1990; AUTODOCK está disponible de Scripps Research Institute, La Jolla, CA); GOLD (Cambridge Crystallographic Data Centre (CCDC); Jones y colaboradores, J. Mol. Biol. 245:43-53, 1995); y FLEXX (Tripos, St. Louis, MO; Rarey, M., y colaboradores, J. Mol. Biol. 261:470-89, 1996). Otros programas apropiados se describen en, por ejemplo, Halperin, y colaboradores Durante la selección de compuestos por los métodos anteriores, la eficacia con la cual ese compuesto puede enlazar las cinasas se puede probar y optimizar por la evaluación por computadora. Por ejemplo, un compuesto se ha diseñado o seleccionado para funcionar como un inhibidor de las cinasas puede ocupar un volumen que no traslapa el volumen ocupado por los residuos de sitio activo cuando el sustrato nativo está unido, sin embargo, los expertos en la técnica reconocerán que hay cierta flexibilidad, permitiendo así el rearreglo de las cadenas principales y cadenas laterales. Además, un experto puede diseñar los compuestos que pueden explotar el cambio de la proteína durante el enlace, por ejemplo, dando por resultado un ajuste inducido. Un inhibidor de la cinasa eficaz puede demostrar una diferencia relativamente pequeña en energía entre sus estados unidos y libres (es decir, debe tener una energía pequeña de deformación de enlace y/o tensión conformacional baja durante el enlace). Así, los inhibidores de la cinasa más eficientes se deben, por ejemplo, diseñar con una energía de deformación de enlace no mayor de 10 kcal/mol, no mayor de 7 kcal/mol, no mayor de 5 kcal/mol, o no mayor de 2 kcal/mol. Los inhibidores de la cinasa pueden interactuar con la proteína en más de una conformación que es similar en energía de enlace total. En estos casos, la energía de deformación de enlace se toma como la diferencia entre la energía del compuesto libre y la energía promedio de las conformaciones, observada cuando el inhibidor se enlaza a la enzima. El software de computadora específico está disponible en la técnica para evaluar la energía de deformación del compuesto y la interacción electrostática. Los ejemplos de programas diseñados para tales usos incluyen: Gaussian 94, revisión C (Frisch, Gaussian, Inc., Pittsburgh, PA ©1995); AMBER, versión 7. (Kollman, University of California at San Francisco, ©2002); QUANTA/CHARMM (Accelrys, Inc., San Diego, CA, ©1995); Insight ll/Discover (Accelrys, Inc., San Diego, CA, ©1995); DelPhi (Accelrys, Inc., San Diego, CA, ©1995); y AMSOL (University of Minnesota) (Quantum Chemistry Program Exchange, Indiana University). Estos programas se pueden implementar, por ejemplo, con una estación de trabajo de computadora, al igual bien conocido en la técnica, por ejemplo, una estación de trabajo LINUX, SGl o Sun. Otros sistemas de hardware y paquetes de software serán conocidos a los expertos en la técnica. Los expertos en la técnica pueden expresar la proteína cinasa usando los métodos conocidos en la técnica, y los métodos descritos en la presente. Los polipéptidos nativos y mutados de la cinasa descritos en la presente se pueden químicamente sintetizar por completo o en parte usando las técnicas que son bien conocidas en la técnica (véase, por ejemplo, Creighton, Creighton, Proteins: Structures and Molecular Principies, W.H. Freeman & Co., NY, 1983).

Los sistemas de expresión del gen se pueden utilizar para la síntesis de polipéptidos nativos y mutados. La vectores de expresión que contienen la secuencia de codificación del polipéptido nativo o mutado y las señales de control apropiadas de transcripción/traducción, que se conocen por los expertos en la técnica, pueden construirse. Estos métodos incluyen técnicas de ADN recombinante in vitro, técnicas sintéticas y recombinación in vivo/ recombinación genética. Vea, por ejemplo, las técnicas descritas en Sambrook y colaboradores, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, NY, 2001, y Ausubel y colaboradores, Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and Wiley hiterscience, NY, 1989. Los sistemas del vector de hospedador-expresión se pueden utilizar para expresar la cinasa. Estos incluyen, pero no se limitan a , m icroorganismos tales como bacterias transformadas con la secuencia de codificación que contiene el ADN del bacteriófago recom binante, vectores de expresión del ADN del plásmido o ADN del cósmido; levadura transformada con la secuencia de codificació n que contiene los vectores de expresión de la levadu ra recom binante; sistemas celulares de insecto infectados con la secuencia de codificación que contiene los vectores de expresión del virus recombinante (por ejemplo, baculovirus) ; sistemas celulares de planta infectados con los vectores de expresión del virus recom binante (por ejemplo , virus del mosaico de la coliflor, CaMV; virus del mosaico del tabaco, TMV) o transformados con la secuencia de codificación q ue contiene los vectores de expresión del plásmido recombinante (por ejem plo, plásmido Ti); o sistemas de célula animal. La proteín a se tam bién puede expresar en sistemas de terapia del gen humano , incluyendo , por ejemplo , expresar la proteína para aumentar la cantidad de la proteína en un individuo, o para expresar una proteína terapéutica diseñada . Los elementos de la expresión de estos sistemas varían en su fuerza y especificidades .

Los vectores específicamente diseñados perm iten el traslado del AD N entre los hospedadores tales com o células de bacteria-levad ura o bacteria-anim al . Un vector de expresión apropiadamente construido puede contener: un origen de la replicación para la réplica autónoma en cél ulas hospedadoras , uno o más marcadores seleccionables, un número lim itado de sitios útiles de la enzim a de restricci ón , un potencial para un n úmero de copia alto , y promotores activos. Un promotor se define como una secuencia de ADN que dirige la polimerasa del ARN para enlazarce al ADN e iniciar la síntesis del ARN. Un promotor fuerte es uno que provoca que mARNs se inicien a una frecuencia alta. El vector de expresión también puede abarcar varios elementos que afectan la transcripción y traducción, incluyendo, por ejemplo, promotores constitutivos e inducibles. Estos elementos son frecuentemente dependientes del hospedador y/o vector. Por ejemplo, en la clonación en sistemas bacterianos, promotores inducibles tales como el promotor T7, pL del bacteriófago ?, plac, ptrp, ptac (promotor híbrido de ptrp-lac) y similares puede ser utilizado; en la clonación en los sistemas de célula de insecto, promotores tales como el promotor de polihedrina del baculovirus pueden utilizarse; en la clonación en los sistemas de célula de planta, promotores derivados del genoma de las células de planta (por ejemplo, promotores del choque de calor; el promotor para la subunidad pequeña de RUBISCO; el promotor para la proteína de enlace a la clorofila a/b) o de los virus de plantas (por ejemplo, el promotor 35S ARN de CaMV; el promotor de la proteína de revestimiento de TMV) pueden utilizarse; en la clonación en los sistemas de célula mamífera, promotores mamíferos (por ejemplo, promotor de la metalotioneina) o promotores virales mamíferos, (por ejemplo, promotor del adenovirus tardío; promotor del virus de vaccinia 7.5K; promotor SV40; promotor del virus del papiloma bovino; y el promotor del virus Epstein-Barr), pueden utilizarse.

Varios métodos se pueden utilizar para introducir el vector en las células hospedadoras, por ejemplo, transformación, transfección, infección, fusión del protoplasto, y electroporación. Las células con el vector de expresión se propagan de forma clonal y se analizan individualmente para determinar si producen los polipéptidos apropiados. Los varios métodos de selección, incluyendo, por ejemplo, resistencia antibiótica, se pueden utilizar para identificar las células hospedadoras que se han transformado. La identificación de los clones de célula hospedadora que expresan el polipéptido se puede hacer por varios medios, incluyendo pero sin limitarse a la reactividad ¡nmunológica con anticuerpos anti-cinasa, y la presencia de la actividad relacionada con las células hospedadoras. La expresión de ADNc se puede también realizar usando mARN sintético producido in vitro. El ARNm sintético se puede traducir eficientemente en los varios sistemas sin células, incluyendo pero sin limitarse a los extractos del germen de trigo y a los extractos del reticulocito, así como traducido eficientemente en sistemas basados en células, incluyendo, pero sin limitarse, a la microinyección en oocitos de rana. Para determinar la secuencia(s) del ADNc que produce niveles óptimos de actividad y/o proteína, se construyen moléculas modificadas del ADNc. Un ejemplo no-limitante de un ADNc modificado es donde el uso del codón en el ADNc se ha optimizado para la célula hospedadora en la cual el ADNc será expresado. Las células hospedadoras se transforman con las moléculas de ADNc y los niveles del ARN y/o proteína cinasa se m iden. Los niveles de la proteína cinasa en las cél ulas hospedadoras son cuantificados por una variedad de métodos tales como técnicas de in munoafinidad y/o afinidad del ligando , g ranos de afin idad de la cinasa-específica o anticuerpos específicos se utilizan para aislar la proteína de 35S-metionina etiq uetado o no etiq uetada. La proteína etiq uetada o no etiq uetada es analizada por SDS-PAGE. La proteína no etiquetada es detectada por manchado Western , ELISA o RÍA que emplean anticuerpos específicos. Después de la expresión de la cinasa en una célula hospedadora recombinante, los polipéptidos se pueden recuperar para proporcionar la proteína en forma activa . Varios procedimientos de purificación están disponibles y son convenientes de usar. La cinasa recombinante se puede purificar de lisatos de células o de medios de cultivo acondicionados, por varias com binacio nes de, o aplicación individual , del fraccionamiento, o de etapas de cromatog rafía que se conocen en la técn ica. Adem ás , la cinasa recom binante se puede, separar de otras proteínas celulares por medio de una columna de inmuno-afinidad hecha con anticuerpos monoclonales o policlonales específicos para la proteína naciente de longitud com pleta o fragm entos de polipéptido de las mismas. Otras técnicas de purificación basada en afinidad conocidas en la técnica pueden tam bién utilizarse.

Alternativamente , los polipéptidos se pueden recuperar de una célula hospedadora en una forma inactiva, no plegada, por ejemplo, de cuerpos de la inclusión de bacterias. Las proteínas recuperadas en esta forma se pueden solubilizar con un desnaturalizante, por ejemplo, clorhidrato de guanidinio, y después replegarse en una forma activa usando los métodos conocidos a los expertos en la técnica, tal como diálisis.

B. Ensayos de Crecimiento Celular Una variedad de ensayos de crecimiento celular se conoce en la técnica y son útiles en identificar los compuestos heterociclos de anillo fusionado(es decir "compuestos de prueba") capaces de inhibir el crecimiento y/o proliferación celular (por ejemplo, reducción). Por ejemplo, una variedad de células se conoce por requerir de cinasas específicas para el crecimiento y/o proliferación. La capacidad de tal célula de crecer en presencia de un compuesto de prueba se puede determinar y comparar al crecimiento en ausencia del compuesto de prueba identificando así las características antiproliferativas del compuesto de prueba. Un método común de este tipo es medir el grado de incorporación de la etiqueta, tal como timidine tritiada, en el ADN de células divisorias. Alternativamente, la inhibición de la proliferación celular puede ser probada determinando la actividad metabólica total de células con un marcador sustituyente que se correlacione con el número de la célula. Las células se pueden tratar con un indicador metabólico en presencia y ausencia del compuesto de prueba. Las células viables metabolizan el indicador metabólico de tal modo formando un producto metabólico detectable. Donde los niveles del producto metabólico detectable se disminuyen en presencia del compuesto de prueba con relación a la ausencia del compuesto de prueba, la inhibición del crecimiento y/o proliferación celular se indica. Los indicadores metabólicos ejemplares incluyen, por ejemplo las sales de tetrazolio y AlamorBIue® (véase sección de ejemplos siguiente).

V. Composiciones Farmacéuticas y Administración En otro aspecto, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que incluye un modulador de heterociclo cinasa de anillo fusionado en mezcla con un excipiente farmacéuticamente aceptable. Un experto en la técnica reconocerá que las composiciones farmacéuticas incluyen las sales farmacéuticamente aceptables de los moduladores de heterociclo cinasa de anillo fusionado descritos anteriormente. En aplicaciones terapéuticas y/o de diagnóstico, los compuestos de la invención se pueden formular por una variedad de modos de administración, incluyendo la administración sistémica y tópica o localizada. Las técnicas y formulaciones se pueden encontrar generalmente en Remington: The Science and Practice of Pharmacy (20th ed.) Lippincott, Williams & Wilkins (2000).

Los compuestos de acuerdo a la invención son efectivos sobre una amplia gama de dosificaciones. Por ejemplo, en el tratamiento de humanos adultos, las dosificaciones de 0.01 a 1000 mg, de 0.5 a 100 mg, de 1 a 50 mg por día, y de 5 a 40 mg por día, son ejemplos de dosificaciones que pueden ser utilizadas. Una dosificación más preferible es 10 a 30 mg por día. La dosificación exacta dependerá de la ruta de administración, la forma en la cual se administra el compuesto, del sujeto a tratarse, del peso corporal dei sujeto a tratarse, y la preferencia y experiencia del médico que atiende.

Las sales farmacéuticamente aceptables son generalmente bien conocidas a los expertos en la técnica, y pueden incluir, a modo de ejemplo pero sin limitación, acetato, bencensulfonato, besilato, benzoato, bicarbonato, bitartrato, bromuro, edetato de calcio, carnsilato, carbonato, citrato, edetato, edisilato, estolato, esoiato, fumarato, gluceptato, gluconato, glutamato, glicolilarsanilato, hexilresorcinato, hidrabamina, hidrobromuro, clorhidrato, hidroxinaftoato, yoduro, isetionato, lactato, lactobionato, malato, maleato, mandelato, mesilato, mucato, napsilato, nitrato, pamoato (embonato), pantotenato, fosfato/difosfato, poligalacturonato, salicilato, estearato, subacetato, succinato, sulfato, tannato, tartrato, o teoclato. Otras sales farmacéuticamente aceptables se pueden encontrar en, por ejemplo, Remington: The Science and Practice of Pharmacy (20th ed.) Lippincott, Williams & Wilkins (2000). Las sales farmacéuticametne aceptables preferidas incluyen, por ejemplo, acetato, benzoato, bromuro, carbonato, citrato, gluconato, hidrobromuro, clorhidrato, maleato, mesilato, napsilato, pamoato (embonato), fosfato, salicilato, succinato, sulfato, o tartrato. Dependiendo de las condiciones específicas que son tratadas, tales agentes se pueden formular en formas de dosificación líquidas o sólidas y administrar sistémica o localmente. Los agentes se pueden suministrar, por ejemplo, en una forma de liberación basada en tiempo- o sostenida-baja como se conoce por los expertos en la materia. Las técnicas para la formulación y administración se pueden encontrar en Remington: The Science and Practíce of Pharmacy (20th ed.) Lippincott, Williams & Wilkins (2000). Las rutas convenientes pueden incluir oral, bucal, por inhalación de aerosol, administración sublingual, rectal, transdérmica, vaginal, transmucosal, nasal o intestinal; suministro parenteral, incluyendo inyecciones intramusculares, subcutáneas, intramedulares, así como inyección intraventricular directo, intratecal, intravenosa, intra-articular, intra-esternal, intra-sinovial, intra-hepática, intralesional, intracraneal, intraperitoneal, intranasal, o intraocular u otros modos de administración. Para la inyección, los agentes de la invención se pueden formular y diluir en soluciones acuosas, tal como en amortiguadores fisiológicamente compatibles tales como solución de Hank, solución de Ringer, o amortiguador salino fisiológico. Para tal administración transmucosal, los penetrantes apropiados para la barrera a impregnarse se utilizan en la formulación. Tales penetrantes se conocen generalmente en la técnica. El uso de portadores inertes farmacéuticamente aceptables para form ular los com puestos en la presente descritos para la práctica de la invención en dosificaciones convenientes para la administración sistémica, está dentro del alcance de la invención . Con la elección apropiada del portador y práctica de fabricación conveniente, las composiciones de la presente invención , en particular, las formuladas como soluciones, se pueden administrar parenteralmente , por ejemplo por inyección intravenosa. Los com puestos se pueden formular fácilmente usando portadores farmacéuticamente aceptables bien conocidos en la técnica en dosificaciones convenientes para la administración oral . Tales portadores permiten a los compuestos de la invención formularse como tabletas , pildoras , cápsulas, líquidos , geles, jarabes, pastas, suspensiones y similares, para la ingestión oral por un sujeto (por ejemplo, un paciente) que se tratará. Para la administración nasal o por inhalación , los agentes de la invención se pueden también form ular por los métodos con ocidos a los expertos en la técnica, y pueden incluir, por ejemplo , pero sin limitarse a , ejemplos de sustancias de solubilización , dil ución , o dispersión tal como , sustancias salinas, conservadores , tales como alcohol bencilo, promotores de absorción , y fluorocarbonos . Las composiciones farm acéuticas convenientes para el uso en la presente invención incluyen composiciones en donde los ingredientes activos se contienen en una cantidad efectiva para lograr su propósito previsto. La determ inación de las cantidades eficaces está en conformidad con la capacidad de los expertos en la técnica, especialmente en la luz de la descripción detallada proporcionada en la presente.

Adem ás de los ingredientes activos , estas com posiciones farmacéuticas pueden contener portadores farmacéuticamente aceptables convenientes que incluyen excipientes y auxiliares que facilitan el procesam iento de los compuestos activos en las preparaciones q ue se pueden utilizar de form a farm acéutica. Las preparaciones form uladas para la adm inistración oral pueden estar en la forma de tabletas, grageas , cápsulas , o soluciones.

Las preparaciones farmacéuticas para uso oral pueden ser obtenidas combinando los compuestos activos con excipientes sólidos, opcion almente m oliendo una mezcla resultante, y procesando la mezcla de granulos, después de agregar los auxiliares convenientes, si se desea, para obtener las tabletas o núcleos de grageas . Los excipientes convenientes son , en particular, rellenos tales como azúcares, incl uyendo lactosa, s ucrosa, mannitol , o sorbitol; preparaciones de celulosa, por ejemplo, almidón de maíz, almidón de trig o, almidón del arroz, al midón de patata, gelatina, tragacanto de goma, celulosa metílica , hidroxipropilmetil-celulosa, carboximetil-celulosa de sodio (CMC) , y/o polivi nilpirrol idona (PVP: povidona) . Si se desea, los agentes de desintegración pueden agregarse, tal como la polivinilpirrolidona reticulada, agar, o ácido algínico o una sal de los m ismos, por ejemplo alginato de sodio.

Los núcleos de grageas se proporcionan con capas convenientes. Para este propósito, las soluciones concentradas de azúcar pueden ser utilizadas , las que pueden contener opcionalmente goma arábica, talco, polivin ilpirrolidona, gel de carbopol , polietileng licol (PEG) , y/o el dióxido de titanio , soluciones de laca, y solventes orgánicos convenientes o mezclas de solventes . Los colorantes o pigmentos pueden agreg arse a las tabletas o capas de grageas para la identificación o caracterizar diferentes combinaciones de dosis del compuesto activo.

Las preparaciones farmacéuticas que pueden ser utilizadas para la forma oral incluyen las cápsulas duras hechas de gelatina , así como cápsulas selladas, suaves, hechas de gelatina, y un plastificante, tal com o glicerol o sorbitol . Las cápsulas duras pueden contener los ingredientes activos en mezcla con el relleno tal como lactosa , ag l utinantes tales como almidones , y/o los lubricantes tales como talco o estearato de magnesio y, opcionalmente, estabilizadores. En cápsulas suaves, los com puestos activos se pueden disolver o suspender en líq uidos convenientes , tales como aceites grasos , parafina líq uida, o polietilenglico les líquidos (P EGs) . Adem ás, los estabilizadores pueden agregarse. Dependiendo de la condición particular, o estado de enfermedad , a tratarse o prevenirse, agentes terapéuticos adicionales, q ue se administran normalmente para tratar o prevenir tal condición , se pueden administrar j unto con los inhibidores de esta invención. Por ejemplo, los agentes quimioterapéuticos u otros agentes antiproliferativos se pueden combinar con los inhibidores de esta invención para tratar enfermedades proliferativas y cáncer. Los ejemplos de agentes quimioterapéuticos conocidos incluyen, pero no se limitan a, adriamicina, dexametasona, vincristina, ciclofosfamida, fluorouracil, topotecan, taxol, interferones, y derivados de platino.

Otros ejemplos de agentes, que los inhibidores de esta invención pueden también combinarse con, incluyen, sin limitarse, agentes antiinflamatorios tales como corticoesteroides, bloqueadores de TNF, IL-1 RA, azatioprina, ciclofosfamida, y sulfasalazína; agentes inmunomoduladores e inmunosupresivos tales como ciclosporina, tacrolimus, rapamicina, micofenolato mofetil, interferones, corticoesteroides, ciclofofamida, azatioprina, y sulfasalazina; factores neurotróficos tales como inhibidores de acetilcolinesterasa, inhibidores de MAO, interferones, anticonvulsivos, bloqueadores del canal de iones, riluzol, y agentes anti-Parkinsonianos; agentes para tratar enfermedad cardiovascular tal como beta-bloqueadores, inhibidores de ACE, diuréticos, nitratos, bloqueadores del canal de calcio, y estatinas; agentes para tratar enfermedad del hígado tales como corticoesteroides, colestiramina, interferones, y agentes antivirales; agentes para tratar trastornos de la sangre tales como corticoesteroides, agentes anti-leucémicos, y factores del crecimiento; agentes para tratar la diabetes tal como insulina, análogos de la insulina, inhibidores de la alfa glucosidasa, big uanidas , y fotosintetizador de la i nsulina; y agentes para tratar trastornos de la inmunodeficiencia tal com o la g am ma g lobulina . Estos agentes adicionales se pueden administrar por separado, como parte de un régimen de dosificación m últiple, de la composición que contiene el inhibidor. Alternativamente, estos agentes pueden ser parte de una sola forma de dosificación , mezclados junto con el inhibidor en una sola composición. La presente invención no debe limitarse en alcance por las modalidades ejem plificadas, que se desean com o ilustraciones de los aspectos sim ples de la invención . De hecho, varias m odificaciones de la invención además de ios descritos en la presente l legarán a ser evidentes a los expertos en la técnica de la descripción precedente. Tales modificaciones se desean q ue estén dentro del alcance de la invención . Por otra parte, una o más características de cualq uier m odalidad de la invención se pueden com binar con una o más de otras características de cualquier otra m odalidad de la invención , sin apartarse del alcance de la invención . Por ejemplo, los moduladores de heterociclo cinasa de an illo fusionado descritos en la sección de mod uladores de heterociclo cinasa de an illo fusionado son ig ualmente aplicables a los métodos de tratam iento y a los métodos de inhibir las cinasas descritos en la presente . Las referencias citadas a lo largo de esta solicitud son ejemplos del nivel de habilidad en la técnica y son incorporadas por este medio por referencia en la presente en su totalidad para todos los propósitos , sí o no estén incorporadas específicamente previamente.

