FI91421C - Menetelmä ihmisen kasvainkuoliotekijän (TNF) kanssa reagoivan monoklonaalisen vasta-aineen valmistamiseksi ja vasta-ainetta tuottava hybridisolulinja - Google Patents

Menetelmä ihmisen kasvainkuoliotekijän (TNF) kanssa reagoivan monoklonaalisen vasta-aineen valmistamiseksi ja vasta-ainetta tuottava hybridisolulinja Download PDF

Info

Publication number
FI91421C
FI91421C FI873948A FI873948A FI91421C FI 91421 C FI91421 C FI 91421C FI 873948 A FI873948 A FI 873948A FI 873948 A FI873948 A FI 873948A FI 91421 C FI91421 C FI 91421C
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
tnf
antibody
antibodies
producing
cells
Prior art date
Application number
FI873948A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI91421B (fi
FI873948A0 (fi
FI873948A (fi
Inventor
Achim Moeller
Franz Emling
Original Assignee
Basf Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Basf Ag filed Critical Basf Ag
Publication of FI873948A0 publication Critical patent/FI873948A0/fi
Publication of FI873948A publication Critical patent/FI873948A/fi
Publication of FI91421B publication Critical patent/FI91421B/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI91421C publication Critical patent/FI91421C/fi

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Description

i 91421
Menetelma ihmisen kasvainkuoliotekijan (TNF) kanssa rea-goivian monoklonaalisen vasta-aineen valmistamiseksi ja vasta-ainetta tuottava hybridisolulinja 5 Keksintb koskee erittain spesifista monoklonaalista vasta-ainetta (mAK) TNF:aa vastaan syntetisoivaa hybridoo-masolulinjaa, sekS menetelmaa TNF:n vastaisen monoklonaalisen vasta-aineen valmistamiseksi. Kuvataan myOs menetelma mainitun hybridoomasolulinjan valmistamiseksi.
10 Hiiren myeloomasolujen fuusio immunisoitujen hiiri- en pernasoluihin [Kdhler ja Milstein, Nature 256 (1975) 495 - 497] oli ensimmainen osoitus mahdollisuudesta saada jatkuvia solulinjoja, jotka tuottavat yhdenlaatuisia (ns. monoklonaalisia) vasta-aineita. Sittemmin on suoritettu 15 lukuisia yrityksia valmistaa erilaisia hybridisoluja (ns. hybridoomeja) ja kayttaa niiden muodostamia vasta-aineita erilaisiin tieteellisiin tutkimuksiin (vrt. Current Topics in Microbiology and Immunology, Vol. 81: Lymphocyte Hybri-domas, Springer Verlag, 1978).
20 Biologisten ominaisuuksiensa ansiosta vaikuttaa TNF
kiinnostavalta ja lupaavalta aineelta kaytettavaksi kas-vainsairauksien hoidossa. Yksityiskohtaiset tutkimukset kariutuivat aluksi TNF:n aarimmaisen pieneen pitoisuuteen luonnollisissa soluissa. Vasta geeniteknologian kehityksen 25 ja mahdollisuuden kloonata ihmisesta peraisin olevia pro-teiineja alemmissa organismeissa mydta tuli mahdolliseksi ilmentaa myOs TNF mikro-organismeissa. Hyvin puhtaassa muodossa tallå rekombinantti-TNF:lia (rTNF) on samat vai-kutukset kuin luonnollisella TNF:lia (nTNF).
30 Tieteellisten tutkimusten kuten myiis hoidollisen kaytbn mydta syntyy tarve maarittaa ei ainoastaan TNFrn aktiivisuus vaan itse TNF-proteiini. Biologisen aktiivi-suuden maaritys on kuitenkin vaivalloinen ja tybias suo-rittaa.
35 Keksintd koskee menetelmaa luonnon kasvainkuoliote- kijén, TNF:n, kanssa reagoivan vasta-aineen valmistamisek- 2 si, jolloin menetelmaile on tunnusomaista, etta viljeliaan solulinjaa ECACC 87 050 801 in vitro tai in vivo ja vasta-aine eristetaan puhdistamalla soluviljelman in vitro -su-pernatanteista. KeksintO koskee myOs vasta-ainetta tuotta-5 vaa hybridisolulinjaa ECACC 87 050 801.
KeksinnOn mukainen menetelma monoklonaalisten vas-ta-aineiden valmistamiseksi on sinansa tunnettu (Monoclonal Antibodies, Kennet et al.. Plenum Press, s. 363 -419).
10 BALB/c-hiiria immunosoitiin ruiskuttamalla niihin toistuvasti pieni maara puhdasta, E. colissa tuotettua re-kombinantti-TNF:aa. Heti kun seerumista oli osoitettavissa riittavasti vasta-aineita, fuusioitiin naiden eiainten pernasolut myeloomasoluihin ja viljeltiin saatuja hybride-15 ja.
Yksittaisista viljelmista maaritettiin niiden si-saitamien TNF:lie spesifisten vasta-aineiden pitoisuutta valikointitestin avulla.
Soveltuvista hybridoomista tuotettiin rajaavan lai-20 mennoksen menetelmaa kloonauksessa kayttaen yksittaisso-luista muodostuneita pesakkeita. TS11S tavalla saatiin nelja hybridisolulinjaa, jotka erittivat eri ominaisuuk-silla varustettuja monoklonaalisia vasta-aineita, nimit-tain hybridisolulinjat AM-1, AM-114, AM-195 ja AM-199.
25 NAma solulinjat on talletettu talletuslaitokseen European
Collection of Animal Cell Cultures, ECACC, PHLS Centre for Applied Microbiology and Research, Porton Down, Salisbury SP4 0J6, Englanti, numeroilla 87 050 801, 87 050 802, 87 050 803 ja 87 050 804.
30 Naita hybridisoluja tuotettiin viljelemaiia niita seka in vitro etta in vivo. Korkea lisaantymisnopeus in vivo teki tasta viljelytavasta erityisen edullisen. Tata silmaiia pitaen ruiskutettiin Pristan®;Ha esikasiteltyi-hin BALB/c-hiiriin vatsaontelonsisaisesti yksittaisia hyb-35 ridikantoja. Muodostunut askiittikasvain poistettiin noin 8-10 paivan kuluttua.
91421 3 TNF:n vastaisten monoklonaalisten vasta-aineiden eristys suoritettiin joko in vitro soluviljelmien superna-tantteja tai askiittinestetta puhdistamalla. Puhdistus suoritettiin Bruchin et al. [J. Immunol. Methods 53 (1982) 5 313 - 319] menetelnrån mukaan.
Vasta-aineiden molekyyliominaisuuksia luonnehdit-tiin seuraavasti:
Puhdistettujen vasta-aineiden molekyylipaino oli 150 000 daltonia tai enemman (maaritys polyakryyliamidi-10 geelielektroforeesilla).
Vasta-aineet AM-1, AM-114 ja AM-199 ovat tyyppia IgGl, jolloin raskas ketju on gamma-1. Vasta-aine AM-195 on tyyppia IgG3, jolloin sen raskas ketju on gamma-3.
Kaikilla vasta-aineilla kevyt ketju on kappa (maaritys 15 ELISArlla alatyyppispesifisia vasta-aineita kayttaen).
Monoklonaalisilla vasta-aineilla on suuruusluokkaa yli 109 1/mol oleva korkea affiniteettivakio TNFraa vas-taan, eika niilia ilmene ristikkaisreaktiota lymfotoksii-nin kanssa.
20 Yksittaisten vasta-aineiden sitoutumiskohtien kes- kinaista sijaintia TNF-molekyylissa tutkittiin vasta-aineiden kilpailevalla sitoutumisella.
TNF immobilisoitiin mikrotiitterilevylle. Biotii-nilla leimattua vasta-ainetta inkuboitiin muiden, leimaa-25 mattomien vasta-aineiden kanssa. Tutkittiin, mind yhdis-telmana vasta-aineet kilpailevat keskenaan samoista sitou-tumispaikoista TNF-molekyylissa. Vasta-aine AM-195 sitou-tuu toiseen epitooppiin kuin AM-1 ja AM-199. AM-114:n suh-teen oli havaittavissa lievaa kilpailua.
30 TNF:n aktiivisuus maaritettiin tavanomaisella syto- toksisuusmaaritykselia. Rekombinantti-TNF:aa tai luonnol-lista TNFraa ja vasta-aineylimaaraa inkuboitiin. Vasta-aine AM-195 neutraloi kummankin TNF-valmisteen sytotoksi-sen aktiivisuuden. AM-114:n kohdalla havaittiin kymmenen 35 kertaa heikompi neutraloiva vaikutus. Tama havainto selit-tyy silia olettamuksella, etta antigeeni kasittaa eri alu- 4 eita, jotka reagoivat eri tavalla eri vasta-aineiden kans-sa: vain monoklonaalinen vasta-aine AM-195 reagoi biolo-gista aktiivisuutta sisaltavan alueen kanssa.
Vasta-aineiden sitoutumista ja TNF:n neutraloitu-5 mista koskevista koetuloksista voidaan vetaa se johtopaa-tdis, etta nailia monoklonaalisilla vasta-aineilla voidaan tunnistaa ja maaritelia vahintaan kolme eri TNF:n epitoop-pia.
