ES2639426T3 - Inhibidores de cinasa MST1 y métodos para su uso - Google Patents

Inhibidores de cinasa MST1 y métodos para su uso Download PDF

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ES2639426T3
ES2639426T3 ES12709439.9T ES12709439T ES2639426T3 ES 2639426 T3 ES2639426 T3 ES 2639426T3 ES 12709439 T ES12709439 T ES 12709439T ES 2639426 T3 ES2639426 T3 ES 2639426T3
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Jeffrey Thomas BAGDANOFF
Simon David Peter BAUGH
Marianne Carlsen
Kenneth Gordon Carson
John Anthony GILLERAN
Wei He
Tamas Oravecz
Konstantin SALOJIN
Leonard Sung
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Abstract

Un compuesto de la fórmula:**Fórmula** o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: A es arilo o heterociclo de 4-7 miembros; D es un heterociclo no aromático de 5-7 miembros; X es N o CH; cada uno de Y1 e Y2 es independientemente N o CH; cada R1 es independientemente R1A, -(R1B)nSOpR1C, -(R1B)nSOpN(R1C)2, -(R1B)nNR1cSOpR1C, -(R1B)nC(O)N(R1C)2, o -(R1B)nNR1CC(O)R1C, o hidrocarbilo C1-12 opcionalmente sustituido o heterocarbilo de 2-12 miembros, cuya sustitución opcional es con uno o más de R1A; cada R1A es independientemente amino, alcoxilo, carboxilo, ciano, halo, o hidroxilo; cada R1B es independientemente hidrocarbilo C1-12 opcionalmente sustituido con uno o más de amino, alcoxilo, carboxilo, ciano, halo, o hidroxilo; cada R1C es independientemente hidrógeno o hidrocarbilo C1-12 opcionalmente sustituido o heterocarbilo de 2-12 miembros, cuya sustitución opcional es con uno o más de amino, alcoxilo, carboxilo, ciano, halo, o hidroxilo; cada R3A es independientemente amino, alcoxilo, carboxilo, ciano, halo, o hidroxilo; k es 0 o 1; m es 0-3; n es 0 o 1; p es 0-2; y q es 0-2.

Description

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DESCRIPCION
Inhibidores de cinasa MST1 y metodos para su uso
1. Campo de la invencion
Esta invencion se refiere a compuestos utiles como inhibidores de cinasa 1 de tipo Ste20 de mairnfero (MST1), composiciones que los comprenden, y metodos para su uso.
2. Antecedentes de la invencion
La cinasa 1 de tipo Ste20 de mamnfero (MST1) es un componente de la ruta de senalizacion "Hippo", y "se ha visto implicada en la regulacion del ciclo celular, la apoptosis y las respuestas celulares al estres oxidativo". Choi, J., et al., Plos One 4(11):e8011, 1 (2009). Los ratones deficientes en MST1 presentaban una acumulacion de linfocitos maduros en el timo y una disminucion de linfocitos en la sangre y en los tejidos linfoides perifericos. Dong, Y., et al., J. Immunology 183(6):3865-3872. 3865(2009). Vease tambien, Katagiri, K., et al., Nat Immunol. (9):919-28 (2006); Ling, P., et al., Cell Signal. 20(7): 1237-47 (2008). MST1 tambien se conoce como serina/treonina cinasa 4 (STK4) y cinasa sensible al estres 2 (KRS2).
3. Sumario de la invencion
Esta invencion se refiere a compuestos utiles para la inhibicion de MST1. Una realizacion de la invencion incluye compuestos de la formula:
imagen1
y sales farmaceuticamente aceptables de los mismos, en la que:
A es arilo o heterociclo de 4-7 miembros;
D es un heterociclo no aromatico de 5-7 miembros;
X es N o CH;
cada uno de Y1 e Y2 es independientemente N o CH;
cada R1 es independientemente Ria, -(RiB)nSOpN(Ric)2, -(RiB)nNRicSOpRic -(RiB)nC(O)N(Ric)2, o - (RiB)nNRicC(O)Ric, o hidrocarbilo C1-12 opcionalmente sustituido o heterocarbilo de 2-12 miembros, cuya sustitucion opcional es con uno o mas de Ria;
cada Ria es independientemente amino, alcoxilo, carboxilo, ciano, halo, o hidroxilo;
cada Rib es independientemente hidrocarbilo C1-12 opcionalmente sustituido con uno o mas de amino, alcoxilo, carboxilo, ciano, halo, o hidroxilo;
cada Ric es independientemente hidrogeno o hidrocarbilo C1-12 opcionalmente sustituido o heterocarbilo de 2-12 miembros, cuya sustitucion opcional es con uno o mas de amino, alcoxilo, carboxilo, ciano, halo, o hidroxilo; cada R3A es independientemente amino, alcoxilo, carboxilo, ciano, halo, o hidroxilo; k es 0 o 1; m es 0-3; n es 0 o 1; p es 0-2; y q es 0-2.
Otra realizacion incluye una formulacion que comprende un compuesto de la invencion y un excipiente farmaceuticamente aceptable. Otra incluye un compuesto o formulacion de la invencion para su uso en el tratamiento, gestion o prevencion de una enfermedad o trastorno inflamatorio o autoinmune.
4. Breve descripcion de las figuras
Ciertos aspectos de la invencion pueden entenderse a partir de las figuras adjuntas, descritas a continuacion:
La figura 1 muestra la diferencia entre los ratones MST1-/- (n = 13) y sus hermanos de camada de tipo silvestre (n-11) en un modelo de enfermedad de artritis inducida por colageno (CIA).
La figura 2 muestra el efecto de diferentes dosis de un compuesto de la invencion cuando se administra profilacticamente (figura 2A) y terapeuticamente (figura 2B) a ratones en un modelo de enfermedad de
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encefalomielitis experimental autoimmune (EAE).
La figura 3 muestra el efecto de diferentes dosis de um compuesto de la invencion cuando se admimistra terapeuticamente a ratas en un modelo de enfermedad de EAE.
La figura 4 muestra el efecto de diferentes dosis de un compuesto de la invencion cuando se administra terapeuticamente a ratones en un modelo de enfermedad de CIA. La figura 4A muestra la puntuacion acumulada de artritis en el transcurso del experimento; la figura 4B muestra el cambio en el espesor del tobillo a lo largo del experimento.
La figura 5 muestra el efecto de diferentes dosis de un compuesto de la invencion cuando se administra terapeuticamente a ratas en un modelo de enfermedad de CIA. La figura 5A muestra la puntuacion acumulada de artritis en el transcurso del experimento; la figura 5B muestra el cambio en el espesor del tobillo a lo largo del experimento.
La figura 6 muestra el efecto del tratamiento a corto plazo con un compuesto de la invencion sobre enzimas hepaticas y respuesta a citocinas en ratones sometidos a un modelo de enfermedad de hepatitis inducido por concanavalina A (ConA).
La figura 7 muestra el efecto de diferentes dosis de un compuesto de la invencion cuando se administra terapeuticamente a ratas en un modelo de enfermedad de EAE. La figura 7A muestra la puntuacion clmica en funcion del tiempo; la figura 7B muestra el desarrollo de la enfermedad en funcion de la dosis del compuesto (o vehmulo).
La figura 8 muestra el efecto del tratamiento a corto plazo con un compuesto de la invencion sobre enzimas hepaticas y respuesta a citocinas en ratones sometidos a un modelo de enfermedad de hepatitis inducido por ConA.
La figura 9 muestra el efecto de diferentes dosis de un compuesto de la invencion cuando se administra terapeuticamente a ratones en un modelo de enfermedad de EAE. La figura 9A muestra la puntuacion clmica en funcion del tiempo para los ratones a los que se administro el compuesto (y el vehmulo) por via subcutanea; La figura 9B muestra la puntuacion clmica en funcion del tiempo para los ratones a los que se administro el compuesto (y el vehmulo) por via oral;
La figura 10 muestra el efecto de un compuesto de la invencion en un modelo de CIA de raton en funcion de la dosis y el metodo de administracion. Las figuras 10A y 10B muestran el efecto del compuesto sobre las puntuaciones acumuladas y el cambio en el espesor del tobillo cuando el compuesto (y el control del vehmulo) se administraban por via subcutanea. Las figuras 10C y 10D muestran los resultados obtenidos cuando se administro por via el compuesto (y el control del vehmulo).
5. Descripcion detallada de la invencion
Esta invencion se basa, en parte, en el descubrimiento de que los ratones knockout MST1 son significativamente mas resistentes a los modelos de enfermedades autoinmunes e inflamatorias animales que sus hermanos de camada de tipo silvestre. Este hallazgo motivo el descubrimiento de nuevos compuestos que inhiben MST1, los mas preferidos de los cuales son eficaces en modelos de enfermedad animal y exhiben propiedades toxicologicas y farmacocineticas deseables.
5.1. Definiciones
A menos que se indique otra cosa, las expresiones "compuestos de la invencion" "compuestos de la presente divulgacion", y similares, se refieren a los compuestos desvelados en el presente documento, particularmente compuestos de Formula I y sales de los mismos.
A menos que se indique otra cosa, el termino "hidrocarbilo" se refiere a un resto alifatico o alidclico que tiene una estructura principal entera de carbono y que consiste en atomos de carbono y de hidrogeno. Los ejemplos de grupos hidrocarburo incluyen los que tienen 1-20, 1-12, 1-6, y 1-4 atomos de carbono (denominados como hidrocarbilo C1-20, hidrocarbilo C1-12, hidrocarbilo C1-6, e hidrocarbilo C1-4, respectivamente). Los ejemplos particulares incluyen alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, bencilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, cicloalquilalquilo, cicloalquenilalquilo, naftilo, fenilo, y feniletilo.
Los ejemplos de restos alquilo incluyen restos de cadena lineal o ramificada que tienen 1-20, 1-12, 1-6, 1-4 y 1-3 atomos de carbono (denominados como alquilo C1-20, alquilo C1-12, alquilo C1-6, alquilo C1-4 y alquilo C1-3, respectivamente). Los ejemplos particulares incluyen metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, t-butilo, isobutilo, pentilo, hexilo, isohexilo, heptilo, 4,4-dimetilpentilo, octilo, 2,2,4-trimetilpentilo, nonilo, decilo, undecilo y dodecilo.
Los ejemplos de restos alquenilo incluyen alquenilo C2-20, C2-12 y C2-6 de cadena lineal o ramificada. Los ejemplos particulares incluyen vinilo, alilo, 1 -butenilo, 2-butenilo, isobutilenilo, 1-pentenilo, 2-pentenilo, 3-metil-1-butenilo, 2- metil-2-butenilo, 2,3-dimetil-2-butenilo, 1-hexenilo, 2-hexenilo, 3-hexenilo, 1-heptenilo, 2-heptenilo, 3-heptenilo, 1- octenilo, 2-octenilo, 3-octenilo, 1-nonenilo, 2-nonenilo, 3-nonenilo, 1-decenilo, 2-decenilo y 3-decenilo.
Los ejemplos de restos alquinilo incluyen alquinilo C2-20, C2-12 y C2-6 de cadena lineal o ramificada. Los ejemplos particulares incluyen etinilo y 2-propinilo (propargilo).
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Los ejemplos de restos arilo incluyen antracenilo, azulenilo, fluorenilo, indano, indenilo, naftilo, fenilo y fenantrenilo. Los ejemplos de restos cicloalquilo incluyen cicloalquilo C3-12, C3-7, C4-6 y C6. Los ejemplos particulares incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y adamantilo.
A menos que se indique otra cosa, el termino "halo" incluye fluor, cloro, bromo, y yodo.
A menos que se indique otra cosa, el termino "heterocarbilo" se refiere a un resto que tiene una estructura principal constituida por uno o mas atomos de carbono y uno o mas heteroatomos. Los heteroatomos particulares son nitrogeno, oxfgeno y azufre. Un resto heterocarbilo puede considerarse como un resto hidrocarbilo en el que al menos un atomo de carbono, un grupo CH, CH2, o CH3 se reemplaza con uno o mas heteroatomos y el numero requerido de atomos de hidrogeno para satisfacer las valencias. Los ejemplos de heterocarbilo incluyen restos heterocarbilo de 2-20, 2-12, 2-8, 2-6 y 2-4 miembros, en los que el intervalo numerico se refiere a la suma total de atomos de carbono, nitrogeno, oxfgeno, y/o azufre en el resto. Por lo tanto, la expresion "heterocarbilo de 2-12 miembros" se refiere a un resto heterocarbilo que tiene un total de 2-12 atomos de carbono, nitrogeno, oxfgeno, y/o azufre. Los restos heterocarbilo particulares incluyen heteroalquilo, heteroalquenilo, y heteroalquinilo de cadena lineal o ramificada, asf como heterociclo y heteroarilo.
Los ejemplos de restos heteroalquilo incluyen restos heteroalquilo de 2-8 miembros, 2-6 miembros y 2-4 miembros. Los ejemplos particulares incluyen alcoxilo, acilo (por ejemplo, formilo, acetilo, benzoflo), alquilamino (por ejemplo, di-(alquil C1-3)amino), arilamino, ariloxima, carbamatos, carbamidas, alquilcarbonilo, arilcarbonilo, aminocarbonilo, alquilaminocarbonilo, alquilsulfanilo, arilsulfanilo, alquilsulfinilo, arilsulfinilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, alquilsulfonilamino, y arilsulfonilamino.
A menos que se indique otra cosa, el termino "heterociclo" se refiere a un resto heterocarbilo dclico (monodclico o polidclico) que puede ser aromatico, parcialmente aromatico o no aromatico. Los heterociclos incluyen heteroarilos. Los ejemplos incluyen heterociclos de 4-10 miembros, 4-7 miembros, 6 miembros, y 5 miembros. Los ejemplos particulares incluyen benzo[1,3]dioxolilo, 2,3-dihidro-benzo[1,4]dioxinilo, cinnolinilo, furanilo, hidantoinilo, morfolinilo, oxetanilo, oxiranilo, piperazinilo, piperidinilo, pirrolidinonilo, pirrolidinilo, tetrahidrofuranoflo, tetrahidropiranilo, tetrahidropiridinilo, tetrahidropirimidinilo, tetrahidrotiofenilo, tetrahidrotiopiranilo y valerolactamailo. Dado que el termino "heterociclo" se refiere a un anillo, por sf solo no incluye restos tales como oxazolidinona e imidazolidinona: dichos restos se consideran heterociclos sustituidos, concretamente heterociclos sustituidos con oxo.
Los ejemplos de restos heteroarilo incluyen acridinilo, benzoimidazolilo, benzofuranilo, benzoisotiazolilo, benzoisoxazolilo, benzoquinazolinilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, furilo, imidazolilo, indolilo, isotiazolilo, isoxazolilo, oxadiazolilo, oxazolilo, ftalazinilo, pirazinilo, pirazolilo, piridazinilo, piridilo, pirimidinilo, pirimidilo, pirrolilo, quinazolinilo, quinolinilo, tetrazolilo, tiazolilo, y triazinilo.
A menos que se indique otra cosa, el termino "incluyen" tiene el mismo significado que "incluyen, pero sin limitacion", y el termino "incluye" tiene el mismo significado que "incluye, pero sin limitacion". De forma similar, la expresion "tal como" tiene el mismo significado que el termino "tal como, pero sin limitacion".
A menos que se indique otra cosa, los terminos "gestion" y "gestionar" incluyen prevenir la reaparicion de la enfermedad o trastorno especificado en un paciente que ya ha sufrido la enfermedad o trastorno, y/o alargar el tiempo que un paciente que ha padecido la enfermedad o trastorno sigue en remision. Los terminos incluyen la modulacion del umbral, el desarrollo y/o la duracion de la enfermedad o trastorno, o el cambio de la forma en que un paciente responde a la enfermedad o trastorno.
A menos que se indique otra cosa, la expresion "inhibidor de MST1" se refiere a un compuesto que inhibe MST1 in vitro con una CI50 de menos de 1 pm, 0,5 pm o 0,25 pm como se determina mediante el ensayo descrito en el presente documento.
A menos que se indique otra cosa, la expresion "sales farmaceuticamente aceptables" se refiere a sales preparadas a partir de bases o acidos no toxicos farmaceuticamente aceptables, incluyendo bases o acidos inorganicos y bases o acidos organicos. Las sales de adicion de bases farmaceuticamente aceptables adecuadas incluyen sales metalicas hechas de aluminio, calcio, litio, magnesio, potasio, sodio y cinc o sales organicas hechas de lisina, N,N'- dibenciletilendiamina, cloroprocama, colina, dietanolamina, etilendiamina, meglumina (N-metilglucamina) y procama. Los acidos no toxicos adecuados incluyen acidos inorganicos y organicos tales como acidos acetico, algfnico, antradlico, bencenosulfonico, benzoico, canforsulfonico, dtrico, etenesulfonico, formico, fumarico, furoico, galacturonico, gluconico, glucuronico, glutamico, glicolico, bromddrico, clorddrico, isetionico, lactico, maleico, malico, mandelico, metanosulfonico, mucico, dtrico, pamoico, pantotenico, fenilacetico, fosforico, propionico, salidlico, estearico, sucdnico, sulfadlico, sulfurico, acido tartarico, y acido p-toluenosulfonico. Los acidos no toxicos espedficos incluyen acidos clorddrico, bromddrico, fosforico, sulfurico, y metanosulfonicos. Los ejemplos de sales espedficas incluyen, por tanto, sales clorhidrato y mesilato. Otros se conocen bien en la tecnica. Veanse, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a ed. (Mack Publishing, Easton PA: 1990) y Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19a ed. (Mack Publishing, Easton PA: 1995).
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A menos que se indique otra cosa, el termino "sustituido", cuando se usa para describir una estructura o resto qmmico, se refiere a un derivado de esa estructura o resto en el que uno o mas de sus atomos de hidrogeno estan sustituidos con un atomo, un resto qmmico o funcional, tal como, pero sin limitacion, alcohol, aldetndo, alcoxi, alcanoiloxi, alcoxicarbonilo, alquenilo, alquilo (porejemplo, metilo, etilo, propilo, t-butilo), alquinilo, alquilcarboniloxi (- OC(O)alquilo), amida (-C(O)NH-alquil- o -alquil- NHC(O)alquilo), amidinilo (-C(NH)NH-alquilo o -C(Nr)NH2), amina (primaria, secundaria y terciaria, tales como alquilamino, arilamino, arilalquilamino), aroMo, arilo, ariloxi, azo, carbamoMo (-NHC(O)O-alquil- o -OC(O)NH-alquilo), carbamilo (por ejemplo, CONH2, CONH-alquilo, CONH-arilo), carbonilo, carboxilo, acido carboxflico, antndrido del acido carboxflico, cloruro de acido carbox^lico, ciano, ester, epoxido, eter (por ejemplo, metoxi, etoxi), guanidino, halo, haloalquilo (por ejemplo, -CCl3, -CF3, -C(CF3)3), heteroalquilo, hemiacetal, imina (primaria y secundaria), isocianato, isotiocianato, cetona, nitrilo, nitro, oxfgeno (es dear, para proporcionar un grupo oxo), fosfodiester, sulfuro, sulfonamido (por ejemplo, SO2NH2), sulfona, sulfonilo (incluyendo alquilsulfonilo, arilsulfonilo y arilalquilsulfonilo), sulfoxido, tiol (por ejemplo, sulfhidrilo, tioeter) y urea (- NHCONH-alquil-). En una realizacion particular, el termino sustituido se refiere a un derivado de esa estructura o resto en el que uno o mas de sus atomos de hidrogeno estan sustituidos con alcohol, alcoxi, alquilo (por ejemplo, metilo, etilo, propilo, t-butilo), amida (-C(O)NH-alquil- o -alquilNHC(O)alquilo), amidinilo (-C(NH)NH-alquilo o - C(NR)NH2), amina (primaria, secundaria y terciaria, tales como alquilamino, arilamino, arilalquilamino), arilo, carbamoMo (-NHC(O)O-alquil- o -OC(O)NH-alquilo), carbamilo (por ejemplo, CONH2, asf como CONH-alquilo, CONH-arilo), halo, haloalquilo (por ejemplo, -CCl3, -CF3, -C(CF3)3), heteroalquilo, imina (primaria y secundaria), isocianato, isotiocianato, tiol (por ejemplo, sulfhidrilo, tioeter) o urea (-NHCONH-alquil-).
A menos que se indique otra cosa, una "cantidad terapeuticamente eficaz" de un compuesto es una cantidad suficiente para proporcionar un beneficio terapeutico en el tratamiento o gestion de una enfermedad o afeccion, o para retrasar o minimizar uno o mas smtomas asociados con la enfermedad o afeccion. Una "cantidad terapeuticamente eficaz" de un compuesto significa una cantidad de agente terapeutico, en solitario o en combinacion con otras terapias, que proporciona un beneficio terapeutico en el tratamiento o gestion de la enfermedad o afeccion. La expresion "cantidad terapeuticamente eficaz" puede incluir una cantidad que mejora la terapia global, reduce o evita los smtomas o causas de una enfermedad o afeccion, o mejora la eficacia terapeutica de otro agente terapeutico.
A menos que se indique otra cosa, los terminos "trata", "tratar" y "tratamiento" contemplan una accion que sucede mientras un paciente padece la enfermedad o trastorno especificado, que reduce la gravedad de la enfermedad o trastorno, o retarda o ralentiza el avance de la enfermedad o trastorno.
A menos que se indique otra cosa, uno o mas adjetivos que preceden inmediatamente a una serie de sustantivos debe interpretarse como aplicable a cada uno de los sustantivos. Por ejemplo, la expresion "alquilo, arilo o heteroarilo opcionalmente sustituido" tiene el mismo significado que "alquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido".
Debe observarse que un resto qmmico que forma parte de un compuesto mas grande se puede describir en el presente documento usando un nombre comunmente acordado cuando existe como una sola molecula o un nombre comunmente concedido a su radical. Por ejemplo, los terminos "piridina" y "piridilo" tienen el mismo significado cuando se usan para describir un resto unido a otros restos qmmicos. Por lo tanto, a las dos expresiones "XOH, en la que X es piridilo" y "XOH, en la que X es piridina", se les da el mismo significado, e incluyen los compuestos piridin-2-ol, piridin-3-ol y piridin-4-ol.
Tambien debe observarse que si la estereoqmmica de una estructura o de una porcion de una estructura no esta indicada, por ejemplo, con lmeas en negrita o discontinuas, la estructura o la porcion de la estructura debe entenderse como que abarca todos los estereoisomeros de la misma. De forma similar, los nombres de compuestos que tienen uno o mas centros quirales que no especifican la estereoqmmica de estos centros incluyen estereoisomeros puros y mezclas de los mismos. Ademas, se supone que cualquier atomo mostrado en un dibujo con valencias insatisfechas esta unido a suficientes atomos de hidrogeno para satisfacer las valencias. Ademas, los enlaces qmmicos representados con una lmea continua paralela a una lmea discontinua incluyen enlaces sencillos y dobles (por ejemplo, aromaticos), si las valencias lo permiten. Esta invencion incluye los tautomeros y solvatos (por ejemplo, hidratos) de los compuestos desvelados en el presente documento.
5.2. Compuestos de la invencion
Esta invencion incluye compuestos de la formula:
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y sales farmaceuticamente aceptables de los mismos, en la que:
A es arilo o heterociclo de 4-7 miembros;
D es un heterociclo no aromatico de 5-7 miembros;
X es N o CH;
cada uno de Yi e Y2 es independientemente N o CH;
cada Ri es independientemente Ria, -(RiB)nSOpRic, -(RiB)nSOp(Ric)2, -(RiB)nN(Ric)SOpRic, -(RiB)nC(O)N(Ric)2, o -(RiB)nNRicc(O)Ric, o hidrocarbilo ci.12 opcionalmente sustituido o heterocarbilo de 2-12 miembros, cuya sustitucion opcional es con uno o mas de Ria;
cada Ria es independientemente amino, alcoxilo, carboxilo, ciano, halo, o hidroxilo;
cada Rib es independientemente hidrocarbilo ci.12 opcionalmente sustituido con uno o mas de amino, alcoxilo, carboxilo, ciano, halo, o hidroxilo;
cada R1c es independientemente hidrogeno o hidrocarbilo ^-12 opcionalmente sustituido o heterocarbilo de 2-12 miembros, cuya sustitucion opcional es con uno o mas de amino, alcoxilo, carboxilo, ciano, halo, o hidroxilo; cada R3A es independientemente amino, alcoxilo, carboxilo, ciano, halo, o hidroxilo; k es 0 o 1; m es 0-3; n es 0 o 1; p es 0-2; y q es 0-2.
Los compuestos particulares de la invencion son de la formula:
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en la que Z es N o cR1
Los compuestos particulares de la invencion son de las formulas:
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o
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en las que r es 1 o 2, y R4 es hidrogeno o alquilo.
Cuando sea aplicable a las formulas desveladas en el invencion son de tal forma que X es N.
Cuando sea aplicable a las formulas desveladas en el invencion son de tal forma que Y1 es CH.
Cuando sea aplicable a las formulas desveladas en el invencion son de tal forma que Y2 es CH.
Cuando sea aplicable a las formulas desveladas en el invencion son de tal forma que Z es N.
Cuando sea aplicable a las formulas desveladas en el invencion son de tal forma que Z es CR1.
Cuando sea aplicable a las formulas desveladas en el invencion son de tal forma que R1 es -(R1B)nSOpR1C, -(R11 (R1b)NR1cC(0)R1c.
presente documento, los compuestos particulares de la
presente documento, los compuestos particulares de la
presente documento, los compuestos particulares de la
presente documento, los compuestos particulares de la
presente documento, los compuestos particulares de la
presente documento, los compuestos particulares de la )nSOpN(R1c)2, -(R1B)nNR1cSOpR1c, -(R1B)nC(O)N(R1c)2, o -
Los compuestos particulares de la invencion son de la formula:
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Los compuestos de la invencion pueden prepararse mediante metodos conocidos en la tecnica y por metodos descritos en el presente documento. En general, los compuestos de la invencion pueden prepararse como se muestra a continuacion:
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en el que el bromuro de 2-amino heteroarilo de partida 1 se acopla con un ester boronico aromatico apropiado en condiciones de acoplamiento de Suzuki estandar para proporcionar, despues del tratamiento con un reactivo de bromacion electrofilo, bromuro de 2-amino hetero-biarilo 2. El acoplamiento de Suzuki posterior de 2 con otro ester boronico aromatico que presenta una funcionalidad amida proporciona el producto final 3.
5.3. Metodos de uso
Esta invencion se refiere a un metodo de inhibicion de MST1, que comprende poner en contacto MST1 (in vitro o in vivo) con una cantidad eficaz de un compuesto de la invencion.
Otra realizacion se refiere a un metodo de supresion de la respuesta inmune en un paciente (por ejemplo, un ser humano), que comprende administrar al paciente una cantidad eficaz de un compuesto de la invencion.
Otra realizacion se refiere a un metodo de tratamiento, gestion o prevencion de una enfermedad o trastorno autoinmune o inflamatorio, que comprende administrar a un paciente que lo necesite una cantidad terapeutica o profilacticamente eficaz de un compuesto de la invencion. Los ejemplos de enfermedades y trastornos incluyen aclorhidra autoinmune, enfermedad de Addison, espondilitis anquilosante, smdrome antifosfolfpido, asma (por ejemplo, asma bronquial), dermatitis atopica, gastritis atrofica autoinmune, enfermedad de Behcet, enfermedad celfaca, enfermedad de Crohn, smdrome de Cushing, dermatomiositis, smdrome de Goodpasture, enfermedad de injerto contra huesped, enfermedad de Grave, tiroiditis de Hashimoto, hepatitis (por ejemplo, inflamatoria e inducida con alcohol), atrofia adrenal idiopatica, trombocitopenia idiopatica, smdrome de Kawasaki, smdrome de Lambert- Eaton, lupus eritematoso, esclerosis multiple, miastenia gravis, penfigoide, penfigo vulgar, anemia perniciosa, polinosis, poliarteritis nodosa, cirrosis biliar primaria, colangitis esclerosante primaria, psoriasis, artritis psoriatica, Raynauds, smdrome de Reiter, policondritis recidivante, artritis reumatoide, smdrome de Schmidt, esclerodermia, smdrome de Sjogren, oftalirna simpatica, artritis de Takayasu, arteritis temporal, tirotoxicosis, rechazo de trasplante (por ejemplo, de organo, celula o medula osea), diabetes de tipo 1, colitis ulcerosa, uveftis, y granulomatosis de Wegener.