EJ EM PLOS Los ejemplos siguientes se ofrecen para ilustrar, pero no limitar la invención reivindicada. La preparación de modalidades de la presente invención se describe en los ejem plos sig uientes. Los expertos en la técnica entenderán que las reacciones q u ím icas y los métodos de síntesis proporcionados se pueden modificar para preparar muchos de los otros compuestos de la presente invención . Donde los com puestos de la presente i nvención no se han ejemplificado, los expertos en la técnica reconocerán q ue estos compuestos pueden prepararse modificando los métodos de s íntesis presentados aquí, y usando los métodos de síntesis conocidos en la técnica. Síntesis de compuestos : Método 1 : Etapa 1: Síntesis de 5-bromo-2-fluoro-píridina-3-carbaldehído. Una solución de di-iso-propilamina de litio (5 ml, 35 mmol) en THF anhidro (40 ml) se enfrió a -78 °C bajo nitrógeno y se agregó n-butillitio (2.5 M en hexanos, 12 ml, 30 mmol). La mezcla después se agitó a -78°C durante 15 min antes se agregó 5-bromo-2-fluoro-piridina (5 g, 28 mmol). La mezcla resultante después se agitó a -78°C durante 90 min. Se agregó N-formilpiperidina (4 ml, 36 mmol) muy rápidamente a la suspensión a -78°C y la mezcla se agitó vigorosamente durante 60 segundos. La reacción se enfrió rápidamente de manera inmediata mediante la adición de 10% (p/v) de solución acuosa de ácido cítrico. La mezcla se calentó a temperatura ambiente y se distribuyó entre agua y diclor^metano. La fase acuosa se extrajo tres veces con diclorometano y las fases orgánicas se combinaron, secaron sobre sulfato de sodio, filtraron y concentraron. La cristalización del producto crudo a partir de ciciohexano produjo 5-bromo-2-fluoro-piridína-3-carbaldehído (2.993 g, 52% rendimiento) como cristales en escamas de color beige pálido. 1H-RMN (500 MHz, d6-DMSO) d 10.07 (s, 1H), 8.70 (dd, 1H), 8.55 (dd, 1H). EM: m/z 236, 238 [MNa+], 204, 206 [MH+], 176, 178 [MH-CO+]. Etapas 2 y 3: Síntesis de 5-bromo-1H-pirazolo[3,4-b]piridina. Se colocaron 5-bromo-2-fluoro-piridina-3-carbaldehído (13.66 g, 66.96 mmol), pinacol (8.75 g, 74.0 mmol) y monohidrato del ácido para-toluensulfónico (1.50 g, 7.89 mmol) en un matraz equipado con un condensador de DEAN-STARK y se disolvieron en benceno anhidro (400 ml). La mezcla se calentó a reflujo y el solvente se destiló hasta que el destilado permaneció claro y el volumen restante fue de aproximadamente 200 ml. La mezcla se diluyó con acetato de etilo (300 ml) y lavó con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y salmuera, después de secó sobre sulfato de sodio, se filtró y concentró. El residuo resultante se disolvió en una mezcla de etanol (400 ml) y di-iso-propil-etil-amina (25 ml). Entonces se agregó hidracina anhidra (15 ml, 0.48 mol) y la mezcla resultante se agitó bajo condiciones de reflujo durante 4 h. La mezcla después se concentró a sequedad y el residuo resultante se distribuyó entre agua y tolueno. La fase orgánica se lavó con salmuera dos veces, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y concentró. El residuo se disolvió en éter anhidro (700 ml) y se agregó lentamente cloruro de hidrógeno en éter anhidro (2M, 70 ml) a la solución agitada vigorosamente. El precipitado se filtró, lavó con éter y hexano y después de secó en vacío. H-RMN (500 MHz, d6-DMSO) d 10.31 (s, amplio, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.37 (d, 1H), 7.88 (d, 1H), 6.08 (s, 1H), 3.56 (s, amplio), 1.27 (s, 6H), 1.19 (s, 6H). EM: m/z 198, 200 [MH+].

El sólido anterior se disolvió en una mezcla de agua (500 ml), etanol (200 ml) y ácido clorhídrico acuoso concentrado (50 ml) a 50- 65°C. La mezcla después se agitó a temperatura ambiente durante 16 h antes se neutralizó a pH = 8 con bicarbonato de sodio. El precipitado resultante se filtró y la fase acuosa se extrajo tres veces con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, secaron sobre sulfato de sodio, filtraron y concentraron. El residuo resultante y el precipitado obtenido se cristalizaron a partir de etanol proporcionando 5-bromo-1 H-pirazolo[3,4-b]piridina (6.615 g, 50% rendimiento) como un sólido de color beige cristalino a verde olivo pálido. 1H-RMN (500 MHz, d6-DMSO) d 13.91 (s, 1H), 8.60 (d, 1H), 8.54 (d, 1H), 8.16 (s, amplio, 1H). EM: m/z 198, 200 [MH+]. Etapa 4: Síntesis de 5-bromo-3-yodo-1H-pirazolo[3,4-b]piridina. Se disolvieron 5-bromo-1 H-pirazolo[3,4-b]piridina (3.00 g, 15.2 mmol) y N-yodosuccinimida (3.60 g, 16.0 mmol) en dicloroetano anhidro (100 ml). La mezcla resultante se agitó bajo condiciones de reflujo durante 6 h, se enfrió a temperatura ambiente y diluyó con THF (300 ml). La solución resultante se lavó con una solución acuosa saturada de tiosulfato de sodio (100 ml) y salmuera, después de secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y concentró. El residuo se trituró con una mezcla 1:1 de diclorometano y éter y entonces el éter antes de secarse en vacío proporcionó 5-bromo-3-yodo-1 H-pirazolo[3,4-b]piridina (3.795 g, 77% rendimiento) como un sólido de color beige-marrón. 1H-RMN (500 MHz, J6-DMSO) d 14.31 (s, 1H), 8.65 (d, 1H), 8.20 (d, 1H). EM: m/z 323, 325 [MH+]. Etapa 5: Síntesis de 5-bromo-3-yodo-1-(2-trimetilsilanil-etoxi m eti I )-1 H-pi razo lo[3,4-b] piridina. Bajo nitrógeno se disolvió 5-bromo-3-yodo-1H-pirazolo[3,4-bjpiridina (2.68 g, 8.27 mmol) en DMF anhidro (40 ml). La solución se enfrió a 0-5°C y se agregó un exceso de hidruro de sodio seco hasta que ninguna otra adición resultó en la formación de hidrógeno. A la suspensión resultante se agregó 2-trimetilsilanil- etoximetilcloruro (2.5 ml, 14 mmol) gota a gota a 0-5°C. La mezcla resultante se agitó a 0°C durante 1 h y posteriormente se enfrió rápidamente mediante la adición de metanol y posteriormente de una solución acuosa saturada de cloruro de amonio. La mezcla después se concentró a sequedad a 50°C bajo presión reducida. El residuo resultante se distribuyó entre agua, salmuera y diclorometano. La fase acuosa después se extrajo con diclorometano y las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, filtraron y concentraron. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice instantánea utilizando un gradiente de acetato de etilo en hexanos proporcionó 5-bromo-3-yodo-1-(2-trimetílsilanil-etoximetil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridina (2.929 g, 78% rendimiento) como un sólido de color beige a marrón. 1H-RMN (500 MHz, d6-DMSO) d 8.85 (d, 1H), 8.40 (d, 1H), 5.85 (s, 2H), 3.69 (t, 2H), 0.92 (t, 2H), 0.11 (s, 9H). Etapa 6: Síntesis de 5-bromo-3-(2-metoxi-fenil)-1-(2-trimetilsilaniI-etoximetil)-1 H-pirazolo[354-b] piridina. Una mezcla de 5-bromo-3-yodo-1-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridina (1.606 g, 3.537 mmol), ácido 2-metoxi-fenilo-borónico (575 mg, 3.78 mmol) y del aducto diclorometano de 1,1'-bis(difenilfosfino)ferrocenopaladio(ll)-dicloruro (145 mg, 0.178 mmol) en acetonitrilo (8 ml) y solución acuosa de carbonato de sodio (2M, 8 ml) se agitó en un frasco cerrado a 85°C durante 100 min. La mezcla resultante entonces de distribuyó entre una solución acuosa a saturada de bicarbonato de sodio y diclorometano y la fase acuosa se extrajo tres veces con diclorometano. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, filtraron y concentraron. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice instantánea utilizando un gradiente de acetato de etilo en hexanos proporcionó 5-bromo-3-(2-metoxi-fenilo)-1-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridina (1.002 g, 65% rendimiento) como un aceite de color blanquecino. 1H-RMN (500 MHz, d6-DMSO) d 8.70 (d, 1H), 8.40 (d, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.50 (ddd, 1H), 7.23 (dd, 1H), 7.10 (ddd, 1H), 5.81 (s, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.66 (t, 2H), 0.84 (t, 2H), -0.10 (s, 9H). EM: m/z 456, 458 [MNa+]. Etapa 7: Síntesis de 3-(2-metoxi-fenilo)-5-(4,4,5,5-tetrametil-[l,3,2]dioxaborolan-2-il)-1-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-1H-pirazolo[3,4- bjpiridina. Se colocaron bis(pinacolato)diboro (1.20 g, 4.73 mmol), aducto diclormetano de 1 ,1'-bis(difenilfosfino)ferrocenopaladio(ll)-dicloruro (100 mg, 0.122 mmol) y acetato de sodio anhidro (625 mg, 7.62 mmol) en un frasco enjuagado con nitrógeno. A esto se agregó una solución de 5-bromo-3-(2-metoxi-fenilo)-1-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridina (1.002 g, 2.307 mmol) en DMF anhidro (15 ml). La mezcla resultante se irradió en un Personal Chemistry Optimizer a 130°C durante 60 min y después se concentró a 50°C bajo presión reducida. El residuo resultante se distribuyó entre éter y salmuera y la fase acuosa se extrajo con éter. Las fases orgánicas se combinaron, secaron sobre sulfato de sodio, filtraron y concentraron. El producto crudo entonces se purificó mediante cromatografía en gel de sílice instantánea utilizando un gradiente de acetato de etilo en hexanos proporcionando 3-(2-metoxi-fenilo)-5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1-(2-trimetiísilanil-etoximetil)-1 H-pirazolo[3,4-b]piridina (1.370 g, 123% rendimiento) como un sólido verde olivo pálido. 1H-RMN (500 MHz, d6-DMSO) d 8.76 (d, 1H), 8.40 (d, 1H), 7.59 (dd, 1H), 7.51 (ddd, 1H), 7.25 (m, 1H), 7.12 (ddd, 1H), 5.84 (s, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.67 (t, 2H), 1.33 (s, 12H), 0.84 (t, 2H), -0.10 (s, 9H).

Etapa 8: Síntesis de {2-hidroxi-5-[3-(2-metoxi-fenil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il]-fenil}-morfolin-4-il-metanona. Una mezcla de 3-(2-metoxi-fenil)-5-(4,4,5,5-tetrametil-[l,3,2]dioxaborolan-2-il)-1-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-1 H-pirazolo[3,4-b]piridina (100 mg, 0.21 mmol), (5-bromo-2-hidroxi-fenil)-morfolin-4-il-metanona (66 mg (0.23 mmol) y aducto diclorm etano de 1 ,1'-bis(difenilfosfino)ferrocenopaladio(ll)-dicloruro (9 mg, 11 µmol) en acetonitrilo (2 ml) y solución acuosa de carbonato de sodio (2M, 2 ml) se irradió en un Personal Chemistry Optimizer a 135°C durante 20 min. La mezcla de reacción cruda se distribuyó entre diclorometano y una solución acuosa a saturada de bicarbonato de sodio. La fase acuosa después se extrajo con diclorometano y las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, filtraron y concentraron. El producto crudo entonces se purificó mediante cromatografía en gel de sílice instantánea utilizando un gradiente de acetato de etilo en hexanos proporcionando {2-hidroxi- 5-[3-(2-metoxi-fenil)-1-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-1H-pirazolo[3,4- ' b]piridin-5-il]-fenil}-morfolin-4-il-metanona (35 mg, 30% rendimiento) como un sólido incoloro. 1H-RMN (500 MHz, d6-DMSO) d 8.86 (d, 1H), 8.27 (d, 1H), 7.64 (dd, 1H), 7.62 (dd, 1H), 7.54 (d, 1H), 7.49 (ddd, 1H), 7.24 (d, amplio, 1H), 7.11 (ddd, 1H), 7.00 (d, 1H), 5.84 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.69 (t, 2H), 3.7-3.2 (m, 8H), 0.86 (t, 2H), -0.08 (s, 9H). EM: m/z 583 [MNa+], 561 [MH+], 443 [MH+-(Me3Si(CH2)2O)]. Una solución de {2-hidroxi-5-[3-(2-metoxi-fenil)-1-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-1 H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il]-fenil}-morfolin-4-il-metanona (34 mg, 61 µmol) en diclorometano (15 ml) se enfrió a 0-5°C y se agregó dietileterato de trifluoruro de boro (100 µl, 0.8 mmol). La mezcla después se agitó a 0-5°C durante 40 min antes se agregaron 10 ml de 10% (p/v) de una solución de hidróxido de potasio. La mezcla se agitó adicionalmente a temperatura ambiente durante 1 h. El pH después de ajustó a aproximadamente 3-4 mediante la adición de ácido cítrico y la fase acuosa se saturó con sodio sulfato. La mezcla resultante se extrajo con diclorometano (3x). Las fases orgánicas se combinaron, lavaron con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio, secaron sobre sulfato de sodio y evaporaron para proporcionar {2-hidroxi-5-[3-(2-metoxi-fenil)- 1H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il]-fenil}-morfolin-4-il-metanona (11.5 mg, 44% rendimiento) como un sólido incoloro. 1H-RMN (500 MHz, d6-DMSO) d 13.76 (s, 1H), 10.06 (s, 1H), 8.78 (d, 1H), 8.23 (d, 1H), 7.64 (dd, 1H), 7.62 (dd, 1H), 7.51 (d, 1H), 7.46 (ddd, 1H), 7.22 (d, 1H), 7.10 (t, 1H), 6.99 (d, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.7-3.2 (m, 8H). EM: m/z 431 [MH+]. Otros compuestos se prepararon mediante el Método 1 Tabla 1 létodo 2: Etapa 1: Síntesis de morfoIin-4-il-[3-(1H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il)-fenilo]-metanona. Una mezcla de 5-bromo-1 H-pirazolo[3,4-b]piridina (1.50 g, 7.57 mmol), ácido 3-(morfolin-4-carbonil)fenilborónico (2.136 g, 9.09 mmol) y tetraquis(trifen¡lfosfina)paladio(0) (435 ml, 0.376 mmol) en dimetoxietano (8 ml) y solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (8 ml) se irradió en un Personal Chemistry Optimizer a 175°C durante 60 min. La mezcla de reacción cruda se distribuyó entre diclorometano y una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. La fase acuosa después se extrajo con diclorometano, y entonces el acetato de etilo y las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y concentraron proporcionando una espuma de color vede pálido que contiene 80% de morfolin-4-il-[3-(1 H-pi razolo[3,4-b] piri di n-5-il)-f en il]-m etanona (2.30 g, 80%o rendimiento) y 20% de óxido de trifenilfosfina. 1H-RMN (500 MHz, d6-DMSO) d 13.75 (s, 1H), 8.87 (d, 1H), 8.54 (d, 1H), 8.21 (d, 1H), 7.85 (m, 1H), 7.77 (m, 1H), 7.58 (t, 1H), 7.41 (m, 1H).

Etapa 2: Síntesis de [3-(3-yodo-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il)-fenilo]-morfolin-4-il-metanona. Se disolvieron morfolin-4-il-[3~(1 H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il)-feniloj-metanona (2.30 g, 80%> pura, ~6 mmol) y N-yodosuccinimida (2.50 g, 11.1 mmol) en dicloroetano (180 ml). La mezcla se agitó bajo condiciones de reflujo durante 5 h, después se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con diclorometano. La solución se lavó con solución acuosa saturada de tiosulfato de sodio (1x) y después con una solución acuosa saturada de bromuro de sodio (2x), se secó sobre sulfato de sodio, filtró y concentró. El residuo resultante se lavó con éter (80 ml) y se secó proporcionando [3~(3-yodo-1 H-pirazol o [3, 4-b] pirid in-5-i l)-f en i l o] -morf o l i n-4-i I- metan ona como un polvo de color beige (2.881 g, 88% rendimiento durante las dos etapas). 1H-RMN (500 MHz, d6-DMSO) d 14.19 (s, 1H), 8.92 (d, 1H), 8.14 (d, 1H), 7.91 (m, 1H), 7.83 (m, 1H), 7.59 (ddd, 1H), 7.44 (dt, 1H), 3.75-3.35 (m, 8H).

Etapa 3: Síntesis de morfolin-4-il-{3-[3-(1 H-pirazol-4-il)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il]-fenil}-metanona. Una mezcla de [3-(3-yodo-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il)-fenilo]-morfolin-4-iI-metanona (25 mg, 58 µmol), aducto diclormetano de 1 ,1 '-bis(d¡fenilfosfino)ferrocenopaladio(ll)-dicloruro (5 mg, 6 µmol) y ácido 1 H-pirazol-4-ilborónico (11 mg, 98 µmol) en acetonitrilo (2 ml) y solución 2 M de carbonato de sodio (1 ml) se irradió en un Personal Chemistry Optimizer a 175°C durante 30 min. La mezcla de reacción cruda se diluyó con agua (1 ml) y acetato de etilo (3 ml) y la fase orgánica separada, se filtró y concentró. La mezcla cruda resultante entonces se purificó mediante CLAR de fase inversa activada por masa utilizando un gradiente de acetonitrilo en agua que contiene 0.1% de ácido fórmico proporcionando la morfolin-4-il-{3-[3-(1 H-pirazol-4-il)-1 H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il]-fenil}-metanona (6.2 mg, 29%> rendimiento) como un polvo incoloro. 1H-RMN (500 MHz, de-DMSO) d 13.59 (s, 1H), 13.17 (s, 1H), 8.87 (d, 1H), 8.73 (d, 1H), 8.60 (s, amplio, 1H), 8.17 (s, amplio, 1H), 7.95 (ddd, 1H), 7.89 (t, 1H), (t, 1H), 7.59 (t, 1H), 7.43 (ddd, 1H), 3.80-3.35 (m, 8H). EM: m/z 397 [MNa+], 375 [MH+].

Otros compuestos se prepararon mediante el Método 2: Tabla 2 Método 3: Etapa 1: Síntesis de {3-[3-yodo-1-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il]-fenil}-morfolin-4-il-metanona.

A una solución de [3-(3-yodo-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il)-fenilo]-morfolin-4-il-metanona (2.12 g, 4.88 mmol) en DMF anhidro (30 ml) se agregó hidruro de sodio (60% en aceite mineral, 750 mg, 30 mmol) a 0-5°C. La mezcla se agitó durante unos minutos antes se agregó cloruro trimetilsililetoximetilo (2.0 ml, 11 mmol) gota a gota a la misma temperatura. La mezcla se agitó a 0°C a temperatura ambiente durante 4 horas y después se enfrió a 0-5°C y se enfrió rápidamente por la adición de metanol. La suspensión resultante entonces de distribuyó entre agua, solución de cloruro amonio acuosa saturada y éter. La fase acuosa se extrajo tres veces con éter y las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y concentraron. El producto crudo entonces se purificó mediante cromatografía en gel de sílice utilizando un gradiente de acetato de etilo en hexanos proporcionando {3-[3-yodo- 1-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il]-fenil}-morfolin-4-il-metanona como una espuma de color beige-marrón (1.806 g, 66%) mediante 1H-RMN, el producto se identificó como morfolin-4-il-{3-[2-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-2H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il]-fenil}-metanona). 1H-RMN (500 MHz, d6-DMSO) d 9.08 (d, 1H), 8.29 (d, 1H), 8.01 (m, 1H), 7.95 (t, amplio, 1H), 7.69 (t, 1H), 7.55 (d, amplio, 1H), 5.88 (s, 2H), 3.71 (t, 2H), 3.85-3.45 (m, 8H), 0.94 (t, 2H), -0.2 (s, 9H). EM: m/z 565 [MNa+], 537 [MH+], 447 [MH+-(Me3Si(CH2)2O)].

Etapa 2: Síntesis de {3-[3-(2-metoxi-piridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il]-fenil}-morfolin-4-il-metanona. Una mezcla de {3-[3-yodo-1-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-1 H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il]-fenil}-morfolin-4-il-metanona (33 mg, 66%o puro, 38 µmol), aducto diclormetano de 1,1'-bis(difenilfosfino)ferrocenopaladio(ll)-dicloruro (5 mg, 6 µmol) y ácido 3-trifluorometilfenilborónico (14 mg, 92 µmol) en acetonitrilo (2 ml) y solución 2 M de carbonato de sodio (1 ml) se irradió en un Personal Chemistry Optimizer a 175°C durante 20 min. La mezcla de reacción cruda se diluyó con solución acuosa saturada de bromuro de sodio (1 ml) y acetato de etilo (4 ml) y la fase orgánica separada, se adsorbió en sílice y se purificó mediante cromatografía en gel de sílice instantánea utilizando un gradiente de acetato de etilo en hexanos proporcionando {3-[3-(2-metoxi-piridin-3-il)-1-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-1 H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il]-fenil}- morfolin-4-il-metanona (24 mg, 116% rendimiento) como un residuo de color blanquecino. EM: m/z 568 [MNa+], 546 [MH+], 428 [MH+-(Me3Si(CH2)2O)].