Kaytettaessa vasta-aineita tietyn antigeenin osoit-10 tamiseen voidaan periaatteessa kayttaa kahta eri maaritys-menetelmaa. Ellei antigeeni sisaiia luonnollista leimaa, on kumpaakin menettelya kaytettaessa jompi kumpi komponen-teista leimattava. Leimataan joko antigeeni, esimerkiksi radioaktiivisella leimausisotoopilla, jolloin kaytetaan 15 yleensa kilpailevan sitoutumisen mååritysmenetelmaa, kuten hyvin tunnettua radioimmuunianalyysia (RIA), tai vasta-aine, jolloin edullinen maaritysmenetelma on immuuniradio-metrinen maaritys (IRMA), entsyymikytketty immuunisorptio-analyysi (ELISA) tai kemiluminesenssimaaritys. Naiden eri 20 maaritysmenetelmien ja menetelmamuunnosten yksityiskohdat ovat alan ammattimiehille tuttuja.
Toinen mahdollisuus on liittaa vasta-aineisiin pie-nimolekyylisia hapteeneja, jotka puolestaan voidaan osoit-taa spesifisesti toisella reaktiolla. Esimerkiksi strepta-25 vidiinin kanssa reagoiva biotiini on kayttOkelpoinen. Taman vuoksi kaikki edelia mainitut vasta-aineet leimattiin pitkaketjuisella biotiinilla ja tehtiin jatkovaiheessa nakyviksistreptavidiini-piparjuuriperoksidaasikompleksil-la.
30 Seuraavassa kuvattu maaritys havainnollistaa kiin- teafaasi-sandwich-ELISA:aa. Leimaamaton vasta-aine (AM-1 tai AM-199) adsorboitiin passiivisesti jollekin pinnalle, esim. mikrotiitterilevyn kuoppapinnoille, sidottiin kova-lenttisesti ja pinta salvattiin epaspesifisilta sitoutumi-35 silta tunnetulla tavalla. TNF:aa sisaitavat naytteet ja biotiinilla leimattu vasta-aine (AM-195) pipetoitiin kuop- 91421 5 piin ja levyja inkuboitiin. Voitiin todeta, etta TNF on osoitettavissa naytteista erotuskynnyksen ollessa 10 pg/ml. rTNF:n spesifinen aktiivisuus on hiiri-L929-ko-keen mukaan 8,0 x 106 U/mg, joten taiia ELISA:11a saatlln 5 osoitetuksi pitolsuus 0,1 yksikkoa TNF:aa/ml. Western blot -maaritykselia voitiin osoittaa, ettei vasta-aineilla ole ristikkaisreaktioita minkaan ihmisseerumin aineosan kans-sa. Taten keksinnOn mukaisesti valmistettua vasta-ainetta voidaan kayttaa TNF:n maaritykseen TNF:lia hoidettujen 10 potilaiden seerumista. Se soveltuu edelleen ajankohtaisiin diagnostisiin kayttOtarkoituksiin, esimerkiksi seerumin ja plasman TNF-peilien tutkimiseen.
Koska keksinnOn mukaisesti valmistettu vasta-aine inaktivoi TNF:aa (vrt. esimerkki 6), sitå voidaan kayttaa 15 sellaisten sairauksien hoidossa, joissa veren TNF-pitoi-suus on kohonnut kuten esimerkiksi verenmyrkytyssokki. Edelleen voi olla perusteltua kayttaa TNF-vasta-aineita seuraavien sairauksien hoidossa: elimensiirron yhteydessa ilmeneva hylkiminen, allergiat, autoimmuunisairaudet, reu-20 maattiset sairaudet, sokkikeuhko, tulehdukselliset luu-sairaudet, veren hyytymishairiOt, palovammat. Néihin kayt-tOihin soveltuvat erityisesti sellaiset vasta-aineet, jot-ka neutraloivat TNF:n sytotoksisen aktiivisuuden, kuten keksinnOn mukaisesti saatava vasta-aine.
25 Immuuniaffiniteettikromatografian avulla voidaan myOs eristaa TNF:aa sita sisåltåvasta biologisesta mate-riaalista. Tata vårten vasta-aineet sidotaan tunnetuilla menetelmilia geelimatriisiin, johon lisåtaan TNF:n sisai-tåvå liuos.
30 Seuraavien esimerkkien on tarkoitus selittaa kek- sintoa lahemmin:
Esimerkki 1
Monoklonaalisten vasta-aineiden valmistus a) BALB/c-hiirien immunisointi 35 Naaraspuolisia BALB/c-hiiria immunisoitiin ruiskut- tamalla niihin vatsaontelon sisMisesti (ip) 30 pg rTNF:aa 6 0,5 ml:ssa taydellista Freundin adjuvanttia. 14 palvan kuluttua rulskutettlln eiaimiln uudelleen vatsaontelon sisalsesti 30 pg antigeenia epataydelllsessa Freundin ad-juvantissa. Edelleen 14 paivdn vaieln suoritettiin kaksl 5 Immunisointia vatsaontelonsisaisestl kulloinkin 30 pg:lla antigeenia. Kolmen palvan kuluttua viimeisesta antigeeni-annoksesta poistettiin kahdelta eiaimelta perna.
b) Pernasolususpension valmistus
Poistetuista pernoista valmistettiin solususpensio 10 puristamalla elimet ruostumattomasta teraksesta valmiste-tun seulan (silmakoko 100 pm) lapi. Solut suspendoitiin Dulbeccon minimivaatimuskasvualustaan (DMEM), johon oli lisatty 4,5 g/1 glukoosia, 10 mM glutamiinia, 1 000 yksik-ktia/ml penisilliinia, 100 pg/ml streptomysiinia ja 15 % 15 vasikansikidseerumia. Solut pestiin kolmeen kertaan kasvu- alustalla ja suspendoitiin sitten uudelleen halutuksi pi-toisuudeksi samaan kasvualustaan. Enimmakseen saatlin yh-desta pernasta noin 5 - 10 x 107 solua.
c) Myeloomasolujen viljely 20 Fuusiopartnerina kaytettiin myeloomasoluja
Spl/0-Agl4 (ATCC nro CRL 8287). Solut ovat vastustuskykyi-sia 20 pg:n/ml 8-atsaguaniinipitoisuuden suhteen eivatka kykene kasvamaan hypoksantiinia, aminopteriiniS ja tymi-diinia sisaitavassa kasvualustassa (HAT). Niita viljeltiin 25 DMEM-kasvualustassa, johon oli lisatty 4,5 g/1 glukoosia, 10 mM glutamiinia, 1 000 yksikkda/ml penisilliinia, 100 pg/ml streptomysiinia ja 15 %. vasikansikidseerumia (tdy-dellinen kasvualusta). Fuusioon kaytettiin logaritmisessa kasvuvaiheessa olevia soluja.
30 d) Solujen fuusiointi
Pernasolususpensio sekoitettiin myeloomasoluihin suhteessa 5:1 ja seos pestiin seerumivapaalla DMEM:lia. Pestyt solut suspendoitiin uudelleen 30 ml:aan seerumiva-paata DMEM:aa ja suspensiota sentrifugoitiin 50 ml:n poly-35 propyleenikartioputkessa 800 kierr./min 5 minuutin ajan.
91421 7
Supernatantti kokonaisuudessaan imettiin pois. Pelletille kaadettiin hyvin varovaisesti 0,5 ml 50-%:ista polyetylee-niglykoliliuosta (PEG, Boehringen), jossa PEG:n molekyyli-palno oli 2 000, solupellettl sekoitettiin kevyesti naput-5 tamalla PEG:hen ja seosta sentrifugoitiin sltten 1 000 kierr./min kolmen mlnuutln ajan. Sen jalkeen lisattiin 10 ml DMEM:aa, solupellettl suspendoltlln slihen varovaisesti ja sentrifugoitiin sitten 2 000 kierr./min kolmen minuutin ajan. Solupellettl suspendoitiin uudelleen HAT-kasvualus-10 taan pitoisuudeksi 2 x 106 solua/ml ja jaettiin 0,2 ml:n tilavuuksina mikrotiitterilevyille. Kuoppiin oli edellise-na påivånå siirrostettu noin 50 000 yksitumaista vatsakal-vosolua, edullisesti makrofageja, sydttdsoluiksi.
e) Hybridoomien valikointi ja viljely 15 Solujen fuusioiduttua niita viljeltiin Littlefiel- din [Science 145 (1964) 709 - 712] menetelmén mukaan HAT-kasvualustassa 37 °C:ssa kosteutetussa 5 %:n C02-ilmakehås-sa. Viljelmia ravittiin korvaamalla kahdesti viikossa puo-let kasvualustasta tuoreella HAT-kasvualustalla. Muutamien 20 viikkojen kuluttua testattiin hybridoomasoluviljelmien viljelmasupernatantteja ihmisen kasvainkuoliotekijan vas-taisen aktiivisuuden suhteen. Valikointitestissa positii-visen tuloksen antaneet hybridoomat valittiin kloonatta-vaksi. Tåsså hybridoomeihin sovellettiin rajaavan laimen-25 tamisen menetelmaa, jossa mikrotiitterilevyn 96 kuoppaan siirrostettiin keskimaarin 0,5 solua/kuoppa ja annettiin 105 hiiren kateenkorvasolua syOttdsoluiksi. Talla kloonaus-menettelylia valittuja vasta-aineita tuottavia soluja viljeltiin, minka jaikeen ne pakastettiin sitten ja sailytet-30 tiin nestetypessa taydellisessa kasvualustassa, joka sisalsi 10 % vasikansikidseerumia seka 10 % dime tyylisul fok-sidia.
f) Spesifisten TNF-vasta-aineiden seulontatesti rTNF laimennettiin pitoisuuteen 3 pg/ml PBS:lia 35 (fosfaatilla puskuroitu keittosuolaliuos, jossa on 0,8 % 8
NaCl:a 0,02 molaarisessa natriumfosfaatissa pH:n ollessa saadetty 7,4: aan HC1:lia tai NaOHrlla). Mikrotiitterilevy-jen® kuoppiin asetettiin kuhunkin 0,1 ml tata liuosta. Kahden tunnin huoneen lampdtilassa inkuboinnin jaikeen 5 supernatantti imettiin pois, ja kuoppia kasiteltiin vahin-taan 30 minuutin ajan 0,3 ml:11a l-%:ista naudanseerumi-albumiinia (Sigma, RIA-laatu). Sitten supernatantti pois-tettiin. Lisattiin hybridoomasolulinjoja, jotka olivat kasvaneet yhteneviksi noin 20 - 30-prosenttisesti, super-10 natanttia tai immunisoitujen hiirien seerumilaimennosta ja inkuboitiin huoneen lampOtilasssa vahintaan kaksi tuntia. Kuopat pestiin useaan kertaan 0,3 ml:11a PBS:aa. Sitten niihin lisattiin 0,1 ml hiiren immunoglobuliinin vasta-aineita (Miles) sopivana pitoisuutena ja inkuboitiin kah-15 den tunnin ajan huoneen lampOtilassa. Naihin vasta-ainei-siin oli sidottu entsyymimerkki, peroksidaasi. Positiivi-sen peroksidaasireaktion antoivat kaytetylle antigeenille spesifisia vasta-aineita sisaitavat kuopat.
