CN107106464A - 抗氧化剂和抗氧化/防uv化妆品 - Google Patents

抗氧化剂和抗氧化/防uv化妆品 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种含有酶促合成糖原(ESG)或其α淀粉酶消化物(RG)的抗氧化剂、活性氧抑制剂、抗氧化酶的产生促进剂、抗氧化化妆品、防UV化妆品、消化道炎症的预防或治疗剂、抗氧化饮食品、以及用于提高生物体内的抗氧化作用的使用。

Description

抗氧化剂和抗氧化/防UV化妆品
技术领域
本发明涉及抗氧化剂、抗氧化化妆品或者防UV化妆品。
另外，本发明涉及活性氧抑制剂、抗氧化酶的产生促进剂、消化道炎症的预防或治疗剂。
本发明还涉及抗氧化饮食品和用于提高生物体内的抗氧化作用的使用。
背景技术
为了提高生物体的抗氧化能力，一般的方法是摄取维生素类或多酚类、类胡萝卜素类等抗氧化作用高的成分。近年来，开发出了通过提高生物体内产生的抗氧化酶的产生量来提高生物体的抗氧化能力的技术。作为该方法，提出了：将来自西洋蒲公英的多糖类(非专利文献1)来自地耳的伪枝藻素(非专利文献2)处理为免疫系统的细胞的方法、和食用异葎草酮类或异构化蛇麻草提取物的方法(专利文献1)等。天然物存在非常昂贵和因生产批次而导致效果参差不齐的问题(专利文献2～5)。另外，通常情况下这些天然物对光或热不稳定，在配合于饮食物中使用时在稳定性方面存在问题。并且，还存在水溶性低、难以在饮料等中使用的问题(专利文献6～8)。另外，为天然物的提取物时，有时多种化合物混合存在，活性主体不明确(专利文献1)。
糖原作为动物的储藏多糖为公众所知，是多个葡萄糖通过α-1,4糖苷键聚合的、分支多的高分子。糖原主要在肝脏和骨骼肌合成，发挥着将剩余的葡萄糖暂时储藏起来的作用。
专利文献9中记载了酶促合成糖原能够全面地改善血糖值、内脏脂肪、血中胆固醇、中性脂肪等。
另外，专利文献10中公开了酶促合成糖原的制造方法。
另外，专利文献11中公开了配合有酶促合成糖原的皮肤外用剂，但是并没有关于酶促合成糖原的抗氧化作用的公开。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：WO2006/043671
专利文献2：日本特开平9-23848
专利文献3：日本特开2002-3709798
专利文献4：日本特开平8-73350
专利文献5：日本特开平1-279827
专利文献6：日本特开2007-126455
专利文献7：日本特开2007-126455
专利文献8：日本特表2013-510076
专利文献9：日本特开2013-75917
专利文献10：WO2006/035848
专利文献11：日本特开2009-227632
非专利文献
非专利文献1：Food Chem Toxicol Vol.66Page.56-64(2014)
非专利文献2：Food Chem Toxicol、Vol.69Page.330-338(2014)
发明内容
发明所要解决的课题
本发明的目的在于提供一种低价、且安全性、稳定性优异、活性主体明确的抗氧化剂和化妆品。
另外，本发明的目的在于提供一种活性氧抑制剂、抗氧化酶的产生促进剂、消化道炎症的预防或治疗剂。
另外，本发明的目的在于提供一种具有抗氧化作用的饮食品、用于提高哺乳类等生物的体内的抗氧化作用的使用的发明。
用于解决课题的方法
本发明的发明人发现，酶促合成糖原(enzymatically synthesized glycogen，ESG)或其α淀粉酶消化物(RG)具有抗氧化作用，具有肠中的炎症的预防或治疗作用，作为减轻肌肤因氧化应激和UV(UV-A、UV-B)照射引起的障碍的抗氧化/防UV化妆品的成分、抗氧化饮食品的成分也是有用的。
本发明涉及以下的抗氧化剂、活性氧抑制剂、抗氧化酶的产生促进剂、抗氧化/防UV化妆品、消化道炎症的预防或治疗剂、抗氧化饮食品、以及用于提高生物体内的抗氧化作用的使用。
项1.一种含有酶促合成糖原(ESG)或其α淀粉酶消化物(RG)的抗氧化剂。
项2.一种含有酶促合成糖原(ESG)或其α淀粉酶消化物(RG)的活性氧抑制剂。
项3.一种含有酶促合成糖原(ESG)或其α淀粉酶消化物(RG)的抗氧化酶的产生促进剂。
项4.如项3所述的产生促进剂，其中，抗氧化酶为HO-1。
项5.如项3所述的产生促进剂，其中，抗氧化酶为NQO-1。
项6.如项3～5中任一项所述的产生促进剂，其中，通过使Nrf-2的表达增加来促进抗氧化酶的产生。
项7.一种含有酶促合成糖原(ESG)或其α淀粉酶消化物(RG)的抗氧化化妆品。
项8.如项7所述的抗氧化化妆品，其中，通过抗氧化酶的产生促进来表现抗氧化作用。
项9.一种含有酶促合成糖原(ESG)或其α淀粉酶消化物(RG)的防UV化妆品。
项10.一种含有酶促合成糖原(ESG)或其α淀粉酶消化物(RG)的消化道炎症的预防或治疗剂。
项11.一种含有酶促合成糖原(ESG)或其α淀粉酶消化物(RG)的抗氧化饮食品。
