KR20100042414A - 오매 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 혈행개선 조성물 - Google Patents

오매 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 혈행개선 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 오매 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 혈행개선 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 오매 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈행개선에 의한 혈전 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다. 본 발명에 따른 오매 추출물 또는 이의 분획물은 시험관 내에서 콜라겐에 의해 유도된 사람의 전혈 혈소판 응집 억제 효과 및 혈구변형 스트레스로 유도된 혈류 부착능 억제 효과가 우수하므로 동맥경화증, 뇌출혈, 뇌졸중, 뇌경색 등과 같이 혈액순환 장애로 수반되는 질환의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
오매, 추출물, 혈액순환, 혈전증

Description

오매 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 혈행개선 조성물{Composition for enhancing blood circulation containing the extract or fraction of Prunus Mume as an active ingredient}
본 발명은 오매 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 혈행개선 조성물에 관한 것이다.
최근 선진국뿐 아니라 우리나라에서도 동맥경화증, 뇌출혈, 고혈압, 심장병, 뇌졸중, 뇌경색 등의 순환기 질환이 사망원인 1, 2위를 차지하고 있다. 이러한 성인병은 현대사회로 발전하면서 식생활 양식의 변화 및 내, 외부적인 환경 스트레스로 인해 중, 장년층에서 빈번하게 발생하고 있다. 다양한 원인에 의해 혈관이 막혀 상기 질병들이 발생할 수 있는데, 심장 혈관이 막힐 경우 심근 경색증이 일어날 수 있고, 뇌의 혈관이 막혔을 경우 뇌경색이 발병될 수 있다. 뇌경색의 경우 질병이 계속 진행되어 뇌졸중 증세가 나타나 목숨을 잃게 될 수 있다. 미국의 경우 뇌졸중이 성인의 사망 원인 중 3번째로 높은 순위를 차지하고 있으며 운동성이 무력 하게 되는 가장 큰 요인으로 알려져 있다. 이들 질환의 주요 발병원인으로는 혈전(thrombus)으로 알려져 있는데, 혈전이란 과잉된 혈소판 응집에 의해 매개되는 병리현상으로 인식되고 있다. 또한, 이로 인해 혈액순환의 장애도 발생하게 된다.
지혈은 원래의 형태가 파괴된 혈관으로부터 출혈을 막기 위한 기전으로 혈소판의 활성화 과정, 혈소판과 혈관성분과의 부착, 그에 수반된 혈액응고인자들의 복잡한 상호작용을 거쳐 이루어지며 손상된 혈관을 복원한다[Harlan and Harker, Med. Clin. North. Am., 65:855, 1981]. 한편, 혈소판은 혈관 손상시 콜라겐(collagen), 아라키도닉산(arachidonic acid) 및 ADP(adenosine diphosphate) 등과 같은 각종 응집유도체(agonist)의 자극에 의해 활성화되어 접착 반응(adhesion), 방출 반응(secretion) 및 응집 반응(aggregation)을 일으킨다. 이러한 반응들은 지혈(haemostasis)에 관련되어 있으며, 혈전증(thrombosis) 등을 포함하는 순환계 질환의 발병에도 관여된다고 알려져 있다.
혈소판은 휴지기(resting) 상태에서 특징적인 원형(discoid) 형태를 가지지만 활성화되면 고유의 모양을 상실하고 허족을 가진 불규칙한 모양을 띄는 모양 변형을 거치게 되며, 세포골격(cytoskeleton)류의 중합(polymerization), 포스포릴레이션(phosphorylation) 및 이에 따른 상호작용의 결과를 나타낸다[Nachmias et al., Nature, 313:70, 1985].
지금까지 개발된 항혈소판제로는 데오필린(theopylline), 몰시도민(molsidomin), 베라파밀(verapamil), 니페디핀(nifedipine) 등이 있다. 이들은 cAMP와 cGMP의 생성을 촉진하여 Ca2+의 동원을 억제하는 것으로 알려져 있다. 또한 아스피린, 이미다졸, 인도메타신 등의 비스테로이드계 화합물들은 트롬복산 A2의 생성을 저해함으로써 항혈소판 작용을 가지는 약물들로 알려져 있다. 그러나, 상기 화학물질로 이루어진 약물들은 인체에 지혈 과다 억제, 불임, 소화기 장애 등의 여러 부작용을 야기하는 문제점이 있다. 이에 따라, 상기 화학물질로 이루어진 약물의 부작용을 줄이면서도, 동일한 효과를 보이는 물질을 찾기 위하여, 천연물 또는 한방처방으로부터 혈액순환 개선 작용을 하는 물질에 대한 탐색연구가 많이 진행되고 있다.
