WO2006106972A1

WO2006106972A1 - 吸着材および体外循環用カラム

Info

Publication number: WO2006106972A1
Application number: PCT/JP2006/306944
Authority: WO
Inventors: Masaaki Shimagaki; Yasufumi Yamamura; Katsuhisa Sato; Kazuo Teramoto; Takeshige Oozeki; Shigehisa Wada
Original assignee: Toray Industries, Inc.
Priority date: 2005-03-31
Filing date: 2006-03-31
Publication date: 2006-10-12
Also published as: CN101151056B; CA2603073A1; ES2608854T3; US8584869B2; KR20070116667A; EP1886704A4; EP1886704B1; CN101151056A; CA2603073C; KR100972702B1; US20090275874A1; DK1886704T3; EP1886704A1

Abstract

　本発明は、血液中に存在する細胞、顆粒球や単球などの活性化した白血球、ガン細胞をはじめとする細胞を除去できると共に、残存した細胞に対し活性化を促すようなサイトカイン類の除去も可能であり、しかも圧力損失懸念がなく形状安定性の高い吸着材を提供することを課題とする。　すなわち、本発明は、ゼータ電位が－２０ｍＶ以上であって、血液中の顆粒球・単球を吸着する吸着材、免疫抑制性蛋白質を吸着する癌治療用吸着材、ネットと不織布の２層構造を持つことを特徴とする吸着材、並びに前記いずれかの吸着材を充填してなる血液循環カラムを提供するものである。

Description

明細書

吸着材および体外循環用カラム

技術分野

[0001] 本発明は、吸着材及び体外循環用カラムに関し、詳しくは、血液中から白血球、炎症性、免疫抑制性サイト力イン、液性因子を効率よく除去することができ、いわゆる白血球除去療法、免疫賦活療法、癌治療等に好適に用いられる吸着材、および該吸着材を利用した体外循環用カラム等の血液処理カラムに関するものである。

背景技術

[0002] 血液中には、血球、サイト力インその他液性成分など様々な成分が含まれ、これらの血液成分は体内の免疫のバランス調整にぉ、て重要な役割を果たして、る。また、リポ多糖に代表されるエンドトキシンは、血液中で発熱、血圧低下、血管内凝固、ハーゲマン因子の活性ィ匕など種々の生物活性を示す因子である。特に臨床の場では、例えば外科手術後に患者血液中に混入し、重篤な敗血症を引き起こすことがある。患者血液中に混入したエンドトキシン、特に重篤な患者の血液に混入したェンドトキシンにより刺激を受けた白血球より癌壊死因子、インターロイキン 1、インタ一ロイキン 6、インターフェロンなどの種々のサイト力インや酸過酸化物が放出されることが知られている。また、これら過剰なサイト力インは生理的悪影響を及ぼすことが知られている。

[0003] これまでに血液中の様々な成分を除去するカラムが開発されている。例えば白血球除去や顆粒球除去を目的としたカラム (特許文献 1, 2)や、サイト力イン吸着を目的としたカラム (特許文献 3, 4)、白血球と毒素を同時に吸着することを目的とした力ラム (特許文献 5, 6)が挙げられるが、血球が情報応答する液性因子を同時に除去するものはな力つた。また、ゼータ電位力 SOmV以上である所定の濾材を主要部とする白血球除去フィルターも報告されているが（特許文献 7)、血球除去についての開示にとどまる。従って、これら従来のカラムはいずれも、残存した細胞の正常化が不十分であった。

[0004] 一方、血液成分のうち特に、潜在型トランスフォーミング 'グロウス'ファクタ一'ベータ（以下、 TGF— β )、免疫抑制酸 ¾蛋白、インターロイキン 10、腫瘍壊死因子（以下、 TNF)、プロスタグランジン Ε2などの種々の物質や、 Β細胞、マクロファージ等の細胞は、進行癌患者において異常増殖し、癌特異的キラー細胞の誘導や機能発現を阻害するなど免疫機能を抑制することが報告されている (非特許文献 1 :藤原大美著、腫瘍免疫学、 ρ89— 112、中外医学社、 1998年)。よって、特に癌患者を対象としてこれらの免疫抑制物質を除去し患者の免疫力を向上させ、腫瘍の退縮や増殖の抑制を導くための手段の開発も進められている。

[0005] これら免疫抑制物質を効率よく安全に除去するための技術として、 TGF- β (特許文献 8, 9)、癌胎児性抗原 (特許文献 10)、免疫抑制酸性蛋白（特許文献 11)のそれぞれの吸着を目的とした技術が開示されている。しかし、これらの免疫抑制物質を一つの吸着体で効率よく除去する技術は、 V、まだ開発されて、な、。

[0006] 一方、上述のカラムは、通常、カラム内部にそれぞれ目的とする物質を除去 ·吸着するための濾過材または吸着材（吸着担体)を有し、様々な物質、形状のものが用いられている。例えば、特許文献 1では、血球の目詰まり解消のため複数の繊維径からなる繊維を混合した不織布を用いる。しかし、不織布自体の嵩密度が高ぐ血球除去性の制御が不十分であり、依然として血液循環の際の圧力損失上昇の懸念が問題であった。

また、直径 2mm程度の酢酸セルロースビーズからなる吸着担体 (特許文献 2)においては、圧力損失の懸念はあまりないものの、吸着表面積を大きくすることはできず、吸着担体としては非効率的である。かといつて、粒子径を小さくすることは圧力損失増加につながるため、採用し難い。

[0007] 特許文献 6には、目づまり防止及び形態保持性維持の観点から、吸着担体の嵩密度を 0. 05-0. 15gZcm³に調整することが開示されている力この吸着担体は実用性が低ぐ特に形態安定性が不十分であるという問題点があった。

[0008] 非特許文献 1 :藤原大美著、腫瘍免疫学、 p89— 112、中外医学社、 1998年

特許文献 1 :特開昭 60— 193468号公報

特許文献 2 :特開平 5— 168706号公報

特許文献 3 :特開平 10— 225515号公報特許文献 4：特開 2000— 237585号公報

特許文献 5：特開 2002— 113097号公報

特許文献 6 :特開 2002— 172163号公報

特許文献 7：特開平 6— 142196号公報

特許文献 8：特開 2003 - 339854号公報

特許文献 9：特開 2004— 248950号公報

特許文献 10：特開 2003 - 310751号公報

特許文献 11 :特開 2003— 111834号公報

発明の開示

発明が解決しょうとする課題

[0009] 本発明の第 1の課題は、顆粒球や単球などの細胞を除去し、かつ残存した細胞に対し、活性ィ匕を促すようなサイト力イン類も、残存した液成分中に残らないようにすることにある。このためには、細胞除去と同時に異常に増加するサイト力インをも除去できる機能を吸着体に付与することで、これらの問題点が解決できると考えた。すなわち、本発明は、細胞とサイト力インの同時吸着、同時除去に好適に使用し得る材料を提供すること、およびそれを用いた血液処理カラムを提供することを第 1の目的とするものである。

[0010] また、本発明者等は、体液中に存在し、サイト力イン放出の原因となるエンドトキシン、顆粒球や単球表面に付着したエンドトキシンなどの吸着除去、或いはエンドトキシンによる過剰なサイト力インの生産を予防することにより、エンドトキシン含有血液の状態を改善することが重要であるという知見を得た。この知見に基づき、本発明の第 1の課題には、（1)体液中のエンドトキシンを直接吸着材に吸着させて直接的に除去すること、および（2)顆粒球或いは単球を吸着させて、顆粒球或いは単球などの白血球成分への付着性のエンドトキシンを間接的に血液中より除去することも含まれる。また、（3)該エンドトキシンに起因するサイト力インをも除去して血液中のサイトカイン濃度の上昇を予防すること、も含まれる。

まとめると、上述した本発明の第 1の目的には、顆粒球や単球などの細胞およびサイト力イン類と、エンドトキシンとの両者の吸着および両者の除去に好適に使用し得る高機能材料、およびそれを用いた高機能血液処理カラムを提供することも含まれる。

[0011] 本発明の第 2の課題は、癌細胞増殖に関わる免疫抑制物質を除去することにある。

すなわち、本発明は、上述の従来技術の問題点に鑑み、一般的に普及可能であり、体液中から、直接、 TGF— や免疫抑制酸性蛋白などの免疫抑制物質を高い効率で選択的に吸着すると共に体液中の白血球を除去し正常な白血球バランスに近づけることができ、かつ、安全に体外循環できる材料を提供することを第 2の目的とする。この第 2の目的には、係る免疫抑制物質を吸着する材料を充填した癌治療用の力ラムの提供、並びに該カラムを用いた癌の治療を行うことも含まれる。

[0012] 本発明の第 3の課題は、血液循環カラムとしての安定した利用性を確保することにある。すなわち、本発明は、上述の従来技術の問題点に鑑み、血液中に存在する細胞、特に顆粒球や単球などの活性化した白血球、ガン細胞などを除き、さらに好ましくは過剰に存在するサイト力インをも除去できる、圧力損失が少な、吸着担体を提供すること、並びに吸着特性を損なうことなぐ担体自体の形状安定性を持たせることを第 3の目的とする。

課題を解決するための手段

[0013] 本発明は、上記第 1の目的を達成するために、下記の構成を有する。

(1)ゼータ電位が 20mV以上であって、血液中の顆粒球、単球およびサイト力インを吸着することを特徴とする吸着材。

(2)前記血液分散液からの顆粒球の吸着率が 50%以上、かつ単球の吸着率が 50 %以上であることを特徴とする前記（1)に記載の吸着器。

(3)リンパ球の吸着率が 40%以下であることを特徴とする前記（1)または（2)に記載の吸着材。

(4)前記サイト力インがインターロイキン 1 (IL— 1)、インターロイキンー6 (IL— 6)、インターロイキン一 8 (IL— 8)、インターロイキン一 10 (IL— 10)、 TNF— a、トランスフォーミング 'グロウス'ファクター 'ベータ (TGF— ）、血管新生増殖因子 (VEGF) および免疫抑制酸性蛋白（IAP)からなる群力選ばれる少なくとも 1種であることを特徴とする前記（1)〜（3)の、ずれかに記載の吸着材。

(5)凝固第 ΧΠΙ因子の吸着率が 30%以下であることを特徴とする前記（1)〜 (4)の V、ずれかに記載の吸着材。

(6)ゼータ電位が— 15mV以上であって、 lvol%牛胎仔血清 (FCS)溶解生理食塩水中で 90%以上のリポ多糖 (LPS)吸着能を有することを特徴とする前記（1)に記載の吸着材。

(7) 水不溶性担体に 4級アンモニゥム塩および Zまたは直鎖状アミノ基を結合してなる前記（1)〜（6)の、ずれかに記載の吸着材。

(8) 形状が繊維、膜、中空糸及びビーズから選ばれることを特徴とする前記（1)〜（ 7)の、ずれかに記載の吸着材。

(9) 前記水不溶性担体の形状が繊維状あるいは中空糸形状であって、かつその繊維径が 3 μ mを超えるものであることを特徴とする前記（1)〜（8)の、ずれかに記載の吸着材。

(10) 繊維径が 4〜8 μ mの繊維 Αおよび繊維径が 10〜50 μ mの繊維 Βを含むことを特徴とする前記（9)に記載の吸着材。

(11) 前記繊維 Aが繊維径 4. 5〜8 mの繊維を含むことを特徴とする前記（10)に記載の吸着材。

(12) 前記水不溶性担体の形状がビーズ状であって、かつ材料の表面に径が 3 mを超える突起部分を有することを特徴とする前記（1)〜（8)の、ずれかに記載の吸着材。

(13) 白血球除去療法に用いられることを特徴とする前記（1)〜（12)のいずれかに記載の吸着材。

(14) 前記（1)〜（13)のいずれかに記載の吸着材を容器に充填してなる血液処理カラム。

(15)血液を循環させることを特徴とする（14)記載の血液処理カラム。

(16)白血球除去療法に用いられることを特徴とする（14)または（15)に記載の血液処理カラム。

( 17)生物との体外循環終了時から 150〜 180時間経過後に、体外循環前に比べ、リンパ球数の増加と顆粒球数の減少を示す前記（14)〜（16)のいずれか〖こ記載の血液処理カラム。 [0014] 本発明は、上記第 2の目的を達成するために、下記の構成を有する。

(1)親水性アミン残基を結合した水不溶性重合体を含む吸着材であって、潜在型トランスフォーミング ·グロウス ·ファクター ·ベータ吸着能、および白血球吸着能を有する癌治療用吸着材。

(2)前記親水性アミン残基を結合した水不溶性重合体が、膜、繊維または粒状物であることを特徴とする前記（1)に記載の癌治療用吸着材。

(3)前記（1)または（2)に記載の癌治療用吸着材を用いた癌治療用体外循環カラム。

[0015] 本発明は、上記第 3の目的を達成するために、下記の構成を有する。

(1)少なくともネットと不織布の 2層構造を持つことを特徴とする吸着担体。

(2)前記ネットが、 100mm²中に 10mm²以上の空隙を有するネットであることを特徴とする（1)に記載の吸着担体。

(3)生理活性物質および Zまたは細胞を吸着することを特徴とする（1)記載の吸着担体。

(4)前記ネットが単繊維力もなることを特徴とする（1)な、し (3)の、ずれかに記載の吸着担体。

(5)嵩密度が 0. 02gZcm³以上であることを特徴とする（1)な、し (4)の、ずれかに記載の吸着担体。

(6) (1)な、し (5)の、ずれかに記載の吸着担体が円筒状容器に納められて、ることを特徴とする血液処理カラム。

(7)血液を循環して使用することを特徴とする（6)に記載の血液処理カラム。

発明の効果

[0016] 本発明によれば、過剰に増殖した顆粒球や単球などの人体に不要な白血球やこれら細胞に対し情報伝達するサイト力インを同時に除去することにより、潰瘍性大腸炎、クローン病、自己免疫疾患などの際の血液処理や治療に有用な吸着材及び血液処理用カラムが提供される。