项12.一种酶促合成糖原(ESG)或其α淀粉酶消化物(RG)用于提高生物体内的抗氧化作用的使用。
发明的效果
根据本发明，通过提高生物体的抗氧化能力，能够减轻肠的炎症、和肌肤由于紫外线或活性氧引起的氧化应激。利用ESG、RG等获得的抗氧化作用、防UV作用等可以认为是基于抗氧化蛋白质的表达诱导而实现的，这些作用在细胞或生物体内有效地发挥功能。
本发明能够通过低价、且安全性、稳定性优异、活性主体明确的酶促合成糖原(ESG)或其α淀粉酶消化物(RG)提高生物体内或肌肤中的抗氧化能力，能够预防或治疗氧化应激所参与的肌肤的问题、小肠、大肠中的炎症。
本发明作为具有抗氧化作用、活性氧抑制作用、抗氧化酶的产生促进作用、消化道炎症的预防作用的、医药组合物、饮食品、制剂等是有用的。
附图说明
图1表示ESG对因葡聚糖硫酸钠(DSS)引发的大肠的萎缩带来的影响(小鼠)(A)体重。(B)大肠的长度(照片)。(C)大肠的长度(图表)。
图2表示ESG对大肠组织中的氧化应激的蓄积带来的影响(小鼠)。
图3表示ESG对大肠组织中的抗氧化蛋白质的表达量带来的效果(小鼠)。
图4表示ESG和RG对巨噬细胞(RAW264.7)中的活性氧类(ROS)的蓄积带来的影响。
图5表示ESG和RG对巨噬细胞(RAW264.7)中的抗氧化蛋白质的表达量带来的效果。
图6表示ESG和RG对巨噬细胞(RAW264.7)中的抗氧化蛋白质的表达量带来的效果。(A)表示RG(Enz)、RG和ESG的关系的示意图。(B)用蛋白质印迹法对与氧化作用相关的蛋白质的表达量进行解析的结果。(C)DCF/DAPI的比。图表以将veh(vehicle：溶剂)作为基准的相对值表示。
图7表示来自天然物的糖原对抗氧化蛋白质的表达量和ROS的蓄积带来的影响(RAW264.7)。(A)用蛋白质印迹法对与抗氧化作用相关的蛋白质的表达量进行解析的结果。(B)以DCF/DAPI的比算出的结果。图表以将veh(溶剂)作为基准的相对值表示。
图8表示ESG和RG对表皮细胞(NHEK)中的抗氧化蛋白质的表达量带来的影响。
图9表示ESG和RG对NHEK中的UVB照射诱导ROS蓄积带来的影响。
图10表示ESG对HO-1和NQO-1敲减NHEK中的ROS的蓄积带来的影响。
图11表示ESG和RG对NHEK中的抗氧化蛋白质的表达量带来的效果。(A)表示ESG(Enz)、RG(Enz)、RG、ESG的关系的示意图。(B)使用ESG(Enz)、RG(Enz)进行与ESG、RG的比较研究的结果。(C)以DCF/DAPI的比算出的结果。图表以将UVB(+)作为基准的相对值表示。
图12表示ESG和RG对UVB照射诱导caspase-3、-9活性带来的影响(NHEK)。
具体实施方式
作为本发明中使用的酶促合成糖原(ESG)，可以列举按照专利文献10(WO2006/035848)所记载的方法得到的酶促合成糖原。即，通过使具有合成糖原的能力的分支酶在溶液中与基质发生作用从而产生糖原的工序制造。基质是主要以α-1,4-糖苷键连结的聚合度4以上的α-葡聚糖，能够优选使用淀粉脱支物、糊精脱支物或者酶促合成直链淀粉作为该基质。优选的酶促合成糖原(ESG)的重均分子量为100万Da以上，在通过MALLS法对使50U/g基质的普鲁兰酶以60℃与ESG作用30分钟时得到的生成物进行分析的情况下，重均分子量为50万Da以上；并且在通过MALLS法对使300U/g基质的α-淀粉酶以37℃与ESG作用30分钟时得到的生成物进行分析的情况下，重均分子量为50万Da以上。
用α淀粉酶消化酶促合成糖原(ESG)而得到的消化物(RG)是模拟在摄取了ESG的哺乳动物(例如人类)的消化道中产生的消化物，在实施例中，使用用400U/g ESG的α-淀粉酶消化ESG 24小时后回收未消化的高分子成分而制成的RG。ESG和RG示意地在图6(A)中表示。
天然的糖原没有确认到抗氧化蛋白质的表达诱导作用、抗氧化作用、防UV作用等，因此，这些作用是ESG或RG所特有的作用。作为抗氧化酶，可以列举血红素加氧酶1(HO-1)、NAD(P)H醌氧化还原酶1(NQO1)。酶促合成糖原(ESG)或其α淀粉酶消化物(RG)诱导HO-1、NQO-1的表达，并且诱导参与HO-1表达的转录因子Nrf2。ESG或RG表现出抗氧化作用的机制之一是经由Nrf2的HO-1和NQO-1的表达诱导。
抗氧化作用的机制之二是活性氧类(ROS)的抑制。通过ROS的抑制来抑制脂质的氧化、炎症等，抑制由ROS引起的细胞损伤。
本发明的抗氧化剂、活性氧抑制剂、抗氧化酶的产生促进剂、消化道炎症的预防或治疗剂可以通过口服摄取在生物体内表现抗氧化等的作用，也可以以化妆品的形态用于肌肤，在肌肤中表现这些作用。
在本说明书中，作为“化妆品”，可以列举化妆水、乳液、霜、面膜等的脸部化妆品、或者粉底、口红、眼影等的彩妆化妆品等。化妆品的优选用途为抗氧化和防UV。
本发明还涉及含有ESG和/或RG的饮食品。