La cantidad, via de administracion y programa de dosificacion de un compuesto dependera de factores tales como la indicacion espedfica que se va a tratar, prevenir o gestionar, y la edad, sexo y afeccion del paciente. Los papeles desempenados por tales factores son bien conocidos en la tecnica, y pueden acomodarse mediante experimentacion rutinaria. En una realizacion particular, se administra un compuesto de la invencion a un paciente humano en una cantidad de aproximadamente 1-50, 1-25, o 2,5-15, o 5-10 mpk.
Los compuestos de la invencion se pueden administrar en combinacion con otros farmacos inmunosupresores o antiinflamatorios. Los farmacos se pueden administrar al mismo tiempo o en momentos diferentes.
Los ejemplos de inmunosupresores incluyen aminopterina, azatioprina, ciclosporina A, D-penicillamina, sales de oro, hidroxicloroquina, leflunomida, metotrexato, minociclina, rapamicina, sulfasalazina, tacrolimus (FK506), y sales farmaceuticamente aceptables de los mismos. Un inmunosupresor particular es el metotrexato.
Los ejemplos adicionales incluyen anticuerpos anti-TNF, tales como adalimumab, certolizumab pegol, etanorcept, e infliximab. Otros incluyen bloqueadores de la interleucina-1, tales como anakinra. Otros incluyen anticuerpos anti- celulas B (CD20), tales como rituximab. Otros incluyen bloqueadores de la activacion de linfocitos T, tales como abatacept.
Los ejemplos adicionales incluyen los inhibidores de la inosina monofosfato deshidrogenasa, tales como micofenolato de mofetilo (CellCept®) y acido micofenolico (Myfortic®).
Los ejemplos de farmacos antiinflamatorios incluyen glucocorticoides y AINE.
Los ejemplos de glucocorticoides incluyen aldosterona, beclometasona, betametasona, cortisona, desoxicorticosterona, dexametasona, fludrocortisonas, hidrocortisona, metilprednisolona, prednisolona, prednisona, triamcinolona, y sales farmaceuticamente aceptables de los mismos,
Los ejemplos de AINE incluyen los salicilatos (por ejemplo, aspirina, amoxiprin, benorilato, salicilato de colina y
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magnesio, diflunisal, faislamina, salicilato de metilo, salicilato de magnesio, salicilato de salicilo, y sales farmaceuticamente aceptable de los mismos), acidos arilalcanoicos (por ejemplo, diclofenaco, aceclofenaco, acemetacina, bromfenaco, etodolac, indometacina, nabumetona, sulindac, tolmetina, y sales farmaceuticamente aceptables de los mismos), acidos arilpropionicos (por ejemplo, ibuprofeno, carprofeno, fenbufeno, fenoprofeno, flurbiprofeno, ketoprofeno, ketorolac, loxoprofeno, naproxeno; oxaprozina, acido tiaprofenico suprofeno, y sales farmaceuticamente aceptables de los mismos), acidos arilantramlicos (por ejemplo, acido meclofenamico, acido mefenamico, y sales farmaceuticamente aceptables de los mismos), derivados de pirazolidina (por ejemplo, azapropazona, metamizol, oxifenbutazona, fenilbutazona, sulfinprazona, y sales farmaceuticamente aceptables de los mismos), oxicams (por ejemplo, lornoxicam, meloxicam, piroxicam, tenoxicam, y sales farmaceuticamente aceptables de los mismos), inhibidores de COX-2 (por ejemplo, celecoxib, etoricoxib, lumiracoxib, parecoxib, rofecoxib, valdecoxib, y sales farmaceuticamente aceptables de los mismos), y sulfonanilidas (por ejemplo, nimesulida y sales farmaceuticamente aceptables de los mismos).
5.4. Composiciones farmaceuticas
Esta invencion incluye composiciones farmaceuticas que comprenden uno o mas compuestos de la invencion. Ciertas composiciones farmaceuticas son formas de dosificacion unitarias adecuadas para administracion oral, mucosal (por ejemplo, nasal, sublingual, vaginal, bucal, o rectal), parenteral (por ejemplo, subcutanea, intravenosa, inyeccion en bolo, intramuscular, o intraarterial), o transdermica a un paciente. Los ejemplos de formas de dosificacion incluyen, pero sin limitacion: comprimidos; pastillas, capsulas, tales como capsulas de gelatina blanda elastica. obleas; trociscos; grageas; dispersiones; supositorios; pomadas; cataplasmas (emplastos); pastas, polvos; apositos; cremas; escayolas; soluciones; parches; aerosoles (por ejemplo, aerosoles nasales o inhaladores); geles; formas lfquidas de dosificacion adecuadas para administracion oral o por mucosa a un paciente, incluyendo suspensiones (por ejemplo, suspensiones lfquidas acuosas o no acuosas, emulsiones de aceite en agua o emulsiones lfquidas de agua en aceite), soluciones y elixires; formas de dosificacion lfquidas adecuadas para administracion parenteral a un paciente y solidos esteriles (por ejemplo, solidos cristalinos o amorfos) que se pueden reconstituir para proporcionar formas de dosificacion lfquidas adecuadas para administracion parenteral a un paciente.
La formulacion debe adecuarse al modo de administracion. Por ejemplo, la administracion oral de un compuesto susceptible de degradacion en el estomago puede conseguirse usando un revestimiento enterico. De forma similar, una formulacion puede contener ingredientes que faciliten la administracion del principio o principios activos al sitio de accion. Por ejemplo, los compuestos pueden administrarse en formulaciones liposomicas con el fin de protegerlas de las enzimas degradativas, facilitar el transporte en el sistema circulatorio y efectuar su suministro a traves de las membranas celulares.
De forma similar, los compuestos poco solubles se pueden incorporar en formas de dosificacion lfquidas (y formas de dosificacion adecuadas para la reconstitucion) con la ayuda de agentes solubilizantes, emulsionantes y tensioactivos tales como, pero sin limitacion, ciclodextrinas (por ejemplo, a-ciclodextrina, p-ciclodextrina, Captisol®, y Encapsin™ (vease, por ejemplo, Davis y Brewster, Nat. Rev. Drug Disc, 3:1023-1034 (2004)), Labrasol® Labrafil® Labrafac®, cremafor, y disolventes no acuosos, tales como, pero sin limitacion, alcohol etflico, alcohol isopropflico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bendlico, benzoato de bencilo, propilenglicol, 1,3-butileno glicol, dimetil formamida, dimetilsulfoxido (DMSO), aceites biocompatibles (por ejemplo, aceite de semilla de algodon, cacahuete, mafz, germen, oliva, ricino, y sesamo), glicerol, tetrahidrofurfuril alcohol, polietilenglicoles, esteres de acidos grasos de sorbitan, y mezclas de los mismos (por ejemplo, DMSO:aceite de maizcornoil).
La composicion, forma y tipo de una forma de dosificacion variara tfpicamente dependiendo del uso. Por ejemplo, una forma de dosificacion utilizada en el tratamiento agudo de una enfermedad puede contener cantidades mayores de uno o mas de los principios activos que comprende una forma de dosificacion utilizada en el tratamiento cronico de la misma enfermedad. De forma similar, una forma de dosificacion parenteral puede contener cantidades mas pequenas de uno o mas de los ingredientes activos que comprende una forma de dosificacion oral usada para tratar la misma enfermedad. La explicacion de tales diferencias sera evidente para los expertos en la tecnica. Vease, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a ed., Mack Publishing, Easton PA (1990).
5.4.1. Formas de dosificacion oral
Las composiciones farmaceuticas de la invencion adecuadas para la administracion oral pueden presentarse como formas de dosificacion discretas, tales como, pero sin limitacion, comprimidos (por ejemplo, comprimidos masticables), pastillas, capsulas, y lfquidos (por ejemplo, jarabes aromatizados). Dichas formas de dosificacion contienen cantidades predeterminadas de ingredientes activos y pueden prepararse por metodos de farmacia bien conocidos por los expertos en la tecnica. Veanse de manera general, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a ed., Mack Publishing, Easton PA (1990).
Las formas de dosificacion orales tfpicas se preparan combinando el principio o principios activos en una mezcla mtima con al menos un excipiente de acuerdo con las tecnicas convencionales de composicion farmaceutica. Los excipientes pueden tomar una amplia variedad de formas dependiendo de la forma de preparacion deseada para la
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administracion.
Debido a su facilidad de administracion, los comprimidos y las capsulas representan las formas de unidad de dosificacion mas ventajosas. Si se desea, los comprimidos pueden recubrirse mediante tecnicas habituales acuosas o no acuosas. Dichas formas de dosificacion pueden prepararse mediante metodos de farmacia, En general, las composiciones farmaceuticas y las formas de dosificacion se preparan mezclando uniformemente e mtimamente los principios activos con vehfculos lfquidos, vehfculos solidos finamente divididos, o ambos, y luego moldeando el producto en la presentacion deseada si es necesario. Los desintegrantes se pueden incorporar en formas de dosificacion solidas para facilitar la disolucion rapida. Tambien se pueden incorporar lubricantes para facilitar la fabricacion de formas de dosificacion (por ejemplo, comprimidos).
5.4.2. Formas de dosificacion parenteral
Pueden administrarse formas de dosificacion parenteral a los pacientes por diversas rutas, incluyendo la via subcutanea, intravenosa (incluida la inyeccion en bolo), intramuscular, e intraarterial. Debido a que su administracion tfpicamente evita las defensas naturales de los pacientes contra los contaminantes, las formas de dosificacion parenteral son espedficamente esteriles o capaces de esterilizarse antes de la administracion a un paciente. Los ejemplos de formas de dosificacion parenteral incluyen soluciones listas para inyeccion, productos secos listos para disolverse o suspenderse en un velmculo farmaceuticamente aceptable para inyeccion, suspensiones listas para inyeccion y emulsiones.
Los velmculos adecuados que se pueden usar para proporcionar formas de dosificacion parenterales de la invencion se conocen bien por los expertos en la tecnica. Los ejemplos incluyen: agua para inyeccion USP; velmculos acuosos tales como Inyeccion de Cloruro de Sodio, Inyeccion de Ringer, Inyeccion de Dextrosa, Inyeccion de Dextrosa y Cloruro de Sodio, e Inyeccion de Ringer Lactato; velmculos miscibles en agua tales como alcohol etflico, polietilenglicol, y polipropilenglicol; y velmculos no acuosos tales como aceite de mafz, aceite de semilla de algodon, aceite de cacahuete, aceite de sesamo, oleato de etilo, miristato de isopropilo, y benzoato de bencilo.
6. Ejemplos
Los ejemplos que se refieren a la materia fuera del alcance de las reivindicaciones se proporcionan como Ejemplos de referencia.
6.1. Modelo de enfermedad de encefalomielitis experimental autoinmune (EAE)
Los ratones knockout y los compuestos se ensayaron en un modelo de enfermedad de EAE, que se llevo a cabo generalmente como se describe a continuacion.
Modelo de raton. Aqui. se implemento una adaptacion del metodo de Bettelli, et al., J. Immunol. 161:3299 (1998). Se inmunizaron hermanos de camada C57BI/6-Albino/129SvEv de ocho a 12 semanas de edad por via subcutanea con un total de 300 |jg de peptido MOGp35-55 (MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK) emulsificado en adyuvante completo de Freund (CFA) que contema 250 jg de Mycobacterium tuberculosis inactivadas por calor H37 Ra (Difco Laboratories). El antfgeno se dividio por igual entre dos sitios de inyeccion en los costados abdominales. Inmediatamente despues de la inyeccion del antfgeno emulsionado (dfa 0), cada raton recibio una inyeccion intravenosa de 500 ng de toxina Pertussis (List Biological Laboratories). Los pesos de los animales se registraron antes del inicio del experimento y se controlaron a lo largo del experimento, 2-3 veces por semana. La gravedad de la enfermedad se puntuo en una escala de la siguiente manera: 0 = asintomatica, ningun signo detectable de la enfermedad; 1 = ligera debilidad de la cola/cola floja y/o cuartos traseros cafdos; 2 = paralisis total definida de la cola; 3 = caminar torcido/en balanceo leve y paralisis total de la cola y/o reflejo de enderezamiento alterado leve; 4 = balanceo fuerte con alteracion del control-debilidad de las extremidades posteriores y/o reflejo de enderezamiento alterado; 5 = paralisis de una de las extremidades posteriores, posiblemente con debilidad leve de la parte anterior de la pata; 6 = paralisis de ambas extremidades posteriores y/o debilidad moderada a grave de la parte anterior del antebrazo; 7 = cuadriplejfa/paralisis de todos los miembros posteriores y anteriores; 8 = moribundo/muerto. Cuando se puntuo la gravedad de la EAE con "2" o mas, se pusieron en el suelo de la jaula una fuente de agua adicional que consistfa en Napa Nectar™, y comida pre-humedecida. A los animales con grave de aparicion de la enfermedad se les dio fluidoterapia subcutanea que consiste en 1 cc de solucion salina normal un mmimo de una vez al dfa. Se sacrificaron animales que mostraban puntuaciones de 7-8 sin signos de recuperacion durante mas de 2 dfas.
Modelo de rata. La EAE se provoco en ratas de acuerdo con Mannie, M. D., et al., Proc Natl. Acad. Sci. U.S.A. 82:5515-5519 (1985). Un peptido sintetico que consiste en una secuencia analoga al determinante encefalitogeno de la longitud minima informada de la molecula de protema basica de mielina bovina (MBP) (MBP68-82: YGSLPQKAQRPQDEN). A ratas Lewis (150-200 g, hembra; Charles River Laboratories, Wilmington, MA) se les inyecto por via subcutanea en ambos lados de la rafz dorsal de la cola 0,1 ml de una emulsion que consistfa en 100 jg de peptido MBP encefalitogenico en adyuvante completo de Freund que contema 200 jg de Mycobacterium tuberculosis H37Rv, cepa de Jamaica. Los animales inmunizados se controlaron diariamente para determinar el inicio y la progresion de la enfermedad, comenzando una semana despues de la inmunizacion. La gravedad de la
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enfermedad se puntuo como se ha descrito anteriormente.
Se sacrificaron animales que mostraban puntuaciones de 7-8 sin signos de recuperacion durante mas de 2 dfas.
6.2. Modelo de enfermedad de artritis inducida por colageno (CIA)
Los ratones knockout y los compuestos se ensayaron en un modelo de enfermedad de CIA, que se llevo realizo generalmente como se describe a continuacion.
Modelo de raton. Se inmunizaron ratones DBA/1 de ocho a 16 semanas de edad por via intradermica (i.d.) en varios sitios en la base de la cola con 100 |jg de colageno tipo II de pollo (CII; Sigma Chemical Co.) en adyuvante completo de Freund (CFA, Difco, Detroit, MI) que contema 2,5 mg/ml de M. tuberculosis, seguido de una inyeccion de refuerzo de repeticion i.d. de CII (100 jg emulsionada en CFA) administrada 3 semanas despues de la inmunizacion primaria. Los ratones se controlaron a diario para detectar signos de artritis, y las puntuaciones de gravedad de la enfermedad se evaluaron mediante una puntuacion visual de 0 a 4 de acuerdo con la siguiente escala: 0 = sin eritema ni hinchazon; 1 = eritema e inflamacion leve de la articulacion del pie o del tobillo; 2 = eritema e hinchazon leve que se extiende desde el tobillo hasta el pie medio; 3 = eritema e inflamacion moderada que se extiende desde el tobillo hasta las articulaciones metatarsianas; 4 = eritema e hinchazon grave en el tobillo, el pie y los dedos. Las puntuaciones de gravedad total de la enfermedad se registraron como una suma de puntuaciones visuales para cuatro miembros. Ademas de la puntuacion visual, se midio el grosor de la pata con un calibre micrometrico.
Modelo de rata. La CIA se provoco en ratas de acuerdo con Rosloniec, E. F., et al., Curr Protoc Immunol Capttulo 15: unidad 15, pags. 11-25. Aqrn, a ratas Lewis (150-200 g, hembra; Charles River Laboratories, Wilmington, MA) se les inyecto por via intradermica en la base de la cola un total de 300 jl de una emulsion 1:1 de colageno bovino de tipo II (CII; 150 |jg en total; Sigma- Aldrich) y un adyuvante de Freund incompleto (IFA; 150 jl en total; Sigma- Aldrich), seguido de una inyeccion de refuerzo repetida de la misma emulsion 7 dfas despues de la inmunizacion primaria. Las ratas se controlaron para detectar signos de artritis por puntuacion clmica (observacion visual) de cada pata de rata, utilizando la escala de clasificacion descrita anteriormente. La extension de la hinchazon se calculo restando los valores basales de la primera medicion de los valores de las mediciones posteriores.
6.3. Modelo de enfermedad de hepatitis inducida con concanavalina A (ConA)
Este modelo se llevo a cabo generalmente como se indica a continuacion. A ratones C57BI/6-Albino/129SvEv se les inyecto por via intravenosa (i/v) a traves de la vena lateral de la cola una unica dosis subletal de Concanavalina A de Canavalia ensiformis (Frijol, Tipo IV-S, polvo liofilizado, procesado asepticamente; Sigma) administrada a 10-16 mg/kg de peso corporal de raton en un volumen total de 0,1-0,3 ml de PBS exento de pirogenos. Las inyecciones de la vena de la cola de ratones sujetos en un dispositivo de retencion de raton de Plexiglas se realizaron sin anestesia, utilizando una jeringuilla de 1 ml con una aguja de calibre 27. A las seis y 24 horas despues de la inyeccion, se recogieron muestras de sangre mediante sangrado retro-orbital. Los animales se sacrificaron y se analizaron los sueros de las muestras de sangre para detectar la presencia de IL-12, TNF-a, MCP-1, IFN-y, IL-10, e IL-6 utilizando una matriz de perlas citometricas (CBA) (BD Biosciences, Mountain View, CA), de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Los datos se adquirieron con un citometro de flujo FACSCalibur y se analizaron con BD CBA Software (BD Biosciences). Los marcadores bioqmmicos de la insuficiencia hepatica se evaluaron midiendo enzimas de dano hepatico en suero, aspartato aminotransferasa (AST) y alanina aminotransferasa (ALT), utilizando un analizador bioqmmico clmico estandar. Los hfgados de ratones tratados con ConA fueron seccionados y tenidos con H & E para evaluar el grado de inflamacion inmune mediada por linfocitos T.
6.4. Ratones Knockout MST1
Se criaron ratones knockout MST1 (-/-) y sus hermanos de camada de tipo silvestre (C57BI/6-Albino/129SvEv) y se evaluaron en modelos de enfermedad de hepatitis inducida por EAE, CIA, y ConA.
En el modelo de EAE, se ensayaron hermanos de camada de MST1-/- de ocho a 12 semanas de edad y de tipo silvestre (+/+) (C57BI/6-Albino/129SvEv). En los ratones de tipo silvestre, la EAE comenzo tan pronto como el dfa 8 despues de la inmunizacion, con un inicio medio a los dfas 11,4 ± 0,78 y 12,3 ± 0,9 (experimento n.° 1 y experimento n.° 2, respectivamente). respectivamente). El inicio de la enfermedad se retraso significativamente en los animales deficientes en MST1 (dfa 16,6 ± 1,41 en el experimento n.° 1 y dfa 15,1 ± 1,1 en el experimento n.° 2; p = 0,005 y 0,06, respectivamente). En la fase aguda post-inmunizacion de la EAE (dfas 7-22), hubo una disminucion de 4 a 6 veces en la puntuacion de la enfermedad acumulativa media en ratones MST1-/- en comparacion con sus hermanos de camada de tipo silvestre. Durante esta fase de la enfermedad, la puntuacion clmica media fue significativamente menor en los ratones MST1 -/- que en los animales +/+. Ademas, la puntuacion maxima media de EAE observada en los animales MST1+/+ el dfa 17 despues de la inmunizacion fue significativamente mayor que la puntuacion maxima media de EAE en el grupo MST1-/-. Por lo tanto, la deficiencia homocigotica del gen MST1 retraso significativamente el inicio de la EAE en ratones y alivio la gravedad de la EAE en la fase posterior a la inmunizacion aguda. En conjunto, estos resultados demuestran que los ratones MST1-/- desarrollan EAE menos grave con puntuaciones de enfermedad significativamente mas bajas, y son menos susceptibles a la enfermedad en comparacion con sus
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hermanos de camada de tipo silvestre.
En el modelo de CIA, se ensayaron ratones de control de ocho a 16 semanas de edad deficientes en MST1 y de tipo silvestre (C57BI/6-Albino/129SvEv). Como se muestra en la figura 1, los ratones deficientes en MST1 mostraron una incidencia notablemente disminuida de artritis cuando se compararon con sus hermanos de camada silvestres (* indica p <0,03). La hinchazon de las articulaciones y los signos clmicos de inflamacion en las articulaciones de tobillo y muneca fueron evidentes en los controles de tipo silvestre a partir del dfa 21 despues de la inmunizacion inicial, mientras que los primeros signos de artritis medidos por puntuaciones de gravedad de >2 en los ratones deficientes MST1 se desarrollaron solo el dfa 42. La media de las puntuaciones acumulativvas de artritis en el grupo de control de tipo silvestre se mantuvo superior a 3,5 durante todo el experimento. La gravedad de la artritis disminuyo significativamente en los ratones deficientes en MST1 con una puntuacion media maxima de artritis acumulada de 1,8 y una media maxima A del espesor de tobillo de 70 pm alcanzada el dfa 49, mientras que la artritis en el grupo de control comenzo mas temprano que el dfa 25 despues de la inmunizacion, con una puntuacion media de artritis acumulativa de 3,5 al dfa 28, una puntuacion media maxima de artritis acumulativa de 6,2 al dfa 46 y una media maxima A del espesor del tobillo de 485 pm alcanzada por el dfa 32. Esta disminucion significativa en la gravedad de la artritis en los ratones MST1-/- persistio hasta el dfa 53 despues de la primera inmunizacion.
En el modelo de hepatitis Con-A, se ensayaron ratones -/- y de tipo silvestre de control (C57BI/6-Albino/129SvEv). El analisis de la produccion de citocinas inducida por Con A revelo que los niveles sericos de IL-12, TNF-a, y MCP-1 disminuyeron significativamente en ratones MST-1-/- en comparacion con hermanos de camada de tipo silvestre. De forma similar, la liberacion de enzimas de dano hepatico (ALT y AST) en ratones MST-1-/- fue menor en ratones deficientes en MST-1 que en ratones de tipo silvestre en dos experimentos independientes.
6.5. Metodo sintetico general A y Sintesis de 4-(6-amino-5-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)piridin-3-il)-N- ciclopropilbencenosulfonamida
El compuesto del tftulo se preparo mediante el metodo general A, representado a continuacion:
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en el que: a es acido 1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-ilboronico, PdC^dppf-DCM, Cs2CO3, DMF, 100 °C; b es H2, PdC, MeOH:DMF (1:2); c es Br2, MeOH; y d es acido 4-(N-ciclopropilsulfamoil)fenilboronico, Pd(PPh3)4, Na2CO3 ac., n-BuOH, 100 °C.
En particular, una suspension a temperatura ambiente de 3-bromo-2-nitropiridina (6,4 g, 31,57 mmol), acido 1-oxo- 1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-ilboronico (6,63 g, 34,73 mmol), PdC^dppf-DCM (1,031 g, 1,26 mmol) y Cs2CO3 (15,43 g, 47,35 mmol) en DMF se sonico durante 20 min mientras se evacuo iterativamente la mezcla de reaccion y se cargo de nuevo con N2 seco para realizar la desgasificacion. Despues, la suspension desgasificada se calento a 100 °C y la reaccion se controlo por LC/MS. Tras la finalizacion, la reaccion se filtro y despues se concentro al vado. El material en bruto resultante se disolvio de nuevo en MeOH, se trato con gel de sflice (15 g), despues se concentro al vado a sequedad, y despues se destilo azeotropicamente con tolueno para retirar el metanol en trazas. El polvo se suspendio en DCM, despues se evaporo instantaneamente sobre un lecho largo de sflice, eluyendo con MeOH al 4-10 %:DCM. Las fracciones puras se combinaron y se concentraron. El solido de color pardo resultante se suspendio en DCM (15 ml), despues se filtro para retirar las impurezas de color para proporcionar 6-(2-nitropiridin-3- il)-3,4-dihidroisoquinolin-1(2H)-ona en forma de un solido de color castano (7,4 g, rendimiento del 87 %). 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 8 ppm 8,63 (d, J = 4,5 Hz, 1 H), 8,23 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 8,04 (s a, 1 H), 7,86-7,98 (m, 2 H), 7,38 (s, 1 H), 7,35 (d, J = 9,0 Hz, 1 H), 3,37-3,44 (m, 2 H), 2,95 (t, J = 6,3 Hz, 2 H); 13C RMN (101 MHz, DMSO-de) 8 ppm 163,78, 156,77, 148,11, 142,04, 139,99, 137,26, 129,76, 128,46, 128,33, 127,63, 127,02, 126,19, 27,52; MS (EI) m/z: 270 [M+H]+; HRMS calc. para C14H12N3O3 [M+H]+270,0879, observado 270,0870.
Una solucion de 6-(2-nitropiridin-3-il)-3,4-dihidroisoquinolin-1(2H)-ona (7,4 g, 27,50 mmol) en metanol (100 ml) y
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DMF (200 ml) se desgasifico evacuando iterativamente el matraz de reaccion y cargandose de nuevo con nitrogeno seco (5 X). A la solucion desgasificada se le anadio Pd al 10% sobre carbono (tipo Degussa, agua al 50 % en peso, 1,5 g). La reaccion se cargo con hidrogeno (~1 atm) evacuando iterativamente el recipiente de reaccion y cargandose de nuevo con hidrogeno (3 X). La reaccion se mantuvo a temperatura ambiente con agitacion vigorosa y se controlo por LC/MS. Tras la finalizacion, la reaccion se desgasifico y se purgo con nitrogeno como anteriormente, despues se calento a 70 °C y se filtro mientras estaba caliente sobre una capa de celite. El lecho se aclaro con DMF (100 ml), que se calento a 120 °C. Los extractos organicos combinados se concentraron al vado, y se destilaron azeotropicamente con tolueno (2 x 150 ml) para retirar la DMF residual.
El solido obtenido se trato con metanol (200 ml), despues se calento y se sonico para proporcionar una suspension lechosa. La suspension se enfrio a 0 °C y se trato con bromo (1,48 ml. 28,88 mmol) mediante adicion cuidadosa. La reaccion se controlo por LC/MS, y, despues de la composicion (15 min) se concentro al vado. El material resultante se almaceno a alto vado durante una noche para retirar el bromo en trazas para proporcionar bromhidrato de 6-(2- amino-5-bromopiridin-3-il)-3,4-dihidroisoquinolin-1(2H)-ona en forma de un solido de color pardo (11,16 g, rendimiento del 100 %), que se uso sin purificacion adicional. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 8 ppm 8,31 (d, J = 2,3 Hz, 1 H), 8,03 (s a, 1 H), 8,00 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 7,95 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 7,45 (s, 1 H), 7,44 (s, 2 H), 3,38-3,45 (m, 2 H), 2,96 (t, J = 6,6 Hz, 2 H); 13C RMN (101 MHz, DMSO-de) 8 ppm 163,89, 151,88, 144,15, 140,08, 137,31, 136,47, 130,22, 128,00, 127,79, 127,10, 126,28, 104,76, 48,52, 27,70; MS (EI) m/z: 318, 320 [M+H]+; HRMS calc. para C14H12BrNaO [M+H]+318,0242, observado 318,0234.