Este residuo se disolvió en THF (2 ml) y los tamices moleculares a 4 A activados se agregaron a la mezcla. El fluoruro de tetra-ll-butilamonio en THF (solución 1 M, 0.5 ml, 0.5 mmol) se agregó y la mezcla se agitó a 70°C durante 26 h. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se agregó 1 ml de resina de intercambio catiónico (Amberlyst, Na+-forma) y la mezcla se agitó durante 40 min. La resina y los tamices entonces se filtraron, lavaron con diclorometano y metanol y el filtrado obtenido se concentró. Ei residuo se disolvió en acetato de etilo y purificó mediante cromatografía instantánea en gel de sílice utilizando un gradiente de acetato de etilo que contiene 15% (v/v) de metanol en acetato de etilo. El fracciones del producto se combinaron, concentraron y purificaron mediante CLAR de fase inversa activada por masa utilizando un gradiente de acetonitrilo en agua que contiene 0.1% de ácido fórmico proporcionando {3-[3-(2-metoxi-piridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il]-fenil}-morfolin-4-il-metanona (3.2 mg, 20% rendimiento) como un sólido incoloro. 1H-RMN (500 MHz, d6-DMSO) d 14.01 (s, 1H), 8.91 (d, 1H), 8.51 (d, 1H), 8.31 (dd, 1H), 8.11 (dd, 1H), 7.87 (ddd, 1H), 7.80 (t, 1H), 7.59 (t, 1H), 7.43 (dt, 1H), 7.18 (dd, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.70-3.35 (m, 8H). EM: m/z 416 [MH+]. Otros compuestos se prepararon mediante el Método 3: Tabla 3 létodo 4: Etapa 1: Síntesis de N,N-dimetil-3-(5-(3-(morfolin-4-carbonil)fenil)-1-((2-(tr?metilsílil)etoxi)metil)-1 H -pirazol o [3, 4-b]piridin-3-il)benzamida. Una mezcla de (3-(3-yodo-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1 H-pírazolo[3,4-b]piridin-5-il)fenil)(morfolino)metanona (50 mg, 0.089 mmol), ácido 3-(dimetilcarbamoil)fenilborónico (34 mg, 0.177 mmol), complejo [1 , 1 -bis(d ifen i lfosfino)ferrocen o] dicloropaladio (I I) con diclorometano (3.6 mg, 0.0045 mmol) y carbonato de sodio (solución acuosa 2M, 0.134 ml, 0.267 mmol) en acetonitrilo (1 ml) se calentó en un Personal Microwave a 90°C durante 30 min. La mezcla resultante se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo. Las capas orgánicas se combinaron, secaron sobre sulfato de sodio, filtraron y concentraron a sequedad. La purificación en cromatografía en gel de sílice del producto crudo proporcionó N,N-dimetil-3-(5-(3-(morfolina-4-carbonil)fenil)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi) metil)- 1 H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-il)benzamida como un aceite claro. EM: m/z 586.2 [M + H+]. Etapa 2: Síntesis de N,N~dimet¡l-3-(5-(3-(morfolin-4-carbonil)fenil)-1H- pi razolo[3,4-b]pirid i n-3-i I) benzamida. Una solución de N,N-dimetil-3-(5-(3-(morfolin~4-carbonil)fenil)- 1 -((2-(tri meti Is i lil) etoxi) metil)- 1 H-pirazolo[3, 4-b]piridin-3-il)benzamida en 5% de ácido perclórico en ácido acético (1 ml) se agitó durante 1 h a temperatura ambiente. La solución de bicarbonato de sodio saturada entonces se agregó a la solución lentamente hasta un pH ~ 8 y la mezcla se agitó durante 24 horas a temperatura ambiente. Entonces se utilizó acetato de etilo par la extracción y las capas orgánicas se combinaron, secaron sobre sulfato de sodio, filtraron y concentraron a sequedad. La purificación por CLAR de fase inversa activada por masa produjo N,N-dimetil-3-(5-(3-(morfolin-4-carbonil)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-il)benzamida (7.4 mg, 18% rendimiento durante las dos etapas) como sólidos de color amarillo claro. 1H-RMN (500 MHz, CDCI3) d 2.99 (s, 3H), 3.10 (s, 3H), 3.46 (amplio, 2H), 3.61 (amplio, 2H), 3.76 (amplio, 4H), 7.40 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.52 (m, 2H), 7.64 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.98 (m, 2H), 8.62 (s, 1H), 8.85 (amplio, 1H). EM: m/z 456.1 (M + H+). Otros compuestos se prepararon mediante el Método 4: Las condiciones en la Etapa 2 pueden variar para los compuestos en la siguiente tabla. A veces el sodio carbonato puede necesitarse en vez de de bicarbonato de sodio y la reacción varias veces durante 30 minutos en 24 horas. Tabla 4 létodo 5: Etapa 1: Síntesis del 3-(1 H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il)benzoato de metilo. Una mezcla de 5-bromo-1 H-pirazolo[3,4-b]piridina (2.00 g, 10.10 mmol), ácido 3-(metoxicarbonil)fenilborónico (2.20 g, 12.12 mmol), bicarbonato de sodio (2.2 g, 6.00 mmol), y tetraquis(trifenilfosfina)paladio(0) (0.250 g, 0.202 mmol) en dioxano/agua (40 ml/10 ml) se agitó a 110°C durante 15 horas. La mezcla entonces se vertió en agua helada y se extrajo con acetato de etilo (3X). Las capas orgánicas se combinaron, secaron sobre sulfato de sodio, filtraron y concentraron a sequedad. La cromatografía en gel de sílice del producto crudo produjo 3-(1H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il)benzoato de metilo (8) (1.65 g, 65% rendimiento) como sólidos de color amarillo. EM: m/z 254.0 (M + H+). Etapa 2: Síntesis de 3-(3-yodo-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il)benzoato de metilo. A una solución de 3-(1 H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-ii)benzoato de metilo (1.65 g, 6.52 mmol) en dicloroetano (40 ml) se agregó NIS (1.81 g, 8.04 mmol) y la mezcla se agitó a 70°C durante 6 horas. El solvente se eliminó mediante presión reducida y el producto crudo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice produciendo 3-(3-yodo-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il)benzoato de metilo (9) (988 mg, 40% rendimiento). EM: m/z 379.9 (M + H+). Etapa 3: Síntesis del ácido 3-(3-yodo-1-((2- (trimetilsilil)etoxi)metil)-1H- pirazolo[3,4-b]pirid i n-5-i I) benzoico. A una solución de 3-(3-yodo-1 H-pirazolo[354-b]piridin-5-il)benzoato de metilo (988 mg, 2.61 mmol) en DMF se agregó hidruro de sodio (60% en aceite mineral, 525 mg, 13.03 mmol) a -40°C. La mezcla se agitó durante 60 minutos antes se agregó SEMCI (920 µl, 5.22 mmol). La reacción se calentó a temperatura ambiente y se enfrió rápidamente con metanol y agua. Entonces se utilizó ácido acético para ajustar el pH a 4-5. La mezcla después se extrajo con acetato de etilo (3x) y las capas orgánicas se combinaron, secaron sobre sulfato de sodio, filtraron y concentraron a sequedad. La purificación en cromatografía en gel de sílice del producto crudo resultante produjo ácido 3-(3-yodo-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1 H-pirazolo[3,4-b]piridín-5-il)benzo¡co (200 mg, 15% rendimiento) como sólidos. EM: m/z 517.9 (M + Na+). Etapa 4: Síntesis de (4-(2-(dimetilamino)etil)piperazin-1-il)(3-(3-yodo-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il)fenil)metanona. Una mezcla de ácido 3-(3-yodo-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)- 1 H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il)benzoico crudo (200 mg, 0.404 mmol), N,N-dimetil-2-(piperazin-1-il)etanamina (76 mg, 0.485 mmol), hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (185 mg, 0.485 mmol), trietilamina (0.700 ml, 0.485 mmol) y en DMF (2 ml) se agitó a 90°C en un Personal Microwave durante 1 hora. Entonces se agregó agua a la mezcla y se extrajo con acetato de etilo (3x). Las capas orgánicas se combinaron, secaron sobre sulfato de sodio, filtraron y concentraron a sequedad. La cromatografía en gel de sílice del producto crudo produjo (4-(2-(dimetilamino)etil)piperazin-1-il)(3-(3-yodo-1-((2-(trimetilsilil)etoxi) metil)-1 H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il)fenil)metanona (110 mg, 43% rendimiento) como sólidos de color blanquecino. EM: m/z 635.1 (M + H+). Etapa 5: Síntesis de (4-(2-(dimetilamino)etil)piperazin-1-il)(3-(3-(5-fluoro-2-metoxifenil)~1-((2-(trimetiIsiliI)etoxi)metil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il)fenil)metanona.

Una mezcla de (4-(2-(dimetilamino)etil)piperazin-1-il)(3-(3-yodo-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazolo[3,4~b]piridin-5-il)fenil)metanona (50 mg, 0.079 mmol), ácido 5-fluoro-2-metoxifenilborónico (20 mg, 0.118 mmol), complejo [1,1-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio(ll) con diclorometano (7.9 mg, 0.10 mmol) y carbonato de sodio (solución acuosa 2M, 0.119 ml, 0.237 mmol) en acetonitrilo (1 ml) se calentó en un Personal Microwave a 90°C durante 30 min. La mezcla resultante se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo. Las capas orgánicas se combinaron, secaron sobre sulfato de sodio, filtraron y concentraron a sequedad. La cromatografía en gel de sílice purificación del producto crudo proporcionó (4-(2-(dimetilamino)etil)piperazin-1-il)(3-(3-(5-fluoro-2-metoxifenii)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il)fenil)metanona como un aceite de color amarillo claro. EM: m/z 633.3 (M + H+). Etapa 6: Síntesis de (4-(2-(dimetilamino)etil)piperazin-1-il)(3-(3-(5-f I uoro-2 -metoxif enil )-1 H-pirazol o[3,4-b]pirid i n-5-il)fenil)metanona. Una solución de (4-(2-(dimetilamino)etil)piperazin-1-il)(3-(3-(5-fluoro-2-metoxifenil)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1 H -pirazol o [3,4-b]piridin-5-il)fenil)metanona de la Etapa 5 en 5% de ácido perclóríco en metanol (1 ml) se agitó durante 45 minutos a temperatura ambiente. La solución de hidróxido de sodio (2M) entonces se agregó a la solución lentamente hasta pH - 8. Entonces se utilizó acetato de etilo para la extracción y las capas orgánicas se combinaron y concentraron a sequedad, las cuales se redisolvieron en metanol (1 ml) y carbonato de sodio (2M, 1 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas antes de diluirse con agua y extraerse con acetato de etilo (3x). Las capas orgánicas se combinaron, secaron sobre sulfato de sodio, filtraron y concentraron a sequedad. La purificación por CLAR de fase inversa activada por masa produjo (4-(2-(d ¡meti la ino) etil) piperazin- 1-il) (3-(3-(5-flu oro-2-metoxifenil)-1 H-pi razo lo [3,4-b]piridin-5-il)f eni l) metan ona (25.6 mg, 64% rendimiento del 12) como sólidos de color blanco. 1H-RMN (500 MHz, CD3OD) d 2.42 (s, 6H), 2.49 (amplio, 2H), 2.59 (m, 4H), 2.69 (m, 2H), 3.54 (amplio, 2H), 3.81 (amplio, 2H), 3.85 (s, 3H), 7.17 (m, 2H), 7.40 (dd, J = 3.0, 9.5 Hz, 1H), 7.44 (d, amplio, J = 7.5 Hz, 1H), 7.59 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.72 (amplio, 1H), 7.77 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.39 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.80 (d, J = 2.5 Hz, 1H). EM: m/z 503.2 (M+H+).

Etapa 1: Síntesis de (3-(3-(2,6-dimetoxifenil)-1-((2- (trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il)fenil)(4~(2- (dimetilamino)etil)piperazin-1-il)metanona.

Una mezcla de (4-(2-(dimetilamino)etil)piperazin-1-il)(3-(3-yodo-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il)fenil)metanona (50 mg, 0.079 mmol), ácido 2,6-dimetoxifenilborónico (22 mg, 0.118 mmol), tetraquis(trifenilfosfino)paladio (0) (9.1 mg, 0.10 mmol) y carbonato de sodio (solución acuosa 2M, 0.119 ml, 0.237 mmol) en acetonitrilo (1 ml), fue calentada en un horno de microondas Personal a 120°C por 30 minutos. La mezcla resultante fue diluida con agua y extraída con acetato de etilo. Las capas orgánicas fueron combinadas, secadas sobre sulfato de sodio, filtradas y concentradas hasta un estado seco. La purificación por cromatografía de gel de sílice del producto crudo produjo (3-(3-(2,6-dimetoxifenil)-1-((2- (trimetilsilil)etoxi)metil)-1 H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il)fenil)(4-(2-(dimetilamino)etil)piperazin-1-il)metanona como un aceite claro. EM: m/z 645.3 (M + H+).

Etapa 2: Síntesis de (3-(3-(2,6-dimetoxifenil)-1 H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il)fenil)(4-(2-(dimetilamino)etil)piperazin-1-il)metanona Una solución de (3-(3-(2,6-dimetoxifenil)-1-((2-(tri meti I sil i I) etoxi) met i I)- 1 H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il)fenil)(4-(2- (dimetilamino)etil)piperazin-1-il)metanona. en 5% de ácido perclórico en ácido acético (1 ml) se agitó durante 45 minutos a temperatura ambiente. Una solución de hidróxido de sodio (2M) entonces se agregó a la solución lentamente hasta pH - 8. Después se utilizó acetato de etilo para la extracción y las capas orgánicas se combinaron y concentraron a sequedad, las cuales después se redisolvieron en metanol (1 ml) y carbonato de sodio (2M, 1 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas antes se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo (3x). Las capas orgánicas se combinaron, secaron sobre sulfato de sodio, filtraron y concentraron a sequedad. La purificación por CLAR de fase inversa activada por masa produjo (3-(3-(2,6-dimetoxifenil)-1 H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il)fenil)(4-(2-(dimet¡lamino)etil)piperazin-1-il)metanona (22.70 mg, 56% rendimiento mediante las dos etapas) como sólidos de color blanco. 1H-RMN (500 MHz, CD3OD) d 2.48 (amplio, 2H), 2.52 (s, 6H), 2.60 (m, 4H), 2.69 (m, 2H), 3.51 (amplio, 2H), 3.74 (s, 6H), 3.80 (amplio, 2H), 6.80 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.43 (m, 2H), 7.56 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.75 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.09 (d, J = 2 Hz, 1H), 8.81 (d, J = 2 Hz, 1H). EM: m/z 515.2 (M + H+).

Otros compuestos se prepararon mediante el Método 6: Las condiciones en la Etapa 2 pueden variar para los compuestos en la siguiente tabla. A veces el carbonato de sodio puede necesitarse en vez de bicarbonato de sodio y la reacción varias veces de 30 minutos a 24 horas.

Tabla 5 * Condiciones de acoplamiento de Suzuki de la Etapa 1: 150°C, 1h, µw. ** Condiciones de acoplamiento de Suzuki de la Etapa 1: 120°C, 1h, µw. *** Condiciones de acoplamiento de Suzuki de la Etapa 1: Pd2(dba)3, K3PO4, y diciclohexilfenilfosfina, CH3CN, 150°C, 4h, µw.

Método 7: Etapa 1: Síntesis de etiléster del ácido 5-[3-(2-metoxi-fenil)-1-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il]-nicotínico. Una mezcla de ácido 3-etoxicarbonil-3-piridilborónico (529 mg, 1.91 mmol), aducto diclormetano de 1,1'-bis(difenilfosfino)ferrocenopaladio(ll)-dicloruro (66 mg, 0.09 mmol) y 5-bromo-3-yodo-1-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-1 H- pirazol o [3,4-bjpiridina (780 mg, 1.80 mmol) acetonitrilo (5 ml) y solución acuosa 2 M de carbonato de sodio (5 ml) se agregaron y la mezcla se irradió en un Personal Chemistry Optimizer a 90°C durante 30 minutos. La mezcla de reacción cruda se distribuyó entre acetato de etilo y agua. La fase acuosa se extrajo tres veces con acetato de etilo y las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtró y concentró. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice instantánea utilizando un gradiente de acetato de etilo en hexanos proporcionando etiléster del ácido 5-[3-(2-metoxi-fenil)-1-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-1 H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il]-nicotínico (552 mg, 61% rendimiento) como un aceite de color amarillo. 1H-RMN (500 MHz, de-DMSO) d 9.24 (d, 1H), 9.12 (d, 1H), 9.03 (d, 1H), 8.60 (t, 1H), 8.56 (d, 1H), 7.66 (dd, 1H), 7.51 (ddd, 1H), 7.25 (dd, 1H), 7.12 (dt, 1H), 5.88 (s, 2H), 4.40 (q, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.71 (t, 2H), 1.37 (t, 3H), 0.87 (t, 2H), -0.073 (t, 9H). EM: m/z 505 [MH+]. Etapa 2: Síntesis de ácido 5-[3-(2-metoxi-fenil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il] -nicotínico. A una solución de etiléster del ácido 5-[3-(2-metoxi-fenil)-1-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-1 H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il]-nicotínico (494 mg, 0.98 mmol) en THF (20 ml) se agregó fluoruro de tetra-n-butilamonio en THF (1M, 10 ml, 10 mmol) y tamices moleculares a 4 A activados. La mezcla resultante se agitó a 70°C durante 7 h. Los tamices se filtraron, lavaron con acetato de etilo y el filtrado resultante se concentró. El residuo se distribuyó entre diclorometano y agua. La fase acuosa se extrajo tres veces con diclorometano y las fases orgánicas se combinaron, secaron sobre sulfato de sodio, filtraron y concentraron proporcionando el ácido 5-[3-(2-metoxi-fenil)-1 H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il]-nicotínico (654 mg, 62% de pureza, 405 mg, 119% rendimiento) como un sólido de color marrón. 1H-RMN (500 MHz, d6-DMSO) d 13.98 (s, 1H), 8.99 (d, 1H), 8.95 (s, 1H), 8.88 (d, 1H), 8.43 (t, 1H), 8.40 (d, 1H), 7.67 (dd, 1H), 7.47 (ddd, 1H), 7.23 (d, 1H), 7.10 (dt, 1H), 3.86 (s, 3H). EM: m/z 345 (96%) [M-H-]. Etapa 3: Síntesis de {5-[3-(2-metoxi-fenil)-1H-pirazolo[3,4-b]pir¡din-5-il]- piridin-3-il}-pirrolidin-1-il-metanona. Se disolvió ácido (5-[3-(2-metoxi-fenil)-1 H-pirazolo[3,4- b]piridin-5-il]-nicotínico (350 mg, 62% puro, 0.63 mmol) en DMF anhidro (20 ml) a 50-60°C y la solución se enfrió a temperatura ambiente cuando se agregó resina de PS-HOBt (Argonaut Technologies) (0.9 mmo g"1 de carga, 2.20 g, 1.98 mmol), DMAP (32 mg, 0.26 mmol) y EDCl (375 mg, 1.95 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. La resina se filtró, lavó seis veces con DMF y posteriormente tres veces con éter y se secó. La resina y (5-[3-(2-m etoxi -feni I) -1 H-pirazol o[3,4-b]pirid i n-5-il]-nicotinato) (460 mg, carga teórica 105 µmol) se suspendieron en DMF anhidro (3 ml) que contienen pirrolidina (110 µl, 1.3 mmol) y se agitaron durante 22 h. La resina se filtró, lavó con diclorometano, éter y DMF. El filtrado y lavados se combinaron y concentraron. El residuo resultante se purificó mediante CLAR de fase inversa activada por masa utilizando un gradiente de acetonitrilo en agua que contiene 0.1% de fórmico ácido proporcionando {5-[3-(2-metox¡-fenil)-1 H-pi razolo[3,4-b] piri din-5-il]-piri din-3-il}-pirro I id i n-1 -ilmetanona (2.4 mg, 6 µmol, 6% rendimiento) como un sólido de color marrón claro. 1H-RMN (500 MHz, d6-MeOH) 58.98 (d, 1H), 8.87 (d, 1H), 8.74 (d, 1H), 8.50 (d, 1H), 8.31 (t, 1H), 7.67 (dd, 1H), 7.48 (ddd, 1H), 7.21 (d, 1H), 7.11 (dt, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.65 (t, 2H), 3.58 (t, 2H), 2.02 (m, 2H), 1.96 (m, 2H). EM: m/z 400 [MH+].

Otros compuestos se prepararon mediante el Método 7: Tabla 6 *inicio sintetizado de ácido 3-[3-(2-metoxi-fenil)-1 H-pirazolo[3,4-jb]piridin-5-il]-benzoico y purificado por cromatografía instantánea en gel de sílice usando un gradiente de 20% v/v de metanol en acetato de etilo en hexanos **¡nicio sintetizado de ácido 3-[3-(2-metoxi-fenil)-1 H-pirazolo[3,4- 6]piridin-5-il]-benzoico Método 8: Etapa 1 : Síntesis de [4-(2-dimetilamino-etil)-piperazin-1 -il]-{3-[3-(2-metoxi-fenil)-1 H-pirazolo[3,4-Jb]piridin-5-il]-fenil}-metanona. Ácido 3-[3-(2-metoxi-fenil)-1 H-pirazolo[3,4-j ]piridin-5-il]-benzoico (338 mg, 0.79 mmol) y hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1 -il)- ?/,?/, ?/', ?/'-tetrametiluronio (300 mg, 0.79 mmol) se disolvieron en una mezcla de 20 ml de acetonitrilo y 10 ml de metanol. Se agregó 1 31 mg (0.83 mmol) de 1 -(2-dimetilaminoetil)-piperazina y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 6 h. La mezcla que resultaba se distribuyó entre diclorometano y una solución acuosa 2 M de carbonato de sodio. Las fases se separaron y la capa acuosa se extrajo tres veces con diclorometano. Las capas orgánicas combinadas se combinaron, lavaron con una solución acuosa saturada de bromuro de sodio, secaron sobre sulfato de sodio, y se evaporaron. El material crudo se purificó por cromatografía instantánea en gel de sílice usando un gradiente graduado de acetato de etilo y una mezcla de solvente 4:4: 1 de acetato de etilo, diclorometano y metanol que contiene 2% v/v de 35% p de amoníaco en agua para producir afford [4-(2-dimetilamino-etil)-piperazin-1 -il]-{3-[3-(2-metoxi-fenil)-1 H-pirazolo[3,4-j 3piridin-5-il]-fenil}-metanona (160 mg, 42%) como un aceite. 1 H-RMN (d6-CDCI3) d 8.87 (d) [1 H], 8.36 (d) [1 H], 7.75 (dd) [1 H], 7.68 (t) [1 H], 7.67 (m) [1 H], 7.53 (m) [1 H], 7.46 (mt) [1 H], 7.42 (md) [1 H], 7.13 (dt) [1 H], 7.1 0 (d) [1 H], 3.89 (s) [3H], 3.81 -3.86 (m) [2H], 3.48-3.55 (m) [2H] , 2.58- 2.64 (m) [2H], 2.56 (m) [2H], 2.50 (m) [2H], 2.44-2.52 (m) [2H]. EM: m/z 485 (M+H+). Método 9: Etapa 1 : Síntesis de 5-bromo-3-yodo-1 -(2-metoxi-etoximetil)-1 H-pirazolo[3,4-b] piridina. A una solución de 5-bromo-3-yodo-1 H-pirazolo[3,4-b]piridina (470 mg , 1 .45 mmol), 60% de hidruro de sodio en aceite mineral (1 04 mg, 4.35 mmol) y yoduro de tetra-n-butilamonio (1 34 mg, 0.36 mmol) en DMF (10 ml) se agregó cloruro de metoxietoximetilo (248 µl, 2.18 mmol) a temperatura ambiente y la mezcla se agitó durante 4 h a la misma temperatura y posteriormente se enfrió rápidamente mediante la adición de metanol. La mezcla después se distribuyó entre éter y salmuera y la capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y concentró. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea en gel de sílice usando un gradiente de acetato de etilo en hexanos para producir 5-bromo-3-yodo-1 -(2-metoxi-etoximetil)-1 H-pirazolo[3,4-ó]piridina (254 mg, 0.69 mmol, 74% de producción) como un sólido sin color (mezcla 1:1 con regioisómero 5-bromo-3-yodo-2-(2-metoxi-etoximetil)-1 H-pirazol o[3, 4-bjpiridina). 1H-RMN (500 MHz, d6-DMSO) isómero A (50%) d 8.75 (d, 1H), 8.29 (d, 1H), 5.78 (s, 1H), 3.61-3.63 (m, 2H), 3.37-3.39 (m, 2H), 3.17 (s, 3H); isómero B (50%) d 8.74 (d, 1H), 8.28 (d, 1H), 5.77 (s, 1H), 3.61-3.63 (m, 2H), 3.37-3.39 (m, 2H), 3.16 (s, 3H). Etapa 2: Síntesis de 5~bromo~1-(2-metoxi-etlioximetil)-3-(2-metoxi-f en i I )-1 H-pi razo lo[3,4-j ] piridina.

Una mezcla de 5-bromo-3-yodo-1-(2-metoxi-etoximetil)-li7-pirazolo[3,4-bjpiridina (180 mg, 0.44 mmol), aducto de diclormetano de 1,1'-bis(difenilfosfíno)ferrocenpaladio(ll)-dicloruro (18 mg, 25 µmol) y ácido 2-metlioxifenilboronico (82 mg, 0.51 mmol) en acetonitrilo (3 ml) y solución acuosa 2 M de carbonato de sodio (3 ml) en un recipiente sellado se agitó a 60°C durante 2 h. La mezcla cruda se distribuyó entre acetato de etilo y salmuera. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3x) y las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y concentraron. El producto crudo entonces se purificó por cromatografía instantánea en gel de sílice usando un gradiente de acetato de etilo en hexanos para producir 5-bromo-1-(2-metoxi-etoximetil)-3-(2-metoxi-fenil)-1 H-pirazolo[3,4-b]piridina (80 mg, 0.2 mmol, 46% de producción) como un aceite de color amarillo 1H-RMN (500 MHz, d6-DMSO) d 8.70 (d, 1H), 8.40 (d, 1H), 7.62 (dd, 1H), 7.49 (ddd, 1H), 7.22 (d, 1H), 7.09 (dt, 1H), 5.85 (s, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.68-3.70 (m, 2H), 3.39-3.41 (m, 2H), 3.18 (s, 3H). EM: m/z 316, 318 [MH+].

Etapa 3: Síntesis de ácido 3-[3-(2-metoxi-fenil)-1 H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il]-benzoico. Una mezcla de 5-bromo-3-yodo-1 /2-(2-metoxi-etoximetil)-1 H-pirazolo[3,4-b]piridina (560 mg, 1..36 mmol, mezcla de regioisóomeros), ácido 2-metoxifenilboronico (217 mg, 1 .4 mmol) y aducto de diclormetano de 1 , 1 '-bis(difen¡lfosfino)ferrocenpaladio(ll)-dicloruro (50 mg, 68 µmol) en acetonitrilo (4 ml) y solución acuosa 2 M de carbonato de sodio (2 ml) se agitó en un recipiente sellado a 70°C durante 1 05 minutos. El producto crudo entonces se distribuyó entre acetato de etilo y agua. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3x) y las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y concentraron para producir 5-bromo-1 -(2-metoxi-etoximetil)-3-(2-metoxi-fenil)-1 H-pirazolo[3,4-6]piridina (780 mg , 75% puro, 1 .12 mmol, 82% de producción) como un aceite oscuro crudo. 1 H-RMN (500 MHz, d6-DMSO) d 8.70 (d, 1 H), 8.40 (d, 1 H), 7.62 (dd, 1 H), 7.49 (ddd, 1 H), 7.22 (d, 1 H) , 7.09 (dt, 1 H), 5.85 (s, 2H) , 3.85 (s, 3H), 3.68-3.70 (m, 2H), 3.39-3.41 (m , 2H), 3.1 8 (s, 3H). EM: m/z 316, 31 8 [MH+].