[0017] また、本発明によれば、過剰に増殖した顆粒球や単球などの人体に不要な白血球や、これら細胞に対し情報伝達するサイト力インを同時に除去し、かつ、白血球を活性ィ匕する LPSを同時に除去することにより、潰瘍性大腸炎、クローン病、自己免疫疾患などの血液処理や治療に有用な吸着材および血液処理用カラムが提供される。

[0018] また、本発明により、体液中から、直接、 TGF- βや免疫抑制酸性蛋白などの免疫抑制物質を高い効率で選択的に吸着し、同時に、体液中の白血球を除去することできる癌治療用吸着材及びこれを用いる癌治療用体外循環カラムが提供される。したがって、本発明によれば進行癌の治療または患者の延命および QOLの向上が可能である。

[0019] さらに、本発明によれば、血液循環時の圧力損失が少なぐ形状安定性に優れ、各種血液処理カラムに好適に使用することができる吸着担体 (吸着体)が提供される。特に、過剰に存在する人体に不要な白血球やガン細胞などと、サイト力インなどの生理活性物質を同時に除去するのに好適であり、自己免疫疾患、がん、アレルギーなどの血液処理や治療に有用である。またこの材料は、シャーレ、瓶、膜、繊維、中空糸、粒状物またはこれらを用いた組み立て品などの成形品の形で、ァフィ-ティーク口マトグラフ用カラム、治療用血液カラム、特に体外循環カラムとして好適に使用することができる。

発明を実施するための最良の形態

[0020] 続いて、本発明についてさらに詳細に説明する。

[0021] 吸着材の基本的な構成としては、水不溶性担体に官能基を固定ィ匕したもの、もしくは官能基を固定ィ匕した水不溶性担体を基材にコーティング等したものが好ましい。

[0022] 本発明で用いる水不溶性担体としては、水に不溶で、官能基を固定ィ匕できるものであれば良ぐ特に制限されない。生体適合性の観点からは、ポリプロピレンやポリェチレンなどのォレフィン系榭脂が好ましぐポリアミドやポリエチレンテレフタレートで代表されるポリエステルが好まし!/、。

[0023] 本発明の吸着材においては、細胞表面にある糖タンパク質上のシアル酸や，リン酸を認知したり、サイト力インなどに結合した糖鎖上のシアル酸やリン酸などを認識する上で、ゼータ電位が高い方が好ましい。通常のポリプロピレンやポリエチレン、ポリエチレンテレフタレートなどの高分子材料は、ゼータ電位としてはマイナスの値を持ち、概ね— 30mV程度である。そこで本発明者らは、水不溶性担体に特定の官能基、たとえば 4級アンモ-ゥム塩および Zまたは直鎖状アミノ基を固定ィ匕することで、ゼータ電位を一 20mV以上に設定したところ、これらの吸着特性が良好であることを見出し、本発明に到達した。さらに、ゼータ電位は— 15mV以上であるとリポ多糖 (LPS)に対する吸着特性がいっそう優れるので好ましぐ 10mV以上になるとより効果が高く、一 2mV以上がさらに好ましい。

[0024] 本発明では、顆粒球、単球およびサイト力インへの吸着能を有すると同時に、 LPS の吸着能をも有することが好ましい。 LPSとは、後述するように一般にグラム陰性菌の持つ毒素である。 LPSは白血球上の TLR— 4などのレセプタータンパク質へ結合し、該タンパク質を活性ィ匕することが分力ゝつている。顆粒球、単球およびサイト力インを除去することで、これらに起因する異常状態を軽減できるが、例えば、炎症性部位、潰瘍部位などで進入した菌力発生した LPSが残存すると、患者の状態がせっかく正常状態に近い状態へ移行したにもかかわらず、再度異常状態に陥るおそれがある。本発明の吸着材に、白血球やサイト力インの吸着能と同時に LPSをも除去するための好ましい機構を付与することで、潰瘍性大腸炎、クローン病、自己免疫疾患などの際の効率良い血液処理や治療に有用である。また、かかる多機能的吸着材を用 V、ることで、治療用カラムのコンパクトィ匕を図ることが可能である。

[0025] なお、本発明にお!/ヽてゼータ電位とは、吸着材表面のゼータ電位を!ヽぅ。表面ゼータ電位は、流動電位測定装置によって、流動電位と液体を流すために加えた圧力及び、液体の比導電率を測定することによって計算より求めることができる。本発明の吸着材は、ゼータ電位が— 20mV以上のものであることが好ましぐ 15mV以上がより好ましぐ 2mV以上が特に好ましい。上限については、赤血球の溶血等を防止する観点から 10mV以下とすることが好ましい。

[0026] 本発明にお、て、水不溶性担体の形状は特に限定されな!、が、加工性や、血液処理カラムとした時の圧力損失等の点から、繊維、膜、中空糸又はビーズの形状であることが好ましい。もちろん、これらの組み合わせでも力まわない。

[0027] また、本発明における吸着材は、血液中の顆粒球、単球およびサイト力インを吸着する能力を有し、特に、血液からの顆粒球の吸着率が 50%以上であり、かつ単球の吸着率が 50%以上であることが好ましい。ここで、本発明における吸着率とは、血球を例に取る場合、吸着材を充填したカラムに血液を 1回通過させたときの通過前後の血球量を血球分析装置により測定して、以下の式より求められるものである。カラムの大きさ、形状、血液の通過速度等の条件は、実施例に準じて適宜定めることができる吸着率（％) = [ (カラム通過前の血液中の血球量）（カラム通過後の血液中の血球量）] Z (カラム通過前の血液中の血球量） X loo

[0028] 尚、本発明の吸着材は、血球を吸着する作用を有するものであるが、更に濾過作用を有するものであっても良い。この場合の上記吸着率の算出対象は、吸着により血液中から除去される血球だけでなく濾過により除去される血球も含まれることになる。

[0029] 顆粒球、単球等の細胞を吸着除去させるためには、本発明の吸着材を水不溶性担体として用いることが好ましぐ中でも、繊維、中空糸の繊維径、あるいはビーズ粒子の表面の突起の径 (大きさ）等 (以下、繊維径等）が 3 mを超えることが好ましい。特に、これより径が小さくなると、リンパ球の吸着除去が多くなるため、メモリーセルの除去に繋がりあまり好ましくない。ただし、繊維の径については、リンパ球の吸着除去率を抑制するためには、より好ましい範囲は 4 m以上であり、更に好ましい範囲は 4. 5 m以上である。さらに、リンパ球の除去率をより抑え、かつ顆粒球や単球の除去率低下につながらないようにする観点からは、繊維の径を 5 m以上とすることがより好ましいこともある。しカゝしながら、繊維の径が 8 mを超える場合は、顆粒球、単球の除去率が低下傾向を示し、繊維の径が 10 m以上になると顆粒球や単球の除去率が低下してしまうため、好ましくない。実用上の観点からは繊維の径が 20 m以下であることが好ましい。

[0030] 一方、上記繊維 (繊維 Aとする。 )に対し、主に血球の除去以外の目的、すなわち、吸着材の強度を一定以上に保つ目的から、より太径の繊維を繊維構造体などとして混合することがある（繊維 Bとする。 ) o力かる繊維 Bの径はこの限りではなぐ繊維 Bの繊維の径としては、 10 μ m〜50 μ mが好ましい。 10 μ mを下回る場合は、繊維 Bの混合の主目的である強度維持の効果を期待できな、ことがある。 50 μ mを上回る場合には、繊維 Aとの混合が困難となる。

[0031] リンパ球の除去率 (本発明の吸着材を利用しての吸着率）は、メモリーセルの低下につながりにくい理由力も 40%以下が好ましぐさらに安全性の観点で好ましくは 30 %以下である。

[0032] 本発明の吸着材としては、上記水不溶性担体に、官能基として 4級アンモ-ゥム塩および Zまたは直鎖状アミノ基を固定ィ匕したものが好まし、。 4級アンモ-ゥム塩および Zまたは直鎖状アミノ基を水不溶性担体に固定ィ匕するための反応性官能基としては、ハロメチル基、ハロアセチル基、ハロアセトアミドメチル基、ハロゲン化アルキル基などの活性ハロゲン基、ェポキサイド基、カルボキシル基、イソシアン酸基、チォイソシアン酸基、酸無水物基などをあげることができる力とりわけ、活性ハロゲン基、中でも、ハロアセチル基は、製造が容易な上に、反応性が適度に高ぐ 4級アンモ-ゥム塩および Zまたは直鎖状アミノ基の固定ィ匕反応が温和な条件で遂行できると共に、この際生じる共有結合が化学的に安定なので好ましい。

[0033] 固定ィヒされる官能基としては 4級アンモ-ゥム塩および Zまたは直鎖状アミノ基が好適であり、これらはアンモニア、第 1〜3級ァミノ基がポリマに化学的に結合した状態のものを意味する。さらに、 1〜3級ァミノ基としては、炭素数で言うと、窒素原子 1 個当たり炭素数 18以下であるものが反応率向上のために好ましい。さらに、 1〜3級ァミノ基の中でも、窒素原子 1個当たり炭素数 3以上 18以下、とりわけ、 4以上 14以下のアルキル基を持つ第 3級アミノ基を結合して形成された第 4級アンモ-ゥム基を固定ィ匕したものが、サイト力イン吸着性の観点で優れている。そのような第 3級ァミノ基の具体例としては、トリメチルァミン、トリェチルァミン、 N、 N—ジメチルへキシルァミン、 N、 N—ジメチルォクチルァミン、 N, N—ジメチルラウリルァミン、 N—メチルー N— ェチルーへキシルァミンなどがあげられる。また、直鎖状アミノ基を有する化合物の例としては、テトラエチレンペンタミン等が挙げられる。

[0034] 本発明における 4級アンモ-ゥム塩および Zまたは直鎖状アミノ基の結合の密度は、水不溶性担体の化学構造および用途により異なるが、少なすぎるとその機能が発現しない傾向にあり、一方、多すぎると、固定化後の担体の物理的強度が悪くなり、吸着材としての機能も下がる傾向にあるので、該密度は水不溶性担体の繰り返し単位あたり 0. 01〜2. 0モノレ、より好ましく ίま 0. 1〜1. 0モノレカ良!ヽ。尚、 4級アンモニゥム塩および Ζまたは直鎖状アミノ基を固定化させる (4級化)方法としては、ヨウ化力リウムを触媒とする反応がよく用いられるが、これに縛られずに公知の方法によることが可能である。

[0035] 本発明の吸着材が吸着するサイト力インは、インターロイキン 1 (IL— 1)、インターロイキン 6 (IL— 6)、インターロイキン 8 (IL— 8)、インターロイキン 10 (IL— 10 )、腫瘍壊死因子一 (X (TNF— α )、トランスフォーミング 'グロウス'ファクタ一'ベータ (TGF- β )、血管新生増殖因子 (VEGF)および免疫抑制酸性蛋白（ΙΑΡ)力もなる群力も選ばれる少なくとも 1種のサイト力インである。これらは、すべて白血球除去療法の適用対象とすることが考えられている、潰瘍性大腸炎、クローン病、慢性関節リウマチなどの免疫疾患において、その病態への関与が指摘されているサイト力イン等である。

[0036] これら吸着すべきサイト力インの種類によって、固定ィ匕する 4級アンモ-ゥム塩および Ζまたは直鎖状アミノ基を適宜選択すればよい。たとえば、インターロイキン 1 (I L— 1)、インターロイキン 6 (IL— 6)、トランスフォーミング ·グロウス ·ファクタ^ ~ ·ベータ (TGF— β )、血管新生増殖因子 (VEGF)、免疫抑制酸性蛋白（ΙΑΡ)などは、 Ν、 Ν ジメチルへキシルァミン、 Ν、 Ν ジメチルォクチルァミン、 Ν, Ν ジメチルラゥリルァミンなどを固定ィ匕すると吸着性を付与することができる。また、インターロイキン一 8 (IL— 8)、インターロイキン一 10 (IL— 10)、腫瘍壊死因子一 α (TNF— a )などは、ァミン成分としてテトラエチレンペンタミンを固定ィ匕することで吸着性を付与できる。また、複数の種類の官能基を組み合わせて固定ィ匕することもでき、例えば、 4級ァンモ -ゥム塩および直鎖状アミノ基の両方を用いることも可能である。複数の種類の官能基を組み合わせて用いることにより、吸着されるサイト力インの種類に幅をもたせることができるため好ま、ほ力、所望のサイト力イン吸着特性を高めるなどの利点もある。

[0037] 本発明にお、て、これらサイト力インの吸着除去性の評価は、すべて天然型のタンパク質を用い、 EIA法 (酵素免疫測定法）にて測定したものに基づくものである (条件は、 37°Cで 2時間振とうし、ノツチ吸着させる。 ) o例えば、 IL 6については、実施例に示すバッチ吸着法で測定した吸着率が 50%以上であることが好ま、。更には、残存細胞への影響を低減するためには 60%以上の吸着率があることが好ましい。例えば、 IL 1については、実施例に示すバッチ吸着法で測定した吸着率力 0%以上であることが好ましい。更には、残存細胞への影響を低減するためには 50%以上の吸着率があることが好まし、。

