BG62229B2 - Моноклонални антитела срещу човешки туморнекротизиращ фактор и използването им - Google Patents
Моноклонални антитела срещу човешки туморнекротизиращ фактор и използването им Download PDFInfo
- Publication number
- BG62229B2 BG62229B2 BG098602A BG9860294A BG62229B2 BG 62229 B2 BG62229 B2 BG 62229B2 BG 098602 A BG098602 A BG 098602A BG 9860294 A BG9860294 A BG 9860294A BG 62229 B2 BG62229 B2 BG 62229B2
- Authority
- BG
- Bulgaria
- Prior art keywords
- tnf
- antibodies
- monoclonal antibodies
- cells
- tak
- Prior art date
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 36
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 4
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 claims description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 3
- 238000012606 in vitro cell culture Methods 0.000 claims description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 2
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 claims 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 abstract description 3
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 73
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 73
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 19
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 13
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 12
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 12
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 12
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 12
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 12
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 11
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 11
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 11
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 6
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 6
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 6
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000012983 Dulbecco’s minimal essential medium Substances 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 102000004083 Lymphotoxin-alpha Human genes 0.000 description 5
- 108090000542 Lymphotoxin-alpha Proteins 0.000 description 5
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 5
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 5
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 4
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 4
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 4
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 3
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 3
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 3
- 238000011330 nucleic acid test Methods 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine Natural products O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 description 2
- 244000309466 calf Species 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000009149 molecular binding Effects 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 210000004303 peritoneum Anatomy 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N pristane Chemical compound CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 238000007423 screening assay Methods 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- UVGHPGOONBRLCX-NJSLBKSFSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 6-[5-[(3as,4s,6ar)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]pentanoylamino]hexanoate Chemical compound C([C@H]1[C@H]2NC(=O)N[C@H]2CS1)CCCC(=O)NCCCCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O UVGHPGOONBRLCX-NJSLBKSFSA-N 0.000 description 1
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- LPXQRXLUHJKZIE-UHFFFAOYSA-N 8-azaguanine Chemical compound NC1=NC(O)=C2NN=NC2=N1 LPXQRXLUHJKZIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005508 8-azaguanine Drugs 0.000 description 1
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 1
- 235000011330 Armoracia rusticana Nutrition 0.000 description 1
- 240000003291 Armoracia rusticana Species 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100022230 Caenorhabditis elegans mak-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 101000762448 Homo sapiens Cdc42 effector protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 102000012745 Immunoglobulin Subunits Human genes 0.000 description 1
- 108010079585 Immunoglobulin Subunits Proteins 0.000 description 1
- 208000012659 Joint disease Diseases 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 101100236442 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) mak-5 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 208000025747 Rheumatic disease Diseases 0.000 description 1
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 1
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 230000009137 competitive binding Effects 0.000 description 1
- 230000003750 conditioning effect Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000012364 cultivation method Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000013016 damping Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N dodecyl hydrogen sulfate Chemical compound CCCCCCCCCCCCOS(O)(=O)=O MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940043264 dodecyl sulfate Drugs 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 102000053274 human CDC42EP1 Human genes 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- -1 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 1
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000552 rheumatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- UEOXFKPVURAKAA-RMYJOMHKSA-N streptide Chemical compound NCCC[C@@H]1[C@H](NC(=O)[C@H](C)N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O)C(C)C)CC2=CNC3=C1C=CC=C23 UEOXFKPVURAKAA-RMYJOMHKSA-N 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Public Health (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
Изобретението се отнася до хибридомна клетъчна линия, която синтезира високоспецифични моноклонални антитела (mAK) срещу туморнекрозен фактор (TNF), до моноклоналните антитела, до метод за получаване на хибридомната клетъчна линия и антителата, както и до тяхното използване. 5 претенции
Description
Област на техниката
Изобретението се отнася до хибридомна клетъчна линия, която синтезира високоспецифични моноклонални антитела (шАК) срещу туморнекротизиращ фактор (TNF), до тези моноклонални антитела срещу TNF, до метод за получаване на тази хибридомна клетъчна линия и тези антитела, както и до използването на моноклоналните антитела.
Предшестващо състояние на техниката
Сливането на миши милеомни клетки с клетки от далака на имунизирани мишки (Kohler und Milstein, Nature 256, 495-497 ((975)) е първото сведение за възможността да се получат непрекъснати клетъчни линии които да произвеждат хомогенни (т.н. “моноклонални”) антитела. Съществуват многобройни опити да се произвеждат различни хибридни клетки (така наречените хибридоми) и образуваните от тях антитела да се използват за различни научни изследвания (виж Current Topics in Microbiology and immunology, vol. 81: Lymphocyte Hybridomas, Springer Verlag, 1978).
Поради своите биологични свойства, TNF може да бъде въведен като интересно и многообещаващо средство при лечението на туморни заболявания. Подробни изследвания се провалят поради крайно малката концентрация на TNF в естествените клетки. Едва след развитието на генната технология и възможността да се клонира човешки протеин в понисши организми, стана възможно също да се експресира TNF в микроорганизми. Този рекомбинантен TNF (rTNF) показва във високо пречистена форма същите действия ,както природния TNF (nTNF).
Научните изследвания, също както и терапевтичното приложение, пораждат потребността да се доказват не само активността на TNF, но и самият протеин TNF. Определянето на биологичната активност се провежда трудно и скъпо.
Известно е също, че с антитела срещу TNF може да се блокира действието на TNF (Biochem. Biophys. Res.Comn. 137, 847 (1986). В посочената публикация се съобщава за такива антитела, които трябва да притежават относително висок афинитет към TNF. В нея обаче не е даден никакъв възпроизводим път за тяхното получаване.
Техническа същност на изобретението
Предмет на настоящото изобретение са нови моноклонални миши антитела срещу човешки естествен и рекомбинантен TNF, продуциращите ги хибридни клетъчни линии, методът за тяхното получаване и използването им.
Получаването на моноклонални антитела се осъществява при следване на познати методи (Monoclonal Antibodies, Kennet et al., Plenum Press 1980, 363-419).
Чрез повтарящо се инжектиране на минимално количество пречистен, рекомбинантен TNF от E.coli се имунизират мишки BALB/ с. Когато в серума им се доказват достатъчно антитела, клетки от далака на тези животни се сливат с миеломни клетки и хибридът се култивира.
Отделните култури се изследват чрез скрининг-тестовете за съдържание на специфични антитела срещу TNF.
От подходящите хибридоми се изолират колонии съгласно метода limiting dilution cloning, които се изолират от единични клетки. По този начин се получава между другото клетъчна линия, която се отличава със секреция на моноклонални антитела тАК-195. Тази клетъчна линия е депозирана в European Collection of Animal Cell Cultures (ECSCC), PHLS Centre for Applied Microbiology and Research, Porton Down, Salisbury SP4 OJ4 OJ6, Great Britan N 87 050801. Двете други клетъчни линии (АМ-1 и АМ-199) са депозирани под №№ 87 050804 и 87 050802.
За размножаването на тези хибридни клетки те се култивират както in vitro, така и in vivo. Високата скорост на размножаване in vivo прави този метод на култивиране особено подходящ. За целта предварително обработени с PristanR клетки от BALB/с-мишки се инжектират интраперитонеално с отделните хибридни щамове. Образуващият се асцитен тумор се събира след 8 до 10 дни.
Изолирането на моноклоналните анти тела срещу TNF се извършва чрез пречистване или на течността, намираща се над in vitro клетъчна или на течността намираща се над in vitro клетъчната култура или на асцитната течност. Пречистването се осъществява, като се следва методът на Brauch et al., (J.Immunol. Methods 1982, vol.53, 313-319).
Охарактеризирането на молекулните свойства на антителата тАК-195 показва, че молеуклното тегло на пречистените антитела е по-голямо/равно 150 000 Da (определяне чрез електрофореза на полиакриламиден гел). Антитяло тАК-195 е от типа lgG3, при което неговата тежка верига е 3. Леката верига е κ (Определяне чрез подтипспецифични антитела в ELISA).
Моноклоналното антитяло се отличава с висока афинитетна константа в порядък на големината > 109 Ι/mol спрямо TNF и не показва кръстосана реакция с лимфотоксин.
Относителното положение на местата на свързване за антителата върху TNF молекулата се изследва чрез конкурентно свързване на антителата.
Активността на TNF се определя с обичаен цитотоксичен тест. Рекомбинантен и нативен TNF се инкубират с излишък от антитела. Цитотоксичната активност на двата TNFпрепарата се неутрализира чрез антителата тАК-195. Това означава, че тАК-195 реагира с област, отговорна за биологичната активност.