Una mezcla de aceite crudo anterior (1 .12 mmol), ácido 3-carboxifenilboronico (259 mg (1 .56 mmol) y aducto de diclormetano de 1 , 1 '-bis(difenilfosfino)ferrocenpaladio(l l)-dicloruro (54 mg, 75 µmol) en acetonitrilo (5 ml) y solución acuosa 2 M de carbonato de sodio (5 ml) se irradió en un Personal Chemestry Optimizer a 165°C durante 20 minutos. El producto crudo se diluyó con acetonitrilo y la fase orgánica se separó y concentró. El residuo se disolvió en hidróxido de potasio en agua (10% p/v, 15 ml), se lavó con acetato de etilo (3x) y filtró a través de ceiite. El filtrado entonces se acidificó a pH 3-4 mediante la adición de ácido hidroclórico acuoso concentrado y el precipitado se recolectó. Entonces se agregó diclorometano al precipitado, al material insoluble se filtró y el filtrado se concentró para producir ácido 3-[1 -(2-metoxi-etoximetil)-3-(2-metoxi-fenil)-1 H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il]-benzoico (369 mg , 0.85 mmoi, rendimiento 57 %) como sólido oscuro. 1 H-RMN (500 MHz, d6-DMSO) d 8.95 (d, 1 H), 8.42 (d, 1 H) , 8.26 (t, 1 H), 8.02 (dt, 1 H), 7.98 (dt, 1 H) , 7.68 (dd, 1 H), 7.64 (t, 1 H), 7.51 (ddd, 1 H), 7.25 (d, 1 H), 7.12 (dt, 1 H), 5.91 (s, 2H), 3.87 (s, 3H)S 3.73-3.75 (m, 2H), 3.43-3.45 (m , 2H), 3.21 (s, 3H). EM: m/z 432 [M-H"].

El sólido resultante se disolvió en diclorometano y se agregaron PS-tiofenol (Argonaut Technologies) (1 .4 mmol-g"1 , 1 .2 g, 1 .7 mmol) y ácido trifluoroacético (6 ml). La mezcla resultante se agitó suavemente a 50°C durante 8.5 h. La resina se filtró y lavó con diclorometano y éter. Los filtrados combinados se concentraron y distribuyeron entre una solución saturada de bicarbonato de sodio y diclorometano. La fase acuosa se lavó tres veces con diclorometano y después se acidificó a pH 3-4 mediante la adición de ácido clorhídrico concentrado. La fase acuosa resultante se extrajo tres veces con acetato de etilo. Las fases de acetato de etilo combinadas se lavaron con salmuera, secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y concentraron para producir ácido 3-[3-(2-metoxi-fenil)-1 H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il]-benzoico (1 1 7 mg, 0.34 mmol, 40% de producción, 25% durante las tres etapas) como un sólido de color amarillo. 1H-RMN (500 MHz, d6-DMSO) d 8.87 (d, 1H), 8.37 (d, 1H), 8.24 (t, 1H), 8.02 (dt, 1H), 7.98 (dt, 1H), 7.68 (dd, 1H), 7.64 (t, 1H), 7.47 (ddd, 1H), 7.23 (d, 1H), 7.11 (dt, 1H), 3.86 (s, 3H). EM: m/z 346 [MH+].

Etapa 4: Síntesis de {3-[3-(2-metoxi-fenil)-1H-pirazolo[3,4-fc]piridin-5-il]-fenil}-(4-metil-piperazin-1-il)-metanona. A una solución de ácido 3-[3-(2-metoxi-fenil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il]-benzoico (25 mg, 72 µmol) en DMF anhidro (1.5 ml) se agregó resina PS-DCC (Argonaut Technologies) (180 mg, 0.22 mmol, 1.21 mmol-g"1) y N-metilpiperazina (9.6 µl, 86 µmol). La mezcla resultante se agitó a 60°C durante 16 h. La resina se filtró, lavó con diclorometano y éter y el filtrado se concentró. El residuo se disolvió en diclilorometano y se trató con una resina de PS-trisamina (Argonaut Technologies) (20 mg). La resina se eliminó nuevamente por filtración y se lavó con diclorometano y éter. El filtrado se concentró y el producto crudo resultante se purificó por CLAR de fase inversa activada por masa usando un gradiente de acetonitrilo en agua que contiene 0.1% de ácido fórmico para producir {3-[3-(2-metoxi-fenil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il]-fenil}-(4-metil-piperazin-1-il)-metanona (1.7 mg, 4.0 µmol, 6% de producción). 1H-RMN (500 MHz, d6-DMSO) d 8.87 (d, 1H), 8.37 (d, 1H), 8.24 (t, 1H), 8.02 (dt, 1H), 7.98 (dt, 1H), 7.68 (dd, 1H), 7.64 (t, 1H), 7.47 (ddd, 1H), 7.23 (d, 1H), 7.11 (dt, 1H), 3.86 (s, 3H). EM: m/z 346 [MH+]. Otros compuestos preparados por el método 9: Tabla 7 Etapa 1 : Síntesis de metiléster de ácido 3-[1 -(2-metoxi-etoximetil)-3-(2-metoxi-f en i l)-1 H-pi razo lo[3,4-o]piridin-5-i I] -benzoico.

Una mezcla de 5-bromo-1 -(2-metoxi-etlioximetil)-3-(2-metoxi-fenil)-1 H-pirazolo[3,4-i ]piridina (535 mg, 1 .36 mmol), ácido 3-metoxicarbonilfenilboronico (258 mg, 1 .43 mmol) y aducto de diclormetano de 1 , 1 '-bis(difenilfosf¡no)ferrocenpaladio(ll)-dicloruro (50 mg, 68 µmol) en acetonitrilo (7 ml) y solución acuosa 2 M de carbonato de sodio (7 ml) se irradió en un Personal Chemestry Optimizer a 90°C durante 1 0 minutos. La mezcla resultante se distribuyó entre acetato de etilo y agua. La fase acuosa se extrajo dos veces con acetato de etilo y las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y concentraron. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea en gel de sílice usando un gradiente de acetato de etilo y hexanos para producir metiléster de ácido 3-[1-(2-metoxi-etoximetil)-3-(2-metoxi-fenil)-1H-pirazolo[3,4- £>]piridin-5-il]-benzoico (612 mg, 1.36 mmol, 100% de producción) como un aceite de color amarillo. 1H-RMN (500 MHz, d6-DMSO) d 8.96 (d, 1H), 8.43 (d, 1H), 8.28 (t, 1H), 8.07 (td, 1H), 7.99 (td, 1H), 7.67-7.69 ( , 2H), 7.51 (ddd, 1H), 7.25 (d, 1H), 7.12 (dt, 1H), 5.92 (s, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.87 (s, 3H), 3.73-3.75 (m, 2H), 3.43-3.45 (m, 2H), 3.21 (s, 3H). EM: m/z 372 [MH+]. Etapa 2: Síntesis de metiléster de ácido 3-[3-(2-metoxi-fenil)-1H-pirazolo[3,4-Jb]piridin-5-il]-benzoico. Una solución de metiléster de ácido 3-[1-(2-metoxi-etoximetil)-3-(2-metoxi-fenil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il]-benzoico (573 mg, 1.28 mmol) en diclorometano (25 ml) se enfrió por bajo de a 0-5°C y se agregó boro trifluoruro eterato (0.8 ml, 6.4 mmol). La mezcla se calentó lentamente a temperatura ambiente y se agitó durante 16 h. El precipitado de color amarillo formado se filtró para producir metiléster de ácido 3-[3-(2-metoxi-fenil)-1 H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il]-benzoico (110 mg, 0.29 mmol; 23% de producción). 1H-RMN (500 MHz, d6-DMSO) d 8.88 (d, 1H), 8.39 (d, 1H), 8.27 (t, 1H), 8.06 (td, 1H), 7.99 (td, 1H), 7.65-7.68 (m, 2H), 7.48 (ddd, 1H), 7.23 (d, 1H), 7.11 (dt, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.87 (s, 3H). EM: m/z 360 [MH+]. Etapa 3: Síntesis {3-[3-(2-metoxi-feniI)-1H-pirazolo[3,4-b]píridín-5-il]-fenil}-pirrolidin-1-il-metanona. 3-[3-(2-metoxi-fenil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il]-benzoico metiléster de ácido (30 mg, 83 µmol) se disolvió en pirrolidina (0.35 ml, 4.15 mmol) y la mezcla se agitó a 90°C durante 16 h. La mezcla entonces se concentró y el producto crudo se purificó por cromatografía instantánea en gel de sílice usando un gradiente de 10% v/v de metanol en acetato de etilo para producir {3-[3-(2-metoxi-fenil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il]-feniI}-pirrolidin-1-il-metanona como un sólido de color amarillo (22 mg, 55 µmol, 67% de producción). 1H-RMN (500 MHz, d6-MeOH) d 8.82 (d, 1H), 8.39 (d, 1H), 7.83 (t, 1H), 7.79 (td, 1H), 7.66 (dd, 1H), 7.55-7.59 (m, 2H), 7.48 (ddd, 1H), 7.20 (d, 1H), 7.11 (dt, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.63 (t, 2H), 3.52 (t, 2H), 2.02 (m, 2H), 1.92 (m, 2H). EM: m/z 399 [MH+]. Método 11: Etapa 1: Síntesis {2-hidroxi-5-[3-(2-metoxi-fenil)-1H-pirazolo[3,4-?]piridin-5-il]-piridin-3-il}-morfolin-4-il-metanona. 122 mg (0.25 mmol) de 3-(2-metoxi-fenil)-5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-1 H-pirazolo[3,4-ójpiridina, 150 mg (0.52 mmol) de (5-bromo-2-fluoro-piridin-3-il)-morfolin-4-il-metanona, y 15 mg (18 µmol) de aducto de diclormetano de 1,1'-bis(difenilfosfino)ferrocenpaladio(ii)-d¡cloruro en un recipiente Smith. 2 ml de acetonitrilo, 1 ml de agua y 1 ml de una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio se agregaron y la mezcla resultante se irradió en un Personal Chemestry Optimizer a 1 00°C durante 30 minutos. El residuo resultante se distribuyó entre diclorometano y una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo dos veces con diclorometano. Las fases orgánicas se combinaron, secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y concentraron. El producto crudo entonces se purificó por cromatografía instantánea en gel de sílice usando un gradiente de acetato de etilo que contiene 15% v/v de metanol y hexanos para producir 1 37 mg de un aceite de color beige. El aceite se disolvió en 24 ml de una mezcla 1 : 1 de dimetoxietano y ácido clorhídrico acuoso concentrado. La mezcla se calentó a 55°C durante 1 h y después se neutralizó mediante la adición de bicarbonato de sodio. La mezcla resultante se distribuyó entre acetato de etilo y agua y la fase acuosa se extrajo tres veces con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, secaron sobre sulfato de sodio y se evaporaron. El material crudo se purificó por CLAR de fase inversa activado por masa usando un gradiente de acetonitrilo en agua que contiene 0.1 % de ácido fórmico para producir 12.3 mg (28 µmol, 1 1 % de producción) de {2-hidroxi-5-[3-(2-metoxi-fenil)-1 H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il]-piridin-3-il}-morfolin-4-il-metanona como un sólido blanquecino durante la liofilización. 1 H-RMN (500 MHz, d6-DMSO) d 13.79 (s, 1 H), 12.25 (s, 1 H), 8.77 (d, 1 H), 8.26 (d, 1 H) , 8.00 (d, 1 H), 7.94 (d, 1 H), 7.62 (dd, 1 H), 7.46 (ddd, 1 H), 7.22 (d, 1 H), 7.09 (ddd, 1 H), 3.83 (s, 3H), 3.7-3.2 (m, 8H). EM: m/z 432 [MH+].

Método 12: Etapa 1 : Síntesis de (2-amino-5-bromo-fenil)-morfolin-4-il-metanona. En un recipiente con tapón roscado de 8 ml se agregó anhídrido 5-bromoisatóico (0.200 g, 0.826 mmol), THF anhidro (5 ml), y morfolina (101 mg, 1 .16 mmol) . El recipiente se selló y colocó en un bloque de calor a 60°C durante 1 .5 h, después de lo cual se concentró al vacío. El producto crudo se trituró con Et2O/hexanos para producir 1 1 1 mg (94 %) de (2-Amino-5-bromo-fenil)-morfolin-4-il-metanona como un sólido marrón oscuro, m/z 285/287 [MH+]. Etapa 2: Síntesis de {2-amino-5-[3-(2-metoxi-fenil)-1 H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il]-fenil}-morfolin-4-il-metanona.

En un recipiente de reacción por microondas Personal Chemestry de 5 ml se agregó 3-(2-metoxi-feníl)-5-(4,4,5,5-tetrametil-[1 ,3,2] dioxaborolan-2-il)-1 -(2-trimetilsilanil-etoximetil)-1 H-pirrolo[2,3-b]piridina (0.0498 g , 0.1 03 mmol), (2-amino-5-bromo-fenil)-morfolin-4-il-metanona (0.0378 g, 0.132 mmol), aducto de diclorometano de 1 , 1 '-bis(difenilfosfino)ferrocenpaladio(l l)-dicloruro (13.4 mg, 0.017 mmol), acetonitrilo (1 ml) y NaHCO3 acuoso saturado (1 ml). El recipiente se selló, purgó con N2, e irradió en un Personal Chemestry Optimizer a 90°C durante 5 minutos. Las capas se separaron, y la fase acuosa se extrajo 3X con EtOAc. La fase orgánica combinada se trató con salmuera, secó (Na2SO ), filtró y concentró. El producto crudo se disolvió en 5 ml de una solución que consistió de 1 parte de HCIO4 (70%, ACS) y 20 partes de ácido acético glacial, y la solución se agitó a ta durante 8 h. La mezcla de reacción se concentró al vacío, y se neutralizó a pH 7 con NaHCO3 saturado seguido por NaHCO3 sólido. La mezcla de reacción enfriada rápidamente se dividió entre EtOAc y agua, las capas se separaron, y la fase acuosa se extrajo 2X con EtOAc. La fase orgánica combinada se trató con salmuera, secó (Na2SO4), filtró y concentró. La purificación por CL activada por masa (modo positivo, ESI) a través de una columna de fase inversa C-1 8 (Thomson Instruments Co. ODS-A 100A, 5µ, 50 x 21 .3 mm , eluyendo en 20 ml/min con acetonitrilo (que contiene 0.1 % de ácido fórmicos) y agua (que contiene 0.1 % de ácidos fórmicos) en un gradiente 5-95% , produjo el compuesto de título, el cual durante la liofilización apareció como un aceite viscoso marrón (12.9 mg, 29%). 1H-RMN (500 MHz, d6-DMSO) d 13.71 (br. s, 1 H), 8.74 (d, J=2.0 Hz, 1 H), 8.16(d, J=2.0 Hz, 1 H), 7.62(d, J=7.5 Hz, 1 H), 7.49(dd, J=2.5, 8.0 Hz, 1 H), 7.45(m, 1 H), 7.37(d, J=2.0 Hz, 1 H), 7. 20 (d, J= 8.0 Hz, 1 H), 7.08(t, J=8.5 Hz, 1 H) , 6.81 (d, J=8.0 Hz, 1 H), 5.37(s, 2H) , 3.83 (s, 3H), 3.60 (m, 4 H), 3.49(m , 4 H); EM: m/z 430.1 [MH+].

Otros ejemplos preparados por el método 12: Tabla 8 Método 13: Etapa 1 Síntesis de ácido 2-[3-(2-metoxi-fenil)-1 H-pirazoIo[3,4-b]piridiii-5-il]-tiazole-5-carboxílico. En un recipiente de reacción por microondas Personal Chemistry de 20 ml se agregó 3-(2-metoxi-fenil)-5-(4,4,5, 5-tetrametil-[1 ,3,2]dioxaborolan-2-il)-1 -(2-trimetilsilanil-etoximetil)-1 H-pirrolo[2,3- bjpiridina (0.4992 g, 1 .038 mmol), metiléster de ácido 2-bromo-tiazol-5-carboxílico (0.2592 g, 1 .167 mmol), aducto de diclorometano de 1 , 1 '-bis(difenilfosfino)ferrocenpaladio(ll)-dicloruro (95.4 mg, 0.1 17 mmol), acetonitrilo (5 ml) y 2M de Na2CO3 acuoso (5 ml). El recipiente se selló, purgó con N2, e irradió en un Personal Chemestry Optimizer a 130°C durante 30 minutos. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se acidificó con ácido acético a pH 5. Las capas se separaron, y la fase acuosa se extrajo 5X con EtOAc. La fase orgánica combinada se trató con salmuera, secó (Na2SO4), filtró y concentró. El producto crudo se disolvió en 10 ml de una solución que consistió de 1 parte de HCIO4 (70%, ACS) y 20 partes de ácido acético glacial, y la solución se agitó a ta durante 4 h. La mezcla de reacción se concentró al vacío, y se neutralizó a pH 7 con NaHCO3 saturado seguido por NaHCO3 sólido. La mezcla de reacción enfriada rápidamente se dividió entre EtOAc y agua, las capas se separaron, y la fase acuosa se extrajo 2X con EtOAc. La fase acuosa después se acidificó a pH 4 con ácido acético y se extrajo 5X con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se trataron con salmuera, secaron (Na2SO4) , filtraron y concentraron. La trituración con Et2O produjo el compuesto de título como un polvo verdoso-marrón (0.296 g, 81 % de producción). 1 H-RMN (500 MHz, d6-DMSO) d 13.73 (br. s, 1 H), 9.1 6 (s, 1 H), 8.71 (s, 1 H), 8.40(s, 1 H), 7.68(d, J=8.0 Hz, 1 H), 7.48 (t, J=8.0 Hz, 2H), 7.24 (d, J=8.0 Hz, 1 H), 7.1 0 (t, J=7.5 Hz IH), 3.87 (s, 3H); EM: m/z 353.1 [MH+]. Otros ejemplos preparados por el método 13: Tabla 9 Métqdq l 4 Etapa 1 : Síntesis de 3-Bromo-N,N-dimeti!-bencensulfonamida.

En un recipiente de centelleo de 20 ml se agregaron cloruro de 3-bromobencensulfonilo (0.301 g, 1 . 179 mmol) y piridina anhidra (5 ml). Se agregó gota a gota una solución 2M de dimetilamina en THF (1 .0 ml, 2.0 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a ta bajo N2 durante 5 h después de lo cual se concentró al vacío. El residuo crudo fue dividido entre EtOAc y ácido cítrico 1 M. Se separaron las capas, y la fase orgánica se lavó 3x con ácido cítrico 1 M , después se trató con salmuera, secado (Na2SO4), filtró y concentró. La trituración con Et2O proporcionó 3-bromo-N, N-dimetil-bencensulfonamida como un polvo blanco (0.297 g, 96%). EM: m/z 263.9/265.9 [MH+]. Etapa 2: Síntesis de 3-[3-(2-metoxi-feniI)-1 H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-iI]-N,N-dimetil-bencensulfonamida. En un recipiente de reacción por microondas Personal Chemestry de 5 ml se agregaron 3-(2-metoxi-fenil)-5-(4,4,5,5-tetrametil- [1 ,3,2]dioxaborolan-2-íl)-1 -(2-trimetilsilanil-etoximetil)-1 H-pirrolo[2,3-b]piridina (0.0496 g , 0.103 mmol), 3-bromo-N, N-dimetil-bencensulfonamida (0.0417 g, 0.143 mmol), aducto de diclorometano de 1 , 1 '-bis(difen ilfosfino)ferrocenepaladio(ll)-dicloruro (1 3.9 mg, 0.017 mmol) , acetonitrilo (1 mL) y NaHCO3 acuoso saturado (1 ml). El recipiente fue sellado, purgado con N2, e irradiado en un Personal Chemestry Optimizer a 90°C durante 1 5 minutos. Se separaron las capas, y la fase acuosa se extrajo 3X con EtOAc. La fase orgánica combinada con salmuera se trató, secó (Na2SO4) , filtró y concentró. El producto crudo se disolvió en 5 ml de una solución que consiste de 1 parte de HCIO4 (70%, ACS) y 20 partes de ácido acético glacial, y se agitó la solución a ta durante 1 h. La mezcla de reacción se concentró al vacío, y neutralizada a pH 7 con NaHCO3 saturado seguido por NaHCO3 sólido. La mezcla de reacción enfriada rápidamente se dividió entre EtOAc y agua, se separaron las capas, y la fase acuosa se extrajo 2X con EtOAc. La fase orgánica combinada se trató con salmuera, secó (Na2SO4), filtró y concentró. Purificación por CL activada por masa (modo positivo, ESI) a través de una columna de fase inversa C-1 8 (Thomson Instrument Co. ODS-A 100A, 5 µ, 50 x 21 .3 mm), elusión a 20 ml/min con acetonitrilo (que contiene 0.1 % de ácido fórmico) y agua (que contiene 0.1 % de ácido fórmico) en un gradiente 5-95% producido como el compuesto de título, que durante la lisofilización tuvo el aspecto de un polvo amarillo claro (1 0.4 mg, 25%). 1 H-RMN (500 MHz, d6-DMSO) d= 13.91 (br. s, 1 H), 8.92 (d, J=2.0 Hz, 1 H) , 8.44 (d, J=2.0 Hz, 1 H), 8.12 (m, 1 H), 8.01 (br.s, 1 H), 7.76 (m, 2H), 7.67 (dd, J=2.0, 7.5 Hz, 1 H), 7. 45 (m, 1 H), 7.22 (d, J=8.0 Hz, 1 H), 7.09 (t, J=8.0 Hz, 1 H) , 3.85 (s, 3H) 2.66 (s, 6H); EM: m/z 409.1 [MH+]. Otros compuestos preparados por el método 14: Tabla 10 Método 15: Etapa 1 : Síntesis de ácido 3-[3-(2-metoxi-fenil)-1 H-pirazolo[3,4-6] piridin-5-i I] -benzoico. A una solución de 5-bromo-3-(2-metoxi-fenil)-l-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-1 H-pirazolo[3,4-b]piridina (997 magnesio, 2.30 mmol) en acetonitrilo (15 ml) y NaHCO3 acuoso saturado (1 0 ml) en un recipiente para microondas se agregó ácido 3-carboxifenilboronico, pinacol éster (625 mg , 2.52 mmol) y [1 , 1 '-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II), complejo con diclorometano (1 : 1 ) (94 mg, 0.12 mmol). El recipiente se tapó, enjuagó con N2, evacuó al vacío, y calentó en un microondas a 90°C durante 1500 segundos. El acetonitrilo se eliminó vía evaporación giratoria. Se agregó acetato de etilo y después se separó de la capa acuosa. La capa orgánica fue de color marrón oscuro y la CL/EM mostró que el producto permaneció en esta capa. El concentrado se redujo a un aceite marrón oscuro y se redisolvió en 5% de ácido perclórico en solución de ácido acético (10 ml). La solución de la reacción se agitó 4.5 horas a temperatura ambiente. El ácido perclórico se eliminó vía evaporación giratoria y después se agregó acetato de etilo y H2O. Se agregó el polvo de bicarbonato de sodio agregado hasta pH = 3. La capa orgánica se separó, secó sobre Na2SO , y concentró al vacío para producir un polvo marrón (580 mg, producción del 62%). 1H RMN (500 MHz, d6-DMSO) d 13.81 (br s, 1H), 8.81 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.31 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.95 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 7.90 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 7.59 (m, 2H), 7.41 (t, J= 7.0 Hz, 1H), 7.17 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.04 (t, J= 7.5 Hz, 1H), 3.80 (s, 3H). EM: m/e 346.1 (M + H+).

Etapa 2: Síntesis de {3-[3-(2-metoxi-fenil)-1H-pirazolo[3,4-6]piridin-5-il]-fenil}-(4-pirimidin-2-il-piperazin-1-il)-metanona A una solución de ácido 3-[3-(2-metoxi-fenil)-1H-pirazolo[3,4-j ]piridin-5-il]-benzoico (18 mg, 0.05 mmol) en DMF (1 ml) se agregó HATU (20 mg, 0.05 mmol) y 1-(2-pirimidil)piperazina (11 ul, 0.08 mmol). La solución de reacción se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente. El producto crudo se extrajo en acetato de etilo y lavó con H2O. La capa orgánica se secó sobre Na2SO , filtró, y adsorbió sobre gel de sílice. La purificación por cromatografía instantánea con un gradiente de acetato de etilo (que contiene 10% de MeOH) y hexanos, produjo el compuesto de título como un polvo de color blanco (7.2 mg, 28% de rendimiento). 1H RMN (500 MHz, CD3OD) d 8.85 (d, J= 2 Hz, 1H), 8.42 (d, J= 2 Hz, 1H), 8.35 (d, J= 4.5 Hz, 2H), 7.83 (d, J= 8 Hz, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.64 (m, 2H), 7.50 (m, 2H), 7.20 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.11 (t, J= 8 Hz, 1H), 6.64 (t, J= 4.5 Hz, 1H), 3.96 (br s, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.86 (br s, 4H), 3.60 (br s, 2H). EM: m/z 492.1 (M+H+).

