WO2007086327A1

WO2007086327A1 - 毛乳頭細胞増殖促進剤

Info

Publication number: WO2007086327A1
Application number: PCT/JP2007/050811
Authority: WO
Inventors: Satoru Takayama; Noriko Mori; Makoto Takeuchi; Yasuhiro Kotani
Original assignee: Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo
Priority date: 2006-01-24
Filing date: 2007-01-19
Publication date: 2007-08-02
Also published as: JP5635226B2; JPWO2007086327A1

Abstract

　毛乳頭細胞増殖促進活剤を提供することを課題とし、Ｌ－アスコルビン酸類、フラボノイド類、リボフラビン類、感光素３０１号、非還元性糖類などの脂肪分解抑制作用を有する物質から選ばれる何れか１種又は２種以上を有効成分とする毛乳頭細胞増殖促進剤を提供することにより解決する。

Description

明細書

毛乳頭細胞増殖促進剤

技術分野

[0001] 本発明は、新規な毛乳頭細胞増殖促進剤に関する。

背景技術

[0002] 高齢化社会、ストレス社会といわれる現代社会では、毛髪が様々な原因により、脱毛の危機にさらされる機会が増カロしており、これに対応して様々な「育毛剤」が提案されている。し力しながら、従来の育毛剤では、その脱毛防止、発毛効果などの育毛作用は、必ずしも充分なものではな力つた。その原因の一つとして、育毛剤は、非常に複雑な発毛機構の特定部位に作用するにも関わらず、その点をあまり考慮することなく使用されるため、使用した育毛剤が、使用者の脱毛原因の解決に適していない場合があつたためと考えられる。その点、作用点が明らかな育毛剤が開発されれば、脱毛の原因や症状などに応じて育毛剤を選択又は組み合わせて、脱毛などを防止することが可能となり、より効果的なヘアケアを行うことが可能になる。なお、本発明でいう育毛とは、毛髪の形成促進、発毛促進、養毛、薄毛改善、ふけの発生抑制、かゆみの抑制及び脱毛の抑制を含む。

[0003] 近年、発毛の機構の研究が進み、ヒトの毛髪毛包を構成する毛包角化細胞の増殖

Z分化やアポトーシスを調整し、毛髪の成長サイクル (以下、「毛周期」という。）の調節の中心的な役割を毛乳頭細胞が担っていることが明らかになり、育毛のための毛乳頭細胞増殖促進剤が提案されるようになっている（例えば、特開平 9— 208431号公報及び特開 2005— 41871号公報参照)。また、植毛技術の進歩により、自身の脱毛の起きていない部位の毛髪を外科的に採取して、脱毛部位に移植する試みも行われている。し力しながら、依然として、毛周期を完全にコントロールできる発毛剤や育毛剤は開発されていない。また、移植した毛髪 (以下、「移植毛」と略記する場合がある。）も、必ずしも効率よく脱毛部位の頭皮に着生するわけではなぐ着生率を向上するためには、移植毛の毛包部に存在する毛母の細胞などの増殖をコントロールする毛乳頭細胞を効率よく増殖させることが重要と考えられている。したがって、毛周期を、簡便かつ効果的にコントロールしたり、植毛時の移植毛の着生率を向上させるために有効な新規な毛乳頭細胞増殖促進剤の開発が望まれている。

[0004] 一方、脂質の分解抑制作用を有する Lーァスコルビン酸 2 ダルコシド（以下、「AA — 2G」と略記する場合がある。）、ダルコシルヘスペリジン、ダルコシルルチン及び感光素 301号（6— [2— [ (5—ブロモ 2 ピリジル）ァミノ]ビュル] 1 ェチル 2— ピコリュウムョーダイド、以下、「感光素 301号」と略記する。）、 α , _α—トレハロースなどの非還元性糖類などは、何れも皮膚外用剤の配合成分として使用されてヽる物質であり、毛髪ィ匕粧品の有効成分としても提案されている (例えば、特開平 4— 1824 14号公報及び特開平 4 46112号公報参照)。しかしながら、これらの特許文献には、毛乳頭細胞の増殖促進に関する記載や、これらの物質に、毛乳頭細胞の増殖を促進する作用や、移植毛の頭皮への着生率を向上する作用があることについての記載や示唆は何もされて!、な、。

発明の開示

[0005] 本発明は、毛乳頭細胞増殖促進剤を提供することを課題とする。

[0006] 本発明者は、上記課題を解決するために、鋭意研究、検討を重ねた結果、 Lーァスコルビン酸類、フラボノイド類（ヘスペリジン類、ルチン類、ナリンジン類などを含む）、リボフラビン類、感光素 301号、及び、 a , a トレハロースなどの非還元性糖類から選ばれる、何れか 1種又は 2種以上の物質力毛乳頭細胞の増殖を極めて効果的に促進し、これらの物質は何れも脂質からのラジカルの発生やアルデヒドの生成を抑制し脂質の分解を抑制する作用を有することを見出し、これら物質を有効成分とする毛乳頭細胞増殖促進剤を確立した。また、 L ァスコルビン酸類、フラボノイド類、リボフラビン類及び Z又は非還元性糖類の持つ毛乳頭細胞の増殖促進効果は、これらの物質を皮膚外用剤として直接頭皮に使用した場合だけでなぐ経口摂取や、注射などによる非経口的な投与方法であっても発揮されることを見出した。さらに、ァスコルビン酸類、フラボノイド類、リボフラビン類、感光素 301号、及び Z又は非還元性糖類を含有する水系媒体の処理液に浸漬した毛髪は、毛乳頭細胞の増殖が促進されて、頭皮に移植した際の頭皮への着生率が向上するだけでなぐこれらの物質を、毛髪を移植後に、皮膚外用剤として直接頭皮に使用した場合や経口摂取、さらには、注射などの方法で非経口的に投与した場合にも、移植毛の頭皮への着生率が向上することを見出し、本発明を完成した。

[0007] 本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤は、毛乳頭細胞の増殖を極めて効果的に促進するという優れた効果を有しているので、この毛乳頭細胞増殖促進剤は、毛周期の調節能に優れ、毛周期の回転を促進することから、休止期にある毛根の割合を低減し、毛髪の形成を促進すると共に、毛根を強化して脱毛も抑制するなどの優れた育毛効果を発揮することができる。また、移植用の毛髪の毛根部位を当該毛乳頭細胞増殖促進剤で処理することにより、その毛乳頭細胞の増殖を促進し、頭皮に移植した毛髪の着生率を向上させると共に、着生後の移植毛からの毛髪の形成を促進することができる。

発明を実施するための最良の形態

[0008] 本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤に使用する、 Lーァスコルビン酸類、フラボノイド類、リボフラビン類、感光素 301号、非還元性糖類は、何れも脂質の分解抑制作用を有する物質で、本発明の所期の効果を有するものであれば、その由来や起源は問わず、抽出法、発酵法、酵素法、合成法など、それぞれの物質の製造に適した公知の方法で調製することができる。

[0009] 本発明でいう L—ァスコルビン酸類とは、 L—ァスコルビン酸、 L—ァスコルビン酸の誘導体、これらのアルカリ金属或いはアルカリ土類金属塩などであって、脂質の分解抑制作用を有するものをいう。 Lーァスコルビン酸誘導体としては、例えば、 Lーァスコルビン酸グリコシド、 Lーァスコルビン酸グリコシドのァシル化誘導体、テトラへキシルデカン酸ァスコルビン酸、 Lーァスコルビン酸とトコフエロールがリン酸基を介して結合したァスコルビン酸—トコフェロールリン酸ジエステル、 Lーァスコルビン酸硫酸ェステル、ジパルミチン酸ァスコルビル、パルミチン酸ァスコルビル、 L—ァスコルビン酸ステアリル、リン酸 Lーァスコルビル、 Lーァスコルビン酸ェチルやそれらのァシル化誘導体などを挙げることができ、なかでも、毛乳頭細胞増殖促進活性の強さ及び安全性の点では、糖転移 L—ァスコルビン酸が望ましぐ L—ァスコルビン酸 2—ダルコシドが特に望ましい。なお、本発明でいう脂質の分解抑制作用を有するとは、その物質自体が脂質の分解抑制作用を有する場合だけではなぐ Lーァスコルビン酸 2—グルコシドなどのように、生体に存在する酵素などにより分解されて、脂質の分解抑制作用を発揮する場合を含む。

[0010] 本発明でいうフラボノイド類とは、二つのフエニル基がピラン環或いはそれに近い構造の 3個の炭素原子をはさんで結合している、いわゆる C C Cの炭素骨格から

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なる化合物群であって、脂質の分解抑制作用を有するものをいう。具体的には、フラボン類、イソフラボン類、フラボノール類、フラバノン類、フラバノノール類、フラバン 3, 4ージオール類、フラバンー3—オール類、アントシァ-ジン類、オーロン類、カルコン類、ジヒドロカルコン類などやこれらの誘導体をいう。なかでも、毛乳頭細胞増殖促進活性の強さの点では、フラボノール類ゃフラバン 3—オール類が望ましい。これらの中でも、ヘスペリジン類、ルチン類、ナリンジン類が特に望ましぐ具体的には、ルチン、ヘスペリジン、ナリンジン、これらの糖転移物、ァグリコンゃァグリコン配糖体などを挙げることができる。