在本发明中，作为含有ESG或RG的饮食品，可以列举乳饮料、发酵乳饮料、碳酸饮料、果汁饮料、清凉饮料、运动饮料、营养补充饮料、糖、糖果、口香糖、巧克力、糖粒、零食、饼干、果冻、果酱、奶油、烘烤点心、冰淇淋、酸奶、黄油、奶粉、面包类、营养增补剂、营养食品、流动食品等。这些饮食品优选具有抗氧化作用、活性氧抑制作用、抗氧化酶的产生促进作用、消化道炎症的预防作用等。
ESG和/或RG在动物、特别是哺乳类的生物体内具有抗氧化作用。作为哺乳类，可以列举人类、猴、牛、马、猪、羊、兔、大鼠、小鼠、仓鼠、狗、猫等，特别优选人类。在本发明的抗氧化化妆品和防UV化妆品中，能够与酶促合成糖原一起配合选自保湿成分、美白成分、紫外线吸收剂/散射剂、抗炎症剂、细胞活化剂、表面活性剂、抗氧化剂和其它成分中的至少一种。
作为保湿成分，可以列举抗坏血酸及其衍生物、抗坏血酸以外的维生素类、吡哆素的衍生物、α－生育酚的衍生物、泛酸衍生物、葡萄糖、木糖醇、糊精等的糖类和糖衍生物、D-泛酰醇及其衍生物、氨基酸类及其衍生物、多元醇、酚及其衍生物、胶原类、透明质酸等的粘多糖类、天然保湿因子、高级醇类、低级醇类、醇、矿物油、植物性油脂、动物性油脂、羟基羧酸及其盐、羟基水杨酸糖苷、羟基水杨酸脂肪族酯的糖苷、羟基肉桂酸及其衍生物、咖啡酸及其衍生物、由植物提取的提取物类、中草药提取物类、天然提取物类、胎盘提取物、油溶性甘草提取物、海藻提取物、神经酰胺类、神经酰胺类似结构物、粗糖提取物、粗糖提取物、糖蜜提取物、菌丝体培养物及其提取物、植物发酵提取物类、酵母提取物类、各种菌的发酵提取物类、尿素、桧木醇、硫、壬二酸及其衍生物、维生素E－烟酸酯与二氯乙酸二异丙胺、深层水、碱性单纯温泉水、磷酸化糖及其矿物盐等，能够配合这些保湿成分的1种或2种以上。
作为美白成分，可以列举酪氨酸酶抑制剂、内皮素拮抗剂、α-MSH抑制剂、α-熊果苷、熊果苷及其盐以及其衍生物、抗坏血酸及其衍生物、鞣花酸系化合物及其碱金属盐、曲酸及其衍生物、间苯二酚衍生物、去甲二氢愈创木酸、替普瑞酮、尿囊素、氨基乙基化合物、亚烷基二胺羧酸衍生物、甜菜碱衍生物、酰甲基牛磺酸、常春藤苷、匙羹藤总皂苷、甜菜皂苷γ－吡咙糖苷(γ-pyrrone glycoside)、联苯化合物、亚硫酸氢钠、纤粘蛋白、植物提取液类等，能够配合这些美白成分的1种或2种以上。
作为紫外线吸收剂/散射剂，可以列举苯甲酸系紫外线吸收剂对氨基苯甲酸(以下简记作PABA)、PABA单甘油酯、N,N－二丙氧基PABA乙酯、N,N－二乙氧基PABA乙酯、N,N－二甲基PABA乙酯、N,N－二甲基PABA丁酯、N,N－二甲基PABA戊酯、N,N－二甲基PABA辛酯、邻氨基苯甲酸系紫外线吸收剂高薄荷基－N－乙酰邻氨基苯甲酸酯、水杨酸系紫外线吸收剂水杨酸戊酯、水杨酸薄荷酯、水杨酸高薄荷酯、水杨酸辛酯、水杨酸苯酯、水杨酸苄酯、对异丙醇苯基水杨酸酯、肉桂酸系紫外线吸收剂肉桂酸辛酯、肉桂酸乙基－4－异丙酯、肉桂酸甲基－2,5－异丙酯、肉桂酸乙基－2,4－二异丙酯、肉桂酸甲基－2,4－二异丙酯、对甲氧基肉桂酸丙酯、对甲氧基肉桂酸异丙酯、对甲氧基肉桂酸异戊酯、对甲氧基肉桂酸异丙酯、对甲氧基肉桂酸异戊酯、对甲氧基肉桂酸辛酯(对甲氧基肉桂酸－2－乙基己酯)、对甲氧基肉桂酸－2－乙氧基乙酯、对甲氧基肉桂酸环己酯、α－氰基－β－苯基肉桂酸乙酯、α－氰基－β－苯基肉桂酸－2－乙基己酯、单－2－乙基己酰基－二对甲氧基肉桂酸甘油酯、二苯甲酮系紫外线吸收剂2,4－二羟基二苯甲酮、2,2′－二羟基－4－甲氧基二苯甲酮、2,2′－二羟基－4,4′－二甲氧基二苯甲酮、2,2′,4,4′－四羟基二苯甲酮、2－羟基－4－甲氧基二苯甲酮、2－羟基－4－甲氧基－4′－甲基二苯甲酮、2－羟基－4－甲氧基二苯甲酮－5－磺酸盐、4－苯基二苯甲酮、2－乙基己基－4′－苯基－二苯甲酮－2－羧酸酯、2－羟基－4－正辛氧基二苯甲酮、4－羟基－3－羧基二苯甲酮、其它的紫外线吸收剂3－(4′－甲基亚苄基)－d,l－樟脑、3－亚苄基－d,l－樟脑、咪唑丙烯酸、咪唑丙烯酸乙酯、2－苯基－5－甲基苯并噁唑、2,2′－羟基－5－甲基苯基苯并三唑、2－(2′－羟基－5′－叔辛基苯基)苯并三唑、2－(2′－羟基－5′－甲基苯基)苯并三唑、二亚苄基吖嗪(dibenzalazine)、二甲氧苯甲酰基甲烷、4－甲氧基－4′－叔丁基二苯甲酰基甲烷、5－(3,3－二甲基－2－亚降冰片烯基)－3－戊烷－2－酮(5-(3,3-dimethyl-2-norbornylidene)-3-pentan-2-one))、氧化钛、氧化锌等，能够配合这些紫外线吸收剂/散射剂的1种或2种以上。