[0038] 前述の通り、吸着材の形状としては特に限定はないが、カラムとして用いる場合には、ビーズ、繊維、中空糸、さらには繊維を編織した編地、織物ゃ不織布等の繊維構造物が好ま、。水不溶性担体がそれのみで形態保持できれば単独での使用も可能であるし、形態保持性が低ければ適当な基材にコーティングなどの方法で固定したり、他の吸着材と混合して一つのカラムとして用いることもできる。固定ィ匕あるいは混合などの操作は、上記形状に加工する前に行っても良、。

[0039] 本発明の吸着材においては、形状は特に不織布とすることが好ましい。その場合、不織布の嵩密度は、大きすぎると目づまりしやすぐ逆に小さすぎると形態保持性が悪くなるので、 0. 02gZcm³以上が好ましぐ中でも 0. 02gZcm³以上であることが好ましぐ 0. 05g/cm³以上であることがより好ましい。また、上限としては、好ましくは 0. 15gZcm³以下であるものが使用される。

[0040] 本発明において用いられる不織布は、単独繊維カゝら作られるものであってもよいが、特に好ましくは海島型複合繊維力作られる。すなわち、力かる複合繊維を用いて公知の方法によって不織布にしてから、この不織布を、形態保持性を良くするため、および嵩密度を調整するために、ニードルパンチした後、海成分を溶解することによつて、容易に製造することができる。

[0041] 更に、不織布の形態を取る場合には、後述するようなネットとの二層構造とすることができ、特に、ネットを不織布で包み込んだような構造としても良い。このような構造を取ることにより、円筒形に巻く等してカラムを形成したときに形態保持性を高めることができる。

[0042] 水不溶性担体として好まし、素材は、疎水性繊維、すなわち、ポリエチレン、ポリプロピレンなどのポリオレフインや、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレートなどのポリエステル、テフロンをはじめとするフッ素化ポリマである。このほ力にも表面修飾により各種アルキル基を付加して疎水性部位を設けたものを用いることができる。単独で使用可能な 4級アンモ-ゥム塩および Zまたは直鎖状アミノ基を固定化するポリマとして好適なものの具体例としては、ポリ（p—フエ-レンエーテルスルホン）： { (p— C H )—SO - (p-C H )— O— }n—やユーデル'ポリスルホン：一 { (

6 4 2 6 4

p— C H ) SO— (p-C H ) -0- (p-C H ) C (CH ) (p-C H ) O}—

6 4 2 6 4 6 4 3 2 6 4 n のほか、 { (p— C H )— SO—（p— C H )— O—（p— C H )— O} —、 - { (p-C

6 4 2 6 4 6 4 n 6

H )— SO - (p-C H ) -SO 一（p— C H )— 0}n—、一 { (p— C H )— SO—（p

4 2 6 4 2 6 4 6 4 2

— C H )— O— (p-C H ) -C (CF ) - (p-C H )— O} —などで代表されるポリ

6 4 6 4 3 2 6 4 n

スルホン系重合体、ポリエーテルイミド、ポリイミド、ポリアミド、ポリエーテル、ポリフエ二レンサルファイド、ポリスチレン、アクリルポリマなどで、かつ、アミノ基を共有結合で固定ィ匕できる反応性官能基を持つものが使用される。そのなかでも、ポリスルホン系重合体は安定性が高ぐまた形状保持性が良いので好ましく用いられる。

[0043] 具体的な例としては、前述した反応性官能基を結合させたクロルァセトアミドメチル化ポリスチレン、クロルァセトアミドメチル化したユーデル ·ポリスルホン、クロルァセトアミドメチルイ匕したポリエーテルイミドなどが使用される。さら〖こ、これらのポリマは有機溶媒に対し可溶であるものが、成型のしゃすさの上から、特に好ましく使用される。

[0044] 本発明の吸着材は、力かる 4級アンモ-ゥム塩および Zまたは直鎖状アミノ基を有するポリマ自体、すなわち水不溶性担体自体を繊維、中空糸及びビーズに成形して製造する他、繊維、中空糸及びビーズ、特に生産性の面力好ましくは不織布等の基材に 4級アンモ-ゥム塩および Zまたは直鎖状アミノ基を有するポリマをコーティングして製造することもできる。その際に、該ポリマを溶媒、たとえば塩化メチレン、テトラヒドロフラン、 N, N—ジメチルホルムアミドなどに溶かし、この溶液に該不織布を浸したのち、該溶媒を蒸発させることにより容易に製造される。

[0045] また、 4級アンモ-ゥム塩および Zまたは直鎖状アミノ基を水不溶性担体に固定ィ匕する際の反応溶媒としては、水、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ジメチルスルホキシド、 N, N ジメチルホルムアミド、 N, N ジメチルァセトアミド、 N—メチルピロリドンなどが好ましく用いられる。

[0046] また、本発明の吸着材および血液処理カラムは、その安全面を考慮して、血液処理した際に血液凝固因子 ΧΙΠ (凝固第 ΧΙΠ因子）の活性が低下しないことが好ましい。特に潰瘍性大腸炎やクローン病患者では血液凝固因子 ΧΠΙが低下傾向にあり、本因子が欠乏することで出血傾向に陥る危険がある。血液凝固因子 ΧΠΙの吸着率が 3 0%以下であれば安全に使用できる力 20%以下であることがさらに好適である。か力る吸着率は、実際に処理される血液量 (本発明では、血液とは、全血、血漿、血清、腹水、胸水を指す）に対し、用いられる担体量の比を計算し、クェン酸採血した健常者ボランティア血液力調製した血漿を用いて 1時間、 37°Cでの振盪前後での血液凝固因子 ΧΠΙ活性カゝら求めることができる。血液凝固因子 ΧΙΠ活性は、合成基質法などにより測定することができるが、専門業者に測定を委託することも可能である。

[0047] 本発明の吸着材および血液処理カラムは、 lvol%牛胎仔血清 (FCS)溶解生理食塩水中で 90%以上のリポ多糖 (LPS)吸着能を有するものであっても良い。このようにリポ多糖吸着能を持たせることにより、例えば外科手術後に患者血液中に混入したり、炎症性部位'潰瘍性部位など力混入したエンドトキシンによる過剰なサイト力イン生産を予防できるだけでなぐエンドトキシン自体を効率よく吸着でき、エンドトキシンの生物活性に由来する発熱、ショック、血管内凝固、リンパ球活性化などに対する予防、治療効果を得ることができる。そのため、エンドトキシンの生物活性に由来する発熱、ショック、血液内凝固、リンパ球活性ィ匕などに対する予防、治療効果を得ることができ、特に免疫賦活療法において有用な吸着剤となる。更に、顆粒球、単球、サイト力イン吸着能だけでなくリポ多糖吸着能をも兼備させることにより、一つの吸着剤による同時処理が可能となる点でも好ましい。

[0048] リポ多糖とは、リピド Aの構造を含む分子を意味し、血中に存在しうる LPSの代表的なものとしては、グラム陰性菌の持つ毒素を挙げることができる。

[0049] エンドトキシンは、血液中に過剰に存在すると、白血球からの癌壊死因子、インターロイキン 1、インターロイキン 6、インターフェロンなどの種々のサイト力インや酸過酸化物の過剰な放出を引き起こすことが知られている。本発明の吸着材及び血液処理力ラムが更に、本発明の吸着材に LPSの吸着能を付与することにより、リンパ球、特に Thlタイプのリンパ球が活性ィ匕されることに起因すると推測される、インターフェロンガンマの産生向上効果を得ることもでき、免疫賦活療法において有用である。このようなリンパ球の活性ィ匕の詳細なメカニズムは不明ではある力吸着された LPSに処理血液中の血球が接触することに起因するものと推測される。 [0050] LPSの吸着量は和光純薬製のトキシノメーターで測定することができる。 lvol%FC S添加生理食塩水中に規定量の LPSを混合し、 4時間 37°C水浴中でインキュベーシヨンを行った上清中に残存した LPS量を測定し、同様にトキシノメーターにて測定した添加液中の LPSとの差および比から除去量および除去率を求めることができる。除去量は lOOpgZmg以上が望ましぐ更に好ましくは 200pgZmg以上である。本発明の体液中の顆粒球および Zまたは単球と、サイト力インとを同時に吸着し、 1%F CS溶解生理食塩水中で LPS吸着能を有する能力は、それぞれ別々の吸着材を組み合わせることによつても実現は可能である。この場合、各吸着材を 1つにまとめて力ラムに充填した形態でも良いし、それぞれを別々のカラムに充填してカセットタイプの形態としても良い。ただし、カセットタイプの場合には、コンパクト性が犠牲になりやすぐ一つにまとまった態様の方が便利である。尚、これに限定して考える必要性はなく、必要に応じた形態を適宜選択することが可能である。

[0051] 本発明の血液処理用カラムは、本発明の吸着材をカラム容器に充填することによつて製造することができる。カラム容器としては、公知の血液処理用カラムの容器を用いることができる。カラムの構成としては、吸着材を平板状に形成し、これを重ねて充填したカラム、吸着材が円筒形状に巻かれてなる円筒状フィルターが、両端部に血液入口と血液出口とを有する円筒容器に納められているカラム、吸着材が円筒状にまかれてなる中空円筒状フィルターが、その両端部を封止された状態で血液入口と血液出口とを有する円筒状容器に納められており、容器の血液出口は前記中空円筒状フィルターの外周部に通じる部位に、また容器の血液出口は前記中空円筒状フィルターの内周部に通じる部位にそれぞれ設けられているカラムが好ましい。そのなかでも、円筒中空状フィルターを用いたカラムは、血液中の炎症性白血球の大部分力円筒形状フィルターの外周部の大きな面積の不織布で迅速に除去され、除去されずに残ったわずかな炎症性白血球も、円筒形状フィルターの内周部に到って、その小さな面積の不織布でも十分に除去され、効率的な炎症性白血球除去が可能であるので、最も好ましい。特に本発明の吸着材の形態を不織布とする場合には、癌治療用体外循環カラム調製にあたり、後述するようなネットとの 2層構造、好ましくは、ネットを不織布で包み込んだような構造とした状態で円筒状に巻く等することにより形態保持性を高めることができる。

[0052] 本発明の血液処理用カラムは、白血球除去療法や免疫賦活療法に用いることができる。また、後述するように本発明の血液処理用カラムを用いて生体との体外循環を行うと、体外循環終了時から 150〜180時間経過後に、体外循環前に比べ血中の白血球、特に顆粒球数が減少し、リンパ球数が増加する。このことは、本発明の血液処理用カラムが免疫状態を矯正する機能を有すことを示唆する。特に、進行癌患者では顆粒球の増加と、リンパ球の減少がみられ、免疫状態は抑制されていることが知られているが、本カラムを用いることで、その状態は正常な状態へと矯正される。この効果は体外循環後長時間続くものではなぐおおむね 1週間を過ぎると再び顆粒球増カロ、リンパ球減少傾向が現れるため、 1週間に 1回程度の処置が望まれる。

[0053] 一方、本発明の吸着材は、癌治療に用いることができ、本発明はこのような癌治療用吸着材をも提供するものである。続いて、本発明の癌治療用吸着材についてさらに詳細に説明する。

[0054] 本発明でいう、免疫機能抑制蛋白質とは哺乳動物の免疫機能を抑制する蛋白質であって血液中に存在するものをいい、例えば TGF— β、免疫抑制酸性蛋白、インターロイキン 10、 TNF— αなどを指す。

[0055] 本発明の吸着材を癌治療用吸着材として用いる場合には、免疫抑制性蛋白質 (免疫機能抑制蛋白質)を吸着するものであれば良ぐ吸着能力が大きいほど体外に出す血液量が少なくて済むので好ま、。癌治療用吸着材及び後述の癌治療用体外循環カラムの吸着能力の目安として、血中の TGF— βである潜在型トランスフォーミング ·グロウス ·ファクター ·ベータ（以下、潜在型 TGF— ）が基準物質になる。癌治療用体外循環カラムの吸着能力が潜在型 TGF— βとして、担癌哺乳動物の体重 1 キログラム当たり lOOng以上であることが望ましく、さらに進行癌では血中濃度が高くなっているので 250ng以上であることが望ましい。吸着材 1グラム当たりの潜在型 TG F- β平衡吸着量にカラム充填量グラム数を掛けたものがカラムの吸着能力となる。

[0056] 本発明における潜在型 TGF— β平衡吸着量とは、担癌ラットの血清 lmLに癌治療用吸着材 30mgを入れ、 37°Cで 4時間振とうし、上清中の TGF— 濃度を測定して、吸着前後の濃度差を癌治療用吸着材重量 (0. 03g)で除することにより求めた値である。上清中の TGF— |8濃度は、検体血清を酸で前処理して、潜在型 TGF— β を遊離型の TGF— βとした後、抗 TGF— 抗体を用いる酵素免疫分析法によって求めることができる。例えば、潜在型 TGF— βの場合には、実施例に記したバッチ吸着法の条件で 40%以上であることが好ましい。更に、免疫抑制効果への影響を低減するために 50%以上の吸着率があることが好ましい。 TGF— |8濃度の測定に際しては、市販の分析キットが利用できる。 TGF- βとしては、 TGF— β 1、 TGF- j8 2、 T GF- j8 1. 2、 TGF- β 4、 TGF— β 5など、配列の違いでスーパーファミリーがあることが知られている。特にこれらのアミノ酸配列の相同性は高ぐ吸着材に吸着するときの性質は似通っている。 TGF- βの性質は基本的に TGF— β 1の性質で代表され、その定量のためには特に TGF— β 1の測定キットが汎用されている。