[0011] 本発明でいうリボフラビン類とは、リボフラビン及びその誘導体であって脂質の分解抑制作用を有するものをいい、具体的には、リボフラビン酪酸エステル、リボフラビンリン酸エステル、ロイコフラビン、モノハイドロフラビン、ロイコフラビンリン酸エステル、糖転移リボフラビン、フラビンモノヌクレオチド、フラビンジヌクレオチドなどを挙げることができる。毛乳頭細胞増殖促進活性の強さの点では、リボフラビン及び糖転移リボフラビンが望ましい。

[0012] 本発明でいう感光素 301号とは、厚生省が昭和 57年 12月 27日付けて公示した、化粧品原料基準第二版に収載されたアミノビニール系の化合物で、化学名が 6— [2 — [ (5 ブロモ 2 ピリジル）ァミノ]ビュル] 1 ェチル 2 -ピコリュウムョーダイドのものをいう。

[0013] 本発明でいう非還元性糖類とは、 at , α—トレハロース、 α—マルトシルマルトースなどの a , a トレハロースの糖質誘導体、マルチトール、マルトトリィトールなどの糖アルコール、同じ出願人による国際公開 WO 02Z10361号明細書などに記載のサイクロ {→6) - a—D—ダルコピラノシル一（1→3) - a—D—ダルコピラノシル一 ( 1→6) - a—D—ダルコピラノシル一（1→3) - a—D—ダルコピラノシル一（1→}の構造を有する環状四糖 (以下、「環状二ゲロシルニゲロース」という。）、或いは、特開平 2005— 95148号公報などに記載のサイクロ {→6)— a D ダルコビラノシルー (1→4) - a—D—ダルコピラノシル一（1→6) - a—D—ダルコピラノシル一 (1→4 )一 a D ダルコビラノシルー（1→}の構造を有する環状四糖 (以下、「環状マルトシルマルトース」という。）やサイクロデキストリンなどの環状糖質などのような、脂質の分解抑制作用を有するものを挙げることができる。毛乳頭細胞増殖促進活性の強さの点では、 , α トレハロース、 α , α トレハロースの糖質誘導体、マルチトール及び環状四糖が望ましい。

[0014] 本発明で使用するこれらの物質は、必ずしも高度に精製されておらずともよぐ原料物質や調製の過程で共存するその他の成分との未分離組成物としての形態、それらを部分精製、或いは、高度に精製したものであってもよいし、市販品を使用することも随意である。なお、注射などの方法で直接体内に投与する場合には、高度に精製したものを使用することが望ましぐ発熱物質や微生物が除去されたものが特に望ましい。また、 Lーァスコルビン酸、ヘスペリジン、ルチン、ナリンジン及びリボフラビンなどの糖転移物（以下、これらの物質を総称して「ビタミン配糖体」という場合がある。）は、 1分子当たり 1分子乃至 10分子程度のグルコースが結合したものを含んでいてもよく、これらの配糖体の調製の過程で共存する配糖化されて!、な!、原料物質を含んで!/、てもよいが、注射剤や皮膚外用剤の形態で使用する場合には、 1分子のグルコースが結合したモノダルコシル配糖体の純度を高めたものを使用するのが特に望ましい。ちなみに、これらのビタミン配糖体の巿販品としては、例えば、食品級の Lーァスコルビン酸 2—ダルコシド (株式会社林原商事販売、商品名「ァスコフレッシュ」）、皮膚外用剤用の L ァスコルビン酸 2—ダルコシド (株式会社林原生物化学研究所販売、商品名「AA2G」）、ダルコシルヘスペリジン (株式会社林原生物化学研究所販売、商品名「林原ダルコシルヘスペリジン S」）、ダルコシルルチン (株式会社林原商事販売、商品名「ひ Gルチン」）がある。また、感光素 301号は株式会社林原生物化学研究所から「タカナール」の商品名で販売されて、る。

[0015] 本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤は、有効成分として、脂質の分解抑制作用を有する Lーァスコルビン酸類、フラボノイド類、リボフラビン類、感光素 301号及び非還元性糖類力選ばれる何れか 1種又は 2種以上を含むものであればよぐ毛乳頭細胞増殖促進効果の強さの点からは、有効成分が 1種の場合には、 L—ァスコルビン酸類が望ましいが、 2種以上を組み合わせて用いることが特に望ましい。とりわけ、 L ーァスコルビン酸類とフラボノイド類、リボフラビン類、感光素 301号及び非還元性糖類力選ばれる何れか 1種又は 2種以上とを併用することにより、その相乗作用により、強い毛乳頭細胞増殖促進効果を得ることができる。

また、本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤は、必須成分である L—ァスコルビン酸類、フラボノイド類、リボフラビン類、感光素 301号及び Z又は非還元性糖類に加えて、必要に応じて、かつ本発明の所期の効果を損なわない限り、育毛作用が認められている、本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤の有効成分以外の 5 aレダクターゼ阻害剤、血行促進剤、毛包賦活剤などのような既知の成分の 1種又は 2種以上を併用することにより、 L—ァスコルビン酸類、フラボノイド類、リボフラビン類、感光素 301号及び/ 又は還元性糖類による毛乳頭細胞の増殖促進作用を、さらに効果的に増強することができる。具体的には、 5ひレダクターゼ阻害剤としては、ァセンャク、ァチコリア、ィエルバルイサ、ィチイ、インチン、ゥォ口、ウイキヨウ、ウスべ-ァオイ、エイジッ、オルティガ-ダラ、オンジ、カゴソゥ、カコチヤ、カシュゥ、カツコゥァザミ、力ノコソゥ、ガラナ、カルドサント、カンゾゥ、キササゲ、キンセン力、キンモクセィ、ケィガイ、ケンゴシ、ゲンノショウコ、クァチヤララーテ、クサノォゥ、クマセバ、ゴバイシ、ゴボウシ、コリアンダ一、サイカチ、サイコ、サンシシ、サンショウ、シャタヤク、シャゼンシ、ジヤンカン、ジョゥザン、セドロン、センソ、ソクハクヨウ、ソヨウ、ダイォゥ、ダウントラヮス、チャン力ピエドラ、チヨウジ、二ガキ、ビン口ウジ、マチコ、モッ力、ャクモソゥ、ャマハギ、ョクイニン、レグロ、ロジン、ヮタカもなる群力選ばれた 1種又は 2種以上の植物の溶媒抽出ェキス、ォキセンドロン、または、フィナステリドなどを挙げることができる。血行促進剤としては、アセチルコリン、センブリエキス、ヨウ化ニン-タエキス、イチヨウエキス、塩化力ルプロ-ゥム、スピロノラタトン、ビタミン B塩酸塩、 γ —オリザノール、サークレチン、

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クロマカリム、セファランチン、ニコランジル、 DL— a—トコフェローノレ、 D— α—トコフェローノレ、酢酸 DL— a—トコフェローノレ、酢酸 D— a—トコフェローノレなどのビタミン E類、ニコチン酸、ニコチン酸メチル、 DL— α—トコフエロールニコチン酸エステル、ニコチン酸アミド、ニコチン酸べンジルなどのニコチン酸類、ピナシジル、ミノキシジル、フタリド類、キナエキス、ショウブ根エキス、ソフオラ抽出液、ジイソプロピルアミンジクロロアセテート、トウヒエキス、トウガラシチンキ、ュズ抽出液、カンタリスチンキ、シヨウキヨゥチンキなどが挙げられる。などを挙げることができる。また、毛包賦活剤としては、パントテン酸、パントテン酸エステル、パンテノール、パントテュルェチルエーテルなどのパントテン酸類、 N—ァシルアミノ酸、ペンタデカン、ペンタデカン酸、ペンタデカン酸グリセリド、 6—ベンジルァミノプリン、アデノシン、アデノシン^ーリン酸、ァデノシン^ーリン酸の塩などのアデノシン類、ァスパラギン酸カリウム、ピオチン、タマサキッヅラフジエキス、チクセッニンジンエキス、ォタネニンジンエキスなどのニンジンエキス、ブドゥエキス、リンゴエキス、モノ-トログアヤコールナトリウム、酵母エキス、二ンニクエキス、真珠蛋白抽出液、プラセンタエキス、ローヤルゼリー、カテコール、レゾルシノール、ヒドロキノン、クロ口ゲルシノール、カテキン、タン-ンなどのポリフエノール類、ミノキシジル酸などが挙げられる。 L—ァスコルビン酸類、フラボノイド類、リボフラビン類、感光素 301号及び Z又は非還元性糖類による毛乳頭細胞増殖促進作用をさらに増強する作用の強さの点からは、カテキンやタンニンをはじめとするポリフエノール類が望ましい。また、これらの 5 αレダクターゼ阻害剤、血行促進剤及び Ζ又は毛包賦活剤の含有量は、本発明の所期の効果を妨げない量であれば特に制限はないが、十分な育毛効果と、使用時の皮膚や口腔に対する刺激抑制の観点から、通常、毛乳頭細胞増殖促進剤の全組成中の 0. 0001質量％乃至 10質量％ (以下、本明細書では特にことわらない限り質量％を「％」と表記する。）、特に 0. 001%乃至 5 %が好ましい。

