BG62229B2 - Моноклонални антитела срещу човешки туморнекротизиращ фактор и използването им - Google Patents
Моноклонални антитела срещу човешки туморнекротизиращ фактор и използването им Download PDFInfo
- Publication number
- BG62229B2 BG62229B2 BG98602A BG9860294A BG62229B2 BG 62229 B2 BG62229 B2 BG 62229B2 BG 98602 A BG98602 A BG 98602A BG 9860294 A BG9860294 A BG 9860294A BG 62229 B2 BG62229 B2 BG 62229B2
- Authority
- BG
- Bulgaria
- Prior art keywords
- tnf
- antibodies
- monoclonal antibodies
- cells
- tak
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Public Health (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
Изобретението се отнася до хибридомна клетъчна линия, която синтезира високоспецифични моноклоналниантитела (mAK) срещу туморнекрозен фактор (TNF), до моноклоналните антитела, до метод за получаванена хибридомната клетъчна линия и антителата, кактои до тяхното използване.
Description
Област на техниката
Изобретението се отнася до хибридомна клетъчна линия, която синтезира високоспецифични моноклонални антитела (шАК) срещу туморнекротизиращ фактор (TNF), до тези моноклонални антитела срещу TNF, до метод за получаване на тази хибридомна клетъчна линия и тези антитела, както и до използването на моноклоналните антитела.
Предшестващо състояние на техниката
Сливането на миши милеомни клетки с клетки от далака на имунизирани мишки (Kohler und Milstein, Nature 256, 495-497 ((975)) е първото сведение за възможността да се получат непрекъснати клетъчни линии които да произвеждат хомогенни (т.н. “моноклонални”) антитела. Съществуват многобройни опити да се произвеждат различни хибридни клетки (така наречените хибридоми) и образуваните от тях антитела да се използват за различни научни изследвания (виж Current Topics in Microbiology and immunology, vol. 81: Lymphocyte Hybridomas, Springer Verlag, 1978).
Поради своите биологични свойства, TNF може да бъде въведен като интересно и многообещаващо средство при лечението на туморни заболявания. Подробни изследвания се провалят поради крайно малката концентрация на TNF в естествените клетки. Едва след развитието на генната технология и възможността да се клонира човешки протеин в понисши организми, стана възможно също да се експресира TNF в микроорганизми. Този рекомбинантен TNF (rTNF) показва във високо пречистена форма същите действия ,както природния TNF (nTNF).
Научните изследвания, също както и терапевтичното приложение, пораждат потребността да се доказват не само активността на TNF, но и самият протеин TNF. Определянето на биологичната активност се провежда трудно и скъпо.
Известно е също, че с антитела срещу TNF може да се блокира действието на TNF (Biochem. Biophys. Res.Comn. 137, 847 (1986). В посочената публикация се съобщава за такива антитела, които трябва да притежават относително висок афинитет към TNF. В нея обаче не е даден никакъв възпроизводим път за тяхното получаване.
Техническа същност на изобретението
Предмет на настоящото изобретение са нови моноклонални миши антитела срещу човешки естествен и рекомбинантен TNF, продуциращите ги хибридни клетъчни линии, методът за тяхното получаване и използването им.
Получаването на моноклонални антитела се осъществява при следване на познати методи (Monoclonal Antibodies, Kennet et al., Plenum Press 1980, 363-419).
Чрез повтарящо се инжектиране на минимално количество пречистен, рекомбинантен TNF от E.coli се имунизират мишки BALB/ с. Когато в серума им се доказват достатъчно антитела, клетки от далака на тези животни се сливат с миеломни клетки и хибридът се култивира.
Отделните култури се изследват чрез скрининг-тестовете за съдържание на специфични антитела срещу TNF.
От подходящите хибридоми се изолират колонии съгласно метода limiting dilution cloning, които се изолират от единични клетки. По този начин се получава между другото клетъчна линия, която се отличава със секреция на моноклонални антитела тАК-195. Тази клетъчна линия е депозирана в European Collection of Animal Cell Cultures (ECSCC), PHLS Centre for Applied Microbiology and Research, Porton Down, Salisbury SP4 OJ4 OJ6, Great Britan N 87 050801. Двете други клетъчни линии (АМ-1 и АМ-199) са депозирани под №№ 87 050804 и 87 050802.
За размножаването на тези хибридни клетки те се култивират както in vitro, така и in vivo. Високата скорост на размножаване in vivo прави този метод на култивиране особено подходящ. За целта предварително обработени с PristanR клетки от BALB/с-мишки се инжектират интраперитонеално с отделните хибридни щамове. Образуващият се асцитен тумор се събира след 8 до 10 дни.
Изолирането на моноклоналните анти тела срещу TNF се извършва чрез пречистване или на течността, намираща се над in vitro клетъчна или на течността намираща се над in vitro клетъчната култура или на асцитната течност. Пречистването се осъществява, като се следва методът на Brauch et al., (J.Immunol. Methods 1982, vol.53, 313-319).
Охарактеризирането на молекулните свойства на антителата тАК-195 показва, че молеуклното тегло на пречистените антитела е по-голямо/равно 150 000 Da (определяне чрез електрофореза на полиакриламиден гел). Антитяло тАК-195 е от типа lgG3, при което неговата тежка верига е 3. Леката верига е κ (Определяне чрез подтипспецифични антитела в ELISA).
Моноклоналното антитяло се отличава с висока афинитетна константа в порядък на големината > 109 Ι/mol спрямо TNF и не показва кръстосана реакция с лимфотоксин.
Относителното положение на местата на свързване за антителата върху TNF молекулата се изследва чрез конкурентно свързване на антителата.
Активността на TNF се определя с обичаен цитотоксичен тест. Рекомбинантен и нативен TNF се инкубират с излишък от антитела. Цитотоксичната активност на двата TNFпрепарата се неутрализира чрез антителата тАК-195. Това означава, че тАК-195 реагира с област, отговорна за биологичната активност.
Ако антителата трябва да служат за доказване на определени антигени, по принцип са възможни две постановки на опита. И при двете трябва, ако в антигена липсва естествен маркер, да се предприеме маркиране на единия от компонентите. Това се осъществява или в антигена, например с радиоактивен маркеризотоп, тогава се използва конкурентен изместващ анализ, като известният радиоимуноанализ (RIA), или маркиарнето се извършва на антителата, при което предпочитан тип анализ е имунорадиометричен анализ (IRMA), ензим-свързващ-имуносорбентен анализ (ELISA), или хемилуминисцентен анализ. Подробностите за тези различни методи за анализ и вариантите на методите са познати на специалистите.
Друга възможност е свързването с нискомолекулен хаптен в антитялото, което от своя страна може да се докаже специфично чрез втора реакция. Може да се използва, например биотин,реагиращ със стрептавидин. Антитялото съгласно изобретението след това се маркира с дълговерижен биотин и в следващия етап се проявява с комплекс стрептавидин-пероксидаза от хрян.
Описаният тук анализ представлява твърдофазов сандвич-ELISA. Немаркирано антитяло (тАК-1 или тАК-199) се адсорбира пасивно върху повърхност, например микротитърни плаки или се свързва ковалентно и повърхността се блокира по известен начин срещу неспецифично свързване.
Съдържащите TNF проби и маркираните с биотин антитела тАК-199 се нанасят с пипета в ямките и се инкубират. Може да бъде показано, че TNF се доказва в граници от 10 pg/ml в пробите. Специфичната активност на rTNF е 8,0 х 106 U/mg при опит с мишки L929, така че с ELISA могат да се докажат 0,1 U THF/ml. С помощта на Westem-блот може да се покаже, че антителата не реагират кръстосано с никой от компонентите на човешкия серум. Антителата съгласно изобретението следователно могат да се използват за определяне на TNF в серума от третирани с TNF пациенти. Те могат също да бъдат използвани за актуални диагностични цели, например за определяне на TNF-съдържанието в серума и плазмата.
Тъй като антителата съгласно изобретението инактивират TNF (виж пример 6), те могат да се използват за лечение на заболявания, при които е повишена концентрацията на TNF в кръвта, както например при септичен шок. Освен това, лечение с TNF-антитела може да бъде показано при следните заболявания: отхвърляне на трансплантати, алергии, автоимунни заболявания, заболявания, от кръга на ревматичните форми, белодробен шок, възпалителни заболявания на ставите, смущения в съсирването на кръвта, изгаряния.
