WO2005095427A1 - 血栓症の予防又は治療のための組成物 - Google Patents

Abstract

　硫酸化フコース含有多糖の低分子化物及び／又は薬理学的に許容されるその塩を含有することを特徴とする、血栓症の予防又は治療のための組成物。

Description

明 細 書

血栓症の予防又は治療のための組成物

技術分野

[0001] 本発明は血栓症の予防又は治療に有効な組成物、特に食用の組成物、医薬組成 物に関する。

背景技術

[0002] 血栓症は、生体の血管内で血液の凝固が起こり、血液の循環が妨げられる疾患で ある。血栓の形成により、当該部位、その周辺の組織への血液の供給が減少すること から種々の障害が発生する。脳梗塞、心筋梗塞、深部静脈血栓症 (エコノミークラス 症候群等）は血栓形成に起因する疾患の代表例である。また、血栓症は血栓形成部 位に障害を与える場合のほか、形成された血栓が血液の循環によって他の部位に運 ばれ、その部位に障害を与える場合もある。

[0003] 血栓症の主な原因は血小板の活性化、凝固'線溶系の異常であり、これらの要因 に対応した抗血栓薬、すなわち抗血小板薬、抗凝固薬が使用されている。

抗凝固薬としては、ビタミン K拮抗薬であるヮルフアリン (ジクマロール）、へパリンが 汎用されているが、ヮルフアリンは食事によって摂取されるビタミン κ量や他薬物の影 響を受けやすぐその使用において注意が必要とされる。また、へパリンは注射薬とし て投与される必要がある。

さらに、ゥロキナーゼゃ組織プラスミノーゲンァクチベータ（t_PA)のような血栓溶解 作用を有する酵素製剤も血栓症の治療に使用されているが、酵素製剤はその製造、 品質管理、保存や投与経路についての問題が多い。

さらにこれらの抗血栓薬には、出血傾向の出現等の副作用が見られることが多ぐ その使用におレ、て注意が必要とされる。

[0004] 近年、食生活の変化や社会の高齢化に伴って血栓症は増加の傾向にあると言わ れている。治療のみならず、血栓症の予防にも使用するという観点からは、経口摂取 で効果を示す抗凝固薬が望まれている。へパリン同様に糖鎖骨格を有する抗凝固剤 として、デルマタン硫酸 (例えば、特許文献 1、特許文献 2)、 N—ァセチルノイラミン 酸ホモポリマーの硫酸エステル (例えば、特許文献 3)等が開発されているがいずれ も経口投与によって効果を示しうることは明らかにされてレ、なレ、。

[0005] 特許文献 1：国際公開第 95/09188号パンフレット

特許文献 2 :特開平 10— 158174号公報

特許文献 3：特表 2002— 502454号公報

発明の開示

発明が解決しょうとする課題

[0006] 本発明は、経口で効果を発現することができ、かつ日常的に摂取可能な血栓症の 予防又は治療用の組成物を提供するものである。

課題を解決するための手段

[0007] 本発明者らは、天然物由来の抗血栓作用を有する物質について研究を重ねた結 果、低分子化した硫酸化フコース含有多糖を経口で摂取した場合に血栓の形成が 顕著に抑制されることを見出し、本発明を完成させた。

[0008] すなわち、本発明の第 1の発明は、硫酸化フコース含有多糖の低分子化物及び/ 又は薬理学的に許容されるその塩を含有することを特徴とする、血栓症の予防又は 治療のための組成物に関する。

[0009] 本発明の第 1の発明の組成物は、褐藻類由来の硫酸化フコース含有多糖の低分 子化物を含有してもよい。

[0010] 本発明の第 1の発明の組成物は、硫酸化フコース含有多糖及び/又は硫酸化フコ ース含有多糖含有物を酵素処理することにより得られる硫酸化フコース含有多糖の 低分子化物を含有してもよレ、。

[0011] 本発明の第 1の発明の組成物は、硫酸化フコース含有多糖及び/又は硫酸化フコ ース含有多糖含有物を酸処理することにより得られる硫酸化フコース含有多糖の低 分子化物を含有してもよい。

[0012] 本発明の第 1の発明によれば、ゲルろ過カラムクロマトグラフィーで測定した際のプ ルラン換算の平均分子量力 000〜8000の範囲であってもよレ、。

[0013] 本発明の第 2の発明は、 2〜： 11糖で構成される硫酸化フコース含有オリゴ糖及び /又は薬理学的に許容されるその塩を含有することを特徴とする、血栓症の予防又 は治療のための組成物に関する。

[0014] 本発明の第 2の発明の組成物は、 2〜： 11糖で構成される硫酸化フコース含有オリ ゴ糖が、下記一般式 (ィ匕 1)〜(化 6)から選択される少なくとも 1つの化合物であっても よい。

[0015] [化 1]

CT] [9100]

6LP900/S00Zd£/13d V ムひ OAV [ε^] ioo]

剛 [8Ϊ00]

.l7900/S00Zdf/X3d 9 ムひ OAV HHP*

[0020] [化 6]

(全式中、 Rは Η又は SO Hであり、 Rの少なくとも 1つは SO Hである。）

3 3

[0021] 本発明の第 1または 2の発明の組成物は、医薬であってもよい。

[0022] 本発明の第 1または 2の発明の組成物は、食品又は飲料であってもよい。

[0023] 本発明の第 3の発明は、硫酸化フコース含有多糖及び Z又は硫酸化フコース含有 多糖含有物の酸分解による低分子化物であって、ゲルろ過カラムクロマトグラフィー で測定した際のプノレラン換算の平均分子量が 4000〜8000の範囲である低分子化 物に関する。

[0024] 本発明の第 4の発明は、本発明の第 3の発明の低分子化物を有効成分として含有 することを特徴とする医薬に関する。

[0025] 本発明の第 5の発明は、本発明の第 3の発明の低分子化物を含有することを特徴と する食品又は飲料に関する。

発明の効果

[0026] 本発明の組成物、当該組成物を含有する医薬、食品又は飲料は血栓症、脳梗塞、 心筋梗塞、深部静脈血栓症 (エコノミークラス症候群等）、不安定狭心症、脳卒中、 肺塞栓症の予防又は治療に対して極めて有用である。

図面の簡単な説明

[0027] [図 1]硫酸化フカンオリゴ糖の血栓予防効果を示す図である。

発明を実施するための最良の形態 [0028] すなわち、本発明者らは鋭意研究の結果、硫酸化フコース含有多糖の低分子化物 、特に特定の硫酸化フコース含有オリゴ糖や、硫酸化フコース含有多糖の酸分解物 が抗血栓作用を有することを見出し、本発明を完成させた。