[0017] さらに、本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤は、必要に応じて、かつ本発明の所期の効果を損なわない限り、化粧品、医薬部外品、医薬品、飲食品などにおいて一般的に用いられる、上記以外の各種の油性又は水性成分、保湿剤、増粘剤、防腐剤、酸化防止剤、皮膚溶解剤、角質溶解剤、粉体、乳化剤、 ΡΗ調節剤、香料、色剤、各種の薬剤、水を含む溶媒などを配合することができる。

[0018] その具体例を挙げると、例えば、高級脂肪酸、固形パラフィン、流動パラフィン、シリコーン油、スクヮラン、モノォレイン酸グリセリル、ォリーブ油、イソプロピルミリステート、高級アルコールなどの油分、グリセリン、ヒアルロン酸、プロピレングリコール、ァテロコラーゲン、乳酸ナトリウムなどの保湿剤、マルメ口粘質物、カルボキシビュルポリマ一、キサンタンガム、プルラン、ヒアルロン酸やコンドロイチン硫酸をはじめとするムコ多糖類などの増粘剤、セリン、メチォニン、アルギニン、カル-チンなどのアミノ酸類、ビタミン B、ビ才チン、パントテン酸類などのビタミン類、セファランチンなどの皮膚機

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能亢進剤、エストラジオールなどの女性ホルモン剤、グリチルリチン酸、グリチルレチン酸、ァズレン、カンゾゥ抽出物、藍抽出液などの消炎剤、ヒノキチオールなどの抗菌剤、メントールなどの清涼剤、サリチル酸、亜鉛類、 aーリポ酸、生理活性物質、乳酸、クェン酸などの有機酸類、ミネラル類、甘味料、高甘味度甘味料、コェンザィム Q1 0、上記以外のビタミン類、ハーブエキス類、生薬エキス類などを配合することができる。また、本発明で使用するビタミン配糖体は、何れも生体内で酵素分解を受けて徐々にビタミンとなるので、本来徐放性を有しているものの、この機能をさらに強化するためにリボソームのようなドラッグデリバリーシステム用の担体と共に使用することも随 ,S (？ある。

[0019] 本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤は、その各成分を、原料の段階から製品の段階に至るまでの適宜の工程で、或いは、既存の製品に対して、例えば、希釈、濃縮、乾燥、濾過、遠心分離、混和、混捏、溶解、融解、分散、懸濁、乳化、浸漬、浸透、散布、塗布、被覆、噴霧、注入、晶出、固化、逆ミセル化などの方法の 1種又は 2種以上を適宜組み合わせて製造することができる。

[0020] 本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤は、その全量に対して、有効成分である Lーァスコルビン酸類、フラボノイド類或いはリボフラビン類力何れも 0. 0001%乃至 10%となるように含有せしめればよぐ好ましくは、何れも 0. 001%乃至 1%となるように含有せしめればよい。感光素 301号は、全量に対して、 0. 00001%乃至 1%となるように含有せしめればよぐ好ましくは 0. 0001 %乃至 0. 5%となるように含有せしめればよい。また、非還元性糖類は、全量に対して、 0. 05%乃至 10%となるように含有せしめればよぐ好ましくは 0. 5%乃至 5%となるように含有せしめればよい。これらの物質の配合量が毛乳頭細胞増殖促進剤の全量に対して上記配合量の下限よりも少ない場合には、所望する毛乳頭細胞の増殖促進作用が充分に発揮されず好ましくない。また、上記配合量の上限を超えて配合しても、その効果が増強されることが無いだけでなぐヘスペリジン、ルチン、ナリンジンをはじめとするフラボノイド類、リボフラビン類或いは感光素 301号にあっては、毛乳頭細胞の増殖が阻害される場合がある。また、上記配合量の上限を超えると各々の物質特有の不快臭や不快味を伴うようになったり、使用感が悪くなつたりする場合がある点でも好ましくない。なお、 Lーァスコルビン酸類と、フラボノイド類、リボフラビン類、感光素 301号及び非還元性糖類の何れ力 1種又は 2種以上とを併用する場合、 Lーァスコルビン酸類の配合量の下限については、相乗効果により、単剤で使用する場合よりも低濃度でも毛乳頭細胞増殖促進作用が発揮される場合があるので、本発明の所望する作用が発揮される範囲で、適宜上記配合量をさらに減ずることができる。

[0021] 本発明の毛乳頭増殖促進剤の剤型は、皮膚外用の化粧品、医薬部外品、医薬品などとして、頭部外皮に適用可能な剤型であれば特に限定されず、例えば、液状、乳液状、クリーム状、エアゾール状、ジエル状などの剤型を選択することができ、例えば、トニック、ヘアークリーム、ムース、シャンプー、リンス、乳液、化粧水、ノック、エアゾール剤などの形態で使用することができる。

[0022] 本発明の毛乳頭増殖促進剤のうち、感光素 301号のように経口摂取が認められていない成分を配合したもの以外は、経口摂取はもとより、カテーテルなどを使用して胃や腸内に直接投与してもよぐ注射などにより直接体内に投与することもできる。その経口摂取用の組成物としては、経口的に摂取可能な形態であれば特に制限はなぐ例えば、固状、錠剤、粉末、液状、ペースト状などの形態を選択することができるし、一般の飲食品の形態であってもよい。この毛乳頭細胞増殖促進剤は、経口的に摂取した場合や、注射投与などにより直接体内に投与した場合においても、毛乳頭細胞の増殖促進作用を示す。また、本発明の毛乳頭剤増殖促進剤は、何れの投与経路の場合にも、頭皮を含む皮膚の血行を改善し、シヮゃクスミを改善することもできるので、皮膚に潤いゃ艷を与え、シヮゃコジヮを改善する美肌効果にも優れている。したがって、これらの毛乳頭細胞増殖促進剤は、毛乳頭細胞増殖促進効果と美肌効果のヽずれかを標榜することも、その両方を標榜して販売することも可能である。

[0023] また、本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤を、例えば、自毛を、頭皮の脱毛部位に移植する植毛手術の際に、後頭部や側頭部の健康な毛髪の部位を外科的に採取した頭皮から、毛髪 (毛根部位)を移植用に、 1本乃至数本に分離する時に使用する洗浄液や、毛髪の処理液乃至保存液、又は乾燥防止液などの水系媒体として使用し、毛根の部位を一定時間、当該毛乳頭細胞増殖促進剤と接触せしめることにより、植毛後の毛根の毛乳頭細胞や毛包上皮幹細胞の増殖を促進し、移植した毛髪の着生率の向上及び毛髪形成の促進をは力ることができる。また、植毛時に休止期にある移植毛の毛根にあっても、その毛周期を回転させて、発毛期に移行させることできるので、より効果的に毛髪の形成を促進させることができる。さらに、これらの物質は、毛包上皮幹細胞に対する細胞増殖促進効果も有することから、健康な毛髪から採取した毛乳頭細胞や毛包上皮幹細胞を、試験管内で培養増殖させ、そのまま或いは凍結保存後に、再度、頭皮に移植して毛髪を再生する場合にも、試験管内でのこれらの細胞の増殖促進、及び、移植部位でのこれらの細胞の着生率向上や毛髪形成の促進にも有利に利用することができる。し力も、これらの物質のもつ移植毛の着生率の向上作用及び毛髪形成の促進作用は、当該毛乳頭細胞増殖促進剤を、移植後の頭皮に皮膚外用剤として使用した場合や、経口摂取、注射投与などにより直接体内に投与した場合にぉ、ても発揮される。

[0024] 以下、実験に基づいて、より詳細に本発明を説明する。

[0025] <実験 1：正常ヒト頭髪毛乳頭細胞の増殖に及ぼす Lーァスコルビン酸類、ヘスペリジン、ルチン、リボフラビン又は感光素 301号の影響 >

正常ヒト頭髪毛乳頭細胞の増殖に及ぼす Lーァスコルビン酸類、ヘスペリジン、ルチン、リボフラビン又は感光素 301号の影響を調べる実験を、ヒト毛乳頭細胞を使用して、以下のようにしておこなった。

[0026] <正常ヒト頭髪毛乳頭細胞の調製 >

正常ヒト頭髪毛乳頭細胞 (東洋紡績株式会社販売、商品名「正常ヒト頭髪毛乳頭細胞」）（以下、「ヒト毛乳頭細胞」と略記する場合がある。）を、 1容積％ゥシ胎児血清（以下、「FCS」と略記する。）を含むヒト毛乳頭細胞培養培地 (東洋紡績株式会社販売、商品名「毛乳頭細胞増殖培地」、「正常ヒト頭髪毛乳頭細胞」に同梱）を用いて、 37°C、 5容積⁰ /oCOの条件で、 75cm²のカルチャーフラスコ（コ

2 一-ング社販売、商品名「75cm²カルチャーフラスコ」）で培養した。この細胞 (継代数 4)を、 0. 05%トリプシン含有リン酸緩衝生理食塩水を用いて回収し、 1容積％FCSを添加したダルべッコゥの MEM培地（ギブコ社販売、以下、「DMEM」と略記する。）に再懸濁し、 96 ゥエルのマイクロプレート (岩城硝子株式会社販売、商品名「コラーゲンタイプ: [コート