Посредством имуноафинитетна хроматография може да се пречисти TNF от биологичен материал, който съдържа TNF. За целта антитялото се свързва по известни методи с гелна матрица, през която се подава разтворът, съдържащ TNF.
Примери за изпълнение на изобретението
Следващите примери поясняват изобре3 тението
Пример 1. получаване на моноклонални антитела
a) Имунизиране на BALB/c мишки.
Женски BALB/c мишки се имунизират интраперитонеално (i.p) с 30 pg rTNF в 0,5 ml пълен адювант на Freund. Четиринадесет дни по-късно животните получават отново 30 pg от антигена интраперитонеално в непълен адювант на Freund. Две допълнителни имунизации се правят през 14 дневни интервали с по 30 pg антиген, се отстранява далакът на две животни.
b) приготвяне на суспензия от клетки от далака
От извадените далаци се приготвя клетъчна суспензия, при което органите се пресуват през сито от неръждаема стомана (ширина на отворите 100 pm. Клетките се прехвърлят в Dulbecco Minimal Essential Medium (DMEM), която е допълнена с 4,5 g/1 глюкоза, 10 mM глутамин, 1000 единици/ml пеницилин, 100 pg/ ml стрептомицин и 15% серум от телешки зародиш. Клетките се промиват три пъти със средата и след това се суспендират отново в същата среда в желаната концентрация. Найобщо се получават около 5 до 10 х 107 клетки от далак.
c) Растеж на миеломните клетки
Като партньор за сливането се използват миеломни клетки Sp2/O-Agl4(ATCC N CRL 8287). Клетките са резистентни спрямо 20 pg/ml 8-азагуанин и в среда, която съдържа хипоксантин, аминоптерин и тимидин (НАТ) не могат повече да растат. Те се култивират в DMEM, към която се прибавят 4,5 g/ml глюкоза, 10 mM глутамин, 1000 единици/ml пеницилин, 100 pg/ml стрептомицин и 15% серум от телешки зародиш (пълна среда). За сливането се използват клетките от логаритмичната фаза на растеж.
d) Сливане на клетките
Суспензията от клетки от далака се смесват с миеломни клетки в съотношение 5:1 и се промиват в несъдържаща серум DMEM и се центрофугират 5 min в 50 ml конична полипропиленова епруветка при 800 грт. Надутаечната течност се филтрира под вакуум напълно. Върху пелетите се прибавя съвсем внимателно 0,5 ml 50%-ен разтвор на полиетиленгликол (PEG, Boeriner) с молекулно тегло 2000, клетъчните пелети се смесват с PEG чрез леко тръсване и след това се центрофугират 3 min при 1000 грт. След това се прибавя 10 ml DMEM, клетъчната пелета се разтваря внимателно и след това се центрофугира 3 min при 2000 грт. Клетъчната пелета се суспендира отново в НАТ-среда, при концентрация 2 х 106 клетки/ml и се разпределя върху микротитърни плаки на части по 0,2 ml. В ямките ден преди това са прибавени около 50 000 перитонеални моноядрени клетки, предимно макрофаги, като хранителни клетки.
e) Селекциониране и отглеждане на хибридомите
След сливането, клетките се култивират в НАТ-среда по Littlefield (Science 1964 vol. 145,709-712) при 37°С с 50% СО2, във влажна атмосфера. Културите се подхранват два пъти в седмицата чрез заместване на половината среда с прясна НАТ-среда. След няколко седмици надутаечната течност от хибридомните клетъчни култури се изследва за наличие на активност на античовешки туморнекортизиращ фактор. Хибридомите, които показват положителни резултати в скрининговия тест, се избират за клониране. При това хибридомите се подлагат на Пределно разреждане, при което в 96 микротитърни ямки се посяват средно 0,5 клетки/ямка и се прибавят по 105 тимоцити от мишки като хранителни клетки. Селекционираните по този метод за клониране клетки продуциращи антитела се размножават, замразяват и се съхраняват в допълнена среда, която съдържа 10% серум от телешки зародиш, както и 10% диметилсулфоксид.
f) Скринингов тест за специфични THFантитела rTNF се разрежда до 3 pg/ml в PBS (буфериран с фосфатен разтвор от натриев хлорид, съставен от 0,8% NaCl и 0,02 моларен натриев фосфат, доведен с HCI или NaOH до pH 7,4). Ямки на MikrotiterplattenR се разрежда с по 0,1 ml от този разтвор. След 2 h, при стайна температура, надутаечната течност се филтрира под вакуум и ямките се обработват с 0,3 ml от 1 %-ен разтвор на говежди серумен албумин (Sigma, RIA grade) в продължение на най-малко 30 min. След това надутаечната течност се отстранява. Надутаечната течност от нарастващите хибридомни клетъчни линии, които са приблизително 20-30% конфлуентни, или серумните разреждания от имунизираните мишки се инкубират най-малко в продължение на 2 h при стайна температура. Ямките се промиват с 0,3 ml PBS. След това се инкубират 2 h при стайна температура с 0,1 ml подходяща концентрация от антимиши имуноглобулин-антитела (Miles). Тези антитела свързват с ензимен маркер пероксидаза. Ямките с положителна пероксидазна реакция показват антиген-специфични антитела.
От 360 първоначално налични ямки 80% показват клетъчен растеж. От тях 12 показват положителни резултати в TNF-скрининговия тест. От тях 11 повтарят положителната оценка. За настоящото изобретение се развиват понататък три различни моноклонални хибридоми: АМ:1,АМ-195,АМ-199.
g) Разширение на хибридомните клетъчни култури
Разширение в клетъчната култура in vitro:
Посяват се около 2 х 107 клетки в колби за клетъчни култури с 175 cm3 повърхност за растеж. Надутаечната течност съдържа след три дни секретираните от клетките моноклонални антитела в порядъка от 10 до 20 pg/ml.
Разширение в асцитна мишка in vivo: BALB/c мишки получават i.p. 0,5 ml PristanR за кондициониарне на перитонеумите. В рамките на период от 1 до 2 седмици, на предварително обработените животни се прилага суспензия от 5 до 10 х 106 хибридоми в PBS за животно, интраперитонеално. След 8 до 10 дни перитонеумът се отваря с канюла и се събира съдържащата клетки асцитна течност.
От взетата асцитна течност се отделят клетъчните съставки чрез центрофугиране (5000 rpm, 5 min). Надутаечната течност, която съдържа моноклоналните антитела, се замразява в аликвотни части при -70°С или се пречиства хроматографски до най-малко 90%, което се доказва с гелелектрофореза върху натриев додецилсулфат-полиакриламид (DE-OS 3330 160).
h) типизиране на моноклоналните антитела
Моноклоналинте антитела се охарактеризират по-добре в ELISA-система. Ямките на микротитьрна плака се покриват със слой rTNF (5 gg/ml). След инкубиране 2 h при стайна температура, така приготвената плака с пречистени моноклонални антитела от клетъчната култура се подлага на втори етап на инкубиране (2 h при стайна температура) с антимиши имуноклобулин от различни класове и подкласове, както и с различни класове полеки и по-тежки имуноглобулинови вериги (MiLes). В следващ етап се прибавя маркиран с пероксидаза кози-анти-заешки имуноглобулин (Miles). След 1 h инкубация ензимната реакция се спира чрез прибавяне на оцветен субстрат тетраметил-бензидин (Miles) и водороден пероксид. Резултатите са обобщени в таблица 1.
Таблица 1
Обозначение на антитялото | Клас | Верига | |
Тежка | Лека | ||
гпАК-1 | IgG | гама 1 | капа |
тАК-195 | IgG | гама 3 | капа |
тАК-199 | IgG | гама 1 | капа |
i) Маркиране на моноклоналните антитела
NHS-LC-Biotin (Pierse) се разтваря в PBS и се довежда до концентрация от 1 mg/ ml. 0,1 ml от този разтвор се смесва с 0,1 ml пречистени моноклонални антитела (0,5 mg/ ml PBS) и разтворът се инкубира 2 h при стайна температура. Реакционният разтвор се допълва от 1 ml с PBS и се диализира при 4°С спрямо PBS. Диализатът, т.е. намиращият се в диализната тръба разтвор се съхранява до използването му при 4°С.