Ако антителата трябва да служат за доказване на определени антигени, по принцип са възможни две постановки на опита. И при двете трябва, ако в антигена липсва естествен маркер, да се предприеме маркиране на единия от компонентите. Това се осъществява или в антигена, например с радиоактивен маркеризотоп, тогава се използва конкурентен изместващ анализ, като известният радиоимуноанализ (RIA), или маркиарнето се извършва на антителата, при което предпочитан тип анализ е имунорадиометричен анализ (IRMA), ензим-свързващ-имуносорбентен анализ (ELISA), или хемилуминисцентен анализ. Подробностите за тези различни методи за анализ и вариантите на методите са познати на специалистите.
Друга възможност е свързването с нискомолекулен хаптен в антитялото, което от своя страна може да се докаже специфично чрез втора реакция. Може да се използва, например биотин,реагиращ със стрептавидин. Антитялото съгласно изобретението след това се маркира с дълговерижен биотин и в следващия етап се проявява с комплекс стрептавидин-пероксидаза от хрян.
Описаният тук анализ представлява твърдофазов сандвич-ELISA. Немаркирано антитяло (тАК-1 или тАК-199) се адсорбира пасивно върху повърхност, например микротитърни плаки или се свързва ковалентно и повърхността се блокира по известен начин срещу неспецифично свързване.
Съдържащите TNF проби и маркираните с биотин антитела тАК-199 се нанасят с пипета в ямките и се инкубират. Може да бъде показано, че TNF се доказва в граници от 10 pg/ml в пробите. Специфичната активност на rTNF е 8,0 х 106 U/mg при опит с мишки L929, така че с ELISA могат да се докажат 0,1 U THF/ml. С помощта на Westem-блот може да се покаже, че антителата не реагират кръстосано с никой от компонентите на човешкия серум. Антителата съгласно изобретението следователно могат да се използват за определяне на TNF в серума от третирани с TNF пациенти. Те могат също да бъдат използвани за актуални диагностични цели, например за определяне на TNF-съдържанието в серума и плазмата.
Тъй като антителата съгласно изобретението инактивират TNF (виж пример 6), те могат да се използват за лечение на заболявания, при които е повишена концентрацията на TNF в кръвта, както например при септичен шок. Освен това, лечение с TNF-антитела може да бъде показано при следните заболявания: отхвърляне на трансплантати, алергии, автоимунни заболявания, заболявания, от кръга на ревматичните форми, белодробен шок, възпалителни заболявания на ставите, смущения в съсирването на кръвта, изгаряния.
Посредством имуноафинитетна хроматография може да се пречисти TNF от биологичен материал, който съдържа TNF. За целта антитялото се свързва по известни методи с гелна матрица, през която се подава разтворът, съдържащ TNF.
Примери за изпълнение на изобретението
Следващите примери поясняват изобре3 тението
Пример 1. получаване на моноклонални антитела
a) Имунизиране на BALB/c мишки.
Женски BALB/c мишки се имунизират интраперитонеално (i.p) с 30 pg rTNF в 0,5 ml пълен адювант на Freund. Четиринадесет дни по-късно животните получават отново 30 pg от антигена интраперитонеално в непълен адювант на Freund. Две допълнителни имунизации се правят през 14 дневни интервали с по 30 pg антиген, се отстранява далакът на две животни.
b) приготвяне на суспензия от клетки от далака
От извадените далаци се приготвя клетъчна суспензия, при което органите се пресуват през сито от неръждаема стомана (ширина на отворите 100 pm. Клетките се прехвърлят в Dulbecco Minimal Essential Medium (DMEM), която е допълнена с 4,5 g/1 глюкоза, 10 mM глутамин, 1000 единици/ml пеницилин, 100 pg/ ml стрептомицин и 15% серум от телешки зародиш. Клетките се промиват три пъти със средата и след това се суспендират отново в същата среда в желаната концентрация. Найобщо се получават около 5 до 10 х 107 клетки от далак.
c) Растеж на миеломните клетки
Като партньор за сливането се използват миеломни клетки Sp2/O-Agl4(ATCC N CRL 8287). Клетките са резистентни спрямо 20 pg/ml 8-азагуанин и в среда, която съдържа хипоксантин, аминоптерин и тимидин (НАТ) не могат повече да растат. Те се култивират в DMEM, към която се прибавят 4,5 g/ml глюкоза, 10 mM глутамин, 1000 единици/ml пеницилин, 100 pg/ml стрептомицин и 15% серум от телешки зародиш (пълна среда). За сливането се използват клетките от логаритмичната фаза на растеж.
d) Сливане на клетките
Суспензията от клетки от далака се смесват с миеломни клетки в съотношение 5:1 и се промиват в несъдържаща серум DMEM и се центрофугират 5 min в 50 ml конична полипропиленова епруветка при 800 грт. Надутаечната течност се филтрира под вакуум напълно. Върху пелетите се прибавя съвсем внимателно 0,5 ml 50%-ен разтвор на полиетиленгликол (PEG, Boeriner) с молекулно тегло 2000, клетъчните пелети се смесват с PEG чрез леко тръсване и след това се центрофугират 3 min при 1000 грт. След това се прибавя 10 ml DMEM, клетъчната пелета се разтваря внимателно и след това се центрофугира 3 min при 2000 грт. Клетъчната пелета се суспендира отново в НАТ-среда, при концентрация 2 х 106 клетки/ml и се разпределя върху микротитърни плаки на части по 0,2 ml. В ямките ден преди това са прибавени около 50 000 перитонеални моноядрени клетки, предимно макрофаги, като хранителни клетки.
e) Селекциониране и отглеждане на хибридомите
След сливането, клетките се култивират в НАТ-среда по Littlefield (Science 1964 vol. 145,709-712) при 37°С с 50% СО2, във влажна атмосфера. Културите се подхранват два пъти в седмицата чрез заместване на половината среда с прясна НАТ-среда. След няколко седмици надутаечната течност от хибридомните клетъчни култури се изследва за наличие на активност на античовешки туморнекортизиращ фактор. Хибридомите, които показват положителни резултати в скрининговия тест, се избират за клониране. При това хибридомите се подлагат на Пределно разреждане, при което в 96 микротитърни ямки се посяват средно 0,5 клетки/ямка и се прибавят по 105 тимоцити от мишки като хранителни клетки. Селекционираните по този метод за клониране клетки продуциращи антитела се размножават, замразяват и се съхраняват в допълнена среда, която съдържа 10% серум от телешки зародиш, както и 10% диметилсулфоксид.
f) Скринингов тест за специфични THFантитела rTNF се разрежда до 3 pg/ml в PBS (буфериран с фосфатен разтвор от натриев хлорид, съставен от 0,8% NaCl и 0,02 моларен натриев фосфат, доведен с HCI или NaOH до pH 7,4). Ямки на MikrotiterplattenR се разрежда с по 0,1 ml от този разтвор. След 2 h, при стайна температура, надутаечната течност се филтрира под вакуум и ямките се обработват с 0,3 ml от 1 %-ен разтвор на говежди серумен албумин (Sigma, RIA grade) в продължение на най-малко 30 min. След това надутаечната течност се отстранява. Надутаечната течност от нарастващите хибридомни клетъчни линии, които са приблизително 20-30% конфлуентни, или серумните разреждания от имунизираните мишки се инкубират най-малко в продължение на 2 h при стайна температура. Ямките се промиват с 0,3 ml PBS. След това се инкубират 2 h при стайна температура с 0,1 ml подходяща концентрация от антимиши имуноглобулин-антитела (Miles). Тези антитела свързват с ензимен маркер пероксидаза. Ямките с положителна пероксидазна реакция показват антиген-специфични антитела.
От 360 първоначално налични ямки 80% показват клетъчен растеж. От тях 12 показват положителни резултати в TNF-скрининговия тест. От тях 11 повтарят положителната оценка. За настоящото изобретение се развиват понататък три различни моноклонални хибридоми: АМ:1,АМ-195,АМ-199.
g) Разширение на хибридомните клетъчни култури
Разширение в клетъчната култура in vitro:
Посяват се около 2 х 107 клетки в колби за клетъчни култури с 175 cm3 повърхност за растеж. Надутаечната течност съдържа след три дни секретираните от клетките моноклонални антитела в порядъка от 10 до 20 pg/ml.
Разширение в асцитна мишка in vivo: BALB/c мишки получават i.p. 0,5 ml PristanR за кондициониарне на перитонеумите. В рамките на период от 1 до 2 седмици, на предварително обработените животни се прилага суспензия от 5 до 10 х 106 хибридоми в PBS за животно, интраперитонеално. След 8 до 10 дни перитонеумът се отваря с канюла и се събира съдържащата клетки асцитна течност.