Solukasvua oli 80 %:ssa alunperin kaytetysta 360 20 kuopasta. Naista 12 antoi positiivisen tuloksen TNF-seu- lontatestissS. Naista 11 maaritettiin toistettavasti posi-tiivisiksi. Keksinnttn kayttOOn otettiin nelja eri mono-klonaalista hybridoomaa: AM-1, AM-195, AM-114 ja AM-199.
g) Hybridoomasoluviljelmien kasvatus 25 Kasvatus soluviljelmana (in vitro):
Noin 2 x 107 solua siirrostettiin soluviljely-erlen-meyereihin, joiden kasvatuspinta oli noin 175 cm2. Solu-vapaa supernatantti sisalsi kolmen paivSn kuluttua solu-jen erittamia monoklonaalisia vasta-aineita noin 10 - 20 30 pg/ml.
Kasvatus askiitteina hiirissa (in vivo): BALB/c-hiirille annettiin ip vatsakalvojen esikå-sittelyna 0,5 ml Pristan-®;a. Seuraavien 1-2 viikon ai-kana annettiin esikasitellyille eiaimille ip suspensiona 35 PBS:ssa 5 - 10 x 106 hybridoomaa eiainta kohden. 8-10 91421 9 pSivSn kuluttua vatsakalvo puhkaistiin kanyylilla ja solu-pitoinen askiittineste ker&ttiin.
Saadusta askiittinesteesta erotettiin solut ja nii-den palaset sentrifugoimalla (5 000 kierr./min, 5 minuut-5 tia). Monoklonaaliset vasta-aineet sisaitSvS supernatantti * jaettiin m&&råtilavuuksiin ja pakastettiin -70 °C:ssa tai puhdistettiin kromatografisesti vShintaan 90 %:n puhtaus-asteen omaavaksi, jolloin puhdistuminen todettiin natrium-dodesyylisulfaatti-polyakryyliamidigeelielektroforeesilla 10 (DE-OS 3 330 160).
h) Monoklonaalisten vasta-aineiden tyypitys Monoklonaalisia vasta-aineita luonnehdittiin lahem-min ELISA-maarityksilia. Mikrotiitterilevyn kuopat paai-lystettiin rTNFtlia (5 pg/ml). Nain esikasiteltyja levyja 15 ja soluviljelmasta eristettyja, puhdistettuja monoklonaa lisia vasta-aineita inkuboitiin 2 tunnin ajan huoneen lam-pOtitilassa, minka jaikeen seurasi toinen inkubointi (2 tuntia huoneen lampotilassa) eri luokkia ja alaluokkia edustavilla hiirivastaisilla immunoglobuliineilla, jotka 20 sisaisivat niin ikåån kevyempia ja raskaampia immunoglobu-liiniketjuja (Miles). Seuraavassa vaiheessa lisattiin peroksidaasilla leimattu vuohen kaninvastainen (Miles) im-munoglobuliini. Inkuboinnin kestettya tunnin entsyymireak-tio kaynnistettiin lisaamaiia varisubstraatti, tetrametyy-25 libentsidi (Miles) ja vetyperoksidi. Tulokset on koottu taulukkoon 1.
Taulukko 1 _ketiu 30 vasta-aine_luokka_raskas_kewt AM-1 igG gamma 1 kappa AM-114 IgG gamma 1 kappa AM-195 IgG gamma 3 kappa 35 AM-199 IgG gamma 1 kappa 10 1) Monoklonaalisten vasta-aineiden lelmaus NHS-LC-blotiinia (Pierce) liuotettiin PBS:aan ja pitoisuus sSSdettiin 1 mg:aan/ml. 0,1 ml tata liuosta se-koitettiin 0,1 ml:aan puhdistettua monoklonaalista vasta-5 ainetta (0,5 mg/ml PBS) ja seosta inkuboitiin kaksi tuntia huoneen l&mpbtilassa. Reaktion paatyttya liuokseen lisat-tiin 1 ml PBS:aa ja dialysoitiin PBS:aa vastaan 4 °C:ssa. Dialysaatti, jolla tassa tarkoitetaan pussin sisaan jaavaa nestetta, sailytettiin sen kayttddJn asti 4 °C:ssa.
10 Esimerkki 2
Monoklonaalisten vasta-aineiden affiniteetti TNF:n suhteen
Affiniteettivakiot maaritettiin ELISA-analyysitu-losten perusteella. Tassa titrattiin puhdistettuja vasta-15 aineita vakiomaaraiia TNF:aa, ja vasta-aineiden sitoutumi-nen osoitettiin peroksidaasilla leimatun kanin hiirenvas-taisen immunoglobuliinin sitoutumisen avulla. Sitoutumis-lukemista laskettiin affiniteettivakiot erityisohjelman avulla.
20
Taulukko 2
Monoklonaalisten vasta-aineiden affiniteettivakiot 9 -1 vasta-aine K x 10 11 x mol a 25 AM-1 1,5 + 30 % AM-114 1,4 ± 30 % AM-195 3,5 ± 30 % AM-199 2,0 ± 30 % 30 Esitetyt assosiaatiovakiot K& osoittavat TNF:n vas- ta-aineilla olevan korkea affiniteetti TNF:n suhteen. Esimerkki 3 TNF:n sytotoksisen aktiivisuuden neutralointi TNF:n biologinen aktiivisuus mSSritettiin in vitro 35 hiirisolulinjan L929 (ATCC nro CCL1) lyysin perusteella, 91421 11 kuten ovat kuvanneet Aggarwal et al. (J. Biol. Chem. 260 (1985) 2 345 - 2 354). Tutklttaessa monoklonaalisten vas-ta-alneiden neutralolvaa valkutusta TNF:n sytotokslseen aktilvlsuuteen kaytettiin TNF-pitoisuutta, jolla vahintaan 5 90 %:ssa soluista tapahtui lyysi. Vasta-alneet laimennet- tiin taydelliseen kasvualustaan l:2:n laimennosvåleja kayttaen mikrotiitterilevyille. Kuhunkin vasta-ainelaimen-nokseen (0,1 ml) lisattiin 0,05 ml rekombinantti-TNFraa tal luonnolllsta TNF:aa (1,3 ng/ml) ja inkuboitlin huoneen 10 lampdtilassa kahden tunnin ajan. Sltten lisattiin 50 000 L929-solua 0,05 ml:ssa kasvualustaa ja Inkuboitlin inku-baattorissa 20 - 24 tuntia, minka jaikeen solut kiinnitet-tiin ja varjattiin kristallivioletilla.
TNF:n sytotoksisen vaikutuksen johdosta soluissa 15 tapahtuu lyysi, jolloin ne liuenneina eivat varjayksessa varjaanny. Mikali kuitenkin on lasna riittavasti vasta-aineita neutraloimaan TNFrn sytotoksinen aktiivisuus, var-jaytyvat ehjina sailyneet solut.
20 Taulukko 3 TNF:n sytotoksisen aktiivisuuden neutraloituminen mAK neutraloituminen 25 AM-1 AM-114 + AM-195 ++ AM-199 30 Kuten taulukosta 3 ilmenee, todettiin neutraloitu- mistestissa kolme eri vasta-aineluokkaa. Monoklonaalinen vasta-aine AM-195 neutraloi TNFrn 0,2 pg:n/ml pitoisuutena ja AM-114 2 pg:n/ml pitoisuutena, kun taas AM-l:lia ja AM-199 :lia ei saatu aikaan taydellista neutraloitumista 20 35 pg:n/ml pitoisuudellakaan.
12
Esimerkissa 2 suorltettu assosiaatiovakioiden maa-ritys osoitti, etta vasta-aineet sitovat TNF: aa suunn.il-leen yhta hyvin. Jakautuminen voimakkaasti tai heikosti neutraloiviin seka ei laisinkaan neutraloiviin vasta-ai-5 neisiin osoittaa TNF-molekyylien sisaitavan eri epitooppe-ja ja tarjoaa tietoa niiden erottamiseksi. Vasta-aineiden sitoutumista ja TNF:n neutraloitumista koskevien maaritys-ten tuloksista voidaan paatelia naiden monoklonaalisten vasta-aineiden kykenevat tunnistamaan ja maarittelemaan 10 ainakin kolme eri TNF-epitooppia.
Esimerkkl 4 TNF:n maaritys a) Sopivan monoklonaalisen vasta-aineparin valinta
Kahden vasta-aineen kilpailevan sitoutumisen samaan 15 epitooppiin erottamiseksi kumuloituvasta sitoutumisesta eri epitooppeihin tutkittiin vasta-aineiden seka vasta-aineparien kaikkina kyseeseen tulevina yhdistelmina sitoutumista immobilisoituun TNFraan. TNF sidottiin, kuten esimerkissa 1 on kuvattu. Puhdistettuja vasta-aineita lai-20 mennettiin l:4:n laimennusvålein alkaen pitoisuudesta 24 000 ng/ml. Sitten lisattiin biotiinilla leimattu vasta-aine AM-195 ja inkuboitiin 90 minuutin ajan. Kuopat pes-tiin PBSrlia, joka sisaisi 0,05 % Tween® 20:ta, niihin lisattiin streptavidiini-peroksidaasikompleksi (BRL) ja 25 inkuboitiin 30 minuuttia. Pesun jaikeen kuoppiin lisattiin kuoppaa kohden 0,1 ml peroksidaasisubstraattia (katso esi-merkki 4b). Mikaii kyseessa on kilpaileva sitoutuminen, se johtaa signaalin sammumiseen. Kuten taulukosta 4 ilmenee, sitoutuu monoklonaalinen vasta-aine AM-195 eri TNF-epi-30 tooppiin kuin AM-1 tai AM-199. AM-114:n suhteen on havait-tavissa lievaa kilpailua. Taiia perusteella suoritetaan jatkokokeet kayttaen immobilisoitua AM-1- tai AM-199-vas-ta-ainetta seka biotiinilla leimattua AM-195:ta.
91421 13
Taulukko 4