이러한 천연물질로서 카테킨을 들 수 있다. 녹차에 포함되어 있는 카테킨은 항산화 물질의 일종으로 나쁜 콜레스테롤 수치를 낮춰주고 혈전을 예방하는 데 효과가 있다고 알려져 있으며, 녹차를 마시고 30분쯤 지나면 혈관기능이 개선된다는 연구 결과도 보고되었다[유럽 심혈관예방 및 사회복귀 저널 2008년 7월]. 그러나 여전히 식품과 한약제 추출물을 이용한 개선된 혈행개선제에 대한 요구가 끊임없이 이루어지고 있는 실정이다.
한편, 오매(烏梅, Prunus Mume)는 매실나무의 익지 않은 열매를 항아리에 넣고 뚜껑을 덮은 다음, 진흙으로 봉합하여 검게 될 때까지 가열한 것으로, 오래 된 기침과 가래를 멈추게 하고, 갈증 해소에 좋으며, 신경과민으로 가슴이 답답하고 소화가 잘 안 될때 사용하면 좋다고 알려져 있다. 또한, 상기 오매는 면역기능, 항균작용, 혈당강하 효과가 있다고 알려져 있으며, 종래 오매에 대한 효능 연구는 오매추출물을 포함하는 헬리코박터 필리로의 우라제 활성 억제 효과(대한민국 특허 공개 제2006-0040254호), 오매추출물에서 분리한 베타 시토스테롤-O-D-글루코오스의 진통작용(대한민국 특허공개 제1998-0043925호) 등이 있다. 그러나 아직까지 오매추출물의 혈행개선 작용에 대한 연구는 보고된 바 없다.
이에, 본 발명자들은 식품과 한약제 추출물을 이용한 혈행개선제를 연구하던 중, 오매 추출물 또는 이의 아세테이트 분획물 및 활성분획물이 전혈응집능 억제 효능이 녹차 카테킨보다 뛰어나고, 혈구변형 스트레스(shear stress)로 유도되는 혈소판 부착능 억제 효능이 뛰어남을 발견하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 오매 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 혈행개선에 의한 혈전 질환의 예방 및 치료용 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적은 오매 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 혈행개선용 건강기능식품 조성물을 제공하는 데 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 오매 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 혈행개선에 의한 혈전 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 오매 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 혈행개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 오매 추출물 또는 이의 분획물은 시험관 내에서 콜라겐에 의해 유도된 사람의 전혈 혈소판 응집 억제 효과 및 혈구변형 스트레스로 유도된 혈류 부착능 억제 효과가 우수하므로 동맥경화증, 뇌출혈, 뇌졸중, 뇌경색 등과 같이 혈액순환 장애로 수반되는 질환의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명은 오매 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈행개선에 의한 혈전 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 오매 추출물은 오매로부터 추출하여 얻은 것이 바람직한데, 상기 오매는 매실나무의 익지 않은 열매를 항아리에 넣고 뚜껑을 덮은 다음, 진흙으로 봉합하여 검게 될 때까지 가열한 것으로, 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있다.
상기 오매 추출물을 제조하는 방법은 초음파 추출법, 여과법 및 환류추출법 등 당업계의 통상적인 추출방법을 사용할 수 있다. 바람직하게는 오매를 물, C1~C4의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 추출물일 수 있으며, 보다 바람직하게는 물, 메탄올, 에탄올 또는 이들의 혼합용매에 침지하여 추출한 추출물일 수 있다. 일례로 건조된 오매를 세절한 후 추출용기에 넣고 C1~C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 메탄올 또는 에탄올을 넣고 일정기간 상온에서 방치한 다음, 여과하여 알코올 추출물을 얻을 수 있다. 이때 추출은 상온에서 1주 동안 방치하는 것이 바람직하며, 이후에 농축 또는 동결건조 등의 방법을 추가적으로 거칠 수 있다.