[0029] 以下、本発明に関して具体的に説明する。

[0030] 本発明に開示される血栓症の予防又は治療のための組成物は硫酸化フコース含 有多糖の低分子化物を含有することを特徴とする。なお、本明細書において、硫酸 化フコース含有多糖とは、硫酸化フコースを構成糖として含む多糖 (フコィダン、フコ ィジンとも称される）を意味する。本発明に使用される硫酸化フコース含有多糖の低 分子化物は、下記の硫酸化フコース含有多糖及び Z又は硫酸化フコース含有多糖 含有物を酵素学的手法、化学的手法、物理学的手法等の公知の方法又はこれらの 方法を組み合わせて低分子化することにより得ることができる。また、当該組成物とし ては、硫酸化フコース含有多糖の低分子化物を含んでいればよぐその原料、例え ば海藻ゃナマコ由来の成分が混合されてレ、てもよレ、。

[0031] 本発明において硫酸化フコース含有多糖の低分子化物の製造に用いられる硫酸 化フコース含有多糖としては特に限定はなぐ例えば、海藻類ゃナマコ由来の硫酸 化フコース含有多糖を使用することができ、特に好適には褐藻類由来の硫酸化フコ ース含有多糖が好適に使用される。ここで褐藻類としては、特に限定はないが、例え ば、ガゴメ、マコンブ、トロロコンブ、レツソニァ ニグレツセンス、ワカメ、ァラメ、カジメ、 ジャイアントケルプ等のコンブ目海藻、モズク、ォキナヮモズク、マツモ等のナガマツ モ目海藻、ヒバマタ、ヒジキ、ホンダワラ等のヒバマタ目海藻を使用することができ、好 適にはコンブ目に属する褐藻を使用することができる。これらの褐藻類由来の硫酸化 フコース含有多糖は構成糖として硫酸化フコースを多く含むことから、本発明におい てより好適に使用できる。なお、海藻由来の硫酸化フコース含有多糖は、その由来と なる海藻の種類によって構造が異なることが知られており（バイオサイエンスとインダ ストリー， Vol. 60, No. 6 (2002) )、本発明において、特に好適に使用される海藻 類はガゴメである。

[0032] 本発明において、硫酸化フコース含有多糖の低分子化物の製造に用いられる硫酸 化フコース含有多糖の分子種としては、特に限定はないが、例えば硫酸化フカン (例 えば、国際公開第 99/41288号パンフレット、国際公開第 03/062412号パンフレ ット、および国際公開第 2004/001031号パンフレット参照）、硫酸化グノレクロノフカ ン (例えば、国際公開第 01/81560号パンフレット参照）、硫酸化フコガラタタン (例 えば、国際公開第 03/023036号パンフレット参照）、硫酸化フコグノレクロノマンナン (例えば、国際公開第 02/086116号パンフレット参照）、 F—フコィダン（フコース硫 酸含有多糖—F ;例えば、国際公開第 97Z26896号パンフレット参照）、 U—フコィ ダン (フコース硫酸含有多糖—U ;例えば、国際公開第 97/26896号パンフレット参 照）、これらの混合物が使用できる。本発明において特に好適には、コンブ目海藻由 来の硫酸化フカンが使用される。なお、本明細書において、硫酸化フカンとは硫酸 基とフコースを主要構成成分とする硫酸化フコース含有多糖のことを意味する。コン ブ目海藻由来の硫酸化フカンの主鎖は一般の糖よりも酸に対して弱い L—フコース からなるため、加熱や酸処理により容易に低分子化することができる。特にガゴメ（Kje llmaniella crassifolia)、マコンブ (Laminaria japonica)、めるいはレツソニァ ニグレツセ ンス（Lessonia nigrescens)等の海藻は硫酸化フカンの含有量が多く原料として好適 である。

[0033] 本発明で使用される硫酸化フカンは公知の方法、例えば特開 2003-199596に記載 の方法により製造することができる。例えば、褐藻類の水溶性画分抽出液を公知の 方法、例えば pHが 4〜9、温度は 100°C以下での抽出により得る。また、上記抽出液 中のアミノ酸や低分子の色素等は限外ろ過により効率良く除去できる。疎水性物質 の除去には活性炭処理等も有効である。

[0034] このようにして褐藻類の硫酸化フカン含有画分を得ることができる。また、該画分を 陰イオン交換カラムによる分離に供すればより純度の高い硫酸化フカンを得ることも できる。本発明においては、該硫酸化フカン含有画分や純度の高い硫酸化フカンの いずれも、後述の低分子化処理に使用可能である。

[0035] 本発明に使用される硫酸化フカンの 1例としては、下記一般式 (ィ匕 7)に表される主 骨格のものが例示される。下記一般式 (化 7)において、 nは 1以上の整数であり、例 えば 1〜20, 000の範囲、さらに好ましくは 1〜10, 000の範囲のものが本発明に使 用される硫酸化フカンに含まれる。また、本発明に使用される硫酸化フカンには、上 記範囲であれば、下記一般式 (化 7)が連続的に繰り返した構造を持つもの、及び他 の構造が介在して、非連続的に下記一般式 (化 7)が含有される構造を持つもののレ、 ずれもが含まれる。

[化 7]

(式中、 Rは H又は S〇 Hであり、 Rの少なくとも 1つは SO Hである。）

³ 3

また、本発明において使用される硫酸化フコース含有多糖含有物としては、例えば 上記の海藻類藻体やその乾燥処理物、細断物、粉砕物、抽出物等が使用で ろ 当 該抽出物の抽出方法としては、公知の方法により行えばよく特に限定はないが、例え ば、海藻の乾燥物からの熱水抽出物を硫酸化フコース含有多糖含有物として使用 すること力 Sできる。当該熱水抽出物としては、抽出工程において塩化カルシウムを添 加することで褐藻に含まれているアルギン酸を低減させた抽出物や、脱塩処理等を 施した抽出物を硫酸化フコース含有多糖含有物として使用することもできる。さらに 後述の低分子化処理を効率的に行なうという観点から、当該抽出物から高分子画分 を除去することもできる。例えば、排除分子量 3万の限外ろ過膜を使用し、高分子画 分を除去することもできる。

[0038] 本発明において、硫酸化フコース含有多糖の低分子化物は、上記の硫酸化フコー ス含有多糖及び/又は硫酸化フコース含有多糖含有物を、酵素学的手法、化学的 手法、物理学的手法等の公知の方法をこれらの方法を組み合わせることにより製造 すること力 Sできる。当該低分子化物の分子量としては、例えば糖残基の数で、 2〜50 0糖、好適には 2〜300糖、特に好適には 2〜： 100糖の硫酸化フコース含有多糖の 低分子化物を使用することができる。なお、本発明に使用される硫酸化フコース含有 多糖の低分子化物のうち、 2〜20糖で構成されるものについては硫酸化フコース含 有オリゴ糖と称し、当該オリゴ糖であって硫酸化フコースのみからなるオリゴ糖を硫酸 化フカンオリゴ糖と称する。本発明には前記式 (ィ匕 1)〜（ィ匕 6)に示される 2〜： 11糖で 構成される硫酸化フカンオリゴ糖が好適に使用され、さらに好適には 10糖未満のも のが使用される。