Biotiinilla leimatun AM-195:n sitoutumisen vaikutus mulden monoklonaallsten vasta-aineiden sitoutumiseen TNF:aan 5 Sitoutuminen, % uo mAK:ta/ml_195_114_199_1_ 24 000 3 33 100 100 6 000 4 85 100 100 10 1 500 16 100 100 100 375 63 100 100 100 62 95 100 100 100 0 100 100 100 100 15 b) Entsyymi-immuunitestikoej ar j estelmSn rakenta- minen
Vasta-aine AM-1 tal AM-199 immobilisoitiin passii-visella adsorptiolla tai kovalenttisella sldoksella kanto-alneeseen (lasihelmet, sintteri, polystyrolista taipolyvi-20 nyyllkloridista valmistettu mikrotiitterilevy, suodatinpa-perl tal muu materlaall). Monoklonaallsten vasta-aineiden spesiflsyys sallii vain spesifisen antlgeenin, tassa TNF:n, sitoutumisen sen molekyylin yhden yksittaisen si-toutumiskeskuksen muodostamalla immuunisidoksella. Sitou-25 tumiskelpoisen TNF:η maara on verrannollinen antlgeenin pitoisuuteen ja maaraan liuoksessa. Antigeeni tunnistetaan vasta-aineen ΆΜ-195 sitoutumisesta immuunisidoksella anti-geenimolekyylin muuhun sitoutumiskeskukseen. Vasta-aine AM-195 sisaitaa signaalin. Immobilisoituneen signaalin 30 maara on tailOin suoraan verrannollinen immobilisoituneen antlgeenin maaraan ja taten myOs tutkittavan liuoksen sisal tamaan antigeenipitoisuuteen.
Kokeiden suoritus 1. Paailystys 35 Puhdistettu vasta-aine AM-1 tai AM-199 laimennet- tiin kiinnityspuskuriin (natriumbikarbonaattipuskuri, 14 pH 9,5, 4,2 g/1 = 0,05 M) pitoisuudeksi 5 pg/ml. Mikro-tiitterilevyn kuoppia inkuboitiin 0,1 ml:11a tata lluosta 16 - 20 tuntia 4 °C:ssa.
2. Salpaaminen 5 Kohdan 1 lluos imettiin pols ja kuopat pestlin kah- desti PBS:lia (2 g/1 NaCl, 0,2 g/1 KC1, 1,44 g/1 Na2HP04 x 2H20, 0,2 g/1 KH2P04, pH 7,0). Sitten suoritettiin kuoppien salpaus inkuboimalla 30 minuuttia huoneen lampOtilassa l-%risella naudanseerumialbumiiniliuoksella (Sigma, RIA-10 laatu).
Kohdan 2 liuos imettiin pols ja kuopat pestiin kah-desti PBSrlia. rTMFraa laimennettiin puskurilla I (1 litraan PBS:aa lisattiin 1 g naudanseerumialbumiinia, Sigma, RIA-laatu) alkupitoisuuteen 2,5 ng/ml ja tehtiin laimen-15 nossarja l:2:n laimennosvaiein. 0,1 ml kutakin laimennosta pipetoitiin kuoppiin ja inkuboitiin 2-4 tuntia huoneen lampdtilassa. Pestiin puskurilla (pesupuskuri: PBS + 0,1 % Tween® 20:ta) kolmasti seka lisattiin 0,1 ml biotiinilla laimettua vasta-ainetta AM-195. Esimerkin 1 h) mukaan val-20 mistettu konjugaatti laimennettiin 1:400 puskurilla I ja inkuboitiin 2 tuntia huoneen lampdtilassa tai 16 - 20 tuntia 4-10 °C:ssa.
4. Tehostinj arj estelma
Kuopat pestiin kolmasti pesupuskurilla, lisattiin 25 sitten 0,1 ml streptavidiini-peroksidaasikompleksia (BRL, laimennettuna 1:2 000 PBS/BSA-puskuriin) ja inkuboitiin huoneen lampOtilassa 30 min.
5. Kehitys
Kuopat pestiin kolmasti pesupuskurilla, niihin pi-30 petoitiin 0,1 ml peroksidaasisubstraattia kuoppaa kohden ja inkuboitiin huoneen lampOtilassa 30 minuuttia. Reaktio pysaytettiin lisaamaiia 0,1 ml 2 M H2S04:a kuoppaa kohden. Absorbanssit luettiin mikrotiitterilevylta tunnin kulues-sa 450 nm:n aallonpituudella. .Tyypillinen ominaiskayra on 35 esitetty kuviossa 1. TNF:n erotuskynnys on noin 10 pg/ml.
91421 15
Peroksidaasisubstraatti: TMB-liuos: 42 mM TMB (3,3',5,'-tetrametyylibentsidiini,
Miles) DMSO:ssa - substraattipuskuri: 50 g natriumasetaattia lluotetaan 5 1 l:aan vetta ja pH saadetaan 4,9:aan 1 g:11a sitruunahap- poa 0,1 ml TMB-liuosta llsStaan hitaasti ja ravistaen 10 ml:-aan substraattipuskurla, minka jaikeen lisataan 1,47 μΐ 30-%:ista H202:ta (puhdlstettu laatu, Merck).
10 c) TNF:n maaritys ihmisseerumista
Rekombinaatti-TNF:aa ja/tai luonnollista TNFraa liuotettiin puskuriin I (esimerkki 4b) tal ihmisseerumiin alkupitoisuudeksi 2,5 ng/ml ja laimennettiin samalla liuoksella 1:2 laimennusvalein. Kutakin laimennosta pipe-15 toitiin kuoppaa kohden 0,1 ml kuoppiin, jotka oli edelta-kasin paailystetty vasta-aineella AM-199 tal AM-1, kuten esimerkissa 4b) on kuvattu. Jatkovaiheet suoritetaan, kuten esimerkissa 4 b) on kuvattu.
Kuten kuviosta 1 ilmenee, eivat mitkaan ihmissee-20 rumin ainesosat hairitse TNFtn maaritysta monoklonaalisil-la vasta-aineilla.
d) Vasta-aineiden ja lymfotoksiinin ristikkaisreak-tio
Vasta-aineiden mahdollista ristikkaisreaktiota lym-25 fotoksiinin kanssa tutkittiin esimerkin 1 e) mukaisesti, jolloin mikrotiitterilevyn kuoppapinnat oli paailystetty puhdistetulla rekombinanttilymfotoksiinilla. Vasta-aineilla AM-1, AM-114, AM-195 ja AM-199 ei todettu sitoutumista lymfotoksiiniin.
30 Esimerkki 5 TNF:n osoittaminen seerumista monoklonaalisilla vasta-aineilla kayttaen Western blot -maaritysta.
Ihmisseeruminaytteita, joihin oli lisatty vaihtele-via TNF-maaria, erotettiin geelielektroforeesilla Laemmlin 35 [J. Mol. Biol. 80 (1973) 575 - 599] mukaan kayttaen 12,5- 16 %:ista geelia. Western blot -maaritys suoritettiin Burnet-tin, W.N. [Anal. Biochem. 112 (1981) 195 - 203] ja Reine-sin, D. et al. [J. Biol. Chem. 260 (1985) 1 133 - 1 139] kuvaaman menetelman mukaan. Geelln protellneja sllrrettlln 5 yOn yll nltroselluloosakalvoon (Schleicher ja Schiill). Nltroselluloosakalvoa inkuboltlln huoneen 1ampOtilassa kolmen tunnin ajan l-%risella gelatilnilluoksella (Bio-Rad, 1 lraan PBS:aa liuotettiin 10 g gelatiinia). Sltten nltroselluloosakalvoa Inkuboltlln huoneen lampbtilassa 10 kahden tunnin ajan 20 ml:11a vasta-aineliuosta, joka oli laimennettu pitoisuudeksi 1 pg/ml puskuriin (0,1 % gelatiinia PBSrssa). Supernatantti dekantoitiin pols ja kalvot pestiin useaan kertaan. Kayttamaiia peroksidaasilla lei-mattua hiirenvastaista immunoglobuliinia saatiin TNF naky-15 viin nitroselluloosakalvolla. Erotuskynnys on noin 30 ng TNF:aa. Kuten kuviosta 2 ilmenee, ei monoklonaalinen vas-ta-aine AM-195 reagoi ihmisseerumin minkaån aineosan kans-sa ja sita voidaan taten pitaa TNF:n suhteen spes!fisena. Vasta-aineille AM-1, AM-114 ja AM-199 saatiin samankaltai-20 set tulokset.
Esimerkki 6 TNF:n neutralointi
Monoklonaalisten vasta-aineiden TNF:ta suojaavaa vaikutusta tutkittiin in vivo -olosuhteissa kayttaen uros-25 puolisia Balb/c-hiiria (kokeet 1,2,4) ja C3H/HeN-hiiri8 (koe 3).4-6 viikon ikaiset hiiret valittiin ja jaettiin satunnaisvalinnalla 3 tal 5 eiaimen ryhmiin. Yhdisteet ruiskutettiin laskimon sisaisesti hannan sivulaskimoon (annostilavuus 10 ml/kg. Ennen ruiskutusta TNF liuotet-30 tiin puskuriin A (150 mM NaCl, 0,18 % naudanseerumialbu-miinia, Sigma, RIA-laatu) ja liuosta varastoitiin 6 tun-tia 4-10 °C:ssa. Taman ajan kuluttua TNF:n myrkyllisyys oli suurimmillaan. TNF ruiskutettiin ensin ja sitten mAK 15 - 30 minuutin kuluttua. Menehtymisluvut maaritettiin 24 35 tunnin kuluttua. Saadut tulokset ilmenevat taulukosta 5 91421 17 (lukema 3/5 tarkoittaa, etta kolme viidesta eiaimesta kuo-li).
Taulukko 5 5 annettu yhdiste/ koenumero annetut yhdlsteet _1 2 3 4
Puskurl A 0/3 0/5 0/5 0/5 10 mAK 10 mg/kg 0/3 0/5 0/5 0/5 mAK 5 mg/kg 0/3 0/5 0/5 0/5 TNF 1 mg/kg 3/3 0/5 4/5 4/5 TNF 1 mg/kg + mAK 1 mg/kg 1/3 2/5 1/5 3/5 TNF 1 mg/kg + mAK 5 mg/kg 0/3 0/5 0/5 0/5 15 TNF 2 mg/kg 3/3 5/5 1/5 4/5 TNF 2 mg/kg + mAK 2 mg/kg 3/3 4/5 2/5 5/5 TNF 2 mg/kg + mAK 10 mo/kg 0/3 0/0 0/5 0/5
Kuten taulukosta 5 on paateltavissa, kykenee neut-20 raloiva vasta-aine AM-195 neutraloimaan hiirelle kuoletta-van TNF-annoksen. ElSinten eloonjaantiluvut riippuvat vas-ta-alneen ja TNF:n keskinaisesta palnosuhteesta. TNF:n toksisuuden taydellinen haviaminen havaitaan kåytettaessa palnosuhdetta 5:1. Olettaen etta TNF esiintyy trimeerinaan 25 [FEBS-Lett. 211 (1987) 179], vastaa tama vasta-aineen ja TNF:n keskinaista moolisuhdetta 1,6:1.
TNF ei neutraloidu hiiressa, mikali kéytetaan ei-neutraloivia vasta-aineita.