Пример 2. Афинитет на моноклоналните антитела към TNF
Афинитетните константи се определят въз основа на данните от ELISA. За това пречистените антитела се титрират спрямо кон- 5 стантно количество TNF и свързването на антителата се доказва чрез свързване с маркиран с пероксидаза заешки антимиши имунглобулин. данните от свързването се оценяват със специална програма.
Таблица 2
Афинитетна константа на моноклоналното антитяло | |
Обозначение на антитялото | Ка х 10’ х МоГ’ |
тАК-1 | 1,5 ± 30% |
тАК-195 | 3,5 + 30% |
тАК-199 | 2,5 ±30% |
Показаните константи на асоциация Ка разкриват анти-TNF антителата шАК-195 като високоафинитетни антитела.
Примера 3. Неутрализиране на цитотоксичната активност на TNF.
Биологичната активност на TNF in vitro се определя чрез лизиране на миша клетъчна линия L929 (АТСС N CCL1), както е описано в Aggarwal et al., (J.Biol. Vhem. 1985, vol. 260, 2345-23-54). При опити за неутрализиране на цитотоксичната активност на TNF чрез моноклонални антитела, се избира една концентрация на TNF, при която най-малко 90% от клетките се лизират. Антителата се разреждат в пълна среда в отношение 1:2 на микротитьрни плаки. Към всеки разтвор на антитела (0,1 ml) се добавя 0,05 ml рекомбинантен или нативен TNF (1,3 ng/ml) и се инкубира 2 h при стайна температура. След това се прибавят 50 000 L929 клетки в 0,05 ml среда и след инкубиране от 20 до 24 h в термостат клетките се фиксират и оцветяват с кристалвиолет.
Цитотоксичният ефект на TNF позволява клетките да се лизират и поради това през време на оцветяването да се отмият. Ако са налице обаче достатъчно антитела, цитоток25 сичният ефект на THF се неутрализира и клетките се оцветяват.
Пример 4. Определяне на TNF
а) Избиране на подходяща двойка моноклонални антитела
За различаване между конкурентно свързване на две антитела при един и същи епитоп и адитивно свързване на различни епитопи се изпитва свързването на антителата самостоятелно и по двойки във всички възможни комбинации на имобилизиран TNF. TNF се свързва, както е описано в пример 1. Пречистените антитела, като се започне от 24000 ng/ml се разреждат на етапи до 1:4. След това се прибавят биотинилирани антитела тАК-195 и се инкубират в продължение на 90 min. Ямките се промиват с PBS 0,05% TweenR 20, прибавя им се стрептавидин-пероксидазен комплекс (BRL) и се инкубират 30 min. След етап на промиване във всяка ямка се прибавя по 0,1 ml пероксидазен субстрат (виж пример 4 Ь). При конкуретнто свързване се получава загасване на сигнала. Както може да се разбере от таблица 3, моноклоналните антитела АМ-195 се свързват с друг епитоп на TNF отколкото тАК-1 тАК-199.
Таблица 3
Влияние на свързването на биотин-маркирани тАК-195 върху _______ TNF чрез тАК____________________
pm mAK/ml | 195 | % Свъ, | ззване |
199 | 1 | ||
24000 | 3 | 100 | 100 |
6000 | 4 | 100 | 100 |
1500 | 16 | 100 | 100 |
375 | 63 | 100 | 100 |
62 | 95 | 100 | 100 |
0 | 100 | 100 | 100 |
Ь) Изграждане на ензимен тест
Имобилизират се антителата тАК-l или тАК-199 чрез пасивна адсорбция или ковалентно свързване върху носител (сферички, филтър, микротитърна плака от полистирол или поливинилхлорид филтърна хартия или други материали). Специфичността на моноклоналните антитела позволява само на специфичен антиген, тук TNF, чрез имунно свързване, да се свърже на едно единствено молекулно място на свързване на антигена. Количеството на TNF, което може да се свърже, е пропорционално на концентрацията и количеството на антигена в разтвора. Антигенът се познава чрез имунно свързване на антителата тАК-195 на друго молекулно място на свързване. Антителата тАК-195 носят сигнал. Количеството на сигналите, които могат да се имобилизират следователно е право пропорционално на количеството на имобилизираните антигени и с това също на концентрацията на антигените в изследвания разтвор.
Провеждане на опита
1. Описание
Пречистените антитела тАК-l или тАК199 се разреждат в свързващ буфер (натриевохидрогенкарбонатен буфер pH 9,5, 4,2 g/l=0,05 М) до 5 pg/ml. Ямките на микротитърна плака се инкубират с 0,1 ml от този разтвор в продължение на 16 до 20 h при 4°С.
2. Блокиране
Полученият съгласно 1 разтвор се изсмуква и се промива 2 пъти с PBS (2 g/l NaCl,
0,2 g/l КС1, 1,44 g/l Na2HPO„ x 2H2O, 0,2 g/l KH2PO4, pH 7,0). След това се блокира в продължение на 30 min при стайна температура, с 1 % -ен разтвор на говежди серумен албумин (Sigma, RIA grade).
3. Степен на разреждане и TNF проби
Разтворът съгласно 2 се изсмуква и се промива два пъти с PBS, rTNF се довежда до 2,5 ng/ml с буфер (на 1 I PBS се прибавя 1 g говежди серумен албумин, Sigma, RIA grade) и се разрежда 1:2. С пипета се прибавят по 0,1 ml на ямка и се инкубира 2-4h при стайна температура. След трикратно промиване с буфер (буфер за промиване: PBS + 0,1 % Tween* 20) се прибавят 0,1 ml маркирани с биотин антитела тАК-195. Конюгатът, получен съгласно етапа в пример lh, се разрежда 1:400 с буфер I и се инкубира в продължение на 2 h при стайна температура или 16-20 h при 410°С.
4. Усилваща система
Ямките се промиват 3 пъти с буфер за промиване и след това се инкубират с 0,1 ml стрептавидни-пероксидазен комплекс (BRL, разреден 1:2000 в PBS/BSA-буфер) в продължение (BRL, разреден 1:2000 в PBS/BSA-буфер) в продължение на 30 min при стайна температура.
5. Проявяване
Ямките се промиват 3 пъти с буфер за промиване, с пипета се прибавя по 0,1 ml/ямка пероксидазен субстрат и се инкубира 30 min при стайна температура. Реакцията се спира с
6. 29
0,1 ml/ямка 2М H2S04. Отчитането на абсорбцията в микротитърната плака се извършва в рамките на 1 h при дължина на вълната 450 nm. Характерна калибровъчна крива е представена на фиг.1. Границата на доказване на TNF е при 10 pg/ml.
Пероксидазен субстрат
- Разтвор на ТМВ: 42 mM ТМВ (3,3',5,5’тетраметилбензидин, Miles) в DMSO
- Буфер за субстрата: 50 g натриев ацетат се разтваря до 1 1 вода и се довежда до pH 4,9 с 1 g лимонена киселина.
-0,1 ml от разтвора на ТМВ се прибавя бавно и с разклащане към 10 ml буфер за субстрата, последван от 1,47 μΐ 30% Н202 (найчист, Merck).
c) Определяне на THF в човешки серум Рекомбинантен или нативен TNF се поставя в буфер I (Пример 4Ь) или в човешки серум по 2,5 ng/ml и се разрежда 1:2 при същите условия. С пипета се прибавят по 0,1 ml във всяка ямка, която е наслоена предварително, както е описано в пример 4Ь, с антитела тАК-199 или тАК-1. По-нататък се работи, както е описано в пример 4Ь.
Както се вижда от фиг. 1, никоя съставка от човешкия серум не пречи на определянето на TNF чрез моноклонални антитела.
d) Кръстосана реакция на антителата с лимфотоксин
Доказването на възможна кръстосана реакция на антителата с лимфотоксин се изпитва, съответно на пример 1е, при което ямките на микротитърната плака се наслояват с пречистен рекомбинантен лимфотоксин. Не се открива никакво свързване на антителата шАК-1, тАК-114, тАК-195 и тАК-199 с лимфотоксина.
Пример 5. Доказване на TNF в серума чрез Western-болт.