96ゥエルプレート」）に、 1. 5 X 10³細胞 Z50/z lZゥエルで播種し、以下の試験に使用した。

[0027] <ヒト毛乳頭細胞の増殖効果の判定 >

L—ァスコルビン酸（以下、「AsA」と略記する場合がある。）、 L ァスコルビン酸 2 ダルコシド (株式会社林原生物化学研究所販売、商品名「AA2G」、純度 98%以上）（以下、「AA—2G」と略記する場合がある。）、ヘスペリジン (シグマ社販売、商品名「ヘスペリジン」）、ルチン (シグマ社販売、商品名「ルチン」）、リボフラビン (シグマ社販売、商品名「リボフラビン」）及び感光素 301号 (株式会社林原生物化学研究所販売、商品名「タカナール」、純度 99%以上)を試験試薬として使用し、その何れ力 1 種を、最終濃度が、表 1又は表 2に記載の濃度となるように、 1容積％の FCS添加 D MEM培地に添加し試験液を調製した。これら何れかの試験液を、先に調製したヒト毛乳頭細胞培養 96ゥエルプレートに 50 1Zゥエルで添カ卩し、 5容積⁰ /oCO、 37°C

2 の条件で、 4日間培養後、 MTT法を用いてヒト毛乳頭細胞の増殖率を求め、その結果を表 1又は表 2に示す。なお、ヒト毛乳頭細胞の増殖率（％)は、 1容積％FCS添加 DMEMに、塩基性線維芽細胞増殖因子（以下、「bFGF」と略記する場合がある。 ) を最終濃度 lOngZmlになるように加えて培養したヒト毛乳頭細胞を陽性対照とし、 1 容積％FCS添加 DMEMのみで培養したヒト毛乳頭細胞を陰性対照として用い、 45 Onmの吸光度を測定して、次式により求めた。増殖率 (％) = { (試料の吸光度-陰性対照の吸光度） ÷ (陽性対照の吸光度-陰性対照の吸光度） } X 100

[0028] [表 1]

]

表 1から明らかなように、 L—ァスコルビン酸 2—ダルコシドは 10 /Z Μ乃至 10mMの濃度で、濃度依存的にヒト毛乳頭細胞の増殖促進作用を示した。一方、 Lーァスコルビン酸を単回添加した場合、 100 μ Μ以下ではヒト毛乳頭細胞の増殖促進作用は認められず、 ImM以上添カ卩した場合には細胞毒性が認められた。また、 Lーァスコルビン酸を、投与開始日力 1日 1回、 3日間添カ卩した場合、 10 M乃至 100 Mでヒト毛乳頭細胞増殖促進作用が認められたことから、 1)ヒト毛乳頭細胞の増殖促進作用は、 Lーァスコルビン酸の作用によるものであり、 2) L—ァスコルビン酸 2—ダルコシドは、 Lーァスコルビン酸に比して、細胞毒性が低ぐ且つ、培地中でも安定で、毛乳頭細胞に存在する α ダルコシダーゼの作用により、徐々に分解されて L ァスコルビン酸になることから、より強い細胞増殖作用が得られると推測された。また、表 2 力明らかなように、感光素 301号、ヘスペリジン、ルチン或いはリボフラビンを添カロした場合には、各々 0. OlnM乃至の濃度でヒト毛乳頭細胞の増殖促進作用が認められた。また、 L ァスコルビン酸 2—ダルコシドが濃度依存的なヒト毛乳頭細胞の増殖促進作用を示したのに対して、感光素 301号、ヘスペリジン、ルチン或いはリボフラビンは、特定の濃度範囲でのヒト毛乳頭細胞の増殖促進作用を示し、それを越えた濃度では逆に細胞の増殖が抑制されたことから、 Lーァスコルビン酸 2—ダルコシドと、感光素 301号、ヘスペリジン、ルチン或いはリボフラビンとは、毛乳頭細胞増殖促進の作用機作が異なって、るものと推測された。

<実験 2：ヒト毛乳頭細胞の増殖に及ぼすダルコシルヘスペリジン、ダルコシルルチン、グノレコシノレナリンジン、マノレトース、 _a , —トレノヽロース、マノレチトーノレ、 a マルトシル a , a -トレハロース、環状-ゲロシル-ゲロース或、は環状マルトシルマルトースの影響 >

ヒト毛乳頭細胞の増殖に及ぼすダルコシルヘスペリジン、ダルコシルルチン、ダルコシノレナリンジン、マノレトース、 (X , α トレノヽロース、マノレチトーノレ、 α マノレトシノレ α , a トレハロース、環状-ゲロシル-ゲロース或いは環状マルトシルマルトースの影響を調べる実験を、以下のようにしておこなった。すなわち、ダルコシルヘスペリジン（株式会社林原生物化学研究所販売、試薬級、純度 98%以上）、ダルコシルルチン（株式会社林原生物化学研究所製造、純度 98%以上）、ダルコシルナリンジン (株式会社林原生物化学研究所製造、純度 98%以上)、マルトース (株式会社林原生物化学研究所販売、試薬級、純度 99%以上）、 α , α トレハロース (株式会社林原生物化学研究所販売、化粧品用、純度 99%以上)、マルチトール (株式会社林原生物化学研究所販売、試薬級、純度 99%以上） a マルトシル α , a トレハロース (株式会社林原生物化学研究所製造、純度 98%以上)、環状二ゲロシルニゲロース (株式会社林原生物化学研究所製造、純度 98%以上）、環状マルトシルマルトース (株式会社林原生物化学研究所製造、純度 98%以上)を試験試薬として使用し、その何れ力 1種を、最終濃度が、表 3或いは表 4に記載の濃度となるように、 1容積％の FCS添加 DMEM培地に添カ卩し試験液を調製した。これら何れかの試験液を、実験 1と同様に調製したヒト毛乳頭細胞培養 96ゥエルプレートに 50 1Zゥエルで添カ卩し、 5容積 %CO、 37°Cの条件で、 4日間培養後、実験 1と同じ方法で、 MTT法を用いてヒト毛

2

乳頭細胞の増殖率（％)を求め、ダルコシルヘスペリジン、ダルコシルルチン或いはダルコシルナリンジンを添カ卩した場合の結果を表 3に、マルトース、 a , α—トレハロース、マノレチトーノレ、 —マノレトシノレ α , —トレノヽロース、環状-ゲロシノレ-ゲロース、或いは、環状マルトシルマルトースを添カ卩した場合の結果を表 4に示す。

[表 3]

〔〕0033

毛乳頭細胞の増殖率

試験試薬試験試薬の添カロ量

(%)

環ト状シルレ 0. 1 5mM

a， 0.1

トチルトルルシーひ―.

卜レノヽ 5mM

トルスレロハー 1.

一 0.3

1 5m 0.2

1 50 mM 0.1

0. 1 5mM 0.3

1 1

a D 1. 5mM 5.2

15mM 11.4

1 5 O mM 12.4

Λ

、 0. 1 5mM 0.1

1

- 1. 5 mM 4.9

1 5mM 10.5

1 5 OmM 11.1

0. 0 7 5m 0.2

0. 7 5mM 6.6

7. 5mM 13.6

s 7 5mM 13.1

0. 0 7 5mM 0.1

I 0. 7 5mM 6.6

7. 5mM 13.3

11 il

7 5mM 13.7

0. 0 7 5 mM 0.3

0. 7 5mM 5.1

7. 5mM 13.7

7 5mM 14.2 表 3から明らかなように、ダルコシルヘスペリジン、グノレコシルノレチン或いはダルコシルナリンジンを添カ卩した場合には、各々 0. OlnM乃至の濃度でヒト毛乳頭細胞の増殖促進作用が認められた。この結果は、ダルコシルヘスペリジン、ダルコシルルチン或いはダルコシルナリンジンは、特定の濃度範囲で、毛乳頭細胞の増殖促進作用を有することを物語っている。なお、表 2と表 3を対比すると、同濃度のルチンとダルコシルルチンが同程度の増殖促進作用を示したのに対して、同濃度のダルコシルヘスペリジンとヘスペリジンとでは、ダルコシルヘスペリジンの方が、何れの濃度においても低い増殖促進効果しか示さなかったのは、この実験系では、ダルコシルルチンとダルコシルヘスペリジンとで、ヒト毛乳頭細胞に由来する α ダルコシダーゼによる分解の速度に差があるためと推測された。また、表 4から明らかなように還元糖のマルトースを添加した場合には、毛乳頭細胞に増殖は認められな力つた。これに対して、還元糖の α , —トレノヽロース、マノレチトーノレ、 a—マノレトシノレ , —トレノヽロース、環状-ゲロシル-ゲロース、或いは、環状マルトシルマルトースを添カ卩した場合には、何れの非還元性糖類を添加した場合においても、濃度に依存した毛乳頭細胞の増殖が認められた。 α , α トレハロース及びマルチトールを添加した場合には、 1. 5mM以上の添加で、毛乳頭細胞増殖促進効果が認められ、 15mM以上の添加で、その効果は顕著となった。また、 α マルトシル α , a トレハロース、環状- ゲロシル-ゲロース、或いは、環状マルトシルマルトースを添カ卩した場合には、 0. 75 mM以上の添加で毛乳頭細胞増殖促進効果が認められ、 7. 5mM以上の添加で、その効果は顕著となった。これら非還元性糖類による毛乳頭細胞増殖促進効果は、添力卩量を増やしても細胞増殖は抑制されないことから、ダルコシルヘスペリジン、ダルコシルルチン或いはダルコシルナリンジンによる毛乳頭細胞増殖促進のメカニズムとは異り、ァスコルビン酸類を添加した場合と類似して、ることを物語って、る。