Una suspension del clorhidrato de 6-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-3,4-dihidroisoquinolin-1(2H)-ona de bromhidrato de arilo (6,50 g, 16,25 mmol), acido 4-(N-ciclopropilsulfamoil)fenilboronico (6,57 g, 17,88 mmol), Pd(PPh3)4 (565 mg, 0,49 mmol) y Na2CO3 ac. 2,0 M (4,3 g, 48,75 mmol) en n-BuOH (180 ml) se desgasifico burbujeando una corriente de nitrogeno anhidro durante 10 min. Despues, la mezcla de reaccion se calento a 100 °C durante 3 h. Tras la finalizacion, la reaccion caliente se diluyo con DMF (300 ml) y se calento a 125 °C antes de filtrar la suspension caliente sobre una capa de celite mojada con DMF caliente. Los extractos organicos se enfriaron a temperatura ambiente, despues se trataron con gel de sflice (40 g) y el disolvente se retiro al vado. El polvo seco se suspendio en DCM y se cargo sobre la parte superior de un lecho largo de gel de sflice licuado en dCm y el sistema se eluyo con MeOH al 10-20 %. Las fracciones que conteman el producto se concentraron, y el solido resultante se suspendio en DMF caliente, y despues se filtro. La torta se aclaro con MeOH, despues se seco al vado para proporcionar 4-(6- amino-5-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)piridin-3-il)-N-ciclopropilbencenosulfonamida en forma de un polvo de color blanco (5,3 g, rendimiento del 75%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 8 ppm 8,62 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 8,34 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 8,13 (s a, 2 H), 8,07 (s a, 1 H), 8,04 (d, J = 8,6 Hz, 2 H), 7,99 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 7,88 (d, J = 8,3 Hz, 2 H), 7,57 (s, 1 H), 7,56 (s, 2 H), 3,43 (t, J = 5,7 Hz, 2 H), 2,99 (t, J = 6,3 Hz, 2 H), 2,12 (tt, J = 6,8, 3,5 Hz, 1 H), 0,44-0,53 (m, 2 H), 0,36-0,44 (m, 2 H); MS (EI) m/z: 435 [M+H]+.
6.6. Metodo sintetico general B y Sintesis de 5-(6-amino-5-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)piridin-3-il)-N- etiltiofeno-2-sulfonamida
El compuesto del tttulo se preparo mediante el metodo general B, representado a continuacion:
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en el que: a es NaHCO31 N:DCM (1:1); b es MeLi, t-BuLi, B(O/-Pr)3, THF, -78 °C a temperatura ambiente; y c es 5- bromo-N-etiltiofeno-2-sulfonamida, PdCl2(PPh3)2, MeCN, Na2Co3 ac. 2,0 M, p-ondas a 140 °C durante 6 min.
Una solucion de bromhidrato de 6-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-3,4-dihidroisoquinolin-1(2H)-ona (2,00 g, 5,0 mmol), obtenida como se describe en el Ejemplo 5.2, se enfrio a 0 °C en DCM (50 ml) y se trato lentamente con una solucion ac. 1 N de NaHCO3 (25 ml). La solucion enfriada se agito vigorosamente durante 5 min, y despues las
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capas se separaron. La capa organica se seco sobre MgSO4, se filtro, se concentro y despues se seco vigorosamente al vado. El solido de color castano resultante (1,54 g, 5,0 mmol) se disolvio en THF (500 ml), se enfrio a -78 °C y se trato con una solucion 1,6 M de MeLi en Et2O (10,3 ml, 16,5 ml). La reaccion se mantuvo durante 15 min, antes de la adicion gota a gota de t-BuLi 1,7 M (8,8 ml, 14,96 mmol) durante 10 min. La solucion enfriada se agito vigorosamente durante 45 min mas antes de la adicion de triisopropilborato (5,2 ml, 22,5 mmol). La reaccion se dejo calentar a temperatura ambiente durante 30 min antes de interrumpirse con NH4Cl sat. ac. (1 ml) seguido de agua (5 ml). El precipitado resultante se retiro por filtracion y se lavo con agua fria, despues se seco durante una noche al vado para proporcionar acido (6-amino-5-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)piridin-3-il)boronico (1,10 g, rendimiento del 78%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 8 ppm 8,35 (d, J = 2,3 Hz, 1 H), 7,97 (s a, 1 H), 7,92 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 7,76 (t, J = 5,6 Hz, 1 H), 7,67 (d, J = 2,5 Hz, 1 H), 7,50 (d, J = 3,8 Hz, 1 H), 7,43-7,47 (m, 2 H), 6,21 (s, 2 H), 2,96 (t, J = 6,4 Hz, 2 H), 2,85-2,92 (m, 2 H); MS (EI) m/z: 284 [M+H]+.
Una mezcla de acido (6-amino-5-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)piridin-3-il)boronico (291 mg, 1,02 mmol), 5- bromo-N-etiltiofeno-2-sulfonamida (278 mg, 1,02 mmol), y PdCl2(PPh3)2(35 mg, 0,05 mmol) en n-BuOH (3 ml) se trato con una solucion ac. 2,0 M de Na2CO3 (1 ml) y despues se calento por microondas a 140 °C durante 6 min. Despues, la reaccion se filtro, y se purifico por HPLC para proporcionar 5-(6-amino-5-(1-oxo-1,2,3,4- tetrahidroisoquinolin-6-il)piridin-3-il)-N-etiltiofeno-2-sulfonamida en forma de un solido de color blanco despues de la purificacion por HPLC preparativa. 1H RMN (300 MHz, MeOH) 8 ppm 8,31 (d, J = 2,3 Hz, 1 H), 8,07 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,72 (d, J = 2,3 Hz, 1 H), 7,54 (dd, J = 3,8, 2,1 Hz, 1 H), 7,52 (d, J = 1,7 Hz, 1 H), 7,48 (s, 1 H), 7,34 (d, J = 3,8 Hz, 1 H), 3,57 (dd, J = 13,4, 6,5 Hz, 1 H), 2,93-3,15 (m, 2 H), 1,85-2,03 (m, 3 H), 1,13 (dd, J = 14,5, 7,2 Hz, 3 H); MS (EI) m/z: 429 [M+H]+.
6.7. Metodo sintetico general C y Sintesis de 6-(2-amino-5-(4-(etilsulfonil)fenil)piridin-3-il)-3,4-dihidroisoquinolin- 1(2H)-ona
El compuesto del tftulo se preparo por el Metodo general C, representado a continuacion:
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en el que; a es acido 4-(etilsulfonil)fenilboronico, Pd(PPh3)4, Na2CO3 ac. 2,0 M, n-BuOH, reflujo; b es DCM, NBS; y c es acido 1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-ilboronico, PdCh(PPh3)2, Na2CO2, MeCN, H2O.
En particular, una suspension de 2-amino-5-bromopiridina (1,24 g, 4,67 mmol), acido 4-(etilsulfonil)fenilboronico (1,10 g, 5,14 mmol), y Pd(PPh3)4 (0,16 g, 0,13 mmol) en n-BuOH (20 ml) se trato con Na2CO3 2,0 M ac. (4,5 ml). La reaccion se rocio con N2 seco en sonicacion durante 10 min hasta desgasificar, y despues se calento a reflujo durante 16 h a 100 °C. Tras la finalizacion, la reaccion se enfrio a temperatura ambiente y se concentro a sequedad. El residuo se repartio entre EtOAc (50 ml) y agua (30 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 50 ml). Los extractos organicos combinados se lavaron con salmuera (20 ml), se secaron Na2SO4 y se concentraron. El material en bruto se purifico por cromatograffa ultrarrapida sobre gel de sflice (eluyente de EtOAc al 30-100 %:hexano) para proporcionar 5-(4-(etilsulfonil)fenil)piridin-2-amina en forma de un solido de color blanco (0,57 g, rendimiento del 47%). 1H RMN (300 MHz, MeOH) 8 ppm 8,27-8,31 (m, 1 H), 7,91-7,98 (m, 2 H), 7,79-7,89 (m, 3 H), 6,71 (dd, J = 8,7, 0,7 Hz, 1 H), 3,30-3,35 (m, 2 H), 3,24 (c, J = 7,4 Hz, 2 H), 1,25 (t, J = 7,4 Hz, 3H); MS (EI) m/z: 263 [M+H]+.
Una solucion a temperatura ambiente de 5-(4-(etilsulfonil)fenil)piridin-2-amina (0,56 g, 2,14 mmol) en DCM (15 ml) se trato con NBS (0,42 g, 2,35 mmol) y la reaccion se mantuvo durante 1,5 h. Tras la finalizacion, la mezcla se lavo con una solucion ac. sat. de Na2S2O4 (10 ml), seguido de NaHCO3 sat. ac. (10 ml) y salmuera (5 ml). La capa organica se seco sobre Na2SO4, despues se filtro y se concentro para dar 3-bromo-5-(4-(etilsulfonil)fenil)piridin-2-amina (560 mg, rendimiento del 77%) en forma de un solido de color naranja. 1H RMN (300 MHz, DMSO-de) 8 ppm 8,37-8,49 (m, 1 H), 8,15-8,25 (m, 1 H), 7,90-7,96 (m, 2 H), 7,85-7,90 (m, 2 H), 6,60 (s a, 2 H), 3,34 (c, J = 7,4 Hz, 2 H), 1,11 (t,
J = 7,4 Hz, 3 H); MS (EI) m/z: 343, 341 [M+H]+.
Una mezcla de la 3-bromo-5-(4-(etilsulfonil)fenil)piridin-2-amina (100 mg, 0,29 mmol), acido 1-oxo-1,2,3,4- tetrahidroisoquinolin-6-ilbor6nico (75 mg, 0,29 mmol), PdCl2(PPh3)2 (7,0 mg, 0,01 mmol) y Na2CO3 en 3:1 de 5 MeCN:H2O se calento por microondas a 150°C durante 3 min. Tras la finalizacion, la mezcla de reaccion se filtro, despues se purifico por HPLC preparativa para proporcionar 6-(2-amino-5-(4-(etilsulfonil)fenil)piridin-3-il)-3,4- dihidroisoquinolin-1(2H)-ona en forma de un solido de color amarillo palido (48 mg, rendimiento del 41 %) despues de la purificacion por HPLC preparativa de fase inversa. 1H RMN (400 MHz, MeOD) 8 ppm 8,37 (d, J = 2,5 Hz, 1 H), 8,06 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,94 (d, J = 8,5 Hz, 2 H), 7,89 (d, J = 8,5 Hz, 2 H), 7,81 (d, J = 2,5 Hz, 1 H), 7,53 (d, J = 7,8 10 Hz, 1 H), 7,49 (s, 1 H), 3,56 (t, J = 6,7 Hz, 2 H), 3,19-3,27 (m, 2 H), 3,07 (c, J = 6,5 Hz, 2 H), 1,25 (t, J = 7,3 Hz, 3 H); MS (EI) m/z: 408 [M+H]+.
6.8. Sintesis de 4-(6-amino-5-(1-oxo-1,2.3.4-tetrahidroisoguinolin-6:il)piridin-3-il)-N.N-dietilbencenosulfonamida
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El metodo general A se aplico a acido 4-(N,N-dietilsulfamoil)fenilboronico, proporcionando 4-(6-amino-5-(1-oxo- 1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)piridin-3-il)-N,N-dietilbencenosulfonamida despues de la purificacion por HPLC preparativa. 1H RMN (400 MHz, MeOD) 8 ppm 8,33 (d, J = 2,3 Hz, 1 H), 8,06 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,85 (m, J = 8,5 20 Hz, 2 H), 7,76-7,82 (m, 3 H), 7,53 (dd, J = 8,0, 1,5 Hz, 1 H), 7,48 (s, 1 H), 4,10 (c, J = 7,1 Hz, 4 H), 3,56 (t, J = 6,7 Hz, 2 H), 3,26 (c, J = 7,0 Hz, 6 H), 3,07 (t, J = 6,7 Hz, 2 H); MS (EI) m/z: 451 [M+H]+.
6.9. Sintesis de 4-(6-amino-5-(-hidroxiisoquinolin-6-il)piridin-3-il)-N-etilbencenosulfonamida
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El metodo general C se aplico a acido 4-(N-etilsulfamoil)fenilboronico y 6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)isoquinolin-1-ol para proporcionar 4-(6-amino-5-(1-hidroxiisoquinolin-6-il)piridin-3-il)-N-etilbencenosulfonamida. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 8 ppm 11,31 (d, J = 5,3 Hz, 1 H), 8,47 (d, J = 2,3 Hz, 1 H), 8,30 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 8,12 30 (s, 1 H), 7,96 (d, J = 8,3 Hz, 2 H), 7,80-7,86 (m, 3 H), 7,64 (dd, J = 8,3, 1,5 Hz, 1 H), 7,58 (dd, J = 11,3, 5,5 Hz, 1 H),
7,23 (dd, J = 12,8, 6,8 Hz, 1 H), 6,60 (d, J = 7,0 Hz, 1 H), 2,75-2,84 (m, 2 H), 0,98 (t, J = 7,3 Hz, 3 H); MS (EI) m/z: 421 [M+H]+.
6.10. Sintesis de 4-(2-amino-5-(4-(N-ciclopropilsulfamoil)fenil)piridin-3-il)benzamida
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El metodo general B se aplico a 4-bromo-W-ciclopropilbencenosulfonamida (41 mg, 0,15 mmol), acido 6-amino-5-(4- carbamoilfenil)piridin-3-ilboronico (53 mg, 0,15 mmol), para proporcionar 4-(2-amino-5-(4-(N- 40 ciclopropilsulfamoil)fenil)piridin-3-il)benzamida en forma de un solido de color blanco (29 mg, rendimiento del 41%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 8 ppm 8,42 (d, J = 2,3 Hz, 1 H), 8,03 (s a, 1 H), 7,98 (d, J = 8,3 Hz, 2 H), 7,90 (d, J = 8,5 Hz, 2 H), 7,87 (d, J = 2,5 Hz, 1 H), 7,80 (d, J = 8,5 Hz, 2 H), 7,76 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 7,61 (d, J = 8,3 Hz, 2 H), 7,37 (s a, 1 H), 6,06 (s a, 2 H), 2,06-2,13 (m, 1 H), 0,42-0,50 (m, 2 H), 0,35-0,42 (m, 2 H); MS (EI) m/z: 409 [M+H]+.
45 6.11. Sintesis de 4-(6-amino-5-(1 -oxo-1.2.3.4-tetrahidroisoauinolin-6-il)piridin-3-il)-N-etilbencenosulfonamida
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El metodo general B se aplico a 4-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)-N-etilbencenosulfonamida (50 mg, 0,141 mmol) y acido 4-(N-etilsulfamoil)fenilboronico (64 mg, 0,336 mmol) para proporcionar 4-(6-amino-5-(1-oxo-1,2,3,4- tetrahidroisoquinolin-6-il)piridin-3-il)-N-etilbencenosulfonamida en forma de un solido de color blanco (28 mg, rendimiento del 47 %) despues de la purificacion por HPLC preparativa de fase inversa. 1H RMN (400 MHz, METANOL-c/4) 8 ppm 8,35 (d, J = 2,3 Hz, 1 H), 8,08 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 7,90 (d, J = 8,5 Hz, 2 H), 7,79-7,84 (m, 3 H), 7,48-7,58 (m, 2 H), 3,57 (t, J = 6,8 Hz, 2 H), 3,08 (t, J = 6,8 Hz, 2 H), 2,93 (c, J = 7,8 Hz, 2 H), 1,08 (t, J = 7,3 Hz, 3 H); MS (EI) m/z: 423 [M+H]+.
6.12. Sintesis de 2'-amino-5'-(4-(N-ciclopropilsulfamoil)fenil)-2,3'-bipiridina-5-carboxamida
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El metodo general B se aplico a 4-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)-N-ciclopropilbencenosulfonamida (112 mg, 0,304 mmol) y acido 5-carbamoilpiridin-2-ilboronico (75 mg, 0,453 mmol) para proporcionar 2'-amino-5'-(4-(N- ciclopropilsulfamoil)fenil)-[2,3'-bipiridina]-5-carboxamida en forma de un solido de color blanco (35 mg, rendimiento del 28 %) despues de la purificacion por HPLC preparativa de fase inversa. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 ppm 9,07-9,16 (m, 1 H), 8,53 (d, J = 2,3 Hz, 1 H), 8,47 (d, J = 2,3 Hz, 1 H), 8,32 (dd, J = 14,1, 10,8 Hz, 2 H), 8,21 (s a, 1 H), 8,01 (d, J = 8,5 Hz, 2 H), 7,91 (d, J = 2,5 Hz, 1 H), 7,85 (d, J = 8,3 Hz, 2 H), 7,79 (s a, 2 H), 7,61 (s a, 1 H), 2,062,18 (m, 1 H), 0,34-0,55 (m, 4 H); MS (EI) m/z: 410 [M+H]+.
6.13. Sintesis de -6-(2-amino-5-(1,1-di6xido-2.3-dihidrobenzo[d1isotiazol-5 il)piridin-3-il)-3,4-dihidroisoquinolin-1(2H)- ona
El compuesto del tttulo se preparo mediante el metodo mostrado a continuacion.
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en el que: a es AIBN, NBS, PhMe, 15 h; b es K2CO3, 12 h; c es Pd(PPh3)4, Na2CO3, acido (6-amino-5-(1-oxo-1,2,3,4- tetrahidroisoquinolin-6-il)piridin-3-il)boronico.
A una solucion de 4-bromo-2-metilbencenosulfonamida (496 mg, 2,0 mmol) en tolueno (10 ml) a temperatura ambiente se le anadieron AIBN (383 mg, 2,20 mmol) y N-bromosuccinimida (389 mg, 2,20 mmol). La mezcla se calento a 90 °C durante 2 h. Tras la finalizacion, la reaccion se enfrio a temperatura ambiente. Se anadio agua (20 ml) y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 20 ml). Los extractos organicos combinados se lavaron con salmuera (20 ml), se secaron sobre Na2SO4, y se concentraron a presion reducida para proporcionar un solido de color amarillo palido (170 mg, rendimiento del 26 %) que se recogio en DMF (5 ml) y se trato con K2CO3 (196 mg, 2,0 mmol). La reaccion se agito a temperatura ambiente durante una noche. Despues de la filtracion y la concentracion, el residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida sobre gel de sflice (eluyente de MeOH al 4-10
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%/DCM) para proporcionar 1,1-dioxido de 5-bromo-2,3-dihidrobenzo[d]isotiazol en forma de un solido de color blanco (108 mg, rendimiento del 85%).
El metodo general B se aplico a 1,1-dioxido de 5-bromo-2,3-dihidrobenzo[d]isotiazol (108 mg, 0,44 mmol) y (140 mg, 0,48 mmol) para proporcionar 6-(2-amino-5-(1,1-dioxido-2,3-dihidrobenzo[d]isotiazol-5-il)piridin-3-il)-3,4- dihidroisoquinolin-1(2H)-ona despues de la purificacion por HPLC preparativa de fase inversa. 1H RMN (400 MHz, METANOL-c/4) 8 ppm 8,35 (s a, 1 H), 8,05-8,14 (m, 2 H), 7,86 (s, 2 H), 7,82 (s, 1 H), 7,57 (s, 1 H), 7,53 (s, 1 H), 4,52 (s, 2 H), 3,57 (t, J = 6,8 Hz, 2 H), 3,09 (t, J = 6,5 Hz, 2 H); MS(EI) m/z = 407,5 [M+H]+
6.14. Metodo general D y sintesis de 6'-amino-N-ciclopropil-N-metil-5'-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)-[2,3'- bipiridinal-5-sulfonamida
El compuesto del tftulo se preparo mediante el metodo general D, representado a continuacion:
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en el que: a es Sn(Me)4 y Pd(PPh3)4 dioxano, 90 °C; y b es Pd(PPh3)4, 6-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-3,4- dihidroisoquinolin-1(2H)-ona, dioxano, 90 °C.
6-cloro-N-etil-N-metilpiridina-3-sulfonamida (2,34 g, 10,0 mmol), tetrametil estano (1,08 g, 10,00 mmol) y Pd(PPh3)4 (572 mg, 0,50 mmol) se mezclaron en dioxano (5 ml). Despues de la desgasificacion, la mezcla se calento a 90 °C. Tras la finalizacion, la reaccion se enfrio a temperatura ambiente y se concentro. Despues, el residuo se sometio a cromatograffa ultrarrapida sobre alumina (eluyente de cloroformo al 20-100 %/hexano) para proporcionar N-etil-N- metil-6-(trimetilstannil)piridina-3-sulfonamida (1,46 g, rendimiento del 40%).
Una mezcla de N-etil-N-metil-6-(trimetilstannil)piridina-3-sulfonamida (225 mg, 0,6 mmol) y 6-(2-amino-5- bromopiridin-3-il)-3,4-dihidroisoquinolin-1(2H)-ona (190 mg, 0,6 mmol) y Pd(PPh3)4 (34 mg, 0,03 mmol) en dioxano (3 ml) se desgasifico y se calento a 90 °C. Tras la finalizacion, la reaccion se enfrio a temperatura ambiente y se concentro. El residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida sobre gel de sflice para proporcionar 6'-amino-N-etil- N-metil-5'-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)-[2,3'-bipiridina]-5-sulfonamida en forma de un solido de color amarillo (134 mg, rendimiento del 50%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 8 ppm 8,88 (dd, J = 17,9, 2,1 Hz, 2 H), 8,178,22 (m, 1 H), 8,10-8,16 (m, 2 H), 7,94 (d, J = 7,8 Hz, 2 H), 7,43-7,51 (m, 2 H), 3,41 (s, 2 H), 3,30 (s, 3 H), 2,97 (t, J = 6,4 Hz, 2 H), 0,86 (t, J = 7,3 Hz, 3 H); MS (EI)m/z = 438,5 [M+1]+.
6.15. Sintesis de 6-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N-etil-N,4-dimetilpiridina-3- sulfonamida
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El metodo general D se aplico a N-etil-N,4-dimetil-6-(trimetilstannil)piridina-3-sulfonamida (233 mg, 0,6 mmol) y 6-(2- amino-5-bromopiridin-3-il)-3,4-dihidroisoquinolin-1(2H)-ona (190 mg, 0,6 mmol) para dar 6-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4- tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N-etil-N,4-dimetilpiridina-3-sulfonamida en forma de un solido de color amarillo (41 mg, rendimiento del 33 %) despues de la purificacion por HPLC preparativa de fase inversa. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 8 ppm 8,96 (s, 1 H), 8,84 (s, 1 H), 8,14 (s, 1 H), 7,93-8,04 (m, 2 H), 7,73 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,70 (s, 1 H), 3,39-3,47 (m, 2 H), 3,23 (c, J = 7,3 Hz, 2 H), 3,01 (t, J = 6,5 Hz, 2 H), 2,81 (s, 3 H), 2,61 (s, 3 H), 1,09 (t, J = 7,2 Hz, 3
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H); MS (EI) m/z = 453 [M+1]+.
6.16. Sintesis de 6’-amino-N-etil-N-metil-5’-(6-oxo-5,6-dihidro-4H-tieno[2,3-clpirrol-2-il)-r2,3’-bipiridina1-5-sulfonamida El compuesto del fftulo se preparo mediante el metodo mostrado a continuation:
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en el que: a es AIBN, NBS, CCU; b es NH3, MeOH, DMF; c es K2CO3, MeOH:EtOH (1:1); d es Br2, HOAc, agua e es (3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2-il)carbamato de terc-butilo, Pd(PPh3)4, Na2CO3 2,0 M ac., n- BuOH (5 ml) y; f es NBS, DMF.
A una solution de 3-metiltiofeno-2-carboxilato de metilo (10,0 g, 64,0 mmol) en CCU (100 ml) se le anadieron AIBN (180 mg, 1,1 mmol) y N-bromosuccinimida (11,4 g, 64,0 mmol). La mezcla de reaction se calento a reflujo durante 10 min, y despues se anadio una portion adicional de AlBN (460 mg, 2,8 mmol). Esta reaccion se calento durante una noche a 90 °C en un condensador de reflujo. Tras la finalization, la reaccion se filtro sobre un lecho corto de gel de sflice (eluyente de DCM al 100 %). El filtrado se concentro y se purifico por cromatograffa ultrarrapida sobre gel de sflice (eluyente de EtOAc al 2 %/hexano) para proporcionar 3-(bromometil)tiofeno-2-carboxilato de metilo (9,5 g, rendimiento del 63 %) en forma de un solido de color blanco. 1H RMN (400 MHz, METANOLd) 5 ppm 7,66 (d, J =
5,0 Hz, 1 H), 7,23 (d, J = 5,0 Hz, 1 H), 4,95 (s, 2 H), 3,89 (s, 3 H); MS (EI) m/z = 236,1 [M+1]+.
A una solucion de 3-(bromometil)tiofeno-2-carboxilato (9,3 g, 39,6 mmol) en DMF (150 ml) se le anadio NH3 7,0 N en MeOH (150 ml). Despues de agitar a temperatura ambiente durante 1 h, la reaccion se concentro y se purifico por cromatograffa ultrarrapida sobre gel de sflice (MeOH al 5 %-10 %/DCM) para proporcionar 3-(aminometil)tiofeno-2- carboxilato de metilo (4,86 g, rendimiento del 72 %) en forma de un solido de color blanco. 1H RMN (400 MHz, METANOL-d4) 5 ppm 7,83 (d, J = 5,0 Hz, 1 H), 7,28 (d, J = 5,0 Hz, 1 H), 4,45 (s, 2 H), 3,94 (s, 3 H); MS (EI) m/z = 172,2 [M+1]+.
Una mezcla de 3-(aminometil)tiofeno-2-carboxilato de metilo (4,5 g, 26,3 mmol) y K2CO3 (3,64 g, 26,3 mmol) en 1:1 de MeOH:EtOH (600 ml) se calento durante una noche a reflujo. La reaccion se concentro y se purifico por cromatograffa ultrarrapida sobre gel de sflice (EtOAc al 50-100 %/hexano) para producir 4H-tieno[2,3-c]pirrol-6(5H)- ona (2,2 g, rendimiento del 60 %) en forma de un solido de color blanco. 1H RMN (400 MHz, METANOLd) 5 ppm 7,87 (d, J = 4,8 Hz, 1 H), 7,17 (d, J = 4,8 Hz, 1 H), 4,39 (s, 2 H); MS (EI) m/z = 140,2 [M+1]+.
Una solucion de 4H-tieno[2,3-c]pirrol-6(5H)-ona (1,0 g, 7,2 mmol) en acido acetico (9 ml) y agua (7 ml) se enfrio a 0 °C. Se anadio bromo (407 pl, 7,92 mmol) y la reaccion se mantuvo a 0 °C durante 1,5 h. Tras la finalizacion, se anadio agua (30 ml) y la mezcla se extrajo con EtOAc (2 x 50 ml). Los extractos organicos combinados se lavaron con Na2SO3 ac. al 5 % (30 ml), NaHCO3 ac. sat. (30 ml) y salmuera (30 ml), despues se secaron sobre Na2SO4, se filtraron, y se concentraron. El material en bruto se purifico por cromatograffa ultrarrapida sobre gel de sflice (MeOH al 5 %/DCM) para producir 2-bromo-4H-tieno[2,3-c]pirrol-6(5H)-ona (1,3 g, rendimiento del 83 %) en forma de un solido de color blanco. 1H RMN (400 MHz, METANOL-d4) 5 ppm 7,28 (s, 1 H), 4,39 (s, 3 H); MS (EI) m/z = 140,2 [M+1]+.