От взетата асцитна течност се отделят клетъчните съставки чрез центрофугиране (5000 rpm, 5 min). Надутаечната течност, която съдържа моноклоналните антитела, се замразява в аликвотни части при -70°С или се пречиства хроматографски до най-малко 90%, което се доказва с гелелектрофореза върху натриев додецилсулфат-полиакриламид (DE-OS 3330 160).
h) типизиране на моноклоналните антитела
Моноклоналинте антитела се охарактеризират по-добре в ELISA-система. Ямките на микротитьрна плака се покриват със слой rTNF (5 gg/ml). След инкубиране 2 h при стайна температура, така приготвената плака с пречистени моноклонални антитела от клетъчната култура се подлага на втори етап на инкубиране (2 h при стайна температура) с антимиши имуноклобулин от различни класове и подкласове, както и с различни класове полеки и по-тежки имуноглобулинови вериги (MiLes). В следващ етап се прибавя маркиран с пероксидаза кози-анти-заешки имуноглобулин (Miles). След 1 h инкубация ензимната реакция се спира чрез прибавяне на оцветен субстрат тетраметил-бензидин (Miles) и водороден пероксид. Резултатите са обобщени в таблица 1.
Таблица 1
| Обозначение на антитялото | Клас | Верига | |
| Тежка | Лека | ||
| гпАК-1 | IgG | гама 1 | капа |
| тАК-195 | IgG | гама 3 | капа |
| тАК-199 | IgG | гама 1 | капа |
i) Маркиране на моноклоналните антитела
NHS-LC-Biotin (Pierse) се разтваря в PBS и се довежда до концентрация от 1 mg/ ml. 0,1 ml от този разтвор се смесва с 0,1 ml пречистени моноклонални антитела (0,5 mg/ ml PBS) и разтворът се инкубира 2 h при стайна температура. Реакционният разтвор се допълва от 1 ml с PBS и се диализира при 4°С спрямо PBS. Диализатът, т.е. намиращият се в диализната тръба разтвор се съхранява до използването му при 4°С.
Пример 2. Афинитет на моноклоналните антитела към TNF
Афинитетните константи се определят въз основа на данните от ELISA. За това пречистените антитела се титрират спрямо кон- 5 стантно количество TNF и свързването на антителата се доказва чрез свързване с маркиран с пероксидаза заешки антимиши имунглобулин. данните от свързването се оценяват със специална програма.
Таблица 2
| Афинитетна константа на моноклоналното антитяло | |
| Обозначение на антитялото | Ка х 10’ х МоГ’ |
| тАК-1 | 1,5 ± 30% |
| тАК-195 | 3,5 + 30% |
| тАК-199 | 2,5 ±30% |
Показаните константи на асоциация Ка разкриват анти-TNF антителата шАК-195 като високоафинитетни антитела.
Примера 3. Неутрализиране на цитотоксичната активност на TNF.
Биологичната активност на TNF in vitro се определя чрез лизиране на миша клетъчна линия L929 (АТСС N CCL1), както е описано в Aggarwal et al., (J.Biol. Vhem. 1985, vol. 260, 2345-23-54). При опити за неутрализиране на цитотоксичната активност на TNF чрез моноклонални антитела, се избира една концентрация на TNF, при която най-малко 90% от клетките се лизират. Антителата се разреждат в пълна среда в отношение 1:2 на микротитьрни плаки. Към всеки разтвор на антитела (0,1 ml) се добавя 0,05 ml рекомбинантен или нативен TNF (1,3 ng/ml) и се инкубира 2 h при стайна температура. След това се прибавят 50 000 L929 клетки в 0,05 ml среда и след инкубиране от 20 до 24 h в термостат клетките се фиксират и оцветяват с кристалвиолет.
Цитотоксичният ефект на TNF позволява клетките да се лизират и поради това през време на оцветяването да се отмият. Ако са налице обаче достатъчно антитела, цитоток25 сичният ефект на THF се неутрализира и клетките се оцветяват.
Пример 4. Определяне на TNF
а) Избиране на подходяща двойка моноклонални антитела
За различаване между конкурентно свързване на две антитела при един и същи епитоп и адитивно свързване на различни епитопи се изпитва свързването на антителата самостоятелно и по двойки във всички възможни комбинации на имобилизиран TNF. TNF се свързва, както е описано в пример 1. Пречистените антитела, като се започне от 24000 ng/ml се разреждат на етапи до 1:4. След това се прибавят биотинилирани антитела тАК-195 и се инкубират в продължение на 90 min. Ямките се промиват с PBS 0,05% TweenR 20, прибавя им се стрептавидин-пероксидазен комплекс (BRL) и се инкубират 30 min. След етап на промиване във всяка ямка се прибавя по 0,1 ml пероксидазен субстрат (виж пример 4 Ь). При конкуретнто свързване се получава загасване на сигнала. Както може да се разбере от таблица 3, моноклоналните антитела АМ-195 се свързват с друг епитоп на TNF отколкото тАК-1 тАК-199.
Таблица 3
Влияние на свързването на биотин-маркирани тАК-195 върху _______ TNF чрез тАК____________________
| pm mAK/ml | 195 | % Свъ, | ззване |
| 199 | 1 | ||
| 24000 | 3 | 100 | 100 |
| 6000 | 4 | 100 | 100 |
| 1500 | 16 | 100 | 100 |
| 375 | 63 | 100 | 100 |
| 62 | 95 | 100 | 100 |
| 0 | 100 | 100 | 100 |
Ь) Изграждане на ензимен тест
Имобилизират се антителата тАК-l или тАК-199 чрез пасивна адсорбция или ковалентно свързване върху носител (сферички, филтър, микротитърна плака от полистирол или поливинилхлорид филтърна хартия или други материали). Специфичността на моноклоналните антитела позволява само на специфичен антиген, тук TNF, чрез имунно свързване, да се свърже на едно единствено молекулно място на свързване на антигена. Количеството на TNF, което може да се свърже, е пропорционално на концентрацията и количеството на антигена в разтвора. Антигенът се познава чрез имунно свързване на антителата тАК-195 на друго молекулно място на свързване. Антителата тАК-195 носят сигнал. Количеството на сигналите, които могат да се имобилизират следователно е право пропорционално на количеството на имобилизираните антигени и с това също на концентрацията на антигените в изследвания разтвор.
Провеждане на опита
1. Описание
Пречистените антитела тАК-l или тАК199 се разреждат в свързващ буфер (натриевохидрогенкарбонатен буфер pH 9,5, 4,2 g/l=0,05 М) до 5 pg/ml. Ямките на микротитърна плака се инкубират с 0,1 ml от този разтвор в продължение на 16 до 20 h при 4°С.
2. Блокиране
Полученият съгласно 1 разтвор се изсмуква и се промива 2 пъти с PBS (2 g/l NaCl,
0,2 g/l КС1, 1,44 g/l Na2HPO„ x 2H2O, 0,2 g/l KH2PO4, pH 7,0). След това се блокира в продължение на 30 min при стайна температура, с 1 % -ен разтвор на говежди серумен албумин (Sigma, RIA grade).
3. Степен на разреждане и TNF проби
Разтворът съгласно 2 се изсмуква и се промива два пъти с PBS, rTNF се довежда до 2,5 ng/ml с буфер (на 1 I PBS се прибавя 1 g говежди серумен албумин, Sigma, RIA grade) и се разрежда 1:2. С пипета се прибавят по 0,1 ml на ямка и се инкубира 2-4h при стайна температура. След трикратно промиване с буфер (буфер за промиване: PBS + 0,1 % Tween* 20) се прибавят 0,1 ml маркирани с биотин антитела тАК-195. Конюгатът, получен съгласно етапа в пример lh, се разрежда 1:400 с буфер I и се инкубира в продължение на 2 h при стайна температура или 16-20 h при 410°С.
4. Усилваща система
Ямките се промиват 3 пъти с буфер за промиване и след това се инкубират с 0,1 ml стрептавидни-пероксидазен комплекс (BRL, разреден 1:2000 в PBS/BSA-буфер) в продължение (BRL, разреден 1:2000 в PBS/BSA-буфер) в продължение на 30 min при стайна температура.
5. Проявяване
Ямките се промиват 3 пъти с буфер за промиване, с пипета се прибавя по 0,1 ml/ямка пероксидазен субстрат и се инкубира 30 min при стайна температура. Реакцията се спира с
6. 29
0,1 ml/ямка 2М H2S04. Отчитането на абсорбцията в микротитърната плака се извършва в рамките на 1 h при дължина на вълната 450 nm. Характерна калибровъчна крива е представена на фиг.1. Границата на доказване на TNF е при 10 pg/ml.
Пероксидазен субстрат
- Разтвор на ТМВ: 42 mM ТМВ (3,3',5,5’тетраметилбензидин, Miles) в DMSO
- Буфер за субстрата: 50 g натриев ацетат се разтваря до 1 1 вода и се довежда до pH 4,9 с 1 g лимонена киселина.