<実験 3： L ァスコルビン酸 2 ダルコシドのヒト毛乳頭細胞増殖促進作用に及ぼす感光素 301号、ヘスペリジン、ダルコシルルチン、リボフラビン、 α , α—トレハロース或いは環状-ゲロシル-ゲロースの影響 >

実験 1及び実験 2から、 Lーァスコルビン酸 2—ダルコシドゃ非還元性糖類と、感光素 301号、ヘスペリジン、ダルコシルルチン或いはリボフラビンとは、ヒト毛乳頭増殖の作用機作が異なることが判明したので、 L ァスコルビン酸 2—ダルコシドの毛乳頭細胞増殖促進作用に及ぼす感光素 301号、ヘスペリジン、ダルコシルルチン、リボフラビン、 a , α—トレハロース或いは環状-ゲロシル-ゲロースの影響を調べる実験を、以下のようにしておこなった。すなわち、 Lーァスコルビン酸 2—ダルコシド（株式会社林原生物化学研究所販売、商品名「AA2G」、純度 98%以上）、感光素 301号 (株式会社林原生物化学研究所販売、商品名「タカナール」）、ヘスペリジン (シグマ社販売、商品名「ヘスペリジン」）、リボフラビン (シグマ社販売、商品名「リボフラビン」 )、ダルコシルルチン (株式会社林原生物化学研究所製造、純度 98%以上）、 a , a —トレハロース (林原生物化学研究所販売、試薬級、純度 99%以上)及び環状-ゲロシル-ゲロース (株式会社林原生物化学研究所製造、純度 98%以上)を試験薬剤として使用し、最終濃度が、表 5に記載の濃度となるように、 1容積％の FCSを含む D MEM培地に添加し試験液を調製した。これら何れかの試験液を、実験 1と同じ方法で調製したヒト毛乳頭細胞培養 96ゥエルプレートに 50 1Zゥエルで添カ卩し、 5容積 %CO、 37°Cの条件で、 4日間培養後、 MTT法を用いて実験 1と同じ方法で、各試

2

験液で培養したヒト毛乳頭細胞の増殖率を求めた。この増殖率を使用して、 Chou J . H. (「 synergism and antagonism m chemotherapy」 , 223— 241, 199 1参照）の理論に基づき、 Lーァスコルビン酸 2—ダルコシドと他の試験試薬の二剤を併用した時の L -ァスコルビン酸 2 -ダルコシドの投与量の併用効果指数 (Combin ation Index,以下「CI」と略記する。）を、 CI計算用ソフト（力ルックシン（CalcuSyn )、バイオソフト (BIOSOFT)社 (英国)販売)で計算し、その結果を表 5に示す。また、 CIに基づぐ二剤併用時の相乗効果の程度は、表 6に示す当該計算ソフトに添付されたマニュアルに記載の判定基準に基づき判定し、併せて、表 5に示す。

[表 5]

試験液に含まれる試験薬剤の毛乳頭細胞の C I

濃度と種類相乗作用の程度増殖率（％)

1 mM AA- 2 G +

1 nM 感光素 30 1号 59.4 0.40 相乗作用有り

1 mM AA- 2 G +

1 nM ヘスペリジン 67.9 0.19 強い相乗作用有り

1 mM AA- 2 G +

1 nM リボフラビン 72.2 0.15 強い相乗作用有り

1 mM AA- 2 G +

1 nM グルコシノレノレチン 69.0 0.17 強い相乗作用有り

1 mM AA- 2 G +

1. 5 mM α , ひ一卜レノヽロース 60.3 0.39 相乗作用有り

1 mM AA- 2 G +

0. 75mM 環状ニゲロシル 61.2 0.36 相乗作用有りニゲロース [表 6]

表 5及び表 6から明らかなように、 L—ァスコルビン酸 2—ダルコシド (AA— 2G)と感光素 301号とを併用した場合には、 CIが 0.40となり、ヒト毛乳頭細胞の増殖促進に対して、相乗効果があることが確認された。また、 L—ァスコルビン酸 2—ダルコシドと、ヘスペリジン、ダルコシルルチン或いはリボフラビンの何れ力とを併用した場合には、CIが 0. 1-0.3の範囲内となり、 L—ァスコルビン酸 2—ダルコシドと、ヘスペリジン、ダルコシルルチン或いはリボフラビンとの併用により、ヒト毛乳頭細胞の増殖促進に対して、強い相乗効果があることが確認された。また、 Lーァスコルビン酸 2—ダルコシド (AA— 2G)と、 a , α—トレハロース或いは環状-ゲロシル-ゲロースとを併用した場合にも、 CIが、各々 0. 39、 0. 36となって、ヒト毛乳頭細胞の増殖促進に対して、相乗効果があることが確認された。これらの試験結果は、 Lーァスコルビン酸 2—グルコシドと感光素 301号、ヘスペリジン、ダルコシルルチン、リボフラビン、或いは、 a , _α 一トレハロースゃ環状-ゲロシル-ゲロースなどの非還元性糖類とを併用することにより、優れた毛乳頭細胞増殖促進剤が調製できることを物語っている。

<実験 4：毛周期に及ぼす L ァスコルビン酸 2 ダルコシド、ダルコシルヘスベリジン、ダルコシルルチン、ダルコシルリボフラビン、ダルコシルナリンジン、感光素 301号或いは α , a トレハロースの糖質誘導体の影響 >

毛周期に及ぼす Lーァスコルビン酸 2—ダルコシド、ダルコシルヘスペリジン、グルコシルルチン、ダルコシルリボフラビン、ダルコシルナリンジン、感光素 301号、或いは α , α トレハロースの糖質誘導体の影響を調べる試験を以下のように行った。すなわち、 L ァスコルビン酸 2—ダルコシド (株式会社林原生物化学研究所販売、商品名「AA2G」、純度 98%以上）、ダルコシルヘスペリジン (株式会社林原生物化学研究所販売、試薬級、純度 98%以上）、ダルコシルルチン (株式会社林原生物化学研究所製造、純度 98%以上）、ダルコシルリボフラビン (株式会社林原生物化学研究所製造、純度 98%以上）、ダルコシルナリンジン (株式会社林原生物化学研究所製造、純度 98%以上)及び感光素 301号 (株式会社林原生物化学研究所販売、商品名「タカナール」、純度 98%以上） , a , a トレハロースの糖質誘導体含有糖質 (株式会社林原生物化学研究所販売、商品名「トルナーレ」、 α マルトシル α , α—トレハロースを無水物換算で約 53%含有)を試験試薬として使用した。 L ァスコルビン酸 2—ダルコシド 1%、クェン酸 1%、クェン酸ナトリウム 1%、 70%エタノール 90% 、硬化ヒマシ油エチレンォキシド (40モル付加物） 1%力なる基本処方に、表 7に示す前記試験試薬の何れか 1種を、表 7に示す量添カ卩し、適量のイオン交換水を加えて全量を 100%として、常法により試験用の育毛料 Nol乃至育毛料 Νο6を調製した。また、基本処方に適量のイオン交換水をカ卩えて全量を 100%とした育毛料 Νο7及び、陰性対照として、基本処方力 L—ァスコルビン酸 2—ダルコシドを除いた処方に適量のイオン交換水をカ卩えて、全量を 100%として育毛料 Νο8を調製した。なお、 a , α—トレハロースの糖質誘導体含有糖質は、 α—マルトシル α , ひ一トレハロースの配合割合が 0. 5%となるように添加した。

[0040] <毛周期に及ぼす影響の確認試験 >

試験用の育毛料 Nol乃至育毛料 No 7及び陰性対照（育毛料 No8)の育毛料を用いてこれらの育毛料の毛周期に及ぼす影響を調べるために、ヒトに対して、以下の方法で試験を実施した。すなわち、育毛料 Nol乃至育毛料 No7或いは陰性対照（育毛料 No8)の何れ力 1種を、男性型脱毛に悩む男性 10名（合計 80名）を被験者として、 1日に朝晩 2回、 6ヶ月間使用を続けてもらった。育毛料の有効性評価は、塗布直前及び塗布終了直後に、被験者 1名につき脱毛部位に残存している毛髪を、無作為に 30本抜毛し、毛根を顕微鏡で観察した。毛根の形態により、休止期毛根数を計数し、休止期毛根の割合を求め、休止期毛根の割合が、試験育毛料塗布前に比して 20%以上減少、 20%未満減少乃至 20%未満増加、 20%以上増加の 3群に分けて、その人数を表 7に示す。また、各試験育毛料を塗布した被験者に占める、休止期毛根の割合が、塗布前に比して 20%以上減少した被験者の割合 (％)を求め、下記の判定基準に基づき、毛周期の回転に及ぼす効果を評価して、結果を表 7に示す。なお、試験を通じて、安全性に関する問題は見られな力た。

[0041] 休止期毛根の割合の増減により、育毛料 Nol乃至育毛料 No7及び陰性対照の育毛作用を比較した。休止期毛根とは成長の止まった毛の毛根であり、脱毛を訴えるヒトは、正常なヒトよりもこの休止期毛根の割合が多いことが認められているので育毛作用の効果は、下記の判定基準で評価した。