[0057] 本発明における担癌哺乳動物とは、ヒト、猿、牛、馬、犬、猫、豚、羊などの陸生哺乳動物で、腫瘍が出来たものを意味する。

[0058] このような本発明の癌治療用吸着材は、癌治療用体外循環カラムとして利用することができる。本発明の癌治療用体外循環カラムに詰める免疫抑制性蛋白質を吸着する癌治療用吸着材の量が少ないほど、体外に出す血液量が少なくて済むので、好ましいが、少なすぎると吸着能力が下がり効果が無くなるし、多すぎると生体への負担が大きくなる。一般に、安全上、体外循環時に体外の回路に回す血液の適正な量は、輸血のための採血が許される 200mL以下なら良いとされている。体重 60kgのヒトの全血液量は約 4. 6Lであるので、体外に出す血液量が全血液量の 4%以下なら許容されると言うことになる。一方、吸着材をカラムに充填した場合、血液を通すためには空隙率が 15%以上必要である。これらの条件から、カラムに詰める免疫抑制性蛋白質を吸着する材料の量は担癌哺乳動物の体重 1キログラム当たり 0. 05グラム以上、 3. 5グラム以下が好ましい。

[0059] 本発明の癌治療用吸着材および癌治療用体外循環カラムは、血中で増加した顆粒球や単球等の白血球の吸着除去を同時に行うことができる。顆粒球や単球については高い除去性能を持つことが望ましぐインビト口での除去評価で 35%以上が好ましぐ 50%以上の除去率を持つことがさらに好ましい。特に、顆粒球及び単球の各吸着率が両方とも 50%以上であることが好ま、。これら顆粒球や単球を吸着除去させるために、癌治療用吸着材の形態を適宜選択することが好ましい。具体的には癌治療用吸着材の形態を、繊維 (複合糸、紡績糸等も含む。また、短繊維でも長繊維でもよい。）、膜、中空糸またはビーズとすることが好ましい。繊維は適宜、繊維構造物 (織物、編物、不織布、綿状等）にして使用することができる。中でも不織布の形態を取る場合には、後述するようなネットとの二層構造とすることができ、特に、ネットを不織布で包み込んだような構造を取ることができる。このような構造を取ることにより、円筒形に巻く等してカラムを形成したときに形態保持性を高めることができる。

[0060] 特に、顆粒球や単球の吸着除去能向上のためには、繊維、中空糸の繊維径またはビーズ粒子の表面の突起の径 (大きさ）等 (繊維径等）が 3 mを超えることが好ましい。特にこれより径が小さくなると、リンパ球の吸着除去が多くなるため、メモリーセルの除去に繋がり好ましくない。ただし、繊維の径については、リンパ球の吸着除去率を抑制するためには、 4 μ m以上であることが好ましぐ更に 4. 5 μ m以上とすること力り好ましい。さらに、リンパ球の除去率をより抑え、顆粒球や単球の除去率低下につながらないようにする観点からは、繊維の径を 5 m以上とすることがより好ましいこともある。しかしながら、繊維の径が 8 mを超える場合は、顆粒球、単球の除去率が低下傾向を示し、繊維の径が 10 m以上になると顆粒球や単球の除去率が低下してしまうため、好ましくない。そして 20 m以上となるとさらに低下することから、実用上 20 μ m以下であることが好ましい。

[0061] ただし、血球の除去以外の目的で混合した繊維構造体などの径はこの限りではない。例えば、上記繊維 (繊維 Aとする。 )に対し、主に血球の除去以外の目的、すなわち、吸着材の強度を一定以上に保つ目的から、より太径の繊維を繊維構造体などとして混合することがある (繊維 Bとする。）が、力かる繊維 Bの径はこの限りではなぐ繊維 Bの繊維の径としては、 10 μ m〜50 μ mが好ましい。 10 μ mを下回る場合は、繊維 Bの混合の主目的である強度維持の効果を期待できな、ことがある。 50 μ mを上回る場合には、繊維 Aとの混合が困難となる。

[0062] リンパ球の除去率 (本発明の吸着材を利用しての吸着率）は、メモリーセルの低下につながりにくい理由力も 40%以下とすることが好ましぐさらに安全性の観点で好ましくは 30%以下である。特に進行癌や末期癌では、血中のリンパ球数が減少しているため、 20%以下がさらに好ましい。

[0063] 本発明の癌治療用体外循環カラムの調製は、本発明の癌治療用吸着材をカラム容器に充填することで達成される。その際の本発明の癌治療用吸着材の形態は、上記の通り、不織布、織物、編物、綿状、中空糸、ビーズ等の形態を採用することができる。容器の形状は特に限定されず、従来力体外循環カラムに使用されているものを採用することができるが、円筒状が一般的である。このような円筒状の容器を利用する場合には、特に本発明の癌治療用吸着材の形態を不織布として、後述するようなネットとの二層構造、好ましくは、ネットを不織布で包み込んだような構造とした状態で、円筒状に巻いたもの等を充填することにより形態保持性を高めることができる。

[0064] 本発明の癌治療用吸着材は、親水性アミン残基を結合した水不溶性重合体を含む。親水性アミン残基を結合した水不溶性重合体の調製は、水不溶性担体と親水性アミンを溶媒中で反応させることにより達成される。

[0065] 用いる水不溶性担体の具体例としてはポリスチレンで代表されるポリ（芳香族ビニル化合物）、ポリ（P -フエ-レンエーテルスルホン）や— { (p— C H )— C (CH ) - (p

6 4 3 2

-C H ) -0- (p— C H ) -SO一（p— C H )一 0— }n— (ユーデルポリスルホン）

6 4 6 4 2 6 4

などで代表されるポリスルホン系重合体、ポリエーテルイミド、ポリイミド、ポリアミド、ポリエ一テル、ポリフエ-レンサルファイドなどで、かつ、親水性アミンを固定化するための反応性官能基を有するものがあげられる。親水性アミンを固定化するための反応性官能基としては、ハロメチル基、ハロアセチル基、ハロアセトアミドメチル基、ハロゲン化アルキル基などの活性ノヽロゲン基、ェポキサイド基、カルボキシル基、イソシアン酸基、チォイソシアン酸基、酸無水物基などをあげることができる。水不溶性重合体のさらに具体的な例としては、クロルァセトアミドメチルポリスチレン、クロルァセトアミドメチル化したユーデル ·ポリスルホン、クロルァセトアミドメチル化したポリエーテルイミドなどがあげられる。さらに、これらのポリマは有機溶媒に対し可溶であると、成型しやすい利点がある。

[0066] 本発明でいう親水性アミン残基とは、単独で水に溶解もしくは水を溶解する親水性ァミンがポリマに化学的に結合した状態のものを意味する。さらに、親水性アミン残基を形成する親水性ァミンとしては、炭素数で言うと、窒素原子 1個当たり炭素数 18以下であるものがこれに相当する。

[0067] さらに、親水性ァミンの中でも、窒素原子 1個当たり炭素数 3以上 18以下、とりわけ、 4以上 14以下のアルキル基を持つ第 3級アミンカも得られる第 4アンモ-ゥム基を結合したものが優れている。そのような第 3級ァミンの具体例としては、トリメチルァミン、トリエチルァミン、 N、 N—ジメチルへキシルァミン、 N、 N—ジメチルォクチルァミン、 N, N—ジメチルラウリルァミン、 N—メチル—N—ェチルーへキシルァミンなどがあげられる。さらに、親水性アミンを構成するアルキル基が親水性基である水酸基やエーテル基を含むもの、例えば、 N, N—ジメチルー 6—ヒドロキシへキシルァミンや N, N -ジメチル - 4—メトキシブチルァミン等も親水性ァミンとして好ましく用いうる。

[0068] 本発明における親水性アミン残基の結合の密度は、水不溶性重合体の化学構造により異なるが、少なすぎるとその機能が発現しない傾向にあり、一方、多すぎると、固定化後の水不溶重合体の物理的強度が悪くなり、吸着材としての機能も下がる傾向にあるので、該密度は水不溶性重合体の繰り返し単位 1モルあたり 0. 01〜2. 0モノレ、より好ましく ίま 0. 1〜1. 0モノレカ良!ヽ。

[0069] 本発明の癌治療用吸着材の表面積は、吸着材 1グラム当たり 0. 1平方メートル以上であることが好ましぐより好ましくは、 0. 3平方メートル以上である。ただし無限に大きくはできないので、実際上、限界があり、 10平方メートル以下が好ましい。この表面積は水銀ポロシメトリー法で求めることができる。

[0070] 本発明の癌治療用吸着材は、親水性アミン残基を結合した水不溶性重合体を膜、繊維、粒状物等の形態に成型するか、あるいは親水性アミン残基を結合した水不溶性重合体を、膜、繊維、粒状物等の形態を有する基材に被覆せしめるか、あるいは水不溶性重合体の膜、繊維、粒状物等の成型品に親水性アミン残基を結合させるか等により得ることができる。

[0071] 親水性アミン残基を結合した水不溶性重合体の成型品の製造には、水不溶性重合体の成型品に親水性ァミンの溶液を接触させる不均一系反応の方法と水不溶性重合体の溶液と親水性ァミンの溶液を混合して反応させた後、成型する均一系反応の方法とがある。不均一系反応の方法の一例としては、クロルァセトアミドメチル化ポリスルホンの繊維または中空糸などの成型品をジメチルへキシルァミンやポリアルキレンイミン等のイソプロパノール溶液中に浸し、 0〜100°Cの温度で反応させることにより、容易に達成される。均一系反応による方法の一例を述べると、クロルァセトアミドメチルイ匕ポリスルホンの溶液中に対応したポリアミンをカ卩えて、 0〜100°Cの温度で反応させること〖こより、達成される。その量には特に制限はないが、可溶性のポリマを得るためにはハロアセトアミドメチル基に対し 1倍モル以上用いるのが望ましい。とりわけ

、ポリアミンの場合は、可溶性の重合体を得るためには親水性アミンを大過剰用いるのが好ましい。

[0072] また、反応溶媒としては、水、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ジメチルスルホキシド、 N, N—ジメチルホルムアミド（DMF)などの極性の高い溶媒の方が反応が速く進む利点がある。不均一系反応では、親水性ァミンが溶ける溶媒であれば良く、特に制限はない。均一系で反応させる場合には、水不溶性担体と親水性ァミンの両方が溶解する溶媒、具体的にはテトラヒドロフラン、ジメチルスルホキシド、 N, N- ジメチルホルムアミド、 N, N—ジメチルァセトアミド、 N—メチルピロリドンなどが好ましく用いられる。また、成型品を表面処理する方法も可能で、そのためには水、メタノール、エタノールなどの、ポリスルホンを溶力さずに親水性アミンを溶かす溶媒が好ましく用いられる。

[0073] 本発明における親水性アミン残基を結合した水不溶性重合体をポリエステル繊維、ナイロン繊維、ポリフエ-レンサルファイド繊維などの成型品の表面にコーティングすると、簡単且つ安価に表面積の大きな高次の成型品が得られる利点がある。コーティングは、本発明における親水性アミン残基を結合した水不溶性重合体を塩化メチレンゃテトラヒドロフランなどの低沸点溶媒に溶力したものにナイロンの編み地や織物を浸したのち、溶媒を揮発させることにより容易に達成できる。また、 N, N—ジメチルホルムアミドなどの溶媒に溶力したものを水などのポリマの貧溶媒に入れる湿式コーテイング法も利用できる。コーティングされる成型品のポリマはポリアミド、ポリウレタン、ポリイミド、ポリスルホン、ポリ塩化ビニル、ポリエステルなど、本発明における親水性ァミン残基を結合した水不溶性重合体との接着性の良、ものであれば何でも良ぐその種類には特に制限はないが、ナイロン、ポリエーテノレイミドなどのアミド系のポリマが接着性が特に良いので、好ましく用いられる。 [0074] 上記の成型ゃ基材への被覆において、成型品や基材の形態に採用する繊維として、中空糸を用いることも好ましい。この場合、濾過の機能を具備した吸着材が作れるので、人工透析器として、あるいは、血漿分離器として使用しながら免疫抑制物質および白血球を除去できる利点がある。

[0075] 本発明の癌治療用体外循環カラムは担癌患者の癌の進行を抑制したり、癌患者のクオリティ ·ォブ ·ライフ（以下、 QOL)の向上を図る目的で、癌患者、特に進行癌患者の体外循環治療に用いられる。また、本発明の癌治療用吸着材は、癌切除手術時に出血した血液を返えす際に、免疫抑制性蛋白質を除去しておく目的にも用いることがでさる。

[0076] 一方、本発明は上述のような吸着材のうち好ましい形態とされているものをはじめとする不織布をネットと組み合わせてなる吸着材（吸着担体)をも提供するものである。すなわち、本発明は、少なくともネットと不織布の 2層構造を有する吸着材 (吸着担体 )をも提供するものであり、以下に詳細に説明する。

[0077] 本発明は、前記課題、つまり血液中に過剰に存在する白血球やガン細胞などの細胞と、サイト力インなどの生理活性物質との両方を、同時に高い効率で選択的に吸着除去して、かつ、安全に体外循環できる吸着材について、鋭意検討し、従来技術の吸着材の問題が、大きすぎる嵩密度にあることと、単に嵩密度の小さい不織布を得たとしても、形態保持性を伴わなければ、結局は目づまり等を生じてしまうことに着目し、成し遂げたものである。すなわち、従来技術よりもより嵩密度を小さくし、かつ形状安定性を持たせることに成功した。