[0039] 以下、酵素学的手法により得られる硫酸化フコース含有多糖の低分子化物につい て説明する。本発明において、酵素学的手法により得られる硫酸化フコース含有多 糖の低分子化物としては、特に限定はなレ、が、例えば、アルテロモナス sp. SN- 1009 (FERM BP— 5747、後にフカノバクタ一 リイティカス SN— 1009と改名、 特開 2003— 199596参照）より調製される硫酸化フカン分解酵素、フラボバクテリウ ム sp. SA— 0082株（FERM BP— 5402)より調製されるエンド型フコィダン分 解酵素や硫酸化フコガラタタン分解酵素を使用することにより製造することができる。 なお、これらの分解酵素の調製法や酵素処理方法、得られる分解物については、そ れぞれ特開 2003— 199596、国際公開第 97/26896号パンフレット、国際公開第 00/50464号パンフレットに開示されている。なお、前記の各酵素は、国際公開第 9 9/11797号パンフレット、国際公開第 03/023036号パンフレットに記載の遺伝子 工学的手法により調製することもできる。

[0040] 本発明において、特に好適にはガゴメ由来の硫酸化フカン及び Z又は硫酸化フカ ン含有物を硫酸化フカン分解酵素により消化することで得られる硫酸化フカンの低分 子化物を使用することができる。硫酸化フカン分解酵素は、硫酸化フカンやその低分 子化物などに作用してフコースとフコースの間のひ一L—フコシル結合をエンド的に 加水分解し、還元性末端に L_フコースを持つオリゴ糖を生成させる。本発明に使用 される硫酸化フカンの低分子化物としては、硫酸化フカンに硫酸化フカン分解酵素 を作用させて得られる還元性末端糖力 SL—フコースであるオリゴ糖が例示される。

[0041] 硫酸化フカン分解酵素の調製は、特に限定はないが、前述のフカノバクタ一 リイテ ィカス SN— 1009を培養して、特開 2003— 199596に記載の方法で調製すること ができる。また、上記フカノバクタ一 リイティカス SN— 1009の他にフカノバクタ一 リイティカス SN— 1009の自然的又は人工的変異株、その他アルテロモナス属、フ カノパクター属に属する菌種等であって、本発明に使用する硫酸化フカン分解酵素 生産能を有する微生物により調製することができる。

[0042] 本発明に使用される硫酸化フカンの低分子化物は、硫酸化フカン分解酵素を硫酸 化フカン及び/又は硫酸化フカン含有物に作用させることによって調製することがで きる。硫酸化フカン含有物としては、例えば硫酸化フカンの部分精製品、褐藻類由来 の硫酸化フコース含有多糖画分、褐藻類の水性溶媒抽出物、褐藻類藻体、もしくは これらの混合物が好適に使用できる。

[0043] 本発明に使用される硫酸化フカンオリゴ糖を調製するにあたり、硫酸化フカン、もし くは硫酸化フカン含有物の溶解は通常の方法で行えばよぐ溶解液中の硫酸化フカ ン、もしくは該硫酸化フカン含有物の濃度はその最高溶解濃度でもよいが、通常は その操作性、反応に使用する硫酸化フカン分解酵素の量を考慮して選定すればよ レ、。硫酸化フカンの溶解液としては、水、緩衝液等より目的に応じて選択すればよい 。溶解液の pHは通常中性付近で、酵素反応は通常 30°C付近で行う。反応に使用 する硫酸化フカン分解酵素の配合比率や使用量、反応液の組成、反応時間等を調 整することによって、硫酸化フカンオリゴ糖の分子量を調整することもできる。上記の 様にして得られた硫酸化フカンオリゴ糖を分子量分画あるいは陰イオン交換カラムに より分画することによって、更に均一な分子量あるいは均一な荷電密度分布の硫酸 化フカンオリゴ糖を調製することができる。分子量分画は通常よく使用されている方 法を適用することができ、例えばゲルろ過法や分子量分画膜を使用すればよい。低 分子化物は、必要に応じて更にイオン交換樹脂処理、活性炭処理等の精製操作を 行ってもよぐ必要に応じて脱塩処理、無菌処理、凍結乾燥処理をすることもできる。 この方法により、後述するごとぐ NMR分析により構造決定可能な均一な構造の本 発明の硫酸化フカンオリゴ糖を得ることができる。

[0044] このようにして得られた硫酸化フカンオリゴ糖としては、特に限定はないが例えば、 上記一般式 (化 1)〜（化 6)で表される化学構造を有する硫酸化フカンオリゴ糖が例 示される。なお、当該オリゴ糖はガゴメゃレツソニァ由来の硫酸化フコース含有多糖 を硫酸化フカン分解酵素により消化することで得られるオリゴ糖である（特開 2003— 199596参照）。

[0045] また、化学的手法による本発明に使用される硫酸化フコース含有多糖の低分子化 物の製造方法として、例えば酸分解法が例示される。硫酸化フコース含有多糖の酸 分解条件としては、特に限定はないが、例えば硫酸化フコース含有多糖やその含有 物を酸水溶液に溶解又は懸濁する力、もしくは固体酸の存在下で酸分解反応を行う ことにより、本発明の硫酸化フコース含有多糖の低分子化物が生成する。また、反応 時に加熱することにより、本発明に使用される低分子化物の生成に必要な時間が短 縮される。使用できる酸としては、特に限定はないが、塩酸、硫酸、硝酸等の無機酸 、クェン酸、ギ酸、酢酸、乳酸、ァスコルビン酸、リンゴ酸等の有機酸が例示される。ま た固体酸としては陽イオン交換樹脂、陽イオン交換繊維、陽イオン交換膜等の固体 酸が例示される。操作上の観点から、特に好適には陽イオン交換樹脂が好適に使用 される。使用される陽イオン交換樹脂とは、特に限定はないが、例えば、三菱化学（ 株）製のダイヤイオン SK— Hや PK208LHが例示される。

[0046] 本発明に使用される酸分解法による硫酸化フコース含有多糖の低分子化物の平 均分子量としては、特に限定するものではないが、ゲルろ過カラムクロマトグラフィー で測定したプルラン換算の平均分子量が例えば 4000〜8000、好適には 4500〜7 500、より好適には 5000〜7000の範囲である低分子化物が例示される。さらに好 適には分子量 5900のプルランを指標として本発明の低分子化物の平均分子量をコ ントロールするのが好ましい。なお、本発明者らは、ガゴメ由来の硫酸化フカンオリゴ 糖の 1つとして下記式 (ィ匕 8)で表される化合物を分離しており（例えば、特開 2003— 199596)、当該オリゴ糖の分子量を上記と同様の方法で測定したところ約 5900で あった。すなわち、本発明で使用される酸分解法による硫酸化フコース含有多糖の 低分子化物としては、構成糖の平均数が約 7糖である低分子化物が好適に使用され る。

[化 8]

