JP2015017123A - α−グリコシルヘスペリジンを含有する経口投与・摂取用のSCF産生抑制剤 - Google Patents
α−グリコシルヘスペリジンを含有する経口投与・摂取用のSCF産生抑制剤 Download PDFInfo
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Abstract
【解決手段】 α−グリコシルヘスペリジンを有効成分として含有するメラニン低下剤、皮膚明度低下抑制剤、皮膚粘弾性低下抑制剤、および皮脂量低下抑制剤、並びに、α−グリコシルヘスペリジンおよび/またはヘスペレチンからなるSCF産生抑制剤、かゆみ抑制剤。各剤は飲食品または経口剤(例えば、清涼飲料、錠菓、キャンディー、サプリメント等)として用いる。
【選択図】 図6
Description
1.群構成(被験者群)
被験者(n=25名)を、アクティブ群(α−Gヘスペリジン投与群。n=13名)と、プラセボ群(対照群。n=12名)の2群に分けた。
2.試験試料
試験品:アクティブ群投与試料。錠菓(α−Gヘスペリジン100mg含有/1錠)。1日量5錠(=1日のα−Gヘスペリジン摂取量500mg)。
対照品:プラセボ群投与試料。上記試験品からα−Gヘスペリジンを抜去したもの。1日量5錠。
3.試験試料摂取方法
被験者は、摂取開始日より試験品または対照品を1日1回、朝食後に5錠を、12週間にわたり経口摂取した。
4.試験実施スケジュール
試験試料摂取開始時に測定を行い、開始から6週間後に中間測定、さらに6週間後(=摂取開始から12週間後)に最終測定を行った。
5.皮膚測定方法
測定時(摂取開始時、開始から6週間後、12週間後)のいずれにおいても、一定時間恒温恒湿条件下で皮膚を馴化させた後に測定を行った。
頬部の一定部位の皮膚色を分光測色計CM−2600d(コニカミノルタホールディング(株)製)にて測定し、L*を計測した。
また同時に得られる皮膚反射スペクトルからLambert−Beerの式を用いて皮膚の吸光スペクトルを算出し、その吸光スペクトルが皮膚の主要な吸光成分であるメラニン、ヘモグロビンの吸光スペクトルの和で表せると仮定し、500〜700nmの範囲の10nmおきの21個の反射スペクトルを用いて重回帰分析することでメラニン量を算出した(特許第3727807号公報参照)。
またメラニン量変化量(Δ)(0週、6週、12週)の結果を図2に示す。図2の結果から明らかなように、メラニン量低下について、6週間、12週間とも、アクティブ群のほうが、プラセボ群よりもメラニン量が減少し、6週では統計学的な有意差が認められた。
頬部の一定部位の皮脂量をセブメーター(Courage+Khazaka Electronic GmbH)を用いて測定した。皮脂量の変化量(Δ)(0週、6週、12週)の結果を図3に示す。図3の結果から明らかなように、アクティブ群のほうが、プラセボ群よりも皮脂量の低下が抑制された。
頬部の一定部位の皮膚粘弾性を衝撃波測定装置・レビスコメーター(Courage+Khazaka Electronic GmbH)を用いて測定した。135度における粘弾性低下の変化量(Δ)(0週、6週、12週)結果を図4に示す。図4の結果から明らかなように、アクティブ群のほうが、プラセボ群に比べて、皮膚の粘弾性の低下が抑制された。
そこで本実施例2では、α−Gヘスペリジンのメラニン低下効果の作用機序を解明するために、以下の実験を行った。
正常なメラノサイトおよびメラノーマ細胞に特異的に存在する酵素であるチロシナーゼは、L−チロシンをメラニン色素へと生成転換する。そこでα−Gヘスペリジンのメラニン低下効果の作用機序がチロシナーゼ依存性であるかどうかを調べた。
まず、B16メラノーマ細胞からのメラニン生成に対する作用を下記試験方法により検討した。