作为细胞活化剂，可以列举CoQ10、脱氧核糖核酸及其盐、三磷酸腺苷、一磷酸腺苷等的腺苷酸衍生物以及它们的盐、核糖核酸及其盐、环AMP、环GMP、黄素腺嘌呤核苷酸、鸟嘌呤、腺嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、黄嘌呤以及它们的衍生物、咖啡因、茶碱及其盐、视黄醇和视黄醇棕榈酸酯、视黄醇乙酸酯等的视黄醇衍生物、视黄醛和脱氢视黄醛等的视黄醛衍生物、胡萝卜素等的类胡萝卜素和维生素A类、白藜芦醇、白藜芦醇糖苷、硫胺和硫胺盐酸盐、硫胺硫酸盐等的硫胺盐类、核黄素和乙酸核黄素等的核黄素盐类、吡哆素和盐酸吡哆素、吡哆素二辛酸酯等的吡哆素盐类、黄素腺嘌呤核苷酸、氰钴胺、叶酸类、烟酸和烟酸酰胺、烟酸苄酯等的烟酸衍生物、胆碱类等的维生素B类、γ－亚麻酸及其衍生物、二十碳五烯酸及其衍生物、雌二醇及其衍生物以及它们的盐、乙醇酸、琥珀酸、乳酸、水杨酸等有机酸和它们的衍生物以及它们的盐、植物提取的提取物类、海藻提取的提取物类等，能够配合这些细胞活化剂的1种或2种以上。
作为抗氧化剂，可以列举视黄醇、脱氢视黄醇、视黄醇乙酸酯、视黄醇棕榈酸酯、视黄醛、视黄酸、维生素A油等的维生素A类和它们的衍生物以及它们的盐、α－胡萝卜素、β－胡萝卜素、γ－胡萝卜素、隐黄素、虾青素、岩藻黄质等的类胡萝卜素类及其衍生物、吡哆素、吡哆醛、吡哆醛－5－磷酸酯、吡哆胺等的维生素B类、它们的衍生物及它们的盐、抗坏血酸、抗坏血酸钠、硬脂酸抗坏血酸酯、棕榈酸抗坏血酸酯、二棕榈酸抗坏血酸酯、抗坏血酸磷酸镁等的维生素C类、它们的衍生物及它们的盐、钙化醇、胆钙化醇、1,2,5－二羟基－胆钙化醇等的维生素D类、它们的衍生物及它们的盐、α－生育酚、β－生育酚、γ－生育酚、δ－生育酚、α－生育三烯酚、β－生育三烯酚、γ－生育三烯酚、δ－生育三烯酚、生育酚乙酸酯、生育酚烟酸酯等的维生素E类、它们的衍生物及它们的盐、水溶性维生素E(Trolox)、其衍生物及它们的盐、二羟基甲苯、丁基羟基甲苯、丁基羟基苯甲醚、二丁基羟基甲苯、α－硫辛酸、脱氢硫辛酸、谷胱甘肽、其衍生物及它们的盐、尿酸、异抗坏血酸、异抗坏血酸钠等的异抗坏血酸、其衍生物及它们的盐、没食子酸、没食子酸丙酯等的没食子酸、其衍生物及它们的盐、芦丁、α－糖基－芦丁等的芦丁、其衍生物及它们的盐、色氨酸、其衍生物及它们的盐、组氨酸、其衍生物及它们的盐、N－乙酰半胱氨酸、N－乙酰高半胱氨酸、N－辛酰半胱氨酸、N－乙酰半胱氨酸甲酯等的半胱氨酸衍生物及它们的盐、N,N′－二乙酰胱氨酸二甲酯、N,N′－二辛酰胱氨酸二甲酯、N,N′－二辛酰高胱氨酸二甲酯等的胱氨酸衍生物及它们的盐、肌肽及其衍生物以及它们的盐、高肌肽及其衍生物以及它们的盐、鹅肌肽及其衍生物以及它们的盐、丙氨酰基组胺(Carcinin)及其衍生物以及它们的盐、含有组氨酸和/或色氨酸和/或组胺的二肽或三肽衍生物以及它们的盐、黄烷酮、黄酮、花青素、花色素、黄酮醇、槲皮素、槲皮苷、杨梅素、漆黄素、金缕梅单宁、儿茶素、表儿茶素、棓儿茶素、表棓儿茶素、棓酸表儿茶素酯、棓酸表棓儿茶素酯等的类黄酮类、单宁酸、咖啡酸、阿魏酸、原儿茶酸、查尔酮、谷维醇、鼠尾草酚、芝麻酚、芝麻素、芝麻林素、姜酮、姜黄素、四氢姜黄素、Clovamide、deoxy-Clovamide、姜烯酚、辣椒素、香荚兰胺、鞣花酸、溴苯酚、Flavoglassine、蛋白黑素(Melanoidin)、核黄素、核黄素丁酸酯、黄素单核苷酸、黄素腺嘌呤核苷酸、泛醌、泛醇、甘露醇、胆红素、胆固醇、依布硒、硒代蛋氨酸、铜蓝蛋白、运铁蛋白、乳铁蛋白、白蛋白、胆红素、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化酶、金属硫蛋白、O－膦基－吡哆醛罗丹明、和美国专利第5594012号记载的N－(2－羟基苄基)氨基酸、其衍生物以及它们的盐、N－(4－吡哆基亚甲基)氨基酸、及其衍生物以及它们的盐、植物提取的提取物类、海藻提取的提取物类等，能够配合这些抗氧化剂的1种或2种以上。
作为表面活性剂，可以列举脂肪酸钠、单烷基硫酸盐、烷基聚氧乙烯硫酸盐、烷基苯磺酸盐、单烷基磷酸盐等的阴离子系表面活性剂、烷基三甲基铵盐、二烷基二甲基铵盐、烷基苄基二甲基铵盐等的阳离子系表面活性剂、烷基二甲基氧化胺、烷基羧基甜菜碱等的两亲性表面活性剂、聚氧乙烯烷基醚、脂肪酸脱水山梨糖醇酯、烷基多糖苷、脂肪酸二乙醇酰胺、烷基单缩水甘油醚等的非离子表面活性剂、卵磷脂等的天然表面活性剂等，能够配合这些表面活性剂的1种或2种以上。
作为抗炎症剂，可以列举氧化锌、硫及其衍生物、甘草酸、甘草酸二钾、甘草酸单铵等的甘草酸及其衍生物以及它们的盐、β－甘草次酸、甘草次酸硬脂酯、3－琥珀酰氧基甘草次酸二钠等的甘草次酸及其衍生物以及它们的盐、氨甲环酸、硫酸软骨素、甲灭酸、保泰松、吲哚美辛、布洛芬、酮洛芬、尿囊素、愈创蓝油烃及它们的衍生物以及它们的盐、各种微生物和动植物的提取物等，能够配合这些抗炎症剂的1种或2种以上。
作为其它成分，可以列举精油等香料类或颜料、合成色素等色素类、血行促进剂等，能够配合这些的1种或2种以上。
在本说明书中，作为“消化道炎症”，可以列举活性氧或者氧化应激参与的在消化道中产生炎症或者表现出由炎症引起的症状的消化道的疾患，具体而言，可以列举胃炎、大肠炎、出血性大肠炎、溃疡性大肠炎、过敏性肠道综合症等。利用本发明的预防或治疗药，消化道炎症被治愈或者症状得到减轻。