^900/!i00idf/X3d LV んひ S60/S00Z OAV [0048] 酸の濃度についても特に限定はないが、好ましくは 0. 0001〜5規定、より好ましく は 0. 01〜1規定程度の濃度で使用可能である。また、反応温度も特に限定はない 、 0〜200°C、好ましくは 20〜： 130°C、さらに好ましくは 60〜： 100°Cに設定すれば 良い。

[0049] また、反応時間も特に限定するものではないが、好ましくは数秒〜数日間に設定す れば良ぐ好適には 30分〜 5時間、特に好適には 1時間〜 4時間が例示される。なお 、上記の使用できる酸や酸の濃度、反応温度、反応時間については、本発明に使用 される硫酸化フコース含有多糖の低分子化物の生成量や調製する低分子化物の分 子量に応じて適宜設定することが出来る。

[0050] なお、本発明に使用される硫酸化フコース含有多糖の低分子化物の製造方法とし ては、原料、例えば褐藻からの公知の硫酸化フコース含有多糖の抽出工程の際に 前述の酵素学的手法や化学的手法を施すことにより、より効率的に本発明の硫酸化 フコース含有多糖の低分子化物を製造することも出来る。

[0051] 上記の様にして得られた硫酸化フコース含有多糖の低分子化物を分子量分画ある いは陰イオン交換カラムにより分画することによって、更に均一な分子量あるいは均 一な荷電密度分布の硫酸化フコース含有多糖の低分子化物を調製することができる 。分子量分画は通常よく使用されている方法を適用することができ、例えばゲルろ過 法や分子量分画膜を使用すればよい。低分子化物は、必要に応じて更にイオン交 換樹脂処理、活性炭処理等の精製操作を行ってもよぐ必要に応じて脱塩処理、無 菌処理、凍結乾燥処理をすることもできる。

[0052] 本発明に使用される硫酸化フコース含有多糖の低分子化物は、硫酸基を分子中 に有しており、該基は種々の塩基と反応し、塩を形成する。本発明に使用される硫酸 化フコース含有多糖の低分子化物は、塩になった状態が安定であり、例えばナトリウ ム及び/又はカリウム及び/又はカルシウム等の塩の形態で提供される。これらの物 質の塩はダウエックス 50W等の陽イオン交換樹脂を利用することによって遊離の硫 酸化フコース含有多糖の低分子化物に導くことが可能である。また、これらは、必要 に応じ公知慣用の塩交換を行い所望の種々の塩に交換することができる。

[0053] 本発明に使用される硫酸化フコース含有多糖の低分子化物の塩としては、薬学的 に許容される塩を用いることができ、例えばナトリウム、カリウム等のアルカリ金属、力 ノレシゥム、マグネシウム、亜鉛等のアルカリ土類金属、アンモニゥム等の塩が挙げら れる。

[0054] また、本発明の組成物としては、上記の硫酸化フコース含有多糖の低分子化物及 び/又は薬理学的に許容される塩を含有する他、その他の成分を含有していても良 レ、。ここでその他の成分としては、特に限定されるものではないが、例えば、下記に 示すような医薬に使用される公知の担体を含有していても良い。

[0055] 本発明の組成物、すなわち硫酸化フコース含有多糖の低分子化物及び Z又は薬 理学的に許容されるその塩を含有する組成物を経口投与することで血栓症の予防 効果が見られることから、本発明の組成物は血栓症の治療又は予防に極めて有用で ある。さらに後述の実施例 2に記載のとおり、本発明の組成物は経口投与することに よる出血傾向が出現しないことから、副作用のない医薬品素材として極めて有用であ る。なお、本発明において血栓症としては、血管内での血液の凝固が要因となって 起こる各種疾患を包含するものであり、例えば、脳梗塞、心筋梗塞、深部静脈血栓症 (エコノミークラス症候群等）、不安定狭心症、脳卒中、肺塞栓症についても本発明の 血栓症に包含される。

[0056] また、下記実施例 4に示すとおり、本発明の硫酸化フコース含有多糖の低分子化 物は、うつ血モデルにおける血栓の形成を抑制する。うつ血モデルは特に静脈血流 が停滞することで血液が凝固する状態を呈しており、深部静脈血栓症のモデルの一 つである。深部静脈血栓症とは、手術侵襲、長期臥床、高張輸液、ギプス固定など が発症の危険因子となり、大腿の奥にある静脈に血のかたまりができる症状をいう。こ の血栓の一部が歩いている間に血流に乗って肺にとび、肺の血管を閉塞してしまうと 肺塞栓症が発症する。また、足から脳や心臓に移動すると、卒中や心臓発作を誘発 する恐れもある。これらの症状は、 QOL (生活の質）を非常に悪化させることに加えて 、時には死に至ることもあるため、静脈血栓形成を抑制することには大きな意味があ る。すなわち、本発明の硫酸化フコース含有多糖の低分子化物はこのモデルにおい ても血栓形成抑制作用を有することから、血栓の治療又は予防のための医薬品や機 能性食品素材として非常に有用である。 [0057] また、下記実施例 5に示すとおり、本発明の硫酸化フコース含有多糖の低分子化 物は、シャントモデルにおける血栓の形成を抑制する。シャントモデルは特に動脈内 での組織損傷や血流のうっ滞に対する血液の凝固状態をモデルィヒしたものである。 動脈壁の病変としては、狭窄をともなう粥状硬化症、動脈炎、火傷などがあげられる。 また、レ、つたん血栓が形成されると血流がおそくなるため血栓が発育しやすくなると いわれている。動脈血栓が生じる部位によってはきわめて重篤な病状を生じさせるた め、動脈血栓形成抑制することには大きな意味がある。すなわち、本発明の硫酸化 フコース含有多糖の低分子化物はこのモデルにおいても血栓形成抑制作用を有す ることから、血栓の治療又は予防のための医薬品や機能性食品素材として非常に有 用である。

[0058] さらに本発明の硫酸化フコース含有多糖の低分子化物は、実施例 4〜6に示される とおり、硫酸化フコース含有多糖と比較してもより高い血栓症の予防又は治療作用を 発揮し、出血傾向も見られず、経口で効果を発揮する点において、非常に有用な医 薬、食品素材である。

[0059] 本発明の医薬としては、前記の本発明の組成物の他、前記の硫酸化フコース含有 多糖の低分子化物（以下、本発明の有効成分または前記有効成分と称することがあ る）そのものであってもよぐまた本発明の組成物を含む組成物であってもよい。本発 明の医薬は、たとえば、前記組成物を当該組成物と同じ用途に使用可能な他の成分 、すなわち抗血栓作用を有する組成物などと配合して使用することができる。

[0060] 本発明の医薬の製造は、通常、前記有効成分を薬学的に許容できる液状または固 体状の担体と配合することにより行われ、所望により溶剤、分散剤、乳化剤、緩衝剤、 安定剤、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤等を加えて、錠剤、顆粒剤、散剤、粉末 剤、カプセル剤等の固形剤、通常液剤、懸濁剤、乳剤等の液剤とすることができる。 また、使用前に適当な担体の添カ卩によって液状となし得る乾燥品や、その他、外用 斉 IJとすることちできる。