Otros compuestos hechos por el método 15: Tabla 11 Método 16: Etapa 1 : Síntesis de 5-bromo-3-(2-metoxi-fenil)-1 H-pirazolo[3,4-6]pir¡dina.

A una solución de 5-bromo-3-(2-5-bromo-3-(2-metoxi-fenil)-fenil)-1 -(2-trimetilsilanil-etoximetil)-1 H-pirazolo[3,4-ó]piridina (260 mg, 0.60 mmol) en TF (3 ml) se agregó fluoruro de tetrabutilamonio (6 ml de 1 M en solución de THF, 6.00 mmol) y tamices moleculares. La solución se calentó a reflujo (70°C) durante 4 horas sin agitación. La solución se enfrió a temperatura ambiente y acidificó a pH = 5 agregando gota a gota una solución diluida de ácido acético en MeOH. La solución se filtró y el filtrado se concentró vía evaporación giratoria. El material se extrajo en EtOAc y se lavó 3X con H2O. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y el concentrado se redujo para producir 5-bromo-3-(2-metoxi-fenil)-1 H-pirazolo[3,4-£>]pirid¡na como un sólido anaranjado (177 mg, 97% de producción). EM: m/z 303.9, 305.9 [M+H+]. El material se utilizó directamente en la etapa 2 sin purificación adicional.

Etapa 2: Síntesis de 4-[3-(2-metoxi-fenil)-1 H-pirazolo[3,4-£»] pirid i n-5-il]-N -meti I -benzamida A una solución de 5-bromo-3-(2-metoxi-fenil)-1 H-pirazolo[3,4-D]piridina (26 mg , 0.085 mmol) en acetonitrilo (1 ml) y NaHCO3 acuoso saturado (1 ml) en un recipiente para microondas se agregó ácido 4-(N-metilaminocarbonil)fenilboronico (17 mg, 0.094 mmol) y [1 , 1 -bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio(l l), complejo con diclorometano (1 : 1 ) (3.5 mg, 0.004 mmol). El recipiente se tapó, enjuagó con N2, evacuó al vacío, y calentó en un microondas a 1 30°C durante 1 800 segundos. El material se extrajo en EtOAc y la capa orgánica se secó sobre Na2SO . El material se adsorbió sobre SiO2 y purificado por cromatografía instantánea en un gradiente de EtOAc (que contiene 1 0% de MeOH) y hexano. Las fracciones limpias se concentraron vía la evaporación giratoria para producir el compuesto de título como polvo de color blanco (5.9 mg, 20% de producción). 1 H RMN (500 MHz, CD3OD) d 8.85 (s, 1 H), 8.41 (s, 1 H), 7.94 (d, J= 8.5 Hz, 2H), 7.78 (d, J= 8.5 Hz, 2H), 7.67 (d, J= 7.5 Hz, 1 H), 7.48 (t, 7.0 Hz, 1 H), 7.21 (d, J = 8.5 Hz, 1 H), 7.1 1 (t, J= 7.0 Hz, 1 H), 3.89 (s, 3H), 2.95 (s, 3H). EM: m/z 359.1 [M + H+].

Otros compuestos preparados por el método 16: Tabla 12 Método 17: Etapa 1 : Síntesis de 3-(2-metoxi-fenil)-5-(3-pirrolidin-1 -ilmetil-fenil)-1 H- pirazolo[3,4-?] piridina. A una solución de 3-[3-(2-metoxi-fenil)-1 -(2-tpmetilsilanil-etoximetil)-1 H-pirazolo[3,4-ó]piridin-5-il]-benzaldehído (23 mg , 0.050 mmol) y pirrolidina (5 ul, 0.082 mmol) en dicloetano 1 .5 ml se agregó 3 ul de AcOH. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos, y después a la mezcla se agregó trioxiacetilborohidruro de sodio (22 mg, 0.10 mmol) en una porción. La reacción continuó a temperatura ambiente durante otras 2 hrs, la mezcla entonces se concentró a reflujo para producir el producto SEM, que se trató con una solución de perclorato al 5% en ácido acético (2 ml) a temperatura ambiente durante 1 hr. Los solventes se evaporaron, el residuo se neutralizó con polvo de bicarbonato de sodio y después se purificó por cromatografía instantánea en gel de sílice usando acetato de etilo, después una mezcla de EtOAc/DCM/MeOH/NH4OH (4/4/1 /0.05) para producir 3-(2-metoxi-f enil)-5-(3-pirrolidin-1 -i I meti l-f enil)-1 H-pirazol o[3, 4-¿>]piridina (8.50 mg, producción del 44%) como sólido de color blanco. 1 H RMN (500 MHz, CD3OD) d 1 .89 (d, J= 3 Hz, 4H), 2.76 (d, J =1 .5 Hz, 4H), 3.89 (s, 2H), 3.9 (s, 2H), 7.1 1 (t, J = 1 Hz, 1 H), 7.22 (d, J= 8 Hz, 1 H), 7.42 (t, J= 7 Hz, 1H), 7.47 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 7.48 (d, J =2 Hz, 1H), 7.51 (d, J =2.5 Hz, 1H), 7.65 (t, J= 6.75 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 8.39 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 8.83 (d, J= 2 Hz, 1H). EM: m/z 385 [MH+]. Otros compuestos preparados por el método 17: Tabla 13 Etapa 1 : Síntesis de 5-bromo-S-trimetils?lanilet¡nil-pirazin-2-ilamina. A una solución de 3,5-dibromo-pirazin-2-ilamina (3.00 g, 1 1 .86 mmol) en DMF (35 ml) se agregó trietilamina (1 6 ml), después tetrakistrifenilfina paladio (0) (685 mg, 0.59 mmol) y yoduro de cobre (I) (271 mg, 1 .42 mmol) se agregaron secuencialmente. Finalmente se agregó gota a gota trimetilsililacetileno (2.0 ml, 14.3 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 120°C durante 30 minutos y después se adsorbió directamente sobre gel de sílice. La purificación por cromatografía instantánea en gel de sílice con un gradiente de acetato de etilo/hexano, produjo el compuesto de título (2.30 g, 71 % de producción) como un aceite de color amarillo. EM: m/z 270.0/272.0 [MH+]. Etapa 2: Síntesis de N-(5-bromo-3-trimetilsilaniletinil-pirazin-2-il)-acetamida. A una solución de 5-bromo-3-trimetilsilaniletinil-pirazin-2-ilamina (2.30 g, 8 mmol) en THF anhidro (35 ml) y piridina (1 .62 ml, 20.0 mmol) se agregó cloruro de acetilo (682 µl, 9.6 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche, y después se agitó a 60°C durante 5 horas. Los solventes se eliminaron al vacío y el residuo resultante que se purificó por cromatografía en gel de sílice con un gradiente de acetato de etilo/hexano para producir el compuesto de título (474 mg, 1 .52 mmol) como un sólido de color amarillo claro blanquecino. EM : m/z 31 1 .9/31 3.9 [MH+]. Etapa 3: Síntesis de 2-bromo-5H-pirrolo[2,3-í>]pirazina. A una solución de N-(5-bromo-3-trimetilsilaniletinil-pirazín-2-il)- acetamida (474 mg, 1 .52 mmol) en THF (4 ml) se agregó gota a gota una solución 1 M de fluoruro de tetra-n-butil-amonio en THF (3.3 ml, 3.3 mmol). Después de agitarse a reflujo durante 15 horas, la mezcla de reacción se concentró al vacío y se agregó agua. La capa acuosa se extrajo tres veces con diclorometano y los extractos combinados se absorbieron directamente en gel de sílice. La purificación por cromatografía en gel de sílice con un gradiente de acetato de etilo/hexanos produjo el compuesto de título (130 mg , 43% de producción) como un sólido de color amarillo. 1 H RMN (500 MHz, déDMSO) 12.38 (s br, 1 H), 8.38 (s, 1 H), 7.95 (d, 3.5Hz, 1 H), 6.61 (d, 3.5Hz, 1 H). EM: m/z 197.9/1 99.9 [MH+]. Etapa 4: Síntesis de 2-bromo-7-yodo-5H-pirrolo[2,3-b]pirazina.

A una solución de 2-bromo-5H-pirrolo[2,3-b]pirazina (258 mg, 1 .3 mmol) en acetona (5 ml) se agrego N-yodosuccinimida (324 mg, 1 .44 mmol) en una porción. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 45 minutos. El precipitado resultante se filtró, lavó con una cantidad mínima de acetona, y secó al vació para dar el compuesto de título como un sólido de color marrón claro. 1 H-RMN (500 MHz, d6-DMSO) d 1 2.81 (s br, 1 H), 8.40 (s, 1 H), 8.1 9 (d, 3.0Hz, 1 H). EM: m/z 323.8/325.8 [MH+].

Etapa 5: Síntesis de 2-bromo-7-yodo-5-(toluen-4-sulfonil)-5H-pirro lo [2, 3-b] pirazina. A una suspensión de 2-bromo-7-yodo-5H-pirrolo[2,3-b]pirazina (290 mg , 0.895 mmol) en THF (5 ml) se agregó NaH (60%, 43 mg, 1 .08 mmol) en una porción a 0°C. La mezcla resultante se agitó durante 20 minutos antes de agregar una solución de cloruro de para-toluensulfonilo (1 88 mg, 0.98 mmol) en THF (2 ml). La mezcla de reacción entonces se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Los solventes se eliminaron y el residuo marrón oscuro resultante se lavó con KOH acuoso, agua y se secó para producir el compuesto de título (423 mg , 99% de producción) como un sólido de color marrón claro. 1 H-RMN (500 MHz, d6-DMSO) d 8.60 (d, 1 1 .5Hz, 1 H), 7.99 (d, 1 1 .5Hz, 2H), 7.44 (d, 7.5Hz, 2H), 2.34 (s, 3H) . EM: m/z 477.8/479.8 [MH+J.

Etapa 6: Síntesis de 2-bromo-7-(2-metoxi-fenil)-5-(toluen-4-su!fonil)-5H -pirrólo [2, 3-b] pirazina. Un matraz de fondo redondo de 50 ml se cargó con 2-bromo-7-yodo-5-(toluen-4-sulfonil)-5H-pirrolo[2,3-b]pirazina (423 mg, 0.885 mmol), ácido 2-metoxifenilboronico (148 mg 0.973 mmol) y diclorobis(trifenilfosfino)paladio(l l) (31 mg , 0.04 mmol). A esta mezcla se agregó acetonitrilo (1 0 ml) y una solución acuosa 2 M de bicarbonato de sodio (5 ml). La mezcla de reacción se agitó a 40°C durante 1 hora, después a 55°C durante otra hora. La mezcla de reacción cruda se distribuyó entre acetato de etilo y una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. La fase acuosa entonces se extrajo con acetato de etilo y las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, filtraron y concentraron. El producto crudo entonces se purificó por cromatografía instantánea en gel de sílice usando un gradiente de acetato de etilo en hexanos para producir 2-bromo-7-(2-metoxi-fenil)-5-(toluen-4-sulfonil)-5H-pirrolo[2,3-b]pirazina (139 mg, 34% de producción) como un sólido de color amarillo claro; también se obtuvo 2,7-bis-(2-metoxi-fenil)-5-(toluen-4-sulfonil)-5H-pirrolo[2,3-fo]pirazina del producto de la bis-adición (21 3 mg 50% de producción) . EM: m/z 457.9/460.0 [MH+]; EM : m/z 486.1 [MH+] (producto de la bis-adición).

Etapa 7: Síntesis de ácido 3-[7-(2-metoxi-fenil)-5H-pirrolo[2,3-b]pirazin-2-i I] -benzoico. Una mezcla de 2-bromo-7-(2-metoxi-fenil)-5-(toluen-4-sulfonil)-5H-pirrolo[2,3-b]pirazina (70 mg , 0.15 mmol) , ácido 3-(4,4,5,5-tetrametil-[1 ,3,2]dioxaborolan-2-benzoico (57 mg, 0.23 mmol) y diclorobis(trifenilfosfino)paladio(l l) (5.4 mg, 0.008 mmol) en acetonitrilo (2 ml) y solución acuosa de carbonato de sodio (2 M, 2 ml) se irradió en un Personal Chemestry Optimizer a 95°C durante 20 minutos. La mezcla de reacción cruda se distribuyó entre diclorometano y una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. La fase acuosa entonces se extrajo con diclorometano y las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, filtraron y concentraron. El residuo marrón crudo entonces se disolvió en MeOH (2 ml) y se agregó 5N KOH (1 50 µl). La mezcla entonces se agitó a 40°C durante 2 horas antes de eliminar los solventes. El residuo amarillo resultante fue lavado con HCl diluido (2 ml), agua, y después secado para producir el ácido crudo del ácido 3-[7-(2-metoxi-fenil)-5H-pirrolo[2,3-b]pirazin-2-il]-benzoic, que fue utilizado directamente en la etapa 8. EM: m/z 346.0 [MH+].

Etapa 8: Síntesis de 4-(2-dimetilamino-etil)-piperazin-1 - il]-{3-[7-(2~metoxi-fenil)-5H-p¡rrolo[2,3- >]piraz¡n-2-il]-fenil}-metanona. A una mezcla de ácido 3-[7-(2-metoxi-fenil)-5H-pirrolo[2,3-b]pirazin-2-il]-benzoico (35 mg , 0.1 mmol), EDCl (77 mg , 0.40 mmol), HBTU (3.8 mg, 0.01 mmol) y diisopropiletilamina (175 µl, 1 .0 mmol) en DMF (1 ml) se agregó 2-(dimetilamino)etílpiperzina (55 µl, 0.3 mmol) . La mezcla se agitó a 70°C durante 5 horas antes de que los solventes se eliminaran. El aceite de color amarillo resultante se lavó con agua, disolvió en DMSO y purificó en CLAR de fase inversa para producir el compuesto de título (8.6 mg, 12% durante las 2 etapas) como un sólido de color amarillo. EM: m/z 485.2 [MH+]. Otros compuestos preparados por el método 18: Tabla 14 Método 1 9: Etapa 1 : Síntesis de 3-[7-(2-metoxi-fenil)-5H-pirrolo[2,3-)]pirazin-2-il]-N,N-dimetil-benzamida. Una mezcla de 2-bromo-7-(2-metoxi-fenil)-5-(toluen-4-sulfonil)-5H-pirrolo[2,3-b]pirazina (30 mg, 0.065 mmol), ácido 3-dimetilaminocarbonilfenil-boronico (25.3 mg, 0.130 mmol) y diclorobis(trifenilfosfino)paladio(ll) (2.5 mg, 0.003 mmol) en acetonitrilo (1 ml) y solución acuosa de bicarbonato de sodio (2 M, 1 ml) se irradió en un Personal Chemestry Optimizer a 90°C durante 15 minutos. La mezcla de reacción cruda se distribuyó entre diclorometano y una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. La fase acuosa entonces se extrajo con diclorometano y las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, filtraron y concentraron. El residuo marrón crudo entonces se disolvió en MeOH (5 ml), KOH 5N (50 µl) y la mezcla se agitaron a temperatura ambiente durante 75 minutos. La eliminación retiro de los solventes resulto en un residuo de color amarillo, que entonces se purificó por cromatografía instantánea en gel de sílice usando un gradiente de acetato de etilo en hexanos , después 10% de MeOH en EtOAc para producir 3-[7-(2-metoxi-fenil)-5H-pirrolo[2,3-b]pirazin-2-il]-N, N-dimetil-benzamida (13.0 mg, 54 % de producción) como un sólido de color amarillo claro. 1 H RMN (500 MHz, CD3OD) d 8.89 (m, 1 H) , 8.80 (m, 1 H), 8.40 (m , 1 H), 8.25 (m , 2H), 7.62 (m , 1 H), 7.50 (m , 1 H), 7.25 (m , 1 H), 7.1 0 (m , 2H), 3.97 (m , 3H), 3.17 (m, 3H) , 3.10 (m , 3H). EM: m/z 373.1 [MH+].

Otros compuestos preparados por el método 19: Tabla 15 Método 20: Etapa 1 : Síntesis de 2,7-bis-(2-metoxi-fenil)-5H-pirroIo[2,3-J jpirazina. A una solución de 2,7-bis-(2-metoxi-fenil)-5-(toluen-4-suIfonil)-5H-pirrolo[2,3-6]pirazina (200 mg, 0.412 mmol) en MeOH (5 ml) se agregó una solución de NaOH (66 mg, 1 .65 mmol) en agua (200 µl). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3.5 horas antes de que se eliminaran los solventes. El residuo de color amarillo resultante entonces se purificó por cromatografía instantánea en gel de sílice usando un gradiente de acetato de etilo en hexanos para producir 2,7-bis-(2-metoxi-fenil)-5H-pirrolo[2,3-jb]piraz¡na (43 mg, 32% de producción) como un sólido de color amarillo pálido. 1 H RMN (500 MHz, CD3OD) d 12.21 (s br, 1 H), 8.80 (dd, 6.0Hz, 1 .75Hz, 1 H), 8.69 (s, 1 H), 7.76(dd, 6.0Hz, 1 .75Hz, 1 H) , 7.43 (dt, 7.5Hz, 1 .75Hz, 1 H), 7.20 (m, 2H), 7.13 (m, 2H), 7.04(t, 7.3Hz, 1 H), 3.92 (s, 3H), 3.85(s, 3H) . EM: m/z 332.1 [MH+]. Método 21 : Etapa 1 : Síntesis de metiléster del ácido 5-amino-6-yodo-pírazina-1 -carboxílico. 3-amino-2-pirazinacarboxilato de metilo (1 0 g , 65.3 mmol) y N-yodosuccinimida (24 g, 106.7 mmol) se disolvieron en DMF anhidro (150 ml) y la mezcla se agitó a 70°C durante 1 5 horas bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla entonces se enfrió a temperatura ambiente y se agregó una solución acuosa saturada de tiosulfato de sodio (400 ml) . La suspensión se sónico durante 15 minutos, concentró al vacío y dispersó en agua. El producto crudo se filtró y lavó con etanol frío. El residuo se cristalizó a partir de etanol, usando el carbón decolorado para producir metiléster del ácido 3-amino-6-yodo-pirazina-2-carboxílico (1 1 .2 g , 61 % de producción) como agujas anaranjadas. 1 H RMN (d6-DMSO) d 8.57 [1 H] s, 7.59 [2H] s, br, 3.93 [3H] s. EM: m/z 280 [MH+]. Etapa 2: Síntesis del ácido 3-amino-6-yodo-piraz¡na-2-carboxílico. Metiléster del ácido 3-amino-6-yodo-pirazina-2-carboxílico (45 g , 161 mmol) se disolvió en 750 ml de THF. Se agregó 90 ml de agua y 40 ml de una solución 4 M de hidróxido de litio en agua. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas o hasta que el análisis de TLC mostró solamente el material de línea base. Se agregó una solución de 10% de ácido cítrico en agua para ajustar el pH a aproximadamente 3-4.

La mezcla se diluyó con diclorometano y se separó la fase orgánica. La capa acuosa se extrajo tres veces con diclorometano y las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio y evaporaron. El residuo se secó in vacuo para producir 37.0 g (140 mmol; 87% de producción) de ácido 3-amino-6-yodo-pirazina-2-carboxílico como un polvo de color amarillo. 1 H-RMN (d6-DMSO) d: 1 1 .70 s, débil, 8.44 [1 H] s, 7.50 [2H] s, br. EM: m/z 266 [MH+]. Etapa 3: Síntesis de metoxi-metil-am?da del ácido 3-amino-6-yodo-pirazina-2-carboxílico. Se colocaron 27.50 g (0.104 mol) de ácido 3-amino-6-yodo-pirazina-2-carboxílico, 63.0 g (0.125 mol) de PyBOP (hexafluorofosfato de l -benzotriazoliloxi-tris(pirrolidino)fosfonio) y 1 8.70 g (0.193 mol) de clorhidruro de N,O-dimetilhidroxilamina en un matraz enjuagado con nitrógeno y después se disolvieron en una mezcla de 100 ml de DMF anhidro y 27 ml de N, N-di-iso-propiletilamina. La mezcla se calentó a 80°C durante 16 horas. El solvente fue evaporado a 50-60°C bajo presión reducida para producir un aceite oscuro. El aceite fue extraído de tres a cuatro veces con 300 ml de tolueno. Las fases de tolueno se combinaron y evaporaron. El aceite resultante se purificó vía cromatografía en gel de sílice usando un gradiente de acetato de etilo en hexanos para producir 18.40 g (59.72 mmol; 58%) de metoxi-metil-amida del ácido 3-amino-6-yodo-pirazina-2-carboxílico como un sólido de color amarillo. 1 H RMN (d6-DMSO) d 8.28 [1 H] s, 6.78 [2H] s, 3.66 [3H] s, 3.25 [3H] s. EM: m/z 309 [MH+].

Etapa 4: Síntesis de (3-amino-6-yodo-pirazin-2-il)-fenil-metanona. Se disolvió 8.00 g (25.97 mmol) de metoxi-metil-amida del ácido 3-amino-6-yodo-pirazina-2-carboxílico en 100 ml de THF anhidro bajo nitrógeno. La solución se enfrió a 55°C y se agregaron 27 ml de una solución 3 M de bromuro de fenilmagnesio en éter. La mezcla se dejó calentar a 1 0°C y se agregó una solución de 1 0% de ácido cítrico en agua. La mezcla se diluyó con diclorometano y se separaron las fases. La fase acuosa se extrajo tres veces con diclorometano y las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio y se evaporaron. El sólido resultante se cristalizó a partir de etanol para producir 5.74 g (1 7.66 mmol; 68%) de (3-amino-6-yodo-pirazin-2-il)-fenil-metanona como cristales de color amarillo-naranja. 1 H-RMN (d6-DMSO) d: 8.52 [1 H] s, 7.94 [2H] s, br, 7.85 [2H] d, 7.62 [1 H] t, 7.52 [2H] t. EM: m/z 326 [MH+].