Una solucion de (3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2-il)carbamato de terc-butilo (736 mg, 2,3 mmol), 2-bromo-4H-tieno[2,3-c]pirrol-6(5H)-ona (500 mg, 2,3 mmol) y Pd(PPh3)4 (40 mg, 0,035 mmol) en n-BuOH (5 ml) y Na2CO3 2,0 M (4,6 ml) se desgasifico y la mezcla de reaccion resultante se calento a reflujo a 110 °C durante 2 h. Despues de que se completara, la reaccion se enfrio a temperatura ambiente, se filtro, y se lavo con MeOH (10 ml) y agua (2 x 10 ml). El solido se seco a alto vado produciendo 2-(2-aminopiridin-3-il)-4H-tieno[2,3-c]pirrol-6(5H)-ona (383 mg, rendimiento del 72 %) en forma de un solido de color pardo claro. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 8,40 (s a, 1 H), 8,00 (dd, J = 5,0, 1,8 Hz, 1 H), 7,52 (dd, J = 7,3, 1,8 Hz, 1 H), 7,36 (s, 1 H), 6,66 (dd, J = 7,4, 4,9 Hz, 1 H), 5,99 (s, 2 H), 4,32 (s, 2 H); MS (EI) m/z = 232,3 [M+1]+.
A una solucion de 2-(2-aminopiridin-3-il)-4H-tieno[2,3-c]pirrol-6(5H)-ona (350 mg, 1,52 mmol) en DMF (5 ml) se le
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anadio NBS (297 mg, 1,67 mmol). Tras la finalizacion, la reaccion se concentro y el residuo se recogio en MeOH al 20 %/DCM (10 ml), despues se filtro y se concentro. Despues del secado a alto vado, se aislo 2-(2-aminopiridin-3-il)- 4H-tieno[2,3-c]pirrol-6(5H)-ona (313 mg, rendimiento del 66 %) en forma de un solido de color pardo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 8 ppm 8,44 (s a, 1 H), 8,08 (d, J = 2,5 Hz, 1 H), 7,67 (d, J = 2,3 Hz, 1 H), 7,39 (s, 1 H), 6,27 (s a, 2 H), 4,32 (s, 2 H); MS (EI) m/z= 311,2 [M+1]+.
El metodo general D se aplico a N-etil-N-metil-6-(trimetilstannil)piridina-3-sulfonamida (218 mg, 0,6 mmol) y 2-(2- amino-5-bromopiridin-3-il)-4H-tieno[2,3-c]pirrol-6(5H)-ona (186 mg, 0,6 mmol) para dar 6'-amino-N-etil-N-metil-5'-(6- oxo-5,6-dihidro-4H-tieno[2,3-c]pirrol-2-il)-[2,3'-bipiridina]-5-sulfonamida en forma de un solido de color amarillo (94 mg, rendimiento del 38 %) despues de la purificacion por HPLC preparativa de fase inversa. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 8 ppm 8,91 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 8,87 (d, J = 2,3 Hz, 1 H), 8,44 (s, 1 H), 8,26 (d, J = 2,3 Hz, 1 H), 8,10-8,20 (m, 2 H), 7,43 (s, 1 H), 6,65 (s, 2 H), 4,35 (s, 2 H), 3,30 (s, 4 H), 3,09 (dd, J = 14,3, 7,0 Hz, 2 H), 2,72 (s, 3 H), 1,06 (t, J = 7,0 Hz, 3 H); MS (EI) m/z = 430 [M+1]+.
6.17. Sintesis de 1-(4-(5-amino-6-(1-oxo-1.2.3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)fenil)ciclopentanocarbonitrilo
imagen21
El metodo general A se aplico a 1-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)ciclopentanocarbonitrilo (149 mg, 0,5 mmol) y 6-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-3,4-dihidroisoquinolin-1(2H)-ona (180 mg, 0,5 mmol) para dar 1-(4-(5- amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)fenil)ciclopentanocarbonitrilo en forma de un solido de color amarillo (89 mg, 0,22 mmol, rendimiento 44 %) despues de la purificacion por HPLC preparativa de fase inversa. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 8 ppm 8,60 (s, 1 H), 8,02 (d, J = 8,3 Hz, 3 H), 7,96 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,727,78 (m, 1 H), 7,70 (s, 1 H), 7,57 (m, J = 8,5 Hz, 3 H), 3,38-3,45 (m, 2 H), 2,99 (t, J = 6,4 Hz, 2 H), 2,37-2,46 (m, 2 H), 2,03-2,16 (m, 2 H), 1,84-1,94 (m, 4 H); MS (EI) m/z = 410,5 [M+1]+.
6.18. Sintesis de 6'-amino-N-(ciclopropilmetil)-N-metil-5'-(1-oxo-1.2.3.4-tetrahidroisoquinolin-6-il)-[2.3'-bipiridina1-5- sulfonamida
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El metodo general D se aplico a N-(ciclopropilmetil)-N-metil-6-(trimetilstannil)piridina-3-sulfonamida (233 mg, 0,6 mmol) y 6-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-3,4-dihidroisoquinolin-1(2H)-ona (190 mg, 0,6 mmol) para dar 6'-amino-N- (ciclopropilmetil)-N-metil-5'-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)-[2,3'-bipiridina]-5-sulfonamida en forma de un solido de color amarillo (127 mg, 0,27 mmol, rendimiento del 46 %) despues de la purificacion por HPLC preparativa de fase inversa. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 8 ppm 8,87 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 8,84 (d, J = 2,3 Hz, 1 H), 8,05-8,19 (m, 3 H), 7,90-7,98 (m, 2 H), 7,43-7,50 (m, 2 H), 6,34 (s, 2 H), 3,38-3,45 (m, 2 H), 2,97 (t, J = 1,0 Hz, 2 H), 2,91 (d, J = 6,8 Hz, 2 H), 2,80 (s, 3 H), 0,85-0,96 (m, 1 H), 0,43-0,51 (m, 2 H), 0,16-0,21 (m, 2 H); MS (EI) m/z = 464,5 [M+1]+.
6.19. Sintesis de 6'-amino-N-etil-N.4-dimetil-5'-(1-oxo-1.2.3.4-tetrahidroisoquinolin-6-il)-[2.3'-bipiridina1-5-sulfonamida
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El metodo general D se aplico a N-etil-N,4-dimetil-6-(trimetilstannil)piridina-3-sulfonamida (226 mg, 0,6 mmol) y 6-(2- amino-5-bromopiridin-3-il)-3,4-dihidroisoquinolin-1(2H)-ona (190 mg, 0,6 mmol) para dar 6'-amino-N-etil-N,4-dimetil- 5'-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)-[2,3'-bipiridina]-5-sulfonamida en forma de un solido de color amarillo (41
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mg, rendimiento del 33 %) despues de la purification por HPLC preparativa de fase inversa. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-tfe) 5 ppm 8,84-8,88 (m, 2 H), 8,56 (s, 1 H), 8,23 (s, 1 H), 8,06 (s a, 1 H), 8,00 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 7,49-7,56 (m, 2 H), 3,38-3,48 (m, 2 H), 3,23 (c, J = 7,0 Hz, 2 H), 3,00 (t, J = 6,3 Hz, 2 H), 2,81 (s, 3 H), 2,61 (s, 3 H), 1,09 (t, J =
7,0 Hz, 3 H); MS (EI) m/z = 452,5[M+1]+.
6.20. Metodo general E y sintesis de (S)-4-(6-amino-5-(3-metil-5-oxo-2,3.4.5-tetrahidro-1H-benzor[e1-[1.41diazepin-8- il)piridin-3-il)-N-ciclopropilbencenosulfonamida
El compuesto del fitulo se preparo mediante el metodo general E, representado a continuation:
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en el que: a es (S)-propano-1,2-diamina, DMF, calentamiento por microondas; b es NaOH, MeOH, 70 °C, 2 h; c es HATU, DMF; d es Pd(dba)s, (Bpin)2, 90 °C.
Una suspension de 4-bromo-2-fluorobenzoato de metilo (4,66 mg, 20,0 mmol), (S)-propano-1,2-diamina (2,22 g, 30 mmol) y K2CO3 (2,94 g, 3,0 mmol) se calento por microondas a 140 °C durante 15 min. Despues de la filtration y la concentration, el residuo se purifico por cromatografia ultrarrapida sobre sflice (eluyente de MeOH al 2-10 %/DCM) para proporcionar 2-((2-aminopropil)amino)-4-bromobenzoato de (S)-metilo (2,66 g, 9,20 mmol) en forma de un solido oleoso de color blanco. Este material se disolvio en metanol (160 ml) y se trato con NaOH (13,5 g, 200,0 mmol), y despues se calento a 70 °C durante una noche. Tras la finalization, la reaction se neutralizo a pH ~7 con HCl conc. ac. y el solido se filtro y se lavo con MeOH. El filtrado combinado se concentro para proporcionar acido (S)-2-((2-aminopropil)amino)-4-bromobenzoico en forma de un solido de color blanco. Este solido se uso sin purificacion adicional (2,5 g, rendimiento del 46 %, 2 etapas).
A una solution del acido (S)-2-((2-aminopropil)amino)-4-bromobenzoico en bruto (544 mg, 2,0 mmol) y Et3N (731 mg, 7,24 mmol) en DMF se le anadio HATU (829 mg, 2,18 mmol). Despues de 30 min, la mezcla de reaccion se concentro y se purifico por cromatografia ultrarrapida sobre gel de sflice (eluyente de MeOH al 2-10 %/DCM) para proporcionar (S)-8-bromo-3-metil-3,4-dihidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-5(2H)-ona en forma de un solido oleoso de color blanco (464 mg, rendimiento del 91 %). Este material se disolvio en dioxano (20 ml), despues se trato con Pd2(dba)3 (83 mg, 0,09 mmol), PCy3 (121 mg, 0,43 mmol), diboro pinacol ester (595 mg, 2,35 mmol) y KOAc (532 mg, 5,43 mmol), despues se calento a 90 °C durante 2 h. Tras la finalizacion, la reaccion se enfrio a temperatura ambiente, despues se filtro y se concentro. El material en bruto se sometio a cromatografia ultrarrapida sobre gel de sflice (eluyente de MeOH al 2-10 %/DCM) para proporcionar (S)-3-metil-8-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)- 3,4-dihidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-5(2H)-ona (527 mg, rendimiento del 96 %) en forma de un solido de color amarillo.
El metodo general C se aplico a (S)-3-metil-8-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-3,4-dihidro-H- benzo[e][1,4]diazepin-5(2H)-ona (303 mg, 0,7 mmol) y 4-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)-N- ciclopropilbencenosulfonamida para dar (S)-4-(6-amino-5-(3-metil-5-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-benzo[e][1,4]diazepin- 8-il)piridin-3-il)-N-ciclopropilbencenosulfonamida en forma de un solido de color amarillo (180 mg, rendimiento del 33 %) despues de la purificacion por HPLC preparativa de fase inversa. MS(EI) m/z = 464,6 [M+1]+.
6.21. Sintesis de 6’-amino-N-etil-N-metil-5’-(7-oxo-4,5,6,7-tetrahidrotieno[2,3-c1piridin-2-il)-[2,3’-bipiridina1-5- sulfonamida
El compuesto del fitulo se preparo mediante el metodo mostrado a continuacion:
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en el que: a es P2O5, MsOH; b es H2NOH-HCI, NaOAc, MeOH, despues PPA, 130 °C; c es Br2, HOAc; d es (3- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2-il)carbamato de terc-butilo, Pd(PPh3)4, Na2CO3 ac., n-BuOH, 100 °C; y e es NBS, DMF.
A una suspension de P2O5 (25,4 g, 179,0 mmol) en acido metanosulfonico (100 ml) se le anadio acido 3-(tiofen-3- il)propanoico (5,0 g, 32,0 mmol) y la reaccion se agito a temperatura ambiente durante 1 h. Tras la finalizacion, la reaccion se concentro y el residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida (eluyente de EtOAc al 20-30 %/hexano) para dar 4H-ciclopenta[b]tiofen-6(5H)-ona (1,34 g, rendimiento del 30 %) en forma de un solido de color pardo. 1H RMN (300 MHz, MeOH) 5 ppm 8,14 (d, J = 4,8 Hz, 1 H), 7,17 (d, J = 4,8 Hz, 1 H), 2,94-3,15 (m, 4 H); MS (EI) m/z = 139,2 [M+1]+.
Una solucion de 4H-ciclopenta[b]tiofen-6(5H)-ona (1,34 g, 9,7 mmol), hidroxilamina HCl (1,45 g, 20,8 mmol) y NaOAc (7,3 g, 89,0 mmol) en MeOH (150 ml) se agito durante una noche a temperatura ambiente. Despues, la reaccion se concentro a presion reducida, se recogio en EtOAc (100 ml) y se filtro sobre un lecho de gel de sflice, eluyendo con EtOAc. El filtrado se concentro, se recogio en acido polifosforico (100 g) y se calento durante 2 h a 130°C. Despues de que se completara, la reaccion se interrumpio por vertido sobre hielo-agua (100 ml). La mezcla acuosa se extrajo con DCM (2 x 100 ml) y los extractos combinados se lavaron con NaOH 0,1 M (100 ml), se secaron sobre Na2SO4, despues se filtraron y se concentraron. Se aislo 5,6-dihidrotieno[2,3-c]piridin-7(4H)-ona (837 mg, rendimiento del 55 %) en forma de un solido de color blanco despues de la purification por cromatograffa ultrarrapida sobre gel de sflice (eluyente de EtOAc al 20-30 %/hexano). 1H RMN (300 MHz, MeOH) 5 ppm 7,69 (d, J = 5,0 Hz, 1 H), 7,06 (d, J = 5,0 Hz, 1 H), 3,57 (t, J = 7,1 Hz, 2 H), 2,94 (t, J = 7,1 Hz, 2 H); MS (EI) m/z = 154,2 [M+1]+.
A una solucion a 0 °C de 5,6-dihidrotieno[2,3-c]piridin-7(4H)-ona (820 mg, 5,36 mmol) en HOAc (7 ml) y (5 ml) agua se le anadio bromo (303 pl, 5,9 mmol) y la reaccion se agito 1,5 h. La reaccion se diluyo en agua (30 ml) y la mezcla acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 50 ml). Los extractos organicos combinados se lavaron con Na2SO3 ac. al 5 % (40 ml), NaHCO3 sat. ac. (40 ml), y salmuera (40 ml). El producto organico se seco sobre Na2SO4, despues se filtro y se concentro. Despues de la purificacion por cromatograffa ultrarrapida sobre gel de sflice (eluyente de EtOAc al 50-100 %/hexano), se aislo 2-bromo-5,6-dihidrotieno[2,3-c]piridin-7(4H)-ona (906 mg, rendimiento del 73 %) en forma de un solido de color blanco. 1H RMN (400 MHz, METANOL- d4) 5 ppm 7,10 (s, 1 H), 3,55 (t, J = 7,0 Hz, 2 H), 2,88 (t, J =
7,0 Hz, 2 H); MS (EI) m/z = 233,1 [M+1]+.
Una solucion de (3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2-il)carbamato de terc-butilo (416 mg, 1,3 mmol), 2-bromo-5,6-dihidrotieno[2,3-c]piridin-7(4H)-ona (300 mg, 1,3 mmol) y Pd(PPh3)4 (23 mg, 0,02 mmol) en n-BuOH (3 ml) y Na2CO3 2 M (3 ml) se desgasifico por burbujeo de nitrogeno y la reaccion se calento 2 h a 100 °C. Despues de que se completara, la reaccion se filtro y se concentro a presion reducida, despues se repartio entre DCM (10 ml) agua (10 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con DCM (3 x 10 ml). Los extractos organicos combinados se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. El concentrado se suspendio en EtOAc, se sonico y se filtro para proporcionar 2-(2-aminopiridin-3-il)-5,6-dihidrotieno[2,3-c]piridin-7(4H)-ona (281 mg, rendimiento del 88 %) en forma de un solido de color blanco. 1H RMN (300 MHz, MeOH) 5 ppm 7,99 (dd, J = 5,0, 1,3 Hz, 1 H), 7,62 (dd, J =
7,5, 1,4 Hz, 1 H), 7,25 (s, 1 H), 6,76 (dd, J = 7,5, 5,1 Hz, 1 H), 3,61 (t, J = 7,0 Hz, 2 H), 2,97 (t, J = 7,1 Hz, 2 H); MS
(EI) m/z = 246,3 [M+1]+.
A una solucion de 2-(2-aminopiridin-3-il)-5,6-dihidrotieno[2,3-c]piridin-7(4H)-ona (250 mg, 1,02 mmol) en DMF (3 ml) se le anadio NBS (199 mg, 1,12 mmol). La reaccion se agito a temperatura ambiente durante 1 h, despues se concentro y se recogio en DCM (10 ml). La solucion organica se lavo con Na2S2O3 sat. ac., despues se seco sobre Na2SO4, y se concentro para dar 2-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-5,6-dihidrotieno[2,3-c]piridin-7(4H)-ona (320 mg, rendimiento del 97%) en forma de un solido de color naranja. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 5 ppm 8,06 (d, J = 2,0
Hz, 1 H), 7,73 (s a, 1 H), 7,66 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 7,29 (s, 1 H), 6,23 (s a, 2 H), 3,40-3,50 (m, 2 H), 2,83 (t, J = 6,9
Hz, 2 H); MS (EI) m/z = 325,2 [M+1]+.
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La etapa final del metodo general D se aplico a N-etil-N-metil-6-(trimetilstannil)piridina-3-sulfonamida (233 mg, 0,6 mmol) y 2-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-5,6-dihidrotieno[2,3-c]piridin-7(4H)-ona (194 mg, 0,6 mmol) para dar 6’- amino-N-etil-N-metil-5’-(7-oxo-4,5,6,7-tetrahidrotieno[2,3-c]piridin-2-il)-[2,3’-bipiridina]-5-sulfonamida en forma de un solido de color amarillo (140 mg, 0,31 mmol, rendimiento del 53 %) despues de la purificacion por HPLC preparativa de fase inversa,1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 5 ppm 8,91 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 8,85 (d, J = 2,3 Hz, 1 H), 8,26 (d, J = 2,3 Hz, 1 H), 8,10-8,19 (m, 2 H), 7,73 (s a, 1 H), 7,33 (s, 1 H), 6,62 (s, 2 H), 3,44-3,50 (m, 2 H), 3,09 (s, 2 H), 2,86 (t, J = 1,0 Hz, 1 H), 2,72 (s, 3 H), 1,01-1,09 (m, 3 H); MS (EI) m/z = 444,5 [M+1]+.
6.22. Metodo general F y sintesis de 4-(4-(5-amino-6-(5-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-benzo[e1[1,41diazepin-8-il)pirazin- 2-il)fenil)tetrahidro-2H-piran-4-carbonitrilo
El compuesto del fitulo se preparo mediante el metodo general F, representado a continuacion:
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en el que: a es NaH, ClCH2CH2OCH2CH2Cl,DMSO, 15 h; b es Pd(dppf)Ch, (BPin)2, KOAc, 90 °C, 2 h; c es Pd(PPh3)4, Na2CO3, 2-aminopirizina, 90 °C, 2 h; d es NBS, DMF, ta, 2 h.
A una suspension agitada de 2-(4-clorofenil)acetonitrilo (3,06 g, 20,3 mmol) a 0 °C en DMSO (200 ml) se le anadio NaH (1,79 g, 60 % en aceite mineral, 44,6 mmol). La reaccion se agito a 0 °C durante 15 min y despues a temperatura ambiente durante 30 min, dando como resultado una solucion purpura oscura. A esta solucion se le anadio gota a gota 1-cloro-2-(2-cloroetoxi)etano (3,18 g, 22,33 mmol). La mezcla resultante se agito a temperatura ambiente durante una noche antes de la dilucion con 50 ml de agua y la neutralizacion a pH ~ 7,0 con HCl ac. 1,0 M. La reaccion se extrajo con Et2O (3 x 200 ml) y los extractos organicos combinados se lavaron con salmuera (200 ml), se secaron sobre Na2SO4, y se concentraron. El residuo se purifico por cromatografia ultrarrapida sobre gel de sflice (eluyente de EtOAc al 10-30 %/hexano) para proporcionar 4-(4-clorofenil)tetrahidro-2H-piran-4-carbonitrilo en forma de un solido cristalino de color amarillo (4,01 g, rendimiento del 89 %) (Nota: Este compuesto no ioniza bien en LC/MS. No tiene una absorcion de UV intensa a 220 nM. El Fr por TLC es de 0,6 en AE al 30 %/Hexano).
Una solucion de 4-(4-clorofenil)tetrahidro-2H-piran-4-carbonitrilo (889 mg, 4,0 mmol), Pd(dba)2 (138 mg, 0,24 mmol), PCy3 (268 mg, 0,96 mmol), diboro pinacol ester (1,21 g, 4,8 mmol) y KOAc (1,18 g, 12,0 mmol) en 16 ml de dioxano se calento por microondas a 150 °C durante 15 min. La mezcla resultante se filtro, despues se concentro y se purifico por cromatografia ultrarrapida sobre sflice (eluyente de MeOH al 2-5 %/DCM) para proporcionar 4-(4- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)tetrahidro-2H-piran-4-carbonitrilo en forma de un solido cristalino de color amarillo (1,01 g, rendimiento del 81%).
Una solucion de 4-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)tetrahidro-2H-piran-4-carbonitrilo (1,53 g, 4,86 mmol), Pd(PPh3)4 (271 mg, 0,24 mmol), Na2CO3 2,0 M ac. (4,9 ml) y la 5-bromopirazin-2-amina (846 mg, 4,86 mmol) se combinaron en n-BuOH (20 ml). La suspension se desgasifico durante 10 min en una corriente de burbujeo de nitrogeno anhidro, despues se calento a 90 °C durante 2 h. La mezcla resultante se filtro, se concentro y se purifico por cromatografia ultrarrapida sobre sflice (eluyente de MeOH al 1-5 %/DCM) para proporcionar 4-(4-(5- aminopirazin-2-il)fenil)tetrahidro-2H-piran-4-carbonitrilo (1,08 g, rendimiento del 79%).
A una solucion de 4-(4-(5-aminopirazin-2-il)fenil)tetrahidro-2H-piran-4-carbonitrilo (1,08 m, 3,84 mmol) en DMF (30 ml) se le anadio en una porcion N-bromosuccinimida (747 mg, 4,22 mmol). Despues, la reaccion se agito a temperatura ambiente durante 1 h. Tras la finalizacion, la mezcla se vertio sobre hielo (50 ml) y se agito durante 20 min. Despues de la filtracion y el lavado con agua y secado al vado, se obtuvo 4-(4-(5-amino-6-bromopirazin-2- il)fenil)tetrahidro-2H-piran-4-carbonitrilo en forma de un solido de color pardo oscuro (1,37 g, rendimiento del 100%).
El metodo general C se aplico a 4-(4-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)fenil)tetrahidro-2H-piran-4-carbonitrilo (215 mg,
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0,6 mmol) y 8-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-3,4-dihidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-5(2H)-ona (173 mg, 0,6 mmol) para proporcionar 4-(4-(5-amino-6-(5-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-benzo[e1[1,4]diazepin-8-il)pirazin-2- il)fenil)tetrahidro-2H-piran-4-carbonitrilo en forma de un solido de color amarillo (87 mg, rendimiento del 33%). 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 6 ppm 8,47 (s, 1 H), 8,14 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 8,01 (d, J = 8,3 Hz, 2 H), 7,58 (d, J = 8,3 Hz, 2 H), 7,21 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 7,04 (s, 1 H), 6,40 (s a, 1 H), 4,93 (s a, 2 H), 4,57 (s a, 1 H), 4,12 (d, J = 8,8 Hz, 2 H), 3,94 (t, J = 11,7 Hz, 2 H), 3,50-3,73 (m, 4 H), 2,02-2,26 (m, 4 H); MS (EI) m/z = 441,5 [M+1]+.
6.23. Sintesis de 2'-amino-5'-(4-(N-ciclopropilsulfamoil)fenil)-[2,3'-bipiridinal-5-carboxamida
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Una mezcla de 2-amino-5-bromopiridina (3,58 g, 20,7 mmol), N-ciclopropil-4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2- il)-bencenosulfonamida (5,00 g, 20,7 mmol), carbonato sodico (3,29 g, 31,05 mmol), y PdCl2(PPh3)2 (0,436 g, 0,62 mmol) en 3:1 de acetonitrilo:agua se calento por microondas a 80 °C durante 20 min, y despues a 100 °C durante 15 min. Despues, la reaccion se calento en un bano de aceite a 80 °C durante 16 h. La reaccion se enfrio a temperatura ambiente y se filtro. El solido se lavo con metanol (10 ml), y los filtrados combinados se concentraron. El material en bruto se purifico por cromatograffa ultrarrapida sobre gel de sflice (MeOH al 0-5 %/DCM) para dar 4-(6-aminopiridin- 3-il)-N-ciclopropilebnzenesulfonamida (2,08 g, rendimiento del 35%). 1H RMN (400 MHz, METANOL-d4) 6 ppm 8,27 (d, J = 2,01 Hz, 1 H), 7,88-7,95 (m, 2 H), 7,85 (d, J = 2,51 Hz, 1 H), 7,81-7,84 (m, 1 H), 7,71-7,79 (m, 2 H), 6,45-6,88 (m, 1 H), 1,89-2,41 (m, 1 H), 0,13-0,82 (m, 4 H); MS (EI) m/z: 290 [M+H]+. HPLC (Sunfire C18 4,6 mm x 50 mm, MeCN al 10-90 %:NH4OAc ac. 10 mM, gradiente de 2 min) tR = 1,34 min, 88 % de area integrada.
A una solucion de 4-(6-amino-piridin-3-il)-N-ciclopropilbenzeensulfonamida (1,04 g, 3,59 mmol) en DCM (12 ml) se le anadio en porciones N-bromosuccinimida (0,64 g, 3,59 mmol). La reaccion se agito durante 1 h, despues se filtro. El filtrado se lavo con Na2S2O4 sat. ac. (20 ml), NaHCO3 sat. ac. (10 ml), despues se seco sobre Na2SO4 y se concentro para dar 4-(6-amino-5-bromo-piridin-3-il)-N-ciclopropil-benzeensulfonamida (1,07 g, rendimiento del 81%). 1H RMN (400 MHz, METANOL-d4) 6 ppm 8,30 (d, J = 2,01 Hz, 1 H), 8,12 (d, J = 2,01 Hz, 1 H), 7,92 (d, J = 8,53 Hz, 2 H), 7,76 (d, J = 8,53 Hz, 2 H), 2,19 (tt, J = 6,71, 3,58 Hz, 1 H), 0,17-0,83 (m, 4 H). MS (EI) m/z: 368, 370 [M+H]+. HPLC (Sunfire C18 4,6 mm x 50 mm, MeCN al 10-90 %:NH4OAc ac. 10 mM, gradiente de 2 min) tR = 1,68 min, 90 % de area integrada.
Una mezcla de 4-(6-amino-5-bromo-piridin-3-il)-N-ciclopropil-bencenosulfonamida (100 mg, 0,27 mmol), diboro pinacol ester (103 mg, 0,41 mmol), acetato potasico (40 mg, 0,41 mmol), Pd2(dba)3 (8 mg, 0,008 mmol), y PCy3 (5 mg, 0,016 mmol) en 1,4-dioxano (2 ml) se calento a 80 °C para proporcionar 4-[6-amino-5-(4,4,5,5-tetrametil- [1,3,2]dioxaborolan-2-il)-piridin-3-il]-N-clopropil-bencenosulfonamida (112 mg, rendimiento del 100 %) despues de la purificacion por HPLC preparativa. Este material se combino con 6-cloro nicotinamida (42 mg, 0,27 mmol), Na2CO3 (43 mg, 0,41 mmol), y PdCl2(PPh3)4 (6 mg, 0,008 mmol) en 3:1 de acetonitrilo:agua (2 ml). La mezcla de reaccion se calento por microondas a 150 °C durante 6 min. Tras la finalizacion, la mezcla de reaccion se concentro y se purifico por HPLC preparativa de fase inversa para dar 2'-amino-5'-(4-(N-ciclopropilsulfamoil)fenil)-[2,3'-bipiridina]-5- carboxamida (7 mg, rendimiento del 6%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 6 ppm 9,11 (d, J = 1,25 Hz, 1 H), 8,53 (d, J = 2,26 Hz, 1 H), 8,47 (d, J = 2,26 Hz, 1 H), 8,26-8,39 (m, 2 H), 8,21 (s a, 1 H), 8,00 (d, J = 8,53 Hz, 3 H), 7,91 (d, J = 2,51 Hz, 1 H), 7,76-7,87 (m, 4 H), 7,62 (s a, 1 H), 2,12 (dd, J = 6,53, 3,51 Hz, 1 H), 0,46-0,54 (m, 2 H), 0,37-0,45 (m, 2 H). MS (EI) m/z: 410 [M+H]+. HPLC (Sunfire C18 4,6 mm x 50 mm, MeCN al 10-90 %:NH4OAc ac. 10 mM, gradiente de 2 min) tR = 1,39 min, 96% de area integrada.