[0061] 担体は、本発明の医薬の投与形態および剤型に応じて選択することができる。固 体組成物からなる経口剤とする場合は、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、細粒剤、顆 粒剤等とすることができ、たとえば、デンプン、乳糖、白糖、マンニット、カルボキシメ チルセルロース、コーンスターチ、無機塩などが利用される。また経口剤の調製に当 つては、更に結合剤、崩壊剤、界面活性剤、潤沢剤、流動性促進剤、矯味剤、着色 剤、香料などを配合することもできる。たとえば、錠剤または丸剤とする場合は、所望 によりショ糖、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロースなどの糖衣または胃溶性もしく は腸溶性物質のフィルムで被覆してもよレ、。液体組成物からなる経口剤とする場合は 、薬理学的に許容される乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤などとすることができ、 例えば、精製水、エタノールなどが担体として利用される。また、さらに所望により湿 潤剤、懸濁剤のような補助剤、甘味剤、風味剤、防腐剤などを添加してもよい。

[0062] 一方、非経口剤とする場合は、常法に従い本発明の前記有効成分を希釈剤として の注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、注射用植物油、ゴマ油、落花生油 、大豆油、トウモロコシ油、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなどに溶解 ないし懸濁させ、必要に応じ、殺菌剤、安定剤、等張化剤、無痛化剤などをカ卩えるこ とにより調製すること力 Sできる。また、固体組成物を製造し、使用前に無菌水または無 菌の注射用溶媒に溶解して使用することもできる。

[0063] 外用剤としては、経皮投与用または経粘膜（口腔内、鼻腔内）投与用の、固体、半 固体状または液状の製剤が含まれる。また、座剤なども含まれる。例えば、乳剤、口 ーシヨン剤などの乳濁剤、外用チンキ剤、経粘膜投与用液剤などの液状製剤、油性 軟膏、親水性軟膏などの軟膏剤、フィルム剤、テープ剤、パップ剤などの経皮投与用 または経粘膜投与用の貼付剤などとすることができる。

[0064] 以上の各種製剤は、それぞれ公知の担体などを利用して、適宜、常法により製造 すること力 Sできる。また、力かる製剤における有効成分の含有量は、その投与形態、 投与方法などを考慮し、好ましくは後述の本発明の医薬の投与量範囲で当該有効 成分を投与できるような量であれば特に限定されるものではない。例えば、本発明の 医薬 100重量⁰ /₀中、通常、 0. 001〜100重量⁰ /₀、好まし <は 0. 01〜90重量⁰ /₀、より 好ましくは 0.：!〜 80重量％である。

[0065] 本発明の医薬を投与することにより、血栓症の予防又は治療効果がみられることか ら、本発明の医薬は脳梗塞、心筋梗塞、深部静脈血栓症 (エコノミークラス症候群等 )、不安定狭心症、脳卒中、肺塞栓症の予防又は治療効果が期待できる。 [0066] 本発明の医薬は、製剤形態に応じた適当な投与経路で投与される。投与方法も特 に限定はなぐ内用、外用および注射によることができる。注射剤は、例えば静脈内、 筋肉内、皮下、皮内などに投与し得、外用剤では、たとえば、坐剤をその適する投与 方法により投与すればよい。なお、本発明の組成物は経口投与での効果が顕著であ ることから、好適な投与形態としては、内用が挙げられる。

[0067] 本発明の医薬としての投与量は、その製剤形態、投与方法、使用目的および当該 医薬の投与対象である患者の年齢、体重、症状によって適宜設定され一定ではない 。一般には、製剤中に含有される前記有効成分の投与量で、ヒト (例えば成人） 1日 当り 0. OOOOlmg〜： 1000mg/kg体重、好ましくは 0. OOOlmg〜： 100mg/kg体 重、より好ましくは 0. OOlmg〜： !OmgZkg体重である。もちろん投与量は、種々の 条件によっても変動するので、上記投与量より少ない量で十分な場合もあるし、ある いは範囲を超えて必要な場合もある。投与は、所望の投与量範囲内において、 1日 内において単回で、または数回に分けて行ってもよぐ所定期間に渡って行ってもよ レ、。

[0068] 本発明に係る有効成分には、後述するように特に毒性は認められない。また、副作 用の発生の心配もない。それゆえ、該有効成分によれば、安全かつ適切に血栓症の 予防又は治療効果を発現させることができる。従って、当該有効成分を含んでなる本 発明の医薬、食品又は飲料は、血栓症の予防または治療に有効である。特に本発 明の組成物は経口により血栓形成の抑制効果を有することから、本発明の組成物は 医薬としてのみではなぐ血栓症および血栓症が要因となって誘発される各種疾患 の予防又は治療を目的とすることを付した機能性食品（特定保健用食品）素材として も極めて有用である。本発明の機能性食品又は飲料は目の焦点が合わなレ、、手足 のしびれ、めまい、ろれつが回らない、頭が重い、吐気がする、頭が激しく痛む等の 自覚症状が見られる方や、肩こりの激しい方、血圧が気になる方に対しても有用であ る。

[0069] また、本発明は、本発明の組成物を含有する食品又は飲料を提供する。ここで、「 含有」とは、含有、添加および/または希釈を意味する。本発明の食品又は飲料は、 その抗血栓作用により、上記の疾患の症状改善、予防に極めて有用である。 [0070] なお、本明細書において、前記「含有」とは食品又は飲料中に本発明で使用される 有効成分が含まれるという態様を、前記「添加」とは食品又は飲料の原料に、本発明 で使用される有効成分を添加するという態様を、前記「希釈」とは本発明で使用され る有効成分に、食品又は飲料の原料を添加するとレ、う態様をレ、うものである。

[0071] 本発明の食品又は飲料の製造法に特に限定はない。たとえば、配合、調理、加工 などは一般の食品又は飲料のものに従えばよぐそれらの製造法により製造すること ができ、得られた食品又は飲料に前述の本発明の組成物が含有されていれば良レ、。