Човешки серум с различни добавени количества TNF се разделя чрез гелелектрофо реза на 12,5% гел по Laemli (J.Mol.Biol. 1973, vol.80, 575-599). Методът Western-блот се провежда, както е описано в Burnett, W.N.(Anal. Biochem. 1981, vol.112, 195-203) и Reines D.et.al., (J.Biol.Chem. 1985, vol.260,11331139). Протеините на гела се блотират за една нощ на нитроцелулозна мембрана. (Schleicher & Schull). Нитроцелулозната мембрана се инкубира 3 h при стайна температура с 1%-ен разтвор на желатина (Bio-Rad, към II PBS се прибавят 10 g желатина). След това Нитроцелулозната мембрана с 20 ml разтвор на антитела, който е разреден до 1 pg/ml в буфер (0,1 % желатина в PBS), се инкубира 2 h при стайна температура. Надутаечната течност се декантира и мембраната се промива неколкократно. Проявява се върху мембрана чрез прибавяне на маркиран с пероксидаза антимиши имуноглобулин TNF. Границата на доказване се намира при 30 ng TNF. Както се вижда от фиг.2, моноклоналните антитела тАК-195 не реагират с никой компонента от човешкия серум и поради това трябва да се разглеждат като специфични за TNF.
Пример 6. Неутрализиране на TNF
Защитният ефект на тАК-195 срещу TNF се изследва при in vivo условия у мъжки Ва1Ь/с-(Опит 1,2,4) и C3H/HeN-(OnnT 3) мишки. Мишки на възраст 4-6 седмици се разпределят произволно на групи по 3, съответно 5 животни. Веществата се вкарват венозно в латералната опашна вена (Обем на прилагане ml/kg). TNF се разтваря преди инжектирането в буфер А (150 mM NaCl и 0,18% говежди серумен албумин (Sigma, RIA grade) и се съхранява 6 h при 4-100С. След това време TNF показва най-висока токсичност. Първо се прибавя TNF, 15-30 min след това се прибавя тАК-195. Степента на смъртност се определя след 24 h. Таблица 4 показва получените резултати (3/5 означава, че 3 от 5 животни са умрели).
Таблица 4
Прилагана субстанция | Опит Ns | |||
1 | 2 | 3 | 4 | |
Буфер А | 0/3 | 0/5 | 0/5 | 0/5 |
тАК 10 mg/kg | 0/3 | 0/5 | 0/5 | 0/5 |
тАК 5 mg/kg | 0/3 | 0/5 | 0/5 | 0/5 |
TNF 1 mg/kg | 3/3 | 0/5 | 4/5 | 4/5 |
TNF 1 mg/kg+ тАК 1 mg/kg | 1/3 | 2/5 | 1/5 | 3/5 |
TNF 1 mg/kg+ mAK 5 mg/kg | 3/3 | 0/5 | 0/5 | 0/5 |
TNF 2 mg/kg | 3/3 | 5/5 | 1/5 | 4/5 |
TNF 2 mg/kg+ mAK 2 mg/kg | 3/3 | 4/5 | 2/5 | 5/5 |
TNF 2 mg/kg+ mAK 10 mg/kg | 0/3 | 0/5 | 0/5 | 0/5 |
Както се вижда от таблицата, неутрализиращите антитела тАК-195 могат да неутрализират смъртоносна доза от TNF. Степента на преживяване на животните зависи от тегловното съотношение антитела към TNF, пълно премахване на TNF-токсичността се наблюдава при съотношение 5:1. При предположението, че TNF се намира като пример (FEBS Lett. 211,179, 1987), това отговаря на молно съотношение на антитела към TNF от 1,6 към 1.
TNF не може да бъде неутрализиран от антитела, които не са неутрализиарщи.
Claims (5)
- Патентни претенции1. Моноклонални антитела тАК-195 получени от клетъчна линия, депозирана в ЕСАСС под № 87 050801.
- 2. Хибридна клетъчна линия, депозирана в ЕСАСС под № 87 050801.
- 3. Метод за получаване на моноклонални антитела тАК-195 съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че клетъчната линия ЕСАСС 87 050801 се култивира in vitro или in vivo и антителата се изолират чрез пречистване на течността над in vitro клетъчната култура или на асцитната течност.
- 4. Използване на моноклонални антитела тАК-195a) за доказване на природен или рекомбинантен TNF,b) за определяне на TNF в биологични течности,c) за приготвяне на имунотестове за определяне на TNF,d) за изолиране на TNF, като се използва имуноадсорбционна хроматография.
- 5. Моноклонални антитела тАК-195 за използване за контрол на заболявания.Приложение: 2 фигуриИздание на Патентното ведомство на Република България1113 София, бул. Д-р Г. М. Димитров 52-БЕксперт: Д.Кацарова Редактор: Е.СинковаПор. № 39343 Тираж: 40 ЗС
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE19863631229 DE3631229A1 (de) | 1986-09-13 | 1986-09-13 | Monoklonale antikoerper gegen humanen tumornekrosefaktor (tnf) und deren verwendung |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
BG62229B2 true BG62229B2 (bg) | 1999-05-31 |
Family
ID=6309540
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
BG98602A BG62229B2 (bg) | 1986-09-13 | 1994-02-28 | Моноклонални антитела срещу човешки туморнекротизиращ фактор и използването им |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5231024A (bg) |
EP (1) | EP0260610B1 (bg) |
JP (2) | JP2837160B2 (bg) |
BG (1) | BG62229B2 (bg) |
BR (1) | BR1100843A (bg) |
CA (1) | CA1337717C (bg) |
DE (2) | DE3631229A1 (bg) |
DK (1) | DK473887A (bg) |
ES (1) | ES2058083T3 (bg) |
FI (1) | FI91421C (bg) |
ZA (1) | ZA876807B (bg) |
Families Citing this family (174)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5700466A (en) * | 1981-09-08 | 1997-12-23 | The Rockefeller University | Method of ameliorating or preventing septic shock using a monoclonal antibody specific to cachectin/tumor necrosis factor |
US6309640B1 (en) | 1981-09-08 | 2001-10-30 | The Rockefeller University | Lipoprotein lipase suppression by endotoxin-induced mediator (shock assay) |
US6419927B1 (en) | 1981-09-08 | 2002-07-16 | Anthony Cerami | Method for reducing adverse effects of a human 70kDa mediator which results from endotoxin stimulation of macrophages |
GB2233559B (en) * | 1988-03-11 | 1992-03-04 | Celltech Ltd | Antibodies for use in antilymphocyte antibody therapy |
DE3823804A1 (de) * | 1988-07-14 | 1990-01-18 | Basf Ag | Neutralisation der in vitro und in vivo toxischen eigenschaften von tnf-(alpha) durch monoklonale antikoerper und den davon abgeleiteten fragmenten |
NZ229922A (en) * | 1988-07-18 | 1992-04-28 | Chiron Corp | Monoclonal antibodies specifically binding cachectin (tumor necrosis factor) and compositions |
AU4182289A (en) * | 1988-08-19 | 1990-03-23 | Celltech Limited | Pharmaceutical products for anti-neoplastic therapy |
US20030225254A1 (en) * | 1989-08-07 | 2003-12-04 | Rathjen Deborah Ann | Tumour necrosis factor binding ligands |
US5959087A (en) * | 1989-08-07 | 1999-09-28 | Peptide Technology, Ltd. | Tumour necrosis factor binding ligands |
DE10399036I1 (de) | 1989-08-07 | 2004-04-01 | Peptide Technology Ltd | Bindeligande für Tumornekrosisfaktor. |
JPH05501351A (ja) * | 1989-08-16 | 1993-03-18 | カイロン コーポレイション | プロホルモンタンパク質に対する開裂部位阻止抗体及びその使用 |
US5998378A (en) * | 1989-08-16 | 1999-12-07 | Chiron Corporation | Compositions for the inhibition of TNF hormone formation and uses thereof |
US6586222B1 (en) | 1989-08-16 | 2003-07-01 | Chiron Corporation | Recombinant PR-3 and compositions thereof |