또한, 본 발명은 오매의 에틸아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 혈행개선에 의한 혈전 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
바람직하게는 상기 오매 분획물은 오매 추출물을 물에 현탁시킨 후 디클로로메탄 및 에틸아세테이트로 순차적으로 분획하여 얻은 것일 수 있다.
일례로, 도 1에 나타낸 바와 같이, 상기 오매의 에틸아세테이트 분획물은 오매의 에탄올 추출물을 물에 현탁시키고, 동량의 디클로로메탄을 넣고 진탕한 후 3회 분획하여 디클로로메탄층과 물층으로 분리한 후, 분리된 물층에 에틸아세테이트를 가하여 진탕한 후 3회 분획하여 에틸아세테이트층과 물층으로 분리함으로써 얻을 수 있다.
나아가, 본 발명은 오매의 활성분획물을 유효성분으로 함유하는 혈행개선에 의한 혈전 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 활성분획물은 오매의 에틸아세테이트 분획물을 에틸아세테이트와 헥산의 혼합용매를 이동상으로 사용하여 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 수득할 수 있다. 이때, 상기 실리카겔 컬럼 크로마토그래피는 에틸아세테이트 용매의 농도가 0%(에틸아세테이트:헥산=0:100), 15%(에틸아세테이트:헥산=15:85), 30%(에틸아세테이트:헥산=30:70), 45%(에틸아세테이트:헥산=45:55), 60%(에틸아세테이트:헥산=60:40), 75%(에틸아세테이트:헥산=75:25), 90%(에틸아세테이트:헥산=90:10) 및 100%(에틸아세테이트:헥산=100:0)가 되는 에틸아세테이트와 헥산의 혼합용매를 이용하여 8 종류의 농도의 혼합 용매 각각에 대해 컬럼 크로마토그래피를 충분히 수행하여 분획 1~8의 8개의 분획을 얻었으며, 이중 분획 2, 3, 7 및 8에서 활성분획을 수득할 수 있다.
상기 추출 및 분리방법을 통하여 얻는 추출물 또는 분획물은 이후 농축, 건조과정을 거칠 수 있다. 상기 농축방법은 당업계의 통상적인 방법으로 농축할 수 있으며, 바람직하게는 회전 진공농축기를 이용하여 감압 농축할 수 있다. 상기 분말을 제조하는 방법은 특별히 한정되지는 않으나, 상기 농축된 추출물에 물을 가하여 동결시킨 후, 이를 동결건조기를 사용하여 건조시켜 분말을 제조할 수 있다.
본 발명에 따른 오매 추출물, 이의 에틸아세테이트 분획물 또는 활성분획물을 이용하여 전혈 응집 억제율을 조사한 결과, 비교군인 카테킨과 비교하여 동등이상의 전혈 응집 억제율을 보임을 확인하였다(표 1 참조).
또한, 혈소판 부착능 억제 효과 실험에서, 본 발명에 따른 오매 추출물을 투여함으로써 혈구 부착이 크게 감소됨으로써 혈소판의 응집을 효과적으로 억제할 수 있음을 확인하였다(도 2 참조).
이를 통해 본 발명의 오매 추출물, 이의 에틸아세테이트 분획물 또는 활성분획물은 전혈 응집에 대한 억제 효과가 우수할 뿐만 아니라, 혈구변형 스트레스로 유도된 혈구 부착능 억제 효과가 우수하므로 혈행개선에 의한 혈전 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
이때, 혈전 질환은 혈액에 혈전이 생성되거나 혈액 순환에 문제가 생겨 유발 될 수 있는 질환이면 특별히 한정되지는 않으며, 예를 들면 동맥경화증, 뇌출혈, 뇌출혈, 뇌경색 질환 등의 질환에 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 조성물은 혈전 형성을 수반하는 질환의 예방 및 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
본 발명에 따른 조성물은 투여를 위해서 상기 기재한 유효성분 이외에 추가로 약재학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 제조할 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 담체는 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다. 더 나아가 당 분야의 적정한 방법으로 또는 Remington's Pharmaceutical Science(최근판), Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화할 수 있다.