6.24. Sintesis de 6'-amino-N-ciclopropil-N-metil-5'-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)-[3,3'-bipiridina1-6- sulfonamida
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El metodo general C se aplico a 6'-amino-5'-bromo-N-ciclopropil-[3,3'-bipiridina]-6-sulfonamida (650 mg, 1,76 mmol) y 6'-amino-5'-bromo-N-ciclopropil-[3,3'-bipiridina]-6-sulfonamida (410 mg,2,11 mmol) para proporcionar 6'-amino-N- ciclopropil-N-metil-5'-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)-[3,3'-bipiridina]-6-sulfonamida (130 mg, rendimiento del
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16 %) despues de la purificacion por HPLC preparativa. 1H RMN (400 MHz, DMSOC) 5 ppm 9,11 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 8,51 (d, J = 2,3 Hz, 1 H), 8,39 (dd, J = 8,2, 2,1 Hz, 1 H), 7,93 (s, 3 H), 7,86 (d, J = 2,3 Hz, 1 H), 7,46-7,56 (m, 2 H), 6,19 (s, 2 H), 3,36-3,46 (m, 2 H), 2,96 (t, J = 6,4 Hz, 2 H), 2,88 (s, 3 H), 2,23-2,31 (m, 1 H), 0,72-0,79 (m, 2 H), 0,62-0,69 (m, 2 H); MS (EI) m/z = 450,5 [M+1]+.
6.25. Sintesis de N-(4-(6-amino-5-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoguinolin-6-il)piridin-3-il)fenil)etanosulfonamida
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El metodo general B se aplico a bromhidrato de 6-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-3,4-dihidroisoquinolin-1(2H)-ona (150 mg, 0,38 mmol) y acido 4-(etilsulfonamida)fenilboronico (96 mg, 0,42 mmol) para dar N-(4-(6-amino-5-(1-oxo-1,2,3,4- tetrahidroisoquinolin-6-il)piridin-3-il)fenil)etanosulfonamida (58 mg, rendimiento del 35 %) despues de la purificacion por HPLC preparativa de fase inversa. 1H RMN (400 MHz, DMSOC) 5 ppm 9,79 (s, 1 h), 8,28 (d, J = 2,51 Hz, 1 H), 7,92 (d, J = 8,03 Hz, 2 H), 7,58-7,69 (m, 3 H), 7,44-7,53 (m, 2 H), 7,26 (d, J = 8,78 Hz, 2 H), 5,96 (s a, 2 H), 3,41 (td, J = 6,53, 2,51 Hz, 2 H), 3,16 (s, 2 H), 3,09 (c, J = 7,28 Hz, 2 H), 2,96 (t, J = 6,40 Hz, 2 H), 1,20 (t, J = 7,28 Hz, 3 H); MS (EI) m/z: 422 [M+H]+. HPLC (Sunfire C18 4,6 mm x 50 mm, MeOH al 10-90 %:formiato de amonio 10 mM ac., gradiente de 2 min) tR = 1,94 min, 97 % de area integrada.
6.26. Sintesis de 4-(5-amino-6-(1 -oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N-metil-N-((1R,2R)-2-metil- ciclopropil)bencenosulfonamida
El compuesto del trtulo se preparo mediante el metodo mostrado a continuation:
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en el que: a es 2-(dietoxifosforil)acetato de etilo, n-BuLi, MeTHF, 150 °C despues NaOH ac., 100 °C; b es TEA, EtCO2Cl, acetona, despues NaN3 ac.; c es PhMe, 100 °C, despues alcohol bencflico, CuCl, DMF; d es H2-Pd/C, DCM, despues cloruro de TEA p-bromobencenosulfonilo; e es Cs2CO3, Mel, DMF.
A una solution a 0 °C de 2-(dietoxifosforil)acetato de etilo (16,90 ml, 84,37 mmol) en metiltetrahidrofurano (150 ml) se le anadio n-BuLi (33,0 ml, 82,5 mmol, 2,5 M en hexano). La reaction se mantuvo a 0 °C durante 30 minutos antes de la adicion de (S)-2-metiloxirano. Despues, la mezcla de reaccion se transfirio a un reactor de acero revestido de teflon, se cerro hermeticamente y se calento a 150 °C durante 18 h. El reactor se enfrio a temperatura ambiente, despues se trato con agua:NaOH ac. al 30 % (2:1) y se calento a reflujo a 100 °C durante 5 h. La mezcla bifasica se enfrio de nuevo a temperatura ambiente y se transfirio a un embudo de decantation. Las capas se separaron y la fase acuosa se acidifico con HCl conc. ac. (100 ml) y se extrajo con acetato de isopropilo (3 x 200 ml) mientras se mantuvo la fase acuosa a pH ~3. Los extractos organicos combinados se lavaron con NaCl al 10 % (2 x 100 ml), se filtraron sobre celite y se concentraron para proporcionar acido (1R,2R)-2-metilciclopropanocarboxnico (7,9 g, rendimiento del 92%), que se uso directamente en la siguiente reaccion. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-C) 5 ppm 1,40-1,52 (m, 1 H), 1,30-1,39 (m, 1 H), 1,20-1,28 (m, 1 H), 1,13 (d, J = 6,0 Hz, 3 H), 0,76 (ddd, J = 7,8, 6,5, 4,0 Hz, 1 H).
A una solucion a 0 °C de acido (1R,2R)-2-metilciclopropanocarboxnico (2,0 g, 20,0 mmol) en acetona anhidra (100 ml) se le anadieron trietilamina (2,87 ml, 20,6 mmol) y cloroformiato de etilo (1,96 ml, 20,6 ml). El bano frio se retiro y la reaccion se dejo calentar a temperatura ambiente durante 30 min antes de la adicion de azida sodica (1,36 g,
21,00 mmol) en agua (20 ml). La reaccion se mantuvo a temperatura ambiente durante 1 h, despues se diluyo con DCM (300 ml) y agua (200 ml). Las capas se separaron y el producto organico se lavo con agua (2 x 100 ml) y salmuera (100 ml), despues se seco sobre MgSO4 y se concentro para proporcionar (1R,2R)-2-
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metilciclopropanocarbonil azida (1,8 g, rendimiento del 72 %) que se uso directamente en la siguiente reaccion. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 6 ppm 1,47-1,58 (m, 1 H), 1,35-1,42 (m, 1 H), 1,28-1,34 (m, 1 H), 1,14 (d, J =
6,0 Hz, 3 H), 0,79-0,87 (m, 1 H).
Una solucion de (1R,2R)-2-metilciclopropanocarbonil azida (1,80 g, 14,4 mmol) en tolueno (100 ml) se calento a 90 °C durante 1 h. Despues de cese del desprendimiento de gas, la solucion se canulo en un matraz que contema una suspension de alcohol bendlico (4,5 ml, 43,2 mmol) y cloruro de cobre (I) (750 mg, 7,5 mmol) en DMF (100 ml). La reaccion se mantuvo a temperatura ambiente durante 1 h, despues se diluyo con Et2O (200 ml), despues se lavo con salmuera, se seco sobre MgSO4 y se concentro. El producto en bruto se purifico por cromatograffa ultrarrapida sobre gel de s^lice (eluyente de EtOAc al 20-30 %/hexano) para proporcionar ((1R,2R)-2-metilciclopropil)-carbamato de bencilo (1,68 g, rendimiento del 57%). 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 6 ppm 7,27-7,46 (m, 5 H), 5,11 (s a, 2 H), 4,80-4,99 (m, 1 H), 2,28 (d, J = 3,0 Hz, 1 H), 1,07 (d, J = 5,5 Hz, 3 H), 0,82-0,97 (m, 1 H), 0,67 (ddd, J = 9,0, 5,3, 3,8 Hz, 1 H), 0,51 (c, J = 5,9 Hz, 1 H).
Una solucion de ((1R,2R)-2-metilciclopropil)carbamato de bencilo (1,68 g, 8,2 mmol) en DCM (55 ml) se cargo con Pd al 10 % en peso/C, despues se desgasifico y se cargo con hidrogeno (50 psi). La reaccion se completo despues de 30 min y se filtro sobre celite, aclarando con DCM (15 ml). Las aguas madre se enfriaron a 0 °C, y se trataron con trietilamina (3,43 ml, 24,6 mmol) y cloruro de 4-bromobenceno-1-sulfonilo (2,20 g, 8,61 mmol). El bano fffo se retiro y la reaccion se agito durante 1 h. Tras la finalizacion, la reaccion se lavo con HCl ac. 0,5 M (2 x 20 ml) y salmuera (20 ml), se seco sobre MgSO4 y se concentro para proporcionar 4-bromo-N-((1R,2R)-2- metilciclopropil)bencenosulfonamida (2,06 g, rendimiento del 87 %). 1H RmN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 6 ppm 7,74-7,80 (m, 1 H), 7,66-7,72 (m, 1 H), 4,90 (s a, 1 H), 1,94 (dt, J = 3,5, 1,8 Hz, 1 H), 1,41 (t, J = 7,3 Hz, 1 H), 0,89
1,01 (m, 3 H), 0,70-0,81 (m, 1 H), 0,35-0,45 (m, 1 H).
El procedimiento apropiado especificado en el metodo general F se aplico a la conversion de 4-bromo-N-((1R,2R)-2- metilciclopropil)bencenosulfonamida (2,06 g, 7,1 mmol) en N-((1R,2R)-2-metilciclopropil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)bencenosulfonamida (1,38 g, rendimiento del 58 %) que se obtuvo despues de la cromatograffa ultrarrapida sobre gel de sflice (eluyente de EtOAc al 20-40 %/hexano). 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 6
ppm 7,96 (s, 2 H), 7,85-7,92 (m, 2 H), 4,75-4,80 (m, 1 H), 1,88-1,93 (m, 1 H), 1,38 (s, 12 H), 1,27 (s, 1 H), 0,95 (d, J
= 1,3 Hz, 3 H), 0,70-0,79 (m, 1 H), 0,33-0,40 (m, 1 H).
El procedimiento apropiado especificado en el metodo general F se aplico a la conversion de N-((1R,2R)-2- metilciclopropil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencenosulfonamida (676 mg, 1,69 mmol) en clorhidrato de 4-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N-((1R,2R)-2-
metilciclopropil)bencenosulfonamida despues del tratamiento con HCl ac. (350 mg, rendimiento del 45%). 1H RMN (400 MHz, METANOL-d4) 6 ppm 8,34 (d, J = 6,5 Hz, 2 H), 8,11-8,16 (m, 1 H), 7,97-8,03 (m, 2 H), 7,89-7,96 (m, 2 H),
7,57-7,61 (m, 1 H), 7,54-7,56 (m, 1 H), 3,55-3,61 (m, 2 H), 3,07-3,14 (m, 2 H), 1,84-1,89 (m, 1 H), 0,92-0,97 (m, 3 H),
0,80-0,89 (m, 1 H), 0,64-0,70 (m, 1 H), 0,31-0,38 (m, 1 H); MS (EI) m/z = 450,5 [M+1]+.
A una suspension a temperatura ambiente de clorhidrato de 4-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6- il)pirazin-2-il)-N-((1R,2R)-2-metilciclopropil)bencenosulfonamida (110 mg, 0,227 mmol) y carbonato de cesio (222 mg, 0,681 mmol) se le anadio yoduro de metilo (16,0 pl, 0,251 mmol). Tras la finalizacion, la reaccion se filtro y se concentro, despues se sometio a cromatograffa ultrarrapida sobre gel de sflice (eluyente de MeOH al 5-10 %/DCM) para proporcionar 4-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N-metil-N-((1R,2R)-2-
metilciclopropil)-bencenosulfonamida (90 mg, rendimiento del 86%). 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 6 ppm 8,55 (s, 1 H), 8,25 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 8,16 (d, J = 8,5 Hz, 2 H), 7,92 (d, J = 8,5 Hz, 2 H), 7,83 (dd, J = 8,0, 1,5 Hz, 1 H), 7,70 (s, 1 H), 5,95 (s a, 1 H), 5,14 (s a, 2 H), 3,66 (dt, J = 7,0, 2,3 Hz, 2 H), 3,14 (t, J = 7,0 Hz, 2 H), 2,76 (s, 3 H), 1,48-1,53 (m, 1 H), 1,27-1,35 (m, 1 H), 1,06 (d, J = 6,3 Hz, 3 H), 0,96-1,02 (m, 1 H), 0,47 (dd, J = 12,3, 6,0 Hz, 1 H); MS (EI) m/z = 464,5 [M+1]+.
6.27. Sintesis______de_______4-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N-etil-N,2-
dimetilbencenosulfonamida
El compuesto del fftulo se preparo mediante el metodo mostrado a continuacion:
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en el que: a es N-metiletilamina, CH2CI2, 20 °C, 2 h; b es PdCl2(dppf)-CH2Cl2, (BPin)2, 85 °C, 2 h.
A una solucion a 0 °C de cloruro de 4-bromo-2-metilbencenosulfonilo (1,00 g, 3,71 mmol) en CH2CI2 (10 ml) se le anadio N-etildiisopropilamina (0,71 ml, 4,31 mmol) y N-metiletilamina (0,96 ml, 11,13 mmol). El bano frio se retiro y la reaccion se agito durante 2 h. Tras la finalizacion, la reaccion se concentro, y el material en bruto se disolvio en CH2Cl2 (20 ml). La mezcla se lavo con HCl acuoso 0,5 N (3 x 10 ml), NaHCO3 sat. ac. (2 x 10 ml), agua (10 ml), y NaCl acuoso saturado (5 ml), se seco (Na2SO4), y se concentro para dar 4-bromo-N-etil-2,N-dimetil- bencenosulfonamida (0,91 g, 3,11 mmol, rendimiento del 85%). Este material se disolvio directamente en 1,4- dioxano (10 ml) y se trato con bisboro pinacol ester (0,87 g, 3,43 mmol), PdCh(dppf)-DCM (69 mg, 0,093 mmol), y KOAc (0,92 g, 9,34 mmol). La reaccion se calento a 85 °C durante 2 h. Tras la finalizacion, la reaccion se enfrio a temperatura ambiente y se concentro. El material en bruto se trato con CH2Ch (30 ml) y agua (10 ml). La capa organica se lavo con agua (2 x 10 ml) y salmuera (5 ml), se seco sobre Na2SO4 y se concentro. El material en bruto se purifico por cromatografia ultrarrapida sobre gel de sflice (eluyente de EtOAc al 5-20 %:hexano) para dar N-etil- 2,N-dimetil-4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-bencenosulfonamida (0,64 g, rendimiento del 60%). 1H RMN (300 MHz, MeOH) 5 ppm 7,80-7,88 (m, 1 H), 7,68-7,77 (m, 2 H), 3,26 (c, J = 7,12 Hz, 2 H), 2,83 (s, 3 H), 2,61 (s, 3 H), 1,37 (s, 12 H), 1,17 (t, J = 7,15 Hz, 3 H). MS (EI) m/z: 340 [M+H]+. HPLC (Sunfire C18 4,6 mm x 50 mm, MeCN al 10-90 %:NH4OAc ac. 10 mM, gradiente de 2 min) tR = 2,48 min, 91% de area integrada.
Una solucion de N-etil-2,N-dimetil-4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-bencenosulfonamida (140 mg, 0,42 mmol), 6-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-3,4-dihidroisoquinolin-1(2H)-ona (150 mg, 0,38 mmol) Pd(PPh3)4 (13,2 mg, 0,011 mmol) y Na2CO3 ac. 2,0 M (0,38 ml) en n-butanol (2 ml) se calento por microondas a 150 °C durante 10 min para proporcionar 4-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N-etil-N,2-
dimetilbencenosulfonamida (49 mg, rendimiento del 29 %) despues de la purificacion por HPLC preparativa de fase inversa. 1H RMN (400 MHz, DMSOd) 5 ppm 8,69 (s, 1 H), 8,04 (s, 1 H), 7,93-8,02 (m, 3 H), 7,82 (d, J = 8,28 Hz, 1 H), 7,67-7,77 (m, 2 H), 6,62 (s, 2 H), 3,43 (td, J = 6,40, 2,51 Hz, 2 H), 3,18 (c, J = 6,94 Hz, 3 H), 3,00 (t, J = 6,53 Hz, 2 H), 2,76 (s, 3 H), 2,59 (s, 3 H), 1,08 (t, J = 7,15 Hz, 3 H). MS (EI) m/z: 452 [M+H]+. HPLC (Sunfire C18 4,6 mm x 50 mm, MeCN al 10-90 %:NH4OAc ac. 10 mM, gradiente de 4 min) tR = 2,14 min, 100 % de area integrada.
6.28. Sintesis_____de_____4-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N-ciclopropil-N-
metilbencenosulfonamida
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El metodo general C se aplico a 4-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)-N-ciclopropil-N-metilbencenosulfonamida (383 mg,
1,00 mmol) y 6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-3,4-dihidroisoquinolin-1(2H)-ona (300 mg, 1,1 mmol) para proporcionar 4-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N-ciclopropil-N-
metilbencenosulfonamida (382 mg, rendimiento del 85%) despues de la purificacion por HPLC preparativa. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 5 ppm 8,73 (s, 1 H), 8,26 (d, J = 8,5 Hz, 2 H), 8,03 (s a, 1 H), 7,97 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,84 (d, J = 8,5 Hz, 2 H), 7,74 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,70 (s, 1 H), 3,42 (t, J = 5,3 Hz, 2 H), 2,99 (t, J = 6,4 Hz, 2 H), 2,67 (s, 3 H), 1,77-1,86 (m, 1 H), 0,61-0,81 (m, 4 H); MS (EI) m/z = 450,5 [M+1]+.
6.29. Sintesis de 2-(4-(5-amino-6-(1-oxo-1.2.3.4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)fenil)-2-metilpropanonitrilo
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El metodo general B se aplico a acido 4-(2-cianopropan-2-il)fenilboronico (79 mg, 0,42 mmol) y 6-(3-amino-6- bromopirazin-2-il)-3,4-dihidroisoquinolin-1(2H)-ona (150 mg, 0,38 mmol) en n-butanol (2 ml) para dar 2-{4-[5-amino- 6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidro-isoquinolin-6-M)-pirazin-2-il]-feniM-2metil-propionitrilo (119 mg, rendimiento del 82 %) despues de la purificacion por cromatografia en columna sobre sflice (eluyente de MeOH al 2-5 %/DCM).
1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 5 ppm 8,59 (s, 1 H), 8,02 (d, J = 8,53 Hz, 2 H), 7,96 (d, J = 8,03 Hz, 2 H), 7,75 (dd, J = 8,03, 1,25 Hz, 1 H), 7,70 (s, 1 H), 7,58 (d, J = 8,53 Hz, 2 H), 6,45 (s, 2 H), 3,43 (td, J = 6,40, 2,51 Hz, 2 H), 2,99 (t, J = 6,40 Hz, 2 H), 1,71 (s, 6 H). MS (EI) m/z: 384 [M+H]+. HPLC (Shim-Pack VP ODS 4,6 mm x 50 mm, MeOH al 1090 %-95 %, agua al 5 % con TFA al 0,1 %, gradiente de 4 min) tR = 3,22 min, 99 % de area integrada.
6.30. Metodo general G y sintesis de 4-(5-amino-6-(1-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-benzo[c]azepin-7-il)pirazin-2-il)-N- etil-N-metilbencenosulfonamida
El compuesto del fitulo se preparo mediante el metodo general G, representado a continuacion:
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en el que: a es NaH, (TfO)2NPh, THF; y b es diboro pinacol ester, Pd(dppf)Ch, KOAc, dioxano, 90 °C.
A una solucion a temperatura ambiente de 7-hidroxi-2,3,4,5-tetrahidro-1H-benzo[c]azepin-1-ona (2,3 g, 12,9 mmol) en THF (100 ml) se le anadio NaH (671 mg, 16,7 mmol), seguido de 1,1,1-trifluoro-N-fenil-N- ((trifluorometil)sulfonil)metanosulfonamida (5,98 g, 16,77 mmol). La reaccion se agito a temperatura ambiente durante 2 h, despues se interrumpio con NH4G sat. ac. y se extrajo con EtOAc (3 x 50 ml). Los extractos organicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. El material en bruto se purifico por cromatografia ultrarrapida sobre gel de sflice (eluyente de EtOAc al 20 %/hexano) para proporcionar 1-oxo- 2,3,4,5-tetrahidro-1H-benzo[c]azepin-7-il trifluorometanosulfonato (12,9 mmol, rendimiento del 77 %) MS (EI) m/z =310 [M+1]+.
Una suspension desgasificada de 1-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-benzo[c]azepin-7-il trifluorometanosulfonato (4,0 g, 12,9 mmol) diboro pinacol ester (9,9 g, 39,0 mmol), KOAc (1,9 g, 19,5 mmol), y Pd(dppf)Ch (963 mg, 1,3 mmol) en dioxano (8 ml) se calento a 90 °C durante 1,5 h. Tras la finalizacion, la reaccion se filtro, se concentro, y despues se purifico por cromatografia ultrarrapida sobre gel de sflice (eluyente de EtOAc al 30 %/hexanos) para proporcionar. 7- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-benzo[c]azepin-1-ona (1,5 g, rendimiento del 41%). MS (EI) m/z =288 [M+1]+.
El metodo general C se aplico a 7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-benzo[c]azepin-1- ona (95 mg, 0,33 mmol) y 4-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)-N-etil-N-metilbencenosulfonamida (108 mg, 0,29 mmol) para proporcionar 4-(5-amino-6-(1-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-benzo[c]azepin-7-il)pirazin-2-il)-N-etil-N-
metilbencenosulfonamida (33 mg, rendimiento del 22 %) despues de la purificacion por HPLC preparativa,1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 5 ppm 8,70 (s, 1 H), 8,22 (d, J = 8,5 Hz, 2 H), 8,12 (t, J = 5,8 Hz, 1 H), 7,80 (d, J = 8,5 Hz, 2 H), 7,71 (dd, J = 8,0, 1,5 Hz, 1 H), 7,62-7,66 (m, 2 H), 6,66 (s a, 2 H), 2,93-3,09 (m, 4 H), 2,83 (t, J = 1,0 Hz, 2 H), 2,67 (s, 3 H), 1,94 (dd, J = 12,3, 6,0 Hz, 2 H), 1,03 (t, J = 7,2 Hz, 3 H); MS (EI) m/z = 452,5 [M+1]+.
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6.31. Sintesis de 6-(3-amino-6-(4-(1-ciclopropiletoxi)fenil)pirazin-2-il)-3,4-dihidroisoquinolin-1(2H)-ona El compuesto del trtulo se preparo mediante el metodo mostrado a continuation:
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en el que: a es NaH, 1-ciclopropiletanol, DMF, 100 °C; b es Pd(dppf)Cl2, (BPin)2, KOAc, 90 °C, 2 horas.
A una suspension a 0 °C de NaH (460 mg, 11,4 mmol, dispersion al 60 % en peso en aceite mineral) en DMF (14 ml) se le anadio gota a gota 1-ciclopropiletanol (0,79 ml, 7,41 mmol). El bano frio se retiro durante 30 min antes de la adicion de 1-bromo-4-fluorobenceno (1,00 g, 5,7 mmol). La mezcla de reaction resultante se calento a 100 °C durante 3 h. Tras la finalization, la reaccion se enfrio a temperatura ambiente y se concentro. El aceite resultante se diluyo con agua (30 ml) y se extrajo en EtOAc (3 x 30 ml). Los extractos organicos combinados se lavaron con salmuera (20 ml), despues se secaron sobre MgSO4 y se concentraron para proporcionar 1-bromo-4-(1- ciclopropiletoxi)benceno (1,30 g, rendimiento del 95%). El aceite resultante se uso directamente sin purification adicional.
Una suspension de 1-bromo-4-(1-ciclopropiletoxi)benceno (1,30 g, 5,39 mmol), 4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-octametil-2,2’- bi(1,3,2-dioxaborolano) (1,77 g, 7,01 mmol), PdCEdppf-DCM (197 mg, 0,27 mmol), KOAc (1,06 g, 10,78 mmol) en DMF (12 ml) se calento a 100 °C durante 2 h. Tras la finalizacion, la reaccion se concentro, y despues se purifico por cromatografia ultrarrapida sobre gel de sflice (eluyente de EtOAc al 20-40 %/hexano) para proporcionar 2-(4-(1- ciclopropiletoxi)fenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (1,38 g, rendimiento del 88%).
El metodo general A se aplico a 2-(4-(1-ciclopropiletoxi)fenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (639 mg, 2,00 mmol), proporcionando 6-(3-amino-6-(4-(1-ciclopropiletoxi)fenil)pirazin-2-il)-3,4-dihidroisoquinolin-1(2H)-ona (321 mg, rendimiento del 40 %) despues de la purificacion por HPLC preparativa de fase inversa. 1H RMN (400 MHz, DMSO- de) 5 ppm 8,50 (s, 1 H), 8,00 (s a, 1 H), 7,95 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,88 (d, J = 8,8 Hz, 2 H), 7,72-7,77 (m, 1 H), 7,70 (s, 1 H), 6,97 (d, J = 8,8 Hz, 2 H), 6,30 (s, 2 H), 3,94-4,04 (m, 1 H), 3,42 (td, J = 6,4, 2,5 Hz, 2 H), 2,99 (t, J = 6,5 Hz, 2 H), 1,29 (d, J = 6,0 Hz, 3 H), 1,09 (dt, J = 8,0, 4,9 Hz, 1 H), 0,43-0,53 (m, 2 H), 0,25-0,39 (m, 2 H); MS (EI) m/z = 401,5 [M+1]+.
6.32. Sintesis de 6-(2-amino-5-(4-(2-(dimetilamino)propan-2-il)fenil)piridin-3-il)-3,4-dihidroisoquinolin-1(2H)-ona El compuesto del trtulo se preparo mediante el metodo mostrado a continuacion:
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A una solution de 2-(4-bromofenil)propan-2-amina (500 mg, 2,34 mmol) en DCM (30 ml) se le anadieron formaldehido acuoso al 37 % (525 pl, 7,0 mmol), Na2SO4 (100 mg) y STAB (2,98 g, 14,0 mmol). Despues de agitar 2 h a temperatura ambiente, la reaccion se repartio entre NaHCO3 sat. ac. (20 ml) y DCM (20 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con dCm (2 x 30 ml). Los extractos organicos combinados se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron para proporcionar 2-(4-bromofenil)-N,N-dimetilpropan-2-amina (464 mg,
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rendimiento del 82 %) en forma de un aceite de color amarillo. 1H RMN (400 MHz, METANOL-^) 5 ppm 7,45 (d, J =
6,0 Hz, 4 H), 2,16 (s, 6 H), 1,40 (s, 6 H); MS (EI) m/z = 243,2 [M+1]+.