US5843693A (en) * | 1989-08-16 | 1998-12-01 | Chiron Corporation | Assay method for screening for inhibitors of proTNF conversion |
GB8921123D0 (en) * | 1989-09-19 | 1989-11-08 | Millar Ann B | Treatment of ards |
US6713610B1 (en) * | 1990-01-12 | 2004-03-30 | Raju Kucherlapati | Human antibodies derived from immunized xenomice |
US20040120952A1 (en) * | 2000-08-07 | 2004-06-24 | Centocor, Inc | Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor |
US6277969B1 (en) * | 1991-03-18 | 2001-08-21 | New York University | Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor |
US5919452A (en) * | 1991-03-18 | 1999-07-06 | New York University | Methods of treating TNFα-mediated disease using chimeric anti-TNF antibodies |
US7192584B2 (en) * | 1991-03-18 | 2007-03-20 | Centocor, Inc. | Methods of treating psoriasis with anti-TNF antibodies |
DE06001779T1 (de) * | 1991-03-18 | 2010-01-14 | New York University | Monoklonale und chimäre Antikörper gegen humanen Tumornekrosefaktor |
US6284471B1 (en) | 1991-03-18 | 2001-09-04 | New York University Medical Center | Anti-TNFa antibodies and assays employing anti-TNFa antibodies |
ES2121907T3 (es) * | 1992-08-28 | 1998-12-16 | Bayer Ag | Uso de anticuerpos monoclonales anti-tnf para el tratamiento de meningitis bacterianas. |
US20050255104A1 (en) * | 1993-01-29 | 2005-11-17 | Centocor, Inc. | Methods of treating psoriasis using anti-TNF receptor fusion proteins |
US5888511A (en) * | 1993-02-26 | 1999-03-30 | Advanced Biotherapy Concepts, Inc. | Treatment of autoimmune diseases, including AIDS |
US5626843A (en) * | 1993-02-26 | 1997-05-06 | Advanced Biotherapy Concepts, Inc. | Treatment of autoimmune diseases, including AIDS, by removel of interferons, TNFs and receptors therefor |
NZ278607A (en) * | 1994-02-07 | 1999-05-28 | Knoll Ag | Use of tnf antagonists for treating disorders involving elevated serum levels of il-6 wherein the serum levels are 500pg/ml or above |
DE4409513C1 (de) * | 1994-02-07 | 1995-10-19 | Knoll Ag | Verwendung von anti-TNF-Antikörpern als Arzneimittel zur Behandlung von Erkrankungen mit einem erhöhten Interleukin-6 Serumspiegel |
JPH10504441A (ja) | 1994-03-07 | 1998-05-06 | カイロン コーポレイション | Tnf形成阻害のための組成物およびその使用 |
US6090382A (en) | 1996-02-09 | 2000-07-18 | Basf Aktiengesellschaft | Human antibodies that bind human TNFα |
MX336813B (es) * | 1996-02-09 | 2016-02-02 | Abbvie Biotechnology Ltd | Anticuerpos humanos que ligan el tnfa humano. |
US7608262B2 (en) * | 1996-02-16 | 2009-10-27 | The Kennedy Institute Of Rheumatology | Methods of preventing or treating thrombosis with tumor necrosis factor antagonists |
ES2301183T3 (es) * | 1996-12-03 | 2008-06-16 | Amgen Fremont Inc. | Anticuerpo completamente humano que se une al receptor del egfr. |
US20020031513A1 (en) * | 1997-11-24 | 2002-03-14 | Shamir Leibovitz | Method and pharmaceutical composition for inhibiting premature rapture of fetal membranes, ripening of uterine cervix and preterm labor in mammals |
WO2000051637A1 (en) * | 1999-03-02 | 2000-09-08 | Centocor, Inc. | ANTI-TNFα ANTIBODIES IN THERAPY OF ASTHMA |
EP1163219B1 (en) * | 1999-03-18 | 2005-10-12 | Celgene Corporation | Substituted 1-oxo- and 1,3-dioxoisoindolines and their use in pharmaceutical compositions for reducing inflammatory cytokine levels |
WO2001024828A2 (en) * | 1999-10-06 | 2001-04-12 | Basf Aktiengesellschaft | MODULATORS OF CYTOKINE MEDIATED SIGNALLING PATHWAYS AND INTEGRIN αVβ3 RECEPTOR ANTAGONISTS FOR COMBINATION THERAPY |
US20090081234A1 (en) * | 2000-08-07 | 2009-03-26 | George Heavner | Anti-tnf antibodies, compositions, methods and uses for treatment of depression and related conditions |
US6902734B2 (en) | 2000-08-07 | 2005-06-07 | Centocor, Inc. | Anti-IL-12 antibodies and compositions thereof |
UA81743C2 (uk) | 2000-08-07 | 2008-02-11 | Центокор, Инк. | МОНОКЛОНАЛЬНЕ АНТИТІЛО ЛЮДИНИ, ЩО СПЕЦИФІЧНО ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З ФАКТОРОМ НЕКРОЗУ ПУХЛИН АЛЬФА (ФНПα), ФАРМАЦЕВТИЧНА КОМПОЗИЦІЯ, ЩО ЙОГО МІСТИТЬ, ТА СПОСІБ ЛІКУВАННЯ РЕВМАТОЇДНОГО АРТРИТУ |
US20060018907A1 (en) * | 2000-08-07 | 2006-01-26 | Centocor, Inc. | Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor |
US7288390B2 (en) | 2000-08-07 | 2007-10-30 | Centocor, Inc. | Anti-dual integrin antibodies, compositions, methods and uses |
US20110195063A1 (en) * | 2000-08-07 | 2011-08-11 | Centocor, Inc. | Methods of Treating Ankylosing Spondylitis Using Anti-TNF Antibodies and Peptides of Human Tumor Necrosis Factor |
US20050249735A1 (en) * | 2000-08-07 | 2005-11-10 | Centocor, Inc. | Methods of treating ankylosing spondylitis using anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor |
EP1372720A4 (en) * | 2001-03-02 | 2006-07-26 | Medimmune Inc | PREVENTING OR TREATING INFLAMMATORY OR AUTOIMMUNE DISORDERS BY ADMINISTERING ANTAGONISTS OF INTEGRIN ALPHA V BETA 3 |
CA2385745C (en) * | 2001-06-08 | 2015-02-17 | Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. | Methods of administering anti-tnf.alpha. antibodies |
TWI334439B (en) | 2001-08-01 | 2010-12-11 | Centocor Inc | Anti-tnf antibodies, compositions, methods and uses |
CA2481747A1 (en) * | 2002-04-12 | 2003-10-23 | Medimmune, Inc. | Recombinant anti-interleukin-9 antibodies |
US20040009172A1 (en) * | 2002-04-26 | 2004-01-15 | Steven Fischkoff | Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug |
US20030206898A1 (en) | 2002-04-26 | 2003-11-06 | Steven Fischkoff | Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug |
JP2006504406A (ja) | 2002-06-28 | 2006-02-09 | セントカー・インコーポレーテツド | 哺乳動物のch1欠失ミメティボディ、組成物、方法および使用 |
CA2493067A1 (en) | 2002-07-19 | 2004-01-29 | Abbott Biotechnology Ltd. | Treatment of tnf.alpha. related disorders |
US20040033228A1 (en) | 2002-08-16 | 2004-02-19 | Hans-Juergen Krause | Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders |
MY150740A (en) | 2002-10-24 | 2014-02-28 | Abbvie Biotechnology Ltd | Low dose methods for treating disorders in which tnf? activity is detrimental |
AU2003298816C1 (en) | 2002-12-02 | 2010-12-16 | Amgen Fremont, Inc. | Antibodies directed to Tumor Necrosis Factor and uses thereof |
US7101978B2 (en) * | 2003-01-08 | 2006-09-05 | Applied Molecular Evolution | TNF-α binding molecules |
EP1613273B1 (en) | 2003-04-11 | 2012-06-13 | MedImmune, LLC | Recombinant il-9 antibodies and uses thereof |
US20040229878A1 (en) * | 2003-05-13 | 2004-11-18 | Depuy Spine, Inc. | Transdiscal administration of specific inhibitors of P38 kinase |