作为本发明的化妆品中的ESG或RG的配合量，只要表现抗氧化作用或者防UV作用即可，没有特别限定，例如为0.01～10质量％左右、优选为0.05～5质量％左右。
作为本发明的饮食品中的ESG或RG的配合量，只要表现抗氧化作用即可，没有特别限定，例如为0.01～50质量％左右、优选为0.05～20质量％左右。
在本发明的用于提高生物体内的抗氧化作用的使用的发明中，ESG或RG的成人每1天的摄取量为0.1～20g左右、优选为1～10g左右。通过在肌肤上应用本发明的抗氧化或者防UV化妆品，能够缓解、减轻由氧化应激或紫外线引起的障害。
本发明的消化道炎症的预防或治疗剂的成人每1天的给药量为0.1～20g左右、优选为1～10g左右，能够在1天中1次给药或分成2～4次给药。
本发明的消化道炎症的预防剂通过制成含有营养增补剂的饮食品等日常摄取，能够预防或者减轻消化道的炎症。
实施例
以下，使用实施例，更详细地说明本发明。
实施例中使用的ESG、RG如下所述制备/获得。另外，哺乳动物口服摄取的ESG的约20质量％转化为RG(T.Furuyashiki et al.Food Funct.,2011,2,183-189)，因此，RG以对应于ESG的20质量％的量给予。
ESG根据专利文献10(WO2006/035848)所记载的方法制备。RG通过以ESG为基质、以400U/g基质的量用α-淀粉酶以37℃处理24小时之后，对未消化的高分子成分进行精制来制备。
关于ESG(Enz)，通过以ESG为基质，用充分量的α-淀粉酶和异淀粉酶以37℃处理2小时之后，用充分量的葡糖淀粉酶以37℃处理24小时，直至完全分解为葡萄糖，由此来制备。酶处理后，通过将葡萄糖量定量，确认完全分解。
关于RG(Enz)，通过以RG为基质，进行与ESG(Enz)同样的处理，直至完全分解为葡萄糖，由此来制备。酶处理后，通过将葡萄糖量定量，确认完全分解。
实施例1：对由DSS引发的大肠的萎缩带来的影响(图1)
实验动物从日本SLC购入C57BL/6小鼠(6周龄、雌性)，预备饲养1周之后，分为4组(A、B、C、D)，分别进行以下的操作。
A)在2周内口服给药溶解在水中的ESG(100mg)。(ESG组)
B)在2周内口服给药溶解在水中的ESG(100mg)。从给药开始1周后，将饮用水更换为含有2％的葡聚糖硫酸钠(DSS)(分子量36,000-50,000)的药物，持续直至饲养结束。(ESG/DSS组)
C)在2周内口服给予不含ESG的水。(Cont组)
D)在2周内口服给予不含ESG的水。从给予开始1周后，将饮用水更换为含有2％的DSS的药物，持续直至饲养结束。(DSS组)
饲养遵守《神戸大学六甲台地区动物实验委员会规则》(授权编号：26-05-12)，在动物实验委员会的授权下，按照计划实施。在调节为室温25±2℃、环境湿度的房间中，在照明时间/天(9:00～21:00)的条件下进行饲养。体重每天测量(图1(A))。在饲养结束时，在给予了麻醉药的情况下进行心脏采血之后，摘出大肠，测定大肠的长度(图1(B))。在图1(A)、(C)中，显示在不同的字母(a、b)间具有显著差异(p＜0.05)。由图1所示的结果可知，ESG能够预防或治疗大肠的炎症。
实施例2：对大肠组织中的氧化应激的蓄积带来的影响(图2)
作为大肠内的氧化应激的指标，将脂质过氧化物量作为与2-硫代巴比妥酸(2-thiobarbituric acid)的反应生成物的2-硫代巴比妥酸反应物(2-thiobarbituric acid-reactive substances，TBARS)测定。将实施例1的实验中回收的小鼠的大肠组织(30mg)用剪刀细细地剪断，添加1ml缓冲液(20mM Hepes-NaOH，pH 7.5，含有0.5％Nonidet P-40、1mMEDTA、1μM丁化羟基甲苯、1mM苯甲基磺酰氟和10μg/ml亮肽素)，用均质器均质后，以20,000×g、4℃离心分离20分钟，回收上清液，作为总蛋白质成分。将蛋白质成分(150μg/125μl)与20％三氯乙酸(75μl)、0.8％2-硫代巴比妥酸(50μl)混合，在90℃孵育40分钟。冷却至室温之后，测定TBARS的荧光强度(激发/吸收光：530nm/590nm)。图2的图表表示以对照(Cont)为基准的相对值。统计分析(ANOVA的Turkey post hoc)的结果，在不同的字母(a、b)间具有显著差异(p＜0.05)。可知ESG能够显著抑制由DSS诱发的过氧化脂质的增加和活性氧。
实施例3：对大肠组织中的抗氧化蛋白质的表达量带来的效果(图3)