El metodo general G se aplico a 2-(4-bromofenil)-N,N-dimetilpropan-2-amina (450 mg, 1,86 mmol), para proporcionar N,N-dimetil-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)propan-2-amina (300 mg, rendimiento del 56 %) despues de la purification por cromatograffa ultrarrapida sobre gel de sflice (EtOAc al 50-100 %/hexanos). MS (EI) m/z = 290,2 [M+1]+.
El metodo general C se aplico a N,N-dimetil-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)propan-2-amina (109 mg, 0,38 mmol) y bromhidrato de 6-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-3,4-dihidroisoquinolin-1(2H)-ona (125 mg, 0,31 mmol) para proporcionar 6-(2-amino-5-(4-(2-(dimetilamino)propan-2-il)fenil)piridin-3-il)-3,4-dihidroisoquinolin-1(2H)- ona (14 mg, rendimiento del 11 %) en forma de un solido de color blanco despues de la purificacion por cromatograffa ultrarrapida. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 8,32 (s, 1 H), 7,81-8,11 (m, 2 H), 7,37-7,79 (m, 7 H), 5,87 (s, 2 H), 3,41 (m, 2H), 2,85-3,10 (m, 2 H), 2,11 (s, 6 H), 1,30 (s, 6 H); MS (EI) m/z = 401,5 [M+1]+.
6.33. Sintesis de 4-(5-amino-6-(5-oxo-2,3,4,5-tetrahidrobenzo[f1[1,4oxazepin-8-il)pirazin-2-il)-N-ciclopropil-N- metilbencenosulfonamida
El compuesto del fftulo se preparo mediante el metodo mostrado a continuation:
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Metodo /\ General G ^
Metodo General C
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Una solution de 7-bromocroman-4-ona (340 mg, 1,5 mmol) y acido metanosulfonico (3 ml, 23,0 mmol) en DCM se enfrio a 0 °C y se trato en porciones con NaN3(146 mg, 2,25 mmol), mientras se mantuvo la temperatura interna por debajo de 5 °C. Despues, la reaction se agito a 0 °C durante 4 h. Tras la finalization, la reaction se neutralizo lentamente con NaOH ac. 8 N, despues se diluyo con DCM (20 ml) y agua (20 ml). Las capas se separaron y los productos organicos se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se evaporaron para proporcionar 8-bromo-3,4- dihidrobenzo[f][1,4]oxazepin-5(2H)-ona (370 mg, rendimiento del 100 %). MS (EI) m/z = 242,1 [M+1]+.
Los metodos generales G y C se aplicaron sucesivamente a 8-bromo-3,4-dihidrobenzo[f][1,4]oxazepin-5(2H)-ona (370 mg, 1,5 mmol) para proporcionar 4-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)-N-ciclopropil-N-metilbencenosulfonamida (241 mg, rendimiento del 41 %, 2 etapas) despues de la purificacion de la mezcla de reaccion en bruto sobre gel de sflice (eluyente de MeOH al 2-10 %/DCM. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 5 ppm 8,72 (s, 1 H), 8,43 (dd, J = 10,3, 4,8 Hz, 1 H), 8,26 (d, J = 8,8 Hz, 2 H), 7,90 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,85 (d, J = 8,3 Hz, 2 H), 7,54 (dd, J = 8,0, 1,8 Hz, 1 H), 7,41 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 4,31-4,40 (m, 2 H), 3,56 (s, 3 H), 3,33-3,43 (m, 1 H), 2,47-2,52 (m, 2 H), 0,65-0,79 (m, 4 H); MS (EI) m/z =466,5 [M+1]+.
6.34. Sintesis de 4-(5-amino-6-(1-oxo-3-hidro-4,4-dideutero-isoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N-ciclopropil-N- Trideuterometilbencenosulfonamida
El compuesto del fftulo se preparo mediante el metodo mostrado a continuacion:
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en el que: a es LiAlD4, AICI3, MeOH; b es CrO3, HOAc, H2O; c es NaN3, MeSO3H, DCM; d es BBr3, DCM; e es PhNTf2, NaH, THF; y f es Pd(dppf)Ch, (Bpin)s, KOAc, dioxano.
AlCl3(4,9 g, 36,7 mmol) y LiAlD4(770 mg, 18,4 mmol) se suspendieron en Et2O anhidro (50 ml) y se enfrio a 0 °C. Se anadio lentamente 6-metoxi-2,3-dihidro-1H-inden-1-ona (744 mg, 4,59 mmol) a la suspension agitada. La reaccion se retiro del bano de refrigeracion y se agito durante una noche mientras se calento gradualmente a temperatura ambiente. Tras la finalizacion, la reaccion se interrumpio secuencialmente mediante la adicion de agua (5,6 ml), KOH ac. al 15 % (5,6 ml), y agua (16,8 ml). Se anadio Na2SO4 y la mezcla se filtro. Los extractos organicos se concentraron y despues se purificaron por cromatografia ultrarrapida sobre gel de sflice (eluyente de EtOAc al 30 %/hexanos) para proporcionar 5-metoxi-3,3-dideutero-2-hidro-1H-indeno en forma de un aceite transparente (500 mg, rendimiento del 73 %) 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 5 ppm 7,38 (dd, J = 9,00 Hz, 1 H), 7,18-7,22 (m, 2 H), 3,85 (s, 3 H), 3,06-3,11 (m, 2 H), 2,71-2,75 (m, 2 H).
Se disolvio 5-metoxi-3,3-dideutero-2-hidro-1H-indeno (500 mg, 3,33 mmol) en acido acetico (10 ml) y se anadio lentamente una solucion de CrO3(1,33 g, 13,32 mmol) en acido acetico ac. al 50 % (10 ml). La reaccion se agito a 50 °C durante 0,5 h, despues se enfrio a 0 °C y se interrumpio con isopropanol (3 ml). La mezcla de reaccion se repartio entre NaOH 0,25 N ac. (50 ml) y EtOAc (50 ml). Las capas se separaron y los productos organicos se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4 y se concentraron para proporcionar 5-metoxi-3,3-dideutero-2-dihidro-inden-1- ona (545 mg, rendimiento del 100%). 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 5 ppm 7,70 (s a, 1 H), 6,91 (s a, 2 H), 3,89 (s a, 3 H), 2,67 (s a, 2 H); MS (EI)m/Z = 165,4 [M+1]+.
Se anadio acido metanosulfonico (1,0 ml, 15,4 mmol) a una solucion de 5-metoxi-3,3-dideutero-2-dihidro-inden-1-ona (600 mg, 3,65 mmol) en DCM (40 ml), y la solucion se enfrio a 0 °C. Se anadio lentamente en porciones azida sodica (356 mg, 5,48 mmol) a la solucion agitada. Despues de 6 h a 0 °C, la reaccion se interrumpio con NaOH ac. 8 N (20 ml). Las capas se separaron, y la capa acuosa se extrajo con DCM (3 x 20 ml). Los extractos organicos combinados se lavaron con salmuera (30 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron para proporcionar 6-metoxi-4,4- dideutero-3-hidroisoquinolin-1(2H)-ona (500 mg, rendimiento del 76%). 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 5 ppm 7,99 (d, J = 8,78 Hz, 1 H), 6,88 (dd, J = 8,78, 2,51 Hz, 1 H), 6,74 (d, J = 2,51 Hz, 1 H), 3,88 (s, 3 H), 3,60 (s, 2 H); MS (EI) m/z =180,4 [M+1]+.
A una solucion a -78 °C de 6-metoxi-4,4-dideutero-3-hidroisoquinolin-1(2H)-ona (2,9 g, 16,2 mmol) en DCM (150 ml) se le anadio una solucion 1,0 M recien preparada de BBr3 en DCM (32,4 ml, 32,4 mmol). La reaccion se dejo calentar gradualmente a temperatura ambiente durante una noche. Tras la finalizacion, la reaccion se enfrio a 0 °C y se inactivo cuidadosamente con MeOH (10 ml), despues se concentro y se purifico por cromatografia ultrarrapida sobre gel de sflice (eluyente de MeOH al 10 %/DCM) para proporcionar 6-hidroxi-4,4-dideutero-3-hidroisoquinolin- 1(2H)-ona en forma de un solido de color naranja brillante (2,33 g, rendimiento del 86%). 1H RMN (400 MHz, DMSO- de) 5 ppm 7,66 (d, J = 8,53 Hz, 1 H), 7,60 (s a, 1 H), 6,68 (dd, J = 8,53, 2,51 Hz, 1 H), 6,61 (d, J = 2,26 Hz, 1 H); MS (EI) m/z =166,4 [M+1]+.
Una solucion a temperatura ambiente de 6-hidroxi-4,4-dideutero-3-hidroisoquinolin-1(2H)-ona (2,75 g, 16,2 mmol) en THF (150 ml) se trato con NaH (1,62 g de dispersion al 60 % en peso en aceite mineral, 40,5 mmol). La reaccion se agito durante 0,5 h, despues se trato con PhNTf2 (17,36 g, 48,6 mmol) y la reaccion se mantuvo a temperatura ambiente durante 2 h. Tras la finalizacion, la reaccion se interrumpio con NH4Cl sat. ac. (50 ml), despues se diluyo con agua (50 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 100 ml). Los extractos organicos combinados se lavaron con salmuera (100 ml), despues se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. El material en bruto se purifico por cromatografia ultrarrapida sobre gel de sflice (eluyente de MeOH al 2-10 %/DCM para proporcionar trifluorometanosulfonato de 1- oxo-3-hidro-4,4-dideutero-isoquinolin-6-il (3,31 g, rendimiento del 69 %) en forma de un solido de color ligeramente rojo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 5 ppm 8,14 (s a, 1 H), 7,99 (d, J = 8,53 Hz, 1 H), 7,52 (d, J = 2,51 Hz, 1 H), 7,45 (dd, J = 8,66, 2,64 Hz, 1 H), 3,38 (d, J = 2,76 Hz, 2 H); MS (EI) m/z = 298,2[M+1]+.
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Una suspension de trifluorometanosulfonato de 1-oxo-3-hidro-4,4-dideutero-isoquinolin-6-il (3,30 g, 11,1 mmol) diboro pinacol ester (8,45 g, 33,3 mmol), KOAc (1,63 g, 16,7 mmol) y Pd(dppf)Cl2 (814 mg, 1,1 mmol) en dioxano (50 ml) se desgasifico y despues se calento a 90 °C durante 1,5 h. Tras la finalizacion, la reaccion se filtro, se concentro, despues se purifico por cromatografia ultrarrapida sobre gel de sflice (eluyente de EtOAc al 30 %/hexanos) para proporcionar 6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-3-hidro-4,4-dideutero-isoquinolin-1(2H)-ona (2,2 g, rendimiento del 72%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 5 ppm7,99 (s a, 1 H), 7,80 (dd, J = 1,00 Hz, 1 H), 7,61 (dd, J = 7,78, 5,77 Hz, 2 H), 7,59 (dd, J = 14,00 Hz, 2 H), 3,34 (d, J = 2,26 Hz, 2 H), 1,29 (s, 12 H); MS (EI) m/z = 276,4 [M+1]+. El metodo C se aplico a 6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-3-hidro-4,4-dideutero-isoquinolin-1(2H)- ona (1,14 g, 4,15 mmol) y 3,5-dibromopirazin-2-amina(1,0 g, 3,95 mmol). Tras la finalizacion, la mezcla de reaccion en bruto se filtro y despues se purifico por cromatografia ultrarrapida sobre gel de silice (eluyente de MeOH al 5-10 %/DCM) para proporcionar 4-(5-amino-6-(1-oxo-3-hidro-4,4-dideutero-isoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N-ciclopropil-N- Trideuterometilbencenosulfonamida (435 mg, rendimiento del 23%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 8,72 (s, 1 H), 8,26 (d, J = 8,53 Hz, 2 H), 8,02 (s a, 1 H), 7,97 (d, J = 8,03 Hz, 1 H), 7,84 (d, J = 8,53 Hz, 2 H), 7,74 (dd, J = 8,03, 1,76 Hz, 1 H), 7,70 (d, J = 1,51 Hz, 1 H), 3,41 (d, J = 2,51 Hz, 2 H), 1,78-1,86 (m, 1 H), 0,72-0,79 (m, 2 H), 0,64-0,72 (m, 2 H); MS (EI) m/z = 455,1[M+1]+.
6.35. Sintesis______de______4-(6-amino-5-(4,4-dimetil-1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)piridin-3-il)-N-
ciclopropilbencenosulfonamida
El compuesto del fitulo se preparo mediante el metodo mostrado a continuacion:
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en el que: a es TiCU, ZnMe2, DCM; b es CrO3, HOAc; c es NaN3, MsOH, DCM; d es (Bpin)2, Pd(dppf)Cl2, KOAc, dioxano.
Una solucion 1,0 M de TiCU en DCM (50 ml, 49,8 mmol) se anadio a un recipiente de reaccion que contema DCM (40 ml) enfriado a -40 °C. Despues, una solucion 2,0 M de dimetil cinc en tolueno (35,5 ml, 71,1 mmol) se anadio lentamente y la solucion se agito durante 20 minutos a -40 °C. A esta mezcla se le anadio una solucion de 6-bromo- 2,3-dihidro-1H-inden-1-ona (5,0 g, 23,7 mmol) en DCM (40 ml) y la reaccion se dejo calentar gradualmente a temperatura ambiente durante una noche. Tras la finalizacion, la reaccion se enfrio a 0 °C y se interrumpio con MeOH (10 ml), despues se diluyo con agua (50 ml) y DCM (50 ml). Las capas se separaron y la capa organica se lavo con salmuera (50 ml), se seco sobre Na2SO4, se filtro y se concentro. Se aislo 6-bromo-1,1-dimetil-2,3-dihidro- 1H-indeno (4,14 g, rendimiento del 78 %) en forma de un aceite transparente despues de la purification por cromatografia ultrarrapida sobre gel de sflice (eluyente de hexano). 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 5 ppm 7,22-7,33 (m, 2 H), 7,07 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 2,86 (t, J = 7,3 Hz, 2 H), 1,95 (t, J = 7,3 Hz, 2 H), 1,28 (s, 6 H); MS (EI)m/z = 226,2 [M+1]+.
A una solucion de 6-bromo-1,1-dimetil-2,3-dihidro-1H-indeno (3,6 g, 16 mmol) en acido acetico (50 ml) se le anadio a una solucion de CrO3 (9,6 g, 96,0 mmol) en acido acetico acuoso al 50% (50 ml). Esta solucion se calento durante 3 h a 60 °C. Tras la finalizacion, la mezcla de reaccion se inactivo mediante la adicion de isopropanol (20 ml). La reaccion interrumpida se repartio entre EtOAc (200 ml) y NaOH acuoso 0,25 M (100 ml). Las capas se separaron y los productos organicos se extrajeron con EtOAc (2 x 100 ml). Los extractos organicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. Despues de la purificacion por cromatografia ultrarrapida sobre gel de sflice (eluyente de EtOAc al 50 %/hexanos), se aislo 5-bromo-3,3-dimetil-2,3-dihidro-1H- inden-1-ona (2,91 g, rendimiento del 76 %) en forma de un solido de color blanco. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 5 ppm 7,65 (s, 1 H), 7,47-7,58 (m, 2 H), 2,58 (s, 2 H), 1,42 (s, 6 H); MS (EI)m/z = 240,1 [M+1]+.
Se disolvio 5-bromo-3,3-dimetil-2,3-dihidro-1H-inden-1-ona (1,6 g, 6,7 mmol) en DCM (12 ml) y se enfrio a 0 °C. Despues, se anadio MeSO3H (1,83 ml, 28,1 mmol) seguido de la adicion en porciones de NaN3 (653 mg, 10,1 mmol) durante ~10 min, mientras se mantuvo la temperatura interna de la reaccion por debajo de 5 °C. La reaccion se dejo calentar a temperatura ambiente y se agito 3 h en una atmosfera de nitrogeno. Tras la finalizacion, la reaccion se
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enfrio a 0 °C y se interrumpio con NaOH 8 M ac. Despues de agitar 30 minutos a temperatura ambiente, la reaccion interrumpida se repartio entre DCM (50 ml) y agua (50 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con DCM (2 x 30 ml). Los extractos organicos combinados se lavaron con salmuera (50 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. Se aislo 6-bromo-4,4-dimetil-3,4-dihidroisoquinolin-1(2H)-ona (711 mg, rendimiento del 40 %) en forma de un solido de color blanco despues de la purificacion por cromatografia ultrarrapida sobre gel de sflice (eluyendo en EtOAc al 50-100 %/hexano). 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 5 ppm 8,02 (s a, 1 H), 7,77 (d, J = 8,0
Hz, 1 H), 7,46-7,64 (m, 2 H), 3,16 (d, J = 3,0 Hz, 2 H), 1,27 (s, 6 H); MS (EI) m/z = 255,1 [M+1]+.
Una solucion de 6-bromo-4,4-dimetil-3,4-dihidroisoquinolin-1(2H)-ona (500 mg, 1,97 mmol), diboro pinacol ester (752 mg, 2,96 mmol), KOAc (773 mg, 7,88 mmol) y Pd(dppf)Cl2 (43 mg, 0,06 mmol) en dioxano (7 mll) se calento durante 2 horas a 100 °C a reflujo. Tras la finalizacion, la reaccion se enfrio a temperatura ambiente, se filtro, se concentro y se purifico por cromatografia ultrarrapida sobre gel de sflice, (eluyente de DCM al 2-5 %/MeOH). Las fracciones que conteman el producto se concentraron, se recogieron en hexanos, se sonicaron y se filtraron para proporcionar 4,4- dimetil-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-3,4-dihidroisoquinolin-1(2H)-ona (511 mg, rendimiento del 86 %) en forma de un solido de color blanco. 1H RMN (300 MHz, CLOROFORMO-cf) 5 ppm 8,09 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,71
7,87 (m, 2 H), 3,33 (d, J = 3,1 Hz, 2 H), 1,39 (m, J = 8,0 Hz, 18 H); MS (EI) m/z = 302,2 [M+1]+.
El metodo general C se aplico a bromhidrato de 4-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)-N-ciclopropilbencenosulfonamida (92 mg, ,25 mmol) y 4,4-dimetil-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-3,4-dihidroisoquinolin-1(2H)-ona (75 mg, 0,25 mmol) para dar 4-(6-amino-5-(4,4-dimetil-1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-fl)piridin-3-il)-N-
ciclopropilbencenosulfonamida (43 mg, rendimiento del 37 %) en forma de un solido de color blanco despues de la purificacion por cromatografia ultrarrapida sobre gel de sflice (eluyente de MeOH al 2-5 %/DCM). 1H RMN (400 MHz, DMSOC) 5 ppm 8,61 (s, 1 H), 8,06 (d, J = 8,5 Hz, 2 H), 7,96-8,02 (m, 2 H), 7,80 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 7,75 (dd, J = 7,5, 1,5 Hz, 1 H), 7,62 (d, J = 8,5 Hz, 2 H), 6,00 (s, 2 H), 3,20 (d, J = 2,0 Hz, 2 H), 2,06-2,18 (m, 1 H), 1,33 (s, 6 H), 0,33-0,55 (m, 4 H); MS (EI) m/z = 463,6 [M+1]+.
6.36. Sintesis de 1-(4-(5-amino-6-(1’-oxo-2’,3’-dihidro-1’H-espiro[ciclopropano-1,4’-isoquinolin1-6’-il)pirazin-2- il)fenil)ciclopropanocarbonitrilo
El compuesto del fitulo se preparo mediante el metodo mostrado a continuacion:
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en el que: a es MesSBr, n-BuLi, THF, 0 °C; b es Et2Zn, TFA, CH2I2, DCM, 0 °C; c es KMnO4,1,5 M ac. MgSO4, acetona; d es HONH2-HCl, NaOAc, THF, despues MsOH, TEA, THF; y e es BF3. MeOH, DCM, despues TiCU.
Una solucion 2,5 M de n-BuLi en hexanos (23,6 ml, 59 mmol) se anadio gota a gota a una suspension de 0 °C de bromuro de metiltrifenilfosfonio (16,8 g, 47,0 mmol) en THF (200 ml). Despues de 1 h, se anadio una solucion de 6- bromo-2,3-dihidro-1H-inden-1-ona (10,0 g, 47,0 mmol) en THF (50 ml) a la solucion resultante y el bano frfo de reaccion se retiro. Despues de que se completara, la reaccion se interrumpio con agua (40 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 40 ml). Los extractos organicos combinados se lavaron con salmuera (50 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron para proporcionar 6-bromo-1-metileno- 2,3-dihidro-1H-indeno (6,06 g, rendimiento del 62 %) en forma de un aceite transparente despues de la purificacion por cromatografia ultrarrapida sobre gel de sflice (eluyente hexano). 1H RMN (400 MHz, ClOrOFORmO-C) 5 ppm 7,61 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 7,32 (dd, J = 8,0, 1,8 Hz, 1 H), 7,13 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 5,45 (t, J = 2,5 Hz, 1 H), 5,08 (t, J =
2,1 Hz, 1 H), 2,88-2,98 (m, 2 H), 2,78-2,86 (m, 2 H); MS (EI) m/z = 210,1 [M+1]+.
Una solucion 1,1 M de tolueno de dietil cinc (104,0 ml, 114,8 mmol) se anadio en un recipiente de reaccion que contema DCM (100 ml) y se enfrio a 0 °C. Se anadio TFA (8,9 ml, 114,8 mmol) a la solucion resultante y la reaccion se agito a 0 °C durante 15 min. A la solucion enfriada se le anadio CH2h (9,26 ml, 114,8 mmol), y la reaccion se agito durante 15 minutos mas a 0 °C. Despues, se anadio una solucion de 6-bromo-1-metileno-2,3-dihidro-1H-indeno (6,0 g, 28,7 mmol) en DCM (90 ml) y la reaccion se mantuvo 0 °C durante 15 min mas, y despues se dejo calentar gradualmente a temperatura ambiente. Despues de que se completara, la reaccion se interrumpio con NH4Cl sat. ac.
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(100 ml) y se diluyo con DCM (200 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se lavo con DCM (2 x 100 ml). Los extractos organicos combinados se lavaron con salmuera (100 ml), se secaron sobre Na2SO4, despues se filtraron y se concentraron. Se obtuvo 6'-bromo-2',3'-dihidrospiro[ciclopropano-1,1'-indeno (5,9 g, rendimiento del 93%) despues de la purificacion por cromatograffa ultrarrapida (eluyente de hexanos) en forma de un aceite transparente. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 6 ppm 7,22 (dd, J = 7,9, 1,9 Hz, 1 H), 7,05 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 6,78 (d, J =
l, 8 Hz, 1 H), 2,99 (t, J = 7,5 Hz, 2 H), 2,06-2,20 (t, 2 H), 0,83-1,03 (m, 4 H); MS (EI) m/z = 224,1 [M+1]+.
A una solucion de 6'-bromo-2',3'-dihidrospiro[ciclopropano-1,1'-indeno] (5,7 g, 25,6 mmol) en acetona (78 ml) y 1,5 M
ac. MgSO4 (29 ml) se le anadio KMnO4 (4,46 g, 28,2 mmol). La reaccion se agito durante una noche a temperatura ambiente. Despues de que se completara, la reaccion se filtro sobre celite y se concentro. El residuo se repartio entre agua (100 ml) y EtOAc (200 ml), y las capas se separaron. El producto organico se lavo con salmuera, se seco sobre Na2SO4, despues se filtro y se concentro. Se aislo 6'-bromospiro[ciclopropano-1,1'-inden]-3'(2'H)-ona (2,11 g, rendimiento del 39 %) en forma de un solido de color blanco despues de la cromatograffa ultrarrapida sobre gel de sflice (eluyente de EtOAc al 5 %/hexano). 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 6 ppm 7,59 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 7,45 (dd, J = 8,0, 1,5 Hz, 1 H), 7,14 (d, J = 1,3 Hz, 1 H), 2,76 (s, 2 H), 1,15-1,34 (m, 4 H); MS (EI) m/z = 238,1 [M+1]+.
Una solucion de 6'-bromospiro[ciclopropano-1,1'-inden]-3'(2'H)-ona (2,1 g, 8,86 mmol), hidroxilamina HCl (1,23 g, 17,7 mmol) y NaOAc (4,32 g, 53,1 mmol) en MeOH (160 ml) se agito durante una noche a temperatura ambiente. La reaccion se concentro, se suspendio agua (40 ml), despues se sonico y se filtro. El precipitado se seco a alto vado para dar (E)-6'-bromospiro[ciclopropano-1,1'-inden]-3'(2'H)-ona oxima (2,23 g, rendimiento del 100 %) en forma de un solido de color blanco. Ms (EI) m/z = 253,1[M+1]+.
A una solucion a 0 °C de (E)-6'-bromospiro[ciclopropano-1,1'-inden]-3'(2'H)-ona oxima (500 mg, 1,98 mmol) en THF (5 ml) se le anadio trietilamina (332 pl, 2,38 mmol) seguido de una adicion lenta de MsCl (170 pl, 2,18 mmol). La reaccion se agito 10 minutos a 0 °C y despues se concentro. El residuo se trituro en metanol (5 ml) para proporcionar (E)-6'-bromospiro[ciclopropano-1,1'-inden]-3'(2'H)-ona O-metilsulfonil oxima (653 mg, rendimiento del 100 %) en forma de un solido de color blanco despues de secado a alto vado. 1H RMN (300 MHz, CLOROFORMO- d) 6 ppm 7,64 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,42 (dd, J = 8,3, 1,6 Hz, 1 H), 6,98 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 3,26 (s, 3 H), 3,15 (s, 2 H), 1,06-1,42 (m, 4 H); MS (EI) m/z = 331,2 [M+1]+.
Una solucion de (E)-6'-bromospiro[ciclopropano-1,1'-inden]-3'(2'H)-ona-O-metilsulfonil oxima (653 mg, 1,98 mmol) en DCM (10 ml) se enfrio a 0°C. Se anadio BFaMeOH (362 pl, 4,36 mmol) a la solucion enfriada, seguido de la adicion lenta de TiCU (304 pl, 2,77 mmol) y la reaccion se mantuvo a 0°C durante 4 h. Tras la finalizacion, la reaccion se interrumpio con agua (10 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se lavo con DCM (2 x 10 ml). Los extractos organicos combinados se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. Se aislo 6'-bromo-2',3'-dihidro-1'H- espiro[ciclopropano-1,4'-isoquinolin]-1'-ona (228 mg, 0,90 mmol, rendimiento del 46 %) en forma de un solido de color blanco despues de la purificacion por cromatograffa ultrarrapida (eluyente de EtOAc al 50-100 %/hexano). 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 6 ppm 7,98 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 7,46 (dd, J = 8,3, 1,8 Hz, 1 H), 7,01 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 5,94 (s a, 1 H), 3,37 (d, J = 2,8 Hz, 3 H), 0,94-1,20 (m, 4 H); MS (EI) m/z = 253,1 [M+1]+.
El metodo general G se aplico a 6'-bromo-2',3'-dihidro-1'H-espiro[ciclopropano-1,4'-isoquinolin]-1'-ona (228 mg, 0,90 mmol) para proporcionar despues de la purificacion por cromatograffa ultrarrapida sobre gel de sflice (EtOAc al 50100 %/hexanos), 6'-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-2',3'-dihidro-1'H-espiro[ciclopropano-1,4'-isoquinolin]- 1'-ona (199 mg, rendimiento del 74 %) en forma de un solido de color blanco. 1H RMN (300 MHz, CLOROFORMO-d) 6 ppm 8,12 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,77 (dd, J = 7,6, 1,0 Hz, 1 H), 7,30 (s, 1 H), 3,37 (d, J = 2,3 Hz, 2 H), 1,36 (s, 12 H), 0,94-1,22 (m, 4 H); MS (EI) m/z = 300,2[M+1]+.