[0042] <判定基準 >

休止期毛根の割合が育毛料使用前に比して 20%以上減少した被験者が、 40% 以上である場合を「有効」、 20%以上 40%未満である場合を「やや有効」、 20%未満である 2合を「無効」とした。

[0043] [表 7] 育毛料

グコダルコググ

感光素

期あ毛根休止るに試験試薬の種類無添加無添カロ号

変率別被験化のの糖質誘導体

者数

試験試薬の配合割合（％)

添加の有無有有有有有有有

以上減少

未満減少乃

至 %未満増加

%以上増加

休止期にある毛根が

以上減少した被験者の割合

<%)

効果の評価有効有効有効有効有効有効やや有効無効

[0044] 表 7から明らかなように、 Lーァスコルビン酸 2—ダルコシドと、ダルコシルヘスベリジン（育毛料 No 1)、ダルコシルルチン（育毛料 No2)、ダルコシルリボフラビン（育毛料 No3)、ダルコシルナリンジン（育毛料 No4)、感光素 301号（育毛料 No5)或いは α トレハロースの糖質誘導体含有糖質 (育毛料 No6)の何れ力 1種とを併用した育毛料を使用した場合には、休止期毛根の割合が、使用前に比して減少することが明ら力となった。その効果は、 Lーァスコルビン酸 2—ダルコシドとダルコシルヘスペリジン或いはダルコシルルチンとを併用した場合に最も高くなつた。また、試験試薬として Lーァスコルビン酸 2 ダルコシドのみを含む基本処方の育毛剤（育毛料 No7)を使用した場合にも、試験試薬 2剤を併用した場合 (育毛料 No 1乃至育毛料 No6)よりは弱いながら、使用前に比して休止期毛根の割合の減少が認められた。これらに対して、 L ァスコルビン酸 2—ダルコシド、ダルコシルヘスペリジン、ダルコシルルチン、ダルコシルリボフラビン、ダルコシルナリンジン及び感光素 301号の何れも含まない陰性対照 (育毛料 No8)を使用した場合には、使用前に比して休止期毛根の割合の減少は殆ど認められなかった。

[0045] <実験 5：自毛植毛した際の毛乳頭細胞の増殖に及ぼす Lーァスコルビン酸 2 グルコシド、ダルコシルヘスペリジン、ダルコシルルチン、ダルコシルリボフラビン、感光素 301号、 a , α トレハロース或いは α マルトシル α , α—トレハロースの影響 >

自毛植毛した際の毛乳頭細胞の増殖に及ぼす L ァスコルビン酸 2—ダルコシド、糖転移ヘスペリジン、糖転移ルチン、糖転移リボフラビン、感光素 301号、ひ，ひトレハロース或いは _a マルトシル _a , a トレハロースの影響を調べる実験を自毛移植の際の移植毛を使用して、以下のようにしておこなった。

[0046] <自毛移植用の移植毛の調製 >

自毛植毛を希望する脱毛症の男性 80名を、無作為に 10名ずつ 8つのグループに分けた。各自の後頭部の健康毛の部位から、常法により、毛髪のはえた頭皮を、外科的に採取した。採取した頭皮を、抗菌剤を含む生理食塩水で洗浄後、試験試薬として、実験 1で使用したものと同じ Lーァスコルビン酸 2—ダルコシド、及び、実験 2で使用したものと同じダルコシルヘスペリジン、ダルコシルルチン、ダルコシルリボフラビン、感光素 301号、 , α トレハロース或いは α マルトシル α , α—トレハロースの何れかを、生理食塩水に添加して、表 8に示す濃度となるように調製した処理液に 2時間浸漬し、その浸漬期間中に、処理液中で、個々の毛髪乃至休止期の移植毛を、移植用に切り分けた。対照として生理食塩水のみを使用した処理液で、移植用の毛髪乃至休止期の移植毛を調製した。

[0047] <移植した毛髪乃至休止期の毛髪の着生の有無の判定 >

処理液に 2時間浸漬した移植毛を、生理食塩水に移し、常法により、脱毛部位の頭皮に移植した。移植終了後、移植部位をデジタルカメラで撮影し、約 100本の毛髪を移植した部位を特定して、その範囲に移植した移植毛の本数を正確にカウントした。移植 60日後に、前に撮影したデジタルカメラの映像を基に、移植時にその移植毛の本数をカウントした部位について、移植毛の数をカウントし、移植時の本数で除し、 1 00倍して、移植毛の着生率（％)を求め、その結果を表 8に示す。

[0048] [表 8] 試験試薬移植毛の着生率

(%)

対照 34. 7

1 0 0 n M 感光素 3 0 1号 44. 1

1 0 0 n M グノレコシノレへスぺリジン 47. 6

1 0 0 n M グルコシルルチン 45. 2

1 0 0 n M ダルコシルリボフラビン 50. 8

1 O mM ァスコルビン酸 2—ダルコシド 56. 9

1 5 mM , α—トレノヽロース 44. 5

7 . 5 mM α—マルトシノレ

, α— トレノヽロース 46. 6

[0049] 表 8から明らかなように、対照として使用した生理食塩水中で処理した移植毛を移植した場合の着生率は、 34. 7%だったのに対して、ァスコルビン酸 2—ダルコシド、ダルコシルヘスペリジン、ダルコシルルチン、ダルコシルリボフラビン、感光素 301号、 , α—トレハロース或いは α—マルトシル α , α—トレハロースを添カ卩した生理食塩水中で処理した移植毛の着生率は、各 44. 1%、 47. 6%、 45. 2%、 50. 8%、 5 6. 9%、 44. 5%、 46. 6%となって、何れの場合も、対照よりも高い着生率を示した。この試験結果は、移植毛を頭皮に移植する前に、 Lーァスコルビン酸 2—ダルコシド、感光素 301号、ダルコシルヘスペリジン、ダルコシルルチン、ダルコシルリボフラビン、 a , α—トレハロース或いは α—マノレトシノレ α , α—トレハロースを含有する溶液で処理することにより、移植毛の頭皮への着生率を向上できることを物語っている。

[0050] <実験 6 : L—ァスコルビン酸 2—ダルコシドのヒト毛髪の自毛移植の着生に及ぼす感光素 301号、ダルコシルヘスペリジン、ダルコシルダルコシルルチン、ダルコシルリボフラビン、 α , α—トレハロース、或いは、 α—マルトシル α , α—トレハロースの影響 >

実験 5から、 Lーァスコルビン酸 2—ダルコシド、感光素 301号、ダルコシルヘスペリジン、ダルコシルルチン、ダルコシルリボフラビン、 α , α—トレハロース、或いは、 α マルトシル α , α—トレハロースは、自毛移植時の移植毛の着生率を向上させる作用があることが判明したので、 L ァスコルビン酸 2—ダルコシドの移植毛の着生に及ぼす感光素 301号、ダルコシルヘスペリジン、ダルコシルルチン、ダルコシルリボフラビン、 α , α トレハロース、或いは、 α—マルトシル α , α トレハロースの影響を調べる実験を、以下のようにしておこなった。すなわち、実験 5で使用したものと同じ試験薬剤を使用し、最終濃度が、 Lーァスコルビン酸 2—ダルコシドは、実験 5の 10 分の 1の ImMとし、 L ァスコルビン酸 2—ダルコシド以外は、実験 5と同じ濃度として、表 9に示す濃度となるように、処理液を調製した。これらの処理液を使用して、実験 5と同一の方法、条件で、各処理液につき 10名の脱毛症の男性に自毛植毛を実施した。植毛後 60日目に、実験 5と同じ方法で移植毛の本数をカウントして、着生率を求めて、 Lーァスコルビン酸 2—ダルコシドと感光素 301号、ダルコシルヘスベリジン、ダルコシルダルコシルルチン、ダルコシルリボフラビン、 _α , _a—トレハロース、或いは、 α—マルトシル α , α トレハロースとの併用の効果を調べて、その結果を表 9に示した。

[表 9]

試験液に含まれる試験薬剤の移植毛の着生

率（％)

1 mM AA— 2G 43.4

1 mM AA— 2G +

1 00 nM 感光素 301号 66.3

1 mM A A- 2 G +

1 00 n M ダルコシルヘスぺリジン 68.5

1 mM AA— 2G +

1 00 nM ダルコシルリボフラビン 73.1

1 mM AA- 2 G +

74

1 00 nM グノレコシ /レノレチン .2

1 mM AA- 2 G +

59.3

1 5 mM α , α—トレノヽ口—ス

1 mM AA- 2 G +

7. 5 mM ―マルトシル 61.2

a , a トレノヽ口一ス表 9から明らかなように、 L—ァスコルビン酸 2—ダルコシド（AA— 2G)と、感光素 3 01号、ダルコシルヘスペリジン、ダルコシルルチン、ダルコシルリボフラビン、 a, a トレハロース或いは _a マルトシルひ， _a トレハロースの何れかとを併用した場合に ίま、移植毛の着生率力各々 66. 3%, 68. 5%, 73. 1%, 74. 2%, 59. 3% 、 61. 2%となって、何れの場合も、 L ァスコルビン酸 2—ダルコシド単独の場合の着生率 (43.4%)よりも高い値を示した。また、表 9と表 8との比較から明らかなように、感光素 301号、ダルコシルヘスペリジン、ダルコシルルチン、ダルコシルリボフラビン、 a, a トレハロース或いは a—マノレトシノレ a, a トレハロースの何れかを単独で使用した場合よりも、その着生率が向上していることから、感光素 301号、ダルコシルヘスペリジン、ダルコシルルチン、ダルコシルリボフラビン、 _a, a—トレハロース或いは a—マルトシル a , a—トレハロースには、 L ァスコルビン酸 2—ダルコシドによる移植毛の着生率増強効果をさらに増強する作用があることが確認された。この実験結果は、自毛移植の際に、移植毛を頭皮に移植する前に、 Lーァスコルビン酸 2— ダルコシドと感光素 301号、ダルコシルヘスペリジン、ダルコシルルチン、ダルコシルリボフラビン、 ex , a—トレハロース或いは ex—マルトシル α , —トレハロースとを併用して処理すること〖こより、 L ァスコルビン酸 2 -ダルコシドを単独で使用するよりも、移植毛の頭皮への着生率を向上できることを物語っている。