将实施例1的实验中回收的小鼠的大肠组织(30mg)用剪刀细细地剪断，添加1ml裂解液(lysis buffer)(50mM Tris-HCl，pH 7.5，含有150mM NaCl、0.5％Nonidet P-40、10mM焦磷酸钠、2mM EDTA、1mM苯甲基磺酰氟和10μg/ml亮肽素)，用均质器均质后，以20,000×g、4℃离心分离20分钟，回收上清液，作为总蛋白质成分。将回收的蛋白质供于蛋白质免疫印迹法(Western blot法)，评价NF-E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、β-肌动蛋白(β-actin)的表达量。将蛋白质免疫印迹法中得到的各蛋白质的条带强度用图像解析软件(Image J)数值化，以作为看家基因的β-肌动蛋白的条带强度标准化。图表以将对照(Cont)作为基准的相对值表示。统计分析(ANOVA的Turkey post hoc)的结果，在不同的字母(a、b、c)间具有显著差异(p＜0.05)。可知ESG使HO-1和Nrf2的表达显著增加。
实施例4：对培养细胞中的活性氧类(ROS)的蓄积带来的影响(图4)
在大肠上皮存在大量的巨噬细胞，氧化应激刺激巨噬细胞，从而分泌炎症性细胞因子。并且，炎症性细胞因子进一步产生氧化应激，由此出发恶性循环，诱发大肠炎。为此，对于ESG对巨噬细胞中氧化应激的蓄积带来的效果进行研究。
小鼠巨噬细胞(RAW264.7细胞)由American Type Culture Collection(Manassas,VA,USA)购入，细胞用培养基(DMEM-HG)培养，该培养基在含有10％胎牛血清的Dulbecco's modified Eagle's medium中配合有最终浓度达到4.5g/L的量的D-葡萄糖。在培养RAW264.7细胞的培养基中添加ESG或RG，使其作用24小时。此后，将培养基更换为新鲜的DMEM-HG培养基，在培养基中添加最终浓度达到4mM的量的作为ROS发生剂的2,2'-偶氮双(2-甲基丙脒)二盐酸盐(AAPH)，对细胞进行培养。在添加AAPH 1小时后在培养基中添加作为ROS检测试剂的二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCF-DA)(20μM)，接着培养30分钟。培养结束后，对细胞进行清洗，用4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)将核染色。DCF和DAPI的荧光强度分别以485nm/535nm、355nm/380nm进行测定，作为DCF/DAPI的比算出。图4(A)和图4(B)的图表以将AAPH(－)作为基准的相对值表示。统计分析(ANOVA的Turkey post hoc)的结果，在不同的字母(a、b、c、d、e)间存在显著差异(p＜0.05)。由图4的结果可知，RG浓度依赖性地使ROS量降低。此外，ESG的20质量％在消化道中转化为ESG，因此，ESG也同样地浓度依赖性地使ROS量降低。
实施例5：对巨噬细胞中的抗氧化蛋白质的表达量带来的效果(图5)
小鼠巨噬细胞(RAW264.7细胞)由American Type Culture Collection(Manassas,VA,USA)购入，细胞用培养基(DMEM-HG)培养，该培养基在含有10％胎牛血清的Dulbecco's modified Eagle's medium中配合有最终浓度达到4.5g/L的量的D-葡萄糖。
(A)在培养RAW264.7细胞的培养基中，添加最终浓度达到400μg/ml的量的ESG和RG，使其作用24小时。
(B)在培养RAW264.7细胞的培养基中，添加最终浓度达到0-600μg/ml的量的RG，使其作用24小时。
此后，回收细胞，用蛋白质免疫印迹法对与抗氧化作用相关的蛋白质的表达量进行分析。利用图像解析软件(Image J)将由蛋白质免疫印迹法得到的各蛋白质的条带强度数值化，以作为看家基因的β-肌动蛋白的条带强度标准化。图5(A)、图5(B)的图表以将对照(Cont)作为基准的相对值表示。统计分析(ANOVA的Turkey post hoc)的结果，在不同的字母(a、b、c、d)间存在显著差异(p＜0.05)。可知RG浓度依赖性地促进抗氧化蛋白质(HO-1)和其转录因子Nrf2的表达。另外，ESG通过在哺乳动物的消化道内产生的RG，浓度依赖性地促进抗氧化蛋白质(HO-1)和其转录因子Nrf2的表达。
实施例6：对巨噬细胞中的抗氧化蛋白质的表达量带来的效果(图6)
为了研究由RG引起的抗氧化蛋白质的表达量的增加是否是由RG的结构特异性地引发的，使用将RG用异淀粉酶和葡糖淀粉酶消化至葡萄糖的产物(RG(Enz)，与RG进行比较研究(图6(A))。
在培养RAW264.7细胞的培养基中，以最终浓度达到400μg/ml的量添加ESG或者RG、RG(Enz)，使其作用24小时。此后，回收细胞，用蛋白质免疫印迹法对与抗氧化作用相关的蛋白质的表达量进行分析(图6(B))。