-0,1 ml от разтвора на ТМВ се прибавя бавно и с разклащане към 10 ml буфер за субстрата, последван от 1,47 μΐ 30% Н202 (найчист, Merck).
c) Определяне на THF в човешки серум Рекомбинантен или нативен TNF се поставя в буфер I (Пример 4Ь) или в човешки серум по 2,5 ng/ml и се разрежда 1:2 при същите условия. С пипета се прибавят по 0,1 ml във всяка ямка, която е наслоена предварително, както е описано в пример 4Ь, с антитела тАК-199 или тАК-1. По-нататък се работи, както е описано в пример 4Ь.
Както се вижда от фиг. 1, никоя съставка от човешкия серум не пречи на определянето на TNF чрез моноклонални антитела.
d) Кръстосана реакция на антителата с лимфотоксин
Доказването на възможна кръстосана реакция на антителата с лимфотоксин се изпитва, съответно на пример 1е, при което ямките на микротитърната плака се наслояват с пречистен рекомбинантен лимфотоксин. Не се открива никакво свързване на антителата шАК-1, тАК-114, тАК-195 и тАК-199 с лимфотоксина.
Пример 5. Доказване на TNF в серума чрез Western-болт.
Човешки серум с различни добавени количества TNF се разделя чрез гелелектрофо реза на 12,5% гел по Laemli (J.Mol.Biol. 1973, vol.80, 575-599). Методът Western-блот се провежда, както е описано в Burnett, W.N.(Anal. Biochem. 1981, vol.112, 195-203) и Reines D.et.al., (J.Biol.Chem. 1985, vol.260,11331139). Протеините на гела се блотират за една нощ на нитроцелулозна мембрана. (Schleicher & Schull). Нитроцелулозната мембрана се инкубира 3 h при стайна температура с 1%-ен разтвор на желатина (Bio-Rad, към II PBS се прибавят 10 g желатина). След това Нитроцелулозната мембрана с 20 ml разтвор на антитела, който е разреден до 1 pg/ml в буфер (0,1 % желатина в PBS), се инкубира 2 h при стайна температура. Надутаечната течност се декантира и мембраната се промива неколкократно. Проявява се върху мембрана чрез прибавяне на маркиран с пероксидаза антимиши имуноглобулин TNF. Границата на доказване се намира при 30 ng TNF. Както се вижда от фиг.2, моноклоналните антитела тАК-195 не реагират с никой компонента от човешкия серум и поради това трябва да се разглеждат като специфични за TNF.
Пример 6. Неутрализиране на TNF
Защитният ефект на тАК-195 срещу TNF се изследва при in vivo условия у мъжки Ва1Ь/с-(Опит 1,2,4) и C3H/HeN-(OnnT 3) мишки. Мишки на възраст 4-6 седмици се разпределят произволно на групи по 3, съответно 5 животни. Веществата се вкарват венозно в латералната опашна вена (Обем на прилагане ml/kg). TNF се разтваря преди инжектирането в буфер А (150 mM NaCl и 0,18% говежди серумен албумин (Sigma, RIA grade) и се съхранява 6 h при 4-100С. След това време TNF показва най-висока токсичност. Първо се прибавя TNF, 15-30 min след това се прибавя тАК-195. Степента на смъртност се определя след 24 h. Таблица 4 показва получените резултати (3/5 означава, че 3 от 5 животни са умрели).
Таблица 4
| Прилагана субстанция | Опит Ns | |||
| 1 | 2 | 3 | 4 | |
| Буфер А | 0/3 | 0/5 | 0/5 | 0/5 |
| тАК 10 mg/kg | 0/3 | 0/5 | 0/5 | 0/5 |
| тАК 5 mg/kg | 0/3 | 0/5 | 0/5 | 0/5 |
| TNF 1 mg/kg | 3/3 | 0/5 | 4/5 | 4/5 |
| TNF 1 mg/kg+ тАК 1 mg/kg | 1/3 | 2/5 | 1/5 | 3/5 |
| TNF 1 mg/kg+ mAK 5 mg/kg | 3/3 | 0/5 | 0/5 | 0/5 |
| TNF 2 mg/kg | 3/3 | 5/5 | 1/5 | 4/5 |
| TNF 2 mg/kg+ mAK 2 mg/kg | 3/3 | 4/5 | 2/5 | 5/5 |
| TNF 2 mg/kg+ mAK 10 mg/kg | 0/3 | 0/5 | 0/5 | 0/5 |
Както се вижда от таблицата, неутрализиращите антитела тАК-195 могат да неутрализират смъртоносна доза от TNF. Степента на преживяване на животните зависи от тегловното съотношение антитела към TNF, пълно премахване на TNF-токсичността се наблюдава при съотношение 5:1. При предположението, че TNF се намира като пример (FEBS Lett. 211,179, 1987), това отговаря на молно съотношение на антитела към TNF от 1,6 към 1.
TNF не може да бъде неутрализиран от антитела, които не са неутрализиарщи.
Claims (5)
- Патентни претенции1. Моноклонални антитела тАК-195 получени от клетъчна линия, депозирана в ЕСАСС под № 87 050801.
- 2. Хибридна клетъчна линия, депозирана в ЕСАСС под № 87 050801.
- 3. Метод за получаване на моноклонални антитела тАК-195 съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че клетъчната линия ЕСАСС 87 050801 се култивира in vitro или in vivo и антителата се изолират чрез пречистване на течността над in vitro клетъчната култура или на асцитната течност.
- 4. Използване на моноклонални антитела тАК-195a) за доказване на природен или рекомбинантен TNF,b) за определяне на TNF в биологични течности,c) за приготвяне на имунотестове за определяне на TNF,d) за изолиране на TNF, като се използва имуноадсорбционна хроматография.
- 5. Моноклонални антитела тАК-195 за използване за контрол на заболявания.Приложение: 2 фигуриИздание на Патентното ведомство на Република България1113 София, бул. Д-р Г. М. Димитров 52-БЕксперт: Д.Кацарова Редактор: Е.СинковаПор. № 39343 Тираж: 40 ЗС
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19863631229 DE3631229A1 (de) | 1986-09-13 | 1986-09-13 | Monoklonale antikoerper gegen humanen tumornekrosefaktor (tnf) und deren verwendung |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| BG62229B2 true BG62229B2 (bg) | 1999-05-31 |
Family
ID=6309540
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| BG098602A BG62229B2 (bg) | 1986-09-13 | 1994-02-28 | Моноклонални антитела срещу човешки туморнекротизиращ фактор и използването им |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5231024A (bg) |
| EP (1) | EP0260610B1 (bg) |
| JP (2) | JP2837160B2 (bg) |
| BG (1) | BG62229B2 (bg) |
| BR (1) | BR1100843A (bg) |
| CA (1) | CA1337717C (bg) |
| DE (2) | DE3631229A1 (bg) |
| DK (1) | DK473887A (bg) |
| ES (1) | ES2058083T3 (bg) |
| FI (1) | FI91421C (bg) |
| ZA (1) | ZA876807B (bg) |
Families Citing this family (174)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6419927B1 (en) | 1981-09-08 | 2002-07-16 | Anthony Cerami | Method for reducing adverse effects of a human 70kDa mediator which results from endotoxin stimulation of macrophages |
| US5700466A (en) * | 1981-09-08 | 1997-12-23 | The Rockefeller University | Method of ameliorating or preventing septic shock using a monoclonal antibody specific to cachectin/tumor necrosis factor |
| US6309640B1 (en) | 1981-09-08 | 2001-10-30 | The Rockefeller University | Lipoprotein lipase suppression by endotoxin-induced mediator (shock assay) |
| GB2233559B (en) * | 1988-03-11 | 1992-03-04 | Celltech Ltd | Antibodies for use in antilymphocyte antibody therapy |
| DE3823804A1 (de) * | 1988-07-14 | 1990-01-18 | Basf Ag | Neutralisation der in vitro und in vivo toxischen eigenschaften von tnf-(alpha) durch monoklonale antikoerper und den davon abgeleiteten fragmenten |
| NZ229922A (en) * | 1988-07-18 | 1992-04-28 | Chiron Corp | Monoclonal antibodies specifically binding cachectin (tumor necrosis factor) and compositions |