Etapa 5: Síntesis de 5-yodo-3-(2-metoxi-1-fenil-viniI)-pirazin-2-ilamina. Se disolvieron 2.52 g (12.6 mmol) de bis(trimetils¡lil)amida de potasio en 150 ml de THF anhidro bajo nitrógeno. Se agregó 3.80 g (1 1 .1 mmol) de cloruro de metoximetiltrifenilfosfonio y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 1 hora. A la mezcla resultante se agregó 2.50 g (7.69 mmol) de (3-amino-6-yodo-pirazin-2-il)-fenil-metanona y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción resultante se calentó a reflujo durante 20 horas. Después del enfriamiento la mezcla con diclorometano se diluyó y lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio en agua y se secó sobre sulfato de sodio. Se evaporó el solvente y el residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice usando un gradiente de acetato de etilo en hexanos para producir 1 .942 g (5.50 mmol; 72%) de E- y Z-5-yodo-3-(2-metoxí-1 -fenil-viniI)-pirazin-2-ilamina parcialmente resuelta como un sólido de color amarillo pálido. 1 H-RMN (de-DMSO) d: isómero A 8.12 [1 H] s, 7.33-7.26 [4H] m, 7.20 [1 H] m , 6.66 [1 H] s, 6.00 [2H] s, br, 3.81 [3H] s; isómero B 8.09 [1 H] s, 7.27 [2H] t, 7.17 [1 H] t, 7.1 1 [2H] d, 6.98 [1 H] s, 6.24 [2H] s, br, 3.76 [3H] s. EM: m/z 354 [MH+]. Etapa 6: Síntesis de 5-yodo-3-fenil-1 H-pirrolo[2,3-o]pirazina. Se dispersaron 780 mg de 5-yodo-3-(2-metoxi-1 -fenil-vinil)-pirazin-2-ilamina (forma o mezcla E-, Z-) en 40 ml de una mezcla 1 : 1 de ácido clorhídrico diluido en agua (aproximadamente 1 -2 N) y etanol. La mezcla se calentó a reflujo durante 2 horas. Se agregó hielo a la suspensión resultante y el precipitado se filtró para producir 480 mg de 5-yodo-3-fenil-1 H-pirrolo[2,3-b]pirazina como un polvo de color amarillo pálido. El filtrado se basificó mediante la adición de bicarbonato de sodio y se extrajo tres veces con diclorometano. Los extractos combinados se secaron sobre sulfato de sodio y se evaporaron. El residuo se cristalizó a partir de etanol para producir 76 mg de 5-yodo-3-fenil-1 H-pirrolo[2,3-ó]pirazina como agujas cristalinas verde-marrones para una producción combinada de 556 mg (78%). 1H-RMN (d6-DMSO) d: 12.56 [1 H] s, br, 8.53 [1 H] s, 8.46 [1 H] d, 8.14 [2H] d, 7.45 [2H] dd, 7.25 [1 H] dd. EM: m/z 322 [MH+]. Etapa 7: Síntesis de 5-(3,4-dimetoxi-fenil)-3-fenil-1 H-pi rrol o[2,3-b] pirazina. Se colocaron 50 mg (0.1 6 mmol) de 5-yodo-3-fenil-1 H-pirrolo[2,3-£>]pirazina, 38 mg (0.20 mmol) de ácido 3,4-dmietoxifenilboronico y 6 mg (5 mol %) de diclorobis(trifenilfosfino)paladio(l l) en un recipiente y se agregaron 1 ml de acetonitrilo y 1 ml de una solución acuosa 2 M de carbonato de sodio y se irradió la mezcla en un reactor de microondas Personal Chemistry® a 165°C durante 1200 seg. La mezcla resultante se distribuyó entre 15 ml de una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y 75 ml de diclorometano. Se secó la fase orgánica sobre sulfato de sodio y se evaporó. El producto crudo se purificó vía cromatografía instantánea en gel de sílice usando un gradiente de metanol en diclorometano. El producto aislado se cristalizó a partir de etanol caliente para producir 14 mg (43 µmol, 27% de producción) de 5-(3,4-dimetoxi-fenil)-3-fenil-1 H-pirrolo[2,3-b]pirazina como un polvo de color anaranjado. 1 H-RMN (d6-DMSO) d: 1 2.30 [1 H] s, 8.92 [1H] s, 8.43 [1H] s, 8.35 [2H] d, 7.80 [1H] (m), 7.79 [1H] d(m), 7.46 [2H] dd, 7.25 [1H] dd(d), 7.13 [1H] d, 3.92 [3H] s, 3.84 [3H] s. EM: m/z 332 [MH+]. Otros compuestos preparados por el método 21: Tabla 16 Método 22: Etapa 1 : Síntesis de 5-(morfolin-4-il)-3-fenil-1 H-pirrolo[2,3-J jpirazina. Se disolvió 25 mg (80 µmol) de 5-yodo-3-fenil-1 H-pirrolo[2,3-6]pirazina en 1 ml de morfoline. Se agregó 200 µl de ácido acético glacial y la mezcla se calentó en un reactor de microondas Personal Chemistry® a 250°C durante 2400-4800 seg. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea en gel de sílice sin tratamiento previo usando un gradiente de acetato de etilo en hexanos para producir 13 mg (46 µmol, 58% de producción) de 2-morfolin-4-il-7-fenil-1 H-pirrolo[2,3-¿b]p¡razina como un sólido de color beige. 1 H-RMN (d6-DMSO) d: 1 1 .89 [1 H] s, 8.1 9 [1 H] s, 8.1 8 [2H] d, 7.39 [2H] dd, 7.17 [1 H] dd, 3.80 [4H] t, 3.52 [4H] t. MS, m/z: 281 [MH+]. Tabla 17 Método 23: Etapa 1 : Síntesis de 4-(5-yodo-1 H-pirrolo[2,3-/)]pirazin-3-il)-fenol. Se dispersó 680 mg de 5-yodo-3-{2-metoxi-1 -[4-(tetrahidro-piran-2-iloxi)-fenil]-vinil}-pirazin-2-ilamina en 70 ml de ácido clorhídrico acuoso (1 -2 N) diluido. Se agregó metanol para disolver el material de inicio (1 0-20% v/v) para producir una solución clara. Se agregó 0.5 ml de ácido clorhídrico concentrado y la mezcla se calentó a reflujo durante 7 horas. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se dejó agitar durante 16 horas. La mezcla se neutralizó por la adición de bicarbonato de sodio y se agregó agua según lo necesario para mantener las sales en la solución. La mezcla resultante se extrajo cuatro veces con diclorometano y las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio y se evaporaron para producir 428 mg (1 .27 mmol, 85% de producción) de 4-(5-yodo-1 H-pirrolo[2,3-£>]pirazin-3-il)-fenol como un sólido de color anaranjado de suficiente pureza (>85%), que se puede recristalizar a partir de diclorometano-acetato de etilo para producir 1 95 mg (578 µmol, 39% de producción) de 4-(5-yodo-1 H-pirrolo[2, 3-ó]pirazin-3-il)-fenol puro como cristales de color amarillo-anaranjado. 1 H-RMN (d6-DMSO) d : 12.37 [1 H] (d), 9.43 [1 H] s, 8.49 [1 H] s, 8.26 [1 H] d, 7.92 [2H] d, 8.85 [2H] d. EM: m/z 338 [MH+].

Etapa 2: Síntesis de 4-{5-[3-metoxi-4-hidroxifenil]-1 H-pirroIo[2,3-j ]pirazin-3-iI}-fenol. Se colocaron 84 mg (0.25 mmol) de 4-(5-yodo-1 H-pirrolo[2,3-ó]pirazin-3-il)-fenol, 120 mg (0.33 mmol) de 2-[3-metoxi-4-(4-metoxi- benziloxi)-fenil]-4,4,5,5-tetrametil-[1 ,3,2]dioxaborolan y 1 5 mg (8 mol %) de diclorobis(trifenilfosfino)paladio(l l) en un recipiente y se agregaron 1 .5 ml de acetonitrilo y 1 .5 ml de una solución acuosa 2 M de carbonato de sodio. La mezcla se irradió en un reactor de microondas Personal Chemistry® a 1 65°C durante 1200 seg. La mezcla resultante se distribuyó entre diclorometano y una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. La capa acuosa se extrajo dos veces con diclorometano y las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio y se evaporaron. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea en gel de sílice usando un gradiente de acetato de etilo en hexanos. El intermediario resultante se disolvió en 120 ml de diclorometano y se agregó 1 .5 g (2.12 mmol) de PS-tiofenol (Argonaut Technologies). A esta se agregó 2 ml de ácido trifluoroacético y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La resina se filtró y lavó con diclorometano. El filtrado se lavó con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. Las fases se separaron y la capa acuosa se extrajo dos veces con acetato de etilo. Todas las fases orgánicas se combinaron, secaron sobre sulfato de sodio y se evaporaron. El residuo se calentó con acetonitrilo, se enfrió por debajo de la temperatura ambiente y se eliminó el supernadante. El residuo se secó in vacuo para producir 15 mg (45 µmol, 1 8% de producción) de 4-{5-[3-metoxi-4-hidroxifenil]-1 H-pirrolo[2,3-jb]pirazin-3-il}-fenol como un polvo de color beige. 1 H-RMN (d6-DMSO) d: 12.06 [1 H] d, 9.35 [1 H] s, 9.30 [1 H] s, 8.83 [1 H] s, 8.20 [1 H] d , 8: 12 [2H] d(m), 7.75 [1H] d, 7.65 [1H] dd, 6.93 [1H] d, 6.85 [2H] d(m), 3.91 [3H] s. MS, m/z: 334 [MH+].

Método 24 Etapa 1 : Síntesis de 3-(3-(2-metoxifenil)-1 H-pirazolo[3-4-Jb]piridin-5-il)bencimidato de metilo. El gas de HCl se burbujeó a través de una suspensión de 3-[3-(2-metox¡-f enil)- 1 -(2-tr¡metilsi lanil-etox¡met¡l)-1 H-pirazolo[3, 4-6] piridin-5-il]-beiizonitrilo (40 mg, 0, 088 mmol) en 2.5 ml de MeOH anhidro durante 3 minutos a 0°C. Después de la agitación durante 23 horas a temperatura ambiente, se agregó éter (10 ml) y ocurrió la precipitación. El sólido se recolecto después de la filtración y se secó para producir 3-(3-(2-metoxifenil)-1 H-pirazolo[3,4-ó]piridin-5-il)bencimidato de metilo como un sólido de color amarillo. Etapa 2: Síntesis de C-{3-[3-(2~metoxi-fenil)-1 H-pirazoIo[3,4-j ]piridin-5-il]-fenil}-C-morfolin-4-il-metilenamina. A una solución de 3-(3-(2-metoxifenil)-1 H-pirazolo[3,4-jb]piridin-5-il)bencimida de la etapa en MeOH (1 .0 ml) se agregó morfilina (15.3 mg, 0.176 mmol) y trietilamina (90 mg, 0.88 mmol), la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 días. El solvente entonces se eliminó y el producto crudo se purificó por CLAR de fase inversa para producir C-{3-[3-(2-metoxi-fenil)-1 H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il]-fenil}-C-morfo)in-4-il- metilenamina (3.7 mg, 10% de producción de la dos etapas) como un sólido de color blanco. 1H-RMN (500 MHz, CD3OD) d 8.86 (d, 2Hz, 1H), 8.45 (d, 2Hz, 1H), 8.37 (brs, 1H), 8.02 (m, 1H), 7.96 (t, 1.8Hz, 1H), 7.76 (t, 7.8Hz, 1H), 7.66 (dd, 1.8Hz, 7.8Hz, 1H), 7.63 (m, 1H), 7.49 (m, 1H), 7.21 (d, 8Hz, 1H), 7.12 (dt, 1Hz, 7.8Hz, 1H), 3.95 (m, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.82 (m, 2H) 3.78 (m, 2H), 3.59 (m, 2H). EM: m/z 414.1 [MH+]. Otros compuestos preparados por el método 24: Tabla 18 Bioensayos Los ensayos de cinasa conocidos por el experto en la técnica pueden utilizarse para ensayar las actividades inhibidoras de los compuestos y composiciones de la presente invención. Los ensayos de cinasa incluyen, pero no se limitan a, los siguientes ejemplos. Aunque el primero de estos ejemplos utiliza el dominio cinasa de una forma mutante de Abl T315I ("Abl T315I KD"), el ensayo de cinasa puede utilizar varias formas de enzimas mutantes y tipo silvestre, incluyendo, por ejemplo, la proteína entera, el dominio cinasa, o una porción de los mismos (por ejemplo Abl Y393F). Las cinasas utilizadas en el ensayo también pueden ser de estados de fosforilación variantes. En el ejemplo c-Abl, se utilizó una cinasa mutante en un estado de fosforilación cero. Ensayo de Enzima Acoplada de Piruvato Cinasa c-Abl/Lactato Deshidrogenasa En el ensayo acoplado a piruvato cinasa c-Abl (PK)/lactato deshidrogenasa (LDH), la proteína cinasa dependiente de la fosforilación de un péptido sustrato se acopló a la oxidación de NADH. La oxidación de NADH a NAD+ se detectó monitoreando una disminución en absorbencia de 340 nm. Materiales: péptido sustrato Abl = EAIYAAPFAKKK-OH (Biopeptide, San Diego, CA); ßNADH (Sigma Cat#N-8129, F =709.4); 2M MgCI2; amortiguador HEPES 1M, pH 7.5; Fosfoenolpiruvato (PEP) (Sigma Cat#P-7002, FW=234); Deshidrogenasa de lactato (LDH) (Worthington Biochemical Cat#2756); Piruvato Cinasa (PK) (Sigma Cat#P-9136); ATP (Sigma Cat#A-3377, FW=551); placa brillante UV de 384-pozos Greiner; y dominio cinasa T315I Abl purificado y no fosforilado. Soluciones de reserva: 10 mM de NADH (7.09 mg/ml en miliQH2O) fresca hecha diariamente; 10 mM de péptido sustrato Abl (13.4 mg/ml en miliQH2O) almacenado a -20°C; 100 mM de amortiguador HEPES, pH 7.5 (5 ml de reserva 1 M + 45 ml miliQH2O); 100 mM MgCI2 (5 ml de MgCI2 2M + 95 ml de dH2O); 100 mM de PEP (23.4 mg/ml en dH2O) almacenado a -20°C; 10 mM de ATP (5.51 mg/ml en dH2O) almacenado a -20°C (diluyendo 50 µl en un total de 10 ml de miliQH2O diariamente = 50µM de ATP reservas de trabajo ); 1000 U/ml de PK (varios U/mg con lote) N2 líquido bajo congelamiento instantáneo y almacenado a -80°C; y 1000 U/ml de LDH (varios U/mg con lote) N2 líquido bajo congelamiento instantáneo y almacenado a -80°C. Preparación del Ensayo Estándar para el formato de 384-pozos (50µl de reacción): 300 µM de NADH; 10 mM de MgCI2; 2 mM de PEP; 45 U/ml de PK; 60 U/ml de LDH; 200 µM de péptido sustrato de Abl; 2.5 µl compuesto de prueba (en DMSO); 2µ g/ml de dominio cinasa de Abl; 10 µM de ATP; 100 mM de amortiguador HEPES.

Controles Positivos que contienen DMSO sin compuesto de prueba. Controles Negativos que contienen 5 µl de EDTA 0.5M (50 mM en el ensayo). La forma desfosforilada mutante c-Abl T315I se utilizó en el ensayo bioquímico de rastreo. La reacción de cinasa se inició al tiempo t=0 por la adición de ATP. La actividad se midió siguiendo la pérdida dependiente de tiempo de NADH por la absorbencia espectroscópica a 340 nm. La porción lineal de la curva en progreso resultante después se analizó por la regresión lineal para conseguir la actividad en las unidades/tiempo de absorbencia, descrita como la pendiente de la mejor línea de ajuste (el tiempo moles/unidad puede calcularse utilizando el coeficiente de extinción molar para NADH a 340 nm, 6250M-1cm"1). Los datos se evaluaron utilizando la ecuación: Z'-1-[3*(s++s-)/|µ+-µ.|] (Zhang, y colaboradores, 1999 J Biomol Screening 4(2) 67- 73), donde µ significa el medio y s la desviación estándar. El subíndice señala los controles positivo o negativo. El marcador Z' para un ensayo de investigación consistente será > 0.50. El umbral normal = µ+-3*s+. Cualquier valor que caiga por debajo del umbral se designará como un "acierto". La respuesta a la dosis se analizó usando la ecuación: y=min+{(max- m¡n)/(1+10[compuesto]"logCI5o)}, donde y es la inclinación inicial observada, max=la inclinación en ausencia del inhibidor, min = la inclinación en el inhibidor infinito, y Cl50 es el [compuesto] que corresponde a 1/2 de la amplitud observada total (Amplitud = max-minuto). Para medir la modulación, activación, o inhibición de Abl KD, se agregó un compuesto de prueba al ensayo en un intervalo de concentraciones. Los inhibidores pueden inhibir la actividad de Abl KD en un Cl50 en el intervalo micromolar, intervalo nanomolar, o, por ejemplo, en el intervalo subnanomolar. Ensayos de Cinasa Adicionales Además del ensayo de c-Abl PK/LDH acoplada (anterior), los ensayos de investigación del inhibidor basado en luminiscencia homogéneos se desarrollaron para cinasas c-Abl, MET, AurA, y PDK1 (entre otras). Cada uno de estos ensayo se hizo utilizando un ensayo de depleción de ATP (Cinasa-Glo™, Promega Corporation, Madison, Wl) para cuantificar la actividad de la cinasa. El formato Cinasa-Glo™ utiliza una luciferasa termoestable para generar la señal luminiscente del ATP restante en la solución siguiendo la reacción de cinasa. La señal luminiscente se correlaciona inversamente con la cantidad de actividad de cinasa. Ensayo de la Enzima Basado en luminiscencia de cAbl Materiales: Péptido sustrato Abl = EAIYAAPFAKKK-OH (Biopeptide, San Diego, CA), ATP (sigma Cat#A-3377, FW=551), amortiguador HEPES, pH 7,5, Albúmina de suero bovino (BSA) (Roche 92423420), MgCI2, Staurosporina (Streptomyces sp. Sigma Cat#8566O-IMG), placa de fondo plano de 384 pozos Costar blanca (VWR Cat#29444-088), cinasa Abl (ver más adelante), Kinasa-Glo™ (Promega Cat#V6712). Soluciones de Reserva: 10 mM de péptido sustrato Abl (13.4 mg/ml en miliQH2O) almacenado a -20°C; 100 mM de amortiguador HEPES, pH 7.5 (5 ml de reserva 1M + 45 ml de miliQH2O); 10 mM ATP (5.51 mg/ml en dH2O) almacenado a -20°C (diluyendo 50 µl en un total de 10 ml miliQH2O diario = 50µM de reserva de trabajo de ATP); 1% de BSA (1 g de BSA en 100 ml de HEPES 0.1 M, pH 7.5, almacenado a -20°C), 100 mM de MgCI2; 200 µM de Staurosporina, reactivo 2x de Kinasa-Glo™ (hecho fresco o almacenado a -20°C). Preparación de Ensayo Estándar para el formato de 384 pozos (20 µl de reacción de cinasa, 40 µl de reacción de detección): 10 mM MgCI2; 100 µM de péptido sustrato Abl; 0.1% de BSA; 1 µl del compuesto de prueba (en DMSO); 0.4 µg/ml de dominio de cinasa Abl; ATP de 10 µM; 100 mM de amortiguador HEPES. Los controles positivos contuvieron DMSO sin compuesto de prueba. Los controles negativos contuvieron 10 µM de staurosporina. Las reacciones de cinasa se iniciaron al tiempo t=0 por la adición de ATP. Las reacciones de cinasa se incubaron a 21°C durante 30 minutos, después se agregaron 20 µl del reactivo Kinasa-Glo™ a cada pozo para enfriar rápidamente la reacción de cinasa y para iniciar la reacción de luminiscencia. Después de 20 minutos de incubación a 21°C, la luminiscencia se detectó en un luminómetro de lectura de placa. Ensayo de Enzima Basado en Luminiscencia de MET Materiales: sustrato Poly Glu-Tyr (4:1) (Sigma Cat# P-0275), ATP (Sigma Cat#A-3377, FW=551), amortiguador HEPES, pH 7.5, Albúmina de suero bovino (BSA) (Roche 92423420), MgCI2, Staurosporina (Streptomyces sp. Sigma Cat#85660-1 MG), placa de fondo plano de 384 pozos Costar blanca (VWR Cat#29444-088). Cinasa MET (ver más adelante), Kinasa-Glo™ (Promega Cat#V6712). Soluciones de Reserva: 10 mg/ml de poly Glu-Tyr en agua, almacenado a -20°C; 100 mM de amortiguador HEPES, pH 7.5 (5 ml de reserva 1M + 45 ml de miliQH2O); 10 mM de ATP (5.51 mg/ml en dH2O) almacenado a -20°C (se diluyeron 50 µl en un total de 10 ml de miliQH2O diariamente = 50 µM de reservas de trabajo ATP); 1% de BSA (1 g de BSA en 100 ml de HEPES 0.1 M, pH 7.5, almacenado a -20°C), 100 mM de MgCI2; 200 µM de Staurosporina, 2X reactivo de Kinasa-Glo™ (recién hecho o almacenado a -20°C). Preparación de Ensayo Estándar para el formato de 384 pozos (20 µl de reacción de cinasa, 40 µl de reacción de detección): 10 mM de MgCI2; 0.3 mg/ml de poly Glu-Tyr; 0.1% de BSA; 1 µl de compuesto de prueba (en DMSO); 0.4 µg/ml de cinasa MET; 10 µM de ATP; 100 mM de amortiguador HEPES. Los controles positivos contuvieron DMSO sin compuesto de prueba. Los controles negativos contuvieron 10 µM de Staurosporina. Las reacciones de cinasa se iniciaron en el tiempo t=0 por la adición de ATP. Las reacciones de cinasa se incubaron a 210°C durante 60 mín, después se agregaron 20 µl del reactivo Kinasa-Glo™ a cada pozo para enfriar rápidamente la reacción de cinasa e iniciar la reacción de luminiscencia. Después de 20 min de incubación a 21°C, la luminiscencia se detectó en luminómetro de lectura de placa. Ensayo de Enzima Basado en Luminiscencia de AurA Materiales: Péptido sustrato de Kémptido = LRRASLG (Biopeptide, San Diego, CA), ATP (Sigma Cat#A-3377, FW=551), Amortiguador HEPES, pH 7.5, 10% de Brij 35 (Calbiochem Cat#203728), MgCI2, Staurosporina (Streptomyces sp. Sigma Cat#85660-IMG), placa de fondo plano de 384 pozos Costar blanca (VWR Cat#29444-088), Cinasa AurA autofosforilada (ver más adelante), Kinasa-Glo™ (Promega Cat#V6712). Soluciones de reserva: 10 mM de péptido de Kémptido (7.72 mg/ml en agua), almacenado a -20°C; 100 mM de amortiguador HEPES + 0.015% de Brij 35, pH 7.5 (5 ml de reservas HEPES 1M + 75 µl de 10% de Brij 35 + 45 ml de miliQH2O); 10 mM de ATP (5.51 mg/ml en dH2O) almacenado a -20°C (se diluyeron 50 µl en un total de 10 ml de miliQH2O diariamente = 50 µM de reservas de trabajo ATP); 100 mM de MgCI2; 200 µM de Staurosporina, 2X de reactivo Kinasa-Glo™ (recién hecho o almacenado a -20°C). Reacción de Autofosforilación AurA: se agregaron ATP y MgCI2 a 1-5 mg/ml de AurA a las concentraciones finales de 10 mM y 100 mM, respectivamente. La reacción de autofosforilación se incubó a 21°C durante 2-3 h. La reacción se detuvo por la adición del EDTA a una concentración final de 50 mM, y las muestras congelaron instantáneamente con N2 líquido y almacenado a -80°C. Preparación de Ensayo Estándar para el formato de 384 pozos (20 µl de reacción de cinasa, 40 µl de reacción de detección): 10 mM de MgCI2; 0.2 mM de péptido de Kémptido; 1 µl de compuesto de prueba (en DMSO); 0.3 µg/ml de cinasa AurA autofosforilada; 10 µM de ATP; 100 mM de HEPES + 0.015% de amortiguador Brij. Los controles positivos contuvieron DMSO sin compuesto de prueba. Los controles negativos contuvieron 5 µM de Staurosporina. Las reacciones de cinasa se iniciaron en el tiempo t=0 por la adición de ATP. Las reacciones de cinasa se incubaron a 21°C durante 45 minutos, después se agregaron 20 µl del reactivo Kinasa-Glo™ a cada pozo para enfriar rápidamente la reacción de cinasa e iniciar la reacción de luminiscencia. Después de una incubación de 20 minutos a 21°C, la luminiscencia se detectó en un luminómetro de lectura de placa. Ensayo de Enzima Basado en Luminiscencia de PDK1 Materiales: Péptido sustrato de PDKtide = KTFCGTPEYLAPEVRREPRILSEEEQEMFRDFDYIADWC (Upstate Cat#12-401), ATP (Sigma Cat#A-3377, FW=551), Amortiguador HEPES, pH 7.5, 10% de Brij 35 (Calbiochem Cat#203728), MgCI2, Staurosporina (Streptomyces sp. Sigma Cat#85660-IMG), placa de fondo plano de 384 pozos Costar blanca (VWR Cat#29444-088), cinasa PDK1 (ser más adelante), Kinasa-Glo™ (Promega Cat#V6712). Soluciones de reserva: 1 mM de sustrato PDKtide (1 mg en 200 µl, como se suministró por Upstate), almacenado a -20°C; 100 mM de amortiguador HEPES, pH 7.5 (5 ml de reservas HEPES 1M + 45 ml de m¡MQH2O); 10 mM ATP (5.51 mg/ml en dH2O) almacenado a -20°C (se diluyeron 25 µl en un total de 10 ml de miliQH2O diariamente = 25 µ'M de reservas de trabajo de ATP); 100 mM de MgCI2; 10% de Brij 35 almacenado a 2-8°C; 200 µM de Staurosporina, 2X del reactivo Kinasa-Glo™ (recién hecho o almacenado a -20°C). Preparación de Ensayo Estándar para formato de 384 pozos (20 µl de reacción de cinasa, 40 µl de reacción de detección): 10 mM de MgCI2; 0.01 mM de PDKtide; 1 µl de compuesto de prueba (en DMSO); 0.1 µg/ml de cinasa PDK1; 5µM de ATP; 10 mM de MgCI2; 100 mm de HEPES + 0.01% de amortiguador Brij. Los controles positivos contuvieron DMSO sin ningún compuesto de prueba. Los controles negativos contuvieron 10 µM de estaurosporina. Las reacciones de la cinasa fueron iniciadas en el tiempo t=0 por la adición de ATP. Las reacciones de la cinasa fueron incubadas a 21°C durante 40 min, luego 20 µl de reactivo Kinase-Glo™ se agregaron a cada pozo para enfriar reacción de la cinasa e iniciar la reacción de luminiscencia. Después de 20 min. de incubación a 21°C, la luminiscencia fue detectada en un luminométro de lectura-placa. Preparación del Plásmido de Co-expresión Un plásmido de co-expresión fosfatasa lambda se construyó como sigue. Una estructura de lectura abierta para la cinasa Aurora se ejemplificó a partir de un Homo sapiens (human) biblioteca de ADNc HepG2 (ATCC HB-8065) por la reacción de la cadena de polimerasa (PCR) utilizando los siguientes cebadores: Cebador delantero: TCAAAAAAGAGGCAGTGGGCTTTG Cebador inverso: CTGAATTTGCTGTGATCCAGG. El producto PCR (795 pares de bases esperadas) fue gel purificado como sigue. El producto PCR se purificó mediante electroforesis en 1% de gel de agarosa en amortiguador TAE y la banda de tamaño apropiado se eliminó del gel y eluyó utilizando un kit de extracción de gel estándar. El ADN eluido se ligó durante 5 minutos a temperatura ambiente con topoisomerasa en pSB2-TOPO.