US7429378B2 (en) * | 2003-05-13 | 2008-09-30 | Depuy Spine, Inc. | Transdiscal administration of high affinity anti-MMP inhibitors |
US7344716B2 (en) * | 2003-05-13 | 2008-03-18 | Depuy Spine, Inc. | Transdiscal administration of specific inhibitors of pro-inflammatory cytokines |
EP1631266B1 (en) | 2003-05-13 | 2011-03-16 | DePuy Spine, Inc. | A method of treating degenerative disc disease |
US8273347B2 (en) | 2003-05-13 | 2012-09-25 | Depuy Spine, Inc. | Autologous treatment of degenerated disc with cells |
US7553827B2 (en) * | 2003-08-13 | 2009-06-30 | Depuy Spine, Inc. | Transdiscal administration of cycline compounds |
US8361467B2 (en) * | 2003-07-30 | 2013-01-29 | Depuy Spine, Inc. | Trans-capsular administration of high specificity cytokine inhibitors into orthopedic joints |
UA89481C2 (uk) | 2003-09-30 | 2010-02-10 | Центокор, Инк. | Еритропоетинові міметичні шарнірно-серцевинні міметитіла людини, композиції, способи та застосування |
US8895540B2 (en) * | 2003-11-26 | 2014-11-25 | DePuy Synthes Products, LLC | Local intraosseous administration of bone forming agents and anti-resorptive agents, and devices therefor |
US7435799B2 (en) * | 2004-01-08 | 2008-10-14 | Applied Molecular Evolution | TNF-α binding molecules |
US20070135338A1 (en) * | 2004-03-31 | 2007-06-14 | Karyn O'neil | Human GLP-1 mimetibodies, compositions, methods and uses |
TWI439284B (zh) | 2004-04-09 | 2014-06-01 | Abbvie Biotechnology Ltd | 用於治療TNFα相關失調症之多重可變劑量療法 |
US7351739B2 (en) * | 2004-04-30 | 2008-04-01 | Wellgen, Inc. | Bioactive compounds and methods of uses thereof |
GB0414054D0 (en) | 2004-06-23 | 2004-07-28 | Owen Mumford Ltd | Improvements relating to automatic injection devices |
US7393662B2 (en) | 2004-09-03 | 2008-07-01 | Centocor, Inc. | Human EPO mimetic hinge core mimetibodies, compositions, methods and uses |
WO2006041970A2 (en) * | 2004-10-08 | 2006-04-20 | Abbott Biotechnology Ltd. | Treatment of respiratory syncytial virus (rsv) infection |
EP1809326A4 (en) | 2004-10-27 | 2009-11-04 | Medimmune Inc | MODULATION OF ANTIBODY SPECIFICITY BY MEASURING ADAPTATION OF ITS AFFINITY TO AN APPARENT ANTIGEN |
PA8672101A1 (es) | 2005-04-29 | 2006-12-07 | Centocor Inc | Anticuerpos anti-il-6, composiciones, métodos y usos |
NZ608319A (en) | 2005-05-16 | 2014-08-29 | Abbvie Biotechnology Ltd | Use of tnf inhibitor for treatment of erosive polyarthritis |
PT2452694T (pt) | 2005-06-30 | 2019-02-21 | Janssen Biotech Inc | Anticorpos anti-il-23, composições, métodos e utilizações |
US8187817B2 (en) * | 2005-08-02 | 2012-05-29 | Xbiotech, Inc. | Diagnosis, treatment, and prevention of vascular disorders using IL-1 autoantibodies |
US20070041905A1 (en) * | 2005-08-19 | 2007-02-22 | Hoffman Rebecca S | Method of treating depression using a TNF-alpha antibody |
US9017662B2 (en) | 2005-08-30 | 2015-04-28 | Actogenix N.V. | Anti-TNF alpha producing lactic acid bacteria for the treatment of chronic enterocolitis |
AU2006337105B2 (en) | 2005-11-01 | 2013-05-02 | Abbvie Biotechnology Ltd | Methods and compositions for diagnosing ankylosing spondylitis using biomarkers |
KR101210395B1 (ko) | 2005-12-29 | 2012-12-11 | 얀센 바이오테크 인코포레이티드 | 인간 항-il-23 항체, 조성물, 방법 및 용도 |
TW201333030A (zh) | 2006-04-05 | 2013-08-16 | Abbott Biotech Ltd | 抗體之純化 |
WO2007120656A2 (en) * | 2006-04-10 | 2007-10-25 | Abbott Biotechnology Ltd. | Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis |
EP2007426A4 (en) | 2006-04-10 | 2010-06-16 | Abbott Biotech Ltd | COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF PSORIASTIC POLYARTHRITIS AND THEIR APPLICATIONS |
US20080118496A1 (en) * | 2006-04-10 | 2008-05-22 | Medich John R | Uses and compositions for treatment of juvenile rheumatoid arthritis |
EP2666479A3 (en) | 2006-04-10 | 2014-03-26 | Abbott Biotechnology Ltd | Uses and compositions for treatment of juvenile rheumatoid arthritis |
US9605064B2 (en) | 2006-04-10 | 2017-03-28 | Abbvie Biotechnology Ltd | Methods and compositions for treatment of skin disorders |
US20090317399A1 (en) * | 2006-04-10 | 2009-12-24 | Pollack Paul F | Uses and compositions for treatment of CROHN'S disease |
US20080131374A1 (en) * | 2006-04-19 | 2008-06-05 | Medich John R | Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis |
US20110008282A1 (en) * | 2006-05-15 | 2011-01-13 | Xbiotech, Inc. | IL-1alpha immunization induces autoantibodies protective against atherosclerosis |
AU2007252990B2 (en) * | 2006-05-22 | 2011-10-27 | Xbiotech Inc. | Treatment of cancer with anti-IL-1alpha antibodies |
KR101440795B1 (ko) | 2006-06-30 | 2014-09-22 | 애브비 바이오테크놀로지 리미티드 | 자동 주사 장치 |
WO2008008373A2 (en) | 2006-07-11 | 2008-01-17 | Arubor Corp | Rhinosinusitis prevention and therapy with proinflammatory cytokine inhibitors |
US20080014285A1 (en) * | 2006-07-13 | 2008-01-17 | Di Mauro Thomas M | Method of treating neurodegenerative brain disease with a composite comprising superparamagnetic nanoparticles and a therapeutic compound |
CA3177366A1 (en) | 2006-08-10 | 2008-02-21 | Roy C. Levitt | Localized therapy of lower airways inflammatory disorders with proinflammatory cytokine inhibitors |
ES2442258T3 (es) | 2006-10-27 | 2014-02-10 | Abbvie Biotechnology Ltd | Anticuerpos cristalinos anti-hTNF alfa |
AU2008233173B2 (en) * | 2007-03-29 | 2013-09-19 | Abbvie Inc. | Crystalline anti-human IL-12 antibodies |
KR20100017514A (ko) | 2007-05-07 | 2010-02-16 | 메디뮨 엘엘씨 | 항 icos 항체, 및 종양, 이식 및 자가면역성 질환 치료에서의 이의 용도 |
EP2171451A4 (en) | 2007-06-11 | 2011-12-07 | Abbott Biotech Ltd | METHOD FOR TREATING JUVENILIAN IDIOPATHIC ARTHRITIS |
SG183709A1 (en) | 2007-08-08 | 2012-09-27 | Abbott Lab | Compositions and methods for crystallizing antibodies |
US20090038182A1 (en) * | 2007-08-09 | 2009-02-12 | Lans Maris J | Footwear with built-in scale |
US8986696B2 (en) * | 2007-12-21 | 2015-03-24 | Depuy Mitek, Inc. | Trans-capsular administration of p38 map kinase inhibitors into orthopedic joints |
US20090162351A1 (en) * | 2007-12-21 | 2009-06-25 | Depuy Spine, Inc. | Transdiscal administration of inhibitors of p38 MAP kinase |
CA2710779C (en) | 2007-12-31 | 2017-06-20 | Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft | Antibodies to tnf.alpha. |
JP6078217B2 (ja) * | 2008-01-15 | 2017-02-08 | アッヴィ・ドイチュラント・ゲー・エム・ベー・ハー・ウント・コー・カー・ゲー | 粉末化されたタンパク質組成物及びその作製方法 |
PL2285409T3 (pl) * | 2008-05-30 | 2016-10-31 | Przeciwciała il-1 alfa | |
WO2010030979A2 (en) * | 2008-09-12 | 2010-03-18 | Xbiotech, Inc. | Targeting pathogenic monocytes |
US8415291B2 (en) * | 2008-10-31 | 2013-04-09 | Centocor Ortho Biotech Inc. | Anti-TNF alpha fibronectin type III domain based scaffold compositions, methods and uses |