マウス由来B16メラノーマ細胞を5×104cells/wellの細胞密度で10%FBS−DMEM培地を用いて24穴プレートに播種し、1日間プレ培養した後、α−Gヘスペリジンのアグリコンであるヘスペリジン(質量分子量:610.56)および該ヘスペリジンのアグリコンであるヘスペレチン(質量分子量:302.30)をそれぞれ1μg/mL、3μg/mL、10μg/mL、30μg/mLの濃度となるよう添加した(終濃度0.5%DMSO含有培地に溶解して添加)。3日間培養した後、培地を除去し、PBS洗浄後、各wellに2N−NaOHを加えて細胞を溶解し、この細胞溶解液の吸光度測定(測定波長:405nm、参照波長:690nm)により、細胞内のメラニン量を測定した。
その結果、ヘスペリジンを添加したものでは、30μg/mLの濃度までメラニン生成抑制作用は認められなかった。また、ヘスペレチンを添加したものでは、濃度依存的にメラニンの生成が促進され、30μg/mLでは対照の約3倍のメラニン量であった。
そこで、培養ヒトケラチノサイトにUV照射することで惹起されるメラノサイト刺激因子の生成に対するヘスペリジン、ヘスペレチンの作用を検討した。メラノサイト刺激因子はメラノサイトの増殖作用を示すことから、メラノサイト刺激因子の生成を抑制することによりメラニン生成を抑制することができる。本実施例では、メラノサイト刺激因子としてSCFを用いた。
(試験方法)
包皮由来正常ヒトケラチノサイト;NHEK(F)(Cascade Biologics,Inc.)を、細胞培養皿に播種してサブコンフルエントになるまで培養した(n=3)。
次いでUVB 20mJ/cm2を照射した直後、薬剤(ヘスペリジンおよびヘスペレチン。美白成分として公知のトラネキサム酸も参考薬剤として用いた)を添加し、2日間経過後の培養上清中のSCF量をSCF定量キット(Quantikine(R) Human SCF Kit、R&D Systems)を用いて定量した。
薬剤の細胞毒性によってSCF産生量が低下する可能性も考えられる。そこで薬剤を添加した場合の生細胞の数も併せて計測した。結果を図5に示す。図5中、最左側の棒グラフはUVB照射をせず、薬剤の添加がない場合の生細胞数を示し、最左側から2番目の棒グラフは薬剤添加がないが、UVB照射を行った場合の生細胞数を示す。図5に示す結果から明らかなように、ヘスペリジン、ヘスペレチン、トラネキサム酸のいずれにも、このような細胞毒性が認められなかったことから、SCF抑制作用が生体においてもある程度特異的に作用するといえる。
(配 合 成 分) (質量%)
ビタミンC 33.0
還元麦芽糖水飴粉末 25.7
α−Gヘスペリジン 17.0
結晶セルロース 10.0
澱粉分解物 10.0
ショ糖脂肪酸エステル 2.0
フラバンジェノール 1.3
アラビアゴム 0.5
二酸化チタン 0.5
(摂取例)
1錠500mgを1日6錠摂取する。
(配 合 成 分) (質量%)
α−Gヘスペリジン 90.0
澱粉 10.0
(摂取例)
1カプセル280mgを1日4カプセル摂取する。
(配 合 成 分) (質量%)
粉糖 35.0
澱粉 31.0
α−Gヘスペリジン 21.0
ビタミンC 10.0
ビタミンE 2.5
香料 0.5
(摂取例)
1日1パック(1.2g)を摂取する。
(配 合 成 分) (質量%)
果糖ブドウ糖液糖 30.0
α−Gヘスペリジン 1.0
クエン酸 0.5
香料 適 量
精製水 残 余
(配 合 成 分) (質量%)
還元水飴 40.0
グラニュー糖 20.0
ブドウ糖 19.0
水 9.3
ゼラチン 5.0
α−Gヘスペリジン 5.0
クエン酸 1.0
香料 0.6
色素 0.1
(配 合 成 分) (質量%)
ブドウ糖 40.0
乳糖 30.0
グラニュー糖 19.0
デンプン 5.0
ショ糖脂肪酸エステル 2.0
クエン酸 1.5
α−Gヘスペリジン 1.0
セルロース 1.0
香料 0.5
(配 合 成 分) (質量%)
砂糖 50.0
水飴 47.5
クエン酸 1.5
α−Gヘスペリジン 0.5
香料 0.5
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- 飲食品または経口剤として用いる、α−グリコシルヘスペリジンおよび/またはヘスペレチンからなるSCF産生抑制剤。
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