본 발명에 따른 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투여(예를 들어, 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)할 수 있으며, 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설률 및 질환의 중증도에 따라 그 범위가 다양하다. 본 발명에 따른 혼합 추출물의 일일 투여량은 500±200 ㎎/㎏이며, 바람직하게는 400±100 ㎎/㎏이고, 하루 1회 내지 3회에 나눠 투여하는 것이 바람직하다.
또한, 본 발명은 상기 오매 추출물, 이의 에틸아세테이트 분획물 또는 활성분획물을 함유하는 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 오매 추출물, 이의 에틸아세테이트 분획물 또는 활성분획물은 혈액순환 장애로 인한 질병 개선을 목적으로 하는 건강식품에 첨가할 수 있으며, 본 발명의 추출물 또는 분획물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 오매를 혼합하여 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합량은 사용목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 발명의 오매는 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안정성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한이 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 음료수, 차, 드링크제 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.
본 발명의 식품 보조 첨가제는 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 사용할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에르트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명에 따른 조성물 100 중량부 당 일반적으로 약 0.01~0.04 중량부, 바람직하게는 0.02~0.03 중량부이다.
상기 외에 본 발명에 따른 추출물 또는 분획물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 중점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명에 따른 조성물은 천연 과일 주스, 과일 주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있으며, 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명에 따른 조성물 100 중량부 당 0.01~0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
이하, 본 발명을 다음의 실시예 및 실험예에 의해 보다 상세하게 설명한다. 단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 발명의 범위가 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1> 오매 추출물의 제조
본 실험에 사용한 오매는 한약재시장(대전소재)에서 구입하여 한국한의학연구원 한약품질검사팀에서 외부형태를 비교검사하여 확인한 후 실험에 사용하였다.
건조된 오매(4 kg)를 플라스크에 넣고 95% 에탄올을 가하여 상온에서 7일 동안 침출 추출하였다. 상기와 같은 추출과정을 2회 반복하고, 상기 추출액을 여과지로 여과 후, 450×g로 원심분리한 후 상등액을 회전 진공농축기로 감압 농축하여 오매 추출물을 제조하였다(수율 21%).
<실시예 2> 오매 추출물의 에틸아세테이트 분획물의 제조
상기 실시예 1에서 제조된 오매 추출물(840 g)을 증류수 3L에 현탁시키고, 동량의 디클로로메탄(MC)을 넣고 진탕한 후 3회 분획하여 디클로로메탄층과 물층으로 분리하였다. 분리된 물층에 에틸아세테이트를 가하여 진탕한 후 3회 분획하여 에틸아세테이트층과 물층으로 분리하였다. 다시 분리된 물층에 부탄올을 가하여 진탕한 후 3회 분획하여 부탄올층과 물층으로 분리하였다. 이로부터 디클로로메탄층 분획물(54g), 에틸아세테이트층 분획물(170g), 부탄올층 분획물(440g) 및 물 분획물(194g)을 제조하였다. 전혈 응집 억제 실험 결과, 상기 분획물 중 에틸아세테이트층에서 우수한 전혈응집 억제 효과를 나타내었다.
<실시예 3> 오매의 에틸아세테이트 분획물로부터 활성분획물의 제조
상기 실시예 2의 에틸아세테이트 분획물(170g)에 에틸아세테이트 용매의 농도가 0%(에틸아세테이트:헥산=0:100), 15%(에틸아세테이트:헥산=15:85), 30%(에틸아세테이트:헥산=30:70), 45%(에틸아세테이트:헥산=45:55), 60%(에틸아세테이트:헥산=60:40), 75%(에틸아세테이트:헥산=75:25), 90%(에틸아세테이트:헥산=90:10) 및 100%(에틸아세테이트:헥산=100:0)가 되는 에틸아세테이트와 헥산의 혼합용매를 이용하여 8 종류의 농도의 혼합 용매 각각에 대해 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(70-230 mesh, Merck)를 사용하여 8개의 분획(분획 1~8)으로 분리하였다. 이중 분획 2(1.1 g), 분획 3(3.8 g), 분획 7(1.6 g) 및 분획 8(31.5 g)에서 전혈응집 억제 활성이 우수하였다.
<실험예 1> 전혈 응집능 억제 효과 측정( In vitro )
본 발명의 오매 추출물의 전혈 응집능 억제 효과를 알아보기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다.