[0078] 生理活性物質としては、上述のサイト力イン以外にも、走化因子、抗体、補体、リンフォカイン、その他液性因子など、生物由来の蛋白質や脂質、糖質、ホルモン類などを含み、特に、構造解析や、パターン解析などのため除去作業、治療目的等のターゲットとして選定された物質は対象となる。その他にも、生体にとって悪影響を及ぼす、細菌、細菌毒素、ウィルスなども生理活性物質として取り扱う。細胞については、主に、血球細胞、癌化細胞などであり、血液やリンパ液、腹水、胸水などの滲出液中に出てくる物を対象とする。研究における培養細胞、酵母、細菌類も対象となる。

[0079] 本発明における不織布の素材としては、ポリアミド、ポリエステル、ポリアクリロ-トリル系ポリマ、ポリエチレン、ポリプロピレンなどの公知のポリマを使用することができる。これらのポリマの単独糸であっても、芯鞘型、海島型またはサイドバイサイド型の複合糸であっても力まわない。なお、繊維の断面形状は円形断面であっても、それ以外の異形断面であっても力まわない。不織布の製造方法としては、公知の不織布の製造方法、例えば湿式法、カーディング法、エアレイ法、スパンボンド法、メルトプロ一法等を用いることができる。

[0080] また、力かる不織布を構成する繊維の直径は、目的とする吸着性能を考慮した上で決められるべきものである。たとえば、顆粒球の除去のためには 3 mを超えることが好ましぐ中でも 4 μ m以上であることが好ましぐより好ましくは 5 μ m〜10 μ mのものが使用される。これ以外に、これより太い繊維を同時に混合した不織布とすることもできる。一方、 0. 5〜4 /ζ πιの繊維を用いればリンパ球の除去にも好適に使える。さらに、 0. 5 m未満の繊維を用いれば、生理活性物質の除去効率を上げることが可能となる。

[0081] ここで示した直径は、円柱状のもののみ適用されるものではなぐたとえば楕円ゃ矩形、多角形のものにも適用される。最外層を結んでできた図形の面積を求め、その面積に相当する円の直径を求める。たとえば、 5つの突起部分が存在する星形を例にとると、その 5つの頂点を結ぶ図形を考え、その面積を算出し、対応する円の直径を本発明で言う直径とする。

[0082] また、このような本発明の不織布として好ま U、態様は、上述した顆粒球、単球およびサイト力インを吸着する吸着材、および癌治療用吸着材のうち、不織布の形態のものを挙げることができる。

[0083] 本発明にお、て、上述の不織布は、ネットと組み合わせて積層構造を構成することができる。不織布とネットの 2層構造でもよいが、不織布の間にネットを挟み込んだ形状、すなわち不織布—ネット—不織布のサンドイッチ構造 (3層構造)をとることがより好ましい。もちろん、後述する嵩密度を考慮し、圧力損失に影響のない範囲でさらに多層構造とすることも可能である。

[0084] 本発明におけるネットの素材は、ポリアミド、ポリエステル、ポリアクリロニトリル系ポリマ、ポリエチレン、ポリプロピレンなどの公知のポリマを使用することができる。後述するように、不織布と一体ィ匕した後に官能基導入のための有機合成反応に供する場合は、用いる溶媒の種類や、反応温度に応じて適宜素材を選択すればよい。特に、生体適合性の面からは、ポリプロピレンが特に好まし、。

[0085] 複数の繊維が合糸された状態や紡績糸でネット構造が形成されていると、合糸された糸状間等を血液などの被処理媒体が通過することより圧力損失上昇の懸念があるため、ネットは単糸（モノフィラメント）で形成されていることが好ましい。また単糸であれば、 1本あたりの機械的な強力も保持しやすい。

[0086] ネットの構成としては、特に限定されず、結節網、無結節網、ラッシェル網等を用いることができる。このうち、特にネットを形成する構成材、例えば単糸が交差する部分が接合されているものが、好適に使用できる。このようなネットを用いることにより、単糸など構成材の動きが無ぐ接合されていないネットと比較して、形態保持性、ハンドリング性の向上した吸着担体を得ることができる。ネットは、構成する単糸どうしが接合していてもよい。接合の方法としては、結節、熱による接着等があるが、熱による接着による方法であると、厚みを制御しやすぐかつ安価に実施であるため好ましい。ネットの空隙 (網み目）の形状も特に限定されず、長方形などの四角形、菱形、亀甲形等の各種のものを用いることができる。中でも四角形、特に長方形のものは、不織布を積層したときの強度や、ハンドリング性が向上するため好ましい。さらに、ネットの構成材の不織布に対する位置的な関係を、例えばネットの空隙形状が四角形の場合、不織布の長軸または短軸方向に対し角度 90度 ± 10度の方向をなすようにすることにより、不織布を積層したときの強度や、ハンドリング性能がより向上する。

[0087] ネットを構成する単糸の直径は好ましくは 50 m以上 lmm以下であり、同様にネットの厚みは 50 /z m以上 1. 2mm以下である。これ以上大きな範囲でも可能であるが、単位体積あたりの吸着体そのものの分量を減らすことになり、好ましくはない。

[0088] ネットを用いることで、不織布に形態保持性を付与することができ、嵩密度が小さくても形態の安定した吸着担体とすることができる。なお、ネット自体が圧力損失に影響を与えるので、ネットはなるべく開孔部が大きい方が望ましい。このためには 100m m²中に、 10mm²以上の空隙を有することが望ましぐ特に好ましくは、 3mm角程度の開孔部を有すると、形態保持性も良好となり、好適に使用できる。 [0089] 吸着材の厚みについては限定するものではないが、 0. 1mm以上 10cm以下が取り扱い上、好ましい。例えば、東レネ土製の"トレミキシン"（登録商標）のようなラジアルフロータイプのモジュールに組み込む場合は、中心パイプに巻き付けるため、厚みは lcm以下であることが好ましい。これらは、取り扱い法によって決定される。

[0090] 本発明におけるネットと不織布の 2層構造を持つ吸着材の嵩密度は、 0. 02-0. 1 5gZcm³であることが好ましぐより好ましくは 0. 05-0. 15gZcm³であるものが使用される。嵩密度を大きくすると白血球や細胞などの大きな物質を濾過する能力が向上する力大きすぎると血液循環時に目づまりしやすくなるため、前記の範囲が好ましい。 0. 15gZcm³を超えるものはあえて本発明の構成、すなわちネットと不織布の積層構造を取らず不織布だけでも形態安定性は保たれるが、もちろん本発明において 0. 15gZcm³を超える嵩密度を採用しても力まわない。嵩密度の測定は、例えば以下のようにして行うことができる。吸着体を 3cm角の正方形に切断後、 1mm厚のポリプロピレン製の板を載せたときの吸着体の厚みを 5回測定し、その平均値を厚みとする。この小片の重さを、体積で割ることで嵩密度を求め、これを 5サンプルで実施し、平均値を嵩密度とする。

[0091] 前述の通り、本発明において不織布を用いる場合は、主に不織布部分によって白血球やガン細胞などを吸着及び濾過によって除去することができる。さらに、不織布部分の素材や繊維径を適宜選択することにより、これら白血球やガン細胞などと共にサイト力インなどの生理活性物質をも吸着 ·除去することが可能である。白血球やガン細胞などと共にサイト力インなどの生理活性物質をも効率よく吸着 ·除去するには、当該吸着担体に特定の官能基を導入、固定化することが好ましい。吸着担体、特に不織布部分を構成する素材を適宜選択することにより、特定の官能基を導入せずともサイト力インなどの生理活性物質の吸着 ·除去能を持たせることはできるが、これら官能基の導入によって生理活性物質をより効率的に吸着することができるようになる。

[0092] 不織布を形成する繊維は、特に好ましくは芯がポリプロピレン、鞘がポリスチレンなどの多芯海島型複合繊維からつくられる。素材の組み合わせは、製糸性が良好であれば、いかなる組み合わせも実現できる力特に鞘にポリスチレンを用いると鞘構造に官能基導入が行いやすくなるため、特に好ましい。この場合、アミドメチルイ匕法を適用することで、アミノ基を有する官能基を簡便に導入できる。従来から、環状ペプチド

(ポリミキシン B、ポリミキシン S)、ポリエチレンィミン、 4級アンモ-ゥム塩などの導入が行われている。その具体例として、アミノ基を持つ環状ペプチド残基、ポリアルキレンィミン残基、ベンジルァミノ基、 1級、 2級、 3級のアルキルアミノ基を使用することができる。そのなかでも、好ましくはアミノ基を持つ環状ペプチド残基、ポリアルキレイミン残基、さらに好ましくはアミノ基を持つ環状ペプチド残基が、生理活性物質に対する吸着性能が高くてよい。

[0093] より具体的には、アミノ基を持つ環状ペプチドは、 2個以上 50個以下、より好ましくは 4個以上 16個以下のアミノ酸力もなる環状ペプチドであって、その側鎖に 1個以上のアミノ基を持つものであれば良ぐ特に制限はない。その具体例としては、ポリミキシン B、ポリミキシン E、コリスチン、グラミシジン Sあるいはこれらのアルキルあるいはァシル誘導体などを使用することができる。

[0094] また、本発明で言うポリアルキレンィミン残基とは、ポリエチレンィミン、ポリへキサメチレンィミンおよびポリ（エチレンィミン 'デカメチレンィミン）共重合体で代表されるポリアルキレンィミンまたはその窒素原子の一部を、 n キシルブロマイド、 n—デ力- ルブロマイド、 _n—ステアリルブロマイドなどで代表されるハロゲン化炭化水素の単独または混合物でアルキルィ匕したもの、または、酪酸、バレイン酸、ラウリル酸、ミリスチン酸、レノレイン酸、ステアリル酸などの脂肪酸でァシルイ匕したものを意味する。

[0095] 本発明のネットと不織布の 2層構造を持つ吸着材の製造方法としては、予め別々に作成した不織布とネットを、サーマルボンド法、カレンダ一法、ニードルパンチ法等の公知のウェブ接着方法で積層構造とする方法がある。また、別の方法として、積層構造にするために、あら力じめ、プレパンチングを施した綿状物を作成し、その間にネットを挟み込んでパンチングして不織布ネットー不織布のサンドイッチ層構造を有する吸着担体を作る方法がある力この方法のほうがより簡便であり、好ましい。プレパンチングした綿状物を片面 1枚ネット構造に重ね合わせることも可能である。

[0096] 本発明の体外循環用カラムは、前記ネットと不織布の 2層構造を持つ吸着材 (吸着担体)を容器、特に好ましくは円筒状容器に充填することによって製造することができる。カラムの構成としては、吸着担体を平板状に形成し、これを複数層も重ねて充填したカラム、吸着担体を芯材に、もしくは芯材なしで円筒形状に巻いて構成した円筒状フィルタ一力両端部に血液入口と血液出口とを有する円筒状容器に納められているカラム、吸着担体が円筒状にまかれてなる中空円筒状フィルタ一力その両端部を封止された状態で血液入口と血液出口とを有する円筒状容器に納められており、容器の血液出口は前記中空円筒状フィルターの外周部に通じる部位に、また容器の血液出口は前記中空円筒状フィルターの内周部に通じる部位にそれぞれ設けられているカラム等が好ましい。そのなかでも、円筒中空状フィルターを用いたカラムは、血液中の炎症性白血球の大部分が、円筒形状フィルターの外周部の大きな面積の不織布で迅速に除去され、除去されずに残ったわずかな炎症性白血球も、円筒形状フィルターの内周部に到って、その小さな面積の不織布でも十分に除去され、効率的な炎症性白血球除去が可能であるので、最も好ましい。例えば、円筒形状中空フィルターを作製する場合、サンドイッチ構造にした不織布において、ネット単繊維の長手方向が不織布各切断面に対し垂直になるように不織布を作製することにより、簡単に不織布に強い引っ張り強度を持たせることができ、該不織布を芯材に卷く場合においても、ハンドリング性が向上する。

[0097] 以上説明した本発明の各種吸着材は、体外循環カラムなどの血液処理カラムとして利用することができる。体外循環カラムとして利用する場合、カラム容器に充填する吸着材の量、血液の循環速度にもよるが、通常は、 1時間から 2時間の生体との体外循環実施の後、開始時刻から 150〜 180時間後に、体外循環前に比べ、リンパ球数の増カロと顆粒球数の減少を実現させることができる。よって、本発明の吸着材及び血液処理用カラムは、白血球除去療法及び免疫賦活療法において有用である。

実施例

[0098] 以下、実験例により、本発明をさらに具体的に説明する。

[0099] 実施例 1及び比較例 1 (ゼータ電位の測定）

表面ゼータ電位は、流動電位測定装置 (ZP— 10B (島津製作所製)）によって、流動電位と液体を流すために加えた圧力、及び液体の比導電率を測定することによつて計算により求めた。流動液は、 ImM KC1水溶液を使用し、 pH6± l、温度 20± 5 °Cで測定した。 [0100] (サイト力イン吸着評価）

牛胎仔血清にヒト天然型 IL— 1、 IL— 6を添加し、それぞれ 500pg/mlに調製した。この血清に吸着担体を添加し、 37°C2時間で振とうし、上清を採取し、サンプルとした。担体:血清量 = 30mg : 1mlの固液比で統一し、振とう前後のサイト力イン量を求め除去率を測定した。