[0053] これらの実験結果は、 Lーァスコルビン酸 2 ダルコシド、ダルコシルヘスペリジン、ダルコシルルチン、ダルコシルリボフラビン、ダルコシルナリンジン、感光素 301号或いは α , a トレハロースをはじめとする非還元性糖類は、毛乳頭細胞の増殖を促進し、毛周期における休止期の毛根の割合を低減すると共に、毛根を活性化することができるので、これらの物質の 1種又は 2種以上を用いることによって、優れた育毛効果 (発毛効果、脱毛抑制効果を含む)や自毛植毛時の移植毛の頭皮への着生率向上効果を得ることができることを物語っている。また、 L ァスコルビン酸 2—ダルコシドと、ダルコシルヘスペリジン、ダルコシルルチン、ダルコシルリボフラビン、ダルコシルナリンジン、感光素 301号或いは a , a トレハロースをはじめとする非還元性糖類から選ばれる 1種又は 2種とを併用することにより、 L ァスコルビン酸 2—ダルコシドのもつ毛乳頭細胞の増殖を促進し、毛周期における休止期の毛根の割合を低減すると共に、毛根を活性化する作用を、さらに増強できることを物語っている。

[0054] 以下、実施例により、本発明をさらに具体的に説明する力この実施例により、本発明の技術的範囲が限定的に解釈されるべきものではない。なお、以下の実施例の各成分の配合量は、特に断わらない限り、配合される対象物全体に対する割合 (％)で示す。

実施例 1

[0055] <毛乳頭細胞増殖促進剤 >

以下の成分を以下の配合で均一に混合して、毛乳頭細胞増殖促進剤を調製した。

[0056] 含水結晶 α , α トレハロース (株式会社林原商事

販売、商品名「トレハ」） 69

L ァスコルビン酸 2—ダルコシド（株式会社林原

生物化学研究所販売、商品名「AA2G」 ) 28

ダルコシルヘスペリジン (株式会社林原生物化学研究所販売、商品名「林原ヘスペリジン S」 ) 1

ダルコシルルチン (株式会社林原商事販売、商品名

「a Gノレチン」） 1

ダルコシルリボフラビン (株式会社林原生物化学研

究所製造） 1

[0057] 本品は、毛乳頭細胞増殖促進作用ゃ自毛植毛時の移植毛の頭皮への着生率向上作用を示し、皮膚に潤いを与え、皮膚の老化防止に奏効する、簡便に利用できかつ著効を示す毛乳頭細胞増殖促進剤である。また、本品は、適度な酸味により良好な呈味を示すので、毛乳頭細胞増殖促進のために用いられる旨の表示を付して、毛乳頭細胞増殖促進のための健康補助食品として、このまま経口的に摂取することも、又、水やその他の飲料などに溶解して摂取することも随意である。さらには、特別用途食品、保健機能食品、化粧品、医薬部外品、医薬品、飼料、ペットフード、雑貨などに配合して、これらに毛乳頭細胞増殖促進作用を付与することも随意である。また、本品を、注射剤の製造原料として使用することも随意である。

[0058] 本品を、 1容積⁰ /oFCS添カ卩 DMEMで、ダルコシルヘスペリジンの濃度が 0. 5 M となるように希釈して、実験 1に記載の方法により測定したところ、明確な毛乳頭細胞増殖促進作用が確認された。

実施例 2

[0059] <毛乳頭細胞増殖促進剤 >

[0060] a , α—トレハロースの糖質誘導体含有シラップ（

株式会社林原生物化学研究所販売、商品名「トルナ

一レ」） 75

L ァスコルビン酸 2—ダルコシド（株式会社林原

生物化学研究所販売、商品名「AA2G」 ) 24

ダルコシルヘスペリジン (株式会社林原生物化学研

究所販売、商品名「林原ヘスペリジン S」） 0. 5

ダルコシルリボフラビン (株式会社林原生物化学研究所製造） 0. 3

感光素 301号 (株式会社林原生物化学研究所販売、

商品名「タカナール」） 0. 2

[0061] 本品は、毛乳頭細胞増殖促進作用ゃ自毛植毛時の移植毛の頭皮への着生率向上作用を示し、皮膚に潤いを与え、皮膚の老化防止に奏効する、簡便に利用できかつ著効を示す毛乳頭細胞増殖促進剤である。また、本品を、化粧品、医薬部外品、医薬品などの皮膚外用剤に配合して、これらに毛乳頭細胞増殖促進作用を付与することも随意である。

[0062] 本品を、 1容積⁰ /oFCS添カ卩 DMEMで、ダルコシルヘスペリジンの濃度が 200nMとなるように希釈して、実験 1に記載の方法により測定したところ、明確な毛乳頭細胞増殖促進作用が確認された。

実施例 3

[0063] <毛乳頭細胞増殖促進用剤 >

以下の成分を以下の配合で均一に混合して、液状の毛乳頭細胞増殖促進剤を調製した。

L -ァスコルビン酸 2 -ダルコシド 2

クェン酸 0. 01

クェン酸ナトリウム 0. 1

ダルコシルヘスペリジン 0. 5

ステアリルジメチルアミンォキシド 0. 5

硬化ヒマシ油エチレンォキシド（40モル)付加物 1

a , a -トレハロースの糖質誘導体含有糖質 (株式会

社林原生物化学研究所販売、商品名「トルナーレ） 1

95%エタノール 54

イオン交換水残量

[0064] 本品は、毛乳頭細胞増殖促進作用ゃ自毛植毛時の移植毛の頭皮への着生率向上作用を有し、かつ、育毛効果及び脱毛抑制作用を有する毛乳頭細胞増殖促進剤である。 [0065] 本品を、 1容積⁰ /oFCS添カ卩 DMEMで、ダルコシルヘスペリジンの濃度が 200nMとなるように希釈して、実験 1に記載の方法により測定したところ、明確な毛乳頭細胞増殖促進作用が確認された。

実施例 4

[0066] <毛乳頭細胞増殖促進剤 >

L -ァスコルビン酸 2 -ダルコシド 2

クェン酸 0. 01

クェン酸ナトリウム 0. 1

ダルコシルヘスペリジン 0. 5

N—ヤシラウリル βーァミノプロピオン酸ソーダ 0.2

ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム 0.5

硬化ヒマシ油エチレンォキシド（40モル)付加物 1

藍エキス (株式会社林原生物化学研究所販売、商品名

「藍ルーロス」） 1

95%エタノール 54

イオン交換水残量

[0067] 本品は、毛乳頭細胞増殖促進作用ゃ自毛植毛時の移植毛の頭皮への着生率向上作用を有し、かつ、育毛作用及び脱毛抑制作用を示す、優れた毛乳頭細胞増殖促進剤である。

[0068] 本品を、 1容積⁰ /oFCS添カ卩 DMEMで、ダルコシルヘスペリジンの濃度が 200nMとなるように希釈して、実験 1に記載の方法により測定したところ、明確な毛乳頭細胞増殖促進作用が確認された。

実施例 5

[0069] <毛乳頭細胞増殖促進剤 >

下記配合に基づき、 A相を 60°Cで加熱溶解し、これに溶解した B相を加え、次に C 相を添カ卩し混合した。これに D相を徐々に添カ卩し分散させ、ジエル状の毛乳頭細胞増殖促進剤を調製した。

(A相）

硬化ヒマシ油エチレンォキシド（60モル）付加物 2

グリセリン 10

ジプロピレングリコール 10

1,3—ブチレングリコーノレ 5

ポジエチレングリコーノレ 1500 5

ペンチレングリコール 3. 5

(B相)

カノレボキシビニノレポリマー 1%水溶液 30

へキサメタリン酸ソーダ 0.03

イオン交換水 8.35

(C相)

水酸化カリウム 0.12

イオン交換水 5

(D相)

L -ァスコルビン酸 2 -ダルコシド 2

水酸化カリウム 3

ダルコシルリボフラビン 0. 05

イオン交換水 15. 95

[0070] 本品は、毛乳頭細胞増殖促進作用ゃ自毛植毛時の移植毛の頭皮への着生率向上作用を有し、かつ、育毛作用及び脱毛抑制作用を示す、優れた毛乳頭細胞増殖促進剤である。