在培养RAW264.7细胞的培养基中，添加最终浓度达到400μg/ml的量的ESG或者RG、RG(Enz)，使其作用24小时。此后，将培养基更换为新鲜的DMEM-HG培养基，在培养基中添加最终浓度达到4mM的量的作为ROS发生剂的2,2'-偶氮双(2-甲基丙脒)二盐酸盐(AAPH)，对细胞进行培养。在添加AAPH 1小时后在培养基中添加作为ROS检测试剂的二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCF-DA)(20μM)，接着培养30分钟。培养结束后，对细胞进行清洗，用4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)将核染色。DCF和DAPI的荧光强度分别以485nm/535nm、355nm/380nm进行测定，作为DCF/DAPI的比算出(图6(C))。图6(C)的图表以将veh(仅溶剂)作为基准的相对值表示。统计分析(ANOVA的Turkey post hoc)的结果，在不同的字母(a、b)间存在显著差异(p＜0.05)。由图6的结果可知，发生了分解的RG(Enz)没有效果，浓度依赖性地促进抗氧化蛋白质(HO-1)和其转录因子Nrf2的表达的是RG。
实施例7：对抗氧化蛋白质的表达量和ROS的蓄积带来的影响(图7)
(A)在培养RAW264.7细胞的培养基中，添加最终浓度达到400μg/ml的量的6种来自天然物的糖原(牡蛎/Oys、兔/Type III、肌肉/Type VII、甜玉米/Phyto、slipper limpet/Type VIII、牛肝/Type IX)或者RG，使其作用24小时。此后，回收细胞，用蛋白质免疫印迹法对与抗氧化作用相关的蛋白质的表达量进行分析(图7(A))。
(B)在培养RAW264.7细胞的培养基中，添加最终浓度达到400μg/ml的量的6种来自天然物的糖原(牡蛎/Oys、兔/Type III、肌肉/Type VII、甜玉米/Phyto、slipper limpet/Type VIII、牛肝/Type IX)或者RG，使其作用24小时。此后，将培养基更换为新鲜的DMEM-HG培养基，在培养基中添加最终浓度达到4mM的量的作为ROS发生剂的2,2'-偶氮双(2-甲基丙脒)二盐酸盐(AAPH)，对细胞进行培养。在添加AAPH1小时后在培养基中添加作为ROS检测试剂的二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCF-DA)(20μM)，接着培养30分钟。培养结束后，对细胞进行清洗，用4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)将核染色。DCF和DAPI的荧光强度分别以485nm/535nm、355nm/380nm进行测定，作为DCF/DAPI的比算出(图7(B))。
图7(A)、(B)的图表以将veh作为基准的相对值表示。统计分析(ANOVA的Turkeypost hoc)的结果，在不同的字母(a、b)间存在显著差异(p＜0.05)。
实施例8：对NHEK中的抗氧化蛋白质的表达量带来的影响(图8)
正常人类表皮角质形成细胞(NHEK)由Kurabo Industries,Ltd.(Osaka，Japan)购入，细胞在37℃、5％CO2存在下用EpiLife(注册商标)培养基进行培养。
在培养基中添加最终浓度达到300,600μg/mL的量的ESG、RG和来自牡蛎的糖原，使其作用24小时。此后，回收细胞，用蛋白质免疫印迹法对与抗氧化作用相关的蛋白质(Nrf2,HO-1和NQO-1)的表达量进行分析(图8(A))。
利用图像解析软件(Image J)将由蛋白质免疫印迹法得到的各蛋白质的条带强度数值化，以β-肌动蛋白的条带强度标准化(图8(B)、(C)、(D))。图8的图表以将UVB-作为基准的相对值表示。统计分析(ANOVA的Turkey post hoc)的结果，在不同的字母(a、b、c)间存在显著差异(p＜0.05)。由图8的结果可知，ESG和RG均浓度依赖性地促进Nrf2、HO-1、NQO-1的产生。
实施例9：对NHEK中的UVB照射诱导ROS蓄积带来的影响(图9)
将NHEK接种在35mm培养皿中，以最终浓度达到400,600μg/mL的量添加ESG、RG和来自牡蛎的糖原(OG)，使其作用24小时。在UVB照射(20mJ/cm2，302nm)后，培养30分钟，用荧光基质20μMDCF-DA处理30分钟。此后，用DAPI将核染色。用PBS清洗后，将处理过的细胞超声破碎，DCF和DAPI的荧光强度分别以485nm/535nm、355nm/460nm测定，作为DCF/DAPI的比算出(图9)。图9的图表以将UVB(+)作为基准的相对值表示。统计分析(ANOVA的Turkey posthoc)的结果，在不同的字母(a、b、c、d、e、f)间存在显著差异(p＜0.05)。由图9的结果可知，天然糖原(OG)没有抑制ROS蓄积的效果，但是ESG和RG能够浓度依赖性地抑制ROS蓄积。
实施例10：对HO-1和NQO-1敲减细胞中的ROS的蓄积带来的影响(图10)