[0072] 本発明の食品または飲料としては特に限定はないが、たとえば、本発明に係る前記 有効成分が含有されてなる、穀物加工品（小麦粉加工品、デンプン類加工品、プレミ ックス加工品、麵類、マカロニ類、パン類、あん類、そば類、麩、ビーフン、はるさめ、 包装餅など）、油脂加工品（可塑性油脂、てんぷら油、サラダ油、マヨネーズ類、ドレ ッシングなど）、大豆加工品（豆腐類、味噌、納豆など）、食肉加工品（ハム、ベーコン 、プレスハム、ソーセージなど）、水産製品（冷凍すりみ、力まぼこ、ちくわ、はんぺん、 さつま揚げ、つみれ、すじ、魚肉ハム、ソーセージ、かつお節、魚卵加工品、水産缶 詰、つくだ煮など）、乳製品 (原料乳、クリーム、ヨーグルト、バター、チーズ、練乳、粉 乳、アイスクリームなど）、野菜 ·果実加工品（ペースト類、ジャム類、漬け物類、果実 飲料、野菜飲料、ミックス飲料など）、菓子類 (ガム、飴、チョコレート、クッキー、ビスケ ット類、菓子パン類、ケーキ、餅菓子、米菓類など）、アルコール飲料（日本酒、中国 酒、ワイン、ウィスキー、焼酎、ウォッカ、ブランデー、ジン、ラム酒、ビール、清涼アル コール飲料、果実酒、リキュールなど）、嗜好飲料 (緑茶、紅茶、ウーロン茶、コーヒー 、清涼飲料、乳酸飲料など）、調味料 (しょうゆ、ソース、酢、みりんなど）、缶詰'瓶詰 め'袋詰め食品（牛飯、釜飯、赤飯、カレー、その他の各種調理済み食品）、半乾燥 または濃縮食品（レバ一^ ^一スト、その他のスプレッド、そば'うどんの汁、濃縮スープ 類）、乾燥食品（即席麵類、即席カレー、インスタントコーヒー、粉末ジュース、粉末ス ープ、即席味噌汁、調理済み食品、調理済み飲料、調理済みスープなど）、冷凍食 品（すき焼き、茶碗蒸し、うなぎかば焼き、ハンバーグステーキ、シユウマイ、餃子、各 種スティック、フルーツカクテルなど）、固形食品、液体食品（スープなど）、香辛料類 などの農産 ·林産加工品、畜産加工品、水産加工品などが挙げられる。 [0073] 本発明の食品または飲料には前記有効成分が単独もしくは複数含有、添加および /または希釈されており、その抗血栓作用を発現するための必要量が含まれていれ ば特にその形状に限定はなぐタブレット状、顆粒状、カプセル状等の形状の経口的 に摂取が容易な形状物も包含する。

[0074] 本発明の食品又は飲料中の前記有効成分の含有量は特に限定されず、その官能 と活性発現の観点から適宜選択できるが、例えば、食品又は飲料 100重量％中、 0. 01重量％以上、好ましくは 0. 05〜： 10重量％、より好ましくは 0.：!〜 5重量％である 。また本発明の食品又は飲料は、好ましくはそれらに含有される有効成分が、ヒト（例 えば成人） 1曰当り 0. OOOOlmg〜： 1000mg/kg体重、好ましくは 0. OOOlmg〜： 10 OmgZkg体重、より好ましくは 0. OOlmg〜： 10mg/kg体重となるように摂取すれば よレ、。もちろん摂取量は、種々の条件によっても変動するので、上記摂取量より少な い量で十分な場合もあるし、あるいは範囲を超えて必要な場合もある。

[0075] 本発明で使用される前記有効成分は、その作用発現にとっての有効量の投与を生 物に対し行っても毒性は認められない。たとえば経口投与の場合、硫酸化フコース 含有多糖の低分子化物の乾燥粉末を lg/kg体重でマウスに単回投与しても死亡例 は認められない。また、前記有効成分は、ラットに対し lg/kg体重を経口単回投与 しても死亡例は認められない。

[0076] 以下、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定さ れるものではない。

実施例

[0077] 実施例 1 硫酸化フカンオリゴ糖 (酵素処理物）の製造

(1)ガゴメを充分乾燥後、乾燥物 200kgを自由粉砕機 (ホソカワミクロン製）により粉 砕した。イオン交換水 5000リットルに塩ィ匕カルシウム二水和物（日本曹達社製） 73k gを溶解し、次にガゴメ粉砕物 200kgを混合した。液温 12°Cから液温 90°Cとなるまで 水蒸気吹込みにより 40分間昇温させ、次いで攪拌下 90〜95°Cに 2時間保温し、次 いで冷却し、冷却物 5000リットルを得た。次いで固液分離装置 (タナベウィルテック 社製）を用い、冷却物の固液分離を行い、約 4800リットルの固液分離上清液を調製 した。固液分離上清液 4800リットルを分画分子量 3万の限外ろ過膜 (ダイセン'メン ブレン'システム社製 FE10— FC— FUS0382)を用い、 300リットノレまで濃縮した。 次いでイオン交換水を 300リットノレ加え、また 300リットルまで濃縮するという操作を 5 回行い、脱塩処理を行い、得られた処理液 300リットルに、濾過助剤 Silika # 600S ( 中央シリカ社製） 4kgと celite # 545 (ジョンズ 'マンビル社製） 14kgをカロえて濾過し、 300リットルのガゴメ由来の抽出液を得た。この抽出液を遠心薄膜式濃縮機 (大川原 製作所製エバポール CEP— 30S)で濃縮し、 50リットルの濃縮液を得た。この濃縮 液を凍結乾燥し、硫酸化フコース含有多糖乾燥物 6. 2kgを得た。

[0078] (2)実施例 1一（1)で得られた 2kgの硫酸化フコース含有多糖を 300mMの塩化ナ トリウムと 50mMの塩化カルシウムを含む 50mMのイミダゾール—塩酸緩衝液（pH7 . 5)に溶解し、不溶物を遠心分離法により除去した。得られた硫酸化フコース含有多 糖溶液に、 50mU/mlの硫酸化フカン分解酵素溶液（特開 2003— 199596に記載 のフカノバクタ一 リイティカス由来硫酸化フカン分解酵素）を 5リットルカ卩え、 25°Cで 、 24時間反応させた。さらに、同濃度の硫酸化フカン分解酵素溶液を 3リットル加え、 25°Cで、 24時間反応させた。

こうして得られた硫酸化フコース含有多糖の酵素消化物を分画分子量 3万の限外 ろ過膜（ダイセン'メンブレン'システム社製 FE10— FC— FUS0382)を装着させた 限外ろ過機により処理し、ろ過液 90リットルを回収した。

得られたろ過液を、 RO膜 (SU— 610,東レ製）を装着させた逆浸透膜ろ過システ ムにより、濃縮、脱塩後、 2等分し、それぞれを 200mMの塩化ナトリウムを含む 20m Mのイミダゾール—塩酸緩衝液（ρΗ6· 0)で平衡化した、 45リットルの DEAE—セフ ァロース FFカラムに力け、同緩衝液で洗浄後、 200mMから 1Mの塩化ナトリウムの 濃度勾配により溶出させた。溶出液を 5リットルずつ分画し、それぞれをセルロースァ セテート膜電気泳動法により分析し、泳動距離の長い低分子オリゴ糖 (5、 6、 7糖が 多く含有）と、泳動距離の短い高分子オリゴ糖に区別した。低分子オリゴ糖画分をまと め、 RO膜 (SU— 610,東レ製）を装着させた逆浸透膜ろ過システムにより、濃縮、脱 塩後、凍結乾燥し、本発明の硫酸化フカンオリゴ糖 150gを得た。