EP2358392B1 (en) | 2008-11-12 | 2019-01-09 | MedImmune, LLC | Antibody formulation |
CA2760237C (en) | 2009-04-29 | 2017-11-14 | Abbott Biotechnology Ltd. | Automatic injection device and plunger for same |
ES2796530T3 (es) | 2009-10-26 | 2020-11-27 | Prometheus Biosciences Inc | Ensayos para la detección de fármacos anti-TNF y autoanticuerpos |
NZ600069A (en) | 2009-12-15 | 2015-02-27 | Abbvie Biotechnology Ltd | Improved firing button for automatic injection device |
JP5947727B2 (ja) | 2010-01-20 | 2016-07-06 | メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーションMerck Sharp & Dohme Corp. | 抗ilt5抗体およびilt5結合抗体断片による免疫調節 |
US9023997B2 (en) | 2010-01-20 | 2015-05-05 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Anti-ILT5 antibodies and ILT5-binding antibody fragments |
PT2582391T (pt) | 2010-06-18 | 2019-01-11 | Xbiotech Inc | Tratamento da artrite |
DK2608808T3 (en) | 2010-08-23 | 2017-04-24 | Xbiotech Inc | TREATMENT OF NEOPLASTIC DISEASES |
AU2011317149B2 (en) | 2010-10-18 | 2015-05-07 | Société des Produits Nestlé S.A. | Methods for determining anti-drug antibody isotypes |
AR084210A1 (es) * | 2010-12-08 | 2013-05-02 | Abbott Lab | PROTEINAS DE UNION AL TNF-a |
EP2667918B1 (en) | 2011-01-24 | 2017-03-01 | AbbVie Biotechnology Ltd | Automatic injection devices having overmolded gripping surfaces |
KR20170097789A (ko) | 2011-01-24 | 2017-08-28 | 애브비 바이오테크놀로지 리미티드 | 주사기로부터 니들 실드의 제거 및 자동 주사 디바이스들 |
ES2530175T3 (es) | 2011-02-17 | 2015-02-26 | Nestec S.A. | Ensayos para la detección de autoanticuerpos contra fármacos anti-TNF |
US8658171B2 (en) | 2011-02-28 | 2014-02-25 | Livzon Mabpharm Inc. | Humanized anti-TNFα antibodies |
CN102675460B (zh) | 2011-02-28 | 2015-08-19 | 珠海市丽珠单抗生物技术有限公司 | 抗肿瘤坏死因子α的人源化抗体 |
US9724409B2 (en) | 2011-04-01 | 2017-08-08 | Xbiotech, Inc. | Treatment of inflammatory skin disease |
WO2012149197A2 (en) | 2011-04-27 | 2012-11-01 | Abbott Laboratories | Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins |
EP2729807B1 (en) | 2011-07-06 | 2016-08-17 | Nestec S.A. | Assays for detecting neutralizing autoantibodies to biologic therapy with tnf alpha |
KR102039198B1 (ko) | 2011-09-23 | 2019-10-31 | 엑스바이오테크, 인크. | 악액질 치료법 |
UY34409A (es) * | 2011-10-24 | 2013-05-31 | Abbvie Inc | Inmunoenlazadores dirigidos contra el tnf |
RU2014121043A (ru) * | 2011-10-24 | 2015-12-10 | Эббви Инк. | Биспецифические иммуносвязывающие средства, направленные против tnf и il-17 |
US9334319B2 (en) | 2012-04-20 | 2016-05-10 | Abbvie Inc. | Low acidic species compositions |
US9067990B2 (en) | 2013-03-14 | 2015-06-30 | Abbvie, Inc. | Protein purification using displacement chromatography |
US9181572B2 (en) | 2012-04-20 | 2015-11-10 | Abbvie, Inc. | Methods to modulate lysine variant distribution |
WO2013176754A1 (en) | 2012-05-24 | 2013-11-28 | Abbvie Inc. | Novel purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography |
US9512214B2 (en) | 2012-09-02 | 2016-12-06 | Abbvie, Inc. | Methods to control protein heterogeneity |
BR112015004467A2 (pt) | 2012-09-02 | 2017-03-21 | Abbvie Inc | método para controlar a heterogeneidade de proteínas |
US9545441B2 (en) | 2012-09-18 | 2017-01-17 | Xbiotech, Inc. | Treatment of diabetes |
CA2905010A1 (en) | 2013-03-12 | 2014-09-18 | Abbvie Inc. | Human antibodies that bind human tnf-alpha and methods of preparing the same |
WO2014151901A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-25 | Abbvie Inc. | Improvement of mammalian cell culture performance through surfactant supplementation of feed media |
WO2014151878A2 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-25 | Abbvie Inc. | Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosacharides |
WO2014159579A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-10-02 | Abbvie Inc. | MUTATED ANTI-TNFα ANTIBODIES AND METHODS OF THEIR USE |
AU2013384204B2 (en) | 2013-03-14 | 2017-03-16 | Abbvie Inc. | Low acidic species compositions and methods for producing and using the same |
US9017687B1 (en) | 2013-10-18 | 2015-04-28 | Abbvie, Inc. | Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography |
AU2014240431A1 (en) | 2013-03-14 | 2015-08-27 | Abbvie Inc. | Low acidic species compositions and methods for producing the same using displacement chromatography |
KR102216003B1 (ko) | 2013-03-15 | 2021-02-16 | 얀센 바이오테크 인코포레이티드 | 재조합 단백질에서 c-말단 라이신, 갈락토스 및 시알산 함량을 제어하기 위한 제조 방법 |
US9598667B2 (en) | 2013-10-04 | 2017-03-21 | Abbvie Inc. | Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins |
US9181337B2 (en) | 2013-10-18 | 2015-11-10 | Abbvie, Inc. | Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same |
US9085618B2 (en) | 2013-10-18 | 2015-07-21 | Abbvie, Inc. | Low acidic species compositions and methods for producing and using the same |
US8946395B1 (en) | 2013-10-18 | 2015-02-03 | Abbvie Inc. | Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography |
US20150139988A1 (en) | 2013-11-15 | 2015-05-21 | Abbvie, Inc. | Glycoengineered binding protein compositions |
WO2015198320A1 (en) | 2014-06-24 | 2015-12-30 | Insight Biopharmaceuticals Ltd. | Methods of purifying antibodies |
US20170226552A1 (en) | 2014-07-03 | 2017-08-10 | Abbvie Inc. | Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using cobalt |
WO2016007764A1 (en) | 2014-07-09 | 2016-01-14 | Abbvie Inc. | Methods for modulating the glycosylation profile of recombinant proteins using non-commonly used sugars |
EP3536705A1 (en) | 2014-12-05 | 2019-09-11 | Société des Produits Nestlé S.A. | Isolated soluble alpha-4 integrin, beta-7 integrin and alpha-4/beta-7 heterodimer integrin |
EP3078675A1 (en) | 2015-04-10 | 2016-10-12 | Ares Trading S.A. | Induction dosing regimen for the treatment of tnf alpha mediated disorders |
US10465003B2 (en) | 2016-02-05 | 2019-11-05 | Janssen Biotech, Inc. | Anti-TNF antibodies, compositions, methods and use for the treatment or prevention of type 1 diabetes |
JOP20190162A1 (ar) | 2016-12-30 | 2019-06-27 | Biocad Joint Stock Co | تركيبة صيدلانية مائية من جسم مضاد لـ tnf? أحادي النسيلة معاود الارتباط الجيني |
JP2020506916A (ja) | 2017-01-30 | 2020-03-05 | ヤンセン バイオテツク,インコーポレーテツド | 活動性乾癬性関節炎の治療のための抗tnf抗体、組成物、及び方法 |
MX2019009377A (es) | 2017-02-07 | 2019-12-11 | Janssen Biotech Inc | Anticuerpos anti-tnf, composiciones y metodos para el tratamiento de la espondilitis anquilosante activa. |
JP7145162B2 (ja) | 2017-02-16 | 2022-09-30 | ヤンセン バイオテク,インコーポレイテッド | 化膿性汗腺炎の処置 |