Claims (2)

1. Hybridicellinje ECACC 87 050 801.
1. Hybridisolulinj a ECACC 87 050 801.
2. Menetelma luonnon kasvainkuoliotekijan, TNF:n, 5 kanssa reagolvan vasta-alneen valmistamiseksi, tunnettu siita, etta viljeliaan solulinjaa ECACC 87 050 801 in vitro tai in vivo ja vasta-aine eristetaan puhdistamalla soluviljelman in vitro -supernatanteista. 10
2. Fbrfarande fttr framstailning av en antikropp som reagerar med den naturliga tumOrnekrosfaktoren, TNF, kannetecknat darav, att man odlar cellinjen ECACC 87 050 801 in vitro eller in vivo och isolerar anti-kroppen genom att rena den ur in vitro -supernatanten av 20 cellkulturen.
FI873948A 1986-09-13 1987-09-11 Menetelmä ihmisen kasvainkuoliotekijän (TNF) kanssa reagoivan monoklonaalisen vasta-aineen valmistamiseksi ja vasta-ainetta tuottava hybridisolulinja FI91421C (fi)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19863631229 DE3631229A1 (de) 1986-09-13 1986-09-13 Monoklonale antikoerper gegen humanen tumornekrosefaktor (tnf) und deren verwendung
DE3631229 1986-09-13

Publications (4)

Publication Number Publication Date
FI873948A0 FI873948A0 (fi) 1987-09-11
FI873948A FI873948A (fi) 1988-03-14
FI91421B FI91421B (fi) 1994-03-15
FI91421C true FI91421C (fi) 1994-06-27

Family

ID=6309540

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI873948A FI91421C (fi) 1986-09-13 1987-09-11 Menetelmä ihmisen kasvainkuoliotekijän (TNF) kanssa reagoivan monoklonaalisen vasta-aineen valmistamiseksi ja vasta-ainetta tuottava hybridisolulinja

Country Status (11)

Country Link
US (1) US5231024A (fi)
EP (1) EP0260610B1 (fi)
JP (2) JP2837160B2 (fi)
BG (1) BG62229B2 (fi)
BR (1) BR1100843A (fi)
CA (1) CA1337717C (fi)
DE (2) DE3631229A1 (fi)
DK (1) DK473887A (fi)
ES (1) ES2058083T3 (fi)
FI (1) FI91421C (fi)
ZA (1) ZA876807B (fi)