[0079] 実施例 2 硫酸化フカンオリゴ糖の血栓形成抑制作用

Wistarラット（8週齢、雄性、体重 270 ± 18g)は Charles River (Quebec, Can ada)より購入した。実施例 1で調製した硫酸化フカンオリゴ糖は水に溶解して 0. 1 % 水溶液を調製し、飲水として 30日間与えた。対照群のラットには水を与えた。 30日目 にトロンボシス試験を行った。トロンボシス試験は、 Blakeらの方法にしたがって行つ た。すなわち、ラットをバルビタールとメトキシフルラン (Janssen社、 Toronto)で麻酔 をし、頸部を切開して頸静脈を露出させた。その頸静脈上に 10%ホルマリンをカロえ た 65%メタノール溶液を数滴滴下し、すぐに閉じた。 4時間後に、再びラットを麻酔下 で、頸部を開口して頸静脈に形成された血栓の状態を観察した。血栓の状態は、綿 棒で血管を軽く触ることにより調べ、強固なものを Hard clot,不安定で柔らかいも のを Soft clot,血栓が認められないものを Negativeと判定した。血栓発生率（Inci dence of thrombosis) (%)は、 (Hard clotの観察された個体数）/ (実験に用 レ、た個体数） X 100と、（Soft clotの観察された個体数) Z (実験に用いた個体数） X 100をグラフ化し、図 1に示す。図中、 Hard clotを黒棒で、 Soft clotを白棒で 示す。なお、本実験に用いた個体数は、対照群が 10匹、 0. 1 %硫酸化フカンオリゴ 糖投与群が 19匹である。

また、同時に腹部下大動脈より採血を行い、 0. 3%クェン酸ナトリウム処理をした血 漿を回収し、活性化部分トロンボプラスチン時間（APTT)を APTT Kit (Ventura 社、 USA)を用いて測定した。その結果を表 1に示す。

[表 1]

表 1

A P T T

対照群 2 3 . 9 ± 2 . 7

0 . 1 %硫酸化フカンオリ ゴ糖投与群 2 3 . 0 ± 1 . 1

[0081] 図 1に示す様に対照群のラットと比較すると、飲用水に硫酸化フカンオリゴ糖を 0. 1 %添カ卩した群では有意に血栓の形成が抑制された。

また、表 1に示す様に硫酸化フカンオリゴ糖の投与による APTT値の増加はなぐ 硫酸化フカンオリゴ糖の経口投与による出血傾向の副作用が出現する可能性はな レ、と考えられた。

[0082] 実施例 3 硫酸化フコース含有多糖の酸分解物の製造

(1)ガゴメを充分乾燥後、乾燥物 200kgを自由粉砕機 (ホソカワミクロン製）により粉 砕した。イオン交換水 5000リットルに塩ィ匕カルシウム二水和物（日本曹達社製） 73k gを溶解し、次にガゴメ粉砕物 200kgを混合した。液温 12°Cから液温 90°Cとなるまで 水蒸気吹込みにより 40分間昇温させ、次いで攪拌下 90〜95°Cに 2時間保温し、次 いで冷却し、冷却物 5000リットルを得た。次いで固液分離装置 (タナベウィルテック 社製）を用い、冷却物の固液分離を行い、約 4800リットルの固液分離上清液を調製 した。固液分離上清液 4800リットルを分画分子量 3万の限外ろ過膜 (ダイセン'メン ブレン'システム社製 FE10— FC— FUS0382)を用レヽ、 300リットノレまで濃縮した。 次いでイオン交換水を加え、また 300リットルまで濃縮するという操作を 5回行レ、、脱 塩処理を行った。処理液を抜き出した後、イオン交換水で UF膜を押し出し、両者を あわせ濃縮脱塩液とした。この濃縮脱塩液 450リットルに、濾過助剤 Silika # 600S を 4kgと celite # 545を 14kg添カロし、 4kgの滤過助斉 (JSilika # 600Sでプレコートし たリンターフィルター（内外醸機工業社製）で濾過を行った。得られた濾過液 400リツ トルをガゴメ由来の抽出液とした。

[0083] (2)上記実施例 3—（1)で調製したガゴメ由来の抽出液 38リットル (フコース硫酸含 有多糖定量値において 15g/リットル）を湯浴にて 90°Cまで加熱した。このとき熱水 で洗浄を行った 76gの三菱化学 (株)社製樹脂ダイヤイオン SK— 104Η (0· 02g/l 0ミリリットル）を添加した。その後温度を保ちながら 30分毎にサンプリングを行い、昭 和電光社製ゲルろ過カラム Shodex OHpak SB803を用い高速液体クロマトグラ フィ一にて平均分子量の測定を行った。加熱 3時間を経過した時点で平均分子量が 分子量 5900であるプノレラン標準物質（昭和電工社製）と同じ溶出位置となったため 冷却を行った。室温まで冷却された後、 100メッシュストレーナ一により添加した樹脂 を取り除き、加熱処理液を得た。得られた加熱処理液を 5%水酸化カルシウム懸濁液 で pHを 6. 6に調整した。この pH調整液を凍結乾燥し、硫酸化フコース含有多糖の 酸分解物凍乾物 585gを得た。

[0084] 実施例 4 うつ血モデルによる血栓形成抑制試験

雄性 Wistarラットを日本 SLC社力も購入し、予備飼育の後 12週齢より実験に用い た。水道水に実施例 1一（1)で調製した硫酸化フコース含有多糖を 5%の割合で、ま た、実施例 3で調製した硫酸化フコース含有多糖の酸分解物を 1%の割合で飲用水 に溶解し、ラットに自由摂取させた。連続 1週間投与を行った後、うつ血血栓の形成を 誘導した。血栓形成誘導は、ペントバノレビタールナトリウム麻酔下に腹部を切開して 行った。下大静脈を露出し、左腎静脈から腸骨静脈までのすべての分枝を結紮した 後、最後に左腎静脈の直下で下大静脈を結紮し、下大静脈内をうつ血状態とした。 4 時間後、腹部を再切開して下大静脈内に形成された血栓を取り出し、重量を測定し た。水道水を自由摂取させた群を対照群として、硫酸化フコース含有多糖投与群お よび硫酸化フコース含有多糖の酸分解物投与群と比較した。各群 9匹の平均値土標 準誤差を表 2に示した。

[表 2]

表 2

血栓 量 (mgj 対照群 3 2 . 3 ± 4 . 9 硫酸化フコース含有多糖 5 %飲水投与群 2 5 . 1土 3 . 9 硫酸化フコース含有多糖の酸分解物 1 %飲水投与群 2 1 . 7 ± 4 . 2

平均値士標準誤差

[0086] その結果、対照群に比し硫酸化フコース含有多糖の酸分解物を投与した群におい ては血栓重量の顕著な抑制作用が認められた。硫酸化フコース含有多糖では硫酸 化フコース含有多糖の酸分解物より高用量を投与したときにのみ抑制作用が認めら れた。いずれの投与群でも、投与期間中の体重変化および摂水量の変化には影響 しなかった。