[0101] [作製例 1]

(不織布）

36島の海島複合繊維であって、島が更に芯鞘複合によりなるものを次の成分を用いて、紡糸速度 800mZ分、延伸倍率 3倍の製糸条件で得た。

島の芯成分;ポリプロピレン

島の鞘成分；ポリスチレン 90wt%、ポリプロピレン 10wt%

海成分；エチレンテレフタレート単位を主たる繰り返し単位とし、共重合成分として 5 —ナトリウムスルホイソフタル酸を 3wt%含む共重合ポリエステル

複合比率 (重量比）；芯:鞘:海 = 44： 44： 12

[0102] この繊維 85wt%と、直径 20 μ mのポリプロピレン 15wt%力もなるシート状物を作製した後、ニードルパンチすることによって不織布を得た。次に、この不織布を 90°C 水酸ィ匕ナトリウム水溶液で処理して、海成分のエチレンテレフタレート単位を主たる繰り返し単位とし、共重合成分として 5—ナトリウムスルホイソフタル酸を 3wt%含む共重合ポリエステルを溶解することによって、芯鞘繊維の直径が 5 /z mで、嵩密度が 0. 05g,cm³ (総目付 250gZm²)の不織布を作製した (不織布 1)。

[0103] (中間体）

次に、ニトロベンゼン 600mLと硫酸 390mLの混合液にパラホルムアルデヒド 3gを 20°Cで溶解した後、 0°Cに冷却し、 75. 9gの N—メチロール— a—クロルァセトアミドを加えて、 5°C以下で溶解した。これに 5gの上記原糸 1を浸し、室温で 2時間静置した。その後、繊維を取り出し、大過剰の冷メタノール中に入れ、洗浄した。繊維をメタノールで良く洗った後、水洗し、乾燥して、 7. Ogの α クロルァセトアミドメチル化ポリスチレン繊維 (中間体 A1)を得た。ゼータ電位は 21mVであった。

[0104] (吸着体 (吸着材、吸着担体) ) N, N—ジメチルォクチルァミン 50gとヨウ化カリウム 8gを 360mLの DMFに溶かした溶液に 5gの中間体 A1を浸し、 85°Cのバス中で 3時間加熱した。繊維をイソプロパノールで洗浄後、 ImolZL濃度の食塩水に浸漬した後、水洗し、真空乾燥して、 8. 3gのジメチルォクチルアンモ -ゥム化繊維（吸着体 A1)を得た。ゼータ電位は— lm Vであった。

[0105] また、 N, N ジメチルへキシルァミン 50gとヨウ化カリウム 8gを 360mLの DMFに溶かした溶液に 5gの中間体 A1を浸し、 85°Cのバス中で 3時間加熱した。繊維をイソプロパノールで洗净後、 ImolZL濃度の食塩水に浸漬した後、水洗し、真空乾燥して、 9. 3gのジメチルラウリルアンモ-ゥム化繊維（吸着体 A2)を得た。ゼータ電位は 1. 2mVであった。

[0106] [実施例 1]

健常者ボランティアの血液 50mlをへパリン採血し、その中へ、 500pgZmlになるようにヒト天然型 IL— 1、 IL— 6を溶解し、以下の検討を行った。

[0107] 吸着材 A1および吸着材 A2をそれぞれ 150mgを内容積 2mlのカラムに充填し、 3 7°Cで 1時間、上記血液 25mlを循環した後、血球の組成を自動血液分析器で調べ、また、 IL— 1、 IL— 6の量を EIA法にて定量した。循環前後の差から吸着率を算出した。吸着体 A1ではリンパ球吸着率 19. 5%、顆粒球吸着率 78%、単球吸着率 85% であり、 IL 1吸着率、 IL 6吸着率、はそれぞれ 37%、 32%であった。同様に、健常者ボランティア血液を用い作成したクェン酸血漿で、凝固因子 ΧΙΠの活性低下を見たところ (株式会社 SRLに合成基質法での測定を委託した。以下の凝固因子 XIII の測定においても同様である。） 12%であった。吸着材 A2では、リンパ球吸着率 21 %、顆粒球吸着率 75%、単球吸着率 83%であり、 IL 1吸着率、 IL 6吸着率はそれぞれ 37%、 40%であった。同様に、健常者ボランティア血液を用い作成したタエン酸血漿で、凝固因子 ΧΙΠの活性低下を見たところ 16%であった。

[0108] 別途、サイト力イン吸着評価を行った結果、吸着材 A1では吸着率は IL 1、 IL-6 で、それぞれ 56%、 88%、吸着材 A2では吸着率は IL—1、 IL— 6でそれぞれ 74% 、 93%であった。

[0109] [比較例 1] 中間体 Alを用いて、実施例 1と同様の試験を行った (血液量は 25ml)。リンパ球吸着率は 19.5%、顆粒球吸着率は 78%、単球吸着率は 78%であり、 IL 1吸着率、 IL— 6吸着率は、それぞれ 2%、 3%であった。同様に、健常者ボランティア血液を用 V、作成したクェン酸血漿で、凝固因子 ΧΙΠの活性低下を見たところ 16%であった。別途、サイト力イン吸着評価を行った結果、吸着率は IL 1、 IL 6で、それぞれ 12 %、 13%であった。

[0110] 以上の実施例 1及び比較例 1の結果から明らかなように、ゼータ電位を 20mV以上の吸着材である本発明は、高い効率で血液中の顆粒球および単球を吸着でき、さらにはサイト力インをも同時に高い効率で吸着することができる。

[0111] 実施例 2〜7

顆粒球 ·単球の吸着率と繊維径の相関を取るために、ヒト健常者の血液 (Ht =43 %)を用いて、以下の手順で吸着試験を行った。

[0112] (顆粒球'単球の吸着率の測定と繊維径の相関）

繊維径カ ^sそれぞれ、 2 m、 3 m、 4 m、 6 m、 10 m、 17 mのポリエチレンテレフタレートからなる繊維を溶融紡糸して準備し、 20mgZmlの固液比になるように健常者ヒト血液中に浸漬し (バッチ吸着試験）、 37°Cに保ち、毎分 3回の転倒混和を 5分間行った。この後繊維を取り除き、浸漬前の全血中、および浸漬後の全血中の顆粒球 (好中球の値を代用した）、単球、リンパ球の数をそれぞれシスメッタス社製血球計算機 (XT1800iv)を用いて測定し、吸着率を測定した。各血球の吸着率 (除去率)を表 1に示す。

[0113] [表 1]

表 1 5 m i n除去率平均

繊維径 (μπ,) 好中球（Αν) リンパ球（Αν) 単球 (A ν) 実施例 2 2 1 7. 53 2. 03 26. 20 実施例 3 3 25. 87 2. 34 28. 60 実施例 4 4 33. 03 2. 57 44. 01 実施例 5 6 25. 1 3 1. 55 38. 39 実施例 6 10 32. 52 4. 48 53. 05 実施例 7 1 7 6. 05 - 0. 45 1 2. 76 [0114] (吸着率と繊維径の相関の考察）

顆粒球 ·単球の吸着率と繊維径の相関を取るために、ヒト健常者の血液 (Ht =43 %)を用いて、上述のようなバッチ吸着試験を行った。この検討では、カラムでの循環に対し、 1Z2程度の除去率として得られる。この結果、表 1から明らかなように、検討を行ったこの範囲の繊維径ではリンパ球の吸着率は低率でかつあまり変動が無いこと、顆粒球 (好中球） ·単球の除去率をカラムにおいて 50%以上の高率に保てる範囲が繊維径が約 3 μ mを超える領域であることがわかった。

[0115] 実施例 8〜10及び比較例 2〜4

以下の実施例では、ゼータ電位とリポ多糖吸着能の関係、及びインターフェロンガンマの産生促進効果にっ、て調べた。

[0116] (ゼータ電位の測定）

表面ゼータ電位の測定は、上記実施例 1と同様の条件で行った。

[0117] (サイト力イン吸着評価）

サイト力イン吸着評価は、牛胎仔血清にヒト天然型 IL— 1、 IL— 6を添加し、それぞれ 500pgZmlに調製した。この血清に吸着担体を添加し、 37°C2時間で振とうし、上清を採取し、サンプルとした。担体:血清量 = 30mg : 1mlの固液比で統一し、振とう前後のサイト力イン量を求め除去率を測定した。定量は EIA法を用い、市販のキット（ IL— 1 :R&D System社製ヒト IL—1 jS ELISAキット、 IL— 6：鎌倉テクノサイエンス製)を用いて行った。

[0118] (インターフェロンガンマ産生評価）

ヒトボランティア血液 10mlを用い吸着体を 0. 3g充填した内容積 2mlのポリプロピレン製円筒型カラムに血流速 2mlZminで通過させ、吸着体刺激血液を得た。カラム通過有無の血液をそれぞれフイコール密度勾配遠心法でリンパ球分画を分離した。吸着体接触前の血液と接触後 8時間後のリンパ球濃縮液を、 1〜10 gの PHA (フィトへマグルチニン—L：和光純薬製）で刺激し、刺激前後でのインターフェロンガンマの濃度を測った。定量は EIA法を用い市販のキット（ENDOGEN社製ヒトインターフェロンガンマ ELISAキット）を用いておこなった。（刺激後インターフェロンガンマ濃度 Z刺激前インターフェロンガンマ濃度）を求め、インターフェロンガンマ産生活性とした。

[0119] (血球数の測定）

体液中の血球数の定量、へマトクリット値の測定は、シスメックスネ ±XT— 1800iVを用いて行った。

[0120] (LPSの測定）

LPSの吸着量は和光純薬製のトキシノメーターで測定した。 lvol%FCS添カ卩生理食塩水中に lOngZmlとなるように和光純薬製 LPS (カタログ番号： 120— 04531) を分散させ、 300mgの吸着材と 4時間、 37°Cの条件で水浴中でインキュベーションを行った。上清中に残存した LPS量を測定し、同様にトキシノメーターにて測定した。添加液中の LPSとの差および比から除去量および除去率を求めた。規格値は除去率 90%以上、吸着量は lOOpgZmg以上の LPS吸着能を有することである。

[0121] [作製例 2]

(不織布）

島の芯成分;ポリプロピレン

島の鞘成分；ポリスチレン 90wt%、ポリプロピレン 10wt%

複合比率；芯:鞘:海 = 44： 44： 12 (重量比）

[0122] この繊維 75wt%と、直径 20 μ mのポリプロピレン 25wt%力もなるシート状物を作製した後、ニードルパンチすることによって不織布を得た。次に、この不織布を 90°C 水酸ィ匕ナトリウム水溶液で処理して海成分のエチレンテレフタレート単位を主たる繰り返し単位とし、共重合成分として 5—ナトリウムスルホイソフタル酸を 3wt%含む共重合ポリエステルを溶解することによって、芯鞘繊維の直径が 4. で、嵩密度が 0. 03g/cm³ (総目付 200g/m²)の不織布を作製した (不織布 1)。

[0123] (中間体）

次に、ニトロベンゼン 600mLと硫酸 390mLの混合液にパラホルムアルデヒド 3gを 20°Cで溶解した後、 0°Cに冷却し、 75. 9gの N—メチロール— a—クロルァセトアミドを加えて、 5°C以下で溶解した。これを 20°Cに昇温後直ちに 5gの上記原糸 1を浸し、室温で 2時間静置した。その後、繊維を取り出し、大過剰の冷メタノール中に入れ、洗浄した。繊維をメタノールで良く洗った後、水洗し、乾燥して、 7. Ogの α—クロルァセトアミドメチル化ポリスチレン繊維（中間体 Α2)を得た。ゼータ電位は 23mVであつた o

[0124] (吸着体）

N, N—ジメチルォクチルァミン 50gとヨウ化カリウム 8gを 360mLのメタノールに溶力した溶液に 5gの中間体 A2を浸し、 50°Cのバス中で 3時間加熱した。繊維をイソプロバノールで洗浄後、 ImolZL濃度の食塩水に浸漬した後、水洗し、真空乾燥して、 8. lgのジメチルォクチルアンモ -ゥム化繊維（吸着体 A3)を得た。ゼータ電位は -0. 3mVであった。

[0125] また、 N, N ジメチルへキシルァミン 50gとヨウ化カリウム 8gを 360mLのメタノールに溶カゝした溶液に 5gの中間体 A3を浸し、 50°Cのバス中で 3時間加熱した。繊維をィソプロパノールで洗净後、 ImolZL濃度の食塩水に浸漬した後、水洗し、真空乾燥して、 7. 3gのジメチルへキシルアンモ -ゥム化繊維（吸着体 A4)を得た。ゼータ電位は 2. 2mVであった。

[0126] [実施例 8]

吸着材 A3および吸着材 A4をそれぞれ 150mgを内容積 2mlのカラムに充填し、 3 7°Cで 1時間上記血液 25mlを循環した後、血球の組成を自動血液分析器 (シスメッタス社製 XT— 1800iV)で調べ、また、 IL— 1、 IL— 6量を EIA法にて定量した。吸着体 A3では、リンパ球数 14. 5%減少、顆粒球 72%減少、単球 82%減少が見られ、 IL— 1、 IL— 6は、それぞれ 33%、 52%減少していた。吸着体 A4では、リンパ球数 21 %減少、顆粒球 75%減少、単球 83%減少が見られ、 IL—1、 IL— 6は、それぞれ 37%、 40%減少していた。