Families Citing this family (174)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6309640B1 (en) 1981-09-08 2001-10-30 The Rockefeller University Lipoprotein lipase suppression by endotoxin-induced mediator (shock assay)
US5700466A (en) * 1981-09-08 1997-12-23 The Rockefeller University Method of ameliorating or preventing septic shock using a monoclonal antibody specific to cachectin/tumor necrosis factor
US6419927B1 (en) 1981-09-08 2002-07-16 Anthony Cerami Method for reducing adverse effects of a human 70kDa mediator which results from endotoxin stimulation of macrophages
GB2233559B (en) * 1988-03-11 1992-03-04 Celltech Ltd Antibodies for use in antilymphocyte antibody therapy
DE3823804A1 (de) * 1988-07-14 1990-01-18 Basf Ag Neutralisation der in vitro und in vivo toxischen eigenschaften von tnf-(alpha) durch monoklonale antikoerper und den davon abgeleiteten fragmenten
AU626572B2 (en) * 1988-07-18 1992-08-06 Chiron Corporation Monoclonal antibodies reactive with cachectin
EP0355067A1 (en) * 1988-08-19 1990-02-21 Celltech Limited Pharmaceutical products for anti-neoplastic therapy
US5959087A (en) * 1989-08-07 1999-09-28 Peptide Technology, Ltd. Tumour necrosis factor binding ligands
US20030225254A1 (en) * 1989-08-07 2003-12-04 Rathjen Deborah Ann Tumour necrosis factor binding ligands
DK0486526T3 (da) * 1989-08-07 1996-06-24 Peptide Technology Ltd Bindingsligander for tumornekrosefaktor
US6586222B1 (en) 1989-08-16 2003-07-01 Chiron Corporation Recombinant PR-3 and compositions thereof
US5843693A (en) * 1989-08-16 1998-12-01 Chiron Corporation Assay method for screening for inhibitors of proTNF conversion
US5998378A (en) * 1989-08-16 1999-12-07 Chiron Corporation Compositions for the inhibition of TNF hormone formation and uses thereof
ATE189682T1 (de) * 1989-08-16 2000-02-15 Chiron Corp Prohormonspaltungsplatzblockierungsantikörper
GB8921123D0 (en) * 1989-09-19 1989-11-08 Millar Ann B Treatment of ards
US6713610B1 (en) * 1990-01-12 2004-03-30 Raju Kucherlapati Human antibodies derived from immunized xenomice
US6284471B1 (en) * 1991-03-18 2001-09-04 New York University Medical Center Anti-TNFa antibodies and assays employing anti-TNFa antibodies
DK1097945T3 (da) * 1991-03-18 2007-11-05 Univ New York Monoklonale og kimære antistoffer, der er specifikke for human tumornekrosefaktor
US7192584B2 (en) * 1991-03-18 2007-03-20 Centocor, Inc. Methods of treating psoriasis with anti-TNF antibodies
US6277969B1 (en) * 1991-03-18 2001-08-21 New York University Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US5919452A (en) * 1991-03-18 1999-07-06 New York University Methods of treating TNFα-mediated disease using chimeric anti-TNF antibodies
US20040120952A1 (en) * 2000-08-07 2004-06-24 Centocor, Inc Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
ATE172880T1 (de) * 1992-08-28 1998-11-15 Bayer Ag Verwendung von monoklonalen anti-tnf-antikörpern für die behandlung von bakteriellen meningitiden
US20050255104A1 (en) * 1993-01-29 2005-11-17 Centocor, Inc. Methods of treating psoriasis using anti-TNF receptor fusion proteins
US5626843A (en) * 1993-02-26 1997-05-06 Advanced Biotherapy Concepts, Inc. Treatment of autoimmune diseases, including AIDS, by removel of interferons, TNFs and receptors therefor
US5888511A (en) * 1993-02-26 1999-03-30 Advanced Biotherapy Concepts, Inc. Treatment of autoimmune diseases, including AIDS
NZ278607A (en) * 1994-02-07 1999-05-28 Knoll Ag Use of tnf antagonists for treating disorders involving elevated serum levels of il-6 wherein the serum levels are 500pg/ml or above
DE4409513C1 (de) * 1994-02-07 1995-10-19 Knoll Ag Verwendung von anti-TNF-Antikörpern als Arzneimittel zur Behandlung von Erkrankungen mit einem erhöhten Interleukin-6 Serumspiegel
JPH10504441A (ja) 1994-03-07 1998-05-06 カイロン コーポレイション Ｔｎｆ形成阻害のための組成物およびその使用
US6090382A (en) 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
ATE239041T1 (de) * 1996-02-09 2003-05-15 Basf Ag Humane antikörper welche an humanen tnfalpha binden
US7608262B2 (en) 1996-02-16 2009-10-27 The Kennedy Institute Of Rheumatology Methods of preventing or treating thrombosis with tumor necrosis factor antagonists
KR20080059467A (ko) * 1996-12-03 2008-06-27 아브게닉스, 인크. 복수의 ｖｈ 및 ｖｋ 부위를 함유하는 사람 면역글로불린유전자좌를 갖는 형질전환된 포유류 및 이로부터 생성된항체
US20020031513A1 (en) * 1997-11-24 2002-03-14 Shamir Leibovitz Method and pharmaceutical composition for inhibiting premature rapture of fetal membranes, ripening of uterine cervix and preterm labor in mammals
WO2000051637A1 (en) * 1999-03-02 2000-09-08 Centocor, Inc. ANTI-TNFα ANTIBODIES IN THERAPY OF ASTHMA
WO2000055134A1 (en) * 1999-03-18 2000-09-21 Celgene Corporation Substituted 1-oxo- and 1,3-dioxoisoindolines and their use in pharmaceutical compositions for reducing inflammatory cytokine levels
MXPA02003420A (es) * 1999-10-06 2002-08-20 Basf Ag Inhibidores de la via de senalizacion de endotelina y antagonistas de los receptores de alfav°3 integrina para el tratamiento en combinacion.
US20050249735A1 (en) * 2000-08-07 2005-11-10 Centocor, Inc. Methods of treating ankylosing spondylitis using anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US7288390B2 (en) 2000-08-07 2007-10-30 Centocor, Inc. Anti-dual integrin antibodies, compositions, methods and uses
US6902734B2 (en) 2000-08-07 2005-06-07 Centocor, Inc. Anti-IL-12 antibodies and compositions thereof
UA81743C2 (uk) 2000-08-07 2008-02-11 Центокор, Инк. МОНОКЛОНАЛЬНЕ АНТИТІЛО ЛЮДИНИ, ЩО СПЕЦИФІЧНО ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З ФАКТОРОМ НЕКРОЗУ ПУХЛИН АЛЬФА (ФНПα), ФАРМАЦЕВТИЧНА КОМПОЗИЦІЯ, ЩО ЙОГО МІСТИТЬ, ТА СПОСІБ ЛІКУВАННЯ РЕВМАТОЇДНОГО АРТРИТУ
US20060018907A1 (en) * 2000-08-07 2006-01-26 Centocor, Inc. Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US20110195063A1 (en) * 2000-08-07 2011-08-11 Centocor, Inc. Methods of Treating Ankylosing Spondylitis Using Anti-TNF Antibodies and Peptides of Human Tumor Necrosis Factor
US20090081234A1 (en) * 2000-08-07 2009-03-26 George Heavner Anti-tnf antibodies, compositions, methods and uses for treatment of depression and related conditions
CA2439852A1 (en) * 2001-03-02 2002-09-12 Christine Dingivan Methods of preventing or treating inflammatory or autoimmune disorders by administering integrin alphav beta3 antagonists
CA2817619A1 (en) 2001-06-08 2002-12-08 Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. Methods of administering anti-tnf.alpha. antibodies
TWI334439B (en) * 2001-08-01 2010-12-11 Centocor Inc Anti-tnf antibodies, compositions, methods and uses
JP2005535572A (ja) 2002-04-12 2005-11-24 メディミューン，インコーポレーテッド 組換え抗インターロイキン−９抗体
US20030206898A1 (en) 2002-04-26 2003-11-06 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20040009172A1 (en) * 2002-04-26 2004-01-15 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
JP2006504406A (ja) 2002-06-28 2006-02-09 セントカー・インコーポレーテツド 哺乳動物のｃｈ１欠失ミメティボディ、組成物、方法および使用
AR040603A1 (es) * 2002-07-19 2005-04-13 Abbott Lab S A El uso de un anticuerpo anti-tnfalfa neutralizador de alta afinidad en la fabricacion de un medicamento y conjunto de elementos
US20040033228A1 (en) 2002-08-16 2004-02-19 Hans-Juergen Krause Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders
MY150740A (en) 2002-10-24 2014-02-28 Abbvie Biotechnology Ltd Low dose methods for treating disorders in which tnf? activity is detrimental
CA2508375C (en) 2002-12-02 2014-05-27 Abgenix, Inc. Antibodies directed to tumor necrosis factor and uses thereof
US7101978B2 (en) * 2003-01-08 2006-09-05 Applied Molecular Evolution TNF-α binding molecules
CA2521826C (en) 2003-04-11 2013-08-06 Jennifer L. Reed Recombinant il-9 antibodies and uses thereof
JP2007502327A (ja) 2003-05-13 2007-02-08 デピュイ スパイン、インコーポレイテッド 椎間板変性症の治療法
US8273347B2 (en) * 2003-05-13 2012-09-25 Depuy Spine, Inc. Autologous treatment of degenerated disc with cells
US20040229878A1 (en) * 2003-05-13 2004-11-18 Depuy Spine, Inc. Transdiscal administration of specific inhibitors of P38 kinase
US7553827B2 (en) * 2003-08-13 2009-06-30 Depuy Spine, Inc. Transdiscal administration of cycline compounds
US7344716B2 (en) 2003-05-13 2008-03-18 Depuy Spine, Inc. Transdiscal administration of specific inhibitors of pro-inflammatory cytokines
US7429378B2 (en) * 2003-05-13 2008-09-30 Depuy Spine, Inc. Transdiscal administration of high affinity anti-MMP inhibitors
US8361467B2 (en) * 2003-07-30 2013-01-29 Depuy Spine, Inc. Trans-capsular administration of high specificity cytokine inhibitors into orthopedic joints
UA89481C2 (uk) 2003-09-30 2010-02-10 Центокор, Инк. Еритропоетинові міметичні шарнірно-серцевинні міметитіла людини, композиції, способи та застосування
US8895540B2 (en) * 2003-11-26 2014-11-25 DePuy Synthes Products, LLC Local intraosseous administration of bone forming agents and anti-resorptive agents, and devices therefor
US7435799B2 (en) * 2004-01-08 2008-10-14 Applied Molecular Evolution TNF-α binding molecules
US20070135338A1 (en) * 2004-03-31 2007-06-14 Karyn O'neil Human GLP-1 mimetibodies, compositions, methods and uses
TW201705980A (zh) 2004-04-09 2017-02-16 艾伯維生物技術有限責任公司 用於治療ＴＮＦα相關失調症之多重可變劑量療法
US7351739B2 (en) * 2004-04-30 2008-04-01 Wellgen, Inc. Bioactive compounds and methods of uses thereof
GB0414054D0 (en) 2004-06-23 2004-07-28 Owen Mumford Ltd Improvements relating to automatic injection devices
US7393662B2 (en) * 2004-09-03 2008-07-01 Centocor, Inc. Human EPO mimetic hinge core mimetibodies, compositions, methods and uses
US20060083741A1 (en) * 2004-10-08 2006-04-20 Hoffman Rebecca S Treatment of respiratory syncytial virus (RSV) infection
WO2006047639A2 (en) 2004-10-27 2006-05-04 Medimmune, Inc. Modulation of antibody specificity by tailoring the affinity to cognate antigens
PE20061324A1 (es) 2005-04-29 2007-01-15 Centocor Inc Anticuerpos anti-il-6, composiciones, metodos y usos
CN102961746B (zh) 2005-05-16 2016-06-15 艾伯维生物技术有限公司 TNFα抑制剂治疗腐蚀性多关节炎的用途
PL2452694T3 (pl) 2005-06-30 2019-06-28 Janssen Biotech, Inc Przeciwciała anty-IL-23, kompozycje, sposoby i zastosowania
EP2216653A1 (en) * 2005-08-02 2010-08-11 XBiotech, Inc Diagnosis, treatment and prevention of vascular disorders using il-1alpha autoantibodies
US20070041905A1 (en) * 2005-08-19 2007-02-22 Hoffman Rebecca S Method of treating depression using a TNF-alpha antibody
US9017662B2 (en) 2005-08-30 2015-04-28 Actogenix N.V. Anti-TNF alpha producing lactic acid bacteria for the treatment of chronic enterocolitis
RS53055B (en) 2005-11-01 2014-04-30 Abbvie Biotechnology Ltd PROCEDURES FOR DETERMINING THE EFFICIENCY OF ADALIMUMAB IN RESPONDENTS WHO HAVE ANKILLOSATIVE SPONDILITIS USING CTX-II AND MMP3 AS BIOMARKERS
EP3219328B1 (en) 2005-12-29 2020-06-17 Janssen Biotech, Inc. Human anti-il-23 antibodies, compositions, method and uses