El metodo general C se aplico a 1-(4-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)fenil)ciclopropanocarbonitrilo (95 mg, 0,30 mmol) y 6'-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-2',3'-dihidro-1'H-espiro][ciclopropano-1,4'-isoquinolin]1'-ona (100 mg, 0,33 mmol) para proporcionar 1-(4-(5-amino-6-(1'-oxo-2',3'-dihidro-1'H-espiro[ciclopropano-1,4'-isoquinolin]-6'- il)pirazin-2-il)fenil)ciclopropanocarbonitrilo (44 mg, rendimiento del 36 %) despues de la cromatograffa ultrarrapida sobre gel de sflice (eluyente de MeOH al 2-5 %/DCM),1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 6 ppm 0,76-1,07 (m, 4 H) 1,081,35 (m, 4 H) 1,44-1,63 (m, 2 H) 1,65-1,86 (m, 2 H) 6,37 (s, 1 H) 7,10-7,51 (m, 3 H) 7,68 (d, J = 7,78 Hz, 1 H) 7,838,28 (m, 4 H) 8,57 (s, 1 H). MS (EI) m/z: 408 [M+H]+. HPLC (Sunfire C18 4,6 mm x 50 mm, MeCN al 10-90 %:NH4OAc ac. 10 mM, gradiente de 2 min) tR = 1,69 min, 100 % de area integrada.
6.37. Sintesis_______de_______4-(5-amino-6-(3'-oxospiro[ciclopropano-1,1'-isoindolin1-6'-il)pirazin-2-il)-N-
ciclopropilbencenosulfonamida
El compuesto del tftulo se preparo mediante el metodo mostrado a continuacion:
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en el que: a es Ti(OiPr)4, EtMgBr, Et2O; y b es (Bpin)2, Pd(dba)3, P(Cy)3, dioxano.
A una solucion de 4-cloro-2-cianobenzoato de metilo (2,0 g, 10,2 mmol) en Et2O (40 ml) se le anadio Ti(OiPr)4 (3,43
ml, 11,7 mmol). Despues de enfriar a 0 °C, se anadio lentamente una solucion 3,0 M de EtMgBr en Et2O (6,8 ml, 20,4 mmol). La reaccion se calento a temperatura ambiente y se agito durante 3 h. Despues de que se completara, la reaccion se interrumpio con HCl 1,0 M (20 ml) y despues se filtro sobre celite. Las capas se separaron y la capa acuosa se lavo con EtOAc (2 x 20 ml). Los extractos organicos combinados se secaron sobre Na2SO4, despues se filtraron y se concentraron. El producto en bruto se purifico por cromatografia ultrarrapida sobre gel de sflice (eluyente de MeOH al 2-5 %/DCM) para proporcionar 6’-clorospiro[ciclopropano-1,1’-isoindolin]-3’-ona (400 mg, rendimiento del 21 %) en forma de un solido de color amarillo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 5 ppm 8,75 (s a, 1 H), 7,66 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,40-7,54 (m, 2 H), 1,47 (dt, J = 11,2, 2,8 Hz, 4 H); MS m/z C10H8CINO [M+1]+ = 194,6.
Una solucion de 6’-clorospiro[ciclopropano-1,1’-isoindolin]-3’-ona (380 mg, 1,96 mmol), bis(pinacolato)diboro (808 mg, 3,18 mmol), KOAc (677 mg, 6,9 mmol), P(Cy)3 (137 mg, 0,49 mmol) y Pd(dba)3 (180 mg, 0,20 mmol) en dioxano (8 ml) se calento durante una noche a 100 °C en un condensador a reflujo. Tras la finalizacion, la reaccion se dejo enfriar a temperatura ambiente, se diluyo en DCM (40 ml), se sonico y se filtro. El filtrado se purifico por cromatografia ultrarrapida sobre gel de sflice (eluyente de EtOAc al 50/100 %/hexano). Las fracciones que conteman el producto se recogieron en hexanos, despues se sonicaron y se filtraron para proporcionar 6’-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il)espiro[ciclopropano-1,1’-isoindolin]-3’-ona (520 mg, rendimiento del 93 %) en forma de un solido de color amarillo. 1H RMN (400 MHz, METANOL-d4) 5 ppm 7,70-7,91 (m, 2 H), 7,56 (s, 1 H), 1,46-1,68 (m, 4 H), 1,15-1,43 (m, 12 H); MS (EI) m/z = 286,1 [M+1]+.
El metodo general B se aplico a 4-(5-amino-6-bromo-pirazin-2-il)-N-ciclopropil-bencenosulfonamida (140 mg, 0,38 mmol) y 6’-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)espiro[ciclopropano-1-1’-isoindolin]3’-ona (120 mg, 0,42 mmol) para proporcionar 4-(5-amino-6-(3’-oxospiro[ciclopropano-1,1’-isoindolin]-6’-il)pirazin-2-il)-N-
ciclopropilbencenosulfonamida (58 mg, rendimiento del 34 %) despues de la purification por cromatografia ultrarrapida sobre gel de sflice (eluyente de MeOH al 2-5 %/DCM). 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 5 ppm 0,29-0,58 (m, 4 H) 1,36-1,68 (m, 4 H) 2,13 (d, J = 2,51 Hz, 1 H) 6,62 (s, 1 H) 7,62 (s, 1 H) 7,74-7,96 (m, 5 H) 8,21 (d, J = 8,53 Hz, 2 H) 8,70 (s, 1 H) 8,75 (s, 1 H) 8,96-9,32 (m, 1 H). MS (EI) m/z: 448 [M+H]+. HPLC (Sunfire C18 4,6 mm x 50
mm, MeCN al 10-90 %:NH4OAc ac. 10 mM, gradiente de 2 min) tR = 1,47 min, 97% de area integrada.
6.38. Sintesis de 5-(3-amino-6-(4-(N-ciclopropil-N-metilsulfamoil)fenil)pirazin-2-il)-N-metilindolina-1-carboxamida El compuesto del fitulo se preparo mediante el metodo mostrado a continuation:
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en el que: a es isocianato de metilo, DIEA, THF.
A una solucion de 5-bromoindolina (1,0 g, 5,05 mmol) y DIEA (1,9 ml, 11,11 mmol) en THF (40 ml) se anadio le isocianato de metilo (346 mg, 6,06 mmol). La reaccion se mantuvo a temperature ambiente durante 4 h. El precipitado resultante se filtro y se seco al vado para proporcionar 5-bromo-N-metilindolina-1-carboxamida (935 mg, rendimiento del 72 %) en forma de un solido de color blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 ppm 7,75 (d, J = 8,78
Hz, 1 H), 7,17-7,31 (m, 2 H), 6,60 (d, J = 4,27 Hz, 1 H), 3,85 (t, J = 8,78 Hz, 2 H), 3,10 (t, J = 8,66 Hz, 2 H), 2,65 (d, J
= 4,27 Hz, 3 H); MS (El) m/z = 255,1[M+1]+.
El metodo general G se aplico a 5-bromo-N-metilindolina-1-carboxamida (935 mg, 3,67 mmol) para proporcionar N- metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)indolina-1-carboxamida en forma de una espuma de color blanco (1,10 g, rendimiento del 100 %) despues de la purificacion por cromatograffa ultrarrapida (MeOH al 5 %/DCM). 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 8 ppm 1,34 (s, 12 H) 3,10-3,22 (m, 2 H) 3,90 (s, 2 H) 4,54-4,66 (m, 1 H) 7,60 (s
а, 1 H) 7,66 (d a, J = 1,00 Hz, 1 H) 7,85 (d a, J = 1,00 Hz, 1 H) 7,84-7,91 (m, 1 H); MS (EI) m/z = 301,0 [M-1]-.
El metodo C se aplico N-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)indolina-1-carboxamida (85 mg, 0,28 mmol) y 4-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)-N-ciclopropil-N-metilbencenosulfonamida (100 mg, 0,26 mmol). La capa organica se decanto y despues se trituro con Et2O para proporcionar 5-(3-amino-6-(4-(N-ciclopropil-N-metil- sulfamoil)fenil)pirazin-2-il)-N-metilindolina-1-carboxamida en forma de un solido de color amarillo (35 mg, rendimiento del 28%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 8 ppm 8,58-8,66 (m, 1 H), 8,20-8,31 (m, 1 H), 7,92-7,99 (m, 1 H), 7,79-7,88
(m, 2 H), 7,47-7,64 (m, 2 H), 6,61-6,71 (m, 1 H), 6,60-6,65 (m, 1 H), 6,58-6,71 (m, 2 H), 6,42-6,49 (m, 2 H), 3,88-3,98
(m, 2 H), 3,13-3,25 (m, 2 H), 2,68 (s, 3 H), 2,08 (s, 3 H), 1,79-1,88 (m, 1 H), 0,62-0,81(m, 4 H); MS (EI) m/z = 479,1 [M+1]+.
б. 39. Sintesis_________de________4-(5-amino-6-(8-oxo-5,6,7,8-tetrahidro-2,7-naftiridin-3-il)pirazin-2-il)-N-
ciclopropilbencenosulfonamida
El compuesto del fftulo se preparo mediante el metodo mostrado a continuacion:
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en el que: a es Boc2O, TEA, DCM; b es NalO4, RuCh, DCM, agua, MeCN; c es HCl, dioxano; y d es Me6Sn2, Pd(PPha)4, dioxano, 110 °C.
A una solucion de clorhidrato de 6-cloro-1,2,3,4-tetrahidro-2,7-naftiridina (5,0 g, 24,4 mmol) y dicarbonato de diterc- butilo (8,0 g, 36,6 mmol) en DCM (100 ml) a temperatura ambiente se le anadio trietilamina (10,2 ml, 73,2 mmol). Despues de que se completara, la reaccion se diluyo en DCM (100 ml), se lavo con NaHCO3 sat. ac., se seco sobre Na2SO4, se filtro y se concentro. Este residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida sobre gel de sflice (eluyente de EtOAc al 20 %/hexano) para proporcionar 6-cloro-3,4-dihidro-2,7-naftiridina-2(1H)-carboxilato de terc-butilo (4,0 g, rendimiento del 61 %) en forma de un aceite transparente. 1H RMN (400 MHz, METANOL-d4) 8 ppm 8,17 (s, 1 H), 7,30 (s, 1 H),4,60 (s, 2 H), 3,66 (t, J = 5,9 Hz, 2 H), 2,88 (t, J = 5,8 Hz, 2 H), 1,43-1,61 (m, 9 H); MS (EI) m/z = 269,7 [M+1]+.
A una solucion de NalO4 (9,56 g, 44,7 mmol) y RuCh (927 mg, 4,47 mmol) en agua (50 ml), DCM (50 ml) y MeCN (2 ml) se le anadio una solucion de 6-cloro-3,4-dihidro-2,7-naftiridina-2(1H)-carboxilato de terc-butilo (4,0 g, 14,9 mmol) en DCM (25 ml). Esta reaccion se agito a temperatura ambiente durante 2 h. Tras la finalizacion, la reaccion se interrumpio con isopropanol (10 ml), se filtro sobre celite y la torta de filtro se lavo con DCM (20 ml). El filtrado se repartio en un embudo de decantacion y las capas se separaron. La capa organica se extrajo con DCM (2 x 20 ml) y los extractos organicos combinados se secaron sobre Na2SO4, despues se filtraron y se concentraron. El residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida sobre gel de sflice (eluyente EtOAc al 20-50 %/hexano) para dar 6-cloro-1- oxo-3,4-dihidro-2,7-naftiridina-2(1H)-carboxilato de terc-butilo (3,0 g, rendimiento del 71 %) en forma de un solido
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cristalino de color amarillo. 1H RMN (400 MHz, METANOL- d4) 5 ppm 8,92 (s, 1 H), 7,47 (s, 1 H), 4,03 (t, J = 6,3 Hz, 2 H), 3,09 (t, J = 6,1 Hz, 2 H), 1,54-1,62 (m, 9 H); MS (EI) m/z = 283,7 [M+1]+.
A una solucion de 6-cloro-1-oxo-3,4-dihidro-2,7-naftiridina-2(1H)-carboxilato de terc-butilo (3,0 g, 10,6 mmol) en DCM (20 ml) se le anadio una solucion 4 N de HCl en dioxano (10 ml). Despues de agitar 20 minutos a temperature ambiente, la reaccion se diluyo con DCM (50 ml, despues se sonico y se filtro para dar clorhidrato de 6-cloro-3,4- dihidro-2,7-naftiridin-1(2H)-ona (2,22 g, rendimiento del 93%) en forma de un solido de color blanco. 1H RMN (300 MHz, DMSO-de) 5 ppm 8,70 (s, 1 H), 8,23 (s a, 1 H), 7,57 (s, J = 0,6 Hz, 1 H), 3,40 (t, J = 6,6, 2,8 Hz, 2 H), 2,96 (t, J = 6,6 Hz, 2 H); MS (EI) m/z = 183,6 [M+1]+.
Una solucion de clorhidrato de 6-cloro-3,4-dihidro-2,7-naftiridin-1(2H)-ona (800 mg, 3,7 mmol), hexametilditin (1,83 g, 5,6 mmol) y Pd(PPh3)4 (214 mg, 0,19 mmol) en dioxano (40 ml) se desgasifico en nitrogeno en burbujeo y despues se calento a 110 °C durante 4h. Tras la finalizacion, la reaccion se concentro y se purifico por cromatograffa ultrarrapida sobre alumina neutra (eluyente de EtOAc al 100 %, despues eluyente de MeOH al 5 %/DCM). Esto produjo 6-(trimetilestannil)-3,4-dihidro-2,7-naftiridin-1(2H)-ona (1,22 g, rendimiento del 100 %) en forma de un aceite de color pardo que se uso sin purificacion adicional. MS (EI) m/z [M+1]+= 312.
Una solucion de 4-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)-N-ciclopropilbencenosulfonamida (150 mg, 0,41 mmol), 6- (trimetilstannil)-3,4-dihidro-2,7-naftiridin-1(2H)-ona (150 mg, 0,48 mmol) y Pd(PPh3)4 (23 mg, 0,02 mmol) en dioxano (2 ml) se calento en el microondas 20 min a 150 °C. Tras la finalizacion, la mezcla de reaccion se purifico por HPLC preparativa de fase inversa para proporcionar 4-(5-amino-6-(8-oxo-5,6,7,8-tetrahidro-2,7-naftiridin-3-il)pirazin-2-il)-N- ciclopropilbencenosulfonamida (8 mg, rendimiento del 5 %) en forma de un solido de color naranja despues de la liofilizacion. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 5 ppm 9,02 (s, 1 H), 8,87 (s, 1 H), 8,59 (s, 1 H), 8,35 (d, J = 8,5 Hz, 2 H), 8,17 (s a, 1 H), 7,84-7,99 (m, 3 H), 3,51 (t, 2 H), (t, J = 6,3 Hz, 2 H), 0,29-0,57 (m, 4 H); MS (EI) m/z = 437,5 [M+1]+.
6.40. Sintesis_______de_______4-(5-amino-6-(4-bromo-1-hidroxiisoauinolin-6-il)pirazin-2-il)-N-ciclopropil-N-
metilbencenosulfonamida
El compuesto del tftulo se preparo mediante el metodo mostrado a continuacion:
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en el que: a es DMF:DMF-DMA (10:1), NBS.
A una suspension a temperatura ambiente de clorhidrato de 4-(5-amino-6-(1-hidroxiisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N- ciclopropil-N-metilbencenosulfonamida (1,00 g, 2,07 mmol, preparada por el metodo general C) en DMF (10 ml) se le anadio 1,1-dimetoxi-N,N-dimetilmetanamina (1 ml). En unos minutos, la suspension se descargo a una solucion. Despues, se anadio en una porcion N-bromosuccinimida (386 mg, 2,17 mmol). Despues de 1 h, la reaccion se concentro y se sometio a cromatograffa ultrarrapida sobre gel de sflice (eluyente de MeOH al 4-8 %/DCM) para proporcionar clorhidrato de 4-(5-amino-6-(4-bromo-1-hidroxiisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N-ciclopropil-N- metilbencenosulfonamida (480 mg, rendimiento del 43%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 5 ppm 11,59-11,67 (s a, 1 H), 8,77 (s, 1 H), 8,36 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 8,24-8,30 (m, 2 H), 8,17 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 7,99 (dd, J = 8,3, 1,5 Hz, 1 H), 7,86 (d, J = 8,5 Hz, 2 H), 7,62 (d, J = 6,0 Hz, 1 H), 6,76 (s a, 2 H), 2,69 (s, 3 H), 1,80-1,90 (m, 1 H), 0,76 (s, 2 H), 0,65-0,73 (m, 2 H); MS (EI) m/z = 527,4 [M+1]+.
6.41. Compuestos adicionales
Se prepararon numerosos compuestos adicionales, algunos de los cuales se enumeran a continuacion en la Tabla 1. La Tabla 1 tambien proporciona resultados de ensayo in vitro, que se obtuvieron usando el ensayo descrito en el Ejemplo 6.42, en el que "-" indica que no se obtuvo una medicion; * = CI50 < 0,15 |jM; ** = CI50 <0,05 |jM; y *** = CI50 <0,01 jM.
Tabla 1
Compuesto
CI50 (mM)
ATP 1 mM
ATP 50 mM
4-(6-amino-6'-fluoro-[3,3'-bipiridin]-5-il)benzamida
-- --
4-(2-amino-5-(1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)benzamida
-- *
4-(2-amino-5-(4-sulfamoilfenil)piridin-3-il)benzamida
-- *
4-(2-amino-5-(1-(N,N-dimetilsulfamoil)-1H-imidazol-4-il)piridin-3-il)benzamida
-- --
4-(5-(4-(1H-imidazol-1-il)fenil)-2-aminopiridin-3-il)benzamida
-- *
4-(2-amino-5-(4-benzoilfenil)piridin-3-il)benzamida
-- *
4-(2-amino-5-(4-fluorofenil)piridin-3-il)-2-etoxibenzamida
-- *
3-amino-N-(pentan-2-il)-6-(3,4,5-trimetoxifenil)pirazina-2-carboxamida
-- *
3-amino-N-ciclohexil-6-(3,4-dimetoxifenil)pirazina-2-carboxamida
-- *
4-(2-amino-5-(4-(2-oxo-2-(pirrolidin-1-il)etil)fenil)piridin-3-il)benzamida
-- *
4-(2-amino-5-(4-(N-metilsulfamoil)fenil)piridin-3-il)benzamida
-- *
3-amino-N-ciclohexil-6-(4-(metoximetil)fenil)pirazina-2-carboxamida
-- *
4-(2-amino-5-(4-(bencilcarbamoil)fenil)piridin-3-il)-N-hidroxibenzamida
-- *
6-(2-amino-5-(4-fluorofenil)piridin-3-il)-3,4-dihidroisoquinolin-1(2H)-ona
* **
4-(6-amino-5-(4-hidroxiquinazolin-7-il)piridin-3-il)-N,N-dietilbencenosulfonamida
** ***
4-(2-amino-5-(4-(N,N-dietilsulfamoil)fenil)piridin-3-il)-2-fluorobenzamida
-- **
4-(2-amino-5-(4-(N-ciclopropilsulfamoil)fenil)piridin-3-il)benzamida
** **
4-(6-amino-5-(3-hidroxi-1H-indazol-6-il)piridin-3-il)-N,N-dietilbencenosulfonamida
-- *
3-amino-N-ciclohexil-6-(4-(N-etilsulfamoil)fenil)pirazina-2-carboxamida
* **
4-(6-amino-5-(2-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-benzo[b]azepin-7-il)piridin-3-N)-N,N- dietilbencenosulfonamida
-- *
4-(6-amino-5-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinoNn-6-N)pmdin-3-N)-N- ciclopropilbencenosulfonamida
*** ***
2'-amino-5'-(4-(N,N-dietilsulfamoil)fenil)-[2,3'-bipiridina]-5-carboxamida
** ***
4-(6-amino-5-(3-oxo-2,3-dihidrobenzo[d]isoxazol-6-il)piridin-3-N)-N,N- dietilbencenosulfonamida
-- *
4-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinoNn-6-il)pirazin-2-il)-N,N- di(trideuterometil)bencenosulfonamida
*** ***
4-(5-(4-(N-acetilsulfamoil)fenil)-2-aminopiridin-3-il)benzamida
-- *
4-(6-amino-5-(4-hidroxiquinazolin-7-il)piridin-3-il)-N-etilbencenosulfonamida
** ***
2'-amino-5'-(4-(N-etilsulfamoil)fenil)-[2,3'-bipiridina]-5-carboxamida
** ***
4-(2-amino-5-(2-cloro-4-(N-ciclopropilsulfamoil)fenil)piridin-3-il)benzamida
-- *
4-(2-amino-5-(4-(2-(dimetilamino)-2-oxoetoxi)fenil)piridin-3-il)benzamida
-- *
3-amino-N-(4-(aminometil)ciclohexil)-6-(4-(N-ciclopropilsulfamoil)fenil)pirazina-2- carboxamida
** ***
4-(2-amino-5-(4-propoxifenil)piridin-3-il)benzamida
-- *
Compuesto
CI50 (mM)
ATP 1 mM
ATP 50 mM
4-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N-ciclopropil-N- trideuterometilbencenosulfonamida
*** ***
6-(2-amino-5-(4-(etilsulfonil)fenil)piridin-3-il)-3,4-dihidroisoquinolin-1(2H)-ona
** **
4-(5-amino-6-(5-fenil-1H-imidazol-2-il)pirazin-2-il)-N-cidopropilbencenosulfonamida
-- **
5-(6-amino-5-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)piridin-3-il)-N-(2,2,2- trifluoroetil)tiofeno-2-carboxamida
* **
6-(2-amino-5-(5-metiltiofen-2-il)piridin-3-il)-3,4-dihidroisoquinolin-1(2H)-ona
** ***
6-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N-ciclopropil-N- trideuterometilpiridina-3-sulfonamida
*** ***
6-(2-amino-5-(2-(dimetilamino)tiazol-4-il)piridin-3-il)-3,4-dihidroisoquinolin-1(2H)-ona
-- **
(E)-4-(6-amino-5-(5-(hidroxiimino)-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)piridin-3-il)-N- etilbencenosulfonamida
** ***
4-(6-amino-5-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)piridin-3-il)-N-ciclopropil-N- metilbencenosulfonamida
*** ***
N-ciclopropil-4-(3-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)-1H-pirrolo[2,3-b]pindin-5- il)bencenosulfonamida
** ***
2-(4-(6-amino-5-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pindin-3-il)-N- metilfenilsulfonamido)acetato de metilo
* **
4-(6-amino-5-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)piridin-3-il)-N-etil-N- metilbencenosulfonamida
*** ***
4-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N-ciclopropil-N- metilbencenosulfonamida
*** ***
4-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N-etil-N- metilbencenosulfonamida
*** ***
6'-amino-N-etil-N-metil-5'-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)-[2,3'-bipiridina]-5- sulfonamida
*** ***
6-(3-amino-6-(4-((ciclopropilmetil)sulfonil)fenil)pirazin-2-il)-3,4-dihidroisoquinolin-1(2H)- ona
** ***
4-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N-ciclopropil-N- etilbencenosulfonamida
** ***
4-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N-(ciclopropilmetil)-N- etilbencenosulfonamida
*** ***
4-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N-(2,2-difluoroetil)-N- metilbencenosulfonamida
** ***
6-(5-(4-(4-azaespiro[2,4]heptan-4-ilsulfonil)fenil)-2-aminopiridin-3-il)-3,4- dihidroisoquinolin-1(2H)-ona
** ***
5-(6-amino-5-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)piridin-3-il)-N-etil-N-metiltiofeno-2- sulfonamida
** ***
4-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N-metil-N- propilbencenosulfonamida
*** ***
6-(2-amino-5-(1,1-dioxido-2,3-dihidrobenzo[d]isotiazol-5-il)piridin-3-il)-3,4- dihidroisoquinolin-1(2H)-ona
** ***
Compuesto
CI50 (mM)
ATP 1 mM
ATP 50 mM
4-(5-amino-6-(1-oxo-1,2-dihidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N-ciclopropil-N- metilbencenosulfonamida
*** ***
4-(5-amino-6-(1-hidroxiisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N-etil-N-metilbencenosulfonamida
*** ***
6'-amino-N-ciclopropil-N-metil-5'-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-ilH2,3'- bipiridina]-5-sulfonamida
*** ***
4-(6-amino-5-(7-oxo-4,5,6,7-tetrahidrotieno[2,3-c]pmdin-2-il)piridin-3-il)-N-etil-N- metilbencenosulfonamida
** ***
6-(3-amino-6-(4-(piperidin-1-ilsulfonil)fenil)pirazin-2-il)isoquinolin-1(2H)-ona
*** ***
4-(6-amino-5-(1-oxo-1,2-dihidroisoquinolin-6-il)piridin-3-il)-N-ciclopropil-N- metilbencenosulfonamida
*** ***
6'-amino-N-ciclopropil-N-metil-5'-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-ilH3,3'- bipiridina]-6-sulfonamida
*** ***
4-(3-amino-6-(4-(N-ciclopropil-N-metilsulfamoil)fenil)pirazin-2-il)-2-isopropoxibenzamida
** ***
4-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N-tndeuterometil-N-(2- dideutero-propil)bencenosulfonamida
*** ***
N-(4-(6-amino-5-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pindin-3- il)fenil)etanosulfonamida
** ***
6'-amino-N-ciclopropil-5'-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-ilH2,3-bipindina]-5- sulfonamida
*** ***
6-amino-5-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)-5',6-dihidro-[3,4'-bipiridina]-1'(2'H)- carboxilato de terc-butilo
* **
4-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N-metil-N-((1R,2R)-2- metilciclopropil)bencenosulfonamida
*** ***
6-(2-amino-5-(2-oxoindolin-5-il)piridin-3-il)-3,4-dihidroisoquinolin-1(2H)-ona
** **
6-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N-etil-N-metilpiridina-3- sulfonamida
*** ***
6-amino-N,N-dimetil-5-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)-5',6'-dihidro-[3,4'- bipiridina]-1'(2'H)-sulfonamida
* **
4-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N-ciclopropil-2-fluoro- N-metilbencenosulfonamida
*** ***
4-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N-ciclobutil-N- metilbencenosulfonamida
*** ***
6-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N-ciclopropil-N- metilpiridina-3-sulfonamida
*** ***
4-(2-amino-1-(2-cianoacetil)-1',2',3',6'-tetrahidro-[3,4'-bipiridin]-5-il)-N-ciclopropil-N- metilbencenosulfonamida
* *
5-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N-ciclopropil-N- metilpiridina-2-sulfonamida
** ***
6'-amino-N-metil-5'-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)-N-propil-[2,3'-bipiridina]-5- sulfonamida
*** ***
4-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N- ciclopropilbencenosulfonamida
*** ***
imagen46
Compuesto
CI50 (mM)
ATP 1 mM
ATP 50 mM
1-(4-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2- il)fenil)ciclopropanocarbonitrilo
** ***
4-(5-amino-6-(1-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-benzo[c]azepin-7-il)pirazin-2-il)-N-etil-N- metilbencenosulfonamida
** ***
1-(4-(6-amino-5-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)piridin-3- il)fenil)ciclopropanocarbonitrilo
** **
2-(4-(5-amino-6-(1-oxo-1,2-dihidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)fenil)-2-metilpropanonitrilo
** ***
6-(3-amino-6-(4-(1-ciclopropiletoxi)fenil)pirazin-2-il)-3,4-dihidroisoquinolin-1(2H)-ona
** ***
6-(2-amino-5-(4-(2-(dimetilamino)propan-2-il)fenil)piridin-3-il)-3,4-dihidroisoquinolin- 1(2H)-ona
** ***
2-(4-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)fenoxi)-2- metilpropanamida
** ***
2-(4-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)fenil)acetato de etilo
* **
2-(4-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-1H-pirazoM- il)acetonitrilo
* **
4-(5-amino-6-(1-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-benzo[c]azepin-7-il)pirazin-2-il)-N-ciclopropil- N-metilbencenosulfonamida
*** ***
2-(4-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-2-metilfenil)-2- metilpropanonitrilo
** ***
2-(6'-amino-5'-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-ilH3,3'-bipiridin]-6-il)-2- metilpropanonitrilo
** **
2-(4-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)fenoxi)acetonitrilo
* **
4-(5-amino-6-(5-oxo-2,3,4,5-tetrahidrobenzo[f][1,4]oxazepin-8-il)pirazin-2-il)-N- ciclopropil-N-metilbencenosulfonamida
*** ***
4-(6-amino-5-(2-oxo-1,2,3,4,5,6-hexahidrobenzo[b]azocin-8-il)piridin-3-il)-N-ciclopropil- N-metilbencenosulfonamida
* **
4-(4-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)fenil)tetrahidro-2H- piran-4-carbonitrilo
** ***
4-(5-amino-6-(3-metiM-oxo-1,2,3,4-tetrahidroftalazin-6-il)pirazin-2-il)-N-ciclopropil-N- metilbencenosulfonamida