[0127] LPS除去率については、吸着体 A3で 98%、吸着体 A4で 97%であった。別途、サイト力イン吸着評価を行った結果、吸着体 A3の除去率は IL 1、 IL 6のそれぞれで 56%、 88%、吸着体 A4の除去率は IL 1、 IL 6のそれぞれで 74%、 93%であった。

[0128] [実施例 9]

(体外循環治療）

吸着体 A3を 0. 3g、内径 lcm、内容積 2mLのポリプロピレン製円筒形カラムに充填して、体外循環カラムを調製した。 12週令の WKAH :Hkmラット (雄)の背部皮下に 4—ジメチルアミノアゾベンゼン誘発肝癌細胞 KDH— 8 {矢野諭、北海道医誌、 6 8卷 5号、 654— 664 (1993) }を 1 X 10⁶個接種した。癌細胞は 100%の確率で生着した。（通常、接種 1週間後から腫瘍が大きくなり、接種後 5. 5週間で死亡する。）体外循環カラムは、体外循環前に 1000単位のへノ《リンナトリウムを含む生理食塩水で予備洗浄し、さらに 500mLの生理食塩水で洗浄して用いた。

[0129] KDH細胞接種 2週間後のラットに、体外循環治療を行った。大腿動脈から採血し、体外循環前の顆粒球およびリンパ球の数を自動血液分析器で確認したところ、顆粒球は 9300個 Z μ L、リンパ球は 8100個 Ζ μ であった。体外循環カラムを通した後、大腿静脈に返血する回路を作製し、 2mlZminの血流で、 1時間、体外循環した。体外循環中はへパリンナトリウム注射液（味の素 (株)製)を 200UZhの速度で持続注入した。体外循環カラムは体外循環前に 1000単位のへノ《リンナトリウムを含む生理食塩水で予備洗浄し、さらに 500mLの生理食塩水で洗浄して用いた。体外循環実施後、縫合等の処置を行い、 160時間後に採血を行い、自動血液分析機により顆粒球およびリンパ球の数を測定したところ、顆粒球は 6700個 Z L、リンパ球は 114 00個 Z Lであり、処置前に比べ、リンパ球は増大し、顆粒球は減少していた。このラットをさらに 3週間飼育した後、 KDH細胞接種 2週間後と同じ手技で体外循環を行つた。体外循環前の顆粒球およびリンパ球の数を自動血液分析器で確認したところ、顆粒球は 28000個 Z μ L、リンパ球は 7400個 Ζ μ であった。体外循環 160時間後に採血を行い、自動血液分析機により顆粒球およびリンパ球の数を測定したところ、顆粒球は 26700個 Ζ μ L、リンパ球は 8400個 Ζ μ Lであり、処置前に比べ、リンパ球は増大し、顆粒球は減少していた。 [0130] [比較例 2]

中間体 A2を用いて、実施例 8と同様の試験を行った (血液量は 25ml)。その結果、リンパ球数 19. 5%減少、顆粒球 78%減少、単球 78%減少が見られ、 IL— 1、 IL— 6、はそれぞれ 2%、 3%減少していた。 LPS除去率については、 78%であった。別途、サイト力イン吸着評価を行った結果、除去率は IL—1、 IL— 6のそれぞれで 12% 、 13%であった。

[0131] [比較例 3]

中間体 A2を 0. 3g、内径 lcm、内容積 2mLのポリプロピレン製円筒形カラムに充填して、実施例 8と同じ手法で KDH細胞接種 2週間後のラットに、体外循環を実施した。大腿動脈から採血し、体外循環前の顆粒球およびリンパ球の数を自動血液分析器で確認したところ、顆粒球は 10300個 Z μ L、リンパ球は 8400個 Ζ μ であった。縫合等の処置を行い、 160時間後に採血を行い、自動血液分析機により顆粒球およびリンパ球の数を測定したところ、顆粒球は 15200個 Ζ L、リンパ球は 8100個 Z /z Lであり、処置前に比べ、リンパ球は減少し、顆粒球は増大していた。

[0132] [実施例 10]

ヒト末梢血を用いて吸着体 A4を用いてインターフェロンガンマ産生能の評価を行つた。吸着体未処理の場合は、インターフェロンガンマ濃度比が 20. 4倍であった。これに対し処理時には 35. 2倍となり、免疫活性が向上していることがわかった。

[0133] [比較例 4]

ヒト末梢血を用いて中間体 A2を用いてインターフェロンガンマ産生能の評価を行つた。吸着体未処理の場合は、インターフェロンガンマ濃度比が 20. 1倍であった。これに対し処理時には 21. 2倍となり、免疫活性状態は変化がないことがわ力つた。

[0134] 実施例 11

[作製例 3]

(不織布）

島の芯成分;ポリプロピレン島の鞘成分；ポリスチレン 90wt%、ポリプロピレン 10wt%

複合比率；芯:鞘:海 = 44： 44： 12 (重量比）

[0135] この繊維 50wt%と、直径 20 μ mのポリプロピレン 50wt%力もなるシート状物を作製した後、ニードルパンチすることによって不織布を得た。次に、この不織布を 90°C 水酸ィ匕ナトリウム水溶液で処理して海成分のエチレンテレフタレート単位を主たる繰り返し単位とし、共重合成分として 5—ナトリウムスルホイソフタル酸を 3wt%含む共重合ポリエステルを溶解することによって、芯鞘繊維の直径が 4. で、嵩密度が 0. 03g,cm³ (総目付 200g,m²)の不織布を作製した (不織布 A3)。

[0136] (中間体）

次に、ニトロベンゼン 600mLと硫酸 390mLの混合液にパラホルムアルデヒド 3gを 20°Cで溶解した後、 0°Cに冷却し、 75. 9gの N—メチロール— a—クロルァセトアミドを加えて、 5°C以下で溶解した。これを 20°Cに昇温後直ちに 5gの上記原糸 1を浸し、室温で 2時間静置した。その後、繊維を取り出し、大過剰の冷メタノール中に入れ、洗浄した。繊維をメタノールで良く洗った後、水洗し、乾燥して、 6. 3gの α—クロルァセトアミドメチル化ポリスチレン繊維（中間体 A3)を得た。ゼータ電位は 26mVであつた o

[0137] (吸着体）

N, N—ジメチルォクチルァミン 50gとヨウ化カリウム 8gを 360mLのメタノールに溶力した溶液に 5gの中間体 A3を浸し、 50°Cのバス中で 3時間加熱した。繊維をイソプロバノールで洗浄後、 ImolZL濃度の食塩水に浸漬した後、水洗し、真空乾燥して、 6. 8gのジメチルォクチルァミン 4級化繊維（吸着体 A3)を得た。ゼータ電位は— 1 2. 3mVであった。

[0138] [実施例 11]

前記作製例 3で作製した吸着材 A3および吸着材 A4をそれぞれ 150mgを内容積 2mlのカラムに充填し、 37°Cで 1時間上記血液 25mlを循環した後、血球の組成を自動血液分析器（シスメッタス社製 XT— 1800Vi)で調べ、また、 IL— 1、 IL 6量を EI A法にて定量した。その結果、吸着体 A3ではリンパ球数 10. 5%減少、顆粒球 61% 減少、単球 67%減少が見られ、 IL— 1、 IL 6、はそれぞれ 24%、 38%減少していた。

[0139] LPS除去率については、吸着体 A3で 90%であった。

別途、サイト力イン吸着評価を行った結果、吸着体 A3の除去率は IL 1、 IL 6のそれぞれで 44%、 61%であった。

[0140] 以上の実施例 8〜： L 1及び比較例 2〜4の結果から、ゼータ電位が 20mV以上の吸着材である本発明は、高い効率で血液中の顆粒球および単球を吸着でき、さらに 15mV以上であれば LPSの吸着やサイト力インをも同時に高い効率で吸着することができることが明らかとなった。体外循環治療後の顆粒球やリンパ球数の変動は、メカニズムはわからな、ものの、正常状態と考えられる比率へ変化することがわかつた。

[0141] 実施例 12〜15及び比較例 5〜8

各実施例中の評価方法及び実施手順並びに条件は、以下に従った。

[0142] 1.血液中の成分の分析

TGF— |8濃度はゼンザィム 'テクネ社のヒト TGF— β 1免疫分析キットを使用して求めた。また免疫抑制酸性蛋白の濃度は、三光純薬社製のラット ΙΑΡプレートを使用して求めた。アルブミン濃度はアルブミン分析キットであるアルブミン Β—テストヮコーで求めた。

[0143] 2.吸着材の TGF— β平衡吸着能

5匹の担癌ラットの血清を集めて担癌ラット血清 30mLを調製した。この血清 lmLに吸着材 50mgを入れ、 37°Cで 4時間振とうした。上清中の TGF— 濃度を測定して、吸着前後の濃度差を吸着材重量 (0. 05g)で除した値を TGF— 平衡吸着能とした。

[0144] 3.吸着材の調製

(水不溶性重合体） 36島の海島複合繊維であって、島が更に芯鞘複合によりなるものを次の成分を用いて、紡糸速度 800mZ分、延伸倍率 3倍の製糸条件で得た。

島の芯成分;ポリプロピレン

島の鞘成分；ポリスチレン 90wt%、ポリプロピレン 10wt%

複合比率 (重量比）；芯:鞘:海 =45 : 45 : 10

[0145] この繊維 85%と、直径 17 μ mのポリプロピレン 15%力もなるシート状物を作製した後、ニードルパンチすることによって不織布を得た。次に、この不織布を 95°C水酸ィ匕ナトリウム水溶液で 2時間処理して海成分のエチレンテレフタレート単位を主たる繰り返し単位とし、共重合成分として 5—ナトリウムスルホイソフタル酸を 3wt%含む共重合ポリエステルを溶解することによって、芯鞘繊維の直径が 5 mで、嵩密度が 0. 07 g/cm³ (総目付 250gZm²)の不織布を作製した。

[0146] (中間体）

次に、ニトロベンゼン 600mLと硫酸 390mLの混合液にパラホルムアルデヒド 3gを 20°Cで溶解した後、 0°Cに冷却し、 75. 9gの N—メチロール— a—クロルァセトアミドを加えて、 5°C以下で溶解した。これに 5gの上記不織布 1を浸し、室温で 2時間静置した。その後、繊維を取り出し、大過剰の冷メタノール中に入れ、洗浄した。繊維をメタノールで良く洗った後、水洗し、乾燥して、 7. Ogの α—クロルァセトアミドメチルイ匕ポリスチレン繊維 (中間体 C1)を得た。

[0147] (吸着体）

Ν, Ν—ジメチルォクチルァミン 50gとヨウ化カリウム 8gを 360mLの DMFに溶かした溶液に 5gの中間体 C1を浸し、 85°Cのバス中で 3時間加熱した。繊維をイソプロパノールで洗浄後、 ImolZL濃度の食塩水に浸漬した後、水洗し、真空乾燥して、 8. 3gのジメチルォクチルアンモ -ゥム化繊維（吸着体 C1)を得た。

[0148] また、 N, N—ジメチルへキシルァミン 50gとヨウ化カリウム 8gを 360mLの DMFに溶かした溶液に 5gの中間体 C1を浸し、 85°Cのバス中で 3時間加熱した。繊維をイソプロパノールで洗净後、 ImolZL濃度の食塩水に浸漬した後、水洗し、真空乾燥して、 9. 3gのジメチルラウリルアンモ-ゥム化繊維（吸着体 C2)を得た。

[0149] (スルホン化繊維：比較繊維）

また、パラホルムアルデヒド 500mgを溶解した硫酸 50mLに、 5gの不織布 1を浸し、 95°Cで 1時間加熱した後、水洗、 1モル ZL濃度の食塩水での洗浄、水洗、乾燥を逐次行って、 7. 3gのスルホン化繊維 (比較吸着体 C1)を得た。

[0150] (担癌ラットの調製）

12週令の WKAH： Hkmラット（雄）の背部皮下に 4 ジメチルアミノアゾベンゼン誘発肝癌細胞 KDH— 8{矢野諭、北海道医誌、 68卷 5号、 654— 664 (1993) }を 2 X 10⁸個接種した。癌細胞は 100%の確率で生着した。（通常接種 1週間後から腫瘍が大きくなり、接種後、 5. 5週間で死亡する。 )

[0151] (体外循環カラムの作成）

内径 lcm内容積 2mLのポリプロピレン製円筒形カラムに吸着体 Cl、吸着体 C2、比較吸着体 C1または直径 25 μ mのポリエチレンテレフタレート繊維力もなる不織布をそれぞれ充填して、癌治療用体外循環カラムを調製した。吸着材を各 0. 38g充填したものをそれぞれ実施例 12 (吸着体 C1)、実施例 13 (吸着体 C2)、比較例 2 (比較吸着体 C1)、比較例 3 (直径 25 μ mのポリエチレンテレフタレート繊維）とした。同様に吸着材を各 0. 18g充填したものをそれぞれ実施例 14 (吸着体 C1)、実施例 15 ( 吸着体 C2)、比較例 4 (比較吸着体 C1)比較例 5 (直径 25 μ mのポリエチレンテレフタレート繊維）とした。各実施例の吸着材のゼータ電位は、いずれも— 20mV以上でめつに。

[0152] (担癌ラットの調製と体外循環）

癌治療用体外循環カラムは体外循環前に 1000単位のへパリンナトリウムを含む生理食塩水で予備洗浄し、さらに 500mLの生理食塩水で洗浄して用いた。

[0153] KDH細胞接種 2週間後に 2mLZmLの血流で、 60分間、体外循環した。大腿動脈から採血し、吸着材カラムを通した後大腿静脈に返血した。体外循環中はへパリンナトリウム注射液 (武田薬品工業 (株)）を lOOUZhrの速度で持続注入した。