El vector pSB2-TOPO es una versión de la topoisomerasa activada, modificada de pET26b (Novagen, Madison, Wl) en donde la siguiente secuencia se ha insertado en el sitio Ndel: CATAATGGGCCATCATCATCATCATCACGGT GGTCATATGTCCCTT y la siguiente secuencia insertada en el sitio BamHI: AAGGGGGATCCTAAACTGCAGAGATCC. La secuencia del plásmido resultante, de la secuencia Shine-Dalgarno a través del sitio Ndel "original", el sitio de detención y el sitio BamHI "original" es como sigue: AAGGAGGAGATATACATAATGGGCCATCATCATCATCATCACGGTGG TCATATGTCCCTT [ORF] AAGGGGGATCCTAAACTGCAGAGATCC. La cinasa Aurora expresada que utiliza este vector tiene 14 aminoácidos agregados a la N-terminal (MetGlyHisHisHisHisHisHísGlyGlyHisMetSerLeu) y se agregaron cuatro aminoácidos a la C-terminal (GluGlyGlySer). El plásmido de co-expresión de fosfatasa después se creó insertando el gen de fosfatasa del bacteriófago lambda en el plásmido anterior (Matsui T, y colaboradores, Biochem. Biophis. Res.

Commun., 2001, 284:798-807). El gen de fosfatasa se amplificó utilizando PCR del ADN del bacteriófago lambda templado (H in DI 11 digest, New England Biolabs) utilizando los siguiente cebadores de oligonucleótido: Cebador delantero (PPfor): GCAGAGATCCGAATTCGAGCTC CGTCGACGGATGGAGTGAAAGAGATGCGC Cebador inverso (PPrev): GGTGGTGGTGCTCGAGTGCGGCCGCAA GCTTTCATCATGCGCCTTCTCCCTGTAC. El producto de PCR (744 pares de bases esperados) fue gel purificado. El ADN purificado y ADN del piásmido de no-co-expresión después se digerió con enzimas de restricción Sacl y Xhol. El plásmido y producto de PCR se digirieron después se purificó el gel y se ligaron juntos durante 8 h a 16°C con ligasa del ADN T4 y transformaron en células Top 10 utilizando los procedimientos estándares. La presence del gen de fosfatasa en el plásmido de co- expresión se confirmó por secuenciación. Para protocolos de diologia molecular estándares seguidos aquí, ver también, por ejemplo, las técnicas descritas en Sambrook y colaboradores, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, NY, 2001, y Ausubel y colaboradores, Current Protocolos in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and Wiley Interscience, NY, 1989. Este plásmido de co-expresión contiene la cinasa Aurora y los genes de fosfatasa lambda bajo control del promotor lac, cada uno con su propio sitio de unión de ribosoma. Mediante clonación la fosfatasa en el centro del sitio de clonación múltiple, corriente abajo del gen objetivo, los sitios de restricción convenientes están disponibles para subclonación de la fosfatasa en otros plásmidos. Estos sitios incluyen Sacl, Salí y EcoRI entre la cinasa y fosfatasa e HinDIII, Notl y Xhol corriente abajo de la fosfatasa. Expresión de la proteína cinasa Una estructura de lectura abierta para c-Abl se amplificó de una biblioteca de ADNc Mus musculus (ratón) preparada de hígado de ratón recientemente cosechado usando un kit disponible comercialmente (Invitrogen) por PCR utilizando los siguientes cebadores: Cebador delantero: GACAAGTGGGAAATGGAGC Cebador inverso: CGCCTCGTTTCCCCAGCTC. El producto de PCR (846 pares bajos esperados) se purificó de la mezcla de reacción de PCR usando un kit de limpieza de PCR (Qiagen). El ADN purificado se ligó durante 5 minutos a temperatura ambiente con la topoisomerasa en pSGX3-TOPO. El vector pSGX3-TOPO es una versión de la topoisomerasa-activada, modificada de pET26b (Novagen, Madison, Wisconsin) en donde la siguiente secuencia se ha insertado en el sitio de Ndel: CATATGTCCCTT y la siguiente secuencia insertada en el sitio BamHI: AAGGGCATCATCACCATCACCACTGATCC. La secuencia del plásmido resultante, de la secuencia Shine-Dalgarno a través del sitio de detención y el BamHI, el sitio es como sigue: AAGGAGGA GATATACATATGTC CCTT[ORF]AAGGGCATCAT CACCATCACCACTGATCC. El c-Abl expresado utiliza este vector que tiene tres aminoácidos agregados a su N-terminal (Met Ser Leu) y se agregaron 8 aminoácidos a su C-terminal (GluGlyHisHisHisHisHisHis). Un plásmido de co-expresión de c-Abl/fosfatasa entonces se creó subclonando la fosfatasa a partir del plásmido de co-expresión Aurora del Ejemplo 1 en el plásmido anterior. El plásmido de coexpresión Aurora y el plásmido de no-co-expresión Abl se digirieron 3 horas con enzimas de restricción EcoRI y Notl. Los fragmentos de ADN fueron el gel purificado y el gen de fosfatasa del plásmido Aurora se ligó con el plásmido cAbl digerido durante 8 h a 16°C y se transformó en células Top 10. La presencia del gen de fosfatasa en el constructo resultante se confirmó por el ensayo de digestión de restricción. Este plásmido codifica la co-expresión de la fosfatasa c-Abl y lambda. Tiene la ventaja adicional de dos únicos sitios de restricción, Xbal y Ndel, corriente arriba del gen objetivo que puede utilizarse para subclonar otras proteínas objetivo en este plásmido de co-expresión de fosfatasa. El plásmido para Abl T3151 se preparó modificando el plásmido Abl usando el kit de mutagénesis Quick Change (Stratagene) con el procedimiento sugerido por el fabricante y los siguientes oligonucleótidos: Mm05582dS45'- CCACCATTCTACATAATCATTGAGTTCATGACCTATGGG-3' Mm05582dA45'- CCCATAGGTCATGAACTCAATGATTATGTAGAATGGTGG-3'. La proteína de los plásmidos de co-expresión de fosfatasa se purificó como sigue. El plásmido de no-expresión se transformó en células BL21 (DE3)Codon + RIL (Stratagene) competentes químicamente y el plásmido de co-expresión se transformó en BL21 (DE3)pSA0145 (una cepa que expresa los genes líticos del fago lambda y lisis en congelación y descongelación (Crabtree S, Cronan JE Jr. J Bacteriol abril 1984;158(1):354-6)) y se colocaron en placas sobre cajas de Petri que contienen agar LB con canamicina. Las únicas colonias aisladas se desarrollaron para mid-log y almacenadas a -80°C en LB que contiene 15% de glicerol. Esta cantidad de glicerol se colocó en líneas en placas de agar LB con canamicina y se utilizó una sola colonia para inocular 10 ml de cultivos de LB con canamicina y cloranfenicol, la cual se incubó a 30°C durante la noche con agitación. Este cultivo se utilizó para inocular un matraz de 2 I que contiene 500 ml de LB con canamicina y cloranfenicol, que se hizo crecer en la fase mid-log a 37°C e inducido por la adición de IPTG a una concentración final de 0.5 mM. Después de la inducción de los matraces se incubaron a 21°C durante 18 h con agitación. El c-Abl T315I KD (dominio de cinasa) se purificó como sigue. Las células se recolectaron mediante centrifugación, se sometieron a lisis en amortiguador craqueado diluido (50 mM de Tris HCl, pH 7.5, 500 mM de KCl, 0.1% de Tween 20, 20 mM de imidazol, con sonicación, y centrifugado para eliminar los residuos celulares. La fracción soluble se purificó sobre una columna de IMCA cargada con níquel (Pharmacia, Uppsala, Suecia), y eluida bajo condiciones nativas con un gradiente de 20 mM a 500 mM de ¡midazol en 50 mM de Tris, pH 7.8, 500 mM de NaCI, 10 mM de metionina, 10% de glicerol. La proteína entonces se purificó adicionalmente por filtración en gel usando una columna grado preparativa Superdex 75 equilibrada en amortiguador GF5 (10 mM de HEPES, pH 7.5, 10 mM de metionina, 500 mM de NaCI, 5 mM de DTT, y 10% de glicerol). Las fracciones que contienen el dominio de cinasa c-Abl T3151 KD purificado se reunieron. La proteína obtenida fue 98% puro como se juzgó por la electrofóresis en geles de poliacrilamida de SDS. El análisis de espectroscópico de masa de la proteína purificada mostró que fue predominante únicamente fosforilada. La proteína entonces se desfosforiló con Shrimp Alkalínea Fosfatasa (MBI Fermentas, Burlington, Canadá) bajo las siguientes condiciones: 100U Shrimp Alkalínea Fosfatasa/mg de c-Abl T315I KD, 100 mM de MgCI2, y 250 mM de NaCI adicional. La reacción se produjo durante la noche a 23°C. La proteína se determinó por ser no fosforilada por el análisis espectroscópico de masa. Cualquier precipitado se giró y la fracción soluble se separó de los reactivos mediante filtración en gel usando una columna grado preparativa Superdex 75 equilibrada en amortiguador GF4 (10 mM de HEPES, pH 7.5, 10 mM de metionina, 150 mM de NaCI, 5mM de DTT y 10% de glicerol). Purificación de Met: Las pelotillas de células producidas a partir de la mitad de un cultivo celular de insecto Sf9 de 12 I que expresa el dominio de cinasa del Met humano, se resuspendieron en un amortiguador que contiene 50 mM de Tris-HCl pH 7.7 y 250 mM de NaCI, en un volumen de aproximadamente 40 ml por 1 I de cultivo original. Una tableta de Roche Complete, cóctel inhibidor de proteasa libre de DTA (Cat# 1873580) se agregó por 1 I de cultivo original. La suspensión se agitó durante 1 hora a 4°C. Debris se eliminó mediante centrifugación durante 30 minutos a 39,800 x g a 4°C. El sobrenadante se decantó en un vaso de laboratorio de 500 ml y 10 ml de 50% suspensión de Qiagen Ni-NTA Agarose (Cat# 30250) que se ha pre-equilibrado en 50 mM de Tris-HCl pH 7,8, los 50 mM de NaCl, 10% de glicerol, 10 mM de imidazol y 10 mM de metionina, se agregaron y agitaron durante 30 minutos a 4°C. La muestra después se vertió en una columna de goteo a 4°C y lavó con 10 volúmenes de columna de 50 mM de Tris-HCl pH 7.8, 500 mM de NaCI, 10% de glicerol, 10 mM de imidazol y 10 mM de metionina. La proteína se eluyó usando una etapa de gradiente con dos volúmenes de columna cada uno del mismo amortiguador que contiene 50 mM, 200 mM y 500 mM de imidazol, secuencialmente. El marcado con 6x histidina se dividió durante la noche usando 40 unidades de proteasa de TEV (Invitrogen Cat# 10127017) por 1 mg de proteína mientras se dializa en 50 mM de Tris-HCl pH 7.8, 500 mM de NaCI, 10% de glicerol, 10 mM de imidazol y 10 mM de metionina a 4°C. El marcado con 6x histidina se eliminó pasando la muestra sobre una columna Pharmacia de 5 ml de IMAC (Cat# 17-0409-01) cargada con níquel y equilibrada en 50 mM de Tris-HCl pH 7.8, 500 M de NaCl, 10% de glicerol, 10 mM de imidazol y 10 mM de metionina. La proteína dividida se une a la columna de níquel en una baja afinidad y se eluye con una etapa de gradiente. La etapa de gradiente se produjo con 15% y después 80% del lado B (lado A = 50 mM de Tris-HCl pH 7.8, 500 mM de NaCI, 10% de glicerol, 10 mM de imidazol y 10 mM de metionina; lado B = 50 mM de Tris-HCl pH 7.8, 500 mM de NaCI, 10% de glicerol, 500 mM de ¡midazol y 10 mM de metionina) para cada uno de los 4 volúmenes de columna. La-proteína Met eluida en la primera etapa (15%), mientras que el Met no divido y el marcado con histidina dividido se eluyó en 80% de fracciones. 15% de fracciones se reunieron después de que análisis en gel de SDS-PAGE confirmó la presencia del Met dividido; la purificación adicional se hizo mediante cromatografía de filtración en gel en un grado prep Amersham Biosciences HiLoad 16/60 Superdex 200 (Cat# 17-1069-01) equilibrado en 50 mM de Tris-HCl pH 8.5, 150 mM de NaCI, 10% de glicerol y 5 mM de DTT. Las fracciones limpias se combinaron y concentraron a ~10.4 mg/ml mediante centrifugación en una unidad de filtrado centrífuga Amicon Ultra-15 10,000 Da MWCO (Cat # UFC901024). Purificación de AurA: Las pelotillas de células de insecto Sf9 (~ 18 g) producidas a partir de 6 I de células cultivadas que expresan la Aurora-2 humana se resuspendieron en 50 mM de fosfato Na pH 8.0, 500 mM de NaCI, 10% de glicerol, 0.2% de n-octil-ß-D-glucopiranosida (BOG) y 3 mM de ß-mercaptoetanol (BME). Una tableta de Roche Complete, o cóctel inhibidor de proteasa libre de EDTA (Cat# 1873580) y 85 unidades de Benzonasa (Novagen Cat# 70746-3)) se agregaron por 1 I de cultivo original. Las pelotillas se resuspendieron en aproximadamente 50 ml por 1 I de cultivo original y después se sonicaron en hielo con dos separaciones de 30-45 segundos (100% del ciclo obligado). Debris se eliminó mediante centrifugación y el sobrenadante se pasó a través de un filtro de jeringa de 0.8 µm antes de cargarse en 5 ml de una columna de Ni2+ HiTrap (Pharmacia). La columna se lavó con 6 volúmenes de columna de 50 mM de fosfato Na pH 8.0, 500 mM de NaCI, 10% de glicerol, 3 mM de BME. La proteína se eluyó usando un gradiente lineal del mismo amortiguador que contiene 500 mM de imidazol. El eluyente (24 ml) se dividido durante la noche a 4°C en un amortiguador que contiene 50 mM de fosfato Na pH 8.0, 500 mM de NaCI, 10% de glicerol, 3 mM de BME y 10,000 unidades de TEV (Invitrogen Cat# 10127-017). La proteína se pasó sobre una segunda columna de afinidad de níquel como se describe anteriormente; se recolectó el flujo pasante. Las fracciones de proteína dividida se combinaron y concentraron usando concentradores giratorios. La purificación adicional se hizo mediante cromatografía de filtración en gel en una columna dimensionada S75 en 50 mM de fosfato Na (pH 8.0), 250 mM de NaCI, 1 mM de EDTA, 0.1 mM de AMP-PNP o amortiguador de ATP y 5 mM de DTT. Las fracciones limpias se combinaron y concentraron a aproximadamente 8-11 mg/ml, y cualquiera se congeló instantáneamente en nitrógeno líquido en 120 µl de alícuotas y se almacenaron a -80°C, o almacenaron a 4°C.

Purificación de PDK1: Las pelotillas de células producidas a partir de 6 I de células de insecto Sf9 que expresan PDK1 humano se suspendieron nuevamente en un amortiguador que contiene 50 mM de Tris-HCl pH 7.7 y 250 mM de NaCI en un volumen de aproximadamente 40 ml por 1 I de cultivo original. Una tableta de Roche Complete, cóctel inhibidor de proteasa libre de EDTA (Cat # 1873580) y 85 unidades de Benzonasa (Novagen Cat#70746-3)) se agregaron por 1 I de cultivo original. La suspensión se agitó durante 1 hora a 4°C. Debris se eliminó mediante centrifugación durante 30 minutos a 39,800 x g a 4°C. El sobrenadante se decantó en un vaso de laboratorio de 500 ml y 10 ml de 50% de una suspensión de agarosa Qiagen Ni-NTA (Cat# 30250) que se ha pre-equilibrado en 50 mM de Tris-HCl pH 7.8, 500 mM de NaCI, 10% de glicerol, 10 mM de imidazol y 10 mM de metionina, se agregaron y agitaron durante 30 minutos a 4°C. La muestra después se vertió en una columna de goteo a 4°C y lavada con 10 volúmenes de columna de 50 mM de Tris-HCl pH 7.8, 500 mM de NaCI, 10% de glicerol, 10 M de imidazol y 10 mM de metionina. La proteína se eluyó usando una etapa de gradiente con dos volúmenes de columna cada uno del mismo amortiguador que contiene 50 mM y 500 mM de imidazol, secuencialmente. El marcado con 6x histidina se dividió durante la noche usando 40 unidades de proteasa TEV (Inivitrogen Cat# 10127017) por 1 mg de proteína mientras se dializó en 50 mM de Tris-HCl pH 7.8, 500 mM de NaCI, 10% de glicerol, 10 mM de imídazol y 10 mM de metionina a 4°C. El marcado con 6x histidina se eliminó pasando la muestra sobre una columna Pharmacia de 5 ml EVIAC (Cat # 17-0409-01) cargada con níquel y equilibrada en 50 mM de Tris-HCl pH 7.8, 500 mM de NaCI, 10% de glicerol, 10 mM de imidazol y 10 mM de metionina. La proteína dividida se eluyó en el flujo pasante, mientras la proteína no dividida y el marcado His permaneció unido a la columna Ni. Las fracciones de proteína divididas se combinaron y concentraron usando concentradores giratorios. La purificación adicional se hizo mediante cromatografía de filtración en gel en un grado prep Amersham Biosciences HiLoad 16/60 Superdex 200 (Cat# 17-1069-01) equilibrado en 25 mM de Tris-HCl pH 7.5, 150 mM de NaCI y 5 mM de DTT. Las fracciones limpias se combinaron y concentraron a ~15 mg/ml mediante centrifugación en una unidad de filtrado centrífuga Amicon Ultra-15 10,000 Da MWCO (Cat# UFC901024).

Ensayos Celulares Las células MV4-11 y THP se mantuvieron en Iscove's Modified Dulbecco's Médium complementadas con 10% de suero bovino fetal (FBS) y penicilina/estreptomicina, células Ba/F3 se mantuvieron en RPMI 1640 complementadas con 10% de FBS, penicilina/estreptomicina y 5 ng/ml de ratón recombinante IL-3. Ensayos de Sobrevivencia Celular Los compuestos se prueban en los siguientes ensayos por duplicado. Ensayo de XTT de 96-pozos: Las células se desarrollaron en medio del crecimiento que contiene varias concentraciones de compuestos (duplicados) en una placa de 96 pozos durante 72 horas a 37°C. El número de células de inicio fue de 5000-8000 células por pozo y el volumen fue de 120 µl. Al final de 72-horas de incubación, se agregaron 40 µl de mezcla del marcador de XTT (50:1 de solución de hidrato del ácido 3'-[1-(fen¡lamino-carbonil)-3,4-tetrazolio]-bis (4-metoxi-6-nitro)bencensulfónico de sodio y reactivo acoplador de electrones: se agregó PMS (metilsulfato de N-metildibenzopirazina) a cada pozo de la placa. Después de 2-6 horas adicionales de incubación a 37°C, la lectura de absorbancia a 405 nm con corrección antecedente a 650 nm se midió con un espectrofotómetro.

Ensayo AlamarBIue de 384 pozos: Se colocaron en placas 90 µl de suspensión celular en cada pozo de una placa de 384 pozos preimpresa con 0.5 µl del compuesto en DMSO o DMSO solamente. El número de células de inicio fue de 4000 células por pozo.

Después de una incubación de 72 horas, después se agregan 10 µl de solución AlamarBIue (440 µM de resazurina en PBS) a cada pozo de la placa. Después de una incubación de 2 horas adicionales a 37°C, la fluorescencia se midió usando un fluorómetro de lectura de placa TECAN con excitación a 535 nm y emisión a 591 nm. Ensayo de BCR-ABL Fosfo-ELISA La siguiente tabla muestra los reactivos que se utilizaron normalmente en el ensayo BCR-ABL fosfo-ELISA ("P-ELISA"). Tabla 19. Lista de Reactivos Normales de BCR-ABL fosfo-ELISA (p-ELISA) Las células (células Ba/F3 transfectadas con WT BCR-ABL, otros cinasas, o T315I, Y253F, u otras formas mutantes de BCR-ABL) se desarrollaron en ausencia de IL-3 por lo menos Vz semana antes del ensayo. El día antes del ensayo, las células se alimentaron con medio fresco de modo que al momento del ensayo las células estuvieran en la fase iog. Las células Ba/F3 que se hacen crecer en ausencia de IL-3 mediante la última Vz semana se resuspendieron en RPMl 1640 de modo que cada pozo de una placa de 96 pozos contuvieron aproximadamente 200,000 células. Las células se distribuyeron en una placa de 96 pozos que contiene concentraciones diluidas en serie de los compuestos de prueba. Las células se incubaron normalmente con o sin compuestos de prueba durante 60-120 minutos a 5% de CO2, 37°C. La incubación se realizó con o sin otros aditivos tales como 10% de FCS o 50% de plasma humano. Después de la incubación de los compuestos, el amortiguador de lisis se agregó e incubó durante 10-15 minutos; el lisado se limpió mediante centrifugación. Para hacer la placa de ELISA, los anticuerpos Anti-ABL disponibles comercialmente (por ejemplo (Ab-3, Calbiochem OP20) se prepararon en una concentración de 0.125 µg/ml en amortiguador de revestimiento (0.1 M carbonato de Na, pH 9.5), y se colocan en placas en 10 ml por placa (12.5 µl, 100 µg/ml Ab/10 ml). En una placa de multi-pozos de alta unión, se agregaron 100 µl de Ab en amortiguador de revestimiento a cada pozo, y cada placa se cubrió con un sello de placa e incubó durante la noche a 4°C.