| AU4182289A (en) * | 1988-08-19 | 1990-03-23 | Celltech Limited | Pharmaceutical products for anti-neoplastic therapy |
| WO1991002078A1 (en) | 1989-08-07 | 1991-02-21 | Peptide Technology Ltd | Tumour necrosis factor binding ligands |
| US20030225254A1 (en) * | 1989-08-07 | 2003-12-04 | Rathjen Deborah Ann | Tumour necrosis factor binding ligands |
| US5959087A (en) * | 1989-08-07 | 1999-09-28 | Peptide Technology, Ltd. | Tumour necrosis factor binding ligands |
| US5998378A (en) * | 1989-08-16 | 1999-12-07 | Chiron Corporation | Compositions for the inhibition of TNF hormone formation and uses thereof |
| US6586222B1 (en) | 1989-08-16 | 2003-07-01 | Chiron Corporation | Recombinant PR-3 and compositions thereof |
| US5843693A (en) * | 1989-08-16 | 1998-12-01 | Chiron Corporation | Assay method for screening for inhibitors of proTNF conversion |
| ATE189682T1 (de) * | 1989-08-16 | 2000-02-15 | Chiron Corp | Prohormonspaltungsplatzblockierungsantikörper |
| GB8921123D0 (en) * | 1989-09-19 | 1989-11-08 | Millar Ann B | Treatment of ards |
| US6713610B1 (en) * | 1990-01-12 | 2004-03-30 | Raju Kucherlapati | Human antibodies derived from immunized xenomice |
| US5919452A (en) * | 1991-03-18 | 1999-07-06 | New York University | Methods of treating TNFα-mediated disease using chimeric anti-TNF antibodies |
| DE10199067I2 (de) * | 1991-03-18 | 2006-03-16 | Univ New York | Fuer Menschlichen Tumornekrose-Faktor spezifische Monoklonale und Chimaere Antikoerper |
| US7192584B2 (en) | 1991-03-18 | 2007-03-20 | Centocor, Inc. | Methods of treating psoriasis with anti-TNF antibodies |
| US6277969B1 (en) * | 1991-03-18 | 2001-08-21 | New York University | Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor |
| US20040120952A1 (en) * | 2000-08-07 | 2004-06-24 | Centocor, Inc | Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor |
| US6284471B1 (en) * | 1991-03-18 | 2001-09-04 | New York University Medical Center | Anti-TNFa antibodies and assays employing anti-TNFa antibodies |
| DE69321909T2 (de) * | 1992-08-28 | 1999-04-01 | Bayer Corp., Pittsburgh, Pa. | Verwendung von monoklonalen Anti-TNF-Antikörpern für die Behandlung von bakteriellen Meningitiden |
| US20050255104A1 (en) * | 1993-01-29 | 2005-11-17 | Centocor, Inc. | Methods of treating psoriasis using anti-TNF receptor fusion proteins |
| US5888511A (en) * | 1993-02-26 | 1999-03-30 | Advanced Biotherapy Concepts, Inc. | Treatment of autoimmune diseases, including AIDS |
| US5626843A (en) * | 1993-02-26 | 1997-05-06 | Advanced Biotherapy Concepts, Inc. | Treatment of autoimmune diseases, including AIDS, by removel of interferons, TNFs and receptors therefor |
| DE4409513C1 (de) * | 1994-02-07 | 1995-10-19 | Knoll Ag | Verwendung von anti-TNF-Antikörpern als Arzneimittel zur Behandlung von Erkrankungen mit einem erhöhten Interleukin-6 Serumspiegel |
| NZ278607A (en) * | 1994-02-07 | 1999-05-28 | Knoll Ag | Use of tnf antagonists for treating disorders involving elevated serum levels of il-6 wherein the serum levels are 500pg/ml or above |
| AU709054B2 (en) | 1994-03-07 | 1999-08-19 | Chiron Corporation | Compositions for the inhibition of TNF formation and uses thereof |
| US6090382A (en) | 1996-02-09 | 2000-07-18 | Basf Aktiengesellschaft | Human antibodies that bind human TNFα |
| SI9720020B (en) | 1996-02-09 | 2001-12-31 | Basf Ag | Human antibodies that bind human TNF alpha |
| US7608262B2 (en) * | 1996-02-16 | 2009-10-27 | The Kennedy Institute Of Rheumatology | Methods of preventing or treating thrombosis with tumor necrosis factor antagonists |
| JP4215172B2 (ja) * | 1996-12-03 | 2009-01-28 | アムジェン フレモント インク． | 複数のＶ▲下Ｈ▼およびＶ▲下κ▼領域を含むヒトＩｇ遺伝子座を有するトランスジェニック哺乳動物、ならびにそれから産生される抗体 |
| US20020031513A1 (en) * | 1997-11-24 | 2002-03-14 | Shamir Leibovitz | Method and pharmaceutical composition for inhibiting premature rapture of fetal membranes, ripening of uterine cervix and preterm labor in mammals |
| WO2000051637A1 (en) * | 1999-03-02 | 2000-09-08 | Centocor, Inc. | ANTI-TNFα ANTIBODIES IN THERAPY OF ASTHMA |
| KR100672892B1 (ko) * | 1999-03-18 | 2007-01-23 | 셀진 코오퍼레이션 | 치환된 1-옥소- 및 1,3-디옥소이소인돌린스 및 염증성사이토킨 수치를 감소시키기 위한 약학적 조성물로서의이들의 사용 |
| MXPA02003419A (es) * | 1999-10-06 | 2002-10-17 | Basf Ag | Moduladores de las vias de senalizacion mediadas por citocina y antagonistas de los receptores para integrina alfav°3 para tratamiento en combinacion. |
| UA81743C2 (uk) | 2000-08-07 | 2008-02-11 | Центокор, Инк. | МОНОКЛОНАЛЬНЕ АНТИТІЛО ЛЮДИНИ, ЩО СПЕЦИФІЧНО ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З ФАКТОРОМ НЕКРОЗУ ПУХЛИН АЛЬФА (ФНПα), ФАРМАЦЕВТИЧНА КОМПОЗИЦІЯ, ЩО ЙОГО МІСТИТЬ, ТА СПОСІБ ЛІКУВАННЯ РЕВМАТОЇДНОГО АРТРИТУ |
| US7288390B2 (en) | 2000-08-07 | 2007-10-30 | Centocor, Inc. | Anti-dual integrin antibodies, compositions, methods and uses |
| US20050249735A1 (en) * | 2000-08-07 | 2005-11-10 | Centocor, Inc. | Methods of treating ankylosing spondylitis using anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor |
| US20090081234A1 (en) * | 2000-08-07 | 2009-03-26 | George Heavner | Anti-tnf antibodies, compositions, methods and uses for treatment of depression and related conditions |
| US6902734B2 (en) | 2000-08-07 | 2005-06-07 | Centocor, Inc. | Anti-IL-12 antibodies and compositions thereof |
| US20110195063A1 (en) * | 2000-08-07 | 2011-08-11 | Centocor, Inc. | Methods of Treating Ankylosing Spondylitis Using Anti-TNF Antibodies and Peptides of Human Tumor Necrosis Factor |
| US20060018907A1 (en) * | 2000-08-07 | 2006-01-26 | Centocor, Inc. | Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor |
| JP2004536786A (ja) * | 2001-03-02 | 2004-12-09 | メディミューン，インコーポレイテッド | インテグリンαｖβ３拮抗薬を他の予防薬もしくは治療薬と組み合わせて投与することによる炎症性疾患または自己免疫疾患の予防または治療方法 |
| CA2385745C (en) | 2001-06-08 | 2015-02-17 | Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. | Methods of administering anti-tnf.alpha. antibodies |
| TWI334439B (en) * | 2001-08-01 | 2010-12-11 | Centocor Inc | Anti-tnf antibodies, compositions, methods and uses |
| EP1499352A4 (en) * | 2002-04-12 | 2006-10-11 | Medimmune Inc | ANTI-INTERLEUKIN-9 RECOMBINANT ANTIBODIES |
| US20030206898A1 (en) | 2002-04-26 | 2003-11-06 | Steven Fischkoff | Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug |
| US20040009172A1 (en) * | 2002-04-26 | 2004-01-15 | Steven Fischkoff | Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug |
| WO2004002417A2 (en) | 2002-06-28 | 2004-01-08 | Centocor, Inc. | Mammalian ch1 deleted mimetibodies, compositions, methods and uses |
| EP2336182A1 (en) | 2002-07-19 | 2011-06-22 | Abbott Biotechnology Ltd | Treatment of TNF alpha related disorders |
| US8715664B2 (en) | 2005-05-16 | 2014-05-06 | Abbvie Biotechnology Ltd. | Use of human TNFα antibodies for treatment of erosive polyarthritis |
| US20040033228A1 (en) | 2002-08-16 | 2004-02-19 | Hans-Juergen Krause | Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders |
| MY150740A (en) | 2002-10-24 | 2014-02-28 | Abbvie Biotechnology Ltd | Low dose methods for treating disorders in which tnf? activity is detrimental |
| US7285269B2 (en) | 2002-12-02 | 2007-10-23 | Amgen Fremont, Inc. | Antibodies directed to tumor necrosis factor |
| US7101978B2 (en) * | 2003-01-08 | 2006-09-05 | Applied Molecular Evolution | TNF-α binding molecules |
| EP1613273B1 (en) | 2003-04-11 | 2012-06-13 | MedImmune, LLC | Recombinant il-9 antibodies and uses thereof |
| US20040229878A1 (en) * | 2003-05-13 | 2004-11-18 | Depuy Spine, Inc. | Transdiscal administration of specific inhibitors of P38 kinase |
| EP2286804A1 (en) | 2003-05-13 | 2011-02-23 | DePuy Spine, Inc. | A method of treating degenerative disc disease |
| US7344716B2 (en) * | 2003-05-13 | 2008-03-18 | Depuy Spine, Inc. | Transdiscal administration of specific inhibitors of pro-inflammatory cytokines |
| US7429378B2 (en) * | 2003-05-13 | 2008-09-30 | Depuy Spine, Inc. | Transdiscal administration of high affinity anti-MMP inhibitors |
| US7553827B2 (en) * | 2003-08-13 | 2009-06-30 | Depuy Spine, Inc. | Transdiscal administration of cycline compounds |
| US8273347B2 (en) * | 2003-05-13 | 2012-09-25 | Depuy Spine, Inc. | Autologous treatment of degenerated disc with cells |
| US8361467B2 (en) * | 2003-07-30 | 2013-01-29 | Depuy Spine, Inc. | Trans-capsular administration of high specificity cytokine inhibitors into orthopedic joints |
| UA89481C2 (uk) | 2003-09-30 | 2010-02-10 | Центокор, Инк. | Еритропоетинові міметичні шарнірно-серцевинні міметитіла людини, композиції, способи та застосування |
| US8895540B2 (en) | 2003-11-26 | 2014-11-25 | DePuy Synthes Products, LLC | Local intraosseous administration of bone forming agents and anti-resorptive agents, and devices therefor |
| US7435799B2 (en) * | 2004-01-08 | 2008-10-14 | Applied Molecular Evolution | TNF-α binding molecules |
| WO2005097175A2 (en) * | 2004-03-31 | 2005-10-20 | Centocor, Inc. | Human glp-1 mimetibodies, compositions, methods and uses |
| TWI439284B (zh) | 2004-04-09 | 2014-06-01 | Abbvie Biotechnology Ltd | 用於治療ＴＮＦα相關失調症之多重可變劑量療法 |
| US7351739B2 (en) * | 2004-04-30 | 2008-04-01 | Wellgen, Inc. | Bioactive compounds and methods of uses thereof |
| GB0414054D0 (en) | 2004-06-23 | 2004-07-28 | Owen Mumford Ltd | Improvements relating to automatic injection devices |
| US7393662B2 (en) * | 2004-09-03 | 2008-07-01 | Centocor, Inc. | Human EPO mimetic hinge core mimetibodies, compositions, methods and uses |
| EP1807111A4 (en) * | 2004-10-08 | 2009-05-27 | Abbott Biotech Ltd | SYNCYTIAL RESPIRATORY VIRUS INFECTION (RSV) |
| AU2005299355A1 (en) | 2004-10-27 | 2006-05-04 | Medimmune, Llc | Modulation of antibody specificity by tailoring the affinity to cognate antigens |
| PE20061324A1 (es) | 2005-04-29 | 2007-01-15 | Centocor Inc | Anticuerpos anti-il-6, composiciones, metodos y usos |
| PT2452694T (pt) | 2005-06-30 | 2019-02-21 | Janssen Biotech Inc | Anticorpos anti-il-23, composições, métodos e utilizações |
| ES2346691T3 (es) * | 2005-08-02 | 2010-10-19 | Xbiotech, Inc | Diagnostico, tratamiento y prevencion de trastornos vasculares usando autoanticuerpos il-1alfa. |
| US20070041905A1 (en) * | 2005-08-19 | 2007-02-22 | Hoffman Rebecca S | Method of treating depression using a TNF-alpha antibody |
| EP1948206B1 (en) | 2005-08-30 | 2017-03-01 | Intrexon Actobiotics NV | Anti-tnf alpha producing lactic acid bacteria for the treatment of inflammatory bowel disease |
| EP1948235B1 (en) | 2005-11-01 | 2013-08-28 | AbbVie Biotechnology Ltd | Methods for determining efficacy of adalimumab in subjects having ankylosing spondylitis using ctx-ii and mmp3 as biomarkers |
| ES2807928T3 (es) | 2005-12-29 | 2021-02-24 | Janssen Biotech Inc | Anticuerpos anti-IL-23 humanos, composiciones, procedimientos y usos |
| CN101454025B (zh) | 2006-04-05 | 2014-01-01 | 艾伯维生物技术有限公司 | 抗体纯化 |
| US20080118496A1 (en) * | 2006-04-10 | 2008-05-22 | Medich John R | Uses and compositions for treatment of juvenile rheumatoid arthritis |
| US9605064B2 (en) | 2006-04-10 | 2017-03-28 | Abbvie Biotechnology Ltd | Methods and compositions for treatment of skin disorders |
| US9399061B2 (en) * | 2006-04-10 | 2016-07-26 | Abbvie Biotechnology Ltd | Methods for determining efficacy of TNF-α inhibitors for treatment of rheumatoid arthritis |
| US20090317399A1 (en) * | 2006-04-10 | 2009-12-24 | Pollack Paul F | Uses and compositions for treatment of CROHN'S disease |
| EP2666472A3 (en) | 2006-04-10 | 2014-04-02 | Abbott Biotechnology Ltd | Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis |
| EP2666478A3 (en) | 2006-04-10 | 2014-10-22 | AbbVie Biotechnology Ltd | Uses and compositions for treatment of psoriasis |
| US20080131374A1 (en) * | 2006-04-19 | 2008-06-05 | Medich John R | Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis |
| US20110008282A1 (en) * | 2006-05-15 | 2011-01-13 | Xbiotech, Inc. | IL-1alpha immunization induces autoantibodies protective against atherosclerosis |
| ES2374845T3 (es) * | 2006-05-22 | 2012-02-22 | Xbiotech, Inc | Tratamiento de cáncer con anticuerpos anti-il-1. |
| TWI527603B (zh) | 2006-06-30 | 2016-04-01 | 艾伯維生物技術有限責任公司 | 自動注射裝置 |
| AU2007272970C1 (en) | 2006-07-11 | 2013-01-10 | Roy C. Levitt | Rhinosinusitis prevention and therapy with proinflammatory cytokine inhibitors |
| US20080014285A1 (en) * | 2006-07-13 | 2008-01-17 | Di Mauro Thomas M | Method of treating neurodegenerative brain disease with a composite comprising superparamagnetic nanoparticles and a therapeutic compound |
| EP3669878A1 (en) | 2006-08-10 | 2020-06-24 | Roy C. Levitt | Localized therapy of lower airways inflammatory disorders with proinflammatory cytokine inhibitors |
| MX2009004351A (es) | 2006-10-27 | 2009-05-12 | Abbott Biotech Ltd | Anticuerpos anti-htnfalfa cristalinos. |
| JP2010522752A (ja) | 2007-03-29 | 2010-07-08 | アボット・ラボラトリーズ | 結晶性抗ヒトｉｌ−１２抗体 |
| EP2737907A3 (en) | 2007-05-07 | 2014-11-05 | MedImmune, LLC | Anti-icos antibodies and their use in treatment of oncology, transplantation and autoimmune disease |
| WO2008154543A2 (en) | 2007-06-11 | 2008-12-18 | Abbott Biotechnology Ltd. | Methods for treating juvenile idiopathic arthritis |
| EP2185201A4 (en) * | 2007-08-08 | 2011-11-30 | Abbott Lab | COMPOSITIONS AND METHODS FOR CRYSTALLIZING ANTIBODIES |
| US20090038182A1 (en) * | 2007-08-09 | 2009-02-12 | Lans Maris J | Footwear with built-in scale |
| US20090162351A1 (en) * | 2007-12-21 | 2009-06-25 | Depuy Spine, Inc. | Transdiscal administration of inhibitors of p38 MAP kinase |
| US8986696B2 (en) * | 2007-12-21 | 2015-03-24 | Depuy Mitek, Inc. | Trans-capsular administration of p38 map kinase inhibitors into orthopedic joints |
| JP5570998B2 (ja) * | 2007-12-31 | 2014-08-13 | バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング | ＴＮＦαに対する抗体 |