** ***
6-(3-amino-6-(4-(2-hidroxipropan-2-il)fenil)pirazin-2-il)-3,4-dihidroisoquinolin-1(2H)-ona
** ***
4-(5-amino-6-(2-metiM-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N-ciclopropil-N- metilbencenosulfonamida
* **
4-(5-amino-6-(5-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-8-il)pirazin-2-il)-N- ciclopropil-N-metilbencenosulfonamida
*** ***
4-(6-amino-5-(5-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-8-il)piridin-3-il)-N- ciclopropil-N-metilbencenosulfonamida
*** ***
1-(4-(5-amino-6-(1-oxo-1,2-dihidroisoquinolin-6-il)pirazin-2- il)fenil)ciclopropanocarbonitrilo
** ***
2-(5-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)tiofen-2-il)acetonitrilo
** ***
5-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-1-metil-2,3-dihidro-1H- indeno-1-carbonitrilo
** ***
imagen47
CM
Compuesto
CI50 (mM)
ATP 1 mM
ATP 50 mM
4-(6-amino-5-(4,4-dimetil-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoqumolin-6-il)piridin-3-il)-N- ciclopropilbencenosulfonamida
*** ***
1-(4-(5-amino-6-(4,4-dimetiM-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2- il)fenil)ciclopropanocarbonitrilo
*** ***
4-(5-amino-6-(4,4-dimetiM-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoqumolin-6-il)pirazin-2-il)-N- ciclopropilbencenosulfonamida
*** ***
6-(3-amino-6-(4-(pentafluorosulfanil)fenil)pirazin-2-il)-3,4-dihidroisoquinolin-1(2H)-ona
* **
(S)-4-(6-amino-5-(3-metil-5-oxo-2,3,4,5-tetrahidrobenzo[f][1,4]oxazepin-8-il)pmdin-3-il)- N-ciclopropil-N-metilbencenosulfonamida
** ***
4-(4-(5-amino-6-(4,4-dimetil-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2- il)fenil)tetrahidro-2H-piran-4-carbonitrilo
*** ***
4-(4-(5-amino-6-(1-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-benzo[c]azepin-7-il)pirazin-2- il)fenil)tetrahidro-2H-piran-4-carbonitrilo
** ***
4-(4-(6-amino-5-(4,4-dimetil-1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)piridin-3- il)fenil)tetrahidro-2H-piran-4-carbonitrilo
*** ***
(R)-4-(6-amino-5-(3-((benciloxi)metil)-5-oxo-2,3,4,5-tetrahidrobenzo[f][1,4]oxazepin-8- il)piridin-3-il)-N-ciclopropil-N-metilbencenosulfonamida
* ***
(S)-4-(6-amino-5-(3-(hidroximetil)-5-oxo-2,3,4,5-tetrahidrobenzo[f][1,4]oxazepin-8- il)piridin-3-il)-N-ciclopropil-N-metilbencenosulfonamida
*** ***
4-(5-amino-6-(1'-oxo-2',3'-dihidro-1'H-espiro[ciclopropano-1,4'-isoquinolin]-6'-il)pirazin-2- il)-N-ciclopropil-N-metilbencenosulfonamida
*** ***
1-(4-(5-amino-6-(1'-oxo-2',3'-dihidro-1'H-espiro[ciclopropano-1,4'-isoquinolin]-6'- il)pirazin-2-il)fenil)ciclopropanocarbonitrilo
*** ***
4-(5-amino-6-(5-oxo-2,3,4,5-tetrahidrobenzo[f][1,4]oxazepin-8-il)pirazin-2-il)-N- ciclopropil-2-metilbencenosulfonamida
** ***
4-(5-amino-6-(4,4-dimetil-1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N- ciclopropil-2-metilbencenosulfonamida
*** ***
4-(5-amino-6-(1'-oxo-2',3'-dihidro-1'H-espiro[ciclopropano-1,4'-isoquinolin]-6'-il)pirazin-2- il)-N-ciclopropil-2-metilbencenosulfonamida
*** ***
4-(5-amino-6-(1'-oxo-2',3'-dihidro-1'H-espiro[ciclopropano-1,4'-isoquinolin]-6'-il)pirazin-2- il)-N-ciclopropilbencenosulfonamida
*** ***
4-(6-amino-5-(1'-oxo-2',3'-dihidro-1'H-espiro[ciclopropano-1,4'-isoquinolin]-6'-il)piridin-3- il)-N-ciclopropilbencenosulfonamida
*** ***
4-(6-amino-5-(1'-oxo-2',3'-dihidro-1'H-espiro[ciclopropano-1,4'-isoquinolin]-6'-il)piridin-3- il)-N-ciclopropil-N-metilbencenosulfonamida
*** ***
(S)-4-(5-amino-6-(3-metil-5-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-8-il)pirazin- 2-il)-N-ciclopropil-N-metilbencenosulfonamida
*** ***
(S)-4-(6-amino-5-(3-metil-5-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-8-il)piridin-3- il)-N-ciclopropil-N-metilbencenosulfonamida
*** ***
(S)-4-(6-amino-5-(3-metil-5-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-8-il)piridin-3- il)-N-ciclopropilbencenosulfonamida
*** ***
4-(4-(6-amino-5-(1'-oxo-2',3'-dihidro-1'H-espiro[ciclopropano-1,4'-isoquinolin]-6'-il)piridin- 3-il)fenil)tetrahidro-2H-piran-4-carbonitrilo
*** ***
Compuesto
CI50 (mM)
ATP 1 mM
ATP 50 mM
4-(6-amino-5-(3'-oxospiro[ciclopropano-1,1-isoindolin]-6-il)piridin-3-il)-N-ciclopropil-N- metilbencenosulfonamida
*** ***
4-(4-(5-amino-6-(3'-oxospiro[ciclopropano-1,1'-isoindolin]-6'-il)pirazin-2-il)fenil)tetrahidro- 2H-piran-4-carbonitrilo
** ***
4-(6-amino-5-(3'-oxospiro[ciclopropano-1,1-isoindolin]-6-il)piridin-3-il)-N- ciclopropilbencenosulfonamida
*** ***
4-(5-amino-6-(3'-oxospiro[ciclopropano-1,1-isoindolin]-6-il)pirazin-2-il)-N- ciclopropilbencenosulfonamida
** ***
4-(4-(6-amino-5-(3'-oxospiro[ciclopropano-1,1'-isoindolin]-6'-il)piridin-3-il)fenil)tetrahidro- 2H-piran-4-carbonitrilo
** ***
4-(5-amino-6-(4,4-dideutero-1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N- ciclopropilbencenosulfonamida
*** ***
5-(3-amino-6-(4-(N-ciclopropil-N-metilsulfamoil)fenil)pirazin-2-il)-N-metilindolina-1- carboxamida
** ***
1-(4-(5-amino-6-(3'-oxospiro[ciclopropano-1,1'-isoindolin]-6'-il)pirazin-2- il)fenil)ciclopropanocarbonitrilo
** ***
6'-(3-amino-6-(4-fluorofenil)pirazin-2-il)-2',3-dihidro-1'H-espiro[ciclopropano-1,4'- isoquinolin]-1'-ona
* ***
4-(5-amino-6-(1'-oxo-2',3-dihidro-1'H-espiro[ciclopropano-1,4'-isoquinolin]-6'-il)pirazin-2- il)benzonitrilo
** ***
4-(5-amino-6-(8-oxo-5,6,7,8-tetrahidro-2,7-naftiridin-3-il)pirazin-2-il)-N- ciclopropilbencenosulfonamida
*** ***
4-(5-amino-6-(3,3-dimetil-1-oxoisoindolin-5-il)pirazin-2-il)-N- ciclopropilbencenosulfonamida
** ***
4-(6-amino-5-(3,3-dimetil-1-oxoisoindolin-5-il)piridin-3-il)-N-ciclopropil-N- metilbencenosulfonamida
*** ***
4-(5-amino-6-(4-bromo-1-hidroxiisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N-ciclopropil-N- metilbencenosulfonamida
*** ***
4-(6-amino-5-(8-oxo-5,6,7,8-tetrahidro-2,7-naftiridin-3-il)piridin-3-il)benzonitrilo
** ***
4-(5-amino-6-(8-oxo-5,6,7,8-tetrahidro-2,7-naftiridin-3-il)pirazin-2-il)benzonitrilo
*** ***
4-(5-amino-6-(4,4-dimetil-1,3-dioxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N- ciclopropilbencenosulfonamida
* *
4-(6-(1-acetil-3,3-dimetilindolin-5-il)-5-aminopirazin-2-il)-N-ciclopropil-N- metilbencenosulfonamida
** ***
6-(2-amino-5-(4-fluorofenil)piridin-3-il)-3,4-dihidro-2,7-naftiridin-1(2H)-ona
** **
4-(6-amino-5-(8-oxo-5,6,7,8-tetrahidro-2,7-naftiridin-3-il)piridin-3-il)-N-ciclopropil-N- metilbencenosulfonamida
*** ***
4-(5-amino-6-(8-oxo-5,6,7,8-tetrahidro-2,7-naftiridin-3-il)pirazin-2-il)-N-ciclopropil-N- metilbencenosulfonamida
*** ***
6-(3-amino-6-(4-fluorofenil)pirazin-2-il)-3,4-dihidro-2,7-naftiridin-1(2H)-ona
*** ***
6.42. Medicion in vitro de la inhibicion de MST1
Se realizaron ensayos en proxiplacas negras de 384 pocillos de bajo volumen (Perkin Elmer, PE-Blk-Proxi-6008269).
5
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15
20
25
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35
40
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50
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60
65
Ocho compuestos se diluyeron en primer lugar en placas LDV (Echo) usando una Multiprobe, a una concentracion inicial de compuesto 1 mM en DMSO al 100 %. Utilizando el ECHO, se hizo muestreo en un compuesto de 75 nl en proxiplacas de 384 pocillos. La concentracion de partida del compuesto en cada placa de ensayo es de 7,5 uM, seguido de diluciones de 3 veces, para dar curvas de concentracion de diez puntos cuadruplicadas. Se anadio una solucion 3 x de la enzima MST1 en tampon de cinasa (Invitrogen, PR4940C) a pocillos que conteman compuestos o controles de DMSO, seguido de una etapa de preincubacion de 10 minutos. Las reacciones se iniciaron anadiendo 5 |jl de una mezcla de ATP y Z'-Lyte S/T Pep 7 (Invitrogen, PV3180) y avanzaron a TA durante 1 hora. La concentracion final de reactivos clave en las reacciones de cinasa fue de sustrato 1 jM, enzima 1 nM, ya sea ATP 50 jM o ATP 1 mM. Al final de la reaccion de cinasa, se anadieron 10 jl de solucion en desarrollo (Invitrogen, catalogo n.° PR4876B; tampon de desarrollo A diluido a 150.000X en tampon de desarrollo B) a cada pocillo y se incubaron a TA durante 1 hora. Todos los pocillos se leyeron en un Tecan a 400 nm de excitacion y 460 nm/530 nm de emision. Se usaron controles mas o menos enzimaticos para calcular el porcentaje de inhibicion y se generaron curvas de CI50 usando Excel.
6.43. Ensayo basado en celulas
Tambien se uso un ensayo basado en celulas que controla la autofosforilacion de MST1 intracelular para caracterizar compuestos de la invencion. En este ensayo, se transfectaron celulas HEK293F con un plasmido que codificaba MST1 humano de longitud completa. Las celulas se cultivaron en medio celular (DMEM, FBS al 10 %, 1X GPS) hasta un 80-90 % de confluencia en placas de cultivo de 24 pocillos. En el primer dfa, se tripsinizaron ~2 x 10A7 celulas y resuspendieron en 20 ml de medio celular menos el GPS. Se transfirio un ml de esta suspension de celulas a una copa de muestra de celulas Vi y se contaron las celulas en un Beckman Coulter Vi-Cell XR. Despues, las celulas despues se diluyeron a 3 x 10A5/por ml en DMEM + FBS al 10 %, suficiente para 12 ml para una placa de 24 pocillos. Cada pocillo de una placa de 24 pocillos recibio 500 jl de esta suspension celular para una concentracion final de 1,5 x 10A5 celulas por pocillo. Las celulas se incubaron despues durante la noche a 37 °C y CO2 al 5 %.
En el dfa dos, se transfecto cada pocillo con 0,5 jg de ADN y 1,5 jl de Lipofectamina 2000 (Invitrogen, cat. n.° 11668-019). La mezcla de ADN esta constituida por 5 ng de MST1 T183E, 50 ng de MEKK1, 445 ng de pcDNA3.1, y 50 ul de oPtI-MEM. La Lipofectamina 2000 esta compuesta por 1,5 jl de lipofectamina 2000 y 50 jl de OPTI-MEM. La mezcla de ADN se pipeteo primero en tubos de 15 ml y se incubo a TA durante 5 minutos seguido de la adicion de la mezcla de lipofectamina y la incubacion a TA durante 20 minutos. Se anadieron 100 pl de mezcla de transfeccion de ADN a las celulas en cada pocillo de una placa de 24 pocillos, seguido de incubacion durante una noche a 37 °C y CO2 al 5 %.
El dfa 3, los compuestos se diluyeron en serie con DMSO al 100 % y se transfirio un jl a los pocillos de una placa de 96 pocillos de 1 ml de profundidad. Las placas se transfirieron entonces a una campana Tc y se anadio 1 ml de DMEM + FBS al 0,5 % a cada pocillo que contema 1 jl de compuesto. (concentracion final de DMSO al 0,1 %). Despues, se aspiro la mezcla de medio/transfeccion de cada pocillo de la placa de 24 pocillos que contema las celulas, seguido de la adicion de 300 jl de cada dilucion del compuesto (las diluciones restantes del compuesto se mantuvieron a 4 °C para su uso posterior). Despues, las placas se incubaron a 37 °C y CO2 al 5 % durante 4 horas. A continuacion se pipeteo 1 jl de acido okadaico 225 jM en DMSO al 100 % en una nueva placa de 96 pocillos de 1 ml de profundidad, seguido de la adicion de 300 jl de dilucion del compuesto (almacenado a 4 °C en la etapa anterior) para dar una concentracion final de acido okadaico 0,75 pM. La mezcla de medio/compuesto se aspiro entonces de placas que conteman placas de 24 pocillos y luego se reemplazo con la mezcla de medio/compuesto/acido okadaico. Las celulas se incubaron a 37 °C y CO2 al 5 % durante 2 more horas. Las celulas se separaron por simple pipeteo y las suspensiones celulares de cada pocillo se transfirieron a nuevos tubos de 1,5 ml. Los tubos que conteman los medios se centrifugaron a 1000xg durante 5 minutos para sedimentar las celulas y los sobrenadantes se retiraron cuidadosamente y se desecharon. Los granulos celulares se congelaron generalmente a -80 °C hasta la siguiente etapa.
El dfa 4, las celulas se lisaron y se prepararon para analisis de transferencia de Western de la siguiente manera. Los granulos celulares se descongelaron sobre hielo. El tampon de lisis consistio en los siguientes componentes: Tris, pH 7,5, NaCl 150 mM, Na2EDTA 1 mM, EGTA 1 mM, Triton al 1 %, pirofosfato sodico 2,5 mM, p-glicerofosfato 1 mM, Na3VO4 1 mM, 1 ug/ml de leupeptina, EDTA 10 mM, coctel de inhibidores de proteasa y fosfatasa 2X Halt (Thermo Scientific; cat. n.° 1861284). Se anadieron 100 jl de tampon de lisis recien preparado por muestra, seguido de incubacion en hielo durante 15 minutos, agitacion en vortice durante 10-15 segundos y centrifugacion a 12.000 xg durante 30 segundos. Los sobrenadantes se retiraron cuidadosamente y se mezclaron con tampon de muestra 4X LDS de Invitrogen (cat. n.° NP0008; con DTT 50 mM anadido fresco). Las muestras se desnaturalizaron a 70 °C durante 10 minutos en una maquina de PCR, y se cargaron 10 jl por carril en 2 x geles de 26 pocillos Criterion (Biorad, cat. n.° 345-0034). Despues del SDS-PAGE, las muestras se transfirieron de gel a membrana de PVDF, se bloquearon durante una hora en TBST + leche al 5 %, y se lavaron 3 x durante 5-10 min con TBST. Una membrana se sondeo con anti-MST1 de conejo (1:3000; Millipore, cat. n.° 07-061) diluido en TBST + leche al 5 %, y otra membrana se sondeo con anti-fosfo-MST1 de conejo (T183; Cell Signaling, cat. n.° 3681) (1:2000) diluido en tBsT + BSA al 5 % seguido de incubacion durante una noche a 4 °C.
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65
En el dfa 5, las transferencias de Western se lavaron 3 veces durante 5-10 minutes con TBST, la sonda con anti- conejo-HRP (1:3000; Biorad, cat. n.° 170-6515) se diluyo en TBST + leche al 5 % durante 1 hora a TA, y se lavo 3 veces durante 10 minutes con TBST. Las manchas se desarrollaron con el reactivo ECL (GE Healthcare, cat. n.° RPN2132) en un sistema Biorad Versadoc Imagin (modelo 5000) y se realizo un analisis de volumen en cada banda para obtener valores de densidad.
6.44. Farmacologia de 4-(6-amino-5-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)piridin-3-il)-N-ciclopropil-N- metilbencenosulfonamida
El compuesto 4-(6-amino-5-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)piridin-3-il)-N-ciclopropil-N-metil-
bencenosulfonamida se ensayo en el modelo de enfermedad de EAE descrito anteriormente. En un primer estudio, el efecto profilactico del compuesto se midio: a los ratones se les dosifico en general PO, bid, durante 22 dfas, comenzando en el Dfa (-1) antes de la inmunizacion con peptido MOG (en el grupo de 100 mpk, el compuesto se dosifico BID en los dfas -1-9, y QD los dfas 10-21). Se ensayaron cuatro grupos de ratones (n = 10 por grupo): control de vehteulo; 10 mg/kg, 30 mg/kg, y 100 mg/kg de compuesto. Los resultados se muestran en la Figura 2A, en la que * indica p < 0,05 frente a control.
Un segundo estudio examino el efecto terapeutico del compuesto. Aqrn, los ratones se dosifican generalmente PO, BID, durante 14 dfas, comenzando el Dfa 9 despues de la inmunizacion con peptido MOG (en el grupo de 100 mpk, el compuesto se dosifico BID en los dfas 9-13, y QD los dfas 14-23). Los resultados se muestran en la Figura 2B, en la que * indica p < 0,05 frente a control.
El compuesto tambien se estudio en un modelo de EAE de rata. En este caso, se administraron a cuatro grupos de ratas (n = 10 por grupo) control de vehteulo, dosis de 10 mg/kg, 25 mg/kg, o 50 mg/kg, PO, BID. La dosificacion comenzo el dfa 9 despues de la inmunizacion. Como se muestra en la figura 3, el compuesto mostro otra vez una reduccion dependiente de la dosis en la gravedad de la puntuacion clmica (* indica p <0,05 frente al control).
La figura 4 muestra los resultados obtenidos a partir de un estudio del compuesto en un modelo de enfermedad CIA. En este ensayo, los ratones se dosificaron PO, bid, durante 21 dfas, comenzando el Dfa 20 despues de la inmunizacion. Se utilizaron cuatro grupos de ratones (n = 10 por grupo): control de vehteulo, 10 mg/kg, 30 mg/kg, y 100 mg/kg. Se observo un claro beneficio frente al control (* indica p <0,05 frente a control).
El compuesto se estudio adicionalmente en un modelo de enfermedad CIA de rata, utilizando cuatro grupos de ratas (n = 10 por grupo): control de vehteulo, 10 mg/kg, 25 mg/kg, y 50 mg/kg. Las ratas se dosificaron PO, BID (grupos de 10 y 25 mg/kg) o QD (grupo de 50 mg/kg) a partir del Dfa 11 despues de la inmunizacion. Como se muestra en la figura 5, el compuesto mostro de nuevo un efecto terapeutico. La figura 5A muestra la puntuacion acumulada de la artritis en funcion del tiempo y la dosis; la figura 5B muestra el cambio en el espesor del tobillo en funcion del tiempo y la dosis (* indica p <0,05 frente al control). Aqrn, el espesor del tobillo se midio por volumen (desplazamiento de agua).
La figura 6 muestra el efecto del compuesto sobre la enzima hepatica y la respuesta de citoquinas en un modelo de hepatitis inducida por Con-A. Se utilizaron cuatro grupos de ratones (n = 10 por grupo): control de vehteulo, 10 mg/kg, 30 mg/kg, y 100 mg/kg. Los ratones se dosificaron 16 h y 1 h antes, y 8 h despues, la exposicion a Con-A. Se observo un efecto claro en TNF-a, IL-6, MCP-1, IFN-y, ALT y AST (* indica p <0,05 frente a control; ** indica p <0,1 frente a control).
6.45. Farmacologia_______de_______1-(4-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-
il)fenil)ciclopropanocarbonitrilo
El compuesto 1-(4-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)fenil)ciclopropano-carbonitrilo se estudio en un modelo de EAE de rata. Aqrn, se administraron a cinco grupos de ratas (n = 10 por grupo) control de vehteulo, dosis de 0,3 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, o 10 mg/kg, PO, qD, comenzando el Dfa 10 despues de la inmunizacion. Como se muestra en la figura 7A, el compuesto mostro una reduccion dependiente de la dosis en la gravedad de la puntuacion clmica (* indica p <0,05 frente al control). El efecto tambien se observa en la figura 7B, que muestra el desarrollo de la enfermedad en funcion del grupo de ensayo.
La figura 8 muestra el efecto del compuesto sobre la enzima hepatica y la respuesta de citoquinas en un modelo de hepatitis inducida por Con-A. Se utilizaron cinco grupos de ratones (n = 10 por grupo): control de vehteulo, 1 mg/kg, 3 mg/kg, 10 mg/kg, y 30 mg/kg. Los ratones se dosificaron PO 16 h y 1 h antes, y 8 h despues, la exposicion a Con- A. Se observo un efecto claro en TNF-a, IL-6, MCP-1, IFN-y, ALT y AST (* indica p <0,05 frente a control).
6.46. Farmacologia de 4-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N-ciclopropil-N-metil- bencenosulfonamida
El compuesto 4-(5-amino-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)pirazin-2-il)-N-ciclopropil-N-metil-
bencenosulfonamida se estudio en un modelo de EAE de raton. Aqrn, se administraron a cuatro grupos de ratones (n

Claims (13)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    40
    REIVINDICACIONES
    1. Un compuesto de la formula:
    imagen1
    o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en la que:
    A es arilo o heterociclo de 4-7 miembros;
    D es un heterociclo no aromatico de 5-7 miembros;
    X es N o CH;
    cada uno de Yi e Y2 es independientemente N o CH;
    cada R1 es independientemente R1a, -(RiB)nSOpRiC, -(RiB)nSOpN(R1o)2, -(RiB)nNRicSOpR-C, -(RiB)nC(O)N(R1o)2, o -(RiB)nNRicC(O)Ric, o hidrocarbilo C1.12 opcionalmente sustituido o heterocarbilo de 2-12 miembros, cuya sustitucion opcional es con uno o mas de Ria;
    cada Ria es independientemente amino, alcoxilo, carboxilo, ciano, halo, o hidroxilo;
    cada Rib es independientemente hidrocarbilo C1-12 opcionalmente sustituido con uno o mas de amino, alcoxilo, carboxilo, ciano, halo, o hidroxilo;
    cada Ric es independientemente hidrogeno o hidrocarbilo C1-12 opcionalmente sustituido o heterocarbilo de 2-12 miembros, cuya sustitucion opcional es con uno o mas de amino, alcoxilo, carboxilo, ciano, halo, o hidroxilo; cada R3A es independientemente amino, alcoxilo, carboxilo, ciano, halo, o hidroxilo; k es 0 o 1; m es 0-3; n es 0 o 1; p es 0-2; y q es 0-2.
  2. 2. El compuesto de la reivindicacion 1, que es de la formula:
    imagen2
    en la que:
    Z es N o CRi.
  3. 3. El compuesto de la reivindicacion 2, que es de la formula:
    imagen3
    o que es de la formula:
    5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    o que es de la formula:
    imagen4
    imagen5
    o que es de la formula:
    imagen6
    en la que:
    R4 es hidrogeno o alquilo; y r es 1 o 2,
    o que es de la formula:
    imagen7
  4. 4. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que X es N.
  5. 5. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que Y1 es CH.
  6. 6. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que Y2 es CH.
  7. 7. El compuesto de la reivindicacion 3, en el que Z es N cuando sea aplicable a las formulas desveladas en el
    presente documento.
  8. 8. El compuesto de la reivindicacion 3, en el que Z es CR1 cuando sea aplicable a las formulas desveladas en el presente documento.
  9. 9. El compuesto de cualquiera de la reivindicacion 1-3, en el que R1 es -(R1B)nSOpR-ic, -(R1B)nSOpN(R-ic)2, - (R1B)nNR1cSOpR-ic, -(R1B)nC(O)N(R1c)2, o -(R1B)nNR1cC(O)R1c.
  10. 10. El compuesto de la reivindicacion 9, en el que n = 0, o en el que p = 2.
  11. 11. El compuesto de la reivindicacion 1, que es de la formula:
    imagen8
  12. 12. Una formulacion que comprende un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-11 y un excipiente o diluyente farmaceuticamente aceptable.
    5
  13. 13. Un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-11 o la formulacion de la reivindicacion 12 para su uso en el tratamiento, gestion o prevencion de una enfermedad o trastorno inflamatorio o autoinmune, por ejemplo, aclorhidra autoinmune, enfermedad de Addison, espondilitis anquilosante, smdrome antifosfolfpido, asma (por ejemplo, asma bronquial), dermatitis atopica, gastritis atrofica autoinmune, enfermedad de Behcet, enfermedad
    10 celfaca, enfermedad de Crohn, smdrome de Cushing, dermatomiositis, smdrome de Goodpasture, enfermedad de injerto contra huesped, enfermedad de Grave, tiroiditis de Hashimoto, hepatitis (por ejemplo, inflamatoria e inducida con alcohol), atrofia adrenal idiopatica, trombocitopenia idiopatica, smdrome de Kawasaki, smdrome de Lambert- Eaton, lupus eritematoso, esclerosis multiple, miastenia gravis, penfigoide, penfigo vulgar, anemia perniciosa, polinosis, poliarteritis nodosa, cirrosis biliar primaria, colangitis esclerosante primaria, psoriasis, artritis psoriatica,
    15 Raynauds, smdrome de Reiter, policondritis recidivante, artritis reumatoide, smdrome de Schmidt, esclerodermia, smdrome de Sjogren, oftalirna simpatica, artritis de Takayasu, arteritis temporal, tirotoxicosis, rechazo de trasplante (por ejemplo, de organo, celula o medula osea), diabetes de tipo 1, colitis ulcerosa, uveftis, y granulomatosis de Wegener.
    20 14. El compuesto o formulacion para su uso de acuerdo con la reivindicacion 13, en el que la enfermedad o trastorno
    autoinmune es enfermedad de Crohn, enfermedad de injerto contra huesped, psoriasis, artritis reumatoide, o colitis ulcerosa.
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