NZ596517A (en) 2006-04-05 2013-06-28 Abbott Biotech Ltd Antibody purification
EP2708242A3 (en) 2006-04-10 2014-03-26 Abbott Biotechnology Ltd Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
US9605064B2 (en) 2006-04-10 2017-03-28 Abbvie Biotechnology Ltd Methods and compositions for treatment of skin disorders
EP2010214A4 (en) * 2006-04-10 2010-06-16 Abbott Biotech Ltd USES AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF RHEUMATOID ARTHRITIS
US20080118496A1 (en) * 2006-04-10 2008-05-22 Medich John R Uses and compositions for treatment of juvenile rheumatoid arthritis
WO2008063213A2 (en) 2006-04-10 2008-05-29 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
US20090317399A1 (en) * 2006-04-10 2009-12-24 Pollack Paul F Uses and compositions for treatment of CROHN'S disease
US20080131374A1 (en) * 2006-04-19 2008-06-05 Medich John R Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
US20110008282A1 (en) * 2006-05-15 2011-01-13 Xbiotech, Inc. IL-1alpha immunization induces autoantibodies protective against atherosclerosis
CA2652870C (en) * 2006-05-22 2014-12-02 Xbiotech Inc. Treatment of cancer with anti-il-1a antibodies
BRPI0713802A2 (pt) 2006-06-30 2012-11-06 Abbott Biotech Ltd dispositivo de injeção automático
WO2008008373A2 (en) 2006-07-11 2008-01-17 Arubor Corp Rhinosinusitis prevention and therapy with proinflammatory cytokine inhibitors
US20080014285A1 (en) * 2006-07-13 2008-01-17 Di Mauro Thomas M Method of treating neurodegenerative brain disease with a composite comprising superparamagnetic nanoparticles and a therapeutic compound
LT2068889T (lt) 2006-08-10 2020-02-10 Roy C. Levitt Anakinra, naudojama bronchiolito obliteranso sindromo gydymui
EP2684895A1 (en) * 2006-10-27 2014-01-15 AbbVie Biotechnology Ltd Crystalline anti-hTNFalpha antibodies
EP2142565A4 (en) * 2007-03-29 2010-03-31 Abbott Lab CRYSTALLINE HUMAN ANTI-IL-12 ANTIBODIES
WO2008137915A2 (en) 2007-05-07 2008-11-13 Medimmune, Llc Anti-icos antibodies and their use in treatment of oncology, transplantation and autoimmune disease
US8999337B2 (en) 2007-06-11 2015-04-07 Abbvie Biotechnology Ltd. Methods for treating juvenile idiopathic arthritis by inhibition of TNFα
SG183709A1 (en) 2007-08-08 2012-09-27 Abbott Lab Compositions and methods for crystallizing antibodies
US20090038182A1 (en) * 2007-08-09 2009-02-12 Lans Maris J Footwear with built-in scale
US8986696B2 (en) * 2007-12-21 2015-03-24 Depuy Mitek, Inc. Trans-capsular administration of p38 map kinase inhibitors into orthopedic joints
US20090162351A1 (en) * 2007-12-21 2009-06-25 Depuy Spine, Inc. Transdiscal administration of inhibitors of p38 MAP kinase
JP5570998B2 (ja) 2007-12-31 2014-08-13 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング ＴＮＦαに対する抗体
EP2249809A1 (en) * 2008-01-15 2010-11-17 Abbott GmbH & Co. KG Powdered protein compositions and methods of making same
SI2285409T1 (sl) * 2008-05-30 2016-10-28 Xbiotech, Inc. Protitelesa il-1 alfa
JP5976319B2 (ja) * 2008-09-12 2016-08-23 エックスバイオテク，インコーポレイテッドＸｂｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ． 病原性単球の標的化
US8415291B2 (en) * 2008-10-31 2013-04-09 Centocor Ortho Biotech Inc. Anti-TNF alpha fibronectin type III domain based scaffold compositions, methods and uses
US20110293605A1 (en) 2008-11-12 2011-12-01 Hasige Sathish Antibody formulation
RU2524487C2 (ru) 2009-04-29 2014-07-27 Эббви Байотекнолоджи Лтд Автоматическое инъекционное устройство
NZ599456A (en) 2009-10-26 2014-06-27 Nestec Sa Assays for the detection of anti-tnf drugs and autoantibodies
AU2010331936B2 (en) 2009-12-15 2014-08-28 Abbvie Biotechnology Ltd Improved firing button for automatic injection device
EP2525822B1 (en) 2010-01-20 2017-05-10 Merck Sharp & Dohme Corp. Immunoregulation by anti-ilt5 antibodies and ilt5-binding antibody fragments
AU2011207253B2 (en) 2010-01-20 2015-02-12 Merck Sharp & Dohme Corp. Anti-ILT5 antibodies and ILT5-binding antibody fragments
WO2011159976A2 (en) 2010-06-18 2011-12-22 Xbiotech, Inc. Arthritis treatment
JP6241932B2 (ja) 2010-08-23 2017-12-06 エックスバイオテク, インコーポレイテッドXbiotech, Inc. 腫瘍性疾患のための治療
BR112013009376A2 (pt) 2010-10-18 2016-07-26 Nestec Sa métodos para determinar isótipos de anticorpos antifármacos
AR084210A1 (es) * 2010-12-08 2013-05-02 Abbott Lab PROTEINAS DE UNION AL TNF-a
CN103533975B (zh) 2011-01-24 2017-03-22 艾伯维生物技术有限公司 具有模制抓握面的自动注射装置
MY155753A (en) 2011-01-24 2015-11-30 Abbvie Biotechnology Ltd Removal of needle shields from syringes and automatic injection devices
KR20140008397A (ko) 2011-02-17 2014-01-21 네스텍 소시에테아노님 항-ＴＮＦα 약물에 대한 자가항체 검출을 위한 검정법
CN102675460B (zh) 2011-02-28 2015-08-19 珠海市丽珠单抗生物技术有限公司 抗肿瘤坏死因子α的人源化抗体
US8658171B2 (en) 2011-02-28 2014-02-25 Livzon Mabpharm Inc. Humanized anti-TNFα antibodies
US9724409B2 (en) 2011-04-01 2017-08-08 Xbiotech, Inc. Treatment of inflammatory skin disease
EP2702077A2 (en) 2011-04-27 2014-03-05 AbbVie Inc. Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins
AU2012278802B2 (en) 2011-07-06 2015-11-26 Société des Produits Nestlé S.A. Assays for detecting neutralizing autoantibodies to biologic therapy with TNF alpha
US9809649B2 (en) 2011-09-23 2017-11-07 Xbiotech, Inc. Cachexia treatment
TW201326207A (zh) 2011-10-24 2013-07-01 Abbvie Inc 抗ｔｎｆ免疫結合物
KR20140084254A (ko) * 2011-10-24 2014-07-04 애브비 인코포레이티드 Ｔｎｆ 및 ｉｌ-17로 향하는 이특이성 면역결합제
US9150645B2 (en) 2012-04-20 2015-10-06 Abbvie, Inc. Cell culture methods to reduce acidic species
US9067990B2 (en) 2013-03-14 2015-06-30 Abbvie, Inc. Protein purification using displacement chromatography
WO2013158273A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Abbvie Inc. Methods to modulate c-terminal lysine variant distribution
US9249182B2 (en) 2012-05-24 2016-02-02 Abbvie, Inc. Purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography
SG11201504249XA (en) 2012-09-02 2015-07-30 Abbvie Inc Methods to control protein heterogeneity
US9512214B2 (en) 2012-09-02 2016-12-06 Abbvie, Inc. Methods to control protein heterogeneity
US9545441B2 (en) 2012-09-18 2017-01-17 Xbiotech, Inc. Treatment of diabetes
WO2014143205A1 (en) 2013-03-12 2014-09-18 Abbvie Inc. Human antibodies that bind human tnf-alpha and methods of preparing the same
US8921526B2 (en) 2013-03-14 2014-12-30 Abbvie, Inc. Mutated anti-TNFα antibodies and methods of their use
KR20150129033A (ko) 2013-03-14 2015-11-18 애브비 인코포레이티드 저 산성 종 조성물 및 이의 제조 및 사용 방법
WO2014151901A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Abbvie Inc. Improvement of mammalian cell culture performance through surfactant supplementation of feed media
AU2014240431A1 (en) 2013-03-14 2015-08-27 Abbvie Inc. Low acidic species compositions and methods for producing the same using displacement chromatography
WO2014151878A2 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosacharides
US9017687B1 (en) 2013-10-18 2015-04-28 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography
WO2014149935A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Janssen Biotech, Inc. Manufacturing methods to control c-terminal lysine, galactose and sialic acid content in recombinant proteins
US9598667B2 (en) 2013-10-04 2017-03-21 Abbvie Inc. Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins
US9181337B2 (en) 2013-10-18 2015-11-10 Abbvie, Inc. Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same
US8946395B1 (en) 2013-10-18 2015-02-03 Abbvie Inc. Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography
US9085618B2 (en) 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
WO2015073884A2 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Abbvie, Inc. Glycoengineered binding protein compositions
WO2015198320A1 (en) 2014-06-24 2015-12-30 Insight Biopharmaceuticals Ltd. Methods of purifying antibodies
US20170226552A1 (en) 2014-07-03 2017-08-10 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using cobalt
WO2016007764A1 (en) 2014-07-09 2016-01-14 Abbvie Inc. Methods for modulating the glycosylation profile of recombinant proteins using non-commonly used sugars
CN107250798A (zh) 2014-12-05 2017-10-13 雀巢产品技术援助有限公司 用于检测患者样品中的生物制品的间接均相迁移率变动试验
EP3078675A1 (en) 2015-04-10 2016-10-12 Ares Trading S.A. Induction dosing regimen for the treatment of tnf alpha mediated disorders
US10465003B2 (en) 2016-02-05 2019-11-05 Janssen Biotech, Inc. Anti-TNF antibodies, compositions, methods and use for the treatment or prevention of type 1 diabetes
JOP20190162A1 (ar) 2016-12-30 2019-06-27 Biocad Joint Stock Co تركيبة صيدلانية مائية من جسم مضاد لـ tnf? أحادي النسيلة معاود الارتباط الجيني
EP3573658A4 (en) 2017-01-30 2021-07-21 Janssen Biotech, Inc. ANTI-TNF ANTIBODIES, COMPOSITIONS, AND METHODS FOR TREATMENT OF ACTIVE PSORIATIC ARTHRITIS
CA3052578A1 (en) 2017-02-07 2018-08-16 Janssen Biotech, Inc. Anti-tnf antibodies, compositions, and methods for the treatment of active ankylosing spondylitis
CA3053231A1 (en) 2017-02-16 2018-08-23 Xbiotech Inc. Treatment of hidradenitis suppurativa
WO2020148651A1 (en) 2019-01-15 2020-07-23 Janssen Biotech, Inc. Anti-tnf antibody compositions and methods for the treatment of juvenile idiopathic arthritis
JP2022518250A (ja) 2019-01-23 2022-03-14 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 乾癬性関節炎の治療方法で使用するための抗ｔｎｆ抗体組成物
EP3938391A1 (en) 2019-03-14 2022-01-19 Janssen Biotech, Inc. Methods for producing anti-tnf antibody compositions
JP2022525179A (ja) 2019-03-14 2022-05-11 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 抗ｔｎｆ抗体組成物を産生するための産生方法
WO2020183271A1 (en) 2019-03-14 2020-09-17 Janssen Biotech, Inc. Methods for producing anti-tnf antibody compositions
EP3972690A4 (en) 2019-05-23 2023-07-05 Janssen Biotech, Inc. METHOD OF TREATMENT OF INFLAMMATORY BOWEL DISEASE USING COMBINATION THERAPY OF ANTIBODIES TO IL-23 AND TNF-ALPHA
US20220323580A1 (en) 2019-06-03 2022-10-13 Janssen Biotech, Inc. Anti-tnf antibody compositions, and methods for the treatment of psoriatic arthritis
CN114173873A (zh) 2019-06-03 2022-03-11 詹森生物科技公司 用于治疗活动性强直性脊柱炎的抗tnf抗体、组合物和方法
WO2020263450A1 (en) 2019-06-25 2020-12-30 Procisedx Inc. Detection of anti-tnf alpha drug biologics and anti-drug antibodies
WO2021028752A1 (en) 2019-08-15 2021-02-18 Janssen Biotech, Inc. Anti-tfn antibodies for treating type i diabetes
CA3203308A1 (en) 2020-11-30 2022-06-02 Enigma Biointelligence, Inc. Non-invasive assessment of alzheimer's disease
CA3201564A1 (en) 2020-12-09 2022-06-16 Jung Min Yoo Anti-ox40l antibody, anti-ox40l/anti-tnfalpha bispecific antibody, and uses thereof
KR20240032991A (ko) 2021-07-09 2024-03-12 얀센 바이오테크 인코포레이티드 항-tnf 항체 조성물의 생성을 위한 제조 방법
AU2022306144A1 (en) 2021-07-09 2024-02-22 Janssen Biotech, Inc. Manufacturing methods for producing anti-tnf antibody compositions