El exceso de anticuerpo se eliminó y la placa de ELISA se lavó 3-4 veces con 200 µl de amortiguador de lavado (0.05% de Tween en PBS, pH 7.4). Se transfirieron 150 µl de lisado (ver anteriormente) a la placa de ELISA. Las placas se sellaron e incubaron 2 horas a temperatura ambiente. El anticuerpo de detección (por ejemplo el anti-pTyr conjugado HRP o a-p-Y 4G10 no conjugado, Upstate) se preparó en diluyente de ensayo. El anticuerpo se diluyó 1:1000 (reservas = 2 µg/µl, 200 µg en 100 µl; f.c. = 2 µg/ml) en diluyente de ensayo y se agregaron 10 ml de anticuerpo diluido por placa. El lisado se eliminó de las placas de ELISA, y los pozos se lavaron cuatro veces con 200 µl de amortiguador de lavado por pozo. Se agregaron 100 µl del anticuerpo de detección a cada pozo; la placa se cubrió, e incubó durante 1 hr a temperatura ambiente (21°C). El exceso del anticuerpo de detección se eliminó de las placas de ELISA, y los pozos se lavaron cuatro veces con 200 µl del amortiguador de lavado por pozo. Si es necesario, (es decir para el anticuerpo anti-pTyr sin conjugar) el anticuerpo secundario (HRP anti-conejo de cabra) se diluye 1:3000 en diluyente de ensayo (3.33 µl por 10 ml de diluyente) y se agregó en 10 ml de anticuerpo diluido por placa. El exceso del anticuerpo secundario se eliminó de la placa de ELISA, y la placa se lavó cuatro veces con 200 µl por pozo de amortiguador de lavado. El reactivo sustrato A y reactivo sustrato B (Pierce Cat#37070 SuperSignal ELISA Pico Chemiluminescent Sustrato) se agregaron inmediatamente antes de uso (10 ml de solución resultante por placa). Se agregaron 100 µl de sustrato por pozo, mezclando durante 1 minuto, y la señal quimioluminescente se midió con un luminómetro. Tabla 20: Resultados del ensayo seleccionado Para la tabla 21 anterior, los símbolos de actividad representan un IC50 como sigue. A>10 µM; B = 1-10 µM; C<1 µM.

Claims (1)

1. REIVINDICACIONES 1. Un compuesto que tiene la fórmula: en donde L y L2 son independientemente un enlace, -S(O)n-, -O-, -NH-, alquileno de 1 a 5 átomos de carbono insustituido, o heteroalquileno de 2 a 5 miembros ¡nsustituido, en donde n es un número entero de 0 a 2, y R1 y R2 son independientemente cicloalquilo sustituido o insustituido, heterocicloalquilo sustituido o insustituido, heteroarilo sustituido o insustituido, o arilo sustituido o insustituido, con la condición que R1 no es pirrolilo sustituido o ¡nsustituido, y que L1 no es heteroalquileno de 2 a 5 miembros insustituido cuando R1 y R2 son ambos fenilo insustituido, y que L1 no es -S(O)2-cuando R2 es piperazinilo ¡nsustituido, y que R1 no es isoxazolilo sustituido o insustituido cuando R2 es piridinilo insustituido. 2. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, en donde -S(O)n-, -O-, -NH-, o alquileno de 1 a 5 átomos de carbono insustituido. 3. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, en donde L1 y L2 son un enlace. 4. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, en donde L1 o L2 es un enlace. 5. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, en donde R1 es cicloalquilo sustituido o insustituido, heterocicloalquilo sustituido o insustituido, heteroarilo de 5 ó 6 miembros, o arilo sustituido o insustituido. 6. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, en donde R1 es heteroarilo de 6 miembros sustituido o insustituido, o arilo sustituido o insustituido. 7. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, en donde R1 es (1) cicloalquilo ¡nsustituido de 3 a 7 átomos de carbono; (2) heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros insustituido; (3) heteroarilo insustituido; (4) arilo insustituido; (5) cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido; (6) heterocicloalquilo 3 a 7 miembros sustituido; (7) arilo sustituido; u (8) heteroarilo sustituido; en donde (5) y (6) se sustituyen con un oxo, -OH, -CF3, -COOH, ciano, halógeno, R11-alqu¡lo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R11-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R1 -cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R11-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R12-arilo sustituido o insustituido, R12-heteroarilo sustituido o insustituido, L12-C(X1)R7, -L12-OR8, -L12-NR91R92, o -L12-S(O)mR10, (7) y (8) se sustituyen con -OH, -CF3, -COOH, ciano, halógeno, R11-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R11-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o ¡nsustituido, R11-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R11-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o ¡nsustituido, R12-arilo sustituido o insustituido, R 2-heteroarilo sustituido o insustituido, L12-C(X1)R7, -L12-OR8, -L12-NR91R92, o -L12-S(O)mR10, en donde (a) X1 es =S, =O, o =NR15, en donde R15 es H, -OR151, Realquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o ¡nsustituido, R11-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R11-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R11-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R12-arilo sustituido o insustituido, o heteroarilo sustituido o insustituido, en donde R151 es hidrógeno o R11-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, (b) m es un número entero de 0 a 2; (c) R7 es hidrógeno, R 1-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R11-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R11-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituidos o ¡nsustituido, R11-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R12-arilo sustituido o insustituido, R12-heteroarilo sustituido o insustituido, -OR71, o -NR72R73, en donde R71, R72 y R73 son independientemente hidrógeno, R11-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R11-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R11-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituidos o ¡nsustituido, R11-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o ¡nsustituido, R12-arilo sustituido o insustituido, o R12-heteroarilo sustituido o insustituido, en donde R72 y R73 están opcionalmente unidos con el nitrógeno al cual se unen para formar un R11-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, o R12-heteroariio sustituido o insustituido, (d) R8, R91 y R92 son independientemente hidrógeno, -CF3, Realquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R11-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R11-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o ¡nsustituido, R11-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R12-arilo sustituido o insustituido, R12-heteroarilo sustituido o insustituido, -C(X2)R81, o -S(O)wR81, en donde R91 y R92 se unen opcionalmente con el nitrógeno al cual se unen para formar un R11-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, o R12-heteroarilo sustituido o insustituido, en donde (i) X2 es =S, =O, o =NR16, en donde R16 es R -alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R11-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R 1-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R11-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o ¡nsustituido, R12-arilo sustituido o insustituido, o R12-heteroarilo sustituido o insustituido; (ii) w es es un número entero de 0 a 2, y (iii) R81 es hidrógeno, R11-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R11-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R11-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R11-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o ¡nsustituido, R12-arilo sustituido o insustituido, R12-heteroarilo sustituido o insustituido, o -NR811R812, en donde R811 y R8 2 son independientemente hidrógeno, Realquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R11-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R11-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R11-heterocicloalquilo de 3 a 7.miembros sustituido o insustituido, R12-arilo sustituido o insustituido, o R12-heteroarilo sustituido o insustituido, en donde R811 y R812 se unen opcionalmente con el nitrógeno al cual se unen para formar un R11-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, o R12-heteroarilo sustituido o ¡nsustituido; (e) R10 es hidrógeno, R11-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R11-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R11-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o ¡nsustituido, R11. heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R1 -arilo sustituido o insustituido, R12-heteroarilo sustituido o insustituido, o -NR101R102, en donde (i) R101 y R102 son independientemente hidrógeno, R11-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R11-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R11-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R11-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R12-arilo sustituido o insustituido, o R12-heteroarilo sustituido o insustituido, en donde R101 y R102 se unen opcionalmente con el nitrógeno al cual se unen para formar un R11-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, o R12-heteroarilo sustituido o insustituido; (f) L12 es un enlace, alquileno de 1 a 10 átomos de carbono insustituido, o heteroalquileno insustituido; (g) R11 es oxo, -OH, -COOH, -CF3, -OCF3, -CN, amino, halógeno, R13-alquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R13-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R13-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R13-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o ¡nsustituido, R14-arilo sustituido o insustituido, o R14-heteroarilo sustituido o insustituido; (h) R12 es -OH, -COOH, amino, halógeno, -CF3, -OCF3, -CN, R13-alquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R13-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R13- cícloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R 3-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R14-arilo sustituido o insustituido, o R14-heteroarilo sustituido o insustituido; (i) R13 es oxo, -OH, -COOH, amino, halógeno, -CF3, -OCF3, -CN, alquilo de 1 a 10 átomos de carbono insustituido, heteroalquilo de 2 a 10 miembros insustituido, cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono insustituido, heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros insustituido, arilo insustituido, heteroarilo insustituido; y (j) R14 es -OH, -COOH, amino, halógeno, -CF3, -OCF3, -CN, alquilo de 1 a 10 átomos de carbono insustituido, heteroalquilo de 2 a 10 miembros insustituido, cicloalquilo 3 a 7 átomos de carbono insustituido, heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros insustituido, arilo insustituido, heteroarilo insustituido. 8. El compuesto de conformidad con la reivindicación 7, en donde R1 es heteroarilo de 6 miembros sustituido o ¡nsustituido, arilo sustituido o insustituido. 9. El compuesto de conformidad con la reivindicación 8, en donde L1 es un enlace. 10. El compuesto de conformidad con la reivindicación 7, en donde R1 es (7) u (8), en donde (7) y (8) se sustituyen con un -OH, -CF3, halógeno, alquilo de 1 a 10 átomos de carbono insustituido, heteroalquilo de 2 a 10 miembros insustituido, cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono insustituido, heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros insustituido, arilo insustituido, heteroarilo insustituido, o -L1 -OR8, en donde L12 es un enlace. 11. El compuesto de conformidad con la reivindicación 10, en donde R8 es CF3. 12. El compuesto de conformidad con la reivindicación 7, en donde R1 es (7) u (8), en donde (7) y (8) se sustituyen con un -OCH3, -OCF3, -CH3, -CF3, -OCH2CH3, halógeno o ciclopropiloxi. 13. El compuesto de conformidad con la reivindicación 7, en donde L1 y L2 son un enlace. 14. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 7 ó 13, en donde R2 es (1) cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono insustituido; (2) heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros insustituido; (3) heteroarilo insustituido; (4) arilo insustituido; (5) cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido; (6) heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido; (7) arilo sustituido; u (8) heteroarilo sustituido; en donde (5) y (6) se sustituyen con un oxo, -OH, -CF3, -COOH, ciano, halógeno, R21-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R21-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R2 -heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R22-arilo sustituido o insustituido, o R22-heteroarilo sustituido o ¡nsustituido, -L22-C(X3)R3, -L22-OR4, -L22-NR51R52, o -L22-S(O)qR6, (7) y (8) se sustituyen con un -OH, -CF3, -COOH, ciano, halógeno, R21-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R21-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R22-arilo sustituido o insustituido, R22-heteroarilo sustituido o insustituido, -L22-C(X3)R3, -L22-OR4, -L22-NR51R52, o -L22-S(O)qR6, en donde (a) X3 es =S, =O, o =NR17, en donde R17 es H, -OR171, R21-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o ¡nsustituido, R21-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R2 -cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R22-arilo sustituido o insustituido, o R22-heteroarilo sustituido o insustituido, en donde R171 es H o R21-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido; (b) q es un número entero de 0 a 2; (c) R3 es hidrógeno, R21-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R2 -heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R21-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R22-arilo sustituido o insustituido, R22- heteroarilo sustituido o insustituido, -OR31, o -NR32R33, en donde (i) R31, R32, y R33 son independientemente hidrógeno, Realquilo 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R21-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R22-arilo sustituido o insustituido, o R22-heteroarilo sustituido o insustituido, en donde R32 y R33 se unen opcionalmente con el nitrógeno al cual se unen parpara formar un R21-heteroc¡cloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, o R22-heteroarilo sustituido o insustituido; (d) R4, R51 y R52 son independientemente hidrógeno, -CF3, Realquilo 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R21-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o ¡nsustituido, R22-arilo sustituido o ¡nsustituido, R22-heteroarilo sustituido o insustituido, -C(X4)R41, o -S(O)vR41, en donde R51 y R52 se unen opcionalmente con el nitrógeno al cual se unen para formar un R21-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, o R22-heteroarilo sustituido o insustituido, en donde (i) X4 es =S, =O, o =NR18, en donde R18 es R21-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R21-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R22-arilo sustituido o insustituido, o R22-heteroarilo sustituido o insustituido; (ii) v es un número entero de 0 a 2; (iii) R41 es hidrógeno, R21-alquilo 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R21-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R22-arilo sustituido o insustituido, R22-heteroarilo sustituido o insustituido, o -NR411R412, en donde R411 y R412 son independientemente seleccionados de hidrógeno, R21-alquilo 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R21-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R22-arilo sustituido o insustituido, o R 2-heteroarilo sustituido o insustituido, en donde R411 y R412 se unen opcionalmente con el nitrógeno al cual se unen para formar un R21-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, o R22-heteroarilo sustituido o insustituido; (e) R6 es hidrógeno, Rz1-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R21-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R22-arilo sustituido o insustituido, R22-heteroarilo sustituido o insustituido, o -NR61R62 en donde (i) R61 y R62 son hidrógeno, R21-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R21-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R22-arilo sustituido o insustituido, o R22-heteroarilo sustituido o insustituido, en donde R61 y R62 se unen opcionalmente con el nitrógeno al cual se unen para formar un R21-heterocicloalquiio de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, o R22-heteroarilo sustituido o insustituido; (f) L22 es un enlace, alquileno de 1 a 10 átomos de carbono insustituido o heteroalquileno insustituido; (g) R21 es oxo, -OH, -COOH, -CF3, -OCF3, -CN, amino, halógeno, R23-alquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R23-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R23-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R23-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R24-arilo sustituido o insustituido, o R24-heteroarilo sustituido o insustituido; (h) R22 es -OH, -COOH, amino, halógeno, -CF3, -OCF3, -CN, R23-alquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R23-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R23-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R23- heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o ¡nsustituido, R24-arilo sustituido o insustituido, o R24-heteroarilo sustituido o insustituido; (i) R23 es oxo, -OH, -COOH, amino, halógeno, -CF3, -OCF3, -CN, alquilo de 1 a 10 átomos de carbono insustituido, heteroalquilo de 2 a 10 miembros insustituido, cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono ¡nsustituido, heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros insustituido, arilo insustituido, heteroarilo insustituido; y (j) R24 es -OH, -COOH, amino, halógeno, -CF3, -OCF3, -CN, alquilo de 1 a 10 átomos de carbono insustituido, heteroalquilo de 2 a 10 miembros insustituido, cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono insustituido, heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros insustituido, arilo insustituido, heteroarilo insustituido. 15. El compuesto de conformidad con la reivindicación 14, en donde L2 es un enlace. 16. El compuesto de conformidad con la reivindicación 14, en donde R2 es (3), (4), (7) u (8). 17. El compuesto de conformidad con la reivindicación 15, en donde R2 es (7) u (8). 18. El compuesto de conformidad con la reivindicación 17, en donde (7) y (8) se sustituyen con un -L22-C(X3)R3, -L22-OR4, -L22-NR51R52, -L22-C(NH)-NR32R33, o -L22-S(O)qR6. 19. El compuesto de conformidad con la reivindicación 18, en donde R3 es -NR32R33; X3 es =0 o =NR17; R6 es -NR61R62; R51 es -C(O)R41 o -S(O)vR41. 20. El compuesto de conformidad con la reivindicación 19, en donde R41 es -NR411R412. 21. El compuesto de conformidad con la reivindicación 15, en donde R2 es (7) u (8), en donde (7) y (8) se sustituyen con -OH, -CF3, -COOH, amino, halógeno, heteroalquilo de 2 a 10 3 miembros insustituido, cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono insustituido, heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros insustituido, arilo insustituido, heteroarilo insustituido, o -L22-C(X3)R3, en donde X3 es =O; R3 es alquilo de 1 a 10 átomos de carbono insustituido, heteroalquilo 2 a 10 miembros insustituido, cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono insustituido, heterocicloalquilo 3 a 7 miembros insustituido, arilo insustituido, heteroarilo insustituido, o -NR32R33, en donde R32 y R33 son independientemente hidrógeno, R21-alquilo de 1 a 10 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heteroalquilo de 2 a 10 miembros sustituido o insustituido, R21-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido, R21-heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R22-arilo sustituido o ¡nsustituido, o R22-heteroarilo sustituido o insustituido, en donde R32 y R33 se unen opcionalmente con el nitrógeno al cual se unen para formar un R2 -heterocicloalquilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, o R22-heteroarilo sustituido o insustituido. 22. El compuesto de conformidad con la reivindicación 15, en donde R2 es (7) u (8), en donde (7) y (8) se sustituyen con heteroalq uilo de 2 a 1 0 miembros insustituido, o -L22-C(O)R3 , en donde L22 es un enlace; y R3 es -N R32R33, en donde R32 y R33 son independientemente hidrógeno, R21 -alq uilo de 1 a 1 0 átomos de carbono s ustituido o insustituido, R21-heteroalquilo de 2 a 1 0 miembros sustituido o insustituido, R21-cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono sustituido o insustituido , R21-heterocicloalq uilo de 3 a 7 miembros sustituido o insustituido, R22-arilo sustituido o insustituido, o R22-heteroarilo sustituido o insustituido, en donde R32 y R33 se unen opcionalmente con el nitrógeno al cual se unen para formar un R21-heterocicloalq uilo de 3 a 7 miem bros sustituido o insustituido , o R22-heteroarilo sustituido o insustituido. 23. El com puesto de conform idad co n la reivindicación 1 , en donde R1 es un arilo del anillo fusionado sustituido o heteroarilo del anillo fusionado sustituido o insustituido. 24. El com puesto de conform idad con la reivindicación 1 , en donde R2 es indolilo s ustituido o insustituido , quinolinilo sustituido o insustituido , o benzodioxolilo sustituido o insustituido. 25. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , en donde R2 es un arilo del anillo fusionado sustituido o ¡nsustituido o heteroarilo del anillo fusionado sustituido o insustituido. 26. El com puesto de conformidad con la reivindicaci ón 1 , en donde R1 es indolilo sustituido o insustituido , quinolinilo sustituido o insustituido, o benzodioxolilo sustituido o i nsustituido. 27. El compuesto de conformidad con la reivindicación 14, en donde R1 y R2 son independientemente sustituido o insustituido hidantoinilo, dioxolanilo sustituido o insustituido, dioxanilo sustituido o insustituido, trioxanilo sustituido o insustituido, tetrahidrotíenilo sustituido o insustituido, tetrahidrofuranilo sustituido o insustituido, tetrahidrotiofenilo sustituido o insustituido, tetrahidropiranilo sustituido o insustituido, tetrahidrotiopiranilo sustituido o insustituido, pirrolidinilo sustituido o insustituido, morfolino sustituido o insustituido, piperidinilo sustituido o insustituido, pirazolilo sustituido o insustituido, furanilo sustituido o insustituido, imidazolilo sustituido o insustituido, isoxazolilo sustituido o insustituido, oxadiazolilo sustituido o ¡nsustituido, oxazolilo sustituido o insustituido, piridilo sustituido o insustituido, pirazilo sustituido o insustituido, pirimidilo sustituido o insustituido, piridazinilo sustituido o insustituido, tiazolilo sustituido o insustituido, isotioazolilo sustituido o insustituido, triazolilo sustituido o insustituido, tienilo sustituido o insustituido, triazinilo sustituido o insustituido, tiadiazolilo sustituido o insustituido, o tetrazolilo sustituido o insustituido. 28. Un compuesto que tiene la fórmula: en donde L1 y L2 son independientemente un enlace, -S(O)n-, -O-, -NH- alquileno de 1 a 5 átomos de carbono insustituido, heteroalquileno de 2 a 5 miembros insustituido, en donde n es un número entero de 0 a 2, y R1 y R2 son independientemente cicloalquilo sustituido o insustituido, heterocicloalquilo sustituido o insustituido, heteroarilo sustituido o insustituido, arilo sustituido o insustituido. 29. Un compuesto que tiene la fórmula: en donde L1 y L2 son independientemente un enlace, -S(O)p-, -O-, -NH-, alquileno de 1 a 5 átomos de carbono insustituido, heteroalquileno de 2 a 5 miembros insustituido, en donde n es un número entero de 0 a 2, y R1 y R2 son independientemente cicloalquilo sustituido o insustituido, heterocicloalquilo sustituido o insustituido, heteroarilo sustituido o insustituido, arilo sustituido o insustituido. 30. Un método para modular la actividad de una proteína cinasa que comprende poner en contacto la proteína cinasa con un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 28 ó 29. 31. Un método para tratar cáncer, alergia, asma, inflamación, enfermedad de las vías aéreas obstructiva, enfermedades autoinmunes, enfermedad metabólica, infección, enfermedad del SNC, tumor cerebral, obesidad, asma, trastorno hematológico, enfermedad neurodegenerativa, enfermedad cardiovascular, o enfermedad asociada con angiogénesis, neovascularización, o vasculogénesis en un sujeto en necesidad de tal tratamiento, el método comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 28 ó 29. 32. Un método para modular la actividad de una proteína cinasa que comprende poner en contacto la proteína cinasa con un compuesto que tiene la fórmula: en donde L1 y L2 son independientemente un enlace, -S(O)n-, -O-, -NH-, alquileno de 1 a 5 átomos de carbono insustituido, o heteroalquileno de 2 a 5 miembros insustituido, en donde n es un número entero de 0 a 2, y R1 y R2 son independientemente cicloalquilo sustituido o insustituido, heterocicloalquilo sustituido o ¡nsustituido, heteroarilo sustituido o insustituido, o arilo sustituido o insustituido con la condición que L1 no es heteroalquileno de 2 a 5 miembros insustituido cuando R1 y R2 no son fenilo insustituido. 33. El método de conformidad con la reivindicación 32, en donde la proteína cinasa es una tirosina cinasa Abelson, tirosina cinasa del receptor Ron, tirosina cinasa del receptor Met, tirosina cinasa-3 similar a Fms, cinasas Aurora, cinasa-4 activada por p21, o cinasa-1 dependiente de 3-fosfoinositida. 34. El método de conformidad con la reivindicación 32, en donde la proteína cinasa es una cinasa Bcr-Abl que tiene una mutación seleccionada del grupo que consiste de M244V, L248V, G250E, G250A, Q252H, Q252R, Y253F, Y253H, E255K, E255V, D276G, F311L, T315I, T315N, T315A, F317V, F317L, M343T, M351T, E355G, F359A, F359V, V379I, F382L, L387M, H396P, H396R, S417Y, E459K y F486S. 35. El método de conformidad con la reivindicación 34, en donde la proteína cinasa tiene una mutación T3151. 36. Un método para tratar cáncer, alergia, asma, inflamación, enfermedad de las vías aéreas obstructiva, enfermedades autoinmunes, enfermedad metabólica, infección, enfermedad del SNC, tumor cerebral, obesidad, asma, trastorno hematológico, enfermedad neurodegenerativa, enfermedad cardiovascular, o enfermedad asociada con angiogénesis, neovascularización, o vasculogénesis en un sujeto en necesidad de tal tratamiento, el método comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto que tiene la fórmula: en donde L1 y 2 son independientemente un enlace, -S(O)n-, -O-, -NH-, alquileno de 1 a 5 átomos de carbono insustituido, o heteroalquileno de 2 a 5 miembros insustituido, en donde n es un número entero de 0 a 2, y R1 y R2 son independientemente cicloalquilo sustituido o insustituido, heterocicloalquilo sustituido o insustituido, heteroarilo sustituido o insustituido, o arilo sustituido o insustituido con la condición de que L1 no sea heteroalquileno de 2 a 5 miembros ¡nsustituido cuando R1 y R2 son fenilo insustituido. 37. El método de conformidad con la reivindicación 36, en donde el cáncer se selecciona de leucemia o trastorno mieloproliferativo. 38. Una composición farmacéutica que comprende un excipiente farmacéuticamente aceptable y un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 28 ó 29, o un compuesto que tiene la fórmula: en donde L1 y L2 son independientemente un enlace, -S(O)n-, -O-, -NH-, alquileno de 1 a 5 átomos de carbono insustituido, o heteroalquileno de 2 a 5 miembros insustituido, en donde n es un número entero de 0 a 2, y R1 y R2 son independientemente cicloalquilo sustituido o insustituido, heterocicloalquilo sustituido o ¡nsustituido, heteroarilo sustituido o insustituido, o arilo sustituido o insustituido con la condición de que L1 no sea heteroalquileno de 2 a 5 miembros insustituido cuando R1 y R2 son fenilo insustituido. RESU M EN La presente invención proporciona nuevos m oduladores de heterociclo cinasa de anillo fusionado y métodos para utilizar . los nuevos moduladores de heterociclo cinasa de an illo fusionado para tratar enfermedades mediadas por la actividad de cinasa.