実施例 6

[0071] <毛乳頭細胞増殖促進剤 >

下記配合に基づき、 A相、 B相をそれぞれ加熱溶解して混合し、ホモミキサーで乳化してクリーム状の毛乳頭細胞増殖促進剤を調製した。

(A相）流動パラフィン 5

セトステアリルアルコール 5.5

グリセリルモノステアレート 3

EO (20モル）— 2—オタチルドデシルエーテル 3

プロピルパラベン 0.3

香料 0.1

(B相）

L -ァスコルビン酸 2 -ダルコシド 2

クェン酸 0. 01

クェン酸ナトリウム 0. 1

感光素 301号 0. 005

グリセリン 7

サイクリックマルトシルマルトース (株式会社林原生

物化学研究所製造） 1

ジプロピレングリコール 20

ポリエチレングリコール 4000 5

ドデシル硫酸ナトリウム 0.1

へキサメタリン酸ソーダ 0.005

イオン交換水残量

[0072] 本品は、毛乳頭細胞増殖促進作用ゃ自毛植毛時の移植毛の頭皮への着生率向上作用を有し、かつ、育毛作用及び脱毛抑制作用を示す、優れた毛乳頭細胞増殖促進剤である。

[0073] 男性型脱毛に悩む男性 10名に対して、本品を 1日に朝晩 2回、 1回 0. 5gを、 4ヶ月間脱毛部に使用してもらい、実験 4と同じ方法で、休止期の毛根の割合を測定したところ、試験開始前に比べて、 10名中 7名で、休止期の毛根の割合が、使用前に比して 20%以上減少した。

実施例 7

[0074] <毛乳頭細胞増殖促進剤 > 下記配合処方に基づき、 95%エタノールに適量のイオン交換水をカ卩え、これに、実施例 2の方法で調製した毛乳頭細胞増殖促進剤、硬化ヒマシ油エチレンォキシド ( 40モル)付加物及びポリオキシエチレンラウリルアミンォキシド、ジメチルラウリルアミンォキシドを加えた後、攪拌して、液状の毛乳頭細胞増殖促進剤を得た。

実施例 2の方法で調製した毛乳頭細胞増殖促進剤 1

ポリオキシエチレンラウリルアミンォキシド

ジメチルラウリルアミンォキシド

硬化ヒマシ油エチレンォキシド（40モル)付加物

マノレチトーノレ

95%エタノール

香料

イオン交換水

[0075] 本品は、毛乳頭細胞増殖促進作用ゃ自毛植毛時の移植毛の頭皮への着生率向上作用を有し、かつ、育毛作用及び脱毛抑制作用を示す、優れた毛乳頭細胞増殖促進剤である。

[0076] 本品を、 1容積⁰ /oFCS添カ卩 DMEMで、ダルコシルヘスペリジンの濃度が 200nMとなるように希釈して、実験 1に記載の方法により測定したところ、明確な毛乳頭細胞増殖促進作用が確認された。

実施例 8

[0077] <毛乳頭細胞増殖促進剤 >

下記配合処方に基づき、液状の毛乳頭細胞増殖促進剤を調製した。

L -ァスコルビン酸 2 -ダルコシド 2

クェン酸 0. 01

クェン酸ナトリウム 0. 1

グノレコシノレノレチン 0. 5

ダルコシルナリンジン (株式会社林原生物化学研究所製造）

感光素 301号 0. 001

N—ヤシラウリル βーァミノプロピオン酸ソーダ 0. ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム

硬化ヒマシ油エチレンォキシド（40モル)付加物

サイクリック二ゲロシノレニゲロース

95%エタノール

イオン交換水

[0078] 本品は、毛乳頭細胞増殖促進作用ゃ自毛植毛時の移植毛の頭皮への着生率向上作用を有し、かつ、育毛作用及び脱毛抑制作用を示す、優れた毛乳頭細胞増殖促進剤である。

[0079] 本品を、 1容積⁰ /oFCS添カ卩 DMEMで、ダルコシルヘスペリジンの濃度が 200nMとなるように希釈して、実験 1に記載の方法により測定したところ、明確な毛乳頭細胞増殖促進作用が確認された。

実施例 9

[0080] <毛乳頭細胞増殖促進剤 >

以下の成分を以下の配合で均一に混合して、粉末状の毛乳頭細胞増殖促進剤を調製した。

[0081] 含水結晶 α , α トレハロース (株式会社林原商事

販売、商品名「トレハ」） 65. 5

L ァスコルビン酸 2—ダルコシド（株式会社林原

商事販売、商品名「ァスコフレッシュ」） 15

キトサン 15

糖転移ヘスペリジン (株式会社林原商事販売、商品

名「林原ダルコシルヘスペリジン S」） 2

ダルコシルリボフラビン 1

アデノシンモノフォスフェイト 1

コェンザィム Q10 0. 5

[0082] 本品は、毛乳頭細胞増殖促進や自毛植毛時の移植毛の頭皮への着生率向上のために用いられる旨の表示を付して使用することのできる毛乳頭細胞増殖促進剤である。 [0083] 本品は、皮膚組織の血行を促進し、皮膚に潤いを与え、皮膚の張りゃ艷をよくし、シヮゃコジヮの改善にも優れた効果を有している。男性型脱毛に悩む男性 10名に対して、本品を 1日に朝晩 2回、 1回 lgを、 6ヶ月間食べ続けてもらい、実験 4と同じ方法で、休止期の毛根の割合を測定したところ、試験開始前に比べて、 10名中 6名で、休止期の毛根の割合が、使用前に比して 20%以上減少した。

実施例 10

[0084] <毛乳頭細胞増殖促進剤 >

粉末マルチトール 35

実施例 1の方法で調製した毛乳頭細胞増殖促進剤

粉末卵黄 19

脱脂粉乳 20

塩化ナトリウム 4. 5

塩ィ匕カリウム 1. 85

硫酸マグネシウム 4

チアミン 0. 01

ビタミン Eアセテート 0. 6

ニコチン酸アミド 0. 04

上記配合組成からなる配合物を調製した。この配合物 25質量部を精製水 150質量部に均一に分散 ·溶解させ、 200gずつ褐色ガラス瓶に封入した。

[0085] 本品を、 1容積⁰ /oFCS添カ卩 DMEMで、ダルコシルヘスペリジンの濃度が 200nMとなるように希釈して、実験 1に記載の方法により測定したところ、明確な毛乳頭細胞増殖促進作用が確認された。

[0086] 本品は、毛乳頭細胞増殖促進や自毛植毛時の移植毛の頭皮への着生率向上のために用いられる旨の表示を付して使用することのできる毛乳頭細胞増殖促進剤である。また、本品は、皮膚組織の血行を促進し、皮膚に潤いを与え、皮膚の張りゃ艷をよくし、シヮゃコジヮの改善にも優れた効果を示す。

産業上の利用可能性

[0087] 以上説明したように、本発明の L—ァスコルビン酸類、フラボノイド類、リボフラビン類、感光素 301号及びひ , a トレハロースをはじめとする非還元性糖類などの脂質の分解抑制作用を有する物質から選ばれる何れか 1種又は 2種以上を有効成分とする毛乳頭細胞増殖促進剤は、毛乳頭細胞の増殖を効果的に促進することができる。また、 L ァスコルビン酸類、フラボノイド類、リボフラビン類感光素 301号、及び、非還元性糖類は何れも、飲食品或いは皮膚外用剤に長期間使用されている安全性の極めて高い物質であり、本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤の有効成分として、副作用を懸念すること無く使用することができる。本発明は、斯くも顕著な作用効果を奏する発明であり、斯界に多大の貢献をする、誠に意義のある発明である。

Claims

請求の範囲

[1] 脂質の分解抑制作用を有する物質を有効成分とする毛乳頭細胞増殖促進剤。

[2] 脂質の分解抑制作用を有する物質が、 L—ァスコルビン酸類、フラボノイド類、リボフラビン類、感光素 301号及び非還元性糖類力選ばれる何れ力 1種又は 2種以上である請求の範囲第 1項記載の毛乳頭細胞増殖促進剤。

[3] Lーァスコルビン酸類が Lーァスコルビン酸 2—ダルコシドである、請求の範囲第 2 項記載の毛乳頭細胞増殖促進剤。

[4] フラボノイド類がヘスペリジン、ルチン、ナリンジン、これらの配糖体、ァグリコン及びァグリコン配糖体力選ばれる何れか 1種又 2種以上である請求の範囲第 2項又は第

3項記載の毛乳頭細胞増殖促進剤。

[5] 非還元性糖類が a , a—トレハロース、 a , a—トレハロースの糖質誘導体、マルチトール及び環状四糖から選ばれる何れか 1種又は 2種以上である請求の範囲第 2 項乃至第 4項の何れかに記載の毛乳頭細胞増殖促進剤。

[6] 毛乳頭細胞増殖促進作用を標榜してなる請求の範囲第 1項乃至第 5項の何れかに記載の毛乳頭細胞増殖促進剤。

[7] 自毛植毛の際の移植毛の頭皮への着生率向上剤としての請求の範囲第 1項乃至第 6項の何れかに記載の毛乳頭細胞増殖促進剤。

[8] 自毛植毛の際の移植毛の頭皮への着生率向上剤としての請求の範囲第 1項乃至第 6項の何れかに記載の毛乳頭細胞増殖促進剤の使用。