[0154] 体外循環前と後のラットの血液を採取し、血清中の TGF— β濃度を測定すると共に、癌細胞接種後の生存日数を観察し表 2の結果を得た。 [0155] (インビトロ血球除去評価）

健常者ボランティアから 25mLの血液を採取し、直ちに lOUZmLのへパリンを付与し、以下の循環を 3時間以内に実施する。血液を 37°Cに保ち、 2mLZminの流量で、容量 2mLのカラム（吸着材を直径 lcmに打ち抜き所定量充填）を用いて 90min 循環し、カラム処理後の血液中の白血球を血球計数装置にて分画し、リンパ球数、顆粒球数 (好中球)、単球の除去率を計算する。基準となる除去率は 60min時点の値とする。 )

[0156] [表 2]

表 2

[0157] 実施例 12〜13は TGF— βの血中濃度が低下しており、比較例に比べ寿命も延びている。実施例 12〜15と比較例 5〜8では体外循環後の TGF— |8の血中濃度と癌細胞接種後寿命が反比例することが分かる。また、 TGF— βの血中濃度の低下は吸着材の使用量に比例して起きることが分かる。比較例では TGF— βの血中濃度が下がらず、癌細胞接種後寿命も短力かった。また、治療しない場合の寿命は 5. 5 週であるので、比較例 5〜8から TGF— βの吸着能の低いカラムで体外循環すると、かえって寿命が短くなることがわ力つた。

[0158] 実施例 16、 17及び比較例 9、 10 [実施例 16]

(吸着担体）

島の芯成分;ポリプロピレン

島の鞘成分；ポリスチレン 90wt%、ポリプロピレン 10wt%

複合比率 (重量比）；芯:鞘:海 =42： 43： 15

[0159] この繊維 85wt%と、直径 20 μ mのポリプロピレン繊維 15wt%力もなる不織布を作製した後、この不織布 2枚で、開孔部が 2mm角のポリエステル製ネット (厚み 0. 4m m、単糸径 0. 3mm)を間に挟み、不織布の切断面に対して傾きが 90度になるようにセットし、ニードルパンチすることによって三層構造の吸着担体を得た。次に、この不織布を 90°C水酸ィ匕ナトリウム水溶液で処理して海成分のエチレンテレフタレート単位を主たる繰り返し単位とし、共重合成分として 5—ナトリウムスルホイソフタル酸を 3wt %含む共重合ポリエステルを溶解することによって、芯鞘繊維の直径が 5 mで、嵩密度が 0. 0²g/cm³ (総目付 l ⁵0g/m²)の吸着担体を作製した (吸着担体 Bl)。一定速度で巻き取ったところ、安定した卷取りが可能であり、同形状の円筒状フィルタ一が得られた。

[0160] (中間体）

次に、ニトロベンゼン 600mLと硫酸 390mLの混合液にパラホルムアルデヒド 3gを 20°Cで溶解した後、 0°Cに冷却し、 75. 9gの N—メチロール— a—クロルァセトアミドを加えて、 5°C以下で溶解した。これに 5gの上記吸着担体 1を浸し、室温で 2時間静置した。その後、繊維を取り出し、大過剰の冷メタノール中に入れ、洗浄した。繊維をメタノールで良く洗った後、水洗し、乾燥して、 7. Ogの α—クロルァセトアミドメチル化ポリスチレン繊維 (中間体 B1)を得た。

[0161] (官能基を導入した吸着材 (吸着担体) )

Ν, Ν—ジメチルォクチルァミン 50gとヨウ化カリウム 8gを 360mLの DMFに溶かした溶液に 5gの上記中間体 Blを浸し、 85°Cのバス中で 3時間加熱した。繊維をイソプロバノールで洗浄後、 ImolZL濃度の食塩水に浸漬した後、水洗し、真空乾燥して、 8. 3gのジメチルォクチルアンモ -ゥム化繊維 (官能基を導入した吸着担体 B1)を得た。

[0162] また、これとは別に、 N, N—ジメチルラウリルアミン 50gとヨウ化カリウム 8gを 360m Lの DMFに溶力した溶液に 5gの上記中間体 Blを浸し、 85°Cの湯浴中で 3時間加熱した。繊維をイソプロパノールで洗浄後、 ImolZL濃度の食塩水に浸漬した後、水洗し、真空乾燥して、 9. 3gのジメチルラウリルアンモ-ゥム化繊維 (官能基を導入した吸着担体 B2)を得た。

得られた官能基を導入した吸着担体 B1および B2は、ずれも、ネットを含むため、変形せず、良好な形状を保った。

[0163] [比較例 9]

実施例 16で作成した海島複合繊維を、ネットを用いることなく-一ドルパンチングしたほかは同様にして不織布を作成した。次に、この不織布を 90°C水酸ィ匕ナトリウム水溶液で処理して海成分のエチレンテレフタレート単位を主たる繰り返し単位とし、共重合成分として 5—ナトリウムスルホイソフタル酸を 3wt%含む共重合ポリエステルを溶解することによって、芯鞘繊維の直径が 5 mで、嵩密度が 0. 02g/cm³ (総目付 150gZm²)の不織布を作製した (不織布 B1)。この不織布は横方向への強力が小さく、中間体および吸着体の合成中に、伸びが生じたため、嵩密度を一定に保つことができなかった。

[0164] [実施例 17]

健常者ボランティアの血液 50mlをへパリン採血し、その中へ、 500pgZmlになるようにヒト天然型インターロイキン— 6 (以下、 IL— 6)を溶解し、以下の検討を行った。

[0165] 吸着材 (官能基を導入した吸着担体 Bl) 150mgを内容積 2mlのカラムに充填し、 3 7°Cで 1時間上記血液 25mlを循環した後、血球の組成を自動血液分析器で調べ、また、 IL— 6量を EIA法にて定量した。リンパ球数 12. 5%減少、顆粒球 67%減少が見られ、 IL— 6も 35%減少していた。このとき圧力損失上昇も見られなかった。

[0166] [比較例 10] 比較例 10で作成した不織布を、実施例 17と同様に同量カラムに充填し、残りの 25 mlの血液を用いて検討を行った。

[0167] このとき圧力損失上昇が 45分で起こり、 200mmHgを越えたため、中断した。リンパ球数 31. 5%減少、顆粒球 69%減少が見られ、 IL— 6も 35%減少していた。

[0168] [実施例 18]

実施例 16と同様に不織布を作製する際、開孔部が 2mm角のポリエステル製ネット (厚み 0. 4mm、単糸径 0. 3mm)を間に挟み、不織布の切断面に対して傾きが 110 度になるようにセットした。一定速度で巻き取ったところ、不織布の伸びが確認され卷き取り張力が安定しな力つた。不織布の厚みも一定ではなぐ同形状の円筒状フィルターを得ることができな力つた。

[0169] この不織布 150mgを内容積 2mlのカラムに充填し、 37°Cで 1時間上記血液 25ml を循環した後、血球の組成を自動血液分析器で調べ、また、 IL 6量をEIA法にて定量した。その結果、リンパ球数 12. 5%減少、顆粒球 67%減少が見られ、 IL— 6も 35%減少していた。このとき圧力損失上昇も見られな力つた。

産業上の利用可能性

[0170] 本発明により、血液中の白血球、炎症性、免疫抑制性サイト力インを効率よく吸着除去し、かっ血液中の有用成分の除去率を低くすることが可能な吸着材が提供される。係る本発明の吸着材は白血球除去療法、免疫賦活療法、癌治療等の各種用途に提供できる。

またこの材料は、シャーレ、瓶、膜、繊維、中空糸、粒状物またはこれらを用いた組み立て品などの成形品の形で、ァフィユティークロマトグラフ用カラム、治療用血液力ラム、特に体外循環カラムとして好適に使用することができる。

Claims

請求の範囲

[I] ゼータ電位が 20mV以上であって、血液中の顆粒球、単球およびサイト力インを吸着することを特徴とする吸着材。

[2] リンパ球の吸着率が 40%以下であることを特徴とする請求項 1に記載の吸着材。

[3] 前記サイト力インがインターロイキン 1 (IL— 1)、インターロイキンー6 (IL— 6)、インターロイキン一 8 (IL— 8)、インターロイキン一 10 (IL— 10)、TNF— α、トランスフォ一ミング 'グロウス'ファクター 'ベータ (TGF— ）、血管新生増殖因子 (VEGF)および免疫抑制酸性蛋白（ΙΑΡ)力なる群力選ばれる少なくとも 1種であることを特徴とする請求項 1または 2に記載の吸着材。

[4] 凝固第 ΧΙΠ因子の吸着率が 30%以下であることを特徴とする請求項 1〜3のいずれかに記載の吸着材。

[5] ゼータ電位が 15mV以上であって、 lvol%牛胎仔血清 (FCS)溶解生理食塩水中で 90%以上のリポ多糖 (LPS)吸着能を有することを特徴とする請求項 1〜4のいずれかに記載の吸着材。

[6] 前記吸着材の形状が、繊維、膜、中空糸及びビーズから選ばれる形状であることを特徴とする請求項 1〜5のいずれかに記載の吸着材。

[7] 官能基を結合してなる水不溶性担体を含むことを特徴とする請求項 1〜6の!ヽずれかに記載の吸着材。

[8] 前記水不溶性担体の形状が、繊維径が 3 μ mを超える繊維あるいは中空糸、及び表面の突起の径が 3 μ mを超えるビーズから選ばれる形状であることを特徴とする請求項 7に記載の吸着材。

[9] 前記水不溶性担体の形状が、繊維径が 4〜8 μ mの繊維あるいは中空糸、及びビーズの表面の突起の径カ〜8 μ mのビーズ力選ばれる形状であることを特徴とする請求項 7に記載の吸着材。

[10] 前記水不溶性担体の形状が、繊維径が 4. 5〜8 μ mの繊維あるいは中空糸、及びビーズ粒子の表面の突起の径が 4. 5〜8 μ mのビーズ力選ばれる形状であることを特徴とする請求項 7に記載の吸着材。

[II] 前記水不溶性担体の形状が、繊維径が 10〜50 mの繊維あるいは中空糸を更に含むことを特徴とする請求項 8〜： LOのいずれかに記載の吸着材。

[12] 水不溶性担体に 4級アンモニゥム塩および Zまたは直鎖状アミノ基を結合してなる請求項 7〜： L 1のいずれかに記載の吸着材。

[13] 4級アンモ-ゥム塩が N、 N—ジメチルへキシルァミン、 N、 N—ジメチルォクチルァミン、 N, N—ジメチルラウリルァミン、テトラエチレンペンタミンカも選ばれる少なくとも一つであることを特徴とする請求項 11に記載の吸着材。

[14] 請求項 1記載の吸着材であって、親水性アミン残基を結合した水不溶性重合体を含み、潜在型トランスフォーミング ·グロウス 'ファクター ·ベータ吸着能を有する癌治療用吸着材。

[15] 顆粒球の吸着率が 35%以上、かつ単球の吸着率が 35%以上であることを特徴とする請求項 14記載の癌治療用吸着材。

[16] 前記親水性アミン残基を結合した水不溶性重合体が、膜、繊維または粒状物であることを特徴とする請求項 14または 15記載の癌治療用吸着材。

[17] 顆粒球の吸着率が 50%以上、かつ単球の吸着率が 50%以上であることを特徴とする請求項 1〜16のいずれかに記載の吸着材。

[18] 少なくともネットと不織布の 2層構造を持つことを特徴とする吸着材。

[19] 少なくともネットと不織布の 2層構造を有することを特徴とする請求項 1〜17のいずれかに記載の吸着材。

[20] 前記ネットが、 100mm²中に、 10mm²以上の空隙を有するネットであることを特徴とする請求項 18または 19に記載の吸着材。

[21] 前記ネットの空隙形状が、四角形であることを特徴とする請求項 18〜20のいずれかに記載の吸着材。

[22] 前記 2層構造において、前記ネットの構成材が前記不織布の長軸または短軸方向に対し角度 90度 ± 10度の方向をなすことを特徴とする請求項 18〜21のいずれかに記載の吸着材。

[23] 生理活性物質および Zまたは細胞を吸着することを特徴とする請求項 18〜22の

V、ずれかに記載の吸着材。

[24] 前記ネットが単繊維力もなることを特徴とする請求項 18〜23のいずれかに記載の吸着材。

[25] 前記ネットは、その構成材が互いに交差する部分が接合されてなるものであることを特徴とする請求項 18〜24のいずれかに記載の吸着材。

[26] 嵩密度が 0. 02g/cm³以上であることを特徴とする請求項 18〜25のいずれかに記載の吸着材。

[27] 白血球除去療法または免疫賦活療法に用いられることを特徴とする請求項 1〜26 の!、ずれかに記載の吸着材。

[28] 請求項 1〜27のいずれかに記載の吸着材を容器に充填してなる血液処理カラム。

[29] 請求項 1〜27の、ずれかに記載の吸着材が円筒状容器に納められて、ることを特徴とする血液処理カラム。

[30] 血液を循環して使用されるものであることを特徴とする請求項 28または 29に記載の血液処理カラム。

[31] 生体との体外循環終了時から 150〜180時間経過後に、体外循環前に比べ、リンパ球数の増力!]と顆粒球数の減少を示す請求項 28〜30のいずれかに記載の血液処理カラム。

[32] 請求項 14〜16のいずれかに記載の癌治療用吸着材を用いた癌治療用体外循環カラム。