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0780914B2 (ja) * 1984-04-02 1995-08-30 旭化成工業株式会社 ヒト腫瘍壊死因子に対する抗体
JPS60209528A (ja) * 1984-04-03 1985-10-22 Asahi Chem Ind Co Ltd ヒト腫瘍壊死因子の精製方法
JPS6163698A (ja) * 1984-09-05 1986-04-01 Asahi Chem Ind Co Ltd 生理活性物質に対するモノクロ−ナル抗体とそれを用いる生理活性物質の精製方法
IL73883A (en) * 1984-12-20 1990-12-23 Yeda Res & Dev Monoclonal antibodies against tnf-alpha,hybridomas producing them and method for the purification of tnf-alpha
US4870163A (en) * 1985-08-29 1989-09-26 New York Blood Center, Inc. Preparation of pure human tumor necrosis factor and hybridomas producing monoclonal antibodies to human tumor necrosis factor

Also Published As

Publication number Publication date
EP0260610B1 (de) 1993-09-01
ES2058083T3 (es) 1994-11-01
EP0260610A3 (en) 1989-01-11
DE3787241D1 (de) 1993-10-07
JP2837160B2 (ja) 1998-12-14
FI91421B (fi) 1994-03-15
BR1100843A (pt) 2000-04-18
EP0260610A2 (de) 1988-03-23
JPS63157977A (ja) 1988-06-30
JP2758394B2 (ja) 1998-05-28
JPH09294584A (ja) 1997-11-18
BG62229B2 (bg) 1999-05-31
CA1337717C (en) 1995-12-12
ZA876807B (en) 1989-05-30
DK473887D0 (da) 1987-09-11
US5231024A (en) 1993-07-27
DE3631229A1 (de) 1988-03-24
FI873948A0 (fi) 1987-09-11
DK473887A (da) 1988-03-11
FI873948A (fi) 1988-03-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI91421C (fi) Menetelmä ihmisen kasvainkuoliotekijän (TNF) kanssa reagoivan monoklonaalisen vasta-aineen valmistamiseksi ja vasta-ainetta tuottava hybridisolulinja
US4350683A (en) Antibody production from hybrid cell line
FI75363C (fi) Foerfarande foer framstaellning av en monoklonal antikropp mot maenniskans hjaelpar-t-celler, medelst en ny hybridcellinje.
US5036003A (en) Antibodies to VPF
EP0232921B1 (en) Monoclonal antibodies against hepatitis b virus
EP0156578A2 (en) A process for preparing hybridoma cells which produce tumour specific monoclonal antibodies
US5003048A (en) Method for the purification of lymphokine LK 2
EP0259807B1 (en) Complement-dependent cytolytic anti-trichomonas vaginalis monoclonal antibody and use thereof in therapy and in diagnosis
EP0428485B1 (en) Novel antiidiotypic monoclonal antibodies
US4803167A (en) Monoclonal antidigoxtin antibodies
EP0211368B1 (en) Monoclonal anti-asialo GM1 antibody
RU2105062C1 (ru) Конъюгат на основе анти-jgm-антитела (варианты) и способ снижения секреции jgm антитела лимфоцитами (варианты)
US5576182A (en) Anti-mucus glycoprotein monoclonal antibody
US4746612A (en) Aotus interspecies hybridomas and monoclonal receptors produced thereby
SU1631074A1 (ru) Штамм культивируемых гибридных клеток животных MUS мUSсULUS L. - продуцент моноклональных антител против альфа-фетопротеина человека
SU1631075A1 (ru) Штамм культивируемых гибридных клеток животных MUS мUSсULUS L. - продуцент моноклональных антител против альфа-фетопротеина человека
SU1527260A1 (ru) Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS, используемый дл получени моноклональных антител к @ - тимозину
RU2003682C1 (ru) Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS MUSCULUS L. - продуцент моноклональных антител к @ -легким цеп м иммуноглобулинов человека
RU2002803C1 (ru) Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS MUSCULUS L., используемый дл получени моноклональных антител к JGG 1, 3, 4 человека
EP0278160A2 (en) Human monoclonal anti cancer antibodies, hybridoma cell lines producing them and their uses
EP0439117A1 (en) Monoclonal antibodies which bind (E)-5-(2-bromovinyl)-arabinofuranosyluracil and diagnostic methods based thereon
JPH0532034B2 (fi)
JPH0459879B2 (fi)
JPH02163079A (ja) ヒトアポリポ蛋白質ｂ４８に対する単クローン性抗体を産生するハイブリドーマ
JPH02167073A (ja) 単クローン性抗ヒトアポリポ蛋白質ｂ１００抗体を産生するハイブリドーマ

Legal Events

Date Code Title Description
BB Publication of examined application
FG Patent granted

Owner name: BASF AKTIENGESELLSCHAFT

MA Patent expired