20~30대 사이의 성인 8명(여자 8명)을 무작위로 선정하고, 채혈하기 일주일 전부터 아스피린이나 비스테로이드 항염증 약을 복용시키지 않았다. 일정한 시간에 혈액을 5 ㎖ 용량의 1회용 플라스틱 주사기로 채혈한 후, 응고가 일어나지 않도록 3.2%의 소듐 시트레이트 항혈액응고제가 포함되어 있는 진공튜브(vaccutainer, Becton Dickinson, USA)에 분주하였다. 이후 전혈응집분석기(aggregometer, Chrono Log, USA)를 이용하여 전혈 응집능 억제활성을 측정하였다. 전혈의 혈소판수가 4 ×108 세포/㎖가 되도록 생리식염수로 희석한 후 37 ℃에서 10분간 배양하고 여기에 실시예 1~3에서 제조한 오매 추출물 또는 분획물을 생리식염수 용액에 현탁한 시료 현탁액을 50 ㎕ 가하여 5분간 반응시켰다. 음성대조군으로는 생리식염수를 사용하였고, 비교군으로는 녹차 카테킨(Wako, 일본)을 사용하였다. 이후, 혈소판 응집 유도제 콜라겐(2 ㎍/㎖, Chrono Log, USA)을 일정량 넣고 1,000 rpm으로 교반하면서 37 ℃에서 반응을 시켜 임피던스(impedance) 변화로서 전혈 응집 정도를 판정하였다. 이때, 전혈응집억제능은 전혈 응집의 임피던스를 분석하여 농도에 따른 억제율을 구하고, 이를 이용하여 억제율 50%에 해당하는 추출물의 농도를 구하였다.
실험 결과를 표 1에 나타내었다.
시료 농도(㎍/㎖) 임피던스(Ω) 억제율(%) IC50(㎍/㎖)
음성대조군 (생리식염수) - 16.6±4.2 -
비교군 (녹차 카테킨) 500 6.7±2.6 64.3±14.7 384
250 10.9±3.7 43.5±15.9
125 14.0±2.8 26.7±9.4
에탄올 추출물 2500 0.0±0.0 100.0±0.0 515
1250 0.5±0.7 96.7±4.7
500 5.6±2.3 61.2±29.4
250 9.5±4.9 22.9±12.2
에틸아세테이트층 분획물 2500 0.0±0.0 100.0±0.0 214
1250 1.0±1.2 94.7±6.1
500 3.6±2.1 80.0±12.2
250 5.0±1.2 62.6±14.3
125 14.0±4.7 25.4±6.5
부탄올층 분획물 2500 0.0±0.0 100.0±0.0 684
1250 4.3±3.6 78.6±18.7
500 8.8±2.3 45.8±14.5
125 13.0±2.4 31.4±14.3
50 18.0±4.9 5.6±1.5
물층 2500 0.0±0.0 100.0±0.0 506
1250 0.8±1.5 94.6±10.7
500 6.8±3.6 62.6±17.5
125 14.0±0.6 33.5±5.0
62.5 15.0±6.6 24.7±25.1
50 18.0±4.9 10.9±20.1
분획 1 500 15.5±2.12 13.9±11.8 -
분획 2 500 1.6±1.0 92.3±3.7 101
250 3.7±2.6 79.2±14.5
125 5.0±0.0 73.9±4.7
50 12.3±6.4 37.6±17.9
분획 3 500 2.0±2.8 90.0±12.0 162
250 5.7±1.2 70.2±6.1
125 10.0±0.0 39.3±2.6
분획 4 500 4.8±2.3 65.8±20.3 -
분획 7 500 0.6±0.6 96.2±3.5 303
250 10.0±1.41 37.5±8.8
분획 8 500 1.0±1.1 94.3±5.4 201
250 6.7±2.3 62.3±14.3
125 7.5±2.1 35.2±14.5
상기 표 1에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 오매 추출물의 전혈 응집 억제율은 에탄올 추출물 500 ㎍/㎖에서 61.2±29.4%를 나타냄으로써, 비교군인 녹차 카테킨(500 ㎍/㎖에서 64.3±14.7%의 억제율)과 동등한 전혈 응집 억제율을 나타내었다. 또한, 에틸아세테이트층 분획물은 인체 전혈 응집을 50% 억제하는 농도(IC50)값이 214 ㎎/㎖로 나타나, 비교군(384 ㎎/㎖)보다 낮은 억제 농도를 나타내었다. 나아가, 에틸아세테이트층으로부터 분리된 분획 2, 3, 7 및 8은 IC50 값이 101~303 ㎎/㎖로 나타나, 비교군(384 ㎎/㎖)보다 낮은 억제 농도를 나타내었으며, 특히 분획 2의 경우에는 IC50 값이 101 ㎎/㎖로 나타나 비교군의 녹차 카테킨보다 인체 전혈 응집 억제율이 높은 것으로 나타났다. 따라서, 본 발명에 따른 오매 추출물 또는 분획물은 낮은 농도에서도 효과적으로 전혈 응집을 억제할 수 있으므로 혈행 개선에 유용하게 사용될 수 있다.