MA54750A (fr) | 2019-01-15 | 2021-11-24 | Janssen Biotech Inc | Compositions d'anticorps anti-tnf et procédés pour le traitement de l'arthrite idiopathique juvénile |
JP2022518250A (ja) | 2019-01-23 | 2022-03-14 | ヤンセン バイオテツク,インコーポレーテツド | 乾癬性関節炎の治療方法で使用するための抗tnf抗体組成物 |
CA3133388A1 (en) | 2019-03-14 | 2020-09-17 | Janssen Biotech, Inc. | Methods for producing anti-tnf antibody compositions |
JP2022526881A (ja) | 2019-03-14 | 2022-05-27 | ヤンセン バイオテツク,インコーポレーテツド | 抗tnf抗体組成物を産生するための方法 |
JP2022525179A (ja) | 2019-03-14 | 2022-05-11 | ヤンセン バイオテツク,インコーポレーテツド | 抗tnf抗体組成物を産生するための産生方法 |
CA3138241A1 (en) | 2019-05-23 | 2020-11-26 | Janssen Biotech, Inc. | Method of treating inflammatory bowel disease with a combination therapy of antibodies to il-23 and tnf alpha |
EP3976648A1 (en) | 2019-06-03 | 2022-04-06 | Janssen Biotech, Inc. | Anti-tnf antibody compositions, and methods for the treatment of psoriatic arthritis |
CN114173873A (zh) | 2019-06-03 | 2022-03-11 | 詹森生物科技公司 | 用于治疗活动性强直性脊柱炎的抗tnf抗体、组合物和方法 |
EP3990922A1 (en) | 2019-06-25 | 2022-05-04 | ProciseDx Inc. | Detection of anti-tnf alpha drug biologics and anti-drug antibodies |
WO2021028752A1 (en) | 2019-08-15 | 2021-02-18 | Janssen Biotech, Inc. | Anti-tfn antibodies for treating type i diabetes |
US20240003918A1 (en) | 2020-11-30 | 2024-01-04 | Enigma Biointelligence, Inc. | Non-invasive assessment of alzheimer's disease |
WO2022123293A1 (ko) | 2020-12-09 | 2022-06-16 | 에이치케이이노엔 주식회사 | 항 OX40L 항체, 항 OX40L 및 항 TNFα 이중 특이성 항체 및 이들의 용도 |
AU2022306144A1 (en) | 2021-07-09 | 2024-02-22 | Janssen Biotech, Inc. | Manufacturing methods for producing anti-tnf antibody compositions |
IL309996A (en) | 2021-07-09 | 2024-03-01 | Janssen Biotech Inc | Production methods for the production of anti-TNF antibody compositions |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0780914B2 (ja) * | 1984-04-02 | 1995-08-30 | 旭化成工業株式会社 | ヒト腫瘍壊死因子に対する抗体 |
JPS60209528A (ja) * | 1984-04-03 | 1985-10-22 | Asahi Chem Ind Co Ltd | ヒト腫瘍壊死因子の精製方法 |
JPS6163698A (ja) * | 1984-09-05 | 1986-04-01 | Asahi Chem Ind Co Ltd | 生理活性物質に対するモノクロ−ナル抗体とそれを用いる生理活性物質の精製方法 |
IL73883A (en) * | 1984-12-20 | 1990-12-23 | Yeda Res & Dev | Monoclonal antibodies against tnf-alpha,hybridomas producing them and method for the purification of tnf-alpha |
US4870163A (en) * | 1985-08-29 | 1989-09-26 | New York Blood Center, Inc. | Preparation of pure human tumor necrosis factor and hybridomas producing monoclonal antibodies to human tumor necrosis factor |
-
1986
- 1986-09-13 DE DE19863631229 patent/DE3631229A1/de not_active Withdrawn
-
1987
- 1987-09-08 US US07/094,289 patent/US5231024A/en not_active Expired - Fee Related
- 1987-09-11 ZA ZA876807A patent/ZA876807B/xx unknown
- 1987-09-11 EP EP87113278A patent/EP0260610B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-09-11 JP JP62226755A patent/JP2837160B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1987-09-11 DE DE87113278T patent/DE3787241D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1987-09-11 CA CA000546724A patent/CA1337717C/en not_active Expired - Fee Related
- 1987-09-11 ES ES87113278T patent/ES2058083T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1987-09-11 FI FI873948A patent/FI91421C/fi not_active IP Right Cessation
- 1987-09-11 DK DK473887A patent/DK473887A/da not_active Application Discontinuation
-
1994
- 1994-02-28 BG BG98602A patent/BG62229B2/bg unknown
-
1996
- 1996-12-27 JP JP8349507A patent/JP2758394B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1997
- 1997-05-12 BR BR1100843-1A patent/BR1100843A/pt active IP Right Grant
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
FI91421B (fi) | 1994-03-15 |
JP2837160B2 (ja) | 1998-12-14 |
JPH09294584A (ja) | 1997-11-18 |
CA1337717C (en) | 1995-12-12 |
US5231024A (en) | 1993-07-27 |
ES2058083T3 (es) | 1994-11-01 |
EP0260610A2 (de) | 1988-03-23 |
ZA876807B (en) | 1989-05-30 |
BR1100843A (pt) | 2000-04-18 |
DE3787241D1 (de) | 1993-10-07 |
DK473887A (da) | 1988-03-11 |
JPS63157977A (ja) | 1988-06-30 |
FI873948A0 (fi) | 1987-09-11 |
DE3631229A1 (de) | 1988-03-24 |
DK473887D0 (da) | 1987-09-11 |
EP0260610B1 (de) | 1993-09-01 |
FI873948A (fi) | 1988-03-14 |
JP2758394B2 (ja) | 1998-05-28 |
EP0260610A3 (en) | 1989-01-11 |
FI91421C (fi) | 1994-06-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
BG62229B2 (bg) | Моноклонални антитела срещу човешки туморнекротизиращ фактор и използването им | |
US5047507A (en) | Monoclonal antibodies with specificity affinity for human carcinoembryonic antigen | |
JPH0596A (ja) | ヒト腫瘍致死因子αに対するモノクローナル抗体 | |
JPS62187417A (ja) | 緑膿菌血清型に対する交さ反応性かつ交さ防御性単クロ−ン性抗体 | |
JPH02500004A (ja) | 非還元・非酵素的糖鎖形成蛋白に対するモノクローナル抗体 | |
EP0476226B1 (en) | Monoclonal antibody against human IgE | |
Ball et al. | Isolation and characterization of monoclonal antibodies to (Na++ K+)-ATPase | |
JPH0672158B2 (ja) | 精製されたヒトマクロファージ遊走阻止因子 | |
EP0487610B1 (en) | Prohormone cleavage site blocking antibody | |
Honda et al. | Production of monoclonal antibodies against thermostable direct hemolysin of Vibrio parahaemolyticus and application of the antibodies for enzyme-linked immunosorbent assay | |
US5053492A (en) | Immunopurification using monoclonal antibodies to Mojave toxin | |
Bankert et al. | Screening and replica plating of anti-hapten hybridomas with a transfer template hemolytic spot assay | |
US4803167A (en) | Monoclonal antidigoxtin antibodies | |
JP3745411B2 (ja) | モノクローナル抗体 | |
Marhaug et al. | Monoclonal hybridoma antibodies to human amyloid related protein SAA. | |
RU2049818C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток мыши mus musculus l., испольуемый для получения моноклональных антител к дигоксину | |
RU2117042C1 (ru) | Штамм культивируемых гибридных клеток животного mus musculus - продуцент моноклонального антитела к термостабильному компоненту капсулоподобной субстанции возбудителя мелиоидоза | |
US5352584A (en) | Monoclonal antibodies which bind (E)-5- (2-bromovinyl)-arabinofuranosyluracil and diagnostic methods based thereon | |
RU2003682C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS MUSCULUS L. - продуцент моноклональных антител к @ -легким цеп м иммуноглобулинов человека | |
EP0392976A1 (en) | Monoclonal antibodies to tetracyclic compounds, processes for their production, and applications | |
JPH04316485A (ja) | マンノース結合タンパク質に結合するモノクローナル抗体 | |
Bedi et al. | Monoclonal Antibodies to Rat Plasma Kininogen | |
JPH04248991A (ja) | ヒトガラクト−ス転移酵素に特異的なモノクローナル抗体及び該抗体を産生するハイブリドーマ | |
JPH0488997A (ja) | モノクローナル抗体、これを産生するハイブリドーマ細胞株およびこれを用いた標識法 | |
JPH02177897A (ja) | モノクローナル抗体及び該抗体を使用する生物質の免疫測定法 |