[0087] 実施例 5 シャントモデルによる血栓形成抑制試験

雄性 Wistarラットを日本 SLC社力も購入し、予備飼育の後 12週齢より実験に用い た。実施例 4と同様に、硫酸化フコース含有多糖 5。/₀および硫酸化フコース含有多糖 の酸分解物 1%を飲用水に溶解し、ラットに自由摂取させた。連続 1週間投与を行つ た後、動静脈シャント内に血栓を形成させた。血栓形成は、ペントバルビタールナトリ ゥム麻酔下に頸部を切開して行った。頸動脈と頸静脈の間に予め絹糸を挿入したシ ヤントを形成し、血液を灌流した。 15分後絹糸を取り出し、絹糸上に形成した血栓の 重量を測定した。水道水を自由摂取させた群を対照群として、硫酸化フコース含有 多糖投与群および硫酸化フコース含有多糖の酸分解物投与群と比較した。各群 8〜 9匹の平均値 ±標準誤差を表 3に示した。

[表 3]

表 3

血栓重量 ( mg) 対照群 3 1 . 4 土 2 . 7 硫酸化フニコース含有多糖 5 %飲水投与群 2 3 . 3 土 2 . 6 硫酸化フニコース含有多糖の酸分解物 1 %飲水投与群 2 3 . 3 土 2 . 1 平均値士標準誤差

[0089] その結果、対照群に比し硫酸化フコース含有多糖の酸分解物を投与した群におい ては血栓重量の顕著な抑制作用が認められた。硫酸化フコース含有多糖では硫酸 化フコース含有多糖の酸分解物より高用量を投与したときにのみ抑制作用が認めら れた。いずれの投与群でも、投与期間中の体重変化および摂水量の変化に大きな 差がなかった。

[0090] 実施例 6 ラット血しょう中の抗 Xa活性試験

実施例 1一（1)で調製した硫酸化フコース含有多糖および実施例 3で調製した硫 酸化フコース含有多糖の酸分解物を蒸留水に溶解し、健常ラット血しょうを用いて、こ れらの抗 Xa活性を測定した。活性測定には合成基質（S— 2222、 KABI社)を用い 、一定量の過乗 iJXa因子の共存下で残存する活性を p_二トロア二リンの吸光度を測 定することにより活性測定を行った。緩衝液を添加した時の吸光度をブランクとして、 硫酸化フコース含有多糖および硫酸化フコース含有多糖の酸分解物を添加した時 の吸光度を表 4に示した。

[0091] [表 4]

表 4

吸光度

プランク 0 . 4 2 6

硫酸化フニユース含有多糖添加 0 . 4 0 3 ± 0 . 0 0 6 硫酸化フニコース含有多糖の酸分解物添加 0 . 3 4 0土 0 . 0 1 4

3例の平均値土標準誤差 緩衝液を添加したときのブランクに比し、硫酸化フコース含有多糖を添加するとラッ ト血しょう中の Xa因子の活性が抑制された。硫酸化フコース含有多糖の酸分解物を 添加した場合には、さらに強く抑制された。 Xa因子は血栓の形成において、プロトロンビンカ讣ロンビンになる際に働く重要な 因子であるが、硫酸化フコース含有多糖の酸分解物は、硫酸化フコース含有多糖と 比較してもより強く Xa因子の働きを抑制することにより、血栓形成をより効果的に抑制 する可能性が確認された。

実施例 7

下記の表 5または表 6に示す配合で常法に従って 2種類のキャンディーを試作した

[表 5]

[0094] [表 6]

[0095] 実施例 8

下記の表 7または表 8に示す配合で常法に従って 2種類のチョコレートを試作した。

[0096] [表 7]

表 7 チョ コレート （ 7 0個分、 1個約 4 . 5 g )

砂糖 1 8 0 g

力力才マス 9 0 g

全粉乳、 植物油脂 4 5 g

ココア ター 2 2 . 5 g

レシチン 微量

香料 微量

酸化防止剤 微量

実施例 3で調製した硫酸化フコース含有多糖の酸分解物 1 . 0 g [0097] [表 8]

[0098] 実施例 9

下記の表 9または表 10に示す配合で常法に従って 2種類のクッキーを試作した。

[0099] [表 9]

[0100] [表 10]

産業上の利用可能性

[0101] 本発明により硫酸化フコース含有多糖の低分子化物、硫酸化フコース含有オリゴ 糖を含有する血栓症の予防又は治療のための組成物、当該組成物を含有する医薬 、食品又は飲料が提供される。当該医薬、食品又は飲料は、脳梗塞、心筋梗塞、深 部静脈血栓症、不安定狭心症、脳卒中、肺塞栓症の治療又は予防に有用である。

Claims

請求の範囲

[1] 硫酸化フコース含有多糖の低分子化物及び/又は薬理学的に許容されるその塩 を含有することを特徴とする、血栓症の予防又は治療のための組成物。

[2] 褐藻類由来の硫酸化フコース含有多糖の低分子化物を含有する請求項 1記載の 組成物。

[3] 硫酸化フコース含有多糖及び/又は硫酸化フコース含有多糖含有物を酵素処理 することにより得られる硫酸化フコース含有多糖の低分子化物を含有する請求項 1記 載の組成物。

[4] 硫酸化フコース含有多糖及び/又は硫酸化フコース含有多糖含有物を酸処理す ることにより得られる硫酸化フコース含有多糖の低分子化物を含有する請求項 1記載 の組成物。

[5] ゲルろ過カラムクロマトグラフィーで測定した際のプルラン換算の平均分子量力 ¾0

00〜8000の範囲である請求項 1記載の組成物。

[6] 2〜： 11糖で構成される硫酸化フコース含有オリゴ糖及び/又は薬理学的に許容さ れるその塩を含有することを特徴とする、血栓症の予防又は治療のための組成物。

[7] 2〜： 11糖で構成される硫酸化フコース含有オリゴ糖が、下記一般式 (化 1)〜(化 6) 力 選択される少なくとも 1つの化合物である請求項 6記載の組成物。

[化 1]

Z. 900/S00idf/X3d SS ムひ S60/S00 OAV

.1^900/S00Zdf/X3d ムひ O 剛

ムひ S60/S00Z O

ムひ S60歸 t ΟΛ\ [化 5]

[化 6]

(全式中、 Rは Η又は SO Hであり、 Rの少なくとも 1つは SO Hである。）

3 3

[8] 医薬である請求項 1または 6記載の組成物。

[9] 食品又は飲料である請求項 1または 6記載の組成物。

[10] 硫酸化フコース含有多糖及び/又は硫酸化フコース含有多糖含有物の酸分解に よる低分子化物であって、ゲルろ過カラムクロマトグラフィーで測定した際のプノレラン 換算の平均分子量力 000〜8000の範囲である低分子化物。

[11] 請求項 10記載の低分子化物を有効成分として含有することを特徴とする医薬。

[12] 請求項 10記載の低分子化物を含有することを特徴とする食品又は飲料。