| CN101969929B (zh) * | 2008-01-15 | 2014-07-30 | Abbvie德国有限责任两合公司 | 粉末状蛋白质组合物及其制备方法 |
| ES2576681T3 (es) * | 2008-05-30 | 2016-07-08 | Xbiotech, Inc | Anticuerpos IL-1 alfa |
| US8242074B2 (en) * | 2008-09-12 | 2012-08-14 | Xbiotech, Inc. | Modulation of the amount or function of pathogenic CD14+CD16+ monocytes |
| US8415291B2 (en) | 2008-10-31 | 2013-04-09 | Centocor Ortho Biotech Inc. | Anti-TNF alpha fibronectin type III domain based scaffold compositions, methods and uses |
| BRPI0921845A2 (pt) | 2008-11-12 | 2019-09-17 | Medimmune Llc | formulação aquosa estéril estável, forma de dosagem unitária farmacêutica, seringa pré-carregada, e, métodos para tratar uma doença ou distúrbio, para tratar ou prevenir rejeição, para esgotar células t que expressam icos em um paciente humano, e para interromper arquitetura central germinal em um órgão linfóide secundário de um primata |
| CN102458517B (zh) | 2009-04-29 | 2014-07-23 | 阿布维生物技术有限公司 | 自动注射装置 |
| NZ706187A (en) | 2009-10-26 | 2016-09-30 | Nestec Sa | Assays for the detection of anti-tnf drugs and autoantibodies |
| KR101780210B1 (ko) | 2009-12-15 | 2017-09-21 | 애브비 바이오테크놀로지 리미티드 | 자동 주사 디바이스용 개선된 발사 버튼 |
| US9023997B2 (en) | 2010-01-20 | 2015-05-05 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Anti-ILT5 antibodies and ILT5-binding antibody fragments |
| WO2011091181A1 (en) | 2010-01-20 | 2011-07-28 | Tolerx, Inc. | Immunoregulation by anti-ilt5 antibodies and ilt5-binding antibody fragments |
| JP6324720B2 (ja) | 2010-06-18 | 2018-05-16 | エックスバイオテク, インコーポレイテッドXbiotech, Inc. | 関節炎治療 |
| EP3443985B1 (en) | 2010-08-23 | 2020-12-16 | XBiotech, Inc | Treatment for neoplastic diseases |
| CN103299190B (zh) | 2010-10-18 | 2017-02-15 | 雀巢产品技术援助有限公司 | 确定抗药物抗体同种型的方法 |
| AR084210A1 (es) * | 2010-12-08 | 2013-05-02 | Abbott Lab | PROTEINAS DE UNION AL TNF-a |
| JP6478214B2 (ja) | 2011-01-24 | 2019-03-06 | アッヴィ バイオテクノロジー リミテッド | オーバーモールド把持面を有する自動注射器 |
| KR20170097789A (ko) | 2011-01-24 | 2017-08-28 | 애브비 바이오테크놀로지 리미티드 | 주사기로부터 니들 실드의 제거 및 자동 주사 디바이스들 |
| AU2012254150B2 (en) | 2011-02-17 | 2015-08-13 | Société des Produits Nestlé S.A. | Assays for detecting autoantibodies to anti-TNFalpha drugs |
| US8658171B2 (en) | 2011-02-28 | 2014-02-25 | Livzon Mabpharm Inc. | Humanized anti-TNFα antibodies |
| CN102675460B (zh) | 2011-02-28 | 2015-08-19 | 珠海市丽珠单抗生物技术有限公司 | 抗肿瘤坏死因子α的人源化抗体 |
| US9724409B2 (en) | 2011-04-01 | 2017-08-08 | Xbiotech, Inc. | Treatment of inflammatory skin disease |
| EP2702077A2 (en) | 2011-04-27 | 2014-03-05 | AbbVie Inc. | Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins |
| WO2013006810A1 (en) | 2011-07-06 | 2013-01-10 | Nestec Sa | Assays for detecting neutralizing autoantibodies to biologic therapy with tnf alpha |
| WO2013043973A2 (en) | 2011-09-23 | 2013-03-28 | Xbiotech, Inc. | Cachexia treatment |
| AR088514A1 (es) * | 2011-10-24 | 2014-06-18 | Abbvie Inc | Inmunoligantes biespecificos dirigidos contra tnf |
| SG11201401774VA (en) * | 2011-10-24 | 2014-10-30 | Abbvie Inc | Immunobinders directed against tnf |
| WO2013158273A1 (en) | 2012-04-20 | 2013-10-24 | Abbvie Inc. | Methods to modulate c-terminal lysine variant distribution |
| US9067990B2 (en) | 2013-03-14 | 2015-06-30 | Abbvie, Inc. | Protein purification using displacement chromatography |
| US9505833B2 (en) | 2012-04-20 | 2016-11-29 | Abbvie Inc. | Human antibodies that bind human TNF-alpha and methods of preparing the same |
| WO2013158279A1 (en) | 2012-04-20 | 2013-10-24 | Abbvie Inc. | Protein purification methods to reduce acidic species |
| US9249182B2 (en) | 2012-05-24 | 2016-02-02 | Abbvie, Inc. | Purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography |
| EP2890782A1 (en) | 2012-09-02 | 2015-07-08 | AbbVie Inc. | Methods to control protein heterogeneity |
| US9512214B2 (en) | 2012-09-02 | 2016-12-06 | Abbvie, Inc. | Methods to control protein heterogeneity |
| US9545441B2 (en) | 2012-09-18 | 2017-01-17 | Xbiotech, Inc. | Treatment of diabetes |
| SG11201507365VA (en) | 2013-03-14 | 2015-10-29 | Abbvie Inc | Low acidic species compositions and methods for producing the same using displacement chromatography |
| WO2014151901A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-25 | Abbvie Inc. | Improvement of mammalian cell culture performance through surfactant supplementation of feed media |
| US9017687B1 (en) | 2013-10-18 | 2015-04-28 | Abbvie, Inc. | Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography |
| WO2014151878A2 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-25 | Abbvie Inc. | Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosacharides |
| US8921526B2 (en) | 2013-03-14 | 2014-12-30 | Abbvie, Inc. | Mutated anti-TNFα antibodies and methods of their use |
| EP2836515A1 (en) | 2013-03-14 | 2015-02-18 | AbbVie Inc. | Low acidic species compositions and methods for producing and using the same |
| KR102216003B1 (ko) | 2013-03-15 | 2021-02-16 | 얀센 바이오테크 인코포레이티드 | 재조합 단백질에서 c-말단 라이신, 갈락토스 및 시알산 함량을 제어하기 위한 제조 방법 |
| US9598667B2 (en) | 2013-10-04 | 2017-03-21 | Abbvie Inc. | Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins |
| US9085618B2 (en) | 2013-10-18 | 2015-07-21 | Abbvie, Inc. | Low acidic species compositions and methods for producing and using the same |
| US8946395B1 (en) | 2013-10-18 | 2015-02-03 | Abbvie Inc. | Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography |
| US9181337B2 (en) | 2013-10-18 | 2015-11-10 | Abbvie, Inc. | Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same |
| US20150139988A1 (en) | 2013-11-15 | 2015-05-21 | Abbvie, Inc. | Glycoengineered binding protein compositions |
| WO2015198320A1 (en) | 2014-06-24 | 2015-12-30 | Insight Biopharmaceuticals Ltd. | Methods of purifying antibodies |
| US20170226552A1 (en) | 2014-07-03 | 2017-08-10 | Abbvie Inc. | Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using cobalt |
| US20160185848A1 (en) | 2014-07-09 | 2016-06-30 | Abbvie Inc. | Methods for modulating the glycosylation profile of recombinant proteins using sugars |
| EP3536705A1 (en) | 2014-12-05 | 2019-09-11 | Société des Produits Nestlé S.A. | Isolated soluble alpha-4 integrin, beta-7 integrin and alpha-4/beta-7 heterodimer integrin |
| EP3078675A1 (en) | 2015-04-10 | 2016-10-12 | Ares Trading S.A. | Induction dosing regimen for the treatment of tnf alpha mediated disorders |
| US10465003B2 (en) | 2016-02-05 | 2019-11-05 | Janssen Biotech, Inc. | Anti-TNF antibodies, compositions, methods and use for the treatment or prevention of type 1 diabetes |
| JOP20190162A1 (ar) | 2016-12-30 | 2019-06-27 | Biocad Joint Stock Co | تركيبة صيدلانية مائية من جسم مضاد لـ tnf? أحادي النسيلة معاود الارتباط الجيني |
| MA47362A (fr) | 2017-01-30 | 2019-12-04 | Janssen Biotech Inc | Anticorps anti-tnf, compositions et méthodes pour le traitement du rhumatisme psoriasique actif |