<실험예 2> 혈소판 부착능 억제 측정( In vitro )
본 발명에 따른 오매 추출물의 혈구변형 스트레스로 유도된 혈소판 부착능 억제 효과를 알아보기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다.
혈구변형 스트레스로 유도된 혈소판 부착능을 측정하기 위하여, 혈류챔버(라이브셀, Chamlide SC, Shear stress chamber)와 실린지 펌프(syringe pump, Harvard, KGS-101)를 사용하였고, 이에 대한 측정은 공촛점현미경(Confocal laser scanning microscope, Leica, TCSSP2)을 이용하였다. 사람 전혈 2 ㎖에 대조군으로서 생리식염수만 가하고, 비교군으로서 카테킨의 최종농도가 2.5 ㎎/㎖이 되도록 가하고, 실시예 1로부터 제조한 오매의 에탄올 추출물의 최종농도가 2.5 ㎎/㎖이 되도록 가한 다음, 실온에서 5분간 반응시켰다. 이 혼합액을 콜라겐 코팅 슬라이드를 포함하는 혈류 챔버관에 연결한 다음 주사기 펌프의 유속을 0.428 ㎖/분으로 조절하여 6분간 통과하게 하였다. 이로 인해 혈류챔버관을 통과하는 전혈이 받는 혈구변형 스트레스율이 1300 s-1 정도가 되게 하였다. 반응이 끝난 다음 타이로이드 완충액을 같은 유속으로 통과시켜 콜라겐 코팅 슬라이드 위에 남아있는 혈구들을 세척하였다. 혈류챔버 내에 콜라겐 코팅 슬라이드에 부착된 세포의 이미지를 CCD카메라로 촬영하여 혈구변형 스트레스로 유도된 혈소판 부착능 억제 정도를 육안으로 판정하였다. 그 결과를 도 2에 나타내었다.
도 2에 나타난 바와 같이, 실시예 1의 추출물을 처리한 시료의 경우 비교군보다 혈구 부착이 크게 감소되는 것으로 나타났다. 따라서, 본 발명에 따른 추출물은 혈소판의 응집을 효과적으로 억제할 수 있으므로 혈행 개선에 유용하게 사용될 수 있다.
한편, 본 발명에 따른 상기 오매 추출물 또는 분획물은 목적에 따라 여러 형태로 제제화가 가능하다. 하기는 본 발명에 따른 상기 오매 추출물 또는 분획물을 활성성분으로 함유시킨 몇몇 제제화 방법을 예시한 것으로 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.
<제제예 1> 약학적 제제의 제조
1. 산제의 제조
오매 추출물 또는 이의 에틸아세테이트 분획물 2 g
유당 2 g
전분 1 중량부
상기의 성분을 혼합한 후, 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
2. 정제의 제조
오매 추출물 또는 이의 에틸아세테이트 분획물 100 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상시의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
3. 캡슐제의 제조
오매 추출물 또는 이의 에틸아세테이트 분획물 100 ㎎
옥수수 전분 100 ㎎
유당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
<제제예 2> 음료의 제조
1. 탄산음료의 제조
설탕 5~10 중량부, 구연산 0.05~0.3 중량부, 카라멜 0.005~0.02 중량부, 비타민 C 0.1~1 중량부의 첨가물을 혼합하고, 여기에 본 발명에 따른 오매 추출물 또는 이의 에틸아세테이트 분획물 79~94 중량부를 섞어서 시럽을 만들고, 상기 시럽을 85~98 ℃에서 20~180초간 살균하여 냉각수와 1:4의 비율로 혼합한 다음 탄산가스를 0.5~0.82 중량부를 주입하여 본 발명의 조성물을 함유하는 탄산음료를 제조하였다.