将NHEK接种在35mm培养皿中，培养24小时。使用转染试剂LipofectamineRNAiMAX，将以HO-1和NQO-1为标的的siRNA导入细胞内，进行RNA干扰。添加各自的siRNA和RNAiMAX，使其作用48小时。
回收RNA干扰后的细胞，用蛋白质免疫印迹法检测标的蛋白质的表达量(图10(A))。
使最终浓度600μg/mL的ESG与RNA干扰后的细胞作用24小时。在UVB照射(20mJ/cm2，302nm)后，培养30分钟，用荧光基质20μM DCF-DA处理30分钟。此后，用DAPI将核染色。用PBS清洗后，将处理过的细胞超声破碎，DCF和DAPI的荧光强度分别以485nm/535nm、355nm/460nm测定，作为DCF/DAPI的比算出(图10(B))。图10(B)的图以将UVB(+)作为基准的相对值表示。统计分析(ANOVA的Turkey post hoc)的结果，在不同的字母(a、b、c、d)间存在显著差异(p＜0.05)。由图10的结果可知，ESG的抗氧化效果是介由作为抗氧化蛋白质的HO-1、NQO-1的表达诱导得到的效果。
实施例11：对巨噬细胞中的抗氧化蛋白质的表达量带来的效果(图11)
为了研究由ESG和RG引起的抗氧化蛋白质的表达量的增加是否是由结构特异性地引发的，使用将RG用异淀粉酶和葡糖淀粉酶消化至葡萄糖的产物ESG(Enz)、RG(Enz)，与RG进行比较研究(图11(A))。
在培养NHEK的培养基中，添加最终浓度达到600μg/ml的量的ESG、RG、ESG(Enz)或RG(Enz)，使其作用24小时。此后，回收细胞，用蛋白质免疫印迹法对与抗氧化作用相关的蛋白质的表达量进行分析(图11(B))。
在培养NHEK的培养基中，添加最终浓度达到600μg/ml的量的ESG、RG、ESG(Enz)或RG(Enz)，使其作用24小时。在UVB照射(20mJ/cm2，302nm)后，培养30分钟，用荧光基质20μMDCF-DA处理30分钟。此后，用DAPI将核染色。用PBS清洗后，将处理过的细胞超声破碎，DCF和DAPI的荧光强度分别以485nm/535nm、355nm/460nm测定，作为DCF/DAPI的比算出(图11(C))。图11(C)的图表以将UVB(+)作为基准的相对值表示。统计分析(ANOVA的Turkey posthoc)的结果，在不同的字母(a、b、c)间存在显著差异(p＜0.05)。可知具有分支部分的ESG、RG具有抗氧化蛋白质的表达增强效果，而由酶分解至葡萄糖的RG(Enz)、ESG(Enz)不具有抗氧化蛋白质的表达增强效果。
实施例12：对UVB照射诱导caspase-3、-9活性带来的影响(图12)
将NHEK接种于35mm培养皿中，添加最终浓度达到400,600μg/ml的量的ESG、RG和OG，使其作用24小时。在UVB照射(20mJ/cm2，302nm)后，培养24小时，回收细胞。在细胞提取液中添加最终浓度达到50μM的量的荧光基质Ac-DMQD-7-氨基-4-甲基香豆素(AMC，caspase-3)、Ac-LEHD-AMC(caspase-9)，使其在37℃反应1小时。以355nm/460nm测定AMC的荧光强度(图12)。图表以利用校正曲线算出的AMC量表示。统计分析(ANOVA的Turkey posthoc)的结果，在不同的字母(a、ab、b、c、d、e)间存在显著差异(p＜0.05)。由图12的结果可知，ESG、RG能够用量依赖性地抑制caspase-3、-9的量，能够抑制由UVB照射引起的细胞凋亡。

Claims (12)

1.一种抗氧化剂，其特征在于：
含有酶促合成糖原(ESG)或其α淀粉酶消化物(RG)。
2.一种活性氧抑制剂，其特征在于：
含有酶促合成糖原(ESG)或其α淀粉酶消化物(RG)。
3.一种抗氧化酶的产生促进剂，其特征在于：
含有酶促合成糖原(ESG)或其α淀粉酶消化物(RG)。
4.如权利要求3所述的产生促进剂，其特征在于：
抗氧化酶为HO-1。
5.如权利要求3所述的产生促进剂，其特征在于：
抗氧化酶为NQO-1。
6.如权利要求3～5中任一项所述的产生促进剂，其特征在于：
通过使Nrf-2的表达增加来促进抗氧化酶的产生。
7.一种抗氧化化妆品，其特征在于：
含有酶促合成糖原(ESG)或其α淀粉酶消化物(RG)。
8.如权利要求7所述的抗氧化化妆品，其特征在于：
通过抗氧化酶的产生促进表现抗氧化作用。
9.一种防UV化妆品，其特征在于：
含有酶促合成糖原(ESG)或其α淀粉酶消化物(RG)。
10.一种消化道炎症的预防或治疗剂，其特征在于：
含有酶促合成糖原(ESG)或其α淀粉酶消化物(RG)。
11.一种抗氧化饮食品，其特征在于：
含有酶促合成糖原(ESG)或其α淀粉酶消化物(RG)。
12.一种酶促合成糖原(ESG)或其α淀粉酶消化物(RG)用于提高生物体内的抗氧化作用的使用。
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