| JP2020506947A (ja) | 2017-02-07 | 2020-03-05 | ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド | 活動性強直性脊椎炎を治療するための抗ｔｎｆ抗体、組成物、及び方法 |
| CA3053231A1 (en) | 2017-02-16 | 2018-08-23 | Xbiotech Inc. | Treatment of hidradenitis suppurativa |
| BR112021013903A2 (pt) | 2019-01-15 | 2021-09-21 | Janssen Biotech, Inc. | Composições e métodos de anticorpos anti-tnf para o tratamento da artrite idiopática juvenil |
| KR20210118878A (ko) | 2019-01-23 | 2021-10-01 | 얀센 바이오테크 인코포레이티드 | 건선성 관절염의 치료 방법에 사용하기 위한 항-tnf 항체 조성물 |
| CA3133381A1 (en) | 2019-03-14 | 2020-09-17 | Janssen Biotech, Inc. | Manufacturing methods for producing anti-tnf antibody compositions |
| JP2022526881A (ja) | 2019-03-14 | 2022-05-27 | ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド | 抗ｔｎｆ抗体組成物を産生するための方法 |
| CN113840837A (zh) | 2019-03-14 | 2021-12-24 | 詹森生物科技公司 | 用于产生抗tnf抗体组合物的方法 |
| BR112021023295A2 (pt) | 2019-05-23 | 2022-02-08 | Janssen Biotech Inc | Método de tratamento de doença inflamatória intestinal com uma terapia de combinação de anticorpos para il-23 e tnf-alfa |
| WO2020245676A1 (en) | 2019-06-03 | 2020-12-10 | Janssen Biotech, Inc. | Anti-tnf antibody compositions, and methods for the treatment of psoriatic arthritis |
| CN114173873A (zh) | 2019-06-03 | 2022-03-11 | 詹森生物科技公司 | 用于治疗活动性强直性脊柱炎的抗tnf抗体、组合物和方法 |
| WO2020263450A1 (en) | 2019-06-25 | 2020-12-30 | Procisedx Inc. | Detection of anti-tnf alpha drug biologics and anti-drug antibodies |
| WO2021028752A1 (en) | 2019-08-15 | 2021-02-18 | Janssen Biotech, Inc. | Anti-tfn antibodies for treating type i diabetes |
| CA3203308A1 (en) | 2020-11-30 | 2022-06-02 | Enigma Biointelligence, Inc. | Non-invasive assessment of alzheimer's disease |
| EP4261222A1 (en) | 2020-12-09 | 2023-10-18 | HK inno.N Corporation | ANTI-OX40L ANTIBODY, ANTI-OX40L/ANTI-TNFalpha BISPECIFIC ANTIBODY, AND USES THEREOF |
| IL309997A (en) | 2021-07-09 | 2024-03-01 | Janssen Biotech Inc | Production methods for the production of anti-TNF antibody compositions |
| AU2022308201A1 (en) | 2021-07-09 | 2024-02-22 | Janssen Biotech, Inc. | Manufacturing methods for producing anti-tnf antibody compositions |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0780914B2 (ja) * | 1984-04-02 | 1995-08-30 | 旭化成工業株式会社 | ヒト腫瘍壊死因子に対する抗体 |
| JPS60209528A (ja) * | 1984-04-03 | 1985-10-22 | Asahi Chem Ind Co Ltd | ヒト腫瘍壊死因子の精製方法 |
| JPS6163698A (ja) * | 1984-09-05 | 1986-04-01 | Asahi Chem Ind Co Ltd | 生理活性物質に対するモノクロ−ナル抗体とそれを用いる生理活性物質の精製方法 |
| IL73883A (en) * | 1984-12-20 | 1990-12-23 | Yeda Res & Dev | Monoclonal antibodies against tnf-alpha,hybridomas producing them and method for the purification of tnf-alpha |
| US4870163A (en) * | 1985-08-29 | 1989-09-26 | New York Blood Center, Inc. | Preparation of pure human tumor necrosis factor and hybridomas producing monoclonal antibodies to human tumor necrosis factor |
-
1986
- 1986-09-13 DE DE19863631229 patent/DE3631229A1/de not_active Withdrawn
-
1987
- 1987-09-08 US US07/094,289 patent/US5231024A/en not_active Expired - Fee Related
- 1987-09-11 DK DK473887A patent/DK473887A/da not_active Application Discontinuation
- 1987-09-11 FI FI873948A patent/FI91421C/fi not_active IP Right Cessation
- 1987-09-11 EP EP87113278A patent/EP0260610B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-09-11 DE DE87113278T patent/DE3787241D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1987-09-11 ES ES87113278T patent/ES2058083T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1987-09-11 JP JP62226755A patent/JP2837160B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1987-09-11 ZA ZA876807A patent/ZA876807B/xx unknown
- 1987-09-11 CA CA000546724A patent/CA1337717C/en not_active Expired - Fee Related
-
1994
- 1994-02-28 BG BG098602A patent/BG62229B2/bg unknown
-
1996
- 1996-12-27 JP JP8349507A patent/JP2758394B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1997
- 1997-05-12 BR BR1100843-1A patent/BR1100843A/pt active IP Right Grant
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI873948A (fi) | 1988-03-14 |
| FI873948A0 (fi) | 1987-09-11 |
| JP2837160B2 (ja) | 1998-12-14 |
| EP0260610A2 (de) | 1988-03-23 |
| BR1100843A (pt) | 2000-04-18 |
| JPH09294584A (ja) | 1997-11-18 |
| FI91421C (fi) | 1994-06-27 |
| DK473887D0 (da) | 1987-09-11 |
| FI91421B (fi) | 1994-03-15 |
| US5231024A (en) | 1993-07-27 |
| JP2758394B2 (ja) | 1998-05-28 |
| CA1337717C (en) | 1995-12-12 |
| JPS63157977A (ja) | 1988-06-30 |
| DE3787241D1 (de) | 1993-10-07 |
| EP0260610A3 (en) | 1989-01-11 |
| EP0260610B1 (de) | 1993-09-01 |
| ES2058083T3 (es) | 1994-11-01 |
| DK473887A (da) | 1988-03-11 |
| ZA876807B (en) | 1989-05-30 |
| DE3631229A1 (de) | 1988-03-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| BG62229B2 (bg) | Моноклонални антитела срещу човешки туморнекротизиращ фактор и използването им | |
| US5047507A (en) | Monoclonal antibodies with specificity affinity for human carcinoembryonic antigen | |
| JPH0596A (ja) | ヒト腫瘍致死因子αに対するモノクローナル抗体 | |
| JPS62187417A (ja) | 緑膿菌血清型に対する交さ反応性かつ交さ防御性単クロ−ン性抗体 | |
| JPH02500004A (ja) | 非還元・非酵素的糖鎖形成蛋白に対するモノクローナル抗体 | |
| EP0476226B1 (en) | Monoclonal antibody against human IgE | |
| Ball et al. | Isolation and characterization of monoclonal antibodies to (Na++ K+)-ATPase | |
| JPH0672158B2 (ja) | 精製されたヒトマクロファージ遊走阻止因子 | |
| EP0487610B1 (en) | Prohormone cleavage site blocking antibody | |
| US5053492A (en) | Immunopurification using monoclonal antibodies to Mojave toxin | |
| Bankert et al. | Screening and replica plating of anti-hapten hybridomas with a transfer template hemolytic spot assay | |
| US4803167A (en) | Monoclonal antidigoxtin antibodies | |
| JP3745411B2 (ja) | モノクローナル抗体 | |
| Marhaug et al. | Monoclonal hybridoma antibodies to human amyloid related protein SAA. | |
| RU2049818C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток мыши mus musculus l., испольуемый для получения моноклональных антител к дигоксину | |
| RU2117042C1 (ru) | Штамм культивируемых гибридных клеток животного mus musculus - продуцент моноклонального антитела к термостабильному компоненту капсулоподобной субстанции возбудителя мелиоидоза | |
| US5352584A (en) | Monoclonal antibodies which bind (E)-5- (2-bromovinyl)-arabinofuranosyluracil and diagnostic methods based thereon | |
| RU2003682C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS MUSCULUS L. - продуцент моноклональных антител к @ -легким цеп м иммуноглобулинов человека | |
| EP0392976A1 (en) | Monoclonal antibodies to tetracyclic compounds, processes for their production, and applications | |
| JPH0690784A (ja) | モノクローナル抗体及びその利用 | |
| JPS61249999A (ja) | モノクロ−ナル抗体 | |
| Bedi et al. | Monoclonal Antibodies to Rat Plasma Kininogen | |
| JPH04248991A (ja) | ヒトガラクト−ス転移酵素に特異的なモノクローナル抗体及び該抗体を産生するハイブリドーマ | |
| JPH0488997A (ja) | モノクローナル抗体、これを産生するハイブリドーマ細胞株およびこれを用いた標識法 | |
| JPH02177897A (ja) | モノクローナル抗体及び該抗体を使用する生物質の免疫測定法 |