2. 건강음료의 제조
액상과당(0.5 중량부), 올리고당(2 중량부), 설탕(2 중량부), 식염(0.5 중량부), 물(75 중량부)과 같은 부재료와 본 발명에 따른 오매 추출물 또는 이의 에틸아세테이트 분획물 79~90 중량부를 균질하게 배합하여 순간 살균을 한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 건강음료를 제조하였다.
도 1은 본 발명에 따른 오매 추출물 또는 이의 분획물을 분리하는 과정을 나타내는 도면이다.
도 2는 본 발명의 일실시예에 따른 오매 추출물의 혈소판 부착능 억제 효과를 나타내는 사진이다.

Claims (9)

  1. 오매를 물, 메탄올, 에탄올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 오매 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈행개선에 의한 혈전 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  2. 오매를 물, 메탄올, 에탄올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 오매 추출물을 물에 현탁시킨 후 디클로로메탄 및 에틸아세테이트로 순차적으로 분획하여 얻은 오매의 에틸아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 혈행개선에 의한 혈전 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  3. 오매를 물, 메탄올, 에탄올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 오매 추출물을 물에 현탁시킨 후 디클로로메탄 및 에틸아세테이트로 순차적으로 분획하여 얻은 오매의 에틸아세테이트 분획물을 헥산과 에틸아세테이트의 혼합용매를 이동상으로 하여 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 수득한 오매의 활성분획물을 유효성분으로 함유하는 혈행개선에 의한 혈전 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  4. 제3항에 있어서, 상기 실리카겔 컬럼 크로마토그래피는 에틸아세테이트 용매의 농도가 0%(에틸아세테이트:헥산=0:100), 15%(에틸아세테이트:헥산=15:85), 30%(에틸아세테이트:헥산=30:70), 45%(에틸아세테이트:헥산=45:55), 60%(에틸아세테이트:헥산=60:40), 75%(에틸아세테이트:헥산=75:25), 90%(에틸아세테이트:헥산=90:10) 및 100%(에틸아세테이트:헥산=100:0)가 되는 에틸아세테이트와 헥산의 혼합용매를 이용하여 8 종류의 농도의 혼합 용매 각각에 대해 수행되는 것을 특징으로 하는 혈행개선에 의한 혈전 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  5. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혈전질환은 동맥경화증, 뇌출혈, 뇌졸증 및 뇌경색으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 혈전 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  6. 오매를 물, 메탄올, 에탄올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 오매 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈행개선용 건강기능식품 조성물.
  7. 오매를 물, 메탄올, 에탄올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 오매 추출물을 물에 현탁시킨 후 디클로로메탄 및 에틸아세테이트로 순차적으로 분획하여 얻은 오 매의 에틸아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 혈행개선용 건강기능식품 조성물.
  8. 오매를 물, 메탄올, 에탄올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 오매 추출물을 물에 현탁시킨 후 디클로로메탄 및 에틸아세테이트로 순차적으로 분획하여 얻은 오매의 에틸아세테이트 분획물을 헥산과 에틸아세테이트의 혼합용매를 이동상으로 하여 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 수득한 오매의 활성분획물을 유효성분으로 함유하는 혈행개선용 건강기능식품 조성물.
  9. 제8항에 있어서, 상기 실리카겔 컬럼 크로마토그래피는 에틸아세테이트 용매의 농도가 0%(에틸아세테이트:헥산=0:100), 15%(에틸아세테이트:헥산=15:85), 30%(에틸아세테이트:헥산=30:70), 45%(에틸아세테이트:헥산=45:55), 60%(에틸아세테이트:헥산=60:40), 75%(에틸아세테이트:헥산=75:25), 90%(에틸아세테이트:헥산=90:10) 및 100%(에틸아세테이트:헥산=100:0)가 되는 에틸아세테이트와 헥산의 혼합용매를 이용하여 8 종류의 농도의 혼합 용매 각각에 대해 수행되는 것을 특징으로 하는 혈행개선용 건강기